ES2280773T3 - Nuevos derivados de purina. - Google Patents
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Abstract
Compuesto de fórmula I: (Ver fórmula) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: uno de entre R1 y R2 es metilo, etilo o isopropilo, y el otro es H; R3 y R4 son, cada uno independientemente, H, alquilo C1-C6 ramificado o no ramificado, o arilo, y en la que por lo menos uno de entre R3 y R4 es diferente de H; R5 es un grupo alquilo C1-C5 ramificado o no ramificado o un grupo cicloalquilo C1-C6, cada uno de los cuales puede sustituirse opcionalmente con uno o más grupos OH; R6, R7, R8 y R9 son cada uno independientemente H, halógeno, NO2, OH, OMe, CN, NH2, COOH, CONH2, o SO2NH2.
Description
Nuevos derivados de purina.
La presente invención se refiere a nuevos
derivados de purina 2,6,9-sustituidos y a sus
aplicaciones biológicas. Particularmente, la invención se refiere a
derivados de purina que presentan propiedades antiproliferativas
que resultan útiles en el tratamiento de trastornos proliferativos,
tales como cáncer, leucemia, psoriasis y similares.
La iniciación, el desarrollo, y la finalización
del ciclo celular en mamíferos se regula mediante diversos
complejos de quinasa dependiente de ciclina (CDK), que resultan
críticos para el crecimiento de las células. Estos complejos
comprenden por lo menos una subunidad catalítica (la CDK misma) y
una subunidad reguladora (ciclina). Algunos de los complejos más
importantes para la regulación del ciclo celular incluyen ciclina A
(CDK1, también conocida como cdc2 y CDK2), ciclina
B1-B3 (CDK1), ciclina D1-D3 (CDK2,
CDK4, CDK5, CDK6) y ciclina E (CDK2). Cada uno de estos complejos
se encuentra implicado en una fase particular del ciclo celular.
Sin embargo, no todos los elementos de la familia de CDK se
encuentran implicados exclusivamente en el control del ciclo
celular. De esta manera, la CDK7, la CDK8, y la CDK9 se encuentran
implicadas en la regulación de la transcripción, y la CDK5
desempeña un papel en la función de las células neuronales y
secretoras.
La actividad de las CDK se regula
postraduccionalmente, mediante asociaciones transitorias con otras
proteínas, y mediante alteraciones de su localización intracelular.
El desarrollo tumoral se encuentra estrechamente relacionado con la
alteración genética y la desregulación de las CDK y sus reguladores,
lo que sugiere que los inhibidores de las CDK pueden resultar una
terapéutica anticancerígena útil. De hecho, los primeros resultados
sugieren que las células transformadas y las células normales
difieren en su requisito de, por ejemplo, ciclina A/CDK2, y que
podría resultar posible desarrollar nuevos agentes antineoplásicos
desprovistos de la toxicidad general para el huésped observada en
los fármacos convencionales citotóxicos y citostáticos. Aunque la
inhibición de las CDK relacionadas con el ciclo celular resulta
claramente relevante por ejemplo en aplicaciones oncológicas, éste
podría no ser el caso en la inhibición de las CDK reguladoras de la
ARN polimerasa. Por otro lado, se ha asociado recientemente la
inhibición de la función T/CDK9 de la ciclina a la prevención de la
replicación del VIH y, de esta manera, al descubrimiento de nuevos
datos biológicos sobre la CDK continúa abriendo nuevas indicaciones
terapéuticas para los inhibidores de la CDK (Sausville, E. A.,
Trends Molec. Med. 8:S32-S37, 2002).
La función de las CDK consiste en la
fosforilación y de esta manera, la activación o la desactivación de
algunas proteínas, entre las que se incluyen, por ejemplo,
proteínas del retinoblastoma, lamininas, histona H1, y componentes
del huso mitótico. La etapa catalítica mediada por las CDK implica
una reacción de transferencia de fosfatos desde la ATP hasta el
sustrato enzimático macromolecular. Se han descubierto varios grupos
de compuestos (revisados por ejemplo en Fischer, P. M., Curr. Opin.
Drug Discovery Dev. 4: 623-634, 2001) con
propiedades antiproliferativas gracias al antagonismo de la ATP
específico de la CDK.
El documento nº WO 98/05335 (CV Therapeutics
Inc.) da a conocer derivados de purina
2,6,9-trisustituidos que son inhibidores selectivos
de quinasas del ciclo celular. Dichos compuestos resultan útiles en
el tratamiento de trastornos autoinmunes, por ejemplo la artritis
reumatoide, el lupus, la diabetes de tipo I, la esclerosis
múltiple; en el tratamiento del cáncer, de enfermedades
cardiovasculares, tales como la restenosis, de la enfermedad de
injerto contra huésped, de la gota, de la enfermedad poliquística
del riñón, y de otras enfermedades proliferativas cuya patogénesis
implica la proliferación celular anormal.
El documento nº WO 99/07705 (The Regents of the
University of California) da a conocer análogos de la purina que
inhiben, entre otros, proteína quinasas, proteínas G y polimerasas.
Más específicamente, la invención se refiere a procedimientos de
utilización de dichos análogos de purina para el tratamiento de
trastornos proliferativos celulares y de enfermedades
neurodegenerativas.
El documento nº WO 97/20842 (CNRS) da a conocer
derivados de purina que presentan propiedades antiproliferativas
que resultan útiles en el tratamiento del cáncer, de la psoriasis, y
de trastornos neurodegenerativos.
La presente invención pretende proporcionar
nuevos derivados de purina 2,6,9-sustituidos,
particularmente los que presentan propiedades
antiproliferativas.
\newpage
Un primer aspecto de la invención se refiere a
un compuesto que presenta la fórmula I siguiente:
o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo, en la
que:
uno de entre R^{1} y R^{2} es metilo, etilo
o isopropilo, y el otro es H;
R^{3} y R^{4} son, cada uno
independientemente H, alquilo C_{1}-C_{6}
ramificado o no ramificado, o arilo, y en la que por lo menos uno de
entre R^{3} y R^{4} es diferente de H;
R^{5} es un grupo alquilo
C_{1}-C_{5} ramificado o no ramificado o un
grupo cicloalquilo C_{1}-C_{6}, cada uno de los
cuales puede sustituirse opcionalmente con uno o más grupos OH;
R^{6}, R^{7}, R^{8} y R^{9} son
independientemente H, halógeno, NO_{2}, OH, OMe, CN, NH_{2},
COOH, CONH_{2}, o SO_{2}NH_{2}.
Un segundo aspecto de la invención se refiere a
una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula
I, y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente
aceptables.
Un tercer aspecto de la invención se refiere a
la utilización de un compuesto de fórmula I en la preparación de un
medicamento para el tratamiento de uno o más de los trastornos
siguientes:
- un trastorno proliferativo;
- un trastorno vírico;
- un ictus;
- alopecia;
- un trastorno del SNC;
- un trastorno neurodegenerativo; y
- la diabetes.
Un cuarto aspecto de la invención se refiere a
la utilización de un compuesto de fórmula I como un agente
antimitótico.
Un quinto aspecto de la invención se refiere a
la utilización de un compuesto de fórmula I para la inhibición de
una proteína quinasa.
Un sexto aspecto de la invención se refiere a la
utilización de un compuesto de la invención en un ensayo para la
identificación de compuestos candidatos adicionales que influyan
sobre la actividad de uno o más enzimas CDK.
Tal como se ha indicado anteriormente, un primer
aspecto de la invención se refiere a un compuesto de fórmula I, tal
como se ha descrito anteriormente en la presente memoria.
Es conocido en la técnica que la ruta de
desactivación metabólica in vivo principal del agente
inhibidor de la CDK antiproliferativo experimental llamado
roscovitina (se hace referencia a la solicitud de patente
internacional publicada PCT WO 97/20842; Wang, S., McClue, S. J.,
Ferguson, J. R., Hull, J. D., Stokes, S., Parsons, S., Westwood,
R., y Fischer, P. M., Tetrahedron: Asymmetry
12:2891-2894, 2001) comprende la oxidación del grupo
carbinol en un grupo carboxilo y la excreción posterior de este
metabolito [Nutley, B. P., Raynaud, F. I., Wilson, S. C., Fischer,
P., McClue, S., Goddard, P. M., Jarman, M., Lane, D., y Workman,
P. Clin. Cancer Res., 6 Suppl. (Proc. 11^{th}
AACR-NCI-EORTC Intl. Conf. nº
318), 2000]. El material de síntesis auténtico idéntico a este
metabolito muestra actividad biológica in vitro reducida. De
esta manera, la roscovitina y el derivado carboxilo inhiben la
actividad CDK2/ciclina E con valores de IC_{50} de entre 0,08
\muM y 0,24 \muM, respectivamente. De manera similar, los
valores IC_{50} antiproliferativos medios en un panel
representativo de líneas celulares tumorales humanas transformadas
para la roscovitina y para el derivado carboxilo eran de
aproximadamente 10 \muM y >50 \muM, respectivamente.
De esta manera, en una forma de realización
preferida, la invención pretende proporcionar nuevos derivados de
purina que muestren resistencia mejorada a la desactivación
metabólica.
En una forma de realización preferida de la
invención, uno de entre R^{1} y R^{2} es etilo o isopropilo, y
el otro es H.
En otra forma de realización preferida de la
invención, R^{5} es isopropilo o ciclopentilo.
En una forma de realización preferida, R^{6},
R^{7}, R^{8} y R^{9} son todos H.
En una forma de realización preferida, R^{1} o
R^{2} es etilo, y el otro es H.
En una forma de realización preferida, R^{3} y
R^{4} son cada uno independientemente, H, metilo, etilo, propilo,
butilo o fenilo.
De esta manera, en una forma de realización
preferida, R^{3} y R^{4} son, cada uno independientemente, H,
metilo, etilo, n-propilo, isopropilo,
n-butilo, s-butilo,
t-butilo o fenilo.
En una forma de realización más preferida,
R^{3} y R^{4} son cada uno independientemente H, metilo, etilo,
propilo o butilo.
De esta manera, en una forma de realización
preferida, R^{3} y R^{4} son, cada uno independientemente, H,
metilo, etilo, n-propilo, isopropilo,
n-butilo, s-butilo o
t-butilo.
En una forma de realización todavía más
preferida, R^{3} y R^{4} son independientemente, H, metilo,
etilo, isopropilo o t-butilo.
En una forma de realización especialmente
preferida, dicho compuesto de fórmula I se selecciona de entre los
compuestos siguientes:
(2S3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol;
(2R3S)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol;
(3RS,4R)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-hexan-3-ol;
(3RS,4S)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-hexan-3-ol;
(3RS,4R)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-hexan-3-ol;
(3RS,4S)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-hexan-3-ol;
(3RS,4R)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2,2-dimetil-hexan-3-ol;
(3RS,4S)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2,2-dimetil-hexan-3-ol;
(3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol;
(3S)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol;
(3S)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol;
y
(3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol.
\vskip1.000000\baselineskip
Todavía más preferentemente, dicho compuesto de
fórmula I se selecciona de entre los compuestos siguientes:
(2S3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol;
(2R3S)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol;
(3RS,4R)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-hexan-3-ol;
(3RS,4S)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-hexan-3-ol;
(3RS,4S)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2,2-dimetil-hexan-3-ol;
(3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol;
y
(3S)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-3-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol.
\vskip1.000000\baselineskip
Todavía más preferentemente, dicho compuesto de
fórmula I se selecciona de entre los compuestos siguientes:
(3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol;
(3S)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol;
(2S3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol;
(2R3S)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol;
y
cualquier isómero óptico del compuesto
3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol.
Un segundo aspecto de la invención se refiere a
una composición que comprende un compuesto de fórmula I mezclado
con un diluyente, excipiente o portador farmacéuticamente aceptable,
o una mezcla de los mismos,. Aunque los compuestos de la presente
invención (incluyendo sus sales y ésteres farmacéuticamente
aceptables, y solvatos farmacéuticamente aceptables) pueden
administrarse solos, generalmente se administrarán mezclados con un
portador, excipiente o diluyente farmacéutico, particularmente en
la terapia humana. Las composiciones farmacéuticas pueden ser para
la utilización con seres humanos o animales en medicina humana y
veterinaria.
Pueden encontrarse ejemplos de dichos
excipientes adecuados para las diversas formas diferentes de
composiciones farmacéuticas indicadas en la presente memoria en el
"Handbook of Pharmaceutical Excipients", segunda edición,
(1994), editado por A. Wade y P.J. Weller.
Los portadores o diluyentes aceptables para la
utilización terapéutica son bien conocidos en la técnica
farmacéutica, y se describen, por ejemplo, en "Remington's
Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co." (editor A. R.
Gennaro, 1985).
Entre los ejemplos de portadores adecuados se
incluyen lactosa, almidón, glucosa, metilcelulosa, estearato de
magnesio, manitol, sorbitol y similares. Entre los ejemplos de
diluyentes adecuados se incluyen etanol, glicerol y agua.
La elección del portador, excipiente o diluyente
puede llevarse a cabo según la vía pretendida de administración y
la práctica farmacéutica estándar. Las composiciones farmacéuticas
pueden comprender como portador, excipiente o diluyente, o además
de los mismos, cualquier ligante(s), lubricante(s),
agente(s) de suspensión, agente(s) de recubrimiento o
agente(s) solubilizante adecuados.
Entre los ejemplos de compuestos ligantes se
incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales, tales como glucosa,
lactosa anhidra, lactosa de flujo libre,
beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales
o sintéticas, tales como acacia, tragacanto o alginato sódico,
carboximetilcelulosa y polietilenglicol.
Entre los ejemplos adecuados de lubricantes se
incluyen oleato sódico, estearato sódico, estearato de magnesio,
benzoato sódico, acetato sódico, cloruro sódico y similares.
En la composición farmacéutica pueden incluirse
conservantes, estabilizantes, pigmentos, e incluso agentes
saborizantes. Entre los ejemplos de conservantes se incluyen
benzoato sódico, ácido sórbico y ésteres de ácido
p-hidroxibenzoico. También pueden utilizarse
antioxidantes y agentes de suspensión.
Los compuestos de la presente invención pueden
encontrarse presente en forma de sales o de ésteres, particularmente
en forma de sales o ésteres farmacéuticamente aceptables.
Entre las sales de los compuestos de la
invención farmacéuticamente aceptables se incluyen las sales de
adición de ácido o sales básicas de las mismas. En Berge et
al., J. Pharm. Sci. 66:1-19, (1977), puede
encontrarse una revisión de las sales farmacéuticas adecuadas. La
sales se forman, por ejemplo, con ácidos inorgánicos fuertes, tales
como ácidos minerales, por ejemplo ácido sulfúrico, ácido fosfórico
o ácidos hidrohálicos; con ácidos orgánicos carboxílicos fuertes,
tales como los ácidos alcanocarboxílicos de entre 1 y 4 átomos de
carbono no sustituidos o sustituidos (por ejemplo, con halógeno),
tales como el ácido acético; con ácidos dicarboxílicos saturados o
insaturados, por ejemplo ácido oxálico, ácido malónico, ácido
succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido ftálico o ácido
tetraftálico; con ácidos hidroxicarboxílicos, por ejemplo ácido
ascórbico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido málico, ácido
tartárico o ácido cítrico; con aminoácidos, por ejemplo ácido
aspártico o ácido glutámico; con ácido benzoico; o con ácidos
orgánicos sulfónicos, tales como ácidos
alquil-(C_{1}-C_{4})-sulfónicos
o arilsulfónicos no sustituidos o sustituidos (por ejemplo, por un
halógeno), tal como el ácido metanosulfónico o el ácido
p-toluenosulfónico.
Los ésteres se forman utilizando ácidos
orgánicos o alcoholes/hidróxidos, dependiendo del grupo funcional
que se esterifica. Entre los ácidos orgánicos se incluyen los ácidos
carboxílicos, tales como los ácidos alcanocarboxílicos de entre 1 y
12 átomos de carbono no sustituidos o sustituidos (por ejemplo con
halógeno), tales como el ácido acético; con ácidos dicarboxílicos
saturados o insaturados, por ejemplo ácido oxálico, ácido malónico,
ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido ftálico o
ácido tetraftálico; con ácidos hidroxicarboxílicos, por ejemplo
ácido ascórbico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido málico, ácido
tartárico o ácido cítrico; con aminoácidos, por ejemplo ácido
aspártico o ácido glutámico; con ácido benzoico; o con ácidos
orgánicos sulfónicos, tales como ácidos
alquil-(C_{1}-C_{4})-sulfónicos
o arilsulfónicos no sustituidos o sustituidos (por ejemplo con un
halógeno), tal como el ácido metanosulfónico o el ácido
p-toluenosulfónico. Entre los hidróxidos adecuados
se incluyen los hidróxidos inorgánicos, tales como hidróxido sódico,
hidróxido potásico, hidróxido de calcio, hidróxido de aluminio.
Entre los alcoholes se incluyen los alcanoalcoholes de entre 1 y 12
átomos de carbono no sustituidos o sustituidos (por ejemplo con un
halógeno).
En todos los aspectos de la presente invención
comentados anteriormente, la invención incluye, en caso apropiado,
todos los enantiómeros y tautómeros de los compuestos de fórmula I.
El experto en la materia reconocerá los compuestos que poseen
propiedades ópticas (uno o más átomos de carbono quiral) o
características tautoméricas. Los enantiómeros y/o tautómeros
correspondientes pueden aislarse/prepararse mediante procedimientos
conocidos de la técnica.
Algunos de los compuestos de la invención pueden
existir en forma de estereoisómeros y/o de isómeros geométricos,
por ejemplo pueden poseer uno o más centros asimétricos y/o
geométricos y, por lo tanto, pueden existir en dos o más formas
estereoisoméricas y/o geométricas. La presente invención contempla
la utilización de todos los estereoisómeros e isómeros geométricos
individuales de los agentes inhibidores, y las mezclas de los
mismos. Los términos utilizados en las reivindicaciones comprenden
estas formas, a condición de que dichas formas retengan la
actividad funcional adecuada (aunque no necesariamente en la misma
medida).
La presente invención incluye asimismo
variaciones isotópicas adecuadas del agente o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo. Una variación isotópica de
un agente de la presente invención o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo se define de manera que por lo menos un átomo se
sustituye por un átomo que presenta el mismo número atómico aunque
una masa atómica diferente de la masa atómica que se encuentra
generalmente en la Naturaleza. Entre los ejemplos de isótopos que
pueden incorporarse al agente y las sales farmacéuticamente
aceptables del mismo se encuentran los isótopos de hidrógeno,
carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre, flúor y cloro, tales
como ^{2}H, ^{3}H, ^{13}C, ^{14}C, ^{15}N, ^{17}O,
^{18}O, ^{31}P, ^{32}P, ^{35}S, ^{18}F y ^{36}Cl,
respectivamente. Determinadas variaciones isotópicas del agente y
las sales farmacéuticamente aceptables del mismo, por ejemplo
aquéllas en las que se incorpora un isótopo radioactivo, tal como
^{3}H o ^{14}C, resultan útiles en estudios de distribución de
fármacos y/o de sustratos en los tejidos. Resultan particularmente
preferentes los isótopos tritiados, es decir ^{3}H, y
carbono-14, es decir ^{14}C, por su facilidad de
preparación y su detectabilidad. Además, la sustitución con
isótopos, tales como el deuterio, es decir ^{2}H, puede
proporcionar algunas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor
estabilidad metabólica, por ejemplo la vida media in vivo
incrementada o los menores requisitos de dosis y, por lo tanto,
pueden resultar preferentes en algunas circunstancias. Las
variaciones isotópicas del agente de la presente invención y las
sales farmacéuticamente aceptables del mismo de la presente
invención generalmente pueden prepararse mediante procedimientos
convencionales utilizando variaciones isotópicas apropiadas de
reactivos adecuados.
La presente invención comprende asimismo formas
de solvato de los compuestos de la presente invención. Los términos
utilizados en las reivindicaciones comprenden estas formas.
La invención se refiere además a compuestos de
la presente invención en sus diversas formas cristalinas, formas
polimórficas y formas (an)hidras. Está bien establecido en la
industria farmacéutica que pueden aislarse compuestos químicos en
cualquiera de dichas formas modificando ligeramente el procedimiento
de purificación y/o de aislamiento de los solventes utilizado en la
preparación sintética de dichos compuestos.
La invención incluye además compuestos de la
presente invención en forma de profármaco. Generalmente dichos
profármacos son compuestos de fórmula I en los que se modifican uno
o más grupos adecuados de manera que la modificación pueda
revertirse tras su administración a un sujeto humano o mamífero.
Normalmente la reversión la lleva a cabo un enzima presente en
dicho sujeto de forma natural, aunque resulta posible que se
administre un segundo agente conjuntamente con dicho profármaco
para llevar a cabo la reversión in vivo. Entre los ejemplos
de dichas modificaciones se incluye el éster (por ejemplo,
cualquiera de entre los indicados anteriormente), en el que la
reversión puede llevarla a cabo una esterasa, etc. Los expertos en
la materia conocen bien otros sistemas de este tipo.
