BRPI0708841A2 - peptÍdeos sistÊmicos éteis no tratamento da pele e seus usos em composiÇÕes cosmÉticas ou dermofarmacÊuticas - Google Patents

Abstract

PEPTÍDEOS SINTÉTICOS éTEIS NO TRATAMENTO DA PELE E SEUS USOS EM COMPOSIÇÕES COSMÉTICAS OU DERMOFARMACÊUTICAS. A presente invenção se refere a peptídeos de fórmula geral (I) capazes de regular a fibrinogênese, seus esterecisómeros e misturas dos mesmos, racémicas ou não, e os sais cosméticamente ou dermofarmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, onde Z é alanil, allo-isoleucil, glicil, isoleucil, isoseril, isovalil, leucil, norleucil, norvalil, prolil, seril, treonil, allo-treonil ou valil; n e m podem variar entre 1 e 5; AA se seleciona do grupo formado pelos aminoácidos naturais codificados em sua forma L- ou D- e aminoácidos não codificados; x e y podem variar entre 0 e 2; R~ 1~ é H ou grupo alquil, aril, aralquil ou acil; e R~ 2~ é amino, hidroxil ou tiol, todos eles substituidos ou não com grupos alifáticos ou cíclicos. Um método de obtenção, composições cosméticas ou dermofarmacêuticas que os contenham e seu uso para tratar a pele, preferentemente aquelas condições da pele que requeiram regular a fibrinogênese como são o envelhecimento e/ou a suavização da aparência das cicatrizes.

Description

PEPTÍDEOS SINTÉTICOS ÚTEIS NO TRATAMENTO DA PELE E SEUSUSOS EM COMPOSIÇÕES COSMÉTICAS OU DERMOFARMACÊUTICAS

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção se refere a peptídeossintéticos que regulam a fibrinogênese e as composiçõescosméticas ou dermofarmacêuticas que contêm estes peptídeosde utilidade no tratamento da pele, preferentemente, oupara o tratamento daquelas condições da pele que requeremuma regulação da fibrinogênese ou tratamento de pelesenvelhecidas (ou seja, envelhecimento intrínseco devido aopassar do tempo e a fatores genéticos, ou extrínseco devidoà exposição prolongada ao sol e/ou a contaminaçõesambientais como a radiação ultravioleta (UV) da luz solar,as contaminações químicas, ou fumo de cigarros e apoluição), ou como coadjuvantes nos processos decicatrização para suavizar a aparência das cicatrizes.

ANTECEDENTES DA INVENCAO

A pele é composta de duas camadas: epiderme e aderme. A camada mais externa é a epiderme, que é compostaprincipalmente dos queratinócitos, melanócitos e células deLangerhans, e sua função básica é reter a água do corpo,exerce papel como barreira aos agentes químicosprejudiciais assim como frente à organismos patógenos erealiza os processos de renovação celular. A camada maisinterna, a derme, formada por fibroblastos, adipócitos emacrófagos, está unida fortemente a epiderme através damembrana basal, e contém numerosas terminações nervosas queproporcionam as sensações de tato e temperatura. Abrigamtambém os folículos pilosos, glândulas sudoríparas,glândulas sebáceas, glândulas apócrinas e vasos sangüíneos,e uma de suas funções principais é manter a elasticidade eaparência da pele.

Na derme se encontra também a matrizextracelular, formada por um conjunto de proteínasextracelulares (proteínas fibrosas, glicoproteínas eproteoglicanos) que tem como função chave a de manter aestrutura da pele, e o correto funcionamento edesenvolvimiento dos tecidos depende de que sua formação eregulação seja correto [Wiberg C., Klatt A.R., Wagener R., Paulsson M., Bateman J.F., Heinegard D. y Morgelin M.(2003) "Complexes of matrilin-1 and biglycan or decorinconnect collagen VI microfibrils to both collagen II andaggrecan" J. Biol. Chem. 278, 37698-37704]. As duasproteínas fibrosas mais importantes da matriz extracelularsão ou colágeno e a elastina, responsáveis pelaspropriedades mecânicas dos tecidos, como a capacidade deresistir à tensão, compressão, extensibilidade e torção. Osproteoglicanos têm uma função estrutural e metabólica,visto que as glicoproteínas, junto com os proteoglicanos,servem de pontes de união entre os componentes da matriz eas células [Aumailley M. y Gayraud B. (1998) "Structure andbiological activity of the extracellular matrix" J. Mol.Med. 76, 253-265; Culav E.M., Clark C.H. y Merrilees M.J.(1999) nConnective tissues: matrix composition and itsrelevance to physical therapy" Phys. Ther. 79, 308-319;Scott J.E. (2003) "Elasticity in extracellular matrix'shape modules1 of tendon, cartilage, etc. A slidingproteoglycan-filament model" J. Physiol. 553, 335-343],

Colágeno

Os colágenos são uma família de proteínasfibrosas da matriz extracelular que constitui 25% do totalda massa da proteína nos mamíferos. Foram classificadas emmais de 20 famílias, todas com características individuaisque cumprem funções específicas em tecidos distintos.

A característica principal do colágeno é suaestrutura helicoidal formada por associação de três cadeiaspolipeptídicas, ricas em glicina e prolina. Alterações emsua composição de aminoácidos provocam uma disfunção eperda de suas propriedades mecânicas [Culav E.M., ClarkC.H. y Merrilees M.J. (1999) ^Connective tissues: matrixcomposition and its relevance to physical therapy" Phys.Ther. 79, 308-319]. Estas cadeias polipeptídicas podemassociar-se entre si formando as fibrilas, que apresentamum diâmetro de 10-300 mm e um comprimento de até váriascentenas de micrômetros em tecidos maduros. Estas fibrilasfreqüentemente agregam em estruturas maiores, como hélices,que podem ser vistos por microscopia eletrônica como fibrasde colágeno de vários micrômetros de diâmetro. Esteprocesso é conhecido como fibrinogênese [Aumailley M. yGayraud B. (1998) "Structure and biological activity of theextracellular matrix" J. Mol. Med. 76, 253-265]. Nem todosos colágenos têm a capacidade de formar fibrilas; somenteos colágenos tipo I, II, III, V e XI, são conhecidos comocolágenos fibrilares.

A derme de um adulto está formada basicamente porcolágenos fibrilares de tipo I (em 80-90%), III, e V.Geralmente as fibras de colágeno de tipo I apresentam umdiâmetro maior, uma característica que se correlaciona comsua capacidade de suportar uma maior carga mecânica. 0colágeno de tipo III exerce um papel na extensibilidade dotecido, e com ou passar dos anos é substituído pormoléculas de colágeno de tipo I, processo responsávelparcialmente pelas peles maduras serem menos extensíveisque as infantis. 0 colágeno de tipo V se associa com o detipo I e III regulando o diâmetro das fibrilas [nTheBiology of the Skin", Freinkel R.K. y Woodley D.T., eds.The Parthenon Publishing Group, 2001; Culav E.M., ClarkC.H. y Merrilees M.J. (1999) nConnective tissues: matrixcomposition and its relevance to physical therapy" Phys.Ther. 79, 308-319],

As mutações na molécula de colágeno ou nasmoléculas envolvidas na fibrinogênese do colágeno podemconduzir a um colágeno desestruturado como o que seencontra em patologias como a síndrome de Ehlers-Danlos[Ameye L. y Young M.G. (2002) nMice deficient in smallleucine-rich proteoglycans: novel in vivo models forosteoporosis, osteoarthritis, Ehlers-Danlos syndrome,muscular dystrophy and corneal diseases" Glycobiology 12,107R-116R]. Além disso, a exposição prolongada aos raios UVtambém pode danificar a arquitetura do colágeno e provocarsua substituição por um colágeno menos estruturadoresultando na contração da pele e formação de rugas. Porúltimo, o dano para a arquitetura do colágeno pode darlugar a deposição de colágeno desorganizado durante osprocessos de reparação, como ocorre nos processos decirrose hepática, fibrose pulmonar ou formação decicatrizes dérmicas. Desta forma, a regulação daorganização do colágeno pode ser potencialmente útil nãosomente para tratamentos cosméticos ou dermofarrmacéuticosmas também para tratar diversas condições clínicas.Proteoglicanos

Os proteoglicanos constituem um dos componentesmajoritários da matriz extracelular e se caracterizam porter um cerne protéico unido covalentemente a carboidratoschamados glicosaminoglicanos (GAGs). Estão implicados emmuitos dos processos celulares que transcorrem medianteinterações moleculares na superfície das células, como asinterações célula-matriz extracelular, célula-célula ereceptor-ligando, já que se unem fortemente a proteínas, esão muito abundantes nestas regiões [Perrimon N. yBernfield M. (2001) nCellular functions of proteoglycans-an overview" Semin. Cell Dev. Biol.12, 65-67], Osproteoglicanos atuam como organizadores dos tecidos,facilitam o crescimento celular e o amadurecimento detecidos especializados, exercem um papel fundamental comofiltros biológicos e regulam a atividade dos fatores decrescimento [Iozzo R.V. (1998) nMatrix proteoglycans: frommolecular design to cellular function" Annu. Rev. Biochem.67, 609-652; Ruoslahti E. (1989) nProteoglycans in cellregulation" J. Biol. Chem. 264, 13369-13372].

Os GAGs são polímeros formados por repetições dedissacarídeos, geralmente um aminoaçúcar acetilado (N-acetilglucosamina ou iV-acetilgalactosamina) alternando comácido hialurônico (glucuronato ou iduronato), e apresentamum índice elevado de grupos sulfato, exceto o ácidohialurônico. Por sua riqueza em grupos ácidos estãocarregados negativamente e tendem a atrair cátions como ouNa+ e, por ser osmoticamente ativo, atraem água e permitemmanter a hidratação dos tecidos. Os GAGs mais comuns sãoácido hialurônico, condroitin sulfato, dermatan sulfato,heparan sulfato e queratan sulfato [Sugahara K. y KitagawaH. (2 000) nRecent advances in the study of the biosynthesisand functions of sulfated glycosaminoglycans" Curr. Opin.Struct. Biol. 10, 518-527; Zamfir Ά., Seidler D.G., KresseH. y Peter-Katalinic J. (2003) nStructural investigation ofchondroitin/dermatan sulfated oligosaccharides from humanskin fibroblast decorin" Glycobiology 13, 733-742].

Um tipo de proteoglicanos é o chamado"proteoglicanos ricos em leucina", que não apresentam interação com ácido hialurônico, e que intervém naestruturação da matriz extracelular, na modulação daatividade de fatores de crescimento assim como na regulaçãodas propriedades do crescimento das células [ Iozzo R.V.(1997) "The family of the small leucine-rich proteoglycans:key regulators of matrix assembly and cellular growth"Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 32, 141-174], Embora osdistintos proteoglicanos ricos em leucina apresentemcaracterísticas estruturais comuns, diferem marcadamente emsua regulação genética, em seu padrão de expressão assimcomo em suas interações funcionais [Ramamurthy Ρ. , HockingA.M. y McQuillan D.J. (1996) ^Recombinant decoringlyeoforms. Purifieation and strueture" J. Biol. Chem. 271,19578-19584].

Entre os proteoglicanos da pele se incluemversicano, decorina, biglicano e ácido hialurônico. Estasmoléculas se encontram localizadas em áreas específicas dapele. Assim, a decorina se encontra em associação com asfibras dérmicas [Bianeo P., Fisher L.W., Young M.F.,Termine J.D. y Robey P.G. (1990) nExpression andloealization of the two small proteoglycans biglycan anddecorin in developing human skeletal and non-skeletaltissues" J. Histochem. Cytochem. 38, 1549-1563], Obiglicano se encontra em queratinócitos diferenciados naepiderme e no endotélio vascular [Bianco Ρ. , Fisher L. W. , Young M.F., Termine J.D. y Robey P.G. (1990) nExpressionand localization of the two small proteoglycans biglycanand decorin in developing human skeletal and non-skeletaltissues" J. Histochem. Cytochem. 38, 1549-1563] e oversicano se detecta na lâmina basal da epiderme e emassociação com as fibras da rede elástica da derme, assimcomo nas glândulas sudoríparas e no recobrimento dofolículo piloso [Zimmermann D.R., Dours-Zimmermann M.T.,Schubert M. y Bruckner-Tuderman L. (1994) nVersican isexpressed in the proliferating zone in the epiderme and inassociation with the elastic network of the derme" J. CellBiol. 124, 817-825], Outros estudos indicam que o versicanonão se encontra no epitélio da pele adulto, embora sejaencontrado nos tecidos conectivos adjacentes a essas áreas,incluindo a derme, e no recobrimento dos folículos pilosos[Carrino D.Ά., Sorrell J.M. y Caplan A.I. (2000) nAge-related changes in the proteoglycans of human skin" Arch.Biochem. Biophys. 373, 91-101].

