ES2279452T3

ES2279452T3 - 6-((sustituido)fenil)triazolopirimidinas como agentes antineoplasicos.

Info

Publication number: ES2279452T3
Application number: ES04788820T
Authority: ES
Inventors: Nan Zhang; Semiramis Ayral-Kaloustian; Thai Hiep Nguyen; Yanzhong Wu; Wei Tong
Original assignee: Wyeth Holdings LLC; Wyeth LLC
Current assignee: Wyeth Holdings LLC; Wyeth LLC
Priority date: 2003-09-24
Filing date: 2004-09-17
Publication date: 2007-08-16
Anticipated expiration: 2024-09-17
Also published as: PT1680425E; PL1680425T3; SA04250302A; DK1680425T3; US20050090508A1; EP1680425B1; HK1090374A1; IL174281A0; PA8613301A1; CN1867569A; RU2006107579A; SI1680425T1; DE602004004295D1; DE602004004295T8; CN100519559C; AR045810A1; CA2539252A1; PE20050433A1; US7507739B2; MXPA06003206A

Abstract

Compuesto de Fórmula (I): en la que: R1 se selecciona de entre y cicloalquilo C6-C8 opcionalmente sustituido con R8; R2 es un radical del grupo n es un número entero de 2, 3 ó 4; X es Cl o Br; Y es O, S, CH2 o NR4; Q se selecciona de entre -NR6R7 y -OH; L1 y L2 son, cada uno independientemente, H, F, Cl, Br o CF3; R3 es CF3 o C2F5; R4 y R5 son, cada uno independientemente, H o alquilo C1-C3; R6 y R7 son, cada uno independientemente, H o alquilo C1-C3; o R6 y R7 forman, cuando se toman opcionalmente junto con el átomo de nitrógeno al que cada uno está unido, un anillo heterocíclico saturado de 4 a 6 miembros con 1-2 átomos de nitrógeno y 0-1 átomos de oxígeno o 0-1 átomos de azufre, y opcionalmente sustituido con R8; R8 es alquilo C1-C3; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Description

6-[(sustituido)fenil]triazolopirimidinas como agentes antineoplásicos.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a ciertos compuestos de 6-[(sustituido)fenil]-triazolopirimidina o sales farmacéuticamente aceptables desde el punto de vista farmacéutico, y composiciones que contienen dichos compuestos o sales farmacéuticamente aceptables desde el punto de vista farmacéutico, en los que dichos compuestos son agentes antineoplásicos útiles para el tratamiento del cáncer en mamíferos, el tratamiento o la prevención de tumores cancerosos que expresan multirresistencia a fármacos (MDR) o que son resistentes debido a MDR, a su utilización para la preparación de un medicamento para el tratamiento o la inhibición del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades relacionadas en un mamífero que lo necesite mediante la estimulación de la polimerización de microtúbulos, y a su utilización para la preparación de un medicamento para el tratamiento o la inhibición del crecimiento de tumores cancerosos en un mamífero que presenta resistencia intrínseca o adquirida a agentes quimioterápicos utilizados en el tratamiento con quimioterapia, y en particular agentes antimitóticos, mediante la administración de una cantidad eficaz de un compuesto de la invención y sales del mismo aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

Antecedentes de la invención

La mayoría de los citostáticos utilizados en la actualidad inhiben la formación de precursores esenciales de la biosíntesis de ADN, o bloquean las ADN-polimerasas, o interfieren con la función de molde del ADN, debido a que el ADN fue la principal diana para el desarrollo de fármacos terapéuticos para quimioterapia. Por desgracia, la inhibición de la formación de precursores esenciales de la biosíntesis de ADN o el bloqueo de las ADN-polimerasas, o la interferencia con la función de molde del ADN también afecta a los tejidos normales.

Los fármacos que interfieren con los microtúbulos constituyen una de las principales categorías de agentes antineoplásicos (Rowinsky, E. K. y Tolcher, A. W. Antimicrotubule agents. En: V. T. Devita, Jr., S. Hellman y S. A. Rosenberg (eds.), Cancer Principles and Practice, Ed. 6, págs. 431-452, Philadelphia: Lippincott Williams and Wilkins, 2001). Actúan interfiriendo en la función de los microtúbulos celulares, en particular en el huso mitótico. La alteración de la función normal del huso da lugar a la muerte celular por apoptosis.

En la actualidad hay tres clases principales de agentes farmacológicos conocidos que interfieren con los microtúbulos. Cada uno tiene una región de unión distinta en la \beta-tubulina y presenta efectos distintos en la función de los microtúbulos. Estas clases son: 1) agentes que actúan en el sitio del taxano, que estimulan la formación de microtúbulos y estabilizan los microtúbulos; 2) agentes que actúan en el sitio de la vinca/péptidos, que desestabilizan los microtúbulos y, a menudo, provocan la formación de polímeros anómalos u agregados a altas concentraciones; y 3) agentes que actúan en el sitio de la colquicina, que también desestabilizan los microtúbulos y generalmente no provocan la formación de otros polímeros (Hamel, E. Antimitotic natural products and their interactions with tubulin. Med. Res. Rev., 16: 207-231, 1996). La mayoría de los ligandos de las tres clases de sitios son productos naturales o derivados semisintéticos de productos naturales.

El paclitaxel y su derivado semisintético docetaxel (Taxotere®) interfiere en la formación de microtúbulos y estabiliza los microtúbulos. El paclitaxel (Taxol®) es un diterpeno aislado de la corteza del tejo occidental (del Pacífico), Taxus brevifolia, y es un representante de una nueva clase de agentes terapéuticos que tienen un sistema de anillos del taxano. También se encontró en otros miembros de la familia Taxaceae, incluidos el tejo del Canadá (Taxus canadensis) encontrado en Gaspesia, Canadá oriental, y Taxus baccata, encontrado en Europa, cuyas hojas contienen paclitaxel y análogos, con lo que proporcionan una fuente renovable de paclitaxel y sus derivados. El extracto crudo se analizó por primera vez durante el decenio de 1960, y su principio activo se aisló en 1971, y se identificó su estructura química (M. C. Wani et al, J. Am. Chem. Soc., 93, 2325 (1971)). Además, los análisis adicionales demostraron una amplia gama de actividad en células de melanoma, leucemia, varios carcinomas, sarcomas y linfomas no hodgkinianos, así como varios tumores sólidos en animales. El paclitaxel y sus análogos han sido producidos mediante síntesis parcial a partir de 10-desacetilbacatina III, un precursor obtenido de las hojas y ramillas del tejo, y mediante síntesis total (Holton, et al., J. Am. Chem. Soc. 116: 1597-1601 (1994) y Nicolaou, et al., Nature 367: 630-634 (1994)). El paclitaxel ha demostrado tener actividad antineoplásica. Más recientemente, se ha comprobado que la actividad antitumoral del paclitaxel se debe a la estimulación de la polimerización de microtúbulos (Kumar, N., J. Biol. Chem. 256: 10435-10441 (1981); Rowinsky, et al., J. Natl. Cancer Inst., 82: 1247-1259 (1990); y Schiff, et al., Nature, 277: 665-667 (1979)). El paclitaxel ha demostrado eficacia en varios ensayos clínicos con tumores humanos (McGuire, et al., Ann. Int. Med., 111: 273-279 (1989); Holmes, et al., J. Natl. Cancer Inst., 83: 1797-1805 (1991); Kohn et al., J. Natl. Cancer Inst., 86: 18-24 (1994); y A. Bicker et al., Anti-Cancer Drugs, 4, 141-148 (1993).

Dos agentes que actúan en el sitio del taxano (paclitaxel y docetaxel) y tres agentes que actúan en el sitio de la vinca/péptidos (vinblastina, vincristina y vinorelbina) se utilizan en el ámbito clínico para el tratamiento de varios cánceres humanos. Los taxanos han demostrado ser más útiles contra tumores sólidos (p. ej., de pulmón, de mama, de ovario) que los alcaloides de la vinca, lo que indica que los agentes que estimulan la formación de microtúbulos pueden ser mejores en el ámbito clínico que los que desestabilizan los microtúbulos. Los agentes que actúan en el sitio de la colquicina no se utilizan en terapéutica.

A pesar de la amplia utilización en el ámbito clínico del paclitaxel y el docetaxel, estos fármacos presentan varias limitaciones, por lo que es necesario encontrar agentes mejorados. En primer lugar, muchos tumores presentan resistencia intrínseca (p. ej., tumores de colon) o se convierten en resistentes después de múltiples ciclos de tratamiento, debido, por lo menos en parte, a la expresión de transportadores de fármacos situados en las membranas de las células cancerosas, que bombean los fármacos al exterior de las células, con lo que disminuye su eficacia (Gottesman, M. M. Mechanisms of cancer drug resistance. Annu. Rev. Med., 53: 615-627, 2002). El más conocido de estos transportadores es la glucoproteína P. Por consiguiente, existe una necesidad de encontrar nuevos agentes con efectos similares a los del taxano en la polimerización de microtúbulos, que no sean sustratos de la glucoproteína P o de otras bombas similares, y que sean capaces, por tanto, de superar esta causa de la resistencia al taxano en los pacientes.

En segundo lugar, el paclitaxel y el docetaxel tienen escasa solubilidad en agua, y el paclitaxel debe formularse en Cremophor EL, un vehículo que provoca reacciones graves de hipersensibilidad (Li, C. L., Newman, R. A., y Wallace, S. Reformulating paclitaxel. Science & Medicine, Ene/Feb: 38-47, 1999). Los pacientes reciben de forma típica medicación previa con corticosteroides y antihistamínicos antes de la administración de paclitaxel, para reducir al mínimo estos efectos tóxicos. Por consiguiente, hay una necesidad de encontrar nuevos agentes con efectos similares a los del taxano en la polimerización de microtúbulos, que tengan elevada solubilidad en agua y que puedan administrarse en solución salina fisiológica u otro vehículo adecuado no tóxico.

En tercer lugar, el paclitaxel es un producto natural que tiene una estructura muy compleja, y el docetaxel es un derivado semisintético estrechamente relacionado. Por consiguiente, hay una necesidad de encontrar compuestos que se obtengan fácilmente por síntesis, que sean estructuralmente diferentes de los taxanos, y que tengan efectos similares a los del taxano en la polimerización de microtúbulos.

Por consiguiente, sigue habiendo una necesidad en la técnica de encontrar agentes citotóxicos para su utilización en tratamientos antineoplásicos. En particular, hay una necesidad de encontrar agentes citotóxicos capaces de inhibir o tratar el crecimiento de tumores, que tengan un efecto similar al paclitaxel e interfieran en el proceso de formación de microtúbulos. Además, hay una necesidad en la técnica de encontrar agentes que aceleren la polimerización de tubulina y estabilicen los microtúbulos ensamblados.

Por consiguiente, sería ventajoso proporcionar nuevos compuestos que ofrezcan un método para el tratamiento o la inhibición de la proliferación celular, el crecimiento neoplásico y el crecimiento tumores malignos en mamíferos mediante la administración de compuestos que tienen actividad antineoplásica similar a la del paclitaxel.

Además, sería ventajoso proporcionar nuevos compuestos que ofrezcan un método para el tratamiento o la inhibición del crecimiento de tumores cancerosos que expresan multirresistencia a fármacos (MDR) o que son resistentes debido a MDR.

Sería asimismo ventajoso proporcionar nuevos compuestos que ofrezcan un método para el tratamiento o la inhibición del crecimiento de tumores cancerosos en un mamífero que presentan resistencia intrínseca o adquirida a agentes quimioterápicos, y en particular a agentes antimitóticos.

En la técnica se ha descrito la preparación y la utilización de triazolopirimidinas sustituidas para su empleo como fungicidas en agricultura en las patentes U.S. nº 5.593.996; nº 5.756.509; nº 5.948.783; nº 5.981.534; nº 5.612.345; nº 5.994.360; nº 6.020.338; nº 5.985.883; nº 5.854.252; nº 5.808.066; nº 5.817.663; nº 5.955.252; nº 5.965.561; nº 5.986.135; nº 5.750.766; nº 6.117.865; nº 6.117.876; nº 6.124.301; nº 6.204.269; nº 6.255.309; nº 6.268.371; nº 6.277.856; nº 6.284.762; nº 6.297.251; nº 6.387.848; la publicación de solicitud de patente U.S. US2002/0045631A1; US2002/0061882A1; US20030055069A1, y las publicaciones internacionales números: WO98/46607; WO98/46608; WO99/48893; WO99/41255; WO00/18227; WO01/35738A2; WO02/46195A1; WO02/067679A1; WO02/083676A1; EPO 834513A2; EPO 782997A2; EP0550113B1; FR2784381A1; EPO989130A1; WO98/41496; WO94/20501; EPO945453A1; EPO562615A1; EPO 562615B1; EPO 550113A2; EP 0943241B1; EP 0 988790 B1, y que tienen la siguiente fórmula general:

\vskip1.000000\baselineskip

1

\vskip1.000000\baselineskip

En la publicación internacional WO 02/02563 se describe la utilización de triazolopirimidinas como agentes antineoplásicos.

Los compuestos de la presente invención constituyen una nueva clase de agentes similares al taxano que satisfacen las necesidades descritas anteriormente en la presente memoria, y que difieren de forma significativa de las clases conocidas previamente de compuestos que interfieren con los microtúbulos. Los compuestos de la presente invención se unen al sitio de la vinca de la \beta-tubulina; sin embargo, tienen muchas propiedades que son similares a las de los taxanos y distintas a las de los agentes que se unen al sitio de la vinca. En particular, los compuestos de la presente invención aumentan la polimerización de la tubulina rica en la proteína asociada a los microtúbulos (MAP) en presencia de GTP a bajas relaciones molares de compuesto:tubulina, de forma similar a la del paclitaxel y el docetaxel. Los compuestos de la presente invención también provocan la polimerización de la tubulina de elevada pureza en ausencia de GTP en condiciones experimentales adecuadas, una actividad que es la característica distintiva de los taxanos. Los compuestos de la presente invención muestran una potente citotoxicidad en muchas líneas celulares de cánceres humanos en cultivo, incluidas líneas que sobreexpresan los transportadores de membrana MDR (la glucoproteína P), MRP y MXR, lo que los convierte en activos frente a líneas celulares que son resistentes al paclitaxel y a la vincristina. En particular, ejemplos representativos de la presente invención presentan una elevada solubilidad en agua y pueden formularse en solución salina. Ejemplos representativos de la presente invención son activos como agentes antitumorales en ratones atímicos que portan xenoinjertos de tumor humano de carcinoma de pulmón y de colon, melanoma y glioblastoma, cuando se administran por vía intravenosa o por vía oral.

Sumario de la invención

Según la presente invención, se proporcionan compuestos representados por la Fórmula (I):

2

en la que:

R^{1} se selecciona a partir de

3

y cicloalquilo C_{6}-C_{8} opcionalmente sustituido con R^{8};

R^{2} es un radical del grupo

4

n es un número entero de 2, 3 ó 4;

X es Cl o Br;

Y es O, S, CH_{2} o NR^{4};

Q se selecciona a partir de -NR^{6}R^{7} y -OH;

L^{1} y L^{2} son, cada uno independientemente, H, F, Cl, Br o CF_{3};

R^{3} es CF_{3} o C_{2}F_{5};

R^{4} y R^{5} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3};

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{6} y R^{7} forman, cuando se toman opcionalmente junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, un anillo heterocíclico saturado de 4 a 6 miembros que tiene 1-2 átomos de nitrógeno y 0-1 átomos de oxígeno o 0-1 átomos de azufre, y opcionalmente sustituido con R^{8};

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

o sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

Definiciones

El término alquilo significa un radical alquilo de cadena lineal o ramificada de 1 a 3 átomos de carbono.

El término t-BOC, tal como se utiliza en la presente memoria, significa ter-butoxi-carbonilo.

El término aminoalcoxi significa un grupo de fórmula

5

El término aminoalquilo significa un grupo de fórmula

6

El término aminoalquiltio significa un grupo de fórmula

7

El término aminoalquilamino significa un grupo de fórmula

8

El término hidroxialcoxi significa un grupo de fórmula

9

El término hidróxido de metal alcalino incluye hidróxido de litio, potasio o sodio.

El término carbonato de metal alcalino incluye carbonato de litio, potasio o sodio.

El término hidruro de metal alcalino incluye hidruro de litio, potasio o sodio.

El término base fuerte significa un hidróxido de metal alcalino, carbonato de metal alcalino e hidruro de metal alcalino (p. ej., hidruro de sodio).

Fenilo, tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a un anillo aromático de 6 carbonos.

Cicloalquilo, tal como se utiliza en la presente memoria, significa un anillo monocíclico carbocíclico saturado que tiene de 6 a 8 átomos de carbono, opcionalmente sustituido con alquilo C_{1}-C_{3}. Los ejemplos representativos no limitativos incluyen: ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo.

