ES2283062T3 - Metodo y aparato para determinar el contenido de un componente en una muestra de fluido. - Google Patents
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Abstract
La muestra es aspirada al interior de un sistema de análisis por inyección de flujo (FIA) que incluye una celda de difusión (20) y una celda de detección (30) dispuesta para la determinación del contenido del componente (tal como acetona). Antes de cada nueva muestra, los dos lados de la celda de difusión (20) se lavan con los fluidos portadores. Para incrementar la cadencia hasta alrededor de 250-500 muestras por hora, se establece una presión en comunicación con los conductos para el fluido portador (36, 38). El período de difusión incluye una parte principal del período de reacción, el flujo se detiene o se ralentiza durante un período de tiempo predeterminado (por ejemplo 9,4 segundos) mientras la muestra permanece la celda de difusión (20), después de lo cual la reacción entre el fluido aceptante y el componente a determinar se produce básicamente en la celda de difusión, y el flujo se controla/regula mediante válvulas de estrangulamiento de los conductos flexibles controladas por un temporizador.
Description
Método y aparato para determinar el contenido de
un componente en una muestra de fluido.
La presente invención se refiere a un método
según se describe en el preámbulo de la reivindicación 1. La
invención se refiere además a un aparato, según se describe en el
preámbulo de la reivindicación 18, para llevar a cabo el método.
Además, la invención se refiere a una celda de difusión y una celda
de medición destinadas a usarse en el aparato. La invención es útil
específicamente para la determinación del contenido de acetona en
leche.
Desde hace tiempo ha sido deseable medir el
contenido de acetona en leche para disponer de un instrumento de
detección precoz de la cetosis (una enfermedad metabólica) en las
vacas lecheras. De hecho hay métodos disponibles para tal
determinación, pero en general precisan mucho tiempo.
Peter Marstorp ha descrito en Analytica
Chimica Acta, 149 (1983) pp. 281-289, un método
como el mencionado más arriba y más específicamente un método de
inyección en flujo para la determinación de acetona en leche. Las
muestras de leche que puedan tener algún contenido de acetona se
inyectan en una corriente portadora. La acetona se separa de la
muestra de leche por difusión gaseosa a través de una membrana de
Teflón. La acetona presente en la corriente reactiva situada en el
lado aceptor de la membrana puede detectarse por espectrofotometría
o colorimetría. En la corriente reactiva la acetona
CH_{3}COCH_{3} reacciona con hidroxilamina NH_{2}OH formando
acetoxima:
(CH_{3})_{2}CO + NH_{2}OH
\rightarrow (CH_{3})_{2}C- -NOH +
H_{2}O
cambiando por tanto el equilibrio
hidroxilamonio-hidroxilamina:
\hskip4.3cmNH_{3}OH \ +
\hskip1cm\leftrightarrow
\hskip1cmNH_{2}OH + H +
El cambio de pH puede observarse con un
indicador ácido-base, p. ej. naranja de metilo. El
indicador desprotonado es amarillo y la forma ácida rosa,
absorbiendo luz de 520 nm.
Marstorp describe una instalación experimental
que incluye un analizador por inyección en flujo, que usa una
válvula de inyección del tipo de una válvula rotatoria con un solo
canal de tamaño variable de la muestra y un baño de agua
termostatizado en el que está colocado un sistema modular de
bloques, con serpentines tubulares y conectores. El módulo de
difusión del gas consiste en dos partes, cada una de la cuales tiene
una cavidad de 2 mm de ancho, 80 mm de longitud y 0,2 mm de
profundidad. Están separadas entre sí por una membrana de Teflón de
0,07 mm de espesor. La corriente portadora de la muestra se bombea a
través de una primera cavidad y la corriente reactiva a través de la
otra. Se utilizan una bomba peristáltica con ocho canales y un
colorímetro o un fotómetro de paso de flujo con un filtro de 520
nm. Para la recuperación y evaluación de los datos se usa un
ordenador. Todos los tubos son de PTFE con un diámetro interno de
0,5 mm. Después de la celda de difusión se incluye un serpentín de
30 cm para dar tiempo suficiente a la reacción entre la acetona y el
reactivo. El tamaño de la muestra es de 100 \mul. Con un caudal
unitario de 1,3 ml por minuto se obtiene un tiempo de propagación
de 2,7 segundos como tiempo aproximado de reacción de la acetona y
el cloruro hidroxilamónico. Se estima que dicho método ofrece la
posibilidad de medir hasta 100 muestras por hora, aproximadamente.
La experiencia ha indicado que la válvula de inyección podrá tratar
unas 50.000 muestras. Después resultará inservible dicha válvula y
será necesario sustituirla.
La finalidad de la presente invención es
proporcionar un método como el mencionado en el preámbulo y un
aparato de medida de un componente, y específicamente un
instrumento capaz de medir acetona, que pueda tratar más muestras
que los aparatos conocidos hasta ahora, preferentemente unas
250-500 muestras por hora, y un aparato que esté
adaptado para operar al menos ocho horas cada día de trabajo,
trabajando con un grado elevado de fiabilidad y un remanente bajo, y
que sea fácil de limpiar.
Esto se consigue con un método y un aparato de
la clase mencionada en el preámbulo, que se caracterizan por los
rasgos mencionados en la parte caracterizadora de las
reivindicaciones 1 y 18.
Las válvulas de abrazadera sobre la manguera
controladas por temporizador son fáciles de limpiar, fáciles de
controlar, muy duraderas y muy fiables. La sobrepresión, es decir la
presión de los fluidos portadores, proporciona un caudal unitario
deseado lo suficientemente elevado para que una muestra pueda
atravesar todo el aparato durante un corto periodo de p. ej. 14,4
segundos, correspondiente a 250 muestras por hora, incluyendo una
permanencia de 9,4 segundos en la celda de difusión para asegurar
que gran parte del componente a determinar se difundirá a través de
la membrana y usándose además la larga permanencia para la reacción
entre el reactivo y el componente buscado, a fin de conseguir una
detección fiable en la celda de medición de aguas abajo.
Con relación a esto, es importante que el caudal
unitario aplicado sea elevado (unos 150-160 \mul
por segundo en mangueras de 1 mm de diámetro) comparado con el
caudal unitario de 20 \mul por segundo usado normalmente en el FIA
(Flow Injection Analysis - Análisis por Inyección en
Flujo).
