ES2561081T3 - Anticuerpo que contiene IgG2 que presenta una mutación de aminoácido introducida en el mismo - Google Patents

Anticuerpo que contiene IgG2 que presenta una mutación de aminoácido introducida en el mismo Download PDF

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Abstract

Anticuerpo monoclonal que comprende la región constante de cadena pesada representada por SEC ID nº:30, presenta una actividad agonista, y se une a CD40 humano, en el que el anticuerpo monoclonal comprende una región variable de cadena pesada que comprende CDR1, CDR2 y CDR3 representadas por SEC ID nº: 6, 8 y 10, respectivamente, y la región variable de cadena ligera que comprende CDR1, CDR2 y CDR3 representadas por SEC ID nº:16, 18 y 20, respectivamente.

Description

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Japonesa Publicada Sin Examinar nº 299/88), y similar.
Se puede usar cualquier método de introducción del vector recombinante, en tanto que sea un método para introducir ADN en una célula de animal, y los ejemplos incluyen electroporación [Cytotechnology, 3, 133 (1990)], el método de fosfato de calcio (Solicitud de Patente Japonesa Publicada Sin Examinar nº 227075/90), el método de lipofección [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 7413 (1987)], y similares.
CD40 se puede producir cultivando en un medio el transformante derivado de un microorganismo, una célula de animal o similar que tiene un vector recombinante que comprende ADN que codifica CD40 obtenido mediante el procedimiento descrito anteriormente para formar y acumular CD40 en el cultivo, y recuperándolo del cultivo. El método para cultivar el transformante en el medio se lleva a cabo según el método habitual usado en el cultivo de hospedantes.
Cuando el vector se expresa en una célula derivada de un eucariota, se puede obtener CD40 al que se unen azúcares o cadenas de azúcares.
Cuando se cultiva un microorganismo transformado con un vector recombinante que contiene como promotor un promotor inducible, se puede añadir un inductor al medio, si es necesario. Por ejemplo, se puede añadir al medio isopropil-β-D-tiogalactopiranósido o similar cuando se cultiva un microorganismo transformado con un vector recombinante usando el promotor lac; o se le puede añadir ácido indolacrílico o similar cuando se cultiva un microorganismo transformado con un vector recombinante usando el promotor trp.
Cuando se cultiva un transformante obtenido usando como célula hospedante una célula de animal, el medio incluye medio RPMI 1640 usado generalmente [The Journal of the American Medical Association, 199, 519 (1967)], medio MEM de Eagle [Science, 122, 501 (1952)], medio MEM modificado de Dulbecco [Virology, 8, 396 (1959)] y medio 199 [Proceeding of the Society for the Biological Medicine, 73, 1 (1950)], medio de Dulbecco modificado de Iscove (IMDM), los medios a los que se añade suero fetal de ternera, etc., y similar. El cultivo se lleva a cabo generalmente a un pH de 6 a 8 y 30 a 40ºC durante 1 a 7 días en presencia de 5% de CO2. Si es necesario, durante el cultivo se puede añadir al medio un antibiótico tal como canamicina o penicilina.
Con respecto al método de expresión del gen que codifica CD40, además de la expresión directa, se puede llevar a cabo la producción secretora, la expresión de proteínas de fusión, y similar, según el método descrito en Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Segunda Edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989).
El procedimiento para producir CD40 incluye un método de expresión intracelular en una célula hospedante, un método de secreción extracelular a partir de una célula hospedante, un método de producción sobre una cubierta exterior de membrana de célula hospedante, y similar. El método apropiado se puede seleccionar cambiando la célula hospedante usada y la estructura del polipéptido producido.
Cuando CD40 se produce en una célula hospedante o sobre una cubierta exterior de membrana de célula hospedante, CD40 se puede segregar positivamente de forma extracelular según el método de Paulson et al. [J. Biol. Chem., 264, 17619 (1989)], el método de Lowe et al. [Proc. Natl. Acid. Sci. USA, 86, 8227 (1989), Genes Develop., 4, 1288 (1990)], los métodos descritos en la Solicitud de Patente Japonesa Publicada Sin Examinar nº 336963/93 y en el documento WO 94/23021, y similares.
