ES2305300T3 - Compuestos dimericos y su utilizacion como agentes antiviricos. - Google Patents

Compuestos dimericos y su utilizacion como agentes antiviricos. Download PDF

Info

Publication number
ES2305300T3
ES2305300T3 ES02774166T ES02774166T ES2305300T3 ES 2305300 T3 ES2305300 T3 ES 2305300T3 ES 02774166 T ES02774166 T ES 02774166T ES 02774166 T ES02774166 T ES 02774166T ES 2305300 T3 ES2305300 T3 ES 2305300T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
compound
baselineskip
formula
compounds
infection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES02774166T
Other languages
English (en)
Inventor
Michael D. Dowle
Betty Jin
Simon J. F. Macdonald
Andrew Mcm Mason
Darryl Mcconnell
Van T. T. Nguyen
Stephen E. Shanahan
Wen-Yang Wu
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Biota Scientific Management Pty Ltd
Original Assignee
Biota Scientific Management Pty Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AUPR8798A external-priority patent/AUPR879801A0/en
Priority claimed from AUPS2600A external-priority patent/AUPS260002A0/en
Application filed by Biota Scientific Management Pty Ltd filed Critical Biota Scientific Management Pty Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2305300T3 publication Critical patent/ES2305300T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
    • C07D407/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings
    • C07D407/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
    • C07D309/16—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D309/28—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Compuesto de fórmula general (I): (Ver fórmula) en la que R es un grupo amino o guanidino; R 2 es acetil o trifluoroacetil; X es CONH, SO2NH, NHCO o NHCONH; m es 0 ó 1; n es un número entero comprendido entre 2 y 6; q es un número entero comprendido entre 0 y 3; y Y es hidrógeno o un sustituyente aromático, o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

Compuestos diméricos y su utilización como agentes antivíricos.
La presente invención se refiere a nuevos compuestos químicos que resultan útiles en medicina. En particular la presente invención se refiere a nuevos compuestos diméricos, procedimientos de su preparación, formulaciones farmacéuticas de los mismos y dichos compuestos para su utilización como agentes antivíricos.
\vskip1.000000\baselineskip
Antecedentes de la invención
Los enzimas con la capacidad para escindir el ácido N-acetilneuramínico (NANA), conocido asimismo como ácido siálico, de otros hidratos de carbono se encuentran presentes en muchos microorganismos. Éstos comprenden bacterias tales como Vibrio cholerae, Clostridium perfringens, Streptococcus pneumoniae y Arthrobacter sialophilus, y otros virus tales como el virus de la gripe, el virus paragripal, el virus de la parotiditis, el virus de la enfermedad de Newcastle y el virus de Sendai. La mayor parte de los virus son del grupo de los ortomixovirus o paramixovirus, y transportan la actividad exo-\alpha-sialidasa en la superficie de las partículas víricas. Muchos de dichos organismos que presentan la exo-\alpha-sialidasa constituyen patógenos importantes del ser humano y/o de animales, y algunos, tales como el virus de la gripe y el virus de la enfermedad de Newcastle, provocan enfermedades de gran importancia.
Se ha considerado durante mucho tiempo que los inhibidores de la exo-\alpha-sialidasa pueden prevenir la infección por parte de los virus que transportan exo-\alpha-sialidasa. La mayor parte de los inhibidores de la exo-\alpha-sialidasa son análogos del ácido neuramínico, tales como el ácido 2-desoxi-2,3-deshidro-N-acetilneuramínico (DANA) y algunos de sus derivados (Meindl et al., Virology, 1974 58 457). Nuestra publicación de patente internacional n.º WO 91/16320 describe un cierto número de análogos del DANA que son activos contra la exo-\alpha-sialidasa vírica, y se ha demostrado en particular que el ácido 4-guanidino-2-desoxi-2,3-deshidro-N-acetilneuramínico (compuesto (A), número de código GG167) resulta útil en el tratamiento de la gripe A y B (N. Engl. J. Med., 1997 337 874-880). Otras solicitudes de patente describen diversos derivados muy relacionados con el ácido siálico (por ejemplo, las publicaciones de PCT n.º WO 95/18800, n.º WO 95/20583 y n.º WO 98/06712), y se han descrito asimismo conjugados macromoleculares del GG167 (solicitud internacional de patente n.º PCT/AU97/00771).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
1 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La publicación internacional de patente n.º WO 00/55149 describe compuestos diméricos que comprenden dos moléculas de enlace con la exo-\alpha-sialidasa, tales como el compuesto (A), unidas a un espaciador común o grupo de unión de hasta 100 átomos de longitud.
Ahora hemos descubierto una nueva clase de compuestos que cae dentro del alcance genérico de la publicación internacional de patente n.º WO 00/55149, pero que no se describen específicamente en la misma, y que presentan un perfil de actividad antigripal sorprendentemente ventajosa que comprende un largo período de residencia en los pulmones y una elevada potencia.
Sin pretender ceñirse exclusivamente a la teoría, se considera que la base del largo período de residencia en los pulmones radica en el tamaño y el peso molecular de los compuestos que evitan la entrada a través de las uniones intercelulares herméticas del epitelio respiratorio y en la polaridad de los compuestos que son de tal modo que el paso a través de las membranas celulares se produce de un modo muy ineficiente. Una teoría alternativa consiste en que los propios compuestos interactúan con los fosfolípidos de la membrana celular u otros compuestos del epitelio respiratorio e incrementan el período de residencia en los pulmones.
\newpage
Sumario de la invención
En un primer aspecto la presente invención proporciona un compuesto de fórmula general (I):
2
en la que
R es un grupo amino o guanidino;
R^{2} es acetil o trifluoroacetil;
X es CONH, SO_{2}NH, NHCO o NHCONH;
m es 0 ó 1;
n es un número entero comprendido entre 2 y 6;
q es un número entero comprendido entre 0 y 3; y
Y es hidrógeno o un sustituyente aromático,
o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo.
Preferentemente R es un grupo guanidino.
Preferentemente R^{2} es un grupo acetilo.
Los sustituyentes aromáticos comprenden los grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, halo, haloalquilo, haloalquenilo, haloalquinilo, haloarilo, hidroxi, alcoxi, alqueniloxi, ariloxi, carboxi, benciloxi, haloalcoxi, haloalqueniloxi, haloariloxi, nitro, azido, amino, alquilamino, alquenilamino, alquinilamino, arilamino, bencilamino, acilamino, acilo, ariloacilo, acilamino, aciloxi, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, sulfonilamino, alquilsulfonilamino, arilsulfonilamino, heterociclilo, heterocicloxi, heterociclilamino, haloheterociclil, mercapto, ácido sulfónico, alquiltio, ariltio y aciltio.
Preferentemente los sustituyentes alquilo, alquenilo, alquinilo y alcoxi comprenden hasta 6 átomos de carbono.
Más preferentemente Y es hidrógeno, halógeno, alquilo C_{1-4}, hidroxi, alcoxi C_{1-4}, amino o carboxi.
Los expertos en la materia podrán apreciar que los compuestos de fórmula (I) se pueden modificar par proporcionar unos derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos en uno o más de los grupos funcionales de los compuestos de fórmula (I). Resultan de particular interés como derivados los compuestos modificados en los grupos funcionales carboxilo, los grupos funcionales hidroxilo o en los grupos amino. De este modo, los grupos de interés comprenden ésteres alquílicos, tales como los ésteres metílico, etílico, propílico o isopropílico, ésteres arílicos, tales como los ésteres fenílico, benzoílico, y ésteres acetílicos de los compuestos de fórmula (I).
El término "derivado farmacéuticamente aceptable" significa cualquier sal, éter, éster o sal de dicho éster farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula (I) o cualquier otro compuesto que, que al administrarlo al receptor, puede proporcionar un compuesto de fórmula (I) o un metabolito activo desde el punto de vista antivírico o residuo del mismo. Resultan de particular interés como derivados los compuestos modificados en los grupos carboxi o glicerol hidroxi del ácido siálico, o en los grupos amino y guanidina.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) comprenden aquellas obtenidas a partir de ácidos y bases inorgánicos y orgánicos farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de ácidos adecuados comprenden los ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, perclórico, fumárico, maleico, fosfórico, glicólico, láctico, salicílico, succínico, tolueno-p-sulfónico, tartárico, acético, cítrico, metanosulfónico, fórmico, benzoico, malónico, naftaleno-2-sulfónico y bencenosulfónico. Otros ácidos tales como el ácido oxálico, aun que no son por sí mismos farmacéuticamente aceptables, pueden resultar útiles en la preparación de sales útiles como productos intermedios en la obtención de compuestos de la presente invención y sus sales de adición en ácidos farmacéuticamente aceptables.
Las sales obtenidas a partir de bases apropiadas comprenden sales de metales alcalinos (por ejemplo sodio), de metales alcalinotérreos (por ejemplo magnesio), de amonio y de NR_{4}^{+} (en la que R es un grupo alquilo C_{1-4}).
Los compuestos de la presente invención se pueden preparar mediante los procedimientos descritos en la misma. Resultará evidente para los expertos en la materia que es necesario utilizar grupos protectores para proteger uno o más grupos funcionales de la molécula de enlace con la exo-\alpha-sialidasa durante el proceso de unión de los monómeros al grupo espaciador alquilo. Véase por ejemplo Protective Groups in Organic Synthesis "Grupos protectores en la síntesis orgánica" por T. W. Green y P. G. M. Nuts (John Wiley & Sons, 1991). Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmico (I) se pueden preparar según procedimientos conocidos.
A fin de facilitar el proceso y la preparación, resulta preferible que los compuestos de fórmula (I) se encuentren en forma cristalina.
Por consiguiente, la presente invención proporciona asimismo un procedimiento de preparación del compuesto de fórmula (I) tal como se ha definido anteriormente, que comprende la etapa de desproteger un compuesto de fórmula (II).
3
en la que R y R^{2} se definen como anteriormente y P_{1} es un grupo protector del ácido carboxílico.
