ES2638286T3 - Péptidos inhibidores de la exocitosis neuronal - Google Patents

Abstract

Péptidos de fórmula general R1-AA-R2 capaces de regular Ia exocitosis neuronal, sus estereoisómeros y mezclas de los mismos, racémicas o no, y las sales cosméticamente o farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde AA es una secuencia de 3 a 40 aminoácidos adyacentes contenida en Ia secuencia de aminoácidos de Ia proteína SNAP-25, R1 se selecciona del grupo formado por H o grupoalquilo, arilo, aralquilo o acilo; y R2 se selecciona del grupo formado por amino, hidroxilo o tiol, sustituidos o no con grupos alifáticos o cíclicos, con Ia condición de que cuando R1 es H o acetilo, R2 no es amino, hidroxilo ni tiol no sustituidos. Un método de obtención, composiciones cosméticas o farmacéuticas que loscontienen y su uso para tratar aquellas condiciones que requieranIa regulación de Ia exocitosis neuronal, preferentemente para tratar Ia piel.

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

DESCRIPCION

Peptidos inhibidores de la exocitosis neuronal CAMPO DE LA INVENCION

La presente invencion se refiere a peptidos capaces de regular la exocitosis neuronal y a composiciones cosmeticas o farmaceuticas que contienen dichos peptidos de utilidad en el tratamiento de las condiciones que requieran una regulacion de la exocitosis neuronal, tales como por ejemplo la espasticidad de los musculos, la asimetrla facial y/o las arrugas faciales, preferentemente las arrugas de expresion.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

Uno de los signos mas visibles del envejecimiento humano son los cambios que experimenta la piel: sequedad, aparicion de manchas, flaccidez y arrugas. Estos efectos pueden ser causados por agentes externos como la exposicion constante al sol, la contamination atmosferica o el contacto con agentes qulmicos presentes en, por ejemplo, productos de limpieza, pero tambien son consecuencia de cambios fisiologicos, bioqulmicos e histologicos intrlnsecos del organismo humano, debidos a la disminucion de la slntesis de protelnas como el colageno o la elastina, a un aumento de la proteolisis, y a una rotura general de la barrera de la piel, del tejido conectivo y de la cohesion.

Se han descrito distintos principios activos para la prevention o disminucion de los slntomas del envejecimiento, tales como, por ejemplo, retinoides, hidroxiacidos, flavonoides o derivados de vitamina C y E. Dichos compuestos actuan normalmente mejorando la hidratacion de la piel, aumentando la renovation celular o previniendo la degeneration de los tejidos que forman la piel; sin embargo, su eficacia en la prevencion o tratamiento de las arrugas faciales causadas por la contraccion de los musculos es limitada. La base o mecanismo de formacion de las arrugas faciales de expresion es una tension de los musculos de la epidermis que arrastran la piel hacia el interior. Esta tension muscular es el resultado de una hiperactividad de los nervios que enervan los musculos faciales. La hiperactividad nerviosa se caracteriza por una liberation incontrolada y excesiva de neurotransmisores que excitan las fibras musculares. A tal fin, las moleculas que regulen la exocitosis neuronal contribuyen a relajar la tension muscular y, consecuentemente, a eliminar las arrugas faciales.

Existe, pues, la necesidad de desarrollar nuevos principios activos con eficacia probada para la preparation de una composition cosmetica o farmaceutica para regular la exocitosis neuronal y, por tanto, para tratar la espasticidad de los musculos y reducir y/o eliminar la asimetrla facial y/o las arrugas faciales, especialmente las arrugas de expresion.

Las arrugas de expresion son las arrugas consecuencia del estres ejercido por las contracciones de los musculos faciales responsables de producir las expresiones faciales sobre la piel del rostro. Las arrugas de expresion se suelen localizar en la frente, en el espacio entre las cejas, alrededor de la boca y/o alrededor de los ojos. Dependiendo de la forma del rostro, la frecuencia de las expresiones y la existencia de tics (movimientos convulsivos, que se repiten con frecuencia, producidos por la contraction involuntaria de uno o varios musculos, en este caso musculos faciales), las arrugas de expresion pueden aparecer incluso durante la adolescencia. Los factores externos como la exposicion al sol acentuan su profundidad y su visibilidad.

Con el objetivo de reducir y/o eliminar las arrugas de expresion se han empleado ampliamente las toxinas botullnicas, en especial el serotipo A (BOTOX® Cosmetic, Allergan Inc.) [Carruthers J.D. y Carruthers J.A. (1992) “Treatment of glabellar frown lines with C. botulinum-A exotoxin” J. Dermatol. Surg. Oncol. 18, 17-21; Mendez- Eastman S.K. (2003) “Botox: a review” Plast. Surg. Nurs. 23, 64-69]. El tratamiento terapeutico y cosmetico con BOTOX® consiste en la inyeccion localizada de preparados farmaceuticos (complejo botulina A-hematoglutinina, 500 kDa) diluidos en las zonas donde se localiza la tension muscular. Los efectos parallticos de la toxina son reversibles con una duration media de 6 meses [Jankovic J. y Brin F.M. (1991) “Therapeutic uses of botulinum toxin” New Engl. J. Med. 324, 1186-1194; Jankovic J. (1994) “Botulinum toxin in movement disorders” Curr. Opin. Neurol. 6, 358-366]. El tratamiento, por tanto, requiere la inyeccion repetida de toxina botullnica. El problema principal de este tratamiento es la posibilidad de que se desencadene una reaccion inmune contra el preparado farmaceutico debido a que por su tamano molecular puede ser reconocido por el sistema inmunitario del paciente. La aparicion de anticuerpos contra la toxina botullnica constituye un grave problema ya que contribuye a una clara perdida de eficacia del tratamiento [Jankovic J. y Brin F.M. (1991) “Therapeutic uses of botulinum toxin” New Engl. J. Med. 324, 1186-1194; Jankovic J. (1994) “Botulinum toxin in movement disorders” Curr. Opin. Neurol. 6, 358-366; Jankovic J. y Brin M.F. (1997) “Botulinum toxin: historical perspective and potential new indications” Muscle Nerve Suppl. 6, S129-S145; Davis L.E. (1993) “Botulinum toxin-from poison to medicine” West J. Med. 128, 25-28; Hughes A.J. (1994) “Botulinum toxin in clinical practise” Drugs 48, 888-893; Hambleton P. (1992) “Clostridium botulinum toxins a general review of involvement in disease, structure, mode of action and preparation for clinical use” J. Neurol. 239, 16-20; Borodic G.E.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

y Pearces L.B. (1994) “New concepts in botulinum toxin therapy” Drug Safety 11, 145-152; Brin M.F., Blitzer A., Stewart C., Pine Z., Borg-Stein J., Miller J., Nagalapura N.S. y Rosenfeld D.B. (1993) “Disorders with excessive muscle contraction: Candidates for treatment with intramuscular botulinum toxin (BoTox®)” Botulinum and Tetanus Neurotoxins (Ed. B.R. DasGupata), 559-576]. Esta perdida de eficacia del tratamiento con BOTOX® conlleva la necesidad de aumentar la concentracion del preparado en tratamientos posteriores, lo que a su vez produce una potenciacion de la respuesta inmune. Como alternativa al tratamiento con toxina botullnica del serotipo A se ha barajado el uso de serotipos distintos de las toxinas botullnicas, tales como BoTox B, BoTox F y BoTox E. No obstante, la aplicacion de preparados farmaceuticos con serotipos distintos no puede considerarse una solucion al problema puesto que, tarde o temprano, la reaccion inmune se puede volver a producir. Ademas, el tratamiento con toxinas botullnicas es caro debido, principalmente, a la labilidad e inestabilidad de las preparaciones farmaceuticas que las contienen.

Existe, por tanto, una necesidad imperiosa de desarrollar moleculas que imiten los efectos parallticos de las toxinas botullnicas pero que esten dotadas de estructuras moleculares mucho mas sencillas y estables, que no induzcan reacciones inmunes, y cuyo coste de produccion sea economico. Las moleculas con una naturaleza peptldica cumplen estas propiedades.

A nivel molecular, las toxinas botullnicas son proteasas que degradan protelnas neuronales que estan involucradas en el mecanismo de exocitosis activada por el ion calcio [Schiavo G., Rossetto O. y Montecucco C. (1996) “Bases Moleculares del tetanos y del botulismo” Investigacion y Ciencia 234, 46-55; Montecucco C. y Schiavo G. (1994) “Mechanism of action of tetanus and botulinum neurotoxins” Mol. Microbiol. 13, 1-8; Schiavo G., Rosetto O., Benfenati F., Poulain B. y Montecucco, C. (1994) “Tetanus and botulinum neurotoxins are zinc proteases specific for components of the neuroexocytosis apparatus” Ann. NY Acad. Sci. 710, 65-75]. Por ejemplo, la toxina botullnica A, la mas comunmente utilizada en la practica cllnica y en cosmetica por sus aplicaciones en la eliminacion de las arrugas faciales y de la asimetrla facial, y para suavizar la sintomatologla de enfermedades espasmodicas, trunca la protelna neuronal SNAP-25. Esta protelna SNAP-25 juega un papel importante en la neurosecrecion puesto que esta involucrada en la formacion de un complejo proteico (conocido como complejo SNARE o de fusion) que dirige y controla la liberation de la acetilcolina acumulada en veslculas. El nucleo de dicho complejo de fusion esta formado por las protelnas sintaxina y SNAP-25, localizadas en la membrana plasmatica presinaptica, y la protelna sinaptobrevina o VAMP, localizada en la membrana plasmatica vesicular [Calakos N. y Scheller R.H. (1996) “Synaptic vesicle biogenesis, docking and fusion: a molecular description” Physiol. Rev. 76, 1-29; Sutton R.B., Fasshauer D., Jahn R. y Brunger A. T. (1998) “Crystal structure of a SNARE complex involved in synaptic exocytosis at 2.4A resolution” Nature 395, 347-353]. La funcion principal del complejo de fusion es aproximar y poner en contacto la veslcula cargada de neurotransmisor (acetilcolina) con la membrana plasmatica presinaptica [Calakos N. y Scheller R.H. (1996) “Synaptic vesicle biogenesis, docking and fusion: a molecular description” Physiol. Rev. 76, 129; Sutton R.B., Fasshauer D., Jahn R. y Brunger A.T. (1998) “Crystal structure of a SNARE complex involved in synaptic exocytosis at 2.4A resolution” Nature 395, 347-353]. De esta forma, en respuesta a una elevation de la concentracion de calcio, se favorecera la fusion de ambas membranas plasmaticas, produciendo as! la liberacion del neurotransmisor. Por tanto, dicho complejo proteico SNARE de fusion y anclaje vesicular constituye una diana clave para controlar la neurosecrecion. El truncamiento de cualquiera de las protelnas que forman el complejo de fusion previene su ensamblaje y, por tanto, inhibe la liberacion vesicular y regula la exocitosis neuronal.

Es conocido en el estado de la tecnica que ciertos peptidos derivados de las secuencias de las protelnas que forman el complejo SNARE son capaces de inhibir la exocitosis neuronal, tales como por ejemplo los peptidos derivados de los dominios amino y carboxilo de la protelna SNAP-25 [Apland J.P., Biser J.A., Adler M., Ferrer-Montiel A. V., Montal M., Canaves J.M. y Filbert, M.G. (1999) “Peptides that mimic the carboxy-terminal domain of SNAP-25 block acetylcholine release at an aplysia synapse” J. Appl. Toxicol. 19, Suppl.1: S23-S26; Mehta P.P., Batternger E. y Wilson M. (1996) “SNAP-25 and synaptotagmin involvement in the final Ca2+-dependent triggering of neurotransmitter exocytosis” Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 10471-10476; Ferrer-Montiel A.V., Gutierrez L.M., Apland J.P., Canaves J.M., Gil A., Viniegra S., Biser J.A., Adler M. y Montal M. (1998) “The 26-mer peptide released from cleavage by botulinum neurotoxin E inhibits vesicle docking” FEBS Lett. 435, 84-88; Gutierrez L.M., Canaves J.M., Ferrer-Montiel A.V., Reig J.A., Montal M. y Viniegra S. (1995) “A peptide that mimics the carboxy-terminal domain of SNAP-25 blocks Ca2+-dependent exocytosis in chromaffin cells” FEBS Lett. 372, 39-43; Gutierrez L.M., Viniegra S., Rueda J., Ferrer-Montiel A.V., Canaves J.M. y Montal M. (1997) “A peptide that mimics the C-terminal sequence of SNAP-25 inhibits secretory vesicle docking in chromaffin cells” J. Biol. Chem. 272, 2634-2639; Blanes- Mira C, Valera E., Fernandez-Ballester G., Merino J.M., Viniegra S., Gutierrez L.M., Perez-Paya E. y Ferrer-Montiel A. (2004) “Small peptides patterned after the N-terminus domain of SNAP-25 inhibit SNARE complex assembly and regulated exocytosis” J. Neurochem. 88, 124-135], los peptidos derivados de la secuencia de aminoacidos de la sintaxina [Martin F., Salinas E., Vazquez J., Soria B. y Reig J.A. (1996) “Inhibition of insulin release by synthetic peptides show that the H3 region at the C-terminal domain of syntaxin-1 is crucial for Ca2+-but not for guanosine 5'-[gamma-thio]thriphosphate-induced secretion” Biochem. J. 320, 201-205], de la sinaptobrevina [Cornille F., Deloye F., Fournie-Zaluski M.C., Roques B.P. y Poulain B. (1995) “Inhibition of neurotransmitter release by synthetic proline-rich peptides shows that the N-terminal domain of vesicle-associated membrane protein/synaptobrevin is critical for neuro-exocytosis” J. Biol. Chem. 270, 16826-16830], de la sinaptotagmina [Mehta P.P., Batternger E. y

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

Wilson M. (1996) “SNAP-25 and synaptotagmin involvement in the final Ca2+-dependent triggering of neurotransmitter exocytosis” Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 10471-10476] y de la protelna snapin [Ilardi J.M., Mochida S. y Sheng Z.H. (1999) “Snapin: A SNARE associated protein implicated in synaptic transmission” Nat. Neurosci. 2, 119-124]. Del mismo modo, se han descrito tambien peptidos sinteticos obtenidos por diseno racional o por rastreo de librerlas qulmicas sinteticas que son capaces de interferir en la formation del complejo SNARE inhibiendo la exocitosis neuronal [Blanes-Mira C., Pastor M.T., Valera E., Fernandez-Ballester G., Merino J.M., Gutierrez L.M., Perez-Paya E. y Ferrer-Montiel A. (2003) “Identification of SNARE complex modulators that inhibit exocytosis form an a-helix-constrained combinatorial library” Biochem J. 375, 159-166].

La aplicacion industrial de este tipo de compuestos ha sido limitada. La industria cosmetica ha realizado importantes esfuerzos para desarrollar compuestos que imiten la action de las toxinas botullnicas con uso exclusivo en el tratamiento y prevention de la formacion de las arrugas de expresion [Blanes-Mira C., Clemente J., Jodas G., Gil A., Fernandez-Ballester G., Ponsati B., Gutierrez L.M., Perez-Paya E. y Ferrer-Montiel, A. (2002) “A synthetic hexapeptide (Argireline®) with anti-wrinkle activity” Int. J. Cosmetic Res. 24, 303-310]. En concreto, la patente EP1.180.524 de Lipotec, S.A. describe peptidos derivados del fragmento amino-terminal de la protelna SNAP-25 que poseen efecto antiarrugas, y la solicitud de patente internacional WO97/34620 describe tambien peptidos derivados de la secuencia de aminoacidos de la protelna SNAP-25, en concreto de su region carboxi-terminal, o de la sinaptobrevina o de la sintaxina capaces de inhibir la exocitosis neuronal.

El documento WO 2006/094193 A2 da a conocer composiciones para liberation transdermica con una actividad biologica similar a la toxina botullnica, con menor nivel de toxicidad y menor peso molecular para incrementar su penetration de la piel. Las composiciones contienen un oligopeptido que comprende la secuencia de aminoacidos EEMQRR asociada a un portador cargado positivamente. El oligopeptido puede, opcionalmente, estar modificado mediante la adicion de grupos funcionales o de una secuencia adyacente de 3-14 aminoacidos neutros o no polares con el fin de incrementar la penetracion transdermica.

El documento WO 2005/105029 A1 da a conocer composiciones para mejorar la firmeza de la piel, que comprenden peptidos modificados con isoleucil-lisil-valil-alanil-valina como secuencia base.

