ES2552688T3 - Adenovirus de simio con proteínas de la cápside hexónica de SAdV-46 y usos del mismo - Google Patents
Adenovirus de simio con proteínas de la cápside hexónica de SAdV-46 y usos del mismo Download PDFInfo
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Abstract
Un adenovirus recombinante que tiene una cápside que comprende una proteína hexónica seleccionada de: una proteína hexónica que comprende los aminoácidos 1 a 959 de la SEC ID N.º: 79 (SAdV-46); una proteína hexónica que comprende un fragmento de la proteína hexónica de SAdV que consiste en la SEC ID N.º: 79 con un truncamiento N-terminal o C-terminal de 50 aminoácidos de longitud; y una proteína hexónica que comprende un fragmento de la SEC ID N.º: 79 que consiste en los residuos de aminoácidos 138 a 163, los residuos de aminoácidos 138 a 441, o los residuos de aminoácidos 125 a 443; una proteína pentónica; y una proteína de fibra; encapsidando dicha cápside una molécula heteróloga portadora de un gen unido operativamente a secuencias de control de la expresión que dirigen la transcripción, traducción y / o expresión del mismo en una célula huésped y elementos cis de adenovirus en 5' y 3' necesarios para la replicación y la encapsidación, comprendiendo dichos elementos cis una repetición terminal invertida de adenovirus en 5' y una repetición terminal invertida de adenovirus en 3'.
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Como alternativa, los vectores recombinantes de SAdV-43, -45, -46, -47, -48, -49 y -50 pueden usarse en estos procedimientos Tales vectores de simio adenovíricos recombinantes pueden incluir, por ejemplo, un Ad/AAV híbrido de simio en el que las secuencias de Ad de simio flanquean un casete de expresión de rAAV compuesto de, por ejemplo, AAV 3 ' y / o ITR en 5' y un transgén sometido al control de secuencias reguladoras que controlan su expresión. Un experto en la técnica reconocerá que todavía otros vectores adenovíricos de simio y / o las secuencias génicas de SAdV-43, -45, -46, -47, -48, -49 y -50 serán útiles para la producción de rAAV y otros virus dependientes del auxiliar adenovírico.
En todavía otra alternativa, las moléculas de ácidos nucleicos están diseñadas para la liberación y la expresión de productos génicos adenovíricos seleccionados en una célula huésped para lograr un efecto fisiológico deseado. Por ejemplo, una molécula de ácido nucleico que contiene secuencias que codifican una proteína SAdV-43, -45, -46, -47, -48, -49 o -50 E1a se puede administrar a un sujeto para su uso como una terapéutica para el cáncer. Opcionalmente, dicha molécula se formula en un vehículo a base de lípidos y preferentemente se dirige a las células cancerosas. Tal formulación se puede combinar con otras terapias contra el cáncer (por ejemplo, cisplatino, taxol, o similares). Todavía otros usos para las secuencias adenovíricas proporcionadas en el presente documento serán fácilmente evidentes para un experto en la técnica.
Además, un experto en la técnica entenderá fácilmente que las secuencias de SAdV-43, – 45, -46, -47, -48, -49 y -50 pueden adaptarse fácilmente para su uso para una diversidad de sistemas de vectores víricos y no víricos para la entrega in vitro, ex vivo o in vivo de moléculas terapéuticas e inmunógenas. Por ejemplo, las secuencias de Ad de simio SAdV-43, -45, -46, -47, -48, -49 y -50 pueden usarse en una diversidad de sistemas de vectores rAd y no-rAd. Dichos sistemas de vectores pueden incluir, por ejemplo, plásmidos, lentivirus, retrovirus, poxvirus, virus de la vacuna y sistemas víricos adenoasociados, entre otros. La selección de estos sistemas de vectores no es una limitación de la presente invención.
También se proporcionan moléculas útiles para la producción de las proteínas de simios y las proteínas derivadas de simios de la invención. Tales moléculas que portan polinucleótidos incluidas las secuencias de ADN de SAdV-43, 45, -46, -47, -48, -49 o -50 pueden estar en forma de ADN desnudo, de un plásmido, de un virus o de cualquier otro elemento genético.