Los compuestos de fórmula (I) presentan actividad antivírica. En particular dichos compuestos son inhibidores de la exo-\alpha-sialidasa vírica de los ortomixovirus y los paramixovirus, por ejemplo la exo-\alpha-sialidasa vírica de la gripe A y B, la paragripe, la parotiditis y la enfermedad de Newcastle.
De este modo, en un segundo aspecto la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I) o un derivado del mismo farmacéuticamente aceptable, para utilizar como agente terapéutico activo en el tratamiento de una infección vírica, por ejemplo en infecciones producida por ortomixovirus o paramixovirus.
Los compuestos de la presente invención se pueden utilizar en un procedimiento para la prevención o el tratamiento de una infección vírica que comprende la etapa de la administración a un paciente que necesita la misma de una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula (I), o una sal o derivado del mismo farmacéuticamente aceptable.
Preferentemente, la infección vírica es una infección producida por ortomixovirus o paramixovirus. Más preferentemente la infección vírica es una infección de la gripe A o B.
Preferentemente el paciente es un animal tal como un mamífero, más preferentemente un ser humano, o un miembro del género Equus, por ejemplo un caballo, un asno o un mulo. Más preferentemente el mamífero es un ser humano.
En un cuarto aspecto la presente invención proporciona la utilización de un compuesto de la presente invención para fabricar un medicamento destinado al tratamiento de una infección vírica.
Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "cantidad efectiva" significa una cantidad del compuesto de fórmula I efectiva para prevenir o tratar una infección vírica a fin de producir la respuesta terapéutica pretendida. Por ejemplo, para superar o atenuar los efectos de una infección vírica.
El término "cantidad terapéuticamente efectiva" significa una cantidad del compuesto de fórmula I para producir la respuesta terapéutica pretendida. Por ejemplo, tratar o prevenir una infección vírica.
La "cantidad terapéuticamente efectiva" específica variará, obviamente, con factores tales como la infección vírica particular que se está tratando, el estado físico del paciente, el tipo de animal que se está tratando, la duración del tratamiento, la naturaleza de la terapia simultánea (si es que se realiza alguna), y la formulación específica utilizada y la estructura del compuesto o de sus derivados.
Generalmente, los términos "tratar", "tratamiento" y similares se utilizan en la presente memoria significando que afectan al paciente, tejido o célula para obtener un efecto farmacológico y/o fisiológico pretendido. El efecto puede ser preventivo desde el punto de vista de prevenir completamente o parcialmente una infección vírica o signo o síntoma de la misma, y/o puede ser terapéutica desde el punto de vista de curar parcialmente o completamente una infección vírica. "Tratar" tal se utiliza en la presente memoria abarca cualquier tratamiento de, o prevención de, una infección vírica en un vertebrado, un mamífero, particularmente un ser humano, y comprende (a) prevenir que se produzca la infección vírica en un paciente susceptible de la infección vírica, pero que no ha sido diagnosticado aún con la infección vírica, pero que no ha sido diagnosticado aún padeciéndola; (b) inhibir la infección vírica, es decir, detener su desarrollo; o (c), aliviar o atenuar los efectos, es decir, provocar la regresión de los síntomas de la infección vírica.
Los compuestos de la presente invención se pueden utilizar asimismo en procedimientos de diagnóstico, en particular en procedimientos para la detección del virus de la gripe. Para utilizar dichos procedimientos puede resultar ventajoso unir un compuesto de la invención a un marcador, tal como un marcador radiactivo, fluorescente o quimioluminiscente.
Los procedimientos de diagnóstico para los que los compuestos de la presente invención resultan apropiados se describen, por ejemplo, en nuestras solicitudes anteriores PCT/AU97/00109 y PCT/AU97/00771.
En un quinto aspecto la presente invención proporciona un procedimiento ex vivo para la detección de una infección vírica que comprende la etapa de poner en contacto el compuesto de la presente invención con una muestra de la que se sospecha que contiene el virus.
Se podrá apreciar además que la cantidad de un compuesto de la presente invención requerida para utilizar en el tratamiento variará no únicamente con el compuesto particular seleccionado sino también con la vía de administración, la naturaleza del trastorno a tratar, y la edad y el estado clínico del paciente, y quedará en última instancia a discreción del facultativo o veterinario. Sin embargo, en general, una dosis apropiada se encontrará comprendida entre 0,001 y 100 mg/kg de peso corporal por día, preferentemente comprendida entre 0,01 y 10 mg/kg de peso corporal por día, más preferentemente comprendida entre 0,1 y 1 mg/kg/día.
El tratamiento se inicia preferentemente antes o en el período de la infección y continúa hasta que el virus ya no se encuentra presente en el tracto respiratorio. Sin embargo los compuestos resultan asimismo eficaces si se realiza una administración posinfecciosa, por ejemplo una vez se han confirmado los síntomas.
El tratamiento apropiado se administra una o dos veces, preferentemente únicamente una vez para el tratamiento y preferentemente una vez a la semana para la prevención.
El compuesto se administra convenientemente en forma de dosis unitaria, por ejemplo comprendiendo entre 1 y 100 mg, más convenientemente entre 1 y 20 mg del principio activo por dosis unitaria.
Cuando resulte posible que, para utilizar en la terapia, se administre un compuesto de la presente invención como sustancia química bruta, se prefiere presentar el principio activo como formulación farmacéutica.
De este modo, en un sexto aspecto la presente invención proporciona una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal o derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables y, opcionalmente, otros ingredientes terapéuticos y/o preventivos. El (los) excipientes ha(n) de ser "aceptables" en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y de no resultar nocivos para el receptor del (de los) mismo(s).
Los compuestos de la presente invención se pueden utilizar asimismo en combinación con otros agentes terapéuticos y/o preventivos, por ejemplo otros agentes antiinfecciosos. En particular los compuestos de la presente invención se pueden utilizar con otros agentes antivíricos. La presente invención de este modo proporciona en un séptimo aspecto una combinación que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal o derivado del mismo farmacéuticamente aceptable junto con otro principio terapéuticamente y/o preventivamente activo, en particular un agente antivírico.
Las combinaciones a las que se ha hecho referencia anteriormente se pueden presentar para utilizar en forma de una formulación farmacéutica y de este modo dichas formulaciones comprenden una combinación tal como se ha definido anteriormente junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable para la misma lo que significa un aspecto adicional de la presente invención.
Los agentes terapéuticos y/o preventivos para utilizar en dichas combinaciones comprenden otros agentes antiinfecciosos, en particular agentes antibióticos y antivíricos tales como los utilizados en el tratamiento de infecciones respiratorias, por ejemplo otros compuestos o vacunas eficaces contra los virus de la gripe, tales como los análogos del ácido siálico a los que se ha hecho referencia anteriormente, por ejemplo, se pueden incorporar a dichas combinaciones zanamivir, oseltamivir, amantadina, rimantadina y ribavirina y Fluvax.
Los componentes individuales de dichas combinaciones se pueden administrar tanto separadamente, secuencialmente o simultáneamente en formulaciones farmacéuticas separadas o combinadas.
Cuando los compuestos de la presente invención se utilizan con un segundo principio activo terapéutico y/o preventivo contra el mismo virus, la dosis de cada compuesto puede ser tanto la misma como distinta de la utilizada cuando cada compuesto se utiliza por separado. Los expertos en la materia podrán estimar las dosis apropiadas.
Las formulaciones farmacéuticas comprenden aquellas apropiadas para la administración oral, rectal, intranasal, tópica (comprendiendo la bucal y la sublingual), vaginal o parenteral (comprendiendo la intramuscular, la subcutánea y la intravenosa), a aquellas apropiadas para la administración en el tracto respiratorio (comprendiendo las fosas nasales) por ejemplo por inhalación o insuflación. Las formulaciones se pueden presentar convenientemente, cuando resulte apropiado, en dosis unitarias discretas, y se pueden preparar mediante cualquiera de los procedimientos conocidos en la técnica farmacéutica. Dichos procedimientos comprenden la etapa de unir el principio activo con excipientes líquidos o excipientes sólidos finamente divididos o ambos, y a continuación, si resulta necesario, conformar el producto en la formulación pretendida.
Las formulaciones farmacéuticas apropiadas para la administración local se pueden presentar convenientemente como unidades discretas tales como cápsulas, sello o comprimidos que comprenden cada uno de ellos una cantidad predeterminada del principio activo; como polvo o gránulos, como solución, suspensión o emulsión. El principio activo se puede presentar asimismo como inyección intravenosa rápida, electuario o pasta. Los comprimidos y las cápsulas para la administración oral pueden comprender excipientes convencionales tales como aglutinantes, sustancias de relleno, lubricantes, desintegrantes o agentes humectantes. Los comprimidos se pueden revestir según procedimientos muy conocidos en la técnica. Las preparaciones líquidas orales se pueden encontrar por ejemplo en forma de suspensiones acuosas o aceitosas, soluciones, emulsiones, jarabes o elixires, o se pueden presentar como un producto seco para su conformación con agua u otro vehículo adecuado antes de la utilización. Dichas preparaciones líquidas pueden comprender aditivos convencionales tales como agentes de suspensión, emulsionantes, vehículos no acuosos, que pueden comprender aceites comestibles o conservantes.
Los compuestos según la presente invención se pueden formular asimismo para la administración parenteral mediante inyección, por ejemplo inyección intravenosa rápida o venoclisis continua, y se pueden presentar como dosis unitarias en ampollas, jeringuillas llenadas previamente, recipientes para la venoclisis de un volumen pequeños o para dosis múltiples con un conservante añadido. Las composiciones se pueden presentar en forma de suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos, y pueden comprender agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Alternativamente, el principio activo se puede presentar en forma pulverulenta, obtenido mediante el aislamiento aséptico del sólido estéril o por liofilización a partir de una disolución, para realizar un vehículo apropiado, por ejemplo agua estéril y sin pirógenos, antes de su utilización.
