ES2454741T3 - Composiciones farmac�uticas y m�todos para tratar la disfunci�n er�ctil - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica en una forma de dosificación apropiada para utilizar en el tratamiento de disfunción eréctil, dicha composición que comprende: (a) Angiotensina-(1-7) y/o un agonista del receptor de la Angiotensina-(1-7) y/o un análogo de la Angiotensina-(1-7), en donde el agonista del receptor o el análogo de la Angiotensina-(1-7) se selecciona del grupo que consiste de DAla 7-Ang-(1-7), D-Pro7-Ang-(1-7), y AVE 0991, en una cantidad efectiva; y (b) un portador farmacéuticamente aceptable; en donde la composición además comprende al menos un agente anti-hipertensivo o un inhibidor de PDE, en donde al menos un agente anti-hipertensivo se selecciona del grupo que consiste de los antagonistas del receptor de la Angiotensina II, los inhibidores de ACE, los agentes b-bloqueantes y los agentes diuréticos, en donde el antagonista del receptor de la Angiotensina II, se selecciona del grupo que consiste de losartan, candersartan, irbersartan, valsartan, olmesartan, eprosartan y telmisartan; el inhibidor de ACE se selecciona del grupo que consiste de captopril, enalapril, fosinopril, delapril, benzepril; el agente b-bloqueante se selecciona del grupo que consiste de acebutolol, atenolol, betaxolol, bisoprolol, esmolol, metropolol, propanolol, timolol, pindolol, penbutolol, labetalol, carvedilol; el agente diurético se selecciona del grupo que consiste de clorotiazida, clortalidona, furosemida, hidroclorotiazida, manitol, metolazona, mezcla de amilorida e hidroclorotiazida, mezcla de triamtereno e hidroclorotiazida, y diuréticos ahorradores de potasio, tales como amilorida, espirolactona, y triamtereno; y en donde el inhibidor de PDE se selecciona del grupo que consiste de papaverina, sildenafil, vardenafil, tadalafil.

Description

Composiciones farmac�uticas y m�todos para tratar la disfunci�n er�ctil

Campo de la invenci�n

La presente invenci�n se refiere al uso de la Angiotensina-(1-7), sola o en combinaci�n con otros agentes terap�uticos en el tratamiento de la disfunci�n er�ctil (DE). Tambi�n se proveen, los m�todos para tratar la DE y/o para restaurar la capacidad er�ctil basados en el uso de la Angiotensina-(1-7) sola o en combinaci�n con otros agentes terap�uticos.

Antecedentes de la invenci�n

Se cree que la impotencia o la insuficiencia er�ctil es un trastorno generalizado que afecta aproximadamente al doce por ciento de los hombres adultos de menos de cuarenta y cinco a�os, aproximadamente veinte por ciento de los hombres a los sesenta a�os, y aproximadamente cincuenta y cinco por ciento de los hombres a los setenta y cinco a�os. Se ha identificado un n�mero de causas de la insuficiencia er�ctil, adem�s de las deficiencias anat�micas del pene o el escroto, que impide una erecci�n suficiente para la penetraci�n vaginal. Estas causas son psicol�gicas y f�sicas en origen y en cualquier individuo que sufre de impotencia pueden existir m�s de una causa de disfunci�n er�ctil.

La disfunci�n er�ctil puede ser psicol�gica, resultante, por ejemplo, de la ansiedad o la depresi�n, sin deterioro som�tico aparente u org�nico. Tal disfunci�n er�ctil, que se conoce como “psicog�nica”, es responsable de aproximadamente quince a veinte por ciento de los casos de impotencia. En otros casos, la disfunci�n er�ctil se asocia con la aterosclerosis de las arterias que suministran sangre al pene; tal disfunci�n se conoce como “arteriog�nica” o “ateroscler�tica”. Aproximadamente del cuarenta al sesenta por ciento de los casos de la impotencia son de origen arteriog�nico.

En incluso otros casos, existe p�rdida en las venas en el pene de tal manera que no se obtiene ni se mantiene la presi�n suficiente para una erecci�n. Esta disfunci�n se conoce como “fuga venosa”, o “drenaje anormal”. Esta condici�n a menudo es exacerbada mediante la presencia de alguna disfunci�n arteriog�nica por medio de la cual se altera el suministro de sangre al pene. En incluso otros casos, la disfunci�n se asocia con una neuropat�a, tal como da�o de los nervios que se asocia, por ejemplo, a partir de una cirug�a o una lesi�n p�lvica, en el sistema nervioso que afecta el pene. Dicha disfunci�n se conoce como “neurog�nica” y aproximadamente del diez al quince por ciento de los casos de la impotencia son de origen neurog�nico.

Tambi�n existe una alta incidencia de insuficiencia er�ctil entre diab�ticos, particularmente aquellos con diabetes mellitus dependiente de la insulina. La disfunci�n er�ctil en diab�ticos por lo general se clasifica como “diabetog�nica”, aunque la disfunci�n fundamental es neurog�nica por lo general asociada con la neuropat�a, pero puede ser arteriog�nica o neurog�nica y arteriog�nica. Aproximadamente la mitad de los hombres diab�ticos sufren de insuficiencia er�ctil, y aproximadamente la mitad de los casos de impotencia neurog�nica se da en los diab�ticos.

Algunas veces, la insuficiencia er�ctil es un efecto secundario de ciertos f�rmacos, tales como los beta-bloqueantes que se administran para reducir la presi�n sangu�nea en personas que sufren de hipertensi�n, o f�rmacos administrados para tratar la depresi�n o la ansiedad. El consumo excesivo de alcohol tambi�n se ha relacionado con la insuficiencia er�ctil. Estas formas de insuficiencia er�ctil se pueden considerar como un subconjunto de insuficiencia neurog�nica o psicog�nica.

Un n�mero de m�todos para tratar la impotencia est� disponible. Estos tratamientos incluyen, tratamientos farmacol�gicos, cirug�a y, en casos de disfunci�n psicog�nica, algunas veces es efectiva la asesor�a psicol�gica.

En los casos raros, d�nde la insuficiencia es intratable debido a una fuga venosa, generalmente se puede emplear la cirug�a para reparar la lesi�n venosa y de ese modo curar la insuficiencia o, si sigue habiendo una insuficiencia er�ctil despu�s de la reparaci�n de la lesi�n venosa, hace que la insuficiencia sea sensible al tratamiento por medio de m�todos farmacol�gicos. As� mismo, son ampliamente utilizados los implantes de pene, que proveen un medio mec�nico para producir una erecci�n suficiente para la penetraci�n vaginal, para tratar la impotencia. En los �ltimos a�os, se han empleado los implantes, especialmente en casos d�nde la intervenci�n farmacol�gica no es efectiva, que por lo general son casos de impotencia aterog�nica severa. El tratamiento de la impotencia con implantes de pene, sin embargo, conlleva graves desventajas. Tal tratamiento requiere cirug�a y necesita la destrucci�n total de los tejidos er�ctiles del pene, siempre excluyendo la erecci�n normal.

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Tambi�n son disponibles los m�todos de tratamiento farmacol�gico. Sin embargo, no se ha demostrado que tales m�todos, sean altamente satisfactorios o tengan efectos secundarios potencialmente severos.

El VIAGRA� (citrato de sildenafilo, Pfizer, Inc., New York, N.Y.), tomado por v�a oral, es efectivo para un m�ximo del 80% (dependiendo de la severidad de la disfunci�n er�ctil (DE) y/o cualquier enfermedad subyacente) de los pacientes para producir una erecci�n adecuada para el contacto sexual. Es efectivo para un amplio rango de causas. Los pacientes exitosos de VIAGRA� tienen erecciones naturales, normales. El VIAGRA� no tiene efecto en la libido (deseo sexual) de manera que no ser� efectivo a menos que un hombre se sienta estimulado.

El VIAGRA� suprime la enzima fosfodiesterasa de manera que el monofosfato de guanosina c�clico (cGMP), la sustancia qu�mica que produce la erecci�n, no se descompone, as� que se produce una erecci�n normal. El cGMP es un vasodilatador natural (dilata las arterias del pene), que relaja el m�sculo liso de las arterias del pene de manera que el m�sculo liso relajado, en combinaci�n con la presi�n sangu�nea normal, hace que las arterias del pene se dilaten de manera que las c�maras de erecci�n se inundan con sangre para producir una erecci�n.

Los hombres que no pueden tomar VIAGRA� o lo encuentran ineficaz, por lo general son capaces de lograr erecciones utilizando otro tratamiento que produce erecciones directamente, sin estimulaci�n sexual. Este tratamiento utiliza la vasodilataci�n (dilataci�n del vaso) por medio de medicamentos (vasodilatores) que dilatan las arterias del pene de manera que las c�maras de erecci�n se inunden con sangre para producir una erecci�n. Estos medicamentos relajan el m�sculo liso de las arterias del pene para causar la dilataci�n de la arteria.

El vasodilator m�s com�n es el ALPROSTADIL� (Caverjet, Edex, Schwarz Pharma USA Holdings, Inc., Wilmington, Del.). Este puede ser inyectado en la base del pene (en uno de los cuerpos cavernosos) con una aguja o insertado en la uretra en forma de pellet a trav�s de un sistema de administraci�n llamado MUSE (Supositorio Uretral Medicado para Erecciones). El ALPROSTADIL� es efectivo en m�s del 80% de los pacientes y MUSE para aproximadamente el 30% de los hombres con disfunci�n er�ctil. Para los hombres para quienes el ALPROSTADIL� no es efectivo, una mezcla inyectada de vasodilatores (TRIMIX), es efectiva para aproximadamente el 62% de los pacientes.

Los hombres que son capaces de lograr una erecci�n normal, pero no la pueden sostener porque tienen fuga venosa se pueden ayudar mediante una banda de constricci�n del pene. Este es un dispositivo similar a un anillo que se sujeta alrededor de la base del pene para evitar que la sangre se escape. Se encuentra disponible una banda para el pene denominada Actis (Vivus Corp.).

