ES2572648T3 - Dispositivo de análisis con zonas compartidas - Google Patents

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Abstract

Un dispositivo de análisis con un dispositivo de lectura de resultado de análisis para leer el resultado de análisis realizados en el dispositivo de análisis, siendo el dispositivo de análisis (20) para determinar la presencia y/o cantidad de uno o más analitos en una muestra de líquido, comprendiendo dicho dispositivo de análisis: a) una primera y segunda tiras de ensayo de análisis (22, 23) cada una de las cuales comprende una trayectoria de flujo respectiva que tiene una zona de detección (24, 26) para inmovilizar un reactivo de unión marcado, en que la detección de un reactivo de unión marcado en una o ambas zonas de detección es indicativa de la presencia y/o cantidad de uno o más analitos, en que la primera y segunda tiras de ensayo de análisis están en sustratos separados o están previstas en un sustrato común pero aisladas de tal manera que el líquido no puede atravesar desde la trayectoria de flujo de una tira de ensayo de análisis a la trayectoria de flujo de la otra, y en que la primera y segunda tiras de ensayo de análisis tienen una región (21) de aplicación de muestra porosa común; b) una sola zona de referencia compartida (27) presente en una de dichas primera y segunda tiras de ensayo de análisis; comprendiendo el dispositivo de lectura de resultado de análisis: c) una o más fuentes de luz (41, 45) para iluminar las zonas de detección y la zona de referencia compartida; d) uno o más fotodetectores (4) para detectar luz procedente de las zonas de detección y de la zona de referencia compartida, cuyo fotodetector o fotodetectores generan una señal, la magnitud de cuya señal está relacionada con la cantidad de luz detectada; y e) medios de tratamiento de señal para tratar señales procedentes del fotodetector o fotodetectores; en que el valor de la señal obtenida procedente de la zona de referencia compartida en una de dichas tiras de ensayo de análisis es utilizado para compensar el valor de la señal obtenida en la zona de detección de la otra de dichas tiras de ensayo de análisis.

Description

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DESCRIPCION
Dispositivo de analisis con zonas compartidas CAMPO DEL INVENTO
El presente invento se refiere a un dispositivo y metodo de analisis para determinar la presencia o cantidad de un analito. En particular se refiere a la determinacion de un analito a lo largo de un rango de concentracion extendido.
ANTECEDENTES DEL INVENTO
Se han desarrollado y comercializad o dispositivos simples de analisis inmunologico de flujo lateral para la deteccion de analitos en muestras de fluido, vease por ejemplo el documento EP291194. Tales dispositivos comprenden tipicamente un portador poroso que comprende un reactivo de union marcado que se puede mover secado capaz de unirse al analito en cuestion, y un reactivo de union inmovilizado tambien capaz de unirse al analito previsto en una zona de deteccion aguas abajo del reactivo de union marcado. La deteccion del reactivo de union marcado inmovilizado en la zona de deteccion proporciona una indicacion de la presencia de analito en la muestra.
Alternativamente, cuando el analito de interes es un hapteno, el dispositivo de analisis inmunologico puede emplear una reaccion de competencia en la que un analito marcado o un analito analogo compite con un analito presente en la muestra para un reactivo de union inmovilizado en una zona de deteccion. Alternativamente el dispositivo de analisis puede emplear una reaccion de inhibicion por lo que un analito inmovilizado o un analito analogo es proporcionado en una zona de deteccion, comprendiendo el dispositivo de analisis un reactivo de union marcado que se puede mover para el analito.
Un dispositivo de analisis puede determinar mas de un analito. Por ejemplo en el caso de analisis para determinar la presencia de drogas de abuso, el dispositivo puede ser capaz de determinar todo un panel de drogas. Tales dispositivos de analisis inmunologico de flujo lateral estan provistos con multiples zonas de deteccion, estando previstas tales zonas en uno o en multiples portadores de flujo lateral.
La determinacion del resultado del analisis se ha llevado a cabo tradicionalmente a simple vista. Sin embargo tales dispositivos requieren que el resultado sea interpretado por el usuario lo que introduce un grado indeseable de subjetividad.
Como tal, se han desarrollado dispositivos digitales que comprenden un medio de deteccion optico dispuesto para determinar el resultado del analisis asf como un medio de visualizacion para visualizar el resultado del analisis. Se conocen lectores de analisis digitales para utilizar en combinacion con tiras de ensayo de analisis para determinar la concentracion y/o cantidad de analito en una muestra de fluido como lo son los dispositivos de analisis que comprenden un lector de analisis digital integral.
Luz procedente de una fuente de luz, tal como un diodo emisor de luz (LED), es hecha brillar sobre una parte del portador poroso y la luz o bien reflejada o bien transmitida es detectada por un fotodetector. Tfpicamente, el lector tendra mas de un LED para iluminar diferentes zonas del portador, y se ha previsto un fotodetector correspondiente para cada uno de la pluralidad de los LED. El documento EP1484601 describe una disposicion optica para un dispositivo de lectura digital de tira de ensayo de flujo lateral que comprende una disposicion de deflector que permite la posibilidad de reducir el numero de fotodetectores en el dispositivo.
Los documentos US 2007/0081920, US 2005/0208593 y DE 10 2006 003 380 describen un dispositivo de analisis que tiene una o mas tiras de ensayo de analisis.
Tales dispositivos son a menudo disenados para ser de un solo uso y por lo tanto es deseable mantener los costes de tales dispositivos tan bajos como sea posible, especialmente donde estan involucrados componentes opticos y electronicos caros.
RESUMEN DEL INVENTO
Es un objeto de acuerdo con un aspecto del invento proporcionar un dispositivo de analisis de acuerdo con la reivindicacion 1 que tiene una o mas zonas compartidas que permiten una reduccion en el numero de componentes opticos que son requeridos para un dispositivo de analisis que comprende dos o mas trayectorias de flujo de analisis.
De acuerdo con un primer aspecto, el dispositivo proporciona un dispositivo de analisis para determinar la presencia y/o cantidad de uno o mas analitos en una muestra de lfquido que comprende:
a) un primer y segundo analisis que comprenden cada uno una trayectoria de flujo que tiene una zona de deteccion para inmovilizar un reactivo de union marcado, en que la deteccion de un reactivo de union marcado en una o ambas zonas de deteccion es indicativa de la presencia y/o cantidad de uno o mas analitos;
b) una zona de referencia compartida;
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c) una o mas fuentes de luz para iluminar las zonas de deteccion y la zona de referencia;
d) uno o mas fotodetectores para detectar luz procedente de las zonas de deteccion y de la zona de referencia, cuyo fotodetector o fotodetectores generan una senal, la magnitud de cuya senal esta relacionada con la cantidad de luz detectada; y
e) medios de tratamiento de senal para tratar senales procedentes del fotodetector o fotodetectores.
Es otro objeto del dispositivo proporcionar un lector de analisis para utilizar con una o mas tiras de ensayo de analisis que comprenden dos o mas trayectorias de flujo de analisis, teniendo el lector de analisis una reduccion en el numero de componentes opticos que son tfpicamente requeridos.
De acuerdo con un segundo aspecto, el dispositivo proporciona un lector de analisis para leer el resultado del primer y segundo analisis que comprenden cada uno una trayectoria de flujo, comprendiendo cada trayectoria de flujo una zona de deteccion para inmovilizar el reactivo de union marcado, en la que la deteccion del reactivo de union marcado en una o ambas zonas de deteccion es indicativa de la presencia y/o cantidad de uno o mas analitos, y una zona de referencia compartida; comprendiendo dicho lector de analisis:
a) una o mas fuentes de luz para iluminar las zonas de deteccion, y la zona de referencia compartida;
b) uno o mas fotodetectores para detectar luz procedente de las zonas de deteccion y de la zona de referencia, cuyo fotodetector o fotodetectores generan una senal, la magnitud de cuya senal esta relacionada con la cantidad de luz detectada; y
medios de tratamiento de senal para tratar senales procedentes del fotodetector o fotodetectores, en que la senal obtenida procedente de la zona de referencia compartida es utilizada para compensar los valores de las senales obtenidas procedentes de las zonas de deteccion.
Preferiblemente los analisis en los que el lector es operativo para leer son realizados sobre una o mas tiras de ensayo de analisis que comprenden primera y segunda trayectorias de flujo que comprenden cada una una respectiva de dichas zonas de deteccion.
El primer y/o segundo analisis pueden comprender un reactivo de union marcado proporcionado en una forma que se puede mover aguas arriba de la zona de deteccion en un estado seco antes de la utilizacion del dispositivo.
La zona de referencia compartida puede estar comprendida como parte o bien del primer o bien del segundo analisis. Alternativamente la zona de referencia puede estar prevista en una trayectoria de flujo subsidiaria al primer y segundo analisis. La zona de referencia puede ser elegida a partir de una parte de la trayectoria de flujo que no corresponde a una zona de deteccion, o cuando un reactivo marcado secado esta presente aguas arriba de la zona de deteccion, de una parte que no corresponde a donde esta presente el reactivo marcado secado. La zona de referencia puede estar prevista aguas abajo o aguas arriba de la zona de deteccion. La medicion de la zona de referencia permite la medicion de los niveles de fondo de luz reflejada o transmitida desde la trayectoria de flujo. El nivel de fondo puede estar afectado, por ejemplo, por la reflectancia optica del portador poroso, la presencia de muestra de lfquido, o de componentes del analisis tales como un reactivo de union marcado. Los niveles de luz medida en la zona de deteccion pueden por lo tanto ser corregidos con respecto a los niveles de luz de fondo para proporcionar una senal compensada mas exactamente indicativa de la cantidad de reactivo de union marcado presente en la zona de deteccion. La medicion en la zona de referencia tambien compensa cualquier variacion entre muestras de fluido aplicadas a dispositivos de analisis, por ejemplo muestras de orina pueden variar ampliamente de color. El valor de la senal obtenida en la zona de referencia para un analisis es utilizado para compensar el valor de la senal obtenida en la zona de deteccion para el otro analisis. Como tal la zona de referencia es “compartida” entre ambos analisis. La prevision de una zona de referencia compartida puede reducir el numero de componentes requeridos para el dispositivo de analisis, ya que cada zona de referencia requerina tfpicamente una fuente de luz.
