ES2569399T3

ES2569399T3 - 2-(fenil o heterociclil)-1H-fenantro(9,10-d)imidazoles como inhibidores de la mPGES-1

Info

Publication number: ES2569399T3
Application number: ES06817652.8T
Authority: ES
Inventors: Anh Chau; Bernard Cote; Yves Ducharme; Richard Frenette; Richard Friesen; Marc Gagnon; Andre Giroux; Evelyn Martins; Hongping Yu; Tom Wu
Original assignee: Merck Canada Inc
Current assignee: Merck Canada Inc
Priority date: 2005-11-23
Filing date: 2006-11-21
Publication date: 2016-05-10
Anticipated expiration: 2026-11-21
Also published as: AU2006317419A1; CA2629527C; US7442716B2; RU2008125055A; CA2629527A1; US20090075998A1; EP1954683B1; WO2007059610A1; US20070208017A1; CN101370787B; JP5276445B2; EP1954683A1; CN101370787A; NO20082834L; US7943649B2; BRPI0618881A2; ZA200803926B; NZ568107A; JP2009516713A; EP1954683A4

Abstract

Un compuesto que se selecciona entre las siguientes tablas:**Fórmula** o una sal farmaceuticamente aceptable de cualquiera de los compuestos anteriores.

Description

imagen1

imagen2

Ej.: R3/R6 R6/R3 J K L M Y1 (M+H)+

124: Cl CH CH CH CCN H 521

125: imagen3 Cl CH CH CH CCN H 507

126: imagen4 Cl CH CH CH CCN H 463

127: imagen5 Cl CH CH CH CCN H 435

128: imagen6 Cl CH CH CH CCN H 547

129: imagen7 Cl CH CH CH CCN H 477

130: imagen8 Cl CH CH CH CCN H 481

131: imagen9 Cl CH F CH CCN H 479

132: imagen5 imagen5 CH CH CH CCN H 461

133: imagen5 imagen5 CH CH CH CCN H 461

134: imagen5 imagen5 CH CH CH CCN H 461

135: imagen5 Cl CH CH CH CCN H 451

136: Br Cl CH OH CH CCN H 474

137: imagen9 Cl CH OH CH CCN H 477

138: imagen10 imagen11 CH CH CH CCN H 517

139: imagen12 imagen13 CH CH CH CCN H 489

140: imagen14 imagen15 CH CH CH CCN H M − H: 667

141: imagen14 Br CH CH CH CCN H 585

142: imagen9 Cl CH Cl CH CCN H 495

143: imagen5 imagen5 CH CH CH CCN H 401

144: imagen16 Cl CH CH CH CCN H 465

145: Br imagen5 CH CH CH CCN H 479

146: imagen5 imagen5 CH CH CH CCN H 431

147: imagen9 imagen5 CH CH CH CCN H 483

148: imagen5 imagen5 CH CH CH CCN H 459

149: imagen5 imagen5 CH CH CH CCN H 457

150: imagen17 Cl CH CF CH CCN H 467

151: imagen18 Cl CH CF CH CCN H 483

152: imagen5 Cl CH CF CH CCN H 469

153: imagen5 imagen5 CH CH CH CCN H 471

154: imagen19 Cl CH CH CH CCN H 491

155: imagen20 Cl CH CH CH CCN H 484

156: Br imagen5 CH CH CH CCN H 454

157: imagen21 imagen5 CH CH CH CCN H 457

159: imagen22 imagen23 CH CH CH CCN H 555

160: imagen21 imagen5 CH CH CH CCN H 497

161: imagen22 imagen5 CH CH CH CCN H 508

162: imagen24 Cl CH CH CH CCN H 514

163: imagen5 imagen5 CH CH CH CCN H 457

164: imagen25 Cl CH CH CH CCN H 487

165: imagen26 Cl CH CH CH CCN H 460

166: imagen27 Cl CH CH CH CCN H 464

167: imagen5 Cl CH CH CH CCN H 451

168: imagen5 imagen5 CH CH CH CCN H 487

169: imagen5 imagen5 CH F CH CCN H 505

170: imagen28 Cl CH CH CH CCN H 476

171: imagen29 Cl CH CH CH CCN H 479

172: imagen5 imagen30 CH F CH CCN H 519

173: Br imagen5 CH CH CH CCN H 495

174: imagen5 imagen5 CH CH CH CCN H 473

175: imagen5 imagen5 CH CF CH CCN H 491

176: imagen5 imagen31 CH CH CH CCN H 501

177: imagen5 imagen31 CH CF CH CCN H 519

178: OH Cl CH CH CH CCN H 395

179: Cl imagen5 CH CH CH CCN H 437

180: imagen5 imagen32 CH CH CH CCN H 543

181: Cl imagen33 CH CH CH CCN H 461

182: imagen5 imagen34 CH CH CH CCN H 501

183: imagen35 Cl CH CH CH CCN H 465

184: Cl imagen36 CH CH CH CCN H 495

185: Cl imagen37 CH CH CH CCN H 479

186: imagen38 Cl CH CH CH CCN H 463

187: Br Cl CH imagen5 CH CCN H 487

188: imagen5 imagen39 CH CF CH CCN H 529

189: Cl Br CH N CH CCN H 459

190: imagen40 Cl CH N CH CCN H 462

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condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo heptadecaetileno-oxicetanol,

o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol tales como monooleato de polioxietilensorbitol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de polietilensorbitán. Las suspensiones

