PT1529047E - Novos derivados de purina - Google Patents

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PT1529047E
PT1529047E PT03748238T PT03748238T PT1529047E PT 1529047 E PT1529047 E PT 1529047E PT 03748238 T PT03748238 T PT 03748238T PT 03748238 T PT03748238 T PT 03748238T PT 1529047 E PT1529047 E PT 1529047E
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isopropyl
amino
pyridin
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PT03748238T
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Michael Jarman
Peter Fischer
Edward Mcdonald
Bernard Nutley
Florence Raynaud
Stuart Wilson
Paul Workman
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Cancer Rec Tech Ltd
Cyclacel Ltd
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Description

DESCRIÇÃO "NOVOS DERIVADOS DE PURINA"
CAMPO DE INVENÇÃO A presente invenção refere-se a novos derivados de ourina 6,9-substituídos e suas apli cações biológicas. Em · particular, invenção rerere- se a derivadi os oe purina que têm p. ropriedades t iproli ferat ivas que são út eis no tratamento de distúrbios oliterativos, t cancro, leucemia, u 'soriase e semelhantes
Ί ΤΊ Ί r :iacao, oroore ss Ao e o mamifer o sã io regulados H'3VÓ8 d1 depende nte 1 0-0 Cd-diritil ^ OL ;K) , que s celular . Es tes complexos compreendi C 3 L 3.]. 11 .1. C 3 (o próprio CL )K) e uma dos com :p]. GX' os mais import -.antes par, incluem CIO .i. I. ΓΊ 3. A íLDK.i. também cíclina Bl- B3 (CDK.1), C.i .c.'J . _i. n 3 i} 1" ciclina E j ;CDK2). Cada r :m destes fase pa irtic ular do ciclo c elular. da fann ilia CDK estão en vo ividos ciclo cel.ul .ar. Assim, o s CDKs 7, reguiaç ão d a transcrição, e CDKS da célula neuronal e secretória. ius 3.0 do ciclo celu.1 ..ar de V 3 Σ l Los CC smplexos de cinase crític os para o cresc imento pe io men os, uma SUbu nidade -guJ .adora (cicln 13.) , Alguns re gul 3 Ç3 0 GO C .1 cio c elular :hec :.í dc > CC orno cdcL L, e CDK2), D3 (CDK2, CDK4, CDK5 f CDKc), complexos está envolvido numa Contudo, nem todos os membros exclusivamente no controlo do 8 e 9 estão implicados na desempenha um papel na função A actividade dos CDKs é regulada pós-traducionalmente, através de associações transitórias com outras proteínas, e através de alterações das suas localizações intracelulares. 0 desenvolvimento tumoral está intimamente associado cora a alteração genética e a desreguiação dos CDKs e dos seus reguladores, sugerindo que os inibidores dos CDKs podem ser terapêuticos anticancerígenos úteis. De facto, resultados iniciais sugerem que células normais e transformadas diferem na sua exigência para, e. g., ciciina A/CDK2 e que pode ser possível desenvolver novos agentes antineoplásicos desprovidos da habituai toxicidade para o hospedeiro observada com fármacos citotoxicos e citostáticos convencionais. Embora a Inibição de CDKs relacionados com o ciclo celular seja claramente relevante em, e. g,s aplicações oncológicas, pode não ser o caso para a inibição de CDKs regulados por A RN. Por outro lado, a inibição da função de CDK9/ciciína T foi recentemente associada a. prevenção da repiicação do VIH e, deste modo, a descoberta de novas biologias de CDK continua a abrir novas indicações terapêuticas para inibidores de CDK (Sausville, E. A. Trends Molec. Med. 2002, 8, S32-837). A função dos CDKs é fosforilar e assim actrvar ou desactivar determinadas proteínas, incluindo, e, g\, proteínas de retinobiastoma, laminas, histona Hl, e componentes do fuso mítótíco. O passo catalítico mediado por CDKs envolve uma reacção de transferência de fósforo do AT? para o substrato enzímático maeromolecular. Verificou-se que diversos grupos de compostos (revistos em, e, g\, Físcher, P. M. Curr. Opin. Drug Discovery Dev. 2001, 4, 623-634) possuem propriedades antiproiiferativas em virtude de antagonismo de ATP especifico de CDK. O documento WO 98/05335 (CV Therapeutics Inc) divulga derivados de purina 2,6,9-trissubstituídos que são inibidores selectívos de :inaí úteis i 10 t ratamento de distú. reumatô .1 0 Θ p- lúpus, dia' s tratame nto do cancro, doe nça c doença de hospedeiro vs, policis tico e outras doenças envolve prc literaçào celul Lar ar o doeu mento WO 99/0" /7 05 Califor 1 i -L cl ,í divulga análogos C ϊ 11 ci d· Θ d· de proteína, prot especif icaia ente, a inveni ção r desses anál ogos de purin; i par; celular es e doenças neuroc iegene 0 documento WO 97/2C ; 8 4 2 ( purina que apresentam pj ropris úteis nc tratamento do neu rode gene rativos, A pres ente invenção prociv purina 2, 6 v 9-substituído 3f p cancro, propriedades antiproliferativas. do ciclo celular, Esses compostos são los autoimunes, e„ g,, artrite tipo I? escl. erose mui tipi a/ diovaseular, tal como restenose, íxerto, gota, doença do rim proliferativas cuja patogénese punna que micem inter a±ia as G e polimerases. Mais (CNRS) também divulga derivados de osorias s que sao distúrbios
Um primeiro aspecto da invenção refere-se a um composto de fórmula I
1 ου um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que ura de R1 e Rj: é metilo, etiio ou isopropilo, e o outro é H; RJ e R4 são cada um independentemente H, alquilo Ci-Ce ramificado ou nâo ramificado, ou arilo, e em que, pelo menos, ura de R5 e Pd é diferente de H; RJ é um grupo alquilo C;-CR ramificado ou não ramificado ou um grupo cicloalquilo Cú-Cú, cada um dos quais pode ser substituído opcionalmente com um ou mais grupos OH; ilogèneo, N02, R% Pd, R'J e Pd são cada um independentemente fí, OH, OMe, CN, NH2, COOH, CONH2, ou S02NH2.
Um segundo aspecto da invenção refere-se a uma composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula 1 e um veículo, diiuente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
Um terceiro aspecto composto de fórmula 1 tratamento de um ou mais da invenção refere-se à utilização cie um na preparação de um medicamento para dos seguintes distúrbios: um distúrbio proliferativo; um distúrbio virai; um acidente vascular cerebral; aiopecia; um distúrbio do SNC; um distúrbio neurodegenerativo; e diabetes,
Um quarto aspecto da invenção refere-se à utilização de um composto de fórmula 1 como um agente antiraitótico.
Um quinto aspecto da invenção refere-se à utilização de um composto de fórmula 1 para inibir uma cinase de proteína.
Um sexto aspecto da invenção refere-se à utilização de um composto da invenção num ensaio para identificar ma is compostos candidatos que influenciam a activida.de de uma ou ma is enzimas
Q 0! m.o mer O O aci .nici/ um arimel 3 3pe C "C- ( i da in venç 30 ref £1 γ'£1 - se a um compost 0 de fó rmula 1 como aqui de frnr do ant erio mente É conhec ido na té ícní ca que 3 orin c rpa] . via o e desact ivaç ão raet abó I .103 lii vivo do age nte ini br tório de CDK ant :iprolife rati V O exp er.í m ent a i. roscoviti na (referênc :.i.a a Pub 1 O 3 0 3. 0 de Ped: ido de L Çd U ent e In ter nacional PCT WO 97/ '20 842; I fane : f O * f ‘ MeCIue, : S - J Fer gus 0 n, J. Rí Hull, J. D., St ok ^ ^ « , P arsons, 3., Wes twood, R., p vsclier , P. Μ. Ί ;e tr ahedron Asymme :try 2001, 12, 2891 -289 4) com pre p nde a OX.i.O.GÇâO GO grupo c. arl oinoi a u: n grupo carboxi lo e 3 sub 3 Θ 0' uente e XC.reÇâO C zest ;e meta) ao: Li to [ Nut e y, E , . P., Ra yn.au d, p I - f Wí Isor: ς r s -·' ^ * f Fi scher, P. , McCU -ue, S., Gi oddard, : P. M
Jarman, M., Lane, í 3., e Workman, P. Ciin. Câncer Re s. 2000, 6 Supl, ( 'Proc. 11L1 Ai aCR-NC I-EORTC I ntl. Conf. #318)]. 0 material sintétí co autêntico idênt ico a est e metabolito mostra actividade biológi ca reduzida in vi\ iro. Assí. rç a roscovitina e o derivado oarboxi io inibem a activ: Ldade de CDK2/ciclina E com valores de IC50 de 0,08 e 0,24 uM, respectivamente. Do mesmo modo, os valores de ICDo antiproliferativos médios num painel representativo de linhas celulares tumorais humanas transformadas para a roscovitina e o derivado carboxílo foram aproxímadamente 10 e > 50 μΜ, respectivamente.
Numa forma de realização preferida da invenção, um de R e R"; é etilo ou isoprooilo, e o outro é K.
Noutra forma de realização preferida da invenção, RJ é isopropiio ou ciclopentiio.
Numa forna de realização preferida, R% R', R8 e R9 são todos H,
Numa forma de realização preferida, R1 ou Ri é etilo e o outro é H.
Numa forma de realização preferida, R3 e R'; são cada um independentemente H, metilo, etilo, propilo, butilo ou fenilo.
Assim, numa forma de realização preferida, R3 e R* são cada um independentemente H, metiio, etilo, n-propilo, isopropiio, n-butílo, s-butilo, t-butilo ou fenilo.
Numa forma de realização mais preferida, R3 e R4 são cada um independentemente H, metiio, etilo, propilo ou butilo.
Assim, numa forma de realização preferida, R3 e Ri são cada um independentemente H, metiio, etilo, n-propilo, isopropiio, n-butílo, s-butilo ou t-butilo.
Numa forma de realização ainda mais preferida, R' e são cada um independentemente fí, metiio, etilo, isopropiio ou t-butilo.
Numa forma de realização especialmente preferida, o referido composto de fórmula 1 é seieccionado a partir do seguinte: (2S3R)-3-{9-Isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-iiamino}-pentan-2-oi; (2R.3S) -3-{ 9-Isopropil-6- [ (piridin-3-ilmetil) -amino] -9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol; (3RS, 4R)-4-{9-Isopropil-6-[{piridin-3-ilmetii)-amino]-9H-purin-2-iiamiRO}-hexan-3-oi; (3RS,4S)~4~{9-1sopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-iiamino}-hexan-3-oi; (3RS,4R)-4-[9-Isopropil-6-[(piridin-3-ilmetii)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metii-hexan-3-ol; (3RS, 4S) --4--{ 9-1sopropil-6- [ (piridin-3-ilmetil} -araino] -9R-pu r i n-2-i1amιη o}-2-me t iI-he xa n-3-o1; (3RS, 4R)-4-(9-Isopropil~6~[ípiridin-3-ilmetii)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2,2-dimetii-hexan-3-ol; (3RS, 4S)-4-{9-Isopropil-6-[{piridin-3-ilmetíI)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2,2-dimetiI-hexan-3-ol; (3R) "3“ { 9-1 sopropil-6-- [ (piridin-3-ilmetil) -araino] -9H-puri 2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol; (35)~3~{9-Isopropil~6~[(piridin-3-ilraetil)-araino]-9H-puri 2-ilamino}-2-raetil-pentan-2-oi; (3S) --3-- {9-Isopropil-6- [ (piridin-3-ilraetil) - amino] -9H-purí 2 - i 1 arai η o} - 2 - me t i 1. - p e n t a n - 2 - o 1; e (3R)-3-{9-Isopropil-6-[(piritíin-3-ilmetil)-araino]-9H-puri 2-ilamino}-2-raetil-pentan-2-ol.
De uai modo ainda mais preferido, o referido composto fórmula 1 é seleccionado a partir do seauinte: (2S3R)-3-{9-Isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilaraino}-pentan-2-ol; (2P3S) -3-{ 9-1 sopropil-6-- [ (piridin-3-ilraetil) -amino] -9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol; (3RS, 4P)-4-{9-Isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilaraino}-hexan-3-ol; (3RSf4S)-4-{9-Isopropil-6-[{piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-hexan-3-ol; (3RS, 4S)-4-{9-Isopropil-6-[(piridin-3-ilraetil)-araino]-9H-purin-2-ilamino}-2,2-diraetil-hexan-3-ol; (3-R) -3- {9- Isopropil-6- [ (piric iin-3-ilmetil)-amino] -9H-puri ilamino}-2-rae ití l-pentan-2- ” 0 A- / Θ (3S)-3“{9- Isopropil-6- [ (piric Iin-3-ilmetíl)-amino] -9H-purí 3-ilamino}-2-metil-pentan-2- or,
De um modo ainda mais preferido, o referido composto de fórmula 1 é seieccionado a partir do seguinte: (3R)-3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilaminoI-2-metil-pentan-2-ol; (3S) -3- { 9-isopropi 1-6- [ (piridin-3-ilmetil) - amino] -ÓH-purin-2-i1amino}- 2-meti1-pent an-2-oi; {2S3R3 -3-{ 9-isopropí 1-6- [ (piridin-3-ί imetil) -amino] -9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol; (2R3S)-3-{9-isopropil-6-f(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-iIamino}-pentan-2-ol; e qualquer isómero óptico de 3-{9-isopropil-6-[(piridin-3-íImetil)-amino]-9H-purin-2-iiamino}-pentan-2-οΙ.
Um segundo aspecto da invenção refere-se a uma composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula 1 misturado com um diluente, excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável, ou uma sua mistura. Embora os compostos da presente invenção (incluindo os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, ésteres e solvatos farmaceuticamente aceitáveis) possam ser administrados isoladamente, eles serão geralmente administrados misturados com um. veículo, excipiente ou diluente farmacêutico, parti cularraente para terapia humana. As composições farmacêuticas podem ser para utilização humana ou animal, em medicina humana e veterinária.
Os exemplos desses excipientes adequados para as várias diferentes formas de composições farmacêuticas aqui descritas podem ser encontrados no "Handbook of Pharraaceutical Excipients, 2* Edição, (1994), Editado por A Wade e PJ Welier,
Os veículos terapêutica sào bem conhecidos na técnica ou diluente aceitáveis ^ utilização farmacêutica, e são para descritos, por exemplo, em Remington/ s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co, (edi. A, R. Gennaro, 1985).
Os exemplos de veículos adequados incluem lactose, amido, glucose, metilcelulose, estearato de magnésio, manitol, sorbitol e semelhantes. Os exemplos de diluentes adequados incluem etanol, glicerol e agua. A escolha do veículo, excipiente ou diluente farmacêutico pode ser seleccionada tomando em consideração a via de administração pretendida e a prática farmacêutica padrão. As composições farmacêuticas podem compreender como, ou adicionalmente ao, veículo, excipiente ou diluente qualquer aglutinante (s), lubrificante (s), agente (s) de suspensão, agente (s) de revestimento, agente (s) de solubilizaçâo adequado(s).
Os exemplos de aglutinantes adequados incluem amido, gelatina, açúcares naturais, tais como, glucose, lactose anidra, lactose cie escoamento livre, beta-lactose, edulcorantes cie milho, gomas sintéticas e naturais, tais como, acácia, tragacanto ou alginato de sódio, carboximetiiceiulose e polietílenoglicol.
Os exemplos de lubrificantes adequados incluem oleato de sódio, estearato de sódio, estearato de magnésio, benzoato de sódio, acetato de sódio, cloreto de sódio e semelhantes.
Podem ser proporcionados conservantes, estabilizadores, corantes e mesmo agentes aromatizantes na composição farmacêutica. Os exemplos de conservantes incluem benzoato de sódio, ácido sórbico e ésteres do ácido p-hidroxibenzóico.
Também podem ser utilizados antioxidantes e agentes de suspensão.
Os compostos da presente invenção podem estar presentes como sais ou ésteres, em. particular sais ou ésteres farm.aceutícomente a o e í t a v e r s .
Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da invenção incluem os seus sais de adição de ácido ou base adequados. Um. a revisão de sais farmac :êuticos adeq- uados pode ser encontrada ern Berge et ai J Pharm. Sei, Γ f" b o, .í - Ú9 (1977). Os sais são fora lados, por exí ímpio, com ci Kj 1.0.0 o inorg árticos fortes. tais como, ácidos minerais, e, g,, ácido sulfúrico, ácido fosfórico ou haioácidos; com ácidos carboxíiicos orgânicos fortes, tais como, ácidos alcanocarboxílicos de i a 4 átomos de carbono que são não substituídos ou substituídos (e. g., com halogéneo), tais como, ácido acético; com ácidos dícarboxiiicos saturados ou não saturados, por exemplo, oxálico, malónico, succinico, maleico, fumárico, ftálico ou tetraftálico; com ácidos hidroxicarboxíiicos, por exemplo, ácido ascórbico, 0 o 1'—z 0 f iáct í C 0 ; máir co, t artárico ou cítrico; com am.i noáeidos j“· --Λ -y exemp. Io, áci aspártico ou glutâmico; com áci do bensóico; ou coai áci dos sul Lfónicos or :gân.i. o 0 Γ 0.1 0 coaio Ci. Kj H. 0.0 S 8..J. quii- ( Ci-C4) - 01 a. ri.' f-sulfónicos que são Π 3 0 SUb stituido s ou substit ruído s ( por ΘΧΘιΓίροϋ f com Uiíl 1”! cl 10 C| Θ neo) , tai s como á ci do m .etanc- ou p -toluen o-suifónicc >s. ácidos orgânicos ou funcional a ser ácidos carboxíiicos, 12 átomos de carbono
Os ésteres são formados quer utilizando álcoois/hidróxidos, dependendo do grupo esterifiçado. Os ácidos orgânicos incluem cais como, acio.cs alcanocarboxílicos de 1 a que são não substituídos ou substituídos (e, g., com halogéneo), tais como ácido acético; com ácidos dícarboxííicos saturados ou não saturados, por exemplo, oxáiico, maiónico, suecinioo, maleíco, fumárico, itálico ou tetraftálico; com ácidos hidroxicarboxílicos, por exemplo, ácido ascórbico, glicólico, láctico, málico, tartárico ou cítrico; com aminoácídos, por exemplo, ácido aspártico ou glutâmíco; com ácido benzóico; ou com ácidos sulfónicos orgânicos, tais como ácidos alquil-(Ci-C4)” ou aril-sulfónicos que são não substituídos ou substituídos (por exemplo, com um halogéneo), tais como ácido metano- ou p~-tolueno~sulíónicG3 „ Os hidróxidos adequados incluem hidróxidos inorgânicos, tais como, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de cálcio, hidróxido de alumínio. Os álcoois incluem aícanoálcoois de 1-12 átomos de carbono que pedem ser não substituídos ou substituídos, e. g., com um halogéneo).
Em tod.es os aspectos da presente invenção previ amente discutidos, a invenção inclui, sempre que apropriado, todos os enantiómeros e tautómeros dos compostos de fórmula 1, 0 especialista na técnica reconhecerá os compostos que possuem propriedades ópticas (um ou mais átomos de carbono quirais) ou caracteristicas tautoméricas. Os enantiómeros e/ou tautómeros correspondentes podem ser isolados/preparados através de métodos conhecidos na técnica.
ESTEREOXSGMRRGS E XSQMRRGS GEOMÉTRICOS podem existir como - e. g., eles podem e/ou geométricos e
Alguns dos compostos da invenção estereoisómeros e/ou isómeros geométricos possuir um ou mais centros assimétricos podem, assim, existir em duas ou mais formas estereoisoméricas e/ου geométricas. A presente invenção contempla a utilização de todos os estereoisómeros e isómeros geométricos individuais desses agentes inibidores, e suas misturas. Os termos utilizados nas reivindicações abrangem estas formas, desde que as referidas formas retenham a actividade funcional apropriada (embora não necessariamente ao mesmo nível).
A presente invenção inclui também todas as variações í sotópicas adequadas do agente ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável. Uma variação isotópica de um agente da presente invenção ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável é definida como uma em que, pelo menos, um átomo é substituído por um. átomo que tem o mesmo número atómico mas uma massa atómica diferente da massa atómica, geralmente encontrada na natureza. Os exemplos de isótopos que podem ser incorporados no agente e nos seus sais farmaceuticamente aceitáveis incluem isótopos de hidrogénio, carbono, azoto, oxigénio, fósforo, enxofre, flúor e cloro, tais como, "li, ?H, ±3C, i4C, 1:'N i(0 i80 JiP
JbS iCF e 3oCl respect ivamente. Determinadas variações isotópicas do agente e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, aquelas em que é incorporado um isótopo radioactivo tal como Ή ou 14C, são úteis em estudos de distribuição tecidular de fármaco e/ou substrato. São particularmente preferidos isótopos tritiados, i. e., bí, e carbcno-14, i. e., 14C, pela sua facilidade de preparação e detectabilidade. Alem disso, a substituição com isótopos, tais como, dentário, i. e„, J1R, pode produzir determinadas vantagens terapêuticas resultantes de uma maior estabilidade metabólica, por exemplo, semi-vida aumentada in vivo ou exigências de dosagem reduzida e, deste modo, podem ser preferidos em algumas circunstâncias. As variações isotópicas do agente da presente invenção e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis desta invenção podem ser geralmente preparadas através de procedimentos convencionais utilizando variações isotópicas apropriadas de reagentes adequados, A presente invenção também inclui formas de solvato dos compostos da presente invenção. Os termos utilizados nas reivindicações abrangem estas formas.
Invenção refere-se adicionalmente a compostos da presente invenção nas suas várias formas cristalinas, formas polimórficas, formas anidras e hidratadas. Está bem estabelecido dentro da indústria farmacêutica que os compostos químicos podem ser isolados em qualquer uma dessas formas através de variação ligeira do método de purificação e/ou forma de isolamento e solventes utilizados na preparação sintética desses compostos. A invenção inclui adicionalmente compostos da presente invenção na forma de pró-fármaco. Esses pró-fármaoos são geralmente compostos de fórmula 1 em que um ou ma is grupos apropriados foram modificados de modo que a modificação possa ser revertida com a administração a um indivíduo humano ou mamífero. Essa reversão é geralmente realizada através de uma enzima naturalmente presente nesse indivíduo, embora seja possível que um segundo agente seja administrado conjuntamente com esse pró-fármaco de forma a realizar a reversão in vivo. Os exemplos dessas modificações incluem éster (por exemplo, qualquer um daqueles descritos acima), em que a reversão pode ser realizada por uma esterase etc. Outros desses sistemas serão bem conhecidos dos especialistas na técnica.
As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser adaptadas para as vias de administração orai, rectai, vaginal, parentérica, intramuscular, mtraperitoneai, intraarterial, intratecal, intrabronquial, subcutânea, intradérmica, intravenosa, nasal, bucal ou sublingual.
Para a administração oral, é feita utilização particular de comprimidos, pílulas, comprimidos, cápsulas de gel, gotas e cápsulas. De um modo preferido, estas composições contêm a partir de 1 até 250 mg e, de um modo mais preferido, a partir de 10-100 mg, de ingrediente activo por dose.
Outras formas de administração compreendem soluções ou emulsões que podem ser injectadas intravenosamente, intraarterialmente, intratecalmente, subcutaneamente, intradermicamente, intraperitonealmente ou intramuscuiarmente, e que são preparadas a partir de soluções estéreis ou esterilizáveis. As composições farmacêuticas da presente invenção podem também ser na forma de supositórios, pessários, suspensões, emulsões, loções, unguentos, cremes, géis, sprays, soluções ou pós de polviihação.
Um meio alternativo da administração transdérmica é através da utilização de pensos dérmicos. Por exemplo, o ingrediente activo pode ser incorporado num creme que consiste numa emulsão aquosa de polietilenoglicóis ou parafina liquida, O ingrediente 1 activo pode também ser incorporado, a uma concentração entre 10% em. peso, num ungi sento que consiste r ruma. base de cera branca ou de parafi: ia mo le branca coi riuntament e com tais estab.il izadores e con servar: ites como pode ser requer :id.o.
As formas injectáveis podem conter entre 10-1000 mg, de um modo preferrdo entre 10-250 mg, de ingrediente activo por dose. podem ser formul adas na form a de dosagem forma de porções discretas qi :;e contêm uma um mú itiplo ou sub-umdade de uma dose
As composições unitária, í. e„, na dose unitária, ou unitária.
