ES2643836T3 - Cámara desechable para analizar fluidos biológicos - Google Patents

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ES2643836T3 ES15178645.6T ES15178645T ES2643836T3 ES 2643836 T3 ES2643836 T3 ES 2643836T3 ES 15178645 T ES15178645 T ES 15178645T ES 2643836 T3 ES2643836 T3 ES 2643836T3
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Description

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DESCRIPCION
Camara desechable para analizar fluidos biologicos Antecedentes de la invencion
1. Campo tecnico
La presente invencion se refiere a camaras para analizar fluidos biologicos en general, y a camaras que permiten la iluminacion de material particulado dentro del fluido biologico en particular.
2. Informacion de los antecedentes
El metodo clasico de enumeracion de partfculas en un medio lfquido, tales como celulas sangumeas en sangre entera o bacterias u otro material en la orina u otro fluido biologico, es el hemocitometro, que incluye una camara fabricada con una altura precisa y que tiene areas ralladas y visibles de dimension precisa. El lfquido que contiene las partfculas que se van a enumerar se introduce en la camara. El lfquido se diluye en caso necesario para reducir el numero de partfculas hasta un numero que pueda manejarse. El operador cuenta entonces el numero de partfculas en un area demarcada y determinada. Ya que el area y la altura de la camara se conocen con precision, puede calcularse la cuenta de partfculas por volumen. Aunque estas camaras se controlan generalmente para delimitar un area conocida, esto no es necesario si tal camara se usa en un analizador de imagen. Con un analizador de imagen, las rallas en la camara son innecesarias ya que el campo de vision puede calcularse exactamente a partir de la imagen.
Ya que se fabrican con precision, las camaras del hemocitometro son relativamente caras y no se consideraban desechables. Las modernas tecnicas de moldeo de plastico de precision han permitido la fabricacion de algunos tipos de camaras de hemocitometro a suficiente bajo coste para considerarse desechables en algunos casos, pero las camaras que necesitan una precision sustancial y/o espesores menores que el tradicional 0,1 mm son muy diffciles de moldear con precision.
La patente de Estados Unidos con n° 4.950.455 describe una camara de conteo formada a partir de una placa de vidrio ngida y un cubreobjetos de vidrio ngido con partfculas ngidas, tales como perlas de vidrio, contenidas entremedias. Las perlas mantienen una fina separacion entre la placa y el cubreobjetos, formando por tanto la camara de conteo.
Una camara de conteo formada a partir de paneles superiores e inferiores, ngidos y separados por partfculas ngidas tiene limitaciones sustanciales, sin embargo. En referencia a las FIGS. 1 y 2, un conjunto de la tecnica anterior denotado generalmente con el numero 2 consiste en una placa 3 de vidrio inferior, un cubreobjetos 4 de vidrio superior y una capa atrapada formada a partir de una pluralidad de perlas 5. Ya que cualquier perla microscopica no es completamente uniforme, con un coeficiente de variacion del diametro de hasta el 10% o mas, las perlas 6 grandes “soportan” el cubreobjetos 4 hasta cierto punto, y las perlas 7 pequenas no tienen efecto en la separacion.
Las diferencias en el diametro de la perla son un problema ya que aunque es facil determinar y/o controlar el
diametro medio de las perlas, la extension de los diametros no se controla tan bien, convirtiendo el sistema en
menos preciso de lo deseado. Esto tiene como resultado una separacion entre las capas superior e inferior de aproximadamente el diametro medio de la perla mas una desviacion estandar. Un problema mayor es la presencia de residuos particulados tal como se muestra en la FIG. 2. Estos residuos pueden estar presentes cuando la camara se fabrica o pueden introducirse mediante el ambiente o a partir de una muestra. Los residuos 8 pueden “soportar” el cubreobjetos 4 y crear una gran area de volumen incrementado en la camara, lo que destruye su precision.
Otro problema con este tipo de camara de la tecnica anterior es que es diffcil empaquetar una pluralidad de tales
desechables en un instrumento usado para escanear y contar partfculas automaticamente, tal como un sistema de
analisis de imagen.