B. Proteínas adenovíricas
Se describen los adenovirus SAdV-43, -45, -46, -47, -48, -49 y -50, tales como proteínas, enzimas y fragmentos de los mismos, que están codificadas por los ácidos nucleicos adenovíricos descritos en el presente documento. También son de interés las proteínas de SAdV-43, -45, -46, -47, -48, -49 y -50, enzimas y fragmentos de las mismas, que tienen las secuencias de aminoácidos codificadas por estas secuencias de ácidos nucleicos que se generan por otros procedimientos. Tales proteínas incluyen las codificadas por los marcos de lectura abiertos identificados en la tabla anterior, las proteínas en la siguiente tabla (también mostradas en el listado de secuencias) y los fragmentos de las mismas de las proteínas y polipéptidos.
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con el virus producido por los procedimientos descritos en el presente documento y / o conocidos por los expertos en la técnica. Un "elemento de control" o "secuencia de control" es una secuencia de nucleótidos implicada en una interacción de moléculas que contribuye a la regulación funcional de un polinucleótido, incluyendo replicación, duplicación, transcripción, corte y empalme, traducción o degradación del polinucleótido. La regulación puede afectar a la frecuencia, la velocidad o la especificidad del proceso y puede ser de naturaleza potenciadora o inhibidora. Los elementos de control se conocen en la técnica y ejemplos de algunos se discuten en otra parte en esta memoria descriptiva. Como se usa en el presente documento, secuencias “operativamente unidas” incluyen tanto secuencias de control de la expresión que son contiguas al gen de interés como secuencias de control de la expresión que actúan en trans o a una distancia para controlar el gen de interés.
Las secuencias de control de la expresión incluyen secuencias adecuadas de iniciación, terminación, promotoras y potenciadoras de la transcripción; señales eficientes del procesamiento de ARN, tales como señales de corte y empalme y de poliadenilación (poli A); secuencias que estabilizan el ARNm citoplasmático; secuencias que potencian la eficiencia de la traducción (es decir, secuencia consenso de Kozak); secuencias que potencian la estabilidad proteica; y cuando se desee, secuencias que potencian la secreción del producto codificado.
En la técnica se conoce un gran número de secuencias de control de la expresión, incluyendo promotores que son nativos, constitutivos, inducibles y / o específicos de tejido y pueden usarse. Los ejemplos de promotores constitutivos incluyen, sin limitaciones, el virus retrovírico del sarcoma de Rous (VSR), el promotor LTR (opcionalmente con el potenciador del VSR), el promotor del citomegalovirus (CMV) (opcionalmente con el potenciador del CMV) [véase, por ejemplo, Boshart et al., Cell , 41: 521 a 530 (1985)], el promotor del SV40, el promotor de la dihidrofolato reductasa, el promotor de la β-actina, el promotor de la fosfoglicerol cinasa (PGK) y el promotor de EF1α [Invitrogen].