Um especialista na técnica pode facilmente determinar uma dose apropriada de uma das composições presentes para administrar a um indivíduo, sem demasiada experimentação. Tipicamente, um médico irá determinar a dosagem real que será ma is adequada para um doente individual e irá depender de uma variedade de factores incluindo a actividade do composto específico utilizado, a estabilidade metabólica e duração de acção desse composto, a idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, modo e tempo de administração, velocidade de excreção, combinação de fármacos, a gravidade do estado particular, e do indivíduo submetido à terapia. As dosagens aqui divulgadas são exemplifreatavas do caso médio, Podem existir naturalmente casos individuais em que são merecidas gamas de dosagem superiores ou inferiores, e essas estão dentro do âmbito desta invenção.
Dependendo da necessidade, o agente pode ser administrado partir de 0,01 até 30 mg/kg de peso corporal, tal numa aose a mg/kg de peso até como a partir de 0,1 até 10 mg/kg, de um modo ma is preferido a partir de 0,1 até 1 mg/kg de peso corporal.
Numa forma de realização exempiificativa, serão administradas, uma ou mais doses de 10 até 150 mg/dia, ao doente para o tratamento de malignidade.
Venricou-se que leucemias a E >res ΘΓ1 re mve nça o poss uem o por [ i L. O ( S Θ rem úteis no c > r· t aís como, cancr os, SOÍ liados ; com. prolífera ção . Clo θ Θ rt istenost iilt ipm iferatii /0 dentro do er de mo nstrado a' través da ião CS ilular nu m : snsaio de oor ex; emplo, Q Liei Iquer U filei 19, T7 , Saos- ' f CCRF-C EM, raç ôd O de inibic 3.0 de oin ase num ensaio apropriado. Estes ensaios, incluindo métodos para o seu desempenho, sâo descritos mais detalhadamente nos Exemplos acompanhantes. Utilizando esses ensaios pode ser determinado se um composto é ant iproli ferat ivo no contexto da presente invenção.
Uma forma de realização preferida da presente invenção refere-se, deste modo, à utilização de um ou mais compostos da invenção na preparação de um medicamento para tratamento de um distúrbio proliferativo.
Como aqui utilizada, a frase "preparação de um medicamento" inclui a utilização de um composto da invenção directamente como o medicamento, adicionalmente à sua utilização num programa de selecçâo para ma is agentes terapêuticos ou em qualquer fase da preparação de um tal medicamento, 0 termo "distúrbio proiíferativo" é aqui utilizado num sentido lato para incluir qualquer distúrbio que requeira controlo do ciclo celular, por exemplo, distúrbios cardiovasculares, tais como, restenose e cardiomicpatia, distúrbios auto-imunes, tais como, glomerulonefrite e artrite reumatóide, distúrbios dermatológicos, tais como, psoriase, distúrbios anti-inflamatórros, antífúngicos, antiparasitários, tais como, malária, enfisema e alopecia. Nestes distúrbios, os compostos da presente invenção podem induzir apoptose ou manter a estase dentro das células desejadas, como necessário. De um modo preferido, o distúrbio proliferativo é um cancro ou leucemia„
Noutra forma de realização preferida, o distúrbio proliferativo é a psoriase.
Os compostos da invenção podem inibir qualquer um dos passos ou fases no ciclo celular, por exemplo, formação do envelope nuclear, saida da fase estacionária do cicio celular (GO), progressão Gl, decondensação do cromossoma, degradação do envelope nuclear, INÍCIO, Iniciação da replícação do ADN, progressão da replicaçâo do ADN, terminação da replicação do ADN, duplicação do centrossoma, progressão G2, activação de funções mitóticas ou meióticas, condensação do cromossoma, separação do centrossoma, nucleação de microtúbulos, formação e função do fuso, interacções com proteínas motoras dos microtúbulos, separação e segregação da croniatina, inactivação de funções mitóticas, formação do anel contráctil, e funções de citocinése. Em particular, os compostos da invenção podem influenciar determinadas funções génicas, tais como, ligação da cromatina, formação de complexos de replicação, licenciamento de replicação, fosfor ilação ou outra activida.de de modificação secundária, degradação proteolitica, ligação de microtúbulos, ligação de actina, ligação de septina, actividade de nucieaçâo do centro de organização de microtúbulos e ligação a componentes das vias de sinalização do cicio celular.
Um aspecto adicional da invenção refere-se a um método de tratamento de uma doença proiiferativa, compreendendo o referido método a administração a um mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula 1.
Numa forma de realização preferida deste aspecto, o distúrbio proiiferativo é cancro ou leucemia.
Numa forma de realização ainda mais preferida deste aspecto, o composto é administrado numa quantidade suficiente para inibir, pelo menos, uma enzima CDK.
De um modo preferido, o composto da invenção é administrado numa quantidade suficiente para inibir, peio menos, um de CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK6, CDK7, CDK8 e/cu CDK9.
De um modo mais preferido, o composto da invenção é administrado numa quantidade suficiente para inibir, pelo menos, um de CDK2 e/ou CDK4.
De um modo ainda mais preferido, a enzima CDK é CDK2.
Numa forma de realização preferida deste aspecto, composto é administrado ora1mente.
Outro aspecto da invenção refere-se a utilização de um composto de fórmula 1 como um agente antimitótico.
Ainda outro aspecto da invenção refere-se à utilização de um composto de fórmula 1 para tratamento de um distúrbio neurodegenerativo.
De um modo preferido, o distúrbio neurodegenerativo é apoptose neuronal,
Outro aspecto da invenção refere-se a utilização de um composto de fórmula 1 como um agente antiviral.
Assim, outro aspecto da invenção refere-se à utilização de um composto da invenção na preparação de um medicamento para tratamento de um distúrbio virai, tal como c itomegalovíru s humano (HCMV), vírus herpes simplex tipo 1 (HSV-1), vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (VIH- -D, e vírus da varicela zoster (VZV).
Numa forma de realização mais preferida da invenção, o composto da invenção é administrado numa quantidade suficiente para inibir uma ou mais dos CDKs da célula hospedeira envolvidos na replicação virai, i, e. CDK2, CDK7, CDKS e CDK9 [Wang D, De la Fuente C, Deng L, Wang L, Ziiberman I, Eadie C, Healey M, Stein D, Denny T, Harríson LD, Meijer L, Kashanchi F. Inhibition of human immunodefícíency vírus type 1 transcription by Chemical cyclin-dependent kinase inhibitors. J. Virol. 2001; 75: 7266-72791.
Como aqui definido, um efeito antiviral dentro do âmbito da presente invenção pode ser demonstrado através da capacidade para inibir CDK2, CDK7, CDKS ou CDK9.
Numa forma de realização particularmente preferida, a invenção refere-se a. utilização de um ou mais compostos da invenção no tratamento de um distúrbio virai que ê sensível ou dependente de CDK. Os distúrbios dependentes de CDK estão associados com ura nível acima do normal de actividade de uma ou mais enzimas CDK, Esses distúrbios associados, de um modo preferido, cora um t nível anormal de ac rtividade de CDK2, CDK8 e/ou CDK9. D im distúrbio ser rsível a CDK e um distú que uma aberração no nível, de C! DK não é a causa prímár está a jusante da aberração metab •ólica primária. cenários, pode-se dizer que CDK 2, CDK' 7, CDK8 e/ou CDK; parte da via meta bórica sensível e os inibidores de CDK deste modo, esrar activos no trat; amento desses distúrbios. ma í
Outro aspecto da invenção refere-se à utilização dos compostos da invenção, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, na preparação de um medicamento para tratamento da dia bete 3 . Nu ma forma de realizaç âO par1 ticular: rente preferi da, s. dia bete s é diabete s tipo II. A GSK 3 é uma de diversa ί S eira ases de pro Leiiia que fosf ;cri iam a glic ^ 0 C| ;nic si] ntase (GS \ / * 7\ Λ p 3 trmuraç ão d; i srnte «2, lIí de coqé nío através da ínsuli .na no mús culo es quelét íco resu da des orí laçáo e activação da GS Ά acção d. ^ GSK3 na GS i :esu Ita assim na desactivação da ultima e, deste modo, supressão da conversão de qlucose em qlicoaénio nos músculos. A diabetes tipo II (diabetes mellitus não dependente de insulina) é uma doença multi-factorial. A hiperglícemia é devida a resistência á insulina no fígado, músculos, e outros tecidos, acoplada com secreção diminuída de insulina. 0 músculo esquelético é o principal local para a incorporação de glucose estimulada pela insulina, é ai quer removida da circulação ou convertida em glicogénio. A deposição de glicogénio no músculo é a principal determinante na homeostasis da glucose e diabéticos tipo II têm armazenamento defeituoso de glicogénio no músculo. Existem evidências que um aumento na actividade de GSK3 é importante na diabetes tipo II [Chen, Y. H.; Hansen, L.; Chen, M.X.; Ejorbaek, C.; Vestergaard, H. ; Hansen, I„; Cohen, P. T.; Pedersen, 0. Diabetes, 1994, 43, 1234]. Além disso, foi demonstrado que a GSK3 é sobreexpressa em células musculares de diabéticos tipo II e que existe uma correlação inversa entre a actividade de GSK3 do músculo esquelético e a acção da insulina [Nikculina, 8. E„; Ciaraldi, T.P.; Mudaiiar, 8.; Mohideen, P.; Cárter, L. ; Henry, R.R. Diabetes, 2000, 49, 263]. A inibição de GSK3 tem, deste modo, significado terapêutico no tratamento da diabetes, particularmente tipo II, e neuropatia diabética. É de notar que a GSK3 é conhecida por fosforilar muitos substratos diferentes da GS, e está assim envolvida na regulação de múltiplas vias bioquímicas. Por exemplo, a GSK é altaraente expressa era sistemas nervosos centrais e periféricos.
Outro aspecto da invenção refere-se, deste modo, à utilização de compostos « da invenção, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, n 3. preparação de um : medicamento para tratamento de distúrbios do SNC, por exemple >, distúrbios neurodeceneratrvos, De um modo preferido, o distúrbio do SNC é a doença de Aizheimer. Tau é um substrato de GSK -3 que foi implicado na etiologia da doença de Aizheimer. um células nervosas saudáveis, o Tau organiza-se conjuntamente com tubulina em microtúbulos. Contudo, na doença de Alzheimer, o tau forma grandes tranças de filamentos, que quebram as estruturas de microtúbulos na célula nervosa, prejudicando, desse modo, o transporte de nutrientes assim como a transmissão de mensagens neuronais.
Sem desejar estar condicionado pela teoria, crê-se que os inibidores de GSK3 possam ser capazes de prevenir e/ou inverter a híperfosforilação anormal da proteína tau associada a microtúbulos que ê uma característica invariante da doença de Alzheimer e de uma variedade de outras doenças neurodegenerativas, tais como, paralisia supranuclear progressiva, degeneração corticobasal e doença de Pick. As mutações no gene tau provocam formas herdadas de demência f ront o-tempo raI, destacando adicionalmente a relevância da disfunção da proteína tau para o processo neu rodegenerati vo [Goedert, M. Curr. Opin. Gen. Dev,, 2001, 11. 3431,
Outro aspecto da invenção refere-se à utilização de compostos da invenção, ou seus sais farmaceuticaraente aceitáveis, na preparação de um medicamento para tratamento do distúrbio bipolar.
Ainda outro aspecto da invenção refere-se à utilização de compostos da invenção, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, na preparação de um medicamento para tratamento de um acidente vascular cerebral. A redução da apoptose neuronai é um objestivo terapêutico importante no contexto do traumatismo craniano, acidente vascular cerebral, epilepsia e doença do neurónio motor [Mattson M.P., Nat. Rev. Mol. Ce 1.1. Biol., 2000, 1, 120] . Deste modo, a GSK3 como um factor pró-apoptót ico em células neuronais torna esta cinase de proteína um alvo terapêutico atractivo para a concepção de iármacos inibitórios para tratamento destas doenças.
Ainda outro aspecto da invenção refere-se a. utilização de compostos da invenção, ou seus sais farraaceuticamente aceitáveis, na preparação de um medicamento para tratamento da alopecia. 0 crescimento do cabelo é controlado através da via de sinalização Wnt, em particular Wnt-3. Em sistemas de modelo de cultura de tecrdos da pele, a expressão de mutantes não degradáveis de 3-catenina conduz a um aumento dramático na população de cérulas estaminais putativas, que têm um potencial proliferativo superior [Zhu, A., J„; Watt, F,M, Development, 1999, 126, 2285]. Esta população de células estaminais expressa um. nível superior de β-catenina não associada a caderina [DasGupta, R.; Fuchs, E. Development, 1999, 126, 4557], que pode contribuir para o seu potencial proliferativo elevado. Além disso, murganhos transgénicos que sobreexpressam uma β-catenina truncada na pele sofrem morfogénese do folículo piloso de novo, que é normalmente apenas estabelecido durante a embriogénese, A. aplicação ectópica de inibidores de GSK3 pode, deste modo, ser terapeuticamente útil no tratamento da calvície e no restabelecimento do crescimento do cabeio após alopecia induzida por quimioterapia, Um aspecto adicionai da invenção refere-se a um método de tratamento de um distúrbio dependente de GSK3, compreendendo o referido método a administração a um indivíduo com necessidade do mesmo, de um composto de acordo com a invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como definido acima, numa quantidade suficiente para inibir GSK3.
De um modo preferido, o composto da invenção, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é administrado numa quantidade suficiente para inibir GSK3/S.
Numa forma de realização da invenção, o composto da invenção é administrado numa quantidade suficiente para inibir, pelo menos, uma enzima de PLK.
As cinases de tipo polo (PLKs} constituem uma família de cinases de proteína de serina./treonina. Os mutantes mitóticos de Drosofila melanogaster no locus polo apresentam, anomalias do fuso [Sunkel et al., J. Celi Sei., 1388, 89, 25] e verificou-se que polo codifica uma cinase mitótica [Llamazares et al., Genes Dev., 1991, 5, 2153]. Em humanos, existem três PLKs íntimamente relacionadas [Gíover et al., Genes Dev,, 1998, 12, 3777]. Elas contêm um domínio catalítico de cinase do terminal amino altamente homólogo e os seus terminais carboxilo contêm duas ou três regiões conservadas, as caixas polo, A função das caixas polo permanece parciaimente compreendida mas estão implicados no direccíonamento de PLKs para compartimentos subcelulares [Lee et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1998, 95, 9301; Leung et ai., Nat. StrucL. Biol., 2002, 9, 719], mediação de interseções com outras proteínas [Kauseimann et ai., EMBG J., 1999, 18, 5528] ou podem constituir parte de um domínio auto-regulador [Nígg, Guris
Gpin. Celi Biol., 1998, 10, 776] . Além disso, a actívrdade de PLK1 dependente de caixa polo é requerida para uma transição metafase/anafase apropriada e citocinése [Yuan et al., Câncer
Res., 2002, 62, 4186; Seong et ai., Ji Biol. Chem., 2002, 277, 32282] .
Estudos mostraram que as PLKs humanas regulam alguns aspectos fundamentais da mitose [Lane et al., J. Celi. Biol 1996, 135, 1701; Cogsweii et ai., Celi Growth Differ., 2000, II, 615] . Em particular, crê-se que a actividade de PLK1 é necessária para a maturação funcional dos centrossomas na G2 tardia/profsse precoce e subsequente estabelecimento de um fuso bipolar. 0 deplecçáo de PLK1 celular através da técnica do ARN interferente pequeno (siARN) confirmou também que esta proteína é requerida para processos mitóticos múltiplos e conclusão da citocinése [Liu et ai., Proc. Natl. AcacL Sei. USA, 2002, 99, 8672] .
Numa forma de realização raais preferida da invenção, o composto da invenção é administrado numa quantidade suficiente para inibir PLK1,
Das três PLKs humanas, a PLK1 é a melhor caracterizada; eia regula uma varredade de efertos do ciclo de divisão celular, incluindo o início da mitose [Toyoshima-Morirnoto et ai., Nature, 2001, 410, 215; Roshak et ai., Ceil Signaíling, 2000, 12, 405], activação do ponto de verificação de lesão do ADN [Smits et ai., Nat. Cell Bíol., 2000, 2, 672; van Vngt et ai., J. Biol. Cnem., 2001, 276, 41656], regulação do complexo que promove . a a n a f a s e [Sumara et al., Mol . Cell, 2002, 9, 515; Golan et al,, J. Biol. Chem2002, 277, 15552; Kotani et ai., Mol . Cell, 1998, 1, 371], fosforilação do proteossoma [Fenç et ai., Cell Grewth
Differ., 2001, 12, 29], e duplicação e maturação do centrossoma [Dai et ai., Oncogene, 2002, 21, 6195].
Especificamente, a iniciação da mitose requer activação do factor que promove a fase M (MPF), o complexo entre a cinase CDKl dependente de ciciina e ciclinas de tipo B [Nurse, Nature, 1990, 344, 503], As últimas acumulam-se durante as fases S e G2 do ciclo celular e promovera a fosforilação inibitória do complexo MPF pelas cinases WEE1, MI Kl e MIT1. No fim da fase G2, a correspondente desfosforilação através da fosfatase de especificidade dupla CDC25C provoca a activação de MPF [Nigg, Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 2001, 2, 21], Na interfase, a ciciina B localiza-se no citoplasma [Hagting et al., EMBQ J,, 1998, 17, 4127], torna-se depois fosforilada durante a profase event o provoca a to •ansloc ^ (“·, nuc lecii [Hagt.i ng £1 T- a1,, Cu 1? 17, Biol, , 19 S 9, 9, 680 J- tf i. / ' f J, Biol, ri u ' F 2001, 2 76, 3 6 0 4 ] . Pensa-se q ne i s acura· J 1 3 Ç o.1 o nu clea .r de MP r cK. rtivo duran t e a profa se é importa nte para . miei. ar θ' vent os da f c: c-- M [ γγι ... i... .. . J_ cl ir d. Z Cl W G L a 1., Curr. Gpm, Ce •11 Bi! O.L B } 200 C b 1 2, 6 o 8 ] , Cont udo, o MPF nu cl e ar é manti do inact ivo atra ivés de WI .j Mj j. 3 menos que neutr alisado por CDC 25C„ A , prój pr.í a fos f a t a s e CDC2 • 3C, 1 o cai rr. . z cida no o itopiasma dl irar; te a inte rfas e, a curau .1 a no núclec ' na profa se [Seki et ai. , Mol. 3 ίο 1. C 'eii. 1992, 3, 137 3; Eeai d G L a 1., Cel1, 1993, 04 ' 1 ! 463; Dâ.l 3 .1 .. et a. .1. , Mol. Cell boi,, 1 Q Q J > .ma- através da fosforilação de PLK1 [Rosnak et ai Signa 11ing, 2000, 12, 4 05] . Esta cínase é um importante da 2. n .1. C .1.3 Ç cl· O 0.3 fase iVÍ regulador
Numa forma de realização particularmente preferida, os compostos da invenção são inibidores antagonisticos de ATP de PLK1.
No presente contexto, o antagonismo de ATP refere-se à capacidade de um composto inibidor para diminuir ou prevenir a actividade catalítica de PLK, i. e., transferência de fósforo do ATP para um substrato macromolecular de PLK, em virtude de ligação reversível ou irreversível no sítio activo da enzima de um tal modo que enfraqueça ou abole a ligação do ATP.
Noutra forma de realização preferida, o composto da invenção é administrado numa quantidade suficiente para inibir PLK2 e/ou PLK3. de cicl: na B [To 215] como cie 2 0 ί \ r\ J -1 / J 3 341] é p .“\ ' 7.Λ C[ h ' é promovida 19, 44 65], A. entrada nucle Morimoto et ai., Natui [Toyoshima-Morimoto et al
Os PLK2 (também conhecido como SNK) Γ' ‘ΛΓρ .-\ PRK e FNK ) oe mamií sendo produtos génicos ei nas e de PLK.3 parece ati G2, Ξ também activado V Θ1? iL .t icação de lesão do •esulta em P aragem do C.l O o Mol . Cell. Biol., 200 2, 22, bem entend id o des L.rê to PL lis. ções pós-mi "!" 0 ticas j .mpo: :tan tes ‘ J., 1999, 1 8 , 5528] íifíip e-se a 1 :tilisa çâo de um 1U8. c ina.se de proteína. e PLK3 (também conhecido "ero foram originalmente mostrados como precoces imediatos. A actividade de ngir um pico durante a fase S tardia e durante a activação do ponto de ADN e stress oxidativo grave. 0 PLK3 também: desempenha um papei importante na regulação da dinâmica dos microtúbulos e da função do centrossoma na célula e a expressão desregulada de PLK.3 r celular e apoptose [Wang et ai.,
34 50] . O PLK2 é o homólogo menos Ambos os PLK2 e PLK3 podem ter fun adicionais íKauselmann et al., EMBC
Numa for :ma de reanzaçao pref er id; a deste aspecto, a cinase de proteír ia é uma cinase de pendente de ciciina. De um modo pre.i :erído, 5. cinase de proteína è CDK1 , CDK2, CDK3, CDK4, CDKb, CDKr l, CDK8 ou CDK.9, de um modo mais pre' ferido CDK2,
Um aspecto adicional da invenção refere-se a um método de inibir uma cinase de proteína, compreendendo o referido método o contacto da referida cinase de proteína com um composto de fórmula 1. de um modo ainda
Numa forma de realização preferida deste aspecto, a cinase de proteína é uma cinase dependente de ciciina, mais preferido CDK2.
ENSAIOS
Outro aspecto da invenção refere-se à utilização de um composto, como aqui definido acima, num ensaio para identificar mais compostos candidatos que influenciam a actividade de uma ou mais enzimas de CDK,
De um modo preferido, o ensaio é capaz de identificar compostos candidatos que são capazes de inibir uma ou mais enzimas de CDK.
De um modo mais preferido, o ensaio é um ensaio de ligação competitiva.
De um modo preferido, o composto candidato é formado por modificação SAR convencional de um composto da invenção.
Como aqui utilizado, o termo "modificação SAR convencional" refere-se a métodos padrão conhecidos na técnica para variar um dado composto através de derivatização química.
Assim, num aspecto, o composto identificado pode actuar como um modelo (por exemplo, um molde) para o desenvolvimento de outros compostos. Os compostos utilizados em tal teste podem estar livres em solução, fixos a um suporte sólido, suportados numa superfície celular, ou localizados intraceiuiarmente. Pode ser medida a abolição de actividade ou a formação de complexos de ligação entre o composto e o agente a ser testado. 0 ensaio da presente invenção pode ser uma selecçâo, peio que é testada uma variedade de agentes. Num aspecto, o método de ensaio da presente invenção ê uma selecçâo de elevada C8.peC.Í.O.SCi.0 „
Esta invenção selecçâo de fármaco neutralizantes capazes específicamente com um também contempla a utilização de ensaios de competitivo, em que anticorpos de ligação a um composto competem composto de teste para ligação a um
Outra técnica para seieocionar, proporciona uma selecçâo de elevada capacidade (HTS) de agentes que têm uma afinidade de ligação adequada às substâncias e é baseada no método descrito em detalhe no documento KO 84/03564, E esperado que os métodos de ensaio da presente sejami adc mquados para a selec :ção, tan to a pequena como escala, de compostos de teste assim como em. quantitativos. invenção a grande ensaios
De um modo preferido, o ensaio de ligação competitiva compreer 'ide o contacto de um compost o de fórmu ia 1 com uma enzi de CDK na presença de U1T i substrato conhecido da referida enzi de CDK C.\ detecção de qr íalquer alt eração na interacção entre ref erí d; i e; szima de CDK £ o .referido substrato conhecido.
Um sexto aspecto da invenção proporciona um método de detecção da ligação de um ligando a uma enzima de CDK, compreendendo o referido método os passos de: (1) contacto de um. ligando com uma enzima de CDK na presença de um substrato conhecido da referida enzima de CDK; (ii) detecção de qualquer alteração na interacção entre a referida enzima de CDK e o referido substrato conhecido; e em que o referido ligando é um composto de fórmula 1.
Um aspecto da 1; 'ivençao re . ν,Γ} „ se : a i ,;m proces so que comp -f p ç.·. p e os pass d -1 ΟΘ " (a) real izacão oe um mé todo de ΘΓΊ8 3. i. 0 ci qni desc y ~ o abaix .0 f íb) iden t ilic d. Ç <â 0 de um ou mais d X. gando capaze s d e ligaç ão a um domí nio d e ligação do li gando; e íc) prep a ração de uma qua.nt.idc ;de G6 Li .m ou ma dos re feridos 1igandos. Outr o aspect 0 da invençã o propo rc lona um proces so que comp reend e os passos de: (a) realização de um método de ensaio aqui descrito abaixo; íb) identificação de um ou mais ligandos capazes de ligação a um Ί d v αί; '.X.V.Í domínio de i lioando; e (c) preparação de uma composição farmacêutica que compreende um ou mais dos referidos ligandos.
