ES2369846T3 - Composición y procedimiento para aumentar la densidad celular en cultivos celulares infectados con lentivirus. - Google Patents
Composición y procedimiento para aumentar la densidad celular en cultivos celulares infectados con lentivirus. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2369846T3 ES2369846T3 ES02769679T ES02769679T ES2369846T3 ES 2369846 T3 ES2369846 T3 ES 2369846T3 ES 02769679 T ES02769679 T ES 02769679T ES 02769679 T ES02769679 T ES 02769679T ES 2369846 T3 ES2369846 T3 ES 2369846T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- cell culture
- cell
- neomycin
- density
- micrograms
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 24
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 80
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 claims abstract description 37
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 claims abstract description 37
- 241000713800 Feline immunodeficiency virus Species 0.000 claims abstract description 23
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims abstract description 22
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 14
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims abstract description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 60
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 claims description 11
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 11
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 claims description 11
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 claims description 11
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 9
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 9
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 claims description 6
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 claims description 6
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 claims description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000013589 supplement Substances 0.000 claims description 5
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000012592 cell culture supplement Substances 0.000 claims description 4
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 claims 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 5
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 5
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 241000713325 Visna/maedi virus Species 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 1
- 241001112741 Bacillaceae Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000713704 Bovine immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000713730 Equine infectious anemia virus Species 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 1
- 241000713311 Simian immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 208000009724 equine infectious anemia Diseases 0.000 description 1
- PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 229940053050 neomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 1
- 108700018363 polymyxin B(1) Proteins 0.000 description 1
- WQVJHHACXVLGBL-GOVYWFKWSA-N polymyxin B1 Polymers N1C(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)CCCC[C@H](C)CC)CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1CC1=CC=CC=C1 WQVJHHACXVLGBL-GOVYWFKWSA-N 0.000 description 1
- 108010089148 polymyxin B2 Proteins 0.000 description 1
- SGPYLFWAQBAXCZ-RUDZPDEXSA-N polymyxin B2 Chemical compound N1C(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)CCCCC(C)C)CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1CC1=CC=CC=C1 SGPYLFWAQBAXCZ-RUDZPDEXSA-N 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000011814 protection agent Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
- C12N2740/15051—Methods of production or purification of viral material
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Un cultivo celular de virus de la inmunodeficiencia felina (VIF), que comprende al menos una célula huésped infectada con VIF y una cantidad promotora del crecimiento de un antibiótico que consiste esencialmente en neomicina, presente en una cantidad de 20 microgramos/ml a 60 microgramos/ml de dicho cultivo, o una sal o derivado biológicamente compatible de la misma, y en el que el antibiótico aumenta la densidad del cultivo celular en al menos aproximadamente el 20% sobre un cultivo celular de células huésped infectadas con lentivirus que no contiene nada de dicho antibiótico.
Description
Composición y procedimiento para aumentar la densidad celular en cultivos celulares infectados con lentivirus.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a nuevos cultivos celulares. En particular, la invención se refiere a nuevos cultivos
5 celulares infectados con el virus de la inmunodeficiencia felina (VIF), que contienen un antibiótico adecuado para aumentar la densidad celular y potenciar el crecimiento del cultivo. La invención también se refiere a nuevos procedimientos para aumentar la densidad de los cultivos celulares usando ciertos antibióticos.
Los lentivirus constituyen una clase de virus que pueden conducir a una diversidad de enfermedades tanto en seres
10 humanos como en animales. Estas enfermedades a menudo están precedidas por varios meses o incluso años de incubación. Por ejemplo, las patologías asociadas con el SIDA están causadas por los virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y son el resultado de un progreso crónico de la enfermedad, algunas veces causando caquexia y muerte en el paciente varios años después de la infección.
Los lentivirus también se han asociado con diversas patologías en especies tales como simios y monos, así como
15 animales domesticados tales como caballos, burros, ganado vacuno, cabras, y ovejas. Entre éstas, la anemia infecciosa equina (AIE) se ha caracterizado como la enfermedad infecciosa más importante de los caballos, existente en todo el mundo. Los lentivirus de las ovejas son patógenos relativamente comunes en la mayoría de las partes del mundo, e incluyen el virus Maedi-visna y el virus de la neumonía progresiva como dos tipos predominantes. El virus de la inmunodeficiencia bovina es una causa importante de enfermedad en el ganado
20 vacuno.
