ES2345573T3 - Utilizacion de ranolazina para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de las posdespolarizaciones precoces (ead). - Google Patents

Abstract

Compuesto seleccionado de entre el grupo constituido por un compuesto de fórmula I: **(Ver fórmula)** en la que: R1, R2, R3, R4 y R5 son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo inferior, alcoxi inferior, ciano, trifluorometilo, halo, alquiltio inferior, alquilsulfinilo inferior, alquilsulfonilo inferior o alquilamido opcionalmente N-sustituido, con la condición de que cuando R1 sea metilo, R4 no sea metilo; o R2 y R3 formen conjuntamente -OCH2O-; R6, R7, R8, R9 y R10 son cada uno independientemente hidrógeno, acilo inferior, aminocarbonilmetilo, ciano, alquilo inferior, alcoxi inferior, trifluorometilo, halo, alquiltio inferior, alquilsulfinilo inferior, alquilsulfonilo inferior o dialquilamino inferior; o R6 y R7 forman conjuntamente -CH=CH-CH=CH-; o R7 y R8 forman conjuntamente -O-CH2O-; R11 y R12 son cada uno independientemente hidrógeno o alquilo inferior; y W es oxígeno o azufre; en la que alquilo inferior se refiere a una cadena de hidrocarburo no ramificada saturada de 1 a 4 carbonos y acilo inferior se refiere al grupo RC(O)A, en el que R es alquilo inferior y A representa el punto de acoplamiento; un isómero de un compuesto de fórmula I, y una sal farmacéuticamente aceptable o un éster de un compuesto de fórmula I o su isómero para su utilización en la supresión de las posdespolarizaciones precoces (EAD) en un mamífero.

Description

Utilización de ranolazina para la preparación de un medicamento para el tratamiento de las posdespolarizaciones precoces (EAD).

Campo de la invención

La presente invención se refiere al objeto de la reivindicación 1.

Antecedentes de la invención

El corazón es, en esencia, una bomba responsable de circular la sangre en todo el cuerpo. En un corazón que funciona normalmente dicha circulación es producida por la generación de impulsos eléctricos que, por ejemplo, aumentan o disminuyen la frecuencia cardíaca y/o la fuerza de contracción en respuesta a las demandas del sistema circulatorio.

Los impulsos eléctricos del corazón pueden detectarse y presentarse eléctricamente (electrocardiograma, EKG) y la forma de onda eléctrica del EKG se caracteriza por un acuerdo aceptado como complejo "PQRST". El complejo PQRST incluye la onda P, que corresponde a la onda de despolarización auricular; el complejo QRS, que corresponde a la onda de despolarización ventricular; y la onda T, que representa la repolarización de las células cardíacas. Por lo tanto, la onda P está asociada a la actividad en las cámaras cardíacas superiores y el complejo QRS y la onda T reflejan ambos la actividad en las cámaras inferiores.

Si la señal eléctrica llega a perturbarse de alguna manera, la acción de bombeo eficaz del corazón puede deteriorarse o incluso interrumpirse completamente. La perturbación del latido rítmico regular del corazón es uno de los trastornos más frecuentes observados en las cardiopatías. Los ritmos irregulares (arritmia) pueden ser una molestia menor o pueden indicar un problema grave. Por ejemplo, las arritmias pueden indicar una anomalía subyacente en el músculo, válvulas o arterias cardíacos e incluyen la situación en la que el corazón está latiendo demasiado lentamente (bradicardia) y también en la que el corazón está latiendo demasiado rápidamente (taquicardia).

Las taquicardias se clasifican en dos tipos generales: taquicardias supraventriculares y taquicardias ventriculares.

Las taquicardias supraventriculares incluyen la taquicardia paroxística supraventricular (PSVT), la fibrilación auricular, el aleteo auricular, la reentrada en el nódulo AV y el síndrome de Wolff-Parkinson White (WPW). La taquicardia supraventricular (SVT) es una enfermedad en la que los impulsos eléctricos que se desplazan a través del corazón son anormales a causa de un problema cardíaco en alguna parte por encima de las cámaras inferiores del corazón. La SVT puede implicar frecuencias cardíacas de 140 a 250 latidos por minuto (lo normal es aproximadamente de 70 a 80 latidos por minuto).

Las taquicardias ventriculares incluyen la propia taquicardia ventricular, así como la fibrilación ventricular y taquicardia ventricular en entorchado (TdP). La taquicardia ventricular (VT) es un ritmo cardíaco rápido que se origina en los ventrículos. La VT tiende a interrumpir la contracción ordenadamente del músculo ventricular, de modo que la capacidad del ventrículo para impulsar la sangre se reduce a menudo significativamente. Esto, combinado con la frecuencia cardíaca excesiva, puede reducir la cantidad de sangre que está siendo bombeada realmente por el corazón durante la VT a niveles peligrosos. En consecuencia, aunque los pacientes con VT pueden sentirse algunas veces relativamente bien, con frecuencia experimentan (además de las palpitaciones omnipresentes) mareos extremos, pérdida de la conciencia o incluso muerte súbita. Por regla general, la VT no se produce en pacientes sin cardiopatía subyacente. Para la gente que padece cardiopatía subyacente, generalmente es cierto que cuanto peor es la función ventricular izquierda, mayor es el riesgo de desarrollar taquicardias ventriculares que ponen en peligro la vida.

Las taquicardias ventriculares pueden surgir en situaciones de isquemia de miocardio tales como angina inestable, angina crónica, angina variable, infarto de miocardio, síndrome coronario agudo y además en la insuficiencia cardíaca, tanto aguda como crónica.

Existe una enfermedad conocida como prolongación anormal de repolarización, o síndrome de QT prolongado (LQTS), que se refleja en un mayor intervalo medio entre la onda Q y la onda T medidas por EKG. La prolongación del intervalo QT hace a los pacientes vulnerables a un ritmo cardíaco anormal, muy rápido (una "arritmia") conocida como taquicardia ventricular en entorchado. Cuando se produce la arritmia, no se bombea sangre fuera del corazón, y el cerebro se ve privado rápidamente de sangre, lo que produce la pérdida repentina de la consciencia (síncope) y conduce potencialmente a la muerte súbita.

El LQTS es producido por la disfunción de los canales iónicos del corazón o por fármacos. Estos canales controlan la circulación de los iones potasio, los iones sodio y los iones calcio, cuya circulación dentro y fuera de las células genera la actividad eléctrica del corazón. Los pacientes con LQTS normalmente no tienen ninguna cardiopatía estructural subyacente identificable. El LQTS puede ser heredado, con propensión a desarrollar una variedad determinada de taquicardia ventricular en determinadas circunstancias, por ejemplo, el ejercicio, la administración de determinados agentes farmacológicos o incluso durante el sueño. Alternativamente, los pacientes pueden adquirir el LQTS, por ejemplo por exposición a determinadas medicaciones de venta con receta.

La forma adquirida del LQTS puede ser producida por agentes farmacológicos. Por ejemplo, la incidencia de la taquicardia ventricular en entorchado (TdP) en pacientes tratados con quinidina se estima que oscila entre el 2,0 y el 8,8%. DL-sotalol ha sido asociado a una incidencia que oscila entre el 1,8 y el 4,8%. Una incidencia similar ha sido descrita para los agentes de antiarritmia de clase III más recientes, tales como dofetilida e ibutilida. De hecho, se ha demostrado también que un número cada vez más creciente de agentes no cardiovasculares agravan y/o precipitan TdP. Se ha publicado que más de 50 fármacos disponibles en el mercado producen TdP. Este problema parece surgir más frecuentemente con los fármacos más recientes y numerosos han sido retirados del mercado en los últimos años (p. ej. prenilamina, terodilina y en algunos países terfenadina, astemizol y cisaprida). Se ha demostrado que la TdP producida por fármacos se desarrolla en gran medida como consecuencia de un aumento en la dispersión de la repolarización secundaria para el aumento de las heterogeneidades eléctricas intrínsecas del miocardio ventricular.

La mayoría de los agentes farmacológicos que son capaces de producir repolarización prolongada y el LQTS adquirido pueden agruparse en la medida que actúan principalmente por uno de los cuatro mecanismos diferentes (1) un retardo de una o ambas corrientes I_{Ks} e I_{Kj} de K. Son ejemplos quinidina, N-acetilprocainamida, cesio, sotalol, bretylium, clofilium y otros nuevos agentes antiarrítmicos de clase III (esta acción podría ser posiblemente antagonizada específicamente por fármacos que activan el canal de K, tales como pinacidil y cromakalin); (2) supresión de I_{to}, como en el caso de la 4-aminopiridina, que se demostró que prolonga la repolarización y produce las EAD preferentemente en las células M subepicardiales caninas, que se publicó que tienen I_{to} prominente; (3) un aumento en I_{Ca}, como en el caso de Bay K 8644 (esta acción pudo ser invertida por los bloqueantes del canal de Ca); (4) un retardo de la inactivación de I_{Na}, como en el caso de aconitina, veratridina, batracotoxina, DPI y las toxinas de la anémona de mar (ATX), antopleurina-A (AP-A) y ATX-II (esta acción pudo ser antagonizada por fármacos que bloquean la I_{Na} y/o inactivan lentamente la corriente de Na, tales como la lidocaína y la mexiletina). Debido a estos fármacos (p. ej., la lidocaína y la mexiletina) pueden acortar la repolarización prolongada, también pueden suprimir las EAD producidas por los dos primeros mecanismos.

La lista de fármacos que producen LQTS y TdP está aumentando continuamente. Literalmente, cualquier agente farmacológico que pueda prolongar QT puede producir el LQTS. La incidencia de TdP no se ha correlacionado con las concentraciones en el plasma de fármacos que se conoce que precipitan esta arritmia. Sin embargo, concentraciones elevadas en el plasma, resultantes de la dosis excesiva o del metabolismo reducido de algunos de estos fármacos, pueden aumentar el riesgo de precipitar la TdP. Dicho metabolismo reducido puede resultar de la utilización simultánea de otros fármacos que interfieren con las enzimas citocromo P_{450}. Las medicaciones descritas que interfieren con el metabolismo de algunos fármacos asociados a TdP incluyen el cetoconazol generalizado y fármacos con estructura similar (fluconazol, itraconazol, metronidazol); inhibidores de la reabsorción de serotonina (fluoxetina, fluvoxamina, sertralina) y otros antidepresores (nefazodona), inhibidores de la proteasa del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) (indinavir, ritonavir, saquinavir); bloqueantes del canal de dihidropiridina cálcica (felodipina, nicardipina, nifedipina) y eritromicina y otros antibióticos macrólidos. El pomelo y el zumo de pomelo pueden interactuar también con algunos fármacos interfiriendo con las enzimas del citocromo P_{450}. Algunos de estos fármacos han estado asociados a TdP, no tanto porque prolongan el intervalo QT, sino porque son inhibidores principalmente de P4503A4, y de este modo aumentan la concentración en el plasma de otros agentes que prolongan QT. El mejor ejemplo es el cetoconazol y el itraconazol, que son potentes inhibidores de la enzima y de este modo responden de TdP durante la terapia con terfenadina, astemizol o cisaprida. Por otra parte, la incidencia del fármaco asociado a la TdP ha sido muy baja con algunos fármacos: difihidramina, fluconazol, quinina, litio, indapamida y vasopresina. Debe apuntarse también que la TdP puede proceder de la utilización de fármacos que producen la prolongación de QT en los pacientes con afecciones médicas, tales como la disfunción hepática o el LQTS congénito, o en aquellos con alteraciones de electrolitos (particularmente hipocalemia e hipomagnesemia).

Sin embargo, existen fármacos antiarrítmicos que son conocidos porque prolongan el intervalo QT pero no producen la TdP. Se ha descubierto que una propiedad común a dichos fármacos es la capacidad de inhibir simultáneamente otros iones corrientes tales como los canales de I_{Na} y/o el canal de I_{Ca}.

La forma heredada del LQTS se produce cuando se desarrolla una mutación en uno de los varios genes que producen o "codifican" uno de los canales iónicos que controlan la repolarización eléctrica. Existen por lo menos cinco formas diferentes de LQTS heredadas, caracterizadas como LQT1, LQT2, LQT3, LQT4 y LQT5. Se caracterizaron originalmente por la diferente forma del trazo del EKG y se han asociado ulteriormente con mutaciones génicas específicas. La forma LQT1, procedente de las mutaciones génicas de KCNQ1 (KVLQT1) o KCNE1 (MinK), es la más frecuente, totalizando aproximadamente del 55 al 60% de los pacientes genotipados. Las mutaciones LQT2, de HERG o KCNE2 (MiRP1), es la siguiente a aproximadamente 35 a 40%, y LQT3, procedente de las mutaciones SCN5A totaliza aproximadamente del 3 al 5%. Los pacientes con dos mutaciones parecen totalizar menos del 1% de todos
los pacientes, pero esto puede cambiar a medida que se estudian más pacientes con técnicas genéticas más recientes.

El gen mutante produce canales anormales que deben formarse, y como estos canales no funcionan apropiadamente, la recuperación eléctrica del corazón tarda más, lo que se manifiesta como un intervalo QT prolongado. Por ejemplo, una deleción heredada de los residuos de aminoácidos 1505 a 1507 (KPQ) en el canal cardíaco del Na^{+}, codificada por SCN5A, produce el síndrome de LQT3 dominante autosómico grave, asociado a arritmias ventriculares mortales. Las arritmias mortales se producen en el 39% de los pacientes con LQT3 durante el sueño o el descanso, supuestamente porque la corriente de Na^{+} tardía en exceso prolonga la repolarización, particularmente a bajas frecuencias cardíacas, y de este modo favorece el desarrollo de posdespolarizaciones precoces (EAD) y latidos ectópicos. La ralentización preferencial de la repolarización en el miocardio medio debe además aumentar la dispersión transparietal de la repolarización y producir bloqueo unidireccional y arritmias reentrantes. En otro 32% de pacientes con LQT3, se desencadenan episodios cardíacos mortales por ejercicio o emoción.

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Recientemente se ha publicado que una variante del gen SCN5A del canal de sodio cardíaco estaba asociada con la arritmia en afroamericanos. El polimorfismo con configuración monocatenaria (SCCP) y el análisis de la secuencia del ADN pusieron de manifiesto una transversión heterocigótica de C a A en el codón 1102 de SCN5A que produce una sustitución de serina (S1102) por tirosina (Y1102). S1102 es un resto conservado situado en las secuencias intracelulares que enlaza los dominios II y III del canal. Estos investigadores descubrieron que el alelo de Y1102 aumentaba la sensibilidad a la arritmia. Se descubrió que el QT_{c} (QT corregido) se prolongaba notablemente con amiodarona, lo que conduce a taquicardia ventricular en entorchado.

Hay necesidad de proporcionar un agente que trate o impida la LQTS heredada o adquirida de manera que reduzca el riesgo de la arritmia y la TdP. se ha demostrado anteriormente que la ranolazina es un agente eficaz para el tratamiento de la angina de pecho sin producir ningún efecto o efectos mínimos en la frecuencia cardíaca o la presión sanguínea. Actualmente, de manera sorprendente, los investigadores han descubierto que la ranolazina y los compuestos relacionados son agentes eficaces para la profilaxis y/o tratamiento de la arritmia heredada o adquirida.

Sorprendentemente, los investigadores han descubierto que los compuestos que inhiben los canales iónicos I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} tardío presentan este espectro preferido de actividad. Dichos compuestos prolongan la duración potencial de acción ventricular, aumentan el periodo resistente efectivo ventricular, disminuyen la TDR, aumentan la APD y no producen las EAD. Por ejemplo, la ranolazina, que es conocida por ser útil en el tratamiento de la angina de pecho y de la insuficiencia cardíaca congestiva, se ha descubierto que es útil en el tratamiento de la taquicardia ventricular en virtud de su capacidad para inhibir los canales iónicos I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} tardío a niveles de dosis que no bloquean los canales de calcio. Esto es particularmente sorprendente, porque la patente U.S. nº 4.567.264 da a conocer que la ranolazina es un fármaco cardioselectivo que inhibe los canales de ión calcio y sugiere que como consecuencia de su efecto para bloquear los canales de calcio debe ser útil en el tratamiento de una multitud de estados patológicos incluyendo la arritmia. Sin embargo, los investigadores han descubierto que la ranolazina actúa como un agente antiarrítmico eficaz a concentraciones que tienen poco o ningún efecto sobre el canal de calcio. La falta de efecto o el efecto mínimo sobre la actividad del canal de calcio a niveles de dosis terapéutica es beneficiosa porque obvia los efectos bien conocidos de los inhibidores del canal de ión calcio (p. ej., cambios en la presión sanguínea) que son indeseables cuando se trata la arritmia en un paciente. Los investigadores han descubierto también que la ranolazina es eficaz en la supresión de las EAD y en la actividad desencadenada que son efectos secundarios de la administración de fármacos tales como quinidina y sotalol.

Por consiguiente, se proporciona un procedimiento nuevo y eficaz de tratamiento de la VT que restablece el ritmo sinusal mientras que está virtualmente libre de efectos secundarios indeseables, tales como los cambios en la presión arterial media, la presión sanguínea, la frecuencia cardíaca u otros efectos desfavorables.

Sumario de la invención

Un objetivo de la presente invención consiste en proporcionar un procedimiento eficaz de supresión de la posdespolarización precoz (EAD) en un mamífero. Por consiguiente, en un primer aspecto, la invención se refiere a un compuesto de fórmula I:

1

en la que:

R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4} y R^{5} son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo inferior, alcoxi inferior, ciano, trifluorometilo, halo, alquiltio inferior, alquilsulfinilo inferior, alquilsulfonilo inferior o alquilamido opcionalmente N-sustituido, con la condición de que cuando R^{1} sea metilo, R^{4} no sea metilo;

o R^{2} y R^{3} forman conjuntamente -OCH_{2}O-;

R^{6}, R^{7}, R^{8}, R^{9} y R^{10} son cada uno independientemente hidrógeno, acilo inferior, aminocarbonilmetilo, ciano, alquilo inferior, alcoxi inferior, trifluorometilo, halo, alquiltio inferior, alquilsulfinilo inferior, alquilsulfonilo inferior o dialquilamino inferior; o

R^{6} y R^{7} conjuntamente forman -CH=CH-CH=CH-; o

R^{7} y R^{8} forman conjuntamente -O-CH_{2}O-;

R^{11} y R^{12} son cada uno independientemente hidrógeno o alquilo inferior; y

W es oxígeno o azufre;

o un isómero de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster de un compuesto de fórmula I o su isómero, para la utilización en la supresión de la posdespolarización precoz en un mamífero.

Un compuesto preferido es la ranolazina, que se denomina N-(2,6-dimetilfenil)-4-[2-hidroxi-3-(2-metoxifenoxi)propil]-1-piperazinacetamida {conocida también como 1-[3-(2-metoxifenoxi)-2-hidroxipropil]-4-[(2,6-dimetilfenil)-aminocarbonilmetil]-piperazina}, como mezcla racémica, o un isómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. Se administra preferentemente a niveles de dosis que inhiben los canales iónicos I_{kt}, I_{ks} e I_{Na} tardío pero no inhiben los canales de calcio u otros canales iónicos. La ranolazina, como mezcla racémica o isómero, puede formularse como base libre o como sal farmacéuticamente aceptable. Si se formula como sal farmacéuticamente aceptable, se prefiere la sal dihidrocloruro.

