ES2397799T3 - (Oxazolidinon-5-il-metil)-2-tiofen-carboxamidas sustituidas y su uso en el sector de la coagulación sanguínea - Google Patents

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Abstract

Compuesto de la fórmula en la que R1 representa cloro, trifluorometoxi, metilo, etilo, n-propilo, metoxi, metoximetilo o etoximetilo, R2 representa hidrógeno o metilo, y R3 representa un grupo de fórmulas en las que * es el punto de unión al anillo de oxopiridina, n representa el número 1, 2, 3 o 4, m representa el número 1 o 2, R4 representa hidrógeno, metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo, 2-metoxiet-1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo,R5 representa hidrógeno, metilo o etilo, o R4 y R5 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo de pirrolidin-1-ilo, un anillo de 2-metoximetilpirrolidin-1-ilo, un anillo de morfolin-4-ilo, un anillo de 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo, un anillo de 1,4-oxazepan-4-ilo, un 4-metilpiperazin-1-ilo o un anillo de 4-hidroxipiperidin-1-ilo,R6 representa hidrógeno, metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo, 2-metoxiet-1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo,R7 representa hidrógeno, metilo o etilo, o R6 y R7 forman con el átomo de nitrógeno al que están unidos un anillo de pirrolidin-1-ilo, un anillo de 2-metoximetilpirrolidin-1-ilo, un anillo de morfolin-4-ilo, un anillo de 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo, un anillo de 1,4-oxazepan-4-ilo, un 4-metilpiperazin-1-ilo o un anillo de 4-hidroxipiperidin-1-ilo, o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales

Description

(Oxazolidinon-5-il-metil)-2-tiofen-carboxamidas sustituidas y su uso en el sector de la coagulación sanguínea
La invención se refiere a nuevas oxazolidinonas sustituidas, a procedimientos para su preparación, a su uso para eltratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, así como a su uso para la preparación de medicamentos para eltratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, particularmente de enfermedades tromboembólicas.
La coagulación sanguínea es un mecanismo protector del organismo con cuya ayuda pueden “taponarse” de formarápida y fiable defectos en la pared vascular. Así puede evitarse o minimizarse la pérdida de sangre. La hemostasiadespués de lesión vascular se realiza esencialmente mediante el sistema de coagulación, en el que se desencadenauna cascada enzimática de reacciones complejas de proteínas plasmáticas. A este respecto, participan numerososfactores de coagulación sanguínea de los que algunos, en cuanto se activan, transforman respectivamente lossiguientes precursores inactivos en su forma activa. Al final de la cascada, se produce la conversión del fibrinógeno soluble en la fibrina insoluble, de modo que se llega a un coágulo sanguíneo. Tradicionalmente, se diferencia en lacoagulación sanguínea entre el sistema intrínseco y el extrínseco, que desembocan en un modo de reacción de finalcomún. A este respecto, corresponden papeles clave a los factores Xa y IIa (trombina).
El factor Xa combina las señales de ambos modos de coagulación, ya que se genera tanto por el factor VIIa/factor tisular (modo extrínseco) como por el complejo tenasa (modo intrínseco) mediante reacción del factor X. La serinproteasa Xa activada escinde la protrombina en trombina.
La trombina transmite mediante un conjunto de reacciones las señales de la cascada al estado de coagulación de lasangre. La trombina escinde directamente el fibrinógeno en fibrina. Activa el factor XIII necesario para la estabilización del coágulo de fibrina hasta el factor XIIIa. Además, la trombina es un potente desencadenante de laagregación de trombocitos (mediante activación de PAR-1) que prestan igualmente una contribución elevada a lahemostasia. Mediante la activación del TAFI (inhibidor de fibrinólisis activable por trombina) a TAFIa, la trombina enel complejo con trombomodulina inhibe la descomposición del coágulo. La activación de los factores V y VIII conduce a la potenciación de la producción de trombina y por tanto a su vez a la intensificación de la reacción decoagulación, que contrarrestra esta producción de trombina intensificada en complejo con proteína C activadapreparada con trombomodulina e impide así el exceso de hemostasia (trombosis).
Además de factor X y trombina que se encuentran libres en la sangre, son también conocidas formas unidas.Durante la generación de un coágulo de fibrina, se unen trombina y protrombinasa (factor Xa en complejo) a la estructura de fibrina. Estas moléculas enzimáticas poseen además actividad y no pueden inhibirse por laantitrombina III endógena. Los coágulos poseen entonces de este modo un potencial coagulante general.
En el transcurso de muchas enfermedades cardiocirculatorias y metabólicas, como resultado de factores sistémicoscomo por ejemplo hiperlipidemia, diabetes o tabaquismo, debido a alteraciones del flujo sanguíneo con estasis como, por ejemplo, en fibrilación auricular, o como resultado de alteraciones patológicas de la pared vascular, por ejemplo, disfunciones endoteliales o aterosclerosis, se llega a una tendencia elevada a la activación de la coagulación y detrombocitos. Esta hemostasia indeseada y excesiva puede conducir a enfermedades tromboembólicas y complicaciones trombóticas con estados potencialmente mortales mediante la formación de trombos ricos en fibrina y plaquetas.
La hemostasia está sujeta a un complejo mecanismo de regulación. Una activación incontrolada del sistema de coagulación o una inhibición defectuosa de los procesos de activación puede causar la formación de trombosis locales o embolias en vasos (arterias, venas, vasos linfáticos) o cavidades cardiacas. Esto puede conducir a enfermedades trombóticas o tromboembólicas graves. Además, una hipercoagulabilidad sistémica puede conducir auna coagulopatía de consumo en el marco de una coagulación intravascular diseminada. Las complicaciones tromboembólicas aparecen además en anemias hemolíticas microangiopáticas, circulaciones sanguíneas extracorpóreas, como hemodiálisis, así como prótesis de válvulas cardiacas y prótesis endovasculares.
Las enfermedades tromboembólicas son la causa más frecuente de morbilidad y mortalidad en la mayoría de lospaíses industrializados [“Heart Disease: A Textbook of Cardiovascular Medicine“, Eugene Braunwald, 5ª edición,1997, W.B. Saunders Company, Filadelfia].
En la terapia y la profilaxis de enfermedades tromboembólicas y trombóticas, los anticoagulantes, es decir,sustancias para la inhibición o el impedimento de la coagulación sanguínea, desempeñan un papel esencial. Para eltratamiento de enfermedades tromboembólicas o trombóticas agudas, particularmente aquellas en las que es necesaria una suspensión o adaptación de la anticoagulación (por ejemplo síndrome coronario agudo, sepsis), oenfermedades en las que es necesaria una inhibición profiláctica del sistema de coagulación a corto plazo según lanecesidad (por ejemplo, hemodiálisis, cardioconversión), se usan anticoagulantes administrados por vía parenteral.
Los anticoagulantes conocidos en el estado de la técnica, es decir, sustancias para la inhibición o el impedimento dela coagulación sanguínea, presentan distintas desventajas a menudo graves. Se evidencia por tanto en la práctica amenudo como difícil e insatisfactorio un procedimiento de tratamiento o profilaxis eficaz y seguro de enfermedadestrombóticas/tromboembólicas agudas.
En la terapia aguda y profilaxis de enfermedades tromboembólicas, encuentran uso por un lado la heparina y heparinas de bajo peso molecular (NMH), que se administran por vía intravenosa o subcutánea. La heparina es unamezcla de glucosaminoglucanos sulfatados en alto grado de origen animal (peso molecular 3-40 kDa con la mayorincidencia a 15 kDa; extraída por ejemplo de pulmones bovinos), de los que según la preparación son anticoagulantes aproximadamente un 30 %. La dosificación se realiza por tanto por unidades y debe controlarseexactamente en los pacientes. Una toma incontrolada sin control conduce a un alto riesgo de subdosis o sobredosisy por tanto a hemorragias. Las heparinas de bajo peso molecular (NMH) se preparan a partir de heparina nofraccionada (UFH). Están mejor definidas respecto al tamaño y muestran debido a su menor tamaño un perfil alterado de efectos secundarios.
Las heparinas no actúan directamente sobre la enzima, sino que conducen a la formación de antitrombina III (AT(III))para la aceleración de la unión de AT(III) a factores de coagulación con un sitio de unión a AT(III). Pertenecen a éstos ante todo factor Xa y trombina (factor IIa). Aunque las UFH de ambas enzimas son aproximadamente igual depotentes, las NMH muestran un espectro de acción desplazado a favor del factor Xa, que culmina en última instanciaen la inhibición del factor Xa puro del pentasacárido fondaparinux. Este mecanismo indirecto es desventajoso endeterminados aspectos:
En el marco de enfermedades que acompañan a una coagulopatía de consumo, el agotamiento de AT(III) conduce a que las heparinas no sean ya eficaces. En contraposición: mediante la toma de heparinas, se priva al organismo delas últimas reservas de AT(III) libre.
En el marco de la generación de un trombo, se unen protrombinasa (factor Xa) y trombina a éste. Estas enzimas decoagulación son activas y contribuyen a la potenciación del trombo. La inhibición de trombina o factor Xa unido altrombo merece por tanto en la reducción de riesgos de enfermedades arteriales una atención especial. La AT(III) no posee como proteína debido a su tamaño la capacidad de inhibir factores de coagulación unidos a trombo. Por tanto, las heparinas no pueden contribuir a esta reducción de riesgos.
En el marco del uso para tratamientos de enfermedades como, por ejemplo, síndrome coronario agudo o sepsis, esespecialmente ventajoso si la terapia puede suspenderse a corto plazo. Las UFH tienen una semivida relativamentecorta de 30–150 min. Además, su efecto puede antagonizarse por el sulfato de protamina. Es desventajosa aquí lalarga semivida de las distintas NMH, particularmente del fondaparinux, que hace casi imposible una adaptaciónsencilla de la terapia a situaciones agudas. Se llega a que el efecto de estas sustancias sólo parcialmente loantagoniza el sulfato de protamina.
Generalmente, la toma de UFH comprende un alto riesgo de hemorragia, particularmente pueden aparecerhemorragias cerebrales y hemorragias en el tracto gastrointestinal, y puede llegarse a trombocitopenia, alopeciamedicamentosa u osteoporosis [Pschyrembel, “Klinisches Wörterbuch“, 257ª edición, 1994, Walter de GruyterVerlag, página 610, entrada “Heparina“; Römpp Lexikon Chemie, versión 1.5, 1998, Georg Thieme Verlag Stuttgart, entrada “Heparina“]. Las heparinas de bajo peso molecular muestran, aunque con baja incidencia, un espectrosimilar de efectos secundarios, particularmente con respecto a la aparición de HIT-II.
En el marco de las enfermedades cardiacas y también enfermedades sépticas, puede llegarse simultáneamente alimitaciones, a veces agudas, de la función renal. Las sustancias que se eliminan por los riñones pueden acumularseen el cuerpo en estas situaciones y conducir a un riesgo de hemorragia claramente elevado. Aunque con UFH no es necesario ningún ajuste de la dosis, las NMH deben adaptarse la dosis. El fondaparinux no está recomendado enpacientes con alteración grave de la función renal.
Además, se usan, aunque en medida claramente menor, hirudina y el péptido preparado sintéticamente derivado dela misma bivalirudina, así como la sustancia de bajo peso molecular argatrobán. A este respecto, se trata deinhibidores directos de trombina que muestran un alto riesgo de hemorragia. La hirudina y bivalirudina deben adaptarse en su dosificación si aparece una alteración de la función renal. El argatrobán muestra un efecto antitrombótico comparativamente débil y no es bien soluble en agua. Debido a la falta de inhibición del factor Xa, lapreparación de trombina no puede inhibirse dentro y fuera del trombo, es decir, en una reacción de coagulación engran exceso, existe el peligro de que estas sustancias se “titulen“.
Están en desarrollo otras sustancias que son administrables por vía parenteral. A este respecto, se trata desustancias que inhiben factor Xa o trombina y por tanto inhiben la preparación de o la actividad trombina.
Además, hay sustancias que se usan o desarrollan para terapia oral. Debido a su perfil de acción y fisicoquímico(baja solubilidad, inicio de acción más lento, larga semivida), no son o son poco adecuadas para el tratamiento ensituaciones agudas. Representa una de dichas clases de anticoagulantes los antagonistas de vitamina K. Pertenecen a ellos, por ejemplo, 1,3-indanodionas, pero ante todo compuestos como warfarina, fenprocumón,dicumarol y otros derivados de cumarina que inhiben no selectivamente la síntesis de distintos productos dedeterminados factores de coagulación dependientes de vitamina K en el hígado. Limitado por el mecanismo deacción, el efecto se ejerce sólo muy lentamente (tiempo de latencia hasta el inicio de la acción de 36 a 48 horas).Los compuestos pueden administrarse ciertamente por vía oral, pero debido al alto riesgo de hemorragia y alestrecho índice terapéutico, es necesario un costoso ajuste y observación individuales del paciente. Además, se handescrito efectos secundarios adicionales como alteraciones gastrointestinales, caída del cabello y necrosis cutánea.
Otras sustancias antitrombina o anti-factor Xa que se desarrollan para terapia oral muestran una solubilidad demasiado baja para la terapia parenteral o tienen una semivida larga, deseada para la terapia oral, que no posibilitauna respuesta rápida ante un cambio.
Recientemente, se han descrito planteamientos en las que se han ensayado in vitro e in vivo inhibidores de trombina y factor Xa de bajo peso molecular a distintas relaciones de mezcla. Así, se ha mostrado un fuerte potencialsinérgico. Con tanogitrano, se ha descrito una sustancia de bajo peso molecular que inhibe in vitro tanto trombina como factor Xa, pero que posee una fuerte preferencia por la inhibición de trombina. El tanogitrano se excreta esencialmente sin cambios por los riñones, lo que hace probable un ajuste de dosis en el caso de insuficiencia renal.
En medicamentos antitrombóticos, la amplitud terapéutica es de vital importancia: la distancia entre la dosisterapéuticamente eficaz para la inhibición de la coagulación y la dosis a la que pueden aparecer hemorragiasdebería ser lo mayor posible, de modo que se alcanzara una eficacia terapéutica máxima con un perfil de riesgosmínimo. Como muestran los experimentos con mezclas de inhibidores de trombina y factor Xa de bajo peso molecular, los
compuestos que inhiben tanto trombina como factor Xa poseerían por su carácter dual una sinergia especialmentefuerte y por ello podrían combatir con especial eficacia la generación de trombos. Así, los compuestos inhiben ambas enzimas decisivas de la cascada de coagulación sin tener que bloquear completamente las enzimasinvidiuales. El resto residual de factor Xa y trombina conduce a una homestasia intacta y por tanto a una amplitudterapéutica especialmente ventajosa. En un modelo de derivación arteriovenosa en conejos, ha podido mostrarse que la coadministración de dosificaciones antitrombóticamente eficaces sólo débilmente del inhibidor selectivo deFXa PD0313052 y del inhibidor selectivo de trombina argatrobán conducen a un efecto antitrombótico superaditivofuerte. Además, no se observó en la combinación de las dosis inviduales con el efecto sinérgico máximo ningunaintensificación de las hemorragias. Estas observaciones permiten la conclusión de que la inhibición simultánea detrombina y FXa aumenta la amplitud terapéutica con respecto a la distancia del efecto antitrombótico al riesgo de hemorragia (Journal of Thrombosis and Haemostasis, 4: 834–841).
Esta sinergia se muestra con especial claridad considerando el desarrollo del tiempo de protrombina dependiente dela concentración de sustancia en comparación directa con inhibidores de factor Xa y trombina puros. Este fuerteefecto sobre ambas enzimas decisivas de la cascada de coagulación se considera como especialmente ventajoso si existe un alto riesgo de formación de trombos o la formación de trombos puede conducir a una enfermedad fatal. Seaplican ambos, por ejemplo, a enfermedades aterotrombóticas en el intervalo de síndrome coronario agudo o a lasituación después de un infarto de miocardio agudo.
Además, serían también activos contra factores de coagulación unidos al coágulo de fibrina compuestos que inhiben tanto trombina como factor Xa, en contraposición con heparinas, hirudina y antagonistas de vitamina K. El límite delpotencial trombótico de un coágulo ya presente es un punto crítico en la prevención de una oclusión arterial. Estosucede de forma especialmente eficaz mediante la inhibición tanto de la actividad trombina presente como de laformación de nueva trombina en el coágulo. Aunque un inhibidor de trombina puro no puede impedir la producción de trombina de tipo avalancha mediante el complejo de protrombinasa que contiene factor Xa unido al coágulo y el efecto inhibidor por tanto puede sobrecompensar una coagulación fuertemente estimulada por la gran cantidad detrombina producida, ningún inhibidor del factor Xa puro puede inhibir la actividad trombina ya presente. Puesto queésta ya no es inhibible mediante mecanismos fisiológicos, la trombina unida a coágulo representa un riesgoespecialmente grande. En contraposición con ello, los compuestos duales, es decir, compuestos que inhiben tantotrombina como factor Xa, están en disposición de inhibir tanto la producción de trombina como la actividad trombina en coágulos y por tanto impedir también el crecimiento potencial del coágulo.
Se describen oxazolidinonas como inhibidores del factor Xa de bajo peso molecular no peptídicos en el documento WO 01/47919. El documento US 2006/069260 divulga el compuesto {2-oso-3-[4-(2-oxo-2H-piridin-1-il)-fenil]-oxazolidin-5metil}amida del ácido 5-cloro-tiofen-2-carboxilico como inhibidor del factor Xa.
Es por tanto un objetivo de la presente invención proporcionar compuestos duales, es decir, compuestos que inhiben tanto la trombina como el factor Xa, y que mediante la inhibición de la producción de y actividad trombina encoágulos impiden su crecimiento potencial, con una amplia ventana terapéutica y buena solubilidad en agua y medios fisiológicos, para combatir enfermedades, particularmente enfermedades tromboembólicas, en hombres y animales.
Son objeto de la invención compuestos de fórmula
R3 R2 O Cl
(I), O
en la que
R1 representa cloro, trifluorometoxi, metilo, etilo, n-propilo, metoxi, metoximetilo o etoximetilo,
R2 representa hidrógeno o metilo,
y
R3 representa un grupo de fórmulas
R7
R4
N
*
o R6
N
mOn
*
R5
,
en las que 1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo,
*
es el punto de unión al anillo de oxopiridina,
n
representa el número 1, 2, 3 o 4,
m
representa el número 1 o 2,
R4
representa hidrógeno, metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo, 2-metoxiet
R5 representa hidrógeno, metilo o etilo,
o
R4 y R5 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo de pirrolidin-1-ilo, un anillo de 2metoximetilpirrolidin-1-ilo, un anillo de morfolin-4-ilo, un anillo de 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo, un anillo de 1,4oxazepan-4-ilo, un 4-metilpiperazin-1-ilo o un anillo de 4-hidroxipiperidin-1-ilo,
R6 representa hidrógeno, metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo, 2-metoxiet1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo,
R7 representa hidrógeno, metilo o etilo,
R6 y R7 forman con el átomo de nitrógeno al que están unidos un anillo de pirrolidin-1-ilo, un anillo de 2metoximetilpirrolidin-1-ilo, un anillo de morfolin-4-ilo, un anillo de 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo, un anillo de 1,4oxazepan-4-ilo, un 4-metilpiperazin-1-ilo o un anillo de 4-hidroxipiperidin-1-ilo,
y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.
Son compuestos según la invención los compuestos de fórmula (I) y sus sales, solvatos y solvatos de las sales, loscompuestos comprendidos por la fórmula (I) de las fórmulas citadas a continuación y sus sales, solvatos y solvatos de las sales, así como los compuestos comprendidos por la fórmula (I) citados a continuación como ejemplos derealización y sus sales, solvatos y solvatos de las sales, a menos que no se trate ya en los compuestos comprendidos por la fórmula (I) citados a continuación de sales, solvatos y solvatos de las sales.
Los compuestos según la invención pueden existir, dependiendo de su estructura, en formas estereoisoméricas(enantiómeros, diastereómeros). La invención comprende por tanto los enantiómeros o diastereómeros y susrespectivas mezclas. A partir de dichas mezclas de enantiómeros y/o diastereómeros, pueden aislarse los componentes individuales estereoisoméricos de modo conocido.
En caso de que los compuestos según la invención puedan aparecer en formas tautoméricas, la presente invencióncomprende todas las formas tautoméricas.
Como sales son preferentes en el marco de la presente invención sales fisiológicamente inocuas de los compuestossegún la invención. Están comprendidas también sales que no son adecuadas por sí mismas para aplicacionesfarmacéuticas, pero que pueden usarse, por ejemplo, para el aislamiento o purificación de los compuestos según lainvención.
Sales fisiológicamente inocuas de los compuestos según la invención comprenden sales de adición de ácido deácidos minerales, ácidos carboxílicos y ácidos sulfónicos, por ejemplo, sales de ácido clorhídrico, ácido bromhídrico,ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido toluenosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido naftalenodisulfónico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido propiónico, ácido láctico,ácido tartárico, ácido málico, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido maleico y ácido benzoico.
Las sales fisiológicamente inocuas de los compuestos según la invención comprenden también sales de bases habituales como, por ejemplo y preferentemente, sales de metales alcalinos (por ejemplo, sales de sodio y potasio), sales de metales alcalinotérreos (por ejemplo, sales de calcio y magnesio) y sales de amonio, derivadas deamoniaco o aminas orgánicas de 1 a 16 átomos de C como, por ejemplo y preferentemente, etilamina, dietilamina,trietilamina, etildiisopropilamina, monoetanolamina, dietanolamina, trietanolamina, diciclohexilamina, dimetilaminoetanol, procaína, dibencilamina, N-metilmorfolina, arginina, lisina, etilendiamina y N-metilpiperidina.
Como solvatos se designan en el marco de la invención aquellas formas de compuestos según la invención queforman un complejo en estado sólido o líquido mediante coordinación con moléculas de disolvente. Los hidratos sonuna forma especial de solvatos en los que la coordinación se realiza con agua. Como solvatos, son preferentes en elmarco de la presente invención los hidratos.
En las fórmulas del grupo que puede representar R3, el punto final de la linea, además de representar respectivamente un *, no representa un átomo de carbono o un grupo CH2, sino que es componente del enlace con el átomo al que está unido R3.
Son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que
R1 representa cloro, trifluorometoxi, metilo, etilo, n-propilo, metoxi o metoximetilo,
R2 representa hidrógeno o metilo,
y
R3
representa un grupo de fórmulas
R7
R4
N n * o R6 N m O *
R5
,
en las que
* es el punto de unión al anillo de oxopiridina, n representa el número 1, 2 o 3, m representa el número 1 o 2, R4 representa hidrógeno, metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo, 2-metoxiet
1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo, R5 representa hidrógeno, metilo o etilo, o R4 y R5 forman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos un anillo de pirrolidin-1-ilo, un anillo de 2
metoximetilpirrolidin-1-ilo, un anillo de morfolin-4-ilo, un anillo de 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo, un anillo de 1,4
oxazepan-4-ilo, un 4-metilpiperazin-1-ilo o un anillo de 4-hidroxipiperidin-1-ilo, R6 representa hidrógeno, metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo, 2-metoxiet1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo,
R7 representa hidrógeno, metilo o etilo, o R6 y R7 forman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos un anillo de pirrolidin-1-ilo, un anillo de 2
metoximetilpirrolidin-1-ilo, un anillo de morfolin-4-ilo, un anillo de 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo, un anillo de 1,4oxazepan-4-ilo, un 4-metilpiperazin-1-ilo o un anillo de 4-hidroxipiperidin-1-ilo, y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R1 representa metilo, etilo, n-propilo, metoxi o metoximetilo, R2 representa hidrógeno o metilo, y R3 representa un grupo de fórmulas
R7 R4
N *
o R6N
mO R5
n
*
, en las que
* es el punto de unión al anillo de oxopiridina, n representa el número 1, 2 o 3, m representa el número 1 o 2, R4 representa hidrógeno, metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo, 2-metoxiet
1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo, R5 representa hidrógeno, metilo o etilo,
R6 representa hidrógeno, metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo, 2-metoxiet1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo, R7 representa hidrógeno, metilo o etilo, y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R1 representa metilo, etilo, n-propilo, metoxi o metoximetilo,
R2
representa hidrógeno,
o
R1
representa metilo,
R2
representa metilo,
y
R3
representa un grupo de fórmulas
R7
R4
N n * o R6 N m O *
R5
,
en las que
* es el punto de unión al anillo de oxopiridina, n representa el número 1, 2 o 3, m representa el número 1 o 2, R4 representa hidrógeno, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1-ilo, R5 representa hidrógeno, R6 representa hidrógeno, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1-ilo, R7 representa hidrógeno, y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R1 representa metilo, metoxi o metoximetilo, R2 representa hidrógeno, o R1 representa metilo, R2 representa metilo, y R3 representa un grupo de fórmulas
R7 R4
N *
o R6N
mOn
*
R5
, en las que
* es el punto de unión al anillo de oxopiridina, n representa el número 2,
5 m representa el número 1, R4 representa 2-hidroxiet-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1-ilo, R5 representa hidrógeno, R6 representa 2-hidroxiet-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1-ilo, R7 representa hidrógeno,
15 y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R1 representa metilo o metoxi, R2 representa hidrógeno, o
25 R1 representa metilo, R2 representa metilo, y R3 representa un grupo de fórmulas
R7 R4
N
oder R6N
n
*
R5 35 en las que,
* es el punto de unión al anillo de oxopiridina, n representa el número 2, m representa el número 1, R4 representa 2-hidroxiet-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1-ilo,
45 R5 representa hidrógeno, R6 representa 2-hidroxiet-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1-ilo, R7 representa hidrógeno, y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que
55 R1 representa metilo, metoxi o metoximetilo, R2 representa hidrógeno, o R1 representa metilo, R2 representa metilo,
65 y R3 representa un grupo de fórmula
*
mO
R4
N
n
*
R5
en la que
5 * es el punto de unión al anillo de oxopiridina, n representa el número 2, R4 representa 2-hidroxiet-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1-ilo, R5 representa hidrógeno,
y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.
15 También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R1 representa metoximetilo, R2 representa hidrógeno, o R1 representa metilo,
25 R2 representa metilo, y R3 representa un grupo de fórmula
,
R4 N
n
*
R5
, en la que
35 * es el punto de unión al anillo de oxopiridina, n representa el número 2, R4 representa 2-hidroxiet-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1-ilo, R5 representa hidrógeno, y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.
45 También son preferentes compuestos de fórmula (I), en la que R1 representa metilo, R2 representa hidrógeno, o R1 representa metilo,
55 R2 representa metilo, y R3 representa un grupo de fórmula
R7 N
* R6
mO
,
en la que
* es el punto de unión al anillo de oxopiridina, m representa el número 1, R6 representa 2-hidroxiet-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1-ilo, R7 representa hidrógeno, y sus sales, solvatos y los solvatos de sus sales. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que n representa el número 2. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que m representa el número 1. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R1 representa metilo, metoxi o metoximetilo. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R2 representa hidrógeno. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R1 representa metilo y R2 representa hidrógeno. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R1 representa metilo y R2 representa metilo. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R4 representa 2-hidroxiet-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1
ilo. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R5 representa hidrógeno. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R6 representa 2-hidroxiet-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1
ilo. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R7 representa hidrógeno. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R1 representa metilo, etilo, n-propilo, metoxi o metoximetilo, R2 representa hidrógeno o metilo, y R3 representa un grupo de fórmulas
R7 R4
N
*
o R6
N
mO R5
n
*
, en las que
* es el punto de unión al anillo de oxopiridina, n representa el número 1, 2 o 3, m representa el número 1 o 2, R4 representa metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-metoxiet-1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, tetrahidrofuran-2
ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo, R5 representa hidrógeno, metilo o etilo, o R4 y R5 forman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos un anillo de pirrolidin-1-ilo, un anillo de 2
metoximetilpirrolidin-1-ilo, un anillo de morfolin-4-ilo, un anillo de 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo, un anillo de 1,4oxazepan-1-ilo, un 4-metilpiperazin-1-ilo o un anillo de 4-hidroxipiperidin-1-ilo, R6 representa metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-metoxiet-1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, tetrahidrofuran-2
ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo,
R7 representa hidrógeno, metilo o etilo, R6 y R7 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo de pirrolidin-1-ilo, un anillo de 2
metoximetilpirrolidin-1-ilo, un anillo de morfolin-4-ilo, un anillo de 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo, un anillo de 1,4oxazepan-4-ilo, un anillo de 4-metilpiperazin-1-ilo o un anillo de 4-hidroxipiperidin-1-ilo, y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R1 representa metilo, etilo, n-propilo, metoxi o metoximetilo, R2 representa hidrógeno, o R1 representa metilo, R2 representa metilo, y R3 representa un grupo de fórmulas
R7 R4
N
*
o R6
N
mO R5
n
*
, en las que
* es el punto de unión al anillo de oxopiridina n representa el número 1, 2 o 3, m representa el número 1 o 2, R4 representa metilo, etilo o ciclopropilo, R5 representa hidrógeno, metilo o etilo, o R4 y R5 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo de morfolin-4-ilo, un 4-metilpiperazin-1
ilo o un anillo de 4-hidroxipiperidin-1-ilo, R6 representa ciclopropilo, ciclobutilo, 2-metoxiet-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo, R7 representa hidrógeno, metilo o etilo, R6 y R7 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo de pirrolidin-1-ilo, un anillo de 2
metoximetilpirrolidin-1-ilo, un anillo de 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo, un anillo de 1,4-oxazepan-4-ilo o un anillo de 4metilpiperazin-1-ilo, y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales. También son preferentes compuestos de fórmula (I) en la que R1 representa metilo, metoxi o metoximetilo, R2 representa hidrógeno, o R1 representa metilo, R2 representa metilo, y R3 representa un grupo de fórmulas
R7 R4 N
*
o R6
N
mO R5
n
*
, en las que
5 * es el punto de unión al anillo de oxopiridina, n representa el número 1, 2 o 3, m representa el número 1 o 2,
10 R4 representa metilo o ciclopropilo, R5 representa hidrógeno o metilo,
15 o R4 y R5 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un 4-metilpiperazin-1-ilo o un anillo de 4hidroxipiperidin-1-ilo,
20 R6 representa ciclopropilo, ciclobutilo o 2-metoxiet-1-ilo, R7 representa hidrógeno o metilo R6 y R7 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo de pirrolidin-1-ilo, un anillo de 2
25 metoximetilpirrolidin-1-ilo o un 4-metilpiperazin-1-ilo, y sus sales, sus solvatos y las sales de sus solvatos. También es particularmente preferente el compuesto 5-cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(trans-4-hidroxiciclohexil)amino]etil}
30 2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metoxifenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}tiofen-2-carboxamida de fórmula
H HO
N OO Cl O
S
NN H
N H3C O O
así como sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales. El compuesto se describe en el ejemplo 6.
35 También es particularmente preferente el compuesto 5-cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(2-hidroxietil)amino]etil}-2oxopiridin-1(2H)-il]-3-(metoximetil)fenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]etil}tiofeno-2-carboxamida de fórmula
HO
H
N OO Cl O
S
NN H
N O
O H3C 40 así como sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales. El compuesto se describe en el ejemplo 9.
También es particularmente preferente el compuesto 5-cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(trans-4-hidroxiciclohexil)amino]etil}2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-(metoximetil)-fenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2-carboxamida de fórmula
HHO N
OO Cl O
N
N S
H
N
O OH3C
5 así como sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales. Se describe el compuesto en el ejemplo 10.
También es particularmente preferente el compuesto 5-cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(trans-4hidroxiciclohexil)amino]etoxi}-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2-carboxamida 10 de fórmula
HO
N
H
OO O Cl O
S
N
H
N
H3C
O así como sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales. El compuesto se describe en el ejemplo 21. También es particularmente preferente el compuesto 5-cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(2-hidroxietil)amino]etil}-2oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-dimetilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2-carboxamida de fórmula HO
NH OO
H 3C
Cl O
S
N
N
H
N
H3C
O 20 así como sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales. El compuesto se describe en el ejemplo 37.
También es particularmente preferente el compuesto 5-cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(trans-4-hidroxiciclohexil)amino]etil}2-oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-dimetilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2-carboxamida de fórmula 25
HHO
N OO
H3C
Cl O
SNN H
N
H3C
O
así como sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales. El compuesto se describe en el ejemplo 38.
5 Las definiciones de restos dadas con detalle en las respectivas combinaciones o combinaciones preferentes de restos se sustituyen, independientemente de las combinaciones de restos dadas respectivas, también por cualquierdefinición de restos de otras combinaciones.
Son muy especialmente preferentes combinaciones de dos o más de los intervalos preferidos citados anteriormente.
10 Es además objetivo de la invención un procedimiento para la preparación de compuestos de fórmula (I), o sus sales,sus solvatos o los solvatos de sus sales, en el que
[A] se hacen reaccionar los compuestos de fórmula 15
X O R2 O Cl n
O N S
N
H
N
(II), R1 O
en la que n, R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente, y 20 X representa hidroxilo o bromo, con compuestos de fórmula H
N
R5 (III),
25 en la que R4 y R5 tienen el significado dado anteriormente, dando compuestos de fórmula
R4 N O R2 O Cl
R4
R5
n
O N S
N
H
N
(Ia), R1 O
30 en la que n, R1, R2, R4 y R5 tienen el significado dado anteriormente, o
[B] se hacen reaccionar los compuestos de fórmula
Y O
R2 O
O m
Cl O N
S
N
H
N
(IV), R1 O
en la que m, R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente, y
5 Y representa hidroxilo o cloro,
con compuestos de fórmula
H
N
R7 (V),
R6
10 en la que R6 y R7 tienen el significado dado anteriormente,
dando compuestos de fórmula
R6
N O
R2 O
O ClR7
m O N
S
N H N
(Ib), R1 O
15 en la que m, R1, R2, R6 y R7 tienen el significado dado anteriormente.
Los compuestos de fórmulas (Ia) y (Ib) forman los compuestos de fórmula (I).
20 La base libre de la sal puede obtenerse, por ejemplo, mediante cromatografía en columna de fase inversa con ungradiente de acetonitrilo-agua con adición de una base, particularmente usando una columna RP18 PhenomenexLuna C18(2) y dietilamina como base, o mediante la disolución de la sal en un disolvente orgánico y la agitación consoluciones acuosas de sales básicas como hidrogenocarbonato de sodio.
25 También se describe un procedimiento para la preparación de compuestos de fórmula (I) o sus solvatos, en el quelas sales de los compuestos o solvatos de las sales de los compuestos se transforman en los compuestos mediantecromatografía con adición de una base.
30 En el caso en que X sea hidroxilo, la reacción se realiza según el procedimiento [A] en general en disolventes inertes, en presencia de anhídrido del ácido trifluorometanosulfónico, eventualmente en presencia de una base,preferentemente en un intervalo de temperatura de -78 °C hasta temperatura ambiente a presión normal.