Los promotores inducibles permiten la regulación de la expresión génica y pueden estar regulados por compuestos suministrados de forma exógena, factores ambientales tales como la temperatura, o la presencia de un estado fisiológico específico, por ejemplo, fase aguda, un estado de diferenciación particular de la célula, o solo en las células en replicación. Los promotores inducibles y los sistemas inducibles están disponibles a partir de diversas fuentes comerciales, incluyendo, sin limitaciones, Invitrogen, Clontech y Ariad. Se han descrito muchos otros sistemas y un experto en la técnica los puede seleccionar fácilmente. Por ejemplo, los promotores inducibles incluyen el promotor de la metalotionina de oveja (MT) inducible con cinc y el promotor del virus del tumor mamario de ratón (MMTV) inducible por dexametasona (Dex). Otros sistemas inducibles incluyen el sistema del promotor de la polimerasa de T7 [documento WO 98/10088]; el promotor de ecdisona de insectos [No et al., Proc. Natl. Acad. Sci. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 93: 3346 hasta 3351 (1996)], el sistema reprimible por tetraciclina [Gossen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 89: 5.547 a 5.551 (1992)], el sistema inducible por tetraciclina [Gossen et al., Science, 268: 1766 hasta 1769 (1995), véase también Harvey et al., Opin. Chem. Biol., 2:512-518 (1998)]. Otros sistemas incluyen el dímero FK506, VP16 o p65 usando castradiol, difenol murislerona, el sistema inducible por RU486 [Wang et al., Nat. Biotech., 15:239-243 (1997) y Wang et al., Gene Ther., 4:432-441 (1997)] y el sistema inducible por rapamicina [Magari et al., J. Clin. Invest., 100:2865-2872 (1997)]. La eficacia de algunos promotores inducibles aumenta a lo largo del tiempo. En tales casos se puede potenciar la eficacia de tales sistemas insertando varios represores en tándem, por ejemplo, TetR unido a un TetR a través de un IRES. Como alternativa, se puede esperar al menos 3 días antes de rastrear la función deseada. Alguien puede potenciar la expresión de las proteínas deseadas por medios conocidos para potenciar eficacia de este sistema. Por ejemplo, utilizando el elemento regulador postranscripcional del virus de la hepatitis de la marmota (WPRE).
En otra realización, se utilizará el promotor nativo para el transgén. Puede preferirse el promotor nativo cuando se desea que la expresión del transgén imite la expresión nativa. El promotor nativo se puede utilizar cuando la expresión del transgén debe regularse temporalmente o en términos de desarrollo, o de una manera específica de tejido, o en respuesta a estímulos transcripcionales específicos. En una realización adicional, también se pueden usar otros elementos de control de la expresión nativos, tales como elementos potenciadores, sitios de poliadenilación o secuencias de consenso Kozak, para imitar la expresión nativa.
Otra realización del transgén incluye un transgén unido operativamente a un promotor específico de tejido. Por ejemplo, si se desea la expresión en el músculo esquelético, debe usarse un promotor activo en el músculo. Estos incluyen los promotores de genes que codifican la β-actina esquelética, la cadena ligera de la miosina 2A, la distrofina, la creatina cinasa muscular, así como promotores musculares sintéticos con actividades superiores a las de los promotores de origen natural (véase Li et al., Nat. Biotech., 17:241-245 (1999)). Se conocen ejemplos de promotores que son específicos de tejido para hígado (albúmina, Miyatake et al., J. Virol., 71:5124-32 (1997); el promotor del núcleo del virus de la hepatitis B, Sandig et al., Gene Ther., 3:1002-9 (1996); alfa-fetoproteína (AFP), Arbuthnot et al., Hum. Gene Ther., 7:1503-14 (1996)), osteocalcina ósea (Stein et al., Mol. Biol. Rep., 24:185-96 (1997)); sialoproteína ósea (Chen et al., J. Bone Miner. Res., 11:654-64 (1996)), linfocitos (CD2, Hansal et al., J. Immunol., 161:1063-8 (1998); cadena pesada de la inmunoglobulina; cadena del receptor de linfocitos T), neuronales tales como el promotor de la enolasa específica de neuronas (NSE) (Andersen et al., Mol. Neurobiol., 13:503-15 (1993)), gen de la cadena ligera del neurofilamento (Piccioli et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 88:5611-5 (1991)) y el gen vgf específico de neuronas (Piccioli et al., Neuron, 15:373-84 (1995)), entre otros.
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defectivo en la replicación y contiene diversos genes de adenovirus además de las secuencias descritas anteriormente. Tal virus auxiliar se utiliza deseablemente en combinación con una línea celular que expresa E1.
Los virus auxiliares también se pueden formar en los conjugados poli-catiónicos como se describe en Wu et al., J. Biol. Chem., 264:16985-16987 (1989); K. J. Fisher y J. M. Wilson, Biochem. J., 299:49 (abril 1, 1994). Los virus auxiliares pueden contener opcionalmente un segundo minigén indicador. En la técnica se conoce una serie de tales genes indicadores. La presencia de un gen indicador en el virus auxiliar que es diferente del transgén en el vector de adenovirus permite controlar de forma independiente tanto el vector Ad como el virus auxiliar. Este segundo indicador se utiliza para permitir la separación entre el virus recombinante resultante y el virus auxiliar tras la purificación.