En un segundo aspecto, la invención se refiere a un procedimiento de supresión de la posdespolarización precoz en un mamífero que comprende administrar una cantidad eficaz de ranolazina, o un isómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto o su isómero, a un mamífero que lo necesita.

En un tercer aspecto, la invención se refiere a un procedimiento de supresión de la posdespolarización precoz en un mamífero que comprende la administración de ranolazina o un isómero de la misma o una sal farmacéutica aceptable del compuesto o su isómero a un nivel de dosis que inhibe los canales iónicos I_{Na} tardíos. Se prefiere una cantidad terapéutica que inhiba los canales iónicos I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} tardío. Es más preferida una cantidad terapéutica que inhiba los canales iónicos I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} tardío pero no inhiba los canales de calcio.

En una forma de realización preferida, los compuestos de la invención se administran de manera que se proporciona la concentración en el plasma del compuesto de Fórmula I de por lo menos 350 \pm 30 ng/ml durante por lo menos 12 horas.

En una segunda forma de realización preferida, los compuestos de la invención se administran en forma de formulación de liberación lenta que mantiene las concentraciones en el plasma del compuesto de Fórmula I por lo menos en menos de un máximo de 4.000 ng/ml, preferentemente entre aproximadamente 350 y aproximadamente 4.000 ng de base/ml, durante por lo menos 12 horas.

En una tercera forma de realización preferida, los compuestos de la invención se administran en una formulación que contiene entre 10 mg y 700 mg de un compuesto de Fórmula I. Un compuesto preferido de Fórmula I es la ranolazina o un isómero de la misma, o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto o un isómero de la misma.

En una cuarta forma de realización preferida, los compuestos de la invención se administran en una formulación que proporciona un nivel de dosis de aproximadamente 1 a aproximadamente 30 micromoles por litro de formulación. Se prefiere la administración de una formulación que proporcione un nivel de dosis entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10 micromoles por litro de la formulación.

En un cuarto aspecto, la presente invención se refiere a un procedimiento de supresión de la posdespolarización precoz en un mamífero que comprende la administración de una cantidad terapéutica de un compuesto de Fórmula I a niveles de dosis que inhiben los canales iónicos I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} tardío pero no inhibe los canales de calcio.

En un quinto aspecto, la presente invención se refiere a un procedimiento de supresión de la posdespolarización precoz en un mamífero mediante la administración de un compuesto de Fórmula I como inyección intravenosa rápida de manera que proporciona un nivel en el plasma del compuesto de Fórmula I de por lo menos 350 \pm 30 ng/ml durante por lo menos 12 horas.

En un sexto aspecto, la presente invención se refiere a un procedimiento de supresión de la posdespolarización precoz en un mamífero mediante la administración de un compuesto de Fórmula I como formulación de liberación sostenida de manera que mantiene un nivel en el plasma del compuesto de Fórmula I inferior a un máximo de 4.000 ng/ml, preferentemente entre aproximadamente 350 a aproximadamente 4.000 ng/ml durante por lo menos 12 horas.

En un séptimo aspecto, la presente invención se refiere a procedimientos de supresión de la posdespolarización precoz en un mamífero en los que un compuesto de fórmula I o un isómero del mismo, o de una sal o éster farmacéuticamente aceptables del compuesto o su isómero son administrados por inyección intravenosa rápida o por composición de liberación sostenida.

En un octavo aspecto, la presente invención se refiere a procedimientos de supresión de la posdespolarización precoz en un mamífero en los que un compuesto de fórmula I o un isómero del mismo, o de una sal o éster farmacéuticamente aceptables del compuesto o su isómero son administrados por inyección intravenosa rápida o por composición de liberación sostenida.

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En un noveno aspecto, la presente invención se refiere a la utilización de un compuesto de Fórmula I o de un isómero de la misma, o de una sal o éster farmacéuticamente aceptables del compuesto o su isómero para la preparación de una composición farmacéutica para la supresión de la posdespolarización precoz en un mamífero.

Abreviaturas

APD:

Duración potencial de la acción

BCL:

Longitud del ciclo básico

EAD:

Posdespolarización precoz

ECG y EKG:

Electrocardiograma

I_{Kr}:

Corriente rápida de rectificación del canal de potasio

I_{Ks}:

Corriente lenta de rectificación del canal de potasio

I_{Na, L}:

Corriente tardía del canal de sodio

epi células:

Células epicárdicas

endo células:

Células endocárdicas

LQTS:

Síndrome de la QT de larga duración

Células M:

Células procedentes de la zona mediomiocárdica del corazón

RPM:

Potencial de la membrana en reposo

TdP:

taquicardia ventricular en entorchado

TDR:

Dispersión transparietal de repolarización

VT:

taquicardia ventricular

Leyendas de las figuras

Figura 1. Relación entre un hipotético acción potencial de acción del sistema conductor y transcurso de tiempo de las corrientes que lo generan.

Figura 2. Propagación normal del impulso.

Figura 3. Efecto de la ranolazina sobre el componente de activación rápida de la corriente rectificadora retardada (I_{Kr}) en miocitos caninos del ventrículo izquierdo. A: Trazos de la corriente representativos registrados durante pulsaciones de 250 ms a 30 mV de un potencial de mantenimiento de -40 mV y retrorrepolarización a -40 mV antes y después de la ranolazina (50 \muM). Las células se bañaron en solución de Tyrode que contiene nifedipina 5 \muM. B: Curvas de respuesta a la concentración para los efectos inhibidores de ranolazina sobre I_{Kr}. Se midió I_{Kr} como corriente de cola en la repolarización a -40 mV después de una pulsación de despolarización de 250 ms a 30 mV (n = 5-8).

Figura 4. La ranolazina inhibe lentamente el componente de activación de la corriente rectificadora retardada (I_{Ks}). A: Trazos de la corriente I_{Ks} representativos registrados en un experimento típico en miocitos epicárdicos del ventrículo izquierdo canino en presencia y ausencia de ranolazina 100 \muM. Las corrientes se produjeron mediante una etapa de despolarización a 30 mV durante 3 s en un potencial de mantenimiento de -50 mV seguido de una etapa de repolarización a 0 mV (4,5 s). Se midió I_{Ks} como la corriente de cola registrada después de la etapa de repolarización. La ranolazina (100 \muM), bloqueó casi completamente la I_{Ks} y el efecto inhibidor se invirtió completamente en el periodo de reposo farmacológico. B: Curva de respuesta a la concentración para el efecto inhibidor de ranolazina en I_{Ks} (medido como la corriente de cola producida por la etapa de repolarización a 0 mV después de una etapa de despolarización de 3 s a 30 mV) (n = 5-14) en presencia de E-40315 \muM, y nifedipina 5 \muM. Los valores representan la media \pmSEM de la corriente de cola normalizada. La ranolazina inhibió a I_{Ks} con una IC_{50} de 13,4 \muM.

Figura 5. La ranolazina no afecta a I_{K1} en los miocitos ventriculares caninos. A: Se presentan trazos representativos de la corriente registrados antes y después de la exposición a ranolazina (100 \muM) durante las etapas de voltaje de un potencial de mantenimiento de -40 mV a potenciales de prueba 900 ms que oscilan entre 100 y 0 mV. B: Relaciones I-V en estado estacionario construidas representando el nivel de corriente medido al final de la pulsación de 900 ms en función de los voltajes de la prueba. La ranolazina hasta una concentración de 100 \muM, no alteró I_{K1}. Se presentan los datos como media \pmS.E.M. (n = 6).

Figura 6. Efectos de la ranolazina sobre los potenciales de acción epicárdico y en las células M a una longitud del ciclo básico (BCL) de 2.000 ms ([K^{+}]_{0} = 4 mM). A: Se presentan los potenciales de acción sobreimpuestos de la transmembrana registrados en las condiciones de referencia y después de la adición de concentraciones de ranolazina (1-100 \muM) progresivamente mayores. B y C: Los gráficos representan el efecto dependiente de la concentración de ranolazina sobre la duración del potencial de acción (APD_{50} y APD_{90}). Los datos presentados son la media\pmSD. * -p<0,05 vs. la referencia.

Figura 7. Efectos de la ranolazina sobre la duración del potencial de acción epicárdico y en las células M (APD_{50} y APD_{90}) a una longitud del ciclo básico de 500 ms ([K^{+}]_{0} = 4 mM). Los gráficos representan el efecto dependiente de la concentración de ranolazina sobre la duración del potencial de acción (APD_{50} y APD_{90}). Los datos presentados son la media\pmSD. * -p<0,05 vs. la referencia.

Figura 8. Efecto de la ranolazina sobre la velocidad de aumento de la carrera ascendente del potencial de acción (V_{máx}). Se presentan los potenciales de acción sobreimpuestos (B) y las correspondientes carreras ascendentes diferenciadas (dV/dt, A) registrados en las condiciones de referencia y en presencia de ranolazina 10 y 100 \muM (BCL=500 ms). C: Relación de respuesta a la concentración del efecto de ranolazina para reducir V_{máx}.

Figura 9. Efectos de la ranolazina sobre los potenciales de acción epicárdico y de las células M registrados a una longitud de ciclo básico de 2.000 ms y [K^{+}]_{0} = 2 mM. A: Se presentan los potenciales de acción transmembranarios sobreimpuestos registrados en ausencia y presencia de ranolazina (1-100 \muM). B y C: Los gráficos representan el efecto dependiente de la concentración de ranolazina sobre la duración potencial de la acción (APD_{50} y APD_{90}). Datos presentados como media \pmSD. * -p<0,5 vs. la referencia.

Figura 10. Efectos de la ranolazina sobre la duración del potencial de acción epicárdico y de las células M (APD_{50} y APD_{90}) a una longitud de ciclo básico de 500 ms ([K^{+}]_{0} = 2 mM). Los gráficos representan el efecto dependiente de la concentración de ranolazina sobre la duración potencial de la acción (APD_{50} y APD_{90}). Datos presentados como media \pmSD. * -p<0,5 vs. la referencia.

Figura 11. Cada panel presenta, de arriba a abajo, un trazo de ECG y los potenciales de acción de la transmembrana registrados en el miocardio medio (zona M) y epicardio (Epi) de la preparación en cuña ventricular izquierda canina perfundida arterialmente a una longitud del ciclo básico (BCL) de 2.000 ms. Las señales sobreimpuestas representan las condiciones de referencia (referencia) y el efecto de ranolazina sobre un intervalo de concentración de 1 a 100 \muM. A: Performada utilizando la solución de Tyrode que contiene KCl 4 mM para perfundir la cuña. B: Performada utilizando Tyrode que contiene KCl 2 mM.

Figura 12. Datos del compuesto que ilustran gráficamente los valores de APD_{90} (de Epi y M) y del intervalo QT (A, C) y de los valores de ADP_{50} (B, D) antes y después de la exposición a ranolazina (1-100 \muM). A, B: KCl 4 mM. C, D: KCl 2 mM. BCL=2.000 s.

Figura 13: Efecto de la ranolazina para suprimir las posdespolarizaciones precoces (EAD) producidas por d-sotalol en preparaciones de células M. A y B: Potenciales de acción transmembranaria sobreimpuestos registrados en dos preparaciones de células M en condiciones de referencia, en presencia del bloqueo de I_{Kr} (d-sotalol 100 \muM) y después de la adición de concentraciones aumentadas paso a paso de ranolazina (5, 10 y 20 \muM) en presencia continua de d-sotalol. Longitud del ciclo básico = 2.000 ms.

Figura 14. Bloqueo de I_{Na} tardío por ranolazina registrado utilizando la técnica de la fijación de voltaje con parche perforado. A: Se presentan corrientes sensibles a TTX en la solución de referencia (trazo negro) y después de ranolazina 20 \muM (trazo rojo). B: Resumen del diagrama de la curva de respuesta a la concentración para 2 a 8 células.

Figura 15. Efectos de ranolazina sobre I_{to}. Se registraron corrientes durante etapas de 100 ms a -10 (corriente de salida pequeña), 0 y 10 mV. I_{to} registrada en la solución de referencia (izquierda, trazos negros) y 4 minutos después de la adición de ranolazina 50 \muM (derecha, trazos rojos).

Figura 16. Datos resumidos de los efectos de ranolazina sobre I_{to} a 3 potenciales de prueba para las concentraciones de 10 \muM (9 células), 20 \muM (9 células), 50 \muM (6 células) y 100 \muM (7 células).

Figura 17. I_{to} normalizada y efectos de ranolazina. Estos datos son los mismos que los presentados en la figura 4.

Figura 18. El panel superior presenta los trazos sobreimpuestas de I_{Na-Ca} en la solución de referencia, 4 min. después de la adición de ranolazina 100 \muM y después de volver a la solución de referencia (trazo rojo). El panel inferior de la figura presenta la curva de respuesta a la concentración.

Figura 19. Curvas de respuesta a la concentración para I_{Kr}, I_{Ks}, I_{Ca}, I_{Na, tardía} e I_{NaCa} en un solo diagrama. I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} tardía presentaban sensibilidades similares a la ranolazina, mientras que I_{NaCa} e I_{Ca} eran considerablemente menos sensibles.

Figura 20. Efectos de la ranolazina sobre el potencial de acción de la fibra Purkinje. A y B: Los gráficos representan los efectos dependientes de la concentración de ranolazina (1-100 \muM) sobre la duración potencial de la acción (APD_{50} y APD_{90}) a una BCL de 500 (A) y 2.000 (B) ms. C y D: Potenciales de acción transmembranaria sobreimpuestos registrados en las condiciones de referencia y tras la adición de concentraciones progresivamente superiores de ranolazina a una BCL de 500 (C) y 2.000 (D) ms. ([K^{+}]_{0} = 4 mM). Los datos se representan como media \pm SD. * -p<0,05 vs. la referencia.

Figura 21. Efectos dependientes de la concentración de ranolazina sobre la velocidad de aumento de la carrera ascendente de la acción potencial (V_{máx}). Se presentan los potenciales de acción sobreimpuestos (B) y las carreras ascendentes diferenciadas correspondientes (dV/dt, A) registrados en ausencia y presencia de ranolazina (1-100 \muM) (BCL=500 ms). C: Relación de respuesta a la concentración del efecto de ranolazina para reducir V_{máx}.

Figura 22. Efectos de la ranolazina sobre el potencial de acción de la fibra Purkinje en presencia de [K^{+}]_{0}. A y B: Los gráficos representan los efectos dependientes de la concentración de ranolazina (1-100 \muM) sobre la duración potencial de acción (APD_{50} y APD_{90}) a una BCL de 500 (A) y 2.000 (B) ms. ([K^{+}]_{0} = 3 mM). Los datos se representan como media \pm SD. * -p<0,05 vs. la referencia.

Figura 23. Efecto de ranolazina para suprimir la posdespolarización precoz (EAD) producida por d-sotalol en una preparación de fibra de Purkinje. Se muestran los potenciales sobreimpuestos de la acción transmembranaria registrados en una preparación de fibra de Purkinje en presencia del bloqueo de I_{Kr} (d-sotalol 100 \muM) y después de la adición de la concentración aumentada paso a paso de ranolazina (5 y 10 \muM) en presencia continuada de d-sotalol. Longitud del ciclo básico = 8.000 ms.

Figuras 24A y B. Datos electrofisiológicos globales para sotalol. Se muestran los efectos de sotalol sobre la ERP ventricular izquierda y derecha en ms.

Figuras 25A y B. Datos electrofisiológicos globales para sotalol. Se muestran los efectos de sotalol sobre la QTP e intervalos de QRS en ms.

Figura 26. Datos electrofisiológicos globales para ranolazina. Se presentan los efectos de ranolazina sobre la ERP ventricular izquierda y derecha en ms.

Figura 27. Datos electrofisiológicos globales para ranolazina. Se presentan los efectos de ranolazina sobre la ERP-LV media.

Figura 28. Datos electrofisiológicos globales para ranolazina. Se presentan los efectos de ranolazina sobre el intervalo QT en ms.

Figura 29. Datos electrofisiológicos globales para ranolazina. Se presentan los efectos de ranolazina sobre el intervalo QRS.

Figura 30. Bloqueo de I_{Na} tardía por la ranolazina registrado utilizando la técnica de la fijación de voltaje de acción potencial. A: Se presentan corrientes sensibles a TTX en la solución de referencia y después de ranolazina 20 \muM. Las medidas se hacen en los dos cursores, correspondientes a voltajes de 20 mV y -28 mV. La inhibición fue mayor a 20 mV, pero alguna corriente sensible a TTX permanece a -28 mV en presencia de ranolazina. La corriente sensible a TTX también permanece al principio en el potencial acción en presencia de ranolazina.

Figura 31. Bloqueo de I_{Na,tardía} por ranolazina. 2.000 ms de BCL. Resumen del diagrama de la curva de respuesta a la concentración. Las barras de error son \pms.e.m., número de células 3 a 11 células.

Figura 32. Bloqueo de I_{Na,tardía} por ranolazina. 300 ms de BCL. Resumen del diagrama de la curva de respuesta a la concentración. Las barras de error son \pms.e.m., número de células 6 a 10 células.

Figura 33. Datos resumidos de los efectos de ranolazina sobre I_{Na,tardía} a velocidades lentas y rápidas de estimulación. Las barras de error son \pms.e.m., número de células de 6 a 12 células.

Figura 34. Efecto de ranolazina a 3, 10 y 300 \mumoles/l sobre la duración potencial de la acción de miocitos.

Figura 35. Efectos de ranolazina a 30 \mumoles/l sobre un miocito modulado en primer lugar a 2 Hz y a continuación a 0,5 Hz.

Figura 36. Comparaciones de APD_{50} y APD_{90} medidas en ausencia y presencia de 3, 10 y 30 \mumoles/l de ranolazina a las frecuencias de modulación de 0,5, 1 y 2 Hz.

Figura 37. Efectos de ranolazina, acortando la APD_{50} y la APD_{90} a varias frecuencias de modulación. Normalizadas como porcentaje de la referencia.

Figura 38. Efecto de quinidina a 5 \mumoles/l sobre la duración de la acción potencial de un miocito modulado a 0,25 Hz. Ranolazina a 10 \mumoles/l atenuó el efecto de quinidina.

Figura 39. Efectos de quinidina y/o ranolazina sobre las EAD. Se observó que ranolazina a 10 \mumoles/l era eficaz para suprimir las EAD producidas por quinidina.

Figura 40. Efectos de quinidina y/o ranolazina sobre la actividad desencadenada. Se observó que la ranolazina a 10 \mumoles/l era eficaz para suprimir la actividad supresora desencadenada producida por quinidina.

Figura 41. Efectos de ATXII y/o de ranolazina a 1, 3, 10 y 30 \mumoles/l sobre la duración de la acción potencial en los miocitos ventriculares de cobaya.

Figura 42. Efectos de ATXII y/o de ranolazina a 1, 3, 10 y 30 \mumoles/l sobre la duración de la acción potencial en los miocitos ventriculares de cobaya. La ranolazina a una concentración tan baja como 1 \mumol/l suprimió eficazmente las EAD producidos por ATXII y la actividad desencadenada.

Figura 43. Efectos de ATXII y/o de ranolazina a 1, 3, 10 y 30 \mumoles/l sobre la duración de la acción potencial en los miocitos ventriculares de cobaya. La ranolazina a una concentración tan baja como 1 \mumol/l suprimió eficazmente las EAD producidos por ATXII y la actividad desencadenada.

Figura 44. Efectos de ATXII y/o de ranolazina a 1, 3, 10 y 30 \mumoles/l sobre la duración de la acción potencial en los miocitos ventriculares de cobaya. La ranolazina a una concentración tan baja como 1 \mumol/l suprimió eficazmente las EAD producidos por ATXII y la actividad desencadenada.