Otros lentivirus son indicadores vitales de patología en animales tales como los gatos. El virus de la inmunodeficiencia felina, estructuralmente similar al VIH, puede causar la muerte en gatos caseros. De forma creciente, los doctores, veterinarios, e investigadores están dedicando un tiempo y recursos considerables para prevenir y tratar las enfermedades causadas por estos virus.
25 Parte de la investigación implica cultivar cultivos tisulares que contienen células, por ejemplo linfocitos, que se han infectado con VIF. Los cultivos celulares con linfocitos pueden cultivarse en matraces T, frascos rotatorios, matraces de centrifugación y biorreactores usando medios tales como medio esencial mínimo (MEM), medio del Roswell Park Memorial Institute (RPMI), MEM de Dulbecco (DMEM), y AIM V (Gibco/LTI, Grand Island, NY) suplementado con suero bovino hasta aproximadamente el 20% y hasta aproximadamente el 5% de albúmina sérica bovina (BSA). Los
30 cultivos a gran escala pueden cultivarse en agitadores grandes, fermentadores, y biorreactores en presencia de agentes químicos de protección contra cizalla, espesantes, emulsionantes o compuestos tales como metilcelulosa, carboxilmetilcelulosa, y tensioactivos tales como la serie Pluronic, por ejemplo PLURONIC® F-68, fabricado por BASF Corporation of Wyandotte, Michigan.
En el mantenimiento de cultivos tisulares que contienen virus, los investigadores buscan destruir las bacterias
35 dañinas dentro del cultivo de modo que las células que contienen el virus pueden crecer y propagarse. Al mismo tiempo, un objetivo concomitante es maximizar el crecimiento del cultivo celular. Para facilitar el cultivo y la destrucción de las bacterias, se ha aceptado la práctica de añadir antibióticos, habitualmente una combinación de los mismos, al cultivo celular. Por ejemplo, el documento U.S. 5.958.423 expone un cultivo celular de células renales bovinas Madin-Darby (MDBK) en el que se utiliza hasta 30 !g/ml de polimixina B y neomicina, y hasta 2,5 !g/ml de
40 anfotericina B.
Lo que ahora se necesita en la técnica son nuevas composiciones de cultivo celular que contengan células infectadas con VIF. Especialmente se necesitan nuevos cultivos celulares en los que el crecimiento celular pueda maximizarse y pueda minimizarse simultáneamente la presencia de organismos dañinos tales como bacterias. También se necesitan nuevos procedimientos para cultivar cultivos celulares en los que pueda aumentarse la
45 densidad de los mismos a través de la promoción del crecimiento tisular. Adicionalmente se necesitan nuevos aditivos que puedan optimizar la densidad de cultivos celulares posibilitando y potenciando el crecimiento de las células que componen el cultivo.
En una realización, la presente invención se refiere a un cultivo celular que comprende al menos una célula huésped
50 infectada con VIF y una cantidad promotora del crecimiento de un antibiótico que consta esencialmente de neomicina o una sal biológicamente compatible de la misma.
La invención también se refiere a un cultivo celular que contiene al menos una célula huésped infectada con VIF y neomicina o una sal biológicamente compatible de la misma, de modo que la neomicina esté presente sustancialmente sin otro antibiótico en una cantidad que sea eficaz para inhibir el crecimiento bacteriano y para
55 aumentar la densidad del cultivo celular.
ES 2 369 846 T3
También se proporciona como parte de la invención un procedimiento para aumentar la densidad de un cultivo celular en el que las células del mismo se han infectado con VIF, que implica añadir un antibiótico que consta esencialmente de neomicina o una sal biológicamente aceptable de la misma al cultivo celular.
La divulgación también proporciona una composición adecuada para su adición a un cultivo celular infectado con VIF. La composición contiene una cantidad potenciadora de la densidad celular de un antibiótico que consta esencialmente de neomicina o una sal biológica de la misma, junto con al menos un suplemento de cultivo celular. El suplemento de cultivo celular es deseablemente suero derivado bovino.