En primer lugar, el elevado caudal unitario
contribuye a reducir el tiempo total de paso del flujo de una
muestra por el aparato, en segundo lugar, el elevado caudal unitario
permite que el movimiento del fluido de muestra continúe durante
algún tiempo dentro de la "cámara" o del "canal" de la
celda de difusión, después de que haya sido detenido el flujo
cerrando una válvula controlada de abrazadera sobre la manguera.
El movimiento continuado del fluido de muestra
en el lado donador mejora la difusión desde el lado donador hacia el
lado aceptor del componente examinado (p. ej. acetona). De modo
similar, en el lado aceptor también se presenta un movimiento
continuado del fluido portador, siendo importante dicho movimiento
para la velocidad de difusión, así como para la velocidad de la
reacción entre el componente de difusión y el reactivo del fluido
portador del lado aceptor. De este modo pueden evitarse los
"reactores" o "espirales mezcladoras" usados normalmente
en el FIA, que inevitablemente ocasionan dispersión y por tanto un
deterioro de la sensibilidad del aparato.
Con la descripción siguiente resultarán
evidentes otras ventajas de la invención.
La Figura 1 muestra esquemáticamente un sistema
para llevar a cabo la invención.
La Figura 2A muestra un ejemplo de una
realización de una celda de medición con la forma de una cubeta de
flujo de un fotómetro para la detección del contenido de
acetona.
La Figura 2B muestra otro ejemplo de una
realización de una celda de medición con la forma de una cubeta de
flujo de un fotómetro para la detección del contenido de
acetona.
La Figura 3A muestra un diagrama de un sistema
en flujo de una realización preferida de un aparato según la
invención, que es capaz de tratar 250 muestras por hora.
La Figura 3B muestra un diagrama de un sistema
en flujo alternativo de una realización de un aparato según la
invención, que es capaz de tratar 250 muestras por hora.
La Figura 4 muestra un diagrama de un sistema en
flujo de otra realización preferida de un aparato según la
invención, que es capaz de tratar 500 muestras por hora.
La Figura 5 muestra como ejemplo un diagrama de
la función respecto al tiempo de un aparato de medición de acetona,
según la invención y según se muestra en las Figuras 3A, 3B y 4.
La Figura 6 muestra esquemáticamente un ejemplo
de un plan cronológico de apertura y cierre de las válvulas
correspondiente al diagrama de la Figura 5.
La Figura 7 muestra como ejemplo una vista
oblicua de una celda de difusión.
La Figura 8 muestra la media parte inferior de
la celda de difusión de la Figura 7.
La Figura 9 es una vista en sección de la media
parte inferior de la celda de la Figura 8 según la línea
IX-IX, y
la Figura 10 es una vista en sección de la media
parte inferior de la Figura 8 según la línea
X-X.
La Figura 11 muestra un diagrama de un sistema
en flujo de otra realización de un aparato según la invención, que
es capaz de tratar 500 muestras por hora.
En lo que sigue se explicará más ampliamente la
invención mediante ejemplos del aparato analizador. La Figura 1
muestra esquemáticamente y como ejemplo una disposición de un
sistema de un aparato analizador según la invención. Una muestra es
aspirada en un sistema en flujo, p. ej. estando dispuesto como se
muestra en la Figura 3A, 3B ó 4. El sistema en flujo incluye unos
líquidos portadores y una celda de difusión y funciona según el
principio de FIA. El componente examinado se separa en la celda de
difusión. El componente examinado es arrastrado en el lado aceptor
de la celda de difusión por un nuevo líquido portador, que también
sirve de reactivo e indicador o que incluye un reactivo y un
indicador, que permiten medir y registrar mediante una celda de
medición 30 la presencia y preferentemente la cantidad del
componente examinado. Un ordenador o módulo similar de control
proporciona el almacenamiento y proceso de los datos de la medición,
los cuales pueden almacenarse, visualizarse e imprimirse de
cualquier manera conocida que se desee. De manera conocida per
se, el mismo ordenador - o un segundo módulo similar de control
- puede estar preparado para ejecutar la temporización de las
válvulas y de la bomba peristáltica, de modo que las válvulas se
abran y se cierren p. ej. como se indica en la Figura 6. Puesto que
la implementación de un control de este tipo es muy conocida no se
explicará con mayor detalle.
Los aparatos descritos en lo que sigue están
preparados para analizar leche respecto a un posible contenido de
acetona. Las Figuras 3A, 3B y 4 muestran esquemáticamente y como
ejemplos tres disposiciones casi idénticas de sistemas en flujo de
un aparato analizador para medir acetona en leche. Todas las partes
correspondientes tienen las mismas referencias numéricas y la
siguiente explicación remite a los tres ejemplos. La Figura 3B
difiere de la Figura 3A en que muestra una disposición alternativa
de una línea de medición 24. La Figura 4 muestra un sistema en
flujo que comprende una celda doble de difusión 20. La disposición
de la Figura 3B también puede combinarse con una celda doble de
difusión 20, de modo similar al sistema en flujo mostrado en la
Figura 4.
10 es un recipiente de muestras de leche. 20 es
una celda de difusión con una membrana M. 30 es una celda de
medición, y preferentemente una celda fotométrica de medición como
se muestra en las Figuras 2A ó 2B, en la que el líquido que pasa
por la celda es iluminado con luz de 520 nm de longitud de onda. Un
detector 76 proporciona una señal eléctrica que indica la
absorbancia de la luz. Después de una calibración del aparato puede
deducirse el contenido de acetona a partir de dicha señal
eléctrica.
Los recipientes 12 y 14 se muestran como
recipientes cerrados de almacenamiento de un líquido portador o un
líquido tampón, preferentemente un tampón citrato, y un reactivo p.
ej. cloruro hidroxilamónico + un líquido indicador, estando ambos
comprimidos a 0,25 x 10^{5} Pa (0,25 bar) sobre la presión
atmosférica mediante una bomba de aire comprimido P (60) controlada
con un manómetro 16 y un regulador de presión 18. En una realización
alternativa uno o ambos recipientes de almacenamiento pueden estar
abiertos a la atmósfera y provistos de una bomba que permita
generar una sobrepresión en un pequeño recipiente a presión
conectado a un conducto del líquido portador y que pueda
proporcionar de este modo un caudal unitario deseado en el conducto
del líquido portador. Preferentemente se usa un caudal unitario de
unos 150-160 \mul por segundo. En una realización
preferida actualmente, mostrada en la Figura 11, unas bombas de
jeringa 101, 102, conectadas entre al menos dos válvulas de
abrazadera sobre la manguera W101 y V4/V8/V7 y W102 y V6/V10/V11a
respectivamente, proporcionan las presiones y los caudales
unitarios deseados. Además, en la Figura 11 está provista una
segunda toma de muestras (copa 110, pipeta 122 y válvula V33) p.
ej. de aspiración de muestras estándares para ajustar y/o calibrar
el aparato.
