ES2263687T3 - Inhibidores tripeptidicos de la hepatitis c. - Google Patents

Inhibidores tripeptidicos de la hepatitis c.

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ES2263687T3
ES2263687T3 ES01997024T ES01997024T ES2263687T3 ES 2263687 T3 ES2263687 T3 ES 2263687T3 ES 01997024 T ES01997024 T ES 01997024T ES 01997024 T ES01997024 T ES 01997024T ES 2263687 T3 ES2263687 T3 ES 2263687T3
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Abstract

Un compuesto que tiene la Fórmula en la que: (a) R1 es alquilo C1-8, cicloalquilo C3-7 o alquilcicloalquilo C4-10, los cuales están todos opcionalmente sustituidos de una a tres veces con halógeno, ciano, nitro, alcoxi C1-6, amido, amino o fenilo, o R1 es arilo C6 o C10 que está opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno, ciano, nitro, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, amido, amino o fenilo; (b) m es 1 ó 2; (c) n es 1 ó 2; (d) R2 es alquilo C1-6, alquenilo C2-6 o cicloalquilo C3-7, cada uno opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno, o R2 es H; (e) R3 es alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con fenilo, alquenilo C3-12, cicloalquilo C3-7, o alquilcicloalquilo C4-10, en el que el cicloalquilo o alquilcicloalquilo están opcionalmente sustituidos con hidroxi, alquilo C1-6, alquenilo C2-6 o alcoxi C1-6; o R3 junto con el átomo de carbono al que está unido forma un grupo cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido con alquenilo C2-6; (f) Y es H, fenilo sustituido con nitro, piridilo sustituido con nitro, o alquilo C1-6 en el que dicho alquilo está opcionalmente sustituido con ciano, OH o cicloalquilo C3-7; (g) B es H, alquilo C1-6, R4-(C=O)-, R4O(C=O)-, R4- N(R5)-C(=O)-, R4-N(R5)-C(=S)-, R4SO2-, o R4-N(R5)-SO2-; (h) R4 es (i) alquilo C1-10 opcionalmente sustituido con fenilo, carboxilo, alcanoilo C1-6, 1-3 halógenos, hidroxi, -OC(O)-alquilo(C1-6), alcoxi C1-6, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C1-6, amido o (alquil inferior)-amido; o -O-fenilo opcionalmente sustituido con halógeno o alcoxi C1-6; (ii) cicloalquilo C3- 7, cicloalcoxi C3-7 o alquilcicloalquilo C4-10, todos opcionalmente sustituidos con hidroxi, carboxilo, (alcoxi C1- 6)carbonilo, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C1-6, amido o (alquil inferior)-amido; (iii) amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C1-6; amido; o (alquil inferior)amido; (iv) arilo C6 o C10 o aralquilo C7- 16, todos opcionalmente sustituidos con alquilo C1-6, halógeno, nitro, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C1-6; o (v) Het o (alquil inferior)-Het, ambos opcionalmente sustituidos con alquilo C1-6, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C1-6; (vi) biciclo(1.1.1)pentano; (vii) -C(O)-O- alquilo(C1-6), alquenilo C2-6, alquinilo C2-6; y (i) R5 es H o alquilo C1-6, dicho alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con 1-3 halógenos; o una sal, solvato o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.

Description

Inhibidores tripeptídicos de la hepatitis C.
Antecedentes de la invención
El virus de la hepatitis C (VHC) es el agente etiológico principal del 90% de los casos de hepatitis no A, no B (Choo y col., 1989, Kuo y col., 1989). La incidencia de la infección por el VHC se está convirtiendo cada vez más en un problema grave de salud pública, con 2-15% de los individuos del mundo infectados. Aunque la infección primaria por el VHC a menudo es asintomática, la mayoría de las infecciones por el VHC progresan a un estado crónico que puede persistir durante décadas. De los que tienen infecciones crónicas por el VHC, se cree que aproximadamente 20-50% finalmente desarrollarán una enfermedad hepática crónica (p. ej., cirrosis) y 20-30% de los casos conducirá a insuficiencia hepática y cáncer de hígado. Se espera que cuando la población actual infectada por el VHC envejezca, se triplique la morbidez y mortalidad asociadas con el VHC.
Un tratamiento aprobado para la infección por el VHC usa interferón (IFN) que afecta indirectamente a la infección por el VHC estimulando la respuesta antivírica del hospedante. Sin embargo, el tratamiento con IFN es en gran medida ineficaz, produciéndose una respuesta antivírica sostenida en menos de 30% de los pacientes tratados. Además, el tratamiento con IFN induce un conjunto de efectos secundarios de diferente gravedad en más de 90% de los pacientes (p. ej., pancreatitis aguda, depresión, retinopatía, tiroiditis). La terapia con una combinación de IFN y ribavirina ha proporcionado una tasa de respuesta ligeramente más sostenida, pero no ha aliviado los efectos secundarios inducidos por el IFN.
Una estrategia general para el desarrollo de agentes antivíricos ha sido inactivar las enzimas codificadas víricamente esenciales para la replicación del virus. En el caso del VHC un inhibidor que se dirigiera selectivamente a la serina proteasa del VHC, NS3, probablemente proporcionaría una terapia ventajosa para tratar las infecciones por el VHC en pacientes por inhibición de la replicación del VHC.
Entre los compuestos que han demostrado eficacia para inhibir la replicación del VHC, como inhibidores selectivos de la serina proteasa NS3 del VHC, están los compuestos tripeptídicos descritos en la solicitud internacional número PCT/CA99/00736, publicación nº WO 00/09543, titulada tripéptidos inhibidores de la hepatitis C. Sin embargo, estos compuestos no inhiben suficientemente la serina proteasa del VHC o no tienen suficiente potencia, y por lo tanto, no pueden proporcionar un tratamiento óptimo a los pacientes infectados por el VHC.
Lo que se necesita son compuestos, útiles para tratar pacientes infectados por el VHC, por inhibición selectiva de la serina proteasa NS3 del VHC, en los que estos compuestos tengan una permeabilidad celular adecuada para inhibir suficientemente la replicación del VHC en el cuerpo del paciente.
Resumen de la invención
La presente invención se refiere a compuestos, o sales, solvatos o profármacos de los mismos farmacéuticamente aceptables, que tienen la estructura de la Fórmula I
1
en la que:
(a) R_{1} es alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, los cuales están todos opcionalmente sustituidos de una a tres veces con halógeno, ciano, nitro, alcoxi C_{1-6}, amido, amino o fenilo,
o R_{1} es arilo C_{6} o C_{10} que está opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno, ciano, nitro, alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, amido, amino o fenilo;
(b) m es 1 ó 2;
(c) n es 1 ó 2;
(d) R_{2} es alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6} o cicloalquilo C_{3-7}, cada uno opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno, o R_{2} es H;
(e) R_{3} es alquilo C_{1-8} opcionalmente sustituido con fenilo, alquenilo C_{3-12}, cicloalquilo C_{3-7}, o alquilcicloalquilo C_{4-10}, en el que el cicloalquilo o alquilcicloalquilo están opcionalmente sustituidos con hidroxi, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6} o alcoxi C_{1-6}; o R_{3} junto con el átomo de carbono al que está unido forma un grupo cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con alquenilo C_{2-6};
(f) Y es H, fenilo sustituido con nitro, piridilo sustituido con nitro, o alquilo C_{1-6} en el que dicho alquilo está opcionalmente sustituido con ciano, OH o cicloalquilo C_{3-7};
(g) B es H, alquilo C_{1-6}, R_{4}-(C=O)-, R_{4}O(C=O)-, R_{4}-N(R_{5})-C(=O)-, R_{4}-N(R_{5})-C(=S)-, R_{4}SO_{2}-, o R_{4}-N(R_{5})-SO_{2}-;
(h) R_{4} es (i) alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con fenilo, carboxilo, alcanoilo C_{1-6}, 1-3 halógenos, hidroxi, -OC(O)-alquilo(C_{1-6}), alcoxi C_{1-6}, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; o -O-fenilo opcionalmente sustituido con halógeno o alcoxi C_{1-6}; (ii) cicloalquilo C_{3-7}, cicloalcoxi C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, todos opcionalmente sustituidos con hidroxi, carboxilo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; (iii) amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; amido; o (alquil inferior)amido; (iv) arilo C_{6} o C_{10} o aralquilo C_{7-16}, todos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, halógeno, nitro, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; o (v) Het o (alquil inferior)-Het, ambos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; (vi) biciclo(1.1.1)pentano; (vii) -C(O)-O-alquilo(C_{1-6}), alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6}; y
(i) R_{5} es H o alquilo C_{1-6}, dicho alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con 1-3 halógenos;
o una sal, solvato o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.
La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica útil para inhibir la proteasa NS3 del VHC, o para tratar pacientes infectados por el virus de la hepatitis C, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención, o una sal, solvato o profármaco del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La presente invención se refiere además al uso, en la fabricación de un medicamento para tratar mamíferos infectados por el virus de la hepatitis C, de un compuesto de la presente invención, o una sal, solvato o profármaco del mismo.
Adicionalmente, la presente invención se refiere al uso, en la fabricación de un medicamento, para inhibir la proteasa NS3 del VHC, de un compuesto de la presente invención, o una sal, solvato o profármaco del mismo.
Descripción detallada de la invención
Tal como se usa en el presente documento, se aplican las siguientes definiciones salvo que se indique lo contrario. Respecto a los casos en los que se usa (R) o (S) para indicar la configuración de un sustituyente, se hace en el contexto del compuesto entero y no en el contexto del sustituyente solo.
El término "halógeno" tal como se usa en el presente documento, significa un sustituyente halógeno seleccionado de bromo, cloro, flúor o yodo.
La expresión "alquilo C_{1-6}" tal como se usa en el presente documento, significa sustituyentes alquilo acíclicos, de cadena lineal o ramificada, que contienen de 1 a 6 átomos de carbono, e incluye, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, butilo, terc-butilo, hexilo, 1-metiletilo, 1-metilpropilo, 2-metipropilo, 1,1-dimetiletilo.
La expresión "alquenilo C_{3-10}" tal como se usa en el presente documento, solo o combinado con otro radical, significa un radical alquilo como se ha definido antes que contiene de 2 a 10 átomos de carbono, y que además contiene al menos un doble enlace. Por ejemplo alquenilo incluye alilo y etenilo.
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Halógenoalquilo se refiere a un radical alquilo que está sustituido con uno o más radicales halógeno, tal como trifluorometilo.
La expresión "alcoxi C_{1-6}" tal como se usa en el presente documento, significa el radical -O(alquilo C_{1-6}) en el que el alquilo es como se ha definido antes, que contiene hasta seis átomos de carbono. Alcoxi incluye, por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, 1-metiletoxi, butoxi y 1,1-dimetiletoxi. El último radical normalmente se conoce como terc-butoxi.
La expresión "halógenoalcoxi C_{1-6}" tal como se usa en el presente documento, significa el radical -O(halógenoalquilo C_{1-6}) en el que el halógenoalquilo es como se ha definido antes.
La expresión “alcanoilo C_{1-6}” tal como se usa en el presente documento, significa radicales 1-oxoalquilo lineales o ramificados que contienen de 1 a 6 átomos de carbono e incluye, por ejemplo, formilo, acetilo, 1-oxopropilo (propionilo), 2-metil-1-oxopropilo, 1-oxohexilo y similares.
La expresión "cicloalquilo C_{3-7}" tal como se usa en el presente documento, significa un sustituyente cicloalquilo que contiene de 3 a 7 átomos de carbono e incluye, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo.
Esta expresión también incluye un grupo cíclico "espiro" tal como espirociclopropilo o espirociclobutilo:
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La expresión "cicloalquilo insaturado" incluye, por ejemplo, ciclohexenilo.
La expresión "alquilcicloalquilo C_{4-10}" tal como se usa en el presente documento, significa un radical cicloalquilo que contiene de tres a siete átomos de carbono unidos a un radical alquilo, y los radicales unidos contienen hasta diez átomos de carbono, por ejemplo ciclopropilmetilo, ciclopentiletilo, ciclohexilmetilo, ciclohexiletilo o cicloheptiletilo.
La expresión "cicloalcoxi C_{3-7}" tal como se usa en el presente documento, significa un grupo cicloalquilo C_{3-7} unido a un átomo de oxígeno, tal como por ejemplo, butiloxi o ciclopropiloxi.
La expresión "arilo C_{6} o C_{10}" tal como se usa en el presente documento, significa un grupo monocíclico aromático que contiene 6 átomos de carbono o un grupo bicíclico aromático que contiene 10 átomos de carbono, por ejemplo, arilo incluye fenilo, 1-naftilo o 2-naftilo.
La expresión "aralquilo C_{7-16}" tal como se usa en el presente documento, significa un arilo C_{6} o C_{10} como se ha definido antes, unido a un grupo alquilo, e incluye, por ejemplo, bencilo, butilfenilo y 1-naftilmetilo.
El término "aralquil-amino" tal como se usa en el presente documento, significa un grupo amino sustituido con un grupo aralquilo C_{7-16}, tal como el siguiente aralquil-amino
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La expresión "(alquil C_{1-6})-amida" tal como se usa en el presente documento, significa una amida monosustituida con un alquilo C_{1-6}, tal como
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La expresión "carboxi(alquilo C_{1-6})" tal como se usa en el presente documento, significa un grupo carboxilo (COOH) unido por un grupo alquilo C_{1-6} como se ha definido antes, e incluye por ejemplo, ácido butírico.
El término "heterociclo" tal como se usa en el presente documento, significa un radical monovalente obtenido por eliminación de un hidrógeno de un heterociclo saturado o insaturado (incluyendo aromático), de cinco, seis o siete miembros, que contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre. Además, el término heterociclo incluye heterociclos como se han definido antes, que están condensados con una o más estructuras anulares distintas. Los ejemplos de heterociclos adecuados incluyen, pero no se limitan pirrolidina, tetrahidrofurano, tiazolidina, pirrol, tiofeno, diazepina, 1H-imidazol, isoxazol, tiazol, tetrazol, piperidina, 1,4-dioxano, 4-morfolina, piridina, pirimidina, tiazolo[4,5-b]-piridina, quinolina, o indol, o los siguientes heterociclos:
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La expresión "alquil(C_{1-6})-heterociclo" tal como se usa en el presente documento, significa un radical heterocíclico como se ha definido antes unido por un grupo alquilo lineal o ramificado, en el que el alquilo es como se ha definido antes y contiene de 1 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos de alquil(C_{1-6})-Het incluyen:
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Cuando se usan para nombrar los compuestos de la presente invención, las denominaciones "P1', P1, P2, P3 y P4", tal como se usan en el presente documento, señalan las posiciones relativas de los restos aminoácidos de una unión de inhibidor de proteasa respecto a la unión del sustrato de escisión peptídico natural. En el sustrato natural la escisión se produce entre P1 y P1' donde las posiciones no cebadoras indican los aminoácidos partiendo del extremo C-terminal del sitio de escisión natural del péptido extendiéndose hacia el extremo N; mientras que las posiciones de cebador van desde el extremo N-terminal de la designación del sitio de escisión y se extienden al extremo C. Por ejemplo, P1' se refiere a la primera posición alejada del extremo derecho del extremo C del sitio de escisión (es decir, primera posición del extremo N); mientras que P1 empieza la numeración desde el lado izquierdo del sitio de escisión del extremo C, P2: segunda posición desde el extremo C, etc.) (véase Berger A. & Schechter I., Transactions of the Royal Society London series (1970), B257, 249-264].
Así, en los compuestos de fórmula I, las partes de "P1' a P4" de la molécula se indican a continuación:
7
Tal como se usa en el presente documento, la expresión "ácido 1-aminociclopropil-carboxílico" (Acca) se refiere a un compuesto de fórmula:
8
Tal como se usa en el presente documento, la expresión "terc-butilglicina" se refiere a un compuesto de fórmula:
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El término "resto" con referencia a un aminoácido o derivado de aminoácido, significa un radical derivado del correspondiente \alpha-aminoácido por eliminación del hidroxilo del grupo carboxi y un hidrógeno del grupo \alpha-aminoácido. Por ejemplo, los términos Gln, Ala, Gly, Ile, Arg, Asp, Phe, Ser, Leu, Cis, Asn, Sar y Tyr representan los "restos" de L-glutamina, L-alanina, glicina, L-isoleucina, L-arginina, ácido L-aspártico, L-fenilalanina, L-serina, L-leucina, L-cisteína, L-asparagina, sarcosina y L-tirosina, respectivamente.
La expresión "cadena lateral" con referencia a un aminoácido o resto aminoácido significa un grupo unido al átomo de carbono \alpha del \alpha-aminoácido. Por ejemplo, el grupo R de la cadena lateral para la glicina es hidrógeno, para la alanina es metilo, para la valina es isopropilo. Para los grupos R o cadenas laterales específicos de los \alpha-aminoácidos, se hace referencia al texto de A.L. Lehninger de Bioquímica (véase el capítulo 4).
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Para los compuestos de la presente invención, se prefiere que m sea 2. También se prefiere que n sea 1. Además se prefiere que R_{2} sea etilo o etenilo. Se prefiere además que R_{1} sea ciclopropilo, ciclobutilo o un fenilo opcionalmente sustituido.
Adicionalmente, se prefiere que R_{1} sea ciclopentilo.
En una realización preferida, los compuestos de la presente invención tienen la estructura de Fórmula II
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Fórmula II
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en la que R_{3}, B e Y son como se han definido para la Fórmula I, mientras que R_{11} es alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, naftilo, o fenilo, en el que dicho fenilo está opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno, ciano, nitro, alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, amido o fenilo. Además, R_{12} es alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6} o H. La presente invención comprende además sales, solvatos, profármacos de compuestos de Fórmula II, así como composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos de Fórmula II, o sales, solvatos o profármacos de los mismos.
En otra realización preferida, los compuestos de la presente invención tienen la estructura de Fórmula III
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Fórmula III
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en la que R_{3}, B e Y son como se han definido en la Fórmula I, y R_{11} es como se ha definido en la Fórmula II. Preferiblemente, en los compuestos de Fórmula III, R_{11} se selecciona de ciclopropilo, ciclobutilo o fenilo opcionalmente sustituido. La presente invención comprende además sales, solvatos y profármacos de compuestos de Fórmula III, así como composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos de Fórmula III, o sales, solvatos o profármacos de los mismos.
En otra realización preferida, los compuestos de la presente invención tienen la estructura de la Fórmula IV
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Fórmula IV
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en la que R_{3}, B e Y son como se han definido para la Fórmula I, y R_{11} es como se ha definido en la Fórmula II. Preferiblemente, en los compuestos de Fórmula IV, R_{11} se selecciona de ciclopropilo, ciclobutilo o fenilo opcionalmente sustituido. La presente invención comprende además sales, solvatos y profármacos de compuestos de Fórmula IV, así como composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos de Fórmula IV, o sales, solvatos o profármacos de los mismos.
Otra realización preferida son los compuestos de Fórmula V
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Fórmula V
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en la que R_{3}, n, B, e Y son como se han definido para la Fórmula I, R_{11} es como se ha definido en la Fórmula II, y p es 1-5.
Preferiblemente, en los compuestos de Fórmula V, R_{11} se selecciona de ciclopropilo, ciclobutilo o fenilo opcionalmente sustituido. Los compuestos de la presente invención incluyen diastereoisómeros de los grupos funcionales espiro de los compuestos de Fórmula V, en los que los diastereoisómeros están mezclados o se ha preparado un diastereoisómero individual o se ha aislado de una mezcla de diastereoisómeros.
La presente invención comprende además sales, solvatos, profármacos de los compuestos de Fórmula V, así como composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos de Fórmula V, o sales, solvatos o profármacos de los mismos.
Todavía en otra realización preferida alternativa, los compuestos de la presente invención tienen la siguiente fórmula estructural
Fórmula VI
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en la que:
(a) R_{31} es alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, los cuales están todos opcionalmente sustituidos con hidroxi, halógeno, alcoxi C_{1-6}, tioalquiloC_{1-6}, amido, amino, (alquil C_{1-6})-amido, arilo C_{6} o C_{10}, aralquilo C_{7-16}, Het, o (alquil C_{1-6})-Het, y dichos arilo, arilalquilo o Het están opcionalmente sustituidos con halógeno, alquilo o (alquil inferior)-Het;
(b) n es 1 ó 2;
(c) R_{32} es H, alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-3}, cicloalquilo C_{3-7}, alquenilo C_{2-6} o alquinilo C_{2-6}, todos opcionalmente sustituidos con halógeno;
(d) R_{33} es alquilo C_{1-8}, alquenilo C_{3-12}, cicloalquilo C_{3-7}, cicloalquenilo C_{4-13} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, todos opcionalmente sustituidos con hidroxi, alcoxi C_{1-6}, tioalquilo C_{1-6}, amino, amido, (alquil inferior)-amido, arilo C_{6} o C_{10}, o aralquilo C_{7-16};
(e) Y_{2} es H o alquilo C_{1-6};
(f) B_{2} es H, R_{14}-(C=O)-, R_{14}O(C=O)-, R_{14}-N(R_{15})-C(=O)-, R_{14}-N(R_{15})-C(=S)-, R_{14}SO_{2}-, o R_{14}-N(R_{15})-SO_{2}-;
(g) R_{14} es (i) alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo, alcanoilo C_{1-6}, hidroxi, alcoxi C_{1-6}, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; (ii) cicloalquilo C_{3-7}, cicloalcoxi C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, todos opcionalmente sustituidos con hidroxi, carboxilo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo, amino opcionalmente monosustituido o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; (iii) amino opcionalmente monosustituido o disustituido con alquilo C_{1-6}; amido; o (alquil inferior)amido; (iv) arilo C_{6} o C_{10} o aralquilo C_{7-16}, todos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente monosustituido o disustituido con alquilo C_{1-6}; o (v) Het o (alquil inferior)-Het, ambos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente monosustituido o disustituido con alquilo C_{1-6}; y
(h) R_{15} es H o alquilo C_{1-6}.
La presente invención comprende además sales, solvatos, profármacos de los compuestos de Fórmula VI, así como composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos de Fórmula VI, o sales, solvatos o profármacos de los mismos.
Los compuestos de la presente invención, en virtud de su resto básico, pueden formar sales por adición de un ácido farmacéuticamente aceptable. Las sales de adición de ácido se forman a partir de un compuesto de Fórmula I y un ácido inorgánico farmacéuticamente aceptable, incluyendo, pero sin limitar, clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, sulfúrico, fosfórico, o un ácido orgánico tal como p-toluenosulfónico, metanosulfónico, acético, benzoico, cítrico, malónico, fumárico, maleico, oxálico, succínico, sulfámico o tartárico. Así pues, los ejemplos de dichas sales farmacéuticamente aceptables incluyen cloruro, bromuro, yoduro, sulfato, fosfato, metanosulfonato, citrato, acetato, malonato, fumarato, sulfamato y tartrato.
Las sales de un grupo amina pueden comprender también sales de amonio cuaternario en las que el nitrógeno del amino lleva un grupo orgánico adecuado tal como un resto alquilo, alquenilo, alquinilo o aralquilo.
Los compuestos de la presente invención, que están sustituidos con un grupo básico, pueden existir en forma de sales formadas por adición de base. Dichas sales de adición de base incluyen las obtenidas a partir de bases inorgánicas que incluyen, por ejemplo, sales de metal alcalino (p. ej., sodio y potasio), sales de metales alcalinotérreos (p. ej., calcio y magnesio), sales de aluminio y sales de amonio. Además, las sales de adición de base adecuadas incluyen sales de bases orgánicas fisiológicamente aceptables tales como trimetilamina, trietilamina, morfolina, piridina, piperidina, picolina, diciclohexilamina, N,N'-dibenciletilendiamina, 2-hidroxietilamina, bis-(2-hidroxietil)amina, tri-(2-hidroxietil)amina, procaína, dibencilpiperidina, N-bencil-p-fenetilamina, deshidroabietilamina, N,N'-bishidroabietilamina, glucamina, N-metilglucamina, colidina, quinina, quinolina, etilendiamina, ornitina, colina, N,N'-bencilfenetilamina, cloroprocaína, dietanolamina, dietilamina, piperazina, tris(hidroximetil)aminometano e hidróxido de tetrametilamonio y aminoácidos básicos tales como lisina, arginina y N-metilglutamina. Estas sales se pueden preparar por procedimientos que conocen los expertos en la técnica.
Algunos compuestos de la presente invención y sus sales, también pueden existir en forma de solvatos con agua, por ejemplo hidratos, o con disolventes orgánicos tales como metanol, etanol o acetonitrilo para formar, respectivamente, un metanolato, etanolato o acetonitrilato. La presente invención incluye cada solvato y sus mezclas.
Esta invención también abarca profármacos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención. Los profármacos son derivados de los compuestos de la invención que tienen grupos que se pueden escindir química o metabólicamente y, por solvolisis o en condiciones fisiológicas, convertirse en los compuestos de la invención que son farmacéuticamente activos in vivo. Un profármaco de un compuesto de las Fórmulas I-VI se puede formar de una forma convencional con un grupo funcional de los compuestos tal como un grupo amino, hidroxi o carboxi. La forma de derivado profármaco a menudo ofrece ventajas de solubilidad, compatibilidad tisular, o liberación retardada en un organismo mamífero (véase, Bundgard, H., Design of Prodrugs, pp. 7-9, 21-24, Elsevier, Amsterdam 1985). Los profármacos incluyen derivados de ácidos que conocen bien los expertos en la técnica, tales como por ejemplo, ésteres preparados por reacción del compuesto ácido de origen con un alcohol adecuado, o amidas preparadas por reacción del compuesto ácido de origen con una amina adecuada. Cuando se encuentran presentes grupos ácidos colgantes en los compuestos de esta invención, se prefieren los profármacos ésteres alifáticos o aromáticos simples derivados de los mismos. En algunos casos, es conveniente preparar los profármacos de éster doble tales como ésteres de (aciloxi)-alquilo o ésteres de (alcoxicarbonil)oxi-alquilo.
Además, los compuestos de la presente invención, o como sal, solvato o profármaco de los mismos, pueden presentar polimorfismo. La presente invención también abarca cualquiera de dichas formas polimórficas.
Los compuestos de la presente invención (Fórmulas I-IV y VI) también contienen dos o más centros quirales. Por ejemplo, los compuestos de las Fórmulas I-IV y VI pueden incluir el elemento ciclopropilo de P1 de fórmula
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en la que C_{1} y C_{2} representan cada uno un átomo de carbono asimétrico en las posiciones 1 y 2 del anillo de ciclopropilo. Sin tener en cuenta otros posibles centros asimétricos en otros segmentos de los compuestos de Fórmulas I-IV y VI, la presencia de estos dos centros asimétricos significa que los compuestos de las Fórmulas I-IV y VI pueden existir en forma de mezclas racémicas de diastereoisómeros, tales como los diastereoisómeros de las Fórmulas I-IV y VI en las que Q tiene una configuración sin respecto a la amida o sin respecto al carbonilo como se muestra a continuación.
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La presente invención incluye tanto los enantiómeros como mezclas de enantiómeros tales como mezclas racémicas.
Como se ilustra en los ejemplos sucesivos, se pueden preparar mezclas racémicas y después separar en isómeros ópticos individuales, o estos isómeros ópticos se pueden preparar por síntesis quiral.
Los enantiómeros se pueden resolver por procedimientos que conocen los expertos en la técnica, por ejemplo, por formación de sales diastereoisómeras que se pueden separar por cristalización, cromatografía de gas-líquido o de líquido, reacción selectiva de un enantiómero con un reactivo específico para el enantiómero. Se observará que cuando el enantiómero deseado se convierte en otra entidad química por una técnica de separación, después es necesaria una etapa adicional para formar la forma enantiómera deseada. Alternativamente, los enantiómeros específicos se pueden sintetizar por síntesis asimétrica usando reactivos, sustratos catalizadores o disolventes ópticamente activos, o convirtiendo un enantiómero en otro por transformación asimétrica.
Algunos compuestos de la presente invención también pueden existir en diferentes formas conformacionales estables que se pueden separar. La asimetría de torsión debida a la rotación restringida de un enlace sencillo asimétrico, por ejemplo debido al impedimento estérico o a la tensión anular, puede permitir la separación de diferentes confórmeros. La presente invención incluye cada isómero conformacional de estos compuestos y mezclas de los mismos.
Algunos compuestos de la presente invención pueden existir en forma de ion híbrido, y la presente invención incluye cada una de las formas de ion híbrido de estos compuestos y mezclas de los mismos.
Los compuestos de la presente invención son útiles para inhibir la proteasa NS3 del VHC, así como para prevenir o tratar la infección por el virus de la hepatitis C y para tratar las consiguientes afecciones patológicas. El tratamiento implica administrar a un paciente que necesite dicho tratamiento, un compuesto de la presente invención, o una sal, solvato o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable, o una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéutico y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención, o una sal, solvato o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.
Los expertos en la técnica observarán que la referencia al tratamiento en este documento, se extiende a la profilaxis así como al tratamiento de infecciones o síntomas establecidos. Esto incluye iniciar el tratamiento antes o después de la exposición al virus. Además, la presente invención se puede administrar junto con inmunomoduladores, tales como interferones \alpha, \beta o \gamma; otros agentes antivíricos tales como ribavirina, amantadina; otros inhibidores de la proteasa NS3 del VHC; inhibidores de otros objetivos en el ciclo vital del VHC, que incluyen, pero no se limitan, helicasa, polimerasa, metaloproteasa, o sitio de entrada internos al ribosoma (IRES); o combinaciones de los mismos. Los agentes adicionales se pueden combinar con los compuestos de esta invención para crear una sola forma de dosificación. Alternativamente, estos agentes adicionales se pueden administrar por separado a un mamífero como parte de una forma de dosificación múltiple.
Estos procedimientos son útiles para disminuir la actividad de la proteasa NS3 de VHC en un mamífero. Estos procedimientos son útiles para inhibir la replicación vírica en un mamífero. Si la composición farmacéutica comprende sólo un compuesto de esta invención como componente activo, dichos procedimientos pueden comprender adicionalmente la etapa de administrar a dicho mamífero un agente seleccionado de un agente inmunomodulador, un agente antivírico, un inhibidor de la proteasa del VHC, o un inhibidor de otros objetivos en el ciclo vital del VHC tales como helicasa, polimerasa o metaloproteasa o IRES. Dicho agente adicional se puede administra a un mamífero antes, simultáneamente, o después de administrar las composiciones de esta invención.
Los compuestos de la presente invención también son útiles para la preparación y realización de ensayos de cribado o replicación para compuestos antivíricos. Además, los compuestos de la presente invención son útiles para establecer o determinar el sitio de unión de otros compuestos antivíricos a la proteasa NS3 del VHC, por ejemplo, por inhibición competitiva.
Los compuestos de la presente invención se pueden administrar por vía oral, parenteral (incluyendo inyecciones subcutáneas, inyección intravenosa, intramuscular, intraesternal o técnicas de infusión), por pulverizador de inhalación o por vía rectal, en formulaciones de unidad de dosificación que contienen excipientes, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables no tóxicos, convencionales.
Esta invención también proporciona una composición farmacéutica para usar en el procedimiento terapéutico descrito antes. Una composición farmacéutica de la presente invención comprende una cantidad eficaz de un compuesto de las Fórmulas I-VI asociado con un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.
El principio activo en dichas formulaciones comprende de 0,1 por ciento a 99,9 por ciento en peso de la formulación. Por "farmacéuticamente aceptable" se entiende que el vehículo, diluyente o excipiente debe ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no se perjudicial para su receptor.
Las presentes composiciones farmacéuticas se preparan por procedimientos conocidos usando ingredientes conocidos y fácilmente disponibles. Las composiciones de esta invención se pueden formular para proporcionar liberación rápida, sostenida o retardada del principio activo después de administrarlo al paciente usando procedimientos conocidos en la técnica. Cuando se preparan las composiciones de la presente invención normalmente el principio activo se mezclará con un vehículo o se diluirá con un vehículo, o se encerrará dentro de un vehículo que puede estar en forma de una cápsula, sobre, papel u otro envase. Cuando el vehículo sirve como diluyente puede ser un material sólido, semisólido o líquido que actúa como vehículo, excipiente o medio para el principio activo. Por lo tanto, las composiciones pueden estar en forma de comprimidos, píldoras, polvos, perlas, pastillas, sobres, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles, (en forma de sólido o en un medio líquido), cápsulas de gelatina blanda o dura, supositorios, soluciones inyectables estériles, polvos envasados estériles y similares.
Los compuestos se pueden administrar por una variedad de vías incluyendo la vía oral, intranasal, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular e intranasal.
Cuando se administran por vía oral, estas composiciones se preparan de acuerdo con técnicas conocidas en la técnica de la formulación farmacéutica. Para administración oral, el compuesto típicamente se formula con excipientes tales como aglutinantes, cargas, lubricantes, extensores, diluyentes, agentes de disgregación y similares como se sabe en la técnica.
Para administración parenteral, el compuesto se formula en diluyentes o disolventes aceptables por vía parenteral, no tóxicos y farmacéuticamente aceptables, tales como manitol, 1,3-butanodiol, agua, dextrosa al 5 por ciento, solución de Ringer o solución isotónica de cloruro sódico, o agentes de dispersión, humectantes y de suspensión adecuados, tales como aceites fijos, blandos y estériles, incluyendo mono o diglicéridos, y ácidos grasos, incluyendo ácido
oleico.
Un compuesto de la presente invención, o una sal o solvato del mismo, se puede formular en formulaciones de dosificación unitaria que comprenden una dosis entre aproximadamente 0,1 mg y aproximadamente 1000 mg o más, de acuerdo con el tratamiento particular implicado. Un ejemplo de una formulación de dosificación unitaria comprende 5 mg de un compuesto de la presente invención en una ampolla de vidrio estéril de 10 ml. Otro ejemplo de una formulación de dosificación unitaria comprende aproximadamente 10 mg de un compuesto de la presente invención en forma de una sal farmacéuticamente aceptable en 20 ml de solución salina isotónica contenida en una ampolla estéril.
Los compuestos de la presente invención también se pueden administrar a seres humanos en un intervalo de dosificación de 1 a 100 mg/kg de peso corporal en dosis divididas. Un intervalo de dosis preferido es de 1 a 20 mg/kg de peso corporal por vía oral en dosis divididas. Sin embargo, se entenderá que el nivel de dosis específico y la frecuencia de la dosificación para cualquier paciente particular puede variar y dependerá de una variedad de factores incluyendo la actividad del compuesto específico usado, la estabilidad metabólica y la duración de la acción de este compuesto, la vía de administración, la edad, peso corporal, saludo general, sexo, dieta, modo y tiempo de administración, tasa de excreción, combinación de fármacos, gravedad de la afección particular y el hospedante que recibe la
terapia.
A continuación se muestra un procedimiento general útil para la síntesis de compuestos incluidos en esta invención. Las preparaciones mostradas a continuación se describen con el propósito de ilustrar y no se pretende que sean interpretadas como limitantes de los procedimientos para preparar los compuestos por cualesquiera otros
procedimientos.
Los expertos en la técnica observarán que hay disponibles una serie de procedimientos para preparar los compuestos de la presente invención. Estos compuestos se pueden preparar por procedimientos que incluyen procedimientos conocidos en la técnica química para producir compuestos estructuralmente análogos, o por un procedimiento nuevo descrito en el presente documento. Un procedimiento para preparar estos compuestos (o una de sus sales farmacéuticamente aceptable) y productos intermedios nuevos para fabricar estos compuestos proporciona más características de la invención y se ilustran por los siguientes procedimientos en los que los significados de los radicales genéricos son como se han definido antes, salvo que se especifique lo contrario. Se reconocerá que se puede preferir o puede ser necesario preparar dicho compuesto en el que un grupo funcional está protegido, usando un grupo protector convencional y después eliminando el grupo protector para proporcionar un compuesto de la presente invención.
Los compuestos de la presente invención se pueden sintetizar de acuerdo con un procedimiento general como se ilustra en el Esquema I (en el que CPG es un grupo protector de carboxilo y APG es un grupo protector de amino):
Esquema I
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De forma breve, P1, P2 y P3 se pueden unir por técnicas de acoplamiento de péptidos conocidas. Los grupos P1, P2 y P3 se pueden unir entre sí en cualquier orden siempre que el compuesto final corresponda a péptidos de las Fórmulas I-VI. Por ejemplo, P3 se puede unir a P2-P1; o P1 se puede unir a P3-P2.
En general, los péptidos se alargan mediante desprotección del grupo \alpha-amino del resto N-terminal y acoplamiento del grupo carboxilo sin proteger del siguiente aminoácido N-protegido de forma adecuada mediante una unión peptídica usando los procedimientos descritos. Este procedimiento de desprotección y acoplamiento se repite hasta que se obtiene la secuencia deseada. Este acoplamiento se puede llevar a cabo con los aminoácidos constituyentes por pasos, como se representa en el Esquema I. El acoplamiento entre dos aminoácidos, un aminoácido y un péptido, o dos fragmentos peptídicos se puede llevar a cabo usando procedimientos de acoplamiento estándar tales como el procedimiento de la azida, procedimiento del anhídrido de ácido carbónico-carboxílico mixto (cloroformiato de isobutilo), procedimiento de la carbodiimida (diciclohexilcarbodiimida, diisopropilcarbodiimida, o carbodiimida soluble en agua), procedimiento del éster activo (éster de p-nitrofenilo, imido-éster N-hidroxisuccínico), procedimiento del reactivo k de Woodward, procedimiento del carbonildiimidazol, reactivos de fósforo o procedimientos de oxidación-reducción. Algunos de estos procedimientos (especialmente el procedimiento de la carbodiimida) se pueden potenciar por adición de 1-hidroxibenzotriazol o 4-DMAP. Estas reacciones de acoplamiento se pueden llevar a cabo en solución (fase líquida) o en fase sólida.
De forma más explícita, la etapa de acoplamiento implica el acoplamiento deshidratante de un carboxilo libre de una sustancia reaccionantes con el grupo amino libre del otro reaccionante en presencia de un agente de acoplamiento para formar un enlace amida de unión. Se encuentran descripciones de dichos agentes de acoplamiento en libres de texto generales sobre química de péptidos, por ejemplo, M. Bodanszky, "Peptide Chemistry", 2^{nd} rev ed., Springer-Verlag, Berlin, Alemania, (1993). Los ejemplos de agentes de acoplamiento adecuados son N,N'-diciclohexilcarbodiimida, 1-hidroxibenzotriazol en presencia de N,N'-diciclohexilcarbodiimida o N-etil-N'-[(3-dimetilamino)propil]carbodiimida. Un agente de acoplamiento práctico y útil es el hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris-(dimetilamino)fosfonio disponible en el comercio, solo o en presencia de 1-hidroxibenzotriazol o 4-DMAP. Otro agente de acoplamiento práctico y útil es el tetrafluoroborato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio disponible en el comercio. Todavía otro agente de acoplamiento práctico y útil es el hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio.
La reacción de acoplamiento se lleva a cabo en un disolvente inerte, por ejemplo diclorometano, acetonitrilo o dimetilformamida. Se añade un exceso de amina terciaria, por ejemplo, diisopropiletilamina, N-metilmorfolina, N-metilpirrolidina o 4-DMAP para mantener la mezcla de reacción a pH aproximadamente 8. La temperatura de reacción normalmente está en el intervalo entre 0ºC y 50ºC y el tiempo de reacción normalmente está en el intervalo entre 15 min y 24 h.
Los grupos funcionales de los aminoácidos constituyentes en general deben estar protegidos durante las reacciones de acoplamiento para evitar la formación de los enlaces no deseados. Los grupos protectores que se pueden usar están listados en Greene, "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley & Sons, New York (1981) y "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", Vol. 3, Academic Press, New York (1981), cuyas descripciones se incorporan en el presente documento por referencia.
El grupo \alpha-amino de cada aminoácido que se va a acoplar a la cadena de péptido en crecimiento debe estar protegido (APG). Se puede usar cualquier grupo protector conocido en la técnica. Los ejemplos de dichos grupos incluyen: 1) grupos acilo tales como formilo, trifluoroacetilo, ftalilo y p-toluenosuflonilo; 2) grupos carbamato aromáticos tales como benciloxicarbonilo (Cbz o Z) y benciloxicarbonilos sustituidos, y 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc); 3) grupos carbamato alifáticos tales como terc-butoxicarbonilo (Boc), etoxicarbonilo, diisopropilmetoxicarbonilo y aliloxicarbonilo; 4) grupos alquilcarbamato cíclicos tales como ciclopentiloxicarbonilo y adamantiloxicarbonilo; 5) grupos alquilo tales como trifenilmetilo y bencilo; 6) trialquilsililo tales como trimetilsililo; y 7) grupos que contienen tiol tales como feniltiocarbonilo y ditiasuccinoilo.
El grupo protector de \alpha-amino preferido es Boc o Fmoc. Hay muchos derivados de aminoácidos protegidos de forma adecuada para la síntesis de péptidos disponibles en el comercio.
El grupo protector de \alpha-amino del resto aminoácido recién añadido se escinde antes del acoplamiento del siguiente aminoácido. Cuando se usa el grupo Boc, los procedimientos elegidos son ácido trifluoroacético, solo o en diclorometano, o HCl en dioxano o en acetato de etilo. Después la sal de amonio resultante se neutraliza o bien antes del acoplamiento o en situ con soluciones básicas tales como tampones acuosos o aminas terciarias en diclorometano o acetonitrilo o dimetilformamida. Cuando se usa el grupo Fmoc, los reactivos elegidos son piperidina o piperidina sustituida en dimetilformamida, pero se puede usar cualquier amina secundaria. La desprotección se lleva a cabo a una temperatura entre 0ºC y temperatura ambiente (t.a. o TA) normalmente 20-22ºC.
Cualquiera de los aminoácidos que tenga grupos funcionales en la cadena lateral se debe proteger durante la preparación del péptido usando cualquiera de los grupos descritos antes. Los expertos en la técnica observarán que la selección y uso de los grupos protectores adecuados para estos grupos funcionales de la cadena lateral depende del aminoácido y de la presencia de otros grupos protectores en el péptido. La selección de dichos grupos protectores es importante en cuanto que el grupo no debe eliminarse durante la desprotección y acoplamiento del grupo \alpha-amino.
Por ejemplo, cuando se usa Boc como el grupo protector del \alpha-amino, son adecuados los siguientes grupos protectores de la cadena lateral: se pueden usar restos p-toluenosulfonilo (tosilo) para proteger el amino de la cadena lateral de los aminoácidos tales como Lys y Arg; restos acetamidometilo, bencilo (Bn) o terc-butilsulfonilo para proteger la cadena lateral que contiene sulfuro de la cisteína; se pueden usar éteres de bencilo (Bn) para proteger las cadenas laterales que contienen hidroxi de la serina, treonina o hidroxipropilina; y se pueden usar ésteres de bencilo para proteger las cadenas laterales que contienen carboxi del ácido aspártico y glutámico.
Cuando se elige Fmoc para la protección del \alpha-amino, normalmente son aceptables grupos protectores basados en terc-butilo. Por ejemplo, Se puede usar Boc para lisina y arginina, éter de terc-butilo para serina, treonina e hidroxiprolina, y éster de terc-butilo para ácido aspártico y ácido glutámico. Se puede usar el resto trifenilmetilo (tritilo) para proteger la cadena lateral que contiene sulfuro de la cisteína.