En el caso de la administración tópica para la epidermis los compuestos según la presente invención se pueden formular como ungüentos, cremas o lociones, o como parches transdérmicos. Los ungüentos y las cremas se pueden formular, por ejemplo con una base acuosa o aceitosa con la adición de los agentes espesantes y/o gelificantes adecuados. Las lociones se pueden formular con una base acuosa o aceitosa, y en general comprenderán uno o más agentes emulsionantes, estabilizantes, dispersantes, de suspensión espesantes o colorantes.
Las formulaciones adecuadas para la administración tópica en la boca comprenden pastillas para chupar que contienen el principio activo en una base saborizada, habitualmente sacarosa, goma arábiga o goma de tragacanto; pastillas que comprenden el principio activo en una base inerte tal como gelatina o sacarosa o goma arábiga; enjuagues bucales que comprenden el principio activo en un excipiente líquido adecuado.
Las formulaciones farmacéuticas apropiadas para la administración rectal en la que el excipiente es un sólido se presentan preferentemente como dosis unitarias en supositorio. Los excipientes apropiados comprenden manteca de cacao y otros materiales utilizados habitualmente en la técnica, y los supositorios se pueden realizar convenientemente mediante la mezcla del principio activo con el (los) excipiente(s) ablandado(s) o fundidos, a continuación se enfrían y se moldean.
Las formulaciones apropiadas para la administración vaginal se pueden presentar como óvulos vaginales, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o aerosoles que comprenden aparte del principio activo dichos excipientes apropiados tal como se conocen en la técnica.
En el caso de la administración por el tracto respiratorio, comprendiendo la administración intranasal, los inhibidores de la exo-\alpha-sialidasa se pueden administrar mediante cualquiera de los procedimientos y formulaciones utilizados en la técnica para la administración por el tracto respiratorio.
Por lo tanto, en general, los compuestos se puede administrar en forma de solución o suspensión o como polvo seco.
Las soluciones y suspensiones serán generalmente acuosas, por ejemplo preparadas a partir de agua sola (por ejemplo agua estéril o sin pirógenos) o agua y un codisolvente fisiológicamente aceptable (por ejemplo etanol, propilenglicol o macrogoles tales como el PEG 400).
Dichas soluciones o suspensiones pueden comprender además otros excipientes por ejemplo conservantes (tales como el cloruro de benzalconio), agentes solubilizantes / tensioactivos tales como los polisorbatos (por ejemplo Tween 80, Span 80, cloruro de benzalconio), agentes amortiguadores del pH, agentes de ajuste de la isotonicidad (por ejemplo el cloruro sódico), intensificadores de la absorción e intensificadores de la viscosidad. Las suspensiones pueden comprender además agentes de suspensión (por ejemplo celulosa microcristalina, carmelosa sódica).
Las soluciones o suspensiones se aplican directamente a las fosas nasales mediante medios convencionales, por ejemplo con un cuentagotas, una pipeta o un nebulizador. Las formulaciones se pueden proporcionar en formas unitarias o multidosis. En este último caso resulta conveniente proporcionar un dosificador. En el caso del cuentagotas o de la pipeta ello se puede conseguir al administrar el paciente un volumen predeterminado apropiado de la solución o suspensión. En el caso de un aerosol ello se puede conseguir por ejemplo mediante una bomba dosificadora de aerosolización rociada.
La administración por el tracto respiratorio se puede realizar asimismo mediante una formulación para aerosol en la que se proporciona un compuesto en un envase presurizado con un propulsor apropiado, tal como un compuesto clorofluorocarbonado (CFC), por ejemplo diclorodifluorometano, triclorodifluorometano o diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas apropiado. El aerosol puede comprender convenientemente asimismo un tensioactivo tal como la lecitina. La dosis del fármaco se puede controlar disponiendo una válvula de dosificación.
Alternativamente los compuestos se pueden proporcionar en forma de un polvo seco, por ejemplo una mezcla de polvo del compuesto en una base apropiada para el polvo tal como lactosa, almidón, derivados del almidón tales como la hipromelosa y la povidona (PVP). Convenientemente el excipiente del polvo formará un gel en las fosas nasales. La composición del polvo se puede presentar en forma de dosis unitaria, por ejemplo en cápsulas o cartuchos de por ejemplo gelatina, o en envases alveolados desde los que se puede administrar al polvo mediante un inhalador.
En las formulaciones destinadas a la administración por el tracto respiratorio, que comprenden las formulaciones intranasales, el compuesto presentará generalmente un tamaño de partícula pequeño, por ejemplo aproximadamente de 5 micrómetros o inferior. Dicho tamaño de partícula se puede obtener por medios conocidos en la técnica, por ejemplo mediante micronización.
Cuando se pretenda, se pueden utilizar formulaciones adaptadas para proporcionar una liberación sostenida del principio activo.
Preferentemente los compuestos de la presente invención se administran al tracto respiratorio mediante inhalación, insuflación o administración intranasal, o una combinación de los mismos.
"Relenza" se administra por inhalación como polvo de paso total mediante un "Diskhaler" (oseltamivir). Una formulación similar resultaría adecuada para la presente invención.
Por lo tanto, según un octavo aspecto de la presente invención se proporciona un inhalador que comprende una formulación tal como se ha definido anteriormente.
Se podrá apreciar que el inhalador se puede presentar asimismo en forma de un inhalador de aerosolización con dosímetro.
A efectos de la presente especificación se comprenderá claramente que el término "comprendiendo" significa "incluyendo pero sin limitarse a", y que la palabra "comprende" tiene el significado correspondiente.
Todas las publicaciones, comprendiendo, pero sin limitarse a las mismas, patentes y solicitudes de patente, citadas en la presente especificación se incorporan a la presente memoria por referencia tal como si cada publicación individual se indicase específicamente e individualmente para incorporarse como referencia a la misma como descritas en su totalidad.
Descripción detallada de la invención
La presente invención se describirá a continuación en detalle mediante los siguientes ejemplos no limitativos presentados únicamente como referencia.
TABLA 1 
\vskip1.000000\baselineskip
4 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Métodos automáticos Método verde (LC/MS)
Espectrómetro de masas Micromass Platform II funcionando en modo de electroaerosol de iones positivos, intervalo de masas 100 - 1000 uma.
Columna: 3,3 cm x 4,6 mm ID, 3 \mum ABZ+PLUS
Flujo: 3 ml/min
Volumen de inyección: 5 \mul
Disolvente A: acetonitrilo al 95% + ácido fórmico al 0,05%
Disolvente B: ácido fórmico al 0,1% + acetato de amonio 10 mMolar
Gradiente: 0% A / 0,7 min, 0 - 100% A / 3,5 min, 100% A / 1,1 min, 100 - 0% A / 0,2 min
\newpage
Método púrpura (Masas con HPLC con sistema AutoPrep)
La columna Prep utilizada fue una Supelcosil ABZplus (10 cm x 2,12 cm)
Longitud de onda de UV: 200 - 320 nM
Flujo: 20 ml/min
Volumen de inyección: 1 ml
Disolvente A: ácido fórmico al 0,1%
Disolvente B: acetonitrilo al 95% + ácido fórmico al 5%
Gradiente: 100% A / 1 min, 100 - 80% A / 9 min, 80 - 1% A / 3,5 min, 1% A / 1,4 min, 1 - 100% A / 0,1 min
\vskip1.000000\baselineskip
Método turquesa (HPLC AutoPrep)
La columna Prep utilizada fue una Supelcosil ABZplus (10 cm x 2,12 cm)
Longitud de onda de UV: 230 nm
Flujo: 4 ml/min
Volumen de inyección: 2 ml
Disolvente A: acetonitrilo + TFA al 0,05%
Disolvente B: agua + TFA al 0,1%
\vskip1.000000\baselineskip
Método A (LC/MS)
Espectrómetro de masas Micromass Platform II funcionando en modo de electroaerosol de iones positivos, intervalo de masas 100 - 1000 uma.
Columna: 3,3 cm x 4,6 mm ID, 3 \mum ABZ+PLUS
Flujo: 3 ml/min
Volumen de inyección: 5 \mul
Disolvente A: acetonitrilo al 95% + ácido fórmico al 0,05%
Disolvente B: ácido fórmico al 0,1% + acetato de amonio 10 mMolar
Gradiente: 0% A / 0,7 min, 0 - 100% A / 3,5 min, 100% A / 1,1 min, 100 - 0% A / 0,2 min
\vskip1.000000\baselineskip
Método B (LC/MS)
Espectrómetro de masas Waters ZQ funcionando en modo de electroaerosol de iones positivos, intervalo de masas 100 - 1000 uma.
