ES2582210T3 - Procedimiento y composiciones para tratar la piel - Google Patents

Abstract

Una composición para el cuidado de la piel que comprende al menos un activador del gen CLOCK o PER1 en los queratinocitos seleccionado del grupo que consiste en:**Fórmula** y mezclas de los mismos; y, al menos una enzima de reparación del ADN seleccionada del grupo que consiste en: - enzimas de reparación por escisión de bases (BER), - enzimas de reparación por escisión de nucleótidos (NER), - ADN polimerasas, - ADN helicasas, - enzimas de reparación de errores de emparejamiento (MMR); - y mezclas de las mismas.

Description

imagen1

imagen2

imagen3

imagen4

imagen5

imagen6

5

10

15

20

25

30

imagen7

en la que R1 es H, OR y NRR, en la que cada R es independientemente H, alquilo C1-20 de cadena lineal o ramificada; R2 es H u OH; y R3 es H, alquilo C1-20 de cadena lineal o ramificada.

Es preferente si R1 es OR, si R es un alquilo C1-20 lineal o ramificado, preferentemente metilo; R2 es H; y R3 es un alquilo C1-20 de cadena lineal o ramificada, más preferentemente, butilo.

Los ejemplos de compuestos protectores solares frente a UVA adecuados de esta fórmula general incluyen 4-metildibenzoilmetano, 2-metildibenzoilmetano, 4-isopropildibenzoilmetano, 4-terc-butildibenzoilmetano, 2,4-dimetildibenzoylmetano, 2,5-dimetildibenzoilmetano, 4,4'diisopropilbenzoilmetano, 4-terc-butil-4'-metoxidibenzoilmetano, 4,4-diisopropilbenzoilmetano, 2-metil-5-isopropil-4´-metoxidibenzoilmetano, 2-metil-5-terc-butil-4'-metoxidibenzoilmetano, etcétera. Es particularmente preferente 4-terc-butil-4'-metoxidibenzoilmetano, también denominado avobenzona. Avobenzona está comercialmente disponible de Givaudan-Rour bajo la marca comercial Parsol® 1789 y Merck & Co. bajo el nombre comercial Eusolex® 9020.

Otros tipos de protectores solares frente a UVA incluyen derivados del ácido dialcanforsulfónico, tales como ecamsul, un protector solar en venta bajo el nombre comercial Mexoryl®, que es ácido tereftalilidendialcanforsulfónico, que tiene la fórmula:

imagen8

La composición puede contener desde aproximadamente un 0,001-20 %, preferentemente un 0,005-5 %, más preferentemente aproximadamente un 0,005-3 % en peso de la composición de protector solar frente a UVA. En el modo de realización preferente de la invención, el protector solar frente a UVA es avobenzona y está presente en no más de aproximadamente un 3 % en peso de la composición total.

2. Protectores solares químicos frente a UVB

El término "protector solar frente a UVB" quiere decir un compuesto que bloquea la radiación UV en el intervalo de longitudes de onda de desde aproximadamente 290 a 320 nm. Existe una variedad de protectores solares químicos frente a UVB, incluyendo ésteres de ácido alfa-ciano-beta,beta-difenilacrílico como se expone en la patente de EE. UU. n.º 3.215.724, que se incorpora en el presente documento por referenciaen su totalidad. Un ejemplo particular de un éster de ácido alfa-ciano-beta,beta-difenilacrílico es octocrileno, que es 2-ciano-3,3-difenilacrilato de 2-etilhexilo. En determinados casos, la composición puede contener no más de aproximadamente un 10% en peso de la composición total de octocrileno. Las cantidades adecuadas varían desde aproximadamente un 0,001-10 % en peso. Se puede adquirir octocrileno de BASF bajo el nombre comercial Uvinul® N-539.

Otros protectores solares adecuados incluyen derivados de bencilideno alcanfor como se expone la patente de EE. UU. n.º 3.781.417. Dichos derivados de bencilideno alcanfor tienen la fórmula general:

imagen9

en la que R es p-tolilo o estirilo, preferentemente estirilo. Es particularmente preferente 4-metilbencilideno alcanfor, que es un compuesto protector solar frente a UVB soluble en lípidos en venta bajo el nombre comercial Eusolex 6300 por Merck.

