ES2319574T3 - Aminopirimidinas como moduladores de quinasa. - Google Patents

Aminopirimidinas como moduladores de quinasa. Download PDF

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Abstract

Un compuesto de fórmula I ** ver fórmula** y N-óxidos, sales farmacéuticamente aceptables, solvatos, isómeros geométricos e isómeros estereoquímicos del mismo, donde: r es 1 ó 2; Z es NH, N(alquilo) o CH 2; B es fenilo, heteroarilo, o un heteroarilo benzo-condensado de nueve a diez miembros; R 1 es: donde n es 1,2, 3 ó 4; R a es hidrógeno, alcoxi, fenoxi, fenilo, heteroarilo opcionalmente sustituido con R 5, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino, oxazolidinonilo opcionalmente sustituido con R 5, pirrolidinonilo opcionalmente sustituido con R5, piperidinonilo opcionalmente sustituido con R5, heterodionilo cíclico opcionalmente sustituido con R5, heterociclilo opcionalmente sustituido con R5, -COORy, -CONRwRx, -N(Rw)CON(Ry)(Rx), -N (Ry)CON(Rw)(Rx), -N(Rw)C(O)ORx, -N(Rw)CORy, -SRy, -SORy, -SO2Ry, -NRwSO2Ry -NRwSO2Rx, -SO3Ry, -OSO 2NR wR x o -SO 2NR wR x; R w y R x se seleccionan independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, aralquilo o heteroaralquilo, o R w y R x pueden tomarse opcionalmente juntos para formar un anillo de 5 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heterorresto seleccionado entre O, NH, N(alquilo), SO2, SO o S; Ry se selecciona entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, fenilo, aralquilo, heteroaralquilo o heteroarilo; R5 es uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre: halógeno, ciano, trifluorometilo, amino, hidroxilo, alcoxi, -C(O)alquilo, -SO2alquilo, -C(O)N(alquilo)2, alquilo, C(1-4)alquil-OH o alquilamino; y R 3 es uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alcoxi, halógeno, alcoxiéter, hidroxilo, tio, nitro, cicloalquilo opcionalmente sustituido con R 4, heteroarilo opcionalmente sustituido con R4, alquilamino, heterociclilo opcionalmente sustituido con R4, -O(cicloalquilo), pirrolidinonilo opcionalmente sustituido con R4, fenoxi opcionalmente sustituido con R4, -CN, -OCHF2, -OCF3, -CF3, alquilo halogenado, heteroariloxi opcionalmente sustituido con R4, dialquilamino, -NHSO2alquilo, tioalquilo o -SO2alquilo; donde R4 se selecciona independientemente entre: halógeno, ciano, trifluorometilo, amino, hidroxilo, alcoxi, -C(O)alquilo, -CO 2alquilo, -SO 2alquilo, -C(O)N(alquilo) 2, alquilo o alquilamino.

Description

Aminopirimidinas como moduladores de quinasa.
Remisión a solicitudes relacionadas
Esta solicitud reivindica la prioridad de la solicitud provisional de Patente de Estados Unidos Nº 60/689.715, presentada el 10 de junio de 2005 y la solicitud provisional de Patente de los Estados Unidos Nº 60/751.083, presentada el 16 de diciembre de 2005.
Campo de la invención
La invención se refiere a compuestos nuevos que funcionan como moduladores de la proteína tirosina quinasa. Más particularmente, la invención se refiere a compuestos nuevos que funcionan como inhibidores de FLT3 y/o c-kit y/o TrkB.
Antecedentes de la invención
La presente invención se refiere a aminopirimidinas como inhibidores de tirosina quinasas, que incluyen FLT3, c-kit y/o TrkB. Las pirimidinas se han presentado con propiedades terapéuticas útiles en los documentos: US 5104877 y WO 9214468 (preparación de [(tetrazolilbifenil)metilamino]pirimidinacarboxilatos y compuestos relacionados para el tratamiento de psoriasis); DE 10108480 y WO 2002068413 (preparación de pirozolilpirimidinas como insecticidas); WO 2002050066, WO 2002066461, WO 2002068415, US 6653300, US 2003036543, US 6664247, US 2003055068, US 2003078275, US 6653301, US 2003105090, US 2003004164, US 6656939, US 2003022885, US 6727251, US 2004116454, US 2004157893, US 2004132781 y US 2004167141; (compuestos de pirazolo útiles como inhibidores de proteína quinasa y uso terapéutico de los mismos) US 6107301 y US 6342503 (preparación de 1-N-alquil-N-arilpirimidinaminas como inhibidores CRF); WO 2001085700, WO 2001085700 y US 2003171374 (preparación de aminopirimidinas sustituidas y triazinas como inhibidores de la replicación del VIH); WO 2001085699; WO 2001085699 y US 2003186990 (preparación de profármacos de pirimidinas inhibidores de la replicación del VIH); WO 2001022938 (preparación de acinilaminobenzonitrilos y compuestos relacionados como virucidas) WO 2000027825, US 2003114472 y US 2004039005 (preparación de arilaminopirimidinas como inhibidores de la replicación del VHI); WO 2004058762, WO 2004058762 y US 2004152739 (preparación de pirrolopiridinonas como compuestos inhibidores de la proteína quinasa activada por mitógeno y la proteína quinasa-2 activada); WO 2003094920 (compuestos microbicidas de pirimidina o triazina para prevenir la transmisión sexual del VIH); WO 2004005283 y US 2004097531 (preparación de imidazolpirimidinas y compuestos relacionados como inhibidores de la proteína quinasa JNK); véanse también: Wardakhan, Wagnat W.; Fleita, Daisy H.; Mohareb, Rafat M. Reaction of 4-aryl-3-thiosemicarbazides with phenyl isothiocyanate: a facile synthesis of thiazole, pyrazole and pyrimidine derivatives. Journal of the Chinese Chemical Society (Taipei) (1999), 46 (1), 97-104; y Taylor, Edward C; Ehrhart, Wendell A.; Tomlin, Clive O. S.; Rampal, Jang B. A novel ring-switching amination: conversion of 4-amino-5-cyanopyrimidine to 4,6-diamino-5-cyanopyrimidine. Heterocycles (1987), 25(1), 343-5. También se indican los documentos: JP 9274290 (desarrollador y método de procesamiento de material fotográfico de haluro de plata); DE 10060412, WO 2002046151 y US 2004082586 (3,4-dihidro-2H-pirrolos como pesticidas); WO 2004039785 y US 2004152896 (Procesos para la preparación de compuestos de pirrolidinil etilamina por una aminación de arilo mediada por cobre).
Las proteína quinasas son componentes enzimáticos de las rutas de transducción de señal que catalizan la transferencia de fosfato terminal desde el ATP al grupo hidroxi de los residuos de proteínas tirosina, serina y/o treonina. Por tanto, los compuestos que inhiben las funciones proteína quinasa son herramientas valiosas para evaluar las consecuencias fisiológicas de la activación de la proteína quinasa. La expresión excesiva o la expresión inapropiada de proteína quinasas normales o mutantes en mamíferos ha sido un asunto de estudio extenso y se ha demostrado que juegan un papel significativo en el desarrollo de muchas enfermedades, que incluyen diabetes, angiogénesis, psoriasis, restenosis, enfermedades oculares, esquizofrenia, artritis reumatoide, arterosclerosis, cardiopatías y cáncer. También se han estudiado los beneficios cardiotónicos de la inhibición de quinasa. En resumen, los inhibidores de las proteína quinasas tienen una utilidad particular en el tratamiento de enfermedades del ser humano y de los
animales.
Los receptores de la familia TrK de tirosina quinasas, TrkA, TrkB y TrkC, son los receptores de señalización que median las acciones biológicas de las hormonas peptídicas de la familia de neurotrofinas. Esta familia de factores del crecimiento incluye el factor de crecimiento nervioso (NGF), el factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF) y dos neurotrofinas (NT), NT-3 y NT-4. El TrkB sirve como un receptor tanto para el BDNF como para el NT-4. El BDNF promueve la proliferación, diferenciación y supervivencia de componentes neurales normales tales como las células retinianas y las células gliales.
Recientemente se ha presentado (véase, Nature 26 de agosto de 2004; 430(7003): 973-4; 1034-40) que la activación del TrkB es un supresor potente y específico de la muerte celular independiente de anclaje (anoikis). La supervivencia celular independiente de anclaje permite a las células tumorales migrar a través de la circulación sistémica y crecer en órganos distantes. Este proceso metastático con frecuencia es responsable del fracaso del tratamiento del cáncer y la causa de la mortalidad en el cáncer. Otros estudios (véase, Cancer Lett. 10 de abril de 2003; 193(1): 109-14) también han sugerido que el agonismo BDNF del TrkB es capaz de bloquear la muerte celular inducida por cisplatino. En conjunto, estos resultados sugieren que la modulación de TrkB es un objetivo atractivo para el tratamiento de enfermedades proliferativas benignas y malignas, especialmente de enfermedades tumorales.
El receptor c-kit tirosina quinasa y su ligando el Factor de Células Madre (SCF) son esenciales para la hematopoyesis, la melanogenesis y la fertilidad. El SCF actúa en múltiples niveles de la jerarquía hematopoyética para promover la supervivencia, proliferación, diferenciación, adhesión y activación funcional celular. Es de particular importancia en los linajes de células madre y eritroides, pero también actúa sobre células madre y progenitoras multipotenciales, megacariocitos y un subconjunto de progenitores linfoides (véase, Int J Biochem Cell Biol. octubre de 1999; 31 (10): 1037-51). Las mutaciones esporádicas de c-kit así como los mecanismos de activación autocrinos/paracrinos de la ruta de SCF/c-kit se han implicado en una diversidad de tumores malignos. La activación del c-kit contribuye a la metástasis potenciando el crecimiento tumoral y reduciendo la apoptosis. Adicionalmente, frecuentemente el c-kit muta y se activa en los tumores estromales gastrointestinales (GIST) y la activación mediada por ligando del c-kit está presente en algunos cánceres de pulmón (véase, Leuk Res. mayo de 2004; 28 Suppl 1: S11 -20). El receptor c-kit también se expresa en más del 10% de los blastos en el 64% de las leucemias mielógenas agudas de novo (AML) y el 95% de las recaídas de AML. El c-kit media en la proliferación y los efectos anti-apoptósicos en la AML (véase, Curr Hematol Rep. enero de 2005; 4(1): 51-8).
La expresión de c-kit se ha descrito en una amplia diversidad de tumores malignos humanos, que incluyen mastocitosis, leucemia de mastocitos, tumor estromal gastrointestinal, linfoma sinonasal de células asesinas naturales/células T, seminoma, disgerminoma, carcinoma tiroideo; carcinoma pulmonar de células pequeñas, melanoma maligno, carcinoma cístico adenoide, carcinoma ovárico, leucemia mielógena aguda, linfoma anaplásico de células grandes, angiosarcoma, carcinoma endometrial, ALL pediátrica de células T, linfoma, carcinoma mamario y carcinoma prostático. Véase, Heinrich, Michael C. et al. Review Article: Inhibition of KIT Tyrosine Kinase Activity: A Novel Molecular Approach to the Treatment of KIT-Positive Malignancies.
El ligando (FLT3L) de tirosina quinasa 3 (FLT3) similar a fms es una de las citoquinas que influye en el desarrollo de múltiples linajes hematopoyéticos. Estos efectos ocurren a través de la unión del FLT3L al receptor de FLT3, también denominado como quinasa-2 de hígado fetal (flk-2) y STK-1, un receptor tirosina quinasa (RTK) que se expresa en las células madre y progenitoras hematopoyéticas. El gen FLT3 codifica un RTK unido a membrana que juega un importante papel en la proliferación, diferenciación y apoptosis de las células durante la hematopoyesis normal. El gen FLT3 principalmente se expresa mediante las células progenitoras mieloides y linfoides tempranas. Véanse McKenna, Hilary J. et al. Mice lacking flt3 ligand have deficient hematopoyesis affecting hematopoietic progenitor cells, dendritic cells, and natural killer cells. Blood. Junio de 2000; 95: 3489-3497; Drexler, H. G. y H. Quentmeier (2004). "FLT3: receptor and ligand". Growth Factors 22(2): 71-3.
Las células estromales de la médula y otras células expresan el ligando para FLT3 y tienen una acción sinérgica con otros factores de crecimiento para estimular la proliferación de células madre, células progenitoras, células dendríticas y células asesinas naturales.
Los trastornos hematopoyéticos son trastornos premalignos de estos sistemas e incluyen, por ejemplo, los trastornos mieloproliferativos, tales como trombocitemia, trombocitosis esencial (ET), metaplasia mieloide angiogénica, mielofibrosis (MF), mielofibrosis con metaplasia mieloide (MMM), mielofibrosis idiopática crónica (IMF) y policitemia verdadera (PV), las citopenias y los síndromes mielodisplásicos premalignos. Véanse Stirewalt, D. L. y J. P. Radich (2003). "The role of FLT3 in haematopoietic malignancies". Nat Rev Cancer 3(9): 650-65; Scheijen, B. y J. D. Griffin (2002). "Tyrosine kinase oncogenes in normal hematopoiesis and hematological disease". Oncogene 21(21): 3314-33.
Las malignidades hematológicas son cánceres de los sistemas de formación de sangre e inmune del organismo, la médula ósea y los tejidos linfáticos. Mientras que en la médula ósea normal, la expresión de FLT3 está limitada a las células progenitoras tempranas, en las malignidades hematológicas, el FLT3 se expresa a niveles altos o las mutaciones de FLT3 causan una inducción no controlada del receptor de FLT3 y la ruta molecular cadena abajo, posiblemente activación Ras. Las malignidades hematológicas incluyen leucemias, linfomas (linfomas no-Hodgkin), enfermedad de Hodgkin (denominado también linfoma de Hodgkin) y mieloma, por ejemplo, leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia promielocítica aguda (APL), leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia mieloide crónica (CML), leucemia neutrofílica crónica (CNL), leucemia indiferenciada aguda (AUL), linfoma anaplásico de células grandes (ALCL), leucemia prolinfocítica (PML), leucemia mielomonocítica juvenil (JMML), ALL de células T adultas, AML con mielodisplasia de trilinaje (AML/TMDS), leucemia de linaje mixto (MLL), síndromes mielodisplásicos (MDS), trastornos mieloproliferativos (MPD), mieloma múltiple (MM) y sarcoma mieloide. Véase Kottaridis, P. D., R. E. Gale, et al. (2003). "Flt3 mutations and leukaemia". Br J Haematol 122(4): 523-38. El sarcoma mieloide también está asociado con las mutaciones de FLT3. Véase, Ansari-Lari, Ali et al. FLT3 mutations in myeloid sarcoma. British Journal of Haematology. Septiembre de 2004 126(6): 785-91.
Se han detectado mutaciones de FLT3 en aproximadamente el 30% de pacientes con leucemia mielógena aguda y un pequeño número de pacientes con leucemia linfomática aguda o síndrome mielodisplásico. Los pacientes con mutaciones de FLT3 tienen tendencia a tener un mal pronóstico, con tiempos de remisión y supervivencia libre de la enfermedad disminuidos. Existen dos tipos conocidos de mutaciones activadoras de FLT3. Una es una duplicación de 4-40 aminoácidos en la región yuxtamembrana (mutación ITD) del receptor (del 25-30% de pacientes) y la otra es una mutación puntual en el dominio de quinasa (del 5-7% de los pacientes). Con mucha frecuencia las mutaciones implican duplicaciones en tándem pequeñas de aminoácidos dentro del dominio yuxtamembrana del receptor y dan como resultado actividad tirosina quinasa. La expresión de un receptor FLT3 mutante en células de médula murina da como resultado un síndrome mieloproliferativo letal y estudios preliminares (Blood. 2002; 100: 1532-42) sugieren que el FLT3 mutante coopera con otros oncogenes de la leucemia para otorgar un fenotipo más agresivo.
En conjunto, estos resultados sugieren que los inhibidores específicos de las quinasas individuales FLT3 y c-kit y especialmente del grupo de quinasas que comprende FLT3 y c-kit, presentan un objetivo atractivo para el tratamiento de trastornos hematopoyéticos y malignidades hematológicas.
Los inhibidores de quinasa FLT3 conocidos en la técnica incluyen AG1295 y AG1296; Lestaurtinib (también conocido como CEP 701, antiguamente KT-5555, Kyowa Hakko, autorizado para Cephalon); CEP-5214 y CEP-7055 (Cephalon); CHIR-258 (Chiron Corp.); EB-10 e IMC-EB 10 (ImClone Systems Inc.); GTP 14564 (Merk Biosciences RU). Midostaurina (también conocida como PKC 412 Novartis AG); MLN 608 (Millennium EEUU); MLN-518 (antiguamente CT53518, COR Therapeutics Inc., autorizado para Millennium Pharmaceuticals Inc.); MLN-608 (Millennium Pharmaceuticals Inc.); SU-11248 (Pfizer EEUU); SU-11657 (Pfizer EEUU); SU-5416 y SU 5614; THRX-165724 (Theravance Inc.); AMI-10706 (Theravance Inc.); VX-528 y VX-680 (Vertex Pharmaceuticals EEUU, autorizado para Novartis (Suiza), Merck & Co EEUU) y XL 999 (Exelixis EEUU). Las siguientes Solicitudes Internacionales de PCT y Solicitudes de Patentes de los Estados Unidos describen moduladores de quinasa adicionales, que incluyen moduladores de FLT3: WO 2002032861, WO 2002092599, WO 2003035009, WO 2003024931, WO 2003037347, WO 2003057690, WO 2003099771, WO 2004005281, WO 2004016597, WO 2004018419, WO 2004039782, WO 2004043389, WO 2004046120, WO 2004058749, WO 2004058749, WO 2003024969 y la Solicitud de Patente de los Estados Unidos Nº 20040049032.
Véanse también Levis, M., K. P. Tse, et al. 2001 "A FLT3 tyrosine kinase inhibitor is selectively cytotoxic to acute myeloid leukemin blasts harboring PLT3 internal tandem duplication mutations". Blood 98(3): 885-7; Tse KF, et al. Inhibition of FLT3-mediated transformation by use of a tyrosine kinase inhibitor. Leukemia. Julio de 2001; 15(7): 1001-10; Smith, B. Douglas et al. Single-agent CEP-701, a novel FLT3 inhibitor, shows biologic and clinical activity in patients with relapsed or refractory acute myeloid leukemia Blood, mayo de 2004; 103: 3669 - 3676; Griswold, Ian J. et al. Effects of MLN518, A Dual FLT3 and KIT Inhibitor, on Normal and Malignant Hematopoiesis. Blood, Julio de 2004; [Epub ahead of print]; Yee, Kevin W. H, et al. SU5416 and SU5614 inhibit kinase activity of wild-type and mutant FLT3 receptor tyrosine kinase. Blood, septiembre de 2002; 100: 2941-294; O'Farrell, Ann-Marie et al. SU11248 is a novel FLT3 tyrosine kinase inhibitor with potent activity in vitro and in vivo. Blood, mayo 2003; 101: 3597 - 3605; Stone, R.M. et al. PKC 412 FLT3 inhibitor therapy in AML: results of a phase II trial. Ann Hematol. 2004; 83 Suppl US89-90; y Murata, K. et al. Selective cytotoxic mechanism of GTP-14564 a novel tyrosine kinase inhibitor in leukemia cells expressing a constitutively active Fms-like tyrosine kinase 3 (FLT3). J Biol Chem. 29 de agosto de 2003; 278(35): 32892-8; Levis, Mark et al. Novel FLT3 tyrosine kinase inhibitors. Expert Opin. Investing. Drugs (2003) 12(12) 1951-1962; Levis, Mark et al. Small Molecule FLT3 Tyrosine Kinase Inhibitors. Current Pharmaceutical Design, 2004, 10, 1183-1193.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona aminopirimidinas nuevas (los compuestos de Fórmula I) como moduladores de la proteína tirosina quinasa, particularmente inhibidores de FLT3 y/o c-kit y/o TrkB y el uso de tales compuestos para reducir o inhibir la actividad quinasa de FLT3 y/o c-kit y/o TrkB en una célula o un sujeto y el uso de tales compuestos para prevenir o tratar en un sujeto trastornos relacionados con FLT3 y/o c-kit y/o TrkB o tratar un trastorno proliferativo celular.
Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I y un vehículo farmacéuticamente aceptable es ilustrativa de la invención. Otra ilustración de la presente invención es una composición farmacéutica preparada mediante la mezcla de cualquiera de los compuestos de Fórmula I y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Otras características y ventajas de la invención serán aparentes a partir de la siguiente descripción detallada de la invención y a partir de las reivindicaciones.
Descripción detallada de la invención Definiciones
Como se usan en este documento, los siguientes términos pretenden tener los siguientes significados (se proporcionan definiciones adicionales cuando es necesario a lo largo de la memoria descriptiva):
El término "alquenilo", si se usa solo o como parte de un grupo sustituyente, por ejemplo, "alquenil C_{1-4}(arilo)", se refiere a un radical de hidrocarburo monovalente, de cadena lineal o ramificada, parcialmente saturado, que tiene al menos un doble enlace carbono-carbono, por lo que el doble enlace se obtiene a partir de la retirada de un átomo de hidrógeno de cada uno de dos átomos de carbono adyacentes de una molécula alquilo parental y el radical se obtiene a partir de la retirada de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono. Los átomos pueden orientarse alrededor del doble enlace en la conformación cis (Z) o trans (E). Los radicales alquenilo típicos incluyen, pero sin limitación, etenilo,
propenilo, alilo (2-propenilo), butenilo y similares. Los ejemplos incluyen grupos alquenilo C_{2-8} o alquenilo C_{2-4}.
El término "C_{a \cdot b}" (donde a y b son números enteros que se refieren a un número designado de átomos de carbono) se refiere a un radical alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi o cicloalquilo o a la porción alquilo de un radical en el que el alquilo aparece como prefijo raíz que contiene de a a b átomos de carbono, inclusive. Por ejemplo, C_{1-4} se refiere a un radical que contiene 1, 2, 3 ó 4 átomos de carbono.
El término "alquilo", si se usa solo o como parte de un grupo sustituyente, se refiere a un radical de hidrocarburo monovalente, de cadena lineal o ramificada, saturado, en el que el radical se obtiene a partir de la retirada de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono. A menos que se indique específicamente (por ejemplo, por el uso de un término limitante tal como "átomo de carbono terminal"), las variables de los sustituyentes pueden reemplazarse en cualquier átomo de la cadena de carbono. Los radicales alquilo típicos incluyen, pero sin limitación, metilo, etilo, propilo, isopropilo y similares. Los ejemplos incluyen grupos alquilo C_{1-8}, alquilo C_{1-6} y alquilo C_{1-4}.
El término "alquilamino" se refiere a un radical formado por la retirada de un átomo de hidrógeno del nitrógeno de una alquilamina, tal como butilamina, y el término "dialquilamino" se refiere a un radical formado por la retirada de un átomo de hidrógeno del nitrógeno de una amina secundaria, tal como dibutilamina. En ambos casos, se espera que el punto de unión con el resto de la molécula sea el átomo de nitrógeno.
El término "alquinilo", si se usa solo o como parte de un grupo sustituyente, se refiere a un radical de hidrocarburo monovalente, de cadena lineal o ramificada, parcialmente saturado, que tiene al menos un triple enlace carbono-carbono, por lo que el triple enlace se obtiene a partir de la retirada de dos átomos de hidrógeno de cada uno de dos átomos de carbono adyacentes de una molécula alquilo parental y el radical se obtiene a partir de la retirada de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono. Los radicales alquinilo típicos incluyen etinilo, propinilo, butinilo y similares. Los ejemplos incluyen grupos alquinilo C_{2-8} o alquinilo C_{2-4}.
El término "alcoxi" se refiere a un radical alcohólico de hidrocarburo monovalente, lineal o ramificado, saturado o parcialmente insaturado, obtenido a partir de la retirada del átomo de hidrógeno del sustituyente oxígeno del hidróxido en un alcano, alqueno y alquino parental. Cuando se desean niveles específicos de saturación, se usan las nomenclaturas "alcoxi", "alqueniloxi" y "alquiniloxi", coherentes con las definiciones de alquilo, alquenilo y alquinilo. Los ejemplos incluyen grupos alcoxi C_{1-8} o alcoxi C_{1-4}.
El término "alcoxiéter" se refiere a un radical alcohólico de hidrocarburo lineal o ramificado, saturado, obtenido a partir de la retirada del átomo de hidrógeno del sustituyente oxígeno del hidróxido en un hidroxiéter. Los ejemplos incluyen grupos 1-hidroxil-2-metoxi-etano o 1-(2-hidroxil-etoxi)-2-metoxi-etano.
El término "aralquilo" se refiere a un grupo alquilo C_{1-6} que contiene un sustituyente arilo. Los ejemplos incluyen bencilo, feniletilo o 2-naftilmetilo. Se desea que el punto de unión con el resto de la molécula sea el grupo alquilo.
El término "aromático" se refiere a un sistema de anillos de hidrocarburo cíclicos que tiene un sistema de electrones \pi conjugados.
El término "arilo" se refiere a un radical de anillo hidrocarburo cíclico, aromático, obtenido a partir de la retirada de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono del sistema de anillos. Los radicales arilo típicos incluyen fenilo, naftalenilo, fluorenilo, indenilo, azulenilo, antracenilo y similares.
El término "arilamino" se refiere a un grupo amino, tal como amoniaco, sustituido con un grupo arilo, tal como fenilo. Se espera que el punto de unión con el resto de la molécula sea a través del átomo de nitrógeno.
El término "ariloxi" se refiere a un radical átomo de oxígeno sustituido con un grupo arilo, tal como fenilo. Se espera que el punto de unión con el resto de la molécula sea a través del átomo de oxígeno.