También, la cantidad de producción se puede incrementar según el método descrito en la Solicitud de Patente Japonesa Publicada Sin Examinar nº 227075/90 utilizando un sistema de amplificación génica que usa un gen de dihidrofolato reductasa.
CD40 se puede aislar y purificar del cultivo anterior, por ejemplo, según lo siguiente.
Cuando CD40 se expresa intracelularmente en un estado disuelto, las células, tras el cultivo, se recuperan mediante centrifugación, se suspenden en un tampón acuoso y entonces se rompen usando un aparato de ultrasonidos, una prensa francesa, un homogeneizador de Manton Gaulin, dinomil o similar, para obtener un extracto libre de células. El extracto libre de células se centrifuga para obtener un sobrenadante, y se puede obtener una preparación purificada sometiendo el sobrenadante a técnicas generales de aislamiento y purificación de enzimas, tal como extracción con disolventes; desalado con sulfato de amonio, etc.; extracción de sales; precipitación con un disolvente orgánico; cromatografía de intercambio iónico usando una resina tal como dietilaminoetil (DEAE)-sefarosa, DIAION HPA-75 (fabricada por Mitsubishi Chemical); cromatografía de intercambio catiónico usando una resina tal como Ssefarosa FF (fabricada por Pharmacia); cromatografía hidrófoba usando una resina tal como butil-sefarosa o fenilsefarosa; filtración en gel usando un tamiz molecular; cromatografía de afinidad; cromatoenfoque; electroforesis tal como enfoque isoeléctrico; y similar, que se pueden usar solas o en combinación.
Cuando CD40 se expresa de forma intracelular formando un cuerpo de inclusión, las células se recuperan, se destruyen y se centrifugan de la misma manera, y el cuerpo de inclusión de CD40 se recupera como una fracción de precipitación. El cuerpo de inclusión de la proteína recuperado se solubiliza con un agente que desnaturaliza la
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inmunofluorescentes (una citometría de flujo) en los que las células o tejidos en los que se expresa el antígeno se tratan, si es necesario, con un tensioactivo o metanol para hacer que un anticuerpo permee fácilmente a las células
o tejidos, después el anticuerpo de la presente invención se deja reaccionar con ello, después se deja reaccionar adicionalmente con un anticuerpo anti-inmunoglobulina o fragmento de unión del mismo sometido a marcaje 5 fluorescente tal como FITC, marcaje enzimático tal como peroxidasa o marcaje con biotina, y el marcador se visualiza y se observa bajo un microscopio, o las células se dejan reaccionar con un anticuerpo marcado fluorescentemente y se analizan mediante un citómetro de flujo. Esto se puede llevar a cabo mediante los métodos descritos, por ejemplo, en las bibliografías [Monoclonal Antibodies-Principles and practice, Tercera Edición, Academic Press (1996), Manual for Experiments of Monoclonal Antibodies, Kodansha Scientific (1987)].
10 Particularmente, puesto que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de la presente invención se une a la estructura tridimensional de una región extracelular de CD40, preferiblemente se puede usar para la detección mediante una citometría de flujo de una célula que expresa el polipéptido que mantiene una estructura tridimensional de tipo natural.
15 Además, usando el sistema FMAT8100HTS (fabricado por Applied Biosystems) que utiliza el principio de la tinción de anticuerpo fluorescente, la cantidad de antígeno o cantidad de anticuerpo se puede medir sin separar el complejo de anticuerpo-antígeno formado ni el anticuerpo o antígeno libre que no está implicado en la formación del complejo de anticuerpo-antígeno.
20 A continuación se describen ejemplos específicos (la región señal se estima mediante SignalPver.3. Además, la región de CDR se decide según la regla de Kabat et al.).
