ES2314891T3 - Sulfonas tripeptidicas y tetrapeptidicas. - Google Patents
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Abstract
Compuesto de fórmula (Ver fórmula) en la que: X es L-gamma-glutamilo o L-gamma-glutamilglicilo; Y es H, alquilo opcionalmente sustituido, heteroalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido o heteroaralquilo opcionalmente sustituido; y Z es alquilo C5 - 9, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido o heteroaralquilo opcionalmente sustituido; o su mono o diéster alquílico C1 - 10, fenil-alquílico C1 - 3 o (heteroaril C5 - 6)-alquílico C1 - 3; o una sal del compuesto o su mono o diéster.
Description
Sulfonas tripeptídicas y tetrapeptídicas.
Esta invención se refiere a sulfonas
tripeptídicas y tetrapeptídicas, a composiciones farmacéuticas que
las contienen, a su uso farmacéutico y a su preparación.
Las patentes estadounidenses números 5599903;
5763570; 5767086; 5786336 y 5955432; la publicación de patente
europea número 0 645 397; y las publicaciones internacionales PCT
números WO 95/08563 y WO 96/40205 dan a conocer diversos compuestos
tripeptídicos y tetrapeptídicos que son análogos de del glutatión
reducido
(L-\gamma-glutamil-L-cisteinilglicina),
incluyendo compuestos de fórmula [WO 95/08563]:
y sus ésteres, amidas y
éster/amidas mixtas alquílicas o alquenílicas
C_{1-10} o aralquílicas
C_{7-12}, en la
que:
- \quad
- Z es S, O o C;
- \quad
- n es de 1 a 3;
- \quad
- cuando Z es S u O y n es 1, X es un hidrocarbilo C_{1-20} que contiene opcionalmente 1 ó 2 heteroátomos O, S o N no adyacentes, no sustituido o mono o disustituido con halógeno, -NO, -NO_{2}, -NR_{2}, -OR o -SR, en los que R es H o alquilo C_{1-4};
- \quad
- cuando Z es S y n es 2, un X es tal como se definió anteriormente y el otro X es alquilo C_{1-4}; y
- \quad
- cuando Z es C y n es 3, un X es tal como se definió anteriormente y los otros dos X son independientemente H o alquilo C_{1-4};
- \quad
- YCO es \gamma-glu, \beta-asp, glu, asp, \gamma-glu-gly, \beta-asp-gly, glu-gly, asp-gly; y
- \quad
- AA_{c} es un aminoácido acoplado a través de un enlace peptídico al resto del compuesto.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos se describen como que tienen
diversos usos, incluyendo como reactivos útiles en la
caracterización de isoenzimas glutatión S-transferasa (GST),
en la determinación de complementos de GST de células y tejidos,
como ligandos de afinidad cromatográfica, agentes de unión e
inhibidores de enzimas; y terapéuticamente para: potenciar los
efectos citotóxicos de agentes quimioterápicos en células tumorales,
ejercer citotoxicidad selectivamente en células tumorales, aumentar
la producción de progenitoras de granulocitos y macrófagos (GM) en
la médula ósea, estimular la diferenciación de médula ósea, aliviar
los efectos destructores de la médula ósea de agentes
quimioterápicos y modular la hematopoyesis en la médula ósea.
TLK117, identificado en esas patentes y
publicaciones como TER 117 y denominado diversamente como
\gamma-Glu-Cys(Bz)-fenil-Gly,
\gammaE-C(Bz)-\varphiG,
\gammaE-C(Bz)-PG,
\gammaE-C(bencil)-\varphiG
y bencil-PG, es uno de estos compuestos. TLK117 es
el compuesto de fórmula
y puede denominarse
L-\gamma-glutamil-S-(fenilmetil)-L-cisteinil-D-fenilglicina.
TLK117 inhibe GST P1-1 con una CI_{50} de
aproximadamente 400 nM. TLK199, identificado en esas patentes y
publicaciones como TER 199, es el éster dietílico de TLK117;
mientras que TLK261 y TLK262 son los ésteres dimetílico y
diisopropílico,
respectivamente.
La solicitud estadounidense publicada número
2003/0100511 y la publicación internacional PCT número WO 00/44366
dan a conocer formulaciones lipídicas, incluyendo formulaciones
liposomales, de diésteres de compuestos de fórmula:
en la
que:
cada éster es C_{1-25};
YCO es \gamma-glu o
\beta-asp;
G* es fenilglicina;
Z es CH_{2}, O o S; y
X es alquilo C_{6-8}, bencilo
o naftilo
o una sal farmacéuticamente aceptable de los
mismos; o
\vskip1.000000\baselineskip
un compuesto de fórmula:
en la
que:
- \quad
- R_{1} y R_{2} se eligen independientemente de grupos alquilo lineales o ramificados (C_{1-25}), grupos cicloalquilo (C_{6-25}), grupos alquilo sustituidos (C_{2-25}), heterociclos (C_{6-20}), éteres o poliéteres (C_{3-25}) o en la que R_{1}-R_{2} (C_{2-20}) forman juntos un macrociclo con la fórmula; y
- \quad
- R_{3} es alquilo C_{6-8}, bencilo o naftilo
- \quad
- o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
\vskip1.000000\baselineskip
Townsend et al, Mol. Cancer Tber.,
1(12), 1089-1095 (2002) da a conocer el
compuesto de fórmula
la "vinilsulfona", como uno de
los dos productos de la escisión mediada por GST de canfosfamida, un
agente anticancerígeno activado por GST de
fórmula
que se da a conocer en la patente
estadounidense número 5556942 y la publicación internacional PCT
número WO 95/09866, en la que se denomina TER
286.
Muchos estados se caracterizan por un
debilitamiento de la médula ósea, incluyendo el síndrome
mielodisplásico (MDS), una forma de preleucemia en la que la médula
ósea produce niveles insuficientes de uno o más de los tres
elementos principales de la sangre (glóbulos blancos, glóbulos rojos
y plaquetas). La mielosupresión, una reducción de los niveles de
células sanguíneas y de la generación de nuevas células sanguíneas
en la médula ósea, también es un efecto tóxico común de muchos
fármacos quimioterápicos.
Se ha mostrado que TLK199 induce la
diferenciación de células de leucemia promielocítica
HL-60 in vitro, potencia la actividad de
agentes citotóxicos tanto in vitro como in vivo y
estimula la formación de colonias de los tres linajes de células
progenitoras hematopoyéticas en la sangre periférica humana normal.
En las pruebas preclínicas, se ha mostrado que TLK199 aumenta la
producción de glóbulos blancos en animales normales así como en
animales en los que se había disminuido el número de glóbulos
blancos mediante tratamiento con cisplatino o fluorouracilo.
Efectos similares pueden proporcionar un nuevo enfoque para tratar
el MDS. TLK199 está evaluándose actualmente en un ensayo clínico de
fase II para el tratamiento de MDS. Resultados intermedios de este
ensayo, notificados en las reuniones de 2004 y 2005 de la American
Society of Hematology (Sociedad Americana de Hematología),
demostraron que TLK199 se toleraba bien y daba como resultado una
mejora hematológica de múltiples linajes. Estos resultados también
sugieren un posible papel para TLK199 en el tratamiento de
citopenias inducidas por quimioterapia.
Sería deseable desarrollar inhibidores potentes
de GST P1-1 para su uso en seres humanos para:
potenciar los efectos citotóxicos de agentes quimioterápicos en
células tumorales, ejercer citotoxicidad selectivamente en células
tumorales, aumentar la producción de progenitoras de GM en la médula
ósea, estimular la diferenciación de médula ósea, aliviar los
efectos mielosupresores de agentes quimioterápicos y modular la
hematopoyesis en la médula ósea.
En un primer aspecto, esta invención es
compuestos de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
- \quad
- X es L-\gamma-glutamilo o L-\gamma-glutamilglicilo;
- \quad
- Y es H, alquilo opcionalmente sustituido, heteroalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido o heteroaralquilo opcionalmente sustituido; y
\newpage
- \quad
- Z es alquilo C_{5-9}, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido o heteroaralquilo opcionalmente sustituido;
- \quad
- y sus mono y diésteres alquílico C_{1-10}, fenil-alquílico C_{1-3} o (heteroaril C_{5-6})-alquílico C_{1-3};
- \quad
- y sales de los compuestos y sus mono y diésteres.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos (especialmente en forma ácida)
son inhibidores, normalmente inhibidores selectivos, de GST
P1-1 in vitro. En la forma diéster, también
se ha mostrado que son eficaces en la inmunoprecipitación de
GST\pi a partir de células HL-60 in vitro y
que son citotóxicos frente a células HL-60 in
vitro. También son activos para potenciar la diferenciación de
células HL-60 in vitro y se ha mostrado que
uno potencia la formación de colonias de granulocitos/monocitos a
partir de células murinas de la médula ósea ex vivo. A
partir de esto y a partir de la similitud estructural con TLK117,
TLK199 y compuestos relacionados, por tanto se espera que los
compuestos de esta invención actúen terapéuticamente en seres
humanos para: potenciar los efectos citotóxicos de agentes
quimioterápicos en células tumorales, ejercer citotoxicidad
selectivamente en células tumorales, aumentar la producción de
progenitoras de GM en la médula ósea, estimular la diferenciación
de células de la médula ósea, aliviar los efectos mielosupresores de
agentes quimioterápicos y modular la hematopoyesis en la médula
ósea.
En un segundo aspecto, esta invención es
composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos del primer
aspecto de esta invención y opcionalmente uno o más excipientes.
En un tercer aspecto, esta invención es métodos
terapéuticos, particularmente en un ser humano, de uno o más de:
potenciar los efectos citotóxicos de agentes quimioterápicos en
células tumorales, ejercer toxicidad selectivamente en células
tumorales, aumentar la producción de progenitoras de GM en la médula
ósea, estimular la diferenciación de células de la médula ósea,
aliviar los efectos mielosupresores de agentes quimioterápicos y
modular la hematopoyesis en la médula ósea, mediante la
administración de compuestos del primer aspecto de esta invención o
una composición farmacéutica del segundo aspecto de esta invención y
el uso de los compuestos del primer aspecto de esta invención en la
fabricación de un medicamento para uno o más de: potenciar los
efectos citotóxicos de agentes quimioterápicos en células
tumorales, ejercer toxicidad selectivamente en células tumorales,
aumentar la producción de progenitoras de GM en la médula ósea,
estimular la diferenciación de células de la médula ósea, aliviar
los efectos mielosupresores de agentes quimioterápicos y modular la
hematopoyesis en la médula ósea.