Otros ejemplos de esta tecnica anterior se muestran en los documentos US4264560, GB1049364 o US3447863. Lo que se necesita es un aparato y metodo para superar las limitaciones de la tecnica anterior, que proporcione una camara para analizar fluidos biologicos, incluyendo la enumeracion de material particulado dentro del fluido, que sea barato de producir, relativamente insensible a los residuos particulados atrapados, y dispuesto para empaquetarse para su uso en un sistema de ensayo automatizado.
Sumario de la invencion
De acuerdo con un primer aspecto de la presente invencion, se proporciona un aparato para analizar fluido biologico tal como se reivindica en la reivindicacion 1.
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En una realizacion el aparato comprende ademas:
un par de rodillos de presion, separados entre s^ por una cantidad que provoca que el primer miembro plano y el segundo miembro plano esten en contacto sustancialmente con todos los separadores cuando los miembros planos se extraen entre los rodillos de presion;
en el que la camara se forma corriente abajo de los rodillos de presion.
En algunas realizaciones preferentes, la al menos una camara incluye un puerto.
Preferentemente, al menos uno del primer miembro plano y el segundo miembro plano comprende plastico flexible. Ademas, preferentemente, tanto el primer miembro plano como el segundo miembro plano comprenden plastico flexible.
Preferentemente, los separadores son flexibles en relacion con el primer miembro plano y el segundo miembro plano.
Preferentemente, uno de los separadores, el primer miembro plano y el segundo miembro plano, tiene una mayor flexibilidad en relacion con al menos uno de los otros de los separadores, el primer miembro plano y el segundo miembro plano. Ademas, preferentemente, el primer miembro plano tiene una mayor flexibilidad que el segundo miembro plano y los separadores.
Preferentemente, los separadores se unen a al menos uno del primer miembro plano o el segundo miembro plano.
Preferentemente, al menos uno del primer miembro plano o el segundo miembro plano comprende elementos ngidos enlazados.
Preferentemente, uno del primer miembro plano o el segundo miembro plano comprende elementos ngidos enlazados y el otro del primer miembro plano o el segundo miembro plano comprende plastico flexible.
Preferentemente, los separadores incluyen perlas de plastico ligeramente compresibles y tenidas uniformemente.
Preferentemente, los separadores son proyecciones de altura uniforme unidas a al menos uno del primer miembro plano o el segundo miembro plano.
Preferentemente, uno del primer miembro plano o el segundo miembro plano comprende uno o mas puertos.
De acuerdo con una realizacion de la presente invencion, cada miembro plano es una cinta que puede enrollarse en un carrete. En algunas realizaciones, los miembros planos estan unidos inicialmente entre sf. En otras realizaciones, cada miembro plano esta separado inicialmente del otro miembro plano.
De acuerdo con una realizacion de la presente invencion, se proporciona un casete que tiene al menos un carrete fuente y al menos un carrete receptor. Los miembros planos se enrollan inicialmente en un carrete fuente, y se transfieren a un carrete receptor durante el funcionamiento del aparato. Una region de analisis esta dispuesta entre los carretes fuente y receptor. Los miembros planos pasan a traves de la region de analisis durante el funcionamiento del aparato.
La presente invencion se extiende a un metodo de enumeracion de constituyentes celulares o particulados de una muestra de sangre anticoagulada y entera, como se reivindica en la reivindicacion 14.
Preferentemente, el fluido biologico es sangre. El metodo comprende ademas preferentemente la etapa de calcular la altura de la camara midiendo la atenuacion promedia de luz transmitida a traves de los separadores.
Preferentemente, la etapa de determinar el volumen de fluido biologico contenido dentro de la pelfcula comprende ademas las etapas de: determinar el area de la pelfcula; y calcular el volumen de fluido biologico multiplicando la altura de la camara por el area de la pelfcula.
Preferentemente, el volumen de la pelfcula se calcula por formacion de imagenes interferometrica de la cafda de fluido biologico depositado sobre el miembro plano antes de aproximarse a los miembros planos.
