ES2282780T3 - Metodo para el diagnostico de la fibrosis hepatica. - Google Patents
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Abstract
Un método para la detección de la presencia y/o gravedad de una hepatopatía en un paciente que comprende a) medición del TIMP-1 (inhibidor tisular de metaloproteinasa I) en una muestra obtenida de un paciente b) medición de A2M (alfa-2-macroglobulina) en dicha muestra c) medición de PLT (número de plaquetas en sangre) en dicha muestra d) medición de PI (índice de protrombina) en dicha muestra e) medición opcional o bien determinación de al menos un parámetro adicional seleccionado del grupo formado por urea y GGT (gama-glutamiltranspeptidasa) en dicha muestra f) medición opcional de al menos un parámetro bioquímico o clínico adicional en dicha muestra g) diagnóstico de la presencia y/o gravedad de una enfermedad hepática basado en la presencia de los niveles medidos de TIMP-1, A2M, PLT, PI y de los parámetros medidos según las etapas e) y f).
Description
Método para el diagnóstico de la fibrosis
hepática.
La presente invención se refiere a los campos de
la hepatología y de la fibrosis hepática. En particular hace
referencia a un grupo de marcadores serológicos que se pueden
utilizar para diagnosticar la fibrosis hepática, utilizados
especialmente para diagnosticar la fibrosis hepática debida a la
infección crónica por hepatitis C. Estos marcadores se pueden usar
para controlar el tratamiento terapéutico de la fibrosis
hepática.
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La hepatopatía fibrótica se encuentra
clasificada como la octava causa más frecuente de mortalidad, a la
que se atribuyen 1,3 millones de muertes al año (Murray y Lopez,
1997, Lancet 349, 1269-1276). Los mecanismos
celulares de la fibrosis son complejos. Como respuesta a la lesión
hepática, por ejemplo, causada por la infección crónica del virus de
la hepatitis C (VHC), la infección por el virus de la hepatitis B
(VHB), la esteatosis hepática o hepatopatía alcohólica, la
hepatopatía farmacógena o medicamentosa o la cirrosis biliar
idiopática, células estrelladas hepáticas normalmente quiescentes
son activadas dando lugar a miofibroblastos. Estas células producen
unas proteínas de matriz extracelular y liberan inhibidores
titulares de las metaloproteinasas que se enlazan e inactivan las
metaloproteinasas responsables de la degradación cicatricial. Como
resultado de todo ello, la fibrosis y la cicatriz se pueden acumular
a través de una producción elevada de tejido y de proteínas como el
colágeno y una degradación reducida de estos compuestos, de manera
que la función del hígado se ve alterada (McHutchinson 2004, CME
Newsletter Tx Reporter Gastroenterology, 2-4).
Mientras que la fibrosis hepática es un proceso
reversible que da lugar a la acumulación de matriz extracelular, la
cirrosis hepática es un proceso irreversible que se caracteriza por
unas bandas gruesas de matriz que rodean por completo el parénquima
para formar nódulos. Si no se trata, la fibrosis hepática puede
llevar a una cirrosis, posiblemente cáncer. Por esta razón, un
diagnóstico a tiempo y preciso de la fibrosis hepática es esencial
para lograr un tratamiento médico efectivo.
La biopsia hepática habitual todavía se
considera como el tratamiento de referencia para la evaluación de la
fibrosis y de la inflamación. La biopsia hepática se recomienda para
clasificar y estadificar la enfermedad, confirmar el diagnóstico y
establecer un valor de referencia para documentar la mejoría o la
progresión de la enfermedad, ayudar a determinar el pronóstico y es
necesaria para la terapia (McHutchinson, ver antes; para revisión
ver Gebo y cols.2002 Hepatology 36, 161-172).
Existen numerosos sistemas de clasificación
histológica que se han utilizado para semicuantificar el grado de
fibrosis hepática y de inflamación en pacientes con hepatitis C
crónica. Uno de los sistemas de clasificación que más se utiliza es
el sistema METAVIR (Bedossa y cols., 1994, Hepatology, 20,
15-20). METAVIR clasifica la fibrosis hepática en 5
fases o estadios que oscilan desde el F0 al F4. El F0 equivale a
fibrosis nula, F1 corresponde a fibrosis leve (fibrosis portal sin
tabiques). La fibrosis moderada a seria se clasifica como F2 a F4
(F2: poco tabique, F3: numerosos tabiques sin cirrosis), estadio F4
corresponde al último estadio de la cirrosis. La fibrosis se
considera clínicamente significativa a partir de F>=2.