Las composiciones farmacéuticas de la presente
invención pueden adaptarse para la administración por vía oral,
rectal, vaginal, parenteral, intramuscular, intraperitoneal,
intraarterial, intratecal, intrabronquial, subcutánea, intradérmica,
intravenosa, nasal, bucal o sublingual.
Para la administración oral, se utilizan
particularmente tabletas comprimidas, píldoras, tabletas, gélulas,
gotas y cápsulas. Preferentemente, estas composiciones contienen
entre 1 mg y 250 mg, y más preferentemente entre 10 mg y 100 mg de
ingrediente activo por dosis.
Otras formas de administración comprenden
soluciones o emulsiones que pueden inyectarse por vía intravenosa,
intraarterial, intratecal, subcutánea, intradérmica, intraperitoneal
o intramuscular, y que se preparan a partir de soluciones estériles
o esterilizables. Las composiciones farmacéuticas de la presente
invención también pueden encontrarse en forma de supositorios,
pesarios, suspensiones, emulsiones, lociones, pomadas, cremas,
geles, pulverizadores, soluciones o polvos para uso externo.
Un medio alternativo de administración
transdérmica consiste en la utilización de un parche cutáneo. Por
ejemplo, los ingredientes activos pueden incorporarse a una crema
constituida por una emulsión acuosa de polietilenglicoles o
parafina líquida. El ingrediente activo también puede incorporarse,
en una concentración de entre 1% y 100%, a una pomada constituida
por una base de cera blanca o de parafina blanda blanca, junto con
dichos estabilizadores y conservantes según resulte necesario.
Las formas inyectables pueden contener entre 10
mg y 1.000 mg, preferentemente entre 10 mg y 250 mg de ingrediente
activo por dosis.
Las composiciones pueden formularse en forma de
unidad de dosificación, es decir, en forma de porciones discretas
que contienen una unidad de dosis, o un múltiplo o una subunidad de
una unidad de dosis.
Un experto en la materia puede determinar
fácilmente una dosis apropiada de una de las composiciones
instantáneas que se deben administrar a un sujeto, sin necesidad de
experimentación indebida. Típicamente, un médico determinará la
dosificación exacta que resultará más adecuada para un paciente
individual y dependerá de diversos factores, entre los que se
incluyen la actividad del compuesto específico utilizado, la
estabilidad metabólica y la duración de la acción de ese compuesto,
la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, la
forma y el tiempo de administración, la velocidad de excreción, la
combinación de fármacos, la severidad de la condición particular, y
el individuo sometido al tratamiento. Las dosificaciones dadas a
conocer en la presente memoria resultan ejemplificativos del caso
general. Por supuesto pueden existir casos individuales en los que
se consideren intervalos de dosificación superiores o inferiores, y
éstos se encuentran comprendidos dentro del alcance de la presente
invención.
Según resulte necesario, el agente puede
administrarse a una dosis de entre 0,01 y 30 mg/kg de peso corporal,
por ejemplo entre 0,1 mg/kg y 10 mg/kg, más preferentemente entre
0,1 y 1 mg/kg de peso corporal.
En una forma de realización ejemplificativa, se
administran al paciente una o más dosis de entre 10 mg/día y 150
mg/día para el tratamiento de la malignidad.
Se ha descubierto que los compuestos de la
presente invención poseen actividad antiproliferativa y por lo
tanto se cree que resultarán útiles en el tratamiento de trastornos
proliferativos, tales como cánceres, leucemias, u otros trastornos
relacionados con la proliferación celular incontrolada, tal como la
psoriasis y la restenosis.
Tal como se define en la presente memoria, se
puede demostrar un efecto antiproliferativo dentro del alcance de
la presente invención por la capacidad de inhibir la proliferación
celular en un ensayo in vitro de células completas, por
ejemplo utilizando cualquiera de las líneas celulares A549, HeLa,
HT-29, MCF7, Saos-2,
CCRF-CEM, HL-60 y
K-562, o mostrando inhibición de la quinasa en un
ensayo apropiado. Estos ensayos, incluyendo los procedimientos para
su realización, se describen con mayor detalle en los Ejemplos
adjuntos. Mediante la utilización de dichos ensayos puede
determinarse si un compuesto es antiproliferativo en el contexto de
la presente invención.
Por lo tanto, una forma de realización preferida
de la presente invención se refiere a la utilización de uno o más
compuestos de la invención en la preparación de un medicamento para
el tratamiento de un trastorno proliferativo.
Tal como se utiliza en la presente memoria, la
expresión "preparación de un medicamento" comprende la
utilización de un componente de la invención directamente como el
medicamento, además de su utilización dentro de un programa de
cribado para agentes terapéuticos adicionales o en cualquier etapa
de la preparación de dicho medicamento.
La expresión "trastorno proliferativo" se
utiliza en la presente memoria en un sentido amplio para incluir
cualquier trastorno que requiera el control del ciclo celular, por
ejemplo trastornos cardiovasculares, tales como la restenosis y/o
cardiomiopatías, trastornos autoinmunes, tales como la
glomerulonefritis y la artritis reumatoide, trastornos
dermatológicos, tales como la psoriasis, trastornos
antiinflamatorios, antimicóticos, antiparasitarios, tales como la
malaria, el enfisema y la alopecia. En estos trastornos, los
compuestos de la presente invención pueden inducir la apoptosis o
mantener la estasis de las células deseadas según resulte necesario.
Preferentemente, el trastorno proliferativo es un cáncer o una
leucemia.
En otra forma de realización preferida, el
trastorno proliferativo es la psoriasis.
Los compuestos de la invención pueden inhibir
cualquiera de las etapas del ciclo celular, por ejemplo la formación
de la cubierta nuclear, la finalización de la fase quiescente del
ciclo celular (G0), la progresión de G1, la descondensación de los
cromosomas, la fragmentación de la cubierta nuclear, INICIO, el
inicio de la replicación del ADN, la progresión de la replicación
del ADN, la finalización de la replicación del ADN, la duplicación
de los centrosomas, la progresión de G2, la activación de las
funciones mitóticas o meitóticas, la condensación de los
cromosomas, la separación de los centrosomas, la nucleación de los
microtúbulos, la formación y función del huso, las interacciones
con las proteínas motoras de los microtúbulos, la separación y
segregación de las cromátidas, la desactivación de las funciones
mitóticas, la formación del anillo contráctil, y las funciones de
la citoquinesis. En particular, los compuestos de la invención
pueden influir sobre determinadas funciones génicas, tales como la
unión a la cromatina, la formación de complejos de replicación, la
regulación de la replicación, la fosforilación u otra actividad de
modificación secundaria, la degradación proteolítica, la unión a
los microtúbulos, la unión a la actina, la unión a la septina, la
actividad de nucleación del centro organizador de microtúbulos y la
unión a componentes de las rutas de señalización del ciclo
celular.
Un aspecto adicional de la invención se refiere
a un procedimiento para el tratamiento de una enfermedad
proliferativa, comprendiendo dicho procedimiento la administración
a un mamífero de una cantidad terapéuticamente efectiva de un
compuesto de fórmula I.
En una forma de realización preferida de dicho
aspecto, el trastorno proliferativo es cáncer o leucemia.
En una forma de realización todavía más
preferida de dicho aspecto, el compuesto se administra en una
cantidad suficiente para inhibir por lo menos un enzima CDK.
Preferentemente, el compuesto de la invención se
administra en una cantidad suficiente para inhibir por lo menos una
de entre las quinasas CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5, CDK6, CDK7, CDK8
y/o CDK9.
Más preferentemente, el compuesto de la
invención se administra en una cantidad suficiente para inhibir por
lo menos una de entre las quinasas CDK2 y/o CDK4.
Todavía más preferentemente, el enzima CDK es
CDK2.
En una forma de realización preferida del
presente aspecto, el compuesto se administra por vía oral.
Otro aspecto de la invención se refiere a la
utilización de un compuesto de fórmula I como agente
antimitótico.
Todavía otro aspecto de la invención se refiere
a la utilización de un compuesto de fórmula I para el tratamiento de
un trastorno neurodegenerativo.
Preferentemente, el trastorno neurodegenerativo
es la apoptosis neuronal.
Otro aspecto de la invención se refiere a la
utilización del compuesto de fórmula I como agente antivírico.
De esta manera, otro aspecto de la invención se
refiere a la utilización de un compuesto de la invención en la
preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno
vírico, tal como el citomegalovirus humano (CMVH), el virus herpes
simplex de tipo 1 (VHS-1), el virus de la
inmunodeficiencia humana de tipo 1 (VIH-1), y el
virus de la varicela zoster (VVZ).
En una forma de realización preferida de la
invención, el compuesto de la invención se administra en una
cantidad suficiente para inhibir una o más de las CDK de la célula
huésped implicadas en la replicación vírica, es decir CDK2, CDK7,
CDK8 y CDK9 [Wang, D., De la Fuente, C., Deng, L., Wang, L.,
Zilberman, I., Eadie, C., Healey, M., Stein, D., Denny, T.,
Harrison, L. E., Meijer, L., Kashanchi, F. Inhibition of human
immunodeficiency virus type 1 transcription by chemical
cyclin-dependent kinase inhibitors. J. Virol.
75:7266-7279, 2001].
Tal como se define en la presente memoria, puede
demostrarse un efecto antivírico dentro del alcance de la presente
invención por la capacidad de inhibición de las quinasas CDK2, CDK7,
CDK8 o CDK9.
En una forma de realización particularmente
preferida, la invención se refiere a la utilización de uno o más
compuestos de la invención en el tratamiento de un trastorno vírico
que es dependiente o sensible a la CDK. Los trastornos que dependen
de la CDK se encuentran relacionados con un nivel de actividad
superior al normal de uno o más enzimas CDK. Dichos trastornos se
encuentran preferentemente relacionados con un nivel de actividad
anormal de las quinasas CDK2, CDK7, CDK8 y/o CDK9. Un trastorno
sensible a la CDK es un trastorno en el que una aberración del
nivel de la CDK no es la causa principal sino que es la consecuencia
de la aberración metabólica principal. En estos escenarios, las
quinasas CDK2, CDK7, CDK8 y/o CDK9 pueden considerarse parte de la
ruta metabólica sensible y por lo tanto los inhibidores de la CDK
pueden presentar actividad en el tratamiento de dichos
trastornos.
Otro aspecto de la invención se refiere a la
utilización de compuestos de la invención, o de sales
farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la preparación de un
medicamento para el tratamiento de la diabetes.
En una forma de realización particularmente
preferida, la diabetes es la diabetes de tipo II.
La GSK3 es una de entre varias proteína quinasas
que fosforilan la glucógeno sintasa (GS). La desfosforilación y la
activación de la GS permite la estimulación de la síntesis de
glucógeno en los músculos esqueléticos por parte de la insulina. De
esa manera, la acción de la GSK3 sobre la GS resulta en la
desactivación de ésta última y, de esta manera, en la supresión de
la conversión de la glucosa en glucógeno en los músculos.
La diabetes de tipo II (diabetes mellitus no
dependiente de insulina) es una enfermedad multifactorial. La
hiperglucemia se debe a la resistencia a la insulina en hígado,
músculos, y otros tejidos, junto con alteraciones de la secreción
de la insulina. El músculo esquelético es el sitio principal de
captación de glucosa inducida por insulina, en el que se retira de
la circulación o se convierte en glucógeno. La deposición del
glucógeno en los músculos es el determinante principal de la
homeostasis de la glucosa, y los diabéticos de tipo II presentan un
almacenamiento defectivo del glucógeno en los músculos. Existen
pruebas de que un incremento de la actividad de la GSK3 resulta
importante en la diabetes de tipo II [Chen, Y. H.; Hansen, L.; Chen,
M. X.; Bjorbaek, C.; Vestergaard, H.; Hansen, T.; Cohen, P. T.;
Pedersen, O. Diabetes 43:1234, 1994]. Además, se ha demostrado que
la GSK3 se encuentra sobreexpresada en las células musculares de los
diabéticos de tipo II y que existe una correlación inversa entre la
actividad de la GSK3 de los músculos esqueléticos y la acción de la
insulina [Nikoulina, S. E.; Ciaraldi, T. P.; Mudaliar, S.; Mohideen,
P.; Carter, L.; Henry, R. R. Diabetes 49:263, 2000].
Por lo tanto, la inhibición de la GSK3 resulta
de importancia terapéutica en el tratamiento de la diabetes,
particularmente de la diabetes de tipo II, y de la neuropatía
diabética.
Cabe destacar que es conocido que la GSK3 lleva
a cabo la fosforilación de muchos sustratos además de la GS, y que,
por lo tanto, se encuentra implicada en la regulación de múltiples
rutas bioquímicas. Por ejemplo, la GSK se encuentra altamente
expresada en los sistemas nerviosos central y periférico.
Por lo tanto, otro aspecto de la invención se
refiere a la utilización de compuestos de la invención, o de sales
farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la preparación de un
medicamento para el tratamiento de trastornos del SNC, por ejemplo
trastornos neurodegenerativos.
Preferentemente, el trastorno del SNC es la
enfermedad de Alzheimer.
Tau es un sustrato de la GSK3 que se ha
implicado en la etiología de la enfermedad de Alzheimer. En las
células nerviosas sanas, Tau se coensambla con la tubulina para
formar microtúbulos. Sin embargo, en la enfermedad de Alzheimer,
Tau forma grandes marañas de filamentos que perturban la estructuras
de los microtúbulos en la células nerviosas, perjudicando de esa
manera el transporte de nutrientes, así como la transmisión de
mensajes neuronales.
Sin pretender restringirse a ninguna teoría en
particular, se cree que los inhibidores de la GSK3 podrían prevenir
y/o revertir la hiperfosforilación anormal de la proteína Tau
asociada a microtúbulos, que es una característica invariante de la
enfermedad de Alzheimer y de una serie de otras enfermedades
neurodegenerativas, tales como la parálisis supracraneal
progresiva, la degeneración corticobasal y la enfermedad de Pick.
Las mutaciones del gen tau producen formas heredadas de la demencia
frontotemporal, subrayando adicionalmente la relevancia de la
disfunción de la proteína Tau en el proceso neurodegenerativo
[Goedert, M., Curr. Opin. Gen. Dev. 11:343, 2001].
Otro aspecto de la invención se refiere a la
utilización de compuestos de la invención, o de sales
farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la preparación de un
medicamento para el tratamiento del trastorno bipolar.
Todavía otro aspecto de la invención se refiere
a la utilización de compuestos de la invención, o de sales
farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la preparación de un
medicamento para el tratamiento de un ictus.
La reducción de la apoptosis neuronal es un
objetivo terapéutico importante en el contexto del traumatismo
craneal, el ictus, la epilepsia, y la enfermedad de las neuronas
motoras [Mattson, M. P., Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 1:120,
2000]. Por lo tanto, la GSK3 como factor proapoptótico de las
células neuronales convierte a esta proteína quinasa en una diana
terapéutica atractiva para el diseño de fármacos inhibitorios para
el tratamiento de estas enfermedades.
Todavía otro aspecto de la invención se refiere
a la utilización de compuestos de la invención, o de sales
farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la preparación de un
medicamento para el tratamiento de la alopecia.
El crecimiento del pelo está controlado por la
ruta de señalización de Wnt, particularmente de
Wnt-3. En sistemas modelo de cultivo de tejidos de
la piel, la expresión de mutantes no degradables de la
\beta-catenina conduce a un incremento drástico
de la población de células madre putativas, que presentan un
potencial proliferativo superior [Zhu, A. J.; Watt, F. M.,
Development 126:2285, 1999]. Esta población de células madre expresa
un nivel superior de \beta-catenina no asociada a
caderina [DasGupta, R.; Fuchs, E., Development 126:4557, 1999], que
podría contribuir a su elevado potencial proliferativo. Además, los
ratones transgénicos que sobreexpresan una
\beta-catenina truncada en la piel experimentan
morfogénesis de novo de los folículos capilares, que
normalmente se establece solamente durante la embriogénesis. De esta
manera, la aplicación ectópica de los inhibidores de la GSK3 podría
resultar terapéuticamente útil en el tratamiento de la calvicie y en
la recuperación del crecimiento del cabello tras la alopecia
inducida por quimioterapia.
Otro aspecto de la invención se refiere a un
procedimiento para el tratamiento de un trastorno dependiente de la
GSK3, comprendiendo dicho procedimiento la administración a un
sujeto que lo necesita de un compuesto según la presente invención,
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, tal como se ha
definido anteriormente, en una cantidad suficiente para inhibir la
GSK3.
Preferentemente, el compuesto de la invención, o
la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en una
cantidad suficiente para inhibir la GSK3\beta.
En una forma de realización de la invención, el
compuesto de la invención se administra en una cantidad suficiente
para inhibir el enzima PLK.
Las quinasas polo (PLK) constituyen una familia
de serina/treonina proteína quinasas. Los mutantes mitóticos de
Drosophila melanogaster en el locus polo muestran
anormalidades del huso [Sunkel et al., J. Cell Sci. 89:25,
1988] y se descubrió que el polo codificaba una quinasa mitótica
[Llamazares et al., Genes Dev. 5:2153, 1999]. En seres
humanos, existen tres PLK estrechamente relacionadas [Glover et
al., Genes Dev. 12:3777, 1998]. Contienen un dominio
aminoterminal catalítico quinasa altamente homólogo y sus extremos
carboxilo contienen dos o tres regiones conservadas, las cajas
polo. La función de las cajas polo sigue sin comprenderse
completamente, pero se encuentran implicadas en el transporte de
las PLK hacia los compartimentos subcelulares [Lee et al.,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:9301, 1998; Leung et al., Nat.
Struct. Biol. 9:719, 2002], en la mediación de las interacciones
con otras proteínas [Kauselmann et al., EMBO J. 18:5528,
1999], o pueden constituir parte de un dominio autorregulador
[Nigg, Curr. Opin. Cell Biol. 10:776, 1998]. Además, se requiere la
actividad de PLK1 dependiente de caja polo para la transición
metafase/anafase y citoquinesis correctas [Yuan et al.,
Cancer Res. 62:4186, 2002; Seong et al., J. Biol. Chem.
277:32282, 2002].
Los estudios han demostrado que las PLK humanas
regulan algunos aspectos fundamentales de la mitosis [Lane et
al., J. Cell. Biol. 135:1701, 1996; Cogswell et al., Cell
Growth Differ. 11:615, 2000]. En particular, se cree que la
actividad de la PLK1 resulta necesaria para la maduración funcional
de los centrosomas en la fase G2 tardía/profase temprana y para el
establecimiento posterior de un huso bipolar. La inhibición de la
PLK1 celular mediante la técnica de los ARN interferentes pequeños
(ARNip) también ha confirmado que se requiere esta proteína para
múltiples procesos mitóticos y para completar la citoquinesis [Liu
et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:8672, 2002].
En una forma de realización más preferida de la
invención, el compuesto de la invención se administra en una
cantidad suficiente para inhibir la PLK1.
De entre las tres PLK humanas, la PLK1 es la
mejor caracterizada: regula varios efectos del ciclo de la división
celular, entre los que se incluyen el inicio de la mitosis
[Toyoshima-Morimoto et al., Nature 410:215,
2001; Roshak et al., Cell. Signalling 12:405, 2000], la
activación del punto de vigilancia de daños del ADN [Smits et
al., Nat. Cell Biol. 2:672, 2000; van Vugt et al., J.
Biol. Chem. 276:41656, 2001], la regulación del complejo promotor
de la anafase [Sumara et al., Mol. Cell 9:515, 2002; Golan
et al., J. Biol. Chem. 277:15552, 2002; Kotani et
al., Mol. Cell 1: 371, 1998], la fosforilación de los
proteosomas [Feng et al., Cell Growth Differ. 12:29, 2001],
y la duplicación y la maduración de los centrosomas [Dai et
al., Oncogene 21:6195, 2002].
Específicamente, la iniciación de la mitosis
requiere la activación del factor promotor de la fase M (FPM), el
complejo entre la quinasa dependiente de ciclina CDK1 y las ciclinas
tipo B [Nurse, Nature 344:503, 1990]. Estos últimos se acumulan
durante las fases S y G2 del ciclo celular y promueven la
fosforilación inhibitoria del complejo FPM por parte de las
quinasas WEE1, MIK1 y MYT1. Al final de la fase G2, la
desfosforilación correspondiente por parte de la fosfatasa de doble
especificidad CDC25C provoca la activación del FPM [Nigg, Nat. Rev.
Mol. Cell Biol. 2:21, 2001]. En la interfase, la ciclina B se
localiza en el citoplasma [Hagting et al., EMBO J. 17:4127,
1998], resulta a continuación fosforilada durante la profase y este
suceso provoca la traslocación nuclear [Hagting et al.,
Curr. Biol. 9:680, 1999; Yang et al., J. Biol. Chem.
276:3604, 2001]. La acumulación nuclear de FPM activo durante la
profase se considera importante para el comienzo de los sucesos de
la fase M [Takizawa et al., Curr. Opin. Cell Biol. 12:658,
2000]. Sin embargo, la quinasa WEE1 mantiene inactivo el FPM
nuclear excepto si resulta contrarrestada por la fosfatasa CDC25C.