Un nuevo medicamento Uprima (apomorfina), tomado por v�a oral, se encuentra en estudios. Busca dirigir los mecanismos en el cerebro para producir una erecci�n. En Europa se ha aprobado para el tratamiento de la disfunci�n er�ctil.

Un medicamento t�pico Topiglan (ALPROSTADIL�) ha tenido resultados prometedores, aplicado en la cabeza del pene para producir una erecci�n directamente, sin estimulaci�n sexual. Un ung�ento facilitar�a el modo de administraci�n, al tiempo que reduce el riesgo de efectos adversos en comparaci�n con la inyecci�n o el pellet uretral.

Dos medicamentos orales, vardenafil y tadalafil, como el sildenafil (VIAGRA�), son inhibidores de PDE-5 que suprime la enzima que descompone el vasodilator natural cGMP, con el fin de facilitar y mantener una erecci�n.

Cuando se utilizan dos o m�s medicamentos en combinaci�n, el tratamiento se denomina farmacoterapia de combinaci�n. Cuando un medicamento se utiliza solo, el tratamiento se denomina monoterapia. Cuando falla cualquier monoterapia, puede ser efectiva una farmacoterapia de combinaci�n.

Las farmacoterapias de combinaci�n que utilizan al menos dos medicamentos han sido utilizadas experimentalmente con resultados significativos. Se ha evaluado la combinaci�n de VIAGRA� y MUSE (Eur. Urol. 2000; 38: 30-4 and BJU. Int. 2000; 86: 469-73 and Urol. 2000; 163: 198).

Otro estudio evalu� el beneficio de bloqueantes alfa orales (doxazosina oral diaria) en combinaci�n con intracavernosa (inyectada) ALPROSTADIL� (Urol. 1998; 52: 739-43).

Otro estudio (Internat. J. Impot. Res. 2002; 14(1): 50-53) combin� el VIAGRA� con Cardura (doxazosina) oral diariamente.

Los p�ptidos de la angiotensina (Ang) son un grupo de p�ptidos reguladores en el sistema angiotensina-renina (RAS), que ayuda a regular la presi�n sangu�nea y el volumen extracelular en el cuerpo. Se conocen varios p�ptidos de la angiotensina, por ejemplo, Ang-(2-8) (angiotensina III), Ang-(3-8) (angiotensina IV), Ang II (4-8), Ang II (5-8), Ang II (1-4), Ang-(1-9), y Ang-(1-7).

La Ang-(1-7) es un heptap�ptido biol�gicamente activo de (RAS), y sus funciones por lo general son opuestas a aquellas atribuidas a Ang II, que es el principal componente efector de RAS. La Ang-(1-7) se puede formar a partir

5 de Ang II a trav�s de la enzima convertidora de la angiotensina 2 (ACE-2), o directamente a partir de Ang I por la acci�n de neutra- o prolil-endopeptidasas. El receptor para Ang-(1-7) es el receptor acoplado a la prote�na G, Mas (v�ase Santos R.A.S., et al. (2003). PNAS, USA, 100: 8258-8263). Las principales actividades de Ang-(1-7) son la vasodilataci�n a trav�s de la estimulaci�n del �xido n�trico, prostaglandinas y potenciaci�n de las actividades de la bradicinina, y antidiur�ticos.

10 Se conocen otras actividades importantes de Ang-(1-7), por ejemplo, Ang-(1-7) se puede involucrar en los mecanismos de aprendizaje y de memoria (v�ase, Santos, R.A. and Campagnole-Santos, M.J. (1994) Braz J Med Biol Res. 27(4):1033-47; Hellner, K., et al. (2005) Mol Cell Neurosci. 29(3):427-35).

La Tabla 1 resume las actividades biol�gicas de Ang-(1-7) y otras angiotensinas importantes (fuente: Ferreira AJ, and Santos RAS. (2005). Braz J Med Biol Res, 38:499-507).

15 Tabla 1. Efectos cardiovasculares mediados por los receptores de la angiotensina

Angiotensina

Receptor Acciones

Ang II

AT1 Efecto presor y vasoconstricci�n Aumento de inotropismo y cronotropismo Efecto arritmog�nico Remodelaci�n y Proliferaci�n celular Trombosis e inflamaci�n

Ang II

AT2 Inhibici�n de Proliferaci�n celular Apoptosis Vasodilataci�n

Ang-(1-7)

AT1-7(Mas) * Vasodilataci�n Potenciaci�n de vasodilataci�n inducida por BK Efecto anti-arritmog�nico Mejora de funci�n contr�ctil post-isqu�mica Inhibici�n de Proliferaci�n celular

Ang-(3-8) (Ang IV)

AT4 (IRAP) Vasodilataci�n Inhibici�n de Proliferaci�n celular

Des-Asp1-Ang I

AT1 Inhibici�n de Proliferaci�n celular inducida por Ang II

* Las acciones mediadas por Mas se enumeran, bas�ndose en la evidencia directa o indirecta (bloqueada por A779). Ang = angiotensina; BK = bradiquinina; IRAP = aminopeptidasa regulada por la insulina

Los beneficios del uso de la Angiotensina-(1-7) en una enfermedad card�aca y sus complicaciones ha sido un tema importante relacionado con este heptap�ptido. Por ejemplo, U.S. Patent Application 2004/171584 revela las

formulaciones que comprenden la angiotensina-(1-7) y/o el losartan para el tratamiento de la hipertensi�n arterial y otras enfermedades cardiovasculares. Adem�s, U.S. Patent Application 2005/069533 revela las formulaciones de angiotensina-(1-7) para tratar la hipertensi�n arterial, heridas, quemaduras, eritema, tumores, alopecia, enfermedades de la sangre, diabetes mellitus, la motilidad del esperma, nefropat�a, trastornos gastrointestinales y ginecol�gicos, angiog�nesis y angioplastia.

Se sabe que existen al menos tres rutas diferentes para formar la Ang-(1-7) (v�ase, por ejemplo, Ferreira, A.J. and Santos, R.A.S. (2005) Braz J Med Biol Res, 38:499-507); Loot, A.E. (2005). Therapeutic perspectives of Angiotensina-(1-7) in heart failure. Thesis Dissertation. University of Groningen). La Ang-(1-7) se puede formar a partir de Ang I (1-10), (i) directamente, mediante la acci�n combinada de endopeptidasa neutra y prolilendopeptidasa (NEP y PEP), o (ii) indirectamente, por la hidr�lisis del intermedio Ang-(1-9) por la acci�n de la enzima convertidora de la angiotensina y la endopeptidasa neutra (ACE y NEP). Alternativamente, Ang-(1-7) se puede formar por la hidr�lisis de Ang II (1-8) por la acci�n de prolilcarboxipeptidasa, prolil-endopeptidasa y la enzima convertidora de la angiotensina 2 (PCP, PEP y ACE2).

Los trastornos sexuales de la presente invenci�n se conocen por aquellos expertos en la t�cnica (v�ase, por ejemplo, Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, Fourth Edition, (DSM-IV), American Psychiatric Association, Washington D.C., 1994 as� como the DSM-IV Guidebook, American Psychiatric Press, Inc., Washington D.C., 1995.

Por lo tanto, aunque la impotencia es un problema ubicuo, existen pocos m�todos satisfactorios disponibles para tratar este trastorno. Por consiguiente, es un objeto en este documento proveer los m�todos y las composiciones para tratar la impotencia.

Resumen de la invenci�n

La presente divulgaci�n se refiere al uso de Ang-(1-7) en el tratamiento de la disfunci�n er�ctil (DE). Ang-(1-7) se puede utilizar sola o en combinaci�n con otros agentes terap�uticos para DE.

La divulgaci�n tambi�n incluye el uso de an�logos de Ang-(1-7) en el tratamiento de DE. Los an�logos de Ang-(1-7) se pueden utilizar solos o en combinaci�n con otros agentes terap�uticos para DE.

La divulgaci�n tambi�n incluye el uso de agonistas del receptor de Ang-(1-7) en el tratamiento de DE. Los agonistas del receptor de Ang-(1-7) se pueden utilizar solos o en combinaci�n con otros agentes terap�uticos para DE.

Una primera modalidad de la invenci�n actual se refiere a una composici�n farmac�utica en una forma de dosificaci�n apropiada, dicha composici�n que comprende: (a) la Ang-(1-7) y/o un agonista del receptor de la Angiotensina-(1-7), y/o un an�logo de la Angiotensina-(1-7) en una cantidad efectiva, tanto para disminuir los s�ntomas de la disfunci�n er�ctil como para restaurar la capacidad er�ctil; (b) un inhibidor de PDE o al menos un agente anti-hipertensivo, y (c) un portador farmac�uticamente aceptable.

En una segunda modalidad, la presente invenci�n se refiere a una composici�n farmac�utica para utilizar en el tratamiento de la disfunci�n er�ctil en un individuo con necesidad de dicho tratamiento, dicho uso que comprende la administraci�n a dicho individuo de una cantidad efectiva de Ang-(1-7) y/o un agonista del receptor de Ang-(1-7), y/o un an�logo Ang-(1-7), solos o en combinaci�n con otros ingredientes activos, en donde la composici�n es efectiva para revertir la disfunci�n er�ctil causada por tratamiento a largo plazo de la hipertensi�n, como se define anteriormente.

En una modalidad preferida, la invenci�n es un complejo de inclusi�n formado por la Ang-(1-7) y una ciclodextrina.

Adicionales objetos, caracter�sticas, y ventajas de la invenci�n van a ser aclarados por medio de la siguiente descripci�n. Adicionalmente, las ventajas de la presente invenci�n ser�n evidentes a partir de la siguiente explicaci�n en referencia a los dibujos.

Breve descripci�n de los dibujos

La Figura 1 muestra la inmunolocalizaci�n de Mas en estructuras de penes de ratas y humanos. Mas fue localizado en membranas de c�lulas endoteliales del cavernoso (tri�ngulos) y de m�sculo liso (flechas) de humano (a-b) y rata (c-d), c�lulas de m�sculo liso y endotelio arteriolar de rata (d-e).

