ES2306852T3 - Uso de glicosaminoglicanos sulfatados para establecer un parto efectivo en mujeres. - Google Patents

Abstract

Uso de glicosaminoglicanos sulfatados seleccionados del grupo consistente en sulfatos de heparán, sulfatos de heparán despolimerizados, sulfatos de dermatán, sulfatos de dermatán despolimerizados, heparinas de bajo peso molecular, y heparinas despolimerizadas, que tienen una actividad anticoagulante de 100 unidades BP por mg o menos, para la fabricación de una preparación farmacéutica para la prevención y el tratamiento del progreso lento del parto a término.

Description

Uso de glicosaminoglicanos sulfatados para establecer un parto efectivo en mujeres.

La presente invención se refiere al uso de ciertos glicosaminoglicanos sulfatados para la fabricación de una composición farmacéutica para la prevención y el tratamiento del progreso lento del parto a término.

Antecedentes

Un problema clínico común en obstetricia es el parto prolongado o en algunos casos disfuncional. El progreso lento o detención del parto está documentado en aproximadamente 40-60% de todos los nacimientos en Suecia. En los países en vías de desarrollo las muertes maternas debido a la detención del parto con fuertes hemorragias internas postparto son las razones más comunes de muertes maternas. El progreso lento del parto es el indicador más común para la operación cesárea de emergencia, que a su vez da lugar con frecuencia a que se requiera operación cesárea electiva en el siguiente embarazo. Otras complicaciones del parto prolongado generan aumento de la asfixia fetal trayendo como resultado secuelas a largo plazo.

El útero está compuesto por dos partes, el cuerpo y el cuello que tienen diversas funciones durante el embarazo y el parto. El cuerpo uterino consiste principalmente en fibras musculares lisas, el miometrio, insertado en la matriz extracelular, ECM, y el cuello consiste principalmente en la ECM. Los componentes dominantes de la ECM son los colágenos, pero también existen proteoglicanos aunque en una menor cantidad. Los proteoglicanos consisten en un núcleo de proteína al cual están unidas de una a cien cadenas de polisacáridos, glicosaminoglicanos.

La coordinación entre las contracciones uterinas y el ablandamiento, o en otras palabras maduración, y dilatación del cuello es crucial para un parto normal. La incongruencia entre estos procesos conduce a partos anormales.

Durante el embarazo y el parto tanto el cuello como el cuerpo son remodelados. Una remodelación profunda del cuerpo resulta en un aumento de aproximadamente siete veces su volumen. Una remodelación insuficiente del útero está relacionada con una contractilidad alterada. Una dilatación normal de la abertura del cuello de 1 a 10 cm durante el parto establecido implica una reconstrucción total del tejido cervical conectivo generado por una disminución de la concentración de colágeno y proteoglicanos y que trae como resultado un cuello elástico y suave. Las alteraciones de la maduración cervical, si el proceso comienza demasiado temprano, pueden dar lugar a un parto pretérmino. El parto pretérmino debe estar coordinado con una maduración cervical pretérmino para lograr un parto prematuro. Por otra parte la maduración cervical insuficiente trae como resultado un embarazo postérmino con alta frecuencia de parto prolongado y partos instrumentales. Así la maduración cervical y las contracciones miometriales son dos procesos, que deben ser coordinados para lograr un parto normal.

La fisiología del parto normal y del parto prolongado sigue estando poco clara. El control hormonal parece incluir un efecto inhibitorio por la progesterona y de activación por el aumento de los niveles de estrógeno. Ha sido sugerido involucrar al inicio del parto la hormona que libera corticotrofina, prostaglandina y una proporción cambiada de estrógeno/progesterona. La infusión intravenosa de oxitocina, introducida en 1950, sigue siendo el tratamiento dominante del parto prolongado e investigaciones y artículos de revistas publicados recientemente sobre el progreso lento del parto presentan principalmente diferentes cronogramas de tratamiento de administración de oxitocina. Este tratamiento falla en muchos casos y da lugar a un aumento del número de partos por operación. Han sido realizados pocos esfuerzos para desarrollar nuevos medicamentos para el aumento del parto a pesar de un tremendo problema global de progreso lento del parto.