Una cámara 70 recibe leche procedente de la
celda de difusión 20 y reactivos procedentes de la celda de medición
30. Además, la cámara 70 recibe líquidos de lavado a través de un
conducto 28, llamado "manguera de lavado a", y estos líquidos
son dispensados desde la misma como aguas residuales a través de un
conducto 66, también llamado manguera de residuos, y de una bomba
de acción sobre la manguera (bomba peristáltica) 80. En esta
descripción, los medios de conductos son un tubo fino o una manguera
flexible, con un diámetro interno típico de 1,0 mm aproximadamente.
Preferentemente, los líquidos de lavado son los mismos que los
líquidos portadores.
En los diagramas mostrados en las Figuras
3-4, V1-V13 son válvulas, y en la
realización preferida todas las válvulas son válvulas de abrazadera
sobre la manguera, es decir, una válvula que comprende una parte de
manguera que puede comprimirse, es decir aplastarse, y cerrarse
usando una abrazadera, estando hecha dicha parte de manguera de un
material elástico deformable (p. ej. goma o plástico tal como
silicona) y que tiene gran capacidad de recuperar rápidamente su
forma original cuando cesa la presión de la abrazadera. Esto está en
contradicción con el FIA convencional que normalmente usa válvulas
rotatorias para conseguir la dosificación/dosis exacta de las
muestras.
V1 es una válvula de entrada a un conducto 42,
denominado "manguera donadora 1", del lado donador de la celda
de difusión 20. V2 está situada en la "manguera de bombeo" o
rama 34 del lado de succión de la bomba de acción sobre la manguera
80. V3 está situada en el tubo de entrada 32, también llamado
manguera de pipeta, que desemboca en una pipeta 22 que puede
bajarse hasta el recipiente de muestras 10. V4 está situada en un
conducto 36, también denominado "conducto de líquido
portador", que lleva el líquido portador del recipiente 12. V5
está situada en la "manguera de lavado a", 28. Los restos de
leche y el líquido de lavado se retiran/transfieren a través de la
"manguera de lavado a" hacia la cámara de residuos 70. V6 es
una válvula de entrada al lado aceptor de la celda de difusión 20,
es decir a la manguera aceptora 46 situada en el extremo del segundo
conducto de líquido portador 38. V7 es una válvula de entrada del
líquido de lavado al conducto 56, también denominado "manguera de
lavado b", situado en el lado donador de la celda de difusión 20.
(En la realización preferida y mostrada el líquido de lavado es el
mismo que el líquido portador y también sirve de líquido tampón).
V11 es una válvula del conducto 66, también denominado manguera de
residuos, que constituye la salida de la cámara 70. V12 es una
válvula de impulsión de la cámara y V13 es una válvula del conducto
68, y la válvula 13 normalmente está abierta a la atmósfera.
En la Figura 4 se usa una celda doble de
difusión 20 y se introducen tres válvulas extra V8, V9 y V10. La
celda de difusión puede ser una cubeta especial de difusión con dos
canales 88 a cada lado de la membrana M, preferentemente como se
muestra en las Figuras 7-10, o dos celdas separadas.
V8 es una válvula de entrada del líquido de lavado en el conducto
58, también denominado "manguera de lavado c", situado en el
lado donador de la celda de difusión 20. La válvula V8 se usa para
lavar el lado donador de la membrana, del mismo modo que la válvula
V7. V9 es una válvula de entrada a un conducto 44, también
denominado "manguera donadora 2", situado en el lado donador
de la celda de difusión 20. La válvula V9 deja la muestra en el
segundo canal 88 de la celda de difusión, del mismo modo que la
válvula V1 deja una muestra en el primer canal 88. V10 es una
válvula de entrada del lado aceptor de la celda de difusión 20, es
decir de la manguera aceptora 48 situada en el extremo del segundo
conducto de líquido portador 38. La válvula 10 deja que pase
reactivo al segundo canal 88 del lado aceptor de la membrana, del
mismo modo que la válvula V6 al primer canal 88.
La bomba de acción sobre la manguera 80 puede
aspirar líquido del recipiente de muestras 10 a través de la pipeta
22, la válvula V3, la manguera de pipeta 32, la manguera de bombeo
34, una línea de medición 24 - que contiene un volumen de unos 30
\mul - y la válvula V2. La salida de la bomba de acción sobre la
manguera está conectada a la salida A. El conducto 26, también
denominado "manguera de mezclado", está provisto de varios
nudos (knots) de mezclado 50 que permiten mezclar la muestra
de leche y el tampón citrato (usado como líquido portador) antes de
introducir la muestra en la celda de difusión 20. El diseño de los
nudos 50 supone un compromiso entre la sensibilidad y el mezclado
con el tampón. Los nudos mejoran el mezclado, pero prolongan el
tubo, de modo que empeora la sensibilidad. Muchos nudos pequeños
proporcionan buen mezclado, pero también ocasionan dispersión y
pérdida de sensibilidad. La realización actualmente preferida
incluye un solo nudo doble ("nudo de pescador") realizado en
una manguera que tiene un diámetro interno de 1 mm.
La manguera mezcladora 26 conecta la línea de
medida 24 al lado aceptor de la celda de difusión 20 mediante una
conexión en T 40 y a través de la manguera donadora 1 (42), que
tiene la válvula V1, y en la Figura 4 a través de la manguera
donadora 2 (44) que tiene la válvula V9. La muestra de leche se
introduce por la manguera mezcladora 26 en el lado donador de la
celda de difusión. El lado aceptor está en comunicación de fluido
con la celda de medición 30, p. ej. una cubeta fotométrica, por un
conducto 54.
Como puede verse en las Figuras
5-6, el tiempo preferido de transferencia de la
muestra de leche de 30 \mul a través de los nudos mezcladores 50
hasta la membrana M es de 1 segundo aproximadamente. Esto
proporciona la máxima sensibilidad bajo las condiciones presentes.
