ES2330341T5 - Espuma terapéutica que comprende una solución esclerosante y una baja cantidad de nitrógeno gaseoso - Google Patents

Description

DESCRIPCION

Espuma terapeutica que comprende una solucion esclerosante y una baja cantidad de nitrogeno gaseoso

5 La presente invencion se refiere a una espuma que comprende un material esclerosante, en particular, una solucion esclerosante, que es adecuada para uso en el tratamiento de diversas enfermedades que tienen que ver con los vasos sangufneos, en particular, varices y otros trastornos que tienen que ver con la malformacion venosa.

La esclerosis de varices se basa en la inyeccion en las venas de sustancias lfquidas esclerosantes que, entre otros, 10 causa una reaccion inflamatoria localizada favoreciendo la eliminacion de estas venas anomalas. Hasta hace poco, la escleroterapia era una tecnica que se elegfa en casos de varices de calibre medio y pequeno, tratandose con cirugfa las de diametros iguales o superiores a7 mm.

Actualmente, se ha desarrollado una microespuma inyectable adecuada para uso terapeutico, en particular en venas mas 15 grandes, y se describe en los documentos EP-A- 0656203y US 5676962 (Cabrera &Cabrera), incorporados a la presente memoria descriptiva como referencia. Los mismos describen una microespuma de baja densidad producida con una sustancia esclerosante que, cuando se inyecta en una vena, desplaza la sangre y garantiza que el esclerosante contacta el endotelio del vaso en una concentracion conocida y durante un tiempo controlable, consiguiendo una esclerosis de todo el segmento ocupado.

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Antes de la fecha de prioridad de estas patentes se conocfa, desde hacfa muchos anos, que la inyeccion de lfquido esclerosante en varices, especialmente en varices mas pequenas, podia ser eficaz. Asimismo, se conocfa, desde hacfa muchos anos, la inyeccion de una pequena cantidad de aire en una vena antes de inyectar lfquido esclerosante, siendo el objetivo desplazar la sangre de la vena para evitar que el esclerosante se diluyera demasiado deprisa. Un 25 perfeccionamiento de esta tecnica fue hacer una espuma o lfquido inconsistente e inyectarla en lugar de aire puro, antes de la inyeccion del lfquido esclerosante. Estas tecnicas, conocidas como “bloque de aire” y desarrolladas por Orbach, generalmente solo eran eficaces para tratar venas mas pequenas.

Ademas, existfan descripciones de espumas mas finas para el tratamiento de varices mas pequenas (mas adelante se 30 cita bibliograffa de Fluckiger) o un procedimiento combinado que usa tanto cirugfa como espuma para eltratamiento de toda lavena safena mayor: Mayer; Brucke:“The Aetiologyand Treatment of Varicosities of the Lower Extremities”, Chirurgische Praxis, 521-528,1957.

Todas estas descripciones anteriores de tratamiento con espuma describen la preparacion de la espuma con aire como el 35 componente gaseoso. Ninguno de los documentos menciona que el aire en la espuma inyectada cause problemas graves. Un antecedente menciona una embolia gaseosa aparentemente transitoria. P. Fluckiger: “Non- surgical retrograde sclerosis of varicose veins with Varsyl foam"; Schweizerische Medizinische Wochenschriff N° 48, pags.1368-1370 (1956). En este artfculo, el autor indica que redujo el volumen de espuma administrado de15 ml a 10 ml como consecuencia de que un paciente sufrio dolor toracico al levantarse justo despues del tratamiento con15 ml de espuma. En una conferencia 40 posterior, el mismo autor indico que de hecho habfa usado posteriormente 15 ml de espuma sin observar efectos secundarios: conferencia de 1962titulada “A contribution to techniques for out patient treatment of varicose veins” dada la Sociedad Dermatologica de Hamburgo. La bibliograffa de Mayer y Brucke citada anteriormente parece describir el uso de hasta 50ml de espuma de aire y no menciona ningun problema.

45 No obstante, se conoce que la rapida inyeccion intravenosa de una gran cantidad de aire, en contraposicion a la espuma de aire, puede llevar a una embolia gaseosa que puede ser mortal. A pesar de esto, los que practican las tecnicas con espuma y bloque de aire, que se han descrito anteriormente, no in dican que los volumenes de aire implicados en sus tecnicas fueran suficientes como para causar problemas graves.

50 La tecnica con bloque de aire perdio gran aceptacion en la decada de los 80 y las otras tecnicas con espuma que se han mencionado anteriormente eran practicamente insolitas.

Los Cabrera propusieron el uso de una microespuma, es decir, una microespuma con burbujas microscopicamente pequenas, por ejemplo, cuando la mayorfa de las burbujas no se pueden ver a simple vista, para inyeccion en varices. El 55 uso de una microespuma, en contraposicion a la espuma con burbujas mas grandes, da lugar a muchas ventajas en cuanto a capacidad de control y capacidad para desplazar sangre incluso en las varices mas grandes, permitiendo el tratamiento de practicamente todas las varices sin recurrir a la cirugfa. Segun se usa en la presente memoria descriptiva, el termino espuma abarca espumas con burbujas de todos los tamanos, que incluye microespumas.

En la bibliograffa sobre la patente de los Cabrera que se ha mencionado anteriormente, se encontrara la primera

ensenanza de que posibles problemas relacionados con la inyeccion intravenosa de un producto de microespuma hecho con aire son lo suficientemente graves como para merecer un cambio. Estos documentos indican que las tecnicas anteriores a base de aire son “peligrosas debido a los efectos secundarios del nitrogeno atmosferico que solo es ligeramente soluble en sangre”, si bien no se menciona exactamente que peligros son, ni que volumenes o ritmos de 5 inyeccion de aire o gas de nitrogeno dan lugar a dichos peligros.

Ademas de ser los primeros en proponer una microespuma, en contraposicion a una espuma con burbujas mas grandes, y en proponer el tratamiento de incluso las venas mas grandes sin cirugfa, los Cabrera tambien propusieron que la microespumase hiciera con oxfgeno o una mezcla de dioxido de carbono y oxfgeno. En el contexto de estos 10 antecedentes, se puede ver que la contribucion de los Cabrera es muy innovadora en muchos sentidos, valorando frente a las ideas imperantes en ese momento,

(i) el potencial de una microespuma esclerosante,

(ii) la necesidad de gases solubles,

15 (iii) el uso de oxfgeno que no degrada la microespuma, sino que lo absorbe la sangre,

(iv) la seguridad del oxfgeno, pero tambien (v) la posibilidad de incorporar un porcentaje de dioxido de carbono altamente soluble.

Desde la publicacion de la tecnica con microespuma de los Cabrera a mediados de los 90, muchos facultativos han 20 adoptado la espuma, tanto en Europa como en EEUU. En la reciente conferencia mundial de flebologos en San Diego en agosto de 2003, aproximadamente, un tercio de los, mas o menos, doscientos cincuenta documentos que se presentaron se referfan a tratamiento con espuma.

No obstante, casi sin excepcion, los facultativos que actualmente usan espuma esclerosante la hacen con aire. La opinion 25 varfa respecto a cuanta espuma se deberfa inyectar- algunos recomiendan solo 5 ml, mientras que otros estan dispuestos a inyectar mas.

La microespuma de los Cabrera se prepara de manera improvisada en la clfnica justo antes de su uso. La preparacion supone batir la solucion esclerosante con un pequeno cepillo que un motor hace girar a alta velocidad, debajo de una tapa 30 que esta conectada a una fuente de oxfgeno o de oxfgeno y dioxido de carbono. Muchos facultativos seguidores de los Cabrera usan una tecnica alternativa para la preparacion improvisada de espuma que supone pasar la solucion esclerosante y aire de manera repetida entre dos jeringuillas conectadas. Otra alternativa es una jeringuilla con un segundo embolo con agujeros en su superficie y que se puede mover de manera independiente en el deposito de jeringuilla para espumar un lfquido y una mezcla gaseosa en la jeringuilla. Ambos de estos ultimos tipos de procedimiento 35 son poco practicos y dejan un margen de variacion de la composicion de espuma en funcion de la persona que la prepara: contenido de gas, tamano de burbuja, densidad y estabilidad, todo se debe tener en cuenta. Estas tecnicas exigen un alto grado de atencion y conocimiento que puede resultar diffcil de reproducir bajo presion, es decir, cuando el tiempo disponible para preparar la espuma es reducido.

40 Actualmente, se esta desarrollando y esta en ensayo clfnico en Europa y en los EEUU un producto que basicamente intenta reproducir la microespuma de los Cabrera de un modo mas practico y facilmente reproducible. Este producto es un sistema de bombonas presurizadas, en el que la espuma se produce pasando gas y solucion esclerosante a presion a traves de una serie de mallas finas. En los ensayos de dicho producto el objetivo es tratar toda una vena safena mayor y sus venas afluentes varicosas en un unico tratamiento, que puede suponer la inyeccion de 25 ml o incluso 50 ml de 45 espuma.

El documento WO00/72821-A1 (BTG International Limited), incorporado a la presente memoria descriptiva como referencia, describe los conceptos fundamentales subyacentes a dicho producto en bombona. La espuma se produce pasando gas y lfquido esclerosante a traves de una o mas mallas que tienen pequenas aberturas medidas en 50 micrometres. Al igual que las patentes de los Cabrera, este documento reconoce los posibles problemas relacionados con el aire/nitrogeno e intenta reducir los niveles de nitrogeno en la espuma. Una forma preferente de gas que se describe en el documento WO00/72821-A1comprende oxfgeno al 50% v/v o mas, siendo el resto dioxido de carbono o dioxido de carbono, nitrogeno y gases residuales en la proporcion que se encuentran en el aire atmosferico. En el ejemplo 2 de dicha publicacion se propone una espuma hecha con un 100% de oxfgeno, sin embargo, la tecnica descrita en dicho 55 ejemplo hubiera producido de hecho una espuma con un contenido en nitrogeno superior al 2%.

En una solicitud de patente posterior, documento WO02/41872-A1 (BTG International Limited), incorporada a la presente memoria descriptiva como referencia, el lfquido esclerosante y un gas rico en oxfgeno dispersable en sangre, fisiologicamente aceptable, se almacenan en recipientes independientes hasta justo antes del uso, momento en el que el

gas dispersable en sangre se introduce en el recipiente que contiene el liquido esclerosante. Posteriormente, se libera la mezcla gaseosa dispersable en sangre y liquido esclerosante, interactuando los componentes de la mezcla, previa liberacion de la mezcla, para formar una espuma esclerosante. En el sistema que se describe en esta solicitud de patente, se introduce deliberadamente una proporcion de nitrogeno (25%) en la bombona de polidocanol. Tras cargar la 5 bombona de liquido esclerosante (polidocanol) con oxfgeno de la bombona de oxfgeno a mayor presion, el porcentaje de nitrogeno se reduce hasta, aproximadamente, el 7 o el 8%. Se consideraba que este nivel de nitrogeno se podrfa tolerar. Esta publicacion de patente desvela un intervalo del 3% al 10% para el nitrogeno en la fase gaseosa de la espuma.

El documento WO 2004/062461-A2 desvela una espuma esclerosante que incorpora un porcentaje de helio para ayudar 10 a la deteccion de fugas. El Ejemplo 1 de dicha publicacion de patente es practicamente equivalente al Ejemplo 2del documento WO 00/7281-A1 anteriormente citado, siendo la unica diferencia la incorporacion del helio a la mezcla. Si se sigue el procedimiento definido en dicho ejemplo, probablemente se obtendra una mezcla de gases que incorpore mas de un 2% de nitrogeno.

15 Los actuales inventores siguen investigando aspectos clfnicos de la inyeccion de espuma esclerosante, asf como perfeccionando el producto de espuma en bombonas y sometiendolo a ensayos clfnicos en Europa y en los EEUU. Siempre se ha intentado desarrollar un producto de espuma seguro que a la vez este lo mas definido posible, pero cuya especificacion tenga tolerancias alcanzables. Son muchos los parametros de una espuma que se pueden variar. Los mismos incluyen, entre otros: el producto qufmico, su pureza y la concentracion de la solucion, el tamano de las burbujas, 20 o, con mas exactitud, la distribucion de tamanos, la densidad (es decir, la proporcion de liquido a gas), la duracion de la espuma (medida en terminos de “semivida, o el tiempo que tarda la mitad de la espuma envolver a liquido) y la mezcla gaseosa.

Como cuestion practica, resulta diffcil excluir totalmente de una espuma el nitrogeno, que constituye, aproximadamente, el 25 80% del aire. Esto es cierto si la espuma se hace usando un sistema de bombonas, en cuyo caso el nitrogeno tiende a entrar en la bombona durante la elaboracion, o usando las tecnicas con jeringuilla o la tecnica con cepillo giratorio de los Cabrera, o incluso cualquiera de una serie de otras tecnicas menos comun es que se han desarrollado desde la descripcion de microespuma de los Cabrera.

30 En una tecnica con dos jeringuillas, el procedimiento probable para introducir el componente gaseoso, si se hiciera una espuma con un gas distinto al aire, serfa conectar una jeringuilla a una fuente presurizada de gas, posteriormente desconectarla y volverla a conectar a otra jeringuilla que contuviera esclerosante. En este tipo de tecnica, se bombean las dos jeringuillas para crear espuma y, posteriormente, se separa la jeringuilla llena de espuma. La posibilidad de acceso de un porcentaje reducido de aire/nitrogeno durante dicho proceso es obvia. Del mismo modo, incluso con la tecnica de 35 los Cabrera, puede resultar diffcil excluir el 100% del aire/nitrogeno del entorno en el que se prepara la espuma.

Uno de los objetivos del producto de espuma que han desarrollado los inventores es tratar toda una vena safena mayor con grandes venas afluentes varicosas en un paciente humano con una inyeccion. Se necesitan hasta 25 ml, 30 ml o posiblemente incluso 50 ml de espuma. Actualmente, los usuarios de espuma de aire mas conservadores inyectan una 40 maximo de 5 ml en el sistema venoso, aparentemente sin observar efectos nocivos. Por lo tanto, los inventores pensaron que una cantidad equivalente de nitrogeno en una dosis relativamente grande de espuma necesaria para tratar toda la vena safena tambien podia ser segura. Por consiguiente, usaron esto como un punto de partida: 5ml de aire con nitrogeno al 80% contendra 4 ml de nitrogeno, una proporcion correspondiente de nitrogeno en, por ejemplo, 50 ml de espuma baja en nitrogeno serfa, aproximadamente, del 8%.

