RS56621B1

RS56621B1 - C-19 steroidi za inhibiranje neovaskularizacije

Info

Publication number: RS56621B1
Application number: RS20171258A
Authority: RS
Inventors: Gerhard Unteregger
Original assignee: Curadis Gmbh
Priority date: 2014-12-30
Filing date: 2014-12-30
Publication date: 2018-03-30
Also published as: EP3215161A1; WO2016107778A1; HRP20171875T1; CN107206010A; ES2651442T3; EA202190993A3; EP3040075B1; US10426785B2; CN113117089A; JP2018508474A; CN107206010B; CA2972324C; US20170360804A1; EA201791209A1; PT3040075T; NO3040075T3; EA039485B1; EP3040075A1; JP6788592B2; DK3040075T3

Description

Opis

Oblast pronalaska

[0001] Ovaj pronalazak odnosi se na oblast medicine, naročito na nove upotrebe C-19 steroidnih jedinjenja, određenije na C-19 steroide koji imaju androsten-3-on strukturu sa specifičnim sktrukturalnim konfiguracijama, određenije na 4- i/ili 17-položaju, za inhibiciju neovaskularizacije, angiogeneze i dalje upotrebe. Ovaj pronalazak naročito se odnosi na odabrane C-19 steroide koji inhibiraju proliferaciju i/ili migracija endotelijalnih ćelija i/ili ćelija glatkih mišića u tretiranju bolesti koja uključuje patološku neovaskularizaciju i/ili prekomerne regenerativne procese koji su na primer povezani sa tumorima ili zapaljenskim stanjima. Dalje, ovaj pronalazak odnosi se na redukciju sinteze ili ekspresije, naročito pod terapeutskim situacijama zapaljenja i/ili kancera i povezanim stanjima povezanih tkiva, proliferacije-, kancer- i/ili zapaljenje-relevantnim faktorima rasta ili receptora faktora rasta, odabrani iz grupe koju čine vaskularni endotelijalni faktor rasta (VEGF), receptor vaskularnog endotelijalnog faktora rasta (VEGFR) i funkcionalno povezani faktori rasta, naročito receptor 13 faktora rasta fibroblasta (FGFR 13), receptor faktora rasta izveden iz trombocita (PDGFR) a i/ili β, receptor faktora rasta mastocita / matičnih ćelija (SCFR; takođe poznat kao c-Kit ili tirozin-proteinska kinaza Kit ili CD117).

Opis stanja tehnike

[0002] Angiogeneza je fiziološki proces tkivne vaskularizacije koja uključuje rast novih krvnih sudova u tkivu kada god za njima postoji potreba. Na primer, u stanju deprivacije kiseonika kako to može slično bti slučaj nakon formiranja rane, smatra se da ćelije oslobađaju angiogene faktore čime se indukuje rast novih sudova. Primera radi, vaskularni endotelijalni faktor rasta doživljava se kao najznačajniji faktor koji indukuje proliferaciju endotelijalnih ćelija, ćelije koje formiraju sudove, što vodi ka vaskularizaciji.

[0003] Međutim, ovaj fiziološki proces might be deregulisan u nekoliko patoloških stanja, što vodi ka prekomerne i nepotrebne ili čak i štetne formacije novih sudovi, što se takođe naziva neovaskularizacija. Sa druge strane, ovo stanje neovaskularizacije samo po sebi može da izazove bolesti ili patološko stanje, npr. u slučaju prekomernog formiranja ožiljaka ili neovaskularnog glaukom. Sa druge strane, neovaskularizacija promoviše progresiju određenih bolesti budući da je ona npr. izazvana od strane nekoliko čvrstih tumora, npr. kancer dojke, kancer prostate ili limfomi kao Hočkin-ovi ili ne-Hočkin-ovi limfomi, ili ne-čvrsti poput multiple mijeloma.

[0004] Kako je angiogeneza ili neovaskularizacija znak tumora, koncept anti-kancer terapija je da se inhibira formacija novih sudovi i da se tako tumor "izgladni". Nekoliko novih jedinjenja je razvijeno u u culju ciljanja blokiranja proliferacije i migracije endotelijalnih ćelija. Primera radi, monoklonalno antitelo protiv VEGF - bevacizumab (Avastin) – uspešno se koristi kod pacijenata sa raznim tumorima u sprečavanju metastaza i smanjivanju ti tumora.

[0005] Pored ga antitela koja blokiraju VEGF i njegovi receptor VEGFR mali molkeuli široko se koriste kao tirozin-kinaza-inhibitori (TKIs nalik Sunitinib i 2<ga>generacija lekova Dovitinib = TKi 258) sumirani su u pregledima od strane Mukherji et al. ili Heidegger et al. U kontekstu kancera prostate (Mukherji D, Temraz S, Wehbe D, Shamseddine A: Angiogenesis and anti-angiogenic therapy in prostate cancer. Critical Reviews in Oncology/Hematology 87 (2013) 122-131; Heidegger I, Massoner P, Eder IE, Pircher A, Pichler R, Aigner F, Bektic J, Horninger W, Klocker H: Novel therapeutic approaches for the tretman of castration-resistant prostate cancer. Journal of Steroid Biochemistry & Molecular Biology 138 (2013) 248-256).

[0006] Međutim, unos bevacizumaba ili inhibitora malog molekula može biti praćeno sa nekoliko ozbiljnih i/ili manje ozbiljnih sporednih efekata; štaviše, razvoj rezistenije na lek regularno je primeećeno u kliničkim podešavanjima u toku tretiranja. Prema tome, postoji potreba za novim ciljanim molekulima za anti-angiogenu terapiju, pri čemu je ta terapija povezana sa manje sporednih efekata.

[0007] Nedavno su steroidni hormoni kontroverzno procenjeni na njihov efekat na angiogenezu.

Primera radi, Frank-Lissbrant i kolege opisali su rapidnu neovaskularizaciju u ventralnom režnju prostate pacova kastriranih pacova nakon ponavljajućeg subkutanog doziranja testosterona. (Franck-Lissbrant I, Häggström S, Damber JE, Bergh A: Testosterone stimulates angiogenesis and vascular regrowth in the ventral prostate in castrated adult rats. Endocrinology 1998;139(2):451-6).

[0008] Dalje, Liao et al. Opisali su efekat testosterona u promovisanju vaskularne migracija endotelijalnih ćelija kultivisanih humanih umbilikalnih endotelijalnih ćelija (HUVEC-e) (Liao W, Huang W, Guo Y, Xin M, Fu X: Testosterone promotes vascular endotelijalna ćelija migration via upregulation of ROCK-2/moesin cascade. Mol Biol Rep (2013) 40:6729-6735).

[0009] Uloga testosterona u regulisanju endotelijalne funkcije i igranju uloge u razvoju i sazrevanju endotelijalnih progenitornih ćelija u kontekstu erektilne fiziologije dalje je predviđeno u pregledu Traisha i Galoosian-a (Traish AM, Galoosian A: Androgens modulate endothelial function and endothelial progenitor cells in erectile physiology. Korean J Urol 2013; 54:721-731).

