ES2284500T3 - Procedimiento de preparacion de fumagilina. - Google Patents

Abstract

Procedimiento for the preparación de fumagilina por liberación de su sal, caracterizado por hacer reaccionar la sal de fumagilina con diciclohexilamina con un ácido orgánico en medio alcohólico.

Description

Procedimiento de preparación de fumagilina.

La fumagilina de la fórmula (I), un producto de fermentación de Aspergillus fumigata, es un potente agente antimicrosporidial. En el documento DD-A-36735 se describe un procedimiento para su preparación por fermentación. Su forma estable de sal con diciclohexilamina se usa en medicina veterinaria contra la microsporidiosis de abejas y peces (Fumidil, Fumadil B, Amebicilina, etc). La preparación de la sal de fumagilina con diciclohexilamina se describe en el documento AT-B-193076.

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Recientemente, se ha encontrado que la fumagilina es potente para curar las infecciones intestinales provocadas por Microsporidia y/o Criptosporidia en hombres (documento WO 96/30010). Estas infecciones son enfermedades mortales para los pacientes con inmunodeficiencia.

La fumagilina, el monoéster del ácido decatetraenodioico y del fumagilol, es un material muy sensible. Debido a sus grupos reactivos (dos grupos epóxido capaces de ser hidroxilados y de sufrir apertura del anillo; cadena de polieno conjugado capaz de experimentar dimerización, polimerización, epoxidación e hidroxilación; un grupo éster capaz de ser hidrolizado), la fumagilina es muy sensible al calor, el aire, la luz, los ácidos y las bases. Se considera que es estable a -80ºC.

La fumagilina da sales estables con aminas que contengan sustituyentes cicloalquilo voluminosos, como la ciclohexilamina o la diciclohexilamina (la última se usa en la medicina veterinaria). Sin embargo, estas aminas no son farmacéuticamente aceptadas en la medicina para seres humanos como componentes que forman sales, ya que pueden acumularse en los tejidos debido a su carácter lipófilo. Además, la sal de fumagilina con diciclohexilamina usada en la medicina veterinaria es de una pureza de sólo 85%. (Esto significa un contenido de fumagilina de sólo 61%).

Para obtener fumagilina, apropiada como una sustancia fármaco para el tratamiento de seres humanos, los presentes inventores tuvieron como objetivo preparar fumagilina en forma pura a partir de la sal de fumagilina con diciclohexilamina comercialmente disponible, mediante un método que también sea adecuado para realizarlo a mayor escala. La purificación de fumagilina by recristalización -subsiguiente a la liberación- es posible en pequeñas cantidades, pero no es aconsejable en cantidades mayores debido a la sensibilidad del material al calor. Por lo tanto, en el esfuerzo de los presentes inventores fue esencial obtener fumagilina en estado puro directamente del procedimiento de liberación, sin posterior purificación.

No hay ninguna referencia que se encuentre en la bibliografía para la preparación de fumagilina pura a partir de sus sales.

El método común para obtener ácidos orgánicos a partir de sus sales es la liberación del ácido en un medio acuoso mediante un ácido orgánico o inorgánico. Como la fumagilina es sensible a los ácidos, los presentes inventores usaron ácidos orgánicos más suaves, es decir ácidos alcanocarboxílicos de pKa 4,7 - 4,9, en cantidad en exceso.

Los presentes inventores llevaron a cabo la liberación de fumagilina a partir de su sal con diciclohexilamina con una cantidad en exceso de ácido acético (pKa 4,76). La temperatura de la mezcla de reacción acuosa se mantuvo cuidadosamente entre 0-(+5)ºC. Sin embargo, la fumagilina precipitada no fue lo bastante pura. Por lo tanto, se extrajo con diclorometano, la fase diclorometano se lavó con agua, se secó, se concentró a vacío y la fumagilina se precipitó de la disolución concentrada tras la adición de metanol. El producto así obtenido fue puro, pero contenía diclorometano residual en alta cantidad. El procedimiento completo fue tedioso, largo y no apropiado para realizarlo a mayor escala. Los rendimientos variaron entre 45-60%, y ni los rendimientos ni tampoco la calidad del producto fueron bien reproducibles.