El tiempo óptimo de transferencia de la muestra, es decir, el
periodo de tiempo en el que están abiertas las válvulas V4 y V1,
depende de la longitud de la manguera que incluye los nudos y la
válvula V1 y del volumen de los canales 88 de la celda de difusión.
El tiempo de transferencia de la muestra de leche puede encontrarse
fácilmente por experimentación variando el tiempo hasta que se
obtenga un máximo del impulso de señal.
Se aplica una presión de 0,25 x 10^{5} Pa
(0,25 bares) que proporciona un caudal unitario de
150-160 \mul por segundo en los tubos utilizados,
que típicamente son mangueras con diámetro interior de unos 0,5 a 2
mm, y preferentemente 1,0 mm.
El descenso de la pipeta, la operación de la
bomba de acción sobre la manguera 80, y la apertura y el cierre de
todas las válvulas del sistema en flujo, están controlados por
temporizador, siendo controlados con un módulo de control o una
pluralidad de módulos de control con varios temporizadores, p. ej.
controlados mediante un ordenador, tal como un ordenador personal.
Además, el ordenador puede proporcionar el almacenamiento y proceso
de los datos de medición procedentes del detector fotométrico.
El diagrama de la Figura 5 muestra
esquemáticamente el funcionamiento del sistema en flujo. La mitad
superior muestra las funciones de un aparato con una sola celda de
difusión, "celda 1". En la mitad inferior de la Figura 5 se
muestran las funciones correspondientes de una posible segunda
celda, "celda 2". La Figura 6 muestra esquemáticamente cuándo
se baja la pipeta, cuándo se acciona la bomba de acción sobre la
manguera 80 y cuándo se abren y cierran las válvulas
V1-V13 en una realización preferida, descrita en lo
que sigue.
Se baja la pipeta PIP hasta la copa de muestras
10. Se abren V3 y V2 durante tres segundos mientras se acciona la
bomba de acción sobre la manguera 80. Con ello se aspiran unos 3 ml
de la muestra de leche en el sistema en flujo - a través de la
pipeta 22, la válvula V3, la manguera de pipeta 32 y la línea de
medida 24, que tiene un volumen de 30 \mul. La dimensión de la
línea de medida 24 determina el volumen de la muestra (unos 30
\mul) que se enviará a la celda de difusión 20. Realmente el
volumen no es crítico, pero debe ser substancialmente el mismo de
una muestra a otra. Además - después del mezclado con el líquido
portador/líquido tampón procedente del recipiente 12 - debe ser
suficientemente grande para que cubra la membrana de la celda de
difusión 20. La mayor parte de los 3 ml se usa para purgar los
restos de la muestra anterior de leche, que quedaron en la pipeta 22
y en la manguera de pipeta 32, a través de la manguera de bombeo 34
y la bomba de acción sobre la manguera 80.
Simultáneamente se abren las válvulas V7 y V6
durante unos dos segundos, de modo que el lado donador y el lado
aceptor de la celda de difusión 20 se lavan con tampón citrato
procedente del recipiente 12 a través del conducto de líquido
portador 36, la "manguera de lavado b" (56) y la manguera
donadora de salida 52, - y con reactivo procedente del recipiente 14
a través del conducto de líquido portador 38, la manguera aceptora
1 (46) (y en la Figura 4 la manguera aceptora 2 (48)), la manguera
aceptora de salida 54 y la manguera de salida 55 hacia la cámara 70,
respectivamente, para retirar los restos de la muestra previa. Ambos
lados de la membrana se lavan con el mismo caudal unitario y la
misma presión para evitar la deformación y por tanto el desgaste
mecánico de la fina membrana. Después se cierran las válvulas V6 y
V7.
Ahora se abren V4 y V1 durante un segundo, con
lo que el tampón citrato procedente del recipiente 12 es impulsado
por el conducto de líquido portador 36 que comprende la válvula V4
de modo que la muestra de leche de 30 \mul de la línea de medida
24 es impulsada a través de los nudos mezcladores 50 y la
"manguera donadora 1" (42) que comprende la válvula V1 y entra
en el lado donador de la celda de difusión 20. La válvula V6 del
lado aceptor se mantiene abierta durante el mismo periodo de
tiempo, con lo que el reactivo procedente del recipiente 14 es
impulsado por el conducto de líquido portador 38 (y en la Figura 4
por la manguera aceptora 46) que comprende la válvula V6 y luego a
través del conducto 54 hacia la celda de medición 30, de modo que
ambos lados de la membrana M quedarán expuestos de nuevo al mismo
caudal unitario.
Preferentemente, la bomba de acción sobre la
manguera 80 funciona durante un corto periodo de p. ej. 100 ms poco
después de la introducción de la muestra en la celda de difusión - y
al mismo tiempo que V3 y V2 permanecen abiertas. La pipeta 22 usada
para aspirar la muestra de la copa de muestras 10 está levantada
encima de la copa en esta etapa. Por consiguiente, una apertura
breve de las válvulas V3 y V2 provoca la succión de una pequeña
cantidad de aire en la pipeta (inhalación de la pipeta). Esto
proporciona buena separación entre las muestras de leche,
diminuyendo de este modo el remanente en la línea de leche. Tras la
introducción de la muestra de leche en la celda de difusión 20 se
cierran la válvula V1 (de la manguera donadora 1, (42)) y la válvula
V6 (de la manguera aceptora 46 situada en el extremo del conducto de
líquido portador 38), de manera que los líquidos se mantienen en
ambos lados de la membrana M durante un periodo predeterminado de
tiempo mientras se difunde la acetona a través de la membrana M.
Este periodo debería ser de unos 5-20 segundos y
preferentemente de unos 10 segundos. En la Figura 6 se muestra de
9,4 segundos. En las Figuras 5 y 6 se muestra la "inhalación"
inmediatamente después de que la muestra ha entrado en la celda de
difusión. No obstante, la "inhalación" puede disponerse en
cualquier momento del periodo en el que la pipeta tiene una posición
levantada.
En el período de difusión - durante el que la
muestra se mantiene en la celda de difusión 20 - el tiempo puede
usarse para lavar la línea de medida 24 de 30 \mul y la manguera
mezcladora 26 que comprende los nudos mezcladores 50, estando
abiertas durante dos segundos la válvula V4 del conducto de líquido
portador 36 y la válvula V5 de la "manguera de lavado a" (28),
de modo que el tampón citrato sea impulsado hacia arriba por la
bomba de aire comprimido 60 a través del conducto de líquido
portador 36, de la línea de medida 24 y de la manguera mezcladora 26
con nudos mezcladores 50 hasta una conexión 40 y luego salga por la
manguera de lavado a (28) hacia la cámara de residuos 70. Entonces
se cierran de nuevo las válvulas V4 y V5.
