ES2314890T3 - Tioeteres tripeptidicos y tetrapeptidicos. - Google Patents
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Abstract
Compuesto de fórmula (Ver fórmula) en la que: n es 0 ó 1; W es L- -glutamilo o L- -glutamilglicilo; X es cicloalquilo C5 - 6 opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo C5 - 6 opcionalmente sustituido, fenilo opcionalmente sustituido o heteroarilo C5 - 6 opcionalmente sustituido; Y es =O, =N-OH o =N-O(alquilo C1 - 3 opcionalmente sustituido); y Z es fenilo opcionalmente sustituido o heteroarilo C5 - 6 opcionalmente sustituido; o su mono o diéster alquílico C1 - 10, fenil-alquílico C1 - 3 o (heteroaril C5 - 6)-alquílico C1 - 3; o una sal del compuesto o su mono o diéster.
Description
Tioéteres tripeptídicos y tetrapeptídicos.
Esta invención se refiere a tioéteres
tripeptídicos y tetrapeptídicos, a composiciones farmacéuticas que
los contienen, a su uso farmacéutico y a su preparación.
Las patentes estadounidenses números 5599903;
5763570; 5767086; 5786336 y 5955432; la publicación de patente
europea número 0 645 397; y las publicaciones internacionales PCT
números WO 95/08563 y WO 96/40205 dan a conocer diversos compuestos
tripeptídicos y tetrapeptídicos que son análogos de del glutatión
reducido
(L-\gamma-glutamil-L-cisteinilglicina),
incluyendo compuestos de fórmula [WO 95/08563]:
y sus ésteres, amidas y
éster/amidas mixtas alquílicas o alquenílicas
C_{1-10} o aralquílicas
C_{7-12}, en la
que:
- \quad
- Z es S, O o C;
- \quad
- n es de 1 a 3;
- \quad
- cuando Z es S u O y n es 1, X es un hidrocarbilo C_{1-20} que contiene opcionalmente 1 ó 2 heteroátomos O, S o N no adyacentes, no sustituido o mono o disustituido con halógeno, -NO, -NO_{2}, -NR_{2}, -OR o -SR, en los que R es H o alquilo C_{1-4};
- \quad
- cuando Z es S y n es 2, un X es tal como se definió anteriormente y el otro X es alquilo C_{1-4}; y
- \quad
- cuando Z es C y n es 3, un X es tal como se definió anteriormente y los otros dos X son independientemente H o alquilo C_{1-4};
- \quad
- YCO es \gamma-glu, \beta-asp, glu, asp, \gamma-glu-gly, \beta-asp-gly, glu-gly, asp-gly; y
- \quad
- AA_{c} es un aminoácido acoplado a través de un enlace peptídico al resto del compuesto.
Los compuestos se describen como que tienen
diversos usos, incluyendo como reactivos útiles en la
caracterización de isoenzimas glutatión S-transferasa (GST),
en la determinación de complementos de GST de células y tejidos,
como ligandos de afinidad cromatográfica, agentes de unión e
inhibidores de enzimas; y terapéuticamente para: potenciar los
efectos citotóxicos de agentes quimioterápicos en células tumorales,
ejercer citotoxicidad selectivamente en células tumorales, aumentar
la producción de progenitoras de granulocitos y macrófagos (GM) en
la médula ósea, estimular la diferenciación de médula ósea, aliviar
los efectos destructores de la médula ósea de agentes
quimioterápicos y modular la hematopoyesis en la médula ósea.
TLK117, identificado en esas patentes y
publicaciones como TER 117 y denominado diversamente como
\gamma-Glu-Cys(Bz)-fenil-Gly,
\gammaE-C(Bz)-\varphiG,
\gammaE-C(Bz)-PG,
\gammaE-C(bencil)-\varphiG
y bencil-PG, es uno de estos compuestos. TLK117 es
el compuesto de fórmula
y puede denominarse
L-\gamma-glutamil-S-(fenilmetil)-L-cisteinil-D-fenilglicina.
TLK117 inhibe GST P1-1 con una CI_{50} de
aproximadamente 400 nM. TLK199, identificado en esas patentes y
publicaciones como TER 199, es el éster dietílico de
TLK117.
La patente estadounidense número 6627732 y la
publicación internacional PCT número WO 99/54346 dan a conocer
derivados de glutatión de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
- \quad
- A es H o acilo C_{1-20};
- \quad
- R_{1} es alquilo C_{1-26} o alquenilo C_{3-26}; y
- \quad
- R_{2} es H, alquilo C_{1-26} o alquenilo C_{3-26};
- \quad
- excluyendo el caso en el que R_{1} es alquilo C_{1-10} o alquenilo C_{3-10} y R_{2} es H, alquilo C_{1-10} o alquenilo C_{3-10};
La solicitud estadounidense publicada número
2003/0100511 y la publicación internacional PCT número WO 00/44366
dan a conocer formulaciones lipídicas, incluyendo formulaciones
liposomales, de diésteres de compuestos de fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
- \quad
- cada éster es C_{1-25};
- \quad
- YCO es \gamma-glu o \beta-asp;
- \quad
- G* es fenilglicina;
- \quad
- Z es CH_{2}, O o S; y
- \quad
- X es alquilo C_{6-8}, bencilo o naftilo
- \quad
- o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; o
\vskip1.000000\baselineskip
un compuesto de fórmula:
en la
que:
- \quad
- R_{1} y R_{2} se eligen independientemente de grupos alquilo lineales o ramificados (C_{1-25}), grupos cicloalquilo (C_{6-25}), grupos alquilo sustituidos (C_{2-25}), heterociclos (C_{6-20}), éteres o poliéteres (C_{3-25}) o en la que R_{1}-R_{2} (C_{2-20}) forman juntos un macrociclo con la fórmula; y
- \quad
- R_{3} es alquilo C_{6-8}, bencilo o naftilo
- \quad
- o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Muchos estados se caracterizan por un
debilitamiento de la médula ósea, incluyendo el síndrome
mielodisplásico (MDS), una forma de preleucemia en la que la médula
ósea produce niveles insuficientes de uno o más de los tres
elementos principales de la sangre (glóbulos blancos, glóbulos rojos
y plaquetas). Una reducción de los niveles de células sanguíneas y
de la generación de nuevas células sanguíneas en la médula ósea,
mielosupresión, también es un efecto tóxico común de muchos
fármacos quimioterápicos.
Se ha mostrado que TLK199 induce la
diferenciación de células de leucemia promielocítica
HL-60 in vitro, potencia la actividad de
agentes citotóxicos tanto in vitro como in vivo y
estimula la formación de colonias de los tres linajes de células
progenitoras hematopoyéticas en la sangre periférica humana normal.
En las pruebas preclínicas, se ha mostrado que TLK199 aumenta la
producción de glóbulos blancos en animales normales así como en
animales en los que se había disminuido el número de glóbulos
blancos mediante tratamiento con cisplatino o fluorouracilo.
Efectos similares pueden proporcionar un nuevo enfoque para tratar
el MDS. TLK199 está evaluándose actualmente en un ensayo clínico de
fase II para el tratamiento de MDS. Resultados intermedios de este
ensayo, notificados en las reuniones de 2004 y 2005 de la American
Society of Hematology (Sociedad Americana de Hematología),
demostraron que TLK199 se toleraba bien y daba como resultado una
mejora hematológica de múltiples linajes. Estos resultados también
sugieren un posible papel para TLK199 en el tratamiento de
citopenias inducidas por quimioterapia.
Sería deseable desarrollar inhibidores potentes
de GST P1-1 para su uso en seres humanos para:
potenciar los efectos citotóxicos de agentes quimioterápicos en
células tumorales, ejercer citotoxicidad selectivamente en células
tumorales, aumentar la producción de progenitoras de GM en la médula
ósea, estimular la diferenciación de médula ósea, aliviar los
efectos mielosupresores de agentes quimioterápicos y modular la
hematopoyesis en la médula ósea.
\vskip1.000000\baselineskip
En un primer aspecto, esta invención es
compuestos de fórmula
en la
que:
- \quad
- n es 0 ó 1;
- \quad
- W es L-\gamma-glutamilo o L-\gamma-glutamilglicilo;
- \quad
- X es cicloalquilo C_{5-6} opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo C_{5-6} opcionalmente sustituido, fenilo opcionalmente sustituido o heteroarilo C_{5-6} opcionalmente sustituido;
- \quad
- Y es =O, =N-OH o =N-O(alquilo C_{1-3} opcionalmente sustituido); y
- \quad
- Z es fenilo opcionalmente sustituido o heteroarilo C_{5-6} opcionalmente sustituido;
- \quad
- y sus mono y diésteres alquílico C_{1-10}, fenil-alquílico C_{1-3} o (heteroaril C_{5-6})-alquílico C_{1-3};
- \quad
- y sales de los compuestos y sus mono y diésteres.
