ES2313368T3 - Metodos y composiciones para el tratamiento de afecciones oftalmicas con derivados de retinilo. - Google Patents
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Abstract
Utilización de la 4-hidroxifenil-retinamida o la 4-metoxifenil-retinamida en la preparación de un medicamento destinado a reducir la formación de o la limitación de la propagación de la atrofia geográfica o la degeneración de los fotorreceptores en el ojo de un mamífero o al tratamiento de la degeneración macular relacionada con la edad en forma seca.
Description
Métodos y composiciones para el tratamiento de
afecciones oftálmicas con derivados de retinilo.
Los métodos y las composiciones descritos en la
presente memoria se refieren al tratamiento de afecciones
oftálmicas.
El ciclo visual o ciclo retinoide consiste en
una serie de reacciones impulsadas por la luz y catalizadas por
enzimas en las que la rodopsina del cromóforo visual activo es
convertida en un todo-trans-isómero que posteriormente es
regenerado. Parte del ciclo ocurre dentro del segmento exterior de
los bastones y parte del ciclo ocurre en el epitelio retinal
pigmentado (ERP). Los componentes de este ciclo incluyen diversas
deshidrogenasas e isomerasas, así como también proteínas para
transportar intermediarios entre los fotorreceptores y el ERP.
Otras proteínas asociadas con el ciclo visual
son responsables del transporte, la extracción y/o la eliminación
de compuestos y productos tóxicos que se acumulan a partir de la
producción excesiva de retinoides del ciclo visual, tal como
todo-trans-retinal (atRAL). Por ejemplo, la
N-retinilideno-N-retiniletanolamina
(A2E) se produce por la condensación de todo-trans-retinal
con fosfatidiletanolamina. Aunque ciertos niveles de este
fluoróforo de emisión naranja son tolerados por los fotorreceptores
y el ERP, cantidades excesivas pueden comportar efectos adversos,
los que incluyen la producción de lipofuscina y potencialmente
drusas bajo la mácula. Ver, p. ej., Finnemann, S.C., Proc. Natl.
Acad. Sci., 99:3842-47 (2002). Además, la A2E
puede ser citotóxica para el ERP, lo que puede producir daño y
destrucción de la retina. Las drusas son depósitos extracelulares
que se acumulan bajo el ERP y son factores de riesgo para
desarrollar degeneración macular relacionada con la edad. Ver, p.
ej., Crabb, J.W., et al., Proc. Natl. Acad. Sci.,
99:14682-87 (2002). De este modo, la extracción y
eliminación de los productos tóxicos producidos por reacciones
secundarias en el ciclo visual son importantes, ya que hay varias
líneas de evidencia que indican que el exceso de acumulación de
productos tóxicos es responsable en parte de los síntomas asociados
con las degeneraciones maculares y distrofias retinales.
Existen dos categorías generales de degeneración
macular relacionada con la edad: las formas húmeda y seca. La
degeneración macular seca, que es responsable de aproximadamente 90
por ciento de todos los casos, es conocida también como
degeneración macular atrófica, no exudativa o drusenoide. Con la
degeneración macular seca, típicamente se acumulan drusas bajo el
tejido del ERP en la retina. Puede producirse después pérdida de
visión cuando las drusas interfieren con la función de los
fotorreceptores en la mácula. Esta forma de degeneración macular
tiene como resultado la pérdida gradual de la visión a lo largo de
muchos años.
La degeneración macular húmeda, que es
responsable de aproximadamente 10 por ciento de los casos, es
conocida también como neovascularización de la coroides,
neovascularización subretinal, o degeneración exudativa o discoide.
En la degeneración macular húmeda, se puede formar un desarrollo
anormal de los vasos sanguíneos bajo la mácula; estos vasos pueden
dejar escapar sangre y líquido hacia adentro de la mácula y dañar
las células de los fotorreceptores. Hay estudios que muestran que
la forma seca de degeneración macular puede llevar a la forma
húmeda de degeneración macular. La forma húmeda de degeneración
macular puede avanzar rápidamente y producir un daño grave a la
visión central.
La enfermedad de Stargardt, conocida también
como distrofia macular de Stargardt o Fundus Flavimaculatus, es la
forma de distrofia macular que se inicia en la juventud encontrada
con más frecuencia. La investigación indica que esta afección se
transmite como un rasgo recesivo autosómico en el gen ABCA4
(conocido también como el gen ABCR). Este gen es un miembro
de la Superfamilia ABC de genes que codifican proteínas
transmembrana implicadas en el transporte dependiente de la energía
de un amplio espectro de sustancias a través de las membranas.
Los síntomas de la enfermedad de Stargardt
incluyen una disminución de la visión central y dificultad para
adaptarse a la oscuridad, problemas que generalmente empeoran con la
edad, de manera que muchas personas que padecen la enfermedad de
Stargardt experimentan pérdida visual de 20/100 a 20/400.
Generalmente, a las personas que padecen la enfermedad de Stargardt
se les estimula para que eviten la luz brillante debido a la
sobreproducción potencial de todo-trans-retinal.
Los métodos de diagnóstico de la enfermedad de
Stargardt incluyen la observación de un caso de deterioro atrófico
o como "bronce martillado" en la mácula, y la presencia de
numerosas manchas blancas amarillentas que se producen dentro de la
retina rodeando la lesión macular central de caso atrófico. Otras
pruebas de diagnóstico incluyen el uso de un electrorretinograma,
electrooculograma y pruebas de adaptación a la oscuridad. Además, se
puede usar un angiograma con fluoresceína para confirmar el
diagnóstico. En esta última prueba, la observación de una coroides
"oscura" o "silenciosa" aparece asociada a la acumulación
de lipofuscina en el epitelio retinal pigmentado del paciente, uno
de los primeros síntomas de la degeneración macular.
Actualmente, las opciones de tratamiento de las
degeneraciones maculares y distrofias maculares son limitadas.
Algunos pacientes con DMA en la forma seca han respondido a altas
dosis de vitaminas y minerales. Además, algunos estudios han
indicado que la fotocoagulación de drusas con láser impide o retarda
el desarrollo de drusas que lleva a los síntomas más severos de DMA
(degeneración macular asociada con la edad) en la forma seca.
Finalmente, ciertos estudios han mostrado que la reoféresis
extracorpórea beneficia a los pacientes con DMA en la forma
seca.
Sin embargo, los éxitos han sido limitados y
sigue existiendo una gran necesidad de nuevos métodos y tratamientos
para gestionar y limitar la pérdida de visión asociada con las
degeneraciones y distrofias maculares. Radu et al., Proc.
Nat. Acad. Sci, 100, 4742-4747 (2203) dan a conocer
que la isotretinoína inhibe la acumulación de lipofuscina en un
modelo de ratón de degeneración macular de Stargardt recesiva.
K.C. Lewis et al., Euro. J. Cancer, 32A,
1803-1808 (1996) dan a conocer que la administración
de 4-(hidroxifenil)retinamida puede conducir a la ceguera
nocturna.
La presente invención se refiere a la
4-hidroxifen-retinamida o a la
4-metoxifen-retinamida utilizada o
para su utilización como en las reivindicaciones.
En la presente memoria son presentados métodos,
composiciones y formulaciones para (a) tratar afecciones oftálmicas,
y (b) controlar síntomas que presagian (por ejemplo, factores de
riesgo) o que están asociados con tales afecciones oftálmicas. En
un caso, tales métodos y formulaciones comprenden el uso de
derivados de retinilo. En otros casos las afecciones oftálmicas son
degeneraciones maculares, distrofias maculares y distrofias
retinales. En otros casos, los métodos y formulaciones son usados
para proteger de la luz los ojos de un mamífero; en otros casos,
los métodos y formulaciones son usados para limitar la formación de
todo-trans-retinal,
N-retinilideno-N-retiniletanolamina,
N-retinilideno-fosfatidil-etanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-fosfatidil-etanolamina,
N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retiniletanolamina,
N-retinilideno-fosfatidiletanolamina,
lipofuscina, atrofia geográfica (de la cual un ejemplo no
limitativo es un escotoma), degeneración de fotorreceptores y/o
drusas en el ojo de un mamífero. En otros aspectos, tales métodos y
formulaciones comprenden el uso de agentes que pueden deteriorar la
visión nocturna. En otros aspectos, tales métodos y formulaciones
comprenden el uso de agentes para tratar afecciones oftálmicas (a)
bajando los niveles de retinol sérico en el cuerpo de un paciente,
(b) modulando la actividad de enzimas o proteínas en el ojo de un
paciente donde tales enzimas o proteínas están involucradas en el
ciclo visual, tal como a título de ejemplo,
lecitina-retinol aciltransferasa y/o proteína que se
une al retinaldehído celular, o (c) combinando los efectos de (a) y
(b). En otros casos más, se usan los métodos y formulaciones en
combinación con otras modalidades de tratamiento.
En un caso, son métodos para reducir la
formación de todo-trans-retinal en un ojo de un mamífero que
comprenden administrar al mamífero por lo menos una vez una
cantidad efectiva de un primer compuesto que tiene la estructura de
la Fórmula (I):
en la que X^{1} se selecciona de
entre el grupo constituido por NR^{2}, O, S, CHR^{2}; R^{1} es
(CHR^{2})_{x}-L^{1}-R^{3},
en la que x es 0, 1, 2, o 3; L^{1} es un enlace simple o
-C(O)-; R^{2} es una fracción seleccionada de entre el
grupo constituido por H, alquilo (C_{1}-C_{4}),
F, fluoroalquilo (C_{1}-C_{4}), alcoxi
(C_{1}-C_{4}),-C(O)OH,
-C(O)-NH_{2}, -alquilamina
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-alquilo
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-fluoroalquilo
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-alquilamina
(C_{1}-C_{4}), y
-C(O)-alcoxi
(C_{1}-C_{4}); y R^{3} es H o una fracción,
sustituido opcionalmente con 1-3 sustituyentes
seleccionados independientemente, seleccionados de entre el grupo
constituido por alquenilo (C_{2}-C_{7}),
alquinilo (C_{2}-C_{7}), arilo, cicloalquilo
(C_{3}-C_{7}),
cicloalquenilo(C_{5}-C_{7}), y un
heterociclo, con la condición que R^{3} no sea H cuando x sea 0 y
L^{1} sea un enlace simple; o un metabolito activo, o un
profármaco o solvato de éste farmacéuticamente
aceptable.
En otro caso, son métodos para reducir la
formación de
N-retinilideno-N-retiniletanolamina,
N-retinilideno-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-
fosfatidiletanolamina,
N-retinilideno-N-retinil-fosfatidil-etanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-etanolamina,
y/o
N-retinilideno-fosfatidiletanolamina
en un ojo de un mamífero, que comprenden administrar al mamífero
por lo menos una vez una cantidad efectiva de un primer compuesto
que tiene la estructura de la Fórmula (I).
En otro caso son métodos para reducir la
formación de lipofuscina en un ojo de un mamífero que comprenden
administrar al mamífero una cantidad efectiva de un primer compuesto
que tiene la estructura de la Fórmula (I).
En otro caso son métodos para reducir la
formación de drusas en un ojo de un mamífero que comprenden
administrar al mamífero una cantidad efectiva de un primer compuesto
que tiene la estructura de la Fórmula (I).
\newpage
En otro caso son métodos para modular
lecitina-retinol aciltransferasa en un ojo de un
mamífero que comprenden administrar al mamífero una cantidad
efectiva de un primer compuesto que tiene la estructura de la
Fórmula (I).
En otro caso son métodos para tratar
degeneración macular en un ojo de un mamífero que comprenden
administrar al mamífero una cantidad efectiva de un primer
compuesto que tiene la estructura de la Fórmula (I). En otro
ejemplo de este caso, la degeneración macular es degeneración
macular juvenil, incluyendo enfermedad de Stargardt. En otro
ejemplo de este caso, (a) la degeneración macular es degeneración
relacionada con la edad en forma seca, o (b) la degeneración
macular es distrofia de conos y bastones. En otro ejemplo de este
caso, la degeneración macular es la forma húmeda de degeneración
macular relacionada con la edad. En otro ejemplo de este caso, la
degeneración macular es neovascularización de la coroides,
neovascularización subretinal, o degeneración exudativa o
discoide.
En otro caso son métodos para reducir la
formación o limitar la difusión de atrofia geográfica (de la cual
un ejemplo no limitativo es un escotoma) y/o degeneración de
fotorreceptores en un ojo de un mamífero, que comprenden
administrar al mamífero una cantidad efectiva de un primer compuesto
que tiene la estructura de la Fórmula (I).
En otro caso son métodos para reducir la
formación de desarrollo anormal de vasos sanguíneos bajo la mácula
en un ojo de un mamífero, que comprenden administrar al mamífero una
cantidad efectiva de un primer compuesto que tiene la estructura de
la Fórmula (I).
En otro caso son métodos para proteger los
fotorreceptores en un ojo de un mamífero que comprenden administrar
al mamífero una cantidad efectiva de un primer compuesto que tiene
la estructura de la Fórmula (I).
En otro caso son métodos para proteger de la luz
un ojo de un mamífero, que comprenden administrar al mamífero una
cantidad efectiva de un compuesto que tiene la estructura de la
Fórmula (I).
En otro caso son métodos para interrumpir el
ciclo visual en un ojo de un mamífero, que comprenden administrar al
mamífero una cantidad efectiva de un compuesto que tiene la
estructura de la Fórmula (I).
En otro caso es el uso de un compuesto de la
Fórmula (I) para fabricar un medicamento para tratar una enfermedad
o afección oftálmica en un animal en la cual la actividad de por lo
menos una proteína del ciclo visual contribuye a la patología y/o a
los síntomas de la enfermedad o afección. En un ejemplo de este
caso, la proteína del ciclo visual se selecciona de entre el grupo
constituido por lecitina-retinol aciltransferasa y
proteína que se une al retinaldehído celular. Todavía en otro
ejemplo de este caso, la enfermedad o afección oftálmica es una
retinopatía. Todavía en otro ejemplo, o como una alternativa, la
retinopatía es una degeneración macular. Todavía en otro ejemplo, o
como una alternativa, el síntoma de la enfermedad o afección es la
formación de todo-trans-retinal.
N-retinilideno-N-retiniletanolamina,
N-retinilideno-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina,
N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-etanolamina,
N-retinilideno-fosfatidiletanolamina,
lipofuscina, degeneración de fotorreceptores, atrofia geográfica
(de la cual un ejemplo no limitativo es un escotoma),
neovascularización de la coroides y/o drusas en el ojo de un
mamífero.
En cualquiera de los casos mencionados
anteriormente son otros ejemplos en los cuales (a) X^{1} es
NR^{2}, en el que R^{2} es H o
alquilo(C_{1}-C_{4}); (b) en el que x es
0; (c) x es 1 y L^{1} es -C(O)-; (d) R^{3} es un arilo
sustituido opcionalmente; (e) R^{3} es un heteroarilo sustituido
opcionalmente; (f) X^{1} es NH y R^{3} es un arilo sustituido
opcionalmente, incluyendo otras formas de realización más en las
que (i) el grupo arilo tiene un sustituyente, (ii) el grupo arilo
tiene un sustituyente seleccionado de entre el grupo constituido
por halógeno, OH, Oalquilo(C_{1}-C_{4}),
NHalquilo(C_{1}-C_{4}), Ofluoroalquilo
(C_{1}-C_{4}), y
N[alquilo(C_{1}-C_{4})]_{2},
(iii) el grupo arilo tiene un sustituyente, que es OH, (v) el arilo
es un fenilo, o (vi) el arilo es naftilo; (g) el compuesto es
o un metabolito activo, o un
profármaco o solvato de éste farmacéuticamente aceptable; (h) el
compuesto es 4-hidroxifenilretinamida, o un
metabolito, o un profármaco o solvato de éste farmacéuticamente
aceptable; (i) el compuesto es
4-metoxifenilretinamida, o (j) 4-oxo
fenretinida, o un metabolito, o un profármaco o solvato de éste
farmacéuticamente
aceptable.
En cualquiera de los casos antes mencionados son
otros ejemplos en los que (a) la cantidad efectiva del compuesto es
administrada sistémicamente al mamífero; (b) la cantidad efectiva
del compuesto es administrada al mamífero por vía oral; (c) la
cantidad efectiva del compuesto es administrada al mamífero por vía
intravenosa; (d) la cantidad efectiva del compuesto es administrada
al mamífero por vía oftálmica; (e) la cantidad efectiva del
compuesto es administrada por iontoforesis; o (f) la cantidad
efectiva del compuesto es administrada al mamífero por
inyección.
En cualquiera de los casos antes mencionados son
otros ejemplos en las que el mamífero es un humano, las que
incluyen las formas de realización en las que (a) el humano es un
portador del gen mutante ABCA4 para la enfermedad de
Stargardt o el humano tiene un gen mutante ELOV4 para la
enfermedad de Stargardt, o tiene una variación genética en el
factor H del complemento asociado con degeneración macular
relacionada con la edad, o (b) el humano tiene una afección
oftálmica o un rasgo seleccionado de entre el grupo constituido por
enfermedad de Stargardt, retinitis pigmentosa recesiva, atrofia
geográfica (de la cual un ejemplo no limitativo es un escotoma),
degeneración de fotorreceptores, DMA en forma seca, distrofia
recesiva de conos y bastones, degeneración macular exudativa
relacionada con la edad, distrofia de conos y bastones, y retinitis
pigmentosa. En cualquiera de los casos antes mencionados existen
otros ejemplos en los que el mamífero es un modelo animal para
degeneración retinal, proporcionándose en la presente memoria
ejemplos de éstos.
En cualquiera de los casos antes mencionados
existen otros ejemplos que comprenden múltiples administraciones de
la cantidad efectiva del compuesto, las que incluyen otros ejemplos
en los que (i) el tiempo entre las múltiples administraciones es
por lo menos de una semana; (ii) el tiempo entre las múltiples
administraciones es por lo menos de un día; y (iii) el compuesto es
administrado al mamífero diariamente; o (iv) el compuesto es
administrado al mamífero cada 12 horas. En otros ejemplos o
alternativos, el método comprende un período de descanso del
fármaco, en el que se suspende temporalmente la administración del
compuesto o se reduce temporalmente la dosis del compuesto que está
siendo administrado; al final del período de descanso se reanuda la
dosis del compuesto. La duración del período de descanso del
fármaco puede variar de 2 días a 1 año.
En cualquiera de los casos antes mencionados
existen otros ejemplos que comprenden administrar por lo menos un
agente adicional seleccionado de entre el grupo constituido por un
inductor de la producción de óxido nítrico, un agente
antiinflamatorio, un antioxidante fisiológicamente aceptable, un
mineral fisiológicamente aceptable, un fosfolípido con carga
negativa, un carotenoide, una estatina, un fármaco antiangiogénico,
un inhibidor de metaloproteinasa matriz, ácido
13-cis-retinoico (incluyendo derivados del ácido
13-cis-retinoico), ácido 11-cis-retinoico (incluyendo
derivados del ácido 11-cis-retinoico), ácido
9-cis-retinoico (incluyendo derivados del ácido
9-cis-retinoico), y derivados de retinilamina. En otros
ejemplos:
- (a)
- el agente adicional es un inductor de la producción de óxido nítrico, incluyendo ejemplos en los que el inductor de la producción de óxido nítrico se selecciona de entre el grupo constituido por citrulina, ornitina, L-arginina nitrosada, L-arginina nitrosilada, N-hidroxi-L-arginina nitrosada, N-hidroxi-L-arginina nitrosilada, L-homo-arginina nitrosada y L-homoarginina nitrosilada;
- (b)
- el agente adicional es un agente antiinflamatorio, incluyendo ejemplos en los que el agente antiinflamatorio se selecciona de entre el grupo constituido por un fármaco antiinflamatorio no esteroide, un inhibidor de lipoxigenasa, prednisona, dexametasona, y un inhibidor de ciclooxigenasa;
- (c)
- el agente adicional es por lo menos un antioxidante fisiológicamente aceptable, incluyendo ejemplos en los que el antioxidante fisiológicamente aceptable se selecciona de entre el grupo constituido por Vitamina C, Vitamina E, betacaroteno, Coenzima Q, y 4-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperadin-N-oxilo, o formas de realizaciones en las que (i) el por lo menos un antioxidante fisiológicamente aceptable se administra con el compuesto que tiene la estructura de la Fórmula (I), o (ii) por lo menos dos antioxidantes fisiológicamente aceptables son administrados con el compuesto que tiene la estructura de la Fórmula (I);
- (d)
- el agente adicional es por lo menos un mineral fisiológicamente aceptable, incluyendo ejemplos en los que el mineral fisiológicamente aceptable se selecciona de entre el grupo constituido por un compuesto de zinc (II), un compuesto de Cu (II), y un compuesto de selenio (II), o ejemplos que comprenden además administrar al mamífero por lo menos un antioxidante fisiológicamente aceptable;
- (e)
- el agente adicional es un fosfolípido con carga negativa, incluyendo ejemplos en los que el fosfolípido con carga negativa es fosfatidilglicerol;
- (f)
- el agente adicional es un carotenoide, incluyendo ejemplos en los que el carotenoide se selecciona de entre el grupo constituido por luteína y zeaxantina;
- (g)
- el agente adicional es una estatina, incluyendo ejemplos en los que la estatina se selecciona de entre el grupo constituido por rosuvastatina, pitivastatina, simvastatina, pravastatina, cerivastatina, mevastatina, velostatina, fluvastatina, compactina, lovastatina, dalvastatina, fluindostatina, atorvastatina, atorvastatina cálcica, y dihidrocompactina;
- (h)
- el agente adicional es un fármaco antiangiogénico, incluyendo ejemplos en los que el fármaco antiangiogénico es Rhufab V2, triptofanil-tRNA sintetasa, un aptámero pegilado contra el factor de crecimiento del epitelio vascular, escualamina, acetato de anecortave, profármaco combretastatina A4, Macugen^{TM}, mifepristone, triamcinoleno acetonida Subtenon, triamcinoleno acetonida intravitreal cristalina, AG3340, fluocinoleno acetonida, y VEGF-Trap (Trampa de Factor de Crecimiento del Endotelio Vascular);
- (i)
- el agente adicional es un inhibidor de metaloproteinasa matriz, incluyendo ejemplos en los que el inhibidor de metaloproteinasa matriz es un inhibidor de tejidos de metaloproteinasas, \alpha_{E}-macroglobulina, una tetraciclina, un hidroxamato, un quelante, un fragmento de MMP sintética, una succinil mercaptopurina, un fosfonamidato y un ácido hidroxámico;
- (j)
- el agente adicional es ácido 13-cis-retinoico (incluyendo derivados del ácido 13-cis-retinoico), ácido 11-cis-retinoico (incluyendo derivados del ácido 11-cis-retinoico), o ácido 9-cis-retinoico (incluyendo derivados del ácido 9-cis-retinoico);
- (k)
- el agente adicional es un derivado de retinilamina, incluyendo un derivado de todo-trans-retinilamina, un derivado de 13-cis-retinilamina, un derivado de 11-cis-retinilamina, o un derivado de 9-cis-retinilamina;
- (l)
- el agente adicional se administra (i) antes de administrar el compuesto que tiene la estructura de la Fórmula (I), (ii) después de administrar el compuesto que tiene la estructura de la Fórmula (I), (iii) simultáneamente con la administración del compuesto que tiene la estructura de la Fórmula (I), o (iv) tanto antes como después de administrar el compuesto de la Fórmula (I); o
- (m)
- el agente adicional y el compuesto que tiene la estructura de la Fórmula (I) son administrados en la misma composición farmacéutica.
En cualquiera de los casos antes mencionados
existen otros ejemplos que comprenden administrar al mamífero
reoferesis extracorpórea.
En cualquiera de los casos antes mencionados
existen otros ejemplos que comprenden administrar al mamífero una
terapia seleccionada de entre el grupo constituido por translocación
retinal limitada, terapia fotodinámica, tratamiento de drusas con
láser, cirugía del agujero macular, Phi-Motion,
terapia con haz de protones, cirugía de desprendimiento de retina y
vítrea, banda escleral, cirugía submacular, termoterapia
transpupilar, terapia con Fotosistema I, estimulación de
microcorriente, agentes antiinflamatorios, RNA interferencia,
administración de remedios para los ojos tales como yoduro de
fosfolina o ecotiofato o inhibidores de anhidrasa carbónica,
implante de microchips, terapia con células madres, terapia de
reemplazo génico, terapia génica con ribozimas, trasplante de
células de fotorreceptores/retinales, y acupuntura.
En cualquiera de los casos mencionados
anteriormente existen otros ejemplos que comprenden el uso de
fotocoagulación con láser para extraer drusas del ojo del
mamífero.
En cualquiera de los casos mencionados
anteriormente existen otros ejemplos que comprenden administrar al
mamífero por lo menos una vez una cantidad efectiva de un segundo
compuesto que tiene la estructura de la Fórmula (I), en donde el
primer compuesto es diferente del segundo compuesto.
En cualquiera de los casos mencionados
anteriormente existen otros ejemplos que comprenden (a) supervisar
la formación de drusas en el ojo del mamífero; (b) medir los niveles
de lipofuscina en el ojo del mamífero mediante autofluorescencia;
(c) medir la agudeza visual en el ojo del mamífero; (d) realizar un
examen de campo visual en el ojo del mamífero, incluyendo ejemplos
en los que el examen de campo visual es un examen de campo visual
de Humphrey; (e) medir los espectros de autofluorescencia o
absorción de
N-retinilideno-fosfatidil-etanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-fosfatidil-etanolamina,
N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-etanolamina,
y/o N-retinilideno- fosfatidiletanolamina en el ojo
del mamífero; (f) realizar un examen de rapidez de lectura y/o
agudeza visual; (g) medir tamaño del escotoma; o (h) medir el tamaño
y número de las lesiones de atrofia geográfica.
En cualquiera de los casos mencionados
anteriormente existen otros ejemplos que comprenden determinar si el
mamífero es un portador del alelo mutante ABCA4 para la
enfermedad de Stargardt o si tiene un alelo mutante de ELOV4 para
la enfermedad de Stargardt o si tiene una variación genética en el
factor H del complemento asociada con degeneración macular
relacionada con la edad.
En cualquiera de los casos mencionados
anteriormente existen otros ejemplos que comprenden un tratamiento
adicional para la degeneración retinal.