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Hasta hace poco, los inventores consideraban que una espuma con nitrogeno, aproximadamente, al 8% serfa aceptable, desde el punto de vista de la seguridad, y que este porcentaje representaba una tolerancia facilmente alcanzable de niveles de nitrogeno en la especificacion de la espuma. Aceptar este nivel de nitrogeno tambien tiene la ventaja de que se podrfa introducir, deliberadamente en la bombona de polidocanol, una pequena cantidad de nitrogeno para reducir los 50 efectos negativos del dioxido de carbono altamente soluble en la estabilidad de la espuma (como se ha analizado anteriormente). El documento WO02/41872-A1, al que se ha hecho referencia anteriormente, describe dicha espuma y un sistema para hacerla.

Como se ha analizado anteriormente, aparte de las publicaciones de patente que se han mencionado anteriormente, la 55 tecnica publicada sobre tratamiento de varices con espuma casi no mencion asf existe peligro por inyectar hasta 15 ml de espuma de aire. El unico efecto senalado por Fluckiger fue dolor toracico temporal. Las publicaciones de patente que se han mencionado anteriormente, que mencionan los peligros del nitrogeno, no dicen nada respecto a la cantidad de nitrogeno queserfa peligrosa, ni respecto a que efectos perjudiciales podrfan provocar. Una gran mayorfa de facultativos usan actualmente espuma a base de aire, si bien algunos limitan la cantidad inyectada a 5 ml. Los inventores han

participado en un ensayo clfnico europeo, de fase III, en varios centros con 650 pacientes del producto en bombonas que se ha descrito anteriormente que contiene nitrogeno entre el 7 y el 8%, no se observaron efectos negativos graves asociados al componente gaseoso de la espuma.

5 Actualmente, la investigacion adicional en relacion con los ensayos clfnicos del sistema de bombonas, que se ha descrito anteriormente, ha puesto de manifiesto la presencia de grandes cantidades de burbujas en el corazon, algunas de las cuales perduran durante un perfodo de tiempo considerable. La supervision del corazon con ultrasonido durante el tratamiento de pacientes de este ensayo ha dejado ver muchas burbujas en el lado derecho del corazon y en vasos sangufneos asociados. Dado que la espuma se inyecta en la circulacion venosa, es decir, la conectada al lado derecho 10 del corazon, se esperaba que se observaran algunas burbujas en el lado derecho del corazon. No obstante, la cantidad y persistencia de las burbujas fue sorprendente.

Ademas, se observaron burbujas en el lado izquierdo del corazon de un paciente que posteriormente mostro tener una comunicacion interventricular leve o persistencia del agujero oval (“PFO”), es decir, un agujero en el corazon. Los 15 pacientes indicaron sufrir un trastorno visual transitorio. Esto es importante porque, una vez en el lado izquierdo de la circulacion, las burbujas pueden avanzar hasta el cerebro, donde pueden provocar microinfartos.

Actualmente se considera que someter a revision medica a todos los pacientes, incluso para el PFO mas leve, no es realmente viable para una intervencion quirurgica programada, tal como tratamiento de varices, y puede incluso no ser 20 posible. Las tecnicas necesarias serfan realmente sofisticadas y posiblemente bastante invasivas. Ademas, esto aumentarfa el tiempo necesario para la intervencion quirurgica e impedirfa el tratamiento de pacientes con dichos PFOs, de los que se considera que hay cantidades considerables.

En vista de estos hallazgos inesperados, los inventores han realizado una importante investigacion basica adicional.

25 Los inventores han realizado experimentos usando modelos animales y se ha encargado a expertos, reconocidos internacionalmente en su campo, que realicen un modelo matematico detallado del comportamiento de las burbujas de oxfgeno, dioxido de carbono y nitrogeno en sangre. Asimismo, los inventores han realizado trabajos in vitro para medir la absorcion de gases en sangre arterial humana pura. Por consiguiente, resulta evidente que, a diferencia de lo que previamente pensaban los inventores y en marcado contraste con las ideas de practicamente todos los facultativos que 30 actualmente preparan espuma improvisada para uso en el tratamiento de varices, incluso el volumen mas reducido de nitrogeno puede ser importante para provocar burbujas persistentes.

Ademas, se han publicado estudios recientes que confirman aun mas que las espumas de aire, previamente propuestas en la tecnica, causan ciertas complicaciones en de terminados grupos de pacientes. Por ejemplo, el Dr.Philip Kritzinger, 35 ha presentado estudios clfnicos en los que las espumas para escleroterapia de venas que se hicieron usando aire, como la fase gaseosa, pueden provocar ataques e infartos de miocardio en algunos ancianos o pacientes con alto riesgo de problemas coronarios.

Los inventores han decidido que a fin de producir un producto adecuado para administracion a pacientes, sin la necesidad 40 de metodologfa de cribado de PFO prolongada, puede ser necesario reducir la cantidad de nitrogeno a lfmites superiores que previamente no estaban reconocidos.

Se han ideado perfeccionamientos adicionales del sistema de bombonas que se describen en los documentos WO00/72821-A1y WO02/41872-A1, especfficamente elevando el porcentaje de dioxido de carbono en la espuma y 45 reduciendo el nitrogeno presente en la espuma practicamente a cero. Para compensarlos efectos nocivos del dioxido de carbono altamente soluble, se ha reducido el tamano de las aberturas de la malla de 20 micrometros a 5 micrometres. Se han hecho bombonas de prueba con este diseno en cantidades bastante grandes. Inicialmente, se prepararon sistemas de doble bombona, como se ha descrito anteriormente, llenando las bombonas con el gas deseado antes de cerrarlas hermeticamente y presurizarlas. Este producto genera una espuma con nitrogeno entre el 1% y el 2%. No obstante, una 50 investigacion adicional ha llevado a los inventores a considerar que incluso este nivel puede ser demasiado elevado.

Reconociendo que siempre habra impurezas, independientemente de la tecnica que se adopte para hacer la espuma, los inventores consideran que una espuma esclerosante con un porcentaje en volumen de gas de nitrogeno en el intervalo de entre 0,01% y 0,8% es clfnicamente segura y consecuentemente reproducible. Ejemplos, que se presentan mas 55 adelante, ilustran la elaboracion/preparacion, asf como los efectos clfnicos de una espuma de este tipo.

Asimismo, los inventores reconocen que tecnicas tales como las que se han descrito anteriormente que usan jeringuillas, junto con una variedad de tecnicas diferentes de preparacion improvisada de espuma esclerosante que se han desarrollado desde la descripcion de los Cabrera, pueden tener cabida en el campo de la escleropatfa con espuma. Estas

tecnicas pueden proporcionar una opcion menos cara que un producto en bombona. Los inventores consideran que se pueden preparar espumas con un porcentaje muy bajo de nitrogeno, como se ha expuesto anteriormente, usando estos tipos de tecnicas asf como usando un sistema de bombonas.

5 La presente invencion proporciona una espuma segun se define en las reivindicaciones.

A efectos de esta solicitud otros diversos terminos tienen las definiciones siguientes: Un Ifquido esclerosante es un Ifquido que es capaz de esclerosar vasos sangrnneos cuando se inyecta en la luz del vaso e incluye, entre otros, soluciones de polidocanol, sulfato de tetradecilo, oleato de etanolamina, morruato sodico, soluciones glucosalinaso 10 glucosadashipertonicas, glicerol cromado, soluciones yodadas. Escleropatfa o escleroterapia se refiere al tratamiento de vasos sangmneospara eliminarlos. Un aerosol es una dispersion de lfquido en gas. Una proporcion mayor de un gas es por encima del 50% volumen/volumen. Una proporcion menor de un gas es por debajo del 50% volumen/volumen. Una cantidad menor de un lfquido en otro lfquido es por debajo del 50% del volumen total. Presion atmosferica y bar son calibre 1000 mbar. Semivida de una espuma es el tiempo que tarda la mitad del lfquido de la espuma en volver a la fase 15 lfquida sin espumar.

FIGURAS

Figura 1 es una vista en planta de un elemento de malla de una unidad de espumado,

20 Figura 2 es una vista en seccion lateral a lo largo de la lmea I-I de la Figura 1 y Figura 3 es una vista en seccion lateral de una unidad de espumado.

Figura 4 muestra una vista transversal de un recipiente previamente presurizado para la generacion de espuma terapeutica, segun lo descrito en el documento WO00/72821-A1 y que se describe detalladamente mas adelante.

Figura 5 muestra una vista transversal de un dispositivo que comprende un recipiente provisto de medios de engranaje y 25 una lanzadera de apilamiento de mallas, segun lo descrito en el documento WO02/41872-A1y que se describe detalladamente mas adelante.

Figura 6 muestra un grafico para compararlos resultados de las cuatro condiciones de doble bombona analizadas en el Ejemplo 16 que aparece mas adelante, que muestra el efecto de la mezcla gaseosa, de la presion del gas y de la malla transportadora en la densidad y la semivida de la espuma. Control 1 usa una mezcla gaseosa de CO2 al 75%/N2al 25% 30 en una bombona de 0,5 bares con una malla de 5 pm, Prueba 1 usa la misma mezcla gaseosa con una malla de 5 pm, Control 2usa CO2 al 100% en una bombona de1,2 bares con la malla de 20 pm, Prueba 2 usa el mismo gas con una malla de 5 pm.

Figura 7 muestra un grafico del numero medio de burbujas en diametro de las cuatro condiciones de doble bombona que se analizan mas adelante.

35 Figura 8 muestra un grafico de la proporcion de burbujas en diametro de las cuatro condiciones de doble bombona que se analizan mas adelante.

Figura 9 muestra un grafico del volumen medio de burbujas en diametro de las cuatro condiciones de doble bombona que se analizan mas adelante.

Figura 10 muestra un grafico de la proporcion de burbujas en diametro de las cuatro condiciones de doble bombona que 40 se analizan mas adelante.

Figura 11 muestra un grafico para comparar los resultados de las cuatro condiciones de doble bombona que se analizan mas adelante, que muestra el efecto del tamano de la malla transportadora en el tiempo de semiseparacion y en la densidad.

45 DESCRIPCION DETALLADA

A efectos de esta solicitud los terminos tienen las siguientes definiciones: Un lfquido esclerosante es un lfquido que es capaz de esclerosar vasos sangrnneos cuando se inyecta en la luz del vaso. Escleropatia o escleroterapia se refiere al tratamiento de vasos sangrnneos para eliminarlos. Un aerosol es una dispersion de lfquido en gas. Una proporcion mayor 50 de un gas es por encima del 50% volumen/volumen. Una proporcion menor de un gases por debajo del 50% volumen/volumen. Una cantidad menor de un lfquido en otro lfquido es por debajo del 50% del volumen total. Presion atmosferica y bar son calibre 1000mb. Semivida de una espuma es el tiempo que tarda la mitad del lfquido de la espuma en volver a la fase lfquida sin espumar.

55 En una forma de realizacion, la espuma es tal que el 50% o mas en numero de sus burbujas de gas de 25 pm diametro depm o superior no tienen un diametro superior a 200 pm.

La semivida se mide convenientemente llenando de espuma un vaso de un volumen y peso conocidos y permitiendo que el lfquido de la misma drene en un vaso graduado, permitiendo la cantidad drenada en un tiempo determinado calcular la semivida, es decir, de conversion de la espuma nuevamente a las fases lfquida y gaseosa que la componen. Esto se

realiza preferentemente a temperature y presion normales, pero en la practica las condiciones ambientales de la clfnica o laboratorio seran suficientes.

Segun se usa en la presente memoria descriptiva, la viscosidad se determina mediante Brookfield DVIl+Pro fabricado por 5 Brookfield Engineering Labs a temperature ambiente.

En una forma de realizacion, la relacion gas/lfquido de la mezcla se controla de tal manera que la densidad de la espuma es de 0,09 g/mLa0,16g/mL, mas preferentemente de 0,11 g/mLa0,14g/mL.

10 En otra forma de realizacion, la espuma tiene una semivida de al menos 100 segundos, tal como por ejemplo, 2 minutos, 2,5 minutos y 3 minutos. La semivida puede ser de hasta 1 o 2 horas o superior, pero preferentemente es inferiora 60 minutos, mas preferentemente inferior a 15 minutos y lo mas preferente inferior a 10 minutos.

En una forma de realizacion, la mezcla de gas y lfquido esclerosante es en forma de aerosol, de una dispersion de 15 burbujas en lfquido o de una macroespuma. Macroespuma significa una espuma que tiene burbujas de gas que se miden en dimension en milfmetros mayor, por ejemplo, aproximadamente 1 mm y superior, tal como se puede producir agitando ligeramente las dos fases mediante sacudidas. En otra forma de realizacion, el gas y el lfquido se proporcionan en forma de un aerosol, en el que se proporciona una fuente de gas presurizado y un medio para mezclar los dos hasta el momento de uso. Puede ser que se produzca primero una macro espuma en la que el lfquido y el gas se unen justo en el 20 momento de uso.

La proporcion de gas a lfquido que se usa en la mezcla puede ser importante a fin de controlar la estructura de la espuma producida, de tal manera que se mejora su estabilidad para el procedimiento y las circunstancias en que se esta realizando. Para algunas espumas, se puede mezclar 1 gramo de lfquido esclerosante con entre, aproximadamente, 6,25 25 y 14,3 volumenes (STP- temperatura y presion normales), mas preferentemente 7 y 12 volumenes (STP,) de gas.

Preferentemente el esclerosante es una solucion de polidocanol o sulfato de tetradecilo sodico en un vehfculo acuoso, por ejemplo, agua, especialmente en una solucion salina. Mas preferentemente la solucion es polidocanol entre el 0,5 y el 5% v/v, preferentemente en agua esteril o en una solucion salina fisiologicamente aceptable, por ejemplo, en una solucion 30 salina entre el 0,5 y el 1,5%v/v. La concentracion de esclerosante en la solucion se aumentara ventajosamente para determinadas anomalfas, tal como sfndrome de Klippel y Trenaunay.

El polidocanol es una mezcla de eteres de monolaurilode macrogolesde formula C12C25 (OCH2CH2) nOHcon un valor medio de n de 9. Se entendera que tambien se podrfan usar mezclas con otras cadenas de alquilo, unidades de 35 repeticion de oxialquilo y/o valores medios de n de, por ejemplo, 7 a 11, pero que 9 se puede obtener mas

™

convenientemente, por ejemplo, de Kreussler, Alemania, por ejemplo, como Aethoxylsklerol ' una solucion tamponada de polidocanol diluido.

