ES2540926T3 - Hidrolizado de proteínas rico en tripéptidos - Google Patents
Hidrolizado de proteínas rico en tripéptidos Download PDFInfo
- Publication number
- ES2540926T3 ES2540926T3 ES03735546.8T ES03735546T ES2540926T3 ES 2540926 T3 ES2540926 T3 ES 2540926T3 ES 03735546 T ES03735546 T ES 03735546T ES 2540926 T3 ES2540926 T3 ES 2540926T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- ala
- proline
- pna
- enzyme
- tripeptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 title abstract description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 9
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 abstract description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 22
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 22
- 101710118538 Protease Proteins 0.000 description 17
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 5
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 4
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 4
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 3
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 3
- 108010068563 PepT tripeptidase Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010070926 Tripeptide aminopeptidase Proteins 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 102100037084 C4b-binding protein alpha chain Human genes 0.000 description 2
- 108090000194 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000003779 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 2
- 101710136733 Proline-rich protein Proteins 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 235000021245 dietary protein Nutrition 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- WRDABNWSWOHGMS-UHFFFAOYSA-N AEBSF hydrochloride Chemical compound Cl.NCCC1=CC=C(S(F)(=O)=O)C=C1 WRDABNWSWOHGMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 description 1
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 102000035101 Aspartic proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005502 Aspartic proteases Proteins 0.000 description 1
- 241000606125 Bacteroides Species 0.000 description 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108010091443 Exopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000018389 Exopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 241000589565 Flavobacterium Species 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- ZPHBZEQOLSRPAK-UHFFFAOYSA-N Phosphoramidon Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O ZPHBZEQOLSRPAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710088675 Proline-rich peptide Proteins 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010039203 Tripeptidyl-Peptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100034197 Tripeptidyl-peptidase 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000589634 Xanthomonas Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 235000019636 bitter flavor Nutrition 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229940021722 caseins Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 229950000964 pepstatin Drugs 0.000 description 1
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 1
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 1
- 108010072906 phosphoramidon Proteins 0.000 description 1
- BWSDNRQVTFZQQD-AYVHNPTNSA-N phosphoramidon Chemical compound O([P@@](O)(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CC=1[C]2C=CC=CC2=NC=1)C(O)=O)[C@H]1O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O BWSDNRQVTFZQQD-AYVHNPTNSA-N 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 150000003147 proline derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 229940080237 sodium caseinate Drugs 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000014268 sports nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 108010039189 tripeptidyl-peptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Un hidrolizado de proteínas en el que al menos 20% molar de los péptidos que tienen un peso molecular de 200 a 2000 Daltons está presente en el hidrolizado como tripéptido y en el cual al menos 30% de los tripéptidos tienen una prolina carboxi-terminal.
Description
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
E03735546
29-06-2015
mezcla con Pefabloc, las metaloproteasas por mezcla con fosforamidón y las proteasas aspárticas por mezcla con pepstatina. Todos los inhibidores más los procedimientos de trabajo pueden obtenerse de Roche.
La solicitud de patente de los mismos inventores, también en tramitación, PCT/EP01/14.480 describe el uso de una endoproteasa específica de prolina que, en conjunción con las endoproteasas de la técnica anterior, es capaz de generar hidrolizados de proteína no amargos. Esta endoproteasa específica de prolina es una enzima capaz de escindir péptidos o polipéptidos en el extremo carboxi-terminal de residuos prolina. Endoproteasas específicas de prolina se encuentran ampliamente en animales y plantas, pero su presencia en microorganismos parece ser limitada. Hasta la fecha, se han identificado endoproteasas específicas de prolina en especies de Aspergillus (EP 0 522 428 y WO 02/45.524), Flavobacterium (EP 0 967 285), Aeromonas (J.Biochem.113, 790-796), Xanthomonas y Bacteroides. Se ha demostrado que una incidencia alta de residuos prolina en el extremo carboxi-terminal de los péptidos puede estar correlacionada con amargor bajo. Además, los autores de la invención han demostrado que la alta incidencia deseada de residuos prolina carboxi-terminales puede conseguirse sólo con concentraciones elevadas de una endoproteasa específica de prolina, a saber concentraciones que exceden de la actividad especificada en JP5.015.314 por varios órdenes de magnitud y además en ausencia de una carboxipeptidasa.