Una vez que se ha completado la elongación del péptido, se eliminan todos los grupos protectores. Cuando se usa una síntesis en fase líquida, los grupos protectores se eliminan por cualquier forma que dicte la elección de los grupos protectores. Estos procedimientos son conocidos por el experto en la técnica.
Además se puede seguir la siguiente orientación para preparar los compuestos de la presente invención. Por ejemplo, para formar un compuesto con R_{4}-C(O)-, R_{4}-S(O)_{2}, se acopla un P3 protegido o el péptido entero o un segmento de péptido a un cloruro de acilo o cloruro de sulfonilo adecuado respectivamente, que esté disponible en el comercio o del cual se conozca la síntesis en la técnica.
Para preparar un compuesto con R_{4}-C(O)-, se acopla un P3 protegido o el péptido entero o un segmento de péptido a un cloroformiato adecuado que está disponible en el comercio o para el cual se conoce la síntesis en la técnica. Para derivados con Boc, se usa (Boc)_{2}O.
Por ejemplo
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a) El ciclopentanol se trata con fosgeno para proporcionar el correspondiente cloroformiato.
b) El cloroformiato se trata con el NH_{2}-tripéptido deseado en presencia de una base tal como trietilamina para proporcionar el carbamato de ciclopentilo.
Para preparar un compuesto con R_{4}-N(R_{5})-C(O)- o R_{4}-NH-C(S)-, se trata un P3 protegido o el péptido entero o un segmento del péptido con fosgeno seguido de amina como se describe en SynLett. Feb. 1995; (2); 142-144, o se hace reaccionar con el isocianato disponible en el comercio y una base adecuada tal como trietilamina.
Para preparar un compuesto con R_{4}-N(R_{5})-S(O_{2})-, se trata un P3 protegido o el péptido entero o un segmento del péptido con un cloruro de sulfamilo recién preparado o disponible en el comercio seguido de la amina como se describe en la patente Ger. Offen. (1998), 84 pp. DE 19802350 o WO 98/32748.
El grupo \alpha-carboxilo del resto C-terminal normalmente se protege en forma de un éster (CPG) que se puede escindir para dar el ácido carboxílico. Los grupos protectores que se pueden usar incluyen: 1) ésteres de alquilo tales como metilo, trimetilsililetilo y t-butilo, 2) ésteres de aralquilo tales como bencilo y bencilo sustituido, o 3) ésteres que se pueden escindir por tratamiento con base suave o por medios reductores suaves tales como ésteres de tricloroetilo y fenacilo.
El ácido \alpha-carboxílico (que resulta de la escisión por tratamiento con ácido suave, base suave o por medios reductores) se acopla con un R_{o}SO_{2}NH_{2} [preparado cuantitativamente por tratamiento de R_{o}SO_{2}Cl en solución saturada de amoniaco en tetrahidrofurano] en presencia de agente de acoplamiento de péptidos tal como CDI o EDAC en presencia de una base tal como 4-dimetilaminopiridina (4-DMAP) y/o 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU) para incorporar el resto P1', montando de forma eficaz el tripéptido P1'-P1-P2-P3-APG.
Además, si el grupo protector de P3 APG se elimina y se sustituye por un resto B por los procedimientos descritos antes, y el ácido \alpha-carboxílico resultante que resulta de la escisión (que resulta de la escisión por tratamiento con ácido suave, base suave o por medios reductores) se acopla con un R_{o}SO_{2}NH_{2} [preparado por tratamiento de R_{o}SO_{2}Cl en solución saturada de amoniaco en tetrahidrofurano] en presencia de un agente de acoplamiento de péptidos tal como CDI o EDAC en presencia de una base tal como 4-dimetilaminopiridina (4-DMAP) y/o 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU) para incorporar el resto P1', se prepara el tripéptido P1'-P1-P2-P3-B.
Los compuestos de la presente invención se pueden preparar por muchos procedimientos incluyendo los descritos en los siguientes ejemplos, y como se describe en la solicitud provisional de EE.UU. nº 60/249.968, titulado "Hepatitis C Tripeptide Inhibitors" de Campbell y Good, presentada el 20 de Noviembre, 2000.
Ejemplificación
Los siguientes ejemplos específicos ilustran la síntesis de los compuestos de presente invención, y no se deben considerar como limitantes de la invención en su campo o alcance. Los procedimientos se pueden adaptar a variaciones con el fin de producir compuestos que abarcan esta invención pero no descritos específicamente. Además, las variaciones de los procedimientos para producir los mismos compuestos de forma algo diferente también serán evidentes para los expertos en la técnica.
Los porcentajes de las soluciones expresan una relación de peso a volumen, y las proporciones de soluciones expresan una relación de volumen a volumen, salvo que se diga lo contrario. Los espectros de resonancia magnética nuclear (RMN) se registraron en un espectrómetro Bruker de 300, 400 o 500 MHz; los desplazamientos químicos (\delta) se dan en partes por millón. La cromatografía ultrarrápida se llevó a cabo en gel de sílice (SiO_{2}) de acuerdo con la técnica de cromatografía ultrarrápida de Still (W.C. Still y col., J. Org. Chem. (1978), 43, 2923).
Todos los datos de cromatografía líquida (CL) se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS usando un detector de UV-Vis SPD-10AV y los datos de espectrometría de masas (EM) se determinaron con un Micromass Platform para el CL en modo de electropulverización (ES+).
Salvo que se indique lo contrario, cada compuesto se analizó por CL/EM, usando una de siete metodologías que tienen las siguientes condiciones:
Columnas: (Procedimiento A) - YMC ODS S7 C18 3,0x50 mm
\hskip1.5cm
(Procedimiento B) - YMC ODS-A S7 C18 3,0x50 mm 
\hskip1.5cm
(Procedimiento C) - YMC S7 C18 3,0x50 mm 
\hskip1.5cm
(Procedimiento D) - YMC Xterra ODS S7 3,0x50 mm 
\hskip1.5cm
(Procedimiento E) - YMC Xterra ODS S7 3,0x50 mm 
\hskip1.5cm
(Procedimiento F) - YMC ODS-A S7 C18 3,0x50 mm 
\hskip1.5cm
(Procedimiento G) - YMC C18 S5 4,6x50 mm
Gradiente: Disolvente A 100%/Disolvente B 0% a disolvente A 0%/disolvente B 100%
Tiempo de gradiente: 2 min (A, B, D, F, G); 8 min. (C, E)
Tiempo de mantenimiento: 1 min. (A, B, D, F, G); 2 min. (C, E)
Caudal: 5 ml/min
Longitud de onda del detector: 220 nm
Disolvente A: MeOH 10%/H_{2}O 90%/TFA 0,1%
Disolvente B: H_{2}O 10%/MeOH 90%/TFA 0,1%
Los compuestos y productos químicos intermedios de la presente invención descritos en los siguientes ejemplos, se prepararon de acuerdo con los siguientes procedimientos.
Ejemplo 1
La Boc-(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina, mostrada a continuación se preparó como se describe en las Etapas 1a-c.
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20 
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Etapa 1a
Preparación de la 4-hidroxi-2-fenil-7-metoxiquinolina, mostrada a continuación 
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21
A una solución de m-anisidina (300 g, 2,44 mol) y benzoilacetato de etilo (234,2g, 1,22 mol) en tolueno (2,0 litros) se añadió HCl (4,0 N en dioxano, 12,2 ml, 48,8 mmol). La solución resultante se calentó a reflujo durante 6,5 h usando un aparato Dean-Stark (se recogieron aproximadamente 56 ml de solución acuosa). La mezcla se enfrió a t.a., se repartió múltiples veces con solución acuosa de HCl (al 10%, 3x500 ml), solución acuosa de NaOH (1,0 N, 2x200 ml), agua (3x200 ml), y la capa orgánica se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para proporcionar un residuo aceitoso (329,5 g). El producto bruto se calentó en un baño de aceite (280ºC) durante 80 min usando un aparato de Dean-Stark (se recogieron aproximadamente 85 ml de líquido). La mezcla de reacción se enfrió a t.a., el residuo sólido se trituró con CH_{2}Cl_{2} (400 ml), la suspensión resultante se filtró y la torta de filtración se lavó más con CH_{2}Cl_{2} (2x150 ml). El sólido resultante se secó a vacío (50ºC; 133 Pa; 1 día) proporcionando la 4-hidroxi-7-metoxi-2-fenilquinolina analíticamente pura en forma de un sólido marrón claro (60,7g, 20% global). RMN ^{1}H \delta (DMSO): 3,86 (s, 3H), 6,26 (s, 1H), 6,94 (dd, J=9,0, 2,4 Hz, 1H), 7,21 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,55-7,62 (m, 3H), 7,80-7,84 (m, 2H), 8,00 (d, J=9,0 Hz, 1H), 11,54 (s, 1H); RMN ^{13}C (DMSO-d_{6}) \delta: 55,38, 99,69, 107,07, 113,18, 119,22, 126,52, 127,17, 128,97, 130,34, 134,17, 142,27, 149,53, 161,92, 176,48. CL-EM (tiempo de retención: 1,26, procedimiento D), EM m/z 252 (M^{+}+1).
Etapa 1b
Preparación de la 4-cloro-7-metoxi-2-fenilquinolina, mostrada a continuación 
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22
El producto de la Etapa 1a (21,7 g, 86,4 mmol) se suspendió en POCl_{3} (240 ml). La suspensión se calentó a reflujo durante 2 horas. Después de separar el POCl_{3} a vacío, el residuo se repartió entre EtOAc (1 litro) y solución acuosa de NaOH fría (generada a partir de 200 ml de NaOH 1,0 N y 20 ml de NaOH 10,0 N) y se agitó durante 15 min. La capa orgánica se lavó con agua (2x200 ml), salmuera (200 ml), se secó (MgSO_{4}), y se concentró a vacío para suministrar la 4-cloro-2-fenil-7-metoxiquinolina (21,0 g, 90%) en forma de un sólido marrón claro. RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta: 3,97 (s, 3H), 7,36 (dd, J=9,2, 2,6 Hz, 1H), 7,49-7,59 (m, 4H), 8,08 (d, J=9,2 Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,26-8,30 (m, 2H); RMN ^{13}C (DMSO-d_{6}) \delta: 55,72, 108,00, 116,51, 119,52, 120,48, 124,74, 127,26, 128,81, 130,00, 137,58, 141,98, 150,20, 156,65, 161,30. CL-EM (tiempo de retención: 1,547, Procedimiento D), EM m/z 270 (M^{+}+1).
Etapa 1c
Preparación de la Boc-(4R)-(2-fenil-7-metoxi-quinolina-4-oxo)-S-prolina, mostrada a continuación 
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23
A una suspensión de Boc-4R-hidroxiprolina (16,44 g, 71,1 mmol) en DMSO (250 ml) se añadió t-BuOK (19,93 g, 177,6 mmol) a 0ºC. La mezcla generada se agitó durante 1,5 horas y después el producto de la Etapa 1b (21,02 g, 77,9 mmol) se añadió en tres porciones en 1 h. La reacción se agitó durante una hora, la mezcla de reacción se vertió en agua fría (1,5 litros) y se lavó con Et_{2}O (4x200 ml). La solución acuosa se acidificó a pH 4,6, se filtró para obtener un sólido blanco, y se secó a vacío para suministrar el producto, Boc(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)prolina (32,5 g, 98%). RMN ^{1}H (DMSO) \delta 1,32, 1,35 (dos s (rotámeros) 9H), 2,30-2,42 (m, 1H), 2,62-2,73 (m, 1H), 3,76 (m, 2H), 3,91 (s, 3H), 4,33-4,40 (m, 1H), 5,55 (m, 1H), 7,15 (dd, J=9,2, 2,6 Hz, 1H), 7,37 (d, J=2,6 Hz, 1H), 7,42-7,56 (m, 4H), 7,94-7,99 (m, 1H), 8,25, 8,28 (2s, 2H), 12,53 (s ancho, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,40, Procedimiento D), EM m/z 465 (M^{+}+1).
Ejemplo 2
Preparación del ácido 1-{[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3-metilbutiril)-4-{7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)-pi-
rrolidina-2-carbonil]amino}-2-etilciclopropano-carboxílico, mostrado a continuación, que se preparó como se describe a continuación en las Etapas 2a-2h.
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24 
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Etapa 2a
Preparación del éster de terc-butilo del ácido 2-etilciclopropano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación
25
A una suspensión de cloruro de benciltrietilamonio (21,0 g, 92,2 mmol) en una solución acuosa de NaOH al 50% (92,4 g en 185 ml de H_{2}O) se añadió 1,2-dibromobutano (30,0 g, 138,9 mmol) y malonato de di-terc-butilo (20,0 g, 92,5 mmol). La mezcla de reacción se agitó vigorosamente 18 h a t.a., y después se añadió una mezcla de hielo y agua. El producto bruto se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3x) y se lavó secuencialmente con agua (3x), salmuera y los extractos orgánicos se combinaron. La capa orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío. El residuo resultante se trató por cromatografía ultrarrápida (100 g de SiO_{2}, Et_{2}O en hexano al 3%) para proporcionar el producto del título (18,3 g, 67,8 mmol, 73% de rendimiento) que se usó directamente en la siguiente reacción.
Etapa 2b
Preparación del éster de terc-butilo del ácido 2-etilciclopropano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación
26
El producto de la Etapa 2a (18,3 g, 67,8 mmol) se añadió a una suspensión de terc-butóxido potásico (33,55 g, 299,0 mmol) en éter seco (500 ml) a 0ºC, seguido de H_{2}O (1,35 ml, 75,0 mmol) y se agitó vigorosamente toda la noche a t.a. La mezcla de reacción se vertió en una mezcla de hielo y agua y se lavó con éter (3x). La capa acuosa se acidificó con solución acuosa de ácido cítrico al 10% a 0ºC y se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (2x), salmuera, se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío para proporcionar el producto del título en forma de un aceite amarillo pálido (10 g, 46,8 mmol, 69% de rendimiento).
Etapa 2c
Preparación del éster de terc-butilo del ácido (1R,2R)/(1S,2S) 2-etil-1-(2-trimetilsilaniletoxicarbonilamino)ciclopropano-carboxílico, mostrado a continuación
27
A una suspensión del producto de la Etapa 2b (10 g, 46,8 mmol) y 3 g de tamices moleculares de 4 \ring{A} recién activados en benceno seco (160 ml), se añadió Et_{3}N (7,50 ml, 53,8 mmol) y DPPA (11 ml, 10,21 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 3,5 h, después se añadió 2-trimetilsilil-etanol (13,5 ml, 94,2 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo toda la noche. La mezcla de reacción se filtró, se diluyó con Et_{2}O, se lavó con una solución acuosa de ácido cítrico al 10%, agua, solución acuosa saturada de NaHCO_{3}, agua (2x), y salmuera (2X), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. El residuo se suspendió con 10 g de resina depuradora de poliisocianato de Aldrich en 120 ml de CH_{2}Cl_{2}, se agitó toda la noche a t.a. y se filtró para proporcionar el producto del título (8 g, 24,3 mmol; 52%) en forma de un aceite amarillo pálido; RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,03 (s, 9H), 0,97 (m, 5H), 1,20 (m ancho, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,40-1,70 (m, 4H), 4,16 (m, 2H), 5,30 (s ancho, 1H).
Etapa 2d
Preparación del éster de terc-butilo del ácido (1R,2R)/(1S,2S) 1-amino-2-etilciclopropanocarboxílico, mostrado a continuación 
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28 
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Al producto de la Etapa 2c (3 g, 9 mmol) se añadió una solución de TBAF 1,0 M en THF (9,3 ml, 9,3 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo durante 1,5 h, se enfrió a t.a y después se diluyó con 500 ml de EtOAc. La solución se lavó sucesivamente con agua (2x100 ml), salmuera (2x100 ml), se secó (MgSO_{4}), y se concentró a vacío.
Etapa 2e
Preparación de los isómeros de P1 (1R,2R) y (1S,2S) del éster de metilo del ácido 2-etil-1-{[4-{7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-2-carbonil]-amino}ciclopropano-carboxílico, mostrado a continuación 
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29 
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Una solución del producto bruto de la Etapa 2d (que se supone que son 9 mmoles) en 10 ml de CH_{2}Cl_{2} se añadió gota a gota a una mezcla de 3,5 g (7,53 mmol, 0,84 equivalentes) de Boc-(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina de la Etapa 1c, 4,1 g (10,8 mmol, 1,2 equivalentes) de HATU y 3 ml de NMM en 32 ml of CH_{2}Cl_{2}. La solución se agitó a t.a. durante una día, se diluyó con 100 ml de CH_{2}Cl_{2} y después se lavó con tampón a pH 4,0 (4x50 ml). La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (100 ml), el lavado acuoso se extrajo con acetato de etilo (150 ml), y la capa orgánica se volvió a lavar con tampón a pH 4,0 (50 ml) y solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (50 ml). Las soluciones orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}), se concentraron y purificaron dos veces usando una columna Isco de 110 g (eluida con EtOAc/Hexanos de 20% a 50% ) para proporcionar 1,38 g (32%) del isómero de P1 (1R,2R) y 1,60 g (37%) del isómero de P1 (1S,2S).
Datos para el isómero de P1 (1R,2R): RMN ^{1}H (metanol-d_{4}) \delta 0,95-1,05 (m, 3H), 1,11 (dd, J=9, 5 Hz, 1H), 1,38, 1,42, 1,44 (3s, 18H), 1,35-1,69 (m, 4H), 2,35-2,52 (m, 1H), 2,64-2,80 (m, 1H), 3,87-3,97 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,37-4,45 (m, 1H), 5,4 7 (m, 1H), 7,15 (dd, J=9, 2,4 Hz, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,40 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,48-7,55 (m, 3H), 8,01-8,04 (m, 3H).
Datos para el isómero de P1 (1S,2S): RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 0,98 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,12-1,26 (m, 1H), 1,39, 1,41 (dos s (rotámeros) 9H), 1,44 (s, 9H), 1,39-1,69 (m, 4H), 2,35-2,52 (m, 1H), 2,67-2,80 (m, 1H), 3,93 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,36-4,46 (m, 1H), 5,48 (m, 1H), 7,14-7,17 (m, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,41 (m, 1H), 7,47-7,57 (m, 3H), 8,02-8,05 (m, 3 H).
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Etapa 2f
Preparación del isómero de P1 (1R,2R) del éster de metilo del ácido 2-etil-1-{[4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carbonil]-amino)-ciclopropanocarboxílico, mostrado a continuación
30
Una solución del isómero de P1 (1R,2R) del éster de terc-butilo del ácido 2-(1-terc-butoxicarbonil-2-etilciclopropil-1-carbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)pirrolidina-1-carboxílico (830 mg, 1,3 mmol), de la Etapa 2e, se trató con 100 ml de HCl 4 N/dioxanos durante 1 día y se concentró a vacío. El sólido resultante se trituró con 100 ml de éter para proporcionar 670 mg (95%) de ácido 2-etil-1-{[4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carbonil]-amino}-ciclopropano-carboxílico, el cual se disolvió inmediatamente en 100 ml de MeOH/CH_{2}Cl_{2} al 60%. La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC, se añadieron 3,1 ml de TMSCHN_{2} 2 M, y se calentó a t.a. en 10 min. La reacción sólo se había completado en un 50% y se inactivó por adición gota a gota de HCl 4 N/dioxano y después se volvió a someter a las condiciones de reacción que completaron la reacción, y después se inactivó con HCl 4 N/dioxano en exceso. La solución se concentró para proporcionar 700 mg de dihidrocloruro del éster de metilo del ácido 2-etil-1-{[4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carbonil]amino}-ciclopropanocarboxílico. RMN ^{1}H (metanol-d_{4}) \delta 0,99 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,24-1,29 (m, 1H), 1,50-1-68 (m, 4H), 2,55-2,65 (m, 1H), 2,96 (dd, J=14,7, 7,5 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,96 (s ancho, 2H), 4,07 (s, 3H), 4,66 (dd, J=10,3, 7,5 Hz, 1H), 5,97 (s, 1H), 7,48 (d, J=9,1 Hz, 1H), 7,56 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,70-7,75 (m, 3H), 8,07-8,09 (m, 2H), 8,42 (d, J=9,1 Hz, 1H).
Opcionalmente, esta sal de dihidrocloruro se convirtió en el análogo N-Boc haciéndola reaccionar con Et_{3}N/
(BOC)_{2}O en MeOH para formar el isómero de P1 1R,2R del éster de metilo del ácido 2-(1-terc-butoxicarbonil-2-etilciclopropil-1-carbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-1-carboxílico. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,99 (t, J=7 Hz, 3H), 1,15-1,29 (m, 1H), 1,40, 1-44 (dos s (rotámeros) 9H), 1,40-1,52 (m, 4H), 2,39-2,46 (m, 1H), 2,65-2,76 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,89-3,98 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,40-4,45 (m, 1H), 5,48 (m, 1H), 7,16 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,41 (d, J=2 Hz, 1H), 7,48-7,56 (m, 3H), 8,02-8,05 (m, 3H).
Etapa 2g
Preparación de isómero de P1 (1R,2R) del éster de metilo del ácido 1-{[1-{2-terc-butoxicarbonil-amino-3-metil-butiril)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi}-pirrolidina-2-carbonil]amino}-2-etilciclopropanocarboxílico, mostrado a continuación
31
A una suspensión del producto de la Etapa 2f (120 mg/0,21 mmol), N-BOC-1-Valina (51 mg, 0,23 mmol), NMM (0,10 ml, 0,84 mmol) en DMF (2,5 ml) se añadió HATU (89 mg, 0,23 mmol) a 0ºC. Después de agitar durante 2 días, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (80 ml), se lavó con tampón a pH 4,0 (2x30 ml), solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (30 ml), y salmuera (30 ml), se secó (MgSO_{4}), y se purificó por una columna Isco de 10 g (eluida con EtOAc en Hexanos de 15% a 60%) para suministrar un vidrio opaco (132 mg, 0,19 mmol, 91%). RMN ^{1}H \delta 0,97-1,01 (m, 6H), 1,13 (m, 1H), 1,23 (dd, J=9, 5 Hz, 1H), 1,27 (s, 9H), 1,44 (dd, J=8, 5 Hz, 1H), 1,52-1,66 (m, 3H), 1,98-2,05 (m, 1H), 2,41-2,47 (m, 1H), 2,71-2,76 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,98 (s, 3H), 4,05-4,12 (m, 2H), 4,59-4,69 (m, 2H), 5,58 (m, 1H), 7,12 (dd, J=9,2, 2 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,42 (d, J=2 Hz, 1H), 8,07, 8,08 (2s, 2H), 8,12 (d, J=9,2 Hz, 1H). CL-EM (tiempo de retención: 1,54, Procedimiento D), EM m/s 689 (M^{+}+1).
Etapa 2h
Preparación del isómero de P1 (1R,2R) del ácido 1-{[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3-metilbutiril)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)pirrolidina-2-carbonil]amino)-2-etilciclopropanocarboxílico, mostrado a continuación
32
A una suspensión del producto de la Etapa 2g (124 mg, 0,18 mmol) en THF (7,9 ml), CH_{3}OH (0,8 ml) y H_{2}O (4,2 ml) se añadió LiOH (62 mg, 1,1 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante dos días, se acidificó a pH neutro, y se concentró a vacío hasta que quedó solo la capa acuosa. El residuo acuoso resultante se acidificó a pH 3,0 por adición de solución acuosa de HCl 1,0 N, y se extrajo con EtOAc (4x80 ml). Los disolventes orgánicos combinados se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para proporciona el producto del título en forma de un vidrio opaco (100 mg, 0,148 mmol, 82%). RMN ^{1}H \delta 0,88-1,03 (m, 9H), 1,11 (m, 1H), 1,23 (s, 9H), 1,19-1,70 (m, 5H), 1,96-2,01 (m, 1H), 2,43-2,52 (m, 1H), 2,70-2,77 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 4,00-4,10 (m, 2H), 4,57-4,65 (m, 2H), 5,59 (s, 1H), 7,11-7,15 (m, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,41 (m, 1H), 7,53-7,60 (m, 3H), 8,04-8,07 (m, 2H), 8,12 (d, J=9 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,50, Procedimiento D), EM m/z 675 (M^{+}+1).
Ejemplo 3
Compuesto 1, el isómero de P1 (1R,2R) del éster de isopropilo del ácido {1-[2-(2-etil-1-metanosulfonilaminocarbonilciclopropil-carbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-1-carbonil]-2-metilpropil}carbámico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
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A una solución de EDAC (21 mg, 0,11 mmol) en CH_{2}Cl_{2} se añadió una solución del producto de la Etapa 2h (40 mg, 0,06 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (2 porciones x 0,5 ml), seguido de 4-DMAP (14,5 mg, 0,11 mmol y metanosulfonamida disponible en el comercio (Aldrich) (11,3 mg, 0,11 mmol). La solución resultante se agitó durante 8 días, y después se añadió DBU (16,7 mg, 0,11 mmol). La reacción se agitó durante dos días adicionales, se diluyó con EtOAc (80 ml) y se lavó con tampón a pH 4,0 (3x30 ml), solución acuosa de NaHCO_{3} (2x30 ml), salmuera (30 ml), se secó (MgSO_{4}) y se purificó por una columna Isco de 10 g (eluida con EtOAc en Hexanos de 15% a 100%) para proporcionar el Compuesto 1 en forma de un vidrio opaco (23,4 mg, 50%). RMN ^{1}H (metanol-d_{4}) \delta 0,93-0,97 (m, 9H), 1,13-1,17 (m, 1H), 1,22 (s, 9H), 1,43-1,65 (m, 4H), 2,06-2,15 (m, 1H), 2,31-2,40 (m, 1H), 2,62 (dd, J=14, 7 Hz, 1H), 3,20 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 4,02-4,11 (m, 2H), 4,52-4,64 (m, 2H), 5,56 (m, 1H), 7,09 (d, J=9, 2 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,38 (d, J=2 Hz, 1H), 7,47-7,57 (m 3H), 8,03-8,09 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención: 1,45, Procedimiento D), EM m/z 752 (M^{+}+1).
El procedimiento de acoplamiento, descrito en el presente documento en el Ejemplo 3, se puede usar para preparar los derivados de N-acilsulfonamida de ácidos tripeptídicos que contienen un vinil-Acca, tal como el que contiene el producto de la Etapa 11e, o un etil Acca tal como el que contiene el producto de la Etapa 2h.
Ejemplo 4
Compuesto 2: El isómero de P1 (1R,2R) del éster de terc-butilo del ácido {1-[2-(1-ciclo-propanosulfonilamino-carbonil-2-etilciclopropil-carbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetilpropil}carbámico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 4a-d.
34
Etapa 4a
Preparación del isómero de P1 (1R,2R) del éster de terc-butilo del ácido 2-(1-carboxi-2-etil-ciclopropilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-1-carboxílico, mostrado a continuación
35
A una suspensión de 1,55 g (2,83 mmol) de la sal de dihidrocloruro del producto de la Etapa 2f, en 60 ml de CH_{3}CN, se añadieron 1,60 ml (12 mmol) de TMSCN y la mezcla se calentó a reflujo durante 30 min en atmósfera de Ar. A la solución resultante se añadieron 0,93 g (4,26 mmol) de (BOC)_{2}O, la mezcla se calentó a reflujo durante 5 h, y después se enfrió a t.a. Se añadieron aproximadamente 10 ml de MeOH, la reacción se agitó durante 10 min y después se concentró a vacío. El residuo se cromatografió en una columna Biotage 25M (eluida con MeOH/CH_{2}Cl_{2} de 0% a 5% para proporcionar 1,550 g (95%) del producto del título en forma de una espuma. RMN ^{1}H (CD_{3}OD) \delta 1,03 (m, 3H), 1,11-1,56 (m, 3H), 1,44 (s, 9H),1,56 (m, 2H), 2,47 (m, 1H), 2,65-2,78 (m, 1H), 3,95 (s, 5H), 4,41-4,46 (m, 1H), 5,50 (m, 1H), 7,21 (dd, J=9,0, 2,0 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H),7,3 9 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,56-7,58 (m, 3H), 7,98-3,08 (m, 3H); RMN ^{13}C (CD_{3}OD, rotámeros, 2 C=O a 175 de intensidad débil) \delta 13,85, 21,69, 23,08, 28,66, 33,90, 37,88, 49,64, 49,93, 53,35, 56,39, 60,53, 78,28, 82,24, 100,82, 105,23, 116,26, 120,29, 124,63, 129,30, 130,20, 131,79, 138,45, 149,26, 156,19, 160,16, 164,16, 164,36; CL-EM (tiempo de retención: 1,54, Procedimiento D), EM m/z 575 (M^{+}+1). HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{32}H_{38}N_{3}O_{7}; 576,2710, encontrado 576,2716.
Etapa 4b
Preparación del isómero de P1 (1R,1S) del éster de terc-butilo del ácido 2-(1-ciclopropanosulfonilamino-carbonil-2-etil-ciclopropilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-1-carboxílico, mostrado a continuación 
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36
Una solución del producto de la Etapa 4a (1,55 g, 2,70 mmol) y CDI (0,568g, 3,50 mmol) en THF (22 ml), DMF (3 ml) y CH_{2}Cl_{2} (25 ml) se calentó a reflujo durante 60 min, se añadieron 2 gotas de Et_{3}N, la mezcla se calentó a reflujo durante 30 min más, y después se dejó enfriar a t.a.
Se añadió ciclopropilsulfonamida (0,424 g, 3,50 mmol) en una porción antes de añadir una solución de DBU (523 \mul, 0,291 mmol). La reacción se agitó durante 14 h, se añadieron 150 \mul (1 mmol) de DBU y 100 mg (0,83 mmol) de ciclopropilsulfonamida y la mezcla se agitó durante 11 horas más. La mezcla se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con tampón a pH 4,0 (3x30 ml), agua (20 ml), salmuera (20 ml), se secó (MgSO_{4}) y se purificó con una columna Biotage 65 M (eluida con MeOH en CH_{2}Cl_{2} de 0% a 5%) para proporcionar el producto en forma de una espuma (1,52, 83%). RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 0,94-1,65 (m, 12H), 1,44 (s, 9H), 2,27-2,36 (m, 1H), 2,53-2,59 (m, 1H), 2,93-3,01 (m, 1 H), 3,93 (s, 3H), 3,87-3,97 (m, 2H), 4,22-4,36 (m, 1H), 5,47 (m, 1H), 7,14 (dd, J=9,0, 2,0 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,38 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,48-7,56 (m, 3H), 7,97-8,04 (m, 3H); RMN ^{13}C (CD_{3}OD, rotámeros) \delta 6,00, 6,30, 6,73, 13,95, 20,83, 23,90, 28,75, 31,72, 32,07, 33,09, 35,41, 36,47, 37,00, 40,56, 56,11, 60,42, 78,07, 82,68, 100,16, 107,54, 116,46, 119,52, 124,01, 129,01, 129,91, 130,76, 141,08, 156,38, 161,20, 162,13, 163,33, 164,91, 171,84, 175,85; CL-EM (tiempo de retención: 1,67, procedimiento B), EM m/z 679 (M^{+}+1). HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{35}H_{43}N_{4}SO_{3}: 679,2802, encontrado 679,2805.
Etapa 4c
Preparación del isómero de P1 (1R,2R) del dihidrocloruro de la (1-ciclopropanosulfanilaminocarbonil-2-etilciclopropil)amida del ácido 4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-2-carboxílico, mostrado a continuación 
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37
Una solución de 1,50 g (2,20 mmol) del producto de la Etapa 4b en 125 ml de HCl 4 N en dioxanos se agitó durante 2,5 h. La mezcla se concentró a vacío a 2 ml y se añadieron 30 ml de Et_{2}O. El precipitado resultante se filtró y el sólido blanco se secó con alto vacío (40ºC, 133 Pa) toda la noche para proporcionar 1,424 g (99%) del producto del título. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 0,97-1,75 (m, 13H), 2,27-2,36 (m, 1H), 2,53-2,61 (m, 1H), 2,92-3,01 (m, 1H), 4,07 (s, 3H), 3,87-4,30 (m, 2H), 6,01 (m, 1H), 7,48 (dm, J=8,0 Hz, 1H), 7,62-7,79 (m, 5H), 8,13 (d, J=3,1 Hz, 1H), 8,57 (d, J=9,1 Hz, 1H); RMN ^{13}C (CD_{3}OD, rotámeros) \delta 6,02, 6,48, 6,56, 13,89, 21,22, 22,69, 32,00, 33,11, 33,86, 37,10, 41,63, 52,86, 57,14, 60,46, 81,18, 100,68, 102,44, 116,11, 122,13, 126,93, 130,22, 130,85, 133,27, 134,01, 143,82, 158,35, 162,72, 167,31, 170,26, 171,15; CL-EM (tiempo de retención: 1,23, procedimiento B), EM m/z 579 (M+H)^{+}. HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{30}H_{35}SN_{4}O_{6}: 579,2277, encontrado 579,2250.
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Etapa 4d
Preparación del Compuesto 2
A una solución de (100 mg, 0,154 mmol) del producto de la Etapa 4c, en 2 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 53,2 mg (0,23 mmol) de BOC-L-terc-leucina, 31,3 mg (0,23 mmol) de HOAT, 87,5 mg (0,23 mmol) de HATU, y 161 \mul (0,92 mmol) de DIPEA. La mezcla se agitó 1 día y se repartió entre 100 ml de EtOAc y 50 ml tampón a pH 4,0. La capa de EtOAc se lavó con salmuera (50 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. El residuo se cromatografió sobre dos placas de PTLC de 1000 \mu (cada una de 20X40 cm, eluidas con MeOH en CH_{2}Cl_{2} al 2%) de Analtech para proporcionar 115 mg (94%) de Compuesto 2 en forma de una espuma. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 0,90-1,08 (m, 2H), 0,96 (t, J=7 Hz, 3H), 1,03 (s, 9H), 1,12-1,33 (m, 2H), 1,26 (s, 9H), 1,43-1,66 (m, 5H), 2,29-2,40 (m, 1H), 2,64 (dd, J=14, 7 Hz, 1H), 2,85-3,02 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,07-4,12 (m, 1H), 4,24-4,27 (m, 1H), 4,50-4,56 (m, 2H), 5,53 (m, 1H), 6,67 (d, J=9,5 Hz, 1H), 7,06 (dd, J=9,2, 2,2 Hz, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,37 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,46-7,56 (m, 3H), 8,03-8,07 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención: 1,52 procedimiento A), EM m/z 792 (M^{+}+1). HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{41}H_{54}N_{5}O_{9}S 792,3642, encontrado: 792,3654.
Ejemplo 5
Compuesto 3, el isómero de P1 (1R,2R) del éster de terc-butilo del ácido {1-[2-(1-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2-etil-ciclopropilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-1-carbonil]-2-metilpropil}carbámico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
38
A una solución de (700 mg, 1,074 mmol) del producto de la Etapa 4c en 14 ml de of CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 350 mg (1,61 mmol) de N-BOC-L-Valina, 219,3 mg (1,61 mmol) de HOAT, 613 mg (1,61 mmol) de HATU y 1,12 ml (6,45 mmol) de DIPEA. La mezcla se agitó 1 día y se repartió entre 700 ml de EtOAc y 350 ml de tampón de pH 4,0. La capa de EtOAc se lavó con salmuera (350 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. El residuo se cromatografió en una columna Biotage 40+ M (eluida con MeOH en CH_{2}Cl_{2} de 0% a 10%) para proporcionar 800 mg de un residuo bruto ligeramente impuro. Este material se cromatografió sobre cinco placas de PTLC de 1000 \mu (cada una de 20X40 cm, eluidas con MeOH en CH_{2}Cl_{2} al 2%) de Analtech para proporcionar 650 mg (78%) del Compuesto 3 en forma de un sólido blanco. CL/EM tr-min (MH^{+}):1,45 (778) (procedimiento A). HRMS m/z: (M+H) calculado para C_{40}H_{52}N_{5}SO_{9}: 778,3486, encontrado: 778,3509.
RMN ^{1}H: (Metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 0,66-1,37 (m, 5H), 0,82 (d, J=7 Hz, 3H), 0,88 (t, J=7, 3H), 1,05 (m, 12H), 1,61-1,81 (m, 3H), 2,07-2,43 (m, 3H), 2,55-2,67 (in, 1H), 2,79-3,10 (m, 1H), 3,82-3,87 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 4,03 (d, J=12 Hz, 1H), 4,12-4,17 (m, 1H), 4,49-4,55 (m, 1H), 5,28 (m, 1H), 6,82-6,94 (m, 2H), 7,38-7,50 (m, 4H), 7,68-7,81 (m, 1H), 7,92-7,96 (m, 2H).
Ejemplo 6
Compuesto 4, el isómero de P1 (1R,2R) del dihidrocloruro de la (1-ciclopropano-sulfonilaminocarbonil-2-etilciclopropil)amida del ácido (1-(2-amino-3-metilbutiril)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carboxílico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
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39
Se disolvieron un total de 600 mg de Compuesto 3 en 60 ml de HCl 4 N/dioxanos y se agitaron 2,5 h. La suspensión se concentró hasta que quedaba aproximadamente 1 ml de disolvente, se añadieron 60 ml de Et_{2}O y la mezcla se filtró y el sólido resultante se secó toda la noche (50ºC, 3.325 Pa) para proporcionar 500 mg (86%) del Compuesto 4 en forma de un sólido blanco. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) 8 0,99 (t, J=7 Hz, 3H), 1,03-1,20 (m, 9H), 1,22-1,29 (m, 2H), 1,46-1,70 (m, 4H), 2,21-2,37 (m, 1H), 2,42-2,51 (m, 1H), 2,78-2,83 (m, 1H), 2,93-3,03 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,15-4,26 (m, 2H), 4,48 (d, J=13 Hz, 1H), 4,71-4,76 (m, 1H), 5,92 (m, 1H), 7,45-7,48 (m, 1H), 7,59 (d, J=2 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,70-7,77 (m, 3H), 8,10, 8,10 (2s, 2H), 8,41 (d, J=9 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,10 procedimiento A), EM m/z 677 (M^{+}+1).
Ejemplo 7
Compuesto 5, el isómero de P1 (1R,2R) de la (1-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-2-etilciclopropil)amida del ácido 1-[2-(2-ciclopropilacetilamino)-3-metilbutiril]-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-2-carboxílico,
mostrado a continuación, se preparó como sigue.
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40 
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A una solución de 85 mg (0,113 mmol) de Compuesto 4, 119 \mul (0,68 mmol) de DIPEA, 23,1 mg (0,17 mmol) de HOAT y 17 mg (0,17 mmol) de ácido ciclopropil-acético en 2 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 64,6 mg (0,17 mol) de HATU. La mezcla se agitó 18 h y se repartió entre 100 ml de EtOAc y 35 ml de tampón a pH 4,0. La capa de EtOAc se lavó con salmuera (35 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. El residuo se cromatografió en una placa PTLC de 20X40 cm de 1000 \mu (eluida con MeOH en CH_{2}Cl_{2} al 2%) de Analtech para proporcionar 63 mg (73%) de Compuesto 5 en forma de una espuma. RMN ^{1}H (metanol-d_{4}) \delta 0,07-0,10 (m, 2H), 0,37-0,44 (m, 2H), 0,80-0,86 (m, 1H).0,94-0,97 (m, 6H), 1,00 (d, J=7 Hz, 3H), 1,05-1,10 (m, 2H), 1,16-1,21 (m, 2H), 1,25-1,30 (m, 1H), 1,50-1,57 (m, 2H), 1,60-1,65 (m, 2H), 1,93-2,01 (m, 2H), 2,15-2,22 (m, 1H), 2,33-2,38 (m, 1H), 2,61 (dd, J=14, 6,6 Hz, 1H), 2,93-2,98 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,13 (dd, J=12, 3,5 Hz, 1H),4,44 (t, J=9 Hz, 1H), 4,49-4,56 (m, 2H), 5,60 (m, 1H), 7,12 (dd, J=9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,38 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,50-7,55 (m, 3H),7,91 (d, J=9 Hz, 1H), 8,04-8,05 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención: 1,51 procedimiento A), EM m/z 786 (M^{+}+1). HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{40}H_{50}N_{5}O_{8}S 760,3380, encontrado: 760,3398.
Ejemplo 8
Compuesto 6, el isómero de P1 (1R,2R) del éster de ciclopentilo del ácido 1-[2-(1-ciclopropanosuIfonilaminocarbonil-2-etil-ciclopropilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-1-carbonil]-2-metilpropil]-carbámico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
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41
A una solución de 85 mg (0,113 mmol) de Compuesto 4 y 119 \mul (0,68 mmol) de DIPEA en 2 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 400 \mul (0,27 mol) de cloroformiato de ciclopentilo solo en THF (preparado de forma análoga al cloroformiato usado en el Ejemplo 21, etapa 21a). La mezcla se agitó 18 h y se repartió entre 100 ml de EtOAc y 35 ml de tampón a pH 4,0. La capa de EtOAc se lavó con salmuera (35 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. El residuo se cromatografió en una placa PTLC de 20X40 cm de 1000 \mu (eluida con MeOH en CH_{2}Cl_{2} al 2%) de Analtech para proporcionar 71 mg (79%) de P4(ciclopentil-O(C=O))N-P3(L-Val)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxi-quinolina-4-oxo)prolina]-P1(1R,2R Etil-Acca)-CONHSO_{2}Ciclopropano, éster de ciclopentilo del ácido {1-[2-(1-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2-etil-ciclopropilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2-metilpropil}carbámico en forma de una espuma. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}, rotámeros \sim1/1) \delta (Metanol d-4, rotámeros \sim1/1) \delta 0,80-1,80 (m, 26H), 2,04-2,22 (m, 1H), 2,24-2,39 (m, 1H), 2,61-2,69 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,04-,4,12 (m, 2H),4,53-4,65 (m, 3H), 5,51-5,57 (m, 1H), 7,11 (d, J=8 Hz, 1H), 7,21-7,25 (m, 1H), 7,39-7,40 (m, 1H), 7,49-7,56 (m, 3H), 8,03-8,09 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención: 1,69, procedimiento D), EM m/z 816 (M^{+}+1). HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{41}H_{52}N_{5}O_{9}S 790,3486, encontrado: 790,3479.
Ejemplo 9
Compuesto 7, el isómero de P1 (1R,2R) del éster de etilo del ácido 1-[2-(1-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2-etil-ciclopropilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-1-carbonil]-2-metil-propil}carbámico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
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42
A una solución de 85 mg (0,113 mmol) de Compuesto 4 y 119 \mul (0,68 mmol) de DIPEA en 2 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 27 \mul (0,27 mol) de cloroformiato de etilo solo (Aldrich). La mezcla se agitó 18 h y se repartió entre 100 ml de EtOAc y 35 ml de tampón a pH 4,0. La capa de EtOAc se lavó con salmuera (35 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. El residuo se cromatografió sobre una placa de PTLC de 20X40 cm de 1000 \mu (eluida con MeOH en CH_{2}Cl_{2} al 2%) de Analtech para proporcionar 66 mg (78%) de Compuesto 7 en forma de un sólido blanco. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 0,70 (t, J=7 Hz, 3H), 0,88-1,34 (m, 15H), 1,46-1,80 (m, 4H), 2,07-2,38 (m, 2H), 2,46 (m, 1H), 2,58-2,62 (m, 1H), 3,66-3,81 (m, 2H), 3,38 (s, 3H), 4,05-4,13 (m, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,54 (dd, J=11, 6 Hz, 1H), 4,60 (dd, J=11, 6 Hz, 1H), 5,49, 5,52 (m, 1H), 6,57 (d, J=8 Hz, NH), 7,20 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,47-7,55 (m, 4H), 7,74 (d, J=9 Hz, 1H), 8,02-8,05 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención: 1,39; procedimiento A), EM m/z 750 (M^{+}+1). HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{38}H_{4B}N_{5}O_{9}S 750,3173, encontrado: 750,3172.
