ES2292034T3 - Soporte revestido de celulas. - Google Patents

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ES2292034T3 ES05022145T ES05022145T ES2292034T3 ES 2292034 T3 ES2292034 T3 ES 2292034T3 ES 05022145 T ES05022145 T ES 05022145T ES 05022145 T ES05022145 T ES 05022145T ES 2292034 T3 ES2292034 T3 ES 2292034T3
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Cynthia Marcelo
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Abstract

Un sistema para el tratamiento de heridas que comprende: (a) células sobre un soporte sólido, en el que las mencionadas células se seleccionan entre el grupo constituido por fibroblastos, células endoteliales, melanocitos, células de músculos lisos, fibroblastos fetales y células epiteliales; y (b) una envoltura que comprende material de malla que tiene poros, envoltura que aloja el mencionado soporte sólido, en el que la mencionada envoltura está sellada para prevenir que el mencionado soporte sólido salga de la mencionada envoltura.

Description

Soporte revestido de células.
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Campo de la invención
La presente invención se refiere en general a la curación y regeneración de tejidos y, más en particular, a procedimientos y sistemas para curar heridas. En particular se refiere a un sistema para el tratamiento de heridas que comprende:
(a)
células sobre un soporte sólido, en el que las mencionadas células se seleccionan entre el grupo constituido por fibroblastos, células endoteliales, melanocitos, células de músculos lisos, fibroblastos fetales y células epiteliales; y
(b)
una envoltura que comprende material de malla que tiene poros, envoltura que aloja el mencionado soporte sólido, en el que la mencionada envoltura está sellada para impedir que el mencionado soporte sólido salga de la mencionada envoltura,
y al uso de células sobre un soporte sólido, en el que las mencionadas células se seleccionan entre el grupo constituido por fibroblastos, células endoteliales, melanocitos, células de músculos lisos, fibroblastos fetales y células epiteliales, y en el que las mencionadas células están contenidas dentro de una envoltura que comprende un material de malla que tiene poros, proporcionándose así una envoltura sellada que contiene poros, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de heridas.
Antecedentes de la invención
El objetivo principal del tratamiento de heridas es conseguir el cierre de la herida. Las heridas cutáneas abiertas representan una categoría importante de heridas y entre ellas están incluidas heridas de quemaduras, úlceras neuropáticas, úlceras debidas a opresión, úlceras de estasis venosa y úlceras diabéticas. Rutinariamente, las heridas cutáneas abiertas se curan por un procedimiento que comprende seis componentes principales: (i) inflamación, (ii) proliferación de fibroblastos, (iii) proliferación de vasos sanguíneos, (iv) síntesis de tejido conectivo, (v) epitelización y (vi) contracción de la herida. La curación de heridas empeora cuando estos componentes, individualmente o en conjunto, no funcionan apropiadamente. Numerosos factores pueden afectar a la curación de heridas, entre ellos mala nutrición, infección, agentes farmacológicos (por ejemplo, actinomicina y esteroides), diabetes y edad avanzada (véase Hunt y Goodson en Current Surgical Diagnosis & Treatment (Way; Appleton & Lange), págs. 86-98 (1988).
Las heridas que no se curan fácilmente son objeto de considerable tensión física, emotiva y social así como de grandes gastos financieros (véase, por ejemplo, Richey y otros, Annals of Plastic Surgery 23(2):159-165 (1989)). De hecho, las heridas que no se curan apropiadamente y llegan a infectarse pueden requerir la escisión del tejido afectado. Se han desarrollado varias modalidades de tratamiento a medida que ha progresado el conocimiento básico de los científicos sobre las heridas y los mecanismos de curación de las heridas.
La modalidad convencional más comúnmente usada para ayudar a la curación de heridas implica el uso de apósitos para las heridas. En la década de los 60, un cambio importante en el cuidado de heridas se produjo cuando se descubrió que la curación de heridas con un apósito húmedo oclusivo era, hablando en general, más eficaz que el uso de apósitos secos no oclusivos (Winter, Nature 193:293-94 (1962)). Hoy en día se usan rutinariamente numerosos tipos de apósitos, incluidas películas (por ejemplo, películas de poliuretano), hidrocoloides (partículas coloidales hidrófilas unidas a espuma de poliuretano), hidrogeles polímeros reticulados que contienen aproximadamente como mínimo 60% de agua), espumas (hidrófilas e hidrófobas), alginatos cálcicos (materiales compuestos de fibras de alginato cálcico, no tejidos) y celofán (celulosa con un plastificante) (Kannon y Garrett, Dermatol. Surg. 21:583-590 (1995); Davies, Burns, 10:94 (1983)). Desafortunadamente, ciertos tipos de heridas (por ejemplo, úlceras diabéticas, llegas debidas a opresión) y las heridas de ciertos sujetos (por ejemplo, receptores de corticoesteroides exógenos) no curan a tiempo (si curan) usando tales apósitos.
En un intento de mejorar la curación de heridas, se han utilizado varias modalidades farmacéuticas. Por ejemplo, algunos médicos han usado regímenes de tratamiento que implican el uso de sulfato de zinc. Sin embargo, la eficacia de estos regímenes se ha atribuido principalmente a la inversión de los efectos de niveles subnormales de zinc en suero (por ejemplo, resistencia aminorada del huésped y actividad bactericida intracelular alterada) (Riley, Am. Fam. Physician 24:107 (1981)). Si bien otras deficiencias de vitaminas y minerales se han asociado también con una curación disminuida de heridas (por ejemplo, deficiencias en vitaminas A, C y D; y de calcio, magnesio, cobre y hierro), no hay evidencia fuerte de que el aumento de los niveles en suero de estas sustancias por encima de los niveles normales intensifica sustancialmente la curación de heridas. Así, excepto en circunstancias muy limitadas, la promoción de la curación de heridas con estos agentes ha tenido poco éxito. El documento WO-A-96/12510 describe un material de trasplante para el tratamiento de heridas que comprende un biomaterial que contiene células epiteliales unidas a microvehículos.
Lo que se necesita es un medio seguro, eficaz e interactivo para intensificar la curación de heridas crónicas. El medio debe ser capaz de ser usado sin considerar el tipo de herida o la naturaleza de la población de pacientes a la que pertenece el sujeto.
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Sumario de la invención
La presente invención se define en las reivindicaciones y está dirigida a sistemas y procedimientos para intensificar la curación de heridas, especialmente heridas crónicas (por ejemplo, heridas diabéticas llagas, debidas a opresión).
La presente invención no está limitada por la naturaleza del soporte sólido; obviamente, la presente invención contempla el uso de cualquier soporte o matriz tridimensional (por ejemplo, matrices que comprenden glicosaminoglicanos) al que se adherirán células seleccionadas entre el grupo constituido por fibroblastos, células endoteliales, melanocitos, células de músculos lisos, fibroblastos fetales y células epiteliales se adherirán, y en el que se dividirán y mantendrán sus comportamientos funcionales (por ejemplo, curación de heridas).
En realizaciones preferentes, el soporte sólido comprende perlas revestidas con colágeno. En realizaciones particulares, las perlas revestidas con colágeno se ponen en una envoltura, bolsa o recipiente similar que tiene poros, y la envoltura se pone luego en el sitio de la herida para uso como un promotor interactivo de la curación de la herida. La presente invención no está limitada por la naturaleza de la envoltura; sin embargo, en una realización, los poros son lo bastante grandes como para permitir que las células de las perlas salgan de la envoltura a la herida, mientras que en otra realización, los poros son demasiado pequeños para que las células salgan de la envoltura pero lo bastante grandes para que puedan permitir que factores celulares salgan de la envoltura, o componentes fluidos de le herida entren en la envoltura. En ciertas realizaciones, las envoltura se remplazan cada unos pocos días hasta que se curan las heridas.