[0010] Eisermann et al. prijavili su da androgeni analog R1881 indukuje VEGF ekspresiju u ćelijskim linijama kancera prostate, čime verovatno dovodi do VEGF-indukovane angiogeneze (Eisermann K, Broderick CJ, Bazarov A, Moazam MM, Fraizer GC: Androgen up-regulates vascular endothelial growth factor expression in prostate cancer cells via an Sp1 binding site. Molecular Cancer 2013, 12:7).

[0011] Nasuprot tome, Chao et al. su opisali anti-angiogena efekte SR16388, sintetički steroid sa sposobnostima vezivanja za ER alfa i ER beta receptor, (Chao WR, Amin K, Shi Y, Hobbs P, Tanabe M, Tanga M, Jong L, Collins N, Peters R, Laderoute K, Dinh D, Yean D, Hou C, Sato B, Alt C, Sambucetti L.: SR16388: a steroidal antiangiogenic agent with potent inhibitorne effect on tumor growth in vivo. Angiogenesis.2011 Mar;14(1):1-16).

[0012] Nepredviđeni efekti na angiogenezu, takođe su primećeni sa drugim dobro poznatim androgenima, koji su u međuvremenu ili svi izbačeni sa tržišta ili povučeni zbog njihovih sporednih efekata. Thomas et al. su opisali da Danazol (17α-Etinil-17β-hidroksiandrost-4-eno [2,3-d]izoksazol) inhibira određene funkcije endotelijalnih ćelija kao što je proliferacija i cevasta formacija, ali manjka u inhibiranju kritičknr faze invazije u tkivo (Thomas GW, Rael LT, Shimonkevitz R, Curtis CG, Bar-Or R, Bar-Or D: Effects of danazol on endothelial cell function and angiogenesis. Fertil Steril.2007 Oct;88 (4 Suppl):1065-70). Zbog svojih androgenih osobina (virilizacija, povećanje slobodnog testosterona i pored inhibicije sinteze testosterona) i njegovog nepogodnog profila, povučen je sa tržišta.

[0013] Nandrolon, 17β-Hidroksiestr-4-en-3-on, takođe dobro poznat anabolički lek, ispoljava određene antiproliferativne karakteristike na HUVEC ćelije (D'Ascenzo S, Millimaggi D, Di Massimo C, Saccani-Jotti G, Botrè F, Carta G, Tozzi-Ciancarelli MG, Pavan A, Dolo V.: Detrimental effects of anabolic steroids on human endothelial cells. Toxicol Lett.2007 Mar 8;169 (2):129-36.)

[0014] Međutim, ostaje nepoznato da li se on translatuje u inhibiciju angiogeneze budući da je u životinjskom modelu amiotropične lateralne skleroze primećeno da nandrolon povećava formaciju TGF-beta, za koju je pozanto da stimuliše ekspresiju jednog od najpotentnijih angiogenih faktora, tj. VEGF (Galbiati M, Onesto E, Zito A, Crippa V, Rusmini P, Mariotti R, Bentivoglio M, Bendotti C, Poletti A. The anabolic/androgenic steroid nandrolone exacerbates gene expression modifications induced by mutant SOD1 in muscles of mouse models of amyotrophic lateral sclerosis. Pharmacol Res.2012 Feb;65(2):221-30). Sa druge strane, Nandrolon redukuje VEGF nivoe u mišićima ispitnih pacova (Paschoal M, de Cassia Marqueti R, Perez S, Selistre-de-Araujo HS. Nandrolone inhibits VEGF mRNA in rat muscle. Int J Sports Med.2009 Nov;30(11):775-8).

[0015] Stanazolol (17α-Metil-5a-androstano[3,2-c]pirazol-17β-ol) povećava ekspresiju TGF beta 1, za koju je poznato da povećava proizvodnju najpotentnijeg angiogenog faktora VEGF (Cao Y,Townsend CM, Ko T: Transforming growth factor-beta (TGF-beta) induces vascular endothelial growth factor (VEGF) and plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) gene expression through Smad3 transcription factor. ACS, 2005 Volume 201, Issue 3, Suppl.17-18).

[0016] Štaviše, Thorpe et al. su pokazali da heparin adipinski hidrazid- (HAH-) povezani kortizol može predstavljati nove inhibitore angiogeneze za tretiranje kancera i drugih angiogenih bolesti (Thorpe PE, Derbyshire EJ, Andrade SP, Press N, Knowles PP, King S, Watson GJ, Yang YC, Rao-Betté M.: Heparinsteroid conjugates: new angiogenesis inhibitors with antitumor aktivnost in mice. Cancer Res.1993 Jul 1;53(13):3000-7.)

[0017] U svetlu raznih potencijalnih ciljanih molekula steroidnih hormona, npr. steroidni hormonski receptori ili enimi, postaje evidentno da ishod interakcije definisane ćelije ili tkiva sa definisanim steroidima razlikuje se od pola do pola, tkiva do tkiva i specifično obrasca dostupnih i aktivnih steriodnih receptora. Specifini biološki odgovor na steroidne hormone je pod uticajem (i) razlika u ekspresionom obrascu npr. steroidnih hormonskih receptora, (ii) ekspresije enzima i (iii) razlika u ekspresiji receptora ko-faktora (ko-aktivatori ili ko-represori) koji modulišu receptor odgovor i (iv) prisustva steroida u ćelijskoj kulturi, organu ili tkivu. Previđanje biološkog odgovora ka prirodnom steroidu ili sintetičkom analogu pokazalo se teško; na osnovu dostupne literature stručnjak može čak i da jedinjenja nalik testosteronu mogu da indukuju angiogenezu.

[0018] Postoji potreba, a samim tim to je cilj ovog pronalaska, da se obezbedi efektivan inhibitor angiogeneze, k ije sposoban da inhibira proliferaciju endotelijalnih i/ili ćelija glatkih mišića i/ili migraciju i/ili da redukuje sintezu ili ekspresiju VEGF i/ili VEGFR, čime se inhibira neovaskularizacija u bolestima koje uključuju prekomerne regenerativne procese, tj. procese koji se javljaju u raznim bolestima.

[0019] Ovi kao i drugi ciljevi, koji će postati očigledni iz opisa ovog pronalaska koji sledi, postižu se predmetom nezavisnih patentnih zahteva. Neki od poželjnih primera izvođenja ovog pronalaska definisani su predmetom zavisnih patentnih zahteva.

Suština ovog pronalaska

[0020] Razni aspekti, pogodne karakteristike i poželjni primeri izvođenja ovog pronalaska kakvi su sumirani u tačkama koje slede, respektivno sami ili u kombinaciji, doprinose rešavanju cilja ovog pronalaska.

