ES2314056T3 - Activadores de la anhidrasa carbonica para mejorar el aprendizaje y la memoria. - Google Patents

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Abstract

Compuesto activador de la anhidrasa carbónica para mejorar la cognición atencional en una dosis eficaz para mejorar la cognición atencional al ser administrado al cerebro de un sujeto que necesita una mejora de su cognición atencional, definiéndose dicho compuesto activador de la anhidrasa carbónica mediante la estructura I: (Ver fórmula) en la que R 1 y R 2 son independientemente H, o alquilo C1-C6 o alquilo C1-C4 lineal, ramificado o cíclico; o en la que R 1 es (Ver fórmula) y n es 1 ó 2 y R 2 es H, o alquilo C 1-C 6 o alquilo C 1-C 4 lineal, ramificado o cíclico; y sales de los mismos.

Description

Activadores de la anhidrasa carbónica para mejorar el aprendizaje y la memoria.
Antecedentes de la invención
La presente invención se refiere a la utilización de composiciones para la preparación de un fármaco para mejorar la atención, el aprendizaje y la memoria mediante la activación de la anhidrasa carbónica. Los fármacos que favorecen la adquisición y/o el recuerdo de memoria asociativa representan objetivos importantes en la terapia de los desórdenes cognitivos. La eficacia de dichas terapias depende de si los mecanismos afectados por dichos fármacos están realmente involucrados en la memoria como tal. Se cree que el aprendizaje y la memoria requieren modificaciones de la fuerza sináptica en las neuronas relevantes de la red, mediante una interacción de múltiples recorridos aferentes y moléculas de señalización (Christie y otros, 1994; Komhauser y Greenberg, 1997; Ohno y otros, 1997; Alkon y otros, 1998; Paulsen y Moser, 1998; Xiang y otros, 1998 Tang y otros, 1999; Wu y otros, 2000). El requerimiento de múltiples interacciones sinápticas, frente a un recorrido glutamatérgico individual, estudiado a menudo experimentalmente, es de hecho consistente con la caracterización de múltiples déficits de neurotransmisores en los deterioros de la memoria, incluyendo la enfermedad de Alzheimer. En consecuencia, dirigir la acción hacia las interacciones sinápticas/de señalización relevantes en las huellas mnémicas puede ser una forma eficaz de alcanzar farmacológicamente un efecto específico sobre el aprendizaje y la memoria.
En los mamíferos, el papel esencial de las células piramidales CA1 del hipocampo en la memoria espacial está bien establecido. Las células piramidales CA1 reciben, además del aporte glutamatérgico procedente de las neuronas piramidales CA3, abundantes aportes colinérgicos y GABAérgicos. Se cree que se requiere la activación de los aferentes septales médicos dentro del recorrido perforante, un aporte colinérgico masivo al hipocampo (Cooper y Sofroniew, 1996), para el aprendizaje asociativo (Dickinson-Anson y otros, 1998; Perry y otros, 1999), dado que su disrupción anula la memoria espacial (Winson, 1978; Winkler y otros, 1995). Por otro lado, las interneuronas GABAérgicas controlan la actividad de la red del hipocampo y sincronizan el disparo de células piramidales (Buhl y otros, 1995; Cobb y otros, 1995; Banks y otros, 2000). Se conoce el hecho de que una interneurona GABAérgica inerva aproximadamente 1.000 células piramidales, desactivando eficazmente la emisión de señales cuando las interneuronas están activas (Sun y otros, 2000). De este modo, la interacción funcional entre estos aportes principales juega un papel significativo en la memoria dependiente del hipocampo (Bartus y otros, 1982; Winkler y otros, 1995; Paulsen y Moser, 1998), y ha atraído enormemente la atención en un esfuerzo para "diseccionar" las huellas mnémicas.
De forma consistente con las observaciones de que las respuestas sinápticas GABAérgicas se pueden invertir de inhibidoras a excitadoras (Alkon y otros, 1992; Collin y otros, 1995; Kaila y otros, 1997; Taira y otros, 1997; Sun y otros, 2000, 2001b), se han dado pruebas de que dicha inversión sináptica depende del aumento de conductancia de HCO_{3} a través del complejo GABA_{A} receptor-canal, y modifica enormemente la operación de transferencia de señales a través de la red del hipocampo (Sun y otros, 1999, 2000). La inversión sináptica parece depender de la anhidrasa carbónica, una enzima con contenido en zinc que cataliza la hidratación reversible del dióxido de carbono. La anhidrasa carbónica está presente en los compartimentos intracelulares de las células piramidales (Pasternack y otros, 1993). El hecho de que un inhibidor de la anhidrasa carbónica impermeante a la membrana, la benzolamida, se muestra eficaz a la hora de bloquear la inversión sináptica cuando se introduce en las células piramidales registradas, pero no cuando se aplica extracelularmente (Sun y otros, 1999), indica que la enzima subyacente es intracelular. De este modo, el bloqueo de la formación rápida de HCO_{3} que depende de la actividad de la anhidrasa carbónica impide la inversión sináptica in vitro y deteriora la plasticidad espástica y la memoria en ratas.
La acetazolamida, un conocido inhibidor de la actividad de la anhidrasa carbónica, inhibe el ritmo theta, el aprendizaje y la memoria. Sun MK, Zhao WQ, Nelson TJ, Alkon DL., "Theta Rhythm of Hippocampal CA1 Neuron Activity: Gating by GABAergic Synaptic Depolarization" ["Ritmo theta de la actividad neuronal CA1 del hipocampo: desbloqueo por despolarización sináptica GABAérgica"], J Neurophysiol 2001 Jan;85(1):269-79. Los datos disponibles que ponían de manifiesto que la inhibición de la actividad de la anhidrasa carbónica degradaba la formación de la memoria no predecían que su activación mejoraría dicha formación de la memoria. Por ejemplo, no se sabía si la enzima ya actuaba a un nivel máximo en las neuronas involucradas en el aprendizaje y no se podía activar adicionalmente. Tampoco se sabía si existían mecanismos homeostáticos en dichas células que neutralizarían cualquier activación debida a la administración de un compuesto de acuerdo con la invención.
La solicitud de Patente pendiente PCT/US01/18329, solicitada el 7 de junio de 2001 por el National Institutes of Health, da a conocer el hecho de que activar la anhidrasa carbónica puede producir una mejora en el aprendizaje y la memoria. Existe una necesidad desde hace tiempo de compuestos y agentes farmacéuticos que activen la anhidrasa carbónica y mejoren el aprendizaje y la memoria de los mamíferos.
Z. Chen y otros, informan en Brain Research 839 (1999) 186-189 sobre los efectos de la histamina sobre las deficiencias de memoria inducidas por MK-801 en el comportamiento frente al laberinto radial en ratas.
El documento WO 00/66617 A1 da a conocer métodos de diagnóstico y tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y otras demencias asociadas a atrofia neuronal utilizando, entre otros, 5-metiladenina, leucina, mistidina o vinblastina como compuestos eficaces. Los documentos RO-A 86 393 y RU-A-2 115 653 dan a conocer compuestos de imidazola en composiciones farmacéuticas.
