ES2323172T3

ES2323172T3 - Mimeticos de cadena-beta.

Info

Publication number: ES2323172T3
Application number: ES03817163T
Authority: ES
Inventors: Michael Kahn; Eguchi Masakatsu; Sung Hwan Moon; Jae Uk Chung
Original assignee: Choongwae Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Choongwae Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2003-05-30
Filing date: 2003-05-30
Publication date: 2009-07-08
Anticipated expiration: 2023-05-30
Also published as: CN1802378A; JP2006526568A; EP1646633B1; CA2527375A1; AU2003249672A1; ATE428713T1; EP1646633A1; BRPI0318325B8; DE60327263D1; BR0318325A; BRPI0318325B1; AU2003249672B2; CA2527375C; JP4546923B2; WO2004108731A1; NZ543790A; KR20060056896A; KR101018453B1

Abstract

Un compuesto que tiene la siguiente estructura:**(Ver fórmula)** en la que: A es -(CH)-, -N- o -CH2-N-; B es -(CH2)- o -(CH2-CH2)-; D es -(C=O) o -(CH2)-; W es -(C=O)- o nada; X es -NH(C=O)-; Y es oxígeno o azufre; L es hidrógeno, -C(O)NHR3 o R5;...

Description

Miméticos de cadena-\beta.

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Antecedentes de la invención Campo de la invención

La presente invención se refiere, de modo general, a miméticos de cadena-\beta según se define en las reivindicaciones adjuntas.

Descripción de la técnica relacionada

La selección aleatoria de moléculas para su posible actividad como agentes terapéuticos se ha estado llevando a cabo durante muchos años y ha producido una serie de importantes descubrimientos de fármacos. Aunque los avances en la biología molecular y en la química electrónica han conducido a un mayor interés en lo que se ha denominado "diseño racional de fármacos", estas técnicas no han demostrado ser tan rápidas o fiable como se predijo inicialmente. Por tanto, en años recientes se ha renovado el interés y se ha vuelto a la selección aleatoria de fármacos. Con este propósito se han realizado avances concretos en nuevas tecnologías basadas en el desarrollo de bancos de química combinatoria, y la búsqueda en estos bancos para descubrir miembros biológicamente activos.

En general, los bancos de química combinatoria son sencillamente una colección de moléculas. Estos bancos varían según la especie química incluida en el banco, así como en los procedimientos empleados para generar los miembros del banco y para identificar los miembros que interaccionan con dianas biológicas de interés. Aunque este campo aún es joven, los procedimientos para generar y seleccionar bancos ya son bastante diversos y sofisticados. Por ejemplo, un informe reciente de diversos bancos químicos combinatorios ha identificado una serie de dichas técnicas (Dolle, J. Com. Chem., 2(3):383-433, 2000), incluyendo el uso de miembros del banco marcados y no marcados (Janda, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:10779-10785, 1994).

Inicialmente, los bancos de química combinatoria estaban limitados en general a miembros de origen peptídico o nucleotídico. Con este propósito, las técnicas de Houghten et al. ilustran un ejemplo de lo que se denomina un procedimiento "iterativo definido de modo dual" para montar bancos de péptidos combinatorios solubles mediante técnicas de síntesis de escisión (Nature (Londres), 354:84-86, 1991; Biotechniques, 13:412-421, 1992; Bioorg. Med. Chem. Lett., 3:405-412, 1993). Mediante esta técnica se han obtenido bancos de péptidos solubles que contienen decenas de millones de miembros. Estos bancos han demostrado ser eficaces en la identificación de péptidos opioides, tales como metionin- y leucinencefalina (Dooley y Houghten, Life Sci., 52, 1509-1517, 1993), y un banco de péptidos N-acilados se ha empleado para identificar acetalinas, que son potentes antagonistas de opioides (Dooley et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:10811-10815, 1993). En fechas más recientes se ha construido un banco de péptidos opioides con sólo D-aminoácidos y se ha buscado actividad analgésica contre el receptor mu ("\mu") de opioides (Dooley et al., Science, 266:2019-2022, 1994).

Aunque los bancos combinatorios que contienen miembros de origen peptídico y nucleotídico tienen un valor significativo, aún son necesarios en la técnica bancos que contengan miembros de origen diferente. Por ejemplo, los bancos de péptidos tradicionales, en gran medida, simplemente varían la secuencia de aminoácidos para generar miembros del banco. Aunque se reconoce que las estructuras secundarias de los péptidos son importantes para la activi-
dad biológica, estos bancos de péptidos no imparten una estructura secundaria constreñida a los miembros del banco.

Con este propósito, algunos investigadores han ciclado péptidos con puentes disulfuro para intentar proporcionar una estructura secundaria más constreñida (Tumelty et al., J. Chem. Soc., 1067-1968, 1994; Eichler et al., Peptide Res., 7:300-306, 1994). Sin embargo, estos péptidos ciclados en general son aún bastante flexible y son poco biodisponibles y, por tanto, sólo han conseguido un éxito limitado.

En fechas más recientes se han desarrollado compuestos no peptídicos que imitan bastante bien la estructura secundaria de vueltas inversas que se encuentran en las proteínas o los péptidos biológicamente activos. Por ejemplo, la patente de EEUU nº 5.440.013 de Kahn, el documento publicado PCT WO94/03494 de Kahn, y el documento PCT WO02/092010 de Urban, describen compuestos no peptídicos conformacionalmente constreñidos que imitan la estructura tridimensional de las vueltas inversas.

Aunque se han realizado avances significativos en la síntesis y la identificación de miméticos de péptidos conformacionalmente constreñidos, siguen siendo necesarias en la técnica moléculas pequeñas que imiten la estructura secundaria de los péptidos. También son necesarios en la técnica bancos que contengan este tipo de miembros, así como técnicas para sintetizar y seleccionar miembros del banco dirigidos contra dianas de interés, en particular dianas biológicas, para identificar miembros del banco bioactivos. Por ejemplo, la patente de EEUU nº 5.929.237 y su continuación en parte patente de EEUU nº 6.013.458 de Kahn, también describen compuestos conformacionalmente constreñi-
dos que imitan la estructura secundaria de regiones de vueltas inversas de péptidos y proteínas biológicamente activos.

La presente invención también satisface estas necesidades y ofrece otras ventajas relacionadas, proporcionando compuestos conformacionalmente constreñidos que imitan la estructura secundaria de las estructuras de cadena-\beta de péptidos y proteínas biológicamente activos.

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Breve sumario de la invención

Brevemente, la presente invención se dirige a compuestos conformacionalmente constreñidos que imitan la estructura secundaria de las estructuras de cadena-\beta de péptidos y proteínas biológicamente activos. Esta memoria descriptiva también describe bancos que contienen dichos compuestos, así como su síntesis y selección.

Los compuestos de la presente invención tienen la estructura general que se muestra en la reivindicación 1 adjunta.

Breve descripción de los distintos aspectos de los dibujos

Las figuras 1 y 2 ilustran una metodología para preparar bancos de la presente invención, y compuestos de la presente invención.

La figura 3 ilustra una metodología sintética para preparar un banco de la presente invención, y compuestos de la presente invención, como se describe más a fondo en el ejemplo 9.

La figura 4 ilustra una metodología sintética para preparar un banco de la presente invención, y compuestos de la presente invención, como se describe más a fondo en el ejemplo 10.

Descripción detallada de la invención

Se describen compuestos conformacionalmente constreñidos que imitan la estructura secundaria de la regiones de cadena-\beta de péptidos y proteínas biológicamente activos. Estas estructuras miméticas de cadena-\beta tienen utilidad en una amplia gama de campos, incluyendo su uso como agentes de diagnóstico y terapéuticos. También se describen bancos que contienen las estructuras miméticas de cadena-\beta de esta invención, así como procedimientos para seleccionar éstos para identificar miembros biológicamente activos.

En un aspecto, la presente invención se dirige a estructuras miméticas de cadena-\beta de la fórmula que aparece en la reivindicación 1 adjunta. Las estructuras miméticas de cadena-\beta de la presente invención son útiles como agentes bioactivos incluyendo, pero sin limitarse a su uso como agentes de diagnóstico, profilácticos y/o terapéuticos. Los bancos de estructuras miméticas de cadena-\beta de esta descripción son útiles para la identificación de dichos agentes bioactivos. En la práctica de la presente descripción, los bancos pueden contener de decenas a cientos a miles (o más) de estructuras miméticas de cadena-\beta individuales (también se denominan en la presente "miembros").

En un aspecto de la presente descripción, se describe una estructura mimética de cadena-\beta que tiene la siguiente estructura

1

en la que A es -(CH)-, -N- o -CH_{2}-N-, B es -(C=O)- o -(CH_{2})_{m}-, W es -(C=O)--Y(C=O)-,- NH(C=O)- o nada, X es -NH-, -NH(C=O)- o nada, Y es oxígeno o azufre, Z es oxígeno o hidrógeno (cuando Z es hidrógeno, entonces C=Z representa CH_{2}), L es hidrógeno, R_{5}, -C(O)NHR_{3} o sus equivalentes, n = 0 ó 1, y m = 1 ó 2; R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} son iguales o diferentes, y se seleccionan independientemente de hidrógeno, un resto de cadena lateral de aminoácido o su derivado, el resto de la molécula, un conector y un soporte sólido, y sus estereoisómeros.

En un aspecto de la descripción, R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en amino(alquilo C_{2-5}), guanidino(alquilo C_{2-5}), (alquil C_{1-4})guanidino(alquilo C_{2-5}), di(alquil C_{1-4})guanidino(alquilo C_{2-5}), amidino(alquilo C_{2-5}), (alquil C_{1-4})amidino(alquilo C_{2-5}), di(alquil C_{1-4})amidino(alquilo C_{2-5}), alcoxi C_{1-3}, fenilo, fenilo sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), bencilo, bencilo sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidino, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), naftilo, naftilo sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), bisfenilmetilo, bifenilmetilo sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), piridilo, piridilo sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidino, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), piridil(alquilo C_{1-4}), piridil(alquilo C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes de la piridina se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidino, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), pirimidil(alquilo C_{1-4}), pirimidil(alquilo C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes de la pirimidina se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), triazin-2-il(alquilo C_{1-4}), triazin-2-il(alquilo C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes de la triazina se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), imidazo(alquilo C_{1-4}), imidazol(alquilo C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes del imidazol se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), imidazolinil(alquilo C_{1-4}), N-amidinopiperazinil-N-(alquilo C_{0-4}), hidroxi(alquilo C_{2-5}), (alquil C_{1-5})amino(alquilo C_{2-5}), hidroxi(alquilo C_{2-5}), (alquil C_{1-5})amino(alquilo C_{2-5}), N-amidinopiperidinil(alquilo C_{1-4}) y 4-aminociclohexil(alquilo C_{0-2}).

En una realización, R_{1}, R_{2} y R_{3} son iguales o diferentes y representan el resto del compuesto, y R_{4} se selecciona de un resto de cadena lateral de aminoácido o su derivado. En otra realización, L representa -C(=O)NHR_{3}, y R_{1}, R_{2} y R_{3} son los iguales o diferentes y representan el resto del compuesto o un resto de cadena lateral de aminoácido o su derivado, y R_{4} es hidrógeno.

Tal como se emplea en la presente, un "resto de cadena lateral de aminoácido" representa cualquier resto de cadena lateral de aminoácido presente en proteínas naturales incluyendo, pero sin limitarse a los restos de cadena lateral de aminoácidos naturales identificados en la tabla 1. Otros restos de cadena lateral de aminoácidos naturales de esta invención incluyen, pero sin limitarse a los restos de cadena lateral de 3,5-dibromotirosina, 3,5-diyodotirosina, hidroxilisina, y-carboxiglutamato, fosfotirosina y fosfoserina. Además, también pueden utilizarse cadenas laterales de aminoácidos glicosilados en la práctica de esta invención incluyendo, pero sin limitarse a treonina, serina y asparagina glicosiladas.

TABLA 1

2

3

Además de los restos de cadena lateral de aminoácidos naturales, los restos de cadena lateral de aminoácidos de la presente invención también incluyen diversos derivados de éstos. Tal como se emplea en la presente, un "derivado" de un resto de cadena lateral de aminoácido incluye modificaciones y/o variaciones de los restos de cadena lateral de aminoácidos naturales. Por ejemplo, los restos de cadena lateral de los aminoácidos alanina, valina, leucina, isoleucina y fenilalanina pueden clasificarse, en general, como restos alquilo, arilo o arilalquilo inferior. Los derivados de los restos de cadena lateral de aminoácidos incluyen otros restos alquilo, arilo o arilalquilo inferior de cadena lineal o ramificada, cíclicos o no cíclicos, sustituidos o no sustituidos, y saturados o insaturados.

Tal como se emplean en la presente, las expresiones "el resto del compuesto" y "el resto de la molécula" significan cualquier resto, agente, compuesto, soporte, molécula, conector, aminoácido, péptido o proteína unidos covalentemente a la estructura mimética de cadena-\beta. La unión se realiza preferiblemente en las posiciones R_{1} y/o R_{2} y/o R_{3}. Estas expresiones también incluyen restos de cadena lateral de aminoácidos y sus derivados.

Tal como se emplea en la presente, los "restos alquilo inferior" contienen de 1-12 átomos de carbono, los "restos arilo inferior" contienen de 6-12 átomos de carbono, y los "restos aralquilo inferior" contienen de 7-12 átomos de carbono. Por tanto, en una realización, el derivado de cadena lateral de aminoácido se selecciona de un alquilo C_{1-12}, un arilo C_{6-12}, y un arilalquilo C_{7-12}, y en una realización más preferida, de un alquilo C_{1-7}, un arilo C_{6-10}, y un arilalquilo C_{7-11}.

Los derivados de cadena lateral de aminoácidos de esta invención incluyen además derivados sustituidos de los restos alquilo, arilo y arilalquilo inferior, en los que el sustituyente se selecciona, pero no se limita a uno o más de los siguientes restos químicos: -OH, -OR, -COOH, -COOR, -CONH_{2}, -NH_{2}, -NHR, -NRR, -SH, -SR-, -SO_{2}R, -SO_{2}H, -SOR y halógeno (incluyendo F, Cl, Br y I), en los que cuando aparece R, éste se selecciona independientemente de restos alquilo, arilo y aralquilo inferior de cadena lineal o ramificada, cíclicos o no cíclicos, sustituidos o no sustituidos, y saturados o insaturados. En un aspecto, el sustituyente tiene menos de 18 átomos de carbono. Además, los restos alquilo, arilo y arilalquilo inferior cíclicos de esta invención incluyen naftaleno, así como compuestos heterocíclicos como tiofeno, pirrol, furano, imidazol, oxazol, tiazol, pirazol, 3-pirrolina, pirrolidina, piridina, pirimidina, purina, quinolina, isoquinolina y carbazol. Los derivados de cadena lateral de aminoácidos incluyen además derivados de heteroalquilo de la porción alquílica de los restos alquilo y aralquilo inferior incluyendo, pero sin limitarse a silanos y fosfonatos de alquilo y aralquilo.

