ES2268071T3 - Vesiculas naturales que mimetizan la apoptosis y uso de las msimas en tratamiento medico. - Google Patents
Vesiculas naturales que mimetizan la apoptosis y uso de las msimas en tratamiento medico. Download PDFInfo
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Abstract
Uso en la fabricación de un medicamento para aliviar los síntomas de (i) enfermedades inflamatorias, así como de (ii) enfermedades mediadas por células T, enfermedades de disfunción endotelial o enfermedades por expresión de citocina inapropiada, en el que están implicadas citocinas pro-inflamatorias o antiinflamatorias, de vesículas biológicas naturales que presentan fosfatidilserina en su superficie de membrana externa.
Description
Vesículas naturales que mimetizan la apoptosis y
uso de las mismas en tratamiento médico.
Esta invención se refiere al uso de vesículas
biológicas naturales que presentan fosfatidilserina en su superficie
de membrana externa.
Se reconocen dos mecanismos de muerte celular en
el organismo, necrosis y apoptosis. La apoptosis es el procedimiento
de muerte celular programada, descrito por Kerr y col. en 1992
[Kerr, J. F. R., Wyllie A. H., Curie, A. R. (1992)], "Apoptosis:
a basic biological phenomenon with wide-ranging
implications in tissue kinetics". "British Journal of Cancer
26: 239-257", por el cual se mantienen en
equilibrio dinámico los niveles de los distintos sistemas orgánicos
y tejidos en el organismo ya que división celular continua se
equilibra mediante la muerte celular. Las células que sufren
apoptosis frecuentemente muestran cambios morfológicos distintivos
tales como disminución del volumen celular pronunciada,
modificación de los citoesqueletos dando como resultado burbujas en
la membrana pronunciadas, una condensación de la cromatina y
degradación del ADN en fragmentos de tamaño oligonucleosomal. Tras
estos cambios morfológicos, una célula apoptótica puede dividirse en
un número de fragmentos pequeños conocidos como cuerpos
apoptóticos, que consisten esencialmente en cuerpos unidos a la
membrana que contienen orgánulos intactos, cromatina, etc.
Normalmente las células apoptóticas y los cuerpos apoptóticos se
eliminan rápidamente del organismo mediante fagocitosis
principalmente mediante macrófagos y células dendríticas, antes de
que puedan llegar a ser lisadas y liberar sus contenidos
intracelulares potencialmente pro-inflamatorios.
Los macrófagos que han ingerido células
apoptóticas y/o cuerpos apoptóticos parecen inhibir la producción
de citocina pro-inflamatoria (Fadok y col., 1998) y
además pueden regular a la baja una respuesta Th-1
en el sistema inmune de un paciente tras la inyección de células o
cuerpos apoptóticos, o tras la inyección de células susceptibles a
apoptósis acelerada, en la fagocitosis de las mismas.
Durante la apoptósis, la fosfatidilserina llega
a estar expuesta externamente en la membrana de la célula [Fadok,
V. A., Voelker, D. R., Campbell, P. A., Cohen, J. J., Bratton, D.
L., Henson, P. M.(1992), "Exposure of phosphatidylserine on the
surface of apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and
removal by macrophages", Journal of Inmunology
148:2207-2216] y esta fosfatidilserina expuesta se
une a receptores específicos para mediar la absorción y eliminación
de células apoptóticas en mamíferos [Fadok, V. A., Bratton, D. L.,
Rose, D. M., Pearson, A., Exekewitz, R. A. B., Henson, P. M.(2000),
"A receptor for phophatidylserine-specific
clearance of apoptotic cells", Nature 405:85-90].
La expresión en superficie de fosfatidilserina en células es un
procedimiento reconocido de identificación de células
apoptóticas.