Tras el período de difusión se abren las
válvulas V4, V1 y V6 durante 1 segundo, cerrándolas de nuevo
después. Con esta operación es impulsado hacia arriba el tampón
citrato a través del conducto de líquido portador 36, de la línea
de medida 24, de la manguera mezcladora 26, de la conexión 40, de la
"manguera donadora 1" (42), que comprende la válvula V1, del
lado donador de la celda de difusión 20 y sale por la manguera
donadora de salida 52 hacia la cámara de residuos 70. De este modo
se lavan con líquido tampón los restos de leche de la válvula V1 y
del lado donador de la membrana. Al mismo tiempo la bomba de aire
comprimido 60 impulsa hacia arriba el líquido reactivo a través del
conducto de líquido portador 38 (y de la manguera aceptora 46 en la
Figura 4) que tiene la válvula V6 y luego por el lado aceptor de la
celda de difusión, haciendo de este modo que la parte de líquido
reactivo que ha quedado en la celda de difusión durante el período
de difusión, y que ha absorbido la acetona difundida, sea impulsada
hacia la celda de medida 30, p. ej. un fotómetro, en la que puede
detectarse como impulso de tensión el cambio de color del líquido
reactivo debido a la acetona, p. ej. registrarse mediante un
ordenador, y opcionalmente visualizarse en un osciloscopio (o en la
pantalla del ordenador empleado).
Se repite el mismo procedimiento con la muestra
siguiente de leche y sucesivas. En el diagrama funcional de la
Figura 5-6 puede verse que un ciclo completo de
medición tarda 14,4 segundos. Después se aspira en el sistema una
nueva muestra. Los 14,4 segundos por muestra corresponden a 250
muestras por hora.
Ha de entenderse que el tiempo se usa
óptimamente para purgar el sistema con objeto de conseguir el
elevado número de 250 muestras por hora:
1) Ya durante el período de difusión, cuando los
líquidos permanecen en la celda de difusión, se lavan la línea de
medida de 30 \mul y los nudos mezcladores.
2) Inmediatamente después del período de
difusión y durante el paso del líquido aceptor por la celda de
medición, se empieza el lavado de la celda de difusión abriendo las
válvulas V1, V4, V6/V9, V4, V10 (medida + lavado).
3) Durante la aspiración de la muestra en el
sistema en flujo se lavan ambos lados de la membrana durante unos
2-3 segundos (V7, V6).
4) El plan cronológico de apertura y cierre de
las válvulas asegura que se mantenga la misma presión en ambos lados
de la membrana para evitar la deformación y por tanto el desgaste de
la membrana.
La acetona es una molécula grande. Por
consiguiente su difusión a través de la membrana es un proceso
lento. Además, la reacción entre la acetona y el reactivo aplicado,
cloruro hidroxilamónico, tarda un tiempo considerable. En la
técnica anterior se insertaba un serpentín mezclador entre el lado
aceptor de la celda de difusión y la cubeta fotométrica para
asegurar un mezclado y una reacción completos.
Según la presente invención el tiempo de
reacción está incluido en el tiempo total de permanencia de los
líquidos en la celda de difusión. Se soslaya cualquier longitud
extra (innecesaria) de manguera, tal como un serpentín mezclador,
que pudiera producir dispersión y por tanto pérdida de
sensibilidad.
La función del aparato que tiene la celda doble
de difusión, en principio es como se describe para la celda simple,
pero las funciones de las dos celdas se desplazan entre sí de manera
ventajosa a fin de que el sistema en flujo se aplique óptimamente.
Como se muestra en los cronogramas de las Figuras 5 y 6, la
aspiración en la celda 2 comienza en la mitad del ciclo de medición
de muestras de la celda 1, es decir, 7,2 segundos después del
comienzo de la aspiración en el sistema en flujo que entra en la
celda 1.
Con la disposición de la Figura 4 puede tomarse
una nueva muestra cada 7,2 segundos, es decir, 500 muestras por
hora, manteniendo un tiempo de difusión de 9,4 segundos. El uso de
un tiempo de difusión más corto da lugar a menor sensibilidad.
Preferentemente, la celda doble de difusión
puede diseñarse como se muestra en la Figura 7, que muestra una
celda ensamblada 20, y en las Figuras 8-10 que
muestran una media parte 82 de la celda. Preferentemente, las dos
mitades tienen substancialmente la misma forma, p. ej. mantenidas
juntas entre sí con abrazaderas (no mostradas) y dos orificios
pasantes 84, 86 con tornillos o pernos (no mostrados). El
posicionamiento exacto de las dos mitades puede asegurarse con dos
trozos cortos de tubo 87 dispuestos en cada orificio taladrado 86.
Preferentemente, una de las mitades 82 está provista de accesorios
de montaje ajustado a los trozos de tubo 87 de los orificios
taladrados 86, y la otra mitad 82 está provista de accesorios de
montaje holgado en los trozos de tubo 87 de los orificios taladrados
86. De este modo se desmonta y vuelve a montarse fácilmente la celda
de difusión para sustituir la membrana M.
Los canales 88 de fluido deberían tener la menor
profundidad posible para obtener la mejor sensibilidad posible. Se
usa preferentemente una profundidad de 0,3 mm para evitar los
problemas debidos a burbujas de aire atrapadas en la celda. La
anchura de los canales puede ser de 3 mm. El criterio de elección de
las dimensiones, incluyendo la anchura, es obtener una superficie
grande de membrana, pero con pequeña deformación en caso de pequeñas
diferencias de presión. Si el volumen de fluido se hace demasiado
grande resulta más difícil el lavado de la celda de difusión,
haciendo que aumente el remanente entre las muestras. La entrada y
la salida se disponen mediante tubos finos 90, introducidos en
orificios taladrados en cada extremo de y preferentemente
perpendiculares a los canales 88 de
fluido.
fluido.
Las Figuras 2A y 2B muestran dos ejemplos de una
disposición óptica en la que la celda de medición 30 es una celda
fotométrica con un camino óptico 75 dispuesto entre una fuente
luminosa 74 y un fotodiodo que sirve de detector 76 y va seguido
por un amplificador electrónico 77. La fuente luminosa puede ser una
lámpara halógena y 73 es un filtro óptico de 520 nm. Preferentemente
se usa un LED potente de 520 nm. Tal LED puede montarse directamente
en la celda de medición 30 y elimina la necesidad de un filtro
óptico.
