ES2566493T3 - Péptidos sintéticos utilizados para el tratamiento de la piel y el uso de los mismos en composiciones cosméticas o dermofarmacéuticas - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a péptidos de fórmula general (I) capaces de regular la fibrilogénesis, sus estereoisómeros y mezclas de los mismos, racémicas o no, y las sales cosméticamente o dermofarmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde Z es alanil,

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

DESCRIPCION

Peptidos sinteticos utilizados para el tratamiento de la piel y el uso de los mismos en composiciones cosmeticas o dermofarmaceuticas

Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a peptidos sinteticos que regulan la fibrilogenesis y a composiciones cosmeticas o dermofarmaceuticas que contienen dichos peptidos utiles en el tratamiento de la piel, preferentemente para el tratamiento de aquellas afecciones de la piel que requieren una regulacion de la fibrilogenesis tal como el tratamiento de la piel envejecida (bien sea envejecimiento intrmseco debido al paso del tiempo y a factores geneticos, o extrmseco debido a la exposicion prolongada al sol y/o a contaminantes ambientales tales como la radiacion ultravioleta (UV) de la luz solar, los contaminantes qmmicos, el humo de los cigarrillos y la polucion), o como coadyuvantes en los procesos de cicatrizacion para suavizar el aspecto de las cicatrices.

Antecedentes de la invencion

La piel esta formada por dos capas: la epidermis y la dermis. La capa mas externa es la epidermis, que esta compuesta en su mayor parte por queratinocitos, melanocitos y celulas de Langerhans, y su funcion basica es retener el agua del cuerpo, actuar como mecanismo de barrera frente a agentes qmmicos daninos asf como frente a organismos patogenos y llevar a cabo los procesos de renovacion celular. La capa mas interna, la dermis, formada por fibroblastos, adipocitos y macrofagos, esta unida fuertemente a la epidermis a traves de la membrana basal, y contiene numerosas terminaciones nerviosas que proporcionan las sensaciones del tacto y la temperatura. Alberga tambien los folmulos pilosos, glandulas sudonparas, glandulas sebaceas, glandulas apocrinas y vasos sangumeos, y una de sus funciones principales es mantener la elasticidad y el aspecto de la piel.

La dermis tambien incluye la matriz extracelular, formada por un conjunto de protemas extracelulares (protemas fibrosas, glucoprotemas y proteoglucanos) cuya funcion clave es la de mantener la estructura de la piel, y el correcto funcionamiento y desarrollo de los tejidos depende de que su formacion y regulacion sea correcta [Wiberg C., Klatt A.R., Wagener R., Paulsson M., Bateman J.F., Heinegard D. y Morgelin M. (2003) “Complexes of matrilin-1 and biglycan or decorin connect collagen VI microfibrils to both collagen II and aggrecan” J. Biol. Chem. 278, 3769837704], Las dos protemas fibrosas mas importantes de la matriz extracelular son el colageno y la elastina, responsables de las propiedades mecanicas de los tejidos, tales como la capacidad de resistir la traccion, compresion, extensibilidad y torsion. Los proteoglucanos tienen una funcion estructural y metabolica, mientras que las glucoprotemas, junto con los proteoglucanos, sirven de puentes de union entre los componentes de la matriz y las celulas [Aumailley M. y Gayraud B. (1998) “Structure and biological activity of the extracellular matrix” J. Mol. Med. 76, 253-265; Culav E.M., Clark C.H. y Merrilees M.J. (1999) “Connective tissues: matrix composition and its relevance to physical therapy” Phys. Ther. 79, 308-319; Scott J.E. (2003) “Elasticity in extracellular matrix 'shape modules' of tendon, cartilage, etc. A sliding proteoglycan-filament model” J. Physiol. 553, 335-343].

Colageno

Los colagenos son una familia de protemas fibrosas de la matriz extracelular que constituyen el 25 % del total de la masa proteica en mairnferos. Se han clasificado en mas de 20 familias, todas con caractensticas individuales que cumplen funciones espedficas en distintos tejidos.

La caractenstica principal del colageno es su estructura helicoidal formada por asociacion de tres cadenas polipeptfdicas, ricas en glicina y prolina. Las alteraciones en su composicion de aminoacidos provocan una disfuncion y perdida de sus propiedades mecanicas [Culav E.M., Clark C.H. y Merrilees M.J. (1999) “Connective tissues: matrix composition and its relevance to physical therapy” Phys. Ther. 79, 308-319]. Estas cadenas polipeptfdicas pueden asociarse entre sf formando las fibrillas, que tienen un diametro de 10-300 nm y una longitud de hasta varios cientos de micrometros en tejidos maduros. Estas fibrillas a menudo se agregan en estructuras mayores, tal como haces de cables, que pueden verse por microscopia electronica como fibras de colageno de varios micrometros de diametro. A este proceso se le conoce como fibrilogenesis [Aumailley M. y Gayraud B. (1998) “Structure and biological activity of the extracellular matrix” J. Mol. Med. 76, 253-265]. No todos los colagenos tienen la capacidad de formar fibrillas; solo los colagenos tipo I, II, III, V y XI, a los que se conoce como colagenos fibrilares.

La dermis de un adulto esta formada basicamente por los colagenos fibrilares de tipo I (el 80-90 %), III, y V. En general, las fibras de colageno de tipo I presentan un diametro mayor, una caractenstica que se correlaciona con su capacidad de soportar una mayor carga mecanica. El colageno de tipo II desempena un papel en la extensibilidad del tejido, y con el paso de los anos lo reemplazan moleculas de colageno de tipo I, un proceso que es parcialmente responsable de que las pieles maduras sean menos extensibles que las infantiles. El colageno de tipo V se asocia con los de tipo I y III regulando el diametro de las fibrillas [“The Biology of the Skin”, Freinkel R.K. y Woodley D.T., eds. The Parthenon Publishing Group, 2001; Culav E.M., Clark C.H. y Merrilees M.J. (1999) “Connective tissues: matrix composition and its relevance to physical therapy” Phys. Ther. 79, 308-319].

Las mutaciones en la molecula de colageno o en las moleculas implicadas en la fibrilogenesis del colageno pueden conducir a un colageno desestructurado, como el que se encuentra en patologfas tales como el smdrome de Ehlers-

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

Danlos [Ameye L. y Young M.G. (2002) “Mice deficient in small leucine-rich proteoglycans: novel in vivo models for osteoporosis, osteoarthritis, Ehlers-Danlos syndrome, muscular dystrophy and corneal diseases” Glycobiology 12, 107R-116R]. Asimismo, la exposicion prolongada a los rayos UV puede danar la arquitectura del colageno y provocar su sustitucion por un colageno menos estructurado con el posterior adelgazamiento de la piel y la formacion de arrugas. Por ultimo, el dano a la arquitectura del colageno puede dar lugar a la deposicion de colageno desorganizado durante los procesos de reparacion, como se produce en los procesos de cirrosis hepatica, fibrosis pulmonar o formacion de cicatrices dermicas. Por lo tanto, la regulacion de la organizacion del colageno puede ser potencialmente util no solo para tratamientos cosmeticos o dermofarmaceuticos, sino tambien para tratar diversas afecciones clmicas.

Proteoglucanos

Los proteoglucanos constituyen uno de los componentes principales de la matriz extracelular y se caracterizan por tener un nucleo proteico unido covalentemente a carbohidratos llamados glucosaminoglucanos (GAG). Estan implicados en muchos de los procesos celulares que se producen mediante interacciones moleculares en la superficie de las celulas, tales como las interacciones celula-matriz extracelular, celula-celula y receptor-ligando, ya que se unen avidamente a protemas, y son muy abundantes en estas regiones [Perrimon N. y Bernfield M. (2001) “Cellular functions of proteoglycans- an overview” Semin. Cell Dev. Biol.12, 65-67]. Los proteoglucanos actuan como organizadores de los tejidos, facilitan el crecimiento celular y la maduracion de tejidos especializados, desempenan un papel imprescindible como filtros biologicos y regulan la actividad de los factores de crecimiento [lozzo R.V. (1998) “Matrix proteoglycans: from molecular design to cellular function” Annu. Rev. Biochem. 67, 609-652; Ruoslahti

E. (1989) “Proteoglycans in cell regulation” J. Biol. Chem. 264, 13369-13372].

Los GAG son polfmeros formados por repeticiones de disacaridos, en general un aminoazucar acetilado (W-acetilglucosamina o W-acetilgalactosamina) alternando con acido uronico (glucuronato o iduronato), y presentan un mdice elevado de grupos sulfato, excepto el acido hialuronico. Debido a su elevado contenido en grupos acidos, estan cargados negativamente y tienden a atraer cationes tales como el Na+ y, al ser osmoticamente activos, atraen agua y permiten mantener la hidratacion de los tejidos. Los GAG mas comunes son acido hialuronico, condroitm sulfato, dermatan sulfato, heparan sulfato y queratan sulfato [Sugahara K. y Kitagawa H. (2000) “Recent advances in the study of the biosynthesis and functions of sulfated glycosaminoglycans” Curr. Opin. Struct. Biol. 10, 518-527; Zamfir A., Seidler D.G., Kresse H. y Peter-Katalinic J. (2003) “Structural investigation of chondroitin/dermatan sulfated oligosaccharides from human skin fibroblast decorin” Glycobiology 13, 733-742].

Un tipo de proteoglucanos son los asf llamados “proteoglucanos ricos en leucina”, que no interactuan con acido hialuronico y estan implicados en la estructuracion de las matrices extracelulares, en la modulacion de la actividad de factores de crecimiento asf como en la regulacion de las propiedades del crecimiento de las celulas [lozzo R.V. (1997) “The family of the small leucine-rich proteoglycans: key regulators of matrix assembly and cellular growth” Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 32, 141-174]. Aunque los distintos proteoglucanos ricos en leucina presentan caractensticas estructurales comunes, difieren claramente en su regulacion genetica, en su patron de expresion asf como en sus interacciones funcionales [Ramamurthy P., Hocking A.M. y McQuillan D.J. (1996) “Recombinant decorin glycoforms. Purification and structure” J. Biol. Chem. 271, 19578-19584].