El concepto de una zona de referencia compartida es bastante contrario a la intuicion. El proposito de una medicion de referencia es permitir variaciones en las lecturas de fondo de senales que pueden surgir, entre otras cosas, como un resultado de variaciones en la composicion de un reactivo o de una tira de ensayo. Por consiguiente, la practica normal es utilizar una zona de referencia separada en cada analisis, de manera que pueda hacerse una medicion de referencia “dedicada” para cada analisis. Los presentes inventores han encontrado, sin embargo, que se puede prescindir de zonas de referencia separadas y en su lugar sera suficiente una sola zona de referencia compartida.
La fuente de luz es convenientemente un LED. Puede emplearse una pluralidad de LED. En una realizacion cada zona en el analisis (zona de deteccion, de referencia o de control) es iluminada por un LED respectivo. Uno o mas fotodetectores pueden comprender convenientemente un fotodiodo. En una realizacion preferida se emplea un solo fotodiodo u otro fotodetector. En una realizacion hay cuatro LED y un solo fotodiodo.
El dispositivo de analisis puede comprender ademas una zona de control que puede ser una sola zona de control prevista como parte del primer o del segundo analisis. Alternativamente la zona de control puede ser prevista en una
trayectoria de flujo subsidiaria al primer y segundo analisis. La prevision de una sola zona de control reduce aun mas el numero de fuentes de luz que se necesitan. El proposito de la zona de control es indicar que el analisis se ha llevado a cabo correctamente, en particular que la muestra de fluido ha sido aplicada al dispositivo y que el reactivo de union marcado se ha movido a lo largo de la trayectoria de flujo en una cierta magnitud. La zona de control puede estar prevista 5 aguas abajo de la zona de deteccion. Una zona de control adecuada esta descrita en el documento EP291194 y puede comprender un reactivo de union inmovilizado para un reactivo de union marcado. Una poblacion separada de reactivo de union marcado puede estar prevista aguas arriba de las zonas de deteccion y control en las que dicha poblacion separada de reactivo de union marcado es capaz de ser inmovilizada en la zona de control pero no resulta inmovilizada en la zona de deteccion en presencia o ausencia de analito. La zona de control es tipicamente prevista aguas abajo de la 10 zona de deteccion. La senal obtenida en la zona de control tambien puede estar referenciada con respecto a la senal obtenida en la zona de referencia.
Esta medicion de la senal en la zona de control proporciona un valor o indicacion de que el ensayo se ha llevado a cabo correctamente (o incorrectamente) para ese analisis. Si por ejemplo, la zona de control indica que el ensayo se ha llevado a cabo correctamente para un analisis, se hace una suposicion de que el ensayo se ha llevado a cabo 15 correctamente en el otro analisis. Por lo tanto la zona de control puede ser considerada como estando “compartida” entre los analisis del dispositivo de analisis. Como en el caso de una zona de referencia compartida, la prevision de una zona de control unica o compartida permite utilizar un numero reducido de componentes opticos en el dispositivo. La razon para hacer esta suposicion es que es muy probable que si la muestra de lfquido ha sido aplicada a una trayectoria de flujo de analisis, esa muestra de lfquido ha sido aplicada a la trayectoria de flujo, especialmente asf si las dos trayectorias 20 de flujo de analisis estan conectadas, por ejemplo por un medio de recepcion de muestra comun, por ejemplo un receptor de muestra poroso. Ademas, si el dispositivo de analisis ha sido sometido, por ejemplo, a condiciones, tales como la entrada de humedad que pueden dar como resultado, por ejemplo, una pobre nueva suspension de los reactivos que se pueden mover, o temperatura elevada que puede desnaturalizar los reactivos de union, es probable que ambas trayectorias de flujo resulten afectadas. Como en el caso de una zona de referencia compartida, el concepto de una zona 25 de control compartida tambien es contrario a la intuicion. La senal en la zona de control es calculada con respecto a la senal en la zona de referencia.
Las zonas de control y referencia pueden estar previstas como parte del mismo analisis o previstas como parte de diferentes analisis. En una realizacion ejemplar, las zonas de referencia compartida y control estan previstas cada una en analisis separados, por ejemplo, un analisis comprende una zona de deteccion y una zona de referencia, y el otro analisis 30 comprende una zona de deteccion y una zona de control.
De acuerdo con un tercer aspecto el dispositivo proporciona un dispositivo de analisis para determinar la presencia y/o cantidad de uno o mas analitos en una muestra de lfquido que comprende:
a) un primer y segundo analisis que comprenden cada uno una trayectoria de flujo que tiene una zona de deteccion para inmovilizar un reactivo de union marcado, en la que la deteccion de un reactivo de union marcado en una o ambas zonas
35 de deteccion es indicativa de la presencia y/o cantidad de uno o mas analitos;
b) una zona de control compartida;
c) una o mas fuentes de luz para iluminar las zonas de deteccion y la zona de control;
d) uno o mas fotodetectores para detectar luz procedente de las zonas de deteccion y de la zona de control, cuyo fotodetector o fotodetectores generan una senal, la magnitud de cuya senal esta relacionada con la cantidad de luz
40 detectada; y
e) medios de tratamiento de senal para tratar senales procedentes del fotodetector o fotodetectores.
De acuerdo con un cuarto aspecto, el dispositivo proporciona un lector de analisis para leer el resultado del primer y segundo analisis comprendiendo cada uno:
una trayectoria de flujo, comprendiendo cada trayectoria de flujo una zona de deteccion para inmovilizar el reactivo de 45 union marcado, en que la deteccion del reactivo de union marcado en una o ambas zonas de deteccion es indicativa de la presencia y/o cantidad de uno o mas analitos; y
una zona de control compartida;
comprendiendo dicho lector de analisis:
a) una o mas fuentes de luz para iluminar las zonas de deteccion, y la zona de control compartida;
50 b) un umbral de senal de control almacenado
c) uno o mas fotodetectores para detectar luz procedente de las zonas de deteccion y de la zona de control, cuyo fotodetector o fotodetectores generan una senal de control y senales de deteccion, la magnitud de cuyas
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senales esta relacionada con la cantidad de luz detectada; y
d) medios de tratamiento de senal para tratar senales procedentes del fotodetector o fotodetectores y para comparar la senal obtenida procedente de la zona de control al umbral de control de senal, y para determinar que ambos analisis se han llevado a cabo correctamente si la senal de control es igual o mayor que el umbral de senal de control.
El dispositivo y lector de analisis de acuerdo con el primer, segundo y tercer aspectos del dispositivo puede comprender un umbral de senal de control.
El umbral de senal de control puede estar almacenado en el dispositivo o lector. La senal medida desde la zona de control puede ser comparada al umbral de senal de control para determinar si ha resultado inmovilizado suficiente reactivo de union marcado en dicha zona. Si el valor de la senal de control es igual o sobrepasa el umbral de senal de control, el dispositivo o lector puede determinar que el analisis se ha llevado cabo satisfactoriamente. Si la senal de control es menor que el umbral de senal de control, el dispositivo o lector puede determinar que el analisis no se ha llevado a cabo satisfactoriamente y proporcionara un mensaje de error.
La senal detectada desde la zona de control puede estar referida a una senal obtenida desde una zona de referencia.
Un dispositivo de analisis de acuerdo con el tercer aspecto tambien puede comprender una zona de referencia compartida.
El primer y/o segundo analisis pueden comprender convenientemente un reactivo de union para un analito o un reactivo de union marcado proporcionado en una forma inmovilizada en la zona de deteccion.
Empleando una referencia compartida y/o una zona de control compartida, el dispositivo de analisis proporciona un numero reducido de zonas que necesitan ser interrogadas y por consiguiente el numero de componentes opticos que necesitan ser empleados. La utilizacion de zonas compartidas es mas eficaz cuando las arquitecturas de analisis del primer y segundo analisis son muy similares o, si la zona de referencia y/o control esta prevista en una o mas trayectorias de flujo subsidiarias, cuando la arquitectura de analisis de las una o mas trayectorias de flujo subsidiarias es similar al primer y segundo analisis. Asf, por ejemplo, los analisis comprenderan tfpicamente ambos portadores porosos de material similar (por ejemplo, ambos comprenden portadores de nitrocelulosa). Tambien es ventajoso utilizar la misma muestra de lfquido para cada analisis. Esto puede lograrse convenientemente previendo una region de aplicacion de muestra comun que esta en comunicacion fluida con ambos analisis. Asf una sola muestra de lfquido aplicada al dispositivo a traves de la region de aplicacion de muestra comun puede fluir a traves tanto del primer como del segundo analisis. En casos en los que el primer y segundo analisis no son identicos, puede ser aceptable prever una zona de referencia compartida siempre que los niveles de fondo de luz que senan detectados en cada analisis sean suficientemente similares entre sf.
Los medios de tratamiento de senal pueden comprender una unidad de procesador central que es capaz de tratar las senales obtenidas procedentes de los fotodetectores de las zonas respectivas y de calcular valores obtenidos en la zona de ensayo con respecto a la zona de referencia. Los datos de medicion pueden ser tomados en diferentes momentos durante el analisis y pueden ser tomados despues de que se haya activado el dispositivo pero antes de que la muestra de fluido haya sido aplicada al dispositivo, con el fin de obtener valores opticos de transmision o reflectancia de luz en el estado seco.
Un “sumidero” absorbente puede estar previsto en el extremo distal de las trayectorias de flujo de analisis. Un sumidero comun puede estar previsto o puede estar previsto un sumidero en el extremo distal de cada analisis. El sumidero absorbente puede comprender preferiblemente un material muy absorbente tal como, por ejemplo, papel Whatman CF7, y debena proporcionar suficiente capacidad de absorcion para eliminar cualquier conjugado no unido de la proximidad de las zonas de deteccion, la zona de referencia y la zona de control. Como una alternativa a tal sumidero puede ser suficiente tener una longitud de material poroso en fase solida que se extiende mas alla de la zona de deteccion. Una ventaja de proporcionar un sumidero muy absorbente es que elimina o elimina sustancialmente el reactivo de union marcado sobrante de las trayectorias de flujo de los analisis respectivos. Esto tiene el efecto de minimizar la cantidad de reactivo de union marcado no unido en la proximidad de zonas respectivas y por lo tanto permite trayectorias de flujo de analisis que han de ser empleadas en el dispositivo que pueden tener diferentes cantidades de reactivo de union marcado.