La expresión "cicloalquilo benzo-condensado" se refiere a un sistema de anillos condensados, bicíclicos, en el que uno de los anillos es fenilo y el otro es un anillo cicloalquilo o cicloalquenilo. Los radicales cicloalquilo benzo-condensados típicos incluyen indanilo, 1,2,3,4-tetrahidronaftalenilo, 6,7,8,9-tetrahidro-5H-benzocicloheptenilo, 5,6,7,8,9,10-hexahidrobenzociclooctenilo y similares. Un sistema de anillos cicloalquilo benzo-condensado es un subconjunto del grupo arilo.
El término "heteroarilo benzo-condensado" se refiere a un radical de sistema de anillos condensados, bicíclicos, donde uno de los anillos es fenilo y el otro es un anillo heteroarilo. Los radicales heteroarilo benzo-condensado típicos incluyen indolilo, indolinilo, isoindolilo, benzo[b]furilo, benzo[b]tienilo, indazolilo, benzotiazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, cinnolinilo, ftalazinilo, quinazolinilo, y similares. Un anillo heteroarilo benzo-condensado es un subconjunto del grupo heteroarilo.
La expresión "heterociclilo benzo-condensado" se refiere a un radical de sistema de anillos condensados, bicíclicos, donde uno de los anillos es fenilo y el otro es un anillo heterociclilo. Los radicales heterociclilo benzo-condensado típicos incluyen 1,3-benzodioxolilo (también conocido como 1,3-metilendioxifenilo), 2,3-dihidro-1,4-benzodioxinilo (también conocido como 1,4-etilendioxifenilo), benzo-dihidro-furilo, benzo-tetrahidro-piranilo, benzo-dihidro-tienilo y similares.
El término "carboxialquilo" se refiere a un grupo carboxi alquilado tal como terc-butoxicarbonilo, en el que el punto de unión con el resto de la molécula es el grupo carbonilo.
La expresión "heterodionilo cíclico" se refiere a un compuesto heterocíclico que tiene dos sustituyentes oxo. Los ejemplos incluyen tiazolidinadionilo, oxazolidinadionilo y pirrolidinadionilo.
El término "cicloalquenilo" se refiere a un radical cicloalquilo parcialmente insaturado obtenido a partir de la retirada de un átomo de hidrógeno de un sistema de anillos de hidrocarburo que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono. Los ejemplos incluyen ciclohexenilo, ciclopentenilo y 1,2,5,6-ciclooctadienilo.
El término "cicloalquilo" se refiere a un radical de anillo hidrocarburo monocíclico o bicíclico, saturado o parcialmente insaturado, obtenido a partir de la retirada de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono del anillo. Los radicales cicloalquilo típicos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, cicloheptilo y ciclooctilo. Otros ejemplos incluyen cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquilo C_{5-8}, cicloalquilo C_{3-12}, cicloalquilo C_{3-20}, decahidronaftalenilo y 2,3,4,5,6,7-hexahidro-1H-indenilo.
La expresión "sistema de anillos condensados" se refiere a una molécula bicíclica en la que dos átomos adyacentes están presentes en cada uno de los dos restos cíclicos. Pueden estar presentes opcionalmente heteroátomos. Los ejemplos incluyen benzotiazol, 1,3-benzodioxol y decahidronaftaleno.
El término "hetero" usado como un prefijo para un sistema de anillos se refiere al reemplazo de al menos un átomo de carbono del anillo por uno o más átomos seleccionados independientemente entre N, S, O o P. Los ejemplos incluyen anillos en los que 1, 2, 3 ó 4 miembros del anillo son un átomo de nitrógeno; o 0, 1, 2 ó 3 miembros del anillo son átomos de nitrógeno y 1 miembro es un átomo de oxígeno o azufre.
El término "heteroaralquilo" se refiere a un grupo alquilo C_{1-6} que contiene un sustituyente heteroarilo. Los ejemplos incluyen furilmetilo y piridilpropilo. Se desea que el punto de unión con el resto de la molécula sea el grupo alquilo.
El término "heteroarilo" se refiere a un radical obtenido a partir de la retirada de un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono del anillo de un sistema de anillos heteroaromático. Los radicales heteroarilo típicos incluyen furilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, oxadiazolilo, triazolilo, tiadiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, indolizinilo, indolilo, isoindolilo, benzo[b]furilo, benzo[b]tienilo, indazolilo, bencimidazolilo, benzotiazolilo, purinilo, 4H-quinolizinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, cinnolinilo, ftalzinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, 1,8-naftiridinilo, pteridinilo y similares.
La expresión "cicloalquilo heteroaril-condensado" se refiere a un radical de sistema de anillos condensados bicíclicos donde uno de los anillos es cicloalquilo y el otro es heteroarilo. Los radicales cicloalquilo heteroaril-condensados típicos incluyen 5,6,7,8-tetrahidro-4H-ciclohepta(b)tienilo, 5,6,7-trihidro-4H-ciclohexa(b)tienilo, 5,6-dihidro-4H-ciclopenta(b)tienilo y similares.
El término "heteroariloxi" se refiere a un radical átomo de oxígeno sustituido con un grupo heteroarilo, tal como piridilo. Se espera que el punto de unión con el resto de la molécula sea a través del átomo de oxígeno.
El término "heterociclilo" se refiere a un radical de anillo monocíclico, saturado o parcialmente insaturado, obtenido a partir de la retirada de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono o nitrógeno del anillo. Los radicales heterociclilo típicos incluyen 2H-pirrol, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, pirrolidinilo, 1,3-dioxolanilo, 2-imidazolinilo (también denominado 4,5-dihidro-1H-imidazolilo), imidazolidinilo, 2-pirazolinilo, pirazolidinilo, tetrazolilo, piperidinilo, 1,4-dioxanilo, morfolinilo, 1,4-ditianilo, tiomorfolinilo, 1,1-dióxido de tiomorfolinilo, piperazinilo, azepanilo, hexahidro-1,4-diazepinilo y similares.
El término "oxo" se refiere a un átomo de oxígeno radical; dicho átomo de oxígeno tiene dos valencias abiertas que se unen al mismo átomo, más preferiblemente un átomo de carbono. El grupo oxo es un sustituyente apropiado para un grupo alquilo. Por ejemplo, propano con un sustituyente oxo es acetona o propionaldehído. Los heterociclos también pueden estar sustituidos con un grupo oxo. Por ejemplo, oxazolidina con un sustituyente oxo es oxazolidinona.
El término "sustituido" se refiere a una molécula núcleo en la que uno o más átomos de hidrógeno se han reemplazado por uno o más restos de radicales funcionales. La sustitución no se limita a una molécula núcleo, sino que también puede aparecer en un radical sustituyente, por lo que el radical se convierte en un grupo enlazador.
La expresión "seleccionado independientemente" se refiere a uno o más sustituyentes seleccionados entre un grupo de sustituyentes, donde los sustituyentes pueden ser iguales o diferentes.
La nomenclatura de sustituyentes usada en la descripción de la presente invención se obtuvo indicando primero el átomo que tiene el punto de unión, seguido de los átomos del grupo enlazador hacia el átomo de la cadena terminal de izquierda a derecha, sustancialmente como en:
alquil (C_{1-6})-C(O)NHalquil (C_{1-6})-(Ph)
o indicando primero el átomo de la cadena terminal, seguido de los átomos del grupo enlazador hacia el átomo que tiene el punto de unión, sustancialmente como en:
Ph-alquilamido (C_{1-6})-alquilo (C_{1-6})
cualquiera de los cuales se refiere a un radical de la fórmula:
1
Las líneas dibujadas en los sistemas de anillos de los sustituyentes indican que el enlace puede unirse a cualquiera de los átomos adecuados del anillo.
Cuando cualquier variable (por ejemplo, R_{4}) aparece más de una vez en cualquier realización de la Fórmula I, cada definición pretende ser independiente.
Las expresiones "que comprende", "que incluye" y "que contiene" se usan en este documento en su sentido más amplio, no limitante.
Nomenclatura
Excepto cuando se indique, los nombres de los compuestos se obtuvieron usando reglas de nomenclatura bien conocidas por los especialistas en la técnica, por referencias de nomenclatura de IUPAC convencionales, tales como Nomenclature of Organic Chemistry, Secciones A, B, C, D, E, F y H, (Pergamon Press, Oxford, 1979, Copiright 1979 IUPAC) y A Guide to IUPAC Nomenclature of Organic Compounds (Recommendations 1993), (Blackwell Scientific Publications, 1993, Copyright 1993 IUPAC); o paquetes de software disponibles en el mercado tales como Autonom (marca de software de nomenclatura proporcionado en el juego de office ChemDraw Ultra® comercializado por CambridgeSoft.com); y ACD/lndex Name^{TM} (marca de software de nomenclatura del mercado comercializado por Advanced Chemistry Development, Inc., Toronto, Ontario).
Abreviaturas
Como se usan en este documento, las siguientes abreviaturas pretenden tener los siguientes significados (se proporcionan abreviaturas adicionales cuando es necesario a lo largo de la memoria descriptiva):
ATP
adenosin trifosfato
Boc
terc-butoxicarbonilo
DCM
diclorometano
DMF
dimetilformamida
DMSO
dimetilsulfóxido
DIEA
diisopropiletilamina
DTT
ditiotreitol
EDC
clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
EDTA
ácido etilendiaminatetraacético
EtOAc
acetato de etilo
FBS
suero bovino fetal
FP
polarización por fluorescencia
GM-CSF
factor de estimulación de colonias de granulocitos y macrófagos
HBTU
Hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametiluronio
HOBT
1-hidroxibenzotriazol hidrato
HP\betaCD
hidroxipropil \beta-ciclodextrina
HRP
peroxidasa de rábano picante
i-PrOH
alcohol isopropílico
LC/MS (ESI)
Cromatografía líquida/espectro de masas (ionización por electronebulización)
MeOH
Alcohol metílico
NMM
N-metilmorfolina
RMN
resonancia magnética nuclear
PS
poliestireno
PBS
solución salina tamponada con fosfato
RPMI
Rosewell Park Memorial Institute
TA
temperatura ambiente
RTK
receptor de tirosina quinasa
NaHMDS
hexametildisilazano sódico
SDS-PAGE
electroforesis en gel de poliacrilamida de dodecil sulfato sódico
TEA
trietilamina
TFA
ácido trifluoroacético
THF
tetrahidrofurano
TLC
cromatografía de capa fina
\vskip1.000000\baselineskip
Fórmula I
La presente invención comprende compuestos de Fórmula I:
2
y N-óxidos, sales farmacéuticamente aceptables, solvatos, isómeros geométricos e isómeros estereoquímicos de los mismos, donde:
\quad
r es 1 ó 2;
\quad
Z es NH, N(alquilo) o CH_{2};
\quad
B es fenilo, heteroarilo (donde dicho heteroarilo es preferiblemente pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, piranilo, tiopiranilo, piridinilo, pirimidinilo, pirazinilo, N-óxido de piridinilo o N-óxido de pirrolilo, y más preferiblemente pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, piridinilo, pirimidinilo o pirazinilo), o un heteroarilo benzo-condensado de nueve a diez miembros (donde dicho heteroarilo benzo-condensado de nueve a diez miembros es preferiblemente benzotiazolilo, benzooxazolilo, benzoimidazolilo, benzofuranilo, indolilo, quinolinilo, isoquinolinilo o benzo[b]tiofenilo);
\quad
R_{1} es:
3
\quad
donde
\quad
n es 1, 2, 3 ó 4;
\quad
R_{a} es hidrógeno, alcoxi, fenoxi, fenilo, heteroarilo opcionalmente sustituido con R_{5} (donde dicho heteroarilo es preferiblemente pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, piranilo, tiopiranilo, piridinilo, pirimidinilo, triazolilo, pirazinilo, N-óxido de piridinilo o N-óxido de pirrolilo, y más preferiblemente pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, piridinilo, pirimidinilo, triazolilo o pirazinilo), hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino, oxazolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, pirrolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, piperidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, heterodionilo cíclico opcionalmente sustituido con R_{5}, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{5} (donde dicho heterociclilo es preferiblemente pirrolidinilo, tetrahidrofuranoílo, tetrahidrotiofenilo, imidazolidinilo, tiazolidinilo, oxazolidinilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, tiomorfolinilo, 1,1-dióxido de tiomorfolinilo, piperidinilo, morfolinilo o piperazinilo), -COOR_{y}, -CONR_{w}R_{x}, -N(R_{w})CON(R_{y})(R_{x}), -N(R_{y})CON(R_{w})(R_{x}), -N(R_{w})C(O)OR_{x}, -N(R_{w})COR_{y}, -SR_{y}, -SOR_{y}, -SO_{2}R_{y}, -NR_{w}SO_{2}R_{y}, -NR_{w}SO_{2}R_{x}, -SO_{3}R_{y}, -OSO_{2}NR_{w}R_{x},
\quad
R_{w} y R_{x} se seleccionan independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, aralquilo (donde la porción arilo de dicho aralquilo es preferiblemente fenilo) o heteroaralquilo (donde la porción heteroarilo de dicho heteroaralquilo es preferiblemente pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, piranilo, tiopiranilo, piridinilo, pirimidinilo, pirazinilo, N-óxido de piridinilo o N-óxido de pirrolilo, y más preferiblemente pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, piridinilo, pirimidinilo o pirazinilo), o R_{w} y R_{x} pueden tomarse opcionalmente juntos para formar un anillo de 5 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heterorresto seleccionado entre O, NH, N(alquilo), SO_{2}, SO o S, seleccionado preferiblemente entre el grupo que consiste en:
4
\quad
R_{y} se selecciona entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo (donde dicho cicloalquilo es preferiblemente ciclopentanilo o ciclohexanilo), fenilo, aralquilo (donde la porción arilo de dicho aralquilo es preferiblemente fenilo), heteroaralquilo (donde la porción heteroarilo de dicho heteroaralquilo es preferiblemente pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, piranilo, tiopiranilo, piridinilo, pirimidinilo, pirazinilo, N-óxido de piridinilo o N-óxido de pirrolilo, y más preferiblemente pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, piridinilo, pirimidinilo o pirazinilo), o heteroarilo (donde dicho heteroarilo es preferiblemente pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, piranilo, tiopiranilo, piridinilo, pirimidinilo, pirazinilo, N-óxido de piridinilo o N-óxido de pirrolilo, y más preferiblemente pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, piridinilo, pirimidinilo o pirazinilo);
\quad
R_{5} es uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre: halógeno, ciano, trifluorometilo, amino, hidroxilo, alcoxi, -C(O)alquilo, -SO_{2}alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, alquilo, alquil C(_{1-4})-OH o alquilamino; y
\quad
R_{3} es uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre; hidrógeno, alquilo, alcoxi, halógeno, alcoxiéter, hidroxilo, tio, nitro, cicloalquilo opcionalmente sustituido con R_{4} (donde dicho cicloalquilo es preferiblemente ciclopentanilo o ciclohexanilo), heteroarilo opcionalmente sustituido con R_{4} (donde dicho heteroarilo es preferiblemente pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, piranilo, tiopiranilo, piridinilo, pirimidinilo, triazolilo, pirazinilo, N-óxido de piridinilo o N-óxido de pirrolilo; y más preferiblemente pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, piridinilo, pirimidinilo, triazolilo o pirazinilo), alquilamino, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{4} (donde dicho heterociclilo es preferiblemente tetrahidropiridinilo. tetrahidropirazinilo, dihidrofuranilo, dihidrooxazinilo, dihidropirrolilo, dihidroimidazolilo, azepenilo, pirrolidinilo, tetrahidrofuranoílo, tetrahidrotiofenilo, imidazolidinilo, tiazolidinilo, oxazolidinilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, piperidinilo, morfolinilo o piperazinilo), -O(cicloalquilo), pirrolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{4}, fenoxi opcionalmente sustituido con R_{4}, -CN, -OCHF_{2}, -OCF_{3}, -CF_{3}, alquilo halogenado, heteroariloxi opcionalmente sustituido con R_{4}, dialquilamino, -NHSO_{2}alquilo, tioalquilo o -SO_{2}alquilo; donde R_{4} se selecciona independientemente entre halógeno, ciano, trifluorometilo, amino, hidroxilo, alcoxi, -C(O)alquilo, -CO_{2}alquilo, -SO_{2}alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, alquilo o alquilamino.
Como se usa en lo sucesivo, la expresión "compuestos de Fórmula I" pretende incluir también los N-óxidos, sales farmacéuticamente aceptables, solvatos, isómeros geométricos e isómeros estereoquímicos de los mismos.
Realizaciones de fórmula I
En una realización de la presente invención: los N-óxidos están presentes opcionalmente en uno o más de: N-1 o N-3 (véase la Figura 1a a continuación para los números de anillo).
Figura 1a
5
La Figura 1a ilustra átomos en el anillo numerados de 1 a 8, como se usan en la presente memoria descriptiva.
En una realización de la presente invención, el grupo oximina (-O-N=C-) de la posición 5 puede estar en la configuración E o Z.
Son realizaciones preferidas de la invención compuestos de Fórmula I en la que están presentes una o más de las siguientes limitaciones:
\quad
r es 1 ó 2;
\quad
Z es NH, N(alquilo) o CH_{2};
\quad
B es fenilo o heteroarilo;
\quad
R_{1} es:
6
\quad
donde
\quad
n es 1, 2, 3 ó 4;
\quad
R_{a} es hidrógeno, alcoxi, fenoxi, fenilo, heteroarilo opcionalmente sustituido con R_{5}, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino, oxazolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, pirrolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, piperidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, heterodionilo cíclico opcionalmente sustituido con R_{5}, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{5}, -COOR_{y}, -CONR_{w}R_{x}, -N(R_{w})CON(R_{y})(R_{x}), -N(R_{y})CON(R_{w})(R_{x}), -N(R_{w})C(O)OR_{x}, -N(R_{w}) COR_{y}, -SR_{y}, -SOR_{y}, -SO_{2}R_{y}, -NR_{w}SO_{2}R_{y}, -NR_{w}SO_{2}R_{x}, -SO_{3}R_{y} -OSO_{2}NR_{w}R_{x} o -SO_{2}NR_{w}R_{x};
\quad
R_{w} y R_{x} se seleccionan independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, aralquilo o heteroaralquilo, o R_{w} y R_{x} pueden tomarse opcionalmente juntos para formar un anillo de 5 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heterorresto seleccionado entre O, NH, N(alquilo), SO_{2}, SO o S;
\quad
R_{y} se selecciona entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, fenilo, aralquilo, heteroaralquilo o heteroarilo;
\quad
R_{5} es uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre: halógeno, ciano, trifluorometilo, amino, hidroxilo, alcoxi, -C(O)alquilo, -SO_{2}alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, alquilo, -alquil C(_{1-4})-OH o alquilamino; y
\quad
R_{3} es uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alcoxi, halógeno, alcoxiéter, hidroxilo, tio, nitro, cicloalquilo opcionalmente sustituido con R_{4}, heteroarilo opcionalmente sustituido con R_{4}, alquilamino, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{4}, -O(cicloalquilo), pirrolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{4}, fenoxi opcionalmente sustituido con R_{4}, -CN, -OCHF_{2}, -OCF_{3}, -CF_{3}, alquilo halogenado, heteroariloxi opcionalmente sustituido con R_{4}, dialquilamino, -NHSO_{2}alquilo, tioalquilo o -SO_{2}alquilo; donde R_{4} se selecciona independientemente entre: halógeno, ciano, trifluorometilo, amino, hidroxilo, alcoxi, -C(O)alquilo, -CO_{2}alquilo, -SO_{2}alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, alquilo o alquilamino.
Otras realizaciones preferidas de la invención son compuestos de Fórmula I en la que están presentes una o más de las siguientes limitaciones:
\quad
r es 1 ó 2;
\quad
Z es NH o CH_{2};
\quad
B es fenilo o heteroarilo;
\quad
R_{1} es:
\vskip1.000000\baselineskip
7 
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
donde
\quad
n es 1, 2, 3 ó 4;
\quad
R_{a} es hidrógeno, alcoxi, fenoxi, fenilo, heteroarilo opcionalmente sustituido con R_{5}, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino, oxazolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, pirrolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, piperidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, heterodionilo cíclico opcionalmente sustituido con R_{5}, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{5}, -COOR_{y}, -CONR_{w}R_{x}, -N(R_{w})CON(R_{y})(R_{x}), -N(R_{y})CON(R_{w})(R_{x}), -N(R_{w})C(O)OR_{x}, -N(R_{w}) COR_{y}, -SR_{y}, -SOR_{y}, -SO_{2}R_{y}, -NR_{w}SO_{2}R_{y}, -NR_{w}SO_{2}R_{x}, -SO_{3}R_{y}, -OSO_{2}NR_{w}R_{x} o -SO_{2}NR_{w}R_{x};
\quad
R_{w} y R_{x} se seleccionan independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, aralquilo o heteroaralquilo, o R_{w} y R_{x} pueden tomarse opcionalmente juntos para formar un anillo de 5 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heterorresto seleccionado entre O, NH, N(alquilo), SO_{2}, SO o S;
\quad
R_{y} se selecciona entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, fenilo, aralquilo, heteroaralquilo o heteroarilo;
\quad
R_{5} es uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre: halógeno, ciano, trifluorometilo, amino, hidroxilo, alcoxi, -C(O)alquilo, -SO_{2}alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, alquilo, -alquil C(_{1-4})-OH o alquilamino; y
\quad
R_{3} es uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alcoxi, halógeno, alcoxiéter, hidroxilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido con R_{4}, heteroarilo opcionalmente sustituido con R_{4}, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{4}, -O(cicloalquilo), fenoxi opcionalmente sustituido con R_{4}, heteroariloxi opcionalmente sustituido con R_{4}, dialquilamino o -SO_{2}alquilo; donde R_{4} se selecciona independientemente entre halógeno, ciano, trifluorometilo, amino, hidroxilo, alcoxi, -C(O)alquilo, -CO_{2}alquilo, -SO_{2}alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, alquilo o alquilamino.
Otras realizaciones más de la invención son compuestos de Fórmula I en la que están presentes una o más de las siguientes limitaciones:
\quad
r es 1 ó 2;
\quad
Z es NH o CH_{2};
\quad
B es fenilo o heteroarilo;
\newpage
\quad
R_{1} es:
\vskip1.000000\baselineskip
8 
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
donde
\quad
n es 1, 2, 3 ó 4;
\quad
R_{a} es hidrógeno, alcoxi, heteroarilo opcionalmente sustituido con R_{5}, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino, oxazolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, pirrolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{5}, -CONR_{w}R_{x}, -N(R_{w})CON(R_{y})(R_{x}), -N(R_{y})CON(R_{w})(R_{x}), -N(R_{w})C(O)OR_{x}, -N(R_{w})COR_{y}, -SO_{2}R_{y}, -NR_{w}SO_{2}R_{y} o -SO_{2}NR_{w}R_{x};
\quad
R_{w} y R_{x} se seleccionan independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, aralquilo o heteroaralquilo, o R_{w} y R_{x} pueden tomarse opcionalmente juntos para formar un anillo de 5 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heterorresto seleccionado entre O, NH, N(alquilo), SO_{2}, SO o S;
\quad
R_{y} se selecciona entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, fenilo, aralquilo, heteroaralquilo o heteroarilo;
\quad
R_{5} es uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre: halógeno, ciano, trifluorometilo, amino, hidroxilo, alcoxi, -C(O)alquilo, -SO_{2}alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, alquilo, -alquil C(_{1-4})-OH o alquilamino; y
\quad
R_{3} es uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alcoxi, halógeno, alcoxiéter, hidroxilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido con R_{4}, heteroarilo opcionalmente sustituido con R_{4}, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{4}, -O(cicloalquilo), fenoxi opcionalmente sustituido con R_{4}, heteroariloxi opcionalmente sustituido con R_{4}, di-alquilamino o -SO_{2}alquilo; donde R_{4} se selecciona independientemente entre halógeno, ciano, trifluorometilo, amino, hidroxilo, alcoxi, -C(O)alquilo, -CO_{2}alquilo, -SO_{2}alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, alquilo o alquilamino.
Son realizaciones particularmente preferidas de la invención compuestos de Fórmula I en la que están presentes una o más de las siguientes limitaciones:
\quad
r es 1;
\quad
Z es NH o CH_{2};
\quad
B es fenilo o heteroarilo;
\quad
R_{1} es
\vskip1.000000\baselineskip
9 
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
donde
\quad
n es 1, 2, 3 ó 4;
\quad
R_{a} es hidrógeno, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino, heteroarilo, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{5}, -CONR_{w}R_{x}, -SO_{2}R_{y}, -NR_{w}SO_{2}R_{y}, -N(R_{y})CON(R_{w})(R_{x}) o -N(R_{w})C(O)OR_{x};
\quad
R_{w} y R_{x} se seleccionan independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, aralquilo o heteroaralquilo; o R_{w} y R_{x} pueden tomarse opcionalmente juntos para formar un anillo de 5 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heterorresto seleccionado entre O, NH, N(alquilo), SO, SO_{2} o S;
\quad
R_{y} se selecciona entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, fenilo, aralquilo, heteroaralquilo o heteroarilo;
\quad
R_{5} es un sustituyente seleccionado independientemente entre: -C(O)alquilo, -SO_{2}alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, alquilo o -alquil C(_{1-4})-OH; y
\quad
R_{3} es un sustituyente seleccionado independientemente entre: alquilo, alcoxi, halógeno, cicloalquilo, heterociclilo, -O(cicloalquilo), fenoxi o dialquilamino.