Decorina

A decorina é considerada um dos proteoglicanoschave na regulação da estruturação e função de muitos doselementos da matriz extracelular. A decorina se une afatores de crescimento, incluindo o fator de crescimento detransformação beta (TGF-β), a outras proteínas da matrizextracelular como a fibronectina e a trombospondina, areceptores de membrana celular (receptor de endocitose dadecorina), e também pode interferir diretamente sobre ociclo celular através da indução de p21, um inibidorpotente das quinases dependentes de ciclinas (CDKs)[Stander Μ. , Naumann U. , Wick W. y Weller M. (1999)"Transforming growth factor-beta and p-21: multiplemolecular targets of decorin-mediated suppression ofneoplastic growth" Cell Tissue Res. 296, 221-227].

Muitos dos estudos sobre a interação da decorinacom componentes da matriz extracelular citam sobre a uniãoao colágeno de tipo I, embora se saiba que também interagemcom outros colágenos como os tipos II, III e VI. Embora seconsidere que o principal fator que influi na formação dasfibrilas de colágeno in vivo é a própria estrutura docolágeno, existem várias moléculas como a decorina quepodem regular e ajustar este processo. A decorina atrasa edificulta a formação das fibrilas, provoca uma conseqüenteredução no diâmetro médio das fibrilas e força as fibras decolágeno a adotar uma distribuição espacial regular[Danielson K.G., Fazzio Ά., Cohen I., Cannizzaro L.A.,Eichstetter L. y Iozzo R.V. (1993) nThe human decorin gene:intron-exon organization, discovery of two alternativelyspliced exons in the 5' untranslated region, and mapping ofthe gene to chromosome 12q23" Genomics 15, 146-160], Esteprocesso está mediado pelo cerne protéico do proteoglicano,e requer sua estrutura terciária conservada [Svensson L. ,Heinegard D. y Oldberg A. (1995) "Decorin-binding sites forcollagen type I are mainly located in leucine-rich repeats4-5" J. Biol. Chem. 270, 20712-20716; Keene D.R., RidgwayC.C. y Iozzo R.V. (1998) nType VI microfilaments interactwith a specific region of banded collagen fibrils in skin"J. Histochem. Cytochem. 46, 215-220] . Existe evidência deque a tripla hélice do colágeno de tipo I pode ser um localde união à decorina específico [Keene D.R., Ridgway C.C. yIozzo R.V. (1998) nType VI microfilaments interact with aspecific region of banded collagen fibrils in skin" J.Histochem. Cytochem. 46, 215-220] e que existem interaçõesadicionais com moléculas de dermatansulfato [Kresse Η. ,Liszio C., Schonherr E. y Fisher L.W. (1997) nCritical roleof glutamate in a central leucine-rich repeat of decorinfor interaction with type I collagen" J. Biol. Chem. 272,18404-18410]. A decorina se une a duas moléculas paralelasadjacentes de colágeno da fibrila, ajudando a estabilizar afibrila e orientar a fibrinogênese. Ao estar unida nasuperfície das fibrilas de colágeno a interação lateralentre as triplas hélices de colágeno é mais difícil, já queatua como espaçador, e o diâmetro das fibrilas diminui,controlando assim as dimensões das fibrilas, uniformizandoseu diâmetro e a distância regular entre elas, permitindo-se deste modo manter a forma do tecido [Tenni R., Viola M.,Welser F., Sini P., Giudici C., Rossi A. y Tira M.E. (2002)nInteraction of decorin with CNBr peptides from collagens Iand II. Evidence for multiple binding sites and essentiallysyl residues in collagen" Eur. J. Biochem. 269, 1428-143 7; Scott J.E. (1996) nProteodermatan and proteokeratansulfate (decorin, lumican/fibromodulin) proteins arehorseshoe shaped. Implications for their interactions withcollagen" Biochemistry 35, 8795-8799].

A importância destas interações de decorina comcolágeno também tem sido demonstrado in vivo utilizando-seratos transgênicos que não possuem o gene da decorina e,portanto, não produzem decorina em seu organismo. Estesanimais são viáveis, mas apresentam uma pele muito frágil,com a derme muito delgada, com uma reduzida força elásticae reduzida resistência à tensão, e sua análise histopatológica mostra que suas fibrilas de colágenoapresentam diâmetros irregulares ao longo das fibrilasdevido às agregações laterais incontroladas [Kresse Η. ,Liszio C., Schonherr E. y Fisher L.W. (1997) nCritical roleof glutamate in a central leucine-rich repeat of decorinfor interaction with type I collagen" J. Biol. Chem. 272,18404-18410; Danielson K.G., Baribault H., Holmes D. F.,Graham H., Kadler K.E. y Iozzo R.V (1997) nTargeteddisruption of decorin leads to abnormal collagen fibrilmorphology and skin fragility" J. Cell. Biol. 136, 729-743;

Keene D.R., Ridgway C.C. y Iozzo R.V. (1998) nType VImicrofilaments interact with a specific region of bandedcollagen fibrils in skin" J. Histochem. Cytochem. 46, 215-220]. Esta observação corrobora o fato amplamente aceito deque a força da pele se correlaciona diretamente com aorganização geral, o conteúdo e as propriedades físicas darede de colágeno fibrilar [Dombi G.W., Haut R.C. y SullivanW.G. (1993) nCorrelation of high-speed tensile strengthwith collagen content in control and lathyritic rat skin"J. Surg. Res. 54, 21-28], Além disso, estes animaistransgênicos apresentam também uma degradação de colágenoaumentada, o que contribui para a pouca qualidade de suapele [Schaefer L., Macakova K., Raslik I., Micegova M.,Grõne H-J., Schõnherr E., Robenek H., Echtermeyer F.G.,Grassei S., Bruckner P., Schaefer R.M., Iozzo R.V. y KresseH. (2002) nAbsence of decorin adversely influencestubulointerstitial fibrosis of the obstructed kidney byenhanced apoptosis and increased inflammatory reaction" Am.J. Pathol. 160, 1181-1191]. Pode-se observar também umaorganização irregular das fibrilas de colágeno em distintaspatologias humanas que conduzem a fenótipos com a pelefrágil, sugerindo que a alteração dos processos defibrinogênese é suficiente para provocar uma pele frágil euma estrutura desorganizada da matriz, e conseqüentementeos indivíduos que possuem um processo de fibrinogênesedesregulado apresentam uma maior incidência de lesões assimcomo de processos de cicatrização anormal [Keene D.R.,Ridgway C.C. y Iozzo R.V. (1998) nType VI microfilamentsinteract with a specific region of banded collagen fibrilsin skin" J. Histochem. Cytochem. 46, 215-220; Iozzo R.V.(1999) nThe biology of the small leucine-richproteoglycans" J. Biol. Chem. 274, 18843-18846].

A decorina não interage somente com as fibras decolágeno, como também com outras proteínas estruturais.

Isto é devido presumidamente a sua estrutura tridimensionalem forma de ferradura, onde as repetições das regiões ricasem leucina se dispõem de forma paralela, sendo necessáriassó umas poucas repetições para sua união ao ligando[Schonherr Ε., Broszat Μ., Brandan Ε., Bruckner P. y KresseH. (1998) nDecorin core protein fragment Leul55-Val260interacts with TGF-beta but does no t compete for decorinbinding to type I collagen" Arch. Biochem. Biophys. 355,241-248]. Dos resultados de estudos de dinâmica molecularrealizados sugere-se que a forma côncava de ferradura dadecorina tem uma abertura com um ângulo suficiente paraacomodar uma tripla hélice, com um diâmetro deaproximadamente 2 nm, que é ligeiramente superior aodiâmetro de uma molécula de colágeno (1.5 nm), visto que osbraços da ferradura tem uma espessura similar à molécula decolágeno [Kresse H., Liszio C., Schonherr E. y Fisher L.W.

(1997) nCritical role of glutamate in a central leucine-rich repeat of decorin for interaction with type Icollagen" J. Biol. Chem. 272, 18404-18410; Scott J.E.(1996) "Proteodermatan and proteokeratan sulfate (decorin,lumican/fibromodulin) proteins are horseshoe shaped.Implications for their interactions with collagen"

Biochemistry 35, 8795-8799].

Os estudos estruturais teóricos realizadospleiteiam a hipótese de que são as regiões Lys130-Arg133 yArg2 72 -His27b da decorina as responsáveis pela união aocolágeno, mais precisamente na região Asp857-Arg-Gly-Glu860[Kresse H., Liszio C., Schonherr E. y Fisher L.W. (1997)nCritical role of glutamate in a central leucine-richrepeat of decorin for interaction with type I collagen" J.Biol. Chem. 272, 18404-18410]. As duas regiões da decorinase encontram uma em cada braço da ferradura,aproximadamente equidistantes nos extremos da molécula, emsentido antiparalelo. Sem dúvida, o fato de que a decorinaadote uma forma de ferradura faz com que a seqüência lineargire 18 0° de um braço da ferradura para o outro,encontrando-se realmente os dois fragmentos em posiçãoparalela. Deste modo, se consegue uma complementariedade decargas dos resíduos das correntes laterais implicados nainteração ([-,+,0,-] para colágeno e [+,-,0,+] para osfragmentos de decorina), que parece ser crítica para estabilizar a interação entre as duas moléculas [Scott J.E.(1996) xxProteodermatan and proteokeratan sulfate (decorin,lumican/fibromodulin) proteins are horseshoe shaped.Implications for their interactions with collagen"Biochemistry 35, 8795-8799].

Envelhecimento

A pele sofre mudanças dramáticas com a idade, queenglobam desde mudanças em sua morfologia, fisiologia e emsuas propriedades mecânicas. A pele dos bebês é lisa esuave, com uma camada grossa de gordura e uma camadaprotetora muito fina de queratina, visto que a pele dosidosos é muito fina e apresenta muitas rugas, com umacamada de gordura muito pequena. A matriz extracelulartambém experimenta mudanças com a idade, e estas contribuemao conjunto de mudanças das propriedades físicas da pelerelacionados com o envelhecimento [Wiberg C., Klatt A.R.,Wagener R., Paulsson M., Bateman J.F., Heinegard D. yMorgelin M. (2003) nComplexes of matrilin-1 and biglycan ordecorin connect collagen VI microfibrils to both collagenII and aggrecan" J. Biol. Chem. 278, 37698-37704]. Aexposição prolongada ao sol e aos contaminantes ambientaisacelera o processo de envelhecimento da pele, já que aexposição aos raios UV inibe a síntese de colágeno efibronectina por fibroblastos e catalisa a degradação docolágeno por estimulação da síntese das enzimas que adegradam (metaloproteases de matriz). Foram descritasmudanças nas moléculas de colágeno de tipo I, que são oscomponentes majoritários da matriz extracelular da derme[Hunzelmann N., Ueberham U., Eckes B., Hermann K. y KriegT. (1997) nTransforming growth factor-beta reversesdeficient expression of type (I) collagen in culturedfibroblasts of a patient with metageria" Biochim. Biophys.Actá. 1360, 64-70].

A indústria cosmética vem realizando importantesesforços para resistir esta perda da funcionalidade doscomponentes da matriz extracelular com a idade. O balançoentre a produção e a degradação de biomoléculas essenciaisda pele (por exemplo, colágeno) vem se reduzindo com oenvelhecimento assim como os processos de degradação, eisso conduz a uma retração e desorganizações progressivasda derme que provoca uma flacidez na derme com aconseqüente formação de rugas. Em nível microscópico, ocolágeno das peles envelhecidas (tanto cronologicamente -peles maduras - como por exposição prolongada ao sol ou ascontaminações ambientais) se caracteriza por apresentarfibrilas grossas organizadas de maneira similar às vezes decabos, que não estão tão alinhadas como estão em pelesjovens [Oikarinen A. (1990) "The aging of the skin:chronoaging versus photoaging" Photodermatol. Photoimmunol.Photomed. 7, 3-4], Portanto, aqueles métodos que permitamuma melhor organização das fibras de colágeno apresentam umpotencial efeito benéfico sobre as peles maduras ou sobreas peles envelhecidas, permitindo recuperar parcialmente aspropriedades mecânicas (elasticidade, flexibilidade efirmeza) que perderam com a idade ou a exposição ao sole/ou às contaminações ambientais e apresentando um melhoraspecto, com menos presença de rugas e mais firme.