Como una alternativa a prever un reactivo de union inmovilizado en la zona de deteccion, el reactivo de union puede estar previsto en una forma que se puede mover que es capaz de unirse a un complejo reactivo de union de analito marcado. Por ejemplo el reactivo de union puede ser conjugado con una partfcula grande tal como agarosa y la zona de deteccion puede comprender un filtro cuyo tamano de poro tiene dimensiones mas pequenas que la partfcula grande, pero mayores que el tamano del reactivo de union marcado, de tal manera que el filtro es capaz de atrapar cualquier complejo marcado de reactivo de union/analito/reactivo de union presente, siendo capaz cualquier reactivo de union marcado que no esta unido de forma compleja al reactivo de captura de pasar a traves del filtro. Aun alternativamente un reactivo puede estar previsto en una forma inmovilizada en la zona de deteccion que es capaz de unir un complejo
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marcado que se puede mover de reactivo de union/analito/reactivo de union. Por ejemplo el reactivo de union puede estar previsto en una forma que se puede mover y conjugado a una especie de aglutinante tal como biotina, siendo el reactivo inmovilizado en la zona de deteccion un asociado de union complementary tal como estreptavidina.
El dispositivo de analisis puede emplear un analisis inmunologico de tipo sandwich y/o un analisis competitivo/de inhibicion para la determinacion de un analito. Un ejemplo de un analisis inmunologico de tipo sandwich es aquel en el que se forma un complejo marcado de reactivo de union/analito/reactivo de union. El dispositivo comprendera ffpicamente un reactivo de union marcado para el analito en una forma que se puede mover previsto aguas arriba de una zona de deteccion que comprende un reactivo de union inmovilizado para el analito. Alternativamente, en particular cuando el analito de interes es un hapteno, el dispositivo de analisis inmunologico puede emplear una reaccion de competencia en la que un analito marcado o un analogo de analito marcado compite con un analito presente en la muestra para un reactivo de union inmovilizado en una zona de deteccion. El analito marcado o un analogo de analito marcado puede estar previsto en una forma que se puede mover aguas arriba de la zona de deteccion. Aun alternativamente el dispositivo de analisis puede emplear una reaccion de inhibicion en la que un analito inmovilizado o un analogo de analito esta previsto en la zona de deteccion, comprendiendo el dispositivo de analisis un reactivo de union marcado que se puede mover para el analito.
El termino “trayectoria de flujo” se refiere a un sustrato que es capaz de transportar un ffquido desde una primera posicion a una segunda posicion y puede ser por ejemplo un canal capilar, una trayectoria de micro fluidos, o un portador poroso tal como un portador poroso de flujo lateral. El portador poroso puede comprender uno o una pluralidad de materiales de portador poroso que pueden solaparse en una disposicion lineal o apilada o que estan conectados de manera fluida. Los materiales del portador poroso pueden ser los mismos o diferentes. El primer y segundo analisis pueden estar previstos en sustratos separados o pueden estar previstos en un sustrato comun de tal maneta que el ffquido que esta siendo transportado a lo largo de la trayectoria de flujo del primer analisis no es capaz de cruzar la trayectoria de flujo del segundo analisis. Por ejemplo, el primer y segundo analisis pueden estar previstos en el mismo portador poroso de tal manera que la primera y segunda trayectorias de flujo esten aisladas entre sff Esto puede lograrse por ejemplo cortando con laser partes del portador poroso para hacerle no poroso, separando asf el primer y segundo analisis. Alternativamente, un material de bloqueo no poroso puede ser aplicado a lo largo de una tira para proporcionar dos trayectorias de flujo (de manera ffpica esencialmente paralelas) en el mismo portador poroso.
En particular la trayectoria de flujo puede ser un portador poroso de flujo lateral. Materiales adecuados que pueden ser empleados como un portador poroso incluyen nitrocelulosa, fibra de acetato, celulosa o derivados de la celulosa, poliester, poliolefinas o fibra de vidrio. El portador poroso puede comprender nitrocelulosa. Esto tiene la ventaja de que un reactivo de union puede ser inmovilizado firmemente sin un tratamiento qmmico previo. Si el material poroso en fase solida comprende papel, por ejemplo, la inmovilizacion del anticuerpo en la segunda zona necesita ser realizada por acoplamiento qmmico utilizando, por ejemplo, CNBr, carbonildiimidazol, o cloruro de tresilo.
El termino “reactivo de union” se refiere a un miembro de un par de union, es decir, dos moleculas diferentes en que una de las moleculas se une con la segunda molecula a traves de medios qmmicos y/o ffsicos. Las dos moleculas estan relacionadas en el sentido de que su union entre ellas es de tal manera que son capaces de distinguir su asociado de union de otros constituyentes de analisis que tienen caracteffsticas similares. Los miembros del par de union son referidos como ligando y receptor (anti-ligando), un miembro de par de union y un asociado de par de union, y similares. Una molecula tambien puede ser un miembro de par de union para una agregacion de moleculas; por ejemplo un anticuerpo producido contra un complejo inmune de un segundo anticuerpo y su anffgeno correspondiente pueden ser considerados como un miembro de par de union para el complejo inmune.
Ademas de miembros de par de union de anffgeno y de anticuerpo, otros pares de union incluyen, como ejemplos sin limitacion, biotina y avidina, carbohidratos y lectinas, secuencias de nucleotidos complementarias, secuencias de peptidos complementarias, moleculas efectoras y receptoras, co-factores enzimaticos y enzimas, inhibidores enzimaticos y enzimas, una secuencia de peptidos y un anticuerpo espedfico para la secuencia o la protema entera, acidos y bases polimericos, aglutinantes de colorantes y de protema, aglutinantes de peptidos y protemas espedficos (por ejemplo, ribonucleasa, S-peptido y S-protema de ribonucleasa), y similares. Ademas, pares de union especfica pueden incluir miembros que son analogos del miembro de union espedfica original.
“Marcador” cuando es utilizado en el contexto de un reactivo de union marcado, se refiere a cualquier sustancia que es capaz de producir una senal que es detectable por medios visuales o instrumentales. Diversos marcadores incluyen marcadores que producen senales a traves de medios qmmicos o ffsicos, tales que son opticamente detectables. Tales marcadores incluyen enzimas y sustratos, cromogenos, catalizadores, compuestos fluorescentes, compuestos quimio- luminiscentes, especies electro activas, moleculas de colorante, marcadores radioactivos y marcadores de parffculas. El propio analito puede ser inherentemente capaz de producir una senal detectable. El marcador puede estar unido covalentemente al reactivo de union. En particular el marcador puede ser seleccionado a partir de uno que es opticamente detectable.
El marcador puede comprender una parffcula tal como oro, plata, parffculas no metalicas coloidales tales como selenio o teluro, parffculas tenidas o coloreadas tales como una parffcula de poffmero que incorpora un colorante, o un sol de colorante. El colorante puede ser de cualquier color adecuado, por ejemplo azul. El colorante puede ser fluorescente.
Pueden prepararse soles de colorante a partir de materias colorantes hidrofobas comercialmente disponibles, tales como Foron Blue SRP (Sandoz) y Resolin Blue BBLS (Bayer). Marcadores de poKmero adecuados pueden ser elegidos a partir de una gama de poKmeros sinteticos, tales como poliestireno, poliviniltolueno, acido acrflico-poliestireno y poliacroleina. Los monomeros utilizados son normalmente insolubles en agua, y son emulsionados en un surfactante 5 acuoso de modo que se forman micelas de monomero, que son a continuacion inducidas a polimerizar por la adicion de un iniciador a la emulsion. Se producen partmulas de polfmero sustancialmente esfericas. Un rango de tamano ideal para tales partmulas de polfmero es de aproximadamente 0,05 pm a aproximadamente 0,5 pm. De acuerdo con una realizacion ejemplar el marcador es una partmula polimerica azul.
Los reactivos de union secados pueden estar previstos en un material portador poroso previsto aguas arriba de un 10 material portador poroso que comprende la zona de deteccion. El material portador poroso aguas arriba puede ser macro-poroso. El material portador macro-poroso debena ser de union debil a las protemas o de carencia de union, o debena ser facilmente bloqueable por medio de reactivos tales como BSA o PVA, para minimizar la union no espedfica y para facilitar el movimiento libre del reactivo marcado despues de que el cuerpo macro-poroso haya resultado humedecido con la muestra de lfquido. El material de portador macro-poroso puede ser tratado previamente con un 15 agente tensioactivo o un disolvente, si es necesario, para hacerle mas hidrofilo y para promover una rapida absorcion de la muestra de lfquido. Materiales adecuados para un portador macro-poroso incluyen materiales plasticos tales como polietileno y polipropileno, u otros materiales tales como papel o fibra de vidrio. En el caso en que el reactivo de union marcado es marcado con una partmula detectable, el cuerpo macro-poroso puede tener un tamano de poro al menos diez veces mayor que el tamano de partmula maximo del marcador de partmula. Tamanos de poro mayores 20 proporcionan una mejor liberacion del reactivo marcado. Como una alternativa a un portador macro-poroso, el reactivo de union marcado puede estar previsto en un sustrato no poroso previsto aguas arriba de la zona de deteccion, formando parte dicho sustrato no poroso de la trayectoria de flujo.
El portador poroso puede comprender un portador macro-poroso de fibra de vidrio aguas arriba de y solapandose en su extremo distal a un portador poroso de nitrocelulosa.
25 La muestra de lfquido puede derivarse de cualquier fuente, tal como una fuente industrial, medioambiental, agncola, o biologica. La muestra puede derivarse o consistir de una fuente fisiologica que incluye sangre, suero, plasma, fluido intersticial, saliva, esputo, lfquido de lente ocular, sudor, orina, leche, moco, lfquido sinovial, lfquido peritoneal, exudados transdermicos, exudados fanngeos, lavado broncoalveolar, aspiraciones traqueales, lfquido cerebroespinal, semen, moco cervical, secreciones vaginales o uretrales y lfquido amniotico. En particular la fuente puede ser humana y en 30 particular la muestra puede ser orina.