Los proteoglucanos de la piel incluyen versicano, decorina, biglucano y acido hialuronico. Estas moleculas se localizan en areas espedficas de la piel. Asf, la decorina esta en asociacion con las fibras dermicas [Bianco P., Fisher L.W., Young M.F., Termine J.D. y Robey P.G. (1990) “Expression and localization of the two small proteoglycans biglycan and decorin in developing human skeletal and non-skeletal tissues” J. Histochem. Cytochem. 38, 1549-1563], el biglucano se encuentra en queratinocitos diferenciadores en la epidermis y en el endotelio vascular [Bianco P., Fisher L.W., Young M.F., Termine J.D. y Robey P.G. (1990) “Expression and localization of the two small proteoglycans biglycan and decorin in developing human skeletal and non-skeletal tissues” J. Histochem. Cytochem. 38, 1549-1563] y el versicano se detecta en la lamina basal de la epidermis y en asociacion con las fibras de la red elastica de la dermis, asf como en las glandulas sudonparas y en el recubrimiento del folmulo piloso [Zimmermann D.R., Dours-Zimmermann M.T., Schubert M. y Bruckner-Tuderman L. (1994) “Versican is expressed in the proliferating zone in the epidermis and in association with the elastic network of the dermis” J. Cell Biol. 124, 817825]. Otros estudios indican que el versicano no esta presente en el epitelio de la piel adulta, aunque sf esta presente en los tejidos conectivos adyacentes a estas areas, incluyendo la dermis, y en el recubrimiento de los folmulos pilosos [Carrino D.A., Sorrell J.M. y Caplan A.I. (2000) “Age-related changes in the proteoglycans of human skin” Arch. Biochem. Biophys. 373, 91-101].

Decorina

La decorina se considera que es uno de los proteoglucanos clave en la regulacion de la estructuracion y funcion de muchos de los elementos de la matriz extracelular. La decorina se une a factores de crecimiento, incluyendo el factor de crecimiento transformante beta (TGF-13), a otras protemas de la matriz extracelular tal como la fibronectina y la trombospondina, a receptores de membrana celular (receptor de endocitosis de la decorina), y tambien puede interferir de forma directa sobre el ciclo celular a traves de la induccion de p21, un inhibidor potente de las cinasa dependiente de ciclina (CDK) [Stander M., Naumann U., Wick W. y Weller M. (1999) “Transforming growth factor- beta and p-21: multiple molecular targets of decorin-mediated suppression of neoplastic growth” Cell Tissue Res.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

296, 221-227].

Muchos de los estudios sobre la interaccion de la decorina son respecto a la union al colageno de tipo I, aunque se sabe que tambien interaccionan con otros colagenos tales como los tipos II, III y VI. Aunque se considera que el principal factor que influye en la formacion de las fibrillas de colageno in vivo es la propia estructura del colageno, hay distintas moleculas, tales como la decorina, que pueden regular y ajustar este proceso. La decorina retrasa y hace diffcil la formacion de las fibrillas, provoca una consecuente reduccion de los diametros promedio de las fibrillas y fuerza a las fibras de colageno a adoptar una distribucion espacial regular [Danielson K.G., Fazzio A., Cohen I., Cannizzaro L.A., Eichstetter L. y Iozzo R.V. (1993) “The human decorin gene: intron-exon organization, discovery of two alternatively spliced exons in the 5' untranslated region, and mapping of the gene to chromosome 12q23” Genomics 15, 146-160]. Este proceso esta mediado por el nucleo proteico del proteoglucano, y requiere que conserve su estructura terciaria [Svensson L., Heinegard D. y Oldberg A. (1995) “Decorin-binding sites for collagen type I are mainly located in leucine-rich repeats 4-5” J. Biol. Chem. 270, 20712-20716; Keene D.R., Ridgway C.C. y Iozzo R.V. (1998) “Type VI microfilaments interact with a specific region of banded collagen fibrils in skin” J. Histochem. Cytochem. 46, 215-220]. Existe evidencia de que la triple helice del colageno de tipo I tiene un sitio de union a decorina espedfico [Keene D.R., Ridgway C.C. y Iozzo R.V. (1998) “Type VI microfilaments interact with a specific region of banded collagen fibrils in skin” J. Histochem. Cytochem. 46, 215-220] y de que existen interacciones adicionales con moleculas de dermatan sulfato [Kresse H., Liszio C., Schonherr E. y Fisher L.W. (1997) “Critical role of glutamate in a central leucine-rich repeat of decorin for interaction with type I collagen” J. Biol. Chem. 272, 18404-18410]. La decorina se une a dos moleculas paralelas adyacentes de colageno de la fibrilla, ayudando a estabilizar la fibrilla y orientar la fibrilogenesis. Al estar unida a la superficie de las fibrillas de colageno, la interaccion lateral entre las triples helices de colageno se hace mas diffcil, ya que actua de espaciador, y el diametro de las fibrillas disminuye, controlando asf las dimensiones de las fibrillas, en concreto la uniformidad de su diametro y la distancia regular entre ellas, permitiendole asf mantener la forma del tejido [Tenni R., Viola M., Welser

F. , Sini P., Giudici C., Rossi A. y Tira M.E. (2002) “Interaction of decorin with CNBr peptides from collagens I and II. Evidence for multiple binding sites and essential lysyl residues in collagen” Eur. J. Biochem. 269, 1428-1437; Scott J.E. (1996) “Proteodermatan and proteokeratan sulfate (decorin, lumican/fibromodulin) proteins are horseshoe shaped. Implications for their interactions with collagen” Biochemistry 35, 8795-8799].

La importancia de estas interacciones de decorina con el colageno tambien se ha demostrado in vivo mediante los ratones transgenicos que no tienen el gen de la decorina y, por tanto, no producen decorina en su organismo. Estos animales son viables, pero presentan una piel muy fragil, con la dermis muy delgada, con una fuerza elastica reducida y resistencia a la traccion reducida, y su analisis histopatologico muestra que sus fibrillas de colageno tienen diametros irregulares a lo largo de las fibrillas debido a agregaciones laterales incontroladas [Kresse H., Liszio C., Schonherr E. y Fisher L.W. (1997) “Critical role of glutamate in a central leucine-rich repeat of decorin for interaction with type I collagen” J. Biol. Chem. 272, 18404-18410; Danielson K.G., Baribault H., Holmes D.F., Graham H., Kadler K.E. y Iozzo R.V (1997) “Targeted disruption of decorin leads to abnormal collagen fibril morphology and skin fragility” J. Cell. Biol. 136, 729-743; Keene D.R., Ridgway C.C. y Iozzo R.V. (1998) “Type VI microfilaments interact with a specific region of banded collagen fibrils in skin” J. Histochem. Cytochem. 46, 215-220]. Esta observacion concuerda con el hecho ampliamente aceptado de que la fuerza de la piel se correlaciona directamente con la organizacion general, el contenido y las propiedades ffsicas de la red de colageno fibrilar [Dombi

G. W., Haut R.C. y Sullivan W.G. (1993) “Correlation of high-speed tensile strength with collagen content in control and lathyritic rat skin” J. Surg. Res. 54, 21-28]. Ademas, dichos animales transgenicos tambien tienen una degradacion de colageno aumentada, lo que contribuye a la poca calidad de su piel [Schaefer L., Macakova K., Raslik I., Micegova M., Grone H-J., Schonherr E., Robenek H., Echtermeyer F.G., Grassel S., Bruckner P., Schaefer R.M., Iozzo R.V. y Kresse H. (2002) “Absence of decorin adversely influences tubulointerstitial fibrosis of the obstructed kidney by enhanced apoptosis and increased inflammatory reaction” Am. J. Pathol. 160, 1181-1191]. Se pueden observar tambien una organizacion irregular de las fibrillas de colageno en distintas patologfas humanas que conducen a fenotipos con la piel fragil, lo que sugiere que la alteracion de los procesos de fibrilogenesis es suficiente para provocar una piel fragil y una estructura desorganizada de la matriz, y por consiguiente los individuos que tienen un proceso de fibrilogenesis desregulado tienen una mayor incidencia de lesiones asf como de procesos de cicatrizacion anormales [Keene D.R., Ridgway C.C. y Iozzo R.V. (1998) “Type VI microfilaments interact with a specific region of banded collagen fibrils in skin” J. Histochem. Cytochem. 46, 215-220; Iozzo R.V. (1999) “The biology of the small leucine-rich proteoglycans” J. Biol. Chem. 274, 18843-18846].

La decorina no solo interacciona con las fibras de colageno, sino que tambien interacciona con otras protemas estructurales. Esto es debido presumiblemente a su estructura tridimensional en forma de herradura, donde las repeticiones de las regiones ricas en leucina se disponen de forma paralela, siendo necesarias solo algunas repeticiones para su union a un ligando [Schonherr E., Broszat M., Brandan E., Bruckner P. y Kresse H. (1998) “Decorin core protein fragment Leu155-Val260 interacts with TGF-beta but does not compete for decorin binding to type I collagen” Arch. Biochem. Biophys. 355, 241-248]. De los resultados de estudios de dinamica molecular realizados se deduce que la cara concava de la herradura de la decorina tiene una abertura con un angulo suficiente para dar cabida a una triple helice, con un diametro de aproximadamente 2 nm, que es ligeramente superior al diametro de una molecula de colageno (1,5 nm), mientras que los brazos de la herradura tienen un grosor similar a la molecula de colageno [Kresse H., Liszio C., Schonherr E. y Fisher L.W. (1997) “Critical role of glutamate in a central leucine-rich repeat of decorin for interaction with type I collagen” J. Biol. Chem. 272, 18404-18410; Scott J.E.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

(1996) “Proteodermatan and proteokeratan sulfate (decorin, lumican/fibromodulin) proteins are horseshoe shaped. Implications for their interactions with collagen” Biochemistry 35, 8795-8799].

Los estudios estructurales teoricos realizados consideran la hipotesis que son las regiones Lys -Arg y Arg - His275 de la decorina las responsables de la union a colageno, concretamente a la region Asp857-Arg-Gly-Glu860 [Kresse H., Liszio C., Schonherr E. y Fisher L.W. (1997) “Critical role of glutamate in a central leucine-rich repeat of decorin for interaction with type I collagen” J. Biol. Chem. 272, 18404-18410]. Las dos regiones de la decorina se encuentran una en cada brazo de la herradura, aproximadamente equidistantes de los extremos de la molecula, en sentido antiparalelo. Sin embargo, el hecho de que la decorina adopte una forma de herradura hace que la secuencia lineal rote 180° de un brazo de la herradura al otro, estando realmente los dos fragmentos en disposicion paralela. Por lo tanto, se consigue una complementariedad de cargas de los restos de las cadenas laterales implicados en la interaccion ([-,+,0,-] para colageno y [+,-,0,+] para los fragmentos de decorina), que parece ser cntica para estabilizar la interaccion entre las dos moleculas [Scott J.E. (1996) “Proteodermatan and proteokeratan sulfate (decorin, lumican/fibromodulin) proteins are horseshoe shaped. Implications for their interactions with collagen” Biochemistry 35, 8795-8799].