Além do colágeno, a matriz extracelular dérmicatambém contém proteoglicanos que estão envolvidos naspropriedades que apresentam os tecidos e que são alteradoscom ou envelhecimento. Entre eles, a decorina écatabolizada em um fragmento ao que se conhece comodecorunt, que corresponde a uma versão da decorina comausência do fragmento carboxi-terminal. As peles de origemfetal, sem dúvida não apresentam níveis detectáveis dedecorunt, enquanto os níveis máximos de decorunt sedeterminam a partir dos 3 0 anos, que é a idade a partir daqual se inicia a manifestar os sinais do envelhecimento. Acapacidade do decorunt para se unir a uma molécula decolágeno é 100 vezes menor a que apresenta a decorina,fator que se correlaciona com o fato de que a decorunt nãoapresenta justamente uma das regiões da decorina que éessencial para a união ao colágeno [Wiberg C., Klatt A.R. ,Wagener R., Paulsson M., Bateman J.F., Heinegard D. yMorgelin M. (2003) vComplexes of matrilin-1 and biglycan ordecorin connect collagen VI microfibrils to both collagenII and aggrecan" J. Biol. Chem. 278, 37698-37704]. Sabendoque a decorina influi nos processos de fibrogênese docolágeno e regula o diâmetro das fibrilas, a aparição dadecorunt pode ter um efeito importante sobre a elasticidadee as diferenças morfológicas entre as fibras de colágeno depeles jovens e a de peles envelhecidas [Carrino D.Ά.,Sorrell J.M. y Caplan Ά.Ι. (2 000) nAge-related changes inthe proteoglycans of human skin" Arch. Biochem. Biophys.373, 91-101], Tem sido demonstrado, também, que a sínteseda decorina se mostra diminuída nas peles envelhecidas porexposição prolongada ao sol ou aos contaminantesambientais. [Bernstein E.F., Fisher L.W., Li K., LeBaronR.G., Tan E.M. y Uitto J. (1995) nDifferential expressionof the versican and decorin genes in photoaged and sun-protected skin. Comparison by immunohistochemical andnorthern analyses" Lab. Invest. 72, 662-669], já que estetipo de pele também apresenta uma desorganização docolágeno. Desta forma, a diminuição do conteúdo de decorinafuncional da pele envelhecida, seja pela idade ou pela5 exposição prolongada ao sol e aos contaminantes ambientais,está relacionada diretamente com a formação de uma rede decolágeno fibrilar desestruturada que conduz a uma pelefrágil, menos elástica e com menos resistência a tensão.

Cicatrização

A cura de feridas nos adultos é um complicadoprocesso reparativo. O processo de cura começa com orecrutamento de uma variedade de células especializadaspara a sua transferência ao local da ferida, e gera adeposição de matriz extracelular e membrana basal,angiogênese, atividade seletiva de protease ereepitelização. Um componente importante do processo decura nos mamíferos adultos é a estimulação de fibroblastospara gerar a matriz extracelular. Esta matriz extracelularconstitui um componente principal de tecido conectivo quese desenvolve para reparar a zona de da ferida.

O tecido conectivo que se forma durante oprocesso de cura é de natureza fibrosa. Uma cicatriz é umaestrutura morfológica anormal resultante de uma lesão ouferida prévia (como, por exemplo, uma incisão, uma exisãoou um trauma) e se compõe de um tecido conectivo, que épredominantemente uma matriz de colágeno dos tipos I e IIIe fibronectina. Na pele a cicatriz consta de fibras decolágeno numa organização anormal assim como de umadeposição de colágeno em excesso. Nos mamíferos, quando acicatriz se forma sobre a pele, apresentando um aspectoenrugado, se deve ao fato de conter colágeno em excessodisposto de maneira irregular, e se classificam comocicatrizes hipertróficas. Um quelóide é outra forma decicatrização patológica que não somente fica elevada sobrea superfície da pele, mas que também se extende além doslimites da lesão original, e também possui uma quantidadeexcessiva de tecido conectivo que está organizado demaneira anormal formando predominantemente bandasverticiais de tecido de colágeno. Uma análise do conteúdode decorina em cicatrizes hipertróficas mostra que aconcentração desta é de 25% da que se encontra en tecidossãos. [Scott P. G. , Dodd C.M., Ghahary A. , Shen J. y TredgetE.E. (1998) nFibroblasts from post-burn hypertrophic scartissue synthesize Iess decorin than normal dermalfibroblasts" Clin. Sei. (Lond). 94, 541-547], fato queexplica a organização irregular do colágeno presente nascicatrizes hipertróficas.

Assim mesmo, se tem detectado formas truncadas dedecorina em cicatrizes hipertróficas [Honda T., MatsunagaΕ. , Katagiri K. , y Shinkai H. (1986) nThe proteoglycans inhypertrophic scar" J. Dermatol. 13, 326-333; Garg H.G.,Lippay E.W., Burd D.A.R y Neame P.J. (1990) nPurificationand characterization of iduronic acid-rich and glueuronieacid-rich proteoglycans implicated in human post-burnkeloid scar" Carbohydr. Res. 207, 295-305], e se temdemonstrado que estas formas truncadas não são capazes deregular a formação de fibrilas de colágeno em um ensaio defibrilogênese [Carrino D.A., Õnnerfjord P., Sandy J.D., CS-Szabo G., Scott P.G., Sorrell J.M., Heinegard D. y CaplanA.I. (2003) nAge related changes in the proteoglycans ofhuman skin" J. Biol. Chem. 278, 17566-17572].

A presença de cicatrizes é um fato não aceitoesteticamente pela maioria dos seres humanos. A medicinavem realizando importantes esforços em desenvolverprocessos cirúrgicos minimamente invasivos, como são asartroscopias ou as laparoscopias, que não só disminuem osriscos de complicações pós-cirúrgicas, mas que tambémapresentam a ventagem de deixar cicatrizes de tamanhosmuito pequenos ou apenas visíveis. Apesar de tais esforços,a maioria das intervenções cirúrgicas continua sendorealizada de forma invasiva, de modo que o controle docorreto processo de cicatrização continua sendo um tema devital importância. Evitar a formação de cicatrizeshipertróficas e/ou queloides, que apresentan um colágenoorganizado de maneira irregular, é um dos objetivos dosetor cosmético e dermofarmacêutico. Portanto, aquelesmétodos que permitam uma melhor organização das fibras decolágeno terão um potencial efeito benéfico sobre ascicatrizes, permitindo, assim, suavizar sua aparência.

Assim sendo, as composições cosméticas oudermofarmacêuticas que contenham moléculas que imitem aatividade da decorina interagindo com as fibrillas ou asfibras de colágeno, organizando o processo defibrinogênese, são candidatos potenciais para seu uso comoprodutos antienvelhecimento, com o fim de aumentar aelasticidade, firmeza, estruturação e flexibilidade dapele, ou como coadjuvante em tratamentos pós-cirúrgicos como fim de suavizar a aparência das cicatrizes.

Existem diferentes patentes de aplicaçãocosmética ou dermofarmacéutica que mencionam a decorinapara o tratamento ou prevenção do envelhecimento, assimcomo para suavizar a aparência das cicatrizes. Asolicitação de patente US2003/0124152 descreve o uso dadecorina em composições cosméticas ou dermatológicas para otratamento do envelhecimento intrínseco (devido ao passardo tempo e a fatores genéticos) ou extrínseco (devido aexposição prolongada ao sol ou a contaminantes ambientaiscomo a radiação ultravioleta (UV) da luz solar, oscontaminantes químicos, a fumaça dos cigarros e apoluição). A patente US5.510.328 descreve o uso da decorinaem composições farmacêuticas para reduzir ou inibir acontração das feridas, e a patente US6,509,314 descrive ouso da decorina para a prevenção ou redução da cicatrizaçãodas feridas. Existem outras patentes que descrevemcompostos ou extratos vegetais que estimulam a síntese dadecorina endógena, como por exemplo os descritos naspatentes JP2004051508, FR2834462, EP1367988, US6.551.602,US6.455.057, US6.440.434, US6.423.325, US6.287.553 eUS6.042.841. Na literatura se tem publicado trabalhos deinvestigação centrados na busca dos domínios de união dedecorina ao colágeno que descrevem alguns peptídeossintéticos que são capazes de unir-se ao colágeno, e quepotencialmente poderiam ter a mesma atividade que adecorina, mas todas as seqüências correspondem a fragmentosda decorina nativa [Vides V.M., Laschinger C.A., AroraP.D., Lee W., Hakkinen L., Larjava H., Sodek J. y McCullochC.A. (2 005) ^Collagen phagocytosis by fibroblasts isregulated by decorin" J. Biol. Chem. 280, 23103-23113;Schonherr Ε., Broszat Μ. , Brandan Ε. , Bruckner P. y KresseH. (1998) "Decorin core protein fragment Leul55-Val260interacts with TGF-beta but does not compete for decorinbinding to type I collagen" Arch. Biochem. Biophys. 355,241-248], Sem dúvida não existe na atualidade nenhumareferência ao uso de peptideos não contidos na seqüêncianativa da decorina que reproduzam a ação da decorina em suaunião ao colágeno, regulando a fibrinogênese e ajudando amanter uma rede de colágeno estruturada.

O solicitante da presente invenção determinou queos peptideos sintéticos da invenção são eficazes naorganização da fibrinogênese, reproduzindo assim a funçãoda decorina. A seqüência dos peptideos da invenção não seencontra contida na seqüência nativa da decorina, podendoconsiderar-se como peptideos miméticos da atividade dadecorina. Tem sido descrito na literatura que para suaunião ao colágeno, e consequentemente a regulação dafibrinogênese, as seqüências peptídicas devem ter quatroaminoácidos com um padrão de cargas [+,-,o,+] [Scott J.E.(1996) nProteodermatan and proteokeratan sulfate (decorin,lumican/fibromodulin) proteins are horseshoe shaped.Implications for their interactions with collagen"Biochemistry 35, 8795-8799], de modo que exista umacomplementação de cargas com o fragmento Asp857-Arg-Gly-Glu860 do colágeno que permita estabilizar a interação. 0solicitante da presente invenção tem afirmado que nem todasas seqüências que cumprem tal complementação de cargaspostulada por Scott são capazes de organizar afibrinogênese. Enquanto o peptídeo sintético RELH, quecorresponde a seqüência 272-275 da decorina apresenta opadrão de cargas e é capaz de organizar a fibrinogênese, ospeptideos His-Asp-Ala-Arg, Orn-Asp-Nva-His, His-Asp-Ile-Histambém apresentam o padrão de cargas, mas não tem efeitosobre a fibrinogênese. Assim, a observação do padrão decargas [+,-,0,+] postulado por Scott não é um requisitosuficiente para a regulação da fibrinogênese por partedaqueles peptideos que o cumpram. Surpreendentemente, osestudos realizados pelo solicitante da presente invençãotem establecido que a regulação da fibrinogêneses édeterminada por aquelas seqüências peptidicas que dispõemde um resíduo do aminoácido citrulina junto a um padrão decargas [+,-,0], como por exemplo as seqüências Lys-Asp-Ile-Cit ou Lys-Asp-Val-Cit. A patente RU2.181.728 descreve umpeptídeo sintético de 10 aminoácidos unido mediante umaponte dissulfeto a um peptídeo de 12 aminoácidos que temuma seqüência que engloba a seqüência Lys-Glu-Leu-Cit, queestá baseada na molécula de interleucina-8 e estimula amigração de neutrófilos. Apesar de tal peptídeo obedecer aopadrão de cargas [+,-,0] e dispor de um resíduo decitrulina contíguo, não esta englobado dentro da famíliados peptideos da presente invenção, já que tem um total de22 aminoácidos. Além disso, tal patente não dá nenhumindício nem sugere que o peptídeo descrito seja capaz deinibir a fibrinogênese.