Figura 45. Efectos de ATXII y/o de ranolazina a 1, 3, 10 y 30 \mumoles/l sobre la duración de la acción potencial en los miocitos ventriculares de cobaya. La ranolazina a una concentración tan baja como 1 \mumol/l suprimió eficazmente las EAD producidos por ATXII y la actividad desencadenada.

Figura 46. Efectos de ATXII y/o de ranolazina a 1, 3, 10 y 30 \mumoles/l sobre la duración de la acción potencial en los miocitos ventriculares de cobaya. La ranolazina a una concentración tan baja como 1 \mumol/l suprimió eficazmente las EAD producidos por ATXII y la actividad desencadenada.

Figura 47. Efectos de ATXII y ranolazina a 10 \muM sobre EAD inducida y la prolongación del MAP en el modelo cardíaco aislado de cobaya perfundido con tampón K-H. La ranolazina a una concentración tan baja como 10 \muM redujo o suprimió eficazmente las EAD producidas por ATXII y la prolongación del MAP.

Figura 48. Efectos de ATXII sobre la VT. ATXII (20 nM) produjo VT, tanto la VT espontánea como la VT producida por modulación.

Figura 49. Efecto de ATXII (20 nM) y ranolazina sobre la VT inducida. La ranolazina a una concentración de 30 \muM redujo o suprimió eficazmente la VT producida por ATXII.

Figura 50. Efecto de ATXII (20 nM) y ranolazina sobre la EAD inducida y \DeltaMAP.

Descripción detallada de la invención

La invención proporciona unos medios de supresión de la posdespolarización precoz en un mamífero.

El ritmo cardíaco normal (ritmo sinusal) resulta de los potenciales de acción (AP) que se generan por el comportamiento electrofisiológico muy integrado de los canales iónicos sobre múltiples células cardíacas. Los canales de sodio, calcio y potasio son los canales más importantes para determinar la forma y la duración del potencial de acción cardíaco. En resumen, la activación de los canales de sodio y del calcio conduce a la entrada de iones cargados positivamente en las células cadiacas individuales, lo que produce la despolarización de la membrana. Por el contrario, la abertura de los canales de potasio permite que el flujo de carga positiva fuera de las células y, en la parte larga, termina el potencial de acción y repolariza la célula (Figura 1).

Los AP se propagan desde su origen en el nódulo sinoauricular, a través del nódulo sinoauricular, a través del músculo auricular, luego a través del nódulo auriculoventricular (AV), a través del sistema de conducción de Purkinje, y por último al ventrículo.

La arritmia, alteración en la secuencia normal de iniciación del impulso y propagación en el corazón, puede proceder de una cardiovasculopatía primaria, trastornos pulmonares, trastornos autonómicos, trastornos generalizados, efectos secundarios relacionados con fármacos, efectos heredados (mutaciones de genes) o desequilibrios de electrolitos.

El ritmo sinusal normal y las arritmias se observan en electrocardiogramas (ECG). Un ECG es un trazado gráfico de las variaciones en el potencial eléctrico, producidas por la excitación del músculo cardíaco y detectadas en la superficie del cuerpo. A partir de la frecuencia cardíaca de los electrocardiogramas, pueden medirse la duración del intervalo PR, reflejo del tiempo de conducción nodal AV, la duración de QRS, reflejo del tiempo de conducción en el ventrículo y el intervalo QT, que es una medida de la duración del potencial de acción ventricular. Una representación del ECG generado durante este ritmo sinusal se presenta en la Figura 2.

Las taquicardias ventriculares están producidas por el aumento de automaticidad, las posdespolarizaciones y automaticidad desencadenada y reentrada. El aumento de automaticidad se produce en las células que normalmente presentan despolarización diastólica espontánea. La estimulación B-adrenérgica, la hipocalemia y la expansión de las células del músculo cardíaco aumentan la pendiente de la fase 4 y de este modo aceleran la velocidad del nódulo sinoauricular, mientras que la acetilcolina reduce la velocidad del nódulo sinoauricular disminuyendo tanto la pendiente de la fase 4 como por hiperpolarización. Cuando se propagan impulsos desde una zona de automaticidad normal o anormal aumentada para excitar el resto del corazón se producen arritmias.

Las posdespolarizaciones y la automaticidad desencadenada se producen en algunas condiciones patofisiológicas en las que un potencial de acción cardíaca normal está interrumpido o es seguido de una despolarización anormal. Si esta despolarización anormal alcanza el umbral, puede a su vez, dar lugar a carreras ascendentes secundarias, que a continuación pueden propagarse y crear ritmos anormales. Estas carreras ascendentes secundarias anormales se producen solamente después de una carrera ascendente normal, o "activadora" y por eso se denominan ritmos activados. Se reconocen dos formas principales de ritmos activados: (1) posdespolarización retardada (DAD) que puede producirse en condiciones de sobrecarga del calcio intracelular (isquemia miocárdica, estrés adrenérgico, etc.). Si esta la posdespolarización alcanza el umbral, un latido o latidos desencadenado(s) secundario(s) puede(n) producirse y; (2) las posdespolarizaciones precoces (EAD) se producen con frecuencia cuando existe una prolongación marcada del potencial de acción cardíaco. Cuando ocurre esto, la repolarización de la fase 3 puede ser interrumpida por una EAD. La activación mediada por EAD in vitro y las arritmias clínicas son las más frecuentes cuando la frecuencia cardíaca subyacente es lenta, el K^{+} extracelular es bajo y están presentes determinados fármacos que prolongan la duración del potencial de acción. Las EAD resultan de un aumento en la corriente interna neta durante la fase de repolarización del potencial de acción.

La TdP es un efecto secundario frecuente y grave del tratamiento con muchos tipos diferentes de fármacos; y podría ser producida por las EAD y la activación resultante. Sin embargo, existen otras condiciones que miden el riesgo de TdP, incluyendo la hipocalemia, hipomagnesemia, hipocalcemia, bloqueo AV de alto grado, trastornos congénitos y bradicardia grave.

El síndrome de QT prolongado (LQTS) se produce por la disfunción de las estructuras proteicas en las células del corazón denominadas canales iónicos. Estos canales controlan la circulación de iones como moléculas con potasio, sodio y calcio. La circulación de estos iones dentro y fuera de las células produce la actividad eléctrica del corazón. Las anomalías de estos canales pueden adquirirse o heredarse. La forma adquirida se produce normalmente por medicaciones de venta con receta.

La forma heredada se produce cuando se desarrolla una mutación en uno de los varios genes que producen o "codifican" uno de los canales iónicos que controlan la repolarización eléctrica. El gen mutante hace que se formen canales anormales, y como estos canales anormales no son tan eficaces como los canales normales, la recuperación eléctrica del corazón tarda más. Esto se manifiesta en el electrocardiograma (ECG, EKG) por un intervalo de QT prolongado. La prolongación de QT hace vulnerable al corazón a las VT polimórficas, un tipo de los cuales es un ritmo cardíaco rápido y anormal conocido como "taquicardia ventricular en entorchado".

La LQTS congénita se produce por mutaciones de por lo menos uno de seis genes

2

Las enfermedades LQT y los canales iónicos listados en la tabla anterior son los mismos para LQTS adquirida que para la LQTS heredada.

Debe apuntarse que si la forma heredada o adquirida de LQTS está presente en un mamífero y han aparecido síntomas de una VT, entonces la administración de un compuesto de fórmula I, especialmente ranolazina, reduce la aparición y/o frecuencia de VT. Si la forma heredada o adquirida de LQTS está presente, pero no hay ningún síntoma de VT, entonces la administración de un compuesto de Fórmula I, especialmente ranolazina, impide la aparición de VT.

El pentobarbital sódico es conocido porque prolonga el intervalo QT, pero también reduce la dispersión transparietal de la repolarización. Esto se hace inhibiendo I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} de forma más destacada. La reducción de la dispersión transparietal se muestra por una prolongación mayor de APD en las células epi y endo que en las células M. El pentobarbital sódico también suprime la actividad de la EAD producida por d-sotalol en las células M. De este modo, a pesar de sus acciones para prolongar QT, el pentobarbital no produce TdP.

La amiodarona es conocida porque prolonga QT y en pocos casos produce TdP. Se descubrió que la amiodarona reduce la dispersión transparietal de la repolarización al presentar una prolongación mayor de APD en las células epi y endo que en las células M. La amiodarona bloquea los canales de sodio, potasio y calcio en el corazón. Cuando se administra de manera prolongada (30 a 40 mg/kg/día por vía oral durante 30 a 40 días) suprime también la capacidad del bloqueador de I_{Kj}, d-sotalol, para producir una dispersión notable de la repolarización o de la actividad de la EAD.

En las preparaciones en cuña perfundidas arterialmente de ranolazina en el ventrículo izquierdo canino se descubrió que prologan preferentemente la APD_{90} de las células epicárdicas (epc). Se descubrió que la reducción en la dispersión transparietal era más pronunciada a concentraciones más altas porque la ranolazina también abrevia la APD_{90} de las células M a la vez que prolonga la de las células epi.

Se llevaron a cabo también pruebas en miocitos aislados procedentes del ventrículo izquierdo canino para determinar si la ranolazina produce las EAD y si la acción de la ranolazina en la corriente de sodio tardía y en la corriente de calcio puede antagonizar la producción de EAD por d-sotalol en las fibras de Purkinje. Las EAD no se observaron en presencia de ranolazina. Se descubrió que ranolazina suprime las EAD producidas por d-sotalol a concentraciones tan bajas como 5 micromolar/l.

Se descubrió también que la ranolazina bloquea el canal de calcio, pero lo hace también a una concentración (296 micromolar/l) mucho mayor que la concentración terapéutica del fármaco (\sim2 a 8 \muM).

De este modo, incluso si la ranolazina presenta un intervalo QT prolongado, no produce las EAD ni la TdP.

Debido a que la ranolazina puede producir un intervalo QT prolongado, la ranolazina puede aumentar la duración de APD de los miocitos ventriculares. El intervalo QT de la superficie EKG refleja la duración de la repolarización ventricular.

Se descubrió que la ranolazina disminuía la APD de miocitos de cobaya (reversible en el periodo de reposo farmacológico). Se descubrió también que la ranolazina reduce APD en presencia de quinidina. Quinidina es conocida por activar las EAD y la TdP. Se descubrió que ranolazina suprime las EAD y otra actividad desencadenada producida por la quinidina.

ATXII (una toxina de la anémona de mar) ralentiza la inactivación del estado abierto del canal de sodio, activa las EAD, prolonga el intervalo QT y produce un aumento agudo en la dispersión transparietal de la repolarización como resultado de la prolongación mayor de APD en las células M. Los datos demuestran que ranolazina produce una disminución en APD en presencia de ATXII. Por consiguiente, la ranolazina suprime las EAD producidas por ATXII. ATXII es un activador del ión sodio que simula el síndrome de LTQ3 (que conduce a TdP). Por lo tanto, la ranolazina no conduce a TdP, en su lugar suprime la TdP producida por ATX.

Definiciones

Tal como se utiliza en la presente memoria, las siguientes palabras y frases tienen generalmente los significados establecidos a continuación, excepto en la medida en que el contexto en el que se utilizan se indique lo contrario.

El término "Aminocarbonilmetilo" se refiere a un grupo que presenta la estructura siguiente:

3

en la A representa el punto de acoplamiento.

Los términos "Halo" o "halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.

La expresión "Acilo inferior" se refiere a un grupo que presenta la estructura siguiente:

4

en la que R es alquilo inferior como se define en la presente memoria, y A representa el punto de acoplamiento, e incluye grupos tales como acetilo, propanoílo, n-butanoílo y similares.

La expresión "Alquilo inferior" se refiere a una cadena hidrocarbonada saturada no ramificada de 1 a 4 carbonos, tal como metilo, etilo, n-propilo y n-butilo.

La expresión "Alcoxi inferior" se refiere a un grupo -OR, en el que R es alquilo inferior como se ha definido en la presente memoria.

La expresión "Alquiltio inferior" se refiere a un grupo -SR en el que R es alquilo inferior como se ha definido en la presente memoria.

La expresión "Alquilsulfinilo inferior" se refiere a un grupo de fórmula:

5

en la que R es alquilo inferior como se ha definido en la presente memoria, y A representa el punto de acoplamiento.

La expresión "Alquilsulfonilo inferior" se refiere a un grupo de fórmula:

6

en la que R es alquilo inferior como se ha definido en la presente memoria, y A representa el punto de acoplamiento.

La expresión "Alquilamido opcionalmente N-sustituido" se refiere a un grupo que presenta la estructura siguiente:

7

en la que R es independientemente hidrógeno o alquilo inferior y R' es alquilo inferior como se ha definido en la presente memoria, y A representa el punto de acoplamiento.

El término "fármaco" o "fármacos" se refiere a medicaciones de venta con receta así como a medicaciones que pueden adquirirse sin receta y a todos los agentes farmacológicos.

El término "Isómeros" se refiere a compuestos que tienen la misma masa atómica y el mismo número atómico pero se diferencian en una o más propiedades físicas o químicas. Todos los isómeros del compuesto de Fórmula I están comprendidos dentro del alcance de la invención.

El término "Opcional" u "opcionalmente" se refiere al episodio o circunstancia descritos posteriormente que pueden ocurrir o no, y que la descripción incluye casos en los que dicho episodio o circunstancia ocurre y casos en los que no.

La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad de un compuesto de Fórmula I que es suficiente para efectuar el tratamiento, como se define a continuación, cuando se administra a un mamífero necesitado de dicho tratamiento. La cantidad terapéuticamente eficaz variará dependiendo del paciente y de la enfermedad que se esté tratando, del peso y de la edad del paciente, de la gravedad de la enfermedad, de la forma de administración y similares, que puede ser determinada fácilmente por cualquier experto en la materia.

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El término "tratamiento" significa cualquier tratamiento de una enfermedad en un mamífero, que incluye:

(i)

prevenir la enfermedad, es decir, provocar los síntomas clínicos de la enfermedad no en desarrollo;

(ii)

inhibir la enfermedad, es decir, interrumpir el desarrollo de los síntomas clínicos, y/o

(iii)

aliviar la enfermedad, es decir, producir la remisión de los síntomas clínicos.

Arritmia se refiere a cualquier frecuencia cardíaca anormal. Bradicardia se refiere a la frecuencia cardíaca anormalmente lenta mientras que taquicardia se refiere a una frecuencia cardíaca anormalmente rápida. Tal como se utiliza en la presente memoria, el tratamiento de la arritmia se pretende que incluya el tratamiento de las taquicardias supraventriculares tales como la fibrilación auricular, el aleteo auricular, la taquicardia reentrante nodal AV, la taquicardia auricular y las taquicardias ventriculares (VT), incluyendo la taquicardia idiopática ventricular, la fibrilación ventricular, el síndrome de preexcitación y la taquicardia ventricular en entorchado (TdP).

El ritmo sinusal se refiere a la frecuencia cardíaca normal.

La expresión "mamífero cardíaco inmunodeprimido" significa un mamífero que presenta un estado cardiopatológico, por ejemplo angina de pecho, insuficiencia cardíaca congestiva, isquemia y similares.

En muchos casos, los compuestos de la presente invención son capaces de formar sales ácidas y/o básicas en virtud de la presencia de grupos amino y/o carboxilo o grupos similares a éstos. La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales que conservan la eficacia biológica y las propiedades de los compuestos de Fórmula I, y que no son biológicamente indeseables. Las sales de adición de base farmacéuticamente aceptables pueden prepararse a partir de bases inorgánicas y orgánicas. Las sales derivadas de bases inorgánicas, incluyen a título de ejemplo solamente, sales de sodio, potasio, litio, amonio, calcio y magnesio. Las sales derivadas de bases orgánicas incluyen, pero no se limitan a, sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, tales como alquil aminas, dialquil aminas, trialquil aminas, alquil aminas sustituidas, di(alquil sustituido) aminas, tri(alquil sustituido) aminas, alquenil aminas, dialquenil aminas, trialquenil aminas, alquenil aminas sustituidas, di(alquenil sustituido) aminas, tri(alquenil sustituido) aminas, cicloalquil aminas, di(cicloalquil) aminas, tri(cicloalquil) aminas, cicloalquil aminas sustituidas, cicloalquil amina disustituida, cicloalquil aminas trisustituidas, cicloalquenil aminas, di(cicloalquenil) aminas, tri(cicloalquenil) aminas, cicloalquenil aminas sustituidas, cicloalquenil aminas disustituidas, cicloalquenil aminas trisustituidas, aril aminas, diaril aminas, triaril aminas, heteroaril aminas, diheteroaril aminas, triheteroaril aminas, aminas heterocíclicas, aminas diheterocíclicas, aminas triheterocíclicas, di- y tri-aminas mixtas en las que por lo menos dos de los sustituyentes en la amina son diferentes y se seleccionan del grupo constituido por alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo, cicloalquenilo sustituido, arilo, heteroarilo, heterocíclico y similares. También están incluidas las aminas en las que dos o tres sustituyentes, junto con el nitrógeno de amino, forman un grupo heterocíclico y heteroarilo.

Ejemplos específicos de aminas adecuadas incluyen, a título de ejemplo solamente, isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, tri(isopropil)amina, tri(n-propil)amina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, trometamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína, etilendiamina, glucosamina, N-alquilglucaminas, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, morfolina, N-etilpiperidina y similares.

Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables pueden prepararse a partir de ácidos inorgánicos y orgánicos. Las sales derivadas de ácidos inorgánicos incluyen el ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares. Las sales derivadas de ácidos orgánicos incluyen ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido malónico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinnámico, ácido mandélico, ácido metansulfónico, ácido etansulfónico, ácido p-toluensulfónico, ácido salicílico y similares.

Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antimicóticos, agentes isotónicos y retardadores de absorción y similares. La utilización de dichos medios y agentes para sustancias farmacéuticamente activas en bien conocida en la materia. Excepto en la medida en que cualquier medio o agente convencional sea incompatible con el ingrediente activo, se contempla su utilización en las composiciones terapéuticas. También pueden incorporarse en las composiciones Ingredientes activos complementarios.

Composiciones farmacéuticas y administración

Los compuestos de la invención se administran normalmente en forma de composiciones farmacéuticas. La presente invención, por consiguiente, proporciona composiciones farmacéuticas que contienen, como ingrediente activo, uno o más de los compuestos de la invención, o una sal o éster farmacéuticamente aceptable de los mismos, y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables; vehículos, incluyendo diluyentes sólidos y cargas inertes; diluyentes, incluyendo una solución acuosa esterilizada y varios disolventes orgánicos; potenciadores de permeación; disolventes y adyuvantes. Los compuestos de la invención pueden administrarse solos o en combinación con otros agentes terapéuticos. Dichas composiciones se preparan de manera bien conocida en la técnica farmacéutica (véase, p. ej. Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Co., Philadelphia, PA 17ª ed. (1985) y "Modern Pharmaceutics", Marcel Dekker, Inc. 3ª ed. (G.S. Banker & C.T. Rhodes, eds.).

Los compuestos de la invención pueden administrarse en dosis individuales o múltiples mediante cualquiera de los modos de administración aceptados de agentes con utilidades similares, por ejemplo como se describe en las patentes y solicitudes de patentes mencionadas anteriormente, incluyendo las vías rectal, bucal, intranasal y transdérmica, por inyección intraarterial, intravenosa, intraperitoneal, parenteral, intramuscular, subcutánea, por vía oral, por vía tópica, como inhalador, o mediante un dispositivo impregnado o recubierto tal como una endoprótesis, por ejemplo, o un polímero cilíndrico insertado en la arteria.

