ES2664571T3 - Anticuerpos monoclonales contra GT468 para el tratamiento de cáncer - Google Patents

Abstract

Un anticuerpo que se une a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 y que media la inhibición de la proliferación de células, donde dichas células expresan una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 y/o se caracterizan por la asociación de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 con su superficie celular.

Description

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colon, cáncer de páncreas, cáncer de esófago, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de riñón, cáncer de próstata y cáncer de hígado.

En una realización particular, el sujeto al que se le administra el anticuerpo se trata adicionalmente con un agente quimioterapéutico, radiación o un agente que modula, por ejemplo, mejora o inhibe, la expresión o actividad de un receptor de Fc, por ejemplo, un receptor de Fc-gamma, tal como una citoquina. Las citoquinas típicas para la administración durante el tratamiento incluyen al factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), al factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF), interferón  (IFN-) y factor de necrosis tumoral (TNF). Los agentes terapéuticos típicos incluyen, entre otros, agentes antineoplásicos tales como doxorrubicina, cisplatino, Taxotere, 5-fluoruracilo, metotrexato, gemcitabina y ciclofosfamida.

En otro aspecto más, la invención se refiere a una estrategia de inmunización para inmunizar animales no humanos tales como ratones con GT468 humana o un fragmento de péptido de la misma para obtener anticuerpos. Los péptidos preferidos para la inmunización son aquellos seleccionados del grupo que consiste en las SEQ ID NOs: 210 y 35-79, o sus derivados. Por consiguiente, en realizaciones preferidas, los anticuerpos de la invención son los obtenidos por inmunización usando péptidos seleccionados del grupo que consiste en las SEQ ID NOs: 2-10 y 3579, o derivados de las mismas. Análogamente, los anticuerpos contra GT468 pueden generarse en un animal transgénico no humano, tal como un ratón transgénico. El animal transgénico no humano puede ser un ratón transgénico que tiene un genoma que comprende un transgén de cadena pesada y un transgén de cadena ligera que codifica todo o una porción de un anticuerpo.

Se pueden inmunizar animales de tipo silvestre, así como animales no humanos transgénicos con una preparación purificada o enriquecida de antígeno GT468 y/o ácidos nucleicos y/o células que expresan GT468 o un fragmento peptídico de los mismos. Preferiblemente, el animal no humano es capaz de producir múltiples isotipos de anticuerpos monoclonales humanos para GT468 (por ejemplo, IgG, IgA y/o IgM) sometiéndose a recombinación V-D-J y cambio de isotipo. El cambio de isotipo puede producirse, por ejemplo, mediante el cambio de isotipo clásico o no clásico.

De acuerdo con esto, en otro aspecto más, la enseñanza abarca células B aisladas de un animal no humano como se describió anteriormente. Las células B aisladas se pueden inmortalizar por fusión a una célula inmortalizada para proporcionar una fuente (por ejemplo, un hibridoma) de anticuerpos. Tales hibridomas (es decir, que producen anticuerpos descritos en este documento) también están abarcados por la presente enseñanza.

Como se ejemplifica aquí, los anticuerpos de la invención se pueden obtener directamente de hibridomas que expresan el anticuerpo, o se pueden clonar y expresar en forma recombinante en una célula huésped (por ejemplo, una célula CHO o una célula linfocítica). Otros ejemplos de células huésped son microorganismos, tales como E. coli, y hongos, tales como levadura. Alternativamente, pueden producirse de forma recombinante en un animal no humano o planta transgénicos.

Las células de hibridoma preferidas para producir los anticuerpos descritos en este documento son las depositadas en DSMZ (Inhoffenstr. 7B, 38124 Braunschweig, Alemania) que tienen las siguientes designaciones y números de acceso:

a.

4E9-1H9, número de acceso DSM ACC2822, depositada el 13 de marzo de 2007

b.

9B6-2A9, número de acceso DSM ACC2826, depositada el 13 de marzo de 2007

c.

59D6-2F2, número de acceso DSM ACC2824, depositada el 13 de marzo de 2007

d.

61C11-2B5, número de acceso DSM ACC2825, depositada el 13 de marzo de 2007

e.

78H11-1H6, número de acceso DSM ACC2823, depositada el 13 de marzo de 2007

f.

22-1A-1, número de acceso DSM ACC2895, depositada el 11 de marzo de 2008

g.

22-2A-1, número de acceso DSM ACC2893, depositada el 11 de marzo de 2008

h.

22-9B-1, número de acceso DSM ACC2896, depositada el 11 de marzo de 2008

i.

23-33A-1, número de acceso DSM ACC2897, depositada el 11 de marzo de 2008

j.

23-19A-1, número de acceso DSM ACC2891, depositada el 11 de marzo de 2008

k.

F11 # 33F7D12, número de acceso DSM ACC2894, depositada el 11 de marzo de 2008

l.

4A12 2D4 1A10, número de acceso DSM ACC2892, depositada el 11 de marzo de 2008

m.

4E9 1D12 2D4, número de acceso DSM ACC2898, depositada el 11 de marzo de 2008

Los anticuerpos preferidos son aquellos producidos por y obtenibles a partir de los hibridomas descritos anteriormente y las formas quimerizadas y humanizadas de los mismos. Otros anticuerpos preferidos son aquellos que tienen la especificidad de los anticuerpos producidos por los hibridomas descritos anteriormente y, en particular, los que comprenden la porción de unión a antígeno o el sitio de unión a antígeno, en particular la región variable, de los anticuerpos producidos por y que pueden obtenerse de los hibridomas descritos anteriormente.

