ES2243095T3 - Receptores acoplados a proteina g humanos huerfanos. - Google Patents
Receptores acoplados a proteina g humanos huerfanos.Info
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Abstract
Uso de un receptor acoplado a proteína G para rastrear compuestos candidatos a agentes farmacéuticos para una enfermedad o estado de desorden relacionado con el páncreas, donde el receptor acoplado a proteína G comprende una versión activa independiente del ligando de un receptor que tiene la SEQ ID NO. 8.
Description
Receptores acoplados a proteína G humanos
huérfanos.
La invención descrita en este documento de
patente se relaciona con los receptores transmembrana, y más
particularmente con los receptores acoplados a proteína G humanos,
huérfanos, endógenos, ("GPCRs", G
protein-coupled receptors).
Aunque existen varias clases de receptores en los
humanos, con diferencia la más abundante y terapéuticamente
relevante es la representada por los receptores acoplados a
proteína G (GPCR o GPCRs). Se estima que hay unos 100.000 genes en
el genoma humano, y de estos, aproximadamente el 2%, o 2.000 genes,
se estima que codifican para GPCRs. Los receptores, incluyendo los
GPCRs, para los cuales ha sido identificado su ligando endógeno son
referidos como receptores "conocidos", mientras que los
receptores para los cuales no se ha identificado el ligando
endógeno son referidos como receptores "huérfanos". Los GPCRs
representan una importante área para el desarrollo de productos
farmacéuticos: a partir de aproximadamente 20 de los 100 GPCRs
conocidos se han desarrollado el 60% de todos los fármacos de
prescripción. Esta distinción no es sólo semántica,
particularmente en el caso de los GPCRs. Así, los GPCRs huérfanos
son a la industria farmacéutica lo que fue el oro para California a
finales del siglo XIX- una oportunidad de crecimiento, expansión,
mejora y desarrollo.
Los GPCRs comparten un motivo estructural común.
Todos estos receptores tienen siete secuencias de entre 22 y 24
aminoácidos hidrofóbicos que forman siete hélices alfa, cada una de
las cuales atraviesa la membrana (cada región transmembrana se
identifica con un número, es decir, transmembrana-1
(TM-1), transmembrana-2
(TM-2), etc.). Las hélices transmembrana están
unidas mediante cadenas de aminoácidos entre la
transmembrana-2 y la
transmembrana-3, la transmembrana-4
y la transmembrana-5, y la
transmembrana-6 y la transmembrana-7
en el exterior, o lado "extracelular", de la membrana celular
(llamadas regiones "extracelulares" 1, 2 y 3
(EC-1, EC-2 y EC-3),
respectivamente). Las hélices transmembrana también están unidas por
cadenas de aminoácidos entre la transmembrana-1 y
la transmembrana-2, la
transmembrana-3 y la
transmembrana-4, y la
transmembrana-5 y la transmembrana-6
en el interior, o lado "intracelular", de la membrana celular
(llamadas regiones "intracelulares" 1, 2 y 3
(IC-1, IC-2 y IC-3)
respectivamente). El "carboxi" ("C") terminal del receptor
se localiza en el espacio intracelular en la célula, y el
"amino" ("N") terminal del receptor se localiza en el
espacio extracelular fuera de la célula.
Generalmente, cuando un ligando endógeno se une
con el receptor (a menudo referido como "activación" del
receptor), hay un cambio en la conformación de la región
intracelular que permite el acoplamiento entre la región
intracelular y una "proteína-G" intracelular.
Se ha descrito que los GPCRs son "promiscuos" respecto a las
proteínas G, es decir, que un GPCR puede interactuar con más de una
proteína G. Ver, Kenakin, T., 43 Life Sciences 1095
(1988). Aunque existen otras proteínas G, actualmente, Gq, Gs, Gi y
Go son proteínas G que han sido identificadas. El acoplamiento de
GPCR activado por ligando endógeno con la proteína G, inicia un
proceso en cascada de señalización (llamado "transducción de
señal"). Bajo condiciones normales, la transducción de señal
resulta en último término en la activación celular o la inhibición
celular. Se piensa que el bucle IC-3, así como el
carboxi terminal del receptor interactúan con la proteína G.
Bajo condiciones fisiológicas, los GPCRs existen
en la membrana celular en equilibrio entre 2 conformaciones
diferentes: un estado "inactivo" y un estado "activo". Un
receptor en un estado inactivo es incapaz de enlazar el circuito de
transducción de señal intracelular para producir una respuesta
biológica. Cambiando la conformación del receptor al estado activo
se permite el enlace al circuito de transducción (vía la proteína G)
y se produce una respuesta biológica. Un receptor puede
estabilizarse en un estado activo mediante un ligando endógeno o un
compuesto tal como un fármaco.
Se describen aquí receptores acoplados a proteína
G humanos huérfanos endógenos. La invención se refiere a Rup3: otros
GPRCs se discuten sólo como referencia.
Las Figuras 1A y 1B proporcionan "tablas" de
referencia para ciertos dot-blots proporcionados
aquí (ver también, Figuras 2A y 2B, respectivamente).
Las Figuras 2A y 2B proporcionan reproducciones
de los resultados de ciertos análisis de dot-blot
resultantes de hCHN3 y hCHN8, respectivamente (ver también,
Figuras 1A y 1B, respectivamente).
La Figura 3 proporciona una reproducción de los
resultados del análisis de hRUP3 por RT-PCR.
La Figura 4 proporciona una reproducción de los
resultados del análisis de hRUP4 por RT-PCR.
La Figura 5 proporciona una reproducción de los
resultados del análisis de hRUP6 por RT-PCR.
La literatura científica que se ha desarrollado
en torno a receptores ha adoptado un número de términos para
referirse a ligandos con diferentes efectos sobre los receptores.
Para la claridad y consistencia, se usarán las siguientes
definiciones a lo largo de este documento de patente. En el caso de
que estas definiciones entren en conflicto con otras definiciones
para estos términos, las siguientes definiciones prevalecerán:
Las Abreviaturas de aminoácidos usadas
aquí se definen en la Tabla 1:
\vskip1.000000\baselineskip
| Alanina | ALA | A |
| Arginina | ARG | R |
| Asparagina | ASN | N |
| Ácido aspártico | ASP | D |
| Cisteína | CYS | C |
| Ácido glutámico | GLU | E |
| Glutamina | GLN | Q |
| Glicina | GLY | G |
| Histidina | HIS | H |
| Isoleucina | ILE | I |
| Leucina | LEU | L |
| Lisina | LYS | K |
| Metionina | MET | M |
| Fenilalanina | PHE | F |
| Prolina | PRO | P |
| Serina | SER | S |
| Treonina | THR | T |
| Triptófano | TRP | W |
| Tirosina | TYR | Y |
| Valina | VAL | V |
Composición significa un material que
comprende al menos un componente.
Endógeno significará un material que un
mamífero produce naturalmente. Por ejemplo, y sin ser una
limitación, ENDÓGENO en relación al término "receptor",
significará aquél que es producido naturalmente por un mamífero (por
ejemplo, y sin ser una limitación, un humano) o un virus. En
contraste, el término NO ENDÓGENO en este contexto significará aquél
que no es producido naturalmente por un mamífero (por ejemplo, y sin
ser una limitación, un humano) o un virus.
Célula hospedadora significará una célula
capaz de tener incorporado un Plásmido y/o un Vector en su interior.
En el caso de una Célula Hospedadora procariota, un Plásmido se
replica típicamente como una molécula autónoma mientras la Célula
Hospedadora se replica (generalmente, el Plásmido se aísla entonces
para su introducción en una Célula Hospedadora eucariota); en el
caso de una Célula Hospedadora eucariota, un Plásmido se integra en
el ADN celular de la Célula Hospedadora de manera que cuando la
Célula Hospedadora se replica, se replica el Plásmido.
Preferiblemente, para el propósito de la invención descrita aquí, la
Célula Hospedadora es eucariota, y más preferiblemente, de mamífero,
y más preferiblemente seleccionada del grupo que consiste en las
células 293, 293T y COS-7.