La solicitud de patente internacional
PCT/EP99/
03.136, publicación nº WO99/58.645, inventores Gregoire, M. Y Barthaleyns, J., describe cuerpos apoptóticos derivados de células tumorales humanas recuperados de la biopsia del tumor de un paciente e inducidos a apoptósis, que proporcionan antígenos eficaces reconocidos por el sistema inmune. Se recuperan para ofrecer oportunidades en inmunoterapia anticancerosa para mejorar las respuestas celular y humoral específicas frente a tumores.
03.136, publicación nº WO99/58.645, inventores Gregoire, M. Y Barthaleyns, J., describe cuerpos apoptóticos derivados de células tumorales humanas recuperados de la biopsia del tumor de un paciente e inducidos a apoptósis, que proporcionan antígenos eficaces reconocidos por el sistema inmune. Se recuperan para ofrecer oportunidades en inmunoterapia anticancerosa para mejorar las respuestas celular y humoral específicas frente a tumores.
Según la presente invención, se usan vesículas
biológicas naturales con membranas que presentan fosfatidilserina
en su superficie de membrana externa en la fabricación de un
medicamento para aliviar los síntomas de (i) enfermedades
inflamatorias, así como de (ii) enfermedades mediadas por células T,
enfermedades de disfunción endotelial o enfermedades por expresión
de citocina inapropiada en los que están implicados citocinas
pro-inflamatorias o antiinflamatorias. Tales
vesículas, al administrarse a un paciente mamífero, mimetizarán el
proceso de apoptosis con la consiguiente regulación a la baja de
citocinas pro-inflamatorias y/o regulación al alza
de citocinas antiinflamatorias. Las células inmunes pueden envolver
las entidades en un procedimiento in vivo parecido a la
apoptósis, con la consiguiente regulación de bajada de citocinas
pro-inflamatorias y/o regulación al alza de
citocinas antiinflamatorias. Por consiguiente, estas vesículas
biológicas naturales pueden usarse con propósitos terapéuticos,
para tratamiento o profilaxis de un amplio intervalo de enfermedades
de mamíferos en las que estén implicadas citocinas
pro-inflamatorias o antiinflamatorias.
La figura adjunta es una representación gráfica
de los resultados del ejemplo experimental específico siguiente,
concretamente un gráfico de la hinchazón total de la oreja en un
modelo de ratón debido a la inflamación (hipersensibilidad por
contacto) en animales tratados según la invención y animales de
control.
Las vesículas naturales con membranas usadas en
la presente invención son vesículas que presentan fosfatidilserina
(FS) en sus superficies de membrana externa. Con la introducción
adecuada al organismo del mamífero, por ejemplo mediante inyección
intramuscular, las células presentadoras de antígeno tales como
macrófagos y células dendríticas parecen buscar las vesículas
inyectadas y los grupos de FS de las membranas de las mismas
interaccionan con los receptores de FS en las células presentadoras
de antígeno, dando como resultado un procedimiento similar a la
apoptosis de envolver las vesículas con la consiguiente regulación
de bajada de citocinas inflamatorias y/o regulación al alza de
citocinas antiinflamatorias.
Vesículas biológicas naturales preferidas
específicas que presentan FS en una superficie de membrana externa,
de interés particular en la presente invención, incluyen las
siguientes:
Exosomas, que son microvesículas obtenidas de
células cultivadas y que pueden también producirse in vivo,
por ejemplo, durante la maduración de reticulocitos (véase Trams y
col., Biochimica et Physica Acta, (1981)
645:63-70; y también Johnstone, Biochem. Cell.