Los compuestos (especialmente en forma ácida)
son inhibidores, normalmente inhibidores selectivos, de GST
P1-1 in vitro. En la forma diéster, también
se ha mostrado que son eficaces en la inmunoprecipitación de
GST\pi a partir de células HL-60 in vitro y
que son citotóxicos frente a células HL-60 in
vitro. A partir de esto y a partir de la similitud estructural
con TLK117, TLK199 y compuestos relacionados, por tanto se espera
que los compuestos actúen terapéuticamente en seres humanos para:
potenciar los efectos citotóxicos de agentes quimioterápicos en
células tumorales, ejercer citotoxicidad selectivamente en células
tumorales, aumentar la producción de progenitoras de GM en la
médula ósea, estimular la diferenciación de médula ósea, aliviar
los efectos mielosupresores de agentes quimioterápicos y modular la
hematopoyesis en la médula ósea.
En un segundo aspecto, esta invención es
composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos del primer
aspecto de esta invención y opcionalmente uno o más excipientes.
En un tercer aspecto, esta invención es métodos
terapéuticos, particularmente en un ser humano, de uno o más de:
potenciar los efectos citotóxicos de agentes quimioterápicos en
células tumorales, ejercer toxicidad selectivamente en células
tumorales, aumentar la producción de progenitoras de GM en la médula
ósea, estimular la diferenciación de médula ósea, aliviar los
efectos mielosupresores de agentes quimioterápicos y modular la
hematopoyesis en la médula ósea, mediante la administración de
compuestos del primer aspecto de esta invención o una composición
farmacéutica del segundo aspecto de esta invención y el uso de los
compuestos del primer aspecto de esta invención en la fabricación
de un medicamento para uno o más de los métodos terapéuticos
mencionados anteriormente.
En un cuarto aspecto, esta invención es
compuestos de fórmula
en la
que:
- \quad
- W es N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilo o N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilglicilo, en los que R^{1} es un grupo protector de amina; y
- \quad
- n, X, Y y Z son tal como se definió en la reivindicación 1;
- \quad
- y sus mono y diésteres alquílico C_{1-10}, fenil-alquílico C_{1-3} o (heteroaril C_{5-6})-alquílico C_{1-3};
- \quad
- y sales de los compuestos y sus mono y diésteres.
\vskip1.000000\baselineskip
Estos compuestos son útiles como productos
intermedios en la preparación de los compuestos del primer aspecto
de esta invención.
En un quinto aspecto, esta invención es métodos
de síntesis de los compuestos del primer aspecto de esta
invención.
Las realizaciones preferidas de esta invención
se caracterizan por la especificación y por las características
según las reivindicaciones 2-21 de esta solicitud
tal como se presenta y de composiciones farmacéuticas, métodos y
usos de estos compuestos.
"Alquilo" significa un grupo monovalente
derivado de un hidrocarburo saturado o insaturado (pero no
aromáticamente insaturado) que puede ser lineal, ramificado o
cíclico mediante eliminación de un átomo de hidrógeno a partir de
un átomo de carbono, tal como metilo, etilo, propilo,
1-propenilo, isopropilo, butilo, isobutilo,
sec-butilo, terc-butilo, pentilo,
hexilo, ciclopentilo,
ciclopenten-1-ilo,
ciclopropilmetilo, ciclohexilo y ciclohexilmetilo. Los alquilos
saturados y alquilos C_{1}-C_{6} son ejemplos.
Obsérvese que la definición de "alquilo" en esta solicitud es
más amplia que la definición convencional e incluye grupos
denominados más comúnmente como "cicloalquilo",
"cicloalquilalquilo", "alquenilo" y "alquinilo".
"Alquilo C_{1-3}
sustituido" (en la definición de Y) significa alquilo
C_{1-3} sustituido con 1 ó 2, especialmente 1,
grupos seleccionados de halógeno, hidroxilo, metilo,
trifluorometilo, metoxilo y amino.
"Cicloalquilo C_{5-6}
sustituido" significa ciclopentilo o ciclohexilo, sustituido con
1 ó 2, especialmente 1, grupos seleccionados de halógeno,
hidroxilo, metilo, trifluorometilo y metoxilo, especialmente F, Cl o
metilo.
"Heterocicloalquilo
C_{5-6}" significa ciclopentilo o ciclohexilo
en los que 1 de los grupos metileno de anillo está sustituido por
O, S, SO_{2}, NH o N-metilo; e incluye 2- y
3-tetrahidrofuranilo, 3- y
4-tetrahidropiranilo,
4-tetrahidrotiopiranilo y su S,S-dióxido, y
2-, 3- y 4-piperidinilo. "Heterocicloalquilo
C_{5-6} sustituido" significa
heterocicloalquilo C_{5-6} sustituido de la misma
manera descrita anteriormente para cicloalquilo
C_{5-6} sustituido.
"Fenilo sustituido" significa fenilo
sustituido con hasta 3 sustituyentes seleccionados de halógeno, -CN,
-NO_{2}, -OH, alquilo C_{1-3} opcionalmente
sustituido con halógeno (por ejemplo etilo, trifluorometilo),
alquiloxilo C_{1-3} opcionalmente sustituido con
halógeno, formilo, carboxilo y alcoxicarbonilo
C_{1-3}.
"Halógeno" significa F, Cl o Br.
"Heteroarilo C_{5-6}"
significa 2- o 3-furilo, 2- o
3-tienilo o 2-, 3- o 4-piridinilo.
"Heteroarilo C_{5-6} sustituido" significa
heteroarilo C_{5-6} sustituido de la manera
descrita anteriormente para fenilo sustituido.
Las "sales" se describen en la sección
titulada "compuestos de esta invención".
Un "grupo protector de amina" es un grupo
que puede proteger el grupo \alpha-amina del
glutamilo de un compuesto del primer aspecto de esta invención o un
producto intermedio del mismo durante la síntesis de ese compuesto
y puede eliminarse posteriormente sin afectar al resto del compuesto
del primer aspecto de esta invención. Grupos comunes de este tipo
incluyen terc-butoxicarbonilo y benciloxicarbonilo, que
pueden eliminarse convenientemente mediante acidolisis. Los grupos
protectores de amina se conocen bien en la técnica de la síntesis
orgánica y particularmente la síntesis de péptidos. Los grupos
adecuados de este tipo y las condiciones para su eliminación se
describen en libros tales como Synthesis of Peptides and
Peptidomimetics, Workbench edition, M. Goodman, ed., Georg Tieme
Verlag, Stuttgart, Alemania, 2004 y Protective groups in organic
synthesis, 3 ed., T.W. Greene y P.G.M. Wuts, eds., John Wiley &
Sons, Inc., Nueva York, Nueva York, EE.UU., 1999 y los conocerá
bien el experto en la
técnica.
técnica.
Una "cantidad terapéuticamente eficaz"
significa la cantidad que, cuando se administra a un mamífero,
especialmente un ser humano, para realizar el tratamiento mediante
uno de los métodos terapéuticos, es suficiente para realizar el
tratamiento para el estado que es el objeto del tratamiento
terapéutico. "Tratar" o "tratamiento" de un estado en un
mamífero incluye uno o más de:
(1) inhibir el desarrollo del estado, por
ejemplo, detener su desarrollo,
(2) mitigar el estado, por ejemplo, provocar una
regresión o cura del estado,
(3) evitar la recurrencia del estado y
(4) paliar los síntomas del estado.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos del primer aspecto de esta
invención son compuestos de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
en la
que:
- \quad
- n es 0 ó 1;
- \quad
- W es L-\gamma-glutamilo o L-\gamma-glutamilglicilo;
- \quad
- X es cicloalquilo C_{5-6} opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo C_{5-6} opcionalmente sustituido, fenilo opcionalmente sustituido o heteroarilo C_{5-6} opcionalmente sustituido;
- \quad
- Y es =O, =N-OH o =N-O(alquilo C_{1-3} opcionalmente sustituido); y
- \quad
- Z es fenilo opcionalmente sustituido o heteroarilo C_{5-6} opcionalmente sustituido;
- \quad
- y sus mono y diésteres alquílico C_{1-10}, fenil-alquílico C_{1-3} o (heteroaril C_{5-6})-C_{1-3} alquílico;
- \quad
- y sales de los compuestos y sus mono y diésteres.
Los compuestos preferidos del primer aspecto de
esta invención incluyen aquellos compuestos que tienen una o más de
las siguientes características:
1. W es
L-\gamma-glutamilo;
2. X es ciclopentilo, ciclohexilo, furilo,
tienilo o piridinilo, o fenilo opcionalmente sustituido;
especialmente ciclohexilo o 3-tienilo, o fenilo
opcionalmente sustituido con flúor, cloro, ciano, metilo, hidroxilo
o metoxilo; especialmente cuando el fenilo no está sustituido o
tiene 1 sustituyente en la posición 4; tal como fenilo,
4-clorofenilo y 4-hidroxifenilo;
3A. n es 0; o
3B. n es 1, e Y es =O, =N-OH o
=N-OCH_{2}CH_{2}NH_{2};
4. el sustituyente Z-(C=Y)_{n}- está en
la posición 2 ó 4 del grupo fenilo al que está unido;
5. Z es piridilo o es fenilo opcionalmente
sustituido;
6A. el compuesto es un diácido; o
6B. el compuesto es un diéster, especialmente un
diéster alquílico C_{1-6}, más especialmente un
diéster alquílico C_{1-3}. particularmente un
éster dietílico.