En un cuarto aspecto, esta invención es métodos
de preparar compuestos del primer aspecto de esta invención.
En un quinto aspecto, esta invención es
compuestos de fórmula
en la
que:
- \quad
- X es N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilo o N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilglicilo, en los que R^{1} es un grupo protector de amina; e
- \quad
- Y y Z son tal como se definió para los compuestos del primer aspecto de esta invención;
- \quad
- y sus mono y diésteres alquílico C_{1-10}, fenil-alquílico C_{1-3} o (heteroaril C_{5-6})-alquílico C_{1-3};
- \quad
- y sales de los compuestos y sus mono y diésteres.
\vskip1.000000\baselineskip
Estos compuestos son útiles como productos
intermedios en la preparación de los compuestos del primer aspecto
de esta invención.
Las realizaciones preferidas de esta invención
se caracterizan por la especificación y por las características
según las reivindicaciones 2-20 de esta solicitud
tal como se presenta y de composiciones farmacéuticas, métodos y
usos de estos compuestos.
"Alquilo" significa un grupo monovalente
derivado de un hidrocarburo C_{1-10},
preferiblemente C_{1-6}, saturado o insaturado
(pero no aromáticamente insaturado) que puede ser lineal, ramificado
o cíclico mediante eliminación de un átomo de hidrógeno a partir de
un átomo de carbono, tal como metilo, etilo, propilo,
1-propenilo, isopropilo, butilo, isobutilo,
sec-butilo, terc-butilo, pentilo,
hexilo, ciclopentilo,
ciclopenten-1-ilo,
ciclopropilmetilo, ciclohexilo y ciclohexilmetilo. Los alquilos
saturados y alquilos C_{1}-C_{6} son ejemplos.
Obsérvese que la definición de "alquilo" en esta solicitud es
más amplia que la definición convencional e incluye grupos
denominados más comúnmente como "cicloalquilo",
"cicloalquilalquilo", "alquenilo" y "alquinilo".
Un "alquilo sustituido" es un alquilo
sustituido con hasta tres átomos de halógeno y/o un sustituyente
seleccionado de -CN, -NO_{2}, -OR y -NR_{2} (en el que cada R
es independientemente H o alquilo C_{1-3}). Por
tanto, por ejemplo, grupos alquilo sustituidos incluyen grupos
tales como trifluorometilo y 3-cloropropilo. Grupos
cicloalquilo C_{5-6} sustituidos preferidos son
ciclopentilo y ciclohexilo, sustituidos con 1 ó 2, especialmente 1,
grupos seleccionados de halógeno, hidroxilo, metilo, trifluorometilo
y metoxilo, especialmente flúor, cloro o metilo.
"Heteroalquilo" significa "alquilo"
(tal como se definió anteriormente) en el que 1 ó 2 de los grupos
metileno están sustituidos por O, S, SO_{2} o NR (en el que R es
H o alquilo C_{1-3}), incluyendo grupos lineales
tales como 3-oxapentilo; anillos monocíclicos que
contienen 5 ó 6 átomos de anillo tales como
2-tetrahidrofuranilo,
2-pirrolidinilo, 3-piperidinilo,
2-piperazinilo, 4-dihidropiranilo y
3-morfolinilo; y grupos tales como
tetrahidrofuran-2-ilmetilo y
piperidin-3-iletilo. Grupos
cicloheteroalquilo C_{5-6} preferidos son
ciclopentilo o ciclohexilo en los que 1 de los grupos metileno de
anillo está sustituido por O, S, SO_{2}, NH o
N-metilo; e incluyen 2- y
3-tetrahidrofuranilo, 3- y
4-tetrahidropiranilo,
4-tetrahidrotiopiranilo y su S,S-dióxido y
2-, 3- y 4-piperidinilo. Un "heteroalquilo
sustituido" es un heteroalquilo sustituido de la manera descrita
anteriormente para un alquilo sustituido.
"Arilo" significa un grupo monovalente
derivado de un hidrocarburo aromático que contiene
6-14 átomos de carbono de anillo mediante
eliminación de un átomo de hidrógeno a partir de un átomo de carbono
y puede ser monocíclico (tal como fenilo), policíclico condensado
(tal como naftilo) o policíclico unido con enlace (tal como
bifenililo).
"Arilo sustituido" significa arilo
sustituido con hasta 3 sustituyentes seleccionados de halógeno, -CN,
-NO_{2}, -OH, alquilo C_{1-3} opcionalmente
sustituido con halógeno (por ejemplo etilo, trifluorometilo),
alquiloxilo C_{1-3} opcionalmente sustituido con
halógeno, fenoxilo, (heteroaril
C_{5-6})oxilo, formilo, carboxilo,
alcoxicarbonilo C_{1-3} y -NR_{2} (en el que
cada R es independientemente H o alquilo
C_{1-3}).
"Aralquilo" significa alquilo sustituido
con arilo, tal como bencilo y fenetilo. "Aralquilo sustituido"
significa aralquilo en el que uno o ambos del arilo y el alquilo
están sustituidos de la manera descrita anteriormente para arilo
sustituido y alquilo sustituido.
"Halógeno" significa F, Cl o Br.
"Heteroarilo" significa un grupo
monovalente derivado de un hidrocarburo aromático que contiene
5-14 átomos de carbono de anillo mediante
eliminación de un átomo de hidrógeno a partir de un átomo de
carbono, en el que de 1 a 4 de los átomos de carbono de anillo se
sustituyen por O, S, N o NR (en el que R es H o alquilo
C_{1-3}) y puede ser monocíclico que contiene 5 ó
6 átomos de anillo (tal como furilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo,
imidazolilo, piridinilo, pirazinilo, piridazinilo y pirimidinilo);
bicíclico condensado (tal como bencimidazolilo, benzotriazolilo y
quinolilo); o bicíclico unido con enlace, especialmente (heteroaril
C_{5-6})-fenilo tal como
4-(2-piridil)fenilo. Grupos heteroarilo
C_{5-6} preferidos son 2- y
3-furilo, 2- y 3-tienilo y 2-, 3- y
4-piridinilo. "Heteroarilo sustituido"
significa heteroarilo sustituido de la manera descrita anteriormente
para arilo sustituido.
"Heteroaralquilo" significa alquilo
sustituido con heteroarilo, tal como
2-pirrolilmetilo. "Heteroaralquilo sustituido"
significa heteroaralquilo sustituido de la manera descrita
anteriormente para alquilo sustituido.
Las "sales" se describen en la sección
titulada "compuestos de esta invención".
Un "grupo protector de amina" es un grupo
que puede proteger el grupo \alpha-amina del
glutamilo de un compuesto del primer aspecto de esta invención o un
producto intermedio del mismo durante la síntesis de ese compuesto
y puede eliminarse posteriormente sin afectar al resto del compuesto
del primer aspecto de esta invención. Grupos comunes de este tipo
incluyen terc-butoxicarbonilo y benciloxicarbonilo, que
pueden eliminarse convenientemente mediante acidolisis; con
benciloxicarbonilo que también puede eliminarse convenientemente
mediante hidrogenación catalítica. Los grupos protectores de amina
se conocen bien en la técnica de la síntesis orgánica y
particularmente la síntesis de péptidos. Los grupos adecuados de
este tipo y las condiciones para su eliminación se describen en
libros tales como Synthesis of Peptides and Peptidomimetics,
Workbench edition, M. Goodman, ed., Georg Tieme Verlag, Stuttgart,
Alemania, 2004 y Protective groups in organic synthesis, 3 ed.,
T.W. Greene y P.G.M. Wuts, eds., John Wiley & Sons, Inc., Nueva
York, Nueva York, EE.UU., 1999 y los conocerá bien el experto en la
técnica.
\newpage
Una "cantidad terapéuticamente eficaz"
significa la cantidad que, cuando se administra a un mamífero,
especialmente un ser humano, para realizar el tratamiento mediante
uno de los métodos terapéuticos, es suficiente para realizar el
tratamiento para el estado que es el objeto del tratamiento
terapéutico. "Tratar" o "tratamiento" de un estado en un
mamífero incluye uno o más de:
(1) inhibir el desarrollo del estado, por
ejemplo, detener su desarrollo,
(2) mitigar el estado, por ejemplo, provocar una
regresión o cura del estado,
(3) evitar la recurrencia del estado y
(4) paliar los síntomas del estado.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos del primer aspecto de esta
invención son compuestos de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
- \quad
- X es L-\gamma-glutamilo o L-\gamma-glutamilglicilo; e
- \quad
- Y es H, alquilo opcionalmente sustituido, heteroalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido o heteroaralquilo opcionalmente sustituido;
- \quad
- Z es alquilo C_{5-9} opcionalmente sustituido, heteroalquilo C_{5-9} opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido o heteroaralquilo opcionalmente sustituido;
- \quad
- y sus mono y diésteres alquílico C_{1-10}, fenil-alquílico C_{1-3} o (heteroaril C_{5-6})-C_{1-3} alquílico;
- \quad
- y sales de los compuestos y sus mono y diésteres.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos preferidos del primer aspecto de
esta invención incluyen aquellos compuestos que tienen una o más de
las siguientes características:
1. X es
L-\gamma-glutamilo;
2. Y es cicloalquilo C_{5-6}
opcionalmente sustituido, cicloheteroalquilo
C_{5-6} opcionalmente sustituido, fenilo
opcionalmente sustituido o heteroarilo C_{5-6}
opcionalmente sustituido; especialmente Y es ciclopentilo,
ciclohexilo, tienilo, furilo, piridinilo o fenilo opcionalmente
sustituido; más especialmente ciclohexilo o más especialmente
fenilo, opcionalmente sustituido con 1 ó 2 grupos flúor, cloro,
metilo, hidroxilo, metoxilo o trifluorometilo; tal como en el que
el fenilo no está sustituido o está sustituido y uno de los
sustituyentes está en la posición 4, particularmente en el que sólo
hay un sustituyente;
3. Z es alquilo C_{5-9} o es
fenilo, 1- o 2-naftilo, 2-, 3- o
4-bifenililo o 2-, 3- o 4-(heteroaril
C_{5-6})fenilo, cada uno opcionalmente
sustituido con de 1 a 3 grupos halógeno, ciano, hidroxilo,
carboxilo, trifluorometilo o -R, -OR, -COOR o -NR_{2} (en los que
R es alquilo C_{1-3}); especialmente fenilo o 2-,
3- o 4-bifenililo o 2-, 3- o 4-(heteroaril
C_{5-6})fenilo, cada uno opcionalmente
sustituido con flúor, cloro, ciano, hidroxilo, metoxilo, metilo o
trifluorometilo;
4A. el compuesto es un diácido; o
4B. el compuesto es un diéster, especialmente un
diéster alquílico C_{1-6}, más especialmente un
diéster alquílico C_{1-3}.