Ligando significará una molécula de origen
natural, endógena, específica para un receptor de origen natural y
endógeno.
Receptor no huérfano significará una
molécula de origen natural, endógena, específica para un ligando de
origen natural y endógeno, en el que la unión de un ligando a un
receptor activa un circuito de señalización intracelular.
Receptor huérfano significará un receptor
endógeno para el cual el ligando endógeno específico para ese
receptor no ha sido identificado o no es conocido.
Plásmido significará la combinación de un
vector y ADNc. Generalmente, un Plásmido es introducido en una
Célula Hospedadora con el propósito de la replicación y/o la
expresión del ADNc como una proteína.
Vector, en referencia a ADNc, significará
un ADN circular capaz de incorporar al menos un ADNc y capaz de
incorporarse en una Célula Hospedadora.
El orden de las siguientes secciones está pensado
para una mejor eficiencia en la descripción y no se pretende, ni
debe interpretarse, como una limitación en la descripción o en las
reivindicaciones que le siguen.
Los esfuerzos del proyecto Genoma Humano han
llevado a la identificación de una plétora de información respecto a
secuencias de ácido nucleico localizadas en el genoma humano; en
este esfuerzo se ha dado el caso de que la información de secuencia
genética se ha hecho disponible sin una comprensión o reconocimiento
de si alguna secuencia genómica en particular contiene o podría
contener información de marco abierto de lectura que traduzca
proteínas humanas o no. Varios métodos de identificación de
secuencias de ácido nucleico dentro del genoma humano están dentro
del ámbito de conocimiento de aquéllos expertos en la materia. Por
ejemplo, y sin suponer una limitación, una variedad de GPRCs,
descritos aquí, fueron descubiertos revisando la base de datos
GenBank^{TM}, mientras que otros GPRCs fueron descubiertos usando
una secuencia de ácido nucleico de un GPRC, previamente secuenciado,
para llevar a cabo una búsqueda BLAST^{TM} en la base de datos
EST. La Tabla A, a continuación, lista los GPRCs huérfanos
endógenos, descritos con un GPCR homólogo respectivo de GPCR:
La homología del receptor es útil en términos de
conseguir una apreciación del papel de los receptores descritos en
el cuerpo humano. Adicionalmente, esta homología puede proporcionar
ideas de posibles ligando(s) endógenos que puedan ser
activadores naturales para los GPRCs huérfanos descritos.
Las técnicas se han vuelto más fácilmente
accesibles durante los últimos años para la identificación de
ligandos endógenos (esto, en principio, con el propósito de
proporcionar una manera de llevar a cabo ensayos de unión de
receptor que requieren un ligando endógeno del receptor) porque el
estudio tradicional de receptores siempre se ha basado en el
supuesto a priori (basado históricamente) de que el ligando
endógeno debe ser identificado en primer lugar antes de que el
descubrimiento pueda continuar buscando antagonistas y otras
moléculas que puedan afectar al receptor. Incluso en casos donde un
antagonista pudiera ser conocido previamente, la búsqueda se
extendería inmediatamente a buscar el ligando endógeno. Este modo de
pensar ha perdurado en la investigación de receptores incluso
después del descubrimiento de receptores activados
constitutivamente. Lo que no había sido reconocido hasta ahora es
que es el estado activado del receptor el más útil para el
descubrimiento de agonistas, agonistas parciales y agonistas
inversos del receptor. Para aquellas enfermedades que resultan de un
receptor demasiado activado o de un receptor infraactivado, lo
deseado en un fármaco terapéutico es un compuesto que actúe
reduciendo el estado activo del receptor o aumentando la actividad
del receptor, respectivamente, no necesariamente un fármaco que sea
un antagonista del ligando endógeno. Esto es debido a que un
compuesto que reduce o aumenta la actividad del estado activo del
receptor no necesita unirse en el mismo sitio que el ligando
endógeno. Así, como enseña un método de esta invención, cualquier
búsqueda de compuestos terapéuticos debería comenzar rastreando
compuestos contra el estado activo independiente de ligando.
Como es conocido en el estado de la técnica, los
GPCRs pueden ser "activos" en su estado endógeno incluso sin la
unión del ligando endógeno del receptor. Tales receptores
naturalmente activos pueden ser probados para identificación directa
(es decir, sin la necesidad del ligando endógeno del receptor) de,
en particular, agonistas inversos. Alternativamente, el receptor
puede ser "activado" vía, por ejemplo, mutación del receptor
para establecer una versión no endógena del receptor que será activa
en ausencia del ligando endógeno del receptor.
Rastreando compuestos candidatos contra una
versión endógena o no endógena activada constitutivamente de los
GPCRs humanos huérfanos descritos aquí, se pueden proporcionar para
la identificación directa de compuestos candidatos que actúan en
este receptor de la superficie celular, sin necesitar el uso del
ligando endógeno del receptor. Mediante la determinación de las
áreas del cuerpo donde se expresa y/o se sobreexpresa la versión
endógena de los GPCRs humanos descritos aquí, es posible determinar
estados de enfermedad/desorden relacionados que estén
asociados
con la expresión y/o sobreexpresión del receptor; en este documento de patente se describe una aproximación a ello.
con la expresión y/o sobreexpresión del receptor; en este documento de patente se describe una aproximación a ello.
En relación a la creación de una mutación que
pueda probar la activación constitutiva de los GPCRs humanos
huérfanos descritos aquí, se basa en la distancia del residuo de
prolina donde se presume que está localizada dentro del TM6 del GPCR
típicamente cercano a la interfaz TM6/IC3 (tal residuo de prolina
parece estar bastante conservado). Mutando el residuo de aminoácido
localizado a 16 residuos de este residuo (presumiblemente localizado
en la región IC3 del receptor) a, preferiblemente, un residuo de
lisina, se puede obtener tal activación. Otros residuos de
aminoácido pueden ser útiles en la mutación de esta posición para
conseguir este objetivo.
Preferiblemente, la secuencia de ADN del GPCR
humano huérfano se puede usar para hacer una sonda para (a) análisis
dot-blot contra ARNm tisular, y/o (b) identificación
por RT-PCR de la expresión del receptor en muestras
de tejido. La presencia de un receptor en un tejido, o en un tejido
enfermo, o la presencia del receptor en concentraciones elevadas en
tejido enfermo comparado con un tejido normal, puede ser
preferiblemente utilizada para identificar una correlación con un
régimen de tratamiento, incluyendo pero no limitado a, una
enfermedad asociada a esa enfermedad. Mediante esta técnica los
receptores pueden igualmente ser localizados en regiones de órganos.
Basándose en las funciones conocidas de los tejidos específicos
donde el receptor está localizado, se puede deducir el rol funcional
putativo del receptor.
Cuando un receptor de proteína G se vuelve
constitutivamente activo (es decir, activo en ausencia de unión con
ligando endógeno), se une a una proteína G (por ejemplo, Gq, Gs, Gi,
Go) y estimula la unión de GTP a la proteína G. Entonces la proteína
G actúa como una GTPasa e hidroliza lentamente el GTP a GDP, por lo
cual el receptor, bajo condiciones normales, queda desactivado. Sin
embargo, los receptores activados constitutivamente continúan
cambiando GDP a GTP. Un análogo no hidrolizable de GTP,
[^{35}S]GTP\gammaS, puede usarse para monitorizar uniones
mejoradas a membranas que expresan receptores activados
constitutivamente. Se ha descrito que [^{35}S]GTP\gammaS
puede ser usado para monitorizar acoplamiento de proteína G a
membranas en ausencia y presencia de ligando. Un ejemplo de esta
monitorización, entre otros ejemplos bien conocidos y disponibles
para los expertos en la materia, fue descrito por Traynor y Nahorski
en 1995. El uso preferido de este sistema de ensayo es para el
rastreo inicial de compuestos candidatos ya que el sistema es
genéricamente aplicable a todos los receptores acoplados a proteína
G, cual sea la proteína G en particular que interacciona con el
dominio intracelular del receptor.
