ES2551828B1

ES2551828B1 - Composiciones alimentarias que comprenden sales de tungsteno (VI)

Info

Publication number: ES2551828B1
Application number: ES201430747A
Authority: ES
Inventors: Ignacio CANALS ALMAZÁN; Agnès ARBAT BUGIÉ
Original assignee: Oxolife SL
Current assignee: Oxolife SL
Priority date: 2014-05-21
Filing date: 2014-05-21
Publication date: 2016-09-12
Anticipated expiration: 2034-05-21
Also published as: AU2015263221A1; TW201600022A; AU2015263221B2; WO2015177393A1; NZ726934A; ES2551828A1; UY36133A; AR100545A1

Abstract

Composiciones alimentarias que comprenden sales de tungsteno (VI) así como su preparación, para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético.

Description

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DESCRIPCION

Composiciones alimentarias que comprenden sales de tungsteno (VI)

La presente invention se refiere al uso de sales de tungsteno (VI) para la preparation de composiciones alimentarias, asl como a dichas composiciones alimentarias, en especial para favorecer la fertilidad y la reproduction normal en un mamlfero hembra no diabetico.

ESTADO DE LA TECNICA

La fertilidad en mamlferos es un proceso multietapico que de forma natural no es totalmente eficiente. Factores como la edad, los habitos alimenticios o el estilo de vida, entre otros, modulan el exito de este proceso. Asl, se conoce por ejemplo que la tasa de embarazo en mujeres de 20 a 24 anos es de aproximadamente el 86%, mientras que en mujeres de 35 a 32 anos decae hasta un 50% [Management of the Infertile Woman por Helen A. Carcio; The Fertility Sourcebook por M. Sara Rosenthal, ASAS Summary of FAIR 2012]. Otros factores, como el sobrepeso o el bajo peso, tambien son responsables de retrasos en la consecution de un embarazo de forma natural o incluso de la imposibilidad de su consecucion [Fertil Steril 2013;100:631-7]. Se estima que aproximadamente un 66% de las parejas no conciben de forma natural durante los 3 primeros meses de relaciones sexuales sin protection. Esta cifra disminuye hasta el 15% de las parejas durante el decurso del primer ano de relaciones sexuales no protegidas. Infertilidad se define (WHO, ASRM, NICE) como la incapacidad de concebir tras 12 meses de relaciones sexuales regulares no protegidas Tambien se ha acunado, especialmente en Europa, el termino “subfertilidad” para definir a aquellas parejas con alguna forma o grado de fertilidad reducida, que conlleva un retraso en la conception [Gnoth C et al Definition and prevalence of subfertility and infertility Human reproduction 2005;20(5):1144-1147].

Las principales causas de infertilidad entre las mujeres incluyen disfunciones ovulatorias, patologlas del tracto reproductivo, reduction en la calidad de los oocitos y la depletion folicular inherente al envejecimiento. Sin embargo, tambien existe un porcentaje considerable de mujeres con infertilidad inexplicada, tambien denominada infertilidad idiopatica, de la que una de las posibles causas esta relacionada con deficiencias en el proceso de implantation.

El desarrollo folicular, la ovulation, la migration del ovulo inmaduro (oocito), asl como la posterior concepcion e implantacion del cigoto en la pared uterina se encuentra regulado por secreciones hormonales de ciertos organos endocrinos como por ejemplo la hipofisis, el

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hipotalamo y la glandula tiroides. Entre las multiples causas biologicas de la infertilidad en la mujer se pueden destacar tambien las causas ligadas a desordenes de los estlmulos hormonales que regulan todo este proceso

Se conocen diferentes tratamientos para la infertilidad femenina entre los que se encuentran la administration de medicamentos para tratar problemas hormonales que conllevan alteraciones de la ovulation. Asimismo se han postulado algunos efectos beneficiosos con numerosos tratamientos en base a la ingesta de suplementos vitamlnicos, especialmente vitamina B, vitamina C, vitamina E y acido folico, suplementos minerales como sales o complejos de hierro, zinc, o selenio, acidos grasos esenciales (omega 3), asl como extractos de plantas tales como Sauzgatillo (Vitex agnus chastus), Damiana, regaliz, flor de Trebol Rojo, Baya de Agnocasto, Cohosh Negro, Dong Quai (Angelica sinensis), Name o Camote Silvestre (Dioscorea villosa), Ralz de Unicornio Falso, te verde, Ortigas (Urtica dioica), Avena salvaje (Avena sativa), Diente de leon (Taraxacum officinale), etc. aunque para ninguno de estos tratamientos se ha podido demostrar claramente su eficacia.

El porcentaje de embarazos conseguidos mediante los tratamientos mencionados anteriormente presentan limitaciones. Asl, por ejemplo, se ha observado que el tratamiento de mujeres cuya ovulacion es irregular o ausente mediante la administracion de citrato de clomifeno, un farmaco de la familia de los estilbenos, permite la restauracion de la ovulacion en un porcentaje elevado, pero la tasa de embarazo continua siendo baja, aproximadamente igual o inferior al 50%.

Los tratamientos de fecundation in vitro son muy efectivos en la etapa de fecundation del oocito. Sin embargo, la tasa de implantation de los embriones en la pared uterina es baja. Esto promueve las transferencias multiples de embriones por cada ciclo de fecundacion in vitro, con la consecuencia de un porcentaje mayor de embarazos multiples considerados de riesgo.

Por ultimo, es conocido que las alteraciones metabolicas como la diabetes o la obesidad conllevan una limitation de la fertilidad. Se conoce que la recuperation parcial o total de la glucemia, la insulinemia y/o el peso corporal de ratones hembra diabeticos u obesos con la funcion reproductora danada, comporta una mejora de la fertilidad.

Diferentes tratamientos farmacologicos, como la metformina o sales de tungsteno (VI), o incluso cambios en el estilo de vida, han demostrado mejorar la diabetes o alteraciones en la

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insulina, como por ejemplo la deficiencia o la resistencia a la insulina, consiguiendo recuperar la funcion reproductora total o parcialmente, cuando la infertilidad es debida a la diabetes o alteraciones en la insulina.

