ES2262654T3 - Metodo para el tratamiento de la vejiga sobreactiva. - Google Patents

Abstract

El uso de (S)-N-[2-(3, 4-diclorofenil)-4-[4-(2- oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metil- benzamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma en la preparación de un medicamento para tratar o prevenir vejiga sobreactiva o incontinencia urinaria.

Description

Método para el tratamiento de la vejiga sobreactiva.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a un método para el tratamiento y/o la prevención de la vejiga sobreactiva o de la incontinencia urinaria, y a compuestos y composiciones para uso en el método.

Antecedentes

Vejiga sobreactiva ("OAB") es una expresión para un síndrome que engloba el tenesmo vesical, la necesidad imperiosa de orinal y la polaquiuria. La incontinencia urinaria ("UI") es la pérdida involuntaria de orina que resulta de la incapacidad de la vejiga para retener la orina como consecuencia del tenesmo vesical o del estrés físico o mental (incontinencia por estrés).

La vejiga normal se llena a una velocidad fisiológica dictada por la función de los riñones. La vejiga puede alojar grandes volúmenes de orina debido a las propiedades físicas de la vejiga así como a un sistema inhibidor neural. Se cree que el mecanismo inhibidor implica la inhibición de la actividad parasimpática o un incremento del tono simpático para producir la relajación del detrusor y permitir que se produzca el llenado. Durante el llenado, el cuello de salida de la vejiga y la uretra se contraen para evitar pérdidas. El vaciamiento o micción se caracteriza por una relajación del cuello de salida y la uretra, seguido de la contracción del músculo detrusor. Cuando la vejiga está vacía, el músculo detrusor se relaja, y el cuello de salida y la uretra se contraen para cerrar la vejiga y mantener la continen-
cia.

Se estima que entre un 4 y un 8% de la población total padece UI en cualquier momento, aunque en la mayoría de los países sólo se diagnostica a alrededor del 15% de tales pacientes. De los diagnosticados, sólo alrededor del 70% reciben tratamiento médico. El tenesmo vesical prevalece más en los ancianos, y el 80% de los casos son mujeres. Regularmente se usan almohadillas y otros dispositivos físicos por una gran cantidad de pacientes incontinentes que no reciben tratamiento médico. Se estima que el mercado de los Estados Unidos de América para almohadillas para incontinencia es de \textdollar1500 millones en 1997.

El tratamiento médico habitualmente más prescrito para OAB en países occidentales es el antagonista muscarínico oxibutinina. El tratamiento con oxibutinina está asociado con un efecto secundario de "boca seca", que es muy mal tolerado por algunos usuarios. Otros efectos secundarios de los antagonistas muscarínicos incluyen el estreñimiento, anormalidades de la acomodación visual y xeroftalmia (ojos secos). En Japón, se prescribe propiverina para OAB, y también el Flavoxato es un producto importante para el tratamiento de tenesmo vesical. Se ha comercializado para OAB una segunda generación de antagonistas del receptor M3 muscarínicos, la tolterodina. La tolterodina tiene una eficacia comparable con la oxibutinina, pero con una menor aparición de efectos secundarios. La tolterodina se administra dos veces al día, mientras que la oxibutinina se debe tomar 2-3 veces al día. Las tasas de eficacia subjetiva para oxibutinina y tolterodina oscilan desde 20-50%, con efectos secundarios (principalmente boca seca) observados en aproximadamente un 78% y 39% de los pacientes, respectivamente.

Se ha estudiado la terapia con estrógenos y progesterona para la incontinencia, con alguna evidencia de que la terapia de sustitución con estrógenos y/o progesterona puede aliviar parcialmente la incontinencia en algunas mujeres. Sin embargo, no hay ninguna señal concluyente de que la terapia hormonal sola sea suficiente para curar la incontinencia. Algunos estudios han demostrado que la terapia de sustitución con hormonas ayuda a evitar infecciones del aparato urinario recurrentes postmenopáusicas, y mejora la UI. Otros estudios sugieren que los agonistas alfa-adrenérgicos, los agentes bloqueadores de receptores beta-adrenérgicos, los compuestos bloqueadores de receptores colinérgicos y los fármacos estimulantes del receptor colinérgico pueden ser beneficiosos.

A pesar de la disponibilidad de los tratamientos existentes, existe una necesidad importante no satisfecha y creciente de un tratamiento médico eficaz y aceptable para UI y OAB.

Descripción de la invención

Ahora se ha descubierto que ciertos compuestos que se unen al receptor de neuroquinina 2 ("NK2R") son útiles para el tratamiento y la prevención de la vejiga sobreactiva ("OAB") y de la incontinencia urinaria o uretral ("UT"). En particular, se ha descubierto que el ligando de NK2R, la (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metilbenzamida, es útil para el tratamiento y la prevención de OAB y de la incontinencia urinaria o uretral.

En un aspecto, la invención proporciona un método que comprende tratar o prevenir OAB o UI en un sujeto, particularmente en un ser humano, con un ligando de NK2R. En particular, el método comprende tratar OAB o UI con (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metilbenzamida (el "Compuesto"), y más particularmente el método comprende tratar con una cantidad terapéuticamente eficaz del Compues-
to.

En un segundo aspecto, la invención proporciona el uso de (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metilbenzamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, en la preparación de un medicamento para tratar y/o prevenir OAB o UI en mamíferos, en particular en seres humanos.

En un tercer aspecto, la invención proporciona sales farmacéuticamente aceptables del Compuesto, y composiciones que contienen el Compuesto, o sus sales farmacéuticamente aceptables.

