ES2727532T3 - Intervenciones basadas en angiopoyetina para el tratamiento de la malaria cerebral - Google Patents

Intervenciones basadas en angiopoyetina para el tratamiento de la malaria cerebral Download PDF

Info

Publication number
ES2727532T3
ES2727532T3 ES14800207T ES14800207T ES2727532T3 ES 2727532 T3 ES2727532 T3 ES 2727532T3 ES 14800207 T ES14800207 T ES 14800207T ES 14800207 T ES14800207 T ES 14800207T ES 2727532 T3 ES2727532 T3 ES 2727532T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
angiopoietin
modified
composition
mice
subject
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES14800207T
Other languages
English (en)
Inventor
Ngambo Lisa Arleen Purcell
Sarah Higgins
Kevin Kain
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University Health Network
Regeneron Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
University Health Network
Regeneron Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University Health Network, Regeneron Pharmaceuticals Inc filed Critical University Health Network
Application granted granted Critical
Publication of ES2727532T3 publication Critical patent/ES2727532T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/49—Cinchonan derivatives, e.g. quinine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1858—Platelet-derived growth factor [PDGF]
    • A61K38/1866—Vascular endothelial growth factor [VEGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1891—Angiogenesic factors; Angiogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/515—Angiogenesic factors; Angiogenin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una proteína angiopoyetina modificada para su uso en un método de tratamiento, prevención o mejora de al menos un síntoma, indicación o complicación de la malaria cerebral, comprendiendo dicho método administrar la composición a un sujeto que lo necesite, en la que la angiopoyetina modificada comprende una proteína de fusión que comprende al menos un dominio similar a fibrinógeno de angiopoyetina-1 fusionado a un fragmento Fc de inmunoglobulina.

Description

DESCRIPCIÓN
Intervenciones basadas en angiopoyetina para el tratamiento de la malaria cerebral
Campo de la invención Antecedentes
La malaria cerebral es una causa importante de morbilidad y mortalidad global, caracterizada normalmente por la pérdida de la integridad de la barrera hematoencefálica y el deterioro neurológico, seguidos de la muerte en el 15-30 % de los casos a pesar del tratamiento. La malaria cerebral en seres humanos es causada por Plasmodium falciparum. Los síntomas típicos de la malaria cerebral incluyen fiebre, cefalea y mialgia seguidos de somnolencia, confusión, deterioro del equilibrio o la coordinación, deterioro motor, coma y muerte. Las opciones de tratamiento actualmente se limitan a los derivados de quinina o artemisinina, que controlan la parasitemia, pero no son tan efectivos para reducir la mortalidad. Por consiguiente, existe una necesidad no satisfecha en la técnica de enfoques terapéuticos y preventivos eficaces sin efectos secundarios adversos que prevengan o traten la malaria cerebral. Breve sumario de la invención
De acuerdo con la presente invención, se proporcionan composiciones farmacéuticas estrictamente de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas para su uso en el tratamiento, prevención o mejora de al menos un síntoma, indicación o complicación de la malaria cerebral (incluyendo, por ejemplo, malaria cerebral experimental, malaria por falciparum, etc.) en un sujeto.
En determinadas realizaciones, el al menos un síntoma, indicación o complicación se selecciona del grupo que consiste en fiebre, cefalea y mialgia seguidos de somnolencia, confusión, fuga vascular, pérdida de integridad de la barrera hematoencefálica, nivel sanguíneo elevado de un marcador endotelial, secuestro de eritrocitos parasitados en el cerebro, deterioro del equilibrio o la coordinación, deterioro motor, esplenomegalia, pérdida de reflejos y autoconservación, falta de comportamiento relacionado con la higiene, lesión pulmonar aguda, convulsiones, coma y muerte. En determinadas realizaciones, el marcador endotelial se selecciona del grupo que consiste en angiopoyetina-1 (Ang1), angiopoyetina-2 (Ang2), receptor de angiopoyetina Tie2, factor de von Willebrand (vWF), molécula de adhesión intercelular-1 (ICAM-1), IP-10, E-selectina y molécula de adhesión celular vascular-1 (VCAM-1).