En conjunción con las endoproteasas de la técnica anterior, la endoproteasa específica de prolina es capaz de hidrolizar extensamente proteínas ricas en prolina produciendo péptidos relativamente pequeños con una distribución de tamaños estrecha. Debido a la preferencia de escisión, de la endoproteasa específica de prolina, muchos de los péptidos formados tienen un residuo prolina carboxi-terminal. Adicionalmente, el proceso del hidrolizado es relativamente simple, dado que no está implicado un paso de eliminación del amargor por exoproteasas, por lo que únicamente se formarán niveles bajos de aminoácidos libres.
Desde un punto de vista económico, la implicación de esta observación es que existe una clara necesidad en el presente proceso para el uso de endoproteasas específicas de prolina en cantidades altas y en una forma pura o aislada, que se describe en la solicitud de patente de los mismos inventores, también en tramitación, PCT/EP01/14.180. Una vía preferida de obtención de PSE purificada y aislada es por la superproducción de una endoproteasa específica de prolina de este tipo utilizando técnicas de DNA recombinante. Dado que muchos productos alimenticios son ácidos y las incubaciones enzimáticas de larga duración en circunstancias industriales no estériles requieren condiciones de incubación ácidas y una temperatura de proceso de 50 ºC o mayor para prevenir la contaminación microbiana, un método más preferido es la superproducción de una endoproteasa específica de prolina estable en medio ácido utilizando técnicas de DNA recombinante. Un método particularmente preferido es la superproducción de una endoproteasa específica de prolina derivada de Aspergillus, y un método muy preferido es la superproducción de una endoproteasa específica de prolina derivada de Aspergillus niger. Adicionalmente, las enzimas conforme a la invención pueden utilizarse en forma inmovilizada, con lo que pueden tratarse grandes cantidades de líquidos que contengan proteínas. Vías para seleccionar materiales soporte apropiados y métodos de inmovilización adecuados han sido descritos extensamente en la bibliografía, por ejemplo en "Immobilization of Enzymes and Cells" (ed. Gordon F. Bickerstaff; ISBN 0-89603-386-4).
Una vez que las nuevas enzimas se han hecho disponibles en forma relativamente pura, se contemplan otras aplicaciones nuevas y sorprendentes que presentan ventajas técnicas y económicas.
Una nueva aplicación podría ser la creación de hidrolizados no amargos a partir de sustratos proteináceos con nuevas composiciones de aminoácidos. Dichas nuevas composiciones de aminoácidos pueden ofrecer ventajas importantes en ciertas aplicaciones alimentarias y médicas. Ejemplos son caseína o aislado de proteína de gluten de trigo o maíz con niveles altos de residuos de aminoácidos hidrófobos y, más específicamente, residuos prolina presentes. Hasta ahora, tales sustratos no tenían uso práctico alguno debido a los desagradables sabores amargos generados por hidrólisis y los grados limitados de hidrólisis obtenidos utilizando los métodos de la técnica anterior. Por utilización del método de hidrólisis conforme a la invención, pueden hacerse disponibles nuevos hidrolizados no amargos para uso en nutrición infantil y clínica, en dietas terapéuticas así como en dietas para el consumidor y nutrición deportiva.
Otras ventajas, no relacionadas directamente con la supresión de sabores amargos, incluyen la incubación de la enzima con proteínas alimentarias a fin de reducir su respuesta alergénica o inmunológica. Varias proteínas alimentarias contienen subfracciones altamente alergénicas, tales como el gluten de trigo que contiene prolaminas con secuencias peptídicas ricas en prolina. Estas proteínas pueden someterse a las nuevas enzimas para atenuar su antigenicidad. Una aplicación específica es el uso de una combinación de una endoproteasa, preferiblemente una endoproteasa específica de prolina con una tripeptidasa para consumo oral. Una composición de este tipo para ingestión oral podría ser una tableta o una píldora o un polvo o líquido en el cual la combinación de las dos enzimas exhibe una estabilidad al almacenamiento satisfactoria. Si se mantiene en forma seca, la estabilidad al almacenamiento deseada de las enzimas planteará pocos problemas técnicos. Formulaciones líquidas de enzimas que proporcionan estabilidades al almacenamiento satisfactorias y adecuadas para consumo oral han sido descritas en la técnica anterior. Por ingestión oral y la combinación de las 2 enzimas estables en medio ácido, se facilitará la digestión de proteínas ricas en prolina tales como caseínas o glútenes, previniendo o minimizando con ello los efectos descritos para, por ejemplo, el esprue celíaco.