También son adecuados los derivados de cinamato que tienen la fórmula general:

imagen10

en la que R y R1 son cada uno independientemente un alquilo C1-20 de cadena lineal o ramificada. Es preferente si R es metilo y R1 es un alquilo C1-10, preferentemente C8, de cadena ramificada. El compuesto preferente es metoxicinamato de etilhexilo, también denominado Octoxinate o metoxicinamato de octilo. El compuesto se puede adquirir de 10 Givaudan Corporation bajo el nombre comercial Parsol® MCX, o de BASF bajo el nombre comercial Uvinul® MC 80.

También son adecuados los derivados de mono-, di-y trietanolamina de dichos metoxicinamatos, incluyendo metoxicinamato de dietanolamina. También es aceptable cinoxato, el derivado de éter aromático del compuesto anterior. Si está presente, el cinoxato se debe encontrar en no más de aproximadamente un 3% en peso de la composición total.

15 También son adecuados como agentes de protección frente a UVB diversos derivados de benzofenona que tienen la fórmula general:

imagen11

en la que R a R9 son cada uno independientemente H, OH, NaO3S, SO3H, SO3Na, Cl, R", OR", donde R" es alquilo C1-20 de cadena lineal o ramificada. Los ejemplos de dichos compuestos incluyen benzofenona 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,

20 10, 11 y 12. Es particularmente preferente si el derivado de benzofenona es benzofenona 3 (también denominada oxibenzona), benzofenona 4 (también denominada sulisobenzona), benzofenona 5 (sulisobenzona sódica) y similares. La más preferente es benzofenona 3.

También son adecuados determinados derivados de salicilato de mentilo que tienen la fórmula general:

imagen12

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

o polihídricos de cadena corta; alcoholes (C12-40) de ácidos grasos saturados o insaturados, alifáticos o aromáticos, de colesterol; etcétera.

En un modo de realización, el alcohol es colesterol, o un alcohol de ácido graso saturado o insaturado, alifático o aromático, que puede tener desde 6 a 40, preferentemente desde aproximadamente 10 a 30, más preferentemente desde aproximadamente 12 a 22 átomos de carbono. Los ejemplos incluyen alcohol oleílico, alcohol cetearílico, alcohol cetílico, alcohol estearílico, alcohol isoestearílico, alcohol behenílico y similares. Los ejemplos de dichos ingredientes incluyen Oleth 2-100; Steareth 2-100; Beheneth 5-30; Ceteareth 2-100; Ceteth 2-100; Choleth 2-100 en los que el intervalo numérico quiere decir el número de unidades de repetición de óxido de etileno, por ejemplo, Ceteth 2-100 quiere decir Ceteth donde el número de unidades de repetición de óxido de etileno varía desde 2 a 100. También son adecuados los derivados de alcoholes alcoxilados, tales como ésteres de ácido fosfórico de los mismos.

Algunos tensioactivos orgánicos no iónicos preferentes incluyen Oleth-3, Oleth-5, fosfato de Oleth-3, Choleth-24; Ceteth-24; etcétera.

También son adecuados los alcoholes alcoxilados formados con alcoholes mono-, di-o polihídricos de cadena corta, por ejemplo, los que tienen desde aproximadamente 1 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos incluyen glucosa, glicerina o derivados alquilados de las mismas. Los ejemplos incluyen glycereth 2-100; gluceth 2-100; metil gluceth 2-100, etcétera. Son más preferentes metil gluceth-20; glicereth-26 y similares.

Otros tipos de alcoholes alcoxilados son tensioactivos adecuados, incluyendo polímeros de óxido de etileno que tienen números variables de grupos de repetición de OE, generalmente denominados PEG 12 a 200. Es más preferente PEG-75, que se puede adquirir de Dow Chemical bajo el nombre comercial Carbowax PEG-3350.