La presente invención da a conocer la utilización de compuestos para la preparación de fármacos para mejorar la atención y/o la adquisición de memoria, que comprende estimular la actividad intraneuronal de la anhidrasa carbónica tal como se especifica en la reivindicación 1. La estimulación se alcanza administrando un activador de anhidrasa carbónica. La utilización permite el tratamiento de desórdenes neurodegenerativos a efectos de mejorar la capacidad cognitiva, tratar la demencia y también mejorar la atención y el aprendizaje en individuos sanos.
La presente invención da a conocer la utilización de un compuesto para la preparación de un fármaco para el tratamiento de la cognición atencional, en la que dicho compuesto potencia la actividad intraneuronal de la anhidrasa carbónica, mejorando de este modo el establecimiento de un ritmo theta.
La presente invención se refiere a la utilización de un compuesto según la reivindicación 1.
El activador de la anhidrasa carbónica se puede administrar como composición farmacéutica o en un portador farmacéuticamente aceptable.
El paciente puede presentar un desorden neurodegenerativo, o la utilización mejora la capacidad cognitiva, la atención, el aprendizaje y/o la memoria en individuos sin ningún desorden neurológico.
La utilización del compuesto según la reivindicación 1 facilita el establecimiento de un ritmo theta a través de despolarización GABAérgica mediada por bicarbonato. La utilización del compuesto según la reivindicación 1 mejora la formación de memoria, el aprendizaje, la memoria espacial y/o la atención. La utilización del compuesto según la reivindicación 1 interviene en la cascada de señalización intracelular responsable del ritmo theta, comprendiendo dicha intervención la modulación de la conductancia de HCO_{3}^{-} por modificación directa de la actividad intraneuronal de la anhidrasa carbónica. La intervención puede modular la corriente de HCO_{3}^{-} en relación con las corrientes de Cl^{-} y K^{+}.
La utilización del compuesto puede mejorar la cognición atencional en un sujeto con la enfermedad de Alzheimer, ictus, hipoxia y/o isquemia.
La utilización del compuesto puede utilizar un compuesto que proporciona una actividad de la anhidrasa carbónica, como mínimo, del 150%, el 200% o el 250% con respecto a la de la alanina in vitro.
También se da a conocer un artículo de fabricación que comprende una composición farmacéutica que comprende un compuesto activador embalado junto con un etiquetaje que indica su utilización para mejorar la cognición atencional, siendo eficaz dicho compuesto activador para mejorar la actividad de la anhidrasa carbónica en el cerebro y seleccionándose el mismo entre estructuras tales como las definidas en la reivindicación 1, o sales de los mismos.
Otros objetivos y ventajas se harán evidentes a partir de una consideración de la descripción, los dibujos y los ejemplos.
Breve descripción de los dibujos
La presente invención se comprende más detalladamente a partir de la siguiente descripción detallada, que hace referencia a las figuras adjuntas:
Las figuras 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f y 1g demuestran la activación asociada de los aportes colinérgicos y GABAérgicos y de la inversión sináptica a largo término inducida por la anhidrasa carbónica desde una respuesta inhibidora a una respuesta excitadora. La estimulación de pulso individual del estrato piramidal (50 \muA, 50 \mus) evoca un IPSP (control), que no se modifica por baño de ácido quinurénico (KYN; 500 \muM, 20 min; figura 1a). El IPSP (control), sin embargo, es eliminado por la bicuculina (BIC; 1 \muM, 30 min; figura 1b). La aplicación de fenilalanina (referencia) (100 \muM, empezando en la flecha vertical de d) reduce ligeramente el IPSP cuando se aplica individualmente (figura 1c), pero induce una inversión sináptica de largo plazo de las respuestas GABAérgicas cuando se asocia con la coestimulación (en la punta de flecha de la figura 1d; bajo el punto "Materiales y métodos") del estrato oriens y el estrato piramidal (PhAla + Co-estim; figura 1d y figura 1e). Sin embargo, la misma coestimulación no desencadena la inversión sináptica (Co-estim; figura 1d y figura 1f) y se eliminan los efectos de la coestimulación con fenilalanina sobre la inversión sináptica (ACET + PhAla-Co-estim; figura 1d y figura 1g) mediante la aplicación de acetazolamida (referencia) (10 \muM, también empezando en la flecha vertical de la figura 1d). Las puntas de flecha indican el tiempo en el que se suministra la estimulación de pulso individual del estrato piramidal. En d, los puntos de datos se indican como valor promedio \pm error estándar del valor promedio y, para una mayor claridad, únicamente se ilustran cada dos
minutos.
Las figuras 2a, 2b, 2c, 2d, 2e y 2f muestran cómo la inversión sináptica convierte el filtro de aporte excitatorio en un amplificador. La estimulación de pulso individual del estrato piramidal evoca un IPSP (figura 2a). La estimulación de pulso individual de Sch a una intensidad por encima del umbral evoca un potencial de acción (figura 2b). La coestimulación de pulso individual del estrato piramidal y de Sch (la misma que las figuras 2a y 2b) elimina el EPSP y no se evoca ningún potencial de acción (figura 2c). Tras la coestimulación asociada del estrato piramidal y el estrato oriens (bajo el punto "Materiales y métodos") en presencia de fenilalanina (referencia), el IPSP se invierte a EPSP, observado al mismo potencial de membrana en reposo (figura 2d). La estimulación de pulso individual de Sch a intensidades por debajo del umbral evoca un EPSP (figura 2e). La coestimulación de pulso individual del estrato piramidal y de Sch (la misma que las figuras 2d y 2e) evoca un potencial de acción (figura 2f). Las puntas de flecha indican el tiempo en el que se suministra la estimulación de pulso individual del estrato piramidal o la coestimulación. Las unidades de barra de calibración son las mismas para las huellas y las inserciones (como la figura 2a), excepto las figuras 2b y 2f.
Las figuras 3a, 3b, 3c, 3d y 3f demuestran cómo el activador de la anhidrasa carbónica mejora el comportamiento de las ratas en el ensayo de laberinto acuático de plataforma escondida. La figura ilustra la latencia de escape (valor promedio \pm error estándar del valor promedio; n = 10 para cada grupo) en el entrenamiento en laberinto acuático (figura 3a) a lo largo de ocho ensayos (F_{7,105} = 55,78, p < 0,0001), las velocidades de nado (figura 3c) y la preferencia de cuadrante (figuras 3d-f) llevados a cabo al final de la octava sesión de entrenamiento. El cuadrante 4 es el cuadrante diana durante el entrenamiento. Las inserciones son recorridos tomados por ratas representativas, indicándose los números de cuadrante. La relación de diana se define como el tiempo de búsqueda en el cuadrante diana/promedio de los cuadrantes no diana (figura 3b). Las figuras 4a y 4b muestran una correlación lineal entre la actividad relativa de la anhidrasa carbónica en presencia del compuesto activador y la latencia de escape (figura 4a), que refleja el aprendizaje, y la relación de cuadrante diana (figura 4b), que refleja la memoria. Las técnicas fueron tal como se describen en los ejemplos. La fenilalanina y la acetazolamida son compuestos de referencia.