Una vez los compuestos candidatos están
identificados usando el ensayo "genérico" de receptores
acoplados a proteína G (es decir, un ensayo para seleccionar
compuestos que son agonistas, agonistas parciales, o agonistas
inversos), es preferible rastrear más para confirmar que los
compuestos han interactuado en el sitio del receptor. Por ejemplo,
un compuesto identificado mediante el ensayo "genérico" podría
no unirse con el receptor, pero en cambio podría simplemente
"desacoplar" la proteína G del dominio intracelular.
Gs estimula la enzima adenilil ciclasa. Gi (y
Go), al contrario, inhiben esta enzima. La adenilil ciclasa cataliza
la conversión de ATP en AMPc; así, los GPCRs activados
constitutivamente que acoplan la proteína Gs están asociados a
niveles celulares incrementados de AMPc. Por otra parte, GPCRs
activados constitutivamente que acoplan la proteína Gi (o Go) están
asociados a niveles celulares reducidos de AMPc. Ver, en
general, "Indirect Mechanisms of Synaptic Transmission,"
Chpt. 8, From Neuron To Brain (3ª Ed.) Nichols, J.G. et
al eds. Sinauer Associates, Inc. (1992). De esta manera, se
pueden utilizar ensayos que detectan AMPc para determinar si un
compuesto candidato es, por ejemplo, un agonista inverso al receptor
(es decir, un compuesto así descendería los niveles de AMPc). Se
pueden utilizar varias aproximaciones para medir AMPc conocidas en
el estado de la técnica; una aproximación más preferida radica en el
uso de anticuerpos antiAMPc en un formato basado en ELISA. Otro tipo
de ensayo que puede ser utilizado es un ensayo de sistema de
detección de segundo mensajero de la célula entera. Los promotores
en los genes dirigen la expresión de las proteínas que un gen en
particular codifica. El AMP cíclico dirige la expresión génica
promoviendo la unión de una proteína de unión a ADN sensible a AMPc
o un factor de transcripción (CREB) que se une al promotor en sitios
específicos llamados elementos de respuesta a AMPc, y lleva a la
expresión del gen. Se pueden construir sistemas de detección que
tengan un promotor que contenga múltiples elementos de respuesta a
AMPc antes del gen de detección, p. ej.,
\beta-galactosidasa o luciferasa. Así, un receptor
activado constitutivamente unido a Gs causa la acumulación de AMPc,
el cual activa el gen y la expresión de la proteína de detección.
De esta manera, la proteína de detección como la
\beta-galactosidasa o la luciferasa pueden ser
detectadas usando ensayos bioquímicos estándares (Chen et al.
1995).
Gq y Go están asociadas a la activación de la
enzima fosfolipasa C, que, a su vez, hidroliza al fosfolípido
PIP_{2}, liberando dos mensajeros intracelulares:
diacicloglicerol (DAG) e inistol 1,4,5-trifosfato
(IP_{3}). La acumulación creciente de IP_{3} está asociada a la
activación de los receptores asociados a Gq y Go. Ver, en
general, "Indirect Mechanisms of Synaptic Transmission,"
Chpt. 8, From Neuron To Brain (3ª Ed.) Nichols, J.G. et
al eds. Sinauer Associates, inc. (1992). Los ensayos que
detectan la acumulación de IP_{3} pueden ser utilizados para
determinar si un compuesto candidato es, p. ej., un agonista
inverso de un receptor asociado a Gq o Go (es decir, un compuesto
así disminuiría los niveles de IP_{3}). Los receptores asociados
a Gq también pueden ser examinados utilizando un ensayo de detección
AP1 en el cual la fosfolipasa C dependiente de Gq provoca la
activación de genes que contienen elementos AP1; así, los
receptores asociados a Gq activados provocarán un aumento en la
expresión de dichos genes, por lo que los agonistas inversos
provocarán un descenso de tal expresión, y los agonistas provocarán
un aumento de tal expresión. Se encuentran disponibles
comercialmente ensayos para tal detección.
El uso de un GPCR endógeno huérfano activado
constitutivamente, o de un GPCR no endógeno huérfano activado
constitutivamente, para el rastreo de compuestos candidatos para la
identificación directa de agonistas inversos, agonistas y agonistas
parciales tiene la dificultad única de que, por definición, el
receptor sea activo incluso en ausencia de unión con un ligando
endógeno. Así, a menudo es útil utilizar una aproximación que mejore
la señal obtenida por el receptor activado. Una aproximación
preferida es el uso de una Proteína de Fusión GPCR.
En general, una vez se determina que un GPCR está
o ha estado constitutivamente activado, utilizando las técnicas de
ensayo descritas anteriormente (así como otras), es posible
determinar la proteína G predominante que se acopla con el GPCR
endógeno. El acoplamiento de la proteína G al GPCR proporciona un
circuito de señalización que puede ser analizado. Debido que es más
preferido que el rastreo se lleve a cabo usando un sistema de
expresión mamífero, se espera que tal sistema tenga proteína G
endógena. De esta manera, por definición, en un sistema así, el GPCR
huérfano activado constitutivamente dará señal continuamente. En
relación a esto, es preferido que esta señal sea mejorada, de manera
que en presencia de, p. ej., un agonista inverso al receptor, es más
probable que permita diferenciar más fácilmente, particularmente en
el contexto de rastreo, entre el receptor cuando está en contacto
con el agonista inverso.
Se pretende que la Proteína de Fusión GPCR mejore
la eficacia del acoplamiento de la proteína G con el GPCR. La
Proteína de Fusión GPCR se prefiere para rastreos con un GPCR no
endógeno activado constitutivamente, ya que esa aproximación
incrementa la señal que se utiliza más preferentemente en este tipo
de técnicas de rastreo, aunque la Proteína de Fusión GPCR también
puede ser (y preferiblemente lo es) utilizada con un GPCR endógeno
activado constitutivamente. Esto es importante para dar una relación
"señal-ruido" significativa; tal relación
significativa es preferible para el rastreo de los compuestos
candidatos como se describe aquí.
La realización de una construcción útil para la
expresión de una Proteína de Fusión GPCR está dentro del ámbito del
experto en la materia. Los vectores de expresión y sistemas
disponibles comercialmente ofrecen una variedad de aproximaciones
que se pueden ajustar a las necesidades particulares de un
investigador. El criterio de importancia para tal construcción de
una Proteínas de Fusión GPCR es que la secuencia del GPCR y la
secuencia de la proteína G sean ambas de marco interno
(preferentemente, la secuencia para el GPCR esta más arriba
(upstream) de la secuencia de la proteína G) y que el codón de
"terminación" del GPCR debe ser eliminado o sustituido de tal
manera que tras la expresión del GPCR, la proteína G también pueda
ser expresada. El GPCR puede estar enlazado directamente a la
proteína G, o pueden haber residuos espaciadores entre los dos
(preferiblemente, no más de unos 12, aunque este número puede ser
fácilmente determinado por el experto en la materia). Tenemos una
preferencia (basada en la conveniencia) del uso de un espaciador en
algunos de aquellos sitios de restricción que no son usados
efectivamente y que bajo expresión se convierten en espaciadores.
Más preferiblemente, la proteína G que se acopla al GPCR habrá sido
identificada previamente a la creación de la construcción de la
Proteína de Fusión GPCR. Ya que sólo unas pocas proteínas G han sido
identificadas, es preferible que una construcción que comprende la
secuencia de la proteína G (es decir, una construcción de proteína G
universal) sea válida para la inserción de una secuencia de un GPCR
endógeno; esto proporciona eficiencia en el contexto de rastreos a
gran escala de varios GPCRs diferentes con diferentes
secuencias.
Aunque un uso preferido de los GPCRs humanos
huérfanos descritos puede ser para la identificación directa de
compuestos candidatos como agonistas inversos, agonistas, o
agonistas parciales (preferiblemente para uso como agentes
farmacéuticos), estas versiones de GPCRs humanos también pueden ser
utilizadas en investigación. Por ejemplo, sistemas in vitro
e in vivo que incorporen GPCRs pueden utilizarse tanto para
descubrir además y comprender el papel que estos receptores juegan
en la condición humana, sana o patológica, como para entender el
papel de la activación constitutiva como aplica en la cascada de
señalización. El valor de los GPCRs humanos huérfanos es que su
utilidad como herramienta de investigación se puede mejorar
determinando la localización(es) de esos receptores en el
cuerpo, los GPCRs se pueden usar para entender el papel de estos
receptores en el cuerpo humano antes de que se identifique el
ligando endógeno.