Tal como se utiliza en la presente memoria, un anillo heterocíclico saturado es un anillo de 4 a 6 átomos, que tiene 1-2 átomos de nitrógeno, 0-1 átomos de oxígeno o 0-1 átomos de azufre, opcionalmente sustituido con alquilo C_{1}-C_{3}. Los ejemplos representativos no limitantes incluyen: morfolina, piperidina, pirrolidina, piperazina, azetidina y N-metil-piperazina.

La presente invención proporciona un método para el tratamiento o la inhibición del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades relacionadas en un mamífero que lo necesite, mediante la administración de una cantidad eficaz de los compuestos de Fórmula (I) y sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

La presente invención también proporciona un método para el tratamiento o la inhibición del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades relacionadas en mamíferos que lo necesiten que implica interaccionar con la tubulina y los microtúbulos estimulando la polimerización de microtúbulos, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz de los compuestos de Fórmula (I) y sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

También se proporciona un método para el tratamiento o la prevención de tumores que expresan multirresistencia a fármacos (MDR) o que son resistentes debido a MDR en un mamífero que lo necesite, en el que dicho método comprende administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz de dichos compuestos o sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

La presente invención también proporciona un método para estimular la polimerización de tubulina en un sistema que contiene tubulina, poniendo en contacto dicho sistema que contiene tubulina con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I) o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

Además, la presente invención proporciona un método para estabilizar microtúbulos en un sistema que contiene tubulina, que comprende poner en contacto dicho sistema que contiene tubulina con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

También se proporciona un método para el tratamiento, la inhibición del crecimiento, o la erradicación de un tumor en un mamífero que lo necesite, en el que dicho tumor es resistente a por lo menos un agente quimioterápico, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz de los compuestos de Fórmula (I) y sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

En otro aspecto adicional, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula (I) en combinación o en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable. En particular, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I) y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Los compuestos de la presente invención pueden contener un átomo de carbono asimétrico, y algunos de los compuestos de la presente invención pueden contener uno o más centros asimétricos y pueden dar lugar, por tanto, a estereoisómeros, tales como enantiómeros y diastereómeros. Los estereoisómeros de la presente invención se nombran de acuerdo con el sistema de Cahn-Ingold-Prelog. Aunque se muestra sin atender a la estereoquímica en la Fórmula (I), la presente invención incluye todos los estereoisómeros individuales posibles, así como las mezclas racémicas y otras mezclas de los estereoisómeros R y S (mezclas escalémicas que son mezclas de cantidades distintas de enantiómeros) y las sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico. Se incluyen en el alcance de la presente invención los isómeros (R) y (S) de los compuestos de Fórmula general (I) que tienen un centro quiral, y los racematos de los mismos. La presente invención comprende todos los estereoisómeros de los compuestos, bien exentos de otros estereoisómeros o bien mezclados con otros estereoisómeros en cualquier proporción, y, por tanto, incluye, por ejemplo, una mezcla racémica de enantiómeros, así como una mezcla diastereomérica de isómeros. La configuración absoluta de cualquier compuesto puede determinarse por cristalografía convencional de
rayos X.

Pueden obtenerse isómeros ópticos en forma pura mediante técnicas estándar de separación o síntesis específica de enantiómeros.

También están comprendidos en el alcance de la invención los polimorfos, hidratos y solvatos de los compuestos de la presente invención

\newpage

Una forma de realización preferida de la invención es el compuesto de Fórmula (Ia) que se muestra a continuación:

10

o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

Una forma de realización preferida de la invención es el compuesto de Fórmula (Ib) que se muestra a continuación:

11

o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

También son preferidos los compuestos de Fórmula (I) en los que R^{2} es

12

o sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

También son preferidos los compuestos de Fórmula (I) en los que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8} opcionalmente sustituido con R^{8}, o sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

Entre el grupo de compuestos más preferidos de la presente invención según la Fórmula (Ia), incluidas las sales farmacéuticamente aceptables desde el punto de vista farmacéutico, se encuentran los seleccionados de entre los subgrupos a) y b) presentados a continuación:

a)

R^{2} es

13

n = 3;

X es Cl o Br;

Y es O;

R^{3} es CF_{3};

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{5} es H o metilo;

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{6} y R^{7} cuando se toman opcionalmente, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo heterocíclico saturado de 4 a 6 miembros con 1-2 átomos de nitrógeno y 0-1 átomos de oxígeno o 0-1 átomos de azufre, y opcionalmente sustituido con R^{8};

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1} es F;

L^{2} es H o F;

o sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico; y

\vskip1.000000\baselineskip

b)

R^{2} es

14

n es 3;

X es Cl;

Y es O;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{6} es metilo;

R^{7} es H o metilo;

L^{1} es F;

L^{2} es F;

o sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

\vskip1.000000\baselineskip

Entre el grupo de compuestos más preferidos de la presente invención según la Fórmula (1), incluidas las sales farmacéuticamente aceptables desde el punto de vista farmacéutico, se encuentra el subgrupo presentado a continuación:

R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8};

R^{2} es

15

n es 3;

X es Cl;

Y es O;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{6} es metilo;

R^{7} es H o metilo;

L^{1} es F;

L^{2} es F;

o sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

\vskip1.000000\baselineskip

Entre los más preferidos del grupo de compuestos de la presente invención según la fórmula (Ia), incluidas las sales farmacéuticamente aceptables desde el punto de vista farmacéutico, se encuentran los del grupo presentado a continuación:

R^{2} es

16

X es Cl;

n es 3;

Y es O;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{3} es CF_{3};

R^{5} es H o metilo;

R^{6} es metilo;

R^{7} es H o metilo;

L^{1} es F;

L^{2} es F;

o sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

\vskip1.000000\baselineskip

Entre los más preferidos del grupo de compuestos de la presente invención según la fórmula (Ib), incluidas las sales farmacéuticamente aceptables desde el punto de vista farmacéutico, se encuentran los del grupo presentado a continuación:

R^{2} es

17

X es Cl;

n es 3;

Y es O;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{3} es CF_{3};

R^{5} es H o metilo,

R^{6} es metilo;

R^{7} es H o metilo;

L^{1} es F;

L^{2} es F;

o sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

\vskip1.000000\baselineskip

Los compuestos específicamente preferidos de la presente invención según la Fórmula (I) son los siguientes compuestos, o sales farmacéuticamente aceptables desde el punto de vista farmacéutico:

5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-(2,2,2-trifluoroetil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-(2,2,2-trifluoroetil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

6-[4-(3-aminopropoxi)-2,6-difluorofenil]-5-cloro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[3-(etilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-(4-{3-[etil(metil)amino]propoxi}-2,6-difluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-pirrolidin-1-ilpropoxi)fenil]-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-piperidin-1-ilpropoxi)fenil]-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-morfolin-4-ilpropoxi)fenil]-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

6-[4-(3-azetidin-1-ilpropoxi)-2,6-difluorofenil]-5-cloro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2-fluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[2-(metilamino)etoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[2-(dimetilamino)etoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(2-morfolin-4-iletoxi)fenil]-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-(4-{[3-(dimetilamino)propil]tio}-2,6-difluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

2-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]etanol,

3-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propan-1-ol,

4-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]butan-1-ol,

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{1},N^{3},N^{3}-trimetilpropano-1,3-diamina,

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{3},N^{3}-dimetilpropano-1,3-diamina,

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{2},N^{2}-dimetiletano-1,2-diamina,

5-bromo-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{3-[2-(dimetilamino)etoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{3-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{3-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

3-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propan-1-ol;

3-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]-N,N-dimetilpropan-1-amina;

3-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]-N-metilpropan-1-amina

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

\vskip1.000000\baselineskip

Los compuestos específicamente preferidos de la presente invención según la Fórmula (Ib) son los siguientes compuestos o sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico, seleccionados de entre el grupo:

5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

6-[4-(3-aminopropoxi)-2,6-difluorofenil]-5-cloro-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

\newpage

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)propoxi]fenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[3-(etilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-(4-{3-[etil(metil)amino]propoxi}-2,6-difluorofenil)-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-pirrolidin-1-ilpropoxi)fenil]-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-piperidin-1-ilpropoxi)fenil]-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-morfolin-4-ilpropoxi)fenil]-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

6-[4-(3-azetidin-1-ilpropoxi)-2,6-difluorofenil]-5-cloro-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2-fluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[2-(metilamino)etoxi]fenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[2-(dimetilamino)etoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(2-morfolin-4-iletoxi)fenil]-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-(4-{[3-(dimetilamino)propil]tio}-2,6-difluorofenil)-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

2-[4-(5-cloro-7-{[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]etanol,

3-[4-(5-cloro-7-{[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propan-1-ol,

4-[4-(5-cloro-7-{[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]butan-1-ol,

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{1},N^{3},N^{3}-trimetilpropano-1,3-diamina,

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{3},N^{3}-dimetilpropano-1,3-diamina,

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{2},N^{2}-dimetiletano-1,2-diamina,

5-bromo-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{3-[2-(dimetilamino)etoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{3-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina y

5-cloro-6-{3-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina.

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina.

\vskip1.000000\baselineskip

Los compuestos específicamente preferidos de la presente invención según la Fórmula (Ia) son los siguientes compuestos o sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico:

\newpage

5-cloro-6-4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{3-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina y

5-cloro-6-{3-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina.

\vskip1.000000\baselineskip

Los compuestos más particularmente preferidos de la presente invención según la Fórmula (Ia) son los siguientes compuestos o sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico:

5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina y

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina.

\vskip1.000000\baselineskip

Un compuesto específicamente preferido de la presente invención según la Fórmula (Ib) es el siguiente compuesto o sales farmacéuticamente aceptables del mismo:

\vskip1.000000\baselineskip

Los compuestos más específicamente preferidos de la invención comprenden:

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina, clorhidrato,

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina, sal de succinato,

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina, sal de fumarato,

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina, sal de succinato dihidrato y

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina, sal de fumarato dihidrato

\vskip1.000000\baselineskip

Otros compuestos más específicamente preferidos de la invención son:

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina, sal de succinato y

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina sal de succinato dihidrato.

\vskip1.000000\baselineskip

Otros compuestos preferidos de la presente invención según la Fórmula (I) son los siguientes compuestos, o sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico:

5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

6-[4-(3-aminopropoxi)-2,6-difluorofenil]-5-cloro-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)propoxi]fenil}-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[3-(etilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-(4-{3-[etil(metil)amino]propoxi}-2,6-difluorofenil)-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-pirrolidin-1-ilpropoxi)fenil]-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-piperidin-1-ilpropoxi)fenil]-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-morfolin-4-ilpropoxi)fenil]-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

6-[4-(3-azetidin-1-ilpropoxi)-2,6-difluorofenil]-5-cloro-N-[1,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2-fluorofenil}-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[2-(metilamino)etoxi]fenil}-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[2-(dimetilamino)etoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(2-morfolin-4-iletoxi)fenil]-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-(4-{[3-(dimetilamino)propil]tio}-2,6-difluorofenil)-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

2-[4-(5-cloro-7-{[2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]etanol,

3-[4-(5-cloro-7-{[2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propan-1-ol,

4-[4-(5-cloro-7-{[2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]butan-1-ol,

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{1},N^{3},N^{3}-trimetilpropano-1,3-diamina,

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{3},N^{3}-dimetilpropano-1,3-diamina,

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{2},N^{2}-dimetiletano-1,2-diamina,

5-bromo-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil}-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{3-[2-(dimetilamino)etoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina,

5-cloro-6-{3-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina, y

5-cloro-6-{3-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina.

Descripción detallada de la invención

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse a partir de: (a) materiales de partida comercializados, (b) materiales de partida conocidos que pueden prepararse como se describe en los procedimientos de la literatura, o (c) nuevos intermediarios descritos en los esquemas y procedimientos experimentales de la presente memoria.

Las reacciones se llevan a cabo en un disolvente apropiado para los reactivos y materiales empleados, que es adecuado para la transformación que se lleva a cabo. Los expertos en la materia de síntesis orgánica apreciarán que los varios grupos funcionales presentes en la molécula deben ser coherentes con las transformaciones químicas propuestas. Para ello puede ser necesario sopesar el orden de las etapas de síntesis. Debe prestarse la atención adecuada a la protección de los grupos reactivos funcionales para evitar reacciones secundarias no deseadas. Los sustituyentes de los materiales de partida pueden ser incompatibles con algunas de las condiciones de reacción. Los expertos en la materia apreciarán dichas limitaciones relativas a los sustituyentes que son compatibles con las condiciones de reacción. Las reacciones se llevan a cabo en atmósfera inerte, cuando convenga.

Los compuestos de la presente invención comprendidos por la Fórmula (I) en la que Y es O, S, o NR^{4} y R^{1} es

18

pueden prepararse empleando un procedimiento presentado en el Esquema I, que comprende tratar un compuesto de Fórmula (II) (documentos US 5.948.783, US 5.986.135, US 6.117.876 y US 6.297.251) en el que R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{5}, L^{1}, L^{2}, y X son como se ha definido anteriormente en la presente memoria, y L^{3} representa un grupo saliente, que es un grupo eliminable, en particular un átomo de flúor, con un compuesto de fórmula HY-(CH_{2})_{n}Q, en el que Q e Y son como se ha definido anteriormente en la presente memoria, en presencia de una base fuerte, incluidos hidróxido de metal alcalino, carbonato de metal alcalino e hidruro de metal alcalino, p. ej., hidruro de sodio, en presencia o ausencia de un disolvente. Los disolventes adecuados incluyen disolventes apróticos, tales como dimetilsulfóxido, dimetilformamida, y similares. La reacción se lleva a cabo de forma adecuada a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 0°C hasta aproximadamente 100°C.

Esquema I

19

Los compuestos de Fórmula (I) en los que R^{1} es

20

Y es CH_{2} pueden prepararse empleando un procedimiento descrito a continuación en el Esquema II, en el que R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{5}, R^{6}, R^{7}, L^{1}, L^{2}, X y n son como se ha definido anteriormente.

\vskip1.000000\baselineskip

Esquema II

21

Como se describe en el Esquema II, el tratamiento del diéster (III) con 2-amino-1,3,4-triazol (IV) en presencia de una base de amina terciaria tal como tributilamina, a una temperatura de hasta 190°C proporciona el compuesto (V). La halogenación del compuesto (V) con agentes halogenantes POX_{3}, PX_{3}, o PX_{5}, tales como oxicloruro de fósforo u oxibromuro de fósforo, da lugar al compuesto 5,7-dihalo (VI), en el que X se ha definido anteriormente en la presente memoria. El desplazamiento del grupo 5-bromo o 5-cloro del compuesto 5,7-dihalo (VI) con una amina (VII) en un disolvente aprótico adecuado, tal como dimetilsulfóxido o dimetilformamida, y similares, en presencia de una base, p. ej., N,N-diisopropiletilamina, proporciona los compuestos de Fórmula (I).

El diéster (III) puede prepararse mediante un procedimiento catalizado por paladio, en el que el trifluorometanosulfonato (XI) se acopla con el ácido aminoalquil-borónico (XII). El trifluorosulfonato (XI) puede prepararse acoplando el bromuro (VIII) con malonato de dietilo (U.S. 5.981.534), para proporcionar el diéster (IX), seguido por la desmetilación en presencia de tribromuro de boro, para dar lugar al fenol (X). La reacción adicional del fenol (X) con anhídrido trifluorometanosulfónico da lugar al trifluorometanosulfonato (XI), como se muestra en el Esquema III.

\newpage

Esquema III

22

Los compuestos de Fórmula (I) en los que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}, Y es O, S, o NR^{4}, y Q es OH pueden prepararse mediante un procedimiento descrito a continuación en el Esquema IV y el Esquema V, en los que L^{1}, L^{2}, L^{3}, X y n son como se ha definido anteriormente. El éster (XIII) se hace reaccionar con el cloruro de ácido (XIV), preparado a partir del correspondiente ácido carboxílico, en el que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}, en presencia de diisopropilamida de litio (LDA), para dar lugar al cetoéster (XV). La reacción adicional del cetoéster (XV) con 2-amino-1,3,4-triazol (IV) en presencia de una base de amina terciaria tal como tributilamina a una temperatura de hasta 190°C da lugar al pirimidin-5-ol (XVI).

Esquema IV

23

Como se muestra en el Esquema V, el pirimidin-5-ol (XVI) se hace reaccionar con el compuesto (XVII) en presencia de una base fuerte que incluye un hidróxido de metal alcalino, carbonato de metal alcalino e hidruro de metal alcalino, p. ej., hidruro de sodio en un disolvente aprótico, que incluye dimetilsulfóxido, dimetilformamida, y similares, para dar lugar al éter (XVIII). La reacción del éter (XVIII) con los agentes halogenantes POX_{3}, PX_{3} o PX_{5}, tales como oxicloruro de fósforo u oxibromuro de fósforo, en presencia de N,N-dietilanilina da lugar al compuesto (XIX), en el que X se ha definido anteriormente en la presente memoria, que se hace reaccionar después con 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona (DDQ), para dar lugar a alcohol (XX) en el que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}.