Son disolventes inertes, por ejemplo, diclorometano, dietiléter, nitrometano, 1,2-dicloroetano o acetonitrilo, 35 preferentemente diclorometano.
Son bases, por ejemplo, 2,6-dimetilpiridina, piridina, 2,6-di-terc-butil-4-metilpiridina, diisopropiletilamina, 2,6-lutidina, trimetilamina, preefriblemente 2,6-dimetilpiridina.
40 En el caso de que X sea bromo, la reacción se realiza según el procedimiento [A] en general en disolventes inertes, preferentemente en un intervalo de temperatura de –78 ºC hasta temperatura ambiente a presión normal.
Son disolventes inertes, por ejemplo, dimetilformamida.
45 En el caso de que Y sea hidroxilo, la reacción se realiza según el procedimiento [B] en general en disolventes inertes, en presencia de anhídrido del ácido trifluorometanosulfónico, eventualmente en presencia de una base,preferentemente en un intervalo de temperatura de –78 ºC a temperatura ambiente a presión normal.
Son disolventes inertes, por ejemplo, diclorometano, dietiléter, nitrometano, 1,2-dicloroetano o acetonitrilo, preferentemente diclorometano.
Son bases, por ejemplo, 2,6-dimetilpiridina, piridina, 2,6-di-terc-butil-4-metilpiridina, diisopropiletilamina, 2,6-lutidina, trimetilamina, preferentemente 2,6-dimetilpiridina.
5 En el caso de que Y sea cloro, la reacción se realiza según el procedimiento [B] en general en disolventes inertes,eventualmente en presencia de una sal de halógeno, preferentemente en un intervalo de temperatura de temperatura ambiente hasta reflujo del disolvente a presión normal.
10 Son disolventes inertes, por ejemplo, 1,2-dimetoxietano.
Son sales de halógeno, por ejemplo, yoduro de sodio.
Los compuestos de fórmulas (III) y (V) son conocidos o pueden sintetizarse según procedimientos conocidos a partir15 de los compuestos de partida correspondientes.
Los compuestos de fórmula (II) en la que X representa hidroxilo son conocidos o pueden prepararse haciendoreaccionar el compuesto de fórmula
O
en la primera etapa con compuestos de fórmula
Si
H3C
R2O OH3C
CH3 n
NH2N
(VII), R1
en la que n, R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente, dando compuestos de fórmula
Si
H3C
R2
O O
H3C
Cl
CH3 n
H OH
S
N
N
H
N
(VIII),
R1
O
en la que n, R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente, ciclándose en la segunda etapa en presencia de fosgeno o equivalentes de fosgeno como, por ejemplo, carbonildiimidazol (CDI),
y escindiéndose en la tercera etapa el grupo sililo y obteniéndose los compuestos de fórmula (II).
5 La reacción de la primera etapa se realiza en general en disolventes inertes, en presencia de un ácido de Lewis,preferentemente en un intervalo de temperatura de temperatura ambiente hasta reflujo del disolvente a presiónnormal.
10 Son disolventes inertes, por ejemplo, disolventes polares apróticos como, por ejemplo, acetonitrilo, butironitrilo, diclorometano o cloroformo, es preferente el acetonitrilo.
Son ácidos de Lewis, por ejemplo, perclorato de magnesio, trifluorometanosulfonato de iterbio (III), bromuro de litio,triflato de magnesio o tricloruro de aluminio, es preferente el perclorato de magnesio.
15 La reacción de la segunda etapa se realiza en general en disolventes inertes en presencia de una base, preferentemente en un intervalo de temperatura de temperatura ambiente hasta reflujo del disolvente a presiónnormal.
20 Son disolventes inertes, por ejemplo, disolventes polares apróticos como, por ejemplo, acetonitrilo o butironitrilo.
Son bases, por ejemplo, bases aminas terciarias fuertes como, por ejemplo, 4-N,N-dimetilaminopiridina.
Es preferente la reacción con N,N'-carbonildiimidazol como equivalente de ácido carbónico con adición de 4-N,N25 dimetilaminopiridina como base.
La reacción de la tercera etapa se realiza según procedimientos conocidos por el experto, por ejemplo, mediantereacción con fluoruro de tetrabutilamonio en un disolvente como, por ejemplo, tetrahidrofurano, o mediante reaccióncon ácido clorhídrico en metanol, preferentemente en un intervalo de temperatura de temperatura ambiente hasta
30 reflujo del disolvente a presión normal.
El compuesto de fórmula (VI) es conocido o puede sintetizarse según procedimientos conocidos a partir de loscompuestos de partida correspondientes.
35 En un procedimiento alternativo, pueden prepararse los compuestos de fórmula (II) en la que X representa hidroxilo haciendo reaccionar los compuestos de fórmula
Si
H3C
R2 O
O O
H3C
CH3 n
O
N
N
NH2
(XVI),
R1 40 en la que n, R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente, con compuestos de fórmula Cl
(XVII),
en la que
Q representa halógeno, preferentemente bromo o cloro, o hidroxilo, 50 y escindiendo a continuación el grupo sililo.
Para el caso en que Q sea halógeno, la reacción se realiza en general en disolventes inertes, eventualmente enpresencia de una base, preferentemente en un intervalo de temperatura de –30 ºC a 50 ºC a presión normal.
Son disolventes inertes, por ejemplo, tetrahidrofurano, cloruro de metileno, piridina, dioxano o dimetilformamida, es5 preferente el tetrahidrofurano o cloruro de metileno.
Son bases, por ejemplo, trietilamina, diisopropiletilamina o N-metiletilmorfolina, es preferente la diisopropiletilamina.
Para el caso en que Q sea hidroxilo, la reacción se realiza en general en disolventes inertes, en presencia de un10 reactivo de deshidratación, eventualmente en presencia de una base, preferentemente en un intervalo de temperatura de -30 °C a 50 °C a presión normal.
Son disolventes inertes, por ejemplo, hidrocarburos halogenados como diclorometano o triclorometano, hidrocarburos como benceno, nitrometano, dioxano, dimetilformamida o acetonitrilo. Es igualmente posible usar15 mezclas de disolventes. Son especialmente preferentes diclorometano o dimetilformamida.
Como reactivos de deshidratación, son adecuados a este respecto, por ejemplo, carbodiimidas como, por ejemplo,N,N'-dietil-, N,N,'-dipropil-, N,N'-diisopropil-, N,N'-diciclohexilcarbodiimida, clorhidrato de N-(3-dimetilaminoisopropil)N'-etilcarbodiimida (EDC), N-ciclohexilcarbodiimida-N‘-propiloximetil-poliestireno (PS-carbodiimida) o compuestos de20 carbonilo como carbonildiimidazol, o compuestos de 1,2-oxazolio como 3-sulfato de 2-etil-5-fenil-1,2-oxazolio o perclorato de 2-terc-butil-5-metilisoxazolio, o compuestos de acilamino como 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina o anhídrido del ácido propanofosfónico, o cloroformiato de isobutilo, o cloruro de bis-(2-oxo-3-oxazolidinil)fosforilo o hexafluorofosfato de benzotriazoliloxitri-(dimetilamino)fosfonio o hexafluorofosfato de O(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HBTU), tetrafluoroborato de 2-(2-oxo-1-(2H)-piridil)-1,1,3,3-tetra
25 metiluronio (TPTU) o hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU) o 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) o hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfonio (BOP) o Nhidroxisuccinimida, o mezclas de estos con bases.
Son bases, por ejemplo, carbonatos alcalinos como, por ejemplo, carbonato o hidrogenocarbonato de sodio o30 potasio, o bases orgánicas como trialquilaminas, por ejemplo, trietilamina, N-metilmorfolina, N-metilpiperidina, 4dimetilaminopiridina o diisopropiletilamina.
Preferentemente, se lleva a cabo la condensación con HATU o con EDC en presencia de HOBt.
35 La escisión del grupo sililo se realiza según procedimientos conocidos por el experto, por ejemplo, mediante reacción con fluoruro de tetrabutilamonio en un disolvente como, por ejemplo, tetrahidrofurano, o mediante reaccióncon ácido clorhídrico en metanol, preferentemente en un intervalo de temperatura de temperatura ambiente hastareflujo del disolvente a presión normal.
40 Los compuestos de fórmula (XVII) son conocidos o pueden sintetizarse según procedimientos conocidos a partir de los compuestos de partida correspondientes.
Los compuestos de fórmula (II) en la que X representa bromo, son conocidos o pueden prepararse haciendoreaccionar los compuestos de fórmula (II) en la que X representa hidroxilo con bromuro de tionilo, como se describe45 en el ejemplo 11A.
Los compuestos de fórmula (VII) son conocidos o pueden prepararse reduciendo el grupo nitro de compuestos defórmula
SiH3C
R2O OH3C
CH3 n N
NO2 (IX),
R1
50 en la que n, R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente.
La reacción se realiza en general con un reductor en disolventes inertes, preferentemente en un intervalo de55 temperatura de temperatura ambiente hasta reflujo del disolvente a presión normal hasta 300 kPa.
Son reductores, por ejemplo, paladio sobre carbón activo e hidrógeno, dicloruro de estaño, tricloruro de titanio o formiato de amonio y paladio sobre carbón activo en una mezcla de etanol y acetato de etilo, es preferente el paladiosobre carbón activo e hidrógeno o dicloruro de estaño.
Son disolventes inertes, por ejemplo, éteres como dietiléter, metil-terc-butiléter, 1,2-dimetoxietano, dioxano, tetrahidrofurano, glicoldimetiléter o dietilenglicoldimetiléter, alcoholes como metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol o terc-butanol, hidrocarburos como benceno, xileno, tolueno, hexano, ciclohexano o fracciones de
5 petróleo, u otros disolventes como dimetilformamida, dimetilacetamida, acetonitrilo o piridina, son preferentes como disolventes tetrahidrofurano, metanol, etanol, isopropanol o, en el caso de dicloruro de estaño, dimetilformamida.
Los compuestos de fórmula (IX) son conocidos, pueden sintetizarse según procedimientos conocidos a partir de loscompuestos de partida correspondientes o pueden prepararse análogamente a procedimientos descritos en la parte10 de ejemplos.
Los compuestos de fórmula (IV) en la que Y representa cloro, son conocidos o pueden prepararse haciendoreaccionar compuestos de fórmula
O R2 O
O
A
Cl O N
S
N
H
N
(X), R1 O
15 en la que R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente, y
A representa metilo o (2-metoxietoxi)metilo, 20 en la primera etapa mediante escisión del grupo metoxi o (2-metoxietoxi)metoxi dando compuestos de fórmula
O R2 O
HO
N
N R1
25 en la que R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente, y en la segunda etapa con compuestos de fórmula
Cl 30
en la que m tiene el significado dado anteriormente, y E representa bromo o yodo.
Cl
O SH
N
(XI),
O
E m (XII),
35 Para el caso en que A represente metilo, la reacción de la primera etapa se realiza en general en disolventes inertes en presencia de tribromuro de bromo, preferentemente en un intervalo de temperatura de –78 ºC hasta temperaturaambiente a presión normal.
Son disolventes inertes, por ejemplo, diclorometano o 1,2-dicloroetano, preferentemente diclorometano.
40 Para el caso en que A represente (2-metoxietoxi)metilo, la reacción de la primera etapa se realiza en general endisolventes inertes en presencia de ácido trifluoroacético, preferentemente en un intervalo de temperatura de temperatura ambiente hasta reflujo del disolvente a presión normal.
45 Son disolventes inertes, por ejemplo, diclorometano o 1,2-dicloroetano, es preferente el diclorometano.
La reacción de la segunda etapa se realiza en general en disolventes inertes, en presencia de una base, preferentemente en un intervalo de temperatura de temperatura ambiente hasta reflujo del disolvente a presiónnormal. Eventualmente, se lleva a cabo esta reacción en un microondas
50 Son disolventes inertes, por ejemplo, N,N-dimetilformamida o 1-metil-2-pirrolidina, es preferente la N,Ndimetilformamida.
Son bases, por ejemplo, carbonatos alcalinos como carbonato de cesio, sodio o potasio.
Los compuestos de fórmula (XII) son conocidos o pueden sintetizarse según procedimientos conocidos a partir delos compuestos de partida correspondientes.
5 Los compuestos de fórmula (IV) en la que Y representa hidroxilo, son conocidos o pueden prepararse haciendoreaccionar en la segunda etapa de la síntesis anteriormente dada los compuestos de fórmula (XI) con (2bromoetoxi)(terc-butil)dimetilsilano y escindiendo a continuación el grupo sililo.
10 Los compuestos de fórmula (X) son conocidos o pueden prepararse haciendo reaccionar el compuesto de fórmula
(VI) en la primera etapa con compuestos de fórmula
15 en la que R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente, y
A representa metilo o (2-metoxietoxi)metilo,
dando compuestos de fórmula 20 R2
AO O Cl H OH N
S
N
H N
(XIV), R1 O
en la que R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente, y
25 A representa metilo o (2-metoxietoxi)metilo,
y ciclando en la segunda etapa en presencia de fosgeno o equivalentes de fosgeno como, por ejemplo, carbonildiimidazol (CDI) dando compuestos de fórmula (X).
30 Las reacciones de la primera etapa se realizan según el procedimiento que se describe para la reacción del compuesto de fórmula (VI) con compuestos de fórmula (VII) hasta compuestos de fórmula (VIII).
Las reacciones de la segunda etapa se realizan según el procedimiento que se describe para la reacción decompuestos de fórmula (VIII) hasta compuestos de fórmula (II).
35 Los compuestos de fórmula (XIII) son conocidos o pueden prepararse reduciendo el grupo nitro de compuestos de fórmula
40 en la que R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente, y
A representa metilo o (2-metoxietoxi)metilo.
45 Las reacciones se realizan según el procedimiento que se describe para la reacción de compuestos de fórmula (XI) hasta compuestos de fórmula (VII).
Los compuestos de fórmula (XV) son conocidos o pueden sintetizarse según procedimientos conocidos a partir delos compuestos de partida correspondientes.
Los compuestos de fórmula (XVI) son conocidos o pueden prepararse escindiendo el grupo protector ftalimida decompuestos de fórmula
Si
H3C O O R2 O
H3C CH3 n N
N
(XVIII),
R1 O
5 en la que n, R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente. La reacción se realiza en general con una solución acuosa de metilamina o una solución de hidrato de hidrazina en
10 etanol, preferentemente con una solución acuosa de metilamina a reflujo del disolvente a presión normal.
Los compuestos de fórmula (XVIII) son conocidos o pueden prepararse haciendo reaccionar en la primera etapa
compuestos de fórmula (VII) con un compuesto de fórmula
O
dando compuestos de fórmula
SiH3C
R2O OH3C
O CH3 n
H OH N
N N (XX),
R1 O
20 en la que n, R1 y R2 tienen el significado dado anteriormente,
y ciclando en la segunda etapa en presencia de fosgeno o equivalentes de fosgeno como, por ejemplo, carbonildiimidazol (CDI) dando los compuestos de fórmula (XVIII).
25 Las reacciones de la primera etapa se realizan según el procedimiento que se describe para la reacción delcompuesto de fórmula (VI) con compuestos de fórmula (VII) dando compuestos de fórmula (VIII).
Las reacciones de la segunda etapa se realizan según el procedimiento que se describe para la reacción de30 compuestos de fórmula (VIII) dando compuestos de fórmula (II).
El compuesto de fórmula (XIX) es conocido o puede sintetizarse según procedimientos conocidos a partir de los
compuestos de partida correspondientes.
La preparación de los compuestos según la invención puede ilustrarse mediante los siguientes esquemas de síntesis: Esquema 1:
H3 C H3 C
H3C SiO H3C SiO H3C
R2 R2O O
H3C
NH2N NH2N
R1 R1
Cl O S
H N
O H3 C H3C H3C SiO H3C
R2 O O
Cl
H OH SNN H
N
N
R1
O
O
Cl
S Cl
H3 C
O H3C Si O H3C
O R2 O
n
Cl
ONH2 SNN H
R1 N
R1 O
HO
H
N
HO
R2 O
O
HO
R2 O
O
Cl
Cl
NH2
O
S
O
N
N
H
S
N
N
N
H
N
R1
R1
O
O
Esquema 2:
Cl
Cl
Cl
O
Los compuestos según la invención muestran un espectro de acción farmacológica valioso imprevisible.
Son adecuados por tanto para uso como medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades enhombres y animales.
En el caso de los compuestos según la invención, se trata de inhibidores duales de los factores de coagulación sanguínea Xa y trombina (factor IIa), que actúan particularmente como anticoagulantes. Los compuestos inhiben tanto trombina como factor Xa, impiden mediante la inhibición de la producción de y actividad trombina en coágulossu crecimiento potencial y presentan una amplia ventana terapéutica.
Además, los compuestos según la invención disponen de propiedades fisicoquímicas convenientes como, por ejemplo, buena solubilidad en agua y medios fisiológicos, lo que es una ventaja para su aplicación terapéutica.
Es un objetivo adicional de la presente invención el uso de compuestos según la invención para el tratamiento y/o laprofilaxis de enfermedades, preferentemente de enfermedades tromboembólicas y/o complicaciones tromboembólicas.
Se cuentan entre las “enfermedades tromboembólicas“ en el sentido de la presente invención particularmenteenfermedades como infarto de miocardio con elevación del segmento ST (STEMI) y sin elevación del segmento ST(no-STEMI), angina de pecho estable, angina de pecho inestable, reoclusiones y reestenosis después de intervenciones coronarias como angioplastia o derivación aortocoronaria, enfermedadas oclusivas arteriales periféricas, embolias pulmonares, trombosis venosas profundas y trombosis de venas renales, ataques isquémicostransitorios, así como apoplejía trombótica y trombembólica.
Los compuestos según la invención son por tanto adecuados también para la prevención y el tratamiento detromboembolias cardiogénicas como, por ejemplo, isquemias cerebrales, apoplejía y tromboembolias e isquemias sistémicas en pacientes con arritmias cardiacas agudas, intermitentes o persistentes como, por ejemplo, fibrilaciónauricular y aquellos que experimentan una cardioversión, además en pacientes con enfermedades de las válvulascardiacas o con válvulas cardiacas artificiales.
Las complicaciones tromboembólicas aparecen además en anemias hemolíticas microangiopáticas, circulaciones sanguíneas extracorpóreas como hemodiálisis, así como prótesis de válvulas cardiacas. Además, se tienen enconsideración también los compuestos según la invención para la profilaxis y/o el tratamiento de enfermedadesvasculares ateroscleróticas y enfermedades inflamatorias como enfermedades reumáticas del aparato locomotor,además igualmente para la profilaxis y/o el tratamiento de enfermedad de Alzheimer. Además, los compuestossegún la invención pueden usarse para la inhibición del crecimiento tumoral y de la formación de metástasis, en microangiopatías, degeneración macular relacionada con la edad, retinopatía diabética, nefropatía diabética y otrasenfermedades microvasculares, así como para la prevención y el tratamiento de complicaciones tromboembólicascomo, por ejemplo, tromboembolias venosas en pacientes con tumores, particulamente aquellos que han experimentado operaciones quirúrgicas importantes o una quimio- o radioterapia.
Además, se tienen en consideración también los compuestos según la invención para la profilaxis y/o el tratamiento de hipertonía pulmonar.
El concepto “hipertonía pulmonar“ comprende determinadas formas de hipertonía pulmonar como se establecen, porejemplo, por la Organización Mundial de la Salud (OMS) (“Clinical Classification of Pulmonary Hypertension“, Venecia 2003). Se citan como ejemplos la hipertonía arterial pulmonar, la hipertonía pulmonar en enfermedades delcorazón izquierdo, la hipertonía pulmonar en enfermedades pulmonares y/o hipoxia y la hipertonía pulmonar comoresultado de tromboembolias crónicas (CTEPH).
La “hipertonía arterial pulmonar“ incluye la hipertonía arterial pulmonar idiopática (IPAH, designada anteriormentetambién como hipertonía pulmonar primaria), la hipertonía arterial pulmonar familiar (FPAH) y la hipertonía arterialpulmonar asociada (APAH), que está asociada a colagenosis, defectos congénitos de derivación sistémicopulmonar, hipertensión portal, infección por VIH, la toma de determinadas drogas y medicamentos, con otrasenfermedades (enfermedades de la glándula tiroides, enfermedades de almacenamiento de glucógeno, enfermedadde Gaucher, telangiectasia hereditaria, hemoglobinopatías, enfermedades mieloproliferativas, esplenectomía), conenfermedades con una contribución venosa/capilar significativa como la enfermedad veno-oclusiva pulmonar y lahemangiomatosis pulmonar-capilar, así como la hipertonía pulmonar persistente en recién nacidos.
La hipertonía pulmonar en enfermedades del corazón izquierdo incluye la enfermedad de la aurícula o ventrículoizquierdo y fallos de válvula mitral o aórtica.
La hipertonía pulmonar en enfermedad pulmonar y/o hipoxia incluye enfermedades pulmonares obstructivas crónicas, enfermedad pulmonar intersticial, síndrome de apnea del sueño, hipoventilación alveolar, mal de montaña crónico y malformaciones constitutivas.
La hipertonía pulmonar como resultado de tromboembolias crónicas (CTEPH) incluye la oclusión tromboembólica dearterias pulmonares proximales, la oclusión tromboembólica de arterias pulmonares distales y embolias pulmonaresno trombóticas (tumor, parásitos, cuerpos extraños).
Es un objetivo adicional de la presente invención el uso de compuestos según la invención para la preparación demedicamentos para el tratamiento y/o la profilaxis de hipertonía pulmonar en sarcoidosis, histiocitosis X ylinfangiomatosis.
Además, pueden tenerse también en consideración las sustancias según la invención para el tratamiento de fibrosispulmonares y hepáticas.
Además, se tienen en consideración también los compuestos según la invención para el tratamiento y/o la profilaxisde sepsis (o septicemia), síndrome inflamatorio sistémico (SIRS), disfunción orgánica séptica, insuficiencia orgánicaséptica e insuficiencia multiorgánica, síndrome disneico agudo (ARDS), lesión pulmonar aguda (ALI), choqueséptico, DIC (“coagulación intravascular diseminada“ o “coagulopatía de consumo”) y/o de insuficiencia orgánicaséptica.
“Sepsis” se define como la aparición de una infección y un “síndrome de respuesta inflamatoria sistémica”(designado en adelante como “SIRS”). El SIRS aparece en el marco de infecciones, pero también en otros estadoscomo lesiones, quemaduras, choque, operaciones, isquemias, pancreatitis, reanimación o tumores. Según ladefinición del ACCP/SCCM Consensus Conference Committee de 1992 (Crit. Care Med. 1992; 20: 864-874), sedescriben los síntomas necesarios para el diagnóstico de “SIRS” para diagnóstico y parámetros de medida (entre otros, temperatura corporal modificada, frecuencia cardiaca elevada, dificultades de respiración y hemogramamodificado). Posteriormente (2001), la SCCM/ESICM/ACCP/ATS/SIS International Sepsis Definitions Conferencemantuvo esencialmente los criterios, pero refinó los detalles (Levy y col., Crit. Care Med. 2003; 31: 1250-1256).
En el transcurso de una sepsis, puede llegarse a una activación del sistema de coagulación (“coagulación intravascular diseminada“ o “coagulopatía de consumo“, designada en adelante como “DIC”) con formación demicrotrombos en distintos órganos y complicaciones hemorrágicas secundarias. Además, puede llegarse a daño endotelial con elevación de la permeabilidad vascular y aparición de líquido y proteínas en el espacio extravasal. Enel transcurso posterior, puede llegarse a una insuficiencia de un órgano (por ejemplo, insuficiencia renal, insuficiencia hepática, insuficiencia respiratoria, déficit del sistema nervioso central e insuficiencia cardiaca/circulatoria) o insuficiencia multiorgánica. “Choque séptico“ designa la aparición de una reducción de lapresión sanguínea de tratamiento necesario que promueve un daño orgánico adicional y está acompañado por unempeoramiento del pronóstico.
Los agentes patológicos pueden ser bacterias (gram-positivas y gram-negativas), hongos, virus y/o eucariotas. Lapuerta de entrada o infección primaria pueden ser, por ejemplo, neumonía, infección de las vías urinarias o peritonitis. La invención puede estar acompañada, pero no obligatoriamente, por una bacteremia.
La DIC y/o el SIRS pueden aparecer en el marco de una sepsis, pero también como resultado de operaciones,enfermedades tumorales, quemaduras u otras lesiones. En la DIC, se llega a una activación masiva del sistema decoagulación en la superficie de células endoteliales dañadas, las superficies de cuerpos extraños o tejidosextravasculares lastimados. Como consecuencia, se llega a la coagulación en vasos pequeños de distintos órganos,con hipoxia y posterior disfunción orgánica. En segundo lugar, se llega al consumo de factores de coagulación (porejemplo, factor X, protrombina y fibrinógeno) y plaquetas, mediante el cual se rebaja la capacidad de coagulación dela sangre y pueden aparecer hemorragias graves.
La terapia de la sepsis consiste por un lado en la eliminación consistente de la causa infecciosa, por ejemplo,mediante saneamineto operativo del foco y antibiosis. Por otro lado, consiste en la asistencia temporal por medicinaintensiva del sistema orgánico afectado. Se describen terapias de los distintos estados de esta enfermedad, porejemplo, en la siguiente publicación (Dellinger y col., Crit. Care Med. 2004; 32: 858-873). Para la DIC, no existen terapias eficaces probadas.
Son objeto adicional de la presente invención medicamentos que contienen un compuesto según la invención y uno
o más principios activos adicionales, particularmente para el tratamiento y/o la profilaxis de las enfermedades citadas anteriormente. Como principios activos de combinación adecuados, se citan por ejemplo y preferentemente:
•
Terapia antibióticaSe tienen en cuenta distintas combinaciones de medicamentos antibióticos o antifúngicos, como terapia estudiada (antes de la aparición del hallazgo microbiano) o como terapia específica.
•
Terapia de líquidosPor ejemplo, cristaloides o líquidos coloidales.
•
VasopresoresPor ejemplo, norepinefrina, dopamina o vasopresina.
•
Terapia inotrópicaPor ejemplo, dobutamina.
•
Corticosteroides Por ejemplo, hidrocortisona o fludrocortisona.
•
Proteína C activada humana recombinante Xigris
•
Productos sanguíneosPor ejemplo, concentrado de eritrocitos, concentrado de trombocitos, eritropoyetina o plasma congeladoreciente.
•
Ventilación artificial en lesión pulmonar aguda (ALI) inducida por sepsis
o síndrome disneico agudo (ARDS) Por ejemplo, hipercapnia permisiva, menores volúmenes corrientes
•
Sedación, administración de analgésicos y bloqueo neuromuscularSedación: por ejemplo, diazepam, lorazepam, midazolam o propofol. Opiáceos: por ejemplo, fentanilo,hidromorfona, morfina, meperidina o remifentanilo. AINE: por ejemplo, ketorolaco, ibuprofeno o acetaminofeno. Bloqueo neuromuscular: por ejemplo, pancuronio.
•
Control de glucosa Por ejemplo, insulina, glucosa.
•
Procedimientos de sustitución renal Por ejemplo, hemofiltración venovenosa continua o hemodiálisis intermitente. Dopamina a bajas dosis para protección renal.
•
AnticoagulantesPor ejemplo, para la profilaxis de trombosis o en procedimientos de sustitución renal, por ejemplo, heparinano fraccionada, heparina de bajo peso molecular, heparinoides, hirudina, bivalirudina o argatrobán.
•
Terapia de bicarbonato
•
Profilaxis de úlcera por estrésPor ejemplo, inhibidores del receptor H2, antiácidos.
Los compuestos según la invención pueden usarse además para impedir la coagulación ex vivo, por ejemplo, para laconservación de productos sanguíneos y plasmáticos, para la purificación/pretratamiento de catéteres y otros medios auxiliares y aparatos médicos, para el recubrimiento de superficies artificiales de medios auxiliares y aparatos médicos usados in vivo o ex vivo o en muestras biológicas que contienen factor Xa y/o factor IIa.
Es un objetivo adicional de la presente invención el uso de los compuestos según la invención para la preparaciónde un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, particularmente de las enfermedadesanteriormente citadas.
Es un objetivo adicional de la presente invención un procedimiento para impedir la coagulación sanguínea in vitro, particularmente en conservas sanguíneas o muestras biológicas que contienen factor Xa y/o factor IIa, caracterizadoproque se añade una cantidad anticoagulante eficaz del compuesto según la invención.