La inducción del parto en mujeres con cuello uterino desfavorable ha sido realizada mediante la aplicación local de prostaglandina E2 durante alrededor de veinte años. En 15-20% de dichos casos la maduración cervical y la inducción del parto fallan. Lo más prominente es la detención del parto.

Arte anterior

Las contracciones uterinas debido a la heparina son descritas como un efecto secundario de la administración intravenosa de altas dosis de heparina para el tratamiento de la trombosis venosa a una multigrávida de 32 años en la semana treintaidos del embarazo, por K. Shaker y otros, Britsh Medical Journal 16 de Noviembre de 1974. La heparina es un glicosaminoglicano aislado sobre una base comercial a partir de tejidos animales y usado en la clínica como un medicamento antitrombótico.

El efecto contractivo de la heparina descrito, cuando es usada como anticoagulante, debe ser considerado como un efecto secundario, un efecto divergente, que no ha sido reportado en ningún otro caso. Este efecto secundario tampoco ha tenido un impacto en la práctica clínica.

Osmers, Rüdiger, y otros, Obstet. Gynecol. Vol 81, No. 1, 1993, páginas 88-92, han investigado el contenido y los patrones de distribución de los glicosaminoglicanos en el cuello uterino humano durante el embarazo y el parto. Encontraron que la cantidad total aumentó durante el embarazo y alcanzó el valor más alto al inicio del parto. Por ejemplo hubo un agudo aumento del ácido hialurónico al inicio del parto, y durante el parto un aumento de sulfatos de heparina, y una disminución de sulfatos de dermatán. Es concluido que la maduración cervical es sobre todo un proceso metabólico controlado por la síntesis de glicosaminoglicano. Es considerado que la pérdida de sulfatos de dermatán está asociada a la desestabilización de las fibrillas de colágeno.

A esto puede ser añadido que la disminución de sulfatos de dermatán significa que solo hay pequeñas cantidades de sulfatos de dermatán libres en el cuello, y que los sulfatos de dermatán son encontrados solamente como parte de los proteoglicanos decorin y biglicano.

La EP 0 509 120 B1 divulga el uso de glicosaminoglicanos, GAGs, para la preparación de una composición farmacéutica tópica para la prevención y la terapia de enfermedades del área cervical vaginal. Como ejemplos de dichas enfermedades son mencionados los estados de distrofia y atrofia inducidos por la carencia de hormonas de estrógeno, dermatitis vaginal, vaginitis no específica, etc. Se dice que los GAGs participan en la protección y restauración del ecosistema vaginal natural.

Los glicosaminoglicanos son descritos como pertenecientes a una clase altamente heterogénea de macromoléculas que tienen moléculas muy grandes que contienen unidades de disacárido de repetición que forman macromoléculas lineales. En general cada una de las unidades de repetición comprende un residuo que consiste en un aminoazúcar, es decir glucosamina o galactosamina, y un residuo de ácido urónico que consiste en ácido glucurónico o ácido idurónico. El grupo hidroxilo en C_{2}, C_{3}, C_{4} y C_{6} y el grupo amino en C_{2} pueden ser substituidos por grupos sulfato. Los GAGs son representados por los siguientes compuestos: heparina, sulfato de heparán, sulfato de dermatán, ácido hialurónico, sulfato de condroitin, sulfato de queratán.

La EP 0 867 452 A1 se refiere a un agente de maduración cervical que contiene como ingrediente activo ácido hialurónico o un derivado de este.

Es bien conocido que los glicosaminoglicanos tienen una multiplicidad de efectos en la actividad celular.

Descripción de la invención

Ha sido descubierto recientemente que la expresión de proteoglicanos de sulfato de heparán varía durante la remodelación uterina durante el embarazo y el parto. Por tanto es considerado que ellos desempeñan un papel fundamental en el parto. También ha sido descubierto que el tratamiento de las membranas uterinas humanas con glicosaminoglicanos sulfatados aumenta la actividad contráctil de estas.

La presente invención se refiere al uso de glicosaminoglicanos sulfatados que tienen una actividad anticoagulante de 100 unidades BP/mg o menos para la fabricación de una preparación farmacéutica para la preparación profiláctica o el tratamiento curativo del cuello y del miometrio para establecer un parto efectivo en las mujeres. El parto normal incluye un ablandamiento del cuello y contracciones miometriales regulares.

