ES2436225T3

ES2436225T3 - Inhibidores TRPA1 para tratamiento del dolor

Info

Publication number: ES2436225T3
Application number: ES06848704T
Authority: ES
Inventors: Magdalene M. Moran; Christopher Fanger; Jayhong A. Chong; Colleen Mcnamara; Xiaoguang Zhen; Josh Mandel-Brehm
Original assignee: Hydra Biosciences LLC
Current assignee: Hydra Biosciences LLC
Priority date: 2005-12-22
Filing date: 2006-12-22
Publication date: 2013-12-27
Anticipated expiration: 2026-12-22
Also published as: US20110009430A1; TWI423819B; US8389529B2; JP5858557B2; TWI610684B; EP1962855A2; JP2014065744A; JP6541549B2; US20180093986A1; AU2013202367A1; US7671061B2; TW201412332A; US8178542B2; US20070219222A1; JP2009521485A; EP1962855B1; AU2016273866B2; TW201622749A; CN102499921A; US20140221401A1

Abstract

Un compuesto de Fórmula II o una sal del mismo, o un solvato o hidrato del compuesto o de su sal:**Fórmula** donde n es un número entero de 1 a 3 y R2 representa heteroarilo substituido; y donde dicho compuesto in hibe una corriente mediada por el TRPA1 con una CI50 menor de 10 micromolar,para uso en un método de tratamiento o de prevención de una afección seleccionada entre asma, enfermedadpulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino,glomerulonefritis, enfermedades neuroinflamatorias tales como la esclerosis múltiple, trastornos del sistemainmunitario, dolor agudo y/o crónico, sensibilidad al tacto, quemaduras, inflamación, neuropatía diabética, psoriasis,eczema, dermatitis, neuralgia postherpética (culebrilla), migraña, incontinencia, fiebre, sofocos, mucositis oral, dolordebido al cáncer, cistitis de la vejiga, dolor asociado a la enfermedad de Crohn y al Síndrome del Intestino Irritable(SII), síndrome de Grierson-Gopalan (más conocido como síndrome de los pies ardientes), síndrome de la bocaardiente (SBA) y tos, o como depilatorio para promover la pérdida, o inhibir el crecimiento, del pelo en un paciente,donde dicha CI50 es determinada por un registro de pinzamiento zonal de membranas realizado en el modo decélulas enteras con un potencial de sujeción de -40 mV mediante las siguientes etapas: (a) disponer de células de la línea comercial HEK293/TREx (Invitrogen) que expresan TRPA1 a partir de unaconstrucción codificante de una proteína TRPA1 con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC NºID.: 1; (b) disponer de una solución interna de aspartato de cesio 140 mM, EGTA 10 mM, CaCl2 2,2 mM, MgCl2 2,08mM y HEPES 10 mM, pH 7,2, y con adición de 60 mg/ml de anfotericina antes del experimento; (c) disponer de una solución externa de NaCl 150 mM, KCl 4,5 mM, MgCl2 3 mM, HEPES 10 mM, glutamina10 mM, EGTA 1 mM, pH 7,4; (d) aplicar una rampa de voltaje de -120 a +100 mV, de 400 ms de duración, cada 5 segundos; (e) estudiar la capacidad del compuesto para bloquear la corriente hacia el interior o hacia el exterior en lapresencia continuada de AITC 5 micromolar; y (f) determinar el valor de la CI50.

Description

Inhibidores TRPA1 para tratamiento del dolor

SOLICITUDES RELACIONADAS

[0001] Esta solicitud reivindica el beneficio de prioridad para las solicitudes provisionales Estadounidenses con números de serie 60/753.665, depositada el 22 de Diciembre de 2005, y 60/817.892, depositada el 29 de Junio de 2006.

Antecedentes

[0002] Existen una variedad de proteínas de canales iónicos para mediar en el flujo de iones a través de las membranas celulares. La apropiada expresión y función de las proteínas de los canales iónicos es esencial para el mantenimiento de la función celular, la comunicación intracelular y similares. Numerosas enfermedades son el resultado de una regulación errónea del potencial de membrana o de un manejo anormal del calcio. Dada la importancia primordial de los canales de iones en la modulación del potencial de membrana y del flujo de iones en las células, tiene un gran interés la identificación de agentes que puedan promover o inhibir canales iónicos particulares como herramientas de investigación y como posibles agentes terapéuticos.

[0003] Uno de tales canales es el canal de Receptores de Potencial Transitorio A1 (TRPA1) (ANKTM1). TRPA1 es un canal permeable al calcio, específicamente un canal de cationes permeable al calcio no selectivo. Además de a los iones calcio, los canales TRPA1 son permeables a otros cationes, por ejemplo el sodio. Así, los canales TRPA1 modulan el potencial de membrana modulando el flujo de cationes, tales como los iones calcio y sodio. Aunque los canales catiónicos no selectivos, tales como TRPA1, modulan, entre otros, el flujo de iones calcio, son mecanísticamente distintos de los canales de calcio regulados por voltaje. En general, los canales de calcio regulados por voltaje responden a la despolarización de la diferencia de potencial a través de la membrana y pueden abrirse para permitir un flujo de calcio hacia el interior desde el medio extracelular y un rápido aumento en los niveles

o concentraciones de calcio intracelular. Por el contrario, los canales catiónicos no selectivos generalmente se abren por transducción de señal, son de larga duración y producen cambios menos rápidos en la concentración de iones. Estas diferencias mecanísticas van acompañadas de diferencias estructurales entre los canales regulados por voltaje y los permeables a cationes. Así, aunque muchos y diversos canales actúan regulando el flujo de iones y el potencial de membrana en varios tipos celulares y en respuesta a numerosos estímulos, es importante reconocer las diferencias estructurales, funcionales y mecanísticas significativas entre diferentes clases de canales iónicos.

[0004] Dado que la regulación errónea de los canales iónicos va con frecuencia asociada a afecciones patológicas, sería deseable identificar y producir compuestos que puedan modular una o más funciones de los canales iónicos, incluido el TRPA1. Dichos compuestos tienen una variedad de usos in vitro e in vivo.

Resumen

[0005] Un aspecto importante de la consecución de una homeostasis celular es el mantenimiento de concentraciones iónicas apropiadas en diversos tipos celulares durante el desarrollo y en respuesta a numerosos estímulos. Un gran número de diversos tipos de canales iónicos actúan con el fin de mantener la homeostasis celular moviendo iones hacia dentro y hacia fuera de las células a través de la membrana plasmática, y en el interior de las células moviendo iones a través de las membranas de los orgánulos intracelulares, incluyendo, por ejemplo, el retículo endoplásmico, el retículo sarcoplásmico, las mitocondrias y los orgánulos endocíticos, entre los que se incluyen los endosomas y los lisosomas. Uno de tales canales iónicos es el canal catiónico no selectivo TRPA1. TRPA1 es permeable a los cationes y pertenece a la familia más extensa de los canales iónicos TRP.

[0006] Los canales TRP han sido clasificados en al menos seis grupos: TRPC (corto), TRPV (vainilloide), TRPM (largo, melastatina), TRPP (policistinas), TRPML (mucolipinas) y TRPA (ANKTM1). El grupo TRPC puede dividirse en 4 subfamilias (TRPC1, TRPC4,5, TRPC3,6,7 y TRPC2) en base a la homología de secuencia y a las similitudes funcionales. Actualmente, la familia TRPV tiene 6 miembros. TRPV5 y TRPV6 están más estrechamente relacionados entre sí que con TRPV1, TRPV2, TRPV3 o TRPV4. TRPA1 está más estrechamente relacionado con TRPV3 que con el resto, y está más estrechamente relacionado con TRPV1 y TRPV2 que con TRPV5 y TRPA6. La familia TRPM tiene 8 miembros. Como constituyentes, se incluyen los siguientes: el miembro fundador TRPM1 (Melastatina o LTRPC1), TRPM3 (KIAA1616 o LTRPC3), TRPM7 (TRP-PLIK, ChaK(1), LTRPC7), TRPM6 (ChaK2), TRPM2 (TRPC7 o LTRPC2), TRPM8 (Trp-p8 o CMR1), TRPM5 (Mtr1 o LTRPC5) y TRPM4 (FLJ20041 o LTRPC4). El único miembro en mamíferos de la familia TRPA es ANKTM1. La familia TRPML consiste en las mucolipinas, que incluyen TRPML1 (mucolipinas 1), TRPML2 (mucolipinas 2) y TRPML3 (mucolipina 3). La familia TRPP consiste en dos grupos de canales: los que se predice que tienen seis dominios de transmembrana y los que tienen 11. Se predice que TRPP2 (PKD2), TRPP3 (PKD2L1) y TRPP5 (PKD2L2) tienen todos ellos seis dominios de transmembrana. Se piensa que TRPP1 (PKD1, PC1), PKDREJ y PKD-1L1 tienen todos 11 dominios de transmembrana.

[0007] Los canales TRP constituyen una clase grande e importante de canales implicados en la modulación de la homeostasis celular. La presente invención proporciona compuestos y composiciones que modulan al menos un miembro de la familia TRP. Específicamente, la presente invención proporciona compuestos y composiciones para antagonizar una función de TRPA1. La modulación de una función de TRPA1 proporciona un medio para la modulación de la homeostasis del calcio, de la homeostasis del sodio, de los niveles de calcio intracelular, de la polarización de la membrana (potencial de membrana en reposo) y/o de los niveles de cationes en una célula. Los compuestos que pueden modular una o más funciones de TRPA1 son útiles en muchos aspectos, incluyendo, aunque sin limitación, el mantenimiento de la homeostasis del calcio, el mantenimiento de la homeostasis del sodio, la modulación de los niveles de calcio intracelular, la modulación de la polarización de la membrana (potencial de membrana), la modulación de los niveles de cationes y/o el tratamiento o la prevención de enfermedades, trastornos

: o afecciones asociados a la homeostasis del calcio, a la homeostasis del sodio, a la dishomeostasis del calcio o del sodio o a la polarización/hiperpolarización de la membrana (incluyendo hipo- e hiperexcitabilidad), y/o el tratamiento

: o la prevención de enfermedades, trastornos o afecciones asociados a la regulación o a la regulación errónea de la expresión o de la función de TRPA1. Adicionalmente, la descripción proporciona, en ciertas realizaciones, compuestos y composiciones que antagonizan tanto una función de TRPA1 como una función de uno o más canales TRP adicionales.

[0008] La invención proporciona un compuesto de Fórmula II o una sal del mismo, o un solvato o hidrato del compuesto o de su sal:

donde n es un número entero de 1 a 3 y R2 representa heteroarilo substituido, y donde dicho compuesto inhibe una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 inferior a 10 micromolar, para uso en un método de tratamiento o de prevención de una afección seleccionada entre asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino, glomerulonefritis, enfermedades neuroinflamatorias, tales como la esclerosis múltiple, trastornos del sistema inmune, dolor agudo y/o crónico, sensibilidad al tacto, quemaduras, inflamación, neuropatía diabética, psoriasis, eczema, dermatitis, neuralgia postherpética (culebrilla), migraña, incontinencia, fiebre, sofocos, mucositis oral, dolor debido a cáncer, cistitis de vejiga, dolor asociado a la enfermedad de Crohn y al Síndrome del Intestino Irritable (SII), síndrome de Grierson-Gopalan (más conocido como síndrome de los pies ardientes), síndrome de la boca ardiente (SBA) y tos, o como depilatorio para promover la pérdida del pelo o inhibir su crecimiento en un paciente, donde dicha CI50 es determinada por medio de un registro de pinzamiento zonal de membranas realizado en el modo de células enteras con un potencial de sujeción de -40 mV mediante las siguientes etapas:

(a): disponer de células de la línea comercializada HEK293/TREx (Invitrogen) que expresen TRPA1 a partir de una construcción codificante de una proteína TRPA1 con una secuencia de aminoácidos representada en la SEC. Nº ID.: 1;

(b): disponer de una solución interna de aspartato de cesio 140 mM, EGTA 10 mM, CaCl2 2,2 mM, MgCl2 2,08 mM y HEPES 10 mM, pH 7,2, y habiendo añadido 60 mg/ml de anfotericina antes del experimento;

(c): disponer de una solución externa de NaCl 150 mM, KCl 4,5 mM, MgCl2 3 mM, HEPES 10 mM, glutamina 10 mM, EGTA 1 mM, pH 7,4;

(d): aplicar un gradiente de voltaje de -120 a +100 mV, de 400 ms de duración, cada 5 segundos;

(e): estudiar la capacidad del compuesto para bloquear la corriente hacia dentro o hacia fuera en la presencia continua de AITC 5 micromolar; y

(f): determinar el valor de la CI50.

[0009] La invención proporciona además una preparación farmacéutica adecuada para uso en un paciente humano

o para uso veterinario, que contiene una cantidad efectiva de un compuesto de Fórmula II o una sal del mismo, o un solvato o hidrato del compuesto o de su sal, según la reivindicación 1, para uso en un método de tratamiento o prevención de una afección seleccionada entre asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino, glomerulonefritis, enfermedades neuroinflamatorias, tales como la esclerosis múltiple, trastornos del sistema inmune, dolor agudo y/o crónico, sensibilidad al tacto, quemaduras, inflamación, neuropatía diabética, psoriasis, eczema, dermatitis, neuralgia postherpética (culebrilla), migraña, incontinencia, fiebre, sofocos, mucositis oral, dolor debido a cáncer, cistitis de vejiga, dolor asociado a la enfermedad de Crohn y al Síndrome del Intestino Irritable (SII), síndrome de Grierson-Gopalan (más conocido como síndrome de pies ardientes), síndrome de boca ardiente (SBA) y tos, o como depilatorio para promover la pérdida del cabello o inhibir su crecimiento en un paciente.

[0010] También se describe aquí un método de modulación de una función de TRPA1 en una célula o animal, consistente en administrar una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe una función de TRPA1, donde el compuesto inhibe un flujo de iones mediado por TRPA1. También se describe aquí un método de modulación de una función de TRPA1 en una célula, consistente en administrar a la célula una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe una función de TRPA1, donde el compuesto inhibe la corriente hacia fuera mediada por TRPA1. También se describe aquí un método de modulación de una función de TRPA1 en una célula, consistente en administrar a la célula una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe una función de TRPA1, donde el compuesto inhibe la corriente hacia dentro mediada por TRPA1. También se describe aquí un método de modulación de una función de TRPA1 en una célula, consistente en administrar a la célula una cantidad efectiva de un compuesto que inhibe una función de TRPA1, donde el compuesto inhibe la corriente tanto hacia dentro como hacia fuera mediada por TRPA1. Ciertas realizaciones proporcionan también compuestos para uso en un método de prevención o tratamiento de una enfermedad o afección reivindicada relacionada con la función de TRPA1 en un sujeto, consistente en administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que inhibe una función de TRPA1, donde el compuesto inhibe la corriente hacia dentro mediada por TRPA1. Ciertas realizaciones proporcionan compuestos para uso en un método de prevención o tratamiento de una enfermedad o afección reivindicada relacionada con la función de TRPA1 en un sujeto, consistente en administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que inhibe una función de TRPA1, donde el compuesto inhibe la corriente hacia fuera mediada por TRPA1. Ciertas realizaciones también proporcionan compuestos para uso en un método de prevención o tratamiento de una enfermedad o afección reivindicada relacionada con la función de TRPA1 en un sujeto, consistente en administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que inhibe una función de TRPA1, donde el compuesto inhibe la corriente tanto hacia dentro como hacia fuera mediada por TRPA1. Ciertas realizaciones proporcionan compuestos para uso en un método de prevención o tratamiento de una enfermedad o afección reivindicada relacionada con la función de TRPA1 en un sujeto, consistente en administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que inhibe una función de TRPA1, donde el compuesto inhibe el flujo de iones mediado por TRPA1. Obsérvese que inhibición de una corriente particular se refiere a la capacidad de un compuesto para inhibir esa corriente (v.g., hacia dentro y/o hacia fuera) en un ensayo in vitro o in vivo. La inhibición de una corriente particular en un ensayo in vivo o in vitro sirve como representación de la actividad funcional particular del compuesto particular.

[0011] Los siguientes artículos son ejemplos del estado de la técnica concerniente a la estructura y función de TRPA1 (Jordt et al., (2004), Nature 427: 260-265; Bautista et al., (2005), PNAS: 102(34): 12248-12252).

[0012] Un aspecto de la presente invención se relaciona con compuestos para uso en un método para el tratamiento

o la prevención de una afección reivindicada que conlleva activación del TRPA1 o para la cual una reducida actividad del TRPA1 puede reducir su gravedad, mediante administración de un antagonista del TRPA1 que inhibe una corriente mediada por TRPA1 y/o un flujo de iones mediado por TRPA1. A continuación, se describen con mayor detalle antagonistas del TRPA1 que tienen CI50 medidas para la inhibición del TRPA1 de 10 micromolar o menos, 5 micromolar o menos, 2 micromolar o menos, 1 micromolar o menos, 500 nanomolar o menos, 200 nanomolar o menos, 100 nanomolar o menos e incluso 10 nanomolar o menos. En ciertas realizaciones, el antagonista del TRPA1 inhibe la corriente mediada por TRPA1 hacia dentro o hacia fuera, o ambas, con una CI50 de 1 micromolar o menos, y más preferiblemente con una CI50 de 500 nanomolar o menos, 200 nanomolar o menos, 100 nanomolar o menos, 25 nanomolar o menos e incluso 10 nanomolar o menos. En ciertas realizaciones, el antagonista del TRPA1 inhibe al menos un 95% de la corriente mediada por TRPA1 o del flujo de iones mediado por TRPA1 cuando se administra a 5 micromolar o menos, e incluso más preferiblemente a 1 micromolar o menos.

[0013] En ciertas realizaciones, los antagonistas del TRPA1 en cuestión inhiben el TRPA1 con una CI50 al menos un orden de magnitud por debajo de su CI50 para la inhibición de una o más de las actividades de los canales TRPV5, TRPV6, NaV 1.2, TRPV1, uniporter mitocondrial y HERG, e incluso más preferiblemente dos o incluso tres órdenes de magnitud por debajo.

[0014] En ciertas realizaciones, los antagonistas del TRPA1 en cuestión son al menos 10, 20, 30, 40 ó 50 veces más selectivos para la inhibición de la actividad del TRPA1 que para la de una o más de las actividades de los canales TRPV5, TRPV6, NaV 1.2, TRPV1, uniporter mitocondrial o hERG. En otras palabras, el antagonista inhibe la actividad del TRPA1 (una o más funciones del TRPA1) 10, 20, 30, 40 ó 50 veces más potentemente que la de uno o más de los canales anteriores.

[0015] En ciertas realizaciones, los antagonistas del TRPA1 en cuestión inhiben el TRPA1 con una CI50 al menos un orden de magnitud más potente que su Ki para el receptor de AMPA. En otras determinadas realizaciones, los antagonistas del TRPA1 en cuestión inhiben el TRPA1 con una CI50 al menos dos órdenes de magnitud, o incluso tres órdenes de magnitud, o cuatro órdenes de magnitud, más potente que su Ki para el receptor de AMPA. En ciertas realizaciones, los antagonistas del TRPA1 en cuestión no se unen apreciablemente al receptor de AMPA. En otras palabras, los antagonistas en cuestión inhiben el TRPA1 con una CI50 particular y, cuando se administran a esa concentración, los antagonistas no se unen apreciablemente al receptor de AMPA (v.g., no se unen específica y apreciablemente al receptor de AMPA). En ciertas realizaciones, los compuestos de la invención inhiben una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 más potente que su Ki para el receptor de AMPA. En tales realizaciones, la capacidad de los inhibidores del TRPA1 en cuestión para disminuir el dolor sería, por lo tanto, independiente de la unión a, y la modulación de, el receptor del ácido alfa-amino-3-hidroxi-5-metil-4-isoxazolpropiónico (AMPA), al cual se ha implicado en la recepción del dolor neuropático.

[0016] En ciertas realizaciones, los antagonistas del TRPA1 inhiben el TRPA1 con una CI50 al menos un orden de magnitud por debajo de su CI50 para la inhibición del TRPV1, e incluso más preferiblemente dos o incluso tres órdenes de magnitud por debajo. En ciertas realizaciones, los antagonistas del TRPA1 en cuestión pueden ser seleccionados en cuanto a su selectividad para TRPA1 frente a TRPV1 en base a tener una CI50 para la inhibición del TRPV1 mayor de 10 micromolar.

[0017] En ciertas realizaciones, los antagonistas del TRPA1 inhiben uno o más de TRPV2, TRPV4, TRPV3 y/o TRPM8 con una CI50 de 10 micromolar o menos.

[0018] En ciertas realizaciones, el antagonista del TRPA1 tiene un índice terapéutico (I.T.) para tratar la afección con el compuesto de 10 o superior, e incluso más preferiblemente tiene un I.T. de al menos 25, 50 o incluso 100.

[0019] En realizaciones preferidas, el inhibidor del TRPA1 tiene una CI50 para la inhibición del TRPA1 que, a esa concentración, no causa un alargamiento del intervalo QT en el paciente ni altera la regulación de la temperatura en el paciente.

[0020] En ciertas realizaciones, el inhibidor del TRPA1 está destinado a su uso para el tratamiento o la mejoría del dolor. Como ejemplos de clases de dolor que pueden ser tratadas usando un inhibidor del TRPA1, se incluyen, aunque sin limitación, el dolor nociceptivo, el dolor inflamatorio y el dolor neuropático. El dolor que puede ser tratado con un inhibidor del TRPA1 puede ser crónico o agudo.

[0021] En ciertas realizaciones, el inhibidor del TRPA1 está destinado a su uso para el tratamiento o la mejoría de los síntomas de la incontinencia.

[0022] En ciertas realizaciones, el inhibidor del TRPA1 es no narcótico y tiene pocos o ningún efecto colateral narcótico. En otras determinadas realizaciones, el inhibidor del TRPA1 puede ser usado para tratar o mejorar el dolor con menos efectos colaterales que los aliviadores narcóticos del dolor. Como ejemplos de efectos colaterales que pueden estar substancialmente ausentes a dosificaciones efectivas de los inhibidores del TRPV3, se incluyen uno o más de los siguientes: exoftalmos, catalepsia, trastornos de la motilidad intestinal e inhibición de la sensación en áreas no lesionadas del cuerpo.

[0023] En ciertas realizaciones, un inhibidor del TRPA1 para uso en el tratamiento de las enfermedades o indicaciones reivindicadas tiene una o más de las características estructurales o funcionales aquí expuestas.

[0024] Un aspecto de la presente invención proporciona una preparación farmacéutica adecuada para uso en un paciente humano o para uso veterinario, que contiene una cantidad efectiva de un compuesto de Fórmula II o de una sal del mismo, o de un solvato o hidrato del compuesto o de su sal, y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. En ciertas realizaciones, las preparaciones farmacéuticas pueden estar destinadas a su uso en el tratamiento o la prevención de una afección reivindicada que conlleve activación del TRPA1 o cuya gravedad pueda verse reducida por una reducida actividad del TRPA1. En ciertas realizaciones, las preparaciones farmacéuticas tienen una actividad pirogénica lo suficientemente baja como para resultar adecuadas para uso en un paciente humano o para uso veterinario. En ciertas realizaciones, la preparación farmacéutica contiene una cantidad efectiva de cualquiera de los compuestos mostrados anteriormente, donde el compuesto inhibe el TRPA1 (v.g., una corriente mediada por TRPA1 y/o un flujo de iones mediado por TRPA1) con una CI50 de 10 micromolar o menos. En ciertas realizaciones, la preparación farmacéutica contiene un compuesto que inhibe el TRPA1 con una CI50 de 5 micromolar o menos, 2 micromolar o menos o 1 micromolar o menos, o incluso con una CI50 de 500 nM o menos, 250 nM o menos, 200 nM o menos o incluso 100 nM o menos.

[0025] En ciertas realizaciones, el inhibidor del TRPA1 para uso en los métodos o en las preparaciones farmacéuticas de la presente invención es seleccionado entre los compuestos de la invención mostrados en la Tabla

2. En ciertas realizaciones, la presente invención contempla el uso de cualquier compuesto de la invención mostrado en la Tabla 2 en cualquiera de los métodos o preparaciones farmacéuticas de la presente invención.

[0026] Los antagonistas del TRPA1 de la presente invención pueden ser usados como parte de una profilaxis o de un tratamiento para el asma, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica, la artritis reumatoide, la osteoartritis, la enfermedad inflamatoria del intestino, la glomerulonefritis, las enfermedades neuroinflamatorias, tales como la esclerosis múltiple, los trastornos del sistema inmune, el dolor agudo y/o crónico, la sensibilidad al tacto, las quemaduras, la inflamación, la neuropatía diabética, la psoriasis, el eczema, la dermatitis, la neuralgia postherpética (culebrilla), la migraña, la incontinencia, la fiebre, los sofocos, la osteoartritis, la mucositis oral, el dolor debido a cáncer, la cistitis de la vejiga, el dolor asociado a la enfermedad de Crohn y al Síndrome del Intestino Irritable (SII), la artritis reumatoide, el síndrome de Grierson-Gopalan (más conocido como síndrome de pies ardientes), el síndrome de boca ardiente (SBA) y la tos, o se utilizan como depilatorios para promover la pérdida del vello o inhibir su crecimiento en un paciente. La invención contempla además el uso de compuestos que tengan cualquiera de las estructuras proporcionadas en la descripción en la fabricación de un medicamento o de una preparación farmacéutica para tratar o reducir los síntomas de cualquiera de las enfermedades o afecciones reivindicadas. Se pueden formular los compuestos para uso en el tratamiento de una enfermedad o afección particular para su administración por una vía apropiada para la enfermedad o afección particular.

[0027] Los antagonistas del TRPA1 pueden ser administrados solos o en combinación con otros agentes terapéuticos. Por ejemplo, los antagonistas del TRPA1 son administrados conjuntamente con uno o más de los siguientes: un agente antiinflamatorio, un agente antiacné, un agente antiarrugas, un agente anticicatrizante, un agente antipsoriásico, un agente antiproliferativo, un agente antifúngico, un agente antivírico, un agente antiséptico, un agente antimigraña, un agente queratolítico o un inhibidor del crecimiento del pelo.

[0028] Los antagonistas del TRPA1 pueden ser administrados por vía tópica, oral, transdérmica, rectal, vaginal, parenteral, intranasal, intraocular, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal, intraesternal o inhalatoria.

[0029] En ciertas realizaciones preferidas, se administra un antagonista del TRPA1 por vía tópica.

[0030] En ciertas realizaciones preferidas, se administra un antagonista del TRPA1 por vía oral.

[0031] En ciertas realizaciones preferidas, se administra un antagonista del TRPA1 por vía parenteral.

[0032] En ciertas realizaciones preferidas, se administra un antagonista del TRPA1 para prevenir, tratar o aliviar los signos y síntomas del dolor agudo, del dolor crónico, de la sensibilidad al tacto o de la sensibilidad al picor, o como parte del tratamiento de una quemadura, como, por ejemplo, el dolor postquirúrgico, el dolor debido a cáncer o el dolor neuropático.

[0033] En ciertas realizaciones preferidas, se administra un antagonista del TRPA1 para prevenir, tratar o aliviar los signos y síntomas de la migraña.

[0034] En ciertas realizaciones preferidas, se administra un antagonista del TRPA1 para prevenir, tratar o aliviar los signos y síntomas de la osteoartritis.

[0035] En ciertas realizaciones preferidas, se administra un antagonista del TRPA1 para prevenir, tratar o aliviar los signos y síntomas de la artritis reumatoide.

[0036] En ciertas realizaciones preferidas, se administra un antagonista del TRPA1 para prevenir, tratar o aliviar los signos y síntomas de la mucositis oral.

[0037] En ciertas realizaciones preferidas, se administra un antagonista del TRPA1 para promover la pérdida de vello o inhibir su crecimiento en un paciente.

[0038] Aún otro aspecto de la presente invención se relaciona con el uso de un antagonista del TRPA1, v.g., un agente de pequeña molécula que inhibe la corriente hacia el interior mediada por TRPA1 con una CI50 de 1 micromolar o menos, en la fabricación de un medicamento para prevenir, tratar o aliviar los síntomas de una enfermedad, trastorno o afección reivindicada que conlleve activación del TRPA1, o cuya gravedad pueda verse reducida por una reducida actividad del TRPA1, en un paciente.

[0039] Otro aspecto más de la presente invención se relaciona con una preparación farmacéutica que contiene un agente que inhibe la corriente hacia el interior mediada por TRPA1 con una CI50 de 1 micromolar o menos y un excipiente o solvente farmacéuticamente aceptable, donde el agente se presenta en una forma de dosificación que aporta una cantidad efectiva para prevenir, tratar o aliviar los síntomas de una enfermedad, trastorno o afección reivindicada que conlleva activación del TRPA1, o cuya gravedad pueda verse reducida por una reducida actividad del TRPA1, en un paciente. En ciertas realizaciones preferidas, la preparación farmacéutica no provoca alargamiento del intervalo QT en el paciente.

[0040] En ciertas realizaciones ilustrativas, la preparación farmacéutica contiene un agente que inhibe la corriente mediada por TRPA1 con una CI50 al menos un orden de magnitud menor que su CI50 para la inhibición de la función de NaV 1.2, la función de TRPV1, la función de TRPV5, la función de TRPV6, la función del uniporter mitocondrial y la función de HERG, y un excipiente o solvente farmacéuticamente aceptable, donde el agente se presenta en una forma de dosificación que aporta una cantidad efectiva para prevenir, tratar o aliviar los síntomas de una enfermedad, trastorno o afección reivindicada que conlleve activación del TRPA1, o cuya gravedad pueda verse reducida por una reducida actividad del TRPA1, en un paciente, pero que no provoca alargamiento del intervalo QT.

[0041] En otra realización ilustrativa, la preparación farmacéutica contiene un agente que inhibe una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de 1 micromolar o menos y un excipiente o solvente farmacéuticamente aceptable, donde el agente se presenta en una forma de dosificación que aporta una cantidad efectiva para prevenir, tratar o aliviar los síntomas de una enfermedad, trastorno o afección reivindicada que conlleve activación del TRPA1, o cuya gravedad pueda verse reducida por una reducida actividad del TRPA1, en un paciente, pero que no provoca alargamiento del intervalo QT.

[0042] Una preparación preferida es una formulación tópica para reducir la actividad del TRPA1 en la piel o las mucosas, que contiene un agente que inhibe una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de 1 micromolar o menos.

[0043] Otra preparación preferida es un parche o vendaje removible que contiene: (i) una base polimérica y (ii) un agente que inhibe una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de 1 micromolar o menos.

[0044] Aún otra formulación ilustrativa es una composición exfoliante cutánea para aplicación tópica a un animal que contiene un vehículo tópico; uno o más ingredientes exfoliantes cutáneos seleccionados entre el grupo consistente en ácidos carboxílicos, cetoácidos, a-hidroxiácidos, 1-hidroxiácidos, retinoides, peróxidos y alcoholes orgánicos, estando dichos uno o más ingredientes exfoliantes cutáneos contenidos en una cantidad total de al menos aproximadamente un 12% en peso y siendo capaces de inducir irritación de la piel y de efectuar una exfoliación de la piel de dicho sujeto; y un agente que inhibe una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de 1 micromolar o menos, cuyo agente se presenta en una cantidad efectiva para producir efectos analgésicos, antiirritantes y/o antiinflamatorios cuando se aplica a la piel.

[0045] Aún otra realización es una composición antitusiva para administración peroral que contiene un agente que inhibe una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de 1 micromolar o menos y un soporte farmacéutico oralmente aceptable en forma de líquido de base acuosa o de sólido disolvible en la boca, seleccionado entre el grupo consistente en jarabe, elixir, suspensión, spray, pastilla para chupar, pastilla masticable, polvo y tableta masticable. Dichas composiciones antitusivas pueden incluir uno o más agentes adicionales para tratar síntomas de tos, de alergia o de asma seleccionados entre el grupo consistente en: antihistamínicos, inhibidores de la 5lipooxigenasa, inhibidores de los leucotrienos, inhibidores H3, agonistas de los receptores 1-adrenérgicos, derivados de xantina, agonistas de los receptores a-adrenérgicos, estabilizadores de las células cebadas, expectorantes, antagonistas de los receptores de taquiquinina NK1, NK2 y NK3 y agonistas GABAB.

[0046] Aún otra realización es un dispensador aerosol de dosis calibrada que contiene una composición farmacéutica en forma de aerosol para suministro pulmonar o nasal que contiene un agente que inhibe una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de 1 micromolar o menos. Por ejemplo, puede ser un inhalador de dosis calibrada, un inhalador de polvo seco o un nebulizador de chorro de aire.

[0047] Aún otra realización es un ungüento ocular o un colirio para administración ocular. Dichas composiciones oculares pueden ser útiles para el tratamiento o el alivio del dolor ocular, incluyendo el dolor resultante de una abrasión ocular o el dolor postquirúrgico.

[0048] En otro aspecto, la invención contempla que se puede usar cualquiera de los inhibidores de TRPA1 de la presente invención, incluyendo inhibidores que tienen una o más de las características aquí descritas, para inhibir una función del TRPA1, por ejemplo una corriente mediada por TRPA1 y/o un flujo de iones mediado por TRPA1. En algunas realizaciones, los compuestos pueden ser usados para inhibir una corriente mediada por TRPA1 in vitro, por ejemplo en células en cultivo. En algunas realizaciones, los compuestos pueden ser usados para inhibir una corriente mediada por TRPA1 in vivo. En ciertas realizaciones, los compuestos inhiben una corriente tanto hacia el interior como hacia el exterior mediada por TRPA1. En ciertas realizaciones, los compuestos inhiben un flujo de iones mediado por TRPA1 in vitro, por ejemplo en células en cultivo. En otras determinadas realizaciones, los compuestos inhiben un flujo de iones mediado por TRPA1 in vivo.

[0049] La invención contempla preparaciones y usos farmacéuticos de antagonistas de TRPM1 que tienen cualquier combinación de las características que anteceden o que se exponen más adelante, así como cualquier combinación de las características estructurales o funcionales de los antagonistas de TRPA1 aquí descritos. Se puede usar cualquiera de tales antagonistas o preparaciones en el tratamiento de cualquiera de las enfermedades o afecciones aquí descritas. Se puede usar cualquiera de tales antagonistas o preparaciones para inhibir una función del TRPA1, por ejemplo una corriente mediada por TRPA1 y/o un flujo de iones mediado por TRPA1.

Descripción detallada de los dibujos [0050]

Las Figuras 1a y 1b resumen experimentos que muestran la eficacia de un antagonista del TRPA1 en la disminución de un síntoma de dolor en el modelo del dolor por bradiquinina. La Figura 2 resume experimentos que muestran la eficacia de un antagonista del TRPA1 en la disminución del dolor en el modelo del dolor por formalina. Las Figuras 3a y 3b resumen experimentos que muestran la eficacia de un antagonista del TRPA1 en la disminución de la inflamación inducida por carragenina. La Figura 4 resume experimentos que muestran la eficacia de un antagonista del TRPA1 en la disminución del dolor en el modelo del dolor por CFA. Los resultados representados en la Figura 4 muestran adicionalmente que los efectos del antagonista del TRPA1 son específicos para la pata lesionada.

Descripción detallada de las tablas

[0051] La Tabla 1 proporciona ejemplos de compuestos de Fórmula I (ejemplos de referencia) con su correspondiente actividad in vitro valorada en experimentos de pinzamiento zonal de membranas. La tabla también incluye datos indicativos de la especificidad de diversos compuestos estudiados para la inhibición de la actividad del TRPA1 en comparación con la de otros canales iónicos. Se valoraron datos comparativos frente a otros canales iónicos en pinzamiento zonal de membranas. La Tabla 2 proporciona ejemplos de compuestos de Fórmula II con su correspondiente actividad in vitro valorada en experimentos de pinzamiento zonal de membranas. Los compuestos 211, 225, 230, 232-235, 253-255, 269-272, 274, 287, 340, 341, 356, 370, 373 y 381 son ejemplos de la invención. Los otros compuestos son ejemplos de referencia. La tabla también incluye datos indicativos de la especificidad de diversos compuestos estudiados para la inhibición de la actividad del TRPA1 en comparación con la de otros canales iónicos. Se valoraron datos comparativos frente a otros canales iónicos en pinzamiento zonal de membranas. Al menos dos de los compuestos indicados como inhibidores de una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de menos de 500 nM inhiben una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de menos de 200 nM. Al menos uno de los compuestos indicados como inhibidores de una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de menos de 500 nM inhibe una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de menos de 100 nM.

Descripción detallada de la invención

[0052] La homeostasis celular es el resultado de la sumación de sistemas reguladores implicados en, entre otros, la regulación del flujo de iones y del potencial de membrana. Se consigue la homeostasis celular, al menos en parte, por el movimiento de iones hacia el interior y hacia el exterior de las células a través de la membrana plasmática, y dentro de las células por el movimiento de iones a través de las membranas de los orgánulos intracelulares, incluyendo, por ejemplo, el retículo endoplásmico, el retículo sarcoplásmico, las mitocondrias y los orgánulos endocíticos, incluyendo los endosomas y los lisosomas.

[0053] El movimiento de iones a través de las membranas celulares es realizado por proteínas especializadas. Los canales TRP son una gran familia de canales catiónicos no selectivos que funcionan ayudando a regular el flujo de iones y el potencial de membrana. Los canales TRP se subdividen en 6 subfamilias, incluyendo la familia TRPA (ANKTM1). TRPA1 es un miembro de la clase TRPA de los canales TRP.

[0054] Los canales catiónicos no selectivos, tales como el TRPA1, modulan el flujo de iones calcio y sodio a través de las membranas celulares. El flujo hacia el interior de sodio y de calcio da lugar a una despolarización de la célula. Esto aumenta la probabilidad de que los canales iónicos regulados por voltaje alcancen el umbral requerido para la activación. Como resultado, la activación de los canales catiónicos no selectivos puede aumentar la excitabilidad eléctrica y aumentar la frecuencia de sucesos dependientes del voltaje. Como sucesos dependientes del voltaje, se incluyen, aunque sin limitación, los potenciales de acción neuronales, los potenciales de acción cardíacos, la contracción del músculo liso, la contracción del músculo cardíaco y la contracción del músculo esquelético.

[0055] El flujo de calcio hacia el interior provocado por la activación de canales catiónicos no selectivos, tales como el TRPA1, también altera la concentración de calcio libre intracelular. El calcio es una molécula de segundo mensajero ubicua dentro de la célula. Por lo tanto, las alteraciones en los niveles de calcio intracelular tienen profundos efectos sobre la transducción de señal y la expresión génica. Así, la activación de canales catiónicos no selectivos, tales como el TRPA1, puede dar lugar a cambios en la expresión génica y en el fenotipo celular. Los sucesos de expresión génica incluyen, aunque sin limitación, la producción de ARNm codificantes de receptores de la superficie celular, canales iónicos y kinasas. Estos cambios en la expresión génica pueden dar lugar a hiperexcitabilidad en esa célula. Los bloqueantes de TRPA1 tienen también, por lo tanto, el potencial de disminuir o prevenir el dolor y/o de disminuir la hiperactividad de la vejiga.

[0056] Las proteínas TRPA1 son canales operados por receptores que se expresan en las neuronas sensoriales (véase, v.g., Jordt et al., (2004), Nature 427: 260-265), incluyendo aquéllas cuyos cuerpos celulares residen en el ganglio de la raíz dorsal, el ganglio del trigémino y los ganglios nudosos (véanse Jordt et al. (2004), Nature 427: 260265; Nagata et al. (2005), J. Neurosci. 25(16): 4052-61). Además, se pueden encontrar bajos niveles de mensaje TRPA1 en algunos tipos de fibroblastos (véase Jaquemar et al. (1999), JBC 274(11): 7325-33). También se ha dicho que TRPA1 se expresa en la vejiga. La estimulación de una serie de receptores extracelulares, incluyendo, aunque sin limitación, los receptores acoplados a proteína G o las tirosina kinasas de receptores, es suficiente para activar el TRPA1.