Enveiecimiento

La piel experimenta cambios dramaticos con la edad, que incluyen cambios en su morfologfa, fisiologfa y en sus propiedades mecanicas. La piel de los bebes es lisa y suave, con una capa gruesa de grasa y una capa protectora muy fina de queratina, mientras que la piel de los ancianos es muy delgada y presenta muchas arrugas, con una capa de grasa muy pequena. La matriz extracelular tambien experimenta cambios con la edad, y estos contribuyen al grupo de cambios de las propiedades ffsicas de la piel relacionados con el envejecimiento [Wiberg C., Klatt A.R., Wagener R., Paulsson M., Bateman J.F., Heinegard D. y Morgelin M. (2003) “Complexes of matrilin-1 and biglycan or decorin connect collagen VI microfibrils to both collagen II and aggrecan” J. Biol. Chem. 278, 37698-37704]. La exposicion prolongada al sol y a los contaminantes ambientales acelera el proceso de enveiecimiento de la piel, ya que la exposicion a los rayos UV inhibe la smtesis de colageno y fibronectina en fibroblastos y cataliza la degradacion del colageno estimulando la smtesis de las enzimas que lo degradan (metaloproteasas de matriz). Se han descrito cambios en las moleculas de colageno de tipo I, que son los componentes principales de la matriz extracelular de la dermis [Hunzelmann N., Ueberham U., Eckes B., Hermann K. y Krieg T. (1997) “Transforming growth factor-beta reverses deficient expression of type (I) collagen in cultured fibroblasts of a patient with metageria” Biochim. Biophys. Acta. 1360, 64-70].

La industria cosmetica ha realizado importantes esfuerzos para contrarrestar esta perdida de la funcionalidad de los componentes de la matriz extracelular con la edad. El balance entre la produccion y la degradacion de biomoleculas imprescindibles de la piel (por ejemplo el colageno) tiende, con la edad, hacia los procesos de degradacion, y esto conduce a un adelgazamiento y desorganizacion progresivos de la dermis, lo que provoca flacidez en la dermis con la posterior formacion de arrugas. A nivel microscopico, el colageno de la piel envejecida (tanto piel envejecida cronologicamente -pieles maduras- como piel envejecida por exposicion prolongada al sol o a los contaminantes ambientales) se caracteriza por tener fibrillas gruesas organizadas de manera similar a haces de cables, que no estan tan alineadas como en la piel joven [Oikarinen A. (1990) “The aging of the skin: chronoaging versus photoaging” Photodermatol. Photoimmunol. Photomed. 7, 3-4]. Por lo tanto, los procedimientos que permitan una mejor organizacion de las fibras de colageno tendran un potencial efecto beneficioso sobre la piel madura o sobre la piel envejecida, permitiendoles recuperar parcialmente las propiedades mecanicas (elasticidad, flexibilidad y firmeza) que perdieron con la edad o la exposicion al sol y/o a los contaminantes ambientales y que tengan un mejor aspecto, con menor presencia de arrugas y mas tersa.

Ademas del colageno, la matriz extracelular dermica tambien contiene proteoglucanos que estan implicados en las propiedades de los tejidos y que se ven alterados con el envejecimiento. Entre ellos, la decorina se cataboliza en un fragmento que se conoce como decorunt, que corresponde a una version de la decorina que carece del fragmento carboxilo terminal. Las pieles de origen fetal, sin embargo, no tienen niveles detectables de decorunt, mientras que los niveles maximos de decorunt se determinan a partir de los 30 anos, que es la edad a partir de la cual se empiezan a manifestar los signos del envejecimiento. La capacidad de decorunt para unirse a una molecula de colageno es 100 veces menor que la de la decorina por sola, un factor que se correlaciona con el hecho de que decorunt carece justamente de una de las regiones de la decorina que es imprescindible para la union al colageno [Wiberg C., Klatt A.R., Wagener R., Paulsson M., Bateman J.F., Heinegard D. y Morgelin M. (2003) “Complexes of matrilin-1 and biglycan or decorin connect collagen VI microfibrils to both collagen II and aggrecan” J. Biol. Chem. 278, 37698-37704]. Sabiendo que la decorina influye en los procesos de fibrilogenesis del colageno y regula el diametro de las fibrillas, la presencia de decorunt puede tener un efecto importante sobre la elasticidad y las diferencias morfologicas entre las fibras de colageno de la piel joven y las de la piel envejecida [Carrino D.A., Sorrell J.M. y Caplan A.I. (2000) “Age-related changes in the proteoglycans of human skin” Arch. Biochem. Biophys. 373, 91-101]. Tambien se ha demostrado que la smtesis de decorina esta disminuida en la piel envejecida por la exposicion prolongada al sol o a los contaminantes ambientales [Bernstein E.F., Fisher L.W., Li K., LeBaron R.G., Tan E.M. y Uitto J. (1995) “Differential expression of the versican and decorin genes in photoaged and sun-protected skin. Comparison by immunohistochemical and northern analyses” Lab. Invest. 72, 662-669], por lo tanto este tipo de piel tiene una desorganizacion del colageno. Por lo tanto, la disminucion del contenido de decorina funcional de la piel envejecida, se deba ya sea a la edad o a la exposicion prolongada al sol y a los contaminantes ambientales,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

esta relacionada de forma directa con la formacion de una red de colageno fibrilar desestructurada, que conduce a una piel fragil, menos elastica y con menos resistencia a la traccion.

Cicatrizacion

La curacion de heridas en los adultos es un complicado proceso reparativo. El proceso de curacion comienza con la incorporacion de una diversidad de celulas especializadas para su traslado al sitio de la herida, e implica la deposicion de matriz extracelular y membrana basal, angiogenesis, actividad selectiva de proteasa y reepitelizacion. Un componente importante del proceso de curacion en los mairnferos adultos es la estimulacion de fibroblastos para generar la matriz extracelular. Esta matriz extracelular es un componente principal del tejido conectivo que se desarrolla para reparar la zona de la herida.

El tejido conectivo que se forma durante el proceso de curacion tiene a menudo una naturaleza fibrosa. Una cicatriz es una estructura morfologica anormal resultante de una lesion o herida previa (tal como, por ejemplo, una incision, una escision o un trauma), y esta formada de un tejido conectivo que es, de forma predominante, una matriz de colageno de los tipos I y II y fibronectina. En la piel la cicatriz consta de fibras de colageno en una organizacion anormal, asf como de una deposicion de colageno en exceso. En los mamfferos, cuando la cicatriz se eleva sobre la piel, presentando un aspecto abultado, se debe al hecho de que contienen colageno en exceso dispuesto de manera irregular, y se clasifican como cicatrices hipertroficas. Un queloide es otra forma de cicatrizacion patologica que no solamente se eleva sobre la superficie de la piel, sino que se extiende tambien hasta mas alla de los lfmites de la lesion original, y tambien tiene una cantidad excesiva de tejido conectivo que esta organizado de manera anormal, formando de forma predominante bandas vorticiales de tejido conectivo. Un analisis del contenido de decorina en cicatrices hipertroficas muestra que su concentracion es de solo el 25 % de la encontrada en tejidos sanos [Scott P.G., Dodd C.M., Ghahary A., Shen J. y Tredget E.E. (1998) “Fibroblasts from post-burn hypertrophic scar tissue synthesize less decorin than normal dermal fibroblasts” Clin. Sci. (Lond). 94, 541-547], un hecho que explica la organizacion irregular del colageno presente en las cicatrices hipertroficas.

Asimismo, se han detectado formas truncadas de decorina en cicatrices hipertroficas [Honda T., Matsunaga E., Katagiri K., y Shinkai H. (1986) “The proteoglycans in hypertrophic scar” J. Dermatol. 13, 326-333; Garg H.G., Lippay E.W., Burd D.A.R y Neame P.J. (1990) “Purification and characterization of iduronic acid-rich and glucuronic acid-rich proteoglycans implicated in human post-burn keloid scar” Carbohydr. Res. 207, 295-305], y se ha demostrado que estas formas truncadas no son capaces de regular la formacion de fibrillas de colageno en un ensayo de fibrilogenesis [Carrino D.A., Onnerfjord P., Sandy J.D., CS-Szabo G., Scott P.G., Sorrell J.M., Heinegard D. y Caplan A.I. (2003) “Age related changes in the proteoglycans of human skin” J. Biol. Chem. 278, 17566-17572].

La presencia de cicatrices en la piel es un factor que la mayona de los seres humanos no aceptan esteticamente. El sector medico ha realizado importantes esfuerzos en desarrollar procedimientos quirurgicos mmimamente invasivos, tal como las artroscopias o las laparoscopias, que no solo disminuyen los riesgos de complicaciones postquirurgicas sino que tambien tienen la ventaja de dejar cicatrices de tamanos muy pequenos o apenas visibles. A pesar de estos esfuerzos, la mayona de las intervenciones quirurgicas continuan llevandose a cabo mediante cirugfa abierta, de modo que el control del correcto proceso de cicatrizacion continua siendo una cuestion de vital importancia. Evitar la formacion de cicatrices hipertroficas y/o queloides, que tiene un colageno organizado de forma irregular, es uno de los objetivos del sector cosmetico y del dermofarmaceutico. Por lo tanto, los procedimientos que permitan una mejor organizacion de las fibras de colageno tendran un potencial efecto beneficioso sobre las cicatrices, permitiendoles suavizar su apariencia.

Por lo tanto, las composiciones cosmeticas o dermofarmaceuticas que contengan moleculas que imiten la actividad de la decorina mediante la interaccion con las fibrillas o las fibras de colageno, regulando el proceso de fibrilogenesis, son candidatas potenciales para su uso como productos antienvejecimiento con el fin de aumentar la elasticidad, firmeza, estructuracion y flexibilidad de la piel, o como coadyuvantes en tratamientos postquirurgicos con el fin de suavizar la apariencia de las cicatrices.

Existen distintas patentes con una aplicacion cosmetica o dermofarmaceutica que mencionan la decorina para el tratamiento o prevencion del envejecimiento, asf como para suavizar la apariencia de las cicatrices. La solicitud de patente US2003/0124152 describe el uso de la decorina en composiciones cosmeticas o dermatologicas para el tratamiento del envejecimiento intnnseco (debido al paso del tiempo y a factores geneticos) o extnnseco (debido a la exposicion prolongada al sol o a contaminantes ambientales tales como la radiacion ultravioleta (UV), los contaminantes qmmicos, el humo de los cigarrillos y la polucion). La patente US5.510.328 describe el uso de la decorina en composiciones farmaceuticas para reducir o inhibir la contraccion de las heridas, y la patente US6.509.314 describe el uso de la decorina para la prevenir o reducir la cicatrizacion de las heridas. Existen otras patentes que describen extractos o compuestos vegetales que estimulan la smtesis de decorina endogena, tal como, por ejemplo, los descritos en las patentes JP2004051508, FR2834462, EP1367988, US6.551.602, US6.455.057, US6.440.434, US6.423.325, US6.287.553 y US6.042.841. En la bibliograffa se han publicado trabajos de investigacion centrados en la busqueda de los dominios de union de decorina a colageno, que describen algunos peptidos sinteticos que son capaces de unirse al colageno, y que potencialmente podnan tener la misma actividad que la decorina, pero todas las secuencias corresponden a fragmentos de la decorina nativa [Vides V.M., Laschinger C.A., Arora P.D., Lee W., Hakkinen L., Larjava H., Sodek J. y McCulloch C.A. (2005) “Collagen phagocytosis by

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

fibroblasts is regulated by decorin” J. Biol. Chem. 280, 23103-23113; Schonherr E., Broszat M., Brandan E., Bruckner P. y Kresse H. (1998) “Decorin core protein fragment Leu155-Val260 interacts with TGF-beta but does not compete for decorin binding to type I collagen” Arch. Biochem. Biophys. 355, 241-248]. Sin embargo, no existe actualmente ninguna referencia al uso de peptidos no contenidos en la secuencia nativa de la decorina que imiten la accion de la decorina en su union al colageno, regulando la fibrilogenesis y ayudando a mantener una red de colageno estructurada.