Un modo preferido para la administración es la vía parenteral, particularmente por inyección. Las formas en las que pueden incorporarse las nuevas composiciones de la presente invención para la administración por inyección incluyen suspensiones acuosas u oleosas o emulsiones, con aceite de sésamo, aceite de maíz, aceite de semillas de algodón o aceite de cacahuete, así como elixires, manitol, dextrosa o una solución acuosa esterilizada y vehículos farmacéuticos similares. Las soluciones acuosas en solución salina se utilizan también de manera convencional para inyectables, pero son menos preferidas en el contexto de la presente invención. Pueden emplearse también etanol, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol líquido y similares (y mezclas adecuadas de los mismos), derivados de ciclodextrina y aceites vegetales. Puede mantenerse la fluidez apropiada, por ejemplo, mediante la utilización de un recubrimiento, tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en caso de dispersión y mediante la utilización de tensioactivos. La prevención de la acción de microorganismos puede llevarse a cabo mediante varios agentes antibacterianos y antimicóticos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal y similares.

Se preparan soluciones inyectables esterilizadas incorporando el compuesto de la invención en la cantidad requerida en el disolvente apropiado con otros varios ingredientes enumerados anteriormente, como se requiere, seguido de ultrafiltración. Generalmente, se preparan dispersiones incorporando varios ingredientes activos esterilizados en el vehículo estéril que contiene los medios de dispersión básicos y los demás ingredientes requeridos de los enumerados anteriormente. En caso de polvos esterilizados para la preparación de soluciones inyectables estériles, los procedimientos preferidos de preparación son técnicas de secado al vacío y de liofilización que proporcionan un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado de una solución ultrafiltrada previamente del mismo.

La administración oral es otra vía de administración de los compuestos de Fórmula I. La administración puede realizarse mediante cápsulas o comprimidos entéricos recubiertos o similares. En la preparación de las composiciones farmacéuticas que incluyen por lo menos un compuesto de Fórmula I, el ingrediente activo es diluido normalmente por un experimento y/o incluido dentro de dicho vehículo que puede estar en forma de cápsula, bolsita, papel u otro recipiente. Cuando el excipiente sirve como diluyente, puede ser un material sólido, semisólido o líquido (como anteriormente), que actúa como vehículo, portador o medio para el ingrediente activo. De este modo, las composiciones pueden estar en forma de comprimidos, píldoras, polvos, pastillas, bolsitas, sellos, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles (en forma sólida o en unos medios líquidos), pomadas que contienen, por ejemplo, hasta el 10% en peso del compuesto activo, cápsulas de gelatina blandas y duras, soluciones inyectables estériles y polvos estériles envasados.

Algunos ejemplos de excipientes adecuados incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma de acacia, fosfato cálcico, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato cálcico, celulosa microcristalina, polividona, celulosa, agua esterilizada, jarabe y metilcelulosa. Las formulaciones pueden incluir además: agentes lubricantes tales como talco, estearato de magnesio y aceite mineral; agentes humectantes; agentes emulsionantes y de suspensión; agentes conservantes tales como benzoato de metilo y de propilhidroxibenzoato; agentes edulcorantes; y agentes aromatizantes.

Las composiciones de la invención pueden formularse a fin de proporcionar una liberación rápida, lenta o retardada o cualquier combinación de estos medios de liberación del ingrediente activo después de la administración al paciente empleando procedimientos conocidos en la materia. Los sistemas de administración de fármacos de liberación controlada para la administración oral incluyen sistemas con bomba osmótica y sistemas de difusión/disolución que incluyen depósitos recubiertos de polímero o formulaciones de fármaco-matriz de polímero. En las patentes U.S. nº 3.845.770; nº 4.326.525; nº 4.902.514 y nº 5.616.345 y en el documento WO 0013687 se proporcionan ejemplos de sistema de liberación controlada. Otra formulación para su utilización en los procedimientos de la presente invención emplea dispositivos ("parches") de administración transdérmica. Dichos parches transdérmicos pueden utilizarse para proporcionar infusión continua o discontinua de los compuestos de la presente invención en cantidades controladas. La construcción y utilización de parches transdérmicos para la administración de agentes farmacéuticos es bien conocida en la técnica. Véanse, p. ej., las patentes U.S. nº 5.023.252, nº 4.992.445 y nº 5.001.139. Dichos parches pueden construirse para la administración pulsátil, o bajo demanda de agentes farmacéuticos.

Las composiciones se formulan preferentemente en una forma farmacéutica unitaria. La expresión "formas farmacéuticas unitarias" se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias para pacientes humanos y otros mamíferos, que contiene cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculado para producir el efecto terapéutico deseado, junto con un excipiente farmacéutico adecuado (p. ej., un comprimido, cápsula o ampolla). Los compuestos de Fórmula I son eficaces en un intervalo amplio de dosificación y se administran generalmente en una cantidad farmacéuticamente eficaz. Preferentemente, para la administración oral, cada unidad de dosificación contiene de 10 mg a 2 g de un compuesto de Fórmula I, más preferentemente de 10 a 700 mg, y para la administración parenteral, preferentemente de 10 a 700 mg de un compuesto de Fórmula I, más preferentemente aproximadamente 50 a aproximadamente 200 mg. Debe entenderse, sin embargo, que la cantidad del compuesto de Fórmula I administrada realmente la determinará un médico, a la luz de las circunstancias pertinentes, que incluyen la enfermedad que debe tratarse, la vía de administración seleccionada, el compuesto real administrado y su actividad relativa, la edad, peso y respuesta de cada paciente, la gravedad de los síntomas del paciente y similares.

Para preparar composiciones sólidas tales como comprimidos, el ingrediente activo principal se mezcla con un excipiente farmacéutico para formar una composición de la preformulación sólida que contiene una mezcla homogénea de un compuesto de la presente invención. Cuando se describe a estas composiciones de formulación como homogéneas, significa que el ingrediente activo está dispersado uniformemente en toda la composición de tal modo que la composición puede subdividirse fácilmente en formas farmacéuticas unitarias igualmente eficaces tales como comprimidos, píldoras y cápsulas.

Los comprimidos o cápsulas de la presente invención pueden estar recubiertos o si no compuestos para proporcionar una forma farmacéutica que ofrezca la ventaja de la acción prolongada, o para proteger de las condiciones ácidas del estómago. Por ejemplo, el comprimido o píldora puede comprender un componente de dosificación interno y un componente de dosificación externo, estando este último en forma de una envoltura sobre el anterior. Los dos componentes pueden estar separados por una capa entérica que sirve para resistir la disgregación en el estómago y permite al componente interno pasar intacto al duodeno o retardarse en la liberación. Puede utilizarse una variedad de materiales para dichas capas o recubrimientos entéricos, incluyendo dichos materiales un número de ácidos y mezclas poliméricos de ácidos poliméricos con dichos materiales como goma laca, alcohol cetílico y acetato de celulosa.

En una forma de realización, las composiciones preferidas de la invención se formulan a fin de proporcionar una liberación rápida, lenta o retardada del ingrediente activo después de la administración al paciente, especialmente formulaciones de liberación lenta. El compuesto más preferido de la invención es la ranolazina, que se denomina (\pm)-N-(2,6-dimetil-fenil)-4-[2-hidroxi-3-(2-metoxifenoxi)propil]-1-piperazina-acetamida. A menos que se indique de otro modo, las concentraciones de ranolazina en el plasma utilizadas en la memoria y en los ejemplos se refieren a ranolazina base libre.

Las composiciones para inhalación o insuflado incluyen soluciones y suspensiones en disolventes acuosos u orgánicos farmacéuticamente aceptables, o mezclas de los mismos, y polvos. Las composiciones líquidas o sólidas pueden contener excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados tal como se ha descrito anteriormente. Preferentemente las composiciones se administran por vía respiratoria oral o nasal para el efecto local o generalizado. Las composiciones en disolventes con preferencia farmacéuticamente aceptables pueden ser nebulizadas mediante la utilización de gases inertes. Las soluciones nebulizadas pueden inhalarse directamente desde el dispositivo de nebulización o el dispositivo de nebulización puede estar acoplado a una tienda con máscara facial o a una máquina de respiración a presión positiva intermitente. Las composiciones en solución, suspensión o en polvo pueden administrarse, preferentemente por vía bucal o nasal, desde dispositivos que liberan la formulación de manera apropiada.

La formulación intravenosa de ranolazina se prepara por un procedimiento de llenado aséptico de la manera siguiente. En un recipiente adecuado, se disuelve la cantidad requerida de dextrosa monohidratada en agua para inyectables (WFI) en aproximadamente el 78% del peso final del lote. Se añade en agitación continua la cantidad requerida de ranolazina base libre a la solución de dextrosa. Para facilitar la disolución de ranolazina, el pH de la solución se ajusta hasta un objetivo comprendido entre 3,88 y 3,92 con solución de ácido clorhídrico 0,1 N o 1 N. Además, puede utilizarse HCl 0,1 N o NaOH 1,0 N para hacer el ajuste final de la solución a un pH objetivo entre 3,88 y 3,92. Una vez disuelta la ranolazina, se ajusta el lote al peso final con WFI. En confirmación de que las especificaciones del procedimiento se han cumplido, la mayor parte de la solución de ranolazina se esteriliza por ultrafiltración a través de dos filtros estériles de 0,2 \mum. Posteriormente, la mayor parte de la solución de ranolazina estéril se llena asépticamente en viales de vidrio estériles y se tapa asépticamente con tapones esterilizados. Los viales tapados se sellan a continuación con sellos de aluminio con estuche limpios.

Los compuestos de la invención pueden estar impregnados en una endoprótesis por difusión, por ejemplo, o recubiertos en la endoprótesis tal como en forma de gel, por ejemplo, utilizando procedimientos conocidos por un experto en la materia a la luz de la presente descripción.

La formulación intravenosa de ranolazina se prepara mediante un procedimiento de llenado aséptico de la manera siguiente. En un recipiente adecuado, se disuelve la cantidad requerida de monohidrato de dextrosa en agua para inyectables (WFI) en aproximadamente el 78% del peso final del lote. Se añade en agitación continua la cantidad requerida de ranolazina base libre a la solución de dextrosa. Para facilitar la disolución de ranolazina, el pH de la solución se ajusta hasta un objetivo entre 3,88 y 3,92 con solución de ácido clorhídrico 0,1 N o 1 N. Además, puede utilizarse HCl 0,1 N o NaOH 1,0 N para hacer el ajuste final de la solución a un pH objetivo entre 3,88 y 3,92. Una vez disuelta la ranolazina, se ajusta el lote al peso final con WFI. En confirmación de que las especificaciones del procedimiento se han cumplido, la mayor parte de la solución de ranolazina se esteriliza por ultrafiltración a través de dos filtros estériles de 0,2 \mum. Posteriormente, la mayor parte de la solución de ranolazina estéril se llena asépticamente en viales de vidrio estériles y se tapa asépticamente con tapones esterilizados. Los viales tapados se sellan a continuación con sellos de aluminio con estuche limpios.

Las formulaciones de liberación lenta preferidas de la presente invención están preferentemente en forma de comprimido que comprende una mezcla íntima del compuesto y un aglutinante dependiente del pH parcialmente neutralizado que controla la velocidad de disolución en los medios acuosos en todo el intervalo de pH en el estómago (por lo general aproximadamente 2) y en el intestino (por lo general aproximadamente alrededor de 5,5).

Para proporcionar una liberación sostenida del compuesto, puede seleccionarse uno o más aglutinantes dependientes del pH para controlar el perfil de disolución del compuesto de modo que la formulación libere el fármaco lenta y continuamente a medida que la formulación pasa a través del estómago y del aparato digestivo. La capacidad de control de la disolución del o de los aglutinante(s) dependiente(s) del pH es particularmente importante en una formulación de liberación sostenida debido a que una formulación de liberación sostenida que contiene suficiente compuesto para la administración dos veces al día puede producir efectos secundarios desfavorables si el compuesto es liberado demasiado rápidamente ("sobredosis").

Así pues, los aglutinantes dependientes del pH adecuados para su utilización en la presente invención son aquellos que inhiben la liberación rápida del fármaco en un comprimido durante su estancia en el estómago (donde el pH es inferior a aproximadamente 4,5) y que favorecen la liberación de una cantidad terapéutica de compuesto desde la forma farmacéutica en el aparato digestivo inferior (donde el pH es generalmente superior a aproximadamente 4,5). Muchos materiales conocidos en la técnica farmacéutica como aglutinantes "entéricos" y agentes de recubrimiento presentan las propiedades de disolución al pH deseado. Éstos incluyen derivados del ácido ftálico tal como los derivados del ácido ftálico de polímeros y copolímeros vinílicos, hidroxialquilcelulosas, alquilcelulosas, acetatos de celulosa, acetatos de hidroxialquilcelulosa, éteres de celulosa, acetatos de alquilcelulosa, y los ésteres parciales de los mismos, y polímeros y copolímeros de ácidos alquil inferior acrílicos y acrilatos de alquilo inferior y los ésteres parciales de los mismos.

Los materiales aglutinantes dependientes del pH preferidos que pueden utilizarse junto con el compuesto para crear la formulación de liberación sostenida son los copolímeros del ácido metacrílico. Los copolímeros del ácido metacrílico son copolímeros del ácido metacrílico con ésteres de acrilato o metacrilato neutros tales como el acrilato de etilo o el metacrilato de metilo. Un copolímero más preferido es el copolímero del ácido metacrílico, tipo C, USP (que es un copolímero del ácido metacrílico y acrilato de etilo que tiene entre el 46,0% y 50,6% de unidades de ácido metacrílico). Dicho copolímero está comercialmente disponible, en Röhm Pharma como Eudragit® L 100-55 (en forma de polvo) o L30D-55 (en forma de dispersión al 30% en agua). Otros materiales aglutinantes dependientes del pH que pueden utilizarse solos o en combinación en una forma farmacéutica de formulación de liberación sostenida incluyen ftalato de hidroxipropilcelulosa, ftalato de hidroxipropil-metilcelulosa, ftalato de acetato de celulosa, ftalato de polivinilacetato, ftalato de polividona y similares. Uno o más aglutinantes dependientes del pH están presentes en las formas farmacéuticas de la presente invención en una cantidad que oscila entre aproximadamente 1 y aproximadamente 20% en peso, más preferentemente entre aproximadamente 5 y aproximadamente 12% en peso y aún más preferentemente alrededor del 10% en peso.

Uno o más aglutinantes independientes del pH pueden ser utilizados en las formulaciones de liberación sostenida en formas de dosificación bucales. Obsérvese que los aglutinantes dependientes del pH y los agentes potenciadores de la viscosidad tales como hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, metilcelulosa, polividona, ésteres de poli(met)acrilato neutros, y similares, no proporcionan el control de la disolución requerido proporcionado por los aglutinantes dependientes del pH identificados. Los aglutinantes independientes del pH están presentes en la formulación de la presente invención en una cantidad que oscila entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10% en peso, y preferentemente en una cantidad que oscila entre aproximadamente 1 y aproximadamente el 3% en peso, y aún más preferentemente alrededor del 2,0% en peso.

Como se muestra en la Tabla 1, el compuesto preferido de la invención, ranolazina, es relativamente insoluble en soluciones acuosas que tienen un pH superior a aproximadamente 6,5, aunque la solubilidad comienza a aumentar drásticamente por debajo de aproximadamente pH 6. Aunque en las siguientes soluciones de ranolazina de los ejemplos en agua o soluciones con un pH de aproximadamente 6 se preparan a base de dihidrocloruro de ranolazina. En las partes de la exposición de los ejemplos siguientes, las concentraciones de ranolazina obtenidas como resultado de los experimentos están calculadas como ranolazina base libre.

TABLA 1

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Al aumentar el contenido en aglutinante dependiente del pH en la formulación disminuye la velocidad de liberación de la forma de liberación sostenida del compuesto en la formulación a pH es inferior a 4,5 típico del pH encontrado en el estómago. El recubrimiento entérico formado por el aglutinante es menos soluble y aumenta la velocidad de liberación relativa aproximadamente a pH 4,5, donde la solubilidad del compuesto es inferior. Una selección apropiada de la selección del aglutinante dependiente del pH permite una velocidad de liberación más rápida del compuesto en la formulación anterior de pH 4,5, mientras que afecta en gran medida a la velocidad de liberación a pH bajo. La neutralización parcial del aglutinante facilita la conversión del aglutinante en una película de tipo látex que se forma alrededor de cada gránulo. Por consiguiente, el tipo y la cantidad del aglutinante del pH y la cantidad de la composición de neutralización parcial se seleccionan para controlar íntimamente la velocidad de la disolución del compuesto en la formulación.

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Las formas farmacéuticas de la presente invención deberían tener una cantidad de aglutinantes dependientes del pH suficiente para producir una formulación de liberación sostenida en la que la velocidad de liberación del compuesto se controla de modo que a pH bajos (inferior a aproximadamente 4,5) la velocidad de disolución está significativamente ralentizada. En el caso del copolímero de ácido metacrílico, tipo C, USP (Eudragit® L 100-55), una cantidad adecuada de aglutinante dependiente del pH está comprendida entre 5% y 15%. El aglutinante dependiente del pH tendrá por lo general entre aproximadamente 1 y aproximadamente 20% de grupos carboxilo neutralizados del aglutinante ácido metacrílico. Sin embargo, es preferible que el grado de neutralización oscile entre aproximadamente 3 y 6%. La formulación de liberación sostenida puede contener también excipientes farmacéuticos íntimamente mezclados con el compuesto y el aglutinante dependiente del pH. Los excipientes farmacéuticamente aceptables pueden incluir, por ejemplo, aglutinantes independientes del pH o agentes formadores de película tales como hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, metilcelulosa, polividona, ésteres poli(met)acrilato neutros (p. ej., los copolímeros de metacrilato de metilo/acrilato de etilo comercializados con la marca comercial Eudragit® NE por Röhm Pharma, almidón, gelatina, azúcares, carboximetilcelulosa y similares. Otros excipientes farmacéuticos útiles incluyen diluyentes tales como lactosa, manitol, almidón anhidro, celulosa microcristalina y similares; agentes tensioactivos tales como ésteres de polioxietilen sorbitol, ésteres de sorbitol y similares; y agentes colorantes y agentes aromatizantes. Están también presentes opcionalmente lubricantes (tal como talco y estearato de magnesio) y otros adyuvantes para preparación de comprimidos.

Las formulaciones de liberación sostenida de la presente invención tienen preferentemente un contenido en compuesto de aproximadamente 50% en peso a aproximadamente 95% o más en peso, más preferentemente entre aproximadamente 70% y aproximadamente 90% en peso y aún más preferentemente entre aproximadamente 70 y aproximadamente 80% en peso; un contenido en aglutinante dependiente del pH comprendido entre el 5% y el 40%, preferentemente entre el 5% y el 25%, y más preferentemente entre el 5% y el 15%, con el resto de la forma farmacéutica que comprende aglutinantes independientes del pH, cargas y otros excipientes opcionales. En la Tabla 2 se presentan a continuación algunas formulaciones de liberación sostenida preferidas de la presente invención.