Son realizaciones más particularmente preferidas de la invención compuestos de Fórmula I en la que están presentes una o más de las siguientes limitaciones:
\quad
r es 1;
\quad
Z es NH o CH_{2};
\quad
B es fenilo o piridinilo;
\quad
R_{1} es:
10
\quad
donde
\quad
n es 1, 2, 3 ó 4;
\quad
R_{a} es hidrógeno, dialquilamino, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{5}, -CONR_{w}R_{x}, -N(R_{y})CON(R_{w}) (R_{x}), o -NR_{w}SO_{2}R_{y};
\quad
R_{w} y R_{x} se seleccionan independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, aralquilo, heteroaralquilo, o R_{w} y R_{x} pueden tomarse opcionalmente juntos para formar un anillo de 5 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heterorresto seleccionado entre O, NH, N(alquilo), SO_{2}, SO o S;
\quad
R_{y} se selecciona entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, aralquilo, heteroaralquilo o heteroarilo;
\quad
R_{5} es un sustituyente seleccionado independientemente entre: -C(O)alquilo, -SO_{2}alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, alquilo o alquil C(_{1-4})-OH; y
\quad
R_{3} es un sustituyente seleccionado independientemente entre: alquilo, alcoxi, heterociclilo, cicloalquilo o -O(cicloalquilo).
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Sales farmacéuticamente aceptables
Los compuestos de la presente invención también pueden estar presentes en forma de sales farmacéuticamente aceptables.
Para uso en medicinas, las sales de los compuestos de esta invención se refieren a "sales farmacéuticamente aceptables" no tóxicas. La FDA aprobó formas de sales farmacéuticamente aceptables (Ref. International J. Pharm. 1986, 33, 201-217; J. Pharm. Sci., 1977, Jan, 66(1), p1) incluyendo sales ácidas/aniónicas o básicas/catiónicas farmacéuticamente aceptables.
Las sales ácidas/aniónicas farmacéuticamente aceptables incluyen, pero sin limitación, acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bitartrato, bromuro, edetato de calcio, camsilato, carbonato, cloruro, citrato, diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gliceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilbromuro, metilnitrato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, pamoato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, sulfato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato y trietyoduro. Los ácidos orgánicos o inorgánicos también incluyen, pero sin limitación, ácido clorhídrico, perclórico, sulfúrico, fosfórico, propiónico, glicólico, metanosulfónico, hidroxietanosulfónico, oxálico, 2-naftalenosulfónico, p-toluenosulfónico, ciclohexanosulfámico, sacarínico o trifluoroacético.
Las sales básicas/catiónicas farmacéuticamente aceptables incluyen, pero sin limitación, aluminio, 2-amino-2-hidroximetil-propano-1,3-diol (también conocido como tris(hidroximetil)aminometano, trometano o "TRIS"), amoniaco, benzatina, t-butilamina, calcio, gluconato de calcio, hidróxido de calcio, cloroprocaína, colina, colina bicarbonato, cloruro de colina, ciclohexilamina, dietanolamina, etilendiamina, litio, LiOMe, L-lisina, magnesio, meglumina, NH_{3}, NH_{4}OH, N-metil-D-glucamina, piperidina, potasio, t-butóxido de potasio, hidróxido de potasio (acuoso), procaína, quinina, sodio, carbonato sódico, 2-etilhexanoato de sodio (SEH), hidróxido sódico, trietanolamina (TEA) o cinc.
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Isómeros estereoquímicos
Un especialista en la técnica reconocerá que los compuestos de Fórmula I pueden tener uno o más átomos de carbono asimétricos en su estructura. Se entiende que la presente invención incluye dentro de su alcance formas de enantiómeros individuales de los compuestos, mezclas racémicas y mezclas de enantiómeros en las que está presente un exceso enantiomérico.
El término "enantiómero individual", como se usa en este documento, define todas las formas hidroquirales posibles que los compuestos de Fórmula I y sus N-óxidos, sales de adición, aminas cuaternarias o derivados fisiológicamente funcionales pueden poseer.
Pueden obtenerse formas isoméricas estereoquímicamente puras por aplicación de principios conocidos en la técnica. Los diastereoisómeros pueden separarse por métodos de separación física tales como cristalización fraccionada y técnicas cromatográficas, y los enantiómeros pueden separarse unos de otros por cristalización selectiva de las sales diastereoméricas con ácidos o bases ópticamente activas o por cromatografía quiral. Los estereoisómeros puros también pueden prepararse sintéticamente a partir de materiales de partida estereoquímicamente puros apropiados, o usando reacciones estereoselectivas.
El término "isómero" se refiere a compuestos que tienen la misma composición y peso molecular pero que difieren en las propiedades físicas y/o químicas. Dichas sustancias tienen el mismo número y tipo de átomos pero difieren en la estructura. La diferencia estructural puede estar en la constitución (isómeros geométricos) o en una capacidad de rotar el plano de luz polarizada (enantiómeros).
El término "estereoisómero" se refiere a isómeros de constitución idéntica que difieren en la disposición de sus átomos en el espacio. Los enantiómeros y diastereómeros son ejemplos de estereoisómeros.
El término "quiral" se refiere a las características estructurales de una molécula que hacen imposible la superposición de la misma sobre su imagen especular.
El término "enantiómero" se refiere a una de un par de especies moleculares que son imágenes especulares entre sí y no pueden superponerse.
El término "diastereómero" se refiere a estereoisómeros que no son imágenes especulares.
Los símbolos "R" y "S" representan la configuración de sustituyentes alrededor de uno o varios átomos de carbono quirales.
El término "racemato" o "mezcla racémica" se refiere a una composición compuesta por cantidades equimolares de dos especies enantioméricas, donde la composición está desprovista de actividad óptica.
El término "homoquiral" se refiere a un estado de pureza enantiomérica.
El término "actividad óptica" se refiere al grado en el que una molécula homoquiral o mezcla no racémica de moléculas quirales rota un plano de luz polarizada.
El término "isómero geométrico" se refiere a isómeros que difieren en la orientación de los átomos sustituyentes en relación con un doble enlace carbono-carbono, a un anillo cicloalquilo o a un sistema bicíclico enlazado. Los átomos sustituyentes (distintos de H) en cada lado de un doble enlace carbono-carbono pueden estar en una configuración E o Z. En la configuración "E" (en lados opuestos), los sustituyentes están en lados opuestos en relación con el doble enlace carbono-carbono; en la configuración "Z" (mismo lado), los sustituyentes se orientan en el mismo lado en relación con el doble enlace carbono-carbono. Los átomos sustituyentes (distintos de hidrógeno) unidos a un anillo carbocíclico pueden estar en una configuración cis o trans. En la configuración "cis", los sustituyentes están en el mismo lado en relación con el plano del anillo; en la configuración "trans", los sustituyentes están en lados puestos en relación con el plano del anillo. Los compuestos que tienen una mezcla de especies "cis" y "trans" se denominan "cis/trans".
Debe apreciarse que los diversos sustituyentes estereoisómeros, isómeros geométricos y mezclas de los mismos usados para preparar compuestos de la presente invención están disponibles en el mercado, pueden prepararse sintéticamente a partir de materiales de partida disponibles en el mercado o pueden prepararse en forma de mezclas isoméricas y después obtenerse en forma de isómeros resueltos usando técnicas bien conocidas por los especialistas en la técnica.
Los descriptores isoméricos "R", "S", "E", "Z", "cis" y "trans" se usan como se describe en este documento para indicar la configuración o configuraciones de los átomos con respecto a una molécula núcleo y pretenden usarse como se define en la bibliografía (IUPAC Recommendations for Fundamental Stereochemistry (Section E), Pure Appl. Chem., 1976, 45:13-30).
Los compuestos de la presente invención pueden prepararse en forma de isómeros individuales por síntesis específica de isómeros o resolverse a partir de una mezcla isomérica. Las técnicas de resolución convencional incluyen formar la base libre de cada isómero de un par isomérico usando una sal ópticamente activa (seguido de cristalización fraccional y regeneración de la base libre), formar un éster o amida de cada uno de los isómeros de un par isomérico (seguido de separación cromatográfica y retirada del auxiliar quiral) o resolver una mezcla isomérica de un material de partida o un producto final usando TLC preparativa (cromatografía de capa fina) o una columna de HPLC quiral.
Polimorfos y solvatos
Además, los compuestos de la presente invención pueden tener una o más formas cristalinas polimorfas o amorfas y como tales pretenden incluirse en el alcance de la invención. Además, algunos de los compuestos pueden formar solvatos, por ejemplo, con agua (es decir, hidratos) o disolventes orgánicos comunes, y éstos también pretenden incluirse dentro del alcance de esta invención. Como se usa en este documento, el término "solvato" se refiere a una asociación física de uno o más compuestos de la presente invención con una o más moléculas disolventes. Esta asociación física implica grados variables de unión iónica y covalente, incluyendo unión de hidrógeno. En ciertos casos, el solvato podrá aislarse, por ejemplo, cuando se incorporan una o más moléculas disolventes en la estructura reticular cristalina del sólido cristalino. El término "solvato" pretende incluir solvatos en fase de solución y aislables. Los ejemplos no limitantes de solvatos adecuados incluyen etanolatos, metanolatos y similares. Se pretende que la presente invención incluya dentro de su alcance solvatos de los compuestos de la presente invención. Por lo tanto, en los métodos de tratamiento de la presente invención, el término "administrar" incluirá el medio para tratar, mejorar o prevenir n síndrome, trastorno o enfermedad descrita en este documento con un compuesto descrito específicamente o un compuesto, o solvato del mismo, que se incluirá obviamente dentro del alcance de la invención aunque no se describa específicamente para algunos de los compuestos de la presente invención.
N-óxidos
Los compuestos de Fórmula I pueden convertirse en las formas de N-óxido correspondientes siguiendo procedimientos conocidos en la técnica para convertir un nitrógeno trivalente en su forma de N-óxido. Dicha reacción de N-oxidación puede realizarse Generalmente haciendo reaccionar el material de partida de Fórmula I con un peróxido orgánico o inorgánico apropiado. Los peróxidos inorgánicos apropiados comprenden, por ejemplo, peróxido de hidrógeno, peróxidos de metales alcalinos o de metales alcalinotérreos, por ejemplo, peróxido sódico, peróxido potásico; los peróxidos orgánicos apropiados pueden comprender peroxiácidos tales como, por ejemplo, ácido bencenocarboperoxoico o ácido bencenocarboperoxoico sustituido con halo, por ejemplo, ácido 3-clorobencenocarboperoxoico, ácidos peroxoalcanoicos, por ejemplo, ácido peroxoacético, alquilhidroperóxidos, por ejemplo, hidroperóxido de t-butilo. Son disolventes adecuados, por ejemplo, agua, alcoholes inferiores, por ejemplo etanol y similares, hidrocarburos, por ejemplo tolueno, cetonas, por ejemplo 2-butanona, hidrocarburos halogenados, por ejemplo, diclorometano, y mezclas de dichos disolventes.
Formas tautoméricas
Algunos de los compuestos de Fórmula I también pueden existir en sus formas tautoméricas. Dichas formas, aunque no se indican explícitamente en la presente solicitud, pretenden incluirse dentro del alcance de la presente invención.
Preparación de compuestos de la presente invención
Durante cualquiera de los procesos para la preparación de los compuestos de la presente invención, puede ser necesario y/o deseable proteger grupos sensibles o reactivos en cualquiera de las moléculas implicadas. Esto puede conseguirse por medio de grupos protectores convencionales, tales como los descritos en Protecting Groups, P. Kocienski, Thieme Medical Publishers, 2000; y T.W. Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3ª Ed. Wiley Interscience, 1999. Los grupos protectores pueden retirarse en una etapa conveniente posterior usando métodos conocidos en la técnica.
Esquema de Reacción General
11
Los compuestos de fórmula I pueden prepararse por métodos conocidos por los especialistas en la técnica. Los siguientes esquemas de reacción sólo pretenden representar ejemplos de la invención y de ninguna manera pretenden limitar la invención.
Los compuestos de fórmula I, en la que B, Z, r, R_{1} y R_{3} se definen como en la Fórmula I, pueden sintetizarse como se muestra por la ruta sintética General ilustrada en el Esquema 1. El tratamiento del pirimidina-4,6-diol II en condiciones de reacción de Vilsmeier (DMF/POCl_{3}) puede proporcionar el 4,6-dicloro-pirimidina-5-carbaldehído III, que después del tratamiento con amoniaco puede proporcionar el intermedio clave 4-amino-6-cloropirimidina-5-carbaldehído IV. El tratamiento de IV con una amina cíclica V en un disolvente tal como DMSO a una temperatura de 25ºC a 150ºC en presencia de una base tal como diisopropiletilamina puede proporcionar la pirimidina VI. El tratamiento de VI con el R_{1}ONH_{2} apropiado en un disolvente tal como MeOH puede proporcionar el producto final I. Aunque sólo se representa la forma anti de la Fórmula I, se espera que puedan formarse en la reacción final tanto los isómeros geométricos anti como syn. Los isómeros pueden separarse por cromatografía en columna y son espectroscópicamente distintos por los desplazamientos químicos de ^{1}H RMN del hidrógeno de metino H_{a} correspondiente de la oxima (Figura 1b).
12
Los espectros de ^{1}H RMN observados del isómero anti principal muestran un desplazamiento químico campo abajo adicional característico del hidrógeno de metino H_{a} en comparación con el desplazamiento químico del hidrógeno de metino H_{a} del isómero syn. La diferencia observada en los desplazamientos químicos de ^{1}H del hidrógeno H_{a} de los isómeros de la oxima anti y syn guarda relación con los conocidos en la bibliografía en la técnica (Biorg. Med. Chem. Lett. 2004, 14, 5827-5830).
Esquema 1
13
Los reactivos de R_{1}ONH_{2}, donde R_{1} se define como en la Fórmula I, están disponibles en el mercado o pueden prepararse por la secuencia de reacción ilustrada en el Esquema 2a. La alquilación del bencilideno VII con un electrófilo apropiado R_{1}LG, donde LG puede ser un grupo saliente tal como bromuro o yoduro, y una base tal como KOH en un disolvente tal como DMSO, puede proporcionar el intermedio de bencilideno VIII, que después del tratamiento en condiciones ácidas tales como HCl 4 N puede proporcionar el reactivo de R_{1}ONH_{2} deseado. Un método relacionado para prepara los reactivos de R_{1}ONH_{2}, donde n, R_{1} y R_{a} se definen como en la Fórmula I, se ilustra en el Esquema 2b. La alquilación del bencilideno VII con un electrófilo apropiado PGO(CH_{2})_{n}LG, donde PG es un grupo protector de alcohol conocido y LG puede ser un grupo saliente tal como bromuro o yoduro, con una base tal como KOH en un disolvente tal como DMSO, puede proporcionar el bencilideno O-alquilado. La desprotección del grupo protector de alcohol conocido por los especialistas en la técnica en condiciones convencionales, la conversión del alcohol en un grupo saliente apropiado conocido por los especialistas en la técnica tal como un mesilato, y una posterior reacción de desplazamiento de SN_{2} con un heterociclo nucleófilo apropiado, heteroarilo, amina, alcohol, sulfonamida o tiol seguido de retirada de bencilideno mediada por ácido pueden proporcionar el reactivo de R_{1}ONH_{2}. Si el nucleófilo R_{a} es un tiol, la oxidación adicional del tiol puede proporcionar los sulfóxidos y sulfonas correspondientes. Si el nucleófilo R_{a} es un amino, la acilación del nitrógeno con un agente de acilación o sulfonilación apropiado puede proporcionar las amidas, carbamatos, ureas y sulfonamidas correspondientes. Si el R_{a} deseado es COOR_{y} o CONR_{w}R_{x}, puede obtenerse a partir del grupo hidroxilo correspondiente. La oxidación del grupo hidroxilo para dar el ácido seguido de formación de éster o amida en condiciones conocidas en la técnica puede proporcionar ejemplos en los que R_{a} es COOR_{y} o CONR_{w}R_{x}.
Esquema 2a
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14 
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Esquema 2b
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140
donde:
LG es un Grupo Saliente
Nuc es Nucleófilo
PG es un Grupo Protector
Los reactivos de amina V, donde Z es NH o N(alquilo) y B, r, y R_{3} se definen como en la Fórmula I, pueden prepararse por la secuencia de reacción ilustrada en el Esquema 3a. La acilación de la N-Boc diamina IX con un agente de acilación apropiado X, donde LG puede ser p-nitrofenoxi, cloruro, bromuro o imidazol, puede proporcionar el intermedio acilado XI. La retirada del grupo protector de N-Boc en condiciones ácidas puede proporcionar la amina deseada V. Los reactivos de acilación X están disponibles en el mercado o pueden prepararse como se ilustra en el Esquema 3a. El tratamiento de un R_{3}BZH apropiado, donde Z es NH o N(alquilo), con un reactivo de acilación apropiado tal como carbonildiimidazol o cloroformiato de p-nitrofenilo (donde LG puede ser cloruro, imidazol o p-nitrofenoxi) en presencia de una base tal como trietilamina puede proporcionar X. Muchos reactivos de R_{3}BZH están disponibles en el mercado y pueden prepararse por varios métodos conocidos (por ejemplo, Tet Lett 1995, 36, 2411-2414). Un método alternativo para acceder a V, donde Z es CH_{2} y B, r, y R_{3} se definen como en la Fórmula I, se resume en el Esquema 3b. El acoplamiento de una amina cíclica IX con un R_{3}BCH_{2}CO_{2}H apropiado usando un reactivo de acoplamiento convencional tal como clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC) o 1-hidroxibenzotriazol (HOBT) puede proporcionar el intermedio acilado XI. La retirada del grupo protector de N-Boc en condiciones ácidas puede proporcionar la amina deseada V.
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Esquema 3a
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15 
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Esquema 3b
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150 
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Como alternativa, los compuestos de fórmula I, en la que B, Z, r, R_{1} y R_{3} se definen como en la Fórmula I, pueden sintetizarse como se resume por la ruta sintética general ilustrada en el Esquema 4. El tratamiento de la 4-cloropirimidina IV con una diamina apropiada IX en un disolvente tal como acetonitrilo en presencia de una base tal como diisopropiletilamina puede proporcionar la pirimidina XII. El tratamiento de la 5-carbaldehído pirimidina XII con un R_{1}NH_{2} apropiado en un disolvente tal como MeOH puede producir el intermedio XIII, que tras la desprotección posterior del grupo protector de N-Boc por tratamiento ácido puede proporcionar la diamino pirimidina XIV. La acilación de XIV en presencia de una base tal como diisopropiletilamina con un reactivo apropiado X, donde Z es NH o N(alquilo) y LG puede ser cloruro, imidazol, o p-nitrofenoxi, o, cuando Z es CH_{2}, por acoplamiento con un R_{3}BCH_{2}CO_{2}H apropiado usando un reactivo de acoplamiento convencional tal como clorhidrato de 1-(3-dimetilamino-propil)-3-etilcarbodiimida (EDC) o 1-hidroxibenzotriazol (HOBT), puede proporcionar el producto final I. Aunque sólo se representa la forma anti de la Fórmula I, se espera que en la secuencia de reacción puedan formarse tanto los isómeros geométricos anti como syn. Los isómeros pueden separarse por cromatografía en columna y son espectroscópicamente distintos.
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Esquema 4
16
Como alternativa, los compuestos de fórmula I, en la que Z es NH y B, r, R_{1} y R_{3} se definen como en la Fórmula I, pueden sintetizarse como se resume por la ruta sintética general ilustrada en el Esquema 5. El tratamiento de la 4-cloropirimidina IV con una diamina apropiada IX en un disolvente tal como acetonitrilo en presencia de una base tal como diisopropiletilamina puede proporcionar la pirimidina XII. El tratamiento de la 5-carbaldehído pirimidina XII con un R_{1}ONH_{2} apropiado en un disolvente tal como MeOH puede producir el intermedio XIII, que tras la desprotección posterior del grupo protector de N-Boc por tratamiento ácido puede proporcionar la diamino pirimidina XIV. La acilación de XIV en presencia de una base tal como diisopropiletilamina con un R_{3}BNCO apropiado puede proporcionar el producto final I. Aunque sólo se representa la forma anti de la Fórmula I, se espera que en la secuencia de reacción puedan formarse tanto los isómeros geométricos anti como syn. Los isómeros pueden separarse por cromatografía en columna y son espectroscópicamente distintos.
Esquema 5
17
Un método alternativo para preparar compuestos de fórmula I, en la que Z es NH o N(alquilo) y B, r, R_{1} y R_{3} se definen como en la Fórmula I, se resume por la ruta sintética general ilustrada en el Esquema 6. El tratamiento de la 4-cloropirimidina IV con una diamina apropiada IX en un disolvente tal como acetonitrilo en presencia de una base tal como diisopropiletilamina puede proporcionar la pirimidina XII. La desprotección del grupo protector de N-Boc por tratamiento ácido puede proporcionar la diamino pirimidina XV, que puede acilarse posteriormente con el reactivo apropiado X, donde LG puede ser cloruro, imidazol o p-nitrofenoxi, en presencia de una base tal como diisopropiletilamina para proporcionar la pirimidina XVI. El tratamiento de la 5-carbaldehído pirimidina XVI con un R_{1}ONH_{2} apropiado en un disolvente tal como MeOH puede proporcionar el producto final I. Aunque sólo se representa la forma anti de la Fórmula I, se espera que en la reacción final puedan formarse tanto los isómeros geométricos anti como syn. Los isómeros pueden separarse por cromatografía en columna y son espectroscópicamente distintos.
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Esquema 6
18
Compuestos representativos
A continuación se presentan compuestos representativos de la presente invención sintetizados por los métodos mencionados anteriormente. Los ejemplos de la síntesis de compuestos específicos se presentan más adelante. Los compuestos preferidos son los números 1, 2, 7, 12, 13, 16, 17, 18, 19, 27; se prefieren particularmente los números 1, 2, 7, 12 y 17.
19
20
21
22
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24
25
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27
Ejemplo 1 
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(4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
28 
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a. 4,6-Dicloro-pirimidina-5-carbaldehído
29
Una mezcla de DMF (3,2 ml) y POCl_{3} (10 ml) a 0ºC se agitó durante 1 h, se trató con 4,6-dihidroxipirimidina (2,5 g, 22,3 mmol) y se agitó durante 0,5 h a temperatura ambiente. La mezcla heterogénea se calentó a reflujo durante 3 h y los volátiles se retiraron a presión reducida. El residuo se vertió en hielo agua y se extrajo seis veces con éter etílico. La fase orgánica se lavó con NaHCO_{3} acuoso, se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un sólido de color amarillo (3,7 g, 95%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 10,46 (s, 1H), 8,90 (s, 1H).
b. 4-Amino-6-cloro-pirimidina-5-carbaldehído
30
Se burbujeó amoniaco a través de una solución de 4,6-dicloro-pirimidina-5-carbaldehído (1 g, 5,68 mmol) en tolueno (100 ml) durante 10 min y la solución se agitó a temperatura ambiente durante una noche. El precipitado de color amarillo se retiró por filtración, se lavó con EtOAc y se secó al vacío para producir el producto puro (880 mg, 99%). ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 10,23 (s, 1H), 8,72 (a, 1H), 8,54 (a, 1H), 8,38 (s, 1H).
Método A
a. Éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-5-formil-pirimidin-4-il)-piperazina-1-carboxílico
31
A una suspensión de 4-amino-6-cloro-pirimidina-5-carbaldehído (446,8 mg, 2,85 mmol) en CH_{3}CN (2 ml) se le añadió éster terc-butílico del ácido piperazina-1-carboxílico (583,1 mg, 3,13 mmol), seguido de DIEA (736,7 mg, 5,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 100ºC. Después de 2 h, se enfrió a temperatura ambiente y el precipitado se retiró por filtración, se lavó con CH_{3}CN (3 x 4 ml) y se secó al vacío para producir el compuesto del título en forma de un polvo de color blanco (818 mg, 93,6%). ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 9,75 (s, 1H), 8,28 (a, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,83 (a, 1H), 3,59 (m, 4H), 3,43 (m, 4H), 1,41 (s, 9H); LC/MS (ESI) calc. para C_{14}H_{22}N_{5}O_{3} (MH)^{+} 308,2, encontrado 308,2.
b. Éster terc-butílico del ácido 4-[6-amino-5-(rnetoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
32
Una mezcla de éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-5-formil-pirimidin-4-il)-piperazina-1-carboxílico (59,1 mg, 0,19 mmol) y MeONH_{2}\cdotHCl (52 mg, 0,62 mmol) en MeOH (1,5 ml) se agitó a 75ºC durante 0,5 h y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (EtOAc como eluyente) para producir el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (48 mg, 74,6%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,19 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,53 (t, J = 5,10 Hz, 4H), 3,33 (t, J = 5,10 Hz, 4H), 1,47 (s, 9H); LC/MS (ESI) calc. para C_{15}H_{25}N_{6}O_{3} (MH)^{+}337,2, encontrado 337,3.
c. Sal del ácido trifluoroacético de 4-amino-6-piperazin-1-il-pirimidina-5-carbaldehído O-metil-oxima
33
Se trató éster terc-butílico del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico (22,1 mg, 0,066 mmol) con TFA al 50%/CH_{2}Cl_{2} (4 ml). Después de 14 h, la mezcla se evaporó y se secó al vacío para producir el compuesto del título. ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 8,29 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,93 (t, J = 5,16 Hz, 4H), 3,35 (t, J = 5,37 Hz, 4H); LC/MS (ESI) calc. para C_{10}H_{17}N_{6}O (MH)^{+} 237,1, encontrado 237,2.
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d. 4-Nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico
34
A una solución de 4-isopropoxianilina (9,06 g, 60,0 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (120 ml) y piridina (30 ml) se le añadió en porciones cloroformiato de 4-nitrofenilo (10,9 g, 54,0 mmol) con agitación durante \sim1 min con breve refrigeración con un baño de hielo. Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 h, la solución homogénea se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (300 ml) y se lavó con HCl 0,6 M (1 x 750 ml) y HCl 0,025 M (1 x 1 l). La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color violeta-blanco (16,64 g, 98%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,31-8,25 (m, 2H), 7,42-7,32 (m, 4H), 7,25-7,20 (m, 2H), 6,93 (s a, 1H), 2,90 (sept., J = 6,9 Hz, 1H), 1,24 (d, J = 6,9 Hz, 6H). LC/MS (ESI) calc. para C_{16}H_{17}N_{2}O_{5} (MH)^{+} 317,1, encontrado 633,2 (2MH)^{+}.