En el caso concreto del tungstato sodico, se conoce que ratas con diabetes e insulinopenia inducida por la inyeccion de estreptozotocina, recuperan parcialmente los niveles de insulina circulantes tras un tratamiento prolongado (10 semanas) con tungstato sodico como consecuencia de revertir parcialmente la diabetes. Posteriormente, cuando las ratas hembras parcialmente recuperadas de la diabetes se aparean con machos sanos, se observa que, de forma paralela a la recuperacion parcial de la diabetes, han recuperado parcialmente su capacidad reproductora. En particular, se observa que el porcentaje de partos con respecto al numero de raspados positivos en los ratones hembras que hablan sido parcialmente recuperadas de la diabetes tras un tratamiento con tungstato sodico aumenta hasta el 66%, porcentaje inferior a las hembras que no padeclan diabetes donde el porcentaje es del 100%. (cf. J. Ballester y colaboradores, "Tungstate administration improves the sexual and reproductive function in female rats with streptozotocin-induced diabetes", Human Reproduction, 2007, vol. 22, pp. 2128-2135). No obstante, no se observo ni postulo efecto alguno de las sales de tungsteno (VI) en animales hembra no diabeticos.

El tungsteno se encuentra en cantidades traza en animales y plantas. Por ejemplo, en plantas se han descrito contenidos hasta un maximo de 100 mg/kg [Gbaruko B.C. & Igwe J.C. Global Tungsten: Occurrence, Chemistry, Environmental and Health Exposure Issues. Journal of Environmental Research 2007;1(1):27-32].

En vista de todo lo anterior, a pesar de la intensa investigacion y los avances la comprension y manejo del proceso reproductivo de los mamlferos y de los humanos en particular, todavla numerosas parejas no se benefician de las diferentes aproximaciones disponibles en la actualidad para incrementar la fertilidad por serles ineficaces. Por lo tanto, todavla hay una necesidad de encontrar nuevas alternativas para la mejora de la eficiencia reproductiva natural y/o el tratamiento de infertilidad femenina que den una mayor eficacia.

RESUMEN DE LA INVENCION

Se ha encontrado ahora que la administration de una sal de tungsteno (VI), o un solvato de dicha sal es efectiva para favorecer la fertilidad y la reproduction normal en un mamlfero hembra no diabetico. A pesar de que era conocido que el tungstato sodico puede revertir parcialmente las alteraciones en la funcion reproductora en ratones hembras diabeticas

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debido a que produce una normalization de los niveles de glucosa en sangre, no se ha descrito ni se ha sugerido que el tungstato sodico puede tener un efecto sobre la funcion del sistema reproductor femenino en mamlferos hembra no diabeticas, favoreciendo la fertilidad y la reproduction normal.

Por lo tanto, un primer aspecto de la presente invention se refiere al uso de una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma, para la preparation de una composition alimentaria para favorecer la fertilidad y la reproduction normal en un mamlfero hembra no diabetico.

Un segundo aspecto de la presente invention se refiere a una composition alimentaria, la cual comprende una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma en una concentration mayor de 100 mg/kg.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION

Tal y como indicado anteriormente, de acuerdo con un primer aspecto la presente invention se refiere al uso de una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma, para la preparation de una composition alimentaria para favorecer y/o contribuir a la fertilidad y la reproduction normales en un mamlfero hembra no diabetico.

En el marco de la presente invention, el termino “composition alimentaria” englobarla cualquier alimento, solido o llquido, enriquecido con sal de tungsteno (VI), as! como cualquier suplemento o complemento nutricional que contenga al menos una sal de tungsteno (VI).

El termino “favorecer la fertilidad y la reproduction normal” o “contribuir a la fertilidad y la reproduction normal” se refiere a una contribution a la fertilidad y reproduction normales, o mejorar la fertilidad y la reproduction normal (reduciendo los tiempos para lograr un embarazo), entendiendo por “fertilidad y reproduction normales” un estado de fertilidad en el cual se logra, siguiendo las definiciones proporcionadas previamente:

* en una situation de subfertilidad: un embarazo en un periodo de 12 meses de relaciones sexuales regulares y no protegidas; y

* en una situation de infertilidad: un embarazo tras un periodo 12 meses de relaciones sexuales regulares y no protegidas. Se incluyen aqul la necesidad de restaurar y/o potenciar la ovulation, mejorar la calidad del oocito y del embrion, aumentar la implantation del cigoto en la pared uterina, regular una alteration del eje hipotalamico-hipofisario-ovarico, incluyendo slndrome de ovario poliqulstico, slndrome metabolico, hiperprolactinemia, endometriosis, hipotiroidismo, esclerosis multiple, artritis reumatoide, lupus eritematoso,

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cirrosis, artritis reumatoide, ceiiaqula, fallo renal cronico, causas idiopaticas y desordenes alimentarios, tales como anorexia nerviosa y bulimia.

De acuerdo con una realization particular, la composition alimentaria de la invention contiene una concentration total (es decir, la suma de todas las sales de tungsteno (VI) contenidas en la composicion) de sales de tungsteno de al menos 100 mg/kg; de acuerdo con otras realizaciones particulares, dicha concentracion total preferiblemente de al menos 150 mg/kg, al menos 200 mg/kg, al menos 250 mg/kg, al menos 300 mg/kg, al menos 350

mg/kg, al menos 400 mg/kg, al menos 450 mg/kg, al menos 500 mg/kg, al menos 550

mg/kg, al menos 600 mg/kg, al menos 650 mg/kg, al menos 700 mg/kg, al menos 750

mg/kg, al menos 800 mg/kg, al menos 850 mg/kg, al menos 900 mg/kg o al menos 850

mg/kg.

De acuerdo con otra realizacion particular, la concentracion total de sales de tungsteno (VI) es igual o inferior a 1000 mg/kg.