7
5
10
15
20
25
30
35
40
45
E03735546
29-06-2015
Ejemplos
Ejemplo 1
Propiedades de la tripeptidilpeptidasa codificada por el gen 12 (TPAP-A) de Aspergillus niger
La enzima codificada por el gen 12 (descrita en la solicitud de patente de los mismos inventores, también en tramitación, PCT/EP02/01984) se obtuvo por superproducción en una célula hospedadora de A. niger y se purificó por cromatografía. La purificación se llevó a cabo en una columna Resource Q en acetato de 50 milimoles/litro de pH 4,5. La elución por aumento de la concentración de NaCl produjo la enzima en un pico de actividad neta. La actividad se midió por incubación con el péptido sintético Ala-Ala-Phe-pNA. La solución con la enzima purificada contenía 8 unidades/mL si se ensayaba en el péptido sintético Ala-Ala-Phe-pNA a pH 4,0 y 60 ºC (véase la sección Materiales y Métodos).
En un primer experimento, la enzima pura se incubó a pH 5 y 50 ºC con 2 sustratos cromógenos sintéticos diferentes, a saber Ala-Ala-Phe-pNA y Ala-Phe-pNA (ambos de Bachem, Suiza). Se prepararon soluciones stock de estos péptidos en DMSO, que se diluyeron luego 100 veces en el tampón acuoso deseado. La incubación con el sustrato Ala-Ala-Phe-pNA condujo a un aumento significativo de la absorbancia a 410 nanómetros, mientras que la incubación con Ala-Phe-pNA no lo hizo. Esta observación demuestra claramente que esta tripeptidasa puede escindir únicamente tripéptidos y no exhibe actividad de aminopeptidasa que pueda conducir a un aumento indeseable de aminoácidos libres.
En un segundo experimento, se demostraron las características preferidas de estabilidad de la enzima codificada por el gen 12. Cuatro muestras de la enzima purificada se incubaron a pH 5 durante una hora a 0, 40, 50 y 60 ºC respectivamente. Se añadió luego a cada muestra de enzima el sustrato Ala-Ala-Phe-pNA arriba mencionado y se determinó la actividad enzimática en cada muestra calentada por medida del aumento de absorbancia a 410 nanómetros. Mientras que la muestra de 0 ºC exhibía 100% de actividad, la muestra de 40 grados exhibía 96% de actividad residual, la muestra de 50 grados 92% de actividad residual y la muestra de 60 grados 88% de actividad residual. Estos datos confirman la estabilidad sorprendente de esta tripeptidasa TPAP-A de Aspergillus en las condiciones de proceso preferidas por la industria alimentaria.
Por último, se obtuvo una impresión de las preferencias de escisión de la tripeptidilpeptidasa corriente. A este fin, la incubación se llevó a cabo con los péptidos sintéticos Ala-Ala-Phe-pNA, Ala-Ala-Ala-pNA y Ala-Ala-Pro-pNA. Los 3 péptidos se disolvieron en DMSO a una concentración 150 milimolar. La reacción se efectuó en tampón de citrato (citrato 0,1 M), a pH 4,0 y a 60 ºC.
Se añadieron a la cubeta 940 microlitros de tampón, 50 microlitros de muestra enzimática y 10 microlitros de sustrato, y después de agitar se midió cinéticamente la reacción a 405 nanómetros durante 10 minutos. La enzima se testó en diferentes diluciones.
Con objeto de calcular la actividad específica, se determinó espectrofotométricamente la concentración de proteínas de la solución enzimática a 280 nanómetros utilizando un coeficiente de extinción molar de 1,21 para 1 gramo/litro (basado en contenido de Trp y Tyr en la molécula de enzima).