Son un objeto adicional de la presente invención medicamentos que contienen un compuesto según la invención y uno o varios principios activos adicionales, particularmente para el tratamiento y/o la profilaxis de las enfermedadesanteriormente citadas. Como principios activos de combinación adecuados se citan, por ejemplo y preferentemente:
•
agentes hipolipidemiantes, particularmente inhibidores de la HMG-CoA-(3-hidroxi-3-metilglutarilcoenzima A)-reductasa como, por ejemplo, lovastatina (Mevacor; documento US 4.231.938), simvastatina(Zocor; documento US 4.444.784), pravastatina (Pravachol; documento US 4.346.227), fluvastatina (Lescol;documento US 5.354.772) y atorvastatina (Lipitor; documento US 5.273.995);
•
agentes terapéuticos coronarios/vasodilatadores, particularmente inhibidores de ACE (enzima conversorade angiotensina) como, por ejemplo, captopril, lisinopril, enalapril, ramipril, cilazapril, benazepril, fosinopril,quinapril y perindopril, o antagonistas de receptor AII-(angiotensina II) como, por ejemplo, embusartán (documento US 5.863.930), losartán, valsartán, irbesartán, candesartán, eprosartán y temisartán, o
antagonistas de adrenoceptor � como, por ejemplo, carvedilol, alprenolol, bisoprolol, acebutolol, atenolol, betaxolol, carteolol, metoprolol, nadolol, penbutolol, pindolol, propanolol y timolol, o antagonistas deadrenoceptor alfa-1 como, por ejemplo, prazosina, bunazosina, doxazosina y terazosina, o diuréticos como, porejemplo, hidroclorotiazida, furosemida, bumetanida, piretanida, torasemida, amilorida y dihidralazina, o
5 bloqueantes de canal de calcio como, por ejemplo, verapamilo y diltiazem, o derivados de dihidropiridina como, por ejemplo, nifedipino (Adalat) y nitrendipino (Bayotensin), o preparados nitro como, por ejemplo, 5mononitrato de isosorbida, dinitrato de isosorbida y trinitrato de glicerina, o sustancias que causan unaelevación del monofosfato de guanosina cíclico (GMPc) como, por ejemplo, estimulantes de la guanilato ciclasa soluble (documentos WO 98/16223, WO 98/16507, WO 98/23619, WO 00/06567, WO 00/06568, WO 00/06569,
10 WO 00/21954, WO 00/66582, WO 01/17998, WO 01/19776, WO 01/19355, WO 01/19780, WO 01/19778, WO 07/045366, WO 07/045367, WO 07/045369, WO 07/045370, WO 07/045433);
• activadores de plasminógeno (trombolíticos/fibrinolíticos) y compuestos aumentadores de la trombólisis/fibrinólisis como inhibidores del activador de plasminógeno (inhibidores de PAI) o inhibidores del
15 inhibidor de la fibrinólisis activada por trombina (inhibidores de TAFI) como, por ejemplo, activador de plasminógeno de tejido (t-PA), estreptocinasa, reteplasa y urocinasa;
• sustancias anticoagulantes eficaces (anticoagulantes) como, por ejemplo, heparina (UFH), heparinas de
bajo peso molecular (NMH) como, por ejemplo, tinzaparina, certoparina, parnaparina, nadroparina, ardeparina,20 enoxaparina, reviparina, dalteparina y danaparoide,
AVE 5026 (Sanofi-Aventis, presentación de la compañía del 12 de febrero de 2008),
M118 (Momenta Pharmaceuticals Inc, nota de prensa del 14 de febrero de 2008),
25 ORG42675 (Organon International Inc, página web de la compañía, abril de 2007),
e inhibidores directos de trombina (DTI) como, por ejemplo
30 Exanta (Ximelagatrán)
O O
N
N H
H N
HN HO
NH O O
CH3
,
Rendix (Dabigatrán)
35 CH3 O
N O
N O
CH3H
N N NH2 NN
O
CH3
O
,
AZD-0837 [Informe anual de AstraZeneca 2006, 19 de marzo de 2007]
OO HO
NN
H N
F
O NH2 CH3F O Cl
,
SSR-182289A [J. Lorrain y col. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 2003, 304, 567-574; J-M Altenburger y col. Bioorg.Med.Chem. 2004, 12, 1713-1730]
F
TGN-167 [S. Combe y col. Blood 2005, 106, resumen 1863 (ASH 2005)],
N-[(benciloxi)carbonil]-L-fenilalanil-N-[(1S)-1-(dihidroxiboril)-4-metoxibutil]-D-prolinamida [documento WO 2005/084685]
CH 3
O
O
O
NO
O
H
N N OH
HH B HO
, sofigatrán [WHO Drug Information 2007, 21, 77] H
H3C
H2N CH3
N
N S CH3
H CH3O HO
CH3OHN
O
,
MCC-977 [“Mitsubishi Pharma website pipeline“ 2006, 25 de julio de 2006],
MPC-0920 [Nota de prensa: “Myriad Genetics Begins Phase 1 Trial of Anti-Thrombin Drug MPC-0920“, Myriad
Genetics Inc, 2 de mayo de 2006] y TGN-255 (flovagatrán)
CH3 O
O
O O
N
O
H N
O Na+ N B
HH OH
5 e inhibidores directos del factor Xa como, por ejemplo rivaroxabán (BAY 59-7939): 5-Cloro-N-({(5S)-2-oxo-3-[4-(3-oxomorfolin-4-il)fenil]-1,3-oxazolidin-510 il}metil)tiofeno-2-carboxamida [documento WO 2001/47919] O
AX-1826 [S. Takehana y col. Japanese Journal of Pharmacology 2000, 82 (Supl. 1), 213P; T. Kayahara y col. 15 Japanese Journal of Pharmacology 2000, 82 (Supl. 1), 213P],
tanogitrán (BIBT-986, profármaco: BIBT-1011): N-[(1R)-1-{2-[({4-[amino(imino)metil]fenil}amino)metil]-1metil-1H-bencimidazol-5-il}-1-metil-2-oxo-2-pirrolidin-1-iletil]glicina [American Chemical Society – 226ª Reunión Annual, Nueva York, NY, EE.UU., 2003]
20 HO
O
H
H 3C N N
N NHO N N
HCH3 NH2
,
compuestos que se dieron a conocer en el documento WO 2004/056784,
25 YM-150 [Y. Iwatsuki y col. Blood 2006, 108, resumen 911 (ASH 2006)],
N-{4-bromo-2-[(5-cloropiridin-2-il)carbamoil]-6-hidroxifenil}-1-isopropil-piperidin-4-carboxamida [documento JP2005/179272]
CH3
compuestos que se dieron a conocer en el documento WO 2000/242270,
AZ12300547: 6-[4-({(2S)-4-[(3-cloro-1H-indol-6-il)sulfonil]-2-metil-6-oxopiperazin-1-il}metil)fenil]-2-metilpiridazin3(2H)-ona [K.L Granberg y col. American Chemical Society – 232ª Reunión Nacional, San Francisco, EE.UU., 2006, MEDI 391]
, 10 compuestos que se dieron a conocer en el documento WO 2007/008142,
razaxabán (DPC-906): 1-(3-amino-1,2-benzoisoxazol-5-il)-N-(4-{2-[(dimetilamino)metil]-1H-imidazol-1-il}-2fluorofenil)-3-(trifluorometil)-1H-pirazol-5-carboxamida [J. Med. Chem. 2005, 48, 1729-1744] 15 FF
F F
H
N
N N
N
O N
NH2
N
H3C CH3 O
N
,
apixabán (BMS-562247): 1-(4-metoxifenil)-7-oxo-6-[4-(2-oxopiperidin-1-il)fenil]-4,5,6,7-tetrahidro-1Hpirazolo[3,4-c]piridin-3-carboxamida [documentos WO 2003/026652, WO 2003/049681] 20 O
NH2
N
N
N
O O
N
O
CH3
,
BMS-691648: 3-cloro-N-[(3S,4R)-1-(metilsulfonil)-4-{[4-(2-oxopiridin-1(2H)-il)benzoil]amino}piperidin-3-il]-1Hindol-6-carboxamida [T. Güngör y col. Drugs Fut. 2006, 31(Supl A): resumen P118; documento WO 2004/082687]
OH3C S
O
N
O O
N
H
O NH
N
NH
Cl
5 , DX-9065a: ácido (2S)-3-{7-[amino(imino)metil]-2-naftil}-2-(4-{[(3S)-1-etanimidoilpirrolidin-3il]oxi}fenil)propanoico [T. Nagahara y col. J. Med. Chem. 1994, 37, 1200-1207] NH
H2N
10 ,, DU-176b [Y. Morishima y col. Blood 2004, 104, resumen 1862 (ASH 2004); T. Fukuda y col. Blood 2004, 104, resumen 1852 (ASH 2004); T. Furugohri y col. Blood 2004, 104, resumen 1851 (ASH 2004)], 15 N-(5-cloropiridin-2-il)-N'-[(1S,2R,4S)-4-(dimetilcarbamoil)-2-{[(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro[1,3]tiazolo[5,4-c]piridin2-il)carbonil]amino}ciclohexil]etano-diamida [documentos US 2005/0020645, WO 2005/47296] CH3 ON
CH3 Cl
N S
O
HN H
N
N HN
H3C N
O O
, 20 compuestos que se dieron a conocer en el documento US 2005/0020645, LY517717: N-{(1R)-2-[4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazin-1-il]-2-oxo-1-feniletil}-1H-indol-6-carboxamida [documentos WO 2000/76971, WO 2002/100847] H3C
N
N
O H
N
N
N
H O 25 ,
813893 [“Proteinase Inhibitor Design - Fourth SCI-RSC Symposium, Proteinase 2004: Strategies for New Medicines (Part I)”, Londres], 6-cloro-N-{(3S)-1-[(1S)-1-metil-2-morfolin-4-il-2-oxoetil]-2-oxopirrolidin-3-il}naftaleno-2-sulfonamida [N.S. 5 Watson y col. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2006, 16, 3784; documentos WO 2002/100830; WO 2002/100886] Cl O
H
N
H3C
S N
OO ON O
, KFA-1982 (profármaco de KFA-1829) [T. Koizumi y col. Journal of Thrombosis and Hemostasis 2003, 1 Supl
10 1, P2022], EMD-503982 [Merck KGaA Annual Report 2006, 48-49], EMD-495235: 5-cloro-N-[(1R)-1-(metoximetil)-2-{[3-metil-4-(3-oxomorfolin-4-il)fenil]amino}-2-oxoetil]tiofeno-2
15 carboxamida [Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004, 14, 5817-5822]
Cl S
H
H 3C O N O ON
N
H
O O CH3
, M-55113: 4-[(6-cloro-2-naftil)sulfonil]-1-[(1-piridin-4-ilpiperidin-4-il)metil]piperazin-2-ona [H. Nishida y col. Chem. 20 Pharm. Bull. 2001, 49, 1237-1244] O
M-55551/M-55555: ácido (2R)-4-[(6-cloro-2-naftil)sulfonil]-6-oxo-1-[(1-piridin-4-ilpiperidin-4-il)metil]piperazin-225 carboxílico [H. Nishida y col. Chem. Pharm. Bull. 2002, 50, 1187-1194]
O OH
Cl N NN
S O O
O
N ,
M-55190: éster etílico del ácido (2R)-4-[(6-cloro-2-naftil)sulfonil]-6-oxo-1-[(1-piridin-4-ilpiperidin-430 il)metil]piperazin-2-carboxílico [H. Nishida y col. “16th Int Symp Med Chem”, Bolonia, 18-22 de septiembre, 2000, resumen PA-125]
CH3 Cl
N N OO
N
S O O
O
N , M-55532: 7-[(6-cloro-2-naftil)sulfonil]-8a-(metoximetil)-1'-piridin-4-iltetrahidro-5H-espiro[1,3-oxazolo[3,2a]pirazin-2,4'-piperidin]-5-ona [H. Nishida y col.” 228th ACS National Meeting”, Filadelfia, 22-26 de agosto, 2004, MEDI-251; H. Nishida y col. Chem. Pharm. Bull. 2004, 52, 406-412; idem 459-462]
CH3
O
OO
S
O
N
N N
N
Cl O
, N-({7-[(5-cloro-1H-indol-2-il)sulfonil]-5-oxo-1'-propioniltetrahidro-8aH-espiro[1,3-oxazolo-[3,2-a]pirazin-2,4'piperidin]-8a-il}metil)-N-metilglicina [documento WO 2006/106804] O
HO N OOH3C
S O O NN NN
ClH3C
H O
,
PRT54021 [U. Sinha y col. Blood 2006, 108, resumen 907 (ASH 2006); K. Abe y col. Blood 2006, 108, resumen 15 901 (ASH 2006)],
compuestos que se dieron a conocer en el documento WO 2006/002099,
otamixabán (FXV-673, RPR-130673): éster metílico del ácido (2R,3R)-2-{3-[amino(imino)metil]bencil}-3-{[4-(120 oxidopiridin-4-il)benzoil]amino}butanoico [V. Chu y col. Thrombosis Research 2001, 103, 309-324; K.R. Guertin y col. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2002, 12, 1671-1674]
25 AVE3247 [Sanofi Aventis, presentación de la compañía, París, 13 de febrero de 2007], SAR377142 (SSR-7142) [Sanofi Aventis, presentación de la compañía, París, 13 de febrero de 2007], HMR-2906 [“XVIIth Congress of the International Society for Thrombosis and Haemostasis”, Washington D.C.,
30 EE.UU., 14-21 de agosto, 1999; “Generating greater value from our products and pipeline”. Presentación de la compañía Aventis SA, 5 de febrero, 2004],
idraparinux [Harry R. Büller y col. Blood, 2006, 108, resumen 571 (ASH 2006)] y
fondaparinux;
•
sustancias inhibidoras de la agregación de plaquetas (inhbidores de la agregación de plaquetas, inhibidoresde la agregación de trombocitos) como, por ejemplo, ácido acetilsalicílico (como, por ejemplo, aspirina), ticlopidina (Ticlid), clopidogrel (Plavix) y prasugrel;
•
antagonistas de receptor de fibrinógeno (antagonistas de glicoproteína-IIb/IIIa) como, por ejemplo,abciximab, eptifibatida, tirofibán, lamifibán, lefradafibán y fradafibán;
•
así como antiarrítmicos.
Son un objeto adicional de la presente invención medicamentos que contienen al menos un compuesto según lainvención, habitualmente junto con uno o varios coadyuvantes inertes no tóxicos farmacéuticamente adecuados, asícomo su uso con los fines anteriormente citados.
Los compuestos según la invención pueden actuar de forma sistémica y/o local. Con este fin, pueden administrarsede modo adecuado como, por ejemplo, por vía oral, parenteral, pulmonar, nasal, sublingual, lingual, bucal, rectal,dérmica, transdérmica, conjuntival, ótica o en forma de implante o prótesis endovascular.
Para estos modos de administración, pueden administrarse los compuestos según la invención en formas deadministración adecuadas.
Para administración oral, son adecuadas formas de administración de liberación rápida y/o modificada de loscompuestos según la invención funcionales según el estado de la técnica, que contienen los compuestos según lainvención en forma cristalina y/o amorfizada y/o disuelta como, por ejemplo, comprimidos (comprimidos norevestidos o revestidos, por ejemplo, con revestimientos gastrorresistentes o de disgregación retardada o insolubles,que controlan la liberación del compuesto según la invención), comprimidos o películas/obleas de disgregaciónrápida en la cavidad oral, películas/liofilizados, cápsulas (por ejemplo, cápsulas de gelatina dura o blanda), grageas,gránulos, pellas, polvos, emulsiones, suspensiones, aerosoles o soluciones.
La administración parenteral puede realizarse evitando una etapa de resorción (por ejemplo, por vía intravenosa,intraarterial, intracardiaca, intraespinal o intralumbar) o incluyendo una resorción (por ejemplo, por vía intramuscular,subcutánea, intracutánea, percutánea o intraperitoneal). Para administración parenteral, son adecuados comoformas de administración, entre otros, preparados de inyección e infusión en forma de soluciones, suspensiones,emulsiones, liofilizados o polvos estériles.
Para los demás modos de administración, son adecuadas, por ejemplo, presentaciones farmacéuticas de inhalación(entre otros, inhaladores de polvo, nebulizadores), gotas, soluciones o pulverizadores nasales, comprimidos,películas/obleas o cápsulas de administración lingual, sublingual o bucal, supositorios, preparaciones auriculares uoculares, cápsulas vaginales, suspensiones acuosas (lociones, mezclas para agitar), suspensiones lipófilas,pomadas, cremas, sistemas terapéuticos transdérmicos (por ejemplo, parches), leches, pastas, espumas, polvosfinos, implantes o prótesis endovasculares.
Son preferentes la administración oral o parenteral, particularmente la administración parenteral.
Los compuestos según la invención pueden transformarse en las formas de administración mencionadas. Estopuede realizarse de modo conocido mediante mezclado con coadyuvantes inertes no tóxicos farmacéuticamente adecuados. Se cuentan entre estos coadyuvantes, entre otros, vehículos (por ejemplo, celulosa microcristalina,lactosa, manitol), disolventes (por ejemplo, polietilenglicoles líquidos), emulsionantes y agentes dispersantes o humectantes (por ejemplo, dodecilsulfato de sodio, oleato de polioxisorbitán), aglutinantes (por ejemplo, polivinilpirrolidona), polímeros sintéticos y naturales (por ejemplo, albúmina), estabilizantes (por ejemplo,antioxidantes como, por ejemplo, ácido ascórbico), colorantes (por ejemplo, pigmentos inorgánicos como, porejemplo, óxidos de hierro) y correctores del sabor y/u olor.
En general, se ha mostrado ventajoso administrar en administración parenteral cantidades de aproximadamente0,001 a 5 mg/kg, preferentemente de aproximadamente 0,01 a 1 mg/kg de peso corporal para obtener resultadoseficaces. En administración oral, la dosificación asciende a aproximadamente 0,01 a 100 mg/kg, preferentemente a aproximadamente 0,01 a 20 mg/kg y con muy especial preferencia a 0,1 a 10 mg/kg de peso corporal.
A pesar de ello, puede ser eventualmente necesario desviarse de las cantidades citadas, a saber, dependiendo del peso corporal, modo de administración, comportamiento individual frente al principio activo, tipo de preparado ymomento o intervalo en el que se realiza la administración. Así, puede ser suficiente en algunos casos con menos dela cantidad mínima anteriormente citada, mientras que en otros casos debe superarse el límite superior citado. En elcaso de administración de cantidades grandes, puede ser aconsejable dividir ésta en varias tomas individuales a lolargo del día.
Los siguientes ejemplos de realización ilustran la invención. La invención no está limitada a los ejemplos.
Los datos de porcentaje en los siguientes ensayos y ejemplos son, a menos que se indique otra cosa, porcentajesen peso; las partes son partes en peso. Las relaciones de disolvente, relaciones de dilución y datos de concentración de soluciones líquido/líquido se refieren respectivamente al volumen.
A. Ejemplos
Abreviaturas
CDI carbonildiimidazol D doblete (en RMN) TLC cromatografía en capa fina DCI ionización química directa (en EM) dd doblete de dobletes (en RMN) DMAP 4-dimetilaminopiridinaDMF N,N-dimetilformamida DMSO dimetilsulfóxido d día(s)
d. t. del valor teórico (en rendimiento) eq. equivalente(s) ESI ionización por electropulverización (en EM) h hora(s) HPLC cromatografía líquida de alta presión/alto rendimiento CL-EM cromatografía líquida acoplada a espectroscopía de masas m multiplete (en RMN) min minuto(s) EM espectroscopía de masas RMN espectroscopía de resonancia nuclear FI fase inversa (en HPLC) TA temperatura ambiente TR tiempo de retención (en HPLC) s singlete (en RMN) THF tetrahidrofurano
Procedimientos de CL-EM y HPLC
Procedimiento 1 (HPLC): Instrumento: HP 1100 con detección DAD; columna: Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2,1 mm, 3,5 μm; eluyente A: 5 ml de ácido perclórico (al 70 %) / l de agua, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0 min 2 %de B, 0,5 min 2 % de B, 4,5 min 90 % de B, 6,5 min 90 % de B, 6,7 min 2 % de B, 7,5 min 2 % de B; flujo: 0,75 ml/min; temperatura de columna: 30 °C; detección: UV 210 nm.
Procedimiento 2 (HPLC): Instrumento: HP 1100 con detección DAD; columna: Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2,1mm, 3,5 μm; eluyente A: 5 ml de ácido perclórico (al 70 %) / l de agua, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0 min 2 %de B, 0,5 min 2 % de B, 4,5 min 90 % de B, 9 min 90 % de B, 9,2 min 2 % de B, 10 min 2 % de B; flujo: 0,75 ml/min; temperatura de columna: 30 °C; detección: UV 210 nm.
Procedimiento 3 (CL-EM): Tipo de aparato de EM: Micromass ZQ; tipo de aparato de HPLC: Waters Alliance 2795;columna: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácidofórmico al 50 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %; gradiente: 0,0 min 90 % de A � 2,5 min 30 % de A � 3,0 min 5 % de A • 4,5 min 5 % de A; flujo: 0,0 min 1 ml/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 ml/min; estufa: 50 °C; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 4 (CL-EM): Tipo de aparato de EM: Micromass ZQ; tipo de aparato de HPLC: HP 1100 Series; UVDAD; columna: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %; gradiente: 0,0 min 90 % de A
� 2,5 min 30 % de A � 3,0 min 5 % de A � 4,5 min 5 % de A; flujo: 0,0 min 1 ml/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 ml/min; estufa: 50 °C; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 5 (CL-EM): Instrumento: Micromass Quattro LCZ con HPLC Agilent Serie 1100; columna: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %; gradiente: 0,0 min 90 % de A � 2,5 min 30 % de A � 3,0 min 5 % de A � 4,5 min 5 % de A; flujo: 0,0 min 1 ml/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 ml/min; estufa: 50 °C;detección UV: 208-400 nm.
Procedimiento 6 (CL-EM): Tipo de aparato de EM: Micromass ZQ; tipo de aparato de HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; columna: Phenomenex Gemini 3μ 30 mm x 3,00 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido fórmico al 50%, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %; gradiente: 0,0 min 90 % de A � 2,5 min 30 % de A � 3,0 min 5 % de A � 4,5 min 5 % de A; flujo: 0,0 min 1 ml/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 ml/min; estufa: 50 °C; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 7 (CL-EM): Instrumento: Micromass Platform LCZ con HPLC Agilent Serie 1100; columna: ThermoHypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %, eluyente B: 1 l deacetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %; gradiente: 0,0 min 100 % de A � 0,2 min 100 % de A • 2,9 min 30 % de A � 3,1 min 10 % de A � 5,5 min 10 % de A; estufa: 50 °C; flujo: 0,8 ml/min; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 8 (CL-EM): Tipo de aparato de EM: Waters ZQ; tipo de aparato de HPLC: Waters Alliance 2795; columna: Phenomenex Onyx Monolithic C18, 100 mm x 3 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido fórmico al50 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %; gradiente: 0,0 min 90 % de A � 2 min 65 % de A � 4,5 min 5 % de A � 6 min 5 % de A; flujo: 2 ml/min; estufa: 40 °C; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 9 (CG-EM): Instrumento: Micromass GCT, GC6890; columna: Restek RTX-35MS, 30 m x 250 μm x 0,25 μm; flujo constante con helio: 0,88 ml/min; estufa: 60 °C; entrada: 250 °C; gradiente: 60 °C (mantenido 0,30
min), 50 °C/min - 120 °C, 16 °C/min - 250 °C, 30 °C/min - 300 °C (mantenido 1,7 min).
Procedimiento 10 (CG-EM): Instrumento: Micromass GCT, GC6890; columna: Restek RTX-35, 15 m x 200 μm x 0,33 μm; flujo constante con helio: 0,88 ml/min; estufa: 70 °C; entrada: 250 °C; gradiente: 70 °C, 30 °C/min - 310 °C 5 (mantenido 3 min).
Procedimiento 11 (CL-EM): Instrumento: Micromass Quattro LCZ con HPLC Agilent Serie 1100; columna: Phenomenex Onyx Monolithic C18, 100 mm x 3 mm, eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %,eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %; gradiente: 0,0 min 90 % de A � 2 min 65 % de A • 4,5 min 5 % de A � 6 min 5 % de A; flujo: 2 ml/min; estufa: 40 °C; detección UV: 208- 400 nm.
Procedimiento 12 (CL-EM): Instrumento: Micromass Quattro LCZ con HPLC Agilent Serie 1100; columna: Phenomenex Synergi 2,5 μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido fórmicoal 50 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %; gradiente: 0,0 min 90 % de A � 0,1 min 90
15 % de A � 3,0 min 5 % de A � 4,0 min 5 % de A � 4,1 min 90 % de A; flujo: 2 ml/min; estufa: 50 °C; detección UV: 208- 400 nm.
Procedimiento 13 (CL-EM): Tipo de aparato de EM: Micromass ZQ; tipo de aparato de HPLC: Waters Alliance 2795; columna: Phenomenex Synergi 2,5 μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %; gradiente: 0,0 min 90 % deA - 0,1 min 90 % de A - 3,0 min 5 % deA - 4,0 min 5 % de A - 4,01 min 90 % de A; flujo: 2 ml/min; estufa: 50°C; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 14 (CL-EM): Instrumento: Micromass Quattro Premier con Waters UPLC Acquity; columna: Thermo
25 Hypersil GOLD 1,9μ 50 mm x 1 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %; gradiente: 0,0 min 90 % de A - 0,1 min 90 % de A - 1,5 min 10 % deA - 2,2 min 10 % de A; flujo: 0,33 ml/min; estufa: 50 °C; detección UV: 210 nm.
Compuestos de partida
Ejemplo 1A
5-Cloro-N-[(2S)-oxiran-2-ilmetil]tiofeno-2-carboxamida
O Se prepara el ejemplo 1A como se describe en el documento WO04/101557 (ejemplo 6A).
Ejemplo 2A
3-(Hidroximetil)piridin-2(1H)-ona
45 A una suspensión de 10,0 g (71,9 mmol) de ácido 2-hidroxinicotínico en 100 ml de tolueno se añaden a TA 23,2 g (144 mmol) de hexametildisilano y 0,781 g (7,19 mmol) de clorotrimetilsilano y se agita durante 30 min a 110 ºC conun agitador KPG. Después, se enfría a –40 ºC y se añaden gota a gota a la solución 22,5 g (158 mmol) de una solución 1 M de hidruro de diisobutilaluminio en diclorometano. Se descongela a TA, se agita durante 18 h a TA, se lleva finalmente a pH= 4 con ácido clorhídrico diluido a -10 ºC y se añaden 500 ml de metanol de modo que latemperatura no supere los –10 ºC. Se separa por filtración el sedimento formado, se añaden al filtrado 100 ml deagua, se agita durante 1 h a 50 ºC y se separa por filtración el sedimento. Después de concentrar el filtrado, se obtienen 8,55 g (95 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 11,53 (s a, 1H), 7,40 (d, 1H), 7,25 (d, 1H), 6,19 (dd, 1H), 5,00 (t, 1H), 4,28 55 (d, 2H).
HPLC (procedimiento 1): TR = 0,27 min.
EM (ESIpos, m/z): 148 (M+Na)+.
Ejemplo 3A
3-({[terc-Butil(difenil)silil]oxi}metil)piridin-2(1H)-ona
5 A 1,00 g (7,99 mmol) del compuesto del ejemplo 2A en 19 ml de DMF se añaden a TA 0,65 g (9,59 mmol) deimidazol, 2,42 g (8,79 mmol) de terc-butildifenilclorosilano y 0,10 g (0,80 mmol) de DMAP y se agita durante 18 h.Después, se añaden 180 ml de agua y se deja durante 3 h a 0 ºC. Después de filtrar, se purifica el residuo obtenido
10 mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo/etildimetilamina 1000:1). Se obtienen 801 mg (27 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 11,61 (s a, 1H), 7,69-7,52 (m, 5H), 7,51-7,38 (m, 6H), 7,30 (d, 1H), 6,29 (dd, 1H), 4,51 (s, 2H), 1,05 (s, 9H). 15 HPLC (procedimiento 2): TR = 5,27 min.
EM (DCI, m/z): 364 (M+H)+.
20 Ejemplo 4A
3-({[terc-Butil(difenil)silil]oxi}metil)-1-(2-cloro-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona
25 A 1,08 g (2,97 mmol) del compuesto del ejemplo 3A en 21 ml de DMF se añaden a 0 °C 0,500 g (4,46 mmol) de tercbutilato de potasio y se agita durante 30 min a temperatura ambiente. Se añaden 0,571 g (3,27 mmol) de 2-cloro-1fluoro-4-nitrobenceno y se agita a TA. Después de 4,5 h, se añaden 200 ml de agua y después se extrae tres vecescon acetato de etilo. Se lavan las fases orgánicas combinadas con agua y a continuación se secan sobre sulfato de
30 sodio. Después de filtrar, se separa el disolvente a vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 9:1). Se obtienen 872 mg (56 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,52 (d, 1H), 8,32 (dd, 1H), 7,85 (d, 1H), 7,76 (dd, 1H), 7,68-7,63 (m, 4H),7,59-7,55 (m, 1H), 7,54-7,41 (m, 6H), 6,54 (dd, 1H), 4,56 (s a, 2H), 1,07 (s, 9H). 35 HPLC (procedimiento 2): TR = 6,05 min.
EM (DCI, m/z): 519 (M+H)+.
40 Ejemplo 5A
1-(4-Amino-2-clorofenil)-3-({[terc-butil(difenil)silil]oxi}metil)piridin-2(1H)-ona
Se disuelven 800 mg (1,54 mmol) del compuesto del ejemplo 4A en 48 ml de THF. Después, se añaden 50 mg (0,05mmol) de paladio sobre carbón y se hidrogena a TA en atmósfera de hidrógeno a presión normal. A continuación, se 5 filtra, se lava posteriormente con THF y se libera el filtrado de disolvente. Se vuelve a hacer reaccionar el producto de reacción (pureza: 95 %) sin purificación adicional.
HPLC (procedimiento 1): TR = 5,55 min.
10 EM (ESIpos, m/z): 489 (M+H)+.
Ejemplo 6A
N-{[(5S)-3-{4-[3-({[terc-Butil(difenil)silil]oxi}metil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-cloro-fenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}-515 clorotiofeno-2-carboxamida
CH3
H3C H3C Si
O O O ClON
N SH
N
Cl O
A solución de 789 mg (1,61 mmol) del compuesto del ejemplo 5A en 24 ml de acetonitrilo se añaden 386 mg (1,77
20 mmol) del compuesto del ejemplo 1A. Se añaden a la supensión 540 mg (2,42 mmol) de perclorato de magnesio. Después de 19 h a TA, se añaden 193 mg (0,952 mmol) del compuesto del ejemplo 1A y se agita durante 30 hadicionales a TA. Después, se añaden 523 mg (2,46 mmol) de 1,1‘-carbonildiimidazol y 19 mg (0,09 mmol) de DMAPy se calienta a 60 ºC. Después de 21 h, se diluye con solución acuosa saturada de cloruro de sodio y acetato deetilo. Se extrae la fase acuosa dos veces con acetato de etilo y se secan las fases orgánicas combinadas sobre
25 sulfato de sodio. Después de filtrar, se libera de disolvente y se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 1:1). Se obtienen 533 mg (45 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,97 (t, 1H), 7,85 (dd, 1H), 7,73 (dd, 1H), 7,70-7,63 (m, 5H), 7,58 (dd, 1H),7,53-7,38 (m, 8H), 7,19 (d, 1H), 6,47 (dd, 1H), 4,91-4,82 (m, 1H), 4,55 (s a, 2H), 4,24 (dd, 1H), 3,89 (dd, 1H), 3,6530 3,58 (m, 2H), 1,07 (s, 9H).
HPLC (procedimiento 2): TR = 6,07 min.
EM (ESIpos, m/z): 732 (M+H)+. 35
Ejemplo 7A
3-({[terc-Butil(difenil)silil]oxi}metil)-1-(2-metil-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona Se hacen reaccionar 1,50 g (4,13 mmol) del compuesto del ejemplo 3A análogamente al ejemplo 4A con 704 mg(4,54 mmol) de 2-fluoro-5-nitrotolueno. Se obtienen 570 mg (28 % d.t.) del compuesto del título.
5 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,29 (d, 1H), 8,17 (dd, 1H), 7,76 (dd, 1H), 7,67-7,63 (m, 4H), 7,57 (d, 1H),7,53 (dd, 1H), 7,51-7,41 (m, 6H), 6,52 (t, 1H), 4,63-4,51 (m, 2H), 2,12 (s, 3H), 1,07 (s, 9H).
HPLC (procedimiento 4): TR = 3,39 min. 10 EM (ESIpos, m/z): 499 (M+H)+.
Ejemplo 8A
15 1-(4-Amino-2-metilfenil)-3-({[terc-butil(difenil)silil]oxi}metil)piridin-2(1H)-ona
Se disuelven 555 mg (1,11 mmol) del compuesto del ejemplo 7A en 15 ml de THF, se añaden 150 mg de paladio
20 sobre carbón y se hidrogenan en atmósfera de hidrógeno a presión normal hasta que se ha absorbido la cantidad teórica de hidrógeno. Se separa por filtración el catalizador y se obtienen después de concentración a vacío 520 mg(99 % d.t.) del compuesto del título.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 7,70-7,63 (m, 5H), 7,51-7,41 (m, 6H), 7,40-7,36 (m, 1H), 6,78 (d, 1H), 6,4725 6,41 (m, 2H), 6,38 (t, 1H), 5,22 (s ancho, 2H), 4,59-4,48 (m, 2H), 1,81 (s, 3H), 1,06 (s, 9H).
HPLC (procedimiento 5): TR = 3,20 min.
EM (ESIpos, m/z): 469 (M+H)+. 30
Ejemplo 9A
N-[((5S)-3-{4-[3-({[terc-Butil(difenil)silil]oxi}metil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il)metil]-5clorotiofeno-2-carboxamida 35
O O O
Cl O SN HCH3 NCH3 N
H3C
O
Se disuelven 522 mg (1,11 mmol) del compuesto del ejemplo 8A en 10 ml de acetonitrilo y se añaden a 0 ºC 266 mg(1,22 mmol) del compuesto del ejemplo 1A. Se añaden 373 mg (1,67 mmol) de perclorato de magnesio y se deja en
5 agitación durante 20 h a TA. Después, se añaden 271 mg (1,67 mmol) de 1,1´-carbonildiimidazol y 14 mg (0,11 mmol) de DMAP y se calienta la mezcla de reacción durante 20 h a 60 ºC. Se concentra después a vacío y seañaden agua y terc-butilmetiléter. Se extrae dos veces con acetato de etilo. Se secan las fases orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio y se concentran. Se purifica el residuo mediante HPLC preparativa. Se obtienen562 mg (71 % d.t.) del producto deseado.
10 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,97 (t, 1H), 7,74-7,63 (m, 6H), 7,58-7,41 (m, 9H), 7,23 (d, 1H), 7,19 (d, 1H), 6,45 (t, 1H), 4,89-4,80 (m, 1H), 4,58-4,49 (m, 2H), 4,21 (t, 1H), 3,90-3,83 (m, 1H), 3,63-3,58 (m, 2H), 1,98 (s,3H), 1,07 (s, 9H).
15 HPLC (procedimiento 4): TR = 3,39 min.
EM (ESIpos, m/z): 712/714 (35Cl/37Cl) (M+H)+.
Ejemplo 10A
20 5-Cloro-N-[((5S)-3-{4-[3-(hidroximetil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il)metil]tiofeno-2carboxamida
25 Se disuelven 530 mg (0,74 mmol) del compuesto del ejemplo 9A en 9 ml de THF. Se añaden 1,5 ml de una solución1 M de fluoruro de tetrabutilamonio en THF y se deja agitar durante 30 min a TA. Se añade algo de agua, seconcentra y se purifica mediante HPLC preparativa. Se obtienen 335 mg (93 % d.t.) del producto deseado.
30 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 9,00 (t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,55-7,49 (m, 3H), 7,39 (d, 1H), 7,23 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 6,36 (t, 1H), 5,14 (s ancho, 1H), 4,90-4,82 (m, 1H), 4,38-4,29 (m, 2H), 4,22 (t, 1H), 3,91-3,85 (m, 1H), 3,62 (t, 2H), 2,01 (s, 3H).
HPLC (procedimiento 3): TR = 1,66 min. 35 EM (ESIpos, m/z): 474/476 (35Cl/37Cl) (M+H)+.
Ejemplo 11A
40 N-{[(5S)-3-{4-[3-(Bromometil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}-5-clorotiofeno-2carboxamida
O
Se disuelven 50 mg (0,11 mmol) del producto del ejemplo 10A en 1 ml de diclorometano. Se añaden 0,024 ml (0,32mmol) de bromuro de tionilo y se deja agitar durante 1,5 h a TA. Se diluye con 1 ml de metanol y 3 ml de5 diclorometano y a continuación se libera de disolvente a vacío. Se vuelve a hacer reaccionar el producto bruto sin purificación adicional.
Ejemplo 12A
10 3-Bromo-1-(2-metil-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona
Se disuelven 44,5 g (280 mmol) de 3-bromopiridin-2(1H)-ona en 750 ml de dimetilsulfóxido anhidro y se añaden a
15 temperatura ambiente en porciones 33,4 g (298 mmol) de terc-butilato de potasio. Se agita la suspensión durante 1 h a esta temperatura, antes de añadir 38,5 g (280 mmol) de 1-fluoro-2-metil-4-nitrobenceno, y se calienta la soluciónde reacción durante 20 h a 80 ºC. Se deja enfriar y se diluye cuidadosamente con agua. Se separa por filtración elsedimento cristalino precipitado, se lava con algo de agua y se seca a vacío. Se obtienen 62 g (80 % d.t.) del producto deseado.
20 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,34 (d, 1H), 8,21 (dd, 1H), 8,10 (dd, 1H), 7,71-7,63 (m, 2H), 6,36 (t, 1H), 2,17 (s, 3H).
CL-EM (procedimiento 3): TR = 1,72 min 25 EM (ESIpos): m/z = 309 (M+H)+.
Ejemplo 13A
30 1-(2-Metil-4-nitrofenil)-3-vinilpiridin-2(1H)-ona
Se disuelven 50 g (162 mmol) del compuesto del ejemplo 12A en 700 ml de dioxano anhidro, se añaden 62 g (194
35 mmol) de tributilvinilestaño y 4,7 g (4 mmol) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio y se calienta a reflujo durante 15 h. Se deja enfriar y se filtra a través de tierra de diatomeas. Se lava posteriormente con acetato de etilo y se concentranlos filtrados combinados a vacío hasta sequedad. Se pone el residuo en gel de sílice y se purifica por cromatografíaen 800 g de gel de sílice con un gradiente de ciclohexano y acetato de etilo. Se obtienen 27 g (62 % d.t.) del producto deseado.
40 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,35 (d, 1H), 8,2 (dd, 1H), 7,75 (dd, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,55 (dd, 1H),6,75 (dd, 1H), 6,45 (t, 1H), 6,15 (dd, 1H), 5,30 (dd, 1H), 2,17 (s, 3H).
CL-EM (procedimiento 4): TR = 1,86 min 45 EM (ESIpos): m/z = 257 (M+H)+
Ejemplo 14A
3-(2-Hidroxietil)-1-(2-metil-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona
A 38 g (148 mmol) del compuesto del ejemplo 13A se añade con refrigeración con hielo durante 45 min una solución de 40 g (326 mmol) de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano en 650 ml de tetrahidrofurano. Se agita posteriormente durante10 una hora adicional a esta temperatura, antes de añadir una solución de 30 g (747 mmol) de hidróxido de sodio en 740 ml de agua durante 15 min. Se añaden 151 ml de una solución de peróxido de hidrógeno al 30 % de modo quela temperatura no supere los 30 ºC. Después de terminar la adición, se retira la refrigeración y se agitaposteriormente durante 30 minutos adicionales. Se extrae varias veces con acetato de etilo, se lavan las fasesorgánicas combinadas con una solución de 780 g (1,63 mol) de bisulfito de sodio, se separa la fase orgánica y se
15 extrae de nuevo la fase acuosa con acetato de etilo. Se lavan las fases orgánicas combinadas con solución saturada de cloruro de sodio, se secan sobre sulfato de magnesio y se evaporan a vacío hasta sequedad. Se dispone elresiduo en gel de sílice y se purifica por cromatografía con un gradiente de ciclohexano y acetato de etilo. Sepurifican las fracciones que contienen producto y se concentran a vacío hasta sequedad. Se obtienen 38 mg (93 %d.t.) del producto deseado.
20 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,33 (d, 1H), 8,18 (d, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,48-7,40 (m, 2H), 6,33 (t, 1H), 4,58 (t, 1H), 3,62-3,50 (m, 2H), 2,62 (t, 2H), 2,15 (s, 3H).
CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,57 min 25 EM (ESIpos): m/z = 275 (M+H)+
Ejemplo 15A
30 3-(2-{[terc-Butil(difenil)silil]oxi}etil)-1-(2-metil-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona
Se disuelven 38 g (138 mmol) del compuesto del ejemplo 14A en 200 ml de N,N-dimetilformamida anhidra y se
35 añaden a 0 ºC 12,2 g (198 mmol) de imidazol y, en porciones, 46 mg (135 mmol) de terc-butil(cloro)difenilsilano. Después de agitar durante una noche, se diluye con agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Se lavan lasfases orgánicas combinadas dos veces con solución saturada de cloruro de sodio, se secan sobre sulfato demagnesio, se filtran y se evaporan a vacío. Se pone el residuo en gel de sílice y se purifica por cromatografía con ungradiente de ciclohexano y acetato de etilo. Se combinan las fracciones que contienen producto y se concentran a
40 vacío hasta sequedad. Se obtienen 62 g (88 % d.t.) del producto deseado.
CL-EM (procedimiento 5): TR = 3,18 min
EM (ESIpos): m/z = 483 (M+H)+ 45
Ejemplo 16A
1-(4-Amino-2-metilfenil)-3-(2-{[terc-butil(difenil)silil]oxi}etil)piridin-2(1H)-ona
H3C
Se disuelven 62 g (121 mmol) del compuesto del ejemplo 15A en 2 l de una mezcla 1:1 de etanol y acetato de etilo y
5 se añaden 46 g (726 mmol) de formiato de amonio y 0,6 g de paladio sobre carbón. Se calienta a 80 ºC. Después de 45 min, se deja enfriar y se filtra a través de gel de sílice. Se lava posteriormente con acetato de etilo y se evapora elfiltrado a vacío hasta sequedad. Se obtienen 36 g (61 % d.t.) del producto deseado.
CL-EM (procedimiento 7): TR = 1,84 min 10 EM (ESIpos): m/z = 221 (M+H)+
Ejemplo 17A
15 N-[((5S)-3-{4-[3-(2-{[terc-Butil(difenil)silil]oxi}etil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metil-fenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il)metil]-5clorotiofeno-2-carboxamida
O
20 Se disuelven 35,6 g (74,1 mmol) del compuesto del ejemplo 16A en 800 ml de acetonitrilo anhidro y se añaden a 0 ºC 19 g (89 mmol) del compuesto del ejemplo 1A. Se añaden 25 g (110 mmol) de perclorato de magnesio, se retirala refrigeración y se agita durante 15 h a temperatura ambiente. Se añaden 24 mg (148 mmol) de 1,1carbonildiimidazol y 180 mg (1,4 mmol) de N,N-dimetilaminopiridina y se calienta a reflujo durante 2 h. Se dejaenfriar y se separa el disolvente por destilación a vacío. Después, se recoge en acetato de etilo y se lava con agua,
25 así como tres veces con solución saturada de cloruro de sodio. Después de secar sobre sulfato de magnesio, se filtra y se evapora a vacío hasta sequedad. Se dispone el residuo en gel de sílice y se purifica por cromatografía conun gradiente de ciclohexano y acetato de etilo. Se combinan las fracciones que contienen producto y se concentrana vacío hasta sequedad. Se obtienen 46,4 g (84 % d.t.) del producto deseado.
30 CL-EM (procedimiento 5): TR = 3,31 min
EM (ESIpos): m/z = 700 (M+H)+
Ejemplo 18A
35 5-Cloro-N-[((5S)-3-{4-[3-(2-hidroxietil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il)metil]tiofeno-2carboxamida
HO
OO Cl O
S
NN H
N
H3C O
A 43,8 g (60,3 mmol) del compuesto del ejemplo 17A se añaden con refrigeración con hielo 400 ml de ácidoclorhídrico 1,25 N en metanol. Después de 1 h, se diluye con diclorometano y se separa a continuación la fase
5 acuosa. Se lava la fase orgánica dos veces con agua, se seca sobre sulfato de sodio y se concentra a vacío hasta sequedad después de filtrar. Se dispone el residuo en gel de sílice y se purifica por cromatografía con un gradientede ciclohexano y acetato de etilo. Se combinan las fracciones que contienen producto y se concentran a vacío hastasequedad. Se obtienen 19,6 g (66 % d.t.) del producto deseado.
10 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,98 (t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,55-7,47 (m, 2H), 7,40 (dd, 1H), 7,35 (dd, 1H), 7,25-7,17 (m, 2H), 6,26 (t, 1H), 4,90-4,82 (m, 1H), 4,60 (t, 1H), 4,22 (t, 1H), 3,92-3,84 (m, 1H), 3,66-3,54 (m,4H), 2,60 (t, 2H), 2,01 (s, 3H).
CL-EM (procedimiento 5): TR = 1,87 min 15 EM (ESIpos): m/z = 488 (M+H)+
Ejemplo 19A
20 3-Bromo-1-(2-metoxi-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona
Se disuelven 70 g (403 mmol) de 3-bromopiridin-2(1H)-ona en 1 l de dimetilsulfóxido anhidro y se añaden a
25 temperatura ambiente 54 g (484 mmol) de terc-butilato de potasio. Se agita la suspensión durante 1 h a esta temperatura. Se añaden 69 g (403 mmol) de 1-fluoro-2-metoxi-4-nitrobenceno y se calienta la solución de reacción durante 20 h a 80 ºC. Se diluye cuidadosamente con 5 l de agua. Se separa por filtración el sólido precipitado, selava con agua y se seca a vacío. Se obtienen 103 g (72 % d.t.) del producto deseado.
30 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,05 (dd, 1H), 8,1 (d, 1H), 7,95 (dd, 1H), 7,7 (d, 1H), 7,6 (dd, 1H), 6,3 (t, 1H), 3,9 (s, 3H).
EM (ESIpos): m/z = 342 (M+NH4)+
35 Ejemplo 20A
1-(2-Metoxi-4-nitrofenil)-3-vinilpiridin-2(1H)-ona
40 Se disuelven 100 g (308 mmol) del compuesto del ejemplo 19A en 1,4 l de dioxano anhidro y se añaden 8,9 g (7,7 mmol) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio y 117 g (370 mmol) de tributilvinilestaño. Se calienta a reflujo durante 16 h.Después, se deja enfriar y se filtra la solución de reacción a través de tierra de diatomeas. Se concentran los filtradosa vacío hasta sequedad. Se purifica por cromatografía el residuo en gel de sílice usando un gradiente de
45 ciclohexano y acetato de etilo. Se combinan las fracciones que contienen producto y se concentran a vacío hasta sequedad. Se mezcla con éter de petróleo hasta iniciar la cristalización. Se separan los cristales por filtración y sesecan a vacío. Se obtienen 37 g (41 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,0 (m, 2H), 7,7 (m, 2H), 7,5 (dd, 1H), 6,7 (c, 1H), 6,4 (t, 1H), 6,1 (dd, 1H), 5,3 (dd, 1H), 3,9 (s, 3H).
5 EM (ESIpos): m/z = 273 (M+H)+
Ejemplo 21A
3-(2-Hidroxietil)-1-(2-metoxi-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona 10
A 37 g (136 mmol) del compuesto del ejemplo 20A se añade a 0 °C durante 45 min una solución de 36 g (299 mmol)de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano en 600 ml de tetrahidrofurano. Después de una hora adicional a esta temperatura, se15 añade durante 15 min una solución de 27 g (680 mmol) de hidróxido de sodio (1 N en agua). Se agita durante 5 min adicionales antes de añadir 120 ml de una solución de peróxido de hidrógeno al 30 % de modo que la temperaturano supere los 30 ºC. Se retira la refrigeración y se agita posteriormente durante 30 min adicionales. Se extrae variasveces con acetato de etilo, se lavan las fases orgánicas combinadas con una solución de 730 g (1,50 mol) debisulfito de sodio, se separa la fase orgánica y se extrae la fase acuosa de nuevo con acetato de etilo. Se lavan las
20 fases orgánicas combinadas con solución saturada de cloruro de sodio, se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran a vacío hasta sequedad. Se absorbe el residuo en gel de sílice y se purifica por cromatografía usando ungradiente de ciclohexano y acetato de etilo. Se combinan las fracciones de producto y se evaporan a vacío hastasequedad. Para la cristalización, se mezclan con terc-butilmetiléter. Se separan los cristales por filtración y se secana vacío. Se obtienen 24 g (60 % d.t.) del producto deseado.
25 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,0 (d, 1H), 7,95 (dd, 1H), 7,6 (d, 1H), 7,4 (d, 1H), 6,35 (t, 1H), 4,6 (t, 1H), 3,9 (s, 3H), 3,55 (m, 2H), 2,6 (m, 2H).
EM (ESIpos): m/z = 291 (M+H)+ 30
Ejemplo 22A
3-(2-{[terc-Butil(difenil)silil]oxi}etil)-1-(2-metoxi-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona
H3C
35 Se disuelven 24 g (81 mmol) del compuesto del ejemplo 21A en 200 ml de N,N-dimetilformamida anhidra y seañaden 7,2 g (106 mmol) de imidazol y 27 g (98 mmol) de terc-butil(cloro)difenilsilano. Después de 16 h, se diluyecon 1,2 l de agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Se lavan las fases orgánicas combinadas dos veces
40 con agua, se secan sobre sulfato de magnesio, se filtran y se evaporan a vacío. Para la cristalización, se añade tercbutilmetiléter y se separan por filtración los cristales obtenidos y se secan a vacío. Se obtienen 30 g (67 % d.t.) delproducto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,0 (d, 1H), 7,95 (dd, 1H), 7,6-7,5 (m, 5H), 7,5-7,4 (m, 8H), 6,35 (t, 1H), 45 3,8 (m, 5H), 2,7 (m, 2H), 1,0 (s, 9H).
Ejemplo 23A
1-(4-Amino-2-metoxifenil)-3-(2-{[terc-butil(difenil)silil]oxi}etil)piridin-2(1H)-ona
5 Se disuelven 25 g (48 mmol) del compuesto del ejemplo 22A en 800 ml de una mezcla 1:1 de etanol y acetato de etilo y se añaden 18 g (286 mmol) de formiato de amonio y 800 mg de paladio sobre carbón. Se calienta a 80 ºC.Después de 60 min, se deja enfriar y se filtra a través de gel de sílice. Se lava posteriormente con acetato de etilo y se evapora el filtrado a vacío hasta sequedad. Se obtienen 27 g (98 % d.t.) del producto deseado.
10 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 7,6 (m, 4H), 7,4 (m, 6H), 7,3 (dd, 1H), 7,25 (dd, 1H), 6,75 (d, 1H), 6,3 (d, 1H), 6,2 (dd, 1H), 6,1 (t, 1H), 5,3 (b, 2H), 3,8 (m, 2H), 3,6 (s, 3H), 2,7 (m, 2H), 1,0 (s, 9H).
EM (ESIpos): m/z = 499 (M+H)+
15 Ejemplo 24A
N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-{[terc-Butil(difenil)silil]oxi}etil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metoxi-fenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}
5-clorotiofeno-2-carboxamida
H3 C
H3C H3C OO Cl O
S
N
N
H
N
H3C O O
Se disuelven 29 g (58 mmol) del compuesto del ejemplo 23A en 600 ml de acetonitrilo anhidro y se añaden a 0 °C 15g (69 mmol) del compuesto del ejemplo 1A. Se añaden 19 g (87 mmol) de perclorato de magnesio, se retira larefrigeración y se agita durante 15 h a TA. Después, se añaden 19,0 g (116 mmol) de 1,1-carbonildiimidazol y 14125 mg (1,21 mmol) de N,N-dimetilaminopiridina y se calienta a reflujo. Después de 2 h, se deja enfriar y se separa el disolvente por destilación a vacío. Se disuelve el residuo en acetato de etilo y se lava con agua, así como tres vecescon solución saturada de cloruro de sodio. Después de secar sobre sulfato de magnesio, se filtra y se evapora avacío hasta sequedad. Se purifica el residuo por cromatografía en gel de sílice usando un gradiente de ciclohexano y acetato de etilo. Se combinan las fracciones que contienen producto y se concentran a vacío hasta sequedad. Se
30 obtienen 37 g (85 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 = 9,0 (t, 1H), 7,7 (d, 1H), 7,6 (m, 4H), 7,5-7,3 (m, 9H), 7,2 (m, 2H), 7,1 (m, 1H), 6,2 (t, 1H), 4,8 (m, 1H), 4,4 (t, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,8 (a, 2H), 3,7 (s, 3H), 3,65 (m, 2H), 2,7 (m, 2H), 1,0 (s, 9H).
35 CL-EM (procedimiento 8): TR = 4,53 min
EM (ESIpos): m/z = 742 (M+H)+
Ejemplo 25A
40 5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-hidroxietil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metoxifenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2carboxamida
HO
OO Cl O
S
N
N
H
N
H3C O O
5 Se disuelven 37 g (49 mmol) del compuesto del ejemplo 24A a 0 °C en 313 ml de ácido clorhídrico 1,25 N en metanol. Después de 1 h, se evapora la solución a vacío y se diluye con diclorometano. Se lava la fase orgánica dosveces con agua, se seca sobre sulfato de magnesio y se evapora a vacío hasta sequedad después de filtrar. Sepurifica por cromatografía el residuo en gel de sílice usando un gradiente de diclorometano y metanol. Se combinanlas fracciones de producto y se concentran a vacío hasta sequedad. Se obtienen 19 g (78 % d.t.) del producto
10 deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 9,00 (t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,35 (dd, 1H), 7,30 (dd, 1H),7,25 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 7,15-7,08 (m, 1H), 6,19 (t, 1H), 4,91-4,83 (m, 1H), 4,60 (t, 1H), 4,25 (t, 1H), 3,94-3,87 (m,1H), 3,73 (s, 3H), 3,66-3,53 (m, 4H), 2,62-2,55 (m, 2H).
15 EM (ESIpos): m/z = 504 (M+H)+
Ejemplo 26A
20 2-(Bromometil)-1-fluoro-4-nitrobenceno
Br
Se disuelven 186 g (1,20 mol) de 2-fluoro-5-nitrotolueno en 1,2 l de tetraclorometano y se añaden 214 g (1,20 mol)
25 de N-bromosuccinimida. Se añaden 19,7 g (120 mmol) de azodiisobutironitrilo y se calienta a reflujo. Después de 16 h, se deja enfriar, se filtra y se evapora a vacío hasta sequedad. Se disuelve el residuo en 300 ml de diclorometano y se añaden 300 g de arena de playa. Después, se concentra de nuevo a vacío hasta sequedad y se dispone elresiduo en un 1 kg de columna de gel de sílice. Se purifica por cromatografía con una mezcla 20:1 de ciclohexano y acetato de etilo y se evaporan las fracciones de producto a vacío hasta sequedad. Se cristaliza el residuo con
30 ciclohexano y se seca a vacío. Se obtienen 92 g (32 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,57-8,52 (m, 1H), 8,33-8,27 (m, 1H), 7,56 (t, 1H), 4,62 (s, 2H).
CG-EM (procedimiento 9): TR = 7,79 min 35 EM (ESIpos): m/z = 154 (M-Br)+
Ejemplo 27A
40 1-Fluoro-2-(metoximetil)-4-nitrobenceno
Se disuelven 30 g (128 mmol) del compuesto del ejemplo 26A en 1,3 l de tolueno anhidro y se añaden 45 g (19245 mmol) de óxido de plata (I) y 24,6 g (769 mmol) de metanol anhidro. Se calienta durante 16 h a 60 ºC. Después, se enfría y se filtra a través de gel de sílice. Se eluye el producto fraccionadamente con un gradiente de ciclohexano y
ciclohexano/acetato de etilo 25:1. Se evaporan las fracciones de producto a vacío hasta sequedad y se secan avacío. Se obtienen 17 g (72 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,41-8,36 (m, 1H), 8,22-8,16 (m, 1H), 7,26 (t, 1H), 4,58 (s, 2H), 3,49 (s, 5 3H).
CG-EM (procedimiento 9): TR = 6,52 min
EM (ESIpos): m/z = 154 (M-OCH3)+. 10
Ejemplo 28A
3-Bromo-1-[2-(metoximetil)-4-nitrofenil]piridin-2(1H)-ona
O
15 H3C
Se disuelven 38 g (391 mmol) de 3-bromo-2-hidroxipiridina en 1250 ml de dimetilsulfóxido anhidro y se añaden enporciones con 53 g (469 mmol) de terc-butilato de potasio. Se agita posteriormente durante 1 hora antes de añadir72,4 g (391 mmol) del compuesto del ejemplo 27A. Después de terminada la adición, se calienta durante 3 h a 8020 ºC. A continuación, se deja enfriar y se agita posteriormente durante 16 h adicionales a temperatura ambiente. Se enfría después la solución de reacción a 15 ºC y se lleva a pH 3 cuidadosamente a esta temperatura con ácidoclorhídrico 1 N. Se añaden 4 l de agua y se extrae tres veces con 2 l de acetato de etilo. Se lavan las fasesorgánicas combinadas con solución saturada de cloruro de sodio y se secan sobre sulfato de magnesio. Después,se concentra a vacío hasta sequedad y se añade terc-butilmetiléter para la cristalización. Se separan por filtración
25 los cristales y se secan a vacío. Se obtienen 94 g (71 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6,5/ppm): 5 = 8,37 (d, 1H), 8,33 (dd, 1H), 8,10 (dd, 1H), 7,73-7,67 (m, 2H), 6,35 (t, 1H), 4,3 (c, 2H), 3,3 (s, 3H).
30 CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,88 min
EM (ESIpos): m/z = 339 (M+H+)+.
Ejemplo 29A
35 1-[2-(Metoximetil)-4-nitrofenil]-3-vinilpiridin-2(1H)-ona
O
H3C
40 Se disuelven 94 g (277 mmol) del compuesto del ejemplo 28A en 1,2 l de dioxano anhdiro y se añaden 8 g (6,9 mmol) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0). Se añaden lentamente a temperatura ambiente 105 g (333 mmol) detributilvinilestaño y después de terminada la adición, se calienta a reflujo durante 21 h. Se deja enfriar y se filtra lasolución de reacción a través de tierra de diatomeas. Se lava posteriormente con acetato de etilo y se concentran losfiltrados orgánicos combinados a vacío hasta sequedad. Se disuelve el residuo restante con diclorometano y se
45 dispone en tierra de diatomeas. Se purifica por cromatografía en 1,2 kg de gel de sílice usando un gradiente de ciclohexano y acetato de etilo. Se combinan las fracciones que contienen producto y se concentran a vacío hastasequedad. Se obtienen 23 g (29 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,36 (d, 1H), 8,31 (dd, 1H), 7,77 (dd, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,56 (dd, 1H), 50 6,80-6,71 (m, 1H), 6,45 (t, 1H), 6,14 (dd, 1H), 5,33 (dd, 1H), 4,37-4,22 (m, 2H), 3,26 (s, 3H).
CL-EM (procedimiento 6): TR = 2,07 min EM (ESIpos): m/z = 387 (M+H+)+.
Ejemplo 30A
3-(2-Hidroxietil)-1-[2-(metoximetil)-4-nitrofenil]piridin-2(1H)-ona
O
H3C
10 Se disuelven 23 g (80 mmol) del compuesto del ejemplo 29A en 80 ml de tetrahidrofurano anhidro y se enfría a 5 ºC.Durante 15 min, se añaden 21 g (176 mmol) de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano (solución 0,5 M en tetrahidrofurano). Sesepara la refrigeración y se agita posteriormente 2 h adicionales a temperatura ambiente. Después, se enfría denuevo a 5 ºC y se añaden 400 ml de lejía de sosa 1 N. Después de terminada la adición, se añaden en porciones a
15 esta temperatura 81 ml de solución de peróxido de hidrógeno al 30 %. Después de diluir con 500 ml de acetato de etilo, se lava hasta la desaparición del peróxido con 32 ml de solución de hidrogenosulfito de sodio al 40 %. Sesepara la fase orgánica y se extrae la fase acuosa cuatro veces con acetato de etilo. Se lavan las fases orgánicas combinadas con solución saturada de cloruro de sodio, se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran a vacíohasta sequedad después de filtrar. Se purifica por cromatografía en gel de sílice usando un gradiente de ciclohexano
20 y acetato de etilo. Se combinan las fracciones que contienen producto y se concentran a vacío hasta sequedad. Se obtienen 20 g (77 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,36 (d, 1H), 8,30 (dd, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,45 (d, 1H), 6,33 (t, 1H), 4,60 (t, 1H), 4,35-4,20 (m, 2H), 3,62-3,55 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 2,62 (t, 2H). 25 CL-EM (procedimiento 8): TR = 1,60 min
EM (ESIpos): m/z = 305 (M+H+)+.
30 Ejemplo 31A
3-(2-{[terc-Butil(difenil)silil]oxi}etil)-1-[2-(metoximetil)-4-nitrofenil]piridin-2(1H)-ona
O
H3C
35 Se disuelven 20 g (65 mmol) del compuesto del ejemplo 30A en 75 ml de N,N-dimetilformamida anhidra y se añadenprimero con refrigeración 5,3 g (78 mmol) de imidazol y después en porciones durante 3 min 19 g (72 mmol) de tercbutildifenilclorosilano. Se separa la refrigeración y se agita durante 19 h adicionales a temperatura ambiente. Sediluye la solución de reacción con acetato de etilo y se lava tres veces con agua y dos veces con solución saturada
40 de cloruro de sodio. Después, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra a vacío hasta sequedad. Se añade al residuo terc-butilmetiléter, se separan por filtración los cristales obtenidos y se secan a vacío. Se
obtienen 39 g (90 % d.t.) del producto deseado. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,35 (d, 1H), 8,31 (dd, 1H), 7,65-7,35 (m, 13H), 6,35 (t, 1H), 4,32-4,14 (m, 2H), 3,92-3,80 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 2,78-2,71 (m, 2H), 0,97 (s, 9H).
5 CL-EM (procedimiento 8): TR = 4,59 min EM (ESIpos): m/z = 543 (M+H+)+.
10 Ejemplo 32A 1-[4-Amino-2-(metoximetil)fenil]-3-(2-{[terc-butil(difenil)silil]oxi}etil)piridin-2(1H)-ona
O
H3C
15 Se disuelven 25 g (48 mmol) del compuesto del ejemplo 31A en 500 ml de acetato de etilo y 500 ml de etanol. Seañaden 18 g (286 mmol) de formiato de amonio y 1 g de paladio sobre carbón y se calienta a reflujo durante 45 min.Después, se deja enfriar y se filtra la solución de reacción por gel de sílice. Se concentra el filtrado a vacío hastasequedad. Se obtienen 25 g (100 % d.t.) del producto deseado.
20 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 7,65-7,20 (m, 12H), 6,79 (d, 1H), 6,68 (d, 1H), 6,54 (dd, 1H), 6,20 (t, 1H), 5,46-5,25 (m, 2H), 4,04-3,91 (m, 2H), 3,87-3,77 (m, 2H), 3,07 (s, 3H), 2,75-2,68 (m, 2H), 0,95 (s, 9H).
CL-EM (procedimiento 6): TR = 3,22 min 25 EM (ESIpos): m/z = 513 (M+H+)+.
Ejemplo 33A
30 N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-{[terc-Butil(difenil)silil]oxi}etil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-(metoxi-metil)fenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5il]metil}-5-clorotiofeno-2-carboxamida
H3C
H3C O H3C OO
Cl
O SNN H
N O
O
H3C
35 Se disuelven 25 g (47 mmol) del compuesto del ejemplo 32A en 500 ml de acetonitrilo anhidro y se añaden 15 g (61 mmol) del compuesto del ejemplo 1A y 16 g (71 mmol) de perclorato de magnesio. Se agita durante 5 h a temperatura ambiente antes de añadir de nuevo 1 g (4,1 mmol) del compuesto del ejemplo 1A. Después de 21 h, seañaden 15,3 g (95 mmol) de carbonildiimidazol y 116 mg (0,65 mmol) de dimetilaminopiridina y se calienta a reflujodurante 3,5 h. Después, se separa el disolvente a vacío y se recoge el residuo en 800 ml de acetato de etilo. Se lavala solución con agua, así como dos veces con solución saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de
5 magnesio y a continuación se concentra a vacío. Se separa el residuo en gel de sílice usando un gradiente de ciclohexano y acetato de etilo. Se combinan las fracciones que contienen producto y se concentran a vacío hastasequedad. Se obtienen 26,5 g (72 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 9,00 (t, 1H), 7,73-7,35 (m, 15H), 7,23 (d, 1H), 7,19 (d, 1H), 6,28 (t, 1H),10 4,90-4,81 (m, 1H), 4,28-3,80 (m, 6H), 3,62 (t, 2H), 3,11 (s, 3H), 2,79-2,71 (m, 2H), 0,97 (s, 9H).
CL-EM (procedimiento 6): TR = 3,39 min
EM (ESIpos): m/z = 756 (M+H+)+. 15
Ejemplo 34A
N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-{[terc-Butil(difenil)silil]oxi}etil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-(metoxi-metil)fenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5il]metil}-5-clorotiofeno-2-carboxamida
HO
OO Cl O
S
NN H
N
O
O H3C
A 27 g (34 mmol) del compuesto del ejemplo 33A se añaden con refrigeración con hielo 135 ml de ácido clorhídrico1,25 N en metanol. Se agita adicionalmente durante 45 min a esta temperatura. Se lleva a pH 7 con refrigeración
25 con hielo con lejía de sosa 1 N y se extrae varias veces la solución fría con diclorometano. Se lavan las fases orgánicas combinadas con solución saturada de cloruro de sodio y se secan sobre sulfato de magnesio. Se evaporaa vacío hasta sequedad y se purifica por cromatografía el residuo con un gradiente de diclorometano y metanol engel de sílice. Se combinan las fracciones que contienen producto y se concentran a vacío hasta sequedad. Seobtienen 16,4 g (89 % d.t.) del producto deseado.
30 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,98 (t, 1H), 7,72-7,66 (m, 2H), 7,62-7,56 (m, 1H), 7,40 (dd, 1H), 7,36(dd, 1H), 7,27 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 6,25 (t, 1H), 4,90-4,82 (m, 1H), 4,60 (t, 1H), 4,27-4,08 (m, 3H), 3,94-3,87 (m, 1H),3,65-3,55 (m, 4H), 3,18 (s, 3H), 2,60 (t, 2H).
35 CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,96 min
EM (ESIpos): m/z = 518 (M+H+)+.
Ejemplo 35A
40 3-Alil-1-(2-metil-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona
45 Se disponen en un matraz calentado 1,50 g (4,85 mmol) del compuesto del ejemplo 12A, 1,44 g (9,46 mmol) de fluoruro de cesio y 0,56 g (0,48 mmol) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) en 30 ml de THF desgasificado. Seañade gota a gota una solución de 2,04 g (12,1 mmol) de 2-alil-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano en 5 ml deTHF desgasificado y se calienta a reflujo durante una noche. Después, se diluye con diclorometano y se añadeagua. Después de la separación de fases, se extrae la fase acuosa tres veces con diclorometano. Se secan las
50 fases orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio y se concentran. Se purifica mediante cromatografía en gel de sílice y se obtienen 1,18 g (62 % d.t.) del compuesto del título.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,31 (d, 1H), 8,18 (dd, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,46 (dd, 1H), 7,44-7,38 (m, 1H),6,35 (t, 1H), 5,96 (dddd, 1H), 5,16-5,06 (m, 2H), 3,20 (d, 2H), 2,15 (s, 3H).
HPLC (procedimiento 2): TR = 4,05 min. EM (ESIpos, m/z): 271 (M+H)+.
Ejemplo 36A
3-(3-Hidroxipropil)-1-(2-metil-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona
10 Se añaden gota a gota a 0 ºC lentamente 18,5 ml (9,25 mmol) de una solución de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano 0,5 M en THF a 1,00 g (3,70 mmol) del compuesto del ejemplo 35A en 4 ml de THF. Después de 1 hora a temperaturaambiente, se enfría de nuevo a 0 ºC y se añaden gota a gota 18,5 ml (18,5 mmol) de una solución de hidróxido desodio 1 M en agua. Se agita durante 30 min adicionales a 0 ºC y se añaden después 3,24 ml de una solución de
15 peróxido de hidrógeno al 30 % de modo que la temperatura no supere los 30 ºC. Se deja agitar durante 30 min con refrigeración con hielo y se mezcla después con acetato de etilo, así como a continuación con 11 g (40 mmol) desolución de hidrogenosulfito de sodio. Se separa la fase orgánica y se extrae la fase acuosa dos veces con acetatode etilo. Se lavan las fases orgánicas combinadas con solución acuosa saturada de cloruro de sodio. Se seca la faseorgánica sobre sulfato de sodio y después se evapora a vacío hasta sequedad. Se purifica por cromatografía el
20 residuo en gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 1:4). Se obtienen 1,03 g (83 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,31 (d, 1H), 8,18 (dd, 1H), 7,66-7,51 (m, 1H), 7,47-7,38 (m, 2H), 6,33 (t, 1H), 4,46 (t, 1H), 3,46-3,38 (c, 2H), 2,52-2,45 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 1,73-1,62 (m, 2H).
25 HPLC (procedimiento 1): TR = 3,51 min.
EM (DCI, m/z) = 289 (M+H)+.
Ejemplo 37A
30 1-(4-Amino-2-metilfenil)-3-(3-hidroxipropil)piridin-2(1H)-ona
35 Se disuelven 475 mg (1,65 mmol) del compuesto del ejemplo 36A en 48 ml de THF. Después, se añaden 50 mg (0,05 mmol) de paladio sobre carbón y se hidrogena a TA en atmósfera de hidrógeno a presión normal. A continuación, se filtra, se lava posteriormente tres veces con THF y se libera el filtrado de disolvente. Se vuelve ahacer reaccionar el producto de reacción sin purificación adicional.
40 HPLC (procedimiento 1): TR = 2,82 min.
EM (DCI, m/z): 259 (M+H)+.
Ejemplo 38A
45 5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-(3-hidroxipropil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2carboxamida
HO
OO Cl O
S
NN H
N
H3C O
Se disuelven 580 mg (2,24 mmol) del compuesto del ejemplo 37A en 12,7 ml de acetonitrilo anhidro y se añaden 538 mg (2,47 mmol) del compuesto del ejemplo 1A y 751 mg (3,37 mmol) de perclorato de magnesio. Se agita durante
5 3,5 h a temperatura ambiente. Después, se añaden 437 mg (2,69 mmol) de carbonildiimidazol y 27 mg (0,23 mmol) de 4-dimetilaminopiridina y se calienta a reflujo durante 18 h. A continuación, se añade a 100 ml de agua y se extraetres veces con 50 ml de acetato de etilo. Se lavan las fases orgánicas combinadas con solución saturada de clorurode sodio, se secan sobre sulfato de sodio y a continuación se concentran a vacío. Se purifica el residuo medianteHPLC preparativa. Se obtienen 175 mg (16 % d.t.) del producto deseado.
10 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,99 (t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,57-7,47 (m, 2H), 7,40-7,31 (m, 2H), 7,23 (d,1H), 7,20 (d, 1H), 6,26 (t, 1H), 4,90-4,81 (m, 1H), 4,46 (dd, 1H), 4,22 (t, 1H), 3,91-3,85 (m, 1H), 3,62 (t, 2H), 3,42(ddd, 2H), 3,31 (s, 1H), 2,48-2,42 (m, 1H), 2,01 (s, 3H), 1,67 (ddd, 2H).
15 HPLC (procedimiento 2): TR = 3,92 min
EM (DCI, m/z) = 502 (M+H)+.
Ejemplo 39A
20 3-Metoxi-1-(2-metil-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona
25 Se disuelven 28,5 g (228 mol) de 3-metoxipiridin-2(1H)-ona en 850 ml de dimetilsulfóxido y se añaden a TA 31 g (273 mmol) de terc-butilato de potasio. Se agita la suspensión durante 30 min a TA, antes de añadir 35 g (228 mmol)de 1-fluoro-2-metil-4-nitrobenceno y se calienta la solución de reacción durante 20 h a 80 ºC. Después, se diluyecuidadosamente con 1 l de agua y se lleva a pH 1-2 con ácido clorhídrico 1 N. Se extrae la solución varias veces condiclorometano. Se lavan los extractos orgánicos combinados con agua y solución saturada de cloruro de sodio, se
30 secan sobre sulfato de sodio, se filtran y se evaporan a vacío. Se lava el sólido obtenido con un poco de tercbutilmetiléter, se separa por filtración y se seca a vacío. Se obtienen 42,8 g (72 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6,5/ppm): 5 = 8,35 (d, 1H), 8,18 (dd, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,13 (dd, 1H), 6,95 (dd, 1H), 6,32 (t, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,25 (s, 3H).
35 CL-EM (procedimiento 3): TR = 1,45 min
EM (ESIpos): m/z = 261 (M+H)+
40 Ejemplo 40A
3-Hidroxi-1-(2-metil-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona
Se disuelven 23,3 g (90 mmol) del ejemplo 39A en 730 ml de diclorometano anhidro y se enfría a 0 ºC. Durante 10minutos, se añaden gota a gota 224 ml (224 mmol) de una solución 1 N de tribromuro de boro, antes de agitar 1,5 h adicionales a esta temperatura. Se añaden a la preparación 200 ml de agua y se extrae la fase acuosa tres vecescon diclorometano. Se lavan las fases orgánicas combinadas con solución saturada de cloruro de sodio, se secansobre sulfato de sodio y se separan por filtración. Se separa el disolvente a vacío, se lava el sólido obtenido con tercbutilmetiléter y se separa por filtración. Se obtienen 20,1 g (91 % d.t.) del compuesto deseado.
5 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6,5/ppm): 5 = 9,50 (s, 1H), 8,42 (d, 1H), 8,20 (dd, 1H), 7,6 (d, 1H), 7,05 (d, 1H), 6,85 (dd, 1H), 6,25 (t, 1H), 2,25 (s, 3H).
CL-EM (procedimiento 3): TR = 1,45 min 10 EM (ESIpos): m/z = 246 (M+H)+.
Ejemplo 41A
15 3-[(2-Metoxietoxi)metoxi]-1-(2-metil-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona
Se disuelven 10,0 g (41 mmol) del ejemplo 40A en diclorometano anhidro y se añaden 13,6 g (89 mmol) de 1,8
20 diazabiciclo(5.4.0)undec-7-eno. Se añaden a esta solución a 25 ºC lentamente y en porciones 8,6 g (69 mmol) de 1(clorometoxi)-2-metoxietano. Después de 1 hora adicional, se filtra la solución por gel de sílice y se evapora a vacíohasta sequedad. Se obtienen 20,1 g (91 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,32 (d, 1H), 8,19 (dd, 1H), 7,6 (d, 1H), 7,22 (dd, 1H), 7,15 (dd, 1H), 6,325 (t, 1H), 5,25 (s, 2H), 3,78-3,72 (m, 2H), 3,51-3,45 (m, 2H), 3,23 (s, 3H), 2,15 (s, 3H).