Portanto, não existe nenhum indício no estado datécnica que a citrulina seja um resíduo necessário para aregulação da fibrinogênese, fazendo com que um especialistana matéria não poderia deduzir a natureza dos peptideos queregulam a fibrinogênese.

Assim, os peptideos da presente invenção podemser úteis no tratamento daquelas condições da pele querequeram uma regulação da fibrinogênese, comotratamento de peles envelhecidas (bem seja pelo passar daidade ou pela exposição ao sol e/ou aos contaminantesambientais) ou como coadjuvantes nos processos decicatrização para suavizar a aparência das cicatrizes.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

A presente invenção proporciona uma soluçãosensível, eficaz e sem riscos para o tratamento dascondições da pele que requerem uma regulação dafibrinogênese, como são o envelhjecimento ou acicatrização, que compreende a aplicação sobre a pele deuma composição cosmética ou dermofarmacêutica que contem,ao menos, um peptídeo de fórmula geral (I). No contexto dapresente invenção, o termo "tratamento" se refere aredução, retardamento e/ou prevenção dos sinais deenvelhecimento ou a suavização da aparência dascicatrizes. O termo "envelhecimento" se refiere às trocasque experimenta a pele com o passar da idade(cronoenvelhecimento) ou por exposição ao sol(fotoenvelhecimento) ou a agentes ambientais como são afumaça do cigarro, as condições climáticas extremas de frioou vento, os contaminantes químicos ou a poluição, e incluitodos as trocas externas visíveis assim como perceptíveismediante ao tato, como por exemplo e sem sentidolimitativo, o desenvolvimento de descontinuidades na pelecomo rugas, linhas finas, gretas, irregularidades ouasperezas, aumento do tamanho dos poros, perda daelasticidade, perda da firmeza, perda da textura, perda dacapacidade de recuperação da deformação, descolamento dapele como o descolamento das bochechas, a aparição debolsas embaixo dos olhos ou a aparição de papada entreoutros, mudança na cor da pele como manchas, olheiras ouaparição de zonas hiperpigmentadas como manchas da idadeentre outros, diferenciação anômala, hiperqueratinização,elastose, queratose, perda de pelo, perda da estruturaçãodo colágeno e outras mudanças histológicas do estratocórneo, da derme, da epiderme, do sistema vascular (porexemplo a aparição de veias de aranha ou telangiectasias)ou daqueles tecidos próximos à pele entre outros.

Portanto, um primeiro aspecto desta invenção serefere a um peptideo capaz de regular a fibrinogênese,segundo a fórmula geral (I):

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Seus escereoisomeros e misturas dos mesmos,racemicas ou não, e os sais cosméticamente oudermofarmacêuticamente aceitáveis dos mesmos, no qual:

Z se destaca do grupo formado por alanil, allo-isoleucil, glicil, isoleucil, isoseril, isovalil, leucil,norleucil, norvalil, prolil, seril, treonil, alio-treonilou va1i1;

"n" e "m" podem variar independentemente entre síentre 1 e 5;

"AA" se destaca do grupo formado pelosaminoácidos naturais codificados na sua forma "L-" ou "D-"ou aminoácidos não codificados;

"x" e "y" podem variar independentemente entre sientre O e 2;Ri se destaca do grupo formado por "H" ou grupoalquil, aril, aralquil ou acil; e

R2 se destaca do grupo formado por amino,hidroxil ou tiol, substituídos ou não com grupos alifáticosou cíclicos.

As estruturas preferidas dos peptídeosrepresentados na fórmula geral (I) são aquelas onde:Z pode ser: isoleucil, treonil ou valil ;Ri pode ser: H ou acil de C2 a C24 linear,ramificado ou cíclico, saturado ou insaturado; e

R2 pode ser: amino ou hidroxil, substituídos ounão com grupos alifáticos de C1 a C24 lineares, ramificadosou cíclicos, saturados ou insaturados.

Os peptídeos da presente invenção podem existircomo estereoisómeros ou misturas de estereoisómeros; porexemplo, os aminoácidos que os compõem podem terconfiguração L-, D-, ou ser racémicos independentemente umdo outro. Portanto, é possível obter misturas isoméricasassim como racémicos ou misturas diastereoméricas, oudiastereómeros puros ou enantiómeros, dependendo do númerode carbonos assimétricos e de quais isómeros ou misturasisoméricas estão presentes.

A estrutura preferida dos peptídeos de fórmulageral (I) são isómeros puros, ou seja, enantiómeros oudiastereómeros.

No contexto da presente invenção, o termo"aminoácidos não codificados" se refere àqueles

aminoácidos não codificados pelo código genético, naturaisou não, como por exemplo, e sem sentido limitativo,citrulina, ornitina, sarcosina, desmosina, norvalina, ácido4-aminobutírico, ácido 2-aminobutirico, ácido 2-aminoisobutírico, ácido 6-aminohexanoico, 1-naftilalanina,2-naftilalanina, ácido 2-aminobenzoico, ácido 4-aminobenzoico, 4-clorofenilalanina, ácido 2,3-diaminopropiónico, ácido 2,4-diaminobutírico, cicloserina,carnitina, cistina, penicilamina, ácido piroglutámico,tienilalanina, hidroxiprolina, alio-isoleucina, allo-treonina, ácido isonipecótico, isoserina, fenilglicina,estatina, β-alanina, norleucina, N-metilaminoácidos, β-aminoácidos ou γ-aminoácidos entre outros, assim como seusderivados. Uma lista dos aminoácidos não naturais pode serencontrada no artigo "Unusual amino acids in peptidesynthesis" de D.C. Roberts y F. Vellaccio, en The Peptides,Vol. 5 (1983), Chapter VI, Gross E. and Meienhofer J.,Eds., Academic Press, New York, USA ou também nos catálogoscomerciais das empresas especializadas do setor, como porexemplo NeoMPS, Bachem, Novabiochem, Sigma-Aldrich,Peptides International, Advanced ChemTech, Chem-Impex,Maybridge Chemical, Chirotech Technology, PenínsulaLaboratories ou RSP Amino Acid Analogues entre outras.

No contexto da presente invenção, quando χ e ysão diferentes de O se entende claramente que a natureza deAA não dificulta a atividade dos peptídeos da invenção, masque contribui na regulação da fibrinogênese ou não temefeito sobre ela.

No contexto da presente invenção, o termo "grupoalifático" se refere a um grupo hidrocarbonado saturado ouinsaturado, linear ou cíclico.

O termo "grupo hidrocarbonado" se utiliza napresente invenção para indicar, por exemplo, os gruposalquilo, alquenil e alquinil.

O termo "grupo alquil" se refere a um grupohidrocarbonado saturado linear ou ramificado, incluindo,por exemplo, metil, etil, isopropil, isobutil, t-butil,heptil, dodecil, hexadecil, octadecil, amil, 2-etilhexil,2-metilbutil, 5-metilhexil e similares.

O termo "grupo alquenil" se refere a um grupohidrocarbonado não saturado, linear ou ramificado com umaou mais ligações duplo carbono-carbono, tal como ou grupovinil.

O termo "grupo alquinilo" se refere a um grupohidrocarbonado não saturado, linear ou ramificado com umaou mais ligações triplo carbono-carbono.

O termo "grupo cíclico" se refere a um anillfechado hidrocarbonado, que pode ser classificado comogrupo alicíclico, aromático ou heterocíclico.

O termo "grupo alicíclico" se refere a um grupohidrocarbonado cíclico com propriedades parecidas a gruposalifáticos.

O termo "grupo aromático" ou "grupo aril" sereferem a um grupo hidrocarbonado aromático mono oupolicíclico.

O termo "grupo heterocíclico" se refere a um anilfechado hidrocarbonado, sendo que um ou mais dos átomos doanil é um elemento diferente ao carbono (por exemplo,nitrogênio, oxigênio, enxofre, etc.).

Tal e como se entende nesta área técnica, aexistência de um alto grau de substituição não é somentetolerado, porém aconselhado. Portanto, pode existirsubstituição nos peptídeos da presente invenção. Com afinalidade de simplificar a presente descrição da invenção,os termos "grupo" e "bloco" se utilizarão para diferenciarentre espécies químicas que permitam substituição ou quepodem ser substituídas ("grupo"), e aquelas que nãopermitem substituição ou que não podem ser substituídas("bloco"). Desta forma, quando o termo "grupo" se usa paradescrever um substituinte químico, o material químicodescrito inclui tanto o grupo não substituído como aqueleque contém os átomos de O, N ou S.

Por outro lado, quando o termo "bloco" forutilizado para descrever um composto químico ousubstituinte, somente pode incluir-se material químico nãosubstituído. Por exemplo, a expressão "grupo alquil"incluirá não somente substituintes alquílicos saturados decadeia aberta, tais como metil, etil, propil, isobutil esimilares, como também substituintes alquílicos quecontenham outros substituintes conhecidos pela técnicaatual, tais como hidroxi, alcoxi, amino, carboxilo,carboxamido, átomos de halógeno, ciano, nitro,alquilsulfoniIo, entre outros. Deste modo, "grupo alquil"inclui grupos éteres, haloalquilos, alcoois, tiois,carboxilos, aminas, hidroxialquilos, sulfoalquilos,guanidinos entre outros. Por outro lado, a expressão "blocoalquil" se limita somente a inclusão de substituintesalquílicos saturados de cadeia aberta, tais como metil,etil, propil, isobutil e similares.

Dentro do âmbito da presente invenção seencontram os sais cosméticamente ou dermofarmacêuticamenteaceitáveis dos peptídeos de fórmula (I) proporcionados poresta invenção. O termo "sais cosméticamente oudermofarmacéuticamente aceitáveis" inclui os saishabitualmente utilizados para formar sais metálicos ou saisde adição de ácidos, ou seja, orgânicos (como por exemplo,e sem sentido limitativo acetato, citrato, oleato, oxalatoou gluconato) ou inorgânicos (como por exemplo, e semsentido limitativo cloruro, sulfato, borato ou carbonato).

A natureza do sal não é crítica, sempre e guando sejacosméticamente ou dermofarmacéuticamente aceitável. Os saiscosméticamente ou dermofarmacéuticamente aceitáveis dospeptídeos de fórmula (I) podem obter-se por métodosconvencionais, bem conhecidos pela técnica atual.

A síntese dos peptídeos de fórmula geral (I) poderealizar-se segundo métodos convencionais, conhecidos pelatécnica atual, como por exemplo, a adaptação dos métodos desínteses de peptídeos em fase sólida [Stewart J.M. y YoungJ.D. (1984) -Solid Phase Peptide Synthesis", 2nd edition,Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois; Bodanzsky M. yBodanzsky A. (1984) »The practice of Peptide Synthesis",Springer Verlag, New York; Lloyd-Williams P., Albericio F,y Giralt E. (1997) Chemical Approaches to the Synthesis ofPeptides and Proteins. CRCr Boca Raton (FL, USA)], asíntese em solução, uma combinação dos métodos de síntesesem fase sólida e em solução ou a síntese enzimática[Kullmann W. (1980) »Proteases as catalysts for enzymaticsyntheses of opioid peptides" J. Biol. Chem. 255, 8234-82381. Os peptídeos podem ser obtidos igualmente porfermentação de uma cepa bacteriana, modificada ou não porengenharia genética, com o objetivo de produzir asseqüências desejadas.

Por exemplo, um método de obtenção dos peptídeosde fórmula geral (I) é aquele no qual se faz reagir umfragmento do peptídeo de fórmula geral (I) que possui umgrupo carboxil livre ou um derivado reativo deste, com umfragmento complementar, que possui um grupo amino, com aomenos um átomo de hidrogênio livre, com a conseqüenteformação de uma ligação tipo amida, e onde tais fragmentosapresentam os grupos funcionais que não participam naformação da ligação tipo amida, caso haja, convenientementeprotegidos, com grupos protetores temporários ou permanentes.

