ES2651442T3 - Esteroides C-19 para inhibir la neovascularización - Google Patents

Abstract

Un compuesto definido por la fórmula 1**Fórmula** En donde a, b y c respectivamente indican, independientemente unos de los otros, un enlace sencillo o un doble enlace, con la condición de que al menos uno de a, b y c representa un doble enlace, y con la condición de que si a es un enlace sencillo y b es un doble enlace, R2 no es H; R1 es o bien hidrógeno o alquilo C1 a C6; R2 es o bien OR5 o hidrógeno, en donde R5 es hidrógeno o alquilo de cadena lineal o ramificada C1 a C12; R3 es, en el caso de que c sea un enlace sencillo, o bien hidrógeno o alquilo C1 a C6, o en caso de que c sea un doble enlace, CHR5, en donde R5 es lo mismo que se define antes; R4 es hidrógeno, alquilo C1 a C12, fenilo no sustituido o sustituido por un grupo alquilo C1 a C12 o acilo COR6; siendo R6 hidrógeno, alquilo de cadena lineal o ramificada C1 a C12, fenilo o benzoilo, respectivamente no sustituido o sustituido por alquilo C1 a C12, o cualquier grupo que lleve a hidroxilo tras la metabolización biológica o desprotección química, particularmente un éster, éter, acetal, carbonato, carbamato, fosfato, fosfonato, cetal, sulfato o sulfonato; y sales de los mismos, Para usar en un tratamiento médico como inhibidor de la angiogénesis, en donde dicho compuesto es 4- hidroxitestosterona o sus sales o ésteres.

Description

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DESCRIPCION

Esteroides C-19 para inhibir la neovascularizacion Campo de la invencion

La presente invencion se refiere al campo de la medicina, particularmente a nuevos usos de compuestos esteroideos C-19, mas particularmente a esteroides C-19 que tienen una estructura androsten-3-ona con configuraciones estructurales especificas, en particular en la posicion 4 y/o 17, para la inhibicion de la neovascularizacion, angiogenesis y mas usos. La presente invencion se refiere particularmente a esteroides C-19 seleccionados que inhiben la proliferacion y/o migracion de celulas endoteliales y/o de celulas musculares lisas en el tratamiento de enfermedades que implican una neovascularizacion patologica y/o procesos regenerativos excesivos que estan asociados por ejemplo con tumores o procesos inflamatorios. Ademas, la presente invencion se refiere a la reduccion de la sintesis o expresion, especialmente bajo situaciones terapeuticas de inflamacion y/o cancer y procesos relacionados de tejidos asociados, de factores de crecimiento o receptores de factor de crecimiento relevantes en la proliferacion, cancer y/o inflamacion, seleccionados del grupo que consiste en factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), receptor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFR) y factores de crecimiento relacionados funcionalmente, principalmente el receptor del factor de crecimiento de fibroblastos 13 (FGFR 13), receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR) a y/o p, receptor del factor de crecimiento de mastocitos/celulas madre (SCFR; tambien conocido como c-Kit o kit de tirosina-proteina quinasa o CD117).

Descripcion de los antecedentes de la tecnica

La angiogenesis es un proceso fisiologico de la vascularizacion tisular que implica el crecimiento de nuevos vasos sanguineos en un tejido donde se los necesita. Por ejemplo, en un proceso de carencia de oxigeno como seria de forma similar el caso despues de la formacion de una herida, se piensa que las celulas liberan factores angiogenicos induciendo asi el crecimiento de nuevos vasos. Por ejemplo, el factor de crecimiento endotelial vascular se percibe como el factor mas importante que induce la proliferacion de las celulas endoteliales, las celulas que forman los vasos, llevando a la vascularizacion.

Sin embargo, este proceso fisiologico podria desregularse en varios procesos patologicos, llevando a una excesiva e innecesaria o incluso danina formacion de nuevo vasos, que tambien se denomina como neovascularizacion. Por un lado, este proceso de neovascularizacion en si mismo provocaria una enfermedad o proceso patologico, por ejemplo, en caso de excesiva formacion de cicatriz o glaucoma neovascular. Por otro lado, la neovascularizacion promueve la progresion de ciertas enfermedades ya que esta por ejemplo se desencadena por varios tumores solidos, por ejemplo cancer de mama, cancer de prostata o linfomas como linfomas de Hodgkin o no de Hodgkin, o tumores no solidos como mieloma multiple.

Como la angiogenesis o neovascularizacion es una marca distintiva de los tumores, es una idea en la terapia anti- cancerigena inhibir la formacion de nuevos vasos y asi “matar de hambre” al tumor. Se han desarrollado varios nuevos compuestos que tienen como objetivo el bloqueo de la proliferacion y migracion de las celulas endoteliales. Por ejemplo, un anticuerpo monoclonal contra VEGF -bevacizumab (Avastin) - se usa con exito en pacientes con diversos tumores para evitar la metastasis y para reducir los tumores.

Ademas de los anticuerpos que bloquean VEGF y su receptor VEGFR se usan ampliamente pequenas moleculas como inhibidores de tirosina quinasa (TKI como Sunitinib y farmacos de 2s generacion Dovitinib = TKi 258) que se resumen en revisiones por Mukherji et al. o Heidegger et al. en el contexto de cancer de prostata (Mukherji D, Temraz S, Wehbe D, Shamseddine A: Angiogenesis and anti-angiogenic therapy in prostate cancer. Critical Reviews in Oncology/Hematology 87 (2013) 122-131; Heidegger I, Massoner P, Eder IE, Pircher A, Pichler R, Aigner F, Bektic J, Horninger W, Klocker H: Novel therapeutic approaches for the treatment of castration-resistant prostate cancer. Journal of Steroid Biochemistry & Molecular Biology 138 (2013) 248-256).

Sin embargo, la ingesta de bevacizumab o inhibidores de pequenas moleculas puede estar acompanada de varios efectos secundarios serios y/o menos serios; ademas, el desarrollo de resistencia al farmaco se observa de forma regular en el contexto clinico durante el curso del tratamiento. Por tanto, hay una necesidad de nuevas moleculas diana para la terapia anti-angiogenica, estando la terapia asociada con menos efectos secundarios.

Recientemente, las hormonas esteroideas se han evaluado de forma controvertida por su efecto en la angiogenesis. Por ejemplo, Frank-Lissbrant y colegas describieron la rapida neovascularizacion en el lobulo de la prostata ventral de rata de ratas castradas despues de repetidas dosis subcutaneas de testosterona. (Frank-Lissbrant I, Haggstrom S, Damber JE, Bergh A: Testosterone stimulates angiogenesis and vascular regrowth in the ventral prostate in castrated adult rats. Endocrinology 1998; 139(2):451-6).

Ademas, Liao et al. describieron un efecto de la testosterona para promover la migracion de celulas endoteliales vasculares de celulas endoteliales umbilicales humanas cultivadas (HUVEC) (Liao W, Huang W, Guo Y, Xin M, Fu X: Testosterone promotes vascular endothelial cell migration via upregulation of ROCK-2/moesin cascade. Mol Biol Rep (2013) 40:6729-6735).