Esquema V

24

\newpage

En lo que se refiere al Esquema VI, el pirimidin-5-ol (XVI) en el que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}, se hace reaccionar con el compuesto (XXI), en el que Y es O, S o -NR^{4}, y R^{6} y R^{7} son distintos de H, en presencia de una base fuerte que incluye un hidróxido de metal alcalino, carbonato de metal alcalino e hidruro de metal alcalino, p. ej., hidruro de sodio, en presencia de un disolvente aprótico que incluye dimetilformamida, dimetilsulfóxido, y similares, para dar lugar a la amina (XXII). La reacción de la amina (XXII) con los agentes halogenantes POX_{3}, PX_{3} o PX_{5}, tales como oxicloruro de fósforo u oxibromuro de fósforo, en presencia de N,N-dietilanilina da lugar al compuesto (XXIII), en el que X se ha definido anteriormente en la presente memoria, R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8}, y R^{6} y R^{6} y R^{7} son distintos de H.

Esquema VI

25

Como se muestra en el Esquema VII, el pirimidin-5-ol (XVI) en el que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8} se hace reaccionar con el compuesto de amino (XXIV), en el que Y es O, S o -NR^{4}, y R^{7} es H, en presencia de una base fuerte que incluye un hidróxido de metal alcalino, carbonato de metal alcalino e hidruro de metal alcalino, p. ej., hidruro de sodio en presencia de un disolvente aprótico que incluye: dimetilformamida, dimetilsulfóxido, y similares, para dar lugar a la amina (XXV). La reacción de la amina (XXV) con el dicarbonato de di-ter-butilo da lugar a la amina (XXVI) bloqueada con ter-butoxi-carbonilo (t-BOC). La reacción de la amina (XXVI) bloqueada con (t-BOC) con agentes halogenantes POX_{3}, PX_{3} o PX_{5}, tales como oxicloruro de fósforo u oxibromuro de fósforo en presencia de N,N-dietilanilina da lugar al compuesto (XXVII), en el que X se ha definido anteriormente en la presente memoria. A continuación se desbloquea el compuesto (XXVII) con ácido trifluoroacético (TFA), para dar lugar a la amina (XXVIII).

Esquema VII

26

Se entiende que la presente invención comprende todas las formas cristalinas e hidratadas de los compuestos de Fórmula (I) y sus sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico. Las sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico de los compuestos de la presente invención son las derivadas a partir de ácidos orgánicos e inorgánicos que forman sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico, tales como, acético, tartárico, fumárico, succínico, maleico, malónico, clorhídrico, bromhídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, metanosulfónico, bencenosulfónico, L-aspártico, R o S-mandélico, palmítico, y ácidos conocidos similares aceptables. Otra sal es la sal del ácido trifluoroacético (TFA). Son particularmente preferidas las sales de clorhidrato, fumarato y succinato.

Como ejemplo representativo de la formación de una sal farmacéuticamente aceptable, la sal de clorhidrato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina se neutraliza con hidróxido acuoso de metal alcalino o carbonato acuoso de metal alcalino, y se hace reaccionar después con una sal adecuada, farmacéuticamente aceptable, para formar el ácido descrito anteriormente en la presente memoria en un disolvente adecuado. Los disolventes adecuados que pueden utilizarse incluyen: agua, metanol, etanol, isopropanol, o una combinación de los mismos, y similares. Un disolvente preferido es agua.

Preferentemente, las sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico pueden formarse por calentamiento de los compuestos de Fórmula (I) en un disolvente adecuado, a aproximadamente 30-100°C, preferentemente a aproximadamente 65-75°C, hasta que se forme una solución transparente. Tras enfriar, el compuesto puede recogerse y secarse.

Utilizando las condiciones descritas anteriormente en la presente memoria se producen la sal de succinato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina y la sal de fumarato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina. En particular, pueden formarse dihidratos poniendo en contacto los compuestos con una atmósfera de agua a aproximadamente 80-100% de humedad relativa durante aproximadamente 24 horas a temperatura ambiente.

Por consiguiente, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención en combinación o asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable. En particular, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Sobre la base de los resultados de los procedimientos estándar de análisis farmacológico descritos en la presente memoria, los compuestos de la presente invención son útiles como agentes para el tratamiento, la inhibición o el control del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades relacionadas en un mamífero que lo necesite. Los compuestos de la invención son útiles como agentes para el tratamiento, la inhibición o el control del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades relacionadas en un mamífero que lo necesite mediante la interacción con la tubulina y los microtúbulos, y la estimulación de la polimerización de microtúbulos. Los compuestos de la invención son, por tanto, útiles para el tratamiento o la prevención de tumores cancerosos que expresan multirresistencia a fármacos (MDR) o que son resistentes debido a MDR.

En particular, cuando se pone en contacto un sistema que contiene tubulina con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I) se estimula la polimerización de microtúbulos y se estabilizan los microtúbulos, y al estimular la polimerización de microtúbulos y estabilizar los microtúbulos dichos compuestos de Fórmula (I) son útiles como agentes para el tratamiento, la inhibición o el control del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades relacionadas. El sistema que contiene tubulina puede estar en una célula tumoral, con lo que se inhibe la enfermedad neoplásica mediante la administración de una cantidad eficaz de un compuesto descrito en la presente invención. Pueden tratarse mamíferos y, en particular, seres humanos. Además, dicho sistema que contiene tubulina puede estar en un paciente. En el caso del tratamiento del cáncer, se cree que muchas neoplasias tales como leucemia, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de tiroides, cáncer de ovario, cáncer renal, cáncer de próstata y cánceres de mama pueden tratarse mediante la administración de cantidades eficaces de los compuestos de fórmulas (I). Además, los compuestos de Fórmula (I) son útiles para el tratamiento o la prevención de tumores cancerosos que expresan multirresistencia a fármacos (MDR) o que son resistentes debido a MDR. Tal como se utiliza en la presente memoria, cáncer se refiere a todos los tipos de cánceres, o neoplasias o tumores benignos o malignos.

Los cánceres preferidos para el tratamiento utilizando los métodos proporcionados en la presente memoria incluyen carcinoma, sarcoma, linfoma o leucemia. Por carcinoma se entiende un tumor epitelial benigno o maligno, que incluye, sin limitarse a los mismos, carcinoma de mama, carcinoma de próstata, carcinoma de pulmón no microcítico, carcinoma de colon, carcinoma de melanoma, carcinoma de ovario, o carcinoma renal. Un hospedador preferido es un ser humano.

La dosis concreta utilizada del principio activo puede variar dependiendo del compuesto particular empleado, la forma de administración y la gravedad del trastorno que se va a tratar. Sin embargo, se obtienen, en general, resultados satisfactorios cuando los compuestos de la invención se administran en una dosis diaria de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal. Una pauta preferida para obtener resultados óptimos sería desde aproximadamente 1 mg hasta aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal por día, y se emplean unidades de dosificación de modo que se administre un total de aproximadamente 70 mg hasta aproximadamente 1400 mg del compuesto activo en un período de 24 horas a un individuo de aproximadamente 70 kg de peso corporal.

La pauta posológica para el tratamiento de mamíferos puede ajustarse para proporcionar la respuesta terapéutica óptima. Por ejemplo, pueden administrarse varias dosis divididas cada día o puede reducirse la dosis proporcionalmente según lo requieran las necesidades de la situación terapéutica. Una ventaja claramente práctica es que estos compuestos activos pueden administrarse de cualquier forma que sea conveniente, tal como por vía oral, intravenosa, intramuscular o subcutánea.

Los compuestos activos de la invención pueden administrarse preferentemente por vía oral, por ejemplo, con un diluyente inerte o con un excipiente comestible asimilable, o pueden estar incluidos en cápsulas de gelatina dura o blanda, o pueden comprimirse para formar comprimidos, o pueden incorporarse directamente a los alimentos de la dieta. Para la administración terapéutica por vía oral, estos compuestos activos pueden añadirse a excipientes y utilizarse en forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, pastillas para chupar, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas, y similares. Dichas composiciones y preparaciones deben contener por lo menos 0,1% del compuesto activo. Naturalmente, el porcentaje de las composiciones y preparaciones puede variarse, y puede situarse de forma práctica entre aproximadamente 2% y aproximadamente 60% del peso de la unidad. La cantidad de compuesto activo en dichas composiciones útiles en terapéutica es suficiente para obtener una dosis adecuada. Las composiciones o preparaciones preferidas según la presente invención se elaboran de modo que un forma de dosis unitaria por vía oral contiene entre 10 y 1000 mg de compuesto activo.

Los comprimidos, pastillas para chupar, pastillas, cápsulas, y similares también pueden contener lo siguiente: un aglutinante tal como goma tragacanto, goma arábiga, almidón de maíz o gelatina; excipientes tales como fosfato dicálcico; un agente desintegrante tal como almidón de maíz, almidón de patata, ácido algínico, y similares; un lubricante tal como estearato de magnesio; y un edulcorante tal como sacarosa, lactosa; o puede añadirse sacarina o un agente saborizante tal como menta, aceite de gaulteria o saborizante de cereza. Cuando la forma de dosis unitaria es una cápsula, puede contener, además del tipo de materiales mencionados anteriormente, un excipiente líquido. Otros materiales diversos pueden estar presentes en forma de recubrimientos o como aditivos para modificar de alguna otra manera la forma física de la dosis unitaria. Por ejemplo, los comprimidos, pastillas o cápsulas pueden recubrirse con goma laca, azúcar, o ambas. Un jarabe o elixir puede contener el compuesto activo, sacarosa como agente edulcorante, metil- y propilparabenos como conservantes, un colorante y un saborizante tal como sabor de cereza o de naranja. Naturalmente, cualquier material utilizado en la preparación de cualquier dosis unitaria debe ser farmacéuticamente puro y sustancialmente no tóxico en las cantidades utilizadas. Además, dichos compuestos activos pueden incorporarse en preparaciones y formulaciones de liberación sostenida.

Dichos compuestos activos también pueden administrarse por vía parenteral o intraperitoneal. Las soluciones o suspensiones de dichos compuestos activos en forma de base libre o de sal farmacológicamente aceptable pueden prepararse en agua mezclada de forma adecuada con un tensioactivo tal como hidroxipropilcelulosa. Las dispersiones también pueden prepararse en glicerol, polietilenglicoles líquidos y sus mezclas en aceites. En condiciones normales de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservante para prevenir la proliferación de microorganismos.

Las formas farmacéuticas aceptables para su uso en inyecciones incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables. En todos los casos, la forma debe ser estéril y debe ser líquida para que pueda administrarse fácilmente con jeringa. Debe ser estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento, y debe protegerse de la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El excipiente puede ser un disolvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido), mezclas adecuadas de los mismos, y aceites vegetales.

La administración intravenosa es una forma preferida de administración de los compuestos de la invención. Para la administración intravenosa, los ejemplos no limitantes de excipientes adecuados incluyen solución salina fisiológica, agua bacteriostática, Cremophor ELTM (BASF, Parsippany, N.J.) o solución salina tamponada con fosfato (PBS). La composición debe ser estéril y debe ser líquida para que pueda administrarse fácilmente con jeringa. Debe ser estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento, y debe protegerse de la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El excipiente puede ser un disolvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido, y similares), y mezclas adecuadas de los mismos. La prevención de la acción de microorganismos puede lograrse utilizando varios agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal, y similares. En muchos casos, se preferirá incluir en la composición agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, cloruro de sodio. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede lograrse incluyendo en la composición un agente que retarda la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.

Tal y como se utiliza en la presente invención, el término proporcionar una cantidad eficaz de un compuesto significa bien la administración directa de dicho compuesto, o la administración de un profármaco, derivado o análogo que se transformará en el interior del organismo en la cantidad eficaz del compuesto.

Además de su utilidad descrita anteriormente, algunos de los compuestos de la presente invención son útiles para la preparación de otros compuestos de la presente invención.

Los ejemplos de la presente invención se evaluaron en diversos procedimientos estándar de análisis farmacológico que demostraron que los compuestos de la presente invención poseen actividad significativa como estimuladores de la polimerización de microtúbulos, y son agentes antineoplásicos. Sobre la base de la actividad mostrada en los procedimientos estándar de análisis farmacológico, los compuestos de la presente invención son, por consiguiente, útiles como agentes antineoplásicos. Los cánceres asociados se seleccionan de entre el grupo constituido por, cáncer de mama, de colon, de pulmón, de próstata, melanoma, epidérmico, leucemia, de riñón, de vejiga, bucal, de laringe, de esófago, de estómago, de ovario, de páncreas, de hígado, de piel, y de cerebro. En particular, los compuestos de la presente invención exhiben un efecto similar al del paclitaxel. A continuación se presentan los procedimientos de análisis utilizados y los resultados obtenidos.

Procedimientos estándares de análisis farmacológico Materiales y métodos 1. Medios y reactivos para cultivo celular

El medio es RPMI-1640 con L-glutamina, enriquecido con suero de ternero fetal termoinactivado al 10%, 100 unidades/ml de penicilina, y 100 \mug/ml de estreptomicina (Gibco, Grand Island, NY). La tubulina rica en la proteína asociada a microtúbulos (MAP), que contenía aproximadamente 70% de tubulina y 30% de MAP (n.º ML113), y tubulina de alta pureza (> 99% de pureza, n.º TL238), ambas procedentes de cerebro bovino, se obtienen de Cytoskeleton, Inc., Denver, CO. El tampón PEM (piperazina-N,N'-bis [2-ácido etanosulfónico] 80 mM, pH 6,9, ácido etilenglicol-bis((\beta-aminoetil-éter)-N,N,N',N'-tetraacético 1 mM, cloruro de magnesio 1 mM) y guanosina-5'-trifosfato (GTP) se obtienen asimismo de Cytoskeleton. El [^{3}H]paclitaxel, de actividad específica 14,7 Ci/mmol, se adquiere de Moravek Biochemicals (Brea, CA). La [^{3}H]vinblastina, de actividad específica 9,60 Ci/mmol y las columnas MicroSpin G-50 se obtienen de Amersham Biosciences (Piscataway, NJ). La [^{3}H]colquicina, de actividad específica 76,5 Ci/mmol, se obtiene de New England Nuclear (Boston, MA). Otros reactivos se obtienen de Sigma (St. Louis, MO).

2. Líneas celulares

Las líneas celulares de cáncer humano se obtienen, a no ser que se indique lo contrario, de la American Type Culture Collection (Rockville, MD). Las siguientes líneas celulares progenitoras sensibles a fármacos, y sus líneas homólogas derivadas resistentes a fármacos, se obtienen de las líneas originales como se indica a continuación: (a) La línea S1 (línea progenitora a partir de un subclón de la línea de carcinoma de colon humano LS174T) y la línea derivada S1-M1-3.2 (denominada S1-M1 en la presente memoria) que expresa la proteína transportadora de fármacos MXR, fueron obtenidas del Dr. L. Greenberger, Wyeth Research (Rabindran, S. K., He, H., Singh, M., Brown, E., Collins, K. I., Annable, T., y Greenberger, L. M. Reversal of a novel multidrug resistance mechanism in human colon carcinoma cells by fumitremorgin C. Cancer Res., 58: 5850-5858, 1998); (b) La línea progenitora de leucemia promielocítica humana HL-60 y la línea derivada HL-60/ADR, que expresa la proteína transportadora de fármacos MRP1, fueron obtenidas del Dr. M. Center, University of Kansas (McGrath, T., y Center, M. S. Adriamycin resistance in HL60 cells in the absence of detectable P-glycoprotein. Biochem. Biophys. Res. Commun., 145: 1171-1176, 1987), a través del Dr. L. Greenberger, Wyeth Research; y (c) La línea progenitora KB-3-1 (denominada KB en la presente memoria, clonada a partir de un carcinoma epidermoide humano) y las líneas derivadas KB-8-5 y KB-V1, que expresan niveles moderados y muy elevados, respectivamente, de la proteína transportadora de fármacos MDR1 (glucoproteína P) fueron obtenidas del Dr. M. Gottesman, National Cancer Institute (Shen, D. W., Cardarelli, C., Hwang, J., Cornwell, M., Richert, N.,Ishii, S., Pastan, I., y Gottesman, M. M. Multiple drug-resistant human KB carcinoma cells independently selected for high-level resistance to colchicine, adriamycin, or vinblastine show changes in expression of specific proteins. J. Biol. Chem., 261: 7762-7770, 1986) a través del Dr. L. Greenberger, Wyeth Research.