Outro exemplo de método de obtenção dos peptídeosde fórmula geral (I) é aquele no qual se faz reagir umfragmento do peptideo de fórmula geral (I) que possui umgrupo notável, como por exemplo, o grupo tosil·, o grupomesil e grupos halógenos entre outros, com um fragmentocomplementar que possui um grupo amino com ao menos umátomo de hidrogênio livre mediante uma reação desubstituição nucleófila, e onde tais fragmentos apresentamos grupos funcionais que não participam na formação deligação N-C, caso haja, convenientemente protegidos, comgrupos protetores temporários ou permanentes. Exemplos degrupos protetores, sua introdução e sua eliminação, podemser encontrados descritos na literatura [Greene T.W. (1981)nProtective groups in organic synthesis", John Wiley &Sons, New York; Atherton B. y Sheppard R.C. (1989) "SolidPhase Peptide Synthesis: A practical approach", IRL OxfordUniversity Press], O termo "grupos protetores" incluitambém os suportes poliméricos empregados na síntese emfase sólida.

Quando a síntese se realiza total ou parcialmenteem fase sólida, se podem citar como suportes sólidos autilizar no método da invenção, os suportes depoliestireno, polietilenglicol injetado no poliestireno esimilares, como por exemplo, resinas p-metilbenzhidrilamina(MBHA) [Matsueda G.R. y Stewart J.M. (1981) nA p-methylbenzhydrylamine resin for improved solid-phasesynthesis of peptide amides" Peptides 2, 45-50], resinas2-clorotritilo [Barlos K., Gatos D., Kallitsis J.,Papaphotiu G., Sotiriu P., Wenqing Y. y Scháfer W. (1989)nDarstellung geschützter peptid-fragmente unter einsatzsubstituierter triphenylmethyl-harze" Tetrahedron Lett. 30,3943-3946; Barlos K., Gatos D., Kapolos S., Papaphotiu G.,Schâfer W. y Wenqing Y. (1989) nVeresterung von partiellgeschützten peptid-fragmenten mit harzen. Einsatz von 2-chlortritylchlorid zur synthese von Leul5 -gastrin I"Tetrahedron Lett. 30, 3947-3951], resinas TentaGel® esimilares, que podem incluir ou não um espaçador lábil, talcomo ácido 5 -(4-aminometil-3,5-dimetoxifenoxi) valérico(PAL) [Albericio F., Kneib-Cordonier N., Biancalana S.,Gera L., Masada R.I., Hudson D. y Barany G. (1990)nPreparation and application of the 5-(4-(9-fluorenylmethyloxycarbonyl)awinomethyl-3,5-dimethoxyphenoxy)-valeric acid (PAL) handle for the solid-phase synthesis of C-terminal peptide amides under mildconditions" J. Org. Chem. 55, 3730-3743], ácido2 - [4-aminometil- (2,4-dimetoxifenil)] fenoxiacético (AM)[Rink H. (1987) "Solid-phase synthesis of protected peptidefragments using a trialkoxy-diphenyl-methylester resin"Tetrahedron Lett. 28, 3787-3790], Wang [Wang, S.S. (1973)nP-Alkoxybenzyl Alcohol Resin and r>-Alkoxybenzyloxycarbonylhydrazide Resin for Solid PhaseSynthesis of Protected Peptide Fragments" J. Am. Chem. Soe.95, 1328-1333] e similares, que permitam a desproteção eexcisão simultânea do composto do suporte polimérico.

Os peptídeos segundo a invenção podem formarparte de diversos tipos de composições para sua aplicaçãoexterna no corpo de um mamífero, preferivelmente no serhumano. Neste sentido, a invenção proporciona umacomposição cosmética ou dermofarmacêutica que compreende aomenos um peptldeo de fórmula geral (I) . Tais composiçõespodem ser preparadas mediante métodos convencionaisconhecidos pelos especialistas da matéria.

Os peptídeos da invenção têm uma solubilidade emágua variável, dependendo da natureza dos grupos R1, R2, AAe Z e os valores de n, m, χ e y. Aqueles que não sejamsolúveis em água podem solubilizar-se em solventesconvencionais cosmética ou dermofarmacêuticamenteaceitáveis tais como por exemplo, e sem limite, água,etanol, propanol ou isopropanol, propilenglicol, glicerina,butilenglicol ou polietilenglicol ou qualquer combinaçãodeles. Os peptídeos também podem ser incorporadospreviamente em sistemas de veiculação e/ou sistemas deliberação sustentada, cosméticos ou dermofarmacêuticos comoliposomas, milipartículas, micropartículas e nanopartículasassim como em esponjas, vesículas, micelas, miliesferas,microesferas e nanoesferas, lipoesferas, milicápsulas,microcápsulas e nanocápsulas, com a finalidade de conseguiruma maior penetração do princípio ativo. Assim mesmo, ospeptídeos da presente invenção também podem adsorver-sesobre polímeros orgânicos sólidos ou suportes minerais comotalco, bentonita, silício, amido ou maltodextrina entre outros.

Estas preparações podem ser usadas em diferentestipos de formulações como por exemplo, cremes, emulsões deóleo e/ou silicone em água, emulsões de água em óleo e/ousilicone, óleos, leites, bálsamos, espumas, loções, géis,linimentos, soros, sabões, ungüentos, mousses, pomadas,barras, lápices ou vaporizadores ("sprays"), incluindo asformulações de permanência ("leave on") e as de enxague("rinse-off"), assim como podem ser incorporadas mediantetécnicas conhecidas por especialistas na matéria adiferentes tipos de acessórios sólidos tais como porexemplo, toalhas, hidrogéis, adesivos (ou não adesivos) oumáscaras faciais, ou podem incorporar-se a diferentesprodutos da linha de maquiagem tais como corretores deolheiras, fundos de maquiagem, loções ou leitesdemaquilantes, sombras de olhos e barras de lábios entre outros.

Os peptídeos também podem incorporar-se a tecidospara a confecção de vestuários que estejam em contatodireto com a pele do corpo, de modo que liberem ospeptídeos da invenção por biodegradação do sistema deancoragem a tecido ou pela fricção do vestuário com ocorpo, pela humidade corporal, pelo pH da pele ou pelatemperatura corporal. Exemplos de vestuários, tecidos emeios de imobilização dos peptídeos aos tecidos, entre osque se encontram a micro encapsulação, poden encontrar-sedescritos na literatura e são conhecidos pela técnica atual[Schaab C.K. (1986) "Impregnating Fabrics Wi thMicrocapsules", HAPPI May 1986; Nelson G. (2002)"Application of microenca.psula.tion in textiles" Int. J.Pharm. 242, 55-62], Vestuários preferidos são vendas,faixas, meias, calcinhas, sutiãs e mangas para os braços eantebraços.

A composição cosmética ou dermofarmacêuticaobjeto da presente invenção pode aplicar-se também naszonas do corpo que requeiram tratamento mediante injeçãosubcutânea, injeção intradérmica, cura oclusiva ou medianteiontoforese, com a finalidade de conseguir uma maiorpenetração do princípio ativo. As zonas preferidas para aaplicação são rosto, colo, antebraços, peito, glúteos,abdômen e músculos.

As composições mencionadas na presente invençãopodem conter ingredientes adicionais comumente empregadosem composições para o cuidado e tratamento da pele, taiscomo por exemplo, e sem limite, agentes emulsionantes,emolientes, disolventes orgânicos, acondicionadores da pelecomo por exemplo, humectantes, alfahidroxiácidos,hidratantes, vitaminas, pigmentos ou corantes, polímerosgelificantes, espessantes, suavizantes, agentes anti-rugas,agentes capazes de diminuir ou tratar as bolsas embaixo dosolhos, agentes clareadores ou despigmentantes, agentesesfoliantes, agentes anti-envelhecimento, agentescapturadores de radicais livres e/ou anti-contaminaçãoatmosférica, inibidores da NO-sintase, agentesantioxidantes, agentes anti-glicação, agentes estimuladoresda síntese de macromoléculas dérmicas ou epidérmicas e/oucapazes de inibir sua degradação, como por exemplo, agentesestimuladores da síntese de colágeno, agentes estimuladoresda síntese de elastina, agentes estimuladores da síntese delaminina, agentes estimuladores da síntese de decorina,agentes inibidores da degradação de colágeno, agentesinibidores da degradação de elastina, agentes estimuladoresda proliferação de fibroblastos, agentes estimuladores daproliferação de queratinócitos, agentes estimuladores dadiferenciação de queratinócitos, agentes estimuladores dasíntese de lipídeos componentes do extrato córneo(ceramidas, ácidos graxos, etc.), agentes dermorelaxantes,agentes estimuladores da síntese de glicosaminoglicanos,agentes reafirmantes, agentes anti-estrías, agentescalmantes, agentes antiinflamatórios, agentes que atuamsobre a circulação capilar e/ou a microcirculação, agentesque atuam sobre o metabolismo das células, agentesestimuladores e/ou inibidores da síntese de melanina,agentes destinados a melhorar a união derme-epiderme,agentes antimicrobianos, conservantes, perfumes, agentesquelantes, extratos vegetais, óleos essenciais, extratosmarinhos, agentes provenientes da biofermentação, saisminerais, extratos celulares e filtros solares (agentesfotoprotetores de natureza orgânica ou natureza mineralativos contra os raios ultravioleta AeB) entre outros,sempre que sejam física e químicamente compatíveis com oresto dos componentes da composição e em especial com ospeptídeos de fórmula geral (I) da presente invenção. Anatureza de tais ingredientes adicionais pode ser sintéticaou de origem natural, como por exemplo, extratos vegetais.

Assim mesmo, as composições da presente invençãopodem conter ou se podem co-administrar com compostosanalgésicos e/ou compostos antiinflamatórios com afinalidade de diminuir inchaço e a irritação associadastanto a peles sensíveis como aos processos de cicatrizaçãoou para tratar as cicatrizes hipertróficas ou quelóideas.

Entre tais compostos podem destacar-se compostos de tipoesteroídeo como a hidrocortisona, de tipo não esteroídeocomo ou paracetamol ou o ácido acetilsalicíIico ou extratosnaturais ou óleos essenciais com atividade analgésica eantiinflamatória intrínseca.

Um aspeto adicional da presente invenção serefere a uma composição cosmética ou dermofarmacêutica quecompreende uma quantidade cosméticamente oudermofarmacêuticamente eficaz de ao menos um peptídeosegundo a fórmula geral (I) , e além disso, uma quantidadecosméticamente ou dermofarmacêuticamente eficaz de ao menosum extrato com atividade anti-rugas e/ou antienvelhecimentocomo por exemplo e sem limite, os extratos de Vitisvinifera, Rosa canina, Curcuma longa, Iris pallida,Theobroma cacao, Ginkgo biloba, ou Dunaliella salina entreoutros ou pelo menos um composto sintético, extrato ouproduto de biofermentação com atividade anti-rugas e/ouantienvelhecimento como por exemplo, e sem limite,Matrixyls comercializado por Sederma, Vialoxe ou Syn-ake°comercializados por Pentapharm, Myoxinol™ comercializadopor Cognis, Algisum C ou Hydroxyprolisilane CNcomercializados por Exsymol, Argirelme , Leuphasyl ,Aldenine° ou Lipochroman° comercializados por Lipotec,Kollaren0 comercializado por Institut Europeen de BiologieCellulaire, Collaxyl ou Quintescme comercializados porVincience, antagonistas do canal de Ca2+ como a alverina,os sais de manganês ou de magnésio, certas aminassecundárias ou terciárias, retinol e seus derivados,idebenona e seus derivados, Coenzima QlO e seus derivados,ácido boswélico e seus derivados ou agonistas de canais decloro entre outros.