Outro aspecto da invenção proporciona um processo que compreende os passos de: (a) realização de um método de ensaio aqui descrito abaixo; (b) identificação de um ou mais ligandos capazes de ligação a um dominio de ligação do ligando; (c) modificação de um ou mais dos referidos ligandos capazes de ligação a um domínio de ligação do ligando; (d) realização do método de ensaio aqui descrito abaixo; (e) preparação opcional de uma composição farmacêutica que compreende um ou mais dos referidos ligandos. A invenção refere-se também a um ligando identificado através do método aqui descrito abaixo.
Ainda outro aspecto da invenção refere-se a uma composição farmacêutica que compreende um ligando identificado através do método aqui descrito abaixo. i Utl iizaçao ae um descr ito abaixo, na pa ra U -Í. .1. -Í. Z 3. Ç â 0 no
Outro aspecto aa invenção rerere-se .igando identificado através do método acu. rreparação de uma composição farmacêutico iratamento de distúrbios proiiferativos.
Os métodos acima podem ser utilizados para a selecção de um .qando útil como um inibidor de uma ou mais enzimas de CDK.
PROCESSO
Um aspecto adicional da invenção refere-se a um processo para a preparação de um composto de fórmula I como aqui definido acima, compreendendo o referido processo fazer reagir um composto de fórmula V com um composto de fórmula
VI
de fórmula III para formar um composto de fórmula IV; (ii) alquilação do referido composto de fórmula IV com um halogeneto de alquilo, Pf-X', para formar um composto de fórmula V,
De um modo preferido, o referido composto de fórmula VI é preparado através dos seguintes passos:
é um IX; para o de ue é T é é um IX; para
(i) oxidação de um composto de fórmula VIII, em que PG grupo protector, para formar um composto de fórmula
(11) aiquílação do referido composto de fórmula IX formar um composto de fórmula X; (iii) remoção do grupo protector PG do referido compost fórmula X para formar um composto de fórmula IX, q equivalente à fórmula VI (em que um de R3 ou R" ê H)
Aifcernativamente, o referido composto de fórmula V preparado através dos seguintes passos:
(1) oxidação de um composto de fórmula VIII, em que PG grupo protector, para formar um composto de fórmula
(íi) alquilaçâo do referido composto de fórmula IX formar um composto de fórmula X; (iii) oxidação do referido composto de fórmula X para formar um composto de fórmula XI; (ív) alquilaçâo do referido composto de fórmula Xi para formar um composto de fórmula XII; remoção do grupo protector PG do referido composto de fórmula XIII para formar um composto de fórmula VI.
De um modo mais preferido, os passos de dos oroeessos acima são realizados através oxidação (i) e (iii) de uma oxidação de
Swern.
De um modo preferido, a reacçâo de alquilaçâo dos passos (ii) e (iv) dos processos acima são realizados através de tratamento do composto com um reagente de alquil-lítio na presença de um catalisador do complexo de brometo de cobre/sulfureto de dimetilo.
Numa forma de realização preferida alternativa, R* ::: R4 e o referido composto de fórmula VI é preparado por um processo que compreende os passos de:
conversão de um composto de fórmula XVI, em que PG' é um grupo protector e R é um grupo alquilo, num composto
XVII (i) (i i) r emoção dos grupos protector* 2S PG' do referid· o composto d e fórmula XV11 par •a formar i jm composto de fó: rmula VI. De um modo preferido, o referido composto de fórn ruía XVI é convertido num composto de fórmula ] <VII através de uma dupla reacção de Grignard. De um modo ma is prefer ido, rela tivamente a esta forma de realização, o referido composto de fórmula VI é preparado 3 T. T. 3. V Θ 3 (1 0 3 seguintes passos: R1 JR2 (i) fazer reagir um composto de fórmula XIV com S0C12 e MeOH para formar um composto de fórmula XV; íií) protecção do grupo amino do referido composto de fórmula XV para formar um composto de fórmula XVIa; (iii) fazer reagir o referido composto de fórmula XVIa com um reagente de Grignard BfX", em que Ff é como definido na reivindicação 1 e X é um halogeneto, para formar um R1 Rz HO.
NH2 XIV
HO
-PG’ j^3 PG' xvn
R1 R2 HO
NH2 R3 R4 VI (iv) remoção dos grupos protectores PG' do referido composto de fórmula XVII para formar o referido composto de fórmula vi.
Os grupos protectores PG e PGf adequados serão familiares aos especialistas na técnica relevante. A título de exemplo, de um modo preferido, o grupo protector PG' é um grupo benzilo, En, e o grupo protector PG é um grupo trútilo.
Os detalhes adicionais da preparação de compostos da presente invenção são delineados nos Exemplos acompanhantes sob o titulo de "Síntese". A presente invenção é ainda descrita através dos seguintes exemplos.
Em contraste com a roscovrtrna, os compostos da presente invenção contêm substituintes de C-2 de purina modificados. Em particular, os compostos da invenção contêm substituintes de C-2 que têm um grupo álcool secundário ou terciário em vez de um grupo álcool primário. Sem desejar estar condicionado pela teoria, crê-se que a presença desses substituintes de C-2 modificados conduz a uma redução na conversão metabólica álcool-carboxilo.
De forma a compensar a redução na solubilidade aquosa esperada em resultado da incorporação de substituintes alquilo adicionais no substituinte de C-2, o grupo benzilamino de C-6 da roscovitina foi substituído com um grupo (pirídín-3-il}-metilamino. Os exemplos acompanhantes demonstram que esta modificação é tolerada em termos de actividade biológica (inibição e efeito antiproliferativo na linha celular tumorai humana de CDK2/ciclina E ou A, CDKl/cíclina B).
Assim, a presente invenção demonstra que a modificação dos substituintes de 02 e 06 de purina da roscovitina produz novos compostos com utilidade terapêutica intensificada. De facto, foi demonstrado que a colocação de um ou dois substituintes de alquilo inferior no carbinol C do substiturnte de C-2 de purina, presente na roscovitina não é apenas tolerado em termos de retenção da aotívídade biológica desejada (potência e selectivicade da inibição da cinase de proteína; citotoxicidade), mas nalguns casos proporciona compostos mais potentes. Além disso, a inclusão de um grupo (piridin-3-ii)-metilamino no lugar do grupo benzi lamino assegura hidrofíli cidade e perfis de solubilidade aquosa melhorados para os compostos desta invenção comparativamente á roscovitina (coeficientes de partição calculados de n-oetanol/água: 2,5 < CiogP < 3,8 comparativamenfe a CiogP — o, / cara ai roscovitina). Além disso, foi demonstrado que compostos selecciorados, aqui exemplificados, possuem resistência aumentada à degradação metabólica utilizando um sistema de modelo in vitro apropriado. srni
Os compostos de estrutura geral 1 podem ser preparados através de métodos conhecidos na técnica (reviste em Fischer, P.M., e Lane, D.P. Curi. Mecí. Ckem. 2001, 7. 1213-1245) . Uma via sintética conveniente é mostrada abaixo no Esquema 1 e começa com 2,6-dicioropurina (2, X = Cl) ou 2-amino-6-cloropurina (2, X = NHp comercialmente disponível. No último caso, o grupo smino é transformado para proporcionar o material inicial de 6-cloro-2- f luoro-purina particularmente adequado (2, X ::: F;
Gray, N. S „, Kwon, S., e Schultz, P, G. Tetranedron Lett, 1997, 38, 1161-1164.) , A arainação selectíva na posição 06 raais reactiva com a pirrdrimetilamína 3 apropriada produz depois o intermediário 4. Este é alquilado na posição N-S, e. g., através de substituição nucieofiiica utilizando o haiogeneto de alquilo apropriado R°~X, 0 produto 5 é finalmente aminado com uma bidroxietilaiaina 6 a temperatura elevada.
Os aminoálcoois substituídos 6 (Rx ou R2 <> H) podem ser sintetizados a partir de a-aminoálcoois 7 (R1 ou Pd <> H) como mostrado abaixo no Esquema 2. Muitos dos últimos estão disponíveis comercialmente; al ternat ivamen t e, podem ser prontamente preparados através de redução dos ot-aminoácidos correspondentes. A reacção inicial na metodologia sintética adoptada foi a protecção de tritilo da função amino para produzir o intermediário B (R' ou Pd <> H; Evans, P, A., Hoimes,
Perkin Trans, 1, 1994, J. Chem. Soc., A. 3., e Russel, K. 3397-3409) „ Este foi submetido à oxidação de Swern no aldeído 9 correspondente (R1 ou <> H; Takayama, H,, Ichikawa, T.,
Kuwajima, T., Kitajima, M„, Seki, H., Aimi, N, , e Nonato, M . G. J, Am. Chem. Soc. 2000, 122, 8635-8639) . A introdução do Substitui nte ] 21 {se <> H) cu R4 (se R1 <> H) foi reaií zada através de alquilação controlada por quelação (Eeets, Μ, t. , Roelfing, K., e Griebenow, N, Tetrahedron Lett. 1994, 35, 1969-1972) utilizando o reagente de alquíl-lítio apropriado e um catalisador complexo de brometo de cobre/sulfureto de dimetiio em éter dietiiico. Dependendo do substituíste a ser introduzido, este procedimento produziu intermediários 10 em excesso diastereomérico (de) de 50-80%. Alternativamente, podem ser utilizados métodos aquirais, opcionalmente seguidos por separação/resoiução dos isómeros cpticos. Para a produção de aminoálcoois, em que ambos R" e Rh são diferentes de Η, o intermediário 10 foi submetido a outra reacção de oxidação de Swern na cetona 12 respeetiva, seguida por introdução do segundo substituinte através de alquilação. O passo final na síntese para todos os aminoálcoois foi a remoção do grupo tritilo utilizando ácido trifluoroacético para produzir 6 ou 11. R1 JR2 R1 JR2
R1 .R2 HO
7 HO. ,C(C6H5)3 C(C6Hõ)3
H 8
Na quel.es Cc ; C, Q em que os amínoálcoo os contêm dois substit nintes i .dê nticos no carbinoi C (6, R1 ou R2 <> H; R3 = R4, não H) , , estes pc )dem ser obtidos directamente cL partir de um. Θ S L Θ Γ 0 ,e cí-amrr ioá eido ccrrespondent e adequado, g\, através de dupla . alquílaç ão de Grignard (Gu· enter, B. R o / e Kirm.se, W. Liebigs Ann. Ch i em , 13t 30, 518-532),
En ci 10 C 0 o CC >mpostos dos exemp los ab aixo í ΌΓ£ um in vestiçado s p, ara i a 1JS a ctiv idade ini .bitória de C d K2/c.ic lin a E, CDKl/eii 3 -1- I Γ ia B, DK.4 / cí cli na Dl e CDK7/CÍ cl ina H, Ei 1K-; 2 e DKA. As cí nas :;es .epen .d ente s de cicl .ina huma nas re combin. ant Θ S f Π Ία T 08.0.8.3 í som Hi ut q r DK1/ c icii na Bl, C DR2/cicixna E, CDK4 Θ CDK7 /ciciina H foram xpre sas em célula ís sf9 ui silizar ido ura Si sterns i de expr ess, ão de :acul Γ\ vi.ru s. A cícl ina Dl r :ecombí nante fo.i 0YjD‘ ΓΘ8 8'3. ΘΓΠ p CG.. l. .1 « S F oteí m purifl .cadas 3 tiíIcLV és de cromatogj :af i a de afinidade de quelato metálico até mais de 90% de homogeneidade. Os ensaios de cinase foram realizados em placas de 96 poços utilizando CDK/cíclinas recombinant.es, ERK-2 actívo recombínante (Upstate Biotechnology), ou a subunídade catalitíoa da cinase dependente de ΆΜΡ cíclico (PKA) (Calbiochem Cat. 539487). Os ensaios foram realizados em tampão de ensaio (25 mM de β-glicerofosfato, 20 mM de MOPS, 5 mM de EGTA, 1 mM de DTT, 1 mM de NajVOi, ph 7,4), em que foram adicionados 2-i ug de enzima activa com substratos apropriados (histona fíl purificada para CDK2, proteína retinoblastcma-GST recombínante (resíduos 773-923) para CDK4, péptido biotinil-Ahx-(Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser),; para CDK7, proteína básica de mieiína para ERK-2, ou péptido Kemptide (Fluka Biochemika Cat. 60645) para PKA). A reacção foi iniciada através da adição de mistura Mg/ATP (15 mM de MgC1.2 + 100 μΜ de ATP com 30-50 kBq por poço de [y-3‘P] -ATP) e as misturas incubadas durante 10 min (CDK2/ciclina E, ERK-2, PKA) ou 45 min (CDKi/ciciina Dl, CDK7/ciclina H) como necessário, a 30 °C. As reacções foram paradas em gelo, seguidas de filtração através de placas de filtração p8i ou placas de filtração de GE/C (para CDK4) (Whatman Polyfiltronics, Kent, RU) , excepto para CDK7 em. que, após paragem da reacção em gelo, foram adicionados 10 y.L de avidina a 10 mg/mL a cada poço e incubados adicionalmente durante 10 min, seguidos por filtração como para o ensaio de CDK2. Após lavagem 3 vezes com 75 mM de ácido ortofosfóríco aq, as placas foram secas, for adicionado líquido de cintilação e medida a radioactividade incorporada num contador de cintilações (TopCount, Packard Instruments, Pangbourne, Berks, RU) . Os compostos para o ensaio de cinase foram preparados como stocks de 10 mM em DMSO e diluídos em 10% de DMSO em tampão de ensaio. Os dados foram analisados utilizando software de ajuste de curva (GraphPad Prism versão 3.00 para Windows, GraphPad Software, San Diego Califórnia EUA) para determinar os valores de IC50 (concentração do composto de teste que inibe a actividade de cinase em 50%.) . Estes valores para os compostos da presente invenção são mostrados na Tabela 1. . to tox padr âo ut.il í Z 3 i.ndo α1 a, 3 0 guin tes nas A5 4 9, He: 6 a, m 2 9, MC F 7, 62 , .As linhas lu .1 ..ares fo ram ;ríc ;ar Type C - Ltur e Collecti on, ssa ^ f τ tt\ ·; Γ\ *; V bt Ζυΐ 10- 2209, EUA) . Fo ram TT dí 2 72-h (azul de tiazolí lo; í.zo] 2-i.l]--2, 5-diten.il .tetr a zól io) G„ ; Thoma s, D. . G. f Darl: i.ng, tv « 31-M 3; Lovelai id, B, E. ; Jo' hn s, ' f Wang, Z. X „ ; h« eri ;zog, P. 2r; ' f 501-10; ) _ Resi. ;r:ii dame; ate: o. '0 aca c o 96 poç C· '-J o de ae ordo 001' :l o de UI t dia TO.: ara f-s r iUt ro a s / °C.
Os compostos dos exemplos abaixo foram submetidos a um ensaio de proliferação celular p; linhas celulares tumorais humana; obtidas a partir da ATCC (. 10801 University Boalevard, Mí realizados ensaios padrão de brometo de 3-[4,5-dimetil (Haselsfoerçer, S,; Peterson, L, Anti Câncer Drugs 1996, 7, G.; Mackay, I. R.; Vaiilant, F.
Biochemistry International 19' células foram inoculadas em tempo de duplicação e incuba d;
Os compostos de teste foram preparados em DMSO e preparadas diluições 1/3 em série em 100 yL de meio celular, adicionados às células (em triplicados) e incubados durante 72 h a 37 °C. O MT? foi preparado como um stock de 5 mg/mL em meio celular e meio foi removido das células yL de PBS. Foi depois adicionada poço e incubada no escuro a 37 °C MTT foi removida e a.s cej.aj.as j.l de PBS. 0 corantí e MTT for ooco cie DMSG com a gitaçãc ) „ pp e os dados . analisados utiliz ando (GraphPad 1 ’risra versão b C\ ct 0 e *-P U para San Díego Califórnia FU A) cara (concentração do composto de teste esterilizado por filtração. O seguido por uma lavagem com 200 uma solução de MTT a 20 yL por durante 4 h. A so1uçao de novamente lavaoas oom 2 v 0 y solubilizatío com 200 yL por absorvêncía foi lida a 54 0 nm software de ajuste de curva Windows, GraphPad Software, determinar os valores de IChe que inibe o crescimento celular em 50%) . Estes valores para os compostos da presente invenção são mostrados na Tabela 2.
Crtotoxicidade selectiva
Os compostos representativos desta invenção foram examinados para o seu efeito antiprol.iferat.ivo contra linhas celulares turnorais humanas e linhas celulares humanas não transformadas imortalizadas (linhas celulares "normais") . Os resultados são sumariados na Tabela 3. Pode ser observado que os compostos examinados são agentes antiproliferativos várias vezes mais potentes comparativamente à roscovitina. Além disso, o seu efeito citotóxico é significativamente raais pronunciado contra linhas celulares transformadas versus não transformadas.
Ensaio de metabolismo in vitro comparativo
Incubações microssomais e preparação de amostras para análise
Os microssomas foram obtidos a partir da Totem Biologicals, Northampton, Inglaterra. A proteína microssomal (0,2 mg) e a roscovitina ou um composto de teste desta invenção (concentração final de 10 μΜ) foram misturados em soro fisiológico tamponado com fosfato (1.00 pL) contendo NADPH (20 mM), MgClz (10 mM) e EDTA (1,5 mM), As amostras foram incubadas durante 30 min e a reacção parada através da adição de metanol gelado (300 μΕ) contendo olomucina (Vesely, J., fíavlicek, L., Strnad, M., Blow, J. J., Donella-Deana, A., Pi.nna, L., Letham, D.S.» Kato, J., Detivaud, L., Leclerc, S.f Meijer, L. Eur. J. Bíochem. 1934, 224, 771-786) como padrão interno. As curvas de ealibração foram preparadas a Ο, 1 e 10 μΜ em mícrossomas pré-incubados durante 30 min e estes foram também tratados com metanol contendo olomucina. Todas as amostras foram depois centrifugsdas e os sobrenadantes analisados através de croraatografia liquida-espectrometria de massa.
Cromatografia Líqulda-Espectrometria de Massa A coluna de cromatografia foi uma Supelco LOABZ, 50 x 4,6 mm, coluna zwiteriónica de 5 pm (Supelco Inc., Supelco Parle, Bellefonte, PA, EUA), Os eiaentes em gradiente consistiam em metanol (A) e 0,1% de ácido fórmico em água (B) . O gradiente começou com 10:90 (A:B v/v) que foi mantido isocraticamente durante 0,5 min, seguido por um aumento linear até 90:10 (A:B v/v) durante 6 min que foi depois mantido nestas condições durante mais 4 min. O caudal foi de 1 mL/min ao longo do processo. Para LC-UV-MS, as amostras foram introduzidas utilizando um amostrador automático Gilson 215 (Anachem Ltd., Bedforáshire, RU) ligado a uma bemba quaternária Thermoseparations B4000, coluna (como descrito acima) e detector Thermoseparations UV1000 ajustado a 254 nm (Thermoquest Ltd., Hemel Hempstead, Hertfordshire, RU). O eiuente do detector passou, sem se separar, num espectrómetro de massa de armadilha de iões Thermoquest LCQ com uma fonte de electrospray operada em modo positivo. As condições do espectrómetro de massa foram gás principal 80, gás auxiliar 20 (ambos em. unidades arbitrárias), voltagem capilar de 4 a 4,5 kV e temperatura de capilar aquecido de 250 a 280 °C. A gama de massa foi 50-750. O tempo de varrimento foi controlado através da armadilha de iões que foi ajustada para um tempo máximo de injecção iònica de 200 ms ou o tempo requerido para injectar 2 x 10° iões; para cada varrimento, o sistema utilizou automaticamente o tempo mais curto.
Análise de dados
Para analisar os resultados, foram extraídos perfis iónicos seleccionados dos iões MH' do composto de teste e do padrão interno e obtida a área dos picos relevantes. A proporção da área de pico (composto de teste/padrão interno) da incubação de teste foi depois comparada com as proporções da área. de pico obtidas a partir da curva de calibração do composto de teste. A partir destes valores, for determinada a concentração restante do composto de teste após 30 min de incubação com a proteína microssomal. Os resultados para compostos representativos da presente invenção são sumariados na Tabela 3, em que a estabilidade metabólica do composto é também comparada com a da roscovítina em termos de metabolismo (coluna A) , inibição de CDK2 in vitro (coluna B) e citotoxicidade in vitro em linhas celulares tumorais (coluna C) . São também mostradas as eficácias in vitro (coluna A x C) e exposição celular (coluna A x C) comparativas. Estes resultados sugerem que os compostos da presente invenção vão ter eficácia in vivo melhorada comparativamente à roscovítina. Os coeficientes de partição de n-octanol/água calculados (ClogP) estão também incluídos na Tabela 3. Pode ser observado que aqueles compostos com actividade celular e estabilidade metabólica melhorada possuem também um ClogP inferior à da roscovítina, sugerindo um solubilidade aquosa melhorada e, deste modo, facilidade de formulação para administração de fármaco in vivo. Ácido (2R) -2- (6~benzilãmino~9~isopropil~9H~purin~2~ilãinino) butiri cg
Foi dissolvida benzil-(2-fluoro-9-isopropii-9H-purin-6-il)~ arftina {151 mg, 0,5 rnmol) em NMP (5 raL) e DEU (1,5 mL, 10 rnraoi) . Foi depois adicionado ácido (/<) - (-) -2-aminobutirico (99% ee/GLC; 1.03 g, 10 mmol) e a mistura foi agitada sob I\b a 160 °C durante 1 h. Após arrefecimento, a mistura foi diluída com ácido cítrico (10% de solução aq) e CK2CÍ2 (25 mL cada), As fases foram separadas e a fracção orgânica foi extraída com solução salina (2 x 10 mL) , seca sobre MgSCg, filtrada e evaporada, O resíduo foi redissolvido em MeCN e foi fraccionado através de RP-HPLC preparativa (Vydac 218TP1022, 9 mL/min, 22,5 - 32,5% de MeCN em. H20 contendo 0,1% de CF3COOH durante 40 min) . As fracções apropriadas foram reunidas e liofilizadas para produzir o composto do título puro (137 mg, 74,4%) como um sólido esbranquiçado amorfo. RP-HPLC Anal. (Vydac 218TP54, 1 mL/min): tR - 16,04 min (0-60% de MeCN), 15,95 min (22,5-32,5% de MeCN em H20 contendo 0,1% de CF3COOH durante 20 min), pureza: > 98% (À = 214 nm) . RMN de XH (d6-DMSO, 300 MHz) õ: 0,95 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2CH3) ; 1,51 (d, J = 6,7 Hz, 6H, Cfí(CH3)2); 1,78 (m, J = 7.3 Hz, 2H, CH2CH3); 4,27 (m, 1H, CHCH2) ; 4,64 (hept., J = 6,7 fíz, 1H, CH(CH3)2); 4,69 (m, 2H, Cfí2Ph) / 7,25-7,41 (m, 6H, ArH) . DE-MALDI-TOF MS (matriz de ácido a-ciano·· 4 -hidroxicinâmico) : [M + H] ‘ - 369,41. FAB-MS: [Μ + H] ‘ - 369,2033 (C19H22N602 requer 369,2039). (R)-2- (Tritil-amino)-butan-l-ol
A uma solução agitada de (R)- (-)-2-aminobutan-l-ol (10 g, 1 eq, 112,18 mraol) em DCM (500 mL) sob urna atmosfera de árgon à temperatura ambiente, foi adicionada DIEA (30 mL, 1,51 eq, 172,22 niraoi} seguida por cloreto de tritilo (35,4 mL, 1,13 eq, 126,98 mraol). A mistura de reacçâo foi agitada à temperatura ambiente durante 48 h, quando a TLC (hexano:éter:MeOH; 55:40:5} indicou que a reacção tinha sido completa. O solvente for evaporado in vácuo e o resíduo precipitado a partir de acetona (50 mL) com hexano (900 mL) com agitação, o precipitado foi removido por filtração e o frltrado foi evaporado in vácuo. O resíduo foi dissolvido em hexano (1 L), filtrado e o filtrado foi evaporado in vácuo para produzir o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 32 g (86%), RMN de fH (dí-DMSO, 250 MHz): δ 0,56 (t, 3H, J - 7,41 Hz, -NHCH (CH2ÇH3) CH2OH) , 1,10 (m, 2K, -NHCH (CHZCH3) CH2OH) , 2,22 (m, 1K, -NHCH (CH2CH3) CH2OH) , 2,38 (m, 1H, -NHCH (CH2CH?) CH2OH) , 2,72 + 3,00 (2 x m, 2H, “NHCH (CH2CH3) CIpOR) , 4,28 (t, 1H, J - 5,26 Hz, NHCH (CH2CH3) CH2OH) , 7,14-7,49 (m, 15H, 3x Ph) . (S) -2- (Tritil-amino) -butan-l-ol ηο^ν.