Las características y ventajas anteriores y otras de la invención llegarán a ser más evidentes a partir de la descripción detallada de las realizaciones preferidas de la invención dada a continuación.
Descripción detallada de las realizaciones preferidas
La presente invención se refiere a cultivos celulares. Aquellos contemplados para su uso en este documento son aquellos adecuados para investigación y estudio que son capaces de albergar VIF y permitir el crecimiento del mismo. Dichos cultivos celulares incluirían por lo tanto linfocitos que pueden llegar a infectarse con uno o más lentivirus. Los cultivos celulares adecuados incluirían linfocitos felinos. Pueden preferirse linfocitos de células T para su uso en este documento, así como FetJ independiente de IL-2 y linfocitos FL6.
El término "lentivirus" se usa en este documento para abarcar todos los lentivirus conocidos y aún por descubrir, incluyendo, sin limitación, el virus de la anemia infecciosa equina, el virus Maedi-visna, el virus de la neumonía progresiva, el virus de la artritis-encefalitis caprina, el virus de la inmunodeficiencia felina (VIF), virus de la inmunodeficiencia de simios que infectan especies tales como el macaco, y monos africanos y babuinos, y el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) Tipos I y II. El término "lentivirus" también incluye análogos, derivados y secuencias peptídicas de cualquiera de los anteriores. Para su uso en este documento 15 se prefiere el virus de la inmunodeficiencia felina (VIF).
Los cultivos celulares de la invención pueden cultivarse usando procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, las células huésped tales como linfocitos pueden infectarse de forma crónica con VIF usando procedimientos aceptados, y después cultivarse en medios adecuados. Preferiblemente, los medios son medios sustancialmente líquidos. Incluso más preferiblemente, los medios se proporcionan inicialmente en forma de medios sustancialmente libres de suero. Las células huésped pueden suspenderse en los medios líquidos, por ejemplo. La densidad celular del cultivo celular cultivado puede variar de acuerdo con las células huésped particulares, los medios, y la cámara de cultivo, pero puede estar dentro del intervalo de aproximadamente 1 X 104 a aproximadamente 1 X 106 células adecuadas por mililitro (ml) de cultivo celular (incluyendo el medio). Más preferiblemente, la densidad celular es de aproximadamente 2 X 105 a aproximadamente 5 X 105 células por mililitro.
Como parte adicional de la invención, los cultivos celulares contienen un antibiótico adecuado que es eficaz en la inhibición del crecimiento de bacterias dentro del cultivo, aumentando al mismo tiempo el crecimiento de las células y aumentando de este modo la densidad del cultivo celular. Para su uso en este documento se prefiere el antibiótico neomicina, que incluiría todas las sales biológicamente compatibles y derivados de la misma, tales como sulfato de neomicina. Por "biológicamente compatible" se entiende que la sal o derivado del mismo sustancialmente no tiene efectos biológicos adversos sobre la célula.
La cantidad de neomicina incluida en el cultivo celular puede variar de acuerdo con las necesidades de los especialistas en la técnica, pero típicamente se incluye en una cantidad que aumentará la densidad del cultivo celular. Habitualmente se prefiere una cantidad de neomicina dentro del intervalo de aproximadamente 20 microgramos/ml de cultivo celular a aproximadamente 60 microgramos/ml de cultivo celular (incluyendo el medio). En una realización más preferida, la cantidad de neomicina será de aproximadamente 30 microgramos/ml a aproximadamente 60 microgramos/ml.
Se prefiere utilizar neomicina para potenciar el crecimiento y la densidad del cultivo celular sin la inclusión de otros antibióticos tales como polimixina B y gentamicina, por ejemplo. La polimixina B puede obtenerse de la polimixina B1 y B2 que se producen por el cultivo de Bacillus polimyxa (Prazmowski) Migula (Fam. Bacillaceae). Ahora se ha descubierto que incluir tanto neomicina como polimixina B en el cultivo celular puede, en muchos casos, provocar un aumento significativamente menor en la densidad celular en comparación con el uso de neomicina sola.