1. Anticuerpo IgG2-AAS (341)
25 (1) Secuencia de ADN de cadena pesada (SEC ID NO: 1)
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(i) Señal: A en la posición 1 a A en la posición 60 5 (ii) Región variable: C en la posición 61 a A en la posición 444
● CDR1: A en la posición 151 a C en la posición 171
● CDR2: A en la posición 214 a T en la posición 267 10
● CDR3: G en la posición 364 a C en la posición 411
(iii) Región constante: G en la posición 445 a A en la posición 1422
15 ● Posición 234 que está indicada por el índice EU como en Kabat et al.: 234 que está indicada por el índice EU como en Kabat et al.: G en la posición 784 a A en la posición 786
● posición 237 que está indicada por el índice EU como en Kabat et al.: G en la posición 790 a A en la
posición 792 20
● posición 331 que está indicada por el índice EU como en Kabat et al.: T en la posición 1072 a C en la posición 1074
(2) Secuencia de aminoácidos de cadena pesada (SEC ID NO: 2) 25
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(ii) Región variable: Q en la posición 21 a S en la posición 148
● CDR1: S en la posición 51 a N en la posición 57 5
●
CDR2: R en la posición 72 a S en la posición 89
●
CDR3: A en la posición 122 a V en la posición 137 (iii) Región constante: A en la posición 149 a A en la
posición 474 10
● posición 234 que está indicada por el índice EU como en Kabat et al.: A en la posición 262
● posición 237 que está indicada por el índice EU como en Kabat et al.: A en la posición 264 15 ● posición 331 que está indicada por el índice EU como en Kabat et al.: S en la posición 358
(3) Secuencia de ADN de cadena ligera (SEC ID NO:11)
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(i) Señal: A en la posición 1 a A en la posición 60
(ii) Región variable: G en la posición 61 a A en la posición 372 25 ● CDR1: A en la posición 130 a C en la posición 162
● CDR2: A en la posición 208 a T en la posición 228
● CDR3: C en la posición 325 a T en la posición 342 (iii) Región constante: C en la posición 373 a T en la 30 posición 693
(4) Secuencia de aminoácidos de cadena ligera (SEC ID NO: 12)
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(ii) Región variable: E en la posición 21 a K en la posición 124
● CDR1 : R en la posición 44 a A en la posición 54
● CDR2: D en la posición 70 a T en la posición 76
● CDR3: Q en la posición 109 a T en la posición 114 5 (iii) Región constante: R en la posición 125 a C en la posición 231
2. Anticuerpo IgG2-AAS (21.4.1)
(1) Secuencia de ADN de cadena pesada (SEC ID NO: 21)
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15 (i) Señal: A en la posición 1 a C en la posición 57
(ii) Región variable: C en la posición 58 a A en la posición 435
(iii) Región constante: G en la posición 436 a A en la posición 1413 20
● posición 234 que está indicada por el índice EU como en Kabat et al.: G en la posición 775 a A en la posición 777
● posición 237 que está indicada por el índice EU como en Kabat et al.: G en la posición 781 a A en la 25 posición 783
● posición 331 que está indicada por el índice EU como en Kabat et al.: T en la posición 1063 a C en la posición 1065
(2) Secuencia de aminoácidos de cadena pesada (SEC ID NO: 22)
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(i) Señal: M en la posición 1 a S en la posición 19 10 (ii) Región variable: Q en la posición 20 a S en la posición 145
(iii) Región constante: A en la posición 146 a K en la posición 471
●
posición 234 que está indicada por el índice EU como en Kabat et al.: A en la posición 259
●
posición 237 que está indicada por el índice EU como en Kabat et al.: A en la posición 261
15
● posición 331 que está indicada por el índice EU como en Kabat et al.: S en la posición 355 20 (3) Secuencia de DNA de cadena ligera (SEC ID NO: 25)
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(i)
Señal: A en la posición 1 a C en la posición 60
(ii)
Región variable: G en la posición 61 a T en la posición 384
(iii) Región constante: A en la posición 385 a T en la posición 702
(4) Secuencia de aminoácidos de cadena ligera (SEC ID NO: 26)
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5 (i) Señal: M en la posición 1 a C en la posición 20
(ii) Región variable: D en la posición 21 a R en la posición 128
(iii) Región constante: T en la posición 129 a C en la posición 234
10 La presente invención se describe más abajo mediante los Ejemplos; sin embargo, la presente invención no está limitada a los siguientes Ejemplos.