\vskip1.000000\baselineskip
Generalmente, se prefiere un compuesto que tiene
un número mayor de estas características más que un compuesto que
tiene un número menor de estas características; en particular, la
adición de una de estas características a un compuesto que tiene
menos de todas las características dará generalmente como resultado
un compuesto que se prefiere más que el compuesto sin la
característica.
Sales adecuadas (véase Berge et al., J.
Pharm. Sci., 66:1 (1971) para una lista no exclusiva) de los
compuestos de esta invención son las formadas cuando bases
inorgánicas (por ejemplo hidróxido de sodio, potasio y calcio) o
bases orgánicas (por ejemplo etanolamina, dietanolamina,
trietanolamina, etilendiamina, trometamina,
N-metilglucamina) reaccionan con los grupos
carboxílicos y las formadas cuando ácidos inorgánicos (por ejemplo,
ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico y
clorosulfónico) o ácidos orgánicos (por ejemplo ácidos acético,
propiónico, oxálico, málico, maleico, malónico, fumárico o
tartárico y ácidos alcano o arenosulfónicos tales como ácidos
metansulfónico, etansulfónico, bencensulfónico, bencensulfónico
sustituido tal como clorobencensulfónico y toluensulfónico,
naftalensulfónico y naftalensulfónico sustituido,
naftalendisulfónico y naftalendisulfónico sustituido y
canforsulfónico) reaccionan para formar sales de adición de ácido de
los grupos amina, de los compuestos. Tales sales se forman
preferiblemente con ácidos y bases farmacéuticamente aceptables. Una
sal adecuada para los compuestos es una sal de adición de ácido,
especialmente con un ácido inorgánico, tal como la sal
clorhidrato.
La preparación de los compuestos del primer
aspecto de esta invención mediante el procedimiento de esta
invención implica:
- (a)
- oxidar un compuesto (un "compuesto de sulfuro") de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
- \quad
- en la que:
- \quad
- X es L-\gamma-glutamilo o L-\gamma-glutamilglicilo, o es N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilo o N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilglicilo, en los que R^{1} es un grupo protector de amina e
- \quad
- Y y Z son tal como se definieron para los compuestos del primer aspecto de esta invención;
- \quad
- o su mono o diéster alquílico C_{1-10}, fenil-alquílico C_{1-3} o (heteroaril C_{5-6})-alquílico C_{1-3};
para dar un compuesto del primer o del quinto
aspecto de esta invención;
\vskip1.000000\baselineskip
- (b)
- si X es N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilo o N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilglicilo, desproteger la sulfona resultante que es un compuesto del quinto aspecto de esta invención para dar un compuesto del primer aspecto de esta invención; y opcionalmente
- (c)
- si el compuesto del primer aspecto de esta invención preparado en la etapa (a) o en la etapa (b) es un diácido, formar un mono o diéster del compuesto; o
- (d)
- si el compuesto preparado en la etapa (a) o (b) es un mono o diéster, desesterificar el compuesto para preparar el diácido del compuesto; y
- (e)
- formar una sal del compuesto preparado en cualquiera de las etapas (a) a (d).
\vskip1.000000\baselineskip
En la etapa (a), se oxida el átomo de azufre
para preparar un compuesto del primer aspecto de esta invención (si
el grupo amina del glutamilo no está protegido) o un compuesto del
quinto aspecto de esta invención (si el grupo amina del glutamilo
está protegido con R^{1}).
Normalmente, se disuelve el compuesto de sulfuro
en un disolvente adecuado, se añade un agente de oxidación y se
mantiene la mezcla de reacción a una temperatura suficiente y un
tiempo suficiente para completar la oxidación. Las combinaciones de
disolvente/oxidante adecuadas incluyen combinaciones de ácido
alcanoico C_{2-3}/peróxido de hidrógeno/ácido
peroxialcanoico tales como ácido acético/ácido peroxiacético y
ácido acético/peróxido de hidrógeno/ácido peroxiacético y el uso de
ácidos peroxialcanoicos C_{2-3} o ácido
peroxitrifluoroacético tanto como disolvente como oxidante. Tras
extinguir el exceso de oxidante con un reactivo tal como sulfuro de
dimetilo si se desea, se aísla el compuesto del primer (o el quinto)
aspecto de esta invención sencillamente mediante concentración.
Combinaciones de disolvente/oxidante particularmente adecuadas
incluyen combinaciones en las que la oxidación tiene lugar en un
sistema bifásico, con el compuesto de sulfuro disuelto en un
disolvente aprótico no polar tal como un éster (por ejemplo acetato
de isopropilo) y estando el oxidante en disolución acuosa.
Oxidantes adecuados para estas oxidaciones bifásicas incluyen
boratos y compuestos de peroxilo tales como perboratos y
persulfatos, por ejemplo persulfato de amonio, sodio o potasio y un
oxidante particularmente adecuado es monopersulfato de potasio, tal
como OXONE^{TM} (2KHSO_{5}.KHSO_{4}.K_{2}SO_{4}). Tras la
separación de las fases acuosa y no acuosa y el lavado opcional de
la fase no acuosa para garantizar la completa eliminación de
cualquier oxidante, se aísla el compuesto del primer (o quinto)
aspecto de esta invención de la fase no acuosa mediante
concentración.
En la etapa opcional (b), se desprotege el grupo
amina protegido con R^{1} de un compuesto del quinto aspecto de
esta invención para preparar un compuesto del primer aspecto de esta
invención.
El compuesto del quinto aspecto de esta
invención puede desprotegerse mediante cualquier método adecuado
para la eliminación del grupo protector de amina que además no
afecta al resto de la molécula. Cuando el grupo protector de amina
es un grupo que puede eliminarse de manera acidolítica, se
desprotege convenientemente mediante el uso de un ácido fuerte, tal
como ácido trifluoroacético opcionalmente en presencia de
diclorometano. Cuando el grupo protector de amina es un grupo
protector de amina que puede eliminarse de manera catalítica, se
desprotege convenientemente mediante isomerización o reducción
catalítica, aunque grupos tales como benciloxicarbonilo,
considerado generalmente como que puede eliminarse de manera
catalítica, también pueden eliminarse de manera acidolítica.
Para la reducción catalítica, normalmente se
disuelve el compuesto en un disolvente adecuado tal como a un
alcanol C_{1-4} o un disolvente prótico polar o en
un disolvente aprótico no polar, especialmente en presencia de
agua, por ejemplo acetato de isopropilo en presencia de agua y se
pone en contacto con hidrógeno o un donador de hidrógeno tal como
ciclohexeno o 1,4-ciclohexadieno en presencia de un
catalizador de reducción, normalmente un catalizador de paladio tal
como negro de paladio, paladio sobre sulfato de bario y paladio
sobre carbono. Para la isomerización catalítica, se usa un complejo
de paladio de valencia cero tal como
tetrakis(trifenilfosfina)paladio (0), normalmente en
presencia de un eliminador de grupo alilo nucleófilo tal como una
amina secundaria. Tras la eliminación del catalizador, se aísla el
compuesto del primer aspecto de esta invención, de manera
conveniente como una sal de adición de ácido (en la etapa opcional
(e)).
En las etapas opcionales (c) y (d), se
esterifica el compuesto del primer aspecto de esta invención (si es
un diácido y se desea un éster) o se desesterifica (si es un éster y
se desea el diácido). Estas esterificaciones o desesterificaciones
son convencionales y pueden llevarse a cabo mediante cualquiera de
los métodos bien conocidos por los expertos en la técnica; en
particular, una técnica de esterificación conveniente implica la
reacción del compuesto de diácido del primer aspecto de esta
invención con el alcohol que produce el éster deseado, usando ese
alcohol como disolvente, en presencia de un halosilano tal como
clorotrietilsilano a temperaturas entre temperatura ambiente y la
temperatura de ebullición del alcohol.
En la etapa opcional (e), se forma una sal del
compuesto del primer aspecto de esta invención. Ésta será
normalmente una sal de adición de ácido (véase la definición de
"sales" anterior). De manera conveniente, esto se realiza
inmediatamente tras formar el compuesto del primer aspecto de esta
invención; y puede lograrse mediante la adición de un disolvente
que se volverá un antidisolvente para la sal, tal como un disolvente
aprótico, por ejemplo un hidrocarburo o un hidrocarburo halogenado
tal como diclorometano, seguido por la adición del ácido elegido
para formar la sal, especialmente en forma del ácido anhidro solo o
en un disolvente aprótico, por ejemplo gas de cloruro de hidrógeno.
Si es necesario o se desea puede añadirse antidisolvente adicional
para la sal, por ejemplo éteres tales como dietil éter, metil
terc-butil éter y tetrahidrofurano, especialmente metil
terc-butil éter.
Los materiales de partida para el procedimiento
(los "compuestos de sulfuro") son tripéptidos y tetrapéptidos,
opcionalmente mono o diesterificados, opcionalmente protegidos en la
amina del glutamilo y con el azufre de la cisteína alquilado con un
grupo Z-CH_{2}-.
Estos análogos de glutatión alquilados en S se
preparan convenientemente mediante métodos convencionales de
síntesis de péptidos bien conocidos por los expertos en la
técnica.
