ES2281977T3 - Proteinas de estreptococo del grupo b y su utilizacion. - Google Patents

Proteinas de estreptococo del grupo b y su utilizacion. Download PDF

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Rebecca Kerry Wilson
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Abstract

Péptido que comprende la secuencia de aminoácidos identificada en la presente memoria como SEC. ID. nº 23, o un homólogo o fragmento del mismo, en el que dicho homólogo o fragmento es capaz de producir anticuerpos con afinidad para dicho péptido, para su utilización terapéutica.

Description

Proteínas de estreptococo del grupo B y su utilización.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a la identificación de genes y proteínas bacterianos y a su utilización. Más particularmente, se refiere a su utilización en terapia, para inmunización y en el cribado de fármacos.
Antecedentes de la invención
El estreptococo del grupo B (GBS), conocido también como Streptococcus agalactiae, es el agente etiológico de varias enfermedades. En particular, GBS produce:
Infección neonatal de comienzo precoz
Esta infección normalmente comienza en el útero y produce septicemia grave y neumonía en niños, que es letal si no se trata e incluso con tratamiento está asociada a una tasa de mortalidad entre el 20 y el 30%.
Infección neonatal de comienzo tardío
Esta infección se produce en el periodo breve después del nacimiento hasta aproximadamente los 3 meses de edad. Produce una septicemia, que está complicada por meningitis en el 90% de los casos. Otras infecciones focales también se producen incluyendo la osteomielitis, la artritis séptica, abscesos y endoftalmia.
Infecciones del adulto
Éstas parecen ser cada vez más frecuentes y se producen más frecuentemente en mujeres que acaban de dar a luz un bebé, los ancianos y los inmunodeficientes. Se caracterizan por la septicemia y las infecciones focales incluyendo la osteomielitis, la artritis séptica, los abscesos y la endoftalmia.
Infecciones de las vías urinarias
GBS es una causa de las infecciones de las vías urinarias y en el embarazo representa aproximadamente el 10% de todas las infecciones.
Infecciones veterinarias
GBS produce mastitis crónica en las vacas. Ésta, a su vez, conduce a la reducción de la producción de leche y por consiguiente es de una importancia económica considerable.
Las infecciones por GBS pueden tratarse con antibióticos. Sin embargo, se prefiere la inmunización. Por consiguiente es deseable desarrollar un inmunógeno que pueda utilizarse en una vacuna terapéuticamente eficaz.
Sumario de la invención
La presente invención se basa en la identificación de un gen en GBS, y también se refiere asimismo a organismos, al producto del que puede localizarse en la superficie externa del organismo y por consiguiente puede utilizarse como diana en inmunoterapia.
Según un aspecto de la invención, un péptido comprende la secuencia de aminoácidos identificada en la presente memoria como SEC. ID. nº 23 o un homólogo o fragmento funcional del mismo para su utilización terapéutica, por ejemplo, cuando se aisla.
La expresión "fragmentos funcionales" se utiliza en la presente memoria para definir una parte del gen o péptido que conserva la actividad del gen o péptido total. Por ejemplo, un fragmento funcional del péptido puede utilizarse como determinante antigénico, útil en una vacuna o en la producción de anticuerpos.
Un fragmento del gen puede utilizarse para codificar el péptido activo. Alternativamente, el fragmento del gen puede tener utilidad en terapia génica, dirigiendo el gen natural in vivo para ejercer un efecto terapéutico.
Un péptido según la presente invención puede comprender la secuencia de aminoácidos identificada en la presente memoria como SEC. ID. nº 23.
Debido a la posición extracelular o en la superficie de la célula, el péptido de la presente invención puede ser un candidato adecuado para la producción de una vacuna terapéuticamente eficaz contra GBS. La expresión "terapéuticamente eficaz" se desea que incluya el efecto profiláctico de las vacunas. Por ejemplo, una vacuna puede comprender un péptido según la invención, o los medios para su expresión, para el tratamiento de la infección. La vacuna puede ser administrada a hembras antes o durante el embarazo para proteger a la madre y al recién nacido contra la infección por GBS.