Generalmente, se prefiere un compuesto que tiene
un número mayor de estas características más que un compuesto que
tiene un número menor de estas características; en particular, la
adición de una de estas características a un compuesto que tiene
menos de todas las características dará generalmente como resultado
un compuesto que se prefiere más que el compuesto sin la
característica.
Sales adecuadas (véase Berge et al., J.
Pharm. Sci., 66:1 (1971) para una lista no exclusiva) de los
compuestos de esta invención son las formadas cuando bases
inorgánicas (por ejemplo hidróxido de sodio, potasio y calcio) o
bases orgánicas (por ejemplo etanolamina, dietanolamina,
trietanolamina, etilendiamina, trometamina,
N-metilglucamina) reaccionan con los grupos
carboxílicos y las formadas cuando ácidos inorgánicos (por ejemplo,
ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico y
clorosulfónico) o ácidos orgánicos (por ejemplo ácidos acético,
propiónico, oxálico, málico, maleico, malónico, fumárico o
tartárico y ácidos alcano o arenosulfónicos tales como ácidos
metansulfónico, etansulfónico, bencensulfónico, bencensulfónico
sustituido tal como clorobencensulfónico y toluensulfónico,
naftalensulfónico y naftalensulfónico sustituido,
naftalendisulfónico y naftalendisulfónico sustituido y
canforsulfónico) reaccionan para formar sales de adición de ácido de
los grupos amina, de los compuestos. Tales sales se forman
preferiblemente con ácidos y bases farmacéuticamente aceptables. Una
sal adecuada para los compuestos es una sal de adición de ácido,
especialmente con un ácido inorgánico, tal como la sal
clorhidrato.
La preparación de los compuestos del primer
aspecto de esta invención mediante el procedimiento de esta
invención implica una de las etapas (a1) a (a4):
(a1) alquilar el átomo de azufre de la cisteína
de un tripéptido o tetrapéptido de fórmula
o su mono o diéster, normalmente
con el grupo de amina del glutamilo protegido con R^{1}, con un
grupo bencilo sustituido de
fórmula
en la que L es un grupo saliente
tal como cloro, bromo o un (alcano C_{1-6})- o
bencensulfonato opcionalmente sustituido tal como metan-,
trifluorometan-, bencen-, 4-toluen-,
4-nitrobencen-, 4-clorobencen- o
4-bromobencensulfonato, especialmente bromo;
o
(a2) acoplar un dipéptido o tripéptido
opcionalmente protegido de fórmula
en la que si n es 1, Y es
=O;
o su monoéster en el carboxilato de glutamilo,
normalmente con el grupo amina del glutamilo protegido con R^{1},
con un aminoácido de fórmula
O su monoéster;
o
(a3) acoplar un dipéptido de fórmula
en la que si n es 1, Y
=O;
o su monoéster,
con un ácido
L-\gamma-glutámico o
L-\gamma-glutamilglicina
opcionalmente protegido, opcionalmente esterificado en el
\alpha-carboxilato del glutamilo; o
(a4) acoplar un tripéptido o tetrapéptido de
fórmula
o su mono o
diéster,
con un ácido Z-borónico para dar
el compuesto de fórmula
en la que n es
0,
o su mono o diéster;
opcionalmente seguido de una o más de las etapas
(b) a (e):
(b) si W es
N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilo
o
N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilglicilo
en el compuesto preparado en la etapa (a), desproteger el compuesto
del cuarto aspecto de esta invención para dar un compuesto del
primer aspecto de esta invención;
(c) si n es 1, hacer reaccionar un compuesto en
el que Y es =O con hidroxilamina o una O-(alquil
C_{1-3} opcionalmente
sustituido)hidroxilamina para formar un compuesto en el que
=N-OH, o =N-O(alquil
C_{1-3} opcionalmente sustituido);
(d1) si el compuesto es un diácido, formar un
mono o diéster del compuesto; o
(d2) si el compuesto es un mono o diéster,
desesterificar el compuesto para preparar el diácido del compuesto;
y
(e) formar una sal del compuesto preparado en
cualquiera de las etapas (a) a (e).
Los materiales de partida para el procedimiento
de la etapa (a1) son tripéptidos y tetrapéptidos, opcionalmente
mono o diesterificados, opcionalmente protegidos en la amina del
glutamilo y con el azufre de la cisteína desprotegido. Estos
análogos de glutatión se preparan convenientemente mediante métodos
convencionales de síntesis de péptidos bien conocidos por los
expertos en la técnica.
La síntesis de péptidos puede realizarse usando
uno de los muchos grupos protectores de S convencionales, tales
como trifenilmetilo, y después se desprotege el péptido protegido en
S resultante, por ejemplo mediante acidolisis. Normalmente, se
disuelve el péptido protegido en S en un ácido que es lo bastante
fuerte para eliminar el grupo protector de azufre que puede
eliminarse de manera acidolítica pero no lo bastante fuerte para
eliminar cualquier grupo protector de amina, opcionalmente en
presencia de un eliminador. Ácidos adecuados de este tipo incluyen
ácido trifluoroacético y otros ácidos fuertes tales como ácido
trifluorometansulfónico, opcionalmente en presencia de un
codisolvente tal como diclorometano; eliminadores adecuados incluyen
sulfuros y éteres aromáticos tales como anisol y tioanisol, fenoles
tales como cresol, y, de la manera más eficaz, silanos incluyendo
trialquilsilanos tales como trietilsilano y triisopropilsilano y
polímeros de silano tales como poli(metilhidrosiloxano); y
un reactivo de desprotección particularmente adecuado es ácido
trifluoroacético en presencia de poli(metilhidrosiloxano).
Puede aislarse el péptido desprotegido en S de la mezcla de reacción
mediante adición de un antidisolvente, por ejemplo un disolvente
aprótico no polar tal como un hidrocarburo o un éter.
Una preparación conveniente de
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-L-cisteinil-D-fenilglicina,
el péptido de partida de varios compuestos de esta invención,
usando los materiales de partida fácilmente disponibles éster
\alpha-bencílico del ácido
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutámico,
S-trifenilmetil-L-cisteína y
D-fenilglicina, es como sigue: se activa el éster
\alpha-bencílico del ácido
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutámico
como el éster de N-hidroxisuccinimida mediante
reacción con N-hidroxisuccinimida y diciclohexilcabodiimida
en 1,4-dioxano anhidro. Se disuelve el éster de
N-hidroxisuccinimida del éster
\alpha-bencílico del ácido
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutámico
en tetrahidrofurano anhidro y se añade a una disolución de
S-trifenilmetil-L-cisteína y
trietilamina en agua para dar
O-\alpha-bencil-N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-S-(trifenilmetil)-L-cisteína.
Ésta se activa como el éster de N-hidroxisuccinimida y se
acopla con D-fenilglicina de la misma manera que
para el acoplamiento entre la \gamma-glutamina y
cisteína para dar
O-\alpha-bencil-N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-S-(trifenilmetil)-L-cisteinil-D-fenilglicina.
También pueden usarse métodos similares pero
usando métodos o grupos de activación diferentes para activar el
grupo \gamma-carboxilo del ácido glutámico y/o el
grupo carboxilo de la cisteína para el acoplamiento; así como
muchos métodos en los que se realiza en premier lugar el
acoplamiento cisteína-fenilglicina, seguido del
acoplamiento de la
S-(trifenilmetil)-L-cisteinil-D-fenilglicina
resultante con el éster \alpha-bencílico del
ácido
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutámico.
También puede usarse otra protección del grupo
\alpha-carboxilo del ácido
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutámico
siempre que pueda desprotegerse en último lugar el grupo
\alpha-carboxilo mientras se deja el resto de la
molécula
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-S-(trifenilmetil)-L-cisteinil-D-fenilglicina
intacto. Se disuelve la
O-\alpha-bencil-N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-S-(trifenilmetil)-L-cisteinil-D-fenilglicina
en un alcohol inferior (por ejemplo metanol) y se elimina el éster
bencílico mediante hidrólisis con base acuosa (por ejemplo NaOH 1
M), seguido de acidificación para permitir el aislamiento de la
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-S-(trifenilmetil)-L-cisteinil-D-fenilglicina
como una sal de adición de ácido. Entonces se desprotege el azufre
de la cisteína de la
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-S-(trifenilmetil)-L-cisteinil-D-fenilglicina
mediante reacción con ácido trifluoroacético y
poli(metilhidrosilosano) en tolueno y puede precipitarse la
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-L-cisteinil-D-fenilglicina
con heptano/metil terc-butil éter.