En las realizaciones preferidas, los anticuerpos, en particular las formas quimerizadas de anticuerpos incluyen anticuerpos que comprenden una región constante de cadena pesada (CH) que comprende una secuencia de aminoácidos derivada de una región constante de cadena pesada humana tal como la secuencia de aminoácidos

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El término "tratamiento de una enfermedad" incluye curar, acortar la duración, mejorar, prevenir, ralentizar o inhibir la progresión o el empeoramiento, o prevenir o retrasar el inicio de una enfermedad o los síntomas de la misma.

Una muestra puede ser cualquier muestra útil de acuerdo con la presente invención, en particular una muestra biológica tal como una muestra de tejido, que incluye fluidos corporales, y/o una muestra celular y puede obtenerse de la manera convencional tal como mediante biopsia de tejido, incluida la biopsia por punción, y tomando sangre, aspirado bronquial, esputo, orina, heces u otros fluidos corporales. De acuerdo con la invención, el término "muestra biológica" también incluye fracciones de muestras biológicas.

El término "anticuerpo" se refiere a una glucoproteína que comprende al menos dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro, o una porción de unión a antígeno de las mismas. El término "anticuerpo" también incluye todas las formas recombinantes de anticuerpos, en particular de los anticuerpos descritos en la presente memoria, por ejemplo, anticuerpos expresados en procariotas, anticuerpos no glicosilados y cualquier fragmento y derivado de anticuerpo que se une a antígeno como se describe a continuación. Cada cadena pesada está compuesta por una región variable de cadena pesada (abreviada en este documento como VH) y una región constante de cadena pesada. Cada cadena ligera está compuesta por una región variable de cadena ligera (abreviada en este documento como VL) y una región constante de cadena ligera. Las regiones VH y VL pueden subdividirse adicionalmente en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de complementariedad (CDR), intercaladas con regiones que están más conservadas, denominadas regiones marco (FR). Cada VH y VL está compuesta por tres CDR y cuatro FR, dispuestas desde el terminal amino al terminal carboxilo en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Las regiones variables de las cadenas pesada y ligera contienen un dominio de unión que interactúa con un antígeno. Las regiones constantes de los anticuerpos pueden mediar la unión de la inmunoglobulina a tejidos o factores del huésped, que incluyen diversas células del sistema inmune (por ejemplo, células efectoras) y el primer componente (Clq) del sistema de complemento clásico.

El término "anticuerpo humanizado" se refiere a una molécula que tiene un sitio de unión a antígeno que se deriva sustancialmente de una inmunoglobulina de una especie no humana, en donde la estructura restante de inmunoglobulina de la molécula se basa en la estructura y/o secuencia de una inmunoglobulina humana. El sitio de unión a antígeno puede comprender dominios variables completos fusionados en dominios constantes o solo las regiones determinantes de complementariedad (CDR) injertadas en regiones marco apropiadas en los dominios variables. Los sitios de unión a antígeno pueden ser de tipo silvestre o modificados por una o más sustituciones de aminoácidos, por ejemplo, modificados para parecerse más a las inmunoglobulinas humanas. Algunas formas de anticuerpos humanizados conservan todas las secuencias de CDR (por ejemplo, un anticuerpo de ratón humanizado que contiene las seis CDR del anticuerpo de ratón). Otras formas tienen una o más CDR que están alteradas con respecto al anticuerpo original.

El término "anticuerpo quimérico" se refiere a aquellos anticuerpos en los que una porción de cada una de las secuencias de aminoácidos de cadenas pesada y ligera es homóloga a secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de una especie particular o pertenecientes a una clase particular, mientras que el resto el segmento de la cadena es homólogo a las secuencias correspondientes en otra. Típicamente, la región variable de ambas cadenas ligera y pesada imita las regiones variables de anticuerpos derivados de una especie de mamíferos, mientras que las porciones constantes son homólogas a secuencias de anticuerpos derivados de otra. Una clara ventaja de tales formas quiméricas es que la región variable puede derivarse convenientemente de fuentes actualmente conocidas que usan células B fácilmente disponibles o hibridomas de organismos hospedadores no humanos en combinación con regiones constantes derivadas, por ejemplo, de preparaciones de células humanas. Si bien la región variable tiene la ventaja de facilidad de preparación y la especificidad no se ve afectada por la fuente, la región constante que es humana, es menos probable que provoque una respuesta inmune de un sujeto humano cuando se inyectan los anticuerpos que serían la región constante de una fuente no humana. Sin embargo, la definición no está limitada a este ejemplo particular.

El término "porción de unión a antígeno" de un anticuerpo (o simplemente "porción de unión"), como se usa en la presente memoria, se refiere a uno o más fragmentos de un anticuerpo que retienen la capacidad de unirse específicamente a un antígeno. Se ha demostrado que la función de unión a antígeno de un anticuerpo puede realizarse mediante fragmentos de un anticuerpo de longitud completa. Los ejemplos de fragmentos de unión abarcados dentro del término "porción de unión a antígeno" de un anticuerpo incluyen (i) fragmentos Fab, fragmentos monovalentes que consisten en los dominios VL, VH, CL y CH; (ii) fragmentos F(ab')2, fragmentos bivalentes que comprenden dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; (iii) fragmentos Fd que consisten en los dominios VH y CH; (iv) fragmentos Fv que consisten en los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo, (v) fragmentos dAb (Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546), que consisten en un dominio VH; (vi) regiones aisladas determinantes de complementariedad (CDR), y (vii) combinaciones de dos o más CDR aisladas que pueden unirse opcionalmente mediante un enlazador sintético. Además, aunque los dos dominios del fragmento Fv, VL y VH, están codificados por genes separados, se pueden unir, usando métodos recombinantes, mediante un enlazador sintético que les permite formarse como una sola cadena de proteína en la que las regiones VL y VH se aparean para formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv de cadena sencilla (scFv); véase, por ejemplo, Bird et al. (1988) Science 242: 423-426, y Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883).

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