ES2531464T3 - Factor VIII, factor de von Willebrand o sus complejos con semivida in vivo prolongada - Google Patents

Abstract

Un factor de von Willebrand (VWF) modificado o un complejo que comprende factor VIII (FVIII) no modificado y VWF modificado, donde el VWF modificado está fusionado en una parte C-terminal del polipéptido de traducción primario de VWF con la parte N-terminal de un polipéptido que mejora la semivida (HLEP), donde el HLEP es albúmina y donde a. el VWF modificado presenta un incremento de la semivida funcional de al menos un 25% en comparación con la semivida funcional del correspondiente VWF de origen natural o el complejo que comprende FVIII no modificado y VWF modificado presenta un incremento de la semivida funcional de al menos un 25% en comparación con el complejo correspondiente de FVIII de origen natural y VWF de origen natural.

Description

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b. el complejo que comprende FVIII no modificado y VWF modificado presenta un incremento de la recuperación in vivo en comparación con la recuperación in vivo del complejo correspondiente que comprende FVIII de origen natural y VWF de origen natural.

Otra realización preferida de la invención consiste en un polipéptido modificado o un complejo que comprende dicho polipéptido modificado o un complejo que comprende dichos polipéptidos modificados según se han descrito anteriormente, donde el polipéptido modificado presenta un incremento de la recuperación in vivo de al menos un 10% en comparación con la recuperación in vivo del polipéptido correspondiente de origen natural o el complejo que comprende dicho polipéptido modificado o un complejo que comprende dichos polipéptidos modificados presenta un incremento de la recuperación in vivo de al menos un 10% en comparación con el complejo correspondiente de FVIII de origen natural y VWF de origen natural.

Otra realización preferida de la invención consiste en

a. un polipéptido modificado o un complejo que comprende dicho polipéptido modificado según se ha descrito anteriormente, donde el componente VWF de dicho complejo está fusionado en el aminoácido C-terminal de su producto de traducción primario con la parte N-terminal de la albúmina.

Otra realización preferida de la invención consiste en un polipéptido modificado o un complejo que comprende dicho polipéptido modificado según se ha descrito anteriormente, donde el polipéptido modificado presenta al menos un 10% de la actividad biológica del polipéptido de origen natural o el complejo que comprende el polipéptido modificado presenta al menos un 10% de la actividad biológica del complejo correspondiente de FVIII de origen natural y VWF de origen natural.

En la presente invención también se engloba un método para preparar un VWF modificado con una mayor semivida funcional, que comprende fusionar la parte N-terminal de la albúmina con una parte C-terminal del polipéptido de traducción primario del VWF, así como también un método para preparar un complejo que comprende FVIII no modificado y VWF modificado mezclando un FVIII de origen natural con un VWF modificado preparado mediante el método descrito anteriormente.

En la invención también se engloba el uso de

a. un FVIII de origen natural y un VWF modificado preparado mediante el método descrito anteriormente

para la elaboración de un preparado farmacéutico combinado para su uso simultáneo, secuencial o por separado en la terapia de trastornos hemorrágicos, preferentemente en la terapia de la hemofilia A y/o la enfermedad de von Willebrand.

La “semivida funcional”, de acuerdo con la presente invención, se refiere a la semivida de la actividad biológica del VWF modificado o de un complejo del FVIII no modificado con VWF modificado una vez se ha administrado a un mamífero y se puede medir in vitro en muestras de sangre tomadas en diferentes intervalos de tiempo a partir de dicho mamífero después de haber administrado el VWF modificado o el complejo de FVIII no modificado con VWF modificado.

Los términos “fusionar” o “fusionado” se refieren a la adición de aminoácidos a la parte C-terminal de VWF. Cuando en la presente se hace referencia a una “fusión con el aminoácido C-terminal de VWF”, esto significa una fusión exactamente con el aminoácido C-terminal de VWF en el aminoácido 2050 de VWF maduro de origen natural. El VWF maduro se refiere al polipéptido respectivo después de la escisión del propéptido. Sin embargo, la invención también engloba una “fusión con la parte C-terminal de VWF”, que en el sentido de esta invención también puede incluir una fusión con una molécula de VWF en la cual se han suprimido una o más posiciones aminoacídicas hasta un máximo de n aminoácidos a partir del aminoácido C-terminal de VWF. La cifra n es un número entero que no debería ser superior a un 5%, preferentemente no debería ser superior a un 1% del número total de aminoácidos del VWF. Normalmente, n es 20, preferentemente 15, más preferentemente 10, aún más preferentemente 5 o inferior (p. ej., 1, 2, 3, 4 o 5).