Según la presente invención, se puede administrar un fármaco a un paciente en un momento determinado a efectos de producir un efecto cognitivo (referido como cognición atencional), tal como aprendizaje, atención relacionada con el aprendizaje, aprendizaje asociativo y adquisición de memoria, así como consolidación de la memoria (sin provocar almacenamiento o recuperación de memoria), activando la anhidrasa carbónica neuronal, por ejemplo mediante compuestos que hacen aumentar la actividad de la anhidrasa carbónica y, de este modo, invierten la actividad GABAérgica desde una conductancia predominantemente hiperpolarizante de Cl^{-} a una conductancia despolarizante principalmente de HCO_{3}^{-}, arrastrando las células piramidales en un ritmo theta.
Los aspectos principales de la invención incluyen (1) efectos cognitivos específicos, (2) efectos de ritmo theta, y en particular, (3) la utilización de un compuesto según la reivindicación 18 para facilitar el aprendizaje por estimulación de la actividad de la anhidrasa carbónica por encima de los niveles de control estándar. El hecho de que la anhidrasa carbónica sea un enlace común entre estimular el potencial postsináptico excitatorio y estimular el ritmo theta permite las terapias de desórdenes neurológicos, incluyendo la terapia cognitiva.
La invención da a conocer la utilización de un compuesto según la reivindicación 1 para mejorar la cognición atencional, que comprende la administración de un compuesto que potencia la actividad de la anhidrasa carbónica intraneuronal, estableciéndose de este modo un ritmo theta. El recorrido metabólico del compuesto incluye preferentemente despolarización GABAérgica mediada por bicarbonato. El término "cognición atencional" pretende incluir formación de la memoria, aprendizaje, memoria espacial y atención. La cognición atencional puede incluir uno o más de los elementos de atención, aprendizaje y/o adquisición y/o retención de la memoria. De acuerdo con la invención, el ritmo theta puede ser aumentado por activadores de la anhidrasa carbónica a efectos de tratar desórdenes neurológicos tales como ictus, hipoxia e isquemia.
Administrar un compuesto utilizado en la invención al tren significa administrar el propio compuesto, que cruza la barrera hematoencefálica en una cantidad eficaz para suministrar el compuesto al cerebro.
Han sido publicados previamente métodos de medición de la actividad de la anhidrasa carbónica y de la cognición atencional en ratas. Sun MK, Zhao WQ, Nelson TJ, Alkon DL., "Theta Rhythm of Hippocampal CA1 Neuron Activity: Gating by GABAergic Synaptic Depolarization" ["Ritmo theta de la actividad neuronal CA1 del hipocampo: desbloqueo por despolarización sináptica GABAérgica"], J Neurophysiol 2001 Jan;85(1):269-79, y
Sun MK, Alkon DL., "Pharmacological Enhancement of Synaptic Efficacy, Spatial Learning, and Memory Through Carbonic anhydrase Activation in Rats" ["Mejoramiento farmacológico de la eficacia sináptica, el aprendizaje espacial y la memoria mediante activación de anhidrasa carbónica en ratas"], J. Pharmacol. and Experimental Therapeutics 297(3):961-967. En presencia de activadores de la anhidrasa carbónica, la comicroestimulación de los aportes colinérgicos del estrato oriens y los aportes GABAérgicos de ácido gamma-aminobutírico del estrato piramidal a baja intensidad invirtieron los potenciales postsinápticos inhibidores hiperpolarizantes mediados por GABA a respuestas despolarizantes. Los activadores de la anhidrasa carbónica provocaron en ratas la exhibición de un mejor aprendizaje en la tarea de laberinto acuático de Morris, lo que sugiere que la inversión sináptica GABAérgica resulta crítica para desbloquear la plasticidad sináptica que subyace a la formación de la memoria espacial. El aumento de la actividad de la anhidrasa carbónica mejora la percepción, el procesamiento y el almacenamiento de las señales relevantes temporalmente asociadas, y representa una terapia importante para la farmacología del aprendizaje y la
memoria.
Los activadores de la anhidrasa carbónica utilizados según la invención se seleccionan entre imidazola y sus análogos estructurales o los derivados tal como se definen mediante la fórmula I, y sales de los mismos, tal como se muestra a continuación mediante las realizaciones descritas a título de ejemplo. Las tablas 1 y 2 muestran compuestos según la presente invención a título de ejemplo. También se indican las actividades de dichos compuestos en relación con el nivel de control de actividad para la isozima CA-II.
Se pueden encontrar compuestos activadores adecuados y métodos para medir la actividad de la anhidrasa carbónica en Clare, B. W. y Supuran, C.T., "Carbonic anhydrase activators: 3: Structure-activity correlations for a series of isozyme II activators" ["Activadores de la anhidrasa carbónica: 3: correlaciones estructura-actividad para una serie de activadores de la isozima II"], J. Pharmaceut. Sci. 83: 768-773, 1994; Supuran, C.T., y otros, "Carbonic anhydrase activators. Part 7. Isozyme II activation with bisazolylmethanes, -ethanes and related azoles" ["Activadores de la anhidrasa carbónica. Parte 7. Activación de la isozima II con bisazolilmetanos, -etanos y azolas relacionadas"], Biol. Pharm. Bull. 16: 1236-1239, 1993; y Supuran, C.T., y otros, "Carbonic anhydrase activators: XV. A kinetic study of the interaction of bovine isozyme II with pyrazoles, bis- y tris- azolyl-methanes" ["Activadores de la anhidrasa carbónica: XV. Estudio cinético de la interacción de la isozima II bovina con pirazolas, bis y tris-azolil-metanos"], Biol. Pharm. Bull. 19: 1417-1422,1996.
Los compuestos activadores según la presente invención son compuestos de imidazola y sus análogos estructurales, derivados y sales, que presentan la estructura general:
1
en la que R^{1} y R^{2} son independientemente H, o alquilo C_{1}-C_{6} o alquilo C_{1}-C_{4} lineal, ramificado o cíclico. Metilo y etilo son ejemplos de grupos alquilo que pueden encontrarse en la posición R^{1}, o en la que R^{1} es
2
y n es 1 ó 2 y R^{2} es H, o alquilo C_{1}-C_{6} o alquilo C_{1}-C_{4} lineal, ramificado o cíclico. Metilo es un ejemplo de R^{2}.
Diferentes grupos R pueden hacer aumentar el efecto del activador y la mejora cognitiva asociada al mismo. Dichos efectos aumentados pueden ser fácilmente determinados mediante experimentación de rutina. Ejemplos de los compuestos de imidazola según la invención (estructura I, compuestos 1-4) y de diimidazolas enlazadas según la invención (compuestos 5-25) se muestran en las tablas 1 y 2, respectivamente.
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TABLA 1
3
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TABLA 2
4
Algunos de estos compuestos fueron ensayados en ratas en experimentos de aprendizaje y memoria. Los resultados se representan en las figuras 4a y 4b. Como se pone de manifiesto, la activación de la anhidrasa carbónica está directamente relacionada con los efectos de aprendizaje y memoria en un mamífero. Una actividad reducida inhibe el aprendizaje la memoria. Una actividad aumentada mejora el aprendizaje y la memoria de un modo linealmente proporcional.