La Figura 2 ilustra gr�ficamente el efecto in vivo de Ang-(1-7) en la respuesta er�ctil por estimulaci�n ganglionar en rata. La Ang-(1-7) (a-b) increment� el aumento de CCP/MAP inducida por estimulaci�n ganglionar que fue mitigado por la infusi�n de A-779 (c). A-779 reduce el aumento de CCP/MAP inducida por un est�mulo m�nimo en el cual se

observ� el valor m�ximo del CCP/MAP (de). L-NAME atenu� el aumento de CCP/MAP inducido por la estimulaci�n el�ctrica que no fue superado por Ang(1-7) (f). Todos los resultados se expresan como la media � s.e.m. El an�lisis estad�stico se realiz� con ANOVA seguido por la prueba post hoc de Bonferroni. *, P<0.05, ** P<0.01 en comparaci�n con el control, registrado 10 min antes de la administraci�n del f�rmaco. La prueba t se realiz� en el protocolo A-779 y L-NAME. * P < 0.05 en comparaci�n con el control.

La Figura 3 muestra �xido n�trico liberado en el cuerpo cavernoso humano inducido por Ang-(1-7). Ang-(1-7) estimul� la liberaci�n de NO en tejido cavernoso de humanos sin disfunci�n er�ctil (a-b) y con disfunci�n er�ctil (c-d). H-WED, humano sin disfunci�n er�ctil; H-DE, humano con disfunci�n er�ctil.

La Figura 4 ilustra el �xido n�trico liberado en cuerpo cavernoso de rata inducido por Ang-(1-7). Ang-(1-7) indujo la liberaci�n de NO en cuerpo cavernoso de rata no-estimulada (a-b). La estimulaci�n ganglionar subm�xima de la rata indujo la liberaci�n de NO, que se aument� por Ang-(1-7) (c-d). ES, estimulada el�ctricamente.

La Figura 5 muestra el �xido n�trico liberado en cuerpo cavernoso de ratones inducido por Ang-(1-7). Ang-(1-7) estimul� la liberaci�n de NO en ratones WT Mas (a-b) que fue suprimido en ratones carentes de Mas (c-d). WT, ratones de tipo salvaje; KO, ratones carentes.

La Figura 6 ilustra las membranas de transferencia mostrando que Ang-(1-7) estimula la fosforilaci�n de eNOS (S1177) y aumenta la actividad de eNOS en c�lulas transfectadas CHO-Mas. a, Expresi�n del receptor de AT1 y AT2 Mas, en CHO y c�lulas transfectadas CHO-Mas, detectada por el an�lisis de transferencia de western con anticuerpos espec�ficos. b, Aumento dependiente del tiempo en fosforilaci�n eNOS. Las c�lulas transfectadas CHO-Mas fueron expuestas a Ang-(1-7), (10-7 M, 5 a 30 min) en la presencia o ausencia de su inhibidor, fosforilaci�n de A779 (10-6 M) y eNOS detectada por el an�lisis de transferencia de western con anticuerpo fosfo-espec�fico (S1177). La fosforilaci�n fue bloqueada completamente por el antagonista de Ang-(1-7), A-779. c, Ang-(1-7) indujo la liberaci�n de NO de una manera dependiente de la dosis. La liberaci�n de NO, durante 30 min se midi� utilizando el fluorocromo 2,3-diaminonaftaleno (DAN). * P< 0.05 (LV, ventr�culo izquierdo).

La Figura 7 ilustra gr�ficamente el efecto de la estimulaci�n del nervio ganglionar sobre CCP/MAP de los ratones Mas+/+ y Mas-/-. a. aumento de CCP/MAP inducido por la estimulaci�n ganglionar en ratones Mas-/- fue significantemente inferior que en Mas+/+. b. aumento de CCP/MAP inducido por una segunda serie de estimulaci�n ganglionar realizada 10 min m�s tarde, se atenu� a�n m�s en Mas-/-que en Mas+/+. Todos los resultados se expresan como la media � s.e.m. ANOVA seguido por la prueba post hoc de Bonferroni. *, P<0.05, ** P<0.01, *** P<0.001 en comparaci�n con Mas+/+.

La Figura 8 muestra el aumento de tejido fibroso producido por la deleci�n gen�tica de Mas. a. Ratones Mas -/te�idos con tricr�mico de Gomori mostr� el aumento en tejido fibroso en comparaci�n con Mas+/+ indicando un aumento del contenido de col�geno. b. Imagen representativa de tinci�n de tricr�mico de Gomori en cuerpo cavernoso de ratones Mas+/+ y Mas-/- (4x - im�genes altas; 40x - im�genes bajas). Los resultados expresados como la media � s.e.m, n=4. La prueba no apareada t de Student seguida por la prueba de Mann Whitney. P < 0.05 en comparaci�n con ratones Mas+/+ (AU, unidad arbitraria).

La Figura 9 ilustra el efecto in vivo de Ang-(1-7) sobre ratas normotensas e hipertensas por sal-DOCA. El tratamiento con Ang-(1-7) (15.5 pmol/Kg/min de peso corporal) potenci� el aumento dependiente del voltaje en CCP/MAP bajo estimulaci�n ganglionar en ratas normotensas (a), y normaliz� la funci�n del pene en ratas hipertensas por sal-DOCA (b-c). Todos los resultados se expresan como la media � s.e.m. ANOVA seguido por la prueba post hoc de Bonferroni. *, P<0.05 en comparaci�n con el control, registrado 10 min, antes de la administraci�n del f�rmaco.

La Figura 10 ilustra el efecto en la funci�n er�ctil de SHR tratado cr�nicamente con el Complejo de Inclusi�n Ang-(1-7)/HPβ-CD y Atenolol. El tratamiento de los animales con Atenolol redujo el aumento de CCP/MAP que fue inducido por estimulaci�n el�ctrica ganglionar (1.5 V, 5 msec pulsos a una frecuencia de 12 Hz). El Complejo de Inclusi�n Ang-(1-7)/HPβ-CD no alter� el aumento de CCP/MAP, pero anul� la atenuaci�n del efecto inducido por Atenolol en la funci�n er�ctil.

Descripci�n detallada de la invenci�n

DE es un trastorno que involucra la falla de un mam�fero macho para lograr la erecci�n, la eyaculaci�n, o ambas. Un aumento en DE por lo general se asocia con la edad y generalmente se causa por una enfermedad f�sica o como un efecto secundario del tratamiento del f�rmaco. Los principales medicamentos responsables de DE son los antihipertensivos (por ejemplo, beta-bloqueantes, simpaticol�ticos, y diur�ticos), y anti-diab�ticos.

Se cree que DE y la enfermedad vascular (por ejemplo, hipertensi�n) est�n relacionadas en el nivel del endotelio. La disfunci�n endotelial resulta en una incapacidad del revestimiento de la c�lula del m�sculo liso en las arteriolas para

relajar, previniendo as� la vasodilataci�n. El �xido n�trico (NO) es un potente vasodilator y se secreta por el endotelio, que se sintetiza a partir de la L-arginina por la sintasa de NO de la enzima endotelial (eNOS).

Ang-(1-7) promueve la liberaci�n de prostaglandinas a partir de c�lulas de m�sculo liso y endotelio vascular, liberaci�n de NO, vasodilataci�n, inhibici�n de crecimiento de c�lula vascular y atenuaci�n de vasoconstricci�n inducida por Ang II.

El sistema angiotensina-renina tiene dos brazos principales: un brazo vasoconstrictor/proliferativo en la cual el principal mediador es la Ang II que act�a sobre los receptores de AT1; y un brazo vasodilator/anti-proliferativo en el cual el principal efector es Ang-(1-7) que act�a a trav�s del Mas receptor acoplado de la prote�na G. Los p�ptidos del sistema renina-angiotensina, incluyendo el vasodilator Ang-(1-7), se administran ampliamente, incluyendo dentro del cuerpo cavernoso (v�ase, por ejemplo, Kifor I., et al. (1997) J Urol. 157: 1920-1925).

Los inventores demostraron que Ang-(1-7) se puede utilizar para tratar DE debido a que: (i) la presencia del Mas en rata y cuerpo cavernoso humano, (ii) el efecto de la estimulaci�n de Mas por Ang-(1-7) sobre la liberaci�n de NO en cuerpo cavernoso humano, (iii) los mecanismos de se�alizaci�n activados a partir de la liberaci�n de NO por Ang-(17); y (iv) actividad en los modelos in vivo de erecci�n del pene.

La mayor�a de las causas de la disfunci�n er�ctil resultan de los efectos adversos sobre los nervios o vasos sangu�neos hacia, de, o dentro del pene. Las causas de la disfunci�n er�ctil incluyen: aterosclerosis (engrosamiento, estrechamiento, endurecimiento y menos elasticidad de los vasos sangu�neos del pene); la anomal�a del mensaje qu�mico hacia o dentro del pene (previniendo as� que las c�maras de erecci�n sean inundadas con sangre para producir la erecci�n); fuga venosa (la sangre se filtra completamente de los vasos del pene); el da�o de los nervios y vasos sangu�neos causado por la diabetes; el da�o de los nervios, causado por enfermedades degenerativas tales como esclerosis m�ltiple y enfermedad de Parkinson; da�o de los nervios causado por extirpaci�n quir�rgica de la pr�stata, la vejiga o el recto; aneurisma de la aorta abdominal (los vasos y los nervios del pene se pueden da�ar); deficiencia de B-12 (provoca problemas neurol�gicos en todo el cuerpo); los tratamientos de radiaci�n contra c�ncer de pr�stata, vejiga o rectal; factores psicol�gicos (estr�s, depresi�n, ansiedad de rendimiento); desequilibrios hormonales tales como deficiencia de testosterona o niveles anormalmente altos de prolactina; alcohol; uso del tabaco; abuso de sustancias; enfermedad de Peyronie (el tejido conectivo del pene se engruesa, lo que interfiere con la capacidad para tener una erecci�n); lesiones en los nervios o arterias necesarias para tener una erecci�n (fractura de pelvis, cerebro, m�dula espinal, abdomen o pene); anti-hipertensivos; anti-depresivos; tranquilizantes; antif�ngicos; anti�cidos; f�rmacos para bajar el colesterol; diur�ticos; nitratos; Proscar (medicamento para la hiperplasia de pr�stata benigna); propecia (para contrarrestar la calvicie); estr�genos; anti-andr�genos; antihistaminas; anti-colin�rgicos; f�rmacos contra el c�ncer; el envejecimiento, la hipertensi�n; la obesidad; y la hipercolesterolemia.