ΓγΟ
Η A uma solução agitada de (S)-(+>-2-aminobutan-l-ol (10 g, 1 eq, 112,18 mmol) em DCM (500 mL) sob uma atmosfera de árgon à temperatura ambiente, foi adicionada DIEA (30 mL, 1,54 eq, 112,22 mmol) seguida por cloreto de tritilo {35,4 mL, 1,13 eq, 126,98 mmol), A mistura. de reaeção foi agitada a esta temperatura durante 18 h, quando a TLC (hexano:éter:MeOfí;
55:40:5) indicou que a reacção tinha sido completa. O solvente foi evaporado in vácuo e o resíduo precipitado a partir de acetona (50 mL) com hexano (SOO mL) com agitação, o precipitado foi removido por filtração e o filtrado foi evaporado in vácuo. O resíduo foi dissolvido em hexano (1 L) , filtrado e o filtrado foi evaporado in vácuo para produzir o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 33 g (89%). RMN de !R
NHCH (CH2CH3)CR2OH) , 7,15-7,52 (m, 15H, 3 x Pb) . (R) ~2~ (Ti:i til-axnino) -butiraláeído
A uma solução agitada de DMSO (3,0 mL, 2,8 eq, 42,28 mmol) em DCM (30 mL) sob uma atmosfera de árgon a -45 °C, foi adicionado cloreto de oxalilo (2 M em DCM, 10,56 mL, 1,40 eq, 21,12 mmol), gota a gota. A mistura de reacção foi agitada a -45 °C durante 1 h, depois da qual uma solução de (R)-2-(tritii-amino) -butan-l-ol (5 g, 1 eq, 15,08 mmol) em DCM (30 mL) foi
adicionada, gota a gota, com agitação. A mistura de reacção foi agitada a esta temperatura durante 3 h, quando a TLC (hexano:éter; 80:20) indicou que a reacção tinha sido completa. Foi adicionada à mistura de reacção uma solução de TEA (10,5 mL, 5 eq, 75, 33 mmol) em DCM (30 mL), e a solução deixada a aquecer até à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura de reacção foi diluída com mais DCM (200 mL) e lavada com água (250 mL). A fase aquosa foi extraída com DCM (3 x 50 mL), e a fase orgânica combinada lavada com solução salina (50 mL), seca (MgSCg) e evaporada in vacuo. O resíduo foi dissolvido em éter (30 mL), o precipitado sólido removido por filtração e o filtrado foi evaporado ir vacuo, O resíduo foi dissolvido em hexano (50 mL) , o precipitado sólido removido por filtração e o filtrado foi evaporado in vacuo para produzir o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 2,59 g (52%). RMN de ‘H (d»~DMSO, 250 MHz) : δ 0,77 (t, 3H, J = 7,42 Hz, -NHCH (CH2ÇH?) CHO) , 1,34-1,61 (m, 2H, -NHCH (ÇH2CH3) CHO) , 2,92 (m, lfí, -NHCH (CH2CH3) CfíO) , 3,62 (d, 1H, J - 8,21 Hz, -NHCH (CH2CH3) CHO) , 7,16-7,46 ( itl , 15H, -NHCH (CH2CH3) CHO) .
Ph), 6,77 (d, 1H,
J 3,00 Hz, (S)~2~ (Tzitil-amino)-butizaldeído
A urna solução agitada de DMSO (2,4 mL, 2,8 eq, 33, 82 mmol} em DCM (30 mL) sob uma atmosfera de árgon a -45 °C, foi adicionado oloreto de oxaiiio (2 M era DCM, 3,45 mL, 1,40 eq, 16,9 rnmol) , gota a gota, A mistura de reacção foi agitada a -45 °C durante 1 h, depois da qual uma solução de (5)-2-(tritil-amino) -butan-1 -ol (4 g, 1 eq, 12,07 mmol) em DCM (30 mL) foi
adicionada, gota a gota, com agitação. A mistura de reacção foi agitada a esta temperatura durante 3 h, quando a TLC (hexano:éter; 80:20) indicou que a reacção tinha sido completa. Foi adicionada à mistura de reacção uraa solução de TEA (8,4 mL, 5 eq, 60,27 ramol) em DCM (30 mL) , e a solução deixada a aquecer até à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura de reacção foi diluída com mais DCM (100 mL) e lavada com água (250 mL). A fase aquosa foi extraída com DCM (3 x 50 mL), e a fase orgânica combinada lavada com solução salina (50 mL), seca (MgSOÀ e evaporada in vacuo. O resíduo foi dissolvido em éter (30 mL), o precipitado sólido removido por filtração e o filtrado for evaporado in vacuo, O resíduo foi dissolvido em hexano (50 mL), o precipitado sólido removido por filtração e o filtrado foi evaporado in vacuo para produzir o composto do titulo como um óleo amarelo claro. Rendimento: 3,64 g (91%). RMN de ‘H (d0-DMSO, 3H, J - 7,42 Hz, - -NHCH ÍCHvCH;;) CHO) -NHCH (CH2CH 3) CHO), / /93 (m, 1H (d, Ifí, J === 5,84 Hz, -NHCH (Cí/CH?) CHO) x Ph), 8/7 (α, 1H, T - 3,00 Hz
/ r n f -> f v 15H, 2 250 ΜΗζ): δ 0 1,37-1,59 (ra, -NHCH (CH2CH3) CEO) 7,16-7,46 (m, -NHCH (CHsCH3) CHO) 9 C 'i p ) - 11 /
A uma s uspensão agitada de CuBr . SMe2 ( 2, /4 g / Θ! 3 f 13,33 mmol) em Et-21 0 (100 m L) ; sob 1 mia atmosi lera d< e árgor i a -7 0 0 C, f 0 i. adício naco metil-lít io (1,6 M em Et; 0 1^ ,6 mL, 4,4 eg, 26,56 mmol), gota a gota L F a a 3 0 lução deixa da a aquecer até à remper at ura ambiente •q 0 fr mi s i run t for rearre >fecida até -7 ' 0 °C, à qual foi 3 da. C -i. ΟΏ 30.3 uma solução de (k)-2- (tritil -amino)- butiraideído (2 g, 1 G:Q ; 6 f 0 5 mmol) er r Et20 (2 5 mL ), gota 3 gota, com a I.Cf 1. l3. Ç 3. O * Â r ui st 11 y ,t) de reac ção : foi ac pitada a Θ 3 l3. remper atura durante h, qua ndo a TLC (hexar: xo: éter; 80"? Q) indico u que a reacc zãe tini 13 sido c comprei t a. F 0 3 cl O J_ C1 .or 133.13. 3 mistar a de r eacção u ma soluç :ão aquosa satui :ada de NH4CI ! Ί \ 00 mL) e deixada a aquecer até à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura de reacçãe foi extraída com éter (2 x 200 mL), e a fase orgânica combinada lavada com solução salina (50 mL), seca
(MqSC evaporada in vácuo, O resíduo for purificado através de
Rendimento de cromatografia em coluna de sílica gel, eluído com hexano:éter (80:20) para produzir o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 1,91 g (91%) . (80% de 2S, 3R: 20% de 2R, 3R) . RMN de XH (dg- DMSO, 250 MHz) : δ 0, 47 & 0,55 (2 x t, J === 7,43 & 7,27 Hz, -NHCH(CH2G93)CH(CH3)OH) , 0,99-1,12 (m, 5H, nhch (£H2CH3) CH (CK3) OH) , 2,03 (m, 1H, -NHCH (CH£CK3) CH (CH3) OH) , 3,32-3,51 (m, 1H, -NHCH (CH2CH3) CH (CK3) OH) , 4,40 (d, 1H, J - 3,79 Hz, -NHCH (CH0CH3) CH (CK3) OH) , 7,14-7,51 (m, I5K, 3 x Ph) . (2Rf3S)-d- (Tritil-amino)-pentan-2-ol
A uma suspensão agitada de CuBr.SMe? (2,7 4 g, 2,2 eq, 13,33 mmol) em éter (100 raL) sob uma atmosfera de árgon a -70 “C, foi adicionado metil-lítío (1,6 M era éter, 15,13 raL, 4,0 eq, 24,21 mmol), gota a gota, e a solução deixada a aquecer até à temperatura ambiente. A mistura foi rearrefecida até -70 °C, à qual. foi adicionada uma solução de (S) -2- (tritil-amino) -butiraldeído (2 g, 1 eq, 6,05 mmol) em Et20 (25 mH), gota a gota, com agitação. A mistura de reacção foi agitada a esta temperatura durante 2 h e depois a -55 °C durante 4 h, quando a TLC (hexano: Et;:0; 80:20) indicou que a reacção tinha sido completa. Foi adicionada à mistura de reacção urna solução aquosa saturada de NH4C1 (100 mL) e deixada a aquecer até à temperatura ambiente durante 16 b, A mistura de reacção foi extraída com ut20 (2 x 200 mL) , e a fase orgânica combinada lavada com solução salina (50 mL), seca (MgSCu} e evaporada m vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna de silica gel, eluido com hexano:Et20 (80:20) para produzir o composto do titulo como ura óleo araarelo claro. Rendimento: 1,37 g (66%) . (80% de 2R, 3S: 20% de 2S,3S). RMN de ]H (d5-DM.SO, 250 MHz) : δ 0, 0,47 & 0,55 (2 x t, J === 7,50 & 7,26 Hz -KHCH (CH2CH3) CH (CH3) OH) , 0,99-1,12 (m, 5H, -NHCH (CK2CH3) CH (CH3) OH) , 2,01 (ra, 1H, -NHCH(CH2CH3)CH(CK3)OH) , 3,22-3,43 (m, 1K, -NHCH{CH2CH3)CH(CH3)OH) , 4,41 (d, 1H, J = 3,31 Ez, -NHCH (CH2CH3) Cfí (CH=>) OH) , 7,14-7,56 (m, 15H, 3 x Ph) . (3RS,4R)-4-(Tritil-ãmino)-hexân-3-ol
A uma solução agitada de (R)-2-(tritíl-amino)-butiraldeido (1,5 g, 1 eq, 4,53 mmol) era Et20 (150 rnL) sob uma atmosfera de árgon a -78 °C, foi adicionado brometo de etilmagnésio (3 M em Et30, 1,51 mL, 1 eq, 4,53 mmol}, gota a gota. A. solução foi agitada a -78 °C durante 2 h, depois deixada a aquecer até à temperatura ambiente durante lo b. A mistura foi rearrefecida aué 0 ,JCf adicionada H?0 (150 mL) , e a fase orgânica separada. A fase aquosa foi extraída com mais Et20 (2 x 50 mL) , e a fase orgânica combinada lavada com solução salina (50 mL), seca (SMgSÍA) e evaporada in vácuo, O resíduo for purificado através de cromatografia em coluna de sílica gel, eluído com hexano:éter (90:10) para produzir o composto do titulo como um óleo amarelo claro. Rendimento: 1,13 g (69%). (57% de 3S,4R: 43% de 3Rf4R). RMN de 1H (d6-DMSO, 25Q MHz): δ 0,45 & 0,69 (t & m, 6H, J - 7,43 Hz, -NHCH ÍCH2CH3) CH (CH2CH3) OH) , 1,12-1,29 (m, 4H, -NHCH (CH2CH3) CH (Cfí2CH3)OH) , 2,16 (m, ifí, -NHCH (CH2CH3) CH (CH2CH3) OH) , 2,54 (m, 1H, -NHCH (CH2CH3) CH (CH2CH3) OH) 3,21-3,40 (m, 1H, 4,42 & 5,37 Ph) , -NHCH (CH2CH3) CH (CH2CH3) OH) , 4,29+4,39 (2 x d, 1H, u === Hz, -NHCH (CH2CH3} CH (CH2CH3)OH) , 7,15-7,52 (m, 15H, 3x (3RS,4S)-4- (Tritil-amino)-hexan-3-ol
A uma solução agitada de (R)-2-(tritil-amino)-butiraldeido (1,5 g, 1 eq, 4,53 mmoi) em Et20 (150 mL) sob uma atmosfera de árgon a -78 °C, foi adicionado brometo de etilmagnésio (3 M em Et20, 1,51 mL, 1 eq, 4,53 mmoi), gota a gota, A solução foi agitada a -78 °C durante 2 h, depois deixada a aquecer até à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi rearrefecida até 0 °C, adicionada H20 (150 mL), e a fase orgânica separada. A fase aquosa foi extraída com mais Et20 {2 x 50 mL) , e a fase orgânica combinada lavada com solução salina (50 mH), seca (MgSCo} e evaporada in vacuc. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna de silíca gel, eluido com hexanoréter (90:10) para produzir o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 1,19 g (73 %) (65% de 3R ,4a: : 35% de: 3a, 4a) . RMN de CH (dG-DMSO, 250 MH s) : δ 0, . 4 6+0, 69 (t & m, 6H, j === 7,34 Hz, -NHCH ÍCH2CH3) CH (CH2( IH3) OH) / 1,13-1 ,29 (m, 4fí, -NHCH (CH2CH3) CH (CK2CH3) OH) , 2,17 (m, 1H, -NHCH (CH2CH3) CH (CH2CH3Í OH) , 2, 55 (m, 1H, -NHCH {CH2CH3) CH (CH2CH3) OH) , 3 ,20-3,39 ím, 1K, -NHCH (CH2CH3) CHCH2CH3) OH) , 4 ,29 & 4, 39 (2 x d, 1H, J - 4,74 c C ÍO Òí w' t -J Hz, -NHCH (CH2CH3) CH (CH2CH3) 0 H) , 7, 15 "· 7,52 (m, 15 H , 3 x Ph) 4 R) - Μ.·::· 7- :1-4- amino) -hexan-3-ο^
A uma suspensão agitada de CuLr„SMe2 (1,37 g, 2,2 eq, 6,66 mmol) em Et20 (100 mL) sob ama atmosfera de árgon a -78 °C, foi adiei onado i sopropí] .-lítio (0, / M em. pentano, 7,29 mL, 4 e 12,1 mmol) r O, O tT, 3. 3 Q 013.} θ 3 solução deixada 3 aquecer até à tempe ra tur 3. ambiente u A mis tur. 3· J 3 ^ rã j'*' T Γ f™ .Cg até -7 0 L f 3 qual foi adiciona· da uma s olução de (R) -2” (trit il-ammo / bulir •aldei do (1 Çb 1 eq, 3,0 3 m mol) em Et2G (2 5 mL ), g o ta a GOt a, com agitaç 30 . A mis tara reacçâ .o foi agitada a Θ: ata t empe ratu ra d.urante 1 0, depois deixada a aquecer até à ΓΛ r. °C e ag.ii ta da 3 esta temperatura durante 3 h. eoí adicionada à mistura de reacçào uma. solução aquosa saturada oe NH C :. (100 mt) e oe.i.xada a aquece "Λ até à temperatura ambiente durante 1 . 6 h. A m istura de reacçã o roi exrraiaa com E t20 (2 x 200 mL) , e a fa se orgân íca combinada lav; ida com solução salina (50 mL ,) , seca (MgS04) e evapor a d a in vácuo, 0 resíduo foi purii iicado at ravés cie cr orna t OG em coluna de gradient p p p Q η "M ca aei, cu lu.ido com hexano : é ter (1 00:0 —> 90:10 ) para p. reduzir 0 compost 0 do trt mo como um óleo incolor. Rend: (.mento: C b 53 g (47 %) . (50 c„ "0 de 35, 4R: 50% d; 3 3i?, 4R) RMN de ! H (de-DMSO, 250 MHz) : δ 0, 44 / \ f 3H, “ ’ f 0 3 Hz, - NHCH íCH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH), 0,52 & 0,77 (2 x d, 6H, j ^ 6,· 4 8 Hz , -NHCH (CH2CH ?) CH (CH (C H?}2)OH) , 0,79-1,: i (m, 2H, -NHCH( i"i 2CH3) CH l (CH (CH3) 2) OH) , 1,72 (m, 1H, -NHCH( o Ar:: 2Cii3) C3H í (CH (CH3) /) OH) , 2,11 (m, ifí, NHCH (CH2CH3) CH (CH (CIb) 2) OH) , 2,77 (m, 1H, NHCH (Cí-LCtb) CH (C'H (CH3) 2) OH) , 2, 39 (m, 1H, NHCH. (CH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) , ,55 (d, Ifí, J - 5,21 Hz, NHCH (CH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) , 7,15-7,86 (m, 15H, 3 x Ph) . {3RS, 4S) -2-Meti 1-4- (tritil-amino) -hexa.n-3-ol
A uma suspensão agitada de CuBr.SMe2 (1,37 g, 2,2 eq, 6,66 mmol) em EtjO {100 mL) sob ama atmosfera de árgon a -78 °C, foi adicionado isopropil-lítio (0,7 m em pentano, 17,29 mL, 4 eq, 12,1 mraoi) , gota a gota, e a solução deixada a aquecer até à temperatara ambiente. A mistura foi rearrefecida até -70 *C, â qual foi adicionada uma solução de (S)-2-(tritil-amino)-butiraldeido (1 g, 1 eq, 3,03 mmol) em EtaO (25 mL), gota a gota, com agitação. A mistura de reacção foi agitada a esta temperatura durante 1 h, depois deixada a aquecer até à -55 °C e agitada a esta temperatura durante 3 h. Foi adicionada à mistura de reacção uma solução aquosa saturada de NfbCl (100 mL) e deixada a aquecer até à temperatura ambiente durante 16 η. A mistura de reacção foi extraída com EtjO (2 x 200 mL) , e a fase orgânica combinada lavada com solução salina (50 mL) , seca (MgSOí) e evaporada in vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna de sílica gel, eluído com bexancuéter (100:0 -a 90:10) para produzir o composto do titulo como um óleo incolor; Rendimento: 0,36 g (32%). (50% < 3e 3R,80: 50% de 33, 4S) . RMN de :lH (de-DMSO, 250 MHz) : δ 0, '18: (t, 3H, J - 6,79 Hz, “NHCH (CH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) , 0,52 & 0,76 (2 x d, 6 H, J - 6,63 Hz, -NHCH (CH2CH3) CH (C'H (CH3) 2) OH) , 0,80-1,15 (m, 2H, -NHCH (ÇH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) , 1,70 (m, Ifí, -NHCH (CH2CH3) CE (CH (CH3) 2) OH) , 2,10 (m. iH, -NHCH (CH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) , 2,76 ím, 1H, -NHCH ;CH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) , 2,99 (m, 1H, -NHCH (CH20H3) CH (CH (CH3) 2) OH) , 4,55 (d, 1H, 6 )' 5, 84 Hz, -NHCH (CH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) , 7,17-7 ,46 (m, 15H, 3 x Ph) (3RS,4R)-2,2-Dimet±l-4- ( tritil-amino)-hexan-3-Gl
A uma suspensão agitada de CuBr.SMe? (1,37 g, 2,2 eq, 6,66 mmol) em Et20 (100 mL) sob uma atmosfera de árgon a -78 °C, foi adicionado úere-butil-litio (1,5 M em pentano, 8,0 mL, 4 eq, 12,0 mmoi) , gota a gota, e a solução deixada a aquecer até à temperatura ambiente. A mistura foi rearrefecída até -55 VC, à qual foi adicionada uma solução de (R)-2-(tritil-amino)-butiraldeido (1 g, 1 eq, 3,03 mmol) in St20 (25 mL), gota a gota, com agitação, e agitada a esta temperatura durante 3 h. Foi adicionada a mistura de reacção uma solução aquosa saturada de NHiCi (100 mL) e deixada a aquecer até à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura de reacção foi extraída com Et20 (2 x 2Q0 mL) , e a fase orgânica combinada lavada com solução salina (50 mL) , seca (MgSCq) e evaporada in vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna de gradiente de sílica gel, eluído com bexano:éter (100:0 90:10) para produzir o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 0,57 g (49%). (55% de 3S,4R: 45% de 3R,4R) . RM.N de ;H (d6-DMSO, 250 MHz) : ò 0,36 & 0,86 (2 x t, 3H, J - 7,42 Hz, -NHCH (CH2ÇH3) CH (C (CH3) 3) OH) , 0,57 & 0,71 (2 x s, 9.H, -NHCH (CH2CH3) CR (C (CH?.) 3) OH) , 1,38-1,52 (m, 2H, -KHCH (CH2CH?.) CH (C (CH3) 3) OH) , 1,99 (rri, 1H, -NHCH (CH2CH3) Cfí (C ((¾) 3) OH) , 2,27 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH) , 2,95 {m, Ifí, -NHCH (CH2CH3) CH (C (CHj) 3) CH) , 4,22 4 4,77 (2 x d, 1H, J - 4,42 5,21 Hz, -NHCH (CH2CH3) CH (C (CH3) 3) OH) , 7,14-7,52 (m, 15H, 3 x ?h) . (3RSf4S)-2,2-Dimetil-4- (tritil-amino)-kexãn-3-ol
A uma suspensão agitada de CuBr.SMe? (1,37 g, 2,2 eq, 6,66 mmol) em Et20 (100 mH) sob uma atmosfera de árgon a -78 °C, foi adicionado terc-butil-lítio (1,5 M em pentano, 8,0 mL, 4 eq, 12,0 mmol), gota a gota, e a solução deixada a aquecer até à temperatura ambiente. A mistura foi rearrefecida até -55 °C, à qual foi adicionada uma solução de (S)-2-(tritil-amino)-butiraldeído (1 g, 1 eq, 3,03 mmol) em. Et20 (25 mL), gota a gota, com agitação, e agitada a esta temperatura durante 3 h. For adicionada à mistura de reacção uma solução aquosa saturada de NHíCi (100 mL) e deixada a aquecer até à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura de reacção foi extraída com Et;,Q (2 x 200 mL) , e a fase orgânica combinada lavada com solução salina (50 mL) , seca (MgSO<) e evaporada in vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna de sílica gel, eiuído com hexano:&t20 (100:0 90:10) para produzir o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 0,4? g (10%). (53% de 3R, 4S: 47% de 3S, 4S) . RMR de ΧΗ (de-DMSO, 250 Mfíz) : δ 0,37 & 0,87 (2 x t, 3H, J - 7,46 Hz, -NHCH (CH2CH.3) CH (C (CH3) 3) OH) , 0,58 & 0,71 (2 x 3, 9H, -NHCH (CH2CH3) CH (C (CH3) 3) CH) , 1,38-1,52 (m, 2fí, -NHCH ÍCH2CH3) CK (C (CH3) 3? CH) , 2,00 (m, 1H, -NHCH (CH;;CH3) CK (C (CH3) 3) OH) , 2,28 (m, 1H, -NHCH (CHpCHj) CH (C (CH3) ;;) OH) , 2,95 (m, 1H, -NHCH(CH£CH3)ÇH(C(CH5)3)OH) , 4,24 & 4,79 {2 x d, 1H, J = 5,21 íx 6,16 Hz, -NHCH (CH2CH3) CH (C (CH3) 3) OH) , 7,15-7,53 (m, 15H, 3 x Ph) . (3R}-3-(Tritil-amino)-pentãn-2-onã