CL-EM (procedimiento 3): TR = 1,79 min
EM (ESIpos): m/z = 335 (M+H)+. 30
Ejemplo 42A
1-(4-Amino-2-metilfenil)-3-[(2-metoxietoxi)metoxi]piridin-2(1H)-ona
H3C
35 Se disuelven 12 g (36 mmol) del ejemplo 41A en 1,2 l de una mezcla 1:1 de acetato de etilo y etanol y se añaden 0,1equivalentes de paladio sobre carbón y con 11,3 g (180 mmol) de formiato de amonio. Se calienta a 80 ºC durante 2horas. Se deja enfriar, se filtra a través de gel de sílice y se separa el disolvente a vacío. Se obtienen 10,6 g (88 %
40 d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 7,12-7,05 (m, 1H), 6,80 (d, 1H), 6,51-6,42 (m, 2H), 6,17 (t, 1H), 5,21 (s, 2H), 3,76-3,71 (m, 2H), 3,49-3,45 (m, 2H), 3,23 (s, 3H), 1,85 (s, 3H).
45 CL-EM (procedimiento 3): TR = 1,10 min
EM (ESIpos): m/z = 305 (M+H)+.
Ejemplo 43A
5-Cloro-N-[((5S)-3-{4-[3-[(2-metoxietoxi)metoxi]-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metil-fenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5il)metil]tiofeno-2-carboxamida
O
O
H3C
OO O Cl
O N
NH
N
H3C O
Se disuelven 9,2 g (30 mmol) del ejemplo 42A en 580 ml de acetonitrilo y se enfrían a 0 °C. Se añaden a esta temperatura 7,3 g (34 mmol) del ejemplo 1A y después se agita durante 10 minutos adicionales. Se añaden 10,2 g10 (46 mmol) de perclorato de magnesio, se retira la refrigeración y se agita posteriormente durante 17 h adicionales. Después, se añaden 14,8 g (91 mmol) de carbonildiimidazol y 0,37 g (3 mmol) de N,N-4-dimetilaminopiridina y secalienta a 60 ºC durante 4 h. Después de enfriar, se agita durante 16 h adicionales a TA y después se evapora a vacío hasta sequedad. Se mezcla el residuo con ácido clorhídrico 1 N y acetato de etilo y se agita vigorosamente.Después de 15 min, se separan las fases, se extrae la fase acuosa tres veces con acetato de etilo y se combinan las
15 fases orgánicas. Después de lavar con solución saturada de cloruro de sodio, se seca y se evapora a vacío hasta sequedad. Se obtienen 17,2 g (95 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6,5/ppm): 5 = 9,0 (t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,56-7,49 (m, 2H), 7,26 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 6,95 (dd, 1H), 6,80 (dd, 1H), 6,20 (t, 1H), 4,90-4,81 (m, 1H), 4,24 (t, 1H), 3,92-3,85 (m, 1H), 3,70-3,55 (m, 3H), 3,5220 3,25 (m, 2H), 2,55 (s, 3H), 2,08-2,02 (m, 3H), 1,91 (s, 3H).
CL-EM (procedimiento 4): TR = 2,13 min
EM (ESIpos): m/z = 548 (M+H)+. 25
Ejemplo 44A
5-Cloro-N-({(5S)-3-[4-(3-hidroxi-2-oxopiridin-1(2H)-il)-3-metilfenil]-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il}metil)tiofeno-2carboxamida 30
Se disuelven 18 g (33 mmol) del ejemplo 43A en 50 ml de ácido trifluoroacético y se agita posteriormente durante 3h antes de evaporar a vacío hasta sequedad. Se disuelve el residuo (22,3 g) en porciones de 2 g cada una en 8,5 ml
35 de dimetilsulfóxido cada vez y se purifica con HPLC preparativa con un gradiente de agua/acetonitrilo. Se purifican las fracciones de producto, se liberan de acetonitrilo y se separan por filtración los cristales generados. Se extrae elfiltrado con acetato de etilo, se combinan las fases de acetato de etilo y se lavan con solución saturada de cloruro desodio, se secan y se evaporan a vacío. Se combina el residuo con los cristales y se seca a vacío. Se obtienen 9,95 g(65 % d.t.) del compuesto deseado.
40 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 9,2 (s a, 1H), 9,00 (t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,56-7,48 (m, 2H), 7,26 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 6,95 (dd, 1H), 6,86 (dd, 1H), 6,2 (t, 1H), 4,92-4,80 (m, 1H), 4,22 (t, 1H), 3,92-3,82 (m, 1H), 3,62 (t, 2H),2,04 (s, 3H).
45 CL-EM (procedimiento 4) TR = 2,09 min
EM (ESIpos): m/z = 460 (M+H)+.
Ejemplo 45A
50 5-Cloro-N-[((5S)-3-{4-[3-(2-hidroxietoxi)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il)metil]tiofeno-2carboxamida
HO
OO O
ClON N
SH
N
H3C O
Se disuelven 2,0 g (4,35 mmol) del ejemplo 44A en 9 ml de N,N-dimetilformamida anhidra, se añaden 3,6 g (26,1mmol) de carbonato de potasio y se agita posteriormente durante 30 min. Se diluye con 3 ml adicionales de N,N
5 dimetilformamida anhidra, se añaden 3,1 g (13,05 mmol) de (2-brometoxi)(terc-butil)dimetilsilano y se calienta a 60 ºC durante 7 h. Se deja enfriar, se filtra y se purifica mediante HPLC preparativa con un gradiente de agua/acetonitrilo. Se evaporan las fracciones de producto a vacío hasta sequedad y se seca el residuo a vacío. Seobtienen 1,17 g (53 % d.t.) del compuesto deseado.
10 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 9,00 (t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,55-7,48 (m, 2H), 7,25-7,18 (m, 2H), 7,05 (dd, 1H), 6,93 (dd, 1H), 6,22 (t, 1H), 4,91 (t, 1H), 4,89-4,82 (m, 1H), 4,22 (t, 1H), 4,00-3,85 (m, 3H), 3,75-3,70 (m, 2H), 3,61 (t, 2H), 2,0 (s, 3H).
CL-EM (procedimiento 5): TR = 1,93 min
15 EM (ESIpos): m/z = 504 (M+H)+.
Ejemplo 46A
20 5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-cloroetoxi)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2carboxamida
Cl
OO O Cl
O N NH
N
H3C O
25 Se disuelven 4,5 g (7,5 mmol) del ejemplo 44A y 1,4 g (9,8 mmol) de bromuro de 2-cloroetilo en 45 ml de N,Ndimetilformamida absoluta y se añaden 3,1 g (22,6 mmol) de carbonato de potasio. Se distribuye la reacción en tresviales de reacción y se agita a 80 ºC durante 40 minutos en microondas (300 W). Se añaden a los viales de reacciónenfriados en tres porciones en total 1,4 g (9,8 mmol) de bromuro de 2-cloroetilo y se agita durante 60 minutosadicionales a 80 ºC en microondas (300 W). Se añade agua a la reacción, se extrae con diclorometano y se lava la
30 fase orgánica separada con ácido clorhídrico 1 N y solución saturada de cloruro de sodio. Se seca sobre sulfato de sodio la fase de diclorometano, se separa por filtración el secante y se separa por destilación el disolvente enrotavapor. Después, se purifica por cromatografía el residuo sobre gel de sílice 60 con la fase móvil diclorometano/acetonitrilo 10/1 y se aclara con diclorometano/metanol 10/1. Se concentran las fracciones quecontienen producto hasta sequedad. Después de purificación fina por HPLC-FI preparativa con una mezcla de
35 acetonitrilo/agua, se obtienen 1,4 g de producto (35 % d.t.).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,96 (t, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,55-7,46 (m, 2H), 7,23 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 7,12 (d, 1H), 6,98 (d, 1H), 6,23 (t, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,32-4,17 (m, 3H), 3,97 (m, 2H), 3,92-3,84 (m, 1H), 3,62 (t, 2H), 2,01 (s, 3H).
40 CL-EM (procedimiento 6): TR = 2,31 min, 2,36 min
EM (ESIpos): m/z = 522 (M+H)+.
45 Ejemplo 47A
Bromuro de (2-fluoro-5-nitrobencil)(trifenil)fosfonio
Se disuelven 20 g (85,5 mmol) del compuesto del ejemplo 26A en 250 ml de tolueno anhidro y se añaden 22,4 g(85,5 mmol) de trifenilfosfina. Se calienta a reflujo la solución durante 16 h, separándose un sedimento. Se deja5 enfriar y se separa el sedimento por filtración. Después de lavar con dietiléter, se seca a vacío. Se obtienen 39 g (92 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,30-8,23 (m, 1H), 7,98-7,88 (m, 4H), 7,81-7,70 (m, 12H), 7,45 (t, 1H), 5,32 (d, 2H).
10 Ejemplo 48A
1-Fluoro-4-nitro-2-[prop-1-en-1-il]benceno
F
15 Se añaden gota a gota a 10 ºC 5,99 g (32,7 mmol) de bis(trimetilsilil)amiduro de sodio a una solución de 13,5 g (27,3mmol) del compuesto del ejemplo 47A en 145 ml de dioxano. Se agita durante 1 h a esta temperatura. Después, seañade una solución de 2,40 g (54,5 mmol) de acetaldehído en 5 ml de dioxano y se agita la reacción durante 1 h a
20 TA. A continuación, se añaden 400 ml de agua, se extrae tres veces con diclorometano y se lavan las fases orgánicas combinadas dos veces con solución acuosa saturada de cloruro de sodio. Después de secar sobre sulfatode sodio y la posterior filtración, se separa el disolvente a vacío. Se purifica mediante cromatografía en gel de sílice(eluyente: ciclohexano/acetato de etilo = 40:1). Se obtienen 5,2 g (100 % d.t.) del producto deseado en forma demezcla de isómeros E/Z.
25 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,47-8,05 (m, 2H), 7,58-7,42 (m, 1H), 6,70-6,05 (m, 2H), 1,90-1,78 (m, 3H).
CG-EM (procedimiento 10): TR = 2,64 y 2,70 min 30 EM (ESIpos): m/z = 181 (M+H+)+.
Ejemplo 49A
35 3-Metoxi-1-{4-nitro-2-[prop-1-en-1-il]fenil}piridin-2(1H)-ona
Se disuelven 14,0 g (111,9 mmol) de 3-metoxipiridin-2(1H)-ona en 350 ml de dimetilsulfóxido, añaden 15,4 g40 (134,3 mmol) de terc-butilato de potasio y se agita posteriormente la suspensión durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se añaden a la mezcla de reacción 20,2 g (111,9 mmol) del ejemplo 48A. Se calienta a 80 ºC y se agita posteriormente durante 12 horas a esta temperatura. Se ajusta a pH 3 la reacción con 150 ml de ácido clorhídrico 1N con refrigeración suave, se diluye con 800 ml de agua, se extrae con diclorometano y se lava consecutivamente lafase orgánica con agua y solución saturada de cloruro de sodio. A continuación, se seca la fase de diclorometano
5 sobre sulfato de sodio, se separa por filtración el secante y se separa totalmente el disolvente en rotavapor. A partir del residuo, se obtienen después de recristalización con terc-butilmetiléter 17,9 g de producto (45 % d.t.).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,50 (d, 0,75H), 8,17 (dd, 0,25H), 8,22-8,13 (m, 1H), 7,17 (d, 0,25H), 7,57(d, 0,75H), 7,09 (dd, 1H), 6,96 (dd, 0,75H) 6,91 (d, 0,25H), 6,59 (m, 0,75H), 6,35-6,23 (m, 1H), 6,09-5,85 (m, 1,25H),10 3,78 (s, 2,25H), 3,75 (s, 0,75H), 1,81 (dd, 2,25H), 1,73 (dd, 0,75H).
CL-EM (procedimiento 3): TR = 2,75 min, 2,79 min
EM (ESIpos): m/z = 273 (M+H)+. 15
Ejemplo 50A
3-Hidroxi-1-{4-nitro-2-[prop-1-en-1-il]fenil}piridin-2(1H)-ona
20 Se disuelven 17,8 g (50,6 mmol) del ejemplo 49A en 300 ml de diclorometano. Se añaden gota a gota a la soluciónenfriada con hielo 31,7 g (126,5 mmol) tribromuro de boro disueltos en 100 ml de diclorometano, y se agita posteriormente durante 1,5 horas a 0 ºC. Se añade hielo a la reacción con agitación. Después, se diluye con agua y
25 a continuación se extrae varias veces con diclorometano/metanol 10/1 y cloroformo. Se secan las fases orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio, se separan por filtración y se separa por destilación el disolvente en rotavapor. A partir del residuo, se obtienen después de recristalización con terc-butilmetiléter/diclorometano (10/1) 9,4 g de producto (67 % d.t.).
30 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 9,43 (s a, 1H), 8,50 (d, 0,75H), 8,27 (dd, 0,25H), 8,22-8,13 (m, 1H), 7,19 (d, 0,25H), 7,59 (d, 0,75H), 6,99 (dd, 1H), 6,85 (d, 0,75H), 6,81 (d, 0,25H), 6,58 (m, 0,75H), 6,31-6,19 (m, 1H), 6,11-5,85(m, 1,25H), 1,81 (dd, 2,25H), 1,73 (dd, 0,75H).
CL-EM (procedimiento 3): TR = 1,78 min
35 EM (ESIpos): m/z = 287 (M+H)+.
Ejemplo 51A
40 3-[(2-Metoxietoxi)metoxi]-1-{4-nitro-2-[prop-1-en-1-il]fenil}piridin-2(1H)-ona
NO2
Se disuelven 15,0 g (48,9 mmol) del ejemplo 50A en 700 ml de diclorometano y se añaden 16,4 g (107 mmol) de
45 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno. Se añade gota a gota a la mezcla enfriada con agua una solución de 100 ml de diclorometano y 10,4 g (83,2 mmol) de 1-(clorometoxi)-2-metoxietano y se agita durante 4 horas a temperaturaambiente. Para el procesamiento, se dispone la solución de reacción directamente en gel de sílice 60 y se purificapor cromatografía con un gradiente de fase móvil de ciclohexano y acetato de etilo (2/1 - 112). Se obtienen 9,6 g(43 % d.t.) de producto.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,50 (d, 0,5H), 8,27 (dd, 0,5H), 8,22-8,13 (m, 1H), 7,19 (d, 0,5H), 7,59 (d,0,5H), 7,23-7,10 (m, 2H), 6,58 (m, 0,5H) 6,85-6,25 (m, 1H), 6,60-5,85 (m, 1,5H), 5,28 (s, 1H), 5,23 (s, 1H), 3,75 (m, 2H), 3,48 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 1,80 (dd, 1,5H), 1,72 (dd, 1,5H).
5 CL-EM (procedimiento 6): TR = 2,09 min
EM (ESIpos): m/z = 361 (M+H)+.
10 Ejemplo 52A
1-(4-Amino-2-propilfenil)-3-[(2-metoxietoxi)metoxi]piridin-2(1H)-ona
15 Se disuelven 2,9 g (7,0 mmol) del ejemplo 51A en una mezcla de 56 ml de acetato de etilo y 35 ml de etanol y se añaden consecutivamente 2,2 g (35,0 mmol) de formiato de amonio y una cantidad catalítica de paladio sobrecarbón al 10 %. Se agita la reacción durante 2 horas a 80 ºC. Para el procesamiento, se filtra la suspensión enfriadapor gel de sílice 60, se lava con etanol y se concentra el filtrado en rotavapor hasta sequedad. Se disuelve el residuo
20 con una mezcla de 56 ml de acetato de etilo y 35 ml de etanol y con 2,2 g (35,0 mmol) de formiato de amonio, así como con una cantidad catalítica de paladio sobre carbón al 10 %. A un tiempo de reacción de 24 horas y unatemperatura de 80 ºC, se reduce totalmente el reactante. Se filtra otra vez la suspensión enfriada por gel de sílice 60,se eluye con etanol y se separa totalmente el disolvente en rotavapor. Se obtienen 3,0 g de producto bruto.
25 CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,73 min, 1,81 min
EM (ESIpos): m/z = 333 (M+H)+.
Ejemplo 53A
30 5-Cloro-N-({(5S)-3-[4-(3-hidroxi-2-oxopiridin-1(2H)-il)-3-propilfenil]-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il}metil)tiofeno-2carboxamida
HO O O Cl
O NH
N
O
H3C
35 Se disuelven 3,0 g (9,0 mmol) del ejemplo 52A en 125 ml de acetonitrilo. Se añaden a la solución enfriada con hielo2,6 g (9,9 mmol) del ejemplo 1A, se agita durante 10 minutos y a continuación se añaden en porciones 3,0 g(13,5 mmol) de perclorato de magnesio. Se agita a temperatura ambiente durante una noche y se añaden después4,4 g (27,1 mmol) de 1,1-carbodiimidazol y 0,1 g (0,9 mmol) de 4-dimetilaminopiridina. Después de 4 horas a 60 ºC,
40 se filtra la suspensión, se lava el residuo de filtrado con acetonitrilo y se concentra el filtrado en rotavapor hasta sequedad. Se recoge el residuo con acetato de etilo, se extrae con 50 ml de ácido clorhídrico 1 N, se extrae la faseácida acuosa varias veces con acetato de etilo y se lavan las fases orgánicas combinadas con solución saturada decloruro de sodio. A continuación, se seca la fase de acetato de etilo sobre sulfato de sodio, se separa por filtración el secante y se separa totalmente el disolvente en rotavapor. Después de purificación fina mediante HPLC-FI
45 preparativa con un gradiente de acetonitrilo/agua, se obtienen 1,1 g (19 % d.t.) de producto.
CL-EM (procedimiento 11): TR = 3,26 min
EM (ESIpos): m/z = 488 (M+H)+.
Ejemplo 54A
5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-cloroetoxi)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-propilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-25 carboxamida
Cl
OO O Cl
O NH
N
O H3C
Se disuelven 241 mg (0,50 mmol) del ejemplo 53A y 270 mg (1,4 mmol) de 1-cloro-2-yodoetano en 9 ml de N,N
10 dimetilformamida y se añaden 131 mg (0,90 mmol) de carbonato de potasio. Se agita la reacción durante 4 horas a 60 ºC. Para el procesamiento, se añade a la suspensión agua y se extrae con diclorometano. Se lava la faseorgánica separada consecutivamente con ácido clorhídrico 1 N y solución saturada de cloruro de sodio, a continuación se seca sobre cloruro de sodio, se separa por filtración el secante y se retira totalmente el disolvente enrotavapor. Después del secado del residuo a vacío, se obtienen 30 mg (12 % d.t.) de producto.
15 CL-EM (procedimiento 6): TR = 2,36 min
EM (ESIpos): m/z = 550 (M+H)+.
20 Ejemplo 55A
1-(4-Amino-2-propilfenil)-3-metoxipiridin-2(1H)-ona
H3CO O
25 Se disuelven 27,0 g (87,7 mmol) del ejemplo 49A en 702 ml de acetato de etilo y 441 ml de etanol, se añaden 16,6 g(263 mmol) de formiato de amonio y 0,093 g (0,09 mmol) de paladio/carbono (al 10 %) y se agita durante 16 h a 80ºC. Debido a la reacción incompleta, se añaden 5,5 g (87 mmol) de formiato de amonio y 0,03 g (0,03 mmol) depaladio/carbono (al 10 %). Después de 16 h adicionales de agitación a 80 ºC, se añaden de nuevo estas cantidades
30 y se agita durante 16 h a 80 ºC. Para el procesamiento, se lleva la solución de reacción a temperatura ambiente y se dispone en una frita de gel de sílice. Se lava posteriormente con etanol, se concentra el filtrado a vacío y se purifica por cromatografía el residuo por gel de sílice 60 con un gradiente de diclorometano y metanol (100/1 - 3011). Se obtienen 17,3 g de producto, que sin embargo no contiene señales en el espectro de RMN de 1H del productointermedio que contiene doble enlace. Se disuelve por tanto el material impurificado en 360 ml de acetato de etilo y
35 226 ml de etanol, se añaden 12,8 g (202 mmol) de formiato de amonio y 0,072 g (0,07 mmol) de paladio/carbono (al 10 %) y se agita durante 36 h a 80 ºC. Después de enfriar, se filtra a través de una frita de gel de sílice, se lavaposteriormente con etanol y se concentra a vacío. Se purifica por cromatografía el residuo por gel de sílice 60 con un gradiente de diclorometano y metanol (100/1 - 1011). Se obtienen 8,35g de producto (47 % d.t.).
40 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 6,97 (dd, 1H), 6,85 (dd, 1H), 6,75 (d, 1H), 6,50 (d, 1H), 6,45 (dd, 1H), 6,15 (t, 1H), 5,22 (s, 2H) 3,71 (s, 3H), 2,12 (t, 2H), 1,45-1,30 (m, 2H), 0,76 (t, 3H).
CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,53 min
45 EM (ESIpos): m/z = 259 (M+H)+.
Ejemplo 56A
5-Cloro-N-({(5S)-3-[4-(3-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il)-3-propilfenil]-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il}metil)tiofeno-250 carboxamida
H3COO O
H3C
Se disuelve 1,00 g (3,87 mmol) del ejemplo 55A en 23,5 ml de acetonitrilo anhidro y se añaden 926 mg (4,26 mmol)del ejemplo 1A y 1,30 g (5,81 mmol) de perclorato de magnesio. Se agita durante 3,5 h a temperatura ambiente.
5 Después, se añaden 1,57 g (9,68 mmol) de carbonildiimidazol y 47 mg (0,38 mmol) de 4-dimetilaminopiridina, se agita durante 4 h a 60 ºC y después durante 18 h a TA. A continuación, se diluye con 300 ml de agua y 150 ml deacetato de etilo y se extrae la fase acuosa dos veces con 150 ml de acetato de etilo. Se secan las fases orgánicascombinadas sobre sulfato de sodio, se concentran a vacío y se purifica el residuo obtenido mediante cromatografía en gel de sílice (diclorometano/metanol 20:1). Se obtienen 1,81 g (92 % d.t.) del producto deseado.
10 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,99 (t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,58-7,47 (m, 2H), 7,26-7,15 (m, 2H), 7,04 (dd, 1H), 6,90 (dd, 1H), 6,23 (dd, 1H), 4,91-4,81 (m, 1H), 4,23 (dd, 1H), 3,93-3,85 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,62 (dd,2H), 2,31-2,23 (m, 2H), 1,50-1,36 (m, 2H), 0,78 (t, 3H).
15 HPLC (procedimiento 2): TR = 4,19 min
EM (ESI pos, m/z) = 502 (M+H)+.
Ejemplo 57A
20 5-Cloro-N-({(5S)-3-[4-(3-hidroxi-2-oxopiridin-1(2H)-il)-3-propilfenil]-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il}metil)tiofeno-2carboxamida
H3C
25 Se disuelven 1,79 g (3,56 mmol) del ejemplo 56A en 104 ml de diclorometano anhidro y se enfrían a -78 °C. Seañaden gota a gota a esta temperatura 28,5 ml (28,5 mmol) de una solución de tribromuro de boro 1 N endiclorometano de modo que la temperatura no supere los -65 °C. Se agita durante 2 h a –78 ºC y después durante 1 h a TA, antes de añadir cuidadosamente a 200 ml de solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio.
30 Después de la separación de fases, se extrae la fase acuosa tres veces con diclorometano, se lavan las fases orgánicas combinadas con solución saturada de cloruro de sodio, se secan sobre sulfato de sodio, se filtran y seevaporan a vacío hasta sequedad. Se obtienen 1,75 g (97 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 9,21 (s, 1H), 8,99 (t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,56-7,47 (m, 2H), 7,29-7,15 (m,35 2H), 6,94 (dd, 1H), 6,80 (dd, 1H), 6,19 (dd, 1H), 4,91-4,81 (m, 1H), 4,23 (dd, 1H), 3,93-3,85 (m, 1H), 3,62 (dd, 2H), 2,35-2,26 (m, 2H), 1,50-1,36 (m, 2H), 0,78 (t, 3H).
HPLC (procedimiento 2): TR = 4,21 min
40 EM (DCI): m/z = 488 (M+H)+.
Ejemplo 58A
5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-cloroetoxi)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-propilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-245 carboxamida
Cl
OO O Cl
O NH
N
O H3C
Se disuelven 1,70 g (3,48 mmol) del ejemplo 57A y 2,49 g (17,4 mmol) de 1-bromo-2-cloroetano en 55 ml de 1-metil2-pirrolidona. Se añaden a la solución 2,27 g (6,96 mmol) de carbonato de cesio y se agita durante 2 horas a 60 ºC. 5 Después, se añaden 500 ml de agua, 100 ml de solución acuosa saturada de cloruro de sodio y 200 ml de tercbutilmetiléter y 200 ml de acetato de etilo. Después de la separación de fases, se extrae la fase acuosa dos vecescon 200 ml de acetato de etilo. Se lavan consecutivamente las fases orgánicas combinadas con lejía de sosa 1 N y solución saturada de cloruro de sodio, a continuación se secan sobre sulfato de sodio, se separa por filtración elsecante y se separa completamente el disolvente en rotavapor. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel
10 de sílice (diclorometano/etanol 40:1). Se obtienen 1,78 g (85 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,99 (t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,56-7,47 (m, 2H), 7,29-7,13 (m, 2H), 7,12 (dd, 1H), 6,99 (dd, 1H), 6,22 (dd, 1H), 4,91-4,82 (m, 1H), 4,30-4,14 (m, 1H), 3,98-3,85 (m, 1H), 3,61 (dd, 2H), 2,352,26 (m, 2H), 2,18 (t, 2H), 1,95-1,85 (m, 2H), 1,50-1,36 (m, 2H), 0,78 (t, 3H).
15 HPLC (procedimiento 2): TR = 4,44 min
EM (ESIpos): m/z = 550 (M+H)+.
20 Ejemplo 59A
3-Bromo-1-(2,6-dimetil-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona
H3C
25 Se disuelven 2,81 g (16,1 mmol) de 3-bromopiridin-2(1H)-ona (O. S. Tee, M. Pavent, J. Am. Chem. Soc. 1982, 104, 4142-4146) en 100 ml de DMF. Se enfría a 0 ºC y se añaden 2,71 g (24,2 mmol) de terc-butilato de potasio. Se retirael baño de hielo y se agita durante 30 min a temperatura ambiente. Se añaden 3,00 g (17,7 mmol) de 1-fluoro-2,5dimetil-4-nitrobenceno y se agitan durante 18 h a 80 ºC y durante 36 h a 100 ºC y durante 18 h a 120 ºC. Después,
30 se añade a agua y se extrae tres veces con acetato de etilo. Se secan las fases orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 4:1). Seobtienen 2,04 g (38 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,19 (s, 2H), 8,14 (dd, 1H), 7,62 (dd, 1H), 6,43 (t, 1H), 2,11 (s, 6H). 35 HPLC (procedimiento 1): TR = 4,13 min.
EM (ESIpos, m/z): 323 (M+H)+.
40 Síntesis alternativa:
Se disuelven 150 g (750 mmol) de 3-bromopiridin-2(1H)-ona (O. S. Tee, M. Pavent, J. Am. Chem. Soc. 1982, 104, 4142-4146) y 207 g (1,50 mol) de carbonato de potasio en 2,9 l de dimetilsulfóxido y se calientan a 120 ºC. Se añadegota a gota a esta temperatura una solución de 317 g (750 mmol) de 1-fluoro-2,5-dimetil-4-nitrobenceno en 700 ml45 de dimetilsulfóxido durante 60 min y se agita durante 3,5 h a 120 ºC. Después de enfriar, se introduce agitando la solución de reacción en una mezcla de agua/ácido clorhídrico. Se extrae con acetato de etilo, se separan las fases y se extrae la fase acuosa de nuevo con acetato de etilo. Se lavan las fases orgánicas combinadas a continuación conagua. Se separan las fases y se seca la fase orgánica sobre sulfato de sodio. Después de concentrar a vacío, sepurifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice (diclorometano, después acetato de etilo/diclorometano
50 1:20). Se combinan las fracciones que contienen producto, se separan los disolventes y se agita el residuo en dietiléter. Se obtienen 112 g (46 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,19 (s, 2H), 8,14 (dd, 1H), 7,62 (dd, 1H), 6,43 (t, 1H), 2,11 (s, 6H).
HPLC (procedimiento 13): TR = 1,59 min. EM (ESIpos, m/z): 323 (M+H)+.
Ejemplo 60A
1-(2,6-Dimetil-4-nitrofenil)-3-vinilpiridin-2(1H)-ona
H3C
10 Se disuelven 2,00 g (6,19 mmol) del compuesto del ejemplo 59A en 31 ml de dioxano anhidro, se añaden 2,36 g(7,42 mmol) de tributilestaño y 143 mg (0,124 mmol) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio y se agita durante 5 h a 100ºC. Se deja enfriar y se filtra a través de tierra de diatomeas. Se lava posteriormente tres veces con acetato de etilo y se concentran los filtrados combinados a vacío hasta sequedad. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel
15 de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 4:1). Se obtienen 846 mg (51 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,17 (s, 2H), 7,78 (dd, 1H), 7,48 (dd, 1H), 6,75 (dd, 1H), 6,48 (dd, 1H), 6,14 (dd, 1H), 5,33 (dd, 1H), 2,10 (s, 6H).
20 HPLC (procedimiento 1): TR = 4,25 min
EM (ESIpos): m/z = 271 (M+H)+.
Síntesis alternativa:
25 Se disuelven 132 g (408 mmol) del compuesto del ejemplo 59A (síntesis alternativa) en 1,27 l de dioxano anhidro, seañaden 136 g (428 mmol) de tributilvinilestaño y 9,44 g (8,17 mmol) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio y se agitadurante 4 h a 100 ºC. Se deja enfriar y se filtra a través de tierra de diatomeas. Se concentra a vacío hastasequedad. Se disuelve el residuo en diclorometano y se purifica mediante cromatografía en gel de sílice (éter de
30 petróleo/acetato de etilo 9:1, después 8:2, después 7:3). Se combinan las fracciones que contienen producto, se separan los disolventes y se agita el residuo en éter de petróleo/dietiléter (10:1). Se obtienen 83 g (75 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,17 (s, 2H), 7,78 (dd, 1H), 7,48 (dd, 1H), 6,75 (dd, 1H), 6,48 (dd, 1H), 35 6,14 (dd, 1H), 5,33 (dd, 1H), 2,10 (s, 6H).
HPLC (procedimiento 13): TR = 1,70 min
EM (ESIpos): m/z = 271 (M+H)+. 40
Ejemplo 61A
1-(2,6-Dimetil-4-nitrofenil)-3-(2-hidroxietil)piridin-2(1H)-ona
HO
O H3C
NO2
N
45 H3C
Se añade a 800 mg (2,96 mmol) del compuesto del ejemplo 60A con refrigeración con hielo una solución de 902 mg(7,40 mmol) de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano en 14,8 ml de tetrahidrofurano. Se agita posteriormente durante 3 h atemperatura ambiente, después se enfría a 0 ºC y se añade una solución acuosa de 591 mg (14,8 mmol) de50 hidróxido de sodio durante 15 min. Se añaden 2,60 ml de una solución de peróxido de hidrógeno al 30 % de modo que la temperatura no supere los 30 °C. Después de terminada la adición, se agita posteriormente durante 30 min a0 ºC. Se añade a la mezcla de reacción con refrigeración con hielo una solución de 8,73 g (32,6 mol) dehidrogenosulfito de sodio en 12 ml de agua. Se diluye con 50 ml de acetato de etilo, se separa la fase orgánica y seextrae la fase acuosa dos veces con acetato de etilo. Se lavan las fases orgánicas combinadas con solución55 saturada de cloruro de sodio, se secan sobre sulfato de sodio y se evaporan a vacío hasta sequedad. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 1:2). Se obtienen 765 mg (89 % d.t.)
del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,15 (s, 2H), 7,46 (dd, 1H), 7,35 (dd, 1H), 6,37 (dd, 1H), 4,62 (dd, 1H), 4,25 (d, 1H), 2,62 (dd, 2H), 2,08 (s, 6H). 5 HPLC (procedimiento 1): TR = 3,59 min
EM (ESIpos): m/z = 289 (M+H)+
10 Síntesis alternativa:
Se añaden 70,7 g (262 mmol) del compuesto del ejemplo 60A (síntesis alternativa) con refrigeración con hielo 1,15 l(575 mmol) de una solución 0,5 N de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano en tetrahidrofurano de modo que la temperatura interna ascienda a entre 10-15 °C. Después, se calienta a TA y se agita posteriormente durante 1,5 h a temperatura15 ambiente. A continuación, se enfría y se añaden a 0-5 °C con 653 ml (1,31 mol) de una solución acuosa 2 M de hidróxido de sodio. Se agita un poco posteriormente y después se añaden 296 g (2,51 mol) de una solución deperóxido de hidrógeno al 30 % de modo que la temperatura no supere los 30 ºC y no baje de 25 ºC. Después determinada la adición, se agita posteriormente durante 30 min. Se añade a la mezcla de reacción agua y acetato deetilo. Después de la separación de fases, se extrae la fase acuosa de nuevo con acetato de etilo. Se lavan las fases
20 orgánicas combinadas con una disolución acuosa de hidrogenosulfito de sodio. Se separa la fase orgánica y se evapora a vacío hasta sequedad. Se disuelve el residuo en diclorometano y se purifica mediante cromatografía engel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 1:2, después acetato de etilo). Se obtienen 66,5 g (88 % d.t.) del producto deseado.
25 RMN de 1H (400 MHz, CDCl3, 5/ppm): 5 = 8,07 (s, 2H), 7,43 (dd, 1H), 6,98 (ddd, 1H), 6,38 (dd, 1H), 3,88 (ddd, 2H), 3,55 (dd, 1H), 2,89 (dd, 2H), 2,19 (s, 6H).
HPLC (procedimiento 14): TR = 0,83 min
30 EM (ESIpos): m/z = 289 (M+H)+.
Ejemplo 62A
3-(2-{[terc-Butil(difenil)silil]oxi}etil)-1-(2,6-dimetil-4-nitrofenil)piridin-2(1H)-ona 35
H3C
Se disuelven 760 mg (2,64 mmol) del compuesto del ejemplo 61A y 0,55 ml (3,9 mmol) de trietilamina en 7 ml deN,N-dimetilformamida anhidra. Se añaden 16 mg (0,13 mmol) de 4-dimetilaminopiridina y 1,09 g (3,95 mmol) de terc
40 butil(cloro)difenilsilano y se agita durante 2 h a TA. Después, se añade a agua y después de la separación de fases se extrae tres veces con acetato de etilo. Se lavan las fases orgánicas combinadas dos veces con agua, se secansobre sulfato de sodio, se filtran y se evaporan a vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice(ciclohexano/acetato de etilo 5:1). Se obtienen 971 mg (58 % d.t.) del producto deseado.