El mamlfero hembra en el marco de la presente invencion puede ser cualquier mamlfero, incluyendo, pero no limitado a, humanos, ratones, ratas, conejos, perros, gatos, cobayas, hamsteres, vacas, caballos, cerdos, ovejas, cabras, etc.

De acuerdo con una realizacion particular, el mamlfero hembra es humano.De acuerdo con otra realizacion particular, la composicion alimentaria sera adecuada para la administration de sales de tungsteno en una dosis diaria de entre 0,001 mg por cada kg de peso corporal del mamlfero hembra (en adelante, mg/kg/dla) y la dosis maxima tolerada para la especie de mamlfero hembra correspondiente.

De acuerdo con una realizacion particular mas, la dosis maxima diaria sera de 1000 mg/kg/dla; de acuerdo con realizaciones particulares adicionales, la administracion se realizarla en dosis de al menos 0,001 mg/kg/dla, de al menos 0,01 mg/kg/dla, de al menos 0,1 mg/kg/dla, de al menos 0,5 mg/kg/dla, de al menos 1 mg/kg/dla, de al menos 10 mg/kg/dla, de al menos 25 mg/kg/dla, de al menos 50 mg/kg/dla, de al menos 100 mg/kg/dla, de al menos 200 mg/kg/dla, de al menos 300 mg/kg/dla , de al menos 400 mg/kg/dla , de al menos 500 mg/kg/dla, de al menos 600 mg/kg/dla, de al menos 700 mg/kg/dla, de al menos 800 mg/kg/dla o de al menos 900 mg/kg/dla.

En general, la sal de tungsteno comprende un anion de tungsteno (VI) y un cation dieteticamente o farmaceuticamente aceptable. Preferiblemente, el cation es un cation

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alcalino o alcalinoterreo. Mas preferiblemente, el cation se selecciona entre el grupo que consiste en sodio, potasio, magnesio, calcio y zinc. Segun una realization particular, la sal de tungsteno (VI) es la sal sodica de tungsteno (VI).

Por su parte, el anion de tungsteno (VI) se selecciona preferiblemente del listado que consiste en WO42-, HWO4-, W2O72- y HW2O7-. Preferiblemente, el anion es WO42-.

De acuerdo con una realizacion particular, la sal esta en forma de solvato; preferiblemente, el solvato es el hidrato, mas concretamente el dihidrato.

Todas las caracterlsticas enumeradas de manera individual para diferentes elementos de la invention pueden ser combinadas entre si, quedando todas las combinaciones posibles incluidas en el alcance de la presente invencion. Asl por ejemplo, segun una realizacion preferida, el solvato de la sal de tungsteno (VI) es el dihidrato y el cation es un cation sodico. Al igual, el resto de combinaciones posibles tambien se pretende esten incluidas en el alcance de la presente invencion.

La composition alimentaria puede ser una composition llquida, es decir, una bebida segun terminos mas generalmente utilizados en la sociedad. Tal composicion llquida, en el marco de la presente invencion, incluye, pero no esta limitada a, cualquier bebida seleccionada del grupo que consiste en leche de origen animal o vegetal, asl como cualquier derivado de la misma, tales como por ejemplo batidos, yogur, kefir, etc.; zumos de frutas y/o hortalizas; agua sin gas o con gas, o agua o bebidas aromatizadas o edulcoradas (mediante edulcorantes nutritivos (sacarosa, fructosa...) o artificiales); condimentos, tales como por ejemplo cualquier salsa, alino, ketchup, aceite, vinagre o preparados de vinagre; bebidas alcoholicas de cualquier tipo; te, cafe; asl como todo tipo de bebidas refrescantes o refrescos, o bebidas energizantes.

La composicion alimentaria tambien puede ser una composicion solida. Por ejemplo, tal composicion solida puede seleccionarse, pero no esta limitado a, del grupo que consiste en derivados de leche de origen animal o vegetal, tales como pueden ser queso, mantequilla, margarina y tofu; cualquier tipo de pan, incluyendo fresco, envasado o congelado, de molde, integrales, especiado, dulce, salado, etc; pasta preparada a partir de cualquier harina de cereal, tal como trigo o semola (macarrones, espaguetis, tallarines, etc); productos de bollerla, incluyendo bizcochos, galletas, magdalenas, rosquillas, etc.; infusiones, te o cafe, a granel o en bolsitas, para preparar bebidas; gelatinas, caramelos, incluyendo los de goma, mas conocidos como “gominolas”; asl como cualquier tipo de condimento solido, por ejemplo oregano, sal, cilantro, perejil, albahaca, etc, o mezclas de los mismos.

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Por ultimo, la composicion alimentaria tambien puede ser suplemento o complemento nutricional, dietetico o alimenticio, empleandose en el marco de la presente invention cualquiera de estos terminos de manera equivalente. Estos terminos se usan habitualmente para composiciones consumidas por via oral, las cuales contienen un ingrediente destinado a complementar la alimentation, en el caso de la presente invencion la(s) sal(es) de tungsteno (VI). Nunca seran un sustituto de un alimento convencional ni un componente unico de una comida o de la dieta alimenticia. Pueden darse en diferentes presentaciones, tales como pastillas, plldoras, tabletas, capsulas, capsulas suaves de gelatina, capsulas de gelatina, obleas, comprimidos efervescentes, llquidos (disolucion, suspension, jarabe), granulos y polvos, todas ellas se incluyen como realizaciones particulares en el ambito de la presente invencion. Excipientes dietetica- o farmaceuticamente aceptables son evidentes al experto para la obtencion de cualquier de las presentaciones anteriores, y se pretenden incluidas en el alcance de la presente invencion.

De acuerdo con una realization particular, cualquiera de las composiciones alimentarias anteriores (composicion solida, composicion llquida o suplemento/complemento nutricional) comprende en su composicion al menos un edulcorante nutritivo, tal como la sacarosa o la fructosa. La ingesta de estos edulcorantes nutritivos debe ser controlada y limitada en pacientes diabeticos, por lo tanto una composicion alimentaria que incluya tal edulcorante nutritivo estarla contraindicada en mamlferos diabeticos o al menos deberla tenerse en cuenta durante el control de su dieta.