Ejemplo 10
Compuesto 8, el isómero de P1 (1R,2R) de la (1-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-2-etil-ciclopropil)amida del ácido 4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)-1-[3-metil-2-(3-propilureido)butiril]pirrolidina-2-carboxílico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
43
A una solución de 85 mg (0,113 mmol) de Compuesto 4 y 119 \mul (0,68 mmol) de DIPEA en 2 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 27 \mul (0,27 mol) de isocianato de n-propilo solo (Aldrich). La mezcla se agitó 18 h y se repartió entre 100 ml de EtOAc y 35 ml de tampón de pH 4,0. La capa de EtOAc se lavó con salmuera (35 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. El residuo se cromatografió sobre una placa de PTLC de 20X40 cm de 1000 \mu (eluida con MeOH en CH_{2}Cl_{2} al 2%) de Analtech para proporcionar 74 mg (85%) de Compuesto 8 en forma de una espuma. RMN ^{1}H (MeOD) \delta 0,81 (t, J=7 Hz, 3H), 0,88-1,68 (m, 20H), 2,05-2,14 (m, 1H), 2,32-2,38 (m, 1H), 2,58-2,62 (m, 1H), 2,87-2,99 (m, 3H), 3,93 (s, 3H), 4,09-4,12 (m, 1H), 4,24-4,27 (m, 1H), 4,50-4,54 (m, 2H), 5,55 (m, 1H), 6,01 (d, J=9 Hz, NH), 7,09 (dd, 7=9,1, 2,1 Hz, 1H), 7,37 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,47-7,52 (m, 3H), 8,02-8,04 (m, 2H), 8,06 (d, J=9,1 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,33, procedimiento A), EM m/z 763 (M^{+}+1), HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{39}H_{51}N_{6}O_{8}S 763,3489, encontrado: 763,3477.
Ejemplo 11
Compuesto 9, el isómero de P1 (1R,2R) del éster de 2-fluoroetilo del ácido 1-[2-{1-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2-etil-ciclopropilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi]pirrolidina-1-carbonil]-2-metilpropil}carbámi-
co, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
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44 
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A una solución de 85 mg (0,113 mmol) de Compuesto 4 y 119 \mul (0,68 xratiol) de DIPEA en 2 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 32 \mul(0,27 mol) de cloroformiato de 2-fluoroetilo solo (Aldrich). La mezcla se agitó 18 h y se repartió entre 100 ml de EtOAc y 35 ml de tampón de pH 4,0. La capa de EtOAc se lavó con salmuera (35 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. El residuo se cromatografió sobre una placa de PTLC de 20X40 cm de 1000 \mu (eluida con MeOH en CH_{2}Cl_{2} al 2%) de Analtech para proporcionar 63 mg (72%) de Compuesto 9 en forma de un sólido blanco. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 0,75-1,23 (m, 14H), 1,26-1-33 (m, 1H), 1,55-1,83 (m, 4H), 2,10-2,36 (m, 3H), 2,48 (m, 1H), 2,54-2,64 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,78-4,64 (m, 8.H), 5,49 (m, 1H), 6,64 (m, NH), 7,18 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,46-7,54 (m, 4H), 7,74 (d, J=9 Hz, 1H), 8,04-8,05 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención; 1,33, procedimiento A), EM m/z 768 (M^{+}+1). HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{38}H_{47}FN_{5}O_{9}S 768,3079, encontrado: 768,3091.
Ejemplo 12
El isómero de P1 (1R,2S) del ácido 1-{[1-2-terc-Butoxicarbonilamino-3,3-dimetilbutiril)-4-{7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-2-carbonil]amino}-2-vinilciclopropanocarboxílico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 12a-e.
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45 
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Etapa 12a
Preparación del hidrocloruro del éster de etilo del ácido (1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropano carboxílico, mostrado a continuación
46
El compuesto nombrado se preparó por cada uno de los siguientes procedimientos A y B.
Procedimiento A
A.1) Preparación del éster de etilo de la N-bencil-imina de la glicina, mostrado a continuación
47
Se suspendió el hidrocloruro del éster de etilo de la glicina (303,8 g, 2,16 mol) en terc-butilmetil-éter (1,6 litros). Se añadieron benzaldehído (231 g, 2,16 mol) y sulfato sódico anhidro (154,6 g, 1,09 mol) y la mezcla se enfrió a 0ºC usando un baño de agua helada. Se añadió gota a gota trietilamina (455 ml, 3,26 mol) en 30 min y la mezcla se agitó durante 48 h a t.a. Después la reacción se inactivó por adición de agua helada (1 litro) y se separó la capa orgánica. La fase acuosa se extrajo con terc-butil-metil-éter (0,5 litros) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con una mezcla de solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (1 litro) y salmuera (1 litro). La solución se secó sobre MgSO_{4}, se concentró a vacío para proporcionar 392,4 g del producto N-bencil-imina en forma de un aceite amarillo espeso. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 1,32 (t, J=7,1 Hz, 3H), 4,24 (q, J=7,1 Hz, 2H), 4,41 (d, J=1,1 Hz, 2H), 7,39-7,47 (m, 3H), 7,78-7,81 (m, 2H), 8,31 (s, 1H).
A.2) Preparación del éster de etilo del ácido N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropano-carboxílico
48
A una suspensión de terc-butóxido de litio (84,06 g, 1,05 mol) en tolueno seco (1,2 litros), se añadió gota a gota una mezcla del éster de etilo de la N-bencil-imina de la glicina (100,4 g, 0,526 mol) y trans-1,4-dibromo-2-buteno (107,0 g, 0,500 mol) en tolueno seco (0,6 litros) en 60 min. Después de completar la adición, la mezcla rojo oscuro se inactivó por adición de agua (1 litro) y terc-butil-metil-éter (TBME, 1 litro). La fase acuosa se separó y se extrajo una segunda vez con TBME (1 litro). Las fases orgánicas se combinaron, se añadió HCl 1 N (1 litro) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La fase orgánica se separó y se extrajo con agua (0,8 litros). Después se combinaron las fases acuosas, se saturaron con sal (700 g), se añadió TBME (1 litro) y la mezcla se enfrió a 0ºC. La mezcla agitada después se basificó a pH 14 por adición gota a gota de NaOH 10 N, se separó la capa orgánica, y la capa acuosa se extrajo con TBME (2 x 500 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron hasta un volumen de 1 litro. A esta solución de la amina libre se añadió dicarbonato de di-terc-butilo (131,0 g, 0,6 mol) y la mezcla se agitó 4 días a t.a. Se añadió dicarbonato de di-terc-butilo adicional (50 g, 0,23 mol) a la reacción, la mezcla se calentó a reflujo durante 3 h, y después se dejó enfriar a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla de reacción se secó sobre MgSO_{4} y se concentró a vacío para proporcionar 80 g de material bruto. Este residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (2,5 kg de SiO_{2}, eluida con MeOH/CH_{2}Cl_{2} de 1% a 2%) para proporcionar 57 g (53%) de éster de etilo del ácido N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropano-carboxílico en forma de un aceite amarillo que solidificó mientras agitaba en el frigorífico. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 1,26 (t, J=7,1 Hz, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,43-1,49 (m, 1H), 1,76-1,82 (m ancho, 1H), 2,14 (q, J=8,6 Hz, 1H), 4,18 (q, J=7,2 Hz, 2H), 5,12 (dd, J=10,3, 1,7 Hz, 1H), 5,25 (s ancho, 1H), 5,29 (dd, J=17,6, 1,7 Hz, 1H), 5,77 (ddd, J=17,6, 10,3, 8,9 Hz, 1H); EM m/z 254,16 (M^{+}-1).
A.3 Preparación del hidrocloruro del éster de etilo del ácido (1R,2S)/(1S,2R) 1-amino-2-vinilciclopropano-carboxílico
49
Se disolvió el éster de etilo del ácido (1R,2S)/(1S,2R) 1-amino-2-vinilciclopropano-carboxílico (9,39 g, 36,8 mmol) en HCl 4N/dioxano (90 ml, 360 mmol) y se agitó durante 2 h a t.a. La mezcla de reacción se concentró para suministrar el hidrocloruro del éster de etilo del ácido (1R,2S)/(1S,2R) 1-amino-2-vinilciclopropano-carboxílico (7 g, 100%). RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta: 1,32 (t, J=7,1, 3H), 1,72 (dd, J=10,2, 6,6 Hz, 1H), 1,81 (dd, J=8,3, 6,6 Hz, 1H), 2,38 (q, J=8,3 Hz, 1H), 4,26-4,34 (m, 2H), 5,24 (dd, 10,3, 1,3 Hz, 1H) 5,40 (d, J=17,2, 1H), 5,69-5,81 (m, 1H).
Procedimiento B
50
A una solución de terc-butóxido potásico (11,55 g, 102,9 mmol) en THF (450 ml) a -78ºC se añadió el éster de etilo de la N,N-dibencil-imina de la glicina (25,0 g, 93,53 mmol) en THF (112 ml). La mezcla de reacción se calentó a 0ºC, se agitó durante 40 min, y después se volvió a enfriar a -78ºC. A esta solución se añadió trans-1,4-dibromo-2-buteno (20,0 g, 93,50 mmol), la mezcla se agitó durante 1 h a 0ºC y se volvió a enfriar a -78ºC. Se añadió terc-butóxido potásico (11,55 g, 102,9 mmol), la mezcla se calentó inmediatamente a 0ºC y se agitó una hora más antes de concentrar a vacío. El producto bruto se recogió en Et_{2}O (530 ml), en solución acuosa de HCl 1 N (106 ml, 106 mmol) y la mezcla bifásica resultante se agitó durante 3,5 h a t.a. Las capas se separaron y la capa acuosa se lavó con Et_{2}O (2x) y se basificó con una solución acuosa saturada de NaHCO_{3}. La amina deseada se extrajo con Et_{2}O (3x) y el extracto orgánico combinado se lavó con salmuera, se secó (MgSO_{4}), y se concentró a vacío para obtener la amina libre. Este material se trató con solución de HCl 4 N en dioxano (100 ml, 400 mmol) y se concentró para proporcionar el hidrocloruro del éster de etilo del ácido (1R,2S)/(1S,2R) 1-amino-2-vinilciclopropano-carboxílico en forma de un semisólido marrón (5,3 g, 34% de rendimiento) idéntico al material obtenido por el procedimiento A, excepto por la presencia de una pequeña impureza aromática no identificada (8%).
Etapa 12b
Preparación del isómero de P1 (1R,2S) del éster de terc-butilo del ácido 2-(1-etoxicarbonil-2-vinilciclopropilcarbamil-4-(7-metoxil-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolindina-1-carboxílico, mostrado a continuación
51
A una solución de Boc-4(R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)prolina de la Etapa 1c (11,0 g, 23,7 mmol), sal de HCl de una mezcla racémica de los diastereoisómeros derivados de P1 (1R,1S) y (1S,2R), de la Etapa 11b, en el que el grupo carboxi es sin respecto al resto vinilo (5,40 g, 28,2 mmol), NMM (20,8 ml; 18,9 mmol) en 500 ml de CH_{2}Cl_{2}/THF al 50% se añadió el reactivo de acoplamiento PyBrop o hexafluorofosfato de bromotrispirrolidino-fosfonio (16,0 g, 34,3 mmol) en tres porciones en 10 min a 0ºC. La solución se agitó a t.a. durante un día y después se lavó con tampón a pH 4,0 (4x50 ml). La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (100 ml), el lavado acuoso se extrajo con acetato de etilo (150 ml), y la capa orgánica se volvió a lavar con tampón a pH 4,0 (50 ml) y solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (50 ml). La solución orgánica se secó (MgSO_{4}), se concentró y se purificó usando una columna Biotage 65M (eluida con EtOAc/Hexanos al 50%) para proporcionar unos 7,5 g de una mezcla 1:1 de los isómeros de P1 (1R,2S) y (1S,2R) del éster de terc-butilo del ácido 2-(1-etoxicarbonil-2-vinilciclopropilcarbamil-4-(7-metoxil-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolindina-1-carboxílico (50% global) o alternativamente, se eluyó en una columna Biotage 65M usando un gradiente lento de EtOAc en hexanos de 15% a 60% para suministrar 3,54 g (25%) del isómero de P1 (1R,2S) eluido con mayor Rf, y 3,54 g (25%) del isómero de P1 (1S,2R) eluido con
menor Rf.
Datos para el isómero de P1 (1R,2S): RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 1,21 (t, J=7 Hz, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,47-1,57 (m, 1H), 1,88 (m, 1H), 2,05-2,19 (m, 1H), 2,39 (m, 1H), 2,88 (m, 1H), 3,71-3,98 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 4,04-4,24 (m, 2H), 4,55 (m, 1H), 5,13 (d, J=10 Hz, 1H), 5,22-5,40 (m, 1H), 5,29 (d, J=17 Hz, 1H), 5,69-5,81 (m, 1H), 7,02 (s ancho, 1H), 7,09 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,41-7,52 (m, 4H), 7,95 (d, J=9 Hz, 1H), 8,03, 8,05 (2s, 2H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta: 14,22; 22,83, 28,25, 33,14, 33,58, 39,92, 51,84, 55,47, 58,32, 61,30, 75,86, 81,27, 98,14, 107,42, 115,00, 117,84, 118,27, 122,63, 123,03, 127,50, 128,72, 129,26, 133,39, 140,06, 151,23, 159,16, 160,34, 161,35, 169,78, 171,68. CL-EM (tiempo de retención: 1,62, procedimiento D), EM m/z 602 (M^{+}+1).
Datos para el isómero de P1 (1S,2R): RMN ^{1}H \delta 1,25 (t, J=7 Hz, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,46-1,52 (m, 1H), 1,84 (m, 1H), 2,12-2,21 (m, 1H), 2,39 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,82 (m, 2H), 3,97 (s, 3H), 4,05-4,17 (m, 2H), 4,58 (m, 1H), 5,15 (d, J=10,8 Hz, 1H), 5,33 (d, J=17 Hz, 1H), 5,30-5,43 (m, 1H), 5,72-5,85 (m, 1H), 7,05 (s, 1H), 7,13 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,46-7,60 (m, 4H), 7,98 (d, J=9, 1H), 3,06-8,10 (m, 2H). CL-EM (tiempo de retención: 1,66, procedimiento D), EM m/z 602 (M^{+}+1).
Etapa 12c
Preparación del diastereoisómero de P1 (1R, 2S) del dihidrocloruro del éster de etilo del ácido 1-{[4-{7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-2-carbonil]-1-amino}-2-vinilciclopropanocarboxílico, mostrado a continuación 
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52 
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El producto de la Etapa 12b (5,88g, 9,77mmol) se disolvió en HCl/dioxano (4,0 M; 200 ml) y se agitó durante 2,5 h a t.a. La mezcla de reacción se concentró para suministrar el producto del título. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 1,24 (t, J=7 Hz, 3H), 1,50 (dd, J=10, 5 Hz, 1H), 1,78 (dd, J=8,4, 5,5 Hz, 1H), 2,24-2,33 (m, 1H), 2,56-2,66 (m, 1H), 3,05 (dd, J=14,6, 7,3 Hz, 1H), 3,98 (s, 2H), 4,06 (s, 3H), 4,15 (q, J=7 Hz, 2H), 4,76 (dd, J=10,6, 7,3 Hz, 1H), 5,13 (dd, J=10,2, 1,8 Hz), 5,32 (dd, J=17, 2 Hz), 5,70-5,83 (m, 1H),6,05 (m, 1H), 7,48 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,65-7,79 (m, 5H), 8,12-8,15 (m, 2H), 8,54 (d, J=9,5 Hz, 1H); RMN ^{13}C (metanol-d_{4}) \delta: 14,77, 23,23, 34,86, 37,25, 41,19, 43,90, 52,66, 60,35, 62,32, 62,83, 68,27, 72,58, 73,70, 81,21, 100,70, 102,44, 116,13, 118,67, 122,25, 126,93, 13 0,27, 13 0,94, 133. 19, 134,14, 134,85, 143,79, 158,39, 166,84, 167,44, 169,57, 171,33. CL-EM (tiempo de retención: 1,55, Procedimiento D), EM m/z 502 (M^{+}+1).
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Etapa 12d
Preparación del isómero de P1 (1R, 2S) del éster de etilo del ácido 1-{[1-2-terc-butoxi-carbonilamino-3,3-dimetil-butiril)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)p-pirrolidina-2-carbonil]-amino}-2-vinil-ciclopropanocarboxílico, mos-trado a continuación 
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53 
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A una suspensión del producto de la Etapa 12c (1,95 g; 3,4mmol), N-BOC-1-terc-leucina (0,94g, 4,08 mmol), NMM (1,87 ml, 17 mmol) en DMF (15 ml) se añadió HATU (1,55 g, 4,08 mmol) a 0ºC. Después de agitar durante 2 días, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (200 ml), se lavó con tampón de pH 4,0 (2x30 ml), solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (30 ml), salmuera (30 ml), se secó (MgSO_{4}), se purificó por una columna Biotage 40 M (eluida con EtOAc en Hexanos de 15% a 60%) para suministrar el producto del título en forma de un sólido blanco (2,21 g, 90%). RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 1,05 (s, 9H),1,20 (t, J=7 Hz, 3H), 1,38-1,43 (m, 1H), 1,41 (s, 9H), 1,80-1,85 (m, 1H), 2,08-2,16 (m, 1H), 2,39-2,47 (m, 1H), 2,90-2,99 (m, 1H), 3,90-4,01 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,12 (q, J=7 Hz, 2H), 4,36 (d, J=10 Hz, 1H), 4,45 (d, J=12 Hz, 1H), 4,75-4,85 (m, 1H), 5,09-5,13 (m, 1H), 5,21-5,34 (m, 2H), 5,69-5,81 (m, 1H), 7,00-7,09 (m, 2H), 7,42-7,54 (m, 5H), 8,01-8,05 (m, 3H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 14,30, 22,85, 26,40, 28,25, 32,20, 34,09, 35,39, 39,97, 53,86, 55,47, 58,28, 58,96, 61,29, 75,94, 79,86, 97,98, 107,43, 115,06, 117,98, 118,38, 123,03, 127,52, 128,76, 129,24, 133,40, 140,26, 151,44, 155,74, 159,16, 160,09, 161,32, 169,55, 5 170,64, 172,63. CL-EM (tiempo de retención: 1,85, Procedimiento D), EM m/z 715 (M^{+}+1).
Etapa 12e
Preparación del producto del título, isómero de P1 (1R, 2S) del ácido 1-{[1-2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetilbutiril)-4-{7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-2-carbonil]amino)-2-vinilciclopropanocarboxílico
A una suspensión del producto de la Etapa 12d (2,63g, 3,68 mmol) en THF (150 ml), CH_{3}OH (80 ml), y H_{2}O (20 ml) se añadió LiOH (1,32g, 55,2 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante dos días, se acidificó a pH neutro y se concentró a vacío hasta que sólo quedó la capa acuosa. El residuo acuoso resultante se acidificó a pH 3,0 por adición de solución acuosa de HCl 1,0 N, y se extrajo con EtOAc (4x200 ml). Los disolventes orgánicos combinados se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para suministrar el producto del título en forma de un sólido blanco (2,41 g, 96%). RMN ^{1}H (CDCl_{3}/Metanol-d_{4}) \delta 0,98, 1,01 (dos s (rotámeros) 9H), 1,40, 1,42 (dos s (rotámeros) 9H), 1,35-1,47 (m, 1H), 1,89-1,93 (m, 1H), 2,03-2,14 (m, 1H), 2,45-2,52 (m, 1H), 2,64-2,78 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,96-4,12 (m, 1H), 4,34 (d, J=10 Hz, 1H), 4,52 (d, J=11 Hz, 1H), 4,58-4,64 (m, 1H), 5,10 (d, J=12 Hz, 1H), 5,24 (d, J=16 Hz, 1H), 5,34 (m, 1H), 5,68-5,86 (m, 2H), 7,02-7,05 (m, 1H), 7,32 (m, 1H), 7,40-7,54 (m, 4H), 7,97-8,03 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención: 1,64, procedimiento D), EM m/z 687 (M^{+}+1).
El procedimiento de hidrólisis descrito en la Etapa 12e, en esta memoria, se puede usar para todos los tripéptidos N-Boc que contienen vinil-Acca como el producto de la Etapa 12d.
Ejemplo 13
Compuesto 10, BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina]-P1(1R,2S) Vinil-Acca)-CONHSO_{2}-Ciclopropano o la denominación alternativa isómero de P1 (1R,2S) del éster de terc-butilo del ácido {1-[2-(1-Ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2-vinilciclo-propilcarbarnoil)-4-{7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetilpropil}carbámico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 13a-b.
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Etapa 13a
Preparación de la ciclopropilsulfonamida 
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A una solución de 100 ml de THF enfriada a 0ºC se burbujeó amoniaco gaseoso hasta que se alcanzó la saturación. A esta solución se añadió una solución de 5 g (28,45 mmol) de cloruro de ciclopropilsulfonilo (adquirido en Array Biopharma) en 50 ml de THF, la solución se calentó a t.a. toda la noche y se agitó un día adicional. La mezcla se concentró hasta que quedaron 2 ml de disolvente, se aplicó sobre 30 g de tapón de SiO_{2} (eluido con EtOAc/hexanos de 30% a 60%) para proporcionar 3,45 g (100%) de la ciclopropilsulfonamida en forma de un sólido blanco. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 0,94-1,07 (m, 4H), 2,52-5 2,60 (m, 1H); RMN ^{13}C (metanol-d_{4}) \delta 5,92, 33,01.
Etapa 13b
Preparación del Compuesto 10
A una solución de CDI (0,238 g, 1,47 mmol) en THF (3 ml) se añadió gota a gota una solución del producto de la Etapa 12e (0,837 g, 1,22 mmol) en THF (20 ml) en 10 min en atmósfera de argón. La solución resultante se agitó durante 30 min, se calentó a reflujo durante 30 min y se dejó enfriar a t.a. Se añadió ciclopropilsulfonamida (0,591 g, 4,88 mmol) en una porción antes de añadir una solución de DBU (0,36 ml, 2,44 mmol) en THF (2 ml). La reacción se agitó durante 18 h, se diluyó con EtOAc (200 ml) y se lavó con tampón de pH 4,0 (3x30 ml), agua (2x30 ml), salmuera (30 ml), se secó (MgSO_{4}) y se purificó por una columna Biotage 40 M (eluida con MeOH en CH_{2}Cl_{2} de 0% a 5%) para proporcionar el Compuesto 10 en forma de un vidrio opaco (0,48g, 50%). RMN ^{1}H (metanol-d_{4}) \delta 0,80-1,10 (m, 2H), 1,03 (s, 9H), 1,17 (s, 2H), 1,27 (s, 9H), 1,38-1,41 (m, 1 H), 1,83-1,85 (m, 1H), 2,15-2,20 (m, 1H), 2,35-2,40 (m, 1H), 2,60-2,70 (m, 1H), 2,84 (s ancho, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,08-4,10 (m, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,50-4,55 (m, 2H), 5,07 (d, J=10,1 Hz, 1H.), 5,25 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,53 (m, 1H), 5,77-5,84 (m, 1H), 7,05-7,07 (m, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,37 (d, J=2 Hz, 1H), 7,47-7,55 (m, 3H), 8. 04-8,07 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención: 1,55, Procedimiento A), EM m/z 790 (M^{+}+1). HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{41}H_{52}N_{5}SO_{9}: 790,3486, encontrado 790,3505.
Este procedimiento de acoplamiento se puede usar para preparar las N-acilsulfonamidas de ácidos tripeptídicos que contienen un resto vinil-Acca o etil-Acca.
Ejemplo 14
Compuesto 11, el BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina)]-P1(1R, 2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}ciclobutano o la denominación alternativa diastereoisómero de P1 (1R,2S) del éster de terc-butilo del ácido {1-[2-(1-ciclobutano-sulfonilaminocarbonil-2-vinilciclo-propilcarbarnoil)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetilpropil}carbámico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 14-b.
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Etapa 14a
Preparación de la ciclobutilsulfonamida 
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A una solución de 5,0 g (37,0 mmol) de bromuro de ciclobutilo en 30 ml de éter dietílico anhidro (Et_{2}O) enfriada a -78ºC, se añadieron 44 ml (74,8 mmol) de terc-butil-litio en pentanos 1,7 M y la solución se calentó lentamente a -35ºC en 1,5 h. Esta mezcla se transfirió mediante cánula lentamente a una solución de 5,0 g (37,0 mmol) de cloruro de sulfurilo recién destilado en 100 ml de hexanos enfriada a -40ºC, se calentó a 0ºC en 1 h y se concentró con cuidado a vacío. Esta mezcla se volvió a disolver en Et_{2}O, se lavó una vez con algo de agua helada, se secó (MgSO_{4}) y se concentró con cuidado. Esta mezcla se volvió a disolver en 20 ml de THF, se añadió gota a gota a 500 ml de solución saturada de NH_{3} en THF y se dejó agitar toda la noche. La mezcla se concentró a vacío hasta un sólido amarillo bruto y se recristalizó en la cantidad mínima de CH_{2}Cl_{2} en hexanos con 1-2 gotas de MeOH para proporcionar 1,90 g (38%) de ciclobutilsulfonamida en forma de un sólido blanco. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 1,95-2,06 (m, 2H), 2,30-2,54 (m, 4H), 3,86 (p, J=8 Hz, 1H), 4,75 (s ancho, 2H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 16,43, 23,93, 56,29. HRMS m/z (M-H)^{-} calculado para C_{4}H_{8}NSO_{2}: 134,0276, encontrado 134,0282.
Etapa 14b
Preparación del Compuesto 11
Siguiendo el procedimiento de la Etapa 13b, 100 mg (0,146 mmol) del producto de la Etapa 12e se hicieron reaccionar con 33,1 mg (0,20 mmol) de CDI, 27,6 mg (0,20 mmol) de ciclobutilsulfonamida y 31 \mul (0,20 mmol) de DBU para proporcionar 84,1 mg (72%) de Compuesto 11 en forma de una espuma. CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,62 (804) (procedimiento D). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 1,03, 1,04 (2s, 9H), 1,27, 1,30 (2s, 9H), 1,33-1,43 (m, 1H), 1,8 0-2,50 (m, 11H), 2,66-2,80 (m, 1H), 3,71-3,88 (m, 1H),3,92, 3,94 (2s, 3H), 4,00-4,13 (m, 2H), 4,51-4,59 (m, 2H), 4,97-5,04 (m, 1H),5,54 (m, 1H), 5,74-5,92 (m, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,36-7,38 (m, 1H), 7,45-7,55 (m, 3H), 8,04-8,11 (m, 3H).
Ejemplo 15
Compuesto 12, el BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina)]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}Ciclopentano o la denominación alternativa diastereoisómero de P1 (1R,2S) del éster de terc-butilo del ácido {1-{2-(1-ciclopentanosulfonilaminocarbonil-2-vinilciclopropil-carbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)-pirrolidin-1-carbonil]-2,2-dimetiIpropil}carbámico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 15a-b.
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Etapa 15a
Preparación de la ciclopentilsulfonamida 
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Una solución de 18,5 ml (37,0 mmol) de cloruro de ciclopentil-magnesio 2 M en éter se añadió gota a gota una solución de 3,0 ml (37,0 mmol) de cloruro de sulfurilo recién destilado (obtenido enAldrich) en 100 ml de hexanos enfriados a -78ºC. La mezcla se calentó a 0ºC en 1 h y después se concentró con cuidado a vacío. Esta mezcla se volvió a disolver en Et_{2}O (200 ml), se lavó una vez con algo de agua helada (200 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró con cuidado. Esta mezcla se volvió a disolver en 35 ml de THF, se añadió gota a gota a 500 ml de solución saturada de NH_{3} en THF y se dejó agitar toda la noche. La mezcla se concentró a vacío hasta un sólido amarillo bruto, el residuo se filtró a través de 50 g de gel de sílice usando EtOAc-hexanos al 70% como eluyente, y después la solución se concentró. El residuo se recristalizó en la cantidad mínima de CH_{2}Cl_{2} en hexanos con 1-2 gotas de MeOH para proporcionar 2,49 g (41%) de ciclopentilsulfonamida en forma de un sólido blanco. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 1,58-1,72 (m, 2H), 1,74-1,88 (m, 2H), 1,94-2,14 (m, 4H), 3,48-3,59 (m, 1H), 4,80 (s ancho, 2H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 25,90, 28,33, 63,54; EM m/e 148 (M-H)^{-}.
Etapa 15b
Preparación del Compuesto 12
Siguiendo el procedimiento de la Etapa 13b, se hicieron reaccionar 60 mg (0,087 mmol) del producto de la Etapa 12e con 19,8 mg (0,122 mmol) de CDI, 18 mg (0,122 mmol) de ciclopentil-sulfonamida y 18 \mul (0,122 mmol) de DBU para proporcionar 45,1 mg (63%) de Compuesto 12 en forma de una espuma. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 1,03 (s, 9H), 1,29 (s, 9H), 1,37-1,43 (m, 1H), 1,55-2,09 (m, 9H), 2,15-2,22 (m, 1H), 2,29-2,39 (m, 1H), 2,63-2,70 (m, 1H), 3,43-3,53 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,04-4,15 (m, 1H), 4,23-4,30 (m, 1H), 4,47-4,57 (m, 2H), 5,08 (d, J=10,2 Hz, 1H), 5,25 (d, J=16,5 Hz. 1H), 5,52 (m, 1H), 5,70-5,80 (m, 1H), 6,54 (d, J=9 Hz, 1H), 7,05 (dd, J=9,2, 2,2 Hz. 1H), 7,37 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,45-7,55 (m, 3H), 8,00-8,06 (m, 3H). CL-EM (tiempo de retención: 1,66, Procedimiento A). EM m/z 818 (M+1)^{+}; 816 (M-1)^{-}.
Ejemplo 16
Compuesto 13, el BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina)]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}Ciclohexano o la denominación alternativa diastereoisómero de P1 (1R,2S) del éster de terc-butilo del ácido {1-[2-(1-Ciclohexano-sulfonilaminocarbonil-2-vinilciclopropilcarbamoil)-4-{7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetilpropil}carbámico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 16a-b.
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Etapa 16a
Preparación de la ciclohexilsulfonamida 
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Una solución de 18,5 ml (37,0 mmol) de cloruro de ciclohexilmagnesio 2 M (TCI Americas) en éter se añadió gota a gota a una solución de 3,0 ml (37,0 mmol) de cloruro de sulfurilo recién destilado en 100 ml de hexanos enfriados a -78ºC. La mezcla se calentó a 0ºC en 1 h y después se concentró con cuidado a vacío. Esta mezcla se volvió a disolver en Et_{2}O (200 ml), se lavó una vez con algo de agua helada (200 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró con cuidado. Esta mezcla se volvió a disolver en 35 ml de THF, se añadió gota a gota a 500 ml de solución saturada de NH_{3} en THF y se dejó agitar toda la noche. La mezcla se concentró a vacío hasta un sólido amarillo bruto, el residuo se filtró a través de 50 g de gel de sílice usando EtOAc-hexanos al 70% como eluyente, y después se concentró. El residuo se recristalizó en la cantidad mínima de CH_{2}Cl_{2} en hexanos con 1-2 gotas de MeOH para proporcionar 1,66 g (30%) de ciclohexilsulfonamida en forma de un sólido blanco. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 1,11-1,3 7 (m, 3H), 1,43-1,56 (m, 2H), 1,67-1,76 (m, 1H), 1,86-1,96 (m, 2H), 2,13-2,28 (m, 2H), 2,91 (tt, J=12, 3,5 Hz, 1H), 4,70 (s ancho, 2H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 25,04, 25,04, 26,56, 62,74; EM m/e 162 (M-1)^{-}.
Etapa 16b
Preparación del Compuesto 13
Siguiendo el procedimiento de la Etapa 13b, se hicieron reaccionar 60 mg (0,087 mmol) del producto de la Etapa 12e con 19,8 mg (0,122 mmol) de CDI, 20 mg (0,122 mmol) de ciclohexilsulfonamida y 18 \mul (0,122 mmol) de DBU para proporcionar 33,2 mg (46%) de Compuesto 13 en forma de una espuma. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 1,03 (s, 9H), 1,14-1,55 (m, 6H), 1,29 (s, 9H), 1,59-1,73 (m, 1H), 1,73-1,92 (m, 3H), 2,04-2,23 (m, 3H), 2,30-2,49 (m, 1H), 2,63-2,69 (m, 1H), 3,41 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,04-4,13 (m, 1H), 4,24-4,28 (m, 1H), 4,47-4,56 (m, 2H), 5,05-5,09 (m, 1H), 5,21-5,28 (m, 1H), 5,51 (m, 1H), 5,69-5,84 (m, 1H), 7,05 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,37 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,47-7,55 (m, 3H), 7,99-8,07 (m, 3H) CL-EM (tiempo de retención: 1,72, procedimiento A), 832 (M^{+}+H). EM m/z 832 (M+1)^{+}; 830 (M-1)^{-}.
Ejemplo 17
Compuesto 14, el BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina)]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}(neopentano) o la denominación alternativa diastereoisómero de P1 (1R,2S) del éster de terc-butilo del ácido {1-[2-[1-(2,2-dimetilpropano-1-sulfonilaminocarbonil)-2-vinil-ciclopropilcarbamoil]-4-{7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetilpropil}-carbámico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 17a-b.
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Etapa 17a
Preparación de la neopentilsulfonamida 
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Siguiendo el procedimiento de la Etapa 16a, 49 ml (37 mmol) de cloruro de neopentilmagnesio 0,75 M en éter (Alfa) se convirtieron en 1,52 g (27%) de neopentilsulfonamida en forma de un sólido blanco. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 1,17 (s, 9H), 3,12 (s, 2H), 4,74 (s ancho, 2H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 29,46, 31,51, 67,38; EM m/e 150 (M-1)^{-}.
Etapa 17b
Preparación del Compuesto 14
Siguiendo el procedimiento de la Etapa 13b, se hicieron reaccionar 60 mg (0,087 mmol) del producto de la Etapa 12e con 19,8 mg (0,122 mmol) de CDI, 13,2 mg (0,096 mmol) de neopentilsulfonamida y 18 \mul (0,122 mmol) de DBU para proporcionar 39,1 mg (55%) de Compuesto 14 en forma de una espuma. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}, rotámeros \sim1/2) \delta 1,04 (s, 9H), 1,13, 1,15 (dos s (rotámeros), 9H), 1,29 (s, 9H), 1,37-1,44 (m, 1H), 1,79, 1,88 (dos dd (rotámeros), J=8, 5 Hz, 1H), 2,15-2,25 (m, 1H), 2,28-2,41 (m, 1H), 2,61-2,72 (m, 1H), 3,14 (d, J=13,9 Hz, 1H), 3,52 (d, J=13,9 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,06-4,15 (m, 1H), 4,24-4,29 (m, 1H), 4,47-4,53 (m, 2H), 5,10 (d, J=10,6 Hz, 1H), 5,25, 5,29 (dos d (rotámeros), J=17 Hz, 1H), 5,53 (m, 1H), 5,70-5,86 (m, 1H), 6,54, 6,64 (dos d (rotámeros), J=9 Hz, 1H), 7,06 (d, J=9 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,37 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,45-7,55 (m, 3H), 8,00-8,06 (m, 3H). CL-EM (tiempo de retención: 1,73, procedimiento A), 820 (M^{+}+H). EM m/z 820 (m+1)^{+}, 818 (M-1)^{-}.
Ejemplo 18
Compuesto 15, el BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo}-S-prolina)]-PI(1R,1S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}(CH_{2-}ciclobutano) o la denominación alternativa diastereoisómero de P1 (1R,2S) del éster de terc-butilo del ácido {1-[2-(1-Ciclobutilmetanosulfonilaminocarbonil-2-vinil-ciclopropilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetilpropil}-carbámico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en Etapas 18a-b.
64
Etapa 18a
Preparación de la ciclobutilcarbonilsulfonamida
65
Una solución de 12,3 g (83 mmol) de bromuro de ciclobutilcarbonilo (Aldrich) y 13,7g (91 mmol) de yoduro sódico en 150 ml de acetona se calentó a reflujo toda la noche y después se enfrió a t.a. Los sólidos inorgánicos se filtraron y la acetona y el yoduro de ciclopropilcarbonilo (8,41g, 46%) se destilaron a temperatura y presión ambientes y 19.950 Pa a 80ºC, respectivamente.
Una solución de 4,0 g (21,98 mmol) de yoduro de ciclobutilcarbonilo en 30 ml de éter dietílico anhidro (Et_{2}O) se enfrió a -78ºC y se transfirió mediante cánula a una solución de 17 ml (21,98 mmol) de sec-butil-litio 1,3 M en ciclohexanos y la solución se agitó durante 5 min. A esta mezcla se transfirió mediante cánula una solución de 3,0 g (21,98 mmol) de cloruro de sulfurilo recién destilado en 110 ml de hexanos enfriados a -78ºC, la mezcla se calentó a t.a. en 1 h y después se concentró con cuidado a vacío. Esta mezcla se volvió a disolver en Et_{2}O, se lavó una vez con algo de agua helada, se secó (MgSO_{4}) y se concentró con cuidado. Esta mezcla se volvió a disolver en 30 ml de THF, se añadió gota a gota a 500 ml de solución saturada de NH_{3} en THF y se dejó agitar toda la noche. La mezcla se concentró a vacío hasta un sólido amarillo bruto y se recristalizó en la cantidad mínima de CH_{2}Cl_{2} en hexanos con 1-2 gotas de MeOH para proporcionar 1,39 g (42%) de ciclobutilsulfonamida en forma de un sólido blanco. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 1,81-2,03 (m, 4H), 2,14-2,28 (m, 2H), 2,81-2,92 (m, 1H), 3,22 (d, J=7 Hz, 2H), 4,74 (s ancho, 2H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 19,10, 28,21, 30,64, 60,93; EM m/e 148 (M-1)^{-}.
Etapa 18b
Preparación del Compuesto 15
Siguiendo el procedimiento de la Etapa 13b, se hicieron reaccionar 100 mg (0,146 mmol) del producto de la Etapa 12e con 33,1 mg (0,204 mmol) de CDI, 30 mg (0,204 mmol) de ciclobutilcarbonilsulfonamida y 31 \mul (0,204 mmol) de DBU para proporcionar 33 mg (28%) de Compuesto 15 en forma de espuma. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}, rotámeros-2/3) \delta 1,04, 1,05 (dos s (rotámeros) 9H), 1,27, 1,30 (dos s (rotámeros) 9H), 1,37-1,40 (m, 1H), 1,73-1,97 (m, 5H), 2,06-2,24 (m, 3H), 2,35-2,49 (m, 1H), 2,65-2,89 (m, 2H), 3,17-3,45 (m, 2H), 3,92, 3,93 (dos s (rotámeros) 3H), 4,04, 4,10 (dos d (rotámeros) J=12 Hz, 1H), 4,23-4,28 (m, 1H), 4,49-4,57 (m, 2H), 5,03-5,08 (m, 1H), 5,20-5,27 (m, 1H), 5-53 (m, 1H), 5,77-5,88 (m, 1H), 6,54, 6,62 (dos d (rotámeros), J=8 Hz, 1H), 7,06 (d, J=9 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,45-7,54 (m, 3H), 8,03-8,09 (m, 3H). CL-EM (tiempo de retención: 1,73, procedimiento B), 818 (M^{+}+H)
Ejemplo 19
Compuesto 16, el BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina)]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}(CH_{2-}ciclopropano) o la denominación alternativa diastereoisómero de P1 (1R,2S) del éster de terc-butilo del ácido {1-[2-(1-Ciclopropilmetanosulfonilaminocarbonil-2-vinil-ciclopropilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetilpropil}-carbámico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 19a-b.
66 
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Etapa 19a
Preparación de ciclopropilcarbonilsulfonamida 
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67 
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Usando el procedimiento de la Etapa 18a se preparó la ciclopropilcarbonilsulfonamida a partir de bromuro de ciclopropilcarbonilo (Aldrich) (véase también JACS 1981, p, 442-445). RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,39-0,44 (m, 2H), 0,67-0,76 (m, 2H), 1,13-1,27 (m, 1H), 3,03 (d, J=7,3 Hz, 2H), 4,74 (s ancho, 2H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 4,33, 5,61, 59,93; EM m/e 134 (M-1)^{-}.
Etapa 19b
Preparación del Compuesto 16
Siguiendo el procedimiento de la Etapa 13b, se hicieron reaccionar 108 mg (0,159 mmol) del producto de la Etapa 12e con 36 mg (0,222 mmol) de CDI, 30 mg (0,222 mmol) de ciclopropilcarbonilsulfonamida y 33 \mul (0,222 mmol) de DBU para proporcionar 42 mg (33%) de Compuesto 16 en forma de espuma. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}, rotámeros \sim2/3) \delta 0,32-0,39 (m, 2H), 0,54-0,68 (m, 2H), 1,03 (s, 9H), 1,27, 1,29 (dos s (rotámeros), 9H), 1,08-1,41 (m, 1H), 1,55-1,86 (m, 2H), 2,10-2,25 (m, 1H), 2,35-2,51 (m, 1H), 2,62-2,80 (m, 1H), 3,07-3,15 (m, 1H), 3,37-3,44 (m, 1H), 3,94, 3,94 (dos s (rotámeros), 3H), 4,03-4,15 (m, 1H), 4,22-4,28 (1, 1H), 4,51-4,60 (m, 2H), 4,99-5,08 (m, 1H), 5,18-5,28 (m, 1H), 5,55 (m, 1H), 5,77-5,94 (m, 1H), 7,06 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,46-7,56 (m, 3H), 8,03-8,12 (m, 3H). CL-EM (tiempo de retención: 1,68, procedimiento D), 804 (M^{+}+H). EM m/e 804 (M+1)^{+};
802 (m-1)^{-}.