La propia fosfatasa CDC25C, localizada en el citoplasma durante la
interfase, se acumula en el núcleo durante la profase [Seki et
al., Mol. Biol. Cell 3:1373, 1992; Heald et al., Cell
74:463, 1993; Dalal et al., Mol. Cell. Biol. 19:4465, 1999].
La entrada nuclear tanto de la ciclina B
[Toyoshima-Morimoto et al., Nature 410:215,
2001] como de la fosfatasa CDC25C
[Toyoshima-Morimoto et al., EMBO Rep. 3:341,
2002] son promovidas mediante la fosforilación por parte de PLK1
[Roshak et al., Cell. Signalling 12:405, 2000]. Esta quinasa
es un regulador importante del inicio de la fase M.
En una forma de realización particularmente
preferida, los compuestos de la invención son inhibidores de PLK1
antagonistas del ATP.
En el presente contexto, el antagonismo de la
ATP se refiere a la capacidad de un compuesto inhibidor para
reducir o impedir la actividad catalítica de PLK, es decir, la
fosfotransferencia de ATP a un sustrato macromolecular de PLK, en
virtud de la unión reversible o irreversible en el sitio activo del
enzima de manera que se reduce o se elimina la unión del ATP.
En otra forma de realización preferida, el
compuesto de la invención se administra en cantidad suficiente para
inhibir PLK2 y/o PLK3.
Las PLK2 (también denominada SNK) y PLK3
(también denominada PRK y FNK) de mamífero originalmente se demostró
que eran productos de genes inmediatos tempranos. Aparentemente, la
actividad de PLK3 se incrementa durante la fase S tardía y la fase
G2. También se activa durante la activación de la vigilancia de
daños del ADN y durante el estrés oxidativo severo. La PLK3 también
desempeña un papel importante en la regulación de la dinámica de
los microtúbulos y en el funcionamiento de los centrosomas en la
célula, y la expresión desregulada de PLK3 da lugar a la detención
del ciclo celular y a la apoptosis [Wang et al., Mol. Cell.
Biol. 22:3450, 2002]. La PLK2 es el homólogo menos conocido de las
tres PLK. Tanto la PLK2 como la PLK3 pueden presentar funciones
postmitóticas adicionales importantes [Kauselmann et al.,
EMBO J. 18:5528, 1999].
Otro aspecto de la invención se refiere a la
utilización de un compuesto de fórmula I para la inhibición de una
proteína quinasa.
En una forma de realización preferida de dicho
aspecto, la proteína quinasa es una quinasa dependiente de ciclina.
Preferentemente, la proteína quinasa es CDK1, CDK2, CDK3, CDK4,
CDK5, CDK6, CDK7, CDK8 o CDK9, más preferentemente CDK2.
Otro aspecto de la invención se refiere a un
procedimiento para la inhibición de una proteína quinasa,
comprendiendo dicho procedimiento la unión de dicha proteína
quinasa a un compuesto de fórmula I.
En una forma de realización preferida de dicho
aspecto, la proteína quinasa es una quinasa dependiente de ciclina,
todavía más preferentemente es CDK2.
Otro aspecto de la invención se refiere a la
utilización de un compuesto, tal como se ha definido anteriormente
en la presente memoria, en un ensayo para la identificación de
compuestos candidatos adicionales que influyan sobre la actividad de
uno o más enzimas CDK.
\newpage
Preferentemente, el ensayo es capaz de
identificar compuestos candidatos capaces de inhibir uno o más
enzimas CDK.
Más preferentemente, el ensayo es un ensayo de
unión competitiva.
Preferentemente, el compuesto candidato se
genera mediante modificación SAR convencional de un compuesto de la
invención.
Tal como se utiliza en la presente memoria, la
expresión "modificación SAR convencional" se refiere a
procedimientos estándares conocidos de la técnica para modificar un
compuesto dado por medio de la derivatización
química.
química.
De esta manera, según un aspecto, el compuesto
identificado puede actuar como un modelo (por ejemplo, como molde)
para el desarrollo de otros compuestos. Los compuestos utilizados en
dicho ensayo pueden encontrarse libres en solución, fijados a un
soporte sólido, transportados en la superficie de una célula, o
localizarse intracelularmente. Puede medirse la eliminación de la
actividad o la formación de complejos de unión entre el compuesto y
el agente sometido a ensayo.
El ensayo de la presente invención puede ser un
cribado, en el que se someten a ensayo varios agentes. En un
aspecto, el procedimiento de ensayo de la presente invención es un
cribado de alto rendimiento.
La presente invención contempla asimismo la
utilización de ensayos de cribado de fármacos en los que anticuerpos
de neutralización capaces de unirse a un compuesto compiten
específicamente con un compuesto de ensayo para la unión a un
compuesto.
Otra técnica de cribado proporciona el cribado
de alto rendimiento (HTS) de agentes con una afinidad de unión
adecuada para las sustancias y se basa en el procedimiento descrito
con detalle en el documento nº WO 84/
03564.
03564.
Se prevé que los procedimientos de ensayo de la
presente invención resulten adecuados para el cribado de los
compuestos de ensayo tanto a escala menor como a gran escala, así
como en ensayos cuantitativos.
Preferentemente, el ensayo de unión competitiva
comprende la unión de un compuesto de fórmula I con un enzima CDK
en presencia de un sustrato conocido de dicho enzima CDK, y la
detección de cualquier cambio en la interacción entre dicho enzima
CDK y dicho sustrato conocido.
Un sexto aspecto de la invención proporciona un
procedimiento de detección de la unión de un ligando a un enzima
CDK, comprendiendo dicho procedimiento las etapas siguientes:
- (i)
- la puesta en contacto de un ligando con un enzima CDK en presencia de un sustrato conocido de dicho enzima CDK;
- (ii)
- la detección de cualquier cambio en la interacción entre dicho enzima CDK y dicho sustrato cono-cido;
y en el que dicho ligando es un compuesto de
fórmula I.
\vskip1.000000\baselineskip
Un aspecto de la invención se refiere a un
procedimiento que comprende las etapas siguientes:
- a)
- realización de un procedimiento de ensayo descrito anteriormente en la presente memoria;
- b)
- identificación de uno o más ligandos capaces de unirse a un dominio de unión a ligando; y
- c)
- preparación de una cantidad de uno o más de dichos ligandos.
\vskip1.000000\baselineskip
Otro aspecto de la invención proporciona un
procedimiento que comprende las etapas siguientes:
- a)
- realización de un procedimiento de ensayo descrito anteriormente en la presente memoria;
- b)
- identificación de uno o más ligandos capaces de unirse a un dominio de unión a ligando; y
- c)
- preparación de una composición farmacéutica que comprende uno o más de dichos ligandos.
\newpage
Otro aspecto de la invención proporciona un
procedimiento que comprende las etapas siguientes:
- a)
- realización de un procedimiento de ensayo descrito anteriormente en la presente memoria;
- b)
- identificación de uno o más ligandos capaces de unirse a un dominio de unión a ligando; y
- c)
- modificación de uno o más de dichos ligandos capaces de unirse a un dominio de unión a ligando;
- d)
- realización del procedimiento de ensayo descrito anteriormente en la presente memoria;
- e)
- opcionalmente, preparación de una composición farmacéutica que comprende uno o más de dichos ligandos.
La invención también se refiere a un ligando
identificado mediante el procedimiento descrito anteriormente en la
presente memoria.
Todavía otro aspecto de la invención se refiere
a una composición farmacéutica que comprende un ligando identificado
mediante el procedimiento descrito anteriormente en la presente
memoria.
Otro aspecto de la invención se refiere a la
utilización de un ligando identificado mediante el procedimiento
descrito anteriormente en la presente memoria en la preparación de
una composición farmacéutica para la utilización en el tratamiento
de trastornos proliferativos.
Los procedimientos anteriores puede utilizarse
para el cribado de un ligando que resulte útil como inhibidor de
uno o más enzimas CDK.
Un aspecto adicional de la invención se refiere
a un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula
I, tal como se ha definido anteriormente, comprendiendo dicho
procedimiento la reacción de un compuesto de fórmula V con un
compuesto de fórmula VI.
en la que R^{1-9}
son tal como se define en la reivindicación 1, y X es Cl o
F.
Preferentemente, dicho compuesto de fórmula V se
prepara mediante las etapas siguientes:
- (i)
- reacción de un compuesto de fórmula II con un compuesto de fórmula III, formando un compuesto de fórmula IV;
- (ii)
- alquilación de dicho compuesto de fórmula IV con un haluro de alquilo, R^{5}-X', para formar un compuesto de fórmula V.
Preferentemente, dicho compuesto de fórmula VI
se prepara mediante las etapas siguientes:
- (i)
- oxidación de un compuesto de fórmula VIII, en el que GP es un grupo protector, para formar un compuesto de fórmula IX;
- (ii)
- alquilación de dicho compuesto de fórmula IX, para formar un compuesto de fórmula X;
- (iii)
- eliminación del grupo protector GP de dicho compuesto de fórmula X, para formar un compuesto de fórmula IX, que es equivalente a la fórmula VI (en la que uno de entre R^{3} o R^{4} es H).
\vskip1.000000\baselineskip
Alternativamente, dicho compuesto de fórmula VI
se prepara mediante las etapas siguientes:
- (i)
- oxidación de un compuesto de fórmula VIII, en la que GP es un grupo protector, para formar un compuesto de fórmula IX;
- (ii)
- alquilación de dicho compuesto de fórmula IX, para formar un compuesto de fórmula X;
- (iii)
- oxidación de dicho compuesto de fórmula X, para formar un compuesto de fórmula XI;
- (iv)
- alquilación de dicho compuesto de fórmula XI, para formar un compuesto de fórmula XII;
- (v)
- eliminación del grupo protector GP de dicho compuesto de fórmula XIII, para formar un compuesto de fórmula VI.
Más preferentemente, la oxidación en la etapas
(i) y (iii) del procedimiento anterior se consigue mediante una
oxidación de Swern.
Preferentemente, la reacción de alquilación de
las etapas (ii) y (iv) del procedimiento anterior se consigue
tratando el compuesto con un reactivo de
alquil-litio en presencia de un complejo catalizador
de bromuro de cobre/sulfuro de dimetilo.
En una forma de realización alternativa
preferida, R^{3} = R^{4} y dicho compuesto de fórmula VI se
prepara mediante un procedimiento que comprende las etapas
siguientes:
- (i)
- conversión de un compuesto de fórmula XVI, en la que GP' es un grupo protector y R es un grupo alquilo, en un compuesto de fórmula XVII;
- (ii)
- eliminación del grupo protector GP' de dicho compuesto de fórmula XVII, para formar un compuesto de fórmula VI.
Preferentemente, dicho compuesto de fórmula XVI
se convierte en un compuesto de fórmula XVII a través de una
reacción doble de Grignard.
Más preferentemente, con respecto a la presente
forma de realización, dicho compuesto de fórmula VI se prepara
mediante las etapas siguientes:
- (i)
- reacción de un compuesto de fórmula XIV con SOCl_{2} y MeOH, para formar un compuesto de fórmula XV;
- (ii)
- protección del grupo amino de dicho compuesto de fórmula XV, para formar un compuesto de fórmula XVIa;
- (iii)
- reacción de dicho compuesto de fórmula XVIa con un reactivo de Grignard R^{3}X'', en el que R^{3} es tal como se define en la reivindicación 1 y X'' es un haluro, para formar un compuesto de fórmula XVII;
- (iv)
- eliminación del grupo protector GP' de dicho compuesto de fórmula XVII, para formar dicho compuesto de fórmula VI.
Resultarán familiares para los expertos en la
materia los grupos de protección adecuados GP y GP'. A modo de
ejemplo, preferentemente el grupo protector GP' es un grupo bencilo,
Bn, y el grupo protector GP es un grupo tritilo.
Se proporcionan detalles adicionales sobre la
preparación de los compuestos de la presente invención en los
ejemplos siguientes bajo el título de "Síntesis".
La presente invención se describe adicionalmente
mediante los ejemplos siguientes.
En contraste con la roscovitina, los compuestos
de la presente invención contienen sustituyentes en
C-2 de purina modificada. Particularmente, los
compuestos de la invención contienen sustituyentes
C-2 que presentan un grupo de alcohol secundario o
terciario en lugar de un grupo de alcohol primario. Sin pretender
restringirse a ninguna teoría en particular, se cree que la
presencia de dichos sustituyentes C-2 modificados
conduce a una reducción de la conversión metabólica de alcohol a
carboxilo.
Con el fin de compensar la reducción de
solubilidad acuosa esperada como resultado de la incorporación de
sustituyentes alquilo adicionales en el sustituyente
C-2, se sustituyó el grupo bencilamino
C-6 de la roscovitina por un grupo
(piridin-3-il)-metilamino.
Los ejemplos adjuntos demuestran que esta modificación se tolera en
términos de actividad biológica (CDK2/ciclina E o A, inhibición de
CDK1/ciclina B y efecto antiproliferativo sobre la línea celular
tumoral humana).
De esta manera, la presente invención demuestra
que la modificación de los sustituyentes C-2 y
C-6 de purina de la roscovitina proporcionan
compuestos nuevos con utilidad terapéutica mejorada. De hecho, se ha
demostrado que la introducción de uno o dos sustituyentes de
alquilo inferior en el C del carbinol del sustituyente
C-2 de la purina en la roscovitina no solamente se
tolera en términos de la retención de la actividad biológica
deseada (potencia y selectividad de la inhibición de la proteína
quinasa; citotoxicidad), sino que, en algunos casos, proporciona
compuestos más potentes. Además, la inclusión de un grupo
(piridin-3-il)-metilamino
en lugar del grupo bencilamino garantiza una hidrofilicidad y
perfiles de solubilidad acuosa mejorados para los compuestos de la
presente invención en comparación con la roscovitina (coeficientes
de partición de n-octanol/agua calculados:
2,5<ClogP<3,8 en comparación con ClogP = 3,7 para la
roscovitina). Además, los compuestos seleccionados ejemplificados
en la presente memoria se ha demostrado que poseen una resistencia
mejorada a la degradación metabólica utilizando un sistema in
vitro modelo adecuado.
Los compuestos de estructura general 1 pueden
prepararse mediante procedimientos conocidos de la técnica
(revisados en Fischer, P. M., y Lane, D. P. Curr. Med. Chem.
7:1213-1245, 2001). A continuación, en el esquema 1,
se muestra una ruta sintética conveniente y parte de
2,6-dicloropurina (2, X = Cl) o de
2-amino-6-cloropurina
(2, X = NH_{2}), disponibles comercialmente. En este último caso,
el grupo amino se transforma para proporcionar el material de
partida particularmente adecuado
6-cloro-2-fluoro-purina
(2, X = F; Gray, N. S., Kwon, S., y Schultz, P. G., Tetrahedron
Lett. 38:1161-1164, 1997). La aminación selectiva en
la posición más reactiva C-6 con la
piridilmetilamina 3 apropiada proporciona a continuación el
intermediario 4. Éste se alquila en posición N-9,
por ejemplo mediante sustitución nucleofílica utilizando el haluro
alquilo R^{5}-X apropiado. El producto 5
finalmente se amina con una hidroxietilamina 6 a temperatura
elevada.
Esquema
1
Los aminoalcoholes sustituidos 6 (R^{1} o
R^{2} <> H) pueden sintetizarse a partir de
\alpha-aminoalcoholes 7 (R^{1} o R^{2}
<> H), tal como se muestra en el Esquema 2. Muchos de estos
últimos se encuentran disponibles comercialmente; alternativamente,
pueden prepararse fácilmente por reducción de los
\alpha-aminoácidos correspondientes. La reacción
inicial en el procedimiento sintético adoptado consistió en la
protección del tritilo de la función amino, proporcionando el
intermediario 8 (R^{1} o R^{2} <> H; Evans, P. A.,
Holmes, A. B., y Russell, K. J., Chem. Soc., Perkin Trans.
1:3397-3409, 1994). Éste se sometió a oxidación de
Swern, dando lugar al aldehído 9 correspondiente (R^{1} o R^{2}
<> H; Takayama, H., Ichikawa, T., Kuwajima, T., Kitajima, M.,
Seki, H., Aimi, N., y Nonato, M. G., J. Am. Chem. Soc.
122:8635-8639, 2000). La introducción del
sustituyente R^{3} (si R^{2} <> H) o del sustituyente
R^{4} (si R^{1} <> H) se llevó a cabo mediante alquilación
controlada por quelación (Reetz, M. T., Roelfing, K., y Griebenow,
N., Tetrahedron Lett. 35:1969-1972, 1994) utilizando
el reactivo alquil-litio apropiado y un complejo
catalizador de bromuro de cobre/sulfuro de dimetilo en éter
dietílico. Dependiendo del sustituyente que se debe introducir,
este procedimiento proporcionó intermediarios 10 en exceso
diastereomérico (e.d.) de entre 50% y 80%. Alternativamente, pueden
utilizarse procedimientos aquirales, seguidos opcionalmente de
separación/resolución de los isómeros ópticos. Para la producción
de aminoalcoholes en los que tanto R^{3} como R^{4} son
diferentes de H, el intermediario 10 se sometió a otra reacción de
oxidación de Swern, dando lugar a la cetona 12 respectiva, seguido
de la introducción del segundo sustituyente mediante alquilación. La
etapa final de la síntesis para todos los aminoalcoholes consistió
en la eliminación del grupo tritilo utilizando ácido
trifluoroacético, proporcionando el compuesto 6 ú 11.
Esquema
2
En los casos en los que los aminoalcoholes
contienen dos sustituyentes idénticos en el C del carbinol (6,
R^{1} o R^{2} <> H; R^{3} = R^{4}, no es H), éstos
pueden obtenerse directamente a partir de un éster de
\alpha-aminoácido correspondiente adecuado, por
ejemplo mediante doble alquilación de Grignard (Guenther, B. R., y
Kirmse, W., Liebigs Ann. Chem. 518-532, 1980).
Los compuestos de los ejemplos siguientes se
investigaron para su actividad inhibidora de CDK2/ciclina E,
CDK1/ciclina B, CDK4/ciclina D1 y CDK7/ciclina H,
ERK-2 y PKA. Se expresaron en células sf9 utilizando
un sistema de expresión baculovirus las quinasas recombinantes
humanas dependientes de ciclina etiquetadas con His_{6}
siguientes: CDK1/ciclina B1, CDK2/ciclina E, CDK4 y CDK7/ciclina H.
La ciclina D1 recombinante se expresó en E. coli. Se
purificaron las proteínas mediante cromatografía de afinidad de
quelato metálico hasta una homogeneidad superior al 90%. Los
ensayos con quinasa se llevaron a cabo en placas de 96 pocillos
utilizando CDK/ciclinas recombinantes, ERK-2 activa
recombinante (Upstate Biotechnology), o subunidad catalítica de
quinasa dependiente de AMP cíclico (PKA) (Calbiochem nº de cat.
539487). Los ensayos se llevaron a cabo en tampón de ensayo
(\beta-glicerofosfato 25 mM, MOPS 20 mM, EGTA 5
mM, DTT 1 mM, Na_{3}VO_{3} 1 mM, pH 7,4), al que se le
añadieron entre 2 \mug y 4 \mug de enzima activo con sustratos
adecuados Chistona purificada H1 para CDK2, GST recombinante
proteína de retinoblastoma (residuos 773-928) para
CDK4, péptido
biotinil-Ahx-(Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser)_{4}
para CDK7, proteína básica de mielina para ERK-2, o
péptido Kemptide (Fluka Miochemika Cat. 60645) para PK1. Se inició
la reacción añadiendo una mezcla de Mg/ATP (MgCl_{2} 15 mM + ATP
100 \muM con 30 kBq a 50 kBq por pocillo de
[\gamma-^{32}P]-ATP) y mezclas
incubadas durante 10 minutos (CDK2/ciclina E, ERK-2,
PKA) o 45 minutos (CDK4, ciclina D1, CDK7/ciclina H) según
necesidad, a 30ºC. Se detuvieron las reacciones en hielo, seguido
de la filtración a través de placas de filtración p81 o GF/C (para
CDK4) (Whatman Polyfiltronics, Kent, UK), excepto para CDK7 en la
que, tras detener la reacción en hielo, se añadieron 10 \mul de
avidina a 10 mg/ml a cada pocillo y se incubaron nuevamente durante
10 minutos, seguido de la filtración, tal como en el ensayo de
CDK2. Tras 3 lavados con ácido ortofosfórico acuoso 75 mM, se
secaron las placas, se añadió cóctel de centelleo y se midió la
radioactividad incorporada en un contador de centelleo (TopCount,
Packard Instruments, Pangbourne, Berks., UK). Los compuestos para
los ensayos de quinasa se prepararon como soluciones madre 10 mM en
DMSO y se diluyeron en DMSO al 10% en tampón de ensayo. Los datos se
analizaron utilizando software de ajuste de ecuaciones de regresión
a curvas (Graphpad Prism versión 3,00 para Windows, GraphPad
Software, San Diego California, USA) con el fin de determinar los
valores de IC_{50} (concentración del compuesto de ensayo que
inhibe la actividad en un 50%). Estos valores de los compuestos de
la presente invención se muestran en la Tabla 1.