Pero existen algunos inconvenientes en la
aplicación de la biopsia hepática para diagnosticar y estadificar la
fibrosis. La fibrosis hepática está sujeta a un error de muestreo
de manera que la parte pequeña de la muestra podría no reflejar la
situación real en todo el hígado. Debido a ello no es un marcador
preciso del proceso dinámico de degradación constante. Además los
patólogos a menudo no están de acuerdo en sus lecturas de muestras
histológicas donde se produce una variabilidad entre observadores y
del propio observador en un 10 hasta un 20% de las biopsias
(Cadranel y cols., 2000, Hepatology 32,
477-481).
La biopsia hepática es un procedimiento doloroso
y traumático para el paciente. También está asociado a un riesgo de
hemorragia y otras complicaciones después del muestreo. Además se
trata de un procedimiento caro debido a las complicaciones previstas
que siguen a la hospitalización del paciente.
La fibrosis hepática es la complicación
principal de la infección crónica por VHC que lleva al desarrollo de
una cirrosis y de una enfermedad hepática descompensada. Por lo
tanto para el tratamiento eficaz de estos pacientes es esencial
realizar una investigación dirigida que examine el desarrollo y la
progresión de la fibrosis. La evaluación de la fibrosis progresiva
se efectuará de la mejor manera con ensayos no traumáticos capaces
de discriminar las fases intermedias de la fibrosis. Se han
publicado una serie de marcadores individuales y de algoritmos de un
grupo de marcadores, pero en la actualidad no se dispone de un
biomarcador individual potente o de unas referencias de
biomarcadores que permitan una predicción fiable de una fibrosis
(Exactitud del diagnóstico > 80%). En el 2002 se promovieron
investigaciones adicionales en el desarrollo de medidas dinámicas no
agresivas de la fibrosis hepática por parte de los National
Institutes of Health Consensus Development Conference. En
particular, los estudios acerca de las alternativas a la biopsia
hepática deberían aportar detalles suficientes sobre los métodos de
biopsia (tamaño medio de las piezas de biopsia; grupo o cuadro
calificativo, bien caracterizado histológicamente) para convencer a
los lectores de la exactitud del patrón de referencia. La biopsia
hepática depende considerablemente de los criterios de rendimiento
optimizados y puede conducir a una clasificación errónea de las
fases histológicas debidas a la variabilidad entre observadores y a
unos tamaños de muestra demasiado pequeños (<10 mm).
Ha habido una búsqueda amplia de marcadores
serológicos o bioquímicos que reflejen los procesos fibróticos en la
enfermedad del hígado y que puedan servir como un sustituto de la
biopsia hepática. En los últimos años se han investigado un par de
marcadores bioquímicos y serológicos no traumáticos o mínimamente
agresivos, que ayuden a diagnosticar las enfermedades hepáticas. En
particular, se han utilizado combinaciones de marcadores para
categorizar pacientes de acuerdo con su fase o grado de
fibrosis.
La US 6.631.330 revela el uso de una combinación
de al menos 4 marcadores bioquímicos seleccionados del grupo formado
por la \alpha-2-macroglobulina,
aspartatoaminotransferasa,
\gamma-glutamiltranspeptidasa,
\gamma-globulina, bilirrubina total, albúmina,
\alpha_{1}-globulina,
\alpha2-globulina, haptoglobina,
\beta-globulina, apoA1, IL-10,
TGF-\beta1, apoA2 y ApoB. Los valores obtenidos de
4 de estos marcadores se combinan matemáticamente para determinar la
presencia de la fibrosis hepática. Con este grupo de marcadores se
pueden obtener una exactitud diagnóstica de un 80%.
La solicitud de patente internacional WO
2003/073822 describe un método para diagnosticar la presencia o
gravedad de la fibrosis hepática en un paciente. Este método utiliza
la combinación de al menos tres marcadores que son el
\alpha-2-macroglobulina, el ácido
hialurónico y el inhibidor tisular de la metaloproteinasa 1
(TIMP-1). Con este método se puede obtener una
exactitud diagnóstica de un 80% (Mc Hutchinson, 2004, ver
antes).
Existe la necesidad de desarrollar un método no
traumático o mínimamente agresivo para conseguir una exactitud
superior en el diagnóstico a la hora de determinar la fibrosis
hepática y clasificar y discriminar entre las diferentes fases de
fibrosis de un modo más fidedigno que el que se conoce en la
actualidad, de manera que sea posible el control del avance de la
fibrosis y su respuesta al tratamiento. Además dicho método debería
ser adecuado para pruebas en serie en analizadores automáticos.