El documento WO 2006/106164 A1 da a conocer una composition dermofarmaceutica o cosmetica que comprende peptidos derivados de encefalina para reducir y/o eliminar las arrugas faciales.

El documento WO 2004/099237 A1 da a conocer tripeptidos y derivados de los mismos para aplicacion cosmetica para mejorar la estructura de la piel.

El documento Veronese et al. (2005) “PEGylation, successful approach to drug delivery” Drug Discovery Today 10 (21), 1451-1458, da a conocer que la pegilacion incrementa el potencial de los peptidos y las protelnas como agentes terapeuticos.

El documento Chicharro C. et al. (2001) “N-terminal fatty acid substitution increases the leishmanicidal activity of CA(1-7)M(2-9), a Cecropin-Melittin hybrid peptide” Antimicrobial Agents and Chemotherapy 45 (9), 2441-2449, da a conocer que la acilacion de la lisina N-terminal del peptido hlbrido sintetico cecropin A-melittin (CA(1-17)M(2-9) (KWKLFKKIGAVLKVL-NH2) con acidos grasos lineales saturados incrementa la actividad leishmanicida del peptido, pero la acilacion del residuo Ne-7 lisina provoca una reduction drastica en la actividad del peptido.

El documento Tsutsumi Y. et al. (2000) “Site-specific chemical modification with polyethylene glicol of recombinant immunotoxin anti-Tac(Fv)PE38 (LMB-2) improves antitumor activity and reduces animal toxicity and immunogenicity” PNAS 97 (15), 8548-8553, da a conocer que la pegilacion de la inmunotoxina recombinante anti-Tac(Fv)-PE38 (LMB-2) incrementa la estabilidad y la actividad antitumoral, acompanada por una disminucion en la toxicidad e inmunogeneicidad animal.

Ninguna de las patentes descritas anteriormente se refiere a derivados de la protelna SNAP-25 modificados qulmicamente de manera irreversible como agentes reguladores de la exocitosis neuronal. La patente EP1.180.524 describe potenciales modificaciones qulmicas reversibles de los peptidos del extremo amino-terminal de la protelna SNAP-25 con el fin de aumentar su biodisponibilidad y su facilidad de paso a traves de la barrera hematoencefalica y del tejido epitelial, tales como la esterification de las cadenas laterales de los residuos de aspartico y glutamico, que posteriormente van a ser degradadas in vivo por esterasas intracelulares, recuperandose el peptido no modificado responsable de la actividad biologica. Sorprendentemente, el solicitante de la presente invention ha descubierto que modificaciones qulmicamente irreversibles de los extremos amino y/o carboxil de dichos peptidos no solo les confieren mayor resistencia a la degradation frente a proteasas intracelulares, provocando una mayor duration de su efecto como reguladores de la exocitosis neuronal, sino que sorprendentemente son capaces de incrementar su eficacia in vitro de dos a treinta veces respecto a la del correspondiente peptido no modificado.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

La modificacion de protelnas con cadenas lipldicas esta descrita como modificacion irreversible cuando esta se realiza sobre grupos amino presentes en sus secuencias, bien sea en su extremo amino-terminal, bien sea en las cadenas laterales de los residuos de lisina, mientras que cuando esta se realiza sobre los grupos tiol de los residuos de cistelna se considera reversible, ya que el peptido o protelna modificados son hidrolizados in vivo por las correspondientes tioesterasas [Magee A.I. (1990) “Lipid modification of proteins and its relevance to protein targeting" J. Cell Sci. 97, 581-584; Mumby S.M. (1997) “Reversible palmitoylation of signaling proteins” Curr. Opin. Cell Biol. 9, 148-154]. El estado de la tecnica describe ejemplos de modificaciones irreversibles de peptidos con derivados de cadenas de acidos grasos con el objetivo de mejorar su eficacia in vivo, aumentando su permeacion a traves de la piel [Lintner K. y Peschard O. (2000) “Biologically active peptides: from a laboratory bench curiosity to a functional skin care product” Int. J. Cosmet. Sci. 22, 207-218] o consiguiendo una mejor respuesta inmunologica para su desarrollo como potenciales vacunas [Gahery H., Choppin J., Bourgault I., Fischer E., Maillere B. y Guillet J.G. (2005) “HIV preventive vaccine research at the ANRS: the lipopeptide vaccine approach” Therapie 60, 243-248], as! como para inducir un mayor efecto citotoxico bien sea en bacterias [Eisenstein B.I. (2004) “Lipopeptides, focusing on daptomycin, for the treatment of Gram-positive infections” Expert Opin. Investig. Drugs 13, 1159-1169] o en hongos [Avrahami D. y Shai Y. (2004) “A New Group of Antifungal and Antibacterial Lipopeptides Derived from Nonmembrane Active Peptides Conjugated to Palmitic Acid” J. Biol. Chem. 279, 12277-12285]. Este tipo de modificaciones no siempre provoca un cambio en la eficacia in vitro de dichos peptidos; por ejemplo la palmitoilacion del tripeptido GHK no modifica su capacidad de inducir la slntesis de colageno en fibroblastos [Lintner K. y Peschard O. (2000) “Biologically active peptides: from a laboratory bench curiosity to a functional skin care product” Int. J. Cosmet. Sci. 22, 207-218], de modo que un experto en la materia en el momento de la presente invencion no podrla predecir si la modificacion de un peptido con un grupo hidrocarbonado aumentarla, disminuirla o dejarla inalterada su eficacia in vitro respecto al correspondiente peptido sin modificar.

Es tambien conocida en el estado de la tecnica la modificacion qulmica irreversible de peptidos y protelnas mediante la incorporacion covalente de unidades repetitivas de polietilenglicol, conocida como “PEGilacion”, basicamente con el fin de aumentar el tiempo de vida media in vivo, disminuir la toxicidad y reducir la inmunogenicidad y antigenicidad de los peptidos y protelnas [Savoca K.V., Abuchowski A., van Es T., Davis F.F. y Palczuk N.C. (1979) “Preparation of a non-immunogenic arginase by the covalent attachment of polyethylene glycol” Biochim. Biophys. Acta 578, 47-53; Hershfield M.S., Buckley R.H., Greenberg M.L., Melton A.L., Schiff R., Hatem C., Kurtzberg J., Markert M.L., Kobayashi R.H., Kobayashi A.L., et al. (1987) “Treatment of adenosine deaminase deficiency with polyethylene glycol-modified adenosine deaminase” N. Engl. J. Med. 316, 589-596; Katre N.V. (1990) “Immunogenicity of recombinant IL-2 modified by covalent attachment of polyethylene glycol” J. Immunol. 144, 209213; Wang Q.C., Pai L.H., Debinski W., FitzGerald D.J. y Pastan I. (1993) “Polyethylene glycol-modified chimeric toxin composed of transforming growth factor oc and Pseudomonas exotoxin” Cancer Res. 53, 4588-4594; Clark R., Olson K., Fuh G., Marian M., Mortensen D., Teshima G., Chang S., Chu H., Mukku V., Canova-Davis E., Somers T., Cronin M., Winkler M. y Wells J.A. (1996) “Long-acting growth hormones produced by conjugation with polyethylene glycol” J. Biol. Chem. 271, 21969-21977; He X.H., Shaw P.C. y Tam S.C. (1999) “Reducing the immunogenicity and improving the in vivo activity of trichosanthin by site-directed pegylation” Life Sci. 65, 355-368; Harris J.M. y Chess R.B. (2003) “Effect of PEGylation on pharmaceuticals” Nat. Rev. Drug Discov. 2, 214-221]. Los ejemplos existentes en el estado de la tecnica describen modificaciones de los peptidos y protelnas con el objetivo de mejorar sus propiedades farmacologicas de distribucion y eliminacion y as! mejorar su actividad biologica in vivo sin alterar su actividad biologica in vitro, pero en ningun caso sugieren que la potencial PEGilacion pueda incrementar la actividad biologica de la protelna in vitro, mas bien al contrario, existen ejemplos descritos como el caso del interferon PEGilado en que la actividad in vitro se ve reducida comparandola con la del interferon nativo [Rajender Reddy K., Modi M. W. y Pedder S. (1992) “Use of peginterferon alfa-2a (40 KD) (Pegasys) for the treatment of hepatitis C” Adv. Drug Deliv. Rev. 54(4), 571-86].

Sorprendentemente, la presente invencion demuestra que la modificacion qulmica de manera irreversible de secuencias peptldicas derivadas de la protelna SNAP-25 es capaz de aumentar la eficacia de dichas secuencias en la inhibicion de la exocitosis neuronal. No existe ningun indicio en el estado de la tecnica que dichas modificaciones deban incrementar la eficacia inhibidora de dichos peptidos, por lo que un experto en la materia no podrla deducir la naturaleza de las modificaciones requeridas de los peptidos para incrementar su capacidad inhibidora de la exocitosis neuronal.

As! pues, la presente invencion proporciona una solucion novedosa a las necesidades existentes que comprende el descubrimiento de unas secuencias peptldicas derivadas de la protelna SNAP-25 modificadas qulmicamente de manera irreversible capaces de inhibir la exocitosis neuronal de manera mas eficaz y prolongada que los correspondientes peptidos no modificados ya conocidos en el estado de la tecnica.

DESCRIPCION DE LA INVENCION

La presente invencion proporciona una solucion sencilla, eficaz y sin riesgos para la regulacion de la exocitosis neuronal, que comprende la aplicacion en el cuerpo de un mamlfero de una composicion que contiene, al menos, un

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

peptido que tiene una secuencia de aminoacidos derivada de la secuencia de aminoacidos de la protelna SNAP-25 y esta modificado qulmicamente de manera irreversible en sus extremos amino y/o carboxil.

Por lo tanto, un primer aspecto de la invencion se refiere a un peptido capaz de regular la exocitosis neuronal, un peptido con una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en:

CH3-(CH2)4-CO-EEMQRR-NH2

CH3-(CH2)6-CO-EEMQRR-NH2

CH3-(CH2)b-CO-EEMQRR-NH2

CH3-(CH2)10-CO-EEMQRR-NH2

CH3-(CH2)i2-CO-EEMQRR-NH2

CH3-(CH2)14-CO-EEMQRR-NH2

CH3-(CH2)16-CO-EEMQRR-NH2

CH3-(CH2)18-CO-EEMQRR-NH2

CH3-(CH2)20-CO-EEMQRR-NH2

Ac-EEMQRR-NH-(CH2)5-CH3

Ac-EEMQRR-NH-(CH2)7-CH3

Ac-EEMQRR-NH-(CH2)9-CH3

Ac-EEMQRR-NH-(CH2)ii-CH3

Ac-EEMQRR-NH-(CH2)i3-CH3

Ac-EEMQRR-NH-(CH2)i5-CH3

Ac-EEMQRR-NH-(CH2)i7-CH3

Ac-PEGi-EEMQRR-NH2

Ac-PEG2-EEMQRR-NH2

Ac-PEG3-EEMQRR-NH2

Ac-PEG4-EEMQRR-NH2

Ac-PEG5-EEMQRR-NH2

sus estereoisomeros, mezclas de los mismos, y sus sales cosmeticamente y farmaceuticamente aceptables. La estructura de Ac-PEGn es

O O

H3C

imagen1

O n

donde n puede variar de 1 a 5.

Los peptidos de la presente invencion pueden existir como estereoisomeros o mezclas de estereoisomeros; por ejemplo, los aminoacidos que los componen pueden tener configuracion L-, D-, o ser racemicos independientemente uno de otro. Por tanto, es posible obtener mezclas isomericas as! como racemicos o mezclas diastereomericas, o diastereomeros puros o enantiomeros, dependiendo del numero de carbonos asimetricos y de que isomeros o mezclas isomericas esten presentes. Las estructuras preferidas de los peptidos de la invencion son isomeros puros, es decir, enantiomeros o diastereomeros.

Los terminos “grupo” y “bloque” se utilizaran para diferenciar entre especies qulmicas que permiten sustitucion o que pueden ser sustituidas (“grupo”), y aquellas que no permiten sustitucion o que no pueden ser sustituidas (“bloque”). De esta forma, cuando el termino “grupo” se usa para describir un sustituyente qulmico, el material qulmico descrito incluye tanto el grupo no sustituido como aquel que contiene los atomos de O, N o S.

En el contexto de la presente invencion "secuencia de aminoacidos derivada de la secuencia de aminoacidos de la protelna SNAP-25" significa cualquier secuencia de aminoacidos o fragmento contenido en la secuencia de aminoacidos de la protelna SNAP-25, definida por la SEQ ID No.1, o cualquier secuencia de aminoacidos que difiera de una secuencia contenida en la secuencia SEQ ID No.1 por mutacion, insercion, delecion o sustitucion de al menos un aminoacido, o por degeneracion del codigo genetico, siempre y cuando corresponda a un peptido que posea la actividad de la protelna SNAP-25. Las mutaciones, inserciones o sustituciones pueden tener lugar mediante aminoacidos codificados geneticamente o mediante aminoacidos no codificados, naturales o sinteticos, tales como por ejemplo, y sin sentido limitativo, citrulina, ornitina, sarcosina, desmosina, norvalina, acido 4-aminobutlrico, acido 2-aminobutlrico, acido 2-aminoisobutlrico, acido 6-aminohexanoico, 1 -naftilalanina, 2-naftilalanina, acido 2-aminobenzoico, acido 4-aminobenzoico, 4-clorofenilalanina, acido 2,3-diaminopropionico, acido 2,4-diaminobutlrico, cicloserina, carnitina, cistina, penicilamina, acido piroglutamico, tienilalanina,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

hidroxiprolina, a//o-isoleucina, a//o-treonina, acido isonipecotico, isoserina, fenilglicina, estatina, B-alanina, norleucina, N-metilaminoacidos, B-aminoacidos o Y-aminoacidos entre otros, as! como sus derivados. Una lista de los aminoacidos sinteticos se puede encontrar en el artlculo "Unusual amino acids in peptide synthesis" de Roberts D.C. y Vellaccio F., en The Peptides, Vol. 5 (1983), Chapter VI, Gross E. and Meienhofer J., Eds., Academic Press, New York, USA o bien en los catalogos comerciales de las empresas especializadas del sector, como por ejemplo NeoMPS, Bachem, Novabiochem, Sigma-Aldrich, Peptides International, Advanced ChemTech, Chem-Impex, Maybridge Chemical, Chirotech Technology, Peninsula Laboratories o RSP Amino Acid Analogues, entre otras.

Dentro de los peptidos de la invencion derivados de la secuencia de aminoacidos de SNAP-25 definida por la SEQ ID No.1 y modificados qulmicamente de manera irreversible, las secuencias preferidas son aquellas que poseen una secuencia de aminoacidos contenida en la region comprendida entre los residuos 12 a 17, definida por la SEQ ID No.11.

Dentro del ambito de la presente invencion se encuentran las sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables de los peptidos proporcionados por esta invencion. El termino “sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables” incluye las sales habitualmente utilizadas para formar sales metalicas o sales de adicion de acidos, bien sean sales de adicion de acido organico (tales como por ejemplo acetato, citrato, oleato, trifluoroacetato, oxalato o gluconato, entre otros) o sales de adicion de acido inorganico (tales como por ejemplo cloruro, sulfato, borato o carbonato, entre otros). La naturaleza de la sal no es crltica, siempre y cuando sea cosmeticamente o farmaceuticamente aceptable. Las sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables de los peptidos de la invencion pueden obtenerse por metodos convencionales, bien conocidos en el estado de la tecnica.

La slntesis de los peptidos de la invencion puede realizarse segun metodos convencionales, conocidos en el estado de la tecnica, como por ejemplo la adaptacion de los metodos de slntesis de peptidos en fase solida [Stewart J.M. y Young J.D. (1984) “So/id Phase Peptide Synthesis, 2nd edition” Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois; Bodanzsky M. y Bodanzsky A. (1984) “The practice of Peptide Synthesis” Springer Ver/ag, New York; L/oyd-Wi//iams P., A/bericio F. y Gira/t E. (1997) “Chemica/ Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins” CRC, Boca Raton (FL, USA)], la slntesis en solucion, una combinacion de los metodos de slntesis en fase solida y en solucion o la slntesis enzimatica [Ku//mann W. (1980) “Proteases as cata/ysts for enzymic syntheses of opioid peptides” J.Bio/.Chem. 255, 8234-8238]. Los peptidos se pueden obtener igualmente por fermentacion de una cepa bacteriana, que esta modificada o no por ingenierla genetica con el objetivo de producir las secuencias deseadas, o bien por hidrolisis controlada de protelnas de origen animal o vegetal, preferentemente de origen vegetal, que libere fragmentos peptldicos que contengan, al menos, la secuencia deseada.