Biol., (1982) 70:179-190);
Prostasomas, que son orgánulos extracelulares
vesiculares encontrados en plasma seminal (véase Rooney y col.,
J. Exp. Med., (Mayo 1993) 177:1409-1420);
Vesículas de membrana desprendida de forma
inducida o espontánea, es decir, vesículas de membrana desprendida
a partir de células como resultado de inducción usando detergentes
tales como lisofosfatidilcolina o espontáneamente (véase Feber y
col., Biochimica et Biophysica Acta, (1980)
595:244-256; también Emerson y col., The Journal
of Immunology, (agosto 1981)
127(2):482-486);
Procoagulante unido a vesículas de membrana
plasmática, es decir actividad similar a la tromboplastina asociada
a vesículas de membrana, que se encuentra por ejemplo en fluido de
lavado broncoalveolar y derivado de macrófagos alveolares (véase
Lyberg y col., Eur. Respir. J., (1990)
3:61-67);
Eritrocitos con pérdida de asimetría de
fosfolípidos, es decir eritrocitos con distribución transbicapa de
fosfolípidos aleatoria, simétrica; estos pueden producirse, por
ejemplo, mediante el aumento de los niveles de Ca^{++}
intracelular (véase Pradham y col., Molecular Membrane
Biology (1994) 11:181-188);
Plaquetas activadas, plaquetas con actividad
pro-coagulante, que se asocian con la reorientación
de FS desde la zona interna a al externa de la bicapa de membrana
de la plaqueta (véase Bevers y col., Biochimica et Biophysica
Acta (1983) 736:57-66); y
Micropartículas derivadas de plaquetas, que son
vesículas membranosas o micropartículas liberadas de membranas de
plaquetas tras la activación de las plaquetas (véase Gilbert y col.,
The Journal of Biological Chemistry, (16 de septiembre de
1991) 266(26):17.261-17.268).
Las más preferidas entre las vesículas citadas
para su uso en la presente invención son fantasmas eritrocitarios
vueltos del revés, que expresan FS en la superficie externa y
glóbulos rojos drepanocíticos, que expresan FS en la superficie
como parte de la patología (véase Schroit y col., Biol. Cell (1984)
51:227-238).
Se proporcionan y se administran a pacientes
vesículas biológicas naturales que presentan FS en una superficie
de membrana externa que tienen la propiedad de mimetizar células
apoptóticas y/o cuerpos apoptóticos ya que son fagocitadas por
leucocitos del sistema inmune del paciente con los efectos
beneficiosos acompañantes tales como inhibición de la liberación de
citocinas pro-inflamatorias y/o promoción de la
liberación de citocinas antiinflamatorias. Estas vesículas
naturales son cuerpos tridimensionales que tienen formas y
dimensiones que comprenden desde aquellas parecidas a células de
mamíferos a formas y dimensiones que se aproximan a las de cuerpos
apoptóticos producidos por apoptósis de células de mamíferos y
tienen grupos FS en las superficies de membrana externa de las
mismas.
Como se cita anteriormente, se sabe que la FS
expuesta en la membrana externa de una célula juega un papel clave
en la eliminación de linfocitos apoptóticos por macrófagos. En
macrófagos está presente un receptor para FS. Un "receptor de
fosfatidilserina" o "receptor FS" es un receptor en una
célula presentadora de antígeno (CPA), tal como un macrófago, cuya
actividad se bloquea mediante fosfatidilserina soluble, monomérica u
oligomérico. Se contempla que el receptor FS pueda estar presente
también en otras CPA, tales como células dendríticas y células
B.
En una forma de realización preferida en
particular, las vesículas biológicas naturales que presentan FS en
una superficie de membrana externa son fantasmas eritrocitarios. Los
eritrocitos (glóbulos rojos) en su estado natural tienen FS en las
superficies internas de la membrana celular. Si están vacías de
hemoglobina y otros contenidos celulares, se conocen como
"fantasmas eritrocitarios" y comprenden efectivamente una
vesícula vacía de una membrana eritrocitaria. Estos fantasmas
pueden darse la vuelta mediante medios físicos/químicos tales como
sometimiento a tensión oxidativa, sometimiento a energía sonora y
similares, mediante procedimientos conocidos en la técnica, de modo
que presenten FS en la superficie externa de la membrana mientras
que mantienen forma vesicular e integridad de membrana. En Steck,
T. L., 1974 "Preparation of impermeable inside-out
and right-side out vesicles from erythrocyte
membranes", en: Method in Membrane Biology, Kom, E. D.