Los compuestos de los ejemplos descritos a
continuación fueron sometidos a un ensayo estándar de proliferación
celular utilizando las líneas celulares tumorales humanas
siguientes: A-459, HeLa, HT-29,
MCF7, Saos-2, CCRF-CEM,
HL-60, y K-562. Las líneas celulares
se obtuvieron de la ATCC (American Type Culture Collection, 10801
University Boulevard, Manessas, VA. 20110-2209,
USA). Se llevaron a cabo ensayos estándares con MTT de 72 horas
(azul de tiazolilo; bromuro de
3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolio)
(Haselsberger, K.; Peterson, D. C.; Thomas, D. G.; Darling, J. L.,
Anti Cancer Drugs, 1996, 7, 331-8; Loveland,
B. E.; Johns, T. G.; Mackay, I. R.; Vaillant, F.; Wang, Z. X.;
Hertzog, P. J., Biochemistry International
27:501-10, 1992). En resumen: se cultivaron las
células en placas de 96 pocillos de acuerdo con tiempo de doblado y
se incubaron durante la noche a 37ºC. Los compuestos de ensayo se
prepararon en DMSO y se preparó una dilución 1/3 en serie en 100
\mul de medio celular, se añadieron a las células (por triplicado)
y se incubaron durante 72 horas a 37ºC. La MTT se preparó como
solución madre de 5 mg/ml en medio celular y se esterilizó mediante
filtración. Se eliminó el medio de las células seguido de un lavado
con 200 \mul de PBS. A continuación, se añadió la solución de
MTT, 20 \mul por pocillo, y se incubó en la oscuridad a 37ºC
durante 4 horas. Se eliminó la solución de MTT y se lavaron las
células nuevamente con 200 \mul de PBS. Se solubilizó el colorante
MTT con 200 \mul de DMSO por pocillo bajo agitación. Se leyó la
absorbancia a 540 nm y se analizaron los datos utilizando software
para el ajuste de regresiones a curvas (GraphPad Prism versión 3.00
para Windows, GraphPad Software, San Diego California, USA) con el
fin de determinar los valores de IC_{50} (concentración del
compuesto de ensayo que inhibe la actividad en un 50%). Estos
valores de los compuestos de la presente invención se muestran en la
Tabla 2.
Se examinaron compuestos representativos de la
presente invención por su efecto antiproliferativo frente a líneas
celulares tumorales humanas y frente a líneas celulares humanas
inmortalizadas no trasformadas (líneas celulares "normales").
Los resultados se resumen en la Tabla 3. Puede apreciarse que los
compuestos examinados son agentes antiproliferativos varias veces
más potentes en comparación con la roscovitina. Además, su efecto
citotóxico es significativamente más pronunciado frente a líneas
celulares transformadas que frente a líneas celulares no
transformadas.
Se obtuvieron microsomas de Totem Biologicals,
Northampton, Inglaterra. Se mezclaron la proteína microsómica (0,2
mg) y la roscovitina o un compuesto de ensayo de la invención
(concentración final 10 \muM) en solución salina tamponada con
fosfato (100 \mul) que contenía NADPH (20 nM), MgCl_{2} (10 nM)
y EDTA (1,5 nM). Se incubaron las muestras durante 30 minutos y se
detuvo la reacción mediante la adición de metanol helado (300
\mul) que contenía olomoucina (Vesely, J., Havlicek, L., Strnad,
M., Blow, J. J., Donella-Deana, A., Pinna, L.,
Letham, D. S., Kato, J., Detivaud, L., Leclerc, S., Meijer, L.,
Eur. J. Biochem., 1994, 224, 771-786) como
estándar interno. Se prepararon curvas de calibración a 0 \muM, 1
\muM y 10 \muM en microsomas previamente incubados durante 30
minutos, y éstos también se trataron con metanol que contenía
olomucina. A continuación, se centrifugaron todas las muestras y se
analizaron los sobrenadantes mediante cromatografía
líquida-espectrometría de masas.
La columna de cromatografía era una columna
Supelco LC-ABZ, 50 mm x 4,6 mm, zwitteriónica de 5
\mum (Supelco Inc., Supelco Park, Bellefonte, PA., USA). Los
gradientes de eluyente consistían de metanol (A) y ácido fórmico al
0,1% en agua (B). El gradiente se inició con una proporción 10:90
(A:B v/v) que se mantuvo isocráticamente durante 0,5 minutos,
seguido de un incremento lineal hasta llegar a la proporción 90:10
(A:B v/v) durante más de 6 minutos que después se mantuvo bajo
estas condiciones durante 4 minutos adicionales. El caudal se
mantuvo a 1 ml/min durante todo el procedimiento. Se introdujeron
cuatro muestras de LC-UV-MS
utilizando un automuestreador Gilson 215 (Anachem Ltd.,
Bedfordshire, UK) junto con una bomba cuaternaria Thermoseparations
P4000, una columna (tal como se ha descrito anteriormente) y un
equipo detector Thermoseparations UV1000 fijado a 254 nm
(Thermoquest Ltd., Hemel Hempstead, Hertfordshire, UK). El eluyente
del detector pasó, sin separarse, a un espectrómetro de masas de
trampa de iones Thermoquest LCQ dotado de una fuente de
electropulverización que funcionaba en modo positivo. Las
condiciones del espectrómetro de masas eran de gas de impulsión 80,
gas auxiliar 20 (ambas unidades arbitrarias), voltaje capilar de 4
kV a 4,5 kV y temperatura del capilar caliente de entre 250ºC y
280ºC. El intervalo de masas era de 50 a 750. Se controló el tiempo
de barrido mediante la trampa de iones, que se configuró a un
tiempo máximo de inyección de iones de 200 ms o al tiempo requerido
para inyectar 2 x 10^{8} iones; en cada barrido, el sistema
utilizó automáticamente el tiempo que se alcanzaba antes.
Para el análisis de los resultados se extrajeron
trazas de iones seleccionadas de los iones MH^{+} del compuesto
de ensayo y estándar interno y se obtuvo el área de los picos
relevantes. A continuación se comparó la proporción del área
(compuesto de ensayo/estándar interno) de la incubación de ensayo
con las proporciones de las áreas de los picos obtenidas a partir
de la curva de calibración del compuesto de ensayo. A partir de
estos valores, se determinó la concentración del compuesto de
ensayo restante tras 30 minutos de incubación de proteína
microsómica. Los resultados de los compuestos representativos de la
presente invención se resumen en la Tabla 3, en la que también se
compara la estabilidad metabólica del compuesto con la de la
roscovitina en términos de metabolismo (columna A), de inhibición
de la CDK2 in vitro (columna B), y de toxicidad in
vitro en las líneas celulares tumorales (columna C). También se
muestra una comparación entre la eficacia in vitro (columna A
x columna C) y la exposición celular (columna A x columna C). Estos
resultados sugieren que los compuestos de la presente invención
presentan una eficacia in vivo mejorada en comparación con la
de la roscovitina. En la Tabla 3 también se incluyen los
coeficientes de partición de n-octanol/agua
calculados (ClogP). Puede apreciarse que los compuestos con
actividad celular y estabilidad metabólica mejoradas también poseen
un valor de ClogP inferior al de la roscovitina, sugiriendo una
solubilidad acuosa mejorada y de esta manera, la facilidad de
formularla para la administración farmacológica in vivo.
Se disolvió
bencil-(2-fluoro-9-isopropil-9H-purin-6-il)-amino
(151 mg, 0,5 mmoles) en NMP (5 ml) y en DBU (1,5 ml, 10 mmoles). A
continuación, se añadió ácido
(R)-(-)-2-aminobutírico (ee/GLC 99%;
1,03 g, 10 mmoles) y se agitó la mezcla bajo N_{2} a 160ºC
durante 1 hora. Tras el enfriamiento, se diluyó la mezcla con ácido
cítrico (solución acuosa al 10%) y con CH_{2}Cl_{2} (25 ml de
cada uno). Se separaron estas fases y se extrajo la fracción
orgánica con una solución hipersalina (2 x 10 ml), se secó sobre
MgSO_{4}, se filtró, y se evaporó. Se redisolvió el residuo en
MeCN y se fraccionó mediante HPLC-RP preparativa
(Vydac 218TP1022, 9 ml/min, 22,5% a 32,5% de MeCN en H_{2}O con
contenía CF_{3}COOH al 0,1% durante más de 40 minutos). Se
agruparon fracciones adecuadas y se liofilizaron, proporcionando el
compuesto del título puro (137 mg, 74,4%) en forma de sólido
blanquecino amorfo. Análisis de HPLC-RP (Vydac
218TP54, 1 ml/min): t_{R}=16,04 min (0% a 60% de MeCN), 15,95 min
(22,5% a 32,5% de MeCN en H_{2}O que contenía CF_{3}COOH al 0,1%
durante 20 minutos), pureza: >98% (\lambda=214 nm).
^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO, 300 MHz):
\delta 0,95 (t, J=7,3 Hz, 3H, CH_{2}CH_{3}); 1,51 (d,
J=6,7 Hz, 6H, CH(CH_{3})_{2}); 1,78 (m,
J=7,3 Hz, 2H, CH_{2}CH_{3}); 4,27 (m, 1H,
CHCH_{2}); 4,64 (hept., J=6,7 Hz, 1H,
CH(CH_{3})_{2}); 4,69 (m, 2H, CH_{2}Ph);
7,25-7,41 (m, 6H, ArH).
DE-MALDI-TOF MS (matriz de ácido
\alpha-ciano-4-hidroxicinámico):
[M+H]^{+} = 369,41. FAB-MS:
[M+H]^{+} = 369,2033 (C_{19}H_{25}N_{6}O_{2}
requiere 369,2039).
Se añadió DIEA (30 ml, 1,54 eq, 172,22 mmoles) a
una solución agitada de
(R)-(-)2-aminobutan-1-ol
(10 g, 1 eq., 112,18 mmoles) en DCM (500 ml) bajo una atmósfera de
argón a temperatura ambiente, seguido de cloruro de tritilo (35,4
ml, 1,13 eq., 126,98 mmoles). Se agitó la mezcla de reacción a
temperatura ambiente durante 48 horas, tras indicar el TLC
(hexano:éter:MeOH; 55:40:5) que la reacción se había completado. Se
evaporó el solvente in vacuo y se precipitó el residuo a
partir de acetona (50 ml) con hexano (900 ml) bajo agitación,
eliminando el precipitado mediante filtración y evaporando el
filtrado in vacuo. Se disolvió el residuo en hexano (1 l),
se filtró y se evaporó el filtrado in vacuo, proporcionando
el compuesto del título en forma de aceite amarillo claro.
Rendimiento: 32 g (86%). ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta 0,56 (t, 3H,
J=7,41 Hz, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH_{2}OH),
1,10 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH_{2}OH), 2,22
(m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH_{2}OH),
2,38 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH_{2}OH), 2,72
+ 3,00 (2 x m, 2H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH_{2}OH), 4,28 (t, 1H,
J=5,26 Hz, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH_{2}OH),
7,14-7,49 (m, 15H, 3 x Ph).
Se añadió DIEA (30 ml, 1,54 eq, 172,22 mmoles) a
una solución agitada de
(S)-(+)-2-aminobutan-1-ol
(10 g, 1 eq., 112,18 mmoles) en DCM (500 ml) bajo una atmósfera de
argón a temperatura ambiente, seguido de cloruro de tritilo (35,4
ml, 1,13 eq., 126,98 mmoles). Se agitó la mezcla de reacción a
temperatura ambiente durante 48 horas, al indicar la TLC
(hexano:éter:MeOH; 55:40:5) que la reacción se había completado. Se
evaporó el solvente in vacuo y se precipitó el residuo a
partir de acetona (50 ml) con hexano (900 ml) bajo agitación,
eliminando el precipitado mediante filtración y evaporando el
filtrado in vacuo. Se disolvió el residuo en hexano (1 l),
se filtró y se evaporó el filtrado in vacuo, proporcionando
el compuesto del título en forma de aceite amarillo claro.
Rendimiento: 33 g (89%). ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta 0,58 (t, 3H,
J=7,26 Hz, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH_{2}OH),
1,10 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH_{2}OH), 2,24
(m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH_{2}OH),
2,39 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH_{2}OH), 2,76
& 3,03 (2 x m, 2H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH_{2}OH), 4,32 (t, 1H,
J=4,97 Hz, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH_{2}OH),
7,15-7,52 (m, 15H, 3 x Ph).
Se añadió gota a gota cloruro de oxalilo (2 M en
DCM, 10,56 ml, 1,40 eq, 21,12 mmoles) a una solución agitada de
DMSO (3,0 ml, 2,8 eq, 42,28 mmoles) en DCM (30 ml) bajo una
atmósfera de argón a -45ºC. Se agitó la mezcla de reacción a -45ºC
durante 1 hora, seguido de la adición gota a gota de una solución de
(R)-2-(tritil-amino)-butan-1-ol
(5 g, 1 eq, 15,08 mmoles) en DCM (30 ml) bajo agitación. Se agitó
la mezcla de reacción a esta temperatura durante 3 horas, al
indicar la TLC (hexano:éter; 80:20) que la reacción se había
completado. Se añadió una solución de TEA (10,5 ml, 5 eq, 75,33
mmoles) en DCM (30 ml) a la mezcla de reacción, y se dejó que la
solución se calentara hasta la temperatura ambiente a lo largo de
16 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con una cantidad
adicional de DCM (200 ml) y se lavó con agua (250 ml). Se extrajo la
fase acuosa con DCM (3 x 50 ml), y se lavó la fase orgánica
agrupada con una solución hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4})
y se evaporó in vacuo. Se disolvió el residuo en éter (30
ml), se eliminó el precipitado sólido mediante filtración y se
evaporó el filtrado in vacuo. Se disolvió el residuo en
hexano (50 ml), se eliminó el precipitado mediante filtración y se
evaporó el filtrado in vacuo, proporcionando el compuesto del
título en forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 2,59 g
(52%). ^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO,
250 MHz): \delta 0,77 (t, 3H, J=7,42 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CHO),
1,34-1,61 (m, 2H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CHO), 2,92 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CHO), 3,62 (d, 1H, J=8,21 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CHO),
7,16-7,46 (m, 15H, 3 x Ph), 8,77 (d, 1H, J=3,00 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CHO).
Se añadió cloruro de oxalilo (2 M en DCM, 8,45
ml, 1,40 eq, 16,9 mmoles) a una solución agitada de DMSO (2,4 ml,
2,8 eq, 33,82 mmoles) en DCM (30 ml) bajo una atmósfera de argón a
-45ºC, gota a gota. Se agitó la mezcla de reacción a -45ºC durante
1 hora, seguido de la adición gota a gota de una solución de
(S)-2-(tritil-amino)-butan-1-ol
(4 g, 1 eq, 12,07 mmoles) en DCM (30 ml) bajo agitación. Se agitó
la mezcla de reacción a esta temperatura durante 3 horas, al
indicar la TLC (hexano:éter; 80:20) que la reacción se había
completado. Se añadió una solución de TEA (8,4 ml, 5 eq, 60,27
mmoles) en DCM (30 ml) a la mezcla de reacción, y se dejó que la
solución se calentara hasta la temperatura ambiente a lo largo de
16 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con una cantidad
adicional de DCM (100 ml) y se lavó con agua (250 ml). Se extrajo la
fase acuosa con DCM (3 x 50 ml), y se lavó la fase orgánica
agrupada con una solución hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4})
y se evaporó in vacuo. Se disolvió el residuo en éter (30
ml), se eliminó el precipitado sólido mediante filtración y se
evaporó el filtrado in vacuo. Se disolvió el residuo en
hexano (50 ml), se eliminó el precipitado mediante filtración y se
evaporó el filtrado in vacuo, proporcionando el compuesto del
título en forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 3,64 g
(91%). ^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO,
250 MHz): \delta 0,77 (t, 3H, J=7,42 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CHO),
1,37-1,59 (m, 2H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CHO), 2,93 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CHO), 3,62 (d, 1H, J=5,84 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CHO),
7,16-7,46 (m, 15H, 3 x Ph), 8,77 (d, 1H, J=3,00 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CHO).
Se añadió gota a gota
metil-litio (1,6 M en Et_{2}O, 16,6 ml, 4,4 eq,
26,56 mmoles) a una suspensión agitada de CuBr.SMe_{2} (2,74 g,
2,2 eq, 13,33 mmoles) en Et_{2}O (100 ml) bajo una atmósfera de
argón a -70ºC, y se dejó que la solución se calentara hasta la
temperatura ambiente. Se volvió a enfriar la mezcla hasta -70ºC,
añadiendo a continuación gota a gota una solución de
(R)-2-(tritil-amino-)-butiraldehído
(2 g, 1 eq, 6,05 mmoles) en Et_{2}O (25 ml) bajo agitación. Se
agitó la mezcla de reacción a esta temperatura durante 2 horas, al
indicar la TLC (hexano:éter; 80:20) que la reacción se había
completado. Se añadió una solución acuosa saturada de NH_{4}Cl
(100 ml) a la mezcla de reacción, y se dejó que la mezcla se
calentara hasta la temperatura ambiente a lo largo de 16 horas. Se
extrajo la mezcla de reacción con éter (2 x 200 ml), y se lavó la
fase orgánica agrupada con una solución hipersalina (50 ml), se secó
(MgSO_{4}) y se evaporó in vacuo. Se purificó el residuo
mediante cromatografía de columna en gel de sílice eluyendo con
hexano:éter (80:20), proporcionando el compuesto del título en
forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 1,91 g (91%). (80%
e.d. 2S,3R: 20% e.d.
2R,3R). ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta 0,47 & 0,55 (2
x t, J=7,43 & 7,27 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
0,99-1,12 (m, 5H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
2,03 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
3,32-3,51 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH), 4,40
(d, 1H, J = 3,79 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
7,14-7,51 (m, 15H, 3 x Ph).
Se añadió gota a gota
metil-litio (1,6 M en éter, 15,13 ml, 4,0 eq, 24,21
mmoles) a una suspensión agitada de CuBr.SMe_{2} (2,74 g, 2,2 eq,
13,33 mmoles) en éter (100 ml) bajo una atmósfera de argón a -70ºC,
y se dejó que la solución se calentara hasta la temperatura
ambiente. Se volvió a enfriar la mezcla hasta -70ºC, añadiendo a
continuación gota a gota una solución de
(S)-2-(tritil-amino-)-butiraldehído
(2 g, 1 eq, 6,05 mmoles) en Et_{2}O (25 ml) bajo agitación. Se
agitó la mezcla de reacción a esta temperatura durante 2 horas y a
continuación a -55ºC durante 4 horas, al indicar la TLC
(hexano:Et_{2}O; 80:20) que la reacción se había completado. Se
añadió una solución acuosa saturada de NH_{4}Cl (100 ml) a la
mezcla de reacción, y se dejó que la mezcla se calentara hasta la
temperatura ambiente a lo largo de 16 horas. Se extrajo la mezcla de
reacción con Et_{2}O (2 x 200 ml), y se lavó la fase orgánica
agrupada con una solución hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4})
y se evaporó in vacuo. Se purificó el residuo mediante
cromatografía de columna en gel de sílice eluyendo con
hexano:Et_{2}O (80:20), proporcionando el compuesto del título en
forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 1.37 g (66%). (80%
e.d. 2R,3S: 20% e.d.
2S,3S). ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta 0,47 & 0,55
(2 x t, J=7,50 & 7,26 Hz
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
0,99-1,12 (m, 5H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
2,01 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
3,22-3,43 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH), 4,41
(d, 1H, J=3,31 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
7,14-7,56 (m, 15H, 3 x Ph).
Se añadió gota a gota bromuro de etilmagnesio (3
M en Et_{2}O, 1,51 ml, 1 eq, 4,53 mmoles) a una solución agitada
de
(R)-2-(tritil-amino)-butiraldehído
(1,5 g, 1 eq, 4,53 mmoles) en Et_{2}O (150 ml) bajo una atmósfera
de argón a -78ºC. Se agitó la solución a -78ºC durante 2 horas, a
continuación se dejó que se calentara hasta la temperatura ambiente
a lo largo de 16 horas. Se volvió a enfriar la mezcla hasta 0ºC, se
añadió H_{2}O (150 ml), y se separó la fase orgánica. Se extrajo
la fase acuosa con una cantidad adicional de Et_{2}O (2 x 50 ml),
y se lavó la fase orgánica agrupada con una solución hipersalina (50
ml), se secó (MgSO_{4}) y se evaporó in vacuo. Se purificó
el residuo mediante cromatografía de columna en gel de sílice
eluyendo con hexano:éter (90:10), proporcionando el compuesto del
título en forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 1,13 g
(69%). (57% e.d. 3S,4R: 43% e.d.
3R,4R). ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta 0,45 & 0,69
(t & m, 6H, J=7,43 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
1,12-1,29 (m, 4H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
2,16 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
2,54 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
3,21-3,40 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
4,29+4,39 (2 x d, 1H, J=4,42 & 5,37 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
7,15-7,52 (m, 15H, 3 x Ph).
