ES2601681T3 - Nuevos medicamentos de uso tópico basados en ácido hialurónico sulfatado como agente de activación o inhibición de la actividad de las citoquinas - Google Patents

Nuevos medicamentos de uso tópico basados en ácido hialurónico sulfatado como agente de activación o inhibición de la actividad de las citoquinas Download PDF

Info

Publication number
ES2601681T3
ES2601681T3 ES10721126.0T ES10721126T ES2601681T3 ES 2601681 T3 ES2601681 T3 ES 2601681T3 ES 10721126 T ES10721126 T ES 10721126T ES 2601681 T3 ES2601681 T3 ES 2601681T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
hyaluronic acid
sulfation
has3
accordance
skin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES10721126.0T
Other languages
English (en)
Inventor
Matteo D'este
Giovanni Gennari
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fidia Farmaceutici SpA
Original Assignee
Fidia Farmaceutici SpA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fidia Farmaceutici SpA filed Critical Fidia Farmaceutici SpA
Application granted granted Critical
Publication of ES2601681T3 publication Critical patent/ES2601681T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/136—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline having the amino group directly attached to the aromatic ring, e.g. benzeneamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73—Polysaccharides
    • A61K8/735—Mucopolysaccharides, e.g. hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A61K9/006—Oral mucosa, e.g. mucoadhesive forms, sublingual droplets; Buccal patches or films; Buccal sprays
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
    • A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q1/00—Make-up preparations; Body powders; Preparations for removing make-up
    • A61Q1/02—Preparations containing skin colorants, e.g. pigments
    • A61Q1/04—Preparations containing skin colorants, e.g. pigments for lips
    • A61Q1/06—Lipsticks
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01035—Hyaluronoglucosaminidase (3.2.1.35), i.e. hyaluronidase

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)

Abstract

Ácido hialurónico sulfatado de uso tópico para el tratamiento de hidratación de patologías de la piel caracterizadas por sequedad, liquenificación, dicho ácido hialurónico sulfatado (HA) que tiene un peso molecular en el intervalo de 150.000 a 250.000 Da y un grado de sulfatación igual a 1 o 3, previsto como el número de grupos sulfato por unidad de disacárido, la sulfatación que implica a los hidroxilos del alcohol presentes en la cadena del polisacárido.