En realizaciones adicionales, la envoltura comprende un material de malla que tiene poros. En ciertas realizaciones, el material de malla comprende poliéster. En una realización, los poros son lo bastante grandes para permitir que las células de las perlas salgan de la envoltura a la herida, mientras que, en otra realización, los poros son demasiado pequeños para permitir que las células de las perlas salgan de la envoltura pero lo bastante grandes para que permitan que factores celulares (por ejemplo, citoquinas) salgan de la envoltura o que componentes fluidos de la herida entren en la envoltura.
Además, en otras realizaciones, la envoltura comprende una membrana biocompatible. En realizaciones adicionales, el medio de eliminación comprende un asa o un brabante unido a la envoltura.
Definiciones
Para facilitar la comprensión de la invención expuesta en la descripción siguiente se definen ahora varios términos.
El término "herida" se refiere en general a lesiones de la piel y el tejido subcutáneo iniciadas de diferentes formas (por ejemplo, llagas debidas a opresión por una permanencia prolongada en cama o heridas inducidas por un trauma) y con características variables. Las heridas se pueden clasificar en cuatro grandes grados dependiendo de la profundidad de la herida: (i) grado I: heridas limitadas al epitelio; (ii) grado II: heridas que se extienden a la dermis; (iii) grado III: heridas que se extienden al tejido subcutáneo; y (iv) grado IV (o heridas de espesor entero) heridas en que quedan expuestos los huesos (por ejemplo, un punto de opresión descrandao tal como trocánter mayor o sacro). El término "herida de espesor parcial" se refiere a heridas que abarcan los grados I-III; entre los ejemplos de heridas de espesor parcial figuran heridas de quemaduras, llagas debidas a opresión, úlceras de estasis venosa y úlceras diabéticas. El término "herida profunda" incluye las heridas de grado III y grado IV.
El término "herida crónica" se refiere a una herida que no se ha curado en 30 días.
La frase "poner en posición la envoltura en la herida" significa poner en contacto alguna parte de la herida con la envoltura. "Que contiene" incluye, aunque no únicamente, poner la envoltura en la proximidad de la herida de manera que las células estén en comunicación fluida con la herida.
Las frases "promover la curación de heridas", "intensificar la curación de heridas" y otras similares se refieren a la inducción de la formación de tejido de granulación o la contracción de heridas y/o la inducción de la epitelización (esto es, la generación de nuevas células del epitelio).
La frase "contenido de fluidos de la herida" se refiere a líquido asociado con una herida, así como células, factores de células, iones, macromoléculas y material proteínico en suspensión tal como líquido en el sitio de la herida.
El término "sujeto" se refiere a seres humanos y animales.
Los términos "envoltura", "compartimiento" y otros similares se refieren, en general, a cualquier recipiente capaz de contener un soporte sólido revestido con células dentro de un lugar delimitado, que permite que factores celulares salgan de la envoltura a la herida y que entren contenidos líquidos de la herida. En realizaciones preferentes, la envoltura es una bolsa de malla estéril hecha de una malla de poliéster tejida de calidad médica. En una realización, la presente invención contempla una envoltura degradable (esto es, una envoltura que se deshace con el tiempo). Además, la presente invención contempla una envoltura construida con membranas. Después de situar el soporte sólido que contiene células (por ejemplo, que crecen sobre la superficie del soporte sólido o dentro del soporte sólido) dentro de la envoltura, se cierra la envoltura para prevenir que el soporte sólido salga de la envoltura. En una realización, la envoltura cerrada comprende además un medio de transporte para transportar factores celulares (por ejemplo, fuera de la envoltura y a la herida). Si bien la presente invención no está limitada a un medio de transporte particular, el medio de transporte puede incluir un medio para aplicar presión (por ejemplo una bomba).
El término "soporte sólido" se refiere en general a cualquier soporte que permite el crecimiento de células, incluidas, aunque no limitativamente, perlas de microvehículos, geles e insertos de placas de cultivo. Las perlas de microvehículo adecuadas para uso con la presente invención son asequibles de varias fuentes, entre ellas Sigma, Pharmacia e ICN. Los insertos de placas de cultivo (por ejemplo, matrices soporte de células que generalmente comprenden una membrana que soporta el crecimiento de células) son asequibles comercialmente de, entre otras fuentes, Collaborative Biomedical Products, Coslar, ICN y Millipore. En realizaciones preferentes, los insertos de placas de cultivo comprenden una membrana microporosa permeable que permite la difusión libre de iones y macromoléculas.
El término "soporte sólido trasplantable" se refiere a un soporte sólido que contiene células que se puede poner dentro de una envoltura. La envoltura que contiene el soporte sólido que contiene células se puede poner luego en una herida para promover la curación de la herida.
Las frases "medio para separar", "medio de separación" y similares se refieren en general a cualquier mecanismo útil para ayudar a retirar de una herida una envoltura que contiene células (y/o a poner en una herida la envoltura que contiene células). En algunas realizaciones, el medio para separar la envoltura comprende un asa, un hilo, un brabante, un cordel o similar que está unido a la envoltura; en realizaciones preferentes, el medio de separación está unido a un agarradero que se puede usar como ayuda para poner la envoltura que contiene el soporte sólido dentro de la herida y para retirarla.
El término "apósito" se refiere en general a cualquier material aplicado a una herida para protección, como absorbente, drenaje, etc. Comercialmente hay disponibles numerosos tipos de apósitos, incluidas películas (por ejemplo, películas de poliuretano), hidrocoloides (partículas hidrófilas coloidales unidas a espuma de poliuretano), hidrogeles (polímeros reticulados que contienen aproximadamente como mínimo 60% de agua), espumas (hidrófilas o hidrófobas), alginatos cálcicos (materiales compuestos no tejidos de fibras de alginato cálcico) y celofán (celulosa con un plastificante) (Kannon y Garrett, Dermatol. Surg. 21:583-590 (1995); Davies, Burns 10:94 (1983)). La presente invención contempla también el uso de apósitos impregnados con compuestos farmacológicos (por ejemplo, antibióticos).
El término "biocompatible" significa que hay un efecto mínimo (esto es, no hay diferencia significativa en comparación con el control), si es que hay alguno, sobre el ambiente. Por ejemplo, en algunas realizaciones de la presente invención, la envoltura comprende una membrana biocompatible; la membrana tiene en sí un efecto mínimo sobre las células del soporte sólido dentro de la membrana y sobre el sujeto (esto es, no tiene un impacto perjudicial sobre la salud del sujeto o la velocidad de curación de la herida) después de poner la envoltura sobre la herida.
El término "matriz extracelular" se refiere en sentido amplio a material para soportar el crecimiento de células. No se pretende que la presente invención se limite a un material particular, puesto que la presente invención contempla una amplia variedad de materiales, incluido, aunque no únicamente, material que se distribuye en el cuerpo de organismos multicelulares, tal como glicoproteínas, proteoglicanos y carbohidratos complejos. La presente invención contempla el uso de un sustrato de matriz extracelular con los insertos de cultivos sobre los que se cultivan las células. Aunque la presente invención no está limitada por la naturaleza de la matriz extracelular, entre las matrices extracelulares preferidas están incluidas Matrigel, Growth Factor Reduced Matrigel, colágeno fibrilar, laminina, fibronectina y colágeno de tipo IV. El colágeno es la matriz extracelular más preferida para uso con la presente invención. Sin embargo, la presente invención no está limitada al uso de colágeno ni al uso de soportes sólidos comerciales que están revestidos con colágeno u otras matrices extracelulares.