Se añadió gota a gota bromuro de etilmagnesio (3
M en Et_{2}O, 1,51 ml, 1 eq, 4,53 mmoles) a una solución agitada
de
(R)-2-(tritil-amino)-butiraldehído
(1,5 g, 1 eq, 4,53 mmoles) en Et_{2}O (150 ml) bajo una atmósfera
de argón a -78ºC. Se agitó la solución a -78ºC durante 2 horas, a
continuación se permitió que se calentara hasta la temperatura
ambiente a lo largo de 16 horas. Se volvió a enfriar la mezcla hasta
0ºC, se añadió H_{2}O (150 ml), y se separó la fase orgánica. Se
extrajo la fase acuosa con Et_{2}O (2 x 50 ml), y se lavó la fase
orgánica agrupada con una solución hipersalina (50 ml), se secó
(MgSO_{4}) y se evaporó in vacuo. Se purificó el residuo
mediante cromatografía de columna en gel de sílice eluyendo con
hexano:éter (90:10), proporcionando el compuesto del título en
forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 1,19 g (73%). (65%
e.d. 3R,4S: 35% e.d.
3S,4S). ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta 0,46+0,69 (t &
m, 6H, J=7,34 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
1,13-1,29 (m, 4H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
2,17 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
2,55 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
3,20-3,39 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
4,29 & 4,39 (2 x d, 1H, J=4,74 & 5,53 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
7,15-7,52 (m, 15H, 3 x Ph).
Se añadió gota a gota
isopropil-litio (0,7 M en pentano, 17,29 ml, 4 eq,
12,1 mmoles) a una suspensión agitada de CuBr.SMe_{2} (1,37 g,
2,2 eq, 6,66 mmoles) en Et_{2}O (100 ml) bajo una atmósfera de
argón a -78ºC, y se dejó que la solución se calentara hasta la
temperatura ambiente. Se volvió a enfriar la mezcla hasta -70ºC,
añadiendo a continuación gota a gota una solución de
(R)-2-(tritil-amino-)-butiraldehído
(1 g, 1 eq, 3,03 mmoles) en Et_{2}O (25 ml) bajo agitación. Se
agitó la mezcla de reacción a esta temperatura durante 1 hora, a
continuación se dejó que se calentara hasta los -55ºC y se agitó a
esta temperatura durante 3 horas. Se añadió una solución acuosa
saturada de NH_{4}Cl (100 ml) a la mezcla de reacción, y se dejó
que la mezcla se calentara hasta la temperatura ambiente a lo largo
de 16 horas. Se extrajo la mezcla de reacción con Et_{2}O (2 x
200 ml), y se lavó la fase orgánica agrupada con una solución
hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4}) y se evaporó in
vacuo. Se purificó el residuo mediante cromatografía de columna
en gradiente de gel de sílice eluyendo con hexano:Et_{2}O (100:0
\rightarrow 90:10), proporcionando el compuesto del título en
forma de aceite incoloro. Rendimiento: 0,53 g (47%). (50%
e.d. 3S,4R: 50% e.d.
3R,4R) ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta 0,44 (t, 3H,
J=7,03 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
0,52 & 0,77 (2 x d, 6H, J=6,48 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 0,79-1,13 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 1,72 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 2,11 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 2,77 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 2,99 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 4,55 (d, 1H, J=5,21 Hz, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 7,15-7,46 (m, 15H, 3 x Ph).
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 0,79-1,13 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 1,72 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 2,11 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 2,77 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 2,99 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 4,55 (d, 1H, J=5,21 Hz, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 7,15-7,46 (m, 15H, 3 x Ph).
Se añadió gota a gota
isopropil-litio (0,7 M en pentano, 17,29 ml, 4 eq,
12,1 mmoles) a una suspensión agitada de CuBr.SMe_{2} (1,37 g,
2,2 eq, 6,66 mmoles) en Et_{2}O (100 ml) bajo una atmósfera de
argón a -78ºC, y se dejó que la solución se calentara hasta la
temperatura ambiente. Se volvió a enfriar la mezcla hasta -70ºC,
añadiendo a continuación gota a gota una solución de
(S)-2-(tritil-amino-)-butiraldehído
(1 g, 1 eq, 3,03 mmoles) en Et_{2}O (25 ml) bajo agitación. Se
agitó la mezcla de reacción a esta temperatura durante 1 hora, a
continuación se dejó que se calentara hasta los -55ºC y se agitó a
esta temperatura durante 3 horas. Se añadió una solución acuosa
saturada de NH_{4}Cl (100 ml) a la mezcla de reacción, y se dejó
que la mezcla se calentara hasta la temperatura ambiente a lo largo
de 16 horas. Se extrajo la mezcla de reacción con Et_{2}O (2 x
200 ml), y se lavó la fase orgánica agrupada con una solución
hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4}) y se evaporó in
vacuo. Se purificó el residuo mediante cromatografía de columna
en gel de sílice eluyendo con hexano:éter (100:0 \rightarrow
90:10), proporcionando el compuesto del título en forma de aceite
incoloro. Rendimiento: 0,36 g (32%). (50% e.d.
3R,4S: 50% e.d. 3S,4S)
^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO, 250 MHz):
\delta 0,44 (t, 3H, J=6,79 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
0,52 & 0,76 (2 x d, 6H, J=6,63 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})
OH), 0,80-1,15 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 1,70 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 2,10 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 2,76 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 2,99 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 4,55 (d, 1H, J=5,84 Hz, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 7,17-7,46 (m, 15H, 3 x Ph).
OH), 0,80-1,15 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 1,70 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 2,10 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 2,76 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 2,99 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 4,55 (d, 1H, J=5,84 Hz, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 7,17-7,46 (m, 15H, 3 x Ph).
Se añadió gota a gota
terc-butillitio(1,5 M en pentano, 8,0 ml, 4
eq, 12,0 mmoles) a una suspensión agitada de CuBr.SMe_{2} (1,37
g, 2,2 eq, 6,66 mmoles) en Et_{2}O (100 ml) bajo una atmósfera de
argón a -78ºC, y se dejó que la solución se calentara hasta la
temperatura ambiente. Se volvió a enfriar la mezcla hasta -55ºC,
añadiendo a continuación gota a gota una solución de
(R)-2-(tritil-amino-)-butiraldehído
(1 g, 1 eq, 3,03 mmoles) en Et_{2}O (25 ml) bajo agitación, y se
agitó a esta temperatura durante 3 horas. Se añadió una solución
acuosa saturada de NH_{4}Cl (100 ml) a la mezcla de reacción, y se
dejó que la mezcla se calentara hasta la temperatura ambiente a lo
largo de 16 horas. Se extrajo la mezcla de reacción con Et_{2}O (2
x 200 ml), y se lavó la fase orgánica agrupada con una solución
hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4}) y se evaporó in
vacuo. Se purificó el residuo mediante cromatografía de columna
en gradiente de gel de sílice eluyendo con hexano:éter (100:0
\rightarrow 90:10), proporcionando el compuesto del título en
forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 0,57 g (49%). (55%
e.d. 3S,4R: 45% e.d.
3R,4R), ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta 0,36 & 0,86
(2 x t, 3H, J=7,42 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
0,57 & 0,71 (2 x s, 9H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
1,38-1,52 (m, 2H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
1,99 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
2,27 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
2,95 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
4,22 & 4,77 (2 x d, 1H, J=4,42 5,21 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
7,14-7,52 (m, 15H, 3 x Ph).
Se añadió gota a gota
terc-butil-litio (1,5 M en pentano,
8,0 ml, 4 eq, 12,0 mmoles) a una suspensión agitada de
CuBr.SMe_{2} (1,37 g, 2,2 eq, 6,66 mmoles) en Et_{2}O (100 ml)
bajo una atmósfera de argón a -78ºC, y se dejó que la solución se
calentara hasta la temperatura ambiente. Se volvió a enfriar la
mezcla hasta -55ºC, añadiendo a continuación una solución de
(S)-2-(tritil-amino-)-butiraldehído
(1 g, 1 eq, 3,03 mmoles) en Et_{2}O (25 ml) gota a gota, bajo
agitación, y se agitó a esta temperatura durante 3 horas. Se añadió
una solución acuosa saturada de NH_{4}Cl (100 ml) a la mezcla de
reacción, y se dejó que la mezcla se calentara hasta la temperatura
ambiente a lo largo de 16 horas. Se extrajo la mezcla de reacción
con Et_{2}O (2 x 200 ml), y se lavó la fase orgánica agrupada con
una solución hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4}) y se evaporó
in vacuo. Se purificó el residuo mediante cromatografía de
columna en gel de sílice eluyendo con hexano:éter (100:0
\rightarrow 90:10), proporcionando el compuesto del título en
forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 0,47 g (40%). (53%
e.d. 3R,4S: 47% e.d.
3S,4S), ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta 0,37 & 0,87
(2 x t, 3H, J=7,46 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
0,58 & 0,71 (2 x s, 9H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
1,38-1,52 (m, 2H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
2,00 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})
OH), 2,28 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH), 2,95 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH), 4,24 & 4,79 (2 x d, 1H, J=5,21 & 6,16 Hz, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH), 7,15-7,53 (m, 15H, 3 x Ph).
OH), 2,28 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH), 2,95 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH), 4,24 & 4,79 (2 x d, 1H, J=5,21 & 6,16 Hz, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH), 7,15-7,53 (m, 15H, 3 x Ph).
Se añadió gota a gota cloruro de oxalilo (2 M en
DCM, 7,69 ml, 1,4 eq, 15,38 mmoles) a una solución agitada de DMSO
(2,19 ml, 2,8 eq, 30,86 mmoles) en DCM (30 ml) bajo una atmósfera de
argón a -45ºC. Se agitó la mezcla de reacción a -45ºC durante 1
hora, seguido de la adición gota a gota de una solución de
(2S,3R)-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol
(3,81 g, 1 eq, 11,04 mmoles) en DCM (20 ml) bajo agitación. Se
agitó la mezcla de reacción a esta temperatura durante 4 horas, al
indicar la TLC (hexano:éter; 80:20) que la reacción se había
completado. Se añadió N-etilpiperidina (7,54 ml, 5 eq, 54,88
mmoles) a la mezcla de reacción, y se dejó que la solución se
calentara hasta la temperatura ambiente a lo largo de 16 horas. Se
diluyó la mezcla de reacción con una cantidad adicional de DCM (50
ml) y se lavó con agua (200 ml). Se extrajo la fase acuosa con DCM
(2 x 50 ml), y se lavó la fase orgánica agrupada con una solución
hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4}) y se evaporó in
vacuo. Se disolvió el residuo en Et_{2}O (100 ml), se eliminó
el precipitado sólido mediante filtración y se evaporó el filtrado
in vacuo. Se disolvió el residuo en hexano (50 ml), se
eliminó el precipitado mediante filtración y se evaporó el filtrado
in vacuo, proporcionando el compuesto del título en forma de
aceite amarillo claro. Rendimiento: 3,78 g (100%).
^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO, 250 MHz):
\delta 0,73 (t, 3H, J=7,35 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})O),
1,47-1,60 (m, 5H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3}O), 3,12 (d,
1H, J=8,38 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})O),
3,32 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})O),
7,16-7,49 (m, 15H, 3 x Ph).
Se añadió gota a gota cloruro de oxalilo (2 M en
DCM, 6,85 ml, 1,4 eq, 13,70 mmoles) a una solución agitada de DMSO
(1,95 ml, 2,8 eq, 27,48 mmoles) en DCM (30 ml) bajo una atmósfera de
argón a -45ºC. Se agitó la mezcla de reacción a -45ºC durante 1
hora, seguido de la adición gota a gota de una solución de
(2R,3S)-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol
(3,39 g, 1 eq, 9,83 mmoles) en DCM (20 ml) bajo agitación. Se agitó
la mezcla de reacción a esta temperatura durante 4 horas, al
indicar la TLC (hexano:éter; 80:20) que la reacción se había
completado. Se añadió N-etilpiperidina (6,71 ml, 5 eq, 48,84
mmoles) a la mezcla de reacción, y se dejó que la solución se
calentara hasta la temperatura ambiente a lo largo de 16 horas. Se
diluyó la mezcla de reacción con una cantidad adicional de DCM (50
ml) y se lavó con agua (200 ml). Se extrajo la fase acuosa con DCM
(2 x 50 ml), y se lavó la fase orgánica agrupada con una solución
hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4}) y se evaporó in
vacuo. Se disolvió el residuo en Et_{2}O (100 ml), se eliminó
el precipitado sólido mediante filtración y se evaporó el filtrado
in vacuo. Se disolvió el residuo en hexano (50 ml), se
eliminó el precipitado mediante filtración y se evaporó el filtrado
in vacuo, proporcionando el compuesto del título en forma de
aceite amarillo claro. Rendimiento: 3,15 g (93%).
^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO, 250 MHz):
\delta 0,73 (t, 3H, J=7,50 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})O),
1,45-1,62 (m, 5H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3}O), 3,12 (d,
1H, J=8,53 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})O),
3,31 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})O),
7,13-7,45 (m, 15H, 3 x Ph).
Se añadió gota a gota yoduro de metilmagnesio (3
M en éter, 2,54 ml, 3 eq, 7,62 mmoles) a una solución agitada de
(3R)-3-(tritil-amino)-pentan-2-ona
(0,87 g, 1 eq, 2,54 mmoles) en Et_{2}O (100 ml) bajo una atmósfera
de argón a temperatura ambiente. Se introdujo la solución en un
baño de aceite precalentado a 45ºC y se sometió a reflujo a esta
temperatura durante 16 horas. Se volvió a enfriar la mezcla hasta
0ºC, se añadió H_{2}O (100 ml), se filtró la solución a través de
Celite, y se lavó el Celite con una cantidad adicional de Et_{2}O
(50 ml). Se separó la fase orgánica agrupada, se extrajo la fase
acuosa con Et_{2}O (2 x 50 ml), y se lavó la fase orgánica
agrupada con una solución hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4})
y se evaporó in vacuo. Se purificó el residuo mediante
cromatografía de columna en gel de sílice eluyendo con hexano:éter
(100:0 \rightarrow 90:10), proporcionando el compuesto del título
en forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 0,21 g (23%).
^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO, 250 MHz):
\delta 0,26 (t, J=7,42 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
1,00 & 1,25 (2 x s, 6H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
0,72-1,43 (m, 2H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
1,84 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
2,90 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
4,32 (s, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
7,17-7,46 (m, 15H, 3 x Ph).
Se añadió gota a gota yoduro de metilmagnesio (3
M en Et_{2}O, 1,72 ml, 3 eq, 5,16 mmoles) a una solución agitada
de
(3S)-3-(tritil-amino)-pentan-2-ona
(0,59 g, 1 eq, 1,72 mmoles) en Et_{2}O (100 ml) bajo una atmósfera
de argón a temperatura ambiente. Se introdujo la solución en un
baño de aceite precalentado a 45ºC y se sometió a reflujo a esta
temperatura durante 16 horas. Se volvió a enfriar la mezcla hasta
0ºC, se añadió H_{2}O (100 ml), se filtró la solución a través de
Celite, y se lavó el Celite con una cantidad adicional de Et_{2}O
(50 ml). Se separó la fase orgánica agrupada, se extrajo la fase
acuosa con Et_{2}O (2 x 50 ml), y se lavó la fase orgánica
agrupada con una solución hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4})
y se evaporó in vacuo. Se purificó el residuo mediante
cromatografía de columna en gel de sílice eluyendo con
hexano:Et_{2}O (100:0 \rightarrow 90:10), proporcionando el
compuesto del título en forma de aceite amarillo claro. Rendimiento:
0,10 g (16%). ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta 0,27 (t, J=7,10
Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
0,99 & 1,25 (2 x s, 6H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
0,75-1,42 (m, 2H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
1,88 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
2,92 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
4,32 (s, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
7,18-7,46 (m, 15H, 3 x Ph).
Se añadió gota a gota CF_{3}COOH (10 ml) a una
solución agitada de
(2S,3R)-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol
(1,32 g, 1 eq, 3,83 mmoles) en DCM (50 ml) bajo una atmósfera de
argón a temperatura ambiente, y se agitó la solución a esta
temperatura durante 1 hora. Se evaporó el solvente in vacuo y
se precipitó el residuo en Et_{2}O (15 ml) con hexano (300 ml),
bajo agitación, proporcionando un aceite amarillo. Se separó el
solvente del aceite por decantación, y se lavó el aceite con hexano
(30 ml) y se secó in vacuo, proporcionando el compuesto del
título en forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 0,30 g (99%).
(80% e.d. 2S,3R: 20% e.d.
2R,3R), ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta 0,915 & 0,924
(2 x t, 3H, J=7,50 & 7,58 Hz,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
1,06 & 1,13 (2 x d, J=6,48 & 6,32 Hz),
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
1,41-1,59 (m, 2H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
2,77 & 2,93 (2 m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
3,62-3,72 & 3,80-3,90 (2 x m,
1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
7,75 (bs, 2H, NH_{2}).
Se añadió gota a gota CF_{3}COOH (10 ml) a una
solución agitada de
(2R,3S)-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol
(1,64 g, 1 eq, 4,75 mmoles) en DCM (50 ml) bajo una atmósfera de
argón a temperatura ambiente, y se agitó la solución a esta
temperatura durante 1 hora. Se evaporó el solvente in vacuo y
se precipitó el residuo en Et_{2}O (15 ml) con hexano (300 ml),
bajo agitación, proporcionando un aceite amarillo. Se separó el
solvente del aceite por decantación, y se lavó el aceite con hexano
(30 ml) y se secó in vacuo, proporcionando el compuesto del
título en forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 0,30 g (98%).
(80% e.d. 2R,3S: 20% e.d.
2S,3S), ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta 0,913 & 0,923
(2 x t, 3H, J=7,50 & 7,50 Hz,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
1,11 & 1,18 (2 x d, J=6,48 & 6,48 Hz),
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
1,41-1,65 (m, 2H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
2,76 & 2,93 (2 m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
3,61-3,69 & 3,80-3,90 (2 x m,
1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
7,73 (bs, 2H, NH_{2}).
Se añadió gota a gota CF_{3}COOH (7 ml) a una
solución agitada de
(3RS,4R)-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol
(1,13 g, 1 eq, 3,14 mmoles) en DCM (15 ml) bajo una atmósfera de
argón a temperatura ambiente, y se agitó la solución a esta
temperatura durante 4 horas. Se evaporó el solvente in vacuo,
se añadió EtOH (20 ml), y se eliminó in vacuo, y este
procedimiento se repitió dos veces. Se precipitó el residuo en
Et_{2}O (5 ml) con hexano (40 ml), bajo agitación, proporcionando
un aceite amarillo. Se separó el solvente del aceite por
decantación, y se lavó el aceite con hexano (30 ml) y se secó in
vacuo, proporcionando el compuesto del título en forma de
aceite amarillo claro. Rendimiento: 0,37 g (100%). (57% e.d.
3S,4R: 43% e.d. 3R,4R),
^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO, 250
MHz): \delta 0,79 & 0,92 (t & m, 6H, J=7,42 Hz,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
1,30-1,67 (m, 4H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
2,70 (m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
2,84 & 2,96 (2 x m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
3,41 & 3,56 (2 x m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
7,71 (bs, 2H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH).
Se añadió gota a gota CF_{3}COOH (7 ml) a una
solución agitada de
(3RS,4S)-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol
(1,19 g, 1 eq, 3,31 mmoles) en DCM (15 ml) bajo una atmósfera de
argón a temperatura ambiente, y se agitó la solución a esta
temperatura durante 4 horas. Se evaporó el solvente in vacuo,
se añadió EtOH (20 ml), y se eliminó in vacuo, y este
procedimiento se repitió dos veces. Se precipitó el residuo en
Et_{2}O (5 ml) con hexano (40 ml), bajo agitación, proporcionando
un aceite amarillo. Se separó el solvente del aceite por
decantación, y se lavó el aceite con hexano (30 ml) y se secó in
vacuo, proporcionando el compuesto del título. Rendimiento:
0,39 g (99%). (65% e.d. 3R,4S: 35% e.d.
3S,4S), ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta 0,79 & 0,92
(t & m, 6H, J=7,50 Hz,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
1,22-1,68 (m, 4H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})
OH), 2,71 (m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
2,83 & 2,95 (2 x m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
3,39 & 3,54 (2 x m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
7,77 (bs, 2H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH).
Se añadió gota a gota CF_{3}COOH (5 ml) a una
solución agitada de
(3RS,4R)-2-metil-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol
(0,53 g, 1 eq, 1,41 mmoles) en DCM (20 ml) bajo una atmósfera de
argón a temperatura ambiente, y se agitó la solución a esta
temperatura durante 1 hora. Se evaporó el solvente in vacuo y
se precipitó el residuo en Et_{2}O (10 ml) con hexano (90 ml),
bajo agitación, proporcionando un aceite amarillo. Se separó el
solvente del aceite por decantación, y se lavó el aceite con hexano
(20 ml) y se secó in vacuo, proporcionando el compuesto del
título en forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 0,18 g
(100%). (50% e.d. 3S,4R: 50% e.d.