Ejemplo 1
15 Construcción de vector de expresión
Entre los anticuerpos anti-CD40 descritos en el documento WO02/088186, se construyó un fragmento de ADN que comprende un ADN (SEC ID NO:3) de una región variable de cadena pesada de un anticuerpo (en adelante
20 denominado en la presente memoria como “anticuerpo 341-1-19”) producido mediante un hibridoma KM341-1-19 (nº de acceso BP-7759), y un fragmento de ADN que comprende un ADN (SEC ID NO:13) de una región variable de cadena ligera del anticuerpo.
De forma similar, entre los anticuerpos anti-CD40 descritos en el documento WO03/040170, WO03/040170, se
25 construyó cada uno de un fragmento de ADN que comprende un ADN (SEC ID NO:23) de una región variable de cadena pesada de 21.4.1 (en adelante denominado en la presente memoria como “anticuerpo 21.4.1”), y un fragmento de ADN que comprende un ADN (SEC ID NO:27) de una región variable de cadena ligera del anticuerpo.
Se construyó un fragmento de ADN para que contuviese un ADN (en adelante denominado en la presente memoria
30 como “IgG2-AAS/DNA”) con adición de un codón de parada TGA a un ADN (SEC ID NO:29) que codifica IgG2 en el que valina en la posición 234, glicina en la posición 237 y prolina en la posición 331 se sustituyeron por alanina, alanina y serina, respectivamente (la numeración se basa en el índice EU de Kabat et al). Después, el fragmento de ADN resultante se introdujo en el vector N5KG2-Val Lark (IDEC Pharmaceuticals, en adelante denominado en la presente memoria como “vector N5KG2”) que tiene una región constante IgG2. Esto es, un fragmento de ADN que
35 comprende IgG2-AAS/DNA se escindió del fragmento de ADN usando NheIy BamHI, y se sustituyó por un ADN que codifica una región constante IgG2 del vector N5KG2. El vector de expresión resultante se denominó vector N5KG2/V234A/G237A/P331S. Además, el vector N5KG2-Val Lark que comprende un AND (en adelante denominado en la presente memoria como IgG2-S/DNA), en el que se añadió un codón de parada TGA a un ADN (SEC ID NO:31) que codifica IgG2 en el que prolina en la posición 331 se sustituyó por serina (la numeración se
40 basa en el índice EU de Kabat et al), se construyó según el método descrito en el documento WO05/063981. Esto es, se construyó un fragmento de ADN que comprende IgG2-S/DNA, y se escindió de él un fragmento de ADN que comprende IgG2-S/DNA usando NheIy BamHI, seguido de la sustitución por un ADN que codifica una región constante IgG2 del vector N5KG2. El vector de expresión resultante se denominó como un vector N5KG2/P331S.
45 Este vector N5KG2/V234A/G237A/P331S y el vector N5KG2/P331S se digirieron con BglII y BsiWI, respectivamente, y después se les insertó el fragmento de ADN que comprende un ADN de una región variable de cadena ligera del anticuerpo 341-1-19. A continuación, los vectores obtenidos se digirieron con SalIy NheI, y entonces se les insertó el fragmento de ADN que comprende un ADN de una región variable de cadena pesada del anticuerpo 341-1-19. Finalmente, se completaron los vectores de expresión que comprendieron una región variable del anticuerpo 341-1
50 19, y una región constante de cadena pesada que fue IgG2 en la que valina en la posición 234, glicinia en la posición 237 y prolina en la posición 331 se sustituyeron por alanina, alanina y serina, respectivamente (la numeración se basa en el índice EU de Kabat et al), o fue IgG2 en la que prolina en la posición 331 se sustituyó por serina (la numeración se basa en el índice EU de Kabat et al) (cada uno de ellos se denominó como vector N5KG2/V234A/G237A/P331S-341 y vector N5KG2/P331S-341).