El fluido aceptor circula por la manguera
aceptora de salida 54 y entra en un canal de la celda de medición
30, llenando el camino óptico 75, avanzando por un canal y siguiendo
por el conducto 55 hacia la cámara de residuos 70. En la celda el
líquido aceptor es iluminado por la luz de 520 nm a lo largo del
camino óptico 75. Debido al fluido aceptor utilizado, la presencia
de acetona producirá un cambio de color que implica un aumento
medible de la absorción de la luz de 520 nm. Preferentemente debería
ser corta la longitud del recorrido desde la celda de difusión 20
por la manguera aceptora de salida 54, y el volumen de la celda de
medición debería ser lo menor posible para mantener baja la
dispersión. (En esta especificación, "Dispersión" significa el
mezclado no deseado con el fluido portador, que debilita el cambio
de color y disminuye por tanto el impulso electrónico que se
registra). Es importante una dispersión baja en relación con la
sensibilidad del aparato respecto a la acetona. Además, el camino
óptico tendrá una longitud suficiente para permitir la detección del
aumento de absorción provocado por el cambio de color del indicador.
Preferentemente se usa un camino óptico de 6 mm con un diámetro de
1 mm (p. ej. correspondiente al de los cables ópticos). Como se
muestra en la realización de la Figura 2B, la fuente luminosa 74 y/o
el camino óptico 75 pueden conectarse mediante cables ópticos 78.
De este modo puede asegurarse que exista cierta distancia entre la
cubeta 30 llena de fluido y el conjunto de circuitos electrónicos
relacionados con la detección de los impulsos de las señales que
representan la medida de la presencia de acetona. En una
realización preferida actualmente la celda de difusión y la celda
de medición están dispuestas substancialmente adyacentes entre sí.
En una realización aún más ventajosa (no mostrada) las dos celdas
pueden integrarse en una sola unidad que combina el canal aceptor 88
con el camino óptico de la celda de medición.
Esta influencia ha sido ignorada en la técnica
anterior. Sin embargo, la experiencia del presente inventor indica
que el contenido de amoniaco de las muestras de leche puede llegar a
ser cinco veces el contenido normal. En tales casos no es aceptable
que se ignore el contenido de amoniaco de la leche. El amoniaco se
difunde a través de la membrana produciendo un impulso negativo
procedente del detector y por tanto un error en la medición de la
acetona. A fin de minimizar el error del amoniaco se sugiere mezclar
la muestra con un tampón que sea capaz de combinarse con el
amoniaco, es decir, un tampón que tenga un valor de pH bajo. En el
aparato conocido, como portador en el lado donador se usa un tampón
fosfato neutro. Según la presente invención se aplica un tampón
ácido y preferentemente un tampón de ácido cítrico con un pH = 6,6
aproximadamente.
Los experimentos con el tampón antes mencionado
y nudos mezcladores 50 con muestras que tenían cinco veces el
contenido normal de amoniaco en leche, mostraron un error en la
medición de acetona de sólo 0,04 mM, lo cual es la décima parte del
límite inferior de la cetosis (0,4 mM de acetona) y esto es
aceptable. Aumentando la concentración del tampón puede asegurarse
una influencia aún menor del amoniaco.
El nuevo método y el aparato son ventajosos
especialmente porque proporcionan una velocidad de muestreo de
hasta 500 muestras/h. La aplicación de válvulas de abrazadera sobre
la manguera, en lugar de las válvulas rotatorias de inyección
usadas convencionalmente en el FIA, es esencial para conseguir la
elevada velocidad de muestreo. Las válvulas de abrazadera sobre la
manguera son muy fiables y duraderas. Además, las válvulas de
abrazadera sobre la manguera son fáciles de lavar y no tienen
volúmenes "muertos" que son difíciles de limpiar
minuciosamente.
El FIA convencional aplica bombas de acción
sobre la manguera y un flujo líquido de 1-1,3 ml por
minuto = 16-22 \mul por segundo. En la presente
invención se desea mayor caudal unitario, es decir,
150-160 \mul por segundo. Las bombas de acción
sobre la manguera - también denominadas bombas peristálticas - en
realidad no son adecuadas porque la manguera se desgasta y tiene
que sustituirse, requiriendo a menudo una nueva calibración. En
consecuencia, en el nuevo sistema en flujo se sustituyen las bombas
de acción sobre la manguera, por válvulas de abrazadera sobre la
manguera controladas por temporizador. El necesario elevado flujo de
fluido se obtiene estableciendo una sobrepresión en los conductos
y/o recipientes de los líquidos portadores, p. ej. en los
recipientes de almacenamiento. Esto puede efectuarse, por ejemplo,
como se muestra en las Figuras 3 y 4 usando una bomba de aire
comprimido P y un regulador de presión, ajustados adecuadamente a
0,25 x 10^{5} Pa (0,25 bares). El flujo líquido de la pluralidad
de conductos puede controlarse según se desee usando la combinación:
sobrepresión en los recipientes cerrados y válvulas de abrazadera
sobre la manguera controladas por temporizador. El elevado caudal
unitario se obtiene sin apenas desgaste de las mangueras.
La única bomba de acción sobre la manguera
presente en el sistema en flujo, según la invención, no es crítica.
La bomba tiene que aspirar en el sistema tanta leche como
intercambie completamente la línea 24 de leche durante el periodo
(p. ej. 3 segundos) de aspiración de las muestras.
Según la invención, el tiempo de difusión (la
difusión de acetona a través de la membrana M) y el tiempo de
reacción (la reacción de la acetona con el líquido aceptor situado
en el otro lado de la membrana), se usan junto con una "detención
de flujo", es decir, que los líquidos de ambos lados de la
membrana permanecen durante un periodo en la celda de difusión
mientras se difunde la acetona a través de la membrana. De este modo
se aumenta la sensibilidad, pero al mismo tiempo se aumenta el
tiempo de medición por muestra, disminuyendo por tanto el número de
muestras medido por hora. Según la invención, esta disminución se
compensa aumentando el caudal unitario mediante la utilización de la
sobrepresión en los recipientes de almacenamiento 12, 14. Además,
según la invención se usa una celda doble de difusión, de modo que
se duplica el número de muestras por hora. Además, el mayor caudal
unitario puede hacer que el líquido de las cámaras de la celda
continúe su movimiento durante parte del período de difusión. Esto
mejora la difusión a través de la membrana y la reacción entre la
acetona y el reactivo.