Columna: 3,3 cm x 4,6 mm ID, 3 \mum ABZ+PLUS
Flujo: 3 ml/min
Volumen de inyección: 5 \mul
Disolvente A: acetonitrilo al 95% + ácido fórmico al 0,05%
Disolvente B: ácido fórmico al 0,1% + acetato de amonio 10 mMolar
Gradiente: 0% A / 0,7 min, 0 - 100% A / 3,5 min, 100% A / 1,1 min, 100 - 0% A / 0,2 min
\vskip1.000000\baselineskip
Método C (HPLC AutoPrep)
La columna Prep utilizada fue una Supelcosil ABZplus (10 cm x 2,12 cm)
Longitud de onda de UV: 230 nm
Flujo: 4 ml/min
Volumen de inyección: 2 ml
Disolvente A: acetonitrilo + TFA al 0,05%
Disolvente B: agua + TFA al 0,1%
Gradiente: 0 - 40% A / 20 min, 40% A / 20 min, 40 - 100% A / 0,3 min, 100% A / 15 min, 100 - 0% A / 3 min
\vskip1.000000\baselineskip
Método D (HPLC orientada a masas con sistema AutoPrep)
La columna Prep utilizada fue una Supelcosil ABZplus (10 cm x 2,12 cm)
Longitud de onda de UV: 200 - 320 nM
Flujo: 20 ml/min
Volumen de inyección: 1 ml
Disolvente A: ácido fórmico al 0,1%
Disolvente B: acetonitrilo al 95% + ácido fórmico al 5%
Gradiente: 100% A / 1 min, 100 - 80% A / 9 min, 80 - 1% A / 3,5 min, 1% A / 1,4 min, 1 - 100% A / 0,1 min
\vskip1.000000\baselineskip
Abreviaturas
EtOAc acetato de etilo
MeOH metanol
HPLC cromatografía en fase líquida de alta presión
SPE extracción en fase sólida
LC/MS cromatografía en fase líquida / espectrometría de masas
DMF N,N-dimetilformamida
WSCDI Metyoduro de 1-(3-Dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
HOBt 1-hidroxobenzotriazol
DIPEA N,N-diisopropiletilamina
MeCN acetonitrilo
RT temperatura ambiente
EtOAc acetato de etilo
MgSO_{4} sulfato magnésico
DMF dimetilformamida
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 1 Preparación del compuesto 1
Producto intermedio 1
6
Se realizó 3 veces el secado azeotrópico del éster metílico del ácido ilamino-4-azido-6-[(S)-4-nitrofenoxicarbonilo-
xi)-(2-oxo-[1,3]dioxolan-4R-il)-metil]-5,6-dihidro-4H-piran-2-carboxílico (véase Eur. J. Med. Chem. 1999, 34, 563 - 574) (2,00 g, 3,8 mmol) a partir de tolueno anhidro y a continuación se disolvió en acetonitrilo anhidro (20 ml) con la adición de unas pocas microesferas de un tamaño de tamiz de 3 ángstrom. Se trató la disolución agitada con N-terc-butoxicarbonil-1,4-diaminobutano (0,72 g, 3,8 mmol) y trietilamina (0,43 g, 4,2 mmol). Se agitó la mezcla durante 16 h en una atmósfera de nitrógeno. Se eliminaron los productos volátiles al vacío para obtener un residuo de color amarillo. Este se volvió a disolver en EtOAc (50 ml), se lavó con HCl 0,5 M (30 ml) y a continuación saladar (30 ml). Se secó la disolución (Na_{2}SO_{4}) y se evaporó el disolvente al vacío para obtener una espuma cremosa coloreada. La purificación posterior se realizó mediante cromatografía flash de Biotage, eluyendo inicialmente una proporción EtOAc : ciclohexano (1:1) y a continuación EtOAc. La evaporación del disolvente al vacío proporcionó el producto intermedio 1 (1,26 g, rendimiento del 58%) como un sólido blanco. La LC/MS (Método B) presentó MH^{+} = 571; T_{RET} =2,87 min.
Producto intermedio 2
7
El producto intermedio 1 (0,76 g, 1,33 mmol) se disolvió en etanol (24 ml) y se sometió a hidrogenación catalítica con un catalizador Lindlar (0,095 g) durante 16 h. Se retiró el catalizador por filtración y la evaporación del disolvente al vacío proporcionó el producto intermedio 2 (0,72 g, rendimiento del 99%) como una espuma cremosa coloreada. La LC/MS (Método A) presentó MH^{+} = 545; T_{RET} = 2,24 min.
Producto intermedio 3
8
El producto intermedio 2 (0,72 g, 1,32 mmol) se disolvió en tetrahidrofurano (7 ml) y se trató con N,N'-bis-(terc-butoxicarbonil)-1-guanilpirazol (0,45 g, 1,45 mmol). Se agitó la mezcla en una atmósfera de nitrógeno durante 16 h. Se eliminaron los productos volátiles al vacío para proporcionar un residuo sólido que se purificó mediante cromatografía flash de Biotage; se eluyó inicialmente una proporción EtOAc : ciclohexano (1:1) y a continuación EtOAc : ciclohexano (5:3). La evaporación del disolvente al vacío proporcionó el producto intermedio 3 (0,48 g, rendimiento del 46%) como un sólido blanco. La LC/MS (Método A) presentó MH^{+} = 787; T_{RET} = 3,64 min.
\vskip1.000000\baselineskip
Producto intermedio 4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
9 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto intermedio 3 (0,48 g, 0,61 mmol) se disolvió en diclorometano (19 ml). Se enfrió la disolución en un baño de hielo y se añadió proporcionalmente ácido trifluoacético (19 ml) durante 5 minutes. A continuación se agitó la mezcla durante 1 h en una atmósfera de nitrógeno antes de dejarla calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 16 h. Se eliminaron los productos volátiles al vacío y el residuo azeotrópico a partir de tolueno para eliminar el resto de ácido trifluoacético. La trituración con éter dietílico (20 ml) produjo un sólido blanco que se separó para proporcionar el producto intermedio 4 (0,50 g). La LC/MS (Método B) presentó (M - H)^{-} = 485; T_{RET} = 0,52 min.
\vskip1.000000\baselineskip
Producto intermedio 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
10 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto intermedio 4 (0,050 g, 0,07 mmol) se sometió a un secado azeotrópico 3 veces a partir de tolueno anhidro y a continuación se disolvió en una mezcla de acetonitrilo anhidro (2 ml) y DMF anhidro (1 ml). Se trató la disolución sucesivamente con ácido isoftálico (0,005 g, 0,03 mmol), HOBt (0,010 g, 0,07 mmol), WSCDI (0,013 g, 0,07 mmol) y DIPEA (0,026 g, 0,20 mmol). Se agitó la mezcla durante 16 h en una atmósfera de nitrógeno. Se eliminaron los productos volátiles al vacío para producir un residuo de color amarillo que se purificó mediante HPLC preparativa orientada a masas (método D) para proporcionar el producto intermedio 5 (0,013 g) como un sólido blanco. La LC/MS (Método A) presentó (M + 2H^{+})/2 = 552; T_{RET} = 2,05 min.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 1 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
11 
\vskip1.000000\baselineskip
El producto intermedio 5 (0,012 g, 001 mmol) se disolvió en una mezcla de agua (0,5 ml) y metanol (0,5 ml). La disolución resultante se trató con trietilamina (0,090 g, un excedente). Se agitó la mezcla durante 50 minutos antes de proceder a la eliminación rápida de los productos volátiles al vacío para proporcionar un residuo sólido blanco. La purificación mediante HPLC preparativa (método C) proporcionó el compuesto 1 (0,002 g) como un sólido blanco. La LC/MS (Método B) presentó (M + 2H^{+})/2 = 512; T_{RET} =1,77 min.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 2 Preparación del compuesto 2
Producto intermedio 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
12 
\vskip1.000000\baselineskip
Se realizó el secado azeotrópico del éster metílico del ácido (4S, 5R, 6R)-5-acetilamino-4-azido-6-[(S)-4-nitrofeno-
xicarboniloxi)-(2-oxo-[1,3]dioxolan-4R-il)-metil]-5,6-dihidro-4H-pran-2-carboxílico (véase Eur. J. Med. Chem. 1999, 34, 563 - 574) (4,0 g) con tolueno (50 ml) y se disolvió en MeCN (40 ml) y trietilamina (1,12 ml) y se añadió ácido hidrocloruro del éster t-butílico del ácido 3-aminopropiónico (1,396 g). Tras 3 días a RT, se eliminó el disolvente y se diluyó el residuo con EtOAc (150 ml). Éste se lavó con una disolución de ácido cítrico al 5% (2 x 50 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró. La purificación mediante Biotage se eluyó con ciclohexano : EtOAc en una proporción de 1:1, a continuación de 60:40 y a continuación de 65:35 de ciclohexano : EtOAc proporcionando el producto intermedio 6 como una espuma incolora (3,45 g).
^{1}H-NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,72 (d, 1H), 5,97 (d, 1H), 5,53 (t, 1H), 5,40 (t, 1H), 5,03-4,95 (m, 2H), 4,92 (dd, 1H), 4,74 - 4,64 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,64 - 3,54 (m, 1H), 3,38 - 3,27 (m, 2H), 2,65 - 2,56 (m, 1H), 2,52 - 2,43 (m, 1H), 2,06 (s, 3H), 1,70 (s, 1H), 1,48 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
Producto intermedio 7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
13 
\vskip1.000000\baselineskip
Se preparó de un modo similar al producto intermedio 2 a partir del producto intermedio 6. LC/MS (método verde) MH^{+} 504, T_{RET} = 2,22 min.
\vskip1.000000\baselineskip
Producto intermedio 8
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
14 
\vskip1.000000\baselineskip
El producto intermedio 8 se preparó de un modo similar al producto intermedio 3 a partir del producto intermedio 7.
LC/MS (método verde) MH^{+} 744, T_{RET} = 3,66 min.
\vskip1.000000\baselineskip
Producto intermedio 9
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
15 
\vskip1.000000\baselineskip
El producto intermedio 8 (1,44 g), ácido trifluoacético (20 ml), diclorometano (20 ml) y anisol (2 ml) se agitaron a RT durante 3 h tras lo que se eliminaron los productos volátiles al vacío. Se trituró el residuo con Et_{2}O (2 x 25 ml) y a continuación se secó al vacío para producir el producto intermedio 9 como un sólido blanco (1,22 g).
LC/MS (método verde) MH^{+} 488, T_{RET} = 1,25 min.
\vskip1.000000\baselineskip
Producto intermedio 10
\vskip1.000000\baselineskip
16 
\vskip1.000000\baselineskip
El producto intermedio 9 (0,12 g), DIPEA (0,14 ml), m-xililendiamina (0,0132 ml) y hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitrispirrolidinofosfonio (0,104 g) se mezclaron a RT durante 2 días y a continuación se concentraron al vacío. Se realizó la purificación utilizando HPLC orientada a masas (método púrpura) proporcionando el producto intermedio 10 (0,038 g).
LC/MS (método verde) MH^{+}/2 538, T_{RET} = 1,74 min.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 2
17
El producto intermedio 10 (0,038 g), agua (1,5 ml), metanol (1,5 ml) y trietilamina (0,5 ml) se mezclaron a RT durante 1 h. Se eliminaron los productos volátiles al vacío y se aciduló el residuo acuoso a un pH de 4 con ácido trifluoacético. La HPLC en fase inversa (método turquesa) eluido con MeCN al 0 - 17,5% durante 30 min produjo el compuesto 2 (7,6 mg).