Otros péptidos pueden prepararse fácilmente
mediante métodos similares, partiendo de los aminoácidos o a partir
de dipéptidos si están disponibles. Muchos de los aminoácidos de
fórmula
tales como
D-fenilglicina,
D-(4-clorofenil)glicina,
D-(4-hidroxifenil)glicina,
D-(3-tienil)glicina,
D-ciclohexilglicina, están comercialmente
disponibles en forma resuelta y en algunos casos como los ésteres.
Otros están disponibles en forma racémica, pero pueden resolverse
mediante cualquiera de los métodos conocidos para la resolución de
aminoácidos.
Entonces, en la etapa (a1) se alquila el anión
tiolato del péptido desprotegido en S con un grupo bencilo
sustituido de fórmula
en la que L es un grupo saliente
tal como cloro, bromo o un (alcano C_{1-6}) o
bencensulfonato opcionalmente sustituido tal como metan-,
trifluorometan-, bencen-, 4-toluen-,
4-nitrobencen-, 4-clorobencen- o
4-bromobencensulfonato, especialmente bromo para
preparar el péptido alquilado en S de manera apropiada. Esto se
realiza de manera conveniente cuando la amina del glutamilo está
protegida, para minimizar las reacciones secundarias, pero puede
realizarse incluso cuando la amina no está
protegida.
Normalmente, se disuelve el péptido desprotegido
en S en una disolución de una base fuerte (por ejemplo un
hidróxido, carbonato, bicarbonato, fosfato o alcóxido de metal
alcalino o metal alcalinotérreo, o hidróxido de amonio; o una base
de amina orgánica tal como tetrametilguanidina,
1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno
(DBU) y similares) en un disolvente adecuado (por ejemplo un
alcanol C_{1-6}, un diol tal como
1,2-etanodiol o 1,3-propanodiol, un
éter tal como 2-metoxietanol,
1,2-dimetoxietano o tetrahidrofurano y similares)
para formar el anión tiolato, se añade el grupo bencilo sustituido
(normalmente en exceso) y se mantiene la mezcla de reacción a una
temperatura y un tiempo apropiados hasta la finalización. Las
condiciones de reacción convenientes son el uso de tetrahidrofurano
al 20% en agua y un exceso de aproximadamente diez veces de
bicarbonato de sodio.
El péptido puede prepararse como un diácido
(aunque esto puede implicar protección intermedia del
\alpha-carboxilo del glutamilo así como de la
amina) o como un mono o diéster, dependiendo del estado de los
aminoácidos de partida. Si el péptido se prepara como un diácido,
puede mono o diesterificarse (normalmente mientras está protegido
en la amina) antes de la alquilación del átomo de azufre de la
cisteína y las condiciones de esterificación serán normalmente
similares a las que pueden usarse para la esterificación de un
compuesto del primer aspecto de esta invención.
En las etapas (a2) y (a3), en primer lugar el
anión tiolato de una cisteína opcionalmente protegida en amina se
alquila con un grupo bencilo sustituido de fórmula
para formar el aminoácido central
del tripéptido o tetrapéptido del primer aspecto de esta invención;
y entonces el péptido se ensambla mediante métodos convencionales
de síntesis de
péptidos.
La alquilación de la cisteína puede realizarse
mediante métodos similares a los usados para la alquilación del
tripéptido o tetrapéptido anterior; y el acoplamiento de los
diversos aminoácidos para dar el péptido resultante que es un
compuesto del primer o el cuarto aspecto de esta invención también
puede realizarse mediante métodos similares a los comentados
anteriormente.
En la etapa (a4) un tripéptido o tetrapéptido
que contiene
S-[(halofenil)metil]-cisteína [que se
ha sintetizado mediante cualquier método conveniente, por ejemplo
mediante alquilación del péptido desprotegido en S de la manera
descrita para la etapa (a1) o mediante la alquilación de cisteína
seguido de acoplamiento para formar el péptido de la manera
descrita anteriormente para las etapas (a2) y (a3)] se acopla en un
acoplamiento de Suzuki con un ácido borónico de fórmula
Z-B(OH)_{2}.
En la etapa opcional (b), se desprotege el grupo
amina protegido en R^{1} de un compuesto del cuarto aspecto de
esta invención para preparar un compuesto del primer aspecto de esta
invención mediante cualquier método adecuado para la eliminación
del grupo protector de amina que no afecta también al resto de la
molécula, normalmente mediante acidolisis usando un ácido fuerte,
tal como ácido trifluoroacético, opcionalmente en presencia de
diclorometano.
En la etapa opcional (c), se hace reaccionar el
compuesto del primer aspecto de esta invención en el que n es 1 e Y
es =O con hidroxilamina o una O-(alquil C_{1-3}
opcionalmente sustituido)hidroxilamina para formar un
compuesto en el que =N-OH, o
=N-O(alquil C_{1-3}
opcionalmente sustituido). Normalmente la reacción se lleva a cabo
mediante reacción con la hidroxilamina en una disolución acuosa (que
opcionalmente también contiene un disolvente orgánico miscible en
agua tal como tetrahidrofurano) en presencia de una base.
En las etapas opcionales (d1) y (d2), se
esterifica el compuesto del primer aspecto de esta invención (si se
desea un éster) o se desesterifica (si se desea el diácido). Estas
esterificaciones o desesterificaciones son convencionales y pueden
llevarse a cabo mediante cualquiera de los métodos bien conocidos
por los expertos en la técnica; en particular, una técnica de
esterificación conveniente implica la reacción del compuesto de
diácido del primer aspecto de esta invención con el alcohol que
produce el éster deseado, usando ese alcohol como disolvente, en
presencia de un halosilano tal como clorotrietilsilano a
temperaturas entre temperatura ambiente y la temperatura de
ebullición del alcohol.
En la etapa opcional (e), se forma una sal del
compuesto del primer aspecto de esta invención. Ésta será
normalmente una sal de adición de ácido (véase la definición de
"sales" anterior). De manera conveniente, esto se realiza
inmediatamente tras formar el compuesto del primer aspecto de esta
invención; y puede lograrse mediante la adición de un disolvente
que se volverá un antidisolvente para la sal, tal como un disolvente
aprótico, por ejemplo un hidrocarburo o un hidrocarburo halogenado
tal como diclorometano, seguido por la adición del ácido elegido
para formar la sal, especialmente en forma del ácido anhidro solo o
en un disolvente aprótico, por ejemplo gas de cloruro de hidrógeno.
Si es necesario o se desea puede añadirse antidisolvente adicional
para la sal, por ejemplo éteres tales como dietil éter, metil
terc-butil éter y tetrahidrofurano, especialmente metil
terc-butil éter.
Un experto en la técnica no tendrá dificultades,
teniendo en cuenta esa experiencia y esta divulgación (incluyendo
los ejemplos), en preparar compuestos del primer y del quinto
aspecto de esta invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos del primer aspecto de esta
invención (especialmente en la forma de ácido) son inhibidores muy
potentes, normalmente inhibidores selectivos, de GST
P1-1. También son activos para potenciar la
diferenciación de células HL-60 in vitro y
se ha mostrado que uno potencia la formación de colonias de
granulocitos/monocitos a partir de células murinas de la médula ósea
ex vivo. Por tanto se espera que los compuestos actúen
terapéuticamente en seres humanos para: potenciar los efectos
citotóxicos de agentes quimioterápicos en células tumorales (dado
que GST, especialmente GST P1-1, que está aumentada
en muchos tejidos tumorales, está implicada en la resistencia de
células tumorales frente a agentes quimioterápicos; de manera que un
inhibidor de GST reducirá la capacidad de las células tumorales
para aclarar el agente quimioterápico), ejercer citotoxicidad
selectivamente en células tumorales (de nuevo debido a la inhibición
de la isoenzima GST), aumentar la producción de progenitoras de GM
en la médula ósea, estimular la diferenciación de médula ósea,
aliviar los efectos mielosupresores de agentes quimioterápicos y
modular la hematopoyesis en la médula ósea.
Los compuestos del cuarto aspecto de esta
invención y el procedimiento del quinto aspecto de esta invención
son útiles en la preparación de compuestos del primer aspecto de
esta invención.
El segundo aspecto de esta invención es
composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto del primer
aspecto de esta invención, opcionalmente que incluyen también un
excipiente, tal como un excipiente farmacéuticamente aceptable.
El tercer aspecto de esta invención es métodos
terapéuticos que implican administrar los compuestos del primer
aspecto de esta invención o las composiciones farmacéuticas del
segundo aspecto de esta invención, normalmente en una cantidad
terapéuticamente eficaz, y el uso de estos compuestos para una o más
de: potenciar los efectos citotóxicos de agentes quimioterápicos en
células tumorales, ejercer toxicidad selectivamente en células
tumorales, aumentar la producción de progenitoras de GM en la
médula ósea, estimular la diferenciación de médula ósea, aliviar
los efectos mielosupresores de agentes quimioterápicos y modular la
hematopoyesis en la médula ósea.