55 Además, los vectores N5KG2_V234A_G237A_P331S y N5KG2_P331S se digirieron con BglII y BsiWI, respectivamente, y entonces el fragmento de ADN que comprende un ADN que codifica una región variable de cadena ligera del anticuerpo 21.4.1 y el fragmento de ADN que comprende un ADN que codifica una región variable de cadena pesada del anticuerpo 21.4.1 se insertaron de forma similar en el vector obtenido para completar de ese
60 modo los vectores de expresión (se denominaron como vector N5KG2/V234A/G237A/P331S-21.4.1 y vector
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imagen35
Coulter; IM1936U) y se incubó a temperatura del hielo durante 15 minutos. Después, llevando a cabo la hemolisis y la inmovilización usando FACS Lysing Solution (BD), se midió la fluorescencia mediante FACS (FACScalibur, Becton Dickinson). Como resultado, se encontró que el CD40 humano se expresó en células B, en células mononucleares y en plaquetas, que se sabe generalmente que expresan CD40.
5 A continuación, el anticuerpo IgG2-AAS(341) o el anticuerpo IgG2-S(341) se diluyó con tampón de fosfato y se administró a un ratón transgénico BAC con CD40 humano (cuatro animales para cada anticuerpo) a través de la vena caudal (10 µg/cabeza (se administró una disolución de 50 µg/ml a una dosis de 200 µl/cabeza)). Se recogieron muestras de sangre de las venas en los puntos antes de la administración y 15 horas, 24 horas y 39 horas después
10 de la administración. Los sueros sanguíneos se obtuvieron llevando a cabo la centrifugación (temperatura ambiente, 9000 rpm, 2 minutos). Los sueros así obtenidos se conservaron en un congelador de temperatura ultrabaja durante el período hasta la medición. Cada suero se diluyó 50 veces con tampón de fosfato, y AST y ALT se midieron usando TA-LN KAINOS (KAINOS Laboratories Inc., nº de catálogo TDR5100) mediante los métodos descritos en los documentos adjuntos.
15 Como resultado, se encontró que las concentraciones de AST y ALT se reducen por el anticuerpo IgG2-AAS(341) en comparación con el anticuerpo IgG2-S(341) (figura 4A y figura 4B).
Ejemplo 7
20 Actividad inhibidora del crecimiento del anticuerpo para célula tumoral
Células T24 (ATCC # HTB-4) se ajustaron para dar una densidad de 1,0 x 105 células/ml usando medio RPMI 1640 (nº de catálogo de GIBCO 31800105) que contiene 10% de suero fetal bovino (nº de catálogo de Invitrogen 10099
25 141), y se dispensaron en una placa de 96 pocillos a 50 µl/pocillo. El anticuerpo IgG2-AAS(341) preparado en el Ejemplo 2 se diluyó, se añadió a la placa de 96 pocillos a 50 µl/pocillo y se cultivó a 37ºC durante 3 días en presencia de 5% de CO2. Se le añadió Cell Titer-Glo Luminescent Cell Viability Assay (nº de catálogo de Promega G7570) a 100 µl/pocillo, y se dejó reposar a temperatura ambiente durante 10 minutos. La señal de emisión se midió usando SpectraMax M5, y la relación del número de células que sobrevivieron a cada concentración se calculó en
30 relación con el número de células que sobrevivieron cuando el anticuerpo no se añadió como 100%. Como resultado, se encontró que el anticuerpo IgG2-AAS(341) inhibió el crecimiento de las células T24 de una manera dependiente de la concentración.
A continuación se describen las secuencias parciales de ADN y de aminoácidos del anticuerpo de la presente 35 invención.