El efecto de anticoagulación fue evaluado midiendo el aumento en tiempo de coagulación por mg de glicosaminoglicanos sulfatados, y es indicado en unidades BP por mg. La heparina tiene una actividad anticoagulante de 157 unidades BP/mg.

Los glicosaminoglicanos sulfatados, es decir principalmente heparina, sulfato de heparán, sulfato de dermatán y sulfato de condroitin, están compuestos por residuos alternos de hexosamina y ácido urónico. El ácido hialurónico no tiene grupos sulfato. La presencia de ácido lucorónico D (GlcA) y su epímero C-5 ácido idurónico L (ldoA) y la sulfatación específica de residuos de hexosaminas y uronosilo dota al polímero de una variación estructural extrema. La estructura puede oscilar de ninguno o muy pocos hasta aproximadamente 100% de disacáridos que contienen ácido idurónico. La organización de disacáridos que contienen GlcA y ldoA-N-hexosamina puede variar de bloques largos a un patrón de disacáridos alternos. Un alto grado de sulfatación y un alto grado de sulfato de ácido idurónico implica generalmente una gran actividad biológica del compuesto. Existen diferentes polisacáridos bien definidos de sulfato de dermatán (DS), sulfato de condroitin (CS), sulfato de heparán (HS) y heparina despolimerizada.

El sulfato de heparán, que tiene glucosamina y ácido urónico como disacáridos repetitivos y que consiste en disacáridos N-acetilados y N-sulfatados que son ordenados principalmente de manera segregada, tiene distribución ubicua en las superficies de la célula y en la matriz extracelular. Generalmente está menos sulfatado y tiene un contenido más bajo de iduronato que la heparina y tiene una estructura más variada. Las interacciones entre el sulfato de heparán y las proteínas están implicadas en una variedad de procesos fisiológicos, tales como adhesión celular, regulación enzimática, acción de la citocina, entrada de virus y propiedades anticoagulantes. Los sulfatos de heparán poseen actividad anticoagulante que depende de la presencia de un pentasacárido anticoagulante específico, sin embargo considerablemente menor que la heparina. El sulfato de heparán es un polisacárido lineal que puede ser preparado a partir de la mucosa intestinal porcina o del pulmón bovino, de fracciones laterales de heparina usando fracciones de cloruro de cetilpiridinio y extracción secuencial de sal como es descrito por Fransson y otros, Structural studies on heparan sulphates, Eur. J. Biochem. 106, 59-69 (1980).

La invención se refiere al uso de un glicosaminoglicano sulfatado, que pertenece al grupo que consiste en sulfatos de heparán y sulfatos de heparán despolimerizados.

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El sulfato de dermatán es un polisacárido lineal sulfatado compuesto por residuos alternos de ácido urónico y galactosamina N-acetilada. Los ácidos urónicos son D-GlcA o L-ldoA y el disacárido puede ser sulfatado en 4 y 6 y 2 en galactosamina y ldoA, respectivamente. El DS puede ser preparado de piel y mucosa intestinal porcina. El sulfato de dermatán posee actividades biológicas tales como organización de la matriz extracelular, interacciones con citocinas, actividades anticoagulantes y reclutamiento de neutrófilos.

La invención también se refiere al uso de sulfatos de dermatán o sulfatos de dermatán despolimerizados.

Las heparinas de bajo peso molecular o heparinas despolimerizadas son oligosacáridos lineales que tienen un M_{r} de entre 2 y 10 kDa, que consisten principalmente en residuos alternos de glucosamina N-sulfatada y ldoA y que contienen con frecuencia el pentasacárido anticoagulante. Ellas pueden ser preparadas a partir de heparinas mediante segmentación química específica. Su función clínica principal es inhibir el factor Xa, dando por resultado un efecto antitrombótico. Se ha propuesto que tienen propiedades antimetastásicas. Fragmin® (Pharmacia, Suecia) es un ejemplo de una heparina molecular baja obtenida por despolimerización controlada de heparina y que tiene un efecto antitrombótico debido a la inhibición del factor Xa. Los fragmentos de heparina que tienen actividad anticoagulante selectiva, así como métodos para la preparación de los mismos, son descritos en la patente US número 4,303,651. Sin embargo, el efecto anticoagulante normalmente no es deseable para una preparación que será usada durante el parto.

