ES2304531T3 - Derivados heterobiciclicos de pirazol como inhibidores de quinasa. - Google Patents

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Abstract

Un compuesto biciclopirazol de fórmula (I): (Ver fórmula) en la que X es un grupo seleccionado entre NR', O, S, SO o SO2, cada uno de R y R1, siendo iguales o diferentes, se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre -R', -COR', -COOR', -CONHR', -CONR'R", -SO2R', -SO2NHR' o -SO2NR'R", en los que cada uno de R' y R", siendo iguales o diferentes, se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo, opcionalmente sustituido, alquilo C1 - 6, alquenilo C2 - 6, alquinilo C2 - 6 de cadena lineal o ramificada, arilo, heterociclilo o arilalquilo C1 - 6; R2 es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre -R', -CH2OR' y OR', en los que R' es lo definido antes; y sus sales farmacéuticamente aceptables.

Description

Derivados heterobicíclicos de pirazol como inhibidores de quinasa.
La presente invención se refiere a nuevos derivados de biciclopirazol, a un procedimiento para su preparación, a composiciones farmacéuticas que los comprenden y a su uso como agentes terapéuticos, en particular en el tratamiento de enfermedades vinculadas a proteinaquinasas desreguladas.
El mal funcionamiento de las proteinaquinasas (PK) es la señal de numerosas enfermedades. Una gran parte de los oncogenes y protooncogenes involucrados en cánceres humanos codifican las PK. Las actividades intensificadas de las PK están implicadas también en muchas enfermedades no malignas tales como hiperplasia prostática benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación vascular de células lisas asociada a ateroesclerosis, fibrosis pulmonar, artritis glomerulonefritis y estenosis y reestenosis posquirúrgica.
Las PK están implicadas también en afecciones inflamatorias y en la multiplicación de virus y parásitos. Las PK pueden desempeñar también un papel importante en la patogénesis y el desarrollo de trastornos neurodegenerativos.
Para una referencia general al mal funcionamiento o desregulación de las PK véase, por ejemplo, Current Opinión in Chemical Biology 1999, 3, 459-465.
Consecuentemente, hay una necesidad en la terapia de compuestos activos en la modulación de la actividad de proteinaquinasas desreguladas.
La presente invención ha descubierto ahora que ciertos nuevos biciclopirazoles, de acuerdo con la presente invención, son capaces de modular la actividad de proteinaquinasas desreguladas y son así útiles, en terapia, en el tratamiento de enfermedades causadas por y/o asociadas con proteinaquinasas desreguladas.
En la técnica son conocidos varios compuestos heterocíclicos como inhibidores de proteinaquinasas. Por ejemplo, se han descrito 2-carboxamido-pirazoles y 2-ureido-pirazoles, y sus derivados, como inhibidores de proteina quinasa en las solicitudes de patente internacional WO 01/12189, WO 01/12188, WO 02/48114 y WO 02/70515, todas ellas en nombre del propio solicitante.
Se describen también compuestos bicíclicos condensados que comprenden restos de pirazol y tienen actividad inhibidora en los documentos WO 00/69846, WO 02/12242 y WO 03/28720, todos en nombre del propio solicitante. El documento WO 02/22601 describe inhibidores de proteinaquinasas que son derivados de 3-aminopirazol.
La presente invención proporciona así, como primer objeto, un compuesto biciclopirazol de fórmula (I)
1
en la que
X es un grupo seleccionado entre NR', O, S, SO o SO_{2},
cada uno de R y R_{1}, siendo iguales o diferentes, se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre -R', -COR', -COOR', -CONHR', -CONR'R'', -SO_{2}R', -SO_{2}NHR' o -SO_{2}NR'R'', en los que cada uno de R' y R'', que son iguales o diferentes, se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6} de cadena lineal o ramificada, arilo, heterociclilo o arilalquilo C_{1-6};
R_{2} es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre -R', -CH_{2}OR' y OR', en los que R' es lo definido antes;
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
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Los compuestos de fórmula (I), objeto de la presente invención, pueden tener átomos de carbono asimétricos y por tanto pueden existir como isómeros ópticos individuales o como sus mezclas racémicas. Consecuentemente, todos los isómeros individuales, incluidos isómeros ópticos y geométricos, de los compuestos de fórmula (I) y cualquier mezcla de ellos están también dentro del alcance de la invención.
A la vista de todo lo anterior, está claro para una persona experta que los átomos de nitrógeno no sustituidos en el anillo de pirazol condensado de los compuestos de la invención se pueden equilibrar rápidamente, en solución, como mezclas de los dos tautómeros siguientes:
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2 
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Consecuentemente, cuando sólo se indica un tautómero de fórmula (I) o (Ia), se ha de entender también que el otro así como cualquier mezcla de ellos está comprendido en el alcance de la invención, a no ser que se indique específicamente lo contrario.
Tal como se usa en esta memoria, y a no ser que se especifique lo contrario, el término alquilo C_{1-6} lineal o ramificado, como tal o como parte de un resto más complejo (por ejemplo, aril-alquilo), se entiende que es un grupo tal como, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, s-butilo, t-butilo, n-pentilo, n-hexilo y similar. Preferiblemente, el mencionado alquilo se selecciona entre un grupo alquilo C_{1-4} lineal o ramifi-
cado.
Con el término arilo, sea como tal o como parte de un resto más complejo (por ejemplo, aril-alquilo) se entiende un hidrocarburo monocarbocíclico, bicarbocíclico o policarbocíclico así como heterocíclico, con preferiblemente de 1 a 4 restos de anillo, sean condensados o unidos entre sí por enlaces simples, de los que al menos uno de los anillos carbocíclicos o heterocíclicos es aromático.
Son así ejemplos no limitativos de grupos arilo de acuerdo con la invención, fenilo, indanilo, bifenilo, \alpha- o \beta-naftilo, fluorenilo, 9,10-dihidroantracenilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, indolilo, imidazolilo, imidazopiridilo, 1,2-metilendioxifenilo, tiazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, pirrolil-fenilo, furilo, fenil-furilo, benzotetrahidrofuranilo, oxazolilo, isoxazolilo, pirazolilo, cromenilo, tienilo, benzotienilo, isoindolinilo, benzoimidazolilo, tetrazolilo, tetrazolilfenilo, pirrolidinil-tetrazolilo, isoindolinil-fenilo, quinolinilo, isoquinolinilo, 2,6-difenil-piridilo, quinoxalinilo, pirazinilo, fenil-quinolinilo, benzofuranilo, 1,2,3-triazolilo, 1-fenil-1,2,3-triazolilo y similares.
De acuerdo con los significados atribuidos antes a R, R_{1}, R_{2}, R' y R'', cualquiera de los grupos anteriores puede además estar opcionalmente sustituido, en cualquiera de sus posiciones libres, con uno o más grupos, por ejemplo, de 1 a 6 grupos, seleccionados entre: halógeno, nitro, grupos oxo(=O), carboxi, ciano, alquilo, alquilo fluorado, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterociclilo, grupos amino y sus derivados tales como, por ejemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino, ureido, alquilureido o arilureido; grupos carbonilamino y sus derivados tales como, por ejemplo, formilamino, alquilcarbonilamino, alquenilcarbonilamino, arilcarbonilamino, alcoxicarbonilamino, sulfonamido, alquilsulfonamido y arilsulfonamido; grupos hidroxi y derivados suyos tales como, por ejemplo, alcoxi, ariloxi, alquilcarboniloxi, arilcarboniloxi, cicloalqueniloxi o alquilidenaminooxi; grupos carbonilo y derivados tales como, por ejemplo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, cicloalquiloxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilamino-carbonilo; derivados sulfurados tales como, por ejemplo, alquiltio, ariltio, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, alquilsulfinilo, arilsulfinilo, arilsulfoniloxi, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo o dialquilaminosulfonilo. A su vez, cuando sea apropiado, cada uno de los sustituyentes anteriores puede estar sustituido además con uno o más de los grupos antes mencionados.
A no ser que se especifique lo contrario, el término halógeno significa flúor, cloro, bromo o yodo.
El término alquilo fluorado significa uno cualquiera de los antes mencionados grupos alquilo C_{1-6} lineales o ramificados además sustituidos con uno o más átomos de flúor tales como, por ejemplo, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 1,2-difluoroetilo, 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropil-2-ilo y similares.
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El término alquenilo o alquinilo significa uno cualquiera de los antes mencionados grupos alquilo C_{2-6} lineales o ramificados que comprende un doble o triple enlace, respectivamente.
Son ejemplos no limitativos de grupos alquenilo o alquinilo, por ejemplo, vinilo, 1-propenilo, alilo, isopropenilo, butenilo, pentenilo, hexenilo, etinilo, propinilo, butinilo y similares.
El término alcoxi significa cualquier grupo alcoxi C_{1-6} lineal o ramificado, por ejemplo, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, isobutoxi, s-butoxi, t-butoxi, n-pentiloxi, n-hexiloxi y similares.
Los términos cicloalquilo o cicloalquenilo significan un grupo carbocíclico C_{3-6} tal como, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y los correspondientes grupos insaturados tales como ciclopropenilo, ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo y similares.
De todo lo anterior, resulta evidente a una persona experta que el término arilo abarca anillos carbocíclicos aromáticos y anillos heterocíclicos aromáticos, estos últimos conocidos también como grupos heteroarilo, además condensados o unidos por enlaces simples a anillos heterocíclicos no aromáticos, típicamente heterociclos de 5 a
7 miembros.
El término heterociclo de 5 a 7 miembros, que abarca heterociclos aromáticos denominados antes grupos arilo, pretende significar un carbociclo de 5 a 7 miembros, saturado o parcialmente insaturado, en el que uno o más átomos de carbono, por ejemplo, de 1 a 3 átomos de carbono, están reemplazados por heteroátomos tales como nitrógeno, oxígeno o azufre.
Son ejemplos no limitativos de heterociclos de 5 a 7 miembros, opcionalmente benzocondensados o además sustituidos, 1,3-dioxalano, pirano, pirrolodina, pirrolina, imidazolina, pirazolidina, pirazolina, piperidina, piperazina, morfolina, tetrahidrofurano, azabiciclononano y similares.
Obviamente, cualquier grupo que sea identificable por un nombre compuesto ha de entenderse como construido a partir de los restos de los que deriva de acuerdo con el sistema de nomenclatura que se está adoptando convencionalmente en química orgánica. Como ejemplo, el término halo-heterocicliloalquilo representa un grupo alquilo que está sustituido por un grupo heteriociclilo que está sustituido, a su vez, por un átomo de halógeno, en el que alquilo, heterociclilo y halógeno son los definidos antes.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) son las sales de adición de ácido con ácidos inorgánicos u orgánicos, por ejemplo, los ácidos nítrico, clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, perclórico, fosfórico, acético, trifluoroacético, propiónico, glicólico, láctico, oxálico, malónico, málico, maleico, tartárico, cítrico, benzoico, cinámico, mandélico, metanosulfónico, isetiónico y salicílico, así como las sales con bases inorgánicas u orgánicas, por ejemplo, de metales alcalinos o alcalinotérreos, en especial hidróxidos, carbonatos o bicarbonatos de sodio, potasio, calcio o magnesio, aminas acíclicas o cíclicas, preferiblemente metilamina, etilamina, dietilamina, trietilamina o piperidina.
Una clase preferida de compuestos de la invención está representada por los derivados de la fórmula (I) en la que X es S; R es -COR', -CONHR'; R_{1} es -COR', -COHR', -CONR'R'', -SO_{2}NHR' o -SO_{2}NR'R'', en los que cada uno de R' y R'', siendo iguales o diferentes entre sí, es lo indicado antes; y R_{2} es un átomo de hidrógeno.
Aún son más preferidos, dentro de la clase anterior, los derivados de la fórmula (I) en la que R es -COR'; R_{1} es -CONHR' o -CONR'R'', en los que cada uno de R' y R'', siendo iguales o diferentes, es lo definido antes.
Otra clase de compuestos preferidos de la invención está representada por los derivados de la fórmula (I) en la que X es O; R es -COR', -CONHR'; R_{1} es -COR', -CONHR', -CONR'R'', -SO_{2}NHR' o SO_{2}NR'R'', en los que cada uno de R' y R'', siendo iguales o diferentes, es lo definido antes, y R_{2} es un átomo de hidrógeno.
Aún son más preferidos dentro de la clase anterior, los derivados de la fórmula (I) en la que R es -COR', R_{1} es -CONHR' o -CONR'R'', en los que cada uno de R' y R'', siendo iguales o diferentes, es lo antes definido.
Para referencia a cualquier compuesto específico de fórmula (I) de los invención, opcionalmente en forma de una sal farmacéuticamente aceptable véase, como ejemplo, la sección experimental siguiente y las reivindica-
ciones.
De acuerdo con un objetivo adicional de la invención, se proporcionan los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables para uso como medicamentos.
La invención proporciona también el uso de un compuesto de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables en la fabricación de un medicamento para tratar un paciente que sufre una enfermedad causada por y/o asociada a una actividad alterada (dicho de otra forma, desregulada) de proteínaquinasa.
Se describe en esta memoria un procedimiento para tratar en un mamífero, incluido el hombre, que sufre una enfermedad causada por y/o asociada a una actividad alterada (dicho de otra forma, desregulada) de proteínaquinasa, procedimiento que comprende administrar al mencionado mamífero que la necesita una cantidad eficaz de un compuesto biciclopirazol de la fórmula (I)
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3 
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en la que
X es un grupo seleccionado entre NR', O, S, SO o SO_{2},
cada uno de R y R_{1}, siendo iguales o diferentes, se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre -R', -COR', -COOR', -CONHR', CONR'R'', SO_{2}R', -SO_{2}NHR' o -SO_{2}NR'R'', en los que cada uno de R' y R'', siendo iguales o diferentes, se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6} de cadena lineal o ramificada, arilo, heterciclilo o arilalquilo C_{1-6};
R_{2} es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre -R', -CH_{2}OR' y OR', en los que R' es lo definido antes;
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
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En una realización preferente del procedimiento descrito antes para tratar un mamífero, la enfermedad asociada con una actividad alterada de la proteinaquinasa se selecciona entre el grupo constituido por cáncer, trastornos proliferativos celulares, enfermedad de Alzheimer, infecciones virales, enfermedades autoinmunes y trastornos neurodegenerativos.
Entre los tipos preferidos de cáncer que se pueden tratar están incluidos carcinoma, carcinoma celular escamoso, tumores hematopoyéticos de linaje mieloide o linfoide, tumores de origen mesenquémico, tumores del sistema nervioso central y periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentoso, queratoxantomas, cáncer folicular del tiroide y sarcoma de Kaposi.
En otra realización preferente del procedimiento para tratar un mamífero descrito antes, el trastorno proliferativo celular se selecciona entre el grupo constituido por hiperplasia prostática benigna, poliposis de adenomatosis familiar, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación vascular de células lisas asociada con ateroesclerosis, fibrosis pulmonar, artritis glomerulonefritis y estenosis y reestenosis posquirúrgica.
Además, el procedimiento para tratar un mamífero, objeto de la presente invención, proporciona también inhibición de la angiogénesis y la metástasis.
Los compuestos de la invención son útiles como inhibidores de la Aurora quinasa y también como inhibidores de otras proteinaquinasas tales como, por ejemplo, quinasas ciclinadependientes (cdk), proteínaquinasa C en diferentes isomorfos, Met, PAK-4, PAK-5, ZC-1, STLK-2, DDR-2, Aurora 1, Aurora 2, Bub-1, PLK, Chk1, Chk2, HER2, raf1, MEK1, MAPK, EGF-R, PDGF-R, FGF-R, IGF-R, VEGF-R, Pl3K, tirosinaquinasa wee-1, Src, Abl, Akt, ILK, MK-2, IKK-2, Cdc7, Nek, siendo así eficaces en el tratamiento de enfermedades asociadas con otras proteina*
quinasas.
De acuerdo con otro objetivo más de la invención, se proporciona un procedimiento para preparar los compuestos de la invención y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Por tanto, los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden obtener por un procedimiento que comprende:
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(a) hacer reaccionar un compuesto de la fórmula (II)
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en la que R_{1}, R_{2} y X son lo definido antes, con nitrito sódico y hacer reaccionar seguidamente la sal de diazonio así obtenida con un agente reductor adecuado para obtener un compuesto de la fórmula (I) en la que R es un átomo de hidrógeno y R_{1}, R_{2} y X son lo definido antes y, si se desea,
(b) convertir el compuesto de la fórmula (I) así obtenido en otro compuesto de la fórmula (I) en la que R no es hidrógeno; y/o, si se desea,
(c) convertir un compuesto de la fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I) o en una de sus sales farmacéuticamente aceptable.
El procedimiento anterior se puede realizar de acuerdo con procedimientos bien conocidos en la técnica.
De lo anterior es evidente a una persona experta en la técnica que si un compuesto de fórmula (I), preparado de acuerdo con el procedimiento anterior, se obtiene como mezcla de isómeros, su separación en isómeros individuales de fórmula (I), realizada de conformidad con técnicas convencionales, está dentro del alcance de la presente invención.
De acuerdo con la etapa (a) del procedimiento, la reacción entre un compuesto de fórmula (II) y nitrito sódico se puede realizar en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, agua, tetrahidrofurano (THF), acetonitrilo (MeCN), dimetilformamida (DMF), dioxano, acetona, metanol, y en condiciones ácidas, por ejemplo, en presencia de ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, acético, fluorobórico o trifluoroacético. La reacción se realiza a una temperatura que varía de aproximadamente -30ºC a aproximadamente 5ºC y durante un tiempo que varía de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 6 horas. La sal de diazonio así obtenida se convierte luego en el compuesto de fórmula (I) deseado, sin necesidad de que sea aislado, por tratamiento con un agente reductor adecuado tal como, por ejemplo, hidruro de litioaluminio, borohidruro sódico, hidruro de sodioaluminio, cloruro de zinc o cloruro de estaño.