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Un papel de la testosterona en la regulacion de la funcion endotelial y que juega un papel en el desarrollo y maduracion de las celulas madre endoteliales en el contexto de la fisiologia erectil se sugiere tambien en una revision de Traish y Galoosian (Traish AM, Galoosian A: Androgens modulate endothelial function and endothelial progenitor cells in erectile physiology. Korean J Urol 2013; 54:721-731).

Eisermann et al. presento que el analogo de androgeno R1881 induce la expresion de VEGF en las lineas celulares del cancer de prostata, llevando asi probablemente a la angiogenesis inducida por VEGF (Eisermann K, Broderick, CJ, Bazarov A, Moazam MM, Fraizer GC: Androgen up-regulates vascular endothelial growth factor expression in prostate cancer cells via an Sp1 binding site. Molecular Cancer 2013, 12:7).

En contraste con eso, Chao et al. describio los efectos anti-angiogenicos de SR16388, un esteroide sintetico con propiedades de union al receptor ER alfa y ER beta (Chao WR, Amin K, Shi Y, Hobbs P, Tanabe M, Tanga M, Jong L, Collins N, Peters R, Laderoute K, Dinh D, Yean D, Hou C, Sato B, Alt C, Sambucetti L.: SR16388: a steroidal antiangiogenic agent with potent inhibitory effect on tumor growth in vivo. Angiogenesis. Marzo de 2011; 14(1 ):1-16).

Los efectos impredecibles en la angiogenesis se ven ademas con otros androgenos bien conocidos, que mientras tanto o bien todos se han excluido del mercado o se han retirado debido a sus efectos secundarios. Thomas et al. describio que Danazol (17a-etinil-17p-hidroxiandrost-4-eno [2,3-o(|isoxazol) inhibe ciertas funciones celulares endoteliales tales como la proliferacion y la formacion de tubos pero carece de la inhibicion de la etapa critica de la invasion en el tejido (Thomas GW, Rael LT, Shimonkevitz R, Curtis CG, Bar-Or R, Bar-Or D: Effects of danazol on endothelial cell function and angiogenesis. Fertil Steril. Octubre de 2007; 88 (4 Supl.):1065-70). Debido a sus propiedades androgenicas (virilizacion, aumento de testosterona libre a pesar de la inhibicion de la sintesis de testosterona) y su perfil desfavorable se retiro del mercado.

La nandrolona, 17p-hidroxiestr-4-en-3-ona, tambien un farmaco anabolico bien conocido, ejerce ciertas propiedades antiproliferativas en las celulas HUVEC (D’Ascenzo S, Millimaggi D, Di Massimo C, Saccani-Jotti G, Botre F, Carta G, Tozzi-Ciancarelli MG, Pavan A, Dolo V.: Detrimental effects of anabolic steroids on human endothelial cells. Toxicol Lett. 8 de marzo de 2007; 169 (2):129-36).

Sin embargo, se desconoce, si esto se traduce en la inhibicion de la angiogenesis ya que en un modelo animal de esclerosis lateral amiotrofica se observo que la nandrolona aumenta la formacion de TGF-beta, que se conoce por estimular la expresion de uno de los factores angiogenicos mas potentes, es decir, VEGF (Galbiati M, Onesto E, Zito A, Crippa V, Rusmini P, Mariotti R, Bentivoglio M, Bendotti C, Poletti A. El esteroide anabolico/androgenico nandrolona exacerba las modificaciones de expresion genica inducidas por el SOD1 mutante en los musculos de modelos de raton de esclerosis lateral amiotrofica. Pharmacol Res. Febrero de 2012; 65(2):221-30). Por el contrario, la nandrolona reduce los niveles de VEGF en los musculos de ratas que se ejercitan (Paschoal M, de Cassia Marqueti R, Perez S, Selistre-de-Araujo HS. Nandrolone inhibits VEGF mRNA en rat muscle. Int J Sports Med. Noviembre de 2009; 30(11):775-8).

El estanazolol (17a-metil-5a-androstano[3,2-c]pirazol-17p-ol) aumenta la expresion de TGF beta 1, que se conoce por aumentar la produccion del factor angiogenico mas potente VEGF (Cao Y, Townsend CM, Ko T: Transforming growth factor-beta (TGF-beta) induces vascular endothelial growth factor (VEGF) and plasminogen activator inhibitor- 1 (PAI-1) gene expression through Smad3 transcription factor. ACS, 2005 Volumen 201, Tema 3, Supl. 17-18).

Ademas, Thorpe et al. mostro que el cortisol unido a hidrazida adipica de heparina (HAH) representaria nuevos inhibidores de angiogenesis para el tratamiento de cancer y otras enfermedades angiogenicas (Thorpe PE, Derbyshire EJ, Andrade SP, Press N, Knowles PP, King S, Watson GJ, Yang YC, Rao-Bette M.: Heparin-steroid conjugates: new angiogenesis inhibitors with antitumor activity in mice. Cancer Res. 1 de Julio de 1993; 53(13):3000- 7).

A la luz de las diversas moleculas diana potenciales de hormonas esteroideas, por ejemplo los receptores o enzimas de hormonas esteroideas, se hace evidente que el resultado de una interaccion de una celula o tejido definido con esteroides definidos es diferente del genero a genero, del tejido a tejido y el patron especifico de los receptores esteroideos disponibles y activos. La respuesta biologica especifica a las hormonas esteroideas esta influida por (i) diferencias en el patron de expresion de por ejemplo receptores de hormonas esteroideas, (ii) la expresion de enzimas y (iii) diferencias en la expresion de co-factores (co-activadores o co-represores) del receptor que modulan la respuesta del receptor y (iv) la presencia de esteroides en el cultivo celular, organo o tejido. La prediccion de una respuesta biologica hacia un esteroide natural o analogo sintetico parece dificil; en base a la bibliografia disponible el experto puede incluso predecir que los compuestos tipo testosterona pueden inducir la angiogenesis.

Hay una necesidad, y por tanto es un objetivo de la presente invencion, proporcionar un inhibidor de angiogenesis efectivo, que sea capaz de inhibir la proliferacion y/o migracion de celulas endoteliales y/o musculares lisas y/o reducir la sintesis o expresion de VEGF y/o de VEGFR, inhibiendo por tanto la neovascularizacion en enfermedades que implican procesos regenerativos excesivos, es decir, procesos que se dan en diversas enfermedades.

Estos objetivos ademas de otros, que seran evidentes desde la siguiente descripcion de la presente invencion, se consiguen mediante el contenido de las reivindicaciones independientes. Algunas de las realizaciones preferidas de la presente invencion se definen por el contenido de las reivindicaciones dependientes.

Compendio de la invencion

5 Diversos aspectos, caracteristicas ventajosas y realizaciones preferidas de la presente invencion como se resumen en los siguientes puntos, respectivamente solos o en combinacion, contribuyen a resolver el objeto de la invencion.

