ES2615515T3 - Proteína antisecretora para uso en el tratamiento del síndrome compartimental - Google Patents

Abstract

Una proteína de factor antisecretor (AF), un homólogo, y/o un fragmento de la misma, que tiene actividad antisecretora, y/o una de sus sales farmacéuticamente activas, para uso en el tratamiento y/o prevención de un síndrome compartimental causado por la presencia de un tumor benigno y/o maligno en un cuerpo.

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

DESCRIPCION

Protema antisecretora para uso en el tratamiento del smdrome compartimental Campo de la invencion

La invencion se encuentra en el campo del smdrome compartimental, y en diversas afecciones asociadas con el mismo. Mas espedficamente, la invencion concierne a la transferencia de lfquido, sales y sustancias entre celulas por un lado y por el otro los espacios extracelulares y el sistema vascular en un compartimento, formado por un tejido, organo y/o una estructura definida, en un organismo, opcionalmente con el proposito de su normalizacion. El compartimento cerrado comprende estructuras que vanan de tamano y se extienden de un tejido, una unidad anatomica definida a un organo en un organismo. La estructura afectada patologicamente podna presentar un mal funcionamiento debido a agentes toxicos, farmacos, hemorragia, tumores, que ocasionan una presion de lfquido intersticial anormalmente elevada. La invencion se refiere a protemas antisecretoras espedficas para usar dentro del campo del smdrome compartimental en condiciones patologicas, como se define en las reivindicaciones.

Antecedentes de la invencion

El termino smdrome compartimental se utiliza en la practica medica para caracterizar un estado patologico caracterizado por un aumento anormal de presion dentro de un volumen cerrado, un compartimento, que esta causando reduccion o incluso bloqueo del flujo de sangre y linfa a traves de un volumen definido, especificado. Una presion demasiado alta sobre los vasos sangumeos impide el flujo sangumeo a traves de las venas, los capilares e incluso las arteriolas y las arterias, altera las condiciones de trabajo para el lfquido intersticial en el entorno extracelular, dando como resultado la disminucion del suministro adecuado de nutrientes y oxfgeno para las celulas y los tejidos dentro de dicho espacio. Un factor igualmente importante es la carencia de drenaje de productos de desecho y metabolitos, a menudo acidos, que a traves de su acumulacion se anaden adicionalmente al deterioro de la funcion y el metabolismo de las celulas dentro de dicho compartimento. Un efecto neto de dichas alteraciones es que la presion en el compartimento aumenta y a la larga se acerca a niveles proximos a la presion arterial sistemica. La presion sangumea real a la entrada del sistema vascular arterial en el compartimento constituye de este modo un elemento clave, determinando el nivel maximo al que puede aumentar la presion. En estructuras avasculares, tales como cartflago y discos intervertebrales, el suministro adecuado depende de la transferencia de lfquido y otros componentes hacia y desde la zona de difusion, por medio de iones celulares y sistemas de bombeo de lfquido y por medio de gradientes de presion osmotica, que requieren funciones celulares apropiadas. Si persiste una PC (presion compartimental) fuertemente elevada, esta ocasionara una lesion grave a las celulas, tejidos y organos implicados. Las hemorragias y la hinchazon de las celulas y los tejidos en dicho compartimento se pueden anadir adicionalmente al dano como lo hace la subsiguiente isquemia. Cuanto mayor es el tiempo transcurrido con PC elevada, mas extenso y grave es el dano, que finalmente se vuelve irreversible y sigue la muerte celular necrotica. Al dano se anaden distorsion, deslocalizacion y rotura mecanicas. La muerte celular apoptotica se puede anadir con posterioridad a la lesion inicial. El SC (smdrome compartimental) crea senales de alarma clmica tales como dolor, sensibilidad, hinchazon y reduccion o incluso perdida de funcion, y finalmente necrosis. La gravedad del dano depende de la localizacion del compartimento, los tipos de celulas y tejidos implicados, las caractensticas del entorno extracelular, la PC real, las alteraciones metabolicas y su duracion por mencionar alguno de los factores clave de importancia para el resultado y las consecuencias a largo plazo.

La mayona de los compartimentos en el organismo estan delimitados por tejido conectivo denso, a menudo especializado como vainas, fascias, tendones, ligamentos, capsulas articulares o membranas colagenas no distensibles similares, tales como el pericardio. Adicionalmente, muchos organos endocrinos, tales como el tiroides, y las glandulas exocrinas estan englobados y subdivididos por membranas y vainas de tejido conectivo, formando de ese modo compartimentos. Otro ejemplo de compartimento recubierto, cerrado, ngido son las estructuras oseas, tales como las extremidades, el craneo, las vertebras y los huesos faciales. Cada tipo de celula y tejido expuesto a PC elevada esta caracterizado por su propia tolerancia a las alteraciones metabolicas y mecanicas preponderantes. Sin embargo, el relajamiento de la PC a niveles normales en un tiempo razonable alivia el dano.

La protema antisecretora es una protema de 41 kDa que originalmente fue descrita por proporcionar proteccion contra enfermedades diarreicas e inflamacion intestinal (para una revision, veanse Lange y Lonnroth, 2001). La protema antisecretora se ha secuenciado y se ha clonado su ADNc. Parece ser que la actividad antisecretora es ejercida principalmente por un peptido localizado entre las posiciones 35 y 50 de la secuencia de la protema antisecretora. Investigaciones inmunoqmmicas e inmunohistoqmmicas han revelado que esta presente la protema antisecretora y tambien puede ser sintetizada por la mayona de los tejidos y organos en un organismo. Se han caracterizado peptidos sinteticos, que comprenden la secuencia antidiarreica, (documento WO 97/08202; documento WO 05/030246). Los factores antisecretores se han descrito previamente para normalizar el transporte de lfquidos patologico y/o las reacciones inflamatorias, por ejemplo en el intestino y el plexo coroideo en el sistema nervioso central despues de la sensibilizacion con la toxina del colera (documento WO 97/08202). Tambien se sugirio por lo tanto que la adicion de factores antisecretores a comidas y alimentos era util para el tratamiento del edema, la diarrea, la deshidratacion y la inflamacion en el documento WO 97/08202. El documento WO 98/21978 describe el uso de productos que tienen actividad enzimatica para la produccion de una comida que induce la formacion de

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

protemas antisecretoras. El documento WO 00/038535 describe adicionalmente productos alimenticios enriquecidos en protemas antisecretoras tal cual.

Tambien se ha demostrado que la protema antisecretora y sus fragmentos mejoran la reparacion de tejido nervioso, y la proliferacion, apoptosis, diferenciacion, y/o migracion de celulas pluripotenciales y progenitoras y celulas derivadas de las mismas en el tratamiento de afecciones asociadas con la perdida y/o ganancia de celulas (documento WO 05/030246).

En la actualidad no hay farmacos disponibles que bloqueen ineqmvocamente el aumento de presion y la devuelvan a niveles normales en un SC establecido, ni que prevengan el dano en desarrollo en un SC amenazante o en curso. En la actualidad se utilizan soluciones hipertonicas p. ej. de urea o manitol para pacientes seleccionados que sufren de PIC (presion intracraneal) elevada, pero los efectos son transitorios durando solo unas pocas horas, dependiendo de la localizacion anatomica y del programa de tratamiento final. Tambien se han utilizado corticosteroides para contrarrestar la PIC elevada, pero se pueden desarrollar frecuentemente efectos secundarios graves. Tambien se han recomendado farmacos adicionales, pero principalmente para recluir los smtomas que se presentan. La disminucion de la temperatura interna corporal en combinacion con anestesia de barbiturato se considera beneficiosa. Esta no es, sin embargo, una terapia con farmacos fiable para el SC que se presenta p. ej. en musculos, articulaciones y nervios. La intervencion quirurgica constituye un tratamiento utilizado frecuentemente, pero adolece de la desventaja de anadir per se dano e incomodidad adicional asf como riesgos para el desarrollo de complicaciones.

Una diagnosis fiable de un SC inminente, en desarrollo o establecido puede ser diffcil de realizar incluso para un medico experimentado. Las ayudas al diagnostico basadas en el uso p. ej. de ultrasonido y formacion de imagenes mediante resonancia magnetica (MRI por las siglas en Ingles de "Magnetic Resonance Imaging") se han utilizado, en la actualidad a menudo junto con programas computarizados. En el presente contexto, se ha realizado la determinacion de la presion del lfquido intersticial en el compartimento que se va a investigar midiendo la presion real con la ayuda de un sensor muy pequeno en la punta de una fibra de vidrio que grna la luz. El diametro de la sonda fue de 0,4 mm y el diametro de la fibra de vidrio flexible solo de 0,3 mm, lo que significa que es probable que la lesion por el equipo de medicion no sea de importancia, anadiendo a penas un efecto perceptible sobre los niveles de presion. De ese modo, se debe considerar que el equipo utilizado presenta valores fiables sobre la presion que prevalece en el compartimento, tanto en el lfquido extracelular como en ciertos casos tambien intracelularmente en celulas y/o agregados celulares adyacentes.

Los factores antisecretores (AF por sus siglas en Ingles de "Antisecretory Factors"), espedficamente protemas y peptidos, como se ha descrito en detalle en el documento WO 97/08202, son eficaces para abolir las afecciones hipersecretoras y las enfermedades en el intestino, tales como la diarrea. Otros ejemplos relacionados con los efectos de los AF en relacion con las afecciones hipersecretoras son p. ej. las enfermedades intestinales inflamatorias, el edema cerebral, el glaucoma, la presion intracraneal elevada, la enfermedad de Meniere, y la mastitis. Los AF tambien han sido considerados para el tratamiento del glaucoma (documento WO 97/08202).

Compendio de la presente invencion

La presente invencion es segun las reivindicaciones.

Se describe el uso de una composicion farmaceutica que comprende una protema antisecretora, un homologo, derivado y/o uno fragmento del mismo, que tienen actividad antisecretora, y/o una de sus sales farmaceuticamente activas, para la fabricacion de una composicion farmaceutica y/o un producto nutricional medico para el tratamiento y/o la prevencion del smdrome compartimental. Tambien se describe el tratamiento y/o la prevencion de diversas afecciones asociadas con el smdrome compartimental, tales como la hinchazon de celulas y tejidos.

Ademas, tambien se describe un metodo para el tratamiento y/o prevencion de un smdrome compartimental, tal como se ha mencionado antes, comprendiendo dicho metodo administrar a un mairnfero que lo necesite una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion farmaceutica y/o un producto nutricional medico que comprende una protema antisecretora, un derivado, homologo, y/o fragmento del mismo, que tiene actividad antisecretora, y/o una de sus sales farmaceuticamente activas.

Ademas se describen diversas dosis y rutas de administracion adecuadas para el proposito de tratamiento pretendido asf como la edad, el genero, la afeccion del paciente etc.

El tratamiento es probable que sea muy util para pacientes en riesgo de desarrollar y/o padecer smdrome compartimental, y/o absorcion y/o liberacion de sustancias patogenas. Ademas, tal tratamiento es beneficioso tambien en otras afecciones caracterizadas por el recambio anomalo de lfquido e iones de compartimentos cerrados, tales como compartimentos con presiones anormales.

Breve descripcion de los dibujos

Figura 1: La Fig. 1 muestra la secuencia de aminoacidos de una protema antisecretora de acuerdo con el SEQ ID NO 6 de la presente invencion. La secuencia corresponde al SEQ ID NO 2 del documento US 6344440.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Figura 2: PIC en ratas medida con una sonda guiada por luz de fibra optica implantada en la corteza cerebral en la region de los ventnculos laterales. La Fig. 2a demuestra que la infeccion HSV-1 el d^a 5 da como resultado un aumento de la PIC en un exceso de 40 mm Hg. En contraste, el tratamiento de ratas infectadas con HSV-1 dos veces al dfa con AF, como se muestra en la Fig. 2 b, casi devolvio la PIC a niveles normales. La Fig. 2 c demuestra la PIC baja demostrable en una rata no infectada, no tratada, normal. La sonda se calibro frente a la presion de aire ambiente.

Figura 3: Frecuencia de supervivencia de las ratas infectadas con HSV-1 por medio de la administracion de una solucion de virus en la fosa nasal derecha el dfa 0. La mitad de las ratas (n = 15) se trataron dos veces al dfa con 1 |jg AF-16 (lmea superior) dos veces al dfa intranasalmente, mientras que la otra mitad recibio solo el vehmulo despues de la infeccion con HSV-1 (lmea inferior). De las tratadas solo con el vehmulo unicamente 10% sobrevivio el dfa 14, contrastando con 60% de las tratadas con AF-16. De este modo, AF-16 aumento significativamente la tasa de supervivencia en la encefalitis por HSV.

Figura 4: Secciones de cerebro a pocos (a, b) y muchos (c, d) aumentos de secciones de cerebro despues de la infeccion por HSV en roedores mediante instilacion de una solucion de virus en la fosa nasal derecha. Las celulas nerviosas con protema de HSV en su citoplasma se tinen perfectamente de oscuro. Las celulas gliales (d) en el talamo quedan subrayadas perfectamente debido a su abundancia de protemas de HSV en su citoplasma. Observese que muchas de las celulas nerviosas son no reactivas (no tenidas). No hubo diferencia en la frecuencia o la distribucion de las celulas cerebrales positivas al HSV-1 entre los animales que fueron tratados con AF-16 o solo con el vehmulo.