“Luz” como se ha utilizado aqu pretende abarcar cualquier radiacion electromagnetica adecuada, independientemente de la longitud de onda. A pesar de esto, el dispositivo esta principalmente destinado a utilizar luz en la parte visible del espectro, y “fuente de luz” y “fotodetector” debenan ser interpretados por consiguiente como que abarcan respectivamente cualquier fuente de, y medios para detectar, radiacion electromagnetica, pero especialmente con 35 relacion a la radiacion de longitudes de onda visibles (es decir, en el intervalo de aproximadamente 390 a 800 nm).
El fotodetector o fotodetectores detectaran luz procedente de una o mas zonas del dispositivo de analisis. La luz puede originarse actualmente desde esas zonas, por ejemplo, si el marcador es fluorescente o similar. Mas normalmente sin embargo, el fotodetector o fotodetectores detectaran luz que parece emanar de esas zonas, es decir, luz que se origina desde la fuente de luz y es reflejada y/o transmitida por la zona sobre el fotodetector.
40 Los analitos incluyen, pero no estan limitados a, toxinas, compuestos organicos, protemas, peptidos, microorganismos, bacterias, virus, aminoacidos, acidos nucleicos, carbohidratos, hormonas, esteroides, vitaminas, drogas o medicamentos (incluyendo aquellas administradas con fines terapeuticos asf como aquellas administradas con fines ilfcitos), contaminantes, pesticidas, y metabolitos de o anticuerpos para cualquiera de las sustancias anteriores. El termino analito tambien incluye cualesquiera sustancias antigenicas, haptenos, anticuerpos, macro-moleculas, y combinaciones de los 45 mismos.
El dispositivo de analisis puede determinar uno o mas analitos.
El dispositivo de analisis puede ser capaz de determinar la cantidad o presencia de un analito a lo largo de un rango de analito amplio, en que el primer analisis es capaz de determinar el nivel de analito en un rango de concentracion inferior y el segundo analisis es capaz de determinar el nivel de analito en una muestra de lfquido en una rango de concentracion 50 superior.
Hay varias formas en las que un analisis puede ser preparado con el fin de medir analito en un rango de analito superior.
Por ejemplo, el dispositivo de analisis puede comprender un analisis depurador que comprende un reactivo de union marcado para el analito y un reactivo de union depurador para el analito, previsto aguas arriba de la zona de deteccion. El reactivo de union depurador sirve para eliminar el analito sobrante y reducir la sensibilidad del analisis. Esto tiene el 55 efecto de aumentar el rango dinamico del analisis permitiendo la medicion a niveles de analito superiores. El reactivo de union depurador puede estar inmovilizado, puede moverse o ambas cosas. El reactivo de union depurador puede estar
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previsto bien en la misma region del portador poroso como el reactivo de union marcado que se puede mover, aguas arriba de ella o aguas abajo de ella. El reactivo de union depurador puede unirse a la misma region de union del analito como el reactivo de union marcado que se puede mover o a una region diferente del analito que el reactivo de union marcado. El reactivo depurador puede tener una afinidad diferente para el analito que el reactivo de union marcado que se puede mover del segundo analisis. En una realizacion ejemplar, el reactivo de union depurador tiene una afinidad superior para el analito que el reactivo de union que se puede mover del segundo analisis. La cantidad de reactivo de union depurador puede ser variada para cambiar la sensibilidad del analisis a la concentracion de analito. Aumentar la cantidad de reactivo de union depurador presente reduce la sensibilidad del analisis debido al hecho de que el reactivo de union depurador es capaz de unir mas analito, reduciendo efectivamente la proporcion de reactivo de union marcado que es capaz de unir a la zona de deteccion.
Con el fin de aumentar el rango dinamico del analisis, el dispositivo de analisis puede comprender por ejemplo multiples zonas de deteccion, en que cada zona de deteccion es capaz de unir analito en diferentes niveles de concentracion de analito. Por ejemplo las zonas respectivas pueden comprender un reactivo de union para el analito que tiene afinidades diferentes para el analito.
Otras formas de aumentar el rango dinamico del analisis son proporcionar un dispositivo de analisis que comprende un analisis de union en sandwich y un analisis de competencia o inhibicion. Por ejemplo, el analisis en sandwich puede ser el analisis de alta sensibilidad, en particular es capaz de medir un analito en un rango de concentracion inferior y el analisis de inhibicion o competencia puede ser un analisis de baja sensibilidad, en particular es capaz de medir un analito en un rango de concentracion superior. Otra forma es alterar la afinidad o cantidad del reactivo de union marcado o del reactivo inmovilizado en la zona de deteccion. Un reactivo de union de alta afinidad tendra una sensibilidad de analito superior que un reactivo de union de afinidad inferior. De manera similar una baja concentracion de reactivo de union tendra una sensibilidad de analito inferior que una alta concentracion de reactivo de union. La sensibilidad del analisis puede ser cambiada alterando la relacion de reactivo de union al marcador del reactivo de union marcado. Si una partfcula es utilizada como marcador, entonces la cantidad del reactivo de union aplicado al marcador puede ser alterada para alterar la sensibilidad del analisis. Otra manera de manipular la sensibilidad de un analisis es variar la cantidad del marcador utilizada en el analisis. Por ejemplo la sensibilidad de un analisis puede ser disminuida reduciendo la relacion del reactivo de union a especies marcadas para el reactivo de union marcado.
Otro medio para manipular la sensibilidad de un analisis es alterar la densidad optica de un marcador. La sensibilidad del analisis puede ser disminuida mediante el uso de un marcador con una densidad optica baja. Esto puede ser logrado por ejemplo mediante la provision de un marcador de partfcula de polfmero que tiene una concentracion baja de colorante o mediante la utilizacion de un marcador coloreado que es menos sensible a un detector optico.
Aun otra forma para medir los niveles altos de analito es emplear un reactivo de union marcado que no este en forma de partfculas. Los niveles altos de analito cuando son medidos por medio de un analisis de union en sandwich requieren niveles altos de reactivo de union. En el caso en el que el marcador es un marcador en partfculas, la provision de niveles altos de analito dentro o en el portador poroso puede dar lugar a un impedimento esterico que da como resultado una sensibilidad de analisis pobre. A la inversa, en niveles de analito inferiores, la utilizacion de un reactivo de union marcado que no este en forma de partfculas puede dar lugar a una senal baja debido a la baja densidad optica. Sin embargo, en niveles de analito altos, marcadores que no esten en forma de partfculas pueden estar presentes en niveles suficientemente altos para ser detectadas facilmente. Un ejemplo de un marcador que no esta en forma de partfculas opticamente detectable puede ser un colorante. El colorante puede ser fluorescente.
La sensibilidad de analisis puede estar influenciada por el caudal del portador poroso. Una forma de reducir la sensibilidad del analisis es emplear un portador poroso (tal como nitrocelulosa) que tiene un caudal superior.
La sensibilidad de un analisis puede ser ademas manipulada modificando la tasa a la que el reactivo de union marcado es liberado desde su origen. Otra forma de reducir la sensibilidad de analito es proporcionar una liberacion rapida del reactivo de union marcado del portador poroso durante el contacto con la muestra de lfquido. La liberacion del reactivo de union marcado puede ser modificada por la provision de azucares, protemas u otras sustancias polimericas tales como metilcelulosa dentro del dispositivo.
De acuerdo con una realizacion particular, el dispositivo de analisis comprende un analisis depurador que comprende un segundo reactivo de union (depurador) que se puede mover para el analito y un reactivo de union que se puede mover para el analito previsto aguas arriba de la zona de deteccion.
De acuerdo con una realizacion particular el primer analisis es capaz de medir analito en un rango de concentracion de analito inferior y el segundo analisis es capaz de medir analito en un rango de concentracion de analito superior. El primer analisis puede comprender una zona de referencia compartida y el segundo analisis puede comprender una zona de control compartida.
El primer analisis puede comprender un reactivo de union marcado previsto aguas arriba de una zona de deteccion y el segundo analisis puede comprender un reactivo de union marcado y un reactivo de union depurador que se puede mover previsto aguas arriba de una zona de deteccion. El reactivo de union depurador puede estar previsto en la misma
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posicion o en la region del reactivo de union marcado aguas arriba de la zona de deteccion.
En particular el analito que ha de ser determinado puede ser hCG y en este caso la muestra de Kquido puede ser orina.
El dispositivo de analisis puede determinar un solo analito tal como hCG, en que el primer analisis es capaz de determinar el nivel de hCG en una muestra de lfquido en un primer rango de concentracion y el segundo analisis es capaz de determinar el nivel de hCG en una muestra de lfquido en un segundo rango de concentracion.
Con el fin de medir una concentracion de analito a lo largo de un cierto rango es importante asegurar que hay suficiente reactivo de union marcado presente de tal manera que la senal de analisis no resulta saturada. La medicion de grandes cantidades de analito a menudo requiere un aumento correspondiente en la cantidad de reactivo de union marcado para evitar el denominado “efecto gancho” o saturacion de la senal de analisis con concentracion de analito creciente. La variacion de la senal de control se ha mostrado que se produce particularmente en el caso en el que hay una cantidad aumentada de reactivo de union presente.
Cuando el primer y segundo analisis esta previsto que tienen diferentes cantidades de reactivo de union marcado, se ha mostrado que es ventajoso prever la zona de referencia como parte del analisis que tiene un nivel inferior de reactivo de union marcado.
De acuerdo con una realizacion, el dispositivo de analisis es capaz de medir analito en un rango de analito superior. Hay varias formas de proporcionar tal dispositivo.
Por ejemplo, el dispositivo de analisis puede comprender un reactivo de union marcado para el analito y un segundo reactivo de union para el analito, previstos aguas arriba de la zona de deteccion. El segundo reactivo de union sirve para eliminar analito sobrante y reducir la sensibilidad del analisis. Esto tiene el efecto de aumentar el rango dinamico del analisis permitiendo la medicion en niveles de analito superiores. El segundo reactivo de union puede ser inmovilizado, puede moverse o ambos. El segundo reactivo de union puede estar previsto bien en la misma region del portador poroso que el reactivo de union marcado, aguas arriba de el o aguas abajo de el. El segundo reactivo de union puede unirse a la misma region de union del analito que el reactivo de union marcado que se puede mover o a una region diferente del analito que el reactivo de union marcado. El segundo reactivo puede tener una afinidad diferente para el analito que el reactivo de union marcado que se puede mover del segundo analisis. En una realizacion ejemplar, el segundo reactivo de union tiene una afinidad superior para el analito que el reactivo de union que se puede mover del segundo analisis. La cantidad de segundo reactivo de union puede ser variada para cambiar la sensibilidad del analisis a la concentracion de analito. Aumentar la cantidad de segundo reactivo de union presente reduce la sensibilidad del analisis debido al hecho de que el segundo reactivo de union es capaz de unir mas analito, bajando efectivamente la proporcion de reactivo de union marcado que es capaz de unirse a la zona de deteccion.