En una realización, el VWF modificado presenta la siguiente estructura:

N -VWF -C -L1-H, [fórmula 2]

donde N es una parte N-terminal de VWF, L1 es un enlace químico o una secuencia conectora

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H es albúmina y

C es una parte C-terminal de VWF.

L1 puede ser un enlace químico o una secuencia conectora constituida por uno o más aminoácidos, p. ej., de 1 a 20, de 1 a 15, de 1 a 10, de 1 a 5 o de 1 a 3 (p. ej., 1, 2 o 3) aminoácidos, los cuales pueden ser iguales o diferentes entre sí. Normalmente, las secuencias conectoras no están presentes en la posición correspondiente del factor de coagulación de origen natural. Algunos ejemplos de aminoácidos adecuados presentes en L1 incluyen Gly y Ser.

FVIII puede ser procesado proteolíticamente en varios estadios. Por ejemplo, según se ha mencionado anteriormente, durante su secreción en el plasma, el FVIII monocatenario es escindido intracelularmente en la frontera B-A3 y en diferentes sitios del dominio B. La cadena pesada está unida mediante un ion metálico a la cadena ligera que presenta la estructura de dominios A3-C1-C2. El FVIII se activa mediante la escisión proteolítica en los aminoácidos Arg372 y Arg740 de la cadena pesada y en Arg1689 de la cadena ligera, lo cual genera el heterotrímero de FVIII activado constituido por el dominio A1, el dominio A2 y la cadena ligera (A3-C1-C2), un fragmento de 73 kDa. Por lo tanto, la forma activa de FVIII (FVIIIa) está constituida por una subunidad A1 asociada a través de la unión a un ion metálico divalente a una cadena ligera A3-C1-C2 escindida por la trombina y una subunidad A2 libre asociada de forma relativamente débil con el dominio A1 y el dominio A3.

Preferentemente, N -FVIII – C comprende la secuencia de longitud completa de FVIII. También se engloban deleciones N-terminales, C-terminales o internas de FVIII, siempre que la actividad biológica de FVIII se conserve. La actividad biológica se conserva, en el sentido de la invención, si el FVIII con deleciones conserva al menos un 10%, preferentemente al menos un 25%, más preferentemente al menos un 50%, de la forma preferida al menos un 75% de la actividad biológica de FVIII de origen natural. La actividad biológica de FVIII puede ser determinada por un experto como se describe a continuación.

Una prueba adecuada para determinar la actividad biológica de FVIII consiste, por ejemplo, en el ensayo de coagulación de una etapa o de dos etapas (Rizza et al. 1982. Coagulation assay of FVIII:C and FIXa in Bloom ed. The Hemophilias. NY Churchchill Livingston 1992) o el ensayo FVIII:C de sustrato cromogénico (S. Rosen, 1984. Scand J Haematol 33: 139-145, supl.). El contenido de estas referencias se incorpora a la presente por referencia.

La secuencia de ADNc y la secuencia de aminoácidos de la forma de origen natural madura del FVIII humano de coagulación de la sangre se muestran en la SEQ ID NO:14 y la SEQ ID NO:15, respectivamente. La referencia a una posición aminoacídica de una secuencia específica se refiere a la posición de dicho aminoácido en la proteína FVIII de origen natural y no excluye la presencia de mutaciones, p. ej., deleciones, inserciones y/o sustituciones en otras posiciones de la secuencia a la que se hace referencia. Por ejemplo, una mutación en "Glu2004" referente a la SEQ ID NO:15 no excluye el hecho de que, en el homólogo modificado, falten uno o más aminoácidos en las posiciones 1-2332 de la SEQ ID NO:15.

Las expresiones “Factor VIII de coagulación de la sangre”, “Factor VIII” y “FVIII” se utilizan indistintamente en la presente. La expresión “Factor VIII de coagulación de la sangre” incluye el FVIII de coagulación de la sangre de origen natural, así como también derivados del FVIII de coagulación de la sangre de origen natural que posean la actividad procoagulante del FVIII de coagulación de la sangre de origen natural. Los derivados pueden contener deleciones, inserciones y/o adiciones en comparación con la secuencia de aminoácidos de FVIII de origen natural. El término FVIII incluye formas procesadas proteolíticamente de FVIII, p. ej., la forma antes de la activación, que comprenden la cadena pesada y la cadena ligera.