3. Procedimiento estándar de análisis farmacológico de la citotoxicidad

El ensayo, que está comercializado en forma de kit por Promega (Madison, WI; CellTiter 96 AQ_{ueous}, Ensayo no radiactivo de proliferación celular), se basa en la conversión por células viables, pero no por células muertas, de la sal de tetrazolio, MTS (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolio, sal interna), en un formazano coloreado hidrosoluble que se detecta por espectrofotometría. Los compuestos se analizan a nueve concentraciones, con el objeto de determinar los valores de CI_{50}. Para el procedimiento de análisis, las células se recogen por tripsinización (o, en el caso de células no adherentes, por resuspensión simple), se lavan, se cuentan y se distribuyen en pocillos de placas de microvaloración de 96 pocillos de fondo plano a una concentración de 1000 células por pocillo en 200 \mul de medio. Además, una fila de pocillos en una placa distinta recibió células como se ha indicado anteriormente (placa de "tiempo 0"). Todas las placas se incuban a 37°C en aire húmedo con 5% de CO_{2} durante aproximadamente 24 h.

En el día 2, los compuestos de la prueba se diluyen y se añaden a los pocillos. Los compuestos se disuelven en DMSO a una concentración de 10 mg/ml. Para cada compuesto se preparan nueve diluciones de 2 veces en serie en DMSO. Diez microlitros de cada dilución en DMSO se transfieren a 100 \mul del medio, se mezcla bien, y después se transfieren 5 \mul de esta dilución por cuadruplicado a pocillos que contienen células. La concentración final elevada de cada compuesto es típicamente 5 \muM. Las placas se transfieren de nuevo al incubador durante tres días. En el momento de la adición del fármaco a las placas del experimento, se lleva cabo el ensayo con MTS en la placa de "tiempo 0". Así se obtiene el "valor de MTS a tiempo 0" que está relacionado con el número de células viables por pocillo en el momento de la adición del fármaco.

Después de tres días en cultivo con los compuestos de prueba (día 5, en total), se lleva cabo el ensayo con MTS en todos los pocillos de las placas del experimento. Se promedian los valores de absorbancia de los pocillos con muestra por cuadruplicado y se dividen por el promedio de los valores a "tiempo 0". El promedio de los pocillos testigo sin fármaco, dividido por el promedio del valor a "tiempo 0", dio el aumento máximo del desarrollo del color relativo de MTS debido al crecimiento de las células durante los tres días finales del cultivo. El promedio de los pocillos testigo con elevada concentración de fármaco, dividido por el valor a "tiempo 0", expresaba el mínimo del desarrollo del color relativo para las células que habían sido completamente destruidas. Los nueve valores para cada compuesto se representan frente a la concentración, y la concentración que produce un desarrollo del color relativo a medio camino entre el máximo y el mínimo se considera el valor de la CI_{50}. Los compuestos más potentes presentaban los valores mínimos de CI_{50}.

4. Procedimiento estándar de análisis farmacológico de polimerización de tubulina

Se llevan a cabo dos variaciones de este procedimiento: una utilizando tubulina rica en MAP, y otra utilizando tubulina pura.

La tubulina rica en MAP se disuelve en tampón PEM enfriado con hielo que contenía GTP 1 mM (tampón GPEM) a una concentración de 1,3 mg/ml. La solución se centrifuga a la máxima velocidad en una microcentrifugadora Eppendorf modelo 5415C (Brinkmann Instruments, Westbury, NY) durante 10 min a 4°C inmediatamente antes de su utilización. La solución de tubulina se añade a los pocillos de la mitad del área de una placa de 96 pocillos (Costar n.º 3696, Corning, Inc., Corning, NY) que ya contenía los compuestos de interés. Cada compuesto se analiza por duplicado a una concentración final de 0,3 \muM en un volumen de 110 \mul por pocillo. La concentración final de DMSO en todos los pocillos es 0,3%. Las reacciones testigo, que recibían solamente el disolvente del compuesto, se llevan acabo por cuadruplicado. La placa se coloca en un lector de placas SpectraMax Plus (Molecular Devices Corp. Sunnyvale, CA) mantenido con un termostato a 24°C, y la absorbancia de cada pocillo a 340 nm, que es una medida de la aparición de turbidez debida a la formación de polímeros de tubulina, se determina cada minuto durante 60 minutos. La absorbancia a tiempo 0 para cada pocillo se resta de las lecturas subsiguientes de absorbancia para dicho pocillo, y después se promedian los duplicados.

El procedimiento seguido en el caso de la tubulina pura es similar, con la salvedad de que se introducen los siguientes cambios: La tubulina pura se disuelve en tampón PEM frío que contenía glicerol al 10% sin GTP añadido, a una concentración de 1,5 a 1,8 mg/ml (15 a 18 \muM). El sobrenadante obtenido tras la centrifugación se dispensa en una placa de 96 pocillos que ya contenía los compuestos. Cada compuesto se analiza por duplicado en seis diluciones de 3 veces en serie, comenzando a 24,3 \muM. El lector de placas se mantiene con un termostato a 35°C.

5. Procedimiento estándar de análisis farmacológico de la unión competitiva

La unión de los compuestos de los ejemplos de la presente invención a la tubulina de elevada pureza se estudió utilizando métodos de inhibición competitiva. El heterodímero de \alpha\beta-tubulina contiene sitios de unión para las tres clases principales de agentes farmacológicos que actúan en los microtúbulos: taxanos, agentes que actúan en el sitio de la vinca/péptidos, agentes que actúan en el sitio de la colquicina. Para estudiar la posible competición en los sitios de la vinca/péptidos y los sitios de la colquicina, se llevan a cabo incubaciones en condiciones que no favorecen la polimerización, debido a que la vinblastina y la colquicina se unen preferentemente al heterodímero no polimerizado. Por otra parte, para estudiar la posible competición en el sitio del taxano, se utiliza tubulina polimerizada (microtúbulos) debido a que el paclitaxel se une preferentemente a los microtúbulos.

La tubulina de elevada pureza se disuelve en tampón PEM sin GTP, y se utiliza a una concentración final de 1,0 a 1,3 mg/ml (10 a 13 \muM). A la solución de tubulina se le añaden varias concentraciones de los compuestos de los ejemplos de la presente invención hasta una concentración máxima de 100 \muM, y [^{3}H]vinblastina o [^{3}H]colquicina a concentraciones finales de 100 nM o 50 nM, respectivamente. Estas soluciones se incuban a 24°C durante 1 h, y después se aplican a columnas de MicroSpin G-50, que se centrifugan durante 2 min a 3.000 rpm en una microcentrifugadora Eppendorf 5415C. Se mezcla una parte alícuota del efluente de cada columna (que contiene tubulina y radioligando unido) con líquido de centelleo, y se cuenta en un espectrofotómetro de centelleo líquido. Los testigos incluían muestras sin competidor, y muestras con vincristina, colquicina o paclitaxel no marcados. La capacidad de cada competidor para inhibir la unión del radioligando se expresa como porcentaje de la unión del testigo en ausencia de cualquier competidor.

Para la competición con [^{3}H]paclitaxel, la tubulina de elevada pureza se disuelve en tampón PEM con glutamato 0,75 M y didesoxi-GTP 25 \muM; la concentración final de proteínas es 0,25 a 0,35 mg/ml (2,5 a 3,5 \muM). Estas condiciones estimulan la formación rápida de microtúbulos cortos y estables (Hamel, E., del Campo, A. A., y Lin, C. M. Stability of tubulin polymers formed with dideoxiguanosine nucleotides in the presence and absence of microtubule-associated proteins. J. Biol. Chem., 259: 2501-2508, 1984). La solución se incuba durante 30 min a 37°C para permitir la formación de los microtúbulos. A continuación se añaden [^{3}H]paclitaxel (concentración final de 2,1 \muM, 1,2 Ci/mmol) y competidor (concentración final de 20 \muM, con la salvedad de que es 5 \muM en el caso del paclitaxel no marcado) a partes alícuotas de la solución de tubulina polimerizada y se continúa la incubación a 37°C durante otros 30 min. Los testigos incluían muestras sin competidor y muestras con vincristina, colquicina o paclitaxel no marcados. Después se centrifugan las reacciones a la máxima velocidad en una microcentrifugadora Eppendorf 5415C durante 20 min a temperatura ambiente, para sedimentar las proteínas de los microtúbulos. Se mezclan partes alícuotas de cada sobrenadante por triplicado con líquido de centelleo y se cuentan en un espectrofotómetro de centelleo líquido. A partir de la cantidad de radioactividad en los sobrenadantes y la radiactividad total de partida medida se calcula la cantidad de [^{3}H]paclitaxel unido a las proteínas de microtúbulos sedimentadas. La capacidad de cada competidor para inhibir la unión del radioligando a las proteínas sedimentadas se expresa como porcentaje de los testigos sin
competidor.

6. Procedimiento estándar de prueba farmacológica para el análisis del ciclo celular

Se recogen células HeLa por tripsinización, se lavan, y se cuentan y distribuyen en pocillos de placas de 12 pocillos a una concentración de 125.000 células por pocillo en 2 ml de medio. Las células se cultivan durante toda la noche. Se preparan diluciones del compuesto en DMSO y se añaden partes alícuotas de 10 \mul a cada pocillo, para obtener las concentraciones finales deseadas. Las células se mantienen en cultivo durante 18 h después de la adición del compuesto, y después se recogen las células de cada pocillo (procurando recuperar tanto las células adherentes como no adherentes) y se tratan utilizando el kit CycleTEST PLUS kit (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San José, CA). La citometría de flujo se realiza empleando un instrumento FACSort (Becton Dickinson).

7. Procedimiento estándar de análisis farmacológico de la actividad antitumoral en ratones atímicos que portan xenoinjertos de tumor humano

La capacidad de los compuestos de la presente invención para inhibir el crecimiento tumoral en animales se estudia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico de ratones atímicos con xenoinjertos. Se obtienen ratones nu/nu hembras, generados por exogamia de ratones albinos, de Charles River Laboratories (Wilmington, MA). Los animales reciben inyecciones subcutáneas, en el flanco, de la suspensión deseada de células tumorales. Varios días después, se seleccionan los ratones con tumores de aproximadamente 150 mm^{3} de entre los inyectados (estadificados) y se distribuyen aleatoriamente en grupos de 5-10. El día de la estadificación se denomina día 0. Los compuestos de la invención, formulados generalmente en solución salina (las excepciones se indica en las tablas), se administran a los animales por inyección intravenosa o sonda gástrica siguiendo varias pautas a partir del día 0 o 1, según se indica en las tablas. El grupo testigo de cada experimento recibe dosis con vehículo siguiendo la misma pauta. El tamaño del tumor se mide cada 3-7 días con un calibrador en dos dimensiones ortogonales, y se calcula el volumen del tumor empleando la fórmula: volumen = [(longitud X anchura^{2})/2].

La relación Tumor/Testigo (T/C) se obtiene dividiendo la media del volumen del tumor del grupo tratado por la media del volumen del tumor del grupo testigo en cada día de medición. Una dosis de tratamiento se define como activa si produce una T/C estadísticamente significativa de 0,50 o menos. Un valor de p \leq 0,05, determinado por la prueba de la t de Student unilateral, es necesario para que haya significación estadística. Una dosis de tratamiento se define como tóxica si más del 10% de los animales mueren debido un efecto tóxico relacionado con un compuesto.

Resultados 1. Procedimiento estándar de análisis farmacológico de la citotoxicidad 1.1. Con células COLO 205

COLO 205 es una línea celular de carcinoma de colon humano que se utiliza para el análisis comparativo de los ejemplos de la presente invención y de varios compuestos de referencia. Esta línea es sensible al paclitaxel y a la vincristina. Por ejemplo, como se muestra en la Tabla 1, el compuesto del ejemplo 32 presenta un valor de CI_{50} de 6,6 nM.

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 1 Actividad de compuestos de los ejemplos representativos de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico de la citotoxicidad con MTS en células^{1} COLO 205

27

\begin{minipage}[t]{140mm} ^{1}Los valores de CI_{50} y las desviaciones típicas proceden del número indicado de experimentos independientes\end{minipage}

\vskip1.000000\baselineskip

1.2. Con células KB, KB-8-5 y KB-V1

Las líneas KB expresan diferentes cantidades de la bomba de membrana de la glucoproteína P (MDR1), que produce resistencia a la acción de muchos compuestos citotóxicos, incluidos paclitaxel y vincristina. La línea KB progenitora no expresa la glucoproteína P; la línea KB-8-5 expresa niveles moderados de la proteína, y la línea KB-V1 expresa niveles muy elevados. La capacidad de la glucoproteína P para reconocer y exportar un posible agente citotóxico puede inferirse a partir del cambio en los valores de la CI_{50} en estas líneas (Loganzo, F., Discafani, C. M., Annable, T., Beyer, C., Musto, S., Hari, M., Tan, X., Hardy, C., Hernandez, R., Baxter, M., Singanallore, T., Khafizova, G., Poruchynsky, M.S., Fojo,T., Nieman, J.A., Ayral-Kaloustian,S., Zask, A., Andersen, R. J., y Greenberger, L. M. HTI-286, a synthetic analogue of the tripeptide hemiasterlin, is a potent antimicrotubule agent that circumvents P-glycoprotein-mediated resistance in vitro and in vivo. Cancer Res., 63: 1838-1845, 2003). Si un compuesto es reconocido por la glucoproteína P, su valor de CI_{50} aumentará de forma sustancial (varios cientos de veces) al pasar de KB a KB-8-5 a KB-V1; si un compuesto no es reconocido, tendrá valores de CI_{50} similares (una diferencia de 3 veces o menos) en las tres líneas. Por ejemplo, como se muestra en la Tabla 2, las células KB-8-5 son moderadamente resistentes a paclitaxel (19 veces), vincristina (11 veces), colquicina (3,4 veces) y doxorrubicina (3,0 veces). Los compuestos de los ejemplos representativos de la presente invención (n.^{os} 1, 2a, 4a, 20, 25, 30, 32) muestran un cambio inferior a 2 veces en los valores de CI_{50}.

Pueden determinarse incluso ligeras interacciones de los compuestos con la glucoproteína P empleando la línea KB-V1, que expresa un nivel de esta proteína superior al que se encuentra típicamente en las muestras clínicas procedentes de diversos tumores (Goldstein, L. J.,Galski, H., Fojo, T., Willingham, M., Lai, S.L., Gazdar, A., Pirker, R., Green, A., Crist, W., Brodeur, G. M., Lieber, M., Cossman, J., Gottesman, M. M., y Pastan, I. Expression of a multidrug resistance gene in human cells. J. Natl. Cancer Inst. (Bethesda), 81: 116-124, 1989). Las células KB-V1 presentan una elevada resistencia a paclitaxel (> 345 veces), vincristina (> 156 veces), colquicina (116 veces), mitoxantrona (77 veces) y doxorrubicina (> 130 veces); los compuestos de ejemplos representativos de la presente invención (n.^{os} 20, 25, 30) presentan un cambio inferior a 3 veces en la CI_{50}, en comparación con la línea KB progenitora. Esto indica que dichos compuestos no son reconocidos en absoluto por la glucoproteína P y, por consiguiente, que dichos compuestos superan completamente la resistencia, mediada por la glucoproteína P, a la muerte celular. Los compuestos de ejemplos representativos de la invención (n.^{os} 1a, 2a, 3a, 4a, 32) muestran reconocimiento por la glucoproteína P.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 2 Actividad de compuestos de los ejemplos representativos de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico de la citotoxicidad con MTS empleando células KB, KB-8.5 y KB-VI

28

^{1}Los valores de CI_{50} son medias de 2 experimentos independientes

\begin{minipage}[t]{152mm} ^{2}Relación = CI_{50} en células KB 8.5 o KB VI/CI_{50} en células KB. Una relación de aproximadamente 1 indica falta de resistencia.\end{minipage}

\vskip1.000000\baselineskip

1.3. (Con células HL-60 y HL-60/ADR)

Las células HL-60/ADR sobreexpresan la proteína de multirresistencia MRP1 que media la resistencia a algunos agentes quimioterápicos (Gottesman, M. M., Fojo, T., y Bates, S. E. Multidrug resistance in cancer: role of ATP-dependent transporters. Nature Rev. Cancer, 2: 48-58, 2002). Los valores de CI_{50} de compuestos de ejemplos representativos de la presente invención, así como de compuestos de referencia, en células HL-60/ADR se comparan con los valores de la línea progenitora sensible HL-60. Los resultados, que se presentan en la Tabla 3, indican que mientras que las células HL-60/ADR muestran resistencia a vincristina (8,2 veces), colquicina (7,4 veces), mitoxantrona (17 veces) y doxorrubicina (93 veces), dichas células no muestran resistencia a ninguno de los compuestos de los ejemplos representativos de la invención. Esto indica que los compuestos de la presente invención no son reconocidos por la MRP1 y, por consiguiente, superan la resistencia celular mediada por dicho transportador.