TABLA 2

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Las formulaciones de liberación sostenida de la presente invención se preparan de la manera siguiente: el compuesto y el aglutinante dependiente del pH y cualquiera de los excipientes opcionales se mezclan íntimamente (mezclas en seco). La mezcla mezclada en seco se granula a continuación en presencia de una solución acuosa de una base fuerte que se pulveriza en el polvo mezclado. Se seca el granulado, se tamiza, se mezcla con lubricantes opcionales (tales como talco o estearato de magnesio) y se elaboran los comprimidos. Las soluciones acuosas preferidas de las bases fuertes son soluciones de hidróxidos metálicos alcalinos, tales como hidróxido de sodio o de potasio, preferentemente hidróxido de sodio, en agua (que contiene opcionalmente hasta el 25% de disolventes miscibles en agua tales como los alcoholes inferiores).

Los comprimidos resultantes pueden estar recubiertos con un agente de formación de película opcional, para su identificación, con fines de enmascaramiento del sabor y para mejorar la facilidad de deglución. El agente formador de película por lo general estará presente en una cantidad comprendida entre el 2% y el 4% del peso del comprimido. Los agentes formadores de película adecuados son bien conocidos en la técnica e incluyen copolímeros de hidroxipropil-metilcelulosa, copolímeros de metacrilato catiónicos (metacrilato de dimetilaminoetilo/metacrilato de metil-butilo - Eudragit® E - Röhm. Pharma) y similares. Estos agentes formadores de película pueden contener opcionalmente colorantes, plastificantes y otros ingredientes complementarios.

Los comprimidos tienen preferentemente una dureza suficiente para resistir una compresión de 8 Kp. El tamaño del comprimido dependerá principalmente de la cantidad de compuesto en el comprimido. Los comprimidos incluirán entre 300 y 1.100 mg de compuesto base libre. Preferentemente, los comprimidos incluirán cantidades de la base libre del compuesto que oscila entre 400 y 600 mg, 650 y 850 mg y 900 y 1.100 mg.

Con el fin de influir en la velocidad de disolución, se controla el tiempo durante el que el compuesto que contiene el polvo se mezcla en húmedo. Preferentemente el tiempo total de la mezcla en polvo, es decir el tiempo durante el que el polvo se expone a la solución de hidróxido sódico, oscilará entre 1 y 10 minutos y preferentemente entre 2 y 5 minutos. Después de la granulación, se retiran las partículas del granulador y se colocan en un secador de lecho fluido para el secado a aproximadamente 60ºC.

Se ha observado que estos procedimientos producen formulaciones de liberación sostenida que proporcionan concentraciones en el plasma de picos menores e incluso concentraciones en el plasma eficaces del compuesto durante hasta 12 horas y más después de la administración, cuando el compuesto utilizado en forma de su base libre, mejor que la sal dihidrocloruro más farmacéuticamente frecuente o como otra sal o éster. La utilización de la base libre proporciona por lo menos una ventaja: La proporción de compuesto en el comprimido puede aumentarse, ya que el peso molecular de la base libre es solamente 85% del hidrocloruro. De esta manera, se consigue la administración de una cantidad eficaz de compuesto mientras que se limita el tamaño físico de la unidad de dosificación.

Utilidad y experimentación

El procedimiento es eficaz en el tratamiento de enfermedades que responden a la inhibición simultánea de los canales I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} tardío. Dichas enfermedades incluyen VT, como está ejemplificado por la taquicardia idiopática ventricular, fibrilación ventricular, síndrome de preexcitación y taquicardia ventricular en entorchado.

La experimentación de la actividad se realiza tal como se describe en los ejemplos a continuación, y mediante procedimientos que resultan evidentes para un experto en la materia.

Los siguientes ejemplos sirven para ilustrar la presente invención. Los ejemplos están destinados a mostrar cómo preparar y utilizar los compuestos de la presente invención. En los ejemplos, todas las temperaturas están en grados centígrados.

Los ejemplos siguientes ilustran la preparación de formulaciones farmacéuticas representativas que contienen un compuesto de Fórmula I.

Ejemplo 1

Se preparan cápsulas de gelatina dura que contienen los siguientes ingredientes:

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Los ingredientes anteriores se mezclan y se rellenan en cápsulas de gelatina dura.

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Ejemplo 2

Se prepara una fórmula de comprimido utilizando los ingredientes siguientes:

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Los componentes se mezclan y se compactan para formar comprimidos.

Ejemplo 3

Se prepara una formulación de inhalador en polvo seco que contiene los siguientes componentes:

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El ingrediente activo se mezcla con la lactosa y la mezcla se añade a un dispositivo de inhalación de polvo seco.

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Ejemplo 4

Se preparan comprimidos, que contienen cada uno 30 mg de ingrediente activo de la forma siguiente:

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El ingrediente activo, el almidón y la celulosa se pasan a través de un tamiz nº 20 mesh U.S. y se mezclan a fondo. La solución de polividona se mezcla con los polvos resultantes, que se pasan a continuación a través de un tamiz de 16 mesh U.S. Los gránulos producidos de este modo se secan entre 50ºC y 60ºC y se pasan a través de un tamiz de 16 mesh U.S. El carboximetil almidón sódico, estearato de magnesio y talco, pasados previamente a través de un tamiz nº 30 mesh U.S., se añaden a continuación a los gránulos que, tras el mezclado, se compactan en una máquina de comprimidos para dar comprimidos que pesa cada uno 120 mg.

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Ejemplo 5

Se preparan supositorios, que contienen cada uno 25 mg de ingrediente activo de la forma siguiente:

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El ingrediente activo se pasa a través de un tamiz nº 60 mesh U.S. y se pone en suspensión en los glicéridos de ácido graso saturado previamente mezclados utilizando el calor mínimo necesario. La mezcla se vierte a continuación en un molde de supositorio de 2,0 g de capacidad nominal y se deja enfriar.

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Ejemplo 6

Se preparan suspensiones, que contiene cada una 50 mg de ingrediente activo por dosis de 5,0 ml de la forma siguiente:

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Se mezclan el ingrediente activo, la sacarosa y la goma de xantano, se pasan a través de un tamiz nº 10 mesh U.S. y se mezclan a continuación con una solución preparada previamente de microcelulosa cristalina y carboximetilcelulosa de sodio en agua. El benzoato de sodio, el aromatizante y el colorante se diluyen con algo de agua y se añaden con agitación. Se añade a continuación agua suficiente para producir el volumen requerido.

Ejemplo 7

Una formulación subcutánea se puede preparar de la forma siguiente:

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Ejemplo 8

Se prepara una preparación inyectable que presenta la siguiente composición:

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Ejemplo 9

Se prepara una preparación tópica que presenta la composición siguiente:

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Todos los ingredientes anteriores, excepto el agua, se combinan y se calientan a 60ºC en agitación. Se añade a continuación una cantidad suficiente de agua a 60ºC con fuerte agitación para emulsionar los ingredientes y a continuación se añade agua en c.s. hasta 100 g.

Los ejemplos siguientes demuestran la utilidad de los compuestos de la invención.

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Ejemplo 10 I. Efectos electrofisiológicos de la ranolazina en miocitos aislados, tejidos y preparaciones en cuña perfundidas arterialmente del ventrículo izquierdo canino A. Materiales y procedimientos

Perros que pesaban entre 20 y 25 kg se anticoagularon con heparina (180 UI/kg) y se anestesiaron con pentobarbital (30 a 35 mg/kg, i.v.). Se abrió el tórax mediante una toracotomía izquierda, se escindió el corazón y se colocó en una solución cardioplégica fría ([K^{+}]_{0} = 8 mmoles/l, 4ºC). Todos los protocolos estaban de acuerdo con las directrices establecidas por el Comité Institucional de Cuidados y Usos en Animales.

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1. Estudios de fijación de voltaje en miocitos ventriculares caninos aislados

Se aislaron miocitos mediante disociación enzimática procedentes de una sección en forma de cuña de la pared libre ventricular izquierda suministrada por la arteria coronaria circunfleja izquierda. Se utilizaron en este estudio células de las zonas epicárdica y miocárdica media del ventrículo izquierdo.

La solución de Tyrode utilizada en la disociación contenía (en mM): NaCl 135, KCl 5,4, MgCl_{2} 1, CaCl_{2} 0 ó 0,5, glucosa 10, NaH_{2}PO_{4} 0,33, ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N'-2-etanosulfónico 10 (HEPES) y el pH se ajustó a 7,4 con NaOH.

Se registraron a 37ºC la corriente de potasio rectificadora interna (I_{K1}), la corriente lenta de potasio rectificadora retardada (I_{Ks}), y la corriente rápida de potasio rectificadora retardada (I_{Kr}) utilizando la configuración de fijación de voltaje de las células completa convencional. La composición de las soluciones externa y de la pipeta utilizadas para aislar corrientes iónicas específicas se resume en la Tabla 3.

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TABLA 3

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Se midió I_{K1} utilizando una solución externa que contenía ouabaina 3 \muM y nifedipina 5 \muM para bloquear la bomba de sodio y potasio y corriente de calcio tipo L (I_{Ca,L}), respectivamente. Se midió I_{Ks} en presencia de E-4031 5 \muM y nifedipina 5 \muM para bloquear I_{Kr} e I_{Ca}. La nifedipina 5 \muM estaba presente en la solución externa cuando se estaba registrando I_{Kr}.

Se colocaron miocitos aislados en una cámara de 0,5 ml controlada por temperatura (Medical Systems, Greenvale, NY) en la etapa de un microscopio invertido y se superfundieron a un ritmo de 2 ml/min. Se utilizó un microcolector de cuarzo de ocho barriles (ALA Scientific Instruments Inc., Westbury, NY) colocado a 100 \mum de la célula para aplicar ranolazina a las concentraciones (en \muM) de: 0,1, 0,5, 1,0, 5,0, 10 y 100,0. Se operó un amplificador Axopatch 1D (Axon Instruments, Foster City, CA) en modo fijación de voltaje para registrar las corrientes. Se filtraron las corrientes celulares totales con un filtro Bessel de bajo paso con polo 3 a 5 kHz, digitalizado entre 2 y 5 kHz (Digidata 1200A, Axon Instruments) y se guardó en un ordenador. Se utilizó la adquisición Clampex 7 y el programa informático de análisis (Axon Instruments) para registrar y analizar las corrientes iónicas. La resistencia en la punta de la pipeta fue de 1,0 a 2,0 M\Omega y la resistencia del sello fue superior a 5 G\Omega. La compensación electrónica de la resistencia de la serie fue por término medio 76%. Los voltajes publicados en el texto fueron corregidos para los potenciales en la punta del electrodo del parche. El sello entre la membrana celular y la pipeta del parche se formó inicialmente en la solución externa que contenía CaCl_{2} 1 mM. Se utilizó un puente de KCl 3 M-agar-agar entre el electrodo a tierra Ag/AgCl y la solución externa para evitar el desarrollo de un potencial a tierra cuando se conecta a la solución experi-
mental.

Se produjo I_{Ks} por despolarización a 40 mV durante 3 s. de un potencial de mantenimiento de -50 mV seguido de una etapa de repolarización a 0 mV (4,5 s.). La corriente de cola dependiente del tiempo producida por la repolarización se denominó I_{Ks}. Este protocolo se repitió 5 veces cada 20 s. I_{to} no se bloqueó, pero tuvo una pequeña influencia en la medida de I_{Ks} debido a su inactivación rápida y completa. Todas las mediciones se obtuvieron 5 a 12 min. después de la ruptura del parche ya que no se observa ningún informe detallado significativo de I_{Ks} durante este intervalo.

Se midió I_{Kr} como la corriente de cola dependiente del tiempo producida a un potencial de -40 mV después de una pulsación despolarizante corta de 250 ms a 30 mV. Los datos se presentan como la media \pm S.E.M. de I_{K1} se registraron durante las etapas de 900 ms de voltaje aplicadas desde un potencial de mantenimiento de -40 mV hasta los potenciales de la prueba que oscilan entre -100 mV hasta 0 mV, y se caracterizó como la media de 5 ms de la corriente en estado estacionario al final de la pulsación de la prueba.

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2. Estudios del potencial de acción en tejidos epicárdicos ventriculares caninos aislados y de la zona M

Se aislaron del ventrículo izquierdo preparaciones de células epicárdicas y miocárdicas (M) (tiras aproximadamente de 1 \times 0,5 \times 0,15 cm). Las secciones de tejido se colocaron en un baño tisular (volumen de 5 ml con caudal de 12 ml/min) y se dejaron equilibrar durante por lo menos 4 horas mientras se superfundía con una solución oxigenada de Tyrode (pH = 7,35, to =37 \pm 0,5ºC) y se colocó a una longitud de ciclo básico (BCL) de 2 Hz utilizando estimulación del campo. La composición de la solución de Tyrode era (en mM): NaCl 129, KCl 4, NaH_{2}PO_{4} 0,9, NaHCO_{3} 20, CaCl_{2} 1,8, MgSO_{4} 0,5 y D-glucosa 5,5.

Registros del potencial de acción: Se registraron potenciales de transmembrana utilizando microelectrodos de vidrio habituales rellenos con KCl 2,7 M (resistencia de 10 a 20 M\Omega DC) conectados a un sistema de amplificación de la impedancia con gran entrada (World Precision Instruments, Sarasota, FL, EUA). Se desplegaron señales amplificadas en osciloscopios Tektronix (Beaverton, OR, EUA) y se amplificaron (amplificadores programables modelo 1903-4 [Cambridge Electronic Designs (C.E.D.), Cambridge, Inglaterra]), se digitalizaron (sistema AD/DA modeo 1401 [C.E.D.]), se analizaron (adquisición Spike 2 y módulo de análisis [C.E.D.] y se almacenaron en uno medio magnético.

Protocolos del estudio: Se registraron los potenciales de acción de las preparaciones epicárdicas y de células M. Se obtuvieron registros de referencia después de un periodo de equilibrio de 4 a 6 horas. Se determinaron los efectos de ranolazina a concentraciones de 1, 5, 10, 50 y 100 \muM, con los registros comenzados 30 minutos después de la adición de cada concentración de fármaco. La dependencia de la velocidad de las acciones de ranolazina se determinó registrando los potenciales de acción de transmembra a longitudes del ciclo del ritmo básico (BCL) de 300, 500, 800, 1.000, 2.000 y 5.000 ms. Se presentan los datos registrados a las BCL de 500 y 2.000 ms.

Se midieron los siguientes parámetros del potencial de acción:

1)

Duración del potencial de acción al 50% y 90% de repolarización.

2)

Amplitud

3)

Sobreimpulso

4)

Potencial de la membrana en descanso

5)

Velocidad de ascensión del movimiento ascendente del potencial de acción (V_{máx})

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Se registró el V_{máx} en las condiciones de referencia y en presencia de 10 y 100 \muM de ranolazina. Se midió V_{máx} a una BCL de 500 ms.

Debido a que la K^{+} extracelular baja se sabe que favorece la prolongación de APD producida por fármacos y la polarización posterior preliminar, se llevaron a cabo dos series de experimentos por separado, una a [K^{+}]_{0} normal (4 mM) y la otra con [K^{+}]_{0} baja (2 mM).

\newpage

3. Estudios del potencial de acción en preparaciones de la cuña ventricular izquierda canina prefundida arterialmente

Se disecaron cuñas ventriculares izquierdas transparietales con dimensiones de aproximadamente 12 mm \times 35 mm \times 12 mm de la zona anterior media a basal de la pared ventricular izquierda y una rama diagonal de la arteria coronaria descendiente anterior izquierda se canuló para suministrar el perfundido (solución de Tyrode). La composición de la solución de Tyrode fue (en mM): NaCl 129, KCl 4, NaH_{2}PO_{4} 0,9, NaHCO_{3} 20, CaCl_{2} 1,8, MgSO_{4} 0,5 y D-glucosa 5,5; pH=7,4. Se llevaron a cabo una serie de experimentos por separado utilizando la solución de Tyrode que contenía KCl 2 mM.

Se registraron los potenciales de acción transmembranaria de las zonas (M) epicárdica (EPI) y subendocondrial utilizando microelectrodos flotantes. Se registró un pseudoelectrocardiograma (ECG) transparietal utilizando dos electrodos de K-agar-agar (d.i. de 1,1 mm) colocados a aprox. 1 cm de las superficies epicárdica (+) y endocárdica (-) de la preparación y a lo largo de los mismos ejes que los registros transmembranarios.

Se dejaron equilibrar las cuñas ventriculares en la cámara durante 2 h mientras que se fijaban los ritmos a longitudes del ciclo básico de 2.000 ms utilizando electrodos bipolares de plata en contacto con la superficie endocárdica. Se fijó un caudal constante antes de la isquemia para alcanzar una presión de perfusión de 40 a 50 mm Hg. La temperatura se mantuvo a 37\pm0,5ºC calentando el perfundido y una cámara contigua con agua que rodeaba la cámara con el tejido con el mismo baño calefactor/circulante. La parte descubierta superior de la cámara con el tejido se cubrió en cada experimento a \sim75% de su superficie con láminas de plástico para evitar mejor la pérdida de calor; el 25% restante se mantuvo descubierto para colocar y maniobrar los electrodos del ECG y los microelectrodos flotantes. Se sumergieron completamente las preparaciones en la solución extracelular durante el transcurso del experimento.

Se definió el intervalo QT como el intervalo de tiempo entre la desviación inicial del complejo QRS y el punto en el que se dibuja una tangente en la porción más pronunciada de la parte terminal de la onda T cruzada por la línea isoeléctrica.

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B. Protocolos del estudio

Serie experimental 1: Determinar los cambios en el periodo de repolarización (duración del potencial de acción a 50 y 90% de repolarización [APD_{50} y APD_{90}, respectivamente] y el intervalo QT [ECG]) así como la vulnerabilidad de los tejidos a la arritmogénesis después de perfundir las preparaciones con ranolazina a concentraciones que oscilan entre 1 y 100 \muM. [K^{+}]_{0} = 4 mM.

Se registraron los potenciales de acción transmembranaria en las zonas epicárdica (Epi) y subendocárdica (zona M) utilizando microelectrodos flotantes de vidrio. Se registró simultáneamente el ECG transparietal.

a. Estimulación en estado estacionario: La longitud del ciclo básico (BCL) se varió desde 300 a 2.000 ms para examinar los cambios dependientes de la frecuencia en el tiempo de repolarización (APD y ECG) a las siguientes concentraciones de ranolazina: 1, 5, 10, 50 y 100 \muM.

b. Estimulación eléctrica programada (PES): Se aplicó la estimulación prematura a la superficie epicárdica antes y después de cada concentración de fármaco en un intento de producir arritmias. Se administraron pulsaciones aisladas (S2) una vez después de cada quinto o décimo latido básico (S1) a longitudes del ciclo de 2.000 ms. El intervalo de acoplamiento S1-S2 se redujo progresivamente hasta que se encontró resistencia (los estímulos S2 fueron de 2 a 3 ms de duración con una intensidad igual a 3 a 5 veces el umbral diastólico).

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Serie experimental 2: Determinar los cambios en el tiempo de repolarización (duración del potencial de acción a 50 y 90% de repolarización [APD_{50} y APD_{90}, respectivamente] e intervalo QT [ECG]) así como la vulnerabilidad de la preparación para arritmogénesis después de perfundir las preparaciones con ranolazina a concentraciones que oscilan entre 1 y 100 \muM. [K^{+}]_{0} = 2 mM.

a. Estimulación en estado estacionario: Realizada a longitudes del ciclo básico (BCL) de 500 y 2.000.

b. Estimulación eléctrica programada (PES): Véase anteriormente.

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Fármacos: El dihidrocloruro de ranolazina se diluyó en agua destilada al 100% como solución madre de 50 mM. Se preparó reciente el fármaco para cada experimento.