Existen numerosas ventajas asociadas con la presente invencion. Se descubrio que si una camara de conteo se produce usando separadores dispuestos entre miembros planos, y si al menos uno de los miembros planos y separadores es flexible, la camara se comporta de manera diferente de los dispositivos de la tecnica anterior, y la diferencia es altamente ventajosa. Cuando una camara de conteo se llena con un lfquido, las fuerzas capilares tienden a unir los miembros planos superiores e inferiores, ejerciendo de esta manera una ligera presion en los separadores retenidos. Esta presion provocara que el elemento flexible se deforme de tal manera que provoque que el espesor de la camara se aproxime, de media, a la dimension media de los separadores dispuestos entre los
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miembros pianos. Por ejemplo, si tanto los miembros pianos superiores como inferiores son ngidos y los separadores son flexibles, se comprimiran unos separadores mayores que el diametro medio, y los miembros pianos se aproximaran hasta que mas y mas separadores entren en contacto con los miembros planos, evitando una aproximacion adicional. En ese punto, la altura de la camara se aproxima a la altura media de los separadores y es facilmente comprobable, siempre que la desviacion estandar de las alturas de los separadores sea aceptable y los separadores sean suficientemente flexibles. En otro ejemplo, si los separadores son ngidos y el miembro plano superior es flexible, el miembro plano superior se deformara y “se elevara como una tienda de campana” en una pequena area alrededor de cada uno de los separadores grandes y sera menor sobre los separadores pequenos. La camara tendra una altura media que se aproximara de cerca a la altura media del separador.
Una ventaja de la presente invencion es, por tanto, que una camara se forma con un volumen que puede determinarse con precision ya que la altura de la camara es sustancialmente uniforme.
Otra ventaja de la presente invencion es que puede fabricarse de manera barata y aun asf proporcionar la precision deseada. La presente invencion no requiere huecos o separadores mecanizados con precision para establecer con precision el volumen. Por consiguiente, la invencion puede fabricarse de manera barata y aun asf proporcionar la precision deseada. Ademas, ya que puede fabricarse de manera barata, la presente invencion puede ofrecerse practicamente en un formato desechable.
Estos y otros objetos, rasgos y ventajas de la presente invencion seran aparentes a la luz de la descripcion detallada de la invencion proporcionada a continuacion, y tal como se ilustra en los dibujos adjuntos.
Breve descripcion de los dibujos
Los principios de la invencion se aclaran adicionalmente en referencia a las siguientes figuras, donde:
la FIG. 1 es un esquema en seccion transversal de la invencion de la tecnica anterior, que usa un sistema en el que todos los elementos son ngidos;
la FIG. 2 es un esquema en seccion transversal de la invencion de la tecnica anterior, que usa un sistema en el que todos los elementos son ngidos, y donde los residuos particulados se han atrapado;
la FIG. 3 es un esquema en seccion transversal de la presente invencion, donde los separadores son flexibles en relacion con los miembros planos superiores e inferiores;
la FIG. 4 es un esquema en seccion transversal de la presente invencion, donde el miembro plano superior es flexible en relacion con todos los otros elementos;
la FIG. 5 es un esquema en seccion transversal de la presente invencion, donde el miembro plano superior es flexible en relacion con todos los otros elementos y donde los residuos particulados se han atrapado; la FIG. 6 es una vista esquematica de una primera realizacion de la presente invencion;
la FIG. 6A es una vista esquematica de un instrumento disenado para utilizar una segunda realizacion de la presente invencion;
la FIG. 7 es una vista esquematica de un casete que contiene la primera realizacion de la presente invencion; la FIG. 8 es una vista esquematica de un instrumento disenado para utilizar una realizacion de la presente invencion;
la FIG. 9 es una vista esquematica del instrumento de la FIG. 6 donde la muestra se ha anadido al miembro plano;
la FIG. 10 es una vista esquematica de la muestra tras extenderla entre los miembros planos; y la FIG. 11 es una vista esquematica del campo de analisis.
Descripcion detallada de la invencion
En referencia a las Figuras 3-11, el aparato 10 de la presente invencion para analizar fluido biologico incluye un primer miembro plano 12, un segundo miembro plano 14, y al menos tres separadores 16. Al menos uno de los miembros planos 12, 14 es transparente. Los separadores 16 estan dispuestos entre los miembros 12, 14 y separan los miembros planos 12, 14 para formar una camara 18 con una altura 20. Al menos uno de los miembros 12, 14 o separadores 16 es suficientemente flexible para permitir que la altura de la camara entre los miembros 12, 14 se aproxime a la altura media de los separadores 16.