- sustratos
- dilución U/mL Actividad específica, U/mg
- Ala-Ala-Phe-pNA
- 1:50 7,81 -8,95 2,3
- Ala-Ala-Ala-pNA
- 1:50 a 1:200 76,2 -81,5 21,8
- Ala-Ala-Pro-pNA
- No diluida 0,0 0,0
Por comparación de las absorbancias a 410 nanómetros, estaba claro que la enzima exhibe una preferencia clara para escisión del sustrato Ala-Ala-Ala-pNA. Ala-Ala-Phe-pNA se escindía también, pero a una tasa significativamente menor. No pudo registrarse actividad alguna hacia el sustrato Ala-Ala-Pro-pNA. La última observación demuestra claramente que la combinación con una endonucleasa específica de prolina se prefiere para convertir sustratos proteínicos ricos en residuos prolina en tripéptidos fácilmente asimilables y resistentes a la degradación con residuos prolina carboxi-terminales.
Ejemplo 2
Los hidrolizados de caseína sometidos a una endoproteasa específica de prolina en combinación con una tripeptidilaminopeptidasa están exentos de amargor y contienen una proporción elevada de tripéptidos que tienen residuos prolina carboxiterminales.
Se preparó una solución de caseína al 6% (p/p referido a proteína) por disolución de caseinato de sodio en agua. Después de ajustar el pH a 8,0 con NaOH, se añadió la serina-proteasa Delvolase a una concentración del 4%
12
Claims (1)
-
imagen1
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP02100667 | 2002-06-04 | ||
| EP02100667 | 2002-06-04 | ||
| PCT/EP2003/005876 WO2003102195A1 (en) | 2002-06-04 | 2003-06-03 | Protein hydrolysate rich in tripeptides |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2540926T3 true ES2540926T3 (es) | 2015-07-14 |
Family
ID=29595050
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES03735546.8T Expired - Lifetime ES2540926T3 (es) | 2002-06-04 | 2003-06-03 | Hidrolizado de proteínas rico en tripéptidos |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20050256057A1 (es) |
| EP (1) | EP1509609B1 (es) |
| JP (1) | JP4376180B2 (es) |
| AU (1) | AU2003236689A1 (es) |
| ES (1) | ES2540926T3 (es) |
| WO (1) | WO2003102195A1 (es) |
Families Citing this family (35)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1231137C (zh) | 2001-07-18 | 2005-12-14 | Dsmip资产有限公司 | 乳类蛋白质水解的方法 |
| ES2540926T3 (es) * | 2002-06-04 | 2015-07-14 | Dsm Ip Assets B.V. | Hidrolizado de proteínas rico en tripéptidos |
| DK1663298T3 (da) * | 2003-09-23 | 2019-10-14 | Dsm Ip Assets Bv | Anvendelse af prolinspecifikke endoproteaser til hydrolyse af peptider og proteiner |
| ATE551048T1 (de) * | 2004-06-28 | 2012-04-15 | Dsm Ip Assets Bv | Proteinhydrolysate enthaltende kosmetische zusammensetzungen |
| CN101084004A (zh) * | 2004-12-22 | 2007-12-05 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 单个酶促步骤中的血压降低寡肽 |
| ES2381118T3 (es) | 2004-12-23 | 2012-05-23 | Campina Nederland Holding B.V. | Hidrolizado de proteínas enriquecido en péptidos de inhibición de DPP-IV y su uso |
| DE602006011275D1 (de) * | 2005-02-03 | 2010-02-04 | Dsm Ip Assets Bv | Zusammensetzungen mit epigallocatechingallat und proteinhydrolysat |
| WO2006089921A1 (en) * | 2005-02-24 | 2006-08-31 | Dsm Ip Assets B.V. | Blood pressure lowering peptides from glycomacropeptide |
| ES2454167T3 (es) * | 2005-11-28 | 2014-04-09 | Dsm Ip Assets B.V. | Preparación de enzima que produce un sabor puro |
| US8431531B2 (en) | 2005-11-30 | 2013-04-30 | Campina Nederland Holding B.V. | Methods for stimulating glucagon-like peptide-1(GLP-1) secretion and treatments comprising same |