La invención se refiere especialmente al uso de un glicosaminoglicano que pertenece al grupo que consiste en heparinas despolimerizadas que tienen un peso molecular relativo por debajo de 10000 Da, preferiblemente no mayor de 6000 Da.

Es esencial que la actividad anticoagulante no es demasiado alta, y de acuerdo con un aspecto preferido la invención se refiere al uso de un glicosaminoglicano sulfatado que tiene una actividad anticoagulante de 30 unidades BP/mg o menos.

Pruebas in vitro sugieren que las estructuras sulfatadas bajas de bajo o ningún poder anticoagulante son compuestos preferidos. Así los productos colaterales obtenidos durante la producción de heparina son buenos candidatos para la selección del material de partida. Los compuestos con las propiedades deseadas pueden ser obtenidos a partir de fracciones laterales de heparán y heparina usando oxidación específica del periodato para erradicar las propiedades de enlace de antitrombina III.

La N-desulfatación selectiva seguida por la re-N-acetilación, u O-desulfatación selectiva también produce compuestos con actividad anticoagulante baja.

N-deacetilación selectiva seguida por la N- y/u O-sulfatación específica también da como resultado compuestos de actividad deseada.

La invención se refiere especialmente al uso de un glicosaminoglicano que tiene una proporción sulfato/hexosamina por debajo de 1.0 y una actividad anticoagulante, o tiempo de coagulación, menor de 10 unidades BP/mg.

Si la cantidad de oxitocina endógena ha alcanzado su nivel óptimo en ese momento para el inicio del parto, un tratamiento previo con glicosaminoglicanos sulfatados para ser usados de acuerdo con la invención provocará el comienzo del parto. En caso de un nivel endógeno escaso de oxitocina, los glicosaminoglicanos sulfatados puedan ser utilizados en una sola dosis conjuntamente con oxitocina l.V. para la preparación del miometrio.

La invención también se refiere al uso de glicosaminoglicanos sulfatados para la producción de un preparado farmacéutico que puede ser administrado localmente es decir tópicamente, por ejemplo administración intracervical, vaginal, rectal, o dérmica, o sistémicamente es decir parenteral, por ejemplo por inyección subcutánea o intravenosa. La composición farmacéutica puede ser administrada también por vía oral.

Para la administración parenteral los compuestos activos pueden ser incorporados en una solución o suspensión, que también contiene uno o más coadyuvantes tales como diluyentes estériles tales como agua para inyección, solución salina, aceites fijos, polietilenglicol, glicerol, glicol de propileno u otros solventes sintéticos, agentes antibacterianos, antioxidantes, agentes quelatantes, tampones y agentes para ajustar la tonicidad. La preparación parenteral puede ser entregada en ampollas, jeringas desechables o como infusiones.

Una preparación tópica compuesta por glicosaminoglicanos sulfatados activos en combinación con un portador convencional farmacéuticamente aceptable. El portador o excipiente puede ser un material sólido, semisólido o líquido que puede servir como un vehículo para la sustancia activa. Los ejemplos de preparaciones tópicas son un ungüento, crema, gel, aerosol nasal o vaginal, loción, solución o suspensión.

Para provocar un parto efectivo los glicosaminoglicanos sulfatados pueden ser administrados en una sola dosis cada 24 h durante un período de 1-30, preferiblemente 1-10 días. La dosis debe ser estimada como la dosis más baja que provoca contracciones miometriales. Una dosis simple estimada es 25-100 mg/d, pero puede ser hasta 1 g o más. La dosis está relacionada con la forma de administración.

Ejemplos Ejemplo 1 Preparación de sulfatos de heparán

10 g del subproducto de heparina, TB 001-91 SVCM 950130 (Kabi-Pharmacia, Suecia) fueron disueltos en 1 L de acetato de calcio al 5% -ácido acético 0.5 M. La solución fue filtrada. La solución filtrada fue ajustada entonces a una concentración de etanol de 18%. El sobrenadante después de la centrifugación fue ajustado entonces a una concentración de etanol de 36%. El precipitado fue recogido por centrifugación. Los siguientes sulfatos de heparán fueron preparados de acuerdo con Fransson y otros, Structural studies on heparan sulphates, Eur. J. Biochem. 106, 59-69 (1980).