Por ejemplo, un metodo de obtencion de los peptidos de la invencion es aquel en el cual se hace reaccionar un fragmento del peptido de la invencion que posee un grupo carboxilo libre o un derivado reactivo de este, con un fragmento complementario, que posee un grupo amino, con al menos un atomo de hidrogeno libre, con la consecuente formacion de un enlace tipo amida, y donde los grupos funcionales de dichos fragmentos que no participan en la formacion del enlace tipo amida, si los hubiera, estan convenientemente protegidos, con grupos protectores temporales o permanentes.

Otro ejemplo de metodo de obtencion de los peptidos de la invencion es aquel en el cual se hace reaccionar un fragmento del peptido de la invencion que posee un grupo saliente, como por ejemplo el grupo tosilo, el grupo mesilo y grupos halogeno entre otros, con un fragmento complementario que posee un grupo amino con al menos un atomo de hidrogeno libre mediante una reaccion de sustitucion nucleofila, y donde los grupos funcionales de dichos fragmentos que no participan en la formacion del enlace N-C, si los hubiera, estan convenientemente protegidos, con grupos protectores temporales o permanentes. Ejemplos de grupos protectores, su introduccion y su eliminacion, estan descritos en la literatura [Greene T.W. (1981) “Protective groups in organic synthesis” John Wi/ey & Sons, New Cork; Atherton B. y Sheppard R.C. (1989) “So/id Phase Peptide Synthesis: A practica/ approach” IRL Oxford University Press]. El termino “grupos protectores” incluye tambien a los soportes polimericos empleados en la slntesis en fase solida.

Cuando la slntesis se realiza total o parcialmente en fase solida, se pueden citar como soportes solidos a utilizar en el metodo de la invencion: los soportes hechos de poliestireno, polietilenglicol injertado en poliestireno y similares, tales como por ejemplo resinas p-metilbenzhidrilamina (MBHA [Matsueda G.R. y Stewart J.M. (1981) “A p-methy/benzhydry/amine resin for improved so/id-phase synthesis of peptide amides” Peptides 2, 45-50], resinas 2-clorotritilo [(a) Bar/os K., Gatos D., Ka//itsis J., Papaphotiu G., Sotiriu P., Wenqing Y. y Schafer W. (1989) “Darste//ung geschutzter peptid-fragmente unter einsatz substituierter tripheny/methy/-harze” Tetrahedron Lett. 30, 3943-3946;(b) Bar/os K., Gatos D., Kapo/os S., Papaphotiu G., Schafer W. y Wenqing Y. (1989) “Veresterung von partie// geschutzten peptid-fragmenten mit harzen. Einsatz von 2-ch/orotrity/ch/orid zur synthese von Leu15 -gastrin I” Tetrahedron Lett. 30, 3947-3951], resinas TentaGel® (Rapp Polymere GmbH), resinas ChemMatrix® (Matrix Innovation, Inc) y similares, que pueden incluir o no un espaciador labil, tal como acido 5-(4-aminometil-3,5-dimetoxifenoxi) valerico (PAL) [A/bericio F., Kneib-Cordonier N., Bianca/ana S., Gera L., Masada

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

R.I., Hudson D. y Barany G. (1990) “Preparation and application of the

5-(4-(9-fluorenylmethyloxycarbonyl)aminomethyl-3,5-dimethoxy-phenoxy)-valeric acid (PAL) handle for the solid-phase synthesis of C-terminal peptide amides under mild conditions” J. Org. Chem. 55, 3730-3743], acido 2-[4-aminometil-(2,4-dimetoxifenil)] fenoxiacetico (AM) [Rink H. (1987) “Solid-phase synthesis of protected peptide fragments using a trialkoxy-diphenyl-methylester resin” Tetrahedron Lett. 28, 3787-3790], Wang [Wang S.S. (1973) “p-Alkoxybenzyl Alcohol Resin and p-Alkoxybenzyloxycarbonylhydrazide Resin for Solid Phase Synthesis of Protected Peptide Fragments” J.Am.Chem.Soc. 95, 1328-1333] y similares, que permiten la desproteccion y escision simultanea del compuesto del soporte polimerico.

Los peptidos de la invencion pueden administrarse para regular la exocitosis neuronal por cualquier medio que produzca el contacto de los compuestos con el sitio de accion del mismo en el cuerpo de un mamlfero, preferiblemente el del ser humano, en forma de composicion que los contiene. En este sentido, la invencion proporciona una composicion cosmetica o farmaceutica que comprende al menos un peptido de formula general (I) o sus sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables. Dichas composiciones pueden ser preparadas mediante metodos convencionales conocidos por los expertos en la materia.

Los peptidos de la invencion se utilizan en la composicion cosmetica o farmaceutica de la presente invencion a unas concentraciones cosmeticamente o farmaceuticamente efectivas para conseguir el efecto deseado; preferentemente entre el 0,00000001% (en peso) y el 20% (en peso); preferentemente entre el 0,00001% (en peso) y el 10% (en peso) y mas especlficamente entre el 0,0001% (en peso) y el 5% (en peso).

Los peptidos objeto de la presente invencion tienen una solubilidad en agua variable, segun sea la naturaleza de su secuencia o la modification en los extremos amino y carboxil que presenten. Aquellos que no sean solubles en agua pueden solubilizarse en solventes convencionales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables tales como por ejemplo etanol, propanol o isopropanol, propilenglicol, glicerina, butilenglicol o polietilenglicol.

La cantidad farmaceuticamente efectiva de los peptidos y/o composiciones farmaceuticas segun la invencion, que debe administrarse para tratar una condition patologica, as! como su dosificacion, dependera de numerosos factores, incluyendo la edad, estado del paciente, la severidad de la alteracion o trastorno, el metodo y frecuencia de administration y de los peptidos particulares a utilizar.

Las composiciones farmaceuticas que contienen los peptidos de la invencion pueden presentarse en cualquier forma de administracion, por ejemplo, solida o llquida, y pueden administrarse por cualquier via apropiada, por ejemplo, oralmente, nasalmente, parenteralmente, rectalmente, topicamente o transdermicamente, para lo cual incluiran los excipientes farmaceuticos necesarios para la formulation de la forma de administracion deseada. En el contexto de la presente invencion, el termino “parenteral” incluye inyecciones subcutaneas, intradermicas, intravasculares tales como por ejemplo intravenosas, intramusculares, espinales, intracraneales, intraarticulares, intratecales e intraperitoneales, as! como cualquier otra inyeccion similar o tecnica de infusion. Una revision de las distintas formas farmaceuticas de administracion de medicamentos y de los excipientes necesarios para la obtencion de las mismas puede encontrarse, por ejemplo, en el “Tratado de Farmacia Galenica”, C. Faull i Trillo, 1993, Luzan 5, S.A. Ediciones, Madrid.

Los peptidos de la invencion tambien se pueden incorporar previamente en sistemas de liberation sostenida y/o en sistemas de vehiculizacion cosmeticos o farmaceuticos como liposomas, milipartlculas, micropartlculas y nanopartlculas, esponjas, veslculas, micelas, miliesferas, microesferas y nanoesferas, lipoesferas, milicapsulas, microcapsulas y nanocapsulas, as! como en microemulsiones y nanoemulsiones, con el fin de conseguir una mayor penetration del principio activo y/o mejorar las propiedades farmacocineticas y farmacodinamicas del mismo. Las formulaciones de liberacion controlada pueden prepararse mediante metodos conocidos en el estado de la tecnica, y pueden administrarse, por ejemplo, por administracion topica incluyendo los parches adhesivos, u oralmente, rectalmente o implantation subcutanea, o por implantation directa en una parte del cuerpo concreta, y preferentemente deben liberar una cantidad relativamente constante de los peptidos de la invencion. La cantidad de peptido contenida en la formulacion de liberacion controlada dependera, por ejemplo, del sitio de administracion, la cinetica y duration de la liberacion del peptido de la invencion as! como la naturaleza de la condicion a ser tratada o prevenida.

Los peptidos de la presente invencion tambien pueden adsorberse sobre pollmeros organicos solidos o soportes minerales como talco, bentonita, sllice, almidon o maltodextrina entre otros.

Las preparaciones cosmeticas o farmaceuticas que contienen los peptidos de la presente invencion pueden usarse en distintos tipos de formulaciones de aplicacion topica tales como por ejemplo, y sin sentido limitativo, cremas, emulsiones de aceite y/o silicona en agua, emulsiones de agua en aceite y/o silicona, aceites, leches, balsamos, espumas, lociones, geles, linimentos, sueros, jabones, unguentos, mousses, pomadas, barras, lapices y vaporizadores, incluyendo las formulaciones de permanencia y las de enjuagado, y tambien pueden ser

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

incorporadas mediante tecnicas conocidas por expertos en la materia a distintos tipos de accesorios solidos tales como por ejemplo toallitas, hidrogeles, parches adhesivos (o no adhesivos) o mascarillas faciales, o pueden incorporarse a distintos productos de llnea de maquillaje tales como fondos de maquillaje, lociones, leches desmaquillantes, correctores de ojeras, sombras de ojos y barras de labios, entre otros.

Los peptidos tambien pueden incorporarse a tejidos para la confeccion de prendas que esten en contacto directo con la piel del cuerpo, de modo que liberen los peptidos de la invencion bien por biodegradacion del sistema de anclaje al tejido o bien por la friccion de la prenda con el cuerpo, por la humedad corporal, por el pH de la piel o por la temperatura corporal. Ejemplos de prendas, tejidos y medios de inmovilizacion de los peptidos a los tejidos, entre los que se encuentran la microencapsulacion, pueden encontrarse descritos en la literatura y son conocidos en el estado de la tecnica [Schaab C.K. (1986) "Impregnating Fabrics With Microcapsules", HAPPI May 1986; Nelson G. (2002) “Application of microencapsulation in textiles” Int. J. Pharm. 242, 55-62]. Prendas preferidas son vendas.

La composicion cosmetica o farmaceutica objeto de la presente invencion puede aplicarse en las zonas del cuerpo que requieran tratamiento o cuidado mediante inyeccion subcutanea, inyeccion intradermica, cura oclusiva o mediante iontoforesis, con el fin de conseguir una mayor penetracion del principio activo. La zona de aplicacion vendra determinada por la naturaleza de la condicion a tratar. Una zona preferida para la aplicacion es la zona de la frente que presenta arrugas de expresion as! como en el espacio entre las cejas, las arrugas y llneas finas alrededor de la boca y/o alrededor de los ojos.

La composicion cosmetica o farmaceutica reivindicada en la presente invencion puede contener ingredientes adicionales comunmente empleados en composiciones para el cuidado, limpieza y tratamiento de la piel, tales como por ejemplo, y sin sentido limitativo, agentes emulsionantes, emolientes, disolventes organicos, acondicionadores de la piel tales como por ejemplo humectantes, alfahidroxiacidos, hidratantes, vitaminas, pigmentos o colorantes, pollmeros gelificantes, espesantes, suavizantes, agentes antiarrugas, agentes capaces de disminuir o tratar las bolsas bajo los ojos, agentes blanqueantes o despigmentantes, agentes exfoliantes, agentes anti-envejecimiento, agentes capturadores de radicales libres y/o anti-contaminacion atmosferica, agentes inhibidores de la NO-sintasa, agentes antioxidantes, agentes anti-glicacion, agentes antimicrobianos, agentes antifungicos, agentes estimuladores de la slntesis de macromoleculas dermicas o epidermicas y/o capaces de inhibir su degradation, tales como por ejemplo agentes estimuladores de la slntesis de colageno, agentes estimuladores de la slntesis de elastina, agentes estimuladores de la slntesis de decorina, agentes estimuladores de la slntesis de laminina, agentes inhibidores de la degradacion de colageno, agentes inhibidores de la degradacion de elastina, agentes estimuladores de la proliferation de fibroblastos, agentes estimuladores de la proliferation de queratinocitos, agentes estimuladores de la diferenciacion de queratinocitos, agentes estimuladores de la slntesis de llpidos y componentes del estrato corneo (ceramidas, acidos grasos, etc.), agentes dermorelajantes, agentes estimuladores de la slntesis de glicosaminoglicanos, agentes reafirmantes, agentes antiestrlas, agentes calmantes, agentes antiinflamatorios, agentes que actuen sobre la circulation capilar y/o la microcirculation, agentes que actuen sobre el metabolismo de las celulas, agentes estimuladores y/o inhibidores de la slntesis de melanina, agentes destinados a mejorar la union dermis-epidermis, conservantes, perfumes, agentes quelantes, extractos vegetales, aceites esenciales, extractos marinos, agentes provenientes de la biofermentacion, sales minerales, extractos celulares y filtros solares (agentes fotoprotectores de naturaleza organica o mineral activos contra los rayos ultravioleta A y B), entre otros, siempre que sean flsica y qulmicamente compatibles con el resto de componentes de la composicion y en especial con los peptidos de formula general (I) contenidos en la composicion de la presente invencion. La naturaleza de dichos ingredientes adicionales puede ser sintetica o de origen natural, como por ejemplo extractos vegetales, o provenir de un proceso de biofermentacion.

Un aspecto adicional de la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica o farmaceutica que contiene una cantidad cosmeticamente o farmaceuticamente eficaz de al menos un peptido de la invencion, y ademas una cantidad cosmeticamente o farmaceuticamente eficaz de al menos un extracto con actividad antiarrugas y/o antienvejecimiento tal como por ejemplo y sin sentido limitativo los extractos de Vitis vinifera, Rosa canina, Curcuma longa, Iris pallida, Theobroma cacao, Ginkgo biloba, o Dunaliella salina entre otros o bien de ademas al menos un compuesto sintetico, extracto o producto de biofermentacion con actividad antiarrugas y/o antienvejecimiento como por ejemplo y sin sentido limitativo Matrixyl® comercializado por Sederma, Vialox® o Syn-ake® comercializados por Pentapharm, Myoxinol™ comercializado por Cognis, Algisum C® o Hydroxyprolisilane CN®, comercializados por Exsymol, Argireline®, Leuphasyl®, Aldenine®, Decorinyl®, Decorinol® o Lipochroman® comercializados por Lipotec, Kollaren® comercializado por Institut Europeen de Biologie Cellulaire, Collaxyl® o Quintescine® comercializados por Vincience, antagonistas del canal de Ca2+ como la alverina, las sales de manganeso o de magnesio, ciertas aminas secundarias o terciarias, retinol y sus derivados, idebenona y sus derivados, Coenzima Q10 y sus derivados, acido boswelico y sus derivados, acido gamma-aminobutlrico o agonistas de canales de cloruro, entre otros.

Asimismo, las composiciones de la presente invencion pueden contener o se pueden coadministrar con compuestos analgesicos y/o compuestos antiinflamatorios con el fin de disminuir la hinchazon y la irritation asociadas a pieles sensibles. Compuestos de tipo esteroideo tales como la hidrocortisona, compuestos de tipo no esteroideo tales

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

como el paracetamol o el acido acetilsalicllico o extractos naturales o aceites esenciales con actividad analgesica y antiinflamatoria intrlnseca.

Los peptidos de la invencion poseen un mecanismo de accion similar al de la toxina botullnica, inhibiendo la exocitosis neuronal, por lo que se puede considerar que los peptidos mostraran eficacia en el tratamiento de las arrugas faciales y/o la asimetrla facial, as! como en el tratamiento de aquellas condiciones que presenten espasticidad muscular, tales como las distonias, estrabismo, blefarospasmo, tortlcolis, tics, etc.

Por tanto, un aspecto adicional de esta invencion se refiere al uso de al menos un peptido de la presente invencion en la elaboracion de una composicion cosmetica o farmaceutica para el tratamiento de aquellas condiciones de los mamlferos, preferentemente de los humanos, que requieran regular la exocitosis neuronal. Otro aspecto de la presente invencion se refiere al uso de al menos un peptido dela presente invencion en la elaboracion de una composicion cosmetica o farmaceutica para el tratamiento, limpieza o cuidado de la piel. Un aspecto adicional de esta invencion se refiere al uso de al menos un peptido de la presente invencion en la elaboracion de una composicion cosmetica o farmaceutica para reducir y/o eliminar la asimetrla facial y las arrugas faciales, preferentemente las arrugas de expresion. Otro aspecto adicional de esta invencion se refiere al uso de al menos un peptido de la presente invencion en la elaboracion de una composicion cosmetica o farmaceutica para tratar aquellos desordenes o patologlas neurologicos que cursan con espasticidad muscular, tales como son las distonias, estrabismo, blefarospasmo, tortlcolis, tics, etc.