En otro caso son composiciones farmacéuticas que
contienen una cantidad efectiva del compuesto que tiene la
estructura:
en la que X^{1} se selecciona de
entre el grupo constituido por NR^{2}, O, S, CHR^{2}; R^{1} es
(CHR^{2})_{x}-L^{1}-R^{3},
donde x es 0, 1, 2, o 3; L^{1} es un enlace simple o
-C(O)-; R^{2} es una fracción seleccionada de entre el
grupo constituido por H, alquilo (C_{1}-C_{4}),
F, fluoroalquilo (C_{1}-C_{4}), alcoxi
(C_{1}-C_{4}),-C(O)OH,
-C(O)-NH_{2}, - alquilamina
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-alquilo
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-fluoroalquilo
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-alquilamina
(C_{1}-C_{4}), y
-C(O)-alcoxi
(C_{1}-C_{4}); y R^{3} es H o una fracción,
sustituido opcionalmente con 1-3 sustituyentes
seleccionados independientemente, seleccionados de entre el grupo
constituido por alquenilo (C_{2}-C_{7}),
alquinilo (C_{2}-C_{7}), arilo,
cicloalquilo(C_{3}-C_{7}),
cicloalquenilo(C_{5}-C_{7}), y un
heterociclo, con la condición que R no sea H cuando x sea 0 y
L^{1} sea un enlace simple; o un metabolito activo, o un
profármaco o solvato de éste farmacéuticamente aceptable; y un
vehículo farmacéuticamente
aceptable.
En otro ejemplo del caso de la composición
farmacéutica, (a) el vehículo farmacéuticamente aceptable es
adecuado para administración oftálmica; (b) el vehículo
farmacéuticamente aceptable comprende lisofosfatidilcolina,
monoglicérido y un ácido graso; (c) el vehículo farmacéuticamente
aceptable comprende además harina, un edulcorante y un humectante;
(d) el vehículo farmacéuticamente aceptable comprende aceite de maíz
y un agente tensoactivo no iónico; (e) el vehículo
farmacéuticamente aceptable comprende dimiristoil fosfatidilcolina,
aceite de soja, alcohol t-butílico y agua; (f) el
vehículo farmacéuticamente aceptable comprende etanol, aceite de
ricino alcoxilado, y un agente tensoactivo no iónico; (g) el
vehículo farmacéuticamente aceptable comprende una formulación de
liberación prolongada; o (h) el vehículo farmacéuticamente aceptable
comprende una formulación de liberación rápida.
En otro ejemplo del caso de la composición
farmacéutica, la composición farmacéutica comprende además una
cantidad efectiva de por lo menos un agente adicional seleccionado
de entre el grupo constituido por un inductor de la producción de
óxido nítrico, un agente antiinflamatorio, un antioxidante
fisiológicamente aceptable, un mineral fisiológicamente aceptable,
un fosfolípido con carga negativa, un carotenoide, una estatina, un
fármaco antiangiogénico, un inhibidor de metaloproteinasa matriz,
ácido 13-cis-retinoico (incluyendo derivados del ácido
13-cis-retinoico), ácido 11-cis-retinoico (incluyendo
derivados del ácido 11-cis-retinoico), ácido
9-cis-retinoico (incluyendo derivados del ácido
9-cis-retinoico), y derivados de retinilamina. En otros
ejemplos, (a) el agente adicional es un antioxidante
fisiológicamente aceptable; (b) el agente adicional es un inductor
de producción de óxido nítrico; (c) el agente adicional es un agente
antiinflamatorio; (d) el agente adicional es un mineral
fisiológicamente aceptable; (e) el agente adicional es un
fosfolípido con carga negativa; (f) el agente adicional es un
carotenoide; (g) el agente adicional es una estatina; (h) el agente
adicional es un agente antiangiogénico; (i) el agente adicional es
un inhibidor de metaloproteinasa matriz; o (j) el agente adicional
es un ácido 13-cis-retinoico.
En otro caso son métodos para tratar una
retinopatía que comprenden modular el nivel sérico de retinol en el
cuerpo de un mamífero, incluyendo las formas de realización en donde
(a) la retinopatía es degeneración macular juvenil, incluyendo la
enfermedad de Stargardt; (b) la retinopatía es degeneración macular
relacionada con la edad en forma seca; (c) la retinopatía es
distrofia de conos y bastones; (d) la retinopatía es retinitis
pigmentosa; (e) la retinopatía es degeneración macular relacionada
con la edad en forma húmeda; (f) la retinopatía es o presenta
atrofia geográfica y/o degeneración de fotorreceptores; o (g) la
retinopatía es una degeneración retinal basada en lipofuscina.
En un ejemplo del caso antes mencionado, el
método comprende además administrar al mamífero por lo menos una vez
una cantidad efectiva de un primer compuesto que tiene la
estructura:
en la que X^{1} se selecciona de
entre el grupo constituido por NR^{2}, O, S, CHR^{2}; R^{1} es
(CHR^{2})_{x}-L^{1}-R^{3},
donde x es 0, 1, 2, o 3; L^{1} es un enlace simple o
-C(O)-; R^{2} es una fracción seleccionada de entre el
grupo constituido por H, alquilo (C_{1}-C_{4}),
F, fluoroalquilo (C_{1}-C_{4}), alcoxi
(C_{1}-C_{4}),-C(O)OH,
-C(O)-NH_{2}, -alquilamina
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-alquilo
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-fluoroalquilo
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-alquilamina
(C_{1}-C_{4}), y
-C(O)-alcoxi
(C_{1}-C_{4}); y R^{3} es H o una fracción,
sustituido opcionalmente con 1-3 sustituyentes
seleccionados independientemente, seleccionados de entre el grupo
constituido por alquenilo (C_{2}-C_{7}),
alquinilo (C_{2}-C_{7}), arilo,
cicloalquilo(C_{3}-C_{7}),
cicloalquenilo(C_{5}-C_{7}), y un
heterociclo, con la condición que R no sea H cuando x sea 0 y
L^{1} sea un enlace simple; o un metabolito activo, o un
profármaco o solvato de éste farmacéuticamente
aceptable.
Todavía en otro ejemplo, el método comprende
además administrar por lo menos un agente adicional seleccionado de
entre el grupo constituido por un inductor de la producción de óxido
nítrico, un agente antiinflamatorio, un antioxidante
fisiológicamente aceptable, un mineral fisiológicamente aceptable,
un fosfolípido con carga negativa, un carotenoide, una estatina, un
fármaco antiangiogénico, un inhibidor de metaloproteinasa matriz,
ácido 13-cis-retinoico (incluyendo derivados del ácido
13-cis-retinoico), ácido 11-cis-retinoico (incluyendo
derivados del ácido 11-cis-retinoico), ácido
9-cis-retinoico (incluyendo derivados del ácido
9-cis-retinoico), y derivados de retinilamina. Otros ejemplos
incluyen métodos en donde (a) el agente adicional es un inductor de
producción de oxido nítrico (b) el agente adicional es un agente
antiinflamatorio; (c) el agente adicional es un antioxidante
fisiológicamente aceptable; (d) el agente adicional es por lo menos
un mineral fisiológicamente aceptable; (e) el agente adicional es un
fosfolípido con carga negativa; (f) el agente adicional es un
carotenoide; (g) el agente adicional es una estatina; (h) el agente
adicional es un fármaco antiangiogénico; (i) el agente adicional es
un inhibidor de metaloproteinasa matriz; o (j) el agente adicional
es ácido 13-cis-retinoico.
En otro ejemplo del caso mencionado
anteriormente, el método para tratar una retinopatía comprende
además modular lecitina-retinol aciltransferasa en
un ojo de un mamífero, incluyendo ejemplos donde (a) la retinopatía
es degeneración macular juvenil, incluyendo la enfermedad de
Stargardt; (b) la retinopatía es degeneración macular en forma seca
relacionada con la edad; (c) la retinopatía es distrofia de conos y
bastones; (d) la retinopatía es retinitis pigmentosa; (e) la
retinopatía es degeneración macular relacionada con la edad en
forma húmeda; (f) la retinopatía es o presenta atrofia geográfica
y/o degeneración de fotorreceptores; o (g) la retinopatía es una
degeneración retinal basada en lipofuscina. Todavía en otro ejemplo,
el método comprende además administrar al mamífero por lo menos una
vez una cantidad efectiva de un primer compuesto que tiene la
estructura:
en la que X^{1} se selecciona de
entre el grupo constituido por NR^{2}, O, S, CHR^{2}; R^{1} es
(CHR^{2})_{x}-L^{1}-R^{3},
donde x es 0, 1, 2, o 3; L^{1} es un enlace simple o
-C(O)-; R^{2} es una fracción seleccionada de entre el
grupo constituido por H, alquilo (C_{1}-C_{4}),
F, fluoroalquilo (C_{1}-C_{4}), alcoxi
(C_{1}-C_{4}),-C(O)OH,
-C(O)-NH_{2}, -alquilamina
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-alquilo
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-fluoroalquilo
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-alquilamina
(C_{1}-C_{4}), y
-C(O)-alcoxi
(C_{1}-C_{4}); y R^{3} es H o una fracción,
sustituido opcionalmente con 1-3 sustituyentes
seleccionados independientemente, seleccionados de entre el grupo
constituido por alquenilo (C_{2}-C_{7}),
alquinilo (C_{2}-C_{7}), arilo,
cicloalquilo(C_{3}-C_{7}),
cicloalquenilo(C_{5}-C_{7}), y un
heterociclo, con la condición que R no sea H cuando x sea 0 y
L^{1} sea un enlace simple; o un metabolito activo, o un
profármaco o solvato de éste farmacéuticamente
aceptable.
Todavía en otro ejemplo, el método comprende
además administrar por lo menos un agente adicional seleccionado de
entre el grupo constituido por un inductor de la producción de óxido
nítrico, un agente antiinflamatorio, un antioxidante
fisiológicamente aceptable, un mineral fisiológicamente aceptable,
un fosfolípido con carga negativa, un carotenoide, una estatina, un
fármaco antiangiogénico, un inhibidor de metaloproteinasa matriz,
ácido 13-cis-retinoico (incluyendo derivados del ácido
13-cis-retinoico), ácido 11-cis-retinoico (incluyendo
derivados del ácido 11-cis-retinoico), ácido
9-cis-retinoico (incluyendo derivados del ácido
9-cis-retinoico), y derivados de retinilamina. Otros ejemplos
incluyen métodos en donde: (a) el agente adicional es un inductor
de producción de óxido nítrico; (b) el agente adicional es un agente
antiinflamatorio; (c) el agente adicional es por lo menos un
antioxidante fisiológicamente aceptable; (d) el agente adicional es
por lo menos un mineral fisiológicamente aceptable; (e) el agente
adicional es un fosfolípido con carga negativa; (f) el agente
adicional es un carotenoide; (g) el agente adicional es una
estatina; (h) el agente adicional es un agente antiangiogénico; (i)
el agente adicional es un inhibidor de metaloproteinasa matriz; o
(j) el agente adicional es ácido 13-cis-retinoico.
En otro caso son métodos para tratar retinopatía
que comprenden administrar a un mamífero un agente que deteriora la
visión nocturna del mamífero, los que incluyen realizaciones en
donde (a) la retinopatía es degeneración macular juvenil,
incluyendo la enfermedad de Stargardt; (b) la retinopatía es
degeneración macular relacionada con la edad en forma seca; (c) la
retinopatía es distrofia de conos y bastones; (d) la retinopatía es
retinitis pigmentosa; (e) la retinopatía es degeneración macular
relacionada con la edad en forma húmeda; (f) la retinopatía es o
presenta atrofia geográfica y/o degeneración de fotorreceptores; o
(g) la retinopatía es una degeneración retinal basada en
lipofuscina. Todavía en otro ejemplo, el método comprende además
administrar al mamífero por lo menos una vez una cantidad efectiva
de un primer compuesto que tiene la estructura:
en la que X^{1} se selecciona de
entre el grupo constituido por NR^{2}, O, S, CHR^{2}; R^{1} es
(CHR^{2})_{x}-L^{1}-R^{3},
donde x es 0, 1, 2, o 3; L^{1} es un enlace simple o
-C(O)-; R^{2} es una fracción seleccionada de entre el
grupo constituido por H, alquilo (C_{1}-C_{4}),
F, fluoroalquilo (C_{1}-C_{4}), alcoxi
(C_{1}-C_{4}),-C(O)OH,
-C(O)-NH_{2}, -alquilamina
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-alquilo
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-fluoroalquilo
(C_{1}-C_{4}),
-C(O)-alquilamina
(C_{1}-C_{4}), y
-C(O)-alcoxi
(C_{1}-C_{4}); y R^{3} es H o una fracción,
sustituido opcionalmente con 1-3 sustituyentes
seleccionados independientemente, seleccionados de entre el grupo
constituido por alquenilo (C_{2}-C_{7}),
alquinilo (C_{2}-C_{7}), arilo,
cicloalquilo(C_{3}-C_{7}),
cicloalquenilo(C_{5}-C_{7}), y un
heterociclo, con la condición que R no sea H cuando x sea 0 y
L^{1} sea un enlace simple; o un metabolito activo, o un
profármaco o solvato de éste farmacéuticamente
aceptable.
Todavía en otro ejemplo, el método comprende
además administrar por lo menos un agente adicional seleccionado de
entre el grupo constituido por un inductor de la producción de óxido
nítrico, un agente antiinflamatorio, un antioxidante
fisiológicamente aceptable, un mineral fisiológicamente aceptable,
un fosfolípido con carga negativa, un carotenoide, una estatina, un
fármaco antiangiogénico, un inhibidor de metaloproteinasa matriz,
ácido 13-cis-retinoico (incluyendo derivados del ácido
13-cis-retinoico), ácido 11-cis-retinoico (incluyendo
derivados del ácido 11-cis-retinoico), ácido
9-cis-retinoico (incluyendo derivados del ácido
9-cis-retinoico), y derivados de retinilamina. Otros ejemplos
incluyen métodos en los que: (a) el agente adicional es un inductor
de producción de óxido nítrico; (b) el agente adicional es un agente
antiinflamatorio; (c) el agente adicional es por lo menos un
antioxidante fisiológicamente aceptable; (d) el agente adicional es
por lo menos un mineral fisiológicamente aceptable; (e) el agente
adicional es un fosfolípido con carga negativa; (f) el agente
adicional es un carotenoide; (g) el agente adicional es una
estatina; (h) el agente adicional es un agente antiangiogénico; (i)
el agente adicional es un inhibidor de metaloproteinasa matriz; o
(j) el agente adicional es ácido 13-cis-retinoico.
En otro caso son composiciones farmacéuticas
para (a) reducir la formación de
N-retinilideno-N-retiniletanolamina,
N-retinilideno-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina,
N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-
etanolamina, y/o
N-retinilideno-fosfatidiletanolamina
en un ojo de un mamífero, (b) reducir la formación de lipofuscina
en un ojo de un mamífero, (c) reducir la formación de drusas en un
ojo de un mamífero, (d) impedir la degeneración macular en un ojo de
un mamífero, (e) reducir la formación de todo-trans-retinal
en un ojo de un mamífero, (f) interrumpir el ciclo visual en un ojo
de un mamífero, y/o (g) proteger de la luz un ojo de un mamífero,
que comprenden una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto
que tiene la estructura de la Fórmula (I) y un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
Los compuestos, incluyendo los que presentan la
estructura de la Fórmula (I) pero sin estar limitados a estos, que
son útiles para (a) reducir la formación de
N-retinilideno-N-retiniletanolamina,
N-retinilideno-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina,
N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-etanolamina,
y/o
N-retinilideno-fosfatidiletanolamina
en un ojo de un mamífero, (b) reducir la formación de lipofuscina
en un ojo de un mamífero, (c) reducir la formación de drusas en un
ojo de un mamífero, (d) impedir la degeneración macular en un ojo
de un mamífero, (e) reducir la formación de
todo-trans-retinal en un ojo de un mamífero, y/o (f)
proteger un ojo de un mamífero de la luz, tienen por lo menos una de
las siguientes propiedades: la capacidad de interrumpir el ciclo
visual en el ojo de un mamífero, la capacidad de producir ceguera
nocturna reversible en un mamífero, biodisponibilidad aceptable
para el ojo de un mamífero, y la capacidad de producir en el ojo de
un mamífero una irritación sólo limitada y aceptable.
Todavía en otro caso o caso adicional son
métodos para reducir la formación o para limitar la difusión de
atrofia geográfica y/o degeneración de los fotorreceptores en un ojo
de un mamífero que comprenden administrar al mamífero por lo menos
una vez una cantidad efectiva de un primer compuesto que tiene la
estructura de la Fórmula (I). En otros ejemplos o ejemplos
alternativos, son métodos que comprenden además administrar por lo
menos un agente adicional seleccionado de entre el grupo constituido
por un inductor de producción de óxido nítrico, un agente
antiinflamatorio, un antioxidante fisiológicamente aceptable, un
mineral fisiológicamente aceptable, un fosfolípido con carga
negativa, un carotenoide, una estatina, un fármaco antiangiogénico,
un inhibidor de metaloproteinasa matriz, ácido
13-cis-retinoico (incluyendo derivados de ácido
13-cis-retinoico), ácido 11-cis-retinoico (incluyendo
derivados de ácido 11-cis-retinoico), ácido
9-cis-retinoico (incluyendo derivados de ácido
9-cis-retinoico), y derivados de retinilamina.
En otros ejemplos o ejemplos alternativos de
cualquiera de los métodos mencionados antes que incluyen la
administración de un compuesto que tiene la estructura de la
Fórmula (I), hay métodos que comprenden además medir la velocidad de
lectura y/o la agudeza de lectura del mamífero.
En otros ejemplos o ejemplos alternativos de
cualquiera de los métodos mencionados antes que incluyen la
administración de un compuesto que tiene la estructura de la
Fórmula (I), hay métodos que comprenden además medir el número y/o
el tamaño del escotoma en el ojo del mamífero.
En otros ejemplos o ejemplos alternativos de
cualquiera de los métodos mencionados antes que incluyen la
administración de un compuesto que tiene la estructura de la
Fórmula (I) hay métodos que comprenden además medir el tamaño y/o
número de las lesiones de atrofia geográfica en el ojo del
mamífero.
En otros ejemplos o ejemplos alternativos de
cualquiera de los métodos mencionados antes que incluyen la
administración de un compuesto que tiene la estructura de la
Fórmula (I) hay métodos que comprenden además reducir la
esterificación de vitamina A en el ojo del mamífero.
En otros ejemplos o ejemplos alternativos de
cualquiera de los métodos mencionados antes que incluyen la
administración de un compuesto que tiene la estructura de la
Fórmula (I) hay métodos que comprenden además bajar la
autofluorescencia de lipofuscina del epitelio retinal pigmentado en
el ojo del mamífero.
En otros ejemplos o ejemplos alternativos de
cualquiera de los métodos mencionados antes que incluyen la
administración de un compuesto que tiene la estructura de la
Fórmula (I) hay métodos que comprenden reducir la concentración de
un substrato para una proteína del ciclo visual corriente abajo de
LRAT en el ojo de un mamífero. En otros ejemplos o ejemplos
alternativos, la proteína del ciclo visual corriente abajo se
selecciona de entre el grupo constituido por una proteína chaperona,
una isomerasa, y una deshidrogenasa.
Todavía en otro caso son métodos para reducir la
concentración de un substrato para una proteína del ciclo visual
corriente abajo de LRAT en el ojo de un mamífero que comprenden
administrar al mamífero por lo menos una vez una cantidad efectiva
de un primer compuesto que tiene la estructura de la Fórmula (I). En
otros ejemplos o ejemplos alternativos, la proteína del ciclo
visual corriente abajo se selecciona de entre el grupo constituido
por una proteína chaperona, una isomerasa, y una deshidrogenasa.
Todavía en otro caso son métodos para reducir la
esterificación de vitamina A en un ojo de un mamífero que
comprenden administrar al mamífero por lo menos una vez una cantidad
efectiva de un primer compuesto que tiene la estructura de la
Fórmula (I).
En otro caso son métodos para modular la
actividad de la proteína que se une al retinaldehído celular (CRALBP
= Cellular Retinaldehyde Binding Protein) que comprende poner en
contacto CRALBP con compuestos que tienen la estructura de la
Fórmula (I). En otro ejemplo el compuesto hace contacto directamente
con la proteína que se une al retinaldehído celular. Todavía en
otro ejemplo, tal modulación ocurre in vivo. En un ejemplo
alternativo, tal modulación ocurre in vitro. En otro ejemplo,
tal modulación ocurre en el ojo de un mamífero. En otro ejemplo,
tal modulación proporciona un beneficio terapéutico a un mamífero
que tiene una enfermedad o afección oftálmica. En otro ejemplo, tal
modulación mejora o alivia de otro modo por lo menos un síntoma
asociado con una enfermedad o afección oftálmica en un mamífero. En
otros ejemplos o ejemplos alternativos, la enfermedad o afección se
selecciona de entre el grupo constituido por una degeneración
macular, una distrofia macular, una retinopatía. En otras formas de
realización alternativas, el compuesto es
4-hidroxifenil-retinamida; o un
metabolito, o un profármaco o solvato de éste farmacéuticamente
aceptable. En otras formas de realización alternativas, el
compuesto es 4-metoxifenilretinamida; o un
metabolito, o un profármaco o solvato de éste farmacéuticamente
aceptable.
En otro caso son métodos para modular
indirectamente la actividad de las proteínas del ciclo visual que no
son moduladas directamente por los compuestos de la Fórmula (I). En
un ejemplo de dicho caso, los compuestos de la Fórmula (I) modulan
directamente una de las proteínas del ciclo visual (uniéndose a
dicha proteína o uniéndose al ligando de dicha proteína, pudiendo
la unión ser una unión química, una unión física, o una combinación
de ambas, incluyendo unión de hidrógeno) para reducir la
concentración del producto de reacción esperado de aquella proteína
del ciclo visual. En otro ejemplo, la proteína del ciclo visual que
es modulada directamente por los compuestos de la Fórmula (I) es
LRAT. En otro ejemplo, la modulación directa de LRAT por un
compuesto de la Fórmula (I) reduce la concentración de los ésteres
de todo-trans-retinilo. En otro ejemplo la reducción en la
concentración de los ésteres de todo-trans-retinilo modula
indirectamente la actividad de las proteínas del ciclo visual
corriente abajo reduciendo la concentración de los substratos para
tales proteínas del ciclo visual corriente abajo. En otras
proteínas, tales proteínas del ciclo visual corriente abajo incluyen
isomerasas, proteínas chaperonas, y deshidrogenasas.
Otros objetivos, características y ventajas de
los métodos y composiciones descritos en la presente memoria
resultarán evidentes a partir de la descripción detallada siguiente.
Debe apreciarse, sin embargo, que aunque la descripción detallada y
los ejemplos específicos indican ejemplos específicos, se
proporcionan únicamente a título ilustrativo ya que diversos
cambios y modificaciones resultarán evidentes para los expertos en
la materia a partir de la descripción detallada siguiente.
Las Figuras 1a-1c ilustran
varios análisis de LC de fase inversa de extractos de acetonitrilo
de suero. El suero se obtuvo de ratones a los que se administró DMSO
(Figura 1a), 10 mg/kg de
N-4-(hidroxifenil)retinamida (HPR) (Figura
1b), ó 20 mg/kg de HPR (Figura 1c) durante 14 días.
La Figura 2a ilustra concentraciones oculares de
todo-trans-retinol (atROL) y HPR en función del tiempo en
ratones después de una inyección de 10 mg/kg de HPR.
La Figura 2b ilustra concentraciones séricas de
todo-trans-retinol y HPR en ratones después de 14 días de
tratamiento con DMSO, 10 mg/kg de HPR, ó 20 mg/kg de HPR; ver en la
Figura 11 una versión actualizada y corregida de esta figura.
La Figura 3a ilustra un ensayo de unión de
control para la interacción entre retinol y proteína de unión a
retinol medida por extinción de fluorescencia.
La Figura 3b ilustra un ensayo de unión para la
interacción entre retinol y proteína de unión a retinol en presencia
de HPR (2 \muM) medido por extinción de fluorescencia.
La Figura 4a ilustra el efecto de HPR en la
biosíntesis de A2PE-H_{2} en ratones con mutación
nula abca4.
La Figura 4b ilustra el efecto de HPR en la
biosíntesis de A2E en ratones con mutación nula abca4.
La Figura 5 ilustra el efecto de la dosis de HPR
en la actividad de LRAT en el ERP usando un ensayo bioquímico in
vitro.
La Figura 6a ilustra el efecto de HPR en la
biosíntesis de ésteres de todo-trans-retinilo usando un
ensayo bioquímico in vitro.
La Figura 6b ilustra el efecto de HPR en la
biosíntesis de 11-cis-retinol usando un ensayo bioquímico
in vitro.
La Figura 6c ilustra el efecto de HPR en la
utilización de todo-trans-retinol usando un ensayo bioquímico
in vitro.
La Figura 7 ilustra la interacción de proteína
de unión de retinaldehído celular (CRALBP) con diversos ligandos
medida por extinción de fluorescencia.
La Figura 8 ilustra la interacción de CRALBP con
diversos ligandos medida por cromatografía de exclusión de tamaño y
espectrofotometría UV/Visible.
La Figura 9 ilustra la unión de
N-4-(metoxifenil)retinamida (MPR) a proteína
de unión a retinol (RBP) medida por extinción de fluorescencia.
La Figura 10 ilustra la modulación de la unión
de TTR a RBP-MPR medida por cromatografía de
exclusión de tamaño y espectrofotometría UV/Visible.
La Figura 11 ilustra el análisis de retinol
sérico en función de la concentración de fenretinida.
La Figura 12 ilustra un gráfico de correlación
que relaciona la concentración de fenretinida con reducciones en
retinol, A2PE-H_{2} y A2E en ratones con mutación
nula abca4.
La Figura 13 ilustra (A) la extinción de
fluorescencia de proteína CRALB con 11-cis-retinal (11
c-RAL), y (B) extinción de fluorescencia de proteína CRALB
con fenretinida.
La Figura 14 ilustra un análisis espectroscópico
de la unión de fenretinida a CRALBP.
La Figura 15 ilustra la extinción de
fluorescencia de apo-CRALBP en función de la
concentración de 11 cRAL o fenretinida.
La Figura 16 ilustra el efecto de fenretinida en
la esterificación de vitamina A en el epitelio retinal
pigmentado.
La Figura 17 ilustra la composición retinoide en
ratones tratados con DMSO y HPR adaptados a la luz (panel A); el
efecto de HPR en la regeneración del cromóforo visual (panel B);el
efecto de HPR en el reciclaje del cromóforo blanqueado (panel C); y
mediciones electrofisiológicas de la función de los bastones (panel
D), la función de bastones y conos (panel E) y la recuperación del
fotoblanqueado (panel F).