En un aspecto de la invención, los restos R_{1}, R_{2} y R_{3} se seleccionan de -OH, -OR, -COR, -COOR, -CONH_{2}, -CONR, -CONRR, -NH_{2}, -NHR, -NRR, -SO_{2}R y -COSR, en los que cuando aparece R es como se definió anteriormente.

En otra realización, y además de ser un resto lateral de aminoácido o su derivado (o el resto del compuesto en el caso de R_{1}, R_{2} y R_{3}), R_{1}, R_{2} o R_{3} pueden ser un conector que facilita la unión del compuesto a otro resto o compuesto. Por ejemplo, los compuestos de esta invención pueden estar unidos a uno o más compuestos conocidos, como biotina, para su uso en un ensayo de selección o diagnóstico. Además, R_{1}, R_{2} o R_{3} pueden ser un conector que une el compuesto a un soporte sólido (tal como un soporte utilizado en la síntesis de péptidos en fase sólida) o, como alternativa, pueden ser el propio soporte. En esta realización, la unión a otro resto o compuesto, o a un soporte sólido, se realiza preferiblemente en la posición R_{1}, R_{2} o R_{3}, y más preferiblemente en la posición R_{3}.

En la realización en que X está ausente, A es N, B es -(C=O), y L es -C(O)NHR_{3}, los compuestos de cadena-\beta de esta invención tienen la siguiente estructura (I'):

4

en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, W, Y, Z y n son como se definió anteriormente. En una realización preferida, R_{2} y R_{3} representan el resto del compuesto, y R_{1} y R_{4} se seleccionan de restos de cadena lateral de aminoácidos.

En la realización en que X está ausente, A es N, B es -(CH_{2})_{m}-, y L es -C(O)NHR_{3}, las estructuras miméticas de cadena-\beta de esta invención tienen la siguiente estructura (I''):

5

en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, W, Y, Z, m y n son como se definió anteriormente. En una realización preferida, R_{2} y R_{3} representan el resto del compuesto, y R_{1} y R_{4} se seleccionan de restos de cadena lateral de aminoácidos.

En una realización más específica en que X es -NH-, A es -(CH)-, B es -(CH_{2})_{m}-, y L es -C(O)NHR_{3}, la estructura mimética de cadena-\beta tiene la siguiente estructura (I'''):

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en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, W, Y, Z, m y n son como se definió anteriormente.

En una realización más específica en que A es -CH_{2}-N-, B es -(CH_{2})_{m}-, y L es -C(O)NHR_{3}, los compuestos de esta invención tienen la siguiente estructura (I''''):

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opcionalmente en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, W, X, Y, Z, m y n son como se definió anteriormente, W está ausente, Z es oxígeno e Y es oxígeno.

Las estructuras miméticas de cadena-\beta de la presente invención pueden prepararse utilizando las moléculas componentes de partida apropiadas (en lo sucesivo se denominan "piezas componentes"). Brevemente, en la síntesis de las estructuras miméticas de cadena-\beta que tienen la estructura (I'), la primera y la segunda pieza componente se acoplan para formar un primer-segundo intermedio combinado y, si es necesario, las piezas componentes tercera y/o cuarta se acoplan para formar un tercer-cuarto intermedio combinado (o, si está disponible en el mercado, puede utilizarse un único tercer intermedio), entonces se acoplan el primer-segundo intermedio combinado y el tercer-cuarto intermedio combinado (o tercer intermedio) para proporcionar un primer-segundo-tercer-cuarto intermedio (o un primer-segundo-tercer intermedio) que se cicla para producir las estructuras miméticas de cadena-\beta de esta invención. Como alternativa, las estructuras miméticas de cadena-\beta de estructura (I') pueden prepararse mediante el acoplamiento secuencial de las piezas componentes individuales de forma discontinua en una disolución o mediante síntesis en fase sólida como se emplea habitualmente en la síntesis de péptidos en fase sólida.

Dentro del contexto de la presente descripción, una "primera pieza componente" tiene la siguiente estructura 1:

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en la que R_{2}, A y B son como se definió anteriormente, y R es un grupo protector adecuado para su uso en la síntesis de péptidos. Los grupos R adecuados incluyen grupos alquilo y, en una realización preferida, R es un grupo metilo. Estas primeras piezas componentes pueden sintetizarse con facilidad mediante aminación reductora acoplando CH(OR)_{2}-(CH_{2})_{m}-CHO con H_{2}N-R_{2}, o mediante desplazamiento desde CH(OR)_{2}-(CH_{2})_{m}-Br.

Una "segunda pieza componente" de esta descripción tiene la siguiente estructura 2:

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en la que L y R_{4} son como se definió anteriormente, P es un grupo protector de amino adecuado para su uso en la síntesis de péptidos, y X representa el grupo saliente del grupo ácido carboxílico activado. Los grupos protectores preferidos incluyen t-butil dimetil sililo (TBDMS), BOC, FMOC y ALOC (aliloxicarbonilo). Cuando L es -C(O)NHR_{3}, -NHR_{3} puede ser un grupo protector de carboxilo. Los aminoácidos N-protegidos están disponibles en el mercado, por ejemplo, los aminoácidos FMOC están disponibles en una diversidad de fuentes. La conversión de estos aminoácidos N-protegidos en las segundas piezas componentes de esta invención puede lograrse con facilidad mediante la activación del grupo ácido carboxílico del aminoácido N-protegido. Los grupos ácido carboxílico activados adecuados incluyen haluros de ácido en los que X es un haluro, como cloruro o bromuro, anhídridos de ácidos en los que X es un grupo acilo, como acetilo, ésteres reactivos, como ésteres de N-hidroxisuccinimida y ésteres de pentafluorofenilo, y otros intermedios activados, como el intermedio activo formado en una reacción de acoplamiento utilizando una carbodiimida, como diciclohexilcarbodiimida (DCC).

En el caso de que un derivado de azido de un aminoácido sea la segunda pieza componente, estos compuestos pueden prepararse a partir del correspondiente aminoácido mediante la reacción descrita en Zaloom et al. (J. Org. Chem., 46:5173-5176, 1981).

Una "tercera pieza componente" de esta descripción tiene la siguiente estructura 3:

R_{1}-NH_{2}

\hskip0.5cm

o

\hskip0.5cm

R_{3}-NH_{2}

en la que R_{1} y R_{3} son como se definió anteriormente. Las terceras piezas componentes adecuadas están disponibles en una diversidad de fuentes, o pueden prepararse con facilidad mediante técnicas sintéticas orgánicas convencionales que se utilizan habitualmente para la síntesis de aminas primarias.

De forma más específica, las estructuras miméticas de cadena-\beta de esta descripción de estrutura (I') se sintetizan haciendo reaccionar una primera pieza componente con una segunda pieza componente para producir un primer-segundo intermedio combinado, seguido de hacer reaccionar el primer-segundo intermedio combinado con terceras piezas componentes de modo secuencial, o terceras y cuartas piezas componentes, para proporcionar un primer-segundo-tercer-cuarto intermedio combinado, y después ciclar este intermedio para producir la estructura mimética de cadena-\beta.

La síntesis general de una estructura mimética de cadena-\beta que tenga la estructura I' puede llevarse a cabo mediante la siguiente técnica. Una primera pieza componente 1 se acopla con una segunda pieza componente 2 utilizando un reactivo de acoplamiento, como fosgeno, para producir, después de la N-desprotección, un primer-segundo intermedio combinado 1-2 como se ilustra a continuación:

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en la que A, B, L, R, R_{2}, R_{4}, P, X y n son como se definió anteriormente. X_{2}C(=S) es un ejemplo de un agente de acoplamiento y pueden emplearse otros tipos de agentes de acoplamiento. La síntesis de piezas componentes representativas de esta invención se describe en los ejemplos. Los compuestos miméticos de cadena-\beta con las estructuras (I'') a (I''') pueden prepararse mediante técnicas análogas a la síntesis de componentes modulares descrita anteriormente, pero con las modificaciones apropiadas para las correspondientes piezas.

En otro aspecto de esta descripción, se describen bancos que contienen las estructuras miméticas de cadena-\beta de la presente invención. Una vez montados, los bancos de la presente invención pueden seleccionarse para identificar miembros individuales que tengan bioactividad. Esta selección de los bancos para descubrir miembros bioactivos puede implicar, por ejemplo, evaluar la actividad de unión de los miembros del banco o evaluar el efecto que tienen los miembros del banco sobre un ensayo funcional. La selección normalmente se lleva a cabo poniendo en contacto los miembros del banco (o un subconjunto de miembros del banco) con una diana de interés, como por ejemplo un anticuerpo, una enzima, un receptor o una línea celular. Los miembros del banco que son capaces de interaccionar con la diana de interés se denominan en la presente "miembros del banco bioactivos" o "miméticos bioactivos". Por ejemplo, un mimético bioactivo puede ser un miembro del banco que es capaz de unirse a un anticuerpo o a un receptor, que es capaz de inhibir una enzima, o que es capaz de provocar o de antagonizar una respuesta funcional asociada, por ejemplo, con una línea celular. En otras palabras, la selección de bancos de la presente invención determina cuáles son los miembros del banco que son capaces de interaccionar con una o más dianas biológicas específicas de interés. Cuando se produce esta interacción, el mimético (o miméticos) bioactivo que interacciona puede identificarse a partir de los miembros del banco. La identificación de un único (o un número limitado) mimético (o miméticos) bioactivo a partir del banco produce estructuras miméticas de cadena-\beta que en sí mismas son biológicamente activas y, por tanto, son útiles como agentes de diagnóstico, profilácticos o terapéuticos, y que después pueden utilizarse para avanzar significativamente en la identificación de compuestos líderes en estos
campos.

La síntesis de los miméticos de péptidos del banco de la presente descripción puede realizarse utilizando técnicas de síntesis peptídica conocidas, en combinación con la primera, segunda, tercera y opcionalmente cuarta piezas componentes de esta invención. De manera más específica, cualquier secuencia de aminoácidos puede añadirse al N-terminal y/o al C-terminal del compuesto conformacionalmente constreñido. Para este fin, los miméticos pueden sintetizarse sobre un soporte sólido (tal como una resina PAM) mediante técnicas conocidas (véase, John M. Stewart y Janis D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 1984, Pierce Chemical Comp., Rockford, III) o sobre una resina unida mediante sililo por medio de una unión con alcohol (véase, Randolph et al., J. Am. Chem. Soc., 117:5712-5714, 1995).

Además puede utilizarse una combinación de técnicas de síntesis en disolución y en fase sólida para sintetizar los miméticos de péptidos de esta invención. Por ejemplo, puede utilizarse un soporte sólido para sintetizar la secuencia del péptido lineal hasta el punto en que se añade la cadena-\beta conformacionalmente constreñida a la secuencia. Una estructura mimética de cadena-\beta conformacionalmente constreñida adecuada que se ha sintetizado previamente mediante técnicas de síntesis en disolución puede añadirse entonces como el siguiente "aminoácido" a la síntesis en fase sólida (es decir, el mimético de cadena-\beta conformacionalmente constreñido, que tiene un N-terminal y un C-terminal, puede utilizarse como el siguiente aminoácido que se va a añadir al péptido lineal). Tras la incorporación de la estructura mimética de cadena-\beta conformacionalmente constreñida a la secuencia pueden añadirse otros aminoácidos para completar el péptido unido al soporte sólido. Como alternativa, las secuencias peptídicas lineales protegidas en el N-terminal y C-terminal pueden sintetizarse sobre un soporte sólido, retirarse del soporte, y después acoplarse a las estructuras miméticas de cadena-\beta conformacionalmente constreñidas en disolución utilizando técnicas de acoplamiento en disolución conocidas.

En otro aspecto de la invención se describen procedimientos para construir los bancos. Las técnicas de la química combinatoria tradicionales (véase, por ejemplo, Gallop et al., J. Med. Chem., 37:1233-1251, 1994) permiten preparar con rapidez un vasto número de compuestos mediante la combinación secuencial de reactivos sobre un andamio molecular básico. Las técnicas combinatorias se han utilizado para construir bancos de péptidos derivados de los aminoácidos naturales. Por ejemplo, tomando 20 mezclas de 20 aminoácidos diferentes protegidos de forma adecuada, y acoplando cada una con uno de los 20 aminoácidos se crea un banco de 400 (es decir, 20^{2}) dipéptidos. Si se repite el procedimiento siete veces se prepara un banco de péptidos formado por aproximadamente 26 billones (es decir, 20^{8}) de octapéptidos.

En otro aspecto de la descripción se describen procedimientos para seleccionar los bancos para buscar bioactividad y para aislar los miembros del banco bioactivos. Los bancos de la presente invención pueden ensayarse para detectar bioactivida mediante una diversidad de técnicas y procedimientos. En general, el ensayo de selección puede realizarse (1) poniendo en contacto un banco con una diana biológica de interés, tal como un receptor, y dejar que se produzca la unión entre los miméticos del banco y la diana, y (2) detectar el acontecimiento de unión mediante un ensayo apropiado, tal como mediante el ensayo calorimétrico descrito por Lam et al. (Nature, 354:82-84, 1991) o Griminski et al. (Biotechnology, 12:1008-1011, 1994) (incorporándose ambos como referencia en la presente). En una realización preferida, los miembros del banco están en disolución y la diana se inmoviliza sobre un soporte sólido. Como alternativa, el banco puede inmovilizarse sobre una fase sólida y puede sondarse poniéndolo en contacto con la diana en disolución.

La síntesis de los miméticos de péptidos de un banco de la presente descripción puede realizarse utilizando el esquema general para preparar un banco de miméticos de cadena-\beta indicado en la figura 1. La síntesis de los miméticos de péptidos seleccionados a partir de bancos de moldes bicíclicos de la presente invención se realizó utilizando un bloque reactor FlexChem que tiene una placa de 96 pocillos. En el anterior esquema, "Pol" representa una resina de cloruro de 2-clorotritilo (Novabiochem) y a continuación se proporciona un procedimiento detallado.

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Etapa 1

La resina de cloruro de 2-clorotritilo (1 mmol/g) y una disolución de Fmoc-R_{1}-aminoácido (1,5 equiv.) y DIEA (2 equiv.) en DCE se colocó en un bloque Robinson de 96 pocillos (Flexchem). La mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente. La resina se lavó con DMF, MeOH y después DCM.