Estadísticas: Se realizó el análisis estadístico utilizando análisis de varianza (ANOVA) de una vía de las mediciones repetidas seguido de la prueba de Bonferroni.

Ejemplo 11 Efecto de ranolazina sobre I_{Kr}, I_{Ks} e I_{K1}

La ranolazina inhibió a I_{Kr} e I_{Ks} en función de la concentración, pero no alteró la I_{K1}. Se midió la I_{Kr} como corriente de cola dependiente del tiempo a -40 mV, después de una de activar la pulsación unos 250 ms a 30 mV. La Figura 3A presenta las corrientes registradas en la solución de referencia y después de ranolazina 50 \muM. I_{Kr} fue bloqueada casi completamente por esta concentración de ranolazina. La Figura 3B presenta la relación de respuesta a la concentración para la inhibición de la corriente de cola I_{Kr}, con una IC_{50} de 11,5 \muM.

Se produjo I_{Ks} por una etapa de 3 s a +40 mV y se midió como la corriente de cola máxima dependiente del tiempo después de volver paso a paso hasta 0 mV. En la Figura 4A se muestran las corrientes registradas en las condiciones de referencia, después de ranolazina 100 \muM y después del periodo de descanso farmacéutico. La ranolazina eliminó en gran cantidad (100 \muM) la corriente de cola registrada a 0 mV y este efecto se invirtió completamente durante el periodo de descanso farmacéutico. La relación concentración-respuesta para la inhibición de la corriente de cola I_{Ks} se ilustra en la Figura 4B, indicando una IC_{50} de 13,4 \muM.

Se registró el rectificador interno, I_{K1}, utilizando técnicas de fijación de voltaje con parche perforado. La Figura 5A presenta la I_{K1} registrada a voltajes entre -100 y 0 mV, incrementados en etapas de 10 mV en las condiciones de control (panel izquierdo) y en presencia de ranolazina 100 \muM. En este y cinco experimentos similares, la ranolazina no produjo ningún cambio en la corriente rectificadora interna. El panel B representa los datos del compuesto que ilustran las relaciones corriente-voltaje construidas a partir de la corriente media medida al final de cada pulsación de la prueba.

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Ejemplo 12 Estudios del potencial de acción en tejidos ventriculares caninos aislados

La ranolazina produjo una abreviación dependiente de la concentración tanto de APD_{50} como de APD_{90} en las preparaciones de células M a [K^{+}]_{0} = 4 mM y BCL = 2.000 ms (Fig. 6). En algunas preparaciones, la ranolazina produce un efecto bifásico, prolongando la APD a bajas concentraciones y abreviando la APD a altas concentraciones (Fig. 4A). La repolarización epicárdica fue menos afectada por el fármaco, demostrando una tendencia hacia la prolongación de APD. La dispersión transparietal de la repolarización se redujo a concentraciones moderadas de ranolazina y se eliminó prácticamente a concentraciones mayores.

A una BCL de 500 ms, la ranolazina produjo una prolongación dependiente de la concentración de APD en los tejidos epicárdicos y una abreviación en las preparaciones de células M. A una concentración de 100 \muM, la APD epicárdica superó a la de las células M. Como resultado, se redujo o se eliminó la dispersión transparietal de la repolarización. A la mayor concentración de ranolazina (100 \muM), se invirtió el gradiente de repolarización transparietal. Cabe destacar que la ranolazina produjo una prolongación dependiente de la utilización de APD_{90} en las preparaciones epicárdicas, es decir, la prolongación fue mayor a las velocidades más rápidas (Figuras 6 y 7).

Para evaluar las acciones de ranolazina sobre I_{Na}, se midió la velocidad de aumento del movimiento ascendente del potencial de acción (V_{máx}). La ranolazina produjo una reducción de V_{máx}. Este efecto fue modesto (n.s.) a 10 \muM, pero más sustancial con ranolazina 100 \muM (Figura 8).

A concentraciones de hasta 50 \muM, la ranolazina produjo de poco a ningún efecto en la amplitud, el sobreimpulso, y en el potencial de la membrana en reposo en las preparaciones de las células M (Tabla 4).

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TABLA 4 Ranolazina (en \muM) BCL = 500 ms

21

Los datos se expresan en media \pmSD, n=5 para todos, * -p<0,05 vs. referencia

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A la dosis mayor probada (100 \muM), la ranolazina produjo una disminución en la amplitud de la fase 0. El sobreimpulso del potencial de acción así como el potencial de la membrana en reposo se redujeron, aunque no alcanzó significación estadística.

En las preparaciones epicárdicas, la ranolazina produjo poca a ningún cambio en el potencial de la membrana en reposo, el sobreimpulso y en la amplitud de la fase 0 (Tabla 5).

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TABLA 5 Ranolazina (en \muM) BCL = 500 ms

22

Los datos se expresan en media \pmSD, n=4 para todos excepto ranolazina 100,0 \muM (n=2). En las dos restantes preparaciones epicárdicas, la ranolazina 100,00 \muM produjo una prolongación excesiva de APD, dando como resultado repolarizaciones alternas y/o respuestas 2:1.

En presencia de [K^{+}]_{0} bajo y frecuencias bajas (BCL = 2.000 ms), la ranolazina no produjo ningún cambio significativo en APD_{90} de las células M, sino una abreviación dependiente de la concentración de APD_{50} (Figura 9). En cambio, en el epicardio el fármaco produjo poco cambio en APD_{50}, excepto una prolongación dependiente de la concentración de ADP_{90}. La dispersión transparietal de la repolarización disminuyó de manera importante.

A una BCL de 500 ms, la ranolazina produjo poco cambio en la repolarización de las células M, exceptoo una prolongación dependiente de la concentración importante de ADP_{90} en el epicardio (Figura 10).

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Ejemplo 13 Estudios de potencial de acción en preparaciones de la cuña ventricular izquierda canina perfundida arterialmetne

Cada panel en la Figura 11 presenta un ECG y los potenciales de acción de transmembrana registrados en el miocardio medio (zona M) y en el epicardio (Epi) de la preparación de la cuña ventricular izquierda canina perfundida arterialmente a una longitud del ciclo básica (BCL) de 2.000 ms en ausencia y presencia de ranolazina (1-100 \muM). Se estudiaron los efectos del fármaco con perfundido coronario que contenía KCl 4 mM (paneles izquierdos) o 2 mM (paneles derechos).

En presencia de KCl 4 mM, la ranolazina no alteró significativamente la APD_{90}, sino que redujo significativamente la APD_{50} a altas concentraciones del fármaco (50 y 100 \muM). En cambio en presencia de KCl 2 mM, la ranolazina prolongó significativamente la APD_{90} a concentraciones entre 5 y 100 \muM, pero no alteró significativamente la APD_{50} a ninguna concentración (Tabla 6).

La ranolazina prolongó la APD_{90} del epicardio más que la de las células M a [K^{+}]_{0} de 4 mM. Como consecuencia, la dispersión transparietal de la repolarización se redujo, aunque esto no alcanzó significación. A una [K^{+}]_{0} de 2 mM, la ranolazina prolongó la APD_{90} de las células M más que las del epicardio, dando como resultado un aumento de la dispersión transparietal de la repolarización, que tampoco pudo alcanzar significación (Tabla 7).

La Figura 12 presenta los datos del compuesto del efecto dependiente de la concentración de ranolazina en intervalos de APD_{90} y QT (paneles superiores) y en APD_{50} (paneles inferiores). Con una [K^{+}]_{0} de 4 mM, QT y APD_{90} se vieron poco afectados a cualquier concentración de fármaco; la ADP_{50} se abrevió significativamente a concentraciones de 50 y 100 \muM. Con una [K^{+}]_{0} de 2 mM, QT y APD_{90} de la célula M prolongada a concentraciones de ranolazina superiores a 5 \muM ligeramente, mientras que la APD_{50} se vio poco afectada.

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\newpage

La Tabla 8 destaca el hecho de que no se observa que se desarrollen espontáneamente arritmias por taquicardia ventricular en entorchado, ni podrían producirse por estimulación eléctrica programada bajo alguno de los protocolos que implican la preparación de la cuña ventricular izquierda canina. No se observaron arritmias en las condiciones de referencia o después de cualquier concentración de ranolazina.

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TABLA 8 Taquicardia ventricular en entorchado producida por ranolazina

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No se observaron ni despolarizaciones precoces ni retardadas en preparaciones de tejido o de cuña pretratadas con cualquier concentración de ranolazina. De hecho, la ranolazina demostró ser eficaz en las EAD supresoras producidas por exposición de las preparaciones de las células M a otros bloqueadores de I_{Kr} tales como d-sotalol, tal como se ilustra en la Figura 13. d-sotalol produjo una prolongación destacable de la repolarización y produjo las EAD en las preparaciones de células M. La concentración en función de la ranolazina abrevió el potencial de acción y suprimió las EAD. Un efecto similar de la ranolazina (5-20 \muM) para suprimir la actividad de EAD y abreviar la de APD se observó en 4/4 preparaciones de células M.

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Ejemplo 14 II. Efectos electrofisiológicos de la ranolazina sobre I_{Na}, I_{Ca}, I_{to} e I_{Na-Ca} tardías en miocitos aislados del ventrículo izquierdo canino A. Materiales y procedimientos 1. Estudios de la fijación de voltaje en miocitos ventriculares caninos aislados

A perros macho cruzados adultos se les administró 180 UI/kg de heparina (sal sódica) y se anestesiaron con 35 mg/kg i.v. de pentobarbital sódico, se extirparon rápidamente sus corazones y se colocaron en solución de Tyrode. Se obtuvieron miocitos aislados por disociación enzimática de una sección en forma de cuña de la pared ventricular libre suministrados por la arteria coronaria circunfleja izquierda. Se utilizaron células de las zonas epicárdica y miocárdica izquierda del ventrículo izquierdo. Todos los procedimientos estaban de acuerdo con las directrices establecidas por la Institutional Animal Care and Use Committee.

La solución de Tyrode utilizada en la disolución contenía (mM): NaCl 135, KCl 5,4, MgCl_{2} 1, CaCl_{2} 0 ó 0,5, glucosa 10, NaH_{2}PO_{4} 0,33, ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N'-2-etansulfónico 10 (HEPES) y se ajustó el pH a 7,4 con NaOH.

La corriente de calcio tipo L (I_{Ca}), la corriente transitoria externa (I_{to}) y la corriente de intercambio de sodio y calcio (I_{Na-Ca}) se registraron a 37ºC utilizando electrodos de parche convencionales. En las Tablas 9 y 10, se muestra la composición de las soluciones externa y de pipeta, respectivamente. Se registró la I_{Na} tardía utilizando técnicas de parche perforado.

TABLA 9 Soluciones externas

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TABLA 10 Soluciones internas

26

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Se colocaron células disociadas en una cámara de 0,5 ml (Medical Systems, Greenvale, NY) de temperatura controlada en la etapa de un microscopio invertido y se superfundió a 2 ml/min. Se utilizó un microcolector de cuarzo de diez barriletes (ALA Scientific Instruments Inc., Westbury, NY) colocado 100 \mum de la célula para aplicar ranolazina, tetrodotoxina (TTX) o cadmio. Se operó un amplificador Axopatch 200A (Axon Instruments, Foster City, CA) en modo fijación de voltaje para registrar las corrientes a 37ºC. Se filtraron las corrientes de las células completas con un filtro Bessel de bajo paso y 4 polos a 5 kHz, digitalizado entre 2 y 5 kHz (Digidata 1200A, Axon Instruments) y se guardaron en un ordenador. Se utilizó el programa informático pClamp 8.2 (Axon Instruments) para registrar y analizar las corrientes iónicas. La resistencia en la punta de la pipeta fue de 1,0 a 1,5 M\Omega y la resistencia del sello fue superior a 5 G\Omega. La compensación electrónica de la resistencia de la serie fue por término medio 76%. Los voltajes publicados en el texto fueron corregidos para los potenciales en la punta del electrodo del parche. El sello entre la membrana celular y la pipeta del parche se formó inicialmente en la solución externa que contenía CaCl_{2} 1 mM. Se utilizó un puente de KCl 3 M-agar-agar entre el electrodo a tierra Ag/AgCl y la solución externa para evitar el desarrollo de un potencial a tierra cuando se conecta a la solución experimental.

Se preparó tetrodoxina (TTX) en agua y se diluyó 1:100 para una concentración final de 10 \muM en solución externa. Se preparó la ranolazina en agua a una concentración de 50 mM y se diluyó en solución externa hasta concentraciones finales que oscilan entre 1 y 800 \muM.

Se definió I_{Ca} como corriente interna máxima menos la corriente al final de la pulsación de la prueba. La solución externa contenía TTX 10 \muM para bloquear el componente en estado estacionario de I_{Na} tardía. Se dejaron en reposo las células durante 20 segundos a -90 mV antes de provocar una rampa de 800 ms a -60 mV y una etapa de 15 ms a -50 mV para inactivar los canales de sodio y mantener el control del voltaje, seguido inmediatamente de una etapa de 500 ms a 0 mV para registrar I_{Ca} en las soluciones de referencia. Este protocolo se repitió 5 veces a una frecuencia de 0,5 Hz para cada una de las concentraciones del fármaco. Se midieron los efectos en estado estacionario de la ranolazina como cambio fraccionado en I_{Ca} durante la 5ª pulsación de la serie. Se representaron los cambios en la I_{Ca} frente a la concentración del fármaco a escala semilogarítmica y se ajustaron a una ecuación logística.

Se definió la I_{Na} como la corriente media sensible a TTX medida en los 5 ms finales de la pulsación de prueba a -30 mV. La pérdida transitoria del control del voltaje que se produjo al comienzo de la pulsación de 500 ms no afectó a las corrientes medidas al final de la pulsación^{3}. Se utilizó una serie de pulsaciones de 500 ms repetida a una frecuencia de 1 Hz para determinar el bloqueo en estado estacionario. Se representó la reducción de I_{Na} tardía durante la 10ª pulsación en función de la concentración del fármaco a escala semilogarítmica y se ajustó a una ecuación logística.

Se registró I_{to} en presencia de CdCl_{2} 300 \muM para bloquear I_{Ca}, y se definió como la corriente interna máxima menos la corriente en estacionario al final de la pulsación de la prueba. El potencial de mantenimiento fue -80 mV y se tomó una pulsación de 5 ms a -50 mV antes de producir pulsaciones de 100 ms a -10, 0 y 10 mV, que se repitieron a una frecuencia de 0,1 Hz. Los efectos de ranolazina se evaluaron 4 min. después de la adición de cada concentración de fármaco. Los resultados no se representaron como una función logística ya que la ranolazina presentó un efecto mínimo sobre I_{to}. En lugar de esto, todos los resultados se presentan como medias \pm desviación estándar. Se utilizó una prueba de la t de Student de dos colas para determinar las diferencias entre las medias.

Para activar la I_{Na-Ca} mediante el calcio normal transitorio, una pulsación de 3 ms a -50 mV fue seguida de una etapa de 5 ms a 0 mV para activar la I_{Ca} y un calcio transitorio. Este protocolo de dos etapas fue seguido inmediatamente por una pulsación a -80 mV para registrar la I_{Na-Ca}. Se cuantificó la I_{Na-Ca} como carga total transportada (pA \times ms). Los protocolos de la fijación de voltaje fueron precedidos por una serie de diez pulsaciones a 20 mV suministrados a una frecuencia de 0,5 Hz seguido de un descanso de 6 s. para mantener la carga del calcio de la SR. La reducción de I_{Na-Ca} se representó en función de la concentración de fármaco a escala semilogarítmica y se ajustó a una ecuación logística.

Ejemplo 15

La Figura 14A presenta las corrientes sensibles a TTX en la solución de referencia y 4 min. después de la adición de ranolazina 20 \muM a la solución externa. La Figura 14B presenta el resumen de los resultados de experimentos similares en los que se añadió ranolazina (5 a 50 \muM) a la solución externa. La mitad de la inhibición de I_{Na} tardía se produjo a una concentración de fármaco de 21 \muM.

Se determinó el efecto de la ranolazina sobre I_{to} a los potenciales de la prueba de -10, 0 y 10 mV. I_{to} fue muy resistente a la inhibición por ranolazina. La Figura 15 presenta las corrientes registradas en la solución de referencia (panel izquierdo) y 4 min. después de la adición de ranolazina 50 \muM. El fármaco redujo I_{to} máxima en menos de
10.

La ranolazina a una concentración de 50 \muM redujo la I_{to} en 10 \pm 2% a 10 mV (6 células, p < 0,001). Los efectos de ranolazina a -10 y 0 mV no alcanzaron significación. La ranolazina a una concentración de 100 \muM redujo la I_{to} en 16 \pm 3% y 17 \pm 4% a los potenciales de la prueba de 0 y 10 mV, respectivamente (7 células, p < 0,001). Ranolazina no produjo ningún efecto a las concentraciones de 10 \muM (9 células) y 20 \muM (9 células) a cualquiera de los voltajes de la prueba. Los resultados presentados en la Figura 16 se normalizaron para cada corriente de referencia y se resumen en la Figura 17.

El panel superior de la Figura 18 presenta los trazos sobreimpuestos de I_{Na-Ca} en la solución de referencia, 4 min. después de la adición de ranolazina 100 \muM y después de volver a la solución de referencia. El panel inferior de la Figura 18 presenta la curva de respuesta a la concentración obtenida a partir de 3 a 14 células. La IC_{50} para ranolazina que inhibe la I_{Na-Ca} es 91 \muM.

La Figura 19 presenta las curvas de respuesta a la concentración para I_{Kr}, I_{Ks}, I_{Ca}, I_{Na} tardía e I_{Na-Ca} en un solo gráfico. La inhibición de I_{to} a la concentración mayor ensayada (100 \muM) fue insuficiente para desarrollar una curva completa. I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} tardía presentaron sensibilidades similares a la ranolazina.

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Ejemplo 16 I. Efectos electrofisiológicos de la ranolazina en fibras de Purkinje caninas aisladas. A. Materiales y procedimientos

Perros que pesaban entre 20 y 25 kg se anticoagularon con heparina y se anestesiaron con pentobarbital (30 a 35 mg/kg, i.v.). Se abrió el tórax mediante una toracotomía izquierda, se escindió el corazón y se colocó en una solución cardioplégica fría ([K^{+}]_{0} = 8 mmoles/l, 4ºC). Se aislaron fibras de Purkinje corrientes libres de los ventrículos izquierdo y derecho. Se colocaron las preparaciones en un baño de tejido (5 ml de volumen con un caudal de 12 ml/min) y se dejaron equilibrar durante por lo menos 30 min. mientras se superfundían con una solución oxigenada de Tyrode (pH=7,35, to=37 \pm 0,5ºC) y se fijó un ritmo a una longitud básica del ciclo (BCL) de 1 Hz utilizando estimulación puntual. La composición de la solución de Tyrode fue la siguiente (en mM): NaCl 129, KCl 4, NaH_{2}PO_{4} 0,9, NaHCO_{3} 20, CaCl_{2} 1,8, MgSO_{4} 0,5 y D-glucosa 5,5.

Registros del potencial de acción: Se registraron los potenciales de transmembrana utilizando microelectrodos de vidrio normal rellenos con KCl 2,7 M (resistencia DC de 10 a 20 M\Omega) conectados a un sistema de amplificación de gran entrada de impedancia (World Precision Instruments, Sarasota, FL, EUA). Se observaron las señales amplificadas en osciloscopios Tektronix (Beaverton, OR, EUA) y se amplificaron (4 amplificadores programables modelo 1903 [Cambridge Electronic Designs (C.E.D.), Cambridge, Inglaterra]), digitalizados (sistema AD/DA [C.E.D.] modelo 1401), se analizaron (módulo de adquisición y análisis Spike 2 [C.E.D.] y se almacenaron en medios magnéticos (ordenador personal).