3R,4R), ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta
0,85-0,99 (m, 9H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
1,42-1,79 (m, 2H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
2,95 (m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
3,18 (m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
3,37 (m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
7,58 (bs, 2H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH).
Se añadió gota a gota CF_{3}COOH (5 ml) a una
solución agitada de
(3RS,4S)-2-metil-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol
(0,36 g, 1 eq, 0,97 mmoles) en DCM (20 ml) bajo una atmósfera de
argón a temperatura ambiente, y se agitó la solución a esta
temperatura durante 1 hora. Se evaporó el solvente in vacuo y
se precipitó el residuo en Et_{2}O (10 ml) con hexano (90 ml),
bajo agitación, proporcionando un aceite amarillo. Se separó el
solvente del aceite por decantación, y se lavó el aceite con hexano
(20 ml) y se secó in vacuo, proporcionando el compuesto del
título en forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 0,13 g
(100%). (50% e.d. 3R,4S: 50% e.d.
3S,4S), ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta
0,85-1,01 (m, 9H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
1,44-1,76 (m, 2H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH
(CH_{3})_{2})OH), 2,94 (m, 1H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 3,17 (m, 1H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 3,40 (m, 1H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 7,54 (bs, 2H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH).
(CH_{3})_{2})OH), 2,94 (m, 1H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 3,17 (m, 1H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 3,40 (m, 1H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH), 7,54 (bs, 2H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH).
Se añadió gota a gota CF_{3}COOH (5 ml) a una
solución agitada de
(3RS,4R)-2,2-dimetil-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol
(0,57 g, 1 eq, 1,47 mmoles) en DCM (10 ml) bajo una atmósfera de
argón a temperatura ambiente, y se agitó la solución a esta
temperatura durante 1 hora. Se evaporó el solvente in vacuo y
se precipitó el residuo en Et_{2}O (3 ml) con hexano (20 ml),
bajo agitación, proporcionando un aceite amarillo. Se separó el
solvente del aceite por decantación, y se lavó el aceite con hexano
(20 ml) y se secó in vacuo, proporcionando el compuesto del
título en forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 0,21 g
(100%). (55% e.d. 3S,4R: 45% e.d.
3R,4R), ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta
0,84-0,99 (m, 3H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
1,25-1,29 (m, 9H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
1,20-1,72 (m, 2H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
3,14 (m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
3,39 (m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
3,65 (m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
7,43, 7,77 & 8,54 (3 x bs, 2H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH).
Se añadió gota a gota CF_{3}COOH (5 ml) a una
solución agitada de
(3RS,4S)-2,2-dimetil-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol
(0,47 g, 1 eq, 1,21 mmoles) en DCM (10 ml) bajo una atmósfera de
argón a temperatura ambiente, y se agitó la solución a esta
temperatura durante 1 hora. Se evaporó el solvente in vacuo y
se precipitó el residuo en Et_{2}O (3 ml) con hexano (20 ml),
bajo agitación, proporcionando un aceite amarillo. Se separó el
solvente del aceite por decantación, y se lavó el aceite con hexano
(20 ml) y se secó in vacuo, proporcionando el compuesto del
título en forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 0,18 g (99%).
(53% e.d. 3R,4S: 47% e.d.
3S,4S), ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta
0,86-0,99 (m, 3H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
1,25-1,30 (m, 9H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
1,20-1,67 (m, 2H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
3,14 (m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
3,38 (m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
3,64 (m, 1H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
7,41, 7,73 & 8,44 (3 x bs, 2H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH).
Se añadió gota a gota CF_{3}COOH (2,5 ml) a
una solución agitada de
(3R)-2-metil-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol
(0,21 g, 1 eq, 0,60 mmoles) en DCM (5 ml) bajo una atmósfera de
argón a temperatura ambiente, y se agitó la solución a esta
temperatura durante 1 hora. Se evaporó el solvente in vacuo y
se precipitó el residuo en Et_{2}O (15 ml) con hexano (300 ml),
bajo agitación, proporcionando un aceite amarillo. Se separó el
solvente del aceite por decantación, y se lavó el aceite con hexano
(30 ml) y se secó in vacuo, proporcionando el compuesto del
título en forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 0,07 g
(100%). ^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO,
250 MHz): \delta 0,97 (t, 3H, J=7,42 Hz,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}
OH), 1,06 & 1,19 (2 x s, 6H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 1,28-1,71 (m, 2H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 2,72 (m, 1H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 5,21 (s, 1H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 7,63 (bs, 2H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH).
OH), 1,06 & 1,19 (2 x s, 6H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 1,28-1,71 (m, 2H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 2,72 (m, 1H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 5,21 (s, 1H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 7,63 (bs, 2H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH).
Se añadió gota a gota CF_{3}COOH (2,5 ml) a
una solución agitada de
(3S)-2-metil-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol
(0,38 g, 1 eq, 1,06 mmoles) en DCM (5 ml) bajo una atmósfera de
argón a temperatura ambiente, y se agitó la solución a esta
temperatura durante 1 hora. Se evaporó el solvente in vacuo y
se precipitó el residuo en Et_{2}O (15 ml) con hexano (300 ml),
bajo agitación, proporcionando un aceite amarillo. Se separó el
solvente del aceite por decantación, y se lavó el aceite con hexano
(30 ml) y se secó in vacuo, proporcionando el compuesto del
título en forma de aceite amarillo claro. Rendimiento: 0,12 g (99%).
^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO, 250 MHz):
\delta 0,97 (t, 3H, J=7,42 Hz,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
1,07 & 1,19 (2 x s, 6H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
1,28-1,61 (m, 2H,
NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}
OH), 2,72 (m, 1H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 5,21 (s, 1H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 7,63 (bs, 2H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH).
OH), 2,72 (m, 1H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 5,21 (s, 1H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 7,63 (bs, 2H, NH_{2}CH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH).
Este compuesto se preparó mediante una
modificación de un procedimiento de la literatura (Gray, N. S.;
Kwon, S.; Schultz, P. G., Tetrahedron Lett.
38(7):1161-1164, 1997).
\newpage
Se suspendió
6-cloro-9H-purin-2-ilamina
(75,0 g, 0,44 mmoles) en solución acuosa de HBF_{4} (1,5 l de una
solución al 48% p/p en H_{2}O). Se enfrió esta mezcla hasta -15ºC
y se agitó vigorosamente. A continuación se añadió NaNO_{2} (2,5
l de una solución acuosa 0,3 M) lentamente a lo largo de 75 minutos,
bajo agitación y con un control de temperatura cuidadoso (<
10ºC). Tras completar la adición, se agitó además la solución de
color amarillo pálido a temperatura ambiente durante 30 minutos. A
continuación, se volvió a enfriar hasta -15ºC y se neutralizó
cuidadosamente a pH 6,2 sin NaOH (solución acuosa al 50% p/v). Esta
solución se evaporó utilizando un evaporador rotatorio hasta
alcanzar un estado semiseco. La torta resultante se dividió con una
espátula y se secó en condiciones de alto vacío durante la noche. El
polvo amarillo resultante se cargó en seco en una columna de
cromatografía flash (capa de SiO_{2} de 24 x 15 cm), que se eluyó
con CH_{2}Cl_{2}/MeOH, en una proporción 9:1. Las fracciones
apropiadas se recogieron, se agruparon y se evaporaron. Tras el
secado in vacuo, se obtuvo el compuesto del título (34,8 g,
48%) en forma de polvo incoloro. TLC: R_{f} = 0,25
(CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 9:1), material de partida R_{f} = 0,16
m/z 173 (MH^{+}, 100), 175 (MH^{+2}, 33).
Se añadió DIEA (2,5 ml, 2,75 eq, 14,35 mmoles) a
una solución agitada de
6-cloro-2-fluoropurina
(0,9 g, 1 eq, 5,22 mmoles) en n-BuOH (60 ml) bajo
una atmósfera de argón, enfriada hasta -20ºC, seguido de
C-piridin-3-il-metilamina
(0,58 ml, 1,1 eq, 5,69 mmoles). Se agitó la mezcla de reacción a
-20ºC durante 3 horas, y a continuación se dejó que retornase a la
temperatura ambiente a lo largo de 2 horas, al indicar la TLC
(CHCl_{3}:MeOH; 90:10) que la reacción se había completado. Se
evaporó el solvente in vacuo y se purificó el residuo
mediante cromatografía de columna en gradiente de gel de sílice
eluyendo con CHCl_{3}:MeOH (97:3 \rightarrow 90:10),
proporcionando el compuesto del título en forma de sólido blanco.
Rendimiento: 1,08 g (85%). Mp 218-220ºC.
^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO, 250
MHz): \delta 4,65 (d, 2H, J=5,37 Hz,
-HNCH_{2}-pir), 7,34, 8,43, 8,57 (3 x m,
4H, pir), 8,10 (s, 1H, -N=CH-NH-), 8,83 (bs, 1H,
-HNCH_{2}-pir), 13,07 (bs, 1H,
-N=CH-NH-). FABMS m/z (intensidad relativa): 245
([M+H]^{+}, 40), 176 (27), 154 (100), 136 (74). Masa exacta
(M+H): real: 245,0951, medida: 245,0942. Microanálisis (esperado:
medido) C_{11}H_{9}N_{6}F.0,2 H_{2}O: C; 53,51: 54,03, H;
3,82: 3,83, N; 33,91: 32,74.
Se añadió K_{2}CO_{3} (en polvo, anhidro,
2,75 g, 4,85 eq, 19,90 mmoles) a una solución agitada de
(2-fluoro-9H-purin-6-il)-piridin-3-ilmetil-amina
(1,00 g, 1 eq, 4,10 mmoles) en DMA (12 ml) bajo una atmósfera de
argón, a temperatura ambiente, seguido de
2-bromopropano (3,75 ml, 9,75 eq, 39,93 mmoles). Se
agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 48
horas, al indicar la TLC (CHCl_{3}:MeOH; 90:10) que la reacción se
había completado. Se evaporó el solvente in vacuo y se
dividió el residuo entre agua (200 ml) y EtOAc (100 ml), se separó
la fase acuosa y se extrajo con una cantidad adicional de EtOAc (2
x 50 ml). Se lavó la fase orgánica agrupada con una solución
hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4}), y se evaporó in
vacuo, y se purificó el residuo mediante cromatografía de
columna en gradiente de gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:MeOH
(100:0 \rightarrow 95:5), proporcionando el compuesto del título
en forma de sólido blanco. Rendimiento: 0,73 g (62%). Mp
131-133ºC. ^{1}H-RMN
(d_{6}-DMSO, 250 MHz): \delta 1,49 (2 x s, 6H,
-CH(CH_{3})_{2}), 4,63 (m, 3H,
-CH(CH_{3})_{2} &
-HNCH_{2}-pir), 7,34, 7,24, 8,44, 8,58 (4
x m, 4H, pir), 8,26 (s, 1H, -N=CH-N-), 8,95 (bs, 1H,
-HNCH_{2}-pir). FABMS m/z
(intensidad relativa): 287 ([M+H]^{+}, 100), 245 (8), 154
(23), 136 (18). Masa exacta (M+H): real: 287,1420, medida:
287,1412. Microanálisis (esperado: medido) C_{14}H_{15}N_{6}F:
C; 58,73: 58,57, H; 5,28: 5,21, N; 29,35: 29,27.
Se añadió DIEA (0,2 ml, 10,96 eq, 1,14 mmoles) a
una solución agitada de
(2-fluoro-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-3-ilmetil-amina
(30 mg, 1 eq, 0,10 mmoles) en n-BuOH/DMSO (2,5 ml,
4:1) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón, seguido de
(2S,3R)-3-amino-pentan-2-ol
(60 mg, 5,5 eq, 0,58 mmoles). Se introdujo la mezcla de reacción en
un baño de aceite precalentado a 160ºC y se agitó a esta temperatura
durante 72 horas. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara
hasta la temperatura ambiente y se evaporó el solvente in
vacuo. Se dividió el residuo entre EtOAc (50 ml) y agua (50
ml), se extrajo la fase acuosa con una cantidad adicional de EtOAc
(2 x 25 ml) y se lavó la fase orgánica agrupada con una solución
hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4}), y se evaporó in
vacuo. Se purificó el residuo mediante cromatografía de columna
en gradiente de gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:MeOH (100:0
\rightarrow 98:2), proporcionando el compuesto del título en forma
de sólido blanco. Rendimiento: 22 mg (57%). (80% e.d.
3R,2S: 20% e.d. 3R,2R),
^{1}H-RMN (d-CDCl_{3}, 250 MHz):
\delta 0,90 & 1,05 (2 x t, 3H, J=6,95 & 7,42 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
1,17 & 1,25 (2 x d, 3H, J=6,32 & 6,16 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH)
1,57 (d, 6H, J=6,79 Hz, -CH(CH_{3})_{2}),
1,77-2,09 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH), 3,91-4,03 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH), 4,58-4,69 (m, 1H, -CH(CH_{3})_{2}), 4,83-5,00 (m, 3H, -HNCH_{2}-pir & OH), 6,16 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH), 7,24-7,33 (m, 3H, 2 x pir-H & -N=CH-N-), 7,55 (m, 1H, pir-H), 7,74 (d, 1H, J=7,42 Hz, pir-H), 8,67 (m, 1H, HNCH_{2}-pir). FABMS m/z (intensidad relativa): 370 ([M+H]^{+}, 100), 324 (35), 289 (37), 243 (65), 199 (85). Masa exacta (M+H): real: 370,2355, medida: 370,2347.
1,77-2,09 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH), 3,91-4,03 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH), 4,58-4,69 (m, 1H, -CH(CH_{3})_{2}), 4,83-5,00 (m, 3H, -HNCH_{2}-pir & OH), 6,16 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH), 7,24-7,33 (m, 3H, 2 x pir-H & -N=CH-N-), 7,55 (m, 1H, pir-H), 7,74 (d, 1H, J=7,42 Hz, pir-H), 8,67 (m, 1H, HNCH_{2}-pir). FABMS m/z (intensidad relativa): 370 ([M+H]^{+}, 100), 324 (35), 289 (37), 243 (65), 199 (85). Masa exacta (M+H): real: 370,2355, medida: 370,2347.
Se añadió DIEA (0,2 ml, 10,96 eq, 1,14 mmoles) a
una solución agitada de
(2-fluoro-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-3-ilmetil-amina
(30 mg, 1 eq, 0,10 mmoles) en n-BuOH/DMSO (2,5 ml,
4:1) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón, seguido de
(2R,3S)-3-amino-pentan-2-ol
(60 mg, 5,5 eq, 0,58 mmoles). Se introdujo la mezcla de reacción en
un baño de aceite precalentado a 160ºC y se agitó a esta temperatura
durante 72 horas. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara
hasta la temperatura ambiente y se evaporó el solvente in
vacuo. Se dividió el residuo entre EtOAc (50 ml) y agua (50
ml), se extrajo la fase acuosa con una cantidad adicional de EtOAc
(2 x 25 ml) y se lavó la fase orgánica agrupada con una solución
hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4}), y se evaporó in
vacuo. Se purificó el residuo mediante cromatografía de columna
en gradiente de gel de sílice eluyendo con CHCl_{3}:MeOH (100:0
\rightarrow 98:2), proporcionando el compuesto del título en forma
de sólido blanco. Rendimiento: 25 mg (65%). (80% e.d.
3S,2R: 20% e.d. 3S,2S),
^{1}H-RMN (d-CDCl_{3}, 250 MHz):
\delta 0,90 & 1,05 (2 x t, 3H, J=6,48 & 7,42 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH),
1,16 & 1,24 (2 x d, 3H, J=6,31 & 6,16 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH)
1,57 (d, 6H, J=6,79 Hz, -CH(CH_{3})_{2}),
1,77-2,09 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH), 3,91-4,04 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH), 4,58-4,69 (m, 1H, -CH(CH_{3})_{2}), 4,83 (m, 3H, -HNCH_{2}-pir & OH), 6,11-6,23 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH), 7,24-7,32 (m, 3H, 2 x pir-H + -N=CH-N-), 7,53-7,57 (m, 1H, pir-H), 7,74 (d, 1H, J=7,58 Hz, pir-H), 8,67 (m, 1H, HNCH_{2}-pir). FABMS m/z (intensidad relativa): 370 ([M+H]^{+}, 100), 324 (40), 289 (15), 243 (10), 233 (13), 199 (10). Masa exacta (M+H): real: 370,2355, medida: 370,2347.
1,77-2,09 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH), 3,91-4,04 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH), 4,58-4,69 (m, 1H, -CH(CH_{3})_{2}), 4,83 (m, 3H, -HNCH_{2}-pir & OH), 6,11-6,23 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{3})OH), 7,24-7,32 (m, 3H, 2 x pir-H + -N=CH-N-), 7,53-7,57 (m, 1H, pir-H), 7,74 (d, 1H, J=7,58 Hz, pir-H), 8,67 (m, 1H, HNCH_{2}-pir). FABMS m/z (intensidad relativa): 370 ([M+H]^{+}, 100), 324 (40), 289 (15), 243 (10), 233 (13), 199 (10). Masa exacta (M+H): real: 370,2355, medida: 370,2347.
Se añadió DIEA (0,18 ml, 15 eq, 1,03 mmoles) a
una solución agitada de
(2-fluoro-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-3-ilmetil-amina
(20 mg, 1 eq, 0,07 mmoles) en n-BuOH/DMSO (3,75 ml,
4:1) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón, seguido de
(3RS,4R)-4-amino-hexan-3-ol
(110 mg, 13 eq, 0,94 mmoles). Se introdujo la mezcla de reacción en
un baño de aceite precalentado a 140ºC y se agitó a esta temperatura
durante 72 horas. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara
hasta la temperatura ambiente y se evaporó el solvente in
vacuo. Se dividió el residuo entre EtOAc (50 ml) y una solución
hipersalina/agua (1:1, 100 ml), se extrajo la fase acuosa con una
cantidad adicional de EtOAc (2 x 25 ml) y se lavó la fase orgánica
agrupada con una solución hipersalina (50 ml), se secó
(MgSO_{4}), y se evaporó in vacuo. Se purificó el residuo
mediante cromatografía de columna en gradiente de gel de sílice
eluyendo con CHCl_{3}:MeOH (100:0 \rightarrow 98:2),
proporcionando el compuesto del título en forma de sólido blanco.
Rendimiento: 23 mg (75%). (57% e.d. 4R,3S: 43%
e.d. 4R,3R). ^{1}H-RMN
(d-CDCl_{3}, 250 MHz): \delta
0,87-1,07 (m, 6H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
1,56 (d, 6H, J=6,63 Hz, & -CH(CH_{3})_{2}),
1,43-1,63 (m, 4H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
3,44 (d, 1H, J=6,31 Hz, OH), 3,58-3,71 (m,
1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
3,89-4,01 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
4,56-4,70 (m, 1H,
-CH(CH_{3})_{2}), 4,76-4,95 (m,
2H, -HNCH_{2}-pir),
5,20-5,29 & 6,17-6,34 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
7,19-7,38 (m, 3H, 2 x pir-H &
-N=CH-N-), 7,48-7,60 (m, 1H,
pir-H), 7,72 (d, 1H, J = 7,74 Hz,
pir-H), 8,67 (m, 1H,
HNCH_{2}-pir). FABMS m/z (intensidad
relativa): 384 ([M+H]^{+}, 100), 324 (50), 297 (30). Masa
exacta (M+H): real: 384,2512, medido: 384,2500.
Se añadió DIEA (0,18 ml, 15 eq, 1,03 mmoles) a
una solución agitada de
(2-fluoro-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-3-ilmetil-amina
(20 mg, 1 eq, 0,07 mmoles) en n-BuOH/DMSO (3,75 ml,
4:1) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón, seguido de
(3RS,4S)-4-amino-hexan-3-ol
(110 mg, 13 eq, 0,94 mmoles). Se introdujo la mezcla de reacción en
un baño de aceite precalentado a 140ºC y se agitó a esta temperatura
durante 72 horas. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara
hasta la temperatura ambiente y se evaporó el solvente in
vacuo. Se dividió el residuo entre EtOAc (50 ml) y una solución
hipersalina/agua (1:1, 100 ml), se extrajo la fase acuosa con una
cantidad adicional de EtOAc (2 x 25 ml) y se lavó la fase orgánica
agrupada con una solución hipersalina (50 ml), se secó
(MgSO_{4}), y se evaporó in vacuo. Se purificó el residuo
mediante cromatografía de columna en gradiente de gel de sílice
eluyendo con CHCl_{3}:MeOH (100:0 \rightarrow 98:2),
proporcionando el compuesto del título en forma de sólido blanco.