Description

5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
DESCRIPCION
Nuevos medicamentos de uso topico basados en acido hialuronico sulfatado como agente de activacion o inhibicion de la actividad de las citoquinas
Campo de la invencion
Desde hace muchos anos, la literatura cientlfica/patente ha estado estudiando y describiendo el acido hialuronico sulfatado que se obtiene a partir de acido hialuronico (HA) adecuadamente sulfatado de conformidad con lo que se describe en el estado de la tecnica (EP0940410B1 y EP0702699B1), al que se atribuyen efectos anticoagulantes. HAS ademas puede obtenerse mediante la deacetilacion y posterior sulfatacion de la glucosamina de HA (definido como HANS) (EP0971961B1), para la produccion de artlculos quirurgicos y composiciones farmaceuticas. Las patentes EP0754460B1 y EP1385492B1 ademas son conocidas, en las que el uso de HAS se describe en patologlas tales como, por ejemplo, ARDS (insuficiencia respiratoria aguda), reumatismo articular y artritis reumatoide.
Ademas el documento JP 2000 178196 A (Seikagaku Kogyo Co Ltd; 27 Junio 2000) describe el uso de polisacaridos sulfurados, que tienen una MW de 7500 y 17000 D, como inhibidores de la enzima hialunoridasa en el tratamiento de la dermatitis atopica.
Un objetivo de la presente invencion se refiere a HAS de uso topico como agente regulador de la actividad de citoquinas, segun el Solicitante ha descubierto la capacidad exclusiva de HAS de modular la actividad de citoquinas particulares (tanto pro como antiinflamatoria), ha estudiado su mecanismo de accion y revelo la diferencia esencial entre los dos tipos de producto sulfatado (HAS y HA-NS).
Desde 1970, los cientlficos han entendido que las poblaciones de celulas linfoides seleccionadas pueden producir y liberar en el lecho circulatorio, moleculas de naturaleza proteica no asimilables a los anticuerpos, que se definen con el termino "citoquinas". Ellas representan un nuevo tipo de "hormona", capaz de actuar sobre diferentes objetivos celulares en numerosas regiones del cuerpo.
La progresion de conocimientos cientlficos relacionados con la slntesis y funciones biologicas/bioqulmicas de estas protelnas, ha alterado la "vieja" vision del sistema inmunologico (I.S.) del mismo mundo cientlfico y ha abierto nuevos horizontes en la comprension de sus numerosas funciones, creando as! nuevas perspectivas para el tratamiento de diferentes patologlas, topicas y/o sistemicas, que comprende ademas nuevas posibilidades terapeuticas relacionadas con la inmunoterapia del cancer.
La celula central del I.S., es el linfocito, que representa aproximadamente el 20 % de todos los globulos blancos y, sobre la base de sus diferentes funciones, forma 3 grupos: linfocito B, linfocito T y linfocito asesino. Muchas citoquinas son protelnas solubles producidas por los linfocitos y/o monocitos, capaces de actuar contra otras celulas/tejidos situados ademas muy lejos de su lugar de produccion. Tienen funciones inmunologicas, de hecho, y ademas funciones de regulacion en la slntesis de otras citoquinas por parte de las diferentes celulas del I.S. o celulas objetivos implicadas en la cascada de reacciones iniciadas por el I.S.
Numerosas citoquinas diferentes han sido estudiadas hasta ahora, que tienen ademas numerosos acronimos diferentes, pero las estudiadas, en particular por el Solicitante son: La interleuquina 1 y 2, interleuquina 6, 7 y 12, de aqul en adelante definidas como IL-1, IL-2, IL-6, IL-7 e IL-12 que, con tNf, se definen como citoquinas de naturaleza inflamatoria, mientras que la interleuquina 10 (IL-10) por el contrario, es una citoquina con fuertes propiedades anti- inflamatorias.
La primera citoquina que se estudio fue sin duda la IL-1: presente en dos formas a y p, que es un potente inductor de procesos proinflamatorios (sistemico y/o cutaneo). Se produce principalmente por los linfocitos B, T y macrofagos despues del estlmulo bacteriano o estimulacion por parte de otros agentes que incluyen otras citoquinas; ademas se secreta a partir de los neutrofilos perifericos, celulas endoteliales, epiteliales y del musculo liso, fibroblastos, celulas de Langerhans de la piel, osteoclastos, sinoviocitos y muchos otros tipos de celulas. Ambas formas se unen al mismo receptor y tienen actividades biologicas si no identicas, muy similares. Muchas de sus funciones proinflamatorias se vinculan a la estimulacion de otras citoquinas, tales como IL-6 e IL-8, y su mucha slntesis puede inducirse por citoquinas tales como TNF, interferon, endotoxinas bacterianas, virus y diferentes tipos de otros antlgenos. Se implica en el choque septico pero ademas hay que senalar que los estudios recientes han demostrado que la IL-1 es capaz de activar la expresion de algunos oncogenes y consecuentemente participar en la patogenesis de las neoplasias. Se combina con otras citoquinas, IL-1 por tanto representa uno de los mayores mediadores de los procesos inflamatorios: estimula las celulas T, de hecho, para producir IL-2 y las celulas B para producir inmunoglobulinas. Ademas se implica en la patogenesis de la artritis reumatoide y la artrosis: altas cantidades de IL-1 de hecho se han encontrado en el llquido sinovial de pacientes afectados por artritis reumatoide y/o osteoartrosis. Ademas es activa en numerosas patologlas de una naturaleza prevalentemente cutanea, tales como dermatitis generalmente, dermatitis atopica y psoriasis. Por ultimo, participa en el establecimiento de dano vascular, tales como trombosis venosa y esta presente en todos los vasos con patologlas del tipo arterio/arterioesclerotico. Los antagonistas de los receptores actualmente ya estan en uso cllnico (y
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
ademas estan siendo experimentados) para esta citoquina, como el bloqueo del receptor resulta ser una manera efectiva de tratar estas patologias en las que IL-1 esta entre los protagonistas.
TNF: El factor de necrosis es parte del grupo de citoquinas que promueve la fase de la inflamacion sistemica aguda. TNF por lo tanto, se implica en un numero extremadamente amplio de procesos tales como la proliferacion celular, diferenciacion y apoptosis, carcinogenesis y replicacion viral.
Se produce principalmente por los macrofagos y por una serie de otros tipos de celulas que incluyen mastocitos, celulas linfoides, celulas musculares y endoteliales, fibroblastos y celulas nerviosas. Su sintesis puede estimularse por endotoxinas bacterianas, otras citoquinas tales como IL-2, Interferon e IL-1, y puede inhibirse por esteroides.
Al actuar sobre numerosos organos y sistemas, generalmente junto con otras citoquinas, participa en el establecimiento y la regulacion de muchos procesos patogenicos:
- modula la expresion de muchas proteinas y citoquinas importantes, tales como IL-1 e IL-6, resultando asi implicado en patologias cutaneas tales como vitiligo, eczema, psoriasis y dermatitis generalmente;
- estimula la sintesis de colagenasis en los sinoviocitos y por esta razon, las grandes cantidades de TNF se han encontrado en los liquidos sinoviales de pacientes que sufren de artrosis y artritis reumatoide;
- activa los osteoclastos y por lo tanto induce la reabsorcion del hueso, (osteoporosis);
- atrae fuertemente los neutrofilos y les ayuda a adherirse a las celulas endoteliales para extravasarse;
- estimula la produccion macrofagica de moleculas con una accion oxidante;
- se implica particularmente en patologias del sistema cardiocirculatorio que participan en la formacion de trombosis venosa, en la patogenesis de la arteriosclerosis y vasculitis;
El TNF es capaz de unirse a si mismo a dos receptores, TNF-R1 (receptor de TNF tipo 1) y TNF-R2 (receptor de TNF tipo 2), que se expresan en todas las celulas somaticas que excluyen los eritrocitos. En resumen, el TNF promueve la respuesta inflamatoria tanto sistemica como cutanea, que a su vez desencadena numerosas patologias ademas de naturaleza autoinmune, tales como artritis reumatoide, enfermedad de Crohn, psoriasis y asma. La investigacion cientifica ha intentado hasta ahora perfeccionar los farmacos "biologicos" (tales como, por ejemplo, anticuerpos monoclonales) que inhiben la sintesis de TNF y/o bloquean su receptor.
IL-2: esta es una citoquina aterogenica altamente proinflamatoria, producida principalmente por los linfocitos T, cuya sintesis se inhibe por esteroides y ciclosporinas. IL-2 tiene un papel central en la regulacion de la respuesta inmunologica: estimula de hecho la sintesis de IFN en los leucocitos perifericos e induce la produccion de IL-1 y TNF. IL- 2 ademas puede danar la barrera hematoencefalica y la integridad del endotelio de los vasos cerebrales, causando trastornos neuropsiquiatricos tales como la desorientacion y depresion.
Existen consecuentemente numerosas patologias que se han asociado con una produccion aberrante de IL-2, tales como linfoma de Hodgkin, esclerosis multiple, artritis reumatoide y Lupus eritematoso.
IL-6: producida por muchos tipos de celulas, sobre todo, es decir, con el TNF que es uno de los miembros mas importantes del grupo de mediadores quimicos de la fase aguda del proceso inflamatorio, y por lo tanto se implica en patologias con un fuerte componente inflamatorio, tal como el asma (en donde participa en la aparicion y mantenimiento del proceso inflamatorio), inflamacion intestinal cronica (enfermedad de Crohn), artritis reumatoide y artrosis. Como se afirmo anteriormente, de hecho, las citoquinas tales como TNF, IL-1 e IL-6 han demostrado estar implicadas en gran medida en el proceso de la osteoartrosis articular degenerativa, ya que tienen un papel principal en la regulacion de la expresion de metaloproteasas (responsables de la degradation del cartilago), en la produccion de prostaglandinas y en la activation osteoclastica y, por esta razon, los niveles altos de citoquinas han sido registrados en los Kquidos sinoviales de pacientes que sufren de artrosis y artritis reumatoide (R.A.). Estos descubrimientos han estimulado el uso de inhibidores en las interleuquinas anteriores y/o antagonistas de los receptores como una nueva estrategia de tratamiento de la patologia de la artrosis.
Por ultimo, estudios recientes han conectado el cancer con la longevidad, y revelado como algunos tumores se influencian por el tipo de situacion/cuantitativa de las proteinas citoquinas del paciente: en resumen, la evidencia reciente ha ligado un perfil de produccion baja de IL-10 y secretion alta de IL-6 con un deterioro de la supervivencia clinica de los pacientes afectados por patologias tumorales, mientras que un genotipo capaz de producir y mantener altos niveles de IL-10 pueden facilitar la supervivencia (Caruso C. y otros, Ann N.Y. Acad. sCi., 2004, 1028:1-13).
IL-7: una citoquina producida principalmente por las celulas del estroma de la medula osea, que ademas se secreta por el timo y queratinocitos. IL-7 induce la sintesis de citoquinas inflamatorias tales como IL-1, IL-6 y TNF, participando asi en la patogenesis de algunas enfermedades de la piel (tales como psoriasis y linfoma cutaneo) y el sistema osteoarticular, altos niveles de IL-7 de hecho, han sido encontrados en los pacientes que padecen de R.A.
IL-12: esta proteina ademas juega un papel central en la regulacion de las funciones del I.S. Actua de hecho en la diferenciacion de los linfocitos, induce la sintesis de Interferon y TNF, y su produccion puede inhibirse por la IL-10. La
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
sobreproduccion de esta protelna entra en la patogenesis de enfermedades de naturaleza autoinmune, tales como la colitis, artritis, diabetes dependiente de insulina, encefalomielitis, psoriasis y esclerosis multiple (Brahmachari S. y otros, Minerva Med., 2008, 99(2):105-118).
IL-10: producida principalmente por los linfocitos, es una citoquina de una naturaleza antiinflamatoria, capaz de inhibir la slntesis de IL-2 e Interferon producido por los linfocitos T. La accion antiinflamatoria de IL-10 ademas se revela en la capacidad de inhibir la slntesis de IL-1, IL-6, IL-8, IL-12 y TNF en los macrofagos estimulados con endotoxinas bacterianas. Las deficiencias de IL-10 se asocian con patologlas tales como la diabetes mellitus y las inflamaciones intestinales cronicas, tal como la enfermedad de Crohn. Evidencia reciente ha conducido a IL-10 que se experimenta ademas como un nuevo enfoque terapeutico para el tratamiento del Lupus eritematoso sistemico. Los niveles bajos de IL-10 se han observado en los tejidos cutaneos de los pacientes que sufren de patologlas tales como el vitiligo, psoriasis, eczema y dermatitis. Se deberla senalar que tanto los corticosteroides como la ciclosporina aumentan la produccion y/o liberacion de esta interleuquina partir de las celulas competentes relativas durante la terapia de inmunosupresion convencional para el tratamiento de inflamaciones y rechazo de organos (Zhou X. y otros, Current Drug Targets-Immune, Endocrine & Metabolic Disorders, 2005, 5(465475). Los datos experimentales ademas han demostrado su efectividad en la reduccion de la liberacion de prostaglandinas y la ciclooxigenasa inducidas in vitro por TNF en los sinoviocitos humanos, indicando as! la capacidad de IL-10 de reducir los procesos inflamatorios que implican las articulaciones afectadas por la degeneracion osteoartrosica (Alaaeddine N. y otros, Arthritis & Rheumatism, 1999, 42:710-718). Estudios recientes han confirmado su efectividad terapeutica hacia la patologla del asma en modelos animales experimentales de hiperreactividad bronquial, que muestra como esta citoquina tiene una alta potencialidad terapeutica en la reduccion de la inflamacion que caracteriza a las vlas respiratorias de los pacientes asmaticos, en los que las altas concentraciones de TNF , IL-1, IL-5, IL-6 y IL-8 se han encontrado en el llquido de lavado bronquial y/o en un nivel de suero y/o nivel de tejido (Stankiewicz W. y otros, Mediators of Inflammation, 2002, 11:307-312). Para esta interleuquina, por lo tanto se ha asumido el papel importante de citoquina reguladora del mantenimiento de la homeostasis inmunologica.
El asma puede ser una enfermedad extremadamente invalidante de la que aproximadamente 200 millones de personas en el mundo sufren, con mas de 5.000 muertes al ano. Es una patologla que se basa en una respuesta distorsionada del I.S. a factores ambientales, consecuentemente ligada a una produccion exacerbada de citoquinas pro-inflamatorias para el crecimiento y diferenciacion de mastocitos y eosinofilos con otros tipos de celulas del I.S.. Las causas de esta actividad fuera de equilibrio del sistema inmune todavla no se conocen por completo, no obstante, existen factores geneticos, ambientales, virales y ademas nutricionales que contribuyen de diferentes maneras al desarrollo de esta patologla. Consecuentemente, la busqueda de una terapia efectiva (terapia sistemica y/o local) para su prevencion y/o tratamiento que permite la suspension o la reduccion del uso de esteroides (terapia de tratamiento convencional), podrla representar una solucion valida tanto para las formas mas graves (ya que en cualquier caso permite una reduccion en el uso de esteroides) como para los casos menos graves, como podrla ser total la suspension de la terapia con esteroides.