Secuencia de ADN de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:1)
imagen36
imagen37
Secuencia de aminoácidos de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:2)
imagen38
Secuencia de ADN de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:3)
imagen39
Secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:4)
imagen40
5 Secuencia de ADN de CDR1 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:5) AGCAACAGTG CTACTTGGAA C 10 Secuencia de aminoácidos de CDR1 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:6) SNSATWN 15 Secuencia de ADN de CDR2 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:7) AGGACAT ACTACAGGTC CAAGTGGTAT CGTGATTATG TAGGATCTGT GAAAAGT 20 Secuencia de aminoácidos de CDR2 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(34) (SEC ID NO:8) RTYYRSKWY RDYVGSVKS 25 Secuencia de ADN de CDR3 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:9) GCACAGT GGCTGGGAGG GGATTACCCC TACTACTACA GTATGGACGT C 30 Secuencia de aminoácidos de CDR3 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:10) AQWLGGDYP YYYSMDV 35 secuencia de ADN de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:11)
imagen41
Secuencia de aminoácidos de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:12)
imagen42
Secuencia de ADN de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:13)
imagen43
Secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:14)
imagen44
Secuencia de ADN de CDR1 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:15) 15 A GGGCCAGTCA GAGTGTTAGC AGCTACTTAG CC
Secuencia de aminoácidos de CDR1 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:16) 20 RASQSVS SYLA
Secuencia de ADN de CDR2 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:17) 25 GAT GCATCCAACA GGGCCACT
Secuencia de aminoácidos de CDR2 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:18) 30 D ASNRAT
Secuencia de ADN de CDR3 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:19) 35 CAGCAG CGTAGCAACA CT
Secuencia de aminoácidos de CDR3 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:20) 40 QQ RSNT
Secuencia de ADN de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(21.4.1) (SEC ID NO:21)
imagen45
Secuencia de aminoácidos de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(21.4.1) (SEC ID NO:22)
imagen46
Secuencia de ADN de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(21.4.1) (SEC ID NO:23)
imagen47
Secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(21.4.1) (SEC ID NO:24)
imagen48
10 Secuencia de ADN de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(21.4.1) (SEC ID NO:25)
imagen49
Secuencia de aminoácidos de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(21.4.1) (SEC ID NO:26)
imagen50
Secuencia de ADN de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(21.4.1) (SEC ID NO:27)
imagen51
Secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo IgG2-AAS(21.4.1) (SEC ID NO:28)
imagen52
10 Secuencia de ADN de la región constante de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:29)
imagen53
Secuencia de aminoácidos de la región constante de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341) (SEC ID NO:30)
imagen54
región constante del anticuerpo IgG2-S(341) (SEC ID NO:31)
imagen55
Secuencia de aminoácidos de la región constante de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-S(341) (SEC ID NO:32)
imagen56
Secuencia de aminoácidos del alotipo 1 de IgG2 (SEC ID NO:33)
imagen57
Secuencia de aminoácidos del alotipo 2 de IgG2 (SEC ID NO:34)
imagen58
Secuencia de aminoácidos del alotipo 3 de IgG2 (SEC ID NO:35)
imagen59
10 Esta solicitud se basa en la solicitud provisional U.S. presentada el 20 de abril de 2009 (solicitud provisional U.S. nº 61/170.738).
Aplicabilidad industrial
15 La presente invención puede proporcionar un anticuerpo monoclonal que comprende una región constante de cadena pesada que es IgG2 en la que valina en la posición 234, glicina en la posición 237 y prolina en la posición 331 se sustituyen al menos por alanina, alanina y serina, respectivamente (la numeración se basa en el índice EU de Kabat et al.); tiene actividad agonista; y se une a CD40 humano; un ADN que codifica el anticuerpo monoclonal; un vector que comprende el ADN; un transformante obtenible introduciendo el vector; un método para producir el
20 anticuerpo monoclonal que comprende el uso del transformante; y una composición farmacéutica y un agente terapéutico que comprenden el anticuerpo monoclonal.
Texto libre de listado de secuencias
25 SEC ID NO:1 -Descripción de secuencia artificial: IgG2 -Secuencia de ADN de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341)
SEC ID NO:2 -Descripción de secuencia artificial: IgG2 -Secuencia de aminoácidos de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341)
30 SEC ID NO:3 -Descripción de secuencia artificial: IgG2 -Secuencia de ADN de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341)
SEC ID NO:4 -Descripción de secuencia artificial: IgG2 -Secuencia de aminoácidos de la región variable de la 35 cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341)
SEC ID NO:5 -Descripción de secuencia artificial: IgG2 -Secuencia de ADN de CDR1 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341)
40 SEC ID NO:6 -Descripción de secuencia artificial: IgG2 -Secuencia de aminoácidos de CDR1 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341)
SEC ID NO:7 -Descripción de secuencia artificial: IgG2 -Secuencia de ADN de CDR2 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341)
45 SEC ID NO:8 -Descripción de secuencia artificial: IgG2 -Secuencia de aminoácidos de CDR2 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo IgG2-AAS(341)
imagen60

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  1. imagen1
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