En otro aspecto, la invención proporciona un método para el tratamiento y prevención de OAB o UI en mamíferos y en seres humanos, en particular, que comprende tratar a un sujeto que lo necesite con una cantidad terapéuticamente eficaz de un ligando de NK2R en combinación con otro agente terapéutico.

En aún otro aspecto, la invención proporciona un método para el tratamiento y prevención de OAB o UI en mamíferos, y en particular en seres humanos, que comprende tratar a un sujeto que lo necesite con una cantidad terapéuticamente eficaz de un ligando de NK2R, en combinación con un agente estrogénico y/o una sustancia progestágena, y con o sin el suplemento con un agonista alfa-adrenérgico, con un agente bloqueador del receptor beta-adrenérgico, con un compuesto bloqueador del receptor colinérgico, o con un fármaco que estimule el receptor colinérgico.

En un aspecto adicional, la invención proporciona una composición farmacéutica útil en la práctica de los métodos de la invención, que comprende el Compuesto según el diagrama estructural I, y un excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

En particular, es un objeto de la invención proporcionar un método para el tratamiento de OAB o UI que comprende usar el Compuesto, (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metilbenzamida, que tiene una estructura según el diagrama estructural I:

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Es otro objeto de la invención proporcionar un método que comprende usar el Compuesto para la prevención de OAB o UI.

Aunque los métodos de la invención son aplicables a los mamíferos en general, también son aplicables en particular a los seres humanos.

Por lo tanto, es un objeto de la invención proporcionar un método para tratar a un paciente humano que sufre de vejiga sobreactiva ("OAB"), una expresión generalmente usada, y que se usa aquí, para un síndrome que engloba el tenesmo vesical, la necesidad imperiosa de orinar y la polaquiuria. El tratamiento de la incontinencia urinaria ("UI"), la pérdida involuntaria de orina que resulta de la incapacidad de la vejiga de retener orina como consecuencia de la necesidad imperiosa de orinar (tenesmo vesical), o del estrés físico o mental (incontinencia por estrés), se contempla como un objeto de la invención. El tratamiento de OAB o UI, como se contempla aquí, engloba la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz del Compuesto.

Otro objeto de la invención es proporcionar el Compuesto según el diagrama estructural I, útil para el tratamiento o prevención de OAB o UI.

Un objeto adicional de la invención es proporcionar sales farmacéuticamente aceptables, composiciones, mezclas y similares, del Compuesto, útiles para el tratamiento o prevención de OAB o UI.

Un objeto particular de la invención es proporcionar un método para tratar a un paciente humano que tiene OAB o UI, que comprende administrar una cantidad para el tratamiento eficaz de OAB o UI de (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metilbenzamida al paciente.

Otro objeto particular de la invención es proporcionar un método en el que (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metilbenzamida está en forma de una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

En los métodos de la invención, sales farmacéuticamente aceptables son aquellas sales tales como cloruro, sulfato, tosilato, mesilato, napsilato, besilato, fosfato, salicilato, tartrato, lactato, citrato, benzoato, succinato, acetato o un maleato.

En los métodos de la invención, se contempla que el tratamiento se administre mediante una vía fisiológicamente aceptable, tal como la oral, parenteral, rectal, mediante inhalación o insuflamiento.

En los métodos de la invención, se contempla que la (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metilbenzamida esté en una forma tal como en una cápsula, un comprimido, una disolución acuosa, una suspensión acuosa, una suspensión no acuosa, un supositorio, un aerosol o un polvo.

En ciertos métodos de la invención, también se contempla que la (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxo-perhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metilbenzamida se administrará en combinación con otros agentes terapéuticos. Se contempla que tales agentes sean agentes estrogénicos, sustancias progestágenas, agonistas alfa-adrenérgicos, agentes bloqueadores de receptores beta-adrenérgicos, agentes bloqueadores de receptores colinérgicos o agentes estimulantes del receptor colinérgico. Sin embargo, será manifiesto para los expertos en la técnica que el Compuesto se puede coadministrar con cualquier agente terapéutico o profiláctico, y/o un medicamento o combinación del mismo, que no sea médicamente incompatible con aquel.

Se contempla que la invención englobe composiciones farmacéuticas que comprenden (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metil-benzamida junto con un excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

También se prevé que la invención englobe composiciones farmacéuticas que incluyen agentes tales como agentes estrogénicos, sustancias progestágenas, agonistas alfa-adrenérgicos, agentes bloqueadores de receptores beta-adrenérgicos, agentes bloqueadores de receptores colinérgicos o agentes estimulantes de receptores colinérgicos.

Las composiciones farmacéuticas que están contempladas dentro del alcance de la invención incluyen aquellas que tienen formas tales como cápsulas, comprimidos, disoluciones acuosas, suspensiones acuosas, suspensiones no acuosas, supositorios, aerosoles y polvos.

En otro aspecto, la invención comprende sales farmacéuticamente ventajosas del Compuesto. Entre tales sales se encuentran los napsilatos, besilatos, salicilatos, tartratos, lactatos, benzoatos, succinatos, acetatos y maleatos. Una sal particularmente ventajosa desde el punto de vista farmacéutico es el maleato de (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metilbenzamida.

Otros aspectos, objetos y ventajas de esta invención serán manifiestos para los expertos en la técnica al estudiar la memoria descriptiva y las reivindicaciones anejas.