Um aspecto adicional da presente invenção serefere a uma composição cosmética ou dermofarmacêutica quecompreende uma quantidade cosméticamente oudermofarmacêuticamente eficaz de ao menos um peptídeosegundo a fórmula geral (I), e além disso uma quantidadecosméticamente ou dermofarmacêuticamente eficaz de ao menosun extrato ou combinação de extratos com atividadereafirmante, redensificante e/ou reestruturante como porexemplo, e sem limite, os extratos de Malpighiapunicitolia, Cynara scolymus, Gossypium herbaceum, AloeBarbadensis, Panicum miliaeeum, Morus nigra, Sesamumindicum, Glycine soja, Tritieum vulgare,Pronalen0 Refirming HSC ou Polyplane Refirmingcomercializados por Provital, Lanablue comercializado porAtrium, Pepha^-Nutrix comercializado por Pentapharm, ouextratos vegetais que contenham isoflavonas como Phyto-Flavone comercializado por Vichy entre outros ou umcomposto sintético, extrato ou produto de biofermentaçãocom atividade reafirmante, redensificante e/oureestruturante como por exemplo, e sem limite,Biopeptide EL, Biopeptide CL, Vexel, Matrixyl ou Bio-Bustyl™ comercializados por Sederma, Dermosaccharides® HC,Aglycal, Cytokinol° LS ou Firmiderms LS9120 comercializadospor Laboratoires Serobiologiques, Liftline®, Raftermine® ouRidulisse C* comercializados por Silab, Serilesineecomercializado por Lipotec, Ursolisomes, Basaline® ouCollalift0 comercializados por Coletica/Engelhard, Syn®-©

Coll comercializado por Pentapharm,Hydriamecomercializado por Atrium ou IP2000° comercializado porInstitut Europeen de Biologie Cellulaire entre outros.

Um aspecto adicional da presente invenção serefere a uma composição cosmética ou dermofarmacêutica quecompreende uma quantidade cosméticamente oudermofarmacêuticamente eficaz de ao menos um peptídeosegundo a fórmula geral (I) , e além disso uma quantidadecosméticamente ou dermofarmacêuticamente eficaz de ao menosum extrato ou combinação de extratos com atividadecicatrizante ou reepitelizante ou com eficácia comocoadjuvantes em processos de cicatrização ou reepitelizaçãocomo por exemplo, os extratos de Centella asiática, Rosamoschata, Echinacea angusti folia, Symphytuiu officinal,Equisetum arvense, Hypericum perforatum, Mimosa tenuiflora,Aloe vera, Polyplant" Epithelizing comercializado porProvital, Cytokinol° LS 9028 comercializado por Pentapharmou Deliner3 comercializado por Coletica/Engelhard entreoutros ou ainda o composto sintético, extrato ou produto debiofermentação com atividade cicatrizante ou reepitelizanteou com eficácia como coadjuvante em processos decicatrização ou reepitelização como por exemplo, e semlimite, Antarcticines comercializado por Lipotec entre outros.

Os peptídeos de fórmula geral (I) se utilizam nascomposições cosméticas ou dermofarmacêuticas da presenteinvenção em concentrações cosméticamente oudermofarmacêuticamente efetivas para conseguir o efeitodesejado; preferentemente entre 0.000001% (em pêso) e 20%(em pêso); mas preferentemente entre 0.00001% (em pêso) e10% (em peso) e mais preferentemente entre 0.0001% (empêso) e 5% (em pêso).

Portanto, um aspecto adicional desta invenção serefere ao uso de ao menos um peptideo de fórmula geral (I)na elaboração de uma composição cosmética oudermofarmacêutica para sua aplicação na pele,preferentemente para o tratamento daquelas condições dapele que requeiram uma regulação da fibrinogênese como é otratamento de peles envelhecidas (seja pelo passar da idadeou pela exposição ao sol e/ou aos contaminantes ambientais)ou como coadjuvantes nos processos de cicatrização parasuavizar a aparência das cicatrizes. Aplicações preferidassão as aplicações em músculos, abdômen, glúteos, peito,antebraços, colo e rosto, e também sobre aquelas zonas docorpo que apresentam cicatrizes.

A presente invenção proporciona, além disso, ummétodo cosmético ou dermofarmacêutico para tratar aquelascondições da pele que requeiram uma regulação dafibrinogênese, preferentemente a pele dos humanos, quecompreende a administração de uma quantidade eficaz depeptídeos de fórmula geral (I), preferivelmente em forma deuma composição cosmética ou dermofarmacêutica que oscontenham. A freqüência da aplicação sobre a pele podevariar amplamente, dependendo das necessidades de cadasujeito, sugirindo-se um raio de aplicação desde uma vez aomês até 10 vezes ao dia, pref erentemente desde uma vez nasemana até 4 vezes ao dia, mas preferentemente desde trêsvezes por semana até duas vezes ao dia, maispreferentemente uma vez a dia.

Método cosmético ou dermofarmacêutico preferido éaquele em que a regulação da fibrinogênese tem comoobjetivo reduzir, retardar e/ou prevenir os sinais deenvelhecimento ou suavizar a aparência das cicatrizes.

EXEMPLOS

Os seguintes exemplos específicos que seproporcionam aqui servem para ilustrar a natureza dapresente invenção. Estes exemplos se incluem somente comfins ilustrativos e não podem ser interpretados comolimitações da invenção que aqui se reivindica.

Metodologia Geral

Síntese química

Todos os processos sintéticos se realizam emseringas de polipropileno equipadas com discos depolietileno poroso. Todos os reativos e solventes são dequalidade para sínteses e são usados sem nenhum tratamentoadicional. Os solventes e os reativos solúveis se eliminampor sucção. A eliminação do grupo Fmoc são feitas compiperidina-DMF (2:8, v/v) (lxl min, 1x5 min; 5 mL/gresina) [Lloyd-Williams, P., Albericio, F. y Giralt, E.(1997) "Chemical Approaches to the Synthesis of Peptidesand Proteins" CRC, Boca Raton (FL, USA)]. As lavagens entreas etapas de desproteção, acoplamento, e, outra vez,desproteção são feitas com DMF (3x1 min) usando cada vez10 mL solvente/g resina. As reações de acoplamento sãofeitas com 3 mL solvente/g resina. 0 controle dosacoplamentos se realiza mediante o ensaio da ninhidrina[Kaiser, E., Colescott R.L., Bossinger C.D. y Cook P.I.(1970) nColor test for detection of free terminal aminogroups in the solid-phase synthesis of peptides" Anal.Biochem. 34, 595-598] . Todas as transformações sintéticas elavagenss são feitas a 25°C.

A análise croraatográfica por HPLC foi feita emequipamento Shimadzu (Kyoto, Japón) empregando uma colunade fase reversa termoestática a 30°C (250 χ 4.0 mm,Kromasil C8, 5 μτη, Akzo Nobel, Suécia). A eluição serealiza mediante um gradiente de acetonitrila (+0.07% TFA)em água (+0.1% TFA) a um fluxo de 1 mL/min e a detecção serealiza a 220 nm.

Abreviaturas:

As abreviaturas empregadas para os aminoácidosseguem as regras da Comissão de Nomenclatura Bioquímica daIUPAC-IUB especificadas em Eur. J. Biochem. (1984) 138, 9-37 y en J. Biol. Chem. (1989) 264, 633-673.

Ac, acetil; AM, ácido 2 - [4-aminometil-(2,4-dimetoxifenil)-fenoxiacético; Boc , terc-butiloxicarbonilo;Cit, citrulina; Dap, ácido 2,3-diaminopropiónico; DCM,diclorometano; DIEAf N, I\7-diisopropiletilamina; DIPCDI,N, N'-diisopropilcarbodiimida; DMF, N, i\/-dimetilformamida;equiv, equivalentes; DPPC, dipalmitoiIfosfatidilcolina;ES-MS, espectrometría de massas por eletronspray; Fmoc,fluorenilmetoxicarbonilo; GAGs, glicosaminoglicanos; HOBt,1-hidroxibenzotriazol; HPLC, cromatografia líquida de altaresolução; MBHA, resina p-metilbenzhidrilamina; MeCN,acetonitrila; MeOH, metanol; MLV, vesículas multilaminares;Nva, norvalina; Orn, ornitina; Palm, palmitoil; tBu, terc-butilo; TFA, ácido trifluoroacético; TGF-β, fator decrescimento de transformação β; THF, tetrahidrofurano; TIS,triisopropilsilano; ULV, vesículas unilaminares.EXEMPLO 1

Obtenção de Palm-Dap-Glu-Ile-Cit-OH

São incorporadas 3.5 g de Fmoc-L-Cit-OH (8.8mmol, 1 equiv) dissolvidos em 55 mL de DCM adicionados 1.3mL de DIEA (7.6 mmol, 0.86 equiv) sobre a resina 2-clorotritilo (5.5 g, 8.8 mmol) sêca. Deixar em agitaçãodurante 5 min, passados os quais se adicionam 2.5 mL deDIEA (14.6 mmol, 1.66 equiv). Deixar reagir durante 40 min.

Bloquear os grupos cloreto remanescentes por tratamento com4.4 mL de MeOH.

Desproteger o grupo Fmoc amino terminal comodescrito nos métodos gerais e incorpora sobre a peptidil-resina 7.77 g de Fmoc-L-Ile-OH (22 mmol, 2.5 equiv) napresença de DIPCDI (3.39 mL, 22 mmol, 2.5 equiv) e HOBt(3.37 g, 22 mmol, 2.5 equiv) utilizando DMF como solventedurante Ih. A resina se lava posteriormente como sedescreve nos métodos gerais e se repete o tratamento dedesproteção do grupo Fmoc para incorporar o aminoácidoseguinte. Seguindo os protocolos descritos se acoplam seqüencialmente 9.36 g de Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (22 mmol, 2.5equiv) e 9.38 g de Fmoc-L-Dap(Boc)-OH (22 mmol, 2.5 equiv)em presença de 3.3 7 g de HOBt (22 mmol, 2.5 equiv) em cadaacoplamento e 3.3 9 mL de DIPCDI (22 mmol, 2.5 equiv).

Desproteger o grupo Fmoc N-terminal como descritonos métodos gerais, e incorporar 22.5 g de ácido palmítico(88 mmol, 10 equiv) pré dissolvido em DMF (10 mL) , empresença de 13.55 g de HOBt (88 mmol, 10 equiv) e 13.55 mLde DIPCDI (88 mmol, 10 equiv). Deixar reagir durante 15horas, passadas as quais lavar a resina com THF (5x1min) , DCM (5x1 min) , DMF (5x1 min) , MeOH (5x1 min) ,DMF (5x1 min), THF (5x1 min), DMF (5x1 min), DCM (4 χ1 min), éter (3x1 min), e secar a vácuo.

12.36 g da peptidil-resina seca é tratada com 87mL de TFA-TIS-H2O (90:5:5) durante 2h a temperaturaambiente. Os filtrados são recolhidos sobre éter dietílicofrio (700 mL) , filtrar através de placa porosa e lavar oprecipitado com éter (500 mL) 5 vezes. 0 precipitado finalé seco a vácuo.

EXEMPLO 2:

Síntese H-Lys-Asp-Val-Cit-NH2

Tratar 0.685 mg da resina Fmoc-AM-MBHA defuncionalização 0.73 mmol/g (0.5 mmol) com piperidina-DMFsegundo o protocolo geral descrito com o objetivo deeliminar o grupo Fmoc. Sobre a resina desprotegida seincorporam 0.99 g de Fmoc-L-Cit-OH (2.5 mmol, 5 equiv) empresença de DIPCDI (385 pL, 2.5 mmol, 5 equiv) e HOBt (385mg, 2.5 mmol, 5 equiv) utilizando DMF como solvente durante lh.

A resina se lava posteriormente como descrito nosmétodos gerais e se repete o tratamento de desproteção dogrupo Fmoc para incorporar o aminoácido seguinte. Seguindoos protocolos descritos se acoplam seqüencialmente 0.85 gde Fmoc-L-Val-OH (2.5 mmol, 5 equiv), 1.03 g de Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH (2.5 mmol, 5 equiv) e 1.17 g de Fmoc-L-Lys(Boc)-OH (2.5 mmol, 5 equiv) em presença de 385 mg deHOBt (2.5 mmol, 5 equiv) em cada acoplamento e 385 pL deDIPCDI (2.5 mmol, 5 equiv).

Desproteger o grupo Fmoc N-terminal como descritonos métodos gerais, lavar con DMF (5x1 min), DCM (4x1min), éter dietílico (4x1 min) e secar a vácuo.1.17 g da peptidil-resina sêca se tratam com 15mL de TFA-TIS-H2O (90:5:5) durante 2h a temperaturaambiente. Os filtrados são recolhidos sobre éter dietilicofrio (100 mL), centrifugar 5 min a 4000 rpm e se decanta asolução etérea. Repetir as lavagens com éter 5 vezes. 0precipitado final é seco a vácuo.