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El problema se resuelve mediante un método
conforme a la presente invención. El método para la detección de la
presencia y/o gravedad de una enfermedad hepática en un paciente
comprende las etapas siguientes:
- a)
- medición del TIMP-1 (inhibidor tisular de metaloproteinasa I) en una muestra obtenida de un paciente
- b)
- medición de A2M (alfa-2-macroglobulina) en dicha muestra
- c)
- medición de PLT (número de plaquetas en sangre) en dicha muestra
- d)
- medición de PI (índice de protrombina) en dicha muestra
- e)
- medición opcional o bien determinación de al menos un parámetro adicional seleccionado del grupo formado por urea y GGT (gama-glutamiltranspeptidasa) en dicha muestra
- f)
- medición opcional de al menos un parámetro bioquímico o clínico adicional en dicha muestra
- g)
- diagnóstico de la presencia y/o gravedad de una enfermedad hepática basado en la presencia de los niveles medidos de TIMP-1, A2M, PLT, PI y de los parámetros medidos según las etapas e) y f).
La presente invención permite una diferenciación
segura entre la fibrosis F0/F1 y las fases F2/F3/F4. Además se puede
llevar a cabo un control terapéutico como un control del tratamiento
médico de las enfermedades hepáticas siguiendo el método de la
invención.
El método de la presente invención está
altamente correlacionado con las fases Metavir bien caracterizadas
de la fibrosis hepática. Una ventaja especial del método de la
presente invención en comparación con los métodos convencionales es
el uso de un grupo calificador para minimizar errores de mala
clasificación de observación patológica y de los modelos
estadísticos.
El método de la invención comprende un método no
agresivo íntimamente correlacionado con la gravedad de la fibrosis
tal como ésta viene determinada por varios métodos: biopsia del
hígado y métodos adicionales como la determinación del área de
fibrosis.
El método de la presente invención se basa en un
grupo estadísticamente relevante de muestras de pacientes con una
fibrosis hepática bien caracterizada que abarca todo el campo de
fases Metavir y de muestras de individuos sin fibrosis hepática
debida a hallazgos histológicos (puntuación Metavir:0).Los criterios
de selección iniciales de las muestras es la puntuación Metavir.
Esta referencia viene confirmada en una doble evaluación y de forma
optimizada ya que utiliza muestras con tamaños superiores a 15
mm.
El método de la invención actual permite una
predicción segura de la fibrosis con una exactitud en el diagnóstico
(ED) de al menos un 85%, preferiblemente de al menos un 87%. Puesto
que incluso el estándar de referencia no es un patrón o una
referencia de la fibrosis hepática con respecto a la clasificación
errónea opcional de fases de fibrosis y conduce además a dolor y a
riesgos en la salud del paciente, el método de la presente invención
representa una alternativa a la biopsia.
El método permite la investigación del
desarrollo y del avance de la fibrosis permitiendo un tratamiento
eficaz de los pacientes con VHC crónico. El control de la enfermedad
de los pacientes con VHC crónico puede ser realizado en un breve
intervalo de tiempo en comparación con la biopsia. El método permite
controlar el éxito de la terapia antifibrótica.
El método permite también la investigación del
desarrollo y del avance de la fibrosis en los individuos con una
lesión hepática crónica. Este es un trastorno relativamente
frecuente con unos síntomas mínimos, incluso con un riesgo a largo
plazo de morbididad y mortalidad significativas, que se define
patológicamente por una necrosis hepática que avanza y una
inflamación en el hígado, a menudo acompañada por una fibrosis. El
VHC es la forma más frecuente de lesión hepática crónica. El método
se puede aplicar a otras formas de lesión hepática crónica:
esteatohepatitis alcohólica (EHA), enfermedad del hígado graso
alcohólico (EHGA), esteatohepatitis no alcohólica (EHNA) o bien
enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA). Los métodos de la
invención se pueden utilizar para controlar la gravedad de la EHNA y
la EHGNA. Se pueden utilizar para diagnosticar la fibrosis hepática
en un individuo con hepatitis vírica como el virus de la hepatitis
A, B, C o D o bien el virus de inmunodeficiencia humana (VIH),
hepatitis crónica persistente o crónica activa, enfermedad hepática
autoinmunitaria, como la hepatitis autoinmunitaria y la enfermedad
hepática inducida por fármacos; la cirrosis biliar primaria,
colangitis esclerosante primaria, atresia biliar, enfermedad del
hígado resultante del tratamiento médico o de una enfermedad del
hígado congénita. La invención puede ser utilizada para controlar el
tratamiento con un fármaco con el riesgo de una enfermedad
hepática.
hepática.