Otros usos de los receptores descritos serán
evidentes para los expertos en la materia basándose en, inter
alia, el análisis de este documento de patente.
Los siguientes ejemplos se presentan con el
propósito de aclarar, y no limitar, la presente invención y para
proporcionar información de referencia. Aunque se describen
secuencias específicas de ácido nucleico y aminoácido, se considera
al experto en la materia con la capacidad de hacer pequeñas
modificaciones a estas secuencias mientras consiga los mismos
resultados u otros sustancialmente similares a los proporcionados a
continuación. Excepto cuando se especifica lo contrario, todas las
secuencias de ácido nucleico para los GPCRs humanos huérfanos
endógenos han sido secuenciadas y verificadas. En relación a
receptores equivalentes, el experto en la materia apreciará
fácilmente que pueden llevarse a cabo sustituciones conservativas a
las secuencias descritas con el objetivo de obtener receptores
funcionalmente equivalentes.
Varios de los GPCRs humanos endógenos descritos
fueron identificados en base a la revisión de la información de la
base de datos GenBank.
Buscando en la base de datos, fueron
identificados los siguientes clones de ADNc según se describe a
continuación:
Otros GPCRs humanos endógenos fueron
identificados mediante una búsqueda BLAST de la base de datos EST
(dbest), utilizando los siguientes clones EST como secuencias de
búsqueda. Fueron identificados los siguientes clones EST y usados a
continuación como sonda para rastrear una librería genómica
humana.
Se usó el clon EST de ratón 1179426 para obtener
un clon genómico humano que contuviera las tres secuencias
codificantes de aminoácidos hG2A. El extremo 5' de esta secuencia
codificante se obtuvo mediante 5'RACE^{TM}, y el molde para PCR
fue ADNc de bazo humano Marathon-ready^{TM} de
Clontech. El G2A humano descrito se amplificó mediante PCR
utilizando, durante el primer y segundo ciclo de PCR, los cebadores
específicos para ADNc de G2A como se muestran en las SEQ.ID.NO.:39 y
SEQ.ID.NO.:40:
- 5'-CTGTGTACAGCAGTTCGCAGAGTG-3' (SEQ.ID.NO.:39; 1^{r} ciclo PCR)
- 5'-GAGTGCCAGGCAGAGCAGGTAGAC-3' (SEQ.ID.NO.:40; 2º ciclo PCR)
La PCR se llevó a cabo usando el kit
Advantage^{TM} GC Polymerase (Clontech; se seguirán las
instrucciones de fabricación), a 94ºC durante 30 seg. seguido de 5
ciclos a 94ºC durante 5 seg. y 72ºC durante 4 min.; y 30 ciclos a
94º durante 5 seg. y 70º durante 4 min. Se purificó un fragmento de
aproximadamente 1,3 kb mediante gel de agarosa, se digirió con Hind
III y Xba I y se clonó en el vector de expresión pRC/CMV2
(Invitrogen). El inserto clonado se secuenció mediante el kit T7
Sequenase^{TM} (USB Amersham; se seguirán las instrucciones del
fabricante) y la secuencia se comparó con la secuencia presentada.
Se detectará la expresión de G2A humano sondeando un
dot-blot de ARN (Clontech; se seguirán las
instrucciones del fabricante) con el fragmento marcado con
P^{32}.
La secuenciación del clon EST 1541536 indicó que
hCHN9 es un clon parcial de ADNc que sólo tiene un codón de
iniciación; es decir, el codón de terminación se perdió. Cuando se
utilizó hCHN9 para lanzarlo contra la base de datos (nr), la
secuencia 3' de hCHN9 fue 100% homóloga a la región 5' no traducida
del ADNc del receptor luecotrieno B4, que contenía un codón de
terminación en el marco con secuencia codificante de hCHN9. Para
determinar si la región 5' no traducida del ADNc de LTB4R era la
secuencia 3' de hCHN9, se realizó un PCR usando cebadores basados en
la secuencia 5' que flanquea el codón de iniciación encontrado en
hCHN9 y la secuencia 3' alrededor del codón de terminación
encontrado en la región 5' no traducida de LTB4R. La secuencia del
cebador 5' fue la siguiente:
- 5'-CCCGAATTCCTGCTTGCTCCCAGCTTGGCCC-3' (SEQ.ID.NO.:41; sentido).
- 5'-TGTGGATCCTGCTGTCAAAGGTCCCATTCCGG-3' (SEQ.ID.NO.:42; antisentido).
La PCR se realizó usando ADNc de timo como molde
y polimerasa rTth (Perkin Elmer) con el sistema tampón proporcionado
por el fabricante, 0,25 FM de cada cebador, y 0,2 mM de cada uno de
los 4 nucleótidos. Las condiciones de ciclado fueron 30 ciclos a
94ºC durante 1 min., 65ºC durante 1 min. y 72ºC durante 1 min. y 10
seg. De la PCR se obtuvo un fragmento de 1,1 kb coherente con el
tamaño esperado. Este fragmento de PCR se subclonó en pCMV
(ver a continuación) y se secuenció (ver,
SEQ.ID.NO.:33).
Se clonó la longitud total de hRUP4 mediante
RT-PCR con ADNc de cerebro humano (Clontech) como
molde:
- 5'-TCACAATGCTAGGTGTGGTC-3' (SEQ.ID.NO.:43; sentido) y
- 5'-TGCATAGACAATGGGATTACAG-3' (SEQ.ID.NO.:44; antisentido)
La PCR se realizó usando TaqPlus^{TM}
Precisión^{TM} polimerasa (Stratagene; se seguirán las
instrucciones de fabricación) con los siguientes ciclos: 94ºC
durante 2 min.; 94ºC 30 seg.; 55ºC durante 30 seg., 72ºC durante 45
seg., y 72ºC durante 10 min. Los ciclos del 2 al 4 se repitieron 30
veces.
Los productos de PCR se separaron en un gel de
agarosa al 1% y se aisló un fragmento de PCR de 500 pb que fue
clonado en el vector pCRII-TOPO (Invitrogen) y
secuenciado mediante el kit T7 DNA Sequenase^{TM} (Amsham) y los
cebadores SP6/T7 (Stratagene). El análisis de la secuencia reveló
que el fragmento de PCR era de hecho una forma de AI307658 empalmada
alternativamente que tenía un marco abierto de lectura continuo con
similitud a otros GPRCs. La secuencia completa de este fragmento de
PCR era la siguiente:
Basándose en la secuencia anterior, se utilizaron
como cebadores dos conjuntos de oligonucleótidos sentido, con las
siguientes secuencias:
- 5'-CTGCTTAGAAGAGTGGACCAG-3' (SEQ.ID.NO.:46; oligo 1)
- 5'-CTGTGCACCAGAAGATCTACAC-3' (SEQ.ID.NO.:47; oligo 2)
y dos conjuntos de oligonucleótidos antisentido,
con las secuencias siguientes:
- 5'-CAAGGATGAAGGTGGTGTAGA-3' (SEQ.ID.NO.:48; oligo 3)
- 5'-GTGTAGATCTTCTGGTGCACAGG-3' (SEQ.ID.NO.:49; oligo 4)
para la PCR 3'- y 5-RACE con ADNc
de cerebro humano Marathon-Ready^{TM} (Clontech,
Cat# 7400-1) como molde, según las instrucciones del
fabricante. Los fragmentos de ADN generados por la RACE PCR se
clonaron en el vector pCRII-TOPO^{TM} (Invitrogen)
y se secuenciaron utilizando los cebadores SP6/T7 (Stratagene) y
algunos cebadores internos. El producto 3' RACE contenía una cola
poli(A) y un marco abierto de lectura completo finalizando en
un codón de terminación TAA. El producto 5' RACE contenía un final
5' incompleto; es decir, el codón de iniciación ATG no estaba
presente.