Etapa 2

A la resina hinchada por el DCM antes de la reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se repitió la etapa de desprotección y la mezcla del producto se lavó con DMF, MeOH y después DCM. Se añadió una disolución de ácido 4-R_{2}-amino-2-Fmoc-aminobutírico (1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP a la resina. Después la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente, la resina se lavó con DMF, MeOH y después DCM.

Etapa 3

A la resina hinchada por el DCM antes de la reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se repitió la etapa de desprotección y la mezcla del producto se lavó con DMF, MeOH y después DCM. Se añadió una disolución de ácido 2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-5,5-dimetoxipentanoico (1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP a la resina. La mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente y después la resina se lavó con DMF, MeOH y después
DCM.

Etapa 4

A la resina hinchada por el DCM antes de la reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se repitió la etapa de desprotección y la mezcla del producto se lavó con DMF, MeOH y después DCM. Se añadió una disolución de un R_{3}-ácido disponible en el mercado (1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP a la resina. Después la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente y después la resina se lavó con DMF, MeOH y después DCM.

Etapa 5

La resina se trató con ácido fórmico (1,2 ml cada pocillo) durante 18 horas a temperatura ambiente. Después la resina se retiró mediante filtración, el filtrado se condensó a presión reducida utilizando SpeedVac (Servant) para producir el producto como un aceite. Estos productos se diluyeron con agua al 50%/acetonitrilo y después se liofilizaron después de congelarse.

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La tabla 2 muestra un banco de miméticos de cadena-\beta que puede prepararse según la presente descripción; en el ejemplo 9 se ofrece una preparación representativa. Los compuestos de la tabla 2 ilustran un aspecto de la invención, a saber, los compuestos en que A es -(CH)-, B es -(CH_{2})_{m}, en los que m = 1, W es -(C=O)-, X es -NH(CH=O)-, Y es oxígeno, Z es hidrógeno, de manera que C=Z representa CH_{2}, L es -C(=O)NHR_{3}, n = 0, R_{4} es hidrógeno, y R_{1}, R_{2} y R_{3} son iguales o diferentes y se seleccionan independientemente de un resto de cadena lateral de aminoácido o su derivado, el resto de la molécula, un conector y un soporte sólido, o sus estereoisómeros. En diversas realizaciones de este aspecto de la invención, R_{1}, R_{2} y R_{3} se seleccionan independientemente de restos de peso molecular relativamente bajo, es decir, grupos orgánicos que tienen un peso molecular entre 15 (metilo) y 1.000 g/mol; y/o al menos uno de R_{1}, R_{2} y R_{3} representa una cadena lateral de aminoácido o su derivado. Por ejemplo, en los compuestos de la tabla 2, R^{3} representa derivados del ácido aspártico. En un aspecto, los compuestos de la presente invención tienen un peso molecular en el intervalo de aproximadamente 440 a 750 g/mol, y los compuestos de la tabla 2 proporcionan numerosas ilustraciones de estos compuestos.

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TABLA 2

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La síntesis de los miméticos de péptidos de un banco de la presente descripción puede realizarse utilizando el esquema general para preparar un banco de miméticos de cadena-\beta indicado en la figura 2. La síntesis de los miméticos de péptidos seleccionados a partir de bancos de moldes bicíclicos de la presente invención se realizó utilizando un bloque reactor FlexChem que tiene una placa de 96 pocillos. En el anterior esquema, "Pol" representa una resina de cloruro de 2-clorotritilo (Novabiochem) y a continuación se proporciona un procedimiento detallado.

Etapa 1

La resina de cloruro de 2-clorotritilo (1 mmol/g) y una disolución de Fmoc-R_{1}-beta-aminoácido (1,5 equiv.) y DIEA (2 equiv.) en DCE se colocó en un bloque Robinson de 96 pocillos (Flexchem). La mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente. La resina se lavó con DMF, MeOH y después DCM.

Etapa 2

A la resina hinchada por el DCM antes de la reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se repitió la etapa de desprotección y después la mezcla del producto se lavó con DMF, MeOH y después DCM. Se añadió una disolución de ácido 4-R_{2}-amino-2-Fmoc-aminobutírico (1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP a la resina. Después la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente, la resina se lavó con DMF, MeOH y después DCM.

Etapa 3

A la resina hinchada por el DCM antes de la reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se repitió la etapa de desprotección y la mezcla del producto se lavó con DMF, MeOH y después DCM. Se añadió una disolución de ácido 2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-5,5-dimetoxipentanoico (1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP a la resina. Después la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente y la resina se lavó con DMF, MeOH y después DCM.

Etapa 4

A la resina hinchada por el DCM antes de la reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se repitió la etapa de desprotección y después la mezcla del producto se lavó con DMF, MeOH y después DCM. Se añadió una disolución de un R_{3}-ácido disponible en el mercado (1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP a la resina. Después la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente y después la resina se lavó con DMF, MeOH y después DCM.

Etapa 5

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La tabla 3 muestra un banco de miméticos de cadena-\beta que puede prepararse según la presente invención; en el ejemplo 10 se ofrece una preparación representativa. Los compuestos de la tabla 3 ilustran un aspecto de la invención, a saber, los compuestos en que A es -(CH)-, B es -(CH_{2})_{m}, en los que m = 1, W es nada, es decir, es un enlace directo entre R^{b} y N del anillo heterocíclico, X es -NH(CH=O)-, Y es oxígeno, Z es hidrógeno, de manera que C=Z representa CH_{2}, L es -C(=O)NHR_{3}, n = 0, R_{4} es hidrógeno, y R_{1}, R_{2} y R_{3} son iguales o diferentes y se seleccionan independientemente de un resto de cadena lateral de aminoácido o su derivado, el resto de la molécula, un conector y un soporte sólido, o sus estereoisómeros. En diversas realizaciones de este aspecto de la invención, R_{1}, R_{2} y R_{3} se seleccionan independientemente de restos de peso molecular relativamente bajo, es decir, grupos orgánicos que tienen un peso molecular entre 15 (metilo) y 1.000 g/mol; y/o al menos uno de R_{1}, R_{2} y R_{3} representa una cadena lateral de aminoácido o su derivado. Por ejemplo, en los compuestos de la tabla 3, R^{3} representa derivados del ácido glutárico. En un aspecto, los compuestos de la presente invención tienen un peso molecular en el intervalo de aproximadamente 450 a 800 g/mol, y los compuestos de la tabla 3 proporcionan numerosas ilustraciones de estos compuestos.

TABLA 3

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Las estructuras miméticas de cadena-\beta de la presente invención pueden utilizarse como agentes bioactivos, tales como agentes de diagnóstico, profilácticos y terapéuticos. Preferiblemente, los compuestos se formulan en una forma farmacéuticamente aceptable y después se administran a un paciente que necesite un tratamiento con las estructuras miméticas de cadena-\beta de la presente invención.

Por tanto, la presente descripción proporciona una composición farmacéutica que contiene un compuesto de las estructuras (I'') a (I'''). Para la preparación de la composición farmacéutica que contiene los presentes compuestos, los expertos en la técnica pueden utilizar conocimientos de dominio público y técnicas que son conocidas en la técnica pertinente. Se emplean variedades generalmente conocidas de vehículos y otros aditivos para la preparación de la composición de la presente invención. Las composiciones farmacéuticas de esta descripción pueden administrarse de la manera convencional para la afección de enfermedad que se desee tratar, por ejemplo mediante administración oral, rectal o parenteral.

Para estos fines, los compuestos de la presente invención pueden formularse mediante medios conocidos en la técnica para tomar la forma, por ejemplo, de comprimidos, cápsulas, disoluciones o suspensiones acuosas u oleosas, emulsiones (lípidos), polvos dispersable, supositorios, ungüentos, cremas, gotas y disoluciones o suspensiones inyectables estériles acuosas u oleosas.

Una composición farmacéutica adecuada de la presente descripción es aquella que sea adecuada para la administración oral en una forma de dosificación unitaria como, por ejemplo, un comprimido o una cápsula que contenga de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 1 g del compuesto de esta invención.

En otro aspecto, una composición farmacéutica es aquella que sea adecuada para la administración intravenosa, subcutánea o intramuscular. Un paciente puede recibir, por ejemplo, una dosis intravenosa, subcutánea o intramuscular de aproximadamente 1 \mug/kg a aproximadamente 1 g/kg del compuesto de la presente invención. La dosis intravenosa, subcutánea e intramuscular puede administrarse mediante una inyección en embolada. Como alternativa, la dosis intravenosa puede administrarse mediante una infusión continua a lo largo de un periodo de tiempo.

Como alternativa, un paciente recibirá una dosis oral diaria que es aproximadamente equivalente a la dosis parenteral diaria, administrándose la composición de 1 a aproximadamente 4 veces diarias.

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La siguiente tabla ilustra formas de dosificación farmacéutica representativas que contienen el compuesto o su sal farmacéuticamente aceptable para un uso terapéutico o profiláctico en seres humanos:

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La composición farmacéutica que contiene el compuesto de fórmula general (I) puede utilizarse para una diversidad de efectos biológicamente deseables, incluyendo inhibir una proteasa en un animal de sangre caliente, modular un péptido relacionado con el factor de transcripción de señalización celular en un animal de sangre caliente, e inhibir una quinasa en un animal de sangre caliente. Estos efectos pueden lograrse mediante un procedimiento que comprende administrar al animal que lo necesite una cantidad eficaz del compuesto de fórmula (I).

Además, como se analizará con más detalle a continuación, las estructuras miméticas de cadena-\beta de la presente invención también pueden ser eficaces para inhibir la presentación de MHC-I y/o MHC-II de péptidos a los receptores de células T en un animal de sangre caliente; para inhibir la unión de péptidos a dominios SH2 en un animal de sangre caliente; para inhibir la unión de péptidos a dominios SH3 en un animal de sangre caliente; para inhibir la unión de péptidos a dominios PTB en un animal de sangre caliente; para modular el receptor acoplado a proteína G (GPCR) y el canal iónico en un animal de sangre caliente; y para modular las citoquinas en un animal de sangre caliente.

Inhibición de quinasas (incluyendo la inhibición de dominios SH2 y SH3)

En un aspecto, la presente descripción proporciona un procedimiento para inhibir una quinasa en un animal de sangre caliente. El procedimiento comprende administrar al animal una cantidad de un compuesto de la presente invención, siendo la cantidad eficaz para inhibir una quinasa. Las quinasas (también denominadas proteína quinasas) son una clase de enzimas que catalizan una reacción mediante la cual una biomolécula (de forma típica otra enzima) es fosforilada. Se cree que hasta 1000 quinasas son codificadas por el genoma de mamíferos (Hunter, Cell, 50:823-829, 1987). El gran número de quinasas permite la rápida amplificación de la señal y la existencia de múltiples puntos de regulación.

La fosforilación es una modificación covalente muy habitual que se encuentra en los procesos de transducción de señales y provoca una alteración en la actividad de aquellas proteínas que son fosforiladas. Por tanto, las quinasas son un componente crítico de las vías de señalización. Las quinasas se organizan, de forma típica, en varias regiones funcionales modulares o "dominios" (Cohen, G.B., et al., Cell, 80-237-248, 1995). Un dominio, conocido como "SH3", es una región de 55-70 aminoácidos que se une a péptidos ricos en prolina, en particular de cadena extendida. Otro dominio, conocido como "SH2", es una región de unión a fosfotirosina con una longitud de aproximadamente 100 aminoácidos. Se cree que estos dos dominios están implicados en el reconocimiento y la unión a los sustratos de proteína. Éstos, al igual que otros dominios que incluye sitios de miristoilación y palmotoilación, son responsables del ensamblaje de complejos multiproteínicos que guían al dominio catalítico hacia las dianas correctas (Mayer et al., Mol. Cell. Biol., 12:609-618, 1992; y Mayer y Baltimore, Mol. Cell. Biol., 14:2883-2894, 1994). Aunque se sabe que los dominios SH2 y SH3 están presentes en algunas quinasas, estos dominios también están presentes en otras proteínas. Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse para inhibir la unión mediada por SH2 o SH3 en las quinasas o en otras proteínas.

El cuerpo utiliza las quinasas en un gran número de mecanismos de transducción de señales intracelulares diferentes pero a menudo interrelacionados. Por ejemplo, los factores del crecimientos, los factores de transcripción, las hormonas, las proteínas reguladoras del ciclo celular y muchas otras clases de reguladores celulares utilizan las tirosina quinasas en sus cascadas de señalización (véase, por ejemplo, Bolen et al., FASEB J., 6:3403-3409, 1992; y Ullrich y Schlessinger, Cell, 61:203-212, 1990). Las serina/treonina quinasas forman la mayoría del resto de la familia de las quinasas.

Una estrategia importante para determinar el papel y comprender la función de enzimas, tanto in vitro como in vivo, es el uso de inhibidores específicos de enzimas. Si se descubre que uno o más compuestos inhiben la enzima, el inhibidor puede utilizarse para modular la actividad de la enzima y pueden observarse los efectos de esta disminución. Estas estrategias han contribuido decisivamente en el desciframiento de muchas de las vías del metabolismo intermedio y también han sido importantes en la comprensión de la cinética enzimática y para determinar los mecanismos catalíticos. La presente invención proporciona estos compuestos.

La regulación de muchas respuestas inmunológicas es mediada a través de receptores que transmiten señales a través de tirosina quinasas que contienen dominios SH2. La activación de células T a través del receptor de células T específico de antígenos (TCR) inicia una cascada de transducción de señales que conduce a la secreción de linfoquinas y a la proliferación celular. Una de las respuestas bioquímicas más tempranas tras la activación del TCR es un aumento en la actividad tirosina quinasa. En particular, la activación y la proliferación de células T son controladas mediante la activación, mediada por los receptores de células T, de las tirosina quinasas p56^{lck} y p59^{fyn}, así como ZAP-70 y Syk (Weiss y Litman, Cell, 76:263-274, 1994), que contienen dominios SH2. Otras pruebas indican que varias quinasas de la familia src (lck, blk, fyn) participan en las vías de transducción de señales que surgen de los receptores de antígenos de células B y, por tanto, puede servir para integrar los estímulos recibidos desde varias estructuras de receptores diferentes. Por tanto, los inhibidores que bloquean las interacciones de estos dominios SH2 de quinasas con sus receptores cognados pueden servir como agentes inmunosupresores con utilidad en enfermedades autoinmunológicas, en rechazos de transplantes o como agentes antiinflamatorios, así como agentes anticáncer en casos de leucemias linfocíticas.