Alternativamente, la reducción puede efectuarse por hidrogenación en presencia de catalizadores convencionales, incluidos, por ejemplo, níquel raney o catalizadores de Lindlar. La reacción que da el compuesto (I), en la etapa (a), se realiza en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, agua, ácido clorhídrico, dietil éter, tetrahidrofurano, metanol o etanol, a una temperatura que varía de aproximadamente -30ºC a aproximadamente 70ºC y durante un tiempo que varía de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 48 horas.
De acuerdo con la etapa (b) del procedimiento, los compuestos de fórmula (I) así obtenidos y en los que R es hidrógeno se pueden convertir en una variedad de derivados de la fórmula (I) en la que R no es un átomo de hidrógeno, por tratamiento de acuerdo con procedimientos convencionales conocidos en la técnica para la funcionalización de grupos amino con agentes de alquilación, acilación, sulfonación y similares.
Por ejemplo, se puede preparar un compuesto de la fórmula (I) en la que R no es hidrógeno y se selecciona entre -R', -COR', -COOR', -SO_{2}R', -SO_{2}NHR' y -SO_{2}NR'R'', en los que R' y R'' tienen los significados indicados antes, haciendo reaccionar un compuesto de la fórmula (I) en la que R es hidrógeno, con un compuesto correspondiente de la fórmula (III)
(III)R-Y
en la que R es lo definido antes pero no hidrógeno, e Y es un grupo saliente adecuado, preferiblemente cloro o bromo.
La reacción anterior se puede realizar de acuerdo con procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica por acilación, sulfonilación o alquilación de grupos amino, por ejemplo en presencia de una base terciaria tal como trietilamina, N,N-diisopropiletilamina o piridina, en un disolvente adecuado tal como tolueno, diclorometano, cloroformo, dietil éter, tetrahidrofurano, acetonitrilo o N,N-dimetilformamida, a una temperatura que varía de aproximadamente -10ºC a la de reflujo, durante un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 96 horas.
De lo anterior resulta evidente a una persona experta que la preparación de los compuestos de la fórmula (I) que tienen R igual a -SO_{2}NR'R'' se puede realizar realmente como se ha descrito antes o, alternativamente, haciendo reaccionar apropiadamente un compuesto de fórmula (I) en la que R es -SO_{2}NHR' con cualquier resto reactivo adecuado para preparar sulfonamidas disustituidas.
Análogamente, se puede preparar un compuesto de la fórmula (I) en la que R es un grupo -CONHR' y R' no es hidrógeno haciendo reaccionar un compuesto de la fórmula (I) en la que R es hidrógeno con un compuesto de fórmula (IV)
(IV)R'NCO
en la que R' es lo definido antes pero no es hidrógeno.
Esta reacción se puede realizar en presencia de una base terciaria tal como trietilamina, N,N-diisopropiletilamina o piridina, en un disolvente adecuado tal como tolueno, diclorometano, cloroformo, dietil éter, tetrahidrofurano, acetonitrilo o N,N-dimetilformamida, a una temperatura que varía de aproximadamente -10ºC a la de reflujo y durante un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 72 horas.
Además, opcionalmente se puede hacer reaccionar un compuesto de la fórmula (I) en la que R es un grupo
-CONHR' con un compuesto de la fórmula (V)
(V)R''-Y
en la que R'' es lo definido antes pero no es hidrógeno e Y es un grupo saliente adecuado, preferiblemente cloro o bromo, para obtener el correspondiente compuesto de la fórmula (I) en la que R es -CONR'R'', no siendo ni R' ni R'' átomos de hidrógeno. La reacción es ampliamente conocida en la técnica y permite la preparación de derivados ureido disustituidos (-CONR'R'') a partir de los correspondientes precursores monosustituidos (-CONHR').
Alternativamente, y trabajando también con procedimientos muy bien conocidos, se puede preparar un compuesto de la fórmula (I) en la que R es un grupo -CONR'R'' y R' y R'' tienen los significados definidos antes pero no son hidrógeno haciendo reaccionar con cloroformiato de 4-nitrofenilo un compuesto de la fórmula (I) en la que R es hidrógeno y, posteriormente, con un compuesto de fórmula (VI)
(VI)R'R''NH
Como otro ejemplo, también se puede hacer reaccionar en condiciones operativas reductoras un compuesto de fórmula (I) en la que R es hidrógeno con un compuesto de la fórmula (VII)
(VII)R'-CHO
en la que R' es lo definido antes pero no hidrógeno, para obtener el correspondiente compuesto de la fórmula (I) en la que R es un grupo R'CH_{2}-.
Esta reacción se realiza en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, cloroformo, diclorometano, tetrahidrofurano o acetonitrilo, opcionalmente en presencia de ácido cítrico, etanol o metanol como codisolventes, a una temperatura que varía de aproximadamente -10ºC a la de reflujo, y durante un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 4 días.
Son agentes reductores convencionales en el medio de reacción, por ejemplo, borohidruro sódico, triacetoxiborohidruro sódico y similares.
De lo anterior resulta evidente a una persona experta en la técnica que cualquiera de los anteriores compuestos de fórmula (I) se puede convertir convenientemente en otros derivados de fórmula (I) de acuerdo con la etapa (c) del procedimiento haciendo reaccionar apropiadamente grupos funcionales que no son el grupo R por tratamiento de acuerdo con procedimientos convencionales de síntesis orgánica.
Por ejemplo, por tanto, los compuestos de la fórmula (I) en la que R_{1} es -COOMe se pueden hidrolizar a los correspondientes compuestos carboxi de la fórmula (I) en la que R_{1} es -COOH por tratamiento con una base adecuada, por ejemplo, hidróxido sódico o potásico, de acuerdo con procedimientos convencionales. Alternativamente, los compuestos de la fórmula (I) en la que R_{1} es -COOMe se pueden convertir por transesterificación en los correspondientes compuestos carboxi de la fórmula (I) en la que R_{1} es -COOR', en el que R' es diferente de hidrógeno o metilo. A su vez, los anteriores compuestos de la fórmula (I) en la que R_{1} es un grupo COOH se pueden convertir fácilmente en otros derivados (I) haciendo reaccionar apropiadamente el grupo carboxílico.
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En particular, se puede preparar un compuesto de la fórmula (I) en la que R_{1} es un grupo -CONR'R'' y R no es hidrógeno haciendo reaccionar un compuesto de la fórmula (I) en la que R_{1} es carboxi con un agente de condensación adecuado y, posteriormente, con un compuesto de la fórmula (VIII)
(VIII)R'R''NH
en la que R' y R'' son lo definido antes, de acuerdo con procedimientos conocidos para preparar amidas.
Análogamente, se puede preparar un compuesto de la fórmula (I) en la que R_{1} es -COR' y R no es hidrógeno haciendo reaccionar un compuesto correspondiente de la fórmula (I) en la que R_{1} es un grupo amido CONCH_{3}OCH_{3} de Weinreb con un compuesto de la fórmula (IX)
(IX)R'Li
en la que R' no es hidrógeno.
La reacción se realiza de conformidad con procedimientos convencionales para preparar cetonas, por ejemplo en presencia de un disolvente adecuado tal como tetrahidrofurano, tolueno, dietil éter o hexano, a una temperatura que varía de aproximadamente -78ºC a aproximadamente 10ºC durante un tiempo que varía de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 72 horas, aplicando procedimientos estándar de protección de grupos funcionales cuando sea necesario.
Alternativamente, se puede preparar un compuesto de la fórmula (I) en la que R_{1} es un grupo-COOR' y R y R' no son hidrógeno haciendo reacionar un correspondiente compuesto de la fórmula (I) en la que R_{1} es un grupo -COOH con un compuesto de fórmula (X)
(X)R'OH
en la que R' no es hidrógeno, por tratamiento de acuerdo con procedimientos convencionales para preparar ésteres.
Como ejemplo adicional, la preparación de los compuestos de fórmula (I) que tienen R_{1} igual a -SO_{2}NR'R'' se puede efectuar realmente haciendo reaccionar apropiadamente un compuesto de fórmula (I) en la que R_{1} es-SO_{2}NHR' con cualquier resto adecuado, por ejemplo, un resto de alquilación, de conformidad con metodologías bien conocidas para preparar sulfonamidas disustituidas.
De lo anterior resulta evidente a una persona experta en la técnica que cualquiera de los anteriores compuestos de fórmula (I) se puede convertir convenientemente en otros derivados de fórmula (I) también haciendo reaccionar apropiadamente grupos funcionales diferentes de los anteriores grupos R y R_{1}.
Por ejemplo, los compuestos de fórmula (I) que tienen R_{2} igual a -CH_{2}OH u -OH y R es diferente de hidrógeno se pueden hacer reaccionar con un compuesto de la fórmula (XI)
(XI)R'-Y
en la que R' es lo definido antes pero diferente de hidrógeno e Y es un grupo saliente adecuado, preferiblemente cloro o bromo, para obtener los correspondientes compuestos en los que R_{2} es-CH_{2}OR' o OR'. Esta última reacción se puede realizar en presencia de una base tal como hidruro sódico, N,N-diisopropiletilamina o piridina, en un disolvente adecuado tal como tolueno, diclorometano, cloroformo, dietil éter, tetrahidrofurano, acetonitrilo o N,N-dimetilformamida, a una temperatura que varía de aproximadamente -10ºC a la de reflujo.
Como ejemplo adicional, se puede preparar convenientemente un compuesto de la fórmula (I) en la que X es SO y R es diferente de hidrógeno partiendo de un compuesto correspondiente de la fórmula (I) en la que X es S, haciendo reaccionar este último con un agente oxidante, de acuerdo con procedimientos convencionales. La reacción se puede llevar a cabo en presencia de un agente oxidante tal como, por ejemplo, eterato dietílico de trifluoruro de boro, en presencia de MCPBA, peróxido de hidrógeno en presencia de TFA y similares, en un disolvente adecuado tal como diclorometano, agua, metanol o etanol, a una temperatura que varía de aproximadamente -10ºC a la de reflujo y durante un tiempo de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 48 horas.
Se aplican condiciones oxidantes cuando se preparan compuestos de la fórmula (I) en la que X es SO_{2} a partir de los correspondientes derivados (I) en los que X es S. En este caso, la reacción se puede realizar en presencia de un agente oxidante tal como, por ejemplo, MCPBA, dimetildioxirano, ozono, monoperoxiftalato de Mg, en un disolvente adecuado tal como diclorometano, cloroformo, acetona, acetonitrilo, agua, metanol o etanol, a una temperatura que varía de aproximadamente -10ºC a la de reflujo y durante un tiempo de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 48 horas.
En otro ejemplo, se puede preparar convenientemente un compuesto de la fórmula (I) en la que X es NR' y ni R' ni R'' son hidrógeno a partir de un compuesto correspondiente de la fórmula (I) en la que X es NH por reacción con un compuesto de la fórmula (XI)
(XI)R'Y
en la que R' es lo definido antes pero no es hidrógeno, e Y es un grupo saliente adecuado, como se ha señalado antes.
Esta última reacción se puede realizar en presencia de una base tal como hidruro sódico, t-butilato potásico, carbonato potásico, hidróxido potásico y similares, en un disolvente adecuado tal como tolueno, diclorometano, cloroformo, dietil éter, tetrahidrofurano, acetonitrilo o N,N-dimetilformamida o dimetlsulfóxido, a una temperatura que varía de aproximadamente -10ºC a la de reflujo.
Finalmente, la salificación de un compuesto de fórmula (I), como se indica en la etapa (c) o, alternativamente, su conversión en el compuesto libre de fórmula (I), se efectúan ambas de acuerdo con procedimientos bien conocidos, que se considera que están comprendidos en el ámbito de la invención.
Como lo apreciará fácilmente un experto en la técnica, cuando se preparan los compuestos de la fórmula (I) objeto de la invención, los grupos opcionales tanto de los materiales de partida como de sus intermedios y que podrían dar lugar a reacciones secundarias no deseadas deben ser necesariamente protegidos de acuerdo con procedimientos convencionales. Análogamente, la conversión de estos últimos en compuestos desprotegidos se puede realizar de acuerdo con procedimientos bien conocidos en la técnica.
A este respecto, procede señalar que subproductos opcionales que, por ejemplo, se originan por las reacciones de funcionalización anteriores en el grupo amino, también se pueden presentar en los átomos de nitrógeno del pirazol. Por tanto, se pueden requerir etapas adicionales para aislar el deseado compuesto de fórmula (I) de acuerdo con procedimientos bien conocidos en la técnica.
Por ejemplo, los compuestos obtenidos haciendo reaccionar el derivado amino (I) en el que R es hidrógeno con agentes de acilación, pueden conducir a compuestos en los que la acilación se produce tanto en el grupo amino como en el átomo de nitrógeno del pirazol. Estos compuestos se pueden convertir fácilmente en los correspondientes derivados de fórmula (I) que se están desacilando en el átomo de nitrógeno del pirazol mediante hidrólisis selectiva del grupo acilo en esta misma posición.
Alternativamente, un compuesto de fórmula (I) que se está obteniendo de acuerdo con la etapa (a) del procedimiento se puede proteger primeramente en el átomo de nitrógeno del pirazol de acuerdo con procedimientos conocidos, convertirlo seguidamente en el derivado deseado de fórmula (I), como en la etapa (b) y/o (c) y, finalmente, desprotegerlo.
Por tanto, un objeto adicional de la invención está representado por un procedimiento para preparar los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables que comprende:
(d) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (I) obtenido en la etapa (a) con un derivado clorocarbonato de alquilo de la fórmula (XII)
(XII)R_{3}-O-COCl
en la que R_{3} es un grupo alquilo inferior, para obtener un compuesto de fórmula (XIII)
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que se ha protegiendo en el átomo de nitrógeno del pirazol;
(e) convertir el compuesto de fórmula (XIII) así obtenido en un compuesto de la fórmula (XII) en la que R no es un átomo de hidrógeno:
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(f) escindir en condiciones alcalinas el compuesto de fórmula (XIII) para eliminar el grupo protector de -COOR_{3} y obtener el deseado compuesto de fórmula (I); y/o, si se desea,
(g) convertir un compuesto de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I) o en una de sus sales farmacéuticamente aceptable.
De acuerdo con la etapa (d) del procedimiento, la reacción con el clorocarbonato de alquilo de fórmula (XII) se puede realizar en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano, diclorometano, cloroformo, acetonitrilo, tolueno o mezclas de ellos, en presencia de un secuestrador de protones oportuno tal como trietilamina o diisopropiletilamina, a una temperatura que varía de aproximadamente -5ºC a aproximadamente 35ºC y durante un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 72 horas.
Preferiblemente, en los compuestos de fórmula (XII), R_{3} es un grupo alquilo inferior tal como, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-6} lineal o ramificado.
Obviamente, cuando se hace referencia a ambos compuestos de fórmula (XIII), se piensa que el grupo protector está unido a cualquiera de los átomos de nitrógeno del pirazol esencialmente como sigue:
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De acuerdo con la etapa (f) del procedimiento, el compuesto de fórmula (XIII) se desprotege en el átomo de nitrógeno del pirazol por tratamiento en condiciones alcalinas, de acuerdo con procedimientos convencionales, por ejemplo con solución acuosa de hidróxido sódico o hidróxido potásico en presencia de un codisolvente adecuado tal como metanol, etanol, dimetilformamida o 1,4-dioxano, o por tratamiento con una amina terciaria o diisopropiletilamina en presencia de un alcohol inferior como disolvente, típicamente metanol o etanol.
La reacción de desprotección puede realizarse a una temperatura del intervalo de aproximadamente 18ºC a la de reflujo, y durante un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 72 horas.
Obviamente, cualquier conversión de un compuesto de la fórmula (I) en otro compuesto de la fórmula (I), por ejemplo, como se señala en la etapa (g) del procedimiento, sigue, por analogía, las condiciones operativas antes mencionadas dadas en el anterior proceso de la etapa (c).
Análogamente, la conversión de un compuesto de la fórmula (XIII) en la que R es hidrógeno en otro compuesto de la fórmula (XIII) en la que R no es hidrógeno, como en la etapa (e), sigue las condiciones operativas antes mencionadas dadas en la etapa (b) del proceso antes mencionado.
Alternativamente, de acuerdo con otro objeto adicional de la invención, los compuestos de la fórmula (I) de la invención en la que R no es un átomo de hidrógeno, por ejemplo, es un grupo -COR' o -COOR', y sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden preparar por un procedimiento que comprende:
(h) hacer reaccionar un compuesto de la fórmula (I) que se ha obtenido en la etapa (a) antes mencionada con un exceso de un clorocarbonato o cloruro de acilo adecuado
R'-I-CO-Cl
(XIVa)
R'-CO-Cl
(XIVb)
en los que R' es lo definido antes, para obtener un compuesto de la fórmula (XVa) o (XVb) respectivamente
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(i) escindir en condiciones alcalinas el compuesto de fórmula (XVa) o (XVb) para eliminar el grupo protector del átomo de nitrógeno del pirazol y, por ello, obtener el deseado compuesto de fórmula (I) que presenta R como un grupo -COR' o -COOR'; y, si se desea,
(j) convertir el compuesto de fórmula (I) así obtenido en otro compuesto de fórmula (I) o en una de sus sales farmacéuticamente aceptable.
De acuerdo con la etapa (h) del procedimiento, la reacción entre el compuesto de fórmula (I) y el de fórmula (XIVa) o (XIVb) se puede realizar en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano, diclorometano, cloroformo, acetonitrilo, tolueno o mezclas de ellos, en presencia de un secuestrador de protones oportuno tal como trietilamina o diisopropiletilamina, a una temperatura que varía de aproximadamente -5ºC a aproximadamente 35ºC y durante un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 72 horas.