Description detallada de la invention
Un objeto de la invencion es el acido hialuronico sulfatado de uso topico para el tratamiento de la hidratacion de patologlas de la piel caracterizadas por sequedad, liquenificacion, dicho acido hialuronico sulfatado (HA) que tiene un peso molecular en el intervalo de 150.000 a 250.000 Da y un grado de sulfatacion igual a 1 o 3, previsto como el numero de grupos sulfato por unidad de disacarido, la sulfatacion que implica los hidroxilos alcoholicos presentes en la cadena de polisacarido.
Un objeto adicional de la presente invencion es el acido hialuronico sulfatado de uso topico para la prevencion y/o tratamiento de patologlas de la piel asociadas con deficiencia de la defensa inmune de la IL-10 seleccionadas entre vitiligo, eczema, psoriasis y dermatitis, estimulando la sintesis de citoquinas antiinflamatorias, dicho acido hialuronico sulfatado (HA) que tiene un peso molecular en el intervalo de 150.000 a 250.000 Da o 500.000 a 750.000 Da y un grado de sulfatacion igual a 1, previsto como el numero de grupos sulfato por unidad de disacarido, la sulfatacion que implica los hidroxilos de alcohol presentes en la cadena de polisacarido.
El acido hialuronico sulfatado adecuado para los propositos de la presente invencion se prepara de conformidad con el proceso descrito en EP 702699 B1: la sulfatacion se realiza por medio del complejo SO3-piridina e implica los hidroxilos de alcohol presentes en la cadena de polisacaridos a partir de un HA que se deriva de cualquier fuente, por ejemplo, mediante la extraction a partir de crestas de gallo, ya sea fermentativamente o biotecnologicamente, y que tiene un peso molecular en el intervalo de 150.000 a 250.000 Da y 500.000 a 750.000 Da.
El derivado obtenido mantiene todas las caracteristicas fisicas del polimero de partida inalteradas, en particular, el peso molecular del HA de partida no se reduce por el proceso de sulfatacion permitiendo asi que se mantengan todas las caracteristicas fisicoquimicas del polisacarido de partida. La sulfatacion implica varios grupos hidroxilo de la unidad de disacarido y es por lo tanto posible obtener diferentes grados de sulfatacion, 0,5 a 3,5 (previsto como el numero de grupos sulfato por unidad de disacarido), variando la cantidad de SO3-piridina introducido como es conocido en el estado de la tecnica.
El derivado usado en todas las experimentaciones realizadas tiene un grado de sulfatacion 1 o grado 3 y se define de
4
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
aqul en adelante como HAS1 y HAS3. Todos los grupos carboxilo libres del HA pueden salificarse con cationes de un
origen organico y/o inorganico.
Ambos grados de HAS son solubles en agua y ademas pueden esterilizarse con las tecnicas normales conocidas por
los expertos en el campo, incluso si es preferentemente la esterilizacion usando un autoclave.
El Solicitante describe y reivindica HAS de uso topico en
• la prevencion y/o tratamiento de patologlas de la piel asociadas con la deficiencia inmune y, particularmente, la deficiencia de IL-10, tales como vitiligo, eczema, psoriasis y dermatitis generalmente, que estimula la slntesis de citoquinas antiinflamatorias.
Ademas se describe HAS de uso topico en:
• la prevencion y/o tratamiento topico del asma, asociado con la activacion de IL-1, IL-6 y TNF por inhalacion;
• la prevencion y/o tratamiento de patologlas de la piel asociadas con el dano al endotelio y/o pared de los vasos sangulneos debido, por ejemplo, a traumas, hemorragias vasculares de naturaleza superficial y/o de profundidad media con la consecuente formacion de coagulos y edemas;
• la prevencion y/o tratamiento cutaneo de enfermedades de la piel asociadas con el aumento/activacion de IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12 y TNF tales como, por ejemplo, dermatitis, dermatitis atopica, psoriasis, vitiligo, fotodermatitis, urticaria, todas las irritaciones de la piel (ademas gingivales) y eczema;
• la prevencion y/o tratamiento de enfermedades de naturaleza autoinmune, tales como psoriasis, asma y manifestation de la piel de Lupus eritematoso sistemico (LES) y discoide;
• la prevencion y/o tratamiento topico de las neoplasias de la piel tales como, por ejemplo, basalioma, sarcoma de Kaposi, carcinoma de celulas escamosas, linfoma cutaneo, micosis fungoide y la queratosis actinica;
• la prevencion y/o tratamiento topico de patologlas vasculares tales como, por ejemplo, vasculitis y esclerodermia, asociadas con la activacion de TNF, IL-1 e IL-6.
El Solicitante ha demostrado ademas de hecho, en las experimentaciones descritas a continuation, que:
• HAS es capaz tanto de estimular la production de ARNm nuevo como la slntesis de proteinas de citoquinas de naturaleza anti-inflamatoria (tales como, por ejemplo, IL-10), aumentando asi la capacidad de defensa inmune de las celulas y, consecuentemente de todo el organismo. La action antiinflamatoria de las citoquinas anteriores se revela en la capacidad de inhibir la sintesis de IL-1, IL-6, IL-8, IL-12 y TNF, todas las proteinas altamente proinflamatorias implicadas en numerosas patologias de la piel.
• HAS es efectivo tanto al disminuir la sintesis de ARNm nuevo como en al reducir significativamente la slntesis de proteinas de IL-2, IL-7 e IL-12, en situaciones en las que no se solicita una respuesta inmune y, en particular eventos de estres inflamatorio en el que las celulas responden produciendo una cascada de citoquinas: especialmente en este caso, los datos presentados revelan el mayor efecto de HAS.
• HAS es efectivo al inhibir la union de TNF, IL-1 e IL-6 a su receptor. Estos resultados son de importancia fundamental, ya que demuestran que el comportamiento del producto sulfatado es completamente analogo a los anticuerpos monoclonales especlficos para los receptores de las proteinas proinflamatorias anteriores, por lo tanto, capaces de bloquear su funcion, pero al mismo tiempo no teniendo esta especificidad del anticuerpo. Este bloqueo del receptor representa la forma mas efectiva de antagonizar los efectos proinflamatorios y tumorales del factor TNF, IL-1 e IL-6, abriendo nuevos horizontes para la experimentation clinica, permitiendo el perfeccionamiento de nuevos enfoques terapeuticos en el tratamiento y/o la prevencion de un numero extremadamente grande de patologlas, teniendo en cuenta el papel que TNF, IL-1 e IL-6 juegan en la aparicion y la progresion de numerosas enfermedades sistemicas y de la piel.
Ademas se describe HAS de uso topico en:
• la prevencion y/o tratamiento de Herpes Simple labialis y Herpes genitalis;
• la prevencion y/o el tratamiento del virus de la estomatitis vesicular;
• la prevencion y/o tratamiento de Citomegalovirus.
Se describe ademas el uso de HAS como un agente fibrinolltico para la degradation de los coagulos de fibrina que se forman en un nivel cutaneo (superficie y/o en la profundidad) despues de la rotura del endotelio y/o de la pared de los capilares y/o pequenos vasos, debido a traumas mecanicos y/o hemorragias de una entidad media/pequena.
Un objeto adicional de la presente invention se refiere a HAS de uso topico como un agente altamente deshidratante para el tratamiento de todas las patologlas de la piel caracterizadas por sequedad y liquenificacion.
El Solicitante ha demostrado de hecho que:
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
• la sulfatacion del acido hialuronico aumenta esencialmente la absorcion de la piel, consecuentemente,
• el poder hidratante de HAS ha demostrado ser significativamente mayor que el de HA no sulfatado y por lo tanto causa una importante disminucion de la rugosidad de las superficies de la piel tratada con respecto a las formulaciones de HA y de control topico, revelando as! su capacidad de tratar efectivamente y proteger las superficies de la piel caracterizadas por sequedad, irritacion, liquenificacion, con todas las otras patologlas de la piel que hacen la piel mas sensible a los agentes externos.
La capacidad de HAS de penetrar el grosor de la piel as! eficientemente es la base cientlfica sobre la que se basa esta sorprendente e inesperada nueva propiedad, que permite su formulacion con agentes farmacologicos de diversa naturaleza, tal como por ejemplo, antiinflamatorios no esteroides (particularmente diclofenaco, ketoprofeno e ibuprofeno) o de tipo esteroide, hormonas, vasodilatadores, agentes colinergicos, antibioticos y otros, formulados en varias formas, preferentemente como geles, cremas o parches para una absorcion dermica y/o transdermica.
Por ultimo, el solicitante describe la preparacion de varias formulaciones/composiciones farmaceuticas que contienen HAS como unico principio activo, o en asociacion con otros agentes farmacologicamente y/o biologicamente activos tales como, por ejemplo, esteroides, hormonas, protelnas, factores troficos, vitaminas, farmacos anti-inflamatorios no esteroide (FANS), tales como, por ejemplo diclofenaco, ketoprofeno o ibuprofeno o sales de estos, farmacos de quimioterapia de uso topico, antibioticos, agentes antivirales, anestesicos locales, anticoagulantes y/o agentes fibrinollticos, y/o enzimas tales como, por ejemplo, colagenasa y/o hialuronidasa y/o otras proteasas; que pueden formularse con pollmeros tales como acido hialuronico y sus derivados, carboximetilcelulosa (CMC) y/u otros pollmeros de caracterlstica natural (tal como colageno) o sintetica.
La composicion farmaceutica en cuestion puede formularse como una pomada, lipogel, hidrogel, lapiz labial, crema, ovulos vaginales y velas, espuma, gel de la mucosa, preparaciones oftalmicas, duchas vaginales, enjuagues bucales, parches para la dermis y/o absorcion transdermica, especialmente de FANS y hormonas, soluciones, por lo tanto, puede administrarse mediante la aplicacion topica o mediante inhalacion para el tratamiento de patologlas del sistema respiratorio tal como por ejemplo, asma.
Particular atencion se presta a las composiciones que contienen enzimas tales como hialuronidasa en la formulacion de un medicamento para el tratamiento de hematomas de la piel, y las que contienen farmacos u hormonas no esteroides anti-inflamatorios, en forma de geles, cremas y parches para la absorcion dermica y/o transdermica del farmaco.
Algunos ejemplos de la preparacion de HAS grado 1 y 3, las formulaciones farmaceuticas que lo contienen, se proporcionan para propositos meramente descriptivos y no limitantes, junto con los resultados obtenidos por la experimentacion in vitro.
Ejemplo 1
Preparacion de la sal de tetrabutilamonio del acido hialuronico (HA) que tiene un peso molecular promedio igual a 200 KD (en el intervalo de 150.000 a 250.000 Da)
5.00 g de sal de sodio de acido hialuronico de origen fermentativo (200 KD) se disuelven en 250 ml de agua y la solucion resultante se percola a traves de una columna de vidrio prellenada con 100 cm3 de resina Dowex en forma de tetrabutilamonio (TBA). La solucion eluida de sal HA-TBA se recoge y liofiliza. Se obtienen 7,50 g de producto.
Ejemplo 2
Slntesis de HA sulfatado a partir de HA que tiene un peso molecular promedio de 200 kD y un grado de sulfatacion igual a 3 grupos sulfato por unidad repetitiva
Metodo A
10.0 g de la sal TBA de acido hialuronico que tiene un peso molecular promedio de 200 KD preparado de conformidad con el Ejemplo 1, se disuelven en 300 ml de dimetilsulfoxido (DMSO); 26,0 g del complejo SO3-piridina (trioxido de azufre y piridina, de aqul en adelante abreviado como PySO3) se dispersan en 150 ml de DMSO, y despues se anadio a la solucion de HA. Despues de 20 horas bajo agitacion mecanica a una temperatura de 21 °C, la reaccion se interrumpe mediante la adicion de 0,1 volumenes de agua; el producto de reaccion en bruto se alsla mediante precipitacion despues de la adicion de 2 volumenes de etanol. El solido obtenido se dispersa en 150 ml de agua y el pH se lleva hasta neutralidad con NaOH 1 M. La mezcla se dializa exhaustivamente frente a agua a traves de una membrana con un corte de 12-14.000 Da. El producto dializado se somete a liofilizacion. 9,7 g de producto se obtienen con un grado de sulfatacion igual a 3 grupos sulfato por unidad repetitiva (rendimiento = 88 %).
Metodo B
32.0 g de la sal TBA de acido hialuronico que tiene un peso molecular promedio de 200 KD preparado de conformidad con el Ejemplo 1, se disuelven en 900 ml de N-metilpirrolidona (NMP); 100 g de PySO3 se dispersan en 600 ml de NMP,
6
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
y despues se anade a la solucion de HA. Despues de 20 horas bajo agitacion mecanica a una temperatura de 21 ± 1 °C, la reaccion se interrumpe mediante la adicion de 0,5 volumenes de agua. El pH inicialmente menor que 2,5, se lleva a neutralidad mediante la adicion de un mol de NaOH (en solucion). El producto bruto de la reaccion se alsla por precipitacion mediante la adicion de 2,5 volumenes de metanol y se lavo con 2 volumenes de una mezcla de metanol/agua 8/2. El solido se vuelve a disolver y se dializa frente a agua exhaustivamente usando una membrana con un corte de 12-14.000 Da. 30,4 g de producto se obtienen con un grado de sulfatacion igual a 3 grupos sulfato por unidad repetitiva (rendimiento = 86 %).
Ejemplo 3
Slntesis de HA sulfatado a partir de HA que tiene un peso molecular promedio de 200 kD y un grado de sulfatacion igual a 1 grupo sulfato por unidad repetitiva
Usando el procedimiento ilustrado en el Ejemplo 1, se preparan 10,0 g de la sal TBA de HA, que se disuelven en 350 ml de DMSO. 10,0 g del complejo PySO3 se dispersan en 100 ml de DMSO, y despues se anaden a la solucion de HA. Despues de 20 horas bajo agitacion mecanica a una temperatura de 21 °C, la reaccion se interrumpe mediante la adicion de 0,1 volumenes de agua; el producto de reaccion bruto se alsla mediante precipitacion despues de la adicion de 2,5 volumenes de etanol. El solido obtenido se dispersa en 150 ml de agua y el pH se lleva hasta la neutralidad con NaOH 1 moles/l. La mezcla se dializa exhaustivamente frente a agua a traves de una membrana con un corte de 12
14.000 Da. El producto dializado se somete a liofilizacion. 7,54 g de producto se obtienen con un grado de sulfatacion igual a 1,0 grupo sulfato por unidad repetitiva (rendimiento = 93 %).