1. Un compuesto definido por la formula 1

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En donde a, b y c respectivamente indican, independientemente los unos de los otros, un enlace sencillo o un doble 10 enlace, con la condicion de que al menos uno de a, b y c representa un doble enlace, y con la condicion de que si a es un enlace sencillo y b es un doble enlace, R2 no es H;

Ri es o bien hidrogeno o alquilo Ci a C6;

R2 es o bien OR5 o hidrogeno, en donde R5 es hidrogeno o alquilo de cadena lineal o ramificada Ci a C12;

R3 es, en caso de que c sea un enlace sencillo, o bien hidrogeno u alquilo C1 a C6, o en caso de que c sea un doble 15 enlace, CHR5, en donde R5 es el mismo que se define anteriormente;

R4 es hidrogeno, alquilo C1 a C12, fenilo no sustituido o sustituido por el grupo alquilo C1 a C12 o acilo COR6; siendo R6 hidrogeno, alquilo de cadena lineal o ramificada C1 a C12, fenilo o benzoilo, respectivamente, no sustituido o sustituido por alquilo C1 a C12, o cualquier grupo que lleve a hidroxilo tras la metabolizacion biologica o desproteccion quimica, particularmente un ester, eter, acetal, carbonato, carbamato, fosfato, fosfonato, cetal, sulfato 20 o sulfonato, y sales de los mismos,

Para usar en un tratamiento medico como inhibidor de angiogenesis, en donde dicho compuesto es 4- hidroxitestosterona o sus sales o esteres.

2. El compuesto definido por la formula 1

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En donde a, b y c respectivamente indican, independientemente los unos de los otros, un enlace sencillo o un doble enlace, con la condicion de que al menos uno de a, b y c representa un doble enlace, y con la condicion de que si a es un enlace sencillo y b es un doble enlace, R2 no es H;

Ri es o bien hidrogeno o alquilo Ci a C6;

R2 es o bien OR5 o hidrogeno, en donde R5 es hidrogeno o alquilo de cadena lineal o ramificada Ci a C12;

R3 es, en caso de que c sea un enlace sencillo, o bien hidrogeno o alquilo Ci a C6, o en caso de que c sea un doble enlace, CHR5, en donde R5 es el mismo que se define anteriormente;

R4 es hidrogeno, alquilo C1 a C12, fenilo no sustituido o sustituido por un grupo alquilo C1 a C12 o acilo COR6; siendo R6 hidrogeno, alquilo de cadena lineal o ramificada C1 a C12, fenilo o benzoilo, respectivamente, no sustituido o sustituido por alquilo C1 a C12, o cualquier grupo que lleve a hidroxilo tras la metabolizacion biologica o desproteccion quimica, particularmente un ester, eter, acetal, carbonato, carbamato, fosfato, fosfonato, cetal, sulfato o sulfonato, y sales de los mismos,

Para usar como inhibidor de angiogenesis en la terapia de inflamacion y/o cancer inhibiendo la proliferacion o sintesis de, o bien solo o en combinacion: proliferacion de celulas endoteliales, proliferacion de celulas musculares lisas, migracion de celulas endoteliales, proliferacion de celulas musculares lisas, factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), receptor de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFR), receptor del factor de crecimiento de fibroblastos 13 (FGFR 13), receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR) a y/o p, e inhibidor del receptor del factor de crecimiento de mastocitos/celulas madre (SCFR; tambien conocido como c-kit o kit de tirosina proteina quinasa o CD117), en donde dicho compuesto es 4-hidroxitestosterona o sus sales o esteres.

3. El compuesto para usar segun el punto 1 o 2, en donde el compuesto se define siendo a y c un enlace sencillo, siendo b un doble enlace, y siendo R2 OR5, siendo OR5 como se define en la reivindicacion 1, preferiblemente en donde R5 es o bien hidrogeno o alquilo de cadena lineal o ramificada C1 a C6, y R4 es o bien hidrogeno o COR6 siendo R6 C1 a C6.

4. El compuesto para usar segun la presente invencion es 4-hidroxitestosterona (4-OHT) o sus sales o esteres.

5. El compuesto para usar segun cualquiera de los puntos anteriores para usar como un inhibidor de la neovascularizacion en un proceso patologico que implica procesos regenerativos.

6. El compuesto para usar segun cualquiera de los puntos anteriores para evitar o inhibir la neovascularizacion en un proceso inflamatorio.

7. El compuesto para usar segun el punto 6, en donde el proceso inflamatorio se selecciona del grupo que consiste en artritis, enfermedades inflamatorias del intestino, eczema, neurodermatitis.

8. El compuesto para usar segun cualquiera de los puntos 1 a 5 para evitar o inhibir la neovascularizacion desencadenada por un tumor.

9. El compuesto para usar segun cualquiera del punto 8, en donde la neovascularizacion se desencadena por un tumor de tejido mamario, preferiblemente cancer de mama, o tumor de tejido prostatico, preferiblemente cancer de prostata.

10. El compuesto para usar segun cualquiera de los puntos anteriores 1 a 5 en una profilaxis o tratamiento de un tumor solido y metastasis del mismo.

11. El compuesto para usar segun el punto 10, en donde dicho tumor solido se selecciona del grupo que consiste en canceres renales tales como carcinoma de celulas renales, cancer colorrectal, cancer de pulmon, cancer de cerebro y particularmente glioblastoma, cancer de ovario, cancer de pancreas y linfoma, y metastasis de los mismos.

12. El compuesto para usar segun cualquiera de los puntos 1 a 5 en una profilaxis o tratamiento de un tumor no solido y metastasis del mismo.

13. El compuesto para usar segun el punto 9, en donde dicho tumor no solido es mieloma multiple y metastasis del mismo.

14. El compuesto para usar segun cualquiera de los puntos 1 a 5 para usar en una profilaxis o tratamiento de un neoplasma vascular o vasoproliferativo, particularmente un tumor de celulas endoteliales seleccionadas del grupo que consiste en hemangiomas.

15. El compuesto para usar segun cualquiera de los puntos anteriores 1 a 7 para evitar o tratar una enfermedad relacionada con el ojo.

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16. El compuesto para usar segun cualquiera de los puntos 1 a 5 para usar en una profilaxis o tratamiento de una enfermedad relacionada con el ojo seleccionada del grupo que consiste en retinopatfa diabetica, degeneracion macular, inflamacion ocular, particularmente queratitis, vascularizacion de la cornea, inyeccion vascular en el cuerpo vftreo, vascularizacion de la lente ocular.

17. El compuesto para usar segun cualquiera de los puntos 1 a 5 para evitar o inhibir la neovascularizacion en la reparacion de heridas que incluye la transformacion de tejido funcional regular en tejido blando.

18. El compuesto para usar segun el punto 17 para reducir la formacion de cicatriz mas alla del limite en organos tales como el hfgado o el corazon despues de lesion aguda o cronica o en la piel.

19. El compuesto para usar segun cualquiera de los puntos 1 a 5 para evitar o inhibir las malformaciones vasculares, en particular hemangioma en la piel u organos solidos (hfgado, cerebro, corazon).

20. El compuesto para usar segun cualquiera de los puntos 1 a 5 para evitar o inhibir las enfermedades cardiovasculares, particularmente la alta presion sangufnea, estenosis o restenosis de vasos sangufneos y arteriosclerosis.

21. El compuesto para usar segun cualquiera de los puntos 1 a 5 para el tratamiento contra la obesidad.

22. El compuesto para usar segun cualquiera de los puntos 1 a 5 para un tratamiento contra la endometriosis.

23. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de la formula como se define en cualquiera de los puntos anteriores y un vehfculo y/o excipiente farmaceuticamente aceptable para usar en un tratamiento medico segun cualquiera de los puntos anteriores.