A urna solução agitada de DMSO (2,19 mL, 2,8 eq, 30,86 mmoi) em DCM (30 mL) sob uma atmosfera de árgon a -4 5 °C, foi adicionado cloreto de oxalilo (2 M em DCM, 7,69 mL, 1,4 eq, 15,38 mmoi), gota a gota. A mistura de reacção foi agitada a -45 °C durante 1 h, depois da qual foi adicionada uma solução de (2Sf3R)-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol (3,81 g, 1 eq, 11,04 mmoi) em DCM (20 mL), gota a gota, com agitação. A mistura de reacção foi agitada a esta temperatura durante 4 h, quando a TLC (hexano:éter; 80:20) indicou que a reacção tinha sido completa. Foi adicionada â mistura de reacção N-etilpiperidina (7,54 mL, 5 eq, 54,8 8 mmo1), Θ a solução deixada a aquecer até á temperatura ambiente durante 16 h. A mistura de reacção foi diluída com mais DCM (50 mL) e lavada com água (200 mL) . A fase aquosa fo: L extra lida com. DCM (2 ; combinada i avada r> ,‘"orp 3 0.3 Lução sal evapor cl Ccl in vaci io, 0 res íduo foi precip.it a d o só li Ο Ο 1Γ emov rido por evapor a do in vaci JO, 0 T Θ S iiduo foi o pret cipíi cado sc ilido removido poi evapor ado .i. Π v 3.0 UC pc 1T3. produzir óleo amar elo cl aro. Rendimento: (d,-DM; 50, 250 MHz) '·,) f i “NHCH; CH2ÇH,)C(CH3 )0), 1,41 ?"1,60 (m, NHCH(C H2CH; dC{CH3) 0) , J f 12 (d, -NHCH( ch2ci :í3)c (ch.3 )0), J _ , 32 (m, 7,16-7 , 49 (m, 15H , 3 a : Ph) • / \ 3S) - 3- (Tn t ii~aií uno) -pentan-2 -ou a í 50 . mL) , e 0 t :Γ; C; i?í orgân ", c'< ‘Z·, ina. (í 50 ml 0 , seca i (MgSCç} e dissol vi 0.0 em Et20 (ií jO mL) í o f i Itr; Θ o filt rado foi dissol -vido em hexano (50 mL), : filt ração Θ o filt .rado foi o oom| rosto do titulo ''"Wpf'' um 3,78 g i ’ C\ f , .1. '\J i%) . RM N de CH (t, 3 H, J i - Kz, 5H, - 1H, J 3, 38 Hz, 1H, -K íHCl· i (Cfí2CH3) C (CH:;) (J/ ,
em A uma solução agitada de DMSO (1,95 roL, 2,8 eq, .27,48 mmol) 30 mL) sob uma atmosfera de árgon a -45 °C, foi iioionado cloreto de oxaliio {2 M em DCM, 6,85 mm, 1,4 eq, 13, 70 K imoi) , gota a gota. A mis tura de rea; sção fc 4 5 0 duran te 1 h, d epois da qual i foi . adi.cio nada um. (2 R f 3S) -3-{t: ritil-amir ίο) -pente; ιη-2- ol ( 3,39 g, -i - O. f em. DCM (20 π :L) ç GO TI cl a g o t a, com agit 3ÇaO, A mis- Ciur. 1 o i ag: itada cl Θ ‘6 0 cl tempera tura duran Ice 4 h, qi. (he xano : éter ; 80:20) indicou que a re aCCclO L1. Ui i 13. S1 Foi adi .ciona G3. cl· ΙΊ11. SI cura de reac ção . N-etilpi .peri .dir 9,83 mniol) 5 eq, 48,84 mmol), e a solução deixada a aqu ecer até à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura de reacção foi diluída com ma is DCM (50 mL) e lava d; 3 com água (200 mL) „ A fase aquosa foi extrai d.i a com DCM (2 x 50 mL) , e a fase craânica corabin a da lí. iVâdâ C< ora sol; ação tá o. iin β { 50 ruL) f seca (MgSCu) e evapor cld.CÍ 1Ω vacuo. 0 resi duo foi dissol .vi do em St20 (100 mL), o precip itado sólido removi .do por filtr ação e o filtrado foi evapor a do in vacuo. 0 resi .duo foi cm. sso. Lvído em hexano (50 mL), o precipitado sólido removido por filtração e o filtrado foi evaporado m vácuo para produzir o composto do titulo como um ólec —í cu M ód claro. Rendimento: 3,15 g (93%). RMN le <df-DMSO, 250 MHz}: δ 0 ,73 (t, 3H, J = 7,50 Hz, - -NHCH (C. -1jCH3) ( J (c H;d 0) , 1,^5“ 1,6/ 1 (rrq 5H, -KHCH (CH2CH3) C (CR;;) 0) , 3,1 .2 (d, IR, J 8 Í-". J ry ... f ^ u/, , NHCI {(CR2CH3) C CfíqO), 3,31 (m, 1H, -NHCf : (CH2Crb ) C (CR. )o } Ί 1 d,.. 7 /17 . / .1. ^ 1 } i (m, 15H, 3 x Ph) . e a A uma solução agitada de (3R) -3- (tritil-amino) -pentan-2-ona (0,87 g, 1 eq, 2, 54 mmol) em HltqO (100 mL) sob uma atmosfera de árgon à temperatura ambiente, foi adicionado iodeto de meti Ima gnésio (3 M em éter, 2,54 mL, 3 eq, 7,62 mmol), gota a gota. A solução foi colocada num banho de óleo pré-aquecido a 45 °C e submetida a refluxo a esta temperatura durante 16 h. A mistura foi rearrefecida até 0 °C, adicionada H20 (100 iriL), a solução filtrada através de Celite, e a Ceiite lavada cora raais (3R) -Met '11 ---0- (tr. •amimo) -pentam -01
Et2( 1 ( C - mL) . A fase r orc íânicm i combinada io i 30 pcl H'ciCicl r a fa O; i’.j aqu o s a T r', i extra LI. d 3 com Et20 (2 x 50 ml d, e 3 fase o rgâ ní ca com binada .lavada com sol .ução salina ( 50 m L) Oíri/~‘Ci íiVb v.' v-- \ - -'· gSO. , \ n i ►Ci 0 Vci por a cia ín v. 3CUO. 0 resi dao foi P uri r r cado atra' vé 3 de cro mat ogra afia em COil Jllrl ( de si lica gel, eru: Ld; .j com hexa no: ét er (10 0:0 -» 90:10) p3 TB produzir o composto do ti .t l • Io como um. ól eo ama rei 0 c laro. Rc ar;dimento : : 0,2: 1. g (23%) , . I 1MN de L (dÉ-DM Q Γ) K, U F o 50 MHz ) ; δ 0.. P26 (t, J = ' 7,42 Hz r - NHCH (CH2CR bb '"'Π / ^il \ CH 3/ C DH), 1,00 & 1 F 3 £ (2 X 3 £ H ~k: OCR {C :h2ch?) :C(CH3)2í)H) f /"\ \J / ’ 2- 1,4 3 (n pi H, -NI-1 CH( f" 7 7 C Ή3) C (CHs )2OH) / -1- f 84 (m 1H, -NH f" j. 7 (CH r-, r" !· :í3) C (CH3)2OH ), íl , 90 (mf i H, --NHCE {(CK2C ::h3)C( CH3) 2OH) , 4 > 3 2 / r-, [ Cí / 1 H, --NH CH ( ch2c :h3) c (ch3 )2OH) H / ' ! 17-7,' 5 6 (ta, 15H '3 - : Έ >h) 1 \ Jb; -2-Meti 1 -3- (-< zriti 1 -âffii no) -pentãi :-0. i
i; ma soluç ão £ igitada (3S) -3- (tr 'itii .-arain o) “F •entan-i r-ona (0,59 Qr 1 eq, : L f 1 ^ mmoi) em 1 lt20 (10 0 n nL) sob ui ma d tmosfer " cl de árgcn 3 tempe ratu ra arai aí en te, foi adi ciona do iedeto de metilm a g nés io (3 ;V! em Et20 , 1 13 r } ’ s- a E, 3 eq, 5,16 m. mc 3l), gc ; t ã B gota . A 3 O. lução foi CO.i.OCc 3da num banho de óleo pr :é· -aqueci. do a fl ,-· O 3 J 0 e submetic Λ cl cl refluo :o a esta teme ιθΐ'βτ ;ura c iur ar i te 16 h. A mistur a foi . rearref; ecica a Cté 0 °C f cl O- J_ cion a. d a. H Ê 0 t l 1100 mL ) f a soluça o fri . Lirscls ati ravés d: e Cc ;lite í ^ -ci - Lite j L 3-V 3. da com ma '7 C; Et?0 ( Γ. A w ml [j) . A fa: se orgâ :ni cr 3 cor iibinad a f: oí se par 13. d.3 r 3. fa O (Ci aquosa ioi extr 3. A. d. 3. com. E t.2o (2 : κ 50 mL) , e a. f ase orgí iní ca combínad a., ] 3V3. C ia c om. sob □ ÇâO 1 3 α .1 ..ína { Γ-". Λ mL) , 30 cb (iXiqSO/,ϊ 0 evaporada in vácuo. 0 resíduo foi purificado através de oromatografia em coluna de sílica gel, elurdo com hexano :Hit20 (100:0 ····» 90:10) para produzir o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 0,10 g (16%). RMN de dl (ds-DMSO, 250 MHz) : δ 0,27 ít, J === 7,10 ílz, -NHCH (CH2CH3) Cíl (CH3) Ofí) , 0,99 & 1,25 (2 x s, cH, -NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH) , 0,75-1,42 {m, 2H, NHCH (CH2CH5) C (CH3) 2OH) , 1,88 (m, 1H, -NHCH (CH2CH3) C (CH3) 2OH) , 2,92 (m, 1H, -NHCH (CH2CH3) C (CH3) 2OH) , -NHCH (CHzCH3) C (CH3) .OH) , 7,18-7,46 (m, 15H, 3 4,32 (s, 1K, x Ph) „ (2S,3R)~3~Amino-pentân~2~ol HO. NH2 A uma solução agitada de (2S, 3R)-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol (1,32 g, 1 eq, 3,83 raraol) em DCM (50 mL) sob uma atmosfera de árgon à temperatura ambiente, foi adicionado CEOCOOH (10 mL), gota a gota, e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 h. O solvente foi evaporado in vácuo e o resíduo foi precipitado a partir de Et20 (15 mL) com hexano (300 mL) com agitação para produzir um óleo amarelo. O solvente foi decantado do oleo, e o óleo foi lavado com hexano (30 mL) e seco in vácuo para produzir o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 0,30 g (99%) . (80% de 2S/3R: 20% de 2R,3R). RMN de xfí (dõ-DMSO, 250 MHz) : δ 0,915 & 0,924 (2 x t, 3H, J = 7,50 & 7,58 Hz, NH2CH (CH2ÇH?) CH (CH3) Ofí), 1,06 & 1,13 (2 x d, J - 6,48 & 6,32 Hz), NEtCH (CH9CH3) Cfí (CHj) OH) , 1,41-5:.,59 (m, 2fí, NH2CH(CH2CK3)CH(CH3)OH), 2,77 & 2,93 (2 x m, 1H, NH£ÇH(CH2CR3)CH(CH3)OH) , 3, 62-3,72 & 3,80-3, 90 (2 x m, 1H, 2H, NHj) . NH2CH (CH2CH3) CH (CH3) OH) , 7,75 (bs, <2R,3S)~3~Amino-pentân~2~ol
A uma solução agitada de (22?, 3S) -3- (tritil-amino) -pentan-2-ol (1,64 g, 1 eq, 4,75 mmol) em DCM (50 mL) sob uma atmosfera de árgon á temperatura ambiente, foi adicionado CFjCOOH (10 mL) , gota a gota, e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 h, O solvente foi evaporado in vácuo e o resíduo foi precipitado a partir de Et20 (15 mL) com hexano (300 mL) com agitação para produzir um óleo amarelo. O solvente foi decantado do óleo, ô o óleo foi lavado com hexano (30 mL) e seco in vácuo para produzir o composto do titulo como um óleo amarelo claro. 3 H, J - 7,50 1 7,50 d, J === 6,18 & 6,18 65 (m, 2H, (2 X m, 1H, , 90 (2 x m, 1H,
Rendimento: 0,30 g (98%). (80% de 22?, 3S: 20% de 2S, 3S) . RMN de Ή (de-DMSO, 250 MHz) : 6 0,913 & 0,923 (2 x t Hz, NH2CH (CH2ÇH3) CH (CH2) OH) , 1,11 & 1,18 (2 Hz) , NH2CH (CH2CH?.) CH (ÇH3) OH) , 1,41- NH2CH (£H2CH3) CH (CH?.) OH) , 2,76 + 2,93
NH2ÇH (CH2CH3) CH (CH3) OH) , 3,61-3,69 & 3,8C NH2CH (CH9CH3) CH (CH3) OH) , 7,73 (bs, 2H, NH2) . (3RS, 4R) -4-Airdno-hexan-3-ol A uma solução agitada de {3RS, 4R) -4- (tritil-amino) -hexan-3-ol (1,13 g, 1 eq, 3,14 mraol) em DCM (15 ml) sob uma atmosfera de árgon à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COOH (7 mL), gota a gota, e a solução foi. agitada a esta temperatura durante 4 h. 0 solvente roí evaporado in vacuo, adicionado EtOH (20 mL) , e removido in vacuo, e este processo repetido duas vezes. O resíduo foi precipitado a partir de Etgj (5 mL) com bexano (40 mL) com agitação para produzir um óleo amarelo. O solvente foi decantado do óleo, e o óleo foi lavado com hexano (30 mL) e seco in vacuo para produzir o composto do titulo como um óleo amarelo claro. Rendimento: 0,37 g (100%) . (57% de 3S, 4jR: 43% de 3R,4.R). RMN de 1H (d6-DMSO, 250 MHz) : δ 0,79 & 0,92 (t & m, 6H, J === 7,42 Hz, NH2CH (CH2ÇH3) CH (CH2ÇH3) OH) , 1,30- 1,67 (m, 4H, NH£CR ÍÇR2CR3) CH (ÇH2CR3) OH) , 2,70 (m, 1H, NH2CR (CH2CH3) CH (CH2CH3) OR) , 2,84 & 2,96 (2 x rn, IR, KH;:CH (CH0CE3) CH (CH2CH?.) OH) , 3,41 & 3,56 (2 x m, 1H, NH2CH (CH;.;CH3) CH (CHvCH;;) OH) , 7,71 (bs, 2H,
EtbCH (CÍI2CH3) CH (CIbCH;;) OH) . (3RSf45)-4-Amino-hexan~3~ol \
NH2 A uma solução agitada de (3RS,4S)-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol (1,19 g, 1 eq, 3,31 mraol) em DCM (15 mL) sob uma atmosfera de árgon à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COQH (7 mL) , gota a gota, e a solução foi agitada a esta temperatura durante 4 h. O solvente foi evaporado in vacuo, adicionado EtOH (20 mL) , e removido in vacuo, e este processo repetido duas vezes. O resíduo foi precipitado a partir de Et20 (5 mL) com hexano (40 mL) com agitação para produzir um óleo amarelo. O solvente foi decantado do óleo, e o óleo foi lavado com hexano (30 mL) e seco in vácuo para produzir o composto do título. Rendimento: 0,39 g (99%), (85% de 3Rf4S: 35% de 3Sf 4S) . RMN de CH Ícp-DMSO, O liai MHz): ó 0,73 & 0, 92 (t & m, 6H, J = 7,50 Hz NH2CH (CH2CH3)CH (CH2CH3)OH) r 1,22-1, 68 ím, 4H NHRCH (CH2CH3) CH (CfízCfí;;) Ofí) , 2, . 71 (m, 1H, 1 '[H2Cfí (CH2CH3) CH (CH2CH3) OH) 2,83 3 2,95 (2 x m, 1H, NH2CH (CH2CH3) CH (CH2CH3) Ofí) , 3,39 & 3,54 (2 x m, 1H, NH2CH (CH2CH3) CH (CH2CH3)OH) , 7,77 (bs, 2fí, NH2CH (CR2CH3) CH (CH2CH3) OH) , (3RS, 4R) ~4~Miino~2~metil-kexan-3-ol HO. NH2 A uma solução agitada de {3RS,4R)-^-metil-^-(tritil-amino)-hexan-3-ol (0,53 g, 1 eq, 1,41 mmol) em DCM (20 mH) sob uma atmosfera de árgon à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COOH (5 mL) , gota a gota, e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 h. O solvente foi evaporado in vacuo, o resíduo foi precipitado a partir de Et20 (10 mL) com hexano (90 mL) com agitação para produzir um óleo amarelo, O solvente foi decantado do óleo, e o óleo foi lavado com hexano (20 mL) e seco ín vacuo para produzir o composto do título como um óleo amarelo claro.
Rendimento: 0,18 g (100%). (30% ^ (d6-DMSO, 250 MHz) : NIRCH (CH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) , NH2CH (Cfí2CH3) CH (CH (CH3) 2) Ofí) , NH2CH (CH2CH3) CH (CH(CH3)2)OK) , NHjCR (CH2CRs) CH (CH (CHS) 2) OH) , de 3S,4R: 50% de 3Rr4R). RMN de δ 0,85-0,99 (m, 9fí 1,42-1,79 (m, 2H 2,95 (m, Ifí 3, 18 (m, 1H 3, 37 (m. Ifí NH2CH (Cfí2CH3)ÇH(CH (CH3)2)OK) , MRCH (CH2CH3) CH (CH (CH3) ?_) OH) . 0 8 íb< 2H, (3RS,4S)-4-Amino-2-metil-hexan-3-ol HO. NH2 A uma solução agitada de (3RS,4S)-2-metil-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol (0,36 g, I eq, 0,97 mmol) em DCM (20 mL) sob uma atmosfera de árgon â temperatura ambiente, foi adicionado CFçCOOfí (5 mL), gota a gota, e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 h. O solvente foi evaporado ín vácuo, o resíduo foi precipitado a partir de Et20 (10 mL) com hexano (90 mL) com agitação para produzir um óleo amarelo. 0 solvente foi decantado do óleo, e o óleo foi lavado com hexano (20 mL) e seco in vácuo para produzir 0 composto do título como um óleo amarelo c laro. Rendimento: 0,13 g (100%). (5 0% de 3R,4S: 50% de 3S, 4S) RMN de :lH (de.-DMSO, 250 MHz) : δ 0,85-1,01 (m, 9 H, NH2CH (Cfí2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) , 1,44-1,76 (m, 2H, NH2CH (CH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) , 2, 94 (m, 1H, NH2CH (CH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) , 3,17 (m, 1H, NH2CH (CH2CH3) CH (CH (CH3)2)OH) , 3,40 ím, 1H, NH2CH (CH2CHS) CH (CH (CHS) 2) OH) , 7,54 (bs, 2H, NH2CH (CH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) . (3 RS,4R)~4~Amino~2,2~dimatil-hexan-3-ol
NH2 A uma solução agitada de (3RS, AR)-2, 2-dimetil-4-(tritil-amíno)-hexan-3-ol (0,57 g, 1 eq, 1,47 mmol) em DCM (10 ml) sob uma atmosfera de árgon à temperatura ambiente, foi adicionado CF?COOH (5 mL) , gota a gota, e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 h. O solvente foi evaporado in vacuo, o residuo foi precipitado a partir de EtjO (3 ml) com hexano (20 mL) com agitação para produzir óleo amarelo. O solvente for decantado do óleo, e o óleo foi lavado com hexano (20 ml) e seco in vacuo para produzir o composto do titulo como um óleo amarelo claro. Rendimento: 0,21 g (100%) i . (55% de 35,4R: 45% de 3R, 4R) . RMN de mi (dÊ-DiMSO, 250 IMHz) : d 0,84-0,99 (m, 3H, NHsCH ÍCH2CH3) CH (C (CH3) 3) OH) , 1,25-1,29 (m, 9H, NIRCH (CH2CH3) CH (C (CHS) 3) OH) , 1,20-1,72 (m, 2H, NH2CH (CK2CH3) CH (C (CH3) 3) OH) , 3,14 (m, 1K, NHZÇH(CH2CH3) CH (C (CH;;) 3) OH) , C U Ci - f - (m, 1H, NHjCH (CR2CHS)CH (C (CH3) 3)OH) , 3,65 (m, 1H, NH;;CH (CH3CH3) CH (C (CH3) 3) OH) , 7,43 , 7,77 & 8,54 (3 x bs, 2H,
NfbCii (CH2CH3) CH (C (CH3) 3) OH) . (3RS,4S)-4-Aminc-2,2-dimetil-hexan-3-ol \
NH2 HO. A uma solução agitada de (3RS, 43)-2, 2"dimetíl-4-(trítii-amino) -hexan-3-ol (0,47 g, 1 eq, 1,21 mmol) em DCM (10 mL) sob uma atmosfera de árgon à temperatura ambiente, foi adicionado CFjCOOH (5 mL} , gota a gota, e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 h. O solvente foi evaporado in vácuo, o resíduo foi precipitado a partir de Et30 (3 mL) com hexano {20 mL) com agitação para produzir óleo amarelo. O solvente for decantado do óleo, e o óleo foi lavado com hexano (20 mL) e seco in vácuo para produzir o composto do titulo como um óleo amarelo claro. Rendimento: 0,18 g (99%) . (53% í de 3R,4S: 47% d e 33, 43} . RMN de Aí (de- DM30, 250 MRz): δ 0,86-0,99 (m, 3R, NH2CH (CH3CH3) CH (C (CH3) 5) OH) , 1,25-1 ,30 (m, 9fí, NfbCH (CE2CK3) CH (C (ÇH3) 3) OH) , 1,20-1 , 67 (m, 2H, NHsCR (CH2CR3) CH (C (CH3) 3) OH) , 3,14 (m, 1H, NHZCH (CR2CH3) CH (C (CH;;) 3) OH) , 3, 38 (Kl, iH, nh2cr (CH2CH3) ch (c ;ch3) 3) oh) , 64 (m, 1H, NHZCH (Cfí3CH3) CH (C (CH3) 3) OH) , 7,41, 7,73 & 8,44 (3 x bs, 2fí,
NfbCH (CH2CH3) CH (C (CH3) 3) OH) . (3R)-3-Amino-2-metil-pentân-2-ol HO. NH2 A uma solução agitada de (3R)-2-metil-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol {0,21 g, 1 eq, 0,60 mmol) em DCM (5 mL) sob uma atmosfera de árgon à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COOR (2,5 mL) , gota a gota, e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 h. O solvente foi evaporado in vácuo e o resíduo foi precipitado a partir de Et3o (15 mL) com hexano (300 mL) cora agitação para produzir ura óleo amarelo. O solvente foi decantado do óleo, e o óleo foi lavado com hexano (30 mL) e seco in vácuo para produzir o composto do título como um óleo amarelo claro; Rendimento: 0,07 g (100%), RMN de tH (ds-DMSO, 250 MHz): ó
(3S)-3-Ãmino-2-metil-pentan-2-ol
HO A uma solução agitada de (3S)-2-metii-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol (0,38 g, 1 eq, 1,06 mmol) em DCM (5 mL) sob uma atmosfera de árgon à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COOH (2,5 mL) , gota a gota, e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 h. O solvente foi evaporado in vácuo e o resíduo foi precipitado a partir de Et20 (15 mL) com hexano (300 mL) com agitação para produzir um óleo amarelo. O solvente foi decantado do óleo, e o óleo foi lavado com hexano (30 mL) e seco in vacuo para produzir o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 0,12 g (99%). RMN de Mí (de-DM30, 250 MHz): δ
1H, KH2CH (CH2CH3) C (CH3) 2OH) , 7,63 (bs, 2H, NH2CH (Cfí?CH3) c (CH3) 2oh) . d Cloro -2 - fl uo ro~ 9 H-pari na
Este composto foi preparado através de uma modificação de um procedimento da literatura (Cray, N.S.; Kwon, S.; Schultz, P. G. Tetrahedron Lett. 1997, 38(7), 1161-1164.)