5 acuosas también pueden contener uno o más conservantes, por ejemplo p-hidroxibenzoato de etilo, o n-propilo, uno

o más agentes colorantes, uno o más agentes aromatizantes y uno o más agentes edulcorantes, tales como sacarosa, sacarina o aspartamo.

Las formulaciones líquidas incluyen el uso de sistemas de administración de fármacos auto-emulsionantes y tecnología NanoCrystal®. También se pueden usar complejos de inclusión de ciclodextrina.

Las suspensiones oleosas se pueden formular suspendiendo el ingrediente activo en un aceite vegetal, por ejemplo aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de coco, o en aceite mineral tal como parafina líquida. Las suspensiones oleosas pueden contener un agente espesante, por ejemplo cera de abejas, parafina dura

15 o alcohol cetílico. Para dar una preparación oral de sabor agradable se pueden añadir agentes edulcorantes, tales como los expuestos anteriormente, y agentes aromatizantes. Estas composiciones se pueden conservar mediante la adición de un antioxidante tal como ácido ascórbico.

Los polvos dispersables y gránulos adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua proporcionan el ingrediente activo en mezcla con un agente dispersante o humectante, agente de suspensión y uno o más conservantes. Los agentes dispersantes o humectantes y de suspensión adecuados se ejemplifican con los ya mencionados anteriormente. También pueden estar presentes excipientes adicionales, por ejemplo edulcorantes, aromatizantes y agentes colorantes.

25 Las composiciones farmacéuticas de la invención también pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo aceite de oliva o aceite de cacahuete, o un aceite mineral, por ejemplo parafina líquida o mezclas de éstos. Los agentes emulsionantes adecuados pueden ser fosfátidos naturales, por ejemplo soja, lecitina y ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de sorbitán, y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo monooleato de polioxietilensorbitán. Las emulsiones también pueden contener agentes edulcorantes y aromatizantes.

Los jarabes y elixires se pueden formular con agentes edulcorantes, por ejemplo glicerol, propilenglicol, sorbitol o sacarosa. Dichas formulaciones también pueden contener un demulcente, un conservante y agentes aromatizantes

35 y colorantes. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión se puede formular según la técnica conocida usando los agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión que ya se han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente parenteralmente aceptable no tóxico, por ejemplo como solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden emplear están el agua, la solución de Ringer y una solución isotónica de cloruro sódico. Además, los aceites fijos estériles se emplean convencionalmente como medio disolvente o de suspensión. Para este fin se puede emplear cualquier aceite fijo blando incluyendo mono- o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como el ácido oleico encuentran aplicación en la preparación de inyectables.

45 Los compuestos de Fórmula I también se pueden administrar en forma de supositorios para la administración rectal del fármaco. Estas composiciones se pueden preparar mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado que sea sólido a temperaturas ordinarias pero líquido a la temperatura del recto y por lo tanto se fundirán en el recto para liberar el fármaco. Dichos materiales son manteca de cacao y polietilenglicoles.

Para uso tópico se emplean cremas, ungüentos, jaleas, soluciones o suspensiones, etc., que contienen el compuesto de Fórmula I. (Para los fines de esta solicitud, la aplicación tópica incluirá lavados y enjuagues bucales).