24. La composicion farmaceutica segun el punto 23, en donde la composicion farmaceutica se prepara para la administracion dermica, mucosa o submucosa, transdermica, i.m., s.c., i.v., oral o en supositorios o instilacion en cavidades.

25. La composicion farmaceutica segun los puntos 23 o 24, en donde la composicion farmaceutica se prepara para uso oral, administracion subcutanea, cutanea, intramuscular, intravenosa, intraocular, nasal o transdermica.

26. Una combinacion que comprende

(i) una sustancia activa seleccionada del grupo que consiste en anticuerpos dirigidos contra VEGF, VEGFR o hfbridos de VEGFR/VEGFR soluble, e inhibidores de tirosina quinasa, y

(ii) un compuesto definido por la formula 1

imagen3

En donde a, b y c indican respectivamente, independientemente los unos de los otros, un enlace sencillo o un doble enlace, con la condicion de que al menos uno de a, b y c representa un doble enlace, y con la condicion de que si a es un enlace sencillo y b es doble enlace, R2 no es H;

R1 es o bien hidrogeno o alquilo C1 a C6;

R2 es o bien OR5 o hidrogeno, en donde R5 es hidrogeno o alquilo de cadena lineal o ramificada C1 a C12;

R3 es, en caso de que c sea un enlace sencillo, o bien hidrogeno o alquilo C1 a C6, o en caso de que c sea un doble enlace, CHR5, en donde R5 es el mismo que se define anteriormente;

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R4 es hidrogeno, alquilo Ci a C12, fenilo no sustituido o sustituido por un grupo alquilo Ci a C12 o acilo COR6; siendo R6 hidrogeno, alquilo de cadena lineal o ramificada C1 a C12, fenilo o benzoilo, respectivamente, no sustituido o sustituido por alquilo C1 a C12, o cualquier grupo que lleve a hidroxilo tras la metabolizacion biologica o desproteccion quimica, particularmente un ester, eter, acetal, carbonato, carbamato, fosfato, fosfonato, cetal, sulfato o sulfonato, y sales de los mismos, preferiblemente para usar como se define en cualquiera de los puntos anteriores, en donde dicho compuesto es 4-hidroxitestosterona o sus sales o esteres.

27. Una composicion farmaceutica que comprende una combinacion segun el punto 26.

Descripcion de los dibujos

Fig. 1 A y B: Ensayo de proliferacion tras la exposicion de celulas HUVEC a 4-OHT y TKI 258 usando ensayos WST- 1, resp. solo o en combinacion;

Fig. 2A Principio de ensayo de migracion de transwell;

Fig. 2B Analisis del ensayo de migracion de transwell tras la exposicion de celulas HUVEC a 4-OHT;

Fig. 3 Ensayo de curacion de heridas de celulas HUVEC tras la exposicion a 4-OHT;

Fig. 4 Ensayo de migracion en el tubo de celulas HUVEC tras la exposicion a 4-OHT usando matrigel.

Descripcion detallada de la invencion

La presente invencion se describe ahora en mas detalle mediante realizaciones y ejemplos preferidos, que se presentan sin embargo solo con proposito ilustrativo.

La presente invencion proporciona un compuesto de la formula general 1 definido anteriormente, en donde dicho compuesto es 4-hidroxitestosterona o sus sales o esteres, que se ha encontrado sorprendentemente que inhibe de forma eficaz la angiogenesis, y particularmente cualquiera o una combinacion de (i) a (vi):

(i) inhibicion de la proliferacion de celulas endoteliales;

(ii) inhibicion de la proliferacion de celulas musculares lisas;

(iii) inhibicion de la migracion de celulas endoteliales;

(iv) inhibicion de la migracion de celulas musculares lisas;

(v) reduccion de la expresion o sintesis de proteina VEGF;

(vi) reduccion de la expresion o sintesis de proteina VEGFR;

(vii) reduccion de la expresion o sintesis de proteina de factores de crecimiento funcionalmente relacionados, que incluye los del receptor del factor de crecimiento de fibroblastos 13 (FGFR 13), del receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR) a y/o p, y del receptor del factor de crecimiento de mastocitos/celulas madre (SCFR; tambien conocidos como c-kit o kit de tirosina proteina quinasa o CD117).

Por consiguiente, es particularmente adecuado para el tratamiento de enfermedades que implican procesos regenerativos excesivos que incluyen neovascularizacion en el tejido. Ademas, cualquiera de los tratamientos anti- cancer/anti-proliferativos y/o anti-inflamatorios (i) a (vii) anteriores seran especificamente y selectivamente efectivos en pacientes afectados por dicha proliferacion anormal, y/o en objetivos de tejidos y organos especiales en pacientes donde se da dicha proliferacion anormal. El compuesto de formula 1, 4-hidroxitestosterona (4-OHT) o sus sales o esteres) han encontrado que ejercen sorprendentemente actividad anti-angiogenica y efectos inhibidores especificados como los puntos (i) a (vii) anteriores.

De forma importante, el tejido mencionado anteriormente puede ser especificamente un tejido u organo en el cuerpo humano, en que la (neo)vascularizacion puede tener lugar y puede desencadenarse mediante un tumor particular, tal como tejido mamario canceroso o no canceroso, tejido de prostata, cualquier tejido intestinal, tejido pulmonar, tejido renal, el cerebro, el ojo, tejido del ovario o el tejido vascular per se en el contexto de las anomalias vasculares, que son por ejemplo neoplasmas vasculares o vasoproliferativos tales como hemangiomas o malformaciones vasculares tales como malformaciones vasculares de flujo lento, malformacion capilar, malformacion venosa, malformacion linfatica, malformaciones vasculares de flujo rapido, malformacion arterial, malformacion arteriovenosa, fistula arteriovenosa o malformaciones vasculares combinadas (varias combinaciones de las anteriores).

Por lo tanto, el compuesto de formula 1 (4-OHT) es altamente util para procesos patologicos o situaciones que desencadenan la (neo)vascularizacion, estando por ejemplo en los respectivos casos de tumores o cualquier proceso inflamatorio. El compuesto de formula 1 (4-OHT) es altamente util para la profilaxis o tratamiento de otros canceres y/o una metastasis de los mismos, donde la anti-angiogenesis o vascularizacion/neovascularizacion o

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casos de inhibicion o reduccion mencionados anteriormente (i) a (vii) es relevante, por ejemplo para la profilaxis o tratamiento de cancer renal tal como carcinoma de celula renal, cancer colorrectal, cancer de pulmon, cancer de cerebro, particularmente glioblastoma cancer de ovario, mieloma multiple, linfoma, enfermedades inflamatorias tales como por ejemplo artritis reumatoide, reparacion de heridas para reducir la formacion de cicatrices (especialmente en organos tales como el higado o corazon despues de lesion aguda o cronica o en la piel), malformaciones vasculares, neoplasmas vasculares o vasoproliferativos, tumores de celulas endoteliales, tales como hemangiomas (especialmente en higado, cerebro y/o corazon), enfermedades relacionadas con los ojos tales como retinopatia (diabetica), degeneracion macular, inflamacion ocular, enfermedades cardiovasculares, particularmente alta presion sanguinea, estenosis o restenosis de vasos sanguineos, por ejemplo provocadas por arteriosclerosis, particularmente aterosclerosis, por ejemplo despues de una lesion y/o en el contexto de angioplastia o implantacion de estent. Ademas, el inhibidor de la angiogenesis de la presente invencion puede usarse como agente anti- obesidad, ya que se sabe que los vasos sanguineos en el tejido adiposo nunca maduran totalmente, y se destruyen por tanto mediante los inhibidores de la angiogenesis (D. Bruemmer, Targeting Angiogenesis as Treatment for Obesity; Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 32(2), 161-162, 2012). Ademas, el inhibidor de la angiogenesis de la presente invencion puede usarse como una sustancia activa para tratar la endometriosis, debido a la union entre la anti-angiogenesis y un efecto positivo contra la endometriosis.