Basándose en la nueva secuencia 5', el oligo 3 y
el siguiente cebador:
- 5'-GCAATGCAGGTCATAGTGAGC-3' (SEQ.ID.NO.:50; oligo 5)
fueron utilizados para un segundo proceso 5' RACE
PCR y los productos de PCR se analizaron como antes. Un tercer
proceso de 5' RACE PCR se llevó a cabo usando los cebadores
antisentido:
- 5'-TGGAGCATGGTGACGGGAATGCAGAAG-3' (SEQ.ID.NO.:51; oligo 6) y,
- 5'-GTGATGAGCAGGTCACTGAGCGCCAAG-3' (SEQ.ID.NO.:52; oligo7).
La secuencia de los productos 5' RACE PCR reveló
la presencia del codón de iniciación ATG, y un proceso más de 5'
RACE PCR no generó más secuencia 5'. La secuencia 5' completada se
confirmó por RT-PCR utilizando el cebador
sentido:
- 5'-GCAATGCAGGCGCTTAACATTAC-3' (SEQ.ID.NO.: 53; oligo 8)
y oligo 4 como cebadores y el análisis de
secuencia del producto de PCR de 650 pb generado a partir de moldes
de ADNc de corazón y cerebro humano (Clontech, Cat#
7404-1). La secuencia 3' completada fue confirmada
mediante RT-PCR utilizando oligo 2 y el siguiente
cebador antisentido:
- 5'-TTGGGTTACAATCTGAAGGGCA-3' (SEQ.ID.NO.: 54; oligo 9)
y el análisis de secuencia del producto de PCR de
670 pb generado a partir de moldes de ADNc de cerebro y corazón
humano (Clontech, Cat# 7404-1).
La longitud total de hRUP5 se clonó mediante
RT-PCR usando un cebador sentido más arriba,
upstream, de ATG, el codón de iniciación (SEQ.ID.NO.:55), y un
cebador antisentido que contenía TCA como codón de terminación
(SEQ.ID:NO.:56), el cual tenía las siguientes secuencias:
- 5'-ACTCCGTGTCCAGCAGGACTCTG-3' (SEQ.ID.NO.:55)
- 5'-TGCGTGTTCCTGGACCCTCACGTG-3' (SEQ.ID.NO.:56)
y un ADNc de leucocito periférico humano
(Clontech) como molde. Para la amplificación se usó Advantage cDNA
polimerasa (Clontech) en una reacción de 50 \muL mediante los
siguientes ciclos, repitiendo 30 veces desde el paso 2 al 4: 94ºC
durante 30 seg.; 94ºC durante 15 seg.; 69º durante 40 seg.; 72ºC
durante 3 min.; 72ºC durante 6 min. Se aisló un fragmento de PCR de
1,4 kb, se clonó con el vector pCRII-TOPO^{TM}
(Invitrogen) y se secuenció completamente utilizando el kit T7 ADN
Sequenase^{TM} (Amsham). Ver, SEQ.ID.NO.:9
La longitud total de hRUP6 se clonó mediante
RT-PCR utilizando los cebadores:
- 5'-CAGGCCTTGGATTTTAATGTCAGGGATGG-3' (SEQ.ID.NO.: 57) y
- 5'-GGAGAGTCAGCTCTGAAAGAATTCAGG-3' (SEQ.ID.NO.: 58);
y ADNc de timo humano
Marathon-Ready^{TM} (Clontech) como molde. Para la
amplificación se usó Advantage cDNA polimerasa (Clontech, de acuerdo
con las instrucciones del fabricante) en una reacción de 50 \mul
con los siguientes ciclos: 94ºC durante 30 seg.; 94ºC durante 5
seg.; 66ºC durante 40 seg.; 72ºC durante 2,5 seg. y 72ºC durante 7
min. Los ciclos del 2 hasta el 4 se repitieron 30 veces. Se aisló un
fragmento de PCR de 1,3 kb y se clonó en el vector
pCRII-TOPO^{TM} (Invitrogen) y se secuenció
completamente (ver, SEQ.ID.NO.: 11) utilizando el kit ABI Big
Dye Terminator^{TM} (P.E. Biosystem).
La longitud total de hRUP7 se clonó mediante
RT-PCR usando los cebadores:
- 5'-TGATGTGATGCCAGATACTAATAGCAC-3' (SEQ.IDNO.: 59; sentido) y
- 5'-CCTGATTCATTTAGGTGAGATTGAGAC-3' (SEQ.ID.NO.:60; antisentido)
y ADNc de leucocito periférico humano (Clontech)
como molde. Para la amplificación se usó Advantage^{TM} cDNA
polimerasa (Clontech) en una reacción de 50 \mul con los
siguientes ciclos, repitiendo 30 veces desde el paso 2 al 4: 94ºC
durante 2 min.; 94ºC durante 15 seg.; 60ºC durante 20 seg.; 72ºC
durante 2 min.; 72ºC durante 10 min. Se aisló un fragmento de PCR de
1,25 kb y se clonó en el vector pCRII-TOPO^{TM}
(Invitrogen) y se secuenció completamente utilizando el kit ABI Big
Dye Terminator^{TM} (P.E. Biosystem). Ver,
SEQ.ID.NO.:13.
La longitud total de hARE-5 se
clonó mediante PCR utilizando los cebadores específicos para hARE5
5'-CAGC
GCAGGGTGAAGCCTGAGAGC-3' SEQ.ID.NO.:69 (sentido, 5' del codón de iniciación ATG) y 5'-GGCACCTG
CTGTGACCTGTGCAGG-3' SEQ.ID.NO.:70 (antisentido, 3' del codón de terminación TGA) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó TaqPlus Precisión^{TM} DNA polimerasa (Stratagene) con el siguientes ciclos, con los pasos de 2 a 4 repetidos 35 veces: 96ºC, 2 minutos; 96ºC, 20 segundos; 58ºC, 30 segundos; 72ºC, 2 minutos; y 72ºC, 10 minutos.
GCAGGGTGAAGCCTGAGAGC-3' SEQ.ID.NO.:69 (sentido, 5' del codón de iniciación ATG) y 5'-GGCACCTG
CTGTGACCTGTGCAGG-3' SEQ.ID.NO.:70 (antisentido, 3' del codón de terminación TGA) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó TaqPlus Precisión^{TM} DNA polimerasa (Stratagene) con el siguientes ciclos, con los pasos de 2 a 4 repetidos 35 veces: 96ºC, 2 minutos; 96ºC, 20 segundos; 58ºC, 30 segundos; 72ºC, 2 minutos; y 72ºC, 10 minutos.
Se aisló un fragmento de PCR de 1,1 kb del tamaño
predicho y se clonó en el vector pCRII-TOPO^{TM}
(Invitrogen) y se secuenció completamente (SEQ.ID.NO.:5) utilizando
el kit T7 DNA Sequenase^{TM} (Amsham).
La longitud total de hARE-4 se
clonó mediante PCR utilizando los cebadores específicos de
hARE-4
5'-CTGGT
GTGCTCCATGGCATCCC-3' SEQ.ID.NO.:67 (sentido, 5' del codón de iniciación ATG) y 5'-GTAAGCCTCC
CAGAACGAGAGG-3' SEQ.ID.NO.:68 (antisentido, 3' del codón de terminación TGA) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó Taq DNA polimerasa (Stratagene) y 5% DMSO mediante los siguientes ciclos, con los pasos de 2 al paso 3 repetidos 35 veces: 94ºC, 3 minutos; 94ºC, 30 segundos; 59ºC, 2 minutos; 72ºC, 10 minutos.
GTGCTCCATGGCATCCC-3' SEQ.ID.NO.:67 (sentido, 5' del codón de iniciación ATG) y 5'-GTAAGCCTCC
CAGAACGAGAGG-3' SEQ.ID.NO.:68 (antisentido, 3' del codón de terminación TGA) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó Taq DNA polimerasa (Stratagene) y 5% DMSO mediante los siguientes ciclos, con los pasos de 2 al paso 3 repetidos 35 veces: 94ºC, 3 minutos; 94ºC, 30 segundos; 59ºC, 2 minutos; 72ºC, 10 minutos.