Las composiciones farmacéuticas de la invención también pueden usar potenciadores de la absorción tales como Tween 80, Tween 20, TPGS de Vitamina E (polietilenglicol 1000 succinato de d-alfa-tocoferol) y Gelucire® .

55 Son útiles niveles de dosificación del orden de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 140 mg/kg de peso corporal al día en el tratamiento de los trastornos indicados anteriormente, o como alternativa de aproximadamente 0,5 mg a aproximadamente 7 g por paciente al día. Por ejemplo, la inflamación se puede tratar eficazmente mediante la administración de aproximadamente 0,01 a 50 mg del compuesto por kilogramo de peso corporal al día,

o como alternativa de aproximadamente 0,5 mg a aproximadamente 3,5 g por paciente al día, preferentemente de 2,5 mg a 1 g por paciente al día.

La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con los materiales portadores para producir una forma unitaria de dosificación variará dependiendo del huésped tratado y del modo particular de administración. Por 65 ejemplo, una formulación destinada a la administración oral de seres humanos puede contener de 0,5 mg a 5 g de agente activo compuesto con una cantidad apropiada y conveniente de material portador que puede variar de

aproximadamente el 5 a aproximadamente el 95 por ciento de la composición total. Las formas unitarias de dosificación generalmente contendrán entre aproximadamente 1 mg y aproximadamente 500 mg de un ingrediente activo, normalmente 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 800 mg, o 1000 mg. También se pueden emplear cantidades de dosificación de 4 mg, 8 mg, 18 mg, 20 mg, 36 mg, 40 mg, 80 mg, 160

5 mg, 320 mg y 640 mg. También se incluyen formas unitarias de dosificación que contienen 1, 10 o 100 mg.

Sin embargo, se entiende que el nivel de dosis específico para cualquier paciente particular dependerá de diferentes factores, incluyendo la edad, el peso corporal, salud general, sexo, dieta, tiempo de administración, ruta de administración, velocidad de excreción, combinación de fármacos y la gravedad de la enfermedad particular

10 sometida a terapia.

Métodos de síntesis

Los compuestos de Fórmula I de la presente invención se pueden preparar de acuerdo con las rutas de síntesis

15 descritas en los Esquemas 1 y 4 a continuación y siguiendo los métodos descritos en los mismos. El imidazol de Fórmula I se puede preparar en una secuencia de varias etapas de la fenantrenoquinona imprescindible i. El fenantreno imidazol iii se obtiene tratando la fenantrenoquinona i y un aldehído convenientemente sustituido ii con un reactivo tal como NH4OAc o NH4HCO3 en un disolvente tal como ácido acético. El tratamiento del imidazol iii con CuCN en un disolvente tal como DMF o DMSO produce el mono o bis-nitrilo (M = CCN) Ia. La posterior

20 interconversión de grupos funcionales se puede realizar en cualquiera de las posiciones R1 aR8. Por ejemplo, si uno

o más de los sustituyentes R1 aR8 equivalen a Cl, Br o I y si M es diferente de CBr o CI, Ia se pueden convertir a Ib poniendo Ia en presencia de un alquinilo monosustituido, un estannano, un ácido borónico, un borano o un boronato en condiciones que promuevan la reacción de acoplamiento cruzado, tales como calentamiento en presencia de un catalizador, tal como Pd(PPh3)4 y CuI, en presencia de una base, tal como carbonato sódico o diisopropilamina, y en

25 un disolvente adecuado, tal como THF, DMF o DME. Esta última etapa ejemplificada, o cualquier otra transformación de grupos funcionales apropiados, se pueden repetir de forma iterativa en R1 aR8 .