Figura 5: PCR cuantitativa realizada sobre tejidos cerebrales de ratas infectadas en su fosa nasal derecha con HSV- 1. Los espedmenes de cerebro se obtuvieron entre 5 a 14 dfas despues de la inoculacion del virus en la fosa nasal derecha. Los resultados no demuestran ninguna diferencia entre los grupos tratados con vehmulo y con AF por lo que se refiere a la cantidad de ADN de HSV-1. De este modo, AF-16 no afecta significativamente a la produccion HSV-1 a pesar de que el tratamiento con AF-16 mejoro significativamente la tasa de supervivencia (Fig. 2 b), en comparacion con los tratados solamente con el vehmulo (Fig. 2 a).

Figura 6: Secciones a traves de la lamina cribriforme, una estructura osea que separa el cerebro de la nariz y a traves de la cual para el nervio olfativo. En la figura izquierda (a) el complejo de colorante-protema de azul de Evans- albumina (EBA) se infundio en el espacio subaracnoideo el dfa 5 despues de la infeccion por HSV-1. El animal padecio encefalitis moderada. Observese que no hay EBA rojo en la lamina cribriforme, ni en la nariz, puesto que el paso entre el cerebro y la cavidad nasal se bloquea. En la figura derecha ( b ) el EBA se infundio en el espacio subaracnoideo de una rata normal, no infectada. Observese la coloracion de rojo intenso a lo largo de la placa cribriforme, que revela el paso de LCE desde el cerebro (arriba) a la cavidad nasal (abajo). El tratamiento de animales infectados por HSV-1 con AF-16 abrio el paso para el LCE a traves de la placa cribiforme y de este modo dio como resultado una vision que pareda identica a la de un animal no infectado, normal, como se esboza en la Fig. b.

Definiciones y abreviaturas Abreviaturas

PIC: presion intracraneal; LCE: lfquido cerebrospinal; SNC: sistema nervioso central, es decir el cerebro y la medula espinal; PLI: presion de lfquido intersticial; HSV: virus herpes simplex; PBS: solucion salina tamponada con fosfato; PC: presion compartimental; CC: compartimento cerrado; SC: smdrome compartimental; AF: factor antisecretor, AF- 16: un peptido compuesto de los aminoacidos VCHSKTRSNPENNVGL; octapeptido IVCHSKTR; heptapeptido VCHSKTR; hexapeptido CHSKTR; pentapeptido HSKTR.

Definiciones

En la presente memoria, "smdrome compartimental" se define como una presion elevada que da como resultado alteraciones metabolicas y finalmente dano dentro de un espacio definido en celulas, tejidos, estructuras y/u organos definidos delimitados por estructuras resistentes a la presion. El termino smdrome compartimental se utiliza en la practica medica para caracterizar una afeccion patologica caracterizada por un aumento de presion anomalo dentro de un volumen cerrado, es decir un compartimento, lo que ocasiona la reduccion o incluso el bloqueo p. ej. del flujo de sangre y/o linfa a traves de un volumen definido, especificado. El smdrome compartimental puede causar asf como estar causado por una variedad de afecciones, tales como tumores, segun se describe en la presente memoria. En el presente contexto, el termino "compartimento cerrado" se refiere a un espacio definido en tejidos, organos y/o una estructura anatomica delimitada por estructuras resistentes a la presion.

Las protemas son macromoleculas biologicas constituidas por residuos de aminoacidos conectados entre sf por enlaces peptfdicos. Las protemas, como polfmeros lineales de aminoacidos, tambien denominados polipeptidos. Por lo general, las protemas tienen 50-800 residuos de aminoacidos y por tanto tienen pesos moleculares en el intervalo de aproximadamente 6.000 a aproximadamente varios cientos de miles de Dalton o mas. Las protemas pequenas se denominan peptidos u oligopeptidos. Los terminos "protema" y "peptido" se pueden utilizar indistintamente en el presente contexto.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Una "composicion farmaceutica", en el presente contexto, se refiere a una composicion que comprende una cantidad terapeuticamente activa de una protema antisecretora, opcionalmente en combinacion con un excipiente farmaceuticamente activo, tal como un portador o un vehmulo. Dicha composicion farmaceutica se formula para la ruta de administracion apropiada, que puede variar dependiendo del estado del paciente, as^ como de otros factores, tales como la edad o la eleccion preferida. Una composicion farmaceutica que comprende una protema antisecretora sirve como un sistema de liberacion de farmaco. La composicion farmaceutica despues de la administracion presenta la sustancia activa al organismo de un ser humano o un animal. Dicha composicion farmaceutica puede estar en forma p. ej. de comprimidos, pfldoras, grageas, capsulas, pfldoras para la deposicion, geles, etc., pero no esta limitada a las mismas.

El termino "sal farmaceuticamente activa", se refiere a una sal de una protema antisecretora, que puede ser cualquier sal derivada de allf, basada en la serie de Hofmeiser. Otros ejemplos de las sales farmaceuticamente activas comprenden triflouroacetato, acetato y cloruro de lisina, pero la invencion no esta limitada estas.

El termino "antisecretor" se refiere en el presente contexto a inhibir o disminuir la secrecion, especialmente secreciones intestinales. Por tanto, el termino "protema antisecretora" se refiere a una protema capaz de inhibir o disminuir la secrecion en un organismo.

Un "producto nutricional medico", en el presente contexto, se refiere a una comida, que ha sido preparada con una composicion con una protema antisecretora, de acuerdo con la invencion. Dicha comida puede ser una comida adecuada, en forma lfquida o solida, tal como un lfquido o un polvo, o cualquier otro producto comestible adecuado. Los ejemplos de tal materia se pueden encontrar en el documento WO 0038535.

En el presente contexto, una "protema antisecretora", o uno de sus homologos y/o fragmentos, se puede utilizar indistintamente con el termino "factores antisecretores" o "protemas del factor antisecretor" como se ha definido en la patente WO 97/08202, y se refiere a una protema antisecretora o uno de sus peptidos o uno de sus homologos, derivados y/o fragmento que tienen actividad antisecretora. Por tanto, se debe entender que un "factor antisecretor", una "protema del factor antisecretor", un "peptido antisecretor", un "fragmento antisecretor", o una "protema antisecretora" en el presente contexto, tambien se pueden referir a un derivado, homologo y/o fragmento del mismo. Todos estos terminos se pueden utilizar indistintamente en el contexto de la presente invencion. Ademas, en el presente contexto, el termino "factor antisecretor" se puede abreviar como "AF". La protema antisecretora en el presente contexto tambien se refiere a una protema con propiedades antisecretoras como se ha definido previamente en el documento WO97/08202 y el documento WO 00/38535. Los factores antisecretores tambien se han descrito p. ej. en el documento WO 05/030246. Tambien se pretende que el termino factor antisecretor signifique la yema de huevo enriquecida en factores antisecretores como se ha descrito en el documento SE 900028-2 y el documento WO 00/38535 como se describe mas abajo adicionalmente.

Un "nebulizador", en el presente contexto, se refiere a un dispositivo medico que libera medicacion en forma de niebla a las vfas respiratorias. Los compresores del "nebulizador" impelen el aire a traves de tubos a un recipiente de medicamento relleno de medicamento lfquido. La fuerza del aire rompe el lfquido en partmulas diminutas de tipo niebla que pueden ser inhaladas profundamente en las vfas respiratorias.

Un "inhalador", en el presente contexto, se refiere a un dispositivo medico que libera medicacion en forma de polvo seco a las vfas respiratorias. El aire inhalado hace pasar el polvo seco que va a ser inhalado y distribuye las partmulas diminutas que pueden ser inhaladas profundamente en las vfas respiratorias. O bien el sujeto que va a ser tratado inhala para proporcionar la fuerza requerida al aire, o bien se utiliza aire comprimido, alternativamente se combinan los mismos.

El termino "aerosol" en el presente contexto, se refiere a una suspension gaseosa de partmulas finas solidas o lfquidas.

Un "microbio", segun se describe en la presente memoria, se refiere a un organismo vivo microscopico, tal como p. ej. una bacteria, un hongo, un protozoo asf como un virus. Otros ejemplos de microbios se proporcionan en la presente memoria.

Descripcion detallada de la invencion

Los autores de la presente invencion encontraron sorprendentemente que el tratamiento de un organismo vivo con protemas antisecretoras y/o peptidos (AF) restaura y normaliza la transferencia de nutrientes, productos de desecho, metabolitos, iones, agua y/u otras moleculas en el smdrome compartimental (SC). De este modo se ha encontrado sorprendentemente que las protemas y peptidos antisecretores restauran y/o normalizan la transferencia de agua, iones, metabolitos y sustancias que son p. ej. transferidas desde las celulas, asf como desde los vasos sangumeos a un compartimento cerrado (CC). Las protemas antisecretoras de ese modo reducen y/o contravienen los efectos perjudiciales, y pueden evitar tambien la internalizacion y/o la liberacion de sustancias que entran y/o estan siendo liberadas desde las celulas. Las protemas antisecretoras, homologos, derivados, fragmentos y/o peptidos de las mismas trabajan con independencia de si la causa inicial del smdrome compartimental es una hemorragia, un trauma, una carga pesada, una alteracion vascular, una infeccion por microbios y/o virus, agentes toxicos o una combinacion de cualquiera de dichas causas. Las protemas antisecretoras, los homologos, los derivados, los

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

fragmentos y/o peptidos de las mismas ayudan de este modo a mejorar la supervivencia de celulas y tejidos en el CC. Por consiguiente, el dano inducido de otro modo debido al SC se puede reducir, o incluso prevenir.

Existfa la necesidad desde hace mucho tiempo de farmacos mejorados con el objetivo del tratamiento farmacologico del smdrome compartimental, puesto que en la actualidad no esta disponible una terapia adecuada. Los efectos beneficiosos de las protemas antisecretoras de acuerdo con la presente invencion se ilustran en el siguiente texto.

Los autores de la presente invencion han encontrado que las protemas antisecretoras, homologos, derivados, fragmentos y/o peptidos de las mismas tienen efectos beneficiosos en casos de SC de diferente patogenesis en una diversidad de localizaciones diferentes. Sin desear limitar la presente invencion a una explicacion cientffica espedfica, se cree en la actualidad que las protemas y peptidos antisecretores (AF) pueden ser capaces de abolir el establecimiento del SC en de una manera poderosa, y normalizar las afecciones anteriormente mencionadas, debido a un efecto ejercido que se ha encontrado que tienen las protemas y los peptidos antisecretores (AF) sobre los conglomerados de lfpidos y las caveolas de las membranas celulares.

Los conglomerados de lfpidos son dominios de membrana con un tamano medio de nanometros, caracterizados por altas concentraciones centrales colesterol y esfingomielina (veanse Lodish et al., 2004; Pollard & Earnshaw, 2002; Ross & Pawlina, 2006). Los conglomerados de lfpidos contienen una variedad de protemas de membrana integrantes y perifericas implicadas en la transferencia de masas y la senalizacion celular. Tales plataformas de senalizacion flotan en las membranas celulares y se equipan con los elementos necesarios para las funciones apropiadas como receptores, factores de acoplamiento, sistemas de protemas G, efectores, enzimas y compuestos, y sustratos, siendo capaces de ese modo de recibir y transportar iones, moleculas y senales espedficas. Estos dominios estan interactuando ademas p. ej. con el citoesqueleto, y adicionalmente, influyen en la composicion y el recambio del lfquido intersticial asf como en su presion. La flotilina-1 es una protema, que es un indicador de la prevalencia de los conglomerados de lfpidos. Otro marcador de conglomerados de lfpidos es el esfingolfpido GMi. Adicionalmente, los conglomerados de lfpidos estan relacionados con las caveolas, invaginaciones con forma de botella demostrables en una gran variedad de celulas de mamffero y los sitios para importantes funciones celulares tales como el trafico vesicular y la transduccion de la senal asf como la absorcion, la internalizacion y procesos intracelulares adicionales de p. ej. virus. Existe un recambio de caveolas, que estan relacionadas con la liberacion y la internalizacion no solo de virus sino tambien de microbios. Existe un agrupamiento en las membranas celulares de conglomerados de lfpidos y caveolas de receptores del factor de crecimiento, receptores de la senal inflamatoria, receptores de neurotransmisores y sistemas para la reabsorcion de neurotransmisores, canales ionicos, acuaporinas, y otros transportadores. Los conglomerados de lfpidos y caveolas experimentan cambios dinamicos, rapidos relacionados con la funcion preponderante de celulas y organos en cada momento.

Los autores de la presente invencion han sido capaces recientemente de demostrar que esas protemas antisecretoras, homologos, derivados o fragmentos de las mismas, que tienen actividad antisecretora y/o su equivalente funcional y/o analoga, o una de sus sales farmaceuticamente activas, tienen efectos beneficiosos en el tratamiento y/o la prevencion de la disfuncion de los conglomerados de lfpidos y/o las caveolas en membranas celulares, tales como hipo- y/o hiper-funcion anormal, insuficiente.