Se aisló un fragmento PCR de 1,12 kb del tamaño
predicho y se clonó en el vector pCRII-TOPO^{TM}
(Invitrogen) y se secuenció completamente (SEQ.ID.NO.:3) utilizando
el kit T7 DNA Sequenase^{TM} (Amsham).
La longitud total de hARE-3 se
clonó mediante PCR utilizando los cebadores específicos de
hARE-3
5'-gat
caagcttCCATCCTACTGAAACCATGGTC-3' SEQ.ID.NO.:65 (sentido, los nucleótidos en minúscula representan
Hind III saliente, ATG como codón de iniciación) y 5'-gatcagatctCAGTTCCAATATTCACACCACCGTC-3' SEQ.
ID.NO.:66 (antisentido, los nucleótidos en minúscula representan Xba I saliente, TCA como codón de terminación) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó ADN polimerasa TaqPlus Precisión^{TM} con los siguientes ciclos, los pasos del 2 al 4 repetidos 35 veces: 94ºC, 3 minutos; 94ºC, 1 minuto; 55ºC, 1 minuto; 72ºC, 2 minutos; 72ºC, 10 minutos.
caagcttCCATCCTACTGAAACCATGGTC-3' SEQ.ID.NO.:65 (sentido, los nucleótidos en minúscula representan
Hind III saliente, ATG como codón de iniciación) y 5'-gatcagatctCAGTTCCAATATTCACACCACCGTC-3' SEQ.
ID.NO.:66 (antisentido, los nucleótidos en minúscula representan Xba I saliente, TCA como codón de terminación) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó ADN polimerasa TaqPlus Precisión^{TM} con los siguientes ciclos, los pasos del 2 al 4 repetidos 35 veces: 94ºC, 3 minutos; 94ºC, 1 minuto; 55ºC, 1 minuto; 72ºC, 2 minutos; 72ºC, 10 minutos.
Se aisló un fragmento PCR de 1,3 kb del tamaño
predicho, se digirió con Hind III y Xba I, se clonó en el vector
pRC/CMV2 (Invitrogen) en los sitios Hind III y Xba I y se secuenció
completamente (SEQ.ID.NO.:1) utilizando el kit T7 DNA
Sequenase^{TM} (Amsham).
La longitud total de hRUP3 se clonó mediante PCR
utilizando los cebadores específicos de hRUP3
5'-GTCCTG
CCACTTCGAGACATGG-3' SEQ.ID.NO.:71 (sentido, ATG como codón de iniciación) y 5'-GAAACTTCTCTGCC
CTTACCGTC-3' SEQ.ID.NO.:72 (antisentido, 3' del codón de terminación TAA) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó TaqPlus Precisión^{TM} DNA polimerasa (Stratagene) mediante los siguientes ciclos, los pasos del 2 al 4 repetidos 35 veces: 94ºC, 3 minutos; 94ºC, 1 minuto; 58ºC, 1 minuto; 72ºC, 2 minutos;72ºC, 10 minutos.
CCACTTCGAGACATGG-3' SEQ.ID.NO.:71 (sentido, ATG como codón de iniciación) y 5'-GAAACTTCTCTGCC
CTTACCGTC-3' SEQ.ID.NO.:72 (antisentido, 3' del codón de terminación TAA) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó TaqPlus Precisión^{TM} DNA polimerasa (Stratagene) mediante los siguientes ciclos, los pasos del 2 al 4 repetidos 35 veces: 94ºC, 3 minutos; 94ºC, 1 minuto; 58ºC, 1 minuto; 72ºC, 2 minutos;72ºC, 10 minutos.
Se aisló un fragmento PCR de 1,0 kb del tamaño
predicho y se clonó en el vector pCRII-TOPO^{TM}
(Invitrogen) y se secuenció completamente (SEQ.ID.NO.:7) utilizando
el kit T7 DNA Sequenase^{TM} (Amsham).
Aunque está disponible una variedad de células
para la expresión de proteínas, es más preferible que se utilicen
células mamíferas. La razón principal para ello es práctica, es
decir, la utilización de, p. ej., células de levadura para la
expresión de un GPCR, cuando es posible, introduce en el protocolo
una célula no mamífera la cual puede no (de hecho, en el caso de
levadura, no lo hace) incluir el acoplamiento de receptor, el
mecanismo genético y las rutas de secreción que han evolucionado en
sistemas mamíferos - así, los resultados obtenidos en células no
mamíferas, respecto al uso potencial, no son tan preferidos como
aquéllos obtenidos a partir células mamíferas. De las células
mamíferas, las células COS-7, 293 y 293T son
particularmente preferidas, aunque la célula mamífera específica
utilizada puede ser predicha en base a las necesidades particulares
del artesano. El procedimiento general para la expresión de los
GPCRs descritos es como sigue.
En el día uno, se cultivaron en placa 1X10^{7}
células 293T por placa de 150 mm. En el día dos, se prepararán dos
tubos de reacción (las proporciones a seguir para cada tubo son por
placa): el tubo A se preparará mezclando 20 \mug de ADN (p. ej.,
vector pCMV; vector pCMV con ADNc de receptor, etc.) en 1,2 ml de
DMEM libre de suero (Irvine Scientific, Irvine, CA); el tubo B se
preparará mezclando 120 \mul de lipofectamine (Gibco BRL) en 1,2
ml de DMEM libre de suero. Los tubos A y B son mezclados mediante
inversiones (varias veces), seguido de incubación a temperatura
ambiente durante 30-45 min. La mezcla puede ser
referida como la "mezcla de transfección". Se lavan las células
cultivadas 293T con 1XPBS, seguido por la adición de 10 ml de DMEM
libre de suero. Se añadirán entonces a las células 2,4 ml de la
mezcla de transfección, seguido de incubación durante 4 h a 37ºC/5%
de CO_{2}. Entonces, se eliminó por aspiración la mezcla de
transfección, seguido de la adición de 25 ml de DMEM/10% de Suero
Fetal Bovino. Entonces, las células serán incubadas a 37ºC/5% de
CO_{2}. Después de 72 h de incubación, las células entonces pueden
ser recolectadas y utilizadas para análisis.
Se pueden utilizar varias aproximaciones para la
determinación de la distribución tisular de los GPCRs aquí
descritos.
Usando un formato de dot-blot
para tejidos humanos disponible comercialmente, se sondearon GPCRs
huérfanos endógenos para una determinación de las áreas donde se
localizan tales receptores. Los fragmentos de ADNc de los GPCRs del
Ejemplo 1 (marcados radioactivamente) fueron (o pueden ser)
utilizados como sonda: la sonda marcada radioactivamente fue o
(puede ser) generada utilizando el ADNc completo del receptor
(escindido del vector) usando un kit Prime-It
II^{TM} Random Primer Labelling (Stratagene, #300385); según las
instrucciones del fabricante. Se hibridizó un RNA Master Blot^{TM}
humano (Clontech, #7770-1) con la sonda marcada
radioactivamente de GPCR humano endógeno y se lavó bajo condiciones
severas según instrucciones del fabricante. El blot se expuso al
Kodak BioMax^{TM} Autoradiography film durante la noche a -80ºC.