2. Líneas celulares de complementación
Para generar adenovirus recombinantes de simio (Ad) con deleción de cualquiera de los genes descritos anteriormente, la función de la región del gen delecionado, si es esencial para la replicación y la infectividad del virus, debe proporcionarse al virus recombinante a través de un virus auxiliar o una línea celular , es decir, una línea celular de complementación o empaquetamiento. En muchas circunstancias, una línea celular que expresa el E1 humano puede usarse para transcomplementar el vector Ad de simio. Esto es particularmente ventajoso porque, debido a la diversidad entre las secuencias de SAdV-43, -45, -46, -47, – 48, -49 y -50 y las secuencias de AdE1 humano que se encuentran en las células de empaquetamiento actualmente disponibles, el uso de células que contienen E1 humanas actuales impide la generación de adenovirus competentes para la replicación durante la replicación y el proceso de producción. Sin embargo, en ciertas circunstancias, será deseable utilizar una línea celular que exprese los productos génicos de E1 para la producción de un adenovirus de simio con deleción de E1. Tales líneas celulares se han descrito. Véase, por ejemplo, la patente de EE.UU. N.º: 6.083.716.
Si se desea, se pueden utilizar las secuencias proporcionadas en el presente documento para generar una línea celular o célula de empaquetamiento que exprese, como mínimo, el gen de adenovirus E1 de SAdV-43, -45, -46, -47, -48, -49 o -50 sometido al control transcripcional de un promotor para la expresión en una línea celular parental seleccionada. Los promotores inducibles o constitutivos se pueden usar para este fin. Ejemplos de tales promotores se describen con detalle en otra parte en esta memoria descriptiva. Se selecciona una célula padre para la generación de una línea celular novedosa que expresa cualquier gen de SAdV-43, -45, -46, -47, -48, -49 o -50 deseado. Sin limitación, tal línea celular parental puede ser células HeLa [N.º de acceso en ATCC: CCL 2], A549 [N.º de acceso en ATCC: CCL 185], HEK 293, KB [CCL 17], Detroit [por ejemplo, Detroit 510, CCL 72] y WI-38 [75] CCL, entre otras. Estas líneas celulares están todas disponibles en la Colección Americana de Cultivos Tipo, 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110-2209. Otras líneas celulares parentales adecuadas pueden obtenerse de otras fuentes.
Tales líneas celulares que expresan E1 son útiles en la generación de vectores delecionados de adenovirus de simio recombinantes E1. Adicionalmente, o como alternativa, las líneas celulares que expresan uno o más productos génicos adenovíricos de simio, por ejemplo, E1a, E1b, E2a, y / o E4 ORF6, se pueden construir usando esencialmente los mismos procedimientos que se usan en la generación de vectores víricos de simio recombinantes. Tales líneas celulares pueden usarse para transcomplementar vectores de adenovirus delecionados en los genes esenciales que codifican esos productos, o para proporcionar funciones auxiliares necesarias para el empaquetamiento de un virus dependiente de auxiliar (por ejemplo, virus adenoasociado). La preparación de una célula huésped implica técnicas tales como el ensamblaje de secuencias de ADN seleccionadas. Este ensamblaje puede llevarse a cabo utilizando técnicas convencionales. Tales técnicas incluyen ADNc y clonación genómica, que se conocen bien y se describen en Sambrook et al., citado anteriormente, el uso de secuencias de oligonucleótidos solapantes de los genomas de adenovirus, en combinación con la reacción en cadena de la polimerasa, procedimientos sintéticos y cualesquiera otros procedimientos adecuados que proporcionen la secuencia de nucleótidos deseada.