La posterior hidrólisis selectiva del grupo en el átomo de nitrógeno del pirazol en la etapa (e) es realiza en condiciones alcalinas como anteriormente se ha indicado en la etapa (f).
La Etapa (j), que comprende cualquier variante relacionada con la conversión de un compuesto de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I), se realiza en las condiciones operativas antes mencionadas para la etapa (c).
De acuerdo con otro procedimiento alternativo, el compuesto de fórmula (I) que se está obteniendo en la etapa (a) también se puede soportar sobre una resina adecuada en vez de ser protegido en el átomo de nitrógeno del pirazol y hacer posteriormente que reaccione para que resulten los compuesto deseados.
Por tanto, es objeto de la invención también un procedimiento para preparar los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables, procedimiento que comprende:
(k) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (I) obtenido en la etapa (a) con una resina poliestirénica de isocianato de fórmula (XV)
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para obtener una poliestirenmetilurea de la fórmula (XVI)
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en la que X, R_{1} y R_{2} son lo definido antes,
(l) convertir el compuesto de fórmula (XVI) así obtenido en un compuesto de la fórmula (XVII)
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en la que R no es un átomo de hidrógeno, y
(m) escindir en condiciones alcalinas el compuesto de fórmula (XVII) para eliminar la resina y obtener el compuesto deseado de fórmula (I); y, si se desea,
(n) convertir el compuesto de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I) o en una de sus sales farmacéuticamente aceptable.
De acuerdo con la etapa (k), la reacción entre la resina isocianatometilpoliestirénica de fórmula (XV) y el compuesto de fórmula (I) se puede realizar en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, N,N-dimetilformamida, diclorometano, cloroformo, acetonitrilo, tolueno o mezclas de ellos, a una temperatura que varía de aproximadamente 5ºC a aproximadamente 35ºC y durante un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 72 horas.
De acuerdo con la etapa (l), la conversión del compuesto de fórmula (XVI) soportado por resina en el correspondiente derivado de la fórmula (XVII) (en la que R no es hidrógeno) soportado por resina se puede realizar como antes se ha indicado en la etapa (b) operando en condiciones suaves, por ejemplo, a temperaturas que varían de aproximadamente 5ºC a aproximadamente 60ºC y durante un tiempo que varía de aproximadamente 2 horas a aproximadamente 7 días.
La posterior escisión de la resina, de acuerdo con la etapa (m), se realiza en condiciones alcalinas, por tratamiento de acuerdo con técnicas convencionales, por ejemplo en presencia de hidróxido sódico o potásico acuoso en presencia de un codisolvente adecuado tal como metanol, etanol, dimetilformamida, 1,4-dioxano o acetonitrilo.
Cualquier conversión de un compuesto de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I) como en la etapa (n) sigue las condiciones previamente dadas para la etapa (c).
Todos los compuestos de las fórmulas (II) a (XII), (XIVa), (XIVb) y (XV) de acuerdo con los procedimientos objeto de la presente invención son conocidos y, si no son asequibles comercialmente en sí, se pueden obtener por procedimientos bien conocidos.
El intermedio clave de fórmula (II), en particular, se puede preparar por reducción de un compuesto de fórmula (XVIII)
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de acuerdo con procedimientos convencionales descritos en la bibliografía. Por ejemplo, la reacción se puede realizar en presencia de un agente reductor oportuno tal como, por ejemplo, polvo de hierro, polvo de estaño, cloruro de estaño, cloruro de titanio, o por hidrogenación catalítica en presencia de níquel raney o catalizadores de Lindlar, en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, tolueno, dimetilformamida, acetonitrilo, metanol, etanol, agua, ácido acético o ácido clorhídrico, a una temperatura que varía de aproximadamente -5ºC a 90ºC y durante un tiempo que varía de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 4 días.
A su vez, los compuestos de fórmula (XVIII) se pueden preparar mediante un tratamiento análogo al descrito por El Kassmi A. y otros en Synth. Comm. 1994, 24(1), 95-101, a partir de un compuesto de fórmula (XIX)
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Los compuestos de la fórmula (XIX) en la que R_{1} es un grupo -COOEt, X es S y R_{2} es hidrógeno se pueden preparar de acuerdo con el procedimiento descrito por Dell'Erba C. y otros en Tetr. 1965, 21, 1061-1066.
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Por analogía, el mismo procedimiento permite obtener los correspondientes compuestos de la fórmula (XIX) en la que R_{1} es un grupo -R', -COOR', -SO_{2}R', -SO_{2}NHR' o -SO_{2}NR'R'', siendo R', R'', R_{2} y X lo definido antes, a partir de un compuesto de fórmula (XX)
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Los compuestos de la fórmula (XIX) en la que R_{1} es -SO_{2}NHR' y R', R_{2} y X son lo definido antes se pueden obtener convenientemente a partir de un compuesto correspondiente de la fórmula (XX) en la que R_{1} es -SO_{2}Cl haciéndolo reaccionar con un compuesto de la fórmula (VI)
(IV)R'R''NH
en la que R' y R'' son lo definido antes, no siendo ambas contemporáneamente hidrógeno. Esta última reacción se puede realizar en presencia de una base terciaria tal como trietilamina, N,N-diisopropiletilamina o piridina, en un disolvente adecuado tal como tolueno, diclorometano, cloroformo, dietil éter, tetrahidrofurano, acetonitrilo o N,N-dimetilformamida, a una temperatura que varía de aproximadamente -10ºC a la temperatura de reflujo y durante un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 96 horas.
De lo anterior, una persona experta en la técnica deduce claramente que la preparación de los compuestos de la fórmula (XX) en los que R_{1} es igual a-SO_{2}NR'R'' se puede realizar como se ha descrito previamente o, alternativamente, haciendo reaccionar apropiadamente un compuesto de la fórmula (XX) en la que R_{1} es -SO_{2}NHR' con cualquier resto adecuado (por ejemplo, un resto de alquilación) para preparar sulfonamidas disustituidas.
Los compuestos de la fórmula (XX) en la que ni R_{2} ni R_{1} son hidrógeno, se pueden obtener convenientemente a partir de un compuesto de fórmula (XXI)
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por bromación con un reactivo apropiado. Por ejemplo, la reacción se puede llevar a cabo en presencia de un agente de bromación tal como bromo, N-bromosuccinimida y similares, en un disolvente adecuado tal como tolueno, diclorometano, cloroformo, dietil éter, tetrahidrofurano, acetonitrilo o N,N-dimetilformamida, a una temperatura del intervalo de aproximadamente -10ºC a la temperatura de reflujo, y durante un tiempo de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 96 horas.
Finalmente, de acuerdo con otra realización preferida de la invención, los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden preparar por un procedimiento que comprende:
(i) convertir por una reacción apropiada un compuesto de la fórmula (XXII)
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en la que R_{1}, R_{2} y X son lo definido antes y Hal es un átomo de halógeno, en el correspondiente derivado ciano, opcionalmente separando el isómero deseado si R_{1} en la fórmula (XXXII) anterior es también un resto CHO;
(ii) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (XXIII) así obtenido
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en la que R_{1}, R_{2}, X y Hal son lo definido antes, con un derivado de hidrazona de la fórmula (XXIV): R_{a}R_{b}C=N-NH_{2}, en la que R_{a} y R_{b} son un grupo alquilo C_{1-6} lineal o ramificado, arilo, arilalquilo C_{1-6} o que, junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un grupo heterociclo opcionalmente condensado o un grupo cicloalquilio C_{5-7}, en atmósfera inerte en presencia de un catalizador de Pd, un ligando y una base:
(iii) tratar el compuesto resultante de fórmula (XXV)
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en la que R_{1}, R_{2}, X, R_{a} y R_{b} son lo definido antes, con un ácido en un disolvente adecuado para obtener un compuesto de la fórmula (I) en la que R es un átomo de hidrógeno y R_{1}, R_{2} y Hal son lo definido antes y, si se desea, convertir el compuesto de fórmula (I) así obtenido en otro compuesto de la fórmula (I) o en una de sus sales farmacéuticamente aceptable como se ha descrito antes en las etapas (b) y (c); (d), (e), (f) y (g); (h), (i), (j) o (k), (l), (m), (n). Por ejemplo, un compuesto hidrolizado resultante en el que el grupo R_{1} es COOH se puede hacer reaccionar luego con un compuesto de la fórmula (X) como se ha definido antes, por tratamiento de acuerdo con procedimientos convencionales para preparar ésteres, con el fin de obtener otro compuesto de la fórmula (I) en la que R_{1} es COOR'.
De acuerdo con la etapa (i) del procedimiento, la conversión del grupo CHO en un resto CN se puede realizar de acuerdo con procedimientos convencionales recogidos en la bibliografía. Por ejemplo, la reacción se puede realizar en presencia de hidroxilamina o uno de sus derivados, en presencia de una base como piridina, trietilamina, N,N-diisopropilatilamina, acetato sódico y similares; en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, agua, tetrahidrofurano (THF), acetonitrilo (MeCN), dimetilformamida (DMF), dioxano, metanol o etanol. La reacción ser lleva a cabo a una temperatura del intervalo de aproximadamente 0ºC a aproximadamente 40ºC y durante un tiempo que varía de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 6 horas. La oxima así obtenida se convierte en el compuesto de fórmula (XXIII) deseado, sin necesidad de ser aislada, por tratamiento con un agente deshidratante adecuado tal como, por ejemplo, anhídrido del ácido trifluoroacético. Como en la etapa (ii) del procedimiento, la reacción con un derivado de hidrazona se realiza bajo atmósfera inerte, tal como una atmósfera de nitrógeno o argón, en presencia de un catalizador de Pd como Pd(AcO)_{2}, PdCl_{2}, Pd_{2}(dba)_{3}, una base tal como Cs_{2}CO_{3}, K_{2}CO_{3} o K_{3}PO_{4}, y un ligando difosfina tal como 2,2'-bis(difenilfosfino)-1, 1'-binaftilos (BlNAP), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno (DPPF), 10,11-dihidro-4,5-bis(difenilfosfino)dibenzo-[b,f]oxepina (HomoXantphos), bis(2-(difenilfosfino)fenil) éter (DPEphos), 9,9-dimetil-4,6-bis(difenilfosfina)xanteno (Xantphos), (o-bifenil)P(t-Bu)_{2}, (o-bifenil)-PCy_{2} o similares, o un ligando dialquilfosfinobifenilo funcionalizado tal como 2-diciclohexilfosfino-2'-dimetilaminobifenilo y similares (véase J. Org. Chem., 65 (17), págs. 5338-5341, 2000). El disolvente adecuado es, por ejemplo, tolueno, MeCN, DMF o dioxano, y la reacción se lleva a cabo a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 70ºC a aproximadamente 130ºC y durante un tiempo que varía de aproximadamente 6 horas a aproximadamente 72 horas. En cuanto a los derivados de hidrazona de la fórmula (XXIV), cuando R_{a} y R_{b} junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un heterociclo opcionalmente condensado, puede ser, por ejemplo, un xanteno o tioxanteno o similar; cuando forman un grupo cicloalquilo C_{3-7} puede ser, por ejemplo, un anillo ciclohexano o similar. En la bibliografía se describen otros derivados de hidrazona que se pueden usar en esta etapa; véase, por ejemplo, J. Am. Chem. Soc., 120(26), págs. 6621-6622, 1998. La reacción de la etapa (iii) que da el compuesto de fórmula (I) se realiza con un ácido tal como ácido p-toluenosulfónico, ácido sulfúrico, ácido clorhídrico, ácido trifluoroacético, ácido perclórico y similares, en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, agua, un alcohol como metanol, etanol, propanol, butanol, t-butanol o similar, o una mezcla de ellos, opcionalmente mezclado con otro disolvente como tetrahidrofurano, dioxano, dimetoxietano, DMA, NMP. La reacción se efectúa a una temperatura que varía de aproximadamente 20ºC a aproximadamente 120ºC y durante un tiempo que varía de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 12 horas. En esta etapa (iii), el tratamiento ácido puede también convertir el grupo R_{1} en uno diferente, por ejemplo, por hidrólisis, esto es, el grupo COOR' en COOH, o por transesterificación, por ejemplo, el COOR' en otro grupo COOR' en el que el grupo R' resultante es diferente del grupo R' inicial, dependiendo del disolvente alcohólico empleado.
Todos los compuestos de las fórmulas (XXII) y (XXIV) de acuerdo con los procesos objeto de la presente invención son conocidos y, si no están disponibles comercialmente per se, se pueden obtener de acuerdo con procedimientos bien conocidos.
El intermedio clave de fórmula (XXII), en particular, se puede preparar a partir de un compuesto de la fórmula (XXVI)
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en la que R_{1}, R_{2}, X y Hal son lo definido antes, de acuerdo con procedimientos convencionales descritos en la bibliografía. Por ejemplo, la reacción se puede llevar a cabo en presencia de un derivado de litio, a la que sigue el tratamiento con dimetilformamida y luego con un ácido, análogamente a lo indicado en el Chemical & Pharmaceutical Bulletin (1997), 45(5), 799-806, o en J. Org. Chem., 67(12), 4177-4185; 2002.
Como otro ejemplo más, la reacción se puede efectuar en condiciones suaves con un compuesto de alquilmagnesio análogamente a lo descrito en J. Org. Chem., 65(15), 4618-4185; 2000.
Los compuestos de partida de fórmula (XXVI) son compuestos conocidos o se pueden preparar fácilmente por halogenación de un compuesto de fórmula (XXI) según se ha definido antes, a lo que sigue la esterificación cuando R_{1} es COOH.
Los compuestos intermedios de fórmula (XXIII) de acuerdo con las reivindicaciones 23-24 anexas y los compuestos intermedios de fórmula (XXV) son compuestos nuevos y por tanto son objeto de la presente invención.
De lo anterior resulta evidente a una persona experta que los compuestos de fórmula (I) de la invención se pueden preparar, preferiblemente, efectuando las reacciones antes descritas de modo combinatorio.
Por ejemplo, los compuestos de las fórmulas (XVI) y (XVII) que están soportados por partículas de resina, por ejemplo, de resina poliestirénica o, aún más preferiblemente, por resina poli(isocianato de metilo estirénica), y que se están preparando como se ha descrito antes, se puede hacer que reaccionen de varias maneras descritas antes para que resulten una variedad de compuestos de fórmula (I), que, por ejemplo, son miles de diferentes compuestos de fórmula (I), de acuerdo con procedimientos de química combinatoria.
Por tanto, es objeto de la presente invención también una biblioteca química combinatoria que comprende una pluralidad de compuestos de fórmula (I)
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en la que
X es un grupo seleccionado entre NR', O, S, SO o SO_{2};
cada uno de R y R_{1}, que son iguales o diferentes, se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre -R', -COR', -COOR', -CONHR', -CONR'R'', -SO_{2}R', -SO_{2}NHR' o -SO_{2}NR'R'', en los que cada uno R' y R'', que son iguales o diferentes, se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo, opcionalmente sustituido, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6} lineal o ramificado, arilo, heterociclilo o arilalquilo C_{1-6};
R_{2} es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre -R', -CH_{2}OR', y OR', en el que R' es o definido antes,
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Farmacología
Los compuestos de fórmula (I) son activos como inhibidores de proteinaquinasa y por tanto son útiles, por ejemplo, para restringir la proliferación desregulada de células tumorales.
En terapia se pueden usar en el tratamiento de varios tumores, tales como los indicados anteriormente, así como en el tratamiento de otros trastornos proliferativos celulares tales como psoriasis, proliferación vascular de células lisas asociada con ateroesclerosis y estenosis y reestenosis posquirúrgica y en el tratamiento de la enfermedad de
Alzheimer.
La actividad inhibidora de inhibidores putativos de cdk/ciclina y la potencia de compuestos seleccionados se determinan por un procedimiento de ensayo basado en el uso de tecnología de SPA (Amersham Pharmacia Biotech).
El ensayo está basado en la transferencia de restos de fosfato marcados radiactivamente por la quinasa a un sustrato biotinilado. El producto biotinilado marcado con P33 resultante se deja que se una a perlas de SPA revestidas con avidina (capacidad de biotina 130 pmol/mg) y se midió con un contador de centelleo la luz emitida.
Ensayo de inhibición de la actividad de cdk2/ciclina A
Reacción de la quinasa: Se añadieron a cada pocillo de un fondo de 96 pocillos en U 4 \muM de sustrato de histona H1 biotinilada en el laboratorio (Sigma nº. H-5505), 10 \muM de ATP (0,1 microCi P^{33}\gamma-ATP), 1,1 nM de complejo de ciclina A/CDK2, inhibidor en un volumen final de 30 \mul de tampón (TRIS HCl 10 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/ml de BSA). Después de incubación a temperatura ambiente durante 60 minutos, se paró la reacción añadiendo 100 \mul de tampón de PBS que contenía 32 mM de EDTa, 500 \muM de ATP frío, 0,1% de Triton X100 y 10 mg/ml de perlas de SPA revestidas con estreptavidina. Después de incubación durante 20 minutos, se extrajeron 110 \mul de la suspensión y se pasaron a OPTIPLATEs de 96 pocillos que contenían 100 \mul de CsCl 5M. Después 4 horas, se leyeron las placas en un lector de radiactividad Packard de recuento-TOP.
Determinación de la CI_{50}: Se ensayaron los inhibidores a diferentes concentraciones que variaban de 0,0015 a 10 \muM. Se analizaron los datos experimentales por el programa de ordenador GraphPad Prizm usando la ecuación logística de 4 parámetros:
y = fondo+(cabecera-fondo)/(1+10^((log CI_{50}-x)*pendiente))
en la que x es el logaritmo de la concentración de inhibidor, y es la respuesta; y se inicia en el fondo y sube a la cabecera con una forma sigmoide.