De este modo, se ha demostrado que las protemas antisecretoras, derivados, homologos, y/o fragmentos de las mismas, que tienen una actividad funcional equivalente, y/o una de sus sales farmaceuticamente activas, tienen un efecto beneficioso sobre la disfuncion de los conglomerados de lfpidos y/o las caveolas en membranas celulares y se pueden utilizar por lo tanto para controlar y/o afectar beneficiosamente a la estructura, la distribucion y a multiples funciones de los conglomerados de lfpidos y/o caveolas en las membranas celulares. Los ejemplos de tales efectos beneficiosos pueden ser contrarrestar la funcion anormal, tal como la hipo- o hiper-funcion, restaurar y/o normalizar los conglomerados de lfpidos o caveolas estructuralmente y funcionalmente, mejorar la supervivencia y/o auxiliar en enfermedades, lesiones, procedimientos de reparacion y otras disfunciones. adicionalmente, dichas protemas antisecretoras se pueden emplear para controlar el transporte intracelular y liberar productos celulares, asf como para normalizar la distribucion de componentes del tejido.

Los ejemplos de las afecciones con un alto riesgo de desarrollo de SC son el trauma, asociado con tumores. El uso excesivo de farmacos son otros compuestos patogenos. Los tumores, primarios o metastasis, se anaden a la lista de ejemplos de causas potenciales que dan como resultado un SC.

En el presente contexto, la determinacion de la presion del lfquido intersticial en el compartimento que se va a investigar se realiza midiendo la presion real con la ayuda de un sensor en la punta de una fibra de vidrio guiada por luz. De este modo, se obtienen valores fiables de la presion preponderante en el compartimento, y en algunos casos tambien en celulas adyacentes.

Se sabe de las publicaciones especializadas p. ej. que muchos tumores solidos tienen una alta presion de lfquido intersticial, que dificulta el transporte por los capilares entre las celulas tumorales y la circulacion sangumea y linfatica. De ese modo se crea un obstaculo en lo que se refiere al tratamiento del tumor, debido a la absorcion insuficiente de agentes terapeuticos, tales como los farmacos citotoxicos (Vease Heldin et al., 2004). Adicionalmente, la generacion de radicales libres sera insuficiente en la terapia de radiacion debido a limitaciones en la capacidad de oxfgeno debido a la circulacion sangumea restringida. Existe por lo tanto una gran necesidad de

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

nuevos programas de tratamiento, que mejoren la eficacia de la terapia contra el cancer por medio de la disminucion de la presion de lfquido intersticial.

El uso de protemas y peptidos antisecretores (AF) no esta limitado a los tejidos, los organos y las estructuras anatomicas descritas en los ejemplos, pero incluye smtomas y enfermedades adicionales tambien caracterizados por elevada presion intersticial de lfquido en el tejido y por la absorcion y liberacion de sustancias espedficas.

La protema del factor antisecretor para usar de acuerdo con la presente invencion se puede administrar en un contexto por medio de la aplicacion topicamente, localmente in situ, oralmente, en la nariz, subcutaneamente y/o sistemicamente via vasos sangumeos o via tracto respiratorio.

El factor antisecretor es una clase de protemas que se produce naturalmente en el organismo. La protema humana del factor antisecretor es una protema de 41 kD, que comprende 382 aminoacidos cuando se afsla de la glandula pituitaria. El sitio activo con relacion al efecto del smdrome compartimental, de acuerdo con la presente invencion, parece que esta localizado respecto a la protema en una region proxima al extremo N de la protema, localizado muy probablemente en los aminoacidos 1-163 del SEQ ID NO 6, o en un fragmento de esta region.

Los autores de la presente invencion han demostrado que el factor antisecretor es homologo hasta cierto punto a la protema S5a, tambien denominada Rpn 10, que constituye una subunidad de un componente preponderante en todas las celulas, el proteosoma 26 S, mas espedficamente en el CAP 19 S/PA 700. En la presente invencion, las protemas antisecretoras se definen como una clase de protemas homologas que tienen las mismas propiedades funcionales. Los proteosomas tienen una multitud de funciones relacionadas con la degradacion de protemas sobrantes asf como protemas plegadas erroneamente, desnaturalizadas y por lo demas anormales no deseadas, de vida corta. Adicionalmente, el factor antisecretor/S5a/Rpn10 esta implicado en la distribucion y el transporte de componentes celulares, muy evidentemente protemas.

Los homologos, derivados y fragmentos de las protemas y/o peptidos antisecretores para usar de acuerdo con la presente invencion tienen todos la actividad biologica analoga de ser susceptibles de ser utilizados para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento y/o la prevencion del smdrome compartimental, asf como en un metodo para el tratamiento del smdrome compartimental. Los homologos, derivados y fragmentos, en el presente contexto, comprenden al menos 4 aminoacidos de una protema antisecretora de origen natural, que se puede modificar adicionalmente cambiando uno o mas aminoacidos con el fin de optimizar la actividad biologica de los factores antisecretores en el tratamiento y/o la prevencion del smdrome compartimental.

Ademas, tambien se considera que cualquier secuencia de aminoacidos que sea al menos identica en 70%, por ejemplo que sea identica al menos en 72%, 75%, 77%, 80%, 82%, 85%, 87%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% a la secuencia de aminoacidos de una protema, peptido, homologo, derivado y/o fragmento antisecretores para usar de acuerdo con la invencion, esta dentro del alcance de la presente invencion. En el presente contexto los terminos homologfa e identidad se utilizan indistintamente, es decir una secuencia de aminoacidos que tiene un grado de identidad especificado con otra secuencia de aminoacidos tiene el mismo grado de homologfa con una secuencia de aminoacidos especificada.

Se pretende que un derivado en el presente contexto sea una protema que tiene actividad antisecretora como se define en la presente memoria, estando derivada de otra sustancia bien directamente o por modificacion o sustitucion parcial, en donde uno o mas aminoacidos ha sido sustituido por otro aminoacido, aminoacido el cual puede ser un aminoacido modificado o no natural. Por ejemplo, los derivados del factor antisecretor segun la invencion pueden comprender un grupo protector N terminal y/o C terminal. Un ejemplo de un grupo protector N terminal incluye acetilo. Un ejemplo de un grupo protector C terminal incluye amida.

Se pretende que para las protemas, los homologos, los derivados, los peptidos y/o los fragmento de los mismo que tienen una secuencia de aminoacidos identica al menos, por ejemplo en 95% a un secuencia de aminoacidos de referencia, la secuencia de aminoacidos p. ej. del peptido sea identica a la secuencia de referencia, excepto que la secuencia de aminoacidos puede incluir hasta 5 mutaciones puntuales por cada 100 aminoacidos de la secuencia de aminoacidos de referencia. En otras palabras, para obtener un polipeptido que tiene una secuencia de aminoacidos identica al menos en 95% a una secuencia de aminoacidos de referencia, hasta 5% de los aminoacidos en la secuencia de referencia se pueden suprimir o sustituir por otro aminoacido, o un numero de aminoacidos hasta 5% de los aminoacidos totales en la secuencia de referencia se pueden insertar en la secuencia de referencia. Estas mutaciones de la secuencia de referencia se pueden producir en las posiciones amino o carboxi terminales de la secuencia de aminoacidos de referencia o en cualquier parte entre las posiciones terminales, intercaladas individualmente entre los aminoacidos de la secuencia de referencia o en uno o mas grupos contiguos dentro de la secuencia de referencia.

En la presente invencion, un programa de algoritmos locales es el que mejor se ajusta para determinar la identidad. Los programas de algoritmos locales, (tal como el de Smith Waterman) compara una subsecuencia en una secuencia con una subsecuencia en una segunda secuencia, y encuentra la combinacion de las sub-secuencias y el alineamiento de esas sub-secuencias, que produce la puntuacion de similitud global mas alta. Los espacios internos,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

si se permitieran, estan penalizados. Los algoritmos locales trabajan bien para comparar dos protemas multidominio, que tienen un solo dominio, o solo un sitio de union en comun.

Los metodos para determinar la identidad y la similitud estan codificados en programas disponibles para el publico. Los metodos del programa para ordenador preferidos para determinar la identidad y la similitud entre dos secuencias incluyen, pero no estan limitados a, el paquete de programas GCG (Devereux, J et al (1994)) BLASTP, BLASTN, y AFsTa (Altschul, S.F. et al (1990)). El programa BLASTX esta disponible para el publico del NCBI y otras fuentes (BLAST Manual, Altschul, S.F. et al, Altschul, S.F. et al (1990)). Cada programa de analisis de secuencia tiene una matriz de puntuacion por defecto y penalidades del espacio por defecto. En general, un biologo molecular utilizana los ajustes por defecto establecidos en el programa de soporte logico utilizado.

Las protemas antisecretoras o uno de sus peptidos u homologos, derivados y/o fragmentos que tienen actividad antisecretora como se ha definido la presente memoria, pueden comprender 4 aminoacidos o mas, tal como 5-16 aminoacidos, tal como 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 aminoacidos o mas. En otras realizaciones preferidas el factor antisecretor consiste en 42, 43, 45, 46, 51, 80, 128, 129 o 163 aminoacidos. En realizaciones preferidas el factor antisecretor consiste en 5, 6, 7, 8 o 16 aminoacidos.

En una realizacion preferida, dicha protema antisecretora se proporciona a una concentracion de al menos 1000 unidades FIL/ml en dicha yema de huevo. En el presente contexto una unidad FIL corresponde a una reduccion de 50% del flujo de lfquido en el intestino en comparacion con un control sin suministro de factores antisecretores, como se ha descrito en el documento WO 00/38535 y el documento SE 9000028-2.

En otra realizacion preferida, las protemas antisecretoras o uno de sus peptidos u homologos, derivados o fragmentos que tiene actividad antisecretora para usar de acuerdo con la presente invencion consisten en una secuencia de acuerdo con las siguientes formulas:

X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5

donde X1 es I, los aminoacidos 1-35 del SEQ ID NO 6, o esta ausente, X2 es H, R o K, X3 es S o L, X4 es T o A, X5 es los aminoacidos 43-46, 43-51,43-80 o 43-163 del SEQ ID NO 6, o esta ausente.

El factor antisecretor para usar de acuerdo con la presente invencion, se puede producir in vivo o in vitro, p. ej. sintetizado recombinantemente, sinteticamente y/o qmmicamente, y/o aislado de una fuente de origen natural de factores antisecretores, tal como a partir de glandulas pituitarias de cerdo o de huevos de aves. Despues de su produccion, los factores antisecretores se pueden procesar adicionalmente, por ejemplo mediante escision qmmica o enzimatica a fragmentos activos antisecretores mas pequenos o mediante modificacion de aminoacidos. En la actualidad no es posible obtener factor antisecretor en forma pura mediante purificacion. Sin embargo es posible producir una protema biologicamente activa del factor antisecretor recombinantemente o sinteticamente, como se ha descrito previamente en el documento WO 97/08202 y el documento WO 05/030246. El documento WO 97/08202 tambien describe la produccion de fragmentos biologicamente activos de esta protema de 7-80 aminoacidos.

El factor antisecretor para usar de acuerdo con la invencion puede comprender adicionalmente un grupo protector N terminal y/o C terminal. Un ejemplo de un grupo protector N terminal incluye acetilo. Un ejemplo de un grupo protector C terminal incluye amida.

En una realizacion preferida de la presente invencion el factor antisecretor es uno seleccionado entre los SEQ ID NO 1-6, es decir VCHSKTRSNPENNVGL (SEQ ID NO 1, en este contexto tambien denominado AF-16), IVCHSKTR (SEQ ID NO 2), VCHSKTR (SEQ ID NO 3), CHSKTR (SEQ ID NO 4), HSKTR (SEQ ID NO 5), o la secuencia de aminoacidos de una protema antisecretora de acuerdo con el SEQ ID NO 6 utilizando las abreviaturas de una letra comunes para aminoacidos. Los SEQ ID NO 1, 2, y 3 se han descrito previamente p. ej. en el documento WO 05/030246. Como se especifica en la lista de secuencia adjunta, algunos de los aminoacidos en las secuencias anteriormente especificadas se pueden remplazar por otros aminoacidos. A continuacion en este parrafo, la posicion de un aminoacido concreto en una secuencia de aminoacidos concreta se calcula desde la izquierda, indicando que el aminoacido mas N-terminal esta en la posicion 1 en esa secuencia concreta. Se pueden realizar una o varias sustituciones de aminoacidos cualesquiera como se especifica mas abajo independientemente de otra u otras sustituciones de aminoacido cualesquiera en esa secuencia. En el SEQ ID NO 1, C en la posicion 2 se puede remplazar por S, H en la posicion 3 se puede remplazar por R o K, S en la posicion 4 se puede remplazar por L, y/o T en la posicion 6 se puede remplazar por A. En el SEQ ID NO 2, C en la posicion 3 se puede remplazar por S, H en la posicion 4 se puede remplazar por R o K, S en la posicion 5 se puede remplazar por L, y/o T en la posicion 7 se puede remplazar por A. En el SEQ ID NO 3, C en la posicion 2 se puede remplazar por S, H en la posicion 3 se puede remplazar por R o K, S en la posicion 4 se puede remplazar por L, y/o T en la posicion 6 se puede remplazar por A. En el SEQ ID NO 4, C en la posicion 1 se puede remplazar por S, H en la posicion 2 se puede remplazar por R o K, S en la posicion 3 se puede remplazar por L, y/o T en la posicion 5 se puede remplazar por A. En el SEQ ID NO 5, H en la posicion 1 se puede remplazar por R o K, S en la posicion 2 se puede remplazar por L, y/o T en la posicion 4 se puede remplazar por A.