De acuerdo con otro aspecto, se proporcionan métodos para mejorar o aumentar la supervivencia de un sujeto después de una infección por Plasmodium. Los métodos comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica que comprende una proteína angiopoyetina o angiopoyetina modificada o un fragmento de la misma al sujeto que lo necesite. En un aspecto relacionado, la divulgación proporciona métodos para prevenir la fuga vascular o proteger la integridad de la barrera hematoencefálica, comprendiendo el método administrar una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una proteína angiopoyetina modificada o un fragmento de la misma a un sujeto que lo necesite.
En otro aspecto, la divulgación proporciona métodos para prevenir la malaria cerebral grave en un sujeto infectado con Plasmodium spp., comprendiendo el método seleccionar un sujeto con más del 0,1 % de parasitemia; y administrar una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una proteína angiopoyetina modificada o un fragmento de la misma al sujeto que lo necesite.
En determinadas realizaciones, la administración de la angiopoyetina modificada a un sujeto que lo necesite previene al menos una indicación de deterioro neurológico seleccionada del grupo que consiste en deterioro del equilibrio o la coordinación, deterioro motor, pérdida de reflejos y autoconservación, lesión neurocognitiva a largo plazo y deterioro que incluye deficiencias de memoria y trastornos afectivos, falta de comportamiento relacionado con la higiene, convulsiones y crisis epilépticas o espasmos.
En determinadas realizaciones, la angiopoyetina modificada se administra en combinación con un segundo agente terapéutico o terapia. En determinadas realizaciones, la angiopoyetina modificada se administra como terapia adyuvante junto con un segundo agente terapéutico tal como, por ejemplo, artesunato.
Las moléculas de angiopoyetina ejemplares que se pueden usar en el contexto de los métodos incluyen, por ejemplo, angiopoyetina-1, angiopoyetina recombinante (por ejemplo, angiopoyetina-1 expresada en un vector adenoviral) y una angiopoyetina modificada (por ejemplo, una proteína de fusión que comprende una angiopoyetina o un fragmento de la misma). De acuerdo con determinadas realizaciones, la angiopoyetina modificada es una proteína de fusión que consiste en el dominio similar a fibrinógeno de la angiopoyetina fusionado al fragmento Fc de IgG1 humana y luego forzada a un tetrámero (Davis et al 2003, Nat. Struct. Biol. 10: 38-44). En determinadas realizaciones, la angiopoyetina modificada comprende una proteína de fusión que comprende un primer dominio similar a fibrinógeno de angiopoyetina fusionado en su extremo C-terminal al extremo N-terminal de un fragmento Fc y el fragmento Fc fusionado en su extremo C-terminal al extremo N-terminal de un segundo dominio similar a fibrinógeno de angiopoyetina.
Uno de estos tipos de angiopoyetina modificada que se puede usar en el contexto de los métodos de la presente invención es AngF1-Fc-F1 (SeQ ID NO: 2).
En otro aspecto, la presente divulgación incluye métodos para tratar, prevenir o mejorar al menos un síntoma, indicación o complicación de la malaria cerebral (incluyendo, por ejemplo, malaria cerebral experimental, malaria por falciparum, etc.) en un sujeto. Los métodos de acuerdo con este aspecto de la invención comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-Tie2 o un fragmento de unión a antígeno del mismo a un sujeto que lo necesite. En determinadas realizaciones, el anticuerpo anti-Tie2 es un anticuerpo activador o agonista.
Breve descripción de las figuras
La figura 1 muestra las curvas de supervivencia de ratones C57BI/6 (susceptibles a la malaria cerebral experimental; ECM-S) y BALB/c (resistentes a la malaria cerebral experimental; ECM-R) infectados con Plasmodium berghei ANKA (PbA).
La figura 2 muestra el porcentaje de cambio en veces en la puntuación rápida de coma y comportamiento murino (RMCBS) en ratones ECM-S y ECM-R infectados con PbA.