Ejemplo 20
Compuesto 17, el BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina)]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}(4-bromo-bencenosulfonamida) o la denominación alternativa diastereoisómero de P1 (1R,2S) del éster de terc-butilo del ácido {1-[2-[1-(4-bromobencenosulfonilaminocarbonil-2-vinil-ciclopropilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetilpropil}-carbámico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
68
A una solución del producto de la Etapa 12e (0,035 g, 0,05 mmol) en THF (2 ml) se añadió CDI (0,0165 g, 0,13 mmol) y la solución resultante se calentó a reflujo durante 30 min y se dejó enfriar a t.a. A esta solución se añadió en una porción 4-bromofenilsulfonamida (0,0482 g, 0,20 mmol), preparada por tratamiento de cloruro de 4-bromosulfonilo disponible en el comercio con solución saturada de amoniaco en THF, antes de añadir una solución de DBU (0,0194 ml, 0,13 mmol). La reacción se agitó durante 18 h, se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con tampón a pH 4,0 (10 ml), agua (10 ml), salmuera (10 ml), se secó (MgSO_{4}) y se purificó por una columna Isco de 10 g (eluida con MeOH en CH_{2}Cl_{2} de 0% a 15%) para proporcionar el producto que necesitaba una purificación adicional. El residuo se purificó usando una placa de PTLC de 20X40 cm 1000 \mu de Analtech para proporcionar el Compuesto 17 en forma de una espuma (0,0357g, 79%): RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 1,03 (s, 9H), 1,26, 1,30 (dos s (rotámeros), 9H), 1,43 (m, 1H), 1-74 (dd, J=8, 5 Hz, 1H), 2,02-2,21 (m, 1H), 2,32-2,47 (m, 1H), 2,58-2,66 (m, 1H), 3,92, 3,93 (dos s (rotámeros), 3H), 4,03-4,10 (m, 1H), 4,24 (m, 1H), 4,46-4,58 (m, 2H), 4,87-4,91 (m, 1H), 5,13 (d, J=17Hz, 1H), 5,39-5,46 (m, 1H), 5,56-5,88 (m, 1H), 7,04 (dd, J=9,2, 2,2 Hz, 1H), 7,20-7,18 (m, 1H), 7,35-7,37 (m, 1H), 7,44-7,58 (m, 5H), 7,68-7,79 (m, 2H), 8,00-8,10 (m, 3H). CL-EM (tiempo de retención: 1,77, procedimiento A). HRMS m/z (M^{+}+H) calculado para C_{44}H_{51}SBrN_{5}O_{9}: 904,2591, encontrado 904,2580.
Este procedimiento también se puede usar como un procedimiento general para preparar aril-N-acilsulfonamidas.
Ejemplo 21
Compuesto 18, diastereoisómero de P1 (1R,2S) del éster de tetrahidrofuran-3(S)-ilo del ácido {1-[2-{1-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2-vinilciclopropil-carbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}carbámico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 21a-b.
69
Etapa 21a
Preparación de los cloroformiatos
70
Este procedimiento se usó para preparar los cloroformiatos no disponibles en el comercio. A una solución de 5,96 g (67,6 mmol) de los reactivos disponibles en el comercio (S)-3-hidroxitetrahidrofurano y piridina (5,8 ml; 72 mmol) en THF (150 ml) enfriados a 0ºC se añadió una solución de fosgeno en tolueno 1,93 M (48 ml, 92,6 mmol) en 10 min en atmósfera de argón. La solución resultante se dejó calentar a t.a. en 2 h, el sólido resultante se filtró y las aguas madre se concentraron con cuidado a vacío a temperatura ambiente hasta que se obtuvo la masa teórica. El residuo resultante se disolvió en 100 ml de THF para preparar una solución madre 0,68 M del cloroformiato de 3(S)-oxo-tetrahidrofurano que se podía guardar en el congelador hasta su uso. De forma análoga, otros alcoholes disponibles en el comercio se podían convertir en soluciones madre 0,68 M de los correspondientes cloroformiatos.
Etapa 21b
Preparación del Compuesto 18
Una solución de 3,5 gramos (4,90 mmol) del producto de la Etapa 12e el diastereoisómero de P1 (1R,2S) del éster de etilo del ácido (1-{[1-2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetilbutiril)-4-{7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-2-carbonil]amino}-2-vinilciclopropanocarboxílico) se trató con 170 ml (680 mmol) de HCl 4 N en dioxano durante 2 h y después se concentró a vacío para proporcionar \sim3,37 g (\sim100%). RMN ^{1}H (metanol-d_{4}) \delta 1,18 (s, 9H), 1,25 (t, J=7,0 Hz, 1H), 1,44 (dd, J=9,1, 5,1 Hz, 1H), 1,72 (dd, J=8,1, 5,5 Hz, 1H), 2,18-2,26 (m, 1H), 2,46-2,53 (m, 1H), 2,84 (dd, J=14, 7 Hz, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,09-4,27 (m, 4H), 4,53 (d, J=12 Hz, 1H), 4,76-4,81 (m, 1H), 5,10 (dd, J=10, 1,5 Hz, 1H), 5,27 (dd, J=17,2, 1,5 Hz, 1H), 5,72-5,84 (m, 1H), 5,89 (m, 1H), 7,46 (dd, J=9,2, 2 Hz, 1H), 7,64 (m, 2H), 7,68-7,79 (m, 3H), 8,08-8,16 (m, 2H), 8,42 (d, J=9 Hz, 1H); RMN ^{13}C (metanol-d_{4}) \delta 14,62, 23,22, 26,70, 35,15, 35,89, 36,16, 40,90, 55,30, 57,06, 60,44, 60,86, 62,46, 81,47, 100,56, 102,42, 116,03, 118,04, 121,92, 126,60, 5 130,14, 130,77, 133,24, 133,89, 135,18, 143,58, 158,19, 166,57, 167,87, 168,59, 171,52, 173,87. CL-EM (tiempo de retención: 1,41, Procedimiento D), EM m/z 615 (M^{+}+1). HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{35}H_{43}N_{4}O_{6}: 615,3183, encontrado 615,3185.
A una suspensión de 200 mg (0,29 mmol) de esta sal de HCl y 220 \mul (0,93 mmol) de Et_{3}N en 4 ml de THF, se añadieron 0,93 ml (0,63 mmol) de una solución 0,68 M de cloroformiato de 3 (S)-oxo-tetrahidrofurano, y la mezcla se agitó toda la noche. La mezcla se concentró a vacío y el residuo se cromatografió en dos placas de PTLC de 1000 \mu de Analtech (cada una de 20X40 cm, eluida con EtOAc-Hexanos al 70%) para proporcionar 115 mg (56%) del carbamato de P4 [Tetrahidrofuran-3(S)-il-O(C=O)]N-P3 (L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxi-quinolina-4-oxo)-S-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CO_{2}Et. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 1,02 (s, 9H), 1,22 (t, J=7 Hz, 3H), 1,38-1,43 (m, 1H), 1,50-2,25 (m, 4H), 2,33-2,45 (m, 1H), 2,65 (dd, J=13, 7 Hz, 1H), 3,47-4,25 (m, 8H), 4,34-4,49 (m, 1H), 4,62 (m, 1H), 4,72 (m, 1H), 5,08 (d, J=10 Hz, 1H), 5,25 (d, J=17 Hz, 1H), 5,45 (m, 1H), 5,71-5,83 (m, 1H), 6,97-7,09 (m, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,45-7,55 (m, 3H), 7,89-8,05 (m, 3H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 14,64, 23,27, 26,92, 33,72, 35,01, 35,97, 36,09, 36,22, 40,87, 54,99, 55,98, 60,32, 61,03, 30 62,380, 67,77, 73,90, 76,68, 77,99, 100,03, 107,52, 116,48, 118,01, 119,15, 124,23, 129,07, 128,96, 129,75, 130,52, 13 5,18, 141,29, 152,18, 158,08, 161,10, 161,80, 163,00, 171,51, 172,84, 174,55. CL-EM (tiempo de retención: 1,35, procedimiento B), EM m/z 729,3 (M^{+}+1).
A una solución de 115 mg (0,164 mmol) en 7,1 ml de THF-MeOH al 80%, se añadió una solución de 40 mg (1,0 mmol) de LiOH.H_{2}O en 2,8 ml de H_{2}O. La mezcla se agitó 1 día, se acidificó a pH 7 (usando HCl 2 N) y se concentró a vacío hasta que sólo quedaba la capa acuosa. La solución se acidificó a pH = 4 (usando HCl 2 N) y se repartió repetidas veces (3 X 50 ml) con EtOAc. Las capas de EtOAc combinadas (150 ml) se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron para proporcionar 112 mg (\sim100%) del ácido carboxílico deseado, [Tetrahidrofuran-3(S)-il-O(C=O)]N-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxi-quinolina-4-oxo)-S-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CO_{2}H, en forma de una espuma. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) 1,02, 1,03 (dos s (rotámeros), 9H), 1,42-1,45 (m, 1H), 1,58-1,65 (m, 1H), 1,67-1,70 (m, 1H), 1,82-1,90 (m, 1H), 2,15-2,21 (m, 1H), 2,46-2,51 (in, 1H), 2,70-2,74 (m, 1H), 3,59-3,90 (m, 4H), 3,95 (s, 3H), 4,05 (dd, J=12, 3 Hz, 1H), 4,23-4,26 (m, 1H), 4,52 (d, J=12 Hz, 1H), 4,62-4,77 (m, 2H), 5,07-5,10 (m, 1H), 5,23-5,27 (m, 1H), 5,57 (m, 1H), 5,80-5,88 (m, 1H), 7,09-7,15 (m, 1H), 7,27 (m, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,49-7,56 (m, 3H), 8,04-8,09 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención: 1,48, procedimiento D): EM m/e 701 (M^{+}+1).
Una solución de [tetrahidrofuran-3(S)-il-O(C=O)]N-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxi-quinolina-4-oxo)-S-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CO_{2}H (0,156 g, 0,223 mmol) y CDI (0,0471g, 0,291 mmol) en THF (5,8 ml) se calentó a reflujo durante 40 min y se dejó enfriar a t.a. Se añadió en una porción ciclopropilsulfonamida (0,0533 g, 0,447 mmol), antes de añadir una solución DBU (0,0422 mg, 0,291 mmol). La reacción se agitó durante 18 h, se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con tampón a pH 4,0 (3x30 ml), agua (20 ml), salmuera (20 ml), se secó (MgSO_{4}) y se purificó por una columna Biotage 40 M (eluida con MeOH en CH_{2}Cl_{2} de 0% a 4%) para proporcionar el producto deseado [Tetrahidrofuran-3(S)-il-O(C=O)]N-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}-Ciclopropano o la denominación alternativa, Compuesto 18, diastereoisómero de P1 (1R,2S) del éster de tetrahidrofuran-3(S)-ilo del ácido {1-[2-(1-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2-vinilciclopropil-carbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}carbámico en forma de una espuma (0,117 g, 65%). RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 1,02-1,07 (m, 11H), 1,22-1,28 (m, 2H), 1,42-1,45 (m, 1H), 1,57-1,64 (m, 1H), 1,80-1,92 (m, 2H), 2,19-2,27 (m, 1H), 2,31-2,41 (m, 1H), 2,68 (dd, J=14, 7 Hz, 1H), 2,90-2,96 (m, 1H), 3,61-3,81 (m, 4H), 3,95 (s, 3H), 4,07-4,11 (m, 1H), 4,25-4,29 (m, 1H), 4,49-4,60 (m, 2H), 4,72-4,76 (m, 1H), 5,10-5,13 (m, 1H), 5,27-5,33 (m, 1H), 5,59 (m, 1H), 5,72-5,80 (m, 1H), 7,10-7,14 (m, 1H), 7,28 (m, 1H), 7,41 (m, 1H), 7,49-7,58 (m, 3H), 8,05-8,08 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención: 1,37, procedimiento D), EM m/z 804 (M^{+} + 1).
Este procedimiento del Ejemplo 21 se puede usar en general para preparar el carbamato de las N-acilsulfonamidas de la presente invención.
Ejemplo 22
Compuesto 19, el [terc-Butil-NH(C=O)]NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}Ciclopropano o la denominación alternativa diastereoisómero de P1 (1R,2S) de la (1-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2-vinilciclopropil)amida del ácido 1-[2-(3-terc-butilureido)-3,3-dimetilbutiril]-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-2-carboxílico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 22a-c.
71
Etapa 22a
Preparación de [terc-Butil-NH(C=O)]NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CO_{2}Et
A una suspensión de 175 mg (0,245 mmol) de la sal de dihidrocloruro del NH_{2}-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CO_{2}Et y 139 \mul (1,0 mmol) de Et_{3}N en 3 ml de THF, se añadieron 57 \mul (0,50 mmol) de isocianato de terc-butilo disponible en el comercio. La mezcla se agitó toda la noche, se diluyó con 20 ml de tampón a pH 4,0 y se repartió con 4 porciones x 50 ml de EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se concentraron a vacío, el residuo se cromatografió en una columna Biotage 25 M (eluida con EtOAc/Hexanos de 15% a 100%) para proporcionar 152 mg (86%) del producto del título. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 1,03 (s, 9H), 1,17 (s, 9H), 1,34-1,45 (m, 1H), 1,61-1,74 (m, 1H), 2,15-2,24 (m, 1H), 2,32-2,51 (m, 1H), 2,61-2,75 (m, 1H), 3,92 (m, 3H), 4,01-4,17 (m, 3H), 4,32 (m, 1H), 4,51-4,60 (m, 2H), 5,07 (d, J=11 Hz, 1H), 5,24 (d, J=17 Hz, 1H), 5,53 (m, 1H), 5,69-5,81 (m, 1H), 7,00-7,11 (m, 1H), 7,21 (m, 1H), 7,36 (m, 1H), 7,44-7,58 (m, 3H), 8,02-8,13 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención: 2,36, procedimiento A), EM m/z 714 (M^{+}+1).
Etapa 22b
Preparación de [terc-Butil-NH(C=O)]NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CO_{2}H
A una solución de 152 mg (0,21 mmol) del producto de la Etapa 22a, en 9,4 ml de THF-MeOH al 30%, se añadió una solución de 52 mg (1,3 mmol) de LiOH.H_{2}O en 3,9 ml de H_{2}O. La mezcla se agitó 1 día, se acidificó a pH 7 (usando HCl 2 N) y se concentró a vacío hasta que sólo quedaba la capa acuosa. La solución se acidificó a pH = 4 (usando HCl 2 N) y se repartió repetidas veces con EtOAc (3 X 50 ml). Las capas de EtOAc combinadas (150 ml) se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron para proporcionar 122 mg (85%) del producto del título en forma de una espuma. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 1,01 (s, 9H), 1,30 (s, 9H), 1,38-1,42 (m, 1H), 1,81-2,28 (m, 2H), 2,22-2,64 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,12 (dd, J=12, 4 Hz, 1H), 4,34-4,41 (m, 1H), 4,51 (d, J=10 Hz, 1H), 4,69 (d, J=11 Hz, 1H),4,79 (m, 1H), 5,08 (d, J=12 Hz, 1H), 5,21 (d, J=17 Hz, 1H), 5,33 (m, 1H), 5,57-5,72 (m, 1H), 6,95 (s, 1H), 7,05 (dd, J=9,2, 2,6 Hz, 1H), 7,40-7,53 (m, 4H), 8,01-8,03 (m, 2H), 8,09 (d, J=9,2 Hz, 1H). CL-EM (tiempo de retención: 1,37, procedimiento B) m/z 686 (M^{+}+1).
Etapa 22c
Preparación del Compuesto 19
Una solución del producto de la Etapa 22b (0,120 g, 0,175 mmol) y CDI (0,0368 g, 0,227 mmol) en THF (5,8 ml) se calentó a reflujo durante 40 min y se dejó enfriar a t.a. Se añadió en una porción ciclopropilsulfonamida (0,0416 g, 0,349 mmol) antes de añadir una solución de DBU (0,0345 mg, 0,227 mmol). La reacción se agitó durante 18 h, se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con tampón a pH 4,0 (3x30 ml), agua (20 salmuera (20 ml), se secó (MgSO_{4}) y se purificó por una columna Biotage 40 M (eluida con MeOH en CH_{2}Cl_{2} de 0% a 4%) para proporcionar el Compuesto 19 en forma de una espuma (0,0872 g, 63%). RMN ^{1}H (metanol-d_{4}) \delta 1,04 (s, 9H), 1,17 (s, 9H), 1,15-1,31 (m, 4H), 1,40 (dd, J=9,5, 5,2 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=8, 5 Hz, 1H), 2,15-2,22 (m, 1H), 2,30-2,37 (m, 1H), 2,65 (dd, J=14, 7, 1H), 2,90-2,95 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,11 (dd, J=11,7, 3,7 Hz, 1H), 4,35 (s, 1H), 4,50 (dd, J=10,4, 7 Hz, 1H), 4,57 (d, J=12 Hz, 1H), 5,09 (dd, J=10, 2 Hz, 1H), 5,26 (dd, J=17, 2 Hz, 1H), 5,56 (m, 1H), 5,70-5,77 (m, 1H), 7,07 (dd, J=9,2, 2 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,38 (d, J=2 Hz, 1H), 7,48-7,55 (m, 3H), 8,04-8,06 (m, 2H), 8,10 (d, J=9. 2 Hz, 1H). CL-EM (tiempo de retención: 1,51, procedimiento D) EM m/e 789 (M^{+}+1).
Ejemplo 23
Compuesto 20: el diastereoisómero de P1 (1R,2S) de la (1-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2-vinil-ciclopropil)amida del ácido 1-{2-[3-ciclopropilmetil-3-(3,3,3-trifluoropropil)-ureido]-3,3-dimetilbutiril}-4-{7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carboxílico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 23a-b.
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72
Etapa 23a
Preparación del hidrocloruro de la ciclopropilmetil-3,3,3-trifluoropropilamina 
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73
Una solución agitada de ácido 3,3,3-trifluoroacético (9,7 ml, 110 mmoles) y N-hidroxisuccinimida (13,92 g, 1,1 equiv.) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) a 0ºC se trató con EDAC (21,08 g, 1 equiv.). La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de agitar toda la noche, se evaporó el disolvente y el residuo se repartió entre EtOAc y agua. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó para dar el éster activo bruto que se usó sin purificación adicional (22,78 g, 92%). RMN ^{1}H (CDCl_{3}) 2,86 (s, 4H), 3,51 (m, 2H).
Una solución agitada del éster activo la N-hidroxisuccinimida del ácido 3,3,3 -trifluoroacético (12,98 g, 57,65 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (80 ml) a 0ºC se trató con ciclopropilmetilamina (5,0 ml, 1 equiv.). La mezcla se agitó temperatura ambiente durante 14 horas y se evaporó. La fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, y se evaporó para dar la amida bruta. Esta se secó con alto vacío durante varias horas y después en atmósfera de nitrógeno a 0ºC se trató con cuidado con una solución de borano en tetrahidrofurano 1 M (173 ml, 3 equiv., 173 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante 14 horas y después se volvió a enfriar a 0ºC. Se añadió MeOH (50 ml) con mucho cuidado para evitar el exceso de espuma, y la mezcla se calentó a reflujo durante 5 horas. Después de volver a enfriar a 0ºC se añadió una solución de pirocarbonato de t-butilo (17,62 g, 1,4 equiv.) en CH_{2}Cl_{2} (25 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente toda la noche y después se evaporó. El residuo se repartió entre EtOAc y agua. La capa orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, y se evaporó para dar la amina protegida con Boc bruta. Esta se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (25 ml) y se trató con HCl en dioxano 4 M (36 ml, 2,5 equiv, 144 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente y después se evaporó. El sólido blanco resultante se trituró con éter, y se secó a vacío (10,10 g, 86%). RMN ^{1}H (D_{2}O) 0,36 (m, 2H),0,67 (m, 2H), 1,07 (m, 1H), 2,72 (m, 2H), 2,99 (m, 2H), 3,89 (m, 2H).
Las etapas de este procedimiento se pueden usar para preparar las dialquil-ureas N-terminales P4 de los tripéptidos, a partir de hidrocloruros de dialquilamina e isocianatos N-terminales de los tripéptidos, para su uso posterior para preparar compuestos de la presente invención. El isocianato del tripéptido se preparó de forma análogo a la descrita en Synlett. Feb. 1995; (2); 142-144, usando un componente amínico, una base terciaria impedida tal como DIPEA o Et_{3}N y fosgeno.
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Etapa 23b
Preparación del Compuesto 20
A una suspensión de 110 mg (0,016 mmol) de esta sal de HCl y 400 \mul (2,30 mmol) de DIPEA en 8 ml de CH_{2}Cl_{2} enfriada a 0ºC, se añadieron 62 mg (0,21 mmol) de trifosgeno comercial. La mezcla se agitó durante 3h, se añadieron 73,4 mg (0,36 mmol) de hidrocloruro de ciclopropilmetil-3,3,3-trifluoropropilamina y el recipiente de reacción se dejó calentar toda la noche a t.a. La mezcla se diluyó con 20 ml de tampón a pH 4,0 y se repartió con porciones 4 x 50 ml de EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron una vez con solución acuosa saturada de NaHCO_{3}, se secaron (MgSO_{4}), se concentraron a vacío, y el residuo se cromatografió en una columna Biotage 40+ M (eluida con EtOAc/Hexanos de 30% a 50%) para proporcionar 68 mg (48%) de la dialquilurea de P4 deseada [N,N-ciclopropilmetil-3,3,3-trifluoropropil]-(C=O)]HN-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxi-quinolina-4-oxo)-S-prolina]-P1(1R,2S Vinil Acca)-CO_{2}Et: RMN ^{1}H (CDCl_{3}/Metanol-d_{4}) \delta 0,19-0,22 (m, 2H), 0,49-0,53 (m, 2H), 0,77-0,92 (m, 1H), 1,05 (s, 9H), 1,24 (t, J=7 Hz, 3H), 1,42 (dd, J=9, 5 Hz, 1H), 1,72 (dd, J=8, 5 Hz, 1H), 2,17-2,22 (m, 1H), 2,27-2,35 (m, 2H), 2,40-2,45 (m, 1H), 2,68-2,73 (m, 1H), 3,01 (dd, J=15, 6 Hz, 1H), 3,08 (dd, J=15, 6Hz, 1H), 3,30-3,46 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,05-4,20 (m, 3H), 4,46-4,51 (m, 2H), 4,62-4,66 (m, 1H), 5,09 (d, J=10 Hz, 1H), 5,26 (d, J=17 Hz, 1H), 5,57 (m, 1H), 5,74-5,81 (m, 1H), 7,09 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,39 (d, J=2 Hz, 1H), 7,51-7,56 (m, 3H), 8,04-8,06 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención; 1,79, procedimiento B) EM m/z 808 (M^{+}+1).
A una solución de 65 mg (0,081 mmol) de la dialquilurea de P4 deseada [N,N-ciclopropilmetil-3,3,3-trifluoropro-
pil]-(C=O)]HN-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxi-quinolina-4-oxo)-S-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CO_{2}Et en una solución de 4 ml de THF y 2,5 ml de MeOH, se añadió una solución de 12 mg (0,48 mmol) de LiOH en 2 ml de H_{2}O. La mezcla se agitó toda la noche, se añadió una porción adicional de 6 mg (0,24 mmol) de LiOH, y la mezcla se agitó 12 h. La mezcla se acidificó a pH 5 (usando HCl 2 N) y se concentró a vacío hasta que sólo quedaba la capa acuosa. La solución se repartió repetidas veces con EtOAc (5 x 15 ml). Las capas de EtOAc combinadas (75 ml) se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron para proporcionar 58 mg (92%) del ácido carboxílico deseado, [N,N-ciclopropilmetil-3,3,3-trifluoropropil]-(C=O)]HN-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxi-quinolina-4-oxo)-S-prolina]-P1(1R,2S Vinil Acca)-CO_{2}H en forma de una espuma: RMN ^{1}H (CDCl_{3}-Metanol-d_{4}) \delta 0,25-0,28 (m, 2H), 0,56-0,62 (m, 2H), 0,85-0,98 (m, 1H), 1,09 (s, 9H), 1,46-1,49 (m, 1H), 1,77 (dd, J=8, 5 Hz, 1H), 2,18-2,23 (m, 1H), 2,33-2,43 (m, 2H), 2,56-2,61 (m, 1H), 2,69 (dd, J=14, 8 Hz, 1H), 3,08 (dd, J=15, 6 Hz, 1H), 3,16 (dd, J=15, 6Hz, 1H), 3,43-3,53 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 4,13 (dd, J=12, 4 Hz, H), 4,50-4,53 (m, 2H), 4,69 (t, J=8 Hz, 1H), 5,11-5,13 (m, 1H), 5,28-5,32 (m, 1H), 5,54 (m, 1H), 5,82-5,90 (m, 1H), 7,11 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,43 (d, J=2 Hz, 1H), 7,51-7,58 (m, 3H), 7,99-8,05 (m, 2H), 8,08 (d, J=9 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,63, procedimiento A), EM m/z 780 (M^{+}+1).
Una solución de [N,N-ciclopropilmetil-3,3,3-trifluoropropil]-(C=O)]HN-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxi-quinolina-4-oxo)-S-prolina]-P1(1R,2S Vinil Acca)-CO_{2}H (58 mg, 0,74 mmol) y CDI (17 mg, 0,104 mmol) en THF (2 ml) se calentó a reflujo durante 60 min y se dejó enfriar a t.a. Se añadió ciclopropilsulfonamida (13 mg, 0,104 mmol) en una porción antes de añadir una solución de DBU (16 \mul, 0,104 mmol). La reacción se agitó durante 72 h, se diluyó con EtOAc (100 ml). La solución se lavó con tampón a pH 4,0 (2 x 20 ml), se secó (MgSO_{4}), se concentró, y se cromatografió en una placa de PTLC de 1000 \mu de Analtech (20X40 cm, eluida con MeOH en CH_{2}Cl_{2} al 2%) para proporcionar 18 mg (27%) de Compuesto 20 en forma de una espuma: RMN ^{1}H (CDCl_{3}-Metanol-d_{4}) \delta 0,22-0,27 (m, 2H), 0,50-0,56 (m, 2H), 0,86-0,94 (m, 1H), 1,00-1,11 (m, 2H), 1,09 (s, 9H), 1,18-1,25 (m, 2H), 1,46-1,48 (m, 1H), 1,90 (dd, J=8, 5 Hz, 1H), 2,18-2,24 (m, 1H), 2,30-2,46 (m, 3H), 2,70 (dd, J=14, 8 Hz, 1H), 2,80 (m, 1H), 3,07 (dd, J=15, 7 Hz, 1H), 3,13 (dd, J=15, 7 Hz, 1H), 3,43-3,49 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 4,16 (dd, J=12, 3 Hz, 1H), 4,50-4,54 (m, 2H), 4,57-4,61 (m, 1H), 5,12 (d, J=12 Hz, 1H), 5,30 (d, J=11 Hz, 1H), 5,63 (m, 1H), 5,75 (d, J=9 Hz, 1H), 5,83-5,90 (m, 1H), 7,13 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,43 (d, J=2 Hz, 1H), 7,52-7,59 (m, 3H), 8,08-8,10 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención: 1,65, procedimiento A), EM m/z 883 (M^{+}+1). EM m/e 883,2 (M+1)^{+}, 881 (M-1)^{-}.
Ejemplo 24
Compuesto 21, el N-BOC-P3-(L-Val)-P2(4R)-(2-fenil-7-metoxi-quinolina-4-oxo)-prolina)]-P1-(1-aminociclopropano-1-)CONHSO_{2}ciclopropano, se preparó como se describe en las siguiente Etapas 24a-d.
74
En la Etapa 24a, el producto, P2 HN-[Dihidrocloruro del éster de metilo de la (4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-5-prolina], se preparó a partir del N-BOC-P2[éster de 1-terc-butilo del ácido (4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina(N-Boc(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina, 4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1,2-dicarboxílico]
75
De forma específica, a una solución de 10 g (21,5 mmol) de éster de 1-terc-butilo del ácido N-Boc-(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina, 4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1,2-dicarboxílico en 500 ml de MeOH enfriada a -78ºC, se burbujeó en HCl gaseoso durante 10 min. La mezcla se calentó a t.a., se agitó toda la noche y se concentró a vacío. Se formó el azeótropo del residuo con tolueno y dioxano para proporcionar 9,71g (100%) del producto del título en forma de un sólido blanquecino. RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 2,56-2,66 (m, 1H), 2,73-2,80 (m, 1H), 3,67-3,86 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,97 (s, 3H), 4,76-4,82 (m, 1H), 5,95 (m, 1H), 7,42 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,65-7,72 (m, 4H), 8,23-8,27 (m, 2H), 8,51 (d, J=9,2 Hz, 1H), 9,68 (s ancho, 1H), 11,4 (s ancho, 1H); CL-EM (tiempo de retención; 0,94, procedimiento D), EM m/e 379 (M^{+}+1).
En la Etapa 24b, se preparó el producto ácido 1-(2-terc-butoxi-carbonilamino-3-metilbutiril)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carboxílico, mostrado a continuación, que también se puede llamar P3 N-BOC (L-Val)-P2[(4R)-{2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)prolina)]-CO_{2}H.
76
De forma específica a una suspensión de 1,95 g (4,32 mmol) de [bis-hidrocloruro del éster de metilo del ácido HN-(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina)], 1,22g (5,62 mmol), N-BOC-1-Valina, 1,89 ml (17,28 mmol) de NMM en DMF (20ml) se añadieron 1,81 g (4,76 mmol) de HATU a 0ºC. La mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a t.a toda la noche, se agitó durante 2 días, se diluyó con EtOAc (100 ml), se lavó con tampón a pH 4, (2x50 ml), solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (50 ml), salmuera (50 ml), se secó (MgSO_{4}), y se purificó por una columna Biotage 40 M (eluida con EtOAc en Hexanos de 15% a 100%) para proporcionar 2,39 g (95%) de éster de metilo del ácido 1-(2-terc-butoxicarbonil-amino-3-metil-1-butiril)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carboxílico (también llamado P3 N-BOC(L-Val)-P2 [(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)prolina}]-CO_{2}Me) en forma de una espuma. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,98 (d, J=7 Hz, 3H), 1,05 (d, J=7 Hz, 3H), 1,34 (s, 9H), 2,00-2,11 (m, 1H), 2,31-2,40 (m, 1H), 2,19 (dd, J=14, 8 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 4,04-4,14 (m, 1H), 4,21-4,26 (m, 1H), 4,49 (d, J=12 Hz, 1H), 4,75 (t, J=8 HZ, 1H); 5,13 (d, J=8 Hz, 1H), 5,35 (m, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,09 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,41-7,55 (m, 4H), 7,99-8,04 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención: 1,40, procedimiento A), EM m/e 578 (M^{+}+1).
Una solución de éster de metilo del ácido 1-{2-terc-butoxicarbonilamino-3 -metilbutiril)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carboxílico (2,865 g, 4,96 mmol) en THF (223 ml), CH_{3}OH (30 ml), y H_{2}O (119 5 ml) se añadió LiOH (952 mg, 39,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante un día, se acidificó a pH neutro, y se concentró a vacío hasta que sólo quedaba fase acuosa. El residuo acuoso resultante se acidificó a pH 4,0 por adición de solución acuosa de HCl 1,0 N y después se saturó con NaCl sólido. Esta mezcla acuosa se extrajo repetidas veces con EtOAc (5x200 ml), los disolventes orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para proporcionar 2,77 g (99%) del producto del título en forma de una espuma. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,97 (d, J=7 Hz, 3H), 1,03 (d, J=7 Hz, 3H), 1,19 (s, 9H), 1,94-2,0 6 (m, 1H), 2,37-2,47 (m, 1H), 2-83 (dd, J=14, 8 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,02-4,09 (m, 2H), 4,63-4,69 (m, 2H), 5,58 (m, 1H), 6,74 (d, J=8 Hz, 1H), 7,15 (dd, J=9 Hz, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,40 (d, J=2 Hz, 1H), 7,51-7,61 (m, 3H), 8,03-8,06 (2H), 8,15 (d, J=9 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,36, procedimiento A), EM m/z 564 (M^{+}+1).
En la Etapa 24c, se preparó el producto ácido 1-{[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3-metilbutiril)-4-{7-metoxi-2-fenilquinolin-4il-oxi)pirrolidina-2-carbonil]amino)-ciclopropanocarboxílico, mostrado a continuación, que también se puede llamar ácido BOC P3-(L-Val)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina) ]-P1-(1-aminociclopropanocarboxílico).
77
De forma específica, en una solución de 3,0 g (14,9 mmol) de ácido 1-terc-butoxicarbonilamina-ciclopropano-carboxílico disponible en el comercio, en 60 ml de MeOH enfriado de 5 a -78ºC, se burbujeó HCl gaseoso durante 10 min. La mezcla se calentó a t.a., se agitó toda la noche y se concentró a vacío para proporcionar 2,26 g (100%) de hidrocloruro del éster de metilo del ácido 1-aminociclopropanocarboxílico, en forma de un sólido blanco (Metanol-d_{4}) \delta 1,36-1,39 (m, 2H), 1,55-1,58 (m, 2H), 3,80 (s, 3H).
Después, a una suspensión de 400 mg (0,71 mmol) del producto de la Etapa 24b, 155 mg (0,92 mmol) de dihidrocloruro del éster de metilo del ácido 1-amino-ciclopropanocarboxílico y 0,40 ml (3,55 mmol) de NMM en CH_{2}Cl_{2}/THF al 50% (15 ml) se añadieron 0,43 g (0,92 mmol) de PyBrop a 0ºC. La mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a t.a. toda la noche, se diluyó con EtOAc (500 ml), se lavó con tampón a pH 4,0 (2x50 ml), solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (50 ml), salmuera (50 ml), se secó (MgSO_{4}), y se purificó por una columna Biotage 40 M (eluida con MeOH en EtOAc de 0% a 1%) para proporcionar 308 mg (66%) de éster de metilo del ácido 1-{[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butiril)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4il-oxi)pirrolidina-2-carbonil]amino}-ciclopropanocarboxílico (también denominado BOC P3-(L-Val)-P2 [éster de metilo del ácido (4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo}-S-prolina)]-P1-(1-aminociclopropanocarboxílico) en forma de una espuma. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 0,95 (d, J=7 Hz, 3H), 0,98 (d, J=7 Hz, 3H), 1,24 (s, 9H), 1,39-1,56 (m, 4H), 1,89-2,05 (m, 1H), 2,41-2,48 (m, 1H), 2,70 (dd, J=14, 8 Hz, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 4,02-4,05 (m, 2H), 4,52-4,63 (m, 2H), 5,47 (m, 1H), 7,04 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,18 (m, 1H), 7,34 (d, J=2 Hz, 1H), 7,45-7,55 (m, 3H), 8,03-8,06 (m, 3H); RMN ^{13}C (Metanol-d_{4}) \delta 17,36, 18,03, 18,98, 19,64, 28,54, 31,66, 34,36, 35,89, 52,92, 54,38, 55,97, 59,68, 60,42, 77,96, 80,41, 99,96, 107,55, 116,43, 119,16, 124,27, 128,96, 12 9,72, 130,47, 141,31, 152,22, 157,86, 161,22, 161,85, 163,03, 173,91, 174,28, 174,83; CL-EM (tiempo de retención:1,39, procedimiento A) EM m/z 661 (M^{+}+1).
Posteriormente, a una solución de éster de metilo del ácido 1-{[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3-metilbutiril)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-il-oxi)pirrolidina-2-carbonil]amino)-ciclopropanocarboxílico (308 mg, 0,47 mmol) en THF (21 ml), CH_{3}OH (3 ml) y H_{2}O (11 ml) se añadió LiOH (56 mg, 2,33 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante un día, se acidificó a pH neutro, y se concentró a vacío hasta que sólo quedaba capa acuosa. El residuo acuoso resultante se acidificó a pH 4,0 por adición de HCl acuoso 1,0 N y se extrajo repetidas veces con EtOAc (3X50 ml), los disolventes orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron, y se concentraron a vacío para proporcionar 292 mg (95%) del producto del título en forma de una espuma. RMN ^{1}H (Metanol-d_{4}) \delta 0,96 (d, J=7 Hz, 3H), 0,99 (d, J=7 Hz, 3H), 1,17 (s, 9H), 1,09-1,47 (m, 4H), 1,51-1,60 (m, 1H), 1,90-2,00 (m, 1H), 2,50-2,59 (m, 1H), 2,80 (dd, J=14, 8 Hz, 1H), 3,99 (s, 3H), 4,02-4,12 (m, 1H), 4,62 (m, 2H), 5,69 (m, 1H), 7,24 (dd, J=9, 2,4 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,60-7,66 (m, 3H), 8,02-8,08 (m, 2H), 8,23 (d, J=9 Hz, 1H). CL-EM (tiempo de retención: 1,50, procedimiento D) EM m/z 647 (M^{+}+1).
En la Etapa 24d, se preparó el Compuesto 21 por adición de CDI (81,2 mg, 0,50 mmol) a una solución del producto de la Etapa 24c (0,270 g, 0,42 mmol), en THF (3 ml), y después se calentó a reflujo durante 60 min. La solución se dejó enfriar a t.a. Después se añadió ciclopropilsulfonamida (0,0607 g, 0,50 mmol) en una porción antes de añadir una solución sola de DBU (0,075 ml, 0,50 mmol). La reacción se agitó durante 18 h, se diluyó con EtOAc (200 ml) y se lavó con tampón a pH 4,0 (3x30 ml), agua (2x30 ml), salmuera (30 ml), se secó (MgSO_{4}) y se purificó usando una placa de PTLC de 1000 \mu de Analtech de 20X40 cm, (eluida con MeOH en CH_{2}Cl_{2} al 2%) para proporcionar el Compuesto 21 en forma de una espuma (0,113 g, 40%): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,49 (750) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 0,88-1,18 (m, 10H), 1,23 (s, 9H), 1,37-1,79 (m, 4H), 2,00-2,09 (m, 1H), 2,43-2,53 (m, 1H), 2. 63-2,76 (m, 1H), 2,76-2,89 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,02-4,11 (m, 2H), 4,54-4-62 (m, 2H), 5,57 (m, 1H), 7,09 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,38 (d, J=2 Hz, 1H), 7,49-7,57 (m, 3H), 8,03-8,11 (m, 3H).
Ejemplo 25
Compuesto 22, el éster de terc-butilo del ácido 1-[2-(1-ciclopropanosulfonilamino-carbonilciclobutilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetilpropil]carbámico, mostrado a continuación, que también se denomina BOC P3-(L-tBuGly)-P2 [(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina)]-P1-(1-aminociclobutano-1-)CONHSO_{2}Ciclopropano, como se describe en las siguientes Etapas 25a-d.
78
En la Etapa 25a, se preparó el producto ácido 1-(2-terc-butoxi-carbonilamino-3,3-dimetilbutiril)-4-{7-metoxi-2-fenilquinolin-4iloxi)pirrolidina-2-carboxílico, mostrado a continuación, que también se denomina P3 N-BOC (L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina)]-CO2H, usando una secuencia de dos etapas.
79
De forma específica, a una suspensión de 3,90 g (8,60 mmol) de [bishidrocloruro del éster de metilo de la HN-(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina)], 2,65 g (11,47 mmol) de N-BOC-L-terc-leucina (L-tBuGly), 3,48 g (34,40 mmol) de NMM en DMF (20 ml) se añadieron 3,62 g (9,52 mmol) de HATU a 0ºC. La mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a t.a. toda la noche, se agitó durante 4 días, se diluyó con EtOAc (200 ml), se lavó con tampón a pH 4 (3x40 ml), solución acuosa saturada NaHCO_{3} (40 ml), se secó (MgSO_{4}), y se purificó por una columna Biotage 40 M (eluida con EtOAc en Hexanos de 15% a 70%) para proporcionar 4,16 g (81%) de éster de metilo del ácido 1-{2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetilbutiril)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carboxílico, que también se denomina P3 N-BOC (L-tBuGly)-P2 [(4R) -(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo}-S-prolina)]-CO_{2}Me, en forma de una espuma. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 1,07 (s, 9H), 1,37 (s, 9H), 2,29-2,39 (m, 1H), 2,78 (dd, J=14, 8 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,06-4,11 (m, 1H), 4,31 (d, J=10 Hz, 1H), 4,54 (d, J=11 Hz, 1H), 4,72-4,77 (m, 1H), 5,2, (d, J=10 Hz, 1H), 5,34 (m, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,07 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,44-7,52 (m, 3H), 7,99-8,03 (m, 3H). CL-EM (tiempo de retención: 1,43, procedimiento A) EM m/e 592 (M^{+}+1).
Después, a una solución de éster de metilo del ácido 1-{2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetilbutiril)-4-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carboxílico (4,179 g, 7,06 mmol) en THF (318 ml), CH_{3}OH (42 ml), y H_{2}O (170 ml) se añadió LiOH (1,356 g, 56,5 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante un día, se acidificó a pH neutro y se concentró a vacío hasta que sólo quedaba capa acuosa. El residuo acuoso resultante se acidificó a pH 4,0 por adición de solución acuosa de Hcl 1,0 N y después NaCl sólido. Esta mezcla acuosa se extrajo repetidas veces con EtOAc/THF al 80% (4X300 ml), los disolventes orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para proporcionar 3,69 g (91%) del producto del título en forma de una espuma. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 1,03 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 2,36-2,43 (m, 1H), 2,78-2,83 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,05 (d, J=10 Hz, 1H), 4,24 (d, J=9 Hz, 1H), 4,54 (d, J=12 Hz, 1H), 4,63-4,67 (m, 1H), 5,52 (m, 1H), 7,09 (dd, J=9 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,51-7,55 (m, 3H), 7,99-8,00 (m, 3H). 8,09 (d, J=9 Hz, 1H). CL-EM (tiempo de retención: 1,44, Procedimiento A), EM m/z 578 (M^{+}+1).
En la Etapa 25b, se preparó el hidrocloruro del éster de metilo del ácido 1-aminociclobutanocarboxílico.
80
De forma específica, se disolvió el ácido 1-aminociclobutanocarboxílico (100 mg, 0,869 mmol) (Tocris) en 10 ml de MeOH, se burbujeó HCl gaseoso durante 2 h. La mezcla de reacción se agitó durante 18 h, y después se concentró a vacío para dar 144 mg de un aceite amarillo. La trituración con 10 ml de éter proporcionó 100 mg del producto del título en forma de un sólido. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 2,10-2,25 (m, 1H), 2,28-2,42 (m, 1H), 2,64-2,82 (m, 4H), 3,87 (s, 3H), 9,21 (s ancho, 3H).
En la Etapa 25c, se preparó el producto, 1-{[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetilbutiril)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi}pirrolidina-2-carbonil]amino)-ciclobutanocarboxílico, mostrado a continuación, que también se puede denominar BOC P3-(L-tBuGly)-P2[(4R)-{2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-S-prolina)]-P1(1-aminociclobutano-1-)CO_{2}Me, usando una secuencia de dos etapas.
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81
A una mezcla de ácido 1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetilbutiril)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carboxílico (100 mg, 0,173 mmol) en 2 ml de cloruro de metileno se añadió DIPEA (112 mg, 0,865 mmol) seguido de HBTU (78,4 mg, 0,207), HOBT-H_{2}O (32 mg, 0,207 mmol), y finalmente hidrocloruro del éster de metilo del ácido 1-aminociclobutano-carboxílico (30 mg, 0,182 mmol). La mezcla se agitó a t.a. durante 24 h, se diluyó con EtOAc (50 ml), se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (25 ml), salmuera (25 ml), y se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se concentró a vacío para dar 134 mg del producto bruto en forma de un aceite amarillo. La cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de etilo/hexano 1:1 dio 93 mg (78%) de éster de metilo del ácido 1-{[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetil-butiril)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carbonil]amino}ciclobutano-carboxílico, que también se denomina BOC P3-(L-tBuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxi-quinolina-4-oxo)-prolina)]-P1-{1-aminociclobutano-1-)CO_{2}Me, en forma de un aceite incoloro. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 1,06 (s, 9H), 1,43 (s, 9H), 1. 98-2,09 (m, 2H), 2,23-2,32 (m, 2H), 2,42-2,50 (m, 1H), 2,61-2,71 (m, 2H), 2,93-3,02 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 4,37 (d, J=12 Hz, 1H), 4,47 (d, J=9 Hz, 1H), 4,87 (t, J=7 Hz, 1H), 5,23-5,26 (d, J=9,8 Hz, 1H), 5,36 (s ancho, 1H), 7,04-7,08 (m, 2H), 7,45-7,54 (m, 5H), 8,05-8,08 (m, 3H); CL-EM (tiempo de retención: 1,67 minutes, Procedimiento D), EM m/z 689 (M^{+}+1). HPLC tiempo de retención: 13,42 min.