LC/MS (método verde) MH^{+}/2 497, T_{RET} = 1,64 min
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 3 Preparación del compuesto 3
Producto intermedio 11
\vskip1.000000\baselineskip
18
El producto intermedio 4 (0,075 g, 0.11 mmol) se sometió a secado azeotrópico 3 veces a partir de tolueno anhidro. El sólido secado se disolvió en una mezcla de cloroformo anhidro (2 ml) y DMF anhidro (1 ml) con la adición de DIPEA (0,056 g, 0,43 mmol). La disolución clara resultante se añadió a cloruro de 1,3-Bencenodisulfonilo (0,014 g, 0,05 mmol) y se agitó la mezcla durante 1 h en una atmósfera de nitrógeno. Se eliminaron los compuestos volátiles al vacío para proporcionar un residuo que se purificó posteriormente mediante SPE en fase inversa (eluyente acetonitrilo acuoso al 15%) para producir el producto intermedio 11 (0,020 g) como un sólido blanco.
La LC/MS (Método B) presentó (M + 2H^{+})/2 = 588; T_{RET} = 2,09 min.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 3 
\vskip1.000000\baselineskip
19 
\vskip1.000000\baselineskip
El producto intermedio 11 (0,020 g, 0,014 mmol) se disolvió en una mezcla de agua (0,5 ml) y metanol (0,5 ml). La disolución resultante se trató con trietilamina (0,090 g, un excedente). Se agitó la mezcla durante 50 minutos antes de proceder a la eliminación rápida de los productos volátiles al vacío para proporcionar un residuo sólido blanco. La preparación mediante HPLC preparativa (método C) proporcionó el compuesto 3 (0,006 g) como un sólido blanco. La LC/MS (Método A) presentó (M + 2H^{+})/2 = 548; T_{RET} = 1_{.}99 min.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 4 Preparación del compuesto 4
Producto intermedio 12
\vskip1.000000\baselineskip
20 
\vskip1.000000\baselineskip
De un modo similar al que se preparó el producto intermedio 10 a partir del producto intermedio 9 y p-xililendiami-
na se obtuvo el producto intermedio 12 (0,038 g). LC/MS (método verde) MH^{+}/2 538, T_{RET} = 1,94 min.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 4 
\vskip1.000000\baselineskip
21 
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto 4 se preparó de un modo similar al compuesto 2 a partir del producto intermedio 12.
LC/MS (método verde) MH^{+}/2 497, T_{RET} = 1,62 min.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 5 Preparación del compuesto 5 mediante la reacción del producto intermedio 13 y el ácido tereftálico 
\vskip1.000000\baselineskip
22 
\vskip1.000000\baselineskip
El producto intermedio aminopropílico 13 se preparó siguiendo una secuencia similar a las etapas descritas para el producto intermedio aminobutílico análogo 4 del ejemplo 1.
El ácido tereftálico (5,93 mg, 0,0357 mmol), el producto intermedio 13 (50 mg, 0,071 mmol) y el hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris (dimetilamino)fosfonio (BOP) (37,7 mg, 0,0852 mmol) se disolvieron en DMF (2 ml) al que se añadió di-isopropiletilamina (DIPEA, 91,8 mg, 0,71 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. La mezcla de la reacción se purificó mediante HPLC en fase inversa utilizando una columna C18 Waters Symmetry (5 micrómetros 19 x 100 mm), y un gradiente de elución tal como se representa en la Tabla siguiente, para obtener el dímero protegido (19,5 mg, 51%), MS 1075 (M + H)^{+}.
23 
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto dimérico protegido (19,5 mg, 0,0182 mmol) se disolvió en una mezcla de agua / metanol / trietilamina en una proporción de 4:4:1 (2 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y a continuación se evaporó hasta secar bajo una presión reducida. Se eliminó la trietilamina restante mediante la adición repetida de agua y evaporación bajo una presión reducida. El residuo restante se purificó mediante HPLC en fase inversa utilizando una columna C18 Waters Symmetry (5 micrómetros 19 x 100 mm), y un gradiente de elución tal como se representa en la Tabla siguiente, para obtener el dímero protegido 5 como un sólido blanco (10,8 mg, 60%) tras liofilizar.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
24 
\vskip1.000000\baselineskip
MS 498,3 (M + 2H)^{2+}, 995,2 (M + H)^{+}
^{1}H-nmr (D_{2}O) \delta (ppm): 1,79 (t, 4H); 1,90 (s, 6H); 3,14 (t, 4H); 3,42 (m, 6H); 3,62 (dd, 2H); 3,98 (m, 2H); 4,08 (dd, 2H); 4,37 (dd, 2H); 4,52 (dd, 2H); 4,88 (dd, 2H); 5,92 (d, 2H); 7,79 (s, 4H).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 6 Preparación del compuesto 5 mediante la reacción de los compuestos intermedios 14 y 15 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
25 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Producto intermedio 14
A una suspensión de ácido tereftálico (141,9 mg, 0,85 mmol) y N-Boc-1,3-diaminopropano (300 mg, 1,72 mmol) en DMF (12 ml) se añadió (392 mg, 3,88 mmol) agitando a temperatura ambiente. A la suspensión blanca se añadió en fracciones BOP (771 mg, 1,74 mmol). Tras la adición de la primera fracción de BOP (aproximadamente 300 mg) la mezcla de la reacción se volvió una disolución clara. Se agitó la mezcla de la reacción a temperatura ambiente durante 16 horas y a continuación se evaporó al vacío para eliminar el DMF. Se agitó el residuo en agua (10 ml) a temperatura ambiente durante 3 horas y a continuación se recogió el producto sólido por filtración. Se lavó el producto sólido con agua (4 x 5 ml) y se filtró. El producto aglutinado del filtro se disolvió en metanol caliente (4 ml) y a continuación se diluyó con agua (9 ml). Se agitó la suspensión a temperatura ambiente durante 3 horas y a continuación se filtró. Se lavó el sólido con agua (4 x 5 ml), a continuación se disolvió en metanol hirviendo (4 ml) y se enfrió hasta la temperatura ambiente. Se dejo agitando la suspensión cristalina a temperatura ambiente durante la noche. Se retiró el producto sólido por filtración, se lavó con metanol frío y se secó al aire para proporcionar el producto bis-amido como un sólido blanco (365 mg, 89,7%), MS 479 (M + H)^{+}. La bis-amida protegida con Boc (360 mg) se agitó en una mezcla de ácido trifluoacético (TFA) (2 ml) y diclorometano (2 ml) a temperatura ambiente durante 4 h, a continuación se evaporó hasta secarla al vacío. Se disolvió el residuo en agua (6 ml) y se liofilizó para eliminar cualquier excedente de TFA y se obtuvo el producto intermedio 14 (sal de TFA) como un sólido blanco (379 mg, 98%), MS 279 (Base + H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Producto intermedio 15
Una disolución de metil (2R, 3R, 4S)-3-(acetilamino)-4-({[(terc-butoxicarbonil)amino][(terc-butoxicarbonil)imino]metil}amino)-2-{(S)-hidroxi[(4R)-2-oxo-1,3-dioxolan-4-il]metil}-3,4-dihidro-2H-piran-6-carboxilato (113 mg,
0,197 mmol) en piridina seca (3 ml) que contenía 4-dimetilaminopiridina (120 mg, 0,982 mmol) se trató con 4-nitrofenilcloroformato (199 mg, 0,987 mmol) a 22ºC. se agitó la mezcla a 22ºC durante 17 h, a continuación se eliminó la piridina al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía SPE (cartuchos de 5 g) eluyendo con ciclohexano - acetato de etilo (4:1 - 2:1) para obtener el producto intermedio 15 como una goma de color amarillo pálido (96 mg, 66%).
NMR \delta (CDCl_{3}) 11,3 (1Hs, NH), 8,58 (1H brd, NH), 8,26 (2H, AA'BB', CH aromáticos), 7,56 (2H, AA'BB', CH aromáticos), 6,82 (1H brd, NH), 5,93 (1Hd, =CH), 5,54 (1Hdd, CH), 5,20 (1Hdt, CH), 5,10 (1Hdt, Ch), 4,78 (2Hm, 2 x CH), 4,44 (1H brq, CH), 4,28 (1Hdd, CH), 3,82 (3Hs CH_{3}), 1,91 (3Hs, CH_{3}), y 1,48 (18Hs, 2x terc butilo).
LCMS R_{t} = 3,87 min, (MH^{+} = 738, MH^{-} = 736).
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 5
El producto intermedio 14 (38,9 mg, 0,768 mmol) y el producto 15 (2 equivalentes) se disolvieron en piridina (0,5 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 h y a continuación se evaporó al vacío hasta alcanzar el secado. El residuo se repartió en diclorometano (15 ml) y agua (3 ml). Se lavó la capa orgánica en agua 2 x 2 ml), a continuación se evaporó hasta alcanzar el secado para obtener un residuo gomoso que se sometió a cromatografía en gel de sílice (20 g, disolvente acetato de etilo / metanol 10:1). La forma protegida del compuesto 5 se aisló de este modo como una espuma blanca 56 mg, 49%).
El compuesto protegido (50 mg, 0,0339 mmol) se trató con TFA y a continuación con trietilamina tal como se ha descrito en el ejemplo 5 para proporcionar el compuesto 5 (16,8 mg, 50%), MS 995 (M + H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 7
Los compuestos 6 a 14 (Tabla 1) de la presente invención se prepararon de un modo análogo al de los ejemplos proporcionados anteriormente y a continuación se presentan los datos de NMR y/o espectrometría de masas.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 6
MS 540,6 (M + 2H)^{2+}
^{1}H-nmr (D_{2}O) \delta (ppm); 1,43 (br, 8H); 1,51 (br, 4H); 1,65 (br, 4H); 2,00 (s, 6H); 3,12 (m, 4H); 3,41 (m, 4H); 3,43 (dd, 2H); 3,70 (dd, 2H); 4,07 (dd, 2H); 4,18 (dd, 2H); 4,46 (dd, 2H); 4,58 (dd, 2H); 4,98 (dd, 2H); 5,98 (d, 2H); 7,85 (s, 4H).