Esquema 1

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La fenantrenoquinona i se puede preparar de acuerdo con las secuencias descritas en el Esquema 2 y 3. La desprotonación de la sal de fosfonio iv (Esquema 2) en presencia de una base, tal como hidruro sódico o metóxido sódico, en un disolvente tal como DMF seguido de la adición del aldehído v produce el estilbeno vi como mezcla de 35 isómeros E y Z. La ciclación intramolecular de esta mezcla tras exposición a la luz UV en presencia de un agente oxidante, tal como yodo, y un captador de ácido, tal como óxido de propileno, en un disolvente adecuado, tal como ciclohexano produce el fenantreno vii. Este fenantreno viia se puede oxidar directamente con un agente oxidante, tal como CrO3, en un disolvente adecuado, tal como ácido acético, para dar la fenantrenoquinona i, u opcionalmente, el fenantreno viia se podría elaborar adicionalmente a fenantreno viib mediante la interconversión apropiada de 40 cualquiera del grupo funcional R1 aR8, tal como transmetalación con un reactivo organometálico, como butil-litio, en un disolvente adecuado tal como THF, seguido de la adición de un electrófilo, como yodo o dióxido de carbono. Como alternativa (Esquema 3), el ácido fenilacético viii se puede condensar con el aldehído ix en presencia de una base, tal como carbonato de potasio, y en presencia de anhídrido acético para dar el nitro estilbeno x. Este nitroarilo x a continuación se reduce con un agente reductor apropiado, tal como el hierro o sulfato de hierro, en presencia de 45 hidróxido de amonio en un disolvente adecuado, tal como ácido acético, para producir la amina xi. La diazotación de esta amina xi con nitrito sódico en presencia de hidróxido acuoso, tal como hidróxido sódico, seguida de

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salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre sílice (50 % de acetato de etilo en hexanos) para dar 2-[9-cloro-6-(2-hidroxi-2-metilpropil)-1Hfenantro[9,10-d]imidazol-2-il]isoftalonitrilo (500 mg) en forma de sólido amarillo. RMN 1H δ (ppm) (400 MHz, acetonad6): 13,13 (1 H, s ancho), 8,87 (1 H, s), 8,77 (1 H, s), 8,58 (1 H, m), 8,43 (1 H, m), 8,35 (2 H, d, J = 7,9 Hz), 7,99 (1 H,

5 t, J = 7,9 Hz), 7,73 (2 H, dd, J = 1,9, 8,6 Hz), 3,51 (1 H, s ancho), 3,08 (2 H, s), 1,26 (6 H, s).

Ejemplo 160

2-[9-(ciclopropilmetoxi)-6-(3-hidroxi-3-metilbut-1-in-1-il)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol-2-il]isoftalonitrilo 10

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Etapa 1: 1bromo4[2(4metoxifenil)vinil]benceno

15 Este estilbeno se preparó como se describe en la Etapa 1 del Ejemplo 36, sustituyendo p-anisaldehído por 4clorobenzaldehído.

Etapa 2: 3bromo6metoxifenantreno

20 Este fenantreno se preparó como se describe en la Etapa 2 del Ejemplo 36, sustituyendo el 1-bromo-4-[2-(4metoxifenil)vinil]benceno de la Etapa 1 anterior por 1-bromo-4-[2-(4-clorofenil)vinil]benceno y realizando la irradiación durante 4 días.

Etapa 3: 3bromo6metoxifenantreno9,10diona

25 Esta quinona se preparó como se describe en la Etapa 3, Ejemplo 36, sustituyendo el 3-bromo-6-metoxifenantreno de la Etapa 2 anterior por 3-bromo-6-clorofenantreno.

Etapa 4: 3bromo6hidroxifenantreno9,10diona

30 Una mezcla de 3-bromo-6-metoxifenantreno-9,10-diona de la Etapa 3 anterior y BBr3 en exceso en CH2Cl2 se agitó a temperatura ambiente para dar 3-bromo-6-hidroxifenantreno-9,10-diona que se usó directamente en la siguiente etapa (Etapa 5 a continuación).

35 Etapa 5: 3bromo6(ciclopropilmetoxi)fenantreno9,10diona

Una solución de 3-bromo-6-hidroxifenantreno-9,10-diona de la Etapa 4 en acetona se trató con exceso de carbonato de potasio, yoduro de potasio y (bromometil)ciclopropano. La mezcla se calentó a reflujo durante toda la noche, seguido de tratamiento convencional para dar 3-bromo-6-(ciclopropilmetoxi)fenantreno-9,10-diona.

40

Etapa 6: 6bromo9(ciclopropilmetoxi)2(2,6dibromofenil)1Hfenantro[9,10d]imidazol

Este imidazol se preparó como se describe en la Etapa 4 del Ejemplo 36, sustituyendo el 3-bromo-6(ciclopropilmetoxi)fenantreno-9,10-diona de la Etapa 5 anterior por 3-bromo-6-clorofenantreno-9,10-diona 45

Etapa 7: 2[6bromo9(ciclopropilmetoxi)1Hfenantro[9,10d]imidazol2il]isoftalonitrilo

Este imidazol se preparó como se describe en la Etapa 5 del Ejemplo 36, sustituyendo el 6-bromo-9(ciclopropilmetoxi)-2-(2,6-dibromofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol de la Etapa 6 anterior por 9-bromo-6-cloro-250 (2,6-dibromofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol. Las impurezas presentes en el producto se separaron por dihidroxilación de Sharpless.