La figura 3 muestra niveles comparativos de colorante azul de Evans extraído de los cerebros de ratones ECM-R y ECM-S infectados con PbA.
La figura 4 muestra el porcentaje de parasitemia en ratones ECM-S y ECM-R infectados con PbA.
La figura 5 muestra los niveles séricos de Ang-1 en el transcurso de la infección por PbA. ***p <0,0001 (tiempo), *p<0,05 (cepa) y **p <0,001 (ANOVA bidireccional con prueba posterior de Bonferroni para la comparación indicada).
Figura 6(a) RMCBS (%) y niveles séricos de Ang-1 (ng/ml) *p<0,05 en comparación con el ANOVA unidireccional, sin tratamiento previo. La figura 6(b) representa gráficos de dispersión que muestran el análisis de regresión lineal entre los niveles séricos de Ang1 (ng/ml) y el tiempo hasta la muerte (horas) (correlación de Spearman, valor r, p<0,0001).
La figura 7 muestra los niveles relativos de proteína Ang2 en ratones ECM-R y ECM-S tras la infección por PbA. La figura 8 muestra los niveles de proteína vWF en ratones ECM-R y ECM-S en el día 6 posterior a la infección con PbA.
La figura 9 muestra los niveles relativos de ARNm de Tie2 en ratones ECM-R y ECM-S tras la infección por PbA. La figura 10 muestra las curvas de supervivencia de ratones C57BI/6 infectados con PbA y tratados con anticuerpo anti-Ang2 (mAb 'B'), control de isotipo (mAb 'A') o solución salina.
La figura 11 muestra el porcentaje de cambio en veces en la RMCBS en ratones C57BI/6 infectados con PbA y tratados con anticuerpo anti-Ang2 (mAb 'B'), control de isotipo (mAb 'A') o solución salina.
La figura 12 muestra el porcentaje de parasitemia en el día 7 después de la infección por PbA en ratones C57BI/6 tratados con anticuerpo anti-Ang2 (mAb 'B'), control de isotipo (mAb 'A') o solución salina.
La figura 13 muestra los niveles de proteína plasmática de (a) vWF y (b) E-selectina, ICAM y VCAM en ratones C57BI/6 sin tratamiento previo (barras rayadas) o ratones infectados con PbA y tratados con anticuerpo anti-Ang2 (mAb 'B') (barras grises) o control de isotipo (mAb 'A') (barras negras).
La figura 14 muestra las curvas de supervivencia de ratones C57BI/6 infectados con PbA y tratados con AngFI-Fc-F1, control con Fc, anticuerpo anti-Ang2, un anticuerpo doble Anti-Ang1/Ang2 ("comparador") o solución salina.
La figura 15 muestra el porcentaje de parasitemia en ratones C57BI/6 infectados con PbA y tratados con AngFI-Fc-F1, control con Fc, anticuerpo anti-Ang2, un anticuerpo doble Anti-Ang1/Ang2 ("comparador") o solución salina.
La figura 16(a) muestra los niveles de colorante azul de Evans extraído de los cerebros de ratones C57BI/6 infectados con PbA y tratados con control con Fc (A), anticuerpo anti-Ang2 (B), AngF1-Fc-F1 (C), o anticuerpo comparador anti-Ang1/Ang2 (D). La figura 16(b) muestra el porcentaje de parasitemia en ratones C57BI/6 infectados con PbA y tratados con control con Fc (A), anticuerpo anti-Ang2 (B), AngF1-Fc-F1 (C) o anticuerpo "comparador" anti-Ang1/Ang2 (D).
La figura 17(a) muestra el porcentaje de cambio en RMCBS en día 6 tras la infección por PbA en ratones C57BI/6 tratados con AngF1-Fc-F1 o control de isotipo. La figura 17(b) muestra el porcentaje de cambio durante 7 días en RMCBS en ratones C57BI/6 infectados con PbA y tratados con AngF1-Fc-F1 o control de isotipo. La figura 18(a) muestra el porcentaje de parasitemia en ratones C57BI/6 infectados con PbA y tratados con AngF1-Fc-F1 o control de isotipo. La figura 18(b) muestra el porcentaje de cambio en veces en el peso de ratones C57BI/6 infectados con PbA y tratados con AngF1-Fc-F1 o control de isotipo.