Particularmente, la presente divulgaci�n se refiere al uso de Ang-(1-7) y/o un agonista del receptor de Ang-(1-7) y/o un an�logo de Ang-(1-7) en el tratamiento de la disfunci�n er�ctil (DE) en un paciente necesitado de dicho tratamiento, en donde la disfunci�n er�ctil es causada por diabetes, enfermedad renal, alcoholismo cr�nico, esclerosis m�ltiple, aterosclerosis, enfermedad vascular, enfermedad neurol�gica o enfermedad psicol�gica. La Ang(1-7) y/o el agonista del receptor de la Ang-(1-7) y/o el an�logo de la Ang-(1-7), se puede utilizar solo o en combinaci�n con otro ingrediente activo.

Adem�s, la presente invenci�n se relaciona particularmente con el uso de la Ang-(1-7) y/o un agonista del receptor de la Ang-(1-7) y/o un an�logo de la Ang-(1-7) en el tratamiento/rehabilitaci�n de la disfunci�n er�ctil (DE), en un paciente necesitado de dicho tratamiento, en donde la disfunci�n er�ctil es causada por anti-hipertensivos, antihistaminas, anti-depresivos, tranquilizantes, supresores del apetito, o por la cirug�a o lesi�n que afecta la erecci�n del pene.

La presente invenci�n tambi�n provee una composici�n farmac�utica en una forma de dosificaci�n apropiada, dicha composici�n que comprende un inhibidor de PDE combinado con la Ang-(1-7) y/o un agonista del receptor de la Ang-(1-7) y/o un an�logo de la Ang-(1-7) y un portador farmac�utico. La composici�n adem�s puede comprender un agente anti-hipertensivo.

El t�rmino “Angiotensina-(1-7)” como se utiliza en este documento, es el heptap�ptido que tiene la secuencia Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro. Los t�rminos “agonista del receptor de la Angiotensina-(1-7)” y “an�logo de la Angiotensina(1-7)” tienen la intenci�n de incluir an�logos o agonistas pept�dicos, y agonistas no-pept�dicos, por ejemplo, Ala1Angiotensina-(1-7), AVE 0991 y aquellos revelados en U.S. Patent Application 2005/069533. As� mismo se incluyen agonistas no-pept�dicos por ejemplo, en U.S. Patent 6,235,766

El t�rmino “agente anti-diab�tico” como se utiliza en este documento, tiene la intenci�n de incluir, potenciadores de la secreci�n de la insulina, por ejemplo, un derivado de biguanida, por ejemplo, metformina o una sal de esta farmac�uticamente aceptable. Otros potenciadores de la secreci�n de la insulina incluyen sulfonilureas (SU),

incluyendo tolbutamida; clorpropamida; tolazamida; acetohexamida; 4-cloro-N-[(1-pirolidinilamino)carbonil]benzensulfonamida (glicopiramida); glibenclamida (gliburida); glicazida; 1-butil-3-metanililurea; carbutamida; glibonurida; glipizida; gliquidona; glisoxepid; glibutiazol; glibuzol; glihexamida; glimidina; glipinamida; fenbutamida; y tolilciclamida, o las sales de estos farmac�uticamente aceptables.

El t�rmino “agente anti-hipertensivo” como se utiliza en este documento, tiene la intenci�n de incluir, antagonistas del receptor de la Angiotensina II, por ejemplo losartan, candersartan, irbersartan, valsartan, olmesartan, eprosartan, telmisartan; agentes β-bloqueantes; agentes bloqueantes del canal de calcio; inhibidores de ACE, por ejemplo captopril, enalapril, fosinopril, delapril, benzepril; y agentes diur�ticos.

El t�rmino “agente β-bloqueante” como se utiliza en este documento, tiene la intenci�n de incluir acebutolol, atenolol, betaxolol, bisoprolol, esmolol, metropolol, propanolol, timolol, pindolol, penbutolol, labetalol, carvedilol. El atenolol fue utilizado como un ejemplo de agente β-bloqueante utilizado en la composici�n de la invenci�n.

El t�rmino “agente diur�tico” como se utiliza en este documento, tiene la intenci�n de incluir, clorotiazida, clortalidona, furosemida, hidroclorotiazida, manitol, metolazona, mezcla de amilorida e hidroclorotiazida, mezcla de triamtereno e hidroclorotiazida, y diur�ticos ahorradores de potasio, tales como amilorida, espirolactona, y el ahorrador triamtereno.

El t�rmino “inhibidores de PDE” como se utiliza en este documento, tiene la intenci�n de incluir, inhibidores de la fosfodiestearasa no-selectivos, por ejemplo papaverina, e inhibidores de la fosfodiesterasa 5, tal como sildenafil, vardenafil y tadalafil o una sal de estos farmac�uticamente aceptable.

Una “cantidad efectiva” es aquella que es suficiente para lograr una mejora en la funci�n er�ctil o un alivio de los s�ntomas de disfunci�n er�ctil, o incluso para restaurar la capacidad er�ctil. Las cantidades efectivas depender�n de la condici�n espec�fica que se trata y la gravedad de la misma; las caracter�sticas individuales del paciente, incluyendo la edad, la condici�n f�sica, el tama�o y el peso; tratamiento concurrente; y el modo de administraci�n. Estos factores son bien conocidos por aquellos expertos en la t�cnica y pueden ser establecidos sin experimentaci�n. Generalmente, las dosis de la Ang-(1-7) o el agonista del receptor de la Ang-(1-7) o el an�logo de la Ang-(1-7) variar�n de aproximadamente 0.01 mg/kg de peso corporal por d�a a 100 mg/kg de peso corporal por d�a, preferiblemente de 0.1 mg/kg de peso corporal por d�a a 10 mg/kg de peso corporal por d�a. Las dosis m�ltiples por d�a, en la mayor�a de los casos, se pueden contemplar para lograr niveles sist�micos apropiados de los ingredientes activos presentes en la composici�n de la invenci�n.

La Ang-(1-7), los agonistas del receptor Ang-(1-7), o los an�logos de Ang-(1-7) descritos en este documento pueden ser los disponibles comercialmente, o se derivan a partir de los compuestos disponibles comercialmente, o se sintetizan de novo utilizando no m�s all� de los procedimientos rutinarios que se conocen por los expertos en la t�cnica de preparaci�n de p�ptidos.

Las composiciones de la presente invenci�n se pueden administrar por medio de una variedad de rutas de administraci�n, incluyendo, por v�a oral, inyecci�n intracavernosa, por v�a t�pica y transdermica administrada a trav�s de la piel en varios sitios o v�as parenterales. El modo particular seleccionado depender� de los ingredientes activos presentes en la composici�n, la severidad de la disfunci�n er�ctil que se trata y la dosificaci�n requerida para la eficacia terap�utica. Preferiblemente, las composiciones de la invenci�n est�n en forma de administraci�n oral debido a la conveniencia del paciente y el programa de dosificaci�n.

En una modalidad, la presente invenci�n se refiere a una composici�n farmac�utica para utilizar en el tratamiento de DE, mediante la administraci�n a un individuo con necesidad de dicho tratamiento de una cantidad de la Ang-(1-7) efectiva para disminuir los s�ntomas de DE. La Ang-(1-7) se puede administrar en una dosis efectiva que mantiene la presi�n sangu�nea sist�mica en niveles superiores de los que pueden causar la disfunci�n sexual. Preferiblemente, la dosis efectiva por v�a terap�utica es suficiente para mantener la presi�n intracavernosa a un nivel sustancialmente cerca de la presi�n arterial media.

En otra modalidad, la presente invenci�n se refiere a una composici�n farmac�utica para utilizar en la restauraci�n de la capacidad er�ctil por la administraci�n a un paciente de una cantidad de Ang-(1-7) y/o un agonista del receptor Ang-(1-7) y/o un an�logo de Ang-(1-7), ya sea solo o combinado con otros ingredientes activos, efectiva para restaurar la capacidad er�ctil.

Las composiciones que contienen Ang-(1-7) se pueden preparar por cualquiera de los m�todos bien conocidos en el estado de la t�cnica. En conformidad, las instrucciones de Remington’s Pharmaceutical Sciences o de una fuente de informaci�n similar se pueden utilizar para preparar una formulaci�n apropiada de acuerdo con la invenci�n.

Cuando se seleccionan las composiciones inyectables, la formulaci�n para administraci�n parenteral preferiblemente comprende una preparaci�n acuosa est�ril de Ang-(1-7) y otros ingredientes activos. La preparaci�n inyectable

est�ril puede ser apropiadamente una suspensi�n o soluci�n inyectable est�ril en un solvente o diluente aceptable parenteralmente, no-t�xico que se conoce por el experto en la t�cnica farmac�utica.

De acuerdo con la invenci�n, las composiciones para administraci�n oral se pueden presentar como unidades discretas tales como c�psulas, comprimidos, comprimidos efervescentes, comprimidos masticables, p�ldoras, polvos, gr�nulos y geles o formas farmac�uticas similares. Otras formas de formulaci�n oral incluyen suspensiones o emulsiones en un portador acuoso o no-acuoso.