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Etapa 6: 3(2{[tercbutil(dimetil)silil]oxi}2metilpropil)6(ciclopropilmetoxi)fenantreno9,10diona

A una solución de terc-butil(2-[6-(ciclopropilmetoxi)-3-fenantril]-1,1-dimetiletoxi)dimetilsilano (0,5 g, 1,15 mmol) de la Etapa 5 anterior, en ácido acético (10 ml), se le añadió CrO3 (0,346 g, 3,46 mmol). La mezcla se agitó a 50 ºC

5 durante 30 min, se enfrió a temperatura ambiente, se vertió en agua y se agitó durante 15 minutos. La suspensión se filtró, se lavó con agua y se bombeó a presión reducida para dar 3-(2-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-2-metilpropil)-6(ciclopropilmetoxi)fenantreno-9,10-diona.

Etapa 7: 6(2{[tercbutil(dimetil)silil]oxi}2metilpropil)9(ciclopropilmetoxi)2(2,6dibromofenil)1Hfenantro[9,1010 d]imidazol

A una solución de 3-(2-{[terc-butil(dimetil)silil)oxi}-2-metilpropil)-6-(ciclopropilmetoxi)fenantreno-9,10-diona (1,15 mmol) de la Etapa 6 anterior en ácido acético (10 ml), se le añadió acetato de amonio (1,78 g, 23 mmol) y dibromobenzaldehído (0,42 g, 1,5 mmol). La mezcla se agitó a 70 ºC durante 1 h, se enfrió a temperatura ambiente,

15 se vertió en agua y se agitó durante 5 minutos. El sólido resultante se lavó con agua y éter dietílico. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre sílice (acetato de etilo al 30 % en hexanos) para dar 6-(2-{[tercbutil(dimetil)silil]oxi}-2-metilpropil)-9-(ciclopropilmetoxi)-2-(2,6-dibromofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol (0,223 g) en forma de sólido amarillo.

20 Etapa 8: 1[9(ciclopropilmetoxi)2(2,6dibromofenil)1Hfenantro[9,10d]imidazol6il]2metilpropan2ol

Se añadió TBAF (1 M en THF, 10 ml) a un matraz que contiene 6-(2-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-2-metilpropil)-9(ciclopropilmetoxi)-2-(2,6-dibromofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol (0,223 g, 0,31 mmol) de la Etapa 7 anterior a temperatura ambiente. La solución resultante se calentó a reflujo durante 36 h, momento en el que se añadió agua a

25 la mezcla de reacción. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo, la capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró. El producto en bruto se usó directamente en la reacción siguiente (Etapa 9 a continuación)

Etapa 9: 2[9(ciclopropilmetoxi)6(2hidroxi2metilpropil)1Hfenantro[9,10d]imidazol2il]isoftalonitrilo

30 Este imidazol se preparó como se describe en la Etapa 5 del Ejemplo 36, sustituyendo el 1-[9-(ciclopropilmetoxi)-2(2,6-dibromofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol-6-il]-2-metilpropan-2-ol en bruto de la Etapa 8 anterior por 9-bromo-6cloro-2-(2,6-dibromofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol. RMN 1H δ (ppm) (400 MHz, acetona-d6): 12,96 (1 H, s ancho), 8,70 (1 H, m), 8,59 (1 H, m), 8,32 (3 H, d, J = 8,0 Hz), 8,28 (1 H, m), 7,95 (1 H, t, J = 7,9 Hz), 7,67 (1 H, d, J = 8,1 Hz), 7,38 (1 H, d, J = 8,7 Hz), 4,09 (2 H, d, J = 6,9 Hz), 3,46 (1 H, s ancho), 3,05 (2 H, s), 1,38-1,34 (1 H, m), 1,25 (6

35 H, s), 0,67-0,63 (2 H, m), 0,45-0,41 (2 H, m).

Ruta B:

Etapa 1: 3bromo6(ciclopropilmetoxi)fenantreno9,10diona

40 Esta quinona se preparó como se describe en la Etapa 5, Ejemplo 160, o siguiendo el procedimiento descrito en la Etapa 3, Ejemplo 36, sustituyendo el 3-bromo-6-(ciclopropilmetoxi)fenantreno de la Etapa 2 de la Ruta A anterior por 3-bromo-6-clorofenantreno.