Otro aspecto de la presente invencion se refiere a un metodo cosmetico o farmaceutico para tratar aquellas condiciones de los mamlferos que requieran una regulacion de la exocitosis neuronal, preferentemente de los humanos, que comprende la administracion de una cantidad eficaz de al menos un peptido de la presente invencion, preferiblemente en forma de una composicion cosmetica o farmaceutica que lo comprende. La presente invencion proporciona, ademas, un metodo cosmetico o farmaceutico para reducir y/o eliminar las arrugas faciales o para tratar la asimetrla facial que comprende la aplicacion en la piel del rostro de una composicion cosmetica o farmaceutica que contiene al menos un peptido de la invencion o sus sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables. Asimismo, la presente invencion proporciona un metodo cosmetico o farmaceutico para tratar aquellos desordenes o patologlas neurologicos que cursan con espasticidad muscular, tales como son las distonias, estrabismo, blefarospasmo, tortlcolis, tics, etc. que comprende la aplicacion de una composicion cosmetica o farmaceutica que contiene al menos un peptido de la invencion o sus sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables.

La frecuencia de la aplicacion puede variar ampliamente, dependiendo de las necesidades de cada sujeto, sugiriendose un rango de aplicacion desde una vez al mes hasta 10 veces al dla, preferentemente desde una vez a la semana hasta 4 veces al dla, mas preferentemente desde tres veces por semana hasta dos veces al dla, aun mas preferentemente, se sugiere, una vez al dla.

El metodo cosmetico o farmaceutico preferido es aquel en que la aplicacion se realiza en aquellas areas del rostro o la frente marcadas con arrugas de expresion, preferentemente sobre las arrugas alrededor de la boca y/o los ojos, y/o sobre las arrugas de la frente y/o sobre las arrugas del espacio entre las cejas.

DESCRIPCION DE LAS FIGURAS

La figura 1 muestra que en presencia de los peptidos de la invencion a una concentracion 0,1mM, la liberacion de [3H]-L-glutamato de cultivos primarios de neuronas de hipocampo de rata se inhibio mas de un 40%, indicando que los compuestos son inhibidores de la exocitosis neuronal. La inhibicion de la liberacion de [3H]-L-glutamato por el peptido no modificado derivado de la secuencia de aminoacidos de la protelna SNAP-25 definido por SEQ ID No.11 a la misma concentracion fue de solo un 5%, requiriendose concentraciones en un rango de 30 veces superiores (3mM) para alcanzar niveles de inhibicion comparables a los de los peptidos modificados irreversiblemente.

REALIZACIONES

Los siguientes ejemplos especlficos que se proporcionan aqul sirven para ilustrar la naturaleza de la presente invencion. Estos ejemplos se incluyen solamente con fines ilustrativos y no han de ser interpretados como limitaciones a la invencion que aqul se reivindica.

Metodologla General

Sintesis quimica

Todos los procesos sinteticos se llevan a cabo en jeringas de polipropileno equipadas con discos de polietileno poroso. Todos los reactivos y disolventes son de calidad para sintesis y se usan sin ningun tratamiento adicional.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Los disolventes y los reactivos se eliminan por succion. La elimination del grupo Fmoc se lleva a cabo con piperidina-DMF (2:8, v/v) (1 x 1min, 1 x 5min; 5mL/g resina) [Lloyd-Williams P., Albericio F. y Giralt, E. (1997) “Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins" CRC, Boca Raton (FL, Ursa)]. Los lavados entre las etapas de desproteccion, acoplamiento, y, otra vez, desproteccion se han llevado a cabo con DMF (3 x 1min) usando 10mL de disolvente/g de resina. Las reacciones de acoplamiento se han realizado con 3mL de disolvente/g de resina. El control de los acoplamientos se realiza mediante el ensayo de la ninhidrina [Kaiser E., Colescott R.L., Bossinger C.D. y Cook P.I. (1970) “Color test for detection of free terminal amino groups in the solid-phase synthesis of peptides" Anal. Biochem. 34, 595-598]. Todas las transformaciones sinteticas y lavados se han llevado a cabo a 25°C.

El analisis por espectrometrla de masas por electroespray se lleva a cabo en un equipo Shimadzu (Kyoto, Japon) LCMS-QP 8000, empleando una mezcla de MeCN:FhO 4:1 (+0.1% TFA) como fase movil y una velocidad flujo de 0.2mL/min.

Abreviaturas:

Las abreviaturas empleadas para los aminoacidos siguen las reglas de la Comision de Nomenclatura Bioqulmica de la IUPAC-IUB especificadas en Eur. J. Biochem. (1984) 138, 9-37 y en J. Biol. Chem. (1989) 264, 633-673.

AM, acido 2-[4-aminometil-(2,4-dimetoxifenil)]-fenoxiacetico; BoNT A, toxina botullnica serotipo A; cps, centipoise; DCM, diclorometano; DIEA, N,N-diisopropiletilamina; DIPCDI, N,N-diisopropilcarbodiimida; DMF,

N,N-dimetilformamida; DPPC, dipalmitoilfosfatidilcolina; eq., equivalente; Fmoc, fluorenilmetoxicarbonilo; HOBt, 1-hidroxibenzotriazol; INCI, Nomenclatura Internacional de Ingredientes Cosmeticos; MBHA, p-metilbenzhidrilamina; MeCN, acetonitrilo; MLV, veslculas multilaminares; MeOH, metanol; NMP, N-metilpirrolidona; Pbf, 2,2,4,6,7-pentametildihidrobenzofuran-5-sulfonilo; PEG, polietilenglicol; PEGn,

-[NH-CH2-(CH2CH2O)3-(CH2)3-NH-CO-CH2CH2-CO-]n; rpm, revoluciones por minuto; SNAP-25, protelna asociada al sinaptosoma (25kDa); tBu, terc-butilo; TFA, acido trifluoroacetico; THF, tetrahidrofurano; ULV, veslculas unilaminares.

EJEMPLO 1

Obtencion de Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-AM-MBHA

Se tratan 151.3g de la resina Fmoc-AM-MBHA con una funcionalizacion de 0.628mmol/g (95mmol, 1eq.) con piperidina-DMF segun el protocolo general descrito con el objetivo de eliminar el grupo Fmoc. Sobre la resina desprotegida se incorporan 154.1 g de Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (237mmol, 2.5eq.) en presencia de DIPCDI (36.6mL, 237mmol, 2.5eq.) y HOBt (35.6g, 237mmol, 2.5eq.) utilizando DmF como disolvente durante 1h.

La resina se lava posteriormente como se describe en los metodos generales y se repite el tratamiento de desproteccion del grupo Fmoc para incorporar el siguiente aminoacido. Siguiendo los protocolos descritos se acoplan secuencialmente, 154.1 g de Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (237mmol, 2.5eq.), 87.5g de Fmoc-Gln-OH (474mmol, 5eq.), 88.2g de Fmoc-L-Met-OH (237mmol, 2.5eq.), 105.3g de Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (237mmol, 2.5eq.) y 105.3g de Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (237mmol, 2.5eq.) en presencia en cada acoplamiento de 36.5g de HOBt (237mmol, 2.5eq.) y 36.6mL de DIPCDI (237mmol, 2.5eq.), excepto en la etapa de incorporation de Fmoc-L-Gln-OH en el que se emplearon 71.3g de HOBt (474mmol, 5eq.).

La Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-AM-MBHA obtenida se lava con DMF (5 x 1min), DCM (4 x 1 min), eter dietllico (4 x 1 min) y se seca al vaclo.

EJEMPLO 2

Obtencion de CH3-(CH2)m-CO-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2

Se desprotege el grupo Fmoc amino-terminal de 1.68g de Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)- AM-MBHA (0.5mmol, 0.296mmol/g, 1eq.) como se describe en los metodos generales, y se incorpora CH3-(CH2)m- COOH (5mmol, 10eq.) predisuelto en DmF (10mL) en presencia de 770mg de HOBt (5mmol, 10eq.) y 770pL de DIPCDI (5mmol, 10eq.). Se deja reaccionar durante 15h, pasadas las cuales la resina se lava con THF (5 x 1min), DCM (5 x 1min), DMF (5 x 1min), MeOH (5 x 1min), DMF (5 x 1min), THF (5 x 1min), DMF (5 x 1min), DCM (4 x 1 min), eter (3 x 1 min), y se seca al vaclo.

1.00g de la peptidil-resina seca se trata con 15mL de TFA-'PraSi-hteO (90:5:5) durante 2h a temperatura ambiente. Se recogen los filtrados sobre eter dietllico frlo (100mL), se centrifugan 5min a 4000rpm y se decanta la solucion de eter. Se repiten los lavados con eter 5 veces. El precipitado final se seca al vaclo.

m

cantidad obtenida pureza PM teorico PM experimental

6

291.2mg 88.2% [M+H]+ = 972.5 [M+H+] = 973.8 [M+2H+/2] = 487.5

8

240.1mg 87.2% [M+H]+ = 1000.5 [M+H+] = 1001.8 [M+2H+/2] = 501.5

12

327.5mg 80.7% [M+H]+ = 1056.6 [M+H+] = 1057.8 [M+2H+/2] = 529.5

14

292.8mg 80.9% [M+H]+ = 1084.6 [M+H+] = 1085.9 [M+2H+/2] = 543.7

20

233.7mg 85.1% [M+H]+ = 1168.74 [M+H+] =1170.0 [M+2H+/2] = 585.7

5

EJEMPLO 3

Obtencion de Ac-PEGn-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Nhh

Se desprotege el grupo Fmoc amino-terminal de 321.0mg de Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)- AM-MBHA (0.095mmol, 0.296mmol/g, 1eq.) como se describe en los metodos generales, y se incorporan 10 Fmoc-PEG1-OH (2.5eq.) predisuelto en NMP, en presencia de 36.5mg de HOBt (0.237mmol, 2.5eq.) y 36.6pL de

DIPCDI (0.237mmol, 2.5eq.), durante 40-60min. Se desprotege el grupo Fmoc amino-terminal como se describe en los metodos generales, y se lleva a cabo la reaccion de incorporation de Fmoc-PEG1-OH y la desproteccion del Fmoc (n-1) veces, donde n = 1-100 para la obtencion de los distintos derivados. La acetilacion del extremo amino-terminal se lleva a cabo con Ac2O (2.5eq.) y DIEA (2.5eq.) en DMF durante 30min.

15 La resina Ac-PEGn-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-AM-MBHA se lava con DMF (5 x 1min), DCM (4 x 1 min), eter dietllico (4 x 1 min) y se seca al vaclo.

22.4mg de Ac-PEGn-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-AM-MBHA se tratan con 1,57mL del coctel TFA-iPr3Si-H2O (95:2.5:2.5) durante 5min a 0°C seguidos de 90min a temperatura ambiente. Se recogen los filtrados sobre eter dietllico frlo (10mL), se centrifugan 5min a 4000rpm y se decanta la solucion de eter. Se repiten 20 los lavados con eter 5 veces. El residuo aceitoso final se redisuelve en MeCN:H2O 1:1 y se liofiliza.

n cantidad obtenida pureza PM teorico PM experimental

1 7.7mg

2 10.0mg

72% [M+H]+ = 1191.6

60% [M+H]+ = 1494.7

[M+2H+/2] = 596.4 [M+3H+/3] = 398.0 [M+2H+/2] = 747.6

5

10

15

20

25

[M+3H+/3] = 498.7

3

10.4mg 64% [M+ H]+ = 1796.1 [M+2H+/2] = 898.7

[M+3H+/3] = 599.6

[M+4H+/4] = 449.8

4

13.7mg 65% [M+ H]+ = 2099.5 [[M+2H+/2] = 1050

[M+3H+/3] = 700.4

[M+4H+/4] = 525.4

[M+5H+/5] = 420.5

5

10.4mg 65% [M+ H]+ = 2400.3 [M+2H+/2] = 1201.1

[M+3H+/3] = 801.1

[M+4H+/4] = 601.0

[M+5H+/5] = 481.0

[M+6H+/6] = 400.9

EJEMPLO 4

Obtencion de Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH-(CH2)s-CH3

Se incorporan 2.10g de Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (3.23mmol, 1eq.) disueltos en 20mL de DCM a los que se han anadido 500pL de DIEA (2.9mmol, 0.90eq.) sobre la resina 2-clorotritilo (2.0g, 3.3mmol) seca. Se deja en agitacion durante 5min, pasados los cuales se anade 1mL de DIEA (5.9mmol, 1.81eq.). Se deja reaccionar durante 40min. Se protegen los grupos cloruro restantes por tratamiento con 1.6mL de MeOH.

Se desprotege el grupo Fmoc amino-terminal como se describe en los metodos generales y se incorporan 3.24g de Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (5mmol, 5eq.) sobre 1mmol de la aminoacil-resina Fmoc-Arg(Pbf)-ClTrt-® en presencia de DIPCDI (770pL, 5mmol, 5eq.) y HOBt (770mg, 5mmol, 5eq.) utilizando DMF como disolvente durante 1h. La resina se lava posteriormente como se describe en los metodos generales y se repite el tratamiento de desproteccion del grupo Fmoc para incorporar el siguiente aminoacido. Siguiendo los protocolos descritos se acoplan secuencialmente, 1.84g de Fmoc-L-Gln-OH (5mmol, 5eq.), 1.86g de Fmoc-L-Met-OH (5mmol, 5eq.), 2.12g de Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH y 2.12g de Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (5mmol, 5eq.) se acoplan secuencialmente en presencia en cada acoplamiento de 770mg de HOBt (5mmol, 5eq.) y 770pL de DIPCDI (5mmol, 5eq.), excepto en la etapa de incorporacion de Fmoc-L-Gln-OH, etapa en la que se adicionan 1.54g de HOBt (10mmol, 10eq.).

Se desprotege el grupo Fmoc amino-terminal como se describe en los metodos generales, se trata la peptidil-resina durante 30min con 2.36mL de anhldrido acetico (25mmol, 25eq.) en presencia de 4.28mL de DIEA (25mmol, 25eq.) utilizando DMF como disolvente, se lava con DMF (5 x 1min), DCM (4 x 1min), eter dietllico (4 x 1min) y se seca al vaclo.

El peptido completamente protegido [Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH] se obtiene por tratamiento durante 5min de la peptidil-resina, previamente desecada al vaclo en presencia de KOH, con una solucion del 3% de TFA en DCM. Los filtrados se recogen sobre eter dietllico frlo y se repite el tratamiento tres veces. Se rotavaporan a sequedad y a temperatura ambiente las soluciones de eter, se resuspende el precipitado en 50% de MeCN en H2O y se liofiliza. Se pesan 279mg del producto en crudo obtenido (367pmol) en un balon, se anaden 3eq. de CH3-(CH2)s-NH2 y 30mL de DMF anhidra. Se anaden 120pL de DIPCDI (2eq.), y se deja reaccionar con agitacion magnetica a 47°C. Se controla la reaccion mediante HPLC por desaparicion del producto inicial, siendo completa tras 24h. Se evapora el disolvente a sequedad y se coevapora dos veces con DCM. El residuo obtenido

[Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH-(CH2)s-CH3] se resuspende en 50mL de una mezcla de TFA-'PraSi-hhO (90:5:5) y se deja reaccionar durante 30min a temperatura ambiente. Se anaden 250mL de eter dietllico frlo, se rotavapora el disolvente y se realizan dos coevaporaciones adicionales con eter. El residuo se disuelve en una mezcla del 50% de MeCN en H2O y se liofiliza.

s

cantidad obtenida pureza PM teorico PM experimental

11

391.2mg 92.2% [M+H]+ = 1058.3 [M+H+] = 1057.9

[M+2H+/2] = 529.8

15

424.5mg 90.5% [M+H]+ = 1114.74 [M+H+] =1114.0

[M+2H+/2] = 557.6

5

EJEMPLO 5

Siguiendo los protocolos generales descritos en los ejemplos 1 a 4, variando de manera rutinaria la naturaleza de los reactivos y de las secuencias peptldicas, se obtuvieron adicionalmente los siguientes peptidos modificados qulmicamente de manera irreversible derivados de la secuencia de la protelna SNAP-25.