Foi suspensa 6-cloro-9H-purin-2-ilamina {75,0 g, 0,44 moi) em HBF,: aq (1,5 L de solução a 48% p/p em H20) . Esta mistura foi arr< ;craa C e foi agitada vigorosamente. Foi depo: adicionado lentamente NaN02 (2,5 L de uma solução aq. a 0,3 M) durante 75 min com agitação e controlo cuidadoso de temperatura (< 10 °C) . Após adição completa, a solução amarela clara foi adicionalmente agitada à temperatura ambiente durante 30 min. Foi depois rearrefecida até -15 CC e foi neutralizada cuidadosamente até pH ^ 6,2 com daOH (solução aq a 50% p/v) . Esta solução foi evaporada rotativamente até à semi-secura, O bolo resultante foi dividido com uma espátula e seco sob alto vácuo de um dia para o outro. O pó amarelo resultante foi carregado a seco numa coluna de cromatografia flash (24 x 15 cm, leito de SiO;:), que foi eiuída com CH-Civ/MeOH, 9:1. Foram recolhidas, reunidas e evaporadas fracções apropriadas. Após secagem in vácuo, o composto do título (34,8 g, 48%) foi obtido como um pó incolor. i'LC: Rf :::: 0,25 (CIpCiaÓMeOH, 9:1), material inicial 'z 173 (MH+, 100) , 175 (MH:p 33) . (2-F1 uoro-9H~purin-6-il) ~piridin~3~iJjneti l-araina
uma solução agitada de 6-cloro-2-tiuoropurina ( n r\ o resíduo 14,35 1,1 eq-, uir; f í mr tio I) err i n- -BuOH (60 tn L) sob ima atmosfera de árgon, at :é -20 °C , foi ad. 1C. íonada D IEA (2,5 rtiL, 2, 75 eq, — / seguid Lcí por C-piridin-3-: S-i -met ilamina (0, 58 mL, . 69 mmol). A mis tu ra ds reacç ãc ! fo: 1 agitada a -20 °C : 1 / e depo d o deixac la ; S J t: et orna r â t emperatura a mbiente h, u' f quand .0 a TLC (C HC 13:MeOH / 90: 10) indicou que a nha sido c :om: jieca„ 0 : so. Ivente f( vaporado in vciCAio e 2_ . purií ics ido at: ravés de cromatografia era co) luna de de sílica ge d., eli jíd.C com. CEC :i. 3: MeC j [- { ( Ç "7 ” ^ ^ Q f; » D 1 0 — W / f az ir o c omp os to do t: ítulo CC ):ug um sólido branco. : 1 , 08 g (8 5: %) . Pi 21 8- 220 cC RMN de XH (d.;-DM QO k) U p — v2 v 65 (d, 2fí / *- f - 5, 37 Hz , -HNCÍ-: 1;- -Pir) 7 "4 8 4 V ; V / J / d 1 v- \ Q _!_ j- > / w (s, 1 • ^ f -N ”Cfí—NH“ -) , s, 83 (bs, 1H, — HNCHj — 0 7 (bs, -1 T 1, -d ~CH -N H~) . F1ABM.S m/z (ínte nsidade 24 5 ([M+E 1 J ! Λ Λ \ ··:( i; / 7 17 6 ( 27), 15 i4 (10 0), 136 (74) M3.3 Sa ;-H) ' d.0a ; 245,09 51. 1' fedida: 2 4 5, 0942. Mi evo anáii se (Esperada : Medida) CnH9NÈF, 0,2H20 : 3,83, K; 33,91: 32,74. 53,31: E; 3,82: (2 F1 uorο 9"ísopropil~9H~purin~6~il} -piridin-3-ilmetiJ-amina
A uma solução agitada de (2-fluoro-9ií-purin-6-il) -piridin-3-ilmetil-amina (1,00 g, 1 eq, 4,10 mmol) eia DMA (12 mL) sob uma atmosfera de árgon, à t.a., foi adicionado K2C03 (pulverizado, anidro, 2,75 g, 4,85 eq, 19,90 mmol) seguido por 2-broroopropano (3,75 mL, 9,75 eq, 39,93 mmol). A mistura de reaeção foi agitada á t.a. durante 48 b, quando a T1C (CHC.I3 :MeOH; 90:10} indicou que a reacçâo tinha sido completa. O solvente foi evaporado in vacuo e o resíduo submetido a partição entre água (200 mL) e EtOAc (100 mL) , a fase aquosa foi separada e extraída com mais EtOAc (2 x 50 mL) . A fase orgânica aumentada foi lavada com solução salina (50 mL) , seca (MgSCb) e evaporada ia vacuo, e o resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna de gradiente de sílica gel, eluido com. CHCi3:MeOH (100:0 -» 95:5), para produzir o composto do título como um sólido branco. Rendimento: 0,73 g (62%). Pf 131-133 “C. RM.N de :lH (d3-DMSO, 250 MHs) : δ 1,49 (2 x s, 6H, “CHÍÇHíb), 4,63 (m, 3H, -ÇH(CH3)Z 7 -HNÇHj-Pir) , 7,34, 7,24, 8,44, 8,53 (4 x m, 4H, Pir) , 8,26 (s, 1H, -N=ÇH-N-), 8,95 (bs, 1H, -HNCHa-Pir) . FABMS m/z (intensidade relativa): 287 ([M4-H]% 100), 245 (8), 154 (23), 136 (18). Massa Exacta (M+H) :
Real: 287,1420. Medida: 287,1412. Microanálise (Esperada:
Medida) CuHlf!N6F: C; 58,73: 58, 57, H; 5,23: 5,21, N; 29, 35: (2S3R)-3-{9-Isopropil~6~[(piridin-3-ilmetil)-aminc]-9H-purín-2-ilamino}-pentan-2-ol
A uma solução agitada de (2-fluoro-9-isopropil-9if-purin-6-11) “piridin-3-ilmetil-amina (30 mg, 1 eq, 0,10 mraoi) em n-BuOH/DMSO (2,5 mL, 4:1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de árgon, foi adicionada DIEA (0,2 mL, 10,96 eq, 1,14 mmol) seguida por (25,31?) -3-amino-pentan-2-ol (60 mg, 5,5 eq, 0,58 mmol). A mistura de reacção foi colocada num banho de óleo pré-aquecido a 160 °C e agitada a esta temperatura durante 72 h. A mistura de reacção foi deixada a arrefecer até á temperatura ambiente e o solvente foi evaporado in vácuo. O resíduo foi submetido a partição entre EtQAc (50 mL) e água (50 mL), a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 x 25 mL), e a fase orgânica combinada foi lavada com solução salina (50 mL), seca (MgSCç) e evaporada in vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna de gradiente de sílica gel eluído com CHCIgMeOH (100:0 98:2), para produzir o composto do título como um sólido branco. Rendimento: 22 mg (57%). (80% de 3R/2S: 20% de 3R, 2R) . RMN de :lH (d-CDCl?.,
1,7 7-2,09 (m, 2H, -NfíCH (CH2CH3) CH (CH3) OH) , 3,91-4,03 (m, 2fí, -NHC H (CELCt b)CH (GH: d OH ), 4,58-4,63 (m, 1H, -CB (Cdla) 2 ) , 4,83-5, ;·\ r, (m, 3H, ~] (IGCfír-Pí r & OH), 6,16 (m, 1H, - KHCH (Cí-i20E- b) Cfí(CH3)OH \ f Jf 7,24 ” ' ! d (m, 3H, 2 x Pír-H & - N-CH t , 7 7^ í rp Ί E, Pir-H ) f Ί Ί Δ 1 r\ 3 H, J = / (Γ ^ . X 1-1 o' p "i y — H ' 8,6 7 (ra, 1H, HNCK 2-1 ír) . FAB MS m/z {inter ί S -i. d.âd.G ΓΘ ] .ativa): 370 { ÍM + H] f. 100), 31 -A (35), 2 89 (37) , 243 (65), ' 1 QO 2 __V (85) . Massa Exa cta ( Mvíi) : Rea d: 370,235 5. Medi da: 3“ 0,2347.
A uma solução agitada de (2-fluoro-9-isopropil-9ií-purin-6-il) -piridin-3-ilmetil-amina (30 mg, 1 eq, 0,10 mmol) em n-BuOH/DMSO (2,5 rn.L, 4:1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de árgon, foi a dicionad a DIBA (0,2 mL 1 - f 1V Ϊ 96 eq, 1,14 mmol) seg ui da por ( 2 R, 3 S )-3-amirl· o-pentan-2-ol (60 m .g, 5,1 1 eg, 0,58 mmo1) . A mistur a de reacção foi colocada n um ba nho de cieo pré-aqueci .o.o a Igu Z e a·: ji.Lao.a a Θ S17. P 77.0 7Qp Θ .77 3.17. ira d.u rante 72 h. A mistura de reacçãc ) for deixada a arrefecer a t.é á temper atura ambiente e o solver ioe ic j d- Θ V tipO rado in vácuo . 0 : residuc ) foi submetiao a partição entre EtOAc (50 mL) e água (50 mL) , a fase aquosa foi extraída com ma is EtOAc (2 x 2 5 mL) , e a fase orgânica combinada foi lavada com solução salina (50 mL) , seca (MgSOí) e evaporada in vácuo, 0 resíduo for purificado através de cromatografia em coluna de gradiente de sílica gel eluído com CHC1?:MeOH (100:0 ····> 93:2) , para produzir o composto do título como um sólido branco. Rendimento: 25 mg (65%). (80% de 3S,2R: 20% d le 3S,: 2S) . RMK de Ή (d-CDCl3, 2 5 0 MHz): δ 0 ,90 & 1, 05 (2 x T "< H - i - - f ~~ 6,42 5 % 7,42 Hz, -NHCHÍCH; >ÇH 3)CH (CH3)OH) , 1,16 & 1,2 4 (2 X d, 3H, J ~ o ,31 & 6,16 Hz, -NHCH (CH :2CH3) CH (CE3) ( )H) 1,57 (d, 6H, H = £ ‘7 Q Hz, -CH (CH3);;: * i Ί "7 O D 1 (Γ , / aí f \j 9 (m, 2E, -NHCH (CH2CH :>) Cfí (CH3)OH), 3,91-4,04 ( ib 2fí, -NHCH(C H2CH,}CH< CH3) UH) , 4,58- r, r r\ u, fc r (m, 1H, -ÇHÍCH3)2), 4,8! 3 (m, 3H, -Μ HCH2-Pir Ó£ OH) , 6, 11- 6, 23 (m, ifí, -NHCH (CrRCHN CH (C K3) OH), 7,24-7 ,32 (m, 3 H, 2 x Pir-H + -N= -CH-l 1-), 7,53-7,57 (m, 1H f Pir-H), ' 6 74 (d, J- — / J - /, d3 Hz, Pir-H; ), 8,67 (m, 1H, HNCH:. :-Pir) . FAEMS i r./z (intensi dade relat iva) : 37 0 ([M+H]% 100), 324 (40 ), 289 (15) , 243 (1 Γ: t - ^ / r 233 (13) , 1S9 (10 ) . Massa Exacta (m-í - w \ iA / : Real: 37 0,235b, Med .ida: 370,23%'
A urna solução agitada de : il)-piridin-3-ilmetil-amina (20 n-BuOH/DMSO (3,75 rnL, 4:1) à -flucro-9-isopropil-9H-purin-6-mg, 1 eq, 0,07 mmoi) ern temperatura ambiente sob uma atmosfera de árgon, foi adicionada DISA (0,18 mL, 15 eq, 1,03 ntmol) seguida por (3RSf 4R) -4-amino-hexan-3--cl (110 mg, 13 eq, 0,93 mmol) , A mistura de reacção foi colocada num banho de óleo pré-aquecído a 14 0 °C e agitada a esta temperatura durante 72 h. A mistura de reacção foi deixada a arrefecer até à temperatura ambiente e o solvente foi evaporado in vácuo. O resíduo foi submetido a partição entre EtOAc (50 mt) e solução salina (1:1, 100 mL) , a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 x 25 mL), e a fase orgânica combinada foi lavada com solução salina (50 mL), seca (MgSOb e evaporada in vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna de gradiente de sílica gel eluído com CHCljíMeOH (100:0 -» 98:2), para produzir o composto do título como um sólido branco. Rendimento: 23 mg (75%). (57% de id, 35: 43% de 4R, 3R) . RMN de XH (d-CDCl3, 250 Mfíz) : δ 0,87-1,07 (m, 6H, -NHCH (CH2ÇH3) CH (Cfí2ÇH3) OH) , 1,56 (d, 6H, u === 6,63 Hz, & --01-1(013)2), 1,43-1 , 63 (m, 4H, -NHCH (CH2CH3) CH (CH2CH3) OH) , 3,44 (d, 1H, J === 6,31 Hz, OH), 3,58-3,71 (m, 1H, -NHCH (CH2CH3) CH íCH2CH?) OH) , 3,89-4,01 (m, 1H, -NHCHíCH2CH:;)CH(CE2CH3)OH) , 4,56-4, 70 (m, 1H, -CH(CH3)2), 4,76-4, 35 (m, 2H, -HKÇHS-Pir) , 5,20-5,29 & 6,17-6,34 (m, 1H, -NHCH (CH2CH3) CH (Cfí2CH3) OH) , 7,13-7,38 (m, 3H, 2 x Pir-H & -N::::CH-N-) , 7, 48-7, 60 (m, 1H, Pir-H), 7,72 (d, IR, J == 7,74 Hz, Pir-H), 8,67 (m, 1H, HKCH2-Pir) . FAEMS m/z (intensidade relativa): 384 ([M-i-Hm, 100), 324 (50), 297 (30) . Massa Exacta (M+H): Real: 384,2512. Medida: 384,2500. {3RS, 4S)~4~{9~Isopropil~6~[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-hexan-3-ol
A uma solução agitada de (2-fluoro-9-isopropil-9H-purin-6-il) -piridin-3-ilmetil-amina (20 mg, 1 eq, 0,07 mmol) em n-BuOH/DMSO (3,75 mL, 4:1) á temperatura ambiente sob uma atmosfera de árgon, foi adicionada DlEA (0,18 mL, 15 eq, 1,03 mmol) seguida por {3RS,4S)-4-amino-hexan-3-ol (110 mg, 13 eq, 0,94 mmol) . A mistura de reacção foi colocada num banho de óleo pré -aquecid; durante 72 h . A mista temperat 11 ir ,di arab lente resíduo foi sub meti d salina ( 1:1, *; r\ , J- U ' 0 mL) (2 x 25 mL) , Θ a faz S 8. .1 -1. D cl· í 50 rm Γ \ :.i; t seca 140 °C e agitada a esta temperatura de reacção foi deixada a arrefecer até à o solvente for evaporado in vácuo. O 20 a partição enrre EtOAc (,5a mL,1 e soruçao a fase aquosa foi extraída corri ma is EtOAc r orqanica coiriJomada rei ravada ccm soruçao (MgSOp e evaporada in vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna de gradiente de silica gel eluído com CHCi3:MeOH (100:0 ·····> 98:2), para produzir o composto do titulo como um sólido branco. Rendimento: 15,5 mg (587 b - (57 % de 4 a '2 ό < í.j r iw 4 3% de 4 S, 3S) . RMN de Ή (d-Ci Xl3, 250 MH :z) : δ 0,84-1, D Q { rn, \J J \ L1 y 6H, -NHCH (Cfí2CH3)C HÍCHg CH3 ) OH) , 1,57 ' (d, 6H, T ô, 4 8 Hz, ~ch (c K 3 ) 2 ) , 1,4 2- -i, r λ O ·':( (m, 4 K, -NHCH; C" 8Í .2CH3 ) CH <CH2C H3)OH) , 3,4 5 (d ? j- ί-i y J = 6 •-n f 3- Hz, OH) , 3, 5: 5-3 f ! 1 i (m, 1H, -NHCH( CH2CH; OCHíC 'H2CHg oh ), 3, 88 -4, 0 3 (m. 1H, -NHCH( f'' :2ch3 )CH(CH2C H3)OH) , 56-4, 74 (rn e 1H, -CH (CH 3)2) , 4,78--4 Ç\ ! 9 ím, 2 H, -HNCH, -aí r) , 0 , /. (0-5,29 &. Ό f 20- 6 f 3 9 (rn, 1H, -NH ( ::h ( o c·: : :2ch3 ) CH(Cfí2C H3)OH) , '—t f\ I / A, ,0-7,3 6 (m, 3H, 9 X P i r - H +
1Η, J (intensidade Massa Exacta -N=CH-N~), 7,49-7,60 (m, 1H, Pir-fí) , 7,72 (d Fir-H) , 8,71 (m, 1E, HNCH2-Pir) . F.ABMS m/z relativa) : 384 ([M+H]% 100), 324 (35), 297 (15) . (M+H): Real: 384,2512. Medida: 384,2500. \KI -4 -2~ilamino}
Isopropn-b- [ (pi. vetil-hexan-3-ol
d i rj mm,3 7 / m. θ t.i 7) 3 jti ί π o j 9 H
A uma solução agitada de (2-fluoro-9-isopropil-9H-purin-6-il) -piridin-3-ilmetil-amina (30 mg, 1 eq, 0,10 mniol) em n-BuOH/DMSO (2,5 mL, 4:1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de árgon, foi adicionada DIEA (0,10 mL, 5,5 eq, 0,57 mmol) seguida por {3RS, 4.R) 4”am.in0”2-metil-hexan-3“0.1 (42 mg, 3,0 eq, 0,32 mmol). A mistura de reacção foi colocada num banho de óleo pré-aquecido a 140 °C e agitada a esta temperatura durante 72 h. A mistura de reacção foi deixada a arrefecer até à temperatura ambiente e o solvente foi evaporado in vácuo, O resíduo foi submetido a partição entre EtOAc (50 mL) e solução salina (1:1, ÍQO mL) , a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 x 25 ml. ) , e a fase organi .ca combinada 1 Ο.Ί. .1 3. v 3 d3 com soiu ção salina (50 mL) , seca (MgSCo) Θ 0 V3p0 0 3 Ciei. ín vácuo. 0 resíduo foi purificado através de cromai icgrafia em coluna de σ: radiente cie sílica gel eluído com. CHC13:M eOH (100:0 - > 98:2), para produzi r o composto d 0 O & O O P P sólido bran co. Rendimen to: 6,3 mg (15%). 50% de 4R,3S: 50% de 4R,3R) . RMN de J'H (d-CDCl3, 250 MHz) :
δ 0, 93-1, 04 (m, 9H, -NHCH (CH2CH3) CH (CH (CH3)2)0H) , 1,57 (d, 6H, J 6,95 Hz, -CH (ÇH3)2), 1,65-1,89 (m, 4 K -NHCH (CHoCH3) CH (CH (CH3) 2)OH) , 3,22-3,32 (r;i, 1H -NHCH (CH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) , 3,82-3,97 (m, 1E -NHCH (CHgCHs) Cfí (CH (CH3) 2) OH) , 4,54-4,70 (m, 1H, -ÇH(CH3)2) , 4,78-4,88 (m, 2H, -HNÇjfc-Pir) , 5,03-5,14 & 6,08-6,20 (m, Ifí, -NHCH ÍCH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) , 7,22-7,36 (m, 3H, 2 x Pir-H & -N-ÇH-N-) , 7, 49-7,58 (m, 1H, Pir-R) , 7,71 (d, 1H, J - 7,90 Hz, Pir-H), 8,47-8,73 (m, IR, HNCH2-Pir) . FABMS m/z (intensidade relativa) : 398 ( [M+H] ’, 100), 324 (50) . Massa Exacta (M+H) : Real: 398,2668. Medida: 398,2654. (3RS,4S)-4-{9-ISGpropil-6-i (pizidin-3-ilmetii)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metii-hexan-3-ol
A uma solução agitada de (2-fluoro-9-isopropil-9H-purin-6-il) -piriáin-3-ilroetil-araina (30 mg, 1 eq, 0,10 ramo!) em n-BuOH/DMSO (2,5 mL, 4:1) a temperatura ambiente sob uma atmosfera de árgon, foi adicionada DIEA (0,20 mL, 11 eq, 1,14 mmol) seguida por (3RS, 4S)-4-amino-2-metil-hexan-3-ol (28 mg, 2,0 eq, 0,21 mmol). A mistura de reacção foi colocada num banho de óleo pré-aquecido a 160 °C e agitada a esta temperatura durante 72 h. A mistura de reacção foi deixada a arrefecer até a temperatura ambiente e o solvente foi evaporado in vácuo, 0 resíduo foi submetido a partição entre EtOAc (50 mL) e solução salina (1:1, 100 mL), a fase aquosa foi extraída com maís EtOAc (2 x 25 mL) , e a fase orgânica combinada foi lavada com solução salina (50 mL), seca (MgSOí) e evaporada in vácuo, O resíduo foi purificado através de oromatografia em coluna de gradiente de sílica gel eluído com CHC.LgMeOH (100:0 --> 98:2), para produzir o composto do titulo como um sólido branco.
Rendimento: 4,3 mg (10%). 50% de 4S,3K: 50% de 4S,3S). RMN de %H (d-CDCl3, 250 MHz) : δ 0f9i-%!.,05 (m, 9H, -NHCH (CH2CH3) CH (Cn3) 2) OH) , 1,57 (d, 6 H, J === 6,95 Hz, -CH(CH?) 2), 1 , 60-1, 95 (m, 4H, -NHCH (ÇH2CH3) CR (ÇH (CH3) 2) OH) , 3,23-3, 33 (m, 1H, -NHÇH (CH2CH3) CH (CH (CH3) 2) OH) , 3,84-4,04 (m, 1H, -NHCH (CH2CH3) CH (CH ÍCH3) 2) OH) , 4,56-4,70 (m, 1H, -CH(CH3)2), 4,77-4,95 (m, 2H, -HNÇH2-Pir) , 5,26-5, 43+6, 27-6,50 (m, Ifí, -NHCH (CH2CH3) Cfí (CH (CHS) 2) OH) , 7,23-7,37 (m, 3H, 2 x Pir-H & N-CH-N™) , 7,51-7,63 (m, 1H, Pir-fí) , 7,73 (d, 1H, J == 7,74 Hz, Pir-H), 8,48-3,76 (m, 1H, HNCH2-Pir) . FABMS m/z (intensidade relativa): 393 ([M+H]% 100), 324 (60). Massa Exacta (M+H): Real: 398,2663. Medida: 393,2654. ( f ‘ΐ λΛ /
P 7 7 y- 7 P k ) - q. c-j. i a /n.i.no / - Isopropi1 -6- [ (pi ri dí , 2~dimet.il ~hexan~3~ol ; — 'j — 7 / J770 £; 7 / ) -amino]-9H-
A uma solução agitada de (2-fluoro-9-isopropil-9ií-purin-6-il) -piridin-3-ilmetil-amina (30 mg, 1 eq, 0,10 mraol) em n-BuOH/DMSO (5 mL, 4:1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de á rgor d foi adicionada DIEA (0,1 r\ U mL, J f f 0,5? ramol) segui da por {3RS, 4.R) -4-amino-2,2-d imc til hex. ?.n--3- ol (52 mg, 3,41 eq, Cd 36 mmol) . 1 i mistura de reacç áo f oi ; :oioc ad a num ba nho de ó leo p:r •é-aquecido a 140 °C e agi tada a est, temperat ura durante 72 h. A rui 3tua •a de reacção fc ri deixada a ar re tecer af é 3. tempe rat ura ambiente e o solvente fo. _ ev aporado i n vácuo 0 resid ao foi submetido a partição enl .re EtO 7\ riC (30 mL e soim C30 salin a ( 1:1 , 100 mi), a fase aquosa fo: _ ex sraída c om mais Et OAc (2 x 25 mL) , e a fase orgânica combi nada foi 1 3. v 3 C 3 com solu ÇãO s a 1 i n a ( 50 mL), seca (MgSCn) e evaporada ín vácuo. 0 residuo foi purif içado através de cromatografia em r~> (~\ Lu na de li madlente de sí 11 c: a g ei eluid.o com. CHCI3:MeOH (100 : 0 -e 9 8:2) , pa ra produzi r 0 compc sto do titulo c orno um sólido bio z p r< .-λ jndin ien to: 7,3 mg (17%) c ^- -J -..- de 4R, 3S : 45% de 4Rf3F \ / * RMN 'ή (d ~ L„- iX,. 3 f 250 MHz) : δ r\ 39-1,03 (m , 12H, -nhch;c 7-7 .·*·: —2^ H3) CH (C í CH3) ; )OH), 1,56 & 1, 5 8 (2 d, 6H, J ::: 0 f 0 i w ? > j n ^ y “CH ch3; ::) , 1, £ Q i (m, 2H, -NHCH (ÇdbCR 3) Cí-1 (C (CH3) 3) OI-I) 3 5 a í (d, 1H, J — 1 Η /j -1 ; ^ Hz, --NHCH i o zClh ) CH (C (CLU) 3 OH), 3,7 6- 2 P Ί (m, Ifí, -NíiCH ; r> h2ch 3) CH (C (CH3) 3)o: R) 4 S7 f -i f J 1 -4,70 (m, 1H, ( Cíi 3)2) , 4,80-4 ' í 89 (m, 2 H, - HNC ;-Pír), ; 5,22-5, 35 & 6,07-6, 23 (rn, 1H, -NHCR1 h2ch 3) CH (C (CH?) 3 ) 0. R) / / / L1 7,36 ím, 3H, 2 x. Pir- H & -N-CH- N "), 7,55 (s, lf Pír-H), / s / 4 (d, 1H, J "7 ^ R ’ f ^ ° Hz, Pir-R) f F 5 0-8,74 ( m, 3. H, HNCR;·; -Pir). FABi IS m/z (intensi da de relativa): 412 {[M+H]+, 100), 324 (80). Massa Exacta (M+H) : Real 412,2825. Medida: 412,2835. (3RSf4S)-4-{9-Isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilâmino}-2,2-dimetil-hexan-3-ol
A uma solução agitad 3. ΟΘ (3 RS,4R) -4 -{9-IsopropiJ. piridin-3-iimetil)-a nino j -9H- -purin-2- •iiamino} -2,2-dimetil- hexan-3-ol (30 mg, 1 eq, 0,10 mmol) em n-BuOH/DMSO (5 mL, 4:1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de árgon, foi adicionada DIEA (0,10 mL, 5,5 eq, 0,57 mmol) seguida por {3RS, 4S) “4-amino- 2,2- •dimetii-hex an-3-o.l (4 3 m g, 2,81 eq, 0,29 mm o.l) . Ã mi s t. ura de reacção foi co.' Locada m :jm ba; nho de óleo pré- aqueci .CO 3 i 4 (’ ) °C e agít „3 03 3. Θ 810 tempera tura durante 72 h. A mista rra de eacção roi deixada a ; 3.ΓΓθί 0C0u : até à temperatura ar nerenti e e 0 SG Ivente foi evaporado i P Vâ.CUG . 0 re sídue foi subraet .ido a par -j—: — V 3 O ent re 0 J.J ic (50 mL) e soiuçá 0 salina (1:1,100 raL) / CL 1- ' cl S 0 aq uo; sa for S Θ C 3. extraída com ma is EtOAc (2 x 25 mL) , e a fase orgânica combinada foi lavada com solução salina (50 mL), seca (MgS04) e evaporada in vácuo. Ο resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna de gradiente de sílica gel eluido com CHCl3:MeOH (100:0 > 98:2), para produzir o composto do título como um sólido branco. Rendimento: 5,4 mg (13%) . (53% de 4S, 3R: 47% de 4S, 3S) . RMK de ]K (d-CD013, 250 MHz) : ô' 0, 99-1,03 (m, 12H, -NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)GH) , 1,57 & 1,59 (2 x d, 6H, J - 6,79 & 6,79 Hz, -CH (ÇHj) 2), 1,70-1,93 (m, 2H, -NHCH (CH2CH5) CH (C (CH3) 3> OH) , 3,55 (d, 1H, J = 2,05 Hz, -NHCH (CHjCH;;) Cfí (C (CH3) 3) OH) , 3, 77-3, 90 (m, ÍH, -NHCH (CH2C{-]3) CH (0 (CH3) 3) OH) , 4,58-4,70 (ra, 1H, -CH(CH3)2), 4,82-4,94 ím, 2H, -NHOp-Hím) , 5,31-5,45 & 6,12-6,34 (m, 1H, -NHCH (CH2CH3) CR (0 (CH5) 3) OH) , 7,26-7,40 (m, 3H, 2 x Pir-H & -N=CH-K-t, 7,55 (s, 1H, Pir-H), 7,75 (d, 1H, J = 7,42 Hz,
Pir-H) , 8,46-8,81 (m, ÍH, HNCH^-Pir) , FABMS m/z (intensidade relativa): 412 {[M+H]% 100), 324 (70). Massa Exacta (M+H): Real: 412,2825. Medida: 412,2835. (3R)-3-{9-Isopropil-6-[ (piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2~ílãmino} -2 -meti l-pentan- 2- ο .Ι
Α uma solução agitada de (2-fluoro-9-isopropil-9H-purin-6-il) -piridin-3-ilmetil-araina (20 mg, 1 eq, 0,07 raraol) em n-BuOH/DMSO (1,25 mL, 4:1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de árgcn, foi adicionada DIEA (0,25 mL, 20,5 eq, 1,44 mmol) seguida por (3i?) -3-antino-2-metil~pentan-2-ol (22 mg, 2/7 eq, 0,19 irtmol) , A mistura de reaoção foi colocada num banho de óleo pré-aquecído a 14 0 °C e agitada a esta temperatura durante 72 h. A mistura de reacção foi deixada a arrefecer até à temperatura ambiente e o solvente foi evaporado in vácuo. O resíduo foi submetido a partição entre EtOAc (50 mh) e solução salina (1:1, 100 mL) , a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 x 25 mL) , e a fase orgânica combinada foi lavada com solução salina (50 mL), seea (MgSO/ e evaporada in vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna de gradiente de sílica gel eluído com CHCljíMeOH (100:0 -» 98:2), para produzir o composto do título como um solido branco. Rendimento: 3,7 mg (14%). RMN de lH (d-CDCÍ3, 250 MHz) : δ 1,00 ít, 3H, J = 7,27 Hz, -NHCH {CH2ÇH3) C (CH3) 2) OH) , 1,21 & 1,31 <2 x s, 6H, -NHCH (CH2CH3) C (Cfí3) 2} OH) , 1,57 (d, 6H, J - 6,63 Hz, CHÍCH,)/, 1,69-1, 89 (m, 2fí, -NHCH (CH2CK3) C (CH3) 2) OH) , 3,66-3,83 (m, ifí, -NHCH (CH2CH3) C (CH3) 2) OH) , 4,59-4,73 (m, 1H, -ÇH(CH3)2), 4,77-5,00 (m, 2H, -NHCH? - Pi r) , 7,26-7,46 (m, 3H, 2 x Pir-H & -N=CH-N-) , 7,49-7, 69 (m, 1H, Pir-H), 7,78 (d, 1H, J = 7,10 Hz, Pir-K) . FABMS m/z (intensidade relativa): 384 ([M+H]% 65), 366 (23), 324 (100), 217 (35), 192 (55) . Massa Exacta (M+H): Real: 384,2512.