Ed., Plenum Press, Nueva York 2, 245-281, se
describen procedimientos para preparar fantasmas eritrocitarios
vueltos del revés.
Hay dos tipos generales de fantasmas
eritrocitarios, concretamente fantasmas blancos, en los que la
hemoglobina se elimina de los glóbulos rojos sin ruptura
significativa de la membrana y fantasmas resellados, en los que la
membrana se abre, se extraen los contenidos de la célula y después
la membrana se vuelve a ensamblar y sellar. En el procedimiento de
la presente invención, puede usarse uno de los dos tipos, o una
mezcla de los dos. La preparación de fantasmas blancos se describe
en Schow, G., y Passow, H. Molecular and Cellular
Biochemistry, vol. 2, nº 2, 15 de diciembre de 1973, págs.
197-217. La preparación de fantasmas resellados se
describe en Bodemann, H. y Passow, H., J. Membrane Biol.,
8, 1-26 (1972) y Rohling, O. y Neidhart, B.,
Anal. Chem. 1999, 71, 1077-1082. El
origen de los fantasmas eritrocitarios para la presente invención
debería ser el mismo o la misma paciente, o un donante compatible.
Pueden usarse también glóbulos rojos compatibles de líneas celulares
cultivadas.
El uso de plaquetas activadas constituye también
una forma de realización preferida de la presente invención. Se
sabe que fosfolípidos tales como FS de la membrana plasmática de
plaquetas humanas no se distribuyen de manera homogénea entre las
dos mitades de la bicapa de membrana. En plaquetas no activadas, FS
esta presente casi exclusivamente en la zona interna de la bicapa.
La activación de las plaquetas, por ejemplo mediante acción
simultánea de trombina y colágeno, provoca que la FS se exponga en
la superficie externa de la membrana. Dichas plaquetas activadas
son útiles en los procedimientos de la presente invención.
Las vesículas biológicas naturales que presentan
FS en una superficie de membrana externa pueden administrarse al
paciente mediante cualquier medio adecuado que las ponga en contacto
operativo con componentes activos del sistema inmune del paciente.
Preferentemente, las vesículas están constituidas en una suspensión
líquida en un líquido biocompatible tal como solución salina
fisiológica y administradas al paciente vía
intra-arterial, intravenosa o más preferentemente
vía intramuscular o subcutánea.
Las dosis a administrar de vesículas biológicas
naturales que presentan FS en una superficie de membrana externa
variarán dependiendo de la naturaleza de la enfermedad del mamífero
que se pretenda tratar y de la identidad y características del
paciente. Es importante que la cantidad eficaz de vesículas no sea
perjudicial para el paciente. Las dosis y regímenes necesarios son
bien conocidos para el médico encargado apropiado. Si se usa la
administración vía intra-arterial, intravenosa,
subcutánea o intramuscular de una suspensión líquida de vesículas,
se prefiere administrar, para cada dosis, aproximadamente
0,1-50 ml de líquido, que contenga una cantidad de
vesículas de membrana que lleven FS naturales según la invención
generalmente equivalente a 1%-1000% del número de células que se
encuentran normalmente en un volumen equivalente de la misma sangre
o el número de cuerpos apoptóticos que puedan generarse de ellas.
Generalmente, el número de tales cuerpos por inyección está en el
intervalo de aproximadamente 500 a aproximadamente 20.000.000. El
número puede, sin embargo, ser cualquiera de 500 a aproximadamente
2 x 10^{9} y preferentemente de 10.000 a aproximadamente 2 x
10^{9}.