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e. (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
35
A una mezcla de sal del ácido trifluoroacético de 4-amino-6-piperazin-1-il-pirimidina-5-carbaldehído O-metil-oxima 23 mg, 0,066 mmol) y 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico (22,8 mg, 0,072 mmol) en CH_{3}CN (1,5 ml) se le añadió DIEA (17 mg, 0,13 mmol). La mezcla se calentó a reflujo con agitación durante 3 h y los disolventes se evaporaron a presión reducida. El residuo de color amarillo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (EtOAc como eluyente) para producir el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (12,7 mg, 46,8%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,19 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,21 (d, J = 8,93 Hz, 2H), 6,81 (d, J = 8,94 Hz, 2H), 6,45 (a, 1H), 4,46 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,58 (m, 4H), 3,42 (m, 4H), 1,30 (d, J = 6,06 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{20}H_{28}N_{7}O_{3} (MH)^{+} 414,2, encontrado 414,2.
\newpage
Método B
f. Éster terc-butílico del ácido 4-(4-isopropoxi-fenilcarbamoil)-piperazina-1-carboxílico
36
Una mezcla de éster terc-butílico del ácido piperazina-1-carboxílico (267,4 mg, 1,44 mmol) y 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico (432,1 mg, 1,36 mmol) en CH_{3}CN (2 ml) se calentó a reflujo durante 2 h y se enfrió a temperatura ambiente. El precipitado se retiró por filtración, se lavó con CH_{3}CN (3 x 3 ml) y se secó al vacío para producir el producto en forma de un sólido de color blanco (459 mg, 93%). ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 7,20 (d,
J = 8,81 Hz, 2H), 6,82 (d, J = 8,93 Hz, 2H), 4,52 (sept., J = 6,03 Hz, 1H), 3,48 (m, 8H), 1,48 (s, 9H), 1,27 (d, J = 6,04 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{19}H_{30}N_{3}O_{4} (MH)^{+} 364,2, encontrado 364,4.
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g. (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido piperazina-1-carboxílico
37
Se trató éster terc-butílico del ácido 4-(4-isopropoxi-fenilcarbamoil)-piperazina-1-carboxílico (169 mg, 0,47 mmol) con TFA al 50%/CH_{2}Cl_{2} (15 ml). Después de 2 h, se evaporó a presión reducida y el residuo se neutralizó con CH_{3} 2 M en MeOH. La evaporación de los disolventes a alto vacío produjo el compuesto del título (119 mg, 97%). ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 7,22 (d, J = 8,83 Hz, 2H), 6,83 (d, J = 8,92 Hz, 2H), 4,52 (sept., J = 6,02 Hz, 1H), 3,76 (t, J = 4,98 Hz, 4H), 3,24 (t, J = 4,99 Hz, 4H), 1,27 (d, J = 6,03 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{14}H_{22}N_{3}O_{2} (MH)^{+} 264,2, encontrado 264,3.
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h. (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
38
A una mezcla de (4-isopropoxi-fenil)-amida del ácido piperazina-1-carboxílico (302,1 mg, 1,15 mmol) y 4-amino-6-cloro-pirimidina-5-carbaldehído (157 mg, 1,0 mmol) en DMSO (2 ml) se le añadió DIEA (258,5 mg, 2,0 mmol). La mezcla se mantuvo en agitación a 100ºC durante 2 h y se añadió MeONH_{2}\cdotHCl (167 mg, 2,0 mmol). La mezcla resultante se calentó a 100ºC durante 0,5 h. Se diluyó con agua y se extrajo con CH_{2}Cl_{2-} Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a presión reducida. El aceite en bruto se sometió a cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (EtOAc como eluyente) para producir el compuesto del título (45 mg, 11%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,19 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,21 (d, J = 8,93 Hz, 2H), 6,81 (d, J = 8,94 Hz, 2H), 6,45 (a, 1H), 4,46 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,58 (m, 4H), 3,42 (m, 4H), 1,30 (d, J = 6,06 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{20}H_{28}N_{7}O_{3} (MH)^{+} 414,2, encontrado 414,4.
Ejemplo 2 (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-morfolin-4-il-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-piperazina-1-carboxílico 
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39 
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a. Sal del ácido trifluoroacético de 4-amino-6-piperazin-1-il-pirimidina-5-carbaldehído 
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40 
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Se trató éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-5-formil-pirimidin-4-il)-piperazina-1-carboxílico (235 mg, 0,76 mmol) con TFA al 50%/CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y la mezcla se agitó durante una noche. Se evaporó a presión reducida para producir un sólido de color blanco, que es puro y se usó directamente para la siguiente etapa de reacción, ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 9,83 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 4,22 (t, J = 5,23 Hz, 4H), 3,42 (t, J = 5,42 Hz, 4H); LC/MS (ESI) calc. para C_{9}H_{14}N_{5}O (MH)^{+} 208,1, encontrado 208,1.
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b. (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-(6-amino-5-formil-pirimidin-4-il)-piperazina-1-carboxílico 
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41 
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A una mezcla de sal del ácido trifluoroacético de 4-amino-6-piperazin-1-il-pirimidina-5-carbaldehído (0,76 mmol) y 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico (253,7 mg, 0,80 mmol) en CH_{3}CN se le añadió DIEA (396 mg, 3,06 mmol). La mezcla se calentó a 100ºC durante 2 h y se enfrió a temperatura ambiente. El precipitado se filtró, se lavó con CH_{3}CN (2 x 2 ml) y EtOAc (2 x 1 ml) y se secó al vacío para producir el compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo claro (120 mg, 41%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 9,88 (s, 1H), 8,73 (a, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,22 (d, J = 8,97 Hz, 2H), 6,84 (d, J = 8,98 Hz, 2H), 6,50 (a, 1H), 6,25 (a, 1H), 4,49 (m, 1H), 3,85 (m, 4H), 3,66 (m, 4H), 1,31 (d, J = 6,06 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{19}H_{25}N_{6}O_{3} (MH)^{+} 385,2, encontrado 385,2.
c. Difenil-metanona O-(2-morfolin-4-il-etil)-oxima
42
Se añadió en porciones clorhidrato de N-(2-cloroetil)morfolina (2,10 g, 11 mmol) a una suspensión de polvo de KOH (1,24 g, 22 mmol) y benzofenona oxima (1,97 g, 10 mmol) en DMSO (23 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se mantuvo en agitación a temperatura ambiente durante 3 días, se diluyó con agua y se extrajo con éter etílico. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se evaporó para producir casi el producto puro. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 7,32-7,50 (m, 10H), 4,35 (t, J = 5,59 Hz, 2H), 3,69 (t, J = 4,52 Hz, 4H), 2,74 (m, 2H), 2,49 (m, 4H); LC/MS (ESI) calc. para C_{19}H_{23}N_{2}O_{2} (MH)^{+} 311,2, encontrado 311,2.
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d. Diclorhidrato de O-(2-morfolin-4-il-etil)-hidroxilamina 
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43 
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Una suspensión de difenil-metanona O-(2-morfolin-4-il-etil)-oxima (2,5 g, 8,06 mmol) en HCl 6 N (13,5 ml) se calentó a reflujo con agitación. Después de 2 h, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se extrajo varias veces con EtOAc. La fase acuosa se evaporó a sequedad al vacío para producir el compuesto del título (740 mg, 63%). ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 4,45 (t, J = 4,49 Hz, 2H), 3,89 (t, J = 4,48 Hz, 4H), 3,47 (t, J = 4,64 Hz, 2H), 3,29 (m, 4H); LC/MS (ESI) calc. para C_{6}H_{15}N_{2}O_{2} (MH)^{+} 147,1, encontrado 147,1.
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e. (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-morfolin-4-il-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-pipera- zina-1-carboxílico 
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44 
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Una mezcla de (4-isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-(6-amino-5-formil-pirimidin-4-il)-piperazina-1-carboxílico (20,9 mg, 0,054 mmol) y sal diclorhidrato de O-(2-morfolin-4-il-etil)-hidroxilamina (12 mg, 0,054 mmol) en MeOH (1 ml) se calentó a 100ºC durante 0,5 h y el disolvente se retiró. El residuo se repartió entre EtOAc y agua. Los extractos orgánicos se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se evaporaron y el residuo se purificó por TLC preparativa (MeOH al 5%/EtOAc) para producir el producto deseado en forma de un sólido de color blanco (16,4 mg, 58,9%). ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 8,24 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,21 (d, J = 8,79 Hz, 2H), 6,83 (d, J = 9,03 Hz, 2H), 4,52 (m, 1H), 4,34 (t, J = 5,63 Hz, 2H), 3,71 (t, J = 4,84 Hz, 4H), 3,63 (m, 4H), 3,43 (m, 4H), 2,75 (t, J = 5,60 Hz, 2H), 2,57 (t, J = 4,96 Hz, 4H), 1,28 (d, J = 6,05 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{25}H_{37}N_{8}O_{4} (MH)^{+} 513,2, encontrado 513,3.
Ejemplo 3 (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(3-hidroxi-propoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-piperazina-1- carboxílico
45 
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a. Difenil-metanona O-(3-hidroxi-propil)-oxima
46
Siguiendo el procedimiento para la síntesis del Ejemplo 2c. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 7,30-7,52 (m, 10H), 4,35 (t, J= 5,83 Hz, 2H), 3,73 (t, J = 5,85 Hz, 2H), 1,95 (m, 2H).
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b. Clorhidrato de 3-Aminooxi-propan-1-ol
47
Siguiendo el procedimiento para la síntesis del Ejemplo 2d. ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 4,26 (t, J = 6,75 Hz, 2H), 3,66 (t, J = 6,11 Hz, 2H), 2,51 (m, 2H).
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c. (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(3-hidroxi-propoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-piperazina-1-carboxílico
48
Se preparó como se ha descrito en el Ejemplo 2e con la excepción de que se usó 3-aminooxi-propan-1-ol en lugar de O-(2-morfolin-4-il-etil)-hidroxilamina. ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 8,22 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,21 (d, J = 8,95 Hz, 2H), 6,83 (d, J = 9,01 Hz, 2H), 4,52 (m, 1H), 4,28 (t, J = 6,48 Hz, 2H), 3,69 (t, J = 6,35 Hz, 2H), 3,63 (m, 4H), 3,43 (m, 4H), 1,94 (m, 2H), 1,28 (d, J = 6,04 Hz, 6H). LC/MS (ESI) calc. para C_{22}H_{32}N_{7}O_{4} (MH)^{+} 458,2, encontrado 458,2.
Ejemplo 4 (4-Piperidin-1-il-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico 
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49 
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a. 4-Nitro-fenil éster del ácido (4-piperidin-1-il-fenil)-carbámico 
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50 
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1d, usando 4-piperidinoanilina y disolvente de tolueno. La cromatografía sobre sílice ultrarrápida (5:2 de hex/EtOAc \rightarrow EtOAc \rightarrow 9:1 de DCM/MeOH) proporcionó el compuesto diana en forma de un polvo de color gris (1,416 g, 73%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,31 -8,25 (m, 2H), 7,42-7,36 (m, 2H), 7,34-7,28 (m, 2H), 6,97-6,90 (m, 2H), 6,82 (s a, 1H), 3,17-3,09 (m, 4H), 1,77-1,66 (m, 4H), 1,63-1,54 (m, 2H). LC/MS (ESI) calc. para C_{18}H_{19}N_{3}O_{4} (MH^{+}) 342,1, encontrado 342,2.
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b. (4-Piperidin-1-il-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico 
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51 
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1e con la excepción de que se usó 4-nitro-fenil éster del ácido (4-piperidin-1-il-fenil)-carbámico en lugar de 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,20 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,29 (m, 4H), 7,07 (a, 2H), 6,46 (a, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,61 (m, 4H), 3,46 (m, 4H), 3,15 (m, 4H), 1,52-1,86 (m, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{20}H_{31}N_{8}O_{2} (MH)^{+} 439,3, encontrado 439,2.
Ejemplo 5 (4-Morfolin-4-il-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico 
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52 
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a. 4-Nitro-fenil éster del ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-carbámico 
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53 
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Una mezcla de 4-morfolinoanilina (1,01 g, 5,68 mmol) y CaCO_{3} (743 mg, 7,42 mmol) (polvo de 10 micrómetros) se trató con una solución de cloroformiato de 4-nitrofenilo (1,49 g, 7,39 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (7,5 ml) al aire en un baño de hielo. La suspensión de reacción espesa agitada fácilmente se agitó durante 1-2 min en el baño de hielo antes de agitarse a temperatura ambiente durante 1 h. La suspensión después se diluyó con 9:1 de CH_{2}Cl_{2}/MeOH (7,5 ml) y se aplicó directamente a una columna de sílice ultrarrápida (95:5 de CH_{2}Cl_{2}/MeOH) para proporcionar 0,7 g de material. Éste se purificó adicionalmente por trituración con tolueno caliente (25 ml) para producir el compuesto del título en forma de un polvo de color verde oliva claro (444 mg, 23%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,31-8,25 (m, 2H), 7,42-7,31 (m, 4H), 6,95-6,85 (m, 3H), 3,89-3,84 (m, 4H), 3,16-3,11 (m, 4H).
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b. (4-Morfolin-4-il-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico 
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54 
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1e con la excepción de que se usó 4-nitro-fenil éster del ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-carbámico en lugar de 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,20 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,22 (m, 4H), 6,87 (a, 2H), 6,26 (a, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,86 (t, J = 4,80 Hz, 4H), 3,60 (m, 4H), 3,47 (t, J = 4,47 Hz, 4H), 3,10 (m, 4H); LC/MS (ESI) calc. para C_{21}H_{29}N_{8}O_{3} (MH)^{+} 441,2, encontrado 441,3.
Ejemplo 6 (6-Ciclobutoxi-piridin-3-il)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico 
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55 
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a. 2-Ciclobutoxi-5-nitro-piridina 
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56 
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Una mezcla de 2-cloro-5-nitropiridina (7,12 g, 45,0 mmol) y ciclobutanol (3,40 g, 47,2 mmol) en THF (30 ml) se agitó vigorosamente a 0ºC mientras se añadía en tres porciones NaH (1,18 g, 46,7 mmol) durante \sim10-20 seg al aire (Precaución: desprendimiento masivo de gas). El residuo de reacción se aclaró con más cantidad de THF (5 ml), seguido de agitación a presión positiva de argón en el baño de hielo durante 1-2 minutos más. Después, el baño de hielo se retiró y la solución homogénea de color pardo se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida a 80ºC, se recogió en EDTA 0,75 M (sal tetrasódica) (150 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (1 x 100 ml, 1 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se concentraron, se recogieron en MeOH (2 x 100 ml) y se concentraron a presión reducida a 60ºC para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite espeso de color ámbar oscuro que cristalizó después de un periodo de reposo (7,01 g, 80%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 9,04 (dd, J = 2,84 y 0,40 Hz, 1H), 8,33 (dd, J = 9,11 y 2,85 Hz, 1H), 6,77 (dd, J = 9,11 y 0,50 Hz, 1H), 5,28 (m, 1H), 2,48 (m,2H), 2,17 (m,2H), 1,87 (m, 1H), 1,72 (m, 1H).
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b. 6-Ciclobutoxi-piridin-3-ilamina 
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57 
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Un matraz que contenía Pd al 10%/C p/p (485 mg) se lavó abundantemente de forma suave con argón mientras se añadía lentamente MeOH (50 ml) a lo largo de los lados del matraz, seguido de la adición en porciones de \sim5 ml de una solución de 2-ciclobutoxi-5-nitro-piridina (4,85 g, 25 mmol), preparada en la etapa anterior, en MeOH (30 ml). (Precaución: la adición a gran escala de extractos orgánicos volátiles a Pd/C en presencia de aire puede provocar fuego.) Después, el matraz se evacuó una vez y se agitó a presión de globo de H_{2} durante 2 h a temperatura ambiente. Después, la reacción se filtró y el filtrado de color ámbar transparente se concentró, se recogió en tolueno (2 x 50 ml) para retirar el MeOH residual y se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto del título en bruto en forma de un aceite de color pardo oscuro translúcido con un ligero olor a tolueno (4,41 g). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 7,65 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,04 (dd, J = 8,71 y 2,96 Hz, 1H), 6,55 (d, J = 8,74 Hz, 1H), 5,04 (m, 1H), 2,42 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 1,80 (m, 1H), 1,66 (m, 1H). LC-MS (ESI) calc. para C_{9}H_{13}N_{2}O (MH^{+}) 165,1, encontrado 165,2.
c. 4-Nitro-fenil éster del ácido (6-ciclobutoxi-piridin-3-il)-carbámico
58
Una mezcla de 6-ciclobutoxi-piridin-3-ilamina (4,41 g, 25 mmol), preparada en la etapa anterior, y CaCO_{3} (3,25 g, 32,5 mmol) (polvo de 10 micrómetros) se trató en una porción con una solución homogénea de cloroformiato de 4-nitrofenilo (5,54 g, 27,5 mmol) en tolueno (28 ml) a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. Después, la mezcla de reacción se cargó directamente sobre una columna de sílice ultrarrápida (95:5 de DCM/MeOH \rightarrow 9:1 de DCM/MeOH) para producir 5,65 g de material, que se purificó adicionalmente por trituración con tolueno caliente (1 x 200 ml) para proporcionar el compuesto del título (4,45 g, 54%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,32-8,25 (m, 2H), 8,12 (d, 1H), 7,81 (m, 1H), 7,42-7,36 (m, 2H), 6,85 (s a, 1H), 6,72 (d, 1H), 5,19-5,10 (m, 1H), 2,50-2,40 (m, 2H), 2,19-2,07 (m, 2H), 1,89-1,79 (m, 1H), 1,75-1,61 (m, 1H). LC-MS (ESI) calc. para C_{16}H_{15}N_{3}O_{5} (MH^{+}) 330,1, encontrado 330,1.
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d. (6-Ciclobutoxi-piridin-3-il)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
59
Se preparó como se ha descrito en el Ejemplo 1e con la excepción de que se usó 4-nitro-fenil éster del ácido (6-ciclobutoxi-piridin-3-il)-carbámico en lugar de 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 8,55 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,12 (d, J = 2,74 Hz, 1H),8,10 (s, 1H), 7,73 (dd, J = 8,72 y 2,72 Hz, 1H), 7,48 (a, 1H), 6,69 (d, J = 8,86 Hz, 1H), 5,05 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,54 (m, 4H), 3,34 (m, 4H), 2,36 (m, 2H), 2,00 (m, 2H), 1,75 (m, 1H), 1,61 (m, 1H); LC/MS (ESI) calc. para C_{20}H_{27}N_{8}O_{3} (MH)^{+} 427,2, encontrado 427,2.
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Ejemplo 7 4-Amino-6-{4-[2-(4-isopropil-fenil)acetil]-piperazin-1-il}-pirimidina-5-carbaldehído O-metil-oxima
60
A una mezcla de sal del ácido trifluoroacético de 4-amino-6-piperazin-1-il-pirimidina-5-carbaldehído O-metil-oxima en bruto (45,3 mg, 0,13 mmol), preparada como el Ejemplo 1c, y ácido (4-isopropil-fenil)-acético (23 mg, 0,13 mmol) en THF anhidro (2 ml) se le añadió HOBT (25,7 mg, 0,17 mmol), seguido de HBTU (63,6 mg, 0,17 mmol) y DIEA (83,4 mg, 0,65 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche y se concentró a presión reducida. El material en bruto se cargó directamente sobre una placa de TLC preparativa para la purificación (MeOH al 5%/EtOAc) (8,6 mg, 16,7%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,16 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,17 (m, 4H), 3,95 (s, 3H), 3,75 (m, 2H), 3,73 (s, 2H), 3,55 (t, J = 4,81 Hz, 2H), 3,38 (t, J = 4,98 Hz, 2H), 3,26 (t, J = 4,79 Hz, 2H), 2,89 (sept., J = 6,81 Hz, 1H), 1,24 (d, J = 6,92 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{21}H_{29}N_{6}O_{2} (MH)^{+} 397,2, encontrado 397,3.
Ejemplo 8 (4-Isopropil-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico 
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61 
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a. 4-Nitro-fenil éster del ácido (4-isopropil-fenil)-carbámico 
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62 
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A una solución de 4-isopropilanilina (3,02 g, 22,3 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (40 ml) y piridina (10 ml) se le añadió en porciones cloroformiato de 4-nitrofenilo (4,09 g, 20,3 mmol) con agitación durante \sim30 seg con breve refrigeración con un baño de hielo. Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 h, la solución homogénea se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (100 ml) y se lavó con HCl 0,6 M (1 x 250 ml), HCl 0,025 M (1 x 400 ml), agua (1 x 100 ml) y NaHCO_{3} 1 M (1 x 100 ml). La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color melocotón claro (5,80 g, 95%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,31-8,25 (m, 2H), 7,42-7,32 (m, 4H), 7,25-7,20 (m, 2H), 6,93 (s a, 1H), 2,90 (h, J = 6,9 Hz, 1H), 1,24 (d, J = 6,9 Hz, 6H). LC/MS (ESI) calc. para C_{16}H_{16}N_{2}O_{4} (2MH)^{+}
601,2, encontrado 601,3.
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b. (4-Isopropil-fenil)-amida del ácido piperazina-1-carboxílico 
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63 
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Una mezcla de éster terc-butílico del ácido piperazina-1-carboxílico (186 mg, 1,0 mmol) y 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropil-fenil)-carbámico (300 mg, 1,0 mmol) en CH_{3}CN (1,5 ml) se calentó a reflujo durante 2 h y se concentró a presión reducida. El residuo se trató con TFA al 50%/CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y la solución se agitó durante una noche. Los disolventes orgánicos se evaporaron y el residuo se neutralizó con NH_{3} 2 M en MeOH. Después de la evaporación de los disolventes, el residuo se repartió entre EtOAc y agua y la fase orgánica se secó y se concentró. El material resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (EtOAc \rightarrow MeOH al 10%/EtOAc) para dar el compuesto del título (126 mg, 51%). ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 7,25 (d, J = 8,53 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 8,69 Hz, 2H), 3,75 (t, J = 5,17 Hz, 4H), 2,85 (sept., J = 6,91 Hz, 1H), 1,21 (d, J = 6,93 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{14}H_{22}N_{3}O (MH)^{+}248,2, encontrado 248,2.
c. (4-Isopropil-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
64
Siguiendo el procedimiento para la síntesis de 1h, usando (4-isopropil-fenil)-amida del ácido piperazina-1-carboxílico en lugar de (4-isopropoxi-fenil)-amida del ácido piperazina-1-carboxílico. ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 8,20 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,25 (d, J = 8,63 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 8,35 Hz, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,64 (m, 4H), 3,42 (m, 4H), 2,85 (sept., J = 6,92 Hz, 1H), 1,22 (d, J = 6,93 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{20}H_{28}N_{7}O_{2} (MH)^{+} 398,2, encontrado 398,3.
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Ejemplo 9 (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(etoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico (configuración anti para -C=N-O-)
65 
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a. Éster terc-butílico del ácido 4-[6-amino-5-(etoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico (configuración anti para -C=N-O-)
66
Una mezcla de éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-5-formil-pirimidin-4-il)-piperazina-1-carboxílico (135,1 mg, 0,44 mmol) y EtONH_{2}\cdotHCl (128,6 mg, 1,32 mmol) en MeOH (1,5 ml) se agitó a 90ºC durante 0,5 h y el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se repartió entre CH_{2}Cl_{2} y agua y la fase orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}). La evaporación del disolvente proporcionó un sólido de color blanco, que se muestra que es una mezcla de dos isómeros (proporción 2:1) por ^{1}H RMN (CDCl_{3}). La purificación por TLC preparativa (EtOAc como eluyente) proporcionó dos isómeros puros. El isómero principal se asigna como el isómero anti (para la configuración de -C=N-O-) (87,7 mg, 56,9%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,13 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 4,21 (c, J = 7,06 Hz, 2H), 3,54 (m, 8H), 1,47 (s, 9H), 1,33 (t,
J = 7,04 Hz, 3H); LC/MS (ESI) calc. para C_{16}H_{27}N_{6}O_{3} (MH)^{+} 351,2, encontrado 351,3.
b. Éster terc-butílico del ácido 4-[6-amino-5-(etoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico (configuración syn para -C=N-O-)
67
Se preparó como se ha descrito en el Ejemplo 9a. Corresponde al isómero minoritario y se asigna como isómero syn (para la configuración de -C=N-O-) (40 mg, 26%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,13 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 4,33 (c, J = 7,17 Hz, 2H), 3,65 (m, 4H), 3,53 (m, 4H), 1,48 (s, 9H), 1,35 (t, J = 7,04 Hz, 3H); LC/MS (ESI) calc. para C_{16}H_{27}N_{6}O_{3} (MH)^{+} 351,2, encontrado 351,3.
c. (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(etoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico (configuración anti para -C=N-O-)
68
Se trató éster terc-butílico del ácido 4-[6-amino-5-(etoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico (isómero anti(36,8 mg, 0,105 mmol) con TFA al 50%/CH_{2}Cl_{2} (1,3 ml) durante 2 h y los disolventes se retiraron a presión reducida. El material resultante se disolvió de nuevo en CH_{3}CN (2 ml) y se mezcló con 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico (36,5 mg, 0,12 mmol) y DIEA (54,3 mg, 0,42 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 95ºC durante 1 h, se concentró y el residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (EtOAc \rightarrow MeOH al 5%/EtOAc) para producir el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (14,4 mg, 32%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,20 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,23 (d, J = 8,88 Hz, 2H), 6,84 (d, J = 8,92 Hz, 2H), 6,30 (a, 1H), 4,49 (sept., J = 6,08 Hz, 1H), 4,21 (c, J = 7,05 Hz, 2H), 3,61 (m, 4H), 3,45 (m, 4H), 1,34 (t, J = 7,18 Hz, 3H), 1,32 (d, J = 6,30 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{21}H_{30}N_{7}O_{3} (MH)^{+} 428,2, encontrado 428,3.