| KR100738648B1 (ko) * | 2005-12-30 | 2007-07-11 | 씨제이 주식회사 | 단백질 분해 효소를 첨가한 된장의 제조방법 및 된장 |
| US20100167979A1 (en) * | 2006-02-09 | 2010-07-01 | Calpis Co. Ltd | Rheumatoid arthritis-preventive agent for oral intake |
| WO2008136326A1 (ja) * | 2007-04-26 | 2008-11-13 | Fuji Oil Company, Limited | 酸性可溶大豆蛋白質の製造法 |
| CN101925674A (zh) * | 2007-11-23 | 2010-12-22 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 改进的生物活性肽生产 |
| AU2009228250B2 (en) | 2008-03-26 | 2015-03-19 | Glanbia Nutritionals (Ireland) Ltd. | Leucine-rich peptide compositions and methods for isolation |
| EP2328566A1 (en) * | 2008-09-30 | 2011-06-08 | DSM IP Assets B.V. | Enzyme composition and application thereof in the treatment of pancreatic insufficiency |
| US20110070334A1 (en) * | 2009-09-20 | 2011-03-24 | Nagendra Rangavajla | Probiotic Stabilization |
| US20140093614A1 (en) * | 2009-09-20 | 2014-04-03 | Mead Johnson Nutrition Company | Probiotic stabilization |
| WO2013177391A1 (en) * | 2012-05-24 | 2013-11-28 | Abbott Laboratories | Sterilized liquid protein supplement including a solubility enhancing nutritional protein |
| WO2014060495A1 (en) * | 2012-10-19 | 2014-04-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for the production of an infant formula |
| RU2662770C2 (ru) | 2013-01-22 | 2018-07-30 | Марс, Инкорпорейтед | Ароматизирующая композиция и пищевые композиции, содержащие ее |
| US9138455B2 (en) | 2013-03-15 | 2015-09-22 | Mead Johnson Nutrition Company | Activating adiponectin by casein hydrolysate |
| US9289461B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-03-22 | Mead Johnson Nutrition Company | Reducing the risk of autoimmune disease |
| US9345741B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-05-24 | Mead Johnson Nutrition Company | Nutritional composition containing a peptide component with adiponectin simulating properties and uses thereof |
| US9345727B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-05-24 | Mead Johnson Nutrition Company | Nutritional compositions containing a peptide component and uses thereof |
| US8889633B2 (en) | 2013-03-15 | 2014-11-18 | Mead Johnson Nutrition Company | Nutritional compositions containing a peptide component with anti-inflammatory properties and uses thereof |
| US9352020B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-05-31 | Mead Johnson Nutrition Company | Reducing proinflammatory response |
| RU2717339C2 (ru) | 2013-12-13 | 2020-03-23 | Сосьете Де Продюи Нестле С.А. | Применение содержащей сладкую молочную сыворотку детской смеси для обеспечения постнатального развития нервной системы желудочно-кишечного тракта младенца и формирования функций кишечника, которыми она управляет |
| CN106795214B (zh) | 2014-03-20 | 2022-09-02 | 百时美施贵宝公司 | 稳定化的基于纤连蛋白的支架分子 |
| WO2016062855A1 (en) * | 2014-10-24 | 2016-04-28 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Proline tolerant tripeptidyl peptidases and uses thereof |
| EP3314004A1 (en) * | 2015-06-26 | 2018-05-02 | DuPont Nutrition Biosciences ApS | Aminopeptidases for protein hydrolyzates |
| US11129404B2 (en) | 2015-12-28 | 2021-09-28 | Abbott Laboratories | Nutritional compositions comprising hydrolyzed protein and a modified fat system and uses thereof |
| JP2018057346A (ja) * | 2016-10-07 | 2018-04-12 | 森永乳業株式会社 | カゼイン酵素処理物及びその製造方法 |