Otros tensioactivos no iónicos adecuados incluyen derivados de sorbitano alcoxilado y sorbitano alcoxilado. Por ejemplo, la alcoxilación, en particular, la etoxilación de sorbitano, proporciona derivados de sorbitano polialcoxilado. La esterificación de sorbitano polialcoxilado proporciona ésteres de sorbitano, tales como los polisorbatos. Por ejemplo, el sorbitano polialcoxilado se puede esterificar con ácidos grasos C6-30, preferentemente C12-22. Los ejemplos de dichos ingredientes incluyen los polisorbatos 20-85, oleato de sorbitano, sesquioleato de sorbitano, palmitato de sorbitano, sesquiisoestearato de sorbitano, estearato de sorbitano, etcétera.

2. Tensioactivos de silicona o silano

También son adecuados diversos tipos de tensioactivos basados en silicona o silano. Los ejemplos incluyen organosiloxanos sustituidos con grupos óxido de etileno u óxido de propileno, tales como PEG dimeticonas que son dimeticonas sustituidas con polietilenglicoles, incluyendo los que tienen las denominaciones INCI de PEG-1 dimeticona; PEG-4 dimeticona; PEG-8 dimeticona; PEG-12 dimeticona; PEG-20 dimeticona; etcétera.

También son adecuados los silanos sustituidos con grupos etoxi o grupos propoxi o ambos, tales como diversos tipos de PEG metil éter silanos, tales como bis-PEG-18 metil éter dimetilsilano; etcétera.

Otros ejemplos de tensioactivos basados en silicona incluyen los que tienen los nombres genéricos dimeticona copoliol; cetil dimeticona copoliol; etcétera.

D. Extractos botánicos

Puede ser deseable incorporar uno más extractos botánicos adicionales en la composición. Si están presentes, los intervalos sugeridos son desde aproximadamente un 0,0001 a un 20 %, preferentemente desde aproximadamente un 0,0005 a un 15 %, más preferentemente desde aproximadamente un 0,001 a un 10 %. Los extractos botánicos adecuados incluyen extractos de plantas (hierbas, raíces, flores, frutos, semillas), tales como flores, frutos, verduras, etcétera, incluyendo extracto de fermento de levadura, extracto de Padina Pavonica, extracto de fermento de Therms Thermophilis, aceite de semilla de Carnelina Sativa, extracto de Boswellia Serrata, extracto de oliva, extracto de Acacia Dealbata, Acer Saccharinum (arce azucarero), Acidopholus, Acorus, Aesculus, Agaricus, Agave, Agrimonia, algas, áloe, cítricos, Brassica, canela, naranja, manzana, arándano americano, arándano rojo, melocotón, pera, limón, lima, guisantes, algas marinas, cafeína, té verde, manzanilla, corteza de sauce, mora, amapola, y los expuestos en las páginas 1646 a 1660 del CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, octava edición, volumen 2. Los ejemplos específicos adicionales incluyen, pero no están limitados a Glycyrrhiza Glabra, Salix Nigra, Macrocycstis Pyrifera, Pyrus Malus, Saxifraga Sarrraentosa, Vitis Vinifera, Morus Nigra, Scutellaria Baicalensis, Anthemis Nobilis, Salvia Sclarea, Rosmarinus Officianalis, Citrus Medica Limonum, Panax Ginseng, Siegesbeckia Orientalis, Fructus Mume, Ascophyllum Nodosum, Glycine Soja extract, Beta Vulgaris, Haberlea Rhodopensis, Polygonum Cuspidaturn, Citrus Aurantium Dulcis, Vitis Vinifera, Selaginella Tamariscina, Humulus Lupuhus, Citrus Reticulata Peel, Punica Granatum, Asparagopsis, Curcuma Longa, Menyanthes Trifoliata, Helianthus Annuus, Hordeum Vulgare, Cucumis Sativus, Evernia Prunastri, Evernia Furfuracea, Kola Acuminata y mezclas de los mismos.