Cuando una cisteína alquilada en S de manera
apropiada no está fácilmente disponible para la síntesis de
péptidos, la síntesis de péptidos puede realizarse usando uno de
los muchos grupos protectores de S convencionales, tales como
trifenilmetilo, y después se desprotege el péptido protegido en S
resultante, por ejemplo mediante acidolisis. Normalmente, se
disuelve el péptido protegido en S en un ácido que es lo bastante
fuerte para eliminar el grupo protector de azufre que puede
eliminarse de manera acidolítica pero no lo bastante fuerte para
eliminar cualquier grupo protector de amina, opcionalmente en
presencia de un eliminador. Ácidos adecuados de este tipo incluyen
ácido trifluoroacético y otros ácidos fuertes tales como ácido
trifluorometansulfónico, opcionalmente en presencia de un
codisolvente tal como diclorometano; eliminadores adecuados incluyen
sulfuros y éteres aromáticos tales como anisol y tioanisol, fenoles
tales como cresol, y, de la manera más eficaz, silanos incluyendo
trialquilsilanos tales como trietilsilano y triisopropilsilano y
polímeros de silano tales como poli(metilhidrosiloxano); y
un reactivo de desprotección particularmente adecuado es ácido
trifluoroacético en presencia de poli(metilhidrosiloxano).
Puede aislarse el péptido desprotegido en S de la mezcla de reacción
mediante adición de un antidisolvente, por ejemplo un disolvente
aprótico no polar tal como un hidrocarburo o un éter.
Después, el anión tiolato del péptido
desprotegido en S se alquila con un compuesto de fórmula
Z-CH_{2}-L, en la que L es un
grupo saliente tal como un halógeno (cloro o bromo) o un alcano o
arenosulfonato opcionalmente sustituido para preparar el péptido
alquilado en S de manera apropiada. Esto se realiza de manera
conveniente cuando la amina del glutamilo está protegida, para
minimizar las reacciones secundarias, pero puede realizarse incluso
cuando la amina no está protegida.
Normalmente, se disuelve el péptido protegido en
S en una disolución de una base fuerte [por ejemplo un hidróxido,
carbonato, bicarbonato, fosfato o alcóxido de metal alcalino o metal
alcalinotérreo, o hidróxido de amonio; o una base de amina orgánica
tal como tetrametilguanidina, DBU
(1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno)
y similares] en un disolvente adecuado (por ejemplo un alcanol
C_{1-6}, un diol tal como
1,2-etanodiol o 1,3-propanodiol, un
éter tal como 2-metoxietanol,
1,2-dimetoxietano o tetrahidrofurano y similares)
para formar el anión tiolato, se añade el compuesto de fórmula
Z-CH_{2}-L (normalmente en exceso)
y se mantiene la mezcla de reacción a una temperatura y un tiempo
apropiados hasta la finalización. Las condiciones de reacción
convenientes son el uso de tetrahidrofurano al 20% en agua y un
exceso de aproximadamente diez veces de bicarbonato de sodio.
Los compuestos de sulfuro también pueden
prepararse tal como sigue:
se alquila una cisteína (opcionalmente
protegida) con un grupo Z-CH_{2}- apropiado y
después se forma el tripéptido o tetrapéptido mediante métodos
convencionales de síntesis de péptidos, acoplando en primer lugar
con un aminoácido de fórmula
y después con una
L-\gamma-glutamina o
L-\gamma-glutamilglicina
(opcionalmente protegida); o acoplando en primer lugar con la
L-\gamma-glutamina o
L-\gamma-glutamilglicina
(opcionalmente protegida) y después con el aminoácido de
fórmula
Muchos de los aminoácidos de fórmula
tales como
D-fenilglicina,
D-(4-clorofenil)glicina,
D-(4-hidroxifenil)glicina,
D-(3-tienil)glicina y
D-ciclohexilglicina, están comercialmente
disponibles en forma resuelta y en algunos casos como los ésteres.
Otros están disponibles en forma racémica, pero pueden resolverse
mediante cualquiera de los métodos conocidos para la resolución de
aminoácidos. Aún otros pueden prepararse mediante métodos conocidos
para la síntesis de
aminoácidos.
Los compuestos de sulfuro pueden prepararse como
diácidos (aunque esto puede implicar la protección intermedia del
\alpha-carboxilo del glutamilo así como la amina)
o como mono o diésteres, dependiendo del estado de los aminoácidos
de partida. Si el compuesto de sulfuro se prepara como un diácido,
puede mono o diesterificarse (normalmente mientras está protegido
en la amina) antes de la oxidación del sulfuro para dar la sulfona y
las condiciones de esterificación serán normalmente similares a las
que pueden usarse para la esterificación de un compuesto del primer
aspecto de esta invención.
Un experto en la técnica no tendrá dificultades,
teniendo en cuenta esa experiencia y esta divulgación (incluyendo
los ejemplos), en preparar compuestos del primer y del quinto
aspecto de esta invención.
Los compuestos del primer aspecto de esta
invención (especialmente en la forma de ácido) son inhibidores,
normalmente inhibidores selectivos, de GST P1-1.
También son activos para potenciar la diferenciación de células
HL-60 in vitro y se ha mostrado que uno
potencia la formación de colonias de granulocitos/monocitos a
partir de células murinas de la médula ósea ex vivo. Por
tanto se espera que los compuestos actúen terapéuticamente en seres
humanos para: potenciar los efectos citotóxicos de agentes
quimioterápicos en células tumorales (dado que GST, especialmente
GST P1-1, que está aumentada en muchos tejidos
tumorales, está implicada en la resistencia de células tumorales
frente a agentes quimioterápicos; de manera que un inhibidor de GST
reducirá la capacidad de las células tumorales para aclarar el
agente quimioterápico), ejercer citotoxicidad selectivamente en
células tumorales (de nuevo debido a la inhibición de la isoenzima
GST), aumentar la producción de progenitoras de GM en la médula
ósea, estimular la diferenciación de médula ósea, aliviar los
efectos mielosupresores de agentes quimioterápicos y modular la
hematopoyesis en la médula ósea.
Los compuestos del quinto aspecto de esta
invención y el procedimiento del cuarto aspecto de esta invención
son útiles en la preparación de compuestos del primer aspecto de
esta invención.
El segundo aspecto de esta invención es
composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto del primer
aspecto de esta invención, opcionalmente que incluyen también un
excipiente, tal como un excipiente farmacéuticamente aceptable,
implicando los métodos terapéuticos la administración de estos
compuestos o una composición farmacéutica que los contiene,
normalmente en una cantidad terapéuticamente eficaz, y el uso de
estos compuestos para el tratamiento del cáncer y para la
fabricación de medicamentos para el tratamiento del cáncer.
Los compuestos pueden administrarse mediante
cualquier vía adecuada para el sujeto que está tratándose y la
naturaleza del estado del sujeto. Las vías de administración
incluyen, pero no se limitan a, la administración mediante
inyección, incluyendo inyección intravenosa, intraperitoneal,
intramuscular y subcutánea, mediante administración transmucosa o
transdérmica, mediante aplicaciones tópicas, aerosol nasal,
supositorios y similares, o puede administrarse por vía oral. Las
composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos pueden
ser opcionalmente formulaciones liposomales, emulsiones,
formulaciones diseñadas para administrar el fármaco a través de las
membranas mucosas o formulaciones transdérmicas. Pueden encontrarse
formulaciones adecuadas para cada uno de estos métodos de
administración, por ejemplo, en Remington: The Science and Practice
of Pharmacy, 20 ed., A. Gennaro, ed., Lippincott Williams &
Wilkins, Filadelfia, Pennsilvania, EE.UU., 2003. Las composiciones
típicas serán o bien orales o bien disoluciones para la infusión
intravenosa y contendrán el compuesto y normalmente también
contendrán uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Las
formas farmacéuticas típicas serán comprimidos, disoluciones para
su infusión intravenosa, polvos liofilizados para su reconstitución
como disoluciones para la infusión intravenosa y formulaciones
liposomales y formulaciones liposomales liofilizadas también para
la administración intravenosa.
Una cantidad terapéuticamente eficaz de un
compuesto del primer aspecto de esta invención es de aproximadamente
10 - 2000 mg/m^{2} de superficie corporal, especialmente de 50 -
1000 mg/m^{2}. La administración puede ser a intervalos de 1 - 35
días; por ejemplo, aproximadamente 250 - 1000 mg/m^{2} a
intervalos de 1 - 5 semanas, especialmente a intervalos de 1, 2, 3
ó 4 semanas o a frecuencias mayores incluyendo tan frecuentemente
como una vez al día durante varios (por ejemplo 5 ó 7) días,
repitiéndose la administración cada 2, 3 ó 4 semanas o infusión
constante durante un periodo de 6 - 72 horas, repitiéndose también
la administración cada 2, 3 ó 4 semanas. Un régimen típico puede
implicar la administración una vez al día durante cinco días cada
tres semanas.
Los siguientes ejemplos muestran las
preparaciones de productos intermedios útiles y las síntesis de los
compuestos de esta invención mediante el procedimiento de esta
invención y la utilidad de los compuestos del primer aspecto de
esta invención como agentes terapéuticos.
Las preparaciones 1 y 2 describen preparaciones
de reactivos para la alquilación en S de cisteína o la cisteína de
los tripéptidos y tetrapéptidos (los "compuestos de sulfuro").
Por motivos de conveniencia, los reactivos se denominan derivados
de bromuro de bencilo (\alpha-bromotolueno).
Preparación
1
Se suspendieron
4-(2-piridil)tolueno, 2 ml (1,98 g, 11,7
mmol), N-bromosuccinimida (NBS), 2,5 g (14,0 mmol) y
\alpha,\alpha'-azobis(isobutironitrilo)
(AIBN), 23 mg (0,14 mmol) en 35 ml tetraclorometano y se sometieron
a reflujo durante 24 horas. Se filtró el producto y se eliminó el
disolvente del filtrado mediante evaporación rotativa. Se añadieron
cantidades iguales de cloroformo y agua y se extrajo el producto. Se
separó la fase de cloroformo y se secó y se eliminó el disolvente.
Se obtuvo bromuro de 4-(2-piridil)bencilo, 2
g, como un sólido amarillo pegajoso.
Preparación
2
Se colocaron 4-bromotolueno, 171
mg (1 mmol), ácido 2-metoxifenilborónico, 152 mg (1
mmol), diacetato de paladio, 1 mg (4 \mumol), bromuro de
N-butilamonio, 322 mg (1 mmol) y Na_{2}CO_{3} acuoso 2 M,
1,9 ml (3,8 mmol), en un vial a presión que puede someterse a
microondas y se calentó hasta 150ºC durante 5 minutos. Tras enfriar
hasta temperatura ambiente, se vertió el producto en un embudo de
decantación y se añadieron 30 ml de cada uno de agua y dietil éter.