Además se conocen PTPasa no transmembrana que contienen dominios SH2, y la nomenclatura se refiere a ellas como SH-PTP1 y SH-PTP2 (Neel, Cell Biology, 4:419-432, 1993). La SH-PTP1 es idéntica a PTP1C, HCP o SHP, y la SH-PTP2 también se conoce como PTP1D o PTP2C. La SH-PTP1 se expresa a altos niveles en células hematopoyéticas de todos los linajes y en todas las etapas de diferenciación. Puesto que el gen SH-PTP1 se identificó como el responsable del fenotipo apolillado (me) de ratón, esto proporciona una base para predecir los efectos de inhibidores que bloquearían su interacción con sus sustratos celulares. Por tanto, se espera que la inhibición de la función SH-PTP1 produzca una respuesta reducidas de células T a la estimulación mitogénica, una disminución de la función de células NK, y una merma en los precursores de células B con potenciales aplicaciones terapéuticas, como se describió anteriormente.

La capacidad de un compuesto de la presente invención para unirse al dominio SH2 de STAT6, o para unirse al dominio SH2 de la proteína tirosina fosfatasa SH-PTP1 puede demostrarse mediante el procedimiento descrito por Payne et al., P.N.A.S. USA, 90:4902-4906, 1993). Pueden seleccionarse bancos de miméticos de unión a SH2 mediante el procedimiento de Songyang et al., Cell, 72:767-7778, 1993. Véase también el procedimiento de Songyang et al., Current Biology, 4:973-982, 1994, para ensayar la capacidad de un compuesto para actuar como sustrato o inhibidor de proteína quinasas.

Por consiguiente, en un aspecto, la presente descripción proporciona un procedimiento para inhibir una fosfatasa en un animal de sangre caliente, comprendiendo dicho procedimiento administrar al animal una cantidad de un compuesto de la presente invención, siendo la cantidad eficaz para inhibir la fosfatasa.

En la diabetes de tipo 2 (no insulino-dependiente), las tirosina fosfatasas (PTP-1b) compensan el efecto de las quinasas de receptores de insulina activadas y puede representar importantes dianas de fármacos. Los experimentos in vitro muestran que la inyección de PTPasa bloquea la fosforilación, estimulada por insulina, de restos tirosilo sobre proteínas endógenas. Por tanto, los compuestos de la invención pueden utilizarse para modular la acción de la insulina en la diabetes.

En otro aspecto, la presente descripción proporciona un procedimiento para inhibir la unión de un resto fosfotirosina en una primera proteína a un dominio SH2 de una segunda proteína. El procedimiento comprende poner en contacto una cantidad de un compuesto de la presente invención con una composición que comprende la primera y la segunda proteína. La cantidad es eficaz para mitigar la unión entre la primera y la segunda proteína que se produce a través del dominio SH2 de la segunda proteína y el resto fosfotirosina de la primera proteína.

Inhibición de proteasas

En otro aspecto, la presente descripción proporciona un procedimiento para inhibir una proteasa en un animal de sangre caliente. El procedimiento comprende administrar al animal una cantidad de un compuesto de la presente invención como se describe en la presente. La cantidad es eficaz para inhibir una proteasa en el animal. En diversas realizaciones, la proteasa es una serina proteasa; la proteasa es una serina proteasa seleccionada de trombina, factor X, factor IX, factor VIII, factor XI, uroquinasa, proteasa de HCV, quimasa triptasa y calicreína; la proteasa es trombina; la proteasa es el factor VII; y la proteasa se selecciona de una aspártico-, cisteína- y metaloproteasa.

Con respecto a la inhibición de proteasas, la catepsina B es una cisteína proteasa lisosómica que normalmente está implicada en el procesamiento de proenzimas y el recambio de proteínas. Unos niveles elevados de actividad se han implicado en la metástasis tumoral (Sloane, B.F. et al., Cancer Metastasis Rev., 9:333-352, 1990), la artritis reumatoide (Werb, Z., Textbook of Rheumatology, Keller, W. N.; Harris, W. D.; Ruddy, S.; Sledge, C. S., eds., 1989, W. B. Saunder Co., Filadelfia, Pa., pp. 300-321), y la distrofia muscular (Katunuma y Kominami, Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol., 108:1-20, 1987).

Las calpaínas son proteasas activadas por Ca^{++} citosólicas o unidas a a membranas que son responsables de la degradación de proteínas citoesqueléticas en respuesta al cambio en los niveles de calcio dentro de la célula. Contribuyen a la degradación de tejidos en la artritis y la distrofia muscular (véase, Wang y Yuen, Trends Pharmacol. Sci., 15:412-419, 1994).

La enzima conversora de interleuquina (ICE) rompe la pro-IL-1-beta para producir IL-1-beta, un mediador clave en la inflamación y, por tanto, los inhibidores de ICE pueden resultar útiles en el tratamiento de la artritis (véase, por ejemplo, Miller B. E. et al., J. Immunol., 154:1331-1338,1995). La ICE o las proteasas de tipo ICE también pueden actuar en la apoptosis (la muerte celular programada) y, por tanto, desempeñar un papel en el cáncer, SIDA, enfermedad de Alzheimer y otras enfermedades en las que está implicada una apoptosis desregulada (véase, Barr y Tomei, Biotechnol., 12:487-493, 1994).

La proteasa de VIH desempeña un papel clave en el ciclo vital del VIH, el virus del SIDA. En las etapas finales de la maduración vírica rompe los precursores poliproteínicos para producir enzimas funcionales y proteínas estructurales del núcleo del virión. Los inhibidores de la proteasa del VIH han sido identificados con rapidez como excelentes dianas terapéuticas para el SIDA (véase, Huff, J. R., J. Med. Chem., 34:2305-2314) y ya han demostrado ser útiles en su tratamiento, según prueba la reciente aprobación por la FDA del ritonavir, el crixiván y el saquinavir.

El virus de la hepatitis C (HCV) es la principal causa de hepatitis no-A y no-B en la actualidad en el mundo. Se estima que infecta hasta 50 millones de personas. En la actualidad no existe un tratamiento satisfactorio disponible para detener el avance de esta enfermedad debilitante. Durante el ciclo vital del virus se produce una poliproteína de aproximadamente 3000 aminoácidos y las proteasas víricas y del hospedante la rompen proteolíticamente para producir los productos génicos víricos maduros. Una serina proteasa localizada dentro de la proteína NS3 de HSV produce una ruptura en cuatro sitios específicos para producir proteínas no estructurales consideradas esenciales para la replicación vírica. Por tanto, los inhibidores de la proteasa de HCV son dianas atractivas para el diseño de fármacos y pueden presentar un gran beneficio terapéutico (Neddermann et al., Biol. Chem., 378:469-476, 1997).

La enzima conversora de angiotensina (ACE) es parte del sistema de renina-angiotensina que desempeña un papel central en la regulación de la presión sanguínea. La ACE rompe la angiotensina I para producir el octapéptido angiotensina II, un potente agente presor debido a su actividad vasoconstrictora. La inhibición de ACE ha demostrado ser terapéuticamente útil en el tratamiento de la hipertensión (Williams, G. H., N. Engl. J. Med., 319:1517-1525,
1989).

Las colagenasas rompen el colágeno, el principal constituyente de la matriz extracelular (por ejemplo, tejido conectivo, piel, vasos sanguíneos). Una elevada actividad colagenasa contribuye a la artritis (Krane et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 580:340-354, 1990), la metástasis tumoral (Flug y Kopf-Maier, Acta Anat., Basilea, 152:69-84, 1995), y otras enfermedades que implican la degradación del tejido conectivo.

Las serina proteasas de tipo tripsina forman una gran familia de enzimas, altamente selectiva, implicada en la hemostasis/coagulación (Davie y Fujikawa, Ann. Rev., 799-829, 1975) y la activación del complemento (Muller-Eberhard, Ann. Rev. Biochem., 44:697-724, 1975). La secuenciación de estas proteasas ha mostrado la presencia de un núcleo de tipo tripsina homólogo con inserciones de aminoácidos que modifican la especificidad y que son responsables, en general, de las interacciones con otros componentes macromoleculares (Magnusson et al., Miami Winter Symposia, 11:203-239, 1976).

La trombina, una serina proteasa de tipo tripsina, actúa para proporcionar una proteolisis limitada, en la generación de fibrina a partir de fibrinógeno y en la actividad del receptor de plaquetas y, por tanto, desempeña un papel crítico en la trombosis y la hemostasis (Mann, K. G., Trends Biochem. Sci., 12:229-233, 1987). La trombina muestra una especificidad notable para la eliminación de los fibrinopéptidos A y B del fibrinógeno mediante la ruptura selectiva de sólo dos enlaces Arg-Gly de las 181 secuencias Arg- o Lys-Xaa en el fibrinógeno (Blomback, Blood Clotting Enzymology, Seeger, W. H. (ed.), Academic Press, Nueva York, 1967, pp. 143-215).

Muchos estados de enfermedad importantes están relacionados con una hemostasis anómala, incluyendo los síndromes coronarios agudos. La aspirina y la heparina se utilizan mucho en el tratamiento de pacientes con síndromes coronarios agudos. Sin embargo, estos agents tienen varias limitaciones intrínsecas. Por ejemplo, la trombosis que complica la ruptura de placas ateroscleróricas tiende a ser un proceso dependiente de plaquetas, mediado por trombina, que es relativamente resistente a la inhibición por la aspirina y la heparina (Fuster et al., N. Engl. J. Med., 326:242-50, 1992).

Los inhibidores de la trombina evitan la formación de trombos en sitios de daños vasculares in vivo. Además, puesto que la trombina también es un potente factor del crecimiento que inicia la proliferación de células del músculo liso en sitios de daños mecánicos en la arteria coronaria, los inhibidores bloquearán esta respuesta proliferativa de células del músculo liso y reducirán la reestenosis. Los inhibidores de trombina también reducirán la respuesta inflamatoria en células de la pared vascular (Harker et al., Am. J. Cardiol., 75:122-16B, 1995).

Además, al menos dos factores de transcripción bien definidos, el factor nuclear (NF)-\kappaB y la proteína activadora (AP)-1, son regulados por el estado de reducción-oxidación (redox) intracelular. La regulación de la expresión génica por el estado redox presenta prometedoras implicaciones terapéuticas. Por ejemplo, los sitios de unión de los factores de transcripción regulados por redox NF-\kappaB y AP-1 se localizan en la región promotora de una gran diversidad de genes que están directamente implicados en la patogénesis de enfermedades, como el SIDA, el cáncer, la aterosclerosis y las complicaciones diabéticas (Sen y Packer, FASEB Journal, 10:709-720, 1996). De forma más específica, la unión de factores de transcripción, como NF-\kappaB y AP-1, a sitios consenso sobre el ADN está controlada por la homeostasis oxidante-antioxidante, en especial por el equilibrio tiol-disulfuro.

En el caso del NF-\kappaB, un tiol fisiológicamente importante que desempeña un papel crucial en la regulación de la función NF-\kappaB es la tiorredoxina reducida o una proteína de tipo tiorredoxina reducida. La tiorredoxina es una importante proteína oxidorreductasa con funciones antioxidantes. Se ha descubierto que al tiorredoxina sobrerregula la unión del NF-\kappaB activado al ADN y, por tanto, aumenta la expresión génica (Schenk et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:1672-1676, 1994). La tiorredoxina se ha implicado en la reducción del NF-\kappaB citosólico activado (concretamente la reducción de cys-62), que puede, por tanto, contribuir a su translocación nuclear y unión al ADN (Hayashi et at., J. Biol. Chem., 268:11380-11388, 1993).

También se ha descubierto que la actividad de unión al ADN de Fos y Jun en el complejo AP-1 es regulada por el estado redox (Abate et al., Science, 249:1157-1162, 1990). Cada proteína contiene una única cisteína conservada (flanqueada por lisina y arginina) en su dominio de unión al ADN. Este tiol no parece formar parte de un enlace disulfuro y puede existir como un ácido sulfénico o sulfínico en su forma oxidada. La Ref-1, una proteína nuclear bifuncional que también posee actividad endonucleasa de reparación del ADN, estimula la unión del AP-1 al ADN mediante la reducción de esta cisteína reguladora. Un mutante Fos, en que la cisteína crítica fue reemplazada por serina, produjo un aumento en tres veces de la actividad de unión del AP-1 al ADN y ya no se sometió al control redox (Okuno et al., Oncogene, 8:695-701, 1993). Por tanto, puesto que al menos cuatro miembros de la familia fos, 3 de la familia jun, y al menos 4 de la familia ATF/CREB de factores de transcripciçon contienen esta cisteína conservada, el control redox de los factores de transcripción parece un mecanismo muy extendido.

Como se mencionó anteriormente, la regulación de factores de transcripción, como NF-\kappaB y AP-1, tiene importantes implicaciones terapéuticas. Por ejemplo, el AP-1 es un importante mediador de la producción de tumores (Yoshioka et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92:4972-4976, 1995). Por tanto, los compuestos que repriman la actividad transcripcional de AP-1 tienen utilidad en el tratamiento del cáncer. Además, debido a su papel directo en la regulación de las respuestas a citoquinas inflamatorias y a endotoxinas, la activación del NF-\kappaB desempeña un papel importante en el desarrollo de enfermedades crónicas, como la artritis reumatoide y de afecciones agudas, como el choque séptico. También se cree que enfermedades autoinmunológicas, como el lupus eritematoso sistémico (SLE) y la enfermedad de Alzheimer, están implicadas en la activación del NF-\kappaB. De forma similar, el NF-\kappaB desempeña un papel importante en la activación de la expresión génica del VIH. Otras afecciones en las que se cree que está implicado el NF-\kappaB incluyen la gripe, la aterosclerosis, la oncogénesis y la ataxia-telangiectasia (AT).

Inhibición de oxidorreductasas

Con respecto a la regulación de los factores de transcripción, los compuestos de esta invención regulan factores de transcripción cuya capacidad para unirse al ADN está controlada por la reducción de un resto cisteína por una oxidorreductasa celular. En una realización, el factor de transcripción es NF-\kappaB. En esta realización, los compuestos de esta invención tienen actividad como mediadores de las respuestas inmunológicas y/o inflamatorias, o actúan para controlar el crecimiento celular. En otra realización, el factor de transcripción es AP-1, y la oxidorreductasa celular es Ref-1. En esta realización, los compuestos de esta invención tienen actividad como agentes antiinflamatorios y/o anticáncer. En otras realizaciones, el factor de transcripción se selecciona de Myb y el receptor de glucocorticoides. Otros factores de transcripción que pueden ser regulados en el contexto de esta invención también incluyen los de la familia NK-\kappaB, como Rel-A, c-Rel, Rel-B, p50 y p52; los de la familia AP-1, como Fos, FosB, Fra-1, Fra-2, Jun, JunB y JunD; ATF; CREB; STAT-1, -2, -3, -4, -5 y -6; NFAT-1, -2 y -4; MAF; factor tiroide; IRF; Oct-1 y -2; NF-Y; Egr-1; y USF-43.