En las tablas 1 y 2 anteriores, se indican compuestos según la invención. Muchos de estos compuestos son conocidos y los métodos para obtenerlos resultan conocidos para las personas expertas en la materia. Los compuestos pueden combinarse y se pueden administrar en un portador farmacéuticamente aceptable, y se pueden empaquetar junto con un etiquetaje que indique el efecto cognitivo.
Los compuestos según la presente invención pueden proporcionar una actividad de anhidrasa carbónica neuronal, como mínimo, del 110, 115, 125, 135, 150, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240 y 250% la de la alanina.
La dosis efectiva para la administración de los compuestos es una dosis que hace aumentar la actividad de la anhidrasa carbónica en las células de los recorridos de señalización neuronal asociados con tareas específicas de aprendizaje, atención y memoria. Cuando los compuestos activadores se administran en dosis efectivas de acuerdo con la presente invención, hacen aumentar la actividad de la anhidrasa carbónica activando directamente la anhidrasa carbónica o induciendo al recorrido neuronal intracelular de señalización de calcio a activar la anhidrasa carbónica. Si la dosis es demasiado elevada, no se produce ningún efecto beneficioso en el aprendizaje, y de hecho el sujeto puede presentar una obstaculización de dicho aprendizaje. De este modo, una dosis elevada puede sobresaturar los recorridos neuronales, y una dosis reducida puede no alcanzar la activación enzimática deseada y su efecto en el aprendizaje. La dosis debe ajustarse a efectos de obtener el resultado deseado.
Extrapolando a partir de la dosificación en ratas, que es predictiva de la dosificación en humanos, las dosis efectivas de fenilalanina (referencia) (50 mM) o imidazola (0,5 M) para tratar humanos pueden incluir el equivalente de 0,1, 0,3, 1,3 ó 10 ml/kg de peso corporal, dos veces al día. Un régimen de dosificación deseable incluye administrar el compuesto aproximadamente 30 minutos antes de la actividad de cognición atencional deseada.
Las composiciones químicas útiles en la presente invención se pueden "convertir" en composiciones farmacéuticas mediante su disolución en, y/o la adición de, portadores o diluyentes apropiados y farmacéuticamente aceptables. De este modo, las composiciones se pueden formular como preparaciones sólidas, semisólidas, líquidas o gaseosas, tales como comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, cremas, soluciones, supositorios, inyectables, inhalantes y aerosoles, utilizando medios convencionales. Se utilizan métodos conocidos para impedir la liberación o absorción del ingrediente o agente activo hasta que alcanza las células o el órgano diana, o para asegurar la liberación en el tiempo del agente. Una forma farmacéuticamente aceptable es aquella que no inactiva ni desnaturaliza el agente activo. En las formas de dosificación farmacéuticas útiles en el presente documento, las presentes composiciones pueden ser utilizadas individualmente o en asociación o combinación adecuadas con otros compuestos farmacéuticamente activos.
Por consiguiente, las composiciones farmacéuticas según la presente invención pueden ser administradas a cualquiera de entre varios lugares de un sujeto y, en consecuencia, ser suministradas a través de cualquiera de entre varias vías a efectos de alcanzar el efecto deseado. El suministro local o sistémico se lleva a cabo administrando la composición farmacéutica por inyección, infusión o instilación en una parte del cuerpo o una cavidad corporal, o mediante ingestión, inhalación o insuflación de un aerosol. Las vías de administración referidas incluyen administración parenteral, que incluye las rutas intramuscular, intracraneal, intravenosa, intraperitoneal, intradérmica subcutánea, o
tópicas.
Las presentes composiciones se pueden presentar como forma de dosificación unitaria, en la que cada unidad de dosificación, por ejemplo, una cucharilla, un comprimido, un volumen fijo de solución inyectable, o un supositorio, contiene una cantidad predeterminada de la composición, sola o en una combinación apropiada con otros agentes farmacéuticamente activos. El término "forma de dosificación unitaria" se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas para un sujeto humano o animal, conteniendo cada unidad, tal como se ha descrito anteriormente, una cantidad predeterminada de la presente composición farmacéutica o combinación en una cantidad suficiente para producir el efecto deseado. Cualquier diluyente o portador farmacéuticamente aceptables puede ser utilizado en una unidad de dosificación, por ejemplo, un portador líquido tal como una solución salina, una solución tampón, u otra solución acuosa fisiológicamente aceptable, o un vehículo. Las especificaciones para las formas de dosificación unitarias novedosas según la presente invención dependen del efecto particular que se desea alcanzar y de las propiedades farmacodinámicas particulares de la composición farmacéutica en el huésped particular.
Una "cantidad efectiva" de composición es una cantidad que produce el efecto deseado en un huésped, efecto que puede ser controlado utilizando cualquier método de punto final conocido por los expertos en la materia.
Además, la cantidad de cada agente activo que se ejemplifica en el presente documento pretende proporcionar una guía general del intervalo de cada componente que puede ser utilizado por el médico a la hora de optimizar dichos métodos para la práctica in vitro o in vivo. Además, los intervalos de dosificación indicados a título de ejemplo no excluyen la utilización de dosis más elevadas o más reducidas, como puede ser el caso en una aplicación particular. Por ejemplo, la dosis y el régimen reales pueden depender de (a) si una composición se administra en combinación con otras composiciones farmacéuticas, o (b) diferencias entre individuos en su farmacocinética, tolerancia a fármacos y metabolismo. De forma similar, las cantidades pueden variar para las aplicaciones in vitro. El experto en la materia puede llevar a cabo cualquier ajuste necesario de acuerdo con las necesidades de la situación particular.
Existen diversas isozimas de la anhidrasa carbónica. Véase Lindskog, "Structure and Function of Carbonic Anhydrase" ["Estructura y función de la anhidrasa carbónica"], Pharmacol. Ther. Vol.74 (1), P1-20, 1997. Se conoce la estructura del lugar de enlace CAII para la acetazolamida y algunos otros inhibidores. Este conocimiento permite el diseño racional de derivados y análogos de los compuestos indicados en el presente documento.
Ejemplo Introducción
Se registraron células piramidales CA1 en cortes de hipocampo de rata. En presencia de activadores de anhidrasa carbónica, la comicroestimulación de aportes colinérgicos del estrato oriens y aportes GABAérgicos de ácido \gamma-aminobutírico del estrato piramidal a bajas intensidades invirtieron los potenciales postsinápticos inhibidores hiperpolarizantes mediados por GABA a respuestas despolarizantes. En ausencia de los activadores, sin embargo, los mismos estímulos resultaron insuficientes para desencadenar la inversión sináptica. Dicha inversión sináptica modificó la función de las sinapsis GABAérgicas de filtro de excitación a amplificador, y se vio inhibida por inhibidores de la anhidrasa carbónica, lo que indicaba la dependencia de HCO_{3}^{-}. La administración ventricular intralateral de estos mismos activadores de la anhidrasa carbónica provocó que las ratas exhibieran un mayor aprendizaje en la tarea del laberinto acuático de Morris, lo que sugería que la inversión sináptica GABAérgica es crítica para desbloquear la plasticidad sináptica que subyace a la formación de la memoria espacial. La actividad aumentada de la anhidrasa carbónica también mejora la percepción, el procesamiento y el almacenamiento de las señales relevantes temporalmente asociadas y representa un importante objetivo terapéutico en la farmacología del aprendizaje Y la memoria.