Tras la extracción, se separaron las fases y se lavó la fase acuosa
con otros 30 ml de dietil éter. Se combinaron los extractos de
éter, se secaron sobre MgSO_{4} y se eliminó el disolvente
mediante evaporación rotativa a vacío. Se obtuvo
2-metoxi-4'-metilbifenilo,
160 mg (rendimiento del 81%) como un producto sólido, pureza del
95% mediante RMN.
\newpage
Se suspendieron
2-metoxi-4'-metilbifenilo,
160 mg (0,81 mmol), NBS, 158 mg (0,91 mmol) y AIBN, 1 mg (0,006
mmol) en 7 ml de tetraclorometano y se sometieron a reflujo durante
24 horas. Se filtró el producto y se eliminó el disolvente del
filtrado mediante evaporación rotativa. Se añadieron cantidades
iguales de dietil éter y de agua y se extrajo el producto. Se
separó la fase de éter y se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se
eliminó el disolvente. Se obtuvo bromuro de
4-(2-metoxifenil)bencilo, 128 mg, como un
aceite.
Puede prepararse bromuro de
4'-(2-cianofenil)bencilo a partir de ácido
2-cianofenilborónico mediante este método.
Pueden prepararse fácilmente otros bromuros de
bencilo sustituidos con fenilo opcionalmente sustituido o
heteroarilo C_{5-6} opcionalmente sustituido
mediante los métodos de estas preparaciones.
La preparación 3 describe la preparación de una
cisteína alquilada en S.
Preparación
3
Se disuelve
N-\alpha-(terc-butoxicarbonil)-L-cisteína,
1,0 g (4,52 mmol), en una mezcla de 9 ml de tetrahidrofurano y 9 ml
de NaOH acuoso 1 M que se había desgasificado burbujeando argón a
través del mismo. Se añadió una disolución de
4-(bromometil)bifenilo, 1,12 g (4,53 mmol), en 5 ml de
tetrahidrofurano (THF) y se agitó la disolución con burbujeo de
argón durante 8 horas a temperatura ambiente. Se eliminó el THF
mediante evaporación rotativa a vacío y se diluyó el residuo con
agua y se lavó con dietil éter. Se acidificó la fase acuosa hasta
pH 3 con HCl acuoso 6 M y se extrajo tres veces con acetato de
etilo. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con agua,
NaHCO_{3} acuoso saturado, agua y salmuera y después se secaron y
se concentraron para dar 1,44 g de
N-\alpha-(terc-butoxicarbonil)-S-(4-bifenililmetil)-L-cisteína
(rendimiento del 82%) como un sólido blanco.
Pueden prepararse fácilmente otras cisteínas
alquiladas en S (opcionalmente protegidas) mediante el método de
esta preparación.
Las preparaciones 4 a 6 describen la preparación
de algunos "compuestos de sulfuro".
Se preparó
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)-metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
como la sal clorhidrato, a partir de 330 mg de
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-L-cisteinil-D-fenilglicina
disolviendo el péptido protegido en la amina en acetonitrilo/agua,
añadiendo un exceso de aproximadamente 10 veces de bicarbonato de
sodio y añadiendo un ligero exceso de 4-(bromometil)bifenilo,
manteniendo después la reacción bajo nitrógeno hasta su
finalización. Se diluyó la mezcla de reacción con agua, se lavó con
dietil éter y se separó la fase acuosa y se acidificó hasta pH
2-3 con ácido clorhídrico, después se extrajo con
acetato de etilo. Se secó la fase orgánica sobre MgSO_{4}
anhidro, se filtró y se redujo el volumen para dar
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil)-L-cisteinil-D-fenilglicina.
Se disolvió el compuesto de sulfuro protegido en la amina,
aproximadamente 300 mg, en 2 ml de ácido trifluoroacético
(TFA):diclorometano 95:5 con 1 gota de agua y se agitó a 45ºC
durante la noche y se purificó mediante HPLC preparativa para dar
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil)-L-cisteinil-D-fenilglicina.
Se aisló la
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil)-L-cisteinil-D-fenilglicina
como la sal clorhidrato. Si se desea, podría haberse llevado
directamente el compuesto de sulfuro protegido en la amina a la
etapa de oxidación (a), para preparar un compuesto del quinto
aspecto de esta invención.
Se prepararon compuestos tales como
L-\gamma-glutamil-S-{[4-(2-piridil)fenil]metil}-L-cisteinil-D-fenilglicina
y sus análogos protegidos en la amina, mediante métodos
similares.
Pueden prepararse fácilmente otros compuestos de
sulfuro, incluyendo compuestos de sulfuro que son mono y diésteres,
mediante métodos similares.
Preparación
5
Se preparó éster dietílico de
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
como la sal clorhidrato, a partir de
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina,
30 mg, mediante esterificación con etanol y clorotrimetilsilano,
dando éster dietílico de
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina.
Se aisló el éster dietílico de
L-\gamma-glutamil-S-[(4-bifenilil)metil]-L-cisteinil-D-fenilglicina
como la sal clorhidrato.
Se prepararon compuestos tales como éster
dietílico de
L-\gamma-glutamil-S-{[4-(2-piridil)fenil]metil}-L-cisteinil-D-fenilglicina
mediante métodos similares. Pueden prepararse fácilmente otros
ésteres, particularmente diésteres, de los compuestos de sulfuro
mediante métodos similares.
Preparación
6
Se preparó éster dietílico de
D-ciclohexilglicina a partir de
D-ciclohexilglicina, 500 mg (3,1 mmol), suspendiendo
el ácido en 15 ml de etanol, añadiendo clorotrimetilsilano, 2,02 ml
(5 equivalentes) y calentando la mezcla a 50ºC durante 18 horas. Se
eliminaron los componentes volátiles a vacío y se disolvió el
residuo en acetato de etilo, se lavó con NaHCO_{3} acuoso y dos
veces con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se
evaporó para dar 401 mg de éster etílico de
D-ciclohexilglicina como un sólido aceitoso.
Se disolvió
N-\alpha-(terc-butoxicarbonil)-S-(4-bifenililmetil)-L-cisteína,
588 mg (1,9 mmol), en 5 ml de dimetilformamida (DMF) y se añadieron
hexafluorofosfato de
O-benzotriazol-N,N,N',N'-tetrametiluronio
(HBTU), 860 mg (1,2 equiv.) y di(isopropil)etilamina,
990 \mul (3 equiv.). Tras 3 minutos, se añadió éster etílico de
D-ciclohexilglicina, 360 mg (1 equiv.), disuelto en
4 ml de DMF, y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2
horas, después se aisló el éster etílico de
N-\alpha-(terc-butoxicarbonil)-S-(4-bifenililmetil)-L-cisteinil-D-ciclohexilglicina
bruto. Se disolvió el péptido en 10 ml de TFA al 20%/diclorometano
y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, después se aisló
el producto bruto mediante eliminación de los compuestos volátiles a
vacío. El trifluoroacetato de
S-(4-bifenililmetil)-L-cisteinil-D-ciclohexilglicina
bruto puede usarse directamente en la siguiente etapa o puede
tratarse adicionalmente.
Se disolvió
N-\alpha-(terc-butoxicarbonil)-O-\alpha-terc-butil-L-\gamma-glutamina
en 2 ml de DMF y se añadieron HBTU, 174 mg (1,2 equiv.) y
di(isopropil)etilamina, 330 \mul (5 equiv.). Tras 5
minutos, se añadió trifluoroacetato de
S-(4-bifenililmetil)-L-cisteinil-D-ciclohexilglicina
bruto, 200 mg (0,38 mmol), disuelto en 2 ml de DMF, y se agitó la
mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. Se vertió la mezcla
en ácido cítrico acuoso 0,1 N y se extrajo con acetato de etilo. Se
lavó la fase orgánica cuatro veces con salmuera, se secó sobre
MgSO_{4} y se evaporaron los compuestos volátiles para dar
N-\alpha-(terc-butoxicarbonil)-O-\alpha-terc-butil-L-\gamma-glutamil-S-(4-bifenililmetil)-L-cisteinil-D-ciclohexilglicina
como un aceite marrón. Esto se disolvió en 10 ml de TFA al
20%/diclorometano y se agitó a temperatura ambiente durante 24
horas. Se eliminaron los compuestos volátiles a vacío y se purificó
el producto mediante HPLC de fase inversa, después se aisló el
L-\gamma-glutamil-S-(4-bifenililmetil)-L-cisteinil-D-ciclohexilglicina
como la sal clorhidrato, 47 mg. Si se desea, también podría haberse
llevado directamente el compuesto de sulfuro protegido a la etapa
de oxidación (a).
Se preparó
L-\gamma-glutamil-S-(4-bifenililmetil)-L-cisteinil-D-(4-clorofenil)glicina
como la sal clorhidrato mediante un método similar.
Ejemplo sintético
1
A 100 mg (0,2 mmol) de clorhidrato de
L-\gamma-glutamil-S-(fenilmetil)-L-cisteinil-D-fenilglicina
(clorhidrato de
TLK117) disueltos en ácido acético se les añadieron 200 \mul de una disolución al 32% de ácido peracético en ácido acético (0,95 mmol). Se mantuvo la mezcla de reacción a temperatura ambiente, siguiendo la reacción mediante CL/EM. Al finalizar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a vacío hasta dar un sólido, después se llevó a acetonitrilo al 50%/agua, se filtró y se lavó el residuo con más acetonitrilo/agua. Se liofilizó el filtrado, después se purificaron el residuo y el filtrado mediante HPLC preparativa y volvieron a liofilizarse las fracciones que contenían producto. Tras la disolución en acetonitrilo/agua y la liofilización, después la trituración con metanol/éter y el secado a vacío, se obtuvo L-\gamma-glutamil-3-[(fenilmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina, 1A, como un producto sólido, con una pureza del 96% mediante CL (detección ELSD). El espectro de RMN del protón (DMSO-d_{6}) era coherente con la estructura propuesta. Se prepararon de manera similar dos lotes adicionales a mayor escala (0,4 mmol y 11 mmol, respectivamente), usando un exceso de 2,3-2,5 veces de ácido peracético y alterando ligeramente las razones de disolvente y las cantidades. En cada caso se obtuvo el mismo producto.