Descripción del dibujo
La Figura representa esquemáticamente una realización de una bolsa de té contemplada para uso con los soportes sólidos que contienen células de la presente invención. Una envoltura, 1, está conectada a un medio de separación, 2 y 3, y contiene el soporte sólido 4. En esta realización, el medio de separación comprende un brabante 2 y un agarradero 3 conectado al brabante.
Descripción de la invención
La presente invención se define en las reivindicaciones y se refiere en general a la curación y regeneración de tejidos y, más en particular, a procedimientos y sistemas para la curación de heridas.
Los ejemplos de células incluyen las células presentadas en la Tabla 1.
TABLA 1
1
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I. Crecimiento de células sobre soportes sólidos
Las células contempladas para uso con la presente invención se hacen crecer sobre soportes sólidos trasplantables.
La presente invención no está limitada por la naturaleza del soporte. Los procedimientos de la presente invención se pueden practicar junto con cualquier soporte que permita el crecimiento de células, incluidos, aunque no únicamente, perlas microvehículo, geles e insertos de placas de cultivo. Cuando se desean perlas microvehículo, hay disponibles comercialmente perlas adecuadas en varias fuentes; por ejemplo, Sigma vende perlas revestidas con colágeno y perlas revestidas con gelatina, Pharmacia vende perlas basadas en dextrano e ICN anuncia perlas de colágeno.
Además, hay disponibles comercialmente insertos de placas de cultivo (por ejemplo, matrices soporte de células que generalmente comprenden una membrana que soporta el crecimiento de células) de, entre otras fuentes, Collaborative Biomedical Products, Coslar, ICN y Millipore. Frecuentemente, tales insertos comprenden poli(tereftalato de etileno), policarbonato, TEFLON® (Gore) y ésteres de celulosa mezclados. En realizaciones particulares, los insertos de placas de cultivo comprenden una membrana microporosa permeable que permite la difusión libre de iones y macromoléculas.
Como se ha indicado antes, la presente invención contempla el uso de soportes sólidos trasplantables.
El uso de soportes sólidos trasplantables para aplicación a heridas ha sido descrito en la técnica. Por ejemplo, Hansbrough y otros (J. Am. Med. Assoc. 262:2125 (1989)) describen membranas de colágeno-glucosamina revestidas con queratinocitos para aplicación en heridas. (Véase también Cooper y otros, J. Surg. Res. 48:528 (1990); Ronfard y otros, Bums 17:181 (191); Tinois y otroas, Exp. Cell Res. 193:310 (1991), y Nanchahal y Ward, Brit. J. Plas. Surg. 45:354 (1992)).
En términos generales, el crecimiento de células "dependientes de anclaje" requiere unión a una superficie y esparcimiento con el fin de que crezcan. Convencionalmente, tales células se han cultivado sobre las paredes de recipientes no agitados (por ejemplo, matraces de cultivo de tejidos) y botellas rodillo (patente U.S. nº. 5.52.474, expedida a Clapper y otros).
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En algunas realizaciones, la presente invención contempla el uso de biorreactores para crecimiento de células (véase patente U. S. nº. 5.459.069, expedida a Palsson y otros, y patente U.S. nº. 5.563.068, expedida a Zhang y otros, incorporadas ambas a esta memoria por referencia). Algunos biorreactores utilizan sistemas de fibras huecas. Frecuentemente, haces de fibras paralelas se encierran en un compartimiento exterior; las células crecen sobre la superficie exterior de las fibras mientras que un medio nutriente y enriquecido con gas fluye a través del centro de las fibras huecas, alimentando así las células (véase, por ejemplo, patente U.S. nº. 5.512.474 expedida a Clapper y otros).
Además, con la presente invención se pueden usar biorreactores que utilizan microvehículos (por ejemplo, perlas de dextrano derivadas de DEAE). En realizaciones preferentes, para anclar las células al soporte sólido se usan proteínas como colágeno, fibronectina y laminina; el adhesivo más preferido para las células es colágeno. Los microvehículos pueden incorporar también una carga iónica para coadyuvar a la fijación de las células al microvehículo. Frecuentemente, los microvehículos son perlas porosas suficientemente grandes para permitir que las células emigren y crezcan en el interior de la perla (véase patente U.S. nº. 5.512.474, expedida a Clapper y otros).
II. Envolturas
En procedimientos preferentes, la envoltura es una bolsa de malla estéril construida de una malla de poliéster tejida, de calidad médica. Aunque no se está limitado a materiales de malla fabricados por una compañía concreta, actualmente Tetko, Inc. y Saati fabrican actualmente materiales de malla adecuados para uso con la presente invención.
Obviamente, también se pueden usar otros materiales adecuados (por ejemplo, nailon) y están dentro del ámbito de la presente invención. De hecho, se puede usar cualquier material que sea biocompatible cuando se pone dentro de una herida. Además, la presente invención contempla el uso de una envoltura construida con membranas, incluidas las membranas vendidas por Gelman Sciences y Millipore.
En una realización preferente, las envolturas se montan en un recipiente de tipo bolsa con cuatro bordes y dos superficies. Estos recipientes se pueden hacer de varias maneras. Por ejemplo, la envoltura se puede hacer por soldadura (esto es, uniendo para hacer un cierre) de dos piezas de material (de aproximadamente dimensiones iguales) en tres bordes. El cuarto borde se deja abierto para llenar la bolsa con perlas de colágeno revestidas con queratinocitos.
En una realización alternativa, la envoltura se puede hacer a partir de una sola pieza que primeramente se pliega sobre sí misma. Luego se puede soldar la zona de solapamiento del material, resultando un tubo cilíndrico. Luego se puede hacer una bolsa cerrando por soldadura uno de los extremos del cilindro dejando abierto el otro para llenarlo con células seleccionadas entre fibroblastos, células endoteliales, melanocitos, células de músculo liso, fibroblastos fetales y perlas de colágeno revestidas con células epiteliales; este diseño de la bolsa tiene la ventaja de requerir una soldadura menos.
La presente invención no está limitada a envolturas montadas como bolsas de cuatro bordes ni está limitada a las técnicas descritas antes para hacer las envolturas. Por ejemplo, con la presente invención se pueden usar también envolturas trapezoidales o circulares.
Para el montaje de las envolturas, la presente invención contempla el uso de una variedad de técnicas de cierre, incluidas la soldadura por ultrasonidos y la soldadura por calor. La técnica de soldadura por ultrasonidos es bien conocida en la tecnología de fabricación de dispositivos médicos (véase, por ejemplo, patentes U.S. n^{os}. 4.576.715 y 5.269.917).
La presente invención no está limitada a una técnica particular de soldadura/cierre; de hecho, con la presente invención se puede usar cualquier técnica de cierre adecuada, incluidas, aunque no únicamente, las de cierre por ultrasonidos, radiofrecuencia, calor e impulsos.
En aquellas realizaciones que comprenden el cierre de una malla, la presente invención no está limitada por el tamaño de poro de la malla. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que los poros extremadamente pequeños pueden retardar o excluir el movimiento de materiales fuera de la envoltura. El intervalo preferido de tamaños de poro es de 10 micrómetros a 300 micrómetros. Análogamente, si se usa una membrana, la membrana debe ser permeable en una cuantía tal que permita que factores celulares crucen la membrana hacia la herida.