Ejemplo 4 (no de conformidad con la invention)
Slntesis de HA sulfatado a partir de HA que tiene un peso molecular bajo (MW promedio de 10 KD, en el intervalo de
5.000 a 30.000 Da) y un grado de sulfatacion igual a 3 grupos sulfato por unidad repetitiva
Usando el procedimiento ilustrado en el Ejemplo 1, se preparan 12,4 g de la sal TBA de acido hialuronico de bajo peso molecular, que se disuelven en 300 ml de NMP. 40 g de PySO3 se dispersan en 100 ml de NMP, y despues se anaden a la solucion de HA. Despues de 20 horas bajo agitacion mecanica a una temperatura de 21 °C, la reaccion se interrumpe mediante la adicion de 0,5 volumenes de agua. El pH inicialmente menor que 2,5, se lleva a neutralidad mediante la adicion de un mol de NaOH 4M. El producto bruto de la reaccion se alsla por precipitacion mediante la adicion de 2,5 volumenes de metanol y se lava con 2 volumenes de una mezcla de metanol/agua 8/2. El solido se vuelve a disolver y se dializa frente a agua exhaustivamente usando una membrana con un corte de 3.500 Da. 12,0 g de producto se obtienen con un grado de sulfatacion igual a 3,0 grupos sulfato por unidad repetitiva (rendimiento = 85 %).
Ejemplo 5 (no de conformidad con la invencion)
Slntesis de HA sulfatado a partir de HA que tiene un peso molecular bajo y un grado de sulfatacion igual a 1 grupo sulfato por unidad repetitiva
Usando el procedimiento ilustrado en el Ejemplo 1, 12,4 g de sal TBA de HA se disuelven en 300 ml de DMSO. 16,0 g de PySO3 se dispersan en 100 ml de DMSO y se anaden despues a la solucion de HA. Despues de 20 horas bajo agitacion mecanica a una temperatura de 21 °C, la reaccion se interrumpe mediante la adicion de 0,1 volumenes de agua; el producto bruto de la reaccion se alsla mediante precipitacion despues de la adicion de 2,5 volumenes de etanol. El solido obtenido se dispersa en 150 ml de agua y el pH se lleva hasta neutralidad con NaOH 1 moles/l. La mezcla se dializa exhaustivamente frente a agua a traves de una membrana con un corte de 3.500 Da. El producto dializado se somete a liofilizacion. 9,04 g de producto se obtienen con un grado de sulfatacion igual a 1,0 grupo sulfato por unidad repetitiva (rendimiento = 90 %).
Ejemplo 6
Slntesis de HA sulfatado a partir de HA que tiene un peso molecular dentro del intervalo de 500-730 kD y un grado de sulfatacion igual a 3 grupos sulfato por unidad repetitiva
21.0 g de sal de sodio de acido hialuronico de origen extractivo (500-730 KD) se disuelven en 1,5 1 de agua y la solucion resultante se percola a traves de una columna de vidrio pre-llenada con 450 cm3 de resina Dowex en forma de TBA. La solucion eluida de sal HA-TBA se recoge y se liofiliza. Se obtienen 32,0 g de producto, que se disuelven en 1,35 1 de NMP; 100 g de PySO3 se dispersan en 650 ml de NMP, y despues se anaden a la solucion de HA. Despues de 20 horas bajo agitacion mecanica a una temperatura de 23 ± 1 °C, la reaccion se interrumpe mediante la adicion de 0,5 volumenes de agua. El pH inicialmente menor que 2,5, se lleva a neutralidad mediante la adicion de NaOH (en solucion a una concentration de 4 moles/l). El producto bruto de la reaccion se alsla por precipitacion mediante la adicion de 2,5 volumenes de metanol y se lava con 3,5 volumenes de una mezcla metanol/agua 8/2. El solido se vuelve a disolver y se dializa frente a agua exhaustivamente usando una membrana con un corte de 12-14.000 Da. 30,3 g de producto se obtienen con un grado de sulfatacion igual a 3 grupos sulfato por unidad repetitiva (rendimiento = 83 %).
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Ejemplo 7
Slntesis de HA sulfatado a partir de HA que tiene un peso molecular de 500-730 kD y un grado de sulfatacion igual a 1 grupo sulfato por unidad repetitiva
21,0 g de sal de sodio de acido hialuronico de origen extractivo (500-730 KD) se disuelven en 1,5 1 de agua y la solucion resultante se percola a traves de una columna de vidrio pre-llenada con 450 cm3 de resina Dowex en forma de TBA. La solucion eluida de la sal HA-TBA se recoge y liofiliza. Se obtienen 32,0 g de producto, que se disuelven en 1,65 1 de NMP; 40 g de PySO3 se dispersan en 350 ml de NMP, y despues se anaden a la solucion de HA. Despues de 20 horas bajo agitacion mecanica a una temperatura de 25 ± 1 °C, la reaccion se interrumpe mediante la adicion de 0,5 volumenes de agua. El pH inicialmente menor que 2,5, se lleva a neutralidad mediante la adicion de NaOH (en solucion a una concentracion de 4 moles/l). El producto bruto de la reaccion se alsla por precipitacion mediante la adicion de 3,5 volumenes de metanol y se lava con 3,5 volumenes de una mezcla metanol/agua 8/2. El solido se vuelve a disolver y se dializa frente a agua exhaustivamente usando una membrana con un corte de 12-14.000 Da. 22,5 g de producto se obtienen con un grado de sulfatacion igual a 1,0 grupo sulfato por unidad repetitiva (rendimiento = 87 %).
Ejemplo 8
Evaluacion del efecto regulador de HAS grado 1 y grado 3 en la expresion genica de IL-10 e IL-12 (IL-12 no de conformidad con la invencion).
Los sinoviocitos humanos previamente se expandieron in vitro y mantuvieron en un cultivo a 37 °C con un medio de DMEM que contiene 10 % de FCS, se sembraron a una concentracion de 20.000 celulas por pocillo (los sinoviocitos son celulas capaces de producir varios tipos de citoquinas, y por lo tanto se usan normalmente para este tipo de prueba experimental). HA sulfatado de grado 1 (HAS1) y grado 3 (HAS3) preparados como se describio en los Ejemplos 1-3, se anadieron despues al medio de cultivo a concentraciones de 0,1 y 0,5 mg/ml (para ambas muestras), mientras que el tratamiento de control se representa por HA no sulfatado que tiene un peso molecular promedio (MW) de 200 KD. Despues de 3 dlas de tratamiento, el PCR en Tiempo Real se realizo para evaluar la expresion genica de IL-10 e IL-12: el ARN celular se extrajo usando el metodo "Trizol", siguiendo las indicaciones del proveedor (reactivo de TRIZOL, LIFE Techonologies, Gibco BRL). En resumen, las celulas se lisaron mediante la adicion de 1,0 ml de Trizol y el ARN total se cuantifico midiendo su absorbancia a 260 nm. Los iniciadores adecuados se seleccionaron para cada gen que se amplifica, usando el software Primer3 (Roche Molecular Diagnostics, Pleasanton, CA, EE.UU.). La expresion genica se evaluo por medio de PCR en Tiempo Real realizado con un TM5500 Rotor-Gene (Corbett research, Sydney, Australia). Las reacciones de PCR se realizaron usando los iniciadores a 300 nm y SYBR Green (Invitroge, Carlsbad, CA, EE.UU.) a 40 ciclos de 15s a 95 °C y 1 min. a 60 °C. El valor de "umbrales de fluorescencia (Ct)" se determino automaticamente por el software, evaluando un coeficiente de amplificacion de los genes estudiados entre el 92 y el 110 %. Para cada muestra de ADNc, el valor de la expresion genica se expreso en terminos de la relacion entre el ct del gen de mantenimiento (es decir, el gen para la protelna beta-actina que representa el gen de control ya que esta presente en todas las celulas y no esta sometido a la influencia de HAS) y el ct del gen de interes (es decir, el gen de la IL-10 y IL- 12), consecuentemente, el valor de ct de mantenimiento /ct del gen se indica en el eje de las ordenadas, que por lo tanto indica la cantidad de ARNm expresado por el gen que se esta estudiando. Los resultados obtenidos se expresan en la Figura 1 y la Figura 2 (Figura 2 no de conformidad con la invencion):
Figura 1: el tratamiento de los sinoviocitos humanos con HAS1 y HAS3 causo un aumento significativo en la expresion genica de la citoquina IL-10 vs el control tratado con HA no sulfatado.
Figura 2 (no de conformidad con la invencion):
Ademas en este experimento, ambos grados de sulfatacion (grado 1 y grado 3) de HAS demostraron ser capaz de reducir significativamente la expresion genica de IL-12, reduciendo a la mitad la slntesis de su ARNm vs el control tratado con HA no sulfatado. Por lo tanto el acido hialuronico sulfatado demostro ser:
• capaz de estimular la produccion de ARNm nuevo para la slntesis de citoquinas antiinflamatorias, aumentando as! la capacidad de defensa de la celula y consecuentemente de todo el organismo, vs aquellas patologlas descritas anteriormente en las que IL-10 demostro ser de importancia fundamental para la resolucion y/o la mejora de enfermedades tales como asma, vitiligo y todas las inflamaciones en las que se implica IL-10.
• efectivo al disminuir la sintesis de ARNm nuevo de la citoquina altamente proinflamatoria IL-12, demostrando que es un agente antiinflamatorio valido capaz de intervenir en la expresion de proteinas implicadas en la patogenesis de enfermedades invalidantes tales como la psoriasis y todas aquellas descritas anteriormente (no de conformidad con la invencion).
Ejemplo 9 (no de conformidad con la invencion)
Inhibicion de la union de TNF a su receptor expresado en lineas de monocitos: evaluacion de la efectividad de HAS grado 1 y grado 3 a valores de MW diferentes
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Estos experimentos se realizaron para evaluar la efectividad de las muestras analizadas (preparado de conformidad con los Ejemplos 1-4, ejemplo 4 no de conformidad con la invencion) sobre la capacidad de inhibir la union de TNF a su receptor expresado por las celulas del ES que se usan normalmente in vitro para este tipo de experimento, llevado a cabo con componentes de citoquinas yodados para una evaluacion en ensayos de union de radioligando.
El procedimiento experimental se realizo como se describe en Baglioni C. y otros, J Biol Chem, 1985, 260:13395-13397.
En resumen, se uso la llnea de histiocitos humanos de linfoma U937, con las caracterlsticas de los monocitos sensibles a la actividad citotoxica de TNF, que expresan su receptor relativo. Las celulas se incubaron inicialmente con 125I-TNF 0,028nM (realizado en agua) simultaneamente con las muestras que se analizan (a una concentracion de 1 mg/ml, que demostro ser la concentracion mas baja que causa la inhibicion maxima), en un tampon de incubacion consistente en 50 mM Tris-HCL pH 7,4, EDTA 0,5 mM, a 4 °C durante 3 horas.
Al final de la incubacion, las celulas se centrifugaron con ftalato de dibutilo/dinonilftalato 2/1 y el precipitado obtenido se conto en un contador y.
Los resultados obtenidos se expresan en la Figura 3 (no de conformidad con la invencion):
Los resultados obtenidos muestran la efectividad de HAS al inhibir totalmente (100 %) la union de TNF a su receptor, tanto para el grado 1 como grado 3, con un MW medio y bajo. Estos resultados son de importancia fundamental, ya que demuestran que el comportamiento del producto sulfatado es completamente analogo al de un anticuerpo monoclonal especlfico para el receptor de TNF, por lo tanto capaz de bloquear su funcion. Este bloqueo del receptor consecuentemente, representa la forma mas efectiva de antagonizar los efectos proinflamatorios y tumorales del factor TNF.
Ejemplo 10 (no de conformidad con la invencion)
Inhibicion de la union de la citoquina IL-1 a su receptor expresado en llneas de fibroblastos: evaluacion de la efectividad de HAS grado 3 a valores de MW diferentes.
Estos experimentos se realizaron para evaluar la efectividad de las muestras probadas (preparadas de conformidad con los Ejemplos 1-3 y 4, (ejemplo 4 no de conformidad con la invencion) sobre la capacidad de inhibir la union de IL-1 a su receptor expresado por las celulas 3T3 de raton, que se usan normalmente in vitro para este tipo de experimento, llevado a cabo con componentes de citoquinas yodados para una evaluacion en ensayos de Union de Radioligando.
El procedimiento experimental se realizo como se describe en Chin J y otros., J Exp Med, 1987, 165:70-86.
En resumen, se uso la llnea de fibroblastos murinos 3T3, sensible a la actividad citotoxica de la IL-1, que expresa su receptor relativo. Las celulas se incubaron inicialmente con 125I-IL-1 10 pM (realizado en agua) simultaneamente con las muestras que se analizan (a una concentracion de 1 mg/ml, que demostro ser la concentracion mas baja que causa la inhibicion maxima), en un tampon de incubacion que consiste en RPMI 1640 que contiene 20 mM HEPES pH 7,2 y 1 % de BSA, a 37 °C durante 2 horas. Al final de la incubacion, las celulas se lavaron con tampon fosfato, despues se disolvieron en 2,5 M de NaOH y se contaron en un contador y.
Los resultados obtenidos se expresan en la Figura 4 (no de conformidad con la invencion):
Los resultados obtenidos muestran la efectividad de HAS (tanto con MW medio como bajo) al inhibir la union de IL-1 a su receptor en 30 %. Estos resultados son extremadamente importantes, ya que demuestran que el comportamiento del producto sulfatado es completamente analogo al de un anticuerpo monoclonal especlfico para el receptor de la citoquina en cuestion, por lo tanto capaz de bloquear su funcion. Este bloqueo del receptor representa la manera mas efectiva de antagonizar los efectos proinflamatorios y tumorales de IL-1, como se describio anteriormente.
Ejemplo 11 (no de conformidad con la invencion)
Inhibicion de la union de la citoquina IL-6 a su receptor expresado en celulas de mieloma humano: evaluacion de la efectividad de HAS grado 3 a valores de MW diferentes
Estos experimentos se realizaron para evaluar la efectividad de las muestras probadas (preparadas de conformidad con los Ejemplos 1-3 y 4 (ejemplo 4 no de conformidad con la invencion) sobre la capacidad de inhibir la union de IL-6 a su receptor expresado en el mieloma humano U266, que se usa normalmente in vitro para este tipo de experimento, llevado a cabo con componentes de citoquinas yodados para una evaluacion en ensayos de Union de Radioligando.
El procedimiento experimental se realizo como se describe en Taga T. y otros, J Exp Med, 1987, 166:967-981.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En resumen, se uso la ilnea de mieloma humano U266, sensible a la actividad citotoxica de IL-6, que expresan su receptor relativo. Las celulas se incubaron inicialmente con 125I-IL-6 0,08nM (realizado en agua) simultaneamente con las muestras que se analizan (a una concentracion de 1 mg/ml, que demostro ser la concentracion mas baja que causa la inhibicion maxima), en un tampon de incubacion que consiste en RPMI 1640 que contiene 25 mM HEPES pH 7,1 y 10 % de BSA, a 4 °C durante 16 horas. Al final de la incubacion, las celulas se lavaron con tampon fosfato, se centrifugaron a 9.000 rpm y el precipitado se conto en un contador Y-
Los resultados obtenidos se expresan en la Figura 5 (no de conformidad con la invencion):