Aunque no se pretende que el ámbito de la
presente invención tenga que limitarse a algunas teorías en
particular de su forma de funcionamiento, la siguiente se ofrece
como una explicación provisional, para un mejor entendimiento de
los modos y medios por los que puede ponerse en práctica la
invención. Se postula que las células presentadoras de antígeno del
sistema inmune del paciente, en particular células presentadoras de
antígeno expertas (CPA), que incluyen macrófagos y células
dendríticas, absorben las vesículas biológicas naturales que
presentan FS en una superficie de membrana externa, de manera
similar al modo en el que las absorberían células apoptóticas y
cuerpos apoptóticos. Al haber absorbido las vesículas, las CPA
inducen una respuesta antiinflamatoria que promueve un cambio en la
población de células Th con un incremento en la proporción de
células Th2 y/u otras poblaciones de células
reguladoras/antiinflamatorias (por ejemplo células Tr1) y una
disminución en las células Th1. Las células Th2 y otras células
reguladoras segregan citocinas antiinflamatorias tales como
interleucina-10, importante para reducir la
inflamación.
La presente invención está indicada para su uso
en profilaxis y tratamiento de una amplia variedad de enfermedades
de mamíferos en las que está implicada la función de células T,
inflamación, disfunción endotelial y expresión de citocina
inapropiada. Puede seleccionarse para el tratamiento un paciente que
tenga, se sospeche que tenga, o sea propenso en particular a
contraer dicha enfermedad. "Tratamiento" significa una
reducción en los síntomas tal como, pero sin limitarse a, una
disminución en la gravedad o número de síntomas de la enfermedad en
particular o limitar además el progreso de los síntomas de la
enfermedad.
Respecto a las enfermedades por la función de
las células T (mediadas por células T), estas son enfermedades
autoinmunes que incluyen diabetes, esclerodermia, psoriasis y
artritis reumatoide. La invención está indicada para el uso con
reacciones alérgicas inflamatorias, enfermedades de reacción a
transplante de órganos o células e infecciones microbianas que
causen aumento de las reacciones inflamatorias. Está también
indicada para usar como preacondicionamiento frente a ingestión de
venenos, exposición a productos químicos tóxicos, daño por
radiación y exposición a sustancias irritantes transportadas por
aire o transportadas por agua, etc, que causan daño por
inflamación. Está indicada también para enfermedades inflamatorias,
alérgicas y mediadas por células T de órganos internos tales como
riñón, hígado, corazón, etc.
Respecto a enfermedades que suponen expresión de
citocina inapropiada para las que está indicada la presente
invención, estas incluyen enfermedades neurodegenerativas. Las
enfermedades neurodegenerativas, que incluyen síndrome de Down,
enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Parkinson, se asocian con
niveles aumentados de ciertas citocinas, que incluyen
interleucina-1\beta
(IL-1\beta)[véase Griffin WST, Stanley, L.
C., Ling, C., White, L., Macleod, V., Perrot, L. HJ., White, C. L.,
Araoz, C., 1989). La interleucina 1 de cerebro y la
inmunorreactividad S-100, están elevadas en síndrome
de Down y enfermedad de Alzheimer (datos de la Academia Nacional de
las Ciencias de EE. UU., 86:7611-7615; Mogi, M.,
Harada, M., Narabayashi, H., Inagaki, H., Minami, M. Nagatsu, T.
(1996)). Los niveles de interleucina (IL)-1 beta,
IL-1, IL-4, IL-6 y
factor de crecimiento transformador alfa, están elevados en líquido
cefalorraquídeo ventricular en parkinsonismo juvenil y enfermedad
de Parkinson (Neuroscience Letters 211:
13-16). Se ha mostrado también que
IL-1\beta inhibe la potenciación a largo
plazo en el hipocampo [Murray, C. A., Lynch, M. A. (1998). Evidence
that increased hippocampal expression of the cytokine
interleukin-1\beta is a common trigger for
age and stress-induced impairments in
long-term potentiation. Journal of Neuroscience
18: 2974-2981]. La potenciación en el
hipocampo a largo plazo es una forma de plasticidad sináptica y se
considera generalmente como un modelo apropiado para la memoria y
el aprendizaje [Bliss, T. V. P., Collinridge, G. L., (1993). A
synaptic modelo f memory: long-term potentiation in
the hippocampus, Nature 361: 31-39]. Además,
la expresión de citocina inapropiada en el cerebro se cree
actualmente que está implicada en el desarrollo y progresión de
enfermedades neurodegenerativas.