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Cálculo de Ki
Procedimiento experimental: La reacción se realizó en tampón (10 mM de Tris, pH 7,5, 10 mM de MgCl_{2}, 0,2 mg/ml de BSA, 7,5 mM de DTT) que contenía 3,7 nM de enzima, histona y ATP (relación constante de ATP frío/marcado 1/3000). La reacción se paró con EDTA y el sustrato se capturó sobre fosfomembrana (placas multitamices de 96 pocillos de Millipore). Después de un extenso lavado, las placas de multitamices se leyeron en un contador de cabecera. Se midieron el control (tiempo 0) para cada ATP y las concentraciones de histona.
Diseño experimental: Se midieron las velocidades de reacción para 4 ATP, sustrato (histona) y las concentraciones de inhibidor. Se diseñó una matriz de concentración de 80 puntos en torno a los respectivos ATP y valores Km del sustrato y los valores de la CI_{50} (0,3, 1, 3, 9 veces Km o los valores de la CI_{50}). Un experimento preliminar de transcurso con el tiempo en ausencia de inhibidor y los diferentes ATP y concentraciones de sustrato permite la selección de un tiempo individual de punto final (10 minutos) en el intervalo lineal de la reacción para el experimento de determinación de Ki.
Estimación de parámetros cinéticos: Los parámetros cinéticos se estimaron por regresión simultánea no lineal por mínimos cuadrados [Ec. 1] (inhibidor competitivo respecto a ATP, mecanismo al azar) usando el conjunto completo de datos (80 puntos):
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en la que A=[ATP], B=[sustrato], I=[inhibidor], Vm=velocidad máxima, Ka, Kb, Ki constantes de disociación de ATP, sustrato e inhibidor, respectivamente, \alpha y \beta el factor cooperativo entre sustrato y la unión de ATP y el sustrato y la unión de inhibidor, respectivamente.
Además, los compuestos seleccionados se caracterizan en un panel de ser/thre quinasas relacionadas estrictamente con el ciclo celular (cdk2/ciclina E, cdkl/ciclina B1, cdk5/p25, cdk4/ciclina D1) y también para la especifidad sobre MAPK, PKA, EGFR, IGF-R Aurora2 y Cdc 7.
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Ensayo inhibición de la actividad de cdk2/ciclina E
Reacción de quinasa: Se añadieron a cada pocillo de un fondo de 96 pocillos en U 10 \muM de sustrato de histona H1 biotinilada en el laboratorio (Sigma nº. H-5505), 30 \muM de ATP (0,3 microCi P^{33}\gamma-ATP), 4 ng de complejo de GST-ciclina E/CDK2, inhibidor en un volumen final de de 30 \mul de tampón (TRIS HCl 10 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/ml de BSA). Después de incubación a temperatura ambiente durante 60 minutos, se paró la reacción añadiendo 100 \mul de tampón de PBS que contenía 32 mM de EDTA, 500 \muM de ATP frío, 0,1% de TritonX-100 y 10 mg/ml de perlas de SPA revestidas con estreptavidina. Después de 20 minutos de incubación, se extrajeron 100 \mul de suspensión y se pasaron a OPTIPLATEs de 96 pocillos que contenían 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, se leyeron las placas durante 2 minutos en un lector de radiactividad por recuento-TOP-Count Packard.
Determinación de la CI_{50}: Véase antes.
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Ensayo de inhibición de la actividad de cdkl/ciclina B1
Reacción de quinasa: Se añadieron a cada pocillo de un fondo de 96 pocillos en U inhibidor de 4 \muM de sustrato de histona H1 biotinilada en el laboratorio (Sigma nº. H-5505), 20 \muM de ATP (0,2 microCi P^{33}\gamma-ATP), 3 ng de complejo de ciclina B/CDK1, inhibidor en un volumen final de de 30 \mul de tampón (TRIS HCl 10 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/ml de BSA). Después de incubación a temperatura ambiente durante 20 minutos, se paró la reacción añadiendo 100 \mul de PBS + 32 mM de EDTA + 0,1% de TritonX-100 + 500 \muM de ATP que contenía 1 mg de perlas de SPA. Luego se pasó un volumen de 110 \mul a OPTIPLATE.
Después de 20 minutos de incubación para captura de sustrato se añadieron 100 \mul de CsCl 5M para la ascensión de las perlas a la parte superior de la Optiplate y se dejó en reposo durante 4 horas antes del recuento de la radiactividad en el instrumento Top-Count.
Determinación de la IC_{50}: Véase antes.
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Ensayo de inhibición de la actividad de cdk5/p25
El ensayo de inhibición se realizó de acuerdo con el protocolo siguiente.
Reacción de quinasa: Se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en U 10 \muM de sustrato de histona H1 biotinilada, 30 \muM de ATP (0,3 microCi P^{33}\gamma-ATP), 15 ng de complejo de CDK5/p25, inhibidor en un volumen final de de 30 \mul de tampón (TRIS HCl 10 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/ml de BSA). Después de incubación a temperatura ambiente durante 35 minutos, se paró la reacción añadiendo 100 \mul de tampón de PBS que contenía 32 mM de EDTA, 500 \muM de ATP frío, 0,1% de Triton X100 y 10 mg/ml de perlas de SPA revestidas con estreptavidina. Después de 20 minutos de incubación se extrajeron 110 \mul de suspensión y se pasaron a OPTIPLATEs de 96 pocillos que contenían 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, se leyeron las placas durante 2 minutos en un lector de radiactividad por recuento TOP-Count Packard.
Determinación de la IC_{50}: Véase antes.
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Ensayo de inhibición de la actividad de cdk4/ciclina D1
Reacción de quinasa: Se añadieron a cada placa de 96 pocillos de fondo en U 0,4 uM de sustrato de ratón GST-Rb \muM (769-921) (nº. sc-4112 de Santa Cruz), 10 \muM de ATP (0,5 \muCi P^{33}\gamma-ATP), 100 ng de GST-cdk4/GST-ciclina D1 expresada en baculovirus, concentraciones adecuas de inhibidor en un volumen final de 50 \mul de tampón (TRIS HCl 10mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, 7,5 mM de DTT+0,2 ml/mg de BSA). Después de una incubación a 37ºC durante 40 minutos, se paró la reacción con 20 \mul de EDTA 120 mM.
Captura: Se pasaron 60 \mul de cada pocillo a una placa MultiScreen para que el sustrato se uniera al filtro de fosfocelulosa. Se lavaron luego las placas 3 veces con 150 \mul/pocillo de PBS Ca^{++}/Mg^{++} y se filtró por el sistema de filtración MultiScreen.
Detección: Se dejaron secar los filtros a 37ºC, luego se añadieron 100 \mul/pocillo de agente de centelleo y el fragmento de Rb marcado con P^{33} se detectó por recuento de radiactividad en el instrumento Top-Count.
Determinación de la IC_{50}: Véase antes.
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Ensayo de inhibición de la actividad de MAPK
Reacción de quinasa Se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en U 10 \muM de sustrato de MBP biotinilado en el laboratorio (Sigma nº. M-1891), 15 \muM de ATP (0,15 microCi P^{33}\gamma-ATP), 30 ng de GST-MAPK (Upstate Biotechnology nº. 14-173), inhibidor en un volumen final de de 30 \mul de tampón (TRIS HCl 10 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/ml de BSA). Después de incubación a temperatura ambiente durante 35 minutos, se paró la reacción añadiendo 100 \mul de tampón de PBS que contenía 32 mM de EDTA, 500 \muM de ATP frío, 0,1% de Triton X100 y 10 mg/ml de perlas de SPA revestidas con estreptavidina. Después de 20 minutos de incubación se extrajeron 110 \mul de suspensión y se pasaron a OPTIPLATEs de 96 pocillos que contenían 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, se leyeron las placas durante 2 minutos en un lector de radiactividad por recuento TOP-Count de Packard.
Determinación de la CI_{50}: Véase antes.
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Ensayo de inhibición de la actividad de PKA
Reacción de quinasa
Se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en U 10 \muM de sustrato de MBP biotinilado en el laboratorio (Sigma nº. H-5505), 10 \muM de ATP (0,2 microCi P^{33}\gamma-ATP), 0,45 U de PKA (Sigma nº. 2645), inhibidor en un volumen final de de 30 \mul de tampón (TRIS HCl 10 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/ml de BSA). Después de incubación a temperatura ambiente durante 90 minutos, se paró la reacción añadiendo 100 \mul de tampón de PBS que contenía 32 mM de EDTA, 500 \muM de ATP frío, 0,1% de Triton X100 y 10 mg/ml de perlas de SPA revestidas con estreptavidina. Después de 20 minutos de incubación se extrajeron 110 \mul de suspensión y se pasaron a OPTIPLATEs de 96 pocillos que contenían 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, se leyeron las placas durante 2 minutos en un lector de radiactividad TOP-Count de Packard.
Determinación de la CI_{50}: Véase antes.
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Ensayo de inhibición de la actividad de EGFR
Reacción de quinasa: Se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en U 10 \muM de sustrato de MBP biotinilado en el laboratorio (Sigma nº. M-1891), 2 \muM de ATP (0,04 microCi P^{33}\gamma-ATP), 36 ng de GST-EGFR expresado en células de insecto, inhibidor en un volumen final de de 30 \mul de tampón (Hepes 50 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 3 mM, MnCl_{2} 3 mM, DTT 1 mM, NaVO_{3} 3 \muM + 0,2 mg/ml de BSA). Después de incubación a temperatura ambiente durante 20 minutos, se paró la reacción añadiendo 100 \mul de tampón de PBS que contenía 32 mM de EDTA, 500 \muM de ATP frío, 0,1% de Triton X100 y 10 mg/ml de perlas de SPA revestidas con estreptavidina. Después de 20 minutos de incubación se extrajeron 110 \mul de suspensión y se pasaron a OPTIPLATEs de 96 pocillos que contenían 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, se leyeron las placas durante 2 minutos en un lector de radiactividad TOP-Count de Packard.
Determinación de la CI_{50}: Véase antes.
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Ensayo de inhibición de la actividad de IGF1-R
El ensayo de inhibición de la actividad de OGF1-R se realiza de conformidad con el protocolo siguiente.
Activación de la enzima: Se debe activar la IGF1-R por autofosforilación antes de empezar el experimento. Justo antes del ensayo se incuba una solución concentrada de la enzima (694 nM) durante media hora a 28ºC en presencia de 100 \muM de ATP y se lleva a la dilución de trabajo en el tampón indicado.
Reacción de la quinasa: Se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en U 10 \muM de sustrato de péptido de IRS1 (PRIMM) biotinilado, 0-20 \muM de inhibidor, 6 \muM de ATP, 1 microCi P^{33}\gamma-ATP, y 6 nM de GST-IGFR (preincubado durante 30 minutos a temperatura ambiente con 60 \muM de ATP frío) en un volumen final de 30 \mul de tampón (Hepes 50 mM, pH 7,9, 3 mM de MnCl_{2} 1 mM de DTT, 3 \muM de NaVO_{3}). Después de incubación a temperatura ambiente durante 35 minutos, se paró la reacción añadiendo 100 \mul de tampón de PBS que contenía 32 mM de EDTA, 500 \muM de ATP frío, 0,1% de Triton X100 y 10 mg/ml de perlas de SPA revestidas con estreptavidina. Después de 20 minutos de incubación se extrajeron 110 \mul de suspensión y se pasaron a OPTIPLATEs de 96 pocillos que contenían 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, se leyeron las placas durante 2 minutos en un lector de radiactividad TOP-Count de Packard.
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Ensayo de inhibición de la actividad de Aurora-2
Reacción de quinasa: A cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en U se añadieron 8 \muM de péptido biotinilado (4 repeticiones de LRRWSLG), 10 \muM de ATP (0,5 uCi P^{33}\gamma-ATP), 7,5 ng de Aurora-2, inhibidor en un volumen final de 30 \mul de tampón (HEPES 50 mM, pH 7,0, MgCl_{2} 10 mM, 1 mM de DTT, 0,2 mg/ml de BSA, 3 \muM de ortovanadato). Después de 60 minutos de incubación a temperatura ambiente se paró la reacción y se capturó el péptido biotinilado añadiendo 100 \mul de suspensión de perlas.
Estratificación: A cada pocillo se añadieron 100 \mul de CsCl 5 M y se dejó en reposo durante 4 horas antes del recuento de radiactividad en el instrumento Top-Count.
Determinación de la IC_{50}: Véase antes.
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Ensayo de inhibición de la actividad de Cdc7/dbf4
El ensayo de inhibición de Cdc7/dbf4 se realiza de acuerdo con el protocolo siguiente:
El sustrato de biotina-MCM2 se transfosforila por el complejo Cdc7/Dbf4 en presencia de ATP marcado con \gamma^{33}-ATP. El sustrato de Biotina-MCM2 fosforilado se captura luego por perlas de SPA revestidas con estreptavidina y se evalúa por recuento de \beta la cuantía de la fosforilación.
El ensayo de inhibición de la actividad de Cdc7/dbf4 se realizó en placas de 96 pocillos de acuerdo con el protocolo siguiente.
A cada pocillo de la placa se añadieron:
-
10 \mul de sustrato (MCM2 biotinilado, concentración final 6 \muM)
-
10 \mul de enzima (Cdc7/Dbf4, concentración final 17,9 nM)
-
10 \mul de compuesto a ensayar (12 concentraciones crecientes en el intervalo de nM a \muM para generar una curva de dosis-respuesta)
-
10 \mul de una mezcla de ATP frío (concentración final 2 \muM) y ATP radiactivo (relación molar con ATP frío, 1/5000)
y luego se usó para iniciar la reacción que se dejó que tuviera lugar a 37ºC.
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El sustrato, la enzima y el ATP se diluyeron con 50 mM HEPES pH 7,9 que contenía 15 mM de MgCl_{2}, 2 mM de DTT, 3 \muM de NaVO_{3}, 2 mM de glicerofosfato y 0,2 mg/ml de BSA. El disolvente para los compuestos a ensayar también contenía 10% de DMSO.
Después de incubación durante 60 minutos se paró la reacción añadiendo a cada pocillo 100 \mul de PBS, pH 7,4, que contenía 50 mM de EDTA, 1 mM de ATP frío, 0,1% de Triton X100 y 10 mg/ml de perlas de SPA revestidas con estreptavidina.
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Después de 20 minutos de incubación se extrajeron 110 \mul de suspensión y se pasaron a OPTIPLATEs de 96 pocillos que contenían 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, se leyeron las placas durante 2 minutos en un lector de radiactividad TOP-Count de Packard.
Determinación de la IC_{50}: Véase antes.
Los compuestos de la invención pueden ser útiles en terapia, por ejemplo, para restringir la proliferación desregulada de células tumorales. Más específicamente, los biciclopirazoles de la invención pueden ser útiles en el tratamiento de una variedad de cánceres, entre los que están incluidos, pero no únicamente, carcinomas de varios órganos, tejidos y glándulas tales como vejiga, mama, colon, riñon, hígado, pulmón, incluido cáncer de pulmón de células pequeñas, esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cerviz, tiroides, próstata y piel, incluido el carcinoma celular escamoso; tumores hematopoyéticos de linaje linfoide, incluidas leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, linfoma de células capilares y linfoma de Burkett; tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, incluidas leucemias mielogéneas agudas y crónicas, síndrome mielodisplásico y leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquimal, incluidos fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluidos astrocitoma, neuroblastoma, glioma y sevanomas; otros tumores, incluidos melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentoso, queratoxantomas, cáncer folicular tiroideo y sarcoma de Kaposi. Debido al papel clave de las PK en la regulación de la proliferación celular, los biciclopirazoles de la invención pueden ser útiles también en el tratamiento de una variedad de trastornos proliferativos tales como, por ejemplo, hiperplasia prostática benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación vascular de células lisas asociada con ateroesclerosis, fibrosis pulmonar, glomerulonefritis artrítica y estenosis y reestenosis posquirúrgicas. Los compuestos de la invención pueden ser útiles en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, como lo sugiere el hecho de que la cdk5 está implicada en la fosforilación de la proteína tau (J. Biochem., 117, 741-749, 1995). Los compuestos de la invención, como moduladores de la apoptosis, pueden ser útiles también en el tratamiento de cáncer, infecciones víricas, prevención del desarrollo del SIDA en individuos infectados por el VIH, enfermedades autoinmunes y trastornos neurodegenerativos. Los compuestos de la invención pueden ser útiles para inhibir la angiogénesis y metástasis tumoral.
Los compuestos de la invención son adecuados para administración a mamíferos, por ejemplo seres humanos, por las vías usuales. El nivel de dosificación depende, como es usual, de la edad, el peso, las condiciones del paciente y la vía de administración. Por ejemplo, un nivel de dosificación adecuado adaptado para administración oral de los compuestos de la invención, por ejemplo, N-bencil-3-{[4-(4-etilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida, puede variar de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg por dosis, de 1 a 5 veces al día.
Los compuestos de la invención se pueden administrar en varias formas de dosificación, por ejemplo oralmente, en forma de comprimidos, cápsulas, comprimidos revestidos con azúcar o una película, soluciones o suspensiones líquidas; rectalmente en forma de supositorios; parenteralmente, por ejemplo intramuscularmente, por vía intravenosa y/o intratecal, y/o inyección o infusión intraespinal; o por administración transdérmica.