La concentracion de esclerosante en el lfquido acuoso es una solucion entre el 1 y el 3% v/v, tal como polidocanol, en 40 agua o solucion salina, tal como, aproximadamente, al 1% v/v. Asimismo, el agua o solucion salina, al menos en algunos casos, contiene alcohol fisiologicamente aceptable entre el 2 y el 4% v/v, por ejemplo, etanol. La solucion salina puede ser tamponada. Cierta solucion salina tamponada es solucion salina tamponada de fosfato. El pH del tampon se puede ajustar para que sea fisiologico, por ejemplo, de pH 6,0a pH 8,0, mas preferentemente, aproximadamente, pH 7,0.

45 El esclerosante tambien puede contener componentes adicionales, tal como estabilizadores, por ejemplo, estabilizadores de espuma, por ejemplo, tal como glicerol. Otros componentes pueden incluir alcoholes, tales como etanol.

Si bien desde un punto de vista teorico puede ser aconsejable eliminar el maximo de nitrogeno posible, se debe entender que, dado que se vive en una atmosfera de nitrogeno al 80%, existen dificultades para hacer una espuma consistente con un grado muy elevado de pureza en cuanto a gas de nitrogeno. Por consiguiente, el lfmite inferior correspondiente al 50 intervalo de impureza de nitrogeno (desde el puno de vista de que sea facil de elaborar y/o menos caro) es 0,01%, 0,05%, 0,1%, 0,2%, 0,3% o 0,4%. Como resultara evidente gracias a los ejemplos que aparecen mas adelante, cada aumento incremental del lfmite inferior del intervalo puede tener como consecuencia que se elimine una etapa de purificacion del procedimiento de elaboracion, con los consiguientes ahorros en el coste.

55 De conformidad con la especificacion original (segun lo expuesto en el documento WO00/72821-A1), preferentemente, la espuma es tal que el 50% o mas en numero de sus burbujas de gas de 25 pm de diametro y superior no tienen un diametro superior a 200 pm. Nuevamente, de conformidad con la especificacion original del documento WO00/72821-A1, preferentemente el procedimiento proporciona una espuma caracterizada porque al menos el 50% en numero de sus

burbujas de gas de 25 pm de diametro y superior no tienen un diametro superior a 150 pm. Mas preferentemente, al menos el 95% de dichas burbujas de gas en numero no tienen un diametro superior a 280 pm. Aun mas preferentemente, al menos el 50% en numero de dichas burbujas de gas no tienen un diametro superior a 130 pm y aun mas preferentemente al menos el 95% de dichas burbujas de gas en numero no tienen un diametro superior a 250 pm.

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Un factor adicional para el entendimiento del perfeccionamiento de los inventores del comportamiento en sangre de las burbujas que comprenden gases solubles es el fenomeno de que el nitrogeno se propague fuera de la sangre y de los tejidos adyacentes y en las burbujas debido a una diferencia en la presion parcial del nitrogeno en las burbujas en comparacion con la de la sangre y tejidos circundantes. Generalmente, este fenomeno solo se producira cuando la 10 presion parcial de nitrogeno en la burbuja sea inferior a la de la sangre y tejidos circundantes.

Parece que el dioxido de carbono, y en menor medida el oxfgeno, se propagara fuera de la burbuja y se disolvera en la sangre circundante relativamente muy rapido, de manera que la burbuja alcanzara bastante rapidamente un punto en el que la presion parcial de nitrogeno en la burbuja sera superior a la de la sangre y tejidos circundantes y, por ultimo, la 15 burbuja sera sustancialmente nitrogeno puro. Tan pronto como se invierta el gradiente de la presion parcial del nitrogeno, el nitrogeno saldra de la burbuja y se disolvera en la sangre, si bien esto ocurrira relativamente despacio debido a la baja solubilidad del nitrogeno. Asimismo, aumentando la saturacion de la sangre circundante con nitrogeno influira en este fenomeno, si se produce en gran medida. Este fenomeno afecta potencialmente al gradiente de presion parcial de nitrogeno en la sangre y tambien puede significar que se alcanza un lfmite de disolucion de nitrogeno si la sangre 20 circundante se satura totalmente con nitrogeno.

Actualmente, no se entiende hasta que punto la saturacion localizada de sangre con nitrogeno es un factor en la disolucion de las burbujas en una espuma dispersante. Sin embargo, dado que el flujo sangufneo esta en constante movimiento, se supone que este efecto solo sera transitorio y que no afectara demasiado a la idea global de disolucion de 25 nitrogeno.

Parece que la fase inicial de disolucion rapida de dioxido de carbono y/u oxfgeno es crftica: cuanto mas corto sea este perfodo, menor sera el volumen de nitrogeno capaz de propagarse en la burbuja.

30 La semivida se mide convenientemente llenando el vaso con un volumen y peso conocidos de espuma y permitiendo que el lfquido del mismo drene en un vaso graduado, permitiendo la cantidad drenada en un tiempo determinado el calculo de la semivida, es decir, de la conversion de la micro espuma a sus fases lfquida y gaseosa de los componentes. Preferentemente, esto se realiza a presion y temperatura normales, pero en la practica las condiciones ambientales de la clfnica o laboratorio seran suficientes.

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Mas convenientemente, el embudo se equilibra previamente en un bano de agua para garantizar una temperatura de 25°C antes del secado y la aplicacion de espuma. La colocacion de una jeringuilla llena de espuma al reves, sin su embolo, encima del embudo que lleva al receptaculo graduado permite una medicion adecuada de este parametro.

40 APARATOS PARA GENERAR ESPUMA

Se observa que pasando una corriente de lfquido esclerosante y el gasa presion a traves de uno o mas conductos de 0,1 pm a 15 pm, como se ha descrito, proporciona una espuma esclerosante inyectable estable a base de gas dispersable en sangre.

45

Preferentemente, un aerosol, dispersion o macro espuma se produce mezclando el gas y el lfquido de flujos respectivos a presion. La mezclase realiza convenientemente en un elemento de interfaz de lfquido y gas, tal como se puede encontrar en bombonas de aerosol. No obstante, el dispositivo de interfaz puede ser muy sencillo, tal como una unica camara o conducto de dimensiones milimetricas, es decir, con un diametro de 0,5 a 20 mm, preferentemente, un diametro de 1 a 50 15 mm, en el que entradas independientes permiten la entrada de gas y lfquido. Convenientemente la interfaz es de un diseno que normalmente se encuentra en las bombonas de aerosol, pero que se selecciona para que permita que la relacion exacta de gas a lfquido permita la formacion de una espuma con la densidad que se define en este momento. Precision Valves (Peterborough Reino Unido) comercializa piezas de insercion adecuadas bajo el nombre Ecosol y se seleccionan para producir la relacion que se especifica mediante el procedimiento anterior.

55

No obstante, la mezcla de gas y lfquido se puede provocar dentro de un tubo invertido llevandola desde la solucion esclerosante, situada en la parte inferior de un recipiente presurizado en el que los agujeros del tubo invertido permiten que entre el gas, hasta una corriente de lfquido que entra desde la parte inferior del tubo. En este caso los agujeros pueden tener un diametro similar a los agujeros Ecosol. Dichos agujeros se pueden producir convenientemente

perforando con laser el tubo invertido.

El uno o mas conductos a traves de los que se pasa el aerosol o macroespuma, producidos de ese modo, para producir la espuma estable, preferentemente, tienen un diametro de entre 4 pm y 22 pm, mas preferentemente, entre 5 pm y 5 11 pm en los que se proporcionan conductos sencillos, tal como mediante aberturas en una malla o tamiz, por ejemplo, de metal o material plastico, colocados en perpendicular al flujo de la mezcla de gas/lfquido. Convenientemente, el conducto tiene una seccion transversal circular o elfptica, pero no necesariamente se limita a estas. Se puede utilizar una serie de mallas o tamices de este tipo a lo largo de la direccion de flujo.

10 Mas preferentemente, los conductos se proporcionan como varias aberturas, de uno o mas elementos, colocadas a traves del flujo. Preferentemente, los elementos tienen un diametro de entre 2 y 30 mm, mas preferentemente, un diametro de entre 6 y 15 mm, orientados hacia el flujo, con un area abierta del 5 al 65%, por ejemplo un area abierta del 2% al 20% para mallas tejidas y un area abierta del 20% al 70% para membranas microporosas. Las aberturas de un material poroso, tal como se proporcionan en un cuerpo perforado, preferentemente proporcionan varios cientos o mas de dichos 15 conductos, mas preferentemente decenas o cientos de miles de dichos conductos, por ejemplo, de 10.000 a 500.000, expuestos a la mezcla de gas y lfquido cuando fluye. Dicho material puede ser una membrana o lamina perforada, una malla, un tamiz o un aglomerado. Aun mas preferentemente, se proporciona una serie de conjuntos de material poroso dispuestos secuencialmente, de tal manera que el gas y el lfquido pasan a traves de los conductos de cada conjunto. Esto lleva a la produccion de una espuma mas uniforme.

20

Cuando se usan varios elementos en serie, preferentemente, los mismos estan separados de 1 a 5 mm, mas preferentemente, de 2 a 4 mm, por ejemplo, separados de 3 a 3,5 mm. El conducto puede adoptar la forma de una separacion entre fibras de una lamina fibrosa colocada en la trayectoria del flujo de gas/lfquido, y la dimension que se ha descrito no es necesariamente el diametro mas largo, sino que es la anchura de la separacion a traves de la que 25 debe fluir la macroespuma o aerosol gas/lfquido.

La presion del gas que se use, cuando se pase a traves de los conductos, dependera de la naturaleza del mecanismo que se use para producir la espuma. Cuando el gas esta contenido en una camara presurizada y solo pasa una vez a traves de la malla, tal como en una bombona de aerosol, en contacto con el lfquido, la presiones adecuadas normalmente 30 estan comprendidas entre 0,01 y 9 bares por encima de la presion atmosferica. Para el uso de mallas, por ejemplo, de 1 a 8 mallas dispuestas en serie, con aberturas con un diametro de 10 a 20 pm, seran adecuados entre otros, de 0,1 a 5 bares por encima de la presion atmosferica. Para el uso de 3 a 5 mallas con abertura de 20 pm se observa que de 1,5 a 1,7 bares por encima de la presion atmosferica es suficiente para producir una buena espuma. Para una membrana con tamano de poro de 0,1 pm, se prefiere una presion de 5 bares o mas por encima de la presion atmosferica.

35

Los conductos pueden tener forma de una membrana, por ejemplo, de polfmero, tal como politetrafluoretileno, en la que la membrana esta formada de fibras conectadas aleatoriamente y tiene un tamano de poro considerado eficaz que puede ser muchas veces inferior a su tamano de poro aparente. Una forma de esto especialmente adecuada es una pelfcula de PTFE orientada biaxialmente comercializada por Tetratec™, USA, bajo la marca comercial Tetratex™, siendo los indices 40 normales una porosidad de 0,1 a 10 pm. Tamanos de poro preferentes para el presente procedimiento y dispositivo son de 3 a 7 pm. Este material se puede laminar con un material de refuerzo poroso para darle resistencia y tiene la ventaja de que una pasada puede ser suficiente para producir una espuma que cumple con los requisitos de uso que se han expuesto anteriormente respecto a la estabilidad. No obstante, resultara evidente para los expertos en la materia que el uso de mas de una membrana en serie de este tipo dara una espuma aun mas uniforme para un determinado conjunto 45 de condiciones.

Un procedimiento mas preferente proporciona una carcasa en la que esta situada una camara presurizable. A efectos de un suministro esteril, la misma estara al menos parcialmente llena de una solucion libre de pirogenos y esteril del esclerosanteen un disolvente acuoso fisiologicamente aceptable, pero que, sin embargo, se puede cargar con la misma 50 en el momento de uso. Este procedimiento conveniente proporciona un paso por el que la solucion puede pasar de la camara presurizable al exterior de la carcasa a traves de una salida y, mas preferentemente, un mecanismo con el que el paso de la camara al exterior se puede abrir o cerrar, de tal manera que, cuando se presurice el recipiente, el fluido sera empujado a lo largo del paso y a traves de uno o mas orificios de salida.

55 El procedimiento se caracteriza especialmente porque la carcasa incorpora una o mas de (a) una fuente presurizada del gas fisiologicamente aceptable que se dispersa rapidamente en sangre y (b) una entrada para la admision de una fuente de dicho gas, conectandose el gas con la solucion al activar el mecanismo.

Se hace que el gas y la solucion pasen a lo largo del paso hasta el exterior de la carcasa a traves de uno o mas,

preferentemente varios, conductos con la dimension que se ha definido anteriormente, a traves de los que deben pasar la solucion y el gas para llegar al exterior, con lo que al contactar, por ejemplo, fluyendo a traves, con los conductos la solucion y el gas forman una espuma.

5 Preferentemente, el gas y el lfquido pasan a traves de un mecanismo de interfaz de gas y lfquido, siendo normalmente una union entre un conducto y uno o mas conductos contiguos, y se transforman en un aerosol, dispersion de burbujas o macroespuma antes de pasar a traves de los conductos, pero como se ha explicado, primero se pueden transformar en una macroespuma, por ejemplo, mediante la agitacion del dispositivo, por ejemplo, manualmente o con un dispositivo de agitacion mecanica.

10

La presion de gas utilizada dependera de los materiales que se usen y de su configuracion, pero convenientemente sera de 0,01 a 9 bares por encima de la presion atmosferica, mas preferentemente, de 0,1 a 3 bares por encima de la presion atmosferica y aun mas preferentemente de 1,5 a 1,7 bares por encima de la presion atmosferica.

15 Un dispositivo preferente es del tipo “valvula en bolsa”. Dicho dispositivo incluye un recipiente flexible estanco al gas y al lfquido que forma una segunda camara interior dentro de la camara presurizable, que esta cerrado hermeticamente alrededor del tubo invertido y lleno de lfquido. Mas preferentemente, el tubo invertido tiene una valvula de una via situada en una posicion entre su extremo situado en el lfquido esclerosante y la union de interfaz de gas y lfquido, que cuando esta cerrado el conducto hacia el exterior, permanece cerrada a fin de separar el lfquido del gas dispersable en sangre, 20 fisiologicamente aceptable, alrededor de la misma en la camara. Al abrir el paso al exterior, la valvula de una via abre y libera lfquido desde el tubo invertido hasta la interfaz de lfquido y gas en la que se produce un aerosol que, a su vez, se pasa posteriormente a traves de los conductos para transformarlo en espuma. Una valvula de una via adecuada es una valvula del tipo boca curva, por ejemplo, como la que comercializa Vernay Labs. Inc, Yellow Springs, Ohio, USA. Coster Aerosols, Stevenage, Reino Unido comercializa construcciones de bombonas con valvula en bolsa y 25 comprenden un laminado de plastico/papel de aluminio.