Tambien se puede usar la combinacion de dos o mas de cualquiera de los fragmentos de acuerdo con el SEQ ID NO 1-6, opcionalmente tambien en combinacion con yema de huevo enriquecida en factores antisecretores.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

Tambien se describe la posibilidad de tratar y/o prevenir el smdrome compartimental por medio de la administracion de yema de huevo enriquecida en factores antisecretores. El documento SE 9000028-2 describe como la formacion de factores antisecretores puede ser estimulada en aves y la posterior recuperacion de los factores antisecretores a partir de productos digeridos de yema de huevo. El documento WO 00/38535 describe adicionalmente como se pueden administrar tales factores antisecretores recuperados o concentrados a animales o seres humanos con una comida o un alimento, o, en forma de productos mas o menos aislados, formulados en productos farmaceuticos. Por lo tanto, tambien se describe el uso de yema de huevo enriquecida en factores antisecretores para la preparacion de productos, tales como composiciones farmaceuticas, para el tratamiento y/o la prevencion del smdrome compartimental o para su uso en un metodo de tratamiento.

En una realizacion de la presente invencion, la composicion farmaceutica comprende adicionalmente un excipiente farmaceuticamente aceptable. La eleccion de los excipientes farmaceuticamente aceptables y su concentracion optima para su uso de acuerdo con la presente invencion puede ser determinada facilmente por el experto en la tecnica por medio de experimentacion. Los excipientes farmaceuticamente aceptables incluyen disolventes, agentes tamponadores, conservantes, agentes quelantes, antioxidantes, estabilizadores, agentes emulsionantes, agentes suspensores y/o diluyentes. Las composiciones farmaceuticas se pueden formular de acuerdo con la practica farmaceutica convencional, p. ej. de acuerdo con "Remington: The science and practice of pharmacy", 21a edicion, ISBN 0-7817-4673-6 o "Encyclopedia of pharmaceutical technology", 2s edicion, ed. Swarbrick J., ISBN: 0-82472152-7. Un excipiente farmaceuticamente aceptable es una sustancia que es sustancialmente inocua para el individuo al que se va a administrar la composicion. Tal excipiente normalmente satisface los requerimientos proporcionados por las autoridades sanitarias nacionales. Farmacopeas oficiales tales como p. ej. la Farmacopea Britanica, la Farmacopea de los Estados Unidos y la Farmacopea Europea establecen patrones para los excipientes farmaceuticamente aceptables.

Lo siguiente es una revision de las composiciones relevantes para el uso opcional en una composicion farmaceutica. La revision esta basada en la ruta de administracion concreta. Sin embargo, se aprecia que en aquellos casos en los que se puede emplear un excipiente farmaceuticamente aceptable en diferentes formas de dosificacion o composiciones, la aplicacion de un excipiente farmaceuticamente aceptable concreto no esta limitada a una forma de dosificacion concreta o a una funcion concreta del excipiente. Se debe hacer enfasis en que la invencion no esta limitada al uso de las composiciones mencionadas a continuacion.

Composiciones parenterales:

Para la aplicacion sistemica, las composiciones para su uso de acuerdo con la invencion pueden contener portadores y excipientes farmaceuticamente aceptables convencionales no toxicos, incluyendo microesferas y liposomas. La liberacion transcutanea constituye una ruta alternativa para la administracion sistemica.

Las composiciones para su uso de acuerdo con la invencion pueden incluir toda clase de composiciones solidas, semisolidas y ftquidas.

Los excipientes farmaceuticamente aceptables pueden incluir disolventes, agentes tamponadores, conservantes, agentes quelantes, antioxidantes, estabilizantes, agentes emulsionantes, agentes suspensores y/o diluyentes. Los ejemplos de los diferente agentes se proporcionan mas abajo.

Ejemplos de los diversos agentes:

Los ejemplos de los disolventes incluyen pero no estan limitados a agua, alcoholes, sangre, plasma, fluido espinal, fluido de ascitis y fluido linfatico.

Los ejemplos de los agentes tamponadores incluyen pero no estan limitados a acido cftrico, acido acetico, acido tartarico, acido lactico, acido hidrogenofosforico, bicarbonatos, sales fosfato, dietilamina, etc.

Los ejemplos de los agentes quelantes incluyen pero no estan limitados a sal sodica de EDTA y acido cftrico.

Los ejemplos de antioxidantes incluyen pero no estan limitados anisol hidroxibutilado (BHA), acido ascorbico y sus derivados, tocoferol y sus derivados, cistema, y sus mezclas.

Los ejemplos de los diluyentes y los agentes disgregantes incluyen pero no estan limitados a lactosa, sacarosa, Emdex, fosfatos de calcio, carbonato de calcio, sulfato de calcio, manitol, almidones y celulosa microcristalina.

Los ejemplos de los agentes aglutinantes incluyen pero no estan limitados a sacarosa, polisacaridos, sorbitol, goma de acacia, alginato de sodio, gelatina, almidones, celulosa, quitosanas, carboximetilcelulosa sodica, metilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, polivinilpirrolidona y polietilenglicol.

La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la invencion se puede administrar en un contexto de administracion local o via infusion periferica intravenosa o via inyeccion intramuscular o subcutanea al paciente o via rutas bucal, pulmonar, nasal, cutanea u oral. Ademas, tambien es posible administrar la composicion farmaceutica a traves de una derivacion insertada quirurgicamente en un ventnculo cerebral del paciente.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

En una realizacion, la composicion farmaceutica para usar de acuerdo con la presente invencion se formula para su administracion intraocular, local, intranasal, oral, subcutanea y/o sistemica. En una realizacion preferida, la composicion para su uso de acuerdo con la invencion se administra mediante aplicacion en forma de una suspension o, incluso mas preferiblemente, un polvo para su inhalacion con un pulverizador, aerosol, inhalador o nebulizador nasalmente y/o al tracto respiratorio.

La administracion de un polvo que comprende factores antisecretores tiene ventajas adicionales en terminos de estabilidad y dosificacion. Una composicion farmaceutica para usar de acuerdo con la invencion se puede administrar tambien topicamente, intraocularmente, intranasalmente, oralmente, subcutaneamente y/o sistemicamente via vasos sangumeos. En una realizacion preferida, la composicion farmaceutica se formula para su administracion intravenosa, intramuscular, local, oral o nasal. Por lo general, cuando se utiliza para la aplicacion topica al ojo, la concentracion aplicada en la composicion de la invencion es de 1 |jg a 10 mg por aplicacion, por ejemplo de 1 jg a 1 mg por aplicacion, preferiblemente 50 - 1000 jg preferiblemente 50 - 250 jg, ya sea en una sola dosis por dfa o repetida varias veces por dfa (dosis multiples), pero no esta limitada a ello.

Sistemicamente administrada a la sangre, la dosis se encuentra dentro del intervalo de 0,1 jg a 10 mg por aplicacion y kg de peso corporal, por ejemplo 0,1 jg a 1 mg por aplicacion y kg de peso corporal, preferiblemente 1 - 1000 jg/kg de peso corporal, por ejemplo preferiblemente 1 - 50, 10 - 100, 100 - 250, o 50 - 500 jg/kg de peso corporal, sea en una sola dosis por dfa o repetida varias veces por dfa. Cuando se utiliza yema de huevo enriquecida en factores antisecretores de acuerdo con la presente invencion, esta formulacion se administra preferiblemente oralmente.

Por lo tanto, la presente invencion se refiere a una protema antisecretora, homologo, y/o fragmento de la misma, que tiene actividad antisecretora, y/o una de sus sales farmaceuticamente activas, para uso en el tratamiento y/o prevencion del smdrome compartimental causado por la presencia de un tumor benigno y/o maligno en un cuerpo. En una realizacion, dicha protema antisecretora consiste en una secuencia de acuerdo con la siguiente formula

X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5

donde X1 es I, los aminoacidos 1-35 del SEQ ID NO 6, o esta ausente, X2 es H, R o K, X3 es S o L, X4 es T o A, X5 es los aminoacidos 43-46, 43-51, 43-80 o 43-163 del SEQ ID NO 6, o esta ausente. En otra realizacion, la protema antisecretora comprende una secuencia de aminoacidos como se muestra en el SEQ ID NO:1. En otra realizacion, la protema antisecretora comprende una secuencia de aminoacidos como se muestra en el SEQ ID NO:2. En otra realizacion mas, la protema antisecretora comprende una secuencia de aminoacidos como se muestra en el SEQ ID NO:3. En otra realizacion mas, la protema antisecretora comprende una secuencia de aminoacidos como se muestra en el SEQ ID NO:4. En otra nueva realizacion, la protema antisecretora comprende una secuencia de aminoacidos como se muestra en el SEQ ID NO:5.

Ademas, en otra realizacion mas, la protema antisecretora es una protema con una secuencia de aminoacidos como se muestra en el SEQ ID NO 6, o uno de sus homologos, y/o fragmentos que comprenden los aminoacidos 38-42 del SEQ ID NO 6.

En otra realizacion mas, la composicion farmaceutica segun se describe en la presente memoria, comprende dos o mas protemas antisecretoras seleccionadas entre las protemas descritas en los SEQ ID NO:1-6, y SEQ ID NO 6 o sus homologos, derivados y/o fragmentos que comprenden los aminoacidos 38-42 del SEQ ID NO 6, o una secuencia como se ha descrito mediante las formulas generales descritas en la presente memoria. Dichas secuencias son todas igualmente preferidas para ser utilizadas en la presente invencion.

En una realizacion preferida, dicha protema antisecretora se proporciona en yema de huevo enriquecida en tal protema antisecretora, y donde dicha protema antisecretora se proporciona preferiblemente a una concentracion de al menos 1000 unidades FIL/ml en dicha yema de huevo.

En una realizacion de la invencion, dicha composicion farmaceutica comprende adicionalmente un excipiente farmaceuticamente aceptable. Tal excipiente puede ser cualquier excipiente preferible elegido para que sea apropiado para el proposito espedfico. Los ejemplos de los excipientes se describen en la presente memoria.

En otra realizacion de la invencion, dicha composicion farmaceutica se formula para su administracion intraocular, intranasal, oral, local, subcutanea y/o sistemica. La ruta de administracion elegida variara dependiendo del estado del paciente que se vaya a tratar y de la edad y el genero del paciente etc.

En otra realizacion, la composicion farmaceutica se formula para su administracion en forma de una pulverizacion, un aerosol o mediante un nebulizador o un inhalador. En otra realizacion mas, la invencion se refiere a una composicion farmaceutica y/o un producto nutricional medico que se formula para su administracion sistemicamente a la sangre a una dosis de 0,1 jg a 10 mg por aplicacion y kg de peso corporal, por ejemplo de 0,1 jg a 1 mg por aplicacion y kg de peso corporal, preferiblemente 1 - 1000 jg/ kg de peso corporal, tal como preferiblemente 1 - 50, 10 -100, 100 - 250, o 50 - 500 jg/ kg de peso corporal, ya sea en una sola dosis por dfa o repetida varias veces por dfa. En otra realizacion, dicha dosis es 1 - 100 jg por aplicacion y kg de peso corporal y dfa. La cantidad de la composicion farmaceutica que es distribuida al paciente que lo necesite variara por supuesto dependiendo del

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

paciente que se vaya a tratar, y sera decidida por el experto en la tecnica, tal como un medico, para cada ocasion. Dicha administracion se puede realizar en forma de una sola dosis o en forma de aplicaciones diarias multiples.

Tambien se describe el uso de una protema antisecretora, sus derivados, homologos, y/o fragmentos, que tienen actividad antisecretora, y/o una de sus sales farmaceuticamente activas, para la fabricacion de una composicion farmaceutica y/o un producto nutricional medico para el tratamiento y/o la prevencion del smdrome compartimental, donde dicho smdrome ocasiona la hinchazon anomala de celulas y tejidos. Adicionalmente, los farmacos pueden ocasionar la elevacion de las presiones de lfquido intersticial en los tejidos asf como hinchazon celular.