Preparación de HS6

El precipitado obtenido entre el etanol al 18 y 36% fue disuelto en 1.2 M de NaCl. Fueron agregados 18 g de cloruro de cetilpiridinio, CPC, y un precipitado fue dejado desarrollar durante 24 h. El precipitado fue recuperado mediante filtración y disuelto en NaCl 2 M. El filtrado fue usado para la preparación de HS5. Al precipitado disuelto fueron añadidos 3 volúmenes de etanol. El precipitado resultante fue dejado desarrollar durante 16 h y recogido mediante centrifugación. Finalmente fue redisuelto en agua y vuelto a precipitar con 3 volúmenes de etanol - 0.4% de acetato de sodio. El precipitado fue recogido mediante centrifugación y secado. El rendimiento fue 4.34 g.

Preparación de HS5

El filtrado de la preparación de HS6 fue entonces diluido con CPC al 0.1% para una concentración final de NaCl 1.0 M. Luego fue tratado como en HS6. El filtrado fue utilizado para la preparación de HS4. El rendimiento fue
0.82 g.

Preparación de HS4

El filtrado de la preparación de HS5 fue diluido entonces con CPC al 0.1% para una concentración final de NaCl 0.8 M. Luego fue tratado como en HS6. El filtrado fue utilizado para la preparación de HS3. El rendimiento fue
0.51 g.

Preparación de HS3

El filtrado de la preparación de HS4 fue diluido entonces con CPC a 0.1% para una concentración final de NaCl 0.6 M. Luego fue tratado como en HS6. El filtrado fue usado para la preparación de HS2. El rendimiento fue 0.17 g.

Preparación de HS2

El filtrado de la preparación de HS3 fue diluido entonces con CPC a 0.1% a una concentración final de NaCl 0.4 M. Luego fue tratado como en HS6. La producción fue de 0.09 g.

Los diferentes sulfatos de heparán fueron analizados en cuanto al contenido de ácido glucurónico, ácido idurónico, y grupos sulfato totales. El número de grupos sulfato en el grupo amino de la hexosamina fue determinado mol por mol, y el porcentaje de residuos de ácido idurónico. Los resultados son presentados en la Tabla 1 a continuación. La actividad anticoagulante también fue evaluada midiendo el tiempo de coagulación por mg de sulfato de heparina, e indicada en unidad BP por mg en la Tabla 1 a continuación.

TABLA 1 Análisis de sulfatos de heparán

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La actividad anticoagulante de todas las preparaciones de sulfato de heparán anteriores puede ser invalidada por la oxidación selectiva de periodato, ver Fransson LA, y Lewis W, Relationship between anticoagulant activity of heparin and susceptibility to periodate oxidation, FEBS Lett. 1979, 97:119-23.

Ejemplo 2 Preparación de sulfato de dermatán

Un kg de piel de cerdo seca fue suspendido en 5 Lde 0.5 M de NaCl, 0.01 M EDTA y de 0.01 M de hidrocloruro de cisteína, pH 6.5. Fueron añadidos 500 mg de papaína cristalina y el condensado fue dejado desarrollar durante 50 h. El condensado fue filtrado y luego precipitado con 75 ml de una solución de CPC al 10%. El complejo de piridinio resultante fue recogido por filtración y redisuelto en NaCl 2 M que contenían 15% de etanol. Esta solución fue diluida con 3 volúmenes de CPC al 0.5%. El precipitado fue recogido y disuelto en 200 ml 1 M de NaCl y 40 ml de etanol. El material fue disuelto en 100 ml de agua y después precipitado con 3 volúmenes de etanol - acetato de sodio al 0.4%. El precipitado resultante fue recogido y secado. El rendimiento final fue 2.32 g. Ver Fransson y otros, Structure of pig skin dermatan sulfate. 1. Distribution of D-glucoronic acid residues. (1971) Eur. J. Biochem. 18, 422-430.

Preparación de DS con diferente contenido de ácido L-idurónico

2.2 g del material obtenido anteriormente fueron disueltos en 220 ml de acetato de calcio al 5% - ácido acético 0.5 M. Esta solución fue mezclada con etanol, y fueron recogidos los precipitados formados entre etanol al 0-18% (DS-18), etanol al 18-36% (DS-36), y etanol al 36-50% (DS-50), respectivamente. Los materiales fueron redisueltos en agua y vueltos a precipitar con 3 volúmenes de etanol - acetato de sodio al 0.4%. Después de secado el rendimiento final fue de 0.9 g para DS-18; 1.02 g para DS-36; 0.28 g para DS-50.