Convenientemente, la valvula de una via esta situada en la parte superior del tubo invertido entre esta y la union de interfaz de lfquido y gas, es decir un dispositivo Ecosol. Esto permite llenar la bolsa antes de la aplicacion de la valvula de una via, seguida de la esterilizacion del contenido, ya sea en la bombona o de otra manera.

30

Un dispositivo preferente de este tipo tiene varias ventajas posibles. Cuando el gas es oxfgeno, se mantiene separado del lfquido antes del uso y, de ese modo, se reduce la posibilidad de que los radicales del oxfgeno reaccionen con los componentes organicos del lfquido, por ejemplo, durante procesos de esterilizacion, tales como irradiacion. Cuando el gas es dioxido de carbono, el almacenamiento puede llevar a que volumenes elevados de gas se disuelvan en el lfquido, que 35 al liberarlo a la presion atmosferica o inferior, se podrfa desgasificar y destruir la espuma demasiado pronto. Dicha separacion tambien evita la sedimentacion de componentes solidificados del esclerosante en los orificios de menor dimension del dispositivo de una bombona no usada, durante el almacenaje y el transporte, especialmente en caso de que la misma no este orientada en vertical.

40 Se prefiere que la interfaz de lfquido y gas se proporcione como un dispositivo con tamano de orificio definido, tal como el dispositivo Ecosol, comercializado por Precision Valve, Peterborough, Reino Unido. Para un dispositivo en el que los conductos de dimension definida estan fuera de la camara presurizada, es decir, montados en el vastago de valvula, la relacion de area de los agujeros de gas a los agujeros de lfquido deberfa ser de, aproximadamente, 3 a 5, preferentemente, aproximadamente, 4. Cuando los conductos estan dentro de la camara presurizada, la relacion es, 45 preferentemente, superior.

Se prefiere que todos los elementos de cualquiera de los dispositivos, que tengan una dimension crftica, esten hechos de un material que no cambia de dimension cuando se expone a un material acuoso. Por consiguiente, elementos con dicha funcion, tales como la interfaz de lfquido y gas y el elemento que define los conductos con una dimension de 0,1 pm a 15 pm, preferentemente, no deberfan ser de un material que se hincha en el agua, tal como Nailon 66, cuando hay 50 probabilidades de que esten expuestos a la solucion durante mas de unos cuantos minutos. Cuando hay probabilidades de dicha exposicion, estas partes se modelan preferentemente a partir de una poliolefina, tal como polipropileno o polietileno.

Preferentemente, la bombona esta dimensionada de tal manera que contiene suficiente gas y solucion para formar hasta 55 500 mL de espuma, mas preferentemente, entre 1 mL y 200 mL y lo mas preferente entre 10 y 60 mL de espuma. Especialmente, la cantidad de gas a presion de dichas bombonas deberfa ser suficiente para producir espuma suficiente para tratar, es decir, llenar, al menos una vena safena humana varicosa. Por consiguiente, las bombonas preferentes pueden ser mas pequenas que las que se usan actualmente para el suministro de espumas de tipo mousse para uso domestico. El dispositivo de bombona mas preferente se puede desechar tras el uso o no se puede volver a usar una vez

abierto a fin de evitar problemas de mantenimiento de esterilidad.

Se puede preferir incorporar un dispositivo que mantiene la presion de gas de la bombona cuando se expulsa la espuma. Dispositivos adecuados son tales comolosdispositivos que se describen bajo la marca comercial PECAP y Atomsol. No 5 obstante, cuando se proporcione una holgura o presion de gas considerable no sera necesario.

No obstante, el sistema de bombona tiene algunos inconvenientes. Es relativamente complicado y, por lo tanto, caro. Ademas, la cantidad inicial de espuma que se genera usando un sistema de bombona puede ser de calidad imprevisible y, por consiguiente, se suele desperdiciar antes de dosificar espuma para uso. No resulta sencillo suministrar espuma 10 directamente de una bombona presurizada a una canula en la vena de un paciente, si bien en teorfa es posible, serfan necesarias disposiciones especiales de control/valvula en la salida de la bombona para que el medico que administra el tratamiento pueda controlar bien el ritmo de suministro. Un problema adicional es que, cuando se detiene o ralentiza la dosificacion de espuma de manera importante, es necesario, al volver a iniciarla, desperdiciar una cantidad de espuma nuevamente antes de dosificar espuma utilizable.

15

Por todos estos motivos, el producto de bombona que se ha mencionado anteriormente, si bien es un sistema bien disenado y muy eficaz, esta disenado para suministrar producto de espuma a una jeringuilla para una posterior administracion a un paciente. A tal efecto se usa una unidad especial de transferencia de espuma. La boquilla de jeringuilla se inserta en un puerto de dicho dispositivo de transferencia y, posteriormente, se usa el dispositivo para 20 desechar la primera parte de espuma antes de cargarla jeringuilla con espuma utilizable.

Otras caracterfsticas y ventajas de la invencion resultaran evidentes gracias a la siguiente descripcion de diversas formas de realizacion especificas, que se hace en relacion con los dibujos adjuntos.

25 A continuacion, haciendo referencia a las Figuras 1 a 3, la unidad de espumado comprende cuatro elementos de malla, comprendiendo cada uno un anillo 51 que tiene una malla 52 sujeta a traves del mismo. La malla tiene perforaciones con un diametro de, aproximadamente, 5 micrometros. Cada elemento de malla tiene superficies de cierre macho y hembra 53,54, respectivamente, las mismas se ven mejor en la Figura12.

30 La Figura 3 muestra cuatro elementos de malla apilados, de tal manera que la superficie de cierre macho de un elemento engrana con la superficie hembra del otro elemento contiguo a este. Los elementos estan retenidos en la carcasa 55 que tiene una mitad de manguito 56 y una mitad de boquilla 57. Los elementos de malla estan retenidos a presion, entre dichas mitades de la carcasa, con las superficies de cierre 53,54 engranadas entre si y con el interior de la carcasa 55 en cada extremo. De este modo se crea un buen cierre hermetico entre los elementos de malla, de manera que todo el flujo 35 a traves de la unidad de espumado debe pasar a traves de la malla.

El extremo de manguito 56 de la carcasa esta formado con un manguito luer estandar 58 que, en uso, encaja en la salida de la boquilla luer de los diversos dispositivos que se han descrito anteriormente. El extremo de boquilla 57 de la carcasa incorpora una boquilla luer estandar 59 en la que se puede colocar un tubo medico que tiene un manguito luer estandar. 40

Se contemplan alternativas a los elementos de malla que se han descrito: puede ser adecuado cualquier elemento que proporcione poros, perforaciones, intersticios, etc. con una dimension en una direccion practicamente transversal a la direccion de flujo de entre 0,1 micrometros y 100 micrometres. Ejemplos pueden incluir, un material textil, un tamiz perforado o un aglomerado.

45

Se proporcionan los ejemplos siguientes para respaldar los conceptos de invencion que se han descrito en la presente memoria descriptiva.

A continuacion, se describira la presente invencion mas detalladamente, solo a modo de ilustracion, haciendo referencia a 50 las Figuras y Ejemplos siguientes. En vista de esto, a los expertos en la materia se les pueden ocurrir formas de realizacion adicionales que esten dentro del alcance la invencion.

Ejemplo 1 - Ejemplo comparativo

55 10 pacientes recibieron tratamiento por varices mediante la inyeccion de espuma hecha con solucion de polidocanolal 1% y una mezcla gaseosa constituida basicamente por nitrogeno entre el 7 y el 8% y el resto dioxido de carbono (aproximadamente, el 22%) y oxfgeno (aproximadamente el 70%).

El procedimiento suponfa la inyeccion de hasta 30ml de espuma (25,5ml de gas) en la seccion estrecha de la vena

safena mayor. Se realizaron exploraciones con ultrasonido de las 4 cavidades cardfacas a todos los pacientes para verificar las burbujas que llegaban al corazon. Se observaron burbujas en las auriculas y ventrfculos derechos de los 10 pacientes examinados. En general, las burbujas aparecieron varios minutos despues de la inyeccion de la espuma y siguieron hasta que se detuvo el registro con ultrasonido, aproximadamente, 40 minutos despues de la inyeccion.

5

En un paciente, se observaron microburbujas en la auricula y el ventrfculo izquierdo. Posteriormente, se confirmo que dicho paciente tenia una persistencia del agujero oval.

Ejemplo 2 - Ejemplo comparativo

10

El objetivo de este experimento era investigar la naturaleza de las burbujas residuales que pasan al corazon tras la inyeccion en la vena safena de espuma de polidocanol hecha con diferentes mezclas gaseosas.

Se inyecto, a una perra de caza de 26 kg anestesiada, espuma que contenfa polidocanol formulado con mezclas 15 gaseosas variables. Se supervisaron burbujas residuales en la arteria pulmonar usando un ecocardiograma transesofagico (TEE). Por medio de un cateter de diametro interior grande, se tomaron muestras de la arteria pulmonar de las burbujas residuales visualizadas en el TEE. En dichas muestras de sangre se analizo la presencia de burbujas residuales usando microscopfa optica y ultrasonido.

20 Se usaron tres composiciones diferentes de espuma como sigue:

polidocanol al 1% y aire polidoncaol al 1% y una mezcla gaseosa constituida por nitrogeno entre el 7 y el 8% y el resto dioxido de carbono y oxfgeno una solucion de polidocanol al 1% y una mezcla gaseosa que compendia nitrogeno en menos del 1% y el resto dioxido de carbono y oxfgeno.

25

Se grabo en video el resultado del TEE y se analizo posteriormente. Para las tres composiciones, las burbujas llegaron a la arteria pulmonar en cantidades suficientes como para dar lugar a una imagen sustancialmente opaca. Se considera que la densidad lfmite de burbuja necesaria para producir una imagen de este tipo es bastante reducida y, por lo tanto, esta imagen, por si misma, no facilito datos utiles. El tiempo que tardo la imagen en volver a una imagen de fondo en estado 30 estable se considero que era aproximadamente indicativo de la cantidad de tiempo que hubieran tardado todas o la mayorfa de las burbujas en disolverse en el flujo sangufneo. El TEE fue muy preciso (mostrando actividad incluso cuando se inyecto solucion salina como un control). Por este motivo resulto diffcil establecer puntos finales exactos. No obstante, se han realizado los siguientes calculos del perfodo de tiempo desde la opacificacion de la imagen hasta decaer a un nivel de fondo. 4minutos 35 2 minutos 20 segundos.

Ademas del analisis con TEE, se observaron las muestras de sangre sacadas de la arteria pulmonar correspondientes a cada espuma durante el perfodo en que la imagen del TEE era sustancialmente opaca. Los resultados de estas 40 observaciones fueron como sigue.

Tan pronto como se tomo la muestra, se observo un volumen considerable de burbujas en la jeringuilla. Cuando se mantuvo la jeringuilla con su eje longitudinal en horizontal, se observo una hilera continua de burbujas extendiendose sustancialmente por toda la longitud de la jeringuilla de 20ml.

45

Inicialmente al tomar la muestra no se observaron burbujas en la jeringuilla, pero tras unos segundos, con la jeringuilla en la posicion horizontal, aparecio una lfnea de burbujas que era mas fina que la lfnea que se observo en la espuma.

Despues de tomar la muestra y mantener la jeringuilla en la posicion horizontal, no se observaron burbujas durante un 50 perfodo de un minuto o superior. Gradualmente, empezo a aparecer una lfnea fina de burbujas a lo largo de la parte superior de la jeringuilla.

No se pudieron medir las burbujas, sin embargo parecfan ser mas pequenas para la composicion C que para la composicion B, siendo, a la vez, las burbujas de la composicion B mas pequenas que las de la composicion A.

55

Ejemplo 3 - Ejemplo comparativo

Se realizaron experimentos in vitro para determinar la absorcion de espuma hecha con diferentes gases en sangre arterial purahumana.

Se prepare un deposito de jeringuilla de 20 ml con polipropileno puncionando su pared lateral con una aguja hipodermica relativamente larga para hacer un agujero con un diametro de, aproximadamente, 1 mm. Posteriormente se tapo el agujero sujetando una pieza de una lamina de vinilo transparente flexible en el mismo con una cinta adhesiva 5 transparente. Se introdujo un pequeno elemento agitador magnetico en el deposito de la jeringuilla y, posteriormente, se volvio a colocar el embolo. A continuacion, se sacaron 20 ml de sangre arterial humana, de la manera habitual, de un paciente usando la jeringuilla, preparada de manera especial, provista de una aguja hipodermica.

Se extrajo la aguja hipodermica y la jeringuilla se coloco en una unidad agitadora magnetica, de manera que el elemento 10 magnetico de la jeringuilla agito completamentela sangre. Posteriormente, la boquilla Luerde la jeringuilla se conecto a una pieza de 50 cm de tuvo manometrico que se dispuso en horizontal y se dejo abierta en un extremo. El tubo manometrico se fijo a una escala.

Posteriormente, se lleno una jeringuilla de 0,5 ml, con una aguja fina previamente colocada, de espuma hecha a partir de 15 solucion de polidocanol al 1% y aire. La densidad de la espuma era de 0,13 g/ml (±0,03 g/ml), constituyendo el componente lfquido, aproximadamente, el 13% del volumen total de espuma (± 3%).

Posteriormente, la aguja de la jeringuilla de 0,5 ml se introdujo a traves de la lamina de vinilo de la pared lateral de la jeringuilla de 20 ml. Se observo que habfa un pequeno volumen de sangre en el tubo manometrico y se anoto en la 20 escala la posicion del extremo distal de dicha columna de sangre. La alfcuota de 0,5 ml de espuma se inyecto rapidamente y simultaneamente se puso en marcha un temporizador (t0). Cuando la espuma desplazo la sangre de la jeringuilla de 20 ml, la columna de sangre de la jeringuilla de 20 ml se desplazo al tubo manometrico y se anoto en la escala la distancia a lo largo del tubo que alcanzo el extremo distal de la columna de sangre. La escala propiamente dicha comprendfa lfneas marcadoras separadas, separadas por igual a intervalos de aproximadamente 1 cm. Se 25 determino que una distancia de 45 intervalos en esta escala correspondfa a una capacidad interna del tubo manometrico de, aproximadamente, 0,5 ml.

Cuando la sangre empezo a absorber el gas de la espuma, la sangre del tubo manometrico empezo a retroceder hacia la jeringuilla. Una vez que parecio que la columna dejo de moverse, se detuvo el temporizador (tF). Nuevamente se anoto la 30 posicion del extremo distal.

Posteriormente, se repitio el experimento respecto a una espuma de la misma densidad, pero hecha con gas de oxfgeno (pureza de “grado medico” - 99,5% mfnimo).