TLK117) disueltos en ácido acético se les añadieron 200 \mul de una disolución al 32% de ácido peracético en ácido acético (0,95 mmol). Se mantuvo la mezcla de reacción a temperatura ambiente, siguiendo la reacción mediante CL/EM. Al finalizar la reacción, se concentró la mezcla de reacción a vacío hasta dar un sólido, después se llevó a acetonitrilo al 50%/agua, se filtró y se lavó el residuo con más acetonitrilo/agua. Se liofilizó el filtrado, después se purificaron el residuo y el filtrado mediante HPLC preparativa y volvieron a liofilizarse las fracciones que contenían producto. Tras la disolución en acetonitrilo/agua y la liofilización, después la trituración con metanol/éter y el secado a vacío, se obtuvo L-\gamma-glutamil-3-[(fenilmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina, 1A, como un producto sólido, con una pureza del 96% mediante CL (detección ELSD). El espectro de RMN del protón (DMSO-d_{6}) era coherente con la estructura propuesta. Se prepararon de manera similar dos lotes adicionales a mayor escala (0,4 mmol y 11 mmol, respectivamente), usando un exceso de 2,3-2,5 veces de ácido peracético y alterando ligeramente las razones de disolvente y las cantidades. En cada caso se obtuvo el mismo producto.
Ejemplo sintético
2
A 123 mg (0,22 mmol) de clorhidrato del éster
dietílico de
L-\gamma-glutamil-S-(fenilmetil)-L-cisteinil-D-fenilglicina
disueltos en 3 ml de ácido acético se les añadieron 225 \mul de
una disolución al 32% de ácido peracético en ácido acético (1,06
mmol). Se mantuvo la mezcla de reacción a temperatura ambiente,
siguiendo la reacción mediante CL/EM. Al finalizar la reacción, se
concentró la mezcla de reacción a vacío hasta dar un sólido,
después se llevó a metanol/dimetilsulfóxido/agua y se purificó
mediante HPLC preparativa y volvieron a liofilizarse las fracciones
que contenían producto. Se obtuvo éster dietílico de
L-\gamma-glutamil-3-[(fenilmetil)
sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina,
1B, como un producto sólido. El espectro de RMN del protón
(DMSO-d_{6}) era coherente con la estructura
propuesta.
\newpage
Ejemplo sintético
3
A 309 mg (0,61 mmol) de clorhidrato de
L-\gamma-glutamil-S-(fenilmetil)-L-cisteinil-D-fenilglicina
suspendidos en 6 ml de alcohol isopropílico se les añadieron 767
\mul de clorotrimetilsilano (6,05 mmol). Se agitó la mezcla de
reacción bajo nitrógeno a temperatura ambiente, cuando se formó
gradualmente un precipitado blanco. Se calentó la mezcla hasta
50ºC, se añadieron 300 \mul adicionales de clorotrimetilsilano y
se mantuvo la mezcla de reacción a temperatura elevada. Tras varias
horas, se encontró que la reacción era completa al 85% (siendo el
resto monoéster); y se filtró el precipitado que se había formado,
se lavó con isopropanol, se secó (rendimiento de 240 mg), se
disolvió en metanol y se purificó mediante HPLC preparativa usando
agua/acetonitrilo 95:5 con ácido clorhídrico al 0,01% como
disolvente. Se disolvió el éster diisopropílico, 87 mg (0,16 mmol),
en 2 ml de ácido acético y se oxidó con el uso de 82 \mul de
disolución de ácido peracético solución (2,5 equivalentes). Al
finalizar la reacción, se añadieron 2 ml de metanol, se purificó el
producto mediante HPLC preparativa usando agua/acetonitrilo 95:5
con ácido trifluoroacético al 0,01% como disolvente y se
liofilizaron las fracciones que contenían producto. Se obtuvo
clorhidrato del éster diisopropílico de
L-\gamma-glutamil-3-[(fenilmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina
como un producto sólido, pureza del 98% mediante HPLC. El espectro
de RMN del protón (DMSO-d_{6}) era coherente con la
estructura propuesta.
Ejemplo sintético
4
Se preparó éster dimetílico de
L-\gamma-glutamil-3-[(fenilmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina,
1C, como la sal clorhidrato, a partir de 500 mg (0,98 mmol) de
clorhidrato de
L-\gamma-glutamil-S-(fenilmetil)-L-cisteinil-D-fenilglicina
usando el método del ejemplo sintético 3, usando metanol en vez de
isopropanol en la esterificación y oxidando el éster dimetílico de
la misma manera que para el éster diisopropílico, con tres ciclos de
disolución/liofilización usados para la purificación. 98% de pureza
mediante HPLC.
Ejemplo sintético
5
Se preparó
L-\gamma-glutamil-3-[(4-bifenililmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina,
11A, como la sal clorhidrato, en tres etapas a partir de 330 mg de
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-L-cisteinil-D-fenilglicina
disolviendo el péptido protegido en la amina en acetonitrilo/agua,
añadiendo un exceso de aproximadamente 10 veces de bicarbonato de
sodio y añadiendo un ligero exceso de 4-(bromometil)bifenilo,
manteniendo después la reacción bajo nitrógeno hasta la
finalización. Se diluyó la mezcla de reacción con agua, se lavó con
dietil éter y se separó la fase acuosa y se acidificó hasta pH
2-3 con ácido clorhídrico, después se extrajo con
acetato de etilo. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de magnesio
anhidro, se filtró y se redujo el volumen hasta dar
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-3-[(4-bifenililmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina.
Se disolvió el sulfuro protegido en amina, aproximadamente 300 mg,
en 2 ml de ácido trifluoroacético:diclorometano 95:5 con 1 gota de
agua y se agitó a 45ºC durante la noche y se purificó mediante HPLC
preparativa para dar
L-\gamma-glutamil-3-[(4-bifenililmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina.
Se oxidó el sulfuro desprotegido de la misma manera que en los
ejemplos sintéticos anteriores para dar éster de
L-\gamma-glutamil-3-[(4-bifenililmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina,
11A, como la sal clorhidrato, 92% de pureza mediante HPLC.
Ejemplo sintético
6
Se preparó
L-\gamma-glutamil-3-[(2-bifenililmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina,
4A, como la sal clorhidrato, en tres etapas a partir de 500 mg de
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-L-cisteinil-D-fenilglicina
usando el método del ejemplo sintético 5, con
2-(bromometil)-bifenilo como agente de alquilación
para el péptido protegido. 99% de pureza mediante HPLC.
Ejemplo sintético
7
Se preparó éster dimetílico de
L-\gamma-glutamil-3-[(2-bifenililmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina,
4B, como la sal clorhidrato, a partir de 143 mg de clorhidrato de
L-\gamma-glutamil-S-(2-bifenililmetil)-L-cisteinil-D-fenilglicina
(como producto intermedio en el ejemplo 6) mediante esterificación
con etanol y clorotrimetilsilano, después oxidación del éster
dietílico, tal como en el ejemplo sintético 3. 94% de pureza
mediante HPLC.
\newpage
Ejemplo sintético
8
Se preparó
L-\gamma-glutamil-3-[(2-naftilmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina,
3A, como la sal clorhidrato, en tres etapas a partir de
N-\alpha-(benciloxicarbonil)-L-\gamma-glutamil-L-cisteinil-D-fenilglicina
usando el método del ejemplo sintético 5, con
2-(bromometil)naftaleno como agente de alquilación para el
péptido protegido. 92% de pureza mediante HPLC.
Se preparó
L-\gamma-glutamil-3-[(5-nitrofuran-2-ilmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina,
14A, como la sal clorhidrato, mediante un método similar. 99% de
pureza mediante HPLC.
En la tabla 1 a continuación se facilitan
compuestos representativos del primer aspecto de esta invención:
\vskip1.000000\baselineskip
- # representa el punto de unión de A al átomo de azufre de sulfonilo del compuesto.
Se prepararon los ésteres dietílicos 1B a 12B de
los compuestos 1A a 12A mediante uno de los métodos tratados
anteriormente; y se analizaron mediante espectrometría de masas,
dando cada compuesto un pico de masa (M/z) correspondiente a su
masa, normalmente M+H con ionización positiva o M-H
con ionización negativa. También se prepararon los ésteres
dimetílico y diisopropílico 1C y 1D del diácido 1A y se analizaron
mediante espectrometría de masas, dando cada compuesto un pico de
masa de M+H con ionización positiva.
Pueden prepararse de manera similar otros
compuestos de esta invención, usando métodos bien conocidos por el
experto en la técnica con referencia a esa experiencia y a esta
divulgación.
Estos ejemplos ilustran los efectos de
compuestos de esta invención (y uno u otro de los compuestos de
comparación TLK117 y TLK199 y la "vinilsulfona" y su éster
dietílico) en ensayos predictivos in vitro.
Se obtuvieron isoenzimas GST
P1-1, A1-1 y M1-1
humanas, y anticuerpo policlonal de conejo
anti-GST\pi humana a partir de EMD Biosciences,
Inc., San Diego, California, EE.UU. Se obtuvo anticuerpo monoclonal
de ratón anti-GST\pi humana a partir de
Dakoctyomation, Inc., Carpinteria, California, EE.UU. Se obtuvo
anticuerpo de cabra conjugado con IRDye800, purificado por afinidad
anti-IgG de conejo a partir de Rockland
Immunochemicals, Inc., Gilbertsville, Pennsilvania, EE.UU. Se
obtuvo la línea de células cancerígenas humanas
HL-60 (leucemia mielocítica promieloide) a partir
del National Cancer Institute, Bethesda, Mariland, EE.UU. Se
obtuvieron medio RPMI 1640 y medio de Dulbecco modificado por
Iscove (IMDM) a partir de Invitrogen, Inc., Carlsbad, California,
EE.UU. Se obtuvo el kit de ensayo
CellTiter-Glo^{TM} a partir de la Promega
Corporation, Madison, Wisconsin, EE.UU. y se usó de acuerdo con las
instrucciones del fabricante. Se obtuvieron anticuerpo conjugado con
ficoeritrina anti-CD11b y anticuerpo de control
isotipo conjugado con ficoeritrina a partir de BD Biosciences, Inc.,
San José, California, EE.UU. Se obtuvo medio de metilcelulosa
MetoCult^{TM} M3234 (metilcelulosa al 2,5% en IMDM, complementado
con suero bovino fetal, albúmina sérica bovina, insulina rh,
transferrina h, 2-mercaptoetanol y
L-glutamina) a partir de StemCell Technologies,
Inc., Vancouver, Canadá y se diluyó (hasta una concentración de
metilcelulosa del 1%) según las instrucciones del fabricante.