Materiales y métodos
Cortes cerebrales. Se anestesiaron ratas macho de Sprague-Dawley (150-180 g) con pentobarbital y se decapitaron. La formación del hipocampo se extrajo y se realizaron cortes (400 \mum) con un cortador de tejido McIllwain (Sun y otros, 1999). Los cortes se mantuvieron en una cámara de interfase (Medical systems Corp., Greenvale, NY) a 31ºC con perfusión continua de fluido cerebroespinal artificial. El fluido cerebroespinal artificial consistía en 125 mM de NaCl, 3 mM de KCl, 1,3 mM de MgSO_{4}, 2,4 mM de CaCl_{2}, 26 mM de NaCHO_{3}, 1,25 mM de NaH_{2}PO_{4} y 10 mM de C_{6}H_{12}O_{6}.
Electrofisiología. Se obtuvieron registros intracelulares a partir de neuronas piramidales CA1 utilizando electrodos de micropipeta de vidrio llenados con acetato de potasio 2 M (pH 7,25), con una resistencia de la punta medida comprendida entre 70 y 120 M\Omega. Las células que exhibían una colocación obvia, característica distintiva de las células piramidales, se utilizaron el estudio. La marcación por tinción de las células registradas que exhiben dicha característica ha puesto de manifiesto anteriormente que las células registradas son efectivamente células piramidales (Sun y otros, 1999). Las señales se amplificaron, digitalizaron y almacenaron utilizando un amplificador AxoClamp-2B y DigiData 1200 con el software de adquisición y análisis de datos P-clamp (Axon Instruments, Foster City, CA). Se estimularon el estrato piramidal, el estrato radiatum y/o el estrato oriens (aproximadamente 200 \mum desde el electrodo de registro), utilizando electrodos bipolares construidos con cable de PtIr aislado con teflón (25 \mum de diámetro, el grosor aproximado del estrato piramidal; FHC Inc., Bowdoinham, ME). Los potenciales postsinápticos hiperpolarizantes monofásicos (PSP) se obtuvieron por estimulación ortodrómica de pulso individual de interneuronas en el estrato piramidal (Collin y otros, 1995). En algunos experimentos, también se colocó un electrodo estimulante (aproximadamente 400 \mum desde los otros electrodos estimulantes cuando se colocaron dos electrodos estimulantes) en el estrato oriens a efectos de activar los terminales colinérgicos y evocar la liberación de acetilcolina (Cole y Nicoll, 1984), o en el estrato radiatum a efectos de evocar los PSP glutamatérgicos. La coestimulación del estrato oriens y el estrato piramidal consistió en la estimulación del estrato oriens con pulsos individuales (20-60 \muA y 50 \mus, 1 Hz durante 10 s) y la estimulación del estrato piramidal con cuatro trenes [10 pulsos/tren a intensidad de control (30-60 \muA y 50 ms, 100 Hz), empezando en la novena estimulación del estrato oriens] con un intervalo entre trenes de 0,5 s.
Fármacos y ligandos. La bicuculina, acetazolamida (disuelta en dimetilsulfóxido), ácido quinurénico, imidazola, fenilalanina y atropina fuera del alcance de la invención se obtuvieron a través de Sigma (St. Louis, MO) y se disolvieron en las concentraciones indicadas y se suministraron a la cámara de corte desde un depósito externo. Para las inyecciones ventriculares intralaterales de fenilalanina (50 mM), imidazola (0,5 M) y/o acetazolamida (10 mM) in vivo, los agentes (2 \mul/lugar/día) se inyectaron bilateralmente durante los días de entrenamiento aproximadamente 30 min antes del entrenamiento, a una velocidad de 1 \mul/min. Las ratas de control recibieron el mismo volumen de solución salina.
Tareas de laberinto espacial. Los efectos del aumento de la formación de HCO_{3} in vivo sobre la memoria espacial se evaluaron en ratas mediante la tarea del laberinto acuático de Morris. Se colocaron ratas macho adultas Wistar (200-250 g) en un espacio a temperatura controlada (20-24ºC) durante una semana, se les dio acceso libre a comida y agua, y se mantuvieron en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h. Las ratas se anestesiaron con pentobarbital de sodio (60 mg/kg vía intraperitoneal) y se colocaron en un aparato estereotáctico (Kopf Instruments, Tujunga, CA). La temperatura central de las ratas se controló y se mantuvo constante (38,0 \pm 0,5ºC) con luz y parche de calentamiento. Se colocaron dos cánulas de guía de acero inoxidable con las puntas posicionadas en las coordenadas (anterior-posterior, 0,5 mm; lateral, 1,5 mm; horizontal, 3,2 mm), en condiciones asépticas. Al finalizar la cirugía y bajo anestesia apropiada, las ratas recibieron (subcutáneamente) banamina (1 mg/kg) y cetoprofeno (5 mg/kg) en solución de lactato/Ringer. Se permitió un período de recuperación de 7 días antes de cualquier experimentación posterior.
El primer día de experimentos, se asignaron todas las ratas aleatoriamente a diferentes grupos (10 en cada uno) y se hicieron nadar durante 2 min en una piscina de 1,5 (diámetro) x 0,6 m (profundidad) (22 \pm 1ºC). Al día siguiente, la ratas se entrenaron en una tarea de dos ensayos por día durante cuatro días consecutivos. Cada ensayo de entrenamiento duró hasta 2 min, durante los cuales las ratas aprendían a escapar del agua encontrando una plataforma escondida colocada en un lugar fijo y sumergida aproximadamente 1 cm por debajo de la superficie del agua. La navegación de las ratas se controló mediante videocámara. Se registró la latencia de escape y la ruta de nado de las ratas a través de la piscina hasta la plataforma. El ensayo de cuadrante (1 min) se llevó a cabo tras extraer la plataforma, 24 h después del último ensayo de entrenamiento.
Se llevaron a cabo análisis estadísticos utilizando el ensayo t de Student para datos apareados o no apareados o ANOVA cuando resultaba apropiado. Los valores se expresan como valor promedio \pm S.E.M., indicando n el número de células o ratas. Todos los animales utilizados en estos experimentos fueron tratados según las normativas del National Institutes of Health para el bienestar de los animales de laboratorio.
Resultados
La microestimulación del estrato piramidal con un pulso individual dio lugar a un potencial postsináptico inhibidor hiperpolarizante (IPSP; figura 1a). El IPSP procedía, principalmente si no exclusivamente, de la activación de los aportes GABAérgicos de las interneuronas Basket, cuyos cuerpos celulares y axones están restringidos al estrato piramidal. Tal como se ha descrito en publicaciones anteriores (Sun y otros, 1999, 2000), los IPSP exhibieron un potencial de inversión de aproximadamente -78 mV. No se observaron componentes PSP menores detectables que exhiben un potencial de inversión diferente. La aplicación en baños de ácido quinurénico (500 \muM, 20 min), un antagonista competitivo de amplio espectro para el N-metil-D-aspartato (NMDA) y para receptores no NMDA (Collingridge y Lester, 1989), abolieron eficazmente los EPSP de las células piramidales CA1 evocadas por estimulación de los recorridos colaterales de Schaffer (Sch; a 96,3 \pm 4,1%, n = 6 de seis ratas diferentes, p < 0,05). A esta concentración, el ácido quinurénico no incrementó las amplitudes de IPSP (-8,2 \pm 0,6 mV de ácido prequinurénico frente a 28,3 \pm 0,7 mV durante la aplicación; n = 7 de siete ratas diferentes, p > 0,05; figura 1a), lo que sugiere que la microestimulación de pulso individual del estrato piramidal no evocó un componente EPSP glutamatérgico significativo. Sin embargo, los IPSP fueron bloqueados por bicuculina, el antagonista selectivo del receptor GABA_{A} (a 97,9 \pm 4,4% de promedio, n = 6 de seis ratas diferentes, p < 0,05; 1 \muM, perfusión de 30 min; figura 1b), lo que indicaba que los IPSP estaban predominantemente mediados por la activación de los receptores GABA_{A} y, en consecuencia, se refirieron como respuestas de interneuronas CA1 de Basket.