En todavía otra alternativa, los productos génicos adenovíricos esenciales se proporcionan en trans mediante el vector adenovírico y / o virus auxiliar. En tal caso, se puede seleccionar una célula huésped adecuada de cualquier organismo biológico, incluyendo células procariotas (por ejemplo, bacterianas) y células eucariotas, incluyendo células de insecto, células de levadura y células de mamíferos. Las células huésped particularmente deseables se seleccionan de entre cualquier especie de mamífero, incluyendo, sin limitación, células tales como células A549, WEHI, 3T3, 10T1 / 2, HEK 293 o PERC6 (de las que todas ellas expresan E1 adenovírico funcional) [Fallaux, FJ et al., (1998), Hum Gene Ther, 9:1909-1917], células Saos, C2C12, L , HT1080, HepG2 y fibroblastos primarios, hepatocitos y mioblastos derivados de mamíferos, incluyendo ser humano, mono, ratón, rata, conejo y hámster. La selección de las especies de mamíferos que proporcionan las células no es una limitación de esta invención; ni lo es el tipo de célula de mamífero, es decir, fibroblastos, hepatocitos, células tumorales, etc.
3. Ensamblaje de partículas víricas y transfección de una línea celular
Generalmente, cuando se proporciona el vector que comprende el minigén mediante transfección, el vector se libera en una cantidad de aproximadamente 5 g a aproximadamente 100 g de ADN,y preferentemente de
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una diversidad de moduladores inmunitarios útiles y dosificaciones para el uso de los mismos, por ejemplo en Yang et al., J. Virol, 70 (9) (sept., 1996); solicitud de patente Internacional N.º: WO96 / 12406, publicada el 2 de mayo de 1996; y solicitud de patente internacional N.º: PCT / US96 / 03035.
1. Transgenes terapéuticos
Productos terapéuticos útiles codificados por el transgén incluyen hormonas y factores de crecimiento y diferenciación, incluyendo, sin limitaciones, insulina, glucagón, hormona de crecimiento (GH), hormona paratiroidea (PTH), factor de liberación de la hormona de crecimiento (GRF), hormona estimulante del folículo (FSH), hormona luteinizante (LH), gonadotropina coriónica humana (hCG), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), angiopoyetinas, angiostatina, factor estimulante de colonias de granulocitos (GCSF), eritropoyetina (EPO), factor de crecimiento del tejido conjuntivo (CTGF), factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF), factor de crecimiento de fibroblastos ácido (aFGF), factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor transformante de crecimiento (TGF), factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), factores de crecimiento de insulina I y II (IGF-I e IGF-II), uno cualquiera de la superfamilia del factor de crecimiento transformante, incluyendo TGF, activinas, inhibinas, o cualquiera de las proteínas morfogenéticas óseas (BMP) BMP 1-15, una cualquiera de la familia de diferenciación de heregluina/neu-regulina/ARIA/ neu (NDF) de factores de crecimiento, factor de crecimiento neural (NGF), factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF), neurotrofinas NT-3 y NT-4/5, factor neurotrófico ciliar (CNTF), factor neurotrófico derivado de la línea de células gliales (GDNF), neurturina, agrina, una cualquiera de la familia de semaforinas/colapsinas, netrina-1 y netrina-2, factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), efrinas, noggin, erizo sonic y tirosina hidroxilasa.
Otros productos transgénicos útiles incluyen proteínas que regulan el sistema inmunitario, incluyendo, sin limitación, citocinas y linfocinas tales como trombopoyetina (TPO), interleucinas (IL) IL-1 a IL-25 (incluyendo, por ejemplo, IL-2, IL-4, factor de células IL-12 e IL-18), proteína quimiotáctica de monocitos, factor inhibidor de leucemia, factor estimulante de las colonias de granulocitos y macrófagos, ligando Fas, factores de necrosis tumoral e interferones y factor de células madres, ligando flk-2 / flt3. Los productos génicos producidos por el sistema inmunitario también son útiles. Estos incluyen, sin limitación, inmunoglobulinas IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, inmunoglobulinas quiméricas, anticuerpos humanizados, anticuerpos de cadena única, receptores de linfocitos T, receptores de linfocitos T quiméricos, receptores de linfocitos T de cadena única, moléculas del MHC de clase I y clase II, así como inmunoglobulinas y moléculas MHC modificadas por ingeniería. Los productos génicos útiles incluyen también proteínas reguladoras del complemento, tales como proteínas reguladoras del complemento, proteína cofactor de membrana (MCP), factor acelerador del deterioro (DAF), CR1, CF2 y CD59.