Otros componentes del cultivo celular de la invención típicamente incluirían al menos un suplemento de cultivo. El suplemento de cultivo puede ser derivado bovino, tal como de suero bovino, y puede incluir suero bovino y albúmina sérica bovina (BSA). El suplemento de cultivo puede incluirse en cantidades de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 10% en volumen del cultivo celular final.
El uso de neomicina como se describe en este documento puede aumentar la densidad celular en al menos aproximadamente el 20%, y más preferiblemente en al menos aproximadamente el 33 1/3% sobre un cultivo celular idéntico de células huésped infectadas con VIF que no contiene ningún antibiótico. La densidad celular puede evaluarse por procedimientos aceptables, incluyendo el uso de exclusión de azul de tripano en hemacitómetro.
ES 2 369 846 T3
El siguiente ejemplo se proporciona para ilustrar un aspecto preferido de la invención, pero no debe entenderse como limitante del alcance de la misma.
En este ejemplo, se cultivaron células Fet-J infectadas de forma crónica con virus de la inmunodeficiencia felina
5 (VIF) en medio sin suero tal como medio DMEM:F12 modificado o medio AIM V, suplementado con 2,5 mg/ml de ALBUMAX®, que se obtiene de BSA. Las células se cultivaron en suspensión en matraces Erlenmeyer en un agitador rotatorio a 150 rpm a 37ºC. Las células se sembraron en placas a una densidad celular de 3 X 105 células viables/ml. Las densidades celulares se determinaron por exclusión de azul de tripano en hemacitómetro. La determinación de la expresión de Gp 120 se consiguió por ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA)
10 usando anticuerpos monoclonales anti-Gp 120 de VIF. Los antibióticos evaluados para la suplementación de VIF incluyeron gentamicina, neomicina y polimixina B. A los medios se les añadieron los antibióticos respectivos a una concentración de 30 microgramos/ml. Las densidades celulares se determinaron en una base de 24 horas por el procedimiento descrito anteriormente. Los resultados se muestran en la TABLA 1.
Grupo Concentración de Día 0 (células/ml) Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Experimental antibiótico (microgramos/ml)
Control N/A 3,0x105 3,6x105 5,5x105 1,0x106 1,2x108 1,2x'
Gentamicina 30 !g/ml 3,0x105 2,4x105 3,2x105 6,5x105 1,1x106 1,1x'
Neomicina 30 !g/ml 3,0x105 4,7x105 7,8x105 1,2x108 1,3x106 1,8x'
Polimixina B 30 !g/ml 3,0x105 2,9x105 4,6x105 5,8x105 6,6x105 6,6x'
Polimixina B + 30 !g/ml + 30 !g/ml 3,0x105 2,9x105 5,0x105 7,0x105 7,7x105 7,8x'
Neomicina
15 Los resultados de la Tabla 1 muestran que las suspensiones de cultivo celular suplementadas con neomicina tenían mejor crecimiento global y un aumento en las densidades celulares. La gentamicina no tuvo efecto significativo, siendo las densidades celulares diarias sustancialmente iguales a los controles. Los cultivos suplementados con polimixina B, o neomicina junto con polimixina B realmente suprimían la densidad celular en comparación con los cultivos en los que no se utilizó antibiótico y por tanto son mucho menos densos que aquellos en los que se usó
20 neomicina por sí misma.
ES 2 369 846 T3
Claims (33)
- REIVINDICACIONES1.- Un cultivo celular de virus de la inmunodeficiencia felina (VIF), que comprende al menos una célula huésped infectada con VIF y una cantidad promotora del crecimiento de un antibiótico que consiste esencialmente en neomicina, presente en una cantidad de 20 microgramos/ml a 60 microgramos/ml de dicho cultivo, o una sal o derivado biológicamente compatible de la misma, y en el que el antibiótico aumenta la densidad del cultivo celular en al menos aproximadamente el 20% sobre un cultivo celular de células huésped infectadas con lentivirus que no contiene nada de dicho antibiótico.
- 2.- El cultivo celular de la reivindicación 1, en el que dicha célula huésped es al menos un miembro seleccionado entre el grupo que consiste en linfocitos.