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B. Protocolos del estudio

Se obtuvieron registros de referencia después de un periodo de equilibrio de 30 minutos Se evaluaron los efectos de ranolazina (1, 5, 10, 50 y 100 \muM) con los registros comenzados 20 minutos después de la adición de cada concentración de fármaco. La dependencia de la velocidad de las acciones de ranolazina se determinó registrando los potenciales de acción a longitudes del ciclo básico (BCL) de 300, 500, 800, 1.000, 2.000 y 5.000 ms. En este informe solamente se presentan como representativos de velocidades de ritmo relativamente rápido y relativamente lento.

Se midieron los siguientes parámetros del potencial de acción:

a.

Duración del potencial de acción al 50% (APD_{50}) y 90% (APD_{90}) de repolarización.

b.

Amplitud

c.

Sobreimpulso

d.

Potencial de la membrana en descanso

e.

Velocidad de ascensión del movimiento ascendente del potencial de acción (V_{máx})

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Dado que se sabe que el K^{+} extracelular bajo favorece la prolongación de APD producida por el fármaco y las posdespolarizaciones precoces, los investigadores determinaron los efectos de ranolazina en presencia de [K^{+}]_{0} normal (4 mM) y bajo (3 mM).

En la fase final, los investigadores evalúan los efectos de ranolazina sobre las EAD producidos por d-sotalol (100 \muM), bloqueante de I_{Kr} apenas específico.

Se diluyó el dihidrocloruro de ranolazina en agua destilada para preparar una solución madre de 50 mM. El fármaco se preparó reciente para cada experimento.

Estadísticas. Se llevó a cabo el análisis estadístico utilizando análisis de varianza de mediciones repetidas de una vía (ANOVA) seguido de la prueba de Bonferroni.

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Ejemplo 17 Concentración normal de K^{+} extracelular (4 mM)

Concentración producida por ranolazina (1 a 100 \muM) y efectos dependientes de la velocidad sobre la repolarización en fibras Purkinje (Fig. 20). Concentraciones bajas de ranolazina (1 a 10 \muM) no produjeron ningún efecto o una abreviación relativamente pequeña de APD. Altas concentraciones de ranolazina (50 y 100 \muM) abreviaron significativamente APD_{50} tanto a velocidades rápidas como lentas. En cambio, APD_{90} se abrevió notablemente a ritmo lento, pero no a ritmo rápido (Fig. 20). No se observó ninguna señal de una EAD a ninguna concentración de fármaco.

Para evaluar el efecto de ranolazina sobre I_{Na}, los investigadores determinaron el efecto del fármaco sobre la velocidad de ascenso del movimiento ascendente del potencial de acción (V_{máx}). La ranolazina produjo una reducción significativa de V_{máx} a concentraciones de 50 y 100 \muM (Fig. 21), lo que indica inhibición de I_{Na} por el fármaco.

La ranolazina, en concentraciones de 1 a 50 \muM, produjo poco efecto a ninguno sobre la amplitud, el sobreimpulso o el potencial de la membrana en reposo (Tabla 11).

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TABLA 11 Efectos de ranolazina sobre la amplitud de la fase 0, potencial de la membrana en reposo (RMP) y sobreimpulso del potencial de acción en fibras de Purkinje en presencia de [K^{+}]_{0} normal

Ranolazina (en \muM)

27

[K^{+}]_{0} = 4,0 mM; BCL = 500 ms

Los datos se expresan como media \pmSD, n=7, *p<0,05 vs. referencia

A la concentración más alta probada (100 \muM) la ranolazina produjo una reducción estadísticamente significativa de la amplitud de la fase 0 y sobreimpulso, coherente con el efecto del fármaco para reducir V_{máx} e I_{Na}.

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Baja concentración del K^{+} extracelular (3 mM)

La reducción del K^{+} extracelular no modificó sustancialmente los efectos de la ranolazina. Las diferencias más obvias incluyen la tendencia del fármaco a prolongar la APD_{90} a concentraciones moderadas y la producción de una abreviación más pequeña de APD por las concentraciones más altas del fármaco a una BCL de 2.000 ms (Figura 22, Tabla 12).

TABLA 12 Efectos de ranolazina sobre la amplitud de la fase 0, potencial de la membrana en reposo (RMP) y sobreimpulso del potencial de acción en fibras de Purkinje en presencia de [K^{+}]_{0} bajo

Ranolazina (en \muM)

28

[K^{+}]_{0} = 3,0 mM; BCL = 500 ms

Los datos se expresan como media \pmSD, n=5, *p<0,05 vs. referencia

Las concentraciones superiores a 5-10 \muM abreviaron significativamente la APD_{50}. Como con la concentración más alta de [K^{+}]_{0}, la amplitud de la fase 0 y el sobreimpulso de potencial de acción fueron reducidos significativamente por concentraciones altas de ranolazina (50 y 100 \muM). No se observaron nunca las EAD.

Supresión de ranolazina de las EAD producidas por d-sotalol

El bloqueador específico de I_{Kr} d-sotalol (100 \muM) produjo actividad de EAD en 4 de cada 6 preparaciones de fibra de Purkinje. La ranolazina, a una concentración tan baja como 5 \muM, suprimió rápidamente las EAD producidas por d-sotalol en 4 de cada 4 fibras de Purkinje (Figura 23). Concentraciones más altas de ranolazina (10 \muM) produjeron una abreviación mayor del potencial de acción.

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Ejemplo 18 IV. Efectos de ranolazina sobre la prolongación de QT y la producción de arritmia en perros anestesiados: Comparación con sotalol A. Materiales y procedimientos

Se trataron previamente perros con Atravet (0,07 mg/kg sc) y a continuación 15 minutos después se anestesiaron con cetamina (5,3 mg/kg iv) y valium (0,25 mg/kg iv) seguido de isoflurano (1-2%), se entubaron y se sometieron a ventilación mecánica. Se sometieron a continuación a bloqueo AV con extirpación por radiofrecuencia. Se practicó una esternotomía media y se insertaron catéters en una arteria femoral para registrar la presión sanguínea (BP) y en ambas venas femorales para infusión de fármacos de la prueba. Se insertaron electrodos bipolares en ambos ventrículos para la determinación por estimulación programada de periodos resistentes (técnica de extraestímulo), así como para la evaluación del intervalo QT y de la duración de QRS a varias longitudes de ciclo básico controladas (BCL). Se produjo TdP mediante la prueba de provocación de fenilefrina, que se administraron como dosis intravenosas rápidas a emboladas de 10, 20, 30, 40 y 50 \mug/kg. Después de cada dosis, se controló por ECG continuamente para detectar arritmias. La BP siempre aumenta después de la fenilefrina, y se dejó suficiente tiempo (por lo menos 10 minutos) para normalizar la BP antes de proporcionar la siguiente dosis de fenilefrina. Se evaluaron los efectos del fármaco de la prueba por los protocolos siguientes.

Los datos se representan como la media \pm S.E.M. Se realizaron comparaciones estadísticas con la prueba t de Student. Se consideró que una probabilidad de 2 colas <0,05 indica significación estadística. En las tablas de datos, * indica P<0,05 y ** P<0,01.

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B. Estudio de diseño (protocolos)

El fármaco de la prueba se infundió como: Grupo 1 (5 perros): Se administró sotalol iv a una dosis de carga de 8 mg/kg y una dosis de mantenimiento de 4 mg/kg/h. Grupo 2 (6 perros): Cinco perros recibieron ranolazina como una carga de 0,5 mg/kg iv seguido por una primera, una segunda y una tercera infusión iv continua de 1,0, 3,0 y 15 mg/kg/h, respectivamente. Un perro recibió ranolazina como una carga de 1,5 mg/kg iv seguido de infusiones de 15 y 30 mg/kg/h. Veinte minutos después de comenzar la infusión de mantenimiento (para sotalol) o 30 minutos después de comenzar cada infusión iv (para ranolazina) se obtuvieron mediciones electrofisiológicas (ERP ventricular derecho e izquierdo, QT y QRS) a unas BCL de 300, 400, 600 y 1.000 ms. Se practicaron a continuación pruebas de provocación con fenilefrina, con todas las dosis dadas a cada cantidad de infusión del fármaco y a cualquier monitor de arritmias.

Ejemplo 19

La Tabla 13 resume los efectos proarrítmicos (bigémino, trigémino, taquicardia ventricular en entorchado y taquicardia ventricular en entorchado que degenera a fibrilación ventricular) de sotalol en el modelo.

TABLA 13 Caso de arritmia en el grupo de sotalol

29

VT = taquicardia ventricular, VF = fibrilación ventricular, mono = monomorfo, tdp = taquicardia ventricular en entorchado, CL = longitud del ciclo, sot = sotalol, PE10, 20, 30, 40, 50 = fenilefrina a 10, 20, 30, 40, 50 \mug/kg respectivamente.

Dos de los cinco perros presentaban proarritmia sin la prueba de provocación de fenilefrina y los cinco presentaban proarritmia en el momento de la prueba de provocación con fenilefrina. Todos los perros murieron finalmente de taquicardia ventricular en entorchado degenerando a fibrilación ventricular producida por la combinación de infusión de sotalol y de inyección epidérmica rápida de fenilefrina. Sotalol aumentó el periodo resistente eficaz del ventrículo derecho (RV) y del ventrículo izquierdo (LV) de manera dependiente de la utilización inversa (Tabla 14 y Figuras 24A y B). Sotalol aumentó el intervalo QT de manera dependiente de la utilización sorprendentemente inversa y no afecta a la duración de QRS (Tabla 15 y Figuras 25A y B).

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TABLA 14 Efectos de sotalol sobre ERP de los ventrículos izquierdo y derecho (ms)

31

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TABLA 15 Efectos sobre QT y e intervalos de QRS (ms)

32

Los resultados están disponibles para los 5 perros que recibieron el protocolo de infusión de ranolazina normal. El perro de la dosis alta murió por el fallo de la bomba durante la infusión de 30 mg/kg/h, con arritmias no ventriculares y el estudio electrofisiológico de este perro no pudo realizarse. La Tabla 16 resume el caso de la arritmia en presencia de ranolazina, sola o en combinación con inyecciones subepidérmicas de fenilefrina (10 a 50 \mug/kg) según un protocolo idéntico al del sotalol anterior. Los investigadores fueron incapaces de producir algunas taquicardias ventriculares en entorchado y/o fibrilación ventricular durante la infusión de ranolazina con y sin inyecciones intravenosas rápidas de fenilefrina.

TABLA 16 Caso de arritmia en el caso de ranolazina

33

Rano = ranolazina, VT = taquicardia ventricular, IDV = latido de escape idioventricular, CL = longitud del ciclo, PE = fenilefrina, inf.= infusión

La ranolazina aumentó ligeramente la ERP (la media aumenta no más de aproximadamente el 10%), con ninguna dependencia inversa por utilización (Tabla 17A y B y Figuras 26 y 27). Se aumentaron modestamente los intervalos QT (el aumento máximo fue aproximadamente del 10%) pero no significativamente, con efectos máximos a 3 mg/kg por hora y una disminución a la dosis más alta (Tabla 18A y B y Figuras 28 y 29).

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TABLA 17A Efectos de ranolazina sobre la ERP del ventrículo derecho e izquierdo (ms)

ERP media -RV+SE

35

TABLA 17B Efectos de ranolazina sobre la ERP del ventrículo derecho e izquierdo (ms)

ERP media -RV+SE

36

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TABLA 18A Efectos de ranolazina sobre los intervalos QT (ms)

QT media \pm SE

37

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TABLA 18B Efectos de ranolazina sobre los intervalos QRS (ms)

QT media \pm SE

38

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Ejemplo 20 Efectos de la ranolazina sobre I_{Na}, tardía durante la fijación de voltaje del potencial de acción

A perros macho cruzados adultos se les administró 180 UI/kg de heparina (sal sódica) y se anestesiaron con 35 mg/kg i.v. de pentobarbital sódico, se extirparon rápidamente sus corazones y se colocaron en solución de Tyrode. Se obtuvieron miocitos aislados por disociación enzimática de una sección en forma de cuña de la pared ventricular libre suministrados por la arteria coronaria circunfleja izquierda. Se utilizaron células de las zonas epicárdica y miocárdica izquierda del ventrículo izquierdo. Todos los procedimientos estaban de acuerdo con las directrices establecidas por la Institucional Animal Care and Use Committee.

La solución de Tyrode utilizada en la disolución contenía (mM): NaCl 135, KCl 5,4, MgCl_{2} 1, CaCl_{2} 0 ó 0,5, glucosa 10, NaH_{2}PO_{4} 0,33, ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N'-2-etansulfónico 10 (HEPES) y se ajustó el pH a 7,4 con NaOH. Las composiciones de las soluciones externa e interna utilizadas se resumen en la Tabla 19.

TABLA 19

39

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La I_{Na} se registró a 37ºC utilizando electrodos de parche convencionales. Se colocaron células disociadas en una cámara de 0,5 ml (Medical Systems, Greenvale, NY) a temperatura controlada en la etapa de un microscopio invertido y se superfundieron a 2 ml/min. Se utilizó un microcolector de cuarzo de diez barriletes (ALA Scientific Instruments Inc., Westbury, NY) colocado 100 \mum de la célula para aplicar ranolazina y tetrodotoxina (TTX). Un calentador en línea (Harvard/Warner, Holliston MA) se utilizó para mantener la temperatura de las soluciones dentro del colector de cuarzo. Se hizo funcionar un amplificador Axopatch 700A (Axon Instruments, Foster City, CA) en modo fijación de voltaje para registrar las corrientes a 37ºC. Se filtraron las corrientes de las células completas con un filtro Bessel de bajo paso y 4 polos a 5 kHz, digitalizado entre 2 y 5 kHz (Digidata 1200A, Axon Instruments) y se guardaron en un ordenador. Se utilizó el programa informático pClamp 8.2 (Axon Instruments) para registrar y analizar las corrientes iónicas. La resistencia en la punta de la pipeta fue de 1,0 a 1,5 M\Omega y la resistencia del sello fue superior a 5 G\Omega. La compensación electrónica de la resistencia de la serie fue por término medio 76%. Los voltajes publicados en el texto fueron corregidos para los potenciales en la punta del electrodo del parche. El sello entre la membrana celular y la pipeta del parche se formó inicialmente en la solución externa que contenía CaCl_{2} 1 mM. Se utilizó un puente de KCl 3 M-agar-agar entre el electrodo a tierra Ag/AgCl y la solución externa para evitar el desarrollo de un potencial a tierra cuando se conecta a la solución experimental.

Se preparó tetrodoxina (TTX) en agua y se diluyó 1:100 para una concentración de Tyrode final de 10 \muM en solución externa. Se preparó dihidrocloruro de ranolazina en agua a una concentración de 5 mM y se diluyó en solución externa hasta concentraciones finales que oscilan entre 1 y 50 \muM.

Se registró la I_{Na, tard\text{í}a} durante una serie de 30 pulsaciones a velocidades de repetición de 300 y 2.000 ms. Las corrientes durante las 5 últimas pulsaciones de las series se promediaron para reducir el ruido, y la última I_{Na} se definió como la corriente sensible a TTX. Se repitieron los protocolos en la solución exenta de fármaco, 2 a 4 minutos después de añadir la ranolazina e inmediatamente después se añadió TTX 10 \muM para bloquear completamente la I_{Na, tard\text{í}a}.

Se utilizaron potenciales de acción, en lugar de pulsaciones cuadradas para la I_{Na, tard\text{í}a} de la fijación de voltaje. A una BCL de 300 ms se hicieron mediciones a medio camino en toda la estabilización a un voltaje de 13 mV y durante la fase 3 de repolarización a un voltaje de -28 mV. A una BCL de 2.000 ms, se hicieron mediciones en posiciones similares a voltajes de 20 mV y -28 mV. La reducción de la I_{Na} tardía se representó en función de la concentración del fármaco a escala semilogarítmica y se ajustó a una ecuación logística.

La Figura 30 presenta las corrientes sensibles a TTX en la solución de referencia y 3 min. después de la adición de ranolazina 20 \muM para la solución externa. La célula se pulsó cada 2.000 ms durante 30 pulsaciones. Esta figura demuestra que las corrientes de la estabilización eran más sensibles a la ranolazina que la corriente de sodio registrada tarde en la fijación de potencial de acción. La inhibición fue máxima a 20 mV, pero alguna corriente sensible a TTX permaneció a -28 mV en presencia de ranolazina.

La Figura 31 presenta los resultados resumidos de experimentos similares en los que se añadió ranolazina (1 a 50 \muM) a la solución externa. La mitad de la inhibición de I_{Na} tardía se produjo a concentraciones de fármaco de 5,9 \muM y 20,8 \muM, respectivamente. La Figura 32 demuestra que la inhibición fue más potente durante la estabilización, aun cuando las células se pulsaron cada 300 ms.

La Figura 33 presenta los datos compuestos de experimentos similares en los que se añadió ranolazina a la solución externa. La mitad de la inhibición de I_{Na, tard\text{í}a} se produjo a una concentración de fármaco de 20,8 \muM y 11,5 \muM cuando se pulsan a longitudes de ciclo básico de 2000 ms y 300 ms, respectivamente.

Ejemplo 21 Efectos de ranolazina sobre la duración de la acción potencial de miocitos ventriculares de cobaya Aislamiento de miocitos ventriculares

Se aislaron miocitos ventriculares individuales de los corazones de cobayas macho adultos (Harlan). En resumen, se perfundieron los corazones con soluciones calientes (35ºC) y oxigenadas en el siguente orden: 1) solución de Tyrode que contiene (en mmoles/l) NaCl 140, KCl 4,6, CaCl_{2} 1,8, MgSO_{4} 1,1, glucosa 10 y HEPES 5, pH 7,4, durante 5 minutos; 2) solución exenta de Ca^{2+} que contiene (en mmoles/l) NaCl 100, KCl 30, MgSO_{4} 2, glucosa 10, HEPES 5, taurina 20 y piruvato 5, pH 7,4, durante 5 minutos; y 3) solución exenta de Ca^{2+} que contiene solagenasa (120 unidades/ml) y albúmina (2 mg/ml) durante 20 minutos. Al final de la perfusión, se extrajeron los ventrículos, se picaron y se agitaron suavemente durante 10 minutos en la solución nº 3. Se recogieron las células aisladas de la suspensión celular.

Medición de la duración del potencial de acción

Se colocaron miocitos en una cámara de registro y se superfundieron con solución de Tyrode a 35ºC. Se aplicaron los fármacos mediante el superfundido. Se midieron los potenciales de acción utilizando microelectrodos de vidrio rellenos con una solución que contenía (en mmoles/l) aspartato-K 120, KCl 20, MgCl_{2} 1, Na_{2}ATP 4, Na_{3}GTP 0,1, glucosa 10, EGTA 1 y HEPES 10 (pH 7,2). La resistencia del microelectrodo fue de 1 a 3 M\Omega. Se utilizaron un amplificador Axopatch-200, una interfase Digidata 1200A y el programa informático pCLAMP6 para llevar a cabo mediciones electrofisiológicas. Se produjeron potenciales de acción mediante pulsaciones despolarizantes de 5 ms aplicadas a varias frecuencias indicadas. Se midió la duración de la acción pencial a una repolarizacón del 50% (APD_{50}) y 90% (APD_{90}). Se hicieron mediciones cuando la respuesta a un fármaco había alcanzado un máximo estable.