Por consiguiente, en un aspecto la presente descripción proporciona un procedimiento para inhibir una oxidorreductasa en un animal de sangre caliente, que comprende administrar al animal una cantidad de un compuesto de la presente invención, siendo la cantidad eficaz para inhibir la oxidorreductasa. La inhibición de la actividad oxidorreductasa puede utilizarse como un medio para regular la transcripción.

Inhibición de CAAX

En otro aspecto, la presente descripción proporciona un procedimiento para la inhibición de CAAX en un animal de sangre caliente. El procedimiento comprende administrar al animal una cantidad de un compuesto de la presente invención como se describe en la presente. La cantidad es eficaz para proporcionar la inhibición de CAAX en el animal.

La Ras, el producto proteico del oncogén ras, es una proteína unida a membrana implicada en la transducción de señales que regulan la división y el crecimiento celular. La mutaciones del gen ras son una de las anomalías genéticas más habituales asociadas con cánceres humanos (Barbacid, M., Annu. Rev. Biochem., 56:779-827, 1987). Estas mutaciones provocan que una señal de crecimiento siempre esté "encendida" lo cual conduce a una célula cancerosa. Para localizarse en la membrana celular, Ras requiere la prenilación de la cisteína dentro de su secuencia CAAX C-terminal por la farnesil transferasa (FTasa) en que, en la secuencia CAAX, "a" se define como un aminoácido con una cadena lateral hidrófoba y "X" es otro aminoácido. Esta modificación postraduccional es crucial para su actividad. Se ha demostrado que los inhibidores de peptidilo de la FTasa con la secuencia CaaX bloquean o frenan el crecimiento de tumores en cultivo celular y en animales completos (Kohl et al., Science, 260:1934-1937, 1993; Buss and Marsters, Chemistry and Biology, 2:787-791, 1995).

Los procedimientos para seleccionar la actividad de un compuesto para inhibir la actividad CAAX son conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, la patente de EEUU nº 6.391.574, que describe un procedimiento para identificar un compuesto que inhibe la eliminación proteolítica de un tripéptido AAX de una proteína CAAX en una célula. Véase también la patente de EEUU nº 5.990.277, que describe varios ensayos adecuados, y las referencias bibliográficas Gibbs et al., Cell, 77:175, 1994; Gibbs, Cell, 65:1, 1991; Maltese, FASEB J., 4:3319, 1990; Moores et al., J. Biol. Chem., 266:14603, 1991; Goldstein et al., J. Biol. Chem., 266:15575, 1991; patente europea 0 461 869 A2; Casey, J. Lipid Res., 33:1731-1740, 1992; Cox et al., Curr. Opin. Cell Biol., 4:1008-1016, 1992; Garcia et al., J. Biol. Chem., 268:18415-18418, 1993; Vogt et al., J. Biol. Chem., 270:660-664, 1995; Kohl et al., Science, 260:1934-1937, 1993; Garcia et al., J. Biol. Chem., 268:18415-18418, 1993; y Vogt et al., J. Biol. Chem. 270:660-664, 1995).

Moléculas MHC

En otro aspecto, la presente descripción proporciona un procedimiento para inhibir la unión de un péptido antigénico a una molécula MHC de clase uno o de clase dos. El procedimiento comprende poner en contacto un compuesto según la presente invención con una composición que comprende un péptido antigénico y una molécula MHC de clase uno o de clase dos. El compuesto se pone en contacto con el antígeno/molécula en una cantidad eficaz para reducir la afinidad de unión entre las dos especies.

Un aspecto importante del sistema inmunológica es la respuesta de células T. Esta respuesta requiere que las células T reconozcan e interaccionen con complejos de moléculas de la superficie celular, denominados antígenos leucocíticos humanos ("HLA") o complejos de histocompatibilidad mayor ("MHC"), y péptidos (véase, por ejemplo, Male et al., Advanced Immunology, J.P. Lipincott Company, 1987). Los antígenos movilizan una respuesta inmunológica, al menos en parte, siendo ingeridos por una célula de presentación del antígeno (APC) que contiene sobre su superficie una glicoproteína de clase II codificada por un gen en el complejo de histocompatibilidad mayor (MHC). El antígeno entonces se presenta a una célula T auxiliar específica en el contexto de la glicoproteína MHC unida a la superficie, y mediante la interacción del receptor de células T específico de antígeno con el complejo antígeno-MHC, la célula T auxiliar es estimulada para que medie en la respuesta inmunológica específica de antígenos, incluyendo la inducción de la función de células T citotóxicas, la inducción de la función de células B, y la secreción de una serie de factores que ayudan e incitan esta respuesta. En un aspecto de la invención, la molécula MHC es HLA-A2.1, HLA-A1 o HLA-A3.1, o cualquier otro alelo de HLA que esté presente en los pacientes con melanoma.

La capacidad de un compuesto de la presente invención para unirse a moléculas MHC I puede demostrarse fundamentalmente como se describe en Elliot et al., Nature, 351:402-406, 1991. De forma similar, la capacidad de un compuesto de la invención para unirse a moléculas MHC II puede demostrarse mediante el procedimiento de Kwok et al., J. Immunol., 155:2468-2476, 1995.

Proteínas con dominio 14-3-3

En otro aspecto, la presente descripción proporciona un procedimiento para inhibir la unión de un primer péptido a un segundo péptido que comprende un dominio 14-3-3, en el que el primer péptido tiene afinidad de unión al dominio 14-3-3 del segundo péptido. El procedimiento comprende poner en contacto un compuesto de la presente invención con una composición que comprende un (primer) péptido que tiene afinidad de unión al dominio 14-3-3 de la segunda proteína.

Las proteínas que tienen el dominio 14-3-3 y sus compañeros de unión se han descrito en la bibliografía. Estos péptidos pueden utilizarse en el procedimiento de la presente invención. Véase, por ejemplo, Dai y Murakami, J. Neurochem., enero 2003, 84(1):23-34; Lim et al., J. Biol. Chem., 25 de octubre 2002, 277(43):40997-1008; Parvaresch et al., FEBS Lett., 18 de diciembre 2002, 532(3):357-362; Eilers et al., Mol. Cell. Biol., diciembre 2002, 22(24):8514-8526; Liu et al., Cancer Res., 15 de noviembre 2002, 62(22):6475-6480; Truong et al., Proteins, 15 de noviembre 2002, 49(3):321-325; Birkenfeld et al., Biochem. J., 1 de enero 2003, 369(Pt 1):45-54; Espejo et al., Biochem. J., 1 de noviembre 2002, 367(Pt 3):697-702; y Benzing et al., J. Biol. Chem., 6 de septiembre 2002, 277(36):32954-
32962.

En la práctica de los procedimientos de esta descripción, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de esta invención se administra a un animal de sangre caliente que lo necesite. Por ejemplo, los compuestos de esta invención pueden administrarse a un animal de sangre caliente al que se le ha diagnosticado o está en riesgo de desarrollar una afección seleccionada de una o más de enfermedad de Crohn, asma, artritis reumatoide, isquemia, lesiones por reperfusión, enfermedad del receptor frente al transplante (GVHD), esclerosis lateral amiotrófica (ALS), enfermedad de Alzheimer, rechazo de aloinjertos y leucemia de células T en adultos.

Complejo de esclerosis tuberosa

Los pacientes que padecen el complejo de esclerosis tuberosa (TSC) desarrollan de forma típica múltiples lesiones focales en el cerebro, el corazón, el riñón y otros tejidos (véase, por ejemplo, Gómez, M.R., Brain Dev., 17(supl.):55-57, 1995). Estudios con células de mamífero han demostrado que la sobreexpresión de TSC1 (que expresa hamartina) y TSC2 (que expresa tuberina) regula negativamente la proliferación celular e induce la detención del ciclo celular en G_{1}/S (véase, por ejemplo, Miloloza, A. et al., Hum. Mol. Genet., 9:1721-1727, 2000). Otros estudios han demostrado que la hamartina y la tuberina actúan al nivel del complejo de degradación de \beta-catenina y, de forma más específica, que estas proteínas regulan negativamente la estabilidad y la actividad de la \beta-catenina participando en el complejo de degradación de la \beta-catenina (véase, por ejemplo, Mak, B.C., et al., J. Biol. Chem., 278(8):5947-5951, 2003). La \beta-catenina es una proteína de 95 kDa que participa en la adhesión celular mediante su asociación con miembros de la familia de cadherina unidos a membranas, y en la proliferación y la diferenciación celular como un componente clave de la vía Wnt/Wingless (véase, por ejemplo, Daniels, D.L., et al., Trends Biochem. Sci., 26:672-678, 2001). Se ha demostrado que la interrupción de esta vía es oncogénica en seres humanos y roedores. La presente invención proporciona compuestos que modulan la actividad \beta-catenina y, en particular, sus interacciones con otras proteínas y, por consiguiente, puede utilizarse en el tratamiento del TSC.

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Los siguientes ejemplos se proporcionan como ilustración y no como limitación.

Ejemplos

En los ejemplos y los ejemplos de preparación se utilizan las siguientes abreviaturas:

BMS:: dimetilsulfuro de boro

CbzOSu:: benciloxicarbonil-N-hidroxisuccinimida

DIC:: 1,3-diisopropilcarbodiimida

DIEA:: N,N-diisopropiletilamina

DIPEA:: N,N-diisopropiletilamina

DMAP:: N,N-dimetilaminopiridina

DMF:: dimetilformamida

DMSO:: sulfóxido de dimetilo

EA:: acetato de etilo

EDC:: hidrocloruro de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida

EDCI:: hidrocloruro de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida

FmocOsu:: 9-fluoreniloxicarbonil-N-hidroxisuccinimida

HATU:: [hexafluorofosfato de 2-(1H-9-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio]

Hex:: hexano

HOBT:: N-hidroxibenzotriazol

MC:: cloruro de metileno

MeOH:: metanol

-OBn:: -O-bencilo

PPTS:: p-toluensulfonato de piridinio

PyBOP:: hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris-pirrolidinofosfonio

p-TsOH:: ácido p-toluensulfónico

THF:: tetrahidrofurano

TLC:: cromatografía en capa fina.

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Ejemplo preparativo 1

(1) Preparación de la amida del ácido naftalen-2-carboxílico

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A una disolución de ácido 2-naftoico (25 g, 0,145 mmol) en MC (200 ml) se le añadió cloruro de oxalilo (38 ml, 0,4356 mol) y una cantidad catalítica de DMF y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de evaporar el disolvente, el cloruro de acilo bruto se diluyó con MC (200 ml) al cual se le añadió gota a gota una disolución de hidróxido de amonio en agua (160 ml) a temperatura de baño de hielo. Después de agitar durante 1 h, el producto precipitado se recogió mediante filtración con succión, se trituró en hexano y se secó para obtener el compuesto del título, que se utilizó en la siguiente etapa sin más purificación.

(2) Preparación de naftalen-2-ilmetilamina

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A una disolución de la amida bruta obtenida en la anterior etapa (1) en THF (100 ml) se le añadió lentamente BMS (27,5 ml, 0,2904 mmol) a 0ºC. La mezcla de reacción resultante se calentó hasta 60ºC durante 3 h, se extinguió con HCl al 5% a 0ºC, se extrajo con EA y se lavó con HCl al 5%. Las capas acuosas se reunieron y se basificaron con NaOH 1 N y de nuevo se extrajeron con EA. Las capas orgánicas se reunieron y se concentraron para producir el compuesto del título (13 g) como un sólido blanco.

TLC sistema 1: MC/MeOH = 90:10 v/v, Rf = 0,23.

RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 4,07 (s, 3H), 7,48 (m, 3H), 7,79 (m, 4H).

Ejemplo preparativo 2

(1) Preparación de la amida del ácido 1H-indol-2-carboxílico

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A una disolución de ácido indol-2-carboxílico (1 g, 6,21 mmol) en MC (30 ml) se le añadió cloruro de oxalilo (1,64 ml, 0,1862 mol) y una cantidad catalítica de DMF y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de evaporar el disolvente, el cloruro de acilo bruto se diluyó con MC (20 ml) al cual se le añadió gota a gota una disolución de hidróxido de amonio en agua (7 ml) con enfriamiento en un baño de hielo. Después de agitar durante 1 h, el producto precipitado se recogió mediante filtración con succión, se trituró en hexano y se secó para obtener el compuesto del título, que se utilizó en la siguiente etapa sin más purificación.

(2) Preparación de (1H-indol-2-il)metilamina

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A una disolución de la amida bruta obtenida en la anterior etapa (1) en THF (30 ml) se le añadió lentamente BMS (1,18 ml, 12,42 mmol) a 0ºC. La mezcla de reacción resultante se calentó hasta 60ºC durante 3 h, se extinguió con HCl al 5% a 0ºC, se extrajo con EA y se lavó con HCl al 5%. Las capas acuosas se reunieron y se basificaron con NaOH 1 N y de nuevo se extrajeron con EA. Las capas orgánicas se reunieron y se concentraron para producir el compuesto del título (0,28 g) como un aceite amarillo.

TLC sistema 1: MC/MeOH = 90:10 v/v, Rf = 0,15.

RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 3,98 (s, 2H), 7,08 (m, 3H), 7,26 (m, 1H), 7,58 (d, 1H), 9,10 (s a, 1H).

Ejemplo preparativo 3

(1) Preparación del éster bencílico del ácido 2-benciloxicarbonilamino-4-oxobutírico

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A una disolución de Z-Aps-OBn (10 g, 0,028 mol) en MC (200 ml) se le añadió cloruro de oxalilo (2,93 ml, 0,0336 mol) y una cantidad catalítica de DMF a 0ºC y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de evaporar el disolvente, el cloruro de acilo bruto se disolvió en benceno (400 ml) y se añadió hidruro de tributilestaño (15,1 ml, 0,056 mmol) y una cantidad catalítica de Pd(0) lentamente 0ºC y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de evaporar el disolvente, se añadió éter (100 ml)/KF al 10% en agua (100 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, seguido de una filtración para producir una disolución bifásica. La capa orgánica se separó y se concentró para producir un producto bruto, que se purificó mediante una cromatografía en columna para obtener el compuesto del título, aldehído de Z-Aps-OBn (6 g) como un aceite de color amarillo pálido.

Rf: 0,29 en hexano/EA (2/1).