Además, los compuestos de la invención se pueden administrar como agentes individuales o, alternativamente, en un procedimiento de terapia de combinación, que comprende tratamientos anticancerosos adicionales tales como terapia de radiación o un régimen de quimioterapia en combinación con agentes citostáticos o citotóxicos, agentes de tipo antibiótico, agentes de alquilación, agentes antimetabólicos, agentes hormonales, agentes inmunológicos, agentes de tipo interferón, inhibidores de ciclooxigenasa (por ejemplo, inhibidores de COX-2, en particular celecoxib, rofecoxib, parecoxib y valdecoxib), inhibidores de metalomatrizproteína, inhibidores de telomerasa, inhibidores de tirosinaquinasa, agentes de receptores del factor anticrecimiento, agentes anti-HER, agentes anti-EGFR, agentes antiangiogenesis, inhibidores de farnesiltransferasa, inhibidores de la ruta de transducción de la señal ras-raf, inhibidores del ciclo celular, otros inhibidores de cdks, agentes de unión de tubulina, inhibidores de topoisomerasa I, inhibidores de topoisomerasa 11 y similares.
Si se formulan a una dosis fijada, tales productos de combinación emplean los compuestos de la invención dentro del intervalo de dosificación descrito antes y el otro agente farmacéuticamente activo dentro del intervalo de dosificación aprobado.
Los compuestos de fórmula (I) se pueden usar secuencialmente con agentes anticancerosos conocidos cuando es inapropiada una formulación de combinación.
También se describe en esta memoria un procedimiento para tratar un mamífero, incluido un ser humano, que sufre una enfermedad causada por y/o asociada con una actividad de proteinaquinasa alterada (desregulada), que comprende administrar al mencionado mamífero que la necesita una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto biciclopirazol de fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, mientras que está sometido simultáneamente, separadamente o secuencialmente a tratamientos anticancerosos.
Otro objeto de la invención es el uso de un compuesto de fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable en la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad causada por y/o asociada con una actividad de proteinaquinasa alterada en un paciente que está sometido simultáneamente, separadamente o secuencialmente a tratamientos anticancerosos.
La presente invención incluye también composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable que puede ser un vehículo o diluyente.
Usualmente, las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la invención se preparan siguiendo procedimientos convencionales y se administran en una forma farmacéuticamente adecuada.
Por ejemplo, las formas sólidas orales pueden contener, junto con el compuesto activo, diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, sucrosa, celulosa, almidón de maíz o almidón de patata; lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio o de calcio y/o polietilenglicoles; agentes aglutinantes, por ejemplo, almidones, goma arábiga, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o polivinilpirrolidona; agentes desintegrantes, por ejemplo, almidón, ácido algínico, alginatos o glicolato de almidón sódico; mezclas efervescentes; colorantes; edulcorantes; agentes humectantes tales como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos y, en general, sustancias no tóxicas farmacéuticamente inactivas usadas en formulaciones farmacéuticas. Los mencionados preparados farmacéuticos se pueden fabricar de manera conocida, por ejemplo, por procedimientos de mezcla, granulación, formación de comprimidos, o de revestimiento con azúcar o con una película.
Las dispersiones líquidas para administración oral pueden ser, por ejemplo, jarabes, emulsiones y suspensiones.
Los jarabes pueden contener como vehículo, por ejemplo, sacarosa o sacarosa con glicerina y/o manitol y/o sorbitol. Las suspensiones y las emulsiones pueden contener como vehículo, por ejemplo, una goma natural, agar, alginato sódico, pectina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o poli(alcohol de vinilo).
Las suspensiones o soluciones para inyecciones intramusculares pueden contener, junto con el compuesto activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, agua estéril, aceite de oliva, oleato de etilo, glicoles, por ejemplo propilenglicol, y, si se desea, una cantidad adecuada de hidrocloruro de lidocaína. Las soluciones para inyecciones o infusiones intravenosas pueden contener como vehículo, por ejemplo, agua estéril o, preferiblemente, pueden estar en forma de soluciones acuosas isotónicas estériles, o pueden contener como vehículo propilenglicol.
Los supositorios pueden contener, junto con el compuesto activo un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, manteca de cacao, polietilenglicol, un tensioactivo éster graso de polioxietilensorbitano o lecitina.
Los siguientes ejemplos tienen la finalidad de ilustrar la presente invención sin plantear limitación alguna.
Ejemplos de síntesis
En el análisis de los compuestos especificados en los ejemplos de síntesis presentados más adelante se usaron los siguientes procedimientos de HPLC. Tal como se usa en esta memoria, el tiempo "Rt" se refiere al tiempo de retención para el compuesto usando el procedimiento de HPLC que se especifica.
Procedimiento A
La HPLC/EM se realizó en una columna Waters X Terra RP 18 (4,6 x 50 mm, 3,5 \mum) usando un sistema Waters 2790 de HPLC equipado con un detector 996Waters PDA y un espectrómetro de masa cuadrupolar individual Micromass modelo ZQ equipado con una fuente de iones de electronebulización (ESI). La fase móvil A era tampón de acetato amónico 5 mM (pH 5,5 con ácido acético/acetonitrilo 95:5), y la fase móvil B era H_{2}O/acetonitrilo (5:95). Gradiente de 10 a 90% de B en 8 minutos, mantenimiento a 90% de B 2 minutos. Detección de UV a 220 nm y 254 nm. Caudal 1 ml/min. Volumen de inyección 10 \mul. Barrido total, intervalo de 100 a 800 amu. El voltaje de capilaridad era de 2,5 kV; la temperatura de la fuente era de 120ºC. el cono era 10 V. Los tiempos de retención (HPLC a temp.amb.) se dan en minutos a 220 nm o 254 nm. Las masas se dan como relación m/z.
Procedimiento B
La HPLC/EM se realizó en una columna Hypersil C 18 BDS (2 x 50 mm, 5 \mum) usando un sistema de HPLC 1312A de Hewlett Packard equipado con un detector de dispersión de la luz por evaporación Polymer Labs PL 1000 y un espectrómetro de masas Micromass ZMD equipado con fuente de iones por electroproyección (ESI). La fase móvil A era una solución acuosa de ácido trifluoroacético (0,1% v/v) y la fase móvil B era una solución en acetonitrilo de ácido trifluoroacético (0,1% v/v). Gradiente de 0 a 95% de B en 1,8 minutos, mantenimiento en B al 95% durante 3 min. Caudal 1 ml/min. Volumen de inyección 3 \mul. Barrido total, intervalo de masa de 150 a 800 amu. La temperatura de la fuente era de 140ºC. El cono era de 25 V. Los tiempos de retención (HPLC a temp. amb.) se dan en minutos. Las masas se dan como relación m/z.
Ejemplo 1 Preparación de 5-ciano-4-nitro-tiofen-2-carboxilato de metilo (1)
A una solución del éster metílico del ácido 5-bromo-4-nitro-tiofen-2-carboxílico (0,30 mol, 80,0 g) en dimetilformamida anhidra (100 ml), en agitación bajo argón, se añadió cianuro de cobre seco (0,36 mol, 32,2 g). La mezcla se calentó a 80ºC durante 3 horas y se vertió en una solución de FeCl_{3}\cdot6H_{2}O (0,45 mol, 121,6 g) en agua (170 ml) y ácido clorhídrico 10 N (35 ml). Después de calentar a 60ºC durante 20 minutos, se enfrió el medio de reacción y se sometió a extracción con diclorometano (6 x 200 ml). La capa orgánica se lavó con ácido clorhídrico 6 N (2 x 200 ml), agua (2 x 250 ml) y agua saturada con NaHCO_{3} (150 ml). La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4}. El filtrado se evaporó a sequedad obteniéndose un sólido rojo que se purificó por cromatografía rápida, sobre gel de sílice, usando como eluyente hexano/acetato de etilo (35:15), resultando el compuesto del título como un sólido blanco (36,3 g, 57%). p.f. 83-85ºC
(M+H)^{+} = 213.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) d ppm 8,3 (s), 3,9 (s).
Análogamente, usando éster etílico del ácido 5-bromo-4-nitro-tiofen-2-carboxílico (2) se preparó 5-ciano-4-nitro-tiofen-2-carboxilato de etilo. p.f.94-96ºC
(M + H)^{+} = 227
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) d ppm 8,3(s), 4,4(q), 1,3(t).
Ejemplo 2 Preparación de 4-amino-5-ciano-tiofen-2-carboxilato de metilo (3)
Se calentó a reflujo durante 3 horas una suspensión de 5-ciano-4-nitrotiofen-2-carboxilato de metilo (0,17 mol, 36 g) y polvo de hierro (0,51 mol, 28,5 g) en 68 ml de ácido acético glacial (1,2 mol). Se concentró el producto en bruto en vacío y se neutralizó con amoniaco diluido. La capa acuosa se sometió a extracción con acetato de etilo (3 x 250 ml) y se secó sobre Na_{2}SO_{4}. El filtrado se evaporó a sequedad, obteniéndose un sólido amarillo que se purificó por cromatografía rápida sobre sílice eluyendo con hexano/acetato de etilo (38:12), para obtener el compuesto del título como un sólido amarillo (21,4 g, 69%). p.f. 187-189ºC.
(M+ H)^{+} = 183
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) d ppm 7,1(s), 6,7(s), 3,7(s).
Análogamente, usando el éster etílico apropiado descrito en el Ejemplo 1, se preparó el 4-amino-5-cianotiofen-2-carboxilato de etilo (4). p.f 138-140ºC
(M + H)^{+} = 197.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) d ppm 7,2(s), 6,6(s), 4,3(s), 1,3(t)
Ejemplo 3 Preparación de 3-amino-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo (5)
A una suspensión de 5-ciano-4-nitro-tiofen-2-carboxilato de metilo (0,10 mol, 21,0 g) en 120 ml de ácido clorhídrico al 37% enfriada en hielo se añadió a gotas una solución de nitrito sódico (0,12 ml, 8,3 g) en 12 ml de agua. Después de 1,5 horas, la suspensión fría se añadió a gotas a una solución previamente preparada de cloruro de estaño (0,80 mol, 151,7 g) en 120 ml de ácido clorhídrico del 37% a 5ºC. Después de 3 horas, se filtró la suspensión fría y el sólido húmedo se trató con 350 ml de agua a ebullición durante 30 minutos. La solución turbia caliente se clarificó por filtración a través de un filtro de tela. Los licores se enfriaron con hielo y se trataron a gotas con 180 ml de hidróxido sódico al 17%. El sólido obtenido se separó por filtración y se secó en vacío a 50ºC, obteniéndose 7,3 g del compuesto del título como un sólido amarillo (rendimiento de 37%). p.f. 218-220ºC.
(M + H)^{+} = 198
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) d ppm 11,7(s), 7,6(s), 5,2(s), 3,8(s).
Análogamente, usando el éster etílico apropiado descrito en el Ejemplo 2 se preparó 3-amino-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de etilo (6). p.f. 231-233ºC.
(M+H)^{+} = 212.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) d ppm 11,8(s), 7,5(s), 5,2(s), 4,3(q), 1,3(t).
Ejemplo 4 Preparación de 3-amino-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo (7)
A una suspensión enfriada en hielo del éster metílico del ácido 3-amino-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (35,5 mmol, 7,0 g) y N,N'-diisopropiletilamina (0,21 mol, 36,5 ml) en 71 ml de tetrahidrofurano se añadieron a gotas 3,5 ml de cloroformiato de etilo (36,6 mmol). La suspensión se concentró en vacío después de 1,5 horas y se diluyó con diclorometano. La fase orgánica se lavó con tampón de pH 4, hidróxido sódico 1N, salmuera y se secó sobre Na_{2}SO_{4}. El filtrado se evaporó a sequedad y se trituró con diclorometano, obteniéndose 6 g de 3-amino-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo (7)
Sólido amarillo, procedimiento cromatográfico A, Rt 3,7 (M + H)^{+} = 270, RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) d ppm 7,95 (s anc, 1H), 4,51 (q, 2H), 3,93 (s, 3H), 1,47 (d, 3H).
Análogamente, usando el éster etílico apropiado descrito en el Ejemplo 3 se preparó 3-amino-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de dietilo (8).
(M + H)^{+} 284.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) d ppm 7,7 (s), 6,3 (s), 4,4 (q), 1,3 (m).;
Ejemplo 5 Preparación de 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de dietilo (9)
Una solución de cloruro de 4-fluorobenzoílo (0,106 mol, 12,7 ml) en 50 ml de diclorometano anhidro se añadió a gotas a una suspensión enfriada en hielo de 3-amino-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo (0,071 mol, 19,1 g) en 100 ml de diclorometano anhidro y 114,0 ml de piridina (1,412 mol). La suspensión resultante se agitó a 5ºC durante 5 horas. La mezcla se concentró en vacío y se diluyó con diclorometano. La capa orgánica se lavó con ácido clorhídrico 1N, hidróxido sódico 1N, salmuera y se secó sobre Na_{2}SO_{4}. El filtrado se evaporó a sequedad resultando un sólido amarillo que se purificó por cromatografía rápida sobre gel de sílice, empleando hexano/acetato de etilo (4:1) como eluyente, obteniéndose el compuesto del título como un sólido de color amarillo pálido (19,6 g, 68%).
Procedimiento cromatográfico A Rt 6,59 (M + H)^{+} = 392.
Análogamente, haciendo reaccionar 3-amino-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo (7) con el cloruro de ácido apropiado se preparan los compuestos siguientes:
(10)
3-[(3,5-difluorobenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etilo 5-metilo,
(11)
3-[(4-t-butilbenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etilo 5-metilo,
(12)
3-[(3-fenoxibenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo,
(13)
3-[(4-trifluorometoxibenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo,
(14)
3-[(tien-2-ilcarbonil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo,
(15)
3-[2-furoilamino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo,
(16)
3-[(1,3-benzodioxol-5-ilcarbonil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo,
(17)
3-{[5-(morfolin-4-ilmetil)-2-furoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo,
(18)
3-[(4-isopropoxibenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo,
(19)
3-[(3-cianobenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo,
(20)
3-(pentanoilamino)-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo,
(21)
3-(ciclopropilcarbonilamino)-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo,
(22)
3-(ciclobutilcarbonilamino)-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo.
Ejemplo 6 Preparación de 3-{{[(4-fluorobencil)amino]carbonil}amino}-1H-tieno[3.2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo (23)
Se añadió isocianato de 4-fluorobencilo (0,130 ml, 1,02 mmol) a una solución de 3-amino-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo (85 mg, 0,32 mmol) en diclorometano anhidro (5 ml). Después de agitar durante 96 horas a temperatura ambiente, se eliminó el disolvente a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (eluyente: diclorometano 50; alcohol metílico 0,5; amoniaco acuoso al 6% 0,1) obteniéndose 80 mg del compuesto del título como un sólido blanco.
Procedimiento cromatográfico A, Rt 6,11, [M + H]^{+} 621-
Análogamente, haciendo reaccionar 3-amino-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo con el isocianato apropiado, se preparan los siguientes compuestos:
(24)
3-{[(bencilamino)carbonil]amino}-1H-tieno[3.2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo,
(25)
3-{[(propilamino)carbonil]amino}-1H-tieno[3.2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo,
(26)
3-{[(t-butilamino)carbonil]amino}-1H-tieno[3.2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo,
(27)
3-[{{[(3-(dimetilamino)propil]amino}carbonil}amino]-1H-tieno[3.2-c]-pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo.
Ejemplo 7 Preparación de 1-(4-morfolin-4-ilbenzoil)-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)-amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo (28)
Se añadió cloruro de oxalilo (19,2 ml, 0,22 mol) a una suspensión de ácido 4-morfolin-4-ilbenzoico (7,56 g, 36,5 mmol) en DCM (210 ml) y DMF (0,34 ml). Después de mantener la mezcla a reflujo durante 6,5 horas, se eliminaron los volátiles cuidadosamente a presión reducida (recogiendo el residuo tres veces con tolueno). El hidrocloruro de cloruro de 4-morfolin-4-ilbenzoilo resultante se añadió en porciones (aprox. 0,5 h) a una suspensión de éster metílico del ácido 3-amino-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (2 g, 10,1 mmol) en DCM seco (240 ml) y piridina (12,2 ml, 0,152 mmol) bajo agitación a 5ºC. La suspensión resultante se agitó durante 72 horas a temperatura ambiente.
A la mezcla de reacción se añadieron luego 200 ml de bicarbonato sódico anhidro y, después de agitar durante 2 horas, se separó el residuo sólido por filtración. Se separó luego la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó, obteniéndose un sólido marrón. Se unieron las dos porciones sólidas, la combinación se trituró con una mezcla ed dietil éter y diclorometano (1:5 v/v), se filtró y se secó en vacío a 40ºC, obteniéndose un polvo de color amarillo pálido.
Procedimiento cromatográfico A de LC-EM, Rt 7,14, [M + H]^{+} 576.
Análogamente se preparan los compuestos siguientes haciendo reaccionar el éster metílico del ácido 3-3-amino-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico con el cloruro de acilo apropiado:
(29)
1-[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]-3-{(4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]-amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo. Procedimiento A, Rt 3,69,
(30)
1-[4-(4-etilpiperazin-1-il)benzoil]-3-{(4-(4-etilpiperazin-1-il)benzoil]-amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo,
(31)
1-[3-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]-3-{(3-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]-amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo,
(32)
1-{4-[(1-metilpiperidin-4-il)oxi]benzoil}-3-({4-[(1-metilpiperidin-1-il)oxi]benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo.
Ejemplo 8 Preparación de ácido 3-(4-fluorobenzoilamino)-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-caboxílico (33)
Se calentó a 70ºC durante 3 horas una suspensión de 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-1H-[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 1-etil 5-metilo (46,9 mmol, 19 g) en 40 mg de NaOH/H_{2}O (1:1) y 100 ml de etanol. La mezcla se concentró luego y el pH de la suspensión obtenida se ajustó a 4 con ácido clorhídrico a 37ºC y tampón de pH 4. La capa acuosa se sometió a extracción con acetato de etilo (3 x 250 ml). Las capas orgánicas recogidas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. El filtrado se evaporó a sequedad, obteniéndose 13,5 g de un sólido blanco que se usó en la siguiente etapa sin purificarlo más rendimiento de 96%).
(M + H)^{+} = 306, procedimiento A, Rt 2,00.