E. Materiales biológicos

También son adecuados diversos tipos de materiales biológicos, tales como los derivados de células, materiales fermentados, etcétera. Si están presentes, dichos materiales pueden variar desde aproximadamente un 0,001 a un

imagen13

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

4.702.844, ambas de las cuales se incorporan en el presente documento por referencia en su totalidad. Entre estos polímeros anfifílicos aniónicos, los polímeros formados de un 20 a un 60 % en peso de ácido acrílico y/o ácido metacrílico, de un 5 a un 60 % en peso de metacrilatos de alquilo inferiores, de un 2 a un 50 % en peso de éter alílico que contiene una cadena de ácido graso como se menciona anteriormente y de un 0 a un 1 % en peso de un agente de reticulación que es un monómero insaturado polietilénico copolimerizable bien conocido, por ejemplo, ftalato de dialilo, (met)acrilato de alilo, divinilbenceno, dimetacrilato de (poli)etilenglicol y metilenbisacrilamida. Un ejemplo comercial de dichos polímeros son terpolimeros reticulados de ácido metacrílico, de acrilato de etilo, de éter de polietilenglicol (que tiene 10 unidades de OE) de alcohol estearílico o steareth-10, en particular, aquellos en venta por la empresa Allied Colloids bajo los nombres SALCARE SC80 y SALCARE SC90, que son emulsiones acuosas que contienen un 30 % de un terpolímero reticulado de ácido metacrílico, de acrilato de etilo y éter alílico de steareth-10 (40/50/10).

También son adecuados los copolímeros de acrilato, tales como poliacrilato-3, que es un copolímero de ácido metacrílico, metilmetacrilato, isopropilisocianato de metilestireno y monómeros de PEG-40 behenato; poliacrilato-10 que es un copolímero de acriloildimetiltaurato de sodio, acrilato de sodio, monómeros de acrilamida y vinilpirrolidona; o poliacrilato-11, que es un copolímero de acriloildimetilacriloildimetiltaurato de sodio, acrilato de sodio, acrilato de hidroxietilo, acrilato de laurilo, acrilato de butilo y monómeros de acrilamida.

También son adecuados los polímeros reticulados basados en acrilato, donde uno o más de los grupos acrílicos pueden tener grupos alquilo de cadena larga (tales como 6-40, 10-30 y similares) sustituidos, por ejemplo, el polímero reticulado de acrilatos/acrilato de alquilo C10-30 que es un copolímero de acrilato de alquilo C10-30 y uno o más monómeros de ácido acrílico, ácido metacrílico, o uno de sus ésteres simples reticulado con éter alílico de sacarosa o éter alílico de pentaeritritol. Dichos polímeros están habitualmente en venta bajo los nombres comerciales Carbopol o Pemulen y tienen la denominación CTFA de carbómero.

También son adecuados los espesantes poliméricos basados en acrilato en venta por Clariant bajo la marca comercial Aristoflex, tales como Aristoflex AVC, que es un copolímero de acriloildimetiltaurato de amonio/VP; Aristoflex AVL que es el mismo polímero encontrado en AVC dispersado en mezcla que contiene triglicéridos caprílico/cápricos, trilaureth-4, poligliceril-2-sesquiisoestearato; o Aristoflex HMB que es polímero reticulado de acriloildimetiltaurato de amonio/metacrilato de beheneth-25 y similares.

3. Poliglicerinas o PEG de alto peso molecular

También son adecuados como los agentes espesantes en fase acuosa diversos derivados de polietilenglicoles (PEG) donde el grado de polimerización varía desde 1.000 a 200.000. Dichos ingredientes se indican con la designación "PEG", seguida del grado de polimerización en miles, tal como PEG-45M, lo que quiere decir PEG que tiene 45.000 unidades de repetición de óxido de etileno. Los ejemplos de derivados de PEG adecuados incluyen PEG 2M, 5M, 7M, 9M, 14M, 20M, 23M, 25M, 45M, 65M, 90M, 115M, 160M, 180M y similares.

También son adecuadas las poliglicerinas que son restos de repetición de glicerina, donde el número de restos de repetición varía desde 15 a 200, preferentemente desde aproximadamente 20-100. Los ejemplos de poliglicerinas adecuados incluyen las que tienen las denominaciones CFTA de poliglicerina-20, poliglicerina-40 y similares.