1. Jedinjenje definisano formulom 1

u kojem

a, b i c respektivno označavaju, nezavisno jedan od drugog, jednostruku vezu ili dvostruku vezu, pod uslovom da najmanje jedan od a, b i c predstavlja dvostruku vezu, i pod uslovom da ukoliko a predstavlja jednostruku vezu, a b predstavlja dvostruku vezu, R2nije H;

R1je ili vodonik ili C1do C6alkil;

R2je ili OR5ili vodonik, gde R5je vodonik ili C1do C12ravnolančani ili razgranati alkil;

R3je, u slučaju da c predstavlja jednostruku vezu, ili vodonik ili C1do C6alkil, ili u slučaju da c predstavlja dvostruku vezu, CHR5, gde R5predstavlja isto kao što je prethodno definisano;

R4je vodonik, C1do C12alkil, fenil nesupstituisan ili supstituisan sa C1do C12alkilom ili COR6acil grupom; R6je vodonik, C1do C12ravnolančani ili razgranati alkil, fenil ili benzoil, respektivno, nesupstituisan ili supstituisan sa C1do C12alkilom, ili bilo koja grupa koja vodi ka hidroksilu nakon biološke metabolizacije ili hemijske deprotekcije, naročito estar, etar, acetal, karbonat, karbamat, fosfat, fosfonat, ketal, sulfat, ili sulfonat, i njihove soli,

za upotrebu u medicinskom tretmanu kao inhibitor angiogeneze, pri čemu pomenuto jedinjenje predstavlja 4-hidroksitestosteron ili njegove soli ili estre.

2. Jedinjenje definisano formulom 1

u kojem

R1je ili vodonik ili C1do C6alkil;

R4je vodonik, C1do C12alkil, fenil nesupstituisan ili supstituisan sa C1do C12alkilom ili COR6acil grupom; R6je vodonik, C1do C12ravnolančani ili razgranati alkil, fenil ili benzoil, respektivno, nesupstituisan ili supstituisan sa C1do C12alkilom, ili bilo koja grupa koja vodi ka hidroksilu nakon biološke metabolizacije ili hemijske deprotekcije, naročito estar, etar, acetal, karbonat, karbamat, fosfat, fosfonat, ketal, sulfat, ili sulfonat, i njihove soli, za upotrebu kao inhibitor angiogeneze u terapiji zapaljenja i/ili kancera inhibiranjem proliferacije ili sinteze, ili samih ili u kombinaciji: proliferacije endotelijalnih ćelija, proliferacije ćelija glatkih mišića, migracije endotelijalnih ćelija, proliferacije ćelija glatkih mišića, vaskularnog endotelijalnog faktora rasta (VEGF), receptora vaskularnog endotelijalnog faktora rasta (VEGFR), , receptora 13 faktora rasta fibroblasta (FGFR 13), receptora faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGFR) α i/ili β, i receptora faktora rasta mastocita / matičnih ćelija (SCFR; takođe poznat kao c-Kit ili tirozin-proteinska kinaza Kit ili CD117), inhibitor, pri čemu pomenuto jedinjenje predstavlja 4-hidroksitestosteron ili njegove soli ili estre.

3. Jedinjenje za upotrebu prema tački 1 ili 2, gde je to jedinjenje definisano time što su a i c jednostruke veze, b je dvostruka veza, a R2je OR5, pi čemu je OR5kao što je definisano u patentnom zahtevu 1, poželjno gde R5je ili vodonik ili C1do C6ravnolančani ili razgranati alkil, a R4 je ili vodonik ili COR6sa R6koji je C1do C6.

4. Jedinjenje za upotrebu prema ovom pronalasku je 4-hidroksitestosteron (4-OHT) ili njegove soli ili estri.

5. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od prethodnih tački za upotrebu kao inhibitor neovaskularizacije kod patološkog stanja koje uključuje regenerativne procese.

6. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od prethodnih tački za prevenciju ili koje inhibira neovaskularizaciju u zapaljenskom stanju.

7. Jedinjenje za upotrebu prema tački 6, gde je to zapaljensko stanje odabrano iz grupe koju čine artritis, zapeljenske bolesti creva, ekcem, neurodermatitis.

8. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od tačaka 1 do 5 za prevenciju ili koje inhibira neovaskularizaciju izazvanu tumorom.

9. Jedinjenje za upotrebu prema tački 8, gde je neovaskularizacija izazvana tumorom tkiva dojke, poželjno kancer dojke, ili tumorom tkiva prostate, poželjno kancer prostate.

10. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od prethodnih tački 1 do 5 u profilaksi ili tretiranju čvrstog tumora i njegove metastaze.

11. Jedinjenje za upotrebu prema tački 10, gde je pomenuti čvrsti tumor odabran iz grupe koju čine kanceri bubrega kao što su karcinom ćelija bubrega, kolorektalni kancer, kancer pluća, kancer mozga i naročito glioblastoma, kancer jajnika, kancer pankreasa, i limfom, i njihove metastaze.

12. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od tačaka 1 do 5 u profilaksi ili tretiranju ne-čvrstog tumora i njihove metastaze.

13. Jedinjenje za upotrebu prema tački 9, gde je pomenuti ne-čvrsti tumor multiple mijeloma i njihove metastaze.

14. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od tačaka 1 do 5 za upotrebu u profilaksi ili tretiranju vaskularne ili vazoproliferativne neoplazme, naročito tumora endotelijalnih ćelija odabranog iz grupe koju čine hemangiome.

15. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od prethodnih tački 1 do 7 za prevenciju ili tretiranje bolesti povezane sa očima.

16. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od tačaka 1 do 5 za upotrebu u profilaksi ili tretiranju bolesti povezane sa očima odabrana iz grupe koju čine dijabetična retinopatija, makularna degeneracija, zapaljenje oka, naročito keratitis, vaskularizacija rožnjače, vaskularno injektovanje u staklasto telo, vaskularizacija očnih sočiva.

17. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od tačaka 1 do 5 za prevenciju ili koje inhibira neovaskularizaciju u zarastanju rana uključujući transformaciju regularno funkcionalnog tkiva u meko tkivo.

18. Jedinjenje za upotrebu prema tački 17 da se smanji prekomerno formiranje ožiljaka u organima kao što su jetra ili srce nakon akutne ili hronične povrede ili na koži.

19. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od tačaka 1 do 5 za prevenciju ili koje inhibira vaskularne malformacije, određenije hemangiom u koži ili čvrstim organima (jetra, mozak, srce).

20. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od tačaka 1 do 5 za prevenciju ili koje inhibira kardiovaskularne bolesti, naročito visok krvni pritisak, stenozu ili restenozu krvnih sudova, i arteriosklerozu.

21. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od tačaka 1 do 5 za tretiranje protiv gojaznosti.

22. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojoj od tačaka 1 do 5 za tretiranje protiv endometrioze. 23. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule kakva je definisana u bilo kojoj od prethodnih tačaka i farmaceutski prihvatljiv nosač i/ili ekscipijens za upotrebu u medicinskom tretmanu u skladu sa bilo kojom od prethodnih tačaka.

24. Farmaceutska kompozicija prema tački 23, gde je ta farmaceutska kompozicija pripremljena za dermalnu, mukozalnu ili submukozalnu, transdermalnu, i.m., s.c., i.v., oralnu ili supozitornu primenu ili postavljanje u šupljine.

25. Farmaceutska kompozicija prema tačkama 23 ili 24, gde je ta farmaceutska kompozicija pripremljena za oralnu upotrebu, subkutanu, kutanu, intramuskularnu intravenoznu, intraokularnu, nazalnu ili transdermalnunu primenu.