En las formas de dosificaci�n s�lidas, los ingredientes activos se pueden mezclar con un portador farmac�uticamente aceptable que comprende al menos un componente seleccionado del grupo que comprende diluentes, aglutinantes, desintegrantes, lubricantes, agentes de coloraci�n, y agentes saborizantes. Los diluentes inertes ejemplares son el carbonato de calcio, fosfato dib�sico de calcio, fosfato trib�sico de calcio, sulfato de calcio, celulosa-microcristalina, celulosa en polvo, dextratos, dextrinas, ciclodextrinas, excipientes de dextrosa, fructosa, caol�n, lactitol, lactosa, manitol, sorbitol, almid�n, almid�n pregelatinizado, sacarosa, az�car comprimible, y az�car glass. Como aglutinantes pueden ser utilizadas una o m�s sustancias, por ejemplo, metil celulosa, hidroxipropil celulosa, hidroxipropil metil celulosa, polivinilpirrolidona, gelatina, goma ar�bica, etil celulosa, alcohol polivin�lico, pululano, almid�n pregelatinizado, agar, tragacanto, alginato de sodio, propilenglicol, y alginato. Como desintegrante pueden ser utilizadas una o m�s sustancias seleccionadas a partir de hidroxipropil celulosa de baja sustituci�n, carboximetilcelulosa, carboximetilcelulosa de calcio, carboximetilcelulosa de sodio, croscarmelosa de sodio, almid�n, celulosa cristalina, hidroxipropil almid�n, y almid�n parcialmente pregelatinizado, y croscarmelosa s�dica. Lubricantes ejemplares son el �cido este�rico, estearato de magnesio, estearato de calcio, talco, aceite de ricino hidrogenado, sacarosa.

De acuerdo con la invenci�n, en el caso de las c�psulas, comprimidos, comprimidos efervescentes, y p�ldoras, las formas de dosificaci�n tambi�n pueden contener agentes de regulaci�n. Las c�psulas de gelatina suave se pueden preparar para contener una mezcla de los ingredientes activos de la invenci�n y aceites vegetales. Las c�psulas de gelatina dura pueden contener gr�nulos de los ingredientes activos en combinaci�n con un s�lido, portador pulverulento tal como, lactosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almid�n de patata, almid�n de ma�z, amilopectina, derivados de celulosa de gelatina. Adem�s, los comprimidos y las p�ldoras se pueden preparar con cubiertas ent�ricas.

De acuerdo con la presente invenci�n, se prefieren particularmente las formas de dosificaci�n de un tipo de liberaci�n controlada/retardada/modulada, que se basan en portadores o matrices incluyendo, pol�meros biocompatibles, polim�rico farmac�uticamente aceptable, matrices, liposomas, liposomas de PEG, o una ciclodextrina o una matriz derivada de ciclodextrina. Se prefieren especialmente las formas de dosificaci�n que comprenden los ingredientes activos encapsulados en una matriz de ciclodextrina como se revela en U.S. Patent Application 2005/069533. En dicha modalidad, la ciclodextrina se selecciona del grupo que consiste de ciclodextrina alquilada, ciclodextrina hidroxialquilada, y ciclodextrina acilada. Se prefiere particularmente una ciclodextrina hidroxialquilada, y m�s preferida es la hidroxipropil β-ciclodextrina. Adem�s, los derivados de la ciclodextrina se describen en Szejtli, J. Chem Rev, (1998), 98, 1743-1753; and Szente, L and Szejtli, J., Advance Drug Delivery Reviews, 36 (1999) 17-28,. Ejemplos de derivados de la ciclodextrina incluyen CDs metilada (RAMEB = βciclodextrina metilada aleatoriamente); CDs hidroxialquiladas (hidroxipropil-β-CD e hidroxipropil γ-ciclodextrina); CDs acetiladas (acetil-γ-ciclodextrina); CDs reactivas (clorotriazinil β-CD); y CDs ramificadas (glucosil- y maltosil β-CD); acetil-γ-ciclodextrina; acetil-β-CD, sulfobutil-β-CD, α-, β- y γ-ciclodextrinas sulfatadas; sulfociclodextrinas alquiladas.

En la modalidad m�s preferida, la composici�n de la invenci�n comprende un Complejo de Inclusi�n hidroxipropil βciclodextrina-Ang-(1-7) (Ang-(1-7)/HPβ-CD).

A continuaci�n, se describir� la presente invenci�n con m�s detalle a modo de Ejemplos.

Experimental

Animales

En los ensayos se utilizaron ratas Wistar macho intactas (220-250g), ratones machos Suizos, Mas-KO (Mas-/-) ratones macho en los antecedentes gen�ticos puros C57BL/6, y ratones control WT C57BL/6 (Mas+/+) criados en las instalaciones para animales del Biological Science Institute (CEBIO, Federal University of Minas Gerais, Minas Gerais, Brazil) para la pr�ctica de la invenci�n actual. Los animales se mantuvieron en cuartos con temperatura controlada, con ciclo de luz/oscuridad 14/10 h (luz a las 6:00 am) con acceso libre a agua y alimento. El comit� para el cuidado para el animal del Federal University of Minas Gerais, Brazil, aprob� todos los protocolos experimentales.

Procedimiento quir�rgico

Ratas normotensas y ratas hipertensas por sal-DOCA, ratones Mas -/- y WT fueron anestesiados con uretano intraperitoneal (140 mg/Kg). La arteria femoral izquierda de la rata y la arteria coronaria de los ratones fueron canulados para el seguimiento continuo de la presi�n arterial media (MAP). El eje del pene se liber� de la piel y de la fascia, y el cuerpo cavernoso derecho fue canulado mediante la inserci�n de una aguja de calibre 30, conectada a un transductor de presi�n, lo que permite el monitoreo continuo de la presi�n del cuerpo cavernoso (CCP) como se ha descrito en otra parte (v�ase, por ejemplo, T. M. Mills, et al., Biol Reprod 59, 1413 (Dec, 1998)). El cuerpo cavernoso izquierdo de la rata fue canulado con agujas de calibre 30 conectadas a jeringas de 10 mL a trav�s de longitudes cortas de tubos de polietileno (PE)-10 y se utilizan para la administraci�n de f�rmacos vasoactivos. Se abri� la cavidad abdominal, exponiendo el ganglio p�lvico mayor derecho (MPG), y se colocaron en esta, electrodos bipolares de plata.

Modelo de animal

Las ratas Wistar machos (130-150g) fueron uninefrectomizadas y se impregnaron con un implante sil�stico subcut�neo que contiene DOCA (200 mg/kg) bajo anestesia tribromoetanol (por ejemplo, F. Ammarguellat, et al. Circulation 103, 319 (Jan 16, 2001)). Los animales fueron mantenidos en agua que contiene NaCl al 1.0% y KCl al 0.2%, durante 4 semanas. Los animales control fueron uninefrectomizados pero no recibieron un implante DOCA y fueron mantenidos con agua potable normal. Se midieron las presiones sangu�neas sist�licas utilizando procedimientos de cola de manguito est�ndar.

Tejido humano

Los fragmentos descartados de tejido de cuerpo cavernoso humano (HCC) se recuperaron durante el implante de pr�tesis del pene o cirug�a de c�ncer de pr�stata, y fueron colocados en soluci�n de Krebs helada para el transporte r�pido al laboratorio. Fueron estudiadas las tiras de HCC de los pacientes con (H-DE) y sin disfunci�n er�ctil (H-WED).

Procedimiento de inmunohistoqu�mica

Los animales se mataron y el cuerpo cavernoso se retir�. Las tiras de cuerpo cavernoso y HCC de rata fueron colocados en 4% de paraformaldehido durante 2 h. Posteriormente, se hicieron las secciones de tejido adyacente (10 μm) en un criostato. Despu�s de este periodo, las secciones se incubaron en PBS, tween al 0.2 %, y BSA al 5%, cada una durante 15 min, y luego se incubaron secuencialmente con anticuerpo primario (1:500) o soluci�n control [que consiste de anticuerpo primario (1:500) preincubado, durante 24 horas a 4 �C con 50 μg de p�ptido de bloqueo correspondiente al N-terminal de la prote�na Mas], durante 24 h, a 4 �C. Despu�s de la incubaci�n del anticuerpo primario o la soluci�n control, las secciones se lavaron en PBS (3 veces, durante 5 min), y posteriormente se incubaron con el anticuerpo secundario (1:400, Alexa 594, Molecular Probes), durante 2 h a temperatura ambiente. La reacci�n se detuvo en soluci�n reguladora Tris (50 mM) y los tejidos se montaron en portaobjetos cubiertos con cromo-alum, se secaron al aire, y se cubri� con el cubreobjetos con medio de montaje glicerol/Tris. Se obtuvieron las im�genes fluorescentes utilizando un microscopio confocal de barrido l�ser Zeiss 510 meta, equipado con un lente de objetivo de inmersi�n en aceite (x63).

Medici�n de NO DAF

El cuerpo cavernoso de rat�n y humano se carg� con DAF-FM (1.0 μM) o DAF-FM m�s Ang-(1-7) (1.0 μM y 10.0 nM, respectivamente) durante 10 minutos a temperatura ambiente. Posteriormente, las tiras se lavaron en PBS (3 veces, durante 5 min) y se congelaron durante la noche a -80 �C.

Las ratas fueron anestesiadas con uretano intraperitoneal (140 mg/Kg). El eje del pene se liber� de la piel y de la fascia, y el cuerpo cavernoso derecho fue canulado mediante la inserci�n de una aguja de calibre 30 conectada a jeringas de 10-μL a trav�s de longitudes cortas de tubos de PE-10 utilizadas para la infusi�n de DAF (1.0 μM) o soluciones DAF m�s Ang-(1-7) (1.0 μM y 15.5 pmol/Kg/min, respectivamente - 0.5 μL/min durante 5 min.). En algunas preparaciones, la cavidad abdominal se abri�, exponiendo el ganglio p�lvico mayor derecho, y los electrodos bipolares de plata se colocaron en este. Se aplic� un est�mulo subm�ximo durante 2 minutos mientras que la soluci�n se infundi� en los senos cavernosos como se describe anteriormente. Los animales se mataron y el cuerpo cavernoso se retir� y se congel� a -80 �C.