[0057] Como proteínas TRPA1 adecuadas para uso según los métodos aquí aportados, se incluyen, por ejemplo: las humanas (secuencias de aminoácidos SEC Nº ID.: 1 y SEC Nº ID.: 3, codificadas por las secuencias nucleotídicas SEC Nº ID.: 2 y SEC Nº ID.: 4, respectivamente) y las murinas (secuencia de aminoácidos SEC Nº ID.: 5, codificada por la secuencia nucleotídica SEC Nº ID.: 6). Como proteínas TRPA1 particulares, también se incluyen proteínas codificadas por ADNc que se hibridarían con la secuencia de TRPA1 (véase la SEC Nº ID.: 2) bajo condiciones estrictas.

[0058] TRPA1 es el canal iónico que responde al aceite de mostaza. El principio activo del aceite de mostaza (isotiocianato de alilo) y el principio activo del ajo (alicina) son ambos capaces de activar el TRPA1. Otros estímulos pueden también ser capaces de activar el TRPA1. Se ha dicho que temperaturas frías severas de entre 4 y 15°C activan el TRPA1 (véase Story et al. (2003), Cell 112(6): 819-829). Sin embargo, este hallazgo ha resultado controvertido (véanse Jordt et al. (2004), Nature 427: 260-265; Nagata et al. (2005), J. Neurosci 25(16): 4052-61). Además, TRPA1 comparte muchas similitudes estructurales con canales TRP (es decir, TRPN1, TRPA1 de Drosophila) en animales inferiores que responden a estimulación mecánica.

[0059] TRPA1 se expresa, entre otros tejidos, en los epitelios de las células pilosas del oído interno, y la alteración de este canal en pez cebra y en ratón inhibe la transducción de las células pilosas. Por lo tanto, se ha propuesto a TRPA1 en la técnica como candidato para el canal de transducción de la audición de vertebrados mecanosensible (véase Corey et al. (2004), Nature 432(7018): 723-730). Si éste fuera el caso, esto sugeriría que los bloqueantes de TRPA1 podrían dar lugar a pérdida de audición, y por ello no tendrían ningún uso práctico como agentes terapéuticos. Sin embargo, la observación de que la respuesta de sobresalto no resulta substancialmente alterada en el ratón con TRPA1 eliminado nos ha llevado a concluir que los antagonistas de TRPA1 pueden no alterar la audición y serían, por lo tanto, candidatos adecuados a fármacos.

[0060] La modulación de la función de las proteínas TRPA1 proporciona un medio de modulación de la homeostasis del calcio, la homeostasis del sodio, la polarización de la membrana y/o los niveles de calcio intracelular, y los compuestos que pueden modular la función del TRPA1 son útiles en muchos aspectos, incluyendo, aunque sin limitación, el mantenimiento de la homeostasis del calcio, la modulación de los niveles de calcio intracelular, la modulación de la polarización de la membrana y el tratamiento o la prevención de enfermedades, trastornos o condiciones asociados a la homeostasis o dishomeostasis del calcio y/o del sodio.

[0061] En ciertos aspectos, la presente invención proporciona compuestos para uso en métodos de tratamiento o mejoría de las enfermedades y afecciones reivindicadas usando pequeñas moléculas que inhiben una corriente mediada por TRPA1 y/o un flujo de iones mediado por TRPA1 con una CI50 de menos de 10 micromolar. Como ejemplos de compuestos adecuados para uso en cualquiera de los métodos de la invención (v.g., para tratar cualquiera de las enfermedades o afecciones reivindicadas), se incluyen compuestos que tienen una o más de las características estructurales o funcionales aquí expuestas (v.g., estructura, especificidad, potencia, solubilidad, etc.). La presente invención contempla el uso de cualquier antagonista de TRPA1 que posea uno o más de los atributos funcionales o estructurales aquí descritos. Adicionalmente, la presente invención contempla el uso de antagonistas de TRPA1 de Fórmula II, así como el uso de cualquiera de los antagonistas inventivos particulares presentados en la Tabla 2. En toda esta solicitud, cuando se atribuyen atributos funcionales particulares a los antagonistas de TRPA1, se entiende que dichos atributos pueden caracterizar a inhibidores de TRPA1 estructuralmente relacionados con, o que difieren de, el compuesto de Fórmula II.

[0062] En ciertas realizaciones, un compuesto adecuado inhibe una corriente de TRPA1 hacia el interior y/o hacia el exterior con una CI50 de menos de 10 micromolar. En ciertas realizaciones, un compuesto adecuado adicional o alternativamente inhibe un flujo de iones mediado por TRPA1 con una CI50 de menos de 10 micromolar. En este caso, se calcula la CI50 mediante el análisis de pinzamiento zonal de membranas expuesto en el ejemplo 2.

[0063] En ciertas realizaciones, la invención proporciona un método de tratamiento o prevención de una afección que conlleva activación del TRPA1 o cuya gravedad puede verse reducida por una reducida actividad del TRPA1, consistente en administrar una cantidad efectiva de un compuesto de Fórmula II o de una sal del mismo, o de un solvato o hidrato del compuesto o de su sal:

donde

n es un número entero de 1 a 3 y

R2 representa un heteroarilo substituido, y

donde dicho compuesto inhibe el TRPA1 con una CI50 de 10 micromolar o menos.

[0064] En ciertas realizaciones, un compuesto de Fórmula II es 10 veces más selectivo para su actividad sobre TRPA1 que para su actividad inhibitoria de la quininogenasa.

[0065] Como ejemplos de compuestos de fórmula II, se incluyen, aunque sin limitación, los compuestos 211, 225, 230, 232-235, 253-255, 269-272, 274, 287, 340, 341, 356, 370, 373 y 381, tal como se muestran en la Tabla 2 junto con sus datos in vitro.

[0066] Un aspecto de la presente invención proporciona una preparación farmacéutica adecuada para uso en un paciente humano o para uso veterinario, consistente en una cantidad efectiva de cualquiera de los compuestos mostrados anteriormente (v.g., un compuesto de Fórmula II o una sal del mismo, o un solvato o hidrato del compuesto o de su sal) y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. En ciertas realizaciones, las preparaciones farmacéuticas pueden estar destinadas a su uso en el tratamiento o la prevención de una afección reivindicada que conlleve activación del TRPA1 o cuya gravedad pueda verse reducida por una reducida actividad del TRPA1. En ciertas realizaciones, las preparaciones farmacéuticas tienen una actividad pirogénica lo suficientemente baja como para resultar adecuadas para uso en un paciente humano o para uso veterinario. La preparación farmacéutica contiene una cantidad efectiva de cualquiera de los compuestos antes mostrados, donde los compuestos inhiben el TRPA1 con una CI50 de 10 micromolar o menos. En ciertas realizaciones, la preparación farmacéutica contiene un compuesto que inhibe el TRPA1 con una CI50 de 1 micromolar o menos, o incluso con una CI50 de 500 nM o menos, 250 nM o menos, 200 nM o menos o incluso 100 nM o menos . [0067] En ciertas realizaciones, el inhibidor del TRPA1 para uso en los métodos o en las preparaciones farmacéuticas de la presente invención es seleccionado entre los compuestos inventivos mostrados en la Tabla 2. En ciertas realizaciones, la presente invención contempla cualquier compuesto mostrado eventualmente substituido para uso en cualquiera de los métodos o preparaciones farmacéuticas de la presente invención.

[0068] Un aspecto de la presente invención proporciona el uso de un inhibidor de TRPA1 en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir una afección reivindicada que conlleve activación del TRPA1 o cuya gravedad pueda verse reducida por una reducida actividad del TRPA1, donde el inhibidor del TRPA1 está representado por cualquiera de los compuestos mostrados anteriormente (v.g., un compuesto de Fórmula II o una sal del mismo, o un solvato o hidrato del compuesto o de su sal). El compuesto inhibe una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de menos de 10 micromolar.

[0069] En ciertas realizaciones de la anterior fórmula, los substituyentes substituidos pueden estar substituidos con uno o más de los siguientes: alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilalquilo, heterociclilalquilo, aralquilo o heteroaralquilo, cualquiera de los cuales puede a su vez estar aún más substituido, o halógeno, hidroxilo, carbonilo (v.g., éster, carboxilo o formilo), tiocarbonilo (v.g., tioéster, tiocarboxilato o tioformiato), cetona, aldehído, amino, acilamino, amido, amidino, ciano, nitro, azido, sulfonilo, sulfóxido, sulfato, sulfonato, sulfamoílo, sulfonamido y fosforilo.

[0070] En la Tabla 2 se facilitan ejemplos de compuestos de la invención. La Tabla 1 resume los datos recogidos para los diversos compuestos de referencia estudiados. La Tabla 1 proporciona los datos de la CI50 para la inhibición de una corriente mediada por TRPA1. La Tabla 1 también proporciona datos de selectividad, cuando se dispone actualmente de ellos, que indican el grado en el que ciertos compuestos también inhiben otros canales iónicos. Adicionalmente, obsérvese que los compuestos representados en la Tabla 1 tienen diversos grados de selectividad para la inhibición de TRPA1. La Tabla 2 proporciona los datos de la CI50 para la inhibición de una corriente mediada por TRPA1. La Tabla 2 también proporciona datos de selectividad, cuando se dispone actualmente de ellos, que indican el grado en el que ciertos compuestos también inhiben otros canales iónicos. Obsérvese que al menos dos de los compuestos representados en la Tabla 2 como inhibidores de una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de 500 nM o menos inhiben una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de 200 nM o menos. Además, al menos un compuesto representado en la Tabla 2 como inhibidor de una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 inferior a 500 nM o menos inhibe una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 de 100 nM o menos. Adicionalmente, obsérvese que los compuestos representados en la Tabla 2 tienen diversos grados de selectividad para la inhibición del TRPA1.

[0071] En ciertas realizaciones, la invención contempla que se puede administrar cualquiera de los compuestos de la invención mostrados en la Tabla 2 para tratar cualquiera de las enfermedades o afecciones reivindicadas. En algunas realizaciones, se formula el compuesto como una preparación farmacéutica antes de su administración. En ciertas realizaciones, el inhibidor del TRPA1 para uso en los métodos o en las preparaciones farmacéuticas de la presente invención es seleccionado entre los compuestos de la invención mostrados en la Tabla 2. En ciertas realizaciones, la presente invención contempla cualquier compuesto de la invención mostrado en la Tabla 2 para uso en cualquiera de los métodos o de las preparaciones farmacéuticas de la presente invención.

[0072] Los compuestos y fórmulas estructurales particulares aquí expuestos son meros ejemplos. Se contempla de forma similar el uso de inhibidores de TRPA1 de pequeña molécula que tienen una más de las características funcionales o estructurales aquí descritas.

[0073] Se pueden usar compuestos de cualquiera de las estructuras anteriores en la fabricación de medicamentos para el tratamiento de cualquiera de las enfermedades aquí expuestas.

[0074] Se pueden usar compuestos de cualquiera de las estructuras anteriores para inhibir una función de un canal TRPA1 in vitro o in vivo.

[0075] En ciertas realizaciones, se pueden usar compuestos que incluyan toda o una porción funcional de cualquiera de las estructuras anteriores en la fabricación de medicamentos para el tratamiento de cualquiera de las enfermedades reivindicadas. Adicional o alternativamente, se pueden usar dichos compuestos en métodos in vitro o in vivo de inhibición de una función del TRPA1, tal como una corriente mediada por TRPA1.

[0076] En ciertas realizaciones, el antagonista de TRPA1 para uso en los métodos de la presente invención es una pequeña molécula que no es un aminoglicósido.

[0077] En realizaciones particulares, se selecciona un antagonista de TRPA1 de pequeña molécula para su uso por ser más selectivo para una isoforma de TRP que para otras, v.g., 10 veces, y más preferiblemente al menos 20, 40, 50, 60, 70, 80 o al menos 100, o incluso 1.000, veces más selectivo para TRPA1 que para uno o más de TRPC6, TRPV5, TRPV6, TRPM8, TRPV1, TRPV2, TRPV4 y/o TRPV3. En otras realizaciones, la diferencia es menor, v.g., inhibe más potentemente a TRPA1 que a TRPM8, TRPV1, TRPV2, TRPV3 y/o TRPV4, preferiblemente al menos dos veces, tres veces, cinco veces o incluso diez veces más potentemente. Se pueden hacer dichas comparaciones, por ejemplo, comparando los valores de la CI50.

[0078] En realizaciones particulares, se selecciona un antagonista de TRPA1 de pequeña molécula para su uso por ser más selectivo para un TRPA1 que para otros canales iónicos no TRP, v.g., 10 veces, y más preferiblemente al menos 20, 40, 50, 60, 70, 80 o al menos 100, o incluso 1.000, veces más selectivo para TRPA1 que para uno o más de NaV1.2, Cav1.2, Cav3.1, HERG y/o uniporter mitocondrial. En otras realizaciones, la diferencia es menor, v.g., inhibe más potentemente a TRPA1 que a NaV1.2, Cav1.2, Cav3.1, HERG y/o el uniporter mitocondrial, preferiblemente al menos dos veces, tres veces, cinco veces o incluso diez veces más potentemente. Se pueden hacer dichas comparaciones, por ejemplo, comparando los valores de la CI50.

[0079] En ciertas realizaciones, se selecciona un compuesto que es un antagonista de TRPA1 para antagonizar selectivamente al TRPA1 con respecto a otros canales iónicos, v.g., el compuesto modula la actividad del TRPA1 al menos un orden de magnitud más potentemente que como modula la actividad de uno o más de NaV1.2, Cav1.2, Cav3.1, HERG y/o uniporter mitocondrial, preferiblemente al menos dos órdenes de magnitud más potentemente, incluso más preferiblemente al menos tres órdenes de magnitud más potentemente. En ciertas realizaciones, el compuesto modula la actividad del TRPA1 al menos 1,5 órdenes de magnitud más potentemente que la actividad de uno o más de NaV1.2, Cav1.2, Cav3.1, HERG o uniporter mitocondrial. Se pueden hacer dichas comparaciones, por ejemplo, comparando los valores de la CI50.

[0080] De forma similar, en realizaciones particulares, se selecciona una pequeña molécula para su uso por carecer de actividad significativa frente a una o más dianas distintas del TRPA1. Por ejemplo, el compuesto puede tener una CI50 por encima de 500 nM, por encima de 1 !M. o incluso por encima de 10 !M o 100 !M para la inhibición de uno

o más de TRPC6, TRPV5, TRPV6, Cav1.2, Cav3.1, NaV1.2, HERG y el uniporter mitocondrial.

[0081] En realizaciones particulares, se selecciona la pequeña molécula para su uso por ser más selectiva para una isoforma de TRP que para otras, v.g., 10 veces, y más preferiblemente al menos 100 o incluso 1.000 veces, más selectiva para TRPA1 que para uno o más de TRPC6, TRPV5, TRPV6, TRPM8, TRPV1, HERG, NaV1.2, uniporter mitocondrial, TRPV3 y/o TRPV4. En otras realizaciones, la diferencia es menor, v.g., inhibe más potentemente a TRPA1 que a TRPM8, TRPV1 y/o TRPV4, preferiblemente al menos dos veces, tres veces, cinco veces o incluso diez veces más potentemente. Se pueden hacer dichas comparaciones, por ejemplo, comparando los valores de la CI50.

[0082] En cierta realización, se selecciona una pequeña molécula por antagonizar la función tanto de TRPA1 como de TRPM8, TRPV1 y/o TRPV3. Aunque dichos compuestos antagonizan selectivamente la función de ambos canales iónicos, los valores de la CI50 no tienen por qué ser idénticos.

[0083] En ciertas realizaciones de cualquiera de los anteriores, se puede seleccionar la pequeña molécula por ser capaz de inhibir la activación mediada por receptores (o mediada por frío/estrés) de TRPA1. En ciertas realizaciones, el antagonista de TRPA1 inhibe la activación mediada por receptores de TRPA1 y la activación inducida por el aceite de mostaza de TRPA1. En otras determinadas realizaciones, el antagonista de TRPA1 inhibe la activación operada por receptores de TRPA1, pero no inhibe la activación inducida por el aceite de mostaza de TRPA1. En otras determinadas realizaciones, el antagonista de TRPA1 inhibe la activación inducida por el aceite de mostaza de TRPA1, pero no inhibe la activación mediada por el frío de TRPA1.

[0084] En ciertas realizaciones de cualquiera de los anteriores, se puede seleccionar la pequeña molécula por inhibir una función del TRPA1 con una CI50 inferior o igual a 1 !M, o incluso inferior o igual a 700, 600, 500, 400, 300, 250, 200 ó 100 nM. En otras realizaciones, se selecciona la pequeña molécula por inhibir una función del TRPA1 con una CI50 inferior o igual a 75 nM, inferior o igual a 50 nM o incluso inferior o igual a 25, 10, 5 ó 1 nM. En otras determinadas realizaciones de cualquiera de los anteriores, la pequeña molécula inhibe la función del TRPA1 con una CI50 inferior o igual a 10 micromolar o inferior o igual a 5 micromolar o inferior o igual a 2,5 micromolar o inferior

o igual a 1,5 micromolar.

[0085] En ciertas realizaciones de cualquiera de los anteriores, se puede seleccionar el compuesto en base a la velocidad de inhibición de una función del TRPA1. En una realización, el compuesto inhibe una función del TRPA1 en menos de 5 minutos, preferiblemente menos de 4, 3 ó 2 minutos. En otra realización, el compuesto inhibe una función del TRPA1 en menos de aproximadamente 1 minuto. En aún otra realización, el compuesto inhibe una función del TRPA1 en menos de aproximadamente 30 segundos.

[0086] En cualquiera de las realizaciones anteriores, el antagonista de pequeña molécula de una función del TRPA1 puede inhibir la corriente hacia el exterior, la corriente hacia el interior o cualquier combinación de una o más de estas corrientes. Los compuestos que inhiben más de una de las corrientes anteriores pueden hacerlo con los mismos o con diferentes valores de CI50. En cualquiera de los anteriores, se puede valorar la capacidad de un compuesto para inhibir una corriente particular in vitro o in vivo. Los compuestos que inhiben cualquiera de las corrientes anteriores en un ensayo in vitro o in vivo se caracterizan como compuestos que inhiben una función del TRPA1. Dicho de otra forma, un ejemplo de función del TRPA1 que puede ser inhibida

[0087] por los presentes compuestos es una corriente mediada por TRPA1. Adicional o alternativamente, otro ejemplo de función del TRPA1 que puede ser inhibida por los presentes compuestos es un flujo de iones mediado por TRPA1.

[0088] En cualquiera de las realizaciones anteriores o de las que se exponen más adelante, la pequeña molécula se caracteriza por algún nivel de actividad frente a otros canales iónicos (v.g., ciertos compuestos son selectivos para la inhibición del TRPA1 y otros compuestos exhiben un nivel de reactividad cruzada frente a uno o más de otros canales iónicos). Cuando una pequeña molécula se caracteriza por su actividad frente a otro canal iónico, se define la inhibición de una función o actividad del otro canal iónico de manera análoga a la forma en que se define una función de un canal TRPA1. Así, inhibición de la función de otro canal iónico significa, por ejemplo, inhibición del flujo de iones mediado por ese otro canal iónico o inhibición de la corriente mediada por ese otro canal iónico.

[0089] En ciertas realizaciones de cualquiera de los anteriores, inhibición de una función del TRPA1 significa que una función, por ejemplo una corriente mediada por TRPA1, se reduce en más de un 50% en presencia de una cantidad efectiva de un compuesto en comparación con la ausencia del compuesto o en comparación con una cantidad no efectiva de un compuesto. En otras determinadas realizaciones, inhibición de una función del TRPA1 significa que una función, por ejemplo una corriente mediada por TRPA1 o un flujo de iones mediado por TRPA1, se reduce en al menos un 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85% o 90% en presencia de una cantidad efectiva de un compuesto en comparación con la ausencia del compuesto. En aún otras realizaciones, inhibición de una función del TRPA1 significa que una función, por ejemplo una corriente mediada por TRPA1, se reduce en al menos un 92%, 95%, 97%, 98%, 99% o 100% en presencia de una cantidad efectiva de un compuesto en comparación con la ausencia del compuesto.

[0090] En cualquiera de las reivindicaciones anteriores, se miden los valores de la CI50 in vitro usando el análisis de pinzamiento zonal de membranas descrito en el Ejemplo 2. Alternativamente, también se pueden calcular y usar las estimaciones del % de inhibición de la corriente o del flujo de iones para valorar la eficacia de un compuesto como inhibidor.

[0091] Sin estar condicionados por la teoría, un compuesto puede inhibir una función del TRPA1 uniéndose covalente o no covalentemente a una porción del TRPA1. Alternativamente, un compuesto puede inhibir una función del TRPA1 indirectamente, por ejemplo asociándose con un cofactor proteico o no proteico necesario para una función del TRPA1. Un experto en la técnica apreciará fácilmente que un compuesto inhibitorio puede asociarse reversible o irreversiblemente con el TRPA1 o un cofactor del mismo. Los compuestos que se asocian reversiblemente con el TRPA1 o un cofactor del mismo pueden continuar inhibiendo una función del TRPA1 incluso después de su disociación.

[0092] En ciertas realizaciones de cualquiera de los anteriores, el compuesto que inhibe una función del TRPA1 es una pequeña molécula orgánica o una pequeña molécula inorgánica. Como ejemplos de pequeñas moléculas, se incluyen, aunque sin limitación, pequeñas moléculas que se unen a un canal TRPA1 e inhiben una o más funciones de un canal TRPA1.

[0093] En ciertas realizaciones de cualquiera de los anteriores, el inhibidor del TRPA1 es utilizado para tratar o mejorar el dolor. Como ejemplos de clases de dolor que se pueden tratar usando un inhibidor del TRPA1, se incluyen, aunque sin limitación, el dolor nociceptivo, el dolor inflamatorio y el dolor neuropático. El dolor que puede ser tratado con un inhibidor del TRPA1 puede ser crónico o agudo. A través de la memoria descriptiva, se discuten con detalle una variedad de afecciones y enfermedades caracterizadas, al menos en parte, por dolor. La invención contempla que se puede tratar el dolor asociado a cualquiera de estas enfermedades o afecciones usando cualquiera de los inhibidores del TRPA1 aquí descritos. Se puede formular el inhibidor en una preparación farmacéutica apropiada para la vía pretendida de administración.

[0094] En ciertas realizaciones, el inhibidor del TRPA1 es no narcótico y tiene pocos o ningún efecto colateral narcótico. En otras determinadas realizaciones, el inhibidor del TRPA1 puede ser usado para tratar o mejorar el dolor con menos efectos colaterales que los aliviadores del dolor narcóticos. Como ejemplos de efectos colaterales que pueden estar substancialmente ausentes a dosificaciones efectivas de los inhibidores del TRPA 1, se incluyen uno o más de los siguientes: exoftalmos, catalepsia, alteración de la motilidad intestinal e inhibición de la sensación en áreas no lesionadas del cuerpo.

[0095] En ciertas realizaciones, el inhibidor del TRPA1 puede ser usado para tratar la incontinencia. En ciertas realizaciones, el inhibidor del TRPA1 es usado para reducir la hiperactividad de la vejiga disminuyendo la actividad de las neuronas que inervan la vejiga. En ciertas realizaciones, la incontinencia va acompañada de dolor. Por ejemplo, la incontinencia que aparece como consecuencia de cistitis de la vejiga o la incontinencia que aparece como consecuencia de una lesión pueden ir acompañadas de dolor. Cuando la incontinencia va acompañada de dolor, se puede administrar un inhibidor del TRPA1 tanto para tratar la incontinencia como para reducir el dolor.

[0096] Los inhibidores del TRPA1 en cuestión pueden ser usados solos o en combinación con otros agentes farmacéuticamente activos. Como ejemplos de dichos otros agentes farmacéuticamente activos, se incluyen, aunque sin limitación, agentes antiinflamatorios (v.g., AINE, antagonistas de los receptores de bradiquinina, hormonas y autacoides, tales como corticosteroides), agentes antiacné (v.g., retinoides), agentes antiarrugas, agentes anticicatrizantes, agentes antiincontinencia (tales como antagonistas de los receptores M1), antieméticos (tales como antagonistas de NK1), agentes antipsoriásicos, antácidos, agentes antiproliferativos (v.g., agentes antieczema, anticancerosos), agentes antifúngicos, agentes antivíricos, agentes antisépticos (v.g., antibacterianos), anestésicos locales, agentes antimigraña, agentes queratolíticos, estimulantes del crecimiento del pelo, inhibidores del crecimiento del pelo y otros agentes usados para el tratamiento de enfermedades o afecciones cutáneas. Ciertos principios activos pertenecen a más de una categoría.

[0097] Para cualquiera de los anteriores, se puede formular un inhibidor del TRPA1 para administración por una vía apropiada para la enfermedad o lesión que se esté tratando. Por ejemplo, se puede formular el inhibidor del TRPA1 para administración oral, transdérmica, tópica, intraperitoneal, intravenosa, intravascular, intratecal, intrapericárdica, intramiocárdica, subcutánea, rectal, vaginal o uretral. Además, se puede formular el inhibidor del TRPA1 para administración mediante un dispositivo. Como ejemplos de dispositivos, se incluyen, aunque sin limitación, un catéter, un alambre, un stent u otro dispositivo intraluminal. Como otros ejemplos de dispositivos de administración, se incluyen también un parche, un vendaje, un protector bucal o un aparato dental.

[0098] La invención contempla composiciones farmacéuticas de cualquiera de los inhibidores del TRPA1 anteriores. Se formulan composiciones farmacéuticas ejemplares en un soporte farmacéuticamente aceptable.

[0099] Los inhibidores TRPA1 en cuestión pueden ser usados solos o como parte de un régimen terapéutico combinados con otros tratamientos, terapias o intervenciones apropiadas para la enfermedad, afección, lesión o trastorno particular que se esté tratando. Cuando se usan como parte de un régimen terapéutico, la invención contempla el uso de inhibidores del TRPA1 en combinación con una o más de las siguientes modalidades de tratamiento: administración de agentes farmacéuticos que no son inhibidores del TRPA1, quimioterapia, radioterapia, terapia homeopática, dieta, manejo del estrés y cirugía.

[0100] Cuando se administran solos o como parte de un régimen terapéutico, en ciertas realizaciones, la invención contempla los inhibidores del TRPA1 para tratar una enfermedad, lesión, trastorno o afección primaria particular. Adicional o alternativamente, la invención contempla los inhibidores del TRPA1 para tratar el dolor asociado a una enfermedad, lesión, trastorno o afección. En aún otras realizaciones, la invención contempla los inhibidores del TRPA1 para tratar síntomas secundarios a la enfermedad, lesión, trastorno o afección primaria.

[0101] La invención contempla antagonistas del TRPA1 y preparaciones farmacéuticas de los mismos que tienen cualquier combinación de las características anteriores o de las siguientes, así como cualquier combinación de las características estructurales o funcionales de los antagonistas del TRPA1 aquí descritos. Se puede usar cualquiera de dichos antagonistas o preparaciones en el tratamiento de cualquiera de las enfermedades o afecciones reivindicadas. Adicionalmente, la invención contempla el uso de cualquiera de dichos antagonistas o preparaciones para inhibir una corriente mediada por TRPA1 in vitro. También se contemplan combinaciones de cualquiera de los aspectos y reivindicaciones anteriores o siguientes de la invención. Por ejemplo, la invención contempla que se pueden formular antagonistas del TRPA1 que tengan cualquiera de las potencias y especificidades particulares aquí señaladas para la vía apropiada de administración y que se pueden usar en el tratamiento de cualquiera de las afecciones o enfermedades reivindicadas. En ciertas realizaciones, la invención contempla preparaciones y usos farmacéuticos de cualquiera de los antagonistas del TRPA1 de la invención presentados en la Tabla 2.

[0102] En ciertas realizaciones de cualquiera los anteriores, los compuestos antagonistas del TRPA1 de la presente invención tienen una o más de cualquiera de las propiedades anteriores (v.g., CI50, especificidad, selectividad, actividad, formulación, etc.). Se contemplan específicamente compuestos y usos de compuestos antagonistas que tienen cualquier combinación de las propiedades anteriores.

Definiciones

[0103] Los términos "antagonista" e "inhibidor" son usados indistintamente para referirse a un agente que reduce o suprime una actividad biológica, tal como reprimir una actividad de un canal iónico, tal como el TRPA1. Los inhibidores del TRPA1 incluyen inhibidores que tienen cualquier combinación de las propiedades estructurales y/o funcionales aquí expuestas.

[0104] Una "cantidad efectiva" de, v.g., un antagonista del TRPA1, con respecto a los métodos de inhibición o de tratamiento en cuestión, se refiere a una cantidad del antagonista en una preparación que, cuando se aplica como parte de un régimen de dosificación deseado, provoca un resultado clínico o funcional deseado. Sin estar condicionados por la teoría, una cantidad efectiva de un antagonista del TRPA1 de la presente invención incluye una cantidad de un antagonista del TRPA1 efectiva para reducir una o más funciones in vitro o in vivo de un canal TRPA1. Como ejemplos de funciones, se incluyen, aunque sin limitación, la polarización de membrana (v.g., un antagonista puede promover hiperpolarización de una célula), el flujo iónico, la concentración de iones en una célula, la corriente hacia el exterior y la corriente hacia el interior. Como compuestos que antagonizan una función del TRPA1, se incluyen compuestos que antagonizan una actividad funcional in vitro o in vivo del TRPA1. Cuando una actividad funcional particular es sólo fácilmente observable en un ensayo in vitro, la capacidad de un compuesto para inhibir la función del TRPA1 en ese ensayo in vitro sirve como representación razonable de la actividad de ese compuesto. En ciertas realizaciones, una cantidad efectiva es una cantidad suficiente para inhibir una corriente mediada por TRPA1 y/o una cantidad suficiente para inhibir un flujo de iones mediado por TRPA1.

[0105] Los inhibidores del TRPA1 de la presente invención pueden caracterizarse según su actividad, o falta de actividad, frente a uno o más de otros canales iónicos. Cuando se hace referencia a otros canales iónicos, se define la inhibición de una función de dichos otros canales iónicos de forma similar. Por ejemplo, inhibición de un canal iónico o una actividad de un canal iónico significa que el antagonista inhibe una o más actividades funcionales del otro canal iónico. Dichas funciones incluyen la corriente mediada por el canal iónico particular, el flujo de iones o la polarización de membrana.

[0106] El término "ácido nucleico" se refiere a una forma polimérica de nucleótidos, ya sean ribonucleótidos o desoxirribonucleótidos o una forma modificada de cualquiera de los dos tipos de nucleótidos. También habría que entender que los términos incluyen, como equivalentes, análogos de ARN o de ADN producidos a partir de análogos de nucleótidos, y, según sea de aplicación para la realización que se esté describiendo, polinucleótidos de una sola hebra (tales como sentido o antisentido) y de doble hebra.

[0107] El término "prevenir" está reconocido en la técnica y, cuando se usa en relación a una afección, tal como una recidiva local (v.g., dolor), una enfermedad como el cáncer, un complejo de síndromes, tal como la insuficiencia cardíaca, o cualquier otra afección médica, es bien entendido en la técnica, e incluye la administración de una composición que reduce la frecuencia, o que retrasa la aparición, de los síntomas de una afección médica en un sujeto con respecto a un sujeto que no recibe la composición. Así, la prevención del cáncer incluye, por ejemplo, la reducción del número de crecimientos cancerosos detectables en una población de pacientes que reciben un tratamiento profiláctico en relación a una población control no tratada, y/o el retraso en la aparición de crecimientos cancerosos detectables en una población tratada frente a una población control no tratada, v.g., en una cantidad estadística y/o clínicamente significativa. La prevención de una infección incluye, por ejemplo, la reducción del número de diagnósticos de la infección en una población tratada frente a una población control no tratada y/o el retraso en la aparición de los síntomas de la infección en una población tratada frente a una población control no tratada. La prevención del dolor incluye, por ejemplo, la reducción de la magnitud de, o alternativamente el retraso de, las sensaciones de dolor experimentadas por los sujetos en una población tratada frente a una población control no tratada.

[0108] El término "polipéptido" y los términos "proteína" y "péptido", que se utilizan aquí indistintamente, se refieren a un polímero de aminoácidos. Como ejemplos de polipéptidos, se incluyen productos génicos, proteínas naturales, homólogos, ortólogos, parálogos, fragmentos y otros equivalentes, variantes y análogos de los anteriores.

[0109] El término "profármaco" pretende cubrir compuestos que, en condiciones fisiológicas, se convierten en los agentes terapéuticamente activos de la presente invención. Un método común para producir un profármaco es incluir restos seleccionados que se hidrolizan en condiciones fisiológicas para dar la molécula deseada. En otros casos, el profármaco se convierte mediante una actividad enzimática del animal hospedador.

[0110] El término "identidad de secuencia" significa que las secuencias son idénticas (es decir, sobre una base de nucleótido a nucleótido para los ácidos nucleicos o una base de aminoácido a aminoácido para los polipéptidos) en una ventana de comparación. El término "porcentaje de identidad de secuencia" se calcula comparando dos secuencias óptimamente alineadas en la ventana de comparación y multiplicando el resultado por 100, para obtener el porcentaje de identidad de secuencia. Los métodos para calcular la identidad de secuencia son conocidos para los expertos en la técnica y se describen con mayor detalle a continuación.

[0111] El término "pequeña molécula" se refiere a un compuesto que tiene un peso molecular inferior a aproximadamente 2.500 uma, preferiblemente inferior a aproximadamente 2.000 uma, incluso más preferiblemente inferior a aproximadamente 1.500 uma, aún más preferiblemente inferior a aproximadamente 1.000 uma, o lo más preferiblemente inferior a aproximadamente 750 uma.

[0112] Los términos "condiciones estrictas" o "condiciones de hibridación estrictas" se refieren a condiciones que promueven la hibridación específica entre dos hebras polinucleotídicas complementarias para formar un dúplex. Las condiciones estrictas pueden ser seleccionadas de manera que estén aproximadamente 5°C por debajo del punto de fusión térmica (Tf) para un dúplex polinucleotídico dado a una fuerza iónica y un pH definidos. La longitud de las hebras polinucleotídicas complementarias y su contenido en GC determinarán la Tf del dúplex, y por lo tanto las condiciones de hibridación necesarias para obtener una especificidad de hibridación deseada. La Tf es la temperatura (bajo fuerza iónica y pH definidos) a la cual se hibrida un 50% de una secuencia polinucleotídica con una hebra complementaria perfectamente emparejada. En ciertos casos, puede ser deseable aumentar la estrictez de las condiciones de hibridación de manera que sean aproximadamente iguales a la Tf para un dúplex particular. En ciertos casos, las condiciones de hibridación estrictas incluyen una etapa de lavado con SSC 0,2X a 65°C.

[0113] Los términos "TRPA1", "proteína TRPA1" y "canal TRPA1" son usados indistintamente en toda la solicitud. Estos términos se refieren a un canal iónico (v.g., un polipéptido) que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC Nº ID.: 1, la SEC Nº ID.: 3 o la SEC Nº ID.: 5, o un polipéptido equivalente, o un fragmento bioactivo funcional del mismo. En ciertos casos, el término se refiere a un polipéptido que comprende, consiste en, o consiste esencialmente en, la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC Nº ID.: 1, la SEC Nº ID.:3 o la SEC Nº ID.: 5. TRPA1 incluye polipéptidos que conservan una función del TRPA1 y comprenden (i) toda o una porción de la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC Nº ID.: 1, la SEC Nº ID.:3 o la SEC Nº ID.: 5; (ii) la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC Nº ID.: 1, la SEC Nº ID.:3 o la SEC Nº ID.: 5 con 1 a aproximadamente 2, 3, 5, 7, 10, 15, 20, 30, 50, 75 o más substituciones de aminoácidos conservadoras; (iii) una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos un 70%, 75%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% a la SEC Nº ID.: 1, la SEC Nº ID.:3 o la SEC Nº ID.: 5; y (iv) fragmentos funcionales de las mismas. Los polipéptidos de la descripción también incluyen homólogos, v.g., ortólogos y parálogos, de la SEC Nº ID.: 1, la SEC Nº ID.: 3 o la SEC Nº ID.: 5.

[0114] El término "TRPA1" se refiere además a un ácido nucleico codificante de un polipéptido de la invención, v.g., un ácido nucleico que comprende una secuencia consistente en, o consistente esencialmente en, la secuencia polinucleotídica expuesta en la SEC Nº ID.: 2, la SEC Nº ID.: 4 o la SEC Nº ID.: 6. Un ácido nucleico de la descripción puede comprender toda, o una porción, de: la secuencia nucleotídica de la SEC Nº ID.: 2, la SEC Nº ID.: 4 o la SEC Nº ID.: 6; una secuencia nucleotídica que es idéntica en al menos un 70%, 75%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% a la SEC Nº ID.: 2, la SEC Nº ID.: 4 o la SEC Nº ID.: 6; una secuencia nucleotídica que se hibrida en condiciones estrictas con la SEC Nº ID.: 2, la SEC Nº ID.: 4 o la SEC Nº ID.: 6; secuencias nucleotídicas codificantes de polipéptidos que son funcionalmente equivalentes a los polipéptidos de la descripción; secuencias nucleotídicas codificantes de polipéptidos que son homólogos o idénticos en al menos aproximadamente un 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% a una secuencia de aminoácidos de la SEC Nº ID.: 1, la SEC Nº ID.:3 o la SEC Nº ID.: 5; secuencias nucleotídicas codificantes de polipéptidos que tienen una actividad de un polipéptido de la descripción y que tienen una homología o identidad de al menos aproximadamente un 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% o más con la SEC Nº ID.: 1, la SEC Nº ID.:3 o la SEC Nº ID.: 5; secuencias nucleotídicas que difieren en 1 a aproximadamente 2, 3, 5, 7, 10, 15, 20, 30, 50, 75 o más substituciones, adiciones o deleciones de nucleótidos, tales como variantes alélicas, de la SEC Nº ID.: 2, la SEC Nº ID.: 4 o la SEC Nº ID.: 6; ácidos nucleicos derivados de, y evolutivamente relacionados con, la SEC Nº ID.: 2, la SEC Nº ID.: 4 o la SEC Nº ID.: 6; y complementos y secuencias nucleotídicas resultantes de la degeneración del código genético para todas las anteriores y otros ácidos nucleicos de la invención. Los ácidos nucleicos de la descripción también incluyen homólogos, v.g., ortólogos y parálogos, de la SEC Nº ID.: 2, la SEC Nº ID.: 4 o la SEC Nº ID.: 6, y también variantes de la SEC Nº ID.: 2, la SEC Nº ID.: 4 o la SEC Nº ID.: 6 que han sufrido una optimización de codones para expresión en un organismo particular (v.g., célula huésped). Cuando no se exprese explícitamente, un experto en la técnica podrá valorar fácilmente si TRPA1 se refiere a un ácido nucleico o a una proteína.

[0115] El término "metabolito oxidativo" pretende cubrir compuestos que se producen por metabolismo del compuesto parental en condiciones fisiológicas normales. Específicamente, un metabolito oxidativo se forma por oxidación del compuesto parental durante el metabolismo. Por ejemplo, un grupo tioéter puede oxidarse para dar el correspondiente sulfóxido o sulfona.

[0116] El término "solvato", tal como se usa aquí, se refiere a un compuesto formado por solvatación (v.g., un compuesto formado por la combinación de moléculas de solvente con moléculas o iones del soluto).