En realizaciones preferentes, las envolturas que contienen el soporte sólido de la presente invención están configuradas como bolsas de té (véase la Figura). Esto es, un extremo de un brabante (3) (por ejemplo, un material biocompatible de nailon) o el sobrante de un cierre hecho por calor) está unido a la envoltura (1) que aloja el soporte sólido (4), mientras que el otro extremo del brabante está unido a un agarradero (2). El agarradero 2 se usa como un "asa" para ayudar a la colocación de la envoltura que contiene el soporte sólido dentro de la herida y a sacarla de ella. La presente invención no está limitada por el material usado para construir el agarradero; en realizaciones preferentes, el agarradero (2) comprende un material de poliéster de calidad médica. Hablando en términos generales, el agarradero (2) está adherido a la piel del paciente en un punto fuera de la herida. El soporte sólido (4) tiene células unidas; se prefiere que tales células sean viables.
III. Transferencia de factores celulares
Después de haber colocado la envoltura dentro de la herida, los factores celulares (por ejemplo, los factores de crecimiento del tipo del factor de crecimiento epidérmico, citoquinas, PGDF, factor del tipo de insulina, TGF-beta, citoquina de factor de crecimiento de queratinocitos, TNF, quimioquinas, péptidos quimiotácticos, inhibidores de tejido de metaloproteinasas, etc) excretados de células seleccionadas entre fibroblastos, células endoteliales, melanocitos, células de músculo liso, fibroblastos fetales y células epiteliales se hacen pasar a través de la envoltura a la herida. Los inventores de la presente invención han encontrado que no es necesario que las células seleccionadas entre fibroblastos, células endoteliales, melanocitos, células de músculo liso, fibroblastos fetales y células epiteliales estén en contacto directo con la herida. Si bien es evidente que no es necesario comprender por qué es suficiente tal contacto indirecto para la curación de la herida con el fin de llevar a la práctica la presente invención, se cree que lo queratinocitos del donante (esto es, los contenidos dentro de le envoltura) crean un medio favorable para el crecimiento de las células seleccionadas entre fibroblastos, células endoteliales, melanocitos, células de músculos lisos, fibroblastos fetales y células epiteliales presentes en la herida del sujeto.
Los inventores han encontrado que el uso de la presente invención junto con materiales de apósito estándar no afecta perjudicialmente a la capacidad de modificar el medio de la herida.
Parte experimental
Los ejemplos siguientes sirven para ilustrar ciertos procedimientos y aspectos de la presente invención.
En la descripción experimental que sigue, se aplican las abreviaturas siguientes: M (molar); mM (milimolar); \muM (micromolar); g (gramos); mg (miligramos); \mug (microgramos); kg (kilogramos); l (litros); ml (mililitros); dl (decililtros), \mul (microlitros); cm (centímetros); mm (milímetros); \mum (micrómetros); nm (nanómeros); h y hr (horas); min (minutos); s y seg (segundos); FDA (United States Food and Drug Agministration); AET, Inc. (Middletown, DE); Abbott (Abbott Laboratories, Chicago, IL); American Electric Co., (Santa Fe Springs, CA); Collaborative Biomedical Products (Bedford, MA); Gelman Sciences (Ann Arbor, MI); ICN (ICN Biomedicals, Inc., Costa Mesa, CA); Jacksobn Labs (Bar Harbor, ME); labelon Corp. (Canadaigua, NY); labine (Melrose Park, IL); Mallinckrodt Veterinary (St. Louis, MO); Millipore (Millipore, MA); Pharmacia Biotech (Upsala, Suecia); Richard-Allen, Inc., (Richland, MI); Saati (Stamford, CT); Signa (St. Louis, MO); Tetko, Inc (Depew, NY); 3M Healthcare (St. Paul, MN) y Thunderware (Orinda, CA).
Ejemplo de referencia 1
Los experimentos de este ejemplo demuestran que los queratinocitos humanos de cultivo crecidos sobre microvehículos macroporosos y contenidos en una envoltura porosa mejoran la curación de heridas hechas quirúrgicamente en ratones
A. Metodología experimental Preparación de queratinocitos humanos
Aislamiento y crecimiento de queratinocitos humanos: Se aislaron queratinocitos humanos (certificado AATB; programa de queratinocitos cultivados de la Universidad de Michigan) en la unidad de quemaduras/trauma de la Universidad de Michigan a partir de piel del espesor de la escisión.
La tripsinización de la piel se efectuó como sigue. La piel se puso con la cara de la dermis hacia abajo en discos Petri de 150 mm. Las piezas se cortaron en piezas menores (aproximadamente 2 cm x aproximadamente 0,3 cm) y se mantuvieron en remojo en solución tampón estéril de HEPES 30 mM, glucosa 10 mM, KCl 3 mM, NaCl 130 mM, Na_{2}HPO_{4} 1 mM (pH 7,4) que contenía 50 unidades de penicilina y 50 \mug de estreptomicina (Sigma, P-0906). Después de mantener en remojo durante 1-2 h a 4ºC, se eliminó el tampón por aspiración y se añadió 0,09% de tripsina (Sigma, tipo IX) en tampón de penicilina y estreptomicina a los pocillos que contenían el tejido de la piel.
Después de tripsinizar durante la noche a temperatura ambiente, se eliminó por aspiración la solución de enzimas y a las piezas de piel se añadió medio MCDB 153 (Gibco, Grand Island, NY) completo que contenía inhibidor de tripsina. El medio MCDB 153 completo se preparó suplementando MCDB 153 (Gibco, Grand Island, NY), preparado como describen Boyce y Ham [Normal human epidermal keratinocytes, en In vitro Models for Cancer Research (Weber y Sekely, editores) CRC Press, Boca Raton, FL, págs. 245-274 (1985)], con hidrocortisona 0,6 \muM (0,218 \mug/ml), 5 ng/ml de factor de crecimiento epidérmico, 5 \mugl de insulina, 6% de extracto pituitario bovino y CaCl_{2} 0,15 mM.
Se separó la dermis de la epidermis y las células epidérmicas basales se separaron de ambos segmentos de la piel rascando suavemente. La suspensión de células se recogió en tubos de centrifugación cónicos de 50 ml, se centrifugaron suavemente a temperatura ambiente y las células se pusieron en suspensión nuevamente en 50 ml de medio completo más 2% de suero quelatado.
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Las células se sometieron a recuento usando un hemacitómetro y 20 x 10^{6} células se cultivaron en matraces T-75 Corning Plastic y se hicieron crecer a 37ºC en atmósfera con 5% de CO_{2} en una incubadora humidificada. Después de 3 días, se eliminó el medio de crecimiento usado y se añadió MCDB 153 completo sin suero. Las células se alimentaron cada día.
Las células subcultivaron durante la fase log. de crecimiento. Después, se tripsinizaron las células usando 0,025% de tripsina (tipo IX) más 0,01% de EDTA en el tampón de HEPES. Las monocapas se lavaron dos veces con el tampón y luego se añadieron 2-3 ml de solución de enzimas recientemente preparada (o una parte alícuota congelada). Después de 1 min, a 37ºC. se aspiró suavemente la solución de enzima y las células se pusieron en matraces a 37ºC durante 2-3 min hasta que las células se separaron del fondo con una ligera vibración del matraz. El medio se neutralizó con 1-3 ml de MCDB 153 más 0,03% de inhibidor de tripsina (Sigma). Se contaron las células, se centrifugaron y cultivaron 0,5 x 10^{6} células por matraz. Las células se subcultivaron 3-4 veces.