Protocolo experimental

1) Se estimularon eléctricamente miocitos ventriculares a una frecuencia de 0,5, 1 ó 2 Hz. Cada miocito se trató con 3, 10 y 30 \mumoles/l de ranolazina. Se determinó en 4 miocitos el efecto de la ranolazina sobre la duración del potencial de acción en cada frecuencia del ritmo.

2) Se produjeron potenciales de acción a una frecuencia de 0,25 Hz y se examinó el efecto de la ranolazina (10 \mumol/l) sobre la duración del potencial de acción en presencia de 5 \mumoles/l de quinidina. Los experimentos se realizaron en 4 miocitos.

Análisis estadístico

Los datos se expresan como media \pm SEM. Se utilizó la prueba de la t de Student de datos emparejados para el análisis estadístico de los datos emparejados, y mediciones ANOVA repetidas de una vía seguido de la prueba de Student-Newman-Keuls se aplicó para comparaciones múltiples. Un valor p<0,05 se consideró estadísticamente significativo.

Efecto de ranolazina a varias frecuencias de ritmo

En ausencia de fármaco, las APD_{50} y APD_{90} medidas a frecuencias de estimulación de 0,5 (n=4), 1 (n=4) y 2 (n=4) Hz fueron de 250\pm20, 221\pm18 y 208\pm9 ms y 284\pm22, 251\pm20 y 245\pm9 ms, respectivamente. De este modo, aumentando la frecuencia de ritmo se produjo un acortamiento dependiente de la velocidad de la duración del potencial de acción. Con independencia de la frecuencia del ritmo, la ranolazina produjo un acortamiento moderado y dependiente de la concentración tanto de la APD_{50} como de la APD_{90}. La Figura 34 demuestra que la ranolazina a 3, 10 y 30 \mumoles/l disminuyó la duración del potencial de acción de los miocitos estimulados a 0,5, 1 y 2 Hz. El acortamiento de la duración del potencial de acción producido por la ranolazina fue parcialmente reversible después del periodo de descanso farmacéutico.

La Figura 35 presenta los resultados obtenidos de un solo miocito con ritmo primero a 2 Hz y a continuación a 0,5 Hz. A las dos frecuencias de ritmo, molazina (30 \mumoles/l) produjo un acortamiento similar de la duración del potencial de acción. En la Figura 36 se presentan las comparaciones de la APD_{50} y APD_{90} medidas en ausencia y presencia de 3, 10 y 30 \mumoles/l de ranolazina a las frecuencias de ritmo de 0,5, 1 y 2 Hz. El acortamiento de APD_{50} y APD_{90} por ranolazina a varias frecuencias de ritmo se normalizan como porcentaje de la referencia, y se presentan en la Figura 37.

Efecto de ranolazina en presencia de quinidina

La Figura 38A demuestra que quinidina (5 \mumoles/l) aumentó la duración del potencial de acción de un miocito con ritmo a 0,25 Hz. Se demuestra que la ranolazina (10 \mumoles/l) ha atenuado el efecto de la quinidina.

La quinidina, además de prolongar la duración del potencial de acción, se sabe que produce posdespolarizaciones precoces (EAD), actividad desencadenada y taquicardias ventriculares en entorchado. Como se muestra en las Figuras 39 y 40, la quinidina (2,5 \mumoles/l) produjo las EAD y la actividad desencadenada. Se observó que la ranolazina (10 \mumoles/l) era eficaz suprimiendo las EAD (Figura 39) y la actividad desencadenada (Figura 40) producida por la quinidina.

Ejemplo 22

Siguiendo los procedimientos y protocolos del Ejemplo 21, se estimularon eléctricamente miocitos ventriculares de cobaya en presencia de ranolazina ya sea solos o en presencia de ATXII [una toxina de la anémona de mar conocida porque simula el síndrome LQT3 ralentizando la inactivación del canal de Na^{+} en el estado abierto y por consiguiente aumentando el pico y la corriente Na^{+} tardía (I_{Na}) de cardiomiocitos]. ATXII es conocido por inducir las posdespolarizaciones precoces (EAD) y la actividad desencadenada y la taquicardia ventricular.

Se observó que ATXII (10 a 40 mmoles/l) aumenta notablemente la duración de los potenciales de acción medidos a 50% de repolarización (APD_{50}) desde 273\pm9 ms hasta 1.154\pm61 ms (n=20, p<0,001) como se presenta en la Figura 41 y produjo EAD en todas las células. Se observaron frecuentemente múltiples EAD y la despolarización mantenida resultante. La ranolazina a una concentración tan baja como 1 \mumol/l suprimió eficazmente las EAD producidas por ATXII y la actividad desencadenada. La prolongación de la APD_{50} producida por ATXII fue significativamente (p<0,001) atenuada por ranolazina a las concentraciones de 1, 3, 10 y 30 \mumoles/l, respectivamente por 60\pm4% (n=7), 80\pm2% (n=7), 86\pm2% (n=12) y 99\pm1% (n=8) como se muestra en las Figuras 42, 43, 44, 45 y 46. Estas figuras representan 5 experimentos diferentes.

Ejemplo 23

Para estudiar el efecto de la ranolazina sobre el MAP (potencial de acción monofásico) producida por ATXII, se utilizó las EAD y taquiarritmia ventricular (VT), se utilizó el modelo de corazón aislado de cerdo de Guinea con tampón K-H perfundido.

Se observó que ATXII (10 a 20 nM) prolonga el MAPD_{90} el 6% en 4 corazones sin arritmia ventricular rápida. ATXII produjo de manera notable las EAD y la VT polimórfica en 10/14 corazones aislados de cobaya. La ranolazina a 5, 10 y 30 \muM suprimió significativamente las EAD y VT, la VT especialmente mantenida, en presencia de ATXII. El efecto protector de ranolazina fue reversible durante el periodo de reposo farmacéutico de ranolazina. Estos resultados se presentan en las Figuras 47 a la 50.

La Figura 47 presenta el MAP y el ECG de la referencia, ATXII (20 nM) y ATXII (20 nM) más ranolazina (10 \muM). Esta figura demuestra que la ranolazina redujo la prolongación de EAD inducida por ATXII y de MAP.

La Figura 48 presenta el MAP y ECG de VT inducida por ATXII (20 nM), VT espontánea o VT inducida por ritmo.

La figura 49 demuestra que la ranolazina redujo la VT producida por ATXII. Esta figura presenta el MAP y ECG tanto para ATXII (20 nM) solo y ATXII (20 nM) más ranolazina (30 \muM).

La Figura 50 demuestra que ranolazina (10 \muM) invirtió la EAD inducida por ATXII y \DeltaMAP.

Ejemplo 24

Para determinar si la ranolazina suprimía ATX-II inducida 1) se utilizaron las EAD y la actividad desencadenada (TA) y 2) miocitos ventriculares de cobayas de taquicardia ventricular (VT) y corazones aislados, respectivamente.

Se registraron los potenciales de acción utilizando la técnica de parche-electrodo con células completas. Se registraron los potenciales de acción monofásica ventricular y los electrogramas de corazones aislados. ATX-II (10-20 nmoles/l) aumentó la APD medida a 50% de repolarización (APD_{50}) de 271\pm7 ms a 1.148\pm49 ms (n=24, p<0,001) y se produjeron EAD en todas las células. Se observaron frecuentemente múltiples EAD y despolarizaciones sostenidas. La ranolazina a concentraciones \geq 1 \mumol/l suprimió las EAD inducidas por ATX-II y TA. La prolongación de la APD_{50} producida por ATX-II fue reducida significativamente (p<0,001) por la ranolazina a concentraciones de 0,1, 0,3, 1, 3, 10 y 30 \mumoles/l por 29\pm1% (n=5), 47\pm1% (n=5), 63\pm3% (n=11), 79\pm1% (n=10), 86\pm2% (n=12) y 99\pm1% (n=8), respectivamente. La ranolazina (10 \mumoles/l) también suprimió las EAD y la TA producida por 2,5 \mumoles/l de quinidina (n=2). La ATX-II (10 a 20 nmoles/l) produjo las EAD y VT en 10 de cada 14 corazones aislados; las EAD inducidas por ATX-II se redujeron significativamente y las VT fueron terminadas por 5 a 30 \mumoles/l de ranolazina.

Ejemplo 25

Para determinar si un aumento por ATX-II (que imita la mutación SCN5A) de la I_{Na(L)} facilita los efectos de E-4031 y 293B (bloqueadores del canal del potasio de los componentes rápido y lento del rectificador retardado (I_{K}) para prolongar la APD y para producir las EAD, y si la ranolazina invierte los efectos de ATX-II y los bloqueantes de K^{+}, se utilizaron miocitos ventriculares de cobaya y corazones aislados.

\newpage

Se midió la APD ventricular de los miocitos aislados de cobaya y corazones, respectivamente, a 50% (APD_{50}) y 90% (MAPD_{90}) de repolarización. ATX-II a baja concentración (3 nmoles/l) solo aumentó ligeramente la APD_{50} en 6\pm2%. Sin embargo, cuando se aplicaba con E-4031 ó 293B, ATX-II potenciaba mucho los efectos de estos bloqueantes de K^{+} para prolongar la APD. En ausencia y presencia de ATX-II, fue aumentada la APD_{50} en 11\pm2% y 104\pm41% por E-4031 (1 \mumol/l) y 40\pm7% y 202\pm59% por 293B (30 \mumoles/l), respectivamente. Además, E-4031 y 293B produjeron las EAD en presencia, pero no en ausencia, de ATX-II. La ranolazina (10 \mumoles/l) suprimió completamente las EAD e invirtió significativamente la prolongación de la APD_{50} en aproximadamente 70% en presencia de ATX-II más E-4031 ó 293B. ATX-II (7 nmoles/l), E-4031 (1 \mumoles/l) y 293B (1 \mumol/l) aumentaron solos la MAPD_{90} en 32\pm0,1%, 30,1\pm0,1% y 6,3\pm0,2%, respectivamente. Cuando se aplica con ATX-II, E-4031 y 293B aumentaron el MAPD_{90} en 127,1\pm0,4% y 31,6\pm0,1%, respectivamente. La ranolazina (10 \mumoles/l) disminuyó significativamente la MAPS_{90} en 24,5\pm0,1% en presencia de ATX-II más E-4031 y en 8,3\pm0,1% en presencia de ATX-II más 293B.

Claims (34)

1. Compuesto seleccionado de entre el grupo constituido por un compuesto de fórmula I:

40

en la que:

R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4} y R^{5} son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo inferior, alcoxi inferior, ciano, trifluorometilo, halo, alquiltio inferior, alquilsulfinilo inferior, alquilsulfonilo inferior o alquilamido opcionalmente N-sustituido, con la condición de que cuando R^{1} sea metilo, R^{4} no sea metilo; o R^{2} y R^{3} formen conjuntamente -OCH_{2}O-;

R^{6}, R^{7}, R^{8}, R^{9} y R^{10} son cada uno independientemente hidrógeno, acilo inferior, aminocarbonilmetilo, ciano, alquilo inferior, alcoxi inferior, trifluorometilo, halo, alquiltio inferior, alquilsulfinilo inferior, alquilsulfonilo inferior o dialquilamino inferior; o

R^{6} y R^{7} forman conjuntamente -CH=CH-CH=CH-; o

R^{7} y R^{8} forman conjuntamente -O-CH_{2}O-;

R^{11} y R^{12} son cada uno independientemente hidrógeno o alquilo inferior; y

W es oxígeno o azufre;

en la que alquilo inferior se refiere a una cadena de hidrocarburo no ramificada saturada de 1 a 4 carbonos y acilo inferior se refiere al grupo RC(O)A, en el que R es alquilo inferior y A

representa el punto de acoplamiento;

un isómero de un compuesto de fórmula I, y una sal farmacéuticamente aceptable o un éster de un compuesto de fórmula I o su isómero

para su utilización en la supresión de las posdespolarizaciones precoces (EAD) en un mamífero.

2. Compuesto para la utilización según la reivindicación 1 que es la ranolazina, que se denomina N-(2,6-dimetilfenil)-4-[2-hidroxi-3-(2-metoxifenoxi)propil]-1-piperazinacetamida, o un isómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable de la ranolazina o su isómero.

3. Compuesto para la utilización según la reivindicación 1, que está destinado a la administración a niveles de dosis que inhiben los canales iónicos I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} tardío pero no inhiben los canales de calcio.

4. Compuesto para la utilización según la reivindicación 2, que es la ranolazina en forma de una sal farmacéuticamente aceptable.

5. Compuesto para la utilización según la reivindicación 4, en el que la sal farmacéuticamente aceptable es la sal dihidrocloruro.

6. Compuesto para la utilización según la reivindicación 2, que es la ranolazina en forma de base libre.

7. Compuesto para la utilización según la reivindicación 1, que está destinado a la administración que comprende un nivel de dosis que inhibe los canales iónicos de I_{Na} tardío.

8. Compuesto para la utilización según la reivindicación 1, que está destinado a la administración que comprende un nivel de dosis que inhibe los canales iónicos de I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} tardío.

9. Compuesto para la utilizacion según la reivindicación 1, que está destinado a la administración que comprende un nivel de dosis que inhibe los canales iónicos de I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} tardío pero no inhibe los canales de calcio.

10. Compuesto para la utilización según la reivindicación 1, que está destinado a la administración de manera que proporciona niveles en el plasma del compuesto de Fórmula I de por lo menos 350\pm30 ng/ml durante por lo menos 12 horas.

11. Compuesto para la utilización según la reivindicación 1, que está destinado a la administración en una formulación de liberación sostenida que mantiene concentraciones en el plasma del compuesto inferiores a un máximo de 4.000 ng/ml, preferentemente entre aproximadamente 350 a aproximadamente 4.000 ng/ml, durante por lo menos 12 horas.

12. Compuesto para la utilización según la reivindicación 1, que está destinado a la administración en una formulación que contiene entre aproximadamente 10 mg y 700 mg de dicho compuesto.

13. Compuesto para la utilización según la reivindicación 12, que es la ranolazina o un isómero de la misma, o una sal farmacéuticamente aceptable de la ranolazina o su isómero.

14. Compuesto para la utilización según la reivindicación 1, que está destinado a la administración en una formulación que proporciona un nivel de dosis comprendido entre aproximadamente 1 y aproximadamente 30 micromoles por litro de la formulación.

15. Compuesto para la utilización según la reivindicación 14, en el que dicha formulación proporciona un nivel de dosis comprendido entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10 micromoles por litro de la formulación.

16. Compuesto para la utilización según la reivindicación 1, que está destinado a la administración por inyección intravenosa rápida o composición de liberación sostenida.

17. Compuesto para la utilización según la reivindicación 1, que está destinado a la administración intravenosa.

18. Utilización de un compuesto de fórmula I:

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en la que:

R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4} y R^{5} son cada uno independientemente hidrógeno, alquilo inferior, alcoxi inferior, ciano, trifluorometilo, halo, alquiltio inferior, alquilsulfinilo inferior, alquilsulfonilo inferior, o alquilamido opcionalmente N-sustituido, con la condición de que cuando R^{1} sea metilo, R^{4} no sea metilo; o R^{2} y R^{3} formen conjuntamente -OCH_{2}O-;

R^{6}, R^{7}, R^{8}, R^{9} y R^{10} son cada uno independientemente hidrógeno, acilo inferior, aminocarbonilmetilo, ciano, alquilo inferior, alcoxi inferior, trifluorometilo, halo, alquiltio inferior, alquilsulfinilo inferior, alquilsulfonilo inferior o, dialquilamino inferior; o

R^{6} y R^{7} forman conjuntamente -CH=CH-CH=CH-; o

R^{7} y R^{8} forman conjuntamente -O-CH_{2}O-;

R^{11} y R^{12} son cada uno independientemente hidrógeno o alquilo inferior; y

W es oxígeno o azufre;

en la que alquilo inferior se refiere a una cadena de hidrocarburo no ramificada saturada de 1 a 4 carbonos y acilo inferior se refiere al grupo RC(O)A, siendo R alquilo inferior y A

representa el punto de acoplamiento;

o un isómero de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster de un compuesto de fórmula I o su isómero

para la preparación de una composición farmacéutica destinada a suprimir las EAD en un mamífero.

19. Utilización según la reivindicación 18, en la que el compuesto de Fórmula I es la ranolazina, que se denomina N-(2,6-dimetilfenil)-4-[2-hidroxi-3-(2-metoxifenoxi)propil]-1-piperazinacetamida, o un isómero de la misma o una sal farmacéuticamente aceptable de la ranolazina o su isómero.

20. Utilización según la reivindicación 18, en la que la composición farmacéutica está destinada a la administración del compuesto de Fórmula I a niveles de dosis que inhiben los canales iónicos I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} tardío pero no inhiben los canales de calcio.

21. Utilización según la reivindicación 19, en la que la ranolazina está en forma de sal farmacéuticamente aceptable.

22. Utilización según la reivindicación 21, en la que la sal farmacéuticamente aceptable es la sal dihidrocloruro.

23. Utilización según la reivindicación 19, en la que la ranolazina está en forma de base libre.

24. Utilización según la reivindicación 18, en la que la composición farmacéutica está destinada a la administración del compuesto de Fórmula I que comprende un nivel de dosis que inhibe los canales iónicos de I_{Na} tardío.

25. Utilización según la reivindicación 18, en la que la composición farmacéutica está destinada a la administración del compuesto de Fórmula I que comprende un nivel de dosis que inhibe los canales iónicos de I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} tardío.

26. Utilización según la reivindicación 18, en la que la composición farmacéutica está destinada a la administración del compuesto de Fórmula I que comprende un nivel de dosis que inhibe los canales iónicos de I_{Kr}, I_{Ks} e I_{Na} tardío pero no inhibe los canales de calcio.

27. Utilización según la reivindicación 18, en la que la composición farmacéutica está destinada a la administración del compuesto de Fórmula I de manera que proporciona niveles en el plasma del compuesto de Fórmula I de por lo menos 350\pm30 ng/ml durante por lo menos 12 horas.

28. Utilización según la reivindicación 18, en la que la composición farmacéutica es una formulación de liberación sostenida que mantiene concentraciones en el plasma del compuesto inferiores a un máximo de 4.000 ng/ml, preferentemente entre aproximadamente 350 a aproximadamente 4.000 ng/ml durante por lo menos 12 horas.

29. Utilización según la reivindicación 18, en la que la composición farmacéutica contiene entre aproximadamente 10 mg y 700 mg de dicho compuesto.

30. Utilización según la reivindicación 29, en la que el compuesto de Fórmula I es la ranolazina, o un isómero de la misma, o una sal farmacéuticamente aceptable de la ranolazina o su isómero.

31. Utilización según la reivindicación 18, en la que la composición farmacéutica proporciona un nivel de dosis comprendido entre aproximadamente 1 y aproximadamente 30 micromoles por litro de composición farmacéutica.

32. Utilización según la reivindicación 31, en la que la composición farmacéutica proporciona un nivel de dosis comprendido entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10 micromoles por litro de composición farmacéutica.

33. Utilización según la reivindicación 18, en la que la composición farmacéutica debe administrarse por inyección intravenosa rápida o composición de liberación sostenida.

34. Utilización según la reivindicación 18, en la que la composición farmacéutica debe administrarse por vía intravenosa.