[0117] El término "hidrato", tal como se usa aquí, se refiere a un compuesto formado por la unión de agua con el compuesto parental.

[0118] El término "tratar" incluye tratamientos profilácticos y/o terapéuticos. El término tratamiento "profiláctico o terapéutico" está reconocido en la técnica e incluye la administración al hospedador de una o más de las composiciones en cuestión. Si se administra antes de la manifestación clínica de la afección no deseada (v.g., enfermedad u otro estado no deseado del animal hospedador), entonces el tratamiento es profiláctico (es decir, protege al hospedador frente al desarrollo de la afección no deseada), mientras que, si se administra tras la manifestación de la afección no deseada, el tratamiento es terapéutico (es decir, está destinado a disminuir, mejorar

o estabilizar la afección no deseada existente o sus efectos colaterales).

[0119] Los términos "compuesto" y "agente" son usados indistintamente para referirse a los inhibidores/antagonistas de la invención. En ciertas realizaciones, los compuestos son pequeñas moléculas orgánicas o inorgánicas, v.g., con pesos moleculares inferiores a 7.500 uma, preferiblemente inferiores a 5.000 uma e incluso más preferiblemente inferiores a 2.000, 1.500, 1.000 ó 500 amu. Una clase de pequeñas moléculas orgánicas o inorgánicas son no peptidílicas, v.g., que contienen 2, 1 o ninguna unión peptídica y/o sacarídica. En otras determinadas realizaciones, los compuestos son agentes peptidílicos, tales como polipéptidos o antibióticos. En otras determinadas realizaciones, los compuestos son proteínas, por ejemplo anticuerpos o aptámeros. Dichos compuestos pueden unirse a, e inhibir una función de, el TRPA1. En otras determinadas realizaciones, los compuestos son ácidos nucleicos, por ejemplo oligonucleótidos antisentido TRPA1 o construcciones de ARNi TRPA1. Dichos compuestos pueden inhibir la expresión del TRPA1, inhibiendo así la actividad del TRPA1. Otros ejemplos de compuestos que pueden actuar como inhibidores incluyen ribozimas y fragmentos peptídicos.

[0120] El término "acilo" está reconocido en la técnica y se refiere a un grupo representado por la fórmula general hidrocarbilC(O)-, preferiblemente alquilC(O)-.

[0121] El término "acilamino" está reconocido en la técnica y se refiere a un resto que puede ser representado por la fórmula general:

donde R9 es como se ha definido anteriormente y R’11 representa un hidrógeno, un alquilo, un alquenilo o -(CH2)m-R8, donde m y R8 son como se ha definido anteriormente.

[0122] Aquí, el término "grupo alifático" se refiere a un grupo hidrocarbonado alifático de cadena lineal, cadena ramificada o cíclico e incluye grupos alifáticos saturados e insaturados, tales como un grupo alquilo, un grupo alquenilo y un grupo alquinilo.

[0123] El término "alquenilo", tal como se usa aquí, se refiere a un grupo alifático que contiene al menos un doble enlace, y pretende incluir tanto "alquenilos no substituidos" como "alquenilos substituidos", los últimos de los cuales se refieren a restos alquenilo que tienen substituyentes que reemplazan a un hidrógeno sobre uno o más carbonos del grupo alquenilo. Dichos substituyentes pueden aparecer sobre uno o más carbonos incluidos o no incluidos en uno o más dobles enlaces. Más aún, dichos substituyentes incluyen todos los contemplados para grupos alquilo, como se discute más adelante, excepto cuando la estabilidad sea prohibitiva. Por ejemplo, se contempla la substitución de grupos alquenilo por uno o más grupos alquilo, carbociclilo, arilo, heterociclilo o heteroarilo.

[0124] Los términos "alcoxilo" o "alcoxi", tal como se utilizan aquí, se refieren a un grupo alquilo, como se define a continuación, que tiene un radical oxígeno unido al mismo. Como grupos alcoxilo representativos, se incluyen metoxi, etoxi, propiloxi, terc-butoxi y similares. Un "éter" está formado por dos hidrocarburos covalentemente unidos por un oxígeno. Por consiguiente, el substituyente de un alquilo que convierte a ese alquilo en un éter es, o se parece a, un alcoxilo, como puede representarse mediante uno de -O-alquilo, -O-alquenilo, -O-alquinilo u -O-(CH2)m-R8, donde m y R8 son como se ha descrito anteriormente.

[0125] El término "alquilo" se refiere al radical de grupos alifáticos saturados, incluyendo grupos alquilo de cadena lineal, grupos alquilo de cadena ramificada, grupos cicloalquilo (alicíclicos), grupos cicloalquilo substituidos con alquilo y grupos alquilo substituidos con cicloalquilo. En realizaciones preferidas, un alquilo de cadena lineal o de cadena ramificada tiene 30 o menos átomos de carbono en su esqueleto (v.g., C1-C30 para cadenas lineales, C3-C30 para cadenas ramificadas), y más preferiblemente 20 o menos, y más preferiblemente 10 o menos. De igual modo, los cicloalquilos preferidos tienen de 3 a 10 átomos de carbono en su estructura de anillo, y más preferiblemente tienen 5, 6 ó 7 carbonos en la estructura de anillo.

[0126] Más aún, el término "alquilo" (o "alquilo inferior"), tal como se utiliza en toda la memoria descriptiva, en los ejemplos y en las reivindicaciones, pretende incluir tanto "alquilos no substituidos" como "alquilos substituidos", refiriéndose estos últimos a restos de alquilo que tienen substituyentes que reemplazan a un hidrógeno sobre uno o más de los carbonos del esqueleto hidrocarbonado. Dichos substituyentes pueden incluir, por ejemplo, un halógeno, un hidroxilo, un carbonilo (tal como un carboxilo, un alcoxicarbonilo, un formilo o un acilo), un tiocarbonilo (tal como un tioéster, un tioacetato o un tioformiato), un alcoxilo, un fosforilo, un fosfato, un fosfonato, un fosfinato, un amino, un amido, una amidina, una imina, un ciano, un nitro, un azido, un sulfhidrilo, un alquiltío, un sulfato, un sulfonato, un sulfamoílo, un sulfonamido, un sulfonilo, un heterociclilo, un aralquilo o un resto aromático o heteroaromático. Los expertos en la técnica entenderán que los restos que substituyen sobre la cadena hidrocarbonada pueden a su vez estar substituidos, si resulta apropiado. Por ejemplo, los substituyentes de un alquilo substituido pueden incluir formas substituidas y no substituidas de grupos amino, azido, imino, amido, fosforilo (incluyendo fosfonato y fosfinato), sulfonilo (incluyendo sulfato, sulfonamido, sulfamoílo y sulfonato) y sililo, así como éteres, alquiltíos, carbonilos (incluyendo cetonas, aldehídos, carboxilatos y ésteres), -CF3, -CN y similares. Se describen a continuación ejemplos de alquilos substituidos. Los cicloalquilos pueden estar además substituidos con alquilos, alquenilos, alcoxis, alquiltíos, aminoalquilos, alquilos substituidos con carbonilo, -CF3, -CN y similares.

[0127] Se pueden hacer substituciones análogas en los grupos alquenilo y alquinilo para producir, por ejemplo, aminoalquenilos, aminoalquinilos, amidoalquenilos, amidoalquinilos, iminoalquenilos, iminoalquinilos, tioalquenilos, tioalquinilos o alquenilos o alquinilos substituidos con carbonilo.

[0128] A menos que se especifique de otro modo el número de carbonos, "alquilo inferior", tal como se usa aquí, significa un grupo alquilo, como se ha definido anteriormente, pero que tiene de uno a diez carbonos, más preferiblemente de uno a seis carbonos, en la estructura de su esqueleto. De igual modo, "alquenilo inferior" y "alquinilo inferior" tienen longitudes de cadena similares. En toda la solicitud, los grupos alquilo preferidos son alquilos inferiores. En realizaciones preferidas, un substituyente aquí designado como alquilo es un alquilo inferior.

[0129] El término "alquinilo", tal como se usa aquí, se refiere a un grupo alifático que contiene al menos un triple enlace y pretende incluir tanto "alquinilos no substituidos" como "alquinilos substituidos", refiriéndose estos últimos a restos de alquinilo que tienen substituyentes que reemplazan a un hidrógeno sobre uno o más carbonos del grupo alquinilo. Dichos substituyentes pueden aparecer sobre uno o más carbonos incluidos o no incluidos en uno o más triples enlaces. Más aún, dichos substituyentes incluyen todos los contemplados para los grupos alquilo, como se ha discutido anteriormente, excepto cuando la estabilidad sea prohibitiva. Por ejemplo, se contempla la substitución de grupos alquinilo por uno o más grupos alquilo, carbociclilo, arilo, heterociclilo o heteroarilo.

[0130] El término "alquiltío" se refiere a un grupo alquilo, como se ha definido anteriormente, que tiene un radical azufrado unido al mismo. En realizaciones preferidas, el resto "alquiltío" está representado por uno de -S-alquilo, -Salquenilo, -S-alquinilo y -S-(CH2)m-R8, donde m y R8 han sido definidos anteriormente. Como grupos alquiltío representativos, se incluyen metiltío, etiltío y similares.

[0131] Los términos "amina" y "amino" están reconocidos en la técnica y se refieren a aminas tanto sin substituir como substituidas, v.g., un resto que puede ser representado por la fórmula general:

o

donde R9, R10 y R’10 representan cada uno independientemente un hidrógeno, un alquilo, un alquenilo o -(CH2)m-R8,

o R9 y R10, tomados junto con el átomo de N al que están unidos, completan un heterociclo de 4 a 8 átomos en la estructura del anillo; R8 representa un arilo, un cicloalquilo, un cicloalquenilo, un heterociclo o un policiclo; y m es cero o un número entero de 1 a 8. En realizaciones preferidas, sólo uno de R9 o R10 puede ser un carbonilo; v.g., R9, R10 y el nitrógeno no forman juntos una imida. En ciertas realizaciones de éstas, ni R9 ni R10 se unen a N por un carbonilo, v.g., la amina no es una amida o imida, y la amina es preferiblemente básica, v.g., su ácido conjugado tiene un pKa superior a 7. En realizaciones incluso más preferidas, R9 y R10 (y eventualmente R’10) representan cada uno independientemente un hidrógeno, un alquilo, un alquenilo o -(CH2)m-R8. Así, el término "alquilamina", tal como se utiliza aquí, significa un grupo amina, como se ha definido anteriormente, que tiene un alquilo substituido o no substituido unido a la misma, es decir, que al menos uno de R9 y R10 es un grupo alquilo.

[0132] El término "amido" está reconocido en la técnica como un carbonilo substituido con amino, e incluye un resto que puede ser representado por la fórmula general:

donde R9 y R10 son como se ha definido anteriormente. Las realizaciones preferidas de la amida no incluirán imidas que puedan ser inestables.

[0133] El término "aralquilo", tal como se usa aquí, se refiere a un grupo alquilo substituido con un grupo arilo (v.g., un grupo aromático o heteroaromático).

[0134] El término "arilo", tal como se usa aquí, incluye grupos aromáticos de un solo anillo de 5, 6 y 7 miembros que pueden incluir de cero a cuatro heteroátomos, por ejemplo benceno, pirrol, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, triazol, pirazol, piridina, pirazina, piridazina y pirimidina y similares. También se puede hacer referencia a aquellos grupos arilo que tienen heteroátomos en la estructura del anillo como "arilheterociclos" o "heteroaromáticos". El anillo aromático puede estar substituido en una o más posiciones del anillo con substituyentes tales como los antes descritos, por ejemplo halógeno, azida, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, policiclilo, hidroxilo, alcoxi, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfato, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltío, sulfonilo, sulfonamido, cetona, aldehído, éster, heterociclilo, restos aromáticos o heteroaromáticos, -CF3, -CN o similares. El término "arilo" también incluye sistemas de anillos policíclicos que tienen dos o más anillos cíclicos, en donde dos o más carbonos son comunes a dos anillos adyacentes (los anillos son "anillos fusionados"), donde al menos uno de los anillos es aromático, v.g., los otros anillos cíclicos pueden ser cicloalquilos, cicloalquenilos, cicloalquinilos, arilos y/o heterociclilos.

[0135] El término "carbociclo", tal como se usa aquí, se refiere a un anillo aromático o no aromático en el que cada átomo del anillo es carbono.

[0136] El término "carbonilo" está reconocido por la técnica e incluye restos tales como los que pueden ser representados por la fórmula general:

donde X es un enlace o representa un oxígeno o un azufre; R11 representa un hidrógeno, un alquilo, un alquenilo, -(CH2)m-R8 o una sal farmacéuticamente aceptable, y R’11 representa un hidrógeno, un alquilo, un alquenilo o -(CH2)m-R8, donde m y R8 son como se ha definido anteriormente. Cuando X es un oxígeno y R11 o R’11 no es hidrógeno, la fórmula representa un "éster". Cuando X es un oxígeno y R11 es como se ha definido anteriormente, se hace aquí referencia al resto como un grupo carboxilo, y particularmente cuando R11 es un hidrógeno, la fórmula representa un "ácido carboxílico". Cuando X es un oxígeno y R’11 es hidrógeno, la fórmula representa un "formiato". En general, cuando se substituye el átomo de oxígeno de la fórmula anterior por azufre, la fórmula representa un grupo "tiocarbonilo". Cuando X es un azufre y R11 o R’11 no es hidrógeno, la fórmula representa un "tioéster". Cuando X es un azufre y R11 es hidrógeno, la fórmula representa un "ácido tiocarboxílico". Cuando X es un azufre y R'11 es hidrógeno, la fórmula representa un "tiolformiato". Por otra parte, cuando X es un enlace y R11 no es hidrógeno, la fórmula anterior representa un grupo "cetona". Cuando X es un enlace y R11 es hidrógeno, la fórmula anterior representa un grupo "aldehído".

[0137] El término "grupo retirador de electrones" se refiere a grupos químicos que retiran densidad de electrones del átomo o grupo de átomos al que está unido el grupo retirador de electrones. La retirada de densidad de electrones incluye la retirada por efectos tanto inductivos como de deslocalización/resonancia. Como ejemplos de grupos retiradores de electrones unidos a anillos aromáticos, se incluyen grupos perhaloalquilo, tales como trifluorometilo, halógenos, azidas, grupos que contienen carbonilo, tales como grupos acilo, grupos ciano y grupos que contienen imina.

[0138] El término "éster", tal como se usa aquí, se refiere a un grupo -C(O)OR9 donde R9 representa un grupo hidrocarbilo.

[0139] Los términos "halo" y "halógeno", tal como se usan aquí, significan halógeno e incluyen cloro, fluoro, bromo y yodo.

[0140] Los términos "hetaralquilo" y "heteroaralquilo", tal como se usan aquí, se refieren a un grupo alquilo substituido con un grupo hetarilo.

[0141] Los términos "heterociclilo" o "grupo heterocíclico" se refieren a estructuras de anillo de 3 a 10 miembros, más preferiblemente anillos de 3 a 7 miembros, cuyas estructuras de anillo incluyen de uno a cuatro heteroátomos. Los heterociclos pueden ser también policiclos. Como grupos heterociclilo, se incluyen, por ejemplo, tiofeno, tiantreno, furano, pirano, isobenzofurano, cromeno, xanteno, fenoxatiina, pirrol, imidazol, pirazol, isotiazol, isoxazol, piridina, pirazina, pirimidina, piridazina, indolizina, isoindol, indol, indazol, purina, quinolizina, isoquinolina, quinolina, ftalazina, naftiridina, quinoxalina, quinazolina, cinolina, pteridina, carbazol, carbolina, fenantridina, acridina, pirimidina, fenantrolina, fenazina, fenarsazina, fenotiazina, furazano, fenoxazina, pirrolidina, oxolano, tiolano, oxazol, piperidina, piperazina, morfolina, lactonas, lactamas tales como azetidinonas y pirrolidinonas, sultamas, sultonas y similares. El anillo heterocíclico puede estar substituido en una o más posiciones con substituyentes tales como los antes descritos, como por ejemplo halógeno, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxilo, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfato, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltío, sulfonilo, cetona, aldehído, éster, un heterociclilo, un resto aromático o heteroaromático, -CF3, -CN o similares.

[0142] Los términos "heteroarilo" y "hetarilo" incluyen estructuras de un solo anillo aromáticas substituidas o no substituidas, preferiblemente anillos de 5 a 7 miembros, más preferiblemente anillos de 5 a 6 miembros, cuyas estructuras de anillo incluyen al menos un heteroátomo, preferiblemente de uno a cuatro heteroátomos, más preferiblemente uno o dos heteroátomos. Los términos "heteroarilo" y "hetarilo" también incluyen sistemas de anillos policíclicos que tienen dos o más anillos cíclicos en los que dos o más carbonos son comunes a dos anillos adyacentes, donde al menos uno de los anillos es heteroaromático, v.g., los otros anillos cíclicos pueden ser cicloalquilos, cicloalquenilos, cicloalquinilos, arilos, heteroarilos y/o heterociclilos. Los grupos heteroarilo incluyen, por ejemplo, pirrol, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, pirazol, piridina, pirazina, piridazina y pirimidina y similares.

[0143] El término "heteroátomo", tal como se usa aquí, significa un átomo de cualquier elemento distinto del carbono

o del hidrógeno. Son heteroátomos preferidos nitrógeno, oxígeno y azufre.

[0144] Los términos "heterociclilo", "heterociclo" y "heterocíclico" se refieren a estructuras de anillo no aromáticas substituidas o no substituidas, preferiblemente anillos de 3 a 10 miembros, más preferiblemente anillos de 3 a 7 miembros, cuyas estructuras de anillo incluyen al menos un heteroátomo, preferiblemente de uno a cuatro heteroátomos, más preferiblemente uno o dos heteroátomos. Los términos "heterociclilo" y "heterocíclico" también incluyen sistemas de anillos policíclicos que tienen dos o más anillos cíclicos en los que dos o más carbonos son comunes a dos anillos adyacentes, donde al menos uno de los anillos es heterocíclico, v.g., los otros anillos cíclicos pueden ser cicloalquilos, cicloalquenilos, cicloalquinilos, arilos, heteroarilos y/o heterociclilos. Los grupos heterociclilo incluyen, por ejemplo, piperidina, piperazina, pirrolidina, morfolina, lactonas, lactamas y similares.

[0145] El término "heterociclilalquilo", tal como se usa aquí, se refiere a un grupo alquilo substituido con un grupo heterocíclico.

[0146] El término "hidrocarbilo", tal como se usa aquí, se refiere a un grupo que se une a través de un átomo de carbono que no tiene un substituyente =O o =S, y típicamente tiene al menos un enlace carbono-hidrógeno y un esqueleto primariamente carbonado, pero puede incluir eventualmente heteroátomos. Así, grupos como metilo, etoxietilo, 2-piridilo y trifluorometilo se consideran como hidrocarbilo para los fines de esta solicitud, pero no así substituyentes tales como acetilo (que tiene un substituyente =O en el carbono de unión) y etoxi (que se une a través de oxígeno, no de carbono). Como grupos hidrocarbilo se incluyen, aunque sin limitación, arilo, heteroarilo, carbociclo, heterociclo, alquilo, alquenilo, alquinilo y sus combinaciones.

[0147] El término "inferior", cuando se usa conjuntamente con un resto químico, tal como acilo, aciloxi, alquilo, alquenilo, alquinilo o alcoxi, pretende incluir grupos en los que hay diez o menos átomos en el substituyente, preferiblemente seis o menos. Un "alquilo inferior", por ejemplo, se refiere a un grupo alquilo que contiene diez o menos átomos de carbono, preferiblemente seis o menos. En ciertas realizaciones, los substituyentes acilo, aciloxi, alquilo, alquenilo, alquinilo o alcoxi aquí definidos son respectivamente acilo inferior, aciloxi inferior, alquilo inferior, alquenilo inferior, alquinilo inferior o alcoxi inferior, tanto si aparecen solos como si aparecen en combinación con otros substituyentes, tal como en hidroxialquilo y aralquilo (en cuyo caso, por ejemplo, no se cuentan los átomos del grupo arilo al contar los átomos de carbono en el substituyente alquilo).

[0148] Tal como se usan aquí, el término "nitro" significa -NO2, el término "halógeno" designa -F, -Cl, -Br o -I, el término "sulfhidrilo" significa -SH, el término "hidroxilo" significa -OH y el término "sulfonilo" significa -SO2-.

[0149] Los términos "policiclilo" o "grupo policíclico" se refieren a dos o más anillos (v.g., cicloalquilos, cicloalquenilos, cicloalquinilos, arilos y/o heterociclilos) en los que dos o más carbonos son comunes a dos anillos adyacentes, v.g., los anillos son "anillos fusionados". Los anillos que se unen a través de átomos no adyacentes se denominan anillos "con puentes". Cada uno de los anillos del policiclo puede estar substituido con substituyentes tales como los antes descritos, como por ejemplo halógeno, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxilo, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfato, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltío, sulfonilo, cetona, aldehído, éster, un heterociclilo, un resto aromático o heteroaromático, -CF3, -CN o similar.

[0150] La expresión "grupo protector", tal como se usa aquí, significa substituyentes temporales que protegen un grupo funcional potencialmente reactivo de transformaciones químicas no deseadas. Como ejemplos de tales grupos protectores, se incluyen ésteres de ácidos carboxílicos, éteres silílicos de alcoholes y acetales y cetales de aldehídos y cetonas, respectivamente. Se ha revisado el campo de la química de los grupos protectores (Greene, T.W.; Wuts,

P.G.M. Protective Groups in Organic Synthesis, 2ª ed.; Wiley: New York, 1991).

[0151] El término "substituido" se refiere a restos que tienen substituyentes que reemplazan a un hidrógeno sobre uno o más carbonos del esqueleto. Se entenderá que "substitución" o "substituido con" incluye la condición implícita de que dicha substitución esté de acuerdo con la valencia permitida del átomo substituido y del substituyente, y de que la substitución dé lugar a un compuesto estable, v.g., que no experimente espontáneamente una transformación, tal como por reorganización, ciclación, eliminación, etc. Tal como se usa aquí, se contempla que el término "substituido" incluya todos los substituyentes permisibles de compuestos orgánicos. En un aspecto amplio, los substituyentes permisibles incluyen substituyentes acíclicos y cíclicos, ramificados y no ramificados, carbocíclicos y heterocíclicos, aromáticos y no aromáticos, de compuestos orgánicos. Los substituyentes permisibles pueden ser uno o más e iguales o diferentes para los compuestos orgánicos apropiados. Para los fines de esta invención, los heteroátomos, tales como el nitrógeno, pueden tener substituyentes de hidrógeno y/o cualquier substituyente permisible de compuestos orgánicos aquí descrito que satisfaga las valencias de los heteroátomos. Los substituyentes pueden incluir cualquier substituyente aquí descrito, por ejemplo un halógeno, un hidroxilo, un carbonilo (tal como un carboxilo, un alcoxicarbonilo, un formilo o un acilo), un tiocarbonilo (tal como un tioéster, un tioacetato o un tioformiato), un alcoxilo, un fosforilo, un fosfato, un fosfonato, un fosfinato, un amino, un amido, una amidina, una imina, un ciano, un nitro, un azido, un sulfhidrilo, un alquiltío, un sulfato, un sulfonato, un sulfamoílo, un sulfonamido, un sulfonilo, un heterociclilo, un aralquilo o un resto aromático o heteroaromático. Los expertos en la técnica entenderán que los restos que substituyen la cadena hidrocarbonada pueden a su vez estar substituidos, si es apropiado.

[0152] Se entenderá que "substitución" o "substituido con" incluye la condición implícita de que dicha substitución esté de acuerdo con la valencia permitida del átomo substituido y del substituyente, y de que la substitución dé lugar a un compuesto estable, v.g., que no experimente espontáneamente una transformación, tal como por reorganización, ciclación, eliminación, etc.

[0153] El término "sulfamoílo" está reconocido en la técnica e incluye un resto que puede ser representado mediante la fórmula general:

en la que R9 y R10 son como se ha definido anteriormente.

[0154] El término "sulfato" está reconocido en la técnica e incluye un resto que puede ser representado por la fórmula general:

en la que R41 es como se ha definido anteriormente.

[0155] El término "sulfonamido" está reconocido en la técnica e incluye un resto que puede ser representado por la fórmula general:

en la que R9 y R’11 son como se ha definido anteriormente.

[0156] El término "sulfonato" está reconocido en la técnica e incluye un resto que puede ser representado por la fórmula general:

en la que R41 es un par de electrones, hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o arilo.

[0157] Los términos "sulfóxido" o "sulfinilo", tal como se usan aquí, se refieren a un resto que puede ser representado por la fórmula general:

en la que R44 es seleccionado entre el grupo consistente en hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, aralquilo o arilo.

[0158] El término "tioéster", tal como se usa aquí, se refiere a un grupo -C(O)SR9 o - SC(O)R9, donde R9 representa un hidrocarbilo.

[0159] Tal como se usa aquí, la definición de cada expresión, v.g., alquilo, m, n, etc., cuando aparece más de una vez en cualquier estructura, pretende ser independiente de su definición en cualquier otro lugar de la misma estructura.

[0160] Los términos triflilo, tosilo, mesilo y nonaflilo están reconocidos en la técnica y se refieren a grupos trifluorometanosulfonilo, p-toluensulfonilo, metanosulfonilo y nonafluorobutanosulfonilo, respectivamente. Los términos triflato, tosilato, mesilato y nonaflato están reconocidos en la técnica y se refieren a grupos funcionales éster de trifluorometanosulfonato, éster de p-toluensulfonato, éster de metanosulfonato y éster de nonafluorobutanosulfonato y a moléculas que contienen dichos grupos, respectivamente.

[0161] Las abreviaturas Me, Et, Ph, Tf, Nf, Ts y Ms representan metilo, etilo, fenilo, trifluorometanosulfonilo, nonafluorobutanosulfonilo, p-toluensulfonilo y metanosulfonilo, respectivamente. Aparece una lista más completa de las abreviaturas utilizadas por los químicos orgánicos con conocimientos ordinarios en la técnica en la primera edición de cada volumen del Journal of Organic Chemistry; esta lista es típicamente presentada en una tabla titulada Lista Estándar de Abreviaturas. Las abreviaturas contenidas en dicha lista, y todas las abreviaturas utilizadas por los químicos orgánicos con conocimientos ordinarios en la técnica, son aquí incorporadas a modo de referencia.

[0162] Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas geométricas o estereoisoméricas particulares. La presente invención contempla que todos esos compuestos, incluyendo los isómeros cis y trans, los enantiómeros R y S, los diastereómeros, los isómeros (d), los isómeros (l), sus mezclas racémicas y otras mezclas de los mismos, quedan dentro del alcance de la invención. Puede haber presencia de átomos de carbono asimétricos adicionales en un substituyente, tal como un grupo alquilo. Se pretende que todos esos isómeros, así como sus mezclas, queden incluidos en esta invención.

[0163] Los métodos de preparación de compuestos substancialmente puros desde el punto de vista isomérico son conocidos en la técnica. Si, por ejemplo, se desea un enantiómero particular de un compuesto de la presente invención, se puede preparar éste por síntesis asimétrica o por derivación con un auxiliar quiral, donde se separa la mezcla diastereomérica resultante y se escinde el grupo auxiliar, para obtener los enantiómeros deseados puros. Alternativamente, cuando la molécula contiene un grupo funcional básico, tal como amino, o un grupo funcional ácido, tal como carboxilo, se pueden formar sales diastereoméricas con un ácido o base ópticamente activos apropiados, seguido de resolución de los diastereómeros así formados por cristalización fraccionada o medios cromatográficos bien conocidos en la técnica y posterior recuperación de los enantiómeros puros. Alternativamente, se pueden preparar mezclas enantioméricamente enriquecidas y compuestos enantioméricos puros utilizando intermediarios sintéticos enantioméricamente puros en combinación con reacciones que, o bien dejan inalterada la estereoquímica en un centro quiral, o bien dan lugar a su completa inversión. Las técnicas para invertir o dejar inalterado un estereocentro particular, y las que resuelven mezclas de estereoisómeros, son bien conocidas en este campo, y queda dentro de la capacidad de un experto en la técnica escoger un método apropiado para una situación particular. Véanse, en general, Furniss et al. (eds.), Vogel’s Encyclopedia of Practical Organic Chemistry, 5ª Ed., Longman Scientific and Technical Ltd., Essex, 1991, pp. 809-816; y Heller, Acc. Chem. Res. 23: 128 (1990).

[0164] Como equivalentes contemplados de los compuestos antes descritos, se incluyen compuestos que por lo demás se corresponden con los mismos y que tienen las mismas propiedades generales de los mismos (v.g., la capacidad para inhibir la actividad del TRPA1), donde se hacen una o más variaciones simples de substituyentes que no provocan efectos adversos sobre la eficacia del compuesto. En general, los compuestos de la presente invención pueden ser preparados por los métodos ilustrados en los esquemas de reacción generales, como, por ejemplo, se describe más adelante, o por modificaciones de los mismos, usando materiales de partida, reactivos y procedimientos de síntesis convencionales de fácil disponibilidad. En estas reacciones, es también posible hacer uso de variantes conocidas en sí mismas, pero que no se mencionan aquí.

[0165] Para los fines de esta invención, se identifican los elementos químicos según la Tabla Periódica de los Elementos, versión CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 67ª Ed., 1986-87, lado interior de la tapa. También para los fines de esta invención, se contempla que el término "hidrocarburo" incluye todos los compuestos permisibles que tengan al menos un átomo de hidrógeno y uno de carbono. En un aspecto amplio, los hidrocarburos permisibles incluyen compuestos orgánicos acíclicos y cíclicos, ramificados y no ramificados, carbocíclicos y heterocíclicos, aromáticos y no aromáticos, que pueden estar substituidos o sin substituir.

[0166] Los compuestos de la presente invención pueden contener también proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen dichos compuestos. Por ejemplo, los compuestos pueden ser radiomarcados con isótopos radiactivos, tales como, por ejemplo, tritio (3H), yodo-125 (125I) o carbono-14 (14C). Se pretende que todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, ya sean o no radiactivas, queden abarcadas por el alcance de la presente invención.

[0167] El símbolo , tanto si se utiliza como un enlace como si se exhibe perpendicular a un enlace, indica el punto en el que se une el resto exhibido a la parte restante de la molécula, al soporte sólido, etc.

[0168] Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas, así como en formas solvatadas, incluyendo formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y quedan incluidas dentro del alcance de la presente invención. Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados por la presente invención y se pretende que queden incluidas dentro del alcance de la presente invención.

[0169] Cuando se especifican los grupos substituyentes por sus fórmulas químicas convencionales, escritas de izquierda a derecha, éstos igualmente abarcan los substituyentes químicamente idénticos que resultarían de escribir la estructura de derecha a izquierda, v.g., se pretende que -CH2O- también represente -OCH2-; también se pretende que -NHS(O)2- represente -S(O)2HN-; etc.

[0170] El término "sales farmacéuticamente aceptables" incluye sales de los compuestos activos que se preparan con ácidos o bases relativamente no tóxicos, dependiendo de los substituyentes particulares que se encuentren sobre los compuestos aquí descritos. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente ácidas, se pueden obtener sales de adición de base por contacto de la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, ya sea neta o en un solvente inerte adecuado. Como ejemplos de sales de adición de base farmacéuticamente aceptables, se incluyen sales de sodio, potasio, calcio, amonio, amino orgánico o magnesio, o una sal similar. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente básicas, se pueden obtener sales de adición de ácido por contacto de la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, ya sea neto o en un solvente inerte adecuado. Como ejemplos de sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables, se incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos, como los ácidos clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrógeno carbónico, fosfórico, monohidrógeno fosfórico, dihidrógeno fosfórico, sulfúrico, monohidrógeno sulfúrico, yodhídrico o fosforoso y similares, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos, como los ácidos acético, trifluoroacético, propiónico, isobutírico, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, ftálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metanosulfónico y similares. También se incluyen las sales de aminoácidos, tales como arginato y similares, y sales de ácidos orgánicos, como los ácidos glucurónico o galacturónico y similares (véase, por ejemplo, Berge et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Ciertos compuestos específicos de la presente invención contienen funcionalidades tanto básicas como ácidas que permiten que los compuestos se conviertan en sales de adición de base o de ácido.

[0171] Las formas neutras de los compuestos son preferiblemente regeneradas por contacto de la sal con una base

o un ácido y aislamiento del compuesto parental en la manera convencional. La forma parental del compuesto difiere de las diversas formas salinas en ciertas propiedades físicas, tales como la solubilidad en solventes polares, pero por lo demás las sales son equivalentes a la forma parental del compuesto para los fines de la presente invención. [0172] El término "actividad pirogénica suficientemente baja", en relación a una preparación farmacéutica, se refiere a una preparación que no contiene un pirógeno en una cantidad que pueda dar lugar a un efecto adverso (v.g., irritación, fiebre, inflamación, diarrea, distrés respiratorio, shock endotóxico, etc.) en un sujeto al que se haya administrado la preparación. Por ejemplo, se pretende que el término incluya preparaciones que estén libres, o substancialmente libres, de una endotoxina, tal como, por ejemplo, un lipopolisacárido (LPS).

Enfermedades, trastornos o afecciones relacionadas con la función del TRPA1

[0173] En ciertas realizaciones, la invención proporciona métodos y composiciones para inhibir una función de un canal TRPA1 in vitro o in vivo. Como ejemplos de funciones, se incluye, aunque sin limitación, una corriente mediada por TRPA1. En ciertas realizaciones, la invención proporciona métodos para prevenir o tratar una enfermedad o trastorno o afección reivindicada por administración de un agente que modula el nivel y/o la actividad de una proteína TRPA1. En otras realizaciones, el compuesto inhibe selectivamente el nivel de expresión y/o la actividad de una proteína TRPA1. En otras palabras, en ciertas realizaciones, el compuesto inhibe la actividad de una proteína TRPA1 preferencialmente en comparación con la actividad de uno o más de otros canales iónicos.

[0174] Se describen aquí compuestos para uso en métodos de prevención o tratamiento de enfermedades y trastornos, que pueden ser, por ejemplo, un dolor o sensibilidad al tacto, tal como el dolor relacionado con una enfermedad o trastorno, v.g., dolor debido a cáncer, una enfermedad o trastorno dermatológico, v.g., psoriasis y carcinomas de células basales y de células escamosas, una enfermedad o trastorno neurodegenerativo, v.g., enfermedad de Alzheimer (EA), enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y otros trastornos cerebrales causados por traumatismo u otras agresiones, incluyendo el envejecimiento, una enfermedad inflamatoria (v.g., asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino, glomerulonefritis, enfermedades neuroinflamatorias, esclerosis múltiple y trastornos del sistema inmune), cáncer (v.g. liposarcoma) u otra enfermedad proliferativa, enfermedad renal y enfermedad hepática, y un trastorno metabólico, tal como la diabetes. Otras enfermedades y afecciones incluyen el dolor postquirúrgico, la neuralgia postherpética, la incontinencia y la culebrilla.

[0175] Debido al importante papel que desempeña la regulación del calcio en muchos procesos celulares, incluyendo la activación celular, la expresión génica, el tráfico celular y la muerte celular apoptótica, la dishomeostasis del calcio está implicada en las muchas enfermedades y trastornos en los que intervienen dichas actividades celulares. Estas enfermedades y trastornos incluyen enfermedades y trastornos dermatológicos; enfermedades y trastornos neurológicos y neurodegenerativos; fiebre asociada a diversas enfermedades, trastornos

o afecciones; incontinencia; enfermedades y trastornos inflamatorios, tales como la enfermedad inflamatoria del intestino y la enfermedad de Crohn; enfermedades y trastornos respiratorios, tales como la tos crónica, el asma y la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC); trastornos digestivos, tales como úlceras y reflujo ácido; enfermedades y trastornos metabólicos, incluyendo la obesidad y la diabetes; enfermedades y trastornos hepáticos y renales; malignidades, incluyendo cánceres; trastornos relacionados con el envejecimiento; y sensibilidad al dolor y al tacto.

[0176] Como enfermedades o afecciones relevantes adicionales, se incluyen enfermedades o trastornos relacionados con el ATP, incluyendo epilepsia, cognición, emesis, dolor (v.g., migraña), asma, enfermedad vascular periférica, hipertensión, afecciones inmunes e inflamatorias, síndrome del intestino irritable, cistitis, depresión, enfermedades degenerativas asociadas al envejecimiento, incontinencia urinaria, eyaculación precoz, fibrosis quística, diabetes, contracepción y esterilidad, y curación de heridas (véanse, por ejemplo, Foresta et al. (1992), J. Biol. Chem. 257: 19443-19447; Wang et al. (1990), Biochim. Biophys. Res. Commun. 166: 251-258; Bumstock y Williams (2000), J. Pharmacol. Exp. Ther. 295: 862-869; y Bumstock, Pharmacol. Rev. (2006), 58:58-86).

[0177] Los inhibidores del TRPA1 aquí descritos pueden ser usados en el tratamiento de cualquiera de las enfermedades o afecciones reivindicadas, incluyendo el tratamiento del dolor asociado a cualquiera de las enfermedades o afecciones reivindicadas. Cuando se usa en un método de tratamiento, un inhibidor puede ser seleccionado y formulado en base a la vía pretendida de administración. Se pueden usar los inhibidores para tratar la enfermedad o afección subyacente o para aliviar un síntoma de la enfermedad o afección. Como ejemplo de síntomas, se incluye el dolor asociado a una enfermedad o afección.

a. Sensibilidad al dolor y al tacto, o enfermedades o trastornos relacionados con el dolor

[0178] Se pueden usar las composiciones y los compuestos aquí presentados en relación a la prevención o el tratamiento del dolor o de la sensibilidad al dolor y al tacto. Puede haber dolor o sensibilidad al dolor y al tacto en una variedad de enfermedades, trastornos o afecciones, incluyendo, aunque sin limitación, la neuropatía diabética, el dolor de pecho, la psoriasis, el eczema, la dermatitis, las quemaduras, la neuralgia postherpética (culebrilla), el dolor nociceptivo, el dolor neuropático periférico y neuropático central, el dolor crónico, el dolor por cáncer y tumores, el dolor inducido por lesión de la médula espinal, lesión por aplastamiento y traumatismo, la migraña, el dolor cerebrovascular y vascular, el dolor en la enfermedad de las células falciformes, el dolor en la artritis reumatoide, el dolor musculoesquelético, incluyendo el tratamiento de los signos y síntomas de la osteoartritis y de la artritis reumatoide, el dolor orofacial y facial, incluyendo el dental, el debido a un trastorno temperomandibular y el relacionado con el cáncer, el dolor de la espalda inferior o pélvico, el dolor relacionado con incisiones quirúrgicas, el dolor inflamatorio y no inflamatorio, el dolor visceral, el dolor psicógeno y el dolor inflamatorio de tejidos blandos, el dolor relacionado con la fibromialgia y la distrofia simpática refleja, y el dolor resultante de cálculos renales o infección en el tracto urinario. Los compuestos y composiciones de la invención pueden ser usados en el tratamiento del dolor crónico, así como del agudo. El dolor crónico o agudo puede ser el resultado de una lesión, de la edad o de una enfermedad.

[0179] Otros canales iónicos han sido implicados en la recepción o la transmisión del dolor. Por ejemplo, se ha reconocido la implicación de los canales de calcio de tipo N en las transmisiones sinápticas que transmiten señales de dolor desde las células nerviosas aferentes sensoriales hasta el sistema nervioso central. Se ha visto que ciertas neurotoxinas peptídicas naturales que bloquean específicamente el canal de calcio de tipo N actúan como analgésicos extremadamente potentes y eficientes en una amplia variedad de modelos de dolor en animales, incluyendo modelos de dolor inflamatorio y neuropático. La evidencia de la que se dispone sugiere que los bloqueantes de los canales de calcio de tipo N son al menos tan eficaces como los opiáceos, están desprovistos de una serie de efectos colaterales típicos de los opiáceos (v.g. depresión respiratoria) y su efecto analgésico no está sujeto al desarrollo de tolerancia.