Lavado de perlas CYTOLINE 1^{MC} Se mantuvieron en autoclave durante 10 min 5 g de células de microvehículo macroporosas CYTOLINE^{MC} (Pharmacia Biotech) en 40 ml de agua MilliQ (Millipore, Bedford, MA) en un matraz erlenmeyer de 125 ml. Después de los procesos de autoclave, se enfriaron las perlas y se aspiró el agua. Las perlas se pusieron en suspensión en 40 ml de agua Milli Q y luego se agitaron a velocidad moderada en una mesa de agitación orbital Labline durante 10 min. Se aspiró nuevamente el agua y se realizó un lavado final con 40 ml de agua
Milli Q.
Las perlas se pasaron a un tubo cónico de cultivo de 50 ml, se aspiró el agua y se añadieron 30 ml de NaOH 1 N. Se incubaron las perlas a temperatura ambiente durante la noche. Se eliminó de las perlas la solución de NaOH por aspiración y las perlas volvieron a ponerse en suspensión en 50 ml de agua Milli Q. La parte alícuota se pasó a un matraz Erlenmeyer de 125 ml y se sacudió a velocidad moderada durante 10 min. Se eliminó de las perlas por aspiración el agua Milli Q y se volvió a poner en suspensión las células en agua Milli Q; este proceso de aspiración/suspensión se repitió un total de 5 veces. El pH era neutro (esto es, inferior a 8) medido con papel de pH.
Se eliminó por aspiración en agua de las perlas y éstas volvieron a ponerse en suspensión en 40 ml de PBS sin Mg^{2+} ni ^{Cu2+}, y se mantuvieron en autoclave a 121ºC durante 30 min.
Crecimiento de queratinocitos en perlas de CYTOLINE 1^{MC}: Se sometió a tratamiento en autoclave como se ha descrito antes una suspensión que contenía 10 ml de solución de PBS y 5 g de perlas (contenida en un tubo de centrifugadora cónico, estéril, de 50 ml). Se decantó la solución y se añadieron a las perlas 50 ml de medio MCDB 153 completo. Las células se acondicionaron en el medio a 37ºC con gas de CO_{2} al 5% durante 48 horas.
Se decantó el medio y las perlas se pasaron a un tubo de centrifugadora separado de 50 ml. Se añadieron 10-15 ml del medio y la suspensión se centrífugo a 1000 rpm durante 3 min. Se decantó el medio y se añadieron 30 x 10^{6} células de mama (de un subcultivo 1 de donante vivo, nunca congeladas). Después de una agitación suave de las células con las perlas durante 5 min, las células y las perlas se vertieron en una botella rodillo de vidrio de 250 ml y se añadieron 50 ml del medio; esto se realizó usando un sistema de crecimiento con agitación y fermentador.
Como ensayo de toxicidad, se eliminaron de la botella rodillo de vidrio 5 ml de células y perlas y se hicieron crecer en un matraz T-4 para determinar el crecimiento de las células en el fondo de plástico de la botella en presencia de las perlas. La botella rodillo se incubó durante la noche a 37ºC y seguidamente se añadieron a la botella rodillo 100 ml adicionales del medio y se inició la rotación de la botella (velocidad de rotación = una vuelta/15 s).
Para alimentar las células se eliminó una parte alícuota del medio y se remplazó con medio fresco ajustado al pH correcto por paso de CO_{2} gas. Las células se alimentaron cada 48 horas.
Diseño experimental
Se hizo un ensayo de animales durante 8 días con dos grupos de 10 animales cada uno. Los apósitos de las heridas (véase más adelante) se cambiaron cada día aparte del día 0 de inicio. Las mediciones de la superficie de la herida y las fotografías se obtuvieron los días 0, 2, 4, 6 y 8.
Todos los procesos quirúrgicos se realizaron en condiciones estériles dentro de una cámara de flujo laminar. Se usaron ratones hembra Un/J de 5 semanas (Jackson Labs). Los ratones Un/J contienen una mutación recesiva hallada en el cromosoma 11 y son atímicos (deficientes en células T). Los ratones tienen un número reducido de linfocitos constituido casi enteramente por células B, una respuesta de IgM normal a antígenos timodependientes, una respuesta pobre a antígenos del timo, macrófagos y actividad intensificada de macrófagos y células de NK y una respuesta intensificada a la infección. Los ratones Un/J no rechazan injertos de piel alogénica y xenogeneica y tumorales.
Los ratones se anestesiaron con metofane (Mallinckrodt Veterinary) y se prepararon con etanol. Usando tijeras quirúrgicas finas, se hizo en los lomos de los ratones una herida quirúrgica de espesor entero de una superficie de aproximadamente 80 mm^{2} (la profundidad de la herida se pudo medir a través del panniculus carnosis, pero la piel del ratón es tan delgada que no se usó aquí como indicador). Los apósitos de la herida (véase más adelante) se aseguraron al extremo cefálico de la herida con una grapa quirúrgica. Luego cada ratón se devolvió a su jaula de biorriesgo.
Los días 2, 4, 6 y 8 los animales se llevaron a la cámara de flujo laminar para quitar la grapa y sustituir la bolsa. Los animales estaban ligeramente constreñidos mientras que se hacían las mediciones y se tomaban las fotografías (descrito más adelante). Se reemplazó y aseguró el apósito y todos los cambios de apósito se hicieron usando técnica estéril sin anestesia general.
Apósito para la herida
A las heridas se pusieron apósitos con queratinocitos humanos cultivados (perlas de queratinocitos) en una bolsa DELNET^{MC} (P530 Natural, AET, Inc) o una bolsa DELNET^{MC} sola P530 Natural, AET, Inc.); las bolsas DELNET^{MC} eran aproximadamente cuadradas (aprox. 23 mm x 25 mm). Las costuras de las bolsas se hicieron con una unidad de cierre por impulsos con calor. (American International Electric Co.). Antes de aplicarlas sobre los ratones, las bolsas DELNET^{MC} se esterilizaron con óxido de etileno gas y se pusieron en un envase estéril. Una banda BANDAID^{MC} (3M Healthcare) cubría las bolsas DELNET^{MC} y se aseguró con grapas quirúrgicas (Richard-Allen, Inc.). La bolsa se grapó a la banda y la banda se grapó al ratón.
El montaje de bolsa y perlas se realizó en una cámara de cultivo de tejidos. Dentro de una cámara de flujo laminar, la suspensión de queratinocitos/perlas se pasó a la bolsa de DELNET^{MC} con una pipeta de vidrio. En la bolsa se pusieron aproximadamente 250 \mul de la suspensión de queratinocitos/perlas. Después de haber cargado las perlas en la bolsa, la costura final se hizo con una aguja quirúrgica calentada en un esterilizador de perlas de vidrio. La bolsa DELNET^{MC} que contenía la suspensión de queratinocitos/perlas se denomina "perlas/bolsa" mientras que la bolsa DELNET^{MC} sin las perlas se denomina "bolsa". Las bolsas y las perlas/bolsas se pusieron en medio MCDB 153 completo descrito antes y después se cargaron y sellaron por calor.