Todavía otros productos génicos útiles incluyen uno cualquiera de los receptores para las hormonas, factores de crecimiento, citocinas, linfocinas, proteínas reguladoras y proteínas del sistema inmunitario. En el presente documento también se abarcan receptores para la regulación del colesterol, incluyendo el receptor de las lipoproteínas de baja densidad (LDL), el receptor de las lipoproteínas de alta densidad (HDL), el receptor de las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y el receptor de secuestrantes. También se contemplan los productos génicos tales como los miembros de la superfamilia de receptores de hormonas esteroideas, incluyendo los receptores de glucocorticoides y los receptores de estrógenos, los receptores de vitamina D y otros receptores nucleares. Además, los productos génicos útiles incluyen factores de transcripción tales como jun, fos, max, mad, factor de respuesta sérica (SRF), AP-1, AP2, myb, MyoD y miogenina, proteínas que contienen la caja ETS, TFE3, E2F, ATF1, ATF2, ATF3, ATF4, ZF5, NFAT, CREB, HNF-4, C/EBP, SP1, proteínas que contienen la caja CCAAT, factor de regulación de interferón (IRF-1), proteína del tumor de Wilms, proteína de unión a ETS, STAT, proteínas de unión a la caja GATA, por ejemplo, GATA-3 y la familia forkhead de las proteínas de hélice alada.
Otros productos génicos útiles incluyen, carbamoil sintetasa I, ornitina transcarbamilasa, arginosuccinato sintetasa, argininosuccinato liasa, arginasa, fumarilacetacetato hidrolasa, fenilalanina hidroxilasa, alfa-1 antitripsina, glucosa-6fosfatasa, porfobilinógeno desaminasa, factor VIII, factor IX, cistationina beta-sintasa, cetoácido descarboxilasa de cadena ramificada, albúmina, isovaleril-CoA deshidrogenasa, CoA carboxilasa propionilo, metilmalonil CoA mutasa, glutaril CoA deshidrogenasa, insulina, beta-glucosidasa, carboxilato piruvato, fosforilasa hepática, fosforilasa cinasa, glicina descarboxilasa, proteína H, proteína T, una secuencia reguladora transmembrana de la fibrosis quística (CFTR) y una secuencia de ADNc de la distrofina.
Otros productos génicos útiles incluyen polipéptidos de origen no natural, tales como polipéptidos quiméricos o híbridos que tienen una secuencia de aminoácidos de origen no natural que contiene inserciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos. Por ejemplo, las inmunoglobulinas de cadena única modificadas por ingeniería podrían ser útiles en ciertos pacientes inmunocomprometidos. Otros tipos de secuencias génicas de origen no natural incluyen moléculas antisentido y ácidos nucleicos catalíticos, tales como ribozimas, que podrían usarse para reducir la sobreexpresión de un objetivo.
La reducción y / o modulación de la expresión de un gen son particularmente deseables para el tratamiento de afecciones hiperproliferativas caracterizadas por células hiperproliferantes, como son los cánceres y la psoriasis. Los polipéptidos diana incluyen aquellos polipéptidos que se producen exclusivamente o a niveles más altos en las
24
Perfiles de citocinas -pulmón
- % de células T CD8 + secretoras de citocinas (~ +/-0,5)
- HAdV-5 SAdV-46
- Total
- 25 30
- IFNγ+ TNFα-IL2
- 7,5 15
- IFNγ+ TNFα+ IL2
- 17 14,5
- IFNγ+ TNFα+ IL2+
- 0,5 0,5
Los resultados para SAdV-45 no mostraron ninguna respuesta inmune. Sin embargo, se creía que esto estaba 5 asociado con la producción de vectores, que se repite.