Los compuestos pueden administrarse mediante
cualquier vía adecuada para el sujeto que está tratándose y la
naturaleza del estado del sujeto. Las vías de administración
incluyen, pero no se limitan a, la administración mediante
inyección, incluyendo inyección intravenosa, intraperitoneal,
intramuscular y subcutánea, mediante administración transmucosa o
transdérmica, mediante aplicaciones tópicas, aerosol nasal,
supositorios y similares, o puede administrarse por vía oral. Las
composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos pueden
ser opcionalmente formulaciones liposomales, emulsiones,
formulaciones diseñadas para administrar el fármaco a través de las
membranas mucosas o formulaciones transdérmicas. Pueden encontrarse
formulaciones adecuadas para cada uno de estos métodos de
administración, por ejemplo, en Remington: The Science and Practice
of Pharmacy, 20 ed., A. Gennaro, ed., Lippincott Williams &
Wilkins, Filadelfia, Pennsilvania, EE.UU., 2003. Las composiciones
típicas serán o bien orales o bien disoluciones para la infusión
intravenosa y contendrán el compuesto y normalmente también
contendrán uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Las
formas farmacéuticas típicas serán comprimidos, disoluciones para
su infusión intravenosa, polvos liofilizados para su reconstitución
como disoluciones para la infusión intravenosa y formulaciones
liposomales y formulaciones liposomales liofilizadas también para
la administración
intravenosa.
intravenosa.
Una cantidad terapéuticamente eficaz de un
compuesto del primer aspecto de esta invención es de aproximadamente
10 - 2000 mg/m^{2} de superficie corporal, especialmente de 50 -
1000 mg/m^{2}. La administración puede ser a intervalos de 1 - 35
días; por ejemplo, aproximadamente 250 - 1000 mg/m^{2} a
intervalos de 1 - 5 semanas, especialmente a intervalos de 1, 2, 3
ó 4 semanas o a frecuencias mayores incluyendo tan frecuentemente
como una vez al día durante varios (por ejemplo 5 ó 7) días,
repitiéndose la administración cada 2, 3 ó 4 semanas o infusión
constante durante un periodo de 6 - 72 horas, repitiéndose también
la administración cada 2, 3 ó 4 semanas. Un régimen típico puede
implicar la administración una vez al día durante cinco días cada
tres semanas.
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Los siguientes ejemplos muestran las
preparaciones de productos intermedios útiles y las síntesis de los
compuestos de esta invención mediante el procedimiento de esta
invención y la utilidad de los compuestos del primer aspecto de
esta invención como agentes terapéuticos.
Las preparaciones 1 y 2 describen preparaciones
de reactivos para la alquilación en S de cisteína o la cisteína de
los tripéptidos y tetrapéptidos. Por motivos de conveniencia, los
reactivos se denominan derivados de bromuro de bencilo
(\alpha-bromotolueno).
\newpage
Preparación
1
Se suspendieron
4-(2-piridil)tolueno, 2 ml (1,98 g, 11,7
mmol), N-bromosuccinimida (NBS), 2,5 g (14,0 mmol) y
\alpha,\alpha'-azobis(isobutironitrilo)
(AIBN), 23 mg (0,14 mmol) en 35 ml tetraclorometano y se sometieron
a reflujo durante 24 horas. Se filtró el producto y se eliminó el
disolvente del filtrado mediante evaporación rotativa. Se añadieron
cantidades iguales de cloroformo y agua y se extrajo el producto. Se
separó la fase de cloroformo y se secó y se eliminó el disolvente.
Se obtuvo bromuro de 4-(2-piridil)bencilo, 2
g, como un sólido amarillo pegajoso.
Se preparó bromuro de
4'-(4-carboxifenil)bencilo a partir de ácido
4'-metil-4-bifenil-carboxílico;
se preparó bromuro de
4'-(4-metoxicarbonil)bencilo a partir de
4'-metil-4-bifenil-carboxilato
de metilo (obtenido a partir del ácido carboxílico mediante
esterificación con metanol y clorotrimetilsilano) y se preparó
bromuro de 4-(benzoil)bencilo a partir de
4-metilbenzofenona, mediante este método.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
2
Se colocaron 4-bromotolueno, 171
mg (1 mmol), ácido 2-metoxifenilborónico, 152 mg (1
mmol), diacetato de paladio, 1 mg (4 \mumol), bromuro de
N-butilamonio, 322 mg (1 mmol) y Na_{2}CO_{3} acuoso 2 M,
1,9 ml (3,8 mmol), en un vial a presión que puede someterse a
microondas y se calentó hasta 150ºC durante 5 minutos. Tras enfriar
hasta temperatura ambiente, se vertió el producto en un embudo de
decantación y se añadieron 30 ml de cada uno de agua y dietil éter.
Tras la extracción, se separaron las fases y se lavó la fase acuosa
con otros 30 ml de dietil éter. Se combinaron los extractos de
éter, se secaron sobre MgSO_{4} y se eliminó el disolvente
mediante evaporación rotativa a vacío. Se obtuvo
2-metoxi-4'-metilbifenilo,
160 mg (rendimiento del 81%) como un producto sólido, pureza del
95% mediante RMN.
Se suspendieron
2-metoxi-4'-metilbifenilo,
160 mg (0,81 mmol), NBS, 158 mg (0,91 mmol) y AIBN, 1 mg (0,006
mmol) en 7 ml de tetraclorometano y se sometieron a reflujo durante
24 horas. Se filtró el producto y se eliminó el disolvente del
filtrado mediante evaporación rotativa. Se añadieron cantidades
iguales de dietil éter y de agua y se extrajo el producto. Se
separó la fase de éter y se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se
eliminó el disolvente. Se obtuvo bromuro de
4-(2-metoxifenil)bencilo, 128 mg, como un
aceite.
Se preparó bromuro de
4'-(4-cianofenil)bencilo a partir de ácido
4-cianofenilborónico y se preparó bromuro de
4'-[3-(trifluorometil)fenil]bencilo a partir de ácido
3-(trifluorometil)-fenilborónico, mediante este
método.
Pueden prepararse fácilmente otros bromuros de
bencilo sustituidos con fenilo opcionalmente sustituido, heteroarilo
C_{5-6} opcionalmente sustituido, benzoilo
opcionalmente sustituido o (heteroaril C_{5-6}
opcionalmente sustituido)carbonilo mediante los métodos de
estas preparaciones.
La preparación 3 describe la preparación de una
cisteína alquilada en S.
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Preparación
3
Se disuelve
N-\alpha-(terc-butoxicarbonil)-L-cisteína,
1,0 g (4,52 mmol), en una mezcla de 9 ml de tetrahidrofurano y 9 ml
de NaOH acuoso 1 M que se había desgasificado burbujeando argón a
través del mismo. Se añadió una disolución de
4-(bromometil)bifenilo, 1,12 g (4,53 mmol), en 5 ml de
tetrahidrofurano (THF) y se agitó la disolución con burbujeo de
argón durante 8 horas a temperatura ambiente. Se eliminó el THF
mediante evaporación rotativa a vacío y se diluyó el residuo con
agua y se lavó con dietil éter. Se acidificó la fase acuosa hasta
pH 3 con HCl acuoso 6 M y se extrajo tres veces con acetato de
etilo. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con agua,
NaHCO_{3} acuoso saturado, agua y salmuera y después se secaron y
se concentraron para dar 1,44 g de
N-\alpha-(terc-butoxicarbonil)-S-(4-bifenililmetil)-L-cisteína
(rendimiento del 82%) como un sólido blanco.
Pueden prepararse fácilmente otras cisteínas
alquiladas en S (opcionalmente protegidas) mediante el método de
esta preparación.
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Ejemplo de síntesis
1
Se preparó
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)-metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
1A, como la sal clorhidrato, a partir de 330 mg de
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-L-cisteinil-D-fenilglicina
disolviendo el péptido protegido en la amina en acetonitrilo/agua,
añadiendo un exceso de aproximadamente 10 veces de bicarbonato de
sodio y añadiendo un ligero exceso de 4-(bromometil)bifenilo,
manteniendo después la reacción bajo nitrógeno hasta su
finalización. Se diluyó la mezcla de reacción con agua, se lavó con
dietil éter y se separó la fase acuosa y se acidificó hasta pH
2-3 con ácido clorhídrico, después se extrajo con
acetato de etilo. Se secó la fase orgánica sobre MgSO_{4}
anhidro, se filtró y se redujo el volumen para dar
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil)-L-cisteinil-D-fenilglicina.
Se disolvió el sulfuro protegido en la amina, aproximadamente 300
mg, en 2 ml de ácido trifluoroacético (TFA):diclorometano 95:5 con
1 gota de agua y se agitó a 45ºC durante la noche y se purificó
mediante HPLC preparativa para dar
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil)-L-cisteinil-D-fenilglicina.
Se aisló la
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil)-L-cisteinil-D-fenilglicina
como la sal clorhidrato.
Se prepararon compuestos tales como
L-\gamma-glutamil-S-{[4-(2-piridil)fenil]metil}-L-cisteinil-D-fenilglicina,
compuesto 8A y
L-\gamma-glutamil-S-[(4-benzoilfenil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
compuesto 9A, mediante métodos similares.