Los compuestos siguientes se preparan análogamente usando los 3-(acilamino)-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxilatos de 1-etil 5-metilo de los Ejemplos 5 y 6:
(34)
ácido 3-[(3,5-difluorobenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(35)
ácido 3-[(4-t-butilbenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(36)
ácido 3-[(3-fenoxibenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(37)
ácido 3-[(4-trifluorometoxibenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; procedimiento A, Rt 3,61,
(38)
ácido 3-[(tien-2-ilcarbonil) amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(39)
ácido 3-[(2-furoilamino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(40)
ácido 3-[(1,3-benzodioxol-5-ilcarbonil)amino]-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-carboxílico,
(41)
ácido 3-{[5-(morfolin-4-ilmetil)-2-furoil]amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(42)
ácido 3-[(4-isopropoxibenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(43)
ácido 3-[(3-cianobenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(44)
ácido 3-(pentanoilamino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(45)
ácido 3-(ciclopropilcarbonilamino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(46)
ácido 3-(ciclobutilcarbonilamino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(47)
ácido 3-({[(4-fluorobencil)amino]carbonil}amino)-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxílico,
(48)
ácido 3-{[(bencilamino)carbonil]amino}-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxílico,
(49)
ácido 3-{[(propilamino)carbonil]amino}-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxílico,
(50)
ácido 3-{[(t-butilamino)carbonil]amino}-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxílico,
(51)
ácido 3-[({[3-(dimetilamino)propil]amino}carbonil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico.
Ejemplo 9 Preparación de 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo (52)
Se mantuvo a reflujo durante 8 horas una mezcla de 1-(4-morfolin-4-ilbenzoil)-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo (4,3 g, 7,5 mml) en MeOH (200 ml) y Et_{3}N (20 ml). Después de enfriar, se separó el precipitado por filtración y se trituró con metanol caliente. Después de filtrar y secar a 40ºC en vacío se obtuvieron 2,4 g del compuesto del título.
LC-EM, procedimiento cromatográfico A, Rt 4,52, [M + H]^{+} 387.
Los compuestos siguientes se preparan análogamente:
(53)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo; procedimiento A, Rt 6,37, [M + H]^{+}, 400,
(54)
3-{[4-(4-eilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo,
(55)
3-{[3-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo; procedimiento A, Rt 3,20,
(56)
3-({4-[(4-metilpiperidin-4-il)oxi]benzoil}amino)-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo; [M + H]^{+} 415.
Ejemplo 10 Preparación de ácido 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxílico (57)
Se calentó a 50ºC durante 8 horas una mezcla de 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxílato de metilo (2,3 g, 6 mmol) e hidróxido sódico acuoso (12,5 ml de una solución 2 N) en MeOH (50 ml). Después de enfriar se eliminó el metanol por evaporación a presión reducida, se añadió agua (5 ml) y se ajustó el pH a 7 añadiendo ácido clorhídrico acuoso. El precipitado se separó por filtración, se lavó con agua y etil éter y se secó a 50ºC en vacío, obteniéndose 2,2 g del compuesto del título.
LC-MS, procedimiento cromatográfico A, Rt 2,06, [M + H]^{+} 373.
Análogamente se preparan los compuestos siguientes:
(58)
Ácido 3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxílico; procedimiento A, Rt 4,14, [M + H]^{-} 386,
(59)
Ácido 3-{[4-(4-etilpiperazin-1-il)benzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxílico,
(60)
Ácido 3-{[3-(4-etilpiperazin-1-il)benzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxílico,
(61)
Ácido 3-({4-[(1-metilpiperidin-4-il)oxi]benzoil}amino)-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxílico; [M + H]^{+} 401.
Ejemplo 11 Preparación de 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-N-isopropil-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida (62)
A una suspensión enfriada con hielo de ácido 3-(4-fluoro-benzoilamino)-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (50,0 mg, 0,164 mmol) y N,N'-diisopropiletilamina (1,476 mmol, 0,253 ml) en 0,3 ml de diclorometano seco se añadieron a gotas 0,078 ml de cloroformiato de etilo (0,492 mmol). A la solución obtenida se añadieron después de 20 minutos 0,083 ml de isopropilamina (0,984 mmol) y se dejó que la solución se calentara a temperatura ambiente. Después de 3 horas se añadieron 0,2 ml de metanol y 0,1 ml de N,N'-diisopropiletilamina y la mezcla de reacción se calentó a 40ºC durante 4 horas. La mezcla se concentró en vacó y se diluyó con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con tampón de pH 4, hidróxido sódico 1 N, salmuera y se secó sobre Na_{2}SO_{4}. El filtrado se evaporó a sequedad para obtener un sólido amarillo que se purificó por cromatografía rápida sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (48:2), obteniéndose el compuesto del título como un sólido blanco (20,5 mg, 36%).
(M + H)^{+} = 347.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) d ppm 12,8(s), 11,3(s), 8,3(d), 8,1(m), 7,6(s), 7,3(m), 4,0(m), 4,2(q), 1,1 (m).
Se prepararon análogamente los compuestos siguientes usando el ácido 3-(acilamino)-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico apropiado y la amina apropiada:
(63)
4-fluoro-N-{5-[(4-metilpiperazin-1-il)carbonil]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-3-il}benzamida; procedimiento A, Rt 3,10; [M + H]^{+} 388,
(64)
N-bencil-3-[(4-fluorobenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida. Procedimiento A, Rt 1,27, [M + H]^{+} 395,
(65)
N-bencil-3-[(3,5-difluorobenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 1,33, [M + ]^{+} 413,
(66)
3-[(4-t-butilbenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida. [M+H]^{+} 371,
(67)
3-[(3-cianobenzoil)amino]-N-(2-metoxietil)-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida. Procedimiento A, Rt 1,02, [M + H]^{+} 370,
(68)
N-bencil-3-[(3-fenoxibenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 6,51, [M + H]^{+} 469,
(69)
N-[(1R)-1-feniletil]-3-{[4-(trifluorometoxi)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 6,27, [M + H]^{+}, 475,
(70)
N-(2,6-dietilfenil)-3-{[4-(trifluorometoxi)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida. Procedimiento A, Rt 7,13, [M+H]^{+} 503,
(71)
N-[(1R)-1-fenilpropil]-3-{[4-(trifluorometoxi)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 6,88, [M + H]^{+} 489,
(72)
N-(3,5-dimetoxifenil)-3-{[4-(trifluorometoxi)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5}-carboxamida; procedimiento A, Rt 6,82, [M + H] 507,
(73)
N-(isopropoxipropil)-3-{[4-(trifluorometoxi)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 5,85, [M + H]^{+} 471
(74)
N-(2-morfolin-4-il-1-feniletil)-3-{[4-(trifluorometoxi)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 6,00 [M+H]^{+} 560,
(75)
3-(2-furoilamino)-N-2-feniletil)-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento B,Rt 1,09 [M + H]^{+} 381,
(76)
N-butil-3-(2-furoilamnio)-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida, procedimiento B, Rt 1,09, [M + H]^{+}, 333,
(77)
N-[5-(pirrolidin.1.ilcarbonil)-1H-tieno[3,2-c]pirazol-3-il}-2-furamida; procedimiento B, Rt 1,17, [M + H]^{+} 331,
(78)
N-(4-metilbencil)-3-[(tien-2-ilcarbonil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento B, Rt 1,31, [M + H]^{+} 397,
(79)
N-butil-3-[(tien-2-ilcarbonil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento B, Rt 1,19 [M + H]^{+} 349,
(80)
N,N-dietil-3-[(tien-2-ilcarbonil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento B, Rt 1,14 [M + H]^{+} 349,
(81)
3-[(1,3-benzoxodioxol-5-ilcarbonil)amino]-N-[(1R)-1-feniletil]-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 5,32 [M + H]^{+} 435,
(82)
3-{[5-(morfolin-4-ilmetil)-2-furoil]amino}-N-[(1R)-1-feniletil]-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,01 [M + H]^{+} 449,
(83)
3-[(4-isopropoxibenzoil)amino]-N-[(1R)-1-feniletil]-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 6,34 [M + H]^{+} 449,
(84)
N-butil-3-(pentanoilamino)]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento B, Rt 1,19 [M + H]^{+} 323,
(85)
N-butil-3-[(ciclopropilcarbonil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento B, Rt 1,05 [M + H]^{+} 307,
(86)
N-butil-3-[(ciclopropilcarbonil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento B, Rt 0,92 [M + H]^{+} 323,
(87)
N-alil-3-{[(bencilamino)carbonil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento B, Rt 1,09 [M + H]^{+} 356,
(88)
N-(2-feniletil)-3-{[(propilamino)carbonil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento B, Rt 1,17 [M + H]^{+} 372,
(89)
3-{[4-etilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-isopropil1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; [M + H]^{+} 441,
(90)
N-etil)-3-{[4-(4-etilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 2,58 [M + H]^{+} 427,
(91)
N-bencil-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 3,70 [M + H]^{+} 475,
\newpage
(92)
N-isopropil-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 2,90 [M + H]^{+} 427,
(93)
Dihidrocloruro de N-etil-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 2,41 [M + H]^{+} 413,
(94)
N-(3-fluorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,07 [M + H]^{+} 493,
(95)
N-(4-fluorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,04 [M + H]^{+} 493,
(96)
N-(3-clorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,26 [M + H]^{+} 510,
(97)
N-(4-clorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,27 [M + H]^{+} 510,
(98)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-fenil-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,23 [M + H]^{+} 461,
(99)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-(1-feniletil)-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,22 [M + H]^{+} 489,
(100)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-(1-fenilpropil)-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,43 [M + H]^{+} 503,
(101)
N-(2-fluorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,02 [M + H]^{+} 493,
(102)
N-(2,4-difluorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,36 [M + H]^{+} 511,
(103)
N-(4-metoxibencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,06 [M + H]^{+} 505,
(104)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[4-(trifluorometil)bencil]-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,88 [M+H]^{+} 543,
(105)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[4-(trifluorometoxi)-bencil]-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,98 [M+H]^{+} 559,
(106)
N-(2-clorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,51 [M+H]^{+} 510,
(107)
N-(2,6-dietilfenil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,72 [M+H]^{+} 517,
(108)
N-(2,6-dimetilfenil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,12 [M+H]^{+} 489,
(109)
N-(2-cloro-6-metilfenil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,30 [M+H]^{+} 510,
(110)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[(1S)-1-feniletil]-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,25 [M+H]^{+} 489,
(111)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[(1R)-1-feniletil]-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,25 [M+H]^{+} 489,
(112)
N-benzohidril-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 5,07 [M+H]^{+} 551;
(113)
N-bencil-N-metil-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 3,99 [M+H]^{+} 489;
\newpage
(114)
N-(2-furilmetil-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 3,60 [M+H]^{+} 465;
(115)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-(tien-2-ilmetil)-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 3,61 [M+H]^{+} 481;
(116)
N-2,3-dihidro-1H-inden-1-il-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,47 [M+H]^{+} 501;
(117)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-1,2,3,4tetrahidronaftalen-1-il-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,39 [M+H]^{+} 515;
(118)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[(1S)-1-fenilpropil]-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,35 [M+H]^{+} 503;
(119)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[(1R)-1-fenilpropil]-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,35 [M+H]^{+} 503;
(120)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-(2-morfolin-4-il-1-feniletil)-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 3,64 [M+H]^{+} 574;
(121)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[(1R)-1-feniletil)-1H-tieno [3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,27 [M+H]^{+} 489;
(122)
Bis(trifluoroacetato) de N-(2-cloro-6-metilbencil)-3-{[4-(4-metil-piperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,52 [M+H]^{+} 523;
(123)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[(1-metil-1H-pirrol-2-il)metil]-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 3,41 [M+H]^{+} 478;
(124)
N-(3-furilmetil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 3,23 [M+H]^{+} 465;
(125)
N-bencil-3-{[4-morfolin-4-ilbenzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,80 [M+H]^{+} 462;
(126)
3-{[4-morfolin-4-ilbenzoil]amino}-N-[(1R)-1-feniletil-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 5,06 [M+H]^{+} 476;
(127)
3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-N-[(1S)-1-feniletil-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 5,04 [M+H]^{+} 476;
(128)
N-benzohidril-3-{[4-morfolin-4-ilbenzoil]amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 6,03 [M+H]^{+} 538;
(129)
N-[(1S)-2-metoxi-1-feniletil]-3-{[4-morfolin-4-ilbenzoil]amino]-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,79 [M+H]^{+} 506;
(130)
(N-[1-(4-clorofenil)etil]-3-{[4-morfolin-4-ilbenzoil]amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 5,61 [M+H]^{+} 511;
(131)
3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-N-[(1R)-1-fenilpropil]-1H-tieno[3,2-c] pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 5,38 [M+H]^{+} 489;
(132)
N-(3-fluorobencil)-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 5,04 [M+H]^{+} 480;
(133)
N-(4-fluorobencil)-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 5,01 [M+H]^{+} 480;
(134)
N-(4-clorobencil)-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c] pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 5,43 [M+H]^{+} 496;
(135)
3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-N-[(1S)-2-morfolin-4-il-1-feniletil-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 4,42 [M+H]^{+} 561,
\newpage
(136)
3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-N-[(1S)-1-fenil-2-pirrolidin-1-iletil-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 3,68 [M+H]^{+} 545,
(137)
3-{[4-(4-metilpiperazin-4-ilbenzoil]amino}-N-[(1S)-1-fenil-2-pirrolidin-1-iletil-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 2,46 [M+H]^{+} 558,
(138)
N-isopropil-3-[(3-fenoxibenzoil)amino]-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 5,84 [M+H]^{+} 421,
(139)
N-etil-3-[(3-fenoxibenzoil)amino]-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; procedimiento A, Rt 5,47 [M+H]^{+} 407,
(140)
N-{5-[(4-metilpiperazin-1-il)carbonil]-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-3-il}-3-fenoxibenzamida; procedimiento A, Rt 4,45 [M+H]^{+} 462,
(141)
4-fluoro-N-{5-[(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)carbonil]-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-3-il)benzamida; procedimiento A, Rt 3,00 [M+H]^{+} 462,
(142)
3-(4-metilpiperazin-1-il)-N-{5-[(4-metilpiperazin-1-il)carbonil]-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-3il}benzamida, procedimiento A, Rt 2,04 [M+H]^{+} 468,
(143)
N-(2-morfolin-4-ilbencil)-3-{[4-(trifluorometoxi)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida, procedimiento A, Rt 6,11, [M + H]^{+} 546,
(144)
4-fluoro-N-{6-metil-5-[(4-metilpiperazin-1-il)carbonil]-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-3il}-benzamida, procedimiento A, Rt 3,50 [M+H]^{+} 468,
(145)
3-[(4-fluorobenzoil)amino]-N-(4-fluorobencil)-6-metil-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida, procedimiento A, Rt 5,60 [M+H]^{+} 427,
(146)
N-(4-fluorobencil)-6-metil-3-[(tien-2-ilcabonil)amino]-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida, procedimiento A, Rt 5,40 [M+H]^{+} 415,
(147)
N-{6-metil-5-[(4-metilpiperazin-1-il)carbonil]-1H-tieno-[3,2-c]-pirazol-3-il}tiofen-2-carboxamida, procedimiento A, Rt 2,69 [M+H]^{+} 390,
(148)
N-{6-metil-5-[(4-metilpiperazin-1-il)carbonil]-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-3-il}-3-fenoxibenzamida, procedimiento A, Rt 4,76 [M+H]^{+} 460,
(149)
N-(4-fluorobencil)-6-metil-[(3-fenoxibenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida, procedimiento A, Rt 6,40 [M + H]^{+} 501.
Ejemplo 12 Preparación de 3-amino-6-metil-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo (150)
Etapa 1
4,5-dibromo-3-metiltiofen-2-carboxilato de metilo
Se añadió bromo a gotas (20 ml, 389 mmol) a una solución de 3-metiltiofen-2-carboxilato de metilo (14,0 g, 89,6 mmol) en 350 ml de ácido acético. Después de agitar a temperatura ambiente durante 16 horas, se añadió la mezcla de reacción a una solución acuosa al 10% (p/v) de hidrogenosulfito sódico. El precipitado se separó por filtración, se lavó con hidrogenosulfito sódico acuoso y agua, y finalmente se secó en vacío a 70ºC, obteniéndose 27,8 g del compuesto del título, que se usó en la etapa siguiente sin purificarlo más.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): ppm 2,55 (s, 3H), 3,84 (s, 3H).
Etapa 2
4-bromo-5-formil-3-metiltiofen-2-carboxilato de metilo
Se añadió cloruro de isopropilmagnesio (solución 2M en THF, 41 ml) a gotas a una solución de 4,5-dibromo-3-metiltiofen-2-carboxilato de metilo (23,5 g, 74,8 mmol) en tetrahidrofurano (250 ml) a -40ºC bajo nitrógeno. Después de agitar a -40ºC durante 3 horas, se añadió dimetilformamida (17,5 ml, 224 mmol) y se dejó que la solución se calentara a la temperatura ambiente.
La mezcla de reacción se vertió luego en acetato de etilo y ácido clorhídrico acuoso. Se separó la capa orgánica, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó. El material resultante en bruto se trituró con n-hexano, obteniéndose 17,6 del compuesto del título, que se usó en la etapa siguiente sin purificarlo más.
RMN ^{1} (DMSO-d_{6}): ppm 2,54 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 10,01 (s, 1H).