El Compuesto posee propiedades de unión a NK2R, e inhibe selectivamente la contracción de los tejidos de la vejiga. Sin embargo, se apreciará que, cuando se usa en el tratamiento de OAB, UI o una enfermedad relacionada, el Compuesto se administrará como una composición farmacéutica apropiada que comprende el Compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del Compuesto, tal como cloruro, sulfato, tosilato, mesilato, napsilato, besilato, fosfato, salicilato, tartrato, lactato, citrato, benzoato, succinato, acetato, maleato, o similar, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. Tales sales se preparan por métodos conocidos por los expertos en la técnica. La forma de una composición farmacéutica se adapta para la vía particular de administración escogida. Algunas formas incluyen, por ejemplo, comprimidos, cápsulas, disoluciones o suspensiones para administración oral; supositorios para administración rectal; disoluciones estériles o suspensiones para administración mediante infusión o inyección intravenosa o intramuscular; disoluciones o suspensiones nebulizadoras o en aerosoles para la administración mediante inhalación; o polvos, junto con diluyentes sólidos farmacéuticamente aceptables, tales como lactosa, para administración mediante insuflamiento.

Para la administración oral, se puede usar convenientemente un comprimido o cápsula que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz desde 0,1 mg hasta 250 mg (y típicamente 5 a 100 mg) del Compuesto. Para la administración mediante inhalación, el Compuesto se administrará a seres humanos en un intervalo de dosis diarias de, por ejemplo, 5 a 100 mg, en una única dosis, o dividida en dos a cuatro dosis diarias. De forma similar, para la inyección o infusión intravenosa o intramuscular, se puede usar convenientemente una disolución o suspensión estéril que contiene hasta 10% p/p (y típicamente 0,05 a 5% p/p) del Compuesto.

La dosis del Compuesto a administrar variará necesariamente según los principios bien conocidos en la técnica, teniendo en cuenta la vía de administración y la gravedad de la patología y el tamaño y edad del paciente bajo tratamiento. Generalmente, se contempla que el Compuesto se administrará como una dosis en el intervalo de alrededor de 0,01 a alrededor de 25 mg/kg, y más particularmente como una dosis en el intervalo de 0,1 a 5 mg/kg. Se entenderá que se pueden usar cantidades generalmente equivalentes de un N-óxido o una sal farmacéuticamente aceptable o una sal de amonio cuaternario del Compuesto.

Ejemplos

La acción del Compuesto como agente terapéutico para el tratamiento de OAB o UI, a través de su acción para unirse a receptores de NK2, se puede mostrar usando ensayos diseñados adecuadamente in vitro.

Ensayos In vitro Inhibición de la Contracción de la Arteria Pulmonar de Conejo Mediada por el Receptor de NK2

Se le administró a conejos blancos machos New Zealand una inyección letal de Nembutal (60 mg/kg) en una vena canulada de la oreja. Se inyectó en la vena de la oreja heparina, 0,0025 ml/kg de una disolución de 1000 U/ml, antes del Nembutal, a fin de disminuir la coagulación de la sangre. Se obtuvieron de cada animal las ramas izquierda y derecha de la arteria pulmonar. Los segmentos, con o sin endotelio, se suspendieron como anillos en baños para tejido encamisados con agua, mantenidos a 37ºC, que contienen una disolución salina fisiológica de la siguiente composición (mM): NaCl (119,0); KCl (4,6); CaCl_{2} (1,8); MgCl_{2} (0,5); NaH_{2}PO_{4} (1,0); NaHCO_{3} (25,0); glucosa (11,0); y se gasificó continuamente con 95% de O_{2}-5% de CO_{2}. La tensión inicial a la que se sometió cada tejido fue 2 g, que se mantuvo durante un período de equilibrado de 0,5 horas. Los cambios en la tensión se midieron en un polígrafo Grass vía transductores de fuerza Grass FT-03.

Para estudiar la contracción mediada por NK2, se retiró el endotelio vascular, y se usó como antagonista beta-Ala^{8}-NKA ("BANK"). Para estudiar la relajación mediada por NKI, se dejó intacto el endotelio, y se indujo la contracción del tejido mediante 3 x 10^{6} M de fenilefrina, añadida 60 minutos antes de obtener los efectos de concentración acumulativa y respuesta de Ac-[Arg^{6}, Sar^{9}, Met(O_{2})^{11}]-Sustancia P (6-11) ("ASMSP"). Al final de los experimentos de relajación se añadió papaverina (1 x 10^{-3} M), para determinar la magnitud máxima de relajación (definida como 100%). La respuesta a cada concentración de ASMSP se expresó como un porcentaje de la relajación total inducida por papaverina. Los valores de EC_{50} para todos los agonistas se calcularon a 50% de la respuesta máxima producida por cada agonista. Se calcularon los valores K_{B} aparentes para el compuesto, usando la ecuación estándar: K_{B} = [antagonista]/(relación de dosis - 1), en la que la relación de dosis fue igual al antilog [(-log molar EC_{50} sin antagonista) - (-log molar EC_{50} con antagonista)]. Los valores de K_{B} resultantes se expresaron como -log molar K_{B}.

Los valores de -log molar K_{B} para el Compuesto frente al receptor de NK2 de la arteria pulmonar de conejo valen como media 9,05 \pm 0,08, y son similares a los valores obtenidos en los bronquios humanos (véase, 8,62 \pm 0,14). Además, el Compuesto provocó un pequeño antagonismo de relajación de la arteria pulmonar de conejo inducida por ASMSP. Sin embargo, el valor de -log molar K_{B} para el antagonista frente a la respuesta mediada por el receptor NK1 es 1.096 veces más pequeño que frente a la respuesta mediada por el receptor NK2, en este tejido. Estos resultados demuestran que el Compuesto es un antagonista muy potente y selectivo del receptor NK2 de taquiquinina.