Los diferentes sulfatos de dermatán fueron analizados en cuanto al contenido de grupos sulfato, ácido glucurónico, ácido idurónico y hexosamina, y los resultados son presentados en la Tabla 2 a continuación.

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TABLA 2 Análisis de sulfatos de dermatán

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Las preparaciones DS contienen 99% de galactosamina de la hexosamina total y las preparaciones HS y heparina contienen >97% glucosamina de la hexosamina total.

Experimental

Prueba 1

Ensayo contráctil

En la siguiente prueba fueron probados sulfato de heparán HS2 y HS6 obtenidos de la fracción lateral de heparina TB 001-91 SVCM 950130 (Kabi-Pharmacia, Suecia). El HS6 difiere de HS2 por estar más altamente sulfatado y tener más residuos de ácido L-idurónico (ver Tabla 1 anterior).

Muestras uterinas fueron obtenidas de mujeres que fueron sometidas a operación de cesárea electiva en las semanas 38-39 de gestación. Las muestras medían 20x10x10 mm y fueron tomadas de la parte superior de la incisión ístmica. La biopsia fue colocada inmediatamente en tampón Krebs-Ringer helado. Las biopsias fueron cortadas en tiras longitudinales, con una longitud de 10-15 milímetros y un ancho de alrededor de 5 mm. La tira fue montada verticalmente en un baño orgánico de 37ºC que contenía 2 ml de solución Krebs-Ringer. La solución fue burbujeada con una mezcla de O_{2} al 95% y CO_{2} al 5% para mantener un pH en el baño de 7.35-7.45. Los experimentos fueron realizados después que las tiras fueron equilibradas a un estado contráctil estable, generalmente dentro de 1-2 h después de montadas. Las contracciones fueron registradas isométricamente con un polígrafo Grass modelo 7 (Grass Instr. Co., Quincy, MA, E.U.). Todas las muestras fueron expuestas a 100 mM de KCl durante el experimento para lograr una respuesta máxima estandarizada. Diferentes dosis de sulfato de heparán fueron agregadas después al baño que contenía la tira uterina. Después de 20 min fue añadida 1 U de oxitocina. La adición de 1 U de oxitocina fue usada solo como control.

Este procedimiento fue repetido usando 6 \mug de sulfato de heparán. Después de 20 minutos fue añadida 1 unidad de oxitocina. Las contracciones fueron registradas y evaluadas integrando la superficie por debajo de la curva. Fueron añadidos dos sulfatos de heparán, HS2 y HS6, con diferentes estructuras y como control fue usada 1 unidad de oxitocina. Ver la Tabla 3 a continuación.

TABLA 3 Contractilidad relativa de la tira miometrial después de la estimulación con sulfato de heparán y oxitocina, en % de control sin estímulo

3

La combinación de oxitocina y HS6 dio lugar a un aumento de 2.5 veces de la fuerza contráctil y la combinación con HS2 resultó en un aumento de 4.1 veces de la fuerza contráctil.

Esto muestra que el sulfato de heparán aumenta la fuerza contráctil de tiras uterinas humanas in vitro. El efecto es dependiente de la estructura del sulfato de heparán, y una estructura sulfatada baja parece ser más efectiva.

Cuando esta prueba fue repetida con el sulfato de dermatán, DS-18, ver Tabla 2, fue registrada contractilidad, pero los resultados todavía no han sido evaluados.