45 HPLC (procedimiento 2): TR = 5,97 min
EM (ESIpos): m/z = 527 (M+H)+.
Síntesis alternativa:
50 Se disuelven 100 g (346 mmol) del compuesto del ejemplo 61A (síntesis alternativa) y 30,7 g (450 mmol) de imidazolen 1 l de N,N-dimetilformamida anhidra. Se añade gota a gota una solución de 117 g (416 mmol) de tercbutil(cloro)difenilsilano en 150 ml de N,N-dimetilformamida y se agita durante 3 h a TA. Después, se mezcla conagua y acetato de etilo, se separan las fases y se lava la fase orgánica con agua, se seca sobre sulfato de sodio, se
55 filtra y se evapora a vacío. Se agita el residuo en éter de petróleo/dietiléter (10:1). Después de filtrar, se lava con éter de petróleo y a continuación se seca con aire. Se obtienen 150 g (82 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, CDCl3, 5/ppm): 5 = 8,04 (s, 2H), 7,68-7,62 (m, 4H), 7,46-7,33 (m, 7H), 6,92 (dd, 1H), 6,30 (dd,1H), 3,95 (dd, 2H), 2,86 (dd, 2H), 2,16 (s, 6H), 1,02 (s, 9H).
HPLC (procedimiento 13): TR = 2,98 min EM (ESIpos): m/z = 527 (M+H)+.
Ejemplo 63A
1-(4-Amino-2,6-dimetilfenil)-3-(2-{[terc-butil(difenil)silil]oxi}etil)piridin-2(1H)-ona
10 H3C
Se disuelven 970 mg (1,84 mmol) del compuesto del ejemplo 62A en 20 ml de THF. Después, se añaden 200 mg depaladio sobre carbón y se hidrogena a TA en atmósfera de hidrógeno a presión normal. A continuación, se filtra a través de tierra de diatomeas, se lava posteriormente tres veces con THF y se libera el filtrado de disolvente. Se
15 vuelve a hacer reaccionar el producto de reacción (1,00 g) sin purificación adicional.
HPLC (procedimiento 2): TR = 4,99 min
EM (ESIpos): m/z = 497 (M+H)+. 20 Síntesis alternativa:
Se disuelven 143 g (271 mmol) del compuesto del ejemplo 62A (síntesis alternativa) en 1,43 l de tetrahidrofurano y se purgan con argón. Se añaden 17 g de paladio sobre carbón (húmedo con agua al 50 %) y después se hidrogena
25 a TA en atmósfera de hidrógeno a presión normal. A continuación, se filtra a través tierra de diatomeas, se lava posteriormente con tetrahidrofurano y se libera el filtrado de disolvente. Se vuelve a hacer reaccionar el producto dereacción (134 g) sin purificación adicional.
HPLC (procedimiento 6): TR = 3,11 min 30 EM (ESIpos): m/z = 497 (M+H)+
Ejemplo 64A
35 N-[((5S)-3-{4-[3-(2-{[terc-Butil(difenil)silil]oxi}etil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-dimetilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il)metil]5-clorotiofeno-2-carboxamida
H3C H3C O H3C O H3C O
Cl O
S
N
N
H
N
H3C
O
40 Se disuelven 800 mg (1,61 mmol) del compuesto del ejemplo 63A en 15 ml de acetonitrilo anhidro y se añaden 385 g (1,77 mmol) del compuesto del ejemplo 1A, así como 539 mg (2,41 mmol) de perclorato de magnesio. Se agita durante 5,5 h a temperatura ambiente. Después, se añaden 652 mg (4,03 mmol) de 1,1-carbonildiimidazol y 19 mg(0,16 mmol) de N,N-dimetilaminopiridina y se calienta a reflujo durante 18 h. Se deja enfriar y se añade a 100 ml deagua y 100 ml de acetato de etilo. Después de la separación de fases, se extrae la fase acuosa dos veces conacetato de etilo y se secan las fases orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio. Después de filtrar, se evapora a
5 vacío hasta sequedad. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 1:2). Se obtienen 664 mg (55 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,99 (t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,63-7,45 (m, 4H), 7,48-7,31 (m, 9H), 7,28 (dd, 1H), 7,20 (d, 1H), 6,32 (t, 1H), 4,90-4,81 (m, 1H), 4,22 (dd, 1H), 3,89-3,82 (m, 3H), 3,62 (t, 2H), 2,76 (dd, 2H), 10 1,94 (s, 6H), 0,95 (s, 9H).
HPLC (procedimiento 2): TR = 5,92 min
EM (ESIpos): m/z = 740 (M+H)+. 15 Síntesis alternativa:
Se disuelven 102 g (171 mmol) del compuesto del ejemplo 68A en 1,45 l de diclorometano y se añaden 44,7 ml (257mmol) de N,N-diisopropiletilamina. Se añade lentamente una solución de 37,1 g (205 mmol) de cloruro de 5
20 clorotiofeno-2-carbonilo en un poco de diclorometano y se agita durante una hora a temperatura ambiente. Después, se añade agua, se separan las fases y se seca la fase orgánica sobre sulfato de sodio. Después de filtrar, se evapora a vacío hasta sequedad. Se vuelve a hacer reaccionar el residuo sin purificación adicional.
HPLC (procedimiento 6): TR = 3,33 min 25 EM (ESIpos): m/z = 740 (M+H)+.
Ejemplo 65A
30 5-Cloro-N-[((5S)-3-{4-[3-(2-hidroxietil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-dimetilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il)metil]tiofeno-2carboxamida
HO
H3C O Cl O
O
SNN H
N
H3C O
35 Se disuelven 660 mg (0,891 mmol) del compuesto del ejemplo 64A en 20 ml de THF y se añaden 512 mg (1,96 mmol) de fluoruro de tetrabutilamonio. Después de 1 h, se concentra a vacío hasta sequedad. Se purifica el residuomediante cromatografía en gel de sílice (diclorometano/metanol 10:1; 1 % de trietilamina). Se obtienen 396 mg (85 % d.t.) del producto deseado.
40 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,98 (t, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,42 (dd, 1H), 7,38 (d, 1H), 7,25 (dd, 1H), 7,19 (d, 1H), 6,29 (t, 1H), 4,90-4,81 (m, 1H), 4,60 (t, 1H), 4,20 (t, 1H), 3,86 (dd, 1H), 3,64-3,52 (m, 4H), 2,62 (t, 2H),1,95 (s, 6H).
HPLC (procedimiento 1): TR = 3,92 min 45 EM (ESIpos): m/z = 502 (M+H)+.
Síntesis alternativa:
50 Se disuelven 157 g (174 mmol) del compuesto del ejemplo 64A (síntesis alternativa) en 1,44 l de diclorometano. Se añaden a gota a gota a 15-20 °C 453 ml (5,32 mol) de ácido clorhídrico concentrado y se agita durante 1 h atemperatura ambiente. Se separan las fases, y se desecha la fase orgánica. Se lava la fase orgánica dos veces condiclorometano. A continuación, se mezcla la fase acuosa con diclorometano y se ajusta a pH 10 con lejía de sosadiluida 1:1 con refrigeración. Se separan las fases, se lava la fase orgánica dos veces con agua y después se seca
55 sobre sulfato de sodio. Después de filtrar, se concentra el filtrado a vacío hasta sequedad. Se agita el residuo en acetona, se enfría a 10 ºC, se separa por filtración a esta temperatura y se lava con acetona fría. Después de secar,se obtienen 75 g (85 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,98 (t, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,42 (dd, 1H), 7,42-7,38 (m, 2H), 7,25 (dd,60 1H), 7,19 (d, 1H), 6,29 (t, 1H), 4,90-4,81 (m, 1H), 4,60 (t, 1H), 4,20 (t, 1H), 3,86 (dd, 1H), 3,64-3,52 (m, 4H), 2,62 (t, 2H), 1,95 (s, 6H).
HPLC (procedimiento 6): TR = 1,93 min
65 EM (ESIpos): m/z = 502 (M+H)+.
Ejemplo 66A
2-[(2R)-3-({4-[3-(2-{[terc-Butil(difenil)silil]oxi}etil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-dimetilfenil}amino)-2-hidroxipropil]-1H-isoindol-1,3(2H)-diona
O
Se disuelven 65 g (131 mmol) del compuesto del ejemplo 63A (síntesis alternativa) en 1,3 l de acetonitrilo y se
10 añaden 27,9 g (137 mmol) de (S)-epoxiftalimida, así como 43,8 g (196 mmol) de perclorato de magnesio. Se agita durante 15 h a temperatura ambiente. Después, se añaden agua y diclorometano, se separan las fases y se seca lafase acuosa sobre sulfato de sodio. Después de filtrar, se evapora a vacío hasta sequedad. Se vuelve a hacerreaccionar el residuo sin purificación adicional.
15 HPLC (procedimiento 14): TR = 1,73 min
EM (ESIpos): m/z = 701 (M+H)+.
Ejemplo 67A
20 2-{[(5S)-3-{4-[3-(2-{[terc-Butil(difenil)silil]oxi}etil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-dimetilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}1H-isoindol-1,3(2H)-diona
O 25 Se disuelven 190 g (204 mmol) del compuesto del ejempelo 66A en 1,01 l de tolueno. Después, se añaden 66,0 g(407 mmol) de 1,1‘-carbonildiimidazol y se calienta a reflujo durante una hora. Después, se enfría a temperaturaambiente y se añade agua y diclorometano.
30 Se separan las fases y se seca la fase orgánica sobre sulfato de sodio. Después de filtrar, se evapora a vacío hasta sequedad. Se agita el residuo en metanol, se separa por filtración el sólido restante y se lava con metanol. Se obtienen 130 g (87 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 7,99-7,82 (m, 4H), 7,65-7,56 (m, 4H), 7,48-7,28 (m, 10H), 6,32 (t, 1H), 35 5,03-4,93 (m, 1H), 4,24 (dd, 1H), 4,00 (dd, 1H), 3,97-3,88 (m, 2H), 3,85 (t, 2H), 2,76 (t, 2H), 1,94 (s, 6H), 0,95 (s, 9H).
HPLC (procedimiento 14): TR = 1,74 min
EM (ESIpos): m/z = 726 (M+H)+. 40
Ejemplo 68A
1-{4-[(5S)-5-(Aminometil)-2-oxo-1,3-oxazolidin-3-il]-2,6-dimetilfenil}-3-(2-{[terc-butil(difenil)silil]oxi}etil)piridin-2(1H)ona
H3C
Se disuelven 130 g (179 mmol) del compuesto del ejemplo 67A en 650 ml de etanol, se añaden 193 ml (2,68 mol) desolución acuosa de metanamina al 40 % y se calienta a 50-55 ºC durante una hora. Después de enfriar a
10 temperatura ambiente, se añade agua y diclorometano, se separan las fases y se seca la fase orgánica sobre sulfato de sodio. Después de filtrar, se evapora a vacío hasta sequedad. Se vuelve a hacer reaccionar el residuo (117 g, 89% d.t.) sin purificación adicional.
HPLC (procedimiento 6): TR = 2,05 min 15 EM (ESIpos): m/z = 597 (M+H)+.
Ejemplo 69A
20 1-(2,6-Dimetil-4-nitrofenil)-3-metoxipiridin-2(1H)-ona
A 336 mg (2,69 mmol) de 3-metoxipiridinona en 10 ml de DMF se añaden a 0 °C 452 mg (4,03 mmol) de terc-butilato
25 de potasio y se agita durante 30 min a temperatura ambiente. Se añaden 500 mg (2,96 mmol) de 1-fluoro-2,5dimetil-4-nitrobenceno y se agita a 80 ºC. Después de 22 h, se calienta a 120 ºC y se agita 20 h adicionales.Después, se enfría y se añade a 100 ml de agua y 15 ml de solución acuosa saturada de cloruro de sodio. Se extraetres veces con 300 ml de acetato de etilo cada una y se secan las fases orgánicas combinadas sobre sulfato desodio. Después de filtrar, se separa el disolvente a vacío y se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de
30 sílice (ciclohexano/acetato de etilo 1:1). Se obtienen 383 mg (52 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,16 (s, 2H), 7,04 (dd, 1H), 6,97 (dd, 1H), 6,38 (dd, 1H), 3,77 (s, 3H), 2,08 (s, 6H).
35 HPLC (procedimiento 1): TR = 2,84 min.
EM (DCI, m/z): 275 (M+H)+.
Ejemplo 70A
40 1-(4-Amino-2,6-dimetilfenil)-3-metoxipiridin-2(1H)-ona Se disuelven 2,05 g (7,47 mmol) del compuesto del ejemplo 69A en 70 ml de acetato de etilo y 70 ml de etanol, se añaden 2,35 g (37,4 mmol) de formiato de amonio y 0,39 g (0,37 mmol) de paladio/carbono (al 10 %) y se agita
5 durante 2 h a 80 ºC. Para el procesamiento, se lleva la solución de reacción a temperatura ambiente y se vierte a través de una frita de gel de sílice. Se lava posteriormente con etanol y se concentra el filtrado a vacío. Se vuelve ahacer reaccionar el producto de reacción (1,65 g) sin purificación adicional.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 6,93-6,83 (m, 2H), 6,33 (s, 2H), 6,19 (dd, 1H), 5,12 (s a, 2H), 3,72 (s, 10 3H), 1,78 (s, 6H).
CL-EM (procedimiento 1): TR = 2,90 min.
EM (DCI, m/z): 245 (M+H)+. 15
Ejemplo 71A
5-Cloro-N-({(5S)-3-[4-(3-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il)-3,5-dimetilfenil]-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il}metil)tiofeno-2carboxamida 20
H3CO OH 3C O ClON
N SH
N
H3C O
A una solución de 555 mg (2,27 mmol) del compuesto del ejemplo 70A en 28 ml de acetonitrilo se añaden 544 mg(2,50 mmol) del compuesto del ejemplo 1A. Se añaden a la suspensión 761 mg (3,41 mmol) de perclorato de25 magnesio, tras de lo cual se deja agitar durante 5,5 h a TA. Después, se añaden 736 mg (4,54 mmol) de 1,1‘carbonildiimidazol y 28 mg (0,23 mmol) de DMAP y se calienta a 60 ºC. Después de 18 h, se añaden de nuevo 28mg (0,23 mmol) de DMAP. Después de 2 h a 70 ºC, se enfría y se diluye con 100 ml de agua. Se extrae la faseacuosa tres veces con 100 ml de acetato de etilo cada vez y se secan las fases orgánicas combinadas sobre sulfatode sodio. Después de filtrar, se libera de disolvente y se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice
30 (diclorometano/etanol 20:1). Después de separar el disolvente, se obtienen 840 mg (69 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,98 (t, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,42-7,32 (m, 2H), 7,20 (dd, 1H), 7,00-6,88(m, 2H), 6,28 (dd, 1H), 4,91-4,80 (m, 1H), 4,20 (dd, 1H), 3,90-3,82 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,60 (dd, 2H), 1,95 (s, 6H). 35 HPLC (procedimiento 14): TR = 1,02 min.
EM (ESIpos, m/z): 488 (M+H)+.
40 Ejemplo 72A
5-Cloro-N-({(5S)-3-[4-(3-hidroxi-2-oxopiridin-1(2H)-il)-3,5-dimetilfenil]-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il}metil)tiofeno-2carboxamida
HO OH 3C O Cl O
S
N
N H
N
H3C O
45 Se disuelven 830 mg (1,70 mmol) del compuesto del ejemplo 71A en 50 ml de diclorometano anhidro y se enfría a –78 ºC. Se añaden gota a gota a esta temperatura 3,40 ml (3,40 mmol) de una solución de tribromuro de boro 1 N en diclorometano de modo que la temperatura no supere los –65 ºC. Se agita durante 2 h a -78 °C, después durante 2,5h a TA y se deja durante 15 h a –20 ºC. Se añade cuidadosamente la solución a temperatura ambiente a unasolución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio. Después de la separación de fases, se extrae la faseacuosa tres veces con diclorometano, se lavan las fases orgánicas combinadas con solución saturada de cloruro de
5 sodio, se secan sobre sulfato de sodio, se filtran y se evaporan a vacío hasta sequedad. Se obtienen 907 mg (69 % d.t., pureza CL-EM 61 %) del compuesto deseado.
CL-EM (procedimiento 6): TR = 2,09 min.
10 EM (ESIpos, m/z) = 474 (M+H)+.
Ejemplo 73A
5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-cloroetoxi)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-dimetilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-215 carboxamida
Cl
O O H3C O Cl
O N
NH
N
H3C O
Se disuelven 900 mg (1,89 mmol) del compuesto del ejemplo 72A y 1,36 g (9,49 mmol) de 1-bromo-2-cloroetano en
20 30 ml de 1-metil-2-pirrolidona. Se añaden a la solución 1,55 g (4,75 mmol) de carbonato de cesio y se agita durante 15 horas a 60 ºC. Después, se añade agua y después de la separación de fases se extrae la fase acuosa tres vecescon terc-butilmetiléter y tres veces con diclorometano. Se lavan las fases orgánicas combinadas consecutivamentecon lejía de sosa 1 N y solución saturada de cloruro de sodio, a continaución se secan sobre sulfato de sodio. Sesepara por filtración el secante y se retira totalmente el disolvente en rotavapor. Se purifica el residuo mediante
25 cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 1:5). Se obtienen 464 mg (45 % d.t., pureza CL-EM 74 %) del producto deseado.
HPLC (procedimiento 6): TR = 2,26 min
30 EM (ESIpos): m/z = 536 (M+H)+.
Ejemplos de realización
Ejemplo 1
35 5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{[(2-hidroxietil)amino]metil}-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5il]metil}tiofeno-2-carboxamida
HO
O
N O
Cl
H O SN HN N
H3C
O 40 Se añaden 38 mg (0,63 mmol) de aminoetanol a una solución de 56 mg (0,11 mmol) del compuesto del ejemplo 11Aen 1 ml de DMF a -10 °C. Después de 30 min a –10 ºC, se añade a agua y a continuación se extrae tres veces conacetato de etilo. Se combinan las fases orgánicas y a continuación se liberan de disolvente a vacío. Se purificamediante HPLC preparativa usando una mezcla de acetonitrilo/agua. Se obtienen 14,5 mg (26 % d.t.) del producto 45 deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 9,00 (t, 1H), 8,28-8,15 (m, 2H), 7,70 (d, 1H), 7,60-7,48 (m, 3H), 7,45 (d,1H), 7,23 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 6,35 (dd, 1H), 4,90-4,82 (m, 1H), 4,22 (dd, 1H), 3,88 (dd, 1H), 3,71-3,45 (m, 6H), 2,68 (dd, 2H), 2,02 (s, 3H).
50 HPLC (procedimiento 2): TR = 3,71 min.
EM (ESIpos, m/z): 517/519 (35Cl/37Cl) (M+H)+.
Ejemplo 2
5-Cloro-N-{[(5S)-3-{3-metil-4-[3-(2-morfolin-4-iletil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]fenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-25 carboxamida
O
N
OO Cl O
S
NN H
N
H3C O
Se disuelven 100 mg (0,21 mmol) del ejemplo 18A en 5 ml de diclorometano anhidro y se enfría a -78 °C. Se añaden
10 66 mg (0,62 mmol) de 2,6-dimetilpiridina y 69 mg (0,25 mmol) de anhídrido del ácido trifluorometanosulfónico a esta temperatura y se agita posteriormente durante 10 min adicionales. Después, se añaden 179 mg (2,05 mmol) demorfolina, después de 5 min se retira la refrigeración y se agita durante 16 h a temperatura ambiente. Se retira eldisolvente a vacío, se disuelve el residuo en un poco de metanol y se purifica mediante HPLC preparativa usando ungradiente de acetonitrilo y agua. Se combinan las fracciones que contienen producto y se concentran a vacío hasta
15 sequedad. Se obtienen 104 mg (91 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 9,0 (t, 1H), 7,7 (d, 1H), 7,5 (m, 2H), 7,45 (dd, 1H), 7,35 (dd, 1H), 7,2 (m,2H), 6,25 (t, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,2 (t, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,65 (t, 2H), 3,55 (m, 4H), 2,3-2,7 (m, 8H), 2,0 (s, 3H).
20 CL-EM (procedimiento 3): TR = 1,30 min
EM (ESIpos): m/z = 556 (M+H+)+.
Análogamente al ejemplo 2, se preparan los ejemplos de la siguiente tabla usando la correspondiente amina.
Ej.
Estructura Caracterización
3
N CH3 H3C N O H3C N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,42 min EM (ESIpos): m/z = 515 (M+H+)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5= 9,0 (t, 1H), 7,7 (d, 1H), 7,5 (m, 2H), 7,45(dd, 1H), 7,35 (dd, 1H), 7,2 (m, 2H), 6,25 (t, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,2 (t, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,65 (t, 2H), 2,45 (m, 4H), 2,15 (s, 6H), 2,0(s, 3H).
4
HO N H N O H3C N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,44 min EM (ESIpos): m/z = 585 (M+H+)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 9,0 (t, 1H), 8,3 (s, 1H), 7,7 (d, 1H), 7,37,55 (m, 4H), 7,2 (m, 2H), 6,3 (t, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,2 (t, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,65 (t, 2H), 3,3 (m, 1H), 2,9 (t, 2H), 2,7 (m, 4H),2,0 (s, 3H), 1,7-1,9 (m, 4H), 1,2 (m, 4H).
5
N H HO N O H3C N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 11): TR = 1,80 min EM (ESIpos): m/z = 531 (M+H+)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 9,0 (t, 1H), 8,3 (s, 1H), 7,7 (d, 1H), 7,55(m, 2H), 7,45 (dd, 1H), 7,4 (dd, 1H), 7,2 (m, 2H), 6,3 (t, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,2 (t, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,65 (t, 2H), 3,55 (t, 2H), 2,95 (m, 2H), 2,8 (t, 2H), 2,75 (m, 2H), 2,0 (s, 3H).
Ejemplo 6
5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(trans-4-hidroxiciclohexil)amino]etil}-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metoxifenil}-2-oxo-1,3oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2-carboxamida 5
H HO
N
OO Cl O
S
NN H
N
H3C O
O
Se disuelven 19 g (38 mmol) del ejemplo 25A en 1000 ml de diclorometano anhidro y se enfría a -78 °C. Se añaden12,3 g (115 mmol) de 2,6-dimetilpiridina y 16 g (57 mmol) de anhídrido del ácido trifluorometanosulfónico a esta 10 temperatura. Se agita posteriormente durante 1,5 h a –78 ºC antes de añadir 44 g (383 mmol) de trans-4aminociclohexanol disueltos en 250 ml de diclorometano y 50 ml de N,N-dimetilformamida. Se retira la refrigeración,se agita durante 16 h a temperatura ambiente y se separa el disolvente a continuación a vacío. Se disuelve elresiduo en un poco de metanol y se purifica mediante HPLC preparativa usando un gradiente de acetonitrilo y agua.Se combinan las fracciones que contienen producto y se concentran a vacío hasta sequedad. Se obtienen 15,2 g (73
15 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, CDCl3, 5/ppm): 5 = 7,72-7,52 (m, 1H), 7,50-7,37 (m, 2H), 7,32 (dd, 1H), 7,21 (d, 1H), 7,10 (dd,1H), 6,92-6,84 (m, 2H), 6,20 (t, 1H), 4,81-4,66 (m, 1H), 4,10-3,95 (m, 1H), 3,87-3,66 (m, 6H), 3,64-3,50 (m, 2H), 2,952,84 (m, 2H), 2,78-2,68 (m, 2H), 2,52-2,41 (m, 1H), 1,98-1,78 (m, 5H), 1,33-1,05 (m, 4H).
20 CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,40 min
EM (ESIpos): m/z = 602 (M+H+)+.
25 Análogamente al ejemplo 6, se preparan los ejemplos de la siguiente tabla usando la correspondiente amina.
Ej.
Estructura Caracterización
7
N O N O OH3C N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,41 min EM (ESIpos): m/z = 573 (M+H+)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5= 9,0 (t, 1H), 7,7 (d, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,35(dd, 1H), 7,3 (dd, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,2 (d, 1H), 7,1 (d, 1H), 6,2 (t, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,25 (t, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,65 (t, 2H), 3,5 (m, 4H), 2,4-2,6 (m, 6H), 2,4 (m, 2H).
CH3
CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,40 min
8
NH3C EM (ESIpos): m/z = 531 (M+H+)+
N O OH3C N O O N H O S Cl RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5= 9,0 (t, 1H), 7,7 (d, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,35(dd, 1H), 7,3 (dd, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,2 (d, 1H), 7,1 (d, 1H), 6,2 (t, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,25 (t, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,65 (t, 2H), 2,4-2,6 (m, 4H), 2,1 (s, 6H).
Ejemplo 9
5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(2-hidroxietil)amino]etil}-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-(metoximetil)fenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5il]metil}tiofeno-2-carboxamida
HO
H
N
OO Cl O
S
NN H
N
O
O H3C
Se disuelven 14 g (27 mmol) del ejemplo 34A en 660 ml de diclorometano anhidro y se enfrían a -78 °C. Se añaden8,7 g (81 mmol) de 2,6-dimetilpiridina y 13 g (46 mmol) de anhídrido del ácido trifluorometanosulfónico a esta
5 temperatura. Después de 10 min a –78 ºC, se añaden 8,2 g (135 mmol) de 2-aminoetanol, después de 5 min adicionales se retira la refrigeración y después se agita durante 16 h a temperatura ambiente. Se separa el disolvente a vacío, se disuelve el residuo en un poco de metanol y se purifica mediante HPLC preparativa usando ungradiente de acetonitrilo y agua. Se combinan las fracciones que contienen producto y se concentran a vacío hastasequedad. Se obtienen 11,1 g (73 % d.t.) del compuesto deseado.
10 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,98 (t, 1H), 7,71-7,65 (m, 2H), 7,62-7,55 (m, 1H), 7,40 (dd, 1H), 7,35(dd, 1H), 7,28 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 6,25 (t, 1H), 4,90-4,82 (m, 1H), 4,42 (t, 1H), 4,27-4,08 (m, 3H), 3,94-3,88 (m, 1H),3,63 (t, 2H), 3,45 (dt, 2H), 3,18 (s, 3H), 2,75-2,68 (m, 2H), 2,61-2,43 (m, 4H).
15 CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,34 min
EM (ESIpos): m/z = 561 (M+H+)+.
Ejemplo 10
20 5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(trans-4-hidroxiciclohexil)amino]etil}-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-(metoximetil)fenil}-2-oxo-1,3oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2-carboxamida
HHO N
OO Cl O
N
N S
H
N
O OH3C
25 Se disuelven 900 mg (1,7 mmol) del ejemplo 34A en 42 ml de diclorometano anhidro y se enfrían a -78 °C. Seañaden 560 mg (5,2 mmol) de 2,6-dimetilpiridina y 833 mg (2,9 mmol) de anhídrido del ácido trifluorometanosulfónicoy se agita durante 1,5 h a –78 ºC. Se añade 1 g (8,7 mmol) de trans-4-aminociclohexanol, se retira después de 5 minla refrigeración y se agita después durante 18 h a temperatura ambiente. Se diluye con agua y diclorometano, se
30 separa la fase orgánica, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y se evapora a vacío. Se recoge el residuo con un poco de metanol y se purifica mediante HPLC preparativa usando un gradiente de acetonitrilo y agua. Se combinanlas fracciones que contienen producto y se concentran a vacío hasta sequedad. Se obtienen 655 mg (61 % d.t.) delcompuesto deseado.
35 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,98 (t, 1H), 7,71-7,65 (m, 2H), 7,62-7,55 (m, 1H), 7,40 (dd, 1H), 7,35 (dd, 1H), 7,27 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 6,25 (t, 1H), 4,90-4,82 (m, 1H), 4,44 (d, 1H), 4,27-4,07 (m, 3H), 3,93-3,83 (m, 1H), 3,62 (t, 2H), 3,18 (s, 3H), 2,76-2,65 (m, 2H), 2,57-2,48 (m, 2H), 2,36-2,27 (m, 2H), 1,84-1,72 (m, 4H), 1,19-1,06(m, 2H), 1,03-0,91 (m, 2H).
40 CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,68 min
EM (ESIpos): m/z = 615 (M+H+)+.
Análogamente al ejemplo 10, se preparan los ejemplos de la siguiente tabla usando la correspondiente amina.
Ej.
Estructura Caracterización
11
N N H O O H3C N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 11): TR = 1,94 min EM (ESIpos): m/z = 557 (M+H+)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 9,0 (t, 1H), 7,7 (m, 2H), 7,6 (m, 1H), 7,4 (dd, 1H), 7,35 (dd, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,2 (d, 1H), 6,25 (t, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,2 (m, 2H), 4,1 (d, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,6 (t, 2H), 3,3 (m, 2H), 3,2 (s, 3H), 2,8 (m, 2H), 2,1 (m, 2H), 0,45 (m, 2H), 0,2 (m, 2H).
CL-EM (procedimiento 11): TR = 1,86 min
12
N H2N O O H3C N O O N H O S Cl EM (ESIpos): m/z = 517 (M+H+)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 9,0 (t, 1H), 7,7 (m, 2H), 7,6 (m, 1H), 7,4 (m, 2H), 7,25 (d, 1H), 7,2 (d, 1H), 6,25 (t, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,2 (m, 2H), 4,1 (d, 1H),3,9 (m, 1H), 3,6 (t, 2H), 3,2 (s, 3H), 2,8 (m, 2H), 2,55 (m, 2H).
13
N N O O H3C N H3C N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 11): TR = 1,69 min EM (ESIpos): m/z = 600 (M+H+)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5= 9,0 (t, 1H), 7,7 (m, 2H), 7,6 (m, 1H), 7,4 (dd, 1H), 7,35 (dd, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,2 (d, 1H), 6,25 (t, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,2 (m, 2H), 4,1 (d, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,6 (t, 2H), 3,2 (s, 3H), 2,2-2,8 (m, 12H), 2,15 (s, 3H).
14
N N O O H3C CH3 H3C N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 11): TR = 1,91 min EM (ESIpos): m/z = 545 (M+H+)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5= 9,0 (t, 1H), 7,7 (m, 2H), 7,6 (m, 1H), 7,4 (m, 2H), 7,25 (d, 1H), 7,2 (d, 1H), 6,25 (t, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,2 (m, 2H), 4,1 (d, 1H),3,9 (m, 1H), 3,6 (t, 2H), 3,2 (s, 3H), 2,3-2,7 (m, 4H), 2,15 (s, 6H).
Ej.
Estructura Caracterización
15
N O N O O H3C N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 11): TR = 1,87 min EM (ESIpos): m/z = 587 (M+H+)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5= 9,0 (t, 1H), 7,7 (m, 2H), 7,6 (m, 1H), 7,4 (dd, 1H), 7,35 (dd, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,2 (d, 1H), 6,25 (t, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,2 (m, 2H), 4,1 (d, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,6 (t, 2H), 3,55 (m, 4H), 3,2 (s, 3H), 2,3-2,8 (m, 8H).
16
N H HO N O O H3C N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 11): TR = 1,89 min EM (ESIpos): m/z = 575 (M+H+)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5= 9,0 (t, 1H), 7,7 (m, 2H), 7,6 (m, 1H), 7,4 (dd, 1H), 7,35 (dd, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,2 (d, 1H), 6,25 (t, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,2 (m, 2H), 4,1 (d, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,6 (t, 2H), 3,45 (t, 2H), 3,2 (s, 3H), 2,7 (t, 2H), 2,4-2,6 (m, 6H), 1,5 (m, 2H).
17
N HO N O O H3C N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 11): TR = 1,89 min EM (ESIpos): m/z = 601 (M+H+)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5= 9,0 (t, 1H), 7,7 (m, 2H), 7,6 (m, 1H), 7,4 (dd, 1H), 7,35 (dd, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,2 (d, 1H), 6,25 (t, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,2 (m, 2H), 4,1 (d, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,6 (t, 2H), 3,45 (m, 1H), 3,2 (s, 3H), 2,7 (m, 2H), 2,3-2,6 (m, 4H), 2,0 (t, 2H), 1,7 (m, 2H), 1,3 (m, 2H).
Ejemplo 18
5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{3-[(trans-4-hidroxiciclohexil)amino]propil}-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metilfenil}-2-oxo-1,3oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2-carboxamida
NHO H
OO Cl O
S
NN
H
N
H3C
O
Se disuelven 92,4 mg (0,18 mmol) del ejemplo 38A en 4,5 ml de diclormetano anhidro y se enfrían a -78 °C y se
10 añaden 67 mg (0,55 mmol) de 2,6-dimetilpiridina y 78 mg (0,28 mmol) de anhídrido del ácido trifluorometanosulfónico. Después de 1 h a –78 ºC, se mezclan con 106 mg (0,920 mmol) de trans-4aminociclohexanol, se retira la refrigeración y se agita durante 72 h a temperatura ambiente. Después de la adiciónde 2,5 ml de metanol, se agita durante 5 min y después se retira el disolvente a vacío. Se purifica el residuomediante HPLC preparativa usando un gradiente de acetonitrilo y ácido trifluorometanosulfónico al 0,2 % en agua.
Se obtienen 7,5 mg (7 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,99 (t, 1H), 8,37-8,21 (m, 2H), 7,70 (d, 1H), 7,58-7,47 (m, 2H), 7,457,36 (m, 2H), 7,22 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 6,32 (dd, 1H), 4,92-4,78 (m, 1H), 4,21 (dd, 1H), 4,00-3,48 (m, 4H), 3,41-3,305 (m, 1H), 2,98-2,85 (m, 2H), 2,02 (s, 3H), 2,00-1,91 (m, 2H), 1,88-1,80 (m, 4H), 1,37-1,15 (m, 6H).
CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,45 min
EM (ESIpos): m/z = 601 (M+H)+. 10
Ejemplo 19
5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{3-[(2-hidroxietil)amino]propil}-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5il]metil}tiofeno-2-carboxamida 15
HO
N
H
OO Cl O
S
NN H
N
H3C O
Se disuelven 92,4 mg (0,18 mmol) del ejemplo 38A en 4,5 ml de diclorometano anhidro y se enfrían a -78 °C y seañaden 67 mg (0,55 mmol) de 2,6-dimetilpiridina y 78 mg (0,28 mmol) de anhídrido del ácido
20 trifluorometanosulfónico. Después de 1 h a –78 ºC, se mezcla con 112 mg (1,84 mmol) de aminoetanol, se retira la refrigeración y se agita durante 72 h a temperatura ambiente. Después de la adición de 2,5 ml de metanol, se agitadurante 5 min y se separa el disolvente a vacío. Se purifica el residuo mediante HPLC preparativa usando ungradiente de acetonitrilo y ácido trifluorometanosulfónico al 0,2 % en agua. Se obtienen 14 mg (14 % d.t.) del compuesto deseado.