(2) Preparación del éster bencílico del ácido 2-benciloxicarbonilamino-4,4-dimetoxibutírico

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A una disolución del aldehído de Z-Asp-OBn (6 g, 17,58 mmol) obtenido en la anterior etapa (1) en MeOH (100 ml) se le añadió una cantidad catalítica de p-TsOH y se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. Después de que se completase la reacción el disolvente se evaporó para producir un producto bruto que se purificó mediante una cromatografía en columna para obtener el compuesto del título, Z-Asp-OBn acetal (5 g) como un aceite de color amarillo pálido.

Rf: 0,32 en hex./EA (2/1).

(3) Preparación del ácido 2-benciloxicarbonilamino-4,4-dimetoxibutírico

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El Z-Asp-OBn acetal (0,5 g, 1,29 mmol) obtenido en la anterior etapa (2) se disolvió en THF (20 ml)/NaOH (0,11 g, 2,1 mmol) en agua (20 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Después de que desapareciera el material de partida, la mezcla de reacción se concentró mediante evaporación y después se diluyó con agua/EA. La capa acuosa se separó, se acidificó cuidadosamente hasta pH 4-5 con HCl 1 N a 0ºC y de nuevo se extrajo con EA. Las capas orgánicas se reunieron y se concentraron para obtener el compuesto del título, Z-Asp-OBn acetal (0,27 g) como un aceite de color amarillo pálido.

TLC sistema 1: hexano/MeOH = 20:10 v/v, Rf = 0,10.

RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 2,20 (s, 2H), 3,35 (d, 6H), 4,25 (m, 2H), 5,19 (t, 2H), 5,80 (d, 1H), 7,37 (s a, 5H).

(4) Preparación del ácido 2-amino-4,4-dimetoxibutírico

63

En un recipiente de reacción equipado con un balón de hidrógeno gaseoso se añadió una disolución del Z-Asp-OBn acetal (2,22 g, 5,73 mmol) obtenido en la anterior etapa (3) en ácido acético (20 ml) y catalizador de Pearlman y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción resultante se filtró, se concentró y se liofilizó para producir un producto bruto, que se utilizó en la siguiente etapa sin más purificación.

(5) Preparación del ácido 2-(9h-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-4,4-dimetoxibutírico

64

A una disolución del Asp-OH acetal bruto obtenido en la anterior etapa (4) en THF (100 ml)/agua (100 ml) se le añadió FmocOsu (2,13 g, 6,3 mmol)/bicarbonato de sodio (1,93 g, 22,92 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción resultante se concentró y se diluyó con agua/EA. La capa acuosa se separó, se acidificó cuidadosamente hasta pH 4-5 con HCl 1 N a 0ºC y de nuevo se extrajo con EA. Las capas orgánicas se reunieron y se concentraron para producir un producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna, para obtener el compuesto del título (1,5 g) como un sólido espumoso.

Rf: 0,15 en hex./EA (2/1).

Ejemplo preparativo 4

(1) Preparación del ácido 2-benciloxicarbonilaminopentadioico

65

A una disolución del ácido L-glutámico (20 g, 136 mmol) en agua/THF (1/1, 400 ml) se le añadió bicarbonato de sodio (45,7 g, 544 mmol) y se enfrió hasta 0ºC en un baño de hielo. A la mezcla de reacción se le añadió CbzOSu (37,3 g, 150 mmol) y se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Después de que la reacción se hubiese completado, la mezcla de reacción resultante se extrajo con EA. La capa acuosa se separó, se acidificó hasta pH 2 con HCl concentrado a 0ºC y de nuevo se extrajo con EA (4 veces). Las capas orgánicas se concentraron para producir un producto bruto, que se purificó mediante una cromatografía en columna para obtener el compuesto del título (16 g) como un aceite incoloro.

Rf: 0,2 en MC/MeOH (9/1).

(2) Preparación del éster bencílico del ácido 4-(2-carboxietil)-5-oxooxazolidin-3-carboxílico

66

En un aparato Dean-Starck se colocó el ácido N-Cbz-L-glutámico (4 g, 14,22 mmol) obtenido en la anterior etapa (1), paraformaldehído (5 g), una cantidad catalítica de pTsOH, tamices moleculares (5 g) y tolueno (100 ml) y se sometió a reflujo hasta que el material de partida desapareció. La mezcla de reacción resultante se enfrió hasta la temperatura ambiente, se filtró y se concentró para producir un producto bruto, que se purificó mediante una cromatografía en columna para obtener el compuesto del título (2 g) como un aceite incoloro.

Rf: 0,45 sólo en EA.

(3) Preparación del éster bencílico del ácido 5-oxo-5-(3-oxopropil)oxazolidin-3-carboxílico

67

A una disolución del ácido glutámico diprotegido (2 g, 6,82 mmol) obtenido en la anterior etapa (2) en MC (200 ml) se le añadió cloruro de oxalilo (0,7 ml, 7,5 mmol) y una cantidad catalítica de DMF a 0ºC y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de evaporar el disolvente, el cloruro de acilo bruto resultante se disolvió en THF (400 ml) al cual se le añadieron lentamente a 0ºC hidruro de tributilestaño (3,86 ml, 14,34 mmol) y una cantidad catalítica de Pd(0) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de evaporar el disolvente se añadió éter (100 ml)/KF al 10% en agua (100 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, seguido de una filtración para producir una disolución bifásica. La capa orgánica se separó y se concentró para producir un producto bruto, que se purificó mediante una cromatografía en columna para obtener el compuesto del título (0,7 g) como un aceite incoloro.

Rf: 0,23 en hexano/EA (4/1).

(4) Preparación del éster bencílico del ácido 4-(3,3-dimetoxipropil)-5-oxooxazolidin-3-carboxílico

68

A una disolución del aldehído diprotegido (0,7 g, 2,53 mmol) obtenido en la anterior etapa (3) en MeOH (30 ml) se le añadió una cantidad catalítica de pTsOH y se agitó a temperatura ambiente durante 7 h. Después de completar la reaccón, la mezcla de reacción se concentró mediante evaporación del disolvente para producir un producto bruto, que se purificó mediante una cromatografía en columna para obtener el compuesto del título (0,5 g) como un aceite incoloro.

Rf: 0,33 en hexano/EA (4/1).

(5) Preparación del ácido 2-benciloxicarbonilamino-5,5-dimetoxipentanoico

69

El acetal diprotegido (0,456 g, 1,411 mmol) obtenido en la anterior etapa (4) se disolvió en MeOH (20 ml)/NaOH 1 N (10 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de que el material de partida hubiese desaparecido completamente, la mezcla de reacción se concentró mediante evaporación del disolvente y se diluyó con agua/EA. La capa acuosa se separó, se acidificó cuidadosamente hasta pH 4-5 con HCl 1 N a 0ºC y de nuevo se extrajo con EA. Las capas orgánicas se reunieron y se concentraron para obtener el compuesto del título (0,35 g) como un aceite incoloro.

Rf: 0,1 en hex./EA (1/1).

(6) Preparación del ácido 2-amino-5,5-dimetoxipentanoico

70

En un recipiente de reacción equipado con un balón de hidrógeno gaseoso se añadió una disolución del Cbz-acetal (0,35 g, 1,13 mmol) obtenido en la anterior etapa (5) en MeOH (10 ml) y una cantidad catalítica de Pd al 10%/C y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción resultante se filtró y se concentró para producir un producto bruto (0,2 g) como un aceite incoloro, que se utilizó en la siguiente etapa sin más purificación.

Rf: 0,01 en hex./EA (1/1).

(7) Preparación del ácido 2-(9h-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-5,5-dimetoxipentanoico

71

A una disolución del Glu-OH acetal bruto obtenido en la anterior etapa (6) en THF (10 ml)/agua (10 ml) se le añadió FmocOsu (0,42 g, 1,24 mmol)/bicarbonato de sodio (0,5 g, 5,9 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de evaporar el disolvente, la mezcla de reacción resultante se diluyó con agua/EA. La capa acuosa se separó y se acidificó cuidadosamente hasta pH 4-5 con HCl 1 N a 0ºC y de nuevo se extrajo con EA. Las capas orgánicas se reunieron y se concentraron para obtener el compuesto del título (0,19 g) como un aceite incoloro.

TLC sistema 1: sólo EA, Rf = 0,25.

RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 1,75 (m a, 4H), 3,28 (d, 6H), 3,43 (q, 1H), 4,20 (t, 1H), 4,38 (m, 3H), 5,62 (d, 1H), 7,31 (m, 4H), 7,65 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).

Ejemplo preparativo 5

(1) Preparación del ácido 2-terc-butoxicarbonilamino-4-metoxicarbonilaminobutírico

72

A una disolución de Boc-Dab-OH (3 g, 13,75 mmol) en H_{2}O (50 ml) se le añadió lentamente NaOH (2,75 g, 68,75 mmol, 5 equiv.) hasta pH > 11, al cual se añadió cloroformiato de metilo (2,6 g, 27,5 mmol, 2 equiv.) en tolueno (50 ml). La mezcla de reacción resultante se agitó durante 2 h. Para la comprobación mediante TLC se tomó una pequeña cantidad de fase acuosa y se acidificó con HCl 1 N. Después de confirmar que la reacción se había completado mediante TLC, la fase orgánica se separó y la fase acuosa se acidificó con una disolución de HCl al 10% y se extrajo con EA (5 ml x 2). Las fases orgánicas se reunieron, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y se concentraron al vacío para producir un producto bruto (3,277 g, 11,86 mmol, 86%) como un aceite incoloro.

TCL sistema: EA, Rf = 0,2.

RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 1,30-1,50 (s a, 9H), 2,00-2,30 (m, 2H), 3,10-3,30 (m, 2H), 3,70 (s a, 3H), 4,35 (m, 1H), 5,40 (m, 1H), 5,65 (s a, 1H).

(2) Preparación del éster terc-butílico del ácido (1-bencilcarbamoil-3-metoxicarbonilaminopropil)carbámico

73

A una disolución del ácido 2-terc-butoxicarbonilamino-4-metoxicarbonilaminobutírico (1,1 g, 3,98 mmol) obtenida en la anterior etapa (1) en DMF (20 ml) se le añadió EDCI (763 mg, 3,98 mmol, 1 equiv.), HOBT (538 mg, 3,98 mmol, 1 equiv.) y DIEA (1,4 ml, 7,96 mmol, 2 equiv.) a 5ºC y se agitó durante 1 día. Después de confirmar que la reacción se había completado mediante una comprobación con TLC, la disolución de reacción se acidificó con HCl al 10% a 5ºC (hasta un pH de aproximadamente 4) y se extrajo con EA (20 ml). Las fases orgánicas se reunieron y se lavaron con NaHCO_{3} saturado y salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y se concentraron al vacío para producir un residuo que se solidificó añadiendo EA y n-hexano y se purificó mediante una cromatografía en columna para obtener el compuesto del título (620 mg, 1,7 mmol, 43%) como un sólido blanco.

Rf: 0,7 (EA).

RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 1,45 (s a, 9H), 1,75-2,10 (m, 2H), 3,05 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 4,25 (m, 1H), 4,45 (d, 2H, J = 5,7 Hz), 5,45 (m, 1H), 7,05 (m, 1H), 7,20-7,45 (m, 5H).

(3) Preparación del hidrocloruro del éster terc-butílico del ácido (3-amino-3-bencilcarbonilpropil)carbámico

74

A una disolución del éster terc-butílico del ácido (1-bencilcarbamoil-3-metoxicarbonilaminopropil)carbámico (1 g, 2,7 mmol) obtenido en la anterior etapa (2) en 1,4-dioxano (10 ml) se le añadió HCl 4 N en 1,4-dioxano (6,8 ml, 27 mmol) y se agitó durante 2 horas. Después de confirmar que la reacción se había completado mediante comprobación con TLC, la disolución de reacción se concentró y se secó al vacío para producir el compuesto del título como un sólido blanco.

Ejemplo de referencia 1

1-bencil-7-metil-6-tioxo-hexahidro-pirimido[1,6-a]pirimidin-2-ona (A) Preparación de N-bencil-3-[3-(2-[1,3]dioxolan-2-iletil)-3-metiltioureido]-propionamida

75

Una suspensión de hidrocloruro de \beta-alaninbencilamido (1,0 eq.) y N-metilmorfolina (2,2 eq.) en diclorometano se trató con tiofosgeno (1,2 eq.) a 0ºC durante 10 min. Se dejó que la mezcla de reacción se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas más. La disolución transparente se diluyó con acetato de etilo y se lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%, agua destilada y una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso.

Este producto se disolvió en diclorometano y se trató con 2-(N-metil-2-aminoetil)-1,3-dioxolano (0,9 eq.) a 0ºC durante 10 min. Se dejó que la mezcla de reacción se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 4 horas más. La reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%, agua destilada, una disolución de NaHCO_{3} saturada, agua destilada y una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso. Este producto bruto se purificó mediante una cromatografía en columna (gel de sílice, acetato de etilo/hexano = 5/2) para producir el producto puro.

RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 2,02 (m, 2H), 2,60 (m, 2H), 3,18 (s, 3H), 3,82 (m, 2H), 3,88 (m, 2H), 4,03(m, 4H), 4,44 (m, 2H), 4,91 (m, 1H), 6,84 (s a, 1H), 7,25-7,38 (m, 5H).

MS (m/z, ESI), 352 (MH^{+}).

(B) Preparación de 1-bencil-7-metil-6-tioxo-pirimido[1,6-a]pirimidin-2-ona

76

La amida obtenida en la anterior etapa (A) se trató con ácido fórmico a 60ºC durante 4 días. Después de la evaporación del ácido fórmico a presión reducida, el residuo se purificó mediante TLC preparativa (gel de sílice, acetato de etilo/metanol = 5/1) para producir el producto del título puro.

RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 2,05 (m, 1H), 2,36 (m, 1H), 2,64 (d, 1H), 2,96 (m, 1H), 3,30 (m, 3H), 3,44(s, 3H), 4,42 (d, 1H), 4,86 (s a, 1H), 5,08 (d, 1H), 5,49 (m, 1H) 7,25-7,38 (m, 5H).

MS (m/z, ESI), 290 (MH^{+}), 311 (M^{+}Na).