Segun la invencion, el smdrome compartimental esta causado por un tumor benigno y/o maligno presente en cualquier parte en un organismo y/o esta relacionado con el tratamiento del tumor y/o estructuras adyacentes. Los tumores estan caracterizados por presiones intersticiales elevadas, que pueden reducir la disponibilidad de las celulas tumorales a los farmacos y las medidas terapeuticas. Ademas, la presion elevada en un tumor puede afectar su tendencia a la diseminacion metastasica. Adicionalmente, los tumores pueden ocasionar debido a su expansion de tamano aumento de presion en tejidos y organos normales adyacentes, generando un SC. De este modo el SC es una complicacion frecuente y grave en muchas vmtimas que padecen tumores. En otra realizacion mas, dicho smdrome esta causado por un farmaco y/o una composicion farmaceutica. En otra realizacion mas, dicho smdrome esta causado por efectos secundarios causados por el tratamiento de un tumor con rayos X, radiacion de alta energfa, enfriamiento local, calentamiento local, fototerapia y farmacos utilizados para el tratamiento del tumor.

Se describe un metodo para el tratamiento y/o la prevencion del smdrome compartimental en un mairnfero que lo necesite, comprendiendo dicho metodo administrar una cantidad eficaz de una composicion farmaceutica que comprende una protema antisecretora o uno de sus derivados, homologos, y/o fragmentos, que tienen actividad antisecretora, y/o una de sus sales farmaceuticamente activas. Dicha protema antisecretora puede consistir en una secuencia de acuerdo con la siguiente formula X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5 donde X1 es I, los aminoacidos 1-35 del SEQ ID NO 6, o esta ausente, X2 es H, R o K, X3 es S o L, X4 es T o A, X5 es los aminoacidos 43-46, 43-51, 43-80 o 43-163 del SEQ ID NO 6, o esta ausente. En otro metodo, dicha protema antisecretora comprende una secuencia de aminoacidos como se muestra en el SEQ ID NO:1. En otro metodo mas, dicha protema antisecretora comprende una secuencia de aminoacidos como se muestra en el SEQ ID NO:2. En otro metodo mas, dicha protema antisecretora comprende una secuencia de aminoacidos como se muestra en el SEQ ID NO:3. Ademas, en otro metodo dicha protema antisecretora comprende una secuencia de aminoacidos como se muestra en el SEQ ID NO:4. En otro metodo mas, dicha protema antisecretora comprende una secuencia de aminoacidos como se muestra en el SEQ ID NO:5. En otro metodo mas, dicha protema antisecretora es una protema con una secuencia de aminoacidos como se muestra en el SEQ ID NO 6, o uno de sus homologos, derivados y/o fragmentos que comprenden los aminoacidos 38-42 del SEQ ID NO 6. En un metodo, dicha composicion farmaceutica comprende dos o mas protemas antisecretoras seleccionadas entre las protemas del SEQ ID NO:1-6, y SEQ ID NO 6 o uno de sus homologos, derivados y/o fragmentos que comprenden los aminoacidos 38-42 del SEQ ID NO 6, o una secuencia como la descrita por la formula general en la presente memoria. Ademas, en un metodo como se describe en la presente memoria, dicha protema antisecretora se proporciona en yema de huevo enriquecida en tal protema antisecretora, y dicha protema antisecretora preferiblemente se proporciona a una concentracion de al menos 1000 unidades FIL/ml en dicha yema de huevo. En otro metodo mas, dicha composicion farmaceutica comprende adicionalmente un excipiente farmaceuticamente aceptable. Dicha composicion farmaceutica se puede formular para su administracion intraocular, intranasal, oral, local, subcutanea y/o sistemica. Dicha composicion farmaceutica y/o producto nutricional se puede formular para su administracion en forma de una pulverizacion, un aerosol, o mediante un nebulizador o un inhalador. En otro metodo, la composicion farmaceutica se formula para su administracion sistemicamente a la sangre a una dosis de 0,1 |jg a 10 mg/kg por aplicacion y kg de peso corporal y dfa, preferiblemente 1-1000 jg por aplicacion y kg de peso corporal y dfa. En un metodo, dicha administracion se realiza en forma de una sola dosis o en forma de aplicaciones diarias multiples. Tambien se describe un metodo para el tratamiento y/o la prevencion del smdrome compartimental en un mamffero que lo necesite, comprendiendo dicho metodo administrar una cantidad eficaz de una composicion farmaceutica que comprende una protema antisecretora o uno de sus derivados, homologos, y/o fragmentos, que tienen actividad antisecretora, y/o una de sus sales farmaceuticamente activas, donde dicho smdrome ocasiona la hinchazon anormal de celulas y tejidos.

Seccion experimental

Ejemplo Num. 1

Se infectaron ratas adultas mediante instilacion en su fosa nasal derecha de una solucion de virus Herpes Simplex tipo 1 (HSV-1; cepa 2762, lote 041028; 1,7 x 107 PFU/mL; 25 jL). Un grupo de animales (n = 6) recibio 10 min despues de la infeccion 25 jL (10 jg) de AF-16 en su fosa nasal derecha, y despues de eso se le instilo la misma dosis de AF-16 dos veces al dfa, cada manana a las 8 AM y cada noche a las 6 PM, hasta que termino el experimento el dfa 6. Ratas infectadas con HSV-1 adicionales (n = 6) recibieron en la nariz a los mismos intervalos de tiempo 25 jL del vehmulo, solucion salina tamponada con fosfato (PBS). El dfa 6, los animales se anestesiaron, se realizo una incision quirurgica a lo largo de la piel de la cabeza, y se libero el hueso del craneo del periostio y el tejido conectivo. Se taladro un agujero con un diametro de aproximadamente 1 mm a traves del hueso parietal derecho y se inserto un sensor de presion en miniatura 3-5 mm en el cerebro o en el ventnculo lateral. Se utilizo un sistema de medicion de la presion de fibra optica (Samba System 3200 & Samba Preclin 420 Sensor; Samba

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

Sensors AB, V Frolunda, Suecia) con un diametro muy pequeno, “ 0,4 mm. Las ratas normales no infectadas teman una presion intracraneal (PIC) que oscilaba entre 4-8 mm Hg, ocasionalmente hasta 12 mm Hg (Fig. 2c). Se midio que las ratas infectadas con HSV-1 tratadas solamente con el vehmulo teman presiones tal elevadas como 30 - 45 mm Hg (Fig. 2a), afectando considerablemente a los animales como reflejaban los smtomas de disfuncion neurologica de gravedad creciente. En contraste, Las ratas infectadas con HSV-1 tratadas desde el momento de la infeccion con AF-16 dos veces diariamente teman PIC casi normales, 8 - 14 mm Hg (Fig. 2 b). Una observacion clave fue que el tratamiento intranasal dos veces al dfa con AF-16 evito el desarrollo de disfunciones neurologicas tales como nariz humeda, ojos enrojecidos, hipersalivacion, dificultad respiratoria, inestabilidad motora, agitacion, agresividad, letargo, cambios rapidos de estado de animo, movimientos repetitivos, ataques, signos de paresia y eventualmente perdida de conocimiento.

Todos los animales infectados con HSV-1 adicionales con smtomas claramente manifiestos fueron tratados con 10 o 25 |jg de AF-16 intranasalmente, empezando el dfa 5, 6 o 7, esto es, despues de haber tomado el vehmulo durante los dfas previos. En tales casos los smtomas de disfunciones neurologicas descritos mas arriba se redujeron en media hora y no volvieron a manifestarse durante una hora. Al mismo tiempo, los efectos reductores de la presion beneficiosos de AF-16 en tales ratas infectadas y tratadas con AF-16 fueron detectables en una hora y se prolongaron durante varias horas. De este modo, ninguna de las ratas tratadas con AF-16 agudamente tuvo signos persistentes de PIC deleterea y por tanto no desarrollaron SC.

La infusion del colorante azul de Evans, conjugada con albumina de suero bovino (EBA), en el espacio subaracnoideo y en los ventnculos laterales dio como resultado ratas normales en las que podfa presentarse el marcador en la mucosa nasal despues de 15-30 minutos (Fig. 5 b). Esto demuestra que una considerable porcion de LCE es drenado de los vasos linfaticos en la mucosa nasal y adicionalmente a traves de las glandulas linfaticas cervicales, volviendolas de color azul (de color Rojo si se investiga mediante microscopfa de fluorescencia). Las ratas infectadas con HSV-1 con signos de disfunciones neurologicas no mostraron, habiendo tenido EBA infundido de un modo similar, tincion de la lamina cribriforme, ni de la mucosa nasal (Fig. 5 a). Esto se observa en la figura mencionada (Fig. 5 a ) ya que no hay tincion de rojo en la mitad derecha de la figura. Sin embargo, el tratamiento con 10 o 25 jg de AF-16 intranasalmente convirtio la imagen de las ratas infectadas con HSV-1 en la de las no infectadas, normales. De este modo, la infusion intranasal de AF-16 revirtio el bloqueo de flujo de LCE, inducido por la infeccion por HSV-1. De ese modo se restauro el flujo de LCE y la PIC volvio a la normalidad.

Los autores de la presente invencion concluyeron que el tratamiento de roedores con AF-16 minimiza los smtomas clmicos de la encefalitis por HSV-1 y, muy evidentemente, normaliza la PIC elevada de otro modo, contrastando con los efectos deletereos por la PIC muy elevada medida en aquellas infectadas con HSV-1 y tratadas solamente con el vehmulo, PBS. Se sabe a partir de la practica clmica que las vmtimas que padecen encefalitis tienen una PIC elevada, que es de capital importancia ya que causa una lesion cerebral no solamente aguda sino tambien persistente. En realidad, se considera que la PIC elevada tiene una importancia clave al ser a la larga causa de disfuncion neurologica y muerte. De este modo, los resultados del experimento num. 1 de los autores de la presente invencion describieron que la administracion de AF-16 a un organismo que padece una afeccion que satisface los criterios de un SC contrarrestaba rapidamente la PIC elevada patologicamente, la reducfa e incluso la devolvfa a un nivel normal, evitando el desarrollo de disfunciones neurologicas y promoviendo la supervivencia con un mal funcionamiento que radica en el cerebro o sistemico persistente mmimo o nulo.

Ejemplo num. 2

En un segundo experimento los autores de la presente invencion investigaron si el AF-16, a una dosis que reducfa la PIC elevada, como se ha descrito en el ejemplo num. 1, tambien mejoraba la supervivencia de roedores adultos infectados con HSV-1. Por lo tanto, se infectaron ratas mediante instilacion en su fosa nasal derecha de 25 jL de una solucion del virus herpes simplex tipo 1 (HSV-1; cepa 2762, lote 041028; 1,7 x 107 PFU/mL). La mitad de los animales recibieron 10 min mas tarde 25 jL (1, 10 o 25 jg) de AF-16 en su fosa nasal derecha, y despues de eso tomaron la misma dosis de AF-16 instilado cada manana a las 8 AM y cada noche a las 6 PM hasta que termino el experimento el dfa 14. La otra mitad del grupo de ratas infectadas con HSV-1 recibieron 25 jL del vehmulo, PBS, con el mismo horario. Los animales fueron estrechamente vigilados varias veces al dfa para determinar los signos de disfuncion de comportamiento o de enfermedad general. Si era asf, los animales se sacrificaban. La Fig. 3 ilustra las tasas de supervivencia para los animales, que estaban todos infectados con HSV-1. Las ratas tratadas con 1 jg de AF-16 (n = 15; lmea superior), sobrevivieron en un grado significativamente mayor, aproximadamente 60%, al final de las 2 semanas de estar funcionando el experimento (Fig. 3). En contraste, las ratas infectadas con HSV-1, que recibieron solamente el vehmulo (n = 15), murieron en gran medida y solamente 10% estuvieron todavfa vivas al final de penodo de ensayo, dfa 14 (Fig. 3). Todas las ratas infectadas tratadas con vehmulo desarrollaron signos de disfunciones neurologicas. El tratamiento dos veces al dfa intranasalmente con 10 jg o con 25 jg de AF-16 dio como resultado que todos los animales infectados sobrevivieran, y ninguno mostro signos de disfuncion neurologica. La microscopfa optica de los espedmenes, fijados en formalina y tratados de acuerdo con los procedimientos rutinarios para las investigaciones histopatologicas e inmunohistoqmmicas (Cf. Zhu, Wang y Hansson 2003), revelaron alteraciones inflamatorias, degenerativas y reactivas en el hipocampo, el cerebelo y el bulbo raqrndeo, muy evidentemente en aquellos infectados y tratados despues con el vehmulo. Se debena enfatizar que el grado y la gravedad de la lesion seran dependientes de la duracion de la exposicion y del nivel de PIC elevada asf como del tiempo de supervivencia. La investigacion inmunohistoqmmica de cerebros de rata infectadas tratadas con vehmulo

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

describio que p. ej. las reactividades con flotilina-1 y acuaporina 1 en el plexo coroide eran diffcilmente demostrables por mas tiempo. En contraste la inmunorreactividades con flotilina-1 y acuaporina 1 definidas fueron facilmente demostrables en el plexo coroide en animales infectados tratados con AF-16, de modo parecido a los cerebros de la ratas no tratadas, no infectadas, normales. De este modo, el tratamiento con AF-16 dificulto la perdida de celulas y facilito la normalizacion de la aparicion y la distribucion de estructuras ordenadas tales como vasos, neuronas incluyendo sinapsis y sustentando las celulas en el sistema nervioso. Adicionalmente, la perdida de inmunorreactividades con flotilina-1 y acuaporina 1 inmunoqmmicamente demostrable en el plexo coroide indica fuertemente una grave alteracion de la prevalencia, distribucion y organizacion de los conglomerados de lfpidos, como se describe mediante la perdida de tincion de flotilina-1, y la distribucion alterada de agua entre compartimentos, p. ej. produccion recambio y flujo de LCE, como se revela por medio de la baja inmunorreactividad con acuaporina 1. Se concluye que el tratamiento con AF-16 de animales con encefalitis por HSV-1 normaliza las funciones esenciales en el sistema nervioso central, aboliendo de ese modo el desarrollo de una PIC elevada, que da como resultado un SC.