A una mezcla del éster de metilo del ácido 1-{[1-(2-terc-butoxicarbonil-amino-3,3-dimetilbutiril)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)pirrolidina-2-carbonil]-amino}-ciclobutano-carboxílico (2) (93 mg, 0,135 mmol) en THF (3 ml), metanol (1,5 ml), y agua (0,4 ml) se añadieron 30 mg de LiOH (65 mg, 2,7 mmol). La mezcla se agitó a t.a. Durante 3 días, se concentró a vacío, y después se repartió entre éter (50 ml) y agua (25 ml). La capa acuosa se acidificó a pH 4 usando HCl 1 N, y se extrajo con éter (3 x 50 ml). Las capas de éter combinadas se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar 81 mg (89%) del producto del título en forma de una espuma blanca. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 1,04 (s, 9H), 1,41 (s, 9H), 1,98-2,09 (m, 2H), 2,20-2,30 (m, 2H), 2,50-2,58 (m, 1H), 2,66-2,80 (m, 2H), 2,84-2,93 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 4,31 (d, J=9 Hz, 1H), 4,54 (d, J=10 Hz, 1H), 4,83 (t, J=7 Hz, 1H), 5,28 (d, J=12 Hz, 1H), 5,39 (s ancho, 1H), 7,03 (s, 1H), 7,08 (dd, J=3,9 Hz, 1H), 7,47-7,55 (m, 4H), 7,64 (s ancho, 1H), 8,06-8,08 (m, 3H). CL-EM (tiempo de retención: 1,66, Procedimiento D), EM m/z 675 (M^{+}+1). HPLC tiempo de retención: 11,06 min.
En la Etapa 25d, se preparó el Compuesto 22 a partir de una mezcla de 64 mg (0,095 mmol) del producto de la Etapa 25c y CDI (19,9 mg, 0,123 mmol) en THF (3 ml) que se calentó a reflujo durante 1 h. Después de enfriar la mezcla de reacción a t.a., se añadió ciclopropilsulfonamida (14,9 mg, 0,123 mmol) seguido de DBU (18,7 mg, 0,123 mmol). Después de agitar a t.a. durante 24 h, la reacción se repartió entre EtOAc (50 ml) y tampón a pH 4,0 (25 ml). La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (25 ml), se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se concentró a vacío. El producto bruto se purificó por una placa de PTLC de 1000 \mu de 20X40 cm de Analtech, (eluida dos veces con metanol en cloruro de metileno al 2,5%) para proporcionar 330 mg (41%) de Compuesto 22 en forma de un sólido blanco. CL-EM (tiempo de retención: 1,67, Procedimiento D), EM m/z 778 (M^{+}+1). HPLC tiempo de retención: 12,03 min.
Ejemplo 26
Los siguientes compuestos de la presente invención también se prepararon por los procedimientos descritos en los Ejemplos 1-25 precedentes.
Compuesto 23
82
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,86 (806) (procedimiento D). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 0,89 (t, J=7,3 Hz, 1H), 1,04 (s, 9H), 1,26-1,44 (m, 12H), 1,67-1,73 (m, 2H), 1,78-1,80 (m, 1H), 2,01-2,09 (m, 1H), 2,53 (m, 1H), 2,68-2,72 (m, 1H), 3,06-3,17 (m, 2H), 3,92, 3,94 (2s, 3H), 4,1,5-4,18 (m, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,49-4,55 (m, 2H), 5,00 (d, J=10 Hz, 1H), 5,18 (d, J=17 Hz, 1H), 5,53 (m, 1H), 5,82-5,90 (m, 1H), 7,06 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,36-7,38 (m, 1H), 7,46-7,554 (m, 3H), 8,04-8,09 (m, 3H).
Compuesto 24
83
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,79 (790) (procedimiento D). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}), 500 MHz) \delta 0,74 (t, J=7,3 Hz, 3H), 1,08 (s, 9H), 0,79-1,29 (m, 10H), 1,34-1,42 (m, 1H), 2,00-2,15 (m, 2H), 2,28-2,35 (m, 1H), 2,39-2,44 (m, 1H), 2,65 (dd, J=14, 6 Hz, 1H), 3,99 (s, 3H), 4,13 (d, J=12 Hz, 1H), 4,22 (d, J=11 Hz, 1H), 4,28 (dd, J=12, 4 Hz, 1H), 4,57-4,61 (m, 1H), 5,00 (d, J=11 Hz, 1H), 5,13 (d, J=17 Hz, 1H), 5,51 (m, 1H), 5,92-5,99 (m, 1H), 6,73 (d, J=9 Hz, NH), 7,20 (s, 1H), 7,42 (d, J=2 Hz, 1H), 7,48-7,56 (m, 4H), 7,82 (d, J=9 Hz, 1H), 8,03-8,04 (m, 3H).
Compuesto 25
84
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,84 (778) (procedimiento D). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,03 (s, 9H), 1,24-1,38 (m, 3H), 1,26 (s, 9H), 1,83 (m, 1H), 2,09-2,18 (m, 1H), 2,41 (m, 1H), 2,66-2,77 (m, 1H), 3,03-3,30 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 4,02-4,14 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,51-4,57 (m, 2H), 5,05 (d, J=10 Hz, 1H), 5,23 (d, J=17 Hz, 1H), 5,53 (m, 1H), 5,75-5,89 (m, 1H), 7,06 (d, J=9 Hz, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,47-7,54 (m, 3H), 8,03-8,10 (m, 3H).
Compuesto 26
85
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,85 (792) (procedimiento D). RMN ^{1}H (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,04 (s, 9H), 1,26-1,30 (m, 12H), 1,34 (m, 1H), 1,56-1,66 (m, 1H), 1,69-1,83 (m, 2H), 2,00-2,11 (m, 1H), 2,46-2,55 (m, 1H), 2,64-2,73 (m, 1H), 3,13-3,19 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 4,12-4,18 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,50-4,58 (m, 2H), 5,01. (d, J=10 Hz, 1H), 5,19 (d, J=17 Hz, 1H), 5,54 (m, 1H), 5,80-5,92 (m, 1H), 7,06 (d, J=9 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,37 (m, 1H), 7,47-7,55 (m, 3H), 8,04-6,12 (m, 3H).
Compuesto 27
86
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,80 (792) (procedimiento D)
Compuesto 28
87
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,57 (690) (procedimiento D). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,04-1,33 (m, 4H), 1,17 (s, 9H), 1,42 (m, 1H), 1,89 (m, 1H), 2,33 (m, 1H), 2,43 (m, 1H), 2,84 (m, 1H), 2,95 (s, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,19 (m, 2H), 4,56 (m, 1H), 4,76 (m, 1H), 5,13 (d, J=10 Hz, 1H), 5,32 (d, J=17 Hz, 1H), 5,65-5,76 (m, 1H), 5,90 (m, 1H), 7,47 (m, 1H), 7,63 (s, 2H), 7,74 (m, 3H), 8,15 (m, 2H), 8,48 (m, 1H).
Compuesto 29
88
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,57 (802) (procedimiento D). RMN ^{1}H: (CDCl_{3}, 500 MHz) \delta 0,94-1,78 (m, 13H), 1,07 (s, 9H), 1,87-2,03 (m, 2H), 2,16-2,19 (m, 1H), 2,32-2,45 (m, 2H), 2,64-2,68 (m, 1H), 3,91-3,96 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,06 (d, J=12 Hz, 1H), 4,20 (dd, J=12, 4 Hz, 1H), 4,56-4,60 (m, 1H), 4,98-5,01 (m, 1H), 5,13-5,16 (m, 20 1H), 5,29 (m, 1H), 6,01-6,08 (m, 1H), 6,88 (s, 1H), 6,92 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,42-7,51 (m, 4H), 7,86 (d, J=9 Hz, 1H), 7,99-8,03 (m, 2H).
Compuesto 30
89
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,90 (804) (procedimiento D). RMN ^{1}H: (CDCl_{3}, 500 MHz \delta 1,20-1,34 (m, 10H), 1,30 (s, 9H), 1,39-1,42 (m, 1H), 1,44-1,55 (m, 2H), 1,55-1,64 (m, 2H), 1,64-1,75 (m, 2H), 1,92 (dd, J=8, 6 Hz, 1H), 2,25-2,30 (m, 1H), 2,39-2,44 (m, 1H), 2,58-2,62 (m, 1H), 3,76-3,82 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,03 (dd, J=12, 4 Hz, 1H), 4,19 (t, J=9 Hz, 1H), 4,49 (dd, J=9, 7 Hz, 1H), 4,64 (d, J=12 Hz, 1H), 5,09 (d, J=11 Hz, 1H), 5,20 (d, J=17 Hz,1H), 5,32 (m, 1H), 5,54 (d, J=8 Hz, 1H), 5,73-5, 80 (m, 1H), 6,94 (s, 1H), 7,01 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,41-7,50 (m, 4H), 7,98-8,00 (m, 3H).
Compuesto 31
90
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,80 (776) (procedimiento D)
Compuesto 32
91
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,85 (778) (procedimiento D). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 0,87 (d, J=7 Hz, 1H), 1,06-1,08 (m, 9H), 1,29-1,3 7 (m, 10H), 1,96-2,06 (m, 1H), 2,04-2,12 (m, 1H), 2,27-2,40 (m, 1H), 2,64-2,68 (m, 1H), 2,94-2,95 (m, 1H), 3,76 (d, J=11,0 Hz, 1H), 3,94, 3,96 (2s, 3H), 4,07 (d, J=11,6 Hz, 1H), 4,18 (dd, J=11,6, 4,6 Hz, 1H), 4,63 (dd, J=10,7, 6,4 Hz, 1H), 4,99 (dd, J=10,4, 1,6 Hz, 1H), 5,31 (m, 1H), 6,01-6,09 (m, 1H), 6,94 (dd, J=9, 2,4 Hz, 1H), 7,43 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,46-7,54 (m, 4H), 7,89 (d, J=9,1 Hz, 1H), 7,98-8,03 (m, 2H).
Compuesto 33
92
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,87 (790) (procedimiento D). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 0,84 (d, J=6,4 Hz, 3H), 1,14-1,19 (m, 2H), 0,89-0,94 (m, 6H), 1,28 (s, 9H), 1,51 (m, 1H), 1,61-1,75 (mi 2H), 2,01-2,07 (m, 2H), 2,32-2,36 (m, 1H), 2,49 (m, 1H), 2,68 (dd, J=13,9, 6,3 Hz, 1H), 3,90, 4,01 (2s, 3H), 4,11 (d, J=11,9 Hz, 1H), 4,20 (dd, J=11,9, 3,4 Hz, 1H), 4,54-4,60 (m, 2H), 4,99 (d, J=11,0 Hz, 1H), 5-13 (d, J=17,4 Hz, 1H), 5,53, 5,57 (m, 1H), 5,87-5,97 (m, 1H), 6,87
(d, J=7,6 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,43 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,47-7,55 (m, 4H), 7,86 (d, J=8,6Hz, 1H), 8,02-8,07 (m, 3H).
Compuesto 34
93
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,93 (792) (procedimiento D).
Compuesto 35
94
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,65 (877) (procedimiento B). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,06 (s, 9H), 1,2 7 (s, 9H), 1,29-1,33 (m, 1H), 1,70-1,73 (m, 1H), 2,06-2,12 (m, 1H), 2,36 (m, 1H), 2,60-2,71 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,08-4,12 (m, 1H), 4,25-4,28 (m, 1H), 4,52-4,57 (m, 2H), 4,91 (d, J=11 Hz, 1H), 5,14 (d, J=17 Hz, 1H), 5,53 (m, 2H), 6,97-7,08 (m, 4H), 7,24 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,47-7,55 (m, 3H), 7,81-7,88 (m, 4H), 8,04-8,09 (m, 3H).
Compuesto 36
95
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,73 (841) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,06 (s, 9H), 1,28 (s, 9H), 1,32-1,35 (m, 1H), 1,69 (dd, J=8, 5,5 Hz, 1H), 2,11-2,18 (m, 1H), 2,31-2,37 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,62 (dd, J=14, 7 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,08-4,13 (m, 1H) 4,25-4,29 (m, 1H), 4,52-4,57 (m, 2H), 4,92 (d, J=12 Hz, 1H), 5,16 (d, J=17 Hz, 1H), 5,37-5,46 (m, 1H), 5,58 (m, 1H), 7,10 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,27 (2s, 1H), 7,38-7,42 (m, 2H), 7,44-7,47 (m, 1H), 7,49-7,58 (m, 3H), 7,77 (m, 2H), 8,04, 8,06 (2s, 2H), 8,10 (d, J=9 Hz, 1H).
Compuesto 37
\vskip1.000000\baselineskip
96 
\vskip1.000000\baselineskip
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,59 (841) (procedimiento B.). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,04 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,21-1-43 (m, 1H), 1-72 (dd, J=7, 5 Hz, 1H), 2,06-2-21 (m, 1H), 2,34 (m, 4H), 2,56-2,72 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,05-4,11 (m, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,48-4,55 (m, 2H), 4,90 (d, J=11 Hz, 1H), 5,13 (d, J=17 Hz, 1H), 5,40-5,87 (m, 2H), 7,06 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,18-7,25 (m, 3H), 7,37 (d, J=2 Hz, 1H), 7,46-7,53 (m, 3H), 7,80 (d, J=8,2, 2H), 8,03-8,10 (m, 3H).
Compuesto 38
\vskip1.000000\baselineskip
97 
\vskip1.000000\baselineskip
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,66 (826) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,06 (s, 9H), 1,28 (s, 9H), 1,31-1,34 (m, 1H), 1,71 (dd, J=8, 5,5 Hz, 1H), 2,11-2,16 (m, 1H), 2,30-2,39 (m, 1H), 2,64-2,72 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,11 (dd, J=12, 2,6 Hz, 1H), 4,25-4,29 (m, 1H), 4,52-4,57 (m, 2H), 4,91 (d, J=10 Hz, 1H), 5,15 (d, J=17 Hz, 1H), 5,37-5,46 (m, 1H), 5,57 (m, 1H), 7,10 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,40 (d, J=2 Hz, 1H), 7,49-7,58 (m, 5H), 7,61-7,65 (m, 1H), 7,96-7,97 (m, 2H), 8,04, 8,05 (2s, 2H), 8,10 (d, J=9 Hz, 1H).
\newpage
Compuesto 39
98
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,73 (895) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,03 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,32 (m, 1H), 1,69-1,73 (m, 1H), 2,00-2,06 (m, 1H), 2,43-2,50 (m, 1H), 2,56-2,60 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,04-4,17 (m, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,45 (d, J=12 Hz, 1H), 4,52 (t, J=8,5 Hz, 1H), 4,84 (d, J=10 Hz, 1H), 5,09 (d, J=17 Hz, 1H), 5,46 (m, 1H), 5,70 (m, 1H), 7,04-7,25 (m, 4H), 7,33-7,40 (m, 2H), 7,47-7,57 (m, 3H), 8,02-8,11 (m, 3H).
Compuesto 40
99
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,66 (851) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,02 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,31 (m, 1H), 1,74 (dd, J=7, 5 Hz, 1H), 2,05-2,11 (m, 1H), 2,46 (m, 1H), 2,61-2,73 (m, 1H), 3,91, 3,94 (2s, 3H), 4,06-4,11 (m, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,48 (d, J=12 Hz, 1H), 4,56 (t, J=9 Hz, 1H), 4,90-4,95 (m, 1H) r 5,14 (d, J=17 Hz, 1H), 5,48 (m, 1H), 5,69-5,76 (m, 1H), 7,02-7,08 (m, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,35-7,39 (m, 1H), 7,47-7,59 (m, 3H), 7,78-7,79 (m, H), 8,01-0,22 (m, 5H).
Compuesto 41
\vskip1.000000\baselineskip
100
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,65 (851) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,02 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,21-1,30 (m, 1H), 1,73 (dd, J=7, 5 Hz, 1H), 2,03-2,09 (m, 1H), 2,41-2,50 (m, 1H), 2,62-2,69 (m, 1H), 3,92, 3,94 (2s, 3H), 4,07-4,11 (m, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,48 (d, J=12 Hz, 2H), 4,52-4,59 (m, 1H), 5,13 (d, J=17 Hz, 1H), 5,48 (m, 1H), 5,72-5,80 (m, 1H), 7,04 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,35-7,39 (m, 1H), 7,46-7,54 (m, 3H), 7,73 (m, 2H), 7,89-8,10 (m, 5H).
Compuesto 42
101
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,70 (860) (procedimiento B). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,04 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 1,31-1,35 (m, 1H), 1,71 (dd, J=8, 5 Hz, 1H), 2,11-2,17 (m, 1H), 2,37-2,44 (m, 1H), 2,67 (dd, J=14, 7 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,12 (dd, J=11,9, 3,1 Hz, 1H), 4,24-4,27 (m, 1H), 4,53-4,60 (m, 2H), 4,81-4,84 (m, 1H), 5,12 (d, J=16,2 Hz, 1H), 5,19-5,28 (m, 1H), 5,58 (s, 1H), 7,10 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,30 (d, J=2 Hz, 1H), 7,42-7,47 (m, 1H), 7,50-7,59 (m, 5H), 8,04-8,13 (m, 4H).
Compuesto 43
102
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,63 (860) (procedimiento B).
Compuesto 44
103
CL/EM tr-min (M+H^{+}): 1,78 (860) (procedimiento B). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,06 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 1,30-1,34 (m, 1H), 1,72 (dd, J=8, 5,5 Hz, 1H), 2,11-2,16 (m, 1H), 2,32-2,43 (m, 1H), 2,68 (dd, J=14, 7 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,07-4,12 (m, 1H), 4,24-4,27 (m, 1H), 4,53-4,57 (m, 2H), 4,92 (d, J=10 Hz, 1H), 5,15 (d, J=17 Hz, 1H), 5,37-5,45 (m, 1H), 5,58 (m, 1H), 7,11 (d, J=9 Hz, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,52-7,57 (m, 5H), 7,91-7,94 (m, 2H), 8,04, 8,05 (2s, 2H), 8,10-8,13 (m, 1H).
Compuesto 45
\vskip1.000000\baselineskip
104 
\vskip1.000000\baselineskip
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,82 (879) (procedimiento B). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,06 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,33 (dd, J=9, 5 Hz, 1H), 1,73 (dd, J=8, 5 Hz, 1H), 2,11-2,17 (m, 1H), 2,36-2,43 (m, 1H), 2,71 (dd, J=14, 7 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,13 (dd, J=12, 3 Hz 1H), 4,25 (s, 1H), 4,53-4,58 (m, 2H), 4,94 (d, J=10 Hz, 1H), 5,17 (d, J=17 Hz, 1H), 5,46-5,53 (m, 1H), 5,60 (m, 1H), 7,13 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,37-7,42 (m, 2H), 7,53-7,58 (m, 3H), 7,92-7,95 (m, 1H), 8,04-8,06 (m, 3H), 8,13 (d, J=9,5 Hz, 1H).
Compuesto 46
\vskip1.000000\baselineskip
105 
\vskip1.000000\baselineskip
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,76 (858) (procedimiento B). RMN ^{1}H (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,03 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 1,33 (dd, J=9,5, 5 Hz, 1H), 1,72 (dd, J=8, 6 Hz, 1H), 2,12-2,18 (m, 1H), 2,36-2,43 (m, 1H), 2,58 (s, 3H), 2,70 (dd, J=14, 7 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,12 (dd, 17=12, 3 Hz, 1H), 4,22-4,26 (m, 1H), 4,54-4,59 (m, 2H), 5,15 (d, J=17 Hz, 1H), 5,28-5,35 (m, 1H), 5,59 (m, 1H), 7,11 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,20-7,27 (m, 3H), 7,40 (d, J=2 Hz, 1H), 7,51-7,57 (m, 3H), 7,72 (dd, J=9, 3 Hz, 1H), 8,04, 8,05 (2s, 2H), 8,12 (d, J=9 Hz, 1H).
\newpage
Compuesto 47
106
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,79 (894) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,05 (s, 9H), 1,26, 1,28 (2s, 9H), 1,31-1,34 (m, 1H), 1,72 (m, 1H), 2,08-2,16 (m, 1H), 2,37-2,42 (m, 1H), 2,68 (dd, J=14, 7 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,13 (dd, J=12 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 4-53-4,57 (m, 2H), 5,13 (d, J=17 Hz, 1H), 5,42-5,49 (m, 1H), 5,59 (m, 1H), 7,12 (d, J=9 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,54-7,57 (m, 3H), 7,70-7,74 (m, 1H), 7,93 (d, J=7 Hz, 1H), 8,04, 8,05 (2s, 2H), 8,12-8,22 (m, 3H).
Compuesto 48
107
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,74 (894) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,01 (s, 9H), 1,26, 1,28 (2s, 9H), 1,30-1,33 (m, 1H), 1,72 (dd, J=8, 5 Hz, 1H), 2,21-2,26 (m, 1H), 2,38-2,44 (m, 1H), 2,69 (dd, J=14, 7 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,12-4,15 (m, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,54-4,59 (m, 2H), 4,82 (dd, J=10, 2 Hz, 1H), 5,10 (d, J=17 Hz, 1H), 5,23-5,30 (m, 1H), 5,60 (m, 1H), 7,12 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,30 (s, 1H), 7-40 (d, J=2 Hz, 1H), 7,51-7,58 (m, 3H), 7,74-7,81 (m, 2H), 7,87-7,91 (m, 1H), 8,04, 8,05 (2s, 2H), 8,12 (d, J=9 Hz, 1H), 8,32 (d, J=7 Hz, 1H).
Compuesto 49
108
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,67 (844) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,04 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,43 (m, 1H), 1,68-1,70 (m, 1H), 1,92-2,00 (m, 1H), 2,57-2,65 (m, 1H), 2,74 (dd, J=14, 8 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,18-4,27 (m, 2H), 4,49-4,59 (m, 2H), 4,89-4,93 (m, 1H), 5,11 (dd, J=17, 2 Hz, 1H), 5,56 (m, 1H), 5,62-5,72 (m, 1H), 7,04-7,14 (m, 3H), 7,28 (s, 1H), 7,39-7,41 (m, 1H), 7,48-7,55 (m, 3H), 7,87-7,93 (m, 2H), 8,06-8,13 (m, 3H).
Compuesto 50
109
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,55 (851) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 0,76 (s, 9H), 1,35 (s, 9H), 1,49 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 2,03-2,05 (m, 1H), 2,31-2,43 (m, 2H), 2,71 (dd, J=13, 6 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,04-4,13 (m, 1H), 4,48-4,64 (m, 2H), 5,07-5,16 (m, 1H), 5,23-5,34 (m, 1H), 5,55-5,76 (m, 2H), 7,05-7,10 (m, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,40 (d, J=2 Hz, 1H), 7,47-7,58 (m, 4H), 7,78-7,89 (m, 1H), 7,92-7,99 (m, 1H), 8,03, 8,0 5 (2s, 2H), 8,09-8,17 (m, 1H), 8,39 (d, J=7,3 Hz, 1H)
Compuesto 51
110
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,66 (871) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,06 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,43 (m, 1H), 1,69-1,72 (in, 1H), 2,09-2,15 (m, 1H), 2,42-2,48 (m, 1H), 2,71 (dd, J=14, 7 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,13-4,16 (m, 1H), 4,22-4,26 (m, 1H), 4,55-4,58 (m, 2H), 4,89 (d, J=10 Hz, 1H), 5,14 (d, J=17 Hz, 1H), 5,47-5,54 (m, 1H), 5,62 (m, 1H), 6,63 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,13-7,15 (m, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,54-7,61 (m, 3H), 8,04, 8,06 (2s, 2H), 8,15.(d, J=9 Hz, 1H), 8,31 (d, J=8 Hz, 1H), 8,44 (d, J=8 Hz, 1H), 8,72 (d, J=9 Hz, 1H).
Compuesto 52
111
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1-70 (871) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 1,05 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,27-1,31 (m, 1H), 1,70 (dd, J=8, 5, Hz, 1H), 2,10-2,16 (m, 1H), 2,42-2,50 (m, 1H), 2,71 (dd, J=14, 7 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,12-4,14 (m, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,54-4,60 (m, 2H), 4,91 (d, J=12 Hz, 1H), 5,15 (d, J=17 Hz, 1H), 5,51-5,59 (m, 2H), 7,13 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,38 (d, J=2 Hz, 1H), 7,53-7,56 (m, 3H), 7,99-8-04 (m, 2H), 8,09-8,31 (m, 3H), 8,27 (d, J=9 Hz, 1H).
Compuesto 53
112
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,70 (871) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 1,02 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,42 (m, 1H), 1,66-1,72 (m, 1H), 1,90-1,98 (m, 1H), 2,56-2,66 (m, 1H), 2,70-2,80 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,16-4,26 (m, 2H), 4,47-4,59 (m, 2H), 5,09 (dd, J=17, 1,5 Hz, 1H), 5,54 (m, 1H), 5,60-5,78 (m, 1H), 6,60 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,06 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,37-7,40 (m, 1H), 7,48-7,65 (m, 4H), 8,04-8,10 (m, 3H), 8,18-8,29 (m, 2H), 8,67 (s, 1H).
Compuesto 54
113
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,79 (844) (procedimiento B). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4} 300 MHz) \delta 1,02 (s, 9H), 1,25 (s, 9H), 1,43 (m, 1H), 1,77 (dd, J=8, 5 Hz, 1H), 2,00-2,19 (m, 1H), 2,38-2,69 (m, 2H), 3,91 (s, 3H), 4,03-4,14 (m, 1H), 4,20-4,33 (m, 1H), 4,45 (d, J=12 Hz, 1H), 4,55 (t, J=9 Hz, 1H), 5,12 (d, J=17 Hz, 1H), 5,44 (m, 1H), 5,67-5,88 (m, 1H), 7,01-7,18 (m, 4H), 7,34 (s, 1H), 7,40-7,57 (m, 3H), 7,82-7,92 (m, 1H), 8,01-8,10 (m, 3H).
Compuesto 55
\vskip1.000000\baselineskip
114
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,75 (905 en EM) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 1,02 (s, 9H), 1-25 (s, 9H), 1,42 (m, 1H), 1,75 (dd, J=8, 5 Hz, 1H), 2,00-2,12 (m, 1H), 2-38-2,46 (m, 1H), 2,57-2,69 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 4,03-4,10 (m, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,47 (d, J=12 Hz, 1H), 4,54 (t, J=9 Hz, 2H), 4,93 (d, J=11 Hz, 1H), 5,14 (d, J=17 Hz, 1H), 5,44 (m, 1H), 5,62-5-84 (m, 1H), 7,04 (dd, J=9, 2,6 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,29-7,37 (m, 2H), 7,45-7,61 (m, 4H), 7,77-7,88 (m, 1H), 7,98-8,11 (m, 4H).
Compuesto 56
\vskip1.000000\baselineskip
115 
\vskip1.000000\baselineskip
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,72 (952 en EM) (procedimiento A). RMN ^{1}H; (metanol-d_{4}, 300 MHz), \delta 1,02 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,32 (m, 1H), 1,84 (dd, J=7,5, 5 Hz, 1H), 2,06-2,13 (m, 1H), 2,43-2,52 (m, 1H), 2,63 (dd, J=14, 7 Hz 1H), 3,92 (s, 3H), 4,03-4,10 (m, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,45 (d, J=11 Hz, 2H), 4. 53-4,58 (in, 2H), 4,89 (m, 1H), 5,08-5,20 (m, 1H), 5,36, 5,42 (m, 1H), 5,71-5,99 (m, 1H), 7,02-7,08 (m, 2H), 7,16 (s, 1H), 7,31-7,38 (m, 2H), 7,44-7-53 (m, 3H), 7,90-8,13 (m, 5H). HRMS calculado para C_{44}H_{51}IN_{5}O_{9}S 952,2452 encontrado 952,2476.
Compuesto 57
\vskip1.000000\baselineskip
116 
\vskip1.000000\baselineskip
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,64 (884) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 1,04 (s, 9H), 1,23 (s, 9H), 1,28-1,37 (m, 1H), 1,72 (dd, J=7,9, 5,7 Hz, 1H), 2,11-2,20 (m, 1H), 2,45-2,54 (m, 1H), 2,78 (dd, J=13,4, 6,8 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,03 (s, 3H), 4,10-4,19 (m, 1H), 4,25-4,35 (m, 1H), 4,64-4,73 (m, 2H), 5,04 (d, J=17,9 Hz, 1H), 5,16-5,28 (m, 1H), 5,80 (in, 1H), 7,30 (dd, J=9,2, 1,8 Hz, 1H), 7,50 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,60 (m, 6H), 8,06-8,08 (m, 2H), 8,15 (d, J=7,3 Hz, 1H), 8,30 (d, J=9,2 Hz, 1H).
\newpage
Compuesto 58
117
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,57 (884) (procedimiento B). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 1,03 (s, 9H), 1,24, 1,29 (2s, 10H), 1,43 (s, 1H), 1,55-1,86 (m, 2H), 2,00 (m, 1H), 2,09 (s, 3H), 2,36-2,45 (m, 1H), 2,59-2,66 (m, 1H), 3,92, 3,94 (2s, 3H), 4,10 (m, 1H), 4,23-4-26 (m, 1H), 4,45-4,58 (m, 2H), 4,91 (d, J=11,7 Hz, 1H), 5,12 (d, J=16,8 Hz, 1H), 5,44 (s, 1H), 5,64-5,76 (m, 1H), 7,05 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,36 (d, J=2,4 Hz, 2H), 7,47-7,55 (m, 3H), 7,59-7,64 (m, 2H), 7,79-7,84 (m, 2H), 8,02-8,08 (m, 3H).
Compuesto 59
118
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,74 (857) (procedimiento E). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 1,05 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,43 (m, 1H), 1,70-1,79, (m, 1H), 2,10 (q, J=8,8 Hz, 1H), 2-32-2,41 (m, 1H), 2,62 (dd, J=13, 7 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 4,06-4,11 (m, 1H), 4,24-4,33 (m, 1H), 4,48-4,57 (m, 2H), 5,00 (d, J=12,1 Hz, 1H), 5,14 (d, J=17,2 Hz, 1H), 5,48 (m, 1H), 5,64-5,66 (m, 1H), 6,91-6,96 (m, 1H), 7,01-7,07 (m, 1H), 7,18-7,41 (m, 3H), 7,47-7,55 (m, 3H), 7,80-7,78 (m, 2H), 8,02-8,08 (m, 3H).
Compuesto 60
119
RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 1,04 (s, 9H), 1,24-1,44 (m, 19H), 1,76 (dd, J=8, 5 Hz, 1H), 2,03-2,21 (m, 1H), 2,40-2,5,0 (m, 1H), 2,58-2,65 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,08-4,14 (m, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,45-4,58 (m, 2H), 4,92 (dd, J=10,4, 2 Hz, 1H), 5,15 (d, J=17,2 Hz, 1H), 5,47 (m, 1H), 5,71 (m, 1H), 7,05 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,34-7,6 8 (m, 6H), 7,77-7,83 (m, 2H), 7,95-8,07 (m, 3H).
Compuesto 61
120
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,58 (790) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 1,05 (s, 9H), 1,26, 1,27 (2s, 18H), 1,33-1,44 (m, 1H), 1,81-1,85 (m, 1H), 2,18-2,35 (m, 2H), 2,67-2,74 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,01-4,10 (m, 1H), 4,19-4,25 (m, 1H), 4,57-4,62 (m, 2H), 5,10 (d, J=12 Hz, 1H), 5,24 (d, J=17 Hz, 1H), 5,53-5,65 (m, 2H), 6,51 (d, J=9 Hz, 1H), 7,07 (dd, J=9, 2 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,40 (d, J=2 Hz, 1H), 7,47-7,57 (m, 3H), 8,03-8,06 (m, 2H), 8,10 (d, J=9 Hz, 1H); HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{42}H_{56}N_{5}SO_{8}: 790,3850 encontrado: 790,3834.
Compuesto 62
121
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,61 (790) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 1,03 (s, 9H), 1,21-1,37 (m, 1H), 1,23 (s, 9H), 1,29 (s, 9H), 1,79-1,86 (m, 1H), 2,00-2,39 (m, 1H), 2,68-2,72 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,04-4,13 (m, 1H), 4,24-4,33 (m, 1H), 4,54-4,69 (m, 2H), 5,09 (d, J=10 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17 Hz, 1H), 5,48-5,67 (m, 2H), 7,05-7,09 (m, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,49-7,62 (m, 3H), 8,04-8,11 (m, 3H); HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{42}H_{56}N_{5}SO_{8}: 790,3850 encontrado: 790,3827.
Compuesto 63
122
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,78 (841) (procedimiento D).
Compuesto 64
123
CL/EM tr-min (MH^{+}): 2,04 (953 en EM) (procedimiento B). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 1,06, 1,08 (2s, 9H), 1,20-1,29 (m, 28H), 1,43 (m, 1H), 1,73 (dd, J=7,9, 5,7 Hz 1H), 2,03-2,14 (m, 1H), 2,38 (m, 1H), 2,68 (dd, J=13,9, 6,2 Hz, 1H), 2,85-2,94 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,14 (dd, J=11,9, 2,7 Hz, 1H), 4,24-4,36 (m, 3H), 4,48-4,61 (m, 2H), 4,78 (d, J=H,3 Hz, 1H), 5,06 (d, J=17,2 Hz, 1H), 5,58 (m, 1H), 7,07-7,11 (m, 1H), 7,18 (s, 2H), 7,27 (s, 1H), 7,40 (d, J=1,8, 1H), 7,47-7,57 (m, 3H), 8,04-8,11 (m, 3H). HRMS calculado parar C_{53}H_{70}N_{5}O_{9}S 952,4894 encontrado 952,4898
Compuesto 65
124
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,77 (902) (procedimiento B). RMN ^{1}H; (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 1,04 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 1,43 (m, 1H), 1,74 (m, 1H), 2,06 (m, 1H), 2,33-2,71 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,09 (m, 1H), 4,24 (m, 1H), 4,42-4,58 (m, 2H), 4,91-4,94 (m, 1H), 5,15 (d, J=16,5 Hz, 1H), 5,47 (m, 1H), 5,74 (m, 1H), 7,04-7,07 (m, 1H), 7,34-7,68 (m, 12H), 7,94-8,07 (m, 5H). HRMS calculado para C_{50}H_{56}N_{5}O_{9}S 902,3799 encontrado 902,3790.
Compuesto 66
125
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,86 (909) (procedimiento B). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 1,03 (s, 9H), 1,25, 1,30 (2s, 9H), 1,43 (m, 1H), 1,72-1,76 (m, 1H), 2,02-2,11 (m, 1H), 2,42-2,51 (m, 1H), 2,61-2,71 (m, 1H), 3,93, 3,94 (2s, 3H), 4,08-4,13 (m, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,47-4,58 (m, 2H), 5,12 (d, J=-17,2 Hz, 1H), 5,50 (m, 1H), 5,64 5,78 (m, 1H), 7,06 (dd, J=9,2, 2,6 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,28-7,32 (m, 2H), 7,37-7,39 (m, 1H), 7,47-7,55 (m, 3H), 7,89-8,12 (m, 5H). HRMS calculado para C_{45}H_{51}F_{3}N_{5}O_{10}S 910,3309 encontrado 910,3298.
Compuesto 67
126
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,43 (764) (procedimiento A). RMN ^{1}H (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 1,03 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,44-1,52 (m, 1H), 1,52-1,65 (m, 11H), 2,27-2,37 (m, 1H), 2,65 (dd, J=13,7, 6,8 Hz, 1H), 2,92-3,01 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,07-4,13 (m, 1H), 4,2 6 (d, J=9,2 Hz, 1H), 4,48-4,53 (m, 1H), 5,56 (s, 1H), 6,67 (d, J=9,5 Hz, NH), 7-24 (s, 1H), 7,36-7,38 (m, 1H), 7,38 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,47-7,57 (m, 3H), 8,03-8,07 (m, 3H).
Compuesto 68
127
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,49 (764) (procedimiento A). RMN ^{1}H (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 0,86-1,16 (m, 6H), 1,19 (s, 9H), 1,43-1,91 (m, 3H), 2,33-2-42 (m, 1H), 2,51-2,68 (m, 2H), 2,92-3,03 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,05-4,12 (m, 2H), 4,54 (dd, J=10,6, 6,2 Hz, 1H), 4,67 (d, J=12,1 Hz, 1H), 5,58 (s, 1H), 6,78 (d, J=9,5 Hz, NH), 7,09 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,38 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,47-7,57 (m, 3H), 8,03-8,10 (m, 3H).
Compuesto 69
Isómero de Rf alto (MeOH/CH_{2}Cl_{2})
\vskip1.000000\baselineskip
128
CL/EM tr-min (MH^{+}):1,49 (738) (procedimiento B). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 0,85-1,75 (m, 13H), 1,47 (s, 9H), 1,75-1,80 (m, 1H), 1,95-2,04 (m, 1H), 2,47-3,03 (m, 3H), 3,93 (s, 3H), 4,0 (m, 2H), 4,51-4,69 (m, 2H), 4,93-5,02 (m, 1H), 5,31-5,40 (m, 1H), 5,46, 5,55 (2s, 1H), 5,80-5,94 (m, 1H), 7,12 (dd, J=9,2, 2,2 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,37 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,46-7,57 (m, 3H), 7,95 (d, J=9,2 Hz, 1H), 8,04-8,11 (m, 2H); HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{41}H_{50}N_{5}SO_{9}: 788,3329, encontrado 788,3322.
Compuesto 70
Isómero de Rf bajo (meOH/CH_{2}Cl_{2})
\vskip1.000000\baselineskip
129 
\vskip1.000000\baselineskip
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,55 (788) (procedimiento B). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 0,98 (t, J=7,3 Hz, 3H), 1,09 (s, 9H), 1,26-1,93 (m, 10H), 2,12-2,21 (m, 1H), 2,32-2,40 (m, 1H), 2,53-2,65 (m, 1H), 2,80 (s ancho, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,09-4,18 (m, 1H), 4,37 (d, J=12 Hz, 1H), 4,54-4,59 (m, 2H), 5,19 (d, J=9,2 Hz, 1H), 5,33 (d, J=16,5 Hz, 1H), 5,46-5,60 (m, 2H), 7,11-7,15 (m, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,43 (d, J=2 Hz, 1H), 7,48-7,58 (m, 3H), 8,01-8,07 (m, 3H). HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{41}H_{50}N_{5}SO_{9}: 788,3329, encontrado 788,3330.
Compuesto 71
\vskip1.000000\baselineskip
130 
\vskip1.000000\baselineskip
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,53 (790) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}/300 MHz) \delta 0,94 (d, J=6,2 Hz, 6H), 1,08 (s, 9H), 1,28-1,33 (m, 1H), 1,70-2,74 (m, 10H), 3,68 (m, 1H), 3,93, 3,98 (2s, 3H), 4,04-4,33 (m, 2H), 4,45-4,60 (m, 2H), 5,14 (d, J=17,6 Hz, 1H), 5,53 (s, 1H), 5,78-5,90 (m, 1H), 7,20, 7,25 (2s, 1H), 7,37-7,42 (m, 1H), 7,49-7,56 (m, 4H), 8,03-8,06 (m, 3H).
\newpage
Compuesto 72
131
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,62 (816). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 300 MHz) \delta 1,24 (s, 9H), 1,39-1,58 (m, 2H), 1,50-2,53 (m, 17H), 2,72-2,80 (m, 1H), 3,75-3,89 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,02-4,13 (m, 2H), 4,54-4,67 (m, 2H), 5,03 (d, J=10,2 Hz, 1H), 5,24 (d, J=17,2 Hz, 1H), 5,54 (s, 1H), 5,78-5-93 (m, 1H), 7,08 (dd, J=9,2, 2 Hz, 1H), 7,25, 7,27 (2s, 1H), 7,39 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,46-7,57 (m, 3H), 8,04-8,06 (m, 2H), 8,13 (d, J=9,2 Hz, 1H).
Compuesto 73
132
CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,65 (883) (procedimiento A). RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}, 500 MHz) \delta 0,22-0,27 (m, 2H), 0,50-0,56 (m, 2H), 0,86-1,36 (m, 5H), 1,09 (s, 9H), 1,46-1,48 (m, 1H), 1,90 (dd, J=8, 5 Hz, 1H), 2,18-2,24 (m, 1H), 2,30-2,46 (m, 1H), 2,70 (dd, J=14, 7 Hz, 1H), 3,07 (dd, J=15, 7 Hz, 1H), 3,13 (dd, J=15, 7 Hz, 1H), 3,43-3,49 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 4,16 (dd, J=12, 3 Hz, 1H), 4,50-4,54 (m, 2H), 4,57-4,61 (m, 1H), 5,12 (d, J=12 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17 Hz, 1H), 5,63 (m, 1H), 5,75 (d, J=9 Hz, NH), 5,83-5,90 (m, 1H), 7,13 (dd, J=9, 2 Ha, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,4 3 (d, J=2 Hz, 1H), 7,52-7,59 (m, 3H), 8,08-8,10 (m, 3H).
Compuestos 74 y 75
133
Compuesto 74 - isómero (1S,2S): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,71 (806).
Compuesto 75 - isómero (1R,2R): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,69 15 (806).
Compuesto 76
134
(1R,2S/1S,2R mezcla 1:1): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,69 (804).
Compuestos 77 y 78
135
Compuesto 77 - isómero (1S,2S): CL/EM tr-min (MH^{+}): 2,10 (832).
Compuesto 78 - isómero (1R,2R): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,73 (832)
Compuesto 79
136
(1R,2S/1S,2R mezcla 1:1): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,72 (830).
Compuesto 80
\vskip1.000000\baselineskip
137 
\vskip1.000000\baselineskip
Isómero (1R,2R): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,87 (861).
Compuestos 81-83
\vskip1.000000\baselineskip
138 
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 81 - (1R,2S/1S,2R mezcla 1:1): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,86 (858).
Compuesto 82 - isómero (1S,2R): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,87 (858).
Compuesto 83 - isómero (1R,2S): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,87 (858).
\newpage
Compuesto 84
139
Isómero (1R,2S): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,66 (818)
Compuesto 85
140
Isómero (1R,2S): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,57 (804)
Compuestos 86-88
141
Compuesto 86 - (1R,2S/1S,2R mezcla 1:1): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,51 (764).
Compuesto 87 - isómero (1R,2S).- CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,50 (764).
Compuesto 88 - isómero (1S,2R): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,52 (764).
Compuesto 89
142
(1R,2S/1S,2R mezcla 1:1): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,44 (750).
Compuesto 90
143
(1R,2S/1S,2R mezcla 1:1): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,54 (764).
Compuesto 91
144
(1R,2S/1S,2R mezcla 1:1): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,52 (790)
Compuesto 92
145
(1R,2S/1S,2R mezcla 1:1): CL/EM tr-min (MH^{+}); 1,45 (776)
Compuesto 93
146
(1R,2S/1S, 2R mezcla 1:1): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,55 (790).
Compuesto 94
147
(1R,2S/1S,2R mezcla 1:1): CL/EM tr-min (MH^{+}): 1,65 (818).