En el sistema en flujo mostrado en las Figuras 3
y 4 se evitan en lo posible las bombas de acción sobre la
mangue-
ra - también denominadas bombas peristálticas. Se usa una sola bomba peristáltica 80 para la aspiración de una muestra de leche y para descargar de la cámara 70 los residuos. Para estos fines la bomba peristáltica no es crítica porque no influye en la exactitud de la dosificación de la celda de medición o de la celda de difusión. Además, la bomba peristáltica 80 puede proporcionar la aireación de la celda de medición (cubeta fotométrica) y su limpieza después del uso.
ra - también denominadas bombas peristálticas. Se usa una sola bomba peristáltica 80 para la aspiración de una muestra de leche y para descargar de la cámara 70 los residuos. Para estos fines la bomba peristáltica no es crítica porque no influye en la exactitud de la dosificación de la celda de medición o de la celda de difusión. Además, la bomba peristáltica 80 puede proporcionar la aireación de la celda de medición (cubeta fotométrica) y su limpieza después del uso.
El nuevo método y el nuevo aparato según la
invención son ventajosos específicamente porque tienen un sistema de
lavado minucioso, que asegura una limpieza correcta entre las
muestras del sistema en flujo para minimizar el remanente. El
sistema de lavado se simplifica porque se usan válvulas de
abrazadera sobre la manguera, en vez de válvulas deslizables y
bombas peristálticas. La válvula de abrazadera sobre la manguera es
fácil de lavar/limpiar y es muy fiable, al contrario que las
válvulas deslizables que se aplican generalmente en el FIA y que se
desgastan rápidamente. El sistema opera con rapidez gracias a un
plan cronológico muy eficaz (Figura 5) y a los elevados caudales
unitarios, los cuales se obtienen fundamentalmente estableciendo una
sobrepresión en los recipientes de almacenamiento o en los
conductos de fluidos portadores que suministran los fluidos de los
recipientes de almacenamiento.
A las personas de la técnica les resultará obvio
que las realizaciones descritas pueden variarse de muchas maneras
dentro del ámbito de las reivindicaciones adjuntas. En los ejemplos
descritos se detiene el flujo durante el período de difusión. No
obstante, también se tiene en cuenta dejar que el flujo continúe muy
lentamente a través del aparato. Ha de ponerse de relieve
específicamente que la invención no se limita a la determinación de
acetona. Con el método reivindicado pueden determinarse otros
componentes químicos usando como líquido tampón y reactivo los
fluidos portadores apropiados. Tampoco se limita a líquidos. También
pueden usarse gases. Asimismo, algunos de los medios de control de
flujo que se muestran como válvulas de abrazaderas sobre la
manguera, podrían incorporarse en bombas controladas de acción sobre
la manguera.
Claims (23)
1. Un método para la determinación del contenido
de un componente de una muestra de fluido mediante Análisis por
Inyección en Flujo, en cuyo método se aspira una muestra en un
sistema en flujo, y una fracción de la muestra se introduce por
inyección en flujo en una línea de un primer fluido portador y se
hace pasar por el lado donador de una celda de difusión (20) que
comprende una membrana (M), de modo que durante un período de
difusión el componente se separa por difusión a través de la
membrana (M) hacia un lado aceptor de la membrana (M) y durante un
período de reacción reacciona con un reactivo de un segundo fluido
portador situado en el lado aceptor, y en el que el segundo fluido
portador, que incluye el reactivo y el componente difundido, fluye
hacia una celda de medición (30) preparada para la determinación del
contenido del componente, y en el que los dos lados de la celda de
difusión (20) se lavan con los fluidos portadores primero y segundo,
respectivamente,
caracterizado porque
- se establece una presión en la comunicación
con los conductos (36, 38) de los fluidos portadores que proporciona
unos caudales unitarios de los fluidos portadores primero y segundo
mayores de 100 \mul por segundo,
- durante un período predeterminado se detiene o
se reduce substancialmente el flujo mientras se llena con fluido de
muestra la celda de difusión (20), de modo que en la celda de
difusión (20) se produce substancialmente la reacción entre el
reactivo y el componente a determinar,
- y el flujo se regula mediante válvulas de
abrazadera sobre la manguera controladas por temporizador.
2. Un método según la reivindicación 1,
caracterizado porque los caudales unitarios son superiores a
100 \mul por segundo y preferentemente son superiores a 125 \mul
por segundo y más preferentemente son de unos
150-160 \mul por segundo durante la inyección de
la muestra en el lado donador de la celda de difusión (20), y
después, durante la transferencia del segundo fluido portador al
interior de la celda de medición (30) en el lado aceptor, dichos
caudales unitarios están determinados por las presiones existentes
en recipientes cerrados de almacenamiento (12, 14) de los fluidos
portadores y/o dichos caudales unitarios están determinados por una
presión y un flujo inducidos por una bomba de jeringa (101,
102).
3. Un método según la reivindicación 1 ó 2,
caracterizado porque durante un período de lavado el caudal
unitario es superior a 100 \mul por segundo y preferentemente es
superior a 125 \mul por segundo y más preferentemente es de unos
150-160 \mul por segundo, estando determinado
dicho caudal unitario por las presiones existentes en recipientes
cerrados de almacenamiento (12, 14) de los fluidos portadores y/o
una presión y un flujo inducidos por una bomba de jeringa (101,
102), en el que los recipientes cerrados de almacenamiento (12, 14)
y la bomba de jeringa (101, 102) son idénticos a los de la
reivindicación 2, si la reivindicación depende de la reivindicación
2.
4. Un método según la reivindicación 1, 2 ó 3,
caracterizado porque la presión es de unos 0,1 x 10^{5} a
0,5 x 10^{5} Pa y preferentemente 0,25 x 10^{5} Pa.
5. Un método según la reivindicación 1,
caracterizado porque los fluidos portadores primero y segundo
son un tampón y un reactivo, respectivamente.
6. Un método según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la muestra es
una muestra de leche.
7. Un método según la reivindicación 6,
caracterizado porque el componente a determinar es
acetona.