Ademas, el compuesto de formula 1 (4-OHT) es altamente util en el tratamiento de tumores tales como carcinomas de celulas renales, que a menudo estan desarrollando resistencia al tratamiento anti-cancerigeno inicial, necesitando por consiguiente una terapia de segunda linea que usa por ejemplo inhibidores mTOR o TKI de 2s generacion. Asi que, el compuesto de la presente invencion proporciona una alternativa a la terapia anti-cancerigena clasica despues de la formacion de resistencia.

Ademas, la invencion proporciona una combinacion que comprende un compuesto de formula 1 (4-OHT) o sus sales o esteres, y una sustancia activa seleccionada del grupo que consiste en anticuerpos dirigidos contra VEGF, VEGFR o hibridos de VEGFR/VEGFR soluble, e inhibidores de tirosina quinasa (TKI). “Combinacion” significa una combinacion fija en una composicion normal o forma de dosificacion normal, o una combinacion separada aunque asociada, por ejemplo, por medio de composiciones administradas de forma simultanea o secuencial, que contienen respectivamente el compuesto de formula 1 y el anticuerpo especificado o TKI. Los ejemplos preferidos de dichos anticuerpos incluyen el anticuerpo monoclonal contra VEGF bevacizumab (Avastin), y los ejemplos preferidos de TKI incluyen sunitinib, dovitinib (TKI 258), imatinib, sorafenib y los TKI presentados adicionalmente por Mukherji et al. (2013) y Heidegger et al. (2013) citados anteriormente.

Ademas, el compuesto de formula 1 (4-OHT) es altamente util para tratar la angiogenesis desencadenada por un tumor, particularmente un cancer o metastasis del mismo, por ejemplo cancer de mama o cancer de prostata o una metastasis del mismo. Sorprendentemente y distinto de las anteriores investigaciones de compuestos relacionados para la inhibicion del crecimiento celular de tumores relacionados con hormonas y formacion de metastasis, en particular en relacion con el cancer de mama o cancer de prostata (documentos WO 2007/131736, WO 2007/131737), se encontro por los inventores que el compuesto de la formula general 1 (4-OHT) como se define anteriormente inhibe la proliferacion y/o migracion de celulas endoteliales humanas y/o celulas de musculo liso. Ademas, se encontro sorprendentemente que el compuesto de formula general 1 (4-OHT) como se define anteriormente reduce la expresion de VEGF y VEGFR en un medio inflamado y/o canceroso. Por ejemplo en caso de tratamientos anti-cancerigenos, y de nuevo independiente y distinto de los tratamientos que implican la inhibicion de crecimiento celular tumoral relacionado con hormonas y formacion de metastasis, como era el caso por ejemplo en relacion con cancer de mama o cancer de prostata (documentos WO 2007/131736, WO 2007/131737), los descubrimientos de la presente invencion permiten hacer uso del tratamiento anti-angiogenesis en los correspondientes nuevos contextos clinicos. Por ejemplo, a diferencia de una destruccion directa de celulas y tejidos diana cancerigenos, la inhibicion de la angiogenesis segun la presente invencion permite inhibir de forma efectiva el crecimiento tumoral adicional y la vascularizacion tumoral a traves de la anti-angiogenesis y/o a traves de la inhibicion o reduccion de efectos (i) a (vii) especificados anteriormente. De esta forma, los medios por los que los tumores pueden nutrirse y por consiguiente por los que la metastasis puede interrumpirse, lo que eventualmente llevara a la inanicion del tumor y por consiguiente a la actividad anti-tumoral indirecta. Por ejemplo, los tratamientos de dichos canceres relacionados con hormonas y metastasis, tales como cancer de mama o cancer de prostata, pueden efectuarse con la inhibicion de la angiogenesis desencadenada por dicho tumor.

Ademas, distinto de los meros efectos anabolicos generales tales como la estabilizacion de colageno y opcionalmente otras proteinas de soporte y por consiguiente considerando la estabilizacion del tejido de soporte y tratamientos relacionados como infarto de miocardio e infarto cerebral, arteriosclerosis, incontinencia urinaria, y similares (documento WO2009/062683), de nuevo los descubrimientos de la presente invencion permiten hacer uso del tratamiento anti-angiogenesis en los correspondientes nuevos contextos clinicos.

Generalmente con respecto a las aplicaciones terapeuticas, los nuevos contextos clinicos se caracterizan por diferencias con respecto a, por ejemplo, grupo de pacientes, eleccion del tiempo (por ejemplo, decisiones de cuando y donde comenzar el tratamiento), dosis y combinacion con otros tratamientos.

Sin estar atados con ninguna teoria, se asume que es debido a un descenso de por ejemplo VEGF y/o VEGFR y/u otros factores de crecimiento o receptores de factor de crecimiento relevantes para la proliferacion, cancer y/o

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inflamacion, por ejemplo en celulas del tejido inflamado y/o canceroso mencionado anteriormente, por ejemplo cualquier celula epitelial que forma el organo mencionado anteriormente y/o el tumor mencionado anteriormente o en celulas del estroma, teniendo por consiguiente de forma indirecta un efecto anti-angiogenico en las celulas vasculares, o debido a un descenso de VEGF y/o VEGFR y/u otros factores de crecimiento o receptores de factor de crecimiento relevantes para la proliferacion, cancer y/o inflamacion en las celulas endoteliales y/o musculares lisas per se. Por consiguiente, la presente invencion proporciona un compuesto para el tratamiento de enfermedades que implican una proliferacion y/o migracion indeseada de las celulas endoteliales y/o musculares lisas, por ejemplo, para las enfermedades mencionadas anteriormente.

En base a estos sorprendentes descubrimientos de la presente invencion, el compuesto de formula I (4-OHT) convincentemente es util en contextos clinicos terapeuticos donde estan implicados factores de crecimiento funcionalmente relacionados, especialmente el receptor de factor de crecimiento de fibroblastos 13 (FGFR 13), el receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR) a y/o p, y el receptor del factor de crecimiento de mastocitos/celulas madre (SCFR; tambien conocido como c-kit o kit tirosina proteina quinasa o CD117).

Este efecto inhibidor puede explotarse en varios aspectos:

1. la neovascularizacion desencadenada por un tumor puede inhibirse de forma efectiva;

2. la neovascularizacion en el tejido inflamado puede inhibirse;

3. la proliferacion anormal de celulas endoteliales y/o musculares lisas per se puede inhibirse, ya que esta puede ser la alteracion patologica en tumores de celulas endoteliales o malformaciones vasculares.