Medida: 384,2494, (3S) -3-{9-Isopropil-6-[ (piridi. ima ] -9H-i -peru
1 ciliÀ-L .[J
A ! ama solu ção , aa.it ada de (2 - f ] .uoj :o- 9 r n Õ C ropi 1. -91 7-pu.ri: il )-Piri .meti! I -am: i na (( 30 mc h CA r f 0,10 mmol) n- BuOH/L •MSO (1, 25 r KL, /; * -j \ ·'· ! 3. ten f:.pe; ::atu. ra. a: mblente sob at mosfer '3 ΟΘ 6 rgon, t* .-"N i adie :i on adí a r )IEA (C ’ / 3 5 ml., 14,4 1, 4 4 mm; cl) seguida por (3 ) -3- amino- -2-meti | ΪΓ1 tan-2-o( 1 (40 3, 2 eq, (34 mmol; 1 , ri mi st .ura : de reacç âO for coi ΧΆ JílClíl 11 Uil :i banh; ól eo pré i-aquecic /. V-'1 d 1 r, r\ \_ 4 {J e s igrt .ada a C C; 3 za t :.ei nperatura dur. Ί O h. . A mi 3 tu: ra d 0 r eac ção fo i dei ,xad. 3 ci arrefec er at te mperat ura anuo lente ; 0 O sol veni :.e fo. 1 Θ Y3O( ;r ci CÍO j. 12 Vcl CUC re sí duo foi subi meti c iO 3. pa rtiç l 3.0 en tre Et: jAc ( 50 mL) Θ 80.1' sa lina t N : 1 10' j mL) f fa 3Θ 3 ique ti Cl fo. X 0 i rira ic ia com n iais E· (2 x 25 mL) , e a fase orgânica combinada foi lavada com solução salina (50 ml.}, seca (MgSOp e evaporada in vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna de gradiente de sílica gel eluído com CHCi3:MeOH (100:0 ·····> 98:2), para produzir o composto do título como um sólido branco. Rendimento: 6,5 mg (16%). RMN de C íd-CI)Cl3, 250 MHz) : δ 1. 00 (t, 3H, J == 7,42 Hz, -NHCH (CH2ÇH3) C (CR3) 2) OH) , 1,22 & 1,31 (2 x s, 6R, -NHCH (CH2CH3) C (CE3) 2) OH) , 1, d7 (α, 6H, J - 6, /9 Hz, -CH (CH3) 2) , 1,70-1, 90 (m, 2H, -NHCH (CK2CK3) C (CH3) 2) OH) , 3,66-3,81 (m, 1H, -NHCH (CH2CH3) C (CH3) 2) OH) , 6-4,73 (m, 1H, -CfítCHjh) , (m, 2H, -HNCH^-Pir) , 7,20-7,45 (m, 3H, 2 x Pir-fí (m
Cri } f J - 7,74 Hz, Pír-H). ÍM-!-K]\ 1.00), 366 (30), i /b t, í0} . Massa rxacta 7,48-7, 69 (m, 1H, Pír-H) , 7,77 (cl, 1H, FABMS n?/z (intensidade relativa) : 334 ( 324 (85), 286 (40), 242 (65), 192 (63), (M+H): Real: 384,2512. Medida: 384. 2494.
Para cl P 1-' Θ p 3 1Γ 3 v 3. 0 ΘϊΓΐ grande esc ala dos enantiómeros ind.ivid.ua is de 3-{9-isoprop.i 1-6- [ (pirid.ir r--3-.il me ti 1)-aminol-9H- purín-2-i lamino}-2-metíi-penta ιη-2-ol 24 (1 (squema 3 abaixo), for adoptado tm procedimento di ferente. A dicloropu rina 14 foi 3ΓΠ.Ϊ. jD 30.3. em C-6 com piríd.1 .imetilamina j. r") p 3 .1Γ 3 oroduzir o intermediário 1.6, que foi depois alquilado em N-9 com 2-bromopropano 17. O cloropurina 18 resultante foi aminada em C-2 com o enantiómero apropriado de 3-amino-2-metil-pentan-2-ol 23.
24 rnetil ico V f segui' do p or Í3 w w f use, W. L iebi nâo foi adequado para s de : rend: Imen L 0 0 pure za prote ri Zi pi do Cf 1. U.pO ctrCu. no benzi. lo) . A rr :.θ tl ΐ 13. Ç â 0 do com e leva· do rendirm ento Θ Γ cl111 depc )is rem OVÍd os rómero s puros de 3" amin 0” eoí prevtia.rri.ente demonstrado que pode ser obtido i?-3-amino-2-metil-pentan-2-ol 23 opticamente puro directamente por conversão do ácido κ-2-amino-butírico 19 no éster metilico í dupla meLiraçao de ariguaro. ou e o o oe r , 3 . r . : Kirm Ann. Chem.f 1980, 518) . Este rnétc trabalho de aumento de escala era te? do produto. Foi, deste modo, adoptada como o derivado de dibenzilo (21, bn aminoéster 21 proporcionou o álcool 22 com pureza. Os grupos benzido hidroliticamente para produzir os ens 2-metil-pentan~2-ol 23.
HN
-N 'N H
O
CI^^N 2, 6-DicIoro- -Su-purina (157, 2 g, 0,83 moí) , butanol (1,2 t), e EtsN (290 mL, 2,08 moí! foram agitados e a que eidos até 50 °C. Foi adicionada 3 -C-piridin-3-il- m.et ilam.ina (9 A m I), 0,76 mol) e a reacção aquecidé ϊ até 120 °C c larante 1 h, 0 aquecimento foi parado e o balão deixado a arre: fecer até à tempc ;ratura ambiente, depois até 0 “C utilizando um banho de 3 Cf U cl QG J. cl 03 - 0 precipitado cor de pessego toi recolhldo por f d. J. 11Γ 3 Ç 3 O f ,J. 3 vado com H;:0 (1 L) , X 10X0X0 {0 X U f 3 L) e seco Del '33. deixar um sólido cor de pêssego. Foi obtida uma segunda c olheita por evaporação do filtrado e lavagens combinados, trituração com H20 (100 iriL) CHCI3 (100 ml), filtração, lavagem com hexano, e secagem.
colhi sitas for am combinadas par a propo: rctonar 0 corap os to do título (196 g f 91%). P .MN dí e ?H (DMSO-ds ) : 5 4, /- '> ,« r 0 / ~ 4 f O y (2H, d, -cHj- NK- } , 6,2 0 (1H, br - ^ f wy \ 7,34-7, 39 (dd, ArH t, / , 7 6-7 v 79 Í1H, d, ArH) , 8, 17 (1H, s, Ã mH-M 8,46-8,· 48 (1H, d, Ai :H) , 8,61 (11 í Q 'Δ A f - t ril ), 8,80 (1H, br , s, NH). (2- -Cloro- isopropi 11-9H- -pviri n-b-il i oiridin- 3-ilmeti :íicl
Foi dissolvida (2- cioro - 9ir-pur in- 6- i i) - piridí n- 3-i 1 met i i- amína (110,3 g, 0,37 moí) em DMF seco (1,5 L) e aquecida até 70 °C com agitação. Foram adicionados K2CO3 (230 g, 1,67 mol) e 2-bromopropano (300 mL, 3,20 mol) e a reacçâo foi agitada a 70 °C de um dia para o outro. A mistura de reacção foi deixada a arrefecer até à temperatura ambiente e o K2C03 foi removido por filtração e lavagem com EtOAc, O filtrado e lavagens combinados foram concentrados num evaporador rotativo e depois sob alto
vácuo para remover a maioria do DMF. 0 resíduo resultante foi agitado vic íorosamente em H20 (1 L) e Cl bCi2 (1 l) até a díssor ti Ç 3 O ser complei -cl « J3 ίΧΙΓιΧΙΟ 3. 3 C[ U O S ci foi ext raída com π 7ais CH2Ci2 / 0 [ Z X ò 1,5 0 -1,5.3 {6 H, d 200 mL), os extractos orgânicos foram combinados, secos sobre MgSCc, e evaporados para produzir o composto do título (87,2 g, 78%) como um pó bege. RMN de %K (DMSO~d6) : r2 (3fí, m, -CH2-NH- & CH (CH3) 2) , 5,20 (1H, br. 3, NH) , 7,34 — 7,39 (dd, ArH) , 7,76-/,/9 (1K, d, ArH) , ;h(ch?}2) , 8,33 (1H, s, ArH, N===CH--]S ]-), 8,46-8,48 (1H, d, A 5, ArH), 8,92 (1H, br. s, NH) , Clorídrato do 'V> .etílico do ácíc lo R-2-amii
NH2.HCI
O 0 á eido (D)-(-)- ~2~c iminobut ir -t C· 0 (50,0 g, 0,4 8 moi) for SUSP enso em MeOH (270 mL) e arre _f C· 1 cidc até -10 °C (banh 0 de gelo C ΟΓΡ sal) com agitação, sob N2. Foi adicionado S0C12 (6 4 mL, 0,8 b 4 mo' 1.) , gota a go 1ΤΓ- α f durant ; α Q '5 ruiu. 0 balão for acop lado 0 Oj"p um c( andensador de rei riuxo e éí c [uec ido até 70 UC. du: rante 1 h depo is arrefecido e ev •aporado (co- -evaporando com MeOH) 0 resi duo foi quebrado e seco s ob ai to vácuo para pz /oduzi .r 0 comp osto do título CO mo um pó br ancc t (75 g, 100%). I 1MN d e 71 / r‘. -\-\ r·. \ v.. I3) : δ 0,88-0,9; 3 ( 3H, t, CH 3C.K2 -), 1,48 (2 H, br, s, IN )¾) , 1,5 0 -1 f 8 C i (2H, m, CH3q I2-) ϊ Λ r 3,-' 50 ( 1H, t, CHNH2) , 3, b 9 í 3H 1 S, °CH3) És te: \r metílico do o. C. ido R.-2- -dí ben zil5mino-butírico
N
Bn
O
Bn clorídrato g, 0,485 mc do éster .) em DM.F metílico do ácido R- 2- seco (500 m L) , sob ϊ d. mrd.no-butírico à temperatura 74 irganicas ag ita.: O K2< - b-bi foi r emov ido 1 ror filt ração 0 mL) • 0 f r 11 trado CO. i ..avag ens ΟΟΠ ibi nadi in V d C uo . ( J 1 :es iduo 0 leosi D fcd 1 0 '1 ' !— O L, ibmet ido a (1 lA Γ f - \ 1 / 0 u20 Π 5 L) , A c amadt :1 om gânrc ta foi aqu 0 s a f: si extra ida co: m ma: Ls Et .OAc (1 I ,) . As combin a d .5.3 foram 0 oncer itrad 5 3 , Pr vppN c; - atr '3. V Θ g de / 1 ror natogra fia fias h e η· ) 3 Ç .Uca ambiente, foi adicionado K2CO? (147 g, 1,065 mol), seguido por adição, gota a gota, de brometo de benzilo (127 mL, 1,065 mol.}· Após 2 b a agitar, o K2CO2 foi removido por filtração e lavado em foi CDC1;; ;) : δ 0,90-0,: -ch2~) O O 3 _ b -A n p '_J p 0 (f A _/ , , / i ( 3 y S; '"Ou lf m, ArH) , i-2-o. 7 (3:7 CHjClo/bexano). As fraoçôes puras foram combinadas, concentradas in vácuo, e secas para produzir o composto do título (136,1 g, 94%) . RMN de XH (CDC13) : δ 0,90-0, 96 (3H, t, CH3CH2”) , 1,75-1,31 {2H, m, ( -CH2-CH-) , 3,50-3,57 (2H, d, -NCfí2I 3,99 (2H, d, -NCH2Ph) , 7,22-7,41 (10R, m, ArH) R-3-Dibenzilamino-2-meti1-oentan-2-ol
Vn'“"
Bn A um balão de 3 tubuladur. as t ie 5 L seco ac opiado com uma condensado: s e um i borbulhador de 1 V; _ f' ai carregado coi n aparas de Mg (53,7 g, 2 !, 2 2 m .ol) e Et20 seco (2 L) . A mistura ror agitada .Cl arrefecida 5 "L 0 0 °C ut.il isando um banho de gel: d. Foi cepo i 3 adicionado Mel (138,2 mL, 2,22 mol) , gota a gota, durante 1 h. ’oi depois adicionado lentamente éster metílico do ácido ί-2-dibenzilamrno-butírico em Ft20 seco (1 1} (durante 10 min) e reacc foi deixada quecer até á temperatura ambiente, tornando-se muito espessa. A reacção for deixada a agitar durante 72 h, arrefecida até 0 °C e terminada através de adição lenta de solução saturada de NEjCi aq (350 g em 1 L) . Após agitação durante 30 min, a mistura de reacção foi filtrada através de uma almofada de Celite e lavada com Et20 (3 x 0,5 L) . A camada etérea roí separada e a camada aquosa extraída com ma.is Et?0 {1 L) . As fracções orgânicas foram combinadas, secas sobre MgSOí e concentradas. O resíduo foi purificado através de cromatografia flash em sílica gel (2% de EtOAc em hexano) para produzir o composto do título (88,4 g, 82%) como um óleo incolor. RMN de ‘H (CDCI3) : δ 1,06 (3H, s, -CCH3) , 1,15-1,26 (6H, m. (3H s & 3K m, -cch3 & -CH2CH3 ), 1,50-1,70 (IH, m, - •CHHCHs) , 1,70-1 ,90 (IH, m, -CKHCH,) , 2,59- 2,64 (IH, dd, -CHN- -) r 3 ,61-3,67 (2H, c 1, KCHgPh) , 3,97-4,02 (2 H, d, -NCK2Ph) , 4,25 (IH, br. s, -OH), 7,24-7,37 (10H, m, Arfí) . R-3-Amino-2-metil-pentân-2-Ql HO. NH2 R-3-Dibenzilamino-2-meti1-pentan-2-ol (21,0 g, 70,9 mmol) e Pd(C) (2,1 g, 20% de Pd em. peso seco, 50% de H20) em. Me OH (100 ml.) foram agitados num hidrogenador Parr a 65 psi de um dia para o outro. O catalisador foi removido por filtração através de uma almofada de Celite, o filtrado concentrado e seco sob alto vácuo para produzir o composto do título como um óleo amarelo límpido (7,585 g, 91%). RMN de ‘H (CDC13) : δ 0,90-1,05 (6H, m (3H s & 3H m) , -CCH3 & --CH2CH3) , 1,18 (3H, s, -CCH3) , 1,55-1, 62 (2H, m, -CH2CH3) , 1, 88-2,25 (2K, br, s, -NH2) , 2,35- 2,40 (IR, dd, -CHN-) . (3R) -3-9-Isopropil-6- [ (piridin- 3-ilrneti 1) -amino] -9íf-pur.in-2-í 1 a rn i η o - 2 - me t i I - p e n t a n - 2 - o ].
HN
Foram aquecidos (2-cloro-9-isopropil-9fí-purin-6-il)-piridin-3-iIrnetíi-amina (24,4 g, 82,4 mmoi) , R-3-amino-2-metil-pentan-2-ol (24,4 g, 209 mrnol) e K2CO3 (24,4 g, 177 mmoi) até 150 °C durante 72 h sob N2. A mistura foi arrefecida, diluída com CH2CI2, e o K2C03 removido por filtração. O filtrado foi evaporado, depois destilado (Kugeirohr) sob alto vácuo para remover o R~3~ amino-2-metil-pentan-2-oi que não reagiu. O resíduo foi submetido a dors cicios de cromatografia flash em sílica gel (a primeira coluna eluída com gradiente linear de 5 a 10% de MeOH em CH2CI2; a segunda coluna eluida com 2,5% de MeOH em CK2CI2) . O resíduo foi dissolvido em EtOAc quente (150 mL) , a solução concentrada num volume de aproximadamente 100 mL e deixada a arrefecer. Foi adicionado EipO (10 mL) para induzir cristalização e a solução foi arrefecida até 0 °C. Os cristais foram recolhidos por filtração, lavados com um pouco de ΕΐχΟ e secos para produzir composto do titulo puro (5,70 g, 18%) como um sólido esbranquiçado. O filtrado e lavagens combinados foram concentrados, o resíduo redissolvido no volume mínimo de Me2CO quente e deixado a arrefecer, O produto sólido foi filtrado e redissolvido no volume mínimo de EtOAc quente e deixado a arrefecer. Os sólidos formados foram removidos por filtração e o filtrado foi novamente concentrado até à secura, redissolvido arrefecido, filtrado numa mistura de Me;:CO quente e EtOAc, para produzir uma segunda colheita de composto do título puro seco (2,15 93' f vj ramo.]., 7%) c orno ura sói ido esbrai aqui Ç5.0.C . P. f. 138-1 4 5 0 c. [a 1d20 +32 , 3-4 n 0,48 r OH) . LC -MS: U ' / ,86 0 0 u ro, // /z 384 >1 e í] % 406 i M + iòiç t! % C20H 29N7O = 383 ,49 M icro análi q ci (% de obs er '2 O- O- 0 (teór ic.0)) - C, 6 2,41 (62 , 64 ); R , 56 (7, 62) ; N, 25, 76 (25 / >-' 7) „ RMN d 3 1H c DCls) Λ 0,93-C , 99 / V --1 -1- í, / OH2CH- \ ! t 1,17 6 1, /' "7 (6 H, 2 3, -c (C ih) 2OH) , 1, c; η ... η , 54 (6 H, d, ..KOU 1 (CH3); \ ! f 1, 65- 1,80 ( 2H, m, -CH 2CH3) / - Γ-1 Í1H, br & f NH ou Ç) U 3 , 3, 60-3, 67 (m, 1 H, - NH CH ( CHzCH3) ~ ) , 9 ϊ o 7 - Λ 1 - f v 2 (1H, m, -NCH (CH ?)2/ , 4, / / H O A (-, \j (2H, m, - HN qv -Pir) , 5,15 íb 1 lÒ f 1H, NH ou OH) , 6, 14 (1E, br „ ^ f NH ou OH ) , n 1 ! 21-7,26 (1H 1 5rí-i i) , 1 /[ 1 * 8 (1H, s, -N” u ΐ'ί “ b “ \ ! > 7, 68- η n d ! 9 / A. / \ Jip „ d, 1H, Pir- -Η) > 3, 51 — 8 c O (ap , d, li p ir-R ), 8, 64 (1H, sp. 3, Pir-H) . RMN de i3C (CDC13) : consistente com a estrutura contendo 20 átomos de C; 10 C a li táticos a δ 10,21, 20,88, 20,92, 21,90, 23,09, 26,64, 40,29 (fraco), 44,72, 61,70 & 72,45 ppra; e 10 C aromáticos a 112,96, 121,73, 132,97, 133,07, 133,6 o, 14 6, 98, 147,67, 148,89 (fraco), 152,9/ & 158,77 ppiru lamino 1—2—mot topropil-e- [ (piridin-3-il~pentan~2~ol 9H-
Este compost àqueles descritos foi obtido utilizando procedimentos análogos ::ima para o enantiómero {R) mas começando com SCI 0. G (L ) ( + )-2-- a mi nobut: Lrn 30 r P.f. 13 0,5-: 14 6 “C • ία] D ... 9 0 1 -·'; r\ f\ \j 'J (c 0, 4 6 , MeOH). LC -MS . q •‘7 ' f 85% pa ro, m/z 38i ϊ [Μ -[ - H] : , 1 -7:0· Hz 3 N-0 3 8 3, 3 9, Microan ál.i . 8Θ ( 0 de observado (teóri .. O O ) ! 62, 51 (62, Ό 4 Ϊ / H, 7,61 0 62: h , f F 1^ f L-.) ϊ / U 1 ώ. ,7 / ; , RMN de :H: δ 0, 93 ~U f Oj C) (3H, *»' r -ΟΗ,ΟΗ;;) 1,1' 7 8 1,2' / V 8' 11 f ^ O j· -C(CH. í)2OE \ / f 1, O J- ~ J- f 54 (6 H, d, -NCH(CH3 h) f f 61 )-l, 80 (2R, m, -CH; 3CH3) , 2,15 (1 H, b y· Q O f NH c íu 01 1) , 3,60 ... 7 ^ 7 r ·~ι o / (rn , 1 H, -NHCH (CH2CH3 )-), 4 r. ~ ... ( - 1 -], 6: 2 (i: Cl ^ m., -NCH ích3: 7), 4,77 ?-··4; , 80 (2 H, m, -HNCHs-Pir) , 5, 1 5 (br S ; 1H / NH ou OH) , 6,1 4 {1H, i ir „ s, NP í 01 .1 OH) , 7,21-7,2 6 (1H, m, Frí ), ·? ! r 4 8 (1H, -N=CH-N- -) , / f ό 8 . '7 ' 1 f 1 / 1 { ap. d, 1H, Pir-H) 8 (Γ 5 i “ 0 0 f 52 (a P - d, : LH, Pir-H), 6 f 6 4 (1 H, ap. s, Pir-H) . RMN de 1 C'/*'· \ — ·- ici3 \ * / * cons is te nte coai cl es tr ata ra contendo 2! 3 átomos de i-' 1 , 10 c alif átíc os a δ 10, 21, 9 0, 8 8, ? 0 Q 9 9 Ί Q; “j 9 9 0 9, 26, ír\ 4 r> r\ ^ W ? 9 7 (fraco), 44,71, 61 ,70 ví 7 9 f\ 7 Ppm; e 10 1 0 arom .átl.C' os 3 J. 1 O O. ; .y [Γ. 121, 7 9 ' -- / : '3'/ Cif, 13 3,07 f 131 3, 65 1 & c: q 7 1 / J- j ^ f ^ - f 46,98, 1.4 8 ('< /*’ , 0 0 I fr aco s } í 152,97 & 158,77 ppm.