La Figura 18 ilustra el análisis de los niveles
de A2PE-H_{2} y A2E en función de la dosis de
fenretinida y el período de tratamiento (paneles
A-F) y autofluorescencia de lipofuscina en el ERP de
ratonescon mutación nula abca4 en función del tratamiento con
fenretinida (paneles G-I).
La Figura 19 ilustra imágenes de microscopía de
luz de las retinas de animales tratados con DMSO y HPR.
La Figura 20 ilustra cromatogramas de
absorbancia y fluorescencia de extractos de la copa ocular de
ratones de control (panel A), y de ratones mantenidos previamente en
una terapia con HPR (panel B) después de un período de 12 días de
reposo del fármaco; cromatogramas de absorbancia y fluorescencia de
extractos de la copa ocular de ratones de control (panel C), y de
ratones mantenidos previamente en una terapia con HPR (panel D)
después de un período de 28 días de reposo del fármaco; el
histograma presenta los niveles relativos de A2E para los ratones
descritos en los paneles A-D.
Los compuestos que tienen la estructura de la
Fórmula (I) han sido usados para el tratamiento del cáncer. En
particular, el compuesto
N-(4-hidroxifenil)retinamida, conocido
también como fenretinida, HPR o 4-HPR, ha sido
sometido a muchas pruebas para el tratamiento del cáncer de mama.
Monn y col., Cancer Res., 39;1339-46 (1979).
La fenretinida ha sido descrita en las patentes US nº 4.190.594 y nº
4.323.581. Se conocen también otros métodos para preparar
fenretinida, y además, se han preparado y probado numerosos análogos
de fenretinida para determinar su eficacia en el tratamiento del
cáncer. Ver, p. ej., la publicación de la solicitud de patente US
2004/0102650; la patente US nº 6.696.606; Villeneuve & Chan,
Tetrahedron Letters, 38:6489-92 (1997); Um,
S.J. y col., Chem. Pharm. Bull., 52:501-506
(2004). Sin embargo, la tendencia general de tales compuestos a
producir ciertos efectos secundarios en pacientes humanos, que
incluyen deterioro de la visión nocturna, ha sido motivo de
preocupación. Ver, p. ej., Decensi, A., y col., J. Natl.
Cancer Inst., 86:1-5-110
(1994); Mariani, L., Tumori., 82:444-49
(1996). Un estudio reciente ha proporcionado también cierta
evidencia de que la
N-(4-hidroxifenil)retinamida puede inducir
diferenciación del tipo neuronal en ciertas células cultivadas del
ERP humano. Ver Chen, S., y col., J. Neurochem.,
84:972-81 (2003).
Sorprendentemente, los compuestos de la Fórmula
(I) pueden usarse para proporcionar beneficio a pacientes que
sufren o que son susceptibles de diversas degeneraciones y
distrofias maculares, incluyendo degeneración macular relacionada
con la edad en forma seca y enfermedad de Stargardt, sin estar
limitadas a éstas. Específicamente, los compuestos de la Fórmula
(I) proporcionan por lo menos algunos de los siguientes beneficios a
tales pacientes humanos: reducción de la cantidad de
todo-trans-retinal (atRAL), reducción de la formación de A2E,
reducción de la formación de lipofuscina, reducción de la formación
de drusas, y reducción de la sensibilidad a la luz. Hay una
reducción de la tendencia a formar A2E en tejidos oftálmicos y
oculares causada en parte por una reducción en la acumulación
excesiva de todo-trans-retinal en
estos tejidos. Como A2E es en sí misma citotóxica para el ERP (lo
que puede llevar a la muerte de las células de la retina), la
administración de compuestos que tienen la estructura de la Fórmula
(I) (solos o combinados con otros agentes, como se describe en la
presente) reduce la tasa de acumulación de A2E, un agente
citotóxico, proporcionando así beneficio a los pacientes. Por otra
parte, como A2E es el principal fluoróforo de la lipofuscina, la
reducción de las cantidades de A2E en tejidos oftálmicos y oculares
tiene también como resultado una reducción de la tendencia a la
acumulación lipofuscina en tales tejidos. De este modo, en algunos
casos los métodos y composiciones descritos en la presente memoria
pueden ser considerados tratamientos basados en la lipofuscina
debido a que la administración de compuestos que tienen la
estructura de la Fórmula (I) (solos o combinados con otros agentes
como se describe en la presente) reduce, baja o produce otro tipo
de impacto en la acumulación de lipofuscina en tejidos oftálmicos
y/u oculares. Una reducción en la tasa de acumulación de
lipofuscina en los tejidos oftálmicos y/u oculares beneficia a los
pacientes que tienen enfermedades o afecciones tales como
degeneraciones y/o distrofias maculares.
Además, como la degeneración macular relacionada
con la edad en forma seca es frecuentemente precursora de la
degeneración macular relacionada con la edad en forma húmeda, los
compuestos de la Fórmula (I) pueden ser usados también como una
terapia preventiva de esta última afección oftálmica.
Es interesante que los compuestos de la Fórmula
(I) y/o sus derivados tienen también efecto en las enzimas o
proteínas del ciclo visual. Por ejemplo, la esterificación en el
epitelio retinal pigmentado incluye lecitina-retinol
aciltransferasa (LRAT) la que cataliza la transferencia de un grupo
acilo de la lecitina al retinol. La administración de la Fórmula
(I) y/o sus derivados modifica la actividad de LRAT, lo cual podría
beneficiar a pacientes que sufren o que son susceptibles de diversas
degeneraciones y distrofias maculares.
La vitamina A en el suero es suministrada a
tejidos extrahepáticos de blanco y es esterificada inmediatamente
por la enzima LRAT unida a la membrana. LRAT cataliza la
transferencia de un ácido graso de los fosfolípidos de la membrana
al retinol, generando con esto ésteres de
todo-trans-retinilo, la principal forma de almacenamiento de
vitamina A en todos los tejido. En el ERP, los ésteres de
todo-trans-retinilo son el único substrato para una enzima
de isomerasa única que genera un precursor del cromóforo visual
sensible a la luz, 11-cis-retinol. La oxidación siguiente de
este retinoide y la conjugación a la apoproteína opsina en la retina
proporciona rodopsina.
Se ha mostrado que la
N-4-(hidroxifenil)retinamida produce una
marcada inhibición de la actividad de LRAT en membranas preparadas
de hígado e intestino delgado. Además, se ha demostrado (p. ej. en
el Ejemplo 13), por primera vez que la actividad de LRAT en el ERP
del ojo es inhibida por HPR. Como se trata en los Ejemplos, la
administración de HPR está asociada también a una disminución del
retinol sérico y de la proteína de unión a retinol (RBP). De esta
manera, además de los efectos sistémicos de HPR (p. ej., niveles
reducidos del retinol sérico), hay también un efecto intracelular
específico de una enzima (p. ej., actividad de LRAT en células del
EPR). El hecho que la homeostasia de vitamina A en el ojo no se base
sólo en el suministro de retinol del suero sino también en
acumulaciones intracelulares de ésteres de retinilo para
proporcionar cromóforo visual, sugiere que los efectos de HPR pueden
ser muy pronunciados en este órgano.
Por otra parte, los compuestos que tienen la
estructura de la Fórmula (I) se unen también a la proteína que se
une al retinaldehído celular (CRALBP), que es otra proteína del
ciclo visual. Para ilustrar este efecto, y únicamente a título de
ejemplo, los datos presentados en las Figuras 7 y 8 demuestran que
HPR se une a CRALBP. Así, en los tejidos oftálmicos donde se puede
encontrar CRALBP, se espera que los compuestos que tienen la
estructura de la Fórmula (I) se unan a CRALBP y en consecuencia, (a)
modulen la unión de otros compuestos, tales como retinaldehido, a
CRALBP, (b) modulen la actividad de CRALBP, (c) sirvan como un
ligando a CRALBP, (d) experimenten actividad catalizada por CRALBP,
incluyendo actividad de transporte, y/o (e) sirvan como un agente
terapéutico en los métodos y composiciones descritos en la presente
memoria.
El Ciclo Visual. La retina de los
vertebrados contiene dos tipos de células de fotorreceptores:
bastones y conos. Los bastones están especializados para ver en
condiciones de luz baja. Los conos son menos sensibles,
proporcionan visión con altas resoluciones temporales y espaciales,
y proporcionan percepción de los colores. En condiciones de luz de
día, la respuesta de los bastones se satura y la visión es mediada
enteramente por los conos. Ambos tipos de células contienen una
estructura llamada el segmento externo que comprende un rimero de
discos membranosos. Las reacciones de transducción visual tienen
lugar sobre la superficie de estos discos. El primer paso en la
visión es la absorción de un fotón por una molécula de
opsina-pigmento (rodopsina), que incluye la
isomeración del cromóforo de 11-cis a todo-trans.
Antes que se pueda recuperar la sensibilidad a la luz, el
todo-trans-retinal resultante debe ser vuelto a convertir en
11-cis-retinal en un proceso multienzimático que tiene lugar
en el epitelio retinal pigmentado, una monocapa de células adyacente
a la retina.
Degeneraciones y Distrofias Maculares o
Retinales. La degeneración macular (denominada también
degeneración retinal) es una enfermedad del ojo que incluye el
deterioro de la mácula, la porción central de la retina.
Aproximadamente 85% a 90% de los casos de degeneración macular son
del tipo "seco" (atrófico o sin neovascularización). En la
degeneración macular seca, el deterioro de la retina está asociado
con la formación de pequeños depósitos amarillos, conocidos como
drusas, bajo la mácula; además, la acumulación de lipofuscina en el
ERP lleva a la degeneración de los fotorreceptores y a atrofia
geográfica. Estos fenómenos llevan a un adelgazamiento y
desecamiento de la mácula. La localización y el grado del
adelgazamiento de la retina producido por las drusas se
correlaciona directamente con el grado de pérdida de visión central.
La degeneración de la capa pigmentada de la retina y de los
fotorreceptores dispuestos encima de las drusas produce atrofia y
puede producir una pérdida lenta de la visión central. Finalmente,
la pérdida del epitelio retinal pigmentado y de las células de
fotorreceptores dispuestas debajo tiene como resultado atrofia
geográfica. La administración de por lo menos un compuesto que
tiene la estructura de la Fórmula (I) a un mamífero puede reducir la
formación, o limitar la difusión de degeneración de los
fotorreceptores y/o atrofia geográfica en el ojo del mamífero.
Únicamente a título de ejemplo, se puede usar la administración de
HPR y/o MPR a un mamífero para tratarla degeneración de los
fotorreceptores y/o atrofia geográfica en el ojo de un mamífero.
En la degeneración macular "húmeda" se
forman nuevos vasos sanguíneos (esto es, neovascularización) para
mejorar el suministro de sangre al tejido retinal, específicamente
debajo de la mácula, una porción de la retina que es responsable de
nuestra visión central aguda. Los nuevos vasos se dañan fácilmente y
a veces se rompen, produciendo sangrado y lesión del tejido
circundante. Aunque la degeneración macular húmeda ocurre sólo en
aproximadamente 10 por ciento de todos los casos de degeneración
macular, es responsable de aproximadamente 90% de la ceguera
relacionada con degeneración macular. La neovascularización puede
llevar a una pérdida rápida de la visión y eventualmente a la
formación de cicatrices de los tejidos retinales y a sangramiento en
el ojo. Este tejido cicatrizal y la sangre producen un área oscura
deformada en la visión, que a menudo deja el ojo con ceguera legal.
La degeneración macular húmeda se inicia generalmente con una
distorsión del campo de visión central. Las líneas rectas se tornan
onduladas. Muchas personas con degeneración macular informan
también tener visión borrosa y puntos ciegos (escotomas) en su campo
visual. Se ha determinado que las proteínas promotoras del
crecimiento llamadas factor de crecimiento del endotelio vascular, o
VEGF, gatillan este desarrollo anormal de los vasos en el ojo. Este
descubrimiento ha llevado a una investigación agresiva de fármacos
experimentales que inhiban o bloqueen el VEGF. Los estudios han
mostrado que se pueden usar agentes anti-VEGF para
bloquear y prevenir el desarrollo anormal de los vasos sanguíneos.
Tales agentes anti-VEGF detienen o inhiben la
estimulación del VEGF, de manera que hay un menor desarrollo de
vasos sanguíneos. Tales agentes anti-VEGF pueden
tener éxito también en antiangiogénesis o en el bloqueo de la
capacidad del VEGF de inducir el desarrollo de vasos sanguíneos
debajo de la retina, así como también las fugas de los vasos
sanguíneos. La administración de por lo menos un compuesto que
tiene la estructura de la Fórmula (I) a un mamífero puede reducir la
formación o limitar la difusión de degeneración macular relacionada
con la edad en la forma húmeda en el ojo del mamífero. Únicamente a
título de ejemplo, se puede usar la administración de HPR y/o MPR a
un mamífero para tratar la degeneración macular relacionada con la
edad en la forma húmeda en el ojo del mamífero. De una manera
similar, los compuestos de la Fórmula (I) (incluyendo únicamente A
título de ejemplo HPR y/o MPR) pueden ser usados para tratar la
neovascularización de la coroides y la formación de vasos sanguíneos
anormales bajo la mácula del ojo de un mamífero.
La enfermedad de Stargardt es una distrofia
macular que se manifiesta como una forma recesiva de degeneración
macular iniciándose durante la niñez. Ver, p. ej., Allikmets y col.,
Science, 277:1805-07 (1997); Lewis y col.,
Am. J. Hum. Genet., 64:422-34 (1999); Stone y
col., Nature Genetics, 20:328.29 (1998); Allikmets, Am.
J. Hum. Genet.,67:793-799 (2000); Klevering y
col., Ophthalmology, 111:546-553 (2004). La
enfermedad de Stargardt se caracteriza clínicamente por una pérdida
progresiva de la visión central y una atrofia progresiva del ERP
que está dispuesto sobre la mácula. Mutaciones en el gen humano
ABCA4 para la proteína Rim (RmP) son responsables de la
enfermedad de Stargardt. Al comienzo de la enfermedad, los pacientes
muestran una demora en adaptarse a la oscuridad, pero en otros
sentidos una función normal de los bastones. Histológicamente, la
enfermedad de Stargardt está asociada con el depósito de gránulos de
pigmento de lipofuscina en las células del ERP.
También se ha implicado a mutaciones en
ABCA4 en la retinitis pigmentosa recesiva, ver, p. ej.,
Cremers y col., Human Mol. Genet., 7:355-62
(1998), distrofia recesiva de conos y bastones, ver id., y
degeneración macular relacionada con la edad no exudativa, ver p.
ej., Allikmets y col., Science, 277:1805-07
(1997); Lewis y col., Am. J. Hum. Genet.,
64:422-34 (1999), aunque la ocurrencia frecuente de
mutaciones de ABCA4 en DMA es aún incierta. Ver Stone y
col., Nature Genetics, 20:328-29 (1998);
Allikmets, Am. J. Hum. Gen., 67:793-799
(2000); Klevering y col., Ophthalmology,
111:546-553 (2004). De una manera similar a la
enfermedad de Stargardt, estas enfermedades están asociadas con una
demora de los bastones en adaptarse a la oscuridad. Ver Steinmetz y
col., Brit. J. Ophthalm., 77:549-54 (1993).
El depósito de lipofuscina en células del ERP se ve también de una
manera preponderante en DMA. Ver Kliffen y col., Microcosc. Res.
Tech., 36:106-22 (1997) y en algunos casos de
retinitis pigmentosa. Ver Bergsma y col., Nature,
265:62-67 (1977). Además, una forma dominante
autosómica de la enfermedad de Stargardt es causada por mutaciones
en el gen ELOV4. Ver Karan, y col.,Proc. Natl. Acad.
Sci. (2005).
Hay también varios tipos de degeneraciones
maculares que afectan a niños, adolescentes o adultos que son
conocidos comúnmente como degeneración macular de inicio prematuro
o juvenil. Muchos de estos tipos son hereditarios y son
considerados como distrofias maculares en lugar de degeneración.
Algunos ejemplos de distrofias maculares incluyen distrofia de
conos y bastones, distrofia corneal, distrofia de Fuch, distrofia
macular de Sorsby, enfermedad de Best, y retinosquisis juvenil,
además de la enfermedad de Stargardt.
Un grupo "alcoxi" se refiere a un grupo
(alquil)O-, donde alquilo se define como en la presente
memoria.
Un grupo "alquilo" se refiere a un grupo de
hidrocarburo alifático. La fracción alquilo puede ser un grupo
"alquilo saturado", lo que significa que no contiene ninguna
fracción alqueno o alquino. La fracción alquilo puede ser también
una fracción "alquilo insaturado", lo que significa que
contiene por lo menos una fracción alqueno o alquino. Una fracción
"alqueno" se refiere a un grupo que consta de por lo menos dos
átomos de carbono y por lo menos un doble enlace de carbono a
carbono, y una fracción "alquino" se refiere a un grupo que
consta de por lo menos dos átomos de carbono y por lo menos un
triple enlace de carbono a carbono. La fracción alquilo, ya sea
saturada o insaturada, puede ser ramificada, de cadena recta, o
cíclica.
La fracción "alquilo" puede tener 1 a 10
átomos de carbono (cada vez que aparezca aquí, un intervalo numérico
tal como "1 a 10" se refiere a cada entero en el intervalo
dado, por ejemplo, "1 a 10 átomos de carbono" significa que el
grupo alquilo puede constar de 1 átomo de carbono, 2 átomos de
carbono, 3 átomos de carbono, etc., hasta llegar a 10 átomos de
carbono e incluirlos, aunque la presente definición cubre también la
ocurrencia del término "alquilo" en donde no se designa ningún
intervalo numérico). El grupo alquilo podría ser también un
"alquilo inferior" que tiene 1 a 5 átomos de carbono. El grupo
alquilo de los compuestos descritos en la presente memoria puede
ser designado como "alquilo C_{1}-C_{4}" o
designaciones similares. Únicamente a título de ejemplo, "alquilo
C_{1}-C_{4}" indica que hay 1 a 4 átomos de
carbono en la cadena alquílica, esto es, la cadena alquílica se
selecciona de entre el grupo constituido por metilo, etilo, propilo,
iso-propilo, n-butilo,
iso-butilo, sec-butilo y
t-butilo. Los grupos alquilo típicos incluyen
metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, butilo
terciario, pentilo, hexilo, etenilo, propenilo, butenilo,
ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y similares,
pero no están limitados de manera alguna a estos.
El término "alquilamina" se refiere al
grupo -N(alquil)_{x}H_{y}, donde x e y se
seleccionan del grupo x=1, y=1 y x=2, y=0. Cuando x=2, los grupos
alquilo, tomados juntos, pueden formar opcionalmente un sistema de
anillos cíclicos.
El término "alquenilo" se refiere a un tipo
de grupo alquilo en el cual los dos primeros átomos del grupo
alquilo forman un enlace doble que no es parte de un grupo
aromático. Esto es, un grupo alquenilo empieza con los átomos
-C(R)=C-R, donde R se refiere a las porciones
restantes del grupo alquenilo, que pueden ser iguales o diferentes.
Los ejemplos no limitativos de un grupo alquenilo incluyen -CH=CH,
-C(CH_{3})=CH, -CH=CCH_{3} y
-C(CH_{3})=CCH_{3}. La fracción alquenilo puede ser
ramificada, de cadena recta, o cíclica (en cuyo caso sería conocido
también como un grupo "cicloalquenilo").
El término "alquinilo" se refiere a un tipo
de grupo alquilo en el cual los dos primeros átomos del grupo
alquilo forman un enlace triple. Esto es, un grupo alquinilo empieza
con los átomos -C\equivC-R, donde R se refiere a
las porciones restantes del grupo alquinilo, que pueden ser iguales
o diferentes. Los ejemplos no limitativos de un grupo alquinilo
incluyen -C\equivCH, -C\equivCCH_{3} y
-C\equivCCH_{2}CH_{3}. La porción "R" de la fracción
alquinilo puede ser ramificada, de cadena recta, o cíclica.
Una "amida" es una fracción química con la
fórmula -C(O)NHR o -NHC(O)R, donde R se
selecciona de entre el grupo constituido por alquilo, cicloalquilo,
arilo, heteroarilo (unido a través de un anillo de carbono) y
heteroalicíclico (unido a través de un carbono del anillo). Una
amida puede ser un aminoácido o una molécula peptídica unida a un
compuesto de la Fórmula (I), formando con esto un profármaco.
Cualquier cadena lateral de amina, hidroxi, o carboxilo en los
compuestos descritos en la presente memoria puede ser amidificada.
Los procedimientos y los grupos específicos para fabricar tales
amidas son conocidos por los expertos en la materia y pueden
encontrarse fácilmente en fuentes de referencia tales como Green y
Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3a. Ed., John Wiley
& Sons, Nueva York, NY, 1999, que es incorporada a la presente
como referencia en su totalidad.
El término "aromático" o "arilo" se
refiere a un grupo aromático que tiene por lo menos un anillo que
tiene un sistema conjugado de electrones pi e incluye tanto grupos
arilo carbocíclico (p. ej. fenilo) como arilo heterocíclico (o
"heteroarilo" o "heteroaromático" (p. ej. piridina). El
término incluye grupos monocíclicos o policíclicos de anillos
fusionados (esto es, anillos que comparten pares de átomos de
carbono adyacentes). El término "carbocíclico" se refiere a un
compuesto que contiene uno o más estructuras de anillos cerrados
covalentemente, y donde los átomos que forman el esqueleto del
anillo son todos átomos de carbono. El término distingue así a los
anillos carbocíclicos de los heterocíclicos en los que el esqueleto
del anillo contiene por lo menos un átomo que es diferente de
carbono.
Un grupo "ciano" se refiere a un grupo
-CN.
El término "cicloalquilo" se refiere a un
radical monocíclico o policíclico que contiene sólo carbono e
hidrógeno, y puede ser saturado, parcialmente insaturado o
completamente insaturado. Los grupos cicloalquilo incluyen grupos
que tienen de 3 a 10 átomos en el anillo. Los ejemplos ilustrativos
de grupos cicloalquilo incluyen las siguientes fracciones:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
El término "éster" se refiere a una
fracción química de la fórmula -COOR, donde R se selecciona de entre
el grupo constituido por alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo
(unido a través de un carbono del anillo) y heteroalicíclico (unido
a través de un carbono del anillo). Cualquier cadena lateral de
amina, hidroxi, o carboxilo en los compuestos descritos en la
presente memoria puede ser esterificada. Los procedimientos y los
grupos específicos para fabricar tales ésteres son conocidos por los
expertos en la materia y pueden encontrarse fácilmente en fuentes
de referencia tales como Green y Wuts, Protective Groups in Organic
Synthesis, 3a. Ed., John Wiley & Sons, Nueva York, NY, 1999,
que es incorporada a la presente por referencia en su totalidad.
El término "halo" o, alternativamente,
"halógeno" significa fluoro, cloro, bromo o yodo. Los grupos
halo preferidos son fluoro, cloro y bromo.
Los términos "haloalquilo",
"haloalquenilo", "haloalquinilo" y "haloalcoxi"
incluyen todos estructuras de alquilo, alquenilo, alquinilo y
alcoxi que son sustituidas con uno o más grupos halo o con
combinaciones de estos. Los términos "fluoroalquilo" y
"fluoroalcoxi" incluyen grupos haloalquilo y haloalcoxi,
respectivamente, en los cuales el grupo halo es flúor.
Los términos "heteroalquilo",
"heteroalquenilo" y "heteroalquinilo" incluyen radicales
alquilo, alquenilo y alquinilo opcionalmente sustituidos y que
tienen uno o más átomos en la cadena esquelética seleccionados de un
átomo distinto de carbono, p. ej., oxígeno, nitrógeno, azufre,
fósforo o combinaciones de estos.
Los términos "heteroarilo" o,
alternativamente, "heteroaromático" se refiere a un grupo arilo
que incluye uno o más heteroátomos en el anillo seleccionados de
nitrógeno, oxígeno y azufre. Una fracción "heteroaromática" o
"heteroarilo" que contiene N se refiere a un grupo aromático en
el cual por lo menos uno de los átomos esqueléticos del anillo es
un átomo de nitrógeno. El grupo heteroarilo policíclico puede ser
fusionado o no fusionado. Los ejemplos ilustrativos de grupos
heteroarilo incluyen las siguientes fracciones:
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\newpage
El término "heterociclo" se refiere a
grupos heteroaromáticos y heteroalicíclicos que contienen uno a
cuatro heteroátomos seleccionado cada uno de O, S y N, en donde
cada grupo heterocíclico tiene de 4 a 10 átomos en su sistema de
anillo, y con la condición que el anillo de dicho grupo no contenga
dos átomos de O o S adyacentes. Los grupos heterocíclicos no
aromáticos incluyen grupos que tienen sólo 4 átomos en su sistema de
anillos, pero los grupos heterocíclicos aromáticos deben tener por
lo menos 5 átomos en su sistema de anillos. Los grupos
heterocíclicos incluyen sistema de anillos fusionados a benzo. Un
ejemplo de un grupo heterocíclico de 4 miembros es azetidinilo
(derivado de azetidina). Un ejemplo de un grupo heterocíclico de 5
miembros es tiazolilo. Un ejemplo de un grupo heterocíclico de 6
miembros es piridilo y un ejemplo de un grupo heterocíclico de 10
miembros es quinolinilo. Los ejemplos de grupos heterocíclicos no
aromáticos son pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo,
tetrahidrotienilo, tetrahidropiranilo, dihidropiranilo,
tetrahidrotiopiranilo, piperidino, morfolino, tiomorfolino,
tioxanilo, piperazinilo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo,
homopiperidinilo, oxepanilo, tiepanilo, oxazepinilo, diazepinilo,
tiazepinilo, 1,2,3,6-tetrahidropiridinilo,
2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo,
indolinilo, 2H-piranilo,
4H-piranilo, dioxanilo,
1,3-dioxolanilo, pirazolinilo, ditianilo,
ditiolanilo, dihidropiranilo, dihidrotienilo, dihidrofuranilo,
pirazolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo,
3-azabiciclo[3.1.0]hexanilo,
3-azabiciclo[4.1.0]heptanilo,
3-H indolilo y quinolizinilo. Los ejemplos de grupos
heterocíclicos aromáticos son piridinilo, imidazolilo,
pirimidinilo, pirazolilo, triazolilo, pirazinilo, tetrazolilo,
furilo, tienilo, isoxazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isotiazolilo,
pirrolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, indolilo, benzimidazolilo,
benzofuranilo, cinolinilo, indazolilo, indolizinilo, ftalazinilo,
piridazinilo, triazinilo, isoindolilo, pteridinilo, purinilo,
oxadiazolilo, tiadiazolilo, furazanilo, benzofurazanilo,
benzotiofenilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinazolinilo,
quinoxalinilo, naftiridinilo, y furopiridinilo. Los grupos
anteriores, como derivados de los grupos presentados antes, pueden
ser unidos a C o unidos a N donde eso es posible. Por ejemplo, un
grupo derivado de pirrol puede ser
pirrol-1-ilo (unido a N) o
pirrol-3-ilo (unido a C). Además un
grupo derivado de imidazol puede ser
imidazol-1-ilo o
imidazol-3-ilo (ambos unidos a N) o
imidazol-2-ilo,
imidazol-4-ilo o
imidazol-5-ilo (todos unidos a C).