- 3.- El cultivo celular de la reivindicación 2, en el que dichos linfocitos son linfocitos de células T.
- 4.- El cultivo celular de la reivindicación 3, en el que dichos linfocitos se seleccionan entre el grupo que consiste en FetJ independiente de IL-2 y linfocitos FL6.
- 5.- El cultivo celular de la reivindicación 4, en el que dicha cantidad de neomicina es eficaz para inhibir el crecimiento bacteriano en dicho cultivo celular.
- 6.- El cultivo celular de la reivindicación 5, en el que dicha neomicina está presente en una cantidad de al menos 30 microgramos/ml.
- 7.- El cultivo celular de la reivindicación 1, en el que dicho cultivo celular está presente en medio sin suero.
- 8.- El cultivo celular de la reivindicación 5, en el que las células de dicho cultivo celular se siembran en placas a una densidad dentro del intervalo de aproximadamente 1 X 105 a aproximadamente 5 X 105 células viables/ml de cultivo celular.
- 9.- El cultivo celular de la reivindicación 10, en el que las células de dicho cultivo celular se siembran en placas a una densidad de aproximadamente 3 X 105 células viables/ml.
- 10.- Un cultivo celular de virus de la inmunodeficiencia felina (VIF) de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende al menos una célula huésped infectada con VIF y neomicina, en el que dicha neomicina está presente en una cantidad de 20 microgramos/ml a 60 microgramos/ml sustancialmente sin otro antibiótico en una cantidad que es eficaz para inhibir el crecimiento bacteriano y aumentar la densidad de dicho cultivo celular en al menos aproximadamente el 20% sobre un cultivo celular de células huésped infectadas con lentivirus que no contiene nada de dicho antibiótico.
- 11.- El cultivo celular de la reivindicación 10, en el que dicho cultivo celular no contienen sustancialmente nada de gentamicina o polimixina B.
- 12.- El cultivo celular de la reivindicación 11, en el que dicha neomicina está presente en dicho cultivo celular en una cantidad de al menos 30 microgramos/ml.
- 13.- El cultivo celular de la reivindicación 11, en el que dicha célula huésped es al menos un miembro seleccionado entre el grupo que consiste en linfocitos.
- 14.- El cultivo celular de la reivindicación 13, en el que dicha célula huésped es un linfocito T.
- 15.- El cultivo celular de la reivindicación 14, en el que dicha célula huésped es al menos un miembro seleccionado entre el grupo que consiste en FetJ independiente de IL-2 y linfocitos T FL6.
- 16.- El cultivo celular de la reivindicación 11, en el que las células de dicho cultivo celular se siembran en placas a una densidad dentro del intervalo de aproximadamente 1 X 105 a aproximadamente 5 X 105 células viables/ml.
- 17.- El cultivo celular de la reivindicación 15, en el que las células de dicho cultivo celular se siembran en placas a una densidad de aproximadamente 3 X 105 células viables/ml.
- 18.- Un procedimiento para aumentar la densidad de un cultivo celular de virus de la inmunodeficiencia felina (VIF), en el que las células del mismo se han infectado con un VIF, que comprende añadir un antibiótico que consta esencialmente de neomicina en una cantidad de 20 microgramos/ml a 60 microgramos/ml a dicho cultivo celular.
- 19.- El procedimiento de la reivindicación 18, en el que dicha neomicina se añade en una cantidad que es eficaz para inhibir el crecimiento bacteriano en dicho cultivo celular.
- 20.- El procedimiento de la reivindicación 19, en el que dicha neomicina se añade en una cantidad de al menos 30 microgramos/ml.
- 21.- El procedimiento de la reivindicación 18, que comprende adicionalmente sembrar en placa dicho cultivo celularES 2 369 846 T3a una densidad dentro del intervalo de aproximadamente 1 X 105 a aproximadamente 5 X 105 células viables/ml.
- 22.- El procedimiento de la reivindicación 21, en el que dicho cultivo celular se siembra en placas a una densidad de aproximadamente 3 X 105 células viables/ml.