La estimulación de pulso individual del estrato oriens (1 Hz, 10 s) coincidente con trenes de estimulación del estrato piramidal produjo una disminución pequeña pero duradera en las amplitudes de IPSP (figura 1, d y f). Por ejemplo, 40 min después de la coestimulación, los picos de IPSP fueron -4,9 \pm 0,7 mV, significativamente más pequeños que -7,4 \pm 0,9 mV antes de la estimulación asociada (n = 8 de siete ratas diferentes, p < 0,05; ensayo de t apareada). Se aplicaron dos activadores de la anhidrasa carbónica, la imidazola (100 \muM, 20 min; Parkes y Coleman, 1989) o la fenilalanina (100 \muM, 20 min; Clare y Supuran, 1994). En presencia de fenilalanina, los picos de IPSP en respuesta a la estimulación de pulso individual del estrato piramidal se redujeron ligera pero significativamente (figura 1c; a -4,5 \pm 0,8 mV en presencia de fenilalanina con IPSP prefenilalanina de -7,6 \pm 1,2 mV; n = 7 de siete ratas diferentes, p < 0,05). En presencia del activador de la anhidrasa carbónica, las mismas intensidades de coestimulación del estrato piramidal y del estrato oriens produjeron una inversión duradera de los IPSP a EP-SP, observados cuando los potenciales de membrana se mantuvieron en sus niveles de control (figura 1, d y e). Así, 40 min después de la coestimulación (punto "Materiales y métodos") y en presencia de fenilalanina, los picos de PSP fueron 6,4 \pm 1,1 mV, significativamente diferentes (n = 8 de ocho ratas diferentes, p < 0,05) de sus valores prefenilalanina (-7,2 \pm 1,2 mV) o con los valores en presencia de fenilalanina pero antes de la coestimulación (figura 1d). En presencia de la imidazola, se observaron efectos similares en los IPSP (-5,3 \pm 0,7 mV en presencia de imidazola frente a unos valores preimidazola de
-7,8 \pm 0,6 mV; n = 7 de siete ratas diferentes, p < 0,05) y efectos de la coestimulación (pico de PSP: 4,2 \pm 0,6 mV, en presencia de imidazola y 40 min tras la coestimulación frente a valores de preimidazola de -7,5 \pm 0,7 mV; n = 6 en seis ratas diferentes, p < 0,05), aunque en general fueron menos potentes. Así, los resultados con imidazola no se ilustraron con detalle.
Tanto el efecto reductor de los activadores de la anhidrasa carbónica sobre los IPSP como el efecto de inversión sináptica con coestimulación de los aportes colinérgico y GABAérgico dependen de la actividad de la anhidrasa carbónica. Por ejemplo, en presencia de acetazolamida (10 \muM, 20 min), un bloqueador de la anhidrasa carbónica y, en consecuencia, de la síntesis de HCO_{3} (Staley y otros, 1995), la fenilalanina no redujo significativamente los picos de IPSP (-7,7 \pm 0,9 mV en presencia de fenilalanina frente a picos de IPSP prefenilalanina de -7,9 \pm 1,1 mV, n = 6 de seis ratas diferentes, p > 0,05). La imidazola, en presencia de acetazolamida, tampoco cambió significativamente el tamaño de los IPSP (-7,5 \pm 1,0 mV en presencia de imidazola frente a picos de IPSP preimidazola de -7,4 \pm 0,8 mV, n = 5 de cinco ratas diferentes, p > 0,05). Las mismas intensidades de coestimulación no indujeron la inversión sináptica (figura 1, d y g) en presencia de acetazolamida y fenilalanina o imidazola. Así, en presencia de acetazolamida y fenilalanina, estos IPSP no se vieron significativamente alterados por la coestimulación del estrato oriens y el estrato piramidal
(-7,8 \pm 1,3 mV, 40 min después, comparados con -7,6 \pm 0,9 mV como valor de control, n = 8 de ocho ratas diferentes,
p > 0,05). Además, la coestimulación no modificó significativamente los IPSP en presencia de acetazolamida e imidazola (-7,7 \pm 1,1 mV, 40 min después, comparados con -7,5 \pm 0,8 mV como valor de control, n = 6 de seis ratas diferentes, p > 0,05).
La influencia de la inversión sináptica GABAérgica en el paso de señal a través de las células CA1 se evaluó cuando los aportes Sch glutamatérgicos se coestimularon. En ocho células, la estimulación por pulso individual del estrato piramidal evocó un IPSP (figura 2a). El aporte Sch excitatorio se estimuló a intensidades un 30% por encima del umbral de potencial de acción (100% de 20 ensayos) de las células registradas (figura 2b). La coestimulación de los aportes GABAérgicos y Sch bloqueó (100% de 20 ensayos; n = 10 de ocho ratas diferentes, p > 0,05) los efectos del aporte de Sch excitatorio, estimulado a intensidades por encima del umbral de potencial de acción (figura 2c) en las ocho células ensayadas. El período efectivo señal-filtración en cada respuesta inhibitoria evocada por pulso individual fue \geq 100 ms, durante el cual no se evocó ningún potencial de acción (0% de 20 ensayos) por estimulación de Sch en la intensidad superior al umbral. Tras la inversión sináptica (figura 2d) inducida por coestimulación de los aportes GABAérgico y colinérgico en presencia de fenilalanina, la estimulación de Sch por debajo del umbral, que por sí sola no evocó potenciales de acción (0% de 20 ensayos; figura 2e), fue suficiente para evocar potenciales de acción (100% de 20 ensayos; n = 8 de ocho ratas diferentes, p < 0,05) cuando se suministró durante el periodo de \textdollar100 ms de estimulación por pulso individual del aporte GABAérgico (figura 2f; n = 8 de ocho ratas diferentes). Se evocaron múltiples picos cuando el PSP de interneuronas CA1 de Basket se coestimuló con estimulación de Sch por encima del umbral tras inducir la inversión sináptica (datos no mostrados). De este modo, tras la inversión sináptica, la actividad de las interneuronas GABAérgicas amplificó los aportes de Sch excitatorios. Por lo tanto, las señales débiles se amplifican tras la inversión sináptica o los potenciales de acción de disparo, mientras que las señales excitatorias intensas no pueden pasar exitosamente a través de la red bajo inhibición asociada.