Además, la invención está indicada para el
tratamiento y profilaxis de una amplia variedad de enfermedades
neurodegenerativas y neurológicas de mamíferos, que incluyen
síndrome de Down, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson,
demencia senil, depresión, esclerosis múltiple, enfermedad de
Huntington, neuropatías periféricas, enfermedades de la médula
espinal, enfermedades de las uniones neuropáticas, enfermedad
desmielinizante inflamatoria crónica, neuropatías que incluyen
mononeuropatías, polineuropatías, neuropatía sensorial distal
simétrica, enfermedades de las uniones neuromusculares, miastenias
y esclerosis lateral amiotrófica.
En lo que respecta a enfermedades que suponen
disfunción endotelial, la presente invención está indicada para el
tratamiento y profilaxis de una amplia variedad de tales
enfermedades de mamíferos que incluyen, pero no están limitadas a,
enfermedades cardiovasculares, tales como aterosclerosis, enfermedad
vascular periférica, fallo cardiaco congestivo, derrame cerebral,
infarto de miocardio, angina de pecho, hipertensión, etc,
enfermedades vasoespásticas tales como enfermedad de Raynaud,
síndrome X cardiaco, migraña, etc y el perjuicio que resulta de la
isquemia (daño isquémico o daño por
isquemia-reperfusión). En resumen, puede ser
sustancialmente cualquier enfermedad que resulte de un
funcionamiento inapropiado del endotelio.
La invención se describe además con propósitos
ilustrativos en los siguientes ejemplos específicos.
Este ejemplo muestra el efecto de la inyección
de fantasmas eritrocitarios en la oreja hinchada en el modelo
murino con hipersensibilidad por contacto (CHS). Este es un modelo
preclínico bien conocido y bien aceptado de inflamación como
resultado tras la regulación a la baja de células
Th-1 o cambio de fenotipo Th-2.
Se prepararon los fantasmas a partir de sangre
con citrato sódico obtenida de ratones sinérgicos. Se diluyó la
sangre con un volumen igual de tampón fosfato isotónico salino
helado (PBS) (300 mOsm). Después de centrifugación a 2000 rpm
durante 5 minutos a temperatura ambiente, se eliminan el plasma y la
capa leuco-plaquetaria y se lava de nuevo 3 veces
con PBS isotónico frío. Un 50% de la suspensión celular (v/v) se
preparó en el tampón fosfato. Se llevó a cabo hemolisis añadiendo
1:15 tampón fosfato (20 mOsm). Esta solución se dejó en hielo
durante 10 minutos. Se pusieron en libertad los fantasmas incubando
las células a 37 grados C durante 40 minutos. Se centrifugaron
después las células durante 5 minutos a 2000 rpm a temperatura
ambiente y se volvieron a suspender en PBS isotónico.
Se consiguieron de Laboratorios Jackson ratones
hembra BALB/c, 6-8 semanas de edad, que pesaban
22-25 g. Se prepararon fantasmas eritrocitarios
según lo anterior.
Se asignaron algunos ratones al grupo A, control
y no recibieron inyecciones. Otros ratones se asignaron al grupo B
y recibieron inyecciones de suspensiones de fantasmas
eritrocitarios.
Se llevaron a cabo los experimentos en 7 días.
El día 1 tuvo lugar la sensibilización. Para los propósitos de
sensibilización, ratones del grupo B recibieron sus inyecciones de
fantasmas eritrocitarios durante el día 1 y fueron anestesiados
usando inyección intraperitoneal (IP) de 0,2 ml de 5 mg/ml de
pentobarbital sódico. Se pulverizó la piel del abdomen del ratón
con ETOH 70%. Se usó una cuchilla para eliminar aproximadamente
2,54 centímetros de diámetro de piel del abdomen. El área
descubierta se pintó con 25 \mul de
2,4-dinitrofluorobenceno (DNFB) al 0,5% en
acetona:aceite de oliva 4:1 usando una punta de pipeta. Los ratones
control del grupo A se sensibilizaron de forma similar, en el mismo
día.