Pueden prepararse fácilmente otros tripéptidos y
tetrapéptidos del primer aspecto de esta invención, incluyendo
compuestos que son mono y diésteres, mediante métodos similares.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de síntesis
2
Se preparó éster dietílico de
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
1B, como la sal clorhidrato, a partir de
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
30 mg, mediante esterificación con etanol y clorotrimetilsilano,
dando éster dietílico de
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
masa exacta 605, EM (m/z) 606 (M+H). Se aisló el éster dietílico de
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina
como la sal clorhidrato.
Se prepararon compuestos tales como éster
dietílico de
L-\gamma-glutamil-S-{[4-(2-piridil)fenil]metil}-L-cisteinil-D-fenilglicina,
compuesto 8B y éster dietílico de
L-\gamma-glutamil-S-[(4-benzoilfenil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
compuesto 9B, mediante métodos similares. Pueden prepararse
fácilmente otros ésteres, particularmente diésteres, de los
compuestos del primer aspecto de esta invención mediante métodos
similares.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de síntesis
3
Se preparó éster dietílico de
D-ciclohexilglicina a partir de
D-ciclohexilglicina, 500 mg (3,1 mmol), suspendiendo
el ácido en 15 ml de etanol, añadiendo clorotrimetilsilano, 2,02 ml
(5 equivalentes) y calentando la mezcla a 50ºC durante 18 horas. Se
eliminaron los componentes volátiles a vacío y se disolvió el
residuo en acetato de etilo, se lavó con NaHCO_{3} acuoso y dos
veces con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se
evaporó para dar 401 mg de éster etílico de
D-ciclohexilglicina como un sólido aceitoso.
Se disolvió
N-\alpha-(terc-butoxicarbonil)-S-(4-bifenililmetil)-L-cisteína,
588 mg (1,9 mmol), en 5 ml de dimetilformamida (DMF) y se añadieron
hexafluorofosfato de
O-benzotriazol-N,N,N',N'-tetrametiluronio
(HBTU), 860 mg (1,2 equiv.) y di(isopropil)etilamina,
990 \mul (3 equiv.). Tras 3 minutos, se añadió éster etílico de
D-ciclohexilglicina, 360 mg (1 equiv.), disuelto en
4 ml de DMF, y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2
horas, después se aisló el éster etílico de
N-\alpha-(terc-butoxicarbonil)-S-(4-bifenililmetil)-L-cisteinil-D-ciclohexilglicina
bruto. Se disolvió el péptido en 10 ml de TFA al 20%/diclorometano
y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, después se aisló
el producto bruto mediante eliminación de los compuestos volátiles a
vacío. El trifluoroacetato de
S-(4-bifenililmetil)-L-cisteinil-D-ciclohexilglicina
bruto puede usarse directamente en la siguiente etapa o puede
tratarse adicionalmente.
Se disolvió
N-\alpha-(terc-butoxicarbonil)-O-\alpha-terc-butil-L-\gamma-glutamina
en 2 ml de DMF y se añadieron HBTU, 174 mg (1,2 equiv.) y
di(isopropil)etilamina, 330 \mul (5 equiv.). Tras 5
minutos, se añadió trifluoroacetato de
S-(4-bifenililmetil)-L-cisteinil-D-ciclohexilglicina
bruto, 200 mg (0,38 mmol), disuelto en 2 ml de DMF, y se agitó la
mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. Se vertió la mezcla
en ácido cítrico acuoso 0,1 N y se extrajo con acetato de etilo. Se
lavó la fase orgánica cuatro veces con salmuera, se secó sobre
MgSO_{4} y se evaporaron los compuestos volátiles para dar
N-\alpha-(terc-butoxicarbonil)-O-\alpha-terc-butil-L-\gamma-glutamil-S-(4-bifenililmetil)-L-cisteinil-D-ciclohexilglicina
como un aceite marrón. Esto se disolvió en 10 ml de TFA al
20%/diclorometano y se agitó a temperatura ambiente durante 24
horas. Se eliminaron los compuestos volátiles a vacío y se purificó
el producto mediante HPLC de fase inversa, después se aisló el
L-\gamma-glutamil-S-(4-bifenililmetil)-L-cisteinil-D-ciclohexilglicina,
compuesto 12A, como la sal clorhidrato, 47 mg.
Se preparó
L-\gamma-glutamil-S-(4-bifenililmetil)-L-cisteinil-D-(4-clorofenil)glicina,
compuesto 11A, como la sal clorhidrato mediante un método
similar.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de síntesis
4
Se preparó
L-\gamma-glutamil-S-({4-[(2-aminoetoxiimino)(fenil)metil]-fenil}metil)-L-cisteinil-D-fenilglicina,
compuesto 10A, tratando
L-\gamma-glutamil-S-[(4-benzoilfenil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
108 mg (0,18 mmol), con diclorhidrato de
O-(2-aminoetil)hidroxilamina, 26 mg
(0,18 mmol), en 5 ml de agua, 5 ml de THF y 10 ml de fosfato de
sodio 0,5 M a pH 4,5. Se calentó la mezcla a 50ºC durante la noche y
se purificó el producto mediante HPLC con tampones de ácido
clorhídrico, aislando aproximadamente 45 mg de cada uno de los dos
isómeros (en el nitrógeno de la oxima) de
L-\gamma-glutamil-S-({4-[(2-aminoetoxiimino)(fenil)metil]-fenil}metil)-L-cisteinil-D-fenilglicina
como sales clorhidrato.
Se preparó éster dietílico de
L-\gamma-glutamil-S-({4-[(2-aminoetoxiimino)(fenil)metil]-fenil}metil)-L-cisteinil-D-fenilglicina,
compuesto 10B, mediante el mismo método partiendo del éster
dietílico de
L-\gamma-glutamil-S-[(4-benzoilfenil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
dando también dos isómeros.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
En la tabla 1 a continuación se facilitan
compuestos representativos del primer aspecto de esta invención:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se prepararon los ésteres dietílicos 1B a 12B de
los compuestos 1A a 12A mediante uno de los métodos tratados
anteriormente, excepto que no se preparó el compuesto 9B; y se
analizaron mediante espectrometría de masas, dando cada compuesto
un pico de masa (M/z) correspondiente a su masa, normalmente M+H con
ionización positiva o M-H con ionización
negativa.
Se aislaron el compuesto 10A y su éster
dietílico 10B como sales clorhidrato y existen como dos isómeros en
el nitrógeno de la oxima. Se han separado los isómeros.
Pueden prepararse de manera similar otros
compuestos de esta invención, usando métodos bien conocidos por el
experto en la técnica con referencia a esa experiencia y a esta
divulgación.
\vskip1.000000\baselineskip
Estos ejemplos ilustran los efectos de
compuestos de esta invención (y uno u otro de los compuestos de
comparación TLK117 y TLK199 y TLK137) en ensayos predictivos in
vitro.
Se obtuvieron isoenzimas GST
P1-1, A1-1 y M1-1
humanas, y anticuerpo policlonal de conejo
anti-GST\pi humana a partir de EMD Biosciences,
Inc., San Diego, California, EE.UU. Se obtuvo anticuerpo monoclonal
de ratón anti-GST\pi humana a partir de
Dakoctyomation, Inc., Carpinteria, California, EE.UU. Se obtuvo
anticuerpo de cabra conjugado con IRDye800, purificado por afinidad
anti-IgG de conejo a partir de Rockland
Immunochemicals, Inc., Gilbertsville, Pennsilvania, EE.UU. Se
obtuvo la línea de células cancerígenas humanas
HL-60 (leucemia mielocítica promieloide) a partir
del National Cancer Institute, Bethesda, Mariland, EE.UU. Se
obtuvieron medio RPMI 1640 y medio de Dulbecco modificado por
Iscove (IMDM) a partir de Invitrogen, Inc., Carlsbad, California,
EE.UU. Se obtuvo el kit de ensayo
CellTiter-Glo^{TM} a partir de la Promega
Corporation, Madison, Wisconsin, EE.UU. y se usó de acuerdo con las
instrucciones del fabricante. Se obtuvieron anticuerpo conjugado con
ficoeritrina anti-CD11b y anticuerpo de control
isotipo conjugado con ficoeritrina a partir de BD Biosciences, Inc.,
San José, California, EE.UU. Se obtuvo medio de metilcelulosa
MetoCult^{TM} M3234 (metilcelulosa al 2,5% en IMDM, complementado
con suero bovino fetal, albúmina sérica bovina, insulina rh,
transferrina h, 2-mercaptoetanol y
L-glutamina) a partir de StemCell Technologies,
Inc., Vancouver, Canadá y se diluyó (hasta una concentración de
metilcelulosa del 1%) según las instrucciones del fabricante.