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 7
MS 1079 (M + 2H)^{2+}, 540,6 (M + 2H)^{2+}, 360,5 (M + 3H)^{3+}
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 8
MS 1079,5 (M + 2H)^{2+}, 540,25 (M + 2H)^{2+}, 360,5 (M + 3H)^{3+}
^{1}H-nmr (CD_{3}OD) \delta (ppm): 1,35 (br, 8H); 1,45 (br, 4H); 1,55 (br, 4H); 1,90 (s, 6H); 3,03 (m, 4H); 3,35 (m, 4H); 3,44 (dd, 2H); 3,56 (dd, 2H); 3,95 (m, 2H); 4,15 (dd, 2H); 4,35 (dd, 2H); 4,52 (dd, 2H); 4,90 (dd, 2H); 5,82 (d, 2H); 7,48 (t, 1H); 7,88 (d, 2H); 8,19 (s, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 9
MS 1039,1 (M + H)^{+}, 520,3 (M + 2H)^{2+}
^{1}H-nmr (D_{2}O) \delta (ppm): 1,79 (t, 4H); 1,90 (s, 6H); 3,19 (t, 4H); 3,46 (m, 6H); 3,60 (dd, 2H); 4,00 (m, 2H); 4,08 (dd, 2H); 4,37 (dd, 2H); 4,47 (dd, 2H); 4,88 (dd, 2H); 5,88 (d, 2H); 8,28 (s, 1H); 8,49 (s, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 10
MS 1123,7 (M + H)^{+}, 562,3 (M + 2H)^{2+}
^{1}H-nmr (CD_{3}OD) \delta (ppm): 1,40 (br, 8H); 1,51 (br, 8H); 1,93 (s, 6H); 2,19 (s, 3H); 3,08 (br, 4H); 3,19 (br, 4H); 3,52 (dd, 2H); 3,65 (dd, 2H); 4,01 (m, 2H); 4,16 (dd, 2H); 4,35 (dd, 2H); 4,53 (dd, 2H); 4,98 (dd, 2H); 5,89 (d, 2H); 7,10 (dd, 2H); 7,40 (s, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 11
MS 995,1 (M + H)^{+}, 498,3 (M + 2H)^{2+}
^{1}H-nmr (D_{2}O) \delta (ppm) : 1,75 (t, 4H); 1,90 (s, 6H); 3,15 (t, 4H); 3,45 (m, 6H); 3,60 (dd, 2H); 3,98 (m, 2H); 4,05 (dd, 2H); 4,35 (dd, 2H); 4,45 (dd, 2H); 4,92 (dd, 2H); 5,91 (d, 2H); 7,50 (t, 1H); 7,92 (d, 2H); 8,07 (s, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 12
MS 995,3 (M + H)^{+}, 498,3 (M + 2H)^{2+}
^{1}H-nmr (D_{2}O) \delta (ppm) : 1,78 (t, 4H); 1,92 (s, 6H); 3,15 (t, 4H); 3,40 (t, 4H); 3,46 (dd, 2H); 3,60 (dd, 2H); 3,95 (m, 2H); 4,00 (dd, 2H); 4,35 (dd, 2H); 4,50 (dd, 2H); 4,93 (dd, 2H); 5,83 (d, 2H); 7,62 (dd, 4H).
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 13
MS 1023,1 (M + H)^{+}, 512,3 (M + 2H)^{2+}
^{1}H-nmr (D_{2}O) \delta (ppm): 1,65 (t, 4H); 1,85 (s, 6H); 3,02 (t, 4H); 3,15 (t, 4H); 3,42 (dd, 6H); 3,52 (s, 4H); 3,59 (dd, 2H); 3,98 (m, 2H); 4,12 (dd, 2H); 4,40 (dd, 2H); 4,50 (dd, 2H); 4,90 (dd, 2H); 5,90 (d, 2H); 7,30 (s, 4H).
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 14
MS 1023,3 (M + H)^{+}, 512, 4 (M + 2H)^{2+}
^{1}H-nmr (D_{2}O) \delta (ppm) : 1,61 (t, 4H); 1,91 (s, 6H); 3,00 (t, 4H); 3,13 (t, 4H); 3,40 (dd, 6H); 3,57 (s, 4H); 3,58 (dd, 2H); 3,99 (m, 2H); 4,10 (dd, 2H); 4,40 (dd, 2H); 4,50 (dd, 2H); 4,90 (dd, 2H); 5,88 (d, 2H); 7,32 (m, 4H).
Ejemplo 8 Preparación y purificación a gran escala del compuesto 5 Sal de TFA a sal de HCl
La sal 2TFA (10 g) del compuesto 5 preparada según el ejemplo 6 se disolvió en MeOH / agua (1:1 v/v) (150 ml) y se aplicó a una columna de intercambio de iones lavada previamente Amberlite IRA-410 (forma cloruro) (4 x 50 cm). La sal de 2HCl del compuesto 5 se eluyó a partir de dicha columna con MeOH / agua (1:1 v/v)Las fracciones que contenían la sal de 2HCl se concentraron al vacío para proporcionar una espuma blanca.
Desprotección
La sal de 2HCl (10,4 g) se disolvió en metanol (144 ml) y agua (144 ml) y se enfrió en hielo.
Se añadió trietilamina (7,75 ml) en tres fracciones durante 10 minutos. Se realizó el seguimiento de la reacción mediante HPLC en fase inversa. Cuando se hubo completado la reacción, la mezcla de la reacción se evaporó al vacío hasta alcanzar el secado.
Una disolución del compuesto 5 impuro que contenía trietilamina se evaporó hasta alcanzar el secado para producir un producto sólido (10,5 g). Dicho sólido se disolvió en 80 ml de agua y 5 ml ácido ortofosfórico se añadieron para garantizar que la disolución de muestra alcanzase un pH de 2. Dicha disolución (ca 100 ml) se sometió a HPLC preparativa utilizando una columna de 7 micrómetros Kromasil C8 (25 cm x 5 cm id.). La resolución cromatográfica del compuesto 5 se alcanzó utilizando un gradiente de elución con pares de iones en el que la fase móvil inicial A era H_{2}O a la que se habían añadido 8 g/litro de laurilsulfato sódico (SLS) y 2 ml/litro de H_{3}PO_{4}. La fase final móvil B era de un 60% de CH_{3}CN / H_{2}O a la que se habían añadido 8 g/litro de SLS y 2 ml/litro de H_{3}PO_{4}. El tiempo del gradiente fue del 0 al 100% B en 70 minutos manteniéndose en 100% B durante 20 minutos. Se ajustó el flujo a 80 ml/min. Se realizó un total de 4 inyecciones de 25 ml cada una. Se ajustó el detector a 260 nm. Las fracciones, de 50 ml cada una de ellas, se agruparon en función de su pureza analítica tal como se había determinado mediante la HPLC, siendo la especificación > 97,5%. Dicho volumen acumulado fue aproximadamente de 1800 ml para 4 separaciones cromatográficas. A fin de eliminar la mayor parte de los iones fosfato y laurilsulfato, la masa acuosa se añadió a 1200 ml de resina de intercambio de iones IRA 410 en forma de cloruro y se agitó al disolución durante 1 hora. Se retiró la resina por filtración y se lavó con 400 ml de H_{2}O que se combinó con el filtrado. A continuación se pasó la fase acuosa a través de una columna de IRA 410 en la forma de cloruro (15 cm x 2,5 cm id.) para eliminar cualquier contaminación restante de iones fosfato o laurilsulfato. A continuación se lavó la columna con 50 ml de H_{2}O y se combinó con el filtrado. Tras la eliminación del CH_{3}CN mediante evaporación giratoria a 40ºC, se ajustó el pH a 7,0. Se separó la fase acuosa en 2 fracciones. La primera fracción se pasó a través de una columna de Amberchrom CG 161 (25 cm x 2,5 cm) a fin de adsorber el compuesto 5. Dicha columna es una resina de poliestireno divinilo benceno que actúa de material de empaquetado en fase inversa. Se lavó la columna con 300 ml de H_{2}O hasta que se eliminaron los iones cloruro del lavado, verificándose esto mediante la falta de reacción con una disolución de AgNO_{3}. Se eluyó la columna con 30% CH_{3}CN / H_{2}O al 30% (500 ml). Se repitió este proceso con la segunda fracción y se combinaron los eluyentes. Se retiraron los disolventes (1 litro) mediante evaporación giratoria para producir 5,7 g de producto sólido.
El material purificado se absorbió en agua (300 ml) y se lavó con diclorometano (3 x 200 ml). A continuación se liofilizó la disolución acuosa para proporcionar el compuesto del título.
^{1}H NMR (D_{2}O) \delta 7,85 (s, 4H, 4 x ArH), 5,67, 5,57 (2 x d, 2H, J = 2,1 Hz, 2 x CH), 4,95 (dd, 2H, J = 9,0, 1,6 Hz, 2 x CH), 4,52 (dd, 2H, J = 10,5, 1,6 Hz, 2 x CH), 4,42 (dd, 2H, J = 9,3, 2,2 Hz, 2 x CH), 4,14 - 4,04 (m, 4H, 4 x CH), 3,67 (dd, 2H, J = 12, 3 Hz, 2 x CH), 3,54 - 3,44 (m, 6H, 2 x CH +2 x CH_{2}), 3,21 (t, 4H, J = 6,7 Hz, 2 x CH_{2}), 1,96 (s, 6H, 2 x CH_{3}), 1,85 (m, 4H, 2 x CH_{2}).