TABLA 3 Actividad de compuestos de los ejemplos representativos de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico de la citotoxicidad con MTS empleando células HL-60 y HL-60/AR

29

	^{1}Los valores de CI_{50} son medias de 2 experimentos independientes
	\begin{minipage}[t]{145mm} ^{2}Relación = CI_{50} en células HL-60/ADR/CI_{50} en células HL-60. Una relación de aproximadamente 1 indica falta de resistencia.\end{minipage}

1.4. Con células S1 y S1-M1

Las células S1-M1 sobreexpresan el transportador MXR que media en la resistencia a algunos agentes quimioterápicos (Gottesman, M. M., Fojo, T., y Bates, S. E. Miltidrug resistance in cancer: role of ATP-dependent transporters. Nature Rev. Cancer, 2: 48-58, 2002). Los valores de CI_{50} de compuestos de los ejemplos representativos de la presente invención, así como de los compuestos de referencia, en células S1-M1 se comparan con los valores en la línea progenitora sensible S1. Los resultados, que se presentan en la Tabla 4, indican que mientras que las células S1-M1 muestran resistencia a la mitoxantrona (> 300 veces) y a la doxorrubicina (74 veces), no muestran resistencia a los compuestos de los ejemplos representativos de la invención. Esto indica que los compuestos de la presente invención no son reconocidos por MXR y que, por consiguiente, superan la resistencia celular mediada por dicho transportador.

TABLA 4 Actividad de compuestos de los ejemplos representativos de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico de la citotoxicidad con MTS empleando células S1 y S1-M1

30

	^{1}Los valores de CI_{50} son medias de 2 experimentos independientes
	\begin{minipage}[t]{145mm} ^{2}Relación = CI_{50} en células S1-M1/CI_{50} en células S1. Una relación de aproximadamente 1 indica falta de resistencia.\end{minipage}

2. Efectos de los compuestos sobre la polimerización de tubulina rica en MAP y la tubulina pura in vitro

En este ensayo, las reacciones testigo con tubulina rica en MAP muestran un perfil de absorbancia en forma de S, caracterizado por tres fases: en primer lugar, una fase de retardo durante la que no tienen lugar cambios en la absorbancia; en segundo lugar, una fase de polimerización en la que aumenta la absorbancia; y en tercer lugar, una fase de meseta, en la que la absorbancia ha alcanzado un máximo y apenas tienen lugar cambios. Los compuestos que aumentan la polimerización, tales como paclitaxel y docetaxel, disminuyen o eliminan la fase de retardo, aumentan la velocidad de la fase de polimerización, y a menudo aumentan la altura de la meseta. Los inhibidores de la polimerización, tales como vincristina y colquicina, reducen o previenen el aumento de la absorbancia. Los compuestos de la presente invención tienen un efecto similar al del taxano en la reacción de polimerización. Este efecto se ha expresado cuantitativamente en la Tabla 5 dividiendo la media de la A_{340} de cada muestra a los 20 min por la media de la A_{340} del testigo a los 20 min, para proporcionar un aumento, en veces, sobre el testigo. El paclitaxel presenta un factor de aumento de 8,5. Los compuestos de los ejemplos de la presente invención presentan factores que alcanzan hasta 8,1, y la mayoría se encuentran en el intervalo de 5 a 6 veces. La vincristina presentaba un factor de aumento de 0, debido a que inhibía completamente la polimerización de tubulina rica en MAP.

TABLA 5 Actividad de compuestos de los ejemplos representativos de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico de polimerización de tubulina empleando tubulina rica en MAP

31

La tubulina pura sin GTP añadido no muestra polimerización en las reacciones testigo. El docetaxel, y en mucha menor medida, el paclitaxel, son capaces de provocar la polimerización de la tubulina pura en estas condiciones. Varios compuestos de los ejemplos de la presente invención provocan asimismo la polimerización de la tubulina pura sin GTP de forma similar a la del docetaxel. La Tabla 6 muestra la medida de la absorbancia en cuatro puntos temporales después del comienzo de las reacciones para una única concentración de compuesto. A esta concentración (24,3 \muM), el docetaxel y los compuestos de los ejemplos representativos 1 a, 2a, 3a, 4a, 11a, 25 y 32 causan un rápido aumento de la absorbancia en los primeros 5 min de la reacción hasta alcanzar una meseta. Estos siete ejemplos causaron asimismo un aumento menor y más lento a 8,1 \muM, pero carecían de efecto a 2,7 \muM. Por otro lado, el docetaxel provocó un pequeño aumento en la absorbancia incluso a 0,1 \muM.

TABLA 6 Actividad de compuestos de los ejemplos representativos de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico de polimerización de tubulina empleando tubulina pura

\vskip1.000000\baselineskip

32

\vskip1.000000\baselineskip

3. Unión de los compuestos a tubulina

El sitio al que se unen los compuestos de la presente invención en la tubulina de alta pureza procedente de cerebro bovino se determina mediante estudios de inhibición competitiva empleando los ligandos radiactivos [^{3}H]vinblastina, [^{3}H]colquicina y [^{3}H]paclitaxel. Los resultados, que se muestra en la Tabla 7, indican que todos los compuestos analizados inhibían la unión de la [^{3}H]vinblastina al heterodímero de tubulina (11-19% del testigo), pero no inhibían la unión de la [^{3}H]colquicina al heterodímero de tubulina, o la del [^{3}H]paclitaxel a los microtúbulos. Estos datos constituyen pruebas sólidas de que dichos compuestos se unen al sitio de la vinca/péptidos de la tubulina y no a los sitios de la colquicina o del taxano. De hecho, la mayoría de los compuestos analizados aumenta la unión de la [^{3}H]colquicina un 12-34% por encima del nivel del testigo, lo que indica que la unión de dichos compuestos al sitio de la vinca/péptidos puede provocar un cambio conformacional en la molécula proteica que da lugar a un aumento en la unión de la colquicina. Este cambio no parece ser provocado por la vincristina. Entre los compuestos testigo analizados, la vincristina inhibía la unión de la [^{3}H]vinblastina pero no la de la [^{3}H]colquicina, y la colquicina inhibía la unión de la [^{3}H]colquicina pero no la de la [^{3}H]vinblastina. La vincristina y la colquicina también parecían inhibir la unión del [^{3}H]paclitaxel a los microtúbulos; no obstante, esto no se debe a la competición por la unión, sino a la despolimerización de los microtúbulos a los que se une el [^{3}H]paclitaxel. Está claro que los compuestos de la presente invención no reducen la unión del [^{3}H]paclitaxel a los microtúbulos, lo que indica que no compiten con la unión del [^{3}H]paclitaxel ni despolimerizan los microtúbulos a los que se une el [^{3}H]paclitaxel.

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 7 Actividad de compuestos de los ejemplos representativos de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de análisis farmacológico^{1} de la unión competitiva

\vskip1.000000\baselineskip

33

	^{1}Los resultados se expresan en porcentaje de la unión al testigo sin competidor.
	^{2}Los datos proceden de 1 (4 muestras repetidas) o 2 (8 muestras repetidas) experimentos independientes.
	^{3}Los datos proceden de 1 a 4 experimentos independientes (3 a 12 muestras repetidas).

\vskip1.000000\baselineskip

4. Efecto de los compuestos en la progresión del ciclo celular

Este procedimiento mide los porcentajes de células de una población que están en las fases G1, S y G2/M del ciclo celular. Utiliza la tinción de los núcleos celulares con yoduro de propidio y análisis por citometría de flujo. El procedimiento también proporciona una estimación de la apoptosis causada por el tratamiento con el fármaco, mediante la medición de la aparición de partículas con cantidades de ADN sub-G1. A elevadas concentraciones (es decir, superiores a concentraciones de aproximadamente 5 x CI_{50}) los compuestos que actúan sobre los microtúbulos detienen las células de forma característica en la fase G2/M del ciclo celular, debido a que alteran los microtúbulos que forman el huso mitótico. No obstante, a concentraciones inferiores (cercanas a los valores de CI_{50}) en algunas líneas celulares, por ejemplo: HeLa, los taxanos tales como paclitaxel y docetaxel provocan apoptosis sustancial antes de que se observe un bloqueo en G2/M (Jordan, M. A., Wendell, K., Gardiner, S., Derry, W. B., Copp, H., y Wilson, L. Mitotic block induced in HeLa cells by low concentrations of paclitaxel (Taxol) results in abnormal mitotic exit and apoptotic cell death. Cancer Res., 56: 816-825, 1996); este efecto no tiene lugar con agentes que despolimerizan los microtúbulos, tales como vincristina y colquicina. Los compuestos de ejemplos representativos de la presente invención se analizan en este procedimiento a múltiples concentraciones con células tras 18 h de cultivo, para determinar si presentaban un perfil "estabilizador" (taxano) o "desestabilizador" (vincristina, colquicina). Los resultados presentados en la Tabla 8 demuestran que presentan un perfil "estabilizador".

Por ejemplo, el compuesto del ejemplo 1a mostró aproximadamente 70% de apoptosis a una concentración de 40 nM, cercana a su CI_{50} en células HeLa, sin aumento en la fracción G2/M en comparación con el testigo no tratado. Al aumentar la concentración por encima de 40 nM, disminuyó la fracción apoptótica y aumentó la fracción G2/M. Se observan perfiles similares con los compuestos de los ejemplos 2a, 3a, y 4a, y con docetaxel. Sin embargo, vincristina y colquicina presentaron un aumento paralelo en ambas fracciones, apoptótica y G2/M, y el grado de apoptosis a las 18 h es mucho menor.

TABLA 8 Actividad de compuestos de los ejemplos representativos de la invención y de compuestos de referencia en el procedimiento estándar de prueba farmacológica para el análisis del ciclo celular en células HeLa

34

36

^{1}Apop = Apoptosis

\vskip1.000000\baselineskip

5. Actividad antitumoral de los compuestos in vivo

Se realizaron varios experimentos con xenoinjertos de tumor humano en ratones atímicos para evaluar la capacidad de los compuestos de la presente invención para inhibir el crecimiento de tumores in vivo. La Tabla 9 presenta los resultados relativos al compuesto del ejemplo 2a con ratones que portaban carcinoma de pulmón no microcítico (NSCLC) H157. El compuesto inhibió el crecimiento del tumor a 25, 15 y 7,5 mg/kg cuando se administraba por vía intravenosa en los días 0 y 6. En otro experimento con NSCLC H157, la sal de succinato del compuesto del ejemplo 2c es activa cuando se administra por vía intravenosa en los días 0 y 7 a 20 y 10 mg/kg (Tabla 10). El compuesto del ejemplo 2a también inhibía el crecimiento de otro NSCLC, A549 (Tabla 11), a 25 y 20 mg/kg, pero no a 15 mg/kg, cuando se administraba por vía intravenosa en los días 0, 6, 13 y 20. El compuesto del ejemplo 2a inhibía el crecimiento de xenoinjertos del carcinoma de colon HT-29, como se muestra en la Tabla 12, cuando se administraba por vía intravenosa a 25 mg/kg en los días 1 y 7. Además, el compuesto del ejemplo 2a inhibía el crecimiento del glioblastoma U87-MG cuando se administraba por vía oral en forma de dosis única en el día 0 a 30, a 20 y 10 mg/kg, pero no a 5 o 2,5 mg/kg (Tabla 13). El compuesto del ejemplo 2a es asimismo activo frente al carcinoma de colon HCT-15 a 20 mg/kg cuando se administra por vía intravenosa en los días 1, 8 y 15 (Tabla 14). El HCT-15 sobreexpresa la glucoproteína P y es resistente al paclitaxel y a la vincristina.

Los compuestos de los ejemplos 1a, 2a, 3a y 4a se analizan frente a xenoinjertos de melanoma LOX. Los resultados de la Tabla 15 demuestran que los cuatro compuestos son activos a 6 y 3 mg/kg, peo no a 1 mg/kg, cuando se administran por vía intravenosa en los días 1, 5, 9, y 13.

Los compuestos de los ejemplos 1a, 2a 3a, y 4a se analizan también frente al carcinoma de colon DLD1. Este tumor sobreexpresa la glucoproteína P y es resistente al paclitaxel y a los alcaloides de la vinca. El compuesto del ejemplo 1 a 15 mg/kg, y el del ejemplo 2 a 20 mg/kg, son activos cuando se administran por vía intravenosa en los días 1, 5, 9 y 13 (Tabla 16).

Los compuestos de los ejemplos 3a y 9 se analizan frente a xenoinjertos de glioblastoma U-87 MG (Tabla 17). Cuando se administra por vía oral, el compuesto del ejemplo 3a es activo a 40, 20 y 10 mg/kg, y el del ejemplo 9 es activo a 20 mg/kg.

El compuesto del ejemplo 4 inhibía el crecimiento del carcinoma de pulmón A549, como se muestra en la Tabla 18, cuando se administraba por vía intravenosa q4dX8 a 40 mg/kg, pero no a 20 ó 10 mg/kg.

Por último, el compuesto del ejemplo 20 es activo frente a xenoinjertos de carcinoma de colon humano LoVo cuando se administra por vía oral en los días 1, 7 y 14 a 50 y 30 mg/kg (Tabla 19). Cuando se administra de forma idéntica, el compuesto del ejemplo 32 es activo a 50 mg/kg, pero no a 30 mg/kg (Tabla 19).

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 9 Actividad in vivo del compuesto del Ejemplo 2a en el procedimiento estándar de análisis farmacológico con xenoinjerto de tumor humano en ratones que portan carcinoma no microcítico de pulmón humano H157

38

	* = p < 0,05
	** = p < 0,01
	El vehículo es solución salina normal

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 10 Actividad in vivo del compuesto del Ejemplo 2c en el procedimiento estándar de análisis farmacológico con xenoinjerto de tumor humano en ratones que portan carcinoma no microcítico de pulmón humano H157

39

	* = p < 0,05
	** = p < 0,01
	El vehículo es solución salina normal

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 11 Actividad in vivo del compuesto del Ejemplo 2a en el procedimiento estándar de análisis farmacológico con xenoinjerto de tumor humano en ratones que portan carcinoma no microcítico de pulmón humano A549

40

	* = p < 0,05
	** = p < 0,01
	El vehículo es solución salina normal

TABLA 12 Actividad in vivo del compuesto del Ejemplo 2a en el procedimiento estándar de análisis farmacológico con xenoinjerto de tumor humano en ratones que portan carcinoma de colon humano HT-29

\vskip1.000000\baselineskip

41

** = p < 0,01

El vehículo es solución salina normal

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 13 Actividad in vivo del compuesto del Ejemplo 2 en el procedimiento estándar de análisis farmacológico con xenoinjerto de tumor humano en ratones que portan glioblastoma humano U87-MG

\vskip1.000000\baselineskip

42

* = p < 0,05

** = p < 0,01

El vehículo es Klucel

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 14 Actividad in vivo del compuesto del Ejemplo 2a en el procedimiento estándar de análisis farmacológico con xenoinjerto de tumor humano en ratones que portan carcinoma de colon humano HCT-15

\vskip1.000000\baselineskip

43

	* = p < 0,05
	** = p < 0,01
	El vehículo es solución salina normal
	Nota: 2 de 5 ratones murieron en el grupo de 25 mg/kg

TABLA 15 Actividad in vivo de los compuestos de los Ejemplos 1 a, 2a, 3a y 4a en el procedimiento estándar de análisis farmacológico con xenoinjerto de tumor humano en ratones que portan melanoma humano LOX

44

	* = p < 0,05
	** = p < 0,01
	El vehículo es solución salina normal

TABLA 16 Actividad in vivo de los compuestos de los Ejemplos 1 a, 2a, 3a y 4a en el procedimiento estándar de análisis farmacológico con xenoinjerto de tumor humano en ratones que portan carcinoma de colon humano DLD1

45

	* = p < 0,05
	** = p < 0,01
	El vehículo es solución salina normal

TABLA 17 Actividad in vivo de los compuestos de los Ejemplos 3a y 9 en el procedimiento estándar de análisis farmacológico con xenoinjerto de tumor humano en ratones que portan glioblastoma humano U87-MG

46

* = p < 0,05

** = p < 0,01

El vehículo es solución salina normal

TABLA 18 Actividad in vivo del compuesto del Ejemplo 4a en el procedimiento estándar de análisis farmacológico con xenoinjerto de tumor humano en ratones que portan carcinoma no microcítico de pulmón humano A549

47

* = p < 0,05

** = p < 0,01

El vehículo es solución salina normal

TABLA 19 Actividad in vivo de los compuestos de los Ejemplos 20 y 32 en el procedimiento estándar de análisis farmacológico con xenoinjerto de tumor humano en ratones que portan carcinoma de colon humano LoVo

48

* = p < 0,05

** = p < 0,01

El vehículo es Methocel al 0,5%/Tween 80 al 0,4%

\vskip1.000000\baselineskip

Los compuestos de la presente invención presentan una potente actividad citotóxica frente a líneas celulares de cáncer humano en cultivo, incluidas líneas que son resistentes a paclitaxel y vincristina debido a la sobreexpresión del transportador de fármacos. Los compuestos de la invención aumentan la velocidad inicial de la polimerización de tubulina rica en MAP, de forma semejante a la de los taxanos y diferente de los efectos inhibidores de los agentes despolimerizantes tales como los alcaloides de la vinca y la colquicina. Los compuestos de la invención también provocan la polimerización de la tubulina pura en ausencia de GTP. Además, los compuestos de la presente invención provocan apoptosis en las células diana a bajas concentraciones (cerca de valores citotóxicos de CI_{50}) sin bloquear el ciclo celular, otra propiedad que es característica de los taxanos, pero no de las vincas o de la colquicina. Los compuestos representativos de la invención inhiben el crecimiento de varios xenoinjertos de tumor humano en ratones atímicos, incluidos tumores resistentes a taxanos y a alcaloides de la vinca.