La figura 19 muestra los niveles de proteína plasmática de las citocinas TNFa e IFNy (a), vWF (b), E-selectina, sICAM y VCAM-1 (c) de ratones C57BI/6 sin tratamiento previo y ratones infectados con PbA y tratados con AngF1-Fc-F1 o control con Fc.
La figura 20 muestra las curvas de supervivencia de ratones C57BI/6 infectados con PbA y tratados con artesunato AngF1-Fc-F1, artesunato solución salina, o solución salina.
La figura 21(a) muestra el porcentaje de parasitemia en ratones C57BI/6 infectados con PbA y tratados con artesunato AngF1-Fc-F1 o artesunato solución salina. La figura 21(b) muestra el porcentaje de cambio en veces en el peso de ratones C57BI/6 infectados con PbA y tratados con artesunato AngF1-Fc-F1 o artesunato solución salina.
Descripción detallada
Antes de describir la presente invención, debe entenderse que la presente invención no se limita a los métodos ni a las condiciones experimentales descritos en particular, ya que dichos métodos y condiciones pueden variar. También debe entenderse que la terminología utilizada en el presente documento únicamente tiene el fin de describir realizaciones particulares, y no se pretende que sea limitante, ya que el alcance de la presente invención estará limitado únicamente por las reivindicaciones adjuntas.
Salvo que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que el que entiende comúnmente una persona normalmente experta en la técnica a la cual pertenece la presente invención. Como se usa en el presente documento, el término "aproximadamente", cuando se usa en referencia a un valor numérico indicado particular, significa que el valor puede variar del valor indicado en no más de un 1 %. Por ejemplo, como se usa en el presente documento, la expresión "aproximadamente 100" incluye 99 y 101 y todos los valores intermedios (por ejemplo, 99,1, 99,2: 99,3, 99,4, etc.). Aunque pueden utilizarse en la práctica de la presente invención cualquier método y material similar o equivalente a los descritos en el presente documento, ahora se describen los métodos y materiales preferidos.
Métodos para el tratamiento, la prevención o la mejora de la malaria cerebral
La patogenia de la malaria cerebral se asocia con la activación endotelial y la pérdida de la integridad de la barrera hematoencefálica. La vía de señalización de angiopoyetina-Tie2 es un regulador clave de la función endotelial. Las alteraciones en el equilibrio angiogénico, específicamente el aumento de angiopoyetina-2 (Ang2) con respecto a Ang1, se han asociado con un desenlace clínico deficiente en la malaria cerebral (Yeo et al, 2008 PNAS; Lovegrove et al PLoS ONE 2009; Erdman et al PLoS ONE 2011; Conroy et al PLoS ONE 2011). Sin embargo, no está claro si la vía de Ang-Tie2 está causalmente implicada en la patogenia de la malaria cerebral. Los inventores han planteado la hipótesis de que la desregulación en las angiopoyetinas contribuye a la patogenia de la malaria cerebral y, por lo tanto, las intervenciones para mantener la activación de Tie2 pueden promover la estabilidad endotelial, prevenir efectos perjudiciales para la barrera hematoencefálica y mejorar el desenlace después de la infección por Plasmodium. Por consiguiente, se muestra en el presente documento, que las angiopoyetinas modificadas, cuando se administran a un sujeto infectado, protegen la integridad de la barrera hematoencefálica y previenen el deterioro neurológico y la muerte. Como se desvela en otra parte en el presente documento, los inventores han usado un modelo murino bien conocido de malaria cerebral experimental (ECM) inducida por Plasmodium berghei ANKA (PbA) para estudiar las alteraciones en las angiopoyetinas asociadas con la gravedad de la enfermedad y la letalidad y para demostrar que la desregulación del eje Ang/Tie2 está asociada con la gravedad de la enfermedad y la letalidad. Como se muestra en el presente documento, los niveles de Ang1 se correlacionan inversamente con la morbilidad y la mortalidad en el modelo en ratón de malaria cerebral. Basándose en los estudios mostrados en el presente documento, se establece que Ang1 es necesaria para mantener la integridad de la barrera hematoencefálica en respuesta a una exposición letal de malaria y puede mejorar la supervivencia por encima de la lograda con el tratamiento convencional (por ejemplo, artesunato) solo. Además, la administración de una angiopoyetina modificada mejoró la integridad de la barrera hematoencefálica y promovió el mantenimiento de un endotelio inactivo mediante la regulación negativa de moléculas proadhesivas implicadas en el secuestro de parásitos y la patogenia de la malaria cerebral.