Ensayo de Unión al Receptor de Neuroquinina

La capacidad de una sustancia para antagonizar neuroquinina A ("NKA") que se une en el receptor NK2 se puede demostrar con un ensayo usando el receptor NK2 humano expresado en células de eritroleucemia de ratón ("MEL"). Las membranas de las células MEL ("MELM") tienen receptores NK2 de alta afinidad y selectivo que se unen a NKA, y la inhibición de la unión de NKA por antagonistas se puede demostrar como se describe en la patente U.S. 5.567.700, Ensayo A, cuya descripción se incorpora aquí en su totalidad.

Se prepararon MELM a partir de células MEL que contienen receptores NK2 de alta afinidad según un protocolo publicado (D. Aharony, et al., Mol. Pharmacol. 45:9-19, 1994), con las siguientes modificaciones: (a) se incluyó yodoacetamida (1 mM) en el tampón de homogeneización; (b) la homogeneización se realizó como se publicó, pero sólo una vez durante un período más corto de 10 segundos, y a una velocidad ajustada a 10; y (c) no se realizó la etapa de equilibrado con KCl/EDTA.

En una preparación típica, la unión de ^{3}H-NKA (2,5 nM) a MELM fue muy específica (96 + 1%) y linealmente dependiente de la concentración de proteína, detectándose una unión significativa a una concentración tan baja como 26 \mug de proteína/ml. Los experimentos de competición en el equilibrio demostraron unión a receptores de alta afinidad, de densidad elevada, con K_{D} = 4,2 \pm 0,35 nM, B_{max} = 6257 \pm 257 fmol/mg de proteína.

El radioligando 3H-neuroquinina A ("^{3}H-NKA"), como [4,5-^{3}H-Leu^{9}]-NKA (actividad específica típica, 117 Ci/mmol), se obtuvo mediante síntesis personalizada a partir de Cambridge Research Biochemicals, y tiene una pureza de >95%. El análisis mediante HPLC repetido demostró que el ligando fue estable cuando se almacenó en viales silanizados con 0,2% de mercaptoetanol, en argón. En el ensayo de unión a receptor no aparecía ninguna degradación o metabolismo del ligando.

El ensayo se llevó a cabo usando un tampón de incubación que consiste en 50 mM de Tris HCl (pH 7,4), 5 mM de Mg^{++}, 100 \muM de tiorfano, 1 nM de ^{3}H-NKA, 0,02% (p/v) de BSA, 30 mM de K^{+}, y 300 \muM de ditiotreitol; y la concentración de la proteína membránica se mantuvo a aproximadamente 0,05-0,025 mg por tubo. La unión no específica se definió normalmente con 1 \muM de NKA. Cada tubo recibió lo siguiente: 150 \mul de tampón de incubación, 20 \mul de ^{3}H-NKA, 20 \mul de Compuesto, NKA o tampón según sea apropiado, y 125 \mul de suspensión de membrana. La reacción se inició mediante adición de las membranas. Los tubos se incubaron durante 60 minutos a 25ºC en un baño de agua con agitación, y la reacción se terminó lavando los tubos con 10 ml de 50 mM de Tris HCl enfriado con hielo, usando un sistema de cosechado de células Brandel para recoger las membranas. Las membranas se recogieron usando filtros Whatman GF/B empapados previamente al menos 4 horas a temperatura ambiente en 0,01% (p/v) de polietilenimina. Los filtros se colocaron en viales de centelleo, y se leyeron en un contador de centelleo Beckman LS 6000LL. La constante de unión, Ki, se calculó mediante métodos estándares, y fue típicamente la media de varias de tales determinaciones.

La especificidad de la inhibición mediante el Compuesto se demostró inhibiendo la unión de NKA tritiada al receptor NK2, en comparación con la inhibición de la unión a un derivado tritiado de SP en una preparación de tejido selectiva para receptores NK1. El Ki, definido como la concentración de Compuesto a la que se logró una inhibición del 50% de la unión de NKA, fue 1,25 x 10^{-9} M. La inhibición del 50% de la unión de SP se logró a una concentración del Compuesto de 1,87 x 10^{-7} M.

Ensayos In vivo

Se apreciará además por aquellos expertos en la técnica que la eficacia de la invención se puede demostrar mediante ensayos estándares in vivo. Lo que sigue describe ciertos ensayos estándares.

Farmacología Pulmonar In vivo del Compuesto Frente a Disnea

Se indujo disnea (respiración abdominal fatigosa) en cobayas conscientes mediante administración en forma de aerosol de BANK, como se describió previamente (Kusner, et al., Euro. J. Pharmacol. 210:299-306, 1992). Todos los animales se pretrataron con atropina, 10 mg/kg ip 45 minutos; indometacina, 10 mg/kg ip 30 minutos; propranolol, 5 mg/kg ip 30 minutos; y tiorfano, 1 mg/ml aerosol durante 5 minutos de duración, comenzando 15 minutos antes de la exposición a fin de bloquear los receptores muscarínicos, ciclooxigenasa, receptores beta-adrenérgicos, y endopeptidasa neutra (EC 3.4.24.11), respectivamente. Los animales se pretrataron con Compuesto o vehículo a tiempos apropiados antes de la exposición a BANK en forma de aerosol durante 780 segundos. BANK se administró a seis animales simultáneamente, siendo administrado en forma de aerosol con un nebulizador ultrasónico DeVilbiss en una corriente de aire que fluye en una cámara de Plexiglas, a un caudal de 2 litros/min. Se registró para cada animal el tiempo requerido para que se produzca la disnea. Los animales que no sufrieron la disnea durante la exposición de 780 segundos se consideraron como completamente protegidos de los efectos del agonista mediante el compuesto de ensayo. Se incluyeron en cada experimento animales de control pretratados con vehículo. Los resultados se dan en valores de % de protección, en los que:

% de protección = \frac{(\text{tiempo de fármaco - tiempo medio de control) x 100}}{(\text{tiempo de aerosol máximo - tiempo de control medio)}}

El Compuesto administrado intravenosamente 30 minutos antes de la exposición provocó una inhibición dependiente de la dosis, con una ED_{50} de 0,13 \mumoles/kg (0,07 mg/kg). La eficacia máxima de 95% se obtuvo con una exposición de 0,3 \mumoles/kg. Igualmente, con la administración oral 120 minutos antes de la exposición, el Compuesto provocó una inhibición dependiente de la dosis con una ED_{50} de 0,75 \mumoles/kg (0,39 mg/kg). La eficacia máxima de 100% se obtuvo con una dosis oral de 3,0 \mumoles/kg del Compuesto. La relación de valores de ED_{50} oral a intravenoso fue 5,8. La duración de los estudios de acción realizados, usando una dosis de 2 mg/kg del Compuesto, demostró una protección de semivida de 146 minutos frente a la disnea inducida por BANK.

Mecánica Pulmonar In vivo en Cobayas Anestesiados

Se anestesiaron cobayas con uretano administrado mediante inyección intraperitoneal (1,5 g/kg), y se prepararon quirúrgicamente para el registro de la mecánica pulmonar como se describe previamente (C.K. Buckner, et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 267:1168-1175, 1993). El caudal se obtuvo mediante un neumotacógrafo Fleisch (no 0000) situado entre el extremo de una cánula traqueal y un transductor de presión diferencial Validyne. Se integró el caudal para proporcionar el volumen corriente. La presión transpulmonar se obtuvo midiendo la diferencia de presión entre una cánula intrapleural, situada en el espacio intercostal 5º ó 6º, y un adaptador lateral de la cánula traqueal con un transductor de presión diferencial Validyne. El ordenador Buxco Pulmonary Mechanics (modelo 6) calculó la resistencia pulmonar (R_{P}) y la distensibilidad pulmonar dinámica (C_{dyn}), basándose en una respiración a respiración. Los resultados de ordenador análogos se digitalizaron y se imprimieron en una impresora Texas Instruments.

Todos los fármacos se administraron intravenosamente, y se obtuvieron los efectos de dosis y respuesta de los agonistas midiendo la respuesta pico después de cada inyección de bolo. La respuesta máxima a un antagonista se definió como una conductancia cero (G_{L}, el recíproco de R_{P}). El valor pico de G_{L} se expresó como un porcentaje del valor de referencia antes de que se añadiese el agonista, y el valor de ED_{50} se calculó como la dosis que da como resultado una reducción de G_{L} hasta 50% de la línea de referencia. Todos los valores de ED_{50} se convirtieron al logaritmo negativo y se expresaron como -log ED_{50}. En cada animal sólo se obtuvo una curva de dosis y respuesta de agonista. El tiempo de pretratamiento con el Compuesto, antes de la administración del agonista, fue 30 minutos. Se administró intravenosamente el antagonista SR 140333 selectivo del receptor NK1, (3 \mumoles/kg), 25 minutos antes de que se usase BANK para provocar la broncoconstricción.

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El Compuesto se administró intravenosamente a 10 mmoles/kg 30 minutos antes de construir una relación de dosis y respuesta con BANK administrado intravenosamente. En estas condiciones experimentales, el Compuesto provocó un desplazamiento hacia la derecha de aproximadamente 196 veces de las curvas de respuesta para BANK. La administración oral del Compuesto (10 mmoles/kg), 120 minutos antes de BANK, provocó un desplazamiento hacia la derecha de aproximadamente 481 veces en la curva de dosis y respuesta inducida por BANK. La magnitud del desplazamiento fue similar para todas las respuestas medidas.

Se puede usar un ensayo in vivo, que sea complementario a los ensayos descritos anteriormente, para averiguar si un compuesto de ensayo es activo cuando se dosifica intravenosa u oralmente, y si un compuesto de ensayo muestra efectos inhibidores sobre las respuestas contráctiles de la vejiga.

Inhibición In vivo de la Contracción de la Vejiga en Ratas

Se anestesiaron ratas hembra Wistar, que pesan 200-300 gramos, mediante administración intramuscular de una mezcla de cetamina/xilazina (3/10 mg/kg, respectivamente). Para cada rata, se afeitó la región abdominal y la parte frontal del cuello. Para la cateterización yugular, la vena yugular derecha se expuso vía una pequeña incisión cervical anterior. El catéter, relleno con disolución salina al 0,9%, se introdujo aproximadamente 2,0 cm en la vena. El extremo distante del catéter se conectó a una jeringuilla para la administración del compuesto de ensayo cuando sea apropiado. Para la cateterización de la vejiga, ésta se expuso a través de una incisión abdominal en la línea central. Los uréteres se ataron con una sutura de seda 4-0, aproximadamente 2 cm por encima de la vejiga. Se realizaron pequeñas incisiones en cada uréter por encima de la ligadura, para permitir el drenaje desde los riñones. Se hizo pasar un catéter a través de la uretra próxima y el esfínter de la vejiga a la luz de la vejiga. El catéter se inundó con disolución salina, y se observó la potencia. La vejiga se vació manualmente y se infló con 0,3 ml de disolución salina. La cánula se unió a un transductor de presión Gould p23 ID, para registrar los cambios en la presión de la vejiga.

Se dejó un período de equilibrado de aproximadamente 15 minutos para la estabilización de los animales. Cada rata se pretrató con administración intravenosa de 10 mg/kg de tiorfano, para inhibir la endopeptidasa neutra 3.4.24.11. El tiorfano se administró 15 minutos antes de la exposición al agonista, BANK.