Microanálisis
Calculado: C 45,02%; H 6,23%; N 15,75%
Obtenido: C 44,80%; H 6,68%; N 14,89%
La LC-MS (Método A) presentó (M + 2H)^{2+} = 498; T_{RET} = 1,67 min
Ejemplo 9 Análisis de los compuestos de fórmula (I) - Inhibición de la reproducción del virus de la gripe
Se realizaron análisis del efecto citopático (CPE) esencialmente tal como describen Watanabe et al. (J. Virological Methods, 1994 48 257). Las células MDCK se infectaron con un inóculo definido del virus (determinado mediante experimentación para que sea el mínimo suficiente para provocar el CPE adecuado en 72 horas y que resulte susceptible de controlar los compuestos a concentraciones consideradas coherentes con las normativas publicadas) en presencia de disoluciones en serie de los compuestos de la presente invención. Los cultivos se incubaron hasta 72 horas a 37ºC en una atmósfera del CO_{2} al 5%. El nivel del CPE y por lo tanto de la multiplicación vírica se determinó mediante el metabolismo del colorante vírico bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT) según procedimientos publicados (véase por ejemplo, Watanabe et al., 1994). La concentración del compuesto que inhibió el CPE en un 50% (DI_{50}) se calculó mediante un programa informático de ajuste a curvas. se analizaron los virus de la gripe A/Sydney/5/97 y B/Harbin/7/95 y los resultados se presentan en la Tabla 2. Los datos comparable para un compuesto
descrito específicamente en el documento WO 00/55149 y para el compuesto A se presentan asimismo en la Tabla 2.
TABLA 2
26
Los datos proporcionados en la tabla 2 demuestran que los compuestos 2 a 14, además de resultar sustancialmente más potentes que el compuesto A altamente activo, son incluso más potentes contra el A/Sydney/5/97 y sustancialmente más potentes contra el virus de la gripe B asilado B/Harbin/7/95 asilado que los compuestos 8 y 10 del documento WO 00/55149.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 10 Ensayo de reducción de placas
Se sembraron células de riñón canino Madin Darby (MDCK) en placas de cultivo tisular de seis pocillos y se hicieron multiplicar hasta converger mediante procedimientos estándar. Se diluyeron los virus de la gripe en un volumen mínimo de disolución salina amortiguada con fosfato enriquecida con seroalbúmina bovina al 0,2% para proporcionar una valoración estimada de 50 a 100 unidades formadoras de placas (pfu) por pocillo. Tras la adsorción a las células MDCK durante una hora a 37ºC en una atmósfera de CO_{2} al 5% se aspiraron los inóculos víricos inocula y se sustituyeron con medio de cultivo vírico (medio mínimo de Eagle enriquecido con BSA, tripsina e insulina / transferrina /
selenio a unas concentraciones óptimas) que contenía suficiente agaragar o agarosa (generalmente del 1 al 2%) para provocar que el medio gelificase a temperatura ambiente y a 37ºC en una atmósfera de CO_{2} al 5% hasta que se desarrollaron las placas (generalmente 2 a 4 días). Las placas se pueden visualizar con un colorante adecuado (por ejemplo violeta cristal al 0,4% violeta cristal en disolución salina) antes de realizar el recuento. La potencia antivírica se expresó como la concentración del producto analizado que reduce el número de placas en un 50% del valor de control sin tratar (CE_{50}).
27 
\vskip1.000000\baselineskip
28
Ejemplo 11 Valoración de la duración prolongada de la acción
Se anestesiaron los roedores y se les administró el compuesto de interés por vía endotraqueal con una dosis de 0,8 ml/kg. A continuación se mantuvieron los roedores en posición vertical hasta que se recuperaron completamente. En distintos instantes, por ejemplo, 2, 8, 24 y 48 horas tras la administración, se determinaron los valores del compuesto en el tejido pulmonar mediante procedimientos analíticos. Se puede utilizar cualquier procedimiento analítico para detectar dicho tipo de compuesto. El período en el que los niveles del compuesto desciendan por debajo de la sensibilidad de las técnicas analíticas identificadas determinará el período de permanencia del compuesto en el tejido pulmonar.
Los datos de la retención en los pulmones de rata para los compuestos seleccionados se presentan a continuación. Se ha de indicar que todos los experimentos comprendieron una dosificación conjunta de un estándar interno, principalmente el compuesto 3 de la publicación de patente internacional n.º WO 02/20514, para permitir la comparación. Los datos se expresan como la proporción con respecto a dicho compuesto, cuya estructura se presenta a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
29 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se incluyen los datos para el compuesto A con finalidades comparativas. Los compuestos de la presente invención presentan una retención significativamente superior a los 7 días que el compuesto A cuando se expresa como proporción de la concentración del compuesto con respecto a la concentración estándar.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página siguiente)
30
Ejemplo 12 Valoración alternativa de la duración prolongada de la acción y de la eficacia
Se ha descrito anteriormente el protocolo para infectar ratones (1 a 4). Se inocularon ratones ligeramente anestesiados por las narinas externas con el virus de la gripe.
Procedimiento y régimen del tratamiento. Se administró una dosis única del compuesto en un momento definido hasta 10 días antes de la infección, preferentemente de 4 a 7 días antes de la infección, o tras la infección, preferentemente inmediatamente tras la infección y hasta 48 horas tras la infección. En la mayor parte de los experimentos se utilizó una cepa no letal de la gripe, y se determinó la eficacia mediante las reducciones en la valoración del virus en los pulmones. A cada ratón al que se administró el compuesto antes de la infección, se extirparon los pulmones tras la infección en un solo día, o en días tras la infección, preferentemente en los días 1 a 4 tras la infección. Se analizaron las muestras pulmonares homogeneizadas con respecto al virus utilizando procedimientos probados, y se estimaron y compararon las valoraciones de las cargas víricas con las valoraciones de los virus en los ratones sin tratar.
En aquellos experimentos en los que se utilizó una cepa letal de la gripe adaptada a ratones, se valoró la eficacia mediante el incremento del índice de supervivencia y/o el número de supervivientes en comparación con los ratones sin tratar.
\vskip1.000000\baselineskip
Referencias
1. Ryan, D. M., J. Ticehurst, M. H. Dempsey, and C.R. Penn, 1994. Inhibition of influenza virus replication in mice by GG167 (4-guanidino-2,4-dideoxy-2,3-dehydro-N-acetylneuraminic acid) is consistent with extracellular activity of viral neuraminidase (sialidase). Antimicrob. Agents and Chemother. 38 (10): 2270 - 2275.
2. von Itzstein M., W. -Y. Wu, G. B. Kok, M. S. Pegg, J. C. Dyason, B. Jin, T. V. Phan, M. L. Smythe, H. F. White, S. W. Oliver, P. M. Colman, J. N. Varghese, D. M. Ryan, J. M. Woods, R. C. Bethell, V. J. Hogham, J. M. Cameron, and C. R. Penn. 1993. Rational design of potent sialidase-based inhibitors of influenza virus replication. Nature (London) 363: 418-423.
3. Woods, J. M., R. C. Bethell, J. A. V. Coates, N. Healey, S. A. Hiscox, B. A. Pearson, D. M. Ryan, J. Ticehurst, J. Tilling, S. A. Walcott, and C. R. Penn. 1993. 4-Guanidino-2,4-dideoxy-2,3-dehydro-N-acetylneuraminic acid is a highly effective inhibitor both of the sialidase (neuraminidase) and of growth of a wide range of influenza A and B viruses in vitro. Antimicrob. Agents Chemother. 37: 1473 - 1479.
4. Robert J Fenton, Peter J Morley, Ian J Owens, David Gower, Simon Parry, Lee Crossman and Tony Wong (1999). Chemoprophylaxis of influenza A virus infections, with single doses of zanamivir, demonstrates that zanamivir is cleared slowly from the respiratory tract. Antimicrob. Agents and Chemother. 43, 11, 2642 - 2647.
\vskip1.000000\baselineskip
Referencias citadas en la descripción
La lista de referencias citadas por el solicitante se presenta únicamente para una mayor comodidad del lector. No forma parte del documento de patente europea. Aunque se ha tenido mucho cuidado en la recopilación de las referencias, no se pueden excluir errores u omisiones y la EPO declina toda responsabilidad en este sentido.
\vskip1.000000\baselineskip
Documentos de patente citados en la descripción
\bullet WO 9116320 A [0003]
\bullet WO 9518800 A [0003]
\bullet WO 9520583 A [0003]
\bullet WO 9806712 A [0003]
\bullet AU 9700771 W [0003] [0031]
\bullet WO 0055149 A [0004] [0005] [0120] [0120] [0121]
\bullet AU 9700109 W [0031]
\bullet WO 0220514 A [0124]
Publicaciones que no corresponden a patentes citadas en la descripción
\bulletMEINDL et al. Virology, 1974, vol. 58, 457 [0003]
\bulletN. Engl. J. Med., 1997, vol. 337, 874-880 [0003]
\bullet T.W. GREEN; P.G.M. NUTS. Protective Groups in Organic Synthesis. John Wiley & Sons, 1991 [0017]
\bulletEur. J. Med. Chem., 1999, vol. 34, 563-574 [0076] [0083]
\bulletWATANABE et al. J. Virological Methods, 1994, vol. 48, 257 [0120]
\bulletWOODS et al. Antimicrob Agents Chemother, 1993, vol. 37, 1473-9 [0120]
\bulletRYAN, D.M.; J. TICEHURST; M.H. DEMPSEY; C.R. PENN. Inhibition of influenza virus replication in mice by GG167 (4-guanidino-2,4-dideoxy-2,3-dehydro-N-acetylneuraminic acid) is consistent with extracellular activity of viral neuraminidase (sialidase. Antimicrob. Agents and Chemother., 1994, vol. 38 (10), 2270-2275 [0127].