Numerosas modificaciones y variaciones están incluidas en el alcance de la memoria descriptiva identificada anteriormente y se espera que sean obvias para un experto en la técnica. Tales modificaciones y alteraciones, tales como selecciones de diferentes minigenes o la selección de los vectores o moduladores inmunes se cree que están
10 dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas a este efecto.
Texto libre de listado de secuencias
La siguiente información se proporciona para las secuencias que contienen texto libre con el identificador numérico 15 <223>.
- SEC ID N.º: (que contiene texto libre)
- Texto libre en <223>
- 1
- Adenovirus de simio de tipo 43
- 2
- Construcción sintética
- 3
- Construcción sintética
- 4
- Construcción sintética
- 5
- Construcción sintética
- 6
- Construcción sintética
- 7
- Construcción sintética
- 8
- Construcción sintética
- 9
- Construcción sintética
- 10
- Construcción sintética
- 11
- Construcción sintética
- 12
- Construcción sintética
- 13
- Construcción sintética
- 14
- Construcción sintética
- 15
- Construcción sintética
- 16
- Construcción sintética
- 17
- Construcción sintética
- 18
- Construcción sintética
- 19
- Construcción sintética
- 20
- Construcción sintética
- 21
- Construcción sintética
- 22
- Construcción sintética
- 23
- Construcción sintética
- 24
- Construcción sintética
- 25
- Construcción sintética
- 26
- Construcción sintética
- 27
- Construcción sintética
- 28
- Construcción sintética
- 29
- Construcción sintética
- 30
- Adenovirus de simio de tipo 43
- 31
- Construcción sintética
- 32
- Cebador basado en adenovirus de simio
- 33
- Cebador basado en adenovirus de simio
- 34
- Cebador basado en adenovirus de simio
- 35
- Cebador basado en adenovirus de simio
34
(continuación)
- SEC ID N.º: (que contiene texto libre)
- Texto libre en <223>
- 36
- Cebador basado en adenovirus de simio
- 37
- Cebador basado en adenovirus de simio
- 38
- Adenovirus de simio de tipo 45
- 39
- Construcción sintética
- 40
- Construcción sintética
- 41
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- 42
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- 44
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- 45
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- 46
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- Construcción sintética
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- 49
- Construcción sintética
- 50
- Construcción sintética
- 51
- Construcción sintética
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- Construcción sintética
- 53
- Construcción sintética
- 54
- Construcción sintética
- 55
- Construcción sintética
- 56
- Construcción sintética
- 57
- Construcción sintética
- 58
- Construcción sintética
- 59
- Construcción sintética
- 60
- Adenovirus de simio de tipo 45
- 61
- Construcción sintética
- 62
- Construcción sintética
- 63
- Construcción sintética
- 64
- Construcción sintética
- 65
- Adenovirus de simio de tipo 45
- 66
- Construcción sintética
- 67
- Adenovirus de simio de tipo 45
- 68
- Construcción sintética
- 69
- Adenovirus de simio de tipo 46
- 70
- Construcción sintética
- 71
- Construcción sintética
- 72
- Construcción sintética
- 73
- Construcción sintética
- 74
- Construcción sintética
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- Construcción sintética
- 76
- Construcción sintética
- 77
- Construcción sintética
- 78
- Construcción sintética
- 79
- Construcción sintética
- 80
- Construcción sintética
- 81
- Construcción sintética
- 82
- Construcción sintética
- 83
- Construcción sintética
- 84
- Construcción sintética
- 85
- Construcción sintética
- 86
- Construcción sintética
- 87
- Construcción sintética
- 88
- Construcción sintética
- 89
- Construcción sintética
- 90
- Adenovirus de simio de tipo 46
- 91
- Construcción sintética
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(continuación)
- SEC ID N.º: (que contiene texto libre)
- Texto libre en <223>
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- Construcción sintética
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- Construcción sintética
- 94
- Construcción sintética