Los resultados obtenidos muestran la efectividad de HAS, tanto con MW medio como bajo, al inhibir totalmente (100 %) la union de IL-6 a su receptor. Estos resultados demuestran consecuentemente el comportamiento del producto sulfatado, ademas en este caso, es completamente analogo al de un anticuerpo monoclonal especlfico para el receptor de la citoquina en cuestion, por lo tanto capaz de bloquear su funcion. Este bloqueo del receptor representa la forma mas efectiva de bloquear los efectos pro-inflamatorios de IL-6.
Ejemplo 12
Evaluacion del efecto inhibidor de HAS grado 1 y grado 3 en la slntesis de protelnas de las citoquinas IL-2, IL-7, IL-10 e IL-12 en PBMC humana
(IL-2, IL-7 e IL-12 no de conformidad con la invencion)
Para estas experimentaciones, se adoptaron celulas mononucleadas de sangre periferica humana (PBMC), que se derivan de varios donantes para evaluar el efecto de HAS en la produccion de las citoquinas enumeradas anteriormente, usando:
- HA no sulfatado (MW promedio: 200 KD),
- HAS1 y HAS3 (preparado como se describio en los Ejemplos 1-3).
La separacion de PBMC (B0yum A., Scand J Clin Lab Invest 21 Suppl, 1968, 97:77-89) se realizo usando el producto Ficoll-Paque PLUS (GE Healthcare) y siguiendo el protocolo indicado por el proveedor. En el dla cero 100.000 celulas se sembraron por pocillo (usando placas de 96 pocillos) en 200 pl de medio RPMI 1640, al que se habla anadido 10 % de suero bovino fetal, HEPES 10 mM, Glutamina 2 mM, 1 % de Penicilina-Estreptomicina 100 U/ml. El efecto de todas las muestras se evaluo en PBMC no tratadas, o se estimulo con Lipopolisacarido LPS (10 pg/ml) (altamente proinflamatorio) o con Fitohemaglutinina PHA (10 pg/ml) (una sustancia capaz de estimular los linfocitos para dividirse), ambos agentes capaces de estimular la slntesis de citoquinas. Las celulas se trataron por separado con los tres compuestos a una concentracion de 0,1 mg/ml o 1 mg/ml. Despues de 24 horas de incubacion a 37 °C (5 % de CO2), 100 pl de sobrenadante se tomaron de cada pocillo para analizar la produccion de IL-2, IL-7, IL-10 e IL-12.
La cuantificacion de los mediadores de la inflamacion se realizo por medio de la tecnologla SearchLight®, usando una placa Custom Human 9-Plex Array siguiendo el protocolo indicado por el proveedor de la tarjeta tecnica.
Los resultados obtenidos se expresan en las Figuras 6-9 (figuras 6-8 no de conformidad con la invencion):
Estos graficos muestran claramente que HAS grado 1 y grado 3 son capaces de reducir significativamente la slntesis de IL-2, IL-7 e IL-12 por parte de los monocitos, tanto cuando las celulas no se estimulan como ademas cuando, por el contrario, se estimulan mediante factores y/o mitogenos inflamatorios especlficos y potentes. HAS por lo tanto demuestra ser una molecula con caracterlsticas farmacologicas precisas, capaz de modular/regular la slntesis de citoquinas con una actividad anti-inflamatoria marcada, tanto en situaciones donde no se estimula una respuesta inmune y, particularmente eventos de estres inflamatorio donde la celula inmune responde produciendo una cascada de citoquinas y, sobre todo, en este caso, los datos presentados revelan un mayor efecto modulador de HAS.
La Figura 9, por otro lado, confirma el estimulo evidente para la produccion de IL-10 ademas para las celulas que pertenecen al Sistema Inmune. Se confirma una vez mas que, consecuentemente HAS es capaz de modular la sintesis de citoquinas, estimulando las que son antiinflamatorias e inhibiendo la sintesis de citoquinas proinflamatorias.
Ejemplo 13
Evaluacion de la permeacion de la piel de HAS1 y HAS3 con valores de MW diferentes.
Evaluacion de la absorcion de la piel de diclofenaco formulado en asociacion con HAS vs HA (no de conformidad con la invencion)
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
La piel usada para realizar los experimentos se obtiene del abdomen de los pacientes entre 30 y 50 anos de edad, sometidos a reducciones abdominales quirurgicas. Las secciones de la piel con un grosor completo se congelan despues de la intervencion quirurgica y se conservan a -20 °C hasta el momento del experimento, en el que las muestras se descongelan a temperatura ambiente y se separan con precision a partir del tejido adiposo. La piel se divide en secciones cuadradas de 2,5cm2, inmersas durante un minuto en agua a una temperatura de 60 °C y con la ayuda de pinzas especlficas, la capa de la cornea y la epidermis (SCE) se separan con precision de los tejidos subyacentes. Las muestras obtenidas se analizan con un microscopio optico y se descartan si se encuentran punciones. La SCE se monta en la parte inferior de una celda de Franz con la epidermis hacia abajo y la capa de la cornea en contacto con la solucion del donador que se encuentra arriba. El area de permeacion es una superficie circular de 0,636 cm2. La parte inferior y superior de la celda de Franz se fijan con precision a la SCE para separar el compartimento donador (volumen de la solucion del donador: 0,50 ml) y el compartimiento aceptor (volumen de solucion del receptor
5,00 ml), cuyos volumenes se calibran con exactitud. Los disolventes que se usan se desgasifican para eliminar la formacion de burbujas, que debe evitarse especialmente para la solucion del receptor, que se regula por termostato a 37 °C por medio de un bano termostatico de circulacion; bajo estas condiciones la SCE esta a una temperatura de 31-33 °C. Cada experimento se realiza triplemente y el resultado previsto como el promedio de los 3, expresado como la cantidad de analito que ha cruzado la unidad de superficie de la piel despues de 24 horas.
La permeacion de HA y HAS1 y HAS3 de ambos MW se realizo a partir de soluciones al 3 % (peso/volumen), con deteccion de la cantidad de permeado a traves del ensayo de acido glucuronico y espectrometrla ICP (Plasma Acoplado Inductivamente) para azufre, respectivamente.
La permeacion de la sal de diclofenaco sodico se realizo sobre la sal como tal en solucion acuosa, sobre la sal en presencia de HA 200 KD a 3 % (peso/volumen) y sobre la sal en presencia de HAS3 preparado de conformidad con el Ejemplo 1-2, a 3 % (peso/volumen). En los tres casos, la concentracion de sal de diclofenaco sodico en la solucion permeante es igual a 1 % (peso/volumen). La concentracion de diclofenaco se determino a traves de analisis de HPLC en fase inversa en un aparato Agilent 1200 Series y deteccion UV (254 nm), columna C18, eluyente acetonitrilo/agua/acido acetico 50/46/4 con un flujo de 1,2 ml/min.
Los resultados obtenidos se grafican en la Figura 10 y la Figura 11 (Figura 11 no de conformidad con la invencion):
La Figura 10 muestra como la sulfatacion de HA ha aumentado significativamente su permeacion a traves de la piel y como este resultado es particularmente evidente para el MW promedio.
La Figura 11, por el contrario, muestra como HAS se comporta como promotor de la absorcion de la piel del principio activo diclofenaco, duplicando su cantidad total de permeado en 24 h con respecto al control y la asociacion con HA.
Ejemplo 14
Evaluacion de la actividad hidratante y protectora obtenida con HAS vs HA y crema base de control.
20 sujetos humanos de edades comprendidas entre 18 y 70 anos, sin patologlas de la piel y tratamiento farmacologico en curso, se trataron diariamente con cantidades ciertas y constantes de los productos probados, a nivel del antebrazo. Los productos experimentales fueron:
• control: que consiste en una crema base hidratante
• crema base (como control) que contiene HA 200 KD 01 %
• crema base (como control) que contiene HAS3 01 %, preparado de conformidad con Ejemplo 1-2
Crema Base: composicion
AGUA DESIONIZADA 85,10 %
DERMOL 88
ETIL HEXIL ETILHEXANOATO 6.50
NIKKOMULESE 41
POLIGLICERIL-10 pentaestearato ALCOHOL behenilico, estearoil LACTILATO DE SODIO 5.00
SEPIGEL 305
POLIACRILAMIDA C13-14 ISO-PARAFINA LAURETH 7 2.50
SEPIGEL 305
POLIACRILAMIDA C13-14 ISO-PARAFINA LAURETH 7 2.50
ISOCIDE PF
FENOXIETANOL, METILPARABENO, ETILPARABENO, PROPILPARABENO, PROPILENGLICOL 0.50
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
KEMIPURE 100
IMIDAZOLIDINILUREA 0.30
EDTA DISODICO
EDTA DISODICO 0.10
Metodo de Produccion
Cargar 90 % de agua y EDTA disodico e Isocide PF Calentar a 65-70 °C; disolver Nikkomulese en un contenedor adecuado, Dermol 88 mediante calentamiento a 65-70 °C; unir la fase grasa con la fase acuosa bajo la accion de una turbina. Enfriar a 30-35 °C, anadir Kemipure 100 disuelto en el restante 10 % de agua, anadir Sepigel para regular la viscosidad y enfriar a 25 °C.
La diferencia en los valores de hidratacion obtenidos se evaluo por medio de un corneometro CM825 mediante un promedio de 3 puntos y un analisis profilometrico de la superficie de la piel se realizo ademas usando una camara de video Visioscan VC98 en el tiempo T0 (valor basal) y T7, despues de 7 dlas de uso de los productos.
Los resultados obtenidos se grafican en las Figuras 12 y 13: La Figura 12 muestra el mayor efecto hidratante de la piel despues del tratamiento con HAS3, vs tanto la crema base y vs la que contiene HA. La Figura 13, por otra parte, demuestra como el Indice de rugosidad de la piel, despues de 7 dlas de tratamiento, se ha reducido de manera significativa con respecto a los controles. Estos datos demuestran claramente la efectividad de HAS en la mejora notablemente del Indice de hidratacion de la piel, que muestra una hidratacion efectiva y actividad protectora sobre la piel reduciendo la transpiracion de agua transepidermica.
Ejemplo 15
Preparacion de una formulacion en forma de una SOLUCION para inhalaciones que contienen HAS grado 1
40 mg (o 20 mg si el HAS tiene un MW de 500-730KD) de acido hialuronico sulfatado grado 1, que tiene un MW bajo o medio, se introducen en un frasco de vidrio de 50 ml, despues de que se anadio 15 ml de PBS 0,2 M a pH 7,4 esteril. La mezcla se somete a agitacion durante aproximadamente 30 minutos, hasta la disolucion completa del polvo. Cuando se ha obtenido la disolucion completa, se anaden 2 ml de propilenglicol y ademas PBS 0,2 M a pH 7,4 esteriles hasta que se alcanza el volumen total de 20 ml. La solucion se mantiene bajo agitacion durante unos pocos minutos.
Ejemplo 16
Preparacion de una formulacion en forma de una solucion para inhalaciones que contiene HAS grado 3
100 mg de acido hialuronico sulfatado grado 3 (HAS3) obtenido a partir de HA 200 KD se introducen en un frasco de vidrio de 50 ml, despues de lo cual se anaden 15 ml de PBS 0,2 M a pH 7,4 esteriles. La mezcla se somete a agitacion durante aproximadamente 30 minutos, hasta la disolucion completa del polvo. Cuando se ha obtenido la disolucion completa, se anaden 2 ml de propilenglicol y ademas PBS 0,2 M a pH 7,4 esteriles hasta que se alcanza el volumen total de 20 ml. La solucion se mantiene bajo agitacion durante unos pocos minutos.
Ejemplo 17
Preparacion de una formulacion en forma de un GEL HIDROFILICO que contiene, HAS, HA y CMC
Metil y propil-parabeno se disuelven en agua purificada a 80 °C. Despues de enfriar la solucion a temperatura ambiente, se anade hialuronato de sodio bajo agitacion hasta la disolucion seguida de HAS1 (o HAS3), manteniendo la agitacion hasta la disolucion completa. El glicerol y el propilenglicol se anaden despues bajo agitacion hasta la disolucion completa. Finalmente se anade carboximetilcelulosa sodica (CMC) y la mezcla hasta que se obtiene una solucion gelificada se mezcla.
Ejemplo 18
Preparacion de una formulacion en forma de GEL HIDROFILICO para uso de la mucosa (sin conservantes) que contiene HAS y HA
Hialuronato de sodio se disuelve bajo agitacion, y despues HAS1 (o HAS3) en una cantidad de agua de aproximadamente 90 % de la prevista en la formula. Propilenglicol, Symdiol 68 se anaden seguido por MP Diol Glycol, mezclando hasta la disolucion completa de varios componentes. El carbomero 974P se anade posteriormente y se mantiene la agitacion hasta la dispersion homogenea de este ultimo. Las perlas de hidroxido de sodio se disuelven en el restante 10 % de agua y esta solucion se anade lentamente a la previamente obtenida, la mezcla para obtener la gelificacion de la fase acuosa se mezcla.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Ejemplo 19
Preparacion de una formulacion en forma de un GEL HIDROFILICO que contiene HAS e Hialuronidasa
Metil y propil-parabeno se disuelven en agua purificada a 80 °C. Despues de enfriar la solucion a temperatura ambiente, se anade la enzima hialuronidasa bajo agitacion, seguido de HAS3, manteniendo la agitacion hasta la disolucion completa de los dos componentes. El carbomero 974P se anade posteriormente y se mantiene la agitacion hasta la dispersion homogenea de este ultimo. Despues se anade TEA para obtener la gelificacion de la fase acuosa. El glicerol y propilenglicol se anaden finalmente bajo agitacion.
Ejemplo 20
Preparacion de una formulacion en forma de una CREMA HIDROFILICA (Emulsion 0/A) que contiene HAS e Hialuronidasa
La fase oleosa se prepara mediante fusion de la parafina llquida, acido estearico y Tefose 1500 bajo agitacion a 50 °C. La fase acuosa se prepara por separado por la disolucion inicial a 80 °C de metil-parabeno y posterior enfriamiento a temperatura ambiente y la incorporacion final de glicerol, hialuronidasa y posteriormente HAS3 bajo agitacion hasta la disolucion completa de varios componentes.
La fase acuosa se une a la fase oleosa y se forma la emulsion, la emulsion O/A obtenida se enfrla bajo agitacion a temperatura ambiente.
Ejemplo 21
Preparacion de una formulacion en la forma de una ESPUMA que contiene HAS e Hialuronidasa
Metil y propil-parabeno se disuelven en agua purificada a 80 °C. Despues de enfriar la solucion a temperatura ambiente, se anade la enzima Hialuronidasa bajo agitacion, seguido de HAS3, manteniendo la agitacion hasta la disolucion completa. El propilenglicol se anade despues y la mezcla hasta la disolucion completa se mezcla; polivinilpirrolidona se incorpora posteriormente, mezclando hasta la disolucion completa y, finalmente, polisorbato 80 manteniendo la agitacion hasta la disolucion.
La fase de distribucion de la solucion obtenida se lleva a cabo despues en un cilindro, procediendo con la presurizacion con un propulsor de isobutano, n-butano, propano.
Ejemplo 22
Preparacion de una formulacion en forma de un UNGUENTO que contiene HAS3 e Hialuronidasa
El unguento base se prepara mediante fusion de parafina llquida ligera y vaselina blanca bajo agitacion a 70 °C. Despues de enfriar a temperatura ambiente, la Hialuronidasa se incorpora bajo agitacion, seguido por HAS3 y la mezcla se mezcla hasta que se obtiene una suspension homogenea.
Ejemplo 23
Preparacion de una formulacion en forma de un LIPOGEL que contiene HAS3 e Hialuronidasa