Ejemplo 10 (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(etoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico (configuración syn para -C=N-O-)
69
Se preparó como se ha descrito en el Ejemplo 9c con la excepción de que se usó el isómero syn de éster terc-butílico del ácido 4-[6-amino-5-(etoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico en lugar de su isómero anti. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,24 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,22 (d, J = 8,97 Hz, 2H), 6,84 (d, J = 8,96 Hz, 2H), 6,22 (a, 1H), 5,60 (a, 2H), 4,48 (sept., J = 6,19 Hz, 1H), 4,33 (c, J = 7,06 Hz, 2H), 3,57 (m, 8H), 1,36 (t, J = 7,08 Hz, 3H), 1,31 (d, J = 6,05 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{21}H_{30}N_{7}O_{3} (MH)^{+} 428,2, encontrado 428,3.
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Ejemplo 11 (4-Piperidin-1-il-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(etoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico 
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70 
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Se preparó como se ha descrito en el Ejemplo 9c con la excepción de que se usó 4-nitro-fenil éster del ácido (4-piperidin-1-il-fenil)-carbámico en lugar de 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,20 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,27 (m, 4H), 7,04 (a, 2H), 6,43 (a, 1H), 4,21 (c, J = 7,07 Hz, 2H), 3,62 (m, 4H), 3,45 (t, J = 4,82 Hz, 4H), 3,13 (m, 4H), 1,54-1,84 (m, 6H), 1,34 (t, J = 7,06 Hz, 3H); LC/MS (ESI) calc. para C_{23}H_{33}N_{8}O_{2} (MH)^{+} 453,3, encontrado 453,3.
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Ejemplo 12 (6-Ciclobutoxi-piridin-3-il)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(etoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico 
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71 
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Se preparó como se ha descrito en el Ejemplo 9c con la excepción de que se usó 4-nitro-fenil éster del ácido (6-ciclobutoxi-piridin-3-il)-carbámico en lugar de 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,20 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,96 (d, J = 2,65 Hz, 1H), 7,73 (dd, J = 8,84 y 2,74 Hz, 1H), 7,26 (a, 2H), 6,66 (d, J = 9,03 Hz, 1H), 6,27 (a, 1H), 5,10 (m, 1H), 4,21 (c, J = 7,05 Hz, 2H), 3,61 (m, 4H), 3,47 (m, 4H), 2,43 (m, 2H), 2,11 (m, 2H), 1,82 (m, 1H), 1,65 (m, 1H), 1,33 (t, J = 7,07 Hz, 3 H); LC/MS (ESI) calc. para C_{21}H_{29}N_{8}O_{3} (MH)^{+} 441,2, encontrado 441,3.
Ejemplo 13 4-Amino-6-{4-[2-(4-isopropil-fenil)-acetil]-piperazin-1-il}-pirimidina-5-carbaldehído O-etil-oxima (configuración anti para -C=N-O-) 
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72 
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Se trató éster terc-butílico del ácido 4-[6-amino-5-(etoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico (una mezcla de los isómeros anti y syn, 37 mg, 0,11 mmol) con TFA al 50%/CH_{2}Cl_{2} (1,5 ml) durante 2 h y los disolventes orgánicos se retiraron a presión reducida. El material resultante se usó para la siguiente reacción de acoplamiento sin purificación. A una mezcla del material anterior y ácido (4-isopropil-fenil)-acético (18,7 mg, 0,11 mmol) en THF (3 ml) se le añadió HOBT (20,9 mg, 0,14 mmol), seguido de HBTU (51,9 mg, 0,14 mmol) y DIEA (67,9 mg, 0,53 mmol). La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche y se concentró. El residuo se sometió directamente a purificación por TLC preparativa (MeOH al 5%/EtOAc) para dar dos productos, que se mostraron como una mezcla de isómeros anti y syn en términos de la configuración de -C=N-O-). El isómero principal es un sólido de color blanco (5,3 mg, rendimiento aislado del 12,3%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,16 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,18 (m, 4H), 4,20 (c, J = 7,08 Hz, 2H), 3,75 (m, 2H), 3,74 (s, 2H), 3,57 (t, J = 5,05 Hz, 2H), 3,37 (t, J = 5,08 Hz, 2H), 3,25 (t, J = 5,06 Hz, 2H), 2,89 (sept., J = 7,25 Hz, 1H), 1,32 (t, J = 7,05 Hz, 3H), 1,23 (d, J = 6,92 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{22}H_{31}N_{6}O_{2} (MH)^{+} 411,2, encontrado 411,3.
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Ejemplo 14 4-Amino-6-{4-[2-(4-isopropil-fenil)-acetil]-piperazin-1-il}-pirimidina-5-carbaldehído O-etil-oxima (configuración syn para -C=N-O-) 
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73 
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Se preparó como se ha descrito en el Ejemplo 13. El isómero minoritario es un sólido de color blanco (1,8 mg, rendimiento aislado del 4,2%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,21 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,18 (m, 4H), 4,31 (c, J = 7,10 Hz, 2H), 3,74 (s, 2H), 3,73 (m, 2H), 3,54 (m, 2H), 3,39 (m, 2H), 3,30 (m, 2H), 2,89 (sept., J = 7,08 Hz, 1H), 1,34 (t, J = 7,07 Hz, 3H), 1,23 (d, J = 6,92 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{22}H_{31}N_{6}O_{2} (MH)^{+} 411,2, encontrado 411,3.
Ejemplo 15 (4-Morfolin-4-il-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(etoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
74
Se preparó como se ha descrito en el Ejemplo 9c con la excepción de que se usó 4-nitro-fenil éster del ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-carbámico en lugar de 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico. ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,16 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,20-7,27 (m, 4H), 6,85-6,91 (a, 2H), 6,23 (a, 1H), 4,22 (c, J = 7,08 Hz, 2H), 3,82-3,89 (m, 4H), 3,54-3,64 (m, 8H), 3,06-3,14 (m, 4H), 1,33 (t, J = 7,09 Hz, 3H). LC-MS (ESI) calc. para C_{22}H_{31}N_{8}O_{3} (MH^{+}) 455,2, encontrado 455,2.
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Ejemplo 16 (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-morfolin-4-il-2-oxo-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-pipera- zina-1-carboxílico
75
Se preparó como se ha descrito en el Ejemplo 2c con la excepción de que se usó clorhidrato de 2-aminooxi-1-morfolin-4-il-etanona en lugar de O-(2-morfolin-4-il-etil)-hidroxilamina. ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,45 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,82 (a, 2H), 7,31 (d, J = 8,95 Hz, 2H), 6,80 (d, J = 8,94 Hz, 2H), 4,91 (s, 2H), 4,50 (m, 1H), 3,55 (m, 4H), 3,32-3,46 (m, 8H), 3,31 (m, 4H), 1,22 (d, J = 6,03 Hz, 6H). LC-MS (ESI) calc. para C_{21}H_{35}N_{8}O_{5} (MH^{+}) 527,3, encontrado 527,1.
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Ejemplo 17 (6-Ciclopentiloxi-piridin-3-il)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
76
a. 2-Ciclopentiloxi-5-nitro-piridina
77
A una solución de 2-cloro-5-nitropiridina (7,01 g, 44,4 mmol) en THF (30 ml) y ciclopentanol (3,9 g, 45,3 mmol) se le añadió en porciones hidruro sódico (1,3 g, 54,2 mmol) con agitación durante \sim30 seg con refrigeración con un baño de hielo a 0ºC. Después de agitar a 0ºC durante 5 min, el baño de hielo se retiró y la reacción se agitó a ta durante 3 h. Después, se concentró al vacío y el residuo se disolvió en DCM, se lavó abundantemente con NaHCO_{3} 1 M y después se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 9:1 de Hexano:Acetato de Etilo) para obtener 2-ciclopentiloxi-5-nitro-piridina pura (0,4 g, 4%). ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 9,07 (s, 1H), 8,32 (m, 1H), 6,74 (d, 1H), 5,53 (m, 1H), 2,00 (m, 2H), 1,81 (m, 4H), 1,66 (m, 2H).
b. 6-Ciclopentiloxi-piridin-3-ilamina
78
A una solución de 2-ciclopentiloxi-5-nitro-piridina (0,3099 g, 1,49 mmol), en MeOH (2 ml) se le añadió Pd al 10%/C (90 mg). La solución se desgasificó y se mantuvo en agitación en una atmósfera de hidrógeno durante una noche. Se filtró a través de una capa de celite y el filtrado se evaporó para producir el producto deseado en forma de un aceite pardo (248 mg, rendimiento del 94%). ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,69 (d, 1H), 7,04 (m, 1H), 6,56 (d, 1H), 5,25 (m, 1H), 1,93 (m, 2H), 1,78 (m, 4H), 1,60 (m, 2H). LC/MS (ESI) calc. para C_{10}H_{14}N_{2}O 178,23, encontrado [M+41+1]^{+} 220,0.
c. 4-Nitro-fenil éster del ácido (6-ciclopentiloxi-piridin-3-il)-carbámico
79
A una solución de 6-ciclopentiloxi-piridin-3-ilamina (0,248 g, 1,39 mmol) en THF (2 ml) se le añadió en porciones cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,280 g, 1,39 mmol). Después de agitar a ta durante 1 h, se formó un precipitado pesado en la capa orgánica. La filtración de la capa orgánica proporcionó el compuesto del título en forma de un sólido de color rosa claro (0,368 g, 77%). ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 11,1 (s, 1H), 9,11 (s, 1H), 9,04 (d, 1H), 8,26 (d, 2H), 7,40 (d, 2H), 7,14 (d, 1H), 5,36 (m, 1H), 2,11 (m, 2H), 1,97 (m, 2H), 1,84 (m, 2H), 1,71 (m, 2H).
d. (6-Ciclopentiloxi-piridin-3-il)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
80
Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 6d con la excepción de que se usó 4-nitro-fenil éster del ácido (6-ciclopentiloxi-piridin-3-il)-carbámico en lugar de 4-nitro-fenil éster del ácido (6-ciclociclobutoxi-piridin-3-il)-carbámico. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,20 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,97 (d, J = 2,74 Hz, 1H), 7,71 (dd, J = 8,87 y 2,82 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 8,87 Hz, 1H), 6,31 (a, 1H), 5,30 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,61 (m, 4H), 3,45 (m, 4H), 1,93 (m, 2H), 1,78 (m, 4H), 1,60 (m, 2H); LC/MS (ESI) calc. para C_{21}H_{29}N_{8}O_{3} (MH)^{+} 441,2, encontrado 441,3.
Ejemplo 18 4-Pirrolidin-1-il-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico 
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81 
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a. Clorhidrato de 4-nitro-fenil éster del ácido (4-pirrolidin-1-il-fenil)-carbámico 
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82 
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A una solución agitada de 4,9 g (30,4 mmol) de 4-pirrolidin-1-il-fenilamina en 70 ml de THF anhidro a temperatura ambiente se le añadió gota a gota una solución de 6,4 g (32 mmol) de cloroformiato de 4-nitrofenilo en 16 ml de THF anhidro. Después de que se completara la adición, la mezcla se agitó durante 1 h y después se filtró. El precipitado se lavó primero con THF anhidro (2 x 10 ml) y después con DCM anhidro (3 x 10 ml) y se secó al vacío para producir 10 g de un sólido de color blanquecino. ^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD): 10,39 (s, 1H), 8,32 (d, 2H), 7,73 (d, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,48 (d, 2H), 3,86-3,68 (s a, 4H), 2,35-2,24 (s a, 4H). LC/MS (ESI): 328 (MH)^{+}.
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b. (4-Pirrolidin-1-il-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico 
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83 
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1e con la excepción de que se usó 4-nitro-fenil éster del ácido (4-pirrolidin-1-il-fenil)-carbámico en lugar de 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico. ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 8,20 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,11 (d, J = 8,77 Hz, 2H), 6,53 (d, J = 8,91 Hz, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,61 (m, 4H), 3,42 (m, 4H), 3,24 (m, 4H), 2,01 (m, 4H); LC/MS (ESI) calc. para C_{21}H_{29}N_{8}O_{2} (MH)^{+} 425,2, encontrado 425,1.
Ejemplo 19 (4-Ciclohexil-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
84
a. 4-Nitro-fenil éster del ácido (4-ciclohexil-fenil)-carbámico
85
Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 8a con la excepción de que se usó 4-ciclohexilanilina en lugar de 4-isopropilanilina. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 10,37 (a, 1H), 8,30 (d, J = 9,30 Hz, 2H), 7,52 (d, J = 9,00 Hz, 2H), 7,41 (d, J = 8,10 Hz, 2H), 7,18 (d, J = 8,70 Hz, 2H), 1,18-1,82 (11H).
b. (4-Ciclohexil-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
86
Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1e con la excepción de que se usó 4-nitro-fenil éster del ácido (4-ciclohexil-fenil)-carbámico en lugar de 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,20 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,24 (d, J = 8,55 Hz, 2H), 7,13 (d, J = 8,50 Hz, 2H), 6,35 (a, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,60 (m, 4H), 3,44 (m, 4H), 2,45 (m, 1H), 1,83 (m, 4H), 1,73 (m, 1H), 1,37 (m, 4H), 1,24 (m, 1H); LC/MS (ESI) calc. para C_{2}3H_{32}N_{7}O_{2} (MH)^{+} 438,3, encontrado 438,3.
Ejemplo 20 (4-Cloro-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
87
Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1e con la excepción de que se usó isocianato de 4-clorofenilo en lugar de 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,20 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,30 (d, J = 9,00 Hz, 2H), 7,25 (d, J = 9,00 Hz, 2H), 6,42 (a, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,61 (m, 4H), 3,46 (m, 4H); LC/MS (ESI) calc. para C_{17}H_{21}ClN_{7}O_{2} (MH)^{+} 390,1, encontrado 390,2.
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Ejemplo 21 (4-Fenoxi-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
88
Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1e con la excepción de que se usó isocianato de 4-fenoxifenilo en lugar de 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,20 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,31 (m, 4H), 7,07 (m, 1H), 6,97 (m, 4H), 6,35 (a, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,62 (m, 4H), 3,47 (m, 4H); LC/MS (ESI) calc. para C_{23}H_{26}N_{7}O_{3} (MH)^{+} 448,2, encontrado 448,2.
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Ejemplo 22 (4-Dimetilamino-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
89
Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1e con la excepción de que se usó isocianato de 4-N,N-dimetilaminofenilo en lugar de 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,21 (s, 1H), 8,14 (s; 1H), 7,18 (d, J = 9,04 Hz, 2H), 6,70 (d, J = 9,06 Hz, 2H), 6,16 (a, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,59 (m, 4H), 3,45 (m, 4H), 2,91 (s, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{19}H_{27}N_{8}O_{2} (MH)^{+} 399,2, encontrado 399,3.
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Ejemplo 23 (4-Isopropil-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-piperazina-1-carboxílico
90
Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1e con la excepción de que se usó isocianato de 4-isopropilfenilo en lugar de 4-nitro-fenil éster del ácido (4-isopropoxi-fenil)-carbámico. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,21 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,25 (d, J-8,44 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 8,38 Hz, 2H), 6,31 (a, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,61 (m, 4H), 3,45 (m, 4H), 2,87 (m, 1H), 1,22 (d, J = 6,92 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{20}H_{28}N_{7}O_{2} (MH)^{+} 398,2, encontrado 398,3.
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Ejemplo 24 (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-[6-amino-5-(metoxiimino-metil)-pirimidin-4-il]-[1,4]diazepano-1-carboxílico 
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91 
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1e con la excepción de que se usó 4-amino-6-[1,4]diazepan-1-il-pirimidina-5-carbaldehído O-metil-oxima en lugar de 4-amino-6-piperazin-1-il-pirimidina-5-carbaldehído O-metil-oxima. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,09 (2H), 7,20 (d, J = 8,99 Hz, 2H), 6,82 (d, J = 8,97 Hz, 2H), 6,29 (a, 1H), 4,47 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,79 (m, 2H), 3,75 (m, 2H), 3,68 (t, J = 5,57 Hz, 2H), 3,57 (t, J = 6,01 Hz, 2H), 2,06 (m, 2H), 1,30 (d, J = 6,06 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{21}H_{30}N_{7}O_{3} (MH)^{+} 428,2, encontrado 428,3.
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Ejemplo 25 (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-amino-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-piperazina-1-carboxílico 
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92 
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 2e con la excepción de que se usó diclorhidrato de O-(2-amino-etil)-hidroxilamina en lugar de diclorhidrato de O-(2-morfolin-4-il-etil)-hidroxilamina. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,20 (2H), 7,22 (d, J = 8,96 Hz, 2H), 6,83 (d, J = 8,99 Hz, 2H), 6,32 (a, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,19 (t, J = 5,18 Hz, 2H), 3,60 (m, 4H), 3,45 (m, 4H), 3,04 (t, J = 5,17 Hz, 2H), 1,31 (d, J = 6,06 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{21}H_{31}N_{8}O_{3} (MH)^{+} 443,2, encontrado 443,3.
Ejemplo 26 (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-(6-amino-5-{[2-(3-etil-ureido)-etoxiimino]-metil}-pirimidin-4-il)-piperazi- na-1-carboxílico 
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93 
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A una solución de (4-isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-amino-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-piperazina-1-carboxílico (44,7 mg, 0,101 mmol) en CH_{3}CN (1,5 ml) se le añadió isocianato de etilo (10,8 mg, 0,152 mmol). La mezcla se agitó durante 1 h y los disolventes se evaporaron. El residuo se lavó con agua y MeOH y se secó al vacío para producir el producto deseado en forma de un sólido de color blanco. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 8,40 (a, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,45 (a, 2H), 7,28 (d, J = 9,03 Hz, 2H), 6,77 (d, J = 9,08 Hz, 2H), 5,92 (t,
J = 5,99 Hz, 1H), 5,85 (t, J = 5,02 Hz, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,07 (t, J = 5,53 Hz, 2H), 3,22-3,54 (10H), 2,97 (m, 2H), 1,20 (d, J = 6,02 Hz, 6H), 0,94 (t, J = 7,14 Hz, 3H); LC/MS (ESI) calc. para C_{24}H_{36}N_{9}O_{4} (MH)^{+} 514,3, encontrado
514,3.
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Ejemplo 27 (4-Isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-metanosulfonilamino-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-pipe- razina-1-carboxílico 
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94 
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A una solución de (4-isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-amino-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-piperazina-1-carboxílico (70,8 mg, 0,16 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (2 ml) se le añadieron MsCl (45,8 mg, 0,4 mmol) y DIEA (77,6 mg, 0,6 mmol). La reacción se agitó durante 1 h y se repartió entre CH_{2}Cl_{2} y agua. Los extractos de CH_{2}Cl_{2} se evaporaron y el residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice (MeOH al 5%/EtOAc como eluyente) para producir el producto deseado. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,20 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,24 (d, J = 8,92 Hz, 2H), 6,83 (d, J = 8,99 Hz, 2H), 6,45 (a, 1H), 5,23 (m, 1H), 4,47 (m, 1H), 4,29 (t, J = 5,36 Hz, 2H), 3,60 (m, 4H), 3,47 (m, 4H), 3,32 (m, 2H), 3,00 (s, 3H), 1,30 (d, J = 6,05 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{22}H_{33}N_{8}O_{4}S (MH)^{+} 521,2, encontrado 521,3.
Ejemplo 28 (4-Pirrolidin-1-il-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-morfolin-4-il-2-oxo-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-pi- perazina-1-carboxílico
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 2e con la excepción de que se usó clorhidrato de 2-aminooxi-1-morfolin-4-il-etanona en lugar de diclorhidrato de O-(2-morfolin-4-il-etil)-hidroxilamina. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 8,26 (a, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,60 (a, 2H), 7,19 (d, J = 8,97 Hz, 2H), 6,48 (d, J = 9,59 Hz, 2H), 4,88 (s, 2H), 3,54 (m, 8H), 3,30-3,47 (8H), 3,16 (m, 4H), 1,92 (m, 4H); LC/MS (ESI) calc. para C_{26}H_{36}N_{9}O_{4} (MH)^{+} 538,3, encontrado 538,3.
Ejemplo 29 (4-Morfolin-4-il-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-morfolin-4-il-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-piperazina-1-carboxílico
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 5b con la excepción de que se usó diclorhidrato de O-(2-morfolin-4-il-etil)-hidroxilamina en lugar de clorhidrato de metoxiamina. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,21 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,25 (d, J = 9,07 Hz, 2H), 6,88 (d, J = 9,07 Hz, 2H), 6,22 (a, 1H), 4,30 (t, J = 5,84 Hz, 2H), 3,86 (t, J = 4,66 Hz, 4H), 3,74 (t, J = 4,60 Hz, 4H), 3,60 (m, 4H), LC/MS (ESI) calc. para C_{26}H_{38}N_{9}O_{4} (MH)^{+} 540,3, encontrado 540,3.
Ejemplo 30 (6-Ciclobutoxi-piridin-3-il)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-morfolin-4-il-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-pipe- razina-1-carboxílico
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 6d con la excepción de que se usó diclorhidrato de O-(2-morfolin-4-il-etil)-hidroxilamina en lugar de clorhidrato de metoxiamina. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,21 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,96 (d, J = 2,68 Hz, 1H), 7,74 (dd, J = 8,83 y 2,79 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 9,16 Hz, 1H), 6,24 (a, 1H), 5,11 (m, 1H), 4,30 (t, J = 5,64 Hz, 2H); 3,74 (m, 4H), 3,61 (m, 4H), 3,45 (m, 4H), 2,73 (t, J = 5,71 Hz, 2H), 2,54 (m, 4H), 2,44 (m, 2H), 2,12 (m, 2H), 1,59-1,82 (2H); LC/MS (ESI) calc. para C_{25}H_{36}N_{9}O_{4} (MH)^{+} 526,3, encontrado 526,2.
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Ejemplo 31 (6-Ciclobutoxi-piridin-3-il)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-amino-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-piperazina-1-carboxílico 
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 6d con la excepción de que se usó diclorhidrato de O-(2-amino-etil)-hidroxilamina en lugar de clorhidrato de metoxiamina. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,21 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,96 (d, J = 2,26 Hz, 1H), 7,74 (dd, J = 8,83 y 2,78 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 8,86 Hz, 1H), 6,31 (a, 1H), 5,10 (m, 1H), 4,20 (t, J = 5,22 Hz, 2H), 3,61 (m, 4H), 3,45 (m, 4H), 3,04 (m, 2H), 2,42 (m, 2H), 2,11 (m, 2H), 1,59-1,87 (2H); LC/MS (ESI) calc. para C_{21}H_{30}N_{9}O_{3} (MH)+ 456-2, encontrado 456,2.
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Ejemplo 32 (4-Morfolin-4-il-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-amino-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-piperazina-1-carboxílico 
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 5b con la excepción de que se usó diclorhidrato de O-(2-amino-etil)-hidroxilamina en lugar de clorhidrato de metoxiamina. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,21 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,25 (d, J = 9,05 Hz, 2H), 6,87 (d, J = 9,05 Hz, 2H), 6,23 (a, 1H), 4,20 (t, J = 5,25 Hz, 2H), 3,86 (t, J = 4,69 Hz, 4H), 3,62 (m, 4H), 3,46 (m, 4H), 3,11 (t, J = 4,86 Hz, 4H), 3,04 (t, J = 5,62 Hz, 2H); LC/MS (ESI) calc. para C_{22}H_{32}N_{9}O_{3} (MH)^{+} 470,3, encontrado 470,2.
Ejemplo 33 (6-Ciclobutoxi-piridin-3-il)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-metanosulfonilamino-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-piperazina-1-carboxílico
100
Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 27 con la excepción de que se usó (6-ciclobutoxi-piridin-3-il)-amida del ácido 4-(6-amino-5-formil-pirimidin-4-il)-piperazina-1-carboxílico en lugar de (4-isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-(6-amino-5-formil-pirimidin-4-il)-piperazina-1-carboxílico. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,20 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,99 (d, J - 3,19 Hz, 1H), 7,74 (66, J = 8,82 y 2,78 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 8,83 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 5,28 (a, 1H), 5,08 (m, 1H), 4,30 (t, J = 4,68 Hz, 2H), 3,61 (m, 4H), 3,45 (m, 6H), 3,00 (s, 3H), 2,42 (m, 2H), 2,11 (m, 2H), 1,59-1,87 (2H); LC/MS (ESI) calc. para C_{22}H_{32}N_{9}O_{5}S (MH)^{+} 534,2, encontrado 534,2.
Ejemplo 34 (4-Pirrolidin-1-il-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-amino-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-piperazina-1-carboxílico
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 2e con la excepción de que se usó diclorhidrato de O-(2-amino-etil)-hidroxilamina en lugar de diclorhidrato de O-(2-morfolin-4-il-etil)-hidroxilamina. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 8,21 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,16 (d, J = 8,85 Hz, 2H), 6,51 (d, J = 8,89 Hz, 2H), 4,19 (t, J = 5,08 Hz, 2H), 3,58 (m, 4H), 3,45 (m, 4H), 3,26 (m, 4H), 3,04 (t, J = 5,30 Hz, 2H), 1,99 (m, 4H); LC/MS (ESI) calc. para C_{22}H_{32}N_{9}O_{2} (MH)^{+} 454,3, encontrado 454,2.
Ejemplo 35 (4-Pirrolidin-1-il-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-metanosulfonilamino-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-piperazina-1-carboxílico
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 27 con la excepción de que se usó (4-pirrolidin-1-il-fenil)-amida del ácido 4-(6-amino-5-formil-pirimidin-4-il)-piperazina-1-carboxílico en lugar de (4-isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-(6-amino-5-formil-pirimidin-4-il)-piperazina-1-carboxílico. ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 8,26 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,11 (d, J = 8,94 Hz, 2H), 6,53 (d, J = 9,00 Hz, 2H), 4,26 (t, J = 5,22 Hz, 2H), 3,62 (m, 4H), 3,50 (m, 2H), 3,44 (m, 4H), 3,24 (m, 4H), 2,97 (s, 3H), 2,00 (m, 4H); LC/MS (ESI) calc. para C_{23}H_{34}N_{9}O_{4}S (MH)^{+} 532,2, encontrado 532,1.