Según otro aspecto de la invención, el péptido o gen puede utilizarse para el cribado de fármacos potenciales antimicrobianos o para la detección de su virulencia.
Un aspecto adicional de la presente invención es la utilización de cualquiera de los productos identificados en la presente memoria, para el tratamiento o prevención de una enfermedad asociada con la infección por una cepa de estreptococos del grupo B.
Si bien la proteína se ha descrito para su utilización en el tratamiento de pacientes, las utilizaciones veterinarias de los productos de la invención se consideran también que están dentro del alcance de la presente invención. En particular, los péptidos o las vacunas pueden utilizarse en el tratamiento de la mastitis crónica, especialmente en vacas.
Descripción de la invención
La presente invención se describe con relación a la cepa M732 de estreptococos del grupo B. Sin embargo, todas las cepas de GBS y muchas otras cepas bacterianas es probable que incluyan péptidos o proteínas relacionados que tienen homología de secuencia de aminoácidos con el péptido de M732. Los organismos que contienen probablemente los péptidos incluyen, pero no se limitan a, S. pneumoniae, S. pyogenes, S. suis, S. milleri, estreptococos y enterococos del grupo C y del grupo G. Pueden desarrollarse vacunas para cada una de éstos de la misma manera que la descrita para GBS.
Preferentemente, los péptidos que pueden ser útiles para la producción de vacunas tienen más del 40% de similitud de secuencia con el péptido identificado en la presente memoria. Más preferentemente, los péptidos presentan más del 60% de similitud de secuencia. Aún más preferentemente, los péptidos presentan más del 80% de similitud de secuencia, p. ej. 95% de similitud.
Una vez caracterizado un gen según la invención, es posible utilizar la secuencia génica para crear homologías en otros microorganismos. De este modo es posible determinar si otros microorganismos tienen productos similares en la superficie externa. La secuencia de homologías puede crearse investigando en las bases de datos existentes, p. ej. EMBL o Genbank.
Los péptidos o proteínas según la invención pueden purificarse y aislarse por métodos conocidos en la materia. En particular una vez identificada la secuencia del gen, será posible utilizar técnicas recombinantes para expresar el gen en un hospedador adecuado. Los fragmentos y homólogos activos pueden identificarse y pueden ser útiles en terapia. Por ejemplo, los péptidos o sus fragmentos activos pueden ser utilizados como determinantes antigénicos en una vacuna, para provocar una respuesta inmunitaria. También pueden utilizarse en la preparación de anticuerpos, para la inmunización pasiva o en aplicaciones para diagnóstico. Los anticuerpos adecuados incluyen anticuerpos monoclonales, o fragmentos de los mismos, incluyendo los fragmentos fv de una sola cadena. Los métodos para la preparación de anticuerpos resultarán evidentes para los expertos en la materia.
La preparación de vacunas basadas en microorganismos atenuados es conocida por los expertos en la materia. Las composiciones de vacunas pueden formularse con portadores o adyuvantes adecuados, p. ej., alúmina, según se necesite o se desee, y utilizarse en terapia, para proporcionar la inmunización eficaz contra los estreptococos del grupo B u otros microorganismos relacionados. La preparación de formulaciones 
\hbox{de vacuna resultará evidente  para el experto.}
Más generalmente, y como es bien conocido por los expertos en la materia, una cantidad adecuada de un componente activo de la invención puede seleccionarse, para su utilización terapéutica, como pueden seleccionarse portadores o excipientes adecuados y vías de administración. Estos factores se seleccionarán o determinarán según criterios conocidos tales como la naturaleza/gravedad de la enfermedad que se va a tratar, el tipo de salud de cada paciente, etc.