De acuerdo con una realizacion particular, el mamlfero hembra no diabetico se selecciona del grupo que consiste en mamlferos hembra que necesitan restaurar y/o potenciar la ovulation, mejorar la calidad del oocito y del embrion, aumentar la implantation del cigoto en la pared uterina, regular una alteration del eje hipotalamico-hipofisario-ovarico, incluyendo slndrome de ovario poliqulstico, slndrome metabolico, hiperprolactinemia, endometriosis, hipotiroidismo, esclerosis multiple, artritis reumatoide, lupus eritematoso, cirrosis, artritis reumatoide, celiaqula, fallo renal cronico, causas idiopaticas y desordenes alimentarios, tales como anorexia nerviosa y bulimia.

De acuerdo con otra realizacion particular, el mamlfero hembra no diabetico se selecciona del grupo que consiste en mamlferos hembra que presentan insulinresistencia (tambien conocida como resistencia a la insulina o resistencia insullnica); la insulinresistencia, cuando se presenta junto con una hiperglicemia, puede conducir al desarrollo de diabetes, no obstante la insulinresistencia sola no conduce a un estado diabetico. Preferiblemente, los

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mamiferos hembra que presentan insulinresistencia se seleccionan del grupo que consiste en hembras mamiferos que presentan una o mas de las siguientes condiciones: Obesidad o sobrepeso, Sfndrome metabolico, Prediabetes, Sfndrome del ovario poliqufstico, Hipertension, Enfermedad coronaria, Hiperlipidemias o dislipemia, Hipertiroidismo, Hiperparatiroidismo, Hiperleptinemia o resistencia a la leptina, Sedentarismo, Desordenes alimentarios, Sfndrome de la apnea obstructiva del sueno, Malnutrition fetal, Sfndrome de Prader Willi, Sfndrome de Rabson-Mendenhall, Esteatosis hepatica, Leprechaunism, Patologias asociadas al exceso de secretion de glucocorticoides (p.ej acromegalia), insulinresistencia causada por tratamientos farmacologico (p.ej glucocorticoides, diureticos tiazfdicos , betabloqueantes), Estres o Menarqufa Precoz [Egas Bejar, Daniela et.al Insulinorresistencia / Insulin resistance. Medicina (Guayaquil);10(2):159-166, abr. 2005; Graves, Thomas K. WHY ISN’T THIS INSULIN WORKING? Western Veterinary Conference 2013 (SA113); Ximena Gaete V. Adelanto de la pubertad en Chile y el mundo. Rev Chil Pediatr 77 (5); 456-465, 2006; Leszek Szablewski Glucose Homeostasis and Insulin Resistance (eISBN: 978-1-60805-) Bentham e-books], Muchas de estas indicaciones se ha descrito que no estan relacionadas con la infertilidad, incluyendo la prediabetes [Acta Diab. Latina 4, 507, 1967].

Otro aspecto de la presente invention se refiere a una composition alimentaria, la cual comprende la sal o sales de tungsteno (VI) o un solvato de las mismas en una concentration de al menos 100 mg/kg. De acuerdo con realizaciones particulares, la sal o sales de tungsteno (VI) estan comprendidas en la composicion en concentraciones de al menos 150 mg/kg, al menos 200 mg/kg, al menos 250 mg/kg, al menos 300 mg/kg, al menos 350

mg/kg, al menos 400 mg/kg, al menos 450 mg/kg, al menos 500 mg/kg, al menos 550

mg/kg, al menos 600 mg/kg, al menos 650 mg/kg, al menos 700 mg/kg, al menos 750

mg/kg.

Todas las definiciones y significados preferidos proporcionados anteriormente en relation al primer aspecto de la invencion son aplicables a este segundo aspecto de la invencion. Asf, por ejemplo, la sal de tungsteno (VI) comprendera un anion de tungsteno (VI) y un cation dieteticamente o farmaceuticamente aceptable, el cual preferiblemente sera un cation alcalino o alcalinoterreo, aun mas preferiblemente un cation sodio, potasio, magnesio y calcio y zinc. Particularmente, la sal sera la sodica de tungsteno (VI). Una vez mas, el anion de tungsteno (VI) se selecciona de los iones WO42-, HWO4-, W2O72- y HW2O7-, preferiblemente WO42-, y en caso de presentarse en forma de solvato, el mismo

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preferiblemente sera el hidrato, mas concretamente el dihidrato. El resto de realizaciones particulares proporcionadas anteriormente para el primer aspecto se refieren tambien a este segundo aspecto.

La composition alimentaria del segundo aspecto de la invention puede ser una composition llquida o bebida, una composicion solida o un suplemento o complemento nutricional (tambien denominado dietetico o alimenticio).

La composicion llquida ya ha sido definida anteriormente en relation con el primer aspecto de la invencion, y todas las realizaciones preferidas son aplicables tambien a este segundo aspecto de la invencion.

Asimismo, la composicion solida se ha definido anteriormente en relacion con el primer aspecto de la invencion, y todas las realizaciones preferidas son aplicables tambien a este segundo aspecto de la invencion.

Al igual, el suplemento o complemento nutricional (o dietetico o alimenticio) ha sido definido anteriormente en relacion con el primer aspecto de la invencion, y todas las realizaciones preferidas son aplicables tambien a este segundo aspecto de la invencion.

Preferiblemente, la composicion comprende un edulcorante nutritivo, tal como la sacarosa o la fructosa.

A continuation se incluyen una serie de ejemplos ilustrativos, no limitativos de la presente invencion.