Con el fin de aumentar el rango dinamico del analisis, el dispositivo de analisis puede comprender por ejemplo multiples zonas de deteccion, en que cada zona de deteccion es capaz de unir analito en diferentes niveles de concentracion de analito. Por ejemplo las zonas respectivas pueden comprender reactivo de union para el analito que tiene unas afinidades diferentes para el analito.
Otras formas de aumentar el rango dinamico del analisis son proporcionar un dispositivo de analisis que comprende un analisis de union en sandwich y un analisis de competencia o inhibicion. Por ejemplo, el analisis en sandwich puede ser el analisis de sensibilidad elevada, en particular es capaz de medir analito en un rango de concentracion inferior y el analisis de inhibicion o competencia puede ser un analisis de sensibilidad baja, en particular es capaz de medir analito en un rango de concentracion superior. Otra forma es alterar la afinidad o cantidad de reactivo de union marcado o del reactivo inmovilizado en la zona de deteccion. Un reactivo de union de alta afinidad tendra una sensibilidad de analito superior que un reactivo de union de afinidad inferior. De manera similar una baja concentracion de reactivo de union tendra una sensibilidad de analito inferior que una alta concentracion de reactivo de union. La sensibilidad de analisis puede ser cambiada alterando la relacion de reactivo de union al marcador del reactivo de union marcado. Si una partfcula es utilizada como marcador, entonces la cantidad de reactivo de union aplicada al marcador puede ser alterada para alterar la sensibilidad del analisis. Otra forma de manipular la sensibilidad de un analisis es variar la cantidad del marcador utilizada en el analisis. Por ejemplo la sensibilidad de un analisis puede ser disminuida reduciendo la relacion de reactivo de union a especies marcadas para el reactivo de union marcado.
Otro medio para manipular la sensibilidad de un analisis es alterar la densidad optica de un marcador. La sensibilidad de analisis puede ser reducida por la utilizacion de un marcador con una baja densidad optica. Esto puede ser logrado por ejemplo por la prevision de un marcador de partfcula de polfmero que tiene una baja concentracion de colorante o por la utilizacion de un marcador coloreado que es menos sensible a un detector optico.
Aun otra forma para medir niveles altos de analito es emplear un reactivo de union marcado que no esta en forma de partfculas. Niveles altos de analito cuando son medidos por medio de un analisis de union en sandwich requieren niveles altos de reactivo de union. En el caso en que el marcador es un marcador en partfculas, la prevision de niveles altos de analito dentro o sobre el portador poroso puede dar lugar a un impedimento esterico que da como resultado una sensibilidad de analisis pobre. A la inversa, en niveles de analito inferiores, la utilizacion de un reactivo de union marcado
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que no esta en forma de partfculas puede dar lugar a una senal baja debido a la densidad optica baja. Sin embargo, en niveles de analito altos, marcadores que no estan en forma de partfculas pueden estar presentes en niveles suficientemente altos para ser detectados facilmente. Un ejemplo de un marcador que no esta en forma de particulas opticamente detectable puede ser un colorante. El colorante puede ser fluorescente.
La sensibilidad de analisis puede estar influenciada por el caudal del portador poroso. Una forma de reducir la sensibilidad del analisis es emplear un portador poroso (tal como nitrocelulosa) que tiene un caudal superior.
La sensibilidad de un analisis se puede manipular ademas modificando la tasa a la que el reactivo de union marcado es liberado desde su origen. Otra forma de reducir la sensibilidad de analito es proporcionar una liberacion rapida del reactivo de union marcado del portador poroso durante el contacto con la muestra de lfquido. La liberacion del reactivo de union marcado puede ser modificada por la provision de azucares, protemas u otras sustancias polimericas tales como metilcelulosa dentro del dispositivo.
De acuerdo con una realizacion particular, el dispositivo de analisis comprende un segundo reactivo de union que se puede mover para el analito y un reactivo de union que se puede mover para el analito previsto aguas arriba de la zona de deteccion. El segundo reactivo de union puede estar previsto en la misma posicion o en una posicion similar aguas arriba de la zona de deteccion que el reactivo de union marcado.
De acuerdo con una realizacion particular, el dispositivo de analisis comprende dos analisis comprendiendo cada uno una trayectoria de flujo, en que el primer dispositivo de analisis es capaz de medir analito en un rango de concentracion de analito inferior y el segundo analisis es capaz de medir analito en un rango de concentracion de analito superior. El primer analisis puede comprender una zona de referencia compartida y el segundo analisis puede comprender una zona de control compartida.
El dispositivo de analisis puede ser utilizado para medir la cantidad o presencia de hCG a lo largo de un rango de concentracion amplio. El rango puede variar de entre aproximadamente lOmlU a aproximadamente 250.000mIU.
El segundo analisis puede comprender un reactivo de union marcado para el analito y un segundo reactivo de union marcado para el analito. El primer analisis puede comprender un reactivo de union marcado para analito previsto aguas arriba de la zona de deteccion.
El dispositivo de analisis puede comprender uno o mas valores de umbral de medicion adicionales para indicar el nivel de analito en un cierto rango de analito. En una realizacion, el dispositivo de analisis comprende un primer y segundo umbrales de medicion, en que una senal de medicion de analito menor que el primer umbral de medicion es indicativa de la ausencia de analito o la ausencia de analito por encima de un cierto nivel y en que una senal de medicion de analito mayor que el segundo umbral es indicativa del nivel de analito en un segundo rango de concentracion y una senal de medicion menor que el segundo umbral es indicativa del nivel de analito en un primer rango de concentracion. De acuerdo con una realizacion particular, el dispositivo de analisis comprende adicionalmente un tercer umbral de medicion, en que una senal de medicion de analito mayor que el tercer umbral es indicativa del nivel de analito en un tercer rango de concentracion.
En particular el dispositivo de analisis puede ser capaz de medir la presencia y cantidad del analito hCG en una muestra de lfquido, en particular orina, de un sujeto mairnfero hembra. El dispositivo de analisis puede comprender un primer umbral de medicion, en que los niveles de senal de analito hCG por debajo del umbral son indicativos de no estar embarazada y en que los niveles de senal de analito hCG mayores o iguales que el primer umbral de medicion son indicativos de estar embarazada, en que el dispositivo comprende al menos otro umbral de medicion. Ademas el dispositivo de analisis puede proporcionar una indicacion del tiempo de embarazo. El dispositivo de analisis puede proporcionar una indicacion basada en el tiempo al usuario, tal como el tiempo de embarazo en unidades de dfas o semanas.
Un analisis completo tfpico para el tiempo de desarrollo de un ensayo de analisis para la determinacion de hCG en orina es de 3 minutos.
Es un objeto deseable del invento reducir el numero de componentes opticos, esto puede ser logrado convenientemente, cuando la zona de referencia esta prevista como parte de un analisis y la zona de control esta prevista como parte del otro analisis. De acuerdo con una realizacion, la zona de referencia esta prevista como parte de un primer analisis que tiene un nivel inferior de reactivo de union marcado y la zona de control esta prevista como parte de un segundo analisis que tiene un nivel superior de reactivo de union.
De acuerdo con una realizacion, el dispositivo de analisis comprende cuatro fuentes de luz, en que la fuentes de luz estan previstas para iluminar las zonas de deteccion del primer y segundo analisis y las zonas de control y de referencia compartidas, estando iluminada cada zona por una fuente de luz respectiva. Uno o mas fotodetectores pueden estar posicionados para detectar luz reflejada y/o transmitida desde las zonas respectivas. De acuerdo con una realizacion, un solo fotodetector puede ser empleado para detectar luz procedente de todas las zonas. Esto puede ser logrado, por ejemplo, iluminando las zonas respectivas secuencialmente de tal manera que el dispositivo es capaz de reconocer desde que zona esta emanando la luz detectada en el fotodetector. El proceso de iluminacion secuencial puede ser
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repetido con una frecuencia fija o variable durante la duracion del analisis de tal manera que los niveles de la senal a lo largo del tiempo pueden ser vigilados en cada zona. Ademas el cambio de niveles de luz detectada desde una o mas zonas puede ser utilizado para determinar si una muestra de fluido ha sido aplicada al dispositivo y cuando lo ha sido y para determinar el caudal de muestra de lfquido a lo largo del dispositivo. La determinacion del caudal puede ser utilizada como otro ensayo de control de calidad, por ejemplo el analisis puede ser rechazado si el caudal es o bien mayor o bien menor que los niveles establecidos. Un metodo y medios de deteccion de caudal adecuado estan descritos por el documento EP1484601.
El reactivo de union marcado se acumula tipicamente en la zona de deteccion a lo largo de un penodo de tiempo para un analisis inmunologico en sandwich y asf la tasa de aumento de senal a lo largo del tiempo puede ser vigilada. El dispositivo puede determinar el resultado despues de que la senal haya alcanzado el equilibrio o mas tfpicamente antes de que la reaccion haya alcanzado el equilibrio. El dispositivo puede proporcionar un resultado cuantitativo tal como un valor individual, un resultado semi-cuantitativo o rango tal como 1-10, 11-20 y asf sucesivamente, o un resultado cualitativo tal como SI/NO. El dispositivo puede determinar el resultado con respecto a uno o mas umbrales de senal. El dispositivo puede tener un tiempo de medicion fijado o proporcionar un resultado anticipado antes de que haya transcurrido el tiempo de medicion fijado. Un resultado anticipado puede por ejemplo ser proporcionado en el caso en el que el dispositivo determina que el nivel de senal nunca sobrepasara un umbral particular o sobrepasa un umbral particular en una etapa temprana. En estos casos particulares el dispositivo puede solicitar una medicion anticipada NO o SI, indicando la ausencia o presencia de analito con respecto a un nivel de base particular (que puede ser cero). Un dispositivo de analisis que emplea un metodo de determinacion de resultado anticipado esta descrito por el documento EP1484601.