Para estudios intravenosos, se administró a los animales 1-3 nmoles/kg de BANK intravenosamente, y se registró la contracción de la vejiga como un incremento en la presión de la vejiga intravesical, en un polígrafo Grass 7D. Se dejó que la respuesta decayese durante un período de equilibrado de 15 minutos antes de la administración intravenosa del compuesto (0,2-5 \mumoles/kg, vehículo de PEG 400-disolución salina al 5%). Posteriormente, transcurrió un período adicional de equilibrado, de 15 minutos, antes de que se repitiese la administración de una dosis equivalente de BANK. Se realizaron estudios preliminares para establecer la equivalencia de las respuestas contráctiles de la vejiga a administraciones múltiples de BANK. Los efectos inhibidores del Compuesto se calcularon como la diferencia en porcentaje entre la respuesta a BANK en presencia y en ausencia del Compuesto.

Para establecer los efectos de dosis y respuesta del compuesto oral, se administró a las ratas el antagonista (0,2-5 \mumoles/kg, vehículo de PEG 400-disolución salina al 5%) mediante alimentación por sonda nasogástrica 1 hora antes de la administración de BANK. La duración de los estudios de acción se llevó a cabo tras la administración oral del Compuesto (1,2 \mumoles/kg, vehículo de PEG 400-disolución salina al 5%) en los tiempos señalados, antes de la administración de BANK. Las respuestas se calcularon como la diferencia en porcentaje entre la respuesta a BANK en presencia de Compuesto, en comparación con los controles tratados ficticiamente.

Para todos los estudios, se administró a cada animal una única dosis de Compuesto. Los resultados experimentales se expresaron como el % de cambio según la media más o menos el Error Estándar de la Media ("\pm S.E.M.") del nivel de referencia.

El Compuesto es activo y selectivo en este ensayo cuando se dosifica intravenosa y oralmente en el intervalo de 0,2 y 5 \mumoles/kg de peso corporal. Cuando se administra intravenosamente, la dosis inhibidora del Compuesto que provocó una atenuación del 50% de la contracción inducida por BANK fue 0,13 \mumoles/kg, o aproximadamente 0,07 mg/kg. La eficacia máxima del Compuesto a 3,5 \mumoles/kg (1,8 mg/kg), frente a BANK intravenoso (3 nmoles/kg), fue aproximadamente 100%.

Cuando se administra oralmente, una dosis inhibidora del Compuesto que provocó una atenuación del 50% de la contracción inducida por BANK fue 1,0 \mumoles/kg, o aproximadamente 0,5 mg/kg. La eficacia máxima lograda con el Compuesto a 5 \mumoles/kg (2,5 mg/kg) fue alrededor de 80%. Se demostró que la duración de acción del Compuesto era alrededor de 6 h, con una semivida aproximada de 3,5 h.

No se ha encontrado que el Compuesto muestre ninguna indicación de defectos secundarios adversos en animales de ensayo de laboratorio a varios múltiplos de la dosis mínima eficaz.

Como se usa aquí, excepto que se establezca de otro modo:

(i)

las temperaturas se dan en grados Celsius ("ºC"); las operaciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente, esto es, a una temperatura en el intervalo de 18-25ºC;

(ii)

las disolución orgánicas se secaron sobre MgSO_{4} anhidro; la evaporación del disolvente se llevó a cabo usando un evaporador giratorio a presión reducida (600-4000 pascales; 4,5-30 mm Hg) con una temperatura del baño de hasta 60ºC;

(iii)

cromatografía significa cromatografía ultrarrápida; la cromatografía de fase inversa significa cromatografía ultrarrápida sobre un soporte revestido con octadecilsilano ("ODS") que tiene un tamaño de partículas de 32-74 \mum, conocido como "PREP-40-ODS" (Art. 731740-100 de Bodman Chemicals, Aston, PA, USA); la cromatografía de capa fina ("TLC") se llevó a cabo sobre placas de gel de sílice;

(iv)

en general, el transcurso de las reacciones fue seguido por TLC, y los tiempos de reacción se dan sólo para ilustración;

(v)

los puntos de fusión están sin corregir, y "desc." indica descomposición; los puntos de fusión dados son los obtenidos para los materiales preparados como se describe; se puede producir polimorfismo como resultado del aislamiento de materiales con diferentes puntos de fusión, en algunas preparaciones;

(vi)

los productos finales tuvieron espectros de resonancia magnética nuclear protónica ("RMN") satisfactorios;

(vii)

los rendimientos se dan sólo para ilustración y no son necesariamente los que se pueden obtener mediante un desarrollo diligente del procedimiento; las preparaciones se repitieron si se requirió más material;

(viii)

cuando se dan, los datos de RMN están en forma de valores de delta para los protones de diagnóstico principales, dados en partes por millón ("ppm") con relación a tetrametilsilano ("TMS") como patrón interno, determinados a 300 MHz usando perdeuteriodimetilsulfóxido ("DMSO-d_{6}") como disolvente; se usan las abreviaturas convencionales para la forma de las señales; las constantes de acoplamiento (J) se dan en Hz; Ar designa un protón aromático cuando se realiza tal asignación;

(ix)

los símbolos químicos tienen sus significados habituales; se usan las unidades y símbolos de SI;

(x)

las presiones reducidas se dan como presiones absolutas en pascales ("Pa"); las presiones elevadas se dan en presiones manométricas, en bares;

(xi)

las relaciones de disolventes se dan en términos de volumen:volumen ("v/v"); y

(xii)

los espectros de masas ("MS") se llevaron a cabo con una energía electrónica de 70 electronvoltios en el modo de impacto electrónico ("EI") usando una sonda de exposición directa; cuando se indica, la ionización se efectuó mediante ionización química ("CI") o mediante bombardeo con átomos rápidos ("FAB"); se dan los valores para m/z; generalmente, sólo se dan los iones que indican la masa progenitora.