\bullet VON ITZSTEIN M., W. -Y.; WU, G.B. KOK; M. S. PEGG; J.C. DYASON; B. JIN; T.V. PHAN; M.L. SMYTHE; H.F. WHITE; S.W. OLIVER; P.M. COLMAN. Rational design of potent sialidase-based inhibitors of influenza virus replication. Nature, 1993, vol. 363, 418-423 [0127]
\bulletWOODS, J.M.; R.C. BETHELL; J.A.V. COATES; N. HEALEY; S.A. HISCOX; B.A. PEARSON; D.M. RYAN; J. TICEHURST; J. TILLING; S.A. WALCOTT. 4-Guanidino-2,4-dideoxy-2,3-dehydro-N-acetylneuraminic acid is a highly effective inhibitor both of the sialidase (neuraminidase) and of growth of a wide range of influenza A and B viruses in vitro. Antimicrob. Agents Chemother., 1993, vol. 37, 1473-1479 [0127]
\bullet ROBERT J FENTON; PETER J MORLEY; IAN J OWENS; DAVID GOWER; SIMON PARRY; LEE CROSSMAN; TONY WONG. Chemoprophylaxis of influenza A virus infections, with single doses of zanamivir, demonstrates that zanamivir is cleared slowly from the respiratory tract. Antimicrob. Agents and Chemother., 1999, vol. 43 (11), 2642-2647 [0127].

Claims (23)

  1. \global\parskip0.900000\baselineskip
    1. Compuesto de fórmula general (I):
    32
    en la que
    R es un grupo amino o guanidino;
    R^{2} es acetil o trifluoroacetil;
    X es CONH, SO_{2}NH, NHCO o NHCONH;
    m es 0 ó 1;
    n es un número entero comprendido entre 2 y 6;
    q es un número entero comprendido entre 0 y 3; y
    Y es hidrógeno o un sustituyente aromático,
    o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo.
  2. 2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R es un grupo guanidino.
  3. 3. Compuesto según las reivindicaciones 1 ó 2, en el que R^{2} es un grupo acetilo.
  4. 4. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que Y es hidrógeno, halógeno, alquilo C_{1-4}, hidroxi, alcoxi C_{1-4}, amino o carboxi.
  5. 5. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es un derivado modificado en los grupos funcionales carboxilo, los grupos funcionales hidroxilo, en los grupos amino o en los grupos guanidina.
  6. 6. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el derivado es un éster alquílico, un éster arílico o un éster acetílico.
  7. 7. Procedimiento de preparación del compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que comprende la etapa de desprotección de un compuesto de fórmula (II).
    33
    en la que R y R^{2} se definen como en la reivindicación 1 y P_{1} es un grupo protector del ácido carboxílico.
  8. 8. Formulación farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) tal como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o una sal farmacéuticamente aceptable o derivado del mismo, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.
  9. 9. Formulación farmacéutica según la reivindicación 8, que comprende además uno o más ingredientes terapéuticos y/o preventivos.
  10. 10. Formulación farmacéutica según la reivindicación 9, en la que el otro ingrediente terapéutico o preventivo es un agente antiinfeccioso.
  11. 11. Formulación farmacéutica según la reivindicación 10, en la que el agente antiinfeccioso es un agente antivírico o antibiótico.
  12. 12. Formulación farmacéutica según la reivindicación 11, en la que los agentes antibiótico o antivírico son aquellos utilizados para tratar infecciones respiratorias.
  13. 13. Formulación farmacéutica según la reivindicación 12, en la que el agente es zanamivir, oseltamivir, amantadina, rimantadina, ribavirina y/o Fluvax.
  14. 14. Inhalador que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o una formulación según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13.
  15. 15. Inhalador según la reivindicación 14 que se encuentra adaptado para la administración oral como polvo de paso total.
  16. 16. Inhalador según la reivindicación 14 que es un inhalador de aerosoles con dosímetro.
  17. 17. Compuesto de fórmula I según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para utilizar en tratamientos.
  18. 18. Compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para utilizar en la prevención o el tratamiento de una infección vírica.
  19. 19. Compuesto según la reivindicación 18, en el que la infección vírica es una infección provocada por un ortomixovirus o un paramixovirus.
  20. 20. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 18 ó 19 en el que la infección vírica es una infección gripal A o B, la paragripal, parotiditis o la enfermedad de Newcastle.
  21. 21. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 20 en el que la administración se realiza en el tracto respiratorio por inhalación, insuflación o por vía intranasal o mediante una combinación de las mismas.
  22. 22. Utilización del compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en la fabricación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de una infección vírica.
  23. 23. Procedimiento ex vivo para la detección de una infección vírica que comprende la etapa de poner en contacto el compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 con una muestra de la que se sospecha que contiene el virus.
ES02774166T 2001-11-09 2002-11-08 Compuestos dimericos y su utilizacion como agentes antiviricos. Expired - Lifetime ES2305300T3 (es)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AUPR8798 2001-11-09
AUPR8798A AUPR879801A0 (en) 2001-11-09 2001-11-09 Novel chemical compounds and their use
AUPS2600 2002-05-27
AUPS2600A AUPS260002A0 (en) 2002-05-27 2002-05-27 Novel chemical compounds and their use
PCT/AU2002/001524 WO2003040135A1 (en) 2001-11-09 2002-11-08 Dimeric compounds and their use as anti-viral agents

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2305300T3 true ES2305300T3 (es) 2008-11-01

Family

ID=25646840

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES02774166T Expired - Lifetime ES2305300T3 (es) 2001-11-09 2002-11-08 Compuestos dimericos y su utilizacion como agentes antiviricos.

Country Status (12)

Country Link
US (2) US7157494B2 (es)
EP (1) EP1451182B1 (es)
JP (2) JP5183853B2 (es)
KR (1) KR100942492B1 (es)
CN (1) CN1285591C (es)
AT (1) ATE398122T1 (es)
CA (1) CA2462337C (es)
DE (1) DE60227100D1 (es)
DK (1) DK1451182T3 (es)
ES (1) ES2305300T3 (es)
PT (1) PT1451182E (es)
WO (1) WO2003040135A1 (es)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7157494B2 (en) * 2001-11-09 2007-01-02 Biota Scientific Management Pty. Ltd. Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
US7317122B2 (en) 2004-12-04 2008-01-08 Xerox Corporation Curable trans-1,2-cyclohexane bis(urea-urethane) compounds
US7144450B2 (en) 2004-12-04 2006-12-05 Xerox Corporation Phase change inks containing trans-1,2-cyclohexane bis(urea-urethane) compounds
US7314949B2 (en) 2004-12-04 2008-01-01 Xerox Corporation Trans-1,2-cyclohexane bis(urea-urethane) compounds
US7153349B2 (en) 2004-12-04 2006-12-26 Xerox Corporation Phase change inks containing curable trans-1,2-cyclohexane bis(urea-urethane) compounds
US7560587B2 (en) 2004-12-04 2009-07-14 Xerox Corporation Bis[urea-urethane] compounds
US7576235B2 (en) 2004-12-04 2009-08-18 Xerox Corporation Processes for preparing bis(urea-urethane) compounds
US7220300B2 (en) 2004-12-04 2007-05-22 Xerox Corporation Phase change inks containing bis(urea-urethane) compounds
CN100471848C (zh) * 2006-06-05 2009-03-25 中国医学科学院医药生物技术研究所 一组长链烷氧烷基取代唾液酸衍生物及其制备方法
CN108003065B (zh) * 2016-10-27 2021-01-08 中国石油化工股份有限公司 一种具有增稠作用的化合物和润滑脂以及它们的制备方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9516276D0 (en) * 1995-08-08 1995-10-11 Biota Scient Management Chemical compounds
HU223099B1 (hu) * 1996-03-01 2004-03-29 Biota Scientific Managemant Pty. Ltd. Eljárás influenzavírus kimutatására és az eljárásban alkalmazható vegyületek
US6153442A (en) * 1998-05-20 2000-11-28 Dade Behring Inc. Reagents and methods for specific binding assays
AUPP913999A0 (en) 1999-03-12 1999-04-01 Biota Scientific Management Pty Ltd Novel chemical compounds and their use
AUPR001000A0 (en) 2000-09-08 2000-10-05 Biota Scientific Management Pty Ltd Novel chemical compounds and their use
US7157494B2 (en) * 2001-11-09 2007-01-02 Biota Scientific Management Pty. Ltd. Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
JP2010027130A (ja) 2008-07-17 2010-02-04 Sony Corp 装着機構および出力装置

Also Published As

Publication number Publication date
WO2003040135A1 (en) 2003-05-15
EP1451182A4 (en) 2005-02-02
JP2010270130A (ja) 2010-12-02
US20070293564A1 (en) 2007-12-20
ATE398122T1 (de) 2008-07-15
CA2462337A1 (en) 2003-05-15
JP5183853B2 (ja) 2013-04-17
DE60227100D1 (de) 2008-07-24
JP2005510519A (ja) 2005-04-21
US20050038108A1 (en) 2005-02-17
CN1285591C (zh) 2006-11-22
KR20050044337A (ko) 2005-05-12
EP1451182A1 (en) 2004-09-01
DK1451182T3 (da) 2008-10-27
US7157494B2 (en) 2007-01-02
CA2462337C (en) 2011-09-27
PT1451182E (pt) 2008-09-17
HK1068346A1 (en) 2005-04-29
KR100942492B1 (ko) 2010-02-12
CN1585765A (zh) 2005-02-23
EP1451182B1 (en) 2008-06-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2313730T3 (es) Derivados y analogos del acido 2-desoxi-2,3-deshibro-n-acetilneuraminico y su ulitizacion como agentes antiviricos.
US7504434B2 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
JP2010270130A (ja) 二量体化合物および抗ウイルス薬としてのそれらの使用
AU2002340634A1 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
ES2305301T3 (es) Compuestos dimericos y su utilizacion como agentes antiviricos.
ES2307793T3 (es) Compuestos dimericos y su utilizacion como agentes antiviricos.
AU2002340632B2 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
AU2002340635B2 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
AU2002336823B2 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
AU2002340632A1 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
HK1068346B (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
AU2002336823A1 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
HK1068347B (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents