ES2640533T3 - Composiciones y métodos novedosos para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la inmunidad - Google Patents

Abstract

Un anticuerpo anti-TIGIT, o un fragmento de unión a TIGIT del mismo, para su uso en un método para la modulación terapéutica de la función y/o la actividad del sistema inmunitario, comprendiendo el método la administración del anticuerpo anti-TIGIT, o del fragmento de unión a TIGIT del mismo, a un cuerpo humano o animal, en donde el anticuerpo anti-TIGIT, o el fragmento de unión a TIGIT del mismo, inhiben la unión de TIGIT a uno o más de PVRL2, PVRL3 y PVR, y en donde el anticuerpo anti-TIGIT, o el fragmento de unión a TIGIT del mismo, comprenden una cadena ligera que comprende una HVR-L1 que comprende SEQ ID NO: 23, una HVR-L2 que comprende SEQ ID NO: 24 y una HVR-L3 que comprende SEQ ID NO: 25, y una cadena pesada que comprende una HVR-H1 que comprende SEQ ID NO: 26, una HVR-H2 que comprende SEQ ID NO: 27 y una HVRH3 que comprende SEQ ID NO: 28.

Description

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aminoácidos de longitud, alternativamente al menos aproximadamente 150 aminoácidos de longitud, alternativamente al menos aproximadamente 200 aminoácidos de longitud, alternativamente al menos aproximadamente 300 aminoácidos de longitud, o más.

5 “Porcentaje (%) de identidad de secuencias de aminoácidos” con respecto a las secuencias de polipéptidos de TIGIT identificadas en el presente documento se define como el porcentaje de restos de aminoácidos en una secuencia candidata que son idénticos a los restos de aminoácidos en la secuencia de polipéptidos de TIGIT específica, después de alinear las secuencias e introducir huecos, si fuera necesario, para lograr el máximo porcentaje de identidad de secuencias, y sin considerar sustituciones conservativas como parte de la identidad de secuencias. El alineamiento con el fin de determinar la identidad de secuencias de aminoácidos en porcentaje puede lograrse de diversas formas que están dentro de la habilidad en la materia, por ejemplo, usando software informático públicamente disponible tal como el software BLAST, BLAST-2, ALIGN o Megalign (DNASTAR). Aquellos expertos en la materia pueden determinar parámetros apropiados para medir el alineamiento que incluyen cualquier algoritmo necesario para lograr el alineamiento máximo con respecto a la longitud completa de las secuencias que se

15 comparan. Sin embargo, para los fines en el presente documento, los valores de identidad de secuencias de aminoácidos en % se generan usando el programa informático de comparación de secuencias ALIGN-2, en el que el código fuente completo para el programa ALIGN-2 está públicamente disponible. El programa informático de comparación de secuencias ALIGN-2 fue escrito por Genentech, Inc. y el código fuente ha sido presentado con documentación de usuario en la oficina de derechos de autor de EE.UU., Washington D.C., 20559, en la que está registrado con el N.º de acceso de derechos de autor de EE.UU. TXU510087. El programa ALIGN-2 está públicamente disponible por Genentech, Inc., South San Francisco, California. El programa ALIGN-2 debería compilarse para uso en un sistema operativo UNIX, preferentemente UNIX V4.0D digital. Todos los parámetros de comparación de secuencias están fijados por el programa ALIGN-2 y no varían.

25 En situaciones en las que ALIGN-2 se emplea para comparaciones de secuencias de aminoácidos, el % de identidad de secuencias de aminoácidos de una secuencia de aminoácidos A dada para, con o contra una secuencia de aminoácidos B dada (que alternativamente puede expresarse como una secuencia de aminoácidos A dada que tiene o comprende un cierto % de identidad de secuencias de aminoácidos para, con o contra una secuencia de aminoácidos B dada) se calcula del siguiente modo:

100 veces la fracción X/Y

en la que X es el número de restos de aminoácidos puntuados como apareamientos idénticos por el programa de alineamiento de secuencias ALIGN-2 en el alineamiento de ese programa de A y B, y en la que Y es el número total

35 de restos de aminoácidos en B. Se apreciará que si la longitud de la secuencia de aminoácidos A no es igual a la longitud de la secuencia de aminoácidos B, el % de identidad de la secuencia de aminoácidos A con respecto a B no será igual al % de identidad de secuencias de aminoácidos B con respecto a A. Como ejemplos de cálculos del % de identidad de secuencias de aminoácidos usando este método, las Tablas 1 y 2 demuestran cómo calcular el % de identidad de secuencias de aminoácidos de la secuencia de aminoácidos designada “Proteína de comparación” con la secuencia de aminoácidos designada “TIGIT”, en la que “TIGIT” representa la secuencia de aminoácidos de un polipéptido de TIGIT hipotético de interés, “Proteína de comparación” representa la secuencia de aminoácidos de un polipéptido contra el que se compara el polipéptido de “TIGIT” de interés, y “X, “Y” y “Z” representan cada uno restos de aminoácidos hipotéticos diferentes.

45 Tabla 1 Proteína de interés XXXXXXXXXXXXXXX (Longitud = 15 aminoácidos) Proteína de comparación XXXXXYYYYYYY (Longitud = 12 aminoácidos)

% de identidad de la secuencia de aminoácidos = (el número de restos de aminoácidos que se corresponden de manera idéntica entre las dos secuencias de polipéptidos como se determina mediante ALIGN-2) dividido entre (el número total de restos de aminoácidos de la proteína de interés) = 5 dividido entre 15 = 33,3 %

Tabla 2

Proteína de interés XXXXXXXXXX (Longitud = 10 aminoácidos) Proteína de comparación XXXXXYYYYYYZZYZ (Longitud = 15 aminoácidos)

% de identidad de la secuencia de aminoácidos =

55 (el número de restos de aminoácidos que se corresponden de manera idéntica entre las dos secuencias de polipéptidos como se determina mediante ALIGN-2) dividido entre (el número total de restos de aminoácidos de la proteína de interés) = 5 dividido entre 10 = 50 % A menos que se establezca específicamente de otro modo, todos los valores del % de identidad de la secuencia de aminoácidos usados en el presente documento se obtienen como se describió en el párrafo inmediatamente precedente y las Tablas 1 y 2 usando el programa informático ALIGN-2. Sin embargo, los valores del % de identidad de la secuencia de aminoácidos también pueden obtenerse como se describe a continuación usando el programa informático WU-BLAST-2 (Altschul et al., Methods in Enzymology 266:460-480 (1996)). La mayoría de los

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anticuerpos, fragmentos o variantes de secuencias de aminoácidos de polipéptidos nativos, péptidos, oligonucleótidos antisentido, moléculas orgánicas pequeñas, etc. Métodos de identificación de agonistas o antagonistas de un polipéptido pueden comprender poner en contacto un polipéptido con una molécula agonista o antagonista candidata y medir un cambio detectable en una o más actividades biológicas normalmente asociadas al

5 polipéptido.

Los términos “antagonista de TIGIT” y “antagonistas de la actividad de TIGIT o expresión de TIGIT” se usan indistintamente y se refieren a un compuesto que interfiere con el funcionamiento normal de TIGIT, ya sea disminuyendo la transcripción o traducción del ácido nucleico que codifica TIGIT, o inhibiendo o bloqueando la actividad del polipéptido de TIGIT, o ambos. Ejemplos de antagonistas de TIGIT incluyen, pero no se limitan a, polinucleótidos antisentido, ARN interferentes, ARN catalíticos, quimeras de ARN-ADN, aptámeros específicos de TIGIT, anticuerpos anti-TIGIT, fragmentos que se unen a TIGIT de anticuerpos anti-TIGIT, moléculas pequeñas que se unen a TIGIT, péptidos que se unen a TIGIT, y otros polipéptidos que se unen específicamente a TIGIT (que incluyen, pero no se limitan a, fragmentos que se unen a TIGIT de uno o más ligandos de TIGIT, fusionados

15 opcionalmente con uno o más dominios adicionales), de forma que la interacción entre el antagonista de TIGIT y TIGIT produzca una reducción o cese de la actividad o expresión de TIGIT. Se entenderá por un experto habitual en la materia que, en algunos casos, un antagonista de TIGIT puede antagonizar una actividad de TIGIT sin afectar otra actividad de TIGIT. Por ejemplo, un antagonista de TIGIT deseable para su uso en ciertos métodos en el presente documento es un antagonista de TIGIT que antagoniza la actividad de TIGIT en respuesta a una de la interacción de PVR, interacción de PVRL3, o interacción de PVRL2, por ejemplo, sin afectar o afectando mínimamente cualquiera de otras interacciones de TIGIT.

Los términos “antagonista de PVR” y “antagonista de la actividad de PVR o expresión de PVR” se usan indistintamente y se refieren a un compuesto que interfiere con el funcionamiento normal del PVR, ya sea 25 disminuyendo la transcripción o traducción del ácido nucleico que codifica el PVR, o inhibiendo o bloqueando la actividad del polipéptido de PVR, o ambos. Ejemplos de antagonistas de PVR incluyen, pero no se limitan a, polinucleótidos antisentido, ARN interferentes, ARN catalíticos, quimeras de ARN-ADN, aptámeros específicos de PVR, anticuerpos anti-PVR, fragmentos que se unen a PVR de anticuerpos anti-PVR, moléculas pequeñas que se unen a PVR, péptidos que se unen a PVR, y otros polipéptidos que se unen específicamente a PVR (que incluyen, pero no se limitan a, fragmentos que se unen a PVR de uno o más ligandos de PVR, fusionados opcionalmente con uno o más dominios adicionales), de forma que la interacción entre el antagonista de PVR y el PVR produzca una reducción o cese de la actividad o expresión de PVR. Se entenderá por un experto habitual en la materia que, en algunos casos, un antagonista de PVR puede antagonizar una actividad de PVR son afectar otra actividad de PVR. Por ejemplo, un antagonista de PVR deseable para su uso en ciertos métodos en el presente documento es un

35 antagonista de PVR que antagoniza la actividad de PVR en respuesta a una interacción de TIGIT sin tener un impacto en las interacciones PVR-CD96 y/o PVR-CD226.

Los términos “agonista de TIGIT” y “agonista de la actividad de TIGIT o expresión de TIGIT” se usan indistintamente y se refieren a un compuesto que potencia o estimula el funcionamiento normal de TIGIT, aumentando la transcripción o traducción del ácido nucleico que codifica TIGIT, y/o inhibiendo o bloqueando la actividad de una molécula que inhibe la expresión de TIGIT o actividad de TIGIT, y/o potenciando la actividad de TIGIT normal (que incluye, pero no se limitan a, potenciar la estabilidad de TIGIT o potenciar la unión de TIGIT a uno o más ligandos diana). Por ejemplo, el agonista de TIGIT puede seleccionarse de un anticuerpo, un fragmento que se une al antígeno, un aptámero, un ARN interferente, una molécula pequeña, un péptido, una molécula antisentido y otro

45 polipéptido de unión. En otro ejemplo, el agonista de TIGIT puede ser un polinucleótido seleccionado de un aptámero, ARN interferente o molécula antisentido que interfiere con la transcripción y/o traducción de una molécula inhibidora de TIGIT. Se entenderá por un experto habitual en la materia que, en algunos casos, un agonista de TIGIT puede agonizar una actividad de TIGIT sin afectar otra actividad de TIGIT. Por ejemplo, un agonista de TIGIT deseable para su uso en ciertos de los métodos en el presente documento es un agonista de TIGIT que agoniza la actividad de TIGIT en respuesta a una de la interacción de PVR, interacción de PVRL3 o interacción de PVRL2, por ejemplo, sin afectar o afectando mínimamente cualquiera de las otras interacciones de TIGIT.

Los términos “agonista de PVR” y “agonista de la actividad de PVR o expresión de PVR” se usan indistintamente y se refieren a un compuesto que potencia o estimula el funcionamiento normal de PVR, aumentando la transcripción 55 o traducción del ácido nucleico que codifica PVR, y/o inhibiendo o bloqueando la actividad de una molécula que inhibe la expresión de PVR o la actividad de PVR, y/o potenciando la actividad de PVR normal (que incluye, pero no se limitan a, potenciar la estabilidad de PVR o potenciar la unión de PVR a uno o más ligandos diana). Por ejemplo, el agonista de PVR puede seleccionarse de un anticuerpo, un fragmento que se une al antígeno, un aptámero, un ARN interferente, una molécula pequeña, un péptido, una molécula antisentido y otro polipéptido de unión. En otro ejemplo, el agonista de PVR puede ser un polinucleótido seleccionado de un aptámero, un ARN interferente, o molécula antisentido que interfiere con la transcripción y/o traducción de una molécula inhibidora de PVR. Se entenderá por un experto habitual en la materia que, en algunos casos, un agonista de PVR puede agonizar una actividad de PVR sin afectar otra actividad de PVR. Por ejemplo, un agonista de PVR deseable para su uso en ciertos métodos en el presente documento es un agonista de PVR que agoniza la actividad de PVR en respuesta a

65 la interacción de TIGIT, o que imita a TIGIT en la interacción con PVR, por ejemplo, sin afectar o afectando mínimamente las interacciones de unión de PVR-CD96 o PVR-CD226.

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posible causa infecciosa. Aunque se han encontrado agentes que estimulan la inflamación aguda, no se ha encontrado que ninguno cause la inflamación crónica asociada a la IBD. La hipótesis de que la IBD es una enfermedad autoinmunitaria está apoyada por la manifestación extraintestinal previamente mencionada de la IBD como artritis de las articulaciones, y la respuesta positiva conocida a la IBD mediante el tratamiento con agentes

5 terapéuticos, tales como glucocorticoides suprarrenales, ciclosporina y azatioprina, que son conocidos por suprimir la respuesta inmunitaria. Además, el tubo GI, más que cualquier otro órgano del cualquier, está continuamente expuesto a posibles sustancias antigénicas, tales como las proteínas de los alimentos, subproductos bacterianos (LPS), etc.

Además, el riesgo de cáncer de colon es altamente elevado en pacientes con colitis ulcerosa grave, particularmente si la enfermedad ha existido durante varios años. Aproximadamente el 20-25 % de los pacientes con IBD eventualmente requieren cirugía para eliminar el colon, debido al sangrado masivo, enfermedad debilitante crónica, perforación del colon o riesgo de cáncer. La cirugía se realiza también algunas veces cuando otras formas de tratamiento médico fallan o cuando los efectos secundarios de los esteroides u otras medicaciones amenazan la

15 salud del paciente. Como la cirugía es invasiva y altera drásticamente la vida, no es una pauta de tratamiento altamente deseable, y normalmente es el tratamiento de último recurso. Con el fin de entender mejor esta enfermedad y posiblemente tratarla, los experimentos determinaron que la TIGIT estaba regulada por incremento tanto en la CD como en la UC cuando se compararon con tejido normal. La modulación de la expresión y/o actividad de TIGIT puede probar ser útil en el tratamiento de una o más formas de IBD.

La artritis reumatoide (RA) es una enfermedad inflamatoria autoinmunitaria sistémica crónica que involucra principalmente a la membrana sinovial de múltiples articulaciones, con lesión resultante del cartílago articular. La patogénesis es dependiente de linfocitos T y está asociada con la producción de factores reumatoides, autoanticuerpos dirigidos contra IgG autóloga, con la formación resultante de complejos inmunitarios que alcanzan 25 altos niveles en el líquido sinovial y la sangre. Estos complejos en la articulación pueden inducir el marcado infiltrado de linfocitos y monocitos en el sinovio y cambios sinoviales marcados posteriores; el espacio articular/líquido sinovial es infiltrado por células similares con la adición de numerosos neutrófilos. Los tejidos afectados son principalmente las articulaciones, frecuentemente en un patrón simétrico. Sin embargo, también se produce enfermedad extrarticular en dos formas principales. Una forma es el desarrollo de lesiones extrarticulares con la enfermedad de las articulaciones progresiva en curso y las lesiones típicas de fibrosis pulmonar, vasculitis y úlceras cutáneas. La segunda forma de enfermedad extrarticular es el llamado síndrome de Felty, que aparece tarde en el transcurso de la enfermedad de RA, algunas veces después de que la enfermedad de las articulaciones se haya vuelto quiescente, e involucra la presencia de neutropenia, trombocitopenia y esplenomegalia. Esta puede ir acompañada por vasculitis en múltiples órganos con la formación de infartos, úlceras de la piel y gangrena. Los pacientes también desarrollan

35 frecuentemente nódulos reumáticos en el tejido del subcutis que recubre las articulaciones afectadas; la etapa tardía de los nódulos tiene centros necróticos rodeados por un infiltrado de células inflamatorias mezcladas. Otras manifestaciones que pueden ocurrir en la RA incluyen: pericarditis, pleuritis, arteritis coronaria, neumonitis intersticial con fibrosis pulmonar, queratoconjuntivitis seca y nódulos reumatoides.

La artritis crónica juvenil es una enfermedad inflamatoria idiopática crónica que empieza frecuentemente con menos de 16 años de edad. Su fenotipo tiene algunas similitudes con la RA; algunos pacientes que son positivos al factor reumatoide son clasificados como artritis reumatoide juvenil. La enfermedad se subclasifica en tres categorías principales: pauciarticular, poliarticular y sistémica. La artritis puede ser grave y es normalmente es destructiva y conduce a anquilosis de las articulaciones y crecimiento retardado. Otras manifestaciones pueden incluir uveítis

45 anterior crónica y amiloidosis sistémica.

El término “cantidad eficaz” es una concentración o cantidad de un polipéptido y/o un agonista/antagonista que produce alcanzar un fin establecido particular. Una “cantidad eficaz” de un polipéptido o agonista o antagonista del mismo puede ser determinada empíricamente. Además, una “cantidad terapéuticamente efectiva” es una concentración o cantidad de un polipéptido y/o agonista/antagonista que es eficaz para lograr un efecto terapéutico establecido. Esta cantidad también puede ser determinada empíricamente.

El término “agente citotóxico”, como se usa en el presente documento, se refiere a una sustancia que inhibe o previene la función de células y/o causa la destrucción de células. El término pretende incluir los isótopos radiactivos

55 (por ejemplo, I131, I125, Y90 y Re186), agentes quimioterapéuticos y toxinas, tales como toxinas enzimáticamente activas de origen bacteriano, fúngico, de plantas o animales, o fragmentos de las mismas.

Un “agente quimioterapéutico” es un compuesto químico útil en el tratamiento del cáncer. Ejemplos de agentes quimioterapéuticos incluyen adriamicina, doxorubicina, epirubicina, 5-fluorouracilo, citosina arabinósido (“Ara-C”), ciclofosfamida, tiotepa, busulfán, citoxina, taxoides, por ejemplo, paclitaxel (Taxol, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ) y doxetaxel (Taxotere, Rhône-Poulenc Rorer, Antony, Francia), toxotere, metotrexato, cisplatino, melfalán, vinblastina, bleomicina, etopósido, ifosfamida, mitomicina C, mitoxantrona, vincristina, vinorelbina, carboplatino, tenipósido, daunomicina, carminomicina, aminopterina, dactinomicina, mitomicinas, esperamicinas (véase la patente de EE.UU. N.º 4.675.187), melfalán y otras mostazas nitrogenadas relacionadas. También se

65 incluye en esta definición agentes hormonales que actúan para regular o inhibir la acción hormonal sobre tumores, tales como tamoxifeno y onapristona.

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Los miembros de la familia TLP comprenden varios aminoácidos absolutamente conservados, incluyendo alanina67 , glicina74, prolina114 y glicina116. Además, los miembros de la familia TLP comprenden varios aminoácidos que están sustancialmente conservados (por ejemplo, encontrados en la mayoría de los miembros de la familia, pero no en cada miembro de la familia), incluyendo un aminoácido seleccionado de valina, isoleucina y leucina en la posición 5 54, un aminoácido seleccionado de serina y treonina en la posición 55, una glutamina en la posición 56, una treonina en la posición 112, y un aminoácido seleccionado de fenilalanina y tirosina en la posición 113. Los miembros de la familia TLP también comprenden tres submotivos estructurales: valina/isoleucina34-serina/treonina5S-glutamina56; alanina67 -X68-73-glicina74 (donde X es cualquier aminoácido); y treonina112-fenilalanina/tirosina113-prolina114 -x 115 glicina116 (donde X es cualquier aminoácido). Se entenderá por un experto habitual en la materia que la numeración

usada anteriormente es con respecto a la secuencia de la proteína TIGIT humana, y aunque la posición relativa de estos restos y motivos conservados en diferentes miembros de la familia de la proteína TLP es idéntica a la posición de aquellos aminoácidos en la secuencia de la TIGIT humana, la numeración absoluta de esos restos en otros miembros de la familia TLP puede diferir.

15 Dada la implicación de los miembros de la familia TLP identificada en la regulación y función inmunitaria, también probablemente otros miembros de esta familia de proteínas están involucrados en la regulación y función inmunitaria. En consecuencia, la divulgación proporciona métodos de determinación de si una proteína dada es un miembro de la familia TLP alineando la secuencia de la proteína con las secuencias de uno o más de los miembros de la familia identificados anteriormente y evaluando la presencia o ausencia en la secuencia de proteína dada de los restos conservados de manera absoluta identificados anteriormente, los restos conservados sustancialmente identificados anteriormente, y/o los submotivos estructurales identificados anteriormente. La divulgación también proporciona métodos de identificación de otros miembros de la familia de la proteína TLP buscando en una o más bases de datos de las secuencias para las proteínas cuyas secuencias de aminoácidos comprenden los restos conservados de manera absoluta identificados anteriormente, los restos conservados sustancialmente identificados

25 anteriormente y/o los submotivos estructurales identificados anteriormente.

La identificación de la familia TLP por los solicitantes en el presente documento también presenta la posibilidad de que las características estructurales comunes de los miembros de la familia TLP puedan permitir que dos o más miembros de la familia TLP se modulen similarmente. Por ejemplo, si los restos de aminoácidos y submotivos conservados y sustancialmente conservados en cada miembro de la familia TLP dan lugar a estructuras tridimensionales similares en aquellos miembros de la familia en uno o más dominios de cada proteína, entonces aquellas estructuras tridimensionales similares pueden ser elegidas como diana con el fin de modular simultáneamente más de un miembro de la familia TLP, o incluso todos los miembros de la familia TLP al mismo tiempo. La divulgación también proporciona así agentes (“agentes que interaccionan con TLP”), que interaccionan 35 específicamente con tales regiones conservadas o sustancialmente conservadas de los miembros de la familia TLP. Tales agentes pueden usarse para identificar uno o más miembros adicionales de la familia TLP, evaluando si una proteína candidata interacciona con un agente que interacciona con TLP. La interacción de la proteína candidata con el agente que interacciona con TLP puede indicar que la proteína también puede ser un miembro de la familia TLP. Los agentes que interaccionan con TLP pueden modular la actividad de TLP. Por ejemplo, un agente que interacciona con TLP puede ser un antagonista de la actividad de TLP, que incluye, pero no se limita a, un inhibidor de molécula pequeña, un anticuerpo inhibidor o un fragmento que se une al antígeno del mismo, un aptámero y un péptido inhibidor. En otro ejemplo, un agente que interacciona con TLP puede ser un agonista de la actividad de TLP, que incluye, pero no se limita a, un anticuerpo agonizante o un fragmento que se une al antígeno del mismo, un péptido agonizante, y una molécula pequeña que estabiliza una estructura de la proteína TLP para facilitar la

45 actividad de la proteína TLP. Los agentes que interaccionan con TLP pueden identificarse en varias formas conocidas, por ejemplo, usando los métodos de cribado descritos en el presente documento.

Los solicitantes muestran mediante análisis de ARNm y FACS que la TIGIT se expresa de manera predominante en varias células T activadas, particularmente células T reguladoras (Treg), células T de memoria, células NK y células T auxiliares de las células B foliculares (Tfh), aisladas de tejido amigdalino. Así, la invención proporciona métodos de identificación de si una célula seleccionada es o no una célula Treg, célula T de memoria, célula NK o célula TFh basándose en si la célula expresa o no a TIGIT. La divulgación también proporciona métodos de uso de TIGIT para purificar Treg, células T de memoria, células NK y células TFh de otros tipos de células inmunitarias que no expresan TIGIT, usando cualquiera de los métodos de purificación conocidos en la técnica y/o descritos en el presente 55 documento (como un ejemplo no limitante, mediante citometría de flujo). Los solicitantes también demuestran que la expresión más alta de TIGIT en estas poblaciones celulares aparece en células Treg activadas. Así, la invención también proporciona métodos de identificación de si una célula dada es una Treg activada basándose en su nivel de expresión de TIGIT con respecto a los niveles de expresión de TIGIT en una o más muestras de control (donde las muestras de control pueden ser valores predeterminados de poblaciones de subconjuntos de células T a modo de ejemplo, o las muestras de control pueden ser otras muestras de subpoblaciones de células T conocidas, tales como células Treg activadas, células Treg no activadas, células T intactas, células T de memoria, células NK, células TFh u otras poblaciones de células T). También se proporcionan métodos de determinación de si una célula Treg dada está activada, determinando su nivel de expresión de TIGIT con respecto a los niveles de expresión de TIGIT en una o más muestras de Treg activadas o inactivadas de control, o con respecto a valores de expresión de TIGIT 65 predeterminados en poblaciones de células Treg activadas o inactivadas conocidas. Se proporcionan además métodos para aislar de manera separada las Treg activadas de otras células T usando cualquiera de los métodos de

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