Los siguientes ejemplos de referencia son útiles en la preparación de ejemplos representativos, no limitantes, de los compuestos de la presente invención que son útiles como estimuladores de la polimerización de microtúbulos y como agentes antineoplásicos.

Ejemplo de referencia 1

Clorhidrato de (1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletilamina

El producto, clorhidrato de (1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletilamina, se prepara según las condiciones descritas en los documentos U.S. 5.986.135 y U.S. 6.204.269.

\newpage

Ejemplo de referencia 2

Clorhidrato de (1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletilamina

El producto, clorhidrato de (1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletilamina, se prepara según las condiciones descritas en los documentos U.S. 5.986.135 y U.S. 6.204.269, utilizando ácido L-(+)-tartárico en lugar de ácido D-(-)-tartárico.

Ejemplo de referencia 3

5-cloro-6-(2,4-difluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

El producto, 5-cloro-6-(2,4-difluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina, se prepara según las condiciones descritas en el documento U.S. 5.986.135, con la salvedad de que se utiliza DMF como disolvente en la última etapa, como se ha descrito en la presente memoria en el Ejemplo 1.

Ejemplo de referencia 4

5-cloro-6-(2,3,6-trifluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

El producto, 5-cloro-6-(2,3,6-trifluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina, se prepara según las condiciones descritas en el documento U.S. 5.986.135, con la salvedad de que se utiliza DMF como disolvente en la última etapa, como se ha descrito en la presente memoria en el Ejemplo 1.

Ejemplo de referencia 5

5,7-dicloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina

El producto, 5,7-dicloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina, se prepara según las condiciones descritas en los documentos U.S. 6.117.876 y U.S. 6.297.251.

Ejemplo de referencia 6

5,7-dihidroxi-6-(2,4,6-trifluorofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina

El producto 5,7-dihidroxi-6-(2,4,6-trifluorofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina, se prepara según las condiciones descritas en los documentos U.S. 6.117.876 y U.S. 6.297.251.

Ejemplo de referencia 7

2-(2,6-difluoro-4-metoxifenil)malonato de dietilo

El producto, 2-(2,6-difluoro-4-metoxifenil)malonato de dietilo, se prepara según las condiciones descritas en el documento U.S. 5.981.534.

Ejemplo de referencia 8

3-(metilamino)propan-1-ol

El producto, 3-(metilamino)propan-1-ol se prepara según las condiciones descritas en J. Org. Chem. 44, 2718 (1979).

Ejemplo de referencia 9

3-(etilamino)propan-1-ol

El producto, 3-(etilamino)propan-1-ol, se prepara según las condiciones descritas en J. Chem. Soc. B, 1300 (1971).

Ejemplo de referencia 10

3-[etil(metil)amino]propan-1-ol

El producto, 3-[etil(metil)amino]propan-1-ol, se prepara según las condiciones descritas en J. Am. Chem. Soc. 54, 2484 (1932).

\newpage

Ejemplo de referencia 11

3-piperidin-1-ilpropan-1-ol

El producto, 3-piperidin-1-ilpropan-1-ol, se prepara según las condiciones descritas en Tetr. Lett. 35, 761 (1994), con la salvedad de que el producto crudo se utiliza sin destilación.

Ejemplo de referencia 12

3-morfolin-4-ilpropan-1-ol

El producto, 3-morfolin-4-ilpropan-1-ol, se prepara según las condiciones descritas en Tetr. Lett. 35, 761 (1994), con la salvedad de que el producto crudo se utiliza sin destilación.

Ejemplo de referencia 13

3-pirrolidin-1-ilpropan-1-ol

El producto, 3-pirrolidin-1-ilpropan-1-ol, se prepara según las condiciones descritas en Tetr. Lett. 35, 761 (1994), con la salvedad de que el producto crudo se utiliza sin destilación.

Ejemplo de referencia 14

3-(metilpiperazin-1-il)propan-1-ol

El producto, 3-(metilpiperazin-1-il)propan-1-ol, se prepara según las condiciones descritas en Tetr. Lett. 35, 761 (1994), con la salvedad de que el producto crudo se utiliza sin destilación.

Ejemplo de referencia 15

3-azetidin-1-ilpropan-1-ol

El producto, 3-azetidin-1-ilpropan-1-ol, se prepara según las condiciones descritas en Tetr. Lett. 35, 761 (1994), con la salvedad de que el producto crudo se utiliza sin destilación.

Ejemplo de referencia 16

3-(dimetilamino)propan-1-tiol

El producto, 3-(dimetilamino)propan-1-tiol, se prepara según las condiciones descritas en J. Organomet. Chem. 480, 177 (1994).

Ejemplo de referencia 17

3-[(4-metoxibencil)oxi]-1-propanol

El producto, 3-[(4-metoxibencil)oxi]-1-propanol, se prepara según las condiciones descritas en Tetrahedron 54,1 (1998).

Los siguientes ejemplos son ejemplos representativos, no limitantes, de los compuestos de la presente invención.

Ejemplo 1 5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

49

Etapa A

5-cloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

Una mezcla de 5,7-dicloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina (3,0 g, 9,4 mmol), clorhidrato de (1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletilamina (4,2 g, 28,2 mmol), y N,N-diisopropiletilamina (4,9 ml, 28,2 mmol) en 100 ml de N,N-dimetilformamida se agita a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno durante 13 h. La mezcla de reacción se diluye con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con ácido clorhídrico 1 N (2x) y cloruro de sodio saturado (2x), se seca con sulfato de magnesio, y se concentra hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 20% en hexanos. La concentración proporciona 5-cloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina en forma de sólido de color amarillo claro (3,56 g). EM: m/z 396,0 (M+H).

Etapa B

5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

A una solución de 5-cloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (600 mg, 1,5 mmol) y 3-dimetilamino-1-propanol (1,03 g, 10 mmol) en 5 ml de dimetilsulfóxido a temperatura ambiente se le añade hidruro de sodio (al 60% en aceite mineral, 400 mg, 10 mmol). Esta mezcla se calienta a 50°C durante 30 min, y se enfría hasta la temperatura ambiente. Se añade agua para desactivar la reacción, y el producto se extrae con acetato de etilo (x2). Los extractos orgánicos combinados se lavan con cloruro de sodio saturado (x4), se secan con sulfato de magnesio y se concentran hasta obtener un residuo. El residuo se somete a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo hasta alcohol metílico al 20% en acetato de etilo. La concentración proporciona 5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina en forma de aceite incoloro (486 mg). EM: m/z 479,2 (M+H).

Ejemplo 1a

Sal de clorhidrato de 5-cloro-6-4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

El producto del Ejemplo 1, 5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina se disuelve en cloruro de metileno (50 ml) y se filtra. El filtrado se burbujea con cloruro de hidrógeno gaseoso. La concentración proporciona la sal de clorhidrato de de 5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina en forma de sólido blanco (540 mg).

Ejemplo 2 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

50

A hidruro de sodio (al 60% en aceite mineral, 2,3 g, 57,6 mmol) en 20 ml de dimetilsulfóxido a temperatura ambiente se le añade una solución de 3-(metilamino)propan-1-ol (5,14 g, 57,6 mmol) en 10 ml de dimetilsulfóxido. La solución se agita a temperatura ambiente durante 1 h y se le añade 5-cloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (5,7 g, 14,4 mmol). La mezcla se calienta a 60°C durante 3 h y se enfría hasta la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluye con acetato de etilo, y se lava con agua y cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se seca con sulfato de magnesio, y se concentra hasta obtener un residuo. El residuo se tritura con una pequeña cantidad de acetona, después con hexanos, y se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 100% hasta alcohol metílico al 100%. La concentración proporciona 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina en forma de sólido blanco (2,7 g). EM: m/z 465,1 (M+H).

\newpage

Ejemplo 2a

Clorhidrato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

El producto del Ejemplo 2 se disuelve en alcohol metílico al 10% en cloruro de metileno (150 ml) y se filtra. El filtrado se burbujea con cloruro de hidrógeno gaseoso. La concentración proporciona la sal de clorhidrato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina en forma de sólido de color amarillo claro (2,92 g).

Ejemplo 2B

Sal de fumarato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

A una suspensión espesa de clorhidrato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (7,50 g, 15,0 mmol) y agua (100 ml) se le añade una solución de hidróxido de sodio (10 N, 2,0 ml, 20 mmol) gota a gota. Después se añade ácido fumárico (3,48 g, 30 mmol). La mezcla se agita durante aproximadamente 15-20 min, y después se calienta hasta aproximadamente 65-75°C y se agita hasta que se disuelve todo el sólido. La solución se filtra y el filtrado se enfría hasta aproximadamente 0-5°C durante aproximadamente 1 h. La mezcla se agita durante 1 h y se filtra a continuación, y el sólido recogido se lava con agua fría e isopropanol. El sólido se seca en vacío a aproximadamente 60°C/10 mmHg durante aproximadamente 20 h, para dar lugar a un sólido blanco (6,54 g, 75%) en forma anhidra. Una porción del compuesto se coloca en una placa de secado a 80-100% de humedad relativa (HR) y temperatura ambiente durante aproximadamente 24 h. El compuesto absorbía 5,8% de agua, dando lugar a la formación de un dihidrato que es estable a temperatura ambiente y a 5-100% de humedad relativa (HR). ^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 8,43 (s, 1H), 6,86 (d, 2H, J = 10,2 Hz), 6,51 (s, 2H), 5,84 (m, 1H), 4,15 (t, 2H, J = 7,9 Hz), 3,04 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 2,57 (s, 3H), 2,08 (m, 2H), 1,33 (d, J = 6,7,
3H).

Este compuesto absorbe dos moles de agua a 5%-100% de HR, y se convierte en su dihidrato. Dihidrato de sal fumarato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina.

Ejemplo 2C

Sal de succinato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

Una mezcla de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (9,00 g, 19,4 mmol) y ácido succínico (2,75 g, 23,3 mmol) en agua (90 ml) se agita durante aproximadamente 15-20 min y después se calienta hasta aproximadamente 65-75°C. La solución se filtra y el filtrado se enfría hasta aproximadamente 0-5°C durante aproximadamente 1 h. La mezcla se agita durante aproximadamente 1 h y después se filtra, y el sólido recogido se lava con agua fría (2 x 9 ml) e isopropanol frío (9 ml). El sólido se seca en vacío a aproximadamente 40°C/10 mmHg durante aproximadamente 20 h, para dar lugar a un sólido blanco en forma anhidra (6,6 g, 73%). Una porción del compuesto se coloca en una placa de secado a 80-100% de humedad relativa (HR) y temperatura ambiente durante aproximadamente 24 h. El compuesto absorbía 5,8% de agua, para formar un dihidrato que es estable a temperatura ambiente y a 5-100% de humedad relativa
(HR).

^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 10,2 (bs, 1H), 8,26 (s, 1H), 6,80 (d, 2H, J = 10,5 Hz), 5,79 (m, 1H), 4,13 (t, 2H, J = 6,3 Hz), 3,03 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 2,57 (s, 3H), 2,35 (s, 4H), 2,07 (m, 2H), 1,27 (d, J = 6,0, 3H).

Este compuesto absorbe dos moles de agua a 5%-100% de RH, y se convierte en su dihidrato. Dihidrato de sal de succinato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina.

Los Ejemplos 3-21 y sus sales de clorhidrato se sintetizan de forma análoga al Ejemplo 1 y Ejemplo 1a.

Ejemplo 3 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-(2,2,2-trifluoroetil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 451,2 (M+H)

51

Ejemplo 3a

Sal de clorhidrato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-(2,2,2-trifluoroetil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina Ejemplo 4 5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-(2,2,2-trifluoroetil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 465,2 (M+H)

52

Ejemplo 4a

Sal de clorhidrato de 5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-(2,2,2-trifluoroetil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina Ejemplo 5 6-[4-(3-aminopropoxi)-2,6-difluorofenil]-5-cloro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 451,5 (M+H)

53

Ejemplo 6 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 534,4 (M+H)

54

Ejemplo 7 5-cloro-6-4-[3-(etilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 479,1 (M+H)

55

Ejemplo 8 5-cloro-6-(4-3-[etil(metil)amino]propoxi}-2,6-difluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 493,0 (M+H)

56

Ejemplo 9 5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-pirrolidin-1-ilpropoxi)fenil]-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 505,2 (M+H)

57

Ejemplo 10 5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-piperidin-1-ilpropoxi)fenil]-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 519,3 (M+H)

58

Ejemplo 11 5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-morfolin-4-ilpropoxi)fenil]-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 521,1 (M+H)

59

Ejemplo 11a

Clorhidrato de 5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-morfolin-4-ilpropoxi)fenil]-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina Ejemplo 12 6-[4-(3-azetidin-1-ilpropoxi)-2,6-difluorofenil]-5-cloro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 489,1 (M-H)

60

Ejemplo 13 5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2-fluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 461,2 (M+H)

61

Ejemplo 14 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[2-(metilamino)etoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 451,0 (M+H)

62

Ejemplo 15 5-cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 493,1 (M+H)

63

Ejemplo 16 5-cloro-6-{4-[2-(dimetilamino)etoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 465,1 (M+H)

64

Ejemplo 17 5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(2-morfolin-4-iletoxi)fenil]-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 504,9 (M-H)

65

Ejemplo 18 5-cloro-6-(4-{[3-(dimetilamino)propil]tio}-2,6-difluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 495,2 (M+H)

66

Ejemplo 19 2-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]etanol; 438,1 (M+H)

67

Ejemplo 20 3-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propan-1-ol; 452,1 (M+H)

68

Ejemplo 21 4-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]butan-1-ol; 463,9 (M-H)

69

Ejemplo 22 N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{1},N^{3},N^{3}-trimetilpropano-1,3-diamina; 492,1 (M+H)

70

A una mezcla de 5-cloro-6-(2,4,6-trifluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (200 mg, 0,51 mmol) en N,N,N'-trimetil-1,3-propanodiamina (3,0 g, 25,8 mmol) se le añade hidruro de sodio (100 mg, 2,5 mmol). La mezcla resultante se calienta a 100°C durante 16 h. La reacción se desactiva después con agua y se extrae con acetato de etilo (x2). Los extractos orgánicos combinados se lavan con cloruro de sodio saturado, se secan con sulfato de magnesio y se concentran hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 100% hasta alcohol metílico al 50% en acetato de etilo hasta alcohol metílico al 100%. La concentración proporciona N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{1},N^{3},N^{3}-trimetilpropano-1,3-diamina (20 mg) en forma de aceite amarillo. EM: m/z 492,1 (M+H).

Los Ejemplos 23-24 se sintetizan de forma análoga al Ejemplo 22.

Ejemplo 23 N^{1}-[4-(5-cloro-7-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{3},N^{3}-dimetilpropano-1,3-diamina; 478,2 (M+H)

71

Ejemplo 24 N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{2},N^{2}-dimetiletano-1,2-diamina; 464,1 (M+H)

72

Ejemplo 25 5-bromo-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

73

Etapa A

5,7-dibromo-6-(2,4,6-trifluorofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina

Una mezcla de 5,7-dihidroxi-6-(2,4,6-trifluorofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina (282 mg, 1,0 mmol) y oxibromuro de fósforo (2,0 g, 7,0 mmol) se calienta a 120°C durante 4 h. El exceso de oxibromuro de fósforo se elimina después en vacío. El residuo se disuelve en cloruro de metileno y se lava con agua y cloruro de sodio saturado (x3). La capa orgánica se seca con sulfato de magnesio, se filtra a través de silicato de magnesio hidratado, y se concentra. Se obtiene 5,7-bibromo-6-(2,4,6-trifluorofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina en forma de semisólido de color canela (380 mg), que se utiliza directamente en la siguiente etapa sin purificación ulterior. EM: m/z 408,9 (M+H).