El término “FVIII” incluye cualesquiera mutantes o variantes de FVIII que contengan al menos un 25%, más preferentemente al menos un 50% y de la forma preferida al menos un 75% de la actividad biológica del factor VIII de origen natural.

A modo de ejemplos no limitantes, las moléculas de FVIII incluyen mutantes de FVIII que previenen o reducen la escisión de APC (Amano 1998. Thromb. Haemost. 79:557-563), mutantes de FVIII que estabilizan adicionalmente el dominio A2 (WO 97/40145), mutantes de FVIII que dan como resultado un incremento de la expresión (Swaroop et al. 1997. JBC 272:24121-24124), mutantes de FVIII que reducen su inmunogenicidad (Lollar 1999. Thromb. Haemost. 82:505-508), FVIII reconstituido a partir de cadenas ligeras y pesadas expresadas de forma diferente (Oh et al. 1999. Exp. Mol. Med. 31:95-100), mutantes de FVIII que reducen la unión a receptores que conducen al catabolismo de FVIII como HSPG (siglas en inglés referentes a proteoglicanos de tipo sulfato de heparán) y/o LRP (siglas en inglés referentes a una proteína relacionada con un receptor lipoproteico de baja densidad) (Ananyeva et al. 2001. TCM, 11:251-257), variantes de FVIII estabilizadas con un puente disulfuro (Gale et al., 2006. J. Thromb. Hemost. 4:1315-1322), mutantes de FVIII con propiedades de secreción mejoradas (Miao et al., 2004. Blood 103:3412-3419), mutantes de FVIII con una mayor actividad específica del cofactor (Wakabayashi et al., 2005. Biochemistry 44:10298-304), mutantes de FVIII con una biosíntesis y secreción mejoradas, una menor interacción con la chaperona del RE, un transporte mejorado de RE-Golgi, una mayor activación o resistencia a la desactivación

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El término “albúmina”, tal como se utiliza en la presente, se refiere de forma colectiva a una secuencia de aminoácidos o polipeptídica de albúmina, o fragmento o variante de albúmina, con una o más actividades funcionales (p. ej., actividades biológicas) de albúmina. En particular, el término “albúmina” se refiere a albúmina humana o sus fragmentos, especialmente la forma madura de la albúmina humana según se muestra en la SEQ ID NO:16 de la presente, o albúmina de otros vertebrados o sus fragmentos, o análogos o variantes de estas moléculas

o sus fragmentos.

En particular, los constructos de fusión de FVIII y/o de fusión de VWF propuestos de la invención pueden incluir variantes polimórficas de origen natural de albúmina humana y fragmentos de albúmina humana. En términos generales, un fragmento o variante de albúmina tendrá una longitud de al menos 10, preferentemente al menos 40 y de la forma más preferida más de 70 aminoácidos. La variante de albúmina puede estar constituida preferentemente

o puede comprender de forma alternativa al menos un dominio entero de albúmina o fragmentos de dichos dominios, por ejemplo, los dominios 1 (aminoácidos 1-194 de la SEQ ID NO:16), 2 (aminoácidos 195-387 de la SEQ ID NO: 16), 3 (aminoácidos 388-585 de la SEQ ID NO: 16), 1 + 2 (1-387 de la SEQ ID NO: 16), 2 + 3 (195-585 de la SEQ ID NO: 16) o 1 + 3 (aminoácidos 1-194 de la SEQ ID NO: 16 + aminoácidos 388-585 de la SEQ ID NO: 16). Cada dominio está constituido a su vez por dos subdominios homólogos, a saber 1-105, 120-194, 195-291, 316-387, 388491 y 512-585, con regiones conectoras entre dominios flexibles que comprenden los residuos de Lys106 a Glu119, de Glu292 a Val315 y de Glu492 a Ala511.

La porción de albúmina de los constructos de fusión de VWF propuestos de la invención pueden comprender al menos un subdominio o dominio de AH o modificaciones conservativas de este.