G. Aceites

En el supuesto de que las composiciones de la invención estén en forma de emulsión, la composición comprende una fase de aceite. Los ingredientes oleosos son deseables por las propiedades protectoras y de hidratación de la piel. Los aceites adecuados incluyen siliconas, ésteres, aceites vegetales, aceites sintéticos, incluyendo pero no limitados a los expuestos en el presente documento. Los aceites pueden ser volátiles o no volátiles, y están preferentemente en forma de un líquido colable a temperatura ambiente. El término "volátil" quiere decir que el aceite tiene una presión de vapor medible, o una presión de vapor de al menos aproximadamente 2 mm de mercurio a 20 °C. El término "no volátil" quiere decir que el aceite tiene una presión de vapor de menos de aproximadamente 2 mm de mercurio a 20 °C.

1. Aceites volátiles

Los aceites volátiles adecuados tienen generalmente una viscosidad que varía desde aproximadamente 0,5 a 5 centistokes a 25 °C y se incluyen siliconas lineales, siliconas cíclicas, hidrocarburos parafínicos o mezclas de los mismos.

(a). Siliconas volátiles

Las siliconas cíclicas son un tipo de silicona volátil que se puede usar en la composición. Dichas siliconas tienen la fórmula general:

imagen14

imagen15

imagen16

imagen17

imagen18

queratinocitos debido a cualquiera de las condiciones anteriores y también mejora la longevidad y viabilidad de los queratinocitos.

La composición se puede aplicar a la piel una o más veces al día. Por ejemplo, la composición se puede aplicar a la piel por la mañana antes de comenzar las actividades diarias y/o por la noche antes de retirarse. La composición se puede

5 aplicar como parte de un tratamiento; es decir, se limpia la piel y se trata con tónico, después de lo cual se aplica la composición de la invención. La composición puede ser parte de un kit que contiene un limpiador, tónico y la composición de la invención.

Preferentemente, la composición se aplica a la cara y/o cuello y escote antes de retirarse para reparar los queratinocitos con ADN dañado y proporcionar una mejora general de la piel. Cuando se aplica antes de retirarse, los 10 activadores del gen CLOCK o PER1 en la composición activan los genes de los queratinocitos en un momento en el que sean menos activos o inactivos en el ciclo del ritmo circadiano normal. A su vez, dicha activación de los genes CLOCK y PER1 en este momento promueve la reparación mejorada de los queratinocitos con ADN dañado. Esto, a su vez, promueve la longevidad y viabilidad celular. De esta manera, se consigue la máxima reparación de los queratinocitos humanos. La combinación de los activadores del gen CLOCK o PER1 con enzimas de reparación del

15 ADN en una composición usada para tratar la piel facial en la noche antes de retirarse maximiza la reparación de los queratinocitos debida a daños en el ADN y también promueve la salud, longevidad y viabilidad celular.

La invención se describirá adicionalmente en conexión con los siguientes ejemplos que únicamente se exponen con propósitos de ilustración.

Ejemplo 1

20 Se preparó como sigue una composición para el tratamiento de la piel:

Ingrediente

% p/p

Fosfato de Oleth-3

0,45

Oleth-3

0,35

Oleth-5

0,24

Butilenglicol

0,20

Escualano

0,50

BHT

0,10

Metoxicinamato de etilhexilo

0,10

Choleth-24/ceteth-24

0,10

Trietanolamina

0,11

Palmitato de retinilo/aceite de Zea mays (maíz)/BHT/BHA

0,10

Butilenglicol

1,1

Manzanilla

0,03

Bisabolol

0,10

Agua

QS

Metilparabeno

0,46

PEG-75

4,00

Bis-PEG-18 metil éter dimetil silano

2,00

Glycereth-26

1,00

Metil gluceth-20

4,00

EDTA trisódico

0,10

Pantetina

0,14

Cafeína

0,05

Goma xantana

0,075

Carbómero

0,26

5

10

15

20

25

30

Trietanolamina

0,50

Fenoxietanol 1

0,70

Alcohol bencílico

0,10

Lisado de fermento de bífidus

9,40

Agua/lisado de fermento de bífidus/lecitina hidrogenada

3,00

Butilenglicol/agua/extracto de Cola AcuKcminata

3,00

Ácido ribonucleico de sodio

0,01

Agua/butilenglicol/tripéptido-32

0,20

Fermento de Lactobacillus/lecitina/agua

0,05

Agua/extracto de Arabidopsis Thaliana/lecitina

0,05

Fenoxietanol

0,02

Hialuronato de sodio

0,01

FD&C rojo n.º 4 (solución acuosa al 1 % con butilenglicol)

0,04

FD&C amarillo n.º 5 (solución acuosa al 1 % con butilenglicol)

0,09

FD&C verde n.º 5 (solución acuosa al 0,1 % con butilenglicol)

0,001

La composición se preparó combinando los ingredientes y mezclándolos bien para formar un líquido. La composición se almacenó en botellas de vidrio marrones.

