ES2554775T3 - Péptido WT1 restringido a HLA-A*1101 y composiciones farmacéuticas que comprenden el mismo - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento o prevención de un cáncer en un sujeto positivo a HLA-A*1101, que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos (1) o (2): (1) una secuencia de aminoácidos de Pro Ile Leu Cys Gly Ala Gln Tyr Arg (SEC ID Nº 5), (2) una secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº 5, en la que se sustituye un aminoácido con otro aminoácido, donde el péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos (2) tiene la capacidad de unirse a una molécula de HLA-A*1101, y tiene la capacidad de inducir un CTL.

Description

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prevención de un cáncer, que comprende el polinucleótido o el vector de expresión. La composición, método de administración y similares de la composición de la presente invención en esta aspecto se ha descrito anteriormente.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento o prevención de un cáncer que

5 comprende la administración de una cantidad eficaz del polinucleótido o el vector de expresión a un sujeto positivo a HLA-A*1101. Ejemplos de cánceres que se van a tratar o prevenir incluyen tumores hematopoyéticos tales como leucemia, síndrome mielodisplásico, mieloma múltiple o linfoma maligno y en cánceres sólidos tales como cáncer gástrico, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de células germinales, cáncer hepático, cáncer de piel, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer uterino, cáncer de cuello uterino o cáncer ovárico.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una célula que comprende el vector de expresión. La célula de la presente invención se puede preparar, por ejemplo, transformando una célula huésped tal como E. coli, levaduras, células de insecto, o células animales con el vector de expresión. El método para la introducción del vector de expresión en una célula huésped se puede seleccionar adecuadamente de entre varios métodos. Cultivando la

15 célula transformada, y recuperando y purificando el péptido WT1 producido, se puede preparar el péptido de la presente invención.

En un aspecto más, la presente invención se refiere a un CTL específico de WT1, que se induce por el péptido WT1 restringido a HLA-A*1101 y/o el dímero peptídico WT1. El CTL de la presente invención reconoce un complejo de un péptido WT1 y una molécula de HLA-A*1101. Por lo tanto, el CTL de la presente invención se puede utilizar para dañar específicamente una célula tumoral positiva a HLA-A*1101 y que expresa WT1 a un alto nivel.

En otro aspecto la presente invención se refiere a un método para el tratamiento o prevención de un cáncer, que comprende la administración de un CTL específico de WT1 a un sujeto positivo a HLA-A*1101. El método de

25 administración del CTL específico de WT1 se puede seleccionar adecuadamente dependiendo de condiciones tales como el tipo de enfermedad, el estado del sujeto o el sitio diana. Ejemplos de tales métodos incluyen, pero no se limitan a, administración intravenosa, administración intradérmica, administración subcutánea, administración intramuscular, administración nasal y administración oral.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para la inducción de un CTL específico de WT1, que comprende el cultivo de una célula mononuclear de sangre periférica en presencia del péptido WT1 restringido a HLA-A*1101 y/o el dímero peptídico WT1 para inducir el CTL específico de WT1 a partir de la célula mononuclear de la sangre periférica. El sujeto a partir del que se deriva la célula mononuclear de sangre periférica puede ser uno cualquiera siempre que sea positivo a HLA-A*1101. Cultivando las células mononucleares de sangre periférica en

35 presencia del péptido WT1 restringido a HLA-A*1101 y/o el dímero peptídico WT1, se inducen los CTL específicos de WT1 a partir de células precursoras de CTL contenidas en las células mononucleares de sangre periférica. Es posible tratar o prevenir tumores hematopoyéticos o cánceres sólidos en un sujeto positivo a HLA-A*1101 administrando el CTL específico de WT1 obtenido de acuerdo con la presente invención al sujeto.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un kit para la inducción de un CTL específico de WT1, que comprende un péptido WT1 restringido a HLA-A*1101 y/o el dímero peptídico WT1 como un componente esencial. Preferentemente, el kit se utiliza en el método para la inducción de un CTL específico de WT1. El kit de la presente invención puede comprender además del péptido WT1 restringido a HLA-A*1101 y/o el dímero peptídico WT1, por ejemplo, un medio para obtener una célula mononuclear de sangre periférica, un adyuvante, un matraz de reacción

45 o similares. En general se adjunta un manual de instrucciones al kit. Utilizando el kit de la presente invención, se pueden inducir eficazmente CTL específicos de WT1.

En un aspecto más la presente invención se refiere a una célula presentadora de antígeno (tal como una célula dendrítica) que presenta un péptido WT1 por medio de una molécula HLA-A*1101, que es inducida por el péptido restringido a HLA-A*1101 y/o el dímero peptídico. Utilizando la célula presentadora de antígeno de la presente invención, se inducen CTL específicos de WT1 eficazmente.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento o prevención de un cáncer, que comprende la administración de células presentadoras de antígeno que presentan un péptido WT1 por medio de una