Los productos de la presente invención fueron identificados de la manera siguiente:
Se preparó un banco de genes parcial de ADN cromosómico (cepa M732) de GBS utilizando los vectores plásmido pFW-phoA1, pFW-phoA2 y pFW-phoA3 (Podbielski, A. et al. 1996. Gene 177:137-147). Estos plásmidos poseen un marcador constitutivo con resistencia al antibiótico espectinomicina adeniltransferasa, que proporciona un alto nivel de resistencia a la espectinomicina y por consiguiente se seleccionan fácilmente. Además, estos vectores contienen un gen phoA de Escherichia coli truncado (no principal) para la fosfatasa alcalina. Estos tres vectores se diferencian solamente con respecto al marco de lectura en el que existe el gen phoA no principal, en comparación con una secuencia de la enzima de restricción BamHI en el marco corriente arriba. Debido a que este gen phoA de E. coli truncado carece de la secuencia principal apropiada para la exportación de esta enzima a través de la membrana bacteriana, la actividad de la fosfatasa alcalina extracelular está ausente cuando estos plásmidos se propagan en un mutante de phoA de E. coli (p. ej. cepa DH5\alpha). El sustrato de fosfatasa alcalina cromógeno, XP (5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato), no introduce células bacterianas intactas y por consiguiente solamente puede detectarse la actividad de la fosfatasa exportada o asociada a la superficie. Cuando la actividad de la fosfatasa alcalina exportada o asociada a la superficie está presente, el sustrato XP cromógeno se escinde para proporcionar un pigmento azul y las colonias bacterianas correspondientes pueden identificarse por su color azul.
El plásmido ADN se digirió hasta la terminación con BamHI y se desfosforiló utilizando fosfatasa alcalina de camarón. El ADN genómico de GBS se digirió parcialmente con Sau3AI, se fraccionó el tamaño en un gradiente de sacarosa y los fragmentos <1 kb de tamaño se ligaron en los vectores pFW-phoA preparados. La cepa DH5\alpha de E. coli se seleccionó como hospedador de clonación ya que carece del gen funcional phoA. Se seleccionaron los plásmidos recombinantes en agar-agar Luria que contiene 100 \mug/ml de espectinomicina y 40 \mug/ml del sustrato cromógeno XP. Los plásmidos que albergan transformantes de E. coli que contienen ADN de la inserción de GBS que complementa la secuencia señal de exportación del gen phoA no principal se identificaron por el color azul de las colonias. Aproximadamente 30.000 plásmidos recombinantes diferentes que contienen el ADN con la inserción de GBS se cribaron de esta manera y los plásmidos recombinantes 83, que complementaban el phoA no principal, se seleccionaron para un estudio adicional.
A partir de estos experimentos, se seleccionaron varios clones conteniendo cada uno un plásmido que contiene un gen (o parte del mismo), que complementaba el phoA no principal.
Una vez identificado el gen en cada clon es posible entonces obtener la secuencia génica completa, de la manera siguiente.
Utilizando el fragmento del gen identificado y secuenciado, se diseñaron cebadores de oligonucleótido para el secuenciado del ADN genómico. Estos cebadores se diseñaron con el fin de secuenciar en una dirección "hacia fuera" de la secuencia obtenida. Una vez leída, se comprobó la secuencia obtenida para comprobar si los terminales 5' y 3' del gen se habían alcanzado. La presencia de estas propiedades se identificó comprobando contra secuencias homólogas, y para el extremo 5' la presencia de un codón de iniciación AUG (o equivalente aceptado) precedido por una secuencia de consenso de Shine-Dalgarno, y para el extremo 3', la presencia de un codón de terminación (interrupción) de la traducción.
En la identificación del gen completo, se diseñaron cebadores para la ampliación del producto completo. Los cebadores utilizados incluían puntos de reconocimiento de la enzima de restricción (NcoI en el extremo 5' y Eco0109I en el extremo 3') para permitir la clonación subsiguiente del producto en el sistema de expresión de lactococos utilizado.
Se realizó la PCR utilizando los cebadores, y se clonaron los productos en un vector de clonación PCR 2.1 (Invitrogen). Después de la confirmación de la presencia del fragmento clonado, el ADN se escindió utilizando las enzimas de restricción NcoI y Eco0109I.