EJEMPLOS

EJEMPLO 1. DESCRIPCION DEL MODELO ANIMAL (RATONES HEMBRAS IRS2 -/-)

El modelo de raton empleado para determinar la actividad de sales de tungsteno (VI) para favorecer la fertilidad y la reproduction normales, es el raton IRS2-/-, un knock-out del gen Irs2 [Burks y colaboradores, "IRS-2 pathways integrate female reproduction and energy homeostasis", Nature, 2000, vol. 407, pp. 377-382], La deletion del gen Irs2 se traduce en un claro dimorfismo sexual en relacion a la fertilidad y al metabolismo de los carbohidratos. Los machos de este modelo presentan resistencia a la insulina y una severa hiperglicemia iniciada desde edades tempranas. Por contra, en edades tempranas, las hembras se mantienen relativamente euglicemicas y desarrollan una ligera insulin-resistencia, que se mantiene hasta edades avanzadas (4-5 meses). Las hembras IRS2-/- en edades tempranas,

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alrededor de 10 semanas de edad, muestran un bajo desarrollo folicular y una anovulacion persistente, acompanada de la ausencia del ciclo estral en la mayorla de los ratones. La tasa de embarazos de los ratones hembra IRS2-/- es del 9% frente a una tasa del 100% en ratones hembra IRS™1 (IRS-2+/+ wild type). Dado que en estas edades las hembras se mantienen euglicemicas y que unicamente desarrollan una ligera insulin-resistencia, la profunda alteracion en la fertilidad, no es una consecuencia directa de las anomallas en el metabolismo de la glucosa.

EJEMPLO 2. ESTUDIO DE OVULACION, IMPLANTACION Y EMBARAZO

A. Animales

10 ratones hembra IRS2-/- de edades comprendidas entre 6 y 8 semanas.

6 ratones macho "wild-type" (IRS2wt) de edades comprendidas entre 6 y 8 semanas.

Los ratones hembras y machos se estabularon por separado en condiciones normales, es decir ciclo luz/oscuridad 12h y temperatura y humedad controladas. Los animales se alimentaron a voluntad (tambien denominado ad libitum) con dieta de pienso estandar.

B. Metodo

Fase de pre-tratamiento

Tras un periodo de aclimatacion, los ratones hembra IRS2-/- se estabularon en grupos de 4-6 ratones/jaula. Durante la fase de pre-tratamiento (2 semanas), a los animales se les administro el agua de bebida sin sal de tungstato.

Fase de tratamiento

El tungstato sodico fue administrado en el agua de bebida (ad libitum) mediante una solucion de 2 mg/ml de tungstato sodico dihidrato (comercializado por Carlo Erba) en agua destilada tras la fase de pre-tratamiento (dla 0 de tratamiento) y hasta 4 semanas antes del sacrificio de los animales. La dosis diaria de tungstato sodico ingerida por los ratones fue aproximadamente de 180 mg/kg de peso corporal.

Cruce

Tras las tres primeras semanas de tratamiento, los ratones hembra IRS2-/- se estabularon en jaulas por parejas junto a un raton macho IRS2wt de forma continua.

Los ratones se observaron diariamente en busca de signos de embarazo o parto.

Tras 4 semanas se intercambiaron los machos entre las jaulas y se mantuvieron durante 4 semanas mas.

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La administration de tungstato se mantuvo durante las 8 semanas en las que machos y hembras se estabularon conjuntamente. Tras estas 8 semanas se retiro el tratamiento y se mantuvo la estabulacion conjunta de machos y hembras durante 4 semanas adicionales.

Sacrificio

Transcurrido este periodo, las hembras fueron sacrificadas y biopsiadas en busca de indicios de embarazo.

C. Resultados

Resultados del Estudio de ovulation

Durante el periodo de pre-tratamiento y durante las 3 primeras semanas de tratamiento se realizaron frotis vaginales a 6 ratones hembras elegidos al azar en los dlas -8; -5; -2; -1; 7; 8; 14; 15 y 22, para determinar la fase del ciclo estral en que se encontraban.

Se introdujo en la vagina de los ratones entre 1 y 2 ml de solution salina con una pipeta pasteur. Con la misma pipeta se recogio el exudado vaginal y se extendio en un portaobjetos. Una vez secado al aire, se fijo y se tino con la tecnica de Papanicolau.

La tecnica de Papanicolau comprende realizar la tincion de los frotis vaginales fijados en el portaobjetos de la siguiente manera:

- 10 inmersiones en alcohol 50 % v/v;

- Sumergir en solution de hematoxilina de Harris durante 3 minutos;

- Enjuagar con agua corriente;

- 10 inmersiones en Alcohol Acido (1% Ac. Clorhldrico);

- Enjuagar con agua corriente;

- 10 inmersiones en Alcohol 95 % v/v;

- Sumergir en solution OG-6 durante 30 segundos;

- 10 inmersiones en alcohol 96 % v/v;

- Sumergir en solution de eosina durante 1 minuto;

- 10 inmersiones en alcohol 96 % v/v;

- 10 inmersiones en alcohol 86 % v/v; y

- 10 inmersiones en xilol

Las preparaciones se analizaron por personal entrenado y utilizando una codificacion y a ciego simple para eliminar el sesgo del observador.

Las muestras se identificaron en las siguientes fases: diestro, proestro, estro, metaestro, anestro o no evaluable. La ciclicidad de las cuatro fases en periodos de 4 a 6 dlas, son indicadores de un ciclo estral normal, mientras que la ausencia de esta ciclicidad y la persistencia en fases anestro, diestro o proestro son indicadores de la ausencia del ciclo 5 estral.

De los 10 ratones hembra sometidos a estudio, en la Tabla 1 se resumen las fases del ciclo estral de los frotis vaginales realizadas a 6 de estos ratones hembras IRS2-/- .

10 Tabla 1

N°: Tiempo (dlas)

Raton: -8 -5 -2 -1 7 8 14 15 22

72: A A P D E E-M E E A

898: D D P P E E E-M M M

926: D D P P E-M E-M D E P

928: D-P D P P E E E-M M A

942: A D P P E E-M E-M A D

972: D D P M M D D

Las fases del ciclo estral son las siguientes: A: Anestro; D: diestro; P: Proestro; E: Estro; y M: metaestro.