Estructura Peso molecular

1.

CH3-(CH2)4-CO-EEMQRR-NH2 945,1

2.

CH3-(CH2)10-CO-EEMQRR-NH2 1029,2

3.

CH3-(CH2)16-CO-EEMQRR-NH2 1113,4

4.

CH3-(CH2)18-CO-EEMQRR-NH2 1041,4

5.

CH3-(CH2)4-CO-EEMQRRA-NH2 1016,4

6.

CH3-(CH2)6-CO-EEMQRRA-NH2 1044,4

7.

CH3-(CH2)8-CO-EEMQRRA-NH2 1072,5

8.

CH3-(CH2)10-CO-EEMQRRA-NH2 1100,5

9.

CH3-(CH2)12-CO-EEMQRRA-NH2 1128,6

10.

CH3-(CH2)14-CO-EEMQRRA-NH2 1156,6

11.

CH3-(CH2)16-CO-EEMQRRA-NH2 1184,7

12.

CH3-(CH2)18-CO-EEMQRRA-NH2 1112,7

13.

CH3-(CH2)20-CO-EEMQRRA-NH2 1240,8

14.

CH3-(CH2)4-CO-EEMQRRAD-NH2 1131,3

15.

CH3-(CH2)6-CO-EEMQRRAD-NH2 1159,3

16.

CH3-(CH2)8-CO-EEMQRRAD-NH2 1187,4

17.

CH3-(CH2)10-CO-EEMQRRAD-NH2 1215,4

18. CH3-(CH2)i2-CO-EEMQRRAD-NH2 1243,5

19. CH3-(CH2)14-CO-EEMQRRAD-NH2 1271,5

20. CH3-(CH2)16-CO-EEMQRRAD-NH2 1299,6

21. CH3-(CH2)18-CO-EEMQRRAD-NH2 1227,6

22. CH3-(CH2)20-CO-EEMQRRAD-NH2 1355,7

23 CH3-(CH2)4-CO-ELEEMQRRADQLA-NH2 1685,9

24. CH3-(CH2)6-CO-ELEEMQRRADQLA-NH2 1713,9

25. CH3-(CH2)8-CO-ELEEMQRRADQLA-NH2 1742,0

26. CH3-(CH2)10-CO-ELEEMQRRADQLA-NH2 1770,0

27. CH3-(CH2)12-CO-ELEEMQRRADQLA-NH2 1798,1

28. CH3-(CH2)14-CO-ELEEMQRRADQLA-NH2 1826,1

29. CH3-(CH2)16-CO-ELEEMQRRADQLA-NH2 1854,2

30. CH3-(CH2)18-CO-ELEEMQRRADQLA-NH2 1782,2

31. CH3-(CH2)20-CO-ELEEMQRRADQLA-NH2 1910,3

32 CH3-(CH2)4-CO-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH2 2675,0

33. CH3-(CH2)6-CO-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH2 2703,0

34. CH3-(CH2)8-CO-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH2 2731,1

35. CH3-(CH2)10-CO-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH2 2759,1

36. CH3-(CH2)12-CO-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH2 2787,2

37. CH3-(CH2)14-CO-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH2 2815,2

38. CH3-(CH2)16-CO-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH2 2843,3

39. CH3-(CH2)18-CO-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH2 2771,3

40. CH3-(CH2)20-CO-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH2 2899,4

41 CH3-(CH2)4-CO-DEANQRATKMLGSG-NH2 1574,8

42. CH3-(CH2)6-CO-DEANQRATKMLGSG-NH2 1602,8

43. CH3-(CH2)8-CO-DEANQRATKMLGSG-NH2 1630,9

44. CH3-(CH2)10-CO-DEANQRATKMLGSG-NH2 1658,9

45. CH3-(CH2)12-CO-DEANQRATKMLGSG-NH2 1687,0

46. CH3-(CH2)14-CO-DEANQRATKMLGSG-NH2 1715,0

47. CH3-(CH2)i6-CO-DEANQRATKMLGSG-NH2 1743,1

48. CH3-(CH2)18-CO-DEANQRATKMLGSG-NH2 1671,1

49. CH3-(CH2)20-CO-DEANQRATKMLGSG-NH2 1799,2

50 CH3-(CH2)4-CO-EEMORRADQ-NH2 1259,4

51. CH3-(CH2)6-CO-EEMQRRADQ-NH2 1287,4

52. CH3-(CH2)8-CO-EEMQRRADQ-NH2 1315,5

53. CH3-(CH2)10-CO-EEMQRRADQ-NH2 1343,5

54. CH3-(CH2)12-CO-EEMQRRADQ-NH2 1371,6

55. CH3-(CH2)14-CO-EEMORRADQ-NH2 1399,6

56. CH3-(CH2)16-CO-EEMQRRADQ-NH2 1427,7

57. CH3-(CH2)18-CO-EEMQRRADQ-NH2 1355,7

58. CH3-(CH2)20-CO-EEMQRRADQ-NH2 1483,8

59 CH3-(CH2)4-CO-EEMQRRADQL-NH2 1372,6

60. CH3-(CH2)6-CO-EEMQRRADQL-NH2 1400,6

61. CH3-(CH2)8-CO-EEMQRRADQL-NH2 1428,7

62. CH3-(CH2)10-CO-EEMQRRADQL-NH2 1456,7

63. CH3-(CH2)12-CO-EEMQRRADQL-NH2 1484,8

64. CH3-(CH2)14-CO-EEMQRRADQL-NH2 1512,8

65. CH3-(CH2)16-CO-EEMQRRADQL-NH2 1540,9

66. CH3-(CH2)18-CO-EEMQRRADQL-NH2 1468,9

67. CH3-(CH2)20-CO-EEMQRRADQL-NH2 1597,0

68 CH3-(CH2)4-CO-ELEEMQRR-NH2 1187,4

69. CH3-(CH2)6-CO-ELEEMQRR-NH2 1215,4

70. CH3-(CH2)8-CO-ELEEMQRR-NH2 1243,5

71. CH3-(CH2)10-CO-ELEEMQRR-NH2 1271,5

72. CH3-(CH2)12-CO-ELEEMQRR-NH2 1299,6

73. CH3-(CH2)14-CO-ELEEMQRR-NH2 1327,6

74. CH3-(CH2)16-CO-ELEEMQRR-NH2 1355,7

75. CH3-(CH2)18-CO-ELEEMQRR-NH2 1283,7

76. CH3-(CH2)20-CO-ELEEMQRR-NH2 1411,8

77. CH3-(CH2)4-CO-ELEEMQRRA-NH2 1258,5

78. CH3-(CH2)6-CO-ELEEMQRRA-NH2 1286,5

79. CH3-(CH2)8-CO-ELEEMQRRA-NH2 1314,6

80. CH3-(CH2)10-CO-ELEEMQRRA-NH2 1342,6

81. CH3-(CH2)12-CO-ELEEMQRRA-NH2 1370,7

82. CH3-(CH2)14-CO-ELEEMQRRA-NH2 1398,7

83. CH3-(CH2)16-CO-ELEEMQRRA-NH2 1426,8

84. CH3-(CH2)18-CO-ELEEMQRRA-NH2 1354,8

85. CH3-(CH2)20-CO-ELEEMQRRA-NH2 1482,9

86 CH3-(CH2)4-CO-ELEEMQRRAD-NH2 1373,6

87. CH3-(CH2)6-CO-ELEEMQRRAD-NH2 1401,6

88. CH3-(CH2)b-CO-ELEEMQRRAD-NH2 1429,7

89. CH3-(CH2)10-CO-ELEEMQRRAD-NH2 1457,7

90. CH3-(CH2)12-CO-ELEEMQRRAD-NH2 1485,8

91. CH3-(CH2)14-CO-ELEEMQRRAD-NH2 1513,8

92. CH3-(CH2)16-CO-ELEEMQRRAD-NH2 1541,9

93. CH3-(CH2)18-CO-ELEEMQRRAD-NH2 1469,9

94. CH3-(CH2)20-CO-ELEEMQRRAD-NH2 1598,0

95 CH3-(CH2)4-CO-ELEEMQRRADQ-NH2 1501,7

96. CH3-(CH2)6-CO-ELEEMQRRADQ-NH2 1529,7

97. CH3-(CH2)8-CO-ELEEMQRRADQ-NH2 1557,8

98. CH3-(CH2)10-CO-ELEEMQRRADQ-NH2 1585,8

99. CH3-(CH2)12-CO-ELEEMQRRADQ-NH2 1613,9

100. CH3-(CH2)14-CO-ELEEMQRRADQ-NH2 1641,9

101. CH3-(CH2)16-CO-ELEEMQRRADQ-NH2 1670,0

102. CH3-(CH2)18-CO-ELEEMQRRADQ-NH2 1598,0

103. CH3-(CH2)20-CO-ELEEMQRRADQ-NH2 1726,1

104. CH3-(CH2)4-CO-ELEEMQRRADQL-NH2 1614,9

105.

CH3-(CH2)6-CO-ELEEMQRRADQL-NH2 1642,9

106.

CH3-(CH2)8-CO-ELEEMQRRADQL-NH2 1671,0

107.

CH3-(CH2)10-CO-ELEEMQRRADQL-NH2 1699,0

108.

CH3-(CH2)12-CO-ELEEMQRRADQL-NH2 1727,1

109.

CH3-(CH2)14-CO-ELEEMQRRADQL-NH2 1755,1

110.

CH3-(CH2)16-CO-ELEEMQRRADQL-NH2 1783,2

111.

CH3-(CH2)18-CO-ELEEMQRRADQL-NH2 1711,2

112.

CH3-(CH2)20-CO-ELEEMQRRADQL-NH2 1839,3

113.

CH3-(CH2)4-CO-KNLTDL-NH2 800,0

114.

CH3-(CH2)6-CO-KNLTDL-NH2 828,0

115.

CH3-(CH2)8-CO-KNLTDL-NH2 856,1

116.

CH3-(CH2)10-CO-KNLTDL-NH2 884,1

117.

CH3-(CH2)12-CO-KNLTDL-NH2 912,2

118.

CH3-(CH2)14-CO-KNLTDL-NH2 940,2

119.

CH3-(CH2)16-CO-KNLTDL-NH2 968,3

120.

CH3-(CH2)18-CO-KNLTDL-NH2 896,3

121.

CH3-(CH2)20-CO-KNLTDL-NH2 1024,4

122.

CH3-(CH2)4-CO-LEEMQRR-NH2 1058,3

123.

CH3-(CH2)6-CO-LEEMQRR-NH2 1086,3

124.

CH3-(CH2)8-CO-LEEMQRR-NH2 1114,4

125.

CH3-(CH2)10-CO-LEEMQRR-NH2 1142,4

126.

CH3-(CH2)12-CO-LEEMQRR-NH2 1170,5

127.

CH3-(CH2)14-CO-LEEMQRR-NH2 1198,5

128.

CH3-(CH2)16-CO-LEEMQRR-NH2 1226,6

129.

CH3-(CH2)18-CO-LEEMQRR-NH2 1154,6

130.

CH3-(CH2)20-CO-LEEMQRR-NH2 1282,7

131.

CH3-(CH2)4-CO-LEEMQRRA-NH2 1129,4

132.

CH3-(CH2)6-CO-LEEMQRRA-NH2 1157,4

133.

CH3-(CH2)8-CO-LEEMQRRA-NH2 1185,5

134.

CH3-(CH2)10-CO-LEEMQRRA-NH2 1213,5

135.

CH3-(CH2)12-CO-LEEMQRRA-NH2 1241,6

136.

CH3-(CH2)14-CO-LEEMQRRA-NH2 1269,6

137.

CH3-(CH2)16-CO-LEEMQRRA-NH2 1297,7

138.

CH3-(CH2)18-CO-LEEMQRRA-NH2 1225,7

139.

CH3-(CH2)20-CO-LEEMQRRA-NH2 1353,8

140.

CH3-(CH2)4-CO-LEEMQRRAD-NH2 1326,7

141.

CH3-(CH2)6-CO-LEEMQRRAD-NH2 1354,7

142.

CH3-(CH2)8-CO-LEEMQRRAD-NH2 1382,8

143.

CH3-(CH2)10-CO-LEEMQRRAD-NH2 1410,8

144.

CH3-(CH2)12-CO-LEEMQRRAD-NH2 1438,9

145.

CH3-(CH2)14-CO-LEEMQRRAD-NH2 1466,9

146.

CH3-(CH2)16-CO-LEEMQRRAD-NH2 1495,0

147.

CH3-(CH2)18-CO-LEEMQRRAD-NH2 1423,0

148.

CH3-(CH2)20-CO-LEEMQRRAD-NH2 1551,1

149.

CH3-(CH2)4-CO-LEEMQRRADQ-NH2 1372,6

150.

CH3-(CH2)6-CO-LEEMQRRADQ-NH2 1400,6

151.

CH3-(CH2)8-CO-LEEMQRRADQ-NH2 1428,7

152.

CH3-(CH2)10-CO-LEEMQRRADQ-NH2 1456,7

153.

CH3-(CH2)12-CO-LEEMQRRADQ-NH2 1484,8

154.

CH3-(CH2)14-CO-LEEMQRRADQ-NH2 1512,8

155.

CH3-(CH2)16-CO-LEEMQRRADQ-NH2 1540,9

156.

CH3-(CH2)18-CO-LEEMQRRADQ-NH2 1468,9

157.

CH3-(CH2)20-CO-LEEMQRRADQ-NH2 1597,0

158.

CH3-(CH2)4-CO-LEEMQRRADQL-NH2 1485,8

159.

CH3-(CH2)6-CO-LEEMQRRADQL-NH2 1513,8

160.

CH3-(CH2)8-CO-LEEMQRRADQL-NH2 1541,9

161.

CH3-(CH2)10-CO-LEEMQRRADQL-NH2 1569,9

162.