[0180] También se ha visto que la potente analgesia periférica inducida por el neuroesteroide reducido en 5-alfa está mediada en parte por los efectos sobre los canales de Ca2+ de tipo T (Pathirathna et al., Pain, Abril de 2005, 114(3): 429-43).

[0181] También se ha visto que la etosuximida, un bloqueante de los canales de calcio de tipo T antiepiléptico y relativamente selectivo, es altamente efectiva para revertir el dolor neuropático causado por los citotóxicos comúnmente empleados paclitaxel o vincristina (Flatters y Bennett, Pain, Mayo de 2004,109(1-2): 150-61).

[0182] La pregabalina, un nuevo fármaco que interacciona con la subunidad de la proteína alfa(2)-delta del canal de calcio regulado por voltaje, constituye un tratamiento eficaz y seguro para el dolor de la neuropatía diabética (Richter et al., J. Pain, Abril de 2005, 6(4): 253-60).

[0183] Lo anterior demuestra la implicación de diversos canales no TRP en la recepción o transmisión del dolor. Específicamente, lo anterior demuestra la implicación de diversos canales de calcio en el dolor.

[0184] La presente invención proporciona compuestos para uso en métodos de tratamiento del dolor, que incluyen la administración de (i) antagonistas de una función del TRPA1; (ii) combinaciones de antagonistas selectivos de una función del TRPA1 y antagonistas selectivos de una función del TRPV1 y/o del TRPV3; o (iii) un paninhibidor de TRP que inhibe una función de dos o más de TRPA1, TRPV1 y TRPV3.

[0185] Además de los miembros de la familia TRPV, otros canales TRP han sido implicados en la recepción y/o sensación de dolor. Por ejemplo, ciertos canales TRPM, incluyendo TRPM8, han sido implicados en la recepción y/o sensación de dolor. Por consiguiente, en ciertas realizaciones, la presente invención incluye compuestos para uso en un método de tratamiento del dolor por administración de (i) una combinación de un antagonista selectivo del TRPA1 y un antagonista selectivo del TRPM8; (ii) una combinación de un antagonista selectivo del TRPA1, un antagonista selectivo del TRPM8 y uno o más de un antagonista selectivo del TRPV1 y/o del TRPV3; (iii) un inhibidor de TRP cruzado que antagoniza una función del TRPA1 y del TRPM8; o (iv) un paninhibidor que antagoniza una función del TRPA1, del TRPM8 y de uno o más de TRPV1 y TRPV3.

[0186] Sin estar condicionados por la teoría, proponemos un posible mecanismo para la forma en que un antagonista del TRPA1 puede ayudar a reducir el dolor. Los antagonistas del TRPA1 pueden dar lugar a hiperpolarización de la célula. Esto puede conducir a una reducción en el disparo de las neuronas y/o a una disminución en la frecuencia del potencial de acción. Además, los inhibidores del TRPA1 pueden reducir el flujo de calcio hacia el interior de las células lesionadas y podría prevenir los cambios dependientes del calcio en la expresión génica que a veces acompañan a la lesión.

b. Enfermedades o trastornos dermatológicos

[0187] El flujo de calcio hacia el interior a través de la membrana plasmática de las células cutáneas es un elemento de señalización crítico implicado en la diferenciación celular en la epidermis cutánea (Dotto, 1999, Crit. Rev. Oral Biol. Med. 10: 442-457). La regulación o modulación de la ruta de entrada del calcio, y por lo tanto un punto de control crítico para el crecimiento de las células cutáneas, puede tratar o prevenir enfermedades o trastornos cutáneos que se caracterizan por hiperplasia epidérmica, una afección en la que las células de la piel proliferan demasiado rápidamente y se diferencian poco. Dichas enfermedades incluyen la psoriasis y los carcinomas de células basales y escamosas. La psoriasis, que se estima afecta a hasta 7 millones de americanos, castiga a quienes la sufren con un malestar de leve a extremo, una mayor susceptibilidad a las infecciones secundarias y un impacto psicológico debido al desfiguramiento de las áreas afectadas (Lebwohl y Ali, 2001, J. Am. Acad. Dermatol.

45: 487-498). Los carcinomas de células basales (CCB) y los carcinomas de células escamosas (CCE) de la piel representan al menos un tercio de todos los cánceres diagnosticados cada año en los Estados Unidos. Se publican más de 1 millón de nuevos casos anualmente y su incidencia va en aumento. A pesar de ser cánceres relativamente no agresivos y de crecimiento lento, los CCB son capaces de producir una destrucción tisular local y un desfiguramiento significativos. Los CCE son más agresivos y por ello presentan complicaciones incluso mayores. Además, dado que un 80% de las lesiones se localizan en la cabeza y el cuello, con otro 15% en los hombros, la espalda o el pecho, los CCB y los CCE de la piel pueden tener un impacto significativo sobre el aspecto y la calidad de vida del paciente afectado.

[0188] Muchos trastornos dermatológicos van acompañados de picor (prurito). El prurito y el dolor comparten muchas similitudes mecanísticas. Ambos se asocian a activación de las fibras C, ambos se potencian por aumentos de temperatura y mediadores inflamatorios y ambos pueden ser apaciguados con opiáceos. La disminución de la excitabilidad neuronal, en particular la excitabilidad de las fibras C, puede aliviar el prurito asociado a diálisis, dermatitis, gestación, hierba venenosa, alergia, piel seca, quimioterapia y eczema.

c. Enfermedades y trastornos neurológicos o neurodegenerativos

[0189] Como enfermedades y trastornos neurodegenerativos, se incluyen, aunque sin limitación, la enfermedad de Alzheimer (EA), la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y otros trastornos cerebrales causados por traumatismo u otras agresiones, incluyendo el envejecimiento.

[0190] Los mecanismos asociados a la señalización del calcio pueden verse alterados en muchas enfermedades neurodegenerativas y en trastornos que se producen como resultado de una lesión cerebral. Por ejemplo, los fibroblastos o los linfocitos T de pacientes con EA han mostrado consistentemente un aumento en la liberación de Ca2+ por los almacenes intracelulares en comparación con controles (Ito et al. (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.

91: 534-538; Gibson et al. (1996), Biochem. Biophys. ACTA 1316: 71-77; Etchenberrigaray et al. (1998), Neurobiology of Disease, 5: 37-45). Consistentemente con estas observaciones, se ha visto que mutaciones en los genes de presenilina (PS1 o PS2) asociadas a EA familiar (EAF) aumentan la liberación de Ca2+ mediada por InsP3 por los almacenes internos (Guo et al. (1996), Neuro Report, 8: 379-383; Leissring et al. (1999), J. Neurochemistry,

72: 1061-1068; Leissring et al. (1999), J. Biol. Chem. 274(46): 32535-32538; Leissring et al. (2000), J. Cell Biol. 149(4): 793-797; Leissring et al. (2000), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97(15): 8590-8593). Más aún, se ha dicho que mutaciones en PS1 o PS2 asociadas a un aumento en la generación del péptido 1-amiloide amiloidogénico en la EA se asocian a una disminución en el nivel de calcio intracelular (Yoo et al. (2000), Neuron, 27(3): 561-572).

[0191] La lesión cerebral traumática experimental ha mostrado iniciar alteraciones masivas en las concentraciones de Ca2+ en el cerebro que pueden contribuir a un mayor daño neuronal. El Ca2+ intracelular puede ser elevado por muchos canales iónicos diferentes. Se ha visto además que los bloqueantes de canales pueden resultar beneficiosos en el tratamiento de la disfunción motora neurológica cuando se administran en el período postraumático agudo (Cheney et al. (2000), J. Neurotrauma, 17(1): 83-91).

d. Enfermedades y trastornos inflamatorios

[0192] Las composiciones y los métodos aquí proporcionados pueden ser también usados en relación al tratamiento de enfermedades inflamatorias seleccionadas entre asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino, glomerulonefritis, enfermedades neuroinflamatorias, tales como la esclerosis múltiple, y trastornos del sistema inmune.

[0193] La activación de los neutrófilos (PMN) por mediadores inflamatorios es en parte conseguida aumentando la concentración del calcio citosólico ([Ca2+]i). Se piensa que cierto flujo de calcio hacia el interior mediado por canales de calcio en particular tiene un importante papel en la activación de PMN. Se ha visto que el traumatismo aumenta el flujo de calcio hacia el interior operado por los almacenes de PMN (Hauser et al. (2000), J. Trauma Injury Infection and Critical Care 48 (4): 592-598) y que prolongadas elevaciones de [Ca2+]i debidas a un mayor flujo de calcio hacia el interior operado por los almacenes pueden alterar el acoplamiento estímulo-respuesta de las quimiotaxinas y contribuir a la disfunción de los PMN tras la lesión. La modulación de PMN [Ca2+]i a través de canales de calcio operados por los almacenes podría, por lo tanto, ser de utilidad en la regulación de la inflamación mediada por PMN y conservar la función cardiovascular tras lesión, shock o sepsis (Hauser et al. (2001), J. Leukocyte Biology 69 (1): 63-68).

[0194] La neuropatía periférica, por ejemplo la neuropatía diabética, es una afección particular que conlleva un componente tanto neuronal como inflamatorio. Sin comprometernos por una teoría mecanística, los antagonistas del TRPA1 de la invención pueden ser útiles en el tratamiento de neuropatías periféricas, incluyendo, aunque sin limitación, la neuropatía diabética. Además de su uso en el tratamiento de neuropatías periféricas (v.g., reducción de la inflamación), los inhibidores en cuestión pueden ser también útiles para reducir el dolor asociado a la neuropatía periférica.

[0195] La inflamación neurogénica se produce con frecuencia cuando la hiperexcitabilidad neuronal da lugar a la liberación de péptidos que desencadenan la inflamación. Estos péptidos incluyen la substancia P y CGRP. El bloqueo de TRPA1 reduciría la actividad neuronal y podría de este modo bloquear la inflamación neurogénica.

e. Cáncer y otras enfermedades proliferativas

[0196] También se describen aquí composiciones y métodos que aquí se proporcionan para uso en relación al tratamiento de malignidades, incluyendo, aunque sin limitación, malignidades de origen linforreticular, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón, melanoma, cáncer de ovario, cáncer de próstata y cáncer rectal, además de los cánceres de piel descritos anteriormente. El nivel de calcio intracelular puede tener un importante papel en la proliferación celular de células cancerosas (Weiss et al. (2001), International Journal of Cancer 92 (6): 877-882).

[0197] Además, el dolor asociado al cáncer o al tratamiento del cáncer es una causa significativa de dolor crónico. Los cánceres de huesos, por ejemplo el osteosarcoma, se consideran excepcionalmente dolorosos y los pacientes con cáncer de huesos avanzado pueden requerir sedación para tolerar el dolor intenso y persistente. Por consiguiente, los antagonistas de TRPA1 de la invención representan una posible terapéutica significativa para el tratamiento del dolor, por ejemplo el dolor asociado al cáncer o al tratamiento del cáncer.

[0198] Dado que el TRPA1 se expresa diferencialmente en células transformadas, los bloqueantes del TRPA1 pueden también afectar a la proliferación de células transformadas y así ser un modo útil para ralentizar la enfermedad (véase Jaquemar et al. (1999), JBC 274(11): 7325-33). Así, los antagonistas del TRPA1 podrían aliviar tanto la causa como los síntomas del dolor del cáncer.

[0199] Los tratamientos contra el cáncer no sólo son dolorosos, sino que pueden incluso ser tóxicos para el tejido sano. Algunos agentes quimioterapéuticos pueden causar una neuropatía dolorosa. Por consiguiente, los antagonistas del TRPA1 de la invención representan una posible terapéutica significativa para el tratamiento del dolor y/o de la inflamación asociados a los tratamientos contra el cáncer que causan neuropatía.

[0200] Una importante función de las prostaglandinas es proteger la mucosa gástrica. Se incluye en esta función la modulación del nivel de calcio intracelular en las células gástricas humanas, que tiene un papel crítico en la proliferación celular. En consecuencia, la inhibición de las prostaglandinas por fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE) puede inhibir el flujo de calcio hacia el interior en las células gástricas (Kokoska et al. (1998), Surgery (St. Louis) 124 (2): 429-437). Los AINE que alivian la inflamación con mayor efectividad producen también el mayor daño gastrointestinal (Canadian Family Physician, Enero de 1998, p. 101). Así, la capacidad para modular independientemente los canales de calcio en tipos celulares específicos puede ayudar a aliviar dicho efecto colateral de la terapia antiinflamatoria. Adicional o alternativamente, la administración de los compuestos inhibidores del TRPA1 de la presente invención puede ser empleada en combinación con AINE, promoviendo así el alivio del dolor utilizando una dosificación reducida de AINE.

f. Incontinencia

[0201] La incontinencia es un problema significativo social y médico que afecta tanto a hombres como a mujeres. La incontinencia tiene muchas causas, incluyendo, aunque sin limitación, edad, gestación, exposición a radiaciones, cirugía, una lesión, cáncer, aumento de la próstata, hiperplasia prostática y enfermedades de la vejiga o de la musculatura que soporta la uretra. La invención contempla compuestos para uso en métodos de tratamiento de la incontinencia debida a cualquiera de los anteriores, así como de la incontinencia de causa desconocida o de la incontinencia debida a ansiedad, estrés o depresión.

[0202] Las composiciones y los compuestos aquí proporcionados pueden ser útiles en relación al tratamiento de la incontinencia. Los modelos animales de incontinencia se asocian con frecuencia a un aumento en la frecuencia de los potenciales de acción espontáneos y a una despolarización crónica de las células musculares lisas. La evidencia sugiere que una corriente catiónica no selectiva podría dar lugar a esta despolarización. Como el ARNm de TRPA1 se expresa en neuronas que inervan la vejiga, el bloqueo de TRPA1 podría ser un tratamiento efectivo para la incontinencia. Además, TRPA1 se activa por estimulación del receptor de acetilcolina de tipo muscarínico 1 (M1, véase Jordt et al. (2004), Nature 427: 260-265). Los agentes antimuscarínicos son fármacos bien conocidos para el tratamiento de una afección tal como la vejiga hiperactiva. De este modo, el bloqueo del TRPA1, una diana secuencia abajo del receptor M1, podría aliviar dichas afecciones sin los efectos colaterales asociados a los antagonistas muscarínicos.

[0203] La incontinencia puede estar causada por cualquiera de una serie de lesiones, enfermedades y afecciones. Algunas de éstas pueden causar malestar significativo y dolor, además de la inconveniencia y de la turbación de la propia incontinencia. Por ejemplo, la cistitis de la vejiga es una afección dolorosa que puede conducir también a incontinencia. Para lesiones o afecciones que dan lugar tanto a incontinencia como a dolor, se pueden usar los inhibidores del TRPA1 para tratar la incontinencia, así como para aliviar el dolor acompañante.

[0204] Para realizaciones en las cuales se usa un inhibidor del TRPA1 para tratar la incontinencia, la invención contempla posibles vías adicionales de administración. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, se puede administrar el inhibidor del TRPA1 directamente en la uretra o en la vejiga mediante un catéter u otro dispositivo intraluminal. Sin embargo, en otras realizaciones, se puede administrar el inhibidor del TRPA1 por vía oral, intravenosa, subcutánea, etc.

g. Regulación de la temperatura

[0205] Debido a los efectos del flujo de iones sobre la tensión y la relajación arterial, los compuestos en cuestión pueden ser también utilizados para afectar a la sensibilidad térmica. Además, dado que los canales TRPA1 son canales que responden a la temperatura implicados en la recepción y la sensación de estímulos fríos, se pueden usar los antagonistas del TRPA1 para modular la sensación de las temperaturas frescas, frías y reducidas que con frecuencia acompañan al dolor.

h. Hipertensión

[0206] Los bloqueantes de canales de calcio regulados por voltaje pertenecen a una clase de medicaciones originalmente desarrolladas para tratar la hipertensión. Dichos bloqueantes inhiben el movimiento del calcio hacia las células musculares del corazón y de las arterias. Como el calcio es necesario para que estos músculos se contraigan, dichos bloqueantes reducen la presión sanguínea disminuyendo la fuerza de la respuesta contráctil cardíaca y relajando las paredes musculares de las arterias. Aunque TRPA1 no es un canal de calcio regulado por voltaje, es aún fundamental en la regulación de la homeostasis del calcio, así como del equilibrio de otros iones, en células y tejidos. Por consiguiente, se pueden usar los antagonistas del TRPA1 de la descripción para tratar la hipertensión. Como usos adicionales de los compuestos en cuestión, se incluyen otras afecciones que pueden verse mejoradas, en todo o en parte, por la relajación de las paredes musculares de los vasos sanguíneos. Como ejemplos de afecciones, se incluyen dolores de cabeza y ataques de migraña.

[0207] Como se ha señalado anteriormente, se pueden usar compuestos que antagonizan una función del TRPA1 en el tratamiento de muchas enfermedades, lesiones, trastornos y afecciones. En ciertas realizaciones, se pueden usar inhibidores del TRPA1 en el tratamiento del dolor. Como se ha señalado anteriormente, se pueden usar inhibidores del TRPA1 en el tratamiento del dolor resultante de lesión o enfermedad, así como del dolor experimentado como consecuencia de un tratamiento. Como ejemplos de clases de dolor, se incluyen el dolor nociceptivo, el dolor inflamatorio y el dolor neuropático. Dicho dolor puede ser crónico o agudo. Se pueden usar inhibidores del TRPA1 en el tratamiento de una o más de cualquiera de las clases de dolor anteriores. En ciertas realizaciones, se pueden usar inhibidores del TRPA1 en el tratamiento del dolor nociceptivo. En otras determinadas realizaciones, se pueden usar inhibidores del TRPA1 en el tratamiento del dolor inflamatorio. En otras determinadas realizaciones, se pueden usar inhibidores del TRPA1 en el tratamiento del dolor neuropático.

[0208] Como se ha señalado anteriormente, los inhibidores del TRPA1 pueden ser particularmente útiles en el tratamiento del dolor asociado a cáncer, osteoartritis, artritis reumatoide, neuralgia postherpética, quemaduras y otras indicaciones anteriormente detalladas. Para mayor ilustración, como indicaciones adicionales para las que se pueden utilizar los compuestos de la descripción, se incluyen el dolor oral, la enfermedad de Fabry, el síndrome del dolor regional complejo, la pancreatitis y el síndrome de fibromialgia.

Enfermedad de Fabry

[0209] Dolencias vagas de dolor en las manos y en los pies pueden ser una característica que se presenta. Estos síntomas son denominados acroparestesias, ya que reflejan la neuropatía periférica, que es una manifestación frecuente de la enfermedad. Este dolor puede ser tanto episódico como crónico. Se pueden desencadenar episodios agudos por exposición a extremos de temperatura, estrés, emoción y/o fatiga.

Fibromialgia

[0210] La fibromialgia (SFM, síndrome de fibromialgia) es un trastorno de dolor y fatiga musculoesquelética extendida. La fibromialgia se caracteriza por dolor en los músculos, ligamentos y tendones. La afección afecta más a mujeres que a hombres y aparece en personas de todas las edades. En conjunto, se estima que el SFM afecta a un 3-6% de la población.

[0211] Loa pacientes han descrito el dolor asociado a la fibromialgia como dolor muscular profundo constante, pulsante, fulgurante y punzante. El dolor incluye a veces una intensa sensación de quemazón. El dolor y la rigidez son frecuentemente peores por la mañana o tras el uso repetido de un grupo particular de músculos.

[0212] Adicionalmente, niveles variables de fatiga, que van de leve a incapacitante, se asocian con frecuencia a la fibromialgia. Otros síntomas de la fibromialgia incluyen síntomas gastrointestinales. Aparecen síndrome del intestino irritable y síntomas de tipo SII, tales como constipación, diarrea, dolor abdominal frecuente, gas abdominal y náusea, en aproximadamente un 40 a un 70% de los pacientes con SFM. Se produce reflujo ácido o enfermedad del reflujo gastroesofágico (ERGE) con una frecuencia similar.

[0213] Otro síntoma frecuente y debilitante del SFM son los dolores de cabeza crónicos, incluyendo migraña y dolores de cabeza de tipo tensión. Dichos dolores de cabeza son experimentados por aproximadamente un 70% de los pacientes con SFM. Adicionalmente, los pacientes con SFM experimentan con frecuencia el síndrome de disfunción de la articulación temporomandibular (también conocido como ATM), que produce dolor en la mandíbula, los dientes y la boca. El ATM puede también exacerbar los dolores de cabeza.

[0214] Otros síntomas comunes del SFM incluyen, aunque sin limitación, síndrome premenstrual y períodos dolorosos, dolor de pecho, rigidez matinal, alteración cognitiva o de la memoria, entumecimiento y sensaciones de hormigueo, fasciculaciones musculares, vejiga irritable, sensación de extremidades hinchadas, sensibilidades cutáneas, sequedad de ojos y de boca, mareo y coordinación alterada. Adicionalmente, los pacientes son con frecuencia sensibles a olores, ruidos fuertes y luces brillantes.

[0215] La causa del SFM sigue siendo desconocida. Sin embargo, se ha ligado la aparición del trastorno a infecciones (víricas o bacterianas), artritis reumatoide, lupus e hipotiroidismo. La conexión entre éstos y otros posibles desencadenantes no está clara.

[0216] El impacto del SFM sobre el paciente guarda una correlación directa con el nivel de dolor y de fatiga. El dolor puede ser tan severo como para interferir con el trabajo normal o el funcionamiento de la familia. Actualmente no existe ninguna cura para el SFM y las terapias actuales se centran primariamente en mejorar el sueño (para disminuir la fatiga) y en tratar el dolor. Los compuestos de la presente invención podrían ser usados para ayudar a manejar el dolor asociado al SFM. Dicho dolor incluye, aunque sin limitación, dolor oral en la mandíbula, los dientes y la boca. Dicho dolor también incluye dolor musculoesquelético no oral, dolor debido a dolores de cabeza y dolor debido a síntomas gastrointestinales.

[0217] El Síndrome del Dolor Regional Complejo (SDRC, también conocido como síndrome del dolor regional crónico) es una afección de dolor crónico. El SDRC era anteriormente conocido como distrofia simpática refleja (DSR). El SDRC es una afección neurológica crónica, dolorosa y progresiva que afecta a la piel, los músculos, las articulaciones y los huesos. El síndrome se desarrolla habitualmente en un miembro lesionado, tal como una pierna rota o después de una cirugía. Sin embargo, muchos casos sólo implican una lesión menor, tal como un esguince, y a veces no se puede identificar ningún suceso lesivo precipitante. El SDRC conlleva un dolor intenso continuo que no guarda proporción con la severidad de la lesión. El dolor empeora, más que mejora, a lo largo del tiempo.

[0218] Aunque el SDRC puede afectar a una variedad de regiones del cuerpo, más frecuentemente afecta a los brazos, las piernas, las manos o los pies. Con frecuencia, el dolor comienza en una porción de un miembro, pero se propaga a lo largo del tiempo hasta incluir la totalidad del miembro o incluso incluir un miembro diferente. Como características típicas, se incluyen cambios dramáticos en el color y la temperatura de la piel sobre el miembro o parte del cuerpo afectados, acompañados de intenso dolor con ardor, sensibilidad cutánea, sudoración e hinchazón.

[0219] En general, el SDRC se caracteriza en dos categorías. El tipo I se produce en ausencia de una lesión de nervio precipitante - aunque puede haber habido algún otro tipo de lesión precipitante. El tipo II (anteriormente denominado causalgia) se produce después de una lesión de nervio. Estas categorías son meramente descriptivas y no guardan correlación con la sintomatología o el pronóstico.

[0220] El National Institute of Neurological Disorders and Strokes (NINDS) dice que entre un 2% y un 5% de los pacientes con lesiones de nervios periféricos y entre un 12% y un 21% de los pacientes con parálisis en un lado del cuerpo (hemiplejia) desarrollan distrofia simpática refleja como complicación. La Reflex Sympathetic Dystrophy Syndrome Association of America (RSDSA) dice que la afección se produce tras un 1-2% de las fracturas óseas.

[0221] Como sucesos precipitantes asociados a la aparición del SDRC, se incluyen los siguientes: lesiones cerebrales, enfermedad cardíaca, ataque cardíaco, infección, parálisis en un lado del cuerpo (hemiplejia), terapia de radiación, trastorno de movimientos repetitivos (v.g., síndrome del túnel carpiano), trastornos de la médula espinal, cirugía y traumatismo (v.g., fractura ósea, disparo de arma de fuego, accidente de circulación). Sin embargo, en un 10-20% de los casos, no se puede encontrar ningún suceso precipitante. Obsérvese que la lesión que precede a la aparición del SDRC puede o no ser significativa.

[0222] Los síntomas del SDRC pueden progresar en tres etapas. Se produce una etapa aguda durante los primeros 1-3 meses y puede incluir dolor con ardor, hinchazón, aumento de la sensibilidad al tacto, aumento del crecimiento del pelo y de las uñas en la región afectada, dolor articular y cambios de color y de temperatura. Una etapa distrófica puede conllevar dolor constante e hinchazón. El miembro afectado se siente con frecuencia frío al tacto y tiene un aspecto azulado. Típicamente, hay rigidez y desgaste muscular (atrofia), así como pérdida ósea precoz (osteoporosis). Estos síntomas se producen normalmente 3-6 meses después del desarrollo del trastorno. Durante una etapa atrófica, la piel se vuelve fría y brillante, se produce una mayor rigidez y debilidad muscular y los síntomas pueden propagarse a otro miembro.

[0223] Otros síntomas incluyen: dolor con ardor, extrema sensibilidad al tacto, cambios en el color de la piel (rojo o azulado), cambios en la temperatura de la piel (caliente o fría), dolor articular, hinchazón (edema), infecciones frecuentes, rigidez muscular, espasmo muscular, temblor, debilidad, dermatitis, eczema, sudoración excesiva y dolor de cabeza de tipo migraña. Un inhibidor del TRPA1 puede ser útil no sólo en el tratamiento del dolor asociado al SDRC, sino también para aliviar muchos de estos otros síntomas, incluyendo la dermatitis, el eczema y las migrañas.

[0224] Los pacientes con SDRC sufren con frecuencia de depresión y ansiedad debido al impacto de la enfermedad sobre su calidad de vida.

[0225] Actualmente no existe cura para el SDRC, por lo que el tratamiento típicamente aspira a aliviar los síntomas dolorosos. Los doctores pueden prescribir analgésicos tópicos, antidepresivos, corticosteroides y opioides para aliviar el dolor. Sin embargo, hasta la fecha ningún fármaco simple o combinación de fármacos ha producido una mejoría duradera y consistente en los síntomas. Otros tratamientos pueden incluir terapia física, bloqueo de los nervios simpáticos, estimulación de la médula espinal y bombas de fármacos intratecales para suministrar opioides y agentes anestésicos locales a través de la médula espinal.

[0226] Los objetivos del tratamiento son controlar el dolor y mantener tanta movilización del miembro afectado como sea posible. Se diseña un plan de tratamiento individualizado que con frecuencia combina modalidades de tratamiento. Actualmente, se usan terapia física, medicaciones, bloqueos nerviosos y soporte psicosocial. Los inhibidores del TRPA1 según la presente invención pueden ser usados en lugar de, o además de, una o más de las actuales modalidades de tratamiento. Por ejemplo, se puede usar un inhibidor del TRPA1 como alternativa a las medicaciones actuales, pero combinado con terapia física.

[0227] Los inhibidores del TRPA1 proporcionan una alternativa para el manejo del dolor en pacientes con SDRC. Se pueden usar inhibidores del TRPA1 en combinación con cualquiera de las medicaciones actuales usadas para tratar a pacientes con SDRC. Alternativamente, se pueden usar inhibidores del TRPA1 como medicación alternativa.

[0228] Además de terapia con fármacos, los pacientes con SDRC reciben a menudo terapia física: se pueden usar inhibidores del TRPA1 además de la terapia física. La terapia física puede ser importante para ayudar a conservar el rango de movimiento y la función en el miembro afectado. Un manejo apropiado del dolor, por ejemplo empleando un inhibidor del TRPA1, no sólo aumenta la comodidad del paciente, sino que también facilita su involucración en la terapia física.

[0229] Independientemente de la combinación particular de terapias usadas para manejar el dolor en pacientes con SDRC, a menudo es crítico un soporte psicológico. Se pueden usar los inhibidores del TRPA1 en combinación con un soporte psicológico.

[0230] Los inhibidores del TRPA1 de la presente invención pueden ser usados en el tratamiento del SDRC. Por ejemplo, se pueden usar los inhibidores del TRPA1 de la presente invención para ayudar a aliviar el dolor asociado al SDRC. Se pueden usar los inhibidores del TRPA1 solos o como parte de un régimen de tratamiento global para ayudar a manejar el dolor y otros síntomas asociados al SDRC. El manejo del dolor para quienes sufren SDRC es crítico para mantener una calidad de vida que tenga sentido. Además, un manejo efectivo del dolor puede permitir a quienes lo sufren participar en la terapia física para ayudar a conservar la movilidad y el uso de los miembros afectados.

[0231] La pancreatitis es una inflamación del páncreas. El páncreas es una gran glándula situada por detrás del estómago y cerca del duodeno. Normalmente, las enzimas digestivas no se vuelven activas hasta alcanzar el intestino delgado, donde comienzan a digerir el alimento. Pero si estas enzimas se vuelven activas en el interior del páncreas, comienzan a "digerir" el propio páncreas.

[0232] La pancreatitis aguda se produce repentinamente, dura un corto período de tiempo y normalmente se resuelve. La pancreatitis crónica no se resuelve por sí misma y da lugar a una lenta destrucción del páncreas. Cualquiera de estas formas puede causar graves complicaciones, incluyendo hemorragia, lesión tisular e infección.

[0233] La pancreatitis aguda puede ser una enfermedad grave mortal con muchas complicaciones. Se producen aproximadamente 80.000 casos en los Estados Unidos cada año, y aproximadamente un 20 por ciento de estos casos se caracterizan como graves.

[0234] La pancreatitis aguda es habitualmente, aunque no de manera exclusiva, causada por cálculos biliares o por abuso de alcohol. La pancreatitis aguda comienza normalmente con dolor en el abdomen superior, que puede durar durante unos cuantos días. El dolor puede ser severo y puede volverse constante. El dolor puede estar limitado al abdomen o puede alcanzar la espalda y otras áreas. A veces, y para algunos pacientes, el dolor es repentino e intenso. Otras veces, o para otros pacientes, el dolor comienza como un dolor leve que empeora después de comer. Alguien con pancreatitis aguda con frecuencia parece y se siente muy enfermo. Otros síntomas pueden incluir abdomen hinchado y sensible, náusea, vómito, fiebre y pulso rápido. Los casos severos de pancreatitis aguda pueden causar deshidratación y presión sanguínea baja, y pueden incluso dar lugar a fallo orgánico, hemorragia interna o muerte.

[0235] Durante los ataques de pancreatitis aguda, los niveles en sangre de amilasa y lipasa están frecuentemente aumentados al menos 3 veces. Se pueden producir también cambios en los niveles en sangre de glucosa, calcio, magnesio, sodio, potasio y bicarbonato.

[0236] El tratamiento actual depende de la severidad del ataque. El tratamiento, en general, está diseñado para el soporte de las funciones vitales del cuerpo, el manejo del dolor y la prevención de complicaciones. Aunque la pancreatitis aguda se resuelva típicamente en unos cuantos días, con frecuencia se requiere el manejo del dolor durante un ataque. Se pueden usar inhibidores de TPRV3 para aliviar el dolor asociado a la pancreatitis aguda.

[0237] Pancreatitis crónica - si continúa la lesión del páncreas, se puede desarrollar una pancreatitis crónica. La pancreatitis crónica se produce cuando las enzimas digestivas atacan y destruyen el páncreas y los tejidos próximos, provocando cicatrización y dolor. La pancreatitis crónica puede estar causada por alcoholismo o por conductos pancreáticos bloqueados, dañados o estrechados. Adicionalmente, parece que influyen factores hereditarios en la enfermedad, y, en ciertos casos, no existe ninguna causa identificable (así llamada pancreatitis idiopática).

[0238] La mayoría de las personas con pancreatitis crónica tienen dolor abdominal. El dolor puede empeorar al comer o al beber, propagarse a la espalda o volverse constante y discapacitante. Otros síntomas incluyen náusea, vómito, pérdida de peso y heces grasas.

[0239] El alivio del dolor es la primera etapa en el tratamiento de la pancreatitis crónica. Una vez se ha manejado el dolor, se instaura un plan dietético rico en carbohidratos y bajo en grasas. Se pueden usar enzimas pancreáticas para ayudar a compensar la disminución en la producción de enzimas por el páncreas lesionado. A veces, se necesita insulina u otros fármacos para controlar la glucosa en sangre.

[0240] Aunque el dolor es típicamente manejado usando terapia con fármacos, puede ser necesaria la cirugía para aliviar el dolor. La cirugía puede ser necesaria para drenar un conducto pancreático aumentado o incluso para eliminar una porción de un páncreas seriamente lesionado.

[0241] El dolor está presente con frecuencia en la pancreatitis crónica. Por ejemplo, el dolor está presente en aproximadamente un 75% de los pacientes con pancreatitis crónica alcohólica, un 50% de los pacientes con pancreatitis crónica idiopática de aparición tardía y un 100% de los pacientes con pancreatitis crónica idiopática de aparición precoz (DiMagno, 1999, Gastroenterology 116(5): 1252-1257).

[0242] Una minoría de los pacientes con dolor tienen lesiones fácilmente identificables relativamente fáciles de tratar quirúrgica o endoscópicamente. En otros pacientes, se piensa con frecuencia que el dolor aparece como resultado de una variedad de causas, incluyendo una elevada presión intrapancreática, isquemia y fibrosis. Sin comprometernos por la teoría, sin embargo, probablemente estos fenómenos no son la causa subyacente del dolor. Más bien, el dolor puede resultar de un fondo de sensibilización neuronal inducida por daños en el perineurio y posterior exposición de los nervios a mediadores y productos inflamatorios.

[0243] Dada la importancia de un manejo efectivo del dolor en pacientes con pancreatitis crónica, son importantes y útiles terapias adicionales para tratar los síntomas dolorosos. Se pueden usar inhibidores del TRPA1 para manejar el dolor asociado a la pancreatitis crónica. Se pueden usar inhibidores del TRPA1 solos o como parte de un plan de tratamiento terapéutico global para manejar a pacientes con pancreatitis crónica. Por ejemplo, se pueden administrar los inhibidores del TRPA1 con enzimas pancreáticas y/o insulina como parte de un régimen terapéutico diseñado para manejar a pacientes con pancreatitis crónica.

[0244] El dolor oral es una categoría particular de dolor que puede ser tratada usando los inhibidores del TRPA1 de la presente invención. El término "dolor oral" se refiere a cualquier dolor en la boca, la garganta, los labios, las encías, los dientes, la lengua o la mandíbula. El término es usado independientemente de la causa del dolor e independientemente de si el dolor oral es un síntoma primario o secundario de una enfermedad, lesión o afección particular.

[0245] El dolor oral tiene un gran número de causas posibles. En ciertas realizaciones, el dolor oral está causado por una lesión o enfermedad de la boca, la mandíbula, los dientes, las encías, la garganta, los labios o la lengua. En otras determinadas realizaciones, el dolor oral es una consecuencia de una lesión o enfermedad que afecta primariamente a otra parte del cuerpo. En aún otras realizaciones, el dolor oral es un efecto colateral de una terapia usada para tratar una lesión o enfermedad de la boca o de otra parte del cuerpo. Los inhibidores del TRPA1 son útiles en el tratamiento del dolor oral independientemente de su causa.

[0246] Todo dolor tiene un serio impacto negativo sobre la salud y el bienestar de quien lo sufre. Sin embargo, el dolor oral puede tener un impacto particularmente perjudicial sobre la salud y la calidad de vida del paciente. En particular, el dolor oral puede interferir con la acción de comer y beber de forma apropiada. Así, los individuos con dolor oral son susceptibles de pérdida de peso, malnutrición y deshidratación. En algunos casos, el dolor oral puede interferir con la hidratación y la nutrición de un modo tan significativo como para requerir soporte intravenoso, nasogástrico u otro soporte artificial (v.g., alimentación y/o hidratación por intubación). Adicionalmente, el dolor oral puede interferir con una higiene oral apropiada. Una higiene oral pobre puede exacerbar aún más muchas de las causas del dolor oral, por ejemplo dolor oral debido a infección o abscesos.

[0247] En ciertas realizaciones, el dolor oral está causado por úlceras, llagas u otras lesiones en la boca. Por ejemplo, el dolor oral puede estar causado por úlceras, llagas u otras lesiones en la lengua, las encías, los labios, la garganta u otros tejidos de la boca. Alternativa o adicionalmente, el dolor oral puede estar causado por inflamación de la garganta, la lengua, las encías, los labios u otros tejidos de la boca. La inflamación puede acompañar a úlceras u otras lesiones, o se puede producir la inflamación antes de, o en ausencia de, la formación de úlceras u otras lesiones.

[0248] La invención contempla compuestos para uso en el tratamiento del dolor oral por administración de un inhibidor del TRPA1 por cualquier vía de administración aquí descrita. En ciertas realizaciones, se administran los inhibidores del TRPA1 para uso en el tratamiento del dolor oral por vía oral. Son preparaciones preferidas para administración oral de los inhibidores del TRPA1 para uso en el tratamiento del dolor oral un colutorio, un gel, una pasta dentífrica u otra pasta, un líquido, una pastilla para chupar, a través de un hisopo o en asociación con un protector bucal o un aparato dental. La preparación y el método particular de administración dependerán de la causa del dolor oral, de la salud general y de las afecciones médicas subyacentes del paciente, de la severidad del dolor y de otras medicaciones o terapias que el paciente esté recibiendo al mismo tiempo. Un profesional médico puede determinar fácilmente la formulación óptima para uso en un paciente particular.

[0249] Las afecciones que se indican a continuación pretenden ilustrar el rango de lesiones y enfermedades de diversa etiología que pueden dar lugar a dolor oral. La invención contempla un inhibidor del TRPA1, según la presente invención, para uso en un método de tratamiento o prevención del dolor oral. En ciertas realizaciones, los compuestos de la invención pueden ser administrados por vía oral, por ejemplo como un gel, una pasta, un colutorio u otra preparación oral, para ayudar a tratar o prevenir el dolor oral asociado a cualquier lesión, enfermedad o afección. Independientemente de la formulación particular, la invención contempla la administración por, por ejemplo, aplicación directa al área afectada de la boca, enjuagado de toda la boca, a través de un hisopo, a través de una jeringa o sobre un protector bucal u otro aparato dental.

[0250] Para cualquiera de estas afecciones, la invención contempla un inhibidor del TRPA1 para administración solo o en combinación con uno o más de otros compuestos o regímenes de tratamiento apropiados para la lesión o afección particular.

Mucositis oral

[0251] La mucositis oral, también conocida como estomatitis, es una complicación común de muchos tratamientos contra el cáncer. Los pacientes que reciben quimioterapia sistémica y/o radioterapia local desarrollan con frecuencia úlceras extremadamente dolorosas en la mucosa oral. Este efecto colateral no se limita a pacientes que sufren cánceres de cabeza y cuello, sino que es más bien un efecto colateral debilitante que afecta a aproximadamente un 40% de todos los pacientes de quimioterapia (Prevention and Treatment of Oral Mucositis in Cancer Patients, 1998, Best Practice: 2, páginas 1-6.)