De acuerdo con la presente invención las
combinaciones preferidas de los parámetros son
TIMP-1, A2M, PLT, PI también llamada SNIFF 4c,
siendo SNIFF la abreviación francesa de store
non-invasif de fibrose du foie; en inglés: nivel no
agresivo de fibrosis hepática) con una exactitud del diagnóstico del
84%; TIMP-1, A2M, PLT, PI, urea (SNIFF 5a ) con una
exactitud del diagnóstico del 84%; y TIMP-1, A2M,
PLT, PI, urea, GGT (SNIFF 6b) con una exactitud del diagnóstico del
87,4%. Estas combinaciones preferidas se pueden ver también en la
tabla 3.
En el sentido de la presente invención, los
términos específicos y las expresiones se deberían entender del modo
siguiente:
Exactitud del diagnóstico (ED) es la exactitud
de la prueba en sí. Esto significa el porcentaje de todas las
pruebas que son realmente positivas o realmente negativas. Cuanto
mayor es la exactitud del diagnóstico más seguros son los resultados
de la prueba. La ED se calcula como la suma de los verdaderos
positivos y de los verdaderos negativos dividida por el número total
de resultados de las muestras y este valor viene influido por la
prevalencia de fibrosis en la población analizada.
El valor de corte es la concentración aritmética
calculada de un biomarcador individual o de una combinación de
varios biomarcadores para la discriminación de un estado sano o
enfermo. En lo que se refiere al valor de corte de la invención se
trata de un valor de 0,5. Si este valor es superior o igual a 0,5
(>=0,5) esto significa que se alcanza la fase Metavir F2 para
distinguir entre fibrosis leve o nula (fases Metavir F0 o F1) y la
fibrosis clínicamente significativa FCS (fases Metavir F2, F3,
F4).
El valor predictivo positivo (VPP) es el
porcentaje de pruebas positivas que son verdaderos positivos.
El valor predictivo negativo (VPN) equivale al
porcentaje de pruebas negativas que son verdaderos negativos.
La puntuación o el valor equivalen a una
combinación aritmética de varios biomarcadores asociados a la
fibrosis. En particular, el valor que aquí se utiliza tiene un
intervalo entre 0 (fibrosis mínima) y 1 (FCS: fibrosis clínicamente
significativa).
AUROC equivale al área bajo la curva de
características del operador receptor. En estas curvas, la
sensibilidad se representa gráficamente frente al recíproco de la
especificidad. Un área bajo la curva ROC de 1.00 indicaría un ideal
de la sensibilidad del 100% y una especificidad del 100%. Cuanto
mayor la pendiente al comienzo de la curva mejor es la relación
entre sensibilidad y especificidad de una prueba.
La sensibilidad es la probabilidad de un
resultado positivo de la prueba en un paciente con una enfermedad o
con un factor de riesgo o en otro estado de salud.
La especificidad es la probabilidad de un
resultado de la prueba negativo en un paciente que no tiene la
enfermedad.
TIMP-1 (inhibidor tisular de la
metaloproteinasa I) es una sialoglucoproteína del aminoácido 184 con
un peso molecular de 28,5 kDA (ver por ejemplo, Murphy y cols.,
Biochem J. 1981, 195, 167-170) que inhibe las
metaloproteinasas como la colagenasa intersticial
MMP-1 o la estromelisina o gelatinasa B. En la
comprensión de la presente invención, el término
TIMP-1 abarca una proteína con una homología
estructural significativa respecto al TIMP-1 humano,
que inhibe la actividad proteolítica de las metaloproteinasas. La
presencia de TIMP-1 humano se puede detectar usando
anticuerpos que detecten específicamente epítopos de
TIMP-1. El TIMP-1 puede determinarse
también por detección de ácidos nucleicos afines como el mARN
correspondiente.
La A2M
(\alpha-2-macroglobulina) es una
proteína conservada, altamente abundante en plasma que sirve como
una proteína de enlace de la proteasa para purificar las proteasas
activas de los fluidos tisulares. La A2M no inactiva la actividad
catalítica de una proteasa pero actúa mediante la compresión física
de la proteasa de referencia doblándose alrededor de la proteasa.