Los efectos de los activadores de la anhidrasa carbónica se ensayaron en el aprendizaje espacial de ratas, utilizando el laberinto acuático de plataforma escondida. Tal como se muestra en la figura 3a, la latencia de escape hacia la plataforma en los tres grupos de ratas descendió después de las sesiones de entrenamiento. El análisis estadístico puso de manifiesto efectos significativos de los grupos (F_{2,27} = 9,192, p < 0,001), ensayos (F_{7,218} = 7,83, p < 0,001), y la sesión de grupos X de los ensayos (F_{14,218} = 3,70, p < 0,001), lo que indicó que el aprendizaje espacial en las ratas inyectadas con fenilalanina (ratas fenilalanina) fue más rápido que en ratas inyectadas con solución salina (ratas de control). Además, un análisis post hoc revela una diferencia significativa del segundo al sexto ensayo (p < 0,05), lo que confirma un mejor aprendizaje en las ratas fenilalanina. De hecho, la latencia de escape de las ratas fenilalanina alcanzó un estado estacionario en el quinto ensayo. Se requirieron tres ensayos adicionales para que las ratas de control exhibieran la misma latencia de escape que las ratas de fenilalanina (figura 3a). Los ensayos de cuadrante 24 h después del último ensayo de entrenamiento revelaron que las ratas de control (F_{3,36} = 159,9, p < 0,0001; ANOVA y ensayo post hoc de Newman-Keuls), y las ratas fenilalanina (F_{3,36} = 201,2, p < 0,0001) pasaron más tiempo buscando en el cuadrante diana (cuadrante 4), en el que se había colocado previamente la plataforma antes de extraerla. Sin embargo, en comparación con las ratas de control, las ratas fenilalanina exhibieron una preferencia claramente mayor por el cuadrante diana (en 24,8 \pm 1,8%, p < 0,05; ensayo de t no apareada) (figura 3, d y e). Las relaciones de cuadrante diana, diana/promedio de los cuadrantes no diana, entre las ratas fenilalanina y las ratas de control, fueron significativamente distintas (p < 0,001; figura 3b). De forma similar, las ratas inyectadas con imidazola (ratas imidazola) también mostraron un aprendizaje más rápido y una latencia de escape significativamente más corta del tercer al sexto ensayos (p < 0,05) que para los animales de control. Los ensayos de cuadrante revelaron que las ratas imidazola tenían una preferencia mayor por el cuadrante diana (en 15,1 \pm 1,6%, p < 0,05) que las ratas de control. Así, las ratas inyectadas con los activadores de la anhidrasa carbónica se comportaron mejor que sus controles en esta tarea de retención de memoria espacial. Las velocidades de nado promedio para los ocho ensayos, sin embargo, no difirió entre todos los grupos (figura 3c; p > 0,05), incluyendo los grupos imidazola y acetazolamida/imidazola (datos no mostrados), lo que indicó que los activadores y el inhibidor de la anhidrasa carbónica no afectaron significativamente a sus actividades sensoriales o locomotoras. Durante los períodos experimentales, ninguna rata mostró signos evidentes de incomodidad o comportamientos anormales, tales como hipo o hiperactividad.
Los efectos de los activadores de la anhidrasa carbónica sobre el aprendizaje espacial fueron sensibles a los inhibidores de la anhidrasa carbónica. Las inyecciones intraventriculares bilaterales de acetazolamida no solo eliminaron los efectos de los activadores de la anhidrasa carbónica sobre el aprendizaje, sino que produjeron un deterioro de la memoria (figura 3a). El grupo acetazolamida/fenilalanina mostró una reducción sorprendentemente menor (F_{1,18} = 40,38, p < 0,0001) en la latencia de escape durante los ensayos de entrenamiento que los grupos de control. Los ensayos de cuadrante pusieron de manifiesto que las ratas acetazolamida/fenilalanina no mostraron ninguna diferencia significativa de preferencia por un cuadrante particular (F_{3,36} = 1,43, p > 0,05; figura 3f) y una relación de cuadrante diana significativamente diferente (p < 0,001) entre las ratas fenilalanina y las ratas de control (figura 3b). Se observaron resultados idénticos en las ratas inyectadas con acetazolamida e imidazola (datos no mostrados).
De acuerdo con la invención, la mejora de la inversión sináptica GABAérgica en el control del procesamiento de señal en la red del hipocampo se puede alcanzar mediante la utilización de activadores de la anhidrasa carbónica, y dichos activadores de la anhidrasa carbónica hacen aumentar la eficacia de la actividad temporalmente asociada de los aportes colinérgico y GABAérgico a la hora de invertir los IPSP GABAérgicos hiperpolarizantes a PSP excitatorios. La inversión sináptica puede inducirse por estimulación postsináptica asociativa (Collin y otros, 1995), activación de la cascada de señales de calexcitina, o coestimulación de los aportes colinérgico y GABAérgico a mayores intensidades y períodos más prolongados de estimulación (Sun y otros, 2001a). Los resultados mostrados anteriormente indican que la presencia de los activadores de enzima facilita la inducción de la inversión sináptica, de tal modo que se requirieron menos trenes, y más débiles, de coestimulación. Así, la administración de activadores de la anhidrasa carbónica puede hacer aumentar de forma aditiva o sinérgica la activación de procedencia natural de la anhidrasa carbónica que tiene lugar en las neuronas de los recorridos asociados con la cognición atencional.
En el estudio se utilizaron dos activadores de enzima de diferentes clases de compuestos, que presentan diferentes espectros de acciones biológicas, arrojando resultados similares. Dichos activadores se administraron directamente al cerebro a efectos de evitar la limitación de acumulación en el cerebro por la barrera hematoencefálica. Se conoce el hecho de que el transporte competitivo y la rápida hidroxilación periférica limitan la concentración de fenilalanina en el cerebro de las sustancias que contienen fenilalanina administradas sistémicamente (tales como aspartamo, cuyos metabolitos incluyen ácido 5-benzil-3,6-dioxo-2-piperazinacético, ácido fenilalaninaspártico, asparaginil-fenilalanina, metiléster de fenilalanina, fenilalanina, ácido aspártico, metanol y formiato). Estos efectos limitan el acceso de la fenilalanina al cerebro y posiblemente su impacto en el comportamiento. Además de la activación de la anhidrasa carbónica, una alta concentración de fenilalanina en el cerebro puede facilitar la síntesis de catecolaminas y la transmisión catecolaminérgica.