[0252] La mucositis oral es extremadamente dolorosa. Adicionalmente, la mucositis oral interfiere con una apropiada nutrición e hidratación de los pacientes de cáncer. Dado el estado ya comprometido de los pacientes que pasan por quimioterapia y/o radioterapia, una mayor interferencia con la nutrición y la hidratación puede minar seriamente la salud de los pacientes. Además, estas úlceras presentan un mayor riesgo de infección. Este riesgo es particularmente agudo en pacientes con sistemas inmunes comprometidos. Son ejemplos de pacientes con un riesgo particular de desarrollar una infección oportunista los pacientes cuyo tratamiento incluyera la eliminación de uno o más nódulos linfáticos, los pacientes que recibieran previamente altas dosis de quimioterapia como preparación para un trasplante de médula ósea o de células madre y los pacientes con un trastorno inmunosupresor subyacente (v.g., VIH o hepatitis).

Llagas en la boca

[0253] Las llagas en la boca, también conocidas como úlceras aftosas (aftas), pueden ser relativamente pequeñas y estar fuera del alcance de la vista. Sin embargo, con frecuencia son dolorosas, persistentes y molestas. Las llagas en la boca son úlceras poco profundas en la boca que pueden hacer que comer y hablar resulte incómodo. Pueden aparecer sobre la lengua, sobre el paladar blando, dentro de la mejilla o el labio o en la base de las encías. Las llagas en la boca difieren del herpes labial en que aparecen sobre los tejidos blandos internos de la boca y no son contagiosas. Por el contrario, el herpes labial comienza casi siempre sobre los labios y con frecuencia no se propaga a los tejidos blandos de la boca. Además, el herpes labial está causado por una forma del virus herpes, lo que le hace ser extremadamente contagioso.

[0254] Los investigadores creen, en general, que el estrés o la lesión tisular pueden causar la erupción de llagas en la boca. En algunos casos, una lesión menor, por ejemplo al morderse el interior de la boca o comer alimentos ásperos, puede desencadenar una llaga en la boca. Otras causas pueden incluir: (i) una función defectuosa del sistema inmune; (ii) problemas nutricionales, tales como una deficiencia de vitamina B-12, zinc, ácido fólico o hierro;

(iii) enfermedades del tracto gastrointestinal; (iv) alergias alimentarias; o (v) el ciclo menstrual.

[0255] Las llagas en la boca pueden aparecer a cualquier edad, pero con frecuencia aparecen por primera vez entre las edades de 10 y 40 años. Aunque las llagas en la boca se resuelven típicamente por sí solas, pueden resultar muy molestas.

Absceso dental/en los dientes

[0256] La infección o la caries pueden dar lugar a un absceso. Un absceso puede tener serias consecuencias dentales y médicas. Por ejemplo, una infección severa causada por un absceso dental puede dar lugar a un seno o a infección sistémica. Además, un absceso puede dar lugar a la necesidad de extraer uno o más dientes. Puede ser necesaria la extracción debido a una caries dental significativa o porque la infección sea demasiado severa como para tratar por completo en presencia del diente que causa las molestias.

[0257] Independientemente del resultado fin al, un absceso dental puede ser extremadamente doloroso. No sólo el dolor es molesto, sino que puede interferir con la apropiada nutrición e hidratación. Los métodos y composiciones para reducir el dolor asociado a abscesos dentales proporcionarían beneficios significativos para su manejo.

Enfermedad del reflujo gastroesofágico

[0258] La enfermedad del reflujo gastroesofágico, o ERGE, se produce cuando el esfínter esofágico inferior (EEI) no se cierra apropiadamente y los contenidos del estómago refluyen hacia el esófago. El EEI es un anillo de músculo en el fondo del esófago que actúa como una válvula entre el esófago y el estómago. Cuando el ácido del estómago que ha refluido toca el revestimiento del esófago, provoca una sensación de ardor en el pecho o en la garganta. Esto se experimenta a menudo como ardor de estómago. El fluido refluido puede incluso ser notado en la parte posterior de la boca, una sensación a la que comúnmente se hace referencia como indigestión ácida.

[0259] Aunque el ardor de estómago ocasional es poco común y no necesariamente es indicativo de ERGE, el ardor de estómago que se produce más de dos veces por semana puede ser un signo de ERGE. Además de la molestia del ardor de estómago y de la indigestión, la ERGE puede dar lugar a otros serios problemas de salud. Por ejemplo, a lo largo del tiempo, el ácido refluido hacia la parte posterior de la garganta puede dar lugar a llagas orales, lesiones

o úlceras en la boca, encías, lengua, garganta o labios. Las lesiones pueden causar un dolor significativo, pueden interferir con la nutrición y la hidratación y pueden dejar a una persona vulnerable a la infección.

[0260] La administración de inhibidores del TRPA1 según la presente invención puede ser útil en el tratamiento del dolor oral por lesiones causadas por la ERGE. Los inhibidores del TRPA1 pueden ser usados como parte de un régimen de tratamiento donde se administra el inhibidor del TRPA1 para ayudar a manejar la molestia de la lesión oral, utilizando otros agentes o intervenciones terapéuticas para manejar la ERGE.

Gingivoestomatitis

[0261] La gingivoestomatitis es un trastorno que conlleva llagas en la boca y en las encías que se producen como resultado de una infección vírica. La gingivoestomatitis se caracteriza por inflamación de las encías y de la mucosa y por múltiples úlceras orales. La inflamación y las úlceras están causadas por infecciones víricas, particularmente las que producen enfermedades comunes en la infancia, tales como el virus herpes (herpes labial y estomatitis herpética aguda) y los virus Coxsackie (enfermedad de manos, pies y boca y herpangina). Estos virus causan úlceras poco profundas con una base grisácea o amarillenta y un margen ligeramente rojo sobre los tejidos de las encías (gingiva), el revestimiento de las mejillas (mucosa bucal) u otros tejidos blandos de la boca. Aunque esta afección puede producirse en pacientes de cualquier edad, es particularmente común en niños.

[0262] Las úlceras orales causadas por estos virus pueden ser muy dolorosas. Las úlceras van frecuentemente acompañadas de fiebre. En general, la afección puede tardar varias semanas en resolverse. Los tratamientos reconocidos para la gingivoestomatitis se centran en la reducción del dolor causado por las úlceras orales. Esto es particularmente importante para niños, que pueden rehusar el alimento o los líquidos debido a sus molestias, lo que les hace especialmente susceptibles a deshidratación. Se pueden usar los compuestos de la presente invención para tratar el dolor asociado a estas úlceras orales.

Muguet

[0263] El muguet es una infección fúngica generalmente causada por la levadura Candida albicans en las membranas mucosas de la boca. Estrictamente hablando, el muguet es sólo una infección temporal por Candida en la cavidad oral de bebés. Sin embargo, se usa el término en general para referirse a infecciones fúngicas en la boca y en la garganta de niños y adultos.

[0264] Candida está presente en la cavidad oral de casi la mitad de la población. Por ejemplo, toda persona que use dentadura postiza tiene Candida, sin sufrir necesariamente ningún efecto adverso. En general, Candida no crea problemas hasta que hay un cambio en la química de la cavidad oral, de tal modo que se favorece el crecimiento de Candida sobre los otros microorganismos que típicamente habitan en la boca y la garganta. Se pueden producir cambios en la química oral suficientes como para permitir el crecimiento de Candida como efecto colateral del consumo de antibióticos o de agentes quimioterapéuticos. La salud general del paciente puede también influir en la química de la boca. La infección por el VIH, la diabetes, la malnutrición, la edad y la inmunodeficiencia son ejemplos de afecciones que pueden cambiar la química oral lo suficiente como para permitir el sobrecrecimiento de Candida en la boca y en la garganta.

[0265] Además de cambios en la química oral, las personas cuyas dentaduras postizas no se ajustan bien pueden sufrir roturas en las membranas mucosas de la boca. Estas roturas proporcionan una oportunidad para la infección por Candida en la boca y en los labios.

[0266] El muguet causa manchas blancas, de color crema o amarillas en la boca. Las manchas están ligeramente elevadas. Si se raspan estas manchas, tienden a sangrar. El muguet puede resultar muy molesto y puede causar una sensación de ardor en la boca y en la garganta. La molestia puede interferir con la hidratación y la nutrición. Además, la molestia puede interferir con una apropiada higiene oral, tal como el cepillado y la utilización de hilo dental.

[0267] El tratamiento estándar del muguet es mediante administración de agentes antifúngicos. Estos agentes pueden ser administrados directamente en la boca, por ejemplo en forma de pastillas que se chupan o de suspensiones orales que se mantienen en la boca antes de tragarlas. Como ejemplos, se incluyen nistatina (v.g., suspensión oral Nystan), anfotericina (v.g., pastillas para chupar Fungilin) o miconazol (v.g., gel oral Daktarin). Además de la terapia antifúngica estándar, se pueden administrar los compuestos de la presente invención para manejar el dolor y las molestias asociadas al muguet.

Glositis

[0268] La glositis es una anormalidad de la lengua que se produce como resultado de una inflamación. La glositis se produce cuando existe una inflamación aguda o crónica de la lengua. Hace que la lengua se hinche y cambie de color. Se pierden las proyecciones de tipo dactilar sobre la superficie de la lengua (papilas), lo que hace que la lengua parezca lisa. La glositis tiene una serie de causas, incluyendo, aunque sin limitación, las siguientes: infecciones bacterianas, infecciones víricas (incluyendo el herpes simplex oral), lesión o traumatismo, exposición a irritantes (v.g., tabaco, alcohol, alimentos calientes, especias), reacciones alérgicas, deficiencias vitamínicas o minerales (v.g., anemia por deficiencia en hierro, anemia perniciosa y otras deficiencias en vitamina B) o como efecto colateral de otras enfermedades o trastornos.

[0269] Los síntomas de la glositis incluyen hinchazón, dolor y sensibilidad de la lengua. Adicionalmente, la lengua cambia a menudo de aspecto, volviéndose lisa y de color rojo obscuro. Como consecuencia de la hinchazón y de las molestias, la glositis hace frecuentemente que masticar, tragar y hablar resulte difícil.

[0270] El tratamiento típico para la glositis depende de la causa subyacente de la inflamación. Independientemente de los antibióticos, antiinflamatorios o agentes antivíricos particulares que puedan administrarse para combatir la causa subyacente de la glositis, se pueden administrar los compuestos según la presente invención para reducir el dolor y las molestias asociadas a la glositis. La reducción del dolor asociado a la glositis es especialmente importante cuando interfiere con una apropiada nutrición e hidratación, o cuando interfiere con, o impide, una apropiada higiene oral.

Enfermedades cutáneas

[0271] Se pueden producir úlceras orales como resultado de cualquiera de una serie de enfermedades cutáneas. Por ejemplo, el liquen plano, el pénfigo, el penfigoide y el eritema multiforme pueden dar lugar a úlceras orales. Dichas úlceras orales pueden causar un dolor significativo, que puede ser tratado usando los compuestos de la presente invención.

[0272] La reducción del dolor puede ayudar a facilitar la curación. Esto es especialmente importante para pacientes con pénfigo y penfigoide que desarrollan úlceras orales. Dichos pacientes ya están inmunosuprimidos y pueden, por lo tanto, ser más susceptibles a infecciones oportunistas procedentes de lesiones en la boca.

Enfermedades gastrointestinales [0273] Se pueden producir úlceras orales como resultado de cualquiera de una serie de enfermedades gastrointestinales. Afecciones que interfieren con una apropiada digestión, con el manejo y el flujo de los ácidos del estómago y de otros ácidos digestivos, con la motilidad y con la eliminación pueden dar lugar a úlceras orales y a otras lesiones. En algunos casos, las úlceras orales son el resultado del reflujo de ácidos o de alimento parcialmente digerido hacia el esófago. En otros casos, las úlceras orales son el resultado de un vómito frecuente. En aún otros casos, las úlceras orales se producen debido a una deficiencia vitamínica, una deficiencia mineral u otra deficiencia nutricional secundaria a la enfermedad gastrointestinal. En aún otros casos, las úlceras orales son parte de la etiología complejo que caracteriza a la enfermedad gastrointestinal.

[0274] Las úlceras orales resultantes de, o experimentadas como parte de, una enfermedad gastrointestinal pueden ser extremadamente dolorosas. Pueden minar la apropiada nutrición e hidratación en un paciente cuya enfermedad gastrointestinal subyacente puede ya imponer múltiples limitaciones sobre la dieta. Por consiguiente, los métodos y composiciones para reducir las molestias y el dolor asociados a estas úlceras orales ofrecen beneficios substanciales para pacientes con una afección gastrointestinal subyacente.

[0275] Como ejemplos de afecciones gastrointestinales que pueden dar lugar a inflamación, lesiones o úlceras orales, se incluyen, aunque sin limitación, la enfermedad de Crohn, la colitis ulcerativa, el síndrome del intestino irritable, el esprúe celíaco y la dermatitis herpetiforme. Los síntomas primarios de estas afecciones pueden ser manejados con dieta, con manejo del estrés y con medicaciones. Se pueden usar los inhibidores del TRPA1 de la presente invención para ayudar a manejar el dolor y las molestias de la inflamación, las lesiones o las úlceras orales causadas por cualquiera de estas afecciones gastrointestinales.

Enfermedades reumatoides

[0276] Una consecuencia de diversas enfermedades reumatoides son las úlceras orales. Por ejemplo, el lupus, el síndrome de Behcet, el síndrome de Sweet y la enfermedad de Reiter pueden dar lugar todos ellos a úlceras orales. Dichas úlceras orales pueden causar un dolor de boca significativo, que puede ser tratado usando los compuestos de la presente invención.

Síndrome de Sjögren

[0277] La boca seca es un síntoma común asociado al síndrome de Sjögren. La boca seca está causada por una disminución en la producción de saliva. La saliva es un fluido corporal esencial para protección y conservación de la cavidad oral y de las funciones orales. Aunque la saliva es mayoritariamente agua, también contiene más de 60 substancias que actúan en las siguientes importantes funciones: proteger, lubricar y limpiar la mucosa oral; ayudar en la masticación, la deglución y la conversación; proteger a los dientes frente a la caries; proteger a la boca, los dientes y la garganta frente a la infección por bacterias, levaduras y virus; soportar y facilitar nuestro sentido del gusto.

[0278] Dadas las importantes funciones de la saliva, una salivación reducida puede dar lugar a muchos problemas. Si la afección persiste durante meses o años, un paciente puede desarrollar complicaciones orales, tales como dificultad para deglutir, caries dental severa y progresiva, infecciones orales (particularmente fúngicas) o combinaciones de éstas. Muchas de las afecciones pueden causar molestias por sí mismas y pueden dar también lugar a lesiones o úlceras orales.

[0279] Se dispone de varias medicaciones para ayudar a aumentar la secreción salival en pacientes con boca seca. La pilocarpina (Salagen®) y la cevimelina (Evoxac®) reducen los síntomas de la boca seca y aumentan la secreción salival. Sin embargo, estos fármacos no evitan la caries dental ni tratan el dolor oral asociado a los síntomas o efectos de la boca seca. Los compuestos de la presente invención pueden ser usados para tratar el dolor asociado a la boca seca.

Deficiencias vitamínicas o minerales

[0280] En algunos casos, las deficiencias vitamínicas o minerales pueden dar lugar a úlceras u otras llagas en la boca. Por ejemplo, la deficiencia en vitamina C puede dar lugar a las lesiones orales características del escorbuto. Las deficiencias en las vitaminas B1, B2, B6 o B12 pueden también dar lugar a lesiones orales. Adicionalmente, las deficiencias en zinc, ácido fólico, hierro, selenio o calcio pueden conducir a lesiones orales.

[0281] En ciertas realizaciones, una deficiencia vitamínica o mineral es un factor precipitante que conduce a una llaga en la boca. Sin embargo, una deficiencia vitamínica o mineral puede también dar lugar a otros tipos de úlceras y lesiones orales. Independientemente de la naturaleza de la lesión, se pueden usar los compuestos de la presente invención para ayudar a manejar el dolor asociado.

Alergias [0282] Las alergias pueden a veces dar lugar a llagas en la boca y a otras lesiones orales. Las lesiones orales debidas a una alergia pueden producirse más probablemente cuando los tejidos orales de una persona entran en contacto con el alergeno causal. Sin embargo, no se requiere necesariamente el contacto entre el alergeno y el tejido oral para producir una lesión oral. Como ejemplos de alergenos que pueden dar lugar a lesiones orales, se incluyen alergenos alimentarios, tales como frutas y verduras (v.g., fresas, limones, naranjas, piñas, manzanas, higos, tomates); marisco; chocolate; frutos secos; lácteos (v.g., leche y quesos); granos de cereales (v.g., trigo sarraceno, trigo, avena, centeno, cebada, proteína de gluten que se encuentra en los granos); aditivos (v.g., cinamonaldehído (un agente saborizante), ácido benzoico (un conservante)); pastas dentífricas (v.g., algunas personas tienen una sensibilidad al laurilsulfato de sodio que se encuentra en ciertas pastas dentífricas y colutorios); fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE; algunas personas tienen una sensibilidad que da lugar a llagas en la boca en respuesta a esta clase de fármaco).

Otros ejemplos de afecciones y lesiones

[0283] Los anteriores son meros ejemplos de enfermedades y afecciones que causan o dan lugar a inflamación, lesiones, úlceras u otras fuentes de dolor oral. En otras realizaciones, el dolor oral se debe a una lesión en la boca, la mandíbula, los labios, las encías o los dientes. En otras realizaciones, el dolor oral se debe a cirugía oral, por ejemplo cirugía para el cáncer, para extracción dentaria o para remodelado de la mandíbula. Otras afecciones que pueden dar lugar a úlceras orales, y por ello a dolor oral, incluyen, aunque sin limitación, varicela, herpes zóster, mononucleosis infecciosa, sífilis, tuberculosis, gingivitis necrotizante aguda y síndrome de boca ardiente. Adicionalmente, afecciones que llevan a un sistema inmune comprometido ponen a los pacientes en riesgo de, entre otras complicaciones, inflamación, lesiones o úlceras orales. La infección por el VIH, el SIDA y la hepatitis son todos ellos afecciones que minan el sistema inmune y pueden dar lugar a lesiones o úlceras orales. Adicionalmente, los individuos que toman inmunosupresores (v.g., receptores de trasplantes de órganos, receptores de médula ósea, receptores de células madre, pacientes con una enfermedad autoinmune) tienen mayor riesgo de desarrollar lesiones orales dolorosas.

[0284] La invención contempla el uso de inhibidores del TRPA1, según la presente invención, en el tratamiento del dolor oral independientemente de la causa subyacente. En ciertas realizaciones, se pueden administrar inhibidores del TRPA1 para tratar el dolor oral por vía oral, por ejemplo, como una pasta, un colutorio, un gel u otra preparación líquida. En ciertas realizaciones, se administra la pasta, el colutorio, el gel o la otra preparación líquida mediante un hisopo, un protector bucal u otro aparato dental. En ciertas realizaciones, se aplica la preparación localmente en la boca, pero por lo demás no se ingiere. Por ejemplo, se puede usar una formulación de colutorio que no se ingiere. Independientemente de la formulación y de la vía de administración, la invención contempla la administración de los inhibidores del TRPA1 en cuestión como parte de una estrategia de tratamiento global que también incluye terapias apropiadas para la enfermedad o afección particular que causó la inflamación, lesión o úlcera oral.

[0285] Se pueden usar los inhibidores del TRPA1 para tratar el dolor oral resultante de cualquiera de las lesiones, enfermedades o afecciones anteriores. Adicionalmente, los Solicitantes hacen notar que los inhibidores del TRPA1 en cuestión pueden ser también útiles en el tratamiento de las propias enfermedades y afecciones subyacentes antes mencionadas. Específicamente, los inhibidores del TRPA1 pueden ser útiles en el tratamiento de la inflamación, y, por lo tanto, enfermedades o afecciones con un componente inflamatorio, tanto si los síntomas se manifiestan en la boca como si lo hacen en otras partes del cuerpo, pueden a su vez ser tratables con los inhibidores del TRPA1 en cuestión. Por consiguiente, la invención contempla y reconoce que, para algunas afecciones, los efectos terapéuticos de la administración de un inhibidor del TRPA1 pueden ser dobles: (i) reducción del dolor asociado a uno o más síntomas de una enfermedad o afección y (ii) tratamiento de los síntomas o de la enfermedad subyacente. Modelos de enfermedades y lesiones

[0286] Los compuestos que antagonizan la función del TRPA1 pueden ser útiles en la profilaxis y el tratamiento de cualquiera de las lesiones, enfermedades, trastornos o afecciones anteriores. Además de ensayos in vitro de la actividad de estos compuestos, se puede estudiar fácilmente su eficacia en uno o más modelos animales. A modo de ejemplo, existen numerosos modelos animales bien conocidos. Se pueden seleccionar uno o más modelos animales adecuados (v.g., adecuados a la luz de la indicación particular).

[0287] Se puede clasificar en general el dolor como dolor crónico y dolor agudo. Las dos categorías del dolor difieren en cuanto a duración, así como en el mecanismo subyacente. El dolor crónico no sólo es persistente, sino que además no responde bien, en general, al tratamiento con los analgésicos, fármacos antiinflamatorios no esteroideos y opioides actualmente disponibles.

[0288] Dos amplias subcategorías del dolor crónico son el dolor neuropático y el dolor del cáncer. Wang y Wang (2003), Advanced Drug Delivery Reviews 55: 949-965. El dolor neuropático se refiere al dolor resultante de un daño (v.g., por enfermedad, lesión, edad) en el sistema nervioso (v.g., nervios, médula espinal, SNC, SNP). El dolor relacionado el cáncer puede estar causado por infiltración tumoral, compresión de nervios, substancias segregadas por los tumores o el régimen de tratamiento particular (v.g., radiación, quimioterapia, cirugía).

[0289] El dolor también se clasifica a menudo por su mecanismo como nociceptivo, inflamatorio o neuropático. El dolor nociceptivo es dolor que se experimenta después de, por ejemplo, cambios o extremos de temperatura, exposición a ácidos, exposición a agentes químicos, exposición a fuerza y exposición a presión. La recepción de los estímulos dolorosos envía impulsos a los ganglios de la raíz dorsal. La respuesta es típicamente una combinación de una respuesta refleja (v.g., retirada de los estímulos) y una reacción emocional. La inflamación es la respuesta del sistema inmunitario a una lesión o enfermedad. En respuesta a una lesión o enfermedad, se reclutan macrófagos, células cebadas, neutrófilos y otras células del sistema inmunitario. Esta infiltración de células, junto con la liberación de citoquinas y otros factores (v.g., histamina, serotonina, bradiquinina, prostaglandinas, ATP, H+, factor de crecimiento de los nervios, TNFa, endotelinas, interleuquinas), puede causar fiebre, hinchazón y dolor. Los tratamientos actuales para el dolor de la inflamación incluyen inhibidores de Cox2 y opioides. El dolor neuropático se refiere al dolor resultante de un daño (v.g., por enfermedad, lesión, edad) en el sistema nervioso (v.g., nervios, médula espinal, SNC, SNP). El tratamiento actual para el dolor neuropático incluye antidepresivos tricíclicos, anticonvulsivantes, bloqueantes de los canales del Na+, antagonistas de los receptores de NMDA y opioides.

[0290] Existen numerosos modelos animales para estudiar el dolor. Los diversos modelos emplean diversos agentes

o procedimientos para estimular el dolor resultante de lesiones, enfermedades u otras afecciones. Blackburn-Munro (2004), Trends in Pharmacological Sciences 25: 299-305 (véase, por ejemplo, la Tabla 1). Se pueden observar entonces las características comportamentales de los animales desafiados. Se pueden estudiar fácilmente compuestos o procedimientos que pueden reducir el dolor en los animales observando las características comportamentales de los animales desafiados en presencia y en ausencia del/de los compuesto(s) o del procedimiento de ensayo.

[0291] Como ejemplos de pruebas comportamentales usadas para estudiar el dolor crónico, se incluyen pruebas de dolor espontáneo, alodinia e hiperalgesia. Id. Para valorar el dolor espontáneo, se pueden observar la postura, la marcha, los signos nocifensivos (v.g., lamido de patas, acicalamiento excesivo, comportamiento exploratorio excesivo, protección de la parte del cuerpo lesionada y automutilación). Para medir el dolor evocado, se pueden examinar las respuestas comportamentales tras exposición al calor (v.g., modelo de lesión térmica).

[0292] Como ejemplos de modelos animales de dolor, se incluyen, aunque sin limitación, el modelo de Chung, el modelo de hiperalgesia inducida por carragenina, el modelo de hiperalgesia inducida por adyuvante completo de Freund, el modelo de lesión térmica, el modelo de formalina y el modelo de Bennett. El modelo de Chung de dolor neuropático (sin inflamación) consiste en ligar uno o más nervios espinales. Chung et al. (2004), Methods Mol. Med.

99: 35-45; Kim y Chung (1992), Pain 50: 355-363. La ligación de los nervios espinales da lugar a una variedad de cambios comportamentales en los animales, incluyendo hiperalgesia al calor, alodinia al frío y dolor continuo. Se pueden administrar compuestos que antagonizan el TRPA1 a los animales ligados para valorar si disminuyen estos cambios de comportamiento inducidos por la ligación en comparación con lo observado en ausencia de compuesto.

[0293] La hiperalgesia inducida por carragenina y la hiperalgesia inducida por adyuvante completo de Freund (ACF) son modelos de dolor inflamatorio. Walker et al. (2003), Journal of Pharmacol Exp Ther 304: 56-62; McGaraughty et al. (2003), Br. J. Pharmacol. 140: 1381-1388; Honore et al. (2005), J. Pharmacol. Exp. Ther. Se pueden administrar compuestos que antagonizan el TRPA 1 a animales desafiados con carragenina o con ACF para valorar si en ellos disminuye la hiperalgesia térmica en comparación con lo observado en ausencia de compuesto. Además, también se puede valorar en estos modelos la capacidad de compuestos que antagonizan la función del TRPA1 para disminuir la hipersensibilidad al frío y/o mecánica. Típicamente, se cree que el modelo de hiperalgesia inducida por carragenina imita el dolor inflamatorio agudo y se cree que el modelo de ACF imita el dolor crónico y el dolor inflamatorio crónico.

[0294] El modelo de Bennett utiliza la isquemia prolongada de la pata para reflejar el dolor crónico. Xanthos et al. (2004), J. Pain 5: S1. Esto proporciona un modelo animal para el dolor crónico, incluyendo el dolor postoperatorio, el síndrome del dolor regional complejo y la distrofia simpática refleja. La isquemia prolongada induce cambios comportamentales en los animales, incluyendo hiperalgesia a estímulos mecánicos, sensibilidad al frío, comportamientos de dolor (v.g., agitación, lamido y/o favorecimiento de la pata) e hiperpatía. Se pueden administrar compuestos que antagonizan el TRPA1 a los animales desafiados para valorar si en ellos disminuyen cualquiera o todos de estos comportamientos en comparación con lo observado en ausencia de compuesto. Se pueden realizar experimentos similares en un modelo de lesión térmica o de quemadura por UV, que puede ser utilizado para imitar el dolor postoperatorio.

[0295] Las migrañas se asocian a dolor significativo e incapacidad para completar tareas normales. Existen varios modelos de migraña, incluyendo el modelo de inflamación neurogénica en rata (véase Buzzi et al. (1990), Br. J. Pharmacol. 99: 202-206) y el modelo de Burstein (véase Strassman et al. (1996), Nature 384: 560-564).

[0296] Como modelos adicionales de dolor neuropático, se incluyen modelos de dolor central basados en lesión de la médula espinal. Se genera dolor crónico induciendo una lesión de la médula espinal, por ejemplo, dejando caer un peso sobre un área quirúrgicamente expuesta de la médula espinal (v.g., modelo de la caída de peso). Se puede inducir adicionalmente lesión de la médula espinal aplastando o comprimiendo la médula espinal, suministrando neurotoxina, usando agentes fotoquímicos o por hemisección de la médula espinal. Wang y Wang (2003).

[0297] Como modelos adicionales de dolor neuropático, se incluyen modelos de lesión de los nervios periféricos. El término neuropatía periférica abarca una variedad de enfermedades, afecciones y lesiones. Un experto en la técnica puede seleccionar fácilmente un modelo apropiado a la luz de la afección o enfermedad particular bajo investigación. Como ejemplos de modelos, se incluyen, aunque sin limitación, el modelo del neuroma, el modelo de Bennett, el modelo de Seltzer, el modelo de Chung (ligación en L5 o en L5/L6), el modelo de crioneurolisis ciática, el modelo de resección del tronco caudal inferior y el modelo de neuritis inflamatoria ciática. Id.

[0298] Como ejemplos de modelos de dolor inflamatorio, se incluye el modelo en rata de inyección intraplantar de bradiquinina. Resumiendo, se valora la sensibilidad térmica basal de los animales en un aparato de Hargreave. Se administran entonces bloqueantes del TRPA1 sistémicamente. Se inyecta bradiquinina a continuación en la pata y se deja que se desarrolle una hiperalgesia. Se mide entonces la latencia de evasión térmica en múltiples puntos de tiempo a lo largo de las horas siguientes (Chuang et al., 2001; Vale et al., 2004).

[0299] También se dispone de ejemplos de modelos de dolor neuropático asociado a enfermedades particulares. La diabetes y la culebrilla son dos enfermedades que van con frecuencia acompañadas de dolor neuropático. Incluso después de un episodio agudo de culebrilla, algunos pacientes continúan sufriendo neuralgia postherpética y experimentan un dolor persistente que dura años. Se puede estudiar el dolor neuropático causado por la culebrilla y/o la neuralgia postherpética en el modelo de neuralgia postherpética (NPH). Se puede estudiar la neuropatía diabética en modelos de ratones diabéticos, así como en modelos químicamente inducidos de neuropatía diabética. Wang y Wang (2003).

[0300] Como se ha señalado anteriormente, el dolor del cáncer puede tener cualquiera de una serie de causas, y existen numerosos modelos animales para examinar el dolor del cáncer relacionado con, por ejemplo, quimioterapia

o infiltración tumoral. Como ejemplos de modelos de dolor de cáncer relacionado con toxinas, se incluyen el modelo de neuropatía periférica inducida por vincristina, el modelo de neuropatía periférica inducida por taxol y el modelo de neuropatía periférica inducida por cisplatina. Wang y Wang (2003). Un ejemplo de modelo de dolor de cáncer causado por infiltración tumoral es el modelo de dolor por invasión del cáncer (DIC). Id.

[0301] Los cánceres óseos primarios y metastáticos se asocian a un tremendo dolor. Existen varios modelos de dolor por cáncer óseo, incluyendo el modelo de dolor por cáncer óseo del fémur en ratón (COF), el modelo de dolor por cáncer óseo del calcáneo en ratón (COC) y el modelo de cáncer óseo de tibia en rata (COT). Id.

[0302] Un modelo adicional de dolor es el modelo de la formalina. Al igual que los modelos de la carragenina y del ACF, el modelo de la formalina consiste en la inyección de un irritante intradérmica o intraperitonealmente en un animal. La inyección de formalina, una solución al 37 por ciento de formaldehído, es el agente más comúnmente usado para inyección intradérmica en el pie (la prueba de la formalina). La inyección de una solución del 0,5 al 15 por ciento de formalina (normalmente, aproximadamente al 3,5%) en la superficie dorsal o plantar del pie anterior o posterior produce una respuesta dolorosa bifásica de intensidad creciente y decreciente durante aproximadamente 60 minutos tras la inyección. Como respuestas típicas, se incluyen la elevación, el lamido, el mordisqueo o la agitación del pie. Estas respuestas se consideran nociceptivas. La fase inicial de la respuesta (también conocida como la Fase Precoz), que dura de 3 a 5 minutos, es probablemente debida a una estimulación química directa delos nociceptores. Ésta va seguida de un período de 10 a 15 minutos durante los cuales los animales exhiben poco comportamiento que sugiera nocicepción. La segunda fase de esta respuesta (también conocida como la Fase Tardía) comienza aproximadamente de 15 a 20 minutos después de la inyección de formalina y dura de 20 a 40 minutos, elevándose inicialmente tanto el número como la frecuencia de comportamientos nociceptivos, alcanzando un pico y cayendo después. Las intensidades de estos comportamientos nociceptivos dependen de la concentración de formalina utilizada. La segunda fase conlleva un período de sensibilización durante el cual se producen los fenómenos inflamatorios. Las dos fases de respuesta a la inyección de formalina hacen del modelo de la formalina un modelo apropiado para estudiar el dolor nociceptivo y el inflamatorio agudo. Puede ser también un modelo, en algunos sentidos, del dolor neuropático.

[0303] Además de cualquiera de los modelos anteriores de dolor crónico, se pueden estudiar compuestos que antagonizan la función del TRPA1 en uno o más modelos de dolor agudo. Valenzano et al. (2005), Neuropharmacology 48: 658-672. Independientemente de si se estudian los compuestos en modelos de dolor crónico, dolor agudo o ambos, estos estudios son típicamente (aunque no exclusivamente) realizados, por ejemplo, en ratones, ratas o cobayas. Adicionalmente, se pueden estudiar los compuestos en diversas líneas celulares que proporcionan ensayos in vitro de dolor. Wang y Wang (2003).

[0304] Muchos individuos que buscan tratamiento para el dolor sufren de dolor visceral. Como modelos animales de dolor visceral, se incluyen el modelo en rata de dolor uterino inflamatorio (Wesselmann et al. (1997), Pain 73: 309317), la inyección de aceite de mostaza en el tracto gastrointestinal para imitar el síndrome del intestino irritable (Kimball et al. (2005), Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 288(6): G1266-73) y la inyección de aceite de mostaza en la vejiga para imitar la vejiga hiperactiva o la cistitis de vejiga (Riazimand (2004), BJU 94: 158-163). Se puede valorar la efectividad de un compuesto TRPA1 por una disminución en el retorcimiento, en la inflamación gastrointestinal o en la excitabilidad de la vejiga.

[0305] El estudio del dolor se apoya ampliamente en los modelos animales anteriores. Lo siguiente aporta referencias ejemplares adicionales que describen el uso de estos modelos en el estudio del dolor: modelo de la lesión térmica (Jones y Sorkin, 1998, Brain Res. 810: 93-99; Nozaki-Taguchi y Yaksh, 1998, Neuroscience Lett. 254: 25-28; Jun y Yaksh, 1998, Anesth. Analg. 86: 348-354), modelo de la formalina (Yaksh et al., 2001, J. Appl. Physiol.

90: 2386-2402), modelo de la carragenina (Hargreaves et al., 1988, Pain 32: 77-88) y modelo del ACF (Nagakura et al., 2003, J. Pharmacol. Exp. Ther. 306: 490-497).

[0306] La inflamación es con frecuencia un importante factor contribuyente al dolor. Como tal, es útil identificar compuestos que actúen como antiinflamatorios. Muchos compuestos que reducen la actividad neural también previenen la inflamación neurogénica. Para medir directamente la inflamación, se puede valorar el volumen del pie de una rata usando un pletismómetro. Después de realizar una medición basal, se puede inyectar carragenina en el pie y se puede monitorizar el volumen en el transcurso de horas en los animales que han sido tratados con vehículo

o con fármaco. Se considera que los fármacos que reducen la hinchazón del pie son antiinflamatorios.

[0307] Para estudiar la eficacia de los antagonistas del TRPA1 para el tratamiento de la tos, se pueden llevar fácilmente a cabo experimentos utilizando el modelo de tos en cobaya consciente. Tanaka y Maruyama (2003), Journal Pharmacol. Sci. 93: 465-470; McLeod et al. (2001), Br. J. Pharmacol. 132: 1175-1178. Resumiendo, los cobayas sirven como modelo animal útil para la tos, ya que, a diferencia de otros roedores, tales como ratones y ratas, los cobayas realmente tosen. Además, la tos del cobaya parece emular la tos humana en términos de postura, comportamiento y aspecto del animal que tose.

[0308] Para inducir la tos, se expone a cobayas conscientes a un agente inductor, tal como ácido cítrico o capsaicina. Se mide la respuesta del animal contando el número de toses. Se puede medir la efectividad de un agente supresor de la tos, por ejemplo un compuesto que inhibe TRPA1, administrando el agente y valorando la capacidad del agente para disminuir el número de toses provocadas por la exposición al ácido cítrico, a la capsaicina

o a otro agente inductor de la tos similar. De este modo, se pueden evaluar e identificar fácilmente inhibidores del TRPA1 para uso en el tratamiento de la tos.

[0309] Como modelos adicionales de la tos, se incluye el modelo en cobaya inconsciente. Rouget et al. (2004), Br. J. Pharmacol. 141: 1077-1083. Se puede adaptar cualquiera de los modelos anteriores para uso en otros animales capaces de toser. Como ejemplos adicionales de animales capaces de toser, se incluyen gatos y perros.

[0310] Existen numerosos modelos de incontinencia en roedores. Éstos incluyen modelos de incontinencia inducida por lesión de nervios, compresión uretral e inflamación. Los modelos de compresión uretral incluyen el modelo de obstrucción del flujo vesical en ratas (Pandita, RK y Andersson KE. Effects of intravesical administration of the K+ channel opener, Z.D6169, in conscious rats with and without bladder outflow obstruction. J. Urol. 162: 943-948, 1999). Como modelos inflamatorios, se incluye la inyección de aceite de mostaza en la vejiga.

[0311] Para estudiar la eficacia de un compuesto inhibidor del TRPA1 en el tratamiento de la incontinencia, se pueden administrar concentraciones variables del compuesto (v.g., concentración baja, media y alta) a ratas tras obstrucción quirúrgica parcial de la salida de la vejiga (OSV). Se puede comparar la eficacia de las dosis variables del compuesto inhibidor del TRPA1 con controles a los que se administran excipientes solos (control de simulación). Se puede además comparar la eficacia con ratas a la que se administra un control positivo, tal como atropina. Se espera que la atropina disminuya la hiperactividad de la vejiga después de una obstrucción parcial de la salida de la vejiga en el modelo OSV. Obsérvese que, cuando se estudian los compuestos en el modelo OSV, se pueden administrar los compuestos directamente en la vejiga o en la uretra (v.g., mediante catéter) o se pueden administrar los compuestos sistémicamente (v.g., oral, intravenosa, intraperitonealmente, etc.).

[0312] Como se ha detallado anteriormente, se pueden usar inhibidores del TRPA1 para tratar los síntomas del dolor asociado a pancreatitis. Se puede estudiar la eficacia de los inhibidores del TRPA1 en el manejo del dolor de la pancreatitis en uno o más modelos animales. Se pueden estudiar los inhibidores en modelos animales generales de dolor, por ejemplo modelos de dolor inflamatorio o de dolor visceral. Alternativa o adicionalmente, se pueden estudiar los inhibidores del TRPA1 en modelos animales que imitan específicamente el dolor que acompaña a la pancreatitis u otra lesión pancreática.

[0313] Se han descrito recientemente varios modelos de dolor pancreático en rata (Lu, 2003, Anesthesiology 98(3): 734-740; Winston et al., 2003, Journal of Pain 4(6): 329-337). Lu et al. indujeron pancreatitis pos administración sistémica de dicloruro de dibutilina en ratas. Las ratas mostraron un aumento en los sucesos de retirada tras estimulación del abdomen con el filamento de von Frey y una menor latencia de retirada tras estimulación térmica durante un período de 7 días. El estado de dolor inducido en estos animales se caracterizaba también por mayores niveles de substancia P en las médulas espinales (Lu, et al., 2003). Para estudiar la eficacia de un inhibidor del TRPA1 en este modelo, se puede administrar un inhibidor del TRPA1 después de, o al mismo tiempo que, la administración de dicloruro de dibutilina. Se puede administrar a los animales control un vehículo o un aliviador conocido del dolor. Se pueden medir los indicios de dolor. Se puede evaluar la eficacia de un inhibidor del TRPA1 comparando los indicios de dolor observados en los animales que recibieron un inhibidor del TRPA1 con los de los animales que no recibieron un inhibidor del TRPA1. Adicionalmente, se puede comparar la eficacia de un inhibidor del TRPA1 con la de los medicamentos conocidos para el dolor.