La parafina llquida ligera, vaselina blanca y alcohol cetilestearilico se funden bajo agitacion a 90 °C. El agente lipogelificante aceite de ricino hidrogenado se anade bajo agitacion hasta que se obtiene una solucion homogenea y despues la mezcla se enfrla lentamente a temperatura ambiente. La Hialuronidasa, HAS3 se incorporan finalmente y la mezcla hasta que se obtiene una suspension homogenea se mezcla.
Ejemplo 24
Preparacion de una formulacion en forma de una LAPIZ LABIAL que contiene HAS y HA
La cantidad correcta de parafina llquida indicada en la formula de fabricacion se carga en un contenedor adecuado. Se calienta a 88-92 °C y la parafina blanda blanca, parafina dura, cera de abejas blanca, ceresina, Arlacel se anaden despues bajo agitacion, la agitacion se mantiene hasta la fusion completa de varios componentes. Acetato de all-rac-a- tocoferilo, alantolna, butilhidroxitolueno, propil p-hidroxibenzoato de metilo se incorporan y la mezcla hasta la disolucion completa se mezcla, manteniendo la masa a 88-92 °C.
La cantidad de agua purificada que se preve en la formula se carga por separado en un contenedor adecuado, hialuronato de sodio, HAS1 (o HAS3) se anaden despues bajo agitacion hasta la disolucion completa, seguido de Edetato disodico manteniendo la agitacion hasta la disolucion.
13
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
La fase acuosa se transfiere bajo agitacion al contenedor que contiene la masa fundida, manteniendo el sistema a 88-92 °C y la agitacion hasta que se obtiene una solucion limpida. Los dos agentes aromatizantes se anaden despues bajo agitacion y la mezcla durante 10' se mezcla. La masa fundida se vierte en moldes y se enfria inmediatamente a T <0 °C hasta que se obtienen barras solidas.
Ejemplo 25
Preparacion de una formulacion en forma de OVULOS VAGINALES que contienen HAS y HA
Se deja que la gelatina se hinche en 70 % de agua purificada a 85 °C; se disuelven el hialuronato de sodio y HAS1 (o HAS3) en la cantidad restante de agua y esta solucion se mezcla con la glicerina llevada a la misma temperatura. La solucion de glicerina se anade a la solucion de gelatina hinchada y se mantiene la agitacion hasta la disolucion completa de la gelatina. La masa se vierte en moldes y se enfria a T < 0 °C hasta que se obtienen los ovulos solidos.
Ejemplo 26
Preparacion de una formulacion en forma de una CREMA HIDROFILICA (Emulsion O/A) que contiene HAS y HA
La fase oleosa se prepara mediante la fusion de la parafina liquida, acido estearico y Tefose 1500 bajo agitacion a 50 °C. La fase acuosa se prepara por separado mediante la disolucion inicial a 80 °C de metil-parabeno y posteriormente enfriamiento a temperatura ambiente y la incorporacion de glicerol, hialuronato de sodio y posteriormente HAS1 (o HAS3) bajo agitacion hasta la disolucion completa de los diversos componentes.
La fase acuosa se une a la fase oleosa y se forma la emulsion, la emulsion O/A obtenida se enfria bajo agitacion a temperatura ambiente.
Ejemplo 27
Preparacion de una formulacion en forma de un UNGUENTO que contiene HAS
El unguento base se prepara por fusion de la parafina liquida ligera y vaselina blanca bajo agitacion a 70 °C. Despues de enfriar a temperatura ambiente, se incorpora HAS1 (o HAS3) bajo agitacion, y se mezcla hasta obtenerse una suspension homogenea la mezcla.
Ejemplo 28
Preparacion de una formulacion en forma de un GEL HIDROFILICO que contiene HAS3, HA y diclofenaco
Metil y propil-parabeno se disuelven en agua purificada a 80 °C. Despues de enfriar la solucion a temperatura ambiente, el diclofenaco sodico, el hialuronato de sodio y despues, el HAS3 se anaden bajo agitacion, manteniendo la agitacion hasta la disolucion completa de los dos componentes. El carbomero 974P se anade posteriormente y se mantiene la agitacion hasta la dispersion homogenea de este ultimo. Despues se anade TEA para obtener la gelificacion de la fase acuosa. El glicerol y propilenglicol se incorporan finalmente bajo agitacion.
Ejemplo 29
Preparacion de una formulacion en forma de una CREMA HIDROFILICA (Emulsion 0/A) que contiene HAS3 y diclofenaco
La fase oleosa se prepara por fusion de la parafina liquida, acido estearico y Tefose 1500 bajo agitacion a 50 °C. La fase acuosa se prepara por separado mediante la disolucion inicial a 80 °C de metil-parabeno y, posteriormente, el enfriamiento a temperatura ambiente y la incorporacion final de glicerol, diclofenaco sodico y, posteriormente, HAS3 bajo agitacion hasta la disolucion completa de los diversos componentes.
La fase acuosa se une a la fase oleosa y se forma la emulsion, la emulsion O/A obtenida se enfria bajo agitacion a temperatura ambiente.
Ejemplo 30
Preparacion de una formulacion en forma de una ESPUMA que contiene HAS y diclofenaco
Metil y propil-parabeno se disuelven en agua purificada a 80 °C. Despues de enfriar la solucion a temperatura ambiente, se anade diclofenaco sodico con agitacion, seguido de HAS3, manteniendo la agitacion hasta la disolucion completa. Despues, se anade propilenglicol y la mezcla hasta la disolucion completa se mezcla; se incorpora la polivinilpirrolidona posteriormente, mezclando hasta la disolucion completa y, finalmente, el polisorbato 80 manteniendo la agitacion hasta la disolucion.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
La fase de distribucion de la solucion obtenida se lleva a cabo despues en un cilindro, procediendo con la presurizacion con un propulsor de isobutano, n-butano, propano.
Ejemplo 31
Preparacion de las formulaciones en forma de un PARCHE cutaneo que contiene HAS y diclofenaco
Estos ejemplos se refieren a la preparacion de una matriz polimerica que contiene HAS para la liberacion controlada de farmacos de uso topico, y en este caso, la sal de diclofenaco sodico FANS, que mejora la absorcion dermica y/o transdermica del principio activo contenido en ella, gracias a la accion promotora de HAS. La matriz en cuestion comprende preferentemente copollmeros de acido acrllico y sus esteres acrllicos y/o metacrllicos con una temperatura de transition vltrea (Tg) inferior a la temperatura ambiente, preferentemente inferior a 0 °C, cuyos grupos de carboxilo libre presentes a lo largo de la cadena polimerica estan salificados con bases organicas (por ejemplo, amoniaco, etilendiamina, copollmeros del ester de acido acrllico y/o metacrllico que tiene una funcion de amonio cationico en el grupo alquilo (EUDRAGIT® E100 se prefiere) o bases inorganicas (por ejemplo, hidroxidos o carbonato o bicarbonato de metales alcalinos, alcalino-terrestre y de transicion) como es conocido por los expertos en el campo. Los copollmeros normalmente usados de acuerdo con la presente invention consisten de 2 o mas monomeros en porcentajes variables; ejemplos de estos monomeros son:
acido acrllico
acrilato de butilo y/o metilo acrilato de 2-etil hexilo metacrilato de glicidilo acetato de vinilo
Muchos copollmeros estan disponibles en el mercado (tales como Duro-tak® 280-2416, 280-2516, 87-2620, 87-2852, 380-1054, 87-2051, Nacional y Almidon) disuelto en disolventes organicos, con un porcentaje de grupos carboxilo libres en el intervalo de 0,1 a 15 %, que pueden salificarse con bases organicas o inorganicas, como se describio anteriormente. Estos copollmeros estan contenidos preferentemente en la matriz de parche cutaneo en una cantidad de 30-90 % en peso.
Adicionalmente, las matrices polimericas que contienen HAS que comprenden los siguientes dos componentes principales pueden prepararse:
a. Se prefieren los polimetacrilatos: es decir, copollmeros del ester de acido acrllico y/o metacrllico que tiene una funcion de amonio cationico en el grupo alquilo (EUDRAGIT® E100, EUDRAGIT® RS y EUdRaGIT® RL). Dichos pollmeros pueden constituir de 10 a 40 % en peso del total de la matriz de adhesiva despues del secado, preferentemente del 10 al 25 %.
b. El acido dicarboxllico o tricarboxllico organico (tales como, por ejemplo, acido succlnico, fumarico, adlpico y laurico), como contraion para el componente cationico a, (ademas, actuan como agentes reticulantes del componente a). El componente b puede ajustarse de modo que se afecta la neutralization parcial o completa. Un componente b adicional adecuado son los pollmeros de acrilato o metacrilato acido-funcionales, por ejemplo, el acido poliacrllico Carbopol®. Los componentes b pueden estar contenidos en % en peso en el intervalo de 1 a 40 % del total de la formulation adhesiva despues del secado, preferentemente de 1 a 20 %.
La matriz polimerica anterior dentro de la formulacion final esta dentro del intervalo de 10-90 % con respecto al peso seco, preferentemente de 50 a 90 % basado en el peso seco de la composition final. La cantidad de principio activo incorporado varla con relation a su naturaleza y el efecto terapeutico dermico o transdermico deseado. Esta normalmente presente en una cantidad en el intervalo de 0,1 a 30 % en peso con respecto al peso seco de la composicion final.
La formulacion ademas puede contener excipientes, lenitivos, emolientes, agentes emulsionantes, moduladores de adhesion, conservantes, plastificantes, acidificantes/tampones. Las cantidades de los excipientes pueden variar en intervalos grandes, entre 0,01 y 30 %, en dependencia de su funcion.
Un promotor de la absorcion cutanea con propiedades lenitivas, antipruriginosas y de anti-enrojecimiento tiene grado 1 o grado 3, preferentemente grado 3, presente en concentraciones en el intervalo de 0,1 a 30 % del peso seco de la composicion final. La matriz anterior asegura: una permeation controlada, y constante del principio activo sin irritation, y adhesividad a la piel.
Metodo de preparacion
1 kg del copollmero de metacrilato seleccionado (por ejemplo, Duro-tak® 280-2416, 280-2516 o 87-2852) que tiene un contenido de solidos de 30-40 % p/p, se anade bajo agitation mecanica con 300g de una solucion al 30 % p/p a base de disolvente/agua EUDRAGIT® E100; la mezcla se deja bajo agitacion moderada durante 30 min. A partir de entonces, se
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
anaden despues, el principio activo (100 g de sal de diclofenaco sodico) y HAS3 previamente disuelto en una solucion acuosa. La mezcla se deja en agitacion hasta la disolucion completa. Para la preparacion de la capa de matriz, esta mezcla se puso despues, en la parte superior de una pellcula de poliester/papel de silicio y el secado se efectua por evaporation de los disolventes residuales. La matriz de propagation tiene un peso seco de aproximadamente 60 g/m2. Por lo tanto, la matriz obtenida se acopla despues, con una pellcula de polietileno o tejido de poliester no tejido para la formation final del parche.
La composition final de cada parche solo contiene 140 mg de diclofenaco y 40 mg de HAS3. Tabla
GEL HiDROFlLICO (Ejemplo 17)
Componentes
Cantidad (mg/1g de hidrogel)
HAS1 (HAS3)
40 mg (10 mg)
CMC
20 mg
Glicerol
100 mg
Propilenglicol
66,75 mg
Hialuronato de sodio
2 mg
Metil p-hidroxibenzoato
2 mg
Propil p-hidroxibenzoato
0,2 mg
Agua purificada
hasta 1g
GEL HiDROFlLICO para uso de la mucosa (Ejemplo 18)
Componentes
Cantidad (mg/1 g de hidrogel)
HAS1 (HAS3)
10 mg
Carbomero 974P
15 mg
Propilenglicol
100 mg
Hidroxido de sodio
0,33 mg
Hialuronato de sodio
2 mg
MP-Diol Glicol
37,5 mg
SymDiol 68
90 mg
Agua purificada
hasta 1g
GEL HiDROFlLICO (Ejemplo 19)
Componentes
Cantidad (U.i o mg/1g de hidrogel)
HAS3
10 mg
Hialuronidasa
150 U.I
Carbomero 974P
15 mg
Glicerol
100 mg
Propilenglicol
66,75 mg
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Trietanolamina
13,25 mg
Metil p-hidroxibenzoato
2 mg
Propil p-hidroxibenzoato
0,2 mg
Agua purificada
hasta 1 g
CREMA HIDROFlLICA (Emulsion O/A) (Ejemplo 20)
Componentes
Cantidad (U.I o mg/1g de crema)
HAS3
10 mg
Hialuronidasa
150 U.I
Tefose 1500
110 mg
Glicerol
80 mg
Acido estearico
33 mg
Parafina llquida
40 mg
Metil p-hidroxibenzoato
1 mg
Agua purificada
hasta 1 g
ESPUMA (Ejemplo 21)
Componentes
Cantidad (U.I o mg/1 g de solucion)
HAS3
10 mg
Hialuronidasa
150 U.I
Polisorbato 80
40 mg
Propilenglicol
40 mg
Polivinilpirrolidona
30 mg
Metil p-hidroxibenzoato
2 mg
Propil p-hidroxibenzoato
0,3mg
Agua purificada
hasta 1 g
Un cilindro contiene aproximadamente 94 % de la solucion y 6 % de propulsor (isobutano, n-butano, propano)
UNGUENTO (Ejemplo 22)
Componentes
Cantidad (U.I o mg/1 g de unguento)
HAS3
20 mg
Hialuronidasa
200 U.I
Parafina ligera llquida
200 mg
Petrolato blanco
hasta 1 g
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
LIPOGEL (Ejemplo 23)
Componentes
Cantidad (U.I o mg/1g de Lipogel)
HAS3
20 mg
Hialuronidasa
200 U.I
Aceite de ricino hidrogenado
10 mg
Alcohol Cetoestearllico
50 mg
Petrolato blanco
365 mg
Parafina ligera llquida
hasta 1 g
LAPIZ LABIAL (Ejemplo 24)
Componentes
Cantidad (mg/1g lapiz labial)
HAS1 (HAS3)
30 mg (10 mg)
Parafina llquida
253,2 mg
Parafina blanda blanca
326,2 mg
Parafina dura
144,3 mg
Cera blanca de abejas
96 mg
Ceresina
28,2 mg
Arlacel 582
95,8 mg
Hialuronato de sodio
2 mg
Alantolna
1,1 mg
Acetato de all-rac-a-tocoferilo
1,1 mg
Propil p-hidroxibenzoato
0,4 mg
Hidroxitolueno de butilo
0,4 mg
Agua purificada
19,2 mg
Edetato disodico
1,1 mg
Saborizante de vainilla
0,5 mg
Saborizante dulce
0,5 mg
OVULOS VAGINALES (Ejemplo 25)
Componentes
Cantidad (mg/1 g de ovulo)
HAS1 (HAS3)
10 mg
Glicerina
580
Gelatina
200
Hialuronato de sodio
2
Agua purificada
hasta 1g
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
CREMA HIDROFlLICA (Emulsion O/A) (Ejemplo 26)
Componentes
Cantidad mg/1g de crema)
HAS1 (HAS3)
10 mg
Tefose 1500
110 mg
Glicerol
80 mg
Acido estearico
33 mg
Hialuronato de sodio
2 mg
Parafina llquida
40 mg
Metil p-hidroxibenzoato
1 mg
Agua purificada
hasta 1 g
UNGUENTO (Ejemplo 27)
Componentes
Cantidad (mg/1g de unguento)
HAS1 (HAS3)
20 mg
Parafina ligera llquida
200 mg
Petrolato blanco
hasta 1 g
GEL HIDROFILICO (Ejemplo 28)
Componentes
Cantidad (mg/1g de hidrogel)
Diclofenaco sodico (*)
30 mg
Carbomero 974P
15 mg
Glicerol
100 mg
HAS3
20 mg
Hialuronato de sodio
2mg
Propilenglicol
66,75 mg
Trietanolamina
13,25 mg
Metil p-hidroxibenzoato
2 mg
Propil p-hidroxibenzoato
0,2 mg
Agua purificada
hasta 1 g
(*): diclofenaco sodico 3 %
CREMA HIDROFlLICA (Emulsion O/A) (Ejemplo 29)
Componentes
Cantidad (mg/1g de crema)
Diclofenaco sodico
10 mg
Tefose 1500
110 mg
Glicerol
80 mg
HAS3
30 mg
5
10
15
20
25
30
Acido estearico
33 mg
Parafina llquida
40 mg
Metil p-hidroxibenzoato
1 mg
Agua purificada
hasta 1 g
(*): diclofenaco sodico 1 %
ESPUMA (Ejemplo 30)
Componentes
Cantidad (mg/1g de solucion)
Diclofenaco sodico
40 mg
Polisorbato 80
40 mg
Propilenglicol
40 mg
HAS3
10 mg
Polivinilpirrolidona
30 mg
Metil p-hidroxibenzoato
2mg
Propil p-hidroxibenzoato
0,3 mg
Agua purificada
hasta 1 g
Un cilindro contiene aproximadamente 94 % de la solucion y 6 % de propulsor (isobutano, n-butano, propano)
(*): diclofenaco sodico 4 %