El primer inventor de la presente invencion ha determinado que los peptidos sinteticos de la invencion son eficaces en la regulacion de la fibrilogenesis, imitando asf la funcion de la decorina. La secuencia de los peptidos de la invencion no esta contenida en la secuencia nativa de la decorina, por lo tanto pueden considerarse como peptidos mimeticos de la actividad de la decorina. En la bibliograffa se ha postulado que para su union a colageno, y por consiguiente la regulacion de la fibrilogenesis, las secuencias peptfdicas deben tener cuatro aminoacidos con un patron de cargas [+,-,0,+] [Scott J.E. (1996) “Proteodermatan and proteokeratan sulfate (decorin, lumican/fibromodulin) proteins are horseshoe shaped. Implications for their interactions with collagen” Biochemistry 35, 8795-8799], de modo que exista una complementariedad de cargas con el fragmento Asp857-Arg-Gly-Glu860 del colageno que permita estabilizar la interaccion. El primer inventor de la presente invencion ha determinado que no todas las secuencias que cumplen dicha complementariedad de cargas que postula Scott son capaces de regular la fibrilogenesis. Aunque el peptido sintetico RELH, que corresponde a la secuencia 272-275 de la decorina cumple el patron de cargas y es capaz de regular la fibrilogenesis, los peptidos His-Asp-Ala-Arg, Orn-Asp-Nva-His, His-Asp-Ile- His, tambien cumplen el patron de cargas pero no tienen efecto sobre la fibrilogenesis. Por lo tanto, el cumplimiento del patron de cargas [+,-,0,+] que postula Scott no es un requisito suficiente para la regulacion de la fibrilogenesis por parte de los peptidos que lo cumplan. De manera sorprendente, los estudios realizados por el primer inventor de la presente invencion han establecido que la regulacion de la fibrilogenesis esta determinada por las secuencias peptfdicas que tienen de un resto del aminoacido citrulina junto un patron de cargas [+,-,0], tal como, por ejemplo, las secuencias Lys-Asp-Ile-Cit o Lys-Asp-Val-Cit. La patente RU2.181.728 describe un peptido sintetico de 10 aminoacidos unido por medio de un puente disulfuro a un peptido de 12 aminoacidos que tiene una secuencia que incluye la secuencia Lys-Glu-Leu-Cit, que es a base de la molecula de interleucina 8 y estimula la migracion de neutrofilos. A pesar del hecho de que dicho peptido cumple el patron de cargas [+,-,0] y tiene un resto de citrulina contiguo, no esta incluido dentro de la familia de los peptidos de la presente invencion, ya que tiene un total de 22 aminoacidos. Ademas, dicha patente no proporciona ningun indicio ni sugiere que el peptido descrito sea capaz de inhibir la fibrilogenesis.

La solicitud internacional WO2006/008392 desvela el uso cosmetico de por lo menos un tipo de tetrapeptido Ac-N- Ser-Asp-Lys-Pro natural o uno de los analogos del mismo, en la forma de un agente antienvejecimiento y reestructurante de la piel.

Por lo tanto, no existe indicio en el estado de la tecnica de que la citrulina sea un resto necesario para la regulacion de la fibrilogenesis, por lo tanto un experto en la materia no podna deducir la naturaleza de los peptidos que regulan la fibrilogenesis.

Por lo tanto, los peptidos de la presente invencion pueden ser utiles en el tratamiento de las afecciones de la piel que requieran una regulacion de la fibrilogenesis, tal como el tratamiento de pieles envejecidas (ya sea debido a la edad o debido a la exposicion al sol y/o a los contaminantes ambientales) o como coadyuvantes en los procesos de cicatrizacion para suavizar el aspecto de las cicatrices.

Descripcion de la invencion

La presente invencion proporciona una solucion simple, eficaz y sin riesgos para el tratamiento de las afecciones de la piel que requieren una regulacion de la fibrilogenesis, tal como el envejecimiento o la cicatrizacion, que comprende la aplicacion sobre la piel de una composicion cosmetica o dermofarmaceutica que contiene, por lo menos, un peptido de formula general (I). En el contexto de la presente invencion, el termino “tratamiento” se refiere a la reduccion, retraso y/o prevencion de los signos de envejecimiento o a la suavizacion del aspecto de las cicatrices. El termino “envejecimiento” se refiere a los cambios que experimenta la piel con la edad (cronoenvejecimiento) o debido a la exposicion al sol (fotoenvejecimiento) o a agentes ambientales tales como el humo del tabaco, las condiciones climaticas extremas de frio o viento, los contaminantes qmmicos o la polucion, e incluye todos los cambios externos visibles asf como los perceptibles mediante el tacto, tal como, por ejemplo, y sin limitacion, el desarrollo de discontinuidades en la piel tales como arrugas, lmeas finas, grietas, irregularidades o rugosidades, aumento del tamano de los poros, perdida de la elasticidad, perdida de la firmeza, perdida de la tersura, perdida de la capacidad de recuperacion de la deformacion, flacidez de la piel tal como la flacidez de las mejillas, la aparicion de bolsas bajo los ojos o la aparicion de papada, entre otros, cambios en el color de la piel tal como manchas, enrojecimiento, ojeras o aparicion de zonas hiperpigmentadas tales como manchas de la edad o pecas, entre otros, diferenciacion anomala, hiperqueratinizacion, elastosis, queratosis, perdida de pelo, perdida de la estructuracion del colageno y otros cambios histologicos del estrato corneo, de la dermis, de la epidermis, del sistema vascular (por ejemplo, la aparicion de venas de arana o telangiectasias) o de los tejidos proximos a la piel entre otros.

5

10

15

20

25

30

35

40

Por lo tanto, un primer aspecto de la presente invencion se refiere a un peptido capaz de regular la fibrilogenesis, de acuerdo con formula general (I):

imagen1

sus estereoisomeros y mezclas de los mismos, que pueden ser racemicas o no, y las sales cosmeticamente o dermofarmaceuticamente aceptables de los mismos, en la que:

Z se selecciona del grupo que consiste en alanilo, a/oisoleucilo, glicilo, isoleucilo, isoserilo, isovalilo, leucilo, norleucilo, norvalilo, prolilo, serilo, treonilo, a/otreonilo o valilo; n y m pueden variar independientemente uno del otro entre 1 y 5;

Ri se selecciona del grupo que consiste en H o grupo alquilo, arilo, aralquilo o acilo; y

R2 se selecciona del grupo que consiste en amino, hidroxilo o tiol, sustituidos o no con grupos alifaticos o dclicos.

Las estructuras preferentes de los peptidos mostradas en la formula general (I) son aquellas en las que:

Z puede ser: isoleucilo, treonilo o valilo;

Ri puede ser: H o acilo de C2 a C24 lineal, ramificado o dclico, saturado o insaturado; y

R2 puede ser: amino o hidroxilo, sustituidos o no con grupos alifaticos de Ci a C24 lineales, ramificados o dclicos, saturados o insaturados.

Los peptidos de la presente invencion pueden existir como estereoisomeros o mezclas de estereoisomeros; por ejemplo, los aminoacidos que los componen pueden tener configuracion L-, D-, o pueden ser racemicos independientemente uno de otro. Por lo tanto, es posible obtener mezclas isomericas asf como racematos o mezclas diastereoisomericas, o diastereoisomeros o enantiomeros puros, dependiendo del numero de carbonos asimetricos y de que isomeros o mezclas isomericas esten presentes.

Las estructuras preferentes de los peptidos de formula general (I) son isomeros puros, es decir, enantiomeros o diastereisomeros.

En el contexto de la presente invencion, la expresion "aminoacidos no codificados" se refiere a los aminoacidos que no codifica el codigo genetico, naturales o no, tal como por ejemplo, y sin limitacion, citrulina, ornitina, sarcosina, desmosina, norvalina, acido 4-aminobutmco, acido 2-aminobutmco, acido 2-aminoisobutmco, acido 6- aminohexanoico, 1-naftilalanina, 2-naftilalanina, acido 2-aminobenzoico, acido 4-aminobenzoico, 4-clorofenilalanina, acido 2,3-diaminopropionico, acido 2,4-diaminobutmco, cicloserina, carnitina, cistina, penicilamina, acido piroglutamico, tienilalanina, hidroxiprolina, a/oisoleucina, a/otreonina, acido isonipecotico, isoserina, fenilglicina, estatina, 13-alanina, norleucina, W-metilaminoacidos, 13-aminoacidos o Y-aminoacidos, entre otros, asf como sus derivados. Se puede encontrar una lista de los aminoacidos no naturales en el artfculo "Unusual amino acids in peptide synthesis" de D.C. Roberts y F. Vellaccio, en The Peptides, Vol. 5 (1983), Capftulo VI, Gross E. and Meienhofer J., Eds., Academic Press, Nueva York, USA, o en los catalogos comerciales de las empresas especializadas del sector, como por ejemplo NeoMPS, Bachem, Novabiochem, Sigma-Aldrich, Peptides International, Advanced ChemTech, Chem-Impex, Maybridge Chemical, Chirotech Technology, Peninsula Laboratories o RSP Amino Acid Analogues entre otras.

En el contexto de la presente invencion, la expresion “grupo alifatico” se refiere a un grupo hidrocarburo saturado o insaturado, lineal o dclico.

La expresion “grupo hidrocarburo” se utiliza en la presente invencion para abarcar, por ejemplo, los grupos alquilo, alquenilo y alquinilo.

La expresion “grupo alquilo” se refiere a un grupo hidrocarburo saturado, lineal o ramificado, que incluye, por ejemplo, metilo, etilo, isopropilo, isobutilo, f-butilo, heptilo, dodecilo, hexadecilo, octadecilo, amilo, 2-etilhexilo, 2-metilbutilo, 5-metilhexilo.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

La expresion “grupo alquenilo” se refiere a un grupo hidrocarburo no saturado, lineal o ramificado, con uno o mas enlaces dobles carbono-carbono, tales como el grupo vinilo.