[0314] Se mostró también la eficacia de la prueba del filamento de von Frey como medio para medir el comportamiento nociceptivo induciendo pancreatitis por administración sistémica de L-arginina (Winston et al., 2003). Se puede estudiar de forma similar la eficacia de un inhibidor del TRPA1 tras pancreatitis inducida por administración sistémica de L-arginina.

[0315] Lu et al. describieron también ensayos directos de comportamiento para el dolor pancreático usando estimulación nociva aguda del páncreas mediante una cánula ductal permanente en ratas despiertas y con libre movimiento. Estos ensayos incluían recorrer la jaula, ponerse sobre dos patas y extender el miembro posterior en respuesta a la infusión intrapancreática de bradiquinina. La administración intratecal de D-APV (antagonista de los receptores de NMDA) o de morfina solos reducía parcialmente los comportamientos de dolor visceral en este modelo. Las combinaciones de ambos reducía los comportamientos de dolor al nivel basal. Se puede estudiar de forma similar la eficacia de un inhibidor del TRPA1 en este sistema.

[0316] Se puede usar cualquiera de los modelos animales anteriores para evaluar la eficacia de un inhibidor del TRPA1 en el tratamiento del dolor asociado a la pancreatitis. Se puede comparar la eficacia con un control sin tratamiento o placebo. Adicional o alternativamente, se puede evaluar la eficacia en comparación con uno o más medicamentos conocidos para el alivio del dolor.

Optimización del tratamiento del dolor

[0317] Se pueden usar los inhibidores del TRPA1, según la presente invención, en el tratamiento de una variedad de lesiones, enfermedades, afecciones y trastornos. Un importante uso terapéutico para los inhibidores del TRPA1 es en el tratamiento del dolor. Como se ilustra mediante la extensa lista de lesiones, afecciones y enfermedades para las que el dolor es un síntoma significativo y a veces debilitante, los métodos y composiciones mejoradas para uso en el tratamiento del dolor proporcionan beneficios substanciales para un enorme rango de pacientes. Dichos métodos y composiciones tienen el potencial de mejorar la calidad de los cuidados y la calidad de vida para pacientes afectados con un diverso rango de lesiones, enfermedades y afecciones. La presente solicitud contempla que un compuesto que inhiba el TRPA1 puede ser usado en el tratamiento de cualquiera de las lesiones, afecciones

: o enfermedades antes mencionadas.

[0318] Una importante cuestión en el tratamiento del dolor es cómo manejar el dolor reduciendo al mismo tiempo los efectos colaterales experimentados con muchos analgésicos. Por ejemplo, aunque muchos opiáceos y otros narcóticos disminuyen de manera efectiva el dolor, los pacientes son con frecuencia incapaces de conducir, trabajar

: o concentrarse mientras toman estas medicaciones. Por lo tanto, aunque los opiáceos, tales como la morfina o la dilaudina, pueden resultar adecuados para uso a corto plazo o para uso durante la hospitalización, no son óptimos para uso a largo plazo. Adicionalmente, los opiáceos y otros narcóticos producen hábito, y los pacientes típicamente desarrollan una tolerancia para estos fármacos. Estas características de los opioides y otros narcóticos los hacen subóptimos para el manejo del dolor.

[0319] La presente invención proporciona inhibidores del TRPA1 para uso in vitro e in vivo. La presente invención también proporciona composiciones y composiciones farmacéuticas que contienen clases particulares de compuestos que inhiben la actividad del TRPA1. En ciertas realizaciones, los inhibidores del TRPA1 en cuestión son selectivos. En otras palabras, en ciertas realizaciones, el compuesto inhibe la actividad del TRPA1 preferencialmente sobre la actividad de otros canales iónicos. En ciertas realizaciones, el compuesto inhibe la actividad del TRPA1 preferencialmente sobre la actividad del TRPV1, TRPV2, TRPV3, TRPV4 y/o TRPM8. En otras determinadas realizaciones, el compuesto es seleccionado por presentar una reacción cruzada con uno o más de otros canales TRP implicados en el dolor. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, el compuesto inhibe la actividad del TRPA1 y también inhibe la actividad de uno o más de TRPV1, TRPV2, TRPV3, TRPV4 y TRPM8.

Terapia de combinación

[0320] Otro aspecto de la invención proporciona una terapia conjunta, donde se administran uno o más de otros agentes terapéuticos con los moduladores del TRPA1. Dicho tratamiento conjunto puede ser conseguido por medio de la dosificación simultánea, secuencial o por separado de los componentes individuales del tratamiento.

[0321] En ciertas realizaciones, se administra un compuesto de la invención conjuntamente con un analgésico. Como analgésicos adecuados, se incluyen, aunque sin limitación, opioides, glucocorticosteroides, antiinflamatorios no esteroideos, naftilalcanonas, oxicams, derivados de para-aminofenol, ácidos propiónicos, derivados de ácidos propiónicos, salicilatos, fenamatos, derivados de fenamatos, pirozoles y derivados de pirozoles. Como ejemplos de dichos compuestos analgésicos, se incluyen, aunque sin limitación, codeína, hidrocodona, hidromorfona, levorfarnol, morfina, oxicodona, oximorfona, butorfanol, dezocina, nalbufina, pentazocina, etodolaco, indometacina, sulindaco, tolmetina, nabumetona, piroxicam, acetaminofeno, fenoprofeno, flurbiprofeno, ibuprofeno, ketoprofeno, naproxeno, diclofenaco, oxaprozina, aspirina, diflunisal, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, prednisolona y dexametasona. Son analgésicos preferidos los antiinflamatorios no esteroideos y los opioides (preferiblemente la morfina).

[0322] En ciertas realizaciones, se administra un compuesto de la invención conjuntamente con un antiinflamatorio no esteroideo. Como compuestos antiinflamatorios no esteroideos adecuados, se incluyen, aunque sin limitación, piroxicam, diclofenaco, etodolaco, indometacina, ketoralaco, oxaprozina, tolmetina, naproxeno, flubiprofeno, fenoprofeno, ketoprofeno, ibuprofeno, ácido mefenámico, sulindaco, apazona, fenilbutazona, aspirina, celecoxib y rofecoxib.

[0323] En ciertas realizaciones, se administra un compuesto de la invención conjuntamente con un agente antivírico. Como agentes antivíricos adecuados, se incluyen, aunque sin limitación, amantadina, aciclovir, cidofovir, desciclovir, desoxiaciclovir, famciclovir, foscamet, ganciclovir, penciclovir, azidouridina, anasmicina, amantadina, bromovinildesoxusidina, clorovinildesoxusidina, citarabina, didanosina, desoxinojirimicina, didesoxicitidina, didesoxiinosina, didesoxinucleósido, edoxuidina, enviroxima, fiacitabina, foscamet, fialuridina, fluorotimidina, floxuridina, hipericina, interferón, interleuquina, isetionato, nevirapina, pentamidina, ribavirina, rimantadina, estavirdina, sargramostina, suramina, tricosantina, tribromotimidina, triclorotimidina, vidarabina, zidoviridina, zalcitabina, 3-azido-3-desoxitimidina, 2’,3’-didesoxiadenosina (ddA), 2’,3’-didesoxiguanosina (ddG), 2’,3’didesoxicitidina (ddC), 2’,3’-didesoxitimidina (ddT), 2’3’-didesoxi-didesoxitimidina (d4T), 2’-desoxi-3’-tiacitosina (3TC

o lamivudima), 2’,3’-didesoxi-2’-fluoroadenosina, 2’,3’-didesoxi-2’-fluoroinosina, 2’,3’-didesoxi-2’-fluorotimidina, 2’,3’didesoxi-2’-fluorocitosina, 2’3’-didesoxi-2’,3’-dideshidro-2’-fluorotimidina (Fd4T), 2’3’-didesoxi-2’-beta-fluoroadenosina (F-ddA), 2’3’-didesoxi-2’-beta-fluoroinosina (F-ddI) y 2’,3’-didesoxi-2’-beta-flurocitosina (F-ddC), fosfomonoformiato trisódico, trifluorotimidina, 3’azido-3’-timidina (AZT), didesoxiinosina (ddI) e idoxuridina.

[0324] En ciertas realizaciones, se administra un compuesto de la invención conjuntamente con un agente antibacteriano. Como agentes antibacterianos adecuados, se incluyen, aunque sin limitación, clorhidrato de amanfadina, sulfato de amanfadina, amikacina, sulfato de amikacina, aminoglicósidos, amoxicilina, ampicilina, amsamicinas, bacitracina, beta-lactamas, candicidina, capreomicina, carbenicilina, cefalexina, cefaloridina, cefalotina, cefazolina, cefapirina, cefradina, cefaloglicina, quilomfenicoles, clorhexidina, gluconato de clorhexidina, clorhidrato de clorhexidina, cloroxina, clorquiraldol, clortetraciclina, clorhidrato de clortetraciclina, ciprofloxacina, circulina, clindamicina, clorhidrato de clindamicina, clotrimazol, cloxacilina, demeclociclina, diclosxacilina, diyodohidroxiquina, doxiciclina, etambutol, clorhidrato de etambutol, eritromicina, estolato de eritromicina, estearato de erhmicina, farnesol, floxacilina, gentamicina, sulfato de gentamicina, gramicidina, giseofulvina, haloprogina, haloquinol, hexaclorofeno, iminocilclina, yodoclorhidroxiquina, kanamicina, sulfato de kanamicina, lincomicina, lineomicina, clorhidrato de lineomicina, macrólidos, meclociclina, metaciclina, clorhidrato de metaciclina, metenina, hipurato de metenamina, mandelato de metenamina, meticilina, metonidazol, miconazol, clorhidrato de miconazol, minociclina, clorhidrato de minociclina, mupirocina, nafcilina, neomicina, sulfato de neomicina, netimicina, sulfato de netilmicina, nitrofurazona, norfloxacina, nistatina, octopirox, oleandomicina, orcefalosporinas, oxacilina, oxitetraciclina, clorhidrato de oxitetraciclina, paraclorometaxilenol, paromomicina, sulfato de paromomicina, penicilinas, penicilina G, penicilina V, pentamidina, clorhidrato de pentamidina, feneticilina, polimixinas, quinolonas, sulfato de estreptomicina, tetraciclina, tobramicina, tomaftato, triclosán, trifampina, rifamicina, rolitetraciclina, espectinomicina, espiramicina, estruptomicina, sulfonamida, tetraciclinas, tetraciclina, tobramicina, sulfato de tobramicina, triclocarbán, triclosán, trimetoprim-sulfametoxazol, tilosina, vancomicina y tirotricina.

[0325] En ciertas realizaciones, se administra un compuesto de la invención conjuntamente con un supresor de la tos, un descongestionante o un expectorante.

[0326] Como ejemplos de retinoides que pueden ser administrados con los inhibidores del TRPA1 en cuestión, v.g., cuando el inhibidor del TRPA1 puede ser usado para reducir el dolor y/o el efecto inflamatorio del retinoide, se incluyen, aunque sin limitación, compuestos tales como el ácido retinoico (tanto cis como trans), el retinol, el adapaleno, la vitamina A y el tazaroteno. Los retinoides son útiles en el tratamiento del acné, la psoriasis, la rosácea, las arrugas y los cánceres de piel, y precursores del cáncer, tales como el melanoma y la queratosis actínica.

[0327] De forma similar, se pueden usar los inhibidores del TRPA1 en cuestión conjuntamente con agentes queratolíticos, entre los que se incluyen peróxido de benzoílo, alfa-hidroxiácidos, ácidos de frutas, ácido glicólico, ácido salicílico, ácido azelaico, ácido tricloroacético, ácido láctico y piroctona.

[0328] Los inhibidores del TRPA1 en cuestión pueden ser también administrados junto con agentes depilatorios (pérdida de pelo).

[0329] Los inhibidores del TRPA1 en cuestión pueden ser usados con agentes antiacné, agentes antieczema y agentes antipsoriásicos. Como compuestos particularmente útiles en el tratamiento del acné, se incluyen el ácido azelaico (un diácido alifático con propiedades antiacné), la antralina (un compuesto difenólico con propiedades antifúngicas y antipsoriásicas) y el masoprocol (ácido nordihidroguayarético, un compuesto tetrafenólico con propiedades antioxidantes, también útil en el tratamiento de la queratosis actínica) y sus análogos (tales como el austrobailignano 6, el oxoaustrobailignano 6, el 4’-O-metil-7,7’-dioxoaustrobailignano 6, el macelignano, el ácido desmetildihidroguayarético, el 3,3’,4-trihidroxi-4’-metoxilignano, la saururenina, el 4-hidroxi-3,3’,4’-trimetoxilignano y el isoanwulignano). Como agentes antieczema, se incluyen el pimecrolimus y el tacrolimus. Como principios activos antipsoriásicos adecuados para uso en la presente invención, se incluyen retinoides (incluyendo isómeros y derivados del ácido retinoico, así como otros compuestos que se unen al receptor del ácido retinoico, tales como el ácido retinoico, la acitretina, el ácido 13-cis-retinoico (isotretinoína), el ácido 9-cis-retinoico y el retinoato de tocoferilo (éster de tocoferol del ácido retinoico (trans o cis)), etretinato, motretinida, 1-(13-cis-retinoiloxi)-2-propanona, 1-(13cis-retinoiloxi)-3-decanoiloxi-2-propanona, 1,3-bis-(13-cis-retinoiloxi)-2-propanona, 2-(13-cis-retinoiloxi)acetofenona, propanoato de 13-cis-retinoiloximetil-2,2-dimetilo, 2-(13-cis-retinoiloxi)-n-metilacetamida, 1-(13-cis-retinoiloxi)-3hidroxi-2-propanona, 1-(13-cis-retinoiloxi)-2,3-dioleoilpropanona, 13-cis-retinoato de succinimdilo, adapaleno y tazaroteno), ácido salicílico (sal monoamónica), antralina, 6-azauridina, derivados de la vitamina D (incluyendo, aunque sin limitación, Rocaltrol (Roche Laboratories), EB 1089 (24a,26a,27a-trihomo-22,24-dieno-1a,25-(OH)2-D3), KH 1060 (20-epi-22-oxa-24a,26a,27a-trihomo-1a,25-(OH)2-D3), MC 1288, GS 1558, CB 1093, 1,25-(OH)2-16-eno-D3, 1,25-(OH)2-16-en-23-ino-D3 y 25-(OH)2-16-en-23-ino-D3, 22-oxacalcitriol, 1a-(OH)D5 (Universidad de Illinois), ZK 161422 y ZK 157202 (Institute of Medical Chemistry-Schering AG), alfacalcidol, calcifediol, calcipotriol (calcipotrieno), maxacalcitriol, colecalciferol, doxercalciferol, ergocalciferol, falecalcitriol, lexacalcitol, maxacalcitol, paricalcitol, secalciferol, seocalcitol, tacaleitol, calcipotrieno, calcitriol y otros análogos descritos en la Patente EE.UU. Nº 5.994.332), pirogalol y tacalcitol.

[0330] Los inhibidores del TRPA1 en cuestión pueden ser también administrados con vitaminas y sus derivados, incluyendo Vitamina A, ácido ascórbico (Vitamina C), alfa-tocoferol (Vitamina E), 7-deshidrocolesterol (Vitamina D), Vitamina K, ácido alfa-lipoico, antioxidantes liposolubles y similares.

[0331] También se pueden usar los inhibidores del TRPA1 en cuestión con protectores cutáneos, tales como alantoína y esculina.

[0332] En ciertas realizaciones, se administran conjuntamente dos o más compuestos de la invención. Cuando se administran conjuntamente dos o más compuestos de la invención, los dos o más compuestos pueden tener un perfil de selectividad y una actividad funcional similares, o los dos o más compuestos pueden tener un perfil de selectividad y una actividad funcional diferentes. A modo de ejemplo, los dos o más compuestos pueden ser ambos aproximadamente 10, 100 ó 1.000 veces más selectivos para la antagonización de una función de TRPA1 que para TRPV1, TRPV5 y TRPV6 (v.g., los dos o más compuestos tienen un perfil de selectividad similar), y además pueden inhibir una función de TRPA1 con una CI50 similar (v.g., una actividad funcional similar). Alternativamente, uno de los dos o más compuestos puede inhibir selectivamente el TRPA1, mientras que el otro de los dos o más compuestos inhibe tanto el TRPA1 como el TRPV1 (v.g., los dos o más compuestos tienen diferentes perfiles de selectividad). Se contempla la administración de combinaciones de dos o más compuestos de la invención que tengan propiedades similares o diferentes.

[0333] En ciertas realizaciones, se administra un compuesto de la invención conjuntamente con uno o más compuestos adicionales que antagonizan la función de un canal diferente. A modo de ejemplo, se puede administrar un compuesto de la invención conjuntamente con uno o más compuestos que antagonizan el TRPV1, el TRPM8 y/o el TRPV3. El/los compuesto(s) que antagonizan(n) el TRPV1, el TPRM8 o el TRPV3 pueden ser selectivos para TRPV1, TRPM8 o TRPV3 (v.g., inhiben el TRPV1 o el TRPV3 10, 100 ó 1.000 veces más potentemente que el TRPA1). Alternativamente, el/los compuesto(s) que antagoniza(n) el TRPV1 o el TRPV3 pueden tener una reacción cruzada con otros canales TRP.

[0334] En otras determinadas realizaciones, se administra un compuesto de la invención conjuntamente con uno o más agentes o regímenes terapéuticos adicionales apropiados para la lesión, enfermedad, afección o trastorno particular que se esté tratando.

Composiciones farmacéuticas

[0335] Aunque es posible administrar solo un compuesto de la presente invención, es preferible administrar el compuesto como una formulación farmacéutica (composición). Los compuestos según la invención pueden ser formulados para administración por cualquier vía conveniente para uso en medicina humana o veterinaria.

[0336] Independientemente de la vía de administración seleccionada, los compuestos de la presente invención, que pueden ser usados en una forma hidratada adecuada, y/o las composiciones farmacéuticas de la presente invención, son formulados en formas de dosificación farmacéuticamente aceptables, tal como se describe a continuación, o por otros métodos convencionales conocidos para los expertos en la técnica.

[0337] Así, otro aspecto de la presente invención proporciona composiciones farmacéuticamente aceptables que contienen una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de los compuestos antes descritos, formulados junto con uno o más soportes (aditivos) y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables. Tal como se describe con detalle a continuación, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser especialmente formuladas para administración en forma sólida o líquida, incluyendo las adaptadas para lo siguiente: (1) administración oral, por ejemplo, pócimas (soluciones o suspensiones acuosas o no acuosas), tabletas, bolos, polvos, gránulos o pastas para aplicación a la lengua; (2) administración parenteral, por ejemplo, por inyección subcutánea, intramuscular o intravenosa, como, por ejemplo, una solución o suspensión estéril; (3) aplicación tópica, por ejemplo, como crema, ungüento, o spray aplicado a la piel; (4) vía intravaginal o intrarrectal, por ejemplo, como pesario, crema o espuma; o

(5): inhalación. Sin embargo, en ciertas realizaciones, los compuestos en cuestión pueden ser simplemente disueltos

: o suspendidos en agua estéril. En ciertas realizaciones, la preparación farmacéutica es apirogénica, es decir, que no eleva la temperatura corporal de un paciente.

[0338] La expresión "cantidad terapéuticamente efectiva", tal como se usa aquí, significa aquella cantidad de un compuesto, material o composición que contiene un compuesto de la presente invención que es efectiva para producir algún efecto terapéutico deseado por inhibición de una función del TRPA1 en al menos una subpoblación de células en un animal y así bloquear las consecuencias biológicas de esa función en las células tratadas, con una razón beneficio/riesgo razonable aplicable a cualquier tratamiento médico.

[0339] Las expresiones "administración sistémica", "administrado sistémicamente", "administración periférica" y "administrado periféricamente", tal como se usan aquí, significan la administración de un compuesto, fármaco u otro material de cualquier manera que no sea directamente en el sistema nervioso central, de tal forma que entre en el sistema del paciente y, por lo tanto, esté sujeto al metabolismo y otros procesos similares, por ejemplo, la administración subcutánea.

[0340] La expresión "farmacéuticamente aceptable" es aquí empleada para hacer referencia a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que resulten adecuados, dentro del alcance del juicio médico fundado, para uso en contacto con los tejidos de los seres humanos y de los animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otros problemas o complicaciones, de forma proporcionada con una razón beneficio/riesgo razonable. La expresión "soporte farmacéuticamente aceptable", tal como se usa aquí, significa un material, composición o vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como un rellenante líquido o sólido, un diluyente, un excipiente, un solvente o un material encapsulante, implicado en portar o transportar los antagonistas en cuestión de un órgano o porción del cuerpo a otro órgano o porción del cuerpo. Cada soporte debe ser "aceptable", en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación, y no perjudicial para el paciente. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como soportes farmacéuticamente aceptables incluyen: (1) azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; (2) almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; (3) celulosa y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa sódica, etilcelulosa y acetato de celulosa; (4) tragacanto en polvo;

(5) malta; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; (9) aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semillas de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja; (10) glicoles, tales como propilenglicol; (11) polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; (12) ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; (13) agar; (14) agentes tamponantes, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; (15) ácido algínico; (16) agua libre de pirógenos; (17) solución salina isotónica; (18) solución de Ringer; (19) alcohol etílico; (20) soluciones de tampón fosfato; y (21) otras substancias compatibles no tóxicas empleadas en formulaciones farmacéuticas.

[0341] Como se ha expuesto anteriormente, ciertas realizaciones de los presentes compuestos pueden contener un grupo funcional básico, tal como amino o alquilamino, y son, por lo tanto, capaces de formar sales farmacéuticamente aceptables con ácidos farmacéuticamente aceptables. El término "sales farmacéuticamente aceptables" en este sentido se refiere a las sales de adición de ácido inorgánico y orgánico relativamente no tóxicas de los compuestos de la presente invención. Estas sales pueden ser preparadas in situ durante el aislamiento y la purificación finales de los compuestos de la invención, o haciendo reaccionar por separado un compuesto purificado de la invención en su forma de base libre con un ácido orgánico o inorgánico adecuado y aislando la sal así formada. Como sales representativas, se incluyen las sales bromhidrato, clorhidrato, sulfato, bisulfato, fosfato, nitrato, acetato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactobionato y laurilsulfonato y similares. (Véase, por ejemplo, Berge et al. (1977), "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66: 1-19).

[0342] Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos en cuestión incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario de los compuestos, v.g., a partir de ácidos orgánicos o inorgánicos no tóxicos. Por ejemplo, dichas sales no tóxicas convencionales incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos, tales como clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, sulfámico, fosfórico, nítrico y similares; y las sales preparadas a partir de ácidos orgánicos, tales como acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, palmítico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, glutámico, benzoico, salicílico, sulfanílico, 2acetoxibenzoico, fumárico, toluensulfónico, metanosulfónico, etanodisulfónico, oxálico, isotiónico y similares.

[0343] En otros casos, los compuestos de la presente invención pueden contener uno o más grupos funcionales ácidos y, por lo tanto, son capaces de formar sales farmacéuticamente aceptables con bases farmacéuticamente aceptables. El término "sales farmacéuticamente aceptables" en estos casos se refiere a las sales de adición de bases inorgánicas y orgánicas relativamente no tóxicas de los compuestos de la presente invención. Estas sales pueden igualmente ser preparadas in situ durante el aislamiento y la purificación finales de los compuestos, o por reacción por separado del compuesto purificado en su forma de ácido libre con una base adecuada, tal como el hidróxido, carbonato o bicarbonato de un catión metálico farmacéuticamente aceptable, con amoníaco o con una amina orgánica primaria, secundaria o terciaria farmacéuticamente aceptable. Como sales alcalinas o alcalinotérreas representativas, se incluyen las sales de litio, sodio, potasio, calcio, magnesio y aluminio y similares. Como aminas orgánicas representativas útiles para la formación de sales de adición de base, se incluyen etilamina, dietilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina y similares. (Véase, por ejemplo, Berge et al., supra)

[0344] También puede haber presencia en las composiciones de agentes humectantes, emulsionantes y lubricantes, tales como el laurilsulfato de sodio y el estearato de magnesio, así como agentes colorantes, agentes de liberación, agentes de revestimiento, agentes edulcorantes, saborizantes y perfumantes, conservantes y antioxidantes.

[0345] Como ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables, se incluyen: (1) antioxidantes hidrosolubles, tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio y similares; (2) antioxidantes solubles en aceites, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol y similares; y (3) agentes quelantes de metales, tales como ácido cítrico, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico y similares.

[0346] Las formulaciones de la presente invención incluyen las que resultan adecuadas para administración oral, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), rectal, vaginal y/o parenteral. Las formulaciones pueden ser convenientemente presentadas en forma de dosificación unitaria y pueden ser preparadas por cualquier método bien conocido en la técnica de la farmacia. La cantidad de principio activo que puede combinarse con un material de soporte para producir una sola forma de dosificación variará dependiendo del hospedador que se esté tratando y del modo particular de administración. La cantidad de principio activo que puede combinarse con un material de soporte para producir una sola forma de dosificación será generalmente aquella cantidad de compuesto que produzca un efecto terapéutico. En general, de un cien por ciento, esta cantidad variará de aproximadamente un 1 por ciento a aproximadamente un noventa y nueve por ciento de principio activo, preferiblemente de aproximadamente un 5 por ciento a aproximadamente un 70 por ciento, más preferiblemente de aproximadamente un 10 por ciento a aproximadamente un 30 por ciento.

[0347] Los métodos de preparación de estas formulaciones o composiciones incluyen la etapa de asociación de un compuesto de la presente invención con el soporte y, eventualmente, uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones son preparadas asociando uniforme e íntimamente un compuesto de la presente invención con soportes líquidos, o soportes sólidos finamente divididos, o ambos, y luego, si es necesario, dando forma al producto.

[0348] Las formulaciones de la invención adecuadas para administración oral pueden estar en forma de cápsulas, cachets, píldoras, tabletas, pastillas para chupar (utilizando una base de sabor, normalmente sacarosa y acacia o tragacanto), polvos, gránulos, o como una solución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso, o como una emulsión líquida de aceite en agua o de agua en aceite, o como un elixir o jarabe, o como pastillas (usando una base inerte, tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia), y/o como colutorios y similares, cada uno de los cuales contiene una cantidad predeterminada de un compuesto de la presente invención como principio activo. También se puede administrar un compuesto de la presente invención como un bolo, un electuario o una pasta.

[0349] En las formas de dosificación sólidas de la invención para administración oral (cápsulas, tabletas, píldoras, grageas, polvos, gránulos y similares), se mezcla el principio activo con uno o más soportes farmacéuticamente aceptables, tales como citrato de sodio o fosfato dicálcico, y/o cualquiera de los siguientes: (1) rellenantes o expansores, tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y/o ácido silícico; (2) ligantes, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y/o acacia; (3) humectantes, tales como glicerol; (4) agentes desintegrantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o de tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos y carbonato de sodio; (5) agentes retardadores de la solución, tales como parafina; (6) aceleradores de la absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario; (7) agentes hidratantes, tales como, por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol; (8) absorbentes, tales como caolín y arcilla bentonita; (9) lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, laurilsulfato de sodio y sus mezclas; y (10) agentes colorantes. En el caso de las cápsulas, las tabletas y las píldoras, las composiciones farmacéuticas pueden también incluir agentes tamponantes. También se pueden emplear composiciones sólidas de un tipo similar como rellenantes en cápsulas de gelatina blanda y dura utilizando excipientes tales como lactosa o azúcares lácteos, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares.

[0350] Se puede producir una tableta por compresión o moldeo, eventualmente con uno o más ingredientes accesorios. Se pueden preparar tabletas comprimidas usando un ligante (por ejemplo, gelatina o hidroxipropilmetilcelulosa), un lubricante, un diluyente inerte, un conservante, un desintegrante (por ejemplo, glicolato de sodio y almidón o carboximetilcelulosa sódica entrecruzada), un tensioactivo o un agente dispersante. Se pueden producir tabletas moldeadas moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte.

[0351] Las tabletas, y otras formas de dosificación sólidas de las composiciones farmacéuticas de la presente invención, tales como grageas, cápsulas, píldoras y gránulos, pueden ser eventualmente marcadas o preparadas con revestimientos y cortezas, tales como revestimientos entéricos y otros revestimientos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica. También se pueden formular para obtener una liberación lenta o controlada del principio activo de su interior usando, por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa en proporciones variables para obtener el perfil de liberación deseado, otras matrices poliméricas, liposomas y/o microesferas. Se pueden esterilizar, por ejemplo, por filtración a través de un filtro de retención de bacterias o incorporando agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que pueden disolverse en agua estéril o algún otro medio inyectable estéril inmediatamente antes de su uso. Estas composiciones pueden también eventualmente contener agentes opacificantes y pueden ser de una composición tal que liberen el/los principio(s) activo(s) sólo o, preferiblemente, en una cierta porción del tracto gastrointestinal, eventualmente de un modo retardado. Como ejemplos de composiciones embebedoras que pueden ser utilizadas, se incluyen substancias poliméricas y ceras. El principio activo puede también estar en forma microencapsulada, si resulta apropiado, con uno o más de los excipientes antes descritos.

[0352] Como formas de dosificación líquidas para administración oral de los compuestos de la invención, se incluyen emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además del principio activo, las formas de dosificación líquidas pueden contener diluyentes inertes comúnmente empleados en la técnica, tales como, por ejemplo, agua u otros solventes, agentes solubilizantes y emulsionadores, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, aceites (en particular, aceites de semillas de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos del sorbitán, y sus mezclas.

[0353] Además de diluyentes inertes, las composiciones orales pueden incluir también adyuvantes, tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y suspensores y agentes edulcorantes, saborizantes, colorantes, perfumantes y conservantes.

[0354] Las suspensiones, además de los compuestos activos, pueden contener agentes suspensores, tales como por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilensorbitol y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, y sus mezclas.

[0355] Es sabido que los esteroles, tales como el colesterol, formarán complejos con ciclodextrinas. Así, en realizaciones preferidas, cuando el inhibidor es un alcaloide esteroideo, puede ser formulado con ciclodextrinas, tales como a-, 1- y y-ciclodextrina, dimetil-1-ciclodextrina y 2-hidroxipropil-1-ciclodextrina.

[0356] Las formulaciones de las composiciones farmacéuticas de la invención para administración rectal, vaginal o uretral pueden presentarse como un supositorio, que puede ser preparado mezclando uno o más compuestos de la invención con uno o más excipientes o soportes no irritantes adecuados, que incluyen, por ejemplo, manteca de cacao, polietilenglicol, una cera para supositorios o un salicilato, y que es sólidos a temperatura ambiente, pero líquido a la temperatura corporal, y, por lo tanto, se fundirá en el recto o en la cavidad vaginal y liberará el compuesto activo.

[0357] Alternativa o adicionalmente, las composiciones pueden ser formuladas para administración mediante un catéter, stent, alambre u otro dispositivo intraluminal. La administración mediante estos dispositivos puede ser especialmente útil para la administración a la vejiga, la uretra, el uréter, el recto o el intestino.

[0358] Como formulaciones de la presente invención que son adecuadas para administración vaginal, se incluyen también pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de spray que contienen soportes que se sabe en la técnica que son apropiados.

[0359] Las formas de dosificación para la administración tópica o transdérmica de un compuesto de esta invención incluyen polvos, sprays, ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, soluciones, parches e inhalantes. El compuesto activo puede ser mezclado en condiciones estériles con un soporte farmacéuticamente aceptable y con cualquier conservante, tampón o propulsor que pueda ser necesario.

[0360] Los ungüentos, pastas, cremas y geles pueden contener, además de un compuesto activo de esta invención, excipientes, tales como grasas animales y vegetales, aceites, ceras, parafinas, almidón, tragacanto, derivados de celulosa, polietilenglicoles, siliconas, bentonitas, ácido silícico, talco y óxido de zinc, o sus mezclas.

[0361] Los polvos y sprays pueden contener, además de un compuesto de esta invención, excipientes, tales como lactosa, talco, ácido silícico, hidróxido de aluminio, silicatos de calcio y polvo de poliamida, o mezclas de estas substancias. Los sprays pueden adicionalmente contener propulsores habituales, tales como clorofluorohidrocarbonos e hidrocarburos no substituidos volátiles, tales como butano y propano.

[0362] Los parches transdérmicos tienen la ventaja añadida de proporcionar un suministro controlado de un compuesto de la presente invención al cuerpo. Dichas formas de dosificación pueden ser preparadas disolviendo o dispersando el compuesto en el medio apropiado. También se pueden usar potenciadores de la absorción para aumentar el flujo del compuesto a través de la piel. Se puede controlar la velocidad de dicho flujo disponiendo de una membrana controladora de la velocidad o dispersando el compuesto en una matriz o gel polimérico.

[0363] También se contemplan dentro del alcance de esta invención formulaciones oftálmicas, ungüentos oculares, polvos, soluciones y similares.

[0364] Las expresiones "administración parenteral" y "administrado parenteralmente", tal como se usan aquí, significan modos de administración distintos de la administración enteral y tópica, normalmente por inyección, y se incluyen, sin limitación, la inyección y la infusión intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal e intraestemal.

[0365] Las composiciones farmacéuticas de esta invención adecuadas para administración parenteral contienen uno o más compuestos de la invención en combinación con una o más soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas isotónicas estériles farmacéuticamente aceptables, o polvos estériles, que pueden ser reconstituidos en soluciones o dispersiones inyectables estériles justo antes de su uso, los cuales pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostáticos, solutos que hacen que la formulación sea isotónica con respecto a la sangre del receptor pretendido, o agentes suspensores o espesantes.

[0366] Como ejemplos de soportes acuosos y no acuosos adecuados que pueden ser empleados en las composiciones farmacéuticas de la invención, se incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol y similares) y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, tales como aceite de oliva, y ésteres orgánicos inyectables, tales como oleato de etilo. Se puede mantener la fluidez apropiada, por ejemplo, mediante el uso de materiales de revestimiento, tales como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de las dispersiones y mediante el uso de surfactantes.

[0367] Estas composiciones pueden también contener adyuvantes, tales como conservantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes y agentes dispersantes. Se puede asegurar la prevención de la acción de los microorganismos mediante la inclusión de diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabén, clorobutanol, ácido fenolsórbico y similares. También puede ser deseable incluir agentes isotónicos, tales como azúcares, cloruro de sodio y similares, en las composiciones. Además, se puede conseguir la absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable mediante la inclusión de agentes que retrasan la absorción, tales como monoestearato de aluminio y gelatina.

[0368] En algunos casos, con objeto de prolongar el efecto de un fármaco, es deseable ralentizar la absorción del fármaco a partir de una inyección subcutánea o intramuscular. Se puede conseguir esto mediante el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo que tiene una escasa solubilidad en agua. La velocidad de absorción del fármaco depende entonces de su velocidad de disolución, que a su vez puede depender del tamaño del cristal y de la forma cristalina. Alternativamente, se consigue una absorción retardada de una forma de fármaco administrada parenteralmente disolviendo o suspendiendo el fármaco en un vehículo oleoso.

[0369] Se preparan formas inyectables depot formando matrices de microencapsulación de los compuestos en cuestión en polímeros biodegradables, tales como polilactida-poliglicolida. Dependiendo de la proporción entre fármaco y polímero y de la naturaleza del polímero particular empleado, se puede controlar la velocidad de liberación del fármaco. Como ejemplos de otros polímeros biodegradables, se incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhídridos). También se preparan formulaciones inyectables depot atrapando el fármaco en liposomas o microemulsiones compatibles con los tejidos corporales.

[0370] Cuando se administran los compuestos de la presente invención como productos farmacéuticos a humanos y animales, se pueden dar per se o como una composición farmacéutica que contenga, por ejemplo, de un 0,1 a un 99,5% (más preferiblemente de un 0,5 a un 90%) de principio activo en combinación con un soporte farmacéuticamente aceptable.

[0371] La adición del compuesto activo de la invención a piensos para animales es preferiblemente realizada preparando una premezcla de pienso apropiada que contenga el compuesto activo en una cantidad efectiva e incorporando la premezcla a la ración completa.

[0372] Alternativamente, se puede mezclar un concentrado intermedio o suplemento alimentario que contenga el principio activo en el pienso. La forma en que se preparan y se administran dichas premezclas de piensos y las raciones completas se describe en libros de referencia (tales como "Applied Animal Nutrition", W.H. Freedman and Co., San Francisco, EE.UU., 1969, o "Livestock Feeds and Feeding" O and B Books, Corvallis, Ore., EE.UU., 1977).

[0373] También se puede disponer de métodos de introducción por dispositivos recargables o biodegradables. Se han desarrollado y se han estudiado in vivo en los últimos años diversos dispositivos poliméricos de liberación lenta para la administración controlada de fármacos, incluyendo productos biofarmacéuticos proteicos. Se puede usar una variedad de polímeros biocompatibles (incluyendo hidrogeles), incluyendo polímeros tanto biodegradables como no degradables, para formar un implante para la liberación mantenida de un compuesto en un sitio diana particular.

[0374] Se pueden variar los niveles reales de dosificación de los principios activos en las composiciones farmacéuticas de esta invención para obtener una cantidad del principio activo que sea efectiva para conseguir la respuesta terapéutica deseada para un paciente, composición y modo de administración particulares, sin que resulte tóxica para el paciente.

[0375] El nivel de dosificación deseado dependerá de una variedad de factores, incluyendo la actividad del compuesto particular de la presente invención empleado, o del éster, sal o amida del mismo, la vía de administración, el tiempo de administración, la velocidad de excreción del compuesto particular empleado, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales usados en combinación con el compuesto particular empleado, la edad, el sexo, el peso, el estado, la salud general y la historia médica previa del paciente tratado y factores similares bien conocidos en las artes médicas.

[0376] Un médico o veterinario con conocimientos ordinarios en la técnica puede fácilmente determinar y prescribir la cantidad efectiva de la composición farmacéutica requerida. Por ejemplo, el médico o veterinario podría comenzar con dosis de los compuestos de la invención empleados en la composición farmacéutica a niveles inferiores a lo necesario para alcanzar el efecto terapéutico deseado y aumentar gradualmente la dosificación hasta alcanzar el efecto deseado.

[0377] En general, una dosis diaria adecuada de un compuesto de la invención será aquella cantidad del compuesto correspondiente a la dosis más baja efectiva para producir un efecto terapéutico. Dicha dosis efectiva dependerá generalmente de los factores antes descritos. En general, las dosis intravenosas, intracerebroventriculares y subcutáneas de los compuestos de esta invención para un paciente oscilarán entre aproximadamente 0,0001 y aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal al día.

[0378] Si se desea, se puede administrar la dosis diaria efectiva del compuesto activo como dos, tres, cuatro, cinco, seis o más subdosis administradas por separado a intervalos apropiados a lo largo del día, eventualmente en formas de dosificación unitaria.

[0379] El paciente que recibe este tratamiento es cualquier animal que lo necesite, incluyendo primates, en particular humanos, y otros mamíferos, tales como équidos, vacuno, cerdos y ovejas, y aves de corral y mascotas en general.