- 23.- El procedimiento de la reivindicación 18, que comprende adicionalmente añadir al menos un suplemento de cultivo a dicho cultivo celular.
- 24.- El procedimiento de la reivindicación 23, en el que dicho suplemento de cultivo es albúmina sérica bovina (BSA).
- 25.- El procedimiento de la reivindicación 18, en el que dicha neomicina es eficaz para aumentar la densidad celular en al menos aproximadamente el 20%.
- 26.- El procedimiento de la reivindicación 25, en el que dicha neomicina es eficaz para aumentar la densidad celular en al menos aproximadamente el 33 1/3%.
- 27.- El procedimiento de la reivindicación 26, en el que dicha neomicina es eficaz para aumentar la densidad celular en al menos aproximadamente el 50%.
- 28.- Un procedimiento para cultivar un cultivo celular de células infectadas con virus de la inmunodeficiencia felina (VIF), que comprende añadir neomicina presente en una cantidad de 20 microgramos/ml a 60 microgramos/ml de dicho cultivo, sustancialmente sin polimixina B o gentamicina a dicho cultivo.
- 29.- El procedimiento de la reivindicación 28, en el que dicha cantidad de neomicina es eficaz para inhibir el crecimiento bacteriano en dicho cultivo celular.
- 30.- El procedimiento de la reivindicación 28, en el que dicha cantidad de neomicina es de al menos 30 microgramos/ml de cultivo celular.
- 31.- El procedimiento de la reivindicación 28, que comprende adicionalmente añadir una cantidad eficaz de al menos un suplemento de cultivo celular a dicho cultivo.
- 32.- El procedimiento de la reivindicación 30, en el que dicho suplemento de cultivo celular es albúmina sérica bovina (BSA).
- 33.- Una composición de cultivo celular, que comprende:a) de aproximadamente 1 X 105 a aproximadamente 5 X 105 células viables/ml de células Fet-J infectadas de forma crónica con virus de la inmunodeficiencia felina;b) un antibiótico que consiste esencialmente en neomicina presente en una cantidad de 20 microgramos/ml a 60 microgramos/ml o una sal o derivado biológicamente compatible de la misma, en la que el antibiótico aumenta la densidad del cultivo celular en al menos aproximadamente el 20% sobre un cultivo celular de células Fet-J infectadas con virus de la inmunodeficiencia felina que no contiene nada de dicho antibiótico.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US29009601P | 2001-05-10 | 2001-05-10 | |
| US290096P | 2001-05-10 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2369846T3 true ES2369846T3 (es) | 2011-12-07 |
Family
ID=23114512
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES02769679T Expired - Lifetime ES2369846T3 (es) | 2001-05-10 | 2002-05-03 | Composición y procedimiento para aumentar la densidad celular en cultivos celulares infectados con lentivirus. |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7160721B2 (es) |
| EP (2) | EP2298343A1 (es) |
| JP (1) | JP4283544B2 (es) |
| KR (1) | KR20040029981A (es) |
| CN (1) | CN1326992C (es) |
| AT (1) | ATE521364T1 (es) |
| AU (1) | AU2002342568B2 (es) |
| BG (1) | BG108315A (es) |
| BR (1) | BR0209482A (es) |
| CA (1) | CA2446131C (es) |
| CY (1) | CY1112123T1 (es) |
| CZ (1) | CZ20033046A3 (es) |
| DK (1) | DK1385540T3 (es) |
| ES (1) | ES2369846T3 (es) |
| HR (1) | HRP20030974A2 (es) |
| HU (1) | HUP0400283A2 (es) |
| MX (1) | MXPA03010208A (es) |
| NO (1) | NO20034961L (es) |
| NZ (1) | NZ529326A (es) |
| PL (1) | PL373847A1 (es) |
| PT (1) | PT1385540E (es) |
| SI (1) | SI1385540T1 (es) |
| WO (1) | WO2002091994A2 (es) |