Medición de la superficie de la herida
La superficie total de las heridas de ratón se realizó como se ha descrito previamente (Schwarz y otros, Wound Repair and Regeneration 3:204-212 (1995)). En resumen, Se trazó la superficie de la herida sobre una película transparente (Apollo, Ronkonkoma, NY) con un marcador fino. La película transparente se fotocopió sobre papel corriente y posteriormente se examinó por barrido con un escáner manual Lightning Scan Pro 256 (Thunderware) a ficha PIC. La superficie del tejido se calculó con análisis de superficies no rectangulares por registro de imagen NIH 1,58 y los datos se expresaron como mm^{2}. La media la desviación estándar se calcularon usando software Statworks (una diferencia estadísticamente significativa era p < 0,05).
B. Resultados experimentales
La Tabla 2 presenta la superficie del tejido de la herida (mm^{2}) en la línea de base (día 0) y los días 2, 4, 6 y 8 para cada ratón que recibió bolsas que contenían perlas revestidas con queratinocitos (perlas/bolsas); también se recoge la reducción del tamaño de la herida como porcentaje del tamaño original de la herida para cada ratón. En la Tabla 3 se presentan datos análogos para ratones que recibieron sólo las bolsas.
La Tabla 4 presenta datos acumulativos para (i) ratones con perlas/bolsas y (ii) ratones con sólo bolsas.
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TABLA 2
2
TABLA 3
3 
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TABLA 4
4
Como lo indican los datos de las Tablas 2-4, las perlas/bolsas presentaban una diferencia estadísticamente representativa en la curación de heridas (esto es, una reducción en la superficie de las heridas) el día 2 en comparación con las bolsas solas (Véase la Tabla 4, p < 0,027). El día 4, las heridas de ratones tratados con perlas/bolsas (Tabla 2.1) tenían una reducción significativa de la superficie de la herida en comparación con las heridas de ratón con sólo las bolsas (Tabla 3) como lo indica el nivel de significación (p < 0,008) en la Tabla 4. El día 6 no había diferencia significativa de la curación de la herida entre los dos grupos (véase Tabla 3, p < 0,16). Sin embargo, el día 8 había de nuevo una reducción estadísticamente significativa en la superficie de la herida en el grupo de perlas/bolsa (Tabla 2) en comparación con el grupo de sólo bolsa (Tabla 3). (Véase Tala 4, p < 0,05).
Los experimentos de este ejemplo revelan que los queratinocitos humanos cultivados que crecen sobre microvehículos macroporosos (perlas/bolsas) promueven la curación de heridas. El modelo de ratón usado predice que los queratinocitos humanos crecidos sobre microvehículos macroporosos contenidos en bolsas intensificarán la curación de heridas en seres humanos.
Ejemplo de referencia 2
Los experimentos de este ejemplo demuestran que los queratinocitos humanos crecidos sobre microvehículos macroporosos y contenidos en una envoltura macroporosa que se cubre luego con un material de apósito para heridas mejoran la curación de heridas hechas quirúrgicamente en ratones.
A. Metodología experimental
Los experimentos de este ejemplo se realizaron como se ha descrito en el Ejemplo 1 con las excepciones siguientes. El grupo de ratones que recibió perlas de microvehículo macroporoso CYTOLINE^{MC} (Pharmacia Biotech) (esto es, el grupo de perlas/bolsa) estaba constituido por 5 animales, mientras que el grupo que recibió sólo las bolsas (esto es, el grupo de bolsas solas) estaba constituido por 4 animales. (Están marcados de 2 a 5 porque el Ratón 4 murió durante la anestesia). En este apósito las bolsas del grupo perlas/bolsa y el grupo de bolsas solas se cubrieron con un apósito de película de poliuretano (TEGADERM^{MC}, 3M Health Care, St. Paul, MN) con un producto de celofán.
Más específicamente, los apósitos de las heridas contenían queratinocitos humanos cultivados crecidos sobre perlas (queratinocitos/perlas) en una bolsa DELNET^{MC} (P530 Natural; AET, Inc) o una bolsa DELNET^{MC} sola (P530 Natural; AET, Inc.). Posteriormente las bolsas se cubrieron con un apósito TEGADERM^{MC} que, a su vez, estaba cubierto con una banda BANDAID^{MC} (3M Healthcare). Las bolsas se graparon a los ratones.
B. Resultados experimentales
La Tabla 5 presenta la superficie del tejido de la herida (mm^{2}) en la línea de base (día 0) y los días 2, 4, 6 y 8 para cada ratón que recibió bolsas que contenían perlas revestidas con queratinocitos (perlas/bolsa); también se recoge la reducción del tamaño de la herida como porcentaje del tamaño original de la herida para cada ratón. En la Tabla 6 se presentan los datos análogos para los ratones que recibieron bolsas solas.
La Tabla 7 presenta datos acumulativos para (i) ratones con perlas/bolsa y (ii) ratones con sólo bolsa.
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TABLA 5
5 
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TABLA 6
6
TABLA 7
7 
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Como lo indican los datos de las Tablas 5-7, las perlas/bolsas demostraron una diferencia estadísticamente significativa en la curación de heridas (esto es, una reducción de la superficie de la herida) el día 4 en comparación con las bolsas solas (véase la Tabla 7, p < 0,026). La diferencia estadísticamente significativa en la curación de la herida entre los dos grupos se mantuvo los días 6 y 8 (p < 0,010 y p < 0,030, respectivamente).
La comparación de los datos de la Tabla 7 con los de la Tabla 1 (Ejemplo 1) indica que los apósitos de heridas sin TEGADERM^{MC} comienzan a contraerse antes que los que tienen TEGADERM^{MC}. Más específicamente, las heridas de los animales con perlas/bolsas tratadas sin TEGADERM^{MC} eran 12% menores el día 2 y 33,9% menores el día 4, mientras que las heridas de los animales con perlas /bolsas tratadas con TEGADERM^{MC} eran 2,2% y 18% menores los mismos días. Sin embargo, el tamaño de las heridas de los animales con perlas/bolsas tratadas con TEGADERM^{MC} eran menores los días 6 y 8 que las de las no tratadas sin TEGADERM^{MC}. Si bien no se requiere entender el mecanismo de este efecto para la práctica de la presente invención, se cree que esto es debido, en parte, a la capacidad de TEGADERM^{MC} de mantener la humedad de las heridas.
Sobre la base de la discusión precedente y los materiales experimentales, está claro que la presente invención proporciona sistemas y procedimientos eficaces y efectivos para la curación de heridas, especialmente la curación de heridas crónicas. Los dispositivos y procedimientos se pueden usar solos o en combinación con otros medios tradicionalmente empleados en la curación de heridas.

Claims (27)

1. Un sistema para el tratamiento de heridas que comprende:
(a)
células sobre un soporte sólido, en el que las mencionadas células se seleccionan entre el grupo constituido por fibroblastos, células endoteliales, melanocitos, células de músculos lisos, fibroblastos fetales y células epiteliales; y
(b)
una envoltura que comprende material de malla que tiene poros, envoltura que aloja el mencionado soporte sólido, en el que la mencionada envoltura está sellada para prevenir que el mencionado soporte sólido salga de la mencionada envoltura.
2. El sistema de la reivindicación 1, en el que las mencionadas células son viables.
3. El sistema de la reivindicación 1, en el que el mencionado soporte sólido comprende perlas.
4. El sistema de la reivindicación 3, en el que las mencionadas perlas son macroporosas.
5. El sistema de las reivindicaciones 1 a 4, en el que las mencionadas células crecen sobre las mencionadas perlas.
6. El sistema de la reivindicación 3, en el que las mencionadas perlas están revestidas con una matriz extracelular.
7. El sistema de la reivindicación 6, en el que la mencionada matriz extracelular se selecciona entre el grupo constituido por Matrigel, Factor de Crecimiento, Matrigel Reducido, colágeno fibrilar, laminina, fibronectina y coláge-
no.