Las secciones adyacentes (20 μm) se prepararon utilizando un criostato. Los tejidos se montaron bajo portaobjetos cubiertos con cromo-alum, se secaron al aire, y se cubri� con el cubreobjetos con medio de montaje glicerol/Tris. Se obtuvieron las im�genes fluorescentes utilizando un microscopio l�ser confocal de barrido excitado a 488 nm con l�ser de ion arg�n (lente de objetivo de inmersi�n en aceite x63).

C�lulas

Las c�lulas de ovario de h�mster Chino (CHO) se transfectaron establemente con cADN Mas de rata impulsado por un promotor de citomegalovirus y se seleccionaron por neomicina como se describe previamente (J. B. Pesquero et al., J Biol Chem 269, 26920 (Oct 28, 1994)). Las c�lulas se cultivaron a 37 �C en DEMEM/F12 (GIBCO™), suplementado con suero fetal bovino al 10% en una atm�sfera saturada con agua de 95% de O2 y 5% de CO2.

Transferencia Western

Las c�lulas se vuelven quiescentes en medio libre de suero 12h antes de la estimulaci�n. Las c�lulas fueron expuestas a Ang-(1-7), (10-7 M, 5 a 30 min) en la presencia o ausencia de su inhibidor, A-779 (10-6 M, preincubaci�n 10 min). Los lisados de c�lulas completas se prepararon y se llev� a cabo la transferencia de western como se describe (R. M. Touyz et al., Circ Res 90, 1205 (Jun 14, 2002)). En resumen, se determinaron las concentraciones de prote�na de los lisados de c�lulas, los lisados fueron sometidos a electroforesis en geles de poliacrilamida- sodio dodecil sulfato al 7.5% (SDS-PAGE) y se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa. Las manchas se bloquearon con leche descremada al 5% y se incubaron con anticuerpos espec�ficos. La fosforilaci�n de eNOS (S1177) se midi� utilizando un anticuerpo fosfo-espec�fico (S1177, 1:1000, Cell Signaling Technology, Beverly, MA). Se detect� la expresi�n del receptor Mas, AT1 y AT2 utilizando los anticuerpos espec�ficos (AT1, 1:500, Santa Cruz Biotechnology, AT2 1:500, Alpha Diagnostics, San Antonio, Tex; Mas, 1:1000). Para confirmar la carga igual se utiliz� el anticuerpo de β-actina (1:1000, Santa Cruz Biotechnology). Las prote�nas inmunoreactivas se detectaron por quimioluminiscencia, y las membranas de transferencia se analizaron densitom�tricamente (Image-Quant software, Molecular Dynamics).

Liberaci�n de NO

Las c�lulas CHO, cultivadas en platos 6 de pozos se estimularon de una manera dependiente de la dosis con Ang(1-7) (10-8 a 10-6 M). Se midi� la cantidad de nitrato durante 30 min, utilizando el m�todo de fluorocromo 2,3diaminonaftaleno (DAN) como se describe previamente (D. J. Kleinhenz, X. Fan, J. Rubin, C. M. Hart, Free Radic Biol Med 34, 856 (Apr 1, 2003)).

Histolog�a

La t�cnica histol�gica se aplic� al cuerpo cavernoso de ratones Mas+/+ y Mas-/-. En el primer caso, las muestras de tejido fresco se congelaron a -80 �C. Las secciones de 20 micras se cortaron de las muestras de tejido fresco y se sometieron a la t�cnica histol�gica, espec�ficamente, tricr�mico de Gomoris. Los datos del microscopio fueron capturados digitalmente.

Para el an�lisis cuantitativo del contenido del tejido fibroso, se mide la intensidad de tinci�n en diferentes zonas del cuerpo cavernoso a partir de Mas +/+ y Mas -/-. La imagen de estas zonas se captur� a 12 bits utilizando un rango de la escala de grises de 0 a 255. Estas zonas se compararon y analizaron utilizando el software Scion Image (www.scioncorp.com).

An�lisis estad�stico

Todos los resultados se expresan como la media � s.e.m. El an�lisis estad�stico se llev� a cabo mediante un ANOVA de dos-v�as seguido por Bonferroni pos-test. Para analizar el efecto intracavernoso de la A-779 y la influencia de L-NAME sobre el efecto de Ang-(1-7), se utiliz� la prueba t de Student para datos no apareados. Se llev� a cabo, el an�lisis estad�stico del contenido del tejido fibroso utilizando la prueba t de Student para datos no apareados seguido por la prueba de Mann Whitney. Un valor de p < 0.05 fue considerado significativo.

Efecto de Ang-(1-7) en los cambios ganglionares estimulados en CCP/MAP

Para examinar el efecto de Ang-(1-7) en cambios ganglionares estimulados en CCP/MAP, se estimul� el nervio con un rango de voltajes (0.5, 0.75, 1.0, 1.2, 1.5, 2.0, 2.5 y 3.0 V, 5 msec pulsos a una frecuencia de 12 Hz), Despu�s de la infusi�n intracavernosa de Ang-(1-7) (a una dosis de 15.5 pmol/Kg/min, 0.5 μL/min). Posteriormente, se repiti� la estimulaci�n ganglionar.

Para examinar el efecto del antagonismo de Mas en el aumento de CCP/MAP inducido ganglionar por Ang-(1-7), despu�s de las mediciones iniciales de CCP y MAP, se administraron de forma simult�nea A-779 y Ang-(1-7), y se repiti� la estimulaci�n ganglionar.

Con el fin de evaluar el papel de la Ang-(1-7) liberada de forma end�gena, en primer lugar se determin� el est�mulo m�nimo en el cual se logr� el valor m�ximo de CCP/MAP. Posteriormente (10 minutos despu�s), se infundi� A-779 (155 pmol/Kg/min) en los senos cavernosos y se repiti� la estimulaci�n.

Para evaluar el efecto de Ang-(1-7) sobre el aumento de CCP/MAP ganglionar estimulado en la presencia de la inhibici�n de NOS, se determin� un est�mulo sub-m�ximo y aplic� al MPG. Posteriormente, se inyect� intracavernosamente L-NAME (200 μg/Kg) y se repiti� la estimulaci�n ganglionar. En lo sucesivo, se administr� Ang(1-7) y se aplic� un est�mulo sub-m�ximo mientras que CCP/MAP se registr� continuamente.

EJEMPLO 1

Determinaci�n de la Inmunolocalizaci�n de Mas en las Estructuras del Pene en Ratas y Humanos

Utilizando la inmunofluorescencia, en primer lugar el receptor Ang-(1-7) Mas se localiz� en las estructuras de pene de ratas y humanos. Se incubaron cortes del cuerpo cavernoso de ratas y humanos durante 24 horas con un anticuerpo primario policlonal anti-Mas o soluci�n control de rat�n [anticuerpo primario (1:500) pre-incubado durante 24 horas a 4 �C con 50 μg del p�ptido de bloqueo correspondiente al N-terminal de la prote�na Mas de rata, y posteriormente, con IgG anti-rat�n de cabra Alexa 594-marcado, durante 2 horas. La figura 1 muestra que Mas se localiz� en la membrana de c�lula del m�sculo liso cavernoso de humano y rata, m�sculo liso esponjoso de rata y c�lulas endoteliales arteriolares.

Utilizando un modelo de rata in vivo, la siguiente etapa fue examinar el efecto de infusi�n intracavernosa de Ang-(17) en la presi�n del cuerpo cavernoso (CCP) y la presi�n arterial media (MAP). La estimulaci�n el�ctrica del ganglio p�lvico mayor (MPG) result� en un aumento dependiente del voltaje en la relaci�n de CCP/MAP, consistente con estudios previos de los mecanismos de erecci�n del pene (por ejemplo, K. K. Chen, et al., J Urol 147, 1124 (Apr, 1992); K. Chitaley, et al., Int J Impot Res 13 Suppl 5, S16 (Dec, 2001); y C. M. Reilly, et al. J Androl 18, 110 (Mar-Apr, 1997). Como se ilustra en la Figura 2a-b, inyecci�n de Ang-(1-7) produjo un aumento peque�o pero significativo en CCP sin alterar MAP inicial (CCP/MAP media � SEM -Anteriormente: 0.1760.014, n=10; Despu�s de Ang-(1-7): 0.2560.027; P < 0.05, n=10). Sorprendentemente, Ang-(1-7) potenci� notablemente el aumento de la relaci�n de CCP/MAP inducida por la estimulaci�n ganglionar. Este efecto fue abolido por el antagonista Mas del receptor A-779 (v�ase Figura 2c), como se describe previamente (v�ase R. A. Santos et al., Brain Res Bull 35, 293 (1994)). Es de destacar, como se ilustra en Figura 2d-e, la infusi�n intracavernosa de A-779 atenu� el aumento de CCP/MAP inducida por la estimulaci�n m�nima en la cual se logr� el valor m�ximo de la CCP/MAP, lo que sugiere que Ang-(17) liberado de forma end�gena contribuye al aumento de CCP/MAP estimulado ganglionar.

EJEMPLO 2

El Efecto Potenciador de la Funci�n Er�ctil producida por Ang-(1-7) es dependiente de NO

Para determinar si el efecto potenciador en la funci�n er�ctil producido por Ang-(1-7) fue dependiente de NO, se llevaron a cabo experimentos adicionales en la presencia del inhibidor NOS, Nw-nitro-L-arginina metil �ster (L-NAME). La administraci�n de L-NAME en los senos cavernosos izquierdos no alter� la CCP o MAP inicial. Por otro lado, como se esperaba (v�ase descripciones previas en C. M. Reilly et al. (1997), and K. Chitaley et al., Nat Med 7, 119 (Jan, 2001)), el tratamiento con L-NAME atenu� significantemente el aumento en CCP/MAP inducido por el est�mulo subm�ximo [media � s.e.m. Contr.: 0.57 � 0.06 frente a L-NAME: 0.38 � 0.05; P < 0.05, n=6]. La respuesta er�ctil atenuada inducida por la inhibici�n de NOS no se super� mediante la administraci�n de Ang-(1-7), lo que sugiere que NO es un importante mediador corriente abajo de su efecto potenciador en este modelo experimental. Este resultado se ilustra en la Figura 2f.