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Ejemplo 36 (4-Pirrolidin-1-il-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-morfolin-4-il-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-piperazi- na-1-carboxílico 
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 2e con la excepción de que se usó (4-pirrolidin-1-il-fenil)-amida del ácido 4-(6-amino-5-formil-pirimidin-4-il)-piperazina-1-carboxílico en lugar de (4-isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-(6-amino-5-formil-pirimidin-4-il)-piperazina-1-carboxílico. ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 8,24 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,11 (d, J = 8,96 Hz, 2H), 6,53 (d, J = 8,97 Hz, 2H), 4,34 (t, J = 5,53 Hz, 2H), 3,71 (t, J = 4,86 Hz, 4H), 3,62 (m, 4H), 3,43 (m, 4H), 3,24 (m, 4H), 2,75 (t, J = 5,70 Hz, 2H), 2,57 (m, 4H), 2,01 (m, 4H); LC/MS (ESI) calc. para C_{26}H_{38}N_{9}O_{3} (MH)^{+} 524,3, encontrado 524,3.
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Ejemplo 37 (4-Isopropil-fenil)-amida del ácido 4-{6-amino-5-[(2-morfolin-4-il-etoxiimino)-metil]-pirimidin-4-il}-piperazina-1-carboxílico 
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Se preparó esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 2e con la excepción de que se usó (4-isopropil-fenil)-amida del ácido 4-(6-amino-5-formil-pirimidin-4-il)-piperazina-1-carboxílico en lugar de (4-isopropoxi-fenil)-amida del ácido 4-(6-amino-5-formil-pirimidin-4-il)-piperazina-1-carboxílico. ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 8,25 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,26 (d, J = 8,57 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 8,43 Hz, 2H), 4,37 (t, J = 6,36 Hz, 2H), 3,74 (t, J = 4,75 Hz, 4H), 3,65 (m, 4H), 3,44 (m, 4H), 2,84 (m, 3H), 2,66 (m, 4H), 1,22 (d, J = 6,92 Hz, 6H); LC/MS (ESI) calc. para C_{25}H_{37}N_{8}O_{3} (MH)^{+}
497,2, encontrado 497,3.
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Actividad biológica Ensayos In Vitro
Se realizaron los siguientes ensayos representativos in vitro para determinar las actividades biológicas de compuestos dentro del alcance de la invención. Estos se proporcionan para ilustrar la invención de una forma no limitante.
La inhibición de la actividad enzimática de FLT3, la proliferación de MV4-11 y la fosforilación de Baf3-FLT3 ilustran la inhibición específica de la enzima FLT3 y los procesos celulares que son dependientes de la actividad de FLT3. La inhibición de la proliferación celular de Baf3 se usa como un ensayo de la citotoxicidad independiente de FLT3, c-Kit y TrkB de compuestos dentro del alcance de la invención. Todos los ejemplos en este documento muestran inhibición significativa y específica de la quinasa FLT3 y de respuestas celulares dependientes de FLT3. Los ejemplos en este documento también muestran la inhibición específica de las quinasas TrkB y c-kit en un ensayo de actividad enzimática. Los compuestos de la presente invención también son permeables a la célula.
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Ensayo Quinasa de Polarización de Fluorescencia de FLT3
Para determinar la actividad de los compuestos de la presente invención en un ensayo quinasa in vitro, se realizó la inhibición del dominio de quinasa aislado del receptor FLT3 humano (a.a. 571-993) usando el siguiente protocolo de polarización de fluorescencia (FP). El ensayo FP FLT3 utiliza el fosfopéptido marcado con fluoresceína y el anticuerpo antifosfotirosina incluido en el kit de Fosfo-Tirosina Quinasa Panvera (Verde) suministrado por Invitrogen. Cuando el FLT3 fosforila el polyGlu_{4}Tyr, el polyGlu_{4}Tyr fosforilado desplaza el fosfopéptido marcado con fluoresceína desde el anticuerpo antifosfotirosina, disminuyendo de este modo el valor de FP. La reacción quinasa de FLT3 se incuba a temperatura ambiente durante 30 minutos en las siguientes condiciones: FLT3 571-993 10 nM, 20 \mug/ml de poly Glu_{4}Tyr, ATP 150 \muM, MgCl_{2} 5 mM y compuesto al 1% en DMSO. La reacción quinasa se detiene con la adición de EDTA. El fosfopéptido marcado con fluoresceína y el anticuerpo anti-fosfotirosina se añaden y se incuban durante 30 minutos a temperatura ambiente.
Todos los puntos de datos son un promedio de muestras triplicadas. Se realizó el análisis de los datos de inhibición y CI_{50} con GraphPad Prism usando una regresión no lineal ajustada con una ecuación de dosis respuesta (pendiente variable) de múltiples parámetros y sigmoidal. La CI_{50} para la inhibición de quinasa representa la dosis de un compuesto que da como resultado una inhibición de la actividad quinasa del 50% en comparación con el control con vehículo DMSO.
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Ensayo Quinasa de Polarización de Fluorescencia de c-kit
Los compuestos de la presente invención también son inhibidores específicos de c-kit. La selección de compuestos preferidos de Fórmula I para uso como inhibidores c-kit se realizó de la siguiente manera usando un ensayo quinasa in vitro para medir la inhibición del dominio de quinasa aislado del receptor c-kit humano en un protocolo de polarización de fluorescencia (FP). El ensayo de c-kit utilizó el fosfopéptido marcado con fluoresceína y el anticuerpo anti-fosfotirosina incluido en el kit de Fosfo-Tirosina Quinasa Panvera (Verde) suministrado por Invitrogen. Cuando el c-kit fosforiló el poly Glu_{4}Tyr, el poly Glu_{4}Tyr fosforilado desplazó el fosfopéptido marcado con fluoresceína desde el anticuerpo anti-fosfotirosina, disminuyendo de ese modo el valor FP. La reacción quinasa de c-kit se incubó a temperatura ambiente durante 45 minutos en las siguientes condiciones: c-kit (ProQinase, lote SP00545) 1 nM, 100 \mug/ml de poly Glu_{4}Tyr, ATP 50 \muM, MgCl_{2} 5 mM, DTT 1 mM, Tween-20 al 0,01%, DMSO o compuesto al 1% en Hepes 100 nM, pH 7,5. La reacción quinasa se detuvo con la adición de EDTA. El fosfopéptido marcado con fluoresceína y el anticuerpo anti-fosfotirosina se añadieron y se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente y se leyó la polarización de fluorescencia. Los puntos de datos fueron un promedio de muestras triplicadas. El análisis de los datos de inhibición y CI_{50} se realizó con GraphPad Prism usando una regresión no lineal ajustada con una ecuación de dosis respuesta (pendiente variable) de múltiples parámetros y sigmoidal. La CI_{50} para la inhibición de quinasa representa la dosis de un compuesto que dio como resultado una inhibición de la actividad quinasa del 50% en comparación con el control con vehículo DMSO.
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Ensayo Quinasa de Polarización de Fluorescencia de Trk B (Datos de CI_{50} de TrkB)
Los compuestos de la presente invención también son inhibidores específicos de TrkB. La selección de los compuestos preferidos de Fórmula I para uso como inhibidores de TrkB se realizó de la siguiente manera. El ensayo de TrkB utilizó el fosfopéptido marcado con fluoresceína y el anticuerpo anti-fosfotirosina incluido en el kit de Fosfo-Tirosina Quinasa Panvera (Verde) suministrado por Invitrogen. Cuando el TrkB fosforiló el poly Glu_{4}Tyr, el poly Glu_{4}Tyr fosforilado desplazó el fosfopéptido marcado con fluoresceína desde el anticuerpo anti-fosfotirosina, disminuyendo de ese modo el valor de FP. La reacción quinasa de TrkB se incubó a temperatura ambiente durante 30 minutos en las siguientes condiciones: TrkB 50 nM (Upstate, Nº de catálogo 14-507M), 20 \mug/ml de poly Glu_{4}Tyr, ATP 150 \muM, MgCl_{2} 5 mM, compuesto al 1% en DMSO. La reacción quinasa se detuvo con la adición de EDTA. El fosfopéptido marcado con fluoresceína y el anticuerpo anti-fosfotirosina se añadieron y se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente. Los puntos de datos fueron un promedio de muestras triplicadas. El análisis de los datos de inhibición y CI_{50} se realizó con GraphPad Prism usando una regresión no lineal ajustada con una ecuación de dosis respuesta (pendiente variable) de múltiples parámetros y sigmoidal. La CI_{50} para la inhibición de quinasa representa la dosis de un compuesto que dio como resultado una inhibición de la actividad quinasa del 50% en comparación con el control con vehículo DMSO.
Inhibición de la Proliferación Celular de MV4-11 y Baf3
Para evaluar la potencia celular de los compuestos de la presente invención, se midió la inhibición de crecimiento específico de FLT3 en la línea celular leucémica MV4-11 (Colección Americana de Cultivos Tipo Número: CRL-9591). Las células MV4-11 se obtienen de un paciente con leucemia mielomonocítica aguda infantil con una translocación en 11q23 que da como resultado un reordenamiento genético MLL y que contiene una mutación FLT3-ITD (AML subtipo M4) (1,2). Las células MV4-11 no pueden crecer y sobrevivir sin FLT3ITD activo.
La línea celular de linfoma de células b murinas, dependiente de IL-3, Baf3, se usó como un control para confirmar la selectividad de los compuestos de la presente invención mediante la medición de la inhibición de crecimiento inespecífica por los compuestos de la presente invención.
Para medir la inhibición de la proliferación mediante los compuestos de ensayo, se usó el reactivo CellTiterGlo (Promega) basado en luciferasa, que cuantifica el número total de células basándose en la concentración de ATP celular total. Las células se siembran en placas a 10.000 células por pocillo en 100 \mul de medio RPMI que contiene pen/estrep, FBS al 10% y 1 ng/ml de GM-CSF o 1 ng/ml de IL-3 para las células MV4-11 y Baf3 respectivamente.
Se añaden diluciones del compuesto o DMSO (vehículo del control) al 1% a las células y se deja que las células crezcan durante 72 horas en condiciones de crecimiento celular convencionales (37ºC, CO_{2} al 5%). Para las mediciones de actividad en células MV4-11 cultivadas en plasma al 50%, las células se sembraron en placas a 10.000 células por pocillo en una mezcla 1:1 de medio de cultivo y plasma humano (volumen final de 100 \mul). Para medir el crecimiento celular total se añadió un volumen igual de reactivo CellTiterGlo a cada pocillo, de acuerdo con las instrucciones del fabricante y se cuantificó la luminiscencia. El crecimiento celular total se cuantificó como la diferencia en los recuentos luminiscentes (unidades de luz relativas, RLU) del número de células en el Día 0 en comparación con el número de células totales en el Día 3 (72 horas de crecimiento y/o tratamiento de compuesto). Una inhibición del crecimiento del cien por ciento se define como una RLU equivalente a la lectura del Día 0. La inhibición del cero por ciento se definió como la señal RLU para el control con vehículo DMSO en el Día 3 de crecimiento. Todos los puntos de datos son un promedio de muestras triplicadas. La CI_{50} para la inhibición del crecimiento representa la dosis de un compuesto que da como resultado una inhibición del crecimiento celular total del 50% en el día 3 del control con vehículo DMSO. El análisis de los datos de inhibición y IC_{50} se realizó con GraphPad Prism usando una regresión no lineal ajustada con una ecuación de dosis respuesta (pendiente variable) de múltiples parámetros y
sigmoidal.
Las células MV4-11 expresan la mutación de duplicación en tandem interna de FLT3 y, por tanto, son completamente dependientes de la actividad de FLT3 para el crecimiento. Se prevé que una actividad fuerte contra las células MV4-11 es una cualidad deseable de la invención. Por el contrario, la citoquina IL-3 dirige la proliferación de células Baf3 y por tanto se usa como un control de toxicidad inespecífica para los compuestos de ensayo. Todos los ejemplos de compuestos en la presente invención mostraron una inhibición de < del 50% a una dosis de 3 \muM (los datos no se incluyen), sugiriendo que los compuestos no son citotóxicos y tienen buena selectividad para FLT3.
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Elisa del Receptor FLT3 Basado en Células
Se midió la inhibición celular específica de la fosforilación de FLT3 de tipo silvestre inducida por ligando FLT de la siguiente manera: se obtuvieron células FLT3 Baf3 que expresan excesivamente el receptor FLT3 del Dr. Michael Heinrich (Oregon Health and Sciences University). Las líneas celulares Baf3 FLT3 se crearon mediante la transfección estable de células Baf3 parentales (una línea de linfoma de células B murina dependiente de la citoquina IL-3 para el crecimiento) con FLT3 de tipo silvestre. Las células se seleccionaron por su capacidad para crecer en la ausencia de IL-3 y en presencia del ligando FLT3.
Las células Baf3 se mantuvieron en RPMI 1640 con FBS al 10%, pen/estrep y 10 ng/ml de ligando FLT a 37ºC y CO_{2} al 5%. Para medir la inhibición directa de la actividad del receptor FLT3 de tipo silvestre y la fosforilación se desarrolló un método de ELISA de tipo sándwich similar a los que se desarrollaron para otros RTK (3,4). Se sembraron en placas 200 \mul de células Baf3 FLT3 (1 x 10^{6}/ml) en placas de 96 pocillos en RPMI 1640 con suero al 0,5% y 0,01 ng/ml de IL-3 durante 16 horas antes de la incubación durante 1 hora con compuesto o vehículo DMSO. Las células se trataron con 100 ng/ml de ligando de Flt (R&D Systems Nº de Catálogo 308-FK) durante 10 minutos a 37ºC. Las células se aglomeraron, se lavaron y se lisaron en 100 \mul de tampón de lisis (Hepes 50 mM, NaCl 150 mM, glicerol al 10%, Triton-X-100 al 1%, NaF 10 mM, EDTA 1 mM, MgCl_{2} 1,5 mM y pirofosfato de sodio 10 mM) complementado con inhibidores de fosfatasa (Sigma Nº de Catálogo P2850) y de proteasa (Sigma Nº de Catálogo P8340). Los lisados se aclararon por centrifugación a 1000 x g durante 5 minutos a 4ºC. Los lisados celulares se transfirieron a placas de microtitulación de 96 pocillos de pared blanca (Costar Nº 9018) recubiertas con 50 ng/pocillo de anticuerpo anti-FLT3 (Santa Cruz Nº de Catálogo sc-480) y se bloquearon con reactivo SeaBlock (Pierce Nº de Catálogo 37527). Los lisados se incubaron a 4ºC durante 2 horas. Las placas se lavaron 3 veces con 200 \mul/pocillo de solución salina tamponada con fosfato/Triton-X-100 al 0,1%. Después las placas se incubaron con una dilución 1:8000 de anticuerpo anti-fosfotirosina conjugado con HRP (Clone 4G10, Upstate Biotechnology Nº de Catálogo 16-105) durante 1 hora a temperatura ambiente. Las placas se lavaron tres veces con 200 \mul/pocillo de solución salina tamponada con fosfato/Triton X-100 al 0,1%. Se realizó la detección de señal con reactivo Super Signal Pico (Pierce Nº de Catálogo 37070) de acuerdo con las instrucciones del fabricante con un luminómetro de microplacas Berthold. Todos los puntos de datos son promedios de muestras triplicadas. Las unidades de luz relativas totales (RLU) de fosforilación de FLT3 estimulada por ligando Flt en presencia del control con DMSO al 0,1% se definió como una inhibición del 0% y la inhibición del 100% fue la RLU total del lisado en el estado basal. Los análisis de datos de inhibición y CI_{50} se realizaron con GraphPad Prism usando una regresión no lineal ajustada con una ecuación de dosis respuesta (pendiente variable) de múltiples parámetros y sigmoidal.
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Referencias de procedimientos biológicos
1.
Drexler HG. The Leukemia-Lymphoma Cell Line Factsbook Academic Pres: San Diego, CA, 2000.
2.
Quentmeier H, Reinhardt J, Zaborski M, Drexler HG. FLT3 mutations in acute myeloid leukemia cell lines. Leukemia. Enero de 2003; 17: 120-124.
3.
Sadick, MD, Sliwkowski, MX, Nuijens, A, Bald, L, Chiang, N, Lofgren, JA, Wong WLT. Analysis of Heregulin-Induced ErbB2 Phosphorylation with a High-Throughput Kinase Receptor Activation Enzyme-Linked Immunsorbent Assay, Analytical Biochemistry. 1996; 235: 207-214.
4.
Baumann CA, Zeng L, Donatelli RR, Maroney AC. Development of a quantitative, high-throughput cell-based enzyme-linked immunosorbent assay for detection of colony-stimulating factor-1 receptor tyrosine kinase inhibitors. J Biochem Biophys Methods. 2004; 60: 69-79.
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Datos biológicos Datos biológicos para FLT3
La actividad de los compuestos representativos de la presente invención se presenta en las Tablas a continuación. Todas las actividades son en \muM y tienen las siguientes incertidumbres: FLT3-quinasa: \pm10%; MV4-11 y Baf3-FLT3: \pm20%.
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Datos Biológicos para TrkB
La actividad de los compuestos representativos de la presente invención se presenta en las Tablas a continuación. Todas las actividades son en \muM y tienen las siguientes incertidumbres: CI_{50} TrkB: \pm 10%.
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Datos Biológicos para c-kit
La actividad de los compuestos representativos de la presente invención se presenta en las Tablas a continuación. Todas las actividades son en nM y tienen las siguientes incertidumbres: CI_{50} C-kit: \pm 10%.
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Métodos de tratamiento/prevención
En otro aspecto de esta invención, los compuestos de la invención se pueden usar para inhibir la actividad tirosina quinasa, que incluye la actividad Flt3 y/o actividad c-kit y/o actividad TrkB o reducir la actividad quinasa, que incluye actividad Flt3 y/o actividad c-kit y/o actividad TrkB, en una célula o un sujeto o para tratar trastornos relacionados con la actividad quinasa de FLT3, y/o c-kit y/o TrkB o expresión en un sujeto.
En una realización de este aspecto, la presente invención proporciona compuestos para reducir o inhibir la actividad quinasa de FLT3 y/o c-kit y/o TrkB en una célula. La presente invención también proporciona compuestos para reducir o inhibir la actividad quinasa FLT3 y/o c-kit y/o TrkB en un sujeto. También se describe un método para inhibir la proliferación celular en una célula que comprende la etapa de contactar la célula con un compuesto de Fórmula I.
La actividad quinasa de FLT3, c-kit o TrkB en una célula o un sujeto se puede determinar mediante procedimientos bien conocidos en la técnica, tales como el ensayo quinasa FLT3 descrito en este documento, el ensayo quinasa c-kit descrito en este documento y el ensayo quinasa TrkB descrito en este documento.
El término "sujeto" como se usa en este documento, se refiere a un animal, preferiblemente un mamífero, lo más preferible es que sea un ser humano, que ha sido el objeto del tratamiento, la observación o el experimento.
La expresión "contactar" como se usa en este documento, se refiere a la adición de un compuesto a células para que las células absorban ese compuesto.
También se describen métodos profilácticos y terapéuticos para tratar un sujeto con riesgo de (o susceptible a) desarrollar un trastorno proliferativo celular o un trastorno relacionado con FLT3 y/o c-kit y/o TrkB.
En un ejemplo, la invención proporciona composiciones farmacéuticas para prevenir un trastorno relacionado con FLT3 y/o c-kit y/o TrkB en un sujeto, comprendiendo dichas composiciones farmacéuticas un compuesto de Fórmula I y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La administración de dicho agente profiláctico puede ocurrir antes de la manifestación de los síntomas característicos del trastorno proliferativo celular o trastorno relacionado con FLT3 y/o c-kit y/o TrkB, para prevenir o, alternativamente, retardar la progresión de una enfermedad o trastorno.
En otro ejemplo, la invención se refiere a composiciones farmacéuticas para tratar en un sujeto un trastorno relacionado con FLT3 y/o c-kit y/o TrkB comprendiendo dichas composiciones farmacéuticas un compuesto de Fórmula I y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La administración de dicho agente terapéutico puede ocurrir al mismo tiempo que la manifestación de síntomas característicos del trastorno, para que dicho agente terapéutico sirva como terapia para compensar el trastorno proliferativo celular o trastornos relacionados con FLT3 y/o c-kit y/o TrkB.
La expresión "cantidad profilácticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un compuesto activo o agente farmacéutico que inhibe o retarda la aparición de un trastorno en un sujeto que un investigador, veterinario, doctor u otro clínico ha buscado.
La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" como se usa en este documento, se refiere a una cantidad de un compuesto activo o agente farmacéutico que provoca la respuesta biológica o medicinal en un sujeto que busca un investigador, veterinario, doctor u otro clínico, que incluye el alivio de los síntomas de la enfermedad o trastorno que se está tratando.
En la técnica se conocen métodos para determinar las dosis terapéuticamente y profilácticamente eficaces para la composición farmacéutica presente.
Como se usa en este documento, el término "composición" tiene por objeto abarcar un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como cualquier producto que se produce, directamente o indirectamente, a partir de combinaciones de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.
Como se usa en este documento, las expresiones "trastornos relacionados con FLT3" o "trastornos relacionados con el receptor FLT3" o "trastornos relacionados con el receptor tirosina quinasa FLT3" incluyen enfermedades asociadas con o que implican actividad de FLT3, por ejemplo, el exceso de actividad de FLT3 y las afecciones que acompañan a estas enfermedades. La expresión "exceso de actividad de FLT3" se refiere a 1) la expresión de FLT3 en células que normalmente no expresan FLT3; 2) expresión de FLT3 mediante células que normalmente no expresan FLT3; 3) expresión aumentada de FLT3 que conduce a proliferación celular indeseada o 4) mutaciones que conducen a la activación constitutiva de FLT3. Los ejemplos de "trastornos relacionados con FLT3" incluyen trastornos que se producen a partir del exceso de estimulación de FLT3 debido a una cantidad anormalmente elevada de FLT3 o mutaciones en FLT3 o trastornos que se producen como resultado de una cantidad anormalmente alta de actividad FLT3 debido a una cantidad anormalmente alta de FLT3 o mutaciones en FLT3. Se conoce que el exceso de actividad de FLT3 ha estado implicado en la patogénesis de varias enfermedades, que incluyen los trastornos proliferativos celulares, trastornos neoplásicos y cánceres enumerados más adelante.
La expresión "trastornos proliferativos celulares" se refiere a proliferación celular indeseada de uno o más subconjuntos de células en un organismo multicelular que da como resultado el daño (es decir, molestias o esperanza de vida disminuida) a organismos multicelulares. Los trastornos proliferativos celulares pueden ocurrir en diferentes tipos de animales y seres humanos. Por ejemplo, como se usa en este documento los "trastornos proliferativos celulares" incluyen trastornos neoplásicos y otros trastornos proliferativos celulares.
Como se usa en este documento, un "trastorno neoplásico" se refiere a un tumor que se produce como resultado del crecimiento celular anormal o incontrolado. Los ejemplos de trastornos neoplásicos incluyen, pero no están limitados a, trastornos hematopoyéticos tales como, por ejemplo, los trastornos mieloproliferativos, tales como trombocitemia, trombocitosis esencial (ET), metaplasia mieloide agnogénica, mielofibrosis (MF), mielofibrosis con metaplasia mieloide (MMM), myelofibrosis idiopática crónica (IMF) y policitemia verdadera (PV), las citopenias y los síndromes mielodisplásicos premalignos; cánceres tales como cánceres del glioma, cánceres pulmonares, cánceres mamarios, cánceres colorrectales, cánceres prostáticos, cánceres gástricos, cánceres esofágicos, cánceres de colon, cánceres pancreáticos, cánceres ováricos y malignidades hematológicas, que incluyen mielodisplasia, mieloma múltiple, leucemias y linfomas. Los ejemplos de malignidades hematológicas incluyen, por ejemplo, leucemias, linfomas (linfoma no Hodgkin), enfermedad de Hodgkin (también llamado linfoma de Hodgkin) y mieloma, por ejemplo, leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia promielocítica aguda (APL), leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia mieloide crónica (CML), leucemia neutrofílica crónica (CNL), leucemia indiferenciada aguda (AUL), linfoma anaplásico de células grandes (ALCL), leucemia prolinfocítica (PML), leucemia mielomonocítica juvenil (JMML), ALL de células T adultas, AML con mielodisplasia de trilinaje (AML/TMDS), leucemia de linaje mixto (MLL), síndromes mielodisplásicos (MDS), trastornos mieloproliferativos (MPD) y mieloma múltiple (MM).
Los ejemplos de otros trastornos proliferativos celulares, incluyen pero no están limitados a, aterosclerosis (Libby P, 2003, "Vascular biology of atherosclerosis: overview and state of the art", Am J Cardiol 91 (3A): 3A-6A) vasculopatías inducidas por transplante (Helisch A, Schaper W. 2003, Arteriogenesis: the development and growth of collateral arteries. Microcirculation, 10(1): 83-97), degeneración macular (Holz FG et al., 2004, "Pathogenesis of lesions in late age-related macular disease", Am J Ophthalmol. 137(3): 504-10), hiperplasia y restenosis de la neointima (Schiele TM et. al., 2004, "Vascular restenosis -striving for therapy". Expert Opin Pharmacother. 5(11): 2221 -32), fibrosis pulmonar (Thannickal VJ et al., 2003, "Idiopathic pulmonary fibrosis: emerging concepts on pharmacotherapy, Expert Opin Pharmacother. 5 (8): 1671-86), glomerulonefritis (Cybulsky AV, 2000, "Growth factor pathways in proliferative glomerulonephritis", Curr Opin Nephrol Hypertens" 9(3): 217-23), glomerulosclerosis (Harris RC et al, 1999, "Molecular basis of injury and progression in focal glomerulosclerosis" Nephron 82(4): 289-99), displasia renal y fibrosis renal (Woolf AS et al., 2004, "Evolving concepts in human renal dysplasia", J Am Soc Nephrol.15(4): 998-1007), retinopatía diabética (Grant MB et al., 2004, "The role of growth factors in the pathogenesis of diabetic retinopathy", Expert Opin Investig Drugs 13(10): 1275-93) y artritis reumatoide (Sweeney SE, Firestein GS, 2004, Rheumatoid arthritis: regulation of synovial inflammation, Int J Biochem Cell Biol. 36(3): 372-8).