| YU (1) | YU88703A (es) |
| ZA (1) | ZA200309556B (es) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10920483B2 (en) | 2018-10-25 | 2021-02-16 | Mark Mutchnik | Window seal for preventing water penetration |
| EP4277933A4 (en) | 2021-01-14 | 2024-12-11 | Senti Biosciences, Inc. | SECRETABLE PAYLOAD REGULATION |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4215107A (en) * | 1978-12-29 | 1980-07-29 | Merck & Co., Inc. | Parainfluenza virus vaccine and its preparation |
| JPS57194787A (en) * | 1981-05-28 | 1982-11-30 | Ajinomoto Co Inc | Culture medium for animal cell |
| US6107077A (en) | 1987-08-26 | 2000-08-22 | Yamamoto; Janet K. | Feline lymphoid cell lines capable of producing FIV for FIV diagnostics and vaccines |
| AU640511B2 (en) * | 1990-07-30 | 1993-08-26 | Pharmacia & Upjohn Company | Hexa-n-(o-hydroxybenzyl) neomycin b for inhibiting human retroviruses and for the treatment of aids |
| JPH08502966A (ja) * | 1992-10-23 | 1996-04-02 | ユニバーシティー・オブ・マサチューセッツ・メディカル・センター | Ｒｎａ／リガンド結合の低分子抑制 |
| US5534408A (en) * | 1993-09-24 | 1996-07-09 | University Of Massachusetts Medical Center | 2-deoxystreptamine aminoglycoside inhibition of HIV RRE/Rev binding |
| PT759780E (pt) | 1994-05-10 | 2001-01-31 | American Home Prod | Vacina melhorada de vsrb vivo modificado |
| DE69636440D1 (de) | 1995-08-25 | 2006-09-21 | Univ Florida | IL-2 unabhängige T-Zellen der Katze |
-
2002
- 2002-05-03 BR BRPI0209482-7A patent/BR0209482A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-05-03 AT AT02769679T patent/ATE521364T1/de active
- 2002-05-03 JP JP2002588913A patent/JP4283544B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-03 PT PT02769679T patent/PT1385540E/pt unknown
- 2002-05-03 HR HR20030974A patent/HRP20030974A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2002-05-03 DK DK02769679.8T patent/DK1385540T3/da active
- 2002-05-03 EP EP10183838A patent/EP2298343A1/en not_active Withdrawn
- 2002-05-03 PL PL02373847A patent/PL373847A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2002-05-03 HU HU0400283A patent/HUP0400283A2/hu unknown
- 2002-05-03 CA CA2446131A patent/CA2446131C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-03 EP EP02769679A patent/EP1385540B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-03 ES ES02769679T patent/ES2369846T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-03 CZ CZ20033046A patent/CZ20033046A3/cs unknown
- 2002-05-03 SI SI200230960T patent/SI1385540T1/sl unknown
- 2002-05-03 AU AU2002342568A patent/AU2002342568B2/en not_active Expired
- 2002-05-03 CN CNB028096002A patent/CN1326992C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-03 MX MXPA03010208A patent/MXPA03010208A/es active IP Right Grant
- 2002-05-03 NZ NZ529326A patent/NZ529326A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-05-03 KR KR10-2003-7014613A patent/KR20040029981A/ko not_active Ceased
- 2002-05-03 WO PCT/US2002/014271 patent/WO2002091994A2/en not_active Ceased
- 2002-05-03 YU YU88703A patent/YU88703A/sh unknown
- 2002-05-07 US US10/140,172 patent/US7160721B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-11-05 BG BG108315A patent/BG108315A/bg unknown
- 2003-11-07 NO NO20034961A patent/NO20034961L/no not_active Application Discontinuation
- 2003-12-09 ZA ZA200309556A patent/ZA200309556B/xx unknown
-
2011
- 2011-09-23 CY CY20111100925T patent/CY1112123T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4283544B2 (ja) | 2009-06-24 |
| CA2446131A1 (en) | 2002-11-21 |
| US20020197714A1 (en) | 2002-12-26 |