La expresion “grupo alquinilo” se refiere a un grupo hidrocarburo no saturado, lineal o ramificado con uno o mas enlaces triple carbono-carbono.

La expresion “grupo dclico” se refiere a un anillo hidrocarburo cerrado, que puede clasificarse como un grupo alidclico, aromatico o heterodclico.

La expresion “grupo alidclico” se refiere a un grupo hidrocarburo dclico con propiedades similares a grupos alifaticos.

La expresion “grupo aromatico” o “grupo arilo” se refieren a un grupo hidrocarburo aromatico mono o polidclico.

La expresion “grupo heterodclico” se refiere a un anillo hidrocarburo cerrado, en el que uno o mas de uno de los atomos del anillo es un elemento distinto del carbono (por ejemplo, nitrogeno, oxfgeno, azufre, etc.).

Dentro del ambito de la presente invencion estan las sales cosmeticamente o dermofarmaceuticamente aceptables de los peptidos de formula (I) proporcionados por esta invencion. La expresion “sales cosmeticamente o dermofarmaceuticamente aceptables” incluye las sales habitualmente utilizadas para formar sales metalicas o sales de adicion de acidos, bien sean organicos (tal como, por ejemplo, acetato, citrato, oleato, oxalato o gluconato) o inorganicos (tal como, por ejemplo, cloruro, sulfato, borato o carbonato). La naturaleza de la sal no es cntica, siempre y cuando sea cosmeticamente o farmaceuticamente aceptable. Las sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables de los peptidos de formula (I) pueden obtenerse por procedimientos convencionales, bien conocidos en el estado de la tecnica.

La smtesis de los peptidos de formula general (I) puede llevarse a cabo de acuerdo con procedimientos convencionales, conocidos en el estado de la tecnica, tal como, por ejemplo, la adaptacion de los procedimientos de smtesis de peptidos en fase solida [Stewart J.M. y Young J.D. (1984) “Solid Phase Peptide Synthesis”, 2nd edition, Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois; Bodanzsky M. y Bodanzsky A. (1984) “The practice of Peptide Synthesis”, Springer Verlag, Nueva York; Lloyd-Williams P., Albericio F. y Giralt E. (1997) Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins. CRC, Boca Raton (FL, USA)], la smtesis en solucion, una combinacion de los procedimientos de smtesis en fase solida y de smtesis en solucion o procedimientos de smtesis enzimatica [Kullmann W. (1980) “Proteases as catalysts for enzymatic syntheses of opioid peptides” J. Biol. Chem. 255, 82348238]. Los peptidos se pueden obtener tambien por la fermentacion de una cepa bacteriana que este modificada o no por ingeniena genetica, con el objetivo de producir las secuencias deseadas.

Por ejemplo, un procedimiento de obtencion de los peptidos de formula general (I) es aquel en el cual se hace reaccionar un fragmento del peptido de formula general (I) que tiene un grupo carboxilo libre o un derivado reactivo del mismo, con un fragmento complementario que tiene un grupo amino, con por lo menos un atomo de hidrogeno libre, con la posterior formacion de un enlace tipo amida, y en el que los grupos funcionales de dichos fragmentos que no participan en la formacion del enlace tipo amida, si los hubiera, estan convenientemente protegidos con grupos protectores temporales o permanentes.

Otro ejemplo de un procedimiento de obtencion de los peptidos de formula general (I) es aquel en el cual se hace reaccionar un fragmento del peptido de formula general (I) que tiene un grupo saliente, tal como, por ejemplo, el grupo tosilo, el grupo mesilo y grupos halogeno, entre otros, con un fragmento complementario que tiene un grupo amino con por lo menos un atomo de hidrogeno libre por medio de una reaccion de sustitucion nucleofila, y en el que los grupos funcionales de dichos fragmentos que no participan en la formacion del enlace N-C, si los hubiera, estan convenientemente protegidos, con grupos protectores temporales o permanentes. Ejemplos de grupos protectores, su insercion y su eliminacion, pueden encontrarse descritos en la literatura [Greene T.W. (1981) “Protective groups in organic synthesis”, John Wiley & Sons, New York; Atherton B. y Sheppard R.C. (1989) “Solid Phase Peptide Synthesis: A practical approach”, IRL Oxford University Press]. La expresion “grupos protectores” incluye tambien a los soportes polimericos empleados en la smtesis en fase solida.

Cuando la smtesis se lleva cabo total o parcialmente en fase solida, se pueden citar los siguientes como soportes solidos a utilizar en el procedimiento de la invencion: soportes fabricados de poliestireno, poliestireno injertado con polietilenglicol y similares, tal como, por ejemplo, resinas de p-metilbenzhidrilamina (MBHA) [Matsueda G.R. y Stewart J.M. (1981) “A p-methylbenzhydrylamine resin for improved solid-phase synthesis of peptide amides” Peptides 2, 45-50], resinas de 2-clorotritilo [Barlos K., Gatos D., Kallitsis J., Papaphotiu G., Sotiriu P., Wenqing Y. y Schafer W. (1989) “Darstellung geschutzter peptid-fragmente unter einsatz substituierter triphenylmethyl-harze” Tetrahedron Lett. 30, 3943-3946; Barlos K., Gatos D., Kapolos S., Papaphotiu G., Schafer W. y Wenqing Y. (1989) “Veresterung von partiell geschutzten peptid-fragmenten mit harzen. Einsatz von 2-chlortritylchlorid zur synthese von Leu15 -gastrin I” Tetrahedron Lett. 30, 3947-3951], resinas TentaGel®, y similares, las cuales pueden incluir o no un espaciador inestable, tal como acido 5-(4-aminometil-3,5-dimetoxifenoxi) valerico (PAL) [Albericio F., Kneib- Cordonier N., Biancalana S., Gera L., Masada R.I., Hudson D. y Barany G. (1990) “Preparation and application of the 5-(4-(9-fluorenylmethyloxycarbonyl)aminomethyl-3,5-dimethoxyphenoxy)-valeric acid (PAL) handle for the solid- phase synthesis of C-terminal peptide amides under mild conditions” J. Org. Chem. 55, 3730-3743], acido

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

2-[4-aminometil-(2,4-dimetoxifenil)] fenoxiacetico (AM) [Rink H. (1987) “Solid-phase synthesis of protected peptide fragments using a trialkoxy-diphenyl-methylester resin” Tetrahedron Lett. 28, 3787-3790], Wang [Wang, S.S. (1973) “p-Alkoxybenzyl Alcohol Resin and p-Alkoxybenzyloxycarbonylhydrazide Resin for Solid Phase Synthesis of Protected Peptide Fragments” J. Am. Chem. Soc. 95, 1328-1333] y similares, que permiten la desproteccion y la escision simultanea del compuesto del soporte polimerico.

Los peptidos de acuerdo con la invencion pueden formar parte de diversos tipos de composiciones para su aplicacion externa en el cuerpo de un mairnfero, preferentemente seres humanos. En este sentido, la invencion proporciona una composicion cosmetica o dermofarmaceutica que comprende por lo menos un peptido de formula general (I). Dichas composiciones se pueden preparar por medio de procedimientos convencionales conocidos para los expertos en la materia.

Los peptidos objeto de la presente invencion tienen una solubilidad en agua variable, de acuerdo con la naturaleza de los grupos R1, R2, y Z y los valores de n y m. Aquellos que no sean solubles en agua pueden solubilizarse en disolventes convencionales cosmeticamente o dermofarmaceuticamente aceptables, tales como, por ejemplo, etanol, propanol o isopropanol, propilenglicol, glicerina, butilenglicol o polietilenglicol o cualquier combinacion de los mismos. Los peptidos tambien se pueden incorporar previamente en sistemas de suministro y/o sistemas de liberacion sostenida cosmeticos o farmaceuticos tales como liposomas, milipartmulas, micropartmulas y nanopartmulas asf como en esponjas, vesmulas, micelas, miliesferas, microesferas y nanoesferas, lipoesferas, milicapsulas, microcapsulas y nanocapsulas, con el fin de conseguir una mayor penetracion del principio activo. Asimismo, los peptidos de la presente invencion tambien pueden adsorberse sobre polfmeros organicos solidos o soportes minerales tales como talco, bentonita, sflice, almidon o maltodextrina, entre otros.

Estas preparaciones pueden utilizarse en distintos tipos de formulaciones tal como, por ejemplo, cremas, emulsiones de aceite y/o silicona en agua, emulsiones de aceite en agua, emulsiones de silicona en agua, emulsiones de agua en aceite y silicona, emulsiones de agua en aceite, aceites, leches, balsamos, espumas, lociones, geles, linimentos, sueros, jabones, unguentos, mousses, pomadas, barras, lapices o aerosoles, incluyendo las formulaciones de “dejar actuar” y las de “aclarar”, y pueden tambien incorporarse por medio de tecnicas conocidas para los expertos en la materia, a distintos tipos de accesorios solidos tales como toallitas, hidrogeles, parches adhesivos (o no adhesivos) o mascarillas faciales, o pueden incorporarse a distintos productos de lmea de maquillaje tales como correctores, bases de maquillaje, lociones o leches desmaquillantes, sombras de ojos y barras de labios, entre otros.

Los peptidos tambien pueden incorporarse a tejidos para la fabricacion de prendas que esten en contacto directo con la piel del cuerpo, de modo que liberen los peptidos de la invencion bien por biodegradacion del sistema de anclaje al tejido, o bien por la friccion de la prenda con el cuerpo, por la humedad corporal, por el pH de la piel o por la temperatura corporal. Estan descritos en la literatura y son conocidos en el estado de la tecnica [Schaab C.K. (1986) "Impregnating Fabrics With Microcapsules", HaPPI May 1986; Nelson G. (2002) “Application of microencapsulation in textiles” Int. J. Pharm. 242, 55-62] ejemplos de prendas, tejidos y medios de inmovilizacion de los peptidos a los tejidos, que incluyen la microencapsulacion. Las prendas preferentes son vendas, fajas, pantis, calcetines, bragas, sujetadores y bandas para los brazos y antebrazos.

La composicion cosmetica o farmaceutica objeto de la presente invencion puede aplicarse en las zonas del cuerpo que requieran tratamiento por medio de inyeccion subcutanea, inyeccion intradermica, envoltura de vapor o por medio de iontoforesis, con el fin de conseguir una mayor penetracion del principio activo. Las zonas preferentes para la aplicacion son rostro, cuello, antebrazos, pecho, gluteos, abdomen y muslos.