Ejemplos químicos Ejemplo 1 Dihidrocloruro de (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metilbenzamida

Se calentó a reflujo durante 2 horas una disolución agitada de (S)-N-[4-[4-(3-aminopropilamino)-piperidino]-2-(3,4-diclorofenil)butil]-N-metilbenzamida (0,356 g) y 1,1'-carbonildiimidazol (0,157 g) en cloroformo (6 ml). La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano, se lavó (bicarbonato sódico acuoso), se secó, se evaporó y se purificó mediante cromatografía, con diclorometano:metanol (gradiente 98:2, 90:10) como eluyente. El material resultante se disolvió en diclorometano, precipitó como la sal de hidrocloruro con cloruro de hidrógeno etéreo, se evaporó, y se colocó a alto vacío toda la noche para dar el compuesto del título como un sólido blanco. MS: m/z = 517 (M+1); Análisis para C_{27}H_{34}Cl_{2}N_{4}O_{2}\cdot2,60 HCl\cdot0,13 (C_{2}H_{5})_{2}O: Calculado: C, 53,14; H, 6,14; N, 9,00; Encontrado: C, 53,14; H, 6,31; N, 9,16.

El intermedio, (S)-N-[4-[4-(3-aminopropilamino)-piperidino]-2-(3,4-diclorofenil)butil]-N-metilbenzamida, se preparó según lo siguiente:

1a. 1-Benciloxicarbonil-4-(3-aminopropilamino)piperidina

Se añadió 1-benciloxicarbonil-4-oxo-piperidina (12,0 g) en metanol (72 ml), a una disolución agitada de 1,3-diaminopropano (5,2 ml) y ácido acético (8,8 ml) en metanol (72 ml). Después de 15 minutos, se añadió, de una sola vez, cianoborohidruro de sodio (9,7 g) en metanol (72 ml). Después de agitarla toda la noche, la mezcla de reacción se evaporó, y el residuo se disolvió con ácido clorhídrico 1 N (100 ml). Se añadió ácido clorhídrico concentrado gota a gota, y se continuó la agitación hasta que cesó el desprendimiento de gas. La mezcla acuosa ácida se lavó con diclorometano, se basificó hasta pH 10 con hidróxido sódico 10 N, y se extrajo con diclorometano. Los extractos de diclorometano se secaron y se evaporaron para dar el compuesto del título como un aceite viscoso. MS: m/z = 292 (M+1); RMN (CD_{3}OD): 7,34 (m, 5), 5,10 (s, 2), 4,13 (m, 2), 2,86 (m, 2), 2,65 (m, 5), 1,90 (m, 2), 1,65 (m, 2), 1,23 (m, 2).

1b. 1-Benciloxicarbonil-4-[2,2,2-trifluoroacetil)-[3-(2,2,2-trifluoroacetilamino)propil]amino]piperidina

Se añadió anhídrido trifluoroacético (10,5 ml) a una disolución de 1-benciloxi-carbonil-4-(3-aminopropilamino)-piperidina (7,5 g) y trietilamina (8,3 ml) en cloroformo (90 ml), a 0ºC. Después de agitarla toda la noche, la mezcla de reacción se diluyó con diclorometano, se lavó (ácido clorhídrico 1 N, bicarbonato sódico acuoso), se secó, se evaporó, y se purificó mediante cromatografía, con diclorometano:metanol (98:2) como eluyente, para dar la piperidina trifluoroacetilada como un aceite viscoso. RMN: 7,36 (m, 5), 5,14 (s, 2), 4,35 (m, 2), 3,93 (m, 1), 3,35 (m, 4), 2,83 (m, 2), 1,87-1,74 (m, 6); MS: m/z = 484 (M+1).

1c. 4-[(2,2,2-Trifluoroacetil)[3-(2,2,2-trifluoroacetilamino)propil]amino]piperidina

Se agitó toda la noche, en un bar de hidrógeno, una disolución de 1-benciloxicarbonil-4-[(2,2,2-trifluoroacetil)-[3-(2,2,2-trifluoroacetil-amino)propil]-amino]piperidina (1,85 g) e hidróxido de paladio al 20% sobre carbón (0,340 g), en etanol (30 ml). La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas, y el filtrado se evaporó para dar el compuesto del título (0,950 g) como un aceite viscoso. RMN (CD_{3}OD): 4,39 (m, 1), 3,98 (m, 1), 3,30 (m, 3), 2,95 (m, 1), 2,82 (m, 1), 2,65 (m, 2), 2,01 (m, 2), 1,75 (m, 2), 1,32 (m, 2); MS: m/z = 350 (M+1).

1d. (S)-N-[2-(3,4-Diclorofenil)-4-[4-[(2,2,2-trifluoroacetil)-[2-(2,2,2-trifluoroacetil-amino)etil]amino]-piperidi-no]butil]-N-metilbenzamida

Se añadió (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-oxobutil]-N-metilbenzamida (0,823 g), en metanol (4 ml), a una disolución de 4-[(2,2,2-trifluoroacetil)-[3-(2,2,2-trifluoro-acetilamino)propil]amino]piperidina (0,600 g) y ácido acético (0,20 ml), en metanol (8 ml). Después de 5 minutos, se añadió, de una sola vez, cianoborohidruro de sodio (0,220 g) en metanol (4 ml). Después de agitarla durante 3 horas, la mezcla de reacción se diluyó con bicarbonato sódico acuoso, se agitó durante 30 minutos, y se extrajo con diclorometano. Los extractos orgánicos se secaron, se evaporaron y se purificaron mediante cromatografía, con diclorometano:metanol (gradiente 98:2, 90:10) como eluyente. El material resultante se disolvió en diclorometano, precipitó como la sal de hidrocloruro con cloruro de hidrógeno etéreo, se evaporó, y se colocó a alto vacío toda la noche para dar el compuesto del título como un sólido blanco. MS: m/z = 683 (M + 1).