Los separadores 16 pueden tener cualquier estructura que puede estar dispuesta entre los miembros planos 12, 14, que pueda hacerse funcionar para separar los miembros planos 12, 14 entre sf. La dimension de un separador 16 que se extiende entre los miembros planos se denomina en el presente documento altura 22 del separador 16. Las alturas 22 de los separadores 16 normalmente no son iguales entre sf exactamente, sino que entran dentro de una tolerancia comercialmente aceptable para medios de separacion usados en aparatos de analisis similares. Las perlas esfericas son un ejemplo de un separador 16 aceptable y comercialmente disponible gracias a, por ejemplo, Bangs Laboratories de Fishers, Indiana, Estados Unidos.
En algunas realizaciones, los separadores 16 consisten en un material que tiene una mayor flexibilidad que uno o ambos del primer miembro plano 12 y el segundo miembro plano 14; es decir, en terminos relativos, uno o ambos de
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los miembros pianos 12, 14 pueden considerarse ngidos en relacion con los separadores 16 y los separadores 16 pueden considerarse flexibles en relacion con uno o ambos de los miembros planos 12, 14.
En otras realizaciones, los separadores 16 consisten en un material que tiene menos flexibilidad que uno o ambos del primer miembro plano 12 y el segundo miembro plano 14; es decir, en terminos relativos, uno o ambos de los miembros planos 12, 14 pueden considerarse flexibles en relacion con los separadores 16 y los separadores 16 pueden considerarse ngidos en relacion con uno o ambos de los miembros planos 12, 14.
Sujetos a las caractensticas de flexibilidad descritas anteriormente, los miembros planos 12, 14 pueden fabricarse a partir de una variedad de materiales, siempre que al menos uno de los miembros planos 12, 14 sea transparente. Las pelmulas de plastico transparentes que consisten en acnlico o poliestireno son ejemplos de miembros planos 12, 14 aceptables. Los miembros planos 12, 14 con la forma de una cinta son particularmente utiles ya que pueden enrollarse facilmente en un carrete.
Ahora, en referencia a la FIG. 3, en una realizacion de la presente invencion 10, el primer miembro plano 12 y el segundo miembro plano 14 estan separados mediante una camara 18 formada mediante una pluralidad de separadores 16 en la forma de perlas esfericas. Estas perlas 16 se forman a partir de un material que tiene una mayor flexibilidad que el primer miembro plano 12 y el segundo miembro plano 14; es decir, los miembros planos 12, 14 pueden considerarse ngidos en relacion con las perlas 16 y las perlas 16 pueden considerarse flexibles en relacion con los miembros planos 12, 14. Pueden usarse perlas 16 de plastico formadas a partir de poliestireno, policarbonato, silicona y similares. En este ejemplo, las perlas 16A grandes se comprimen hasta el punto donde los miembros planos 12, 14 se aproximan al punto donde la mayona de perlas 16 estan tocando las superficies interiores 24 de los miembros planos 12, 14, haciendo por tanto que la altura 20 de la camara sea ligeramente menor que el diametro medio de la perla.
En la FIG. 4, en otra realizacion de la presente invencion 10, el primer miembro plano 12 se forma a partir de un material mas flexible que las perlas 16 esfericas y el segundo miembro plano 14, y cubrira las perlas 16 de teja a modo de tienda de campana, donde las areas entre las perlas 16 son de una altura algo arbitraria determinada mediante los diametros de perla que soportan esa pieza del miembro plano 12. Cualquier pelmula de plastico transparente, tal como acnlica, de poliestireno o similar funcionara siempre que sea lo suficientemente fina para flexionarse tal como se muestra. Debena ser aparente que en esta circunstancia, aunque las pequenas areas locales se desviaran de la altura 20 deseada de la camara, la altura media de todas las areas con forma de tienda de campana estara muy cerca de la del diametro medio de la perla. Los ensayos indican que la altura media de la camara puede controlarse hasta un 1 % o mejor en alturas de la camara de menos de cuatro micrometros usando la presente invencion.
La FIG. 5 muestra la camara 18 de la FIG. 4, en la que se ha alojado una pieza de residuo 26 particulado. El primer miembro plano 12 sobre el residuo 26 ha adquirido la forma de una tienda de campana, y el area bajo el residuo 26 es de altura desconocida, pero esta perturbacion solo afecta a una pequena area de la camara 18, en comparacion con lo que ocurrina si todo el sistema fuera ngido.
La FIG. 6 muestra otra realizacion de la invencion 10, donde el segundo miembro plano 14 se forma a partir de una tira de 2,5 cm de ancho de pelmula de plastico transparente (por ejemplo, tereftalato de polietileno (PET)) de aproximadamente cincuenta (50) micrometros de espesor, el primer miembro plano 12 se forma a partir del mismo material que el segundo miembro plano 14 pero con un espesor de veintitres (23) micrometros, y la camara 18 entremedias se forma a partir de una pluralidad de perlas 16 de plastico con un diametro medio de cuatro (4) micrometros. El primer miembro plano 12 tiene un revestimiento interior de un agente de coloracion, tal como naranja de acridina, que coloreara de manera diferente las celulas sangumeas blancas cuando se examinen con iluminacion fluorescente. Otros reactivos para la fluorescencia incluyen astrozone naranja, FITC, rodamina y similares. Los reactivos que pueden usarse con luz transmitida para colorear de manera diferente las celulas sangumeas blancas incluyen astrozone naranja, azul de metileno, oxacina170. El primer miembro plano 12 incluye una pluralidad de puertos 28 (por ejemplo, aproximadamente trescientos (300) micrometros de diametro) punzonados a intervalos regulares, y los miembros planos 12, 14 se unen en algunos puntos 29 entre los puertos 28 para formar una serie de camaras 18 de analisis separadas.
Esta separacion entre los dos miembros planos 12, 14 en esta realizacion se logra mediante perlas 16 esfericas de diametro conocido y controlado con precision (por ejemplo, aproximadamente cuatro (4) micrometros de diametro).
Estas perlas 16 se distribuyen aleatoriamente en al menos uno de los miembros planos 12, 14 y pueden unirse como parte de la pelmula reactiva que contiene el material de coloracion. El material que retiene las perlas 16 debena ser tal que estas permanezcan fijas al miembro plano 12, 14 hasta al menos despues de que el movimiento de la pelmula fluida haya cesado para que no las arrastre. Un metodo aceptable de revestimiento de una pelmula con perlas 16 es suspender las perlas 16 en una solucion de aproximadamente 0,5 % de fitagel y aplicar un revestimiento fino de la suspension mediante pulverizacion o revestimiento de menisco. La concentracion optima de perlas 16 dependera del tipo de perla y su metodo de fabricacion, asf como de la rigidez relativa y de los miembros planos 12, 14 superiores e inferiores. Esta concentracion puede determinarse empmcamente en una base de lote a
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lote aplicando una serie de concentraciones de perla en los miembros pianos 12, 14 que se van a usar y despues anadiendo un lfquido que contiene un colorante, tal como hemoglobina, que aportara una densidad optica util en el espesor de la capa de lfquido usado. La densidad optica media de la capa de lfquido se representa entonces en funcion de la densidad de la perla 16 para determinar el punto donde la concentracion adicional de la perla no produce un cambio util en el espesor de la capa de lfquido; es decir, el punto donde la altura 20 de la camara es sustancialmente uniforme. Un medio alternativo de proporcionar los separadores es estampar negativamente uno de los miembros planos 12, 14 con proyecciones que tienen aproximadamente la misma altura de aproximadamente cuatro (4) micrometros, por ejemplo, grabando con laser marcas en un rodillo de presion y haciendo pasar un miembro plano 12, 14 a traves del conjunto de rodillo de presion.
La FIG. 7 muestra un casete 30 que tiene una cubierta 32 en la que estan dispuestos un carrete fuente 34, un carrete receptor 36 y una cinta 38 que se extiende entremedias. La “cinta 38” es la realizacion de la presente invencion mostrada en la FIG. 6 y descrita anteriormente. Inicialmente, la cinta 38 se enrolla en el carrete fuente 34. El avance de la cinta 38 se controla mediante los rodillos 40, que aplican traccion a la cintra 38 en un punto remoto del area de examinacion 42 y pueden actuar para extraer la cinta 38 del carrete fuente 34 segun sea necesario. El casete 30 tiene un orificio pasante que permite que un sistema optico proporcione iluminacion a traves de la cinta 38.
La FIG. 8 muestra un sistema 44 de analisis optico que contiene el casete 32. El sistema 44 de analisis optico consiste en componentes unidos que incluyen una lente 46, una fuente 48 de luz de longitud de onda variable y una camara CCD 50 que pueden moverse en tres dimensiones para permitir que el sistema 44 optico se enfoque sobre la cinta 38 en el area de examinacion 42 y proporcionar un movimiento X-Y para permitir el escaneo de toda el area de examinacion 42, bajo el control de un ordenador 52 de sistema. No se muestra la sonda de muestreo para extraer un fluido biologico (por ejemplo, sangre) a partir de un tubo de muestreo y depositar una pequena gota en la cinta 38. Este dispositivo de muestreo puede tener la forma de una sonda de perforacion de tubo o similar, que usa una jeringuilla de progresion accionada a motor para extraer y depositar las muestras de fluido biologico. Estos dispositivos se emplean ampliamente y son bien conocidos en la tecnica y, por tanto, no se describiran en mas detalle en este documento.
La FIG. 9 muestra el conjunto de la FIG. 8 justo despues de haber depositado una gota de fluido biologico 54 (por ejemplo, sangre) en el puerto 28 de entrada de muestras (vease la FIG. 6) de una camara 18 formada entre los miembros planos 12, 14.
La FIG. 10 es una vista esquematica de toda el area de la pelmula 64 de muestreo del fluido biologico 34, que generalmente tiene un borde irregular. En este ejemplo, el fluido biologico es sangre. Ya que las celulas sangumeas blancas dentro de la pelmula 64 de muestreo tienden a atraparse de inmediato en la camara 18, se encuentran generalmente en una mayor concentracion dentro de unos pocos milfmetros del puerto 28.
La FIG. 11 es una vista esquematica del campo de analisis 66 en la FIG. 10, que, en el caso de una muestra de sangre entera, mostrana las celulas 56 sangumeas rojas, las celulas 58 sangumeas blancas, y las plaquetas 60, todo rodeado mediante el plasma sangumeo 62. Las perlas 16 tambien se ven pero se distinguen de inmediato de todos los otros elementos debido a su tamano e mdice de refraccion.
La caracterizacion de las celulas 58 sangumeas blancas (conteo diferencial de las celulas sangumeas blancas) se realiza mediante la clasificacion de cada celula 58 sangumea blanca e individual tal como se encuentra usando metodos de procesamiento de imagen tradicionales o mediante la tecnica descrita en la patente de Estados Unidos con n° 5.321.975 y 6.350.613. Un numero de tinciones supravitales que colorean de manera diferente las diferentes clases de celulas 58 sangumeas blancas tal como se han descrito en la patente de Estados Unidos con n° 6.235.536. Ya que las celulas 58 sangumeas blancas se comprimen ligeramente y su imagen se forma de inmediato, el tecnologo puede visualizar las imagenes almacenadas de celulas en el caso de clasificaciones de celulas cuestionables.
Como un ejemplo de la utilidad de esta invencion, el conteo de celulas 58 sangumeas blancas de la pelmula 64 de muestreo puede realizarse enumerando todas las celulas 58 sangumeas blancas encontradas dentro de la pelmula 64 de muestreo y dividiendo ese numero por el volumen de la pelmula 64 de muestreo. Aunque es posible depositar una cantidad espedfica de la muestra dentro de la camara 18, es preferible depositar una cantidad aproximada y medir indirectamente el volumen. Esto puede realizarse mediante mecanismos tales como: 1) el volumen de la gota de muestreo al depositarse puede calcularse mediante formacion de imagenes por interferometna usando tecnicas opticas disponibles a partir de fuentes tales como Zygo Corporation de Middlefield, Connecticut, Estados Unidos; o 2) el volumen de la muestra despues de la formacion de la pelmula se calcula midiendo el area de la pelmula 64 y multiplicado esto por la altura media de la pelmula.