26. Kombinacija koja obuhvata

(i) aktivnu supstancu odabranu iz grupe koju čine antitela usmerena protiv VEGF, VEGFR ili rastvorljivih VEGFR/VEGFR hibrida, i inhibitora tirozin kinaze, i

(ii) jedinjenje definisano formulom 1

u kojoj

R1je ili vodonik ili C1do C6alkil;

R4je vodonik, C1do C12alkil, fenil nesupstituisan ili supstituisan sa C1do C12alkilom ili COR6acil grupom; R6je vodonik, C1do C12ravnolančani ili razgranati alkil, fenil ili benzoil, respektivno, nesupstituisan ili supstituisan sa C1do C12alkilom, ili bilo koja grupa koja vodi ka hidroksilu nakon biološke metabolizacije ili hemijske deprotekcije, naročito estar, etar, acetal, karbonat, karbamat, fosfat, fosfonat, ketal, sulfat, ili sulfonat, i njihove soli, poželjno za upotrebu kako je definisano u bilo kojoj od prethodnih tačaka, pri čemu pomenuto jedinjenje predstavlja 4-hidroksitestosteron ili njegove soli ili estre.

27. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata kombinaciju prema tački 26.

Opis crteža

[0021]

Fig.1 A i B: Test proliferacije nakon izlaganja HUVEC ćelija sa 4-OHT i TKI 258 primenom WST-1 testova, respektivno samih ili u kombinaciji;

Fig.2A Princip transwell testa migracije;

Fig.2B Analysis transwell testa migracije nakon izlaganja HUVEC ćelije sa 4-OHT;

Fig.3 Test zarastanja rana HUVEC ćelija nakon izlaganja sa 4-OHT;

Fig.4 Test cevaste migracije HUVEC ćelija nakon izlaganja sa 4-OHT primenom matrigela.

Detaljan opis ovog pronalaska

[0022] Ovaj pronalazak detaljnije je opisan poželjnim primerima izvođenja i primerima, koji su međutim, prikazani samo u ilustrativne svrhe. Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje opšte formule 1 definisane gore, pri čemu pomenuto jedinjenje predstavlja 4-hidroksitestosteron ili njegove soli ili estre, koje je začudžujuće pronađeno da efikasno inhibira angiogenezu, a naročito bilo koje od ili kombinaciju (i) do (vi):

(i) inhibicija proliferacije endotelijalnih ćelija;

(ii) inhibicija proliferacije ćelija glatkih mišića;

(iii) inhibicija migracije endotelijalnih ćelija;

(iv) inhibicija migracije ćelija glatkih mišića;

(v) redukcija ekspresije ili sinteze proteina VEGF;

(vi) redukcija ekspresije ili sinteze proteina VEGFR;

(vii) redukcija ekspresije ili sinteze proteina funkcionalno povezanih faktora rasta, uključujući i od receptora 13 faktora rasta fibroblasta (FGFR 13), receptora faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGFR) α i/ili β, i receptora faktora rasta mastocita / matičnih ćelija (SCFR; takođe poznat kao c-Kit ili tirozin-proteinska kinaza Kit ili CD117).

Tako, ono je naročito pogodno za tretiranje bolesti koja uključuje prekomerne regenerativne procese uključujući neovaskularizaciju u tkivu. Dalje, bilo koji od anti-kancer/antiproliferativnih i/ili antizapaljenskih tretmana (i) do (vii) iznad biže specifično ili selektivno efektivan kod pacijenta koji boluje od takve abnormalne proliferacije, i/ili za specijalne tkivne i organ mete kod pacijenata u kojima se javlja takva abnormalna proliferacija. Jedinjenje formule 1, 4-hidroksitestosteron (4-OHT) ili njegove soli ili estri) začuđujuće su pokazali da ispoljavaju anti-angiogenu aktivnost i inhibitorne efekte specificirane kao tačke (i) do (vii) iznad. Važno, prethodno pomenuto tkivo može specifično biti tkivo ili organ u humanom telu, u kojem može doći do (neo)vaskularizacije i može biti izazvan određeni tumor, kao što je kancerogeno ili ne-kancerogeno tkivo dojke, tkivo prostate, bilo koje intestinalno tkivo, tkivo pluća, tkivo bubrega, tkivo mozga, oka, jajnika ili vaskularno tkivo per se u kontekstu vaskularnih anomalija, koje je na primer vaskularne ili vazoproliferativne neoplazme kao što su hemangiomi ili vaskularne malformacije kao što su vaskularne malformacije sporog protoka, kapilarna malformacija, venozna malformacija, limfatična malformacija, vaskularne malformacije brzog protoka, arterijalna malformacija, arteriovenozna malformacija, arteriovenozna fistula ili kombinovane vaskularne malformacije (razne kombinacije prethodno navedenih).

[0023] Prema tome, jedinjenje formule 1 (4-OHT) veoma je korisno za patološka stanja ili situacije koje izazivaju (neo)vaskularizaciju, kakva je na primer u respektivnim slučajevima tumora ili bilo kog zapaljenskog stanja. Jedinjenje formule 1 (4-OHT) veoma je korisno za profilaksu ili tretman ostalih kancera i/ili njihovih metastaza, kod kojih je anti-angiogeneza ili vaskularizacija/neovaskularizacija ili slučajevi prethodno pomenute inhibicije ili redukcije (i) do (vii) relevantna, na primer za profilaksu ili tretman kancera bubrega kao što su karcinom ćelija bubrega, kolorektalni kancer, kancer pluća, kancer mozga, naročito glioblastom kancer jajnika, multiple mijelom, limfom, zapaljenske bolesti kao što su npr. reumatoidni artritis, zarastanje rana radi smanjenja formiranja ožiljaka (naročito u organima kao što su jetra ili srce nakon akutne ili hronične povrede ili na koži), vaskularne malformacije, vaskularne ili vazoproliferativne neoplazme, tumori endotelijalnih ćelija, kao što su hemangiome (naročito u, jetri, mozgu i/ili srcu), bolesti povezane sa očima kao što su (dijabetična) retinopatija, makularna degeneracija, zapaljenje oka, kardiovaskularne bolesti, naročito visok krvni pritisak, stenoza ili restenoza krvnih sudova, na primer izazvana arteriosklerozom, naročito aterosklerozom, na primer praćeno povredom i/ili u kontekstu angioplastike ili implantacije stenta. Dalje, inhibitor angiogeneze ovog pronalaska može se koristiti kao agens za anti-gojaznost, budući da je poznato da krvni sudovi u adipoznom tkivu nikad u potpunosti ne sazru, te su prema tome uništeni inhibitorskim angiogenezama (D. Bruemmer, Targeting Angiogenesis as Treatment for Obesity; Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 32 (2), 161-162, 2012). Štaviše, inhibitor angiogeneze ovog pronalaska može se koristiti kao aktivna supstanca za tretiranje endometrioze, znog veze između anti-angiogeneze i pozitivnog efekta protiv endometrioze.

[0024] Dalje, jedinjenje formule 1 (4-OHT) veoma je korisno u tretiranju tumora kao što su karcinomi bubrežnih ćelija, koji često razvijaju otpornost na inicijalni anti-kancer tretman, zbog čega je potrebna druga linija terapije primenom npr. mTOR inhibitora ili 2<ge>generacije TKIs. Tako, jedinjenje ovog pronalaska obezbeđuje alternativu klasičnoj anti-kancer terapiji nakon obrazovanja reistencije.