Etapa 3
4-bromo-5-ciano-3-metiltiofen-2-carboxilato de metilo
Se añadió hidrocloruro de hidroxilamina (5 g, 72 mmol) a una solución de 4-bromo-5-formil-3-metiltiofen-2-carboxilato de metilo (16,5 g, 63 mmol) en acetonitrilo (175 ml) y piridina (30 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego anhídrido trifluoroacético (21,3 ml, 153 mmol). Después de tres horas se vertió la mezcla de reacción en acetato de etilo y ácido clorhídrico acuoso. Se separó la capa orgánica, se lavó con ácido clorhídrico y agua, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó. El material resultante en bruto se trituró con 90 ml de una mezcla de agua/etanol (1:1) y se secó en vacío, obteniéndose 15 g del compuesto del título, que se usó en la etapa siguiente sin purificarlo más.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}). ppm 2,53 (s, 3H), 3,90 (s, 3H).
Etapa 4
5-ciano-4-[2-(difenilmetilen)hidrazino]-3-metiltiofen-2-carboxilato de metilo
Una solución de 4-bromo-5-ciano-3-metiltiofen-2-carboxilato de metilo (13 g, 50 mmol) y benzofenonahidrazona (11,8 g, 60 mmol) en tolueno (390 ml) se añadió a una suspensión de carbonato de cesio (26 g, 80 mmol), acetato de paladio (365 mg, 1,6 mmol) y 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno en tolueno (120 ml) bajo nitrógeno.
La mezcla resultante se agitó a 110ºC durante 16 horas. Después de enfriar la mezcla a 50ºC, se filtró y se evaporó el tolueno. El material en bruto resultante se trituró con acetato de etilo y se secó en vacío, obteniéndose 13,2 g del compuesto del título, que se usó en la etapa siguiente sin purificarlo más.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) ppm 2,17 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 7,37-7,70 (m, 10H), 8,61 (s, 1H).
Etapa 5
3-amino-6-metil-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo (150)
Se agitó a 80ºC durante 10 horas una mezcla de ácido clorhídrico acuoso (180 ml, solución al 37%), 5-ciano-4-[2-(difenilmetilen)hidrazino]-3-metiltiofen-2-carboxilato de metilo (13 g, 34,6 mmol), alcohol metílico (140 ml) y tetrahidrofurano (100 ml).
Después de haber eliminado el disolvente a presión reducida, se filtró la suspensión resultante y el residuo se lavó con dimetoxietano.
El sólido se disolvió en alcohol metílico (100 ml) y se trató con ácido sulfúrico del 96% (2,5 ml). La solución resultante se agitó a 75ºC durante 16 horas.
Después de enfriar, se evaporó la solución a volumen pequeño bajo presión reducida y se sometió a extracción con una mezcla de dietil éter/n-hexano (1:1).
La capa acuosa se diluyó con solución acuosa al 5% de amoniaco y se sometió a extracción con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico, se evaporó y el residuo se purificó por cromatografía (eluyente: diclorometano, alcohol metílico, amoniaco acuoso al 5% 100:75:5), obteniéndose 4,4 g del compuesto del título.
Procedimiento cromatográfico A, 2,77, [M + H]^{+} 212.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): ppm 2,52 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 5,35 (s anc, 2H), 12,0 (s anc, 1H).
Ejemplo 13 Preparación de 1-acil-3-[(acil)amino]-6-metil-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilatos de metilo
Siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 7, se hizo reaccionar el 3-amino-6-metil-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo, preparado en el ejemplo anterior, con los cloruros de acilo oportunos para preparar los siguientes 1-acil-3-[(acil)amino]-6-metil-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilatos:
(151)
1-(4-fluorobenzoil)-3-[(4-fluorobenzoil)amino]-6-metil-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxilato de metilo,
(152)
6-metil-1-(tien-2-ilcarbonil)-3-[(tien-2-ilcarbonil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo,
(153)
6-metil-1-(3-fenoxibenzoil)-3-[(3-fenoxibenzoil)amino]-1H-tieno[3,2c]-pirazol-5-carboxilato de metilo.
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Ejemplo 14 Preparación de ácidos 3-[(acil)amino]-6-metil-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílicos
Siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 8, los 1-acil-3-[(acil)amino]-6-metil-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilatos del Ejemplo 13 se convirtieron en los correspondientes ácidos 3-[(acil)amino]-6-metil-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxílicos:
(154)
ácido 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-6-metil-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(154)
ácido 6-metil-1-[(tien-2-ilcarbonil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(156)
ácido 6-metil-1-[(3-fenoxibenzoil)amino]-1H-tieno[3,2c]-pirazol-5-carboxílico, procedimiento A, Rt 3,90, [M + H]^{+}, 394
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Ejemplo 15 Preparación de 3-amino-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de propilo (157)
Etapa 1
4,5-dibromo-2-furoato de metilo
A una solución de 69,91 g (0,259 mol) de ácido 4,5-dibromo-2-furoico en 700 ml de metanol se añadieron cuidadosamente 42,4 ml (0,777 mol) de ácido sulfúrico del 98% a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a reflujo durante 7 horas. La solución resultante se concentró a una suspensión a presión reducida y se diluyó con 0,5 l de MTBE. A esta solución enfriada con hielo se añadieron lentamente 0,5 l de citrato trisódico al 30% y 0,25 l de NaOH 2N mientras que se agitaba vigorosamente. Se separó la capa acuosa (pH = 6) y se sometió nuevamente a extracción con 300 ml de MTBE. De los extractos orgánicos se eliminó algún sólido insoluble (material de partida residual). Los extractos transparentes se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y luego se concentraron a sequedad, resultando un sólido de color castaño claro que se purificó por cristalización con 30 ml de MTBE caliente y 60 ml de n-heptano. La mezcla se enfrió a 0/+4ºC, se envejeció durante 1 hora y luego se filtró, obteniéndose 57,13 g de un producto de color crema. De las aguas madre se obtuvieron por cromatografía 12,65 g más de producto (eluyente: acetato de etilo/ciclohexano 5:95). Así, la cantidad total de producto obtenida fue de 69,78 g. Rendimiento: 94,8%.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): ppm 3,84 (s, 3H), 7,65 (s, 1H).
p.f. = 56-57ºC.
Etapa 2
4-bromo-5-formil-2-furoato de metilo
Se enfrió a -45ºC bajo argón una solución de 69,65 g (0,246 mol) de 4,5-dibromo-2-furoato de metilo en 700 ml de THF seco. A esta solución se añadieron lentamente, a lo largo de 45 min a -43/-48ºC, 141,5 ml (0,282 mol) de cloruro de isopropilmagnesio 2 M (Aldrich) y la mezcla se agitó durante una hora más. La suspensión resultante se trató a gotas con 56,8 ml (0,737 mol) de DMF anhidra (Aldrich, H_{2}O<0,005%) a lo largo de 30 minutos a -45ºC y se agitó durante 15 min a la misma temperatura. La mezcla de reacción se calentó lentamente a +20ºC y luego se vertió lentamente en una mezcla de 1,2 l de HCl 1 M y 1,0 l de MTBE. Se separó la capa acuosa y se sometió a extracción dos veces con 1,0 l y 0,5 l de MTBE, La combinación de extractos orgánicos se concentró a sequedad, obteniéndose 57,81 g de material en bruto que se cristalizó en 120 ml de tolueno caliente y 230 ml de n-heptano. La suspensión resultante se enfrió a +4ºC, se envejeció durante 2 horas y se filtró, obteniéndose 46,55 g de un sólido de color beige. Rend. 81,3%
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}). ppm 3,90 (s, 3H), 7,78 (s, 1H), 9,76 (s, 1H).
p.f. = 83-84ºC.
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Etapa 3
4-bromo-5-ciano-2-furoato de metilo
A una solución de 46,55 g (0,20 mol) de 4-bromo-5-formil-2-furoato de metilo en 465 ml de acetonitrilo se añadieron 15,28 g (0,22 mol) de hidrocloruro de hidroxilamina. A esta suspensión se añadieron a gotas 96,6 ml (1,2 mol) de piridina a lo largo de 35 minutos a 20-25ºC. Después de agitar durante 90 minutos, se añadió a gotas anhídrido del ácido trifluoroacético centrado (67,72 ml, 0,48 mol) a lo largo de 45 min a temperatura ambiente. Después de agitar durante 2,5 horas, la masa de reacción se vertió en una mezcla de HCl 1 M (0,75 l) y acetato de etilo (0,75 l); la capa acuosa se sometió nuevamente a extracción con 0,45 l de acetato de etilo. Los extractos orgánicos se lavaron con 0,45 l de HCl 2M y la capa acuosa se sometió a retroextracción con 0,3 l de acetato de etilo. La combinación de extractos orgánicos se concentró a sequedad a presión reducida. El material en bruto se disolvió en 100 ml de etanol al 95% y se trató a gotas con 150 ml de agua con una agitación eficiente a 40-45ºC. La suspensión resultante se enfrió a 0/+4ºC y luego se filtró, obteniéndose, después de secar, 44,2 g de producto como un sólido de color crema pálido. Rend. 96,2%.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): ppm 3,90 (s, 3H), 7,88 (s, 1H).
p.f. = 75-78ºC.
Etapa 4
5-ciano-4-[2-(difenilmetilen)hidrazino]-2-furoato de metilo
En un matraz de reacción seco se cargó bajo argón acetato de paladio (2,098 g, 9,347 mmol), DPPF (10,36 g, 18,69 mmol) y carbonato de cesio (85,27 G, 0,262 mmol). Se añadió al matraz de reacción con una cánula una solución seca preparada previamente de 4-bromo-5-ciano-2-furoato de metilo (43,00 g, 0,187 mol) y benzofenonahidrazona (44,02 g, 0,224 mol) en 1,2 l de tolueno. La suspensión resultante se agitó vigorosamente a 100-104ºC durante 45 horas bajo argón. La mezcla de reacción se enfrió a aproximadamente 70ºC, se añadieron 65 g de Dicalite® y se filtró; la torta se lavó 2 veces con tolueno caliente (400 ml). Se concentró el filtrado en vacío a pequeño volumen y se mantuvo durante 18 horas a +4ºC. El sólido se recogió por filtración y se lavó con 60 ml de tolueno, obteniéndose 53,52 g de producto amarillento. Rend. 82,8%,
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}):ppm 3,84 (s, 3H9, 7,09 (s, 1H), 7,34-7,68 (m, 10H), 9,60 (s, 1H).
p.f = 206-208ºC.
Etapa 5
3-amino-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de propilo (157)
A una solución de 56,01 g (0,1624 mol) de 5-ciano-4-[2-(difenilmetilen)hidrazino]-2-furoato de metilo en 1,12 l de n-propanol se añadieron lentamente 115 ml (2,1 mol) de ácido sulfúrico del 98%. La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 2 horas, obteniéndose una solución de color castaño claro. Se concentró la masa de reacción a presión reducida a pequeño volumen, se enfrió a 0ºC/+4ºC y se diluyó lentamente con 1,1 l de solución al 25% de citrato trisódico dihidratado a lo largo de 90 min, con una agitación eficiente. La mezcla (pH 4) se sometió tres veces a extracción con 600 ml de ciclohexano. Se descartaron los extractos orgánicos mientras que la capa acuosa se enfrió a 0ºC/+4ºC y se ajustó el pH a 6-7 añadiendo cuidadosamente 1 l de solución acuosa de bicarbonato sódico al 10% y, finalmente, 82 ml de N-metilmorfolina. La suspensión resultante se envejeció a 0ºC/+2ºC durante 4 horas y luego se filtró y lavó a fondo con agua, obteniéndose, después de secar, 21,35 g de producto como un sólido castaño claro. Rend. = 62,8%.
Procedimiento cromatográfico A, Rt = 3,6 min, [M + H]^{+} = 210.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): ppm 0,97 (t, 3H), 1,67-1,76 (m, 2H), 4,24 (t, 2H), 5,13 (s, 2H), 7,31 (s, 1H), 11,34 (s anc, 1H).
p.f. = 147-149ºC.
Ejemplo 16 Preparación de 1-acil-3-(acilamino)-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxilatos de propilo
Tratando 3-amino-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de propilo con el cloruro de acilo apropiado análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 7, se prepararon los siguientes 1-acil-3-(acilamino)-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxilatos de propilo:
(158)
1-(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de propilo,
(159)
1-[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)-benzoil]amino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de propilo,
(160)
1-(4-fluorobenzoil)-3-[(4-fluorobenzoil)amino]-1-H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de propilo.
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Ejemplo 17 Preparación de ácidos 3-(acilamino)-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílicos
Los 1-acil-3-(acilamino)-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxilatos de propilo preparados en el ejemplo anterior se hidrolizaron siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 8, obteniéndose los correspondientes ácidos 3-(acilamino)-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílicos
(161)
ácido 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; [M + H]^{+} 357,
(162)
ácido 3-{[4-(4-metilpiperazin-1-ilbenzoil)amino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; [M + H]^{+} 370,
(163)
3-[(4-fluorobenzoil)amino]-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; procedimiento A, 2,18, [M+H]^{+} 370.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 18 Preparación de 3-(acilamino)-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxamidas
Siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 11, se hicieron reaccionar los ácidos 3-(acilamino)-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílicos del Ejemplo 17 con las aminas oportunas para obtener los siguientes compuestos:
(164)
3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-N-[1-fenilpropil]-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Procedimiento A, Rt 5,40, [M + H]^{+} 474,
(165)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[1-fenilpropil]-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Procedimiento A, Rt 3,48, [M + H]^{+} 487,
(166)
3-[(4-fluorobenzoil)amino]-N-[(1-fenilpropil]-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Procedimiento A, Rt 5,48, [M+H]^{+} 407,
(167)
4-fluoro-N-{5-[(4-metilpiperazin-1-il)carbonil]-1H-furo[3,2-c]pirazol-3-il benzamida. Procedimiento A, Rt 2,19, [M+H]^{+} 372,
(168)
3-[(4-fluorobenzoil)amino]-N-[2-morfolin-4-il-1-feniletil]-1H-furo[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida, Procedimiento A, Rt 4,43, [M+H]^{+} 372.
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Ejemplo 18 Preparación de 3-amino-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo (5)
Etapa 1
Preparación de 4,5-dibromo-2-tiofencarboxilato de metilo
A una suspensión de 23,75 g (83,06 mmol) de ácido 4,5-dibromo-2-tiofencarboxílico en 235 ml de metanol se añadieron lentamente 15,5 ml (284 mmol) de ácido sulfúrico del 98% a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a reflujo durante 23 horas. La solución resultante se concentró a presión reducida a una suspensión espesa y se diluyó con 240 ml de diclorometano. A esta solución enfriada en hielo se añadieron lentamente 190 ml de NaOH al 17% bajo una agitación vigorosa. Se separó la capa acuosa y se sometió nuevamente a extracción con 120 ml de diclorometano. La combinación de extractos orgánicos se secó sobre Na_{2}SO_{4} y luego se concentró a sequedad, obteniéndose 24,02 g de producto como un sólido blancuzco. Rend. 96,4%.
RMN ^{1}H (DMSO d_{6}): ppm 3,81 (s, 3H), 7,79 (s, 1H).
p.f. = 79-80ºC.
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Etapa 2
Preparación de 4-bromo-5-formiltiofen-2-carboxilato
Se enfrió a -35ºC/-40ºC bajo argón una solución de 23,45 g (78,17 mmol) de 4,5-dibromo-2-tiofencarboxilato de metilo en 190 ml de THF seco. A esta solución se añadieron a gotas a lo largo de 1 hora, a -35ºC/-40ºC, 43 ml (86 mmol) de cloruro de isopropilmagnesio 2M (Aldrich) y la mezcla se agitó durante 1 hora más. La solución de color marrón claro resultante es trató a gotas con 17,14 g (18,0 ml, 234,5 mol) de DMF anhidra a lo largo de 30 min a -35ºC/-40ºC y se agitó durante 15 min a esta temperatura. Luego se calentó la mezcla de reacción lentamente a 20ºC y se agitó durante 1 hora más a esta temperatura. La masa de reacción se vertió lentamente en una mezcla de 230 ml de HCl 1M y 230 ml de MTBE con una agitación vigorosa; se separó la capa acuosa y se sometió a extracción con 200 ml de MTBE. La combinación de extractos orgánicos se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró a sequedad, obteniéndose 20,14 g de producto en bruto. Éste se trató con 80 ml de n-hexano agitando durante 3 horas. El producto puro (16,5 g) se aisló por succión como un sólido blancuzco. Rend. 84,5%.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): ppm 3,86 (s, 3H), 7,98 (s, 1H), 9,90 (s, 1H).
p.f. = 92-93ºC
Etapa 3
Preparación de 4-bromo-5-cianotiofen-2-carboxilato de metilo
A una solución de 16,48 g (66,17 mmo) de 4-bromo-5-formiltiofen-2-carboxilato de metilo en 165 ml de acetonitrilo se añadieron 5,06 g (72,78 mmol) de hidrocloruro de hidroxilamina. A esta suspensión se añadieron a gotas, a lo largo de 20 min a 20-25ºC, 32,05 ml (397 mmol) de piridina. Después de agitar durante 90 minutos, se añadió anhídrido trifluoroacético neto (22,5 ml, 158,8 mmol) a lo largo de 30 min a temperatura ambiente. Después de agitar durante 2,5 horas, la masa de reacción se vertió en una mezcla de HCl 0,5 M (200 ml) y acetato de etilo (150 ml); la capa acuosa se sometió nuevamente a extracción con 150 ml de acetato de etilo. La combinación de extractos orgánicos se concentró a presión reducida y se lavó nuevamente con 120 ml de HCl 1 M. La fase orgánica es concentró en vacío, obteniéndose un producto sólido en bruto. Este material en bruto se recogió en 75 ml de etanol y se trató con 75 ml de agua con una agitación eficiente. La suspensión resultante se enfrió 0ºC/+4º, luego se filtró, resultando 15,4 g de producto como un sólido de color crema débil. Rend. 94,8%.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): ppm 3,88 (s, 3H), 8,02 (s, 1H).
p.f. = 102-103ºC.