\newpage

Etapa B

5-bromo-6-(2,4,6-trifluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

Una mezcla de 5,7-dibromo-6-(2,4,6-trifluorofenil)[1,2,4]triazolo[1,5a]pirimidina (320 mg, 0,78 mmol), clorhidrato de (1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletilamina (235 mg, 1,57 mmol), y diisopropiletilamina (260 mg, 2,0 mmol) en 5 ml de N,N-dimetilformamida se agita a temperatura ambiente durante 18 h. Se añade agua para desactivar la reacción, y el producto se extrae con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavan con cloruro de sodio saturado (x3), se secan con sulfato de magnesio y se concentran hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de hexanos/acetato de etilo 9:1 hasta hexanos/acetato de etilo 2:1. La concentración proporciona 5-bromo-6-(2,4,6-trifluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina en forma de sólido de color canela claro (60 mg, p.f. 95-97°C). EM: m/z 440,0, 442,0 (M+H).

Etapa C

5-bromo-6-4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

A una solución de 5-bromo-6-(2,4,6-trifluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (44 mg, 0,1 mmol) y 3-dimetilamino-1-propanol (51 mg, 0,5 mmol) en 1 ml de dimetilsulfóxido a temperatura ambiente se le añade hidruro de sodio (al 60% en aceite mineral, 20 mg, 0,5 mmol). La mezcla se calienta a 60°C durante 2 h, y se enfría hasta la temperatura ambiente. Se añade agua para desactivar la reacción, y el producto se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con cloruro de sodio saturado (x3), se seca con sulfato de magnesio y se concentra hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo hasta alcohol metílico al 30% en acetato de etilo. La concentración proporciona 5-bromo-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina en forma de sólido de color canela claro (41 mg, p.f. 40-42°C). EM: m/z 523,1, 525,1 (M+H).

Ejemplo 26 5-cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

74

Etapa A

2-(2,6-difluoro-4-hidroxifenil)malonato de dietilo

A una solución de 2-(2,6-difluoro-4-metoxifenil)malonato de dietilo (2,11 g, 7,0 mmol) en 60 ml de cloruro de metileno a -78°C se le añade tribromuro de boro (2,65 ml, 28 mmol) gota a gota. La mezcla se agita después a -78°C durante 10 minutos, se calienta hasta 0°C, y se agita a 0°C durante 1 h. Se añade lentamente una solución acuosa de bicarbonato de sodio al 5%, para desactivar la reacción. El producto se extrae con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavan con cloruro de sodio saturado, se secan con sulfato de magnesio y se concentran hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 10% en hexanos hasta acetato de etilo al 30% en hexanos. La concentración proporciona 2-(2,6-difluoro-4-hidroxifenil)malonato de dietilo en forma de aceite incoloro (1,91 g). EM: m/z 287,2 (M-H).

Etapa B

2-(2,6-difluoro-4-{[(trifluorometil)sulfonil]oxi}fenil)malonato de dietilo

A una solución 2-(2,6-difluoro-4-hidroxifenil)malonato de dietilo (288 mg, 1,0 mmol) y trietilamina (505 mg, 5,0 mmol) en 5 ml de cloruro de metileno a temperatura ambiente se le añade anhídrido trifluorometanosulfónico (1,41 g, 5,0 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añade lentamente una solución acuosa de bicarbonato de sodio al 5%, para desactivar la reacción. El producto se extrae con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavan con cloruro de sodio saturado, se secan con sulfato de magnesio y se concentran hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de hexanos hasta acetato de etilo al 15% en hexanos. La concentración proporciona 2-(2,6-difluoro-4-{[(trifluorometil)sulfonil]oxi}fenil)malonato de dietilo en forma de aceite incoloro (361 mg). EM: m/z 419,2 (M-H).

Etapa C

2-[2,6-difluoro-4-(4-hidroxibutil)fenil]malonato de dietilo

A una solución 0,5 M de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano (9-BBN) en tetrahidrofurano (95 ml, 47,6 mmol) se le añade, gota a gota, 3-buteno-1-ol (4,1 ml, 47,6 mmol), y la mezcla se agita en atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante 6 h. La solución resultante se transfiere empleando a continuación una aguja con dos salidas a una mezcla de 2-(2,6-difluoro-4-{[(trifluorometil)sulfonil]oxi}fenil)malonato de dietilo (10,0 g, 23,8 mmol), sulfato de potasio (10,1 g, 47,6 mmol) y tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (825 mg, 0,714 mmol) en 40 ml de dioxano a presión con nitrógeno. La mezcla se calienta después a 90°C durante 8 h. La reacción se enfría hasta la temperatura ambiente, y se le añade trimetilamina-N-óxido (3,57 g, 47,6 mmol). La reacción se calienta a 80°C durante 1 h y se enfría hasta la temperatura ambiente. Se añade acetato de etilo para diluir la reacción. La fase orgánica se lava con cloruro de sodio saturado (x2), se seca con sulfato de magnesio y se concentra hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 10% en hexanos hasta acetato de etilo al 50% en hexanos. La concentración proporciona 2-[2,6-difluoro-4-(4-hidroxibutil)fenil]malonato de dietilo en forma de aceite de color marrón (3,5 g). EM: m/z 345,2 (M+H).

Etapa D

2-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil]malonato de dietilo

A una solución de 2-[2,6-difluoro-4-(4-hidroxibutil)fenil]malonato (2,0 g, 5,8 mmol) y trietilamina (2,43 ml, 17,4 mmol) en 15 ml de cloruro de metileno a 0°C se le añade cloruro de metanosulfonilo (0,898 ml, 11,6 mmol). La mezcla resultante se deja calentar hasta la temperatura ambiente en 1,5 h. La mezcla se lava con ácido clorhídrico al 10%, bicarbonato de sodio saturado y cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se seca con sulfato de magnesio y se concentra hasta obtener un aceite amarillo. El aceite amarillo así obtenido se agita con dietilamina 2,0 M en tetrahidrofurano (56 ml, 112 mmol) a temperatura ambiente durante 16 h, y después se concentra. El residuo se diluye con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con agua y cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio y se concentra hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 100% hasta alcohol metílico al 50% en acetato de etilo hasta alcohol metílico al 100%. La concentración proporciona 2-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil]malonato de dietilo en forma de aceite amarillo (1,2 g). EM: m/z 372,2 (M+H).

Etapa E

6-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina-5,7-diol

Una mezcla de 2-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil]malonato de dietilo (1,0 g, 2,7 mmol), 3-amino-1,2,4-triazol (250 mg, 3,0 mmol) y tributilamina (0,71 ml, 3,0 mmol) se agita en atmósfera de nitrógeno a 160°C durante 16 h, y se enfría hasta la temperatura ambiente. La mezcla se agita con 20 ml de hexanos. El material precipitado se recoge por filtración y se lava con hexanos, para dar lugar a 6-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina-5,7-diol en forma de sólido blanco (795 mg). EM: m/z 362,1 (M-H).

Etapa F

5-cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina

Una mezcla de 6-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina-5,7-diol (795 mg, 2,19 mmol) en 4 ml de oxicloruro de fósforo se calienta a 115°C durante 4 h. El exceso de oxicloruro de fósforo se elimina en vacío, y el residuo resultante seca después en alto vacío, para dar lugar a un sólido amarillo (1,13 g), que se utiliza sin purificación ulterior. Una mezcla del sólido anterior (300 mg, 0,75 mmol), clorhidrato de (1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletilamina (675 mg, 4,51 mmol), y N,N-diisopropiletilamina (0,787 ml, 4,51 mmol) en 4 ml de N,N-dimetilformamida se agita a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla de reacción se diluye con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con bicarbonato de sodio saturado y cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 100% hasta alcohol metílico al 50% en acetato de etilo hasta alcohol metílico al 100%. La concentración proporciona 5-cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina en forma de aceite de color amarillo claro (44 mg). EM: m/z 477,2 (M+H).

Los Ejemplos 27-29 se sintetizan de forma análoga al Ejemplo 1, partiendo de 5-cloro-6-(2,3,6-trifluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina.

Ejemplo 27 5-cloro-6-{3-[2-(dimetilamino)etoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 465,1 (M+H)

75

Ejemplo 28 5-cloro-6-{3-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 479,1 (M+H)

76

Ejemplo 29 5-cloro-6-{3-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina; 493,1 (M+H)

77

Ejemplo 30 3-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propan-1-ol

78

Etapa A

3-cicloheptil-3-oxo-2-(2,4,6-trifluorofenil)propanoato de etilo

Una mezcla de ácido 2,4,6-trifluorofenilacético (570 mg, 3,0 mmol), yodoetano (1,56 g, 10 mmol) y carbonato de potasio (1,38 g, 10 mmol) en 5 ml de dimetilsulfóxido se agita a 50°C durante 3 h, y se enfría hasta la temperatura ambiente. La mezcla se reparte entre éter dietílico y agua. La capa orgánica se lava con agua y cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio y se filtra a través de silicato de magnesio hidratado. El filtrado se concentra, para dar lugar a 2,4,6-trifluorofenilacetato de etilo en forma de aceite amarillo claro (581 mg, 2,66 mmol).

Una mezcla de ácido cicloheptanocarboxílico (5,0 g, 35,2 mmol) en 25 ml de cloruro de tionilo se somete a reflujo durante 1 h, y se concentra. El cloruro de ácido cicloheptanocarboxílico crudo así obtenido se utiliza directamente en la siguiente etapa.

Una solución de 2,4,6-trifluorofenilacetato de etilo (436 mg, 2,0 mmol) en 3 ml de tetrahidrofurano se enfría hasta -78°C y se le añade diisopropilamida de litio (2,0 M en heptano/tetrahidrofurano/etilbenceno, 1,0 ml, 2,0 mmol), gota a gota, con agitación. La mezcla se agita a -78°C durante 1 h, y se añade cloruro de ácido cicloheptanocarboxílico (321 mg, 2,0 mmol) gota a gota. La mezcla se calienta hasta la temperatura ambiente y se acidifica con 2 ml de ácido clorhídrico 1,0 N. El producto se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de hexanos hasta acetato de etilo al 10% en hexanos. La concentración proporciona 3-cicloheptil-3-oxo-2-(2,4,6-trifluorofenil)propanoato de etilo en forma de aceite incoloro (410 mg). EM: m/z 341,2 (M-H).

Etapa B

7-cicloheptil-6-(2,4,6-trifluorofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-5-ol

Una mezcla de 3-cicloheptil-3-oxo-2-(2,4,6-trifluorofenil)propanoato de etilo (342 mg, 1,0 mmol), 3-amino-1,2,4-triazol (84 mg, 1,0 mmol) y tributilamina (185 mg, 1,0 mmol) se agita en atmósfera de nitrógeno a 160°C durante 2,5 h y se enfría hasta la temperatura ambiente. La mezcla se disuelve en acetato de etilo y la capa orgánica se lava con ácido clorhídrico 1,0 N y cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra hasta obtener un sólido. El sólido así obtenido se lava con hexanos, para dar lugar a 7-cicloheptil-6-(2,4,6-trifluorofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-5-ol crudo en forma de sólido de color canela claro (225 mg). EM: m/z 363,2 (M+H).

Etapa C

5-cloro-7-cicloheptil-6-(2,6-difluoro-4-{3-[(4-metoxibencil)oxi]propoxi}fenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina;

A una solución de 7-cicloheptil-6-(2,4,6-trifluorofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-5-ol (362 mg, 1,0 mmol) y 3-[(4-metoxibencil)oxi]-1-propanol (490 mg, 2,5 mmol) en 4,0 ml de dimetilsulfóxido a temperatura ambiente se le añade hidruro de sodio (al 60% en aceite mineral, 120 mg, 3,0 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 3 h, y se reparte entre acetato de etilo y ácido clorhídrico 1,0 N. La solución orgánica se lava con cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio y se concentra hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 66% en hexanos hasta alcohol metílico al 5% en acetato de etilo. La concentración proporciona 7-cicloheptil-6-(2,6-difluoro-4-{3-[(4-metoxibencil)oxi]propoxi}-fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-5-ol en forma de aceite amarillo (820 mg).

Al compuesto anterior, 7-cicloheptil-6-(2,6-difluoro-4-{3-[(4-metoxibencil)oxi]-propoxi}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-5-ol (820 mg), se le añaden 5 ml de oxicloruro de fósforo y 2 ml de N,N-dietilanilina, y la mezcla se calienta en condiciones de reflujo durante 1 h. El exceso de oxicloruro de fósforo se elimina en vacío, y el residuo resultante se reparte entre cloruro de metileno y ácido clorhídrico 1 N. La capa orgánica se lava con cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de hexanos hasta acetato de etilo al 20% en hexanos. La concentración proporciona 5-cloro-7-cicloheptil-6-(2,6-difluoro-4-{3-[(4-metoxibencil)oxi]propoxi}fenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina en forma de aceite amarillo (180 mg). EM: m/z 557,2 (M+H).

Etapa D

A una solución de 5-cloro-7-cicloheptil-6-(2,6-difluoro-4-{3-[(4-metoxibencil)oxi]propoxi}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina (56 mg, 0,1 mmol) en 4 ml de cloruro de metileno y 0,2 ml de agua se le añade 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona (100 mg, 0,44 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 20 minutos, después se lava con solución acuosa de bicarbonato de sodio saturado (x2), se seca con sulfato de magnesio, y se concentra hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 33% en hexanos hasta acetato de etilo al 66% en hexanos. La concentración proporciona 3-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propan-1-ol en forma de sólido de color amarillo claro (34 mg). EM: m/z 437,2 (M+H).

Ejemplo 31 3-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]-N,N-dimetilpropan-1-amina;

\vskip1.000000\baselineskip

79

A una solución de 7-cicloheptil-6-(2,4,6-trifluorofenil)[1,2,4]triazolo[1,5a]pirimidin-5-ol (396 mg, 1,1 mmol) y 3-dimetilamino-1-propanol (561 mg, 5,5 mmol) en 5 ml de dimetilsulfóxido a temperatura ambiente se le añade hidruro de sodio (al 60% en aceite mineral, 200 mg, 5 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 3 h y se reparte entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se neutraliza con ácido clorhídrico 1 N hasta pH 8. Parte del producto deseado precipita de la solución, y se recoge por filtración. La solución orgánica se lava con cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio y se concentra hasta obtener un residuo. El residuo se combina con el producto sólido, para proporcionar 7-cicloheptil-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi-2,6-difluorofenil}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-5-ol crudo. EM: m/z 446,1 (M+H).

Al producto crudo anterior, 7-cicloheptil-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi-2,6-difluorofenil}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-5-ol, se le añaden 2 ml de oxicloruro de fósforo y 1 ml de N,N-dietilanilina, y la mezcla se calienta a 110°C durante 1 h. El exceso de oxicloruro de fósforo se elimina en vacío, y el residuo resultante se reparte entre acetato de etilo y solución acuosa de carbonato de sodio al 5%. La capa orgánica se lava con cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio y se concentra hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de cloruro de metileno hasta alcohol metílico al 20% en cloruro de metileno. La concentración proporciona 3-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]-N,N-dimetilpropan-1-amina en forma de sólido de color canela (105 mg). EM: m/z 464,0 (M+H).

Ejemplo 32 Sal de ácido trifluoroacético de 3-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]-N-metilpropan-1-amina

80

Etapa A

3-[4-(7-cicloheptil-5-hidroxi[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]-propil(metil)carbamato de ter-butilo

A una mezcla de hidruro de sodio (al 60% en aceite mineral, 334 mg, 8,35 mmol) en 10 ml de dimetilsulfóxido a temperatura ambiente se le añade 3-(metilamino)propan-1-ol (744 mg, 8,35 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 1 h, y se le añade una solución de 7-cicloheptil-6-(2,4,6-trifluorofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-5-ol (1,12 g, 3,1 mmol) en 10 ml de dimetilsulfóxido. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 6 h, y se le añade una solución de dicarbonato de di-ter-butilo (1,82 g, 8,35 mmol) en 10 ml de dimetilsulfóxido. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 18 h y se diluye con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con agua (x2) y cloruro de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio y se concentra hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 30% en hexanos hasta acetato de etilo al 70% en hexanos. La concentración proporciona 3-[4-(7-cicloheptil-5-hidroxi[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propil(metil)carbamato de ter-butilo en forma de sólido amarillo (876 mg). EM: m/z 530,4 (M-H).

Etapa B

3-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]-propil(metil)carbamato de ter-butilo

A 3-[4-(7-cicloheptil-5-hidroxi[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]-propil(metil)carbamato de ter-butilo (876 mg, 1,64 mmol) se le añaden 5,8 ml de oxicloruro de fósforo y 2,9 ml de N,N-dietilanilina, y la mezcla se calienta a 90°C durante 3 h. El exceso de oxicloruro de fósforo se elimina en vacío, y el residuo resultante se diluye con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con agua con hielo y cloruro de sodio saturado (x2), se seca con sulfato de magnesio y se concentra hasta obtener un residuo. El residuo se cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de hexanos hasta acetato de etilo al 40% en hexanos. La concentración proporciona 3-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propil(metil)carbamato de ter-butilo en forma de aceite amarillo claro (452 mg). EM: m/z 550,1 (M+H).