Para evitar las desventajas del método anterior, los presentes inventores probaron liberaciones mediante ácidos alcanocarboxílicos en medios orgánicos. La liberación en tolueno tuvo éxito, sin embargo, la disolución de la sal tras el efecto del ácido fue inmediatamente seguida por la precipitación de fumagilina, no permitiendo ninguna posibilidad de filtrar, aunque la filtración puede ser importante El producto no fue tan puro como se deseaba y su contenido de tolueno residual fue alto.

A continuación, se probaron liberaciones en disolventes o en mezclas de disolventes de varias relaciones con el criterio de que durante el procedimiento se tiene que llevar a cabo una filtración. Se probaron disolventes tales como tolueno, alcoholes, diclorometano, acetonitrilo, dioxano, acetona, acetato de etilo y sus mezclas binarias. Los rendimientos fueron de medios a buenos. También se investigó el contenido residual de disolvente de los productos.

De acuerdo con lo anterior, el objeto de esta invención es un procedimiento para la preparación de fumagilina por liberación de su sal, caracterizado por hacer reaccionar la sal de fumagilina con diciclohexilamina con un ácido orgánico en medio alcohólico.

Como ácidos orgánicos, pueden usarse ácidos alcanocarboxílicos con un valor de pKa de 4,7-4,9, preferiblemente ácido acético, ácido propiónico, y como medio alcohólico puede usarse metanol, etanol o propanol. El ácido orgánico se usa preferiblemente en exceso.

Como resultado de este procedimiento, los presentes inventores han encontrado que las liberaciones en medio alcohólico dan sorprendentemente resultados favorables. La disolución de la sal pudo filtrarse y el ácido fue liberado de la disolución transparente. Los rendimientos fueron buenos y el producto fue puro. En el caso de un alcohol, el contenido de disolvente residual no es crítico, sin embargo, es favorable que los productos contengan muy poco disolvente residual. El procedimiento en sí mismo fue suave, rápido y bien reproducible.

El resultado más sorprendente fue que las muestras de fumagilina obtenidas por este método en medio alcohólico -probablemente debido a su pureza y al bajo contenido de disolvente residual- se volvieron considerablemente más estables que las muestras obtenidas por otros métodos.

Se llevó a cabo un estudio de estabilidad de 2 semanas a 40ºC, humedad ambiente, de muestras seleccionadas obtenidas por varios métodos. El contenido de fumagilina de las muestras se midió por HPLC antes y después de someterse a tensión. En la tabla siguiente se presentan algunos resultados demostrativos.

Para la liberación, en todos los casos de demostración se usaron 3 equivalentes de ácido acético.

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Así, los presentes inventores han encontrado un método que da fumagilina en alto rendimiento y en estado puro; Además, el producto obtenido por este método se volvió considerablemente más estable que los productos obtenidos por otros métodos de preparación. La mayor estabilidad es una ventaja significativa en el caso de tal sustancia fármaco sensible.

El procedimiento en sí mismo es simple, rápido, bien reproducible, medioambientalmente amigable y también apropiado para realizarlo a mayor escala.

Más detalles de la invención se demuestran mediante los siguientes ejemplos, sin limitar las reivindicaciones a los ejemplos.

Ejemplos Ejemplo 1 Liberación de fumagilina de su sal con diciclohexilamina (DCH) en medio metanólico mediante 3 equivalentes de ácido acético

Se disolvieron 3,2 g (5 mmol) de sal de fumagilina con DCH en 16 mL de metanol a temperatura ambiente. El material insoluble se separó por filtración. Al filtrado transparente se añadieron con agitación a temperatura ambiente 0,90 g (15 mmol) de ácido acético de 99-100%. Después de unos pocos minutos de agitación comenzó a precipitar un material cristalino fino y blanco y antes de 5-10 minutos se obtuvo una suspensión espesa, la cual se enfrió en una nevera durante toda la noche. A continuación, los cristales se separaron por filtración, se lavaron con metanol frío (3 x 4 mL) y se secaron en un secadero a vacío a temperatura ambiente hasta sequedad (aprox. 7 horas).

Producto

Cristales pulvurentos blancos, p.f.: 190,4- 192,3ºC.

Rendimiento: 1,6 g (69,8%)

Pureza por HPLC % de área 97,60%

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Análisis elemental: calculado para C_{26}H_{34}O_{7}

		Teórico:	Encontrado:
	C%	68,10	68,28
	H%	7,47	7,68

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Contenido de agua por Karl-Fisher: 0,16%

Contenido de disolvente residual por GC de espacio de cabeza: \Sigma contenido de disolventes: 249

UV (en etanol 96%): \lambda_{max} = 321 (log \varepsilon 4,69), \lambda_{max} = 335 (log \varepsilon 4,88), \lambda_{max} = 321 (log \varepsilon 4,69).