Los resultados están resumidos para varios receptores en la Tabla B
y C (ver Figuras 1 A y 1 B para una tabla identificando los
varios tejidos y sus localizaciones, respectivamente). Se
proporcionan dot-blots ejemplares en la Figura 2A y
2B para resultados derivados usando hCHN3 y hCHN8,
respectivamente.
| GPCR huérfano | Distribución tisular |
| (niveles más elevados, relativos a otros tejidos en el dot-blot) | |
| hGPCR27 | Cerebro fetal, putamen, glándula pituitaria, caudate nucleus |
| hARE-1 | Bazo, leucocitos periféricos, bazo fetal |
| hPPR1 | Glándula pituitaria, corazón, glándula salival, intestino delgado, testículos |
| hRUP3 | Páncreas |
| hCHN3 | Cerebro fetal, putamen, cortex occipital |
| hCHN9 | Páncreas, intestino delgado, hígado |
| hCHN 10 | Riñón, tiroides |
\vskip1.000000\baselineskip
| GPCR huérfano | Distribución tisular |
| (niveles más elevados, relativos a otros tejidos en el dot-blot) | |
| hARE-3 | Cerebelo izquierdo, cerebelo derecho, testículos, accumbens |
| hGPCR3 | Corpus collusum, caudate nucleus, hígado, corazón, septum interventricular |
| hARE-2 | Cerebelo izquierdo, cerebelo derecho, Substantia |
| hCHN8 | Cerebelo izquierdo, cerebelo derecho, hígado, pulmón |
Para averiguar la distribución tisular de ARNm
hRUP3, se realizó una RT-PCR usando cebadores
específicos para hRUP3 y paneles de ADNc de múltiples tejidos
humanos (MTC, Clonetech) como moldes. Se utilizó Taq DNA polimerasa
(Stratagene) para la reacción de PCR, utilizando los siguientes
ciclos de reacción en una reacción de 40 \mul: 94ºC durante 2
min.; 94ºC durante 15 seg.; 55ºC durante 30 seg.; 72ºC durante 1
min.; 72ºC durante 10 min. Los cebadores fueron como sigue:
- 5'-GACAGGTACCTTGCCATCAAG-3' (SEQ.ID.NO.:61; sentido)
- 5'-CTGCACAATGCCAGTGATAAGG-3' (SEQ.ID.NO.:62; antisentido)
Se cargaron 20 \mul de la reacción en un gel de
agarosa al 1%; los resultados se presentan en la Figura 3.
Como se soporta por los datos de la Figura 3, de
los 16 tejidos humanos del panel de ADNc utilizado (cerebro, colon,
corazón, riñón, ovario, páncreas, placenta, próstata, esqueleto,
intestino delgado, bazo, testículos, leucocito de timo, e hígado)
sólo en el páncreas se evidencia una banda simple hRUP3. Análisis
comparativos adicionales de la secuencia de proteínas de hRUP3 con
otros GPCRs sugieren que hRUP3 está relacionado con GPCRs que tienen
moléculas pequeñas como ligandos endógenos así que se predijo que el
ligando endógeno para hRUP3 es una molécula pequeña.
Se realizó una RT-PCR usando los
oligo 8 y 4 de hRUP4 como cebadores y los paneles de ADNc de
múltiples tejidos humanos (MTC, Clontech) como moldes. Para la
amplificación se usó Taq DNA polimerasa (Stratagene) en una reacción
de 40 \mul mediante los siguientes ciclos: 94ºC durante 30
segundos, 94ºC durante 10 segundos, 55ºC durante 30 segundos, 72ºC
durante 2 minutos, y 72ºC durante 5 minutos con los ciclos del 2 al
4 repetidos 30 veces.
Para analizar los productos
RT-PCR se cargaron 20 \mul de la reacción en un
gel de agarosa al 1%, y se encontró ARNm de hRUP4 expresado en
muchos tejidos humanos, con la expresión más fuerte en corazón y
riñón. (ver, Figura 4). Para confirmar la autenticidad de los
fragmentos de PCR, se usó como sonda para el análisis Southern Blot
un fragmento de 300 pb derivado del extremo 5' de hRUP4. La sonda se
marcó con ^{32}P-dCTP usando el kit
Prime-It II^{TM} Random Primer Labeling
(Stratagene) y se purificó utilizando las microcolumnas
ProbeQuant^{TM} G-50 (Amersham). La hibridación se
hizo durante la noche a 42ºC después de 12 horas de prehibridación.
Finalmente, se lavó el blot a 65ºC con 0,1 x SCC. El Southern blot
confirmó los fragmentos de PCR como hRUP4.
Se realizó una RT-PCR usando los
siguientes cebadores específicos para hRUP5:
- 5'-CTGACTTCTTGTTCCTGGCAGCAGCGG-3' (SEQ.ID.NO.:63; sentido)
- 5'-AGACCAGCCAGGGCACGCTGAAGAGTG-3' (SEQ.ID.NO.:64; antisentido)
y los paneles de ADNc de múltiples tejidos
humanos (MTC, Clontech) como moldes. Para la amplificación se usó
Taq DNA polimerasa (Stratagene) en una reacción de 40 \mul
mediante los siguientes ciclos: 94ºC durante 30 segundos, 94ºC
durante 10 segundos, 62ºC durante 1,5 minutos, 72ºC durante 5
minutos, y con los ciclos del 2 al 3 repetidos 30 veces. Se cargaron
20 \mul de la reacción en un gel de agarosa al 1,5% para analizar
los productos de RT-PCR, y el ARNm hRUP5 se encontró
expresado sólo en los leucocitos de sangre periférica (datos no
facilitados).
Se aplicó RT-PCR para confirmar
la expresión y para determinar la distribución tisular de hRUP6. Los
oligonucleótidos usados, basados en un alineamiento de los segmentos
AC005871 y GPR66, tenían las siguientes secuencias:
- 5'-CCAACACCAGCATCCATGGCATCAAG-3' (SEQ.ID.NO.:73; sentido),
- 5'-GGAGAGTCAGCTCTGAAAGAATTCAGG-3' (SEQ.ID.NO.:74; antisentido).
Se utilizaron los paneles de ADNc de múltiples
tejidos humanos (MTC, Clontech) como moldes. La PCR se realizó
utilizando TaqPlus Precisión^{TM} polimerasa (Stratagene; se
seguirán las instrucciones de fabricación) en una reacción de 40
\mul mediante los siguientes ciclos: 94ºC durante 30 segundos,
94ºC durante 5 segundos, 66ºC durante 40 segundos, 72ºC durante 2,5
minutos, y 72ºC durante 7 min. Los ciclos del 2 al 4 se repitieron
30 veces.
Se cargaron 20 \mul de la reacción en un gel de
agarosa al 1,2% para analizar los productos de
RT-PCR, y un fragmento específico de ADN de 760 pb
que representaba hRUP6 se expresó predominantemente en el timo y con
menos expresión en el corazón, riñón, pulmón, próstata, intestino
delgado y testículos. (ver, Figura 5).
Aunque está disponible una variedad de Vectores
para aquéllos en la materia, con el objetivo de la utilización para
GPCRs humanos, tanto endógenos como no endógenos, es más preferido
que el Vector utilizado sea pCMV. Este vector se depositó con la
Colección de Cultivos Tipo Americana (American Type to Culture
Collection, ATCC) el 13 de Octubre de 1998 (10801 University Blvd.,
Manassas, VA 20110-2209 USA) bajo las condiciones
del Tratado de Budapest para el Reconocimiento Internacional del
Depósito de Microorganismos a los Fines del Procedimiento en Materia
de Patentes. El ADN fue probado por la ATCC y determinado el serlo.
La ATCC ha asignado el siguiente número de depósito a pCMV: ATCC
#203351.
(1) INFORMACIÓN GENERAL
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE: Chen, Ruoping
\hskip3.9cmDang, Huong T,
\hskip3.9cmLiaw, Chen W.
\hskip3.9cmLin, I-Lin
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TITULO DE LA INVENCIÓN: Receptores acoplados a Proteína G humanos huérfanos
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 74
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- DIRECCION DE CORRESPONDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- DESTINATARIO: Arena Pharmaceuticals, Inc.
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- DIRECCIÓN: 6166 Nancy Ridge Drive
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: San Diego
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: California
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Estados Unidos de América
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- (ZIP): 92121
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- FORMATO LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE MEDIO: disquette
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- (B) ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- PROGRAMA: PatentIn Release #1.0, Versión #1.30
\vskip0.800000\baselineskip
- (vi)
- DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE LA SOLICITUD: US
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE REGISTRO:
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CLASIFICACIÓN:
\vskip0.800000\baselineskip
- (viii)
- INFORMACIÓN DEL ABOGADO/AGENTE:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Burgoon, Richard P.