Tabela 1
Inioiçao de cina (μϊΐ; Po.me CDK2 / ciciina E CEE ]./ ciciina B CDK4 / ciaiina Dl DDK 7 / oiclma H ?EA E?sK2 ICbo SÕ 3 01 o SE ICbo 3 D irio SE 30 v.: ICC 0 3 D Kosoovitina 0,10 ϋ, 1 ϋ 2,7 2,3 ± a 4 0,49 0,26 >50 1,2 1.3 (253R} - 3-9 - i TsopT.opi.l-o-í (piridin-j-iimetil)-amino]-ΙΑΙ-ρυπη -2- ilarirno} -pí,-nt3.a--2 -· o 1 0, 0 5 0. 02 4,9 0, 3 14 4 0, 30 0.40 >2 0 0 23 ] 2 (2R35; --3- { 9 -Isoproai 1-- S--[ (pii..iclin-3-i.l;aeL.:.J.} -aan.no I -3ri-p\i”in-2-iian'LÍno} -pentan-2- ol 0,03 0,0: 2,2 1,2 6,8 o 9 ; , 0 >200 2 0 (3 (3.R3- 4P.) --4- { 9-Isopropj.i 1--6--[ {pirid i n- 3 --i laiet.ii) --andno ] -9H-purrr-2-i lamino i -hexan-3- ol 12 2 3 0, 3 >2 0 0 37 6 í 3R5.45) -4- { 9-Inopropl 1-6-i (piridin-j-ilmetil) -ariiino] -913 -our rn--2-ilamino} -bexan--3 -o 1 0 . : 1 1 0, 6 >2 0 0 17 3 RS, 430 -4-f9--loopropil-6--[ (prnldin-r-íimet: 1) -ann.no.l -3H“pi;rin-*2“ilarairiC'} “i-iraril-bexan--3 -ol C, 6 9 U / 3 U 20 O ! , 4 200 (3RS; 4S) -4- { 9-lsopropl 1--6--Γ {pirid Ί n- 3 -i Inet.il) -aaiino ] -9H-purrn-2-i lamino i -2-aebi 1-bexan-3-oi 1, ]. 22 3 : 3 3,5 0, 4 >2 0 0 67 6 (3R5.4R) -4" {9-Isopropl 1-6-[ ípiridin-j-ilmetil) -arrdno] -93- par ia- 2- 1lamino} -2 f Ιο :. rri a t i 1 - b e x a a - 3 - o 1 1 Λ 0, 0 24 3 1 , o 0, 1 >2 0 0 51 { 3RS', 430 --4- í 9--loopnopil-6--[ (pmldin-i-íimet: 1) -anA.no I -3H-purin-2-iianiino} -2,2-dnmooi j.-bexan- 3-cd. 21 0, 6 >200 2 3 4 f 3R; -3 -{ 9-iocprcpii-- 6-: {pirid Ί n- 3 --.i Imet.ii) --ami.no ] -9H-purin-2-.i lamino i· -o-mobi 1-pentar:-2-ol 0.3 0 1,1 11 3 f ;i 0, 4 91 (35)-3-{9-l30proprl-6-[ (pir.idir -3- ilme L i 1) -and. no 1 - 91. -pi;r i n - 2 - j. .1 ao i .1 no} - 2 -me v. j. .1 -pentan-2-oi 0,07 0. 01 4,4 1, 9 12 1 2, 3 1, 5 >2 0 0 ] 0
Tabela 2
Aorividade a n t i p r o 1 i f Θ r a t i v a i η vi 1 r o (72-3 MTT TCv.i- μΜ) )Cbr Sd Ro3oovi ti na 12 (2 53R) -3 -3-1 iCcOpropii·· 3" (pi ri aio -3·· iime til.) -amino --iòi-puri n-2 i.laiui no} "penr.o.n- 2-o]. 1,5 0, 4 í 2.335) --3 - { 9-iLoopropi.i- 6- : (pi ri aio -33- ilrre til.) -amino --93--pori n-2--1.1 ani no} -penr.an- 2--ol 5,6 '··' í (3 RS, 4 3) - i- { 9-- I sopropil -6- [ (piri din--3 -ilrneoil; --amino ] - 93-porin-3-ilamino 1-beaan-3-o'i 1.3Ri', 4 3) - 4--sopropil --6- [ (piriáin-3-ilsein.i; --asj.no) - 99-parin-2-i j.asnno! -hasan-j-oi -a , 0 (3 RS, 4 3) - 4" { 9--Ί sopropil -3- [ (piri dln-3 "j_lrner.il; --amino ; - 93-por in-2-iianino}“S-menii-dexan- 3-oi 2 8 (.3 RS, 43) - 4- { 9-Tsopropil -6- [ (piri din-3-ilmea.ii) -amino j -9H-pnrin-2-ilamino} “i-metii-hoxan-i-oi .1 J 2 (3.R5, 4 3) - 4- { 3-Tsopropil -6- [ (piri din-3-ilmer.il) -amino : -9H-pnrin-2-iianino ] ~2( 2-dimetii-hexan-3-ol 2 (3RS, 45) -4- í 3-Isopropil-c- [ (piridin-3-ilnienii) -amino} -3fI-purin-2-i lanar o p-1 f 2-dimetal -nexan--3-ol 15 14 í 3R) - 3- i 9-1sopropil-6- [ (piridin- 3-iimetii) -amino J -9H-purin-2-ilamine j - 9 -no t i 1 - por:· t a r - 2 - o i_ a?· 2,1 (35) -3- í 9-1 sopropil -6 - [ (piridin- 3-iirnetii) -amino J -9H-purin-2-ilamino J - 9 --me t i ]. - per; t a n -· 2 - o 1 4,0 0 r 9
Linhas celniarea laisorais insanas: A549, HTs9, Saos-l
Tabela 3 rinha celular 72-h ItTT ICíci (ub) Código Tipo Fonte Roscovi tina (2535)-3-9-íIsopropil-c-i. (plrrciin-3-1 l.meti 1) -amlno]-9R-purin-2-1 lamino}-pentan-2-oi (2535) - 3- { 9-lsopropii-6-i. (pl rici.in-ο-Ι l.meti 1) --amlnoj-9R> purin-2-1 lamino} --ponran-2-ol (35)-3-(9-Isopropil-r-L ípiri oii.n--3 -i Im.e L i ].) -amaino ] -9H-purin-2-1 lamino }-2 --mec rr-pentan-2-oi A 5 4 9 Aderente Carcinoma pulmonar 9,7 1 7,1 2,7 1 0,4 0.9 1 0,7 3,6 1 0,2 Hela Aderente A cie no ca. o c r noma cervical 16,9 t 7 , S 2,9 1 0,2 1,4 1 0,2 4 , 7 r. 0 , 3 7:1-2 9 A ierente Aciono carcinoma colorectãl 10,2 1 2,7 2,3 1 0.6 1,1 1 0.2 2,3 1 0,9 MCF7 Λ' ierente Aciono carcinoma mamári o 6,7 1 0,6. 1,6 1 0,2 0,7 1 0,1 2,3 1 0,3 SãO3"2 Aderente Osteossarcens io,7 ± 4,2 2,3 + 0,1 7,2 + 0,2 3 r 3 t (;. 3 CCRF- C-EM SunpeneSe leucemia linloolásiica Opudh 1 d - 1 ± 0 , 8 n «O · n«o» >’·»> Eí J_· - ò 0 Suspensão leucemia p r om j. ο 'ί o o i. t1 c a •aguda 12 , 3 1 7 , 7 n · d.. n · d.. 3,0 a 0,0 K-362 Suspensão ί os com i.a mieiógena cronro3 4 0,414.4 n, c c η , c ί. 34 i 1,2 Aeciia (linhas celulares o 3 n c θ r -i o e r a s) 16, j t 4 0,2 2-3 ± i), 3 1, 7 1 0 , 3 4,0 i 0,2 7[3 2 7 Ne mal Nibroelsate prepuoio > 2 0 10, 2 r 0, 6 5,9 1 0,3 17,3 1 0,7 imo o Ne mal hlcroolo.s Lo pulmonar Embrionário o 2 0 > 2 0 > IQ r 20 SI 3 8 Norma Ί Fíbrotlaato pulmonar letal > 2 0 77,2 r ],2 6,1 1 0,3 > 2 0 Mádia (linhas celulares normais) > 2 0 >10 o ' 0 > 10
Tabela 4 Νθη!β Cloa P % Fárinaco após 3 0 rom. d.e 1 acabaçao ITil cr OS 5 00:3 ] 5: % COIiipO SÍO resiarie / % roscovitina resdsnde B: ICPo CDK2 Γ 0 3 C 0 V11 i r r 3: / IC50 CDK2 composto C: ICso oitotox, V O o CO 01 1 ; Viã / ICM oitotox, Corriposto A r B t\ x C Roscovitina 3 3 1,0 LO 1, 0 1,0 1,0 (2535; -3-3-í 3 aopropil -0-[ (piridir.- 3--1 Ivrietil) -amieo i -9H-puri.n-2-iiaxiino J -pentan-2-oi r f b 0 l-l 2,7 :—1 3.0 3,1 (23:35) -3- ( 3-Isopropii- 6-; (pirio.in- 3-1 Ivrietil) araino i -ÒH-perlri-l-ilaiínno J -pentan-2-oi z f b O / 2,0 3,7 19 ! (355;45)-4-{9-laopropll- 6-( (pirldir.- 3- -1 Ivrietil) -amleo i -9n-parivi-2-11 ani i n o j - ri e x a:i - 3 - o i 3 . 0 '? Ί 0,3 i. ]. '? r' (355.95)-4-{9-laopropil-a-[ (piridin- 3-1 Ivrietil ) aaileo i -9H-parivi-2-11 am i η o j - h e x ar, - 3 - o i 3 . 0 2,2 1,0 2. 1 2 ,· 1 (3RS'45)-4~{9-I ó: 0 p Γ 0 p i 1 “ C “ [ (prrídin- 3--1 laiet.i ij asiloo i -9n-parí:'j-2-iiaromo} -2 f 2-ciiioetiI-5exao--3-ol 0 1,3 0 3 0. 8 0, 4 1,2 (3R) -3- { 9-1sopropii-6··(pirídin·· 3--ilroeiil) -οοιίοο; -95-piirin-Ó-ilaioiao J -2-ioei.il -pentsa-2-o 1 2, 9 Δ d f 2,1 ! - (35)-3-{9-IiOpropil-6- !’ (p.ir idi n- 3--rlroeoil) -anlooi -95-ρΐΊΓΊ η-2-.i Ιοοοίοο 1 -2-'oei.il -penisa-2 -o i 2 - 9 - 1,1 2,9 3,2 3,9
Lisboa, 7 de Março de 2007

Claims (34)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula I
    1 ou u: m seu sal farma ceuticamen te i ice itável, e ;m que um d e R'L e R'; é meti lo, etílo ou : isopropilo, e o ou tro é H; R3 e ; Fc são ^ i. .'"•j i. um i ndep >encl· ent ;emente F i, alq- u .i I o C- -Ct· Γ) âO ramí f icad o, ou 3, T. I. .1.0 } θ ΘΠ1 Q r peio me no s, um de r p p Ps : é dif p ppp ;te i de H; R5 é um grupo alqu: -lo Ci" ‘ p — ami: ficado ou n ão ram; lf ÍC( ado ou um. c irupo cia I.oalquilo C !"'Cs, Cc ida um. o.c s qu a i s ρ 0 c ie ser opci onalmente subst ítu ido com um ou ma is grr ;pos OH f R"r : R 1 p ^ p h q ^ t sao C ei CÍci um j lo de penden temer; te H, Cl cl 1 o géneo, no2, OH, OMe, CR, Kl i2f coc li, C :ONH; r ( ou SOiNFR. Comp osto de acordo com a rela r :m. que um d .e R1 e R2 é et 11o ou i sopre ipílo, íti ,‘“N out ro é H;
  2. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, em que R5 é isopropilo ou ciclopentilo.
  3. 4. Composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que R6, R7, R8 e R9 são todos H.
  4. 5. Composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que um de R1 e R2 é etilo e o outro é H.
  5. 6. Composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que R3 e R4 são cada um independentemente H, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, s-butilo, t-butilo ou fenilo.
  6. 7. Composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que R3 e R4 são cada um independentemente H, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, s-butilo ou t-butilo.
  7. 8. Composto de acordo com a reivindicação 7, em que R3 e R4 são cada um independentemente H, metilo, etilo, isopropilo ou t-butilo.
  8. 9. Composto de acordo com qualquer reivindicação anterior seleccionado a partir do seguinte: (2S3R) -3- {9 -Isopropil-6-[(piridin-3-ilm ietil) -aminol -9R- purin-2-ilamino} -pentan-2-ol; ( 0 po. ς\ _q_ ,r q -Isopropil-6- [ (piridin-3-ilin ietil) -amino] -9H- purin-2-ilamino 1 -penran-2-or; (3RS, 4.R) -4- {9-Isoprocii-6-[(piridin-3-i Imetil)-amino 1 - 9H-purin-2-ilami no }-bexan-3-0.1; (3RS,4S) -4- í 9-Isoprooil-6-[(pírídin-3-i 9H-purin-2”ilamino}-hexan-3-ol; {3RS, 4.R} -4- { 9-Isopropii-6- [ (piridin-3-iimetil) -amino] -9 H - pu r i n - 2 - i 1 a ta ι η o} - 2 - me t i I - h e x a n - 3 - o 1; í3RSf4S)-4-{9-Isopropii-6-[(piritíin~3~ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-met i i-hexan-3-o1; {3RS,45)-4-{9-Isopropil-6-[(piridín-3-ilmetil)-amino]-Sfí-purin-2-iiamino}-2,2-dimetiI-hexan-3-oi; (3RS,45)-4-{9-Isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9R-purin-2-iiamino}-2,2-dimetil-hexan-3-ol; (35)-3-{9-Isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol; (35) -3-{ 9-Isopropil-6- [ (piridin-3-ilmetil) -amino] ···9H-puri n ··· 2 ··· i 1 am i η o} - 2 - me t i 1 ··· pent a n ··· 2 ··· o 1; (35)-3-{9-Isopropii-6-í(piridin-3-iimetil)-amino]-9H-pitrin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol; e i3R)”3”(9~isopropíi“6“[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol,
  9. 10. Composto de acordo com qualquer reivindicação anterior seleccionado a partir do seguinte: [2S3R)-3-{9-Isopropii-6-[(piridin-3-iimetil)-amino]-9fí-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol; (2K35)-3-{9-Isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9R-pu rin-2-ilamino}-pentan-2-o1; (3RS,4R)-4-{9-IsopropiI-6-[(piridin-3-iImetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-hexan-3-ol; (3RSf45}-4-{9-Isopropii-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-hexan-3-oi; (3RS,4S)-4-{9-Isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9K-purín-2-ilamino}-2, 2-dimetil-hexan-3-ol; {3R)-3-{9-Isopropil-6-[(piridin-3-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ílamíno]-2-metil-pentan-2-ol; e {9 - Isopropil- 6-[(piridi n--3-- ilmeti1 )-amino]- Sn- i.in o}-2-meti 1- pentan-2-c 1. acordo com qualquer reivindicação anterior que é a partir do seguinte: {9 -isopropil- 6-[(piridi n-3·-- ilmeti1 ) -aminol - 9H- dn o}-2-meti1- pentan-2-o 1; j 9 -isopropil- 6-[(piridi n-3- ilmetil ) -amino]- Q fJ — in o}-2-metil- pentan-2-o i; 3- {9-isopropi 1-6-[ípiri din- 3-iimet il)-amino ] -9K- iin o}-pentan-2 -ol; 3- {9-isopropi 1-6-[ípiri dín- 3-ilmet il)-amino ] -9H- in o}-pentan-2 "0.1; Θ r isómero ópt :ico de 3- { >/ " -Ί sopropi 1-6-[(pir idin- mi no]-9H~puri n-2-iiamin o} -p entan-2 «01 ,
  10. 12. Composição farmacêutica que compreende um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, misturado com um diluente, excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável, ou uma mistura dos mesmos.
  11. 13. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, na preparação de um medicamento para tratamento de um distúrbio proliferativo.
  12. 14. Utilização de acordo com a reivindicação 13, em que o referido distúrbio proliferativo é cancro ou leucemia.
  13. 15. Utilização de acordo com a reivindicação 13, em que o distúrbio proliferativo é glomerulonefrite, artrite reumatóide, psoriase ou distúrbio pulmonar crónico obstrutivo.
  14. 16. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, na preparação de um medicamento para tratamento de um distúrbio virai.
  15. 17. Utilização de acordo com a reivindicação 16, em que o distúrbio virai é seleccionado a partir de citomegalovirus humano (HCMV), virus herpes simplex tipo 1 (HSV-1), virus da imunodeficiência humana tipo 1 (VIH-1), e virus da varicela zoster (VZV).
  16. 18. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, na preparação de um medicamento para tratamento de um distúrbio do SNC.
  17. 19. Utilização de acordo com a reivindicação 18, em que o distúrbio do SNC é a doença de Alzheimer ou distúrbio bipolar.
  18. 20. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, na preparação de um medicamento para tratamento da alopecia.
  19. 21. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, na preparação de um medicamento para tratamento de um acidente vascular cerebral.
  20. 22. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 21, em que o composto é administrado numa quantidade suficiente para inibir, pelo menos, uma enzima de PLK.
  21. 23. Utilização de acordo com a reivindicação 22, em que a enzima de PLK é PLK1.
  22. 24. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 21, em que o composto é administrado numa quantidade suficiente para inibir, pelo menos, uma enzima de CDK.
  23. 25. Utilização de acordo com a reivindicação 24, em que a enzima de CDK é CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK6, CDK7, CDK8 e/ou CDK9.
  24. 26. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 21, em que o composto é administrado numa quantidade suficiente para inibir a cinase aurora.
  25. 27. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, na preparação de um medicamento para tratamento da diabetes.
  26. 28. Utilização de acordo com a reivindicação 27, em que a diabetes é Diabetes tipo II.
  27. 29. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 ou 28, em que o composto é administrado numa quantidade suficiente para inibir GSK.
  28. 30. Utilização de acordo com a reivindicação 29, em que o composto é administrado numa quantidade suficiente para inibir GSK3p.
  29. 31. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, como um agente antimitótico.
  30. 32. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, para tratamento de um distúrbio neurodegenerativo. 33. 34. 35. 36. 37. 38. 39. Utilização de acordo com a reivindicação 32 para tratamento da apoptose neuronal. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, para inibir uma cinase de proteina. Utilização de acordo com a reivindicação 34, em que a referida cinase de proteína é uma cinase dependente de ciclina. Utilização de acordo com a reivindicação 35, em que a referida cinase dependente de ciclina é CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK6, CDK7, CDK8 e/ou CDK9. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, em qualquer ensaio para identificar mais compostos candidatos capazes de inibirem uma ou mais de uma cinase dependente de ciclina, GSK e uma enzima de PLK. Utilização de acordo com reivindicação 37, em que o referido ensaio é um ensaio de ligação competitiva. Processo para preparação de um composto de fórmula I como definido na reivindicação 1, compreendendo o referido processo fazer reagir um composto de fórmula V com um composto de fórmula VI
    v I era ue RJ ão como definidos na reivind o 1 e X é Cl ou
  31. 40. Processo de acordo com a reivindicação 39, em que o referido composto de fórmula V é preparado através dos seguintes passos:
    (ri) alquiiação do referido composto de fórmula IV com um halogeneto de alquilo, κ'-'-Χ', para formar um composto de fórmula V.
  32. 41. Processo de acordo com a reivindicação 39, em que o referido composto de fórmula VI é preparado através dos seguintes passos: R1 R2 R1 R2 R1 Ri2 R1 R2 HO, •PG VIII 'N' Η H IX PG HO, "N 5^3/4 H X .PG HO 3/4 nh2 XI R1 SR2 °YXN'P<3 pj3/4 H XII rJ nr2 HO.
    ,PG R4 R3 H XIII R1 R2 HO
    NH2 R4 R3 VI oxidação de um composto de fórmula. VIII, em que PG é um grupo protector, para formar ura coraposto de fórmula IX; (ri) alquilação do referido composto de fórmula IX para formar um composto de fórmula X; (iii) remoção do grupo protector PG do referido composto de fórmula X; ou pr; (ií) oxidação de um composto de fórmula VIII, em que PG é um grupo protector, para formar ura composto de fórmula IX; alquilação do referido coraposto de fórmula IX par; formar um composto de fórmula X; (iii) oxidação do referido composto de fórmula X para formar um composto de fórmula XII; (iv) alquiiaçâo do referido composto de fórmula XII para formar um composto de fórmula XIII; (V) remoção do grupo protector PG do referido composto de fórmula XIII.
  33. 42. Processo de acordo com a reivindicação 39, em que R3 = R4, e o referido composto de fórmula VI é preparado através de um processo que compreende os passos de: R1 R2 R1 s.R2 R' R2 R0V^N'pe' — HOxVPG' —- hoxNh2 0 PG' r3 V PG’ R3 R4 XVI xvn VI (i) conversão de um composto de fórmula XVI, em que PG' é um grupo protector e R é um grupo alquilo, num composto de fórmula XVII; (ii) remoção dos grupos protectores PG' do referido composto de fórmula XVII para formar um composto de fórmula VI. 43. Processo de acordo com a reivindicação 42, em que o referido composto de fórmula XVI é convertido num composto de fórmula XVII através de uma dupla reacção de Grignard.
  34. 44. Processo de acordo com a reivindicação 42 ou 43, em que o referido composto de fórmula VI é preparado através dos seguintes passos:
    R1 R2 HO.
    NH2 XIV R1 R2 MeO
    NH2.HCI XV R^R2 HO. PG' N r3 V PG' XVII R1 R2
    nh2 R3 *R4 VI HO. fazer reagir um. composto de fórmula XIV com S0C12 e MeOH para formar um composto de fórmula XV; (ii) proteger o grupo amino do referido composto de fórmula XV para formar um composto de fórmula XVIa; (iii) fazer reagir o referido composto de fórmula XVIa com um reagente de Grignard R3X", em. que R’ é como definido na reivindicação 1 e X" é um halogeneto, para formar um composto de fórmula XVII; íiv) remover os grupos protectores PG' do referido composto de fórmula XVII para formar o referido composto de fórmula VI. Lisboa, 7 de Março de 2007
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