8. Un método según la reivindicación 5 ó según
cualquiera de las reivindicaciones 6 ó 7 como dependientes de la
reivindicación 5, caracterizado porque el fluido tampón
existente en el lado donador es ácido, que tiene un pH menor de 6,8
y preferentemente un pH de 6,6, para que se combine con el
amoniaco.
9. Un método según la reivindicación 7,
caracterizado porque el contenido de acetona se determina
mediante una medición fotométrica, especialmente una medición a 520
nm.
10. Un método según la reivindicación 1,
caracterizado porque la celda de medición (30) y ambos lados
de la celda de difusión (20) se lavan mediante dichos fluidos
portadores respectivos al menos durante una parte del período de
aspiración durante el que se aspira una nueva muestra en el sistema,
preferentemente durante al menos el 60% y más preferentemente
durante al menos el 90% del período de aspiración.
11. Un método según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque tras la
aspiración una fracción de la muestra queda situada en una línea de
medida (24).
12. Un método según la reivindicación 11,
caracterizado porque la fracción situada en la línea de
medida (24) es impulsada hacia el lado donador de la celda de
difusión (20) a través de conductos y nudos mezcladores (50)
abriendo durante un corto período varias válvulas que comprenden una
válvula de fluido portador (V4) y válvulas de entrada a la celda de
difusión de ambos fluidos portadores primero y segundo (V1, V6), en
el que después el contenido de la muestra de la celda de difusión
(20) permanece en ella durante un tiempo predeterminado.
13. Un método según la reivindicación 12,
caracterizado porque los conductos que incluyen la línea de
medida (24) y los nudos mezcladores (50) se lavan tras la
introducción de la muestra en la celda de difusión (20) abriendo
una pluralidad de válvulas, que comprende la válvula de fluido
portador (V4), durante un período predeterminado (LAVADO X) que
coincide con al menos parte del período de difusión.
14. Un método según la reivindicación 13,
caracterizado porque la muestra, tras el período de difusión,
se expulsa de la celda de difusión (20) abriendo de nuevo una
pluralidad de válvulas que comprende la válvula de fluido portador
(V4) y las válvulas de entrada a la celda de difusión de ambos
fluidos portadores primero y segundo (V1, V6), de modo que el
conducto (42) que comprende la válvula de entrada a la celda de
difusión del primer fluido portador (V1) se lava con el fluido
portador puro situado en la línea de medida (24) y en el nudo (50),
mientras se expulsa el fluido situado en el lado donador de la celda
de difusión (20) y se expulsa el fluido situado en el lado aceptor
de la celda de difusión (20) a través de la celda de medición
(30).
15. Un método según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, caracterizado porque se aplica
una pluralidad de celdas de difusión (20), o una celda de difusión
que tiene una pluralidad de conjuntos de canales (88, celda 1,
celda 2), y un suministro alternativo de nuevas muestras a las
celdas de difusión (20) o los conjuntos de canales (88, celda 1,
celda 2).
16. Un método según cualquier reivindicación
precedente, caracterizado porque se aplica una celda doble de
difusión (20) que tiene dos conjuntos de canales (88, celda 1,
celda 2).
17. Un método según la reivindicación 15 ó 16,
caracterizado porque una de las celdas de difusión (celda 1)
y la celda de medición (30) se lavan durante una parte del período
de difusión de la otra celda de difusión (celda 2) o de las otras
celdas de difusión, mientras en la otra u otras celdas (celda 2)
permanece una muestra.
18. Aparato que tiene un sistema en flujo para
llevar a cabo el método según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes y que comprende al menos una celda de difusión (20) y
una celda de medición (30), además de
1) al menos una pipeta de aspiración (22)
dispuesta de modo que esté en comunicación de fluido con la celda de
difusión (20) a través de conductos,
2) un primer recipiente de almacenamiento (12)
para contener un primer fluido portador que también sirve de tampón
y de fluido de lavado,
3) un segundo recipiente de almacenamiento (14)
para contener un segundo fluido portador que también sirve de
reactivo y de fluido de lavado,
caracterizado porque el aparato también
comprende medios para establecer una presión en la comunicación con
conductos (36, 38) de los fluidos portadores a un nivel tal que se
suministran los fluidos portadores del mismo con un caudal unitario
superior a 100 \mul por segundo,
- porque el sistema en flujo comprende válvulas
de abrazadera sobre la manguera controladas por temporizador (V1,
V4, V6) para controlar los caudales unitarios de los fluidos
portadores primero y segundo, respectivamente,
- y porque las válvulas de abrazadera sobre la
manguera (V1, V4, V6) están adaptadas de modo que cuando la muestra
ha llegado a la celda de difusión (20) el flujo que atraviesa la
celda de difusión (20) se detiene o se reduce substancialmente
durante un período predeterminado, preferentemente de 5 a 20
segundos y más preferentemente de unos 10 segundos.
19. Aparato según la reivindicación 18,
caracterizado porque los recipientes de almacenamiento (12,
14) son recipientes cerrados que pueden estar bajo presión y
conectarse a la celda de difusión (20) a través de válvulas
controladas de abrazadera sobre la manguera (V4, V1, V6) y/o porque
están dispuestas bombas de jeringa (101, 102) y válvulas (W101 y
V4/V8/V7 y W102 y V6/V19/V11a) para suministrar fluido
comprimido desde un depósito a los conductos de líquidos
portadores.
20. Aparato según cualquiera de las
reivindicaciones 18 a 19, caracterizado por la disposición de
una cámara de residuos (70) en conexión de fluido con una salida de
la celda de difusión (20) y con una salida de la celda de medición
(30) y preparada para descargar los fluidos por conductos conectados
a una salida de descarga (A).
21. Aparato según cualquiera de las
reivindicaciones 18 a 20, caracterizado porque la celda de
difusión (20) está provista de al menos dos conjuntos de canales
(88) que pueden accionarse de modo que el proceso de difusión se
desarrolle/tenga lugar en un primer conjunto de canales (celda 1)
mientras el otro conjunto u otros conjuntos de canales (celda 2) se
lava(n) con uno o más fluidos de lavado.
\newpage
22. Aparato según cualquiera de las
reivindicaciones 18 a 19, caracterizado porque dispone de un
control de las válvulas para lavar la línea de medida (24), la
manguera mezcladora (26) y el nudo mezclador (50) mientras la
muestra permanece en la celda de difusión (20).
23. Aparato según cualquiera de las
reivindicaciones 18 a 19, caracterizado porque el control de
las válvulas está preparado para lavar la membrana durante la
aspiración de la muestra.
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