\newpage

Etapa C

A una solución de 3-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propil(metil)carbamato de ter-butilo (452 mg, 0,82 mmol) en 4 ml de cloruro de metileno se le añaden 2,3 ml de ácido trifluoroacético. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 18 h, y se concentra en vacío, para dar lugar a 3-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]-N-metilpropan-1-amina como sal del ácido trifluoroacético, en forma de semisólido de color amarillo (400 mg). EM: m/z 450,2 (M+H).

Ejemplo 33 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4] triazol[1,5-a]pirimidin-7-amina; 465,2 (M+H)

81

El producto, 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina se sintetiza utilizando las condiciones del Ejemplo 1 y sustituyendo el clorhidrato de (1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletilamina con clorhidrato de (1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletilamina.

Los Ejemplos 34-37 pueden sintetizarse de forma análoga a la del Ejemplo 30.

Ejemplo 34 3-[4-(5-cloro-7-ciclooctil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propan-1-ol

82

El producto del Ejemplo puede sintetizarse utilizando las condiciones del Ejemplo 30 y sustituyendo el ácido cicloheptanocarboxílico con ácido ciclooctanocarboxílico.

Ejemplo 35 3-[4-(5-cloro-7-ciclohexil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propan-1-ol;

83

El producto del Ejemplo puede sintetizarse utilizando las condiciones del Ejemplo 30 y sustituyendo el ácido cicloheptanocarboxílico con ácido ciclohexanocarboxílico.

Ejemplo 36 2-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]etanol

84

El producto del Ejemplo puede sintetizarse utilizando las condiciones del Ejemplo 30 y sustituyendo el 1,3-propanodiol con etilenglicol.

Ejemplo 37 4-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]butan-1-ol

El producto del Ejemplo puede sintetizarse utilizando las condiciones del Ejemplo 30 y sustituyendo el 1,3-propanodiol con 1,4-butanodiol.

85

Los Ejemplos 38-41 pueden sintetizarse de forma análoga a la del Ejemplo 31.

Ejemplo 38 N-{3-[4-(5-cloro-7-ciclooctil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propil}-N,N-dimetilamina

86

El producto del Ejemplo puede sintetizarse utilizando las condiciones del Ejemplo 31, y sustituyendo el ácido cicloheptanocarboxílico con ácido ciclooctanocarboxílico.

Ejemplo 39 N-{3-[4-(5-cloro-7-ciclohexil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propil}-N,N-dimetilamina

87

El producto del Ejemplo puede sintetizarse utilizando las condiciones del Ejemplo 31 y sustituyendo el ácido cicloheptanocarboxílico con ácido ciclohexanocarboxílico.

Ejemplo 40 N-{2-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]etil}-N,N-dimetilamina

88

El producto del Ejemplo puede sintetizarse utilizando las condiciones del Ejemplo 31 y sustituyendo el 3-dimetilamino-1-propanol con 2-(dimetilamino)etanol.

Ejemplo 41 N-{4-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]butil}-N,N-dimetilamina)

89

El producto del Ejemplo puede sintetizarse utilizando las condiciones del Ejemplo 31 sustituyendo el 3-dimetilamino-1-propanol con 4-(dimetilamino)-1-butanol.

Los Ejemplos 42-45 pueden sintetizarse de forma análoga a la del Ejemplo 32.

Ejemplo 42 N-{3-[4-(5-cloro-7-ciclooctil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propil}-N-metilamina

\vskip1.000000\baselineskip

90

El producto del Ejemplo puede sintetizarse utilizando las condiciones del Ejemplo 32, sustituyendo el ácido cicloheptanocarboxílico con ácido ciclooctanocarboxílico.

Ejemplo 43 N-{3-[4-(5-cloro-7-ciclohexil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propil}-N-metilamina

91

El producto del Ejemplo puede sintetizarse utilizando las condiciones del Ejemplo 32, sustituyendo el ácido cicloheptanocarboxílico con ácido ciclohexanocarboxílico.

Ejemplo 44 N-{2-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]etil}-N-metilamina

92

El producto del Ejemplo puede prepararse utilizando las condiciones del Ejemplo 32, sustituyendo el 3-(metilamino)propan-1-ol con 2-(metilamino)etanol.

Ejemplo 45 N-{4-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]butil}-N-metilamina)

93

El producto del Ejemplo puede prepararse utilizando las condiciones del Ejemplo 32, sustituyendo el 3-(metilamino)propan-1-ol con 4-(metilamino)-1-butanol.

Las mediciones por XRD en polvo indican que la sal de succinato anhidra e hidratada de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (Ejemplo 2c) y la sal de fumarato anhidra e hidratada de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina (Ejemplo 2b) obtenidas son cristalinas y tienen diferentes estructuras cristalinas. Se utiliza un difractómetro de rayos X Philips X'Pert PW3040 para obtener los datos de difracción. La intensidad de difracción se registra cada 0,01° o 0,02° entre el ángulo 2-theta de 4° y 40°. Se utiliza un modo de barrido \theta/2\theta normal. La Tabla 20 presenta la lista de las posiciones de los picos o de los ángulos 2-theta de los correspondientes perfiles de XRD en polvo.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 20 Posiciones de los picos de la sal de succinato (Ejemplo 2c) y de la sal de fumarato (Ejemplo 2b)

94

\newpage

TABLA 20

(Continuación)

95

\newpage

TABLA 20

(Continuación)

96

	* w = débil, b = amplio
	Los picos muy débiles se marcan con (w)
	Los picos relativamente amplios se marcan con (b).

Claims

1. Compuesto de Fórmula (I):

97

en la que:

R^{1} se selecciona de entre

98

y cicloalquilo C_{6}-C_{8} opcionalmente sustituido con R^{8};

R^{2} es un radical del grupo

\vskip1.000000\baselineskip

99

\vskip1.000000\baselineskip

n es un número entero de 2, 3 ó 4;

X es Cl o Br;

Y es O, S, CH_{2} o NR^{4};

Q se selecciona de entre -NR^{6}R^{7} y -OH;

L^{1} y L^{2} son, cada uno independientemente, H, F, Cl, Br o CF_{3};

R^{3} es CF_{3} o C_{2}F_{5};

R^{4} y R^{5} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3};

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{6} y R^{7} forman, cuando se toman opcionalmente junto con el átomo de nitrógeno al que cada uno está unido, un anillo heterocíclico saturado de 4 a 6 miembros con 1-2 átomos de nitrógeno y 0-1 átomos de oxígeno o 0-1 átomos de azufre, y opcionalmente sustituido con R^{8};

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\newpage

2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{2} es

\vskip1.000000\baselineskip

100

\vskip1.000000\baselineskip

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. Compuesto según la reivindicación 1 ó 2, en el que Y es O.

4. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que n es 3.

5. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que Q es -NR^{6}R^{7}.

6. Compuesto según la reivindicación 5, en el que R^{6} es H y R^{7} es H o metilo.

7. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que L^{1} es F y L^{2} es H o F.

8. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que X es Cl.

9. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que R^{3} es CF_{3},

10. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que R^{5} es H o metilo.

11. Compuesto según la reivindicación 1, en el que

R^{2} es

\vskip1.000000\baselineskip

101

\vskip1.000000\baselineskip

n = 3;

X es Cl o Br;

Y es O;

R^{3} es CF_{3};

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{5} es H o metilo;

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

L^{1} es F;

L^{2} es H o F;

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

12. Compuesto según la reivindicación 1, en el que:

R^{2} es

\vskip1.000000\baselineskip

102

\vskip1.000000\baselineskip

n es 3;

X es Cl;

Y es O;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{6} es metilo;

R^{7} es H o metilo;

L^{1} es F;

L^{2} es F;

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

13. Compuesto según la reivindicación 1, en el que

R^{2} es

\vskip1.000000\baselineskip

103

\vskip1.000000\baselineskip

X es Cl;

n es 3;

Y es O;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{3} es CF_{3},

R^{5} es H o metilo,

R^{6} es metilo;

R^{7} es H o metilo;

L^{1} es F;

L^{2} es F;

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\newpage

14. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, representado por la fórmula (Ia)

104

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

15. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, representado por la fórmula (Ib)

105

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

16. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8} opcionalmente sustituido con R^{8}, o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

17. Compuesto según la reivindicación 1, en el que:

R^{1} es cicloalquilo C_{6}-C_{8};

R^{2} es

106

n es 3;

X es Cl;

Y es O;

Q es -NR^{6}R^{7};

R^{6} es metilo;

R^{7} es H o metilo;

L^{1} es F;

L^{2} es F;

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\newpage

18. Compuesto según la reivindicación 1, que es uno de los siguientes:

5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]-triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-(2,2,2-trifluoroetil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-(2,2,2-trifluoroetil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

6-[4-(3-aminopropoxi)-2,6-difluorofenil]-5-cloro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{4-[3-(etilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-(4-{3-[etil(metil)amino]-propoxi}-2,6-difluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-pirrolidin-1-ilpropoxi)fenil]-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-piperidin-1-ilpropoxi)fenil]-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-morfolin-4-ilpropoxi)fenil]-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

6-[4-(3-azetidin-1-ilpropoxi)-2,6-difluorofenil]-5-cloro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2-fluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[2-(metilamino)etoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-4-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{4-[2-(dimetilamino)etoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(2-morfolin-4-iletoxi)fenil]-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-(4-{[3-(dimetilamino)propil]-tio}-2,6-difluorofenil)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

2-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]etanol;

3-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propan-1-ol;

4-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]butan-1-ol;

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{1},N^{3},N^{3}-trimetilpropano-1,3-diamina;

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{3},N^{3}-dimetilpropano-1,3-diamina;

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{2},N^{2}-dimetiletano-1,2-diamina;

5-bromo-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{3-[2-(dimetilamino)etoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{3-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{3-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

3-[4-(5-cloro-7-cicloheptil[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]-N-metilpropan-1-amina;

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

6-[4-(3-aminopropoxi)-2,6-difluorofenil]-5-cloro-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(4-metilpiperazin-1-il)propoxi]fenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{4-[3-(etilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-(4-{3-[etil(metil)amino]propoxi}-2,6-difluorofenil)-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-pirrolidin-1-ilpropoxi)fenil]-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(3-morfolin-4-ilpropoxi)fenil]-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

6-[4-(3-azetidin-1-ilpropoxi)-2,6-difluorofenil]-5-cloro-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2-fluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[2-(metilamino)etoxi]fenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{4-[2-(dimetilamino)etoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-[2,6-difluoro-4-(2-morfolin-4-iletoxi)fenil]-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-(4-{[3-(dimetilamino)propil]tio}-2,6-difluorofenil)-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

2-[4-(5-cloro-7-{[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]etanol;

3-[4-(5-cloro-7-{[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]propan-1-ol;

4-[4-(5-cloro-7-{[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenoxi]butan-1-ol;

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{1},N^{3},N^{3}-trimetilpropano-1,3-diamina;

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{3},N^{3}-dimetilpropano-1,3-diamina;

N^{1}-[4-(5-cloro-7-{[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-6-il)-3,5-difluorofenil]-N^{2},N^{2}-dimetiletano-1,2-diamina;

5-bromo-6-{4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{4-[4-(dimetilamino)butil]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{3-[2-(dimetilamino)etoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{3-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{3-[4-(dimetilamino)butoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1R)-2,2,2-trifluoro-1-etiletil]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-4-[3-(dimetilamino)propoxi]-2,6-difluorofenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

o

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos

19. Compuesto según la reivindicación 1, que es uno de los siguientes:

clorhidrato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

sal de succinato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

sal de fumarato 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

dihidrato de sal de succinato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina;

o

dihidrato de sal de fumarato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina.

20. Polimorfo de la sal de succinato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina que tiene los valores en grados del ángulo 2-theta en difracción de rayos X (XRD) expuestos en la Tabla 20.

21. Polimorfo de la sal de fumarato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina que tiene los valores en grados del ángulo 2-theta en difracción de rayos X (XRD) expuestos en la Tabla 20.

22. Polimorfo del dihidrato de la sal de succinato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina que tiene los valores en grados del ángulo 2-theta en difracción de rayos X (XRD) expuestos en la Tabla 20.

23. Polimorfo del dihidrato de la sal de fumarato de 5-cloro-6-{2,6-difluoro-4-[3-(metilamino)propoxi]fenil}-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil][1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-amina que tiene los valores en grados del ángulo 2-theta en difracción de rayos X (XRD) expuestos en la Tabla 20.

24. Utilización de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para el tratamiento o la inhibición del crecimiento de células de tumores cancerosos y enfermedades asociadas en un mamífero que lo necesite.

25. Utilización de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para la estimulación de la polimerización de tubulina en un sistema que contiene tubulina.

26. Utilización de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para la estabilización de microtúbulos en un sistema que contiene tubulina.

27. Utilización de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de tumores que expresan multirresistencia a fármacos (MDR) o que son resistentes debido a MDR en un mamífero que lo necesite.

28. Utilización de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para el tratamiento, la inhibición del crecimiento, o la erradicación de un tumor en un mamífero que lo necesite, en el que dicho tumor es resistente a por lo menos un agente quimioterápico.

29. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

\newpage

30. Procedimiento para la preparación de un compuesto de Fórmula (I)

\vskip1.000000\baselineskip

107

\vskip1.000000\baselineskip

en la que:

R^{1} es

\vskip1.000000\baselineskip

108

\vskip1.000000\baselineskip

R^{2} es un radical

\vskip1.000000\baselineskip

109

\vskip1.000000\baselineskip

n es un número entero de 2, 3 o 4;

X es Cl o Br;

Y es O, S, o NR^{4};

Q se selecciona a partir de -NR^{6}R^{7} y -OH;

L^{1} y L^{2} son, cada uno independientemente, H, F, Cl, Br o CF_{3};

R^{3} es CF_{3} o C_{2}F_{5};

R^{4} y R^{5} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3};

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{6} y R^{7} forman, cuando se toman opcionalmente junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, un anillo heterocíclico saturado de 4 a 6 miembros con 1-2 átomos de nitrógeno y 0-1 átomos de oxígeno o 0-1 átomos de azufre, y opcionalmente sustituido con R^{8};

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3};

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

\newpage

que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II)

110

en la que L^{3} es un grupo saliente, con un compuesto de fórmula HY-(CH_{2})_{n}Q en presencia de una base fuerte, opcionalmente en presencia de un disolvente aprótico, para dar lugar a un compuesto de Fórmula (I), y si se desea, aislarlo en forma de sal farmacéuticamente aceptable.

31. Procedimiento para la preparación de un compuesto de Fórmula (I)

111

en la que:

R^{1} es

112

R^{2} es un radical del grupo

113

n es un número entero de 2, 3 ó 4;

X es Cl o Br;

Y es CH_{2};

Q es -NR^{6}R^{7};

L^{1} y L^{2} son, cada uno independientemente, H, F, Cl, Br o CF_{3};

R^{3} es CF_{3} o C_{2}F_{5};

R^{5} es H o alquilo C_{1}-C_{3};

R^{6} y R^{7} son, cada uno independientemente, H o alquilo C_{1}-C_{3}; o

R^{8} es alquilo C_{1}-C_{3}; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende las etapas siguientes:

a) hacer reaccionar el diéster (III)

114

con 2-amino-1,3,4-triazol en presencia de una base, para dar lugar a un compuesto (V) de fórmula

115

b) halogenar el compuesto (V) con POX_{3}, para dar lugar al 5,7-dihalo-compuesto (VI)

116

c) hacer reaccionar el 5,7-dihalo-compuesto (VI) con la amina (VII)

117

en presencia de una base en un disolvente aprótico, para dar lugar al compuesto correspondiente de Fórmula (I) en el que Y es -CH_{2}-, y si se desea, aislarlo en forma de sal farmacéuticamente aceptable.

32. Procedimiento para la preparación de una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de Fórmula (I)

\vskip1.000000\baselineskip

118

\newpage

en la que:

R^{1} es

119

R^{2} es un radical

120

n es un número entero 3;

X es Cl;

Y es O;

Q es -NR^{6}R^{7};

L^{1} y L^{2} son, cada uno, F;

R^{3} es CF_{3};

R^{5} es CH_{3};

R^{6} es H;

R^{7} es CH_{3};

que comprende hacer reaccionar un compuesto de Fórmula (I)

121

en la que R^{1}, R^{2} y X se han definido anteriormente en la presente memoria, con un ácido que forma una sal farmacéuticamente aceptable, opcionalmente en presencia de una base fuerte en un disolvente, para proporcionar una sal de Fórmula (I) farmacéuticamente aceptable.