En cada uno de los días 1, 2, 3, 4, 5, 6, y 7,
se inyectaron los ratones experimentales con fantasmas
eritrocitarios suspendidos en solución salina fisiológica, el
volumen de 50 \mul que contiene aproximadamente 600.000 cuerpos,
inyección vía intramuscular (IM). El día 6, tras la inyección de
cada día, se estimularon a los ratones con DNFB de la siguiente
manera: se pintó la superficie dorsal de la oreja derecha con 10
\mul de DNFB 0,2% con una punta de pipeta y se pintó la oreja
izquierda con 10 \mul del vehículo con una punta de pipeta.
El día 7, 24 horas después de la estimulación,
se midió el espesor de la oreja usando un micrómetro de resorte
Peacock, estando los animales anestesiados localmente con halotano.
Se usó el aumento en la inflamación de la oreja como una medida de
la respuesta CHS. El dato se expresa como la diferencia entre el
espesor de la oreja derecha tratada menos el espesor de la oreja
izquierda tratada con el vehículo, en micrómetros. Los resultados
se muestran en la figura adjunta, mostrando un gráfico de barras la
inflamación de la oreja total (media de los animales en cada
grupo). La barra A es el resultado del grupo de control, la barra B
de esos animales tratados con las composiciones de fantasmas. La
diferencia significativa entre los dos grupos experimentales se
determinó mediante la prueba t de Student de dos colas. Se consideró
significativo un valor de p<0,05. El grupo experimental B
muestra mejora estadísticamente significativa (18%) sobre el grupo
de control, que no recibió inyecciones.
Claims (12)
1. Uso en la fabricación de un medicamento
para aliviar los síntomas de (i) enfermedades inflamatorias, así
como de (ii) enfermedades mediadas por células T, enfermedades de
disfunción endotelial o enfermedades por expresión de citocina
inapropiada, en el que están implicadas citocinas
pro-inflamatorias o antiinflamatorias, de vesículas
biológicas naturales que presentan fosfatidilserina en su superficie
de membrana externa.
2. Uso según la reivindicación 1 en el que las
vesículas biológicas naturales se seleccionan entre exosomas,
prostasomas, vesículas con membrana desprendida de forma inducida o
espontánea, procoagulante unido a membrana plasmática de vesículas,
fantasmas eritrocitarios vueltos del revés, glóbulos rojos
drepanocíticos, eritrocitos con pérdida de asimetría de
fosfolípidos, plaquetas activadas, plaquetas con actividad
procoagulante y micropartículas derivadas de plaquetas.
3. Uso según la reivindicación 1 o la
reivindicación 2, en el que las vesículas son fantasmas
eritrocitarios vueltos del revés.
4. Uso según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que las vesículas se usan
en
cantidades de 500-10^{9} por unidad de dosis.
cantidades de 500-10^{9} por unidad de dosis.
5. Uso según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el tratamiento o profilaxis de una
enfermedad autoinmune en el paciente.
6. Uso según cualquiera de las
reivindicaciones 1-4, en el tratamiento o profilaxis
de una enfermedad neurodegenerativa en el paciente.
7. Uso según cualquiera de las
reivindicaciones 1-4, en el tratamiento o profilaxis
de una enfermedad por disfunción endotelial defectiva en el
paciente.
8. Uso según la reivindicación 3, en el que
los fantasmas eritrocitarios se usan en cantidades de
500-10^{9} por unidad de dosis.
9. Uso según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, para administración mediante inyección
intramuscular.
10. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1, 2, 4 a 7 ó 9, en el que las vesículas biológicas
naturales son plaquetas activadas.
11. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1, 2, 4 a 7 ó 9, en el que las vesículas biológicas
naturales son glóbulos rojos drepanocíticos.
12. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1, 2, 4 a 7 ó 9, en el que las vesículas biológicas
naturales son exosomas.
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