La FIG. 6A muestra un sistema 44 de analisis optico que contiene otra realizacion de la presente invencion 10 que incluye un casete 30 con un carrete 68 del segundo miembro plano, un carrete 70 del primer miembro plano y un carrete receptor 72. El avance de los miembros planos 12, 14 se controla mediante los rodillos de presion 74 receptores, que aplican traccion a los miembros planos 12, 14 combinados en un punto remoto del area de examinacion 42 y pueden actuar para extraer los miembros planos 12, 14 de sus carretes 68, 70 segun sea
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necesario. El sistema 44 de analisis optico consiste en componentes unidos que incluyen una lente 46, una fuente 48 de luz de longitud de onda variable y una camara CCD 50 que pueden moverse en tres dimensiones para permitir que el sistema 44 de analisis optico se enfoque sobre los miembros planos 12, 14 unidos en el area de examinacion 42 y proporcionar un movimiento X-Y para permitir el escaneo de toda el area de examinacion 42, bajo el control de un ordenador 52 de sistema. Una gota de fluido biologico 54 (por ejemplo, sangre) se muestra depositada sobre el segundo miembro plano 14. Los rodillos de presion 74 pueden funcionar para hacer avanzar los miembros planos 12, 14 hasta un punto justo mas alla de los rodillos de presion 74, donde los separadores 16 dispuestos entre los miembros planos 12, 14 estan en contacto con cada miembro plano 12, 14 y el fluido biologico contacta con la superficie interior 24 de cada miembro plano 12, 14 y se extiende para formar una pelfcula 64 fina de muestreo. Los miembros planos 12, 14 se hacen avanzar entonces para que pueda leerlos el sistema 44 de analisis optico.
Ya que toda la precision del sistema 44 cuando se usa un metodo de calculo de volumen depende de la precision de la altura 20 de la camara, puede ser conveniente usar un medio estandar interno para calcular la altura 20 exacta de la camara. Un ejemplo de un estandar interno incluye un material flexible o fluido que no puede mezclarse con la muestra y que contiene una concentracion conocida, estable y uniforme de un colorante optico adecuado. El material pueden ser perlas flexibles y tenidas, aceite tenido o similar, y puede estar presente en una o mas areas de la camara 18. Ya que la densidad optica esta en proporcion directa con el espesor del material calibrador, la medicion de la densidad optica de la parte del material calibrador que llena completamente la altura 20 de la camara permitira el calculo de la altura 20 exacta de la camara dentro de las capacidades de precision del sistema optico.
Aunque el uso mas frecuente para tal camara 18 sera la enumeracion de celulas sangumeas en sangre entera, es igualmente util para la examinacion de cualquier fluido sin diluir que tenga suficientes partfculas para contar. La altura 20 de la camara no se limita a los cuatro micrometros divulgados, sino que puede ser mayor o menor para alojar diferentes tamanos y/o concentraciones del separador.
Aunque la presente invencion se ha mostrado y descrito con respecto a las realizaciones detalladas de la misma, los expertos en la materia entenderan que pueden realizarse diversos cambios en la forma y detalle de la misma sin apartarse del alcance de la invencion, que se define por las siguientes reivindicaciones.

Claims (14)

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    REIVINDICACIONES
    1. Un aparato (10) para analizar fluido biologico, que comprende:
    una cinta (38) que incluye un primer miembro plano (12) y un segundo miembro plano (14), separados entre s^ y unidos entre s^ en puntos discretos, en el que al menos uno del primer miembro plano (12) y el segundo miembro plano (14) es transparente, y al menos una camara (18) con una altura (20) se forma entre los miembros planos (12, 14), caracterizado por que
    al menos tres separadores (16) estan dispuestos en cada una de la al menos una camara (18), y en el que al menos uno del primer miembro plano (12), el segundo miembro plano (14), o los separadores (16) es flexible para permitir que la altura (20) de la camara sea sustancialmente uniforme; un carrete fuente (34) en el que se enrolla la cinta (38); y un carrete receptor (36) en el que se enrolla la cinta (38).