Se concluye que el tratamiento mediante instilacion de 1, 10 o 25 |jg de AF-16 dos veces al dfa en una de las fosas nasales aumentaba significativamente la tasa de supervivencia de ratas adultas infectadas con HSV-1 encefalolitogenico y abolfa el desarrollo de disfunciones neurologicas. Tales efectos se deben probablemente a que el tratamiento con AF-16 evitaba que la PIC aumentara hasta niveles perjudiciales, como se demostro en el ejemplo num. 1, en el CC formado por el craneo, y hada volver la PIC a valores aproximadamente normales, evitando el desarrollo de un SC nocivo.

Ejemplo num. 3

Una explicacion alternativa a la mejora de la supervivencia de animales infectados con HSV-1 podna ser que el tratamiento con AF-16 evitaba que el virus se multiplicara y/o se propagara en el cerebro. Se demostro que este no era el caso por medio del siguiente experimento. Se infectaron ratas adultas instilando una solucion del virus herpes simplex tipo 1 (HSV-1; cepa 2762, lote 041028; 1,7 x 107 PFU/mL) en su fosa nasal derecha. La mitad de los animales recibieron 10 min mas tarde 25 jL (1 o 10 jg) de AF-16 en su fosa nasal derecha, y despues de eso se les instilo la misma dosis de AF-16 cada manana a las 8 AM y cada noche a las 6 PM hasta que termino el experimento el dfa 6. Los otros grupos de las ratas infectadas con HSV-1 recibieron a los mismos intervalos de tiempo 25 jL del vehmulo, PBS. Los animales se vigilaron estrechamente para determinar signos de enfermedad general y disfuncion de comportamiento y motora. Los animales se sacrificaron por medio de una sobredosis de anestesico el dfa 6, se les abrio el craneo y se separo el cerebro. Los cerebros, incluyendo los bulbos olfativos, se fijaron mediante inmersion en formalina tamponada durante al menos un dfa. Los cerebros se diseccionaron y se dividieron en varios espedmenes, que se trataron para su investigacion con microscopfa optica despues de embeberlos en parafina y seccionarlos. Las secciones se procesaron para la tincion rutinaria y para la visualizacion inmunohistoqmmica de las protemas de HSV-1 (Fig. 4). Un descubrimiento sorprendente fue que las protemas de HSV-1 se podfan manifestar no solamente en celulas nerviosas (Fig. 4a-c) sino tambien en celulas gliales (Fig. 4d) en el cerebro, incluyendo en el lobulo olfativo y en los ganglios del trigemino. Observese la clara tincion de las celulas nerviosas (negro en la Fig. 4a-c). No hubo, sin embargo, una diferencia obvia con respecto a la prevalencia y distribucion de las protemas de HSV-1 en los cerebros de los animales infectados tratados con AF-16 en comparacion con aquellos tratados solamente con vehmulo. Paralelamente, los ratones fueron infectados con HSV-1 y tratados o bien con AF-16 o bien con vehmulo mediante instilacion dos veces al dfa en la fosa nasal derecha y despues de seis dfas se sacrificaron y los espedmenes de cerebro se trataron como antes para la manifestacion de los antfgenos de HSV, como se ha descrito. Como para las ratas no hubo una diferencia obvia en la distribucion o el grado de antfgenos del virus relacionada con el tratamiento.

Los autores de la presente invencion concluyen por lo tanto que el tratamiento con AF-16 de roedores infectados con una cepa de HSV-1 encefalolitogenica, aislada originalmente de un caso fatal humano, no altera ni la prevalencia, ni la distribucion celular, de las protemas virales de HSV-1 en el cerebro, en comparacion con las tratadas solamente con vehmulo. De este modo, el tratamiento con AF-16 no altera la distribucion de HSV-1 en el SNC. La causa probable del aumento significativo de la superviviencia de los roedores, como se ilustra en el ejemplo num. 2, es por lo tanto, que se evitaba que la PIC aumentara a niveles perjudiciales por medio del AF-16 en el CC formado por el hueso del craneo, como se informa en el ejemplo num. 1. De ese modo, se suprimio el desarrollo de un SC perjudicial.

Ejemplo num. 4

La mejora de la supervivencia de los roedores infectados con HSV-1, como se ilustra en el ejemplo num. 2, se pudo deber con ciertas vacilaciones a que AF-16 bloqueaba o al menos reduda la proliferacion del virus HSV-1 en el cerebro infectado. Por lo tanto, se infectaron ratas adultas instilando una solucion del virus herpes simplex tipo 1 (HSV-1; cepa 2762, lote 041028; 1,7 x 107 PFU/mL) en su fosa nasal derecha. La mitad de los animales infectados recibieron 10 min mas tarde 25 jL (1 o 10 jg) de AF-16 en su fosa nasal derecha, y se les instilo la misma dosis AF- 16 cada manana a las 8 AM y cada noche a las 6 PM hasta que termino el experimento el dfa 6. Los otros grupos de ratas infectadas con HSV-1 recibieron en los mismos intervalos de tiempo 25 jL del vehmulo, PBS. Los animales se vigilaron estrechamente para determinar los signos de enfermedad general y de disfuncion de comportamiento y motora. Los animales se sacrificaron por medio de una sobredosis de anestesico el dfa 6, despues se les abrio

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

rapidamente el craneo y se separo el cerebro. Despues de eso, se trataron las muestras de tejido cerebral mediante RT-PCR para la evaluacion del numero de copias de HSV-1 demostrable en el tejido cerebral, de acuerdo con los procedimientos rutinarios utilizados en Clinical Virology Laboratory, Sahlgrenska University Hospital, Goteborg, Suecia. Un descubrimiento sorprendente fue que no hubo una diferencia significativa con respecto a la prevalencia y distribucion de las copas de ADN de HSV-1 en los roedores tratados con AF-16 en comparacion con los que habfan recibido solamente el vetuculo (Fig. 5). El experimento descrito mas arriba tambien se realizo en ratones paralelamente, y se alcanzaron resultados similares, confirmando la eficacia de AF-16 en multiples especies. De este modo, el AF-16 no tuvo ningun efecto significativo sobre la multiplicacion del virus HSV-1, como se demostro mediante los datos de la PCR (Fig. 5). Es probable que los efectos beneficiosos fueran debidos a que AF-16 supriirna la elevacion anormal de la PIC (Fig. 2) en el CC formado por el craneo, como se ha descrito en el ejemplo num. 1, que si no se trataba debfa dar como resultado un SC perjudicial, danando gravemente el SNC de los animales infectados.

Ejemplo num. 5

Los efectos beneficiosos de AF-16 sobre los animales que padedan encefalitis por HSV-1 podnan estar debidos, con ciertas vacilaciones, a que los AF redudan las reacciones inflamatorias en el SNC. Para someter a ensayo esa hipotesis, se infectaron ratas adultas instilando una solucion del virus herpes simplex tipo 1 (HSV-1; cepa 2762, lote 041028; 1,7 x 107 PFU/mL) en su fosa nasal derecha. La mitad de los animales recibieron 10 min mas tarde 25 |jL (1 o 10 jg) de AF-16 en su fosa nasal derecha, y despues de eso se instilo la misma dosis de AF-16 cada manana a las 8 AM y cada noche a las 6 PM hasta que termino el experimento el dfa 6. La otra mitad de las ratas infectadas con HSV-1 recibieron en los mismos intervalos de tiempo 25 jL del vedculo, solucion salina tamponada con fosfato. El dfa 6, se recogieron muestras de lfquido cerebroespinal (LCE) de los animales, o bien tratados con AF-16 (n = 3), o bien con vedculo (n = 3), de acuerdo con el procedimiento descrito por Huang, Saljo y Hansson (1996). Cuando se analizaron las concentraciones de los marcadores de inflamacion IL-1, IL-6, y TNF-a, se encontro que no hada ninguna diferencia significativa en las concentraciones de cualquiera de ellas en el LCE de los animales infectados tratados con AF-16 en comparacion con las de aquellos que hadan sido tratados con el vedculo. Se concluye que no es probable que el tratamiento con AF-16 mejore la supervivencia de los roedores que padecen encefalitis por HSV-1 alterando la respuesta inflamatoria, sino normalizando la presion intracraneal, evitando de ese modo la prevalencia de una PIC elevada en un CC y de ese modo el desarrollo de un SC. De se modo se considero que los efectos deletereos causados por la encefalitis por HSV-1 estuvieron debidos a que el AF impedfa el desarrollo de un SC.

Ejemplo num. 6

Se indujo un tipo diferente de SC cerebral por medio de una inyeccion de sangre completa autologa en el espacio subaracnoideo, un procedimiento conocido de la literatura para producir el desarrollo de un edema cerebral y una PIC elevada. Se depositaron 50 - 350 |jl de sangre autologa heparinizada en el espacio subaracnoideo de ratas adultas a traves de un pequeno agujero taladrado en el hueso occipital o mediante inyeccion en la cisterna magna a traves de la membrana atlanto-occipital. Los agujeros taladrados en el craneo se taparon finalmente con pegamento SuperBond®. Tales tratamientos con sangre depositada subaracnoideamente aumentaron la PIC, induciendo el desarrollo de un SC en un dfa o en una semana, dependiendo el tiempo exacto de las afecciones y de la cantidad de sangre depositada, en concordancia con los informes de la literatura medica. En los experimentos de los autores de la presente invencion, la inyeccion de 0,2-0,3 mL de sangre heparinizada, autologa en la cisterna magna en ratas Sprague-Dawley adultas dio como resultado en 1-3 dfas una elevacion de la PIC de 13 a 30 mm Hg, evaluada con una sonda guiada por luz para la presion en miniatura implantada (Samba System 3200 & Samba Preclin 420 Sensor; Samba Sensors AB, Gruvgatan 6, SE 42130 V. Frolunda, Suecia). La PIC en ratas adultas normales, ya sean no tratadas o a las que se ha inyectado en lugar de eso solucion salina tamponada con fosfato (PBS), fue de 6 - 9 mm Hg. El tratamiento con 25 jg de AF-16 intranasalmente dos veces al dfa dio como resultado una reduccion de la PIC elevada, que volvfa reproduciblemente a niveles casi normales en 1 - 2 h. Los roedores tratados con AF no mostraron signos de funcion cerebral deteriorada ni ningun deterioro obvio grueso de las funciones de comportamiento o motoras, en contraste con aquellas en las que se hada depositado sangre subaracnoideamente y despues se hadan tratado con vedculo. Se concluye que el tratamiento con AF-16 redujo el grado y la gravedad de la lesion cerebral inducida por el deposito de subaracnoideo de sangre en comparacion con los animales que solo hadan recibido vedculo, PBS. Esto significa que el AF-16 esta suprimiendo y, en caso de SC cerebral ya establecido, reduciendo su gravedad. La pronta respuesta a AF-16 fue decisiva para el efecto beneficioso ejercido por AF-16.

Ejemplo num. 7

Las articulaciones estan encerradas por capsulas de colageno no distensibles, sensibles, caracterizadas adicionalmente por una baja elasticidad pero con plasticidad. En la artritis, la presion en el lfquido sinovial en la cavidad de la articulacion se vuelve elevada, y se anade la inflamacion a los smtomas. Es prevalente un CS. Con el fin de investigar si el tratamiento con AF-16 podna prevenir o al menos reducir el desarrollo de dicho SC, se infectaron ratas adultas mediante inyeccion sistemica de una solucion de un Staphilococcus aureus artritogenico (SA; cepa LS1). Un grupo de animales (n = 3) se trato con AF-16 mientras un segundo grupo de ratas (n = 3) recibio solo el vedculo, PBS. Despues de unos pocos dfas las articulaciones de las rodillas y mas tarde las articulaciones

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

de la mano y el pie se volvieron sensibles, se hincharon y se elevo la presion en las cavidades de las articulaciones, medida con la sonda para la Presion de Fibra Optica Samba (Samba System 3200 & Samba Preclin 420 Sensor; Samba Sensors AB, Gruvgatan 6, SE 42130 V. Frolunda, Suecia), asf como en el tejido inmediatamente circundante. La presion en una articulacion grande normal es de 0-5 mm Hg, pero podna aumentar mas de cinco veces en las articulaciones inflamadas infectadas. Se midio la presion del lfquido intersticial en el tejido subcutaneo a una distancia de la articulacion infectada para su comparacion y se encontro que permaneda dentro de los lfmites normales, ± 2 mm Hg. En contraste, los roedores con una articulacion grande infectada con SA y tratados con AF-16 no teman esas articulaciones hinchadas y doloridas, sensibles, y teman una presion proxima a la normal en la articulacion. Los animales infectados, que solamente recibieron tratamiento con el vehnculo, PBS, desarrollaron SC crecientemente grave con el transcurso del tiempo. Las muestras de lfquido sinovial analizadas para determinar la prevalencia de la bacteria cuantitativamente y cualitativamente de cualquier grupo revelaron que el numero de S. areus era aproximadamente el mismo en las articulaciones mas grandes, con independencia de si las ratas hadan sido tratadas con AF-16 o no.