25 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,99 (t, 1H), 8,51-8,37 (m, 2H), 7,70 (d, 1H), 7,58-7,47 (m, 2H), 7,457,38 (m, 2H), 7,22 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 6,32 (dd, 1H), 4,91-4,82 (m, 1H), 4,22 (dd, 1H), 3,95-3,50 (m, 7H), 3,05-2,89(m, 4H), 2,02 (s, 3H), 1,93-1,82 (m, 2H).
30 CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,45 min
EM (ESIpos): m/z = 546 (M+H)+.
Ejemplo 20
35 5-Cloro-N-{[(5S)-3-{3-metil-4-[2-oxo-3-{2-[(tetrahidrofuran-2-ilmetil)amino]etoxi}-piridin-1(2H)-il]fenil}-2-oxo-1,3oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2-carboxamida
O
N
H
OO O Cl O
SNN H
N
H3C
O 40 Se agitan 80,0 mg (153 μmol) del ejemplo 46A, 23 mg (153 μmol) de yoduro de sodio y 105 μl (77,4 mg, 766 μmol)de 1-(tetrahidrofuran-2-il)metanamina en 2 ml de 1,2-dimetoxietano absoluto durante 8 horas a 90 ºC. Para elprocesamiento, se somete a purificación fina la solución de reacción mediante HPLC-FI preparativa con un gradientede acetonitrilo/agua. Se obtienen 60 mg (67 % d.t.) de producto.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,97 (t, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,55-7,46 (m, 2H), 7,25-7,18 (m, 2H), 7,04 (d,1H), 6,93 (d, 1H), 6,21 (t, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,22 (dd, 1H), 3,97 (m, 2H), 3,90-3,81 (m, 2H), 3,72 (m, 2H), 3,66-3,55(m, 3H), 2,90 (m, 2H), 2,62 (d, 2H), 2,01 (s, 3H), 1,95-1,80 (m, 3H), 1,57-1,96 (m, 1H).
5 CL-EM (procedimiento 3): TR = 1,45 min
ES (ESIpos): m/z = 587 (M+H)+.
10 Ejemplo 21
5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(trans-4-hidroxiciclohexil)amino]etoxi}-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-metilfenil}-2-oxo-1,3oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2-carboxamida
HO
N
H
OO O Cl O
SNN H
N
H3C
O
15 Se agitan 70,0 mg (134 μmol) del ejemplo 46A, 20,0 mg (134 μmol) de yoduro de sodio y 77,2 mg (670 μmol) de trans-4-aminociclohexanol en 1,75 ml de 1,2-dimetoxietano absoluto durante 8 horas a 90 ºC. Para el procesamiento, se somete a purificación fina la solución de reacción concentrada mediante HPLC-FI preparativa con
20 una mezcla de acetonitrilo/agua. Se obtienen 57 mg (69 % d.t.) de producto.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,97 (t, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,53-7,50 (m, 2H), 7,23-7,18 (m, 2H), 7,04 (d,1H), 6,92 (d, 1H), 6,22 (t, 1H), 4,89-4,81 (m, 1H), 4,44 (d, 1H), 4,22 (t, 1H), 3,99-3,82 (m, 3H), 3,62 (t, 3H), 2,87 (t,2H), 2,41-2,31 (m, 1H), 2,01 (s, 3H), 1,80 (t, 4H), 1,53 (s a, 1H), 1,19-0,93 (m, 4H).
25 CL-EM (procedimiento 3): TR = 1,41 min
EM (ESIpos): m/z = 601 (M+H)+.
30 Análogamente al ejemplo 21, se preparan los ejemplos de la siguiente tabla usando la correspondiente amina.
Ej.
Estructura Caracterización
22 23
O N O N H N O H3C N O H3C N O O x HCl N O O N H O S Cl N H O S Cl CL-EM (procedimiento 3): TR = 1,56 min, EM (ESIpos): m/z = 557 (M+H)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5ppm): 10,67(s ancho, 1H), 9,06 (t, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,587,48 (m, 2H), 7,28-7,13 (m, 3H), 7,10 (d, 1H),6,28 (t, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,32 (m, 2H), 4,22 (t,1H), 3,90 (m, 1H), 3,68-3,53 (m, 5H), 3,10 (m, 2H), 2,08-1,93 (m, 5H, de ellos 2,01 (s, 3H)), 1,92-1,80 (m, 2H). CL-EM (procedimiento 11): TR = 2,13 min, EM (ESIpos): m/z = 557 (M+H)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,97(t, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,55-7,46 (m, 2H), 7,257,18 (m, 2H), 7,04 (d, 1H), 6,92 (d, 1H), 6,21 (t, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,22 (dd, 1H), 3,97-3,83 (m, 3H), 3,60 (t, 2H), 3,20 (m, 1H), 2,80 (t, 2H), 2,16-2,05 (m, 2H), 2,01 (s, 3H), 1,72-1,48 (m, 4H).
Ej.
Estructura Caracterización
24
O N H N O H3C N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 11): TR = 2,03 min, EM (ESIpos): m/z = 543 (M+H)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,97(t, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,55-7,46 (m, 2H), 7,257,18 (m, 2H), 7,04 (d, 1H), 6,21 (d, 1H), 6,72 (t, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,22 (dd, 1H), 3,98 (m, 2H),3,89 (m, 1H), 3,60 (t, 2H), 2,94 (t, 2H), 2,14 (m, 1H), 2,01 (s, 3H), 0,38 (m, 2H), 0,22 (m, 2H).
25
NS O O N O H3C O N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 11): TR = 2,03 min, EM (ESIpos): m/z = 621 (M+H)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,97(s ancho, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,55-7,46 (m, 2H), 7,25-7,18 (m, 2H), 7,06 (d, 1H), 6,95 (d, 1H),6,21 (t, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,22 (dd, 1H), 4,03(m, 2H), 3,78 (m, 1H), 3,61 (t, 2H), 3,12-2,98(m, 8H), 2,93 (t, 2H), 2,01 (s, 3H).
26
N CH3 O O N O H3C O N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 11): TR = 2,03 min, EM (ESIpos): m/z = 621 (M+H)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,96(t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,55-7,46 (m, 2H), 7,257,18 (m, 2H), 7,06 (d, 1H), 6,92 (d, 1H), 6,70 (t, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,22 (dd, 1H), 3,95 (m, 2H),3,88 (m, 1H), 3,78-3,50 (m, 7H), 3,41 (td, 1H), 3,18 (t, 1H), 2,82 (m, 2H), 2,65-2,45 (m, 4H), 2,02 (s, 3H), 0,95 (t, 3H).
27
NNH3C N O H3C O N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,41 min, EM (ESIpos): m/z = 586 (M+H)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,97(t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,55-7,46 (m, 2H), 7,257,18 (m, 2H), 7,06 (d, 1H), 6,95 (d, 1H), 6,22 (t, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,22 (dd, 1H), 4,03 (m, 2H),3,88 (m, 1H), 3,61 (t, 2H), 2,68 (t, 2H), 2,48 (m, 4H), 2,29 (m, 4H), 2,15 (s, 3H), 2,01 (s, 3H).
28
O H2N N O H3C N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,43 min, EM (ESIpos): m/z = 503 (M+H)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,97(t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,55-7,46 (m, 2H), 7,257,18 (m, 2H), 7,06 (d, 1H), 6,92 (d, 1H), 6,21 (t, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,22 (dd, 1H), 3,93-3,80 (m, 3H), 3,61 (t, 2H), 2,88 (t, 2H), 2,02 (s, 3H).
29
N H OH3C N O H3C O N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,44 min, EM (ESIpos): m/z = 561 (M+H)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,96(t, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,56-7,44 (m, 2H), 7,267,15 (m, 2H), 7,05 (d, 1H), 6,92 (d, 1H), 6,22 (t, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,21 (dd, 1H), 3,97 (m, 2H),3,88 (m, 1H), 3,61 (t, 2H), 3,38 (t, 2H), 3,22 (s, 3H), 2,88 (t, 2H), 2,72 (t, 2H), 2,02 (s, 3H).
30
N OH3C N O H3C O N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 11): TR = 2,14 min, EM (ESIpos): m/z = 601 (M+H)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,96(t, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,56-7,47 (m, 2H), 7,267,15 (m, 2H), 7,04 (d, 1H), 6,92 (d, 1H), 6,21 (t, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,21 (dd, 1H), 4,07-3,83 (m, 3H), 3,61 (t, 2H), 3,38-3,13 (m, 5H: de ellos3,26 (s, 3H)), 3,09 (m, 1H), 2,65 (m, 2H), 2,28(m, 1H), 2,02 (s, 3H), 1,38-1,75 (m, 1H), 1,721,57 (m, 2H), 1,49-1,39 (m, 1H).
Ej.
Estructura Caracterización
31
O N H HO N H3C O N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 3): TR = 1,40 min, EM (ESIpos): m/z = 547 (M+H)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,98(t, 1H), 7.,0 (d, 1H), 7,55-7,46 (m, 2H), 7,257,17 (m, 2H), 7,05 (d, 1H), 6,97 (d, 1H), 6,24 (t, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,22 (dd, 1H),4,02 (m, 2H), 3,88 (m, 1H), 3,61 (t, 2H), 3,48(m, 2H), 2,98 (m, 2H), 2,72 (t, 2H), 2,02 (s,3H).
32
O N O N O H3C N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 3): TR = 1,33 min, EM (ESIpos): m/z = 587 (M+H)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,97(t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,54-7,47 (m, 2H), 7,257,17 (m, 2H), 7,05 (d, 1H), 6,93 (d, 1H), 6,21 (t, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,22 (dd, 1H), 4,02 (m, 2H),3,70-3,57 (m, 6H), 2,89 (t, 2H), 2,75 (m, 4H), 2,02 (s, 3H), 1,78 (m, 2H).
33
O N H3C OH3C N O H3C N O O N H O S Cl CL-EM (procedimiento 6): TR = 1,46 min, EM (ESIpos): m/z = 575 (M+H)+ RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,96(t, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,55-7,46 (m, 2H), 7,257,17 (m, 2H), 7,05 (d, 1H), 6,93 (d, 1H), 6,21 (t, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,22 (dd, 1H), 4,02 (m, 2H),3,88 (m, 1H), 3,62 (t, 3H), 3,41 (t, 2H), 3,25 (s, 3H), 2,75 (m, 2H), 2,58 (t, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,02 (s, 3H).
Ejemplo 34
5-Cloro-N-{[(5S)-3-(4-{3-[2-(4-hidroxipiperidin-1-il)etoxi]-2-oxopiridin-1(2H)-il}-3-metilfenil)-2-oxo-1,3-oxazolidin-55 il]metil}tiofeno-2-carboxamida
O O O ClHO N
O
S
N N H
N
H3C
O
Se disuelven 88,0 mg (175 μmol) del ejemplo 45A en 5 ml de diclorometano anhidro, se enfrían a -78 °C y se añaden
10 42 μl (69,7 mg, 244 μmol) de anhídrido del ácido trifluorometanosulfónico y 56 mg (524 μmol) de 2,6-dimetilpiridina. Después de 1 hora de agitación a –78 ºC, se añaden gota a gota varias veces 15 μl (24,7 mg, 88 μmol) de anhídridodel ácido trifluorometanosulfónico y se agita posteriormente durante media hora adicional a esta temperatura.Finalmente, se añaden a la reacción 180 mg (1,74 mmol) de 4-hidroxipiperidina a -78 °C, se agita posteriormentedurante 5 minutos, se calienta a temperatura ambiente y se agita durante una noche a esta temperatura. Para el
15 procesamiento, se concentra la preparación en rotavapor y se purifica el residuo dos veces mediante HPLC-FI preparativa con un gradiente de acetonitrilo/agua. Se obtienen 30,0 mg (29 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 8,96 (t, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,55-7,46 (m, 2H), 7,25-7,15 (m,2H), 7,04 (d, 1H), 6,93 (d, 1H), 6,21(t, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,22 (dd, 1H), 4,01 (m, 2H), 3,92-3,84 (m, 1H), 3,62 (t, 2H), 20 3,45 (m, 1H), 2,80 (m, 2H), 2,70 (t, 2H), 2,17 (m, 2H), 2,01 (s, 3H), 1,75-1,64 (m, 2H), 1,45-1,32 (m, 2H).
CL-EM (procedimiento 3): TR = 1,38 min
EM (ESIpos): m/z = 587 (M+H)+. 25
Ejemplo 35
5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(trans-4-hidroxiciclohexil)amino]etoxi}-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-propilfenil}-2-oxo-1,3oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2-carboxamida 30
HO
N
H
O O O
Cl
O
S
N N
H
N
O H3C
Se disponen 30 mg (54 μmol) del ejemplo 58A, 8,2 mg (54 μmol) de yoduro de sodio y 31,4 mg (272 μmol) de trans4-aminohexanol en 750 μl de 1,2-dimetoxietano. Se agita la reacción durante 8 horas a 90 ºC. Para el 5 procesamiento, se concentra totalmente la solución de reacción en rotavapor y se somete a purificación fina mediante HPLC-FI preparativa con una mezcla de acetonitrilo/agua. Se obtiene el producto con 15,0 mg (41 % d.t.).
RMN de 1H (400 MHz, metanol-d4, 5/ppm): 7,61 (dd, 1H), 7,52 (m, 2H), 7,20 (d, 1H), 7,07 (d, 2H), 7,01 (d, 1H), 6,92 (t, 1H), 6,42 (t, 1H), 4,27 (t, 1H), 4,08 (m, 2H), 3,98 (m, 1H), 3,73 (m, 2H), 3,58-3,45 (m, 1H), 3,02 (m, 2H), 2,50 (m, 10 1H), 2,35 (m, 2H), 1,97 (m, 4H), 1,50 (m, 2H), 1,38-1,11 (m, 5H), 0,83 (t, 3H).
CL-EM (procedimiento 8): TR = 2,06 min
EM (ESIpos): m/z = 629 (M+H)+. 15
Ejemplo 36
5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(2-hidroxietil)amino]etoxi}-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-propilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5il]metil}tiofeno-2-carboxamida 20
HO
N
H
O O O
Cl
O
S
N N
H
N
O H3C
Se disuelven 500 mg (0,908 mmol) del ejemplo 58A, 142 mg (0,954 mmol) de yoduro de sodio y 277 mg (4,54 mmol)de 2-aminoetanol en 8 ml de 1,2-dimetoxietano y se agitan durante 4 horas a 90 ºC. Después de concentrar la25 solución de reacción, se recoge en 100 ml de diclorometano y agua y se agita durante 1 h a TA. Se separan las fases y se extrae la fase acuosa con diclorometano. Se lavan las fases orgánicas combinadas con solución saturada de cloruro de sodio y a continuación se secan sobre sulfato de sodio. Se separa por filtración el secante y se separatotalmente el disolvente en rotavapor. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice (diclorometano/etanol 5:1; adición de etildimetilamina al 0,1 % en vol). Se obtienen 241 mg (46 % d.t.) del producto
30 deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 9,01 (t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,58-7,45 (m, 2H), 7,23-7,17 (m, 2H), 7,06 (dd, 1H), 6,95 (dd, 1H), 6,22 (dd, 1H), 4,91-4,82 (m, 1H), 4,65-4,55 (m, 1H), 4,24 (dd, 1H), 4,10-3,85 (m, 3H), 3,62 (dd, 2H), 3,52-3,43 (m, 2H), 2,93 (t, 2H), 2,68 (t, 2H), 2,35-2,20 (m, 2H), 1,50-1,35 (m, 2H), 0,78 (t, 3H).
35 HPLC (procedimiento 2): TR = 4,00 min
EM (ESIpos): m/z = 575 (M+H)+.
Ejemplo 37
5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(2-hidroxietil)amino]etil}-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-dimetilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5il]metil}tiofeno-2-carboxamida
HO
NH
O O
H 3C
Cl O
SNN H
N
H3C O
Se disuelven 100 mg (0,20 mmol) del ejemplo 65A en 3 ml de diclorometano anhidro, se enfría a –78 ºC y se añaden 64 mg (0,59 mmol) de 2,6-dimetilpiridina y 84 mg (0,29 mmol) de anhídrido del ácido trifluorometanosulfónico.
10 Después de 1 h a –78 ºC, se añaden 121 mg (1,99 mmol) de 2-aminoetanol, se retira la refrigeración después de 5 min y se agita durante 18 h a temperatura ambiente. Después, se retira el disolvente a vacío y se purifica el residuo dos veces mediante HPLC preparativa usando un gradiente de acetonitrilo y ácido fórmico al 0,3 % en agua Seobtienen 27 mg (25 % d.t.) del compuesto deseado.
15 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 9,01 (t, 1H), 8,30 (s, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,46 (d, 1H), 7,41-7,34 (m, 2H), 7,31 (d, 1H), 7,19 (d, 1H), 6,33 (dd, 1H), 4,91-4,82 (m, 1H), 4,20 (dd, 1H), 3,86 (dd, 1H), 3,61 (t, 2H), 3,54 (t, 2H), 2,94 (t, 2H), 2,81 (t, 2H), 2,72 (t, 2H), 1,96 (s, 6H).
CL-EM (procedimiento 12): TR = 1,22 min
20 EM (ESIpos): m/z = 545 (M+H)+
Ejemplo 38
25 5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(trans-4-hidroxiciclohexil)amino]etil}-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-dimetilfenil}-2-oxo-1,3oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2-carboxamida
HHO N
O O
H3C
Cl O
SNN H
N
H3C
O
30 Se disuelven 100 mg (0,20 mmol) del ejemplo 65A en 3 ml de diclorometano anhidro, se enfría a -78 °C y se añaden 64 mg (0,59 mmol) de 2,6-dimetilpiridina y 84 mg (0,29 mmol) de anhídrido del ácido trifluorometanosulfónico.Después de 1 h a –78 ºC, se añaden 114 mg (0,97 mmol) de trans-4-aminohexanol, se retira la refrigeración después de 5 min y se agita durante 18 h a temperatura ambiente. Después, se retira el disolvente a vacío y sepurifica el residuo dos veces mediante HPLC preparativa usando un gradiente de acetonitrilo y ácido fórmico al 0,3
35 % en agua. Se obtienen 15 mg (13 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 9,00 (t, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,51-7,42 (m, 1H), 7,41-7,34 (m,2H), 7,31 (d, 1H), 7,19 (d, 1H), 6,33 (dd, 1H), 4,91-4,82 (m, 1H), 4,20 (t, 1H), 3,86 (dd, 1H), 3,64-3,55 (m, 2H), 3,52(dd, 1H), 3,38-3,29 (m, 2H), 2,95-2,86 (m, 2H), 2,78 (dd, 1H), 2,74-2,60 (m, 3H), 1,96 (s, 6H), 1,94-1,75 (m, 2H),
40 1,20-1,10 (m, 3H). El espectro contiene señales de ácido fórmico y/o formiato del compuesto del título.
CL-EM (procedimiento 12): TR = 1,24 min
EM (ESIpos): m/z = 599 (M+H)+
45 Síntesis alternativa 1:
Se disuelven 600 mg (1,19 mmol) del ejemplo 65A en 18 ml de diclorometano anhidro, se enfría a –78 ºC y se añaden 384 mg (3,58 mmol) de 2,6-dimetilpiridina y 573 mg (2,03 mmol) de anhídrido del ácido trifluorometanosulfónico. Después de 1 h a –78 ºC, se añaden 688 mg (5,97 mmol) de trans-4-aminohexanol, se retira la refrigeración después de 5 min y se agita durante 18 h a temperatura ambiente. Después, se separa eldisolvente a vacío y se purifica el residuo mediante HPLC preparativa usando una mezcla 1:1 de
5 acetonitrilo/diisopropiletilamina al 0,1 % en agua. Se obtienen 263 mg (36 % d.t.) del compuesto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,98 (t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,48-7,33 (m, 3H), 7,25 (d, 1H), 7,19 (d, 1H),6,28 (dd, 1H), 4,91-4,82 (m, 1H), 4,44 (d, 1H), 4,20 (t, 1H), 3,86 (dd, 1H), 3,64-3,55 (m, 2H), 2,72 (dd, 2H), 2,64-2,50(m, 3H), 2,35-2,23 (m, 1H), 1,96 (s, 6H), 1,82-1,71 (m, 4H), 1,20-0,89 (m, 4H).
10 CL-EM (procedimiento 14): TR = 0,83 min
EM (ESIpos): m/z = 599 (M+H)+.
15 Síntesis alternativa 2:
Se disuelven 39 g (77 mmol) del ejemplo 65A (síntesis alternativa) en 1,17 l de diclorometano anhidro y se enfría pordebajo de –60 ºC. Se añaden primero 24,9 g (233 mmol) de 2,6-dimetilpiridina y a continuación gota a gota 22,3 ml(132 mmol) de anhídrido del ácido trifluorometanosulfónico. Después de 15 min a –70 ºC, se añade rápidamente una20 solución de 46,1 g (388 mmol) de trans-4-aminohexanol en 360 ml de diclorometano y 360 ml de isopropanol por debajo de -50 °C. Se agita posteriormente durante 15 min en baño de hielo seco y después se retira el baño frío. Después de 3 h, se retira el disolvente a vacío y se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice(diclorometano/ metanol/solución de amoniaco al 25 % 9:1:0,2). Se combinan las fracciones que contienen producto,se liberan de disolvente y se purifican posteriormente varias veces mediante cromatografía en gel de sílice
25 (diclorometano/metanol/ solución de amoniaco al 25 % 9:1:0,2). Se combinan las fracciones que contienen producto y se liberan de disolvente a vacío. Para liberar del metanol aún contenido, se añaden dos veces 130 ml de aguacada vez, después se libera de disolvente a vacío a 50 ºC y se seca a alto vacío. Se obtienen 34,1 g (73 % d.t.) del producto deseado.
30 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,98 (t, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,48-7,33 (m, 3H), 7,25 (d, 1H), 7,19 (d, 1H), 6,28 (dd, 1H), 4,91-4,82 (m, 1H), 4,44 (d, 1H), 4,20 (t, 1H), 3,86 (dd, 1H), 3,64-3,55 (m, 2H), 2,72 (dd, 2H), 2,64-2,50(m, 3H), 2,35-2,23 (m, 1H), 1,96 (s, 6H), 1,82-1,71 (m, 4H), 1,20-0,89 (m, 4H).
Ejemplo 39
35 5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(trans-4-hidroxiciclohexil)amino]etoxi}-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-dimetilfenil}-2-oxo-1,3oxazolidin-5-il]metil}tiofeno-2-carboxamida
HO
N
H
O O H3C O Cl O
S
N
N
H
N
H3C
O 40 Se disponen 211 mg (0,393 mmol) del ejemplo 73A, 62 mg (0,41 mmol) de yoduro de sodio y 226 mg (1,97 mmol) de trans-4-aminohexanol en 3,5 ml de 1,2-dimetoxietano. Se agita la reacción durante 15 horas a 90 ºC. Para el procesamiento, se concentra completamente la solución de reacción en rotavapor, después se recoge en unamezcla de diclorometano/agua y se agita durante 10 min a TA. Después de la separación de fases, se extrae la fase45 acuosa con diclorometano. Se lavan las fases orgánicas combinadas con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio. Después de secar sobre sulfato de sodio, se separa por filtración el secante y se retira totalmente eldisolvente en rotavapor. Se prepurifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice (diclorometano/etanol 10:1,adición de 1 % de etildimetilamina). La posterior purificación mediante HPLC preparativa con una mezcla de acetonitrilo/agua proporciona 104 mg (43 % d.t.) del producto deseado. 50 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 8,99 (t, 1H), 7,61 (dd, 1H), 7,43-7,36 (m, 2H), 7,20 (d, 1H), 7,15-7,07(m, 2H), 6,34 (t, 1H), 4,88-4,80 (m, 1H), 4,23-4,15 (m, 3H), 3,92-3,65 (m, 1H), 3,61 (dd, 4H), 3,40-3,31 (m, 3H), 3,133,03 (m, 1H), 2,07-1,95 (m, 2H), 1,96 (s, 6H), 1,88-1,80 (m, 2H), 1,41-1,30 (m, 2H), 1,23-1,12 (m, 2H).
55 HPLC (procedimiento 2): TR = 3,84 min
EM (ESIpos): m/z = 615 (M+H)+
Ejemplo 40
5-Cloro-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(2-hidroxietil)amino]etoxi}-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-dimetilfenil}-2-oxo-1,3-oxazolidin-5il]metil}tiofeno-2-carboxamida
HO
N
H O OH 3C O Cl O
SNN H
N
H3C
O
Se disuelven 255 mg (0,475 mmol) del ejemplo 73A, 74 mg (0,50 mmol) de yoduro de sodio y 145 mg (2,38 mmol)
10 de 2-aminoetanol en 4,2 ml de 1,2-dimetoxietano y se agitan durante 15 horas a 90 ºC. Para el procesamiento, se concentra completamente la solución de reacción en rotavapor, se recoge el residuo con 100 ml de una mezcla dediclorometano/agua y se agita durante 10 min a TA. Después de la separación de fases, se extrae la fase acuosacon diclorometano. Se lavan las fases orgánicas combinadas con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio.Después de secar sobre sulfato de sodio, se separa por filtración el secante y se retira completamente el disolvente
15 en rotavapor. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice (diclorometano/etanol 10:1� 5:1, adición de 1 % de etildimetilamina). Se obtienen 168 mg (58 % d.t.) del producto deseado.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, 5/ppm): 5 = 9,07 (t, 1H), 7,78-7,72 (m, 1H), 7,41-7,35 (m, 2H), 7,20 (d, 1H), 7,087,02 (m, 2H), 6,31 (dd, 1H), 4,92-4,81 (m, 1H), 4,22-4,12 (m, 2H), 3,92-3,86 (dd, 1H), 3,63-3,56 (m, 4H), 3,40-3,27
20 (m, 3H), 3,23-3,17 (m, 2H), 2,97-2,92 (m, 2H), 1,96 (s, 6H).
HPLC (procedimiento 2): TR = 3,80 min
EM (ESIpos): m/z = 561 (M+H)+. 25
B. Evaluación de la actividad farmacológica
La idoneidad de los compuestos según la invención para el tratamiento de enfermedades tromboembólicas puedemostrarse en los siguientes sistemas de ensayo:
30 a) Descripciones de ensayo (in vitro)
a.1) Medida de la inhibición del factor Xa en tampón
35 Para la determinación de la inhibición del factor Xa de las sustancias anteriormente mencionadas, se configura un sistema de ensayo bioquímico en el que se usa la reacción de un sustrato de factor Xa para la estimación de laactividad enzimática del factor Xa humano. A este respecto, el factor Xa escinde del sustrato peptídico aminometilcumarina, que se mide por fluorescencia. Las determinaciones se llevan a cabo en placas de microvaloración.
40 Se disuelven las sustancias que se van a analizar a distintas concentraciones en dimetilsulfóxido y se incuban durante 30 min con factor Xa humano (1,3 nmol/l disuelto en tampón Tris 50 mmol/l [C,C,Ctris(hidroximetil)aminometano], cloruro de sodio 100 mmol/l, cloruro de calcio 5 mmol/l, 0,1 % de BSA [seroalbúmina bovina], pH 7,4) a 22 °C. A continuación, se añade el sustrato (Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC 5 μmol/l de la compañía
45 Bachem). Después de una incubación de 30 min, se excita la muestra a una longitud de onda de 360 nm y se mide la emisión a 460 nm. Se comparan las emisiones medidas de las preparaciones de ensayo con sustancias deensayo con las preparaciones de control sin sustancia de ensayo (exclusivamente dimetilsulfóxido en lugar desustancia de ensayo en dimetilformamida) y se calculan los valores de CI50 a partir de las relaciones de concentración-efecto.
a.2) Medida de la inhibición de trombina en tampón
Para la determinación de la inhibición de trombina de las sustancias anteriormente mencionadas, se configura unsistema de ensayo bioquímico en el que se usa la reacción de un sustrato de trombina para la estimación de la
55 actividad enzimática de trombina humana. A este respecto, la trombina escinde del sustrato peptídico aminometilcumarina, que se mide por fluorescencia. Las determinaciones se llevan a cabo en placas de microvaloración.
Se disuelven las sustancias que se van a analizar a distintas concentraciones en dimetilsulfóxido y se incuban
60 durante 15 min con trombina humana (0,06 nmol/l disuelta en tampón Tris 50 mmol/l [C,C,Ctris(hidroximetil)aminometano], cloruro de sodio 100 mmol/l, 0,1 % de BSA [seroalbúmina bovina], pH 7,4) a 22 °C. A continuación, se añade el sustrato (Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC 5 μmol/l de la compañía Bachem). Después de unaincubación de 30 min, se excita la muestra a una longitud de onda de 360 nm y se mide la emisión a 460 nm. Se comparan las emisiones medidas de las preparaciones de ensayo con sustancia de ensayo con las preparacionesde control sin sustancia de ensayo (exclusivamente dimetilsulfóxido en lugar de sustancia de ensayo en
5 dimetilsulfóxido) y se calculan los valores de CI50 a partir de las relaciones de concentración-efecto.
a.3) Determinación de la selectividad
Para la detección de la selectividad de las sustancias respecto a la inhibición de trombina y factor Xa, se analiza en
10 las sustancias de ensayo su inhibición de otras serinproteasas humanas como factor XIIa, factor XIa, tripsina y plasmina. Para la determinación de la actividad enzimática del factor XIIa (10 nmol/l de Kordia), factor XIa (0,4 nmol/lde Kordia), tripsina (83 mU/ml de Sigma) y plasmina (0,1 μg/ml de Kordia), se disuelven estas enzimas (tampón Tris 50 mmol/l [C,C,C-tris(hidroximetil)aminometano], cloruro de sodio 100 mmol/l, 0,1 % de BSA [seroalbúmina bovina], cloruro de calcio 5 mmol/l, pH 7,4) y se incuban durante 15 min con sustancia de ensayo a distintas concentraciones
15 en dimetilsulfóxido así como con dimetilsulfóxido sin sustancia de ensayo. A continuación, se inicia la reacción enzimática mediante la adición de los correspondientes sustratos (H-Pro-Phe-Arg-AMC 5 μmol/l de Bachem para factor XIIa, Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC 5 μmol/l de Bachem para tripsina, Boc-Glu(OBzl)-Ala-Arg-AMC 5 μmol/l de Bachem para factor XIa, MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC 50 μmol/l de Bachem para plasmina). Después de un tiempo de incubación de 30 min a 22 ºC, se mide la fluorescencia (excitación: 360 nm, emisión: 460 nm). Se comparan las
20 emisiones medidas de las preparaciones de ensayo con sustancia de ensayo con las preparaciones de control sin sustancia de ensayo (exclusivamente dimetilsulfóxido en lugar de sustancia de ensayo en dimetilsulfóxido) y secalculan los valores de CI50 a partir de las relaciones de concentración-efecto.
a.4) Determinación del efecto inhibidor del factor Xa de los inhibidores potenciales en muestras de plasma
25 Para la determinación de la inhibición del factor Xa en muestras de plasma, se activa el factor Xa presente en elplasma mediante una proteasa de veneno de serpiente de cascabel. A continuación, se mide la actividad de factorXa o su inhibición por inhibidores potenciales mediante la adición de un sustrato cromogénico.
30 Se disuelven las sustancias que se van a analizar a distintas concentraciones en dimetilsulfóxido y se diluyen con solución acuosa de refludano (10 μg/ml). Se mezclan en placas de fondo plano de 96 pocillos transparentes 30 1l deplasma con citrato (Octapharma) con 10 μl de la dilución de sustancia. Después, se añaden 20 1l de una solución deveneno de serpiente de cascabel (veneno de víbora Russel (RVV); reactivo RVV: Pentapharm 121-06, concentraciónfinal 0,6 mU) en un tampón de solución acuosa de cloruro de calcio (concentración final de cloruro de calcio 0,05 M)
35 o 20 μl de solución acuosa de cloruro de calcio (concentración final de cloruro de calcio 0,05 M) sin reactivo RVV (como referencia de muestra no estimulada). Después de la adición de 20 μl de sustrato ChromozymX(concentración final 1,6 mmol/l, Bachem L-1565, diluido en agua), se mide en SpectraFluor Reader con un filtro demedida de 405 nm durante 20 minutos cada minuto. Se realiza la estimación del valor de CI50 cuando se alcanza aproximadamente un 70 % de la señal máxima (aprox. 12 min).
40 Se exponen los datos de eficacia representativos de este ensayo en la siguiente tabla 1:
Tabla 1
Nº de ejemplo
CI50 [nM]
6
31
9
11
10
15
13
17
16
18
21
11
36
29
37
29
38
34
45 a.5) Determinación del efecto inhibidor de trombina de los inhibidores potenciales en muestras de plasma
Se disuelven las sustancias que se van a analizar a distintas concentraciones en dimetilsulfóxido y se diluyen conagua. Se mezclan en placas de fondo plano de 96 pocillos blancas 20 μl de dilución de sustancia con 20 μl desolución de ecarina (reactivo ecarina, compañía Sigma E-0504, concentración final 20 mU por preparación) en50 tampón de Ca (Hepes 200 mM + cloruro de sodio 560 mM + cloruro de calcio 10 mM + 0,4 % de PEG) o con 20 μl de tampón de Ca (como control no estimulado). Además, se añaden 20 μl de sustrato de trombina fluorogénico(compañía Bachem I-1120, concentración final 50 μmol/l) y 20 μl de plasma con citrato (compañía Octapharma) y sehomogeneiza bien. Se mide la placa en SpectraFluorplus Reader con un filtro de excitación de 360 nm y filtro deemisión de 465 nm durante 20 minutos cada minuto. Se realiza la estimación del valor de CI50 cuando se alcanza
55 aproximadamente un 70 % de la señal máxima (aprox. 12 min).
Se exponen en la siguiente tabla 2 los datos de eficacia representativos de este ensayo:
Tabla 2
Nº de ejemplo
CI50 [nM]
6
143
9
10
10
24
13
16
16
10
Nº de ejemplo
CI50 [nM]
21
34
36
36
37
15
38
30
a.6) Ensayo de generación de trombina (trombograma)
Se determina el efecto de las sustancias de ensayo sobre el trombograma (ensayo de generación de trombina segúnHemker) in vitro en plasma humano (Octaplas® de la compañía Octapharma). En el ensayo de generación de trombina según Hemker, se determina la actividad de la trombina en plasma coagulado mediante la medida de losproductos de escisión fluorescentes del sustrato I-1140 (Z-Gly-Gly-Arg-AMC, Bachem). Para iniciar la reacción decoagulación, se usan reactivos de la compañía Thrombinoscope (reactivo PPP: factor tisular recombinante 30 pM, fosfolípidos 24 1M en HEPES). Se lleva a cabo la reacción en presencia de concentraciones variables de sustanciade ensayo o del correspondiente disolvente. Además, se usa un calibrador de trombina de la compañía Thrombinoscope cuya actividad amidolítica es necesaria para el cálculo de la actividad trombina en una muestra deplasma.