[0025] Štaviše, ovaj pronalazak obezbeđuje kombinaciju koja obuhvata jedinjenje formule 1 (4-OHT) ili njegove soli ili estre, i aktivnu supstancu odabranu iz grupe koju čine antitela usmerena protiv VEGF, VEGFR ili rastvorljivih VEGFR/VEGFR hibrida, i inhibitora tirozin kinaze (TKIs). "Kombinacija" označava fiksnu kombinaciju unutar uobičajene kompozicije ili uobičajenog doznog oblika, ili odvojena ali povezana kombinacija, npr. istovremenim ili sekvencijalnim davanjem kompozicija, respektivno koje sadrže jedinjenje formule 1 i specificirano antitelo ili TKI. Poželjni Primeri pomenutih antitela uključuju monoklonalno antitelo protiv VEGF bevacizumaba (Avastin), a poželjni primeri TKI-ova uključuju sunitinib, dovitinib (TKI 258), imatinib, sorafenib i one TKI-ove dalje prijavljene od strane Mukherji et al. (2013) i Heidegger et al. (2013) navedeni gore.

[0026] Dalje, jedinjenje formule 1 (4-OHT) veoma je korisno za tretiranje angiogeneze izazvane tumorom, naročito kancera ili njihovih metastaza, na primer kancer dojke ili kancer prostate ili njihove metastaze.

Iznenađujuće i dinstinktivno od ispitivanja iz stanja tehnike povezanog jedinjenja za inhibiciju rasta hormon-povezanih ćelija tumora i formacija metastaza, određenije u vezi sa kancerom dojke ili kancerom prostate (WO 2007/131736, WO 2007/131737), pronalazači su pronašli da jedinjenje opšte formule 1 (4-OHT) kako je prethodno definisano, inhibira proliferaciju i/ili migraciju humanih endotelijalnih ćelija i/ili ćelija glatkih mišića. Dalje, iznenađujuće je pronađeno da jedinjenje opšte formule 1 (4-OHT) kako je gore definisano, redukuje ekspresiju VEGF i VEGFR u zapaljenom i/ili kancerogenom okruženju. Primera radi, u slučajevima anti-kancer tretmana, i ponovo nezavisnim i različitim od tretmana koji uključuju inhibiciju rasta hormon-povezanih tumor ćelija i formacija metastaza kako je slučaj npr. u vezi sa kancerom dojke ili kancerom prostate (WO 2007/131736, WO 2007/131737), otkrića ovog pronalaska omogućavaju upotrebu tretmana anti-angiogeneze u odgovarajućim novim kliničkim podešavanjima. Na primer, za razliku od direktne destrukcije kancerogenih ciljanih ćelija i tkiva, inhibicija angiogeneze prema ovom pronalasku omogućava efektivano inhibiranje daljeg rasta tumora i vaskularizacije tumora putem anti-angiogeneze i/ili putem inhibicionih ili redukcionih efekata (i) do (vii) specificirani iznad. Na ovaj način, sredstvo pomoću kojeg se tumori mogu hraniti i prema tome pomoću kojeg se metastaze mogu prekinuti, što obično vodi ka izgladnjivanju tumora, a time i indirektnoj anti-tumor aktivnosti. Primera radi, tretiranja takvih hormonpovezanih kancera i metastaza, kao što su kancer dojke ili kancer prostate, mogu se izvesti inhibicijom angiogeneze izazvane takvim tumorom.

[0027] Dalje, za razliku od generalnih anaboličnih efekata kao što su stabilizacija kolagena i opciono drugih podržavajućih proteina, a pod time smatrajući i stabilizaciju nosećeg tkiva i povezanih tretmana poput miokardijalnog infarkta i moždanog infarkta, arterioskleroze, urinarne inkontinencije i slično (WO2009/062683), otkrića ovog pronalaska ponovo omogućavaju upotrebu anti-angiogeneza tretmana u odgovarajućim novim kliničkim podešavanjima.

[0028] Generalno, a u vezi sa terapeutskim primenama, nova klinička podešavanja okarakterisana su razlikom u odnosu na, na primer, grupu pacijenata, podešavanje vremena (npr. odlučivanja kada i gde početi tretman), doze, i kombinovanje sa drugim tretmanima.

[0029] Bez vezivanja za bilo koju teoriju, smatra se da se ovo postiže zbog redukovanja npr. VEGF i/ili VEGFR i/ili drugih proliferacija-, kancer- i/ili zapaljenje-relevantnih faktora rasta ili receptora faktora rasta, npr. u ćelijama prethodno pomenutog zapaljenog i/ili kancerogenog tkiva, npr. bilo koja epitelijalna ćelija koja formira prethodno pomenuti organ i/ili prethodno pomenuti tumor ili u stromalnim ćelije, čime direktno imaju anti-angiogeni efekat na vaskularne ćelije, ili zbog usporavanja VEGF i/ili VEGFR i/ili drugih proliferacija-, kancer- i/ili zapaljenje-relevantnih faktora rasta ili receptora faktora rasta u endotelijalnim i/ili ćelijama glatkih mišića per se. Prema tome, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje za tretman bolesti koja uključuje neželjenu proliferaciju i/ili migraciju endotelijalnih i/ili ćelija glatkih mišića, na primer za prethodno pomenuti bolesti.

[0030] Na osnovu ovih začuđujućih otkrića ovog pronalaska, jedinjenje formule I (4-OHT) kredibilno je korisno u terapeutskim kliničkim podešavanjima u kojima su uključeni funkcionalno povezani faktori rasta, naročito receptor 13 faktora rasta fibroblasta (FGFR 13), receptor faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGFR) a i/ili β, i receptor faktora rasta mastocita / matičnih ćelija (SCFR; takođe poznat kao c-Kit ili tirozin-proteinska kinaza Kit ili CD117).

[0031] Ovaj inhibitorni efekat može se eksploatisati u raznim aspektima:

1. neovaskularizacija izazvana tumorom može biti efektivno inhibirana;

2. neovaskularizacija u zapaljenom tkivu može biti inhibirana;

3. abnormalna proliferacija endotelijalnih i/ili ćelija glatkih mišića perse može biti inhibirana, kako to može biti patološka izmena u tumorima endotelijalnih ćelija ili vaskularnim malformacijama.

[0032] U upotrebi, prethodno pomenuta jedinjenja may mogu se dati pacijentu u količini pogodnoj za inhibiranje proliferacije i/ili migracije endotelijalnih i/ili ćelija glatkih mišića. Dalje, ta upotreba može se odrediti pogodnim uslovima primenjivanja, kao što su tip pacijenta, ili vrsta ciljanog mesta ili organa ili farmaceutske kompozicije ili formulacija koja se sposobna da transportuje prethodno pomenute aktivnosti in vivo na određeno konačno ciljano mesto ili organ unutar pacijenta.

[0033] Dalje, prethodno pomenuto jedinjenje može se dati topiklno i/ili biti naneto na mukozu, npr. u obliku masti, kreme, losiona, gela, spreja, praha, ulja ili trensdermalnog plastera, što takođe obuhvata upotrebu deponujućih oblika (uključujući pelete); ono se može dati parenteralno, npr. intramuskularno, ili intravenoznom ili subkutanom injekcijom ili infuzijom, ili intranazalna, instalacija u šupljine (npr. bešiku, abdomen, creva), i/ili oralno, npr., obliku tableta, kapsula, šećerom ili filmom obloženih tableta, tečnih rastvora ili suspenzija ili rektalno, npr. u obliku supozitorija, ili intraokularno, npr. u obliku injekcije i kao kapi za oči.