Los autores de la presente invencion concluyeron que el tratamiento con AF-16 reduda la presion en la articulacion infectada despues de la inoculacion de microbios artritogenicos, p. ej. bacterias, y probablemente tambien virus y agentes inmunologicos. No hada, sin embargo, diferencia en la multiplicacion o distribucion en las articulaciones de la bacteria patogenica, p. ej. Staphilococcus areus (cepa LSI). Por lo tanto, era probable que las articulaciones infectadas estuvieran danadas por la infeccion con SA, ya que no se administraron antibioticos. Sin embargo, no se dejo que los animales sobrevivieran durante tanto tiempo.

El mayor descubrimiento fue que el tratamiento con AF-16 contrarresto reproduciblemente la presion elevada en la articulacion afectada de otra manera, que constitrna un CC. De ese modo, no se desarrollo SC despues del tratamiento con AF-16 en articulaciones infectadas como se evaluo en el presente estudio.

Ejemplo num. 8

Ratas adultas teman una afeccion de CC inducida y evaluada en los musculos esqueleticos. En la pata trasera, los grandes vasos que se introdudan en el Musculus extensor digitorum longus (EDL) fueron ocluidos durante 1 - 3 horas aplicando una carga de presion externa (Vease Jennische y Hansson, 1987; Jennische, Skottner y Hansson, 1987). Despues de eso, se dejo que el flujo sangumeo se reanudara, y la envoltura del musculo y la incision en la piel se repararon y se suturaron. Este tratamiento dio como resultado una lesion isquemica que ocasiono la necrosis de una fraccion de las fibras del musculo esqueletico de EDL. Se desarrollo un SC a medida que el tejido y el tejido intersticial acumulaban lfquido en dicho compartimento cerrado y adicionalmente el tejido muscular se hincho y se volvio edematoso. La presion en dicho compartimento cerrado aumento, dando como resultado el desarrollo de un SC. Se requirio la intervencion quirurgica para evitar que partes del tejido del musculo esqueletico se necrosaran, si no hada un tratamiento adicional. Sin embargo, si se trataba con AF-16, no se desarrollaba smdrome compartimental cerrado, ya que se pudo demostrar con sensores de presion Samba que la hinchazon reactiva del tejido lesionado y de ese modo la presion dentro del compartimento retornaban aproximadamente a la normalidad. La microscopfa optica de muestras del musculo EDL confirmo que el tratamiento con AF-16 reduda el grado y el volumen de la lesion del tejido, en comparacion con el tratamiento con vetnculo. De este modo, el tratamiento con AF-16 evito el desarrollo de un SC, reduciendo a la larga el perjuicio y la perdida de tejido.

Ejemplo num. 9

Ratas adultas teman experimentalmente una afeccion de CC inducida que afectaba al pericardio y fueron evaluadas con respecto a los efectos del tratamiento con el peptido AF-16. La cavidad pericardica esta delimitando el corazon, formando un saco lleno de un volumen mmimo de lfquido, que permite el acomodo de los movimientos deslizantes resultantes de las bruscas y energicas contracciones del corazon. La cavidad pericardica esta rodeada hacia su periferia por una membrana parietal rica en colageno. En ratas anestesiadas el pericardio es abierto quirurgicamente, a traves de una pequena "ventana" en el diafragma y el mediastino. Se ocasiono un trauma en interior del pericardio frotandolo quirurgicamente a traves de la incision. Estos animales se dividieron en dos grupos, uno se trato con AF-16 mientras el otro solo recibio el vedculo, PBS. Aquellos que hadan sido tratados con AF-16 durante una semana, solo teman una leve acumulacion de lfquido en su cavidad pericardica, a baja presion. En contraste, aquellos animales que se hadan tratado con el vehnculo despues de la friccion teman su pericardio lleno de lfquido a presion, y teman numerosas hebras de fibrina y celulas inflamatorias. Adicionalmente, la envoltura pericardica parietal estaba hinchada, inflamada e infiltrada por numerosos vasos sangumeos dilatados, en parte recien formados.

El hugado, el bazo, el rinon y el tiroides fueron lesionados mecanicamente de un modo similar mediante compresion y expuestos a abrasion. Se pudo demostrar, tambien en esos casos, que el tratamiento con AF-16 reduda el edema y la hinchazon de estas estructuras, respectivamente, en comparacion con lo logrado en el tratamiento con vehnculo. Adicionalmente, se redujo la prevalencia de ascitis y tipos relacionados de excesivo lfquido extracelular a presion elevada. De este modo, AF-16 redujo el grado y la gravedad del SC en organos y tejidos parenquimatosos.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

El desastre del CC, altero gravemente las funciones del corazon, fue menos propenso a desarrollarse en animales tratados con AF. De este modo, el AF-16 dificulto el desarrollo de un SC ca^aco. Se verificaron los mismos efectos beneficiosos de AF para las otras estructuras y organos parenquimaticos investigados.

Ejemplo num. 10

Los discos intervertebrales, que separan los cuerpos vertebrales en la columna, ajustan sus dimensiones de acuerdo con la carga real muchas veces al dfa. El contenido de agua en el nucleus pulposus avascular y el annulus fibrosus en un disco es dependiente del suministro de lfquido, iones, nutrientes y oxfgeno de los ligamentos adyacentes y de las placas finales de las vertebras (Vease, Holm et al., 2007). Los inmensos productos de un disco avascular deben pasar a traves de los mismos obstaculos antes de alcanzar los sistemas vasculares. Por lo tanto, roedores, conejos y cerdos han sido evaluados con respecto a los efectos de la protema AF y de los peptidos AF en lo que se refiere a los efectos sobre los discos invertebrales cuando estan cargados y descargados. Se pudo demostrar que el tratamiento con AF-16 reduda la hinchazon y las reacciones inflamatorias de los discos invertebrales danados. Adicionalmente, cuando se examinaban mediante microscopfa optica secciones coloreadas preparadas a partir de tales discos se demostro que habfan sufrido menos dano en el nucleus pulposus los animales tratados con AF-16 asf como que teman alteraciones reactivas menos prominentes, lo que se esperaba reconocer por lo demas en el annulus fibrosus y los ligamentos acompanantes y el tejido conectivo adyacente. Adicionalmente, los efectos de AF y AF-16 d despues de cargas supramaximas asf como despues de un trauma en los discos intervertebrales revelaron que la rigidez de las conexiones invertebrales y la deformacion inducida estaban mas cerca de la normalidad despues del tratamiento con AF-16 que lo registrado despues del tratamiento con vehnculo. De este modo se describe que los compuestos de AF son beneficiosos en la reduccion de la hinchazon y la lesion de tejidos en un trauma o deformacion y/o una carga excesiva sobre los discos invertebrales.

Ejemplo num. 11

Se investigaron ratas adultas que teman un SC inducido experimentalmente desarrollado en estructuras definidas englobadas por un cierre sensible, tal como un tendon y un nervio, con respecto a si AF-16 afectaba a su destino. Todos los nervios perifericos y autonomicos estan bien delimitados por un endoneurio, un perineurio y un epineurio exterior. Multiples fasdculos nerviosos forman un nervio (Vease Hansson et al., 1987). Los tendones y algunos de los ligamentos de un organismo estan delimitados por una estructura de tipo membrana de colageno sensible, la vaina sinovial. La capa lfmite interna de esta ultima conecta el tendon con su vaina sinovial, lo que permite el deslizamiento a la minima friccion. La periferia de esta ultima estructura esta englobada por una capa de tipo membrana, fibrosa, la vaina fibrosa. El peritendineo englobante esta en alguna localizaciones sujeto en la posicion y recibe nutricion por medio de los mesotendones y por medio de las vrnculas (Vease Hansson et al., 1980). Adicionalmente, otros dispositivos lubricantes son las bursas, los sacos fibrosos cerrados que tienen una fina pelfcula de lfquido y que evitan el roce y la carga pesada contra y entre las estructuras firmes adyacentes. La hinchazon y el edema debidos a una carga excesiva y al trauma asf como la inflamacion deterioran la estructura y la funcion de los nervios perifericos, los tendones y las bursas.

En ratas anestesiadas se rompio el nervio ciatico con la ayuda de un forceps disenado especialmente, como se ha descrito previamente (Stemme et al., 1985; Hansson et al., 1987). Dicho procedimiento dio como resultado no solamente el deterioro de la funcion y la estructura del nervio sino tambien una reduccion de la circulacion de sangre y linfa, y ocasiono la hinchazon del nervio ciatico, el desarrollo de un edema, que inclma estructuras adyacentes y de la envoltura. La PLI se volvio elevada, como se evaluo mediante la insercion de una sonda de medicion de la presion de fibra optica Samba en el tejido afectado. Una de cada dos ratas se trato con AF-16 a una dosis elevada, empezando en el momento de la lesion. Una de cada dos ratas tratadas de forma identica recibio solamente el vehnculo. Se determino que la presion en el perineo se elevaba en un dfa en las tratadas solamente con vehnculo, en concordancia con la hinchazon y el edema local reconocidos macroscopicamente, esto es, hadan desarrollado un SC. En contraste, resulto que los nervios ciaticos tratados con AF-16 teman una presion intraneural que era en la mayor parte de los casos ligeramente elevada o proxima a la medida en un nervio normal. La microscopfa optica de las secciones tenidas debilmente de los nervios ciaticos lesionados confirmo que AF-16 reduda la inflamacion y el edema y la distorsion del tejido.

Se lograron resultados similares cuando se trataron tendones danados (Hansson H A et al., 1980) con AF-16, en comparacion con los observados despues de la administracion de vehnculo. Aquellos que hadan sido tratados con el vehnculo desarrollaron signos de SC en contraste con los tratados con AF y AF-16.

Se concluye que AF-16 impide el desarrollo de un SC en una lesion p. ej. un nervio, un tendon o una bursa.

Ejemplo num. 12

Durante la cirugfa y en los traumas las arterias se pueden danar, haciendo que la pared vascular se hinche. Estos eventos daran como resultado el desarrollo de una PLI elevada en la pared vascular, produciendo reacciones inflamatorias y reconstruccion (Hansson, Jennische & Skottner, 1987). A las ratas de un grupo se les implanto subcutaneamente una minibomba osmotica Alza pre-iniciada, rellena con AF-16, y conectada al lugar de la lesion con un tubo fino de silicona, que permitfa la liberacion del peptido AF-16 directamente en el tejido traumatizado. Los

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

otros animales teman sus bombas rellenas de vehmulo, con fines comparativos. Las arterias danadas se investigaron 3, 5, 7 o 14 dfas mas tarde. Los vasos sangumeos recuperados de los animales tratados con vehmulo eran sensibles, teman un diametro incrementado y estaban hinchados. En contraste, aquellos tratados con AF-16 fueron reconocidos como menos hinchados e inflamados. La tasa de permeabilidad fue mayor para aquellos tratados con AF-16 en comparacion con los expuestos al vehmulo. Cuando se investigaron espedmenes tenidos y seccionados de la arteria femoral despues de 14 dfas resulto obvio que los de las ratas tratadas con AF-l6 mostraban menos dano y reacciones inflamatorias menos prominentes y alteraciones reactivas menos extensas tales como formacion de una neomtima que comprende celulas de la musculatura lisa, en comparacion con los tratados solamente con el vehmulo. Ademas, el numero de macrofagos, celulas espumosas y linfocitos tambien resultaba reducido por el tratamiento con AF-16. Se concluye que AF-16 tema efectos beneficiosos sobre la curacion de vasos sangumeos danados.