Etapa 4
Preparación de 5-ciano-4-[2-(difenilmetilen)hidrazino]tiofen-2-carboxilato de metilo
Se evacuó un matraz cargado con acetato de paladio (375 mg, 1,67 mmol), DPPF (1,85 g, 3,34 mml) y carbonato de cesio (27,2 g, 83,5 mmol) y se rellenó 3 veces con argón, luego se añadieron 70 ml de tolueno con una cánula mientras que se agitaba. Después de 15 minutos se pasó al matraz con una cánula una solución seca de 4-bromo-5-cianotiofen-2-carboxilato de metilo preparada previamente (13,70 g, 55,67 mmol) y benzofenonahidrazona (13,11 g, 66,8 mmol) en 470 ml de tolueno y la suspensión resultante se agitó a 100ºC durante 16 horas bajo argón.
La mezcla de reacción se enfrió a 60ºC, se filtró y la torta es lavó dos veces con tolueno caliente. El filtrado se concentró en vacío, obteniéndose un sólido amarillo-marrón. El material en bruto se agitó con 70 ml de acetato de etilo durante 1 hora a temperatura ambiente y luego se separó el sólido por filtración, obteniéndose 16,78 g del compuesto del título. Rend. 83,4%.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): ppm 3,82 (s, 3H), 7,30-7,65 (m, 1H), 10,02 (s, 1H).
p.f. = 178-180ºC.
Etapa 5
Preparación de 3-amino-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo (5)
A una solución de 18,41 g (50,94 mmol) de 5-ciano-4-[2-(difenilmetilen)-hidrazino]tiofen-2-carboxilato de metilo en 312 ml de THF y 110 ml de metanol, se añadieron lentamente 110 ml de solución de ácido clorhídrico al 37%. La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 14 horas, obteniéndose una solución amarilla transparente. Una parte relevante del producto estaba presente como ácido libre, aproximadamente 30% del producto total.
La masa de reacción se concentró en vacío para eliminar los disolventes orgánicos; la suspensión resultante se mantuvo a +4ºC durante 18 horas y luego se filtró, obteniéndose 10,10 g de un producto cristalino que contenía una mezcla de éster de metilo y ácido libre.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Este sólido se disolvió en 150 ml de metanol, se trató con 3,5 ml de ácido sulfúrico concentrado y se calentó a reflujo durante 24 horas. La mezcla se concentró a pequeño volumen, obteniéndose una suspensión, que se diluyó con 130 ml de agua y se trató cuidadosamente con trietilamina (14 ml) agitando vigorosamente hasta alcanzar un pH igual a 7-8. La mezcla se mantuvo a +4ºC durante 18 horas, luego se filtró y la torta se lavó con agua, obteniéndose 7,63 g de producto puro como un sólido amarillento.
Rend. 76,0%. Procedimiento cromatográfico A, Rt = 2,8 min. Los datos fisicoquímicos son los mismos del compuesto preparado con el procedimiento del Ejemplo 3.
Ejemplo 1 de ensayo biológico
Los compuestos siguientes, explorados de conformidad con los procedimientos descritos en la sección farmacológica anterior, revelaron tener valores de la CI50 para la inhibición de Aurora-2 inferiores a 100 nM:
\quad
52; 57; 66; 79; 82; 91; 92; 93; 94; 95; 96; 97; 99; 100; 101; 102; 104; 106; 107; 108; 109; 110; 111; 112; 113; 114; 115; 116; 117; 118; 119; 120; 121; 122; 123; 124; 125; 126; 127; 128; 129; 130; 131; 132; 133; 134; 135; 136; 137; 146; 161; 162; 163; 164; 165.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 2 de ensayo biológico
Los compuestos siguientes, explorados de conformidad con los procedimientos descritos en la sección farmacológica anterior, revelaron tener valores de la CI_{50} para la inhibición de cdk2/cicina A inferiores a 500 nM:
57; 63; 65; 79; 84; 85; 86; 87; 93; 114; 119; 121; 124; 145; 146; 161; 164; 165; 167.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 3 de ensayo biológico
Los compuestos siguientes, explorados de conformidad con los procedimientos descritos en la sección farmacológica anterior, revelaron tener valores de la CI_{50} para la inhibición de cdc7 inferiores a 1000 nM:
52; 57; 92; 93; 95; 101; 102; 114; 115; 121; 123; 124; 137; 161; 162; 165.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 4 de ensayo biológico
Los compuestos siguientes, explorados de conformidad con los procedimientos descritos en la sección farmacológica anterior, revelaron tener valores de la CI_{50} para la inhibición de PAK4 inferiores a 500 nM:
52; 91; 93; 95; 96; 99; 100; 101; 102; 111; 114; 115; 119; 121; 125; 129; 131; 132; 133; 137; 163; 164.

Claims (24)

1. Un compuesto biciclopirazol de fórmula (I):
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22 
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en la que
X es un grupo seleccionado entre NR', O, S, SO o SO_{2},
cada uno de R y R_{1}, siendo iguales o diferentes, se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre -R', -COR', -COOR', -CONHR', -CONR'R'', -SO_{2}R', -SO_{2}NHR' o -SO_{2}NR'R'', en los que cada uno de R' y R'', siendo iguales o diferentes, se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo, opcionalmente sustituido, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6} de cadena lineal o ramificada, arilo, heterociclilo o arilalquilo C_{1-6};
R_{2} es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre -R', -CH_{2}OR' y OR', en los que R' es lo definido antes;
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
2. Un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, en la que X es S; R es -COR', -CONHR'; R_{1} es -COR', -CONHR', -CONR'R'', -SO_{2}NHR' o -SO_{2}NR'R'', en los que cada uno de R' y R'', siendo iguales o diferentes, es lo definido en la reivindicación 1; y R_{2} es un átomo de hidrógeno.
3. Un compuesto de fórmula (I), de acuerdo con la reivindicación 2, en la que R es COR', R_{1} es -CONHR' o -CONR'R''.
4. Un compuesto de fórmula (I), de acuerdo con la reivindicación 1, en la que X es O; R es -COR', -CONHR'; R_{1} es -COR', -CONHR', -CONR'R'', -SO_{2}NHR' o -SO_{2}NR'R'', en los que cada uno de R' y R'', siendo iguales o diferentes, es lo definido en la reivindicación 1; y R_{2} es un átomo de hidrógeno.
5. Un compuesto de fórmula (I), de acuerdo con la reivindicación 4, en la que R es COR', R_{1} es -CONHR' o -CONR'R''.
6. Un compuesto de fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, según se ha definido en la reivindicación 1, para uso como medicamento.
7. El uso de un compuesto de fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, según se ha definido en la reivindicación 1, en la fabricación de un medicamento para tratar un paciente que sufre una enfermedad seleccionada entre el grupo constituido por cáncer, trastornos proliferativos celulares, enfermedad de Alzheimer, infecciones víricas, enfermedades autoinmunes y trastornos neurodegenerativos.
8. El uso de la reivindicación 7, en el que el cáncer se selecciona entre el grupo constituido por carcinoma, carcinoma de células escamosas, tumores hematopoyéticos de linaje mieloide o linfoide, tumores de origen mesenquimal, tumores del sistema nervioso central y periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentoso, queratoxantomas, cáncer foricular tiroideo y sarcoma de Kaposi.
9. El uso de la reivindicación 7, en el que el trastorno proliferativo celular se selecciona entre el grupo constituido por hiperplasia prostática benigna, poliposis de adenomatosis familiar, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación vascular de células lisas asociada con ateroesclerosis, fibrosis pulmonar, glomerulonefritis artrítica y estenosis y reestenosis posquirúrgica.
10. El uso de la reivindicación 7 que proporciona inhibición de la angiogénesis tumoral y la metástasis, así como tratamiento del rechazo de trasplantes de órganos y la enfermedad de huésped frente a injerto.
11. El uso de acuerdo con la reivindicación 7 que proporciona tratamiento o prevención de la alopecia inducida por radioterapia o inducida por quimioterapia.
12. El uso de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el mamífero que lo necesita se somete además a un régimen de terapia de radiación o de quimioterapia en combinación con al menos un agente citostático o citotóxico.
13. El uso de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el mamífero que lo necesita es un ser humano.
14. Un procedimiento para inhibir la actividad de proteinaquinasa, que comprende poner en contacto la mencionada proteinaquinasa con una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) según se ha definido en la reivindicación 1, con la condición de que se excluyan procedimientos para el tratamiento del cuerpo humano o animal por terapia.
15. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, según se ha definido en la reivindicación 1, y al menos un excipiente, vehículo y/o diluyente farmacéuticamente aceptable.
16. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15, que además comprende uno o más agentes quimioterapéuticos.
17. Un producto o kit que comprende un compuesto de fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, según se ha definido en la reivindicación 1, y un agente quimioterapéutico o más, como preparado combinado para uso simultáneo, separado o secuencial en terapia anticancerosa.
18. Una biblioteca química combinatoria que comprende una pluralidad de compuestos de fórmula (I)
\vskip1.000000\baselineskip
100 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que
X es un grupo seleccionado entre NR', O, S, SO o SO_{2},
cada uno de R y R_{1}, siendo iguales o diferentes, se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre -R', COR', -COOR', -CONHR', -CONR'R'', -SO_{2}R', -SO_{2}NHR' o -SO_{2}NRR'', en los que cada uno de R' y R'', siendo iguales o diferentes, se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo, opcionalmente sustituido, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6} de cadena lineal o ramificada, arilo, heterociclilo o arilalquilo C_{1-6};
R_{2} es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre -R', -CH_{2}OR' y OR', en los que R' es lo definido antes;
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
19. Cualquier compuesto específico de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables, seleccionado entre:
(52)
3-[(4-morfolin-4-il)benzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato de metilo,
(57)
ácido 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(63)
4-fluoro-N-{5-[(4-metilpiperazin-1-il)carbonil]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-3-il}benzamida,
(65)
N-bencil-3-[(3,5-difluorobenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(66)
3-[(4-t-butilbenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(79)
N-butil-3-[(tien-2-ilcarbonil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida;
(82)
3-{[5-(morfolin-4-ilmetil)-2-furoil]amino}-N-[(1R)-1-feniletil]-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida;
(84)
N-butil-3-(pentanoilamino)]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida;
(85)
N-butil-3-[(ciclopropilcarbonil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(86)
N-butil-3-[(ciclopropilcarbonil)amino]-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(87)
N-alil-3-{[(bencilamino)carbonil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(91)
N-bencil-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida
(92)
N-isopropil-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(93)
dihidrocloruro de N-etil-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(94)
N-(3-fluorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(95)
N-(4-fluorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(96)
N-(3-clorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(97)
N-(4-clorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(99)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-(1-feniletil)-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(100)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-(1-fenilpropil)-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(101)
N-(2-fluorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(102)
N-(2,4-difluorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida;
(104)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[4-(trifluorometil)bencil]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida
(106)
N-(2-clorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(107)
N-(2,6-dietilfenil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(109)
N-(2-cloro-6-metilfenil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(110)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[(1S)-1-feniletil]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(111)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[(1R)-1-feniletil]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(112)
N-benzohidril-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida;
(113)
N-bencil-N-metil-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(114)
N-(2-furilmetil-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida;
(115)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-(tien-2-ilmetil)-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(116)
N-2,3-dihidro-1H-inden-1-il-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]-amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(117)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-1,2,3,4-tetrahidro-naftalen-1-il-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
\newpage
(118)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[(1S)-1-fenilpropil]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida;
(119)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[(1R)-1-fenilpropil]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(120)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-(2-morfolin-4-il-1-feniletil)-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(121)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[(1R)-1-feniletil)-1H-tieno [3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(122)
Bis(trifluoroacetato de N-(2-cloro-6-metilbencil)-3-{[4-(4-metil-piperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(123)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[(1-metil-1H-pirrol-2-il)-metil]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(124)
N-(3-furilmetil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1H-tieno-[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(125)
N-bencil-3-{[4-morfolin-4-ilbenzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(126)
3[(4-morfolin-4-ilbenzoil]amino}-N-[(1R)-1-feniletil-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida,
(127)
3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino*-N-[(1S)-1-feniletil-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida,
(128)
N-benzohidril-3-{[4-morfolin-4-ilbenzoil]amino]-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida,
(129)
N-[(1S)-2-metoxi-1-feniletil]-3-{[4-morfolin-4-ilbenzoil]amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(130)
N-[1-(4-clorofenil)etil]-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil]amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(131)
3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-N-[(1R)-1-fenilpropil]-1H-tieno[3,2-c] pirazol-5-carboxamida,
(132)
N-(3-fluorobencil)-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida,
(133)
N-(4-fluorobencil)-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida,
(134)
N-(4-clorobencil)-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(135)
3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-N-[(1S)-2-morfolin-4-il-1-feniletil]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(136)
3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-N-[(1S)-1-fenil-2-pirrolidin-1-iletil]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(137)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[(1S)-1-fenil-2-pirrolin-1-iletil]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(145)
3-[(4-fluorobenzoil)amino]-N-(4-fluorobencil)-6-metil-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida,
(146)
N-(4-fluorobencil)-6-metil-3-[(tien-2-ilcarbonil)amino]-1H-tieno[3,2-c]-pirazol-5-carboxamida,
(161)
ácido 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(162)
ácido 3-{[4-(4-metilpiperazin-1-ilbenzoil)amino]-1H-furo[3,2-c]-pirazol-5-carboxílico,
(163)
ácido 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico,
(164)
3-[(4-morfolin-4-ilbenzil)amino]-N-[-fenilpropil]-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(165)
3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-[1-fenilpropil]-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxamida,
(166)
3-[(4-fluorobenzoil)amino]-N-[(fenilpropil]-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxamida, y
(167)
4-fluoro-N-{5-[(4-metilpiperazin-1-il)carbonil]-1H-furo[3,2-c]-pirazol-3-il}benzamida.
\newpage
20. Un procedimiento para preparar un compuesto biciclopirazol de fórmula (I):
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23 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X, R y R_{1} y R_{2} son lo definido en la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, procedimiento que comprende:
(i) convertir por una reacción apropiada un compuesto de la fórmula (XXII)
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24 
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en la que R_{1}, R_{2} y X son lo definido antes y Hal es un átomo de halógeno, en el correspondiente derivado ciano, opcionalmente separando el isómero deseado si R_{1} en la fórmula (XXII) anterior es también un resto CHO;
\vskip1.000000\baselineskip
(ii) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (XXIII) así obtenido
\vskip1.000000\baselineskip
25 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R_{1}, R_{2}, X y Hal son lo definido antes, con un derivado de hidrazona de la fórmula (XXIV): R_{a}R_{b}C=N-NH_{2}, en la que R_{a} y R_{b} son un grupo alquilo C_{1-6} lineal o ramificado, arilo, arilalquilo C_{1-6} o que, junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un grupo heterociclo opcionalmente condensado o un grupo cicloalquilio C_{5-7}, en atmósfera inerte en presencia de un catalizador de Pd, un ligando y una base:
\newpage
(iii) tratar el compuesto resultante de fórmula (XXV)
26
en la que R_{1}, R_{2}, X, R_{a} y R_{b} son lo definido antes, con un ácido en un disolvente adecuado para obtener un compuesto de la fórmula (I) en la que R es un átomo de hidrógeno y R_{1}, R_{2} y X son lo definido antes y, si se desea, convertir el compuesto de fórmula (I) así obtenido en otro compuesto de la fórmula (I) en la que R no es un átomo de hidrógeno o en una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
21. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 20, caracterizado porque la conversión del compuesto obtenido de fórmula (I) en la que R es un átomo de hidrógeno en otro compuesto de fórmula (I) en la que R no es un átomo de hidrógeno, y/o la conversión de un compuesto de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I) se hace:
(k) haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (I) obtenido en la etapa (iii) de la reivindicación 20 con una resina poliestirénica de isocianato de fórmula (XV)
27
para obtener una poliestirenmetilurea de la fórmula (XVI)
28
en la que X, R_{1} y R_{2} son lo definido en la reivindicación 20,
(l) convirtiendo el compuesto de fórmula (XVI) así obtenido en un compuesto de la fórmula (XVII)
29
en la que R no es un átomo de hidrógeno, y
(m) escindiendo en condiciones alcalinas el compuesto de fórmula (XVII) para elimlnar la resina y obtener el compuesto deseado de fórmula (I); y, si se desea,
(n) convirtiendo el compuesto de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I) o en una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
22. Un compuesto de fórmula (XXV)
30
en la que R_{1}, R_{2}, X, Hal, R_{a} y R_{b} son lo definido en la reivindicación 20.
23. Un compuesto de fórmula (XXIII)
31
en la que X y Hal son lo definido en la reivindicación 20 y R_{1} se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre -R', -COR', -COOR', -CONHR', -CONR'R'', -SO_{2}R', -SO_{2}NHR' o -SO_{2}NR'R'', en los que cada uno de de R' y R'', siendo iguales o diferentes, se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6}, lineal o ramificado, arilo, heterociclilo o aril alquilo C_{1-6}; R_{2} se selecciona entre alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6}, arilo, heterociclilo o arilalquilo C_{1-6}, -CH_{2}OR' y OR', en los que R' es lo definido antes.
24. Un compuesto de fórmula (XXIII)
32
en la que X y Hal son lo definido en la reivindicación 20 y R_{1} se selecciona independientemente entre un grupo lineal o ramificado alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6}; arilo, heterociclilo, arilalquilo C_{1-6}, -COR', -COOR', CONHR', -CONR'R'', -SO_{2}R', -SO_{2}NHR' o -SO_{2}NR'R'', en los que cada uno de de R' y R'', siendo iguales o diferentes, se selecciona independientemente entre hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6}, lineal o ramificado, arilo, heterociclilo o arilalquilo C_{1-6}; R_{2} es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre -R', -CH_{2}OR' y OR', en los que R' es lo definido antes.
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