En el uso, los compuestos mencionados anteriormente pueden administrarse al paciente en una cantidad adecuada para inhibir la proliferacion y/o migracion de celulas endoteliales y/o musculares lisas. Ademas, el uso puede determinarse mediante una condicion de aplicacion apropiada, tal como tipo de paciente o tipo de sitio u organo diana o composicion o formulacion farmaceutica que es capaz de transportar las actividades mencionadas anteriormente in vivo al sitio u organo dina final designado en un paciente.

Ademas, el compuesto mencionado anteriormente puede administrarse de forma topica y/o por aplicacion a la mucosa, por ejemplo, en forma de una pomada, una crema, una locion, un gel, un pulverizador, un polvo, un aceite o un aposito transdermico, que comprende tambien formas de uso de deposito (que incluyen granulos); puede administrarse de forma parenteral, por ejemplo, de forma intramuscular, o por inyeccion intravenosa o subcutanea o por infusion, o intranasal, instilacion en cavidades (por ejemplo, vejiga, abdomen, intestino) y/o de forma oral, por ejemplo, en forma de comprimidos, capsulas, comprimidos recubiertos con azucar o pelicula, disoluciones o suspensiones liquidas o de forma rectal, por ejemplo en forma de supositorios, o de forma intraocular, por ejemplo en forma de inyeccion y como gotas oculares.

La cantidad aplicada para inhibir la proliferacion y/o migracion de celulas endoteliales y/o musculares lisas puede elegirse de forma adecuada por ejemplo dependiendo de la edad, peso, condiciones del usuario y forma de administracion; por ejemplo la dosis adoptada para la administracion oral a seres humanos adultos puede oscilar de aproximadamente 1 a aproximadamente 150-1000 mg por aplicacion, de 1 a 5 veces diarias.

Por consiguiente, dichos compuestos pueden estar comprendidos en composiciones farmaceuticas que comprenden adicionalmente un vehiculo y/o excipiente y/o diluyente farmaceuticamente aceptable.

Para el uso topico, la composicion puede estar formulada incluyendo, por ejemplo, aceites y grasas vegetales tales como aceite de almendra, aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de hueso de melocoton, aceite de ricino; extractos de plantas; aceites etereos; ademas ceras vegetales y aceites sinteticos y animales; grasas y ceras tales como acido estearico y esteres de estearato, acido laurico y esteres lauricos, esteres de sorbitano, alcoholes de cetearilo; lecitina, alcoholes de lanolina, caroteno, fragancias, alcoholes mono- o polihidricos, urea, tensioactivos tales como poloxameros, Tweens y similares; conservantes y colorantes etc. Se prefiere la formulacion como una emulsion de aceite en agua o agua en aceite.

Las formas orales solidas pueden contener por ejemplo, junto con el compuesto activo, diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, celulosa, almidon de maiz o almidon de patata; lubricantes, por ejemplo, silice, talco, acido estearico, estearato de magnesio o calcio, y/o polietilenglicoles, poloxameros, succinato de tocoferil- polietilengicol (TPGS); agentes de union, por ejemplo almidones, gomas arabigas, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o polivinilpirrolidona; agentes disgregantes, por ejemplo, un almidon, acido alginico, alginatos o glicolato de almidon sodico; mezclas efervescentes; tintes, edulcorantes; agentes humectantes, tales como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y, en general, sustancias farmacologicamente inactivas usadas en formulaciones farmaceuticas. Estos preparados pueden fabricarse de forma conocida, por ejemplo, por medio de procesos de mezcla, granulado, formacion de comprimidos, recubrimiento con azucar o recubrimiento con pelicula. Las dispersiones liquidas para el uso oral pueden ser por ejemplo, jarabes, emulsiones y suspensiones.

Los jarabes pueden contener como vehiculo, por ejemplo, sacarosa o sacarosa con glicerina y/o manitol y/o sorbitol.

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Las suspensiones y las emulsiones pueden contener como vehiculo, por ejemplo, una goma natural, agar, alginato sodico, pectina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, o poli(alcohol de vinilo), poloxameros o TPGS.

Las suspensiones o disoluciones para inyecciones intramusculares pueden contener, junto con el compuesto activo, un vehiculo farmaceuticamente aceptable, por ejemplo, agua esteril, aceite de oliva, oleato de etilo, glicoles, por ejemplo, propilenglicol, y si se desea, una cantidad adecuada de hidrocloruro de lidocaina. Las disoluciones para inyecciones o infusiones intravenosas o subcutaneas pueden contener como vehiculo, por ejemplo, agua esteril o preferiblemente pueden estar en forma de soluciones salinas esteriles, acuosas, isotonicas.

Los supositorios pueden contener junto con el compuesto activo un vehiculo farmaceuticamente aceptable, por ejemplo, manteca de cacao, polietilenglicol, un tensioactivo de ester de acido graso de polioxietilensorbinato o lecitina.

El contenido de compuesto activo de una composicion adecuada puede ser al menos 0,0001% en peso, por ejemplo entre 0,0001 y 20% en peso, preferiblemente 0,6% hasta 10% en peso, mas preferiblemente 1 y 5% en peso, del compuesto usado segun la invencion.

Si las sustancias se mezclan para promover la penetracion en la piel, su contenido, cuando se usan hialuronidasas, puede ser de, por ejemplo, entre 0,01 y 1% en peso, preferiblemente 0,05 y 0,2% en peso, cuando se usa dimetilisosorbida o DMSO entre 1 y 25% en peso, preferiblemente 5 y 10% en peso, poloxameros al 0,5-30%, TPGS al 0,5-30%.

La presente invencion se ilustra adicionalmente mediante la descripcion de los siguientes ejemplos, que son sin embargo solo para propositos ilustrativos.

Preparacion y tratamiento de celulas endoteliales de la vena umbilical humana

Todos los experimentos descritos en los siguientes capitulos se realizaron al menos por triplicado, principalmente usando 2 numeros celulares diferentes y varios tiempos de incubacion. Todos los experimentos se realizaron adicionalmente en varias replicas (un HUVEC en diferentes pasos ademas de diferentes preparados). Brevemente, las celulas endoteliales de la vena umbilical humana (en adelante HUVEC) se aislaron recientemente de los cordones umbilicales humanos por metodos conocidos en la tecnica y se usaron en los experimentos del paso p4 hasta el paso p10 para evitar que ningun artefacto se origine a partir de cambios in vitro de las celulas.

En todos los experimentos, el compuesto esteroideo C-19 4-OHT se anadio a las celulas en la concentracion indicada en medio EGM-2 (Lonza) para evitar que ningun artefacto se origine a partir de factores exogenos contenidos en el medio. Todos los experimentos se realizaron al menos tres veces y mostraron el mismo patron de respuesta.

La identidad, diferenciacion y estabilidad a largo plazo de la expresion genica de celulas HUVEC cultivadas se evaluo usando tintado inmunocitoquimico con anticuerpo de Factor anti-von Willebrand (vWF). La expresion de vWF es altamente especifica para las celulas endoteliales. La estabilidad de la expresion de vWF se cuantifico entre el paso 1 y 10. En este horario solo se dan cambios menores en el periodo de cultivo y entre las diferentes cargas usadas.