Por consiguiente, la presente divulgación incluye métodos para tratar, prevenir o mejorar al menos un síntoma, indicación o complicación de la malaria cerebral (incluyendo, por ejemplo, malaria cerebral experimental, malaria por falciparum, etc.) en un sujeto. Los métodos de acuerdo con este aspecto comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica que comprende una proteína angiopoyetina modificada o un fragmento de la misma al sujeto que lo necesite.
La "malaria cerebral" (CM), como se usa en el presente documento, significa una enfermedad infecciosa causada por especies de Plasmodium y caracterizada por la pérdida de la integridad de la barrera hematoencefálica y el deterioro neurológico. Los síntomas de la CM incluyen, pero sin limitación, fiebre, cefalea y mialgia seguidos de somnolencia, confusión, fuga vascular, pérdida de integridad de la barrera hematoencefálica, nivel sanguíneo elevado de un marcador endotelial, secuestro de eritrocitos parasitados en el cerebro, deterioro del equilibrio o la coordinación, deterioro motor, esplenomegalia, pérdida de reflejos y autoconservación, falta de comportamiento relacionado con la higiene, lesión pulmonar aguda, convulsiones, crisis epilépticas, coma y muerte. La clínicopatología de la CM se caracteriza por el secuestro de glóbulos rojos infectados en las vénulas y capilares del cerebro, seguido de activación endotelial. El término "malaria cerebral" incluye, entre otros, la malaria cerebral grave causada en seres humanos por Plasmodium falciparum y la malaria cerebral experimental (ECM), causada en ratones por Plasmodium berghei ANKA.
Como se usan en el presente documento, los términos "tratar", "tratamiento" o similares, significan aliviar un síntoma o una complicación, eliminar la causa de un síntoma o una complicación de forma temporal o permanente, o prevenir o retardar la aparición de un síntoma o complicación de la malaria cerebral en el sujeto. En el contexto de la presente invención, los términos "tratar", "tratamiento" o similares, se refieren a reducir o disminuir la mortalidad en un sujeto infectado con especies de Plasmodium. Los términos también se refieren a prevenir la pérdida de integridad de la barrera hematoencefálica y el deterioro neurológico en un sujeto con malaria cerebral. En determinadas realizaciones, los métodos actuales son útiles para tratar o mejorar al menos un síntoma, indicación o complicación de la malaria cerebral incluyendo, pero sin limitación, fiebre, cefalea y mialgia seguidos de somnolencia, confusión, fuga vascular, pérdida de integridad de la barrera hematoencefálica, nivel sanguíneo elevado de un marcador endotelial, secuestro de eritrocitos parasitados en el cerebro, deterioro del equilibrio o la coordinación, deterioro motor, esplenomegalia, pérdida de reflejos y autoconservación, falta de comportamiento relacionado con la higiene, lesión pulmonar aguda, convulsiones, crisis epilépticas, coma y muerte.
Por la frase "cantidad terapéuticamente eficaz" se entiende una cantidad que produce el efecto deseado para el que se administra. La cantidad exacta dependerá del objetivo del tratamiento, y serán discernibles por un experto en la materia usando las técnicas conocidas (véase, por ejemplo, Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding).