Ejemplo 27
Compuesto 95, el (1(R)-ciclopropanosulfonilamino-carbonil-2(S)-vinil-ciclopropil)amida del ácido 1-{2-[bis-(2-hidroxi-etil)-amino]acetil}-4(R)-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2(S)-carboxílico, mostrado a conti-
nuación, se preparó como se describe en las siguientes Etapas 27a-e.
148
Etapa 27a
Preparación del éster de terc-butilo del ácido 2(S)-(1(R)-etoxicarbonil-2(S)-vinil-ciclopropilcarbamoil)-4(R)-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carboxílico, mostrado a continuación
149
El producto de la Etapa 12a (7,5 g, 39,1 mmol) se combinó con diisopropiletilamina (32,5 ml, 186 mmol) en diclorometano (150 ml). A la mezcla resultante se añadió hidrato de HOBT (6,85 g, 44,7 mmol) y el producto de la Etapa 1c (17,3 g, 37,3 mmol) seguido de la adición de HBTU (16,96 g, 44,7 mmol). Se produjo una reacción ligeramente exotérmica inmediatamente, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente toda la noche. Después la mezcla se concentró a vacío y se volvió a disolver en acetato de etilo (600 ml). La solución se lavó con agua (2 x 200 ml), después con solución acuosa de bicarbonato sódico al 10% (2 x 200 ml), después con agua (150 ml) y finalmente con salmuera (150 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato magnésico anhidro y se filtró, y el filtrado se concentró a vacío hasta un sólido vítreo de color beige. La purificación se llevó a cabo en múltiples lotes (7 g cada uno) por cromatografía ultrarrápida en un cartucho Biotage Flash 75M (hexanos/acetato de etilo al 66%) para proporcionar el isómero de P1 de vinil-acca (1R,2S) de BOC-NH-P2-P1-COOEt como el isómero eluido primero (9,85 g total, 44,0% de rendimiento), seguido de la elución del isómero de P1 de vinil-acca (1S,2R) de BOC-NH-P2-P1-COOEt como segundo isómero eluido (10,43 g total, 46,5% de rendimiento). Se recuperó un total de 1,97 g de fracciones mezcladas para dar una conversión global de 99,3% de los dos diastereoisómeros.
(1R,2S) isómero - RMN ^{1}H: (metanol-d_{4}) \delta 1,23 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,4 (s, 4H), 1,45 (s, 6H), 1,73 (dd, J=7,9, 1,5 Hz, 0,4H), 1,79 (dd, J=7,8, 2,4 Hz, 0,6H), 2,21 (q, J=8,2 Hz, 1H), 2,44-2,49 (m, 1H), 2,66-2,72 (m, 0,4H), 2,73-2,78 (m, 0,6H), 3,93-3,95 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,10-4,17 (m, 2H), 4,44 (q, J=7,8 Hz, 1H), 5,13 (d, J=10,7 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,7 Hz, 0,4H), 5,32 (d, J=17,4 Hz, 0,6H), 5,49 (s ancho, 1H), 5,66-5,82 (m, 1H), 7-16 (dd, J=9,2, 2,5 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,42 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,48-7,55 (m, 3H), 8,02-8,05 (m, 3H); CL-EM (condiciones de HPLC "B", tiempo de retención: 1,55), EM m/z 602 (M^{+}+1).
\newpage
Etapa 27b
Preparación del éster de terc-butilo del ácido 2(S)-(1(R)-carboxi-2(S)-vinil-ciclopropilcarbamoil)-4(R)-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carboxílico, mostrado a continuación
150
El isómero (1R,2S) de la Etapa 27a (9,86 g, 16,4 mmol) se trató con NaOH 1 N (50 ml, 50 mmol) en una mezcla de THF (150 ml) y metanol (80 ml) durante 12 h. La mezcla se concentró a vacío hasta que sólo quedaba capa acuosa. Se añadió agua (100 ml) y se añadió lentamente HCl 1 N hasta que se alcanzó pH=3. Después la mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 200 ml), y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico anhidro, y se filtraron. El filtrado se concentró a vacío para dar el compuesto del título en forma de un polvo blanco (9,2 g, 98% de rendimiento). RMN ^{1}H (metanol-d_{4}) \delta 1,41 (s, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,77 (dd, J=7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,16-2,21 (m, 1H), 2,44-2,51 (m, 1H), 2,74-2,79 (m, 1H), 3,93-3,96 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 4,44 (t, J=7,9 Hz, 1H), 5,11 (d, J=9,5 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,52 (s, 1H), 5,79-5,86 (m, 1H), 7,22 (dd, J=9,16, 2,14 Hz, 1 H), 7,32 (s, 1H), 7,43 (d, J=2,14 Hz, 1H), 7,54-7,60 (m, 3H), 8,04 (dd, J=7,8, 1,4 Hz, 2H), 8,08 (d, J=9,1 Hz, 1H); CL-EM (condiciones de HPLC "B", tiempo de retención: 1,46), EM m/z 574 (M^{+}+1).
Etapa 27c
Preparación de éster de terc-butilo del ácido 2(S)-(1(R)-ciclopropanosulfonilamino-carbonil-2 (S)-vinil-ciclopropilcarbamoil)-4(R)-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carboxílico, mostrado a continuación
151
El producto de la Etapa 27b (7,54 g, 13,14 mmol) se combinó con CDI (3,19 g, 19-7 mmol) y DMAP (2,41 g, 19,7 mmol) en THF anhidro, y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante 45 min. La mezcla ligeramente opaca se dejó enfriar a temperatura ambiente y se le añadió ciclopropilsulfonamida (1,91 g, 15,8 g). Tras añadir DBU (5,9 ml, 39,4 mmol), la mezcla se volvió totalmente transparente. La solución marrón se agitó toda la noche. Después la mezcla se concentró a vacío hasta un aceite y se volvió a disolver en acetato de etilo (500 ml). La solución se lavó con tampón a pH = 4 (3 x 200 ml) y los lavados con tampón combinados se volvieron a extraer con acetato de etilo (200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (150 ml) y se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron. La concentración del filtrado a vacío dio un sólido de color beige. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida en un cartucho Biotage Flash 75M (hexanos/acetato de etilo al 25%) para dar el producto del título (5,85 g, 66% de rendimiento). RMN ^{1}H (metanol-d_{4}) \delta 1,03-1,09 (m, 2H), 1,15-1,23 (m, 2H), 1,40-1,44 (m, 2H), 1,46 (s, 9H), 1,87 (dd, J=8,1, 5,6 Hz, 1 H), 2,21-2,27 (m, 1H), 2,36-2,42 (m, 1H), 2,65 (dd, J=13,7, 6,7 Hz, 1H), 2,93-2,97 (m, 1H), 3,30-3,96 (m, 2H), 4,00 (s, 3H), 4,40 (dd, J=9,5, 7,0 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,4 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,4 Hz, 1H), 5,64 (s, 1H), 5,73-5,80 (m, 1H), 7,30 (dd, J=9,2, 2,1 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,61-7,63 (m, 3H), 8,04-8,05 (m, 2H), 8,15 (d, J=9,5 Hz, 1H); CL-EM (condiciones de HPLC "B", tiempo de retención: 1,48), EM m/z 677 (M^{+}+1).
Etapa 27d
Preparación de (1(R)-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2(S)-vinil-ciclopropil)-amida del ácido 4(R)-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2 (S)-carboxílico, mostrado a continuación
152
El producto de la Etapa 27c (5,78 g, 8,54 mmol) se trató con HCl 4,0 M en 1,4-dioxano (50 ml, 200 mmol) toda la noche. La mezcla de reacción se concentró a vacío y se puso en un horno a vacío a 50ºC durante varios días. Así se obtuvo la sal de bis-hidrocloruro del compuesto del título (5,85 g, cuantitativo) en forma de un polvo de color beige. RMN ^{1}H (metanol-d_{4}) \delta 1,03-1,18 (m, 3H), 1,26-1,30 (m, 1H), 1,36-1,40 (m, 2H), 1,95 (dd, J=8,2, 5,8 Hz, 1H), 2,37 (q, J=8,9 Hz, 1H), 2,51-2,57 (m, 1H), 2,94-2,98 (m, 1H), 3,09 (dd, J=14,6, 7,3 Hz, 1H), 3,98 (d, J=3,7 Hz, 1 H), 3,99 (s, 1 H), 4,08 (s, 3 H), 4,80 (dd, J=10,7, 7,6 Hz, 1 H), 5,15 (dd, J=10,2, 1,4 Hz, 1H), 5,32 (dd, J=17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,61-5,69 (m, 1H), 5,99 (t, J=3,7 Hz, 1H), 7,51 (dd, J=9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,59 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,72-7,79 (m, 3H), 8,09 (dd, J=5 7,0, 1,5 Hz, 2H), 8,53 (d, J=9,2 Hz, 1H); CL-EM (condiciones de HPLC "B", tiempo de retención: 1,01), EM m/z 577 (M^{+}+1).
Etapa 27e
Preparación del Compuesto 95
153
En un recipiente de reacción que contenía resina PS-DIEA (Argonaut Technologies, 0,047 g, 0,175 mmol) se añadió una solución de bicina (0,044 mmol) en DMF (0,25 ml), seguido de la adición de una solución del compuesto 6 (0,020 g, 0,029 mmol) en DMF (0,50 ml), seguido de la adición de una solución de HATU (0,017 g, 0,044 mmol) en DMF (0,25 ml). La mezcla se agitó durante 3 días a temperatura ambiente. A la reacción se añadió reina PS-trisamina (Argonaut Technologies, 0,025 g, 0,086 mmol) y la mezcla se agitó durante 18 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró a vacío y se volvió a disolver en una mezcla de 1,2-dicloroetano y metanol 10:1 (1 ml). Se añadió resina de MP-carbonato (Argonaut Technologies, 0,056 g, 0,175 mmol) y la mezcla se agitó durante 5 d a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró, se pasó por 0,25 g de gel de sílice y se eluyó con 1,2-dicloroetano:metanol 10:1. El disolvente se separó a vacío para dar el producto bruto que se purificó por HPLC preparativa (HPLC prep. Procedimiento "A") y se aisló en forma de la sal del ácido bis-trifluoroacético: CL-EM (condiciones de HPLC "G", tiempo de retención: 1,16), EM m/z 722
Ejemplo 28
Compuesto 96, la (1(R)-ciclopropanosulfonilamino-carbonil-2(S)-vinil-ciclopropil)amida del ácido 1-(2-acetilamino-pent-4-inoil)-4(R)-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi) -pirrolidina-2(S)-carboxílico se muestra a continuación.
154
Este compuesto se preparó de acuerdo con el procedimiento de Ejemplo 27 y después se purificó por HPLC preparativa (HPLC Prep. procedimiento "A") y se aisló en forma de la sal del ácido bis-trifluoroacético. CL-EM (condiciones de HPLC "G", tiempo de retención: 1,28), EM m/z 714 (M^{+}+1).
Ejemplo 29
Compuesto 97, el éster de terc-butilo del ácido {1S-[2S-(1R-ciclopropanosulfonilamino-carbonil-2S-vinIl-ciclopropilcarbamoil)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin 4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2-vinil-ciclopropil}carbámico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 29a-b.
155
Etapa 29a
Preparación de la {1R-ciclopropanosulfonilamino-carbonil-2S-vinil-ciclopropil)amida del ácido 4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, mostrado a continuación
156
El producto de la Etapa 27c (505,0 mg, 0,746 mmol) se trató lentamente con TFA al 50% (10 ml) para controlar el CO_{2} gaseoso del burbujeo vigoroso. Después de agitar a t.a. durante 0,5 h, el disolvente se concentró y el aceite marrón viscoso resultante se secó a vacío toda la noche para dar un sólido marrón con rendimiento cuantitativo. El producto se usó sin purificación adicional. RMN ^{1}H (metanol-d_{4}) \delta 1,03-1,06 (m, 1H), 1,07-1,13 (m, 1H), 1,14-1,19 (m, 1H), 1,25-1,30 (m, 1H), 1,37 (dd, J=9,6, 5,6 Hz, 1H), 1,96 (dd, J=7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,31 (q, J=8,5 Hz, 1H), 2,52-2,58 (m, 1H), 2,93-3,01 (m, 2H), 3,94 (dd, J=13,3, 4,0 Hz, 1H), 4,02 (dd, J=13,3, 1,4 Hz, 1H), 4,07 (s, 3H), 4,76 (dd, J=10,4, 7,6 Hz, 1H), 5,15 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,3, 1,4 Hz, 1H), 5,61-5,69 (m, 1H), 5,96-5,98 (m, 1H), 7,46 (dd, J=9,2, 1,4 Hz, 1H), 7,56 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,71-7,79 (m, 3H), 8,05-8,07 (dd, J=8,5, 1,5 Hz, 2H), 8,40 (d, J=9,4 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,3,0), EM m/z 577 (M^{+}+1);
Etapa 29b
Preparación del Compuesto 97
157
A una solución del producto de la etapa 29a (70,0 mg, 0,087 mmol) en DCM (3 ml) se añadió DIEA (76 \mul 0,43 mmol), HBTU (40 mg, 0,104 mmol), HOBt (16 mg, 0,104 mmol) y ácido amino-2-vinilciclopropanocarboxílico (0,104 mmol). Después de agitar a t.a. durante 14 h, el disolvente se concentró y el material resultante se separó y purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (SiO_{2}, eluida con MeOH en DCM al 5%) para dar 41% de isómero de RF mayor (CI_{50} = 250 nM. El espectro de RMN era complicado por lo que no se incluyó aquí) y 50% de un isómero de RF inferior (CI_{50} = 24n M). RMN ^{1}H (isómero de Rf inferior) (MeOH) \delta 0-85-0,92 (m, 1H), 0,97-1,03 (m, 3H), 1,06-1,10 (m, 1H), 1,15-1,21 (m, 2H), 1,26-1,33 (m, 2H), 1,38 (dd, J=9,2, 4,6 Hz, 1H), 1,46 (s, 9H), 1,58-1,66 (m, 1H), 1,80 (t, J=5,8 Hz, 1H), 1,86 (t, J=6,3 Hz, 1H),2,01 (q, J=8,9 Hz, 1H), 2,40 (q, J=7,9 Hz, 1H), 2,46-2,49 (m, 1H), 2,72 (dd, J=13,7, 7,0 Hz, 1H), 2,84-2,94 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,10 (s, 2H), 4,63-4,70 (m, 2H), 4,94-4,99 (m, 1H), 5,07 (d, J=10,4 Hz, 1H), 5,30 (d, J=16,8 Hz, 1H), 5,54 (s ancho, 1H), 5,82-5,87 (m, 1H), 7,14 (dd, J=9,2, 2,1 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,50-7,56 (m, 3H), 7,98 (d, J=8,9 Hz, 1H), 8,06 (d, J=6,7 Hz, 1H),-CL-EM (tiempo de retención: 1,51), EM m/s 786 (M^{+}+1).
Ejemplo 30
Compuesto 98, la (1R-ciclopropano-sulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)amida del ácido 1-(2S-acetilamino-3,3-dimetil-butiril)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, mostrada a continuación, se
preparó como se describe en las siguientes Etapas 30a-c.
158
Etapa 30a
Preparación del éster de terc-butilo del ácido {1S-[2S-(1R-ciclo-propanosulfonilamino-carbonil-2S-vinil-ciclopropilcarbamoil)-4R-{7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico, mostrado a continuación
159
A una solución del producto de la Etapa 29a (0,671 mmol) en DCM (10 ml) se añadió DIEA (542 \mul, 3,36 mmol), HATU (354 mg, 1,01 mmol), HOAt (127mg, 1,01 mmol), y Boc-Tle-OH (173 mg, 0,805 mmol). Después de agitar a t.a. Durante 16 h, el disolvente se concentró y el aceite viscoso marrón se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (SiO_{2}, eluida con MeOH en DCM al 95%) para dar un sólido espumoso ligeramente amarillo (527 mg, 99% de rendimiento). CL-EM (tiempo de retención: 1,57), EM m/z 790
Etapa 30b
Preparación de la (1R-ciclopropano-sulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)-amida del ácido 1S-(2-amino-3,3-dimetil-butiril)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, mostrada a continuación
160
El producto de la Etapa 30a (950 mg, 1,20mmol) se trató lentamente con TFA al 25% TFA (25 ml) para controlar el CO_{2} gaseoso del burbujeo vigoroso. Después de agitar a t.a. durante 0,5 h, el disolvente se concentró para dar una solución marrón claro y se añadió Et_{2}O para producir una precipitación. El producto marrón claro (1,10 g, 99% de rendimiento) se obtuvo por una filtración a vacío y se usó sin purificación adicional. CL-EM (tiempo de retención: 1,13), EM m/z 690 (M^{+}+1).
Etapa 30c
Preparación del Compuesto 98
A una solución del producto de la Etapa 30b (11,1 mg, 0,0121 mmol) en DCM (1 ml) se añadió polivinilpiridina (6,4 mg, 0,0605 mmol) y anhídrido acético (30 \mul). El vial de reacción se rotó durante 14 h y el contenido se filtró y lavó con DCM. El disolvente se concentró y el residuo se purificó por HPLC preparativa en fase inversa para dar un sólido blanco vítreo en forma de una sal de TFA (4,0 mg, 45% de rendimiento). RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,06 (s, 9H), 1,08-1,10 (m, 2H), 1,23-1,26 (m, 2H), 1,45 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,81 (s, 3H), 1,90 (dd, J=7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J=8,9 Hz, 1H), 2,24-2,46 (m, 1H), 2,75 (dd, J=14,2, 6,9 Hz, 1H), 2,93-2,98 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,17 (dd, J=12,4, 3-2 Hz, 1H), 4,50 (t, J=4,3 Hz, 1H), 4,57-4,61 (m, 2H), 5,14 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,2, 1,4 Hz, 1H), 5,71-5,78 (m, 1H), 5,86 (d, J=3,1, 1H), 4,45 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,54 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,71-7,79 (m, 3H), 8,08 (dd, J=8,2, 1,5 Hz, 3H), 8,30 (d, J=9-5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,35), EM m/z 732 (M^{+}+1).
Ejemplo 32
Los siguientes compuestos se prepararon de acuerdo con el procedimiento de Ejemplo 30.
Compuesto 99
Compuesto 99, la (1R-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)amida del ácido 1-[3,3-dimetil-2S-(2,2,2-trifluoro-acetilamino)-butiril]-4R-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-2S-carboxílico, se muestra a
continuación.
161
El Compuesto 99 se preparó usando anhídrido fluoroacético. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 0,99-1,03 (m, 4H), 1,09 (s, 9H), 1,23-1,26 (m, 3H), 1,46 (dd, J=9,5, 5,2 Hz, 1H), 1,91 (dd, J=8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J=9,0 Hz, 1H), 2,41-2,47 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,16 (dd, J=12,5, 3,1 Hz, 1H), 4,59-4,63 (m, 3H), 5,14 (dd, J=10,2, 1,7 Hz, 1H), 5,30 (dd, J=17,3, 1,1 Hz, 1H), 5,72-5,79 (m, 1H), 5,87 (d, J=4,0, 1H), 7,40 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,54 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,73-7,79 (m, 4H), 8,08 (d, J=6,7 Hz, 3H), 8,29 (d, J=9,5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,50), EM m/z 786 (M^{+}+1).
Compuesto 100
Compuesto 100, el ácido N-{1S-[2S-(1R-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-2S-vinil-ciclopropilcarbamoil)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-succinámico, se muestra a continuación.
162
El Compuesto 100 se preparó usando anhídrido succínico. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,04-1,09 (m, 2H), 1,10 (s, 9H), 1,23-1,25 (m, 2H), 1,44 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,90 (dd, J=8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,20-2,29 (m, 4H), 2,39-2,50 (m, 2H), 2,76 (d, J=6,71 Hz, 1H), 2,93-2,98 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,12 (dd, J=12,7, 3,2 Hz, 1H), 4,49 (d, J=5,2 Hz, 1H), 4,59 (dd, J=10,2, 6,9 Hz, 1H), 4,65 (d, J=11,9 Hz, 1H), 5,14 (dd, J=10,6, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,71-5,78 (m, 1H), 5,85 (d, J=3,1 Hz, 1H), 7,47 (dd, J=9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,63 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,71-7,79 (m, 3H), 8,08 (d, J=7,0 Hz, 2H), 8,31 (dd, J=11,6, 2,5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,31), EM m/z 790 (M^{+}+1).
Compuesto 101
Compuesto 101, la (1R-ciclo-propanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)-amida del ácido 1-[2S-(2,2-dimetil-propionilamino}-3,3-dimetil-butiril]-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico se muestra a continuación.
163
El Compuesto 101 se preparó usando el cloruro de trimetilacetilo. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,01 (s ancho, 9H), 1,02-1,04 (m, 4H), 1,05 (s ancho, 9H), 1,23-1,29 (m, 5H), 1,49 (dd, J=9,6, 6,5 Hz, 1H), 1,90 (dd, J=8,1, 5,7 Hz, 1H), 2,40-2,4,7 (m, 1H), 2,72-2,79 (m, 1H), 2,92-2,96 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,20 (d, J=12,5 Hz, 1H), 4,54-4,60 (m, 3H), 5,14 (dd, J=10,5, 1,7 Hz, 1H), 5,32 (dd, J=17,4, 1,0 Hz, 1H), 5,75-5,82 (m, 1H), 6,92 (d, J=8,9 Hz, 1H), 7,40-7,43 (m, 1H), 7,54 (t, J=2,3 Hz, 1H), 7,66 (d, J=3,1 Hz, 1H), 7,72-7,78 (m, 4H), 8. 07-8,10 (m, 2H), 8,31 (dd, J=9,2, 2,7 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,54), EM m/s 774 (M^{+}+1).
Ejemplo 33
Compuesto 102
Compuesto 102, la (1R-ciclo-propanosulfonilamino-carbonil-2S-vinil-ciclopropil)-amida del ácido 1-[2S-(2-hidroxi-acetilamino)-3,3-dimetil-butiril]-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se muestra a continuación.
164
A una solución del producto de la Etapa 30b (11,1 mg, 0,0121 mmol) en DCM (1 ml) se añadió DIEA (11 \mul, 0,0605 mmol), HATU (6,9 mg, 0. 0182 mmol), HOAT (2,5 mg, 0,01812 mmol) y ácido glicólico (1,4 mg, 0,0182 mmol). Después de agitar a t.a. durante 16 h, se concentró el disolvente y el exceso de DIEA y el residuo resultante se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (3,5 mg, 39% de rendimiento). RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,06-1-07 (m, 2H), 1,07 (s, 9H), 1,22-1,25 (m, 2H), 1,45 (dd, J=9,6, 5,3 Hz, 1H), 1,90 (dd, J=8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J=8,9 Hz, 1H), 2,42-2,47 (m, 1H), 2,76 (dd, J=7,3 Hz, 1H), 2,92-2,98 (m, 1H), 3,74 (d, J=15,5 Hz, 1H), 3,90 (d, J=16,2 Hz, 1H), 4,60 (s, 3H), 4,19 (dd, J=12,5, 3,4 Hz, 1H), 4,56-4,61 (m, 3H), 5,14 (d, J=10,4 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,72-5,79 (m, 1H), 5,86 (s ancho, 1H), 7,45 (dd, J=9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,72-7,79 (m, 4H), 8,08 (d, J=7,0 Hz, 2H), 8,28 (d, J=9,2 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,30), EM m/z 748 (M^{+}+1).
Ejemplo 34
Los siguientes compuestos se prepararon de acuerdo con el procedimiento de Ejemplo 33.
Compuesto 103
Compuesto 103, la (1R-ciclo-propanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)-amida del ácido 1-[2S-(3,3-dimetil-butirilamino)-3,3-dimetil-butiril]-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se muestra a continuación.
165
El compuesto 103 se preparó usando ácido t-butilacético. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 0,78 (s, 9H), 0,90-0,98 (m, 2H), 1,04 (s, 9H), 1,23-1,29 (m, 5H), 1,45 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H),1,86-1,91 (m, 2H), 1,97 (d, J=12,8 Hz, 1H), 2,24 (d, 8,9 Hz, 1H), 2,39-2,45 (m, 1H), 2,76 (dd, J=13,6, 6,0 Hz, 1H), 2,93-2,97 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,16 (dd, J=12,4, 2,9 Hz, 1H), 4,52 (t, J=4,4 Hz, 1H), 4,60 (dd, J=10,5, 6,9 Hz, 1H), 4,65 (dd, J=13,3, 1,1 Hz, 1H), 5,14 (dd, J=10,5, 1,4 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,2, 1,1 Hz, 1H), 5,72-5,79 (m, 1H), 5,85 (s ancho, 1H), 7,42 (dd, J=9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,53 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,72-7,79 (m, 4H), 8,08 (d, J=7,0 Hz, 3H), 8,30 (d, J=9,2 Hz, 2H); CL-EM (tiempo de retención: 1,58), EM m/z 788 (M^{+}+1).
Compuesto 104
Compuesto 104, la (1R-ciclo-propanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)-amida del ácido 1-[2S-(2-ciclopropil-acetilamno)-3,3-dimetil-butiril]-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se muestra a continuación.
166
El Compuesto 104 se preparó con ácido ciclopropanoacético. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 0,07-0,10 (m, 2H), 0,39-0,34 (m, 2H), 0,77-0,82 (m, 1H), 1,00-1,07 (m, 4H),1,08 (s, 9H), 1,21-1,26 (m, 3H), 1,46 (dd, J=9,6, 5,3 Hz, 1H), 1,90 (dd, J=8,2, 5,5 Hz, 1H), 1,96-2,02 (m, 2H), 2,25 (dd, J=17,7, 8,6 Hz, 1H), 2,43-2,46 (m, 1H), 2,78 (dd, J=13,9, 6,6 Hz, 1H), 2,92-2,93 (m, 1H), 4,07 (s, 3H), 4,19 (dd, J=12,5, 3,4 Hz, 1H), 4,55 (s, 1H), 4,60 (dd, J=10,7, 7,7 Hz, 2H), 5,15 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd,- J=17,2, 1,4 Hz, 1H), 5,72-5,87 (m, 1H), 5,87 (d, J=3,4 Hz, 1H), 7,42 (dd, J=9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,72-7,79 (m, 4H), 8,09 (d, J=7,6 Hz, 2H), 8,30 (d, J=9,2 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,49), EM m/z 772 (M^{+}+1).
\newpage
Compuesto 105
Compuesto 105, la (1R-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)amida del ácido 1-{2S-[(biciclo[1.1.1]pentano-2-carbonil)-amino]-3,3-dimetil-butiril}-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se muestra a continuación.
167
El Compuesto 105 se preparó con el ácido biciclo[1.1.1]pentano-2-carboxílico RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,05 (s, 9H), 1,06-1,10 (m, 4H), 1,23-1,26 (m, 2H), 1,44-1,48 (m, 1H), 1,60-1,62 (m, 1H), 1,68 (d, J=2,4 Hz, 1H), 1,91 (dd, J=7,7, 4,7 Hz, 1H), 2,01 (dd, J=9,8, 3,1 Hz, 1H), 2,22-2,27 (m, 1H), 2,40-2,46 (m, 1H), 2,55-2,60 (m, 2H), 2,75-2,81 (m, 1H), 2,92-2,98 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,16 (dd, J=12,7, 3,2 Hz, 1H), 4,57-4,64 (m, 3H), 5,15 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H) 5,32 (dd, J=17,4, 1,5 Hz, 1H), 5,74-5,80 (m, 1H), 5,87 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,39-7,42 (m, 1H), 7,53 (t, J=2,3 Hz, 1H), 7,72-7,78 (m, 4H), 8,06-8,10 (m, 2H), 8,30 (dd, J=9,2, 3,8 Hz, 1H). CL-EM (tiempo de retención: 1,52), EM m/z 784 (M^{+}+1).
Ejemplo 35
Compuesto 106
Compuesto 106, éster de {1S-[2S-(1R-ciclopropano-sulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropilcarbamoil)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propilcarbamoil}-metil del ácido acético, se muestra a continuación.
168
A una solución del producto de la Etapa 30b (35,0 mg, 0,0381 mmol) en DCM (2 ml) se añadió DIEA (40 \mul, 0,0191 mmol), HATU (29 mg, 0,0762 mmol), y ácido acetoacético (6,7 mg, 0,0572 mmol). Después de rotar a t.a. durante 16 h, el disolvente se concentró y el residuo resultante se purificó por una columna ultrarrápida, (SiO_{2}, eluida con MeOH en DCM al 5%) para dar un sólido amarillo (30 mg, 99% de rendimiento). RMN ^{1}H (MeOH) \delta 0,87-0,93 (m, 1H), 0,96-1,02 (m, 1H), 1,06 (s, 11H), 1,20-1-26 (m, 2H), 1,27-1,29 (m, 1H), 1,45 (dd, J=9,5, 5,2 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,08 (s, 3H), 2,22 (q, J=8,9 Hz, 1H), 2,33-2,36 (m, 1H), 2,66 (dd, J=13,1, 6,9 Hz, 1H), 2,92-2,96 (m, 1H), 3,22 (q, J=7,3 Hz, 2H), 3,69-3,76 (m,2H), 3,95 (s, 3H), 4,16 (dd, J=12,1, 3,5 Hz, 1H),4,40 (d, J=12,2 Hz, 1H), 4,48 (s, 2H), 4,52 (dd, J=10,1, 6,7 Hz, 1H), 4,67 (s, 1H), 5,11 (d, J=10,4 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,59 (s ancho, 1H), 5,73-5,80 (m, 1H), 7,17 (dd, J=9,0, 2,3 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,40 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,49-7,56 (m, 3H), 8,04 (d, J=8,9Hz, 1H), 8,06 (d, J=6,7 Hz, 2H); CL-EM (tiempo de retención: 1,33), EM m/z 790 (M^{+}+1).
\newpage
Ejemplo 36
Los siguientes compuestos se prepararon de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 35.
Compuesto 107
Compuesto 107, la (1R-ciclo-propanosulfonilamino-carbonil-2S-vinil-ciclopropil)-amida del ácido 1-[2S-(2-metoxi-acetilamino)-3,3-dimetil-butiril]-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se muestra a continuación
169
El Compuesto 107 se preparó con ácido 4-metoxifenoxiacético y se purificó por HPLC preparativa de fase inversa para dar una sal de TFA en forma de una sal sólida (18,8 mg, 56% de rendimiento). RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,04-1,12 (m, 2H), 1,06 (s, 9H), 1,24-1,26 (m, 2H), 1,37 (dd, J=6,4, 4,0 Hz, 1H), 1,46 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 1-90 (dd, J=8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J=8,9 Hz, 1H), 2.-39-2,45 (m, 1H), 2,74 (dd, J=13-3, 7,2 Hz, 1H), 2,93-2,96 (m, 1H), 3,34 (s, 3H), 3,73 (dd, J=74,2, 15,2 Hz, 2H), 4,05 (s, 3H), 4,18 (dd, J=12,5, 3,1 Hz, 1H), 4,86-4,60 (m, 3H), 5,14 (dd J=10,2, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=16,8, 1,2 Hz, 1H), 5,73-5,80 (m, 1H), 5,82 (s ancho, 1H), 7,39 (dd, J=9,2, 2,1 Hz, 1H), 7,51 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,61 (d, J=9,2 Hz, 1H), 7,69-7,72 (m, 3H), 8,08 (dd, J=7,9, 1,5 Hz, 1H), 8,24 (dd, J=9,2 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,35)., EM m/z 762 (M^{+}+1).
Compuesto 108
Compuesto 108, la (1R-ciclopropanosulfonilamino-carbonil-2S-vinil ciclopropil)amida del ácido 1-{2S-[2-(4-metoxi-fenoxi)-acetilamino]-3,3-dimetil-butiril}-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se
muestra a continuación.
170
El Compuesto 108 se preparó con ácido 4-metoxifenoxiacético. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,04 (s, 9H), 1,08-1,10 (m, 2H), 1,23-1,27 (m, 2H), 1,4 7 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,91 (dd, J=8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J=8,9 Hz, 1H), 2,41-2,47 (m, 1H), 2,76 (dd, J=13,7, 7,0 Hz, 1H), 2,93-2,98 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 4,02 (s, 3H), 4,18 (dd, J=12,4, 3,2 Hz, 1H), 4,23 (d, J=15,0 Hz, 1H), 4,37 (d, J=15,0 Hz, 1H), 4,58-4,62 (m, 3H), 5,14 (d, J=10,4 Hz, 1H), 5,31 (d, J=16,2 Hz, 1H), 5,73-5,81 (m, 1H), 5,86 (s ancho, 1H), 6,85 (d, J=5,5 Hz, 4H), 7,33 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,49 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,71-7,78 (m, 3H), 7,82 (d, J=8,6 Hz, 1H), 8,08 (d, J=8,2 Hz, 1H), 8,2 5 (d, J=9,5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,54), EM m/z 854 (M^{+} +1).
\newpage
Compuesto 109
Compuesto 109, (1R-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)-amida del ácido 1-{2S-[2-(4-fluoro-fenoxi)-acetilamino]-3,3-dimetil-butiril}-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se
muestra a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
171
El Compuesto 109 se preparó con ácido 4-fluorofenoxiacético. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,04 (s, 3,6H), 1,05 (s, 5,4H), 1,07-1,10 (m, 2H), 1,22-1,27 (m, 2H), 1,44-1,48 (m, 1H), 1,88-1,92 (m, 1H), 2,21-2,26 (m, 1H), 2,41-2,47 (m, 1H), 2,76 (dd, J=13,4, 6,7 Hz, 1H), 2,93-2,97 (m, 1H), 4,01 (s, 1,2H), 4,02 (s, 1,8H), 4,16-4,20 (m, 10 1H), 4,28 (d, J=5,2 Hz, 0,4H), 4,31 (d, J=5,2 Hz, 0,6H), 4,40 (d, J=5,2 Hz, 0,6H), 4,41 (d, J=5,2 Hz, 0,4H), 4,58-4,62 (m, 3H), 5,12-5,15 (m, 1H), 5,30 (dd, J=17,1, 0,91 Hz, 0,4H), 5,31 (dd, J=17,1, 1,2 Hz, 0,6H), 5,73-5,81 (m, 1H), 5,86 (s ancho, 1H), 6,88-6,92 (m, 2H), 6,97-7,02 (m, 2H), 7,31-7,35 (m, 1H), 7,49 (d, J=2,4 Hz, 0,4H), 7,50 (d, J=2,4Hz, 0,6H), 7,63 (s, 0,4H), 7,64 (s, 0,6H), 7,70-7,77 (m, 3H), 7,86-7,89 (m, 1H), 8,05-8,08 (m, 2H), 8,4 (d, J=9,5 Hz, 0,4H), 8,5 (d, J=9,2Hz, 0,6H); CL-EM (tiempo de retención: 1,56), EM m/z 842 (M^{+}+1).
Compuesto 110
Compuesto 110, la (1R-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)-amida del ácido 1-{2S-[(furan-2-carbonil)-amino]-3,3-dimetil-butiril}-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se muestra a continuación.
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172
El Compuesto 110 se preparó con ácido furoico. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,09 (s, 3,6H), 1,10 (s, 5,4H), 1,11-1,15 (m, 2H), 1,25-1,28 (m, 2H), 1,47 (q, J=5,5 Hz, 1H), 1,91 (q, J=5,5 Hz, 1H), 2,2 5 (q, J=8,9Hz, 1H), 2,42-2,47 (m, 1H), 2,79 (dd, J=14,7, 7,5 Hz, 1H), 2,95-2,99 (m, 1H), 4,04 (s, 1,2H), 4,05 (s, 1,8H), 4,14-4,19 (m, 1H), 4,61-4,66 (m, 1H), 4,73 (d, J=9,2 Hz, 1H), 5,15 (dd, J=10,1, 0,9 Hz, 1H), 5,32 (d, J=17,4 Hz, 0,6H), 5,33 (d, J=16,5 Hz, 0,4H), 5,74-5,81 (m, 1H), 5,87 (s ancho, 1H), 6,52-6,53 (m, 1H), 6,85 (d, J=3,4 Hz, 1H), 7,28 (dd, J=9,2, 2,5 Hz, 1H), 7,48 (dd, J=8,6, 2,4 Hz, 1H), 7,60-7,66 (m, 2H), 7,73-7,78 (m, 3H), 7,85 (d, J=8,9 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,2 Hz, 1H), 8,18 (d, J=9,2 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,42), EM m/z 784 (M^{+}+1).
\newpage
Compuesto 111
Compuesto 111, la (1R-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)-amida del ácido 1-{2S-[(1-hidroxi-ciclopropanocarbonil)-amino]-3,3-dimetil-butiril)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)pirrolidina-2S-carboxíli-
co, se muestra a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
173
El Compuesto 111 se preparó con ácido 1-hidroxi-1-ciclopropanocarboxílico. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 0,64-0,68 (m, 1H), 0,79-0,84 (m, 1H), 0,89-0,93 (m, 1H), 0,99-1,04 (m, 1H), 1,04-1,08 (m, 2H), 1,09 (s, 9H), 1,23-1,26 (m, 2H), 1,45 (dd, J=9,5, 5,2 Hz, 1H), 1,91 (dd, J=8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J=8,9 Hz, 1H), 2,41-2,47 (m, 1H), 2,76 (dd, J=14,2, 6,9 Hz, 1H), 2,93-2,97 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,17 (dd, J=12,4, 3,2 Hz, 1H), 4,52 (d, J=9,2 Hz, 1H), 4,59-4,62 (m, 2H), 5,14 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,72-5,79 (m, 1H), 5,85 (s ancho, 1H), 7,41 (dd, J=9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,53 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,71-7,78 (m, 4H), 8,07 (dd, J=6,7, 1,5 Hz, 1H), 8,27 (d, J=9,2 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,33), EM m/z 774 (M^{+}+1).
Compuesto 112
Compuesto 112, la (1R-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)-amida del ácido 1-[2S-(2-fluoro-acetilamino)-3,3dimetil-butiril]-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se muestra a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
174
El Compuesto 112 se preparó con la sal de sodio del ácido fluoroacético. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,08 (s, 9H), 1,03-1,12 (m, 3 H), 1,22-1,26 (m, 2H), 1,45 (q, J=5,5 Hz, 1H), 1,90 (q, J=5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J=8,9 Hz, 1H), 2,41-2,27 (m, 1H), 2,27 (dd, J=14,0, 6,7 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 3,97 (s, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,19 (dd, J=12,5, 3,1 HZ, 1H), 4,58-4,62 (m, 3H), 4,64 (q, J=14,0 Hz, 1H), 4,73 (q, J=14,0 Hz, 1H), 5,14 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,71-5,77 (m, 1H), 5,87 (s ancho, 1H), 7,44, J=9,2, 2,4 HZ, 1H), 7,55 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,71-7,79 (m, 3H), 8,08 (dd, J=8,5, 1,5 Hz, 2H), 8,31 (d, J=9,5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,42), EM m/z 750 (M^{+}+1).
\newpage
Ejemplo 37
Compuesto 113
Compuesto 113, el éster de metilo del ácido {1S-[2S-(1R-ciclopropano-sulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropilcarbamoil)-4R-{7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil}-2,2-dimetil-propil}carbámico, se muestra a continuación.
175
A una solución del producto de la Etapa 30b (35 mg, 0,0381 mmol) en DCM (2 ml) se añadió 1,3-dimetil-perhidro-1,2,3-diazafosfina en poliestireno (100 mg, 2,3 mmol/g, 0,229 mmol), y cloroformiato de metilo (9 \mul, 0,114 mmol). El vial de reacción se rotó durante 16 h y se filtró y lavó con DCM. El disolvente se concentró y el residuo se purificó por HPLC preparativa de fase inversa para dar el producto como sal de TFA en forma de sólido blanco (14,7 mg, 35% de rendimiento). RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,05 (s, 9H), 1,07-1,11 (m, 2H), 1,22-1,26 (m, 2H), 1,44 (q, J=5,2 Hz, 1H), 1,90 (q, J=5,7 Hz, 1H), 2,24 (q, J=8,7 Hz, 1H), 2,40-2,46 (m, 1H), 2,77 (dd, J=13,9, 6,9 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H) 3,38 (s, 3H), 15 4,06 (s, 3H), 4,14 (dd, J=12,2, 3,1 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,58-4,64 (m, 2H), 5,13 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,30 (dd, J=17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,70-5,77 (m, 1H), 5,86 (s ancho, 1H), 7,43 (dd, J=9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J=2,1 Hz7 1H), 7,65 (s, 1H), 7,72-7,79 20 (m, 3H), 8,09 (dd, J=6,9, 1,7 Hz, 1H), 8,36 (d, J=9,5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,47), EM m/z 748
Ejemplo 38
Los siguientes compuestos se prepararon de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 37.
Compuesto 114
Compuesto 114, el éster de bencilo del ácido {1S-[2S-(1R-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-2S-vinil-cicIopropilcarbamoil)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico, se muestra a continuación.
176
El Compuesto 114 se preparó con cloroformiato de bencilo. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,05 (s, 9H), 1,06-1,09 (m, 2H), 1,23-1,24 (m, 2H), 1,45 (q, J=5,5 Hz, 1H), 1,90 (q, J=5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J=8,7 Hz, 1H), 2,40-2,46 (m, 1H), 2,77 (dd, J=13,4, 7,0 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 4,12 (dd, J=12,2, 2,4 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,59-4,73 (m, 4H), 5,14 (dd, J=10,2, 1,4 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,71-5,67 (m, 1H), 5,86 (s ancho, 1H), 7,15 (dd, J=7,3, 1,8 Hz, 1H), 7,27 (d, J=6,7 Hz, 1H), 7,32 (dd, J=9,3, 2,0 Hz, 1H), 7,48 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,72-7,79 (m, 3H), 8,07 (d, J=7,0 Hz, 1H), 8,31 (d, J=9,2 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,57), EM m/z 824.
Compuesto 115
Compuesto 115, el éster de etilo del ácido {1S-[2S-(1R-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-2S-vinil-ciclopropilcarbamoil)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico, se muestra a continuación.
177
El Compuesto 115 se preparó con cloroformiato de etilo. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,04 (s, 9H), 1,06-1,11 (m, 4H), 1,23-1,28 (m, 2H), 1,44 (q, J=5,5 Hz, 1H), 1,90 (q, J=5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J=8,7 Hz, 1H), 2,3 9-2,45 (m, 1H), 2,76 (dd, J=14-5, 6,9 Hz, 1H), 2,92-2. 97 (m, 1H), 4,05 (s, 3H), 4,13 (dd, J=12,2, 2,8 Hz, 1H), 4,58-4,63 (m, 2H), 5,14 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,71-5,78 (m, 1H), 5-84 (s ancho, 1H), 7,39 (dd, J=9,3, 2,0 Hz, 1H), 7,52 (d, J 2,1 Hz, 1H), 7,62 (s, 1H), 1,10-1,75 (m, 3H), 8,08 (dd, J=7,9, 1,5 Hz, 1H), 8,32 (d, J=9,2 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,53), EM m/z 762 (M^{+}+1).
Compuesto 116
Compuesto 116, el éster de fenilo del ácido {1S-[2S-(1R-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil-
carbamoil)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico, se muestra a continuación.