| WO2018224035A1 (en) | 2017-06-09 | 2018-12-13 | Novozymes A/S | Polypeptide, use and method for hydrolysing protein |
| KR20190081232A (ko) | 2017-12-29 | 2019-07-09 | 토탈바이오 주식회사 | 곤충(귀뚜라미)의 단백질과 산야초 추출물의 혼합물를 피부 미백, 세포재생, 보습 유효성분으로 포함하는 화장품 조성물 |
Family Cites Families (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2608050B1 (fr) * | 1986-12-15 | 1990-04-13 | Bellon Labor Sa Roger | Procede de preparation d'un melange peptidique riche en di- et tri-peptides, utilisable notamment en nutrition artificielle et en dietetique, melange ainsi obtenu, et utilisation de ce melange en nutrition artificielle et en dietetique |
| EP0321603A1 (fr) | 1987-12-23 | 1989-06-28 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Procédé de préparation d'un hydrolysat de protéines de lactosérum et d'un aliment hypoallergéniques |
| EP0325986A3 (en) | 1988-01-28 | 1989-10-11 | Miles Inc. | Enzymatic hydrolysis of proteins |
| JPH0630615B2 (ja) * | 1988-07-27 | 1994-04-27 | 江崎グリコ株式会社 | 低分子ペプチド組成物及びその製造方法 |
| JPH0614776A (ja) | 1991-07-04 | 1994-01-25 | Fuji Oil Co Ltd | プロリルエンドペプチダーゼ及びその製造方法 |
| JP3010795B2 (ja) | 1991-07-04 | 2000-02-21 | 不二製油株式会社 | ペプチドの苦味除去方法 |
| DK0524906T3 (da) | 1991-07-24 | 2003-08-11 | Novartis Ag | DNA-kodende for prolyl-endopeptidase samt dets anvendelse |
| JPH05252979A (ja) * | 1992-02-28 | 1993-10-05 | Nippon Steel Corp | 低分子ペプチドの製造方法 |
| JPH07115969A (ja) * | 1993-10-25 | 1995-05-09 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 加水分解蛋白質の製造方法 |
| US5616485A (en) * | 1993-12-23 | 1997-04-01 | Cangene Corporation | Streptomyces proteases and improved streptomyces strains for expression of peptides and polypeptides |
| EP0785726B1 (en) | 1994-10-26 | 2004-01-07 | Novozymes A/S | Method for production of a milk protein hydrolyzate |
| WO1996014404A1 (en) | 1994-11-08 | 1996-05-17 | Novo Nordisk A/S | Tripeptidyl aminopeptidase |
| JPH08308565A (ja) * | 1995-05-17 | 1996-11-26 | Mercian Corp | トリペプチジルペプチダーゼおよびその製造方法 |
| FI104465B (fi) | 1995-06-14 | 2000-02-15 | Valio Oy | Proteiinihydrolysaatteja allergioiden hoitamiseksi tai estämiseksi, niiden valmistus ja käyttö |
| US5856308A (en) * | 1996-09-27 | 1999-01-05 | Haemacure Corporation | Artificial collagen |
| ATE218036T1 (de) * | 1996-12-23 | 2002-06-15 | Dsm Nv | Verfahren zur herstellung eines proteinhydrolysates |
| DE69840230D1 (de) * | 1997-05-16 | 2009-01-02 | Novozymes Inc | Polypeptide mit prolyldipeptidylaminopeptidase-aktivität und dafür kodierende nukleinsäuren |
| EP0897012A1 (en) * | 1997-07-05 | 1999-02-17 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Cloning of the prolyl-dipeptidyl-peptidase from aspergillus oryzae |
| JP4727770B2 (ja) | 1997-09-26 | 2011-07-20 | カルピス株式会社 | 尿中カテコールアミン低下、尿中ノルアドレナリン低下、尿中ドーパミン低下及びＦｉｓｃｈｅｒ比低下の少なくとも１つの軽減剤 |
| WO2000052147A2 (en) * | 1999-03-05 | 2000-09-08 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Bacterial prolyl peptidases and methods of use |
| US6310041B1 (en) * | 1999-03-09 | 2001-10-30 | Fornix Biosciences N.V. | Synthetic complementary peptides and ophthalmologic uses thereof |
| FI113741B (fi) | 1999-11-01 | 2004-06-15 | Valio Oy | Menetelmä verenpainetta alentavia peptidejä sisältävän tuotteen valmistamiseksi |
| AU2001247334A1 (en) | 2000-03-10 | 2001-09-24 | Monsanto Company | Novel peptides with anti-hypertensive activity |