El vector en el que se insertó este fragmento era una versión modificada de pNZ8048 (Kuipers, O. P. et al. (1998) J. Biotech. 64: 15-21). Este vector, que contiene un origen lactocócico de replicación, un marcador de resistencia a cloranfenicol, un activador de nisina inducible y un punto de multiclonación fue alterado por la sustitución del punto de multiclonación por dos etiquetas 10X His, flanqueadas en la mayor parte del extremo 5 con un punto NcoI, se dividió en el medio con un punto de multiclonación (incluyendo un punto Eco0109I) y un codón de interrupción (terminación) en el extremo 3' de las etiquetas His.
Se insertó el gen de interés de manera que una etiqueta 10X His estaba en la posición 3' en relación a la zona de codificación. Después de la transformación del plásmido recombinante en L. lactis (cepa NZ9000 - Kuipers, O. P. et al. (1998) supra), se compuso un cultivo líquido de 400 ml y se produjo la traducción de la proteína mediante la adición de nisina al cultivo. Después de una incubación de 2 horas, se recogieron las células y se lisaron moliendo con bolas. El lisado resultante se aclaró por centrifugación, a continuación se pasó sobre una columna de afinidad de metal (Talon, Clontech). Se lavó la columna repetidamente antes de que las proteínas unidas se eluyeran con imidazol.
Para identificar las fracciones que contienen la proteína recombinante activada por His, se analizó una alícuota de cada fracción por SDS-PAGE, transferencia Western y se sondó con anticuerpos anti-His.
La proteína recombinante obtenida se utilizó a continuación para inmunizar conejos blancos de Nueva Zelanda, recogiéndose los sueros preinmunitarios antes de la inmunización. Después de un refuerzo, se sacrificaron los conejos y se recogieron los sueros. Estos sueros se utilizaron en las transferencias Western, ELISA y modelos de protección animal.
Utilizando los sueros obtenidos en los estudios animales, se realizaron estudios de inmunosorción.
Se cultivaron estreptococos del grupo B en 20 ml de caldo de cultivo Todd Hewitt (THB) durante 8 horas, se recogieron y se volvieron a poner en suspensión en 5 ml de PBS. Alícuotas de 50 \mul de éste se utilizaron para recubrir los pocillos en una placa de 96 pocillos (Nunc Immuno-Sorb). Ésta se dejó a 4ºC durante la noche para permitir la absorbancia de las bacterias en la placa. Se lavaron las placas dos veces con PBS, se bloquearon a continuación con BSA al 3% en PBS durante 1 h a 37ºC. Se lavaron de nuevo las placas. Se realizaron diluciones en serie 10 veces de los sueros en PBS y se añadieron 50 \mul de estas diluciones a los pocillos de la placa, por duplicado. Se cubrió la placa y se incubó durante 1 h a 37ºC. Se lavó la placa, se añadieron a continuación a cada pocillo 50 \mul de anticuerpo secundario conjugado con fosfatasa alcalina anticonejo a una concentración de 1:5.000. Después de la incubación a 37ºC durante una hora, se lavó de nuevo la placa. Se añadieron 50 \mul de sustrato (PNPP) a cada pocillo, y se dejó proceder la reacción durante 30 min. antes de leer la adsorbancia a 405 nm.
Se realizaron también estudios de protección animal para probar la eficacia de la protección en los conejos inmunizados.
Se cultivó M732 de GBS en THB hasta alcanzar la fase media-log, aproximadamente 5 horas. Se hizo el recuento de las células en una cámara de recuento, y se diluyeron las bacterias hasta proporcionar una concentración de 2\times10^{7} bacterias por ml en los sueros pre-inmunitarios o de la prueba. Se inyectaron 50 \mul de esto por vía intraperitoneal en ratones de 0 a 1 día de vida. Se observó la supervivencia de los ratones durante 48 horas.
El Ejemplo siguiente ilustra la invención.
Ejemplo 1
Se seleccionó un clon que contenía un plásmido denominado pho3-1. Este plásmido contenía un gen (o parte del mismo), que complementaba el phoA no principal. El nucleótido y las secuencias de aminoácidos deducidas del gen se presentan en las SEC. ID. nº 22 y nº 23.
Se realizó una comparación de la secuencia de aminoácidos de pho3-1.