\newpage
Ejemplo in vitro
1
Este ejemplo ilustra el efecto de compuestos de
esto como inhibidores de las isoenzimas glutatión
S-transferasas GST P1-1, A1-1
y M1-1, in vitro. La inhibición de GST
P1-1 se considera predictiva de la eficacia en los
métodos terapéuticos del tercer aspecto de esta invención, dado que
TLK199 (el éster dietílico de TLK117 sometido a prueba en estos
ensayos) ha mostrado una actividad mieloestimulante en seres humanos
y una actividad de quimiopotenciación en un modelo animal.
Se usaron isoenzimas humanas recombinantes GST
P1-1, A1-1 y M1-1 a
unas concentraciones finales de 0,02, 0,011 y 0,0083 unidades/ml,
respectivamente [1 unidad es la cantidad de enzima que se conjugará
con un 1 \mumol de
1-cloro-2,4-dinitrobenzeno
(CDNB) para reducir el glutatión (GSH) por minuto a 20ºC y pH 6,5],
en tampón de ensayo (KH_{2}PO_{4}/K_{2}HPO_{4} 100 mM, EDTA
0,1 mM, pH 6,5 en agua). Se preparó GSH como una disolución madre
100 mM en agua y CDNB como una disolución madre 100 mM en etanol y
ambas se diluyeron con tampón de ensayo hasta la concentración
apropiada (para lograr una concentración final de 2xK_{m} para la
isoenzima que estaba evaluándose). Se disolvieron los compuestos de
prueba (diácidos, compuestos 1A a 12A y TLK117) en dimetilsulfóxido
(DMSO) y se diluyeron con DMSO hasta la concentración apropiada para
el ensayo (8 concentraciones a lo largo del intervalo con el punto
medio cerca de la CI_{50} esperada). Para cada ensayo, se
añadieron el compuesto de prueba y GSH a la isoenzima.
Inmediatamente después de la adición de disolución de CDNB a la
disolución de isoenzima/compuesto/GSH, se registró la absorbancia a
340 nm de manera continua durante 5 min. en un lector de placas
SpectraMax (Molecular Devices, Inc., Sunnyvale, California,
EE.UU.). Se calculó la actividad inhibitoria de GST de cada
compuesto a partir de las pendientes de las curvas
absorbancia/tiempo a las diversas concentraciones de compuesto de
prueba. Todos los ensayos se realizaron en pocillos por duplicado,
con un control de DMSO, manteniéndose la concentración de DMSO final
al 2%. Los resultados de estos análisis se proporcionan en la tabla
2 a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo in vitro
2
Se sembraron células en fase logarítmica en
placas de 96 pocillos a 1500 células/pocillo en 150 \mul de medio
RPMI 1640 complementado con suero bovino fetal al 10% (FBS) y
L-glutamina al 1% y se incubaron a 37ºC bajo
aire/CO_{2} al 5% durante 4-5 horas. Se
disolvieron los compuestos de prueba (ésteres dietílicos, compuestos
1B a 12B y TLK199) y se diluyeron en serie en DMSO (8
concentraciones a lo largo del intervalo con el punto medio cerca
de la CC_{50} esperada). Tras una dilución adicional de 1:50 en el
medio RPMI 1640 complementado, se añadieron 50 \mul de los
compuestos diluidos para lograr una concentración final de DMSO del
0,5%. Después se incubaron las células durante 72 horas
(aproximadamente tres tiempos de duplicación). Después se recogieron
las células mediante centrifugación (1200 rpm durante 5 min. a
20ºC) y se retiraron 100 \mul del sobrenadante de cultivo y se
sustituyeron por el mismo volumen del reactivo
CellTiter-Glo. Tras la incubación durante 10
minutos a temperatura ambiente con mezclado constante, se leyó la
placa con un luminómetro, siendo el número de células vivas
proporcional a la luminiscencia observada. Todos los ensayos se
realizaron en pocillos por triplicado, con control de disolvente
DMSO. Se calculó la CC_{50} (concentración que provoca una
inhibición del crecimiento del 50%) a partir de la curva
luminiscencia/concentración. Los resultados de estos ensayos se
facilitan en la tabla 2 a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo in vitro
3
Estos resultados se consideran predictivos de
eficacia en los métodos terapéuticos del tercer aspecto de esta
invención, dado que TLK199 (el éster dietílico de TLK117 sometido a
prueba en estos ensayos) ha mostrado actividad mieloestimulante en
seres humanos y actividad de quimiopotenciación en un modelo
animal.
Se sembraron células HL-60 a
6x10^{5} células/ml en 20 ml de medio RPMI-1640
complementado con suero bovino fetal al 10%, glutamina 1 mM y
gentamicina 20 \muM en un matraz T75 y se cultivaron durante la
noche en una atmósfera de CO_{2} al 5% a 37ºC. Se trataron las
células con DMSO al 0,1% o 20 \muM de los compuestos de prueba
(ésteres dietílicos, compuestos 1B a 12B y TLK199) en medio de
cultivo que contenía DMSO al 0,1% durante 2 horas. Tras el
tratamiento, se recogieron las células mediante centrifugación y se
lavaron dos veces con solución salina tamponada con fosfato.
Volvieron a suspenderse los sedimentos celulares en 1 ml de tampón
de lisis (Tris 50 mM, pH 8,0, NaCl 120 mM, tensioactivo
NP-40 al 0,5%, NaF 100 mM; a lo que se habían
añadido inhibidores de fosfatasa y proteasa (Roche Diagnostics,
Indianapolis, Indiana, EE.UU.) antes del uso) y se incubaron con
agitación suave durante 30 minutos a 4ºC. Se aclararon los lisados
celulares mediante centrifugación a 13.000 rpm durante 10 minutos
para eliminar los residuos celulares. Para la inmunoprecipitación,
se añadieron 2,1 \mug de anticuerpo monoclonal de ratón
anti-GST\pi humana a 500 \mul de lisado celular
de 1 mg/ml de proteína total. Tras la incubación durante la noche a
4ºC, se añadieron 30 \mul de perlas de agarosa con proteína A/G
(Pierce, Rockford, IL) a la mezcla y se incubó durante 1 hora a 4ºC.
Después se recogieron las perlas mediante centrifugación, se
lavaron tres veces en tampón de lisis y volvieron a suspenderse en
10 \mul de tampón de muestra de dodecilsulfato de litio no
reductor (Invitrogen, Carlsbad, California, EE.UU.). Se calentaron
las muestras suspendidas a 95ºC durante 5 minutos y se sometieron a
SDS-PAGE en un gel al 4 - 12%, seguido por análisis
mediante inmunotransferencia tipo Western usando anticuerpo
policlonal de conejo anti-GST\pi humana seguido
por anticuerpo de cabra conjugado con IRDye 800, purificado por
afinidad, anti-IgG de conejo. Se visualizaron
bandas de proteína GST\pi y se cuantificó la intensidad de las
bandas en un analizador de infrarrojos Odyssey
(Li-Cor, Lincoln, Nebraska, EE.UU.). Se comparó la
intensidad de banda de un tratamiento con compuesto con su
correspondiente control de DMS y se expresó como inhibición en
porcentaje. Los resultados se muestran en la tabla 2 a
continuación.
Los compuestos de diácido de esta invención son
todos inhibidores muy potentes de GST P1-1
(CI_{50} < 20 nM, teniendo varios CI_{50} < 10 nM) y
también son generalmente selectivos para GST P1-1
con respecto a GST A1-1 y GST M1-1,
las otras dos isoenzimas GST humanas. Todos los ésteres dietílicos
muestran buena citotoxicidad en células HL-60 y
muchos muestran una inhibición significativa de GST\pi medida en
el ensayo de inmunoprecipitación.
Algunos de los compuestos de éster dietílico de
esta invención también se sometieron a prueba para determinar su
capacidad para potenciar la diferenciación de células
HL-60. Esto ilustra el efecto beneficioso de los
compuestos de esta invención para estimular la diferenciación de la
línea celular de leucemia humana HL-60 in
vitro. Estos resultados se consideran predictivos de eficacia en
la mieloestimulación en seres humanos, dado que TLK199, que
potencia la diferenciación en este ensayo, ha mostrado actividad
mieloestimulante en seres humanos. Se incubaron células en fase
logarítmica (1 x 10^{5} células/ml) a 37ºC bajo aire/CO_{2} al
5% durante 24 horas en 2 ml del medio RPMI 1640 complementado usado
en el ejemplo in vitro 2 y se disolvieron los compuestos de
prueba en DMSO, con una concentración de DMSO final del 0,1%. Se
recogieron las células mediante centrifugación (1250 rpm durante 5
min. a 20ºC) y se lavaron con 2 ml de solución salina tamponada con
fosfato (PBS) helada que contenía FBS al 2%, después se tiñeron con
10 \mul de anticuerpo conjugado con ficoeritrina
anti-CD11b o 10 \mul de anticuerpo control isotipo
conjugado con ficoeritrina. Tras reposar durante 30 min. sobre
hielo, volvieron a suspenderse las células en 2 ml de PBS helado que
contenía FBS al 2%. Se recogieron las células mediante
centrifugación (1250 rpm durante 5 min. a 20ºC) y volvieron a
suspenderse en 0,4 ml de PBS que contenía FBS al 2%. Se detectó la
expresión específica en la superficie celular de CD11b, un marcador
para granulocitos y monocitos, mediante citometría de flujo usando
un analizador FACSCalibur (BD Biosciences). Todos los ensayos se
realizaron por triplicado, con control de DMSO. Se expresó el grado
de diferenciación como un múltiplo de la señal del control de DMSO.