EJEMPLO 3

Ang-(1-7) Libera NO en el Cuerpo Cavernoso

Adicionalmente, para demostrar que Ang-(1-7) libera NO en el cuerpo cavernoso, se utiliz� el indicador de NO 4amino-5 metilamino-2’,7’-difluorofluoresceina diacetato (DAF-FM) (v�ase A. Patzak et al., Kidney Int 66, 1949 (Nov, 2004)). Tiras del cuerpo cavernoso de humano, ratones deficientes de Mas (v�ase T. Walther et al., J Biol Chem 273, 11867 (May 8, 1998)) y animales de tipo salvaje (WT) Mas se cargaron con DAF-FM o DAF-FM combinado con soluci�n de Ang-(1-7). En el protocolo de rata in vivo, las mismas soluciones se infundieron en los senos cavernosos durante 5 min con o sin estimulaci�n el�ctrica. En humanos con (H-DE) y sin (H-WED) disfunci�n er�ctil (v�ase Figura 3a-d), rata (v�ase Figura 4 a-b) y cuerpo cavernoso de ratones WT (v�ase Figura 5a-b), Ang-(1-7) indujo una sustancial liberaci�n de NO en el cuerpo cavernoso. Como se ilustra en la Figura 4c-d, la estimulaci�n el�ctrica del MPG con est�mulo subm�ximo indujo la liberaci�n de NO en el cuerpo cavernoso de rata que fue notablemente potenciado por Ang-(1-7). La liberaci�n de NO inducida por Ang-(1-7) estuvo ausente en los ratones carentes de Mas como se muestra en la Figura 5c-d.

EJEMPLO 4

Acumulaci�n de NO Inducida por Ang-(1-7) se debe al Efecto Directo en la Producci�n de NO

Para probar si la acumulaci�n de NO inducida por Ang-(1-7) se debi� a un efecto directo en la producci�n de NO, se llev� a cabo la determinaci�n del efecto del heptap�ptido sobre la fosforilaci�n de NOS endotelial. Para estos experimentos, se utilizaron c�lulas CHO Mas-transfectadas (CHO-Mas) para evitar la interferencia de otros receptores. Como se muestra en la Figura 6a, estas c�lulas no expresan los receptores de AT1 o AT2. Ang-(1-7) fosforila eNOS en la serina 1179, que fue bloqueada por A-779 (v�ase Figura 6b). Para confirmar la viabilidad de la CHO-Mas, estas c�lulas se incubaron con Ang-(1-7), o A-779, o Ang-(1-7) m�s A-779. Como se observa en la Figura 6c, Ang-(1-7) aument� la liberaci�n de NO mediante CHO-Mas, y este efecto fue bloqueado por A-779.

EJEMPLO 5

Efectos de Ang-(1-7) en DE

La pertinencia in vivo de los hallazgos de los precedentes ejemplos se prob� en ratones Mas-/-y ratas hipertensas por sal-DOCA. Como se muestra en la Figura 7 (a-b), la estimulaci�n el�ctrica del MPG de ratones Mas-/-indujo un cambio en CCP que fue atenuada significantemente en comparaci�n con la observada en ratones Mas+/+. Debido a que las disfunciones er�ctiles en estos animales podr�an ser subestimadas por la existencia de compuestos nitrosos almacenados, una segunda serie de estimulaci�n se llev� a cabo 10 minutos despu�s de la primera. De hecho, la disfunci�n er�ctil se vuelve notablemente evidente con una segunda serie de estimulaci�n (v�ase Figura 7b). Como se muestra en la Figura 8, la deleci�n gen�tica de Mas conduce a un aumento marcado en el tejido fibroso en el cuerpo cavernoso del pene, que probablemente comprende la funci�n er�ctil de estos animales.

Con el fin de probar si Ang-(1-7) podr�a mejorar la DE, se determin� su efecto en ratas hipertensas por sal-DOCA (179 � 4 mm de Hg vs. 116 � 2 mm de Hg; P < 0.01) que presentan disfunci�n er�ctil severa, y una actividad del sistema renina-angiotensina suprimida. Las ratas hipertensas por sal-Doca mostraron funci�n er�ctil reducida en nuestro protocolo experimental (2.5 V: 0,55 6 0,10 vs. 0,30 6 0,06; 3.0 V: 0,57 6 0,11 vs. 0,33 6 0,09, n=8 y 6 para Sham y DOCA, respectivamente). La administraci�n local de Ang-(1-7) increment� el aumento inducido el�ctricamente de CCP/MAP tanto en ratas de operaci�n Sham (v�ase Figura 9a) e hipertensas por sal-DOCA (v�ase Figura 9b), normalizaci�n de la funci�n er�ctil de ratas hipertensas por mineralcorticoides (v�ase Figura 9c). Estos datos sugieren que el efecto facilitador de Ang-(1-7) se puede disociar a partir de su actividad antagonista en los efectos de Ang II mediados por AT1.

Ang-(1-7) act�a como un mediador de la erecci�n del pene mediante la activaci�n de Mas y la posterior fosforilaci�n de eNOS que conduce a la liberaci�n de NO. En la ausencia de funci�n er�ctil, Mas se vio gravemente comprometido como se demuestra mediante la fibrosis del pene asociada a una respuesta notablemente deprimida a la estimulaci�n el�ctrica del ganglio p�lvico mayor. Adicionalmente, la funci�n er�ctil severamente deprimida de ratas hipertensas por sal-DOCA se normaliz� esencialmente por medio de la administraci�n de Ang-(1-7).

El aumento observado en la fibrosis por medio del antagonismo de la se�alizaci�n de Ang-1-7 (por ejemplo, la deleci�n de su receptor mostr� en este ejemplo o el uso de un antagonista del receptor) sugiere que Ang-1-7 se puede utilizar para reducir la formaci�n de fibrosis en tejidos, en particular, tejidos del pene (por ejemplo, el cuerpo cavernoso). Otra modalidad de esta invenci�n es el uso de Ang-1-7 para reducir la formaci�n de fibrosis en tejidos del pene para la prevenci�n o tratamiento de las enfermedades del pene relacionadas con la fibrosis, por ejemplo, la disfunci�n er�ctil.

EJEMPLO 6

Preparaci�n de Ang-(1-7) en una matriz de hidroxipropil -ciclodextrina

El p�ptido de Ang-(1-7) se incluy� en una matriz de hidroxipropil β-ciclodextrina como se describe en la U.S. Patent Application 2005/069533. En resumen, la preparaci�n se basa en cantidades equimolares de Ang-(1-7) y/o un agonista del receptor de Ang-(1-7) y/o un an�logo de Ang-(1-7) y una ciclodextrina, por ejemplo hidroxipropil βciclodextrina. El componente ciclodextrina se disuelve en agua mediante el uso de la agitaci�n y el calentamiento. A continuaci�n, se adiciona la cantidad apropiada de Ang-(1-7) a la soluci�n acuosa. Despu�s de la disoluci�n, la mezcla se congel� en nitr�geno l�quido y a continuaci�n se liofiliz� para obtener un complejo de inclusi�n s�lido seco. El producto resultante se someti� a la caracterizaci�n f�sico qu�mica por espectroscop�a de infrarrojo FT, an�lisis t�rmico (TG/DTG y DSC), difracci�n de rayos X y espectroscop�a NMR 1H, 13C y tiempos de relajaci�n T1, y se confirm� la estructura esperada del complejo de inclusi�n Ang-(1-7) /HPβ-CD.

EJEMPLO 7

Ensayos de Absorci�n y Estabilidad Biol�gica en el Complejo de Inclusi�n Ang-(1-7) /HP -CD

Los ensayos para determinar la absorci�n y la estabilidad biol�gica del complejo de inclusi�n Ang-(1-7)/HPβ-CD se hicieron en soluci�n acuosa. Doce ratas Wistar normales preparadas apropiadamente se utilizaron para llevar a cabo los experimentos. Los animales se dividieron en 3 grupos experimentales y se sometieron a un procedimiento de alimentaci�n forzada con una soluci�n salina (0.9%/50μl) de Ang-(1-7) (100μg/50μl) y Ang-(1-7)/HPβ-CD (100μg/50μl). Se recolectaron cuatro muestras de sangre (1 ml, cada una) a partir de los animales. La primera recolecci�n se produjo antes del procedimiento de alimentaci�n forzada, y las tres 2, 6 y 24 horas restantes despu�s de la alimentaci�n forzada.

Los resultados demuestran una absorci�n completa de Ang-(1-7)/HPβ-CD por el tracto gastrointestinal de los animales, con una concentraci�n m�xima en sangre de aproximadamente 6 horas despu�s de la administraci�n (620 � 194 pg/ml), y 24 horas despu�s de la alimentaci�n forzada los niveles de concentraci�n en sangre se redujeron a un nivel basal (30 � 0.8 pg/ml contra 25 � 10 pg/ml (antes de la alimentaci�n forzada)). Cuando el p�ptido de Ang-(17) se administr� solo, la concentraci�n del p�ptido en plasma tambi�n ha aumentado, pero dicho aumento fue aproximadamente 8-veces menor que el valor observado para Ang-(1-7)/HPβ-CD. En resumen, el complejo de inclusi�n de Ang-(1-7)/HPβ-CD se absorbe significantemente mejor por medio del tracto gastrointestinal en comparaci�n con el p�ptido de Ang-(1-7).

EJEMPLO 8

Preparaci�n de una Forma de Dosificaci�n de Ang-(1-7)/HP -CD + Atenolol

El complejo de inclusi�n Ang-(1-7)/HPβ-CD (relaci�n equimolar) se prepar� como se describe en el Ejemplo 6. A continuaci�n, el s�lido liofilizado se mezcl� con el Atenolol en una cantidad determinada en una base de una dosis diaria de 10 mg/kg de peso corporal. Se llev� a cabo la mezcla del complejo de inclusi�n Ang-(1-7)/HPβ-CD y Atenolol mediante un m�todo apropiado bien conocido en la t�cnica farmac�utica. En conformidad la mezcla resultante se diluye por medio de un portador apropiado, por ejemplo, los citados en otra parte en este documento, y la mezcla final se comprime en forma de comprimidos o se rellena en c�psulas.