Polinucleótidos

La invención se refiere además a un polinucleótido que codifica una variante de VWF modificada según se describe en esta solicitud. El término “polinucleótido(s)” se refiere en general a cualquier polirribonucleótido o polidesoxirribonucleótido que puede ser ARN o ADN no modificado o ARN o ADN modificado. El polinucleótido puede ser ADN mono-o bicatenario, o ARN mono-o bicatenario. El término “polinucleótido(s)”, tal como se utiliza en la presente, también incluye ADN o ARN que comprenden una o más bases modificadas y/o bases inusuales tales como la inosina. Se apreciará que se pueden realizar varias modificaciones al ADN y ARN con muchos propósitos útiles conocidos por los expertos en la técnica. El término “polinucleótido(s)”, tal como se utiliza en la presente, abarca tales formas química, enzimática o metabólicamente modificadas de los polinucleótidos, así como también las formas químicas del ADN y ARN características de virus y células, incluidas, por ejemplo, las células simples y complejas.

El experto comprenderá que, debido a la degeneración del código genético, un polipéptido dado puede ser codificado por diferentes polinucleótidos. Estas “variantes” quedan englobadas en esta invención.

Preferentemente, el polinucleótido de la invención es un polinucleótido aislado. La expresión polinucleótido “aislado” se refiere a un polinucleótido que está sustancialmente exento de otras secuencias de ácido nucleico tales como, sin carácter limitante, otros ADN y ARN cromosómicos y extracromosómicos. Los polinucleótidos aislados se pueden purificar a partir de una célula huésped. Se pueden utilizar métodos de purificación de ácidos nucleicos convencionales conocidos por los expertos para obtener los polinucleótidos aislados. El término también incluye polinucleótidos recombinantes y polinucleótidos sintetizados químicamente.

La invención se refiere además a un grupo de polinucleótidos que codifican conjuntamente el VWF modificado de la invención. Un primer polinucleótido del grupo puede codificar la parte N-terminal del VWF modificado y un segundo polinucleótido puede codificar la parte C-terminal del VWF modificado.

Otro aspecto más de la invención consiste en un plásmido o vector que comprende un polinucleótido de acuerdo con la invención. Preferentemente, el plásmido o vector es un vector de expresión. En una realización particular, el vector es un vector de transferencia para su uso en terapia génica humana.

La invención también se refiere a un grupo de plásmidos o vectores que comprenden el grupo anterior de polinucleótidos. Un primer plásmido o vector puede contener dicho primer polinucleótido y un segundo plásmido o vector puede contener dicho segundo polinucleótido.

Otro aspecto más de la invención consiste en una célula huésped que comprende un polinucleótido, un plásmido o vector de la invención o un grupo de polinucleótidos o un grupo de plásmidos o vectores según se describen en la presente.

Las células huésped de la invención se pueden emplear en un método para producir un VWF modificado, el cual forma parte de esta invención. El método comprende:

(a) cultivar células huésped de la invención en condiciones tales que se exprese la proteína de inserción deseada; y

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(b) opcionalmente recuperar la proteína de inserción deseada a partir de las células huésped o a partir del medio de cultivo.

Se prefiere purificar el VWF modificado de la presente invención hasta obtener una pureza ≥ 80%, más preferentemente una pureza ≥ 95% y se prefiere particularmente un estado farmacéuticamente puro que sea superior a una pureza de un 99.9% respecto a macromoléculas contaminantes, en particular otras proteínas y ácidos nucleicos, y exento de agentes infecciosos y pirógenos. Preferentemente, un VWF modificado aislado o purificado de la invención está sustancialmente exento de otros polipéptidos no relacionados.

Los diferentes productos de la invención son útiles como medicamentos. Por consiguiente, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un VWF modificado según se describe en la presente, un polinucleótido de la invención o un plásmido o vector de la invención.

La invención también se refiere a un método para tratar a un individuo que padece un trastorno de coagulación de la sangre tal como la hemofilia A o B. El método comprende administrar a dicho individuo una cantidad eficaz de un VWF modificado o del complejo de FVIII no modificado con VWF modificado según se describe en la presente. En otra realización, el método comprende administrar al individuo una cantidad eficaz de un polinucleótido de la invención o de un plásmido o vector de la invención. Como alternativa, el método puede comprender administrar al individuo una cantidad eficaz de las células huésped de la invención descritas en la presente.