8. El sistema de la reivindicación 7, en el que el mencionado colágeno es colágeno de tipo IV.
9. El sistema de la reivindicación 1, en el que los mencionados poros son lo bastante grandes para permitir que las mencionadas células atraviesen el mencionado material de malla.
10. El sistema de la reivindicación 1, en el que los mencionados poros son demasiado pequeños para permitir que las mencionadas células atraviesen el mencionado material de malla.
11. El sistema de la reivindicación 1, en el que los mencionados poros tienen un tamaño que varía de 10 a 300 micrómetros.
12. El sistema de la reivindicación 1, en el que el mencionado material de malla comprende poliéster.
13. El sistema de la reivindicación 1, en el que la mencionada envoltura comprende un material biocompatible.
14. El sistema de la reivindicación 1, en el que la mencionada envoltura comprende además un medio para quitar la mencionada envoltura de una herida.
15. El sistema de la reivindicación 14, en el que el mencionado medio para quitar la envoltura comprende un bramante fijado a la mencionada envoltura.
16. Uso de células sobre un soporte sólido, en el que las mencionadas células se seleccionan entre el grupo constituido por fibroblastos, células endoteliales, melanocitos, células de músculos lisos, fibroblastos fetales y células epiteliales, y en el que las mencionadas células están selladas en una envoltura que comprende un material de malla que tiene poros, por lo que se dispone de una envoltura sellada que contiene células, para la fabricación de un medicamento para tratamiento de heridas.
17. El uso de la reivindicación 16, en el que el mencionado soporte sólido comprende perlas.
18. El uso de la reivindicación 17, en el que las mencionadas perlas son macroporosas.
19. El uso de la reivindicación 17, en el que las mencionadas perlas están revestidas con una matriz extracelular.
20. El uso de la reivindicación 19, en el que la mencionada matriz extracelular se selecciona entre el grupo constituido por Matrigel, factor de crecimiento, Matrigel Reducido, colágeno fibrilar, laminina, fibronectina y colágeno.
21. El uso de la reivindicación 20, en el que el mencionado colágeno es colágeno de tipo IV.
22. El uso de la reivindicación 16, en el que los mencionados poros son lo bastante grandes para permitir que las mencionadas células atraviesen el mencionado material de malla.
23. El uso de la reivindicación 16, en el que los mencionados poros son demasiado pequeños para permitir que las mencionadas células atraviesen el mencionado material de malla.
24. El uso de la reivindicación 16, en el que los mencionados poros tienen un tamaño que varía de 10 a 300 micrómetros.
25. El uso de la reivindicación 16, en el que el mencionado material de malla comprende poliéster.
26. El uso de la reivindicación 16, en el que el mencionado material de malla comprende una membrana biocompatible.
27. El uso de la reivindicación 16, en el que el medicamento comprende además un apósito para cubrir la mencionada envoltura que contiene células puesta en la mencionada herida.
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Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030105007A1 (en) * 1995-06-07 2003-06-05 Andre Beaulieu PDGF-betabeta and fibronectin combined in a solid wound dressing for the treatment of wounds
US6528483B2 (en) 1995-06-07 2003-03-04 André Beaulieu Method of producing concentrated non-buffered solutions of fibronectin
US7112320B1 (en) 1995-06-07 2006-09-26 Andre Beaulieu Solid wound healing formulations containing fibronectin
US20020037566A1 (en) * 1997-04-16 2002-03-28 Rees Riley S. Cell-coated supports
US5972332A (en) 1997-04-16 1999-10-26 The Regents Of The University Of Michigan Wound treatment with keratinocytes on a solid support enclosed in a porous material
US7056503B2 (en) * 1999-08-19 2006-06-06 Regents Of The University Of Michigan Enclosures housing cell-coated supports for treating tumors
AU2001265151A1 (en) 2000-05-31 2001-12-11 Encelle, Inc. Method of stimulating hair growth
US7144729B2 (en) 2000-09-01 2006-12-05 Dfb Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for tissue regeneration
US20020082222A1 (en) 2000-11-30 2002-06-27 Shapira Nathan Andrew Treatments for neurogenetic disorders, impulse control disorder, and wound healing
US6890343B2 (en) 2000-12-14 2005-05-10 Ensure Medical, Inc. Plug with detachable guidewire element and methods for use
US8083768B2 (en) * 2000-12-14 2011-12-27 Ensure Medical, Inc. Vascular plug having composite construction
US6730509B2 (en) * 2001-01-17 2004-05-04 Bioverse, Inc. Controlled release dispenser
US7132712B2 (en) 2002-11-05 2006-11-07 Fairchild Semiconductor Corporation Trench structure having one or more diodes embedded therein adjacent a PN junction
WO2003072157A1 (en) 2002-02-21 2003-09-04 Encelle, Inc. Immobilized bioactive hydrogel matrices as surface coatings
US20080086792A1 (en) 2006-10-13 2008-04-17 Thomas Charles Kuracina Method and apparatus for diverting sweat, liquid, moisture or the like from an eye
EP1499710B1 (en) * 2002-03-29 2011-08-24 Singapore Eye Research Institute Method for growth of human conjunctival tissue equivalents for research, clinical ocular surface transplantation and tissue engineering
US7407955B2 (en) 2002-08-21 2008-08-05 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co., Kg 8-[3-amino-piperidin-1-yl]-xanthines, the preparation thereof and their use as pharmaceutical compositions
US8975295B2 (en) * 2002-10-25 2015-03-10 Precision Dermatology, Inc. Modulation of zinc levels to improve tissue properties
ATE452649T1 (de) 2003-03-28 2010-01-15 Fuji Film Mfg Europ B V Rgd-angereicherte, gelatine-ähnliche proteine zur verhinderung der zelladhäsion
US7352036B2 (en) 2004-08-03 2008-04-01 Fairchild Semiconductor Corporation Semiconductor power device having a top-side drain using a sinker trench
DE102004054054A1 (de) 2004-11-05 2006-05-11 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Verfahren zur Herstellung chiraler 8-(3-Amino-piperidin-1-yl)-xanthine
WO2007034843A1 (ja) * 2005-09-20 2007-03-29 National Institute For Materials Science 多孔質基盤体とその製造方法並びに多孔質基盤体の使用方法
US20070142762A1 (en) * 2005-12-16 2007-06-21 Eastman Kodak Company Wound dressing
PE20110235A1 (es) 2006-05-04 2011-04-14 Boehringer Ingelheim Int Combinaciones farmaceuticas que comprenden linagliptina y metmorfina
KR101452915B1 (ko) 2006-05-04 2014-10-21 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 다형태
EP1852108A1 (en) 2006-05-04 2007-11-07 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co.KG DPP IV inhibitor formulations
US7319256B1 (en) 2006-06-19 2008-01-15 Fairchild Semiconductor Corporation Shielded gate trench FET with the shield and gate electrodes being connected together
WO2008006083A2 (en) * 2006-07-07 2008-01-10 Surmodics, Inc. Beaded wound spacer device
EP2082030A2 (en) * 2006-10-20 2009-07-29 Keracure, Inc. Devices with cells cultured on flexible supports