35 Se volvio a repetir el experimento, pero esta vez, en lugar de espuma, se introdujo gas de oxfgeno de un cilindro de oxfgeno de grado medico directamente en la jeringuilla de 0,5 ml.

Los resultados de estas tres pruebas se presentan a continuacion en la Tablal.

TABLA 1

Prueba

Espuma/ gas Posicion de inicio de la sangre (“x”) Posicion de la sangre en to(“y”) tF (segundos) Posicion de la sangre en tF (“z”) Volumen absorbido en tF (ml) 0,5(y- Z) (y-x) Volumen lfquido en espuma (ml) Gas no absorbido

ml

%

1

Espuma de aire 2 47 80* 40 0,08 0,13 x 0,5 = 0,07 0,35 81%

2

Espuma de oxigeno 4 48 140 11 0,42 0,13 x 0,5 = 0,07 0,01 2%

3

Gas de oxigeno 2 47 140 5,5 0,46 cero 0,04 8%

*Despues de 80 segundos no se observo ningun movimiento adicional de la columna de sangre.

Lamentablemente, el error experimental de este ejemplo es demasiado grande para llegar a la conclusion de si hay o no un volumen residual de gas en la espuma de gas de oxfgeno o de oxfgeno, si bien evidentemente se absorbe la gran mayona, al menos del gas. Habna un pequeno porcentaje de nitrogeno en el gas, del cilindro de oxfgeno, que solo es puro al 99,5% y que posiblemente se introdujo durante el experimento. Tambien es una posibilidad la difusion de 5 nitrogeno en las burbujas desde la sangre, como se ha analizado anteriormente, y se pudo haber introducido algo de nitrogeno involuntariamente durante el procedimiento.

En este experimento, la prueba de la espuma de aire solo se observo durante unos minutos despues det F. No obstante, los inventores han realizado experimentos adicionales, cuyos resultados no se registran formalmente en la presente

10 memoria descriptiva, en los que se usaba espuma con un porcentaje de nitrogeno. Como en los experimentos anteriores, se inyecto una jeringuilla de 20 ml de sangre arterial pura humana con una alfcuota de 0,5 ml de una espuma que contema un porcentaje de nitrogeno. El contenido de la jeringuilla se agito, como anteriormente, y se dejo transcurrir un penodo de 24 horas. En la jeringuilla siguio habiendo un volumen facilmente visible de burbujas.

15 Ejemplo 4 - preparacion de una bombona con una proporcion de nitrogeno muy baja

Se lleno de agua una bombona de aluminio anodizado con una parte superior abierta. Posteriormente, la bombona se sumergio en un bano de agua y se invirtio. A continuacion, se introdujo en el bano de agua un tubo de un cilindro presurizado de gas de oxfgeno y se abrio el suministro de oxfgeno, limpiando, de ese modo, el aire del tubo.

20 Posteriormente, se sumergio en el bano de agua un ensamblaje superior de la bombona que comprendfa una valvula, un tubo invertido y una unidad de apilamiento de mallas y se conecto al tubo de oxfgeno durante unos segundos para purgar el aire del ensamblaje.

Posteriormente, el tubo de oxfgeno se introdujo en la bombona invertida hasta que se desplazo toda el agua de la

25 bombona. A continuacion, se extrajo el tubo de la bombona y el ensamblaje superior previamente purgado se sujeto rapidamente sobre la parte superior de la bombona cerrando hermeticamente, de ese modo, la bombona. Posteriormente, se extrajo la bombona del bano de agua con el ensamblaje superior todavfa sujeto a la misma. Posteriormente, el ensamblaje superior se sujeto a la bombona usando una tecnica de sujecion estandar.

30 A continuacion, se presurizo la bombona a, aproximadamente, una presion de 8 bares absolutos conectando la valvula de bombona a un tubo de oxfgeno regulado durante 1 minuto. Se libero la presion abriendo la valvula hasta que la presion de la bombona estuvo justo por encima de 1 bar absoluto. Se aplico intermitentemente a la valvula un calibre de presion durante la operacion de liberacion de presion para asegurarse de que la presion de la bombona no descendfa hasta 1 bar absoluto. Se hizo para evitar la posibilidad de que se filtrara aire atmosferico en la bombona.

35

Posteriormente, se volvio a presurizar la bombona hasta 8 bares absolutos y se repitio la operacion de liberacion de presion. A continuacion, se repitio este proceso una tercera vez, siendo la presion definitiva dela bombona de entre 1,1 y 1,2 bares absolutos.

40 Posteriormente, se introdujeron 18 ml de solucion de polidocanol al 1% a traves de la valvula de bombona usando una jeringuilla sin bolsas de aire, incluso las bolsas de aire de la boquilla luer. La valvula de bombona se conecto a un cilindro de dioxido de carbono y se presurizo a 2,2 bares absolutos. Se volvio a conectar el tubo de oxfgeno a la valvula y se aumento la presion a 3,6 bares absolutos.

45 La Tabla 2 que aparece a continuacion muestra el resultado esperado de los ciclos de presurizacion y despresurizacion del oxfgeno, dando por supuesto que habfa oxfgeno puro al 100% en el cilindro y que, a pesar de las precauciones tomadas el 1% del gas de la bombona, tras el procedimiento inicial de llenado con oxfgeno, era nitrogeno. Se da por supuesto el peor caso correspondiente a los valores de presion de la bombona, concretamente, 1,2 bares absolutos (“bara”) y 7,6 bara.

50

TABLA 2

Presion parcial del N2 (bares) Presion de la bombona(bares) % de N2

Inicio

0,012 1,2 1%

1er. ciclo

0,012 7,6 0,16%

0,00189 1,2 0,16%

2° ciclo

0,00189 7,6 0,02%

0,000299

1,2 0,02%

3er. ciclo

0,000299 7,6 0,00%

0,0000472

1,2 0,00%

Como se puede observar el porcentaje de nitrogeno cae hasta cero, calculado hasta la segunda cifra decimal, tras los tres ciclos de presion/liberacion de oxfgeno.

5 El cilindro de oxfgeno que se uso en el proceso anterior era un cilindro de oxfgeno de grado medico estandar suministrado por B.O.C y con una especificacion de pureza del 99,5% o superior. El cilindro de dioxido de carbono que se uso era el denominado “Grado CP”, de B.O.C, que tiene un nivel de pureza del 99,995%.

Valiendo hasta la segunda cifra decimal, la impureza (que sera principalmente nitrogeno) que surge del procedimiento 10 inicial de llenado se deberfa reducir hasta cero tras tres ciclos de presion/liberacion. Del mismo modo, el nivel de impureza en la bombona del cilindro de dioxido de carbono se puede considerar cero hasta la segunda cifra decimal, dado que la pureza de la fuente era del 99,995% y solo, aproximadamente, un tercio del gas de la bombona acabada era dioxido de carbono.

15 Los inventores llevaran a cabo experimentos adicionales en la lfnea de los anteriores usando fuentes de oxfgeno y de dioxido de carbono de pureza superior. El oxfgeno en cilindro siguiente se puede conseguir facilmente en B.O.C.:

“Grado medico” pureza del 99,5% (segun se usa en el procedimiento anterior).

“Grado cero” pureza del 99,6% “Grado N5,0” pureza del 99,999% “Grado N5,5” pureza del 99,9995% “Grado N6,0” pureza del 99,9999%

20

En cada caso la impureza es principalmente nitrogeno. Los siguientes productos de dioxido de carbono en cilindro se pueden conseguir facilmente en B.O.C. Los mismos tienen las siguientes especificaciones:

“Grado CP N4,5” pureza del 99,995% (segun se usa en el procedimiento anterior).

“Grado de investigacion N5,0” pureza del 99,999%.

25

Se entendera que repitiendo el procedimiento que se ha descrito anteriormente usando oxfgeno de “grado cero” tendrfa como resultado una bombona acabada con una impureza maxima (que principalmente sera nitrogeno) del 0,4%.

Naturalmente, la cantidad de ciclos de presion/liberacion se puede aumentar a fin de reducir aun mas la impureza 30 maxima teorica si las fuentes de oxfgeno y dioxido de carbono tuvieran una pureza del 100%. Se trata de un calculo sencillo para mostrar la cantidad de ciclos necesarios para reducir el nivel de impureza de maximo porcentaje a cero, calculado hasta la tercera, la cuarta o la quinta cifra decimal. Siempre que la presion de la bombonano caiga hasta 1 bar absoluto o por debajo de 1 bar absoluto y siempre que los tubos de los cilindros de oxfgeno y dioxido de carbono se limpien con gas antes del acoplamiento a la valvula de bombona, no existe ningun motivo para suponer que, durante los 35 ciclos de presion/liberacion, entraran impurezas considerables en la bombona.

Una mejora del procedimiento para reducir aun mas la posibilidad de que entren impurezas serfa introducir la solucion de polidocanol justo despues del limpiado inicial. De este modo, se eliminara el aire/nitrogeno introducido con el polidocanol durante los ciclos de presion/liberacion siguientes.

40

Una mejora adicional de la tecnica puede ser mantener el bano de agua en un estado agitado usando un agitador magnetico, bajo una atmosfera de oxfgeno continuamente renovada, durante 24 horas. De este modo, se deberfa eliminar el nitrogeno del bano de agua y sustituir por oxfgeno disuelto. Se da por supuesto que llenando la bombona de dicho bano de agua oxigenada deberfa eliminar el bano de agua como una posible fuente de impureza de nitrogeno.

45

Se preve que se puedan llevar a cabo cinco, diez, veinte o incluso 100 ciclos de presion/liberacion.

De esta manera, usando fuentes adecuadas de oxfgeno y dioxido de carbono, como se ha detallado anteriormente, se podra hacer una bombona cargada de polidocanol y una mezcla de oxfgeno y dioxido de carbono que tenga un 50 porcentaje de impureza del 0,005% o inferior (principalmente nitrogeno), usando dioxido de carbono grado CP o usando

dioxido de carbono de grado de investigacion al 0,001% o inferior. Asimismo, se deberfa poder hacer una bombona de polidocanol y oxfgeno con un porcentaje de impureza de gas de nitrogeno del 0,0001% o inferior usando oxfgeno de grado N6,0.

5 Por supuesto se entendera que la produccion de bombonas, de este modo, que tienen un nivel mfnimo de nitrogeno algo mas elevado no resulta diffcil y que se puede conseguir, por ejemplo, reduciendo la cantidad de ciclos de presion/liberacion.

Asimismo, se entendera que la sustitucion de polidocanol por un componente lfquido alternativo serfa una cuestion trivial.

10

Ejemplo 5 - preparacion de bombona con una proporcion de nitrogeno muy baja

Actualmente, los inventores estan desarrollando un procedimiento de fabricacion a gran escala de bombonas con una proporcion de nitrogeno muy baja, usando una metodologfa similar. En dicho procedimiento, se fabrican dos bombonas, 15 una que contiene oxfgeno a 5,8 bares absolutos y la otra dioxido de carbono y solucion de polidocanol a, aproximadamente, 1,2 bares absolutos. En uso, la bombona de CO2/polidocanol se presuriza justo antes del uso conectandola a la bombona de oxfgeno. Esto se describe en el documento WO02/41872-A1.

Existe por lo tanto un procedimiento de fabricacion independiente de las bombonas de oxfgeno y dioxido de 20 carbono/polidocanol. No obstante, resultara evidente que se puede aplicar cualquier procedimiento a la produccion de un producto de una unica bombona que contiene polidocanol y oxfgeno, dioxido de carbono o una mezcla de los dos.

Primero se describira el procedimiento correspondiente a una bombona de oxfgeno que es simplemente una bombona de aluminio anodizado con un ensamblaje de valvula estandar en la parte superior. Antes de colocar el ensamblaje de 25 valvula, primero se limpia la bombona con gas de oxfgeno insertando un tubo de oxfgeno en la parte superior abierta de un cilindro vertical durante 10 segundos. Posteriormente se retira el tubo. En esta fase no se habra eliminado todo el aire y se considera que el nivel de impureza de nitrogeno es de, aproximadamente, el 5% o el 6%. No se ha medido especfficamente, pero se ha deducido a partir del nivel de impureza medido en una fase posterior del procedimiento (vease mas adelante). No se considera que limpiar la bombona durante un perfodo mas prolongado cambiarfa 30 sustancialmente dicho valor correspondiente a impureza de gas de nitrogeno.

Posteriormente, se coloca el ensamblaje de valvula con huelgo y se engrana una cabeza de llenado alrededor de la parte superior de la bombona y del ensamblaje de valvula a fin de hacer un cierre estanco al gas contra la pared de bombona. Conectado a la cabeza de llenado hay un tubo para el oxfgeno. Posteriormente, se eleva la presion de la bombona 35 hasta, aproximadamente, 5,5 bares absolutos (bara). En esta fase se ha medido la impureza de gas de nitrogeno mediante tecnicas estandar de cromatograffa del gas para que sea, aproximadamente, al 1%.

En una fase se pensaba que era aceptable que el nivel de impureza de nitrogeno fuera de, aproximadamente, el 1%, pero despues de los resultados del ensayo clfnico (Ejemplo 1), se ha determinado que es aconsejable un contenido de 40 nitrogeno inferior. Por este motivo, se han anadido etapas adicionales al procedimiento, como sigue.

Manteniendo el cierre hermetico entre la bombona y la cabeza de llenado, el contenido de la bombona se vacfa a traves de la cabeza de llenado hasta que la presion de la bombona esta justo por encima de 1 bara. Como ocurre con el Ejemplo 4 anterior, esto es para impedir cualquier posible ingreso de aire atmosferico a traves del cierre.

45

Manteniendo el cierre hermetico entre la bombona y la cabeza de llenado, se vuelve a aumentar la presion hasta, aproximadamente, 5,5 bara y nuevamente esta presion se libera hasta justo por encima de 1 bara. Posteriormente, la bombona se eleva a su presion definitiva de 5,5 bara ± 0,4 bara. En esta fase, la impureza de gas de nitrogeno medida mediante cromatograffa del gas es de, aproximadamente, el 0,2%.

50

Se entendera que cada uno de los ciclos depresion/liberacion deberfa reducir la impureza debida al aire/nitrogeno residual en un factor de, aproximadamente 5 suponiendo que no haya fugas. Es razonable suponer que no hay fugas dado que continuamente se mantiene una presion positiva en la bombona. Suponiendo que la fuente es oxfgeno puro al 100%, la impureza de nitrogeno teorica, despues de estos tres ciclos de presion/liberacion, deberfa ser de, aproximadamente, el 55 0,05%. Dado que el nivel de nitrogeno medido es de, aproximadamente, 0,2%, aparentemente hay impureza en la tuberfa o el nitrogeno esta entrando en la muestra durante el proceso de medicion. Al menos se puede llegar a la conclusion de que el nivel de impureza es del 0,2% omejor.