A análise por HPLC em um gradiente desde 5 até95% de MeCN ( + 0.07% TFA) em H2O ( + 0.1% TFA) mostrou umapureza superior a 70%. Seu peso molecular se determinou porES-MS [ (M+H) ^órico 517.59, (M+H)+exp 517 . 7] .

EXEMPLO 3:

Obtenção de Ac-Orn-Asp-Thr-Cit-NH- (CH2) 9~CH3

Incorporar 1.28 g de Fmoc-L-Cit-OH (3.23 mmol, .1equiv) dissolvidos en 20 mL de DCM aos que se adicionam 500pL de DIEA (2.9 mmol, 0.90 equiv) sobre a resina 2-clorotritilo (2.0 g, 3.3 mmol) sêca. Agitar durante 5 min,passados os quais se adicionam 1 mL de DIEA (5.9 mmol, 1.81equiv). Deixar reagir durante 4 0 min. Bloquear os gruposcloreto remanescentes por tratamento com 1.6 mL de MeOH.

Sobre 1 mmol da aminoacil-resina, desproteger ogrupo Fmoc amino terminal como descrito nos métodos geraise se incorporam 1.99 g de Fmoc-L-Thr(tBu)-OH (5 mmol, 5equiv) em presença de DIPCDI (770 pL, 5 mmol, 5 equiv) eHOBt (770 mg, 5 mmol, 5 equiv) utilizando DMF como solventedurante Ih. A resina é lavada posteriormente como descritonos métodos gerais e repetir o tratamento de desproteção dogrupo Fmoc para incorporar o aminoácido seguinte. Seguindoos protocolos descritos se acoplam seqüencialmente 2.06 gde Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH (5 mmol, 5 equiv) e 2.27 g de Fmoc-L-Orn(Boc)-OH (5 mmol, 5 equiv) em presença de 770 mg deHOBt (5 mmol, 5 equiv) em cada acoplamento e 770 pL deDIPCDI (5 mmol, 5 equiv).

Desproteger o grupo Fmoc N-terminal como descritonos métodos gerais, tratar a peptidil-resina durante 30 mincom 2.36 mL de anidrido acético (25 mmol, 25 equiv) empresença de 4.28 mL de DIEA (25 mmol, 25 equiv) utilizandoDMF como solvente, lavar com DMF (5x1 min), DCM (4x1min), éter dietílico (4x1 min) e secar a vácuo.

0 peptídeo completamente protegido [Ac-L-Orn(Boc)-L-Asp(OtBu)-L-Thr(tBu)-L-Cit-OH] se obtém portratamento durante 5 minutos da peptidil-resina,previamente seca a vácuo em presença de KOH, com umasolução de 3% de TFA em DCM. Os filtrados são recolhidossobre éter dietílico frio e se repete ou tratamento trêsvezes. São evaporados a temperatura ambiente as soluçõesetéreas, o precipitado é ressuspenso em 50% de MeCN en H2Oe se liofiliza. Pesar 279 mg do cru obtido (367 pmol) em umbalão, se adicionam 350 mg de decilamina (3 equiv) e 30 mLde DMF anidra. São adicionados 120 pL de DIPCDI (2 equiv),e se deixa reagir com agitação magnética a A1°C. Secontrola a reação mediante HPLC por desaparição do produtoinicial, sendo completa após 24 horas. Se evapora osolvente a seco e se coevapora duas vêzes com DCM. 0resíduo obtido [Ac-L-Orn(Boc)-L-Asp(OtBu)-L-Thr(tBu)-L-Cit-Mi-(CH2)9-CH3] é ressuspenso em 50 mL de uma mistura de TFA-DCM-anisol (49:49:2) e se deixa reagir durante 30 min atemperatura ambiente. São adicionados 250 mL de éterdietílico frio, evapora-se o solvente e se realizam duasevaporações adicionais com éter. 0 resíduo se dissolve emuma mistura de 50% de MeCN em H2O e se liofiliza.A análise por HPLC em ura gradiente de 5 a 95% deMeCN ( + 0.07% TFA) em H2O ( + 0.1% TFA) indicou uma purezasuperior a 70%. Seu pêso molecular se determinou por ES-MS[(M+H)+teórico 686.8, (M+H) +exp 686.9],

EXEMPLO 4:

A partir de um modelo de pele humanatridimensional EFT-200 (MatTek Corporation), se tratam ostecidos com H-Lys-Asp-Ile-Cit-NH2 e com H-Lys-Asp-Val-Cit-NH2 a uma concentração de 0.1 mg/mL em meio de cultivo.

Este é trocado diariamente durante 14 dias, adicionandopeptídeo na mesma concentração em cada troca. No 14° dia,os tecidos se fixam com uma solução de 2% paraformaldehidoe 2.5% de glutaraldehido em 0. IM tampão fosfato pH 7.4durante um mínimo de 2h a 4 °C. Em seguida, se realiza após-fixação com 1% tetraóxido de ósraio contendo 0.8% deferricianeto de potássio durante 1 hora a 4 °C.

Seguidamente, se desidratam os tecidos em alcools e seincluem lentamente em resina epoxi (Spurr). Cortam-se asamostras e se orientam corretamente no bloco, deixando quepolimerizem durante 48 horas a 60°C. Se fracionamposteriormente com um ultramicrótomo Ultracut E (Reichert-Jung) e os cortes obtidos, uma vez contrastados, sáoobservados com um Microscópio Electrônico de TransmissãoJeol JEM 1010, determinando o diâmetro das fibrasobservadas com o programa AxioVision.AC (Carl ZeissVision).

A média dos diâmetros das fibrillas de colágenoobservados foi de 6.825 nm para o tecido não tratado e de5.774 nm para H-Lys-Asp-Val-Cit-NH2 y 5.791 nm para H-Lys-Asp-Ile-Cit-NH2, o que supõe uma diminuição do diâmetro dasfibras de colágeno em 15.5% para o tecido tratado com H-Lys-Asp-Val-Cit-NH2 e de um 15.1% para o tratado com H-Lys-Asp-Ile-Cit-NH2 .

EXEMPLO 5:

Preparação de uma composição cosmética contendo Palm-Lys-Asp-Ile-Cit-NH2

A seguinte formulação foi preparada segundo sedescreve na presente invenção:

Em um reator suficientemente grande são pesadosos componentes da Fase A e se aquece a mistura a 8 0°C parafundir as cêras. Em um recipiente adequado para todo oconteúdo se pesam os componentes da Fase B e se aquecem a70° C. Se adiciona a Fase A sobre a Fase B lentamente sobintensa agitação, e posteriormente se adiciona a Fase C amistura anterior sob agitação. Concluída a adição, deixeesfriar com agitação suave e quando a mistura se encontreem temperatura ambiente se adiciona uma solução aquosa dePalm-Lys-Asp-Ile-Cit-NH2 e a lectina, homogeneiza e corrigeo pH com trietanolamina se necessário.

O creme que se obtém tem um pH entre 6 e 7 e umaviscosidade de 10-15 Ns/m2 (6/50) ._

<table>table see original document page 47</column></row><table><table>table see original document page 48</column></row><table>

EXEMPLO 6:

Preparação de liposomas contendo H-Lys-Asp-Val-Cit-NH2

Pesa-se a dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) e sedissolve e clorofórmio. O solvente se evapora a vácuo atéobter uma fina camada de fosfolipido, e esta camada sehidrata por tratamento a 5 5 °C com uma solução aquosa quecont[em o peptideo na concentração desejada (contendoPhenonipe), obtendo os liposomas MLV. Os liposomas ULV seobtém submergindo os liposomas MLV em um banho de ultrasonsa 550C durante 8 ciclos de 2 min em intervalos de 5 min.

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Em um primeiro aspecto, a presente invenção serefere a um peptideo de fórmula geral (I):

<formula>formula see original document page 48</formula>Seus estereoisómeros, seus sais cosméticamente edermofarmacêuticamente aceitaveis e misturas dos mesmos,onde:

Z se destaca do grupo formado por alanil, allo-isoleucil, glicil, isoleucil, isoseril, isovalil, leucil,norleucil, norvalil, prolil, seril, treonil, alio-treonilou valil;

"n" e "m" podem variar independentemente entre sientre 1 e 5;

AA se destaca do grupo formado pelos aminoácidosnaturais codificados em sua forma L- ou D- ou aminoácidosnão codificados;

"x" e "y" podem variar independentemente entre sientre 0 e 2;

R1 se destaca do grupo formado por H ou grupoalquil, aril, aralquil ou acil; e

R2 se destaca do grupo formado por amino,hidroxil ou tiol, substituídos ou não com grupos alifáticosou cíclicos.

Um segundo aspecto importante, no peptídeo defórmula geral (I) de forma preferida R1 é H ou acil de C2 aC24 linear, ramificado ou cíclico, saturado ou insaturado.

Segundo um aspecto importante da invenção nopeptídeo de fórmula geral (I) de forma preferida R2 é aminoou hidroxil, substituídos ou não com grupos alifáticos deC1 a C2/, lineares, ramificados ou cíclicos, saturados ouinsaturados.

Segundo um aspecto importante da invenção nopeptídeo de fórmula geral (I) de forma preferida Z é L-isoleucil, L-treonil ou L-valil.Segundo um aspecto importante da invenção nopeptídeo de fórmula geral (I) de forma preferida Z é L-isoleucil, η é 4, m é 1, R1 é H ou acetil ou palmitoil e R2é amino ou hidroxilo, substituídos ou não com grupos metilou etil ou hexil ou dodecil ou hexadecil.

Segundo um aspecto importante da invenção nopeptídeo de fórmula geral (I) de forma preferida Z é L-treonil, né4, mél, Ri é H ou acetil ou palmitoil e R2 éamino ou hidroxilo, substituídos ou não com grupos metil ouetil ou hexil ou dodecil ou hexadecil.

Segundo un aspecto importante da invenção nopeptídeo de fórmula geral (I) de forma preferida Z é L-valil, η é 4, mél, RiéHou acetil ou palmitoil e R2 éamino ou hidroxil, substituídos ou sem grupos metil ou etilou hexil ou dodecil ou hexadecil.

Segundo um aspecto importante da invenção nopeptídeo de fórmula geral (I) de forma preferida Z é L-isoleucil, né4, mél, xee são O, R1 é H ou acetilo oupalmitoilo e R2 é amino ou hidroxilo, substituídos ou nãocom grupos metil ou etil ou hexil ou dodecil ou hexadecil.

Segundo um aspecto importante da invenção nopeptídeo de fórmula geral (I) de forma preferida Z é L-treonil, né4, mél, xee são 0, Ri é H ou acetil oupalmitoil e R2 é amino ou hidroxil, substituídos ou não comgrupos metil ou etil ou hexil ou dodecil ou hexadecil.

Segundo um aspecto importante da invenção nopeptídeo de fórmula geral (I) de forma preferida Z é L-valil, η é 4, mél, xey são 0, R1 é H ou acetil oupalmitoil e R2 é amino ou hidroxil, substituídos ou não comgrupos metil ou etil ou hexil ou dodecil ou hexadecil.Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere a um procedimento de obtenção de umpeptídeo de fórmula geral (I), que se baseia em síntese depeptídeos em fase sólida.

Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere a um procedimento de obtenção de unpeptídeo de fórmula geral (I), que emprega gruposprotetores selecionados do grupo formado por Fmoc/tButil,Fmoc/tritilo e Fmoc/alil.

Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere a uma composição cosmética oudermofarmacêutica que compreende uma quantidade cosméticaou dermofarmaceuticamente eficaz de ao menos um peptídeo defórmula (I) e ao menos um excipiente ou adjuvante cosméticaou dermofarmaceuticamente aceitável.

Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere a uma composição cosmética oudermofarmacêutica que compreende ao menos um peptídeo defórmula geral (I) incorporado a um veículo e/ou sistema deliberação sustentada cosméticamente oudermofarmaceuticamente aceitável, destacado do grupoformado por lipossomas, milicápsulas, microcápsulas,nanocápsulas, esponjas, vesícuias, micelas, miliesferas,microesferas, nanoesferas, lipoesferas, milipartículas,micropartículas e nanopartículas.

Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere a uma composição cosmética oudermofarmacêutica que compreende ao menos um peptídeo defórmula geral (I) adsorvido sobre um polímero orgânicosólido ou suporte mineral selecionado do grupo formado portalco, bentonita, sílica, amido e maltodextrina.

Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere a uma composição cosmética oudermofarmacêutica na qual o peptideo de fórmula geral (I)se apresenta em uma formulação selecionada do grupo formadopor cremes, emulsões de óleo e/ou silicone em água,emulsões de água em óleo e/ou silicone, óleos, leites,bálsamos, espumas, loções, géis, soros, sabões, ungüentos,mousses, pomadas, barras, lápices e vaporizadores.

Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere a uma composição cosmética oudermofarmacêutica na qual o peptideo de fórmula geral (I)se encontra incorporado em suportes sólidos selecionados dogrupo formado por toalhas, hidrogéis, adesivos, nãoadesivos e máscaras faciais.

Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere a uma composição cosmética oudermofarmacêutica na qual o peptideo de fórmula geral (I)se encontra incorporado em tecidos selecionados do grupoformado por vendas, faixas, meias, calcinhas, sutiãs emangas para braços e antebraços.

Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere a uma composição cosmética oudermofarmacêutica que contem um peptideo de fórmula geral(I) incorporado em produtos de linha de maquiagemselecionados do grupo formado por corretores de olheiras,fundos de maquiagem, loções e leites desmaquiantes, sombrasde olhos e batons de lábios.

Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere a uma composição cosmética oudermofarmacêutica que contem um peptídeo de fórmula geral(I) em uma concentração entre 0.000001% (em peso) e 20% (empeso).

Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere ao uso de um peptídeo de fórmula (I) naelaboração de uma composição cosmética ou dermofarmacêuticapara o tratamento da pele.

Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere ao uso de um peptídeo de fórmula (I) naelaboração de uma composição cosmética ou dermofarmacêuticapara o tratamento da pele com a finalidade de diminuir,retardar e/ou prevenir os sinais do envelhecimento.

Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere ao uso de um peptídeo de fórmula (I) naelaboração de uma composição cosmética ou dermofarmacêuticapara o tratamento da pele dos músculos, abdômen, glúteos,peito, antebraços, colo e rosto.

Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere ao uso de um peptídeo de fórmula (I) naelaboração de uma composição cosmética ou dermofarmacêuticapara o tratamento da pele com a finalidade de suavizar aaparência das cicatrizes.

Segundo outro aspecto importante, a presenteinvenção se refere ao uso de um peptídeo de fórmula (I) naelaboração de uma composição cosmética ou dermofarmacêuticapara o tratamiento da pele daquelas zonas do corpo queapresentem cicatrizes.

Claims (31)

1. Peptídeo de fórmula geral (!)<formula>formula see original document page 54</formula>Seus estereoisômeros, misturas dos mesmos, e seussais cosmeticamente e dermofarmacêuticamente aceitáveis,caracterizado pelo fato de que:Z se destaca do grupo formado por alanil, allo-isoleucil, glicil, isoleucil, isoseril, isovalil, leucil,norleucil, norvalil, prolil, seril, treonil, alio-treonilou valil;"n" e "m" podem variar independentemente entre sientre 1 e 5;AA se destaca do grupo formado pelos aminoácidosnaturais codificados em sua forma L- ou D- e aminoácidosnão codificados;χ e y podem variar independentemente entre síentre 0 e 2;R1. se destaca do grupo formado por H ou grupoalquil, aril, aralquil ou acil;y R2 se destaca do grupo formado por amino,hidroxil ou tiol, substituídos ou não com grupos alifáticosou cíclicos.

2. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 1caracterizado pelo fato de que Ri é H ou acilo de C2 a C24,linear, ramificado ou cíclico, saturado ou insaturado.

3. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 1caracterizado R2 é amino ou hidroxilo, substituídos ou nãocom grupos alifáticos de C3. a C24 lineares, ramificados oucíclicos, saturados ou insaturados.

4. Peptídeo de acordo com a reivindicação 1caracterizado pelo fato de que Z é L-isoleucil, L-treonilou L-valil.

5. Peptídeo de acordo com quaisquer uma dasreivindicações 1, 2, 3 ou 4 caracterizado pelo fato de queZ é L-Ile, Rn é H, acetil ou palmitoil, mél, né4eR2éamino ou hidróxil, substituídos ou não com grupos metil ouetil ou hexil ou dodecil ou hexadecil.

6. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 5caracterizado pelo fato de que χ e y é 0.

7. Peptídeo, de acordo com quaisquer uma dasreivindicações 1, 2, 3 ou 4 caracterizado pelo fato de queZ é L-Thr, R1 é H, acetil ou palmitoil, mél, né4eR2éamino ou hidróxil, substituídos ou não com grupos metil ouetil ou hexil ou dodecil ou hexadecil.

8. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 7caracterizado pelo fato de que χ e y é 0.

9. Peptídeo, de acordo com quaisquer uma dasreivindicações 1, 2, 3 ou 4 caracterizado pelo fato de queZ é L-Val, R1 é H, acetil ou palmitoil, mél, n é 4 e R2 éamino ou hidróxil, substituídos ou não com grupos metil ouetil ou hexil ou dodecil ou hexadecil.

10. Peptídeo, de acordo com a reivindicação 9caracterizado pelo fato de que χ e y é 0.

11. Procedimento de obtenção de um peptídeo defórmula geral (I), de acordo com quaisquer uma dasreivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que serealiza em fase sólida.

12. Procedimento de obtenção de um peptídeo defórmula geral (I), de acordo com a reivindicação 11,caracterizado pelo fato de que emprega grupos protetoresselecionados do grupo formado por Fmoc/tButilo,Fmoc/tritilo e Fmoc/alilo.

13. Composição cosmética ou dermofarmacêuticaque compreende uma quantidade cosmética oudermofarmaceuticamente eficaz de ao menos um peptídeo defórmula (I) de acordo com quaisquer uma das reivindicações-1 a 10 caracterizada pelo fato de que compreende ao menosum excipiente ou adjuvante cosmética oudermofarmaceuticamente aceitável.

14. Composição cosmética ou dermofarmacêutica,de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fatode que peptídeo de fórmula geral (I) se encontraincorporado a um veículo ou a um sistema de liberaçãosustentada cosméticamente ou dermofarmaceuticamenteaceitável, selecionado do grupo formado por lipossomas,milicápsulas, microcápsulas, nanocápsulas, esponjas,vesículas, micelas, miliesferas, microesferas, nanoesferas,lipoesferas, milipartícuias, micropartículas enanopartículas.

15. Composição cosmética ou dermofarmacêutica,de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fatode que o peptídeo de fórmula geral (I) se encontraadsorvido sobre um polímero orgânico ou suporte sólidomineral cosméticamente ou dermofarmaceuticamente aceitávelselecionado do grupo formado por talco, bentonita, sílica,amido ou maltodextrina.

16. Composição cosmética oudermofarmacêutica, de acordo com quaisquer uma dasreivindicações 13, 14 ou 15, caracterizada pelo fato de queapresenta uma formulação selecionada do grupo formado porcremes, emulsões de óleo e/ou silicone em água, emulsões deágua em óleo e/ou silicone, óleos, leites, bálsamos,espumas, loções, géis, soros, sabões, ungüentos, mousses,pomadas, barras, lápices e vaporizadores.

17. Composição cosmética oudermofarmacêutica, de acordo com quaisquer uma dasreivindicações 13, 14 ou 15, caracterizada pelo fato de queo peptídeo de fórmula geral (I) se encontra incorporado emsuportes sólidos selecionados do grupo formado por toalhas,hidrogéis, adesivos, não adesivos e máscaras faciais.

18. Composição cosmética oudermofarmacêutica, de acordo com quaisquer uma dasreivindicações 13, 14 ou 15, caracterizada pelo fato de queo peptideo de fórmula geral (I) se encontra incorporado emprodutos de linha de maquiagem selecionados do grupoformado por corretores de olheiras, fundos de maquiagem,loções demaquilantes, leites demaquilantes, sombras deolhos e batons de lábios.

19. Composição cosmética oudermofarmacêutica, de acordo com quaisquer uma dasreivindicações 13, 14 ou 15, caracterizada pelo fato de queo peptídeo de fórmula geral (I) se encontra incorporado emtecidos.

20. Composição cosmética ou dermofarmacêutica,de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo fatode que o peptideo de fórmula geral (I) se encontraincorporado em vendas, meias, calcinhas, sutiãs, faixas emangas para braços e antebraços.

21. Composição cosmética ou dermofarmacêuticaque compreende uma quantidade cosmética oudermofarmaceuticamente eficaz de ao menos um peptideo defórmula (I), de acordo com quaisquer uma das reivindicações- 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, caracterizada pelo fato deque o peptideo de fórmula geral (I) se encontra a umaconcentração entre 0.000001% e 20% em peso.

22. Composição cosmética ou dermofarmacêutica,de acordo com a reivindicação 21, caracterizada pelo fatode que o peptideo de fórmula geral (I) se encontra a umaconcentração entre 0.0001% e 5% em peso.

23. Composição cosmética ou dermofarmacêuticaque compreende uma quantidade cosmética oudermofarmaceuticamente eficaz de ao menos um peptideo defórmula (I), de acordo com quaisquer uma das reivindicações- 1 a 10, caracterizada pelo fato de que compreende umaquantidade adicional cosmética ou dermofarmaceuticamenteeficaz de um agente ativo selecionado do grupo formado porum agente exfoliante, um agente hidratante, um agentedespigmentante ou clareador, um agente propigmentante, umagente anti-estrias, um agente anti-rugas, um agenteantioxidante, um agente antiglicacão, um inibidor da NO-sintase, um agente anti-envelhecimento, um agente capaz dereduzir ou eliminar as bolsas embaixo dos olhos, um agenteestimulador da síntese de moléculas dérmicas ou epidérmicase/ou para prevenir sua degradação, um agente estimulador daproliferação de fibroblastos e/ou queratinócitos ou paraestimular a diferenciação de queratinócitos, agentedestinados a melhorar a união derme-epiderme, um agentedermorelaxante, um agente reafirmante, um agente anti-contaminação atmosférica e/ou anti-radicais livres, umagente que atue sobre a circulação capilar e/ou amicrocirculação, um agente calmante, um agenteantiinflamatório, um agente antimicrobiano, um agente queatue sobre o metabolismo das células, vitaminas, um agentefotoprotetor, de natureza orgânica ou mineral, ativo contraos raios ultravioleta A e/ou B, ou misturas deles.

24. Composição cosmética ou dermofarmacêutica,de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fatode que o agente ativo é de origem sintética ou um extratovegetal ou provêm de biofermentação.

25. Uso de um peptideo de fórmula (I), deacordo com quaisquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5,-6, 7, 8, 9 ou 10, caracterizado pelo fato de ser naelaboração de uma composição cosmética ou dermofarmacêuticapara o tratamento da pele dos mamíferos.

26. Uso de um peptideo de fórmula (I), deacordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato deser na elaboração de uma composição cosmética oudermofarmacêutica para o tratamento da pele do ser humano.

27. Uso de um peptideo de fórmula (I), deacordo com quaisquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5,-6, 7, 8, 9 ou 10, caracterizado pelo fato de ser naelaboração de uma composição cosmética ou dermofarmacêuticapara o tratamento daquelas condições da pele dos mamíferosque requeiram uma regulação da fibrinogênese.

28. Uso de um peptídeo de fórmula (I) , deacordo com quaisquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5,-6, 7, 8, 9 ou 10, caracterizado pelo fato de ser naelaboração de uma composição cosmética ou dermofarmacêuticaque diminua ou retarde os sinais de envelhecimento.

29. Uso de um peptídeo de fórmula (I), deacordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato deser na elaboração de uma composição cosmética oudermof armacêut ica para o tratamento da pele do colo e dorosto.

30. Uso de um peptídeo de fórmula (I) , deacordo com quaisquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5,-6, 7, 8, 9 ou 10, caracterizado pelo fato de ser naelaboração de uma composição cosmética ou dermofarmacêuticaque suaviza a aparência das cicatrizes.

31. Uso de um peptídeo de fórmula (I), deacordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato deser na elaboração de uma composição cosmética oudermofarmacêutica para o tratamento daquelas zonas da peledos mamíferos que apresentam cicatrizes.