IR (pelet de KBr): 3374 cm^{-1} /v OH, CH/; 1711 cm^{-1} /v C=O/; 163 cm^{-1} /v C=C/; 1445,1372 cm^{-1} /\delta CH_{3},
\beta CH_{2}/; 1276 cm^{-1} /v C-O-C epoxi/; 1233, 1161, 1015 cm^{-1} /v C-O-C/.

MS: Espectro de masas EI: M^{+} m/z = 458

[\alpha]_{D}^{20} = -27,5º (c=1, [etanol:cloruro de metileno 4:1]

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Ejemplo 2 Liberación de fumagilina de su sal con diciclohexilamina en medio metanólico mediante 4 equivalentes de ácido acético

Se disolvieron 3,2 g (5 mmol) de sal de fumagilina con DCH en 16 mL de metanol a temperatura ambiente. El material insoluble se separó por filtración. Al filtrado transparente se añadieron con agitación a temperatura ambiente 1,20 g (20 mmol) de ácido acético de 99-100%. Después de unos pocos minutos de agitación comenzó a precipitar un material cristalino fino y blanco y se obtuvo una suspensión espesa, la cual se trató como se describió en el
ejemplo 1.

Producto

Cristales pulvurentos blancos, p.f.: 190,4-192,3ºC.

Rendimiento: 1,6 g (69,8%)

Pureza por HPLC % de área 97,5%

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Ejemplo 3 Liberación de fumagilina de su sal con diciclohexilamina en medio etanólico mediante 2 equivalentes de ácido acético

Se disolvieron 3,2 g (5 mmol) de sal de fumagilina con DCH en 16 mL de etanol a temperatura ambiente. El material insoluble se separó por filtración. Al filtrado transparente se añadieron con agitación a temperatura ambiente 0,60 g (10 mmol) de ácido acético de 99-100%. Después de unos pocos minutos de agitación comenzó a precipitar un material cristalino fino y blanco y se obtuvo una suspensión espesa, la cual se enfrió en una nevera durante toda la noche. A continuación, los cristales se separaron por filtración, se levaron el etanol frío (3 x 4 mL) y se secaron en un secadero a vacío a temperatura ambiente hasta sequedad (aprox. 10 horas).

Producto

Cristales pulvurentos blancos, p.f.: 190,6-192,0ºC.

Rendimiento: 1,50 g (65,4%)

Pureza por HPLC % de área 97,2%

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Ejemplo 4 Liberación de fumagilina de su sal con diciclohexilamina en medio metanólico mediante 3 equivalentes de ácido propiónico

Se disolvieron 3,2 g (5 mmol) de sal de fumagilina con DCH en 16 mL de metanol a temperatura ambiente. El material insoluble se separó por filtración. Al filtrado transparente se añadieron con agitación a temperatura ambiente 1,11 g (15 mmol) de ácido propiónico de 99%. Después de unos pocos minutos de agitación comenzó a precipitar un material cristalino fino y blanco y se obtuvo una suspensión espesa, la cual se enfrió en una nevera durante toda la noche. A continuación, los cristales se separaron por filtración, se lavaron con metanol frío (3 x 4 mL) y se secaron en un secadero a vacío a temperatura ambiente hasta sequedad (aprox. 9 horas).

Producto

Cristales pulvurentos blancos, p.f.: 190,6-192,4ºC.

Rendimiento: 1,43 g (62,4%)

Pureza por HPLC % de área 97,4%

Claims (5)

1. Procedimiento for the preparación de fumagilina por liberación de su sal, caracterizado por hacer reaccionar la sal de fumagilina con diciclohexilamina con un ácido orgánico en medio alcohólico.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado por usar como ácidos orgánicos, ácidos alcanocarboxílicos, preferiblemente con un valor de pKa de 4,7-4,9.

3. Procedimiento según la reivindicación 2, caracterizado por usar como ácido alcanocarboxílico ácido acético o ácido propiónico.

4. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado por usar como medio alcohólico metanol, etanol o propanol.

5. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado por usar en exceso el ácido orgánico.