La práctica del ensayo se realiza según las indicaciones del fabricante (Thrombinoscope BV): se incuban 4 μl de lasustancia de ensayo o del disolvente, 76 il de plasma y 20 1l de reactivo PPP o calibrador de trombina durante 5 min a 37 ºC. Después de la adición de 20 μl de sustrato de trombina 2,5 mM en Hepes 20 mM, BSA 60 mg/ml, cloruro de calcio 102 mM, se mide la generación de trombina durante 12 min cada 20 s. Se lleva a cabo la medidacon un fluorómetro (Fluoroskan Ascent) de la compañía Thermo Electron, que está equipado con un par de filtradode 390/460 nm y un dispensador. Mediante el uso del programa informático “Thrombinoscope“, se calcula eltrombograma y se representa gráficamente. Se calculan los siguientes parámetros: tiempo muerto, tiempo hasta el pico, pico, ETP (potencial de trombina endógena) y cola de inicio.
a.7) Determinación del efecto anticoagulante
Se determina el efecto anticoagulante de las sustancias de ensayo en plasma humano, de conejo y de rata. Para ello, se extrae sangre usando una solución de citrato de sodio 0,11 M como receptora a una relación de mezcla decitrato de sodio/sangre de 1/9. Se mezcla bien la sangre inmediatamente después de la extracción y se centrifugadurante 15 minutos a aprox. 4000 g. Se separa por pipeteo el sobrenadante.
Se determina el tiempo de protrombina (PT, sinónimo: tiempo de tromboplastina, Quick-Test) en presencia de concentraciones variables de sustancia de ensayo o del correspondiente disolvente con un kit de ensayo comercial(Neoplastin® de la compañía Boehringer Mannheim o Hemoliance® RecombiPlastin de la compañía InstrumentationLaboratory). Se incuban los compuestos de ensayo durante 3 minutos a 37 ºC con el plasma. A continuación, sedesencadena la coagulación mediante la adición de tromboplastina y se determina el momento de inicio de lacoagulación. Se estima la concentración de sustancia de ensayo que efectúa una duplicación del tiempo de protrombina.
Se determina el tiempo de trombina (TT) en presencia de concentraciones variables de sustancia de ensayo o delcorrespondiente disolvente con un kit de ensayo comercial (reactivo trombina de la compañía Roche). Se incuban los compuestos de ensayo durante 3 minutos con el plasma. A continuación, se desencadena la coagulación mediante la adición del reactivo trombina y se determina el momento de inicio de la coagulación. Se estima laconcentración que efectúa una duplicación del tiempo de trombina.
Se determina el tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) en presencia de concentraciones variables de sustancia de ensayo o el correspondiente disolvente con un kit de ensayo comercial (reactivo PTT de la compañía Roche). Se incuban los compuestos de ensayo durante 3 minutos a 37 ºC con el plasma y el reactivo PTT (cefalina,caolín). A continuación, se desencadena la coagulación mediante la adición de cloruro de calcio 25 mM y sedetermina el momento de inicio de la coagulación. Se estima la concentración de sustancia de ensayo que efectúauna duplicación del APTT.
a.8) Tromboelastografía (tromboelastograma)
La tromboelastografía se lleva a cabo con ayuda de un tromboelastógrafo ROTEM de la compañía Pentapharm y losaccesorios de cubeta y sonda parte de él. La medida se realiza en sangre entera que se ha extraído anteriormenteen tubos Monovette con citrato de sodio de la compañía Sarstedt. Se mantiene la sangre en movimiento en los tubos Monovette con ayuda de un agitador y se preincuba durante 30 min a 37 ºC. Se prepara una solución madre 2 M decloruro de calcio en agua. Se diluye ésta 1:10 con solución acuosa de cloruro de sodio al 0,9 %. Para la medición, sedisponen 20 μl de esta solución de cloruro de calcio 200 mM en la cubeta (concentración final de cloruro de calcio12,5 mM). Se añaden 3,2 !l de sustancia o disolvente. Se inicia la medición mediante la adición de 300 μl de sangre completa. Después de la adición, se pipetea de un aldo para otro con puntas de pipeta sin producir burbujas de aire. Se realiza la medición durante 2,5 horas o se detiene al inicio de la fibrinólisis. Para la valoración, se determinan los siguientes parámetros: CT (tiempo de coagulación/ [s]), CFT (tiempo de formación de coágulo/ [s]), MCF(consistencia máxima de coágulo / [mm]) y ángulo alfa [°]. Los puntos de medida se recaban cada 3 segundos y serepresentan gráficamente en el eje y como MCF [mm] y en el eje x como tiempo [s].
a.9) Inhibición de los factores de coagulación trombina y factor Xa unidos a trombo
Los coágulos sanguíneos que se forman antes del inicio de la terapia con anticoagulantes, durante las pausas de laterapia o a pesar de la terapia, contienen grandes cantidades de factores de coagulación que pueden promover unaformación progresiva de trombos. Estos factores de crecimiento están sólidamente unidos al trombo y no pueden eliminarse por lavado. En determinadas situaciones clínicas, puede aparecer por ello un riesgo para los pacientes.En los ensayos mencionados a continuación, pueden detectarse tanto trombina como FXa con actividad biológica(procoagulante) en trombos humanos.
Trombos formados in vitro
Se forman trombos in vitro a partir de plasma humano y se analiza la actividad de los factores de coagulacióntrombina y FXa unidos. Para ello, se mezclan 300 μl de plasma con 30 μl de vesículas lipídicas y 30
1l de una solución acuosa de cloruro de calcio en una placa de 48 MTP, y se incuba durante 30 min. Se llevan a cabo ésta y las etapas siguientes a 37 ºC y con movimiento constante (300 rpm). Se transfieren los trombos formados a una nueva placa de 48 MTP y se lavan con solución de cloruro de sodio al 0,9 % dos veces durante 10 min, secándoseel trombo con papel de filtro entre los procesos de lavado. Se transfiere el trombo a tampón B (tampón Veronal deOwren, 1 % de BSA) y se incuba durante 15 min, se seca con papel de filtro y se incuba durante 30 min en sustancia de ensayo a distintas concentraciones en tampón B. A continuación, se lavan los coágulos dos veces como sedescribe anteriormente. Se secan los trombos y se transfieren a tampón D: (240 μl de tampón Veronal de Owren, 1% de BSA y cloruro de calcio 15,6 mM) y con o sin protrombina 0,6 1M durante 45 min. Se detiene la reacci
ón mediante 75 1l de solución de EDTA al 1 %. Se mide la actividad trombina separadamente en trombo en tampón A(Na2EDTAx2H2O 7,5 mM, cloruro de sodio 175 mM, 1 % de BSA, pH 8,4) o en el sobrenadante de la última etapa. Para ello, se usa el sustrato I-1120 a concentraciones finales 50 1M y se mide la fluorescencia resultante en unlector de placas de fluorescencia (360/465nm).
La actividad de esta trombina unida a trombo no puede reprimirse a concentraciones terapéuticamente relevantesmediante un inhibidor selectivo de FXa. Por el contrario, ésta puede inhibirse con inhibidores de FIIa/Fxa duales o un inhibidor de FIIa de referencia.
Después de la adición de protrombina, se forma trombina nueva en presencia de FXa unido a trombo (complejo deprotrombinasa) que se detecta mediante el sustrato fluorescente. Esta nueva formación de trombina no puedeimpedirse mediante un inhibidor de trombina puro, sino mediante inhibidores de FIIa/FXa duales o el inhibidor de referencia inhibidor selectivo de FXa.
Se analiza la eficacia biológica de la actividad trombina unida a trombo mediante la adición de fibrinógeno marcadofluorescente que se transforma en fibrina mediante trombina activa y se une el trombo. Para ello, se forma el trombocomo se describe anteriormente y se incuba en 250 μl de una solución de fibrinógeno marcada con Alexa488 (100μg/ml) y 30 μl de una solución acuosa de cloruro de calcio 100 mM (con o sin sustancias de ensayo a distintasconcentraciones). Se mide la fluorescencia del sobrenadante en un lector de placas de fluorescencia a una longitudde onda adecuada. Además, se lavan los trombos cuatro veces respectivamente durante 15 min y se evalúamicroscópicamente la fluorescencia. La caída de fluorescencia del sobrenadante y el aumento de fluorescencia delos trombos pueden inhibirse mediante inhidores de FIIa/FXa duales, pero no mediante el inhibidor de referencia deFXa.
Trombos intracardiacos generados in vivo (material de pacientes)
Se repiten los análisis en trombos que se han extraído de pacientes en el marco de operaciones cardiacas delventrículo izquierdo. Para ello, se descongelan los trombos y se dividen en trozos (10 – 100 mg de peso húmedo). Se usan los trombos, según el protocolo, lavados varias veces o sin lavar y se mide la actividad trombina con elsustrato I-1120 (concentración final 100 μM) análogamente al procedimiento anteriormente descrito.
a.10) Diagnóstico especial de alteraciones de la coagulación y función de órganos en ratones y ratas endotoxémicos
Complejos de trombina-antitrombina
Los complejos de trombina-antitrombina (en adelante designados como “TAT”) son una medida de la trombinaformada endógenamente mediante activación de la coagulación. Los TAT se determinan mediante un ensayo ELISA(Enzygnost TAT micro, Dade-Behring). Se obtiene plasma a partir de sangre con citrato mediante centrifugación. Seañaden 50 1l de tampón de muestra TAT a 50 1l de plasma, se agitan un corto tiempo y se incuban durante 15 min atemperatura ambiente. Se extraen por succión las muestras y se lava el pocillo 3 veces con tampón de lavado (300!l/pocillo). Se sacuden las placas entre los procesos de lavado. Se añade solución de conjugado (100 !l) y se incubadurante 15 min a temperatura ambiente. Se extraen por succión las muestras y se lava el pocillo 3 veces con tampónde lavado (300 !l/pocillo). A continuación, se añade sustrato cromogénico (100 1l1pocillo), se incuba durante 30 minen la oscuridad a temperatura ambiente, se añade solución de paro (100 1l1pocillo) y se mide la formación de color a492 nm (lector de placas Saphire).
Parámetros de función de órganos
Se determinan distintos parámetros con los cuales pueden extraerse conclusiones sobre la limitación de la funciónde distintos órganos internos por la toma de LPS, y puede evaluarse el efecto terapéutico de las sustancias deensayo. Se centrifuga sangre con citrato o eventualmente sangre con heparina-litio y se determinan los parámetros apartir del plasma. Se recabaron normalmente los siguientes parámetros: creatinina, urea, aspartato aminotransferasa(AST), alanina aminotransferasa (ALT), bilirubina total, lactato deshidrogenasa (LDH), proteína total, albúmina total y fibrinógeno. Los valores dan información sobre la función de riñones, hígado, sistema circulatorio y vasos.
Parámetros de inflamación
Puede detectarse la extensión de la reacción de inflamación desencadenada por endotoxina a partir del aumento de los mediadores de la inflamación en el plasma, por ejemplo, interleucinas (1, 6, 8 y 10), factor de necrosis tumoral alfa o proteína quimiotáctica de monocitos 1. Para ello, pueden usarse ELISA o el sistema Luminex.
b) Determinación del efecto antitrombótico (in vivo)
b.1) Modelo de derivación arteriovenosa y hemorragia (ratas de modelo combinado)
Se anestesian ratas macho en ayunas (cepa: HSD CPB:WU) con un peso de 300-350 g con inactina (150–180mg/kg). Se desencadena la formación de trombo en una derivación arteriovenosa según los procedimientos descritos por Christopher N. Berry y col., Br. J. Pharmacol. (1994), 113, 1209-1214. Para ello, se exponen la vena yugular izquierda y la arteria carótida derecha. Se pone una derivación extracorpórea mediante un tubo depolietileno de 10 cm de longitud (PE 60) entre ambos vasos. Este tubo de polietileno está ligado a la mitad con untubo de polietileno adicional de 3 cm de longitud (PE 160) que contiene un hilo de nailon cardado y dispuesto en lazopara la producción de una superficie trombogénica. Se mantiene la circulación extracorpórea durante 15 minutos.Después, se retira la derivación y se pesa inmediatamente el hilo de nailon con el trombo. Se había estimado el peso vacío del hilo de nailon antes del inicio del ensayo.
Para la determinación del tiempo de hemorragia, se corta inmediatamente después de la apertura de la circulaciónde derivación la punta de la cola de las ratas 3 mm con una cuchilla de afeitar. Se pone la cola en solución fisiológicade sal común calentada a 37 ºC y se observa la hemorragia de la herida de corte durante 15 min. Se estiman eltiempo hasta la detención de la hemorragia durante al menos 30 s (tiempo de hemorragia inicial), el tiempo dehemorragia total durante 15 minutos (tiempo de hemorragia acumulado), así como la cantidad de pérdida de sangremediante determinación fotométrica de la hemoglobina recogida.
Se administran las sustancias de ensayo antes de la colocación de la circulación extracorpórea y del corte de lapunta de la cola por vía intravenosa por la vena yugular contralateral en forma de inyección intravenosa rápida únicacon posterior infusión continua o mediante sonda esofágica a animales despiertos.
c) Ensayo de solubilidad
Reactivos necesarios:
•
Tampón PBS a pH 7,4: 90,00 g de NaCl p.a. (por ejemplo, nº de art. Merck 1.06404.1000), 13,61 g de KH2PO4 p.a.(por ejemplo, nº de art. Merck 1.04873.1000) y 83,35 g de NaOH 1 N (por ejemplo, nº de art. de Bernd Kraft GmbH01030.4000) pesados en un matraz volumétrico de 1 l, rellenado con agua y agitado durante aprox. 1 hora.
•
Tampón acetato a pH 4,6: 5,4 g de acetato de sodio x 3 H2O p.a. (por ejemplo, nº de art. Merck 1.06267.0500)pesado en un matraz volumétrico de 100 ml, disuelto en 50 ml de agua, mezclado con 2,4 g de ácido acético glacial,rellenado hasta 100 ml con agua, comprobado el pH y ajustado el pH a 4,6 en caso necesario.
•
Dimetilsulfóxido (por ejemplo, nº de art. Baker 7157.2500)
•
Agua destilada.
Preparación de las soluciones de calibración:
Preparación de la solución de partida para las soluciones de calibración (solución madre): Se pesan con exactitudaprox. 0,5 mg del principio activo en un tubo Eppendorf-Safe-Lock de 2 ml (nº de art. Eppendorf 0030 120.094) y semezclan con DMSO hasta una concentración de 600 μg/ml (por ejemplo, 0,5 mg de principio activo + 833 μl deDMSO) y se agita hasta disolución completa mediante un vórtex.
Solución de calibración 1 (20 μg/ml): Se añaden a 34,4 μl de la solución madre 1000 1l de DMSO y se homogeneiza.
Solución de calibración 2 (2,5 μg/ml): Se añaden a 100 μl de la solución de calibración 1 700
1l de DMSO y se homogeneiza.
Preparación de las soluciones de muestra:
Solución de muestra para solubilidad hasta 10 g/l en tampón PBS a pH 7,4: Se pesan con exactitud aprox. 5 mg delprincipio activo en un tubo Eppendorf-Safe-Lock de 2 ml (nº de art. Eppendorf 0030 120.094) y se añade tampónPBS a pH 7,4 hasta una concentración de 5 g/l (por ejemplo, 5 mg de principio activo + 500 μl de tampón PBS a pH7,4).
Solución de muestra para solubilidad hasta 10 g/l en tampón acetato de pH 4,6: Se pesan con exactutud aprox. 5 mgdel principio activo en un tubo Eppendorf-Safe-Lock de 2 ml (nº de art. Eppendorf 0030 120.094) y se añade tampónacetato de pH 4,6 hasta una concentración de 5 g/l (por ejemplo, 5 mg de principio activo + 500 μl de tampón acetato a pH 4,6).
Solución de muestra para solubilidad hasta 10 g/l en agua: Se pesan con exactitud aprox. 5 mg del principio activo en un tubo Eppendorf-Safe-Lock de 2 ml (nº de art. Eppendorf 0030 120.094) y se añade agua hasta una concentración de 5 g/l (por ejemplo, 5 mg de principio activo + 500 μl de agua).
Realización:
Se agitan las soluciones de muestra así preparadas durante 24 horas a 1400 rpm mediante un agitadortermostatizable (por ejemplo, Eppendorf Thermomixer Comfort nº de art. 5355 000.011 con bloque intercambiable nºde art. 5362.000.019) a 20 °C. Se extraen de estas soluciones 180 1l y se transfieren a tubos de centrifugación Beckman Polyallomer (nº de art. 343621). Se centrifugan estas soluciones durante 1 hora a aprox. 223.000 *g (porejemplo, ultracentrífuga Beckman Optima L-90K con rotor de tipo 42.2 Ti a 42.000 rpm). Se extraen de cada soluciónde muestra 100 1l de sobrenadante y se diluyen 1:5, 1:100 y 1:1000 con el disolvente usado respectivamente (agua,tampón PBS a 7,4 o tampón acetato de pH 4,6). Se realiza con cada solución un envasado en un recipienteadecuado para la analítica de HPLC.
Analítica:
Se analizan las muestras mediante HPLC-FI. Se cuantifican mediante una curva de calibración de dos puntos delcompuesto de ensayo en DMSO. Se expresa la solubilidad en mg/l.
Secuencia de análisis:
1.
Solución de calibración a 2,5 mg/ml
2.
3.
Solución de calibración a 20 μg/ml
4.
5.
Solución de muestra 1:5
6.
7.
Solución de muestra 1:100
8.
9.
Solución de muestra 1:1000
10. Procedimiento de HPLC para ácidos:
Agilent 1100 con DAD (G1315A), bomba cuaternaria (G1311A), automuestreador CTC HTS PAL, desgasificador(G1322A) y termostato de columna (G1316A); columna: Phenomenex Gemini C18, 50 x 2 mm, 5 μ; temperatura: 40°C; eluyente A: agua/ácido fosfórico pH 2; eluyente B: acetonitrilo; caudal: 0,7 ml/min; gradiente: 0–0,5 min 85 % deA, 15 % de B; pendiente: 0,5-3 min 10 % de A, 90 % de B; 3–3,5 min 10 % de A, 90 % de B; pendiente: 3,5-4 min 85% de A, 15 % de B; 4-5 min 85 % de A, 15 % de B.
Procedimiento HPLC para bases:
Agilent 1100 con DAD (G1315A), bomba cuaternaria (G1311A), automuestreador CTC HTS PAL, desgasificador(G1322A) y termostato de columna (G1316A); columna: VDSoptilab Kromasil 100 C18, 60 x 2,1 mm, 3,5 μ;temperatura: 30 °C; eluyente A: agua + 5 ml de ácido perclórico/l; eluyente B: acetonitrilo; caudal: 0,75 ml/min;gradiente: 0–0,5 min 98 % de A, 2 % de B; pendiente: 0,5-4,5 min 10 % de A, 90 % de B; 4,5–6 min 10 % de A, 90 %de B; pendiente: 6,5-6,7 min 98 % de A, 2 % de B; 6,7-7,5 min 98 % de A, 2 % de B.
d) Determinación de la farmacocinética (in vivo)
Para la determinación de la farmacocinética in vivo, se administran por vía intravenosa u oral a ratones, ratas, perros
o monos las sustancias de ensayo disueltas en distintos agentes de formulación (por ejemplo, plasma, etanol,DMSO, PEG400, etc.) o mezclas de estos solubilizantes. Se realiza la administración intravenosa a elección enforma de inyección intravenosa rápida o infusión. Las dosis administradas se encuentran en el intervalo de 0,1 a 5mg/kg. Se extraen muestras de sangre mediante un catéter o en forma de plasma post-mortem en distintos momentos durante un intervalo de hasta 26 h. Además, se obtienen parcialmente también muestras de órganos,tejidos y orina. Se realiza la determinación cuantitativa de las sustancias en las muestras de ensayo mediantemuestras calibradas que se adaptan a la matriz respectiva. Las proteínas contenidas en las muestras se separanmediante precipitación con acetonitrilo o metanol. A continuación, se separan las muestras mediante HPLC en undispositivo 2300 HTLC (Cohesive Technologies, Franklin, MA, EE.UU) usando columnas de fase inversa. El sistema de HPLC está acoplado mediante una interfaz Turbo Ion Spray con un espectrómetro de masas de cuadripolo tripleAPI 3000 (Applied Biosystems, Darmstadt, Alemania). Se realiza la valoración de la variación con el tiempo de laconcentración de plasma usando un programa de valoración cinética validado.
Se analiza la afinidad de una sustancia por una proteína de transporte mediante ensayo in vitro en un ensayo deflujo usando células caco-2 o células que sobreexpresan un transportador específico (Troutman MD, Thakker DR,Pharm. Res. 20 (8) 1210- 1224 (2003); Schwab D, Fischer H, Tabatabaei A, Poli S, Huwyler J, J. Med. Chem. 46, 1716-1725 (2003); Merino G, Jonker JW, Wagenaar E, Pulido MM, Molina AJ, Alvarez AI, Schinkel AH, Drug Metab.Dispos. 33 (5) 614- 618 (2005)). Para ello, se cultivan las células en placas de filtro de 24 o 96 pocillos durante 4 a15 días. Para la determinación de la permeación, se añaden las sustancias en tampón HEPES de forma apical (A) o basal (B) a las células y se incuban durante 2 h. Después de 0 h y 2 h, se toman muestras de los compartimentos cisy trans y se analizan mediante CL-EM/EM. Se calcula el valor de Papp mediante la fórmula publicada por Schwab y col.. Se clasifica una sustancia como de transporte activo si la relación de Papp (B-A)/Papp (A-B) es > 2 o < 0,5.
e) Determinación del efecto en la endotoxinemia (in vivo)
Se lleva a cabo el análisis en ratas o ratones. En el modelo de ratones (NMRI, machos), se administra por víaintraperitoneal LPS (Escherichia coli serotipo 055:B5, Sigma-Aldrich) a 50 mg/kg. Se administran las sustancias deensayo hasta 1 hora antes de la inyección de LPS por vía intravenosa en la vena de la cola, por vía subcutánea,interaperitoneal o mediante sonda nasogástrica. 4 horas después de la administración de LPS, se anestesia elanimal (Ketavet/Rompun) y se abre quirúrgicamente el abdomen. Se inyecta solución de citrato de sodio (al 3,2 %p/v) (fórmula: peso corporal en g / 13 veces 100 μl) en la vena cava inferior y se extrae sangre después de 30 s(aprox. 1 ml). Se determinan a partir de la sangre distintos parámetros, por ejemplo, los componentes sanguíneoscelulares (particularmente eritrocitos, leucocitos y trombocitos), el nivel de lactato, la activación de la coagulación(TAT) o parámetros de disfunción de órganos o de insuficiencia de órganos y mortalidad.
f) Descripción metodológica de ensayos de DIC en rata
Se inyecta por vía intravenosa en ratas Wistar macho LPS (E. coli O55 B5, fabricante Sigma, disuelto en PBS) a una dosificación de 250 μg/kg en la vena de la cola (volumen de administración 2 ml/kg). Se administra la sustancia deensayo disuelta en PEG 400/H2O a 60 %/40 % por vía oral (volumen de administración 5 ml/kg) 30 minutos antes dela inyección de LPS. 1, 5 o 4 horas después de la inyección de LPS, se desangran los animales con anestesia letal(Trapanal® 100 mg/kg i.p.) mediante punción cardiaca y se obtiene el plasma con citrato para la determinación defibrinógeno, PT, TAT y recuento de plaquetas. Opcionalmente, se obtiene el suero para la determinación de lasenzimas hepáticas, parámetros de función renal y citocinas. Se determinan TNFa y IL-6 con ELISA obtenibles comercialmente (R&D Systems).
Pueden medirse también parámetros directos de la función de órganos, por ejemplo, presiones ventriculares izquierda y derecha, presión arterial, excreción de orina y gases sanguíneos y estado ácido/base.
C. Ejemplos de realización para composiciones farmacéuticas
Los compuestos según la invención pueden transformarse del modo siguiente en preparados farmacéuticos:
Comprimidos:
Composición:
100 mg del compuesto según la invención, 50 mg de lactosa (monohidratada), 50 mg de almidón de maíz (nativo),10 mg de polivinilpirrolidona (PVP 25) (compañía BASF, Ludwigshafen, Alemania) y 2 mg de estearato de magnesio.
Peso de comprimido 212 mg. Diámetro 8 mm, radido de curvatura 12 mm.
Preparación:
Se granula la mezcla de compuesto según la invención, lactosa y almidón con una solución al 5 % (m/m) de PVP enagua. Se mezcla en granulado después del secado con el estearato de magnesio durante 5 minutos. Se comprimeesta mezcla con una prensa de comprimidos habitual (para el formato del comprimido, véase anteriormente). Se usacomo valor de referencia para la compresión una fuerza de compresión de 15 kN.
Suspensión de administración oral:
Composición:
1000 mg del compuesto según la invención, 1000 mg de etanol (al 96 %), 400 mg de Rhodigel® (goma xantana de la compañía FMC, Pensilvania, EE.UU.) y 99 g de agua. Una monodosis de 10 mg del compuesto según la invención corresponde a 10 ml de suspensión oral. Preparación: Se suspende el Rhodigel en etanol, se añade el compuesto según la invención a la suspensión. Se realiza la adición
de agua con agitación. Se agita hasta la terminación del hinchamiento del Rhodigel durante aprox. 6 h.
Solución de administración oral:
Composición:
500 mg del compuesto según la invención, 2,5 g de polisorbato y 97 g de polietilenglicol 400. Una monodosis de 100 mg del compuesto según la invención corresponde a 20 g de solución oral. Preparación: Se suspende el compuesto según la invención en la mezcla de polietilenglicol y polisorbato con agitación. Se
continúa el proceso de agitación hasta la disolución completa del compuesto según la invención.
Solución i .v.:
Se disuelve el compuesto según la invención a una concentración inferior a la solubilidad de saturación en undisolvente fisiológicamente compatible (por ejemplo, solución isotónica de cloruro de sodio, solución de glucosa al 5 % y/o solución de PEG 400 al 30 %). Se esteriliza por filtración la solución y se envasa en envases de inyecciónestériles y exentos de pirógenos.

Claims (16)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Compuesto de la fórmula R3 O R2 O Cl
    O N S
    N
    H
    N
    (I), R1 O
    5 en la que R1 representa cloro, trifluorometoxi, metilo, etilo, n-propilo, metoxi, metoximetilo o etoximetilo,
    10 R2 representa hidrógeno o metilo, y 15 R3 representa un grupo de fórmulas
    R7 R4
    N
    *
    o R6
    N
    mO R5
    n
    *
    ,
    en las que 20
    * es el punto de unión al anillo de oxopiridina, n representa el número 1, 2, 3 o 4, 25 m representa el número 1 o 2, R4 representa hidrógeno, metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo, 2-metoxiet1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo,
    30 R5 representa hidrógeno, metilo o etilo, o R4 y R5 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo de pirrolidin-1-ilo, un anillo de 2
    35 metoximetilpirrolidin-1-ilo, un anillo de morfolin-4-ilo, un anillo de 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo, un anillo de 1,4
    oxazepan-4-ilo, un 4-metilpiperazin-1-ilo o un anillo de 4-hidroxipiperidin-1-ilo, R6 representa hidrógeno, metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo, 2-metoxiet1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo,
    40 R7 representa hidrógeno, metilo o etilo, o
    45 R6 y R7 forman con el átomo de nitrógeno al que están unidos un anillo de pirrolidin-1-ilo, un anillo de 2metoximetilpirrolidin-1-ilo, un anillo de morfolin-4-ilo, un anillo de 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo, un anillo de 1,4oxazepan-4-ilo, un 4-metilpiperazin-1-ilo o un anillo de 4-hidroxipiperidin-1-ilo,
    o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales. 50
  2. 2. Compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque R1 representa cloro, trifluorometoxi, metilo, etilo, n-propilo, metoxi o metoximetilo,
    55 R2 representa hidrógeno o metilo, y R3 representa un grupo de fórmulas
    R7 R4 N
    *
    o R6
    N
    mO R5
    n
    *
    , en las que
    * es el punto de unión al anillo de oxopiridina, n representa el número 1, 2 o 3, m representa el número 1 o 2, o R4 representa hidrógeno, metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo, 2-metoxiet
    1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo, R5 representa hidrógeno, metilo o etilo, o R4 y R5 forman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos un anillo de pirrolidin-1-ilo, un anillo de 2
    metoximetilpirrolidin-1-ilo, un anillo de morfolin-4-ilo, un anillo de 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo, un anillo de 1,4
    oxazepan-4-ilo, un 4-metilpiperazin-1-ilo o un anillo de 4-hidroxipiperidin-1-ilo, R6 representa hidrógeno, metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo, 2-metoxiet1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo,
    R7 representa hidrógeno, metilo o etilo, o R6 y R7 forman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos un anillo de pirrolidin-1-ilo, un anillo de 2
    metoximetilpirrolidin-1-ilo, un anillo de morfolin-4-ilo, un anillo de 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo, un anillo de 1,4oxazepan-4-ilo, un 4-metilpiperazin-1-ilo o un anillo de 4-hidroxipiperidin-1-ilo,
    o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales.
  3. 3. Compuesto según una de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque R1 representa metilo, etilo, n-propilo, metoxi o metoximetilo, R2 representa hidrógeno o metilo, y R3 representa un grupo de fórmulas
    R7 R4
    N
    *
    o R6
    N
    mO R5
    n
    *
    , en las que
    * es el punto de unión al anillo de oxopiridina, n representa el número 1, 2 o 3, m representa el número 1 o 2, R4 representa hidrógeno, metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo, 2-metoxiet
    1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo, R5 representa hidrógeno, metilo o etilo, R6 representa hidrógeno, metilo, etilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 2-hidroxiet-1-ilo, 3-hidroxiprop-1-ilo, 2-metoxiet
    1-ilo, 3-metoxiprop-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, tetrahidrofuran-2-ilmetilo o 1,4-dioxan-2-ilmetilo, R7 representa hidrógeno, metilo o etilo,
    o una de sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.
  4. 4. Compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque R1 representa metilo o metoxi, R2 representa hidrógeno, o R1 representa metilo, R2 representa metilo, y R3 representa un grupo de fórmulas
    R7 R4
    N
    * o R6N
    mOn
    *
    R5
    , en las que
    * es el punto de unión al anillo de oxopiridina, n representa el número 2, m representa el número 1, R4 representa 2-hidroxiet-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1-ilo, R5 representa hidrógeno, R6 representa 2-hidroxiet-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1-ilo, R7 representa hidrógeno,
    o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales.
  5. 5. Compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque R1 representa metoximetilo, R2 representa hidrógeno, o R1 representa metilo, R2 representa metilo, y R3 representa un grupo de fórmula
    R4 N
    n
    *
    R5
    , en la que
    * es el punto de unión al anillo de oxopiridina,
    n representa el número 2, R4 representa 2-hidroxiet-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1-ilo, 5 R5 representa hidrógeno,
    o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales.
  6. 6. Compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque 10 R1 representa metilo, R2 representa hidrógeno, 15 o R1 representa metilo, R2 representa metilo, 20
    y R3 representa un grupo de fórmula
    R7
    N
    *
    R6
    mO 25 ,
    en la que
    * es el punto de unión al anillo de oxopiridina,
    30 m representa el número 1,
    R6 representa 2-hidroxiet-1-ilo o 4-hidroxiciclohex-1-ilo,
    35 R7 representa hidrógeno,
    o una de sus sales, solvatos o los solvatos de sus sales.
  7. 7. Procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I) o una de sus sales, sus solvatos o los40 solvatos de sus sales según la reivindicación 1, caracterizado porque se hace reaccionar
    [A] un compuesto de la fórmula
    X O R2 O
    Cl
    n
    O
    S
    N
    N
    H
    N
    (II),
    R1
    O
    en la que n, R1 y R2 tienen el significado dado en la reivindicación 1, y X representa hidroxilo o bromo, 50 con un compuesto de fórmula H
    N
    R5 (III),
    R4
    en la que R4 y R5 tienen el significado dado en la reivindicación 1,
    55 dando un compuesto de fórmula
    R4
    N O R2 O ClR5
    n
    O N S
    N
    H
    N
    (Ia), R1 O
    en la que n, R1, R2, R4 y R5 tienen el significado dado en la reivindicación 1, 5 o se hace reaccionar
    [B] un compuesto de fórmula
    Y O R2 O
    O m
    Cl O N
    S
    N
    H
    N
    (IV), R1 O 10 en la que m, R1 y R2 tienen el significado dado en la reivindicación 1, y
    Y representa hidroxilo o cloro,
    15 con un compuesto de fórmula
    H
    N
    R7 (V),
    R6
    en la que R6 y R7 tienen el significado dado en la reivindicación 1, 20 dando un compuesto de fórmula
    R6
    N O R2 O
    O ClR7
    m O N
    SN
    H N
    (Ib), R1 O
    25 en la que m, R1, R2, R6 y R7 tienen el significado dado en la reivindicación 1.
  8. 8. Compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 6 para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades.
  9. 9. Uso de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 6 para la preparación de un medicamento para30 el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades.
  10. 10. Uso de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 6 para la preparación de un medicamento parael tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades tromboembólicas.
    35 11. Uso de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 6 para impedir la coagulación sanguínea in vitro.
  11. 12. Medicamento que contiene un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 6 en combinación con uncoadyuvante inerte no tóxico y farmacéuticamente adecuado.
  12. 13. Medicamento que contiene un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 6 en combinación con un5 principio activo adicional.
  13. 14. Medicamento según la reivindicación 12 o 13 para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades tromboembólicas.
    10 15. Procedimiento para impedir la coagulación sanguínea in vitro, caracterizado porque se añade una cantidad anticoagulante eficaz de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 6.
  14. 16. Uso de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 6 para la preparación de un medicamento para
    el tratamiento y/o la profilaxis de hipertonía pulmonar. 15
  15. 17. Uso de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 6 para la preparación de un medicamento parael tratamiento y/o la profilaxis de sepsis, síndrome inflamatorio sistémico (SIRS), disfunción orgánica séptica,insuficiencia orgánica séptica e insuficiencia multiorgánica, síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS), lesiónpulmonar aguda (ALI), choque séptico, DIC (coagulación intravascular diseminada) y/o de insuficiencia orgánica
    20 séptica.
  16. 18. Compuesto tal como se define en una de las reivindicaciones 1 a 6, para su uso en un procedimiento parael tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades tromboembólicas.
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