Ejemplo in vitro
1
Este ejemplo ilustra el efecto de compuestos de
esto como inhibidores de las isoenzimas glutatión
S-transferasas GST P1-1, A1-1
y M1-1, in vitro. La inhibición de GST
P1-1 se considera predictiva de la eficacia en los
métodos terapéuticos del tercer aspecto de esta invención, dado que
TLK199 (el éster dietílico de TLK117 sometido a prueba en estos
ensayos) ha mostrado una actividad mieloestimulante en seres humanos
y una actividad de quimiopotenciación en un modelo animal.
Se usaron isoenzimas humanas recombinantes GST
P1-1, A1-1 y M1-1 a
unas concentraciones finales de 0,02, 0,011 y 0,0083 unidades/ml,
respectivamente [1 unidad es la cantidad de enzima que se conjugará
con un 1 \mumol de
1-cloro-2,4-dinitrobenzeno
(CDNB) para reducir el glutatión (GSH) por minuto a 20ºC y pH 6,5],
en tampón de ensayo (KH_{2}PO_{4}/K_{2}HPO_{4} 100 mM, EDTA
0,1 mM, pH 6,5 en agua). Se preparó GSH como una disolución madre
100 mM en agua y CDNB como una disolución madre 100 mM en etanol y
ambas se diluyeron con tampón de ensayo hasta la concentración
apropiada (para lograr una concentración final de 2xK_{m} para la
isoenzima que estaba evaluándose). Se disolvieron los compuestos de
prueba (diácidos, compuestos 1A a 12A y TLK117) en dimetilsulfóxido
(DMSO) y se diluyeron con DMSO hasta la concentración apropiada para
el ensayo (8 concentraciones a lo largo del intervalo con el punto
medio cerca de la CI_{50} esperada, la concentración que provoca
una inhibición del 50% de actividad enzimática). Para cada ensayo,
se añadieron el compuesto de prueba y GSH a la isoenzima.
Inmediatamente después de la adición de disolución de CDNB a la
disolución de isoenzima/compuesto/GSH, se registró la absorbancia a
340 nm de manera continua durante 5 min. en un lector de placas
SpectraMax (Molecular Devices, Inc., Sunnyvale, California, EE.UU.).
Se calculó la actividad inhibitoria de GST de cada compuesto a
partir de las pendientes de las curvas absorbancia/tiempo a las
diversas concentraciones de compuesto de prueba. Todos los ensayos
se realizaron en pocillos por duplicado, con un control de DMSO,
manteniéndose la concentración de DMSO final al 2%. Los resultados
de estos análisis se proporcionan en la tabla 2 a continuación.
Ejemplo in vitro
2
Se sembraron células en fase logarítmica en
placas de 96 pocillos a 1500 células/pocillo en 150 \mul de medio
RPMI 1640 complementado con suero bovino fetal al 10% (FBS) y
L-glutamina al 1% y se incubaron a 37ºC bajo
aire/CO_{2} al 5% durante 4-5 horas. Se
disolvieron los compuestos de prueba (ésteres dietílicos, compuestos
1B a 12B y TLK199) y se diluyeron en serie en DMSO (8
concentraciones a lo largo del intervalo con el punto medio cerca
de la CC_{50} esperada). Tras una dilución adicional de 1:50 en el
medio RPMI 1640 complementado, se añadieron 50 \mul de los
compuestos diluidos para lograr una concentración final de DMSO del
0,5%. Después se incubaron las células durante 72 horas
(aproximadamente tres tiempos de duplicación). Después se recogieron
las células mediante centrifugación (1200 rpm durante 5 min. a
20ºC) y se retiraron 100 \mul del sobrenadante de cultivo y se
sustituyeron por el mismo volumen del reactivo
CellTiter-Glo. Tras la incubación durante 10
minutos a temperatura ambiente con mezclado constante, se leyó la
placa con un luminómetro, siendo el número de células vivas
proporcional a la luminiscencia observada. Todos los ensayos se
realizaron en pocillos por triplicado, con control de disolvente
DMSO. Se calculó la CC_{50} (concentración que provoca una
inhibición del crecimiento del 50%) a partir de la curva
luminiscencia/concentración. Los resultados de estos ensayos se
facilitan en la tabla 2 a continuación.
Ejemplo in vitro
3
Este ejemplo ilustra los efectos beneficiosos
de compuestos de esta invención para provocar la inmunoprecipitación
de GST\pi. Estos resultados se consideran predictivos de eficacia
en los métodos terapéuticos del tercer aspecto de esta invención,
dado que TLK199 (el éster dietílico de TLK117 sometido a prueba en
estos ensayos) ha mostrado actividad mieloestimulante en seres
humanos y actividad de quimiopotenciación en un modelo animal.
Se sembraron células HL-60 a
6x10^{5} células/ml en 20 ml de medio RPMI-1640
complementado con suero bovino fetal al 10%, glutamina 1 mM y
gentamicina 20 \muM en un matraz T75 y se cultivaron durante la
noche en una atmósfera de CO_{2} al 5% a 37ºC. Se trataron las
células con DMSO al 0,1% o 20 \muM de los compuestos de prueba
(ésteres dietílicos, compuestos 1B a 12B y TLK199) en medio de
cultivo que contenía DMSO al 0,1% durante 2 horas. Tras el
tratamiento, se recogieron las células mediante centrifugación y se
lavaron dos veces con solución salina tamponada con fosfato.
Volvieron a suspenderse los sedimentos celulares en 1 ml de tampón
de lisis (Tris 50 mM, pH 8,0, NaCl 120 mM, tensioactivo
NP-40 al 0,5%, NaF 100 mM; a lo que se habían
añadido inhibidores de fosfatasa y proteasa (Roche Diagnostics,
Indianapolis, Indiana, EE.UU.) antes del uso) y se incubaron con
agitación suave durante 30 minutos a 4ºC. Se aclararon los lisados
celulares mediante centrifugación a 13.000 rpm durante 10 minutos
para eliminar los residuos celulares. Para la inmunoprecipitación,
se añadieron 2,1 \mug de anticuerpo monoclonal de ratón
anti-GST\pi humana a 500 \mul de lisado celular
de 1 mg/ml de proteína total. Tras la incubación durante la noche a
4ºC, se añadieron 30 \mul de perlas de agarosa con proteína A/G
(Pierce, Rockford, IL) a la mezcla y se incubó durante 1 hora a 4ºC.
Después se recogieron las perlas mediante centrifugación, se
lavaron tres veces en tampón de lisis y volvieron a suspenderse en
10 \mul de tampón de muestra de dodecilsulfato de litio no
reductor (Invitrogen, Carlsbad, California, EE.UU.). Se calentaron
las muestras suspendidas a 95ºC durante 5 minutos y se sometieron a
SDS-PAGE en un gel al 4 - 12%, seguido por análisis
mediante inmunotransferencia tipo Western usando anticuerpo
policlonal de conejo anti-GST\pi humana seguido
por anticuerpo de cabra conjugado con IRDye 800, purificado por
afinidad, anti-IgG de conejo. Se visualizaron
bandas de proteína GST\pi y se cuantificó la intensidad de las
bandas en un analizador de infrarrojos Odyssey
(Li-Cor, Lincoln, Nebraska, EE.UU.). Se comparó la
intensidad de banda de un tratamiento con compuesto con su
correspondiente control de DMS y se expresó como inhibición en
porcentaje. Los resultados se muestran en la tabla 2 a
continuación.
Los compuestos de diácido de esta invención son
potentes inhibidores de GST P1-1 y también son
generalmente selectivos para GST P1-1 con respecto
a GST A1-1 y GST M1-1, las otras dos
isoenzimas GST humanas. Todos los ésteres dietílicos muestran buena
citotoxicidad en células HL-60 y muchos muestran una
inhibición significativa de GST\pi medida en el ensayo de
inmunoprecipitación.
Algunos de los compuestos de éster dietílico de
esta invención también se sometieron a prueba para determinar su
capacidad para potenciar la diferenciación de células
HL-60. Esto ilustra el efecto beneficioso de los
compuestos de esta invención para estimular la diferenciación de la
línea celular de leucemia humana HL-60 in
vitro. Estos resultados se consideran predictivos de eficacia en
la mieloestimulación en seres humanos, dado que TLK199, que
potencia la diferenciación en este ensayo, ha mostrado actividad
mieloestimulante en seres humanos. Se incubaron células en fase
logarítmica (1 x 10^{5} células/ml) a 37ºC bajo aire/CO_{2} al
5% durante 24 horas en 2 ml del medio RPMI 1640 complementado usado
en el ejemplo in vitro 2 y se disolvieron los compuestos de
prueba en DMSO, con una concentración de DMSO final del 0,1%. Se
recogieron las células mediante centrifugación (1250 rpm durante 5
min. a 20ºC) y se lavaron con 2 ml de solución salina tamponada con
fosfato (PBS) helada que contenía FBS al 2%, después se tiñeron con
10 \mul de anticuerpo conjugado con ficoeritrina
anti-CD11b o 10 \mul de anticuerpo control isotipo
conjugado con ficoeritrina. Tras reposar durante 30 min. sobre
hielo, volvieron a suspenderse las células en 2 ml de PBS helado que
contenía FBS al 2%. Se recogieron las células mediante
centrifugación (1250 rpm durante 5 min. a 20ºC) y volvieron a
suspenderse en 0,4 ml de PBS que contenía FBS al 2%. Se detectó la
expresión específica en la superficie celular de CD11b, un marcador
para granulocitos y monocitos, mediante citometría de flujo usando
un analizador FACSCalibur (BD Biosciences). Todos los ensayos se
realizaron por triplicado, con control de DMSO. Se expresó el grado
de diferenciación como un múltiplo de la señal del control de DMSO.
Varios de los compuestos sometidos a prueba potenciaron la
diferenciación de células HL-60.
A partir de estos resultados y de la similitud
estructural de estos compuestos con TLK199, se espera que los
compuestos, especialmente como los diésteres, actúen
terapéuticamente para: potenciar los efectos citotóxicos de agentes
quimioterápicos en células tumorales, ejercer citotoxicidad
selectivamente en células tumorales, aumentar la producción de
progenitoras de GM en la médula ósea, estimular la diferenciación de
médula ósea, aliviar los efectos mielosupresores de agentes
quimioterápicos y modular la hematopoyesis en la médula ósea.