Ejemplo de referencia 2

1,7-dibencil-6-tioxo-hexahidro-pirimido[1,6-a]pirimidin-2-ona (A) Preparación de N-bencil-3-[3-bencil-(3,3-dietoxipropil)tioureido]propionamida

77

Una suspensión de hidrocloruro de \beta-alaninbencilamido (1,0 eq.) y N-metilmorfolina (2,2 eq.) en diclorometano se trató con tiofosgeno (1,2 eq.) a 0ºC durante 10 min. Se dejó que la mezcla de reacción se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas más. La disolución transparente se diluyó con acetato de etilo y se lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%, agua destilada y una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso. Este producto se disolvió en diclorometano y se trató con 2-(N-bencil-1-amino-3,3-dietoxi)propano (0,9 eq.) a 0ºC durante 10 min. Se dejó que la mezcla de reacción se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 6 horas más. La mezcla de reacción resultante se diluyó con acetato de etilo y se lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%, agua destilada, una disolución de NaHCO_{3} saturada, agua destilada y una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso. Este producto bruto se purificó mediante una cromatografía en columna (gel de sílice, acetato de etilo/hexano = 2/1) para producir el producto del título puro.

RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 1,22 (t, 6H), 1,95 (m, 2H), 2,60 (m, 2H), 3,46 (m, 2H), 3,60 (t a, 2H), 3,63 (m, 2H), 3,97 (m, 2H), 4,38 (m, 2H), 4,52 (m, 1H), 5,07 (s a, 2H), 6,16 (s a, 1H), 6,98 (s a, 1H), 7,25-7,38 (m, 10H).

MS (m/z, ESI), 458 (MH^{+}).

(B) Preparación de 1,7-dibencil-6-tioxo-hexahidro-pirimido[1,6-a]pirimidin-2-ona

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78

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La amida obtenida en la anterior etapa (A) se trató con ácido fórmico a 60ºC durante 4 días. Después de la evaporación del ácido fórmico a presión reducida, el residuo se purificó mediante TLC preparativa (gel de sílice, acetato de etilo/metanol = 5/1) para producir el producto puro.

RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 1,94 (m, 1H), 2,24 (m, 1H), 2,62 (m, 1H), 3,01 (m, 1H), 3,18 (m, 1H), 3,43 (m, 1H), 3,62 (m, 1H), 4,39 (d, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,91 (m, 1H), 5,02 (d, 1H), 5,26 (d, 1H), 5,53 (m, 1H), 7,25-7,40 (m, 10H).

MS (m/z, APCI), 366 (MH^{+}).

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Ejemplo de referencia 3

1,7-dibencil-hexahidro-pirimido[1,6-a]pirimidin-2-ona (A) Preparación de N-bencil-3-[3-bencil-3,3-dietoxipropil)tioureido]propionamida

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79

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Una suspensión de hidrocloruro de \beta-alaninbencilamido (1,0 eq.) y N-metilmorfolina (3,2 eq.) en diclorometano se trató con tiofosgeno (0,7 eq.) a 0ºC durante 10 min. Se dejó que la mezcla de reacción se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas más. La disolución transparente se diluyó con acetato de etilo y se lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%, agua destilada y una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso. Este producto se disolvió en diclorometano y se trató con 2-(N-bencil-1-amino-3,3-dietoxi)propano (0,9 eq.) a 0ºC durante 10 min. Se dejó que la mezcla de reacción se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 4 horas más. La mezcla de reacción resultante se diluyó con acetato de etilo y se lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%, agua destilada, una disolución de NaHCO_{3} saturada, agua destilada y una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso. Este producto bruto se purificó mediante una cromatografía en columna (gel de sílice, acetato de etilo/hexano = 2/1) para producir el producto del título puro.

RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 1,23 (t, 6H), 1,87 (m, 2H), 2,55 (m, 2H), 3,24 (m, 2H), 3,49 (m, 2H), 3,59 (m, 2H), 3,65 (m, 2H), 4,45-4,58 (m, 5H), 5,62 (s a, 1H), 6,57 (s a, 1H), 7,25-7,48 (m, 10H).

MS (m/z, ESI), 442 (MH^{+}).

(B) Preparación de 1,7-dibencil-hexahidro-pirimido[1,6-a]pirimidin-2,6-diona

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80

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La amida obtenida en la anterior etapa (A) se trató con ácido fórmico a 60ºC durante 4 días. Después de la evaporación del ácido fórmico a presión reducida, el residuo se purificó mediante TLC preparativa (gel de sílice, acetato de etilo) para producir el compuesto del título.

RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 1,89 (m, 1H), 2,19 (m, 1H), 2,58 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 3,02 (m, 3H), 4,42 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 2,4 Hz, 2H), 4,65 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,98 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 7,25-7,38 (m, 10H).

MS (m/z, ESI), 350 (MH^{+}).

Ejemplo de referencia 4

1,7-dibencil-6-oxo-octahidro-pirimido[1,6-a]pirimidin-2-ona (A) Preparación de una resina ArpoGel unida a (3-bromo-1-metoxipropan-1-oxi)

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81

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Una suspensión de resina ArgoGel seca y para-toluensulfonato de piridinio (240 mg, 0,96 mmol) en 1,2-dicloroetano (15 ml) se calentó a reflujo mientras se retiraba continuamente el disolvente y las trazas de agua. Después de retirar aproximadamente 5 ml del destilado se añadió una disolución de 3-bromo-1,1-dimetoxipropano (700 mg, 3,84 mmol) en 1,2-dicloroetano (5 ml) y la mezcla se mantuvo a reflujo durante 4 h con la retirada continua de EtOH/EDC, tras lo cual la resina se lavó con DMF y dioxano, seguido de una liofilización para producir el producto deseado.

(B) Preparación de una resina ArgoGel unida a (3-bencilamino-1-metoxipropan-1-oxi)

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82

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Una disolución de bencilamina (520 mg, 4,85 mmol) en DMSO (4 ml) se añadió a la resina de bromoacetal (1 g, 0,48 mmol) y la suspensión se agitó a 60ºC durante 15 h. La resina resultante se filtró, se lavó con DMSO, MeOH y MC, y se secó al vacío durante la noche. La amina secundaria se detectó mediante un ensayo de cloranilo.

(C) Preparación de \beta-alaninbencilaminourea

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83

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A una disolución de HCl de \beta-alaninbencilamida (80 mg, 0,36 mmol) en N-metilmorfolina (120 \mul) y MC (2 ml) se le añadió trifosgeno (0,72 mmol) a temperatura ambiente. Después de 10 minutos la disolución de isocianato resultante se añadió a una suspensión de la resina de amina secundaria obtenida en la anterior etapa (2) (100 mg, 0,048 mmol) y se mantuvo la agitación durante 3 h a temperatura ambiente. La resina se lavó con DMF, MeOH y MC y se comprobó que la reacción se había completado con un ensayo de cloranilo.

(D) Preparación de 1,7-dibencil-6-oxo-octahidro-pirimido[1,6-a]pirimidin-2-ona

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84

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La resina que contiene un grupo tiourea de la etapa (C) se trató con ácido fórmico y se mantuvo en agitación durante 15 h. La resina se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró y se purificó mediante una cromatografía (gel de sílice) para obtener el compuesto del título.

MS (m/z, APCI), 366 (MH^{+}).

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Ejemplo de referencia 5

Éster bencílico del ácido 1,7-dibencil-2-oxo-6-tioxo-octahidro-pirimido[1,6-a]pirimidin-4-carboxílico (A) Preparación del éster 4-(9H-fluoren-9-ilmetílico) del éster 1-bencílico del ácido 2-isotiocianatosuccínico

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85

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A una disolución del éster 1-bencílico del ácido 2-terc-butoxicarbonilaminosuccínico (1 g, 3,09 mmol) en MC se le añadió DIC (532 \mul, 1,1 eq.), DMAP (188 mg, 0,5 eq.) y fluorenilmetanol (635 mg, 1,05 eq.). Después de completarse la reacción, la mezcla de reacción resultante se lavó con HCl 1 N y una disolución de NaHCO_{3} saturada y se purificó mediante una cromatografía en columna (gel de sílice) para obtener el fluorenil metil éster (400 mg).

\newpage

Este éster se diluyó en dioxano (10 ml) y se añadió una disolución de HCl 4 N en dioxano y se mantuvo en agitación durante 2 h para eliminar el grupo protector Boc. Después de completarse la reacción, la disolución se evaporó hasta la sequedad. La sal HCl de la amina se diluyó con MC y N-metilmorfolina y se añadió tiofosgeno (1,2 eq.) a aproximadamente 0ºC. Después de completarse la reacción, la mezcla se lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%, agua destilada, una disolución de NaHCO_{3} saturada, agua destilada y una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso. Este producto bruto se purificó mediante una cromatografía en columna (gel de sílice, acetato de etilo/hexano = 1/1) para producir el producto del título puro.

(B) Tiourea del bencil fluorenil éster del ácido aspártico

86

Una disolución en MC del isocianato (0,5 mmol) obtenido en la anterior etapa (A) con N-metilmorfolina se añadió a una suspensión de la resina de amina secundaria (200 mg, 0,04 mmol) obtenida en la etapa (B) del ejemplo 4 y se mantuvo en agitación durante 3 h a temperatura ambiente. La resina resultante se lavó con DMF, MeOH y MC, y se comprobó que la reacción se había completado con un ensayo de cloranilo.

(C) Bencilamida de la tiourea del ácido aspártico

87

La resina obtenida en la anterior etapa (C) se sumergió durante 30 min en DMF (4 ml) y se añadió una disolución de piperidina al 25% para escindir la protección de fluorenilmetilo. La resina resultante se lavó con DMF, MeOH y MC. La resina se secó a presión reducida y se volvió a sumegir, a lo cual se le añadió DIC (8 \mul, 0,05 mmol), HOBt (8 mg, 0,05 mmol) y DIEA (18 \mul, 0,1 mmol) para activar el ácido. Después de agitar durante 30 min se añadió bencilamina y se mantuvo en agitación para obtener la resina de bencilamida deseada.

(D) Preparación del éster bencílico del ácido 1,7-dibencil-2-oxo-6-tioxo-octahidro-pirimido[1,6-a]pirimidin-4-carboxílico

88

La resina obtenida en la anterior etapa (C) se sumergió en MC (4 ml) al cual se le añadió PPTS (10 mg) y se calentó durante 4 h a 60ºC para obtener el compuesto del título.

MS (m/z, ESI), 500 (MH^{+}).

\newpage

Ejemplo de referencia 6

Éster bencílico del ácido 7-bencil-6-tioxo-hexahidro-pirimido[1,6-a]pirimidin-1-carboxílico (A) Preparación del éster bencílico del ácido {3-[3-bencil-3-(3,3-dietoxipropil)tioureido]propil}carbámico

89

Una suspensión del HCl de Cbz-diaminopropano (1,0 eq.) y N-metilmorfolina (2,2 eq.) en MC se trató con tiofosgeno (1,2 eq.) a 0ºC durante 10 min. Se dejó que la disolución resultante se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas más. La disolución transparente resultante se diluyó con acetato de etilo y se lavó con KHSO_{4} al 10%, agua y NaCl saturado. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso, que se disolvió en MC y se trató con N-bencil-1-amino-3,3-dietoxipropano (0,9 eq.) a 0ºC durante 10 min y después se dejó que se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 6 horas más. La mezcla de reacción resultante se diluyó con acetato de etilo y se lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%, agua, NaHCO_{3} saturado, agua y NaCl saturado. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso, que encontes se purificó mediante una cromatografía en columna (gel de sílice, acetato de etilo/hexano, 2/1) para producir el producto del título.

RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 1,17 (t, 6H), 1,5 (s a, 2H), 1,75 (t, 2H), 1,92 (m, 2H), 3,20 (q, 2H), 3,45 (m, 2H), 3,60 (m, 4H), 3,75 (q, 2H), 4,51 (t, 1H), 5,06 (s, 4H), 6,75 (s a, 1H), 7,25-7,38 (m, 10H).

MS (m/z, ESI), 442 (M-OEt^{+}).

(B) Preparación del éster bencílico del ácido 7-bencil-6-tioxo-hexahidro-pirimido[1,6-a]pirimidin-1-carboxílico

90

A una disolución de la amida obtenida en la anterior etapa (A) en MC se le añadió PPTS y se agitó a 70ºC durante la noche. La mezcla de reacción resultante se concentró a presión reducida para producir un residuo, que se purificó mediante TLC preparativa (sólo con acetato de etilo) para obtener el compuesto del título.

RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 1,89 (m, 2H), 1,95 (m, 1H), 2,63 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 3,10 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,89 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,39 (d, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,92 (m, 2H), 5,10 (m, 2H), 7,16-7,4 (m, 10H),

MS (m/z, ESI), 396 (MH^{+}).

Ejemplo de referencia 7

Éster bencílico del ácido 8-acetil-6-oxo-hexahidro-pirazino[1,2-a]pirimidin-1-carboxílico (A) Preparación del ácido [acetil-(2,2-dimetoxietil)amino]acético

91

A una disolución de la sal HCl de bencilglicina (1 eq.) en MeOH se le añadió dimetoxiacetaldehído (1,05 eq.) y después NaCNBH_{3} (1,2 eq.) a temperatura ambiente y se agitó durante 5 h. La mezcla de reacción resultante se concentró a presión reducida para producir un residuo oleoso que se disolvió en MC y se lavó con una disolución de NaHCO_{3} saturada, agua, y una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso, que se disolvió en MC y se trató con trietilamina (3 eq.) y cloruro de acetilo (1,1 eq.) a 0ºC.

Después de completarse la reacción, la mezcla de reacción resultante se lavó con una disolución de NaHCO_{3} saturada, agua, y una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso, que se purificó mediante una cromatografía en columna (gel de sílice, acetato de etilo) para producir el producto puro. Este producto se hidrogenolizó con Pd al 10%/C y un balón que contenía H_{2} para obtener el compuesto del título, que se utilizó en la siguiente etapa sin más purificación.

RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 2,09 (s, 1H), 2,20 (s, 2H), 3,40 (d, 6H), 3,48 (d, 2H), 4,16 (s, 2H), 4,44 (m, 1H).

(B) Preparación del éster bencílico del ácido (3-{2-[acetil-2,2-dimetoxietil)amino]acetilamino}propil)carbámico

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92

\vskip1.000000\baselineskip

A una disolución del ácido (1 eq.) obtenido en la anterior etapa (A) en MC se le añadió HATU (1 eq.), DIPEA (3 eq.) y HCl de Cbz-diaminopropano (1,0 eq.) y se agitó durante 3 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para producir un residuo oleoso, que se purificó mediante TLC preparativa para obtener el compuesto del título.

RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 1,60 (m, 2H), 2,01 (s, 1H), 2,20 (s, 2H), 3,20 (d, 2H), 3,24 (m, 2H), 3,40 (d, 6H), 3,50 (d, 2H), 4,06 (s, 2H), 4,44 (m, 1H), 5,08 (s, 2H), 5,18 (d, 1H), 6,91 (d a, 1H), 7,16 (s a, 5H).

MS (m/z, ESI), 396 (MH^{+}).