55 molécula de HLA-A*1101 a un sujeto positivo a HLA-A*1101. El método de administración de la célula presentadora de antígeno se puede seleccionar adecuadamente de condiciones tal como el tipo de enfermedad, el estado del sujeto o el sitio diana. Ejemplos de tales métodos incluyen, pero no se limitan, la administración intravenosa, administración intradérmica, administración intradérmica, administración subcutánea, administración intramuscular, administración nasal y administración oral.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para la inducción de una célula presentadora de antígeno que presenta un péptido WT1 por medio de una molécula de HLA-A*1101, que comprende el cultivo de una célula presentadora de antígeno inmadura en presencia del péptido WT1 restringido a HLA-A*1101 y/o el dímero peptídico WT1 para inducir la célula presentadora de antígeno que presenta un péptido WT1 por medio de una 65 molécula de HLA-A*1101 a partir de la célula presentadora de antígeno inmadura. La célula presentadora de antígeno inmadura se refiere a una célula tal como una célula dendrítica inmadura que puede madurar en una célula

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presentadora de antígeno. Un sujeto del que se deriva la célula presentadora de antígeno inmadura puede ser uno cualquiera siempre que sea positivo a HLA-A*1101. Debido a que las células presentadoras de antígeno inmaduras están contenidas, por ejemplo, en células mononucleares de sangre periférica, tales células se pueden cultivar en presencia del péptido WT1 y/o el dímero peptídico WT1.

5 En otro aspecto, la presente invención se refiere a un kit para la inducción de una célula presentadora de antígeno que presenta un péptido WT1 por medio de una molécula de HLA-A*1101, que comprende el péptido WT1 restringido a HLA-A*1101 y/o el dímero peptídico WT1 como componente esencial. Preferentemente, el kit se utiliza en el método para la inducción de una célula presentadora de antígeno. Otro componente que va a estar contenido

10 en el kit de la presente invención y similares se han descrito anteriormente. El kit de la presente invención se puede utilizar para inducir eficazmente una célula presentadora de antígeno que presenta un péptido WT1 por medio de una molécula de HLA-A*1101.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un anticuerpo contra un péptido restringido a HLA-A*1101 o un

15 polinucleótido que codifica el péptido. El anticuerpo de la presente invención puede ser un anticuerpo policlonal o un anticuerpo monoclonal.

En un aspecto más, la presente invención se refiere a un método para el diagnóstico de un cáncer, que comprende el uso de CTL específicos de WT1, la célula presentadora de antígeno que presenta un péptido WT1 por medio de

20 una molécula de HLA-A*1101, o el anticuerpo contra el péptido WT1 restringido a HLA-A*1101 o un polinucleótido que codifica el péptido. Preferentemente ese utiliza el CTL específico de WT1 en el método para el diagnóstico de la presente invención. Por ejemplo, es posible diagnosticar un cáncer incubando el CTL, la célula presentadora de antígeno o el anticuerpo con una muestra de un sujeto positivo a HLA-A*1101 o administrándolo a un sujeto positivo a HLA-A*1101, y determinando, por ejemplo, la posición, sitio o cantidad del mismo. El CTL, la célula presentadora

25 de antígeno o el anticuerpo pueden estar marcados. Uniendo un marcador, el método para el diagnóstico de la presente invención se puede practicar eficazmente.

Ejemplos

30 Los siguientes ejemplos ilustran la presente invención en más detalle, pero no se conciben para limitar el ámbito de la misma.

Ejemplo 1: Selección del péptido WT1

35 Se utilizó el RANKPEP (http://bio.dfci.harvard.edu/Tools/rankpep.html) para seleccionar los WT1251, WT1279, WT1312, WT1313, WT1338, WT1378, WT1386, WT1415 y WT1436 que tienen una alta capacidad para unirse a una molécula de HLA-A*1101 derivados de los péptidos de una proteína WT1 (SEC ID Nº 1). Las secuencias de aminoácidos, el número de aminoácidos de la SEC ID Nº 1 y los valores de la afinidad con una molécula de HLA-A*1101 de estos péptidos se muestran en la Tabla 1.

40 [Tabla 1]

Péptido Número de Secuencia de Valor de la aminoácidos aminoácidos afinidad WT1251 (SEC ID Nº 2) 251-259 AAGSSSSVK 15,18 WT1279 (SEC ID Nº 3) 279-287 PILCGAQYR 11,47 WT1312 (SEC ID Nº 4) 312-320 RSASETSEK 14,96 MT1313 (SEC ID Nº 5) 313-321 SASETSEKR 6,87 WT1338 (SEC ID Nº 6) 338-346 SHLQMHSRK 13,72 WT1378 (SEC ID Nº 7) 378-386 TGVKPFQCK 11,33 WT1386 (SEC ID Nº 8) 386-394 KTCQRKFSR 13,82 WT1415 (SEC ID Nº 9) 415-423 SCRWPSCQK 10,29 WT1436 (SEC ID Nº 10) 436-444 NMHQRNMTK 14,19

Preparación de células B-LCL

45 Se separaron las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) por el método de centrifugación en gradiente de densidad Ficoll-Hypaque de la sangre periférica que se habían recolectados de donantes sanos positivos a HLAA*1101. Las PBMC se sembraron entonces en placas de cultivo celular de 24 pocillos a una densidad de aproximadamente 1 x 107 en medio RPMI 1640 que contenía un 10% de FCS, y se añadieron los sobrenadantes del

50 cultivo de células B95-8 (células que producen el virus EB). Se cultivaron a 37 ºC con un 5% de CO2 durante aproximadamente un mes. Se obtuvieron células B-LCL transformadas con el virus EB, que son células B de células tumorales. Se confirmó que las células B-LCL resultantes no expresaban el gen WT1. Se pulsaron las células B-LCL

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