El dispositivo de analisis puede ser utilizado para determinar si un sujeto esta o no embarazado (en particular si la muestra de lfquido contiene hCG por encima de un cierto nivel) y tambien puede emplear umbrales adicionales que indican al usuario el tiempo de embarazo. El tiempo de embarazo puede ser presentado en terminos de una medicion basada en el tiempo o basada en concentracion.
El dispositivo de analisis comprendera tfpicamente un alojamiento. El alojamiento puede ser impermeable a los fluidos y estar construido a partir de un material plastico adecuado, tal como ABS. El dispositivo de analisis puede comprender ademas un miembro de recepcion de muestra para recibir la muestra de fluido. El miembro de recepcion de muestra puede extenderse desde el alojamiento.
El alojamiento puede estar construido de un material impermeable a los fluidos. El alojamiento tambien excluira de manera deseable la luz ambiente. El alojamiento o envolvente se considerara que excluye sustancialmente la luz ambiente si menos del 10%, preferiblemente menos del 5%, y mas preferiblemente menos del 1%, de la luz visible que incide sobre el exterior del dispositivo penetra en el interior del dispositivo. Un material plastico sintetico impermeable a la luz tal como policarbonato, ABS, poliestireno, poliestirol, polietileno de alta densidad, o polipropileno que contiene un pigmento bloqueador de la luz apropiado es una eleccion adecuada para utilizar en la fabricacion del alojamiento. Una abertura puede estar prevista en el exterior del alojamiento que comunica con el analisis previsto dentro del espacio interior dentro del alojamiento. Alternativamente la abertura puede servir para permitir a un receptor de muestra porosa extenderse desde el alojamiento a una posicion externa del alojamiento.
Tambien prevista dentro del alojamiento habra tfpicamente una fuente de alimentacion. El dispositivo comprendera tfpicamente un medio de presentacion para presentar el resultado del analisis asf como un medio de memoria para almacenar datos. Convenientemente el medio de presentacion comprende una pantalla de LCD.
Los medios de presentacion pueden presentar ademas informacion adicional tal como un mensaje de error, detalles personales, hora, fecha y un cronometro para informar al usuario durante cuanto tiempo ha sido medido el analisis. La informacion presentada por el analisis puede estar indicada en palabras, numeros o sfmbolos, en cualquier tipo de letra, alfabeto o idioma, por ejemplo, “positivo”, “negativo”, “+”, “-“, “embarazada”, “no embarazada”, “vea a su medico”, “repetir el ensayo o prueba”.
El dispositivo de analisis puede comprender ademas un receptor de muestra, que comprende un miembro poroso receptor de muestra, en conexion fluida con y aguas arriba de una o ambas trayectorias de flujo de analisis. El dispositivo de analisis puede comprender mas de una trayectoria de flujo de analisis comprendiendo cada una de ellas una zona de deteccion, en cuyo caso puede estar previsto un solo miembro poroso receptor de muestra que es comun a las multiples trayectorias de flujo de analisis. Asf una muestra de fluido aplicada al miembro poroso del dispositivo es capaz de desplazarse a lo largo de las trayectorias de flujo de los analisis respectivos a las zonas de deteccion respectivas. El miembro poroso puede estar previsto dentro de un alojamiento o puede extenderse al menos parcialmente fuera de dicho alojamiento y puede servir, por ejemplo, para recoger un flujo de orina. El miembro poroso puede actuar como un deposito de fluido. El miembro poroso puede estar hecho de cualquier material esponjoso, poroso o fibroso capaz de absorber lfquido rapidamente. La porosidad del material puede ser unidireccional (es decir, con poros o fibras que discurren total o predominantemente paralelos a un eje del miembro) o multidireccional (omnidireccional, de modo que el miembro tiene una estructura amorfa similar a una esponja). Pueden utilizarse material plastico poroso, tal como polipropileno, polietileno (preferiblemente de peso molecular muy alto), fluoruro de polivinilideno, etileno-acetato de vinilo, acrilonitrilo y politetrafluoruroetileno. Otros materiales adecuados incluyen fibra de vidrio. La prevision de un miembro
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poroso receptor de muestra comun permite que una sola muestra sea proporcionada simultaneamente a las trayectorias de flujo del primer y segundo analisis y ademas aumenta la eficacia de proporcionar una zona de referencia compartida y/o de control compartido.
El invento proporciona un metodo de acuerdo con la reivindicacion 25 de realizacion de un analisis para determinar la presencia y/o cantidad de uno o mas analitos, comprendiendo el metodo la operacion de poner en contacto una muestra de lfquido con un dispositivo de analisis.
Vision de conjunto de las figuras
La fig. 1 es una vista de un dispositivo de analisis de acuerdo;
La fig. 2 es una vista esquematica de las trayectorias de flujo de analisis de acuerdo con una realizacion ejemplar;
La fig. 3 es una vista de la disposicion de las fuentes de luz y del fotodetector de la realizacion mostrada en la fig. 2;
La fig. 4 es una vista en seccion transversal esquematica de parte de una realizacion del dispositivo de analisis que ilustra las posiciones relativas de alguno de los componentes de analisis;
Las figs. 5a y 5b son vistas de la parte inferior de una disposicion de deflector que muestran tambien alguno de los componentes opticos de la realizacion mostrada en la fig. 3; y
La fig. 6 es una vista superior de la parte de la realizacion del dispositivo de analisis representada en las figuras precedentes, y que ilustra una tira de ensayo de flujo lateral in situ en el dispositivo de analisis.
Descripcion detallada
Una vista superior externa de un dispositivo de analisis esta mostrada en la fig. 1. El dispositivo (10) es alargado con una longitud de aproximadamente 14 cm y una anchura de aproximadamente 25 mm. La envolvente (11) puede estar formada de una envolvente impermeable a los lfquidos adecuada tal como de policarbonato, ABS, poliestireno, polietileno de alta densidad, o polipropileno. El receptor (12) de muestra poroso externo puede estar formado de cualquier material esponjoso, poroso o fibroso capaz de absorber lfquido rapidamente. Tambien hay mostrada una pantalla de presentacion (15) de LCD para presentar los resultados del analisis. Tambien previstas dentro del dispositivo de analisis y no mostradas, estan las trayectorias de flujo de analisis, fuentes de luz, fotodetector, una fuente de alimentacion y componentes electronicos asociados.
La fig. 2 muestra el diseno del fotodetector y de los portadores porosos de analisis individuales de un dispositivo de analisis de acuerdo con una realizacion ejemplar. El dispositivo de analisis (20) tiene una region de aplicacion de muestra comun (21) que conecta de manera fluida el primer y segundo analisis (22) y (23). Un solo fotodetector (4) esta previsto entre los dos analisis para detectar luz procedente de las zonas respectivas. Las zonas (24) y (25) corresponden respectivamente a una zona de deteccion y control en el primer analisis (22). Las zonas (26) y (27) corresponden respectivamente a una zona de deteccion y referencia en el segundo analisis (23). No se han mostrado los cuatro LED correspondientes cada uno de los cuales ilumina una zona respectiva a traves de una ventana posicionada de manera apropiada.
La fig. 3 muestra una vista de la disposicion de acuerdo con una realizacion ejemplar que comprende un solo fotodetector (32) y cuatro LED (31). El area activa del fotodetector es 1,5 mm x 1,5 mm.
La fig. 4 muestra una vista esquematica en seccion transversal del dispositivo de analisis (40) que muestra las posiciones relativas de alguno de los componentes. La luz procedente del LED (41) ilumina una zona de tira (42) y la luz reflejada desde la zona es detectada en el fotodetector (44). De manera similar, la luz procedente del LED (45) ilumina una zona de tira (46) y la luz reflejada es detectada en el fotodetector. Hay previstos divisores (47) que impiden que la luz procedente del LED incida directamente en el fotodetector. Tambien hay previsto un miembro inclinado (48) que sirve para impedir la iluminacion de la tira (46) por el LED (41) y de manera correspondiente la iluminacion de tira (42) por el LED (45) mientras permite que la luz reflejada desde las tiras de ensayo respectivas sea detectada por el fotodetector. El miembro inclinado tambien sirve para guiar la luz reflejada desde las tiras de ensayo sobre el fotodetector. Los LED estan montados en una superficie (49) hecha de placa de circuito impreso.
La fig. 5a ilustra una vista del lado inferior de la disposicion de deflector de la realizacion ejemplificada. La luz procedente de los LED, de los que se ha mostrado uno (indicado por el numero de referencia 51), ilumina una zona de una tira de analisis (no mostrada) a traves de una abertura. Cada LED esta asociado con una abertura respectiva. En la figura, una abertura ejemplar esta indicada por el numero de referencia 55. La luz es reflejada desde la tira sobre el fotodetector (52). Tambien se ha mostrado el miembro inclinado (53) y el divisor (56). Los LED adyacentes son apantallados entre sf por los deflectores (54).
La fig. 5b muestra una vista del lado inferior de la disposicion de deflector de la realizacion ejemplificada desde una perspectiva diferente. El miembro inclinado (53) es simetrico alrededor del eje (57) y sirve para guiar la luz reflejada
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desde los cuatro LED (no mostrados) sobre el fotodetector (no mostrado).
La fig. 6 muestra una vista superior del dispositivo de analisis que mira hacia abajo sobre una tira de ensayo (61) ubicada sobre las aberturas (62) y mantenida en posicion por pasadores de posicionamiento (63). Los LED y el fotodetector pueden ser vistos parcialmente a traves de las aberturas.
Ejemplo 1
El valor de la senal determinada desde las zonas respectivas para un dispositivo de analisis que comprende una zona de ensayo de baja densidad (para medir la concentracion alta de analito) y una zona de ensayo de sensibilidad alta (para medir la concentracion baja de analito) esta determinada por los medios de calculo de senal como sigue:
La utilizacion de las tiras y ventanas esta definida en la tabla siguiente (vease la fig. 2)
Tira
Ventana 1 Ventana 2
A
Lmea de ensayo de Baja Sensibilidad (LS) Lmea de Control (Ctrl)
B
Lmea de analisis de Alta Sensibilidad (HS) Ventana de referencia (Ref)
Se realizan mediciones de la luz reflejada desde cada ventana aproximadamente dos veces por segundo y un filtro digital pasa bajos es utilizado para rechaza el ruido y uniformizar los datos. Valores filtrados son utilizados para detectar flujo y determinar el resultado y estan expresados en terminos de atenuacion relativa de porcentaje normalizado (%A). Esto tiene en cuenta y minimiza cualesquiera variaciones en los componentes opticos tanto dentro del dispositivo como entre dispositivos.