Se entendera que una solucion de polidocanol o cualquier otro esclerosante lfquido, se podrfa anadir a la bombona

durante el procedimiento anterior y que la valvula estandar y el tubo invertido se podrfan sustituir por una unidad que incluya medios para generar espuma, tal como una malla de aberturas pequenas. En la etapa final, la presion de la bombona se puede elevar hasta lo que sea necesario, por ejemplo, aproximadamente, a 3,5 bara. De este modo, se podrfa hacer un producto de bombona presurizada final que contuviera esclerosante y sustancialmente oxfgeno puro.

5

Actualmente, no se entienden totalmente los efectos, que incluyen un posible efecto oxidizante, de almacenar la solucion de polidocanol bajo oxfgeno presurizado. Por lo tanto, actualmente se prefiere tener un sistema de dos bombonas en el que la solucion de polidocanol se almacena bajo dioxido de carbono y/o nitrogeno.

10 En versiones previas del producto (segun se usa en el Ejemplo 1), la mezcla gaseosa de la bombona de polidocanol era nitrogeno al 25% y dioxido de carbono al 75%. El nitrogeno estaba presente para reducir el efecto nocivo del dioxido de carbono altamente soluble en la estabilidad de la espuma. A fin de reducir al mfnimo tanto el contenido de dioxido de carbono como de nitrogeno de la espuma, dicha bombona se mantuvo a 0,5 bara. Esto significa que, cuando se conecto la bombona a la bombonade oxfgeno y se elevo la presion final a, aproximadamente, 3,5 bara, se redujo el contenido de 15 nitrogeno, aproximadamente, al 7%.

Los inventores comprendieron que (1) era necesario mantener la bombona a una presion por encima de la atmosferica para evitar el riesgo de contaminacion y que (2) el porcentaje de nitrogeno era demasiado elevado. Se produjo un nuevo diseno de bombona en la que la malla generadora de espuma tenia aberturas mas pequenas, 5 micrometres en lugar de 20 20 micrometros. Si bien anteriormente se pensaba que las diferencias de tamano en este nivel no tendrfan un efecto importante en la espuma, en realidad, se observo sorprendentemente que esta reduccion en el tamano de poro de la malla solo era suficiente para compensar el porcentaje aumentado de dioxido de carbono, consecuencia de tener dioxido de carbono sustancialmente puro en la bombona, asf como de mantenerlo justo por encima de 1 bara en lugar de 0,5 bara.

25

Usando una bombona de polidocanol de este diseno y una bombona de oxfgeno, como se ha descrito anteriormente, que solo se presuriza una vez, la espuma resultante tenia una impureza de nitrogeno de, aproximadamente, entre el 1 y el 2%.

30 El procedimiento actual es insertar un tubo de dioxido de carbono en la parte superior abierta de una bombona metalica anodizada durante 10 segundos. Posteriormente, se retira el tubo. En esta fase no sehabra eliminado todo el aire y se considera que el nivel de impureza de nitrogeno es de, aproximadamente, el 5% o el 6%. No se considera que limpiar la bombona durante un perfodo mas prolongado cambiarfa sustancialmente dicho valor correspondiente a impureza de gas de nitrogeno.

35

Posteriormente, se introducen en la bombona 18 ml de solucion de polidocanolal 1%, se vuelve a introducir un tubo de dioxido de carbono y se vuelve a limpiar la bombona durante unos segundos.

El ensamblaje superior, que incluye el tubo invertido, la valvula y la unidad de malla generadora de espuma, se coloca 40 con huelgo y se engrana una cabeza de llenado alrededor de la parte superior de la bombona y de la valvula de ensamblaje a fin de hacer un cierre estanco al gas contra la pared de la bombona. Conectado a la cabeza de llenado hay un tubo para dioxido de carbono. Posteriormente, la presion de la bombona se eleva hasta, aproximadamente, 1,2 bara. En esta fase todavfa no se ha medido la impureza de gas de nitrogeno, pero se espera que sea, aproximadamente, del 0,8%.

45

La impureza final de nitrogeno de una espuma generada a partir de la bombona cargada de polidocanol, despues de haberla conectado a la bombona de oxfgeno para elevar la hasta, aproximadamente, 3,5 bara, se determina por: (0,8 x 1,2 + 0,2 x 2,3)/3,5=0,4%

50 Ejemplo 6: Tecnica de clasificacion segun el tamano de burbuja

La tecnica de clasificacion segun el tamano de burbuja que se uso para medir la distribucion de tamano de burbuja de las espumas, a partir de los Ejemplos 6 a 8 anteriores, comprende un analisis por ordenador de la imagen de las burbujas a traves de un microscopio. Una pequena muestra de la espuma se deposita en una gufa preparada de manera especial 55 que tiene piezas de separacion de 37 micrometros de altura montadas en cada lateral. Posteriormente, se coloca con cuidado una gufa adicional en la parte superior de la muestra y de las piezas de separacion, extendiendo de ese modo la muestra en una capa con un grosor de 37 micrometros. A continuacion, se registra y procesa una imagen digital de parte de la capa de burbujas de 37 micrometros: en la imagen las burbujas parecen anillos, representando el anillo el diametro mas exterior de la burbuja. Cada burbuja se identifica y numera de manera independiente y se calcula su diametro. Para

burbujas con un diametro superior a 37 micrometros se da por supuesto que la burbuja se ha aplastado en cierto grado haciendo que el diametro del anillo de la imagen sea superior al diametro de la burbuja sin deformar. Se aplica un algoritmo para calcular el diametro original de la burbuja sin deformar. Para burbujas de 37 micrometros o inferiores, se da por supuesto que la burbuja ha flotado hacia el lateral inferior de la gufa superior y esta sin deformar. A partir de la 5 inspeccion visual de la imagen digital, no parece que sea un supuesto razonable dado que imagenes de burbujas superpuestas no aparecen o son poco comunes. No obstante, una vez que se haya desarrollado esto, se pretende repetir los experimentos usando un conjunto de gufas con una separacion de 10 micrometros y un software modificado adecuadamente, de manera que sustancialmente todas las burbujas se aplastaran entre las gufas.

10 Ejemplo 7

Se prepare una unidad comprendiendo una carcasa con puertos en cada extremo formados por conexiones luer estandar. En el interior de la carcasa hay un camino que une ambos puertos, camino en el que se instalan cuatro elementos de malla de manera que el flujo entre los puertos debe realizarse a traves de las mallas. Las mallas tienen aperturas de 15 5 micrometros.

Se introdujeron 8 ml de una disolucion de polidocanol all % en una jeringuilla estandar de 20 ml, asegurandose de que se introduce solucion en exceso y que posteriormente se dosifica la solucion con la boquilla apuntando hacia arriba, hasta que se deja el volumen adecuado de solucion de polidocanol. De este modo se eliminan los vacfos de aire de la 20 jeringuilla, especialmente de la boquilla.

Posteriormente, la jeringuilla llena de polidocanol se conecta a la unidad de malla, segun se ha descrito anteriormente, el ensamblaje orientado con la jeringuilla apuntando hacia arriba, y la unidad de malla se llena de solucion, eliminado todas las burbujas de aire.

25

Se conecta un tubo de un cilindro de oxfgeno de gradomedico (pureza del 99,5%) al conector luerde una jeringuilla de 20 ml con el embolo extrafdo. Posteriormente, se limpia el tubo de oxfgeno, el deposito de jeringuilla y el conector luer durante 10 segundos con oxfgeno del cilindro. A continuacion, se extrae el tubo de oxfgeno, manteniendo el suministro de oxfgeno encendido y se inserta el embolo de jeringuilla en el deposito y se baja el embolo. Posteriormente, se vuelve a 30 acoplar el tubo de oxfgeno al luer de la jeringuilla y se permite que la presion del oxfgeno empuje hacia atras el embolo de jeringuilla para llenar la jeringuilla con 12 ml de oxfgeno.

Posteriormente, la jeringuilla de oxfgeno se conecta inmediatamente a la unidad de malla y el gas y la disolucion de polidocanol se impulsan manualmente hacia delante y hacia atras entre las jeringas durante un minuto tan 35 rapidamente como sea posible.

Se sigue un procedimiento similar para una mezcla de 10 ml de polidocanol al 1% y 10 ml de oxfgeno. A continuacion, se realizo un procedimiento adicional con 8 ml de polidocanol al 1% y 12 ml de oxfgeno, usando una carcasa que contenfa unidades de malla con aperturas de 411 micrometres.

40

Ejemplo 8

Una jeringuilla y una unidad de malla llenas desolucion de polidocanol, como se ha descrito en el Ejemplo 7 anterior, se colocan en una “caja con guantes” plegable (una recipiente que se puede cerrar hermeticamente con guantes integrales 45 incorporados en la pared del recipiente para que un usuario pueda manipular el contenido del recipiente). Asimismo, se coloca una jeringuilla adicional, vacfa en la caja con guantes. Posteriormente, la caja se conecta hermeticamente a una fuente de vacfo y, de ese modo, se pliega de tal manera que se extrae sustancialmente todo el aire. Posteriormente, se sustituye la fuente de vacfo por una fuente de oxfgeno puro al 99,995% y la caja con guantes se llena de oxfgeno de esta fuente. Se mantiene el suministro de oxfgeno y se abre una pequena ventilacion en la pared de la caja con guantes 50 opuesta al punto de entrada de oxfgeno. Posteriormente se sigue el procedimiento que se ha descrito en el Ejemplo 7 anterior para llenar la jeringuilla vacfa de oxfgeno, usando el tubo de suministro de oxfgeno puro al 99,995% dentro de la caja con guantes. A continuacion se realiza el procedimiento que se ha descrito en el ejemplo 7 para generar espuma.

Ejemplo 9

55

Se prepara una jeringuilla de polidocanol y una unidad de malla como en el Ejemplo 7 anterior. Se sumerge una jeringuilla en un deposito de agua y se extrae el embolo. Una vez que el deposito de jeringuilla esta totalmente lleno de agua sin bolsas de aire, se sujeta un tapon sobre la boquilla luer. Se mantiene el deposito de jeringuilla con la boquilla apuntando hacia arriba y primero se purga un tubo de un cilindro de oxfgeno puro al 99,9999% y, posteriormente, se

introduce en el deposito de jeringuilla. Cuando se ha sustituido todo el agua por oxfgeno (teniendo cuidado de que se desplace el agua de la boquilla) se inserta el embolo y se extrae la jeringuilla del deposito de agua. A continuacion, se sigue el procedimiento del Ejemplo 7 para conectar la jeringuilla a la unidad de malla y hacer espuma.

5 Como ocurre con el Ejemplo 4 anterior, este procedimiento se podrfa mejorar almacenando el deposito de agua bajo una atmosfera continuamente renovada de oxfgeno puro al 99,9999% durante 24 horas antes de llenar la jeringuilla.

Ejemplo 10

10 En una modificacion de los Ejemplos 7-9, la unidad de malla se puede sustituir por un conector sencillo o por una valvula de tres vfas y en los demas aspectos la tecnica puede seguir igual, con la posible excepcion de que sean necesarias mas pasadas para hacer una espuma aceptable. La abertura de una valvula de tres vfas o conector estandar, a traves de la que se pasa el gas y el lfquido, en su dimension mayor, tendrfa, aproximadamente, de 0,5 mm a 3 mm. Pasando repetidamente el lfquido y el gas a traves de dicha abertura se puede seguir obteniendo una espuma util, si bien con 15 tamanos de burbuja considerablemente superiores a los que se obtienen con los procedimientos de los Ejemplos 6 a 9. Esta tecnica se conoce comunmente como la tecnica “Tessari”. Los inventores han experimentado con la tecnica Tessari y han observado que el tamano y la distribucion de las burbujas varfan mucho en funcion de la proporcion de gas a aire, asf como de la velocidad y la cantidad de pasadas del gas y el lfquido a traves de la abertura. En la bibliograffa se ha indicado que el tamano medio de burbuja de una espuma Tessari es de, aproximadamente, 300 micrometros. Lo mejor 20 que han podido conseguir los inventores usando la tecnica Tessari es una espuma con un tamano medio de burbuja de, aproximadamente, 70 micrometros, si bien para hacer esto se tuvo que aumentar la proporcion de lfquido a gas hasta, aproximadamente, lfquido al 40%, gas al 60%.

En este ejemplo, se puede adaptar la tecnica Tessari para hacer una espuma con la densidad y el tamano de burbuja 25 que se desee, dentro de las limitaciones que se han descrito anteriormente, pero usando gas con un porcentaje muy bajo de impureza de nitrogeno.

Ejemplo 11

30 Se prepare una bombona del tipo que se describe en el documento WO00/72821-A1 con un tubo invertido y un ensamblaje de valvula estandar provisto de un par de pequenas aberturas de entrada de aire, junto con una unidad de apilamiento de mallas con un tamano de abertura de 5 micrometres. El tamano de las aberturas de la valvula se agrando ligeramente en comparacion con la disposicionde valvula que se describe en el documento WO00/72821-A1 (que esta disenada para producir un espuma de densidad entre 1,1g/ml y 1,6g/ml). El objetivo de esta modificacion era aumentar la 35 proporcion de lfquido a gas en la mezcla que pasa a traves del apilamiento de mallas.

Se lleno la bombona con 18 ml de solucion de polidocanol al 1% y se presurizo con una mezcla de oxfgeno, dioxido de carbono y nitrogeno. Posteriormente, se dosifico una espuma.

40 Este procedimiento se repitio para diferentes tamanos de abertura de valvula y para una cantidad de espumas producidas, todas con el aspecto de un lfquido blanco y densidades en el intervalo de 0,3 a 0,5g/ml. Se llevo a cabo un analisis del tamano de burbuja correspondiente a cada una de estas espumas, que mostro el tamano medio de burbuja, aproximadamente, con un diametro de 50 a 80 micrometres.

45 Ejemplo 12

Se repitio el experimento anterior pero con la longitudy el diametro del tubo invertido ajustados en lugar del tamano de las aberturas de la unidad de valvula. Fue necesario aumentar el volumen de lfquido de la bombona para asegurarse de que el tubo invertido acortado llegaba al nivel del lfquido de la bombona.

50

Ejemplo 13

Los inventores preven reproducir los experimentos anteriores usando una formulacion de oxfgeno puro u oxfgeno y dioxido de carbono que tenga niveles de impureza de nitrogeno como se ha descrito anteriormente. Las mismas tecnicas 55 que las que se han descrito en los Ejemplos 4 y 5 se pueden seguir para producir niveles muy bajos de impureza de nitrogeno.