[0034] Primenjena količina za inhibiranje proliferacije i/ili migracije endotelijalnih i/ili ćelija glatkih mišića može se pogodno odabrati na primer u zavisnosti od starosti, težine, stanja korisnika i oblika primene; na primer doza koja je usvojena za oralnu primenu kod odraslih ljudi može se kretati od oko 1 do oko 150-1000 mg po primeni, od 1 do 5 puta na dan.

[0035] Shodno tome, pmenuta jedinjenja mogu biti sadržana u farmaceutskim kompozicijama koje dalje obuhvataju farmaceutski prihvatljiv nosač i/ili ekscipijens i/ili razblaživač.

[0036] Za topikalnu upotrebu, ta kompozicija može biti formulisana uključujući, na primer, biljna ulja i masti kao što su bademovo ulje, ulje kikirikija, maslinovo ulje, ulje iz koštice breskve, kastor ulje; biljni ekstrakti; eterična ulja; dalji biljni voskovi i sintetička i životinjska ulja; masti i voskovi kao što su stearinska kiselina i setarinski estri, laurinska kiselina i laurinski estri, sorbitanski estri, ceterailni alkoholi; lecitin, lanolinski alkoholi, karoten, mirisi, mono- ili polihidrični alkoholi, urea, surfaktanti kao što su poloksameri, Tween-ovi, i slično; prezervativi i koloranti itd.. Formulacija kao emulzija ulje-u-vodi ili voda-u-ulju su poželjne.

[0037] Čvrsti oralni oblici mogu na primer da sadrže, zajedno sa aktivnim jedinjenjem, razblaživače, npr. laktoza, dekstroza, saharoza, celuloza, kukuruzni skrob ili krompirov skrob; maziva, npr. silika, talk, stearinska kiselina, magnezijum ili kalcijum stearat, i/ili polietilen glikoli, poloaksameri, tokoferil polietilen glikol sukcinat (TPGS); vezujući agensi, npr. skrobovi, arabik gume, želatin, metilceluloza, karboksimetilceluloza ili polivinil pirolidon; dezagregirajući agensi, npr. skrob, algininska kiselina, alginati ili natrijum skrob glikolat; šumeće mešavine; bojila, zaslađivači; agensi vlaženja, kao što su lecitin, polisorbati, lauryisulfati; i, uopšteno, ne-toksične i farmakološki neaktivne supstance koje se koriste u farmaceutskim formulacijama. Ovi preparati mogu se proizvesti na poznat način, na primer, umešavanjem, granulisanjem, tabletiranjem, postupcima šećernog oblaganja, ili film-oblaganja. Tečne disperzije za oralnu upotrebu mogu biti npr. sirupi, emulzije i suspenzije.

[0038] Sirupi mogu da sadrže nosač, na primer, saharozu ili saharozu sa glicerinom i/ili manitolom i/ili sorbitolom.

[0039] Suspenzije i emulzije mogu da sadrže nosač, na primer, prirodnu gumu, agar, natrijum alginat, pektin, metilcelulozu, karboksimetilcelulozu, ili polivinil alkohol, poloaksamere, ili TPGS.

[0040] Suspenzije ili rastvori za intramuskularne injekcije mogu da sadrže, zajedno sa aktivnim jedinjenjem, farmaceutski prihvatljiv nosač, npr. sterilnu vodu, maslinovo ulje, etil oleat, glikole, npr. propilen glikol, i ukoliko je poželjno, pogodnu količinu lidokain hidrohlorida.

[0041] Rastvori za intravenozne ili subkutane injekcije ili infuzije mogu da sadrže kao nosač, na primer, sterilnu vodu ili poželjno mogu biti u obliku sterlinih, vodenih, izotoničnih slanih rastvora.

[0042] Supozitorije mogu da sadrže zajedno sa aktivnim jedinjenjem farmaceutski prihvatljiv nosač, npr. kakao-buter, polietilen glikol, surfaktant poliooksietilen sorbitan estra masne kiseline ili lecitin.

[0043] Sadržaj aktivnog jedinjenja pogodne kompozicije može biti najmanje 0.0001 mas.%, na primer između 0.0001 i 20mas.%, poželjno 0.6% do 10mas.%, poželjnije 1 i 5mas.%, jedinjenja upotrebljenog prema ovom pronalasku.

[0044] Ukoliko se supstance umešavaju kako bi promovisale penetraciju kroz kožu, njihov sadržaj, kada se koriste hijaluronidaze, može biti, na primer, između 0.01 i 1mas.%, poželjno 0.05 i 0.2mas.%, kada se koristi dimetilizosorbid ili DMSO između 1 i 25mas.%, poželjno 5 i 10mas.%, poloaksameri 0.5-30%, TPGS 0.5-30%

[0045] Ovaj pronalazak dalje je ilustrovan opisom primera koji slede, koji su međutim navedeni samo u ilustrativne svrhe.

Priprema i tretiranje endotelijalnih ćelija umbilikalnih vena

[0046] Svi eksperimenti opisani u odeljcima koji slede izvedeni su najmanje u triplikatima, uglavnom primenom 2 različita ćelijska broja i različitim inkubacionim vremenima. Svi eksperimenti dodatno su sprovedeni u nekoliko replikata (jedan HUVEC u različitim prolazima kao i azličitim preparatima.

[0047] Ukratko, humane endotelijalne ćelije umbilikalne vene (u nastavku HUVEC) sveže su izolovane iz humanih umbilikalnih vlakana postupcima poznatim u struci, i upotrebljene u eksperimentima za prolaz p4 do prolaza p10 radi prevencije bilo kakvih aretfalta koji potiču iz in vitro promena tih ćelija.

[0048] U svim eksperimentima, C-19 steroidno jedinjenje 4-OHT dodato je u ćelije u indikovanoj koncentraciji u EGM-2 medijumu (Lonza) kako bi se zaobišli bilo kakvi aretafkti koji potiču od egzogenih faktora sadržanih u medijumu. Svi eksperimenti izvedeni su najmanje tri puta i pokazali su isti obrazac odgovora.

[0049] Identite,diferencijacija i dugoročna stabilnost genske ekspresije kultivisanih HUVEC-ćelija procenjena je primenom imunocitohemijskog bojenja sa anti-von Willebrand Faktor (vWF) antitelom. Ekspresija vWF je visoko specifična za endotelijalne ćelije. Stabilnost vWF ekspresije kvantifikovana je između prolaza 1 i 10. Unutar ovog vremenskog rasporeda, došlo je samo do manjih promena unutar kultivacionog perioda i između različitih upotrebljenih serija.

Primer 1: Inhibicija proliferacije endotelijalnih ćelija

[0050] Kao jedan postupak za određivanje ćelijske proliferacije sisarskih endotelijalnih ćelija, izvedeni su testovi proliferacije kakvi su opisani u nastavku.