Una proteasa comprimida por la A2M se encuentra impedida
estéricamente para escindirse en proteínas sustrato. En el sentido
de la invención, la A2M puede ser detectada mediante una valoración
inmunológica utilizando anticuerpos específicos según los formatos
de prueba conocidos por un experto en la materia. La A2M puede ser
determinada también mediante la detección de ácidos nucleicos afines
como el mARN correspondiente.
El PLT (número de plaquetas en sangre) es el
número de plaquetas en sangre y se determina mediante el recuento
de plaquetas usando un contador disponible en el comercio.
El PI (índice de protrombina) es útil para
detectar las interferencias en el sistema de coagulación y se puede
determinar añadiendo tromboplastina a la muestra de plasma y
midiendo el tiempo de coagulación en segundos (llamado
Quick-time). Este valor se correlaciona con un
cociente normalizado internacional que contiene un factor de
corrección que tiene en cuenta la sensibilidad de la tromboplastina
usada.
De acuerdo con la invención, se pueden
determinar parámetros bioquímicos o clínicos adicionales. El
parámetro bioquímico adicional puede ser cualquier parámetro
asociado directa o indirectamente con el metabolismo o la
estructura del hígado como, por ejemplo, la ferritina, hialuronato,
AST (aspartato-aminotransferasa),
MMP-2 (matriz metaloproteinasa-2),
ALT (alanita-aminotransferasa), PIIINP (propéptido
N-terminal del procolágeno tipo III), bilirrubina,
haptoglobina, ApoA1. Se pueden determinar también la hepcidina o la
adiponectina.
La hepcidina es una proteína hepática,
identificada originalmente como un péptido antimicrobiano
circulante. Se trata del jugador central en la comunicación de los
almacenes de hierro del cuerpo con respecto a las células de
absorción intestinal. La adiponectina es secretada por los
adipocitas y circula en unas concentraciones sistémicas
relativamente elevadas para influir en la función metabólica. Los
niveles reducidos de adiponectina sérica indican un riesgo elevado
de enfermedades, por ejemplo, gravedad de la enfermedad del hígado
graso no alcohólico (NAFLD) o esteatohepatitis no alcohólica
(NASH).
Se pueden determinar parámetros clínicos
adicionales como la edad, el sexo, el peso, los hábitos
nutricionales del paciente.
La urea, GGT
(gama-glutamiltransferasa), ferritina, hialuronato,
AST (aspartato-aminotransferasa) y ALT
(alanino-aminotransferasa), ferritina,
MMP-2, PIIINP bilirrubina, heptoglobina, ApoA1,
hepcidina y adiponectina son determinadas mediante estuches de
prueba disponibles en el comercio por medio de métodos inmunológicos
o fotométricos conocidos por el experto en el tema. En caso de que
sea posible se usarán técnicas de hibridación para la detección de
ácidos nucleicos que sean específicos para un análito o parámetro
(como el mARN correspondiente) para la determinación de un
parámetro.
La invención utiliza la determinación de una
pluralidad de parámetros. Por lo tanto la detección de esos
parámetros bioquímicos y serológicos de la invención que puede ser
llevada a cabo en formatos de prueba usando una fase sólida se
lleva a cabo preferiblemente en sistemas de prueba miniaturizados a
base de matrices tal como se describe en US 2003/0017616 o bien WO
99/67643. Estos sistemas de prueba tiene múltiples áreas de prueba
definidas en el espacio y cada una de ellas se puede utilizar para
detectar un análito o parámetro específico único. Por consiguiente,
en un única serie analítica se pueden detectar una pluralidad de
análitos.
El término "áreas o zonas de prueba
definidas" sobre una fase sólida equivale a decir que las áreas
de prueba comprenden unas regiones definidas de la fase sólida que
se encuentran preferiblemente separadas en el espacio de otras áreas
de prueba por unas regiones inertes. Las áreas de prueba definidas
tienen preferiblemente un diámetro de 10 \mum a 1 cm y en
particular de 10 \mum a 5 mm. Las áreas de prueba miniaturizadas
con un diámetro de 10 \mum a 2 mm son las más preferidas. Se
prefieren las fases sólidas con varias áreas de prueba a las que se
conoce también por sistemas matriciales. Dichos sistemas matriciales
se han descrito, por ejemplo, en Ekins y Chu (Clin. Chem. 37, 1995,
1955-1967) y en las patentes americanas números
5.432.099, 5.516.635 y 5.126.276. Tal como se ha mencionado antes,
una ventaja de los sistemas matriciales es que se pueden realizar
varias determinaciones de análito y de control simultáneamente en
una muestra. El uso de áreas de control para detectar el enlace no
específico y/o muestras que interfieren puede mejorar
considerablemente la veracidad de los resultados especialmente con
sistemas matriciales miniaturizados.