CH3-(CH2)12-CO-LEEMQRRADQL-NH2 1598,0

163. CH3-(CH2)i4-CO-LEEMQRRADQL-NH2 1626,0

164. CH3-(CH2)16-CO-LEEMQRRADQL-NH2 1654,1

165. CH3-(CH2)18-CO-LEEMQRRADQL-NH2 1582,1

166. CH3-(CH2)20-CO-LEEMQRRADQL-NH2 1710,2

167^ 2649,0

168. CH3-(CH2)6-CO-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH2 2677,0

169. CH3-(CH2)8-CO-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH2 2705,1

170. CH3-(CH2)10-CO-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH2 2733,1

171. CH3-(CH2)12-CO-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH2 2761,2

172. CH3-(CH2)14-CO-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH2 2789,2

173. CH3-(CH2)16-CO-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH2 2817,3

174. CH3-(CH2)18-CO-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH2 2745,3

175. CH3-(CH2)20-CO-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH2 2873,4

176. CH3-(CH2)4-CO-NORATKMLGSG-NH2 1259,5

177. CH3-(CH2)6-CO-NQRATKMLGSG-NH2 1287,5

178. CH3-(CH2)8-CO-NORATKMLGSG-NH2 1315,6

179. CH3-(CH2)10-CO-NQRATKMLGSG-NH2 1343,6

180. CH3-(CH2)12-CO-NQRATKMLGSG-NH2 1371,7

181. CH3-(CH2)14-CO-NQRATKMLGSG-NH2 1399,7

182. CH3-(CH2)16-CO-NQRATKMLGSG-NH2 1427,8

183. CH3-(CH2)18-CO-NQRATKMLGSG-NH2 1355,8

184. CH3-(CH2)20-CO-NQRATKMLGSG-NH2 1483,9

185. CH3-(CH2)4-CO-ORATKMLGSG-NH2 1145,4

186. CH3-(CH2)6-CO-QRATKMLGSG-NH2 1173,4

187. CH3-(CH2)8-CO-ORATKMLGSG-NH2 1201,5

188. CH3-(CH2)10-CO-QRATKMLGSG-NH2 1229,5

189. CH3-(CH2)12-CO-QRATKMLGSG-NH2 1257,6

190. CH3-(CH2)14-CO-QRATKMLGSG-NH2 1285,6

191. CH3-(CH2)16-CO-QRATKMLGSG-NH2 1313,7

192. CH3-(CH2)i8-CO-QRATKMLGSG-NH2 1241,7

193. CH3-(CH2)20-CO-QRATKMLGSG-NH2 1369,8

194. CH3-(CH2)4-CO-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2274,6

195. CH3-(CH2)6-CO-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2302,6

196. CH3-(CH2)8-CO-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2330,7

197. CH3-(CH2)10-CO-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2358,7

198. CH3-(CH2)12-CO-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2386,8

199. CH3-(CH2)14-CO-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2414,8

200. CH3-(CH2)16-CO-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2442,9

201. CH3-(CH2)18-CO-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2370,9

202. CH3-(CH2)20-CO-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2499,0

203. CH3-(CH2)4-CO-TRIDEANQRATKMLGSG-NH2 1945,3

204. CH3-(CH2)6-CO-TRIDEANQRATKMLGSG-NH2 1973,3

205. CH3-(CH2)8-CO-TRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2001,4

206. CH3-(CH2)10-CO-TRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2029,4

207. CH3-(CH2)12-CO-TRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2057,5

208. CH3-(CH2)14-CO-TRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2085,5

209. CH3-(CH2)16-CO-TRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2113,6

210. CH3-(CH2)18-CO-TRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2041,6

211. CH3-(CH2)20-CO-TRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2169,7

212. CH3-(CH2)4-CO-LESTRRMLQLVEE-NH2 1701,0

213. CH3-(CH2)6-CO-LESTRRMLQLVEE-NH2 1729,0

214. CH3-(CH2)8-CO-LESTRRMLQLVEE-NH2 1757,1

215. CH3-(CH2)10-CO-LESTRRMLQLVEE-NH2 1785,1

216. CH3-(CH2)12-CO-LESTRRMLQLVEE-NH2 1813,2

217. CH3-(CH2)14-CO-LESTRRMLQLVEE-NH2 1841,2

218. CH3-(CH2)16-CO-LESTRRMLQLVEE-NH2 1869,3

219. CH3-(CH2)18-CO-LESTRRMLQLVEE-NH2 1797,3

220. CH3-(CH2)20-CO-LESTRRMLQLVEE-NH2 1925,4

221. CH3-(CH2)4-CO-NKDMKEAEKNLT-NH2 1517,8

222. CH3-(CH2)6-CO-NKDMKEAEKNLT-NH2 1545,8

223. CH3-(CH2)8-CO-NKDMKEAEKNLT-NH2 1573,9

224. CH3-(CH2)10-CO-NKDMKEAEKNLT-NH2 1601,9

225. CH3-(CH2)12-CO-NKDMKEAEKNLT-NH2 1630,0

226. CH3-(CH2)14-CO-NKDMKEAEKNLT-NH2 1658,0

227. CH3-(CH2)16-CO-NKDMKEAEKNLT-NH2 1686,1

228. CH3-(CH2)18-CO-NKDMKEAEKNLT-NH2 1614,1

229. CH3-(CH2)20-CO-NKDMKEAEKNLT-NH2 1742,2

230. CH3-(CH2)4-CO-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2962,4

231. CH3-(CH2)6-CO-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2990,4

232. CH3-(CH2)8-CO-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3018,5

233. CH3-(CH2)10-CO-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3046,5

234. CH3-(CH2)12-CO-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3074,6

235. CH3-(CH2)14-CO-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3102,6

236. CH3-(CH2)16-CO-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3130,7

237. CH3-(CH2)18-CO-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3058,7

238. CH3-(CH2)20-CO-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3186,8

239. Ac-EEMORR-NH-(CH2)5-CH3 973,1

240. Ac-EEMQRR-NH-(CH2)7-CH3 1001,1

241. Ac-EEMORR-NH-(CH2)9-CH3 1029,2

242. Ac-EEMQRR-NH-(CH2)13-CH3 1085,3

243. Ac-EEMQRR-NH-(CH2)17-CH3 1141,4

244. Ac-EEMQRRA-NH-(CH2)5-CH3 1044,4

245. Ac-EEMQRRA-NH-(CH2)7-CH3 1072,4

246. Ac-EEMQRRA-NH-(CH2)9-CH3 1100,5

247. Ac-EEMQRRA-NH-(CH2)11-CH3 1128,6

248. Ac-EEMQRRA-NH-(CH2)13-CH3 1156,6

249. Ac-EEMQRRA-NH-(CH2)15CH3 1184,7

250. Ac-EEMQRRA-NH-(CH2)i7-CH3 1212,7

251. Ac-EEMQRRAD-NH-(CH2)5-CH3 1159,3

252. Ac-EEMQRRAD-NH-(CH2)7-CH3 1187,3

253. Ac-EEMQRRAD-NH-(CH2)9-CH3 1215,4

254. Ac-EEMQRRAD-NH-(CH2)11-CH3 1243,5

255. Ac-EEMQRRAD-NH-(CH2)13-CH3 1271,5

256. Ac-EEMQRRAD-NH-(CH2)15-CH3 1299,6

257. Ac-EEMQRRAD-NH-(CH2)17-CH3 1327,6

258. Ac-ELEEMQRRADQLA-NH-(CH2)5-CH3 1713,9

259. Ac-ELEEMQRRADQLA-NH-(CH2)7-CH3 1741,9

260. Ac-ELEEMQRRADQLA-NH-(CH2)9-CH3 1770,0

261. Ac-ELEEMQRRADQLA-NH-(CH2)11-CH3 1798,1

262. Ac-ELEEMQRRADQLA-NH-(CH2)13-CH3 1826,1

263. Ac-ELEEMQRRADQLA-NH-(CH2)15-CH3 1854,2

264. Ac-ELEEMQRRADQLA-NH-(CH2)17-CH3 1882,2

265. Ac-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH-(CH2)5-CH3 2660,0

266. Ac-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH-(CH2)7-CH3 2688,0

267. Ac-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH-(CH2)9-CH3 2716,1

268. Ac-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH-(CH2)11-CH3 2744,2

269. Ac-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH-(CH2)13-CH3 2772,2

270. Ac-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH-(CH2)15-CH3 2800,3

271. Ac-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH-(CH2)17-CH3 2828,3

272. Ac-DEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)5-CH3 1559,8

273. Ac-DEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)7-CH3 1587,8

274. Ac-DEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)9-CH3 1615,9

275. Ac-DEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)11-CH3 1644,0

276. Ac-DEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)13-CH3 1672,0

277. Ac-DEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)15-CH3 1700,1

278. Ac-DEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)17-CH3 1728,1

279.

Ac-EEMQRRADQ-NH-(CH2)5-CH3 1244,4

280.

Ac-EEMQRRADQ-NH-(CH2)7-CH3 1272,4

281.

Ac-EEMQRRADQ-NH-(CH2)9-CH3 1300,5

282.

Ac-EEMQRRADQ-NH-(CH2)11-CH3 1328,6

283.

Ac-EEMQRRADQ-NH-(CH2)13-CH3 1356,6

284.

Ac-EEMQRRADQ-NH-(CH2)15-CH3 1384,7

285.

Ac-EEMQRRADQ-NH-(CH2)17-CH3 1412,7

286.

Ac-EEMQRRADQL-NH-(CH2)5-CH3 1357,6

287.

Ac-EEMQRRADQL-NH-(CH2)7-CH3 1385,6

288.

Ac-EEMQRRADQL-NH-(CH2)9-CH3 1413,7

289.

Ac-EEMQRRADQL-NH-(CH2)11-CH3 1441,8

290.

Ac-EEMQRRADQL-NH-(CH2)13-CH3 1469,8

291.

Ac-EEMQRRADQL-NH-(CH2)15-CH3 1497,9

292.

Ac-EEMQRRADQL-NH-(CH2)17-CH3 1525,9

293.

Ac-ELEEMQRR-NH-(CH2)5-CH3 1172,4

294.

Ac-ELEEMQRR-NH-(CH2)7-CH3 1200,4

295.

Ac-ELEEMQRR-NH-(CH2)9-CH3 1228,5

296.

Ac-ELEEMQRR-NH-(CH2)11-CH3 1256,6

297.

Ac-ELEEMQRR-NH-(CH2)13-CH3 1284,6

298.

Ac-ELEEMQRR-NH-(CH2)15-CH3 1312,7

299.

Ac-ELEEMQRR-NH-(CH2)17-CH3 1340,7

300.

Ac-ELEEMQRRA-NH-(CH2)5-CH3 1243,5

301.

Ac-ELEEMQRRA-NH-(CH2)7-CH3 1271,5

302.

Ac-ELEEMQRRA-NH-(CH2)9-CH3 1299,6

303.

Ac-ELEEMQRRA-NH-(CH2)11-CH3 1327,7

304.

Ac-ELEEMQRRA-NH-(CH2)13-CH3 1355,7

305.

Ac-ELEEMQRRA-NH-(CH2)15-CH3 1383,8

306.

Ac-ELEEMQRRA-NH-(CH2)17-CH3 1411,8

307.

Ac-ELEEMQRRAD-NH-(CH2)5-CH3 1358,6

308.

Ac-ELEEMQRRAD-NH-(CH2)7-CH3 1386,6

309.

Ac-ELEEMQRRAD-NH-(CH2)9-CH3 1414,7

310.

Ac-ELEEMQRRAD-NH-(CH2)11-CH3 1442,8

311.

Ac-ELEEMQRRAD-NH-(CH2)13-CH3 1470,8

312.

Ac-ELEEMQRRAD-NH-(CH2)15-CH3 1498,9

313.

Ac-ELEEMQRRAD-NH-(CH2)17-CH3 1526,9

314.

Ac-ELEEMQRRADQ-NH-(CH2)5-CH3 1486,7

315.

Ac-ELEEMQRRADQ-NH-(CH2)7-CH3 1514,7

316.

Ac-ELEEMQRRADQ-NH-(CH2)9-CH3 1542,8

317.

Ac-ELEEMQRRADQ-NH-(CH2)11-CH3 1570,9

318.

Ac-ELEEMQRRADQ-NH-(CH2)13-CH3 1598,9

319.

Ac-ELEEMQRRADQ-NH-(CH2)15-CH3 1627,0

320.

Ac-ELEEMQRRADQ-NH-(CH2)17-CH3 1655,0

321.

Ac-ELEEMQRRADQL-NH-(CH2)5-CH3 1599,9

322.

Ac-ELEEMQRRADQL-NH-(CH2)7-CH3 1627,9

323.

Ac-ELEEMQRRADQL-NH-(CH2)9-CH3 1656,0

324.

Ac-ELEEMQRRADQL-NH-(CH2)11-CH3 1684,1

325.

Ac-ELEEMQRRADQL-NH-(CH2)13-CH3 1712,1

326.

Ac-ELEEMQRRADQL-NH-(CH2)15-CH3 1740,2

327.

Ac-ELEEMQRRADQL-NH-(CH2)17-CH3 1768,2

328.

Ac-KNLTDL-NH-(CH2)5-CH3 785,0

329.

Ac-KNLTDL-NH-(CH2)7-CH3 813,0

330.

Ac-KNLTDL-NH-(CH2)9-CH3 841,1

331.

Ac-KNLTDL-NH-(CH2)11-CH3 869,2

332.

Ac-KNLTDL-NH-(CH2)13-CH3 897,2

333.

Ac-KNLTDL-NH-(CH2)15-CH3 925,3

334.

Ac-KNLTDL-NH-(CH2)17-CH3 953,3

335.

Ac-LEEMQRR-NH-(CH2)5-CH3 1043,3

336.

Ac-LEEMQRR-NH-(CH2)7-CH3 1071,3

337.

Ac-LEEMQRR-NH-(CH2)9-CH3 1099,4

338.

Ac-LEEMQRR-NH-(CH2)ii-CH3 1127,5

339.

Ac-LEEMQRR-NH-(CH2)13-CH3 1155,5

340.

Ac-LEEMQRR-NH-(CH2)15-CH3 1183,6

341.

Ac-LEEMQRR-NH-(CH2)17-CH3 1211,6

342.

Ac-LEEMQRRA-NH-(CH2)5-CH3 1114,4

343.

Ac-LEEMQRRA-NH-(CH2)7-CH3 1142,4

344.

Ac-LEEMQRRA-NH-(CH2)9-CH3 1170,5

345.

Ac-LEEMQRRA-NH-(CH2)11-CH3 1198,6

346.

Ac-LEEMQRRA-NH-(CH2)13-CH3 1226,6

347.

Ac-LEEMQRRA-NH-(CH2)15-CH3 1254,7

348.

Ac-LEEMQRRA-NH-(CH2)17-CH3 1282,7

349.

Ac-LEEMQRRAD-NH-(CH2)5-CH3 1229,5

350.

Ac-LEEMQRRAD-NH-(CH2)7-CH3 1257,5

351.

Ac-LEEMQRRAD-NH-(CH2)9-CH3 1285,6

352.

Ac-LEEMQRRAD-NH-(CH2)11-CH3 1313,7

353.

Ac-LEEMQRRAD-NH-(CH2)13-CH3 1341,7

354.

Ac-LEEMQRRAD-NH-(CH2)15-CH3 1369,8

355.

Ac-LEEMQRRAD-NH-(CH2)17-CH3 1397,8

356.

Ac-LEEMQRRADQ-NH-(CH2)5-CH3 1357,6

357.

Ac-LEEMQRRADQ-NH-(CH2)7-CH3 1385,6

358.

Ac-LEEMQRRADQ-NH-(CH2)9-CH3 1413,7

359.

Ac-LEEMQRRADQ-NH-(CH2)11-CH3 1441,8

360.

Ac-LEEMQRRADQ-NH-(CH2)13-CH3 1469,8

361.

Ac-LEEMQRRADQ-NH-(CH2)15-CH3 1497,9

362.

Ac-LEEMQRRADQ-NH-(CH2)17-CH3 1525,9

363.

Ac-LEEMQRRADQL-NH-(CH2)5-CH3 1470,8

364.

Ac-LEEMQRRADQL-NH-(CH2)7-CH3 1498,8

365.