Ejemplo 1: Inhibicion de la proliferacion de celulas endoteliales

Como un metodo para determinar la proliferacion celular de celulas endoteliales de mamiferos, los ensayos de proliferacion se realizaron como se describe a continuacion.

Para determinar las velocidades de proliferacion, se realizaron ensayos WST-1. Esencialmente, 1000 celulas HUVEC/pocillo se sembraron en un plato de 96 pocillos y se expusieron a las concentraciones indicadas de 4-OHT (tambien indicado por el codigo de laboratorio CR 1447) durante 5 dias. La inhibicion de la proliferacion se cuantifico midiendo la escision enzimatica de la sal de tetrazolio de WST-1 a formazano mediante las deshidrogenasas mitocondriales celulares como una lectura para la viabilidad celular, en donde la viabilidad celular de las celulas tratadas se expresa como el porcentaje (%) de controles no tratados que contienen solo el disolvente en concentraciones apropiadas. Las medias de 3 experimentos independientes realizados por triplicado se muestran en la Fig. 1A.

Como se muestra en la Fig. 1A, la inhibicion del crecimiento mediante 4-hidroxitestosterona en todas las concentraciones de 1, 2 y 5 pM se mostro que era significativamente alta (p<0,001) en los 3 cultivos celulares HUVEC (ensayo t), comparable con el inhibidor de VEGF conocido TKI258 (Dovitinib) (0,2, 0,4 y 1,0 pM). Las celulas se cultivaron y subcultivaron en medio de crecimiento de celulas endoteliales (EGM) durante 3 y 5 dias, respectivamente. Como se muestra adicionalmente en la Fig. 1B, la inhibicion del crecimiento de CR 1447 en combinacion con TKI 258 (en comparacion con cada compuesto solo) tambien es altamente significativa (p < 0,001) en los 3 cultivos celulares HUVEC (ensayo t).

Ejemplo 2: Inhibicion de la migracion de celulas endoteliales usando el ensayo de migracion de transwell

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Un pre-requisito de la angiogenesis es la capacidad de las celulas endoteliales para migrar en el tejido. Este proceso se observa en la curacion de heridas y tambien en el proceso de crecimiento tumoral. Las celulas endoteliales migran en el tejido junto a un gradiente de factores tales como VEGF. Este comportamiento puede estudiarse en un modelo in vitro de migracion usando un sistema transwell, como por ejemplo es evidente a partir de la Fig. 2A. Especificamente, la Fig. 2A muestra la disposicion tipica de un ensayo transwell para monitorizar la migracion celular.

Para estudiar la migracion de celulas HUVEC usando el sistema transwell con membranas PET que tienen un tamano de por de 3 pm (24 pocillos sin recubrimiento de fibronectina), las celulas HUVEC en diferentes numeros celulares se colocaron en el compartimiento superior, mientras el atrayente se coloco en el compartimiento inferior. El numero de celulas en el sitio del atrayente de la membrana se comparo con el numero de celulas visibles en un sistema de control (control tampon) y con el atrayente (VEGF) en presencia de 4-OHT.

La Fig. 2B muestra una imagen tipica de tres experimentos independientes, especificamente mediante un ensayo transwell que usan membranas de bloque FI y tincion de propidio-yoduro de las HUVEC migradas. Las celulas se sembraron como se describe y la migracion se realizo durante 48 horas usando VEGF como atrayente en la camara inferior. Las figuras representas ejemplos de 3 experimentos independientes. Se comparo con el control (Co). Como puede verse, 4-OHT inhibe significativamente la migracion de celulas en la membrana, indicado por el numero de celulas migrantes extraordinariamente reducido en las muestras sometidas a tratamiento mediante 4-OHT (codigo “CR”).

Ejemplo 3: Inhibicion de la migracion de celulas endoteliales usando el ensayo de curado de heridas

Otro metodo para estudiar la migracion celular es el ensayo de curado de heridas (rasguno). Este ensayo se parece a los eventos que se dan en un proceso de curado de heridas agudas. Mediante la liberacion de factores desde el area herida las celulas endoteliales migran al area del rasguno, que se parecera al proceso de curado y cierre de la herida por vascularizacion y mas tarde formacion de cicatriz. En resumen, las celulas HUVEC se sembraron en un plato de 12 pocillos y se dejaron crecer hasta alcanzar la confluencia. Posteriormente, se hizo un rasguno, eliminando asi las celulas en el area del rasguno. Las celulas se expusieron a 10 pM de 4-OHT y la migracion de celulas endoteliales al area del rasguno se monitorizo microscopicamente usando un programa de 2 hasta 48 horas, dependiendo del diseno experimental individual.

Se muestra una imagen tipica de tres experimentos independientes en la Fig. 3 que representa los resultados tipicos de 10 experimentos independientes que usan diferentes concentraciones y horarios. Como se muestra, la migracion de celulas endoteliales se inhibe de forma efectiva mediante 4-OHT como se demuestra en el ensayo de curado de heridas (ensayo de rasguno). Despues de 24 h una clara reduccion de la migracion de celulas HUVEC en el area de rasguno en comparacion con las celulas de control no tratadas se ve bajo la influencia de 4-OHT (CR 1447).

Ejemplo 4: Ensayo de migracion en tubo

Despues de la migracion en el tejido de un rasguno, las celulas HUVEC cambian sus caracteristicas de crecimiento y forman microvasos. Este efecto puede evaluarse microscopicamente.

Las celulas HUVEC se sembraron en matrigel (7 mg/ml). Las suspensiones celulares ademas de los geles que contenian 10 pM/L de 4-OHT se anadieron tras el sembrado. Se dejo que se formaran puntos de ramificacion durante la adherencia en esta superficie que imita el caracter de la membrana basal. La formacion del tubo se analizo microscopicamente despues de 12 y 48 horas.

Se muestra una imagen tipica de tres experimentos independientes en la Fig. 4. Por consiguiente, la formacion del tubo de celulas endoteliales humanas (HUVEC) se inhibe significativamente mediante la aplicacion de 4-OHT (muestras especificadas “CR” en la fila inferior). Cuando las celulas endoteliales humanas se sometieron a tapones de matrigel, los puntos de ramificacion como un marcador de la formacion del tubo se inhiben mediante 4-OHT en comparacion con los controles no tratados (flechas rojas). Por tanto, el 4-OHT inhibio notablemente la ramificacion de las celulas e interrumpio masivamente las conexiones celula-celula lineares en el gel, indicando la notable inhibicion de la (neo)vascularizacion.