15 Las fases del ciclo estral encontrados en los frotis vaginales de los ratones hembras IRS2-/- de la Tabla 1 muestran que durante el periodo de pre-tratamiento todos los ratones se encontraban en fase proestro (P) o diestro (D), es decir en ausencia de ciclo estral.

Mientras que tras el inicio de la administration de tungstato, se observa que los ratones 2 0 hembras IRS2-/- se encuentran en fases tardlas del ciclo estral, estro (E) y metaestro(M), lo que es indicador de la recuperacion del ciclo estral normal.

Estos resultados indican que la administration de una sal de tungsteno (VI) permite la recuperation rapida (al septimo dla de tratamiento) del ciclo estral en ratones hembra infertiles IRS2-/- no diabeticas en el 100% de ratones analizados.

5 Resultados del Estudio de implantation y embarazo

Transcurrido el periodo de cruce del metodo del apartado B, las hembras fueron sacrificadas y se llevaron a cabo biopsias en busca de indicios de embarazo.

En la tabla 2 se resume la edad en el momento del tratamiento, si hubo embarazo y el 10 numero de embriones por hembra.

Tabla 2

N° Raton: Edad (meses) al inicio del Embarazo Numero de embriones Implantados o crias nacidas

tratamiento: cruce

72: 10 12 SI 1 crla

942: 10 12 SI 8 crias

928: 10 12 SI 7 embriones

931: 10 12 SI 3 crias

898: 10 12 SI 7 embriones

900: 10 12 NO -

921: 10 12 SI 6 embriones

926: 10 12 SI 8 crias

972: 8 10 NO -

973: 8 10 SI 7 embriones

Los resultados de la Tabla 2 muestran que mientras que la tasa de embarazo de los ratones 15 hembra IRS2-/- sin tratar es del 9%, la tasa de embarazo de los ratones hembra IRS2-/- tratados con tungstato se incrementa hasta el 80%.

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Ademas, estos resultados tambien muestran que la media de crlas/embriones implantados por raton hembra embarazo es de aproximadamente 5, numero que se puede considerar comparable al numero de crlas de un raton hembra.

Asl, los resultados de las Tablas 1 y 2 demuestran que una sal de tungsteno (VI) es un tratamiento eficaz para la recuperacion de la ovulacion y/o el aumento de la implantacion del oocito. Asl, la administration de una sal de tungsteno (VI) tal y como se define en la presente invention es eficaz para el tratamiento de la infertilidad en mamlferos hembras no diabeticos.

EJEMPLO 3. ESTUDIO DE GLUCEMIA Y PESO CORPORAL

A. Animales

6 ratones hembra IRS2-/- de edades comprendidas entre 6 y 8 semanas.

Los ratones hembras se estabularon en condiciones normales, es decir ciclo luz/oscuridad 12h y temperatura y humedad controladas. Los animales se alimentaron a voluntad (tambien denominado ad libitum) con dieta de pienso estandar.

B. Metodo

Fase de tratamiento

Tras un periodo de aclimatacion, el tungstato sodico fue administrado en el agua de bebida (ad libitum) mediante una solution de 2 mg/ml de tungstato sodico dihidrato (comercializado por Carlo Erba) en agua destilada tras la fase de pre-tratamiento (dla 0 de tratamiento) y durante 12 dlas.

C. Resultados

En los dlas 0, 2, 5, 7, 9 y 12 del periodo de tratamiento se monitorizo el peso corporal, y tras las 6 horas de ayuno de cada uno de los dlas mencionados anteriormente se determino la glucosa en sangre, mediante la extraction de sangre de la vena caudal y con un sensor de glucosa (AccuTrend glucose sensor Roche. Mannheim, Germany).

En la tabla 3 se resumen los niveles de glucemia expresados en mg/dl, y en la tabla 4 se resume el peso corporal de los ratones en estudio expresada en gramos.

Tabla 3

Glucemias (mg/dl): R1327 R1345 R1347 R1354 R1376 R1381 Promedio

Dia 0: 146 129 115 126 141 112 128,17

Dia 2: 136 128 118 110 105 107 117,33

Dia 5: 125 142 114 111 137 105 122,33

Dia 7: 140 110 106 89 133 135 118,83

Dia 9: 125 153 109 108 131 125 125,17

Dia 12: 136 116 111 86 123 141 118,83

Tabla 4

Peso corporal (g): 1327 1345 1347 1354 1376 1381 Promedio

Dia 0: 22,7 15,33 18,21 16,5 13,99 15,45 17,03

Dia 2: 22,9 14,84 18,98 17,01 14,18 16,04 17,33

Dia 5: 22,61 14,89 18,2 16,61 13,79 15,72 16,97

Dia 7: 22,42 15,07 17,81 16,35 13,74 15,66 16,84

Dia 9: 22,85 15,56 17,9 16,89 14,5 16,39 17,35

Dia 12: 23,15 15,91 18,24 17,19 14,92 16,89 17,72

5 Los resultados de la Tabla 3 y 4 muestran que durante la administracion de tungstato sodico no se observan variaciones en el peso corporal ni en la glucemia en los primeros 12 dias de tratamiento, el mismo periodo durante el cual a partir del 7 dia de tratamiento ya se consigue la restablecer de la ovulacion en los ratones hembras ensayados (cf. Tabla 1).

10 Asi, los resultados de las Tablas 1 a 4 demuestran que una sal de tungsteno (VI) es un tratamiento eficaz para la recuperacion de la ovulacion y/o el aumento de la implantacion del oocito, de manera independiente de cambios en el peso corporal y cambios en el metabolismo de los carbohidratos. Asi, se demuestra que la administracion de una sal de tungsteno (VI) tal y como se define en la presente invencion o una composition que contiene 15 tal sal de tungsteno (VI) tiene un efecto directo sobre el sistema reproductor femenino y por

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lo tanto es eficaz para favorecer la fertilidad y la reproduction normal en mamlferos hembra no diabeticos.