178
El Compuesto 116 se preparó con cloroformiato de fenilo. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,01-1,10 (m, 5H), 1,13 (s, 7H), 1,23-1,26 (m, 2H), 1,42-1,47 (m, 1H), 1,90 (dd, J=7,8, 6,0 Hz, 1H), 2.,2 5 (q, J=8,7 Hz, 1H), 2,39-2,45 (m, 1H), 2,76 (dd, J=13,9, 6,9 Hz, 1H), 2,93-2,97 (m, 1H), 4,03 (s, 2H), 4,06 (s, 1H), 4,11 (dd, J=12,4, 2,9 Hz, 0,7H), 4,16 (dd, J=12,7, 2,9 Hz, 0,3 H), 4,62 (q, J=7,8 Hz, 1H),4,69 (d, J=12,5 Hz, 1H), 5,14 (d, J=10,4 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,69-5,77 (m, 1H), 5,81 (s ancho, 0. 7H), 5,87 (s ancho, 0,3H), 6,92 (d, J=7,93 Hz, 1H), 7,04 (dd, J=9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,21 (t, J=7,3 Hz, 0,70H), 7,30 (t, J=7,8 Hz, 1,4H), 7,41 (d, J=2,4 Hz, 0,7H), 7,55 (d, J=2,1 Hz, 0,3H), 7,57 (s, 0,7H), 7,65 (s, 0,3H), 7,69-7,77 (m, 3H), 8,01 (d, J=7,3 Hz, 1,4H), 8,08 (d, J=7,0 Hz, 0,6H), 8,28 (t, J=9,2 Hz, 1H). CL-EM (tiempo de retención: 1,62), EM m/z 810 (M^{+}+1).
Compuesto 117
Compuesto 117, la (1R-ciclopropanosulfonilamino-carbonil-2S-vinil-ciclopropil)-amida del ácido 1-(2S-metanosulfonilamino-3,3-dimetil-butiril)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se muestra a continuación.
179
El Compuesto 117 se preparó con cloruro de metanosulfonilo. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,09-1,12 (m, 2H), 1,08 (s, 9H), 1,23-1,26 (m, 2H), 1,45 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,90 (dd, J=7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,23 (q, J=8,7 Hz, 1H), 2,40-2,47 (m, 1H), 2,74 (s, 3H), 2,78 (dd, J=14,0, 7,0 Hz, 1H), 2,93-2,96 (m, 1H), 4,01 (s, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,10 (dd, J=12,5, 3,1 Hz, 1H), 4,58 (d, J=14,4 Hz, 1H), 4,61 (d, J=10,4, 6,7 Hz, 1H), 5,15 (dd, J=10,5, 1,4 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,0, 1,2 Hz, 1H), 5,71-5,78 (m, 1H), 7,45 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,54 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,71-7,79 (m, 3H), 8,06 (dd, J=6,9, 1,7 Hz, 1H), 8,37 (d, J=9,5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,38), EM m/z 768 (M^{+}+1).
Compuesto 118
Compuesto 118, la (1R-ciclopropanosulfonilamino-carbonil-2S-vinil-ciclopropil)-amida del ácido 1-(2S-ciclopropanosulfonilamino-3,3-dimetil-butiril)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se muestra a continuación.
180
El Compuesto 118 se preparó con cloruro de ciclopropanosulfonilo. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 0,73-0,78 (m, 2H), 0,83-0,91 (m, 2H), 1,06-1,10 (m, 2H), 1,08 (s, 9H), 1,22-1,26 (m, 2H), 1,45 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,90 (dd, J=7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J=8,9 Hz, 1H), 2,32-2,36 (m, 1H), 2,41-2,47 (m, 1H), 2,79 (dd, J=13,9, 6,7 Hz, 1H), 2,92-2,96 (m, 1H), 3,95 (s, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,13 (dd, J=12,4, 2,9 Hz, 1H), 4,52 (d, J=12,5 Hz, 1H), 4,61 (q, J=7,0 Hz, 1H), 5,14 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,2, 1,4 Hz, 1H), 5,71-5,76 (m, 1H), 5,81 (s ancho, 1H), 7,43 (dd, J=9,5, 2,5 Hz, 1H), 7,54 (dd, J=2,4 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,71-7,79 (m, 3H), 8,07 (dd, J=7,0, 1,5 Hz, 1H), 8,36 (d, J=9,5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,44), EM m/z 794 (M^{+}+1).
Compuesto 119
Compuesto 119, (1R-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)amida del ácido 1-[2S-(4-fluoro-bencenosulfonil-amino)-3,3-dimetil-butiril]-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se
muestra a continuación.
181
El Compuesto 119 se preparó con cloruro de 4-fluorobencenosulfonilo. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 0,93 (s, 3,6H), 1,01 (s, 2H), 1,08 (s, 5,4H), 1,22-1,26 (m, 2H), 1,41-1,47 (m, 1H), 1,85-1,91 (m, 1H), 2,22-2,27 (m, 1H), 2,40-2,46 (m, 1H), 2,75 (dd, J=14,0, 7,3 Hz, 0,4H), 2,79 (dd, J=14,7, 7,6 Hz, 0,6H), 2,91 (m, 1H), 4,0 (s, 1H), 4,05 (s, 3H), 4,15 (t, J=3,5 Hz, 0,4H), 4,17 (t, J=3,7 Hz, 0,6H), 4,44 (d, J=12,5 Hz, 10,4H), 4,47-4,51 (m, 1H), 4,58 (d, J=12,5 Hz, 0,6H), 4,60-4,64 (m, 1H), 5,13 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,1, 12,1 Hz, 1H), 5,68-5,78 (m, 1H), 5,83 (s ancho, 0,6H), 5,8 7 (s ancho, 0,4H), 7,07-7,12 (m, 1H), 7,40 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 0,4H), 7,44 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 0,6H), 7,55 (d, J=1,5 Hz, 1H), 7,64 (d, J=6,7 Hz, 1H), 7,71-7,81 (m, 4H), 7,93 (d, J=8,5 Hz, 0,6H), 8,07-8,11 (m, 2H), 8,18 (d, J=9,2 Hz, 0,4H), 8,28 (d, J=9,5Hz, 0,6H), 8,41 (d, J=9,5 Hz, 0,4H); CL-EM (tiempo de retención: 1,35), EM m/z 732
Compuesto 120
Compuesto 120, la (1R-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)-amida del ácido 1-[2S-(2-cloro-acetilamino)-3,3dimetil-butiril]-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se muestra a continuación.
182
El Compuesto 120 se preparó con anhídrido cloroacético. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,04-1,11 (m, 3H), 1,08 (s, 9H), 1,22-1,25 (m, 2H), 1,44 (q, J=5,2 Hz, 1H), 1,90 (q, J=5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J=8,8 Hz, 1H), 2,40-2,46 (m, 1H), 2,77 (dd, J=14,2, 6,6 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 3,91 (d, J=13,1 Hz, 1H), 3,99 (d, J=13,4 Hz, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,16 (dd, J=12,4, 3,2 Hz, 1H), 4,52 (t, J=4,3 Hz, 1H), 4,59 (q, J=7,0 Hz, 1H), 4,64 (d, J=12,5 Hz, 1H), 5,13 (dd, J=10,2, 1,7 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,1, 1,5 Hz, 1H), 5,70-5,78 (m, 1H), 5,86 (s ancho, 1H), 7,43 (dd, J=9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,71-7,79 (m, 3H), 8,08 (dd, J=8,2, 1,5 Hz, 1H), 8,34 (d, J=9,5 Hz, 1H). CL-EM (tiempo de retención: 1,47), EM m/z 767
Compuesto 121
Compuesto 121, el éster de metilo del ácido N-{1S-[2S-(1R-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopro-
pilcarbamoil)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-oxalámico, se muestra a continuación.
183
El Compuesto 121 se preparó con cloruro de metil-oxalilo. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,02-1,12 (m, 3H), 1,07 (s, 9H), 1,23-1,2 6 (m, 2H), 1,45 (q, J=5,5 Hz, 1H), 1,90 (q, J=5,5 Hz, 1H), 2,25 (d, J=8,9 Hz, 1H), 2,41-2,47 (m, 1H), 2,77 (dd, J=13,9, 6,6 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 4,07 (s, 3H), 4,16 (dd, J=12,7, 2,9 Hz, 1H), 4,57-4,62 (m, 2H), 5,14 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,72-5,77 (m, 1H), 5,86 (s ancho, 1H), 7,41 (dd, J=9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,64 (s, H), 7,71-7,79 (m, 3H), 8,08 (dd, J=8,2, 1,5 Hz, 1H), 8,27 (d, J=9,2 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,43), EM m/z 776 (M^{+}+1).
Compuesto 122
Compuesto 122, éster de 2-fluoroetilo del ácido {1S-[2S-(1R-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-2S-vinil-ciclopropilcarbamoil)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico, se
muestra a continuación.
184
El Compuesto 122 se preparó con formiato de 2-fluoroetilo. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,01-1,09 (m, 3H), 1,05 (s, 9H), 1,23-1,25 (m, 2H), 1,44 (q, J=5,3 Hz, 1H), 1,89 (q, J=5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J=8,9 Hz, 1H), 2,40-2,46 (m, 1H), 2,77 (dd, J=13,9, 6,9 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 3,92 (dd, J=5,7, 2,9 Hz, 0,5H), 3,95 (dd, J=5,5, 2,8 Hz, 0,5H), 3,97 (dd, J=5,5, 2,8 HZ, 0,5H), 4,01 (dd, J=5,0, 2,6 Hz, 0,5H), 4,05 (s, 3H), 4,14 (dd, J=12,2, 2,8 Hz, 1H) 4,24 (s, 1H), 4,36-4,38 (m, 1H), 4,45-4,48 (m, 1H), 4,59-4,64 (m, 2H), 5,14 (dd, J=10,4, 1,2 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,70-5,77 (m, 1H), 5,86 (s ancho, 1H), 7,42 (dd, J=9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,55 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,71-7,78 (m, 3H), 8,09 (d, J=8,2 Hz, 2H), 8,33 (d, J= 9,5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención; 1,46), EM m/z 780 (M^{+}+1).
Compuesto 123
Compuesto 123, éster de vinilo del ácido {1S-[2S-(4R-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropilcar-
bamoil)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico, se muestra a
continuación.
185
El Compuesto 123 se preparó con cloroformiato de vinilo. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,05 (m, 9H), 1,01-1,13 (m, 3H), 1,24 (d, J=2,4 Hz, 2H), 1,29 (s ancho, 1H), 1,44 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,90 (dd, J=8,1, 5,7 Hz, 1H), 2,24 (q, J=8,5Hz, 1H), 2,40-2,45 (m, 1H), 2,78 (dd, J=13,6, 7,2 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,11 (dd, J=12,2, 2,8 Hz, 1H), 4,24 (d, J=8,9 Hz, 1H), 4,32 (d, J=5,5 Hz, 1H), 4,60-4,66 (m, 3H), 5,14 (d, J=10,7 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,70-5,77 (m, 1H), 5,86 (s ancho, 1H), 6,68 (dd, J=14,2, 6,3 Hz, 1H), 7,40 (dd, J=9,5, 2,1 Hz, 1H), 7,54 (d, J=1,8 HZ, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,72-7,79 (m, 3H), 8,08 (d, J=7,02 Hz, 1H), 8,30 (d, J=9,5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,56), EM m/z 760 (M^{+}+1).
Compuesto 124
Compuesto 124, éster de prop-2-inilo del ácido {1S-[2S-(1R-ciclopropanosulfonil-arninocarbonil-2S-vinil-ciclo-
propilcarbamoil}-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico, se
muestra a continuación.
186
El Compuesto 124 se preparó con cloroformiato de propargilo. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,01-1,09 (m, 3H), 1,05 (s, 9H), 1,21-1,26 (m, 2H), 1,44 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1 H), 1,90 5 (dd, J=7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J=8,9 Hz, 1H), 2,40-2,46 (m, 1H), 2,77 (dd, J=14,2, 6,9 Hz, 1H), 2,83 (t, J=2,1 Hz, 1H), 2,93-2,97 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,12 (dd, J=12,2, 2,9 Hz, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,33 (d, J=2,4 Hz, 2H), 4,59-4,66 (m, 2H), 5,14 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,4 Hz, 1H), 5,70-5,77 (m, 1H), 5,86 (s ancho, 1H), 7,46 (dd, J=9,2, 2,1 Hz, 1H), 7,54 (d, J=2,1Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,71-7,79 (m, 3H), 8,08 (dd, J=7,0, 1,5 Hz, 2H), 8,37 (d, J=9,5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,49), EM m/z 772 (M^{+}+1).
Compuesto 125
Compuesto 125, éster de 2,2-dimetil-propilo del ácido {1S-[2S-(1S-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-2S-vinil-ciclopropilcarbamoil)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil)-2,2-dimetil-propil}-carbámico,
se muestra a continuación.
187
El Compuesto 125 se preparó con cloroformiato de neopentilo. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 0,81 (s, 9H), 1,04 (s, 9H), 1,06-1,12 (m, 3H), 1,23-1,25 (m, 2H), 1,29 (s, 1H), 1,45 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,91 (dd, J=8,1, 5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J=8,8, 1H), 2,40-2,46 (m, 1H), 2,77 (dd, J=14,4, 7,5 Hz, 1H), 2,93-2,98 (m, 1H), 3,17 (d, J=10,1 Hz, 1H), 3,41 (d, J=10,4 Hz, 1H), 4,05 (s, 3H), 4,11 (dd, J=12,4, 2,3 Hz, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,61-4,66 (m, 2H), 5,14 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,2, 1,1 Hz, 1H, 5,71-5,79 (m, 1H), 5,85 (s ancho, 1H), 7,40 (dd, J=9,3, 2,0 Hz, 1H), 7,53 (d, J=2,1, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,71-7,79 (m, 3H), 8,08 (dd, J=8,2, 1,5 Hz, 2H), 8,32 (d, J-=9,5Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,74), EM m/z 804 (M^{+}+1).
Compuesto 126
Compuesto 126, el éster de alilo del ácido {1S-[2S-(1R-ciclopropanosulfonil aminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil-
carbamoil)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico, se muestra a continuación.
188
El Compuesto 126 se preparó con cloroformiato de alilo. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,05 (s, 9H), 1,06-1,09 (m, 4H), 1,22-1,25 (m, 2H), 1,44 (q, J=5,5 Hz, 1H), 1,90 (q, J=5 5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J=8,9 Hz,1H), 2,40-2,46 (m, 1H), 2,78 (q, J=14,0, 7 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 4,05 (s, 3H), 4,10-4,15 (m, 1H), 4,21 (d, J=5,5 Hz, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,60-4,66 (m, 2H), 5,08 (dd, J=10,5, 1,1 Hz, 1H), 5,14 (dd, J=10,4, 1,2 Hz, 1H), 5,17 (dd, J=17,1, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,1, 1,2 Hz, 1H), 7,42 (dd, J=9,5, 2,1Hz, 1H), 7,55 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,71-7,79 (m, 3H), 8,08 (dd, J=6,9, 1,7 Hz, 2H), 8,33 (d, J=9,5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,56), EM m/z 774 (M^{+}+1).
Compuesto 127
Compuesto 127, éster de butilo del ácido {1S-[2S-{1R-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-2S-vinil-ciclopropilcarbamoil)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico, se muestra a continuación.
189
El Compuesto 127 se preparó con cloroformiato de n-butilo. RMN ^{1}H (MeOH) 0,87 (t, J=7,3 Hz, 3H), 1,04 (s, 9H), 1,07-1,11 (m, 2H), 1,23-1,31 (m, 4H), 1,40-1,46 (m, 3H), 1. 90 (q, J=5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J=8,7 Hz, 1H), 2,40-2-46 (m, 1H), 2,77 (dd, J=14,2, 6,9 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 3,55-3,60 (m, 1H), 3,71-3,76 (m, 1H), 3,97 (s, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,13 (dd, J=12,2, 2,4 Hz, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,60-4,66 (m, 2H), 5,13 (dd, J=10,4, 2 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,70-5,78 (m, 1H), 5,86 (s ancho, 1H), 7,41 (dd, J=9,3, 2,0 Hz, 1H), 7,55 (d, J=1,8 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,72-7,79 (m, 3H), 8,07 (d, J=7,0 Hz, 1H), 8,34 (d, J=9,5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,68), EM m/z 790 (M^{+}+1).
Ejemplo 39
Compuesto 128
Compuesto 128, la (1R-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)amida del ácido 1-[3,3-dimetil-2S-(2-nitro-fenilamino)-butiril-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, mostrada a continuación, se preparó por los procedimientos de las siguientes Etapas 39a-b.
190
Etapa 39a
Preparación del ácido 3,3-dimetil-2S-(2-nitro-fenilamino)-butírico, mostrado a continuación
191
A una suspensión de L-terc-leucina (1,0 g, 7,7 mmol) en EtOH (absoluto, 25 ml) en un matraz de presión media se añadió 1-fluoro-2-nitrobenceno (812 ml, 7,7 mmol) y K_{2}CO_{3} (2,3 g, 15,4 mmol). Después de calentar a 105ºC durante 2 h, la mezcla de reacción roja resultante se filtró para separar el exceso de K_{2}CO_{3} y se lavó con DCM. Se concentró el disolvente y la pasta roja se volvió a disolver con DCM y se neutralizó con HCl 1 N. La capa acuosa se extrajo con DCM. Las capas de DCM combinadas se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron. El sólido rojo se volvió a disolver con MeOH, se concentró hasta una suspensión y se añadió Et_{2}O para producir la precipitación. El producto rojo sólido se obtuvo por filtración a vacío (1,6 g, 82% de rendimiento). RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,09 (s, 1H), 1,14 (s, 9H), 3,80 (s, 3H), 6,60 (ddd, J=8,6, 7,0, 1,2 Hz, 1H), 6,97 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,41 (ddd, J=8,9, 7,0, 1,8 Hz, 1H), 8,11 (dd, J=8,6, 1,5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,60), EM m/z 253 (M^{+} + 1).
Etapa 39b
Preparación del Compuesto 128
A una solución del producto de la Etapa 27d (48,4 mg, 0,0745 mmol) en DMF (2 ml) se añadió DIEA (65 \mul, 0,372 mmol), HATU (57 mg, 0,149 mmol), y el producto de la Etapa 39a (38,0 mg, 0,149 mmol). Después de agitar a t.a. durante 16 h, el disolvente se concentró y el residuo se purificó por HPLC preparativa para dar la sal de TFA en forma de un sólido naranja (22,1 mg, 32% de rendimiento). RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,07-1,10 (m, 2H), 1,13 (s, 9H), 1,21-1,30 (m, 2H), 1,42 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,91 (dd, J=10 8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J=8,7 Hz, 1H), 2,40-2,46 (m, 1H), 2,75 (dd, J=13,9, 7,2 Hz, 1H), 2,94-2,99 (m, 1H), 4,08 (s, 3H), 4,12 (dd, J=12,5, 2,4 Hz, 1H), 4,48 (d, J=11,0 Hz, 1H), 4,67 (d, J=7,6Hz, 1H), 5,14 (dd, J=10,7, 1,5 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,68 (m, 1H), 5,89 (s ancho, 1H), 6,49 (t, J=7,8 Hz, 1H), 6,87 (d, J=8,9 Hz, 1H), 6,91 (dd, J=7,0, 1,5 Hz, 1H), 7,28 (dd, J=9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,48 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,73-7,79 (m, 3H), 7,96 (t, J=9,5 Hz, 2H), 8,08 (d, J=8,2 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,67), EM m/z 811 (M^{+}+1).
Ejemplo 40
Compuesto 129
Compuesto 129, la (1R-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)amida del ácido 1-[3,3-dimetil-2S-(3-nitro-25 piridin-4-ilamino)-butiril]-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, mostrada a continuación se preparó de acuerdo con el procedimiento de las siguientes Etapas 40a-b.
192
Etapa 40a
Preparación de la sal de potasio del ácido 3,3-dimetil-2S-(3-nitro-piridin-4-ilamino)-butírico, mostrada a continuación
193
A una suspensión de L-terc-leucina (3,0 g, 21,93 mmol) en EtOH (absoluto, 75 ml) en matraz a presión media se añadió 4-metoxi-3-nitropiridina (3,38 g, 21,93 mmol) y K_{2}CO_{3} (6,7 g, 48,25 mmol). Después de calentar a 105ºC durante 14 h, la mezcla de reacción amarilla resultante se filtró para separar el exceso de K_{2}CO_{3} y se lavó con DCM. Se concentró el disolvente y la pasta amarilla resultante se trituró con MeOH y se separó más K_{2}CO_{3} por filtración. Después el producto se disolvió con MeOH caliente, se concentró hasta una suspensión y se añadió Et_{2}O para producir la precipitación de un sólido amarillo-verde. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 0,97 (s, 1H), 1,13 (s, 9H), 3,88 (s, 1H), 6,92 (d, J=6,4 Hz, 1H), 8,15 (d, J=6,4 Hz, 1H), 9,07 (s, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 0,81), EM m/z 254 (M^{+}+1).
\newpage
Etapa 40b
Preparación del Compuesto 129
El Compuesto 129 se preparó de acuerdo con el procedimiento de la Etapa 39b. RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,07-1,11 (m, 2H), 1,16 (s, 9H), 1,21-1,31 (m, 2H), 1,46 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,91 (dd, J=8,1, 5,6 Hz, 1H), 2,27 (q, J=8,7 Hz, 1H), 2,45-2,50 (m 1H), 2,79 (dd, J=14,4, 7,0 Hz, 1H), 2,94-2,99 (m, 1H), 4,04 (s, 3H), 4,25 (dd, J=12,7, 3,2 Hz, 1H), 4,58 (d, J=11,3 Hz, 1H), 4,71 (dd, J=10,4, 7,3 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 5,14 (d, J=10,4 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,71-5,78 (m, 1H), 5,95 (s ancho, 1H), 7,31 (d, J=7,6 Hz, 1H),7,32 (dd, J=9,5, 2,1 Hz, 1H), 7,53 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,71-7,79 (m, 3H), 7,99 (d, J=7,0 Hz, 1H), 8,10 (d, J=7,0 Hz, 1H), 8,15 (d, J=9,2 Hz, 1H), 9,22 (s, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,36), EM m/z 812 (M^{+}+1).
Ejemplo 41
Compuestos 130 y 131
Los Compuestos 130 y 131, específicamente los isómeros de P3 de la (1R-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-2S-vinil-ciclopopil)amida del ácido 1-{3,3-dimetil-2S-[metil-(2-nitro-bencenosulfonil)-amino]-butiril}-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se prepararon como se describe en las siguientes Etapas 41a-d.
Etapa 41a
Preparación del éster de metilo del ácido 3,3-dimetil-2S-(2-nitro-bencenosulfonilamino)butírico, mostrado a continuación
194
A una solución del hidrocloruro del L-(+)-terc-leucinato de metilo (2,5 g, 13,8 mmol) en DCM (50 ml) se añadió DIEA (7,2 ml, 41,4 mmol) y cloruro de 2-nitrobenceno (3,5 g, 15,2 mmol). Después de agitar a t.a. durante 24 h, la mezcla de reacción se lavó con HCl 1 N (20 ml) y se extrajo con DCM (25 ml). Las capas de DCM combinadas se lavaron con H_{2}O (10 ml), y se neutralizaron con NaOH 1 N. Después se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta una suspensión, se añadió Et_{2}O para producir la precipitación de un producto sólido amarillo (3,05 g, 67% de rendimiento). RMN ^{1}H (MeOH) \delta 0,98 (s, 9H), 3,38 (s, 3H), 3,79 (s, 1H), 7,77-7,83 (m, 2H), 7,84-7,86 (m, 1H), 8,04-8,05 (m, 1H); CL-EM (tiempo de retención; 1,39), EM m/z 353 (M^{+}+1+Na).
Etapa 41b
Preparación del éster de metilo del ácido 3,3-dimetil-2S-[metil-(2-nitro-bencenosulfonil)-amino]-butírico
195
A una solución del éster de metilo del ácido 3,3-dimetil-2S-[(2-nitro-bencenosulfonil)-amino]-butírico (505 mg, 1,53 mmol) en DMF (10 ml) se añadió K_{2}CO_{3} (423 mg, 3,06 mmol). Después de agitar a t.a. durante 20 min, se añadió gota a gota yodometano (476 \mul, 7,65 mmol) y se continuó agitando a t.a. Después de 2 h, se separó el exceso de K_{2}CO_{3} por filtración a vacío y se lavó con MeOH. Se concentró el disolvente y la pasta resultante se volvió a disolver con DCM (30 ml) y se lavó con H_{2}O (3 ml). La capa acuosa se extrajo con 2 x 25 ml de DCM. Las capas de DCM combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron para dar un sólido amarillo (484 mg, 92% de rendimiento). RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,11 (s, 9H), 3,10 (s, 3H), 3,49 (s, 3H), 4,44 (s, 1H), 7,73 (dd, J=7,6, 1,8 Hz, 1H), 7,77-7,83 (m, 2H), 8,02 (dd, J=7,3, 1,8 Hz, 1H); CL-EM ({tiempo de retención: 1,49), EM m/z 345 (M^{+}+1).
\newpage
Etapa 41c
Preparación del ácido 3,3-dimetil-2S-[metil-(2-nitro-bencenosulfonil)-amino]butírico, mostrado a continuación
196
A una solución del producto de la Etapa 41b (250 mg, 0,73 mmol) en THF/MeOH 1:1 (4 ml) se añadió una solución de LiOH (122 mg, 2,90 mmol) en H_{2}O (2 ml). Después de agitar a t.a. Durante 24 h, se concentró el disolvente, se diluyó con H_{2}O (5 ml) y se extrajo con 2 x 20 ml de DCM. La capa de DCM se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para dar el material de partida viscoso marrón (72 mg). La capa acuosa se acidificó con HCl concentrado (\simpH 3) y se extrajo con 3 x 20 ml de DCM. Las capas de DCM combinadas se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron para dar un producto sólido amarillo claro (140 mg, 82% de rendimiento basado en el material de partida recuperado (72 mg, 29%)). RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,14 (s, 9H), 3,12 (s, 3H), 20 4,43 (8, 1H), 7,71 (dd, J=7,63, 1,52 Hz, 1H), 7,74-7,78 (m, 2H), 8,03 (dd, J=7,32, 1,83 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,33), EM m/z 331 (M^{+}+1).
Etapa 41d
Preparación de los Compuestos 130 y 131, mostrados a continuación
197
A una solución del producto de la Etapa 41c (44,1 mg, 0,133 mmol) en DCM (2 ml) se añadió cloruro de oxalilo (59 \mul, 0,67 mmol) y DMF (1 \mul). Después de agitar a t.a. durante 0,5 h, se concentró el disolvente y el residuo del cloruro de ácido resultante se secó a vacío durante 0,5 h y se usó como producto bruto para la siguiente reacción. El cloruro de ácido bruto después se trató con una solución del producto de la etapa 29a (107 mg, 0,133 mmol) y base fosfazeno P1-t-butil-tris-(tetrametileno) (249 \mul, 1,33 mmol, Fluka) en DMF (1 ml). Después de agitar a t.a. durante 14 h, la mezcla de reacción se diluyó con DCM (20 ml), y se lavó con HCl 1 N (3 ml). La capa acuosa se extrajo con DCM (20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron. El residuo resultante se purificó por HPLC de fase inversa para dar un primer isómero (16,2 mg, 12% de rendimiento) y un segundo isómero (11,4 mg, 9% de rendimiento).
Para el primero isómero, mostrado a continuación, que es el Compuesto 130, los datos analíticos eran los siguientes:
198
RMN ^{1}H: (MeOH) \delta 0,97-1,01 (m, 3H), 1,03 (s, 9H), 1,04 (s, 2H), 1,13-1,16 (m, 2H), 1,44 (dd, J=9,5, 5,2 Hz, 1H), 1,93 (dd, 47=7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,27 (q, J=8,7 Hz, 1H), 2,45-2,51 (m, 1H), 2,80 (dd, J=14,3, 7,3 Hz, 1H), 2,83-2,88 (m, 1H), 3,16 (s, 3H), 3,97 (s, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,21 (dd, J=12,5, 3,7 Hz, 1H), 4,38 (d, J=12,5 Hz, 1H), 4,60 (dd, J=9,3, 7,5 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 5,13 (dd, J=10,7, 1,8 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,70-5,78 (m, 1), 5,89 (s ancho, 1H), 7,46 (dd, J=9,5, 2,4 Hz, 1H), 7,56 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,70-7,81 (m, 6H), 7,89 (dd, J=8,6, 0,9 Hz, 1H), 7,92-7,95 (m, 1H), 8,07 (dd, J=8,2, 1,2 Hz, 2H), 8,19 (d, J=9,2 Hz, 1H), CL-EM (tiempo de retención: 1,39), EM m/z 890 (M^{+}+1).
Para el segundo isómero, mostrado a continuación, que es el Compuesto 131, los datos analíticos eran los siguientes:
199
RMN ^{1}H: (MeOH) \delta 1,01 (s, 9H), 1,03-1,08 (m, 2H), 1,19-1,24 (m, 2H), 1,54 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,81-1,86 (m, 2H), 1,92 (dd, J=7,8, 5,6 Hz, 1H), 2,24-2,31 (m, 1H), 2,41-2,50 (m, 1H), 2,80 (dd, ,7=13,9, 6,9 Hz; 1H), 2,90-2,95 (m, 1H), 3,08-3,17 (m, 2H), 3,11 (s, 3H), 3,97 (s, 1H), 4,04 (s, 3H), 4,06 (s, 1H), 4,12 (dd, J=12,2, 2,8 Hz, 1H), 4,40 (s, 1H), 4,48 (d, J=12,2 Hz, 1H), 4,72 (dd, J=10,5, 6,9 Hz, 1H), 5,14 (d, J=10,4 Hz, 1H), 5,34 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,79-5,84 (m, 1H), 5,87 (s ancho, 1H), 7,39 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,45-7,48 (m, 1H), 7,51 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,65-7,69 (m, 3H), 7,70-7,80 (m, 6H), 8,06 (dd, J=8,2, 1,2 Hz, 1H), 8,11 (dd, J=8,2, 1,5 Hz, 2H), 8,24 (d, J=9,5 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,65), EM m/z 890 (M^{+}+1).
Ejemplo 42
Compuestos 132 y 133
Los Compuestos 132 y 133, que son los isómeros de P3 2S y 2R de la (1R-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)amida del ácido (3,3-dimetil-2-metilamino-butiril)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, se prepararon como se describe a continuación.
200
La preparación del Compuesto 132 se muestra a continuación. De forma específica, a una solución de Compuesto 130 (13,9 mg, 5 0,016 mmol) en DMF (1 ml), se añadieron 2-mercaptoetanol (3 gotas) y DBU (5 gotas) y se agitó a t.a. Después de 24 h, el disolvente se concentró y el residuo se purificó por HPLC de fase inversa para dar el producto como la sal de bis-TFA en forma de sólido blanco. (7,2 mg, 48% de rendimiento). RMN ^{1}H (MeOH) \delta 0,86-0,91 (m, 1H), 1,07-1,14 (m, 3H), 1,16 (s, 9H), 1,19-1,22 (m, 1H), 1,25-1,33 (m, 4), 1,42 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,92 (dd, (J=8,1, 5,7 Hz, 1H), 2,27 (q, J=8,7 Hz, 1H), 2,41-2,47 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,79-2,84 (m, 1H), 2,93-2,97 (m, 1H), 4,03 (s, 3H), 4,13 (dd, J=12,2, 3,1 Hz, 1H), 4,47 (d, J=12,2 Hz, 1H), 4,76 (dd, J=9,3, 7,5 Hz, 1H), 5,15 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,30 (dd, J=17,4 Hz, 1H), 5,68-5,75 (m, 1H), 5,86 (s ancho, 1H), 7,37 (dd, J=9,2, 2,1 Hz, 1H), 7,52 (s ancho, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,65-7,70 (m, 3H), 8,05-8,09 (m, 2H), 8,13 (d, J=9,2 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,18), EM m/z 704 (M^{+}+1).
El Compuesto 133, mostrado a continuación, se preparó usando el Compuesto 131 por el procedimiento de preparación del Compuesto 132.
201
RMN ^{1}H (MeOH) \delta 0,86-0,93 (m, 1H), 1,09 (s, 9H), 1,15-1,23 (m, 4H), 1,27-1,33 (m, 3H), 1,37-1,45 (m, 3H), 1,92 (3d, J=7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,32 (q, J=8,7 Hz, 1H), 2,49-2,57 (m, 1H), 2,75 (s, 3H), 2,86 (dd, J=14,0, 7,6 Hz, 1H), 2,95-3,00 (m, 1H), 3,38-3,49 (m, 1H), 4,04 (s, 3H), 4,15 (s, 1H), 4,29 (dd, J=12,5, 3,1 Hz, 1H), 4,39 (d, J=12,2 Hz, 1H), 4,75 (t, J=8,1 Hz, 1H), 5,16 (dd, J=10,4, 1,2 Hz, 1H), 5,34 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,70-5,77 m, 1H), 5,97 (s ancho, 1H), 7,44 (dd, J=9,5, 2,4 Hz, 1H), 7,56 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,69-7,76 (m, 3H), 8,09 (dd, J=7,0, 0,9 Hz, 1H), 8,14 (d, J=9,2 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,21), EM m/z 704 (M^{+}+1).
Ejemplo 43
Compuesto 134
Compuesto 134, (1R-ciclopropano-sulfonilaminocarbonil-2S-vinil-ciclopropil)amida del ácido 1-(2R-dimetilamino-3-fenil-propionil)-4R-{7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2;3-carboxílico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
202
A una solución del dihidrocloruro de la (1R-ciclo-propanosulfonilaminocarbonil-2S-vinilciclopropil}amida del ácido 4R-(7-metoxi-2-fenilquinolin-4-iloxi)pirrolidina-2S-carboxílico (49,5 mg, 0,061 mmol) en DCM (2 ml) se añadió DIEA (64 \mul, 0,37 mmol), HATU (28,0 mg, 0,074 mmol) y N,N-dimetil-1-fenil-alanina (14,0 mg, 0,061 mmol). Después de agitar a t.a. durante 0,5 h, el disolvente y exceso de DIEA se concentraron y el residuo resultante se purificó por HPLC preparativa de fase inversa para dar el compuesto en forma de la sal de bis-TFA como sólido blanco (14,0 mg, 23% de rendimiento) del Compuesto 134, y en forma de sal de bis-TFA como sólido amarillo (6,1 mg, 10% de rendimiento) de Compuesto 135. RMN ^{1}H (MeOH de Compuesto 134) \delta 1,12-1,16 (m, 2H), 1,20-1,25 (m, 1H), 1,28-1,33 (m, 1H), 1,42 (dd, J=9,5, 5,2 Hz, 1H), 1,98 (dd, J=7,9, 5,2 Hz, 1H), 2,26-2,31 (m, 2H), 2,64 (dd, J=12,8, 8,1 Hz, 1H), 3,01 (s ancho, 6H), 3,05-3,09 (m, 2H), 3,42 (dd, J=13,4, 3,7 Hz, 1H), 4,03 (s, 3H), 4,08 (s, 1H), 4,48 (dd, J=10,1, 4,0 Hz, 1H), 4,58 (dd, J=9,8, 7,0 Hz, 1H), 5,17 (dd, J=10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,33 (d, J=17,4 Hz, 1H), 5,60 (s ancho, 1H), 5,76-5,81 (m, 1H), 7,32-7,35 (m, 2H), 7,36-7,40 (m, 4H), 7,42 (d, J=8,2 Hz, 1H), 7,51 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,67-7,71 (m, 4H), 8,02-8,04 (m, 2H), 8,13 (d, J=9,2 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,37), EM m/z 752 (M^{+}+1).
Ejemplo 44
Compuesto 135
Compuesto 135, la (1R-ciclopropanosulfonilamino-carbonil-2S-vinil-ciclopropil)amida del ácido 1-(2S-dimetilamino-3-fenil-propionil)-4R-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2S-carboxílico, mostrada a continuación, se preparó por el procedimiento del Ejemplo 43.
203
RMN ^{1}H (MeOH) \delta 1,10-1,22 (m, 2H), 1,21-1,28 (m, 1H), 1,29-1-35 (m, 1H), 1,42 (dd, J=9,5, 5,2 Hz, 1H), 1,97 (dd, ,7=8,2, 5,2 Hz, 1H), 2,28-2,36 (m 2H), 2,58-2,36 (m, 2H), 3,03 (s, 6H), 3,06-3,08 (m, 3H), 3,39 (dd, J=12,5, 4,0 Hz, 1H), 4,04 (s, 3H), 4,08 (s, 1H), 4,11 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,51 (dd, J=10,7, 4,0 Hz, 1H), 4,62 (dd, J=9,8, 7,0 Hz, 1H), 5,16 (dd, J=10,2, 1,7 Hz, 1H), 5,34 (dd, J=16,8, 1,5 Hz, 1H), 15,63 (s ancho, 1H), 5,75-5,83 (m, 1H), 7,33 (dd, J=6,1, 2,4 Hz, 1H), 7,38-7,42 (m, 5H), 7,47 (s, 1H), 7,54 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,69-7,76 (m, 4H), 8,02-8,02 (m, 2H), 8,18 (d, J=9,2 Hz, 1H); CL-EM (tiempo de retención: 1,30), EM m/z 752 (M^{+}+1);
Ejemplo 45
La sal de hidrocloruro del éster de metilo del ácido 1-amino-espiro[2,3]hexano-1-carboxílico, mostrada a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 45a-45c.
204
Etapa 45a
Preparación del éster de dimetilo del ácido [2,3]hexano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación
205
A una mezcla de metilen-ciclobutano (1,5 g, 22 mmol) y Rh_{2}(OAc)_{4} (125 mg, 0,27 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (15 ml) se añadieron 3,2 g (20 mmol) de diazomalonato de dimetilo (preparado de acuerdo con J. Lee et al. Synth. Comm., 1995, 25, 1511-1515) a 0ºC en un periodo de 6 h. La mezcla de reacción después se calentó a t.a. y se agitó durante otras 2 h. La mezcla se concentró y se purificó por cromatografía ultrarrápida (eluyendo con hexano/Et_{2}O 10:1 a hexano/Et_{2}O 5:1) para dar 1 3,2 g (72%) de éster de dimetilo del ácido [2,3]hexano-1, 1-dicarboxílico en forma de un aceite amarillo. RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,78 (s, 6H), 2,36 (m, 2 H), 2,09 (m, 3H), 1,90 (m, 1H), 1,67 (s, 2H). CL-EM: EM m/z 199 (M^{+}+1) (Procedimiento D).
\newpage
Etapa 45b
Preparación del éster de metilo del ácido espiro[2,3]hexano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación 
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206 
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A una mezcla del éster de dimetilo del ácido espiro[2,3]hexano-1,1-dicarboxílico 1 (200 mg, 1,0 mmol) en 2 ml de MeOH y 0,5 ml de agua se añadió KOH (78 mg, 1,4 mmol). Esta solución se agitó a t.a. durante 2 días. Después se acidificó con HCl diluido y se extrajo dos veces con éter. Las fases orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron para dar 135 mg (73%) del compuesto 2 en forma de un sólido blanco. RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,78 (s, 3H), 2,36-1,90 (m, 8H). CL-EM: EM m/z 185 (M^{+}+1) (Procedimiento D).
Etapa 45c
Preparación del producto del título, la sal de de hidrocloruro del éster de metilo del ácido 1-amino-espiro[2,3]hexano-1-carboxílico
A una mezcla del éster de metilo del ácido espiro[2,3]hexano-1,1-dicarboxílico 2 (660 mg, 3,58 mmol) en 3 ml de t-BuOH anhidro, se añadieron 1,08 g (3,92 mmol) de DPPA y 440 mg (4,35 mmol) de Et_{3}N. La mezcla se calentó a reflujo durante 21 h y después se repartió entre H_{2}O y éter. La fase de éter se secó sobre sulfato magnésico, se filtró y se concentró a vacío para dar un aceite. A este aceite se añadieron 3 ml de una solución de HCl 4 M/dioxano. La solución ácida se agitó a t.a. durante 2 h y después se concentró a vacío. El residuo se trituró con éter para dar 400 mg (58%) de compuesto 3 en forma de un sólido blanco. RMN ^{1}H (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta 8,96 (s ancho, 3 H), 3,71 (s, 3 H), 2,41 (m, 1 H), 2,12 (m, 4 H), 1,93 (m, 1 H), 1,56 25. (q, 2 H, J=8 Hz). CL-EM de la amina libre: EM m/z 156 (M^{+}+1) (Procedimiento D).
Ejemplo 46
Compuesto 136
Compuesto 136, el éster de terc-butilo del ácido (1-[2-(1-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-espiro[2.3]hex-1-ilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 46a-c.
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207 
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Etapa 46a
Preparación del éster de metilo del ácido 1-{[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetil-butiril)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carbonil]-amino}-espiro[2,3]hexano-1-carboxílico, mostrado a continuación
208
A una mezcla de ácido 1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetil-butiril)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carboxílico (50 mg, 0,087 mmol) en CH_{2}Cl_{2} se añadió iPr_{2}EtN (56 mg, 0,43 mmol) y después HBTU (40 mg, 0,10 mmol), HOBT.H_{2}O (16 mg, 0,10 mmol) y sal de hidrocloruro del éster de metilo del ácido 1-amino-espiro[2,3]-carboxílico (18 mg, 0,094 mmol). Se agitó a t.a. toda la noche. Después la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO_{3}, salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con hexano/EtOAc 1:1 para dar el producto del título en forma de un sólido blanco (60 mg, 96%). CL-EM: (tiempo de retención 1,74 min), EM m/z 715 (M^{+}+1) (Procedimiento D).
Etapa 46b
Preparación del ácido 1-{[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetil-butiril)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carbonil]-amino}-espiro [2.3]hexano-1-carboxílico, mostrado a continuación
209
A una mezcla del éster de metilo del ácido 1-{[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetil-butiril)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carbonil}-amino}-espiro[2,3]-hexano-1-carboxílico (60 mg, 0,084 mmol) en 3 ml de THF, 1,5 ml de MeOH y 0,4 ml de H_{2}O se añadió LiOH (30 mg, 1,5 mmol). La mezcla se agitó a t.a. durante 3 días. Después se concentró y se repartió entre solución acuosa saturada de NaHCO_{3} y éter. La capa acuosa se acidificó a pH=4 con HCl diluido, y se extrajo tres veces con EtOAc. Los extractos de EtOAc combinados se secaron sobre sulfato magnésico, se filtraron y se concentraron para proporcionar 55 mg de ácido 1-{[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetil-butiril)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carbonil]-amino}-espiro [2.3] hexano-1-carboxílico en forma de un sólido blanco (93%). CL-EM: (tiempo de retención 1,71 min), EM m/z 701 (M^{+}+1) (Procedimiento D).
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Etapa 46c
Preparación del Compuesto 136
A una mezcla de CDI (17 mg, 0,10 mmol) en THF (3 ml) se añadió ácido 1-{[1-(2-terc-butoxicarbonilamino-3,3-dimetil-butiril)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-2-carbonil]-amino}-espiro[2,3]-hexano-1-carboxílico (55 mg, 0,078 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante 1 h y se dejó enfriar a t.a. Se añadió ciclopropilsulfonamida (13 mg, 0,10 mmol) seguido de DBU (6 mg, 0,10 mmol). La mezcla se agitó a t.a. durante 24 h y después se diluyó con EtOAc. La solución se lavó con tampón a pH = 4, solución acuosa saturada de NaHCO_{3} y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró. El residuo se purificó usando TLC preparativa eluyendo tres veces con MeOH en CH_{2}Cl_{2} al 2,5% para dar 13 mg de Compuesto 148, éster de terc-butilo del ácido {1-[2-(1-ciclopropanosulfonilaminocarbonil-espiro[2.3]hex-1-ilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico, en forma de un sólido blanco (20%). CL-EM: (tiempo de retención 1,63 min), EM m/z 804 (Procedimiento D).