- 95
- Adenovirus de simio de tipo 46
- 96
- Construcción sintética
- 97
- Adenovirus de simio de tipo 46
- 98
- Construcción sintética
- 99
- Adenovirus de simio de tipo 47
- 100
- Construcción sintética
- 101
- Construcción sintética
- 102
- Construcción sintética
- 103
- Construcción sintética
- 104
- Construcción sintética
- 105
- Construcción sintética
- 106
- Construcción sintética
- 107
- Construcción sintética
- 108
- Construcción sintética
- 109
- Construcción sintética
- 110
- Construcción sintética
- 111
- Construcción sintética
- 112
- Construcción sintética
- 113
- Construcción sintética
- 114
- Construcción sintética
- 115
- Construcción sintética
- 116
- Construcción sintética
- 117
- Construcción sintética
- 118
- Construcción sintética
- 119
- Construcción sintética
- 120
- Adenovirus de simio de tipo 47
- 121
- Construcción sintética
- 122
- Construcción sintética
- 123
- Construcción sintética
- 124
- Construcción sintética
- 125
- Adenovirus de simio de tipo 47
- 126
- Construcción sintética
- 127
- Adenovirus de simio de tipo 47
- 128
- Construcción sintética
- 129
- Adenovirus de simio de tipo 48
- 130
- Construcción sintética
- 131
- Construcción sintética
- 132
- Construcción sintética
- 133
- Construcción sintética
- 134
- Construcción sintética
- 135
- Construcción sintética
- 136
- Construcción sintética
- 137
- Construcción sintética
- 138
- Construcción sintética
- 139
- Construcción sintética
- 140
- Construcción sintética
- 141
- Construcción sintética
- 142
- Construcción sintética
- 143
- Construcción sintética
- 144
- Construcción sintética
- 145
- Construcción sintética
- 146
- Construcción sintética
- 147
- Construcción sintética
- 148
- Adenovirus de simio de tipo 48
- 149
- Construcción sintética
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(continuación)
- SEC ID N.º: (que contiene texto libre)
- Texto libre en <223>
- 150
- Construcción sintética
- 151
- Construcción sintética
- 152
- Construcción sintética
- 153
- Adenovirus de simio de tipo 48
- 154
- Construcción sintética
- 155
- Adenovirus de simio de tipo 48
- 156
- Construcción sintética
- 157
- Adenovirus de simio de tipo 49
- 158
- Construcción sintética
- 159
- Construcción sintética
- 160
- Construcción sintética
- 161
- Construcción sintética
- 162
- Construcción sintética
- 163
- Construcción sintética
- 164
- Construcción sintética
- 165
- Construcción sintética
- 166
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- 167
- Construcción sintética
- 168
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- 169
- Construcción sintética
- 170
- Construcción sintética
- 171
- Construcción sintética
- 172
- Construcción sintética
- 173
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- 174
- Construcción sintética
- 175
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- 176
- Adenovirus de simio de tipo 49
- 177
- Construcción sintética
- 178
- Construcción sintética
- 179
- Construcción sintética
- 180
- Construcción sintética
- 181
- Adenovirus de simio de tipo 49
- 182
- Construcción sintética
- 183
- Adenovirus de simio de tipo 50
- 184
- Construcción sintética
- 185
- Construcción sintética
- 186
- Construcción sintética
- 187
- Construcción sintética
- 188
- Construcción sintética
- 189
- Construcción sintética
- 190
- Construcción sintética
- 191
- Construcción sintética
- 192
- Construcción sintética
- 193
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- 194
- Construcción sintética
- 195
- Construcción sintética
- 196
- Construcción sintética
- 197
- Construcción sintética
- 198
- Construcción sintética
- 199
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- 200
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- 201
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- Adenovirus de simio de tipo 50
- 203
- Construcción sintética
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- Construcción sintética
- 205
- Construcción sintética
- 206
- Construcción sintética
- 207
- Adenovirus de simio de tipo 50
37
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-
imagen1
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