El valor medido es inversamente proporcional a la cantidad de luz reflejada.
Para cada ventana, la relacion de ventana en las ventanas de referencia, control y ensayo es igual al valor medido cuando el portador poroso esta seco, t=0 (antes de la adicion de muestra), dividido por el valor medido en el tiempo t despues de la adicion de muestra:
CALCULO DE RELACIONES DE VENTANA FILTRADA
Para cada punto de tiempo t las relaciones de ventana para cada ventana son evaluadas como sigue:
Relacion de Ref
valor de ventana de referencia filtradaftrae=0 valor de ventana de referencia filtradaftrae=,
Relacion HS, =
valor de ventana de ensayoHSfiltradoftrae=0 valor de ventana de ensayoHSfiltradoftra^
Relacion LS, =
valor de ventana de ensayoLSfiltrado„ra^0 valor de ventana de ensayoLSfiltrado„rae=,
Relacion Ctrl, =
valor de ventana de Ctrl filtrado„rae=0 valor de ventana de Ctrl filtrado
CALCULO DE VALORES %A FILTRADOS
La atenuacion relativa de porcentaje normalizado (%A) es proporcionada por la diferencia de la relacion de ventana de referencia (ref.) y la relacion de ventana que es considerada (ventanas de control o de ensayo) dividida por la relacion de ventana de referencia y multiplicada por 100%.
Para cada punto de tiempo t, son calculados valores de %A para la lmea de analisis HS, la lmea de analisis LS y la lmea de control, en que:
HS,(%A)
Relacion de Ref - Relacion de ensayo HS Relacion de Ref
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LS (%A)
Relacion de Ref - Relacion de ensayo LS Relacion de Ref
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Ctrl, (%A)
Relaciont de Ref - Relaciont de Ctrl Relaciont de Ref
x100%
Construccion de dispositivos de analisis
Se construyo un dispositivo de analisis comprendiendo una primera tira de ensayo de analisis que comprende un reactivo de union marcado previsto aguas arriba de una zona de deteccion y una segunda tira de ensayo de analisis que comprende un reactivo de union marcado y un segundo reactivo de union (depurador) para el analito asf como un reactivo de union marcado para una zona de control prevista aguas arriba de una zona de deteccion y una zona de control.
Preparacion de la primera tira de ensayo de analisis
Se preparo la zona de deteccion dispensando una lmea de anticuerpo anti-p-hCG (clon interno 3468) en una concentracion de 3 mg/ml en tampon de PBSA, a una tasa de 1 pl/cm o sobre bandas de nitrocelulosa de dimensiones 350 mm de longitud x 40 mm de anchura (Whatman) que tiene un tamano de poro de 8 micras y un grosor de entre 90100 micras que habfan sido estratificadas a una capa de soporte de 175 micras. Se aplico el anticuerpo anti-p-hCG utilizando la plataforma de dispensacion Biodot xyz3050 como una lmea ~1,2 mm de anchura y ~300 mm de longitud en una posicion de 10 mm a lo largo de la longitud de la nitrocelulosa.
Las bandas de nitrocelulosa se secaron utilizando una estufa de secado Hedinair serie #17494 ajustada a 55 °C y velocidad 5 (un solo paso).
La nitrocelulosa fue bloqueada subsiguientemente utilizando un tampon de bloqueo que comprende una mezcla de 5% de etanol (BDH Analar 104766P) mas 150mM de Cloruro de Sodio (BhD Analar 10241AP) mas 50mM de base de trizma de (Sigma T1503) mas Tween 20 (Sigma P1379) y 1% (peso/volumen) alcohol de polivinilo (PVA, Sigma 360627).
Se aplico el tampon de bloqueo a una tasa de 1,75 pl/mm al extremo proximal de la banda. Una vez que la solucion de bloqueo habfa empapado la membrana se aplico una solucion de 2% (peso/volumen) de sacarosa (Sigma S8501 en agua desionizada) utilizando el mismo aparato a una tasa de 1,6 pl/mm y se le permitio empapar la membrana de celulosa durante ~5 minutos).
Las bandas de NC se secaron entonces utilizando una estufa de secado Hedinair serie #17494 ajustada a 75 °C y velocidad 5 (un solo paso).
Preparacion del reactivo de union marcado que se puede mover sobre el primer material de portador poroso Se preparo el reactivo de union marcado de acuerdo con el siguiente protocolo:
Revestimiento con particulas de latex con un anti-a-hCG
1. Diluir particulas de latex azul de Duke Scientific (400 nm de diametro, DB1040CB en 10% de solidos (peso/volumen)) a 2% de solidos (peso/volumen) con 100 mM de tampon de tetraborato disodico pH 8,5 (BDH AnalaR 102676G) (DTB).
2. Lavar el latex diluido centrifugando un volumen de (2 mls) de latex diluido en dos tubos centnfugos Eppendorf a 17000 rpm (25.848 rcf) durante 10 minutos en una Biofuge Heraeus 17RS centnfuga. Retirar y desechar el sobrenadante y volver a suspender las bolitas en 100 mM DTB para proporcionar un 4% de solidos (peso/volumen) en un volumen total de 1 ml.
3. Preparar una mezcla de etanol y acetato de sodio (95% Etanol BDH AnalaR 104766P con 5% peso/volumen de Acetato de Sodio Sigma S-2889).
4. Anadir 100 pl de solucion de etanol-acetato de sodio al latex lavado en la operacion 2 (esto es el 10% del volumen de latex).
5. Diluir el anticuerpo de stock (clon interno 3299) para proporcionar ~1200 pg/ml de anticuerpo en DTB.
6. Calentar un volumen de 1 ml del anticuerpo diluido de la operacion 5 en un bano de agua ajustado a 41,5 °C durante ~ 2 minutos. Calentar tambien el latex lavado mas etanol-acetato de sodio procedente de la operacion 4 en el mismo bano de agua durante 2 minutos.
7. Anadir el anticuerpo diluido al latex mas etanol-acetato, mezclar bien e incubar durante 1 hora en el bano de agua ajustado a 41,5 °C mientras se mezcla utilizando una agitador magnetico y una pulga magnetica colocada en la mezcla.
8. Preparar 40 mg/ml de Solucion de Albumina de Suero Bovino (BSA) (Intergen W22903 in agua desionizada). Bloquear el latex anadiendo un volumen igual de 40 mg/ml de BSA a la mezcla de latex/anticuerpo/etanol-acetato e incubar en el bano de agua a 41,5 °C durante 30 minutos con agitacion continua.
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9. Centrifugar la mezcla a 17000 rpm durante 10 minutes como en la operacion 2, (dividir el volumen en lotes de 1 ml entre tubos Eppendorf). Retirar y desechar la sustancia que flota en la superficie y volver a suspender las bolitas en 100 mM de DTB. Repetir el centrifugado como en la operacion 2, retirar y desechar la sustancia que flota en la superficie y volver a suspender en pellet en Tampon de Cepillado de Aire (20% (peso/volumen) Sacarosa Sigma S8501, 10% BSA (peso/volumen) en 100 mM de Sigma Base de Trizma T1503 pH a 9). Anadir Tampon de Cepillado de Aire para proporcionar un 4% de solidos (peso/volumen) de latex.
Se conjugo el latex y se pulverizo en una mezcla de BSA y sacarosa sobre un portador poroso de fibra de vidrio (F529- 09, Whatman) a una tasa de 50 g/hr y 110 mm/s y se seco utilizando una Estufa Transportadora de Hedinar con numero de Serie 17494 ajustada a 65 °C y velocidad 5 (un solo paso).
La zona elegida como la zona de referencia estaba a una distancia de 13 mm a lo largo de nitrocelulosa, en particular aguas abajo de la zona de deteccion.
Se unio el material de fibra de vidrio que comprende el reactivo de union marcado a la membrana de nitrocelulosa utilizando una pelteula estratificada revestida de adhesivo transparente (Ferrisgate, 38 mm de ancho) dispuesta de tal manera que el reactivo marcado estaba mas arriba y la fibra de vidrio se solapo a la superficie de nitrocelulosa por ~ 2 mm a lo largo de la longitud (350 mm) de la banda de membrana de nitrocelulosa. Se unio la fibra de vidrio al extremo de la nitrocelulosa de tal manera que estaba aguas arriba de la zona de deteccion.
Se corto subsiguientemente la lamina estratificada en tiras de ensayo que comprenden un material portador poroso de fibra de vidrio que tiene una anchura de 6 mm y una longitud de 25 mm, habiendo sido aplicados los reactivos marcados 20 mm a lo largo de la longitud de la fibra de vidrio, prevista aguas arriba de una membrana de nitrocelulosa y solapandola por 2 mm, que tiene una anchura de 6 mm y una longitud de 40 mm.
Preparacion de la segunda tira de ensayo de analisis
Se preparo la zona de deteccion como sigue:
Se representaron 3 mg/ml de Anticuerpo p-hCG de raton MAb anti-humano (clon 3468) en tampon de PBSA a 1 pl/cm sobre nitrocelulosa (de tipo y dimensiones como los de acuerdo con el primer analisis) en la posicion de 10 mm que utiliza una plataforma de dispensacion Biodot XYZ3050 para proporcionar una unica zona de deteccion para el primer analisis.
Se preparo la zona de control como sigue:
Se representaron 2 mg/ml de Anticuerpo Goat-anti-Conejo (Lampire) en tampon de PBSA a 1 pl/cm sobre la misma nitrocelulosa que la utilizada para el segundo analisis, en la posicion de 13 mm utilizando una plataforma de dispensacion Biodot XYZ3050 para proporcionar una unica zona de control para el dispositivo de analisis.