En la invención actual, la detección de
TIMP-1 y A2M y posiblemente de otros parámetros
bioquímicos idóneos para los métodos de detección que aplican una
fase sólida podría realizarse, por ejemplo, simultáneamente usando
dicho sistema matricial.
\newpage
De acuerdo con la invención, la fase sólida es
cualquier soporte convencional para los métodos de detección,
preferiblemente un soporte no poroso, por ejemplo, un soporte con
una superficie de plástico, vidrio, metal o bien óxido metálico. Los
soportes porosos como las tiras de ensayo son también adecuados. Las
regiones separadas en el espacio (zonas de prueba) están situadas
sobre este soporte. Los receptores de fase sólida inmovilizados se
aplican a estas zonas de prueba. Los receptores de fase sólida son
inmovilizados por los métodos conocidos, por ejemplo, por un enlace
de adsorción directo, por un enlace covalente o por un acoplamiento
a través de pares de enlace de elevada afinidad, por ejemplo,
estreptavidina (o avidina)/biotina, antígeno/anticuerpo o
azúcar/lectina. La presencia o/y la cantidad de análito en una
muestra puede ser determinada por el enlace específico de
componentes del medio de detección, por ejemplo, del análito que se
va a determinar o de un análito análogo al receptor de la
fase
sólida.
sólida.
La detección de parámetros sujetos a ensayos de
fase sólida puede ser realizada naturalmente en sistemas
convencionales, no miniaturizados como los pocillos, tubos o
microesferas.
La detección del análito y en caso de necesidad
la detección de la presencia de reacciones de interferencia se
consigue en el método conforme a la invención de forma conocida
usando los grupos de marcadores adecuados, por ejemplo, los grupos
de marcadores fluorescentes. Alternativamente a las fases sólidas
adecuadas es posible detectar también la interacción de componentes
del medio de detección con las áreas de prueba y de control
opcionales determinando el grosor de capa de cada una de las áreas,
por ejemplo, mediante una espectroscopia de resonancia de
plasmón.
Con sistemas matriciales en los cuales se
detectan varios análitos de una muestra al mismo tiempo, es
preferible utilizar un grupo de marcadores universal que permita una
detección simultánea de varios analitos diferentes respecto a
diferentes áreas de prueba. Un ejemplo de dichos grupos de
marcadores universales son los grupos de marcadores que llevar un
receptor que puede interaccionar de forma específica con un receptor
complementario en un reactivo de prueba, por ejemplo, un receptor
soluble para un análito que va a ser determinado o bien para un
análito análogo (como anticuerpo/antígeno o estreptavidina/biotina
etc.).
El término muestra equivale a una muestra
biológica que contiene o bien presumiblemente contiene al menos uno
de los marcadores conforme a la invención. Por ejemplo, se puede
utilizar como muestra sangre, suero, plasma, orina, saliva, líquido
sinovial o tejido hepático. Las muestras líquidas pueden diluirse
antes del análisis si es preciso.
Para obtener un resultado que ayude a
diagnosticar la enfermedad se utilizan algoritmos matemáticos
conocidos por el experto. Los datos obtenidos se combinarán y
evaluarán mediante métodos estadísticos como la regresión binaria
logística, dando lugar a unas puntuaciones.
La figura 1 muestra datos brutos como los
medidos en 120 pacientes que padecen de una infección por hepatitis
C.
La figura 2 muestra la distribución de una de
las puntuaciones preferidas (SNIFF 6b) y una combinación actual por
Fibrotest en función del grado de Metavir F. Puede observarse que el
método de la presente invención tiene menos pacientes mal
clasificados en las fases Metavir F3 y F4 en comparación con el
método Fibrotest. En particular, la SNIFF 6b clasifica
erróneamente sólo una muestra de fase F3 como negativa (por debajo
de la puntuación 0,5) mientras que el Fibrotest clasifica
erróneamente varias muestras.