45 Etapa 2: 6bromo9(ciclopropilmetoxi)2(2,6dibromofenil)1Hfenantro[9,10d]imidazol

Este imidazol se preparó como se describe en la Etapa 6 del Ejemplo 160.

Etapa 3: 2[6bromo9(ciclopropilmetoxi)1Hfenantro[9,10d]imidazol2il]isoftalonitrilo

50 Este imidazol se preparó como se describe en la Etapa 7 del Ejemplo 160.

Etapa 4: 2(6bromo9(ciclopropilmetoxi)1{[2(trimetilsilil)etoxi]metil}1Hfenantro[9,10d]imidazol2il)isoftalonitrilo

55 Este imidazol protegido por SEM se preparó como se describe en la Etapa 2, Ejemplo 87, sustituyendo el 2-[6bromo-9-(ciclopropilmetoxi)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol-2-il]isoftalonitrilo de la Etapa 3 anterior por 6,9-dibromo-2(2,6-dibromofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol.

Etapa 5: 2(9(ciclopropilmetoxi)6(2oxopropil)1{[2(trimetilsilil)etoxi]metil}1Hfenantro[9,10d]imidazol260 il)isoftalonitrilo

Este imidazol se preparó como se describe en la Etapa 2, Ejemplo 135, sustituyendo el 2-(6-bromo-9(ciclopropilmetoxi)-1-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-1H-fenantro[9,10-d]imidazol-2-il)isoftalonitrilo de la Etapa 4 anterior por 2-(6-bromo-9-cloro-1-([2-(trimetilsilil)etoxi]metil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol-2-il)isoftalonitrilo.

65

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butil(dimetil)silil]oxi}-2-metilpropil)-6-(ciclopropilmetoxi)fenantreno-9,10-diona.

Etapa 6: 1[2(2,6dibromofenil)9(4,4,4trifluorobutoxi)1Hfenantro[9,10d]imidazol6il]2metilpropan2ol

5 Este imidazol se preparó como se describe en la Etapa 8 de la Ruta A del Ejemplo 168, sustituyendo el 6-(2-([tercbutil(dimetil)silil]oxi)-2-metilpropil)-2-(2,6-dibromofenil)-9-(4,4,4-trifluorobutoxi)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol de la Etapa 5 anterior por 6-(2-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-2-metilpropil)-9-(ciclopropilmetoxi)-2-(2,6-dibromofenil)-1Hfenantro[9,10-d]imidazol.

10 Etapa 7: 2[6(2hidroxi2metilpropil)9(4,4,4trifluorobutoxi)1Hfenantro[9,10d]imidazol2il]isoftalonitrilo

Este imidazol se preparó como se describe en la Etapa 5 del Ejemplo 36, sustituyendo el 1-[2-(2,6-dibromofenil)-9(4,4,4-trifluorobutoxi)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol-6-il]-2-metilpropan-2-ol de la Etapa 6 anterior por 9-bromo-6-cloro2-(2,6-dibromofenil)-1H-fenantro[9,10-d]imidazol. RMN 1H δ (ppm) (400 MHz, acetona-d6): 12,95 (1 H, s ancho), 8,72

15 (2H,m),8,33(4H,m),7,96(1H,t,J=7,9Hz),7,68(1H,d,J=8,1Hz),7,42(1H,d,J=9,5Hz),4,36(2H,t,J= 6,0 Hz), 3,45 (1 H, s ancho), 3,05 (2H, s), 2,57-2,51 (2 H, m), 2,20-2,12 (2 H, m), 1,25 (6 H, s).