Los homólogos del producto del gen pho3-1 de GBS pueden identificarse en Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Bacillus subtilis (yutD) y Enterococcus faecalis. Los homólogos de S. pyogenes, S. pneumoniae y E. faecalis se identificaron a partir de los datos de la secuencia genómica y no estaban disponibles anotaciones en cuanto a la identidad del gen o de los productos génicos. En B. subtilis, la función del producto génico yutD es desconocida. Puede advertirse sin embargo, que el gen yutD está situado en el cromosoma de B. subtilis en una zona que contiene genes implicados en la síntesis de la pared celular. El hecho de que esta secuencia de ADN complemente el gen phoA no principal sugiere que este producto génico está situado fuera de la célula.
<110> Microscience Limited
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<120> Proteínas de estreptococo del grupo B y su utilización
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<213> Estreptococo del grupo B
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\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(216)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
5
6 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 72
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
7 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 705
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(705)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
8
9
10 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 234
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
11
12 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 594
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(594)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
13
14 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 197
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
15
16 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1217
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(570)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (679)..(945)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
17
18
19 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 190
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
20
21 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 89
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
22
23 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 378
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(378)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
24 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 125
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
25 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 705
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (118)..(705)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
26
27 
\vskip1.000000\baselineskip
28 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 195
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
29 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 367
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(366)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
30 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 122
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
31 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 570
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(570)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
\vskip1.000000\baselineskip
32
33 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 189
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 19
34 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 978
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(978)
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 20
35
36 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 325
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 21
\vskip1.000000\baselineskip
37
38
39 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 579
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(579)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 22
\vskip1.000000\baselineskip
40
41 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 192
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 23
\vskip1.000000\baselineskip
42
43 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 609
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(609)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 24
\vskip1.000000\baselineskip
44
45 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 202
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 25
\vskip1.000000\baselineskip
46
47 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 357
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(357)
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 26
\vskip1.000000\baselineskip
48 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 118
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 27
\vskip1.000000\baselineskip
49
50 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1191
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(1191)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 28
\vskip1.000000\baselineskip
51
52
53 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 29
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 396
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 29
\vskip1.000000\baselineskip
54
55
56 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1230
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(1230)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 30
\vskip1.000000\baselineskip
57
58
59 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 409
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 31
\vskip1.000000\baselineskip
60
61
62 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 100
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(99)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 32
\vskip1.000000\baselineskip
63 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 33
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Met Asn Lys Ile Thr Thr Leu Ser Thr Ile Ala Leu Thr Leu Met Leu}
\sac{Cys Val Gly Cys Ser Ala Asn Lys Asp Asn Gln Lys Thr Lys Thr Glu}
\sac{Asp}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 34
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 654
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(654)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 34
\vskip1.000000\baselineskip
64
65 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 217
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Estreptococo del grupo B
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 35
66

Claims (9)

1. Péptido que comprende la secuencia de aminoácidos identificada en la presente memoria como SEC. ID. nº 23, o un homólogo o fragmento del mismo, en el que dicho homólogo o fragmento es capaz de producir anticuerpos con afinidad para dicho péptido, para su utilización terapéutica.
2. Péptido según la reivindicación 1, que comprende la secuencia de aminoácidos identificada en la presente memoria como SEC. ID. nº 23.
3. Polinucleótido que codifica un péptido según la reivindicación 1 ó 2, para su utilización terapéutica.
4. Vacuna que comprende un péptido según la reivindicación 1 ó 2.
5. Utilización de un producto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para el cribado de fármacos potenciales o para la detección de virulencia.
6. Utilización de un producto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para la preparación de un medicamento destinado a su utilización en el tratamiento o la prevención de la infección por un microorganismo estreptocócico del Grupo B.
7. Utilización según la reivindicación 6, en la que la infección es una infección focal.
8. Utilización según la reivindicación 6, en la que la infección es una infección de las vías urinarias.
9. Anticuerpo producido contra un péptido según la reivindicación 1 ó 2.
ES99962422T 1998-12-22 1999-12-22 Proteinas de estreptococo del grupo b y su utilizacion. Expired - Lifetime ES2281977T3 (es)

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