Las composiciones mencionadas en la presente invencion pueden contener ingredientes adicionales comunmente utilizados en composiciones para el cuidado y tratamiento de la piel, tales como, por ejemplo, y sin limitacion, agentes de emulsion, emolientes, disolventes organicos, acondicionadores de la piel tal como, por ejemplo, humectantes, alfa hidroxiacidos, hidratantes, vitaminas, pigmentos o colorantes, polfmeros gelificantes, espesantes, suavizantes, agentes antiarrugas, agentes capaces de reducir o tratar las bolsas bajo los ojos, agentes blanqueantes o despigmentantes, agentes exfoliantes, agentes antienvejecimiento, agentes anti radicales libres y/o agentes anti polucion atmosferica, agentes inhibidores de la NO-sintasa, agentes antioxidantes, agentes antiglicacion, agentes estimulantes de la smtesis de macromoleculas dermicas o epidermicas y/o capaces de inhibir su degradacion, tal como, por ejemplo, agentes estimulantes de la smtesis de colageno, agentes estimulantes de la smtesis de elastina, agentes estimulantes de la smtesis de laminina, agentes estimulantes de la smtesis de decorina, agentes inhibidores de la degradacion de colageno, agentes inhibidores de la degradacion de elastina, agentes estimulantes de la proliferacion de fibroblastos, agentes estimulantes de la proliferacion de queratinocitos, agentes estimulantes de la diferenciacion de queratinocitos, agentes estimulantes de la smtesis de lfpidos y de componentes del estrato corneo (ceramidas, acidos grasos, etc.), agentes dermorrelajantes, agentes estimulantes de la smtesis de glicosaminoglucanos, agentes reafirmantes, agentes antiestnas, agentes calmantes, agentes antiinflamatorios, agentes que actuen sobre la circulacion y/o la microcirculacion capilar, agentes que actuen sobre el metabolismo de las celulas, agentes estimulantes y/o inhibidores de la smtesis de melanina, agentes que mejoren la union dermo- epidermica, agentes antimicrobianos, conservantes, perfumes, agentes quelantes, extractos vegetales, aceites esenciales, extractos marinos, agentes producidos mediante biofermentacion, sales minerales, extractos celulares y filtros solares (agentes fotoprotectores organicos o minerales que son activos frente a los rayos ultravioletas A y B), entre otros, siempre que sean ffsica y qmmicamente compatibles con el resto de los componentes de la

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

composicion, y en especial con los peptidos de formula general (I) de la presente invencion. La naturaleza de dichos ingredientes adicionales puede ser sintetica o de origen natural, tal como, por ejemplo, extractos vegetales.

Asimismo, las composiciones de la presente invencion pueden contener o se pueden coadministrar con compuestos analgesicos y/o compuestos antiinflamatorios con el fin de reducir la hinchazon y la irritacion asociadas tanto a pieles sensibles como a los procesos de cicatrizacion, o para tratar las cicatrices hipertroficas o queloideas. Entre dichos compuestos pueden destacarse compuestos de tipo esteroide tal como la hidrocortisona, compuesto de tipo no esteroide tal como el paracetamol o el acido acetilsalidlico, o extractos naturales o aceites esenciales con actividad analgesica y antiinflamatoria intrmseca.

Un aspecto adicional de la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica o dermofarmaceutica que comprende una cantidad cosmeticamente o dermofarmaceuticamente eficaz de por lo menos un peptido de acuerdo con la formula general (I), y ademas una cantidad cosmeticamente o dermofarmaceuticamente eficaz de por lo menos un extracto con actividad antiarrugas y/o antienvejecimiento tal como, por ejemplo, y sin limitacion, los extractos de Vitis vinifera, Rosa canina, Curcuma longa, Iris pallida, Theobroma cacao, Ginkgo biloba, o Dunaliella salina, entre otros o, por otra parte, por lo menos un compuesto sintetico, extracto o producto de biofermentacion con actividad antiarrugas y/o antienvejecimiento como por ejemplo y sin limitacion, Matrixyl® que comercializa Sederma, Vialox® o Syn-ake® que comercializa Pentapharm, Myoxinol™ que comercializa Cognis, Algisum C® o Hydroxyprolisilane CN® que comercializa Exsymol, Argireline®, Leuphasyl®, Aldenine® o Lipochroman® que

ffis ffis ffis

comercializa Lipotec, Kollaren que comercializa Institut Europeen de Biologie Cellulaire, Collaxyl o Quintescine que comercializa Vincience, antagonistas del canal de Ca2+ tal como sales de alverina, de manganeso o de magnesio, determinadas aminas secundarias o terciarias, retinol y sus derivados, idebenona y sus derivados, Coenzima Q10 y sus derivados, acido boswelico y sus derivados, acido gamma aminobutmco o agonistas de canales de cloruro, entre otros.

Un aspecto adicional de la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica o dermofarmaceutica que comprende una cantidad cosmeticamente o dermofarmaceuticamente eficaz de por lo menos un peptido de acuerdo con la formula general (I), y ademas una cantidad cosmeticamente o dermofarmaceuticamente eficaz de por lo menos un extracto o combinacion de extractos con actividad reafirmante, redensificante y/o reestructurante tal como, por ejemplo, y sin limitacion, los extractos de Malpighia punicitolia, Cynara scolymus, Gossypium herbaceum, Aloe barbadensis, Panicum miliaceum, Morus nigra, Sesamum indicum, Glycine soja, Triticum vulgare, Pronalen® Refirming HSC o Polyplan® Refirming que comercializa Provital, Lanablue® que comercializa Atrium, Pepha®-Nutrix que comercializa Pentapharm, o extractos vegetales que contengan isoflavonas tales como Phyto- Flavone® que comercializa Vichy, entre otros o, por otra parte, por lo menos un compuesto sintetico, extracto o producto de biofermentacion con actividad reafirmante, redensificante y/o reestructurante tal como, por ejemplo, y sin limitacion, Biopeptide ELTM, Biopeptide CLTM, Vexel®, Matrixyl® o Bio-BustylTM que comercializa Sederma,

ms ffis ffis ffis

Dermosaccharides HC, Aglycal , Cytokinol LS o Firmiderm LS9120 que comercializa Laboratoires

® ® ® ®

Serobiologiques, Liftline , Raffermine o Ridulisse C que comercializa Silab, Serilesine que comercializa Lipotec,

Ursolisome , Basaline o Collalift que comercializa Coletica/Engelhard, Syn -Coll que comercializa Pentapharm,

Hydriame® que comercializa Atrium o IP2000® que comercializa Institut Europeen de Biologie Cellulaire entre otros.

Un aspecto adicional de la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica o dermofarmaceutica que comprende una cantidad cosmeticamente o dermofarmaceuticamente eficaz de por lo menos un peptido de acuerdo con la formula general (I), y ademas una cantidad cosmeticamente o dermofarmaceuticamente eficaz de por lo menos un extracto o combinacion de extractos con actividad cicatrizante o reepitelizante o con eficacia como coadyuvantes en procesos de cicatrizacion o reepitelizacion tales como, por ejemplo, y sin limitacion, los extractos de Centella asiatica, Rosa moschata, Echinacea angustifolia, Symphytum officinal, Equisetum arvense, Hypericum perforatum, Mimosa tenuiflora, Aloe vera, Polyplant® Epithelizing que comercializa Provital, Cytokinol® LS 9028 que comercializa Pentapharm o Deliner® que comercializa Coletica/Engelhard, entre otros, o por otra parte, por lo menos un compuesto sintetico, extracto o producto de biofermentacion con actividad cicatrizante o reepitelizante o con eficacia como coadyuvante en procesos de cicatrizacion o reepitelizacion, tal como, por ejemplo, y sin limitacion, Antarcticine® que comercializa Lipotec, entre otros.

Los peptidos de formula general (I) se utilizan en las composiciones cosmeticas o dermofarmaceuticas de la presente invencion a concentraciones cosmeticamente o farmaceuticamente eficaces para conseguir el efecto deseado; preferentemente entre el 0,000001 % (en peso) y el 20 % (en peso); mas preferentemente entre el 0,00001 % (en peso) y el 10 % (en peso) e incluso mas preferentemente entre el 0,0001 % (en peso) y el 5 % (en peso).

Por tanto, un aspecto adicional de la presente invencion se refiere al uso de por lo menos un peptido de formula general (I) en la preparacion de una composicion cosmetica o dermofarmaceutica para su aplicacion en la piel, preferentemente para el tratamiento de aquellas condiciones de la piel que requieran una regulacion de la fibrilogenesis, tal como el tratamiento de pieles envejecidas (bien sea debido a la edad o a la exposicion al sol y/o a los contaminantes ambientales) o como coadyuvantes en los procesos de cicatrizacion para suavizar el aspecto de las cicatrices. Las aplicaciones preferentes son las aplicaciones en muslos, abdomen, gluteos, pecho, antebrazos, cuello y rostro, o sobre aquellas zonas del cuerpo que presenten cicatrices.

La presente invencion proporciona adicionalmente un procedimiento cosmetico o dermofarmaceutico para tratar aquellas afecciones de la piel que requieran una regulacion de la fibrilogenesis, preferentemente la piel de los humanos, que comprende la administracion de una cantidad eficaz de peptidos de formula general (I), preferentemente en forma de una composicion cosmetica o dermofarmaceutica que los contiene. La frecuencia de la 5 aplicacion sobre la piel puede variar extensamente, dependiendo de las necesidades de cada sujeto, sugiriendose un intervalo de aplicacion desde una vez al mes hasta 10 veces al dfa, preferentemente desde una vez a la semana hasta 4 veces al dfa, mas preferentemente desde tres veces por semana hasta dos veces al dfa, e incluso mas preferentemente una vez al dfa.

Un procedimiento cosmetico o dermofarmaceutico preferente es aquel en el que el objeto de la regulacion de la 10 fibrilogenesis es reducir, retrasar y/o prevenir los signos de envejecimiento o suavizar el aspecto de las cicatrices.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos espedficos que se proporcionan en el presente documento sirve son utiles para ilustrar la naturaleza de la presente invencion. Estos ejemplos se incluyen solamente con fines ilustrativos y no han de ser interpretados como limitantes de la invencion que se reivindica en el presente documento.

15 Metodologia General

Sintesis quimica

Todos los procedimientos sinteticos se llevan a cabo en jeringas de polipropileno equipadas con discos de polietileno poroso. Todos los reactivos y disolventes son de calidad para sintesis y se utilizan sin ningun tratamiento adicional. Los disolventes y los reactivos solubles se eliminan por succion. La eliminacion del grupo Fmoc se lleva a cabo con 20 piperidina-DMF (2:8, v/v) (1 x 1 min, 1 x 5 min; resina 5 ml/g) [Lloyd-Williams, P., Albericio, F. y Giralt, E. (1997) “Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins” CRC, Boca Raton (FL, USA)]. Los lavados entre las etapas de desproteccion, acoplamiento, y, otra vez, desproteccion se han llevado a cabo con DMF (3 x 1 min) utilizando cada vez 10 ml de disolvente/g de resina. Las reacciones de acoplamiento se han llevado a cabo con 3 ml de disolvente/g de resina. El control de los acoplamientos se llevo a cabo por medio de la prueba de la ninhidrina 25 [Kaiser, E., Colescott R.L., Bossinger C.D. y Cook P.I. (1970) “Color test for detection of free terminal amino groups in the solid-phase synthesis of peptides” Anal. Biochem. 34, 595-598]. Todas las transformaciones sinteticas y los lavados se han llevado a cabo a 25 °C.