Ejemplo 47
Los siguientes compuestos también se prepararon usando el producto de la Etapa 45c, de acuerdo con el procedimiento de Ejemplo 46.
Compuesto 137
210
CL-EM: (tiempo de retención 1,62 min), EM m/z 804 (Procedimiento D).
Compuesto 138
211
CL-EM: (tiempo de retención 1,56 min), EM m/z 790 (Procedimiento D).
Ejemplo 48
Compuesto 139
Compuesto 139, el éster de terc-butilo del ácido {1-[2-(1-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-espiro[2,4]hept-1-ilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}carbámico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 48a-d.
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212 
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Etapa 48a
El éster de dimetilo del ácido espiro[2,4]heptano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
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213 
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Usando el procedimiento de la Etapa 45a, se hicieron reaccionar 1,14 g (13,9 mmol) de metilenciclopentano y 2,0 g (12,6 mmol) de diazomalonato de dimetilo para dar 1,8 g (67%) del éster de dimetilo. RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,73 (s, 6H), 1,80 (m, 2H), 1,70 (m, 4H), 1,60 (m, 4H). CL-EM: EM m/z 213 (M^{+}+1) (Procedimiento D).
Etapa 48b
El éster de metilo del ácido espiro [2,4]heptano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
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214 
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Usando el procedimiento de la Etapa 45b, 1,7 g (8,0 mmol) del producto de la Etapa 48a y 493 mg (8,8 mmol) de KOH dieron 1,5 g (94%) de éster de metilo del ácido espiro[2,4]heptano-1,1-dicarboxílico. RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,80 (s, 3 H), 2,06 (d, 1H, J=5 Hz), 1,99 (d, 1 H, J=5 Hz), 1,80-1,66 (m, 8 H). CL-EM: EM m/z 199 (M^{+}+1) (Procedimiento D).
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Etapa 48c
La sal de hidrocloruro del éster de metilo del ácido 1-amino-espiro[2,4]heptano-1- carboxílico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
215
Usando el procedimiento de la Etapa 45c, 500 mg (2,5 mmol) del producto de la Etapa 48b, 705 mg (2,5 mmol) de DPPA y 255 mg (2,5 mmol) de Et_{3}N dieron 180 mg (35%) de esta sal de hidrocloruro. RMN ^{1}H (300 MHz, d_{6}-DMSO) \delta 8,90 (s ancho, 3 H), 3,74 (s, 3H), 1,84 (m, 1H), 1,69 (m, 4H), 1,58 (m, 4H), 1,46 (d, 1H, J=6 Hz). CL-EM de la amina libre: EM m/z 170 (M^{+}+1) (Procedimiento D).
Etapa 48d
El Compuesto 139 se preparó usando el producto de la Etapa 48c, de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 46. Tiempo de retención (min) 1,69 EM datos de (M+1) m/z 818 (Procedimiento D).
Ejemplo 49
Compuesto 140
Compuesto 140, el éster de terc-butilo del ácido {1-[2-(1-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-espiro[2,2]pentano-1-ilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 49a-d.
216
Etapa 49a
El éster de dimetilo del ácido espiro[2,2]pentano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
217
A una mezcla de metilenciclopropano (1,0 g, 18,5 mmol) (preparado según P. Binger patente de EE.UU. nº de serie 5.723.714) y Rh_{2}(OAc)_{4} (82 mg, 0,185 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (10 ml), se añadió diazomalonato de dimetilo (2,9 g, 18,3 mmol) a 0ºC. En la parte superior del matraz se puso un dedo frío cuya temperatura se mantuvo a -10ºC. La mezcla de reacción se calentó a t.a. y se agitó durante otras 2 h. La mezcla se concentró a vacío y se purificó por cromatografía ultrarrápida (eluyendo con hexano/Et_{2}O 10:1 a hexano/Et_{2}O 5:1) para dar 0,85 g (25%) del éster de dimetilo en forma de un aceite amarillo. RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) d 3,73 (s, 6H), 1,92 (s, 2H), 1,04 (d, 4H, J=3 Hz).
Etapa 49b
El éster de metilo del ácido espiro[2,2]pentano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
218
Usando el procedimiento de la Etapa 45b, 800 mg (4,3 mmol) del producto de la Etapa 49a y 240 mg (4,3 mmol) de KOH dieron 600 mg (82%) del éster de metilo del ácido espiro[2,2]pentano-1,1-dicarboxílico. RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,82 (s, 6H), 2,35 (d, 1 H, J=3 Hz), 2,26 (d, 1H, J=3 Hz), 1,20 (m, 1H), 1,15 (m, 1H), 1,11 (m, 1H), 1,05 (m, 1H). LRMS: EM m/z 169 (M^{+}-1) (Procedimiento D).
Etapa 49c
La sal de hidrocloruro del éster de metilo del ácido 1-amino-espiro[2,2]pentano-1-carboxílico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
219
Usando el procedimiento de la Etapa 45c, 400 mg (2,3 mmol) del producto de la Etapa 49b, 700 mg (2,5 mmol) de DPPA y 278 mg (2,7 mmol) de Et_{3}N dieron 82 mg (20%) de la sal de hidrocloruro RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,19 (s ancho, 3H), 3,81 (s, 3H), 2,16, (d, J=5,5 Hz, 1H), 2,01 (d, J=5,5 Hz, 1H), 1,49 (m, 1H), 1,24, (m, 1H), 1,12 (m, 2H). LRMS de la amina libre: EM m/z 142 (M^{+}+1) (Procedimiento D).
Etapa 49d
El Compuesto 140 se preparó usando el producto de la Etapa 49c, de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 46. Tiempo de retención (min) 1,59 EM datos de (M+1) m/z 790 (Procedimiento D).
Ejemplo 50
Compuesto 141
Compuesto 141, el éster de terc-butilo del ácido {1-[2-(1-ciclopropanosulfonil-aminocarbonil-espiro[2.2]pentan-1-ilcarbamoil)-4-(7-metoxi-2-fenil-quinolin-4-iloxi)-pirrolidina-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico, mostrado a continuación, se preparó como se describe en las Etapas 50a-d.
220
Etapa 50a
El éster de etilo del ácido 5-amino-espiro[2,3]hexano-5-carboxílico, mostrado a continuación, se preparó como sigue.
221
La espiro[2.3]hexan-4-ona 13 (500 mg, 5 mmol), la cual se preparó a partir de biciclopropilideno (A. Meijere y col., Org. Syn. 2000, 78, 142-151) de acuerdo con A. Meijere y col. J. Org. Chem. 1988, 53, 152-161, se combinó con carbonato amónico (1,17 g, 15 mmol) y cianuro potásico (812 mg, 12,5 mmol) en 50 ml de EtOH y 50 ml de agua. La mezcla se calentó a 55ºC durante 2 días. Después se añadió NaOH (7 g, 175 mmol) y la solución se calentó a reflujo toda la noche. Después la mezcla se enfrió a 0ºC, se acidificó a pH 1 con HCl concentrado y se concentró a vacío. Se añadió EtOH a la mezcla de aminoácido bruta, y después se concentró a sequedad (5x) para separar así el agua residual. El residuo se disolvió en 100 ml de EtOH y se enfrió a 0ºC. Después se trató con 1 ml de SOCl_{2} y se calentó a reflujo durante 3 días. Los sólidos se separaron por filtración y el filtrado se concentró a vacío para dar el producto bruto. El producto bruto se repartió entre NaOH 3 N, NaCl y EtOAc. La fase orgánica se secó sobre carbonato potásico y se concentró. El residuo se purificó usando cromatografía en columna en gel de sílice C18 (eluyendo con MeOH/H_{2}O) para dar 180 mg (21%) de compuesto 15 en forma de un aceite. RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,20 (s ancho, 2 H), 4,27 (s, 2 H), 2,80 (s, 1H), 2,54 (s, 1H), 2,34 (m, 2H), 1,31 (s, 3H), 1,02 (s, 1H), 0,66 (m, 3H). RMN ^{13}C (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 170,2 (s), 63,0 (s), 62,8 (s), 26,1 (s), 26,0 (s), 24,9 (s), 13,9 (s), 11,4 (s), 10,9 (s). CL-EM: EM m/z 170 (M^{+}+1) (Procedimiento D).
Etapa 50d
El Compuesto 141 se preparó usando el producto de la Etapa 50c, de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 46. Tiempo de retención (min.) 1,87 EM datos de (M+1) m/z 804 (Procedimiento D).
Ejemplo 51 Preparación de las sales
222
La sal, sal de metanosulfonato del BOCNH-P3 (L-t-BuGly)-P2 [(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-5-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}-ciclopropano, mostrada antes se preparó como sigue.
A una solución de 100 mg (0,124 mmol) de BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2 [(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-3-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}-ciclopropano disuelto en 5 ml de CH_{2}Cl_{2} enfriado a -78ºC, se añadieron 8,4 \mul (0,13 mmol) de ácido metanosulfónico y la mezcla se calentó a t.a. en 10 min. La mezcla se concentró a vacío, se hizo precipitar en la cantidad mínima de CH_{2}Cl_{2} en Et_{2}O, se filtró y se concentró para proporcionar 98 mg de la sal de metanosulfonato de BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-5-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}-ciclopropano en forma de un sólido blanco: CL-EM (tiempo de retención: 1,63, procedimiento A), EM m/z 790 (M^{+}+1). HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{41}H_{52}N_{5}SO_{9}: 790,3486, encontrado 790,3505.
223
La sal, sal de trifluoroacetato de BOCNH-P3 (L-t-BuGly)-P2 [(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-5-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}-ciclopropano, mostrada antes, se preparó como sigue.
A una solución de 100 mg (0,124 mmol) de BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-5-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}-ciclopropano disuelto en 5 ml de CH_{2}Cl_{2} enfriado a -78ºC, se añadieron 10,7 \mul (0,14 mmol) de TFA y la mezcla se calentó a t.a. en 10 min. La mezcla se concentró a vacío, se hizo precipitar en la cantidad mínima de CH_{2}Cl_{2} en Et_{2}O, se filtró y se concentró para proporcionar 98,4 mg de la sal de trifluoroacetato de BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-5-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}-ciclopropano en forma de un sólido blanco CL-EM (tiempo de retención: 1,61, procedimiento A), EM m/z 790 (M^{+}+1). HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{41}H_{52}N_{5}SO_{9}: 790,3486, encontrado 790,3505
224
La sal, sal de ácido clorhídrico de BOCNH-P3 (L-t-BuGly)-P2 [(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-5-prolina]-P1(1R,2SVinil-Acca)-CONHSO_{2}-ciclopropano, mostrada antes, se preparó como sigue.
A una solución de 100 mg (0,124 mmol) de BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-5-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}-ciclopropano disuelto en 5 ml de CH_{2}Cl_{2} enfriado a -78ºC, se añadieron 47 \mul (0,19 mmol) de HCl 4 N en dioxanos y la mezcla se calentó a t.a. en 10 min y después se concentró a vacío. El procedimiento se repitió con 20 \mul adicionales (0,08 mmol). La mezcla se hizo precipitar en la cantidad mínima de CH_{2}Cl_{2} en Et_{2}O, se filtró y se concentró para proporcionar 94 mg de la sal de ácido clorhídrico de BOCNH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2-fenil-7-metoxiquinolina-4-oxo)-5-prolina]-P1(1R,2S Vinil-Acca)-CONHSO_{2}-ciclopropano en forma de un sólido blanco CL-EM {tiempo de retención: 1,61, procedimiento A), EM m/z 790 5 (M^{+}+1). HRMS m/z (M+H)^{+} calculado para C_{41}H_{52}N_{5}SO_{9}: 790,3486, encontrado 790,3495.
Ejemplo 52 Estudios biológicos Ensayo del péptido FRET del complejo de proteasa NS3/4A recombinante del VHC
El propósito de este ensayo in vitro era medir la inhibición de los complejos de proteasa NS3 del VHC, derivados de cepas de BMS, H77C o J416S, como se describe a continuación, por los compuestos de la presente invención. Este ensayo proporciona una indicación de como de eficaces serían los compuestos de la presente invención para inhibir la actividad proteolítica visual del VHC.
Se obtuvo suero de un paciente infectado por el VHC de Dr. R. Wright, Hospital de San Francisco. Se construyó un molde de ADNc de longitud completa diseñado del genoma del VHC (cepa BMS) a partir de fragmentos de ADN obtenidos por la PCR con transcripción inversa (RT-PCR) del ARN del suero y usando cebadores seleccionados basándose en la homología entre otras cepas de genotipo 1a. A partir de la determinación de la secuencia del genoma entero, se asignó un genotipo 1a al VHC aislado de acuerdo con la clasificación de Simmonds y col. (véase P. Simmonds, KA Rose, S Graham, SW Chan, F McOmish, BG Dow, EA Follett, PL Yap y H Marsden, J. Clin. Microbiol., 31(6), 1493-1503 (1993)). Se mostró que la secuencia de aminoácidos de la región no estructural, NS2-5B, era >97% idéntica al genotipo 1a del VHC (H77C) y 87% idéntica al genotipo 1b (J4L6S). Los clones infecciosos, H77C (genotipo 1a) y J4L6S (genotipo 1b) se obtuvieron de R. Purcell (NIH) y las secuencias están publicadas en Genebank (AAB67036, véase Yanagi. M., Purcell, R.H., Emerson, S.U. and Bukh, J. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94(16), 8738-8743 (1997); AF054247, véase Yanagi, M., St Claire, M., Shapiro, M., Emerson, S.U., Purcell, R.H. and Bukh, J. Virology 244 (1), 161-172 (1998)).
Las cepas BMS, H77C y J416S, se usaron para la producción de complejos de proteasa NS3/4A recombinante. Los ADN que codificaban estos complejos de proteasa NS3/4A recombinante (aminoácidos 1027 a 1711) para estas cepas se manipularon como describen P. Gallinari y col. (véase Gallinari P, Paolini C, Brennan D, Nardi C, Steinkuhler C, De Francesco R. Biochemistry. 38 (17): 5620-32, (1999)). Brevemente, se añadió una cola solubilizadora de tres lisinas en el extremo 3' de la región codificadora de NS4A. La cisteína en la posición P1 del sitio de escisión de NS4A-NS4B (aminoácido 1711) se cambió por una glicina para evitar la escisión proteolítica de la cola de lisina. Además, se introdujo una mutación de cisteína a serina por PCR en la posición del aminoácido 1454 para evitar la escisión autolítica en el dominio de helicasa de NS3. El fragmento de ADN variante se clonó en el vector de expresión bacteriano pET21b y el complejo de NS3/4A se expresó en E. coli BL21 (DE3) siguiendo el protocolo descrito por P. Gallinari y col. (véase Gallinari P, Brennan D, Nardi C, Brunetti M, Tomei L, Steinkuhler C, De Francesco R., J Virol. 72(8):6758-69 (1998)) con modificaciones. Brevemente, se indujo la expresión de NS3/4A con IPTG 0,5 mM durante 22 h a 20ºC. Una fermentación típica (10 litros) dio aproximadamente 80 g de pasta de células húmeda. Las células se volvieron a suspender en tampón de lisis (10 ml/g) que consistía en HEPES 25 mM, pH 7,5, glicerol al 20%, NaCl 500 mM, Triton X100 al 0,5%, lisozima 1 \mug/ml, MgCl_{2} 5 mM, DNasa I 1 \mug/ml, \beta-mercaptoetanol 5 mM, inhibidor de proteasa, sin EDTA, se homogeneizaron e incubaron durante 20 min a 4ºC. El homogeneizado se trató con ultrasonidos y se clarificó por ultracentrifugación a 235.000 g durante 1 h a 4ºC. Se añadió imidazol al líquido sobrenadante hasta una concentración final de 15 mM y el pH se ajustó a 8,0. El extracto de proteína bruta se cargó en una columna de Ni-NTA preequilibrada con tampón B (HEPES 25 mM, pH 8,0, glicerol al 20%, NaCl 500 mM, Triton X100 al 0,5%, imidazol 15 mM, \betaME 5 mM). La muestra se cargó con un caudal de 1 ml/min. La columna se lavó con 15 volúmenes de columna de tampón C (el mismo tampón que B excepto con Triton X100 al 0,2%). La proteína se eluyó con 5 volúmenes de columna de imidazol en tampón
200 mM.
Las fracciones que contenían el complejo de NS3/4A se juntaron y se cargaron en una columna de desalación Superdex-S200 preequilibrada con tampón D (HEPES 25 mM, pH 7,5, glicerol al 20%, NaCl 300 mM, Triton X100 al 0,2%, \betabME 10 mM). La muestra se cargó con un caudal de 1 ml/min. Las fracciones que contenían el complejo de proteasa NS3/4A se juntaron y se concentraron hasta aproximadamente 0,5 mg/ml. Se consideró que la pureza de los complejos de proteasa NS3/4A, derivados de las cepas BMS, H77C y J4L6S, era mayor que 90% por SDS-PAGE y análisis de espectrometría de masas.
La enzima se almacenó a -80ºC, se descongeló en hielo y se diluyó antes de usar en tampón de ensayo. El sustrato usado para el ensayo de la proteasa NS3/4A descrito por Taliani y col. en Anal. Biochem. 240 (2):60-67 (1996), fue escindido por el enlace éster por la enzima. La secuencia se basa en parte en el sitio de escisión natural de NS4A/NS4B. El sustrato peptídico se incubó con uno de los tres complejos de NS3/4A recombinantes, en ausencia o presencia de un compuesto de la presente invención, y la reacción se siguió en tiempo real en un Cytofluor Series 4000.
Los reactivos eran los siguientes: HEPES y Glicerol (Ultrapure) se obtuvieron en GIBCO-BRL. El DMSO se obtuvo en Sigma. El \beta-Mercaptoetanol se obtuvo en Bio Rad.
Tampón de ensayo: HEPES 50 mM, pH 7,5; NaCl 0,15 M; Triton al 0,1%; Glicerol al 15%; \betaME 10 mM. Sustrato: concentración final 2 \muM (a partir de una solución madre 2 mM en DMSO almacenada a -20ºC). NS3/4A del VHC de tipo 1a (1b), concentración final 2-3 nM (a partir de una solución madre 5 \muM en HEPES 25 mM, pH 7,5, glicerol al 20%, NaCl 300 mM, Triton-X100 al 0,2%, \betaME 10 mM).
El ensayo se llevó a cabo en una placa de poliestireno de 96 pocillos de Falcon. Cada pocillo contenía 25 \mul de complejo de proteasa NS3/4A en tampón de ensayo, 50 \mul de un compuesto de la presente invención en DMSO/tampón de ensayo al 10% y 25 \mul de sustrato en tampón de ensayo. También se preparó un testigo (sin compuesto) en la misma placa de ensayo. El complejo enzimático se mezcló con solución de compuesto o de testigo durante 1 min antes de iniciar la reacción enzimática por adición del sustrato. La placa de ensayo se leyó inmediatamente usando el Cytofluor Series 4000 (Perspective Biosystems). El instrumento se ajustó para leer una emisión de 340 nm y una excitación de 490 nm a 25ºC. Las reacciones se siguieron en general durante aproximadamente 15 minutos.
El porcentaje de inhibición se calculó con la siguiente ecuación:
100 - [(\delta F_{inh}/ \delta F_{con}) \ x \ 100]
en la que \deltaF es el cambio de fluorescencia en el intervalo lineal de la curva. Se aplicó un ajuste de curva no lineal para los datos de inhibición-concentración, y se calculó la concentración eficaz para 50% (CI_{50}) usando el software Excel X1-fit.
Se encontró que todos los compuestos ensayados tienen CI_{50} de 9 \muM o menos. Los compuestos preferidos tenían CI_{50} de 0,021 \muM, como se encontró para el Compuesto 58, o menores. Además, se encontró que los compuestos de la presente invención que se ensayaron frente a más de un tipo de complejo de NS3/4A tenían propiedades de inhibición similares aunque los compuestos de forma uniforme demostraron mayor potencia frente a las cepas 1b comparado con las cepas 1a.
Ensayos de especificidad
Los ensayos de especificidad se llevaron a cabo para demostrar la selectividad de los compuestos de la presente invención para inhibir la proteasa NS3/4A del VHC comparado con otras serina o cisteína proteasas.
Las especificidades de los compuestos de la presente invención se determinaron frente a una variedad de serina proteasas: leucocito elastasa humana, elastasa pancreática porcina, y \alpha-quimiotripsina pancreática bovina y una cisteína proteasa: la catepsina B del hígado humano. En todos los casos se usó un protocolo de formato de placa de 96 pocillos usando p-nitroanilina colorimétrica (pNA) como sustrato específico para cada enzima, como se ha descrito previamente (patente WO 00/09543) con algunas modificaciones.
Cada ensayó incluía una preincubación de enzima-inhibidor de 1 h a t.a. seguido de la adición de sustrato e hidrólisis hasta \sim30% de conversión medido en un lector de microplaca Spectramax Pro. Las concentraciones de compuesto variaban de 100 a 0,4 \muM dependiendo de su potencia.
Las condiciones y el protocolo finales para cada ensayo eran como se ha publicado previamente (patente WO 00/09543) con la inclusión de un ensayo adicional:
- Tris-HCl 50 mM pH 8, Na_{2}SO_{4} 0,5 M, NaCl 50 mM, EDTA 0,1 mM, DMSO al 3%, Tween-20 al 0,01% con succ-AAA-pNA 133 \muM y elastasa 20 nM
El porcentaje de inhibición se calculó usando la fórmula:
[1-( (UV_{inh}-UV_{blanco})/(UV_{ctl-}UV_{blanco}))] \ x \ 100
Se aplicó un ajuste de curva no lineal a los datos de inhibición-concentración, y se calculó la concentración eficaz para 50% (CI_{50}) mediante el uso del software Excel X1-fit.
Ensayo basado en células de replicón del VHC
Se estableció un sistema de célula entera de replicón del VHC como describen Lohmann V, Korner F, Koch J, Herian U, Theilmann L, Bartenschlager R., Science 285 (5424): 110-3 (1999). Este sistema permite evaluar los efectos de los compuestos de tipo proteasa del VHC en la replicación del ARN del VHC. Brevemente, usando la secuencia de la cepa 1B del VHC descrita en el documento de Lohmann (número de acceso: AJ238799), se generó un ADNc del VHC que codificaba el sitio interno de entrada al ribosoma en 5' (IRES), el gen neo, el EMCV-IRES y las proteínas no estructurales del VHC, NS3-NS5B y NTR en 3'. Se transfectaron los transcritos in vitro del ADNc a células Huh7 y se consiguió la selección de células que expresaban de forma constitutiva el replicón del VHC en presencia del marcador seleccionable, neomicina (G418). Las líneas celulares resultantes se caracterizaron por la producción de ARN positivo y negativo y por la producción de proteína en el tiempo.
Las células Huh7 que expresaban constitutivamente el replicón del VHC, se hicieron crecer en DMEM que contenía FCS al 10% (suero de ternero fetal) y G418 1 mg/ml (Gibco-BRL). Las células se sembraron la noche anterior (1,5 x 10^{4} células/pocillo) en placas estériles de cultivo tisular de 96 pocillos. El compuesto se preparó en DMEM que contenía FCS al 4%, penicilina/estreptomicina 1:100, L-glutamina y DMSO al 0,5% 1:100. Se añadieron mezclas de compuesto/DMSO a las células y se incubaron durante 4 días a 37ºC. Después de 4 días, las células se lisaron usando el kit Rneasy (Qiagen) para aislar y purificar el ARN para la determinación de la CE_{50}, o se evaluó la citotoxicidad usando azul Alamar (Trek Diagnostic systems) para una lectura de la CC_{50}. Para la determinación de la CE_{50}, se normalizó el ARN total purificado usando RiboGreen (Jones LJ, Yue ST, Cheung CY, Singer VL, Anal. Chem., 265(2):368-74 (1998)) y se evaluó la cuantificación relativa de la expresión del ARN del VHC usando el procedimiento Taqmann (Kolykhalov AA, Mihalik K, Feinstone SM, Rice CM, Journal of Virology 74, 2046-2051 (2000)). Brevemente, se añadió el ARN completado hasta un volumen de 5 \mul (\leq 1 ng) a 20 \mul de Ready-Mix que contenía lo siguiente: tampón 5X EZ rTth, MnOAc_{2} 3 mM, dNTP 3 mM, cebador directo 200 nM, cebador inverso 600 nM, sonda 100 nM y rTth polimerasa. Se usaron como patrón muestras que contenían concentraciones conocidas del transcrito de ARN del VHC. Usando el siguiente protocolo de ciclos (95ºC, 1 min; 60ºC, 0,5 min; 95ºC, 2 min; 40 ciclos de 94ºC, 0,5 min, 60ºC; 1 min; y se completa con 60ºC, 10 min), se cuantificó la expresión del ARN del VHC como se describe en el manual de Perkin Elmer. La toxicidad del compuesto (CC_{50}) se determinó por adición de 1/10 de volumen de Azul Alamar al medio de incubación de las células. Después de 4 h, se leyó la señal de fluorescencia de cada pocillo, con una longitud de onda de excitación a 530 nM y una longitud de onda de emisión a 580 nM, usando el Cytofluor Series 4000 (Perspective Biosystems).
Estudios de PK in vivo en ratas
Toda la experimentación con animales se llevó a cabo de acuerdo con las directrices de Animal Welfare Act (acta de bienestar de los animales) de USDA. Para evaluar la exposición sistémica y del hígado, se administraron por vía oral (intubación gástrica) o vía intravenosa (bolo o infusión) compuestos representativos a ratas macho Sprague Dawley que llevaban cánulas permanentes internas en la vena yugular. Después de periodos de tiempo predeterminados después de la administración de dosis, se tomaron muestras de sangre seriadas de la cánula implantada. Se separó el plasma de la sangre tratada con EDTA por centrifugación y se almacenó a -20ºC hasta el análisis. Se sacó el hígado de las ratas después de asfixia por dióxido de carbono, se aclararon con solución salina y secaron con papel secante. Para el análisis se picó una porción de 2 g de la parte exterior de un lóbulo y se homogeneizó con 4 ml de acetonitrilo/tampón HBSS al 4%. Después de centrifugar, el líquido sobrenadante se mantuvo a -20ºC hasta el análisis. La cuantificación de los compuestos representativos en las muestras de plasma y homogeneizado de hígado se llevó a cabo por un procedimiento específico de CL/EM/EM optimizado para cada compuesto.
Ejemplos biológicos
La siguiente Tabla 1 lista los compuestos I representativos de la invención que se ensayaron in vitro de acuerdo con el procedimiento previamente descrito.
Actividad en las células y especificidad
Los compuestos representativos de la invención se evaluaron en el ensayo celular de replicón del VHC y/o en algunos de los ensayos de especificidad señalados. Por ejemplo, se encontró que el Compuesto 58 tenía una CI_{50} de 17 nM frente a NS3/4A de la cepa BMS en el ensayo enzimático. Se obtuvieron valores de potencia similares con las cepas H77C (CI_{50} de 10 nM) y J4L6S (CI_{50} de 8 nM) publicadas. El valor de CE_{50} en el ensayo del replicón era 250 nM. Este compuesto también demostró una potencial eficacia in vivo puesto que se logró la exposición al objetivo vírico cuando el compuesto se administró por vía oral o intravenosa.
En los ensayos de especificidad, se encontró que el mismo compuesto tenía la siguiente actividad: HLE =35 \muM; PPE > 100 \muM; quimiotripsina >100 \muM; Catepsina B > 100 \muM. Estos resultados indican que esta familia de compuestos es muy específicos para la proteasa NS3 y muchos de sus miembros inhiben la replicación del replicón del VHC.
Se encontró que los compuestos ensayados tenían actividades en los siguientes intervalos:
Intervalos de actividad CI_{50}: A es < 50 \muM; B es < 5 \muM; C es < 0,5 \muM; D es < 0,05 \muM
Intervalo de actividad CE_{50}: A es < 50 \muM; B es < 5 \muM; C es < 0,5 \muM; D es < 0,05 \muM.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto CI_{50} CE_{50} Compuesto CI_{50} CE_{50}
1 C 2 D D
3 D D 5 D D
6 D D 7 D C
8 D D 9 D C
(Continuación)
Compuesto CI_{50} CE_{50} Compuesto CI_{50} CE_{50}
10 D D 11 D D
12 C C 13 C C
14 C C 15 C B
16 C C 17 C C
18 D D 19 D D
20 D C 21 D B
22 D C 23 D C
24 C C 25 D C
26 D C 27 D C
28 D B 29 D D
30 D D 31 D D
32 D D 33 D D
34 D C 35 D C
36 D C 37 D D
38 D D 39 D C
40 D C 41 D C
42 D C 43 D C
44 D C 45 D C
46 D C 47 D C
48 D C 49 D C
50 C B 51 D C
52 C C 53 D A
54 D C 55 D D
56 D C 57 C C
58 D C 59 D D
60 C C 61 C B
62 B 63 D C
64 B 65 C
66 C 67 D B
68 D B 69 C C
70 C 71 D D
(Continuación)
Compuesto CI_{50} CE_{50} Compuesto CI_{50} CE_{50}
72 C C 73 D C
74 B 75 C
76 C 77 A
78 D 79 C
80 B 81 B
82 A 83 B
84 B 85 C
86 D C 87 D
88 C 89 C B
90 C 91 D D
92 D 93 D
97 C 98 D C
99 D C 100 D C
101 D C 102 D C
103 D D 104 D D
105 D D 106 D C
107 D C 108 D C
109 D C 110 D C
111 D B 112 D D
113 D D 114 D D
115 D D 116 D D
117 D C 118 D C
119 D C 120 D D
121 D C 122 D D
123 D D 124 D D
125 D D 126 D D
127 D D 128 B B
129 B A 132 D B
136 C B 137 B B
138 B 139 B
140 D C 141 C B

Claims (25)

1. Un compuesto que tiene la Fórmula
225
en la que:
(a) R_{1} es alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, los cuales están todos opcionalmente sustituidos de una a tres veces con halógeno, ciano, nitro, alcoxi C_{1-6}, amido, amino o fenilo,
o R_{1} es arilo C_{6} o C_{10} que está opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno, ciano, nitro, alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, amido, amino o fenilo;
(b) m es 1 ó 2;
(c) n es 1 ó 2;
(d) R_{2} es alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6} o cicloalquilo C_{3-7}, cada uno opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno, o R_{2} es H;
(e) R_{3} es alquilo C_{1-8} opcionalmente sustituido con fenilo, alquenilo C_{3-12}, cicloalquilo C_{3-7}, o alquilcicloalquilo C_{4-10}, en el que el cicloalquilo o alquilcicloalquilo están opcionalmente sustituidos con hidroxi, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6} o alcoxi C_{1-6}; o R_{3} junto con el átomo de carbono al que está unido forma un grupo cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con alquenilo C_{2-6};
(f) Y es H, fenilo sustituido con nitro, piridilo sustituido con nitro, o alquilo C_{1-6} en el que dicho alquilo está opcionalmente sustituido con ciano, OH o cicloalquilo C_{3-7};
(g) B es H, alquilo C_{1-6}, R_{4}-(C=O)-, R_{4}O(C=O)-, R_{4}-N(R_{5})-C(=O)-, R_{4}-N(R_{5})-C(=S)-, R_{4}SO_{2}-, o R_{4}-N(R_{5})-SO_{2}-;
(h) R_{4} es (i) alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con fenilo, carboxilo, alcanoilo C_{1-6}, 1-3 halógenos, hidroxi, -OC(O)-alquilo(C_{1-6}), alcoxi C_{1-6}, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; o -O-fenilo opcionalmente sustituido con halógeno o alcoxi C_{1-6}; (ii) cicloalquilo C_{3-7}, cicloalcoxi C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, todos opcionalmente sustituidos con hidroxi, carboxilo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; (iii) amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; amido; o (alquil inferior)amido; (iv) arilo C_{6} o C_{10} o aralquilo C_{7-16}, todos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, halógeno, nitro, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; o (v) Het o (alquil inferior)-Het, ambos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; (vi) biciclo(1.1.1)pentano; (vii) -C(O)-O-alquilo(C_{1-6}), alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6}; y
(i) R_{5} es H o alquilo C_{1-6}, dicho alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con 1-3 halógenos;
o una sal, solvato o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.
2. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que m es 2.
3. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que n es 1.
4. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{2} es etilo o vinilo.
5. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{3} es alquilo C_{1-6}.
6. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que m es 2, n es 1 y R_{2} es etilo.
7. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que m es 2, n es 1 y R_{2} es vinilo.
8. Un compuesto de la reivindicación 1, 6 ó 7, en el que R_{1} es ciclopropilo.
9. Un compuesto de la reivindicación 1, 6 ó 7, en el que R_{1} es ciclobutilo.
10. Un compuesto de la reivindicación 1, 6 ó 7, en el que R_{1} está opcionalmente sustituido.
11. Un compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula
226
en la que:
(a) R_{11} es alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, naftilo o fenilo, en el que dicho fenilo está opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno, ciano, nitro, alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, amido o fenilo,
(b) R_{12} es alquenilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6} o H;
(c) R_{3} es alquilo C_{1-8}, alquenilo C_{3-12} o cicloalquilo C_{3-7}, o alquilcicloalquilo C_{4-10}, en el que el cicloalquilo o alquilcicloalquilo están opcionalmente sustituidos con hidroxi, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{1-6} o alcoxi C_{1-6};
(d) Y es H o alquilo C_{1-6} en el que dicho alquilo está opcionalmente sustituido con ciano o cicloalquilo C_{3-7};
(e) B es H, R_{4}-(C=O)-, R_{4}O(C=O)-, R_{4}-N(R_{5})-C(=O)-, R_{4}-N(R_{5})-C(=S)-, R_{4}SO_{2}-, o R_{4}-N(R_{5})-SO_{2}-;
(f) R_{4} es (i) alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo, alcanoilo C_{1-6}, hidroxi, alcoxi C_{1-6}, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; (ii) cicloalquilo C_{3-7}, cicloalcoxi C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, todos opcionalmente sustituidos con hidroxi, carboxilo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; (iii) amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; amido; o (alquil inferior)amido; (iv) arilo C_{6} o C_{10} o aralquilo C_{7-16}, todos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; o (v) Het o (alquil inferior)-Het, ambos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; y
(g) R_{5} es H o alquilo C_{1-6},
o una sal, solvato o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.
12. Un compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
227 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que:
(a) R_{11} es alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, naftilo o fenilo, en el que dicho fenilo está opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno, ciano, nitro, alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, amido o fenilo,
(b) R_{3} es alquilo C_{1-8}, alquenilo C_{3-12} o cicloalquilo C_{3-7}, o alquilcicloalquilo C_{4-10}, en el que el cicloalquilo o alquilcicloalquilo están opcionalmente sustituidos con hidroxi, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{1-6} o alcoxi C_{1-6};
(c) Y es H o alquilo C_{1-6} en el que dicho alquilo está opcionalmente sustituido con ciano o cicloalquilo C_{3-7};
(d) B es H, R_{4}-(C=O)-, R_{4}O(C=O)-, R_{4}-N(R_{5})-C(=O)-, R_{4}-N(R_{5})-C(=S)-, R_{4}SO_{2}-, o R_{4}-N(R_{5})-SO_{2}-;
(e) R_{4} es (i) alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo, alcanoilo C_{1-6}, hidroxi, alcoxi C_{1-6}, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; (ii) cicloalquilo C_{3-7}, cicloalcoxi C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, todos opcionalmente sustituidos con hidroxi, carboxilo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; (iii) amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; amido; o (alquil inferior)amido; (iv) arilo C_{6} o C_{10} o aralquilo C_{7-16}, todos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; o (v) Het o (alquil inferior)-Het, ambos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; y
(f) R_{5} es H o alquilo C_{1-6},
o una sal, solvato o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.
\newpage
13. Un compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
228
en la que:
(a) R_{11} es alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, naftilo o fenilo, en el que dicho fenilo está opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno, ciano, nitro, alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, amido o fenilo,
(b) R_{3} es alquilo C_{1-8}, alquenilo C_{3-12} o cicloalquilo C_{3-7}, o alquilcicloalquilo C_{4-10}, en el que el cicloalquilo o alquilcicloalquilo están opcionalmente sustituidos con hidroxi, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{1-6} o alcoxi C_{1-6};
(c) Y es H o alquilo C_{1-6} en el que dicho alquilo está opcionalmente sustituido con ciano o cicloalquilo C_{3-7};
(d) B es H, R_{4}-(C=O)-, R_{4}O(C=O)-, R_{4}-N(R_{5})-C(=O)-, R_{4}-N(R_{5})-C(=S)-, R_{4}SO_{2}-, o R_{4}-N(R_{5})-SO_{2}-;
(e) R_{4} es (i) alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo, alcanoilo C_{1-6}, hidroxi, alcoxi C_{1-6}, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; (ii) cicloalquilo C_{3-7}, cicloalcoxi C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, todos opcionalmente sustituidos con hidroxi, carboxilo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; (iii) amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; amido; o (alquil inferior)amido; (iv) arilo C_{6} o C_{10} o aralquilo C_{7-16}, todos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; o (v) Het o (alquil inferior)-Het, ambos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; y
(f) R_{5} es H o alquilo C_{1-6},
o una sal, solvato o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.
14. Un compuesto que tiene la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
229 
\newpage
en la que:
(a) R_{11} es alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, naftilo o fenilo, en el que dicho fenilo está opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno, ciano, nitro, alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, amido o fenilo,
(b) R_{3} es alquilo C_{1-8}, alquenilo C_{3-12} o cicloalquilo C_{3-7}, o alquilcicloalquilo C_{4-10}, en el que el cicloalquilo o alquilcicloalquilo están opcionalmente sustituidos con hidroxi, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{1-6} o alcoxi C_{1-6};
(c) Y es H o alquilo C_{1-6} en el que dicho alquilo está opcionalmente sustituido con ciano o cicloalquilo C_{3-7};
(d) B es H, R_{4}-(C=O)-, R_{4}O(C=O)-, R_{4}-N(R_{5})-C(=O)-, R_{4}-N(R_{5})-C(=S)-, R_{4}SO_{2}-, o R_{4}-N(R_{5})-SO_{2}-;
(e) R_{4} es (i) alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo, alcanoilo C_{1-6}, hidroxi, alcoxi C_{1-6}, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; (ii) cicloalquilo C_{3-7}, cicloalcoxi C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, todos opcionalmente sustituidos con hidroxi, carboxilo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; (iii) amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; amido; o (alquil inferior)amido; (iv) arilo C_{6} o C_{10} o aralquilo C_{7-16}, todos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; o (v) Het o (alquil inferior)-Het, ambos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; y
(f) R_{5} es H o alquilo C_{1-6},
(g) n es 1 ó 2; y
(h) p es 1, 2, 3, 4 ó 5,
o una sal, solvato o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.
15. Un compuesto de la reivindicación 11, 12, 13 ó 14, en el que R_{11} se selecciona de ciclopropilo, ciclobutilo o fenilo opcionalmente sustituido.
16. Un compuesto que tiene la fórmula
230
en la que:
(a) R_{31} es alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, todos opcionalmente sustituidos con hidroxi, halógeno, alcoxi C_{1-6}, tioalquilo C_{1-6}, amido, amino, (alquil C_{1-6})-amido, arilo C_{6} o C_{10}, aralquilo C_{7-16}, Het, o (alquil C_{1-6})-Het, y dichos arilo, arilalquilo o Het están opcionalmente sustituidos con halógeno, alquilo o (alquil inferior)-Het;
(b) n es 1 ó 2;
\newpage
(c) R_{32} es H, alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-3}, cicloalquilo C_{3-7}, alquenilo C_{2-6} o alquinilo C_{2-6}, todos opcionalmente sustituidos con halógeno;
(d) R_{13} es alquilo C_{1-8}, alquenilo C_{3-12}, cicloalquilo C_{3-7}, cicloalquenilo C_{4-13} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, todos opcionalmente sustituidos con hidroxi, alcoxi C_{1-6}, tioalquilo C_{1-6}, amino, amido, (alquil inferior)-amido, arilo C_{6} o C_{10}, o aralquilo C_{7-16};
(e) Y_{2} es H o alquilo C_{1-6};
(f) B_{2} es H, R_{14}-(C=O)-, R_{14}O(C=O)-, R_{14}-N(R_{15})-C(=O)-, R_{14}-N(R_{15})-C(=S)-, R_{14}SO_{2}-, o R_{14}-N(R_{15})-SO_{2}-;
(g) R_{14} es (i) alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo, alcanoilo C_{1-6}, hidroxi, alcoxi C_{1-6}, amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; (ii) cicloalquilo C_{3-7}, cicloalcoxi C_{3-7} o alquilcicloalquilo C_{4-10}, todos opcionalmente sustituidos con hidroxi, carboxilo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo, amino opcionalmente monosustituido o disustituido con alquilo C_{1-6}, amido o (alquil inferior)-amido; (iii) amino opcionalmente monosustituido o disustituido con alquilo C_{1-6}; amido; o (alquil inferior)amido; (iv) arilo C_{6} o C_{10} o aralquilo C_{7-16}, todos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; o (v) Het o (alquil inferior)-Het, ambos opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, hidroxi, amido, (alquil inferior)-amido, o amino opcionalmente mono o disustituido con alquilo C_{1-6}; y
(h) R_{15} es H o alquilo C_{1-6}.
17. Una sal, solvato o profármaco de un compuesto de la reivindicación 16.
18. Un compuesto de la reivindicación 16, en el que R_{31} es cicloalquilo C_{3-6}, alquilcicloalquilo C_{4-10}, alquilo C_{1-8}, CF_{3} o CCl_{3}.
19. Un compuesto de la reivindicación 16, en el que B_{2} es un derivado de acilo de fórmula R_{14}-O-(C=O)- o un carboxilo de fórmula R_{14}-O-(C=O)-.
20. Un compuesto de la reivindicación 16, en el que R_{2} es H, alquilo C_{1-3}, cicloalquilo C_{3-5} o alquenilo C_{2-4}, todos opcionalmente sustituidos con halógeno.
21. Un compuesto de la reivindicación 16, en el que R_{31} es alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-7}, o alquilcicloalquilo C_{4-10}, todos opcionalmente sustituidos con hidroxi, alcoxi C_{1-6}, tioalquilo C_{1-6}, acetamido o arilo C_{6} o C_{10}.
22. Un compuesto de la reivindicación 16, en el que
B es (CH_{3})_{3}-O-CO-;
Y es H; n es 1;
R_{31} es metilo, ciclopropilo o -CF_{3};
R_{32} es etilo o vinilo; y
R_{13} es t-butilo, i-propilo, s-butilo, i-butilo o ciclohexilmetilo.
23. Una composición farmacéutica que comprende
(a) un compuesto de las reivindicaciones 1-22, o una sal, solvato o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable; y
(b) un vehículo farmacéuticamente aceptable.
24. Uso en la fabricación de un medicamento para inhibir la proteasa NS3 del VHC, de un compuesto de las reivindicaciones 1-22, o una sal, solvato o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.
25. Uso en la fabricación de un medicamento para tratar la infección por el VHC en un mamífero, de un compuesto de las reivindicaciones 1-22, o una sal, solvato o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable.
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