Se mezclo a-hCG de raton-anti-humano mAb (clon 3299) conjugado a 400 nm de latex poliestireno azul (Duke Scientific) con anticuerpo depurador de p-hCG de raton mAb anti-humano (clon interno 3468) a 3 mg/ml para proporcionar un % final de latex azul del 3%, una concentracion 3468 final de 0,075 mg/ml y una concentracion de 0,06 mg/ml del anticuerpo libre de anti-p-hCG. Se barrio con aire la mezcla resultante sobre fibra de vidrio Whatman (carretes F529 de 25 mm de ancho) utilizando el BIODOT XYZS (numero de serie 1673) a 90 g/h pulverizado a 2,02 pg/cm sobre fibra de vidrio F529-09 aproximadamente a la posicion de 20 mm. Se disperso la solucion pulverizada para formar una banda que era de aproximadamente 7 mm de longitud.
El reactivo de union marcado para la zona de control tambien se deposito sobre la misma region del portador poroso que el reactivo de union marcado para el analito como sigue:
Se conjugo IgG de conejo (Dako) a 400 nm de latex de poliestireno de latex azul (Duke Scientific) en BSA/sacarosa para proporcionar un % final de latex azul de 0,7% de solidos y se pulverizo a 65 g/h sobre fibra de vidrio.
Se seco la fibra de vidrio utilizando una Estufa Transportadora Hedinar con numero de Serie 17494 ajustada a 65 °C y velocidad 5 (un solo paso). Se deposito un segundo paso de latex sobre la fibra de vidrio repitiendo lo anterior sin embargo a un desplazamiento de ~ 0,8 mm desde la posicion original de pulverizacion (mas aguas abajo de la fibra de vidrio). La fibra de vidrio fue secada como se ha descrito anteriormente.
Se unio el material de fibra de vidrio con latex pulverizado a la membrana de nitrocelulosa utilizando una pelteula estratificada revestida con un adhesivo transparente (Ferrisgate, 38 mm de ancho) dispuesta de tal manera que el latex pulverizado estaba mas arriba y la fibra de vidrio se solapo a la superficie de la nitrocelulosa por aproximadamente 2 mm a lo largo de la longitud (350 mm) de la banda de membrana de nitrocelulosa. Se previo la fibra de vidrio aguas arriba de la membrana de nitrocelulosa y se previeron los reactivos de union hacia el extremo distal de la fibra de vidrio.
Se corto subsiguientemente la lamina estratificada en tiras de ensayo que comprenden un material de portador poroso de fibra de vidrio que tiene una anchura de 6 mm y una longitud de 25 mm, habiendo sido aplicados los reactivos de union
marcados 20 mm a lo largo de la longitud de la fibra de vidrio, prevista aguas arriba de una membrana de nitrocelulosa y solapandose por 2 mm que tiene una anchura de 6 mm y una longitud de 40 mm. Se previo un receptor de muestra poroso (Filtrona) de 45 mm de longitud, 12 mm de anchura y un grosor de aproximadamente 2,5 mm aguas arriba del primer material portador poroso y solapandolo por aproximadamente 3 mm.
5 Tambien se deposito el reactivo de union marcado para la zona de control sobre la misma region del portador poroso que el reactivo de union marcado para el analito como sigue:
Se conjugo IgG (Dako) de conejo a 400 nm de latex de poliestireno de latex azul (Duke Scientific) en BSA/sacarosa para proporcionar un % final de latex azul de 0,7% de solidos y se pulverizo a 65 g/h sobre fibra de vidrio (F529-09).
Se posicionaron la primera y segunda tiras de ensayo de analisis paralelas entre sf y se superpuso una almohadilla de 10 aplicacion de muestra de poliester comun (505521, Filtrona) en los extremos aguas arriba de ambos analisis. Se superpuso una almohadilla de sumidero absorbente de algodon comun (CF7, Whatman) aguas abajo de las zonas de referencia y control.
Se preparo el dispositivo de analisis montando las tiras de analisis en una configuracion paralela en un alojamiento de plastico que comprende los componentes opticos. Se dispusieron los LED de tal manera que se posicionaron los cuatro 15 LED en estrecha proximidad a las cuatro zonas respectivas (2 zonas de deteccion y las zonas de referencia y de control) en una posicion desplazada y por encima del plano de los analisis. Se posicion un solo fotodetector entre y por encima del plano de los dos analisis y se posiciono en el centro de las tiras de analisis (vease la fig. 2).
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Claims (25)

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    REIVINDICACIONES
    1. Un dispositivo de analisis con un dispositivo de lectura de resultado de analisis para leer el resultado de analisis realizados en el dispositivo de analisis, siendo el dispositivo de analisis (20) para determinar la presencia y/o cantidad de uno o mas analitos en una muestra de lfquido, comprendiendo dicho dispositivo de analisis:
    a) una primera y segunda tiras de ensayo de analisis (22, 23) cada una de las cuales comprende una trayectoria de flujo respectiva que tiene una zona de deteccion (24, 26) para inmovilizar un reactivo de union marcado, en que la deteccion de un reactivo de union marcado en una o ambas zonas de deteccion es indicativa de la presencia y/o cantidad de uno o mas analitos, en que la primera y segunda tiras de ensayo de analisis estan en sustratos separados o estan previstas en un sustrato comun pero aisladas de tal manera que el lfquido no puede atravesar desde la trayectoria de flujo de una tira de ensayo de analisis a la trayectoria de flujo de la otra, y en que la primera y segunda tiras de ensayo de analisis tienen una region (21) de aplicacion de muestra porosa comun;
    b) una sola zona de referencia compartida (27) presente en una de dichas primera y segunda tiras de ensayo de analisis; comprendiendo el dispositivo de lectura de resultado de analisis:
    c) una o mas fuentes de luz (41, 45) para iluminar las zonas de deteccion y la zona de referencia compartida;
    d) uno o mas fotodetectores (4) para detectar luz procedente de las zonas de deteccion y de la zona de referencia compartida, cuyo fotodetector o fotodetectores generan una senal, la magnitud de cuya senal esta relacionada con la cantidad de luz detectada; y
    e) medios de tratamiento de senal para tratar senales procedentes del fotodetector o fotodetectores;
    en que el valor de la senal obtenida procedente de la zona de referencia compartida en una de dichas tiras de ensayo de analisis es utilizado para compensar el valor de la senal obtenida en la zona de deteccion de la otra de dichas tiras de ensayo de analisis.
  2. 2. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun la reivindicacion 1, en el que la primera y/o segunda tiras de ensayo de analisis comprenden un reactivo de union marcado para un analito o un analogo de analito previsto en una forma que se puede mover aguas arriba de la zona de deteccion en un estado seco antes de la utilizacion del dispositivo.
  3. 3. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun las reivindicaciones 1 o 2, en el que la primera y/o segunda tiras de ensayo de analisis comprenden un reactivo de union para un analito previsto en una forma inmovilizada en la zona de deteccion.
  4. 4. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende ademas una sola zona de control compartida (25), que indica si se ha llevado a cabo correctamente o no una ensayo para el analisis.
  5. 5. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun la reivindicacion 4, en el que la zona de control esta comprendida como parte bien de la primera o bien de la segunda tiras de ensayo de analisis.
  6. 6. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun la reivindicacion 4 o la reivindicacion 5, en el que la zona de control esta comprendida como parte de una tira de ensayo de analisis y la zona de referencia compartida esta comprendida como parte de la otra tira de ensayo de analisis.
  7. 7. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la primera y segunda tiras de ensayo de analisis son capaces de detectar la presencia de un analito en diferentes rangos de concentracion.
  8. 8. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que las trayectorias de flujo de la primera y segunda tiras de ensayo de analisis comprenden cada una un portador poroso (42, 46).
  9. 9. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun la reivindicacion 8, en el que el portador o portadores porosos comprenden nitrocelulosa.
  10. 10. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende ademas un sumidero previsto en el extremo distal de las tiras de ensayo de analisis.
  11. 11. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que la primera y segunda tiras de ensayo de analisis comprenden cada una diferentes cantidades de reactivo de union marcado.
  12. 12. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que la primera tira de ensayo de analisis es para la deteccion de un analito en un rango inferior y la segunda tira de ensayo de
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    analisis es para la deteccion del analito en un rango superior.
  13. 13. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun la reivindicacion 12 en el que el segundo analisis tiene una cantidad mayor de reactivo de union marcado que la primera tira de ensayo de analisis.
  14. 14. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que el primer analisis comprende un reactivo de union marcado para el analito previsto aguas arriba de una zona de deteccion y el segundo analisis comprende un reactivo de union marcado para el analito y un segundo reactivo de union marcado para el analito previsto aguas arriba de la zona de deteccion.
  15. 15. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun las reivindicaciones 13 y 14 en el que el primer analisis comprende una zona de referencia compartida y el segundo analisis comprende una zona de control compartida.
  16. 16. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun la reivindicacion 15, en el que la zona de referencia esta prevista aguas abajo de la zona de deteccion.
  17. 17. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun las reivindicaciones 15 y 16, en el que la zona de control esta prevista aguas abajo de la zona de deteccion.
  18. 18. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que un fotodetector detecta luz procedente de una pluralidad de zonas.
  19. 19. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun las reivindicaciones 4 a 18, que comprende una solo fotodetector para detectar luz procedente de las dos zonas de deteccion, la zona de referencia y una zona de control.
  20. 20. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun las reivindicaciones 4 a 19 que comprende cuatro fuentes de luz para iluminar las dos zonas de deteccion, la zona de referencia y una zona de control.
  21. 21. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la cantidad de luz detectada por el fotodetector o fotodetectores procedente de las zonas de deteccion y la zona de referencia es medida antes de la adicion de la muestra al dispositivo de analisis y otra vez despues de la adicion de la muestra al dispositivo de analisis, y una relacion de las dos mediciones, antes y despues de la adicion de la muestra, calculada para cada zona.
  22. 22. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que las fuentes de luz comprenden uno o mas LED.
  23. 23. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el analito que ha de ser determinado es hCG.
  24. 24. Un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la muestra de lfquido es orina.
  25. 25. Un metodo para realizar un analisis para determinar la presencia y/o cantidad de un analito en una muestra de lfquido, comprendiendo el metodo la operacion de poner en contacto la muestra con la region de aplicacion de muestra comun de un dispositivo de analisis con dispositivo de lectura segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes.
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