Con más detalle la puntuación del Fibrotest
combina A2M, haptoglobina, ApoA1, bilirrubina, GGT, edad y sexo de
un paciente. Estos siete parámetros de Fibrotest alcanzan una
exactitud de diagnóstico de aproximadamente un 80% mientras que la
puntuación del SNIFF 6b alcanza una exactitud superior al 87% (ver
también la tabla 3).
La figura 3 muestra unas curvas ROC para grupos
de fibrosis significativos desde un punto de vista clínico de
acuerdo con el método de la invención (SNIFF 6b) en comparación con
el método de US 6.631.330 (Fibrotest 7). La curva ROC para la
invención da lugar a una mayor pendiente y un valor AUROC superior
al del método actual: AUROC 0,920 \pm 0,036 (SNIFF 6b) frente a
0,857\pm0,026 (Fibrotest 7).
La invención se ilustra además en el ejemplo
siguiente:
Se utilizaban estuches de prueba disponibles en
el comercio y todas las pruebas se realizaban de acuerdo con las
instrucciones dadas por los fabricantes que se indican a
continuación.
La figura 1 muestra los datos brutos tal como se
han medido en muestras de 120 pacientes que padecen de una infección
por hepatitis C. Para obtener los datos se utilizaban los estuches
de prueba indicados.
En la tabla 2, se mencionan la exactitud
diagnóstica y los valores AUROC. Puede verse que cada marcador
individual tiene una exactitud inferior al 80%.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
La tabla 3 muestra una comparación de ED/AUROC
con los métodos actuales. Se observaba que los métodos de la
presente invención tenían una exactitud de diagnóstico (ED) superior
de la fibrosis significativa desde un punto de vista clínico por
regresión logística binaria en comparación con los métodos de US
6.631.330 y WO2003/073822.
| n var | es el número de variables analizadas de los parámetros, nPts equivale al número de pacientes analizados. |
Claims (3)
1. Un método para la detección de la presencia
y/o gravedad de una hepatopatía en un paciente que comprende
- a)
- medición del TIMP-1 (inhibidor tisular de metaloproteinasa I) en una muestra obtenida de un paciente
- b)
- medición de A2M (alfa-2-macroglobulina) en dicha muestra
- c)
- medición de PLT (número de plaquetas en sangre) en dicha muestra
- d)
- medición de PI (índice de protrombina) en dicha muestra
- e)
- medición opcional o bien determinación de al menos un parámetro adicional seleccionado del grupo formado por urea y GGT (gama-glutamiltranspeptidasa) en dicha muestra
- f)
- medición opcional de al menos un parámetro bioquímico o clínico adicional en dicha muestra
- g)
- diagnóstico de la presencia y/o gravedad de una enfermedad hepática basado en la presencia de los niveles medidos de TIMP-1, A2M, PLT, PI y de los parámetros medidos según las etapas e) y f).
2. Método conforme a la reivindicación 1
utilizado par controlar el tratamiento terapéutico de la fibrosis
hepática
3. Método conforme a la reivindicación 1 para
clasificar la fibrosis hepática.
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014177747A1 (es) * | 2013-04-30 | 2014-11-06 | Fundación Pública Andaluza Progreso Y Salud | Método de obtención de datos útiles para el diagnóstico diferencial de la fibrosis hepática |
| WO2015047072A1 (es) * | 2013-09-24 | 2015-04-02 | Universidad Nacional Autónoma de México | Arreglo múltiple de anticuerpos específicos para el pronóstico, detección y vigilancia del proceso fibrogénico |
| WO2015047071A1 (es) * | 2013-09-24 | 2015-04-02 | Universidad Nacional Autónoma de México | Prueba in vitro para diagnóstico temprano y estadificación de fibrosis hepática |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100999720B1 (ko) | 2008-11-13 | 2010-12-08 | 아주대학교산학협력단 | 간 경변 진단을 위한 분석방법 |
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| KR101018960B1 (ko) | 2009-02-23 | 2011-03-02 | 아주대학교산학협력단 | 유의성있는 간섬유화 진단을 위한 분석 방법 |
| EP2401689B1 (en) * | 2009-02-26 | 2018-05-09 | Universite D'Angers | Improved diagnosis of liver fibrosis or cirrhosis |