Ensayos para determinar la actividad biológica

20 Inhibición de la actividad prostaglandina E sintasa

Los compuestos se sometieron a ensayo como inhibidores de la actividad prostaglandina E sintasa en ensayos en vivo y en células enteras con sintasas de la prostaglandina E microsomal. Estos ensayos miden la síntesis de prostaglandina E2 (PGE2) usando inmunoensayo enzimático (EIA) o espectrometría de masas. Las células usadas 25 para la preparación microsomal son células CHO-K1 transfectadas transitoriamente con plásmidos que codifican los ADNc de la mPGES-1 humana. Las células usadas para los experimentos basados en células son A549 humanas (que expresan mPGES-1 humana). Se usan cobayas para probar la actividad de compuestos seleccionados en vivo. En todos estos ensayos, el 100 % de actividad se define como la producción de PGE2 en muestras tratadas con vehículo. La CI50 y la DE50 representan la concentración o la dosis de inhibidor requerida para inhibir la síntesis de

30 PGE2 en un 50 % en comparación con el control no inhibido.

Ensayo de la prostaglandina E sintasa microsomal

Se preparan fracciones microsomales de la prostaglandina E sintasa a partir de células CHO-K1 transfectadas

35 transitoriamente con el plásmido que codifica el ADNc de mPGES-1 humana. A continuación se prepararon los microsomas y el ensayo PGES comienza con la incubación de 5 µg/ml de PGES-1 microsomal con compuesto o DMSO (1 % final) durante 20-30 minutos a temperatura ambiente. Las reacciones enzimáticas se llevan a cabo en KPi 200 mM a pH 7,0, EDTA 2 mM y la forma reducida de la GSH 2,5 mM. Se inicia entonces la reacción enzimática con la adición de 1 µM de sustrato final de PGH2 preparada en isopropanol (3,5 % final en el pocillo de ensayo) y se

40 incuba a temperatura ambiente durante 30 segundos. La reacción se detiene con la adición de SnCl2 en HCl 1 N (1 mg/ml final). La medición de la producción de PGE2 en las alícuotas de reacción enzimática se lleva a cabo mediante EIA usando un kit convencional disponible en el mercado (Cat #: 901-001 de Assay Designs).

Los datos de este ensayo para los compuestos representativos se muestran en la tabla siguiente. La potencia se 45 expresa como CI50 y el valor indicado es un promedio de al menos n = 3.

Ej.: h-CHO (nM)

135: 2

152: 3,6

163: 3,2

168: 3,6

172: 1,4

174: 7,1

175: 4,7

176: 3

177: 2,7

180: 1,4

182: 0,9

imagen55

tiempo, tal como 12 horas, con un vehículo adecuado, tal como Methocel al 0,5 % con el 0,02 al 0,2 % de dodecilsulfato sódico, antes de la dosificación.

Métodos

5 Se usaron cobayas Hartley macho con un peso de 200-250 gramos. El LPS (30 mg/kg) se inyecta sub-plantarmente en la pata trasera izquierda de la cobaya para producir hiperalgesia en la pata inyectada. Se toman la temperatura rectal y la latencia de retirada de la pata, una medida de la hipersensibilidad al dolor (hiperalgesia), antes de la inyección de LPS y se usan como referencia. La latencia de retirada de la pata se determina usando el instrumento

10 de hiperalgesia térmica (Ugo Basile Corp.). Durante esta determinación, los animales se colocan en una caja de soporte de plexiglás de 8"x8" encima de una base de vidrio. Se dirige una luz infrarroja leve (223 mW/cm2) hacia la parte inferior de la pata trasera. Se registra el tiempo que necesario para que el animal retire su pata (indicación de que siente el dolor causado por el calor). La luz infrarroja se apaga inmediatamente cuando el animal retira su pata de la zona. La luz también se apagará automáticamente cuando el tiempo llegue a 20 segundos.

15

Paradigma antes de la dosis:

Los compuestos de ensayo se dosifican por ruta oral a 5 ml/kg usando una aguja de alimentación de calibre 18. Se inyecta LPS (serotipo 0111:B4, 10 µg) o solución salina al 0,9 % en la región plantar de la pata trasera izquierda con

20 un volumen de 100 µl usando una aguja del calibre 26 1 hora después de la administración del compuesto. Se toman la temperatura rectal y la latencia de retirada por calor de la pata 4,5 horas después de la administración del LPS. Los animales son sacrificados después de las mediciones utilizando CO2 y se recogen muestras de la médula espinal lumbar, de la pata trasera y de sangre.