  2. 2. El aparato (10) de la reivindicacion 1, en el que la al menos una camara (18) incluye un puerto (28).
  3. 3. El aparato (10) de cualquier reivindicacion anterior, en el que uno de los separadores (16), el primer miembro plano (12) y el segundo miembro plano (14), tiene una flexibilidad mayor en relacion con al menos uno de los otros de los separadores (16), el primer miembro plano (12) y el segundo miembro plano (14).
  4. 4. El aparato (10) de la reivindicacion 3, en el que el primer miembro plano (12) tiene una mayor flexibilidad que el segundo miembro plano (14) y los separadores (16).
  5. 5. El aparato (10) de cualquier reivindicacion anterior, en el que al menos uno del primer miembro plano (12) y el segundo miembro plano (14) comprende plastico flexible.
  6. 6. El aparato (10) de la reivindicacion 5, en el que ambos del primer miembro plano (12) y el segundo miembro plano (14) comprenden plastico flexible.
  7. 7. El aparato (10) de cualquier reivindicacion anterior, en el que los separadores (16) se unen al menos a uno del primer miembro plano (12) o el segundo miembro plano (14).
  8. 8. El aparato (10) de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que uno del primer miembro plano (12) o el segundo miembro plano (14) comprende elementos ngidos enlazados y el otro del primer miembro plano (12) o el segundo miembro plano (14) comprende plastico flexible.
  9. 9. El aparato (10) de cualquier reivindicacion anterior, en el que los separadores (16) incluyen perlas de plastico tenidas uniformemente y ligeramente compresibles.
  10. 10. El aparato (10) de cualquier reivindicacion anterior, que comprende ademas:
    un par de rodillos de presion (40), separados entre sf por una cantidad que provoca que el primer miembro plano (12) y el segundo miembro plano (14) esten en contacto sustancialmente con todos los separadores (16) cuando los miembros planos (12, 14) se extraen entre los rodillos de presion (40); en el que la camara (18) se forma corriente abajo de los rodillos de presion (40).
  11. 11. El aparato (10) de la reivindicacion 10, en el que uno de los separadores (16), el primer miembro plano (12) y el segundo miembro plano (14), tiene una flexibilidad mayor en relacion con al menos uno de los otros de los separadores (16), el primer miembro plano (12) y el segundo miembro plano (14).
  12. 12. El aparato (10) de la reivindicacion 11, en el que el primer miembro plano (12) tiene una mayor flexibilidad que el segundo miembro plano (14) y los separadores (16).
  13. 13. El aparato (10) de la reivindicacion 10, en el que uno del primer miembro plano (12) o el segundo miembro plano (14) comprende elementos ngidos enlazados y el otro del primer miembro plano (12) o el segundo miembro plano (14) comprende plastico flexible.
  14. 14. Un metodo para enumerar los constituyentes celulares o particulados de una muestra de sangre anticoagulada y entera, que comprende las etapas de:
    proporcionar una cinta (38) que incluye un primer miembro plano (12) y un segundo miembro plano (14), separados entre sf y unidos entre sf en puntos discretos, en el que al menos uno del primer miembro plano (12) y el segundo miembro plano (14) es transparente, y al menos una camara (18) con una altura (20) se forma entre los miembros planos (12, 14), y al menos tres separadores (16) estan dispuestos en cada una de la al menos una camara (18), y en el que al menos uno del primer miembro plano (12), el segundo miembro plano (14), o los separadores (16) es flexible para permitir que la altura (20) de la camara sea sustancialmente uniforme, un
    carrete fuente (34) en el que se enrolla la cinta (38), y un carrete receptor (36) en el que se enrolla la cinta (38); depositar una cantidad de fluido biologico (54) en la al menos una camara (18);
    determinar el volumen del fluido biologico (54) contenido dentro de al menos una porcion de la al menos una camara (18);
    5 enumerar directa o indirectamente todos los constituyentes de interes dentro de sustancialmente el volumen de
    fluido biologico (54); y
    expresar los constituyentes enumerados como un volumen de cuenta por unidad.
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