Prueba 2

Efecto en los niveles de Ca^{2+} en fibroblastos cervicales

Cultivos de fibroblastos fueron establecidos en pacientes no embarazadas, y embarazadas a término y en mujeres que parieron vaginalmente (pacientes después del parto). Las células fueron cultivadas en cultivos monocapa con medio esencial mínimo con 10% de suero de ternera donante. Para los experimentos estas células fueron colocadas en placa de cristal de cubierta con semi-confluencia y cargadas con Fluo-4 en solución salina tamponada con fosfato que contenía 10 mM de HEPES durante 30 min. Inicialmente la solución salina tamponada con fosfato que contenía 10 mM de HEPES (tampón HEPES) fue bombeada a la cámara de observación durante 30 s luego KCL en el mismo tampón fue bombeada durante 60 s, seguida por tampón HEPES durante 30 s. Luego fueron añadidos 10 ng de PDGF/ml en tampón HEPES. La fluorescencia fue monitoreada continuamente durante 3 min. En otros experimentos el PDGF fue substituido por l00 \mug de HS6. No fue observado ningún cambio de fluorescencia en los cultivos establecidos de pacientes no embarazadas y embarazadas a término. En los cultivos obtenidos de pacientes directamente después del parto KCl, PDGF y HS6 todos indujeron un aumento transitorio de 4-8 veces de la fluorescencia, lo que demuestra un aumento transitorio de CA^{2+} intracelular. Esto demuestra que las células en los cultivos establecidos de pacientes después del parto son activadas por HS6. Este efecto es postulado como de importancia en el parto para la preparación final del cuello para el alumbramiento.

Prueba 3

Prueba clínica con sal de dalteparina sódica (Fragmin®)

Han sido estudiados datos clínicos sobre el resultado del parto en mujeres nulíparas. A 14 mujeres nulíparas les fue suministrado Fragmin® (Pharmacia, Suecia) subcutáneo durante el embarazo debido a un riesgo creciente de trombosis. La dosis profiláctica administrada fue de 5000 IE diariamente en todas las mujeres excepto a 4 que tenían 2500 IE diariamente. Ocho de las mujeres fueron tratadas durante más de 12 semanas (rango de 12-28 semanas) y 6 de ellas durante 1-6 semanas. Como controles compatibles sirvieron las 13 mujeres nulíparas siguientes sin medicación de Fragmin® que dieron a luz en la misma clínica inmediatamente después que las mujeres incluidas en el estudio. Los puntos finales fueron el tiempo de trabajo de parto-parto (hora) y número de cesáreas y sus indicaciones.

Ninguna correlación pudo ser encontrada entre la duración del tratamiento y la duración del parto. El tiempo de trabajo de parto-parto resultó ser de \pm 5.8 \pm 2.6 h en el grupo de pacientes y 14.0 \pm 6.3 h en el grupo de control (p<0.001). Además fue reportado progreso lento del parto en 6 de las 13 mujeres en el grupo de control comparado con 1 de 14 en el grupo de tratamiento.

El número de cesáreas fue 3 en cada grupo, pero las indicaciones en el grupo de estudio fueron pre-eclampsia, insuficiente analgesia y sospecha de asfixia fetal. En el grupo de control las 3 tenían la indicación principal detención del parto, en dos mujeres en combinación con sospecha de asfixia fetal.

El tiempo de trabajo de parto-parto también ha sido investigado en 21 mujeres paridas a las que se les había suministrado Fragmin® como fue mencionado anteriormente en comparación con 9 controles. El tiempo de trabajo de parto-parto en el grupo al que se le suministró Fragmin® fue de 3.5 \pm 2.9 h (rango de 0.5-8) comparado con 5.9 \pm 2.1 h (rango 3-12) en el grupo de control (p<0.05). El tiempo de trabajo de parto-parto fue por tanto significativamente menor en el grupo medicado.

Claims (7)

1. Uso de glicosaminoglicanos sulfatados seleccionados del grupo consistente en sulfatos de heparán, sulfatos de heparán despolimerizados, sulfatos de dermatán, sulfatos de dermatán despolimerizados, heparinas de bajo peso molecular, y heparinas despolimerizadas, que tienen una actividad anticoagulante de 100 unidades BP por mg o menos, para la fabricación de una preparación farmacéutica para la prevención y el tratamiento del progreso lento del parto a término.

2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 de un glicosaminoglicano, que tiene una actividad anticoagulante de 30 unidades BP por mg o menos.

3. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2 de heparinas de bajo peso molecular o heparinas despolimerizadas, que tienen un peso molecular promedio por debajo de 10000 Da.

4. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2 de heparinas de bajo peso molecular o de heparinas despolimerizadas, que tienen un peso molecular promedio no mayor de 6000 Da.

5. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 de un glicosaminoglicano en combinación con oxitocina.

6. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 de glicosaminoglicanos para la fabricación de una preparación farmacéutica tópica.

7. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 de glicosaminoglicanos para la fabricación de una preparación farmacéutica parenteral.