Las estructuras tipo imidazola, por otro lado, pueden reaccionar con muchas moléculas biológicamente activas, incluyendo monoamina oxidasa, receptores de histamina H_{2}, receptores de angiotensina II tipo 1, lugares de enlace de etanol en complejos receptor-canal GABA, receptores GABA_{C}, el complejo receptor-canal nicotínico-colinérgico, el grupo prostético hemo de la óxido nítrico sintasa, algunos canales K_{ATP}, y lugares de enlace de imidazola. Por lo tanto, las consecuencias biológicas y la especificidad de una concentración aumentada de imidazola en el cerebro todavía están por clarificar. Así, estos resultados no excluyen una posible contribución de una interacción sináptica/señal en otras regiones del cerebro o una acción de las sustancias y sus metabolitos en los \alpha-adrenoceptores, receptores dopaminérgicos y/o receptores histaminérgicos, a la mejora del aprendizaje y la memoria espaciales. Sin embargo, el denominador común de los dos activadores de la anhidrasa carbónica, la acción sobre la anhidrasa carbónica, es probablemente el mecanismo subyacente para los efectos observados. El papel crítico de la activación de la anhidrasa carbónica en los efectos observados de los activadores de la anhidrasa carbónica se demostró adicionalmente de forma directa mediante la efectividad de la acetazolamida, un inhibidor de la anhidrasa carbónica, a la hora de bloquear la inversión sináptica. Se ha puesto de manifiesto que la acetazolamida es capaz de reducir o eliminar el flujo de HCO_{3} en neuronas piramidales del hipocampo que subyace a un PSP despolarizante (Staley y otros, 1995). La actividad de la anhidrasa carbónica en las células piramidales CA1 es esencial, ya que se puso de manifiesto previamente que la aplicación intracelular de benzolamida, un inhibidor de la anhidrasa carbónica impermeante a la membrana, bloquea eficazmente la inversión sináptica GABAérgica (Sun y otros, 1999).
La anhidrasa carbónica es una enzima altamente eficaz. Si su actividad es esencial para codificar y almacenar la información aprendida, se podía esperar la existencia de mecanismos celulares que controlan la actividad de dicha enzima. No existen indicios de que la liberación de Ca^{2+} intracelular aumente la conducción de HCO_{3} a través de los IPSP mediados por receptores GABA_{A} ni de que el efecto sea sensible a la inhibición de la anhidrasa carbónica (Sun y otros, 2000). La asociación de membrana es otro eficaz mecanismo para activar la anhidrasa carbónica (Parkes y Coleman, 1989). La translocación y la asociación de membrana de la anhidrasa carbónica del citosol pueden participar en la adquisición y/o consolidación de la memoria. El procedimiento inventivo permite la activación de la anhidrasa carbónica neuronal mediante cualquiera de estos mecanismos o mediante todos ellos. La participación de la anhidrasa carbónica en las funciones cognitivas es consistente con la evidencia (Meier-Ruge y otros, 1984) de una actividad significativamente disminuida de la enzima en la enfermedad de Alzheimer con respecto a controles de la misma edad y con una edad mayor.
Los presentes resultados demuestran que las respuestas sinápticas invertidas proporcionan un mecanismo postsináptico para dirigir o desbloquear el flujo de señal a través de la red del hipocampo. Se conoce el hecho de que las interneuronas GABAérgicas, particularmente las interneuronas de Basket, cuyos cuerpos celulares y axones están restringidos a la capa celular, inervan la región perisomática de las células piramidales. De este modo, el desencadenamiento de la actividad de las interneuronas en ausencia de inversión sináptica inhibe las células piramidales, bloqueando potentemente la transferencia de señal excitatoria a través del circuito del hipocampo. Una activación asociada de los aportes colinérgicos y GABAérgicos puede desencadenar la inversión sináptica, particularmente cuando se activa la anhidrasa carbónica. Tras la inversión sináptica, sin embargo, el mismo tipo de actividad GABAérgica amplifica la señal excitatoria. De este modo, el mecanismo diferencia respuestas según la naturaleza y la asociación temporal de señales relevantes y los estados de actividad neuronal, un fenómeno que puede subyacer a la plasticidad sináptica en el aprendizaje la memoria (Liu y Cull-Candy, 2000; Shulz y otros, 2000). El mecanismo de inversión sináptica permite a la red llevar a cabo el procesamiento de señal y desbloquear el flujo y la dirección de la información correspondientemente.
Así, según la presente invención, la alteración de los estados de actividad neuronal de los que depende el aprendizaje a través de la actividad de la anhidrasa carbónica representa una eficaz estrategia terapéutica para alcanzar una terapia de la memoria. Los agentes que activan la anhidrasa carbónica de acuerdo con la presente invención tienen un valor clínico para la mejora de la memoria y para el tratamiento del deterioro de la memoria espacial. La fenilalanina (referencia) se puede utilizar en la mayoría de individuos que no presentan un déficit genético de fenilalanina hidroxilasa, y los activadores no de fenilalanina más potentes y selectivos (tales como derivados de imidazola e histamina) pueden ayudar a los individuos con disfunción de la hidroxilasa.
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Claims (16)

1. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica para mejorar la cognición atencional en una dosis eficaz para mejorar la cognición atencional al ser administrado al cerebro de un sujeto que necesita una mejora de su cognición atencional, definiéndose dicho compuesto activador de la anhidrasa carbónica mediante la estructura I:
5
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en la que R^{1} y R^{2} son independientemente H, o alquilo C_{1}-C_{6} o alquilo C_{1}-C_{4} lineal, ramificado o cíclico; o en la que R^{1} es
6
y n es 1 ó 2 y R^{2} es H, o alquilo C_{1}-C_{6} o alquilo C_{1}-C_{4} lineal, ramificado o cíclico; y sales de los mismos.
2. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 1, en el que el compuesto potencia la actividad intraneuronal de la anhidrasa carbónica.
3. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 1, en el que el activador presenta la estructura I y en el que R^{1} es H, metilo o etilo; y R^{2} es H o metilo.
4. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 1, en el que n es 1 ó 2; y R^{2} es H o metilo.
5. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 1, en el que el activador se selecciona de entre el grupo que consiste en imidazola, diimidazola enlazada, y sales de las mismas.
6. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 1, en el que el activador de la anhidrasa carbónica se administra como composición farmacéutica o en un portador farmacéuticamente aceptable.
7. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 1, en el que el paciente presenta un desorden neurodegenerativo.
8. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 1, en el que el compuesto mejora la capacidad cognitiva, la atención, el aprendizaje y/o la memoria en individuos que no presentan un desorden neurológico.
9. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 1, en el que el compuesto facilita el establecimiento de un ritmo theta a través de una despolarización GABAérgica mediada por bicarbonato.
10. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 9, en el que el compuesto mejora la formación de memoria, el aprendizaje, la memoria espacial y/o la atención.
11. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 9, en el que el compuesto interviene en la cascada de señalización intracelular responsable del ritmo theta, comprendiendo dicha intervención la modulación de la conductancia de HCO_{3} por modificación directa de la actividad intraneuronal de la anhidrasa carbónica.
12. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 11, en el que la intervención modula la corriente de HCO_{3}^{-} en relación con las corrientes de Cl^{-} y K^{+}.
13. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 1, en el que el compuesto mejora la cognición atencional en un sujeto afectado por la enfermedad de Alzheimer, ictus, hipoxia y/o isquemia.
14. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 1, en el que el compuesto es tal que proporciona una actividad de la anhidrasa carbónica, como mínimo, del 150% con respecto a la de la alanina in vitro.
15. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 1, en el que el compuesto es tal que proporciona una actividad de la anhidrasa carbónica, como mínimo, del 200% con respecto a la de la alanina in vitro.
16. Compuesto activador de la anhidrasa carbónica, según la reivindicación 1, en el que el compuesto es tal que proporciona una actividad de la anhidrasa carbónica, como mínimo, del 250% con respecto a la de la alanina in vitro.
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