Los grupos heterocíclicos incluyen sistemas de anillos fusionados a
benzo y sistemas de anillos sustituidos con una o dos fracciones oxo
(=O) tal como pirrolidin-2-ona.
Un grupo "heteroalicíclico" se refiere a un
grupo cicloalquilo que incluye por lo menos un heteroátomo
seleccionado de nitrógeno, oxígeno y azufre. Los radicales pueden
ser fusionados con un arilo o heteroarilo. Los ejemplos ilustrativos
de grupos heterocicloalquilo incluyen:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
El término heteroalicíclico incluye también
todas las formas de anillos de los carbohidratos, incluyendo los
monosacáridos, los disacáridos y los oligosacáridos, sin estar
limitados a estos.
El término "anillo con miembros" puede
comprender cualquier estructura cíclica. El término "con
miembros" se usa con el fin de indicar el número de átomos
esqueléticos que constituyen el anillo. Así, por ejemplo,
ciclohexilo, piridina, pirano y tiopirano son anillos con 6 miembros
y ciclopentilo, pirrol, furano y tiofeno son anillos con 5
miembros.
Un grupo "isocianato" se refiere a un grupo
-NCO.
Un grupo "isotiocianato" se refiere a un
grupo -NCS.
Un grupo "mercaptilo" se refiere a un grupo
(alquil)S-.
Los términos "nucleófilo" y
"electrófilo" como se utilizan en la presente memoria tienen
sus significados usuales familiares para la química orgánica
sintética y/o física. Los electrófilos de carbono comprenden
típicamente uno o más átomos de carbono de alquilo, alquenilo,
alquinilo o aromáticos (sp^{3}, sp^{2}, o sp hibridado)
sustituidos con cualquier átomo o grupo que tenga una
electronegatividad de Pauling mayor que aquella del carbono mismo.
Los ejemplos de electrófilos de carbono incluyen carbonilos
(aldehídos, cetonas, ésteres, amidas), oximas, hidrazonas,
epóxidos, aziridinas, haluros de alquilo, alquenilo y arilo, acilos,
sulfonatos (de arilo, alquilo y similares) sin estar limitados a
estos. Otros ejemplos de electrófilos de carbono incluyen los átomos
de carbono insaturados conjugados electrónicamente con grupos que
sacan electrones, siendo ejemplos el carbono 6 en cetonas
alfa-insaturadas o los átomos de carbono en grupos
arilo sustituidos con flúor. Los métodos para generar electrófilos
de carbono, especialmente en formas que den productos controlados
con precisión, son conocidos por los expertos en la materia de la
síntesis orgánica.
La disposición relativa de los sustituyentes
aromáticos (orto, meta y para) imparte una química distintiva
a tales estereoisómeros y es bien reconocida dentro del campo de la
química aromática. Los patrones de sustitución para y
meta proyectan los dos sustituyentes en diferentes
orientaciones. Los sustituyentes dispuestos en posición orto
están orientados en 60º con respecto al otro, los sustituyentes en
posición meta están orientados en 120º con respecto al otro;
los sustituyentes en posición para están orientados en 180º
con respecto al otro.
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\vskip1.000000\baselineskip
Las disposiciones relativas de los
sustituyentes, a saber orto, meta, para,
afectan también las propiedades electrónicas de los sustituyentes.
Sin estar limitado a cualquier tipo o nivel particular de teoría,
se sabe que los sustituyentes dispuestos en las posiciones
orto y para se afectan electrónicamente entre ellos
en un grado mayor que los sustituyentes correspondientes dispuestos
en meta. Los aromáticos meta-bisustituidos son
sintetizados a menudo usando diferentes rutas que aquellas en las
que lo son los aromáticos correspondientes orto- y
para-bisustituidos.
El término "fracción" se refiere a un
segmento o grupo funcional específico de una molécula. Las
fracciones químicas son con frecuencia entidades químicas
reconocidas incrustadas en una molécula o adjuntas a ella.
El término "enlace" o "enlace simple"
se refiere a una unión química entre dos átomos, o dos fracciones
cuando los átomos unidos por el enlace son considerados como parte
de una subestructura mayor.
Un grupo "sulfinilo" se refiere a
-S(=O)-R, donde R se selecciona de entre el grupo
constituido por alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo (unido a
través de un carbono del anillo) y heteroalicíclico (unido a través
de un carbono del anillo).
Un grupo "sulfonilo" se refiere a
-S(=O)_{2}-R, donde R se selecciona de
entre el grupo constituido por alquilo, cicloalquilo, arilo,
heteroarilo (unido a través de un carbono del anillo) y
heteroalicíclico (unido a través de un carbono del anillo).
Un grupo "tiocianato" se refiere a un grupo
-CNS.
El término "sustituido opcionalmente"
significa que el grupo al que se hace referencia puede ser
sustituido con uno o más grupos adicionales seleccionados en forma
individual e independiente de alquilo, cicloalquilo, arilo,
heteroarilo, heteroalicíclico, hidroxi, alcoxi, ariloxi, mercapto,
alquiltio, ariltio, ciano, halo, carbonilo, tiocarbonilo,
isocianato, tiocianato, isotiocianato, nitro, perhaloalquilo,
perfluoroalquilo, sililo, y amino, incluyendo grupos amino mono- y
bisustituidos, y los derivados protegidos de éstos. Los grupos
protectores que pueden formar los derivados protectores de los
sustituyentes anteriores son conocidos por los expertos en la
materia y pueden encontrarse en referencias tales como el trabajo de
Greene y Wuts mencionado anteriormente.
Los compuestos presentados en la presente
memoria pueden poseer uno o más centros quirales y cada centro puede
existir en la configuración R o S. Los compuestos presentados en la
presente memoria incluyen todas las formas diastereómeras,
enantiómeras y epímeras, así como también las mezclas apropiadas de
estos. Si se desea, se pueden obtener estereoisómeros por métodos
conocidos en la técnica, como por ejemplo, la separación de
estereoisómeros por columnas cromatográficas quirales.
Los métodos y formulaciones descritos en la
presente memoria incluyen el uso de N-óxidos, formas cristalinas
(conocidas también como polimorfas), o sales farmacéuticamente
aceptables de los compuestos que tienen la estructura de la Fórmula
(I), así como también metabolitos activos de estos compuestos que
tienen el mismo tipo de actividad. Únicamente a título de ejemplo,
un metabolito conocido de fenretinida es la
N-(4-metoxifenil)retinamida, conocida
también como 4-MPR o MPR. Otro metabolito conocido
de fenretinida es 4-oxo fenretinida. En algunas
situaciones, los compuestos pueden existir como tautómeros. Todos
los tautómeros están incluidos dentro del alcance de los compuestos
presentados en la presente memoria. Además, los compuestos descritos
en la presente memoria pueden existir tanto en formas no solvatadas
como solvatadas con solventes farmacéuticamente aceptables tales
como agua, etanol, y lo análogo. Se considera también que en la
presente memoria se dan a conocer las formas solvatadas de los
compuestos presentados en la presente memoria.
Otros casos son composiciones farmacéuticas que
contienen un compuesto de la Fórmula (I) y un diluyente, excipiente
o vehículo farmacéuticamente aceptable.
El término "composición farmacéutica" se
refiere a una mezcla de un compuesto de la Fórmula (I) con otros
componentes químicos tales como vehículos, estabilizadores,
diluyentes, agentes de dispersión, agentes de suspensión, agentes
espesadores y/o excipientes. La composición farmacéutica facilita la
administración del compuesto a un organismo. Existen en la técnica
numerosas técnicas para administrar un compuesto, las que incluyen
administración intravenosa, oral, en aerosol, parenteral, oftálmica,
pulmonar y tópica, sin estar limitadas a éstas.
El término "vehículo" se refiere a
compuestos o agentes químicos relativamente no tóxicos que facilitan
la incorporación de un compuesto en células o tejidos.
El término "diluyente" se refiere a
compuestos químicos que se usan para diluir el compuesto que
interesa antes de su suministro. Los diluyentes pueden usarse
también para estabilizar compuestos porque pueden proporcionar un
entorno más estable. Las sales disueltas en soluciones
amortiguadoras (que pueden proporcionar también control o
mantenimiento del pH) son utilizadas como diluyentes en la técnica,
incluyendo una solución salina amortiguada con fosfato pero sin
estar limitadas a ésta.
El término "fisiológicamente aceptable" se
refiere a un material, tal como un vehículo o diluyente, que no
anula la actividad biológica o las propiedades del compuesto, y no
es tóxico.
El término "sal farmacéuticamente
aceptable" se refiere a una formulación de un compuesto que no
causa irritación significativa a un organismo al que es
administrada y no anula la actividad biológica y las propiedades del
compuesto. Pueden obtenerse sales farmacéuticamente aceptables
haciendo reaccionar un compuesto de la Fórmula (I) con ácidos tales
como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido
nítrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido
etanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido
salicílico y similares. Se pueden obtener también sales
farmacéuticamente aceptables haciendo reaccionar un compuesto de la
Fórmula (I) con una base para formar una sal tal como una sal de
amonio, una sal de metal alcalino tal como una sal de sodio o
potasio, una sal de metal alcalino térreo tal como una sal de calcio
o magnesio, una sal de bases orgánicas tal como diciclohexilamina,
N-metil-D-glucamina,
tris(hidroximetil)metilamina, y sales con aminoácidos
tales como arginina, lisina y lo análogo, o por otros métodos
conocidos en la técnica.
Un "metabolito" de un compuesto expuesto en
la presente memoria es un derivado de ese compuesto que se forma
cuando el compuesto es metabolizado. El término "metabolito
activo" se refiere a un derivado biológicamente activo de un
compuesto que se forma cuando el compuesto es metabolizado. El
término "metabolizado" se refiere a la suma de los procesos
(incluyendo pero sin estar limitados a reacciones de hidrólisis y
reacciones catalizadas por enzimas) por los cuales una determinada
sustancia es cambiada por un organismo. De este título de ejemplo,
las enzimas pueden producir alteraciones estructurales específicas a
un compuesto. Por ejemplo, el citocromo P450 cataliza diversas
reacciones oxidativas y reductivas, en tanto que las uridina
difosfato glucuroniltransferasas catalizan la transferencia de una
molécula de ácido glucónico activada a alcoholes aromáticos,
alcoholes alifáticos, ácidos carboxílicos, aminas y grupos
sulfidrilo libres. Se puede obtener una mayor información sobre
metabolismo en The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9a.
Edición, McGraw-Hill (1996).
Los metabolitos de los compuestos divulgados en
la presente memoria pueden identificarse ya sea administrando los
compuestos a un huésped y analizando muestras de tejidos del
huésped, o incubando compuestos con células hepáticas in
vitro y analizando los compuestos resultantes. Ambos métodos son
muy conocidos en la técnica.
Únicamente a título de ejemplo, MPR es un
metabolito conocido de HPR, estando ambos contenidos dentro de la
estructura de la Fórmula (I). MPR se acumula sistémicamente en
pacientes que han sido tratados crónicamente con HPR. Una de las
razones por las que MPR se acumula sistémicamente es que MPR sólo se
metaboliza lentamente (si es que lo hace), mientras que HPR es
metabolizado a MPR. Además, MPR puede experimentar un aclaramiento
relativamente lento. De esta manera, (a) hay que tomar en cuenta la
farmacocinética y la farmacodinámica de MPR cuando se administra y
se determina la biodisponibilidad de HPR, (b) MPR es más estable al
metabolismo que HPR, y (c) MPR puede hacerse biodisponible de una
manera más inmediata que HPR después de la absorción. Otro
metabolito conocido de fenretinida es 4-oxo
fenretinida.
MPR puede ser considerado también un metabolito
activo. Como se muestra en las Figuras 9 y 10, MPR (como HPR) puede
unirse a la proteína que se une a retinol (RBP) e impedir la unión
de RBP a transeritrina (TTR). Como resultado de ello, cuando se
administra a un paciente HPR o MPR, una de las características
resultantes esperadas es que MPR se acumule y se una a RBP e inhiba
la unión de retinol a RBP, así como también la unión de RBP a TTR.
En consecuencia, MPR puede (a) servir como inhibidor de la unión de
retinol a RBP, (b) servir como inhibidor de RBP a TTR, (c) limitar
el transporte de retinol a ciertos tejidos, incluyendo tejidos
oftálmicos, y (d) ser transportado por RBP a ciertos tejidos,
incluyendo tejidos oftálmicos. Al parecer, MPR se une más
débilmente a RBP que HPR y es así un inhibidor más débil de la unión
de retinol a RBP. Sin embargo, se espera que tanto MPR como HPR
inhiban la unión de RBP a TTR en una forma aproximadamente
equivalente. Se espera además que MPR, (como HPR) se una a
proteínas del ciclo visual, incluyendo LRAT y CRALBP. Es este
sentido, MPR tiene el mismo modo de acción que HPR y puede servir
como un agente terapéutico en los métodos y composiciones que se
describen en la presente.
Un "profármaco" se refiere a un agente que
es convertido en el fármaco padre in vivo. Los profármacos
son con frecuencia útiles debido a que en algunas situaciones pueden
ser más fáciles de administrar que el fármaco padre. Por ejemplo,
ellos pueden ser biodisponibles por administración oral mientras que
el fármaco padre no lo es. El profármaco puede tener también una
mejor solubilidad en composiciones farmacéuticas que el fármaco
padre. Un ejemplo de profármaco, sin limitación, sería un compuesto
de la Fórmula (I) que es administrado como un éster (el
"profármaco") para facilitar la transmisión a través de una
membrana celular donde la solubilidad en agua es perjudicial para
la movilidad, pero que después es hidrolizado metabólicamente al
ácido carboxílico, la entidad activa, una vez dentro de la célula
donde la solubilidad en agua es beneficiosa. Otro ejemplo de un
profármaco podría ser un péptido corto (poliaminoácido) unido a un
grupo ácido donde el péptido es metabolizado para revelar la
fracción activa.
Los compuestos descritos en la presente memoria
pueden ser administrados a un paciente humano por sí solos, o en
composiciones farmacéuticas donde ellos son mezclados con otros
ingredientes activos, como en terapia combinada, o con un portador
o portadores o con un vehículo o vehículos adecuado(s). Se
pueden encontrar técnicas para la formulación y administración de
los compuestos de la presente solicitud en "Remington: The Science
and Practice of Pharmacy" 20ª edición (2000).
Las rutas de administración adecuadas pueden
incluir, por ejemplo, administración oral, rectal, transmucosal,
transdérmica, pulmonar, oftálmica o intestinal; suministro
parenteral, incluyendo inyecciones intramusculares, subcutáneas,
intravenosas, intramedulares, así como también inyecciones
intratecales, intraventriculares directas, intraperitoneales,
intranasales o intraoculares.
Alternativamente, se puede administrar el
compuesto de una manera local en vez de sistémica, por ejemplo
inyectando el compuesto directamente en un órgano, frecuentemente
en un depósito o formulación de liberación sostenida. Además, se
puede administrar el fármaco en un sistema de suministro dirigida
del fármaco, por ejemplo en un liposoma recubierto con un
anticuerpo específico para un órgano. Los liposomas serán dirigidos
al órgano y captados selectivamente por éste. Además, se puede
proporcionar el fármaco en la forma de una formulación de
liberación rápida, en la forma de una formulación de liberación
prolongada, o en la forma de una formulación de liberación
intermedia.
Las composiciones farmacéuticas que comprenden
un compuesto de la Fórmula (I) pueden ser elaboradas de una manera
conocida, tal como mediante procesos convencionales de mezcla,
disolución, granulación, fabricación de grageas, elución, emulsión,
encapsulación, captura o compresión.
Las composiciones farmacéuticas pueden ser
formuladas de una manera convencional usando uno o más vehículos
fisiológicamente aceptables que comprenden excipientes y auxiliares
que facilitan el procesamiento de los compuestos activos para
formar preparaciones que pueden ser usadas farmacéuticamente. Una
formulación apropiada depende de la ruta de administración elegida.
Se puede usar cualquiera de las técnicas, de los vehículos y de los
excipientes conocidos que sean adecuados y como se entiende en la
técnica por ejemplo en Remington's Pharmaceutical Sciences
mencionado anteriormente.
Los compuestos de la Fórmula (I) pueden ser
administrados de diversas maneras, las que incluyen todas las
formas de suministro local al ojo. Además, los compuestos de la
Fórmula (I) pueden ser administrados sistémicamente, tal como por
vía oral o intravenosa. Los compuestos de la Fórmula (I) pueden ser
administrados tópicamente al ojo y pueden ser formulados en
diversas composiciones oftálmicas que pueden administrarse
tópicamente tales como soluciones, suspensiones, geles o ungüentos.
Así, "administración oftálmica" comprende inyección
intraocular, inyección subretinal, inyección intravitreal,
administración periocular, inyecciones subconjuntivales, inyecciones
retrobulbares, inyecciones intracamerales (que incluyen dentro de
la cámara anterior o vítrea), inyecciones o implantes usando la
técnica sub-Tenon, soluciones oftálmicas,
suspensiones oftálmicas, ungüentos oftálmicos, implantes oculares e
inserciones oculares, soluciones intraoculares, uso de iontoforesis,
incorporación en soluciones quirúrgicas para irrigación, y
compresas (únicamente a título de ejemplo, un tapón de algodón
saturado insertado en el fórnix) pero se limita a estas formas.
La administración de una composición al ojo
tiene generalmente como resultado el contacto directo de los agentes
con la córnea, a través de la cual pasa por lo menos una parte de
los agentes administrados. Con frecuencia, la composición tiene un
tiempo de permanencia efectivo en el ojo de aproximadamente 2 a de
aproximadamente 24 horas, más típicamente de aproximadamente 4 a de
aproximadamente 24 horas y en la forma más típica de aproximadamente
6 a de aproximadamente 24 horas.
Una composición que contiene un compuesto de la
Fórmula (I) puede de manera ilustrativa presentar la forma de un
líquido donde los agentes están presentes en solución, en suspensión
o en ambas formas. Típicamente, cuando la composición se administra
como una solución o suspensión, una primera porción del agente está
presente en solución y una segunda porción del agente está presente
en forma de partículas, suspendidas en una matriz líquida. En
algunas formas de realización, una composición líquida puede incluir
una formulación en gel. En otras formas de realización, la
composición líquida es acuosa. Alternativamente, la composición
puede tener la forma de un ungüento.
Las composiciones útiles pueden ser una
solución, una suspensión o una solución/suspensión acuosa, la que
puede ser presentada en la forma de gotas oftálmicas. Se puede
administrar una dosis deseada al ojo por medio de una cantidad de
gotas conocida. Por ejemplo, para un volumen de gotas de 25 \mul,
la administración de 1-6 gotas suministrará
25-150 \mul de la composición, las composiciones
acuosas contienen típicamente de aproximadamente 0,01% hasta de
aproximadamente 50%, más típicamente de aproximadamente 0,1% hasta
de aproximadamente 20%, aún más típicamente de aproximadamente 0,2%
hasta de aproximadamente 10%,y en la forma más típica de
aproximadamente 0,5% hasta de aproximadamente 5%, peso/volumen de un
compuesto de la Fórmula (I).
Típicamente, las composiciones acuosas tienen pH
y osmolalidad oftálmicamente aceptables. "Oftálmicamente
aceptable" con respecto a una formulación, composición o
ingrediente significa típicamente que no hay ningún efecto
perjudicial persistente en el ojo tratado o en el funcionamiento de
éste, o en la salud general del sujeto que está siendo tratado. Los
efectos transitorios tales como una irritación menor o una sensación
de "punzada" son comunes en la administración oftálmica tópica
de los agentes y son consistentes con la formulación, composición o
ingrediente en cuestión que es "oftálmicamente aceptable".
Una suspensión acuosa útil puede contener
también uno o más polímeros como agentes de suspensión. Los
polímeros útiles incluyen polímeros solubles en agua tales como
polímeros celulósicos tales como hidroxipropilmetilcelulosa, y
polímeros insolubles en agua tales como polímeros entrecruzados que
contienen carboxilo. Las composiciones útiles pueden contener
también un polímero farmacéuticamente aceptable que se adhiera a las
mucosas, seleccionado por ejemplo de carboximetilcelulosa, carbomer
(polímero de ácido acrílico), poli(metilmetacrilato),
poliacrilamida, policarbofilo, copolímero de ácido
acrílico/acrilato de butilo, alginato sódico y dextrano.
Las composiciones útiles pueden incluir también
agentes de solubilización oftálmicamente aceptables para ayudar a
solubilizar un compuesto de la Fórmula (I). El término "agente
solubilizante" incluye generalmente agentes que tienen como
resultado la formación de una solución micelar o una verdadera
solución del agente. Ciertos agentes tensoactivos no iónicos
oftálmicamente aceptables, por ejemplo polisorbato 80, pueden ser
útiles como agentes solubilizantes, como pueden ser oftálmicamente
aceptables los glicoles, poliglicoles, tales como polietilenglicol
400 y éteres de glicol.
Las composiciones útiles pueden incluir también
uno o más agentes de ajuste del pH o agentes amortiguadores
oftálmicamente aceptables, los que incluyen ácidos tales como ácidos
acético, bórico, cítrico, láctico, fosfórico y clorhídrico; bases
tales como hidróxido sódico, fosfato sódico, borato sódico, citrato
sódico, acetato sódico, lactato sódico y
tris-hidroximetilaminometano; y tampones tales como
citrato/dextrosa, bicarbonato sódico y cloruro de amonio. Tales
ácidos, bases y tampones se incluyen en una cantidad requerida para
mantener el pH de la composición en un intervalo oftálmicamente
aceptable.
Las composiciones útiles pueden incluir también
una o más sales oftálmicamente aceptables en una cantidad requerida
para llevar la osmolalidad de la composición a un intervalo
oftálmicamente aceptable. Tales sales incluyen aquellas que tienen
cationes sodio, potasio o amonio y aniones cloruro, citrato,
ascorbato, borato, fosfato, bicarbonato, sulfato, tiosulfato o
bisulfito; las sales adecuadas incluyen cloruro sódico, cloruro
potásico, tiosulfato sódico, bisulfito sódico y sulfato amónico.
Otras composiciones útiles pueden incluir
también uno o más preservantes oftálmicamente aceptables para
inhibir la actividad microbiana. Los preservantes adecuados
incluyen substancias que contienen mercurio tales como merfen y
tiomersal; dióxido de cloro estabilizado; y compuestos de amonio
cuaternario tales como cloruro de benzalconio, bromuro de
cetiltrimetilamonio y cloruro de cetilpiridinio.
Aún otras composiciones útiles pueden incluir
uno o más agentes tensoactivos oftálmicamente aceptables para
mejorar la estabilidad física o para otros fines. Los agentes
tensoactivos no iónicos adecuados incluyen glicéridos de ácidos
grasos y aceites vegetales polioxietilenados, por ejemplo
polioxietileno (60) aceite de ricino hidrogenado, y alquiléteres de
polioxietileno y éteres de alquilfenilo tales como octoxinol 10,
octoxinol 40.
Otras composiciones útiles pueden incluir uno o
más antioxidantes para mejorar la estabilidad química donde se
requiera. Los antioxidantes adecuados incluyen, únicamente a título
de ejemplo, ácido ascórbico y metabisulfito sódico.
Las composiciones de suspensiones acuosas pueden
ser acondicionadas en recipientes para una sola dosis que no pueden
volver a cerrarse. Alternativamente, se pueden usar recipientes de
múltiples dosis que pueden volver a cerrarse, y en ese caso se
incluye típicamente un preservante en la composición.
La composición oftálmica puede tener también la
forma de un artículo sólido que puede ser insertado entre el ojo y
el párpado o en el saco conjuntival, donde libera el agente. La
liberación es en el líquido lagrimal que baña la superficie de la
córnea, o directamente en la córnea misma, con lo cual el artículo
sólido está generalmente en un contacto íntimo. Generalmente los
artículos sólidos adecuados para implantar en el ojo de tal manera
están compuestos principalmente de polímeros y pueden ser
biodegradables o no biodegradables.
Para inyecciones intravenosas, los compuestos de
la Fórmula (I) pueden ser formulados en soluciones acuosas,
preferentemente en tampones fisiológicamente compatibles tales como
solución de Hank, solución de Ringer o tampón de solución salina
fisiológica. Para administración transmucosal, se usan en la
formulación agentes de penetración apropiados para la barrera que
va a ser traspasada. Tales agentes de penetración son conocidos
generalmente en la técnica. Para otras inyecciones parenterales, las
formulaciones apropiadas pueden incluir soluciones acuosas o no
acuosas, preferentemente con tampones o excipientes fisiológicamente
compatibles. Tales excipientes son generalmente conocidos en la
técnica.
Una formulación útil para solubilizar cantidades
mayores de los compuestos de la Fórmula (I) son, sólo a modo de
ejemplo, fosfolípidos con carga positiva, negativa o neutra, o
sistemas agregados lipídicos mixtos de sales biliares/
fosfatidilcolina, tales como aquellos descritos por Li, C.Y. y col.,
en Pharm. Res., 13:907-913 (1996). Otra
formulación que puede ser usada para el mismo propósito con
compuestos que tienen la estructura de la Fórmula (I) implica el
uso de un solvente que contiene un alcohol, tal como etanol,
combinado con un aceite de ricino alcoxilado. Ver, por ejemplo, la
publicación de patente US nº 2002/0183394. O también,
alternativamente, una formulación que contiene un compuesto de la
Fórmula (I) es una emulsión compuesta por un lipoide dispersado en
una fase acuosa, una cantidad estabilizadora de un agente
tensoactivo no iónico, opcionalmente un solvente, y opcionalmente
un agente isotónico. Ver la misma patente. Una formulación más que
contiene un compuesto de la Fórmula (I) incluye aceite de maíz y un
agente tensoactivo no iónico; ver la patente US nº 4.665.098. Otra
formulación que contiene un compuesto de la Fórmula (I) incluye
lisofosfatidilcolina, monoglicérido y un ácido graso; ver la
patente US nº 4.874.795. Otra formulación que contiene un compuesto
de la Fórmula (I) incluye harina, un edulcorante y un humectante;
ver la Publicación Internacional No. WO 2004/069203. Otra
formulación más que contiene un compuesto de la Fórmula (I) incluye
dimiristoil fosfatidilcolina, aceite de soya, alcohol
t-butílico y agua; ver la publicación de la
solicitud de patente US nº 2002/0143062.