Varios de los compuestos sometidos a prueba potenciaron la
diferenciación de células HL-60.
A partir de estos resultados y de la similitud
estructural de estos compuestos con TLK199, se espera que los
compuestos, especialmente como los diésteres, actúen
terapéuticamente para: potenciar los efectos citotóxicos de agentes
quimioterápicos en células tumorales, ejercer citotoxicidad
selectivamente en células tumorales, aumentar la producción de
progenitoras de GM en la médula ósea, estimular la diferenciación de
médula ósea, aliviar los efectos mielosupresores de agentes
quimioterápicos y modular la hematopoyesis en la médula ósea.
Este ejemplo ilustra formulaciones adecuadas
para los compuestos de esta invención, especialmente los
diésteres.
Se prepara una formulación sólida para la
administración oral mediante combinación de lo siguiente:
- Compuesto
- 25,0% p/p
- Estearato de magnesio
- 0,5% p/p
- Almidón
- 2,0% p/p
- Hidroxipropilmetilcelulosa
- 1,0% p/p
- Celulosa microcristalina
- 71,5% p/p
y se comprime la mezcla para formar
comprimidos o se llena en cápsulas de gelatina dura que contienen,
por ejemplo, 250 mg del compuesto. Si se desea pueden recubrirse
los comprimidos, aplicando una suspensión de un agente de formación
de película (por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa), pigmento (por
ejemplo, dióxido de titanio) y plastificante (por ejemplo, ftalato
de dietilo) y secando la película mediante evaporación del
disolvente.
Se prepara una formulación para la
administración i.v. disolviendo el compuesto, por ejemplo como una
sal farmacéuticamente aceptable, hasta una concentración del 1% p/v
en solución salina tamponada con fosfato; y se esteriliza la
disolución, por ejemplo mediante filtración estéril y se sella en
recipientes estériles que contienen, por ejemplo, 250 mg de un
compuesto de esta invención.
Alternativamente, se prepara una formulación
liofilizada disolviendo el compuesto, de nuevo por ejemplo como una
sal farmacéuticamente aceptable, en un tampón adecuado, por ejemplo
el tampón fosfato de la solución salina tamponada con fosfato
mencionada anteriormente, esterilizando la disolución y
dispersándola en viales estériles adecuados, liofilizando la
disolución para eliminar el agua y sellando los viales. La
formulación liofilizada se reconstituye mediante la adición de agua
estéril y la disolución reconstituida puede diluirse adicionalmente
para su administración con una disolución tal como infusión
intravenosa de cloruro de sodio al 0,9% o infusión intravenosa de
dextrosa al 5%.
Alternativamente, se prepara una formulación
liposomal mediante el método de la solicitud publicada
estadounidense número 2003/0100511 (por ejemplo los ejemplos 4 y 5)
usando un compuesto de esta invención en lugar del compuesto 9 de
esa publicación y puede liofilizarse tal como se describe en esa
publicación.
Este ejemplo ilustra un método terapéutico
adecuado para los compuestos de esta invención.
Se administra por vía intravenosa un compuesto
de esta invención, en una formulación intravenosa tal como se
describió en el ejemplo de formulación anterior, a lo largo de 30
minutos a un paciente que padece síndrome mielodisplásico a una
dosis inicial de 50 mg/m^{2}; y se aumenta esta dosis hasta 100
mg/m^{2}, 200 mg/m^{2}, 400 mg/m^{2} y 600 mg/m^{2}. Se
administra el compuesto una vez al día durante cinco días cada tres
semanas.
Claims (26)
1. Compuesto de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
- \quad
- n es 0 ó 1;
- \quad
- W es L-\gamma-glutamilo o L-\gamma-glutamilglicilo;
- \quad
- X es cicloalquilo C_{5-6} opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo C_{5-6} opcionalmente sustituido, fenilo opcionalmente sustituido o heteroarilo C_{5-6} opcionalmente sustituido;
- \quad
- Y es =O, =N-OH o =N-O(alquilo C_{1-3} opcionalmente sustituido); y
- \quad
- Z es fenilo opcionalmente sustituido o heteroarilo C_{5-6} opcionalmente sustituido;
- \quad
- o su mono o diéster alquílico C_{1-10}, fenil-alquílico C_{1-3} o (heteroaril C_{5-6})-alquílico C_{1-3};
- \quad
- o una sal del compuesto o su mono o diéster.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Compuesto según la reivindicación 1, en el
que n es 0.
3. Compuesto según la reivindicación 1, en el
que n es 1.
4. Compuesto según la reivindicación 3, en el
que Y es =O.
5. Compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, en el que W es
L-\gamma-glutamilo.
6. Compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, en el que X es ciclopentilo, ciclohexilo,
tienilo, furilo, piridinilo o fenilo opcionalmente sustituido.
7. Compuesto según la reivindicación 6, en el
que X es ciclohexilo.
8. Compuesto según la reivindicación 6, en el
que X es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 ó 2 grupos flúor,
cloro, metilo, hidroxilo, metoxilo o trifluorometilo.
9. Compuesto según la reivindicación 8, en el
que el fenilo no está sustituido.
10. Compuesto según la reivindicación 8, en el
que el fenilo está sustituido y uno de los sustituyentes está en la
posición 4.
11. Compuesto según la reivindicación 10, en el
que sólo hay un sustituyente.
12. Compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 11, en el que la sustitución
-(C=Y)_{n}-Z está en la posición 2 ó 4 del
grupo fenilo.
13. Compuesto según la reivindicación 12, en el
que la sustitución -(C=Y)_{n}-Z está en la
posición 2 del grupo fenilo.
14. Compuesto según la reivindicación 12, en el
que la sustitución -(C=Y)_{n}-Z está en la
posición 4 del grupo fenilo.
15. Compuesto según la reivindicación 14, en el
que Z es fenilo, opcionalmente sustituido con flúor, cloro, ciano,
metilo, hidroxilo, metoxilo o trifluorometilo.
16. Compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 15, que es un diácido, o una sal del mismo.
17. Compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 15, que es un diéster, o una sal del mismo.
18. Compuesto según la reivindicación 17, que es
un diéster alquílico C_{1-6} o bencílico, o una
sal del mismo.
19. Compuesto según la reivindicación 18, que es
un diéster alquílico C_{1-3}, o una sal del
mismo.
20. Compuesto según la reivindicación 19, que es
un éster dietílico, o una sal del mismo.
21. Compuesto según la reivindicación 1, que se
selecciona de:
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-S-[(2-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-S-[(2'-ciano-4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-S-[(2'-metoxi-4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-S-[(3'-(trifluorometil)-4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-S-[(4'-carboxi-4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-S-[(4'-ciano-4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-S-{[4-(2-piridil)fenil]metil}-L-cisteinil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-S-[(4-benzoilfenil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-S-({4-[(2-aminoetoxiimino)(fenil)metil]fenil}metil)-L-cisteinil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-(4-clorofenil)glicina,
y
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-ciclohexilglicina,
y sus ésteres dietílicos,
y las sales de los compuestos y sus ésteres
dietílicos.
22. Composición farmacéutica que comprende un
compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21.
23. Composición farmacéutica según la
reivindicación 22, que comprende además un excipiente.
24. Uso de un compuesto según una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 21, en la fabricación de un medicamento
para uno o más de: potenciar los efectos citotóxicos de agentes
quimioterápicos en células tumorales, ejercer toxicidad
selectivamente en células tumorales, aumentar la producción de
progenitoras de GM en la médula ósea, estimular la diferenciación
de médula ósea, aliviar los efectos mielosupresores de agentes
quimioterápicos y modular la hematopoyesis en la médula ósea.
25. Compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 21, para su uso en uno o más de: potenciar los
efectos citotóxicos de agentes quimioterápicos en células tumorales,
ejercer toxicidad selectivamente en células tumorales, aumentar la
producción de progenitoras de GM en la médula ósea, estimular la
diferenciación de médula ósea, aliviar los efectos mielosupresores
de agentes quimioterápicos y modular la hematopoyesis en la médula
ósea.
\newpage
26. Compuesto de fórmula
en la
que:
- \quad
- W es N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilo o N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilglicilo, en los que R^{1} es un grupo protector de amina; y
- \quad
- n, X, Y y Z son tal como se definió en la reivindicación 1;
- \quad
- o su mono o diéster alquílico C_{1-10}, fenil-alquílico C_{1-3} o (heteroaril C_{5-6})-alquílico C_{1-3};
- \quad
- o una sal del compuesto o su mono o diéster.
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