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- MUMERO DE REGISTRO: 34.787
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- INFORMACIÓN PARA TELECOMUNICACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TELÉFONO: (858) 453-7200
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TELEFAX: (858) 453-7210
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1260 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(3) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1260 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(4) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 3:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1119 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
(5) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 4:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 372 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
(6) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1107 base de pares
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 5:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(7) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 6:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 368 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(8) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 7:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1008 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 7:
\vskip1.000000\baselineskip
(9) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 8:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1008 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 8:
\vskip1.000000\baselineskip
(10) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 9:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1413 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 9:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(11) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 10:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 468 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 10:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(12) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 11:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1248 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 11:
\vskip1.000000\baselineskip
(13) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 12:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 415 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 12:
\vskip1.000000\baselineskip
(14) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 13:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1173 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 13:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(15) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 14:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 390 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 14:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(16) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 15:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1128 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 15:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(17) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 16:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 375 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 16:
\vskip1.000000\baselineskip
(18) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 17:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1002 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 17:
\vskip1.000000\baselineskip
(19) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 18:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 333 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 18:
\vskip1.000000\baselineskip
(20) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 19:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1122 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 19:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(21) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 20:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 373 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 20:
\vskip1.000000\baselineskip
(22) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 21:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1053 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 21:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(23) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 22:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 350 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 22:
\vskip1.000000\baselineskip
(24) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 23:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1116 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 23:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(25) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 24:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 371 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 24:
\vskip1.000000\baselineskip
(26) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 25:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1113 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 25:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(27) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 26:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 370 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 26:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(28) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 27:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1080 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 27:
\vskip1.000000\baselineskip
(29) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 28:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 359 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 28:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(30) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 29:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1503 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 29:
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(31) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 30:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 500 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 30:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(32) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 31:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1029 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 31:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(33) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 32:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 342 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 32:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(34) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 33:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1077 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 33:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(35) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 34:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 358 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 34:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(36) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 35:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1005 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 35:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(37) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 36:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 334 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 36:
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(38) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 37:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1296 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 37:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(39) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 38:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 431 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 38:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(40) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 39:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 39:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGTGTACAG CAGTTCGCAG AGTG
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(41) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 40:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 40:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGAGTGCCAGG CAGAGCAGGT AGAC
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(42) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 41:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 41:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCCGAATTCC TGCTTGCTCC CAGCTTGGCC C
\hfill31
\vskip1.000000\baselineskip
(43) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 42:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 32 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 42:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTGGATCCT GCTGTCAAAG GTCCCATTCC GG
\hfill32
\vskip1.000000\baselineskip
(44) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 43:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 43:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCACAATGCT AGGTGTGGTC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(45) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 44:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 44:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGCATAGACA ATGGGATTAC AG
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(46) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 45:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 511 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 45:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(47) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 46:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 46:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGCTTAGAA GAGTGGACCA G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(48) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 47:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 47:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGTGCACCA GAAGATCTAC AC
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(49) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 48:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 48:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAAGGATGAA GGTGGTGTAG A
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(50) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 49:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 23 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 49:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTGTAGATCT TCTGGTGCAC AGG
\hfill23
\vskip1.000000\baselineskip
(51) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 50:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 50:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCAATGCAGG TCATAGTGAG C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(52) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 51:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 51:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGAGCATGG TGACGGGAAT GCAGAAG
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(53) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 52:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 52:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTGATGAGCA GGTCACTGAG CGCCAAG
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(54) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 53:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 23 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 53:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCAATGCAGG CGCTTAACAT TAC
\hfill23
\vskip1.000000\baselineskip
(55) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 54:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (vi)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 54:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGGGTTACA ATCTGAAGGG CA
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(56) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 55:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 23 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (vii)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 55:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACTCCGTGTC CAGCAGGACT CTG
\hfill23
\vskip1.000000\baselineskip
(57) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 56:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (viii)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 56:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGCGTGTTCC TGGACCCTCA CGTG
\hfill24
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(58) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 57:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 29 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 57:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAGGCCTTGG ATTTTAATGT CAGGGATGG
\hfill29
\vskip1.000000\baselineskip
(59) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 58:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (x)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 58:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGAGCGTCAG CTCTGAAAGA ATTCAGG
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(60) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 59:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 59:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGATGTGATG CCAGATACTA ATAGCAC
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(61) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 60:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xii)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 60:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCTGATTCAT TTAGGTGAGA TTGAGAC
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(62) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 61:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xiii)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 61:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGACAGGTACC TTGCCATCAA G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(63) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 62:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xiv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 62:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGCACAATG CCAGTGATAA GG
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(64) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 63:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 63:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGACTTCTT GTTCCTGGCA GCAGCGG
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(65) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 64:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xvi)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 64:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGACCAGCCA GGGCACGCTG AAGAGTG
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(66) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 65:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 32 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xvii)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 65:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGATCAAGCTT CCATCCTACT GAAACCATGG TC
\hfill32
\vskip1.000000\baselineskip
(67) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 66:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xviii)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 66:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGATCAGATCT CAGTTCCAAT ATTCACACCA CCGTC
\hfill35
\vskip1.000000\baselineskip
(68) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 67:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xix)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 67:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGGTGTGCT CCATGGCATC CC
\hfill22
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(69) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 68:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xx)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 68:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTAAGCCTCC CAGAACGAGA GG
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(70) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 69:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xxi)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 69:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAGCGCAGGG TGAAGCCTGA GAGC
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(71) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 70:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xxii)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 70:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGCACCTGCT GTGACCTGTG CAGG
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(72) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 71:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xxiii)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 71:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTCCTGCCAC TTCGAGACAT GG
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(73) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 72:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 23 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xxiv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 72:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGAAACTTCTC TGCCCTTACC GTC
\hfill23
\vskip1.000000\baselineskip
(74) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 73:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xxv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 73:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCAACACCAG CATCCATGGC ATCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(75) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 74:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xxvi)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 74:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGAGAGTCAG CTCTGAAAGA ATTCAGG
\hfill27
Claims (13)
1. Uso de un receptor acoplado a proteína G para
rastrear compuestos candidatos a agentes farmacéuticos para una
enfermedad o estado de desorden relacionado con el páncreas, donde
el receptor acoplado a proteína G comprende una versión activa
independiente del ligando de un receptor que tiene la SEQ ID NO.
8.
2. El uso de la reivindicación 1, donde la
versión activa independiente de ligando del receptor es una versión
activa independiente de ligando no endógena que tiene una mutación
localizada 16 residuos de aminoácido N-terminal
desde el residuo conservado de prolina dentro del dominio TM6 de la
SEQ ID NO. 8.
3. El uso de la reivindicación 2, donde el
residuo mutado ha sido mutado a un residuo de lisina.
4. El uso de la reivindicación 1, donde la
versión activa independiente de ligando del receptor es una versión
activa independiente de ligando endógena con secuencia SEQ ID NO.
8.
5. El uso de cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, donde el receptor acoplado a proteína G forma parte de
una proteína de fusión con una proteína G.
6. El uso de cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, donde el rastreo es para un agonista del receptor.
7. El uso de cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, donde el rastreo es para un agonista parcial del
receptor.
8. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1
a 5, donde el rastreo es para un agonista inverso del receptor.
9. Un receptor acoplado a proteína G que es una
versión activa independiente de ligando no endógena de un receptor
que comprende la SEQ ID NO. 8, que tiene una mutación localizada 16
residuos de aminoácido N-terminal desde el residuo
conservado de prolina dentro del dominio TM6 de la SEQ ID NO. 8.
10. El receptor acoplado a proteína G de la
reivindicación 9, donde el residuo mutado ha sido mutado a un
residuo de lisina.
11. Un ácido nucleico aislado que codifica un
receptor acoplado a proteína G o una proteína de fusión según la
reivindicación 9 o la reivindicación 10.
12. Un vector que comprende un ácido nucleico
según la reivindicación 11.
13. Una célula hospedadora que comprende un
vector según reivindicación 12.
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