Rendimiento: 15,5 mg (58%). (57% e.d. 4S,3R:
43% e.d. 4S,3S). ^{1}H-RMN
(d-CDCl_{3}, 250 MHz): \delta
0,84-1,09 (m, 6H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
1,57 (d, 6H, J=6,48 Hz, & -CH(CH_{3})_{2}),
1,42-1,64 (m, 4H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
3,45 (d, 1H, J=6,31 Hz, OH), 3,55-3,71 (m,
1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
3,88-4,03 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
4,56-4,74 (m, 1H,
-CH(CH_{3})_{2}), 4,78-4,99 (m,
2H, -HNCH_{2}-pir),
5,20-5,29 & 6,20-6,39 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
7,20-7,36 (m, 3H, 2 x pir-H +
-N=CH-N-), 7,49-7,60 (m, 1H,
pir-H), 7,72 (d, 1H, J = 7,82 Hz,
pir-H), 8,71 (m, 1H,
HNCH_{2}-pir). FABMS m/z (intensidad
relativa): 384 ([M+H]^{+}, 100), 324 (35), 297 (15). Masa
exacta (M+H): real: 384,2512, medido: 384,2500.
Se añadió DIEA (0,10 ml, 5,5 eq, 0,57 mmoles) a
una solución agitada de
(2-fluoro-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-3-ilmetil-amina
(30 mg, 1 eq, 0,10 mmoles) en n-BuOH/DMSO (2,5 ml,
4:1) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón, seguido de
(3RS,4R)-4-amino-2-metil-hexan-3-ol
(42 mg, 3,0 eq, 0,32 mmoles). Se introdujo la mezcla de reacción en
un baño de aceite precalentado a 140ºC y se agitó a esta temperatura
durante 72 horas. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara
hasta la temperatura ambiente y se evaporó el solvente in
vacuo. Se dividió el residuo entre EtOAc (50 ml) y solución
hipersalina/agua (1:1, 100 ml), se extrajo la fase acuosa con una
cantidad adicional de EtOAc (2 x 25 ml) y se lavó la fase orgánica
agrupada con solución hipersalina (50 ml), se secó (MgSO_{4}), y
se evaporó in vacuo. Se purificó el residuo mediante
cromatografía de columna en gradiente de gel de sílice eluyendo con
CHCl_{3}:MeOH (100:0 \rightarrow 98:2), proporcionando el
compuesto del título en forma de sólido blanco. Rendimiento: 6,3 mg
(15%), 50% e.d. 4R,3S: 50% e.d.
4R,3R). ^{1}H-RMN
(d-CDCl_{3}, 250 MHz): \delta
0,93-1,04 (m, 9H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
1,57 (d, 6H, J=6,95 Hz, -CH(CH_{3})_{2}),
1,65-1,89 (m, 4H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
3,22-3,32 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
3,82-3,97 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
4,54-4,70 (m, 1H,
-CH(CH_{3})_{2}), 4,78-4,88 (m,
2H, -HNCH_{2}-pir),
5,03-5,14 & 6,08-6,20 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH_{2}CH_{3})OH),
7,22-7,36 (m, 3H, 2 x pir-H &
-N=CH-N-), 7,49-7,58 (m, 1H,
pir-H), 7,71 (d, 1H, J = 7,90 Hz,
pir-H), 8,47-8,73 (m, 1H,
HNCH_{2}-pir). FABMS m/z (intensidad
relativa): 398 ([M+H]^{+}, 100), 324 (50). Masa exacta
(M+H): real: 398,2668, medida: 398,2654.
Se añadió DIEA (0,20 ml, 11 eq, 1,14 mmoles) a
una solución agitada de
(2-fluoro-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-3-ilmetil-amina
(30 mg, 1 eq, 0,10 mmoles) en n-BuOH/DMSO (2,5 ml,
4:1) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón, seguido de
(3RS,4S)-4-amino-2-metil-hexan-3-ol
(28 mg, 2,0 eq, 0,21 mmoles). Se introdujo la mezcla de reacción en
un baño de aceite precalentado a 160ºC y se agitó a esta temperatura
durante 72 horas. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara
hasta la temperatura ambiente y se evaporó el solvente in
vacuo. Se dividió el residuo entre EtOAc (50 ml) y solución
hipersalina/agua (1:1, 100 ml), se extrajo la fase acuosa con una
cantidad adicional de EtOAc (2 x 25 ml) y se lavó la fase orgánica
agrupada con una solución hipersalina (50 ml), se secó
(MgSO_{4}), y se evaporó in vacuo. Se purificó el residuo
mediante cromatografía de columna en gradiente de gel de sílice
eluyendo con CHCl_{3}:MeOH (100:0 \rightarrow 98:2),
proporcionando el compuesto del título en forma de sólido blanco.
Rendimiento: 4,3 mg (10%), 50% e.d. 4S,3R: 50%
e.d. 4S,3S). ^{1}H-RMN
(d-CDCl_{3}, 250 MHz): \delta
0,91-1,05 (m, 9H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
1,57 (d, 6H, J=6,95 Hz, -CH(CH_{3})_{2}),
1,60-1,95 (m, 4H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
3,23-3,33 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
3,84-4,04 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
4,56-4,70 (m, 1H,
-CH(CH_{3})_{2}), 4,77-4,95 (m,
2H, -HNCH_{2}-pir),
5,26-5,43+6,27-6,50 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(CH(CH_{3})_{2})OH),
7,23-7,37 (m, 3H, 2 x pir-H &
-N=CH-N-), 7,51-7,63 (m, 1H,
pir-H), 7,73 (d, 1H, J = 7,74 Hz,
pir-H), 8,48-8,76 (m, 1H,
HNCH_{2}-pir). FABMS m/z (intensidad
relativa): 398 ([M+H]^{+}, 100), 324 (60). Masa exacta
(M+H): real: 398,2668, medida: 398,2654.
Se añadió DIEA (0,10 ml, 5,5 eq, 0,57 mmoles) a
una solución agitada de
(2-fluoro-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-3-ilmetil-amina
(30 mg, 1 eq, 0,10 mmoles) en n-BuOH/DMSO (5 ml,
4:1) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón, seguido de
(3RS,4R)-4-amino-2,2-dimetil-hexan-3-ol
(52 mg, 3,41 eq, 0,36 mmoles). Se introdujo la mezcla de reacción
en un baño de aceite precalentado a 140ºC y se agitó a esta
temperatura durante 72 horas. Se dejó que la mezcla de reacción se
enfriara hasta la temperatura ambiente y se evaporó el solvente
in vacuo. Se dividió el residuo entre EtOAc (50 ml) y
solución hipersalina/agua (1:1, 100 ml), se extrajo la fase acuosa
con una cantidad adicional de EtOAc (2 x 25 ml) y se lavó la fase
orgánica agrupada con una solución hipersalina (50 ml), se secó
(MgSO_{4}), y se evaporó in vacuo. Se purificó el residuo
mediante cromatografía de columna en gradiente de gel de sílice
eluyendo con CHCl_{3}:MeOH (100:0 \rightarrow 98:2),
proporcionando el compuesto del título en forma de sólido blanco.
Rendimiento: 7.3 mg (17%). (55% e.d. 4R,3S: 45%
e.d. 4R,3R). ^{1}H-RMN
(d-CDCl_{3}, 250 MHz): \delta
0,99-1,03 (m, 12H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
1,56 & 1,58 (2 x d, 6H, J=6,63 & 6,79 Hz,
-CH(CH_{3})_{2}), 1,69-1,91 (m,
2H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH), 3,55 (d, 1H, J=1,74 Hz, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH), 3,76-3,87 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH), 4,57-4,70 (m, 1H, -CH(CH_{3})_{2}), 4,80-4,89 (m, 2H, -HNCH_{2}-pir), 5,22-5,35 & 6,07-6-23 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH), 7,24-7,36 (m, 3H, 2 x pir-H & -N=CH-N-), 7,55 (s, 1H, pir-H), 7,74 (d, 1H, J = 7,58 Hz, pir-H), 8,50-8,74 (m, 1H, HNCH_{2}-pir). FABMS m/z (intensidad relativa): 412 ([M+H]^{+}, 100), 324 (80). Masa exacta (M+H): real: 412,2825, medida: 412,2835.
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH), 3,55 (d, 1H, J=1,74 Hz, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH), 3,76-3,87 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH), 4,57-4,70 (m, 1H, -CH(CH_{3})_{2}), 4,80-4,89 (m, 2H, -HNCH_{2}-pir), 5,22-5,35 & 6,07-6-23 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH), 7,24-7,36 (m, 3H, 2 x pir-H & -N=CH-N-), 7,55 (s, 1H, pir-H), 7,74 (d, 1H, J = 7,58 Hz, pir-H), 8,50-8,74 (m, 1H, HNCH_{2}-pir). FABMS m/z (intensidad relativa): 412 ([M+H]^{+}, 100), 324 (80). Masa exacta (M+H): real: 412,2825, medida: 412,2835.
Se añadió DIEA (0,10 ml, 5,5 eq, 0,57 mmoles) a
una solución agitada de
(3RS,4R)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2,2-dimetil-hexan-3-ol
(30 mg, 1 eq, 0,10 mmoles) en n-BuOH/DMSO (5 ml,
4:1) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón, seguido de
(3RS,4S)-4-amino-2,2-dimetil-hexan-3-ol
(43 mg, 2,81 eq, 0,29 mmoles). Se introdujo la mezcla de reacción
en un baño de aceite precalentado a 140ºC y se agitó a esta
temperatura durante 72 horas. Se dejó que la mezcla de reacción se
enfriara hasta la temperatura ambiente y se evaporó el solvente
in vacuo. Se dividió el residuo entre EtOAc (50 ml) y una
solución hipersalina/agua (1:1, 100 ml), se extrajo la fase acuosa
con una cantidad adicional de EtOAc (2 x 25 ml) y se lavó la fase
orgánica agrupada con una solución hipersalina (50 ml), se secó
(MgSO_{4}), y se evaporó in vacuo. Se purificó el residuo
mediante cromatografía de columna en gradiente de gel de sílice
eluyendo con CHCl_{3}:MeOH (100:0 \rightarrow 98:2),
proporcionando el compuesto del título en forma de sólido blanco.
Rendimiento: 5.4 mg (13%). (53% e.d. 4S,3R: 47%
e.d. 4S,3S). ^{1}H-RMN
(d-CDCl_{3}, 250 MHz): \delta
0,99-1,03 (m, 12H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
1,57 & 1,59 (2 x d, 6H, J=6,79 & 6,79 Hz,
-CH(CH_{3})_{2}), 1,70-1,93 (m,
2H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
3,55 (d, 1H, J=2,05 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
3,77-3,90 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
4,58-4,70 (m, 1H,
-CH(CH_{3})_{2}), 4,82-4,94 (m,
2H, -HNCH_{2}-pir),
5,31-5,45 &
6,12-6-34 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})CH(C(CH_{3})_{3})OH),
7,26-7,40 (m, 3H, 2 x pir-H &
-N=CH-N-), 7,55 (s, 1H, pir-H), 7,75 (d, 1H,
J = 7,42 Hz, pir-H), 8,46-8,81 (m,
1H, HNCH_{2}-pir). FABMS m/z
(intensidad relativa): 412 ([M+H]^{+}, 100), 324 (70). Masa
exacta (M+H): real: 412,2825, medida: 412,2835.
Se añadió DIEA (0,25 ml, 20,5 eq, 1,44 mmoles) a
una solución agitada de
(2-fluoro-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-3-ilmetil-amina
(20 mg, 1 eq, 0,07 mmoles) en n-BuOH/DMSO (1,25 ml,
4:1) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón, seguido de
(3R)-3-amino-2-metil-pentan-2-ol
(22 mg, 2,7 eq, 0,19 mmoles). Se introdujo la mezcla de reacción en
un baño de aceite precalentado a 140ºC y se agitó a esta temperatura
durante 72 horas. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara
hasta la temperatura ambiente y se evaporó el solvente in
vacuo. Se dividió el residuo entre EtOAc (50 ml) y una solución
hipersalina/agua (1:1, 100 ml), se extrajo la fase acuosa con una
cantidad adicional de EtOAc (2 x 25 ml) y se lavó la fase orgánica
agrupada con una solución hipersalina (50 ml), se secó
(MgSO_{4}), y se evaporó in vacuo. Se purificó el residuo
mediante cromatografía de columna en gradiente de gel de sílice
eluyendo con CHCl_{3}:MeOH (100:0 \rightarrow 98:2),
proporcionando el compuesto del título en forma de sólido blanco.
Rendimiento: 3,7 mg (14%). ^{1}H-RMN
(d-CDCl_{3}, 250 MHz): \delta 1,00 (t, 3H,
J=7,27 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}
OH), 1,21 & 1,31 (2 x s, 6H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 1,57 (d, 6H, J=6,63 Hz, -CH(CH_{3})_{2}), 1,69-1,89 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 3,66-3,83 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 4,59-4,73 (m, 1H, -CH(CH_{3})_{2}),
4,77-5,00 (m, 2H, -HNCH_{2}-pir), 7,26-7,46 (m, 3H, 2 x pir-H & -N=CH-N-), 7,49-7,69 (m, 1H, pir-H), 7,78 (d, 1H, J = 7,10 Hz, pir-H). FABMS m/z (intensidad relativa): 384 ([M+H]^{+}, 65), 366 (23), 324 (100), 217 (35), 192 (55). Masa exacta (M+H): real: 384,2512, medida: 384,2494.
OH), 1,21 & 1,31 (2 x s, 6H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 1,57 (d, 6H, J=6,63 Hz, -CH(CH_{3})_{2}), 1,69-1,89 (m, 2H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 3,66-3,83 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 4,59-4,73 (m, 1H, -CH(CH_{3})_{2}),
4,77-5,00 (m, 2H, -HNCH_{2}-pir), 7,26-7,46 (m, 3H, 2 x pir-H & -N=CH-N-), 7,49-7,69 (m, 1H, pir-H), 7,78 (d, 1H, J = 7,10 Hz, pir-H). FABMS m/z (intensidad relativa): 384 ([M+H]^{+}, 65), 366 (23), 324 (100), 217 (35), 192 (55). Masa exacta (M+H): real: 384,2512, medida: 384,2494.
Se añadió DIEA (0,25 ml, 14,4 eq, 1,44 mmoles) a
una solución agitada de
(2-fluoro-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-3-ilmetil-amina
(30 mg, 1 eq, 0,10 mmoles) en n-BuOH/DMSO (1,25 ml,
4:1) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón, seguido de
(3S)-3-amino-2-metil-pentan-2-ol
(40 mg, 3,2 eq, 34 mmoles). Se introdujo la mezcla de reacción en
un baño de aceite precalentado a 140ºC y se agitó a esta temperatura
durante 72 horas. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara
hasta la temperatura ambiente y se evaporó el solvente in
vacuo. Se dividió el residuo entre EtOAc (50 ml) y una solución
hipersalina/agua (1:1, 100 ml), se extrajo la fase acuosa con una
cantidad adicional de EtOAc (2 x 25 ml) y se lavó la fase orgánica
agrupada con una solución hipersalina (50 ml), se secó
(MgSO_{4}), y se evaporó in vacuo. Se purificó el residuo
mediante cromatografía de columna en gradiente de gel de sílice
eluyendo con CHCl_{3}:MeOH (100:0 \rightarrow 98:2),
proporcionando el compuesto del título en forma de sólido blanco.
Rendimiento: 6,5 mg (16%). ^{1}H-RMN
(d-CDCl_{3}, 250 MHz): \delta 1,00 (t, 3H,
J=7,42 Hz,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
1,22 & 1,31 (2 x s, 6H, -NHCH
(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH), 1,57
(d, 6H, J=6,79 Hz, -CH(CH_{3})_{2}),
1,70-1,90 (m, 2H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
3,66-3,81 (m, 1H,
-NHCH(CH_{2}CH_{3})C(CH_{3})_{2}OH),
4,56-4,73 (m, 1H,
-CH(CH_{3})_{2}), 4,78-5,01 (m,
2H, -HNCH_{2}-pir),
7,20-7,45 (m, 3H, 2 x pir-H &
-N=CH-N-), 7,48-7,69 (m, 1H,
pir-H), 7,77 (d, 1H, J = 7,74 Hz,
pir-H). FABMS m/z (intensidad relativa): 384
([M+H]^{+}, 100), 366 (30), 324 (85), 286 (40), 242 (65),
192 (63), 176 (70). Masa exacta (M+H): real: 384,2512, medida:
384,2494.
Para la preparación a gran escala de los
enantiómeros individuales del
3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol
24 (esquema 3 siguiente), se adoptó un procedimiento diferente. La
dicloropurina 14 se sometió a aminación en C-6 con
piridilmetilamina 15, proporcionando el intermediario 16, que
seguidamente se sometió a alquilación en N-9 con
2-bromopropano 17. La cloropurina 18 resultante se
sometió a aminación en C-2 con el enantiómero
adecuado de
3-amino-2-metil-pentan-2-ol
23.
Esquema
3
Se ha demostrado anteriormente que se puede
obtener
R-3-amino-2-metil-2-pentan-2-ol
23 puro, directamente mediante conversión del ácido
R-2-amino-butírico 19 en
metiléster 20, seguido de metilación doble de Grignard
(Guenther, B. R.; Kirmse, W., Liegigs Ann. Chem. 518, 1980). Este procedimiento no resultó adecuado para la preparación a mayor escala en términos de rendimiento y pureza del producto. Por lo tanto se adoptó la protección del grupo amino como el derivado dibencilo (21, Bn = bencilo). La metilación del aminoéster 21 proporcionó alcohol 22 con un rendimiento y pureza elevados. A continuación, se eliminaron los grupos bencilo hidrogenolíticamente, proporcionando los enantiómeros puros de 3-amino-2-metil-pentan-2-ol 23.
(Guenther, B. R.; Kirmse, W., Liegigs Ann. Chem. 518, 1980). Este procedimiento no resultó adecuado para la preparación a mayor escala en términos de rendimiento y pureza del producto. Por lo tanto se adoptó la protección del grupo amino como el derivado dibencilo (21, Bn = bencilo). La metilación del aminoéster 21 proporcionó alcohol 22 con un rendimiento y pureza elevados. A continuación, se eliminaron los grupos bencilo hidrogenolíticamente, proporcionando los enantiómeros puros de 3-amino-2-metil-pentan-2-ol 23.
Se agitaron
2,6-dicloro-9H-purina (157,2
g, 0,83 mmoles), butan-1-ol (1,2 l),
y Et_{3}N (290 ml, 2,08 mmoles) y se calentaron hasta 50ºC. Se
añadió
3-C-piridin-3-il-metilamina
(94 ml, 0,76 mmoles) y se calentó la reacción hasta 120ºC durante 1
hora. Se detuvo el calentamiento y se dejó que el matraz se enfriara
hasta la temperatura ambiente y a continuación hasta 0ºC utilizando
un baño de agua helada. Se recogió el precipitado de color
anaranjado mediante filtración, se lavó con H_{2}O (1 l), con
hexano (2 x 0,5 l) y se secó, proporcionando un sólido de color
anaranjado. Se obtuvo una segunda parte mediante evaporación del
agrupado de filtrado y lavados, trituración con H_{2}O (100 ml) y
con CHCl_{3} (100 ml), filtración, lavado con hexano, y secado.
Se agruparon las partes, proporcionando el compuesto del título (196
g, 91%). ^{1}H-RMN (DMSO-d6):
\delta 4,67-4,69 (2H, d,
-CH_{2}-NH-), 5,20 (1H, br. s, NH),
7,34-7,39 (dd, ArH),
7,76-7,79
(1H, d, ArH), 8,17 (1H, s, ArH -N=CH-N-), 8,46-8,48 (1H, d, ArH), 8,61 (1H, s, ArH), 8,80 (1H, br. s, NH).
(1H, d, ArH), 8,17 (1H, s, ArH -N=CH-N-), 8,46-8,48 (1H, d, ArH), 8,61 (1H, s, ArH), 8,80 (1H, br. s, NH).
Se disolvió
(2-cloro-9H-purin-6-il)-piridin-3-ilmetil-amina
(110,3 g, 0,37 mmoles) en DMF seco (1,5 l) y se calentó hasta 70ºC,
bajo agitación. Se añadieron K_{2}CO_{3} (230 g, 1,67 mmoles) y
2-bromopropano (300 ml, 3,20 mmoles) y se agitó la
reacción a 70ºC durante la noche. Se dejó que la mezcla de reacción
se enfriara hasta la temperatura ambiente, se eliminó el compuesto
K_{2}CO_{3} mediante filtración y mediante lavado con EtOAc. Se
concentró el agrupado de filtrado y lavados en un evaporador
rotatorio y seguidamente bajo alto vacío para eliminar la mayor
parte del DMF. Se agitó el residuo resultante vigorosamente en
H_{2}O (1 l) y CH_{2}Cl_{2} (1 l) hasta completar la
disolución. Se extrajo la capa acuosa con una cantidad adicional de
CH_{2}Cl_{2} (2 x 200 ml), se agruparon los extractos orgánicos,
se secaron sobre MgSO_{4}, y se evaporaron, proporcionando el
compuesto del título (87,2 g, 78%) en forma de polvo beis.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}):
\delta 1,50-1,53 (6H, d,
-CH(CH_{3})_{2}), 4,67-4,72 (3H,
m, CH_{2}-NH- &
-CH(CH_{3})_{2}), 5,20 (1 H, br. s, NH),
7,34-7,39 (dd, ArH),
7,76-7,79 (1H, d, ArH), 8,33 (1H, s,
ArH, -N=CH-N-), 8,46-8,48 (1H, d,
ArH), 8,61 (1H, s, ArH), 8,92 (1H, br. s,
NH).