| CN107014996A (zh) * | 2009-03-19 | 2017-08-04 | 昂热大学 | 用于评估肝纤维化进展的非侵入方法 |
| WO2010133967A1 (en) * | 2009-05-14 | 2010-11-25 | University Of Oxford | Clinical diagnosis of hepatic fibrosis using a novel panel of low abundant human plasma protein biomarkers |
| EP2327988A1 (en) | 2009-11-28 | 2011-06-01 | Assistance Publique Hôpitaux De Paris | Method for diagnosis of fibrotic diseases |
| EP2590665B1 (en) * | 2010-07-08 | 2015-09-16 | Board of Supervisors of Louisiana State University and Agricultural and Mechanical College | Adenovirus ad36 e4orf1 protein for prevention and treatment of non-alcoholic fatty liver disease |
| JP6193225B2 (ja) * | 2011-06-29 | 2017-09-06 | インナー モンゴリア フルイ メディカル サイエンス カンパニー リミテッドＩｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｆｕｒｕｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ．， Ｌｔｄ | 肝線維症検出装置および検出システム |
| CN102302358B (zh) * | 2011-06-29 | 2014-04-09 | 内蒙古福瑞医疗科技股份有限公司 | 肝纤维化检测系统 |
| CN102636642B (zh) * | 2012-04-06 | 2014-04-30 | 中国人民解放军第三0二医院 | 一种肝纤维化诊断的快速定量试纸条的制备方法 |
| EP3027115B1 (en) * | 2013-08-02 | 2023-09-06 | Echosens | Non-invasive system for calculating a human or animal, reliable, standardized and complete score |
| EP3491388B1 (en) | 2016-08-01 | 2021-09-01 | Centre Hospitalier Universitaire d'Angers | Multi-targeted fibrosis tests |
| WO2019191059A1 (en) * | 2018-03-26 | 2019-10-03 | The General Hospital Corporation | Method for objective, noninvasive staging of diffuse liver disease from ultrasound shear-wave elastography |
| CN110070942A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-07-30 | 深圳市绘云生物科技有限公司 | 一种基于梯度提升树模型的慢性肝病风险评估系统 |
| CN114550942B (zh) * | 2022-02-16 | 2023-06-30 | 四川大学华西医院 | 一种肝脏显著纤维化预测模型及构建方法 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0823558B2 (ja) * | 1984-11-27 | 1996-03-06 | オ−ジエニクス リミテツド | 検定装置 |
| GB8803000D0 (en) * | 1988-02-10 | 1988-03-09 | Ekins Roger Philip | Determination of ambient concentrations of several analytes |
| JP3097866B2 (ja) * | 1991-10-15 | 2000-10-10 | マルティライト リミティド | 標識試薬を使用した結合検定法 |
| AU7129598A (en) * | 1997-04-23 | 1998-11-13 | Instrumentation Laboratory S.P.A. | Recombinant rabbit tissue factor based prothrombin time reagent |
| DE19731465A1 (de) * | 1997-07-22 | 1999-01-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verwendung von Kontrollflächen zur Detektion von Störproben in einem Nachweisverfahren |
| DE60029302T2 (de) * | 2000-04-28 | 2007-08-09 | Bayer Ag | Diagnose von Leberfibrose mit Hilfe von Serummarkeralgorithmen |
| US7141380B2 (en) * | 2000-04-28 | 2006-11-28 | Michael Volker | Assessment of liver fibrosis scoring with serum marker algorithms |
| AU2000278128B2 (en) * | 2000-08-21 | 2006-07-20 | Assistance Publique - Hopitaux De Paris | Diagnosis method of fibrotic disease using biochemical markers |
| US6631330B1 (en) * | 2000-08-21 | 2003-10-07 | Assistance Publique-Hopitaux De Paris (Ap-Hp) | Diagnosis method of inflammatory, fibrotic or cancerous disease using biochemical markers |
| US6986995B2 (en) * | 2002-02-28 | 2006-01-17 | Prometheus Laboratories, Inc. | Methods of diagnosing liver fibrosis |
-
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2007
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014177747A1 (es) * | 2013-04-30 | 2014-11-06 | Fundación Pública Andaluza Progreso Y Salud | Método de obtención de datos útiles para el diagnóstico diferencial de la fibrosis hepática |
| WO2015047072A1 (es) * | 2013-09-24 | 2015-04-02 | Universidad Nacional Autónoma de México | Arreglo múltiple de anticuerpos específicos para el pronóstico, detección y vigilancia del proceso fibrogénico |
| WO2015047071A1 (es) * | 2013-09-24 | 2015-04-02 | Universidad Nacional Autónoma de México | Prueba in vitro para diagnóstico temprano y estadificación de fibrosis hepática |
Also Published As
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