EJEMPLO 9

Evaluaci�n del Efecto del Complejo de Inclusi�n [Ang-(1-7)/HP -CD + Atenolol] en DE

Ocho semanas despu�s del tratamiento con el Complejo de Inclusi�n Ang- (1-7) /HP�-CD y/o Atenolol, se evalu� la funci�n er�ctil de los animales (SHR, ratas hipertensas espont�neamente). En particular, se evalu� la funci�n er�ctil de los animales tratados cr�nicamente con Atenolol despu�s de la administraci�n concomitante con el Complejo de Inclusi�n Ang- (1-7) /HPβ-CD. Los f�rmacos fueron administrados por v�a oral a trav�s de soluciones que los contienen, solos o en combinaci�n. Como control, un grupo de animales se trat� con HPβ-CD.

El procedimiento para inducir la erecci�n y la medici�n presi�n intracavernosa se realizaron como se describe previamente (v�ase, T. M. Mills, R. W. Lewis, V. S. Stopper, Biol Reprod 59, 1413 (Dec, 1998). En primer lugar, los animales (SHR) fueron anestesiados con uretano intraperitoneal (140 mg/kg) y se colocaron sobre una placa t�rmica para mantener la temperatura corporal a 37�C. Una c�nula de polietileno fue introducida en la tr�quea del animal para mantener la permeabilidad de las v�as respiratorias. Despu�s, la arteria femoral izquierda de la rata fue canulada con un tubo de polietileno (PE-50) con soluci�n salina heparinizada (200 U/ml) para el seguimiento continuo de la presi�n arterial media (MAP). El cat�ter se conect� a un transductor de presi�n. La erecci�n del pene se obtuvo por medio de la aplicaci�n de estimulaci�n el�ctrica en el ganglio p�lvico mayor (MPG). Para evaluar los efectos de los cambios de los ganglios estimulados en CCP (presi�n del cuerpo cavernoso)/MAP (presi�n arterial media), el nervio se estimul� con un rango de voltajes (0.5, 0.75, 1.0, 1.2, 1.5, 2.0, 2.5 y 3.0 V, 5 msec pulsos a una frecuencia de 12 Hz). Despu�s, el cuerpo cavernoso izquierdo de la rata fue canulado con agujas de calibre 30 conectadas a un sistema de adquisici�n de datos de ordenador a trav�s de tubos de longitudes cortas de polietileno (PE)-10 que contiene soluci�n salina heparinizada (200 U/ml). Los resultados se presentan como una relaci�n de CCP/MAP a partir de la funci�n de los voltajes empleados para estimular el MPG de acuerdo con el rango de secuencia propuesto.

La Figura 10 muestra claramente que el Atenolol ha reducido el aumento de presi�n intracavernal que fue inducida por la estimulaci�n en el ganglio p�lvico mayor con un voltaje m�ximo de 1.5V. Los animales SHR tratados cr�nicamente con el complejo de inclusi�n Ang-(1-7)/HPβ-CD no presentaron par�metros alterados de presi�n intracavernosa. No obstante, el complejo de inclusi�n Ang-(1-7)/HPβ-CD anul� el efecto de atenuaci�n inducido por el Atenolol en la funci�n er�ctil de los animales tratados cr�nicamente con dicho β-bloqueante.

Claims (16)

1. REIVINDICACIONES

   1. Una composici�n farmac�utica en una forma de dosificaci�n apropiada para utilizar en el tratamiento de disfunci�n er�ctil, dicha composici�n que comprende:

   (a)

   Angiotensina-(1-7) y/o un agonista del receptor de la Angiotensina-(1-7) y/o un an�logo de la Angiotensina-(1-7), en donde el agonista del receptor o el an�logo de la Angiotensina-(1-7) se selecciona del grupo que consiste de DAla7-Ang-(1-7), D-Pro7-Ang-(1-7), y AVE 0991, en una cantidad efectiva; y

   (b)

   un portador farmac�uticamente aceptable;

   en donde la composici�n adem�s comprende al menos un agente anti-hipertensivo o un inhibidor de PDE, en donde al menos un agente anti-hipertensivo se selecciona del grupo que consiste de los antagonistas del receptor de la Angiotensina II, los inhibidores de ACE, los agentes β-bloqueantes y los agentes diur�ticos, en donde

   el antagonista del receptor de la Angiotensina II, se selecciona del grupo que consiste de losartan, candersartan, irbersartan, valsartan, olmesartan, eprosartan y telmisartan;

   el inhibidor de ACE se selecciona del grupo que consiste de captopril, enalapril, fosinopril, delapril, benzepril;

   el agente β-bloqueante se selecciona del grupo que consiste de acebutolol, atenolol, betaxolol, bisoprolol, esmolol, metropolol, propanolol, timolol, pindolol, penbutolol, labetalol, carvedilol;

   el agente diur�tico se selecciona del grupo que consiste de clorotiazida, clortalidona, furosemida, hidroclorotiazida, manitol, metolazona, mezcla de amilorida e hidroclorotiazida, mezcla de triamtereno e hidroclorotiazida, y diur�ticos ahorradores de potasio, tales como amilorida, espirolactona, y triamtereno;

   y en donde el inhibidor de PDE se selecciona del grupo que consiste de papaverina, sildenafil, vardenafil, tadalafil.

2. 2.

   La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 1, en donde la Angiotensina-(1-7) y/o un agonista del receptor de la Angiotensina-(1-7) y/o un an�logo de la Angiotensina-(1-7) est� presente en una cantidad efectiva para reducir sustancialmente los s�ntomas de la disfunci�n er�ctil.

3. 3.

   La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 1, en donde la Angiotensina-(1-7) y/o un agonista del receptor de la Angiotensina-(1-7) y/o un an�logo de la Angiotensina-(1-7) est� presente en una cantidad efectiva para restaurar sustancialmente la capacidad er�ctil.

4. 4.

   La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 1, en donde el agente β-bloqueante es el atenolol.

5. 5.

   La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 1, en donde el portador farmac�uticamente aceptable se selecciona del grupo que consiste de diluentes, aglutinantes, desintegrantes, lubricantes, agentes de coloraci�n, y agentes saborizantes.

6. 6.

   La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 1, en donde la forma de dosificaci�n apropiada se selecciona del grupo que consiste de c�psulas, comprimidos, comprimidos efervescentes, comprimidos masticables, p�ldoras, polvos, gr�nulos, geles, suspensiones, emulsiones, formulaciones inyectables, o una forma de dosificaci�n de tipo de liberaci�n controlada/retardada/modulada.

7. 7.

   La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 6, en donde la forma de dosificaci�n de tipo de liberaci�n controlada/retardada/modulada es una combinaci�n de los ingredientes activos con un material portador o matriz seleccionado del grupo que consiste de pol�meros biocompatibles, matrices polim�ricas farmac�uticamente aceptables, liposomas, liposomas de PEG, y ciclodextrina o derivados de la ciclodextrina seleccionados del grupo que consiste de ciclodextrina metilada, hidroxipropil β-ciclodextrina, hidroxipropil γciclodextrina, acetil γ-ciclodextrina, clorotriazinil β-ciclodextrina, glucosil y maltosil β-ciclodextrina, acetil βciclodextrina, sulfobutil β-ciclodextrina, α-, β- y γ-ciclodextrinas sulfatadas.

8. 8.

   La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 7, en donde la ciclodextrina se selecciona del grupo que consiste de ciclodextrina alquilada, ciclodextrina hidroxialquilada y ciclodextrina acilada.

9. 9.

   La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 8, en donde la ciclodextrina hidroxialquilada es la hidroxipropil β-ciclodextrina.

10. 10.

    La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 1, que comprende un Complejo de Inclusi�n de la Angiotensina-(1-7) con una ciclodextrina o derivado de la ciclodextrina como se define en cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9.

11. 11. La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 10, en donde el Complejo de Inclusi�n 5 de la Angiotensina-(1-7) es un complejo con la hidroxipropil β-ciclodextrina.

12. 12.

    La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 11, en donde el complejo de inclusi�n se combina con el atenolol.

13. 13.

    Una composici�n farmac�utica en una forma de dosificaci�n apropiada para utilizar en el tratamiento de la disfunci�n er�ctil, dicha composici�n que comprende:

    10 (a) Angiotensina-(1-7) y/o un agonista del receptor de la Angiotensina-(1-7) y/o un an�logo de la Angiotensina-(1-7), en donde el antagonista del receptor o an�logo de la Angiotensina-(1-7), se selecciona del grupo que consiste de DAla7-Ang-(1-7), D-Pro7-Ang-(1-7), y AVE 0991, en una cantidad efectiva; y

    (b) un portador farmac�uticamente aceptable;

    en donde la composici�n es efectiva para revertir la disfunci�n er�ctil causada por el tratamiento de la hipertensi�n a 15 largo plazo con agentes anti-hipertensivos como se define en la reivindicaci�n 1.

14. 14.

    La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 13, en donde el agente antihipertensivo es un compuesto β-bloqueante.

15. 15.

    La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 14, en donde el compuesto βbloqueante es el atenolol.

    20 16. La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 15, en donde la Angiotensina-(1-7) es un Complejo de Inclusi�n hidroxipropil β-ciclodextrina-Ang-(1-7) combinado con un compuesto β-bloqueante.
16. 17. La composici�n farmac�utica para utilizar de acuerdo con la reivindicaci�n 16, en donde el compuesto bloqueante es el atenolol.

    FIGURA 1

    FIGURA 2

    FIGURA 3

    FIGURA 4

    FIGURA 5

    FIGURA 6

    FIGURA 7

    FIGURA 8

    FIGURA 9

    FIGURA 10