El analisis cromatografico por HPLC se llevo a cabo en un equipo Shimadzu (Kyoto, Japon) utilizando una columna de fase inversa termoestatizada a 30 °C (250 x 4,0 mm, Kromasil Ca, 5 pm, Akzo Nobel, Suecia). La elucion se llevo 30 a cabo por medio de un gradiente de acetonitrilo (+TFA al 0,07 %) en agua (+TFA al 0,1 %) a un flujo de 1 ml/min, y la deteccion se llevo a cabo a 220 nm.

Abreviaturas:

Las abreviaturas utilizadas para los aminoacidos siguen las reglas de la Comision de Nomenclatura Bioqmmica de la IUPAC-IUB especificadas en Eur. J. Biochem. (1984) 138, 9-37 y en J. Biol. Chem. (1989) 264, 633-673.

35 Ac, acetilo; AM, acido 2-[4-aminometil-(2,4-dimetoxifenil)-fenoxiacetico; Boc, ferc-butiloxicarbonilo; Cit, citrulina; Dap, acido 2,3-diaminopropionico; DCM, diclorometano; DIEA, W,A/-diisopropiletilamina; DIPCDI,

W,W'-diisopropilcarbodiimida; DMF, W,W-dimetilformamida; equiv, equivalentes; DPPC, dipalmitoilfosfatidilcolina; ES-MS, espectrometna de masas por electropulverizacion; Fmoc, fluorenilmetoxicarbonilo; GAG, glicosaminoglicanos; HOBt, 1-hidroxibenzotriazol; HPLC, cromatograffa lfquida de alto rendimiento; MBHA, resina 40 p-metilbenzhidrilamina; MeCN, acetonitrilo; MeOH, metanol; VML, vesfculas multilaminares; Nva, norvalina; Orn,

ornitina; Palm, palmitoilo; tBu, ferf-butilo; TFA, acido trifluoroacetico; TGF-13, factor de crecimiento transformante U; THF, tetrahidrofurano; TIS, triisopropilsilano; VUL, vesfculas unilaminares.

Ejemplo 1

Obtencion de Palm-Dap-Glu-Ile-Cit-OH

45 Se incorporaron 3,5 g de Fmoc-L-Cit-OH (8,8 mmol, 1 equiv) disueltos en 55 ml de DCM a los que se han anadido 1,3 ml de DIEA (7,6 mmol, 0,86 equiv) a la resina de 2-clorotritilo (5,5 g, 8,8 mmol) seca. Se dejo en agitacion durante 5 min, pasados los cuales se anadieron 2,5 ml de DIEA (14,6 mmol, 1,66 equiv). Se dejo reaccionar durante 40 minutos. Se bloquearon los grupos cloruro restantes mediante tratamiento con 4,4 ml de MeOH.

Se desprotegio el grupo Fmoc amino terminal como se describe en los procedimientos generales y se incorporaron a 50 la peptidil-resina 7,77 g de Fmoc-L-Ile-OH (22 mmol, 2,5 equiv) en presencia de DIPCDI (3,39 ml, 22 mmol, 2,5 equiv) y HOBt (3,37 g, 22 mmol, 2,5 equiv) utilizando DMF como disolvente durante 1 h. La resina se lavo posteriormente como se describe en los procedimientos generales y se repitio el tratamiento de desproteccion del grupo Fmoc para incorporar el siguiente aminoacido. Siguiendo los protocolos descritos se acoplaron secuencialmente 9,36 g de Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (22 mmol, 2,5 equiv) y 9,38 g de Fmoc-L-Dap(Boc)-OH (22 mmol,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

2.5 equiv), en presencia, en cada acoplamiento, de 3,37 g de HOBt (22 mmol, 2,5 equiv) y 3,39 ml de DIPCDI (22 mmol, 2,5 equiv).

Se desprotegio el grupo Fmoc N-terminal como se describe en los procedimientos generales, y se incorporaron

22.5 g de acido palmttico (88 mmol, 10 equiv) predisuelto en DMF (10 ml), en presencia de 13,55 g de HOBt (88 mmol, 10 equiv) y 13,55 ml de DIPCDI (88 mmol, 10 equiv). Se dejo reaccionar durante 15 horas, pasadas las cuales la resina se lavo con THF (5 x 1 min), DCM (5 x 1 min), DmF (5 x 1 min), MeOH (5 x 1 min), DMF (5 x 1 min), THF (5 x 1 min), DMF (5 x 1 min), DCM (4 x 1 min), eter (3 x 1 min), y se seco al vado.

12,36 g de la peptidil-resina seca se trataron con 87 ml de TFA-TIS-H2O (90:5:5) durante 2 horas a temperatura ambiente. Se recogieron los filtrados en eter dietflico fno (700 ml), se filtro a traves de una placa porosa y se lavo el precipitado 5 veces con eter (500 ml). El precipitado final se seco al vado.

Ejemplo 2:

Sntesis de H-Lys-Asp-Val-Cit-NH2

0,685 mg de la resina Fmoc-AM-MBHA con una funcionalizacion de 0,73 mmol/g (0,5 mmol) con piperidina-DMF de acuerdo con el protocolo general descrito, con el fin de eliminar el grupo Fmoc. A la resina desprotegida se incorporaron 0,99 g de Fmoc-L-Cit-OH (2,5 mmol, 5 equiv) en presencia de DIPCDI (385 pl, 2,5 mmol, 5 equiv) y HOBt (385 mg, 2,5 mmol, 5 equiv) utilizando DMF como disolvente durante 1 hora.

Posteriormente se lavo la resina como se describe en los procedimientos generales, y se repitio el tratamiento de desproteccion del grupo Fmoc para incorporar el siguiente aminoacido. Siguiendo los protocolos descritos se acoplaron secuencialmente 0,85 g de Fmoc-L-Val-OH (2,5 mmol, 5 equiv), 1,03 g de Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH (2,5 mmol, 5 equiv) y 1,17 g de Fmoc-L-Lys(Boc)-OH (2,5 mmol, 5 equiv) en presencia en cada acoplamiento de 385 mg de HOBt (2,5 mmol, 5 equiv) y 385 pl de DIPCDI (2,5 mmol, 5 equiv).

Se desprotegio el grupo Fmoc N-terminal como se describe en los procedimientos generales, se lavo con DMF (5 x 1 min), DCM (4 x 1 min), eter dietflico (4 x 1 min) y se seca al vado.

1,17 g de la peptidil-resina secar se trataron con 15 ml de TFA-TIS-H2O (90:5:5) durante 2 horas a temperatura ambiente. Se recogieron los filtrados en eter dietflico fno (100 ml), se centrifugaron durante 5 min a 4000 rpm y se decanto la solucion eterea. Se repitieron los lavados con eter 5 veces. El precipitado final se seco al vado.

El analisis por HPLC en un gradiente del 5 al 95 % de MeCN (+TFA al 0,07 %) en H2O (+TFA al 0,1 %) mostro una pureza mayor al 70 %. Su peso molecular se determino mediante ES-MS [(M+H)+teorico 517,59, (M+H)+exp 517,7].

Ejemplo 3:

Obtencion de Ac-Orn-Asp-Thr-Cit-NH-(CH2)g-CH3

Se incorporaron 1,28 g de Fmoc-L-Cit-OH (3,23 mmol, 1 equiv) disueltos en 20 ml de DCM a los que se han anadido 500 pl de DIEA (2,9 mmol, 0,90 equiv) a la resina de 2-clorotritilo (2,0 g, 3,3 mmol) seca. Se dejo en agitacion durante 5 minutos, pasados los cuales se anadio 1 ml de DIEA (5,9 mmol, 1,81 equiv). Se dejo reaccionar durante 40 minutos. Se bloquearon los grupos cloruro restantes mediante el tratamiento con 1,6 ml de MeOH.

Se desprotegio el grupo Fmoc amino terminal en 1 mmol de la aminoacil-resina, como se describe en los procedimientos generales, y se incorporaron 1,99 g de Fmoc-L-Thr(tBu)-OH (5 mmol, 5 equiv) en presencia de DIPCDI (770 pl, 5 mmol, 5 equiv) y HOBt (770 mg, 5 mmol, 5 equiv), utilizando DMF como disolvente durante 1 hora. Posteriormente la resina se lavo como se describe en los procedimientos generales, y se repitio el tratamiento de desproteccion del grupo Fmoc para incorporar el siguiente aminoacido. Siguiendo los protocolos descritos se acoplaron secuencialmente 2,06 g de Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH (5 mmol, 5 equiv) y 2,27 g de Fmoc-L-Orn(Boc)-OH (5 mmol, 5 equiv) en presencia, en cada acoplamiento, de 770 mg de HOBt (5 mmol, 5 equiv) y 770 pl de DIPCDI (5 mmol, 5 equiv).

Se desprotegio el grupo Fmoc N-terminal como se describe en los procedimientos generales, se trato la peptidil- resina durante 30 min con 2,36 ml de anddrido acetico (25 mmol, 25 equiv) en presencia de 4,28 ml de DIEA (25 mmol, 25 equiv) utilizando DMF como disolvente, se lavo con DMF (5 x 1 min), DCM (4 x 1 min), eter dietflico (4 x 1 min) y se seco al vado.

El peptido completamente protegido [Ac-L-Orn(Boc)-L-Asp(OtBu)-L-Thr(tBu)-L-Cit-OH] se obtuvo mediante el tratamiento de la peptidil-resina previamente desecada al vado en presencia de KOH, con una solucion del TFA al 3 % en DCM durante 5 minutos. Los filtrados se recogieron en eter dietflico fno y el tratamiento se repitio tres veces. Las soluciones etereas se rotaevaporaron a sequedad a temperatura ambiente, el precipitado se resuspendio en MeCN al 50 % en H2O, y se liofilizo. Se pesaron 279 mg del producto bruto obtenido (367 pmol) en un matraz esferico, se anadieron 350 mg de decilamina (3 equiv) y 30 ml de DMF anhidra. Se anadieron 120 pl de DIPCDI (2 equiv), y se dejo reaccionar con agitacion magnetica a 47 °C. Se controlo la reaccion por medio de HPLC por desaparicion del producto inicial, completandose tras 24 horas. Se evaporo el disolvente a sequedad y se coevaporo

5

10

15

20

25

30

dos veces con DCM. El residuo obtenido [Ac-L-Orn(Boc)-L-Asp(OtBu)-L-Thr(tBu)-L-Cit-WH-(CH2)9-CH3] se resuspendio en 50 ml de una mezcla de TFA-DCM-anisol (49:49:2) y se dejo reaccionar durante 30 minutes a temperatura ambiente. Se anadieron 250 ml de eter dietilico frte, se rotaevaporo el disolvente y se llevaron a cabo dos coevaporaciones adicionales con eter. El residuo se disolvio en una mezcla de MeCN al 50 % en H2O y se liofilizo.