Expresión de los mutantes propuestos

La producción de proteínas mutadas recombinantes en niveles elevados en células huésped adecuadas requiere el acoplamiento de los ADNc modificados mencionados anteriormente en unidades de transcripción eficaces junto con elementos reguladores adecuados en un vector de expresión recombinante que se pueda propagar en varios sistemas de expresión de acuerdo con métodos conocidos por los expertos en la técnica. Los elementos reguladores de la transcripción eficaces podrían derivar de virus que tengan células animales como sus huéspedes naturales o del ADN cromosómico de células animales. Preferentemente, se pueden utilizar combinaciones de promotorpotenciador derivadas del virus del simio 40, adenovirus, virus del polioma BK, citomegalovirus humanos o la repetición terminal larga del virus del sarcoma de Rous, o combinaciones de promotor-potenciador que incluyan genes transcritos de forma fuertemente constitutiva en células animales como la beta-actina o GRP78. Con el fin de conseguir niveles elevados estables de ARNm transcrito a partir de los ADNc, la unidad de transcripción debe contener en su parte 3’-proximal una región de ADN que codifique una secuencia de poliadenilación-terminación de la transcripción. Preferentemente, esta secuencia deriva de la región de transcripción temprana del virus del simio 40, el gen beta-globina de conejo o el gen activador de plasminógeno tisular humano.

A continuación, los ADNc se integran en el genoma de una línea adecuada de células huésped para la expresión de las proteínas VWF. Preferentemente, esta línea celular debe ser una línea celular animal de origen vertebrado con el fin de garantizar un plegamiento correcto, la formación de puentes disulfuro, la glicosilación relacionada con la asparagina y otras modificaciones posteriores a la traducción, así como también la secreción en el medio de cultivo. Algunos ejemplos de otras modificaciones posteriores a la traducción son la O-sulfatación de la tirosina y el procesamiento proteolítico de la cadena polipeptídica naciente. Algunos ejemplos de líneas celulares que se pueden utilizar son células COS de primate, células L de ratón, células C127 de ratón, células BHK-21 de hámster, células 293 de riñón embriónico humano y células CHO de hámster.

El vector de expresión recombinante que codifica los ADNc correspondientes se puede introducir en una línea celular animal de varias formas diferentes. Por ejemplo, se pueden crear vectores de expresión recombinantes a partir de vectores basados en diferentes virus animales. Algunos ejemplos de ellos son vectores basados en baculovirus, virus vaccinia, adenovirus, y preferentemente virus del papiloma bovino.

Las unidades de transcripción que codifican los ADN correspondientes también se pueden introducir en células animales junto con otro gen recombinante que pueda actuar como marcador seleccionable dominante en estas células con el fin de facilitar el aislamiento de clones celulares específicos que hayan integrado el ADN recombinante en su genoma. Algunos ejemplos de este tipo de genes marcadores seleccionables dominantes son la aminoglicósido-fosfotransferasa de Tn5, que confiere resistencia a la geneticina (G418), la higromicinafosfotransferasa, que confiere resistencia a la higromicina, y la puromicina-acetiltransferasa, que confiere resistencia a la puromicina. El vector de expresión recombinante que codifica un marcador seleccionable de este tipo puede residir ya sea en el mismo vector, como codificador del ADNc de la proteína deseada, o puede ser codificado por un vector diferente que se introduzca de forma simultánea y se integre en el genoma de la célula huésped, lo cual da como resultado frecuentemente una conexión física estrecha entre las diferentes unidades de transcripción.

Otros tipos de genes marcadores seleccionables que se pueden utilizar junto con los ADNc de la proteína deseada se basan en varias unidades de transcripción que codifican la dihidrofolato-reductasa (dhfr). Tras la introducción de este tipo de gen en células que carecen de actividad dhfr endógena, preferentemente células CHO (DUKX-B11, DG44), este permitirá que dichas células crezcan en medios que carecen de nucleósidos. Un ejemplo de un medio de

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este tipo es F12 de Ham sin hipoxantina, timidina ni glicina. Estos genes dhfr se pueden introducir conjuntamente con las unidades de transcripción de ADNc de FVIII en células CHO del tipo anterior, tanto unidos al mismo vector o en vectores diferentes, con lo que se crean líneas celulares dhfr-positivas que producen proteína recombinante.

Si las líneas celulares anteriores se cultivan en presencia del inhibidor de dhfr citotóxico metotrexato, emergerán nuevas líneas celulares resistentes al metotrexato. Estas líneas celulares pueden producir proteína recombinante con una mayor tasa, debido al número amplificado de dhfr que se ha unido y las unidades de transcripción de la proteína deseada. Cuando se propagan estas líneas celulares en concentraciones cada vez mayores de metotrexato (1-10000 nM), se pueden obtener nuevas líneas celulares que produzcan la proteína deseada con una tasa muy elevada.