Claims (11)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto definido por la formula 1

   imagen1

   En donde a, b y c respectivamente indican, independientemente unos de los otros, un enlace sencillo o un doble 5 enlace, con la condicion de que al menos uno de a, b y c representa un doble enlace, y con la condicion de que si a es un enlace sencillo y b es un doble enlace, R2 no es H;

   Ri es o bien hidrogeno o alquilo Ci a C6;

   R2 es o bien OR5 o hidrogeno, en donde R5 es hidrogeno o alquilo de cadena lineal o ramificada Ci a C12;

   R3 es, en el caso de que c sea un enlace sencillo, o bien hidrogeno o alquilo Ci a C6, o en caso de que c sea un 10 doble enlace, CHR5, en donde R5 es lo mismo que se define antes;

   R4 es hidrogeno, alquilo C1 a C12, fenilo no sustituido o sustituido por un grupo alquilo C1 a C12 o acilo COR6; siendo R6 hidrogeno, alquilo de cadena lineal o ramificada C1 a C12, fenilo o benzoilo, respectivamente no sustituido o sustituido por alquilo C1 a C12, o cualquier grupo que lleve a hidroxilo tras la metabolizacion biologica o desproteccion quimica, particularmente un ester, eter, acetal, carbonato, carbamato, fosfato, fosfonato, cetal, sulfato 15 o sulfonato; y sales de los mismos,

   Para usar en un tratamiento medico como inhibidor de la angiogenesis, en donde dicho compuesto es 4- hidroxitestosterona o sus sales o esteres.
2. 2. El compuesto definido por la formula 1

   imagen2

   20 En donde a, b y c respectivamente indican, independientemente unos de los otros, un enlace sencillo o un doble enlace, con la condicion de que al menos uno de a, b y c representa un doble enlace, y con la condicion de que si a es un enlace sencillo y b es un doble enlace, R2 no es H;

   R1 es o bien hidrogeno o alquilo C1 a C6;

   R2 es o bien OR5 o hidrogeno, en donde R5 es hidrogeno o alquilo de cadena lineal o ramificada C1 a C12;

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   R3 es, en caso de que c sea un enlace sencillo, o bien hidrogeno o alquilo Ci a C6, o en caso de que c sea un doble enlace, CHR5, en donde R5 es lo mismo que se define anteriormente;

   R4 es hidrogeno, alquilo Ci a C12, fenilo no sustituido o sustituido por un grupo alquilo Ci a C12 o acilo COR6; siendo R6 hidrogeno, alquilo de cadena lineal o ramificada C1 a C12, fenilo o benzoilo, respectivamente, no sustituido o sustituido por alquilo C1 a C12, o cualquier grupo que lleve a hidroxilo tras la metabolizacion metabolica o desproteccion quimica, particularmente un ester, eter, acetal, carbonato, carbamato, fosfato, fosfonato, cetal, sulfato o sulfonato, y sales de los mismos,

   Para usar segun la reivindicacion 1 en la terapia de inflamacion y/o cancer mediante la inhibicion de la proliferacion o sintesis de, o bien solo o en combinacion: proliferacion de celulas endoteliales, proliferacion de celulas musculares lisas, migracion de celulas endoteliales, proliferacion de celulas musculares lisas, factor de crecimiento endotelial vascular, receptor del factor de crecimiento endotelial vascular, receptor del factor de crecimiento de fibroblastos 13, receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas a y/o p, y receptor del factor de crecimiento de mastocitos/celulas madre,

   En donde dicho compuesto es 4-hidroxitestosterona o sus sales o esteres.
3. 3. El compuesto para usar segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores para usar como un inhibidor de la neovascularizacion en un proceso patologico que implica procesos regenerativos.
4. 4. El compuesto para usar segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores para evitar o inhibir la vascularizacion en un proceso inflamatorio, particularmente en donde el proceso inflamatorio se selecciona del grupo que consiste en artritis, enfermedades inflamatorias del intestino, eczema y neurodermatitis.
5. 5. El compuesto para usar segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores para evitar o inhibir la vascularizacion desencadenada por un tumor, particularmente esta desencadenada por cancer de mama o por cancer de prostata.
6. 6. El compuesto para usar segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores 1 a 5 en una profilaxis o tratamiento de un tumor solido, preferiblemente seleccionado del grupo que consiste en cancer renal, cancer colorrectal, cancer de pulmon, cancer cerebral, cancer de ovario, cancer de pancreas y linfoma, y metastasis de los mismos; o en una profilaxis o tratamiento de un tumor no solido, preferiblemente mieloma multiple o metastasis del mismo.
7. 7. El compuesto para usar segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para usar en una profilaxis o tratamiento de una enfermedad o proceso seleccionado de:

   • Neoplasmas vasculares o vasoproliferativos, preferiblemente un tumor de celulas endoteliales y particularmente hemangioma,

   • Enfermedades relacionadas con los ojos, particularmente en donde la enfermedad relacionada con los ojos se selecciona del grupo que consiste en retinopatia, degeneracion macular, inflamacion ocular, vascularizacion de la cornea, inyeccion vascular en el cuerpo vitreo, y vascularizacion de la lente ocular,

   • Reparacion de heridas, o para la transformacion de tejido funcional regular en tejido blando, en particular para reducir la formacion de cicatriz mas alla del limite,

   • Malformaciones vasculares, en particular contra el hemangioma en la piel u organos solidos,

   • Enfermedades cardiovasculares, particularmente hipertension, estenosis o restenosis de vasos sanguineos, arteriosclerosis

   • Obesidad,

   • Endometriosis.
8. 8. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de la formula como se define en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicho compuesto es 4-hidroxitestosterona o sus sales o esteres, y un vehiculo y/o excipiente farmaceuticamente aceptable para usar en un tratamiento medico segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores.
9. 9. La composicion farmaceutica para usar segun la reivindicacion 8, en donde la composicion farmaceutica se prepara para administracion dermica, mucosa, submucosa, transdermica, i.m., i.v., s.c., intradermica, oral, nasal, intraocular o en supositorios o instilacion en cavidades.
10. 10. Una combinacion que comprende:

    (i) una sustancia activa seleccionada del grupo que consiste en anticuerpos dirigidos contra VEGF, VEGFR o hibridos VEGFR/VEGFR soluble, e inhibidores de tirosina quinasa, y

    (ii) un compuesto definido por la formula 1

    imagen3

    En donde a, b y c respectivamente indican, independientemente los unos de los otros, un enlace sencillo o un doble enlace, con la condicion de que al menos uno de a, b y c representa un doble enlace, y con la condicion de que si a es un enlace sencillo y b es un doble enlace, R2 no es H;

    5 R1 es o bien hidrogeno o alquilo C1 a C6;

    R2 es o bien OR5 o hidrogeno, en donde R5 es hidrogeno o alquilo de cadena lineal o ramificada C1 a Ci2;

    R3 es, en caso de que c sea un enlace sencillo, o bien hidrogeno o alquilo C1 a C6, o en caso de que c sea un doble enlace, CHR5, en donde R5 es lo mismo que se define antes;

    R4 es hidrogeno, alquilo Ci a C12, fenilo no sustituido o sustituido por un grupo alquilo Ci a C12 o acilo COR6; siendo 10 R6 hidrogeno, alquilo de cadena lineal o ramificada C1 a C12, fenilo o benzoilo, respectivamente, no sustituido o

    sustituido por alquilo C1 a C12, o cualquier grupo que lleve a hidroxilo tras la metabolizacion biologica o desproteccion quimica, en donde dicho compuesto es 4-hidroxitestosterona o sus sales o esteres.
11. 11. Una combinacion segun la reivindicacion 10 para usar en un tratamiento medico como se define en las reivindicaciones anteriores.