Para administración oral, los compuestos de la
Fórmula (I) pueden ser formulados fácilmente combinando los
compuestos activos con vehículos o excipientes farmacéuticamente
aceptables que son muy conocidos en la técnica. Tales vehículos
permiten que los compuestos descritos en la presente memoria sean
formulados como comprimidos, polvos, píldoras, grageas, cápsulas,
líquidos, geles, jarabes, elixires, pastas acuosas, suspensiones y
similares para ser ingeridos por vía oral por un paciente que va a
ser tratado. Las preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden
obtenerse mezclando uno o más excipientes sólidos con uno o más de
los compuestos descritos aquí, opcionalmente moliendo la mezcla
resultante, y procesando la mezcla de gránulos, después de agregar
auxiliares adecuados, si se desea, para obtener núcleos de tabletas
o grageas. Los excipientes adecuados son, en particular, rellenos
tales como azúcares que incluyen lactosa, sacarosa, manitol o
sorbitol; preparaciones de celulosa tales como por ejemplo, almidón
de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata,
gelatina, goma tragacanto, metilcelulosa, celulosa microcristalina,
hidroxipropil-metilcelulosa, carboximetilcelulosa
sódica; u otros tales como polivinilpirrolidona (PVP o povidona) o
fosfato cálcico. Si se desea, se pueden agregar agentes de
desintegración, tal como la croscarmelosa sódica entrecruzada,
polivinilpirrolidona, agar o ácido algínico o una de sus sales tal
como alginato sódico.
Los núcleos para grageas son provistos de
recubrimientos adecuados. Para este fin, se pueden usar soluciones
concentradas de azúcares, las que pueden contener opcionalmente goma
arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol,
polietilenglicol, y/o dióxido de titanio, soluciones de lacas y
solventes orgánicos o mezclas de solventes que sean adecuados. Se
pueden agregar tinturas o pigmentos a las tabletas o a los
recubrimientos de grageas para identificarlos o para caracterizar
diferentes combinaciones de dosis del compuesto activo.
Las preparaciones farmacéuticas que pueden
usarse por vía oral incluyen las cápsulas embutidas fabricadas de
gelatina, así como también cápsulas blandas selladas elaboradas con
gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las
cápsulas embutidas pueden contener los ingredientes activos
mezclados con un relleno tal como lactosa, aglomerantes tales como
almidones, y/o lubricantes tales como talco o estearato magnésico
y, opcionalmente, estabilizadores. En las cápsulas blandas, los
compuestos activos pueden ser disueltos o suspendidos en líquidos
adecuados, tales como aceites grasos, parafina líquida, o
polietilenglicoles líquidos. Además se agregar estabilizadores.
Todas las formulaciones para administración oral deben estar en
dosis adecuadas para tal administración.
Para administración bucal o sublingual, las
composiciones pueden tener la forma de comprimidos, pastillas o
geles formulados de una manera convencional.
Otra formulación útil para administrar los
compuestos que tienen la estructura de la Fórmula (I) emplea
dispositivos de suministro transdérmico ("parches"). Tales
parches transdérmicos pueden usarse para proporcionar una infusión
continua o discontinua de los compuestos del presente invención en
cantidades controladas. La construcción y uso de parches
transdérmicos para el suministro de agentes farmacéuticos es muy
conocida en la técnica; ver, por ejemplo, la patente US nº
5.023.252. Tales parches pueden ser construidos para un suministro
transdérmico, pulsada o según demanda de los agentes farmacéuticos.
Más aún, el suministro transdérmico de los compuestos de la Fórmula
(I) puede realizarse por medio de parches de iontoforesis y
similares. Los parches transdérmicos pueden proporcionar un
suministro controlado de los compuestos. La tasa de absorción puede
ser demorada usando membranas que controlan la tasa o atrapando el
compuesto dentro de una matriz de polímero o gel. A la inversa, se
pueden usar mejoradores de absorción para aumentar la absorción. Las
formulaciones adecuadas para la administración transdérmica pueden
presentarse como parches discretos y pueden ser emulsiones
lipofílicas o soluciones acuosas amortiguadas, disueltas y/o
dispersadas en un polímero o un adhesivo. Los parches transdérmicos
pueden ser colocados sobre diferentes partes del cuerpo del
paciente, incluyendo sobre el ojo.
Otros dispositivos de iontoforesis que pueden
usarse para administración ocular de los compuestos que tienen la
estructura de la Fórmula (I) son el aplicador Eyegate, creado y
patentado por Optis France S.A., y el sistema de iontoforesis ocular
Ocuphor^{TM} desarrollado por Iomed, Inc.
Para ser administrados por inhalación, los
compuestos de la Fórmula (I) se suministran convenientemente en la
forma de una presentación de pulverizador en aerosol de compresas
presionizadas o un nebulizador con el uso de un propelente
adecuado, tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano,
diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En
el caso de un aerosol presionizado, la unidad de dosificación puede
determinarse proporcionando una válvula para suministrar una
cantidad dosificada. Pueden formularse cápsulas y cartuchos, por
ejemplo de gelatina, para usar en un inhalador o insuflador, las que
contienen una mezcla del compuesto en polvo y una base adecuada en
polvo tal como lactosa o almidón.
Los compuestos pueden ser formulados para
administración parenteral por inyección, p. ej. inyección de un
bolo o infusión continua. Las formulaciones para inyección pueden
ser presentadas en forma de dosis unitarias, tal como en ampollas,
o en envases de múltiples dosis, con la adición de preservante. Las
composiciones pueden tener formas tales como suspensiones,
soluciones o emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos, y pueden
contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión,
estabilización y/o dispersión.
Las formulaciones farmacéuticas para
administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los
compuestos activos en una forma soluble en agua. Además, las
suspensiones de los compuestos activos pueden prepararse como
suspensiones aceitosas apropiadas para inyección. Los solventes o
vehículos lipofílicos adecuados incluyen aceites grasos tales como
aceite de sésamo, o ésteres sintéticos de ácidos grasos, tales como
oleato de etilo o triglicéridos, o liposomas. Las suspensiones
acuosas para inyección pueden contener substancias que aumentan la
viscosidad de la suspensión, tal como carboximetilcelulosa sódica,
sorbitol o dextrano. Opcionalmente, la suspensión puede contener
también estabilizadores o agentes adecuados que aumentan la
solubilidad de los compuestos para permitir preparar soluciones muy
concentradas.
Alternativamente, el ingrediente activo puede
estar en la forma de polvo para ser constituido con un vehículo
adecuado, tal como agua esterilizada libre de pirógenos, antes de
usar.
Los compuestos pueden ser formulados también en
composiciones rectales tales como geles rectales, espuma rectal,
aerosoles rectales, supositorios o enemas de retención, por ejemplo
que contienen bases convencionales para supositorios tales como
mantequilla de cacao u otros glicéridos.
Además de las formulaciones descritas
anteriormente, los compuestos pueden ser formulados también como una
preparación para depósito. Tales formulaciones de larga acción
pueden ser administradas por implante (tal como en forma subcutánea
o intramuscular) o por inyección intramuscular. Así, por ejemplo,
los compuestos pueden ser formulados con materiales poliméricos o
hidrofóbicos adecuados (tal como una emulsión en un aceite
aceptable) o resinas de intercambio de iones, o como derivados
escasamente solubles, por ejemplo como una sal escasamente
soluble.
Las formas para depósitos inyectables pueden
elaborarse formando matrices microencapsuladas (conocidas también
como matrices de microencapsulación) del compuesto de la Fórmula (I)
en polímeros biodegradables. Dependiendo de la proporción de
fármaco a polímero y de la naturaleza del polímero particular
empleado, se puede controlar la tasa de liberación del fármaco. Las
formulaciones inyectables en forma de depósito pueden ser preparadas
también reteniendo el fármaco en liposomas o microemulsiones.
Únicamente a título de ejemplo, pueden usarse depósitos
yuxtaesclerales posteriores como una forma de administración para
compuestos que tienen la estructura de la Fórmula (I). La
esclerótica es una capa fina sin vasos integrada por una red de
colágeno muy ordenado que rodea la mayor parte del ojo de un
vertebrado. Como la esclerótica carece de vasos, puede utilizarse
como un depósito de almacenamiento natural desde donde el material
inyectado no puede ser extraído o limpiado rápidamente del ojo. La
formulación usada para la administración del compuesto en la capa
escleral del ojo puede tener cualquier forma adecuada para
aplicarla a la esclerótica mediante inyección a través de una cánula
de diámetro pequeño adecuado para inyectar dentro de la capa
escleral. Los ejemplos de formas de aplicación inyectables son
soluciones, suspensiones o suspensiones
coloidales.
coloidales.
Un vehículo farmacéutico para los compuestos
hidrofóbicos de la Fórmula (I) es un sistema de cosolventes
integrado por alcohol bencílico, un agente tensoactivo no polar, un
polímero orgánico miscible con agua, y una fase acuosa. El sistema
de cosolventes puede constar de 10% de etanol, 10% de
polietilenglicol 300, 10% de aceite de ricino con polietilenglicol
40 (aceite de ricino PEG-40) con 70% de solución
acuosa. Este sistema de cosolventes disuelve bien los compuestos
hidrofóbicos, y produce por sí solo una baja toxicidad al ser
administrado sistémicamente. Naturalmente, las proporciones de un
sistema de cosolventes pueden ser variadas considerablemente sin
destruir sus características de solubilidad y toxicidad. Además, se
puede variar la identidad de los componentes de los cosolventes:
por ejemplo, se pueden usar otros agentes tensoactivos no polares de
baja toxicidad en lugar de aceite de ricino PEG-40,
se puede variar el tamaño de la fracción de polietilenglicol 300,
otros polímeros biocompatibles pueden reemplazar al
polietilenglico, tal como polivinil pirrolidona, y se pueden incluir
otros azúcares y polisacáridos en la solución acuosa.
Alternativamente se pueden utilizar otros
sistemas de suministro de compuestos farmacéuticos hidrofóbicos.
Los liposomas y las emulsiones son ejemplos muy conocidos de
vehículos o portadores de suministro para los fármacos
hidrofóbicos. Pueden emplearse también ciertos solventes orgánicos
tales como N-metilpirrolidona, aunque generalmente
a expensas de una mayor toxicidad. Además, los compuestos pueden ser
suministrando usando un sistema de liberación sostenida, tal como
matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que
contienen el agente terapéutico. Hay diversos materiales para
liberación sostenida que han sido establecidos y son muy conocidos
por los expertos en la materia. Dependiendo de su naturaleza
química, las cápsulas de liberación sostenida pueden liberar los
compuestos por un período que va desde algunas semanas hasta más de
100 días. Dependiendo de la naturaleza química y de la estabilidad
biológica del reactivo terapéutico, pueden utilizarse estrategias
adicionales para la estabilización de las proteínas.
Una formulación para la administración de
compuestos que tienen la estructura de la Fórmula (I) ha sido usada
con fenretinida en el tratamiento de neuroblastoma, cánceres ovárico
y de próstata, y es comercializada por Avanti Polar Lipids, Inc.
(Alabaster, Alabama) con el nombre
Lym-X-SorbTM. Esta formulación, que
comprende una matriz lipídica organizada que incluye
lisofosfatidi1colina, monoglicérido y ácido graso, está diseñada
para mejorar la disponibilidad oral de fenretinida. Se propone tal
formulación, esto es, una formulación oral que incluye
lisofosfatidi1colina, monoglicerido y ácido graso, para proporcionar
también una mejor biodisponibilidad de compuestos que tienen la
estructura de la Fórmula (I) para el tratamiento de enfermedades y
afecciones oftálmicas y oculares que incluyen las degeneraciones y
distrofias maculares, pero que no se limitan a éstas.
Todas las formulaciones descritas en la presente
memoria pueden beneficiarse con antioxidantes, agentes quelantes
metálicos, compuestos que contienen tiol y otros agentes
estabilizadores generales. Los ejemplos de tales agentes
estabilizadores incluyen: (a) de aproximadamente 0,5% a de
aproximadamente 2% p/v de glicerol, (b) de aproximadamente 0,1% a
de aproximadamente 1% p/v de metionina, (c) de aproximadamente 0,1%
a de aproximadamente 2% p/v de monotioglicerol, (d) EDTA de
aproximadamente 1 mM a de aproximadamente 10 mM (e) de
aproximadamente 0,01% a de aproximadamente 2% p/v de ácido
ascórbico, (f) 0,003% a de aproximadamente 0,02% p/v de polisorbato
80, (g) 0,00 1% a de aproximadamente 0,05% p/v de polisorbato 20,
(h) arginina, (i) heparina, (j) sulfato de dextrano, (k)
ciclodextrinas, (1) polisulfato de pentosana y otros heparinoides,
(m) cationes bivalentes tales como magnesio y zinc; o (n)
combinaciones de ellos, pero no están limitados a estos.
Muchos de los compuestos de la Fórmula (I)
pueden ser proporcionados como sales con contraiones
farmacéuticamente compatibles. Se pueden formar sales
farmacéuticamente compatibles con muchos ácidos, los que incluyen,
pero no están limitados a clorhídrico, sulfúrico, acético, láctico,
tartárico, málico, succínico, etc. Las sales tienden a ser más
solubles en solventes acuosos o en otros solventes protónicos que
las correspondientes formas de ácidos o bases libres.
El término "mamífero" significa todos los
mamíferos incluyendo los humanos. Únicamente a título de ejemplo,
el término "mamífero" incluye humanos, primates no humanos,
vacas, perros, gatos, cabras, ovejas, cerdos, ratas, ratones y
conejos.
El término "cantidad efectiva" como se usa
en la presente memoria se refiere a aquella cantidad del compuesto
que se está administrando que aliviará en cierto grado uno o más de
los síntomas de la enfermedad, afección o trastorno que se está
tratando.
Las composiciones que contienen el o los
compuesto(s) descritos en la presente memoria pueden ser
administradas para tratamientos profilácticos y/o terapéuticos. El
término "tratamiento" se usa para referirse a tratamientos
profilácticos y/o terapéuticos. En las aplicaciones terapéuticas las
composiciones son administradas a un paciente que ya padece de una
enfermedad, afección o trastorno, en una cantidad suficiente para
curar o detener por lo menos parcialmente los síntomas de la
enfermedad, trastorno o afección. Las cantidades efectivas para
este uso dependerán de la gravedad y del curso de la enfermedad,
trastorno o afección, la terapia previa, el estado de salud del
paciente y su respuesta a los fármacos, y el criterio del médico
tratante. Se considera que resultarán evidentes para el experto en
la materia las cantidades terapéuticamente efectivas por
experimentación rutinaria (por ejemplo una prueba clínica de
graduación de dosis).
En aplicaciones profilácticas, las composiciones
que contienen los compuestos descritos en la presente memoria son
administradas a un paciente que es susceptible o que de otro modo
corre el riesgo de contraer una determinada enfermedad, trastorno o
afección. Tal cantidad se define como "una cantidad o dosis
profilácticamente efectiva". En este uso, las cantidades
precisas dependen también del estado de salud, peso y lo análogo del
paciente. Se considera que resultará evidente para el experto en la
materia determinar tales cantidades profilácticamente efectivas por
experimentación rutinaria (por ejemplo una prueba clínica de
graduación de dosis).
Los términos "mejorar" o "mejoría"
significan aumentar o prolongar ya sea en potencia o en duración un
efecto deseado. Así, en relación con mejorar el efecto de los
agentes terapéuticos, el término "mejoría" se refiere a la
capacidad de aumentar o prolongar el efecto de otros agentes
terapéuticos en un sistema, ya sea en potencia o en duración. Una
"cantidad efectiva para mejorar", como se usa aquí, se refiere
a una cantidad adecuada para mejorar el efecto de otro agente
terapéutico en un sistema deseado. Cuando se usa en un paciente, las
cantidades efectivas para este uso dependerán de la gravedad y del
curso de la enfermedad, trastorno o afección, la terapia previa, el
estado de salud del paciente y su respuesta a los fármacos, y el
criterio del médico tratante.
En el caso en el que la afección del paciente no
mejora, según el criterio del médico la administración de los
compuestos puede ser administrada crónicamente, es decir, por un
período de tiempo prolongado, incluso durante todo el tiempo que
dure la vida del paciente a fin de mejorar o controlar o limitar de
otro modo los síntomas de la enfermedad o afección del paciente.
En el caso en el que el estado del paciente no
mejore según el criterio del médico la administración de los
compuestos puede ser efectuada en forma continua; alternativamente,
la dosis del fármaco que está siendo administrado puede ser
reducida temporalmente o suspendida temporalmente por un cierto
período de tiempo (esto es, un "período de descanso del
fármaco"). La duración del período de descanso del fármaco puede
variar entre 2 días y 1 año, incluyendo únicamente a título de
ejemplo, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días, 10 días, 12
días, 15 días, 20 días, 28 días, 35 días, 50 días, 70 días, 100
días, 120 días, 150 días, 180 días, 200 días, 250 días, 280 días,
300 días, 320 días, 350 días, y 365 días. La reducción de la dosis
durante un período de descanso del fármaco puede ser de 10%-100%,
incluyendo sólo a título de ejemplo 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%,
40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, y
100%.
Una vez que se ha producido la mejoría de la
afección del paciente, se administra si es necesario una dosis de
mantenimiento. Posteriormente, se puede reducir la dosis o la
frecuencia de administración, o ambas, en función de los síntomas,
hasta un nivel en el cual se mantenga la mejoría de la enfermedad,
trastorno o afección. Sin embargo, los pacientes pueden requerir
tratamiento intermitente a largo plazo cuando haya cualquier
recurrencia de los
síntomas.
síntomas.
La cantidad de un agente dado que corresponderá
a tal cantidad variará dependiendo de factores tales como el
compuesto particular, la afección de la enfermedad y su gravedad, la
identidad (p. ej.,peso) del sujeto o huésped que necesita el
tratamiento, pero sin embargo puede ser determinada en forma
rutinaria de una manera conocida en la técnica de acuerdo con las
circunstancias particulares que rodean el caso, incluyendo, p.
ej.,el agente específico que está siendo administrado, la ruta de
administración, la afección que está siendo tratada, y el sujeto o
huésped que está siendo tratado. Sin embargo, en general, las dosis
empleadas para el tratamiento de adultos humanos estará típicamente
en el intervalo de 0,02-5000 mg al día,
preferentemente 1-1.500 mg al día. La dosis deseada
puede ser presentada convenientemente en una sola dosis o como dosis
divididas administradas simultáneamente (o a lo largo de un corto
período de tiempo) o a intervalos apropiados, por ejemplo como dos,
tres, cuatro o más subdosis diarias.
En ciertos casos, puede ser apropiado
administrar por lo menos uno de los compuestos descritos en la
presente memoria (o una sal, éster, amida, profármaco, o solvato
farmacéuticamente aceptable) en combinación con otro agente
terapéutico. Sólo a título de ejemplo, si uno de los efectos
secundarios experimentado por un paciente al recibir uno de los
presentes compuestos es inflamación, puede ser entonces apropiado
administrar un agente antiinflamatorio en combinación con el agente
terapéutico inicial. O también, únicamente a título de ejemplo, la
eficacia terapéutica de uno de los compuestos descritos en la
presente memoria puede ser mejorada por la administración de un
adyuvante (esto es, por sí solo el adyuvante puede tener solamente
un beneficio terapéutico mínimo, pero combinado con otro agente
terapéutico, el beneficio terapéutico total para el paciente es
mejorado). O, también, únicamente a título de ejemplo, el beneficio
experimentado por un paciente puede ser aumentado administrando uno
de los compuestos descrito en la presente memoria con otro agente
terapéutico (que incluye además un régimen terapéutico) que también
tiene beneficio terapéutico. Únicamente a título de ejemplo, en un
tratamiento para la degeneración macular que incluye administrar uno
de los compuestos descritos en la presente, puede producirse un
aumento del beneficio terapéutico proporcionando también al paciente
otros agentes terapéuticos o terapias para degeneración macular. En
todo caso, sin importar cuál sea la enfermedad, trastorno o
afección que está siendo tratada, el beneficio total experimentado
por el paciente puede ser simplemente aditivo de los dos agentes
terapéuticos o el paciente puede experimentar un beneficio
sinérgico.
\newpage
Los ejemplos específicos, no limitativos de
posibles terapias de combinación incluyen el uso de por lo menos un
compuesto de la Formula (I) con inductores de óxido nítrico (NO),
estatinas, fosfolípidos con carga negativa, antioxidantes,
minerales, agentes antiinflamatorios, agentes antiangiogénicos,
inhibidores de metaloproteinasa matriz, y carotenoides. En varios
casos, los agentes de combinación adecuados pueden estar
comprendidos en múltiples categorías (únicamente a título de
ejemplo, la luteína es un antioxidante y un carotenoide). Además,
los compuestos de la Formula (I) pueden ser administrados también
con agentes adicionales que pueden proporcionar beneficio al
paciente, incluyendo sólo A título de ejemplo ciclosporina A.
Además, los compuestos de la Formula (I) pueden
ser usados también en combinación con procedimientos que pueden
proporcionar beneficio adicional o sinérgico al paciente,
incluyendo, únicamente a título de ejemplo, el uso de reoféresis
extracorporea (conocida también como filtración diferencial de
membrana), el uso de telescopios en miniatura implantables, foto-
coagulación de drusas con láser, y terapia de microestimulación.
Se ha mostrado que el uso de antioxidantes
beneficia a los pacientes con degeneraciones y distrofias maculares.
Ver, p. ej., Arch. Ophthalmol., 119: 1417-36
(2001); Sparrow, y col., J. Biol. Chem.,
278:18207-13 (2003). Los ejemplos de antioxidantes
adecuados que podrían usarse combinados con por lo menos un
compuesto que tiene la estructura de la Formula (I) incluyen
vitamina C, vitamina E, betacaroteno y otros carotenoides, coenzima
Q,
4-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil-piperidina-N-oxilo
(conocido también como Tempol), luteína, hidroxitolueno butilado,
resveratrol, un análogo de trolox
(PNU-83836-E), y extracto de
arándano.
Se ha mostrado también que el uso de ciertos
minerales beneficia a pacientes con degeneraciones y distrofias
maculares. Ver, p. ej. Arch. Ophthalmol., 119:
1417-36 (2001). Los ejemplos de minerales adecuados
que podrían usarse combinados con por lo menos un compuesto que
tiene la estructura de la Formula (I) incluyen minerales que
contienen cobre, tales como óxido cúprico (únicamente a título de
ejemplo); minerales que contienen zinc, tal como óxido de zinc
(únicamente a título de ejemplo); y compuestos que contienen
selenio.
Se ha mostrado que el uso de ciertos
fosfolípidos con carga negativa beneficia a pacientes con
degeneraciones y distrofias maculares. Ver, p. ej., Shaban &
Richter, Biol. Chem., 383:537-45 (2002);
Shaban, y col., Exp. Eye Res., 75:99-108
(2002). Los ejemplos de fosfolípidos con carga negativa adecuados
que podrían ser usados en combinación con por lo menos un compuesto
que tiene la estructura de la Fórmula (I) incluyen cardiolipina y
fosfatidilglicerol. Los fosfolípidos con carga positiva y/o neutra
pueden proporcionar también beneficio a pacientes con
degeneraciones y distrofias maculares cuando se usan en combinación
con compuestos que tienen la estructura de la Fórmula (I).
El uso de ciertos carotenoides ha sido
correlacionado con el mantenimiento de la fotoprotección necesaria
en células de fotorreceptores. Los carotenoides son pigmentos
naturales del grupo de los terpenoides que van del amarillo al rojo
y pueden encontrarse en plantas, algas, bacterias, y en ciertos
animales, tales como aves y mariscos. Los carotenoides constituyen
una gran clase de moléculas en la que se han identificado más de
600 carotenoides naturales. Los carotenoides incluyen hidrocarburos
(carotenos) y sus derivados alcohólicos oxigenados (xantofilas).
Ellos incluyen actinioeritrol, astaxantina, cantaxantina,
capsantina, capsorubina,
\beta-8'-apo-carotenal
(apo-carotenal),
\beta-12'-apo-carotenal,
\mu-caroteno, \beta-caroteno,
"caroteno" (una mezcla de \alpha- y
\beta-carotenos),
\gamma-carotenos,
\beta-criptoxantina, luteína, licopeno,
violeritrina, zeaxantina, y ésteres de miembros de estos que
contienen hidroxilo o carboxilo. Muchos de los carotenoides se
presentan en la naturaleza como formas cis- y transisómeras, en
tanto que los compuestos sintéticos son frecuentemente mezclas
racémicas.
En humanos, la retina acumula en forma selectiva
principalmente dos carotenoides: zeaxantina y luteína. Se piensa
que estos dos carotenoides ayudan a proteger la retina porque son
potentes antioxidantes y absorben luz azul. Estudios realizados con
codornices establecen que grupos criados con dietas deficientes en
carotenoides tenían retinas con bajas concentraciones de zeaxantina
y padecían de un daño severo debido a la luz, evidenciado por un
número muy alto de células de fotorreceptores que han experimentado
apoptosis, mientras que el grupo con altas concentraciones de
zeaxantina tenía un daño mínimo. Los ejemplos de carotenoides
adecuados para combinar con por lo menos un compuesto que tiene la
estructura de la Fórmula (I) incluyen luteína y zeaxantina, así como
también cualquiera de los carotenoides mencionados
anteriormente.