| CZ20033046A3 (en) | 2004-03-17 |
| DK1385540T3 (da) | 2011-10-24 |
| EP1385540B1 (en) | 2011-08-24 |
| CN1514734A (zh) | 2004-07-21 |
| PT1385540E (pt) | 2011-10-21 |
| WO2002091994A2 (en) | 2002-11-21 |
| SI1385540T1 (sl) | 2011-10-28 |
| CA2446131C (en) | 2013-07-02 |
| HRP20030974A2 (en) | 2004-02-29 |
| ZA200309556B (en) | 2005-02-23 |
| MXPA03010208A (es) | 2004-03-10 |
| NZ529326A (en) | 2006-09-29 |
| NO20034961L (no) | 2003-12-01 |
| NO20034961D0 (no) | 2003-11-07 |
| CY1112123T1 (el) | 2015-11-04 |
| US7160721B2 (en) | 2007-01-09 |
| CN1326992C (zh) | 2007-07-18 |
| AU2002342568B2 (en) | 2007-11-01 |
| JP2005508139A (ja) | 2005-03-31 |
| BG108315A (bg) | 2005-03-31 |
| HUP0400283A2 (en) | 2007-08-28 |
| EP1385540A4 (en) | 2004-12-01 |
| EP1385540A2 (en) | 2004-02-04 |
| PL373847A1 (en) | 2005-09-19 |
| KR20040029981A (ko) | 2004-04-08 |
| YU88703A (sh) | 2006-05-25 |
| WO2002091994A3 (en) | 2003-05-08 |
| EP2298343A1 (en) | 2011-03-23 |
| BR0209482A (pt) | 2007-01-02 |
| ATE521364T1 (de) | 2011-09-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103124787B (zh) | 制造病毒载体的方法 | |
| Schuetze et al. | The Ets-related transcription factor PU. 1 immortalizes erythroblasts | |
| EA021064B1 (ru) | Непрерывные генетически стабильные птичьи клеточные линии, полученные из эмбрионов, способ их получения и их применение для производства вирусных вакцин, рекомбинантных белков и пептидов | |
| Mitani et al. | Suppressive effect on polyclonal B-cell activation of a synthetic peptide homologous to a transmembrane component of oncogenic retroviruses. | |
| JP2021072857A (ja) | γｃサイトカイン活性の調節 | |
| ES2369846T3 (es) | Composición y procedimiento para aumentar la densidad celular en cultivos celulares infectados con lentivirus. | |
| Foster et al. | Specific suppression of human CD4 surface expression by Nef from the pathogenic simian immunodeficiency virus SIVmac239open | |
| ES2389141T3 (es) | Células huésped que contienen vectores de integración múltiple | |
| Brown | In vitro transformation of submandibular gland epithelial cells and fibroblasts of adult rats by methylcholanthrene | |
| Ball et al. | Development in vitro of isolated oocysts of Plasmodium relictum | |
| RU2346698C1 (ru) | Способ профилактики лейкоза крупного рогатого скота | |
| AU2002342568A1 (en) | Composition and method for increasing cell density in cell cultures infected with lentivirus | |
| CN1700929A (zh) | 含有禽吸收障碍综合征相关病毒的疫苗及其给药方法 | |
| AU2002360659B2 (en) | An avian embryo particulate biomass for the production of virus antigens | |
| US20250027038A1 (en) | Culture method of fish germ stem cells | |
| Kumar et al. | A cell culture system from the eye stalk of Penaeus indicus | |
| Simeonov et al. | Effects of chicken anaemia virus on experimental leukosis, induced by avian myelocytomatosis virus MC29. | |
| JP2001097885A (ja) | ネコ・レトロウイルスワクチン、およびその調製方法 | |
| CN1230204C (zh) | 通过继承性转运抗原特异性的细胞毒t细胞建立的免疫调节方法 | |
| WO1991018971A1 (en) | Non-producer cell lines transformed by amv | |
| RU2038083C1 (ru) | Противовирусное средство | |
| MAMMERICKX et al. | Derived from the Study of an | |
| Tse et al. | Reconstitution of erythroid, megakaryocyte and myeloid hematopoietic support function with neutralizing antibodies against IL-4 and TGFβ1 in long-term bone marrow cultures infected with LP-BM5 murine leukemia virus | |
| Thomas et al. | Factors Influencing the Growth and Maintenance of Tubed Cultures of Embryonic Chick Cells | |
| Finter | Is There Life Without Interferon? |