KR100866577B1 (ko) * 2007-09-28 2008-11-03 삼성전기주식회사 인쇄회로기판의 층간 도통방법
US20090202609A1 (en) * 2008-01-06 2009-08-13 Keough Steven J Medical device with coating composition
EP2077118A1 (en) * 2008-01-07 2009-07-08 Gwo Rei Biomedical Technology Corp. Clottable concentrate of platelet growth factors and preparation method thereof
PE20091730A1 (es) 2008-04-03 2009-12-10 Boehringer Ingelheim Int Formulaciones que comprenden un inhibidor de dpp4
UY32030A (es) 2008-08-06 2010-03-26 Boehringer Ingelheim Int "tratamiento para diabetes en pacientes inapropiados para terapia con metformina"
KR20190016601A (ko) 2008-08-06 2019-02-18 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 메트포르민 요법이 부적합한 환자에서의 당뇨병 치료
US20200155558A1 (en) 2018-11-20 2020-05-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh Treatment for diabetes in patients with insufficient glycemic control despite therapy with an oral antidiabetic drug
JP2012512848A (ja) 2008-12-23 2012-06-07 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 有機化合物の塩の形態
TW201036975A (en) 2009-01-07 2010-10-16 Boehringer Ingelheim Int Treatment for diabetes in patients with inadequate glycemic control despite metformin therapy
KR20240090632A (ko) 2009-11-27 2024-06-21 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 리나글립틴과 같은 ｄｐｐ－ｉｖ 억제제를 사용한 유전자형 검사된 당뇨병 환자의 치료
DK2521535T3 (en) 2010-01-05 2018-06-25 Cell Construct I Llc BIOMATERIALS MANUFACTURED FROM HUMAN HAIR
CA3070513C (en) 2010-05-05 2023-01-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh A dpp-4 inhibitor for use in treatment of skin-alterations or necrosis
KR20130093012A (ko) 2010-06-24 2013-08-21 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 당뇨병 요법
AR083878A1 (es) 2010-11-15 2013-03-27 Boehringer Ingelheim Int Terapia antidiabetica vasoprotectora y cardioprotectora, linagliptina, metodo de tratamiento
DK2731947T3 (en) 2011-07-15 2019-04-23 Boehringer Ingelheim Int SUBSTITUTED DIMERIC QUINAZOLINE DERIVATIVE, PREPARATION AND USE thereof IN PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR TREATMENT OF TYPE I AND TYPE II DIABETES
JP2014532713A (ja) 2011-11-02 2014-12-08 ハルシオン，インコーポレイテッド 創傷処置の方法及び組成物
KR101335176B1 (ko) * 2011-12-12 2013-11-29 테고사이언스 (주) 상처 치유용 드레싱재제
US9555001B2 (en) 2012-03-07 2017-01-31 Boehringer Ingelheim International Gmbh Pharmaceutical composition and uses thereof
WO2013171167A1 (en) 2012-05-14 2013-11-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh A xanthine derivative as dpp -4 inhibitor for use in the treatment of podocytes related disorders and/or nephrotic syndrome
WO2013171166A1 (en) 2012-05-14 2013-11-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh A xanthine derivative as dpp-4 inhibitor for use in the treatment of sirs and/or sepsis
WO2013174767A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Boehringer Ingelheim International Gmbh A xanthine derivative as dpp -4 inhibitor for use in modifying food intake and regulating food preference
JP2015518843A (ja) * 2012-05-25 2015-07-06 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 創傷、例えば、糖尿病性創傷の処置における、ｄｐｐ−４阻害剤と組み合わせてもよい生物活性物質としてのケラチン生成細胞の使用
WO2014062839A1 (en) 2012-10-16 2014-04-24 Surmodics, Inc. Wound packing device and methods
EP3110449B1 (en) 2014-02-28 2023-06-28 Boehringer Ingelheim International GmbH Medical use of a dpp-4 inhibitor
US10201457B2 (en) 2014-08-01 2019-02-12 Surmodics, Inc. Wound packing device with nanotextured surface
EP3132809A1 (en) * 2015-08-21 2017-02-22 Bioskinco GmbH Composition and products comprising senescent cells for use in tissue regeneration
EP4233840A3 (en) 2016-06-10 2023-10-18 Boehringer Ingelheim International GmbH Combinations of linagliptin and metformin

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4576715A (en) * 1981-02-13 1986-03-18 Dresser Industries, Inc Membrane pack and method of making
US4997443A (en) * 1985-08-26 1991-03-05 Hana Biologics, Inc. Transplantable artificial tissue and process
CA1340581C (en) * 1986-11-20 1999-06-08 Joseph P. Vacanti Chimeric neomorphogenesis of organs by controlled cellular implantation using artificial matrices
US5015584A (en) * 1987-10-14 1991-05-14 Board Of Regents, The University Of Texas System Epidermal graft system
US5418154A (en) * 1987-11-17 1995-05-23 Brown University Research Foundation Method of preparing elongated seamless capsules containing biological material
CA2018228C (en) * 1989-06-05 1996-02-27 Nancy L. Parenteau Cell culture systems and media
US5763266A (en) * 1989-06-15 1998-06-09 The Regents Of The University Of Michigan Methods, compositions and devices for maintaining and growing human stem and/or hematopoietics cells
WO1991001720A1 (en) * 1989-08-07 1991-02-21 Herman Wade Schlameus Composition and method of promoting hard tissue healing
US5529914A (en) * 1990-10-15 1996-06-25 The Board Of Regents The Univeristy Of Texas System Gels for encapsulation of biological materials
BG51904A1 (en) * 1991-04-16 1993-11-15 Serdev Method foe epithelium cell covering of open wounds
RU2010028C1 (ru) * 1991-06-28 1994-03-30 Васильев Андрей Валентинович Способ восстановления кожного покрова у тяжелообожженных
US5545423A (en) * 1991-11-25 1996-08-13 Vivorx, Inc. Cytoprotective, biocompatible, retrievable macrocapsule containment systems for biologically active materials
US5269917A (en) * 1992-02-28 1993-12-14 Millipore Corporation Filtration apparatus having stress relief groove
GB9210574D0 (en) * 1992-05-18 1992-07-01 Ca Nat Research Council Biotherapeutic cell-coated microspheres for wound/burn and prothesis implant applications
US5512474A (en) * 1992-05-29 1996-04-30 Bsi Corporation Cell culture support containing a cell adhesion factor and a positively-charged molecule
JPH08501203A (ja) * 1992-06-03 1996-02-13 ケイス・ウエスタン・リザーブ・ユニバーシティー 生理活性物質を連続的に適用するための包帯
IT231279Y1 (it) 1993-10-13 1999-08-02 Abate Luigi Elemento tubolare per la formazione di sacchetti per il confezionamento di prodotti sottovuoto
US5563068A (en) * 1994-04-21 1996-10-08 Genetic Therapy, Inc. Bioreactor
IL115728A0 (en) * 1994-10-25 1996-01-19 Boehringer Mannheim Gmbh Biomaterial containing epithelial cells and use thereof as a transplant
US5741685A (en) * 1995-06-07 1998-04-21 Children's Medical Center Corporation Parenchymal cells packaged in immunoprotective tissue for implantation
US5693332C1 (en) * 1995-08-11 2001-01-09 Univ California Human keratinocytes supported on a hydrophilic membrane and methods of using same to effect wound closure
US5972332A (en) * 1997-04-16 1999-10-26 The Regents Of The University Of Michigan Wound treatment with keratinocytes on a solid support enclosed in a porous material

Also Published As

Publication number Publication date
DE69838356D1 (de) 2007-10-11
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US6299898B2 (en) 2001-10-09
US20030124173A1 (en) 2003-07-03
US5972332A (en) 1999-10-26
DE69838356T2 (de) 2008-05-21
EP0975226B1 (en) 2005-10-26
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