Los inductores de óxido nítrico adecuados
incluyen compuestos que estimulan NO endógeno o elevan los niveles
del factor endógeno relajante derivado del endotelio (EDRF) in
vivo o son sustratos para la óxido nítrico sintasa. Tales
compuestos incluyen, p. ej., L-arginina,
L-homoarginina, y N-hidroxi-
L-arginina, incluyendo sus análogos nitrosados y
nitrosilados (p. ej., L-arginina nitrosada,
L-arginina nitrosilada,
N-hidroxi-L-arginina
nitrosada,
N-hidroxi-L-arginina
nitrosilada, L-homoarginina nitrosada y
L-homoarginina nitrosilada), precursores de
L-arginina y/o sus sales fisiológicamente
aceptables, incluyendo, por ejemplo, citrulina, ornitina, glutamina,
lisina, polipéptidos que comprenden por lo menos uno de estos
aminoácidos, inhibidores de la enzima arginasa (p. ej.,
N-hidroxi-L-arginina
y ácido
2(S)-amino-6-boronohexanoico)
y los sustratos para óxido nítrico sintasa, citoquinas, adenosina,
bradiquinina, calreticulina, bisacodilo, y fenoftaleína. EDRF es un
factor de relajación vascular secretado por el endotelio, y ha sido
identificado como óxido nítrico o un derivado de éste estrechamente
relacionado (Palmer y col., Nature,
327:524-526 (1987); Ignarro y col., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 84:9265-9269 (1987)).
Las estatinas sirven como agentes para bajar
lípidos y/o inductores adecuados de óxido nítrico. Además, se ha
demostrado una relación entre el uso de estatina y la demora en el
inicio o desarrollo de la degeneración macular. G. McGwin, y col.,
British Journal of Ophthalmology, 87:1121-25
(2003). Las estatinas pueden proporcionar así beneficio a un
paciente que padece de una afección oftálmica (tal como las
degeneraciones y distrofias maculares, y las distrofias retinales)
cuando se administran en combinación con compuestos de la Fórmula
(I). Las estatinas adecuadas incluyen, únicamente a título de
ejemplo, rosuvastatina, pitivastatina, simvastatina, pravastatina,
cerivastatina, mevastatina, velostatina, fluvastatina, compactina,
lovastatina, dalvastatina, fluindostatina, atorvastatina,
atorvastatina cálcica (que es la sal hemicálcica de atorvastatina),
y dihidrocompactina.
Los agentes antiinflamatorios adecuados con los
cuales se pueden usar los compuestos de la Fórmula (I) incluyen,
únicamente a título de ejemplo, aspirina y otros salicilatos,
cromolina, nedocromil, teofilina, zileuton, zafirlukast,
montelukast, pranlukast, indometacina, e inhibidores de
lipoxigenasa; fármacos antiinflamatorios no esteroides (NSAIDs)
(tales como ibuprofeno y naproxin); prednisona, dexametasona,
inhibidores de ciclooxigenasa (esto es, inhibidores de
COX-1 y/o COX-2 tales como
Naproxen^{TM}, o Celebrex^{TM}); estatinas (únicamente a título
de ejemplo, rosuvastatina, pitivastatina, simvastatina,
pravastatina, cerivastatina, mevastatina, velostatina,
fluvastatina, compactina, lovastatina, dalvastatina, fluindostatina,
atorvastatina, atorvastatina cálcica (que es la sal hemicálcica de
atorvastatina), y dihidrocompactina); y esteroides disociados.
Los inhibidores apropiados de metaloproteinasas
matriz (MMP) pueden ser administrados también en combinación con
compuestos de la Fórmula (I) a fin de tratar afecciones o síntomas
oftálmicos asociados con degeneraciones maculares o retinales. Se
sabe que las MMP hidrolizan la mayor parte de los componentes de la
matriz extracelular. Estas proteinasas desempeñan un papel central
en muchos procesos biológicos tales como remodelación normal de
tejidos, embriogénesis, curación de heridas y angiogénesis. Sin
embargo, en muchos estados de enfermedad se ha observado una
expresión excesiva de MMP, incluyendo degeneración macular. Se han
identificado muchas MMP, de las cuales la mayoría son zinc
endopeptidasas de múltiples dominios. Se conoce una cantidad de
inhibidores de metaloproteinasas (ver, por ejemplo la reseña de
inhibidores de MMP hecha por Whittaker M., y col., Chemical
Reviews 99(9):2735-2776 (1999)). Los
ejemplos representativos de inhibidores de MMP incluyen Inhibidores
de Tejidos de metaloproteinasas (TIMP) (p. ej.,
TIMP-1, TIMP-2,
TIMP-3, o TIMP-4),
\alpha_{2}-macroglobulina, tetraciclinas (p.
ej., tetraciclina, minociclina, y doxiciclina), hidroxamatos (p.
ej., BATIMASTAT, MARIMISTAT y TROCADE), quelantes (p. ej., EDTA,
cisteína, acetilcisteína, D-penicilamina, y sales de
oro), fragmentos sintéticos de MMP, succinil mercaptopurinas,
fosfonamidatos, y ácidos hidroxamínicos. Los ejemplos de inhibidores
de MMP que pueden usarse en combinación con compuestos de la
Fórmula (I) incluyen, únicamente a título de ejemplo, cualquiera de
los inhibidores mencionados anteriormente.
Se ha mostrado también que el uso de fármacos
antiangiogénicos o anti-VEGF proporciona beneficios
a pacientes con degeneraciones y distrofias maculares. Los Ejemplos
de fármacos antiangiogénicos o anti-VEGF que podrían
usarse en combinación con al menos un compuesto que tenga la
estructura de la Fórmula (I) incluyen Rhufab V2 (Lucentis^{TM}),
Triptofanil-tRNA sintetasa (TrpRS), Eye001 (Aptámero
PEGilado Anti-VEGF), escualamina, Retaane^{TM} 15
mg (acetato de anecortave para suspensión de depósito; Alcon, Inc.),
Profármaco Combretastatina A4 (CA4P), Macugen^{TM},
Mifeprex^{TM} (mifepristona-ru486), triamcinolona
acetonida subtenon, triamcinolona acetonida cristalina
intravitreal, Prinomastat (AG3340- inhibidor sintético de
metaloproteinasa matriz, Pfizer), fluocinolona acetonida
(incluyendo implante intraocular de fluocinolona, Bausch &
Lomb/Control Delivery Systems), inhibidores de VEGFR (Sugen), y
VEGF-Trap (Regeneron/Aventis).
Otras terapias farmacéuticas que han sido
utilizadas para aliviar el deterioro visual pueden ser usadas en
combinación con por lo menos un compuesto de la Fórmula (I). Tales
tratamientos incluyen pero no están limitados a agentes tales como
Visudyne^{TM} con el uso de un láser no térmico, PKC 412, Endovion
(NeuroSearch A/S), factores neurotróficos, los que incluyen A
título de ejemplo el factor neurotrófico derivado de glías y el
factor neurotrófico ciliar, diatazem, dorzolamida, Phototrop,
9-cis-retinal, medicación ocular
(incluyendo terapia Eco) que incluye inhibidores de yoduro de
fosfolina o echotiofato o anhidrasa carbónica,
AE-941 (AEterna Laboratories, Inc.),
Sirna-027 (Sirna Therapeutics, Inc.), pegaptanib
(NeXstar Pharmaceuticals/Gilead Sciences), neurotrofinas (que
incluyen únicamente a título de ejemplo, NT-4/5,
Genentech), Cand5 (Acuity Pharmaceuticals), ranibizumab
(Genentech), INS-37217 (Inspire Pharmaceuticals),
antagonistas de integrina (que incluyen aquellos de Jerini AG y
Abbott Laboratories), EG-3306 (Ark Therapeutics
Ltd.), BDM-E (BioDiem Ltd.), talidomida (como es
usada, por ejemplo, por EntreMed, Inc.),
cardiotrofina-I (Genentech),
2-metoxiestradiol (Allergan/Oculex), DL8234 (Toray
Industries), NTC-200 (Neurotech), tetratiomolibdato
(Universidad de Michigan), LYN-002 (Lynkeus
Biotech), compuesto de microalgas (Aquasearch/Albany, Mera
Pharmaceuticals), D-9120 (Celltech Group plc),
ATX-S10 (Hamamatsu Photonics),
TGF-beta 2 (Genzyme/Celtrix), inhibidores de
tirosina quinasa (Allergan, SUGEN, Pfizer),
NX-278-L (NeXstar
Pharmaceuticals/Gilead Sciences), Opt-24 (OPTIS
France SA), neuroprotectores ganglionares de células retinales
(Cogent Neurosciences), derivados de N-nitropirazol
(Texas A&M University System), KP-102 (Krenitsky
Pharmaceuticals), y ciclosporina A. Ver publicación de solicitud de
patente US nº 20040092435.
En todo caso, los múltiples agentes terapéuticos
(uno de los cuales es uno de los compuestos descritos en la
presente) pueden ser administrados en cualquier orden o aún en forma
simultánea. Si se hace simultáneamente, los múltiples agentes
terapéuticos pueden ser proporcionados en una sola forma unificada,
o en múltiples formas (únicamente a título de ejemplo, como una
sola píldora o como dos píldoras separadas). Uno de los agentes
terapéuticos puede ser proporcionado en múltiples dosis, o ambos
pueden ser proporcionados en múltiples dosis. Si no se administran
en forma simultánea, el tiempo entre las múltiples dosis puede
variar de más de cero semanas a menos de cuatro semanas. Además,
los métodos de combinación, las composiciones y formulaciones no
deben estar limitadas al uso de sólo dos agentes; nosotros
contemplamos el uso de múltiples combinaciones terapéuticas.
únicamente a título de ejemplo, un compuesto que tiene la estructura
de la Fórmula (I) puede ser provisto de por lo menos un
antioxidante y por lo menos un fosfolípido con carga negativa; o un
compuesto que tenga la estructura de la Fórmula (I) puede ser
provisto de por lo menos un antioxidante y por lo menos un inductor
de la producción de óxido nítrico; o un compuesto que tenga la
estructura de la Fórmula (I) puede ser provisto por lo menos de un
inductor de la producción de óxido nítrico y por lo menos un
fosfolípido con carga negativa, y así sucesivamente.
Además los compuestos de la Fórmula (I) pueden
ser usados también en combinación con procedimientos que pueden
proporcionar un beneficio adicional o sinérgico al paciente. Los
procedimientos conocidos, propuestos o que se considera que alivian
un deterioro visual incluyen "translocación retinal limitada",
terapia fotodinámica (que incluye, únicamente a título de ejemplo,
PDT dirigida a receptores, Bristol-Myers Squibb,
Co.; porfimer sódico para inyección con PDT; verteporfin, QLT Inc.;
rostaporfin con PDT, Miravent Medical Technologies; talaporfin
sódico con PDT, Nippon Petroleum; motexafin lutetium, Pharmacyclics,
Inc.), oligonucleótidos antisentido (que incluyen, a título de
ejemplo, productos probados por Novagali Pharma SA e
ISIS-13650, Isis Pharmaceuticals), fotocoagulación
con láser, tratamiento de drusas con láser, cirugía del agujero
macular, cirugía de translocación macular, telescopios en miniatura
implantables, angiografía Phi\sim-Motion (conocida
también como terapia con microláser y tratamiento de vasos
alimentadores), terapia con haz de protones, terapia de
microestimulación, cirugía de desprendimiento de retina y vítrea,
banda escleral, cirugía submacular, termoterapia transpupilar,
terapia de fotosistema I, uso de RNA interferencia (RNAi),
reoféresis extracorpórea (conocida también como filtración
diferencial de membrana y reoterapia), implante de microchips,
terapia con células madres, terapia de reemplazo génico, terapia
génica con ribozimas (que incluye terapia génica para el elemento de
respuesta a la hipoxia, Oxford Biomedica; Lentipak, Genetix;
terapia génica con PDEF, GenVec), trasplante de células de
fotorreceptores/retinales (que incluye células trasplantables del
epitelio retinal, Diacrin, Inc.; trasplante de células retinales,
Cell Genesys, Inc.), y acupuntura.
Otras combinaciones que pueden usarse para
beneficiar a un individuo incluyen el uso de pruebas genéticas para
determinar si ese individuo es portador de un gen mutante del que se
sabe que está correlacionado con ciertas afecciones oftálmicas.
Únicamente a título de ejemplo, se piensa que hay defectos en el gen
humano ABCA4 asociados con cinco fenotipos retinales
distintos que incluyen la enfermedad de Stargardt, distrofia de
conos y bastones, degeneración macular relacionada con la edad y
retinitis pigmentosa. Ver, p. ej., Allikmets y col.,
Science, 277:1805-07 (1997); Lewis y col.,
Am. Hum. Genet., 64:422-34 (1999); Stone y
col., Nature Genetics, 20:328-29 (1998);
Allikmets, Am. J. Hum. Gen., 67:793-799
(2000); Klevering, y col., Ophthalmology,
111:546-553 (2004). Además, una forma autosómica
dominante de la enfermedad de Stargardt es causada por mutaciones
en el gen ELOV4. Ver Karan, y col., Proc. Natl. Acad.
Sci. (2005). Se espera que lospacientes que poseen cualquiera
de estas mutaciones encuentren un beneficio terapéutico y/o
profiláctico en los métodos descritos en la presente memoria.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos de la Fórmula (I) pueden ser
sintetizados usando técnicas sintéticas convencionales conocidas
por los expertos en la materia o usando métodos conocidos en la
técnica en combinación con los métodos descritos en la presente
memoria. Ver, por ejemplo, la publicación de la solicitud de patente
US nº 2004/0102650;Um, S.J., y col., Chem. Pharm. Bull.,
52:501-506 (2004). Además, varios de los compuestos
de la Fórmula (I), tal como fenretinida, pueden ser adquiridos de
diversos proveedores comerciales. Como una guía adicional, se pueden
utilizar también los métodos sintéticos siguientes.
\vskip1.000000\baselineskip
Se proporcionan ejemplos seleccionados de
enlaces covalentes y los grupos funcionales precursores que los
producen en la Tabla titulada "Ejemplos de Enlaces Covalentes y
sus Precursores". Los grupos funcionales precursores son
mostrados como grupos electrofílicos y grupos nucleofílicos. El
grupo funcional en la sustancia orgánica puede ser unido
directamente o puede ser unido por medio de cualquier espaciador o
enlazador útil como se define a continuación.
En general, los electrófilos de carbono son
susceptibles a ser atacados por nucleófilos complementarios,
incluyendo nucleófilos de carbono, en donde un nucleófilo atacante
lleva un par de electrones al electrófilo de carbono a fin de formar
un nuevo enlace entre el nucleófilo y el electrófilo de carbono.
Los nucleófilos de carbono adecuados incluyen
reactivos de alquilo, alquenilo, arilo y alquinilo Grignard,
organolitio, organozinc, alquil-, alquenil-, aril- y
alquinil-estaño (organoestannanos), reactivos de
alquil-, alquenil-, aril- y alquinil-borano
(organoboranos y organoboronatos) pero no están limitados a estos;
estos nucleófilos de carbono tienen la ventaja de ser cinéticamente
estables en agua o solventes orgánicos polares. Otros nucleófilos
de carbono incluyen reactivos de ílidos de fósforo, enol y enolato;
estos nucleófilos de carbono tienen la ventaja de ser relativamente
fáciles de generar de precursores muy conocidos por los expertos en
la materia de la química orgánica sintética. Cuando los nucleófilos
de carbono son usados en conjunto con electrófilos de carbono,
engendran nuevos enlaces carbono-carbono entre el
nucleófilo de carbono y el electrófilo de carbono.
Los nucleófilos que no son de carbono y son
adecuados para acoplarse a electrófilos de carbono incluyen pero no
están limitados a aminas primarias y secundarias, tioles, tiolatos y
tioéteres, alcoholes, alcóxidos, azidas, semicarbazidas y
similares. Cuando se usa estos nucleófilos que no son de carbono en
conjunto con electrófilos de carbono, generan típicamente enlaces
de heteroátomos (C-X-C), donde X es
un heteroátomo, tal como oxígeno o nitrógeno.
El término "grupo protector" se refiere a
fracciones químicas que bloquean algunas o todas las fracciones
reactivas e impiden que tales grupos participen en reacciones
químicas hasta que se extraiga el grupo protector. Se prefiere que
cada grupo protector pueda ser extraído por un medio diferente. Los
grupos protectores que son escindidos en condiciones de reacción
totalmente diferentes llenan el requisito de extracción
diferenciada. Los grupos protectores pueden ser extraídos por
ácidos, bases e hidrogenólisis. Los grupos tales como tritilo,
dimetoxitritilo, acetal y t-butildimetilsililo son
lábiles a los ácidos y pueden usarse para proteger fracciones
reactivas carboxi e hidroxi en presencia de grupos amino protegidos
con grupos Cbz, los que pueden ser extraídos por hidrogenólisis, y
grupos Fmoc, que son lábiles a las bases. Las fracciones reactivas
de ácido carboxílico e hidroxi pueden ser bloqueadas con grupos
lábiles a las bases tales como, sin limitación, metilo, etilo y
acetilo en presencia de aminas bloqueadas con grupos lábiles a los
ácidos tales como carbamato de t-butilo o con
carbamatos que son estables tanto a ácidos como bases pero que
pueden ser extraídos hidrolíticamente.
Las fracciones reactivas de ácido carboxílico e
hidroxi pueden ser bloqueadas también con grupos protectores que
pueden ser extraídos hidrolíticamente tal como el grupo bencilo,
mientras que los grupos amina capaces de unir hidrógeno con ácidos
pueden ser bloqueados con grupos lábiles a las bases tal como Fmoc.
Las fracciones reactivas de ácidos carboxílicos pueden ser
protegidas por conversión a derivados de ésteres simples como se
dan ejemplos en la presente, o pueden ser bloqueados con grupos
protectores que pueden ser extraídos oxidativamente tal como
2,4-dimetoxibencilo, en tanto que los grupos amino
coexistentes pueden ser bloqueados con carbamatos de sililo lábiles
a fluoruro.
Los grupos bloqueadores de alilo son útiles en
presencia de grupos protectores de ácidos y bases ya que los
primeros son estables y pueden ser extraídos posteriormente por
catalizadores metálicos o ácidos pi. Por ejemplo, un ácido
carboxílico bloqueado con alilo puede ser desprotegido con una
reacción catalizada por Pd_{0} en presencia de carbamato de
t-butilo lábil al ácido, o de grupos protectores de
amina de acetato lábiles a la base. Una forma más de grupo
protector es una resina a la que se puede unir un compuesto o
intermediario. Mientras el residuo esté unido a la resina, ese
grupo funcional está bloqueado y no puede reaccionar. Una vez
liberado de la resina, el grupo funcional está disponible para
reaccionar.
Típicamente, los grupos bloqueadores/protectores
pueden seleccionarse de entre:
\vskip1.000000\baselineskip
Otros grupos protectores se describen en la obra
de Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3a. Ed.,
John Wiley & Sons, Nueva York, N.Y. 1999, que se incorpora como
referencia en su totalidad a la presente memoria.
\vskip1.000000\baselineskip
Los siguientes ejemplos proporcionan métodos
ilustrativos para probar la eficacia y seguridad de los compuestos
de la Fórmula (I). Estos ejemplos se proporcionan únicamente a
título ilustrativo y no limitativo del alcance de las
reivindicaciones proporcionadas en la presente memoria.
\vskip1.000000\baselineskip
Detección de Degeneración Macular o
Retinal. La identificación de vasos sanguíneos anormales en el
ojo puede realizarse con un angiograma. Esta identificación puede
ayudar a determinar qué pacientes son candidatos para el uso de una
sustancia candidata u otro método de tratamiento para impedir o
prevenir una mayor pérdida de visión. Los angiogramas pueden ser
útiles también para un seguimiento del tratamiento, así como también
para una evaluación futura de cualquier nuevo desarrollo de los
vasos.
Un angiograma con fluoresceína (angiografía con
fluoresceína, angioscopía con fluoresceína) es una técnica para
visualizar la circulación coroidal y retinal en la parte posterior
del ojo. Se inyecta tintura de fluoresceína por vía intravenosa
seguida por fotografía de múltiples imágenes (angiografía,
evaluación oftalmoscópica (angioscopía), o por una angiografía de
retina de Heidelberg (un sistema láser de exploración confocal).
Además, la retina puede ser examinada por OCT, un modo no invasivo
para obtener imágenes de alta resolución de la retina en sección
transversal. Los angiogramas con fluoresceína se usan para evaluar
una amplia gama de enfermedades retinales y coroidales analizando
las fugas o el posible daño de los vasos sanguíneos que alimentan la
retina. Han sido usados también para evaluar anormalidades del
nervio óptico y del iris por Berkow y col., Am. J.
Ophthalmol. 97:143-7 (1984).
De una manera similar, los angiogramas que
emplean verde de indocianina pueden usarse para visualizar la
circulación en la parte posterior del ojo. Aunque la fluoresceína
es más eficiente para estudiar la circulación retinal, la
indocianina es mejor para observar la capa más profunda de los vasos
sanguíneos de la coroides. El uso de angiografía con indocianina es
útil cuando no se puede observar la neovascularización sólo con
tintura de fluoresceína.
Las dosis apropiadas para humanos de los
compuestos que tienen la estructura de la Fórmula (I) serán
determinadas usando un estudio convencional de graduación de dosis.
Sin embargo, se dispone de ciertas pautas en estudios sobre el uso
de tales compuestos en el tratamiento del cáncer. Por ejemplo, se ha
administrado una dosis de 4800 mg/m^{2} de fenretinida, que es un
compuesto que tiene la estructura de la Fórmula (I), a pacientes
con diversos cánceres. Tales dosis fueron administradas tres veces
al día y las toxicidades observadas fueron mínimas. Sin embargo, la
dosis recomendada para tales pacientes fue de 900 mg/m^{2} basada
en un techo observado sobre niveles plasmáticos obtenibles. Además
la biodisponibilidad de fenretinida es aumentada con las comidas,
siendo la concentración plasmática tres veces mayor después de
comidas con alto contenido de grasas que después de comidas con
carbohidratos.
La observación de ceguera nocturna ocasional en
humanos nos sugiere un deterioro significativo de la regeneración
de rodopsina con dosis terapéuticas normales. Basándose en estos
datos, nosotros proponemos que las concentraciones inhibidoras de
fenretinida en tejido del ERP se logran con dosis similares, o
posiblemente menores que las dosis terapéuticas para el tratamiento
del cáncer en humanos.
\vskip1.000000\baselineskip
Como preparación a las pruebas, todos los
pacientes humanos son sometidos a un examen oftalmológico de rutina
que incluye angiografía con fluoresceína, medición de agudeza
visual, parámetros electrofisiológicos y parámetros bioquímicos y
reológicos. Los criterios de inclusión son los siguientes: agudeza
visual entre 20/160 y 20/32 por lo menos en un ojo y señales de DMA
tales como drusas, atrofia areolar, aglutinación del pigmento,
desprendimiento del epitelio pigmentado o neovascularización
subretinal. Las pacientes embarazadas o que amamantan activamente a
sus hijos quedan excluidas del estudio.
Doscientos pacientes humanos con diagnóstico de
degeneración macular o que tienen formaciones progresivas de A2E,
lipofuscina o drusas en sus ojos, son divididos en un grupo de
control de aproximadamente 100 pacientes y un grupo experimental de
100 pacientes. La fenretinida es administrada diariamente al grupo
experimental. Se administra un placebo al grupo de control según el
mismo régimen con el que se administra la fenretinida al grupo
experimental.
La administración de fenretinida o de placebo a
un paciente se puede realizar por vía oral o parenteral en
cantidades efectivas para impedir el desarrollo o reincidencia de la
degeneración macular. Las cantidades de la dosis efectiva están en
el intervalo de aproximadamente 1-4000 mg/m^{2}
hasta tres veces al día.
Un método para medir el avance de la
degeneración macular en los grupos de control y experimental es la
agudeza visual mejor corregida medida por los gráficos del estudio
de tratamiento temprano de la retinopatía diabética (Early
Treatment Diabetic Retinopathy Study (ETDRS)) (Lighthouse, Long
Island, NY) usando una evaluación lineal y el método de elección
forzada (Ferris y col., Am J Ophthalmol,
94:97-98 (1982)). La agudeza visual se registra en
logMAR. El cambio de una línea en el gráfico de ETDRS es equivalente
a 0,1 logMAR. Otros métodos típicos para medir el avance de la
degeneración macular en los grupos de control y experimental
incluyen el uso de exámenes de campo visual, los que incluyen un
examen de campo visual de Humphrey y medición/monitoreo de
espectros de autofluorescencia o de absorción de
N-retinilideno-fosfatidil-etanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-fosfatidil-etanolamina,
N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-etanolamina,
y/o N-retinilideno-fosfatidiletanolamina, en
el ojo del paciente pero no están limitados a estos. La
autofluorescencia se mide usando una variedad de equipos que
incluyen un oftalmoscopio láser confocal de barrido, pero no están
limitados a éste. Ver Bindewald, y col., Am J Ophthalmol.,
137:556-8 (2004).
Otros métodos para medir el avance de la
degeneración macular en los grupos de control y experimental
incluyen tomar fotografías de fondo, observar cambios en la
autofluorescencia a lo largo del tiempo usando una angiografía de
retina Heidelberg (o alternativamente, técnicas descritas en M.
Hammer, y col., Am J Ophthalmologe 7 de abril de 2004[ pubE
anterior a patente]) y tomar angiogramas con fluoresceína en la
línea de base, tres, seis, nueve y doce meses en las visitas de
seguimiento. La documentación de cambios morfológicos incluye
cambios en (a) tamaño, carácter y distribución de drusas; (b)
desarrollo y avance de la neovascularización de la coroides; (c)
otros cambios o anormalidades del fondo en el intervalo; (d)
velocidad de lectura y/o agudeza de lectura; (e) tamaño del
escotoma; o (f) el tamaño y la cantidad de lesiones de atrofia
geográfica. Además, se administran opcionalmente la prueba de
retícula de Amsler y la prueba de colores.
Para evaluar estadísticamente la mejoría visual
durante la administración de fármacos, los examinadores usan el
gráfico de ETDRS (logMAR) y un protocolo normalizado de refracción y
agudeza visual. La evaluación del promedio de la agudeza visual
mejor corregida (BCVA) del ETDRS (logMAR) desde la línea de base a
través de las visitas de las que se dispone en intervalos después
del tratamiento, puede ayudar a determinar la mejoría visual
estadística.
Para evaluar el ANOVA (análisis de varianza
entre grupos) entre el grupo de control y experimental, los cambios
promedios en la agudeza visual de ETDRS (logMAR) desde la línea de
base a través de las visitas de las que se dispone en intervalos
después del tratamiento son comparados usando el ANOVA en dos grupos
con análisis de mediciones repetidas con covarianza no estructurada
usando el Soporte Lógico SAS/STAT (SAS Institutes Inc, Cary, North
Carolina).