Claims (7)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    Reivindicaciones
    1. Acido hialuronico sulfatado de uso topico para el tratamiento de hidratacion de patologlas de la piel caracterizadas por sequedad, liquenificacion, dicho acido hialuronico sulfatado (HA) que tiene un peso molecular en el intervalo de 150.000 a 250.000 Da y un grado de sulfatacion igual a 1 o 3, previsto como el numero de grupos sulfato por unidad de disacarido, la sulfatacion que implica a los hidroxilos del alcohol presentes en la cadena del polisacarido.
  2. 2. El acido hialuronico sulfatado de uso topico para la prevencion y/o tratamiento de patologlas de la piel asociadas con la deficiencia de la defensa inmune de la IL-10 seleccionadas entre vitiligo, eczema, psoriasis y dermatitis, que estimula la slntesis de citoquinas antiinflamatorias, dicho acido hialuronico sulfatado (HA) que tiene un peso molecular en el intervalo de 150.000 a 250.000 Da o 500.000 a 750.000 Da y un grado de sulfatacion igual a 1, previsto como el numero de grupos sulfato por unidad de disacarido, la sulfatacion que implica los hidroxilos del alcohol presentes en la cadena del polisacarido.
  3. 3. Las composiciones farmaceuticas para su uso de conformidad con la reivindicacion 1, posiblemente asociadas con agentes farmacologicamente y/o biologicamente activos.
  4. 4. Las composiciones farmaceuticas para su uso de conformidad con la reivindicacion 2, posiblemente asociadas con agentes farmacologicamente y/o biologicamente activos.
  5. 5. La composicion farmaceutica para su uso de conformidad con las reivindicaciones anteriores 3 o 4, que contienen esteroides, hormonas, protelnas, factores troficos, vitaminas, farmacos no esteroides antiinflamatorios, farmacos de quimioterapia para uso topico, antibioticos, agentes antivirales, anestesicos locales, anticoagulantes y/o agentes fibrinollticos, enzimas y/u otras proteasas.
  6. 6. La composicion farmaceutica para su uso de conformidad con las reivindicaciones 3-5, que contienen pollmeros tales como el acido hialuronico y sus derivados, carboximetilcelulosa y/u otros pollmeros de origen natural o sintetico.
  7. 7. La composicion farmaceutica para su uso de conformidad con las reivindicaciones 3-6, en forma de un unguento, lipogel, hidrogel, lapiz labial, crema, parches, ovulos vaginales y sondas, espuma, gel de la mucosa, preparaciones oftalmicas, duchas vaginales, enjuagues bucales, soluciones para aplicacion topica o inhalacion.
ES10721126.0T 2009-05-14 2010-05-14 Nuevos medicamentos de uso tópico basados en ácido hialurónico sulfatado como agente de activación o inhibición de la actividad de las citoquinas Active ES2601681T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ITPD20090134 2009-05-14
ITPD2009A000134A IT1397246B1 (it) 2009-05-14 2009-05-14 Nuovi medicamenti ad uso topico a base di acido ialuronico solfatato come agente attivante o inibente l'attivita' citochinica
PCT/EP2010/003050 WO2010130468A1 (en) 2009-05-14 2010-05-14 New medicines for topic use based on sulfated hyaluronic acid as activating or inhibiting agent of the cytokine activity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2601681T3 true ES2601681T3 (es) 2017-02-15