Ac-LEEMQRRADQL-NH-(CH2)9-CH3 1526,9

366. Ac-LEEMQRRADQL-NH-(CH2)ii-CH3 1555,0

367. Ac-LEEMQRRADQL-NH-(CH2)13-CH3 1583,0

368. Ac-LEEMQRRADQL-NH-(CH2)15-CH3 1611,1

369. Ac-LEEMQRRADQL-NH-(CH2)17-CH3 1639,1

370. Ac-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH-(CH2)5-CH3 2634,0

371. Ac-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH-(CH2)7-CHa 2662,0

372. Ac-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH-(CH2)9-CH3 2690,1

373. Ac-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH-(CH2)11-CH3 2718,2

374. Ac-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH-(CH2)13-CH3 2746,2

375. Ac-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH-(CH2)15-CH3 2774,3

376. Ac-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH-(CH2)17-CH3 2802,3

377. Ac-NQRATKMLGSG-NH-(CH2)5-CH3 1244,5

378. Ac-NQRATKMLGSG-NH-(CH2)7-CH3 1272,5

379. Ac-NQRATKMLGSG-NH-(CH2)9-CH3 1300,6

380. Ac-NQRATKMLGSG-NH-(CH2)11-CH3 1328,7

381. Ac-NQRATKMLGSG-NH-(CH2)13-CH3 1356,7

382. Ac-NQRATKMLGSG-NH-(CH2)15-CH3 1384,8

383. Ac-NQRATKMLGSG-NH-(CH2)17-CH3 1412,8

384. Ac-QRATKMLGSG-NH-(CH2)5-CH3 1130,4

385. Ac-QRATKMLGSG-NH-(CH2)7-CH3 1158,4

386. Ac-QRATKMLGSG-NH-(CH2)9-CH3 1186,5

387. Ac-QRATKMLGSG-NH-(CH2)11-CH3 1214,6

388. Ac-QRATKMLGSG-NH-(CH2)13-CH3 1242,6

389. Ac-QRATKMLGSG-NH-(CH2)15-CH3 1270,7

390. Ac-QRATKMLGSG-NH-(CH2)17-CH3 1298,7

391. Ac-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)5-CH3 2259,6

392. Ac-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)7-CH3 2287,6

393. Ac-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)9-CH3 2315,7

394. Ac-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)11-CH3 2343,8

395. Ac-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)i3-CH3 2371,8

396. Ac-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)15-CH3 2399,9

397. Ac-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)17-CH3 2427,9

398. Ac-TRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)5-CH3 1930,3

399. Ac-TRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)7-CH3 1958,3

400. Ac-TRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)9-CH3 1986,4

401. Ac-TRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)11-CH3 2014,5

402. Ac-TRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)13-CH3 2042,5

403. Ac-TRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)15-CH3 2070,6

404. Ac-TRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)17-CH3 2098,6

405. Ac-LESTRRMLQLVEE-NH-(CH2)5-CH3 1729,0

406. Ac-LESTRRMLQLVEE-NH-(CH2)7-CH3 1757,0

407. Ac-LESTRRMLQLVEE-NH-(CH2)9-CH3 1785,1

408. Ac-LESTRRMLQLVEE-NH-(CH2)11-CH3 1813,2

409. Ac-LESTRRMLQLVEE-NH-(CH2)13-CHa 1841,2

410. Ac-LESTRRMLQLVEE-NH-(CH2)15-CH3 1869,3

411. Ac-LESTRRMLQLVEE-NH-(CH2)17-CH3 1897,3

412. Ac-NKDMKEAEKNLT-NH-(CH2)5-CH3 1545,8

413. Ac-NKDMKEAEKNLT-NH-(CH2)7-CH3 1573,8

414. Ac-NKDMKEAEKNLT-NH-(CH2)9-CH3 1601,9

415. Ac-NKDMKEAEKNLT-NH-(CH2)11-CH3 1630,0

416. Ac-NKDMKEAEKNLT-NH-(CH2)13-CH3 1658,0

417. Ac-NKDMKEAEKNLT-NH-(CH2)15-CH3 1686,1

418. Ac-NKDMKEAEKNLT-NH-(CH2)17-CH3 1714,1

419. Ac-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)5-CH3 2990,4

420. Ac-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)7-CH3 3018,4

421. Ac-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)9-CH3 3046,5

422. Ac-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)11-CH3 3074,6

423. Ac-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)13-CH3 3102,6

424. Ac-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)i5-CH3 3130,7

425. Ac-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH-(CH2)17-CH3 3158,7

426. Ac-PEG1-EEMQRRA-NH2 1262,6

427. Ac-PEG2-EEMQRRA-NH2 1565,0

428. Ac-PEG3-EEMQRRA-NH2 1867,4

429. Ac-PEG4-EEMQRRA-NH2 2169,7

430. Ac-PEG5-EEMQRRA-NH2 2472,1

431. Ac-PEG1-EEMQRRAD-NH2 1377,5

432. Ac-PEG2-EEMQRRAD-NH2 1679,9

433. Ac-PEGa-EEMQRRAD-NH2 1982,3

434. Ac-PEG4-EEMQRRAD-NH2 2284,6

435. Ac-PEG5-EEMQRRAD-NH2 2587,0

436. Ac-PEG1-ELEEMQRRADQLA-NH2 1932,1

437. Ac-PEG2-ELEEMQRRADQLA-NH2 2234,5

438. Ac-PEG3-ELEEMQRRADQLA-NH2 2536,9

439. Ac-PEG4-ELEEMQRRADQLA-NH2 2839,2

440. Ac-PEG5-ELEEMQRRADQLA-NH2 3141,6

441. Ac-PEG1-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH2 2921,2

442. Ac-PEG2-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH2 3223,6

443. Ac-PEG3-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH2 3526,0

444. Ac-PEG4-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH2 3828,3

445. Ac-PEG5-ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI-NH2 4130,7

446. Ac-PEG1-DEANQRATKMLGSG-NH2 1821,0

447. Ac-PEG2-DEANQRATKMLGSG-NH2 2123,4

448. Ac-PEG3-DEANQRATKMLGSG-NH2 2425,8

449. Ac-PEG4-DEANQRATKMLGSG-NH2 2728,1

450. Ac-PEG5-DEANQRATKMLGSG-NH2 3030,5

451. Ac-PEG1-EEMQRRADQ-NH2 1505,6

452. Ac-PEG2-EEMQRRADQ-NH2 1808,0

453.

AC-PEG3-EEMQRRADQ-NH2 2110,4

454.

AC-PEG4-EEMQRRADQ-NH2 2412,7

455.

AC-PEG5-EEMQRRADQ-NH2 2715,1

456.

Ac-PEG1-EEMQRRADQL-NH2 1618,8

457.

Ac-PEG2-EEMQRRADQL-NH2 1921,2

458.

AC-PEG3-EEMQRRADQL-NH2 2223,6

459.

AC-PEG4-EEMQRRADQL-NH2 2525,9

460.

AC-PEG5-EEMQRRADQL-NH2 2828,3

461.

AC-PEG1-ELEEMQRR-NH2 1433,6

462.

AC-PEG2-ELEEMQRR-NH2 1736,0

463.

AC-PEG3-ELEEMQRR-NH2 2038,4

464.

AC-PEG4-ELEEMQRR-NH2 2340,7

465.

AC-PEG5-ELEEMQRR-NH2 2643,1

466.

AC-PEG1-ELEEMQRRA-NH2 1504,7

467.

AC-PEG2-ELEEMQRRA-NH2 1807,1

468.

AC-PEG3-ELEEMQRRA-NH2 2109,5

469.

AC-PEG4-ELEEMQRRA-NH2 2411,8

470.

AC-PEG5-ELEEMQRRA-NH2 2714,2

471.

AC-PEG1-ELEEMQRRAD-NH2 1619,8

472.

AC-PEG2-ELEEMQRRAD-NH2 1922,2

473.

AC-PEG3-ELEEMQRRAD-NH2 2224,6

474.

AC-PEG4-ELEEMQRRAD-NH2 2526,9

475.

AC-PEG5-ELEEMQRRAD-NH2 2829,3

476.

AC-PEG1-ELEEMQRRADQ-NH2 1747,9

477.

AC-PEG2-ELEEMQRRADQ-NH2 2050,3

478.

AC-PEG3-ELEEMQRRADQ-NH2 2352,7

479.

AC-PEG4-ELEEMQRRADQ-NH2 2655,0

480.

AC-PEG5-ELEEMQRRADQ-NH2 2957,4

481.

AC-PEG1-ELEEMQRRADQL-NH2 1861,1

482.

AC-PEG2-ELEEMQRRADQL-NH2 2163,5

483.

AC-PEG3-ELEEMQRRADQL-NH2 2465,9

484.

AC-PEG4-ELEEMQRRADQL-NH2 2768,2

485.

AC-PEG5-ELEEMQRRADQL-NH2 3070,6

486.

Ac-PEG1-KNLTDL-NH2 1046,2

487.

Ac-PEG2-KNLTDL-NH2 1348,6

488.

AC-PEG3-KNLTDL-NH2 1651,0

489.

AC-PEG4-KNLTDL-NH2 1953,3

490.

AC-PEG5-KNLTDL-NH2 2255,7

491.

AC-PEG1-LEEMQRR-NH2 1304,5

492.

AC-PEG2-LEEMQRR-NH2 1606,9

493.

AC-PEG3-LEEMQRR-NH2 1909,3

494.

AC-PEG4-LEEMQRR-NH2 2211,6

495.

AC-PEG5-LEEMQRR-NH2 2514,0

496.

AC-PEG1-LEEMQRRA-NH2 1375,6

497.

AC-PEG2-LEEMQRRA-NH2 1678,0

498.

AC-PEG3-LEEMQRRA-NH2 1980,4

499.

AC-PEG4-LEEMQRRA-NH2 2282,7

500.

AC-PEG5-LEEMQRRA-NH2 2585,1

501.

AC-PEG1-LEEMQRRAD-NH2 1572,9

502.

AC-PEG2-LEEMQRRAD-NH2 1875,3

503.

AC-PEG3-LEEMQRRAD-NH2 2177,7

504.

AC-PEG4-LEEMQRRAD-NH2 2480,0

505.

AC-PEG5-LEEMQRRAD-NH2 2782,4

506.

AC-PEG1-LEEMQRRADQ-NH2 1618,8

507.

AC-PEG2-LEEMQRRADQ-NH2 1921,2

508.

AC-PEG3-LEEMQRRADQ-NH2 2223,6

509.

AC-PEG4-LEEMQRRADQ-NH2 2525,9

510.

AC-PEG5-LEEMQRRADQ-NH2 2828,3

511. AC-PEG1-LEEMQRRADQL-NH2 1732,0

512. Ac-PEG2-LEEMQRRADQL-NH2 2034,4

513. AC-PEG3-LEEMQRRADQL-NH2 2336,8

514. AC-PEG4-LEEMQRRADQL-NH2 2639,1

515. AC-PEG5-LEEMQRRADQL-NH2 2941,5

516. AC-PEG1-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH2 2895,2

517. AC-PEG2-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH2 3197,6

518. AC-PEG3-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH2 3500,0

519. AC-PEG4-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH2 3802,3

520. AC-PEG5-MAEDADMRNELEEMQRRADQL-NH2 4104,7

521. AC-PEG1-NQRATKMLGSG-NH2 1505,7

522. AC-PEG2-NQRATKMLGSG-NH2 1808,1

523. AC-PEG3-NQRATKMLGSG-NH2 2110,5

524. AC-PEG4-NQRATKMLGSG-NH2 2412,8

525. AC-PEG5-NQRATKMLGSG-NH2 2715,2

526. AC-PEG1-QRATKMLGSG-NH2 1391,6

527. AC-PEG2-QRATKMLGSG-NH2 1694,0

528. AC-PEG3-QRATKMLGSG-NH2 1996,4

529. AC-PEG4-QRATKMLGSG-NH2 2298,7

530. AC-PEG5-QRATKMLGSG-NH2 2601,1

531. AC-PEG1-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2520,8

532. AC-PEG2-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2823,2

533. AC-PEG3-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3125,6

534. AC-PEG4-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3427,9

535. AC-PEG5-SNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3730,3

536. AC-PEG1-TRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2191,5

537. AC-PEG2-TRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2493,9

538. AC-PEG3-TRIDEANQRATKMLGSG-NH2 2796,3

539. AC-PEG4-TRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3098,6

540.

Ac-PEG5-TRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3401,0

541.

Ac-PEG1-LESTRRMLQLVEE-NH2 1947,2

542.

Ac-PEG2-LESTRRMLQLVEE-NH2 2249,6

543.

Ac-PEG3-LESTRRMLQLVEE-NH2 2552,0

544.

Ac-PEG4-LESTRRMLQLVEE-NH2 2854,3

545.

Ac-PEG5-LESTRRMLQLVEE-NH2 3156,7

546.

Ac-PEG1-NKDMKEAEKNLT-NH2 1764,0

547.

Ac-PEG2-NKDMKEAEKNLT-NH2 2066,4

548.

Ac-PEG3-NKDMKEAEKNLT-NH2 2368,8

549.

Ac-PEG4-NKDMKEAEKNLT-NH2 2671,1

550.

Ac-PEG5-NKDMKEAEKNLT-NH2 2973,5

551.

Ac-PEG1-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3208,6

552.

Ac-PEG2-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3511,0

553.

Ac-PEG3-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 3813,4

554.

Ac-PEG4-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 4115,7

555.

Ac-PEG5-IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG-NH2 4418,1

EJEMPLO 6

Ensayo de la actividad de los peptidos derivados de la protelna SNAP-25 modificados qulmicamente de manera irreversible sobre la exocitosis neuronal de [3H]-L-Glutamato.

5 Para determinar si los peptidos de la invencion inhiben la exocitosis neuronal de neurotransmisores se siguio su actividad sobre la liberacion del neurotransmisor L-glutamato de cultivos primarios de neuronas de hipocampo de rata. La exocitosis de este neurotransmisor en cultivos neuronales puede conseguirse mediante despolarizacion electrica de las celulas. Los cultivos primarios de hipocampo embrionario de rata se preparan mediante metodos convencionales [Blanes-Mira C., Merino J.M., Valera E., Fernandez-Ballester G., Gutierrez L.M., Viniegra S., Perez- 10 Paya E. y Ferrer-Montiel A. “Small peptides patterned after the N-terminus domain of SNAP25 inhibit SNARE complex assembly and regulated exocytosis” J. Neurochem. 88, 124-135] y se mantienen en cultivo durante 14 dlas en incubador a 37°C y 5% CO2. Los cultivos se incuban con [3H]-L-glutamina para cargarlos de [3H]-L-glutamato durante 3h a 37°C. Posteriormente, se lava el exceso de [3H]-L-glutamina, y se incuban con 0,1mM de los peptidos a estudiar durante 1h a 37°C. La liberacion de [3H]-L-glutamato se realiza mediante despolarizacion con 75mM KCl y 15 2mM CaCl2 tamponado en tampon fisiologico durante 10min a 37°C. Se recoge el medio de cultivo y se cuantifica la cantidad de [3H]-L-glutamato en un contador de radioactividad beta. Los resultados se normalizan con respecto a la liberacion de [3H]-L-glutamato en ausencia del peptido y se corrige de la liberacion basal en ausencia de calcio.

EJEMPLO 7

Preparacion de una composicion cosmetica que contiene CH3-(CH2)14-CO-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-CONH2 20 La siguiente formulacion fue preparada segun se describe en la presente invencion:

5

10

15

20

25

30

En un reactor suficientemente grande se pesan los componentes de la Fase A y se calienta la mezcla a 80°C para fundir las ceras. En un recipiente adecuado para todo el contenido se pesan los componentes de la Fase B y se calientan a 70°C. Se adiciona la Fase A sobre la Fase B lentamente y bajo intensa agitacion, y posteriormente se adiciona la Fase C a la mezcla anterior bajo agitacion. Acabada la adicion, se deja enfriar con agitacion suave y cuando la mezcla se encuentra a temperatura ambiente se anade una solucion acuosa de CH3-(CH2)i4-CO-Glu-Glu- Met-Gln-Arg-Arg-CONH2 y lecitina, se homogeneiza y corrige el pH con trietanolamina si es necesario.

La crema que se obtiene tiene un pH entre 6 y 7 y una viscosidad de 10.000-15.000 cps (6/50).

INGREDIENTE (Nomenclatura INCI)

% EN PESO

FASE A

MINERAL OIL

8.0

STEARIC ACID

2.4

CETEARYL ALCOHOL

1.6

BEESWAX

0.8

FASE B

GLYCERIN

2.4

AQUA (WATER)

63.4

FASE C

CARBOMER

0.3

TRIETHANOLAMINE

0.9

FASE D

AQUA (WATER)

15.0

CH3-(CH2)i4-CO-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-CONH2 (0.05%)

5.0

LECITHIN

0.4

EJEMPLO 8

Preparacion de liposomas que contiene CH3-(CH2)i4-CO-ELEEMQRRADQLA-NH2

Este compuesto no esta de acuerdo a la invencion. Este ejemplo es util para entender la invencion. Se pesa dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) y se disuelve en cloroformo. El disolvente se evapora al vaclo hasta obtener una fina capa de fosfollpido, y esta capa se hidrata por tratamiento a 55°C con una solucion acuosa que contiene el peptido a la concentracion deseada (conteniendo Phenonip®), obteniendo los liposomas MLV. Los liposomas ULV se obtienen sumergiendo los liposomas MLV en un bano de ultrasonidos a 55°C durante 8 ciclos de 2min en intervalos de 5min.

INGREDIENTE______________________________________________________% EN PESO

DIPALMITOILFOSFATIDILCOLINA 4.0

CH3-(CH2) 14-CO-ELEEMQRRADQLA-NH2 0.2

PHENONIP® 0.5

5 Segun un primer aspecto, la presente invention se refiere a un peptido con una secuencua de aminoacidis seleccionada del grupo que consiste en:

CH3-(CH2)4-CO-EEMQRR-NH2 CH3-(CH2)6-CO-EEMQRR-NH2 CH3-(CH2)8-CO-EEMQRR-NH2 10 CH3-(CH2)10-CO-EEMQRR-NH2

CH3-(CH2)12-CO-EEMQRR-NH2 CH3-(CH2)14-CO-EEMQRR-NH2 CH3-(CH2)16-CO-EEMQRR-NH2 CH3-(CH2)18-CO-EEMQRR-NH2 15 CH3-(CH2)20-CO-EEMQRR-NH2

Ac-EEMQRR-NH-(CH2)5-CH3 Ac-EEMQRR-NH-(CH2)7-CH3 Ac-EEMQRR-NH-(CH2)9-CH3 Ac-EEMQRR-NH-(CH2)ii-CH3 20 Ac-EEMQRR-NH-(CH2)i3-CH3

Ac-EEMQRR-NH-(CH2)i5-CH3 Ac-EEMQRR-NH-(CH2)i7-CH3 Ac-PEGi-EEMQRR-NH2 Ac-PEG2-EEMQRR-NH2 25 Ac-PEG3-EEMQRR-NH2

Ac-PEG4-EEMQRR-NH2 Ac-PEG5-EEMQRR-NH2

sus estereoisomeros, mezclas de los mismos, y sus sales cosmeticamente y farmaceuticamente aceptables.