La evaluación de toxicidad después del inicio
del estudio, incluye controles cada tres meses durante el año
siguiente, cada cuatro meses el año después y posteriormente cada
seis meses. Los niveles plasmáticos de fenretinida y su metabolito
N-(4-metoxifenil)-retinamida
pueden ser evaluados también durante estas visitas. La evaluación de
toxicidad incluye a pacientes que usan fenretinida así como también
a los pacientes en el grupo de control.
\vskip1.000000\baselineskip
El mismo diseño de protocolo, que incluye
preparación a las pruebas, protocolos de evaluación de
administración, dosificación y toxicidad, que se describen en el
Ejemplo 1, se usa también para probar la eficacia de los compuestos
de la Fórmula (I) para reducir o limitar de otro modo la producción
de A2E en el ojo de un paciente.
Los métodos para medir o monitorear la formación
de A2E incluyen el uso de mediciones autofluorescentes de
N-retinilideno-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina,
N-retinilideno-N-retinilo-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-etanolamina,
y/o N-retinilideno-fosfatidiletanolamina, en
el ojo del paciente. La autofluorescencia se mide usando una
variedad de equipos que incluyen un oftalmoscopio confocal láser de
barrido, pero no están limitado a éste, ver Bindewald, y
col., Am J Ophthalmol., 137:556-8 (2004), o
las técnicas de medición de espectros de autofluorescencia o
absorción indicados en el Ejemplo 1. Otras pruebas que pueden ser
usadas como indicadores suplentes de la eficacia de un tratamiento
determinado incluyen el uso de exámenes de agudeza visual y de
campo visual, exámenes de velocidad de lectura y/o agudeza de
lectura, mediciones del tamaño y cantidad de escotomas y/o lesiones
atróficas geográficas como se describe en el Ejemplo 1. Se usan los
análisis estadísticos descritos en el Ejemplo 1.
\vskip1.000000\baselineskip
El mismo diseño de protocolo, que incluye la
preparación a las pruebas y los protocolos de evaluación de
administración, dosificación y toxicidad que se describen en el
Ejemplo 1, se usa también para probar la eficacia de los compuestos
de la Fórmula (I) para reducir o limitar de otro modo la producción
de lipofuscina en el ojo de un paciente. Se pueden usar también los
análisis estadísticos descritos en el Ejemplo 1.
Las pruebas que pueden ser usadas como
indicadores suplentes de la eficacia de un tratamiento determinado
incluyen el uso de exámenes de agudeza visual y de campo visual,
exámenes de velocidad de lectura y/o agudeza de lectura, mediciones
del tamaño y cantidad de escotomas y/o lesiones atróficas
geográficas, y la medición/monitoreo de la autofluorescencia de
ciertos compuestos en el ojo del paciente, como se describe en el
Ejemplo 1.
\vskip1.000000\baselineskip
El mismo diseño de protocolo, que incluye la
preparación a las pruebas y los protocolos de evaluación de
administración, dosificación y toxicidad que se describen en el
Ejemplo 1, se usa también para probar la eficacia de los compuestos
de la Fórmula (I) para reducir o limitar de otro modo la producción
de drusas en el ojo de un paciente. Se pueden usar también los
análisis estadísticos descritos en el Ejemplo 1.
Los métodos para medir formaciones progresivas
de drusas en los grupos de control y experimental incluyen tomar
fotografías de fondo y angiogramas con fluoresceína en la línea de
base a los tres, seis, nueve y doce meses en las visitas de
seguimiento. La documentación de los cambios morfológicos puede
incluir cambios en (a) tamaño, carácter y distribución de drusas;
(b) desarrollo y avance de la neovascularización de la coroides; y
(c) otros cambios o anormalidades del fondo en el intervalo. Otras
pruebas que pueden ser usadas como indicadores suplentes de la
eficacia de un tratamiento determinado incluyen el uso de exámenes
de agudeza visual y de campo visual, exámenes de velocidad de
lectura y/o agudeza de lectura, mediciones del tamaño y cantidad de
escotomas y/o lesiones atróficas geográficas y la medición/monitoreo
de la autofluorescencia de ciertos compuestos en el ojo del
paciente, como se describe en el Ejemplo 1.
\vskip1.000000\baselineskip
Se cree que los defectos en el gen humano
ABCA4 están asociados con cinco diferentes fenotipos
retinales que incluyen la enfermedad de Stargardt, distrofia de
conos y bastones, degeneración macular relacionada con la edad (en
forma seca y húmeda) y retinitis pigmentosa. Ver por ej., Allikmets
y col., Science, 277:1805-07 (1997); Lewis y
col., Am. J. Hum. Genet., 64:422-34 (1999);
Stone y col., Nature Genetics, 20:328-29
(1998); Allikmets; Am. J. Hum. Gen.,
67:793-799 (2000); Klevering, y col.,
Ophthalmology, 111:546-553 (2004). Además una
forma autosómica dominante de la enfermedad de Stargardt es
producida por mutaciones en el gen ELOV4. Ver Karan, y col.,
Proc. Natl. Acad. Sci.(2005). Se puede diagnosticar que los
pacientes tienen la enfermedad de Stargardt por cualquiera de los
siguientes ensayos: (a) Una estrategia de detección de mutación de
secuenciación directa que puede involucrar la secuenciación de todos
los exones y las regiones de intrones que los flanquean de
ABCA4 o ELOV4 para la(s) mutación(es) de
secuencias; (b) Análisis genómico Southern; (c) Ensayos de
microarrays que incluyen todas las variantes conocidas de
ABCA4 o ELOV4; y (d) Análisis mediante espectrometría
de masa en tandem con cromatografía líquida acoplado con análisis
inmunocitoquímico usando anticuerpos y análisis Western. Las
fotografías de fondo, angiogramas con fluoresceína e imágenes de
oftalmoscopio láser de barrido junto con la historia del paciente y
la de su familia pueden anticipar y/o confirmar el diagnóstico.
\vskip1.000000\baselineskip
La dosis óptima de los compuestos de la Formula
(I) para bloquear la formación de A2E en ratones
abca4^{-}/^{-} puede ser determinada usando un estudio
de graduación de la dosis estándar. Un enfoque ilustrativo,
utilizando fenretinida que es un compuesto que tiene la estructura
de la Fórmula (I), se presenta más adelante. Sin embargo, se pueden
utilizar enfoques similares para otros compuestos que tienen la
estructura de la Fórmula (I).
Los efectos de la fenretinida en el
todo-trans-retinal en retinas de ratones adaptados a la luz
serían determinados de preferencia en dosis que equiparen la dosis
terapéutica humana. El método preferido incluye tratar a los
ratones con una dosis única intraperitoneal en la mañana. Se puede
requerir aumentar la frecuencia de las inyecciones para mantener
los niveles reducidos de todo-trans-retinal en la retina
durante todo el día.
Ratones con inactivación génica de
ABCA4 . ABCA4 codifica la proteína rim (RmP), una
transportadora de casete que se une a ATP (ABC) en los discos del
segmento externo de los fotorreceptores de bastones y conos. El
sustrato transportado por Rmp es desconocido. Los ratones generados
por una mutación de inactivación génica, en el gen abca4,
ver Weng y col., Cell 98:13-23 (1999),
son útiles para el estudio de la función de RmP así como también
para un escrutinio in vivo de la efectividad de las
substancias candidatas. Estos animales manifiestan el fenotipo
ocular complejo: (i) degeneración lenta de fotorreceptores, (ii)
retraso en la recuperación de la sensibilidad de los bastones
después de la exposición a la luz, (iii) atRAL elevado y atROL
reducido en los segmentos externos de los fotorreceptores después de
un fotoblanqueo, (iv) fosfatidiletanolamina (PE) constitutivamente
elevada en segmentos externos, y (v) acumulación de lipofuscina en
las células del ERP. Ver Weng y col., Cell,
98:13-23 (1999).
Las tasas de degeneración de los fotorreceptores
pueden ser monitoreadas en ratones de tipo silvestre y
abca4^{-}/^{-} tratados y no tratados mediante dos
técnicas. Una es el estudio de ratones en diferentes momentos por
análisis de ERG y es adoptado de un procedimiento de diagnostico
clínico. Ver Weng y col., Cell, 98:13-23
(1999). Se ubica un electrodo en la superficie corneal de un ratón
anestesiado y se registra la respuesta eléctrica a un destello de
luz desde la retina. La amplitud de la onda \alpha que se produce
por la hiperpolarización de los fotorreceptores inducida por la
luz, es un indicador sensible de la degeneración de los
fotorreceptores. Ver Kedzierski y col., Invest. Ophthalmol. Vis.
Sci. 38:498-509 (1997). Los ERG se realizan en
animales vivos. Por lo tanto el mismo animal puede ser analizado
repetidamente durante un estudio en el curso del tiempo. La técnica
definitiva para cuantificar la degeneración de los fotorreceptores
es el análisis histológico de secciones de la retina. La cantidad
de fotorreceptores que quedan en la retina en cada punto del tiempo
será determinada contando las hileras de núcleos de fotorreceptores
en la capa nuclear externa.
Extracción de Tejidos. Las muestras de
ojos fueron descongeladas sobre hielo en 1 ml de PBS, pH 7,2 y
homogeneizadas a mano usando un homogeneizador de
vidrio-vidrio Duall. La muestra siguió siendo
homogeneizada después de agregar 1 ml de cloroformo/metanol (2:1,
v/v). La muestra fue transferida a un tubo de borosilicato y se
extrajeron los lípidos en 4 ml de cloroformo. El extracto orgánico
fue lavado con 3 ml de PBS, pH 7,2 y las muestras fueron
centrifugadas después a 3.000 x g, 10 min. Se decantó la fase de
cloroformo y la fase acuosa se extrajo de nuevo con otros 4 ml de
cloroformo. Después de la centrifugación, las fases de cloroformo
fueron combinadas y las muestras fueron llevadas a sequedad bajo
nitrógeno gaseoso. Los residuos de las muestras fueron resuspendidos
en 100 \mul de hexano y analizados por HPLC como se describe a
continuación.
Análisis de HPLC. Las separaciones
cromatográficas se realizaron en una Columna Rx-Sil
(5 \mum, 4,6 x 250 mm) Zorbax de Agilent usando un cromatógrafo
líquido Agilent serie 1100 equipado con detectores de fluorescencia
y una red de diodos. La fase móvil
(hexano/2-propanol/etanol/ KH_{2}PO_{4} 25 mM,
pH 7,0/ ácido acético; 485/376/100/50/0,275, v/v) fue suministrada
a 1 ml/min. La identificación de los máximos de la muestra se hizo
mediante comparación con el tiempo de retención y los espectros de
absorbancia de estándares auténticos. Los datos son informados como
fluorescencia máxima (U.L.) obtenida del detector de
fluorescencia
\vskip1.000000\baselineskip
La administración de fenretinida a un grupo
experimental de ratones y la administración de DMSO solo a un grupo
de ratones de control es realizada y valorada para determinar la
acumulación de A2E. Al grupo experimental se dan 2,5 a 20 mg/kg de
fenretinida al día en 10 a 25 \mul de DMSO. Se prueban dosis más
altas si no se ve ningún efecto, siendo la dosis más alta 50 mg/kg.
Al grupo de control se le dan inyecciones de 10 a 25 \mul de DMSO
solo. A los ratones se les administran substancias experimentales o
de control mediante inyección intraperitoneal (i.p.) por diversos
períodos experimentales de tiempo que no exceden de un mes.
Para valorar la acumulación de A2E en el EPR de
ratones abca4^{-}/^{-}, se proporciona 2,5 a 20 mg/kg de
fenretinida mediante una inyección i.p. por día a ratones
abca4^{-}/^{-} de dos meses. Después de 1 mes, los
ratones experimentales y de control son sacrificados y los niveles
de A2E en el EPR se determinan mediante HPLC. Además, se pueden
monitorear los espectros de autofluorescencia o de absorción de
N-retinilideno-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina,
N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-etanolamina,
y/o N-retinilideno-fosfatidiletanolamina,
usando un espectrofotómetro UV/Visible.
\vskip1.000000\baselineskip
La administración de fenretinida a un grupo de
ratones experimental y la administración de DMSO solo a un grupo de
ratones de control es realizada y valorada para determinar la
acumulación de A2E. Al grupo experimental se le dan 2,5 a 20 mg/kg
de fenretinida al día en 10 a 25 \mul de DMSO. Se prueba con dosis
más altas si no se ve ningún efecto, siendo la dosis más alta de 50
mg/kg. Al grupo de control se le dan inyecciones de 10 a 25 \mul
de DMSO solo. A los ratones se les administran substancias
experimentales o de control mediante inyección intraperitoneal
(i.p.) por diversos períodos experimentales de tiempo que no exceden
de un mes. Alternativamente se puede implantar en los ratones una
bomba que libera substancias experimentales o de control a una tasa
de 0,25 \mul/hr por diversos períodos experimentales de tiempo que
no exceden de un mes.
Para valorar los efectos de la fenretinida en la
formación de lipofuscina en ratones abca4^{-}/^{-}
tratados o no con fenretinida, se pueden examinar los ojos mediante
microscopía electrónica o de fluorescencia.
\vskip1.000000\baselineskip
La administración de fenretinida a un grupo de
ratones experimental y la administración de DMSO solo a un grupo de
ratones de control es realizada y valorada para determinar los
efectos de la fenretinida en la muerte de células de bastones o en
el daño funcional de los bastones. Al grupo experimental se le dan
2,5 a 20 mg/kg de fenretinida al día en 10 a 25 \mul de DMSO. Se
prueba con dosis más altas si no se ve ningún efecto, siendo la
dosis más alta de 50 mg/kg. Al grupo de control se le dan
inyecciones de 10 a 25 \mul de DMSO solo. A los ratones se les
administran substancias experimentales o de control mediante
inyección intraperitoneal (i.p.) por diversos períodos
experimentales de tiempo que no exceden de un mes. Alternativamente
se puede implantar en los ratones una bomba que libera substancias
experimentales o de control a una tasa de 0,25 \mul/hr por
diversos períodos experimentales de tiempo que no exceden de un
mes.
Los ratones que son tratados con 2,5 a 20 mg/kg
de fenretinida por día durante aproximadamente 8 semanas pueden ser
valorados para determinar los efectos de la fenretinida en la muerte
de las células de bastones o el daño funcional de los bastones,
monitoreando registros de ERG y realizando histología retinal.
\vskip1.000000\baselineskip
El siguiente estudio está adaptado del trabajo
de Sieving, P.A., y col., Proc. Natl. Acad. Sci.,
98:1835-40 (2001). Para estudios de exposición a
luz crónica, ratas albinas machos Sprague-Dawley de
7 semanas son hospedadas en un ciclo de 12:12 horas de
luz/oscuridad con luz blanca fluorescente de 5 lux. Se aplican
inyecciones de 20-50 mg/kg de fenretinida mediante
inyecciones i.p. en 0,18 ml de DMSO, tres veces al día durante 8
semanas a las ratas expuestas a luz crónica. Los controles reciben
0,18 ml de DMSO por inyección i.p. Las ratas son sacrificadas dos
días después de las inyecciones finales. Se prueban dosis más altas
si se ve que no hay efectos, siendo la dosis más alta de 50
mg/Kg.
Para estudios de exposición a la luz aguda, las
ratas son adaptadas a la oscuridad durante la noche y se les aplica
una inyección única i.p. de fenretinida de 20-50
mg/kg en 0,18 ml de DMSO bajo luz roja débil y son mantenidas en la
oscuridad por 1 hora antes de ser expuestas a la luz de blanqueo
antes de las mediciones de ERG. Las ratas son expuestas a luz
fluorescente blanca de 2.000 lux por 48 horas. Se registran los ERGs
7 días más tarde y la histología se realiza inmediatamente.
Las ratas son sacrificadas mediante eutanasia y
se les extraen los ojos. Los recuentos de células de la columna del
espesor de la capa nuclear exterior y la longitud del segmento
exterior de los bastones (ROS) son medidos cada 200 \mum a través
de ambos hemisferios y las cantidades se promedian para obtener una
medida de los cambios celulares a través de toda la retina. Se
registran los ERGs de las ratas expuestas a luz crónica a las 4 y 8
semanas de tratamiento. En roedores expuestos a luz aguda, la
recuperación de los bastones de la luz de blanqueo es rastreada por
ERGs adaptados a la oscuridad usando estímulos que no provocan
ningún aporte de los conos. La recuperación de los conos es
rastreada con ERGs fotópicos. Antes de realizar los ERGs, los
animales son preparados con luz roja débil y anestesiados. Las
pupilas son dilatadas y se efectúa un registro de ERGs de ambos ojos
simultáneamente usando anillos corneales de alambre de oro.
\vskip1.000000\baselineskip
Se realizan pruebas en ratones y/o ratas de la
manera descrita en los Ejemplos 6-9 pero con dos
ramificaciones adicionales. En una de las ramificaciones
adicionales, los grupos de ratones y/o ratas son tratados con dosis
crecientes de Accutane, de 5 mg/kg a 50 mg/kg por día. En la segunda
ramificación adicional, los grupos de ratones y/o ratas son
tratados con una combinación de 20 mg/kg por día de fenretinida y
dosis crecientes de Accutane, de 5 mg/kg a 50 mg/kg por día. Los
beneficios de la terapia combinada son valorados de acuerdo a lo
descrito en los ejemplos 6-9.
\vskip1.000000\baselineskip
El efecto de HPR en la reducción de retinol
sérico en sujetos humanos y animales nos llevó a explorar la
posibilidad de que también se puedan detectar reducciones en
lipofuscina y el conjugado bis-retinoide A2E tóxico.
Las razones para este enfoque se basan en dos líneas independientes
de evidencia científica: 1) la reducción en la concentración ocular
de Vitamina A a través de la inhibición de una enzima (11-cis
retinol dehidrogenasa) conocida del ciclo visual tiene como
resultado reducciones profundas en lipofuscina y A2E; 2) los
animales que se mantienen con una dieta deficiente en Vitamina A
muestran reducciones drásticas en la acumulación de lipofuscina. De
este modo, el objetivo de este ejemplo fue examinar el efecto de HPR
en un modelo animal que demuestra una acumulación masiva de
lipofuscina y A2E en el tejido ocular, el ratón con mutación nula
abca4.
Los estudios iniciales comenzaron examinando el
efecto de HPR en el retinol sérico. Los animales fueron divididos
en tres grupos y se les administró DMSO, 10 mg/kg de HPR o 20 mg/kg
de HPR durante 14 días. Al final del período de estudio, se extrajo
sangre de los animales, se prepararon los sueros y se analizó un
extracto de acetonitrilo del suero mediante LC de fase inversa/MS.
Se realizaron análisis espectrales de UV-Vis y de
masa/carga para confirmar la identidad de los máximos eluídos. Se
muestran cronogramas de muestras obtenidos de estos análisis:
Figura 1a.- extracto de un ratón con mutación nula abca4 que
recibe un vehículo de HPR, DMSO; Figura 1b.- 10 mg/kg de HPR;
Figura 1c.- 20 mg/kg de HPR. Los datos muestran claramente una
reducción dependiente de la dosis en el retinol sérico. Los datos
cuantitativos indican que con 10 mg/kg de HPR el todo-trans
retinol disminuye 40%, ver Figura 11. Con 20 mg/kg de HPR el
retinol sérico disminuye 72%, ver Figura 11. Se determinó que las
concentraciones de retinol y HPR en estado fijo en el suero (con 20
mg/kg de HPR) fueron de 2,11 \muM y 1,75 \muM
respectivamente.
Sobre la base de estos hallazgos, se intentaron
seguir explorando el(los) mecanismo(s) de la reducción
de retinol durante el tratamiento con RBP. Una hipótesis
sustentable es que el HPR puede desplazar al retinol compitiendo en
el sitio de unión de retinol en el ERP. Al igual que el retinol, el
HPR absorberá (extinguirá) la energía lumínica en la región de
fluorescencia de la proteína; sin embargo, a diferencia del retinol,
el HPR no emite fluorescencia. Por lo tanto, se puede medir el
desplazamiento del retinol de la holoproteína RBP observando
disminuciones en la fluorescencia de la proteína (340 nm) y del
retinol (470 nm). Nosotros realizamos un ensayo de unión de
competencia usando concentraciones de RBP-retinol/
HPR del ERP que fueron similares a aquellas en la prueba de 14 días
con 20 mg/kg de HPR descrita antes. Los datos obtenidos de estos
análisis revelan que el HPR desplaza de manera eficiente al retinol
de la holoproteína RBP-retinol a temperatura
fisiológica, ver Figura 3b. La unión competitiva de HPR con
RBP fue dependiente de la dosis y saturable. En los ensayos de
control, se determino que las disminuciones en la fluorescencia del
retinol estaban asociadas con aumentos concomitantes en la
fluorescencia de la proteína, ver Figura 3a. Se determinó que este
efecto se debió a efectos de temperatura como la constante de
disociación de los aumentos de RBP-retinol
(disminución de la afinidad) aumentando el tiempo a 37C. En
resumen, estos datos sugieren que los incrementos de HPR más allá
de los equivalentes equimolares relacionados con la holoproteína RBP
(por ej., HPR 1,0 \muM y RBP 0,5 \muM), hará que una fracción
significativa de retinol sea desplazada de RBP in vivo.
\vskip1.000000\baselineskip
Se inició un estudio de un mes para evaluar los
efectos del HPR en la reducción de A2E y de precursores de A2E en
los ratones con mutación nula abca4. Se administró
diariamente HPR en DMSO (ip, 20 mg/kg) a ratones con mutación nula
abca4 (BL6/129, de dos meses), por un período de 28 días.
Ratones de control de igual edad/raza recibieron sólo el vehículo
DMSO. Se tomaron muestras de los ratones a los 0, 14 y 28 días (n=3
por grupo), los ojos fueron enucleados y se extrajeron los
constituyentes solubles en cloroformo (lípidos, retinoides y
conjugados de lípidos-retinoides). Los ratones
fueron sacrificados mediante dislocación cervical, los ojos fueron
enucleados y congelados instantáneamente de manera individual en
ampollas para criogenia. Los extractos de muestras fueron
analizados después mediante HPLC con detección de fluorescencia en
línea. Los resultados de este estudio muestran reducciones
tempranas notables en el precursor de A2E,
A2PE-H_{2}, ver la Figura 4a, y reducciones
posteriores en A2E, ver la Figura 4b. El análisis cuantitativo
reveló una reducción de 70% de A2PE-H_{2} y una
reducción de 55% de A2E después de 28 días de tratamiento con HPR.
Se puede realizar un estudio similar para establecer los efectos del
tratamiento con HPR en los fenotipos electroretinográficos y
morfológicos.
\vskip1.000000\baselineskip
Se examinaron los efectos de HPR en las enzimas
o proteínas del ciclo visual usando ensayos bioquímicos in
vitro. Específicamente, se estudió la utilización de
todo-trans retinol exógeno por membranas preparadas
a partir de ERP bovino. Los datos representativos de nuestros
estudios se muestran en la Figura 5. Los análisis cinéticos de los
datos de inhibición indican que la inhibición semimáxima de LRAT
ocurre con HPR aproximadamente 20 \muM. Los niveles en estado
fijo de HPR en el ERP (determinados por ratones a los que se les ha
administrado 20 mg/kg de HPR, i.p. diariamente durante 28 días)
fluctúan de 5 - 10 \muM. Considerando esto, examinamos los
efectos de HPR 10 \muM en la producción de ésteres de
todo-trans retinilo y 11-cis retinol en ensayos
similares a los descritos antes. Además de las disminuciones en la
utilización de todo-trans-retinol (Figura 6c) y en la
síntesis de ésteres de todo-trans-retinilo (Figura 6a), los
datos revelan una inhibición estadísticamente significativa de la
biosíntesis de 11-cis retinol (p<0,005, indicado con
asterisco), ver Figura 6b. Ante la presencia de retinoides
endógenos, la utilización de todo-trans-retinol exógeno es
extremadamente baja y 11-cis retinol es producido solamente
de los ésteres endógenos de todo-trans-retinilo. De hecho
cuando realizamos nuestros experimentos en presencia de ésteres de
retinilo endógenos no observamos un efecto de HPR en la producción
de 11-cis retinol; sin embargo, persiste la actividad de
inhibición de LRAT. De este modo, los ácidos retinoicos parecen
afectar al menos dos objetivos en el ciclo visual. Hemos
determinado que la reducción de la biosíntesis de 11-cis
retinol inducida por HPR ocurre a través de la inhibición y la
reducción de LRAT en los niveles de ésteres de
todo-trans-retinilo. En esta situación, la enzima isomerasa
despoja el sustrato y la producción de 11-cis retinol
disminuye.
En total, se pone de manifiesto a partir de los
diversos estudios que existen múltiples objetivos para la
modulación de la biosíntesis del cromóforo visual. La reducción del
cromóforo visual lleva después a una disminución consiguiente de
todo-trans-retinal, el retinoide del cual se genera A2E. De
este modo, el tratamiento con HPR no sólo tiene efectos sistémicos
en la disminución de la cantidad de retinol liberado al ojo sino
que también tiene efectos intracelulares en la disminución de
niveles en estado fijo de todo-trans-retinal. El resultado
final será una reducción de A2E en el ERP, como quedó en evidencia
antes.
Así, uno de los resultados de este estudio es
que el tratamiento de las degeneraciones y distrofias maculares,
que incluye controlar la formación de todo-trans-retinal
N-retinilideno-N-retiniletanolamina,
N-retinilideno-fosfatidil-etanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-fosfatidil-etanolamina,
N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina,
dihidro-N-retinilideno-N-retinil-etanolamina,
N-retinilideno-fosfatidiletanolamina, atrofia
geográfica, escotoma, lipofuscina y drusas en el ojo de un
mamífero, sin estar limitado a estos, puede ser afectado por la
administración de un agente o agentes que pueden disminuir los
niveles de retinol sérico y modular al menos una enzima o proteína
en el ciclo visual, incluyendo a título de ejemplo, la actividad de
LRAT. Este enfoque de doble acción para el tratamiento de
distrofias y degeneraciones maculares o retinales o el alivio de
síntomas asociados con dichas enfermedades o condiciones, es
considerado como un enfoque generalmente aplicable y como se
describe en la presente, ha sido observado con la fenretinida.