[0051] Za određivanje brzina proliferacije, izvedeni su WST-1 testovi. Suštinski, 1000 HUVEC ćelije/bazenčić zasejano je u ploču sa 96-bazenčića i izloženo je indikovanim koncentracijama 4-OHT (takođe označen lab. kodom CR 1447) tokom 5 dana. Inhibicija proliferacije kvantifikovana je merenjem enzimatskog cepanja tetrazoliumske soli WST-1 do formazana celularnim mitohondrijalnim dehidrogenazama kao merilo za ćelijsku vijabilnost, gde je ćelijska vijabilnost tretiranih ćelija izražena kao procenat (%) netretiranih kontrola koje sadrže samo rastvarač u poželjnim koncentracijama. Srednje vrednosti 3 nezavisna eksperimenta izvedena u triplikatima prikazane su na Fig.1A.

kako je prikazano na Fig.1A, inhibicija rasta 4-hidroksitestosteronom pri koncentracijama od 1, 2 i 5 µM pokazano je da je veoma značajna (p<0.001) u sve 3 HUVEC ćelijske kulture (t-test), u poređenju sa poznatim VEGF inhibitorom TKI258 (Dovitinib) (0.2, 0.4 i 1.0µM). Ćelije su uzgajane i podkultivisane u medijumu za rast endotelijalnih ćelija (EGM) tokom 3 i 5 dana, respektivno. Kako je dalje prikazano na Fig.1B, inhibicija rasta CR 1447 u kombinaciji sa TKI 258 (u poređenju sa svakim jedinjenjem ponaosob) takođe je veoma značajna (p < 0.001) u sve 3 HUVEC ćelijske kulture (t-test).

Primer 2: Inhibicija migracije endotelijalnih ćelija primenom transwell testa migracije

[0052] Preduslov angiogeneze je sposobnost endotelijalnih ćelija da migriraju u tkivo. Ovaj proces je primećen u zarastanju rana i takođe u procesu rasta tumora. Endotelijalne ćelije migriraju u tkivo duž gradijenta faktora kao što su VEGF. Ovo ponašanje može se ispitati u in vitro modelu migracije primenom transwell sistema, kao što je npr. očigledno iz Fig.2A. Specifično, Fig.2A prikazuje tipičnu postavku transwell testa radi praćenja ćelijske migracije.

[0053] Za ispitivanje migracije HUVEC ćelija primenomtranswell sistema sa PET-membranama sa veličinom pora od 3 µm (24-bazenčići w/o fibronektin-oblaganje), HUVEC ćelije u različitim ćelijskim brojevima smeštene su u gornji odeljak, pri čemu je atraktant smešten u niži odeljak. Broj ćelija na mestru privlačenja membrane, upoređen je sa brojem ćelija vidljive u kontrolnom sistemu (puferska kontrola) i sa atraktantom (VEGF)u prisustvu 4-OHT.

[0054] Fig.2B pokazuje tipičnu sliku tri nezavisna eksperimenta, specifično transwell-testom primenom Fl-blok membrana i propidijum-jodid bojenja migriranih HUVEC-ova. Ćelije su zasejane kako je opisano, a migracija je izvedena tokom 48 h primenom VEGF kao atraktanta u nižoj komori. Crteži predstavljaju primere iz 3 nezavisna eksperimenta. U poređenju sa kontrolom (Co). Kako se može videti, 4-OHT značajno inhibira migraciju ćelija u membrani, što se pokazano značajno redukovanim brojem migrirajućih ćelija u uzorcima podvrgnutim tretiranjima sa 4.OHT (kod "CR").

Primer 3: Inhibicija migracije endotelijalnih ćelija primenom testa zarastanja rana

[0055] Još jedan postupak za ispitivanje ćelijske migracije je test zarastanja rana (skarifikacije). Ovaj test podseća na događaje koji se pojavljuju u akutnom procesu zarastanja rane. Oslobađanjem faktora iz oblasti rane endotelijalne ćelije migriraju u oblast skarifikacije, što će podsećati na prosec zarastanja i zatvaranja rane vaskularizacijom, a zatim formiranjem ožiljka.

Ukratko, HUVEC ćelije zasejane su u ploču sa 12-bazenčića i ostavljene da rastu dok nisu dostigle konfluentnost. Naknadno, skarifikacija je izvedena, čime se uklanjaju ćelije u okviru oblasti skarifikacije. Ćelije su izložene sa 10 µM 4-OHT, a migracija endotelijalnih ćelija u područje skarifikacije praćene su mikroskopski primenom rasporeda od 2 do 48 h, u zavisnosti od pojedinačnog eksperimentalnog dizajna.

[0056] Tipična slika od tri nezavisna eksperimenta prikazana je na Fig.3 predstavljajući tipične rezultate iz 10 nezavisnih eksperimenata primenom različitih koncentracija i vremeskih rasporeda. Kako je prikazano, migracija endotelijalnih ćelija efektivno je inhibirana pomoću 4-OHT kako je prikazano u testu zarastanja rane (test skarifikacije). Nakon 24 h jasna redukcija migracije HUVEC ćelija u području skarifikacije u poređenju sa netretiranim kontrolnim ćelijama, primećena je pod uticajem 4-OHT (CR 1447).

Primer 4: Test cevaste migracije

[0057] Nakon migracije u tkivo skarifikacije, HUVEC ćelije menjaju njihove karakteristike rasta i formiraju mikrosudove. Ovaj efekat procenjen je mikroskopski.

[0058] HUVEC ćelije zasejane su na matrigelu (7 mg/ml). Ćelijske suspenzije kao i gelovi koji sadrže 10 µM/L 4-OHT dodate su nakon zasejavanja, dozvoljeno je formiranje razgranatih tačaka tokom prijanjanja na ovu površinu imitirajući osnovni karakter membrane. Cevasta formacija analizirana mikroskopski nakon 12 i 48 sati.

[0059] Tipična slika od tri nezavisna eksperimenta prikazana je na Fig.4. Shodno tome, cevasta formacija humanih endotelijalnih ćelija (HUVEC) značajno je inhibirana primenom 4-OHT ("CR"-specificiranih uzoraka u donjem redu). Kada su humane endotelijalne ćelije podvrgnute oblogama matrigela, tačke grananja kao jedan od markera cevaste formacije, inhibirane su pomoću 4-OHT u poređenju sa netretiranim kontrolama (crvene strelice). Na taj način, 4-OHT značajno inhibiraju grananje ćelija i masivno distrinuiranih lineranih ćelija-ćelija-konekcija na gelu, što ukazuje na neverovatnu inhibiciju (neo) vaskularizacije.