[0380] El compuesto de la invención puede ser administrado como tal o en mezclas con soportes farmacéuticamente aceptables y/o estériles, y también puede ser administrado junto con otros agentes antimicrobianos, tales como penicilinas, cefalosporinas, aminoglicósidos y glicopéptidos. La terapia conjunta incluye así la administración secuencial, simultánea y por separado del compuesto activo de tal forma que los efectos terapéuticos del primero administrado sean aún detectables cuando se administra la siguiente terapia.

[0381] La presente invención contempla la formulación de los compuestos en cuestión en cualquiera de las composiciones y preparaciones farmacéuticas antes mencionadas. Además, la presente invención contempla la administración por cualquiera de las vías de administración anteriores. Un experto en la técnica puede seleccionar la formulación y la vía de administración apropiadas en base a la afección que se esté tratando y a la salud general, la edad y la talla del paciente en tratamiento.

Composiciones de ácidos nucleicos y de aminoácidos

[0382] La presente descripción proporciona composiciones y composiciones farmacéuticas que contienen, consisten en, o consisten esencialmente en, polipéptidos y ácidos nucleicos TRPA1 particulares. Dichos polipéptidos y ácidos nucleicos pueden ser usados, por ejemplo, en ensayos de rastreo de fármacos o para preparar cebadores o sondas para el estudio de la expresión o la actividad del TRPA1 en células, tejidos u organismos. Tal como se usa aquí, el término "aislado", cuando se usa para hacer referencia a composiciones de ácidos nucleicos y polipéptidos, se refiere a ácidos nucleicos o polipéptidos existentes en un estado distinto al estado en el que existen en la naturaleza. En otras palabras, el término es utilizado para indicar algún nivel de separación con respecto a otras proteínas y componentes celulares con los que la proteína se encuentra endógenamente. Aislado, cuando se usa en este contexto, no significa necesariamente que la proteína o el ácido nucleico estén en forma purificada. Adicionalmente, el término "aislado" no pretende implicar que el polipéptido o el ácido nucleico esté aislado de un organismo. Más bien, el término también incluye ácidos nucleicos y polipéptidos producidos recombinantemente.

[0383] La descripción proporciona un polipéptido aislado que contiene, consiste en, o consiste esencialmente en, la secuencia de aminoácidos representada en la SEC Nº ID.: 1. Dichos polipéptidos pueden incluir la secuencia idéntica o pueden incluir una, dos o tres substituciones, adiciones o deleciones conservadoras. La descripción proporciona un polipéptido aislado codificado por una secuencia de ácido nucleico que contiene, consiste en, o consiste esencialmente en, una secuencia nucleotídica representada en la SEC Nº ID.: 2, o por una secuencia nucleotídica que varía con respecto a la SEC Nº ID.: 2 debido a la degeneración del código genético.

[0384] La descripción también proporciona un ácido nucleico aislado que contiene, consiste en, o consistente esencialmente en, una secuencia nucleotídica representada en la SEC Nº ID.: 2, o una secuencia nucleotídica que varía con respecto a la SEC Nº ID.: 2 debido a la degeneración del código genético. La descripción también proporciona un ácido nucleico aislado que contiene, consiste en, o consiste esencialmente en, una secuencia nucleotídica que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos representada en la SEC. Nº ID. 1.

[0385] La descripción proporciona un vector de expresión, que se replica en al menos una de una célula procariótica y una célula eucariótica. El vector de expresión contiene cualquiera de los ácidos nucleicos TRPA1 anteriores. De forma similar, se proporcionan células que contienen estos vectores de expresión, cuyas células expresan la proteína TRPA1 codificada por el ácido nucleico expresado. El polipéptido expresado puede conservar una o más funciones del TRPA1. Por ejemplo, la célula que contiene el vector de expresión expresa TRPA1 y media en la corriente y/o el flujo de iones (v.g., una corriente mediada por TRPA1). Adicionalmente, se proporcionan métodos de producción de un polipéptido. El método incluye el cultivo de una de las células anteriores (v.g., una célula que expresa polipéptido TRPA1) en un medio de cultivo celular adecuado para expresar dicho polipéptido.

[0386] La célula es transitoriamente transfectada con el vector de expresión y expresa transitoriamente proteína TRPA1. Alternativamente, la célula es establemente transfectada con el vector de expresión y se establece una línea celular estable que expresa TRPA1. La célula que contiene el vector de expresión puede no expresar endógenamente proteína TRPA1 (v.g., la célula no expresa niveles apreciables de proteína TRPA1 en ausencia del vector de expresión). Alternativamente, la célula que contiene el vector de expresión expresa endógenamente proteína TRPA1.

[0387] Se pueden usar células que expresan TRPA1, por ejemplo, células manipuladas para contener un vector de expresión de TRPA1, en ensayos de rastreo para identificar compuestos que modulen una corriente mediada por TRPA1. Como células adecuadas, se incluyen, sin limitación, células procarióticas y células eucarióticas. Como ejemplos de eucariotas, se incluyen vertebrados e invertebrados. Como ejemplos de eucariotas, se incluyen, aunque sin limitación, humanos, ratones, ratas, gatos, perros, conejos, ovejas, vacas, caballos, cabras, primates no humanos, ranas, sapos, peces, pollos, moscas, gusanos y levaduras. Como ejemplos de procariotas, se incluyen bacterias. Cuando se hace referencia a "una célula", se entiende que se refiere al rastreo en al menos una célula (v.g., una sola célula o un cultivo de células). Se pueden proporcionar las células en suspensión o habiendo crecido de manera adherente. Se pueden usar células de cualquier tiempo de desarrollo y tejido. Como ejemplos de células, se incluyen células embrionarias, células larvarias, células juveniles, células fetales y células de adultos. Células y líneas celulares ejemplares pueden derivar de cualquier tipo de tejido o de célula. Las células pueden ser neuronas sensoriales o ganglios nudosos. Las células incluyen células primarias y líneas de células transformadas.

[0388] Como se ha indicado anteriormente, la descripción contempla un vector de expresión que contiene una secuencia codificante de una proteína TRPA1, como aquí se presenta. Un "vector" es un replicón, tal como un plásmido, fago o cósmido, al que se puede unir otro segmento de ADN. El término "vector" se refiere a una molécula de ácido nucleico capaz de transportar otro ácido nucleico al que se ha unido. Un tipo de vector es un episoma, que es un ácido nucleico capaz de replicación extracromosómica. Se pueden usar también vectores capaces de replicación autónoma y/o de expresión de los ácidos nucleicos a los que están unidos. Se hace aquí referencia a los vectores capaces de dirigir la expresión de genes a los que están operativamente unidos como "vectores de expresión". En general, los vectores de expresión que tienen utilidad en técnicas de ADN recombinante están con frecuencia en forma de "plásmidos", que se refieren generalmente a bucles de ADN de doble hebra circulares que, en su forma de vector, no están unidos al cromosoma. Sin embargo, la descripción pretende incluir esas otras formas de vectores de expresión que participan en funciones equivalentes y que a partir de aquí se harán conocidas en la técnica.

[0389] Una "secuencia codificante" de ADN o de ácido nucleico es una secuencia de ADN que se transcribe y traduce en un polipéptido in vivo cuando se pone bajo el control de secuencias reguladoras apropiadas. Los límites de la secuencia codificante vienen determinados por un codón de iniciación en el extremo 5’ (amino) y un codón de parada de la traducción en el extremo 3’ (carboxilo). Una secuencia codificante de la presente descripción puede incluir, aunque sin limitación, ADNc procedente de ARNm eucariótico, secuencias de ADN genómico procedentes de ADN eucariótico (v.g., de mamíferos) y secuencias de ADN sintéticas. Se puede localizar una secuencia de señal de poliadenilación y finalización de la transcripción en 3’ de la secuencia codificante.

[0390] Las secuencias reguladoras o elementos reguladores de ácido nucleico o ADN son secuencias de control de la transcripción y de la traducción, tales como promotores, potenciadores, señales de poliadenilación y finalizadores, que permiten y/o regulan la expresión de una secuencia codificante en una célula huésped. Las secuencias reguladoras para dirigir la expresión de canales iónicos eucarióticos y marcadores detectables de ciertas realizaciones están reconocidas en la técnica y pueden ser seleccionadas mediante una serie de criterios bien entendidos. Se describen ejemplos de secuencias reguladoras en Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology (Academic Press, San Diego, CA (1990)). Por ejemplo, se puede usar cualquiera de una amplia variedad de secuencias de control de expresión que controlan la expresión de una secuencia de ADN cuando se le unen operativamente en estos vectores para expresar secuencias de ADN codificantes de los canales iónicos y los marcadores detectables. Dichas secuencias útiles de control de la expresión incluyen, por ejemplo, los promotores precoz y tardío de SV40, la beta2 tubulina, el promotor precoz inmediato de adenovirus o citomegalovirus, el sistema lac, el sistema trp, el sistema TAC o TRC, el promotor T7, cuya expresión está dirigida por la ARN polimerasa T7, el promotor para la 3-fosfoglicerato kinasa u otras enzimas glicolíticas, los promotores de la fosfatasa ácida, v.g., Pho5, y los promotores de los factores del emparejamiento a de levaduras y otras secuencias que se sabe controlan la expresión de genes de células procarióticas o eucarióticas o sus virus, y diversas combinaciones de los mismos. Habría que entender que el diseño del vector de expresión puede depender de factores tales como la elección de la célula huésped que se ha de transformar. Más aún, también habría que considerar el número de copias del vector, la capacidad para controlar ese número de copias y la expresión de cualquier otra proteína codificada por el vector, tal como marcadores antibióticos.

[0391] La descripción contempla el uso de cualquier promotor que pueda dirigir la expresión de una proteína TRPA1 en células procarióticas o eucarióticas. Tal como se usa aquí, el término "promotor" significa una secuencia de ADN que regula la expresión de una secuencia de ADN seleccionada operativamente unida al promotor y que efectúa la expresión de la secuencia de ADN seleccionada en células. Un "promotor" es generalmente un elemento regulador de ADN capaz de unirse a la ARN polimerasa en una célula e iniciar la transcripción de una secuencia codificante. Por ejemplo, la secuencia promotora puede unirse en su extremo 3’ al sitio de iniciación de la transcripción y prolongarse secuencia arriba (dirección 5’) para incluir el mínimo número de bases o elementos necesarios para iniciar la transcripción a niveles detectables por encima del fondo. En la secuencia promotora se puede encontrar un sitio de iniciación de la transcripción, así como dominios de unión a proteínas responsables de la unión a la ARN polimerasa. Los promotores eucarióticos contendrán con frecuencia, aunque no siempre, cajas "TATA" y cajas "CAAT". Se pueden usar diversos promotores, incluyendo promotores inducibles, para dirigir los diversos vectores de la presente descripción.

[0392] El término "promotor" también abarca promotores y elementos promotores procarióticos y/o eucarióticos. El término "promotor", tal como se usa aquí, incluye promotores "específicos de células", es decir, promotores que efectúan la expresión de la secuencia de ADN seleccionada sólo en células específicas (v.g., células de un tejido específico). El término también cubre los así llamados promotores "permeables", que regulan la expresión de un ADN seleccionado primariamente en un tejido, pero que causan expresión en otros tejidos también. El término también incluye promotores no específicos de tejido y promotores que expresan constitutivamente o que son inducibles (es decir, que se pueden controlar los niveles de expresión).

[0393] Como se ha detallado anteriormente, la descripción contempla vectores de expresión que contienen una secuencia de ácido nucleico TRPA1 y que son capaces de expresar proteína TRPA1. Cuando se expresan en células, estos vectores expresan proteína TRPA1, preferiblemente proteína funcional. Una proteína TRPA1 funcional media en la corriente y/o el flujo de iones y/o el potencial de membrana.

[0394] Se pueden estudiar células que expresan un vector de expresión de TRPA1 para confirmar la expresión de proteína TRPA1. Por ejemplo, se puede confirmar la expresión de proteína usando análisis Western blot, inmunocitoquímica o inmunohistoquímica. Adicional o alternativamente, se puede valorar la función del TRPA1 usando, por ejemplo, análisis de imagen del calcio para evaluar el flujo iónico o métodos electrofisiológicos (v.g., análisis de pinzamiento zonal de membranas) para evaluar la corriente.

Esquemas sintéticos e identificación de antagonistas activos

Librerías combinatorias

[0395] Los compuestos de la presente invención, en particular librerías de variantes que tienen diversas clases representativas de substituyentes, son susceptibles de química combinatoria y otros esquemas de síntesis paralelos (véase, por ejemplo, PCT WO 94/08051). El resultado es que se pueden rastrear grandes librerías de compuestos relacionados, v.g. una librería muy variada de los compuestos antes representados, rápidamente en ensayos de alto rendimiento con objeto de identificar potenciales compuestos punteros agonistas o antagonistas del TRPA1, así como de refinar la especificidad, la toxicidad y/o el perfil citotóxico-cinético de un compuesto puntero. Por ejemplo, se pueden usar ensayos de bioactividad del TRPA1, tales como los aquí descritos, para rastrear una librería de compuestos con objeto de encontrar aquéllos que tengan actividad agonista o actividad antagonista hacia el TRPA1.

[0396] Simplemente como ilustración, una librería combinatoria para los fines de la presente invención es una mezcla de compuestos químicamente relacionados que pueden ser rastreados conjuntamente en cuanto a una propiedad deseada. La preparación de muchos compuestos relacionados en una sola reacción reduce y simplifica en gran medida el número de procesos de rastreo que hay que realizar. Se puede hacer el rastreo para las propiedades físicas apropiadas por métodos convencionales.

[0397] Se puede crear diversidad en la librería a una variedad de diferentes niveles. Por ejemplo, los grupos arilo del substrato usados en las reacciones combinatorias pueden ser diversos en términos del resto de arilo del núcleo, v.g., una multiplicidad en términos de la estructura del anillo, y/o pueden variar con respecto a los otros substituyentes.

[0398] Se dispone de una variedad de técnicas en este campo para generar librerías combinatorias de pequeñas moléculas orgánicas, tales como los presentes compuestos. Véanse, por ejemplo, Blondelle et al. (1995), Trends Anal. Chem. 14: 83; las Patentes EE.UU. de Affymax 5.359.115 y 5.362.899: la Patente EE.UU. de Ellman

5.288.514: la publicación PCT de Still et al. WO94/08051; las Patentes EE.UU. de ArQule 5.736.412 y 5.712.171; Chen et al. (1994), JACS 116: 2661: Kerr et al. (1993), JACS 115: 252; las publicaciones PCT WO92/10092, WO93/09668 y WO91/07087; y la publicación PCT de Lerner et al. WO93/20242). Por consiguiente, se pueden sintetizar una variedad de librerías, del orden de aproximadamente 100 a 1.000.000 o más diversómeros, de los compuestos en cuestión y rastrearlas para la actividad o propiedad particular.

[0399] Muchas variaciones de las rutas anteriores y de rutas relacionadas permiten la síntesis de librerías ampliamente diversas de compuestos que pueden ser estudiados como inhibidores o agonistas del TRPA1.

Ejemplos

Ejemplo 1: Ensayo de rastreo de alto rendimiento

[0400] El ensayo dependía de la detección de la elevación en la concentración de Ca2+ intracelular ([Ca2+]i) tras activación de canales en células que expresaban de manera inducible el canal TRPA1. Se cuantificó la elevación en el Ca2+ mediante el uso de indicadores de Ca2+ fluorescentes, que se cargaron en células y a continuación indicaron la [Caa+]i. Hubo un flujo de Ca2+ hacia el interior después de la activación del canal TRPA1. Los compuestos que inhibían la elevación en la [Ca2+]i fueron considerados como blancos de una mayor investigación.

[0401] Se transfectó establemente la línea comercial HEK293/TREx (Invitrogen) con una construcción de TRPA1 (específicamente, una construcción codificante de una proteína TRPA1 con una secuencia de aminoácidos representada en la SEC Nº ID.: 1) y se rastreó por imagen de calcio convencional para encontrar clones con expresión de TRPA1 tras estimulación con 1 !g/ml de tetraciclina. Se mantuvieron estas células en el medio de crecimiento recomendado por el fabricante suplementado con 100 !g/ml de higromicina para promover la retención de la construcción de TRPA1. Después de crecer hasta prácticamente la confluencia, se plaquearon las células a una densidad de �25.000 células/pocillo en placas CellBind de 384 pocillos (Coming) en presencia de 1 !g/ml de tetraciclina y se dejó que crecieran durante 20-30 h. Se produjo como resultado una monocapa prácticamente confluente. Se cargaron entonces las células con colorante Ca2+: se añadió Fura-2/AM o Fluo4/AM a los pocillos hasta una concentración final de 2 !M o 1 !M, respectivamente, y se incubó durante 80 min. o 60 min., respectivamente, a temperatura ambiente. Se retiró luego el sobrenadante de las células invirtiendo las placas con un golpe brusco y se añadieron entonces a cada pocillo 40 !l de Solución Salina Balanceada de Hank (HBSS; 0,185 g/l de D-glucosa, 0,9767 g/l de MgSO4 (anhidro), 0,4 g/l de KCI, 0,06 g/l de KH2PO4 (anhidro), 0,35 g/l de NaHCO3, 8,0 g/l de NaCl y 0,04788 g/l de Na2HPO4 (anhidro), pH 7,4). Después de � 1 hora para recuperarse de la carga, se estudiaron las células usando el sistema Hamamatsu FDSS 6000, que permitía la iluminación alternativamente a 340 nM y 380 nM para los experimentos con Fura-2, o a 485 nM para los experimentos con Fluo4. Se adquirieron los marcos a 0,2 Hz. Durante el ensayo, las placas fueron sometidas continuamente a vórtice, mezclando con pipeta los pocillos después de la adición de cada reactivo. Para el ensayo de rastreo, se añadieron 13 !l de un stock diluido (a 50 !M) a cada pocillo durante 2 minutos después de recoger una corta línea basal (4 marcos). Se añadieron entonces 13 !l de AITC (isotiocianato de alilo) 37,5 !M a cada pocillo, para alcanzar una concentración final de 10 !M de cada compuesto y 7,5 !M de AITC. Se recogieron los datos durante � 3 minutos después de la adición de AITC, cuando la intensidad fluorescente (para Fluo4) y la razón F340/F380 (para Fura-2) eran proporcionales a la [Ca2+]i. Los controles negativos consistían en células HEK293/TREx TRPA1 expuestas a AITC, pero sin compuesto. Las células del control positivo eran normalmente células HEK293/TREx ("parentales") expuestas a AITC, pero sin compuesto, pero también se usaron a veces células HEK/293 TREx TRPA1 normales, pero sin exponer a AITC o compuesto. Estos controles definían una ventana de rastreo, y se definieron los "blancos" como aquellos compuestos que inhibían la respuesta de fluorescencia en al menos un 40%. Se determinaron los valores de la CI50 para los compuestos definidos como "blancos". Se usó el ensayo de fluorescencia basado en células Fluo4 para determinar la concentración de Ca2+ intracelular en presencia de concentraciones variables de fármaco. Las concentraciones estudiadas fueron 40 !M, 20 !M, 10 !M, 5 !M, 2,5 !M, 1,25 !M y 0,625 !M. Se estudiaron los compuestos por triplicado en todas las concentraciones. Se usó un programa estándar para ajustar las curvas de la CI50.

[0402] Adicional o alternativamente, se puede representar la eficacia como % de inhibición en presencia (de una concentración dada de compuesto) frente a ausencia de compuesto o en comparación con un compuesto control. Por ejemplo, se puede representar la eficacia como % de inhibición del flujo iónico en presencia frente a ausencia de compuesto.

Ejemplo 2: Experimentos de pinzamiento zonal de membranas

[0403] Los experimentos de pinzamiento zonal de membranas permiten la detección de corrientes a través del canal TRPA1 en la línea celular antes descrita. Para permitir el registro de la corriente a un nivel estable y evitar el "agotamiento" observado por otros laboratorios, es necesario usar la técnica zonal perforada, que evita la diálisis del citoplasma con la solución de la pipeta. En registros de pinzamiento zonal en células enteras normales, se pone en contacto un electrodo de vidrio con una sola célula y se establece un sello de alta resistencia (gigaohm) con la membrana celular. Se rompe entonces la membrana para alcanzar la configuración de la célula entera, lo que permite el control del voltaje de la membrana celular y la medición de las corrientes que fluyen a través de la membrana usando el amplificador unido al electrodo y da como resultado la substitución del citoplasma con la solución de la pipeta. Por el contrario, en el modo zonal perforado, está presente un antibiótico, la anfotericina, en la solución de la pipeta y se difunde al contactar con la célula después de alcanzar el sello, en el curso de varios minutos. La anfotericina forma poros permeables a iones en la membrana bajo la pipeta, permitiendo el paso de algunos iones, pero manteniendo la mayoría de los componentes citosólicos nativos. Un sistema de perfusión permite el control de la solución extracelular, incluyendo la adición de bloqueantes y activadores de la corriente. Se puede activar la corriente por adición de AITC 5 !M a la solución.

[0404] Se indujeron células TRPA1 durante 20-48 horas, se retiraron de las placas de cultivo y se replaquearon a baja densidad (para conseguir una buena separación física de una sola célula) sobre cubreobjetos de vidrio para la medición. En algunos casos, se cultivaron las células a baja densidad durante la noche sobre cubreobjetos de vidrio. Se realizaron los registros de pinzamiento zonal en el modo de células enteras con un potencial de mantenimiento de 40 mV. Cada 5 segundos, se aplicó una rampa de voltaje de -120 a +100 mV, de 400 ms de duración. Se cuantificaron las corrientes provocadas a -80 mV y +80 mV. La solución interna consistía en aspartato de cesio 140 mM, EGTA 10 mM, CaCl2 2,2 mM, MgCl2 2,08 mM y HEPES 10 mM, pH 7,2, con adición de Ca2+ libre calculado a 50 nM y 60 mg/ml de anfotericina inmediatamente antes de los experimentos. La solución externa consistía en NaCl 150 mM, KCl 4,5 mM, MgCl2 3 mM, HEPES 10 mM, glutamina 10 mM, EGTA 1 mM, pH 7,4. Al añadir AlTC, se indujo la corriente del TRPA1 sólo en células que expresaban TRPA1 y no en las células HEK293 TREx parentales. La eliminación del estímulo de AITC hace que la mayor parte de la corriente desaparezca. Se estudiaron bloqueantes potenciales en cuanto a su capacidad para bloquear las corrientes tanto hacia el interior como hacia el exterior en la presencia continuada de AITC.

[0405] Se calculó la CI50 de los compuestos estudiando cada compuesto a 5 !M y 500 nM. Cuando el compuesto a 5 !M no mostraba bloqueo, se calculó la CI50 como > 10 !M. Cuando el compuesto a 5 !M mostraba un 50% o menos de bloqueo, se pudo hacer una estimación aproximada de la CI50 en el rango de 5-10 !M. Se calculó de forma similar la CI50 para los compuestos entre 500 nM y 5 !M. Los compuestos que bloqueaban en un 50% o más a 500 nM fueron estudiados de nuevo a múltiples concentraciones y se ajustó el % de bloqueo a cada una de ellas por ecuaciones estándar para determinar la CI50 con precisión usando un experimento de concentración/respuesta de 56 puntos. Excepto donde se indique, los valores de la CI50 presentados en las Tablas 1 y 2 fueron obtenidos de experimentos de pinzamiento zonal.

Ejemplo 3. Otros ensayos de rastreo

[0406] Aunque los inhibidores del TRPA1 ejemplares aquí proporcionados fueron identificados usando los ensayos descritos en los Ejemplos 1 y 2, se pueden usar otros ensayos basados en células para identificar y/o caracterizar inhibidores del TRPA1. Se describe uno de tales ensayos en la Solicitud EE.UU. Nº de Serie 11/078,188, depositada el 11 de Marzo de 2005, cuyos contenidos son aquí incorporados como referencia en su totalidad. La proteína TRPM1 puede expresarse en el sistema de células procarióticas descrito en la Solicitud Nº de Serie 11/078,188, y este sistema puede ser usado para hacer un rastreo de compuestos que modulan una actividad de la proteína TRPA1. Alternativamente, un canal iónico distinto del TRPA1 puede expresarse en el sistema de células procarióticas, y se puede usar el sistema para evaluar el perfil de actividad de un inhibidor del TRPA1 identificado con respecto a otros canales iónicos.

[0407] Cualquier ensayo realizado para identificar y/o caracterizar compuestos que inhiben una actividad del TRPA1 puede ser llevado a cabo en un modo de alto rendimiento, o puede ser llevado a una escala menor examinando los compuestos individuales o números pequeños de compuestos. Adicionalmente, cualquiera de estos ensayos puede ser llevado a cabo (i) como un ensayo primario para identificar compuestos que inhiben una función del TRPA1; (ii) como un ensayo secundario para valorar la especificidad de un compuesto con respecto a su actividad frente a otros canales iónicos; (iii) como un ensayo utilizado en un programa de química medicinal para optimizar los compuestos en cuestión.

Ejemplo 4: Niveles plasmáticos de un inhibidor del TRPA1

[0408] El Compuesto 200 era estable en plasma de rata durante ; 1 hora a 37°C.

[0409] Se determinaron los niveles plasmáticos del Compuesto 200 por HPLC/MS/MS después de una sola dosis en bolo intravenoso de 0,9 mg/kg, una dosis intraperitoneal de 12 mg/kg (suspensión) y una dosis oral de 12 mg/kg (suspensión) en ratas Sprague-Dawley macho.

[0410] Para la administración intravenosa, se formuló la solución del Compuesto 200 en CAPTISOL al 30% p/v, a una concentración diana de 0,25 mg/ml, y se administró como bolo rápido (2-3 segundos) a través de la vena de la cola de ratas conscientes, en un volumen de dosis de 4 ml/kg.

[0411] Para la administración intraperitoneal, se formuló el Compuesto 200 como una suspensión uniforme en CMC (carboximetilcelulosa), a una concentración diana de 1 mg/ml, y se administró en un volumen de dosis de 10 ml/kg.

[0412] Para la administración oral, se formuló el Compuesto 200 como una suspensión uniforme en CMC (carboximetilcelulosa), a una concentración diana de 1 mg/ml, y se administró por sonda oral, en un volumen de dosis de 10 ml/kg, a ratas Sprague-Dawley macho conscientes en ayunas.

[0413] Las estimaciones de la vida media, el aclaramiento plasmático y el volumen de distribución fueron de 32 minutos, 27 ml/kg/minuto y 1.276 ml/kg, respectivamente. La estimación de la biodisponibilidad en ratas en ayunas fue de 8% después de la administración de una suspensión. El perfil de la curva concentración plasmática-tiempo sugería que el Compuesto 200 se absorbía rápidamente, como quedó subrayado por la observación de que la Cmáx aparecía después de 45 min.

[0414] Se observaron niveles plasmáticos similares a la CI50 frente a TRPA1 (1.000 nM =355 ng/ml) tras administración intraperitoneal a 12 mg/kg (15 - 60 min.), y también tras administración oral a 12 mg/kg (45 min.).

[0415] Se preparó un inhibidor del TRPA1 en formulaciones y se administró por varias vías de administración diferentes. Esto indicaba que los inhibidores del TRPA1 podían ser formulados en cualquiera de una serie de formas y adaptados para tratar de la manera más efectiva enfermedades o lesiones particulares. Estas propiedades, junto con los efectos colaterales mínimos observados después de la administración de inhibidores del TRPA1 a ratas, indicaban que los inhibidores del TRPA1 tienen características de fármacos y candidatos a fármacos adecuados.

Ejemplo 5: Estudio de los antagonistas del TRPA1 en un modelo de incontinencia

[0416] Para estudiar la efectividad de un compuesto inhibidor del TRPA1 (Compuesto 200) en el tratamiento de la incontinencia, se administraron concentraciones variables de compuesto [v.g., baja (2,2 micromolar), media (6,6 micromolar) y alta (concentración 20 micromolar)] a ratas tras obstrucción parcial quirúrgica de la salida de la vejiga (OSV). Se comparó la eficacia de dosis variables de compuesto inhibidor del TRPA1 con controles a los que se administraron sólo excipientes (control de simulación). Se comparó también la eficacia con ratas a las que se administró un control positivo, tal como atropina. La atropina no es un inhibidor del TRPA1, pero sí disminuye la hiperactividad de la vejiga después de una obstrucción parcial de la salida de la vejiga en el modelo OSV.

[0417] Se usaron ratas Sprague-Dawley hembra en estos estudios. Las ratas sufrieron una obstrucción parcial quirúrgica de la salida de la vejiga (OSV) o cirugía de simulación. A las cinco semanas de la cirugía OSV (o de simulación), se implantó quirúrgicamente un catéter intravesical en la bóveda de la vejiga para realizar estudios urodinámicos. Una semana después de la implantación del catéter (6 semanas después de la OSV o de la simulación), se iniciaron los estudios urodinámicos. Se conectó el catéter de la vejiga a un puerto de un transducción de presión y se conectó el otro puerto del transductor de presión a una bomba de jeringa. Una balanza analítica por debajo del fondo de alambre de la jaula de los animales medía la cantidad de orina evacuada durante una cistometría continua. Se definió un único cistometrogramo (CMG) como el registro simultáneo de la presión vesical, el volumen infundido y el volumen evacuado durante un solo ciclo de llenado-evacuación.

[0418] Se estudió un inhibidor del TRPA1 (Compuesto 200) en animales con obstrucción de simulación y con OSV a cada concentración. También se estudiaron animales a los que se administró vehículo. Un experimento consistía en al menos 20 ciclos de CMG. Resumiendo, se infundió solución salina isotónica (0,9%) en la vejiga a un ritmo de 175 !l/min. (10,5 ml/h). Después de la infusión de solución salina, se infundió el compuesto antagonista a 175 !l/min.

[0419] Para cada ciclo de CMG, se valoraron los siguientes parámetros: volumen infundido (la cantidad de solución salina o de fármaco infundido por cada ciclo de CMG), volumen evacuado (la cantidad de orina evacuada por el animal por cada ciclo de CMG), presión mínima (presión mínima durante el llenado), umbral de presión (presión antes de la micción cuando la presión de la vejiga comienza a elevarse abruptamente), presión media.(presión media durante el llenado y antes del umbral), presión máxima, intervalo entre micciones (tiempo entre dos sucesos de evacuación subsiguientes) e índice de flujo de orina.

[0420] Estos experimentos demuestran que un inhibidor del TRPA1 era bien tolerado por los animales con la vejiga obstruida. Adicionalmente, estos experimentos demuestran que un inhibidor del TRPA1 reducía tanto el umbral de presión de la vejiga como la presión máxima de la vejiga en el modelo OSV de incontinencia. Estos efectos eran específicos y no se observaron tras la administración de vehículo solo.

Ejemplo 6: Estudio de los antagonistas del TRPA1 en un modelo de dolor inducido por bradiquinina [0421] Como se ha señalado anteriormente, el modelo de bradiquinina conlleva una inyección intraplantar de una solución de bradiquinina de 5 ng/!l. La inyección de la solución de bradiquinina típicamente causa una rápida sensibilización. Se mide la sensibilización valorando la latencia de la evasión térmica del pie inyectado en respuesta a un estímulo térmico leve suministrado por un aparato Hargreaves modificado.

[0422] Las Figuras 1a y 1b resumen los datos obtenidos después de estudiar el Compuesto 200 en el modelo de bradiquinina. Este estudio examinó los efectos antinociceptivos de 200 mg/kg, 50 mg/kg y 12,5 mg/kg de Compuesto 200 por vía intraperitoneal sobre la alodinia táctil inducida por bradiquinina.

[0423] Se administró a ratas Holtzmann macho un inhibidor del TRPA1 o vehículo (metilcelulosa al 0,5%) 30 minutos antes de la inyección de bradiquinina. Se inyectaron el inhibidor o el vehículo intraperitonalmente (IP). Se administró a los animales que recibieron el inhibidor del TRPA1 una dosis de 12,5 mg/kg, 50 mg/kg o 200 mg/kg. Se valoraron 8 animales a cada concentración de inhibidor del TRPA1 suministrada, así como para el vehículo. A los 30 minutos de la administración del fármaco o del vehículo, se suministró bradiquinina a una dosis de 30 !g/100 !l en el pie derecho.

[0424] A través de todo el estudio, se hicieron valoraciones del comportamiento general durante cada período de observación. Las observaciones incluían alodinia táctil (vocalización/agitación inducida por un ligero toque aplicado a la superficie corporal), vocalización espontánea, mordiscos y masticación de la superficie corporal, pérdida del reflejo de colocación y elevación del miembro posterior, pérdida del soporte de peso del miembro posterior y pérdida del reflejo de enderezamiento. Adicionalmente, se valoró y midió la alodinia mecánica. Los resultados presentados en las Figuras 1a y 1b se basan en la valoración de la alodinia mecánica.

[0425] La bradiquinina produjo una reducción significativa en los umbrales táctiles requeridos para evocar el comportamiento de retirada. Esta alodinia persistía durante hasta 240 minutos. El pretratamiento con un inhibidor del TRPA1 suministrado IP a dosis de hasta 200 mg/kg mostró un efecto dependiente de la dosis sobre el umbral mecánico tras la inyección de bradiquinina, que duró durante aproximadamente 60 minutos. Al mismo tiempo, sin embargo, no se observaron cambios en los parámetros comportamentales y se observó sólo sedación suave en 3 de 8 ratas a las que se administró la dosis más alta.

[0426] La bradiquinina intraplantar en la rata produce una alodinia táctil prominente de larga duración. Estos estudios demostraron que un inhibidor del TRPA1 producía una disminución dependiente de la dosis de la alodinia. Además, el fármaco redujo este síntoma de dolor durante aproximadamente 60 minutos. Estos experimentos muestran que un inhibidor del TRPA1 es eficaz para disminuir un síntoma de dolor (v.g., alodinia mecánica) en el modelo de dolor de la bradiquinina.

Ejemplo 7: Estudio de los antagonistas del TRPA1 en un modelo de dolor por formalina

[0427] Como se ha señalado anteriormente, el modelo de la formalina conlleva la inyección de una solución de formalina intradérmica o intraperitonealmente. La inyección de una solución de formalina invoca una respuesta bifásica y proporciona así un modelo para el dolor tanto nociceptivo como inflamatorio. El modelo de la formalina puede ser usado para evaluar la efectividad de un inhibidor del TRPA1 ejemplar en el tratamiento del dolor.

[0428] La Figura 2 resume los datos obtenidos después de estudiar el Compuesto 200 en el modelo de la formalina. Resumiendo, se siguió el siguiente protocolo. Ratas Holtzmann macho recibieron inyecciones intraplantares de 50 !L de formalina al 2%. Se detectó encogimiento del pie mediante un sensor automatizado que detectaba el movimiento de una pequeña banda de metal colocada sobre el pie inyectado. Se administró fármaco o vehículo aproximadamente 15 minutos antes de la inyección de formalina. Se midió la respuesta del animal a la inyección del irritante contando los encogimientos por minuto durante la Fase Precoz (los primeros 5 minutos tras la inyección de formalina), durante la Fase Tardía (aproximadamente 30 minutos después de la inyección de formalina) y durante la fase libre de dolor intermedia. En la Figura 2, la barra situada más a la derecha para cada conjunto de datos (Fase Precoz y Fase Tardía) representa la administración de vehículo solo y la barra situada más a la izquierda representa la administración de gabapentina. La concentración más alta de compuesto inhibidor del TRPA1 administrada es la barra adyacente a la que representa la administración de gabapentina, y la concentración más baja de compuesto inhibidor del TRPA1 administrada es la barra adyacente a la que representa la administración de vehículo.

[0429] En la Figura 2, se resumen los resultados de experimentos ejemplares 2. Se midieron los encogimientos por minuto, una medición del dolor y de las molestias experimentadas por el animal, después de la inyección de formalina en animales que recibieron diversas dosis de inhibidor del TRPA1 (Compuesto 200), gabapentina o un control de vehículo. La administración de un inhibidor del TRPA1 redujo substancialmente los encogimientos por minuto tanto durante la Fase Precoz como durante la Fase Tardía. Estos resultados indicaban que un inhibidor del TRPA1 disminuía ambas fases de dolor en el modelo de la formalina. La eficacia del inhibidor del TRPA1 en ambas fases de este modelo de dolor nociceptivo y dolor inflamatorio respalda el uso de inhibidores del TRPA1 en el tratamiento del dolor severo, incluyendo el dolor crónico y el agudo.

Ejemplo 8: Estudio de los antagonistas del TRPA1 en un modelo de carragenina de dolor inflamatorio agudo [0430] Como se ha señalado anteriormente, el modelo de la carragenina es un modelo de dolor inflamatorio agudo. Como tal, puede ser usado para evaluar la efectividad en el alivio del dolor causado por inflamación, por ejemplo, el dolor debido a la artritis.

[0431] La Figura 3 resume los datos obtenidos después del estudio del Compuesto 200 en el modelo de la carragenina. Resumiendo, se preestudiaron ratas naíf en cuanto a la sensibilidad a un estímulo de calor usando el aparato Hargreaves. Al día siguiente, se inyectaron 100 !l de A-carragenina en la superficie plantar del pie derecho aproximadamente 4,5 horas antes del estudio. 30-60 minutos antes del estudio, se inyectó a las ratas intraperitonealmente vehículo o fármaco (compuesto 200 o diclofenaco para evaluar la eficacia de un inhibidor del TRPA1 administrado IP).

[0432] En este estudio, el fármaco administrado era, o bien un inhibidor del TRPA1, o bien el antiinflamatorio no esteroideo diclofenaco. Tras la administración tanto de carragenina como de fármaco o control de vehículo, se midió el volumen del pie y se utilizó para valorar el descenso en la inflamación.

[0433] La Figura 3 resume los resultados de estos experimentos. Para cada "fármaco" (TRPA1 o diclofenaco) o vehículo, se indican la dosis administrada (en mg/kg) y la vía de administración (IP). Los resultados resumidos en las Figuras 3a y 3b muestran que un inhibidor del TRPA1 disminuía el volumen del pie (v.g., disminuía la inflamación). La disminución de la inflamación era similar a la observada tras la administración de diclofenaco.

[0434] Los resultados resumidos en la Figura 3 muestran que el inhibidor del TRPA1 disminuía la inflamación en el modelo de la carragenina. Esta disminución de la inflamación iría probablemente acompañada de una disminución concomitante del dolor causado por la inflamación. La eficacia del inhibidor del TRPA1 en este modelo de dolor inflamatorio respalda el uso de inhibidores del TRPA1 en el tratamiento de la inflamación y del dolor inflamatorio, por ejemplo, debido a la artritis.

[0435] Obsérvese que, en este estudio, se midió el cambio en el volumen del pie. La reducción del volumen (v.g., disminución de la inflamación) observada tras la administración de un inhibidor del TRPA1 iría presumiblemente acompañada de una correspondiente disminución del dolor o de las molestias que se asocian a la inflamación. Alternativa o adicionalmente, se pueden evaluar directamente los indicios de dolor. Resumiendo, se puede seguir el protocolo señalado anteriormente y, tras inyección de carragenina y de fármaco o de control de vehículo, se puede medir la latencia de evasión térmica. Se expresan los datos como las Latencias de Retirada del Pie (LRP) registradas en segundos.

Ejemplo 9: Estudio de los antagonistas del TRPA1 en el modelo de ACF de dolor inflamatorio

[0436] Como se ha señalado anteriormente, el modelo del Adyuvante Completo de Freund (ACF) es un modelo de dolor inflamatorio. Como tal, puede ser usado para evaluar la efectividad en el alivio del dolor causado por inflamación, por ejemplo, el dolor debido a la artritis y otras afecciones inflamatorias.