Este ejemplo ilustra formulaciones adecuadas
para los compuestos de esta invención, especialmente los
diésteres.
Se prepara una formulación sólida para la
administración oral mediante combinación de lo siguiente:
- Compuesto
- 25,0% p/p
- Estearato de magnesio
- 0,5% p/p
- Almidón
- 2,0% p/p
- Hidroxipropilmetilcelulosa
- 1,0% p/p
- Celulosa microcristalina
- 71,5% p/p
y se comprime la mezcla para formar comprimidos
o se llena en cápsulas de gelatina dura que contienen, por ejemplo,
250 mg del compuesto. Si se desea pueden recubrirse los comprimidos,
aplicando una suspensión de un agente de formación de película (por
ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa), pigmento (por ejemplo, dióxido
de titanio) y plastificante (por ejemplo, ftalato de dietilo) y
secando la película mediante evaporación del disolvente.
Se prepara una formulación para la
administración i.v. disolviendo el compuesto, por ejemplo como una
sal farmacéuticamente aceptable, hasta una concentración del 1% p/v
en solución salina tamponada con fosfato; y se esteriliza la
disolución, por ejemplo mediante filtración estéril y se sella en
recipientes estériles que contienen, por ejemplo, 250 mg de un
compuesto de esta invención.
Alternativamente, se prepara una formulación
liofilizada disolviendo el compuesto, de nuevo por ejemplo como una
sal farmacéuticamente aceptable, en un tampón adecuado, por ejemplo
el tampón fosfato de la solución salina tamponada con fosfato
mencionada anteriormente, esterilizando la disolución y
dispersándola en viales estériles adecuados, liofilizando la
disolución para eliminar el agua y sellando los viales. La
formulación liofilizada se reconstituye mediante la adición de agua
estéril y la disolución reconstituida puede diluirse adicionalmente
para su administración con una disolución tal como infusión
intravenosa de cloruro de sodio al 0,9% o infusión intravenosa de
dextrosa al 5%.
Alternativamente, se prepara una formulación
liposomal mediante el método de la solicitud publicada
estadounidense número 2003/0100511 (por ejemplo los ejemplos 4 y 5)
usando un compuesto de esta invención en lugar del compuesto 9 de
esa publicación y puede liofilizarse tal como se describe en esa
publicación.
Este ejemplo ilustra un método terapéutico
adecuado para los compuestos de esta invención.
Se administra por vía intravenosa un compuesto
de esta invención, en una formulación intravenosa tal como se
describió en el ejemplo de formulación anterior, a lo largo de 30
minutos a un paciente que padece síndrome mielodisplásico a una
dosis inicial de 50 mg/m^{2}; y se aumenta esta dosis hasta 100
mg/m^{2}, 200 mg/m^{2}, 400 mg/m^{2} y 600 mg/m^{2}. Se
administra el compuesto una vez al día durante cinco días cada tres
semanas.
Claims (27)
1. Compuesto de fórmula
en la
que:
- \quad
- X es L-\gamma-glutamilo o L-\gamma-glutamilglicilo;
- \quad
- Y es H, alquilo opcionalmente sustituido, heteroalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido o heteroaralquilo opcionalmente sustituido; y
- \quad
- Z es alquilo C_{5-9}, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido o heteroaralquilo opcionalmente sustituido;
- \quad
- o su mono o diéster alquílico C_{1-10}, fenil-alquílico C_{1-3} o (heteroaril C_{5-6})-alquílico C_{1-3};
- \quad
- o una sal del compuesto o su mono o diéster.
2. Compuesto según la reivindicación 1, en el
que X es L-\gamma-glutamilo.
3. Compuesto según la reivindicación 1 ó 2, en
el que Y es cicloalquilo C_{5-6} opcionalmente
sustituido, cicloheteroalquilo C_{5-6}
opcionalmente sustituido, fenilo opcionalmente sustituido o
heteroarilo C_{5-6} opcionalmente sustituido.
4. Compuesto según la reivindicación 3, en el
que Y es ciclopentilo, ciclohexilo, tienilo, furilo, piridinilo o
fenilo opcionalmente sustituido.
5. Compuesto según la reivindicación 4, en el
que Y es ciclohexilo.
6. Compuesto según la reivindicación 4, en el
que Y es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 ó 2 grupos flúor,
cloro, metilo, hidroxilo, metoxilo o trifluorometilo.
7. Compuesto según la reivindicación 6, en el
que el fenilo no está sustituido.
8. Compuesto según la reivindicación 6, en el
que el fenilo está sustituido y uno de los sustituyentes está en la
posición 4.
9. Compuesto según la reivindicación 8, en el
que sólo hay un sustituyente.
10. Compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 9, en el que Z es alquilo
C_{5-9} o es fenilo, 1- o
2-naftilo, 2-, 3- o 4-bifenililo o
2-, 3- o 4-(heteroaril C_{5-6})fenilo, cada
uno opcionalmente sustituido con de 1 a 3 grupos halógeno, ciano,
hidroxilo, carboxilo, trifluorometilo o -R, -OR, -COOR o -NR_{2}
(en los que R es alquilo C_{1-3}).
11. Compuesto según la reivindicación 10, en el
que Z es fenilo, opcionalmente sustituido con flúor, cloro, ciano,
hidroxilo, metoxilo, metilo o trifluorometilo.
12. Compuesto según la reivindicación 11, en el
que Z es fenilo.
13. Compuesto según la reivindicación 10, en el
que Z es 2-, 3- o 4-bifenililo o 2-, 3- o
4-(heteroaril C_{5-6})fenilo, cada uno
opcionalmente sustituido con flúor, cloro, ciano, hidroxilo,
metoxilo, metilo o trifluorometilo.
14. Compuesto según la reivindicación 13, en el
que Z es 2-, 3- o 4-bifenililo o 2-, 3- o
4-(heteroaril C_{5-6})fenilo.
15. Compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 14, que es un diácido.
16. Compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 14, que es un diéster.
17. Compuesto según la reivindicación 16, que es
un diéster alquílico C_{1-6}.
18. Compuesto según la reivindicación 17, que es
un diéster alquílico C_{1-3}.
19. Compuesto según la reivindicación 18, que es
un éster dietílico.
20. Compuesto según la reivindicación 1, que se
selecciona de:
L-\gamma-glutamil-3-[(fenilmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-3-{[(4-clorofenil)metil]sulfonil}-L-alanil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-3-[(2-naftilmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-3-[(2-bifenililmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-3-{[(2'-ciano-4-bifenilil)metil]sulfonil}-L-alanil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-3-{[(8-quinolil)metil]sulfonil}-L-alanil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-3-{[4-(2-piridil)fenilmetil]sulfonil}-L-alanil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-3-{[(1-isoquinolil)metil]sulfonil}-L-alanil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-3-{[(1-metilbenzotriazol-5-il)metil]sulfonil}-L-alanil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-3-{[2-(1-naftil)etil]sulfonil}-L-alanil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-3-[(4-bifenililmetil)sulfonil]-L-alanil-D-fenilglicina,
L-\gamma-glutamil-3-[(4-bifenililmetil)sulfonil]-L-alanil-D-ciclohexilglicina
y
L-\gamma-glutamil-3-[(4-bifenililmetil)sulfonil]-L-alanil-D-(4-clorofenil)glicina,
y sus ésteres dietílicos
y las sales de los compuestos y sus ésteres
dietílicos.
21. Composición farmacéutica que comprende un
compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20.
22. Composición farmacéutica según la
reivindicación 21, que comprende además un excipiente.
23. Compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 20, para su uso en uno o más de: potenciar los
efectos citotóxicos de agentes quimioterápicos en células tumorales,
ejercer toxicidad selectivamente en células tumorales, aumentar la
producción de progenitoras de GM en la médula ósea, estimular la
diferenciación de células de la médula ósea, aliviar los efectos
mielosupresores de agentes quimioterápicos y modular la
hematopoyesis en la médula ósea.
24. Uso de un compuesto según una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 20, en la fabricación de un medicamento
para uno o más de: potenciar los efectos citotóxicos de agentes
quimioterápicos en células tumorales, ejercer toxicidad
selectivamente en células tumorales, aumentar la producción de
progenitoras de GM en la médula ósea, estimular la diferenciación
de células de la médula ósea, aliviar los efectos mielosupresores de
agentes quimioterápicos y modular la hematopoyesis en la médula
ósea.
25. Compuesto de fórmula
en la
que:
- \quad
- X es N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilo o N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilglicilo, en los que R^{1} es un grupo protector de amina; e
- \quad
- Y y Z son tal como en la reivindicación 1;
- \quad
- o su mono o diéster alquílico C_{1-10}, fenil-alquílico C_{1-3} o (heteroaril C_{5-6})-alquílico C_{1-3};
- \quad
- o una sal del compuesto o su mono o diéster.
26. Método de preparar un compuesto según la
reivindicación 1, que comprende:
- (a)
- oxidar un compuesto de fórmula
- \quad
- en la que:
- \quad
- X es L-\gamma-glutamilo o L-\gamma-glutamilglicilo, o es N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilo o N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilglicilo, en los que R^{1} es un grupo protector de amina; e
- \quad
- Y y Z son tal como en la reivindicación 1;
- \quad
- o su mono o diéster alquílico C_{1-10}, fenil-alquílico C_{1-3} o (heteroaril C_{5-6})-alquílico C_{1-3};
- (b)
- si X es N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilo o N-\alpha-R^{1}-L-\gamma-glutamilglicilo, desproteger la sulfona resultante para dar un compuesto según la reivindicación 1; y opcionalmente
- (c)
- si el compuesto según la reivindicación 1 preparado en la etapa (a) o la etapa (b) es un diácido, formar un mono o diéster del compuesto; o
- (d)
- si el compuesto preparado en la etapa (a) o (b) es un mono o diéster, desesterificar el compuesto para preparar el diácido del compuesto; y
- (e)
- formar una sal del compuesto preparado en cualquiera de las etapas (a) a (d).
27. Método según la reivindicación 26, en el que
R^{1} es un grupo protector de amina que puede eliminarse de
manera catalítica.
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