Las líneas celulares anteriores que producen la proteína deseada se pueden cultivar a gran escala, ya sea en un cultivo en suspensión o en varios soportes sólidos. Algunos ejemplos de estos soportes son microportadores basados en matrices de dextrano o colágeno, o soportes sólidos en forma de fibras huecas o varios materiales cerámicos. Cuando se cultivan en un cultivo de células en suspensión o en microportadores, el cultivo de las líneas celulares anteriores se puede llevar a cabo ya sea como un cultivo en un baño o como un cultivo en perfusión con la producción continua de medio acondicionado durante periodos de tiempo prolongados. Por lo tanto, de acuerdo con la presente invención, las líneas celulares anteriores son adecuadas para el desarrollo de un proceso industrial para la producción de las proteínas mutadas recombinantes deseadas.

Purificación y formulación

La proteína VWF modificada recombinante, la cual se acumula en el medio de células secretoras de los tipos anteriores, se puede concentrar y purificar mediante varios métodos bioquímicos y cromatográficos, que incluyen métodos que emplean diferencias en tamaño, carga, hidrofobicidad, solubilidad, afinidad específica, etc. entre la proteína deseada y otras sustancias en el medio de cultivo celular.

Un ejemplo de tal purificación consiste en la adsorción de la proteína mutada recombinante en un anticuerpo monoclonal, dirigido, p. ej., a una HLEP, preferentemente albúmina humana, o dirigido al factor de coagulación respectivo, el cual se inmoviliza sobre un soporte sólido. Tras la adsorción del VWF modificado sobre el soporte, su lavado y desorción, la proteína se puede purificar adicionalmente mediante varias técnicas cromatográficas basadas en las propiedades anteriores. El orden de los pasos de purificación se selecciona, p. ej., de acuerdo con la capacidad y la selectividad de los pasos, la estabilidad del soporte u otros aspectos. Algunos pasos de purificación preferidos, p. ej., son, sin carácter limitante, pasos de cromatografía de intercambio iónico, pasos de cromatografía de afinidad inmunitaria, pasos de cromatografía de afinidad, pasos de cromatografía de interacción hidrófoba, pasos de cromatografía con tintes, pasos de cromatografía con hidroxiapatita, pasos de cromatografía multimodal y pasos de cromatografía por exclusión de tamaño.

Con el fin de minimizar el riesgo teórico de contaminaciones con virus, se pueden incluir pasos adicionales en el proceso que permitan la desactivación o eliminación eficaz de los virus. Tales pasos son, p. ej., un tratamiento térmico en estado líquido o sólido, un tratamiento con disolventes y/o detergentes, radiación en el espectro visible o UV, radiación gamma o nanofiltración.

Los polinucleótidos modificados (p. ej., ADN) de esta invención también se pueden integrar en un vector de transferencia para su uso en terapia génica humana.

Las diferentes realizaciones descritas en la presente se pueden combinar entre sí. La presente invención se describirá adicionalmente con más detalle en los ejemplos de esta que se muestran más adelante. Esta descripción de realizaciones específicas de la invención se realizará conjuntamente con las figuras adjuntas.

El VWF modificado que se describe en esta invención se puede formular en preparados farmacéuticos para uso terapéutico. La proteína purificada se puede disolver en soluciones tampón acuosas fisiológicamente compatibles convencionales, a las cuales se pueden añadir, opcionalmente, excipientes farmacéuticos para proporcionar preparados farmacéuticos.

Tales portadores y excipientes farmacéuticos, así como también las formulaciones farmacéuticas adecuadas, son de uso común en la técnica (remítase, por ejemplo, a "Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins", Frokjaer et al., Taylor y Francis (2000) o "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 3.a edición, Kibbe et al., Pharmaceutical Press (2000)). En particular, la composición farmacéutica que comprende la variante polipeptídica de la invención se puede formular en forma líquida estable o liofilizada. La variante polipeptídica se puede liofilizar mediante varios procedimientos conocidos en la técnica. Las formulaciones liofilizadas se reconstituyen antes de su uso mediante la adición de uno o más diluyentes farmacéuticamente aceptables tales como agua estéril para inyección o solución salina fisiológica estéril.

Las formulaciones de la composición se suministran al individuo mediante cualquier método farmacéuticamente adecuado de administración. Se conocen varios sistemas de suministro y se pueden utilizar para administrar la

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