1e. (S)-N-[4-[4-(3-Aminopropilamino)piperidino]-2-(3,4-diclorofenil)butil]-N-metilbenzamida

Se agitó durante 1 hora una disolución de la (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-[(2,2,2-trifluoroacetil)-[3-(2,2,2-trifluoroacetilamino)propil]amino]-piperidino]-butil]-N-metilbenzamida bruta (2,5 g) en hidróxido potásico acuoso al 20% (8,5 ml) y en metanol (11 ml). La mezcla de reacción se acidificó hasta pH 2 con ácido clorhídrico 1 N, y se lavó 3 veces con diclorometano. La fase acuosa se basificó entonces hasta pH 10 con hidróxido sódico 10 N, y se extrajo con diclorometano. Los extractos se secaron y se evaporaron para dar el compuesto del título como un aceite viscoso. MS: m/z = 491 (M + 1).

Ejemplo 2 Dihidrocloruro de (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metilbenzamida

Se calentó a reflujo durante 2 horas una disolución agitada de (S)-N-[4-[4-(3-aminopropilamino)piperidino]-2-(3,4-diclorofenil)butil]-N-metilbenzamida (0,356 g) y 1,1'-carbonildiimidazol (0,157 g), en cloroformo (6 ml). La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano, se lavó (bicarbonato sódico acuoso), se secó, se evaporó, y se cromatografió con diclorometano:metanol (gradiente 98:2, 90:10) como eluyente. El material resultante se disolvió en diclorometano, precipitó como la sal de hidrocloruro con cloruro de hidrógeno etéreo, se evaporó, y se colocó a alto vacío toda la noche para dar el compuesto del título como un sólido blanco; MS: m/z = 517 (M+1); Análisis para C_{27}H_{34}Cl_{2}N_{4}O_{2}\cdot2,60 HCl\cdot0,13 (C_{2}H_{5})_{2}O: Calculado: C, 53,14; H, 6,14; N, 9,00; Encontrado: C, 53,14; H, 6,31; N, 9,16.

Ejemplo 3 Sal de maleato de (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metilbenzamida

Se trató gota a gota una disolución agitada, a 50ºC, de (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metilbenzamida (22,29 g) en acetato de etilo (446 ml), con una disolución de ácido maleico (5 g) en etanol absoluto (44,6 ml). Después de la terminación de la adición del ácido maleico, la suspensión resultante se agitó durante 30 minutos a 50ºC, se enfrió lentamente hasta la temperatura ambiente durante 4 h, y después se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La suspensión se filtró, se lavó con acetato de etilo y se secó a vacío a 40ºC para dar el compuesto del título como un polvo cristalino blanco.

Claims (11)

1. El uso de (S)-N-[2-(3,4-diclorofenil)-4-[4-(2-oxoperhidropirimidin-1-il)piperidino]butil]-N-metilbenzamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma en la preparación de un medicamento para tratar o prevenir vejiga sobreactiva o incontinencia urinaria.

2. El uso según la reivindicación 1, de una sal farmacéuticamente aceptable seleccionada de un cloruro, sulfato, tosilato, mesilato, napsilato, besilato, fosfato, salicilato, tartrato, lactato, citrato, benzoato, succinato, y acetato o un maleato.

3. El uso según la reivindicación 1, en la preparación de un medicamento adecuado para la coadministración con uno o más agentes terapéuticos médicamente compatibles.

4. El uso según la reivindicación 3, en el que dichos otros agentes terapéuticos médicamente compatibles se seleccionan de un agente estrogénico, una sustancia progestágena, un agonista alfa-adrenérgico, un agente bloqueador del receptor beta-adrenérgico, un compuesto bloqueador del receptor colinérgico o un fármaco estimulador del receptor colinérgico.

5. El uso según la reivindicación 1, en la preparación de un medicamento adecuado para la administración oral, parenteral, rectal, mediante inhalación o mediante insuflamiento.

6. El uso según la reivindicación 1, en la preparación de un medicamento adecuado para la administración oral.

7. El uso según la reivindicación 1, en la preparación de un medicamento que comprende un comprimido o cápsula que contiene alrededor de 0,1 mg hasta alrededor de 250 mg de dicho compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

8. El uso según la reivindicación 7, que comprende un comprimido o cápsula que contiene alrededor de 5 mg hasta alrededor de 100 mg de dicho compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

9. El uso según la reivindicación 1, en la preparación de un medicamento que comprende alrededor de 0,1 mg hasta alrededor de 250 mg de dicho compuesto adecuado para la administración mediante inhalación como una única dosis o dividido en dos, tres o cuatro dosis diarias.

10. El uso según la reivindicación 9, en la preparación de un medicamento que comprende alrededor de 5 mg hasta alrededor de 100 mg de dicho compuesto adecuado para la administración mediante inhalación como una única dosis o dividido en dos, tres o cuatro dosis diarias.

11. El uso según la reivindicación 1, en la preparación de un medicamento adecuado para la administración como una cápsula, un comprimido, una disolución acuosa, una suspensión acuosa, una suspensión no acuosa, un supositorio, un aerosol o un polvo.