[0437] La Figura 4 resume los datos obtenidos después de estudiar el Compuesto 200 en el modelo de ACF. Se preestudiaron ratas naíf en cuanto a la sensibilidad a un estímulo de calor en el aparato de Hargreaves. Al día siguiente, se inyectaron 100 !l de adyuvante completo de Freund (ACF) en la superficie plantar del pie derecho. Dos días después, por la mañana, se volvieron a preestudiar las ratas. Por la tarde, se inyectó a las ratas control de vehículo o fármaco (inhibidor del TRPA1 200 o el antiinflamatorio no esteroideo diclofenaco). Se inyectaron los fármacos o el vehículo intraperitonealmente y 45 minutos después se estudiaron las ratas en cuanto a hiperalgesia aplicando la fuente de calor al pie inyectado con ACF y al no inyectado y midiendo la latencia a la retirada.

[0438] La Figura 4 resume los resultados de experimentos que muestran que este inhibidor del TRPA1 reducía el dolor en el modelo de ACF de dolor inflamatorio. Específicamente, el inhibidor del TRPA1 reducía la hiperalgesia térmica en este modelo de dolor inflamatorio. La eficacia de este inhibidor del TRPA1 era superior a la del diclofenaco (un antiinflamatorio no esteroideo). Adicionalmente, estos experimentos indicaron que el inhibidor del TRPM1 disminuía el dolor en el pie lesionado sin interferir con la sensación normal. Se ve esto por análisis del pie control (no inflamado), que no estaba afectado.

[0439] La eficacia de un inhibidor del TRPA1 en este modelo de dolor inflamatorio respalda el uso de inhibidores del TRPA1 en el tratamiento del dolor inflamatorio, por ejemplo, el dolor debido a la artritis. El inhibidor del TRPA1 estudiado parecía reducir el dolor sin toxicidad y sin embotar la sensación normal. Adicionalmente, el inhibidor del TRPA1 estudiado reducía el dolor con una eficacia similar o mayor que la de un antiinflamatorio no esteroideo. Dados los efectos colaterales observados de los compuestos antiinflamatorios no esteroideos, los inhibidores del TRPA1 pueden reducir el dolor sin los efectos colaterales experimentados con los analgésicos disponibles.

Ejemplo 10: Estudio de los antagonistas del TRPA1 en un modelo de dolor por lesión térmica [0440] Se puede usar el modelo de lesión térmica para evaluar la efectividad de un inhibidor ejemplar del TRPA1 en el tratamiento del dolor nociceptivo.

[0441] Resumiendo, se puede usar el siguiente protocolo. Se estudian ratas Holtzman macho (de aproximadamente 300 gramos) en cuanto a la evasión térmica usando un aparato de tipo Hargreaves. Bajo anestesia ligera, se aplica una lesión térmica (52°C durante 45 segundos) a un talón. Se estudia a los animales en cuanto a la latencia de evasión térmica del pie lesionado y del no lesionado antes y a los 30, 60, 80 y 120 minutos después de la lesión. Se administra fármaco (un inhibidor del TRPA1) o vehículo (metilcelulosa al 0,5%) después de medir la línea basal y aproximadamente 15-20 minutos antes de la lesión térmica. Además de la medición de la latencia de evasión, se hacen observaciones de comportamiento a lo largo del experimento.

Ejemplo 11: Estudio de los antagonistas del TRPA1 en el modelo de dolor neuropático de Chung

[0442] Resumiendo, se preparan ratas Sprague-Dawley macho (de aproximadamente 175 gramos) con ligación de las raíces nerviosas L4/5. Después de 5-8 días, los animales son estudiados en cuanto a alodinia táctil usando pelos Von Frey. Se valoran los umbrales con el método "arriba-abajo". Se administra fármaco o vehículo y se estudia a los animales periódicamente a lo largo de las cuatro horas siguientes.

Ejemplo 12: Síntesis de compuestos

2-(1,3-Dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)-N-(4-isopropilfenil)acetamida (200):

[0443]

[0444] A una suspensión de ácido teofilino-7-acético (101, 32,5 g, 0,136 mol) en DMF anhidra (400 ml), se le añadió DIPEA (54 ml, 0,31 mol) a 0°C. Se añadió anilina neta (102, 20,4 ml, 0,143 mol), seguido de adición de DMAP (19,2 g, 0,16 mol) y EDCI (30,1 g, 0,16 mol). Se calentó la mezcla de reacción hasta la temperatura ambiente a lo largo de 18 h y se agitó luego a 40-43°C durante 1,5 días. Se diluyó la mezcla de reacción con CH2Cl2 (1,8 l), se lavó con H2O (0,7 l), ácido cítrico al 10% (0,5 l), NaHCO3 (saturado, 0,6 l) y solución salina saturada, se secó sobre Na2SO4 y se concentró in vacuo y se cristalizó con acetato de etilo/hexanos, para obtener el compuesto 200 (41%, 19,8 g): MS (APCI) m/z: 356,2 [M+H]+. Anal. Calc. para C18H21N5O3: C, 60,83; H, 5,96; N, 19,71; Encontrado: C, 60,53; H, 5,97; N, 19,76.

Procedimiento general A para la preparación de amidas por copulación usando EDCI

[0445] A una mezcla de ácido teofilino-7-acético (2 mmol), DMAP (2 mmol), fenetilamina substituida (2 mmol) y DIPEA (4 mmol) en DMF (20 ml), se le añadió EDCI (2 mmol). Se calentó la mezcla de reacción hasta 40°C y se agitó durante la noche. Se concentró la solución in vacuo y se disolvió el residuo en EtOAc (100 ml), se lavó con H2O, ácido cítrico (10%), NaHCO3 (sat.) y solución salina saturada, se secó sobre Na2SO4 y se concentró in vacuo. Se purificó el producto bruto por cromatografía instantánea en gel de sílice eluyendo con MeOH/EtOAc (1~8%).

N-[2-(4-Clorofenil)etil]-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (268):

[0446]

[0449] Se preparó el compuesto 400 (99 mg, 13%) a partir del 101 (503 mg, 2,1 mmol) y del 104 (308 !l, 2,1 mmol) por el Procedimiento general A. MS (APCI): m/z 356 [M+H]+.

Procedimiento general B para la preparación de amidas mediante cloruro de ácido

[0450] Se enfrió una suspensión de ácido teofilino-7-acético (2 mmol) en CHCl3 (15 ml) y MeCN (15 ml) en un baño de agua helada. Se añadió entonces cloruro de oxalilo (2,2 mmol) gota a gota. Se añadió luego DMF catalítica (~25 !l). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante la noche. Se enfrió después la solución en un baño de agua helada y se añadió DMAP (2,5 mmol) en una porción. Se añadió fenetilamina substituida gota a gota y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante la noche. Después de diluir con CHCl3 (50 ml), se lavó la mezcla con H2O, ácido cítrico (10% en H2O) y NaHCO3 (sat.), se secó sobre Na2SO4 y se concentró in vacuo. Se purificó el producto bruto por cromatografía instantánea en gel de sílice eluyendo con MeOH/EtOAc (1~8%).

N-[2-(3,4-Diclorofenil)etil]-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (396):

[0451]

[0452] Se preparó el compuesto 396 (490 mg, 56%) a partir del 101 (506 mg, 2,1 mmol) y del 106 (320 !l, 2,1 mmol) por el Procedimiento general B. MS (APCI): m/z 410 [M+H]+.

N-[2-(4-Dimetilaminofenil)etil]-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (397): [0453]

[0454] Se preparó el compuesto 397 (610 mg, 75%) a partir del 101 (507 mg, 2,1 mmol) y del 107 (350 !l, ~2,2 mmol) por el Procedimiento general B. MS (APCI): mlz 385 [M+H]+.

2-(1,3-Dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)-N-[2-(4-metoxifenil)etil]acetamida (261): [0455]

[0456] Se preparó el compuesto 261 (820 mg, 52%) a partir del 101 (1,01 g, 4,2 mmol) y del 108 (630 !l, 4,3 mmol) por el Procedimiento general B. MS (APCI): m/z 372 [M+H]+.

2-(1,3-Dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)-N-[3-(4-metoxifenil)propil]acetamida (401):

[0458] Se preparó el compuesto 401 (495 mg, 60%) a partir del 101 (506 mg, 2,1 mmol) y del 109 (360 !l, ~2,1 mmol) por el Procedimiento general B. MS (APCI): m/z 386 [M+H]+. Anal. Calc. para C19H23N5O4: C, 59,21; H, 6,01; N, 18,17; Encontrado: C, 59,37; H, 6,06; N, 18,18.

2-(1,3-Dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)-N-[2-(3-metilfenil)etil]acetamida (407): [0459]

[0460] Se preparó el compuesto 407 (494 mg, 65%) a partir del 101 (508 mg, 2,1 mmol) y del 110 (290 !l, ~2,1. mmol). MS (APCI): m/z 356 [M+H]+. Anal. Calc. para C18H21N5O3: C, 60,83; H, 5,96; N, 19,71; Encontrado: C, 61,09; H, 6,03; N, 19,76.

2-(1,3-Dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)-N-[2-(3-metoxifenil)etil]acetamida (408): [0461]

[0462] Se preparó el compuesto 408 (462 mg, 59%) a partir del 101 (502 g, 2,1 mmol) y del 111 (310 !l, 2,1 mmol) por el Procedimiento general B. MS (APCI): m/z 372 [M+H]+. Anal. Calc. para C18H2,N5O4: C, 58,21; H, 5,70; N, 18,86; Encontrado: C, 57,95; H, 5,78; N, 18,61.

N-(2-(4-Cianofenil)etil]-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (409): [0463] 2-(4-Bromofenil)etilcarbamato de t-butilo (113)

[0464] A una solución preenfriada a 0°C de 112 (2,0 g, 10 mmol) en THF (10 ml), se le añadió (Boc)2O (2,2 g, 10 mmol) por porciones. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante la noche. Se concentró in vacuo, para obtener 113 (3 g, 100%) como un sólido blanco, que fue usado en la siguiente etapa sin mayor purificación.

2-(4-Cianofenil)etilcarbamato de t-butilo (114)

[0465] Se disolvió el compuesto 113 (530 mg, 1,8 mmol) en DMF seca (17 ml) bajo N2. Se añadieron Zn(CN)2 (416 mg, 3,6 mmol) y Pd(PPh3)4 (200 mg, 0,18 mmol). Se agitó la mezcla de reacción y se calentó a 150°C en un instrumento microondas (CEM Discover®) durante 20 min., y se concentró entonces la mezcla de reacción in vacuo. Se purificó el residuo por cromatografía instantánea en gel de sílice eluyendo con EtOAc/hexanos (20~80%), para obtener 114 (540 mg, 31 %) como un sólido blanco. MS (APCI, negativo): m/z 245 [M-H]+.

4-Cianofenetilamina (115)

[0466] Se disolvió el compuesto 114 (308 mg, 1,25 mmol) en DCM (4 ml) y se enfrió la solución en un baño de agua helada. Se añadió luego TFA (3,5 ml) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 15 min. Se concentró la mezcla de reacción in vacuo y se disolvió el residuo en EtOAc (50 ml). Se lavó la solución con K2CO3 (sat., 3x) y solución salina saturada, se secó y se concentró, para obtener 115 (175 mg, 95%) como un aceite amarillo claro. MS (APCI): m/z 147 [M+H]+.

N-[2-(4-Cianofenil)etil]-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (409)

[0467] Se preparó el compuesto 409 (93 mg, 21%) a partir del 101 (300 mg, 1,3 mmol) y del 115 (175 mg, 1,2 mmol) según el Procedimiento general B. MS (APCI): m/z 367 [M+H]+. Anal. Calc. para C18H18N6O3.0,04 EtOAc.0,1 H2O: C, 58,68; H, 5,02; N, 22,61; Encontrado: C, 58,75; H, 5,01; N, 22,46.

N-(2-Metoxifenetil)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (403):

[0468]

[0469] Se mezcló el compuesto 101 (600 mg, 2,5 mmol) con HATU (1,14 g, 3,0 mmol) en 20 ml de DMF bajo N2 y se agitó a temperatura ambiente durante 20 min. Se añadió entonces el compuesto 116 (0,36 ml, 2,5 mmol). Se agitó la mezcla resultante durante la noche y se añadió luego acetato de etilo (100 ml). Se lavó la solución resultante con agua (3 x 80 ml) y solución salina saturada (80 ml) y se secó sobre Na2SO4. Durante el secado, aparecieron algunos precipitados sólidos, se añadió metanol (10 ml) para disolver los precipitados y se filtró después la solución. Se concentró el filtrado in vacuo y se purificó el residuo sólido por cromatografía en columna instantánea sobre 40 g de gel de sílice con EtOAc/hexanos como eluyente. Se trituró el producto purificado con éter (25 ml) y se filtró, para obtener 403 como un sólido blanco (224 mg, 24%). MS (APCI): m/z 372 [M+H] +. Anal. Calc. para C18H21N5O4: C, 58,21; H, 5,70; N, 18,86; Encontrado: C, 58,26; H, 5,73; N, 18,74.

N-(2-Fluorofenetil)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (404):

[0470]

[0471] Se mezcló el compuesto 101 (600 mg, 2,5 mmol) con HATU (1,14 g, 3,0 mmol) en 20 ml de DMF bajo N2 y se agitó a temperatura ambiente durante 20 min. Se añadió el compuesto 117 (0,33 ml, 2,5 mmol). Se agitó la mezcla resultante durante la noche. Se añadió EtOAc (100 ml) y se lavó la solución resultante con agua (3 x 80 ml) y solución salina saturada (80 ml), se secó sobre Na2SO4 y se filtró. Se concentró el filtrado in vacuo y se purificó el residuo sólido resultante por cromatografía en columna instantánea sobre 40 g de gel de sílice eluyendo con EtOAc/hexanos. Se trituró el producto purificado con éter (30 ml) y se filtró, para obtener 404 como un sólido blanco (281 mg, 31%). MS (APCI): m/z 360 [M+H]+. Anal. Calc. para C17H18FN5O3•0,3H2O: C, 55,98; H, 5,14; N, 19,20; Encontrado: C, 55,87; H, 5,07; N, 19,13.

N-(2-Clorofenetil)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (405):

[0472]

[0473] Se mezcló el compuesto 101 (600 mg, 2,5 mmol) con HATU (1,14 g, 3,0 mmol) en 20 ml de DMF bajo N2 y se agitó a temperatura ambiente durante 20 min. Se añadió el compuesto 118 (0,35 ml, 2,5 mmol) y se agitó la mezcla resultante durante la noche. Se añadió entonces EtOAc (100 ml) y se lavó la solución resultante con agua (3 x 80 ml) y solución salina saturada (80 ml), se secó sobre Na2SO4 y se filtró. Se concentró el filtrado in vacuo y se trituró el residuo sólido resultante con MeOH (15 ml) y se filtró, para obtener 405 como un sólido blanco (270 mg, 28%). MS (APCI): m/z 376 [M+H]+. Anal. Calc. para C17H18ClN5O3: C, 54,33; H, 4,83; N, 18,64; Cl, 9,43; Encontrado: C, 54,57; H, 4,80; N, 18,66; Cl, 9,52.

N-(2-Metilfenetil)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (406):

[0474]

[0475] Se mezcló el compuesto 101 (600 mg, 2,5 mmol) con HATU (1,14 g, 3,0 mmol) en 20 ml de DMF bajo N2 y se agitó a temperatura ambiente durante 20 min., y luego se añadió el compuesto 119 (338 mg, 2,5 mmol). Se agitó la mezcla resultante durante la noche y se añadió luego acetato de etilo (100 ml). Se lavó la solución resultante con agua (3 x 80 ml) y solución salina saturada (80 ml), se secó sobre Na2SO4 y se filtró. Se concentró el filtrado in vacuo y se purificó el residuo sólido resultante por cromatografía en columna instantánea sobre 40 g de gel de sílice eluyendo con EtOAc/hexanos. Se trituró el producto purificado con éter (30 ml) y se filtró, para obtener 406 como un sólido blanco (290 mg, 32%). MS (APCI): m/z 356 [M+H]+. Anal. Calc. para C18H21O3: C, 60,83; H, 5,96; N, 19,71; Encontrado: C, 60,85; H, 6,01; N, 19,74.

N-(4-Isopropilfenil)-2-(1-metil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (391):

[0476]

Éster etílico del ácido (1-metil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acético (121)

[0477] A una solución de 1-metilxantina (120,1 g, 6,01 mmol) en DMF, se le añadió carbonato de potasio (0,91 g, 6,6 mmol) y se calentó la mezcla de reacción hasta 90°C y se agitó durante 1 h. Se añadió entonces gota a gota una solución de ClCH2COOEt (0,36 g, 3,0 mmol) en DMF a la reacción a lo largo de 45 min. Después de agitar 15 min. más, se enfrió la reacción hasta la temperatura ambiente y se vertió en HCl 1N helado (50 ml). Se extrajo luego la reacción con cloroformo (50 x 2 ml). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con agua (100 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron in vacuo. Se añadió al sólido resultante diclorometano al 30% en hexanos (400 ml) y se agitó la mezcla resultante durante 15 min. y se filtró, para obtener el compuesto 121 como un sólido amarillo (0,6 g, 40%). MS (APCI): m/z 253,32 [M+H]+.

Ácido (1-metil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acético (122)

[0478] Se disolvió el éster 121 (0,6 g, 2,4 mmol) en HCl 2N (25 ml) y se sometió a reflujo durante 2 h. Se enfrió la mezcla de reacción hasta 0°C y se calentó después hasta la temperatura ambiente. Se filtró el precipitado, se lavó con éter y se secó, para obtener un sólido blanco 122 (0,23, 45%).MS (APCI): m/z 224,2 [M+H]+.

N-(4-Isopropilfenil)-2-(1-metil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (391)

[0479] A una solución a 0°C de ácido 122 (0,2 g, 0,89 mmol) en cloroformo (35 ml), se le añadieron cloruro de oxalilo (0,67 g, 5,3 mmol) y una cantidad catalítica de DMF. Se agitó la reacción durante 2 h a temperatura ambiente y se concentró después in vacuo. Se disolvió el material resultante en CHCl3 (30 ml), se enfrió hasta 0°C y se añadió 4isopropilanilina, y se agitó la reacción durante la noche calentando hasta la temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla de reacción con CHCl3 (50 ml) y se lavó con HCl 1N (50 ml). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con agua (75 ml), se secaron sobre Na2SO4, se concentraron in vacuo y se purificó el producto bruto por cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc/hexano y EtOAc/MeOH, para obtener 391 (0,089 g, 33%) como un sólido blanco. MS (APCI): m/z 342,3 [M+H]+. Anal. Calc. para C17H19N5O3.0,28 H2O: C, 58,94; H, 5,69; N, 20,22; Encontrado C, 58,94; H, 5,67; N, 19,78.

2-(1,3-Dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)-N-(4-isopropilfenil)-2-metilpropanamida (387):

[0480]

Éster etílico del ácido 2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)-2-metilpropiónico (123)

[0481] A una solución de teofilina (101,2 g, 11,10 mmol) en DMF, se le añadió carbonato de potasio (1,84 g, 13,32 mmol) y se calentó la reacción hasta 90°C y se agitó durante 1 h. Se añadió entonces 2-bromoisobutirato de etilo (2,59 g, 13,32 mmol) en DMF gota a gota a lo largo de 10 min. Se agitó reflujo a de reacción resultante durante 16 h a 90°C. Se enfrió la reacción hasta la temperatura ambiente, se vertió en HCl 1N helado (50 ml) y se extrajo con cloroformo (100 x 2 ml). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con agua (100 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron in vacuo. Se obtuvo 123 bruto como un sólido amarillo claro (1,1 g, 34%), MS (APCI): m/z 295,5 [M+H]+, y se usó en la siguiente etapa sin mayor purificación.

Ácido 2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)-2-metilpropiónico (124)

[0482] Se disolvió el éster 123 (1 g, 3,39 mmol) en HCl 2N (25 ml) y se sometió la reacción a reflujo durante 30 h. Se enfrió la reacción hasta 0°C y se calentó después hasta la temperatura ambiente. Se filtró el precipitado resultante, se lavó con éter y se secó, para obtener 124 como un sólido blanco (0,55, 55,5%). MS (APCI): m/z 267,4 [M+H]+.

2-(1,3-Dimetil-2,6-dioxo-1,2,36-tetrahidropurin-7-il)N-(4-isopropilfenil)isobutiramida (387)

[0483] A una solución de ácido 124 (0,2 g, 0,75 mmol) en CHCl3 (30 ml) a 0°C, se le añadió cloruro de oxalilo (0,57 g, 4,5 mmol) y una cantidad catalítica de DMF. Se agitó la solución resultante durante 2 h a temperatura ambiente y se concentró in vacuo, y se redisolvió luego en CHCl3. Se enfrió la mezcla hasta 0°C y se le añadió después 4isopropilanilina, y se agitó la mezcla de reacción durante la noche calentando hasta la temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla de reacción con CHCl3 (30 ml) y se lavó con HCl 1N (50 ml). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con agua (75 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron in vacuo, y se purificó el producto bruto por cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc/hexano y EtOAc/MeOH, para obtener 387 como un sólido blanco (0,19 g, 58,8%). MS (APCI): m/z 384,3 [M+H]+. Anal. Calc. para C20H25N5O3: C, 62,65; H, 6,57; N, 18,26; Encontrado C, 62,40; H, 6,51; N, 18,15.

N-(4-Isopropilfenil)-2-(3-metil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (388):

[0484]

[0485] A una solución de ácido 125 (0,5 g, 2,23 mmol) en CHCl3 (50 ml) a 0°C, se le añadió cloruro de oxalilo (1,69 g, 13,3 mmol) y una cantidad catalítica de DMF. Se agitó la solución resultante durante 2 h a temperatura ambiente, se concentró in vacuo y se redisolvió en CHCl3. Se enfrió la solución hasta 0°C y se le añadió 4-isopropilanilina, y se agitó la reacción durante la noche calentando hasta la temperatura ambiente. Se diluyó entonces la mezcla de reacción con CHCl3 (30 ml) y se lavó con HCl 1N (50 ml). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con agua (75 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron in vacuo. Se purificó el producto por cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc/hexanos y EtOAc/MeOH, para obtener 388 como un sólido blanco (0,23 g, 31%). MS (APCI): m/z 342,2 [M+H]+. Anal. Calc. para C17H19N5O3. 0,4 H2O: C, 58,58; H, 5,73; N, 20,09; Encontrado C, 58,72; H, 5,63; N, 19,80.

N-(4-Ciclopentilfenil)-2-(3-metil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (394), N-(4-ciclopentilfenil-2(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (395) y N-(2-ciclopentilfenil)-2-(1,3-dimetil-2,6dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (398):

[0486]

1-Ciclopentil-2-nitrobenceno (127a) y 1-ciclopentil-4-nitrobenceno (127b)

[0487] A una solución agitada de ciclopentilbenceno 126 (5 g, 34,2) en anhídrido acético (50 ml) a 10°C, se le añadió gota a gota ácido nítrico al 70% (2,99 g, 34,2 mmol). Se agitó la mezcla homogénea amarilla durante 1 h a 10°C. Se vertió entonces la reacción en agua, se neutralizó con NaOH concentrado frío y se extrajo varias veces con éter etílico. Se combinaron las capas etéricas y se lavaron con un exceso de carbonato de potasio acuoso (100 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron in vacuo, para obtener una mezcla de compuestos 127a y 127b (6,4 g). Se usó esta mezcla en la etapa siguiente sin mayor purificación.

2-Ciclopentilbencenamina (128a) y 4-ciclopentilbencenamina (128b)

[0488] A una solución de los productos brutos 127a y 127b (2,5 g) en EtOH (100 ml), se le añadió Pd 10%/C (0,9 g, 3,5% mol.) y se agitó la reacción bajo un balón de hidrógeno durante 3 h. Se filtró entonces la reacción a través de Celite, se concentró in vacuo y se purificó el producto bruto por cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc/hexanos, para obtener el orto-compuesto 128a (0,5 g, 23,8%), MS (APCI): m/z 162,3 ([M+H]+) y el para-compuesto 128b (1 g, 47,6%), MS (APCI): m/z 162,3 [M+H]+.

N-(4-Ciclopentilfenil)-2-(3-metil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (394)

[0489] A una solución a 0°C de ácido 129 (2,1 mmol) en CHCl3 (10 ml) y CH3CN (10 ml), se le añadió cloruro de oxalilo (12,6 mmol) y una cantidad catalítica de DMF. Se agitó la solución resultante durante 2 h a temperatura ambiente y se concentró in vacuo. Se redisolvió el residuo en CHCl3 y se enfrió hasta 0°C. Se añadió a esta solución ciclopentilamina 128a y se agitó la reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se diluyó entonces la reacción con CHCl3 (30 ml) y se lavó con HCl 1N (50 ml). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con agua (75 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron in vacuo. Se purificó el producto por cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc/hexanos y EtOAc/MeOH, para obtener el 394 como un sólido amarillo claro (22 %). Pf: 295-300°C. MS (APCI): m/z 368,2 [M+H]+. Anal. Calc. para C19H21N5O3.0,45 H2O: C, 60,77; H, 5,88; N, 18,65; Encontrado C, 61,07; H, 5,85; N, 18,23.

N-(4-Ciclopentilfenil)-2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (395) y N-(2ciclopentilfenil)- 2-(1,3-dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (398)

[0490] A una solución de ácido 130 (2,1 mmol) en CHCl3 (10 ml) y CH3CN (10 ml) a 0°C, se le añadió cloruro de oxalilo (12,6 mmol) y una cantidad catalítica de DMF. Se agitó la solución resultante durante 2 h a temperatura ambiente y se concentró in vacuo. Se redisolvió el residuo en CHCl3 y se enfrió hasta 0°C. Se añadió a esta solución ciclopentilamina 128b y se agitó la reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se diluyó entonces la reacción con CHCl3 (30 ml) y se lavó con HCl 1N (50 ml). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con agua (75 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron in vacuo, y se purificó el producto por cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc/hexanos y EtOAc/MeOH, para obtener 395 (31%) como un sólido rojo claro, Pf: 260-262°C, MS (APCI): m/z 382,2 [M+H]+, Anal. Calc. para C20H23N5O3.0,1 H2O + 0,15 EtOAc: C, 62,41; H, 6,20; N, 17,67; Encontrado C, 62,47; H, 6,20; N, 17,38, y 398 (63%) como un sólido marrón claro, Pf: 201-202°C, MS (APCI): m/z 382,2 [M+H]+, Anal. Calc. para C20H23N5O3: C, 62,98; H, 6,08; N, 18,36; Encontrado C, 62,94; H, 6,10; N, 18,33.

N-(4-Isopropilfenil)-N-metil-2-(1-metil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acetamida (392):

[0491]

temperatura ambiente y se concentró in vacuo. Se redisolvió el residuo en CHCl3 y se enfrió la solución resultante hasta 0°C. Se añadió a esta mezcla N-metil-4-isopropilanilina (0,29 g, 2 mmol) y se agitó la reacción durante la noche calentando hasta la temperatura ambiente. Se diluyó entonces la reacción con CHCl3 (30 ml) y se lavó con HCl 1N (50 ml). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con agua (75 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron in vacuo, y se purificó el producto por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc/hexanos y EtOAc/MeOH, para obtener 392 (0,2 g, 51%) como un sólido marrón claro. Pf: 271-273°C. MS (APCI): m/z 356,2 [M+H]+ Anal. Calc. para C18H21N5O3.0,35 H2O: C, 59,77; H, 6,05; N, 19,36; Encontrado C, 59,77; H, 6,07; N, 19,29.

2-(1,3-Dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)-N-(4-isopropilfenil)-N-metilacetamida (393):

[0493]

[0494] A una solución de ácido 101 (0,5 g, 2,1 mmol) en CHCl3 (30 ml) y CH3CN (30 ml) a 0°C, se le añadió cloruro de oxalilo (1,59 g, 12,6 mmol) y una cantidad catalítica de DMF. Se agitó la solución resultante durante 2 h a temperatura ambiente y se concentró in vacuo. Se redisolvió el residuo resultante en CHCl3 y se enfrió hasta 0°C. Se añadió a esta mezcla N-metil-4-isopropilanilina (0,78 g, 5,2 mmol) y se agitó la reacción durante la noche calentando hasta la temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla de reacción con CHCl3 (30 ml) y se lavó con HCl 1N (50 ml). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con agua (75 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron in vacuo. Se purificó el producto por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc/hexanos y EtOAc/McOH, para obtener 393 como un sólido amarillo claro (0,65 g, 84,4%). Pf: 231-233°C. MS (APCI): m/z 370,2 [M+H]+. Anal. Calc. para C19H23N5O3.0,1 H2O: C, 61,47; H, 6,30; N, 18,87; Encontrado C, 61,28; H, 6,19; N, 18,57.

2-(2,6-Dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)-N-(4-isopropilfenil)acetamida (399):

[0495]

Xantina

Ácido (2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)acético (131)

[0496] Se suspendió xantina (4,8 g, 31,5 mmol) en agua y hidróxido de sodio 2 M (50 ml) y se agitó la suspensión resultante durante 30 min. Se añadió entonces ácido cloroacético (3 g, 31,5 mmol). Se sometió la solución resultante a reflujo durante 5 h, se enfrió hasta la temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se filtró el precipitado y se acidificó luego la solución acuosa (pH 3) con HCl 12 M. Se filtró el precipitado resultante y se lavó luego con EtOH caliente y después con hexanos calientes, para obtener una mezcla de productos brutos 131 y 132. Se añadió agua (65 ml) a estos productos brutos y se sometió la mezcla resultante a reflujo durante 30 min. Se filtró la solución en caliente y se recogió el precipitado. Se lavó entonces el precipitado con etanol y hexanos calientes, para obtener 131 como un sólido blanco (0,9 g, 13,4%).

2-(2,6-Dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)-N-(4-isopropilfenil)acetamida (399)

[0497] A una solución a 0°C de ácido 131 (0,05 g, 0,23 mmol) en DMF/DMSO (1:1, 10 ml), se le añadió HATU (0,13 g, 0,35 mmol). Se calentó la mezcla de reacción hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 15 min. más. Se enfrió luego la reacción de nuevo hasta 0°C y se añadió 4-isopropilamina (0,042 g, 0,31 mmol). Se agitó entonces la reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se evaporó la DMF y se añadió agua. Se lavó el precipitado resultante obtenido con acetato de etilo y se disolvió después en etanol y se sometió a reflujo durante 20 min. Se filtró la solución en caliente y se concentró in vacuo, para obtener 399 como un sólido blanco (0,025 g, 32,4%). Pf: 320-325°C. MS (APCI): m/z 326,1 [M-H]+ Anal. Calc. para C16H17N5O3.0,4 H2O: C, 57,44; H, 5,36; N, 20,93; Encontrado C, 57,43; H, 5,40; N, 20,68.

2-(1,3-Dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)-N-(4-(2-hidroxipropan-2-il)fenil)acetamida (402):

[0498]

Éter, Acetona, -78ºC

Pirrolidina en KOH, 0ºC

(E)-1-((4-Bromofenil)diazenil)pirrolidina (134)

[0499] A una solución a 0°C de 4-bromoanilina (133,10 g, 58,1 mmol) en HCl concentrado (11,7 ml), se le añadió gota a gota una solución de NaNO2 (4 g, 57,9 mmol) en H2O (5 ml). Se agitó entonces la reacción durante 10 min. más a 0°C tras la adición. Se añadió la solución de sal de diazonio resultante de una vez a una solución de pirrolidina (4,54 g, 63,9 mmol) en KOH 1M (50 ml). Se agitó la mezcla de reacción durante 30 min. a 0-10°C. Se filtró luego el precipitado resultante y se recristalizó con etanol absoluto (50 ml), para obtener el compuesto 134 (6,8 g, 46,2%) como cristales de color amarillo claro.

2-(4-Aminofenil)propan-2-ol (135)

[0500] A una solución a -78°C de compuesto 134 (1 g, 3,95 mmol) en éter (20 ml), se le añadió sec-BuLi (1,4 M en hexanos, 0,62 g, 9,67 mmol). Se agitó la solución resultante durante 30 min. a -78°C, seguido de adición de acetona (0,91 g, 15,81 mmol) gota a gota a -78°C. Se calentó la mezcla de reacción hasta la temperatura ambiente durante la noche. Se repartió la mezcla de reacción entre agua y éter y se separaron las capas. Se volvió a extraer la capa acuosa con éter. Se combinaron entonces las capas etéricas y se concentraron in vacuo, para obtener 135 bruto (0,33 g, 55,9%), que fue usado en la etapa siguiente sin mayor purificación.

2,-(1,3-Dimetil-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahidropurin-7-il)-N-[4-(1-hidroxi-1-metiletil)fenil]acetamida (402)

[0501] A una solución a 0°C de ácido 101 (0,32 g, 1,34 mmol) en DMF/DMSO (1:1, 20 ml), se le añadió HATU (0,0,76 g, 2,01 mmol). Se agitó entonces la reacción durante 15 min. más a temperatura ambiente. Se enfrió la solución hasta 0°C y se le añadió amina 135 (0,30 g, 2,01 mmol). Se agitó luego la reacción a temperatura ambiente durante la noche. Se concentró la DMF in vacuo y se añadió agua a la reacción. Se extrajo la capa acuosa con EtOAc. Se lavó después la capa del acetato de etilo de nuevo con agua y se concentró la capa orgánica in vacuo. Se purificó el producto por cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc/hexanos y EtOAc/MeOH, para obtener 402 como un semisólido marrón claro puro (0,086 g, 17,5%). MS (APCI): m/z 372,2 [M-H]+ Anal. Calc. para C18H21N5O4.0,35 EtOAc: C, 57,93; H, 5,96; N, 17,41; Encontrado C, 58,36; H, 6,14; N, 16,96.

Equivalentes

[0502] Los expertos en la técnica reconocerán, o serán capaces de determinar, usando tan sólo una experimentación rutinaria, muchos equivalentes de las realizaciones específicas de la invención aquí descrita. Dichos equivalentes pretenden quedar amparados por las siguientes reivindicaciones.

LISTA DE SECUENCIAS

[0503]

<110> Hydra Biosciences, Inc. Moran, Magdalene M. Fanger, Christopher Chong, Jayhong A. McNamara, Colleen Zhen, Xiaoguang Mandel-Brehm, Josh

<120> Métodos y composiciones para tratar el dolor

<130> HYDR-PWO-047

<150> EE.UU. 60/753.665

<151>

<150>: EE.UU. 60/817.892

<151>

<160>: 6

<170>: FastSEQ para Windows Versión 4,0

<210>: 1

<211>: 1119

<212>: PRT

<213>: Homo sapiens

<400>: 1

<210>: 2

<211>: 3360

<212>: ADN

<213>: Homo sapiens

<400>: 2

<210>: 3

<211>: 1119

<212>: PRT

<213>: Homo sapiens

<400>: 3

<210>: 4

<211>: 3360

<212>: ADN

<213>: Homo sapiens

<400>: 4

<210>: 5

<211>: 1125

<212>: PRT

<213>: Mus musculus

<400>: 5

<210>: 6

<211>: 3378

<212>: ADN

<213>: Mus musculus

<400>: 6

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de Fórmula II o una sal del mismo, o un solvato o hidrato del compuesto o de su sal:

donde n es un número entero de 1 a 3 y R2 representa heteroarilo substituido; y donde dicho compuesto inhibe una corriente mediada por el TRPA1 con una CI50 menor de 10 micromolar, para uso en un método de tratamiento o de prevención de una afección seleccionada entre asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino, glomerulonefritis, enfermedades neuroinflamatorias tales como la esclerosis múltiple, trastornos del sistema inmunitario, dolor agudo y/o crónico, sensibilidad al tacto, quemaduras, inflamación, neuropatía diabética, psoriasis, eczema, dermatitis, neuralgia postherpética (culebrilla), migraña, incontinencia, fiebre, sofocos, mucositis oral, dolor debido al cáncer, cistitis de la vejiga, dolor asociado a la enfermedad de Crohn y al Síndrome del Intestino Irritable (SII), síndrome de Grierson-Gopalan (más conocido como síndrome de los pies ardientes), síndrome de la boca ardiente (SBA) y tos, o como depilatorio para promover la pérdida, o inhibir el crecimiento, del pelo en un paciente, donde dicha CI50 es determinada por un registro de pinzamiento zonal de membranas realizado en el modo de células enteras con un potencial de sujeción de -40 mV mediante las siguientes etapas:

(a)

disponer de células de la línea comercial HEK293/TREx (Invitrogen) que expresan TRPA1 a partir de una construcción codificante de una proteína TRPA1 con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC Nº ID.: 1;

(b)

disponer de una solución interna de aspartato de cesio 140 mM, EGTA 10 mM, CaCl2 2,2 mM, MgCl2 2,08 mM y HEPES 10 mM, pH 7,2, y con adición de 60 mg/ml de anfotericina antes del experimento;

(c)

disponer de una solución externa de NaCl 150 mM, KCl 4,5 mM, MgCl2 3 mM, HEPES 10 mM, glutamina 10 mM, EGTA 1 mM, pH 7,4;

(d)

aplicar una rampa de voltaje de -120 a +100 mV, de 400 ms de duración, cada 5 segundos;

(e)

estudiar la capacidad del compuesto para bloquear la corriente hacia el interior o hacia el exterior en la presencia continuada de AITC 5 micromolar; y

(f)

determinar el valor de la CI50.
2.

Una preparación farmacéutica adecuada para uso en un paciente humano, o para uso veterinario, que contiene una cantidad efectiva de un compuesto de Fórmula I o una sal del mismo, o de un solvato o hidrato del compuesto o de su sal, según la reivindicación 1, para uso en un método de tratamiento o de prevención de una afección seleccionada entre asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino, glomerulonefritis, enfermedades neuroinflamatorias tales como la esclerosis múltiple, trastornos del sistema inmunitario, dolor agudo y/o crónico, sensibilidad al tacto, quemaduras, inflamación, neuropatía diabética, psoriasis, eczema, dermatitis, neuralgia postherpética (culebrilla), migraña, incontinencia, fiebre, sofocos, mucositis oral, dolor debido al cáncer, cistitis de la vejiga, dolor asociado a la enfermedad de Crohn y al Síndrome del Intestino Irritable (SII), síndrome de Grierson-Gopalan (más conocido como síndrome de los pies ardientes), síndrome de la boca ardiente (SBA) y tos, o como depilatorio para promover la pérdida, o inhibir el crecimiento, del pelo en un paciente.
3.

Un compuesto según la reivindicación 1 para uso en un método según la reivindicación 1, o una preparación farmacéutica según la reivindicación 2 para uso en un método según la reivindicación 2, donde dicha afección es el dolor.
4.

Un compuesto según la reivindicación 1 para uso en un método según la reivindicación 1, o una preparación farmacéutica según la reivindicación 2 para uso en un método según la reivindicación 2, donde dicha afección es el dolor oral.

5 5. Un compuesto según la reivindicación 1 para uso en un método según la reivindicación 1, o una preparación farmacéutica según la reivindicación 2 para uso en un método según la reivindicación 2, donde dicha afección es la inflamación.
6. Un compuesto según la reivindicación 1 para uso en un método según la reivindicación 1, o una preparación

10 farmacéutica según la reivindicación 2 para uso en un método según la reivindicación 2, donde dicha afección es la incontinencia.
7. Un compuesto según la reivindicación 1 para uso en un método según la reivindicación 1, o una preparación farmacéutica según la reivindicación 2 para uso en un método según la reivindicación 2, donde dicha afección es

15 seleccionada entre asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino, glomerulonefritis, enfermedades neuroinflamatorias tales como la esclerosis múltiple y trastornos del sistema inmunitario.

128

hTRPA1 hTRPV3

Zonal P1

Interior hTRPA1 Interior hERG hTRPV4 Comp.

CI50 Flúor CI50 CI50 CI50 hNaV1.2 ID Estructura PM (nM) CI50 (nM) (nM) (nM) (nM) CI50 (nM)