Ejemplo 2

Se activaron los genes CLOCK y PER1 en los queratinocitos humanos exponiendo los queratinocitos a Chronolux®, entonces exponiendo las células a la luz UV para averiguar el impacto de la activación de los genes sobre los queratinocitos expuestos a luz UV.

Se cultivaron queratinocitos humanos normales en medio Epilife® que contenía complemento de crecimiento de queratinocitos humanos (S001-5) (Invitrogen -Gibco Cell Culture, Portland, Oregon). Se cultivaron las células en placas de 96 pocillos (Costar®) y se pretrataron con 0, 0,01, 0,1 y 1 mg/ml de Chronolux® en polvo diluido en el medio Epilife® y se incubaron durante la noche a 37 °C en un 5 % de CO2. Después de 24 horas, se aspiró el medio y se lavaron una vez los queratinocitos en solución salina tamponada con fosfato (PBS) de Dulbecco. Se añadieron 100 ml de PBS a cada pocillo y las células se sometió a irradiación UV solar simulada a 80 minutos de exposición. Después de la irradiación, se retiró la PBS y se postrataron los queratinocitos con Chronolux® de nuevo a las mismas diluciones que antes y se incubaron durante la noche a 37 °C en un 5 % de CO2.

Las células se sometieron a ensayo al día siguiente para determinar la viabilidad utilizando el reactivo MTS (CellTiter96, Promega), 100 ul por pocillo. Se tomaron lecturas de absorbancia en el espectrofotómetro SpectraMax190 (Molecular Devices) a 490 nm después de una incubación de dos horas aproximadamente a 37 °C en un 5% de CO2.

Los resultados se exponen en la figura 1 y muestran que la supervivencia celular se incrementó significativamente después de la exposición a UV cuando las células se trataron con dosis variables de Chronolux® antes de dicha exposición a UV. De esta manera, la exposición de los queratinocitos humanos a tripéptido-32 antes de la exposición a UV mejora significativamente la supervivencia celular tras la exposición a luz UV.

Ejemplo 3

Los queratinocitos humanos a la misma concentración que en el experimento previo se trataron con Chronolux® en diluciones variables y se expusieron a luz UV para averiguar el impacto de Chronolux® sobre la inhibición de los daños por UV en los queratinocitos.

Se cultivaron queratinocitos humanos normales (HEKn) en medio Epilife® con complemento de crecimiento de queratinocitos humanos. Se subcultivaron las células a aproximadamente un 70 % de confluencia en una placa de 96 pocillos y se dejó que incubaran durante la noche a 37 °C.

Se pretrataron los queratinocitos con 1 mg/ml de solución de Chronolux® (1 mg/ml de solución acuosa) y con una mezcla que contenía 1 mg/ml de Chronolux®, un 10 % de lisado de fermento de bífidus, Adasomes® al 1 % (una mezcla de un 98,26 % de agua, un 0,5 % de lecitina, un 0,5 % de fermento de Lactobacillus, un 0,375 % de

5

10

15

20

25

30

35

40

45

fenoxietanol, un 0,04 % ácido sórbico y un 0,325 % de caprililglicol) y Roxisomes® al 1 % (una mezcla de un 98 % de agua, un 0,5 % de lecitina y un 0,1 % de fenoxietanol) en solución acuosa. Se sometió a prueba esta mezcla sin diluir y en diluciones de 1:2, 1:4 y 1:8.

Se incubaron los queratinocitos tratadas durante la noche a 37 °C y un 5 % de CO2. Después de 24 horas, se aspiraron las células y se lavaron una vez los queratinocitos en PBS, después de lo cual se añadieron 100 µl de PBS a cada pocillo. Las células se irradiaron con UVB a 150 mJ/cm2. Después de la irradiación, se retiró la PBS; los queratinocitos se pretrataron de nuevo como se expone previamente y se incubaron durante la noche a 37 °C en un 5 % de CO2.