EJEMPLO 4. ESTUDIO DE LA ADHERENCIA EMBRIONARIA EN EL ENDOMETRIO

A. Modelo

Para determinar el efecto del tungstato sodico sobre la receptividad endometrial, se utilizo un modelo de adhesion embrionaria humano-humano "in vitro”, compuesto de la llnea celular endometrial HEC1-A y la llnea celular de trofoectodermo humano JEG-3.

La llnea JEG-3, llnea celular que simula las celulas del trofoectodermo de un embrion humano, son celulas que se crecen en monocapa en el laboratorio, usando placas de baja adherencia, son capaces de formar esferoides que simulan al embrion humano; esta es una de las llneas celulares mas usadas para realizar ensayos de adhesion embrionaria in vitro

B. Metodo

Las llneas celulares se adquirieron comercialmente (American Type Culture Collection (ATCC); Rockville, MD, USA) para realizar los experimentos de adherencia embrionaria en el endometrio. Se descongelaron y expandieron durante 4 pases para disponer de suficientes celulas para realizar todos los ensayos.

Las celulas HEC1-A se plantaron en placas de 24 pocillos y cultivaron con medio de cultivo McCoy 5A, suplementado con 10% suero fetal bovino y 0,1% de antibioticos (fungizona y penicilina), hasta llegar a una confluencia del 90%. Tras alcanzar la confluencia se anadio al medio de cultivo tungstato sodico, a una concentration final de 10/iM, as! como Withaferrin A (como control, compuesto que evita la adhesion embrionaria) o medio de cultivo (datos de adhesion basal), sin ningun componente adicional, durante 24 horas.

Las celulas JEG-3 se plantaron en placas de baja adhesividad con medio de cultivo ‘Eagle’s minimal essential medium’ (EMEM), suplementado con 10% suero fetal bovino y 0,1% de antibioticos (fungizona y penicilina). 24 horas antes del ensayo de adhesion se realizo la formation de los esferoides trofoblasticos JEG-3 a partir de este cultivo. Para ello, se suspendieron en un Erlenmeyer en agitation celulas JEG-3 en el medio previamente descrito a una concentration de 6x105 celulas/6ml. Los esferoides resultantes se recogieron para el ensayo de adhesion.

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Para el ensayo de adhesion, tras 24h de cultivo de las celulas HEC-1A con con medio de cultivo anadiendo tungstato sodico, Withaferrin A o sin adicionar ningun tratamiento, se cambio el medio de cultivo por medio de cultivo fresco sin tratamientos en estudio. Se anadieron los esferoides de trofoectodermo sobre la monocapa de celulas HEC-1A, colocando de 6 a 10 esferoides por pocillo. La adhesion de los esferoides se midio a los 60 minutos, contabilizando como esferoide no adherido aquel que se encontraba flotando en el medio de cultivo y esferoide adherido el que no se encontraba flotando. El examen se realizo con un microscopio invertido (Nikon Diaphot 300; Nikon Corp., Tokyo, Japan). El ensayo se realizo por triplicado.

C. Resultados

Los resultados obtenidos estan recogidos en la tabla 5. Se observo un mayor porcentaje de adhesion embrionaria en las condiciones en las que las llneas HEC-1A fueron tratadas con el tungstato sodico frente a aquellas en las que no lo estuvo. No se observa ninguna adhesion en las celulas tratadas con el control negativo (C-) Withaferrin A.

Tabla 5

: Tasas Absolutas de Adhesion

: Expl Exp2 Exp3 Media

Adhesion Basal: 12% 48% 31% 30%

Tungstato sodico 10 pM: 31% 65% 35% 44%

Withaferrin A (C-): 0% 0% 0% 0%

COMPOSICIONES PARTICULARES DE LA INVENCION

A continuation se preparan composiciones alimentarias segun la invention, a modo ilustrativo. En ningun caso deben ser interpretadas como limitantes del alcance de la invencion.

EJEMPLO 5

Se prepara un alino de ensalada enriquecido con una sal de tungsteno. Se anade a 250 gr de un alino disponible comercialmente una cantidad de 25 mg de Na2WO4 (100 mg/kg) y se agita mecanicamente durante 30 minutos.

EJEMPLO 6

Se prepara una salsa tipo ketchup, enriquecida con una sal de tungsteno. Para ello se anaden 170 mg de Ca WO4 a 200 gr de ketchup comercialmente disponible y se agita mecanicamente durante 1 h.

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EJEMPLO 7

Se prepara leche enriquecida con una sal de tungsteno. Para ello se dispone 1kg de leche de vaca entera, se anaden 150 mg de ZnWO4 y se agita mecanicamente durante 20 minutos. Inmediatamente antes de su consumo se recomienda agitar el envase.

EJEMPLO 8

Se prepara un zumo de fruta enriquecida con una sal de tungsteno. Se anaden 500 mg de MgWO4 a 1 kg de zumo comercial y se agita mecanicamente durante 10 minutos. Inmediatamente antes de su consumo se recomienda agitar el envase.

EJEMPLO 9

Se preparan comprimidos recubiertos con la siguiente composicion:

Celulosa microcristalina PH200 (Diluyente/deslizante) 250,00 mg Sflice coloidal anhidra (Deslizante/adsorbente) 3,00 mg Estearato de magnesio (Lubrificante) 5,00 mg Talco (Lubrificante) 7,00 mg

Opadry® blanco (Opadry® y-1-7000 White)(*) (Pellcula de recubrimiento) 8,00 mg Tungstato sodico dihidratado 200,00 mg

(*) Mezcla de hidroxipropilmetilcelulosa, polietilenglicol 6000 y dioxido de titanio (E-171) EJEMPLO 10

Se preparan comprimidos efervescentes con la siguiente composicion:

Sorbitol, aspartamo, sucralosa y xilitol (edulcorantes) 0,025mg por cada 10 mg

Carbonato calcico 0,350mg por cada 10 mg

Acido cltrico (acidulante) 0,650mg por cada 10 mg

Carbonato acido de sodio (corrector de la acidez) 0,350mg por cada 10 mg

Aroma de naranja 0,25mg por cada 10 mg

Sal de tungsteno

Ejemplo 11

Se preparan capsulas de gelatina con la siguiente composicion:

Nifedipina 6 mg Goma de xantano 5 mg Sabor de naranja 0,3 mg Acido cltrico 0,4 mg Gelucire 44/14 90 mg

Celulosa microcristalina PH10 (Diluyente) 92,00 mg/capsula Tungstato sodico dihidratado 100,00 mg/capsula

Claims

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REIVINDICACIONES

1. Uso de una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma, para la preparation de una composition alimentaria para favorecer la fertilidad y la reproduction normal en un mamlfero hembra no diabetico.
2. Uso segun la reivindicacion 1, caracterizado porque la concentration total de sales de tungsteno en la composicion es igual o superior a 100 mg/kg.
3. Uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado porque el mamlfero es humano.
4. Uso segun la reivindicacion 3, caracterizado porque la administration de la composicion se realiza en una dosis diaria de entre 0,001 mg y 1000 mg de sal de tungsteno (VI) por cada kg de peso corporal del mamlfero hembra.
5. Uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la sal comprende un anion de tungsteno (VI) y un cation dieteticamente o farmaceuticamente aceptable.
6. Uso segun la reivindicacion 5, caracterizado porque el cation es un cation alcalino o alcalinoterreo.
7. Uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 5 o 6, caracterizado porque el cation se selecciona entre el grupo que consiste en sodio, potasio, magnesio , calcio y zinc.
8. Uso segun una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la sal de tungsteno (VI) es la sal sodica de tungsteno (VI).
9. Uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, caracterizado porque el anion de tungsteno (VI) se selecciona de los iones WO42-, HWO4-, W2O72- y HW2O7-.
10. Uso segun la reivindicacion 9, caracterizado porque el anion es WO42-.

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11. Uso segun una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el solvato es el dihidrato.
12. Uso segun las reivindicaciones 6 a 11, caracterizado porque el solvato de sal de tungsteno (VI) es el dihidrato y el cation es un cation sodico.
13. Uso segun una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la composition es una composition llquida o una bebida.
14. Uso segun la reivindicacion 13, caracterizado porque la composicion llquida o bebida se selecciona del grupo que consiste en leche de origen animal o vegetal as! como sus derivados, tales como batidos, yogur y kefir; zumos de frutas y/u hortalizas; agua sin gas, agua con gas y agua aromatizada o edulcorada; condimentos; bebidas alcoholicas; te; cafe; y bebidas refrescantes o refrescos.
15. Uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque la composicion es una composicion solida.
16. Uso segun la reivindicacion 15, caracterizado porque la composicion solida se selecciona entre derivados de leche de origen animal o vegetal, tales como queso, mantequilla, margarina y tofu; harinas; panes; pasta; productos de bollerla, incluyendo bizcochos y galletas; gelatinas, caramelos, gominolas; infusiones, te o cafe; condimentos.
17. Uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque la composicion alimentaria es un suplemento o complemento nutricional.
18. Uso segun la reivindicacion 17, caracterizado porque comprende al menos un excipiente o vehlculo farmaceuticamente aceptable y se presenta en forma de plldora, tableta, pastilla, capsula, polvo, oblea, polvo o comprimido efervescentes, disolucion, suspension, jarabe o granulos.
19. Uso segun una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la composicion comprende sacarosa.

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20. Uso segun una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el mamlfero femenino no diabetico se selecciona del grupo de mamlferos que necesitan restaurar y/o potenciar la ovulacion, mejorar la calidad del oocito o del embrion, aumentar la implantacion del cigoto en la pared uterina, regular una alteration del eje hipotalamico-hipofisario, incluyendo slndrome de ovario poliqulstico, slndrome metabolico, hiperprolactinemia, endometriosis, hipotiroidismo, esclerosis multiple, artritis reumatoide, lupus eritematoso, cirrosis, artritis reumatoide, celiaqula, fallo renal cronico, causas idiopaticas y desordenes alimentarios, tales como anorexia nerviosa y bulimia.
21. Una composition alimentaria, caracterizada porque comprende una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma en una concentration igual o mayor de 100 mg/kg.
22. Composicion segun la reivindicacion 21, caracterizada porque la sal comprende un anion de tungsteno (VI) y un cation dieteticamente o farmaceuticamente aceptable.
23. Composicion segun la reivindicacion 22, caracterizada porque el cation es un cation alcalino o alcalinoterreo.
24. Composicion segun una cualquiera de las reivindicaciones 22 y 23, caracterizada porque el cation se selecciona entre el grupo que consiste en sodio, potasio, magnesio y calcio y zinc.
25. Composicion segun una cualquiera de las reivindicaciones 21 a 24, caracterizada porque la sal de tungsteno (VI) es la sal sodica de tungsteno (VI).
26. Composicion segun una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 25, caracterizada porque el anion de tungsteno (VI) se selecciona de los iones WO42-, HWO4-, W2O72- y HW2O7-.
27. Composicion segun la reivindicacion 26, caracterizada porque el anion es WO42-.
28. Composicion segun una cualquiera de las reivindicaciones 21 a 27, caracterizada porque el solvato es el dihidrato.
29. Composition segun una cualquiera de las reivindicaciones 21 a 28, caracterizada porque el solvato de sal de tungsteno (VI) es el dihidrato y el cation es un cation sodico.

5 30. Composition segun una cualquiera de las reivindicaciones 21 a 29, caracterizada

porque es una composition llquida o una bebida, una composition solida o un suplemento o complemento nutricional.
31. Composition segun la revindication 30, caracterizada porque es una composition

10 llquida o una bebida segun se define en la revindication 14.
32. Composition segun la revindication 30, caracterizada porque es una composition solida segun se define en la revindication 16.

15 33. Composition segun la revindication 30, caracterizada porque la composition

alimentaria es un suplemento o complemento nutricional segun se define en la revindication 18.
34. Composition segun una cualquiera de las reivindicaciones 21 a 33, caracterizada 2 0 porque comprende sacarosa.