Como se usan en este documento, las expresiones "trastornos relacionados con TrkB" o "trastornos relacionados con el receptor TrkB" o "trastornos relacionados con el receptor tirosina quinasa TrkB" incluyen enfermedades asociadas con o que implican la actividad TrkB, por ejemplo, el exceso de actividad de TrkB y las afecciones que acompañan a estas enfermedades. La expresión "exceso de actividad de TrkB" se refiere a 1) expresión de TrkB en células que normalmente no expresan TrkB; 2) expresión de TrkB mediante células que normalmente no expresan TrkB; 3) expresión aumentada de TrkB que conduce a proliferación celular indeseada o 4) expresión aumentada de TrkB que conduce a la supervivencia celular independiente de adhesión; 5) mutaciones que conducen a la activación constitutiva de TrkB. Los ejemplos de "trastornos relacionados con TrkB" incluyen 1) trastornos que se producen como resultado del exceso de estimulación de TrkB debido a una cantidad anormalmente elevada de TrkB o mutaciones en TrkB o 2) trastornos que se producen como resultado de cantidades anormalmente elevadas de actividad TrkB debido a una cantidad anormalmente elevada de TrkB o mutaciones en TrkB.
Los trastornos relacionados con TrkB incluyen varias enfermedades, que incluyen cánceres, tales como, pero no limitados a neuroblastoma, tumor de wilm, mamario, de colon, prostático y pulmonar. Véanse, por ejemplo, Brodeur GM, (2003) "Neuroblastoma: biological insights into a clinical enigma". Nat RevCancer; 3(3): 203-16; Eggerl A et. al. (2001) "Expression of the neurotrophin receptor TrkB is associated with unfavorable outcome in Wilms' tumor" J Clin Oncol. 19(3): 689-96; Descamps S et. al. (2001) "Nerve growth factor stimulates proliferation and survival of human breast cancer cells through two distinct signaling pathways". J Biol Chem. 276(21): 17864-70; Bardelli A, et, al. (2003) "Mutational analysis of the tyrosine kinome in colorectal cancers". Science 300(5621): 949; Weeraratna AT et, al. (2000) "Rational basis forTrk inhibition therapy for prostate cancer". Prostate 45(2): 140-8.19(3):689-96; Ricci et. al., (2001) "Neurotrophins and neurotrophin receptors in human lung cancer". Am J Respir Cell Mol Biol. 25(4): 439-46.
Como se usan en este documento, las expresiones "trastornos relacionados con c-kit" o "trastornos relacionados con el receptor c-kit" o "trastornos relacionados con el receptor tirosina quinasa c-kit" incluyen enfermedades asociadas con o que implican la actividad c-kit, por ejemplo, el exceso de actividad de c-kit y las afecciones que acompañan a estas enfermedades. La expresión "exceso de actividad de c-kit" se refiere a 1) expresión de c-kit en células que normalmente no expresan c-kit; 2) expresión de c-kit mediante células que normalmente no expresan c-kit; 3) expresión de c-kit aumentada que conduce a la proliferación celular indeseada o 4) mutaciones que conducen a la activación constitutiva de c-kit. Los ejemplos de "trastornos relacionados con c-kit" incluyen trastornos que se producen como resultado del exceso de estimulación de c-kit debido a una cantidad anormalmente elevada de c-kit o mutaciones en c-kit o trastornos que se producen como resultado de cantidades anormalmente elevadas de actividad c-kit debido a cantidades anormalmente elevadas de c-kit o mutaciones en c-kit.
Los trastornos relacionados con c-kit incluyen, varias enfermedades, tales como mastocitosis, leucemia de mastocitos, tumor estromal gastrointestinal, linfoma sinonasal de células asesinas naturales/células T, seminoma, disgerminoma, carcinoma tiroideo; carcinoma pulmonar de células pequeñas, melanoma maligno, carcinoma cístico adenoide, carcinoma ovárico, leucemia mielógena aguda, linfoma anaplásico de células grandes, angiosarcoma, carcinoma endometrial, ALL de células T pediátrica, linfoma, carcinoma mamario y carcinoma prostático. Véase Heinrich, Michael C. et al. Review Article: Inhibition of KIT Tyrosine Kinase Activity: A Novel Molecular Approach to the Treatment of KIT-Positive Malignancies.
En una realización adicional a este aspecto, la invención abarca una terapia de combinación para tratar o prevenir un trastorno relacionado con FLT3 y/o c-kit y/o TrkB en un sujeto. La terapia de combinación comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz de un compuesto de Fórmula I y una o más de otras terapias anti-proliferación celular que incluyen quimioterapia, terapia de radiación, terapia génica e inmunoterapia.
En una realización de la presente invención, el compuesto de la presente invención se puede administrar en combinación con quimioterapia. Como se usa en este documento, quimioterapia se refiere a una terapia que implica un agente quimioterapéutico. Se puede usar una diversidad de agentes quimioterapéuticos en los métodos de tratamiento combinado descritos en este documento. Los agentes quimioterapéuticos contemplados como ilustrativos, incluyen, pero no están limitados a: compuestos de platino (por ejemplo, cisplatino, carbo-platino, oxaliplatino); compuestos taxano (por ejemplo, paclitaxcel y docetaxol); compuestos de campototecina (irinotecan, topotecan); alcaloides de vinca (por ejemplo, vincristina, vinblastina, vinorelbina); derivados de nucleósidos anti-tumorales (por ejemplo, 5-fluorouracilo, leucovorin, gemcitabina, capecitabina); agentes alquilantes (por ejemplo, ciclofosfamida, carmustina, lomustina y tiotepa); epipodofilotoxinas/podofilotoxinas (por ejemplo etopósido, tenipósido); inhibidores de aromatasa (por ejemplo, anastrozol, letrozol, exemestano); compuestos anti-estrogénicos (por ejemplo, tamoxifeno, fulvestrant), antifolatos (por ejemplo, premetrexed disódico); agentes hipometilantes (por ejemplo, azacitidina); biológicos (por ejemplo, gemtuzumab, cetuximab, rituximab, pertuzumab, trastuzumab, bevacizumab, erlotinib); antibióticos/antraciclinas (por ejemplo, idarrubicina, actinomicina D, bleomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, mitomicina C, dactinomicina, carminomicina, daunomicina); antimetabolitos (por ejemplo, aminopterina, clofarabina, citosina arabinosida, metotrexato); agentes de unión a la tubulina (por ejemplo, combretastatina, colchicina y nocodazol); inhibidores de topoisomerasa (por ejemplo, camptotecina). Los agentes adicionales útiles incluyen verapamil, un antagonista de calcio que se ha encontrado que es útil en combinación con agentes antineoplásicos para establecer quimiosensibilidad en células tumorales resistentes a agentes quimioterapéuticos aceptados y que potencian la eficacia de tales compuestos en tumores malignos sensibles a fármaco. Véase Simpson WG, The calcium channel blocker verapamil and cancer chemotherapy. Cell Calcium. Diciembre de 1985; 6(6): 449-67. Adicionalmente, los agentes quimioterapéuticos que todavía están por surgir se contemplan como útiles en combinación con el compuesto de la presente
invención.
En otra realización de la presente invención, el compuesto de la presente invención se puede administrar en combinación con terapia de radiación. Como se usa en este documento, "terapia de radiación" se refiere a una terapia que comprende la exposición del sujeto que la necesita a la radiación. Los especialistas en la técnica conocen tal terapia. El esquema apropiado de terapia de radiación será similar a los que se ya se emplean en terapia clínicas en las que la terapia de radiación se usa sola o en combinación con otros quimioterapéuticos.
En otra realización de la presente invención, el compuesto de la presente invención se puede administrar en combinación con una terapia génica. Como se usa en este documento, "terapia génica" se refiere a una terapia que se dirige a genes particulares implicados en el desarrollo tumoral. Las estrategias de terapia génica posibles incluyen la restauración de genes inhibidores del cáncer defectuosos, la transducción celular o la transfección con ADN antisentido correspondiente a genes que codifican factores de crecimiento y sus receptores, estrategias basadas en ARN tales como ribozimas, ARN señuelos, ARN mensajeros antisentido y moléculas pequeñas de ARN de interferencia (ARNsi) y los denominados "genes suicidas".
En otras realizaciones de esta invención, el compuesto de la presente invención se puede administrar en combinación con una inmunoterapia. Como se usa en este documento, "inmunoterapia" se refiere a una terapia que se dirige a una proteína particular implicada en el desarrollo tumoral a través de anticuerpos específicos para tal proteína. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales contra el factor de crecimiento endotelial vascular se han usado en el tratamiento de cánceres.
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Cuando se usa un segundo farmacéutico en adición a un compuesto de la presente invención, los dos farmacéuticos se pueden administrar simultáneamente (por ejemplo, en composiciones separadas o unitarias), secuencialmente en cualquier orden, aproximadamente al mismo tiempo o en programas de dosificación separados. En el último caso, los dos compuestos se administrarán dentro de un periodo y en una cantidad y de una manera que sea suficiente para asegurar que se consiga un efecto provechoso o sinérgico. Se apreciará que el método preferido y el orden de administración y las cantidades de dosificación respectivas y regímenes para cada componente de la combinación dependerán del agente quimioterapéutico particular que se esté administrando en conjunto con el compuesto de la presente invención, su vía de administración, el tumor particular que se esté tratando y el hospedador particular que se esté tratando.
Como entenderán los especialistas en la técnica, las dosis apropiadas de agentes quimioterapéuticos generalmente serán similares o menores que las que se emplean en terapias clínicas en la que los quimioterapéuticos se administran solos o en combinación con otros quimioterapéuticos.
Los especialistas en la técnica pueden determinar fácilmente el método y orden de administración óptimo y las cantidades de dosificación y el régimen usando métodos convencionales y en vista de la información expuesta en este documento.
Sólo a modo de ejemplo, los compuestos de platino se administran provechosamente en una dosis de 1 a 500 mg por metro cuadrado (mg/m^{2}) de área de superficie corporal, por ejemplo de 50 a 400 mg/m^{2}, particularmente en una dosis de aproximadamente 75 mg/m^{2} para el cisplatino y para el carboplatino de aproximadamente 300 mg/m^{2} por ciclo de tratamiento. El cisplatino no se absorbe por vía oral y por lo tanto se tiene que administrar a través de inyección por vía intravenosa, por vía subcutánea, por vía intratumoral o por vía intraperitoneal.
Sólo a modo de ejemplo, los compuestos de taxano se administran provechosamente en una dosis de 50 a 400 mg por metro cuadrado (mg/m^{2}) de área de superficie corporal, por ejemplo de 75 a 250 mg/m^{2}, particularmente en una dosis de aproximadamente 175 a 250 mg/m^{2} para paclitaxel y para docetaxel de aproximadamente 75 a 150 mg/m^{2} por ciclo de tratamiento.
Sólo a modo de ejemplo, los compuestos de camptotecina se administran provechosamente en una dosis de 0,1 a 400 mg por metro cuadrado (mg/m^{2}) de área de superficie corporal, por ejemplo de 1 a 300 mg/m^{2}, particularmente en una dosis de aproximadamente 100 a 350 mg/m^{2} para irinotecan y para topotecan de aproximadamente 1 a 2 mg/m^{2} por ciclo de tratamiento.
Sólo a modo de ejemplo, se puede administrar provechosamente alcaloide de vinca en una dosis de 2 a 30 mg por metro cuadrado (mg/m^{2}) de área de superficie corporal, particularmente en una dosis de aproximadamente 3 a 12 mg/m^{2} para vinblastina, para vincristina en una dosis de aproximadamente 1 a 2 mg/m^{2} y para vinorelbina en una dosis de aproximadamente 10 a 30 mg/m^{2} por ciclo de tratamiento.
Sólo a modo de ejemplo, los derivados de nucleósidos anti-tumorales se pueden administrar provechosamente en una dosis de 200 a 2500 mg por metro cuadrado (mg/m^{2}) de área de superficie corporal, por ejemplo de 700 a 1500 mg/m^{2}. El 5-fluorouracilo (5-FU) comúnmente se usa por administración por vía intravenosa con dosis que varían de 200 a 500 mg/m^{2} (preferiblemente de 3 a 15 mg/kg/día). La gemcitabina se administra provechosamente en una dosis de aproximadamente 800 a 1200 mg/m^{2} y la capecitabina se administra provechosamente aproximadamente de 1000 a 2500 mg/m^{2} por ciclo de tratamiento.
Sólo a modo de ejemplo, se pueden administrar provechosamente agentes alquilantes en una dosis de 100 a 500 mg por metro cuadrado (mg/m^{2}) de área de superficie corporal, por ejemplo de 120 a 200 mg/m^{2}, particularmente para la ciclofosfamida en una dosis de aproximadamente 100 a 500 mg/m^{2}, para clorambucil en una dosis de aproximadamente 0,1 a 0,2 mg/kg de peso corporal, para carmustina en una dosis de aproximadamente 150 a 200 mg/m^{2} y para lomustina en una dosis de aproximadamente 100 a 150 mg/m^{2} por ciclo de tratamiento.
Sólo a modo de ejemplo, se pueden administrar provechosamente los derivados de podofilotoxina en una dosis de 30 a 300 mg por metro cuadrado (mg/m^{2}) de área de superficie corporal, por ejemplo de 50 a 250 mg/m^{2}, particularmente para etopósido en una dosis de aproximadamente 35 a 100 mg/m^{2} y para tenipósido de aproximadamente 50 a 250 mg/m^{2} por ciclo de tratamiento.
Sólo a modo de ejemplo, se pueden administrar provechosamente derivados de antraciclina en una dosis de 10 a 75 mg por metro cuadrado (mg/m^{2}) de área de superficie corporal, por ejemplo de 15 a 60 mg/m^{2}, particularmente para doxorrubicina en una dosis de aproximadamente 40 a 75 mg/m^{2}, para daunorrubicina en una dosis de aproximadamente 25 a 45 mg/m^{2}, y para idarrubicina en una dosis de aproximadamente 10 a 15 mg/m^{2} por ciclo de tratamiento.
Sólo a modo de ejemplo, se pueden administrar provechosamente compuestos antiestrogénicos en una dosis de aproximadamente 1 a 100 mg diarios dependiendo del agente particular y la afección que se esté tratando. El tamoxifeno se administra provechosamente por vía oral en una dosis de 5 a 50 mg, preferiblemente de 10 a 20 mg dos veces al día, continuando la terapia durante suficiente tiempo para conseguir y mantener un efecto terapéutico. El toremifeno se administra por vía oral provechosamente en una dosis de aproximadamente 60 mg una vez al día, continuando la terapia durante tiempo suficiente para conseguir mantener un efecto terapéutico. El anastrozol se administra provechosamente por vía oral en una dosis de aproximadamente 1 mg una vez al día. El droloxifeno se administra provechosamente por vía oral en una dosis de aproximadamente 20 a 100 mg una vez al día. El raloxifeno se administra provechosamente por vía oral en una dosis de aproximadamente 60 mg una vez al día. El exemestano se administra provechosamente por vía oral en una dosis de aproximadamente 25 mg una vez al día.
Sólo a modo de ejemplo, se pueden administrar provechosamente biológicos en una dosis de aproximadamente 1 a 5 mg por metro cuadrado (mg/m^{2}) de área de superficie corporal, o como se conoce en la técnica, si es diferente. Por ejemplo, se puede administrar trastuzumab provechosamente en una dosis de 1 a 5 mg/m^{2} particularmente de 2 a 4 mg/m^{2} por ciclo de tratamiento.
Las dosis se pueden administrar, por ejemplo una, dos o más veces por ciclo de tratamiento, que se puede repetir por ejemplo cada 7, 14, 21 ó 28 días.
Los compuestos de la presente invención se pueden administrar a un sujeto sistémicamente, por ejemplo, por vía intravenosa, por vía oral, por vía subcutánea, por vía intramuscular, por vía intradérmica, o por vía parenteral. Los compuestos de la presente invención también se pueden administrar a un sujeto localmente. Los ejemplos no limitantes de sistemas de administración local incluyen el uso de dispositivos médicos intraluminales que incluyen catéteres de administración de fármacos intravasculares, alambres, endoprótesis vasculares farmacológicas y revestimiento endoluminal. Los compuestos de la presente invención se pueden administrar adicionalmente a un sujeto en combinación con un agente de dirección para conseguir concentración local elevada del compuesto en el sitio diana. Adicionalmente, los compuestos de la presente invención se pueden formular para liberación rápida o liberación lenta con el objeto de mantener los fármacos o agentes en contacto con los tejidos diana durante un periodo que varíe de horas a
semanas.
La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Formula I conjuntamente con un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede contener entre aproximadamente 0,1 mg y 1000 mg, preferiblemente aproximadamente de 100 a 500 mg, del compuesto y puede constituirse en cualquier forma adecuada para el modo de administración seleccionado.
La expresión "farmacéuticamente aceptable" se refiere a entidades y composiciones moleculares que no producen una reacción adversa, alérgica u otra reacción desafortunada cuando se administra a un animal o un ser humano, según corresponda. Dentro de la invención se incluyen por igual los usos veterinarios y las formulaciones "farmacéuticamente aceptables" incluyen formulaciones tanto para uso clínico como veterinario.
Los vehículos incluyen excipientes farmacéuticos necesarios e inertes, que incluyen, pero no están limitados a, aglutinantes, agentes de suspensión, lubricantes, saporíferos, edulcorantes, conservantes, colorantes y recubrimientos. Las composiciones adecuadas para administración oral incluyen formas sólidas, tales como píldoras, comprimidos, comprimidos encapsulados, cápsulas (cada uno incluyendo formulaciones de liberación inmediata, de liberación temporalizada y de liberación sostenida), gránulos y polvos y formas líquidas, tales como soluciones, jarabes, elixires, emulsiones y suspensiones. Las formas útiles para administración parenteral incluyen soluciones estériles, emulsiones y suspensiones.
La composición farmacéutica de la presente invención también incluye una composición farmacéutica para la liberación lenta de un compuesto de la presente invención. La composición incluye un vehículo de liberación lenta (típicamente, un vehículo polimérico) y un compuesto de la presente invención.
Los vehículos biodegradables de liberación lenta son bien conocidos en la técnica. Estos son materiales que pueden formar partículas que capturan dentro de sí mismas un compuesto o compuestos activos y se degradan/disuelven lentamente en un entorno adecuado (por ejemplo, acuoso, ácido, básico, etc) y de ese modo se degradan/disuelven en los fluidos corporales y liberan el o los compuestos activos dentro de los mismos. Las partículas preferiblemente son nanopartículas (es decir, en el intervalo de aproximadamente 1 a 500 nm de diámetro, preferiblemente aproximadamente de 50-200 nm de diámetro y lo más preferible es que sean de aproximadamente 100 nm de diámetro).
La presente invención también proporciona métodos para preparar las composiciones farmacéuticas de esta invención. El compuesto de Fórmula I, como el ingrediente activo, se mezcla íntimamente con un vehículo farmacéutico de acuerdo con técnicas farmacéuticas de preparación de compuestos convencionales, un vehículo que puede tomar una amplia diversidad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración, por ejemplo, oral o parenteral tal como intramuscular. Se puede emplear cualquiera de los medios farmacéuticos habituales para preparar las composiciones en forma de dosificación oral. Por tanto, para preparaciones orales líquidas, tales como por ejemplo, suspensiones, elixires y soluciones, los vehículos y aditivos adecuados incluyen agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes saporíferos, conservantes, agentes colorantes y similares; para preparaciones orales sólidas tales como, por ejemplo, polvos, cápsulas, comprimidos encapsulados, cápsulas de gel y comprimidos, los vehículos y aditivos adecuados incluyen almidones, azúcares, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares. Debido a su facilidad de administración, los comprimidos y las cápsulas representan la forma unitaria de dosificación oral más provechosa, en cuyo caso se emplean obviamente vehículos farmacéuticos sólidos. Si se desea, los comprimidos pueden estar recubiertos con azúcar o por un recubrimiento entérico mediante técnicas convencionales. Para los parenterales, el vehículo habitualmente comprenderá agua estéril, aunque se pueden incluir otros ingredientes, por ejemplo, para propósitos tales como contribuir a la solubilidad o para conservación. También se pueden preparar suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear vehículos líquidos, agentes de suspensión y similares apropiados. En la preparación para liberación lenta, en primer lugar se disuelven o dispersan en un disolvente orgánico un vehículo de liberación lenta, típicamente un vehículo polimérico y un compuesto de la presente invención. Después la solución orgánica obtenida se añade a una solución acuosa para obtener una emulsión de tipo aceite en agua. Preferiblemente, la solución acuosa incluye uno o más agentes tensioactivos. Posteriormente, el disolvente orgánico se evapora de la emulsión de tipo aceite en agua para obtener una suspensión coloidal de partículas que contiene el vehículo de liberación lenta y el compuesto de la presente invención.
Las composiciones farmacéuticas de este documento contendrán, por unidad de dosificación, por ejemplo, comprimido, cápsula, polvo, inyección, cucharadita y similares, una cantidad del ingrediente activo necesaria para administrar una dosis eficaz como se ha descrito anteriormente. Las composiciones farmacéuticas de este documento contendrán, por unidad de dosificación unitaria, por ejemplo, comprimido, cápsula, polvo, inyección, supositorio, cucharadita y similares, de aproximadamente 0,01 mg a 200 mg/kg de peso corporal por día. Preferiblemente, el intervalo es de aproximadamente 0,03 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día, lo más preferible es que sea, de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal por día. Los compuestos se pueden administrar en un régimen de 1 a 5 veces por día. Sin embargo, las dosis pueden variar dependiendo de los requerimientos de los pacientes, la gravedad de la afección que se está tratando y el compuesto que se está empleando. Se puede emplear el uso tanto de administración diaria como de dosificación post-periódica.
Preferiblemente estas composiciones están en formas de dosificación unitaria, tales como comprimidos, píldoras, cápsulas, polvos, gránulos, soluciones o suspensiones parenterales estériles, pulverizaciones en aerosol o líquidas medidas, gotas, ampollas, dispositivos de autoinyección o supositorios; para administración parenteral, intranasal, sublingual o rectal o para administración por inhalación o aislamiento. Alternativamente, la composición se puede presente en una forma adecuada para administración una vez a la semana o una vez al mes; por ejemplo, se puede adaptar una sal insoluble del compuesto activo, tal como la sal de decanoato, para proporcionar una preparación de liberación prolongada para inyección intramuscular. Para preparar composiciones sólidas tales como comprimidos, el ingrediente activo principal se mezcla con un vehículo farmacéutico, por ejemplo ingredientes de formación de comprimidos convencionales tales como almidón de maíz, lactosa, sacarosa, sorbitol, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, fosfato dicálcico o gomas y otros diluyentes farmacéuticos, por ejemplo agua, para formar una composición de preformulación sólida que contenga una mezcla homogénea de un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Cuando se refiere a estas composiciones de preformulación como homogéneas, significa que el ingrediente activo está uniformemente disperso en toda la composición para la que la composición se pueda subdividir fácilmente en formas de dosificación igualmente eficaces tales como comprimidos, píldoras y cápsulas. Después esta composición de preformulación sólida se subdivide en formas de dosificación unitarias del tipo que se ha descrito anteriormente que contienen de 0,1 a aproximadamente 500 mg del ingrediente activo de la presente invención. Los comprimidos o píldoras de la composición nueva se pueden recubrir o de otra forma se pueden preparar compuestos para proporcionar una forma de dosificación que proporcione la ventaja de la acción prolongada. Por ejemplo, el comprimido o píldora puede comprender un componente de dosificación interno y un componente de dosificación externo, estando el último en forma de una envoltura que cubre al primero. Los dos componentes se pueden separar mediante una capa entérica que sirve para resistir a la desintegración en el estómago y permite que el componente interno pase intacto al interior del duodeno o que se retarde su liberación. Se puede usar una diversidad de materiales para tales capas entéricas o revestimientos, materiales que incluyen varios ácidos poliméricos con materiales tales como goma laca, alcohol de acetilo y acetato de celulosa.
Las formas líquidas en las que el compuesto de Fórmula I se puede incorporar para administración por vía oral o por inyección incluyen, soluciones acuosas, jarabes adecuadamente aromatizados, suspensiones acuosas u oleosas y emulsiones aromatizadas con aceites comestibles tales como aceite de semilla de algodón, aceite de sésamo, aceite de coco o aceite de cacahuete, así como elixires y vehículos farmacéuticos similares. Los agentes dispersantes o de suspensión adecuados para suspensiones acuosas, incluyen gomas sintéticas y naturales tales como goma tragacanto, goma arábiga, alginato, dextrano, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, polivinil-pirrolidona o gelatina. Las formas líquidas en agentes de suspensión o dispersantes aromatizados adecuados también puede incluir las gomas sintéticas y naturales, por ejemplo, tragacanto, goma arábiga, metilcelulosa y similares. Para administración parenteral, se desean suspensiones y soluciones estériles. Las preparaciones isotónicas que contienen generalmente conservantes adecuados se emplean cuando se desea administración intravenosa.
Provechosamente, los compuestos de Fórmula I se puede administrar en una dosis única diariamente o la dosis diaria total se puede administrar en dosis divididas de dos, tres o cuatro veces al día. Además, los compuestos de la presente invención se pueden administrar de forma intranasal a través del uso tópico de vehículos intranasales adecuados o a través de parches de piel transdérmicos bien conocidos por los especialistas en la técnica. Para administrarse en forma de un sistema de administración transdérmico, la administración de la dosis, por supuesto, será continua en lugar de intermitente a lo largo de todo el régimen de dosificación.