Ejemplo num. 13

Se han implantado tumores, malignos y benignos, subcutaneamente e intramuscularmente en roedores. Uno de cada dos animales, que tienen tumores con un diametro que oscila de 10 mm a 15 mm, se trato con protemas AF o AF-16, sistemicamente con la ayuda de minibombas osmoticas Alzet implantadas subcutaneamente, por medio de inyeccion de AF-16 en o dentro del tumor. En otro experimento, se libero el peptido AF-16 desde una bomba Alzet 2001 implantada directamente sobre y/o dentro del tumor con un tubo fino de silicona. Las ratas adicionales teman la protema AF inducida por su alimento o tomando AF en la yema de huevo. Para la comparacion, un numero igual de ratas recibieron el mismo tratamiento pero con vehmulo. Se determino la presion del lfquido intersticial (PLI) en el tumor asf como en sus regiones adyacentes con la ayuda de un sensor de presion de fibra de vidrio Samba (diametro 0,4 mm), con y sin un tubo protector, asf como con un equipamiento que permite la determinacion de la presion del lfquido intersticial por medio de la tecnica del cateter de tipo "wick". La PLI en los tumores de los animales tratados con vehmulo fue significativamente elevada, excediendo de 12 mm Hg. La PLI en el tejido conectivo adyacente estaba oscilante entre 0 y 4 mm Hg, pero ocasionalmente podfa ser negativa. Los tumores en el intervalo de 10-15 mm, y tratados con AF-16 como se ha descrito mas arriba, obtuvieron una reduccion de la PLI, que se redujo normalmente a 12 mmHg o menos. Ademas, AF-16 redujo la intensidad y el grado de la reaccion inflamatoria evaluados mediante microscopfa optica de las secciones finas tenidas, preparadas a partir de espedmenes fijados y procesados.

En experimentos paralelos realizados en roedores, se pudieron demostrar los efectos beneficiosos sobre el crecimiento y la diseminacion de tumores implantados tratados con yema de huevo enriquecida en protemas, en comparacion con los efectos del vehmulo.

Se concluye que es probable que la disminucion de la PLI en tumores mejore la microcirculacion, volviendo de ese modo el medio menos hipoxico y promoviendo una mejor penetracion de los farmacos anti-tumorales, que tambien seran mas eficazmente distribuidos. Se concluye que la capacidad de AF-16 para reducir la PLI en tumores mejorara la eficacia del tratamiento con farmacos espedficos. Adicionalmente, es probable que la terapia con radiacion sea mas eficaz ya que la mejora de la microcirculacion despues del tratamiento con AF-16 aumentara los niveles de oxfgeno en el tejido expuesto, promoviendo de ese modo la formacion de radicales libres, de importancia clave en la obstaculizacion del crecimiento del tumor, produciendo a la larga una mejor eliminacion de las celulas tumorales. Se considera que tales efectos de AF-16 sobre la PLI contribuyen a una mejor erradicacion de los tumores, y permite controlar la diseminacion en una vfctima.

Ejemplo num. 14

Se investigaron los efectos de AF en la adicion a celulas procarioticas, que estan encerradas por una pared celular completa, permitiendo de ese modo el desarrollo de una presion elevada debido a la obstaculizacion de las funciones de membrana. Esto se realizo en bacterias, que sintetizan y liberan una amplia variedad de sustancias que pueden ocasionar danos en celulas de mamffero y de este modo en un organismo. Los ejemplos de tales productos son pigmentos, enzimas y toxinas, que son transferidos a traves de la membrana bacteriana externa al entorno extracelular. La inhibicion de dichas actividades de la membrana reducina o incluso bloqueana la transferencia y/o liberacion de tales sustancias patogenicas. Con el fin de investigar si el peptido AF-16 afectaba a la transferencia de productos bacterianos desde su smtesis en la bacteria a su entorno, se realizo el siguiente experimento. Se cultivo durante la noche, u ocasionalmente durante 2 dfas, la bacteria Staphylococcus areus, que sintetiza un pigmento amarillo, en presencia o ausencia del peptido AF-16. Despues de un dfa o dos se enjuago el cultivo bacteriano, y despues se concentro mediante centrifugacion. El pigmento amarillo formado por Staphylococcus aureus se extrajo de la bacteria sedimentada, permeabilizada con metanol y se determino la absorcion de luz mediante espectrometna. Los cultivos de bacteria desarrollados en presencia de AF-16 teman mucho mas pigmento amarillo que los expuestos solamente al vehmulo, despues de la correccion de los valores medidos para el numero de bacterias. Estos resultados demostraron ineqmvocamente que el tratamiento con AF-16 anulaba la transferencia y liberacion de los constituyentes formados en las bacterias al entorno.

Se concluye que el experimento presentado prueba que AF-16 influye eficazmente en el transporte de la masa intracelular y la liberacion de productos desde la bacteria viva.

5

10

15

20

25

30

35

40

Resumen y conclusiones

El tratamiento con el peptido AF-16 anulo o al menos redujo el desarrollo de presiones elevadas en compartimentos cerrados. El tratamiento con AF redujo ademas los signos clmicos adversos en la exposicion a una carga excesiva, lesion, isquemia, agentes toxicos, farmacos y en infecciones. Si se trata con AF-16 la presion en los compartimentos cerrados, no se elevo a los niveles perjudiciales esperados, como resultaba evidente si el animal se trataba solamente con el vehmulo. Los afecciones patologicas tratadas no se relacionaron con la anulacion de las afecciones hipersecretoras por las protemas y peptidos de AF. El efecto descrito de la administracion de peptidos y protemas de AF fue normalmente evidente en una hora y duro varias horas. La respuesta a la administracion de aF fue rapida y redujo los efectos perjudiciales de la presion elevada en los compartimentos cerrados considerablemente Las protemas y peptidos de AF fueron de ese modo efectivos en el tratamiento del SC en un organismo vivo anulando el desarrollo de un SC cerrado, deletereo por lo demas para la funcion del tejido y el organo afectados. Un experto en la tecnica comprende que la normalizacion de la presion en un compartimento cerrado facilita la administracion de otras preparaciones farmaceuticas, con el objetivo de reducir la causa de la presion elevada y sus complicaciones, asf como de dirigir estos farmacos a su diana.

Referencias

1. Hansson H.-A., Jennische E, & Skottner A. Regenerating endothelial cells express insulin-like growth factor-I immunoreactivity after arterial injury. Cell Tissue Res., 1987; 250: 499-505, 1987.

2. Hansson H.-A., Lundborg G & Rydevik B. Restoration of superficially damaged flexor tendons in synovial environment. An experimental ultrastructural study in rabbits. Scand J Plast Reconstr Surg.14, 109-114, 1980.

3. Hansson H.-A., Rozell B, & Skottner A. Rapid axoplasmic transport of insulin-like growth factor I in the sciatic nerve of adult rats. Cell Tissue Res. 1987; 247:, 241-247,1987.

4. Heldin CH, Rubin k, Pietras K & Ostman A. High interstitial fluid pressure - an obstacle in cancer therapy. Nature Reviews Cancer 4, 806-13, 2004.

5. Holm S, Baranto A, Kaigle Holm A, Ekstrom L, Sward L, Hansson T & Hansson H.-A. Reactive changes in the adolescent porcine spine with disc degeneration due to endplate injury. Vet Comp Orthop Traumatol 20, 12-17, 2007.

6. Jennische E & Hansson H.-A. Regenerating skeletal muscle cells express insulin-like growth factor I. Acta Physiol Scand. Jun;130, 327-332, 1987

7. Jennische E, Skottner A & Hansson H.-A. Satellite cells express the trophic factor IGF-I in regenerating skeletal muscle. Acta Physiol Scand. 129, 9-15, 1987

8. Kumar V, Abbas, AK & Fausto N: Robbins and Cotran Pathologic Basis de Disease, 7th ed., W.B.Saunders Co., Philadelphia, 2005.

9. Lange S, & Lonnroth I. The antisecretory factor: synthesis, anatomical and cellular distribution, and biological action in experimental and clinical studies. Intern Rev. Cytology 210, 39-75, 2001.

10. Lodish H, Berk A, Matsudaira P, Kaiser CA, Krieger M, Scott MP, Zipursky SL & Darnell J. Molecular biology of the cell. 5th edit. WH Freeman & Co., New York, 2004.

11. Pollard TD & Earnshaw WC. Cell biology, Saunders, Philadelphia, 2002.

12. Ross MH & Pawlina W. Histology, a text and atlas. 5th edit., Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, 2006.

13. Stemme S, Hansson H.-A., Holmgren A, & Rozell B. Axoplasmic transport of thioredoxin and thioredoxin reductase in rat sciatic nerve. Brain Res. 1985; 359 :140-146.

14. WO 05/030246

15. WO 97/08202

16. WO 98/21978

17. US 6344440

Claims (16)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   50

   REIVINDICACIONES

   1. Una protema de factor antisecretor (AF), un homologo, y/o un fragmento de la misma, que tiene actividad antisecretora, y/o una de sus sales farmaceuticamente activas, para uso en el tratamiento y/o prevencion de un smdrome compartimental causado por la presencia de un tumor benigno y/o maligno en un cuerpo.
2. 2. Una protema de factor antisecretor (AF), un homologo, y/o un fragmento de la misma, que tiene actividad antisecretora, y/o una de sus sales farmaceuticamente activas, para uso segun la reivindicacion 1, donde el smdrome compartimental esta causado por el tratamiento de un tumor y/o estructuras adyacentes.
3. 3. Una protema de factor antisecretor (AF) para uso segun la reivindicacion 1, donde dicha protema de factor antisecretor (AF) corresponde a una secuencia de aminoacidos como se muestra en SEQ ID NO 6:, o un homologo y/o fragmento de la misma que comprende aminoacidos 38-42 de SEQ ID NO: 6 y/o una de sus sales farmaceuticamente activas.
4. 4. Una protema de factor antisecretor (AF) o un homologo y/o un fragmento de la misma, para uso segun la reivindicacion 1, que consiste en una secuencia de acuerdo con la siguiente formula

   X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5

   donde X1 es I, los aminoacidos 1-35 del SEQ ID NO: 6, o esta ausente, X2 es H, R o K, X3 es S o L, X4 es T o A, X5 es los aminoacidos 43-46, 43-51, 43-80 o 43-163 del SEQ ID NO: 6, o esta ausente y/o una de sus sales farmaceuticamente activas.
5. 5. Una protema de factor antisecretor (AF) o un homologo, y/o un fragmento de la misma, para uso segun la reivindicacion 1, donde dicho fragmento comprende una secuencia de aminoacidos como se muestra en el SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 o SEQ ID NO:5, y/o una de sus sales farmaceuticamente activas.
6. 6. Una protema de factor antisecretor (AF) o un homologo, y/o un fragmento de la misma, para uso segun cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde dicho tumor es un tumor primario o una metastasis.
7. 7. Una protema de factor antisecretor (AF) o un homologo, y/o un fragmento de la misma, para uso segun cualquiera de las reivindicaciones 1-6, donde dicho smdrome compartimental esta causado por efectos secundarios causados por el tratamiento de dicho tumor con rayos X, radiacion de alta energfa, enfriamiento local, calentamiento local, fototerapia y/o farmacos utilizados para el tratamiento del tumor.
8. 8. Una protema de factor antisecretor (AF) o un homologo, y/o un fragmento de la misma, para uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el tratamiento de dicho smdrome compartimental mejora la eficacia de la terapia del cancer mediante la disminucion de la presion intersticial.
9. 9. Una protema de factor antisecretor (AF) o un homologo, y/o un fragmento de la misma, para uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde dicha protema de factor antisecretor (AF), un homologo y/o fragmento de la misma, esta presente en una composicion farmaceutica y/o un producto nutricional medico.
10. 10. Una protema de factor antisecretor (AF) o un homologo, y/o un fragmento de la misma, para uso segun la reivindicacion 9, donde dicha composicion farmaceutica y/o producto nutricional medico comprende dos o mas protemas antisecretoras, o un homologo y/o fragmento de las mismas segun cualquiera de las reivindicaciones 1-4.
11. 11. Una protema de factor antisecretor (AF) o un homologo, y/o un fragmento de la misma, para uso segun

    cualquiera de las reivindicaciones 9-10, donde dicha composicion farmaceutica comprende adicionalmente un

    excipiente farmaceuticamente aceptable.
12. 12. Una protema de factor antisecretor (AF) o un homologo, y/o un fragmento de la misma, para uso segun

    cualquiera de las reivindicaciones 9-11, donde dicha composicion farmaceutica se formula para administracion

    dentro de una cavidad corporal, intraocularmente, intranasalmente, oralmente, localmente, cutaneamente, subcutaneamente, intramuscularmente y/o sistemicamente.
13. 13. Una protema de factor antisecretor (AF) o un homologo, y/o un fragmento de la misma, para uso segun cualquiera de las reivindicaciones 9-12, donde dicha composicion farmaceutica se formula para administracion como un pulverizador, aerosol, inhalador o mediante un nebulizador.
14. 14. Una protema de factor antisecretor (AF) o un homologo, y/o un fragmento de la misma, para uso segun cualquiera de las reivindicaciones 9-13, donde la composicion farmaceutica se formula para administracion sistemicamente a la sangre a una dosis de aplicacion de 0,1 |jg a 10 mg por kg de peso corporal y dfa, preferiblemente 1-1000 jg por kg de peso corporal y dfa.
15. 15. Una protema de factor antisecretor (AF) o un homologo, y/o un fragmento de la misma, para uso segun cualquiera de las reivindicaciones 9-14, donde dicha administracion se lleva a cabo bien como una sola dosis o como aplicaciones multiples diarias.
16. 16. Una protema de factor antisecretor (AF) o un homologo, y/o un fragmento de la misma, para uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde dicha protema antisecretora se proporciona en yema de huevo enriquecida en tal protema antisecretora, y donde dicha protema antisecretora se proporciona preferiblemente en dicha yema de huevo.