Family

ID=41226841

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES16178620T Active ES2704921T3 (es) 2009-05-14 2010-05-14 Medicamentos para uso tópico basados en ácido hialurónico sulfatado para el tratamiento de coágulos de fibrina y trombos
ES18185228T Active ES2808575T3 (es) 2009-05-14 2010-05-14 Composiciones farmacéuticas para uso tópico basadas en ácido hialurónico sulfatado como promotor de absorción de la piel
ES10721126.0T Active ES2601681T3 (es) 2009-05-14 2010-05-14 Nuevos medicamentos de uso tópico basados en ácido hialurónico sulfatado como agente de activación o inhibición de la actividad de las citoquinas

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES16178620T Active ES2704921T3 (es) 2009-05-14 2010-05-14 Medicamentos para uso tópico basados en ácido hialurónico sulfatado para el tratamiento de coágulos de fibrina y trombos
ES18185228T Active ES2808575T3 (es) 2009-05-14 2010-05-14 Composiciones farmacéuticas para uso tópico basadas en ácido hialurónico sulfatado como promotor de absorción de la piel

Country Status (15)

Country Link
US (4) US20120121572A1 (es)
EP (3) EP3417855B1 (es)
CN (1) CN102427808B (es)
CA (2) CA2995610C (es)
ES (3) ES2704921T3 (es)
HR (1) HRP20161574T1 (es)
HU (1) HUE030673T2 (es)
IT (1) IT1397246B1 (es)
LT (1) LT2429515T (es)
PL (1) PL2429515T3 (es)
PT (1) PT2429515T (es)
RU (3) RU2543354C2 (es)
SI (1) SI2429515T1 (es)
SM (3) SMT201900015T1 (es)
WO (1) WO2010130468A1 (es)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8343942B2 (en) * 2008-04-04 2013-01-01 University Of Utah Research Foundation Methods for treating interstitial cystitis
JP5758797B2 (ja) 2008-04-04 2015-08-05 ユニバーシティ・オブ・ユタ・リサーチ・ファウンデイション アルキル化半合成グリコサミノグリカンエーテルならびにその製造および使用方法
IT1397247B1 (it) * 2009-05-14 2013-01-04 Fidia Farmaceutici Nuovi agenti regolatori dell'attivita' citochinica
US20130209531A1 (en) 2010-06-08 2013-08-15 University Of Utah Research Foundation Applications of partially and fully sulfated hyaluronan
CA2830933A1 (en) 2011-03-23 2012-09-27 University Of Utah Research Foundation Methods for treating or preventing urological inflammation
ES2991296T3 (es) 2014-10-17 2024-12-03 Fidia Farm Spa Sistema terapéutico dérmico de alta adhesividad
ITUB20155623A1 (it) * 2015-11-16 2017-05-16 Fidia Farm Spa Processo migliorato per la produzione di HA solfatato di elevata purezza
US11576925B2 (en) * 2016-04-25 2023-02-14 Mizhou Hui Application of low-molecular-weight hyaluronic acid (LMW-HA) fragments
WO2018053111A1 (en) 2016-09-15 2018-03-22 University Of Utah Research Foundation In situ gelling compositions for the treatment or prevention of inflammation and tissue damage
IT201600117042A1 (it) * 2016-11-18 2018-05-18 Fidia Farm Spa Acidi ialuronici solfatati funzionalizzati con dopamina
CN111228653A (zh) 2018-11-13 2020-06-05 格莱科米拉治疗公司 用电离辐射加强癌症治疗的方法
IT201900003887A1 (it) 2019-03-18 2020-09-18 Fidia Farm Spa Sistemi di stabilizzazione e di rilascio controllato di farmaci instabili alla sterilizzazione
WO2021133000A1 (ko) * 2019-12-23 2021-07-01 주식회사 엘지화학 항염 또는 항혈관신생용 약제학적 조성물
KR20240125432A (ko) * 2020-09-29 2024-08-19 지로파, 인코포레이티드 통증 완화 및 마취를 위한 조성물 및 방법
CN113754795B (zh) * 2021-10-19 2023-03-10 澳门大学 磺酸化透明质酸类化合物、其制备方法及其应用
US20260232768A1 (en) * 2023-02-09 2026-08-13 Yanhui Xie Treatment of atopic dermatitis with polyethylene glycol-modified interleukin 2, glucocorticoid and hyaluronic acid

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4303676A (en) * 1980-03-21 1981-12-01 Balazs Endre A Hyaluronate based compositions and cosmetic formulations containing same
US5639738A (en) * 1992-02-20 1997-06-17 Hyal Pharmaceutical Corporation Treatment of basal cell carcinoma and actinic keratosis employing hyaluronic acid and NSAIDs
ITPD940054A1 (it) * 1994-03-23 1995-09-23 Fidia Advanced Biopolymers Srl Polisaccaridi solfatati
DE69621528T2 (de) 1995-02-07 2003-01-16 Shiseido Co. Ltd., Tokio/Tokyo Anti-inflamatorische agenzien
GB2317182B (en) * 1996-09-11 2000-11-01 Johnson & Johnson Medical Sulfated polysaccharides and uses thereof in medical treatment
JPH10195107A (ja) * 1997-01-10 1998-07-28 Shiseido Co Ltd オリゴ硫酸化ヒアルロン酸
ATE229038T1 (de) 1997-04-04 2002-12-15 Fidia Advanced Biopolymers Srl N-sulfatierte hyaluronsäureverbindungen, ihre derivate und verfahren zu ihrer herstellung
DE19813234A1 (de) * 1998-03-26 1999-09-30 Knoell Hans Forschung Ev Verfahren zur Herstellung hochsulfatierter Hyaluronsäuren
JPH11279042A (ja) 1998-03-30 1999-10-12 Shiseido Co Ltd 皮膚外用剤
CN1116044C (zh) * 1998-06-24 2003-07-30 凌沛学 含有透明质酸钠的防粘连颗粒剂和粉雾剂及其制作方法
JP2000178196A (ja) * 1998-12-11 2000-06-27 Seikagaku Kogyo Co Ltd 新規ヒアルロニダーゼ阻害剤及び外用剤
DE59906392D1 (de) * 1998-12-23 2003-08-28 Esparma Gmbh Hyaluronatlyase als penetrationsförderer in topischen mitteln
WO2000069917A1 (fr) * 1999-05-18 2000-11-23 Maruho Kabushikikaisha Compositions medicinales destinees a inhiber le systeme kallikreine-kinine ou la phospholipase a¿2?
JP2001163789A (ja) * 1999-12-13 2001-06-19 Maruho Co Ltd マトリックスメタロプロテアーゼ阻害用医薬組成物
AU2001242315A1 (en) * 2000-03-21 2001-10-15 Astion Development Aps Chemical complex comprising a substituted pyridine carboxy derivative and a glucosaminoglycan
IL137559A (en) * 2000-07-27 2006-12-31 Amnon Sintov A system for administering drugs through the skin
DE10053053A1 (de) 2000-10-19 2002-05-16 Knoell Hans Forschung Ev Pharmazeutische Formulierungen zur Hemmung von entzündlichen Arthritiden
US20030162732A1 (en) * 2001-07-05 2003-08-28 Astion Development A/S Combination of aminosugars and cysteine or cysteine derivatives
ITMI20020756A1 (it) * 2002-04-09 2003-10-09 Sinclair Pharma S R L Composizioni farmaceutiche topiche per il trattamento delle dermatiti
US20060094643A1 (en) * 2002-07-03 2006-05-04 Yuri Svirkin Compositions of hyaluronic acid and methods of use
RU2329037C2 (ru) * 2003-02-14 2008-07-20 Комбинаторкс, Инкорпорейтед Комбинированная терапия для лечения иммуновоспалительных заболеваний
DE102004002001A1 (de) * 2004-01-14 2005-08-11 Reinmüller, Johannes, Dr.med. Mittel zur Behandlung von entzündlichen Erkrankungen
GB0411165D0 (en) * 2004-05-19 2004-06-23 Bionovate Ltd Hyaluronic acid containing pharmaceutical or veterinary compounds
ITPD20050168A1 (it) * 2005-06-01 2006-12-02 Fidia Advanced Biopolymers Srl Formulazioni di acido lipoico ed acido ialuronico e o suoi derivati e loro impiego in campo farmaceutico e cosmetico
RU2302231C1 (ru) * 2006-02-08 2007-07-10 Александр Егорович Петренко Глазные капли для лечения синдрома сухого глаза
ITPD20060219A1 (it) * 2006-05-31 2007-12-01 Fidia Farmaceutici Composizioni farmaceutiche contenenti acido ialuronico solfatato nel trattamento dell'osteoartrosi
ITMI20071724A1 (it) * 2007-09-05 2009-03-06 Fidia Farmaceutici Formulazioni topiche antivirali in forma di gel bioadesivo
IT1397247B1 (it) * 2009-05-14 2013-01-04 Fidia Farmaceutici Nuovi agenti regolatori dell'attivita' citochinica

Also Published As

Publication number Publication date
SI2429515T1 (sl) 2016-12-30
PT2429515T (pt) 2016-11-10
US20170107303A1 (en) 2017-04-20
SMT201600455B (it) 2017-01-10
CA2761628C (en) 2018-04-10
RU2014146977A (ru) 2016-06-10
EP3103449A3 (en) 2017-02-15
US11198741B2 (en) 2021-12-14
CA2995610C (en) 2020-04-28
ES2808575T3 (es) 2021-03-01
IT1397246B1 (it) 2013-01-04
EP3103449B1 (en) 2018-10-17
US10435483B2 (en) 2019-10-08
RU2543354C2 (ru) 2015-02-27
EP3417855A1 (en) 2018-12-26
US9504708B2 (en) 2016-11-29
CA2761628A1 (en) 2010-11-18
RU2014146985A3 (es) 2018-06-05
CN102427808A (zh) 2012-04-25
HUE030673T2 (hu) 2017-05-29
CA2995610A1 (en) 2010-11-18
CN102427808B (zh) 2020-05-19
RU2011145992A (ru) 2013-06-20
RU2014146977A3 (es) 2018-06-05
LT2429515T (lt) 2016-12-12
SMT201900015T1 (it) 2019-02-28
EP3417855B1 (en) 2020-07-01
SMT202000522T1 (it) 2020-11-10
RU2014146985A (ru) 2016-06-10
PL2429515T3 (pl) 2017-02-28
EP2429515A1 (en) 2012-03-21
US20120121572A1 (en) 2012-05-17
EP2429515B1 (en) 2016-09-07
WO2010130468A1 (en) 2010-11-18
ITPD20090134A1 (it) 2010-11-15
RU2673661C2 (ru) 2018-11-29
HRP20161574T1 (hr) 2016-12-30
ES2704921T3 (es) 2019-03-20
US20200010573A1 (en) 2020-01-09
RU2673066C2 (ru) 2018-11-22
EP3103449A2 (en) 2016-12-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2704921T3 (es) Medicamentos para uso tópico basados en ácido hialurónico sulfatado para el tratamiento de coágulos de fibrina y trombos
ES2602498T3 (es) Ácidos hialurónicos sulfatados como agentes reguladores de la actividad de citoquinas
HK1167083B (en) New medicines for topic use based on sulfated hyaluronic acid as activating or inhibiting agent of the cytokine activity
HK1167083A (en) New medicines for topic use based on sulfated hyaluronic acid as activating or inhibiting agent of the cytokine activity
JP7396585B2 (ja) Ｔｓｌｐ遺伝子発現抑制用、ｉｌ－３３遺伝子発現抑制用、又はフィラグリン産生促進用組成物
HK1258973B (en) Sulphated hyaluronic acids as regulator agents of the cytokine activity
HK1167084A (en) Sulphated hyaluronic acids as regulator agents of the cytokine activity
HK1167084B (en) Sulphated hyaluronic acids as regulator agents of the cytokine activity