Se suspendió gota a gota ácido
(D)-(-)2-aminobutírico (50,0 g, 0,48 mmoles) en MeOH
(270 ml) y se enfrió hasta -10ºC (baño de sal y hielo), bajo
agitación y N_{2}. Se añadió SOCl_{2} (64 ml, 0,864 mmoles) a lo
largo de 90 minutos. Se ajustó al matraz un condensador de reflujo
y se calentó hasta 70ºC durante 1 hora, después se enfrió y se
evaporó (coevaporando con MeOH). Se desmenuzó el residuo y se secó
bajo alto vacío, proporcionando el compuesto del título en forma de
polvos blancos (75 g, 100%). ^{1}H-RMN
(CDCl_{3}): \delta 0,88-0,95 (3H, t,
CH_{3}CH_{2}-), 1,48 (2H, br. s, NH_{2}),
1,50-1,80 (2H, m, CH_{3}CH_{2}-),
3,35-3,40 (1H, t, CHNH_{2}), 3,69 (3H, s,
OCH_{3}).
Se añadió K_{2}CO_{3} (147 g, 1,065 mmoles)
a hidrocloruro de metiléster de ácido
R-2-amino-butírico (74,5 g,
0,485 mmoles) en DMF seco (500 ml) bajo N_{2} a temperatura
ambiente, seguido de la adición gota a gota de bromuro de bencilo
(127 ml, 1,065 mmoles). Tras 2 horas de agitación se filtró el
compuesto K_{2}CO_{3} y se lavó (EtOAc, 200 ml). Se evaporó
in vacuo el agrupado de filtrado y lavados. Se dividió el
residuo aceitoso entre EtOAc (1,5 l) y H_{2}O (1,5 l). Se separó
la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa con una cantidad
adicional de EtOAc (1 l). Se concentraron las fracciones orgánicas
agrupadas. Se purificó el residuo mediante cromatografía flash en
gel de sílice seco (3:7 CH_{2}Cl_{2}/hexano). Se agruparon las
fracciones puras, se concentraron in vacuo, y se secaron,
proporcionando el título del compuesto (136,1 g, 94%).
^{1}H-RMN (CDCl_{3}): \delta
0,90-0,96 (3H, t, CH_{3}CH_{2}-),
1,75-1,81 (2H, m,
CH_{3}-CH_{2}-),
3,23-3,29 (1H, t,
-CH_{2}-CH-), 3,50-3,57
(2H, d, -NCH_{2}Ph), 3,77 (3H, s, -OCH_{3}),
3,93-3,99 (2H, d, -NCH_{2}Ph),
7,22-7,41 (10H, m, ArH).
Se cargaron virutas de Mg (53,7 g, 2,22 mmoles)
y Et_{2}O seco (2 l) en un matraz de tres cuellos de 5 litros de
capacidad provisto de un condensador y un borboteador de N_{2}. Se
agitó la mezcla y se enfrió hasta 0ºC con un baño de hielo. A
continuación, se añadió MeI (138,2 ml, 2,22 mmoles) gota a gota a lo
largo de 1 hora. A continuación se añadió metiléster de ácido
2-dibencilamino-butírico en
Et_{2}O seco (1 l) lentamente (a lo largo de 10 minutos) y se
dejó que la reacción se calentara hasta la temperatura ambiente,
hasta que espesó mucho. Se agitó la reacción durante 72 horas, se
enfrió a 0ºC y se refrescó añadiendo lentamente una solución acuosa
saturada de NH_{4}Cl (350 g en 1 l). Tras 30 minutos de agitación,
se filtró la mezcla de reacción a través de una placa de Celite y
se lavó con Et_{2}O (3 x 0,5 l). Se separó la capa etérea y se
extrajo la capa acuosa con una cantidad adicional de Et_{2}O (1L).
Se combinaron las fracciones orgánicas, se secaron sobre MgSO_{4}
y se concentraron. Se purificó el residuo mediante cromatografía
flash en gel de sílice (EtOAc al 2% en hexano), proporcionando el
compuesto del título (88,4 g, 82%) en forma de aceite incoloro.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}): \delta 1,06 (3H, s,
-CCH_{3}), 1,15-1,26 (6H, m (3H s & 3H
m), -CCH_{3} & -CH_{2}CH_{3}),
1,50-1,70 (1H, m, -CHHCH_{3}),
1,70-1,90 (1H, m, -CHHCH_{3}),
2-59-2,64 (1H, dd, -CHN-),
3,61-3,67 (2H, d, -NCH_{2}Ph),
3,97-4,02 (2H, d, -NCH_{2}Ph), 4,25 (1H,
br. s, -OH), 7,24-7,37 (10H, m,
ArH).
Se agitaron
R-3-dibencilamino-2-metil-pentan-2-ol
(21,0 g, 70,9 mmoles) y Pd(C) (2,1 g, Pd al 20% en peso
seco, H_{2}O al 50%) en MeOH (100 ml), en un hidrogenerador Parr a
una presión de 65 psi durante la noche. Se eliminó el catalizador
mediante filtración a través de una placa de Celite, se concentró el
filtrado y se secó bajo alto vacío, proporcionando el compuesto del
título en forma de aceite amarillo claro (7,585 g, 91%).
^{1}H-RMN (CDCl_{3}): \delta
0,90-1,05 (6H, m (3H s & 3H m),
-CCH_{3} & -CH_{2}CH_{3}), 1,18 (3H, s,
-CCH_{3}), 1,55-1,62 (2H, m,
-CH_{2}CH_{3}), 1,88-2,25 (2H, br. s,
-NH_{2}), 2,35-2,40 (1H, dd,
-CHN-).
Se calentaron
(2-cloro-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-3-ilmetil-amina
(24,4 g, 82,4 mmoles),
R-3-amino-2-metil-pentan-2-ol
(24,4 g, 209 mmoles), y K_{2}CO_{3} (24,4 g, 177 mmoles) hasta
150ºC durante 72 horas bajo N_{2}. Se enfrió la mezcla, se diluyó
con CH_{2}Cl_{2}, y se eliminó el compuesto K_{2}CO_{3}
mediante filtración. Se evaporó el filtrado, seguidamente se
destiló (Kugelrohr) bajo alto vacío, eliminando el compuesto
R-3-amino-2-metil-pentan-2-ol
no reaccionado. Se sometió el residuo a dos sesiones de
cromatografía flash en gel de sílice (la primera columna se eluyó
con un gradiente lineal de MeOH en CH_{2}Cl_{2} entre 5% y 10%;
la segunda columna se eluyó con MeOH al 2,5% en CH_{2}Cl_{2}).
Se disolvió el residuo en EtOAc caliente (150 ml), se concentró la
solución hasta un volumen de aproximadamente 100 ml y se dejó que
se enfriara. Se añadió Et_{2}O (10 ml) para inducir la
cristalización y se enfrió la solución hasta 0ºC. Se recogieron los
cristales mediante filtración, se lavaron con una cantidad reducida
de Et_{2}O y se secaron, proporcionando el compuesto del título
puro (5,70 g, 18%) en forma de sólido blanquecino. Se concentró el
agrupado de filtrado y lavados, se redisolvió el residuo en el
volumen mínimo de Me_{2}CO caliente y se dejó que se enfriara. Se
filtró el producto sólido y se redisolvió en un volumen mínimo de
EtOAc caliente y se dejó que se enfriara. Se separaron los sólidos
formados mediante filtración y se concentró nuevamente el filtrado
a sequedad, se redisolvió en una mezcla de Me_{2}CO caliente y
EtOAc, se enfrió, se filtró y se secó, proporcionando una segunda
parte del compuesto del título puro (2,15 g, 5,6 mmoles, 7%) en
forma de sólido blanco-sucio. P.f.:
138-145ºC. [\alpha]_{D}^{20} +32,54 (c
0,48, MeOH). LC-MS: 97,86% puro, m/z 384 [M
+ H]^{+}, 406 [M + Na]^{+},
C_{20}H_{29}N_{7}O = 383,49. Microanálisis (% real
(teórico)): C, 62,41 (62,64); H, 7,56 (7,62); N, 25,76 (25,57).
^{1}H-RMN (CDCl_{3}): \delta
0,93-0,99 (3H, t, -CH_{2}CH_{3}), 1,17
& 1,27 (6H, 2s, -C(CH_{3})_{2}OH),
1,51-1,54 (6H, d,
-NCH(CH_{3})_{2}), 1,65-1,80 (2H,
m, -CH_{2}CH_{3}), 2,15 (1H, br. s, NH o OH),
3,60-3,67 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})-),
4,57-4,62 (1H, m,
-NCH(CH_{3})_{2}),
4,77-4-80 (2H, m,
-HNCH_{2}-pir), 5,15 (br. s, 1H, NH o OH),
6,14 (1H, br. s, NH o OH), 7,21-7,26 (1H, m,
pir-H), 7,48 (1H, s, -N=CH-N-),
7,68-7,71 (ap. d, 1H, pir-H),
8,51-8,52 (ap. d, 1H, pir-H), 8,64
(1H, ap. s, pir-H). ^{13}C-RMN
(CDCl_{3}): concuerda con la estructura que contiene 20 átomos de
C; 10 átomos de C alifáticos a \delta 10,21, 20,88, 20,92, 21,90,
23,09, 26,64, 40,29 (débil), 44,72, 61,70 y 72,45 ppm; y 10 átomos
de C aromáticos a 112,96, 121,73, 132,97, 133,07, 133,65, 146,98,
147,67, 148,89 (débil), 152,97 y 158,77 ppm.
Este compuesto se obtuvo utilizando
procedimientos análogos a los descritos anteriormente para el
enantiómero (R) aunque partiendo del ácido
(L)-(+)-2-aminobutírico. P.f.:
140,5ºC a 146ºC. [\alpha]_{D}^{20} -29,00 (c
0,46, MeOH). LC-MS: 97,85% puro, m/z 384 [M +
H]^{+}, C_{20}H_{29}N_{7}O = 383,49. Microanálisis
(% real (teórico)): C, 62,51 (62,64); H, 7,61 (7,62); N, 25,70
(25,57). ^{1}H-RMN: \delta
0,93-0,99 (3H, t, -CH_{2}CH_{3}), 1,17 &
1,27 (6H, 2s, -C(CH_{3})_{2}OH),
1,51-1,54 (6H, d,
-NCH(CH_{3})_{2}), 1,65-1,80 (2H,
m, -CH_{2}CH_{3}), 2,15 (1H, br. s, NH o OH),
3,60-3,67 (m, 1H, -NHCH(CH_{2}CH_{3})-),
4,57-4,62 (1H, m,
-NCH(CH_{3})_{2}),
4,77-4-80 (2H, m,
-HNCH_{2}-pir), 5,15 (br. s, 1H, NH o OH),
6,14 (1H, br. s, NH o OH), 7,21-7,26 (1H, m,
pir-H), 7,48 (1H, s, -N=CH-N-),
7,68-7,71 (ap. d, 1H, pir-H),
8,51-8,52 (ap. d, 1H, pir-H), 8,64
(1H, ap. s, pir-H). ^{13}C-RMN
(CDCl_{3}): concuerda con la estructura que contiene 20 átomos de
C; 10 átomos de C alifáticos a \delta 10,21, 20,88, 20,92, 21,90,
23,09, 26,64, 40,27 (débil), 44,71, 61,70 y 72,45 ppm; y 10 átomos
de C aromáticos a 112,95, 121,72, 132,96, 133,07, 133,65, 146,85,
146,98, 148,86 (débil), 152,97 y 158,77 ppm.
| ^{a} Líneas celulares tumorales humanas: A549, HT29, Saos-2 |
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Claims (44)
1. Compuesto de fórmula I:
o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo, en la
que:
uno de entre R^{1} y R^{2} es metilo, etilo
o isopropilo, y el otro es H;
R^{3} y R^{4} son, cada uno
independientemente, H, alquilo C_{1}-C_{6}
ramificado o no ramificado, o arilo, y en la que por lo menos uno de
entre R^{3} y R^{4} es diferente de H;
R^{5} es un grupo alquilo
C_{1}-C_{5} ramificado o no ramificado o un
grupo cicloalquilo C_{1}-C_{6}, cada uno de los
cuales puede sustituirse opcionalmente con uno o más grupos OH;
R^{6}, R^{7}, R^{8} y R^{9} son cada uno
independientemente H, halógeno, NO_{2}, OH, OMe, CN, NH_{2},
COOH, CONH_{2}, o SO_{2}NH_{2}.
2. Compuesto según la reivindicación 1, en el
que uno de entre R^{1} y R^{2} es etilo o isopropilo, y el otro
es H.
3. Compuesto según la reivindicación 1 ó 2, en
el que R^{5} es isopropilo o ciclopentilo.
4. Compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que R^{6}, R^{7}, R^{8} y
R^{9} son todos H.
5. Compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que uno de entre R^{1} y
R^{2} es etilo y el otro es H.
6. Compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que R^{3} y R^{4} son, cada
uno independientemente, H, metilo, etilo, n-propilo,
isopropilo, n-butilo, s-butilo,
t-butilo o fenilo.
7. Compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que R^{3} y R^{4} son, cada
uno independientemente, H, metilo, etilo, n-propilo,
isopropilo, n-butilo, s-butilo, o
t-butilo.
8. Compuesto según la reivindicación 7, en el
que R^{3} y R^{4} son, cada uno independientemente, H, metilo,
etilo, isopropilo o t-butilo.
9. Compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores seleccionado de entre los
siguientes:
(2S3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol;
(2R3S)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol;
(3RS,4R)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-hexan-3-ol;
(3RS,4S)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-hexan-3-ol;
(3RS,4R)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-hexan-3-ol;
(3RS,4S)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-hexan-3-ol;
(3RS,4R)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2,2-dimetil-hexan-3-ol;
(3RS,4S)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2,2-dimetil-hexan-3-ol;
(3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol;
y
(3S)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol;
(3S)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol;
y
(3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol.
10. Compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores seleccionado de entre los
siguientes:
(2S3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol;
(2R3S)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol;
(3RS,4R)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-hexan-3-ol;
(3RS,4S)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-hexan-3-ol;
(3RS,4S)-4-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2,2-dimetil-hexan-3-ol;
(3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol;
y
(3S)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol.
11. Compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores seleccionado de entre los
siguientes:
(3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol;
(3S)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol;
(2S3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol;
(2R3S)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol;
y
cualquier isómero óptico de
3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol.
12. Compuesto farmacéutico que comprende un
compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 mezclado
con un diluyente, excipiente o portador farmacéuticamente aceptable,
o una mezcla de los mismos.
13. Utilización de un compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 11, en la preparación de un medicamento
para el tratamiento de un trastorno proliferativo.
14. Utilización según la reivindicación 13, en
la que dicho trastorno proliferativo es cáncer o leucemia.
15. Utilización según la reivindicación 13, en
la que dicho trastorno proliferativo es glomerulonefritis, artritis
reumatoide, psoriasis o trastorno pulmonar obstructivo crónico.
16. Utilización de un compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 11, en la preparación de un medicamento
para el tratamiento de un trastorno vírico.
17. Utilización según la reivindicación 16, en
la que el trastorno vírico se selecciona de entre citomegalovirus
humano (CMVH), virus herpes simplex tipo 1 (VHS-1),
virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1),
y virus varicela-zóster (VVZ).
18. Utilización de un compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 11, en la preparación de un medicamento
para el tratamiento de un trastorno del SNC.
19. Utilización según la reivindicación 18, en
la que el trastorno del SNC es la enfermedad de Alzheimer o el
trastorno bipolar.
20. Utilización de un compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 11, en la preparación de un medicamento
para el tratamiento de la alopecia.
\newpage
21. Utilización de un compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 11, en la preparación de un medicamento
para el tratamiento del ictus.
22. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 13 a 21, en la que el compuesto se administra en
una cantidad suficiente para inhibir por lo menos un enzima PLK.
23. Utilización según la reivindicación 22, en
la que el enzima PLK es PLK1.
24. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 13 a 21, en la que el compuesto se administra en
una cantidad suficiente para inhibir por lo menos un enzima CDK.
25. Utilización según la reivindicación 24, en
la que el enzima CDK es CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK6, CDK7, CDK8 y/o
CDK9.
26. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 13 a 21, en la que el compuesto se administra en
una cantidad suficiente para inhibir la quinasa Aurora.
27. Utilización de un compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 11, en la preparación de un medicamento
para el tratamiento de la diabetes.
28. Utilización según la reivindicación 27, en
la que la diabetes es la diabetes de tipo II.
29. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 27 ó 28, en la que el compuesto se administra en
una cantidad suficiente para inhibir la GSK.
30. Utilización según la reivindicación 29, en
la que el compuesto se administra en una cantidad suficiente para
inhibir la GSK3\beta.
31. Utilización de un compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 11 como agente antimitótico.
32. Utilización de un compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 11 para el tratamiento de un trastorno
neurodegenerativo.
33. Utilización según la reivindicación 32 para
el tratamiento de la apoptosis neuronal.
34. Utilización de un compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 11 para la inhibición de una proteína
quinasa.
35. Utilización según la reivindicación 34, en
la que dicha proteína quinasa es una quinasa dependiente de
ciclina.
36. Utilización según la reivindicación 35, en
la que dicha quinasa dependiente de ciclina es CDK1, CDK2, CDK3,
CDK4, CDK6, CDK7, CDK8 y/o CDK9.
37. Utilización de un compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 11 en un ensayo para la identificación
de otros compuestos candidatos capaces de inhibir uno o más de entre
quinasa dependiente de ciclina, GSK y un enzima PLK.
38. Utilización según la reivindicación 37, en
la que dicho ensayo es un ensayo de unión competitiva.
39. Procedimiento para la preparación de un
compuesto de fórmula I según la reivindicación 1, comprendiendo
dicho procedimiento la reacción de un compuesto de fórmula V con un
compuesto de fórmula VI:
en la que R^{1} a R^{9} son tal
como se define en la reivindicación 1 y X es Cl o
F.
40. Procedimiento según la reivindicación 39, en
el que dicho compuesto de fórmula V se prepara mediante las etapas
siguientes:
- (i)
- hacer reaccionar un compuesto de fórmula II con un compuesto de fórmula III, para formar un compuesto de fórmula IV;
- (ii)
- alquilar dicho compuesto de fórmula IV con un haluro de alquilo, R^{5}-X', para formar un compuesto de fórmula V.
41. Procedimiento según la reivindicación 39, en
el que dicho compuesto de fórmula VI se prepara mediante las etapas
siguientes:
- (i)
- oxidar un compuesto de fórmula VIII, en la que GP es un grupo protector, para formar un compuesto de fórmula IX;
- (ii)
- alquilar dicho compuesto de fórmula IX, para formar un compuesto de fórmula X;
- (iii)
- eliminar el grupo protector GP de dicho compuesto de fórmula X;
- \quad
- o
- (i)
- oxidar un compuesto de fórmula VIII, en la que GP es un grupo protector, para formar un compuesto de fórmula IX;
- (ii)
- alquilar dicho compuesto de fórmula IX, para formar un compuesto de fórmula X;
- (iii)
- oxidar dicho compuesto de fórmula X, para formar un compuesto de fórmula XII;
- (iv)
- alquilar dicho compuesto de fórmula XII, para formar un compuesto de fórmula XIII;
- (v)
- eliminar el grupo protector GP de dicho compuesto de fórmula XIII.
42. Procedimiento según la reivindicación 39, en
el que R^{3} = R^{4}, y dicho compuesto de fórmula VI se prepara
mediante un procedimiento que comprende las etapas siguientes:
- (i)
- convertir un compuesto de fórmula XVI, en la que GP' es un grupo protector y R es un grupo alquilo, en un compuesto de fórmula XVII;
- (ii)
- eliminar los grupos protectores GP' de dicho compuesto de fórmula XVII, para formar un compuesto de fórmula VI.
43. Procedimiento según la reivindicación 42, en
el que dicho compuesto de fórmula XVI se convierte en un compuesto
de fórmula XVII mediante una reacción doble de Grignard.
44. Procedimiento según las reivindicaciones 42
ó 43, en el que dicho compuesto de fórmula VI se prepara mediante
las etapas siguientes:
- (i)
- hacer reaccionar un compuesto de fórmula XIV con SOCl_{2} y MeOH, para formar un compuesto de fórmula XV;
- (ii)
- proteger el grupo amino de dicho compuesto de fórmula XV, para formar un compuesto de fórmula XVIa;
- (iii)
- hacer reaccionar compuesto de fórmula XVIa con un reactivo de Grignard R^{3}X'', en la que R^{3} es tal como se define en la reivindicación 1 y X'' es un haluro, para formar un compuesto de fórmula XVII;
- (iv)
- eliminar los grupos protectores GP' de dicho compuesto de fórmula XVII, para formar dicho compuesto de fórmula VI.
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