Por ejemplo, para administración oral en forma de un comprimido o cápsula, el componente farmacológico activo se puede combinar con un vehículo inerte farmacéuticamente aceptable oral y no tóxico tal como etanol, glicerol, agua y similares. Además, cuando se desee o sea necesario, también se pueden incorporar a la mezcla aglutinantes adecuados, lubricantes, agentes disgregantes y agentes colorantes. Los aglutinantes adecuados incluyen, sin limitación, almidón, gelatina, azúcares naturales tales como glucosa o beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas tales como goma arábiga, goma de tragacanto u oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los disgregantes incluyen, sin limitación, almidón, metil celulosa, agar, bentonita, goma de xantano y similares.
La dosis diaria de los productos de la presente invención puede variar en un amplio intervalo de 1 a 5000 mg por ser humano adulto por día. Para administración oral, las composiciones se proporcionan preferiblemente en forma de comprimidos que contienen, 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0, 25,0, 50,0, 100, 150, 200, 250 y 500 miligramos del ingrediente activo para el ajuste sintomático de la dosis al paciente que se tiene que tratar. Una cantidad eficaz del fármaco se administra ordinariamente en un nivel de dosificación de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 200 mg/kg de peso corporal por día. Particularmente, el intervalo es de aproximadamente 0,03 a aproximadamente 15 mg/kg de peso corporal por día y más particularmente, de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal por día. El compuesto de la presente invención se puede administrar en un régimen de hasta cuatro o más veces por día, preferiblemente de 1 a 2 veces por día.
Los especialistas en la técnica pueden determinar fácilmente las dosis óptimas que se tienen que administrar y variarán con el compuesto particular usado, el modo de administración, la potencia de la preparación, el modo de administración y el progreso de la afección patológica. Adicionalmente, los factores asociados con el paciente particular que se esté tratando, que incluyen edad, peso, dieta del paciente y tiempo de administración, darán como resultado la necesidad de ajustar las dosis.
Los compuestos de la presente invención también se pueden administrar en forma de sistema de administración liposómica, tales como vesículas unilamerales pequeñas, vesículas unilamelares grandes y vesículas multilamerales. Los liposomas se pueden formar a partir de una diversidad de lípidos, que incluyen pero no están limitados a lípidos anfipáticos tales como fosfatidilcolinas, esfingomielinas, fosfatidiletanolaminas, fofatidilcolinas, cardiolipinas, fosfatidilserinas, fosfatidilgliceroles, ácidos fosfatídicos, fosfatidilinositoles, diacil trimetilamonio propanos, diacil dimetilamonio propanos y estearilamina, lípidos neutros tales como triglicéridos y combinaciones de los mismos. Estos pueden contener colesterol o estar libres de colesterol.
Los compuestos de la presente invención también se pueden administrar por vía local. Se puede utilizar cualquier dispositivo de administración, tales como catéteres de administración farmacológica intravascular, alambres, endoprótesis vasculares y revestimiento endoluminal. El sistema de administración para un dispositivo de este tipo puede comprender un catéter de infusión local que administra el compuesto a una velocidad controlada por el adminis-
trador.
La presente invención proporciona un dispositivo de administración de fármaco que comprende un dispositivo médico intraluminal, preferiblemente una endoprótesis vascular y una dosis terapéutica de un compuesto de la invención.
La expresión "endoprótesis vascular" se refiere a cualquier dispositivo que se puede administrar mediante un catéter. Rutinariamente una endoprótesis vascular se usa para prevenir el cierre vascular debido a anomalías físicas tales como el crecimiento interior indeseado de tejido vascular debido a trauma quirúrgico. Con frecuencia tiene una estructura tubular expandible de tipo reticular apropiada para dejarse dentro del lumen de un conducto para aliviar una obstrucción. La endoprótesis vascular tiene una superficie de contacto con la pared del lumen y una superficie expuesta al lumen. La superficie que está en contacto con la pared del lumen es la superficie exterior del tubo y la superficie expuesta al lumen es la superficie interior del tubo. La endoprótesis vascular puede ser polimérica, metálica o polimérica y metálica y opcionalmente puede ser biodegradable.
Comúnmente, las endoprótesis vasculares se insertan en el interior del lumen de una forma no expandida y después se expanden de forma autónoma o con la ayuda de un segundo dispositivo en el sitio. Un método típico de expansión ocurre a través del uso de un balón de angioplastia fijado en un catéter que se infla dentro del vaso o conducto de paso corporal estenosado para romper y alterar las obstrucciones asociadas con los componentes de la pared del vaso y para obtener un lumen de mayor tamaño. También se pueden usar endoprótesis vasculares auto-expandibles como las descritas en el documento U.S. 6.776.796 (Falotico et al.). La combinación de una endoprótesis vascular con fármacos, agentes o compuestos que previenen la inflamación y la proliferación puede proporcionar el tratamiento más eficaz para restenosis post-angioplásica.
Los compuestos de la invención se pueden incorporar al interior o fijarse a la endoprótesis vascular de varias maneras y utilizando cualquier cantidad de materiales biocompatibles. En una realización ilustrativa, el compuesto se incorpora directamente en una matriz polimérica, tal como el polímero polipirrol y posteriormente se aplica como recubrimiento sobre la superficie exterior de la endoprótesis vascular. El compuesto se eluye de la matriz por difusión a través del polímero. Las endoprótesis vasculares y los métodos para recubrir fármacos sobre las endoprótesis vasculares se tratan con detalle en la técnica. En otra realización ilustrativa, en primer lugar la endoprótesis vascular se recubre con una capa basal que comprende una solución del compuesto, etileno-co-vinilacetato y polibutilmetacrilato. Después, la endoprótesis vascular se recubre adicionalmente con una capa exterior que comprende sólo polibutilmetacrilato. La capa exterior actúa como una barrera de difusión para evitar que el compuesto se eluya demasiado rápido y entre en los tejidos circundantes. El espesor de la capa exterior o capa superior determina la velocidad a la que el compuesto se eluye a partir de la matriz. Las endoprótesis vasculares y los métodos de recubrimiento se tratan con detalle en la publicación WIPO WO9632907, la Publicación de los Estados Unidos Nº 2002/0016625 y la referencias descritas en los mismos.
La solución del compuesto de la invención y los materiales/polímeros biocompatibles se pueden incorporar en el interior o sobre una endoprótesis vascular de varias maneras. Por ejemplo, la solución se puede pulverizar sobre la endoprótesis vascular o la endoprótesis vascular se puede hundir en la solución. En una realización preferida, la solución se pulveriza sobre la endoprótesis vascular y después se permite que se seque. En otra realización ilustrativa, la solución se puede cargar eléctricamente a una polaridad y cambiarse eléctricamente la endoprótesis vascular a la polaridad opuesta. De esta manera, la solución y la endoprótesis vascular se atraerán la una a la otra. Al usar este tipo de proceso de pulverización, se pueden reducir los residuos y se puede conseguir más control sobre el espesor del recubrimiento. Preferiblemente el compuesto sólo se fija a la superficie exterior de la endoprótesis vascular que se pone en contacto con un tejido. Sin embargo, para algunos compuestos, se puede recubrir la endoprótesis vascular completa. La combinación de la dosis de compuesto aplicada a la endoprótesis vascular y el recubrimiento de polímero que controla la liberación del fármaco es importante para la eficacia del fármaco. El compuesto preferiblemente se mantiene sobre la endoprótesis vascular durante al menos tres días hasta aproximadamente seis meses y más, preferiblemente entre siete y trece días.
Se puede utilizar cualquier cantidad de polímeros biocompatibles no erosionables junto con el compuesto de la invención. Es importante indicar que se pueden utilizar polímeros diferentes para endoprótesis vasculares diferentes. Por ejemplo, la matriz descrita anteriormente de etileno-co-vinilacetato y polibutilmetacrilato trabaja bien con las endoprótesis vasculares de acero inoxidable. Se pueden utilizar otros polímeros más eficazmente con endoprótesis vasculares formadas a partir de otros materiales, que incluyen materiales que muestran propiedades superelásticas tales como aleaciones de níquel y titanio.
La restenosis es responsable de una morbilidad y mortalidad significativa a continuación de la angioplastia coronaria. La restenosis ocurre a través de una combinación de cuatro procesos que incluyen retroceso elástico, formación de trombos, hiperplasia de la íntima y remodelación de la matriz extracelular. Recientemente se han identificado varios factores de crecimiento que juegan una papel en estos procesos que conducen a la restenosis (véase, Schiele TM et. al., 2004, "Vascular restenosis -strivingfortherapy". Expert Opin Pharmacother. 5(11): 2221-32.). Cabe mencionar, que las células musculares lisas vasculares y las células endoteliales expresan los ligandos BDNF de TrkB y las neurotrofinas así como el TrkB (véase, Ricci A, et. al. 2003", Neurotrophins and neurotrophin receptors in human pulmonary arteries". J Vase Res. 37(5): 355-63; véase también, Kim H, et. al., 2004 "Paracrine and autocrine functions of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and nerve growth factor (NGF) in brain-derived endothelial cells", J Biol Chem. 279 (32): 33538-46). Adicionalmente, el TrkB puede jugar un papel en la angiogénesis periférica y la hiperplasia de la íntima debido a su capacidad de evitar la anoikis y prolongar la supervivencia celular (véase, Douma S, et. al., 2004, "Suppression of anoikis and induction of metastasis by the neurotrophic receptor TrkB", Nature. 430(7003): 1034-9.). Por lo tanto, la inhibición de TrkB durante y a continuación de la angioplastia coronaria usando una endoprótesis vascular recubierta presenta una estrategia terapéutica viable.
También se describe un método para el tratamiento de trastornos relacionados con el TrkB, que incluyen restenosis, hiperplasia o inflamación de la íntima, en las paredes de los vasos sanguíneos, en un sujeto que comprende administrar al sujeto un compuesto de la invención en cantidades terapéuticamente eficaces mediante la administración controlada, por liberación a partir de un dispositivo médico intraluminal, tal como una endoprótesis vascular, del compuesto de la invención.
Los métodos para introducir una endoprótesis vascular en el interior del lumen de un organismo son bien conocidos y las endoprótesis vasculares recubiertas con compuesto de esta invención preferiblemente se introducen usando un catéter. Como lo apreciarán los especialistas en la técnica, los métodos variarán ligeramente en base al emplazamiento de la implantación de la endoprótesis vascular. Para la implantación de una endoprótesis vascular coronaria, el catéter de balón que porta la endoprótesis vascular se inserta en la arteria coronaria y la endoprótesis vascular se coloca en el sitio deseado. Se infla el balón, expandiendo la endoprótesis vascular. A medida que la endoprótesis vascular se expande, la endoprótesis vascular se pone en contacto con la pared del lumen. Una vez que la endoprótesis vascular está colocada, el balón se desinfla y se retira. La endoprótesis vascular permanece en el lugar con la superficie de contacto con el lumen que porta el compuesto directamente en contacto con la superficie de la pared del lumen. La implantación de la endoprótesis vascular se puede acompañar por terapia anti-coagulación según sea necesario.
Las condiciones óptimas para la administración de los compuestos para uso en la endoprótesis vascular de la invención pueden variar con los diferentes sistemas de administración local usados, así como las propiedades y concentraciones de los compuestos usados. Las condiciones que se pueden optimizar incluyen, por ejemplo, las concentraciones de los compuestos, el volumen de administración, la velocidad de administración, la profundidad de penetración de la pared vascular, la presión de inflación proximal, la cantidad y el tamaño de las perforaciones y la colocación del catéter de balón de administración de fármaco. Se pueden optimizar las condiciones para la inhibición de la proliferación de células de músculo liso en el sitio de la lesión para que no ocurra un bloqueo arterial significativo debido a la restenosis, como se ha medido, por ejemplo, mediante la capacidad proliferativa de la células musculares lisas o mediante cambios en la resistencia vascular o el diámetro del lumen. Las condiciones óptimas se pueden determinar en base a los datos de estudios de modelos animales usando métodos computacionales de rutina.
Otro método alternativo para la administración de compuestos de esta invención puede ser mediante la conjugación del compuesto con un agente de dirección que dirige el conjugado a su sitio de acción pretendido, es decir, a células endoteliales vasculares o células tumorales. Se pueden usar agentes de dirección tanto de anticuerpo como de no anticuerpo. Debido a la interacción específica entre el agente de dirección y su compañero de unión correspondiente, se puede administrar un compuesto de la presente invención con concentraciones locales elevadas en o próximo al sitio diana y de este modo tratar el trastorno en el sitio diana más eficazmente.
Los agentes de dirección de anticuerpo incluyen anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, que se unen a un componente accesible o dirigible de una célula tumoral, de vasculatura tumoral o de estroma tumoral. El "componente dirigible o accesible" de una célula tumoral, de vasculatura tumoral o de estroma tumoral, preferiblemente es un componente expresado en la superficie, accesible en la superficie o localizado en la superficie. Los agentes de dirección de anticuerpo también incluyen anticuerpos o fragmentos de unión a anticuerpo de los mismos, que se unen a un componente intracelular que se libera a partir de una célula tumoral necrótica. Tales anticuerpos preferibles son anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, que se unen a el o los antígenos intracelulares insolubles presentes en células que se pueden inducir para ser permeables o en fantasmas celulares de sustancialmente todas las células neoplásicas y normales, pero no están presentes ni son accesibles en el exterior de células vivientes normales de un mamífero.
Como se usa en este documento "anticuerpo" tiene por objeto referirse en líneas generales a cualquier agente de unión inmunológico tal como IgG, IgM, IgA, IgE, F(ab')2, un fragmento monovalente tal como Fab', Fab, Dab, así como a anticuerpos creados por ingeniería genética tales como anticuerpos recombinantes, anticuerpos humanizados, anticuerpos biespecíficos y similares. Los anticuerpos pueden ser los policlonales o los monoclonales, aunque los monoclonales son preferidos. Existe una amplia variedad de anticuerpos conocidos en la técnica que tienen especificidad inmunológica para la superficie celular de virtualmente cualquier tipo de tumor sólido (véase, Summary Table on monoclonal antibodies for solid tumors en la Patente de Estados Unidos Nº 5.855.866 de Thorpe et al). Los especialistas en la técnica conocen métodos para producir y aislar anticuerpos contra tumores (véase, Patente de Estados Unidos Nº 5.855.866 de Thorpe et al. y Patente de Estados Unidos Nº 6.34.2219 de Thorpe et al.).
Las técnicas para conjugar restos terapéuticos con anticuerpos son bien conocidas. (Véase, por ejemplo, Amon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), págs. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2ª Ed.), Robinson et al. (eds.), págs. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), págs. 475-506 (1985)). También se pueden aplicar técnicas similares para unir compuestos de la invención a agentes de dirección de no anticuerpo. Los especialistas en la técnica conocerán, o serán capaces de determinar, métodos para formar conjugados, con agentes de dirección de no anticuerpo, tales como pequeñas moléculas, oligopéptidos, polisacáridos u otros compuestos polianiónicos.
Aunque se puede usar cualquier resto enlazante que sea razonablemente estable en la sangre, para enlazar los compuestos de la presente invención al agente de dirección, se prefieren las uniones que se pueden liberar biológicamente y/o espaciadores o enlazadores selectivamente escindibles. Las "uniones que se pueden liberar biológicamente" y los "espaciadores o enlazadores selectivamente escindibles" aún tienen una estabilidad razonable en la circulación, pero se pueden liberar, son escindibles o hidrolizables sólo o preferencialmente en ciertas condiciones, es decir, dentro de cierto entorno o en contacto con un agente particular. Tales uniones incluyen, por ejemplo, uniones disulfuro y trisulfuro y uniones ácido lábiles, como se ha descrito en las Patentes de Estados Unidos Nº 5.474.765 y 5.762.918 y uniones sensibles a enzima, que incluyen uniones peptídicas, ésteres, amidas, fosfodiésteres y glicósidos como se ha descrito en las Patentes de Estados Unidos Nº 5.474.765 y 5.762.918. Tales características de diseño de liberación selectiva facilitan la liberación sostenida de los compuestos a partir de los conjugados en el sitio diana pretendido.
La presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención conjugado con un agente de dirección y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La presente invención proporciona además compuestos conjugados con un agente de dirección para tratar un trastorno proliferativo celular o un trastorno relacionado con FL'1'3 y/o c-kit y/o TrkB.
Cuando se usan proteínas tales como anticuerpos o factores de crecimiento o polisacáridos como agentes de dirección, preferiblemente se administran en forma de composiciones inyectables. La solución de anticuerpo inyectable se administrará en una vena, arteria o en el líquido espinal en el transcurso de 2 minutos a aproximadamente 45 minutos, preferiblemente de 10 a 20 minutos. En ciertos casos, las administraciones intradérmica e intracavitaria son provechosas para los tumores limitados a áreas próximas a regiones particulares de la piel y/o cavidades corporales particulares. Adicionalmente, la administración intratecal se puede usar para tumores localizados en el cerebro.
La dosis terapéuticamente eficaz del compuesto de la presente invención conjugada con un agente de dirección depende del individuo, del tipo de enfermedad, de la patología, del método de administración y otras variables clínicas. Las dosis eficaces se pueden determinar fácilmente usando datos a partir de un modelo animal. Los animales experimentales que portan tumores sólidos se usan frecuentemente para optimizar las dosis terapéuticas apropiadas antes de trasladarlas a un entorno clínico. Tales modelos son conocidos por ser muy fiables para predecir las estrategias anticancerosas eficaces. Por ejemplo, los ratones que portan tumores sólidos, se usan ampliamente en ensayos preclínicos para determinar los intervalos de trabajo de agentes terapéuticos que dan efectos antitumorales beneficiosos con toxicidad mínima.

Claims (26)

1. Un compuesto de Fórmula I:
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114 
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y N-óxidos, sales farmacéuticamente aceptables, solvatos, isómeros geométricos e isómeros estereoquímicos del mismo, donde:
\quad
r es 1 ó 2;
\quad
Z es NH, N(alquilo) o CH_{2};
\quad
B es fenilo, heteroarilo, o un heteroarilo benzo-condensado de nueve a diez miembros;
\quad
R_{1} es:
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115 
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
donde
\quad
n es 1,2, 3 ó 4;
\quad
R_{a} es hidrógeno, alcoxi, fenoxi, fenilo, heteroarilo opcionalmente sustituido con R_{5}, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino, oxazolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, pirrolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, piperidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, heterodionilo cíclico opcionalmente sustituido con R_{5}, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{5}, -COOR_{y}, -CONR_{w}R_{x}, -N(R_{w})CON(R_{y})(R_{x}), -N(R_{y})CON(R_{w})(R_{x}), -N(R_{w})C(O)OR_{x}, -N(R_{w})COR_{y}, -SR_{y}, -SOR_{y}, -SO_{2}R_{y}, -NR_{w}SO_{2}R_{y} -NR_{w}SO_{2}R_{x}, -SO_{3}R_{y}, -OSO_{2}NR_{w}R_{x} o -SO_{2}NR_{w}R_{x};
\quad
R_{w} y R_{x} se seleccionan independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, aralquilo o heteroaralquilo, o R_{w} y R_{x} pueden tomarse opcionalmente juntos para formar un anillo de 5 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heterorresto seleccionado entre O, NH, N(alquilo), SO_{2}, SO o S;
\quad
R_{y} se selecciona entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, fenilo, aralquilo, heteroaralquilo o heteroarilo;
\quad
R_{5} es uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente entre: halógeno, ciano, trifluorometilo, amino, hidroxilo, alcoxi, -C(O)alquilo, -SO_{2}alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, alquilo, C(_{1-4})alquil-OH o alquilamino; y
\quad
R_{3} es uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alcoxi, halógeno, alcoxiéter, hidroxilo, tio, nitro, cicloalquilo opcionalmente sustituido con R_{4}, heteroarilo opcionalmente sustituido con R_{4}, alquilamino, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{4}, -O(cicloalquilo), pirrolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{4}, fenoxi opcionalmente sustituido con R_{4}, -CN, -OCHF_{2}, -OCF_{3}, -CF_{3}, alquilo halogenado, heteroariloxi opcionalmente sustituido con R_{4}, dialquilamino, -NHSO_{2}alquilo, tioalquilo o -SO_{2}alquilo; donde R_{4} se selecciona independientemente entre: halógeno, ciano, trifluorometilo, amino, hidroxilo, alcoxi, -C(O)alquilo, -CO_{2}alquilo, -SO_{2}alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, alquilo o alquilamino.
\newpage
2. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que: R_{w} y R_{x} se seleccionan independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alquenilo, aralquilo o heteroaralquilo, o R_{w} y R_{x} pueden tomarse opcionalmente juntos para formar un anillo de 5 a 7 miembros seleccionado entre el grupo que consiste en:
\vskip1.000000\baselineskip
116 
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3. Un compuesto de la reivindicación 2, en el que B es fenilo o heteroarilo.
4. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que:
\quad
B es fenilo o heteroarilo.
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5. Un compuesto de la reivindicación 4, en el que:
\quad
R_{3} es uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre: hidrógeno, alquilo, alcoxi, halógeno, alcoxiéter, hidroxilo, cicloalquilo opcionalmente sustituido con R_{4}, heteroarilo opcionalmente sustituido con R_{4}, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{4}, -O(cicloalquilo), fenoxi opcionalmente sustituido con R_{4}, heteroariloxi opcionalmente sustituido con R_{4}, dialquilamino o -SO_{2}alquilo.
6. Un compuesto de la reivindicación 5, en el que: R_{a} es hidrógeno, alcoxi, heteroarilo opcionalmente sustituido con R_{5}, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino, oxazolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, pirrolidinonilo opcionalmente sustituido con R_{5}, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{5}, -CONR_{w}R_{x}, -N(R_{w})CON(R_{y})(R_{x}), -N(R_{y})CON(R_{w})(R_{x}), -N(R_{w})C(O)OR_{x}, -N(R_{w})COR_{y}, -SO_{2}R, -NR_{w}SO_{2}R_{y} o -SO_{2}NR_{w}R_{x}.
7. Un compuesto de la reivindicación 6, en el que:
\quad
r es 1;
\quad
R_{a} es hidrógeno, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino, heteroarilo, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{5}, -CONR_{w}R_{x}, -SO_{2}R_{y}, -NR_{w}SO_{2}R_{y}. -N(R_{y})CON(R_{w})(R_{x}) o -N(R_{w})C(O)OR_{x};
\quad
R_{5} es un sustituyente seleccionado independientemente entre: -C(O)alquilo, -SO_{2}alquilo, -C(O)N(alquilo)_{2}, alquilo, o -C(_{14})alquil-OH; y
\quad
R_{3} es un sustituyente seleccionado independientemente entre: alquilo, alcoxi, halógeno, cicloalquilo, heterociclilo, -O(cicloalquilo), fenoxi o dialquilamino.
\vskip1.000000\baselineskip
8. Un compuesto de la reivindicación 7, en el que:
\quad
B es fenilo o piridinilo;
\quad
R_{a} es hidrógeno, dialquilamino, heterociclilo opcionalmente sustituido con R_{5}, -CONR_{w}R_{x}, -N(R_{y})CON(R_{w})(R_{x}) o -NR_{w}SO_{2}R_{y}; y
\quad
R_{3} es un sustituyente seleccionado independientemente entre: alquilo, alcoxi, heterociclilo; cicloalquilo o -O(cicloalquilo).
\newpage
9. Un compuesto de la reivindicación 1 seleccionado entre el grupo que consiste en:
117
118 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
119 
\newpage
y
120
10. Un compuesto de la reivindicación 1 seleccionado entre el grupo que consiste en:
121 
\vskip1.000000\baselineskip
122
y
123 
\vskip1.000000\baselineskip
11. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de las reivindicaciones 1-10 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
12. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para uso como una medicina.
13. Uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno proliferativo celular.
14. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para tratar un trastorno proliferativo celular.
15. Un compuesto de las reivindicaciones 1-10 para reducir o inhibir la actividad quinasa de uno cualquiera de TrkB, c-Kit y FLT3 en una célula.
16. Un compuesto de las reivindicaciones 1-10 para reducir o inhibir la actividad quinasa de uno cualquiera de TrkB, c-Kit y FLT3 en un sujeto.
17. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de las reivindicaciones 1-10 y un vehículo farmacéuticamente aceptable para prevenir o tratar en un sujeto un trastorno relacionado con uno cualquiera de TrkB, c-Kit y FLT3.
18. La composición farmacéutica de la reivindicación 17 que comprende adicionalmente la administración de uno cualquiera de terapia génica, inmunoterapia, terapia de radiación y un agente quimioterapéutico.
19. Un compuesto de las reivindicaciones 1-10 para el tratamiento de un trastorno proliferativo celular relacionado con uno cualquiera de TrkB, c-Kit y FLT3 en un sujeto donde dicho compuesto se va a administrar al sujeto por liberación controlada a partir de un dispositivo médico intraluminal.
20. El compuesto de la reivindicación 19, en el que dicho dispositivo médico intraluminal comprende una endoprótesis vascular.
21. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de las reivindicaciones 1-10 conjurado con un agente de dirección y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
22. Un compuesto de las reivindicaciones 1-10 conjugado con un compuesto de dirección para tratar un trastorno proliferativo celular o un trastorno relacionado con uno cualquiera de TrkB, c-Kit y FLT3.
23. Una combinación de un agente quimioterapéutico y un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.
24. Un proceso para la preparación de un compuesto de un compuesto de la reivindicación 1, comprendiendo dicho proceso hacer reaccionar un compuesto de Fórmula IV:
\vskip1.000000\baselineskip
124
con un compuesto de Fórmula V:
125
en presencia de una base.
25. Un proceso para la preparación de un compuesto de la reivindicación 1, comprendiendo dicho proceso hacer reaccionar un compuesto de fórmula XII:
126
con un compuesto que comprende R_{1}ONH_{2}.
26. Una composición farmacéutica que comprende el producto preparado por el proceso de las reivindicaciones 24-25.
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