Ejemplo 14 Recipiente previamente presurizado

En la Figura 4 se muestra un aparato tfpico para la generacion de espuma terapeutica segun la invencion, como se describe en el documento WO00/72821-A1.

La bombona tiene una pared de aluminio (1), cuya superficie interior esta cubierta de una resina de epoxi. La parte inferior 5 del recipiente (2) esta abombada hacia adentro. La camara interior de la bombona (4) se purga previamente con oxfgeno al 100% durante 1 minuto, conteniendo 15 ml de polidocanol al 1% v/v/solucion salina tamponada con 20 mmol de fosfato/etanol al 4%, posteriormente se llena de la mezcla gaseosa necesaria.

Una valvula de aerosol EcosolT™ estandar con un diametro de 1 pulgada (2,54 cm) (5) (Precision Valve, Peterborough, Reino Unido) se engancha en la parte superior de la bombona tras un llenado parcialmente esteril de la solucion y se 10 puede activar bajando una tapa activadora (6) para liberar el contenido a traves de una boquilla de salida (13) dimensionada para engranar un adaptador Luerde una jeringuilla o conector de variasvfas (no se muestra). Un conector adicional (7) se situa en la parte inferior de la valvula estandar y sujeta cuatro mallas de Nailon 66 mantenidas en anillos de polietileno de alta densidad (HDPE) (8), todas dentro de una cubierta de polipropileno de extremos abiertos. Estas mallas tienen un diametro de 6 mm y tienen un area abierta del 14% constituida por poros de 20 pm, con las mallas 15 separadas 3,5 mm.

Un conector adicional (9) se situa en la parte inferior del conector que sujeta las mallas y recibe una carcasa (10) que sujeta el tubo invertido (12) e incluye agujeros de recepcion de gas (11a, 11b) que admiten gas de la camara (4) en el flujo de lfquido que sube por el tubo invertido al accionar el accionador (6). Estos estan convenientemente definidos por 20 un dispositivo Ecosol, de Precision Valve, Peterborough, Reino Unido, provisto de una pieza de insercion. Los agujeros (11a, 11b) tienen un area transversal de tal manera que se controla la relacion total de la suma de los mismos respecto al area transversal del orificio de control de lfquido en la base de la carcasa de valvula (en la parte superior del tubo invertido) para proporcionar la relacion de gas/lfquido necesaria.

25 Ejemplo 15 Recipiente con medios de engranaje y lanzadera de apilamiento de mallas

En la Figura 15 se muestra un dispositivo que comprende un recipiente provisto de medios de engranaje y de una lanzadera de apilamiento de mallas, como se describe en el documento WO02/41872-A1. El dispositivo comprende un recipiente de baja presion (1) para un lfquido esclerosante acuoso y una atmosfera gaseosa no reactiva, un recipiente 30 (2) para un gas dispersable en sangre, fisiologicamente aceptable, y un medio de engranaje que comprende un conector (3).

El recipiente (2) para un gas dispersable en sangre, fisiologicamente aceptable, esta cargado, a una presion de 5,8 bares absolutos, con la mezcla gaseosa necesaria, mientras que el recipiente (1) esta cargado con un gas inerte. El recipiente 35 (2) se usa para presurizar el recipiente (1), en el momento de uso, a aproximadamente, 3,5 bares absolutos y, posteriormente, se desecha, justo antes de que sea necesaria la espuma. Por lo tanto, en lo sucesivo se hara referencia a los dos recipientes como la bombona de PD [polidocanol] (1) y la bombona de 02(2) y se usara el termino “doble bombona” para hacer referencia al concepto de dosrecipientes.

40 Cada una de estas bombonas (1,2) esta provista de un montaje de ajuste a presion (4,5). Las mismas se pueden hacer como moldes identicos. Las partes de ajuste a presion (4,5) engranan la copa de montaje por enganche (6,7) de cada bombona (1,2) con fuerza de rozamiento elevada. El conector esta hecho de dos mitades (8,9) y la fuerza de rozamiento elevada permite al usuario agarrarlas dos bombonas conectadas (1,2) y girar las mitades del conector (8,9) una respecto a la otra sin deslizamiento entre el conector (3) y las bombonas. Cada uno de estos montajes de bombonas (6,7) tiene 45 agujeros de ajuste a presion (10, 11) para engranar dientes coincidentes (12,13) que estan en las superficies adecuadas de las dos mitades (8,9) del conector.

El conector (3) es un ensamblaje que comprende una serie de moldeos por inyeccion. Las dos mitades (8,9) del conector tienen forma de manguitos de perfil de leva que encajan como dos tubos concentricos. Estos tubos estan unidos por 50 pivotes que sobresalen (14) de una mitad que engranan perfiles de leva hundidos (15) de la otra mitad.

Los perfiles de leva tienen tres posiciones de parada de seguro. El primero de dichos seguros es la posicion de parada para almacenamiento. Se anade una seguridad extra a dicho seguro colocando un aro extrafble (16) en una separacion entre el extremo de un manguito y el otro. Hasta que no se extrae el aro (16) no se pueden girar los manguitos por delante de la primera posicion de seguro. Esto garantiza que no se produzca un accionamiento accidental del 55 conector.

Los manguitos de perfil de leva (8,9) se moldean por inyeccion de ABS, como artfculos separados, y, posteriormente, se ensamblan de manera que engranan entre sf en la primera parada del perfil de leva de seguro. Los manguitos ensamblados se ajustan a presion, como una unidad, en la placa de montaje (5) de la bombona de 02 (2) por medio de

cuatro dientes de fijacion. El aro deseguridad se anade en este momento para hacer un sub-ensamblaje de la bombona de02.

El conector (3) incluye en su interior una serie de elementos de espumado que comprenden una lanzadera de apilamiento 5 de mallas (17) en la mitad de conector (8) adyacente a la bombona de PD (1). La lanzadera de apilamiento de mallas (17) comprende cuatro filtros de disco moldeados por inyeccion con un tamano de agujero de malla de 20 pm y un area abierta de, aproximadamente, el 14% y dos adaptadores de extremo, adecuados para conexion sin fugas a las dos bombonas. Estos elementos se ensamblan previamente y se usan como una pieza de insercion en una operacion de moldeo por inyeccion adicional que los recubre de un sobremolde (18) que proporciona un cierre estanco al gas alrededor 10 de las mallas y define las superficies exteriores de la lanzadera de apilamiento de mallas. Los adaptadores de extremo del apilamiento (17) estan disenados para proporcionar una superficie estanca al gas y/o cierres de borde contra las valvulas de vastago (19,20) de las dos bombonas (1,2) para garantizar la esterilidad de la transferencia de gas entre las dos bombonas.

15 La lanzadera de apilamiento de mallas (17) se ensambla en la valvula de la bombona (19) de PD colocando juntos los componentes en un entorno aseptico.

La bombona de PD (1) y la lanzadera acoplada (17) se acercan al conector (3) y a la bombona de 02 acoplada (2) y se realiza un ajuste deslizante para permitir un ajuste a presion, de los cuatro dientes de fijacion (12) en el lateral de la 20 bombona de PD del conector (3), en los agujeros coincidentes (10) de la placa de montaje (4) dela bombona de PD (1). Esto completa el ensamblaje del sistema. En este estado, hay, aproximadamente, 2 mm de espacio libre entre la valvula de vastago (20) de la bombona de O2 (2) y el punto en el que formara un cierre contra una salida Luer hembra del apilamiento.

25 Cuando se extrae el aro de seguridad (16), se pueden agarrar las dos bombonas (1, 2) y girar una mitad del conector (3) de manera opuesta a la otra mitad para engranar y abrir la valvula de la bombona de 02 (20).

Cuando el giro del conector (3) sigue hasta susegunda posicion de seguro, la valvula de la bombona de PD (19) se abre completamente. Un pequeno agujero de salida (21) de la valvula de vastago (20) limita el flujo de gas de la bombona (2) 30 de O2. La presion de gas tarda, aproximadamente, 45 segundos, en la segunda posicion de seguro, para (casi) equilibrarse entre las dos bombonas hasta un nivel de 3,45 bares ± 0,15 bares.

Tras la espera de 45 segundos en la segunda posicion de seguro, el usuario gira el conector (3) hasta la tercera posicion de seguro. En esta posicion, se pueden separar las dos bombonas (1,2), dejando la bombona de PD (1) con la mitad (8) 35 de conector y el ensamblaje de lanzadera (17) sujetos entre el conector y la bombona de PD. En este momento se desecha la bombona de O2(2).

Una valvula de aerosol estandar (19) con un diametro de 1 pulgada (2,54 cm) (PrecisionValve, Peterborough, Reino Unido) se engancha en la parte superior de la bombona de PD (1) antes o despues del llenado esteril con la solucion y 40 se puede activar bajando la lanzadera de apilamiento de mallas (17), que hace las veces de un mecanismo accionador de la valvula de aerosol, para liberar el contenido a traves de una boquilla de salida (22) dimensionada para engranar un adaptador Luerde una jeringuilla o conector de varias vfas (no se muestra).

Ejemplo 16: Estudio para valorar el efecto en las propiedades ffsicas de la espuma derivado de cambios del 45 material de malla del apilamiento de mallas

Este estudio resume el efecto en las propiedades de la espuma por cambiar el tamano de poro de la malla transportadora de 20 micrometros a 5 micrometros, en combinacion con los cambios de la presion de gas y la composicion gaseosa de la bombona. El estudio es anterior a que los inventores se dieran cuenta de que era aconsejable una concentracion de 50 nitrogeno de 0,8 o inferior. Su objetivo principal era verificar si el uso de una malla de 5 micrometros en lugar de una de 20 micrometros compensarfa la eliminacion de nitrogeno al 25% que previamente se incorporaba deliberadamente a la bombonade polidocanol. El dioxido de carbono al “100%” y el oxfgeno al “100%”, a los que se hace referencia en este ejemplo y en los siguientes, en realidad incorporaran niveles de impureza de nitrogeno y el producto final de doble bombona, que se analiza en estos ejemplos, probablemente producira una espuma con una impureza de nitrogeno, 55 aproximadamente, del 1 al 2%.

Se usaron dos composiciones gaseosas diferentes. En una, la bombona que contiene la solucion de polidocanol al 1% y una atmosfera de CO2/N2al75%/25% se vacfa a una presion de 0,5 bares absolutos, mientras que la otra bombona se presuriza a 5,9 bares absolutos con oxfgeno. En la otra, la bombona que contiene la solucion depolidocanol al 1% se

presuriza a 1,2 ± 0,1 bares absolutos con CO2 al 100%, mientras que la otra bombona se presuriza a 5,8 ± 0,1 bares absolutos con oxfgeno.

El objetivo del estudio es examinar y comparar los resultados obtenidos usando mallas transportadoras de 5 micrometros 5 y 20 micrometros, correspondientes a presiones de la bombona de PD de 0,5 bares absolutos con la atmosfera de gas actual y correspondientes a presiones de la bombona de PD de 1,2 bares absolutos con CO2 al 100% como gas de llenado.

Materiales y Procedimientos:

10

Toda la preparacion de las muestras se llevo a cabo en una cabina de flujo laminar manteniendo los tiempos de exposicion a la atmosfera en un mfnimo.

Se usaron unidades transportadoras que contenfan un apilamiento de mallas tejidas 6/6 con nailon 4 de 6 mm de 15 diametro en una instalacion de molde o esterilizada de clase 100K. Se diferencian en los siguientes aspectos que se muestran en la Tabla 3 que aparece a continuacion.

Tabla 3. Caracteristicas fisicas de las mallas de 20 urn y 5 urn comparadas

Tipo de malla

Grosor (um) Tamano de poro (um) Area abierta (% de area deporos) Diametro de hilo (um)

5 mm

100 5 1 37

20 mm

55 20 14 34

20

BiorelianceLtd, Stirling, Escocia, Reino Unido,hizo la solucion de polidocanol al 1% para el estudio bajo condiciones controladas respecto a la formula de la Tabla 4.

Tabla 4. Composicion de la solucion de polidocanol al 1%

25

Material

Cantidades

% p/p por1000 g

Polidocanol

1,000 10,00 g

Etanol 96% EP

4,200 42,00 g

Dihidratode hidrofosfatodisodico. EP

0,240 2,40 g

Dihidrogenofosfatopotasico. EP

0,085 0,85 g

Solucion de hidroxido sodico 0,1M [usada para ajustar el pH: 7,2a 7,5]

c.s. c.s.

Acidoclorhfdrico0,1 M

c.s. c.s.

Agua para inyeccion. EP[usada para ajustar el peso final]

aprox. 94,475 c.s. para el 100,00% aprox. 944,75 g c.s. para 1000,00 g

TOTAL:

100,00% 1000,00 g

La solucion de polidocanolse paso por un filtro esteril de 0,2 micrometros antes de echarla en botellas de cristal transparente de roscado superior.

5 Se prepararon ensamblajes de doble bombona para la verificacion de las especificaciones de la mezcla gaseosa y la presion de la bombona de polidocanol que se ha detallado en la Tabla 5.

Tabla 5. Resumen de la preparacion de la bombona de PD para cada grupo de tratamiento

Etiqueta de la bombona

Tipo de muestra Composicion gaseosa Presion de gas (bar absoluto) Tamano de poro de la malla (pm)

C

Control 1 CO2al 75%/ N2al25% 0,5 20

D

Prueba1 CO2al 75%/ N2al25% 0,5 5

A

Control 2 CO2al 100% 1,2 20

B

Prueba2 CO2al 100% 1,2 5

10

El orden de prueba de las series experimentales era importante, porque los cambios en la temperatura ambiente del laboratorio afectan a los resultados de tiempo de semiseparacion. Los experimentos se desarrollaron cfclicamente a traves de los tipos de muestra en lugar de verificar todos los tipos de una muestra, seguido de todos los tipos de otra muestra. Esto redujo al mfnimo el efecto de los cambios en la temperatura del laboratorio durante los experimentos. La 15 temperatura del laboratorio se mantuvo lo mas cercana posible a 20°C.

Asimismo, era fundamental que la temperatura del aparato de tiempo de semiseparacion pudiera equilibrarse totalmente a la temperatura ambiente despues de las etapas de lavado y secado entre mediciones experimentales consecutivas. Resumen de las pruebas

20

Las pruebas llevadas a cabo en las unidades de doble bombona, de este estudio, y las especificaciones se resumen en la Tabla 6.