Además, (a) la administración de un agente o agentes que bajan los
niveles de retinol sérico en un paciente sin modular por lo menos
una enzima en el ciclo visual o (b) la administración de un agente
o agentes que modulen por lo menos una enzima en el ciclo visual
sin bajar los niveles de retinol sérico en un paciente, por sí
solos, pueden proporcionar también un tratamiento para tales
distrofias y degeneraciones o sus síntomas asociados. Pueden usarse
ensayos, tales como aquellos descritos en la presente, para
seleccionar otros agentes que posean esta doble acción, incluyendo
agentes seleccionados de los compuestos que tienen la estructura de
la Fórmula (I) así como también otros agentes. Posibles compuestos
líderes incluyen otros agentes conocidos o de los que se ha
demostrado que afectan el nivel del retinol sérico.
Con el fin de determinar los efectos de HPR en
las enzimas o proteínas del ciclo visual in vivo, la
regeneración de rodopsina a partir de reservas de retinoides
endógenos puede ser examinada en ratones de control tratados con HPR
y que concuerdan en edad y raza.
\vskip1.000000\baselineskip
Se realizan pruebas en ratones y/o ratas de la
manera descrita en los Ejemplos 6-9 pero con dos
ramificaciones adicionales. En una de las ramificaciones
adicionales, los grupos de ratones y/o ratas son tratados con una
estatina adecuada tal como: Lipitor® (Atorvastatina), Mevacor®
(Lovastatina), Pravachol® (Pravastatina sódica), Zocor^{TM}
(Simvastatina), Leschol (fluvastatina sódica) y similares, basándose
la dosis óptima en el peso. En la segunda ramificación adicional,
los grupos de ratones y/o ratas son tratados con una combinación de
20 mg/kg por día de fenretinida y dosis crecientes de la estatina
usada en el paso anterior. Las dosis humanas de tales estatinas
sugeridas son por ejemplo: 10-80 mg/día de Lipitor®
(Atorvastatina), 10-80 mg/día de Mevacor®
(Lovastatina), 10-40 mg/día de Pravachol®
(Pravastatina sódica), 5-80 mg/día de Zocor^{TM}
(Simvastatina), 20-80 mg/día de Leschol
(fluvastatina sódica). Las dosis de estatinas para sujetos ratones
y/o ratas deberían calcularse basándose en el peso. Los beneficios
de la terapia combinada son valorados como se describió en los
ejemplos 6-9.
\vskip1.000000\baselineskip
Se realizan pruebas en ratones y/o ratas de la
manera descrita en el Ejemplo 14, pero con vitaminas y minerales
seleccionados. La administración de fenretinida en combinación con
vitaminas y minerales puede efectuarse por vía oral o parenteral en
cantidades efectivas para inhibir el desarrollo o la reincidencia de
la degeneración macular. Las dosis experimentales están
inicialmente en el intervalo de aproximadamente 20 mg/kg diarios de
fenretinida con 100-1000 mg de vitamina C,
100-600 mg de Vitamina E,
10.000-40.000 U.I de vitamina A,
50-200 mg de zinc y 1-5 mg de cobre
durante 15-20 semanas. Los beneficios de la terapia
combinada son valorados de acuerdo a lo descrito en los ejemplos
6-9.
\vskip1.000000\baselineskip
Se incubaron Apo-CRALBP 5 \muM
con 11-cis retinal (11cRAL),
todo-trans-retinal (atRAL) o
N-4-hidroxifenil retinamida (HPR) 1
\muM en PBS a temperatura ambiente durante 1 hora. Como un
control, se agregó el mismo volumen de DMSO a la solución de
Apo-CRALBP. Los espectros de emisión fueron medidos
entre 290 nm y 500 nm con longitudes de onda de excitación de paso
de banda de 280 nm y 2 nm (Ver Figura 7).
Comparado con el control DMSO, los tres
retinoides extinguieron significativamente la emisión de
fluorescencia de CRALBP, teniendo 11cRAL el grado más alto de
excitación y HPR el más bajo, sugiriendo que los tres componentes
se unían a CRALBP. La extinción de la fluorescencia resulta
probablemente de la transferencia de energía de resonancia de la
fluorescencia entre los residuos aromáticos de proteína y los
retinoides unidos.
\vskip1.000000\baselineskip
Se incubó Apo-CRALBP 4 \muM
con 11cRAL, atRAL o HPR 8 \muM en PBS a la temperatura
ambiente durante 1 hora. En el control experimental, se agregó un
volumen equivalente de DMSO a la solución de CRALBP. Se analizaron
50 \mul de cada mezcla de muestra mediante una columna de
filtración de gel (300x7,8 mm) SEC125 Bio-Sil de
BioRad.
En el control de DMSO (ver Figura 8a),
apo-CRALBP fue eluida como multímeros (máximo de
elusión a 8,1 ml), mientras que la holoproteína unida al ligando se
desplazó a la forma de monómero (máximo de elusión a 9,4 ml). En
presencia de 11cRAL, la mayor parte de la CRALBP se une al ligando y
muestra una fuerte absorbancia de 430 nm en la posición de elusión
del monómero (ver Figura 8b). Menos de la mitad de atRAL se une a la
CRALBP (ver Figura 8c), y sólo una pequeña cantidad de HPR se une a
la CRALBP, indicado por el máximo de absorbancia a 350 nm (ver
Figura 8d).
\vskip1.000000\baselineskip
Se incubó Apo-RBP 5 \muM con
MPR en PBS 0, 0,25, 0,5, 1 y 2 \muM a la temperatura ambiente
durante 1 hora respectivamente. Al igual que los controles, se
incubó también la misma concentración de Apo-RBP con
HPR 1 \muM o atROL 1 \muM. Todas las mezclas contenían 0,2% de
Etanol (v/v). Los espectros de emisión fueron medidos entre 290 nm y
500 nm con longitud de onda de excitación a un paso de banda de 280
nm y 3 nm.
Como se muestra en la Figura 9, MPR exhibió una
extinción dependiente de la concentración de la fluorescencia de
RBP y la extinción se saturó con MPR 1 \muM para RBP 0,5 \muM.
Debido a que es probable que la extinción de la fluorescencia
observada se deba a la transferencia de energía de resonancia de la
fluorescencia entre los residuos aromáticos de proteína y la
molécula de MPR unida, se propone que MPR se une a RBP. El grado de
extinción efectuado por MPR es menor que los realizados por atROL y
HPR, otros dos ligandos que se unen a la RBP.
\vskip1.000000\baselineskip
Se incubó Apo-RBP 10 \muM con
MPR 50 \muM en PBS a la temperatura ambiente durante 1 hora. Luego
se agregó a la solución TTR 10 \muM, y la mezcla fue incubada por
una hora más a la temperatura ambiente. Se analizaron 50 \mul de
las mezclas de muestra con y sin adición de TTR por una columna de
filtración de gel (300x7,8 mm) SEC125 Bio-Sil de
BioRad. En experimentos de control, las mezclas de
atROL-RBP y
atROL-RBP-TTR fueron analizadas de
la misma manera.
Como se muestra en la Figura 10a, la muestra de
MPR-RBP exhibió un máximo de elusión de RBP (a 11
ml) con fuerte absorbancia a 360 nm, indicando que RBP se une a
MPR; después de la incubación con TTR, esta absorbancia a 360 nm se
mantuvo con el máximo de elusión de RBP, mientras que el máximo de
elusión de TTR (a 8,6 ml) no contenía ninguna absorbancia aparente
a 360 nm (ver Figura 10b), indicando que MPR-RBP no
se unió a TTR. En el experimento de control de
atROL-RBP, el máximo de elusión de RBP mostró una
fuerte absorbancia a 330 nm (ver Figura 10c); después de la
incubación con TTR, más de la mitad de esta absorbancia a 330 nm se
desplazó al máximo de elusión de TTR (ver Figura 10d), indicando
que atROL-RBP se une a TTR. De este modo, MPR inhibe
la unión de TTR con RBP.
A los ratones con mutación nula ABCA4 se
les administró la dosis indicada de HPR en DMSO (i.p.) diariamente
durante 28 días (n=4 ratones por grupo de dosis). Al final del
período de estudio, se tomaron muestras de sangre y se preparó el
suero. Después de la precipitación de proteínas séricas con
acetonitrilo, las concentraciones de retinol y HPR fueron
determinadas de la fase soluble por LC/MS (ver Figura 11). La
identidad de los compuestos eluídos fue confirmada mediante
espectroscopia de absorción UV-Visible y coelusión
de máximos de las muestras con estándares auténticos.
\vskip1.000000\baselineskip
Los promedios de los grupos de los datos
mostrados en los paneles A - G de la Figura 18 en el Ejemplo 25
(puntos de tiempo de 28 días) están graficados para ilustrar la
fuerte correlación entre los incrementos en el HPR sérico y las
disminuciones en el retinol sérico (ver Figura 12). Las reducciones
en el retinol sérico están altamente correlacionadas con las
reducciones en A2E y los compuestos precursores
(A2PE-H_{2}). Se observa una reducción
pronunciada en A2PE-H_{2} en el grupo de dosis de
2,5 mg/kg (\sim47%) cuando la reducción de retinol sérico es de
sólo 20%. La razón de esta reducción desproporcionada está
relacionada con el contenido inherentemente inferior de retinoide
ocular en este grupo de animales de 2 meses comparado con los otros
grupos. Es probable que si estos animales hubieran sido mantenidos
con la dosis de 2,5 mg/kg durante un período más prolongado, se
obtendría también una mayor reducción en A2E.
\vskip1.000000\baselineskip
Extinción de la fluorescencia de proteína
CRALBP con 11-cis retinal (11cRAL). La emisión de
fluorescencia de apo-CRALBP (0,5 \muM)
recombinante fue medida usando excitación de 280 nm ("sin
11cRAL"). La adición del ligando nativo (11cRAL)
extinguió la fluorescencia de la proteína CRALBP de una manera
dependiente de la concentración (ver Figura 13A). Estos datos
validan el enfoque técnico usado para confirmar la interacción
proteína-ligando.
Extinción de la fluorescencia de proteína
CRALBP con HPR. Los datos mostrados se obtuvieron usando un
diseño experimental idéntico al descrito antes. La emisión de
fluorescencia de apo-CRALBP recombinante se midió
usando una excitación de 280 nm ("sin HPR"). La adición de HPR
extinguió la fluorescencia de la proteína CRALBP de una manera
dependiente de la concentración similar a la observada con el
ligando nativo (ver Figura 13B). Estos datos sugieren fuertemente
que CRALBP se une con HPR en concentraciones fisiológicas.
\vskip1.000000\baselineskip
Para confirmar los datos obtenidos durante el
análisis de fluorescencia de la unión de HPR con CRALBP, se realizó
un segundo análisis usando cromatografía de afinidad y análisis
espectroscópico. La apo-CRALBP recombinante fue
construida con una etiqueta de histidina que se utiliza para
purificar la proteína en una columna de afinidad de Ni+ después de
clonar la expresión. Aquí, nosotros utilizamos esta característica
de apo-CRALBP de "atrapar" específicamente la
proteína y cualquier especie de ligando de proteína para análisis
espectroscópico. Se prepararon dos mezclas de unión que contenían
apo-CRALBP (10 \muM) y 11cRAL (20 \muM) o
HPR (20 \muM). En experimentos de control para analizar la unión
no específica del ligando a la matriz de afinidad, preparamos dos
mezclas adicionales que sólo contenían 11cRAL (20 \muM) o
HPR (20 \muM) en tampón de unión. Las mezclas de unión fueron
hechas pasar a través de columnas de afinidad Ni+ separadas y las
columnas fueron lavadas extensivamente para eluir la proteína y el
ligando que no se habían unido. Después de la adición de tampón de
elusión, las fracciones eluídas fueron analizadas por
espectroscopia. El análisis espectroscópico de la mezcla de unión
de 11cRAL + apo-CRALBP (control positivo)
confirma que esta técnica es efectiva ya que los espectros son
consistentes con la unión de 11cRAL a CRALBP. Es importante
que los datos muestran también que HPR se une a
apo-CRALBP. Si HPR no se uniera a
apo-CRALBP, sólo se observaría la absorbancia de la
proteína (280 nm) en la muestra eluida de HPR +
apo-CRALBP. En vez de esto, se ven dos máximos de
absorción: uno a 280 nm y un segundo a 360 nm, lo que es atribuible
a la absorción de HPR (ver Figura 14).
Se realizó un análisis de la constante de
disociación (K_{D}) para la unión de 11cRAL y HPR a
apo-CRALBO (ver Figura 15). La transformación de
datos de extinción de la fluorescencia reveló valores similares
(\sim 30 nM) para cada ligando). Este cálculo se basa en la
concentración de ligando necesaria para extinguir completamente la
fluorescencia de la proteína. Los datos revelan que tanto
11cRAL como HPR extinguen la fluorescencia de
apo-CRALBP máximamente a \sim1,5 \muM. De este
modo, aunque se describe a apo-CRALBP como una
proteína de unión a retinoide específica para 11-cis,
también parece unirse a HPR. El hecho de que las concentraciones de
HPR en el ERP exceden en mucho de 30 nM durante las pruebas con
animales (aún en la dosis terapéutica más baja de 2,5 mg/kg),
sugiere que se espera un cierto grado de inhibición mediada por HPR
durante la biosíntesis del cromóforo visual en el ciclo visual.
\vskip1.000000\baselineskip
Se identificó un segundo objetivo para HPR en el
ciclo visual usando ensayos bioquímicos in vitro. La
lecitina retinol aciltransferasa (LRAT) cataliza la conversión de
retinol en ésteres de retinilo. La LRAT no sólo es crítica para la
homeostasia de retinol-éster de retinilo sino que además para la
generación de sustrato para la biosíntesis del cromóforo visual.
Los datos mostrados en el panel A de la Figura 16 ilustran el
efecto inhibidor de HPR en la tasa de síntesis de ésteres de
retinilo. En este ensayo los microsomas de ERP de bovino son usados
como una fuente de enzimas y todo-trans-retinol (atROL) es el
sustrato. El HPR disminuye la síntesis neta de ésteres de retinilo
de una manera dependiente de la concentración. Una transformación
secundaria (Eadie-Hofstee) de los datos cinéticos en
el panel A revela que el modo de inhibición es competitivo (ver
Figura 16, panel B). Por lo tanto, el HPR compite con atROL por
sitios de unión en LRAT. Se determinó que la constante de
inhibición aparente(K_{i}) era \sim6 \muM. Esto
significa que en HPR 6 \muM, la tasa de síntesis de ésteres de
retinilo se reduciría en 50%. En un estudio separado, hemos
determinado que las concentraciones de HPR en el ERP se aproximan a
10 \muM con una dosis de 10 mg/kg de HPR.
En resumen, se pone de manifiesto los datos
descritos en los experimentos 20-24 que el efecto
pronunciado de HPR en la reducción de la acumulación de A2E y de
sus precursores durante la pruebas en animales se debió a los
efectos sistémicos en la disminución de retinol sérico y a los
efectos intracelulares dentro del ciclo visual.
\vskip1.000000\baselineskip
El análisis de la composición retinoide en
ratones adaptados a la luz tratados con HPR y DMSO (Figura 17,
panel A) muestra una reducción de aproximadamente 50% de los
retinoides del ciclo visual como resultado del tratamiento con HPR
(10 mg/kg diariamente durante 28 días). Los paneles B y C de la
Figura 17 muestran que el HPR no afecta la regeneración del
cromóforo visual en estos ratones (el panel B es la biosíntesis del
cromóforo visual, el panel C es el reciclado del cromóforo
blanqueado). Los paneles D-F de la Figura 17 son
mediciones electrofisiológicas de la función de los bastones (panel
D), de la función de bastones y conos (panel E) y de la
recuperación del fotoblanqueo (panel F). La única diferencia notable
es la demora en la adaptación a la oscuridad en los ratones tratados
con HPR (panel F).
A los ratones con mutación nula ABCA4 se
les administró la dosis indicada de HPR en DMSO o DMSO solo
diariamente durante 28 días (n=16 ratones por grupo de
tratamiento). Al comienzo del estudio, los ratones en el grupo de
2,5 mg/kg tenían 2 meses, los ratones en los otros grupos de
tratamiento tenían 3 meses. En los tiempos indicados, se tomaron de
cada grupo ratones representativos (n=4) para analizar compuestos
precursores de A2E (ver Figura 18, A2PE-H_{2},
paneles A, C y E) y A2E (ver Figura 18, paneles B, D y F). Los ojos
fueron enucleados, divididos en dos y los componentes solubles en
lípido fueron extraídos del polo posterior mediante división en
fases de cloroformo/metanol-agua. Los extractos de
las muestras fueron analizados mediante LC. La identidad de los
compuestos eluídos fue confirmada mediante espectroscopia de
absorción UV-Visible y coelusión de máximos de las
muestras con estándares auténticos. Nota: limitaciones en los
ratones que concordaron apropiadamente en edad y raza en el grupo
de 10 mg/kg impidieron el análisis en el intervalo de 14 días. Los
datos muestran reducciones dependientes de la dosis de
A2PE-H_{2} durante el período de estudio.
Los paneles G-I en la Figura 18
muestran evidencia morfológica/histológica que el HPR reduce
significativamente la autofluorescencia de lipofuscina en el ERP de
los ratones con mutación nula abcr (modelo animal de
Stargardt). Las condiciones de tratamiento son como las descritas
antes. El nivel de autofluorescencia en el animal tratado con HPR
es comparable con el de un animal de tipo silvestre que concuerda en
edad. La Figura 19 muestra imágenes de microscopía lumínica de las
retinas de animales tratados con DMSO y HPR. No se observó ninguna
morfología aberrante ni compromiso de la integridad en la
citoestructura retinal.
La acumulación de lipofuscina en el epitelio
retinal pigmentado (ERP) es una característica patológica común
observada en diversas enfermedades degenerativas de la retina. Un
fluoróforo tóxico a base de vitamina A (A2E) presente dentro de los
gránulos de lipofuscina ha sido implicado en la muerte de células de
ERP y de fotorreceptores. En estos experimentos empleamos un modelo
animal que manifiesta acumulación acelerada de lipofuscina para
evaluar la eficacia de un enfoque terapéutico basado en la reducción
de Vitamina A sérica (retinol). La fenretinida reduce potencial y
reversiblemente el retinol sérico. La administración de HPR a
ratones que albergan una mutación nula en el gen de la enfermedad
de Stargardt (ABCA4) produjo reducciones profundas en la
proteína de unión con retinol sérico/retinol y detuvo la
acumulación de A2E y de autofluorescencia de lipofuscina en el ERP.
Fisiológicamente, las reducciones inducidas con HPR del cromóforo
visual fueron evidentes como demoras moderadas en la adaptación a
la oscuridad; la cinética de regeneración del cromóforo fue normal.
Es importante que se identificaron también efectos intracelulares
específicos de HPR en la esterificación de Vitamina A y
movilización del cromóforo. Estos descubrimientos demuestran la
naturaleza dependendiente de la Vitamina A de la biosíntesis de A2E
y validan un enfoque terapéutico que es rápidamente transferible a
los pacientes humanos que sufren de enfermedades de la retina
basadas en lipofuscina.
\vskip1.000000\baselineskip
Se administró HPR (10 mg/kg en DMSO) a ratones
ABCA4^{-}/^{-} diariamente durante un período de 28
días. Los ratones ABCA4^{-}/^{-} de control recibieron
sólo DMSO durante el mismo período. El análisis bioquímico (HPLC)
del precursor de A2E (A2PE-H_{2}) y A2E después de
un período de tratamiento 28 días reveló una reducción de estos
fluoróforos en los ojos de ratones tratados con HPR (Figura 18).
Otros análisis por microscopía de fluorescencia corroboraron los
datos bioquímicos y revelaron que los niveles de autofluorescencia
de lipofuscina en ratones ABCA4^{-}/^{-} tratados con HPR
eran comparables a los niveles observados en ratones del tipo
silvestre que no habían sido tratados (Figura 18). Los exámenes
histológicos por microscopía lumínica no mostraron ninguna
alteración de la citoestructura o morfología de la retina (Figura
19). Es importante que las reducciones observadas en la
autofluorescencia de lipofuscina persisten durante un largo tiempo
después del término de la terapia con HPR. La administración de HPR
(10 mg/kg), o DMSO fue interrumpida después de 28 días de
tratamiento y los niveles de A2E y del precursor volvieron a ser
evaluados después de 2 semanas y después de 4 semanas.
Se examinaron extractos de copa ocular mediante
HPLC y se utilizó detección mediante absorbancia y fluorimetría. Se
confirmó la identidad de los máximos indicados mediante análisis
espectral en línea y mediante coelusión con estándares auténticos.
Los datos muestran que en los animales que fueron mantenidos
previamente con terapia con HPR (Figura 20, panel A), los niveles
de A2E y de los precursores (A2PE-H_{2} y A2PE)
permanecieron significativamente reducidos en relación con los
ratones de control (Figura 20, panel B) incluso después de 12 días
sin recibir una dosis de HPR (esto es, un descanso del fármaco de 12
días). Se observaron resultados similares en ratones después de 28
días de descanso del fármaco; los niveles de A2E y de los
precursores (A2PE-H_{2} y A2PE) se mantienen
significativamente reducidos en relación con los ratones de control
(Comparar la Figura 20, panel C, ratones tratados, con la Figura
20, panel D, ratones de control). Además, después de 12 o 28 días
de descanso del fármaco, los niveles de A2E y de los precursores
(A2PE-H_{2} y A2PE) se mantuvieron en los niveles
o próximos a éstos inmediatamente después de los 28 días de
tratamiento (esto es, una reducción de aproximadamente 50% en
relación con el control), aunque después del día 28 del descanso del
fármaco, la cantidad de A2E y de los precursores
(A2PE-H_{2} y A2PE) había aumentado algunos puntos
porcentuales en relación con los niveles de descanso del fármaco de
12 días. A pesar de la persistente reducción en los niveles de A2E
y de los precursores (A2PE-H_{2} y A2PE) en los
ojos de los animales durante un descanso del fármaco HPR, no
pudimos detectar el HPR o metabolitos de HPR (por ej., MPR) en los
ojos de los animales en un descanso del fármaco de 28 días. El
trazo en la Figura 20, paneles C y D, muestra la intensidad de la
autofluorescencia asociada con los máximos indicados. Se pone de
manifiesto que la fluorescencia máxima está alineada con la
abundancia de A2E, A2PE y A2PE-H_{2}.
Estos datos se relacionan con la toxicidad
durante las pruebas críticas manteniendo pacientes con una dosis
reducida de HPR después de una prueba de eficacia clínica a una
dosis mayor. Este análisis puede obviar la necesidad de una
corroboración adicional por microscopía. Hasta donde es de nuestro
conocimiento, no se ha observado este efecto con otros métodos para
tratar una afección o rasgo oftálmico seleccionado de entre el
grupo constituido por la enfermedad de Stargardt, la degeneración
macular relacionada con la edad en forma seca, una degeneración
retinal basada en lipofuscina, la degeneración de los
fotorreceptores y la atrofia geográfica. Tampoco se ha observado
este efecto con métodos para reducir la formación de
N-retinilideno-N-retiniletanolamina en un ojo de un
mamífero, o con métodos para reducir la formación de lipofuscina en
un ojo de un mamífero.
Este efecto no puede ser atribuido a reducciones
a largo plazo en el retinol sérico ya que el retinol sérico ha
regresado a la línea de base 48 horas después de la última dosis de
HPR. El hecho de que el HPR se acumula dentro del ERP, y nuestra
identificación de la inhibición mediada por HPR de enzimas y
proteínas específicas del ciclo visual, sugieren que los efectos
benéficos latentes de HPR durante el período de descanso del fármaco
son atribuibles a efectos dentro del ciclo visual. Además, el HPR
reduce los niveles del retinol sérico lo que lleva a una reducción
en el nivel de retinol en los ojos de los animales tratados. Una vez
que el nivel de retinol ha sido reducido en el ojo, hay un lapso de
tiempo en el incremento posterior en los niveles de retinol en el
ojo. Solos o en combinación, la producción de A2E, A2PE y
A2PE-H_{2} en el ojo se mantiene baja a pesar de
la ausencia de HPR en el suero del ojo.
Claims (14)
1. Utilización de la
4-hidroxifenil-retinamida o la
4-metoxifenil-retinamida en la
preparación de un medicamento destinado a reducir la formación de o
la limitación de la propagación de la atrofia geográfica o la
degeneración de los fotorreceptores en el ojo de un mamífero o al
tratamiento de la degeneración macular relacionada con la edad en
forma seca.
2. Utilización según la reivindicación 1, en la
que la 4-hidroxifenil-retinamida
está presente como un solvato o una sal farmacéuticamente
aceptable.
3. Utilización según la reivindicación 1 de la
4-hidroxifenil-retinamida en la
preparación de un medicamento destinado al tratamiento de la
degeneración macular relacionada con la edad en forma seca.
4. Utilización según la reivindicación 1 de la
4-metoxifenil-retinamida en la
preparación del medicamento destinado al tratamiento de la
degeneración macular relacionada con la edad en forma seca.
5. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, en la que el medicamento está en una forma
adecuada para la administración sistémica.
6. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, en la que el medicamento está en una forma
adecuada para la administración oral.
7. Utilización según la reivindicación 6, en la
que el medicamento está en forma de comprimido, polvo, píldora,
gragea, cápsula, líquido, gel, jarabe, elixir, pasta acuosa, o
suspensión.
8. Utilización según la reivindicación 7, en la
que el medicamento comprende además: (a) lisofosfatidilcolina,
monoglicérido y un ácido graso; (b) harina, un edulcorante, y un
humectante; o (c) aceite de maíz y un surfactante no iónico.
9.
4-Hidroxifenil-retinamida o
4-metoxifenil-retinamida para su
utilización en la reducción de la formación de o para limitar la
propagación de la atrofia geográfica o la degeneración de los
fotorreceptores en el ojo de un mamífero o para su utilización en el
tratamiento de la degeneración macular relacionada con la edad en
forma seca.
10.
4-Hidroxifenil-retinamida para su
utilización según la reivindicación 9, en la que la
4-hidroxifenil-retinamida está en
forma de un solvato o una sal farmacéuticamente aceptable.
11.
4-Hidroxifenil-retinamida para su
utilización según la reivindicación 9, para el tratamiento de la
degeneración macular relacionada con la edad en forma seca.
12.
4-Metoxifenil-retinamida para su
utilización según la reivindicación 9, para el tratamiento de la
degeneración macular relacionada con la edad en forma seca.
13. Compuesto según la reivindicación 9, para su
utilización según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, en la
que el tratamiento es por administración sistémica.
14. Compuesto según la reivindicación 9, para su
utilización según la reivindicación 13, en la que la administración
es la administración oral.
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