Las células se sometieron a ensayo al día siguiente para determinar la viabilidad utilizando el reactivo MTS (CellTiter96, Promega). Se tomaron lecturas de absorbancia en el espectrofotómetro SpectraMax190 (Molecular Devices) a 490 nm después de una incubación de dos horas aproximadamente a 37 °C; un 5 % de CO2.

Los resultados se exponen en la figura 2 y demuestran que la mezcla de tripéptido-32, lisado de fermento de bífidus, Adasomes® y Roxisomes® proporcionaron un incremento dependiente de la dosis en la protección frente al estrés por UVB, por ejemplo, longevidad y viabilidad celular. La mezcla sin diluir proporcionó un incremento de un 86 % en la viabilidad celular en comparación con Chronolux® solo en la radiación de 150 mJ/cm2 de UVB. Se puede concluir que cuando los queratinocitos humanos se trataron con la mezcla, proporcionó un efecto sinérgico que incrementó significativamente la protección frente al estrés por UVB.

Ejemplo 4

Se expuesieron queratinocitos humanos a una composición de la invención (Chronolux® al 0,1 %, lisado de fermento de bífidus al 12,4 %, Adasomes® al 0,05 %, Roxisomes® al 0,05 %; denominada "ANR nueva") y una composición que contenía únicamente lisado de fermento de bífidus (un 21,4 %; denominada "ANR previa") y entonces se irradió con luz UVB para determinar cuán eficazmente las composiciones inhibían los daños en el ADN en los queratinocitos debidos a la luz UVB.

Se cultivaron queratinocitos humanos normales (HEKn) en medio Epilife® con complemento de crecimiento de queratinocitos humanos. Se subcultivaron las células a aproximadamente un 70 % de confluencia en una placa de 96 pocillos (Costar) y se dejó que incubaran durante la noche a 37 °C.

Se pretrataron los queratinocitos con lisado de fermento de bífidus (solución acuosa al 12,4 %) por sí mismo (ANR previa), y una mezcla de lisado de fermento de bífidus (12,4 %), Chronolux® (1 mg/ml), Adasomes® (0,05 %) y Roxisomes® (0,05 %) diluida en medios Epilife®.

Se incubaron los queratinocitos tratados a 37 °C en un 5% de CO2. Después de 24 horas, se aspiraron las células y se lavaron una vez los queratinocitos en PBS de Dulbecco, después de lo cual se añadieron 100 µl de PBS a cada pocillo. Las células se sometieron a irradiación con UVB en 150 y 200 mJ/cm2 de UVB. Después de la irradiación, se retiró la PBS. Se repitió el pretratamiento y se incubaron los queratinocitos durante aproximadamente 30 horas a 37 °C en un 5 % de CO2.

Las células se sometieron a ensayo al día siguiente para determinar la viabilidad utilizando el reactivo MTS (CellTiter96, Promega). Se tomaron lecturas de absorbancia en el espectrofotómetro SpectraMax190 (Molecular Devices) a 490 nm después de una incubación de dos horas aproximadamente a 37 °C; un 5 % de CO2.

Los resultados se exponen en la figura 3 y demuestran un incremento de aproximadamente un 15 % de la supervivencia celular observado tanto en 150 y 200 mJ/cm2 de UVB en las células tratadas con el complejo de ANR nueva en comparación con la ANR previa. Se puede concluir que el complejo de ANR nueva proporcionó más protección significativa frente al estrés por UVB en comparación con la versión previa. La adición de la Chronolux®, Adasomes® y Roxisomes® al extracto de bifidus proporcionó un incremento significativo en la supervivencia celular frente al bifidus solo encontrada en el complejo de ANR previa.

Aunque la invención se ha descrito en conexión con el modo de realización preferente, no pretende limitar el alcance de la invención a la forma particular expuesta, sino, por el contrario, pretende cubrir dichas alternativas, modificaciones y equivalentes que se puedan incluir en el alcance de la invención como se define mediante las reivindicaciones adjuntas.

Claims (1)

1. imagen1

   imagen2

   imagen3