Tabla 6. Resumende pruebas y especificaciones

PRUEBA

ESPECIFICACION

1 Aspecto del dispositivo

Bombonas y valvulas sin corrosion. danos externos

Sin signos de fuga ni

2 Presion de Gas

Bombona de polidocanol

1,10 a 1,30 bares absolutos para muestras de Tipo 2 0,4 a 0,6 bares absolutos para muestras de Tipo 1 4,90 a 5,9 bares absolutos

Bombona de oxfgeno

3 Aspecto de la espuma Tras el accionamiento, se produce una espuma blanca. Una

vez que la espuma se ha asentado, se observa un lfquido transparente e incoloro.

4 pH de la solucion (espuma 6,6 a 7,5

colapsada)

5 Densidad de la espuma 0,10 a 0,16 g/ml

6 Tiempo de semiseparacion de 150 a 240 segundos

la espuma

7

Tamano de burbuja (distribucion de tamano)

<30pm

30pm a 280pm 281pm a 500pm >500pm

<20,0%

>75,0%

<5,0%

Ninguno

8 Partfculas (visibles y Cumple con Ph.Eur.

subvisibles)

9 Partfculas subvisibles La espuma colapsada contiene menos de 1000 partfculas por

ml > 10pm y menos de100 partfculas > 25 pm por ml

10 Identificacion de polidocanolEl patron CG y los tiempos de retencion seran iguales a la mediante el preparacion de

procedimiento CG referencia

11 Ensayo de polidocanol 0,90 a 1,10% v/v

12 Sustancias relacionadas Ningun area >0,20% de impureza identificada Ningun area

>0,10% de impureza sin identificar Impurezas totals area <4%

Resultados:

Los resultados de las pruebas que se han descrito en la Tabla 6 de dobles bombonas preparadas como se ha descrito en la Tabla 5 se resumen en los parrafos siguientes.

Aspecto del dispositivo y de la espuma 5

En todos los casos el aspecto de los dispositivos cumplfa con la especificacion dado que el dispositivo no mostro corrosion de bombonas y valvulas, ni tenfan signos de fuga ni danos externos. Tras el accionamiento de la bombona de PD cargada, se produjo una espuma blanca. Una vez asentada la espuma, se observo un lfquido transparente e incoloro.

10 Densidad, tiempo de semiseparacion y pH La espuma de todos los dispositivos cumplfa con la especificacion de densidad y tiempo de semiseparacion. No obstante, se obtuvo un resultado inesperadamente bajo (bombona C11), sin embargo se verificaron dos dispositivos adicionales que se comportaron segun lo esperado. A pesar del bajo resultado, la media cumplfa con la especificacion. En general, la espuma generada por medio de las lanzaderas de 5Elm tuvo tiempos de semiseparacion mas largos. Los resultados se resumen en laTabla 7.

15

El pH medio de la espuma generada cumplfa con la especificacion. No obstante, la espuma producida a partir de la bombona de CO2 al 100% estaba cerca del lfmite inferior de deteccion de la especificacion y en un caso (bombona C24) estaba justo por debajo de la especificacion. Los resultados se resumen en la Tabla 7

La presion de gas de las bombonas de oxfgeno y de las bombonas de polidocanol cumplfa con la especificacion en 20 todos los casos. En un caso (bombona C16) se registro una presion de bombona de oxfgeno ligeramente inferior a lo esperado. Los resultados se resumen en la Tabla 7.

Tabla 7. Tabla que resume la densidad de la espuma, el tiempo de semiseparacion, el pH y las presiones de gas de la bombona 25

Presion de gas

Condicion de prueba densidad (g/cm3) semivida (seg) pH (bares absolutos) PD

Oxfgeno

Especifica-

cion 0,10 a 0,16 150 a 240 6,6 a 7,5 4,9 a 5,9 0,4a 0,6

CO2 al 100%, 1,2 bares, malla de 20 pm

Bombona A1

0,12 164 6,7 5,6 1,1

Bombona A2

0,13 150 6,7 5,5 1,1

Bombona A3

0,13 153 6,6 5,8 1,1

Bombona A4

0,15 154 6,5 5,5 1,1

Bombona A5

0,13 154 6,7 5,6 1,1

Bombona A6

0,15 154 6,5 5,6 1,1

Media

0,13 155 6,6 5,6 1,1

CO2 al 100%, 1,2 bares, malla de 5 pm

Bombona B1

0,12 182 6,6 5,4 1,1

Bombona B2

0,12 169 6,7 5,6 1,1

Bombona B3

0,14 162 6,6 5,4 1,1

Bombona B4

0,1 173 6,7 5,7 1,1

Bombona B5

0,12 168 6,6 5,6 1,1

Bombona B6

0,15 161 6,5 5,4 1,1

Media

0,13 169 6,6 5,5 1,1

CO2 al 75%/N2 al

25%, 0,5 bares, malla de 20 pm

Bombona C1

0,14 157# 6,9 5,4 0,6

Bombona C2

0,15 182 6,9 5,5 0,6

Bombona C3

0,13 193 6,9 5,4 0,6

Bombona C4

0,15 183 6,9 5,7 0,6

Bombona C5

0,15 192 6,8 5,6 0,5

Bombona C6

0,15 191 6,9 5,0 0,6

Bombona C11

0,14 189 7,0 5,7 0,6

Bombona C12

0,13 179 7,0 5,4 0,6

Media

0,141 83 6,9 5,5 0,6

CO2 al 75%/N2 al 25%, 0,5 bares, malla de 5 pm

Bombona 0,15 203 6,9 5,4 0,6

D1

Bombona D2 0,12

209 7,0 5,6 0,6

Bombona D3

0,16 198 6,8 5,6 0,6

Bombona D4

0,12 205 6,9 5,7 0,6

Bombona D5

0,12 208 6,9 5,4 0,6

Bombona D6

0,15 205 6,9 5,6 0,6

Media

0,14 205 6,9 5,6 0,6

Distribucion de tamano de burbuja

5 El tamano medio de burbuja para todas las condiciones estaba dentro de la especificacion, a excepcion del control 1(C) en el que el > 500pm que obtuvo un promedio de una burbuja con exceso de tamano. Los resultados se resumen en la Tabla 8.

10

Tabla 8. Tabla para resumir la distribucion de tamano de burbuja de ]a espuma generada

Diametros de burbuja (pm)

<30 30 a 280 281 a 500 >500

Especificacion

<=20% >=80% <=5% Ninguno

CO2 al 100%, 1,2 bares, malla de 20 pm

Bombona A1

8,2% 89,5% 2,3% 0

Bombona A2

8,% 89,7% 2,2% 0

Bombona A3

7,9% 85,3% 6,8% 0

Bombona A4

9,0% 88,3% 2,6% 1

Bombona A5

7,9% 90,7% 1,5% 0

Bombona A6

11,0% 88,1% 0,9% 0

Media

8,7% 88,6% 2,7% 0

CO2 al 100%, 1,2 bares, malla de 5 pm

Bombona B1

7,8% 91,8% 0,4% 0

Bombona B2

5,5% 94,% 0,3% 0

Bombona B3

8,6% 90,7% 0,7% 0

Bombona B4

8,8% 91,1% 0,2% 0

Bombona B5

7,7% 92,2% 0,0% 0

Bombona B6

8,2% 91,3% 0,5% 0

Media

7,8% 91,9% 0,4% 0

CO2 al 75%/N2 al 25%, 0,5 bares, malla de 20 pm

Bombona C1

8,9% 87,2% 3,9% 0

Bombona C2

0,0% 89,3% 0,6% 0

Bombona C3

8,9% 86,5% 4,5% 1

Bombona C4

9,7% 87,7% 2,5% 4

Bombona C5

10,7% 87,9% 1,5% 0

Bombona C6

10,1% 88,0% 1,9% 0

Bombona C11

9,6% 89,5% 1,0% 0

Bombona C12

11,0% 87,6% 1,4% 0

Media

9,7% 88,1% 2,5% 1,0

CO2 al 75%/N2 al 25%,

0,5 bares, malla de 5 pm

Bombona D1

7,8% 92,0% 0,2% 0

Bombona D2

8,1% 91,4% 0,6% 0

Bombona D3

10,9% 89,0% 0,1% 0

Bombona D4

8,5% 91,2% 0,2% 0

Bombona D5

8,8% 91,1% 0,1% 0

Bombona D6

10,2% 89,8% 0,0% 0

Media

9,0% 90,7% 0,2% 0

# El valor del Control 1, bombona 1 no se incluye en la media 5 Partfculas (subvisibles)

La espuma colapsada de todas las bombonas cumplfa con la especificacion de las partfculas, siempre que no fuera superior a 1,000 partfculas/ml > 10pm ni superior a 100 partfculas/ml > 25pm. Las que tenfan una mezcla gaseosa de CO2 al 100% dieron las cifras mas bajas de total de partfculas. No se observaron partfculas visibles en la espuma 10 colapsada. En este caso, los resultados se resumen en la Tabla 9.

El aspecto de la espuma de cada dispositivo cumplfa con la especificacion. El aspecto de las bombonas cumplfa con la especificacion.

15 Tabla 9. Partfculas subvisibles segun procedimiento propio MS14

Dispositivo

Recuentospor ml Recuentos por recipiente Resulta-

N_________

________(18ml)____________________ ____do_____

>10pm >10 a 25pm >25pm >10pm >10 a 25pm >10pm

Ref. A

281,6 271,4 10,2 5.069 4.885 184 Cumple

Bombona7 Ref. A

235,3 227,9 7,4 4.235 4.102 133 Cumple

Bombona8 Ref. B

112,8 109,8 3 2.030 1.976 54 Cumple

Bombona7 Ref. B Bombona8

123,1 116,3 6,8 2.216 2.093 122 Cumple

Ref. C

386,1 370,2 15,9 6.950 6.664 286 Cumple

Bombona7 Ref. C

369,5 350,6 18,9 6.651 6.311 340 Cumple

Bombona8 Ref. D

130,2 123,5 6,7 2.344 2.223 121 Cumple

Bombona7 Ref. D

152,1 141,4 10,7 2.738 2.545 193 Cumple

Bombona8

Identificacion de polidocanol, ensayo y sustancias relacionadas. No se observaron diferencias importantes entre los resultados de las preparaciones de Control y de Prueba. Todas las muestras cumplfan con todas las especificaciones respecto a sustancias relacionadas, valor de ensayo e identidad.

5

Se realizo un analisis de las muestras usando la columna de 25 m, pero no se observaron picos importantes relacionados con las interacciones del Nailon 6,6de dichas muestras.

Ejemplo 17. Estudio adicional para valorar el efecto enlas propiedades fisicas de la espuma derivado de cambios del 10 material de malla del apilamiento de mallas

Se repitio el estudio del Ejemplo 16 usando un dispositivo en el que el tamano de poro de la malla transportadora era de 20 micrometros, 11 micrometros y 5 micrometros, en combinacion con cambios respecto a la presion de gas y a la composicion gaseosa de la bombona.Se prepararon ensamblajes de doble bombona para verificar las especificaciones 15 de la mezcla gaseosa y de la presion de la bombona de polidocanolque se han detallado enla Tabla 10.

Tabla 10. Resumen de preparacion de bombona de PD paracada grupo detratamiento

Tipo de muestra

Composicion gaseosa Presion de gas (bar absoluto) Tamano de poro de malla (pm)

Control 1

CO2 al 75%/N2 al 25% 0,5 20

Control 2

CO2 al 100% 1,2 20

Prueba2

CO2 al 100% 1,2 5

Prueba3

CO2 al 100% 1,2 11

Varios lotes de la espuma que resulto de la prueba en la que el tamano de poro de la malla transportadora era dell micrometros tenfan las caracterfsticas siguientes:

5 Tabla 11(a). Diametro de burbuja (micrometros)

<=30

>30 a 280 >280 a 500 >500

9,2%

90,2% 0,6% 0,0%

11,8%

88,2% 0,0% 0,0%

10,6%

89,4% 0,0% 0,0%

10,2%

89,8% 0,0% 0,0%

10,6%

89,1% 0,3% 0,0%

10,5%

89,4% 0,1% 0,0%

Tabla 11(b). Diametro de burbuja (micrometros) excepto las inferiores a 30 pm

<30 a 130

>30 a 280 >280 a 500 >500

59,1%

99,4% 0,6% 0,0%

71,2%

100,0% 0,0% 0,0%

75,3%

100,0% 0,0% 0,0%

67,3%

100,0% 0,0% 0,0%

66,4%

99,7% 0,3% 0,0%

73,6%

99,9% 0,1% 0,0%

10

Tabla 12. Densidad y semivida

Densidad (g/cm3)

Semivida (Min)

0,12

180 seg

0,14

171 seg

0,14

175 seg

0,12

175 seg

0,13

177 seg

0,15

177 seg

Claims (11)

1. REIVINDICACIONES

   1. Una espuma que comprende una fase liquida y una fase gaseosa, en la que la fase liquida comprende al menos un agente esclerosante y la fase gaseosa comprende esencialmente gas fisiologicamente aceptable que es una

   5 mezcla de oxfgeno y dioxido de carbono del 30-50%, caracterizado porque el nitrogeno gaseoso esta presente en la fase gaseosa en una cantidad comprendida entre el 0,01% y el 0,8% en volumen y al menos un gas fisiologicamente aceptable.
2. 2. La espuma de la reivindicacion 1, en la que el nitrogeno gaseoso esta presente en la fase gaseosa en una 10 cantidad comprendida entre el 0,01% y el 0,7%.
3. 3. La espuma de la reivindicacion 1, en la que el nitrogeno gaseoso esta presente en una cantidad comprendida entre el 0,01% y el 0,6%.

   15 4. La espuma segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la espuma tiene una densidad

   inferior a 0,25 g/cm3 y una semivida superior a 100 seg.
4. 5. La espuma segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la semivida es al menos 120 segundos.

   20
5. 6. La espumade la reivindicacion 5, en la que la semivida es al menos 150 segundos.
6. 7. La espuma de la reivindicacion 6, en la que la semivida es al menos 180 segundos.

   25 8. La espuma segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la densidad esta comprendida

   entre 0,07 y 0,22 g/ml.
7. 9. La espuma de la reivindicacion 8, en la que la densidad esta comprendida entre 0,07 y 0,19 g/ml.

   30 10. La espuma de la reivindicacion 9, en la que la densidad esta comprendida entre 0,07y 0,16 g/ml.
8. 11. La espuma de la reivindicacion 10, en la que la densidad esta comprendida entre 0,07y 0,14 g/ml.
9. 12. La espuma segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el al menos un esclerosantese

   35 elige entre polidocanol, glicerol y sulfato de tetradecilosodico.
10. 13. La espuma de la reivindicacion 12, en la que el al menos un esclerosante es polidocanol.
11. 14. La espuma de la reivindicacion 13, en la que el polidocanol esta presente en una concentracion

    40 comprendida entre el 0,5 y el 4% v/v en la fase liquida.