Como se usa en el presente documento, el término "sujeto" se refiere a un animal, preferentemente un mamífero, que exhibe uno o más síntomas, indicaciones o complicaciones de malaria cerebral, y/o al que se la ha diagnosticado malaria cerebral (CM) y/o que necesita una mejora, prevención y/o tratamiento de malaria cerebral. La expresión "un sujeto que lo necesite" también puede incluir, por ejemplo, sujetos que, antes del tratamiento, exhiben (o han exhibido) uno o más síntomas o indicaciones de malaria cerebral tales como, por ejemplo, fiebre, cefalea y mialgia seguidos de somnolencia, confusión, fuga vascular, pérdida de integridad de la barrera hematoencefálica, nivel sanguíneo elevado de un marcador endotelial, secuestro de eritrocitos parasitados en el cerebro, deterioro del equilibrio o la coordinación, deterioro motor, esplenomegalia, pérdida de reflejos y autoconservación, falta de comportamiento relacionado con la higiene, lesión pulmonar aguda, convulsiones, crisis epilépticas, coma y muerte. En el contexto de la presente invención, "un sujeto que lo necesite" puede incluir un subconjunto de población, que puede mostrar un nivel elevado de un marcador endotelial. Dicha población de sujetos puede mostrar un nivel elevado de un marcador endotelial tal como, por ejemplo, Ang1, Ang2, Tie2, vWF, ICAM-1, E-selectina y VCAM-1. Los métodos de la presente invención se pueden usar para tratar la malaria cerebral en adultos, incluyendo los ancianos. En algunas realizaciones, los métodos de la presente invención se usan para tratar a adultos de más de 50 años, más de 55 años, más de 60 años, más de 65 años o más de 70 años.
En algunas realizaciones, los métodos en el presente documento se pueden usar para tratar la malaria cerebral en niños que tienen < 3 años de edad. Por ejemplo, los presentes métodos se pueden usar para tratar lactantes que tienen menos de 1 mes, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses, 10 meses, 11 meses o menos de 12 meses de edad. En otras realizaciones, los métodos de la presente invención se pueden usar para tratar niños que tienen más de 3 años de edad, más de 4 años, 5 años, 6 años, 7 años, 8 años, 9 años, 10 años, 11 años, 12 años, 13 años, 14 años, o más de 15 años de edad.
La presente divulgación también incluye métodos para aumentar la supervivencia en un sujeto con malaria cerebral. Los métodos de acuerdo con este aspecto comprenden administrar al sujeto una o más dosis de una composición farmacéutica que comprende una angiopoyetina modificada para aumentar la supervivencia en el sujeto.
La presente divulgación también incluye métodos para prevenir la malaria cerebral grave en un sujeto infectado con especies de Plasmodium, comprendiendo los métodos administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica que comprende una angiopoyetina modificada al sujeto que lo necesite. En determinadas realizaciones, la angiopoyetina modificada se administra como una proteína exógena.
El término "prevenir" como se usa en el presente documento se refiere a prevenir el desarrollo de una enfermedad. El término, como se usa en el presente documento, también incluye prevenir la fuga vascular, proteger la integridad de la barrera hematoencefálica y la aparición de síntomas neurológicos, tales como espasmos y parálisis tras la infección con el patógeno. En algunas realizaciones, el término se refiere a prevenir la disfunción endotelial, que es una característica patológica clave de la malaria cerebral (incluyendo la malaria cerebral experimental).
La presente divulgación incluye métodos para tratar, prevenir o reducir la gravedad de la malaria cerebral, que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica que comprende una angiopoyetina modificada a un sujeto que lo necesite, en los que la composición farmacéutica se administra al sujeto en dosis múltiples, por ejemplo, como parte de un régimen de dosificación terapéutica específica. Por ejemplo, el régimen de dosificación terapéutica puede comprender administrar múltiples dosis de la composición farmacéutica al sujeto con una frecuencia de aproximadamente una vez al día, una vez cada dos días, una vez cada tres días, una vez cada cuatro días, una vez cada cinco días, una vez cada seis días, una vez a la semana, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas, una vez cada cuatro semanas, una vez al mes, una vez cada dos meses, una vez cada tres meses, una vez cada cuatro meses o con menos frecuencia. En algunas realizaciones, el régimen de dosificación terapéutica comprende administrar múltiples dosis de la composición farmacéutica al sujeto con una frecuencia de aproximadamente una vez al día, aproximadamente 2 veces al día, aproximadamente 3 veces al día o más de 4 veces al día.