Segun otro aspecto importante, la presente invencion se refiere a un procedimiento de obtencion de un peptido de la 30 presente invencion, que se basa en slntesis de peptidos en fase solida.

Segun otro aspecto importante, la presente invencion se refiere a un procedimiento de obtencion de un peptido de la presente invencion, que emplea grupos protectores seleccionados del grupo formado por Fmoc/tButilo, Fmoc/tritilo y Fmoc/alilo.

Segun otro aspecto importante, la presente invencion se refiere a una composition cosmetica o farmaceutica que 35 comprende una cantidad cosmetica o farmaceuticamente eficaz de al menos un peptido de la presente invencion y al menos un excipiente o adyuvante cosmeticamente o farmaceuticamente aceptable.

Segun otro aspecto importante, la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica o farmaceutica que comprende al menos un peptido de la presente invencion incorporado a un sistema de liberation sostenida y/o vehlculo cosmeticamente o farmaceuticamente aceptable seleccionado del grupo que consiste en liposomas, 40 milicapsulas, microcapsulas, nanocapsulas, esponjas, veslculas, micelas, miliesferas, microesferas, nanoesferas, lipoesferas, microemulsiones, nanoemulsiones, milipartlculas, micropartlculas y nanopartlculas.

Segun otro aspecto importante, la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica o farmaceutica que comprende al menos un peptido de la presente invencion adsorbido sobre un pollmero organico solido o soporte mineral seleccionado del grupo que consiste en talco, bentonita, sllice, almidon y maltodextrina.

45 Segun otro aspecto importante la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica o farmaceutica en la que el peptido de la presente invencion se presenta en una formulation seleccionada del grupo que consiste en cremas, emulsiones de aceite y/o silicona en agua, emulsiones de agua en aceite y/o silicona, aceites, leches, balsamos, espumas, lociones, geles, linimentos, sueros, jabones, unguentos, mousses, pomadas, barras, lapices y vaporizadores.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

Segun otro aspecto importante, la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica o farmaceutica en la que el peptido de la presente invencion se encuentra incorporado en soportes solidos seleccionados del grupo que consiste en toallitas, hidrogeles, parches adhesivos, parches no adhesivos y mascarillas faciales.

Segun otro aspecto importante, la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica o farmaceutica en la que el peptido de la presente invencion se encuentra incorporado en tejidos, preferentemente en forma de vendas.

Segun otro aspecto importante, la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica o farmaceutica que contiene un peptido de la presente invencion incorporado en productos de llnea de maquillaje seleccionados del grupo formado por correctores de ojeras, fondos de maquillaje, lociones y leches desmaquillantes, sombras de ojos y barras de labios.

Segun otro aspecto importante, la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica o farmaceutica que contiene un peptido de la presente invencion en una concentracion entre el 0,00000001% (en peso) y el 20% (en peso).

Segun otro aspecto importante la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica o farmaceutica en la que el peptido la presente invencion de forma preferente se encuentra a una concentracion entre el 0,0001% y el 5% en peso.

Segun otro aspecto importante la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica o farmaceutica que comprende una cantidad adicional cosmetica o farmaceuticamente eficaz de un agente activo seleccionado del grupo que consiste de un agente exfoliante, un agente hidratante, un agente despigmentante o blanqueante, un agente propigmentante, un agente antiarrugas, un agente capaz de reducir o eliminar las bolsas bajo los ojos, un agente antioxidante, un agente antiglicacion, un inhibidor de la NO-sintasa, un agente anti-envejecimiento, un agente estimulador de la slntesis de moleculas dermicas o epidermicas y/o para prevenir su degradacion, un agente estimulador de la proliferacion de fibroblastos y/o queratinocitos o para estimular la diferenciacion de queratinocitos, un agente dermorelajante, un agente reafirmante, un agente anti-contaminacion atmosferica y/o anti-radicales libres, un agente que actue sobre la circulation capilar y/o la microcirculation, un agente calmante, un agente antiinflamatorio, un agente que actue sobre el metabolismo de las celulas, un agente fotoprotector organico o mineral activo contra los rayos ultravioleta A y/o B, y mezclas de ellos. De forma preferente el agente activo es sintetico o un extracto vegetal o proviene de biofermentacion.

Segun otro aspecto importante la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica o farmaceutica en la que el agente antiarrugas y/o antienvejecimiento se selecciona del grupo que consiste en Argireline®, Leuphasyl®, Decorinyl®, Decorinol®, Lipochroman® y Aldenine®, comercializados por Lipotec.

Segun un aspecto importante, la presente invencion se refiere al uso de un peptido de la presente invencion o sus sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables en la elaboration de una composicion cosmetica o farmaceutica que regula la exocitosis neuronal.

Segun otro aspecto importante, la presente invencion se refiere al uso de un peptido de la presente invencion o sus sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables en la elaboracion de una una composicion cosmetica o farmaceutica para el tratamiento, limpieza y cuidado de la piel.

Segun un aspecto importante la presente invencion se refiere al uso del peptido de la presente invencion o sus sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables en la preparation de una composicion cosmetica o farmaceutica que reduce y/o elimina las arrugas faciales y/o la asimetrla facial.

Segun otro aspecto importante la presente invencion se refiere al uso del peptido de la presente invencion o sus sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables en la preparacion de una composicion cosmetica o farmaceutica que reduce y/o elimina las arrugas faciales de expresion.

Segun otro aspecto importante la presente invencion se refiere al uso del peptido de la presente invencion o sus sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables en la preparacion de una composicion cosmetica o farmaceutica que reduce y/o elimina las arrugas faciales de expresion mediante aplicacion topica en la frente, en el espacio entre las cejas y/o en las arrugas y llneas finas alrededor de la boca y/o alrededor de los ojos.

Segun otro aspecto importante la presente invencion se refiere al uso del peptido de la presente invencion o sus sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables en la preparacion de una composicion cosmetica o farmaceutica que reduce y/o elimina las arrugas faciales de expresion mediante aplicacion por iontoforesis en la frente, en el espacio entre las cejas y/o en las arrugas y llneas finas alrededor de la boca y/o alrededor de los ojos.

5

10

15

20

25

30

35

Segun otro aspecto importante la presente invencion se refiere al uso del peptido de la presente invencion o sus sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables en la preparacion de una composicion cosmetica o farmaceutica que reduce y/o elimina las arrugas faciales de expresion mediante aplicacion por inyeccion subcutanea o intradermica en la frente, en el espacio entre las cejas y/o en las arrugas y llneas finas alrededor de la boca y/o alrededor de los ojos.

Segun otro aspecto importante la presente invencion se refiere al uso del peptido de la presente invencion o sus sales cosmeticamente o farmaceuticamente aceptables en la preparacion de una composicion cosmetica o farmaceutica que reduce y/o elimina la espasticidad muscular.

<110> LIPOTEC S.A.

<120> PEPTIDOS INHIBIDORES DE LA EXOCITOSIS NEURONAL <130> P-INCI-N-06-0193 <160> 11

<170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 206

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1

Met

Ala i—1 Asp Ala Asp Met Arg Asn i—1 Leu i—1 i—1 Met Gln Arg

1

5 10 15

Arg

Ala Asp Gln Leu Ala Asp Glu Ser Leu Glu Ser Thr Arg Arg Met

20 25 30

Leu

Gln Leu Val Glu Glu Ser Lys Asp Ala Gly Ile Arg Thr Leu Val

35 40 45

Met

Leu Asp Glu Gln Gly Glu Gln Leu Glu Arg Ile Glu Glu Gly

Met

50 55 60

Asp

Gln Ile Asn Lys Asp Met Lys Glu Ala Glu Lys Asn Leu Thr

Asp

65

70 75 80

Leu

Gly Lys Phe Cys Gly Leu Cys Val Cys Pro Cys Asn Lys Leu Lys

85 90 95

Ser

Ser

Asp Ala Tyr Lys Lys Ala Trp Gly Asn Asn Gln Asp Gly Val

100 105 110

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Val Ala

Ser Gln Pro Ala Arg Val Val Asp Glu Arg Glu Gln Met Ala

115 120 125

Ile Ser

Gly Gly Phe Ile Arg Arg Val Thr Asn Asp Ala Arg Glu Asn

130

135 140

Glu Met Asp

Glu Asn Leu Glu Gln Val Ser Gly Ile Ile Gly Asn Leu

145

150 155 160

Arg His

Met Ala Leu Asp Met Gly Asn Glu Ile Asp Thr Gln Asn Arg

165 170 175

Gln Ile Asp Arg

Ile Met Glu Lys Ala Asp Ser Asn Lys Thr Arg Ile

180 185 190

Asp Glu

Ala Asn Gln Arg Ala Thr Lys Met Leu Gly Ser Gly

195 200 205

<210> 2

<211> 84

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 2

Met Ala

Glu Asp Ala Asp Met Arg Asn Glu Leu Glu Glu Met Gln Arg

1

5 10 15

Arg Ala

Asp Gln Leu Ala Asp Glu Ser Leu Glu Ser Thr Arg Arg Met

20 25 30

Leu Gln

Leu Val Glu Glu Ser Lys Asp Ala Gly Ile Arg Thr Leu Val

35 40 45

Met Leu

Asp Glu Gln Gly Glu Gln Leu Glu Arg Ile Glu Glu Gly Met

50 55 60

Asp Gln Ile Asn Lys Asp Met Lys Glu Ala Glu Lys Asn Leu Thr Asp 65 70 75 80

Leu Gly Lys Phe

<210> 3

<211> 37

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 3

Glu Ile Asp Thr Gln Asn Arg Gln Ile Asp Arg Ile Met Glu Lys Ala

1 5 10 15

Asp Ser Asn Lys Thr Arg Ile Asp Glu Ala Asn Gln Arg Ala Thr Lys

20 25 30

5

10

15

20

25

30

35

Met Leu Gly Ser Gly 35

<210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4

Glu Leu Glu Glu Met Gln Arg Arg Ala Asp Gln Leu Ala

1 5 10

<210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5

Ser Leu Glu Ser Thr Arg Arg Met Leu Gln Leu Val Glu Glu Ser Lys

1 5 10 15

<210> 6 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6

Asp Gln Ile Asn Lys Asp Met Lys Glu Ala Glu Lys Asn Leu Thr Asp

1 5 10 15

Leu

<210> 7 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7

Ile Met Glu Lys Ala Asp Ser Asn Lys Thr Arg Ile Asp Glu Ala Asn

1 5 10 15

5

10

15

20

25

30

35

Gln Arg Ala Thr Lys Met Leu Gly Ser Gly 20 25

<210> 8 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8

Glu Glu Met Gln Arg Arg Ala Asp 1 5

<210> 9 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9

Leu Glu Ser Thr Arg Arg Met Leu Gln Leu Val Glu Glu 1 5 10

<210> 10 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10

Asn Lys Asp Met Lys Glu Ala Glu Lys Asn Leu Thr

1 5 10

<210> 11 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11

Glu Glu Met Gln Arg Arg

1 5

Claims (7)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un peptido con una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en

   CH3-(CH2)4-CO-EEMQRR-NH2 CH3-(CH2)6-CO-EEMQRR-NH2 5 CH3-(CH2)8-CO-EEMQRR-NH2

   CH3-(CH2)10-CO-EEMQRR-NH2 CH3-(CH2)12-CO-EEMQRR-NH2 CH3-(CH2)14-CO-EEMQRR-NH2 CH3-(CH2)16-CO-EEMQRR-NH2 10 CH3-(CH2)18-CO-EEMQRR-NH2

   CH3-(CH2)20-CO-EEMQRR-NH2 Ac-EEMQRR-NH-(CH2)5-CH3 Ac-EEMQRR-NH-(CH2)7-CH3 Ac-EEMQRR-NH-(CH2)9-CH3 15 Ac-EEMQRR-NH-(CH2)11-CH3

   Ac-EEMQRR-NH-(CH2)13-CH3 Ac-EEMQRR-NH-(CH2)15-CH3 Ac-EEMQRR-NH-(CH2)17-CH3 Ac-PEG1-EEMQRR-NH2 20 Ac-PEG2-EEMQRR-NH2

   Ac-PEG3-EEMQRR-NH2 Ac-PEG4-EEMQRR-NH2 Ac-PEG5-EEMQRR-NH2

   sus estereoisomeros, mezclas de los mismos, y sus sales cosmeticamente y farmaceuticamente aceptables.

   25 2. Procedimiento de obtencion de un peptido segun la reivindicacion 1, caracterizado porque dicho procedimiento

   se realiza en fase solida.
2. 3. Composicion cosmetica o farmaceutica que comprende una cantidad cosmeticamente o farmaceuticamente eficaz de al menos un peptido segun la reivindicacion 1 y al menos un excipiente o adyuvante cosmeticamente o farmaceuticamente aceptable.

   30 4. Composicion cosmetica o farmaceutica segun la reivindicacion 3, caracterizada porque el peptido segun la

   reivindicacion 1 se encuentra incorporado a un sistema de liberacion sostenida o un vehlculo cosmeticamente o farmaceuticamente aceptable seleccionado del grupo que consiste de liposomas, milicapsulas, microcapsulas, nanocapsulas, esponjas, veslculas, micelas, miliesferas, microesferas, nanoesferas, lipoesferas, microemulsiones, nanoemulsiones, milipartlculas, micropartlculas y nanopartlculas.

   35 5. Composicion cosmetica o farmaceutica segun la reivindicacion 3, caracterizada porque el peptido segun la

   reivindicacion 1 se encuentra adsorbido sobre un pollmero organico o soporte solido mineral cosmeticamente o farmaceuticamente aceptable seleccionado del grupo que consiste en talco, bentonita, sllice, almidon o maltodextrina.
3. 6. Composicion cosmetica o farmaceutica que comprende una cantidad cosmeticamente o farmaceuticamente 40 eficaz de al menos un peptido segun la reivindicacion 1 y una cantidad adicional cosmeticamente o

   farmaceuticamente eficaz de un agente activo seleccionado del grupo que consiste en un agente exfoliante, un agente hidratante, un agente despigmentante o blanqueante, un agente propigmentante, un agente anti-estrlas, un agente antiarrugas, un agente antioxidante, un agente antiglicacion, un inhibidor de la NO-sintasa, un agente anti- envejecimiento, un agente capaz de reducir y/o eliminar las bolsas bajo los ojos, un agente estimulador de la slntesis 45 de moleculas dermicas o epidermicas y/o para prevenir su degradacion, un agente estimulador de la proliferation de fibroblastos y/o queratinocitos y para estimular la diferenciacion de queratinocitos, agentes destinados a mejorar la union dermis-epidermis, un agente dermorelajante, un agente reafirmante, un agente anti-contamination atmosferica y/o anti-radicales libres, un agente que actue sobre la circulation capilar y/o la microcirculation, un agente calmante, un agente antiinflamatorio, un agente antimicrobiano, un agente antifungico, un agente que actue sobre el 50 metabolismo de las celulas, vitaminas, un agente quelante, un agente fotoprotector organico o mineral, activo contra los rayos ultravioleta A y/o B, y mezclas de los mismo.
4. 7. Uso de un peptido segun la reivindicacion 1 en la preparation de una composicion cosmetica o farmaceutica para el tratamiento de aquellas condiciones de los mamlferos que requieran regulation de la exocitosis neuronal.
5. 8. Uso de un peptido segun la reivindicacion 1 en la preparacion de una composicion cosmetica o farmaceutica para el tratamiento, limpieza o cuidado de la piel.
6. 9. Uso de un peptido segun la reivindicacion 1 en la preparacion de una composicion cosmetica o farmaceutica que reduce y/o elimina las arrugas faciales y/o la asimetrla facial.

   5 10. Uso de un peptido segun la reivindicacion 9 en la preparacion de una composicion cosmetica o farmaceutica

   que reduce y/o elimina las arrugas faciales de expresion.
7. 11. Uso de un peptido segun la reivindicacion 1 en la preparacion de una composicion cosmetica o farmaceutica que reduce y/o elimina la espasticidad muscular.