25 Paradigma de reversión:

La retirada por calor de la pata de cada animal se determina antes de y 3 horas después de la inyección sub-plantar de LPS. Los animales que han recibido LPS y no muestran una disminución de la latencia de retirada a las 3 horas se eliminan del estudio y son sacrificados. Los compuestos de ensayo se dosifican po a 5 ml/kg inmediatamente

30 después de la medición de la retirada por calor de la pata. Se toma la latencia de retirada por calor 1,5 y 3 horas después de la administración del compuesto (4,5 y 6 horas después de la administración de LPS). Después de la lectura final, los animales se sacrificaron usando CO2 y se recogieron muestras de la médula espinal lumbar y muestras de sangre para la determinación de las prostaglandinas por espectrometría de masas y del nivel de fármaco, respectivamente.

35 Un método alternativo para la fabricación de Ejemplo 40 es el siguiente:

Ejemplo alternativo 40

imagen56

imagen57

imagen58

imagen59

imagen60

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto que se selecciona entre las siguientes tablas:

imagen1

Ej.

R3/R6 R6/R3 J K L M Y1

124

imagen2 Cl CH CH CH CCN H

125

imagen3 Cl CH CH CH CCN H

130

imagen4 Cl CH CH CH CCN H

131

imagen5 Cl CH CF CH CCN H

134

imagen6 imagen6 CH CH CH CCN H

135

imagen6 Cl CH CH CH CCN H

136

Br Cl CH COH CH CCN H

137

imagen5 Cl CH COH CH CCN H

142

imagen5 Cl CH CCl CH CCN H

145

Br imagen6 CH CH CH CCN H

146

imagen6 imagen6 CH CH CH CCN H

147

imagen5 imagen6 CH CH CH CCN H

148

imagen6 imagen6 CH CH CH CCN H

150

imagen7 Cl CH CF CH CCN H

151

imagen8 Cl CH CF CH CCN H

152

imagen6 Cl CH CF CH CCN H

155

imagen9 Cl CH CH CH CCN H

156

Br imagen6 CH CH CH CCN H

157

imagen10 imagen6 CH CH CH CCN H

159

imagen11 imagen12 CH CH CH CCN H

161

imagen11 imagen6 CH CH CH CCN H

163

imagen6 imagen6 CH CH CH CCN H

165

imagen13 Cl CH CH CH CCN H

166

imagen14 Cl CH CH CH CCN H

167

imagen6 Cl CH CH CH CCN H

171

imagen15 Cl CH CH CH CCN H

173

Br imagen6 CH CH CH CCN H

178

OH Cl CH CH CH CCN H

180

imagen6 imagen16 CH CH CH CCN H

181

Cl imagen17 CH CH CH CCN H

184

Cl imagen18 CH CH CH CCN H

187

Br Cl CH imagen6 CH CCN H

190

imagen19 Cl CH N CH CCN H

126

imagen20 Cl CH CH CH CCN H

127

imagen6 Cl CH CH CH CCN H

128

imagen21 Cl CH CH CH CCN H

129

imagen22 Cl CH CH CH CCN H

132

imagen6 imagen6 CH CH CH CCN H

133

imagen6 imagen6 CH CH CH CCN H

138

imagen23 imagen24 CH CH CH CCN H

139

imagen25 imagen26 CH CH CH CCN H

140

imagen27 imagen28 CH CH CH CCN H

141

imagen27 Br CH CH CH CCN H

143

imagen6 imagen6 CH CH CH CCN H

144

imagen29 Cl CH CH CH CCN H

149

imagen6 imagen6 CH CH CH CCN H

153

imagen6 imagen6 CH CH CH CCN H

154

imagen30 Cl CH CH CH CCN H

160

imagen10 imagen6 CH CH CH CCN H

162

imagen31 Cl CH CH CH CCN H

164

imagen32 Cl CH CH CH CCN H

168

imagen6 imagen6 CH CH CH CCN H

169

imagen6 imagen6 CH CF CH CCN H

170

imagen33 Cl CH CH CH CCN H

172

imagen6 imagen34 CH CF CH CCN H

174

imagen6 imagen6 CH CH CH CCN H

175

imagen6 imagen6 CH CF CH CCN H

176

imagen6 imagen35 CH CH CH CCN H

177

imagen6 imagen35 CH CF CH CCN H

179

Cl imagen6 CH CH CH CCN H

182

imagen6 imagen36 CH CH CH CCN H

183

imagen37 Cl CH CH CH CCN H

185

Cl imagen38 CH CH CH CCN H

186

imagen39 Cl CH CH CH CCN H

imagen40