(C) Preparación del éster bencílico del ácido 8-acetil-6-oxo-hexahidro-pirazino[1,2-a]pirimidin-1-carboxílico

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93

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A una disolución del precursor de amida protegido con Cbz obtenido en la anterior etapa (B) en MC se le añadió PPTS (1 eq.) a temperatura ambiente y se calentó hasta 70ºC durante 5 h. La mezcla de reacción resultante se concentró para producir un residuo que se caracterizó como sigue:

RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 1,90 (m, 2H), 2,10 (s, 1H), 2,30 (s, 2H), 2,61 (m, 1H), 2,82 (m, 1H), 3,15 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,9 (m, 1H), 4,0 (m, 1H), 4,2 (m, 1H), 4,3 (s, 1H), 4,47 (m, 1H), 5,08-5,18 (m, 2H), 5,28 (s a, 1H), 7,16 (s a, 5H).

MS (m/z, ESI), 332 (MH^{+}).

Ejemplo 8 Éster metílico del ácido 7-benzoilamino-4-bencilcarbamoil-6-oxo-hexahidro-pirrolo[1,2-a]pirimidin-1-carboxílico (A) Preparación del éster bencílico del ácido [1-(1-bencilcarbamoil-3-metoxicarbonilaminopropilcarbamoil)-3,3-dimetoxipropil]carbámico

94

A una disolución del aminoácido acetal protegido con Cbz (100 mg, 1,3 eq.) obtenido en el ejemplo preparativo 3 (3) en MC se le añadió PyBOP (1 eq. del ácido), DIPEA (6 eq. del ácido) y HOBt (1,3 eq.) y se agitaron durante 30 min. A la mezcla de reacción se le añadió la sal HCl de aminobencilamida (71 mg, 0,27 mmol) y se agitó durante 7 h. La mezcla de reacción resultante se lavó con NaHCO_{3} saturado, agua y NaCl saturado. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso que se purificó mediante una cromatografía en columna (gel de sílice, acetato de etilo) para obtener el compuesto del título (50 mg, rendimiento: 35%).

RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 2,1 (t, 2H), 3,05 (m, 1H), 3,50 (ss, 6H), 3,45 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 4,25 (q, 1H), 4,41 (m, 2H), 4,55 (m, 1H), 5,0 (q, 2H), 5,3 (m, 1H), 5,95 (m, 1H), 7,2-7,4 (m, 10H).

(B) Preparación del éster metílico del ácido 4-bencilcarbamoil-7-benciloxicarbonilamino-6-oxo-hexahidro-pirrolo[1,2-a]pirimidin-1-carboxílico

95

El precursor de la ciclación de acetal amida (5 mg, 0,009 mmol) obtenido en la anterior etapa (A) se disolvió en ácido fórmico (1 ml) y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción resultante se concentró hasta la sequedad y se utilizó en la siguiente etapa sin más purificación.

RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 2,25 (m, 2H), 2,61 (t, 2H), 3,24 (m, 1H), 3,50 (s, 3H), 3,55 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 4,45 (m, 2H), 4,65 (d, 1H), 4,8 (m, 2H), 5,3 (m, 1H), 5,7 (d, 1H), 7,15-7,4 (m, 10H), 7,85 (m, 1H).

(C) Preparación del éster metílico del ácido 7-benzoilamino-4-bencilcarbamoil-6-oxo-hexahidro-pirrolo[1,2-a]pirimidin-1-carboxílico

96

En un recipiente de reacción equipado con un balón de hidrógeno gaseoso se colocó una disolución del compuesto de anillo bicíclico con Cbz obtenido en la anterior etapa (B) en MeOH y Pd/C (1 mg) a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. Después de que se completase la reacción, la mezcla de reacción se filtró con un filtro de Celite para eliminar el Pd/C y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo oleoso resultante se disolvió en MC, al cual se le añadió una disolución de ácido benzoico (1,1 eq.) en MC y PyBOP (1,1 eq.), HOBt (1,1 eq.) y DIPEA (3 eq.) y se agitó durante 30 min. A la disolución resultante del ácido activado se le añadió una disolución de amina y se mantuvo en agitación durante 3 h. La mezcla de reacción resultante se concentró a presión reducida para producir un residuo oleoso que se purificó mediante TLC preparativa para obtener el compuesto del título.

RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm: 2,25 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 3,27 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,6 (m, 1H), 4,10 (m, 1H), 4,54 (m, 2H), 4,8 (t, 1H), 5,45 (m, 1H), 7,15-7,42 (m, 10H), 7,9 (d, 1H), 8,31 (t, 1H).

Ejemplo 9 Éster metílico del ácido 7-benzoilamino-4-(1-carboxietilcarbamoil)-6-oxo-hexahidro-pirrolo[1,2-a]pirimidin-1-carboxílico

En la figura 3 aparece un esquema sintético que muestra la metodología del ejemplo 9.

Se colocó una resina de cloruro de 2-clorotritilo (200 mg, 1 mmol/g) y una disolución de Fmoc-alanina (1,5 equiv., disponible en el mercado) y DIEA (3 equiv.) en DCE (2 ml) en un vial con una tapa roscada. La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 12 horas. La resina se recogió mediante filtración y se lavó con DMF, MeOH y después con DCM, para proporcionar una primera pieza componente.

A la resina hinchada con DMF antes de la reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se repitió la etapa de desprotección y después la mezcla del producto se lavó con DMF, MeOH y después con DCM. Se añadió a la resina una disolución de ácido 2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-4-metoxicarbonilaminobutírico (1,5 equiv., segunda pieza componente), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP. Después de agitar la mezcla de reacción durante 12 h a temperatura ambiente la resina se lavó con DMF, MeOH y después con DCM.

A la resina hinchada con DMF antes de la reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se repitió la etapa de desprotección y la mezcla del producto se lavó con DMF, MeOH y después con DCM. Se añadió a la resina una disolución de ácido 2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-5,5-dimetoxipentanoico (1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP. Después de agitar la mezcla de reacción durante 12 h a temperatura ambiente la resina se lavó con DMF, MeOH y después con DCM.

A la resina hinchada con DMF antes de la reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se repitió la etapa de desprotección y después la mezcla del producto se lavó con DMF, MeOH y después con DCM. Se añadió a la resina una disolución de ácido benzoico disponible en el mercado (1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP. Después de agitar la mezcla de reacción durante 12 h a temperatura ambiente la resina se lavó con DMF, MeOH y después con DCM.

La resina se trató con ácido fórmico (1,2 ml cada pocillo) durante 18 horas a temperatura ambiente. Después la resina se retiró mediante filtración y el filtrado se condensó a presión reducida para producir el producto como un aceite.

RMN de ^{1}H (300 MHz, MeOH-d_{4}) \delta 1,40 (d, 3H), 1,90 (m, 1H), 2,20 (m, 1H), 2,30-2,50 (m, 2H), 3,15 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,40-3,60 (m, 1H), 4,20-4,40 (m, 2H), 4,70 (t, 1H), 5,40 (t, 1H), 7,25-7,45 (m, 3H), 7,75 (d, 2H).

MS (m/z, ESI): 433 (MH^{+}), 455 (MNa^{+}).

Ejemplo 10 Éster metílico del ácido 7-benzoilamino-4-(2-carboxipropilcarbamoil)-6-oxo-hexahidro-pirrolo[1,2-a]pirimidin-1-carboxílico

En la figura 4 aparece un esquema sintético que muestra la metodología del ejemplo 10.

Se colocó una resina de cloruro de 2-clorotritilo (200 mg, 1 mmol/g) y una disolución de Fmoc-beta-alanina (1,5 equiv.) y DIEA (2 equiv.) en DCE (2 ml) en un vial con una tapa roscada. La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 12 horas. La resina se recogió mediante filtración y se lavó con DMF, MeOH y después con DCM, para proporcionar una primera pieza componente.

A la resina hinchada con DMF antes de la reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se repitió la etapa de desprotección y la mezcla del producto se lavó con DMF, MeOH y después con DCM. Se añadió a la resina una disolución de ácido 2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-4-metoxicarbonilaminobutírico (1,5 equiv., segunda pieza componente), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP. Después de agitar la mezcla de reacción durante 12 h a temperatura ambiente la resina se lavó con DMF, MeOH y después con DCM.

A la resina hinchada con DMF antes de la reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se repitió la etapa de desprotección y después la mezcla del producto se lavó con DMF, MeOH y después con DCM. Se añadió a la resina una disolución de ácido 2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-5,5-dimetoxipentanoico (1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP. Después de agitar la mezcla de reacción durante 12 h a temperatura ambiente la resina se lavó con DMF, MeOH y después con DCM.

RMN de ^{1}H (300 MHz, MeOH-d_{4}) \delta 1,40 (d, 3H), 1,90 (m, 1H), 2,20 (m, 1H), 2,30-2,50 (m, 2H), 3,15 (m, 2H), 3,35 (s, 3H), 3,40-3,60 (m, 3H), 4,20-4,40 (m, 2H), 4,70 (t, 1H), 5,40 (t, 1H), 7,25-7,45 (m, 3H), 7,75 (d, 2H).

MS (m/z, ESI): 447 (MH^{+}), 469 (MNa^{+}).

En la presente se ofrecen diversas referencias bibliográficas que describen con detalle ciertos procedimientos, compuestos y/o composiciones.

Se apreciará que aunque en la presente se han descrito realizaciones específicas de la invención con fines ilustrativos, pueden realizarse diversas modificaciones. Por consiguiente, la invención no está limitada excepto por las reivindicaciones adjuntas.

Claims

1. Un compuesto que tiene la siguiente estructura:

97

en la que:

A es -(CH)-, -N- o -CH_{2}-N-;

B es -(CH_{2})- o -(CH_{2}-CH_{2})-;

D es -(C=O) o -(CH_{2})-;

W es -(C=O)- o nada;

X es -NH(C=O)-;

Y es oxígeno o azufre;

L es hidrógeno, -C(O)NHR_{3} o R_{5};

R_{1}, R_{2}, y R_{3} son iguales o diferentes, y se seleccionan independientemente de hidrógeno; un resto de cadena lateral de aminoácido seleccionado de -CH_{3}, -CH(CH_{3})_{2}, -CH_{2}CH(CH_{3})_{2}, -CH(CH_{3})CH_{2}CH_{3}, -(CH_{2})_{4}NH_{3}^{+}, -(CH_{2})_{3}NHC(NH_{2})NH_{2}^{+},

98

-CH_{2}COO^{-}, -CH_{2}CH_{2}COO^{-}, -CH_{2}CONH_{2}, -CH_{2}CH_{2}CONH_{2},

\vskip1.000000\baselineskip

99

-CH_{2}SH, -CH_{2}CH_{2}SCH_{3}, -CH_{2}OH, - CH(OH)CH_{3},

100

alquilo C_{1-12}; arilo C_{6-12}; arilalquilo C_{7-12}; alquilo C_{1-12} sustituido; arilo C_{6-12} sustituido; arilalquilo C_{7-12} sustituido; heteroalquilo C_{1-12}; (aril C_{7-12})heteroalquilo; amino(alquilo C_{2-5}); guanidino(alquilo C_{2-5}); (alquil C_{1-4})guanidino(alquilo C_{2-5}); di(alquil C_{1-4})guanidino(alquilo C_{2-5}); amidino(alquilo C_{2-5}); (alquil C_{1-4})amidino(alquilo C_{2-5}); di(alquil C_{1-4})amidino(alquilo C_{2-5}); alcoxi C_{1-3}; fenilo; fenilo sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);

bencilo; bencilo sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidino, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);

naftilo; naftilo sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);

bisfenilmetilo; bifenilmetilo sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);

piridilo; piridilo sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);

piridil(alquilo C_{1-4}); piridil(alquilo C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);

pirimidil(alquilo C_{1-4}); pirimidil(alquilo C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);

triazin-2-il(alquilo C_{1-4}); triazin-2-il(alquilo C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);

imidazo(alquilo C_{1-4}); imidazo(alquilo C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil C_{1-4})amino, (dialquil C_{1-4})amino, halógeno, perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);

imidazolinil(alquilo C_{1-4}); N-amidinopiperazinil-N-(alquilo C_{0-4}); hidroxi(alquilo C_{2-5}); (alquil C_{1-5})amino(alquilo C_{2-5}); (dialquil C_{1-5})amino(alquilo C_{2-5}); N-amidinopiperidinil(alquilo C_{1-4}); y 4-aminociclohexil(alquilo C_{0-2});

-OH; -OR; -COR; -COOR; -CONH_{2}; -CONR; -CONRR; -NH_{2}; -NHR; -NRR; -SO_{2}R; y -COSR;

R_{5} es hidrógeno; un resto de cadena lateral de aminoácido seleccionado de -CH_{3}, -CH(CH_{3})_{2}, -CH_{2}CH(CH_{3})_{2}, -CH(CH_{3})CH_{2}CH_{3}, -(CH_{2})_{4}NH_{3}^{+}, -(CH_{2})_{3}NHC(NH_{2})NH_{2}^{+},

101

-CH_{2}COO^{-}, -CH_{2}CH_{2}COO^{-}, -CH_{2}CONH_{2}, -CH_{2}CH_{2}CONH_{2},

102

-CH_{2}SH, -CH_{2}CH_{2}SCH_{3}, -CH_{2}OH, - CH(OH)CH_{3},

103

imidazolinil(alquilo C_{1-4}); N-amidinopiperazinil-N-(alquilo C_{0-4}); hidroxi(alquilo C_{2-5}); (alquil C_{1-5})amino(alquilo C_{2-5}); (dialquil C_{1-5})amino(alquilo C_{2-5}); N-amidinopiperidinil(alquilo C_{1-4}); o 4-aminociclohexil(alquilo C_{0-2});

\newpage

R se selecciona de alquilo C_{1-12}; arilo C_{6-12}; arilalquilo C_{7-12}; heterociclilo seleccionado de tiofeno, pirrol, furano, imidazol, oxazol, tiazol, pirazol, 3-pirrolina, pirrolidina, piridina, pirimidina, purina, quinolina, y carbazol.

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2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que A es -CH_{2}-N-, B es -CH_{2}- o -CH_{2}-CH_{2}-, D es -(CH_{2})-, y L es -C(=O)NHR_{3}.

3. El compuesto de la reivindicación 2, en el que Y es oxígeno.

4. El compuesto de la reivindicación 2 ó 3, en el que W es -(C=O)-.

5. El compuesto de la reivindación 1, en el que A es -CH-, B es -CH_{2}-, Y es oxígeno, D es -CH_{2}-, y L es -C(=O)NHR_{3}.

6. El compuesto de la reivindicación 5, en el que W es -(C=O)-.