El analisis mediante HPLC en un gradiente del 5 al 95 % de MeCN (+TFA al 0,07 %) en H2O (+TFA al 0,1 %) indico una pureza superior al 70 %. Su peso molecular se determino mediante ES-MS [(M+H)+teorico 686,8, (M+H)+exp 686,9].

Ejemplo 4:

A partir de un modelo de piel humana tridimensional EFT-200 (MatTek Corporation), se trataron los tejidos con H- Lys-Asp-Ile-Cit-NH2 y con H-Lys-Asp-Val-Cit-NH2 a una concentracion de 0,1 mg/ml en medio de cultivo. Este se cambio diariamente durante 14 dfas, anadiendo peptido a la misma concentracion en cada cambio. El dfa 14, los tejidos se fijaron con una solucion de paraformaldetedo al 2 % y de glutaraldetedo al 2,5 % en tampon fosfato 0,1M, pH 7,4, durante por lo menos 2 horas a 4 °C. Despues, se llevo a cabo la postfijacion con tetraoxido de osmio al 1 % que contema ferricianuro de potasio al 0,8 % durante 1 hora a 4 °C. Despues, los tejidos se deshidrataron en alcoholes y se incluyeron lentamente en resina epoxi (Spurr). Se cortaron las muestras y se orientaron de forma correcta en el bloque, dejando que polimericen durante 48 horas a 60 °C. Posteriormente se seccionaron con un ultramicrotomo Ultracut E (Reichert-Jung) y los cortes obtenidos, una vez contrastados, se observaron con un Microscopio Electronico de Transmision Jeol JEM 1010, determinando el diametro de las fibras observadas con el programa AxioVision.AC (Carl Zeiss Vision).

El promedio de los diametros de las fibrillas de colageno observados fue de 6,825 nm para el tejido no tratado y de 5,774 nm para H-Lys-Asp-Val-Cit-NH2 y de 5,791 nm para H-Lys-Asp-Ile-Cit-NH2, lo que implica una reduccion del diametro de las fibras de colageno del 15,5 % para el tejido tratado con H-Lys-Asp-Val-Cit-NH2 y del 15,1 % para el tratado con H-Lys-Asp-Ile-Cit-NH2.

Ejemplo 5:

Preparacion de una composicion cosmetica conteniendo Palm-Lys-Asp-Ile-Cit-NH2 La siguiente formulacion se preparo segun se describe en la presente invencion:

En un reactor suficientemente grande se pesaron los componentes de la Fase A y se calento la mezcla a 80 °C para fundir las ceras. En un recipiente adecuado para todo el contenido se pesaron los componentes de la Fase B y se calentaron a 70 °C. Se anadio lentamente la Fase A a la Fase B y en intensa agitacion, y posteriormente se anadio la Fase C a la mezcla anterior en agitacion. Una vez finalizada la adicion, se dejo enfriar con agitacion suave y, cuando la mezcla estaba a temperatura ambiente, se anadio una solucion acuosa de Palm-Lys-Asp-Ile-Cit-NH2 y lecitina, se homogeneizo y corrigio el pH con trietanolamina si era necesario.

La crema que se obtiene tiene un pH entre 6 y 7 y una viscosidad de 10-15 Pa s (6/50).

INGREDIENTE

% EN PESO

FASE A

ACEITE MINERAL

8,0

Acido esteArico

2,4

ALCOHOL CETEARtelCO

1,6

CERA DE ABEJAS

0,8

FASE B

GLICERINA

2,4

AGUA

63,4

FASE C

CARBOMERO

0,3

TRIETANOLAMINA

0,9

FASE D

AGUA

15,0

Palm-Lys-Asp-Ile-Cit-NH2 (0,05 %)

5,0

LECITINA

0,4

Ejemplo 6:

Preparacion de liposomas conteniendo H-Lys-Asp-Val-Cit-NH2

Se peso dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) y se disolvio en cloroformo. El disolvente se evaporo al vado hasta 5 obtener una fina capa de fosfolfpidos, y esta capa se hidrato por tratamiento a 55 °C con una solucion acuosa que contema el peptido a la concentracion deseada (conteniendo Phenonip®), obteniendo los liposomas VML. Los liposomas vUl se obtienen sumergiendo los liposomas VML en un bano de ultrasonido a 55 °C durante 8 ciclos de 2 minutos en intervalos de 5 min.

INGREDIENTE

% EN PESO

DIPALMITOILFOSFATIDILCOLINA H-Lys-Asp-Val-Cit-NH2 PHENONIP® AGUA

4,0 0,2 0,5 c.s.p. 100

10

Claims (12)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   REIVINDICACIONES

   1. Un peptido de formula general (I):

   imagen1

   estereoisomeros del mismo, mezclas del mismo y sales cosmeticamente y dermofarmaceuticamente aceptables del mismo, en la que:

   Z se selecciona del grupo que consiste en alanilo, a/oisoleucilo, glicilo, isoleucilo, isoserilo, isovalilo, leucilo, norleucilo, norvalilo, prolilo, serilo, treonilo, a/otreonilo o valilo; n y m vanan de forma independiente uno del otro entre 1 y 5;

   Ri se selecciona del grupo que consiste en H o grupo alquilo, arilo, aralquilo o acilo;

   y R2 se selecciona del grupo que consiste en amino, hidroxilo o tiol, sustituido o no sustituido con grupos alifaticos o dclicos.
2. 2. El peptido de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que Z es L-isoleucilo, L-treonilo o L-valilo.
3. 3. El peptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que Z es L-Ile, Ri es H, acetilo o palmitoilo, m es 1, n es 4 y R2 es amino o hidroxilo, sustituido o no sustituido con grupos metilo o etilo o hexilo o dodecilo o hexadecilo.
4. 
   4. El peptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que Z es L-Thr, R1 es H, acetilo o

   
   palmitoilo, m es 1, n es 4 y R2 es amino o hidroxilo, sustituido o no sustituido con grupos metilo o etilo o hexilo o

   dodecilo o hexadecilo.
5. 
   5. El peptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que Z es L-Val, R1 es H, acetilo o

   
   palmitoilo, m es 1, n es 4 y R2 es amino o hidroxilo, sustituido o no sustituido con grupos metilo o etilo o hexilo o

   dodecilo o hexadecilo.
6. 6. Una composicion cosmetica o dermofarmaceutica que comprende una cantidad cosmetica o dermofarmaceuticamente eficaz de por lo menos un peptido de la formula (I) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque dicha composicion comprende por lo menos un excipiente o adyuvante cosmetica o dermofarmaceuticamente aceptable.
7. 7. La composicion cosmetica o dermofarmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 6, caracterizada porque el peptido de la formula general (I) esta incorporado en un sistema de suministro o en un sistema de liberacion sostenida que es cosmetica o dermofarmaceuticamente aceptable, seleccionado del grupo que consiste en liposomas, milicapsulas, microcapsulas, nanocapsulas, esponjas, vesfculas, micelas, miliesferas, microesferas, nanoesferas, lipoesferas, milipartfculas, micropartfculas y nanopartfculas.
8. 8. La composicion cosmetica o dermofarmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 6, caracterizada porque el peptido de la formula general (I) esta absorbido en un polfmero organico o soporte solido mineral cosmetica o dermofarmaceuticamente aceptable, seleccionado del grupo que consiste en talco, bentonita, sflice, almidon o maltodextrina.
9. 9. La composicion cosmetica o dermofarmaceutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, caracterizada porque dicha composicion tiene una formulacion seleccionada del grupo que consiste en cremas, emulsiones de aceite y silicona en agua, emulsiones de aceite en agua, emulsiones de silicona en agua, emulsiones de agua en aceite y silicona, emulsiones de agua en aceite, emulsiones de agua en silicona, aceites, leches, balsamos, espumas, lociones, geles, linimentos, sueros, jabones, unguentos, mousses, pomadas, barras, lapices y aerosoles.
10. 10. Una composicion cosmetica o dermofarmaceutica que comprende una cantidad cosmetica o dermofarmaceuticamente eficaz de por lo menos un peptido de la formula (I) de acuerdo con cualquiera de las

    reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque comprende una cantidad cosmetica o dermofarmaceuticamente eficaz adicional de un agente activo seleccionado del grupo que consiste en un agente exfoliante, un agente humectante, un agente despigmentante o blanqueante, un agente propigmentante, un agente antiestnas, un agente antiarrugas, un agente antioxidante, un agente antiglicacion, un inhibidor de la NO-sintasa, un agente antienvejecimiento, un 5 agente capaz de reducir o eliminar las bolsas bajo los ojos, un agente que estimula la smtesis de macromoleculas dermicas o epidermicas y/o previene su degradacion, un agente que estimula la proliferacion de queratinocitos, un agente que estimula la proliferacion de fibroblastos, un agente que estimula la proliferacion de fibroblastos y queratinocitos, un agente que estimula la diferenciacion de queratinocitos, un agente que mejora la union dermo- epidermica, un agente dermorrelajante, un agente reafirmante, un agente antipolucion atmosferica y/o anti radicales

    10 libres, un agente que actua sobre la circulacion y/o la microcirculacion capilar, un agente calmante, un agente antiinflamatorio, un agente antimicrobiano, un agente que actua sobre el metabolismo celular, vitaminas, un agente fotoprotector organico o mineral que es activo frente a los rayos ultravioleta A y/o B, o mezclas de los mismos.
11. 11. Uso de un peptido de la formula (I) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la preparacion de una composicion cosmetica o dermofarmaceutica para el tratamiento de la piel de seres humanos.

    15 12. Uso de un peptido de la formula (I) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la preparacion de

    una composicion cosmetica o dermofarmaceutica para el tratamiento de aquellas afecciones de la piel de mairnferos que requieren una regulacion de la fibrilogenesis.
12. 13. Uso de un peptido de la formula (I) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la preparacion de una composicion cosmetica o dermofarmaceutica que reduce o retrasa los signos de envejecimiento.

    20 14. Uso de un peptido de la formula (I) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la preparacion de

    una composicion cosmetica o dermofarmaceutica que suaviza el aspecto de las cicatrices.