| JP2001302690A (ja) * | 2000-04-19 | 2001-10-31 | Miyagi Kagaku Kogyo Kk | 皮膚浸透性トリペプチド、皮膚浸透性コラーゲンペプチド、皮膚浸透性外用剤および高吸収性食品 |
| ATE475324T1 (de) * | 2000-12-07 | 2010-08-15 | Dsm Ip Assets Bv | Mit carboxy-terminal prolin peptide angereicherte proteinhydrolysate |
| WO2002068623A2 (en) * | 2001-02-23 | 2002-09-06 | Dsm Ip Assets B.V. | Genes encoding proteolytic enzymes from aspargilli |
| ES2540926T3 (es) * | 2002-06-04 | 2015-07-14 | Dsm Ip Assets B.V. | Hidrolizado de proteínas rico en tripéptidos |
-
2003
- 2003-06-03 ES ES03735546.8T patent/ES2540926T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-03 AU AU2003236689A patent/AU2003236689A1/en not_active Abandoned
- 2003-06-03 WO PCT/EP2003/005876 patent/WO2003102195A1/en not_active Ceased
- 2003-06-03 EP EP20030735546 patent/EP1509609B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-03 US US10/516,983 patent/US20050256057A1/en not_active Abandoned
- 2003-06-03 JP JP2004510432A patent/JP4376180B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-02-29 US US12/039,973 patent/US7972808B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2003236689A1 (en) | 2003-12-19 |
| US20080220470A1 (en) | 2008-09-11 |
| JP4376180B2 (ja) | 2009-12-02 |
| US20050256057A1 (en) | 2005-11-17 |
| EP1509609B1 (en) | 2015-04-22 |
| US7972808B2 (en) | 2011-07-05 |
| JP2005528110A (ja) | 2005-09-22 |
| WO2003102195A1 (en) | 2003-12-11 |
| EP1509609A1 (en) | 2005-03-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2540926T3 (es) | Hidrolizado de proteínas rico en tripéptidos | |
| ES2746173T3 (es) | Uso de endoproteasas específicas para prolina para hidrolizar péptidos y proteínas | |
| Mullally et al. | Proteolytic and peptidolytic activities in commercial pancreatic protease preparations and their relationship to some whey protein hydrolyzate characteristics | |
| Matsubara | [46] Purification and assay of thermolysin | |
| AU2004261855B2 (en) | Casein hydrolyzate, process for producing the same and use thereof | |
| JP3153237B2 (ja) | タンパク質加水分解物 | |
| EP0969736B1 (en) | A method of obtaining protein hydrolysates | |
| CA1041351A (en) | Process for the production of protein-containing food additives | |
| CN1728987A (zh) | 可食用的磷蛋白薄膜 | |
| JPH11501207A (ja) | 小麦タンパク質加水分解物の製法 | |
| US5554508A (en) | Process for the enzymatic synthesis of alkyl esters of peptides and peptides, and microparticles therefrom | |
| JP2737790B2 (ja) | 絹タンパク質加水分解物含有食物およびその製造方法 | |
| JP2004016143A (ja) | 水溶性核タンパク質分解物の製造方法 | |
| ES2308531T3 (es) | Hidrolizados de sueros lacteos inhibidores de la eca. | |
| CN1138297A (zh) | 一种稳定蛋白质c或活性蛋白质c的方法以及由此所得的稳定化组合物 | |
| JPH04126039A (ja) | 脱苦味された機能性ペプチドの製造法 | |
| ES2327675T3 (es) | Hidrolizados proteinicos que reducen la tension arterial. | |
| WO1998023170A1 (es) | Procedimiento de obtencion de peptonas vegetales de alto grado de hidrolisis y sus aplicaciones | |
| Atma et al. | Radical-scavenging activity of fish gelatin hydrolysates from bone of Pangasius catfish (Pangasius sutchi) by microbial proteases hydrolysis | |
| JPH07115912A (ja) | 乳清蛋白の酵素分解物 | |
| JP3373156B2 (ja) | 水溶性ポテトペプチドの製造方法 | |
| ES2283011T3 (es) | Enzima proteolitica purificada de purificacion. | |
| JPH06245790A (ja) | オリゴペプチド混合物およびその製造方法 | |
| CN1814776A (zh) | 蛋黄降血压肽及其制备方法 | |
| EP2328566A1 (en) | Enzyme composition and application thereof in the treatment of pancreatic insufficiency |