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje definisano formulom 1

u kojoj a, b i c respektivno označavaju, nezavisno jedan od drugog, jednostruku vezu ili dvostruku vezu, pod uslovom da najmanje jedan od a, b i c predstavlja dvostruku vezu, i pod uslovom da ukoliko a predstavlja jednostruku vezu, a b predstavlja dvostruku vezu, R2nije H; R1je ili vodonik ili C1do C6alkil; R2je ili OR5ili vodonik, gde je R5vodonik ili C1do C12ravnolančani ili razgranati alkil; R3je, u slučaju da c predstavlja jednostruku vezu, ili vodonik ili C1do C6alkil, ili u slučaju da c predstavlja dvostruku vezu, CHR5, gde R5predstavlja isto kao što je prethodno definisano; R4je vodonik, C1do C12alkil, fenil nesupstituisan ili supstituisan sa C1do C12alkilom ili COR6acil grupom; R6je vodonik, C1do C12ravnolančani ili razgranati alkil, fenil ili benzoil, respektivno nesupstituisan ili supstituisan sa C1do C12alkilom, ili bilo koja grupa koja vodi ka hidroksilu nakon biološke metabolizacije ili hemijske deprotekcije, naročito estar, etar, acetal, karbonat, karbamat, fosfat, fosfonat, ketal, sulfat, ili sulfonat; i njihove soli, za upotrebu u medicinskom tretmanu kao inhibitor angiogeneze, pri čemu pomenuto jedinjenje predstavlja 4-hidroksitestosteron ili njegove soli ili estre.
2. Jedinjenje definisano formulom 1

u kojoj a, b i c respektivno označavaju, nezavisno jedan od drugog, jednostruku vezu ili dvostruku vezu, pod uslovom da najmanje jedan od a, b i c predstavlja dvostruku vezu, i pod uslovom da ukoliko a predstavlja jednostruku vezu, a b predstavlja dvostruku vezu, R2nije H; R1je ili vodonik ili C1do C6alkil; R2je ili OR5ili vodonik, gde je R5vodonik ili C1do C12ravnolančani ili razgranati alkil; R3je, u slučaju da c predstavlja jednostruku vezu, ili vodonik ili C1do C6alkil, ili u slučaju da c predstavlja dvostruku vezu, CHR5, gde R5predstavlja isto kao što je prethodno definisano; R4je vodonik, C1do C12alkil, fenil nesupstituisan ili supstituisan sa C1do C12alkilom ili COR6acil grupom; R6je vodonik, C1do C12ravnolančani ili razgranati alkil, fenil ili benzoil, respektivno, nesupstituisan ili supstituisan sa C1do C12alkilom, ili bilo koja grupa koja vodi ka hidroksilu nakon biološke metabolizacije ili hemijske deprotekcije, naročito estar, etar, acetal, karbonat, karbamat, fosfat, fosfonat, ketal, sulfat, ili sulfonat, i njihove soli, za upotrebu prema zahtevu 1 u terapiji zapaljenja i/ili kancera inhibiranjem proliferacije ili sinteze, ili samih ili u kombinaciji: proliferacije endotelijalnih ćelija, proliferacije ćelija glatkih mišića, migracije endotelijalnih ćelija, proliferacije ćelija glatkih mišića, vaskularni endotelijalni faktor rasta, receptor vaskularnog endotelijalnog faktora rasta, receptor 13 faktora rasta fibroblasta, receptor α i/ili β faktora rasta izveden iz trombocita, i receptor faktora rasta mastocita / matičnih ćelija, pri čemu pomenuto jedinjenje predstavlja 4-hidroksitestosteron ili njegove soli ili estre.
3. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od prethodnih zahteva za upotrebu kao inhibitor neovaskularizacije kod patološkog stanja koje uključuje regenerativne procese.
4. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od prethodnih zahteva za prevenciju ili inhibiranje vaskularizacije u zapaljenskom stanju, naročito gde je to zapaljensko stanje odabrano iz grupe koju čine artritis, zapeljenske bolesti creva, ekcem, i neurodermatitis.
5. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od prethodnih zahteva za prevenciju ili inhibiranje vaskularizacije izazvane tumorom, naročito izazvane kancerom dojke ili kancerom prostate.
6. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od prethodnih zahteva 1 do 5 u profilaksi ili tretiranju čvrstog tumora, poželjno odabranog iz grupe koju čine kancer bubrega, kolorektalni kancer, kancer pluća, kancer mozga, kancer jajnika, kancer pankreasa i limfom, i njihove metastaze; ili u profilaksi ili tretiranju nečvrstog tumora, poželjno multiple mijeloma ili njegove metastaze.
7. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1 do 4 za upotrebu u profilaksi ili tretiranju bolesti ili stanja odabranog od: • vaskularne ili vazoproliferativne neoplazme, poželjno tumor endotelijalne ćelije i naročito hemangioma, • bolesti povezane sa očima, naročito gde je ta bolest povezana sa očima odabrana iz grupe koju čine retinopatija, makularna degeneracija, zapaljenje oka, vaskularizacija rožnjače, vaskularno injektovanje u staklasto telo, i vaskularizacija očnih sočiva, • zarastanje rana, ili za transformaciju regularno funkcionalnog tkiva u meko tkivo, određenije da se smanji prekomerno formiranje ožiljaka, • vaskularne malformacije, određenije protiv hemangioma u koži ili čvrstim organima, • kardiovaskularne bolesti, naročito hipertenzija, stenoza ili restenoza krvnih sudova, arterioskleroza • gojaznost, • endometrioza.
8. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule kakva je definisana u bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu pomenuto jedinjenje predstavlja 4-hidroksitestosteron ili njegove soli ili estre, i farmaceutski prihvatljiv nosač i/ili ekscipijens za upotrebu u medicinskom tretmanu u skladu sa bilo kojim od prethodnih zahteva.
9. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 8, gde je ta farmaceutska kompozicija pripremljena za dermalnu, mukozalnu, submukozalnu, transdermalnu, i.m. i.v., s.c, intradermalnu, oralnu, nazalnu, intraokularnu ili supozitornu primenu ili postavljanje u šupljine.
10. Kombinacija koja obuhvata: (i) aktivnu supstancu odabranu iz grupe koju čine antitela usmerena protiv VEGF, VEGFR ili rastvorljivih VEGFR/VEGFR hibrida, i inhibitora tirozin kinaze, i (ii) jedinjenje definisano formulom 1

u kojoj a, b i c respektivno označavaju, nezavisno jedan od drugog, jednostruku vezu ili dvostruku vezu, pod uslovom da najmanje jedan od a, b i c predstavlja dvostruku vezu, i pod uslovom da ukoliko a predstavlja jednostruku vezu, a b predstavlja dvostruku vezu, R2nije H; R1je ili vodonik ili C1do C6alkil; R2je ili OR5ili vodonik, gde R5je vodonik ili C1do C12ravnolančani ili razgranati alkil; R3je, u slučaju da c predstavlja jednostruku vezu, ili vodonik ili C1do C6alkil, ili u slučaju da c predstavlja dvostruku vezu, CHR5, gde R5predstavlja isto kao što je prethodno definisano; R4je vodonik, C1do C12alkil, fenil nesupstituisan ili supstituisan sa C1do C12alkilom ili COR6acil grupom; R6je vodonik, C1do C12ravnolančani ili razgranati alkil, fenil ili benzoil, respektivno, nesupstituisan ili supstituisan sa C1do C12alkilom, ili bilo koja grupa koja vodi ka hidroksilu nakon biološke metabolizacije ili hemijske deprotekcije, pri čemu pomenuto jedinjenje predstavlja 4-hidroksitestosteron ili njegove soli ili estre.
11. Kombinacija prema zahtevu 10 za upotrebu u medicinskom tretmanu kako je definisano u bilo kom od prethodnih zahteva.