En determinadas realizaciones, la angiopoyetina modificada se administra por vía subcutánea, por vía intravenosa, por vía intracraneal, por vía intraventricular, o se administra por vía sistémica en un vector adenoviral a un sujeto que lo necesite.
Los métodos de acuerdo con determinadas realizaciones, comprenden administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica que comprende una angiopoyetina modificada en combinación con un segundo agente terapéutico. El segundo agente terapéutico puede ser un agente seleccionado del grupo que consiste en una artemisinina, quinina o una variante o derivado de las mismas (por ejemplo, artesunato), un antagonista del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) [por ejemplo, una "Trampa de VEGF" tal como aflibercept u otra proteína de fusión que inhibe el VEGF como se expone en el documento US 7.087.411, o un anticuerpo anti-VEGF o un fragmento de unión a antígeno del mismo (por ejemplo, bevacizumab o ranibizumab)], un anticuerpo activador anti-Tie2, un antagonista Ang2, un antihistamínico y un fármaco antiinflamatorio no esteroideo (AINE). Como se usa en el presente documento, la frase "en combinación con" significa que la composición farmacéutica que comprende una angiopoyetina modificada se administra al sujeto al mismo tiempo que, justo antes o justo después de la administración del segundo agente terapéutico. En determinadas realizaciones, el segundo agente terapéutico se administra como una coformulación con la angiopoyetina modificada.
La presente divulgación también se refiere a métodos para tratar, prevenir o mejorar al menos un síntoma, indicación o complicación de la malaria cerebral en un sujeto, en los que los métodos comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-Tie2 o un fragmento de unión a antígeno del mismo al sujeto que lo necesite. En determinadas realizaciones, el anticuerpo anti-Tie2 es un anticuerpo activador o agonista, por ejemplo, el anticuerpo al unirse a Tie2 aumenta la actividad de Tie2 o estimula de otro modo la señalización de Tie2. En determinadas realizaciones, el anticuerpo anti-Tie2 es un anticuerpo como se expone en el documento US20130209492. El anticuerpo anti-Tie2 se puede administrar por vía subcutánea, por vía intravenosa o por vía intracraneal a una dosis de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg del peso corporal del sujeto. En determinadas realizaciones, el anticuerpo anti-Tie2 activador se administra en combinación con un segundo anticuerpo anti-Tie2 activador al sujeto que lo necesite.
En otro aspecto, la presente divulgación incluye métodos para tratar, prevenir o mejorar al menos un síntoma, indicación o complicación de una enfermedad o trastorno asociado con la disfunción de la vía de Ang-Tie2 en un sujeto. Los métodos comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica que comprende una proteína angiopoyetina modificada o un fragmento de la misma al sujeto que lo necesite. En determinadas realizaciones, la angiopoyetina o variantes de la misma se pueden usar para tratar, prevenir o mejorar al menos un síntoma o indicación de una enfermedad o trastorno que incluye malaria cerebral, sepsis, ántrax, dengue, fiebre hemorrágica (incluyendo fiebre hemorrágica viral, por ejemplo, fiebre de Lassa, fiebre amarilla y fiebre del Ébola), síndrome de choque tóxico, SUH, choque hemorrágico (modelo de pérdida masiva de sangre debido a una lesión traumática, por ejemplo, DEI), reperfusión isquémica, síndrome urémico hemolítico, infarto de miocardio y apoplejía.
Angiopoyetinas modificadas
Los métodos de la presente divulgación comprenden administrar a un sujeto que lo necesite una composición terapéutica que comprende una angiopoyetina o una variante de la misma. Como se usa en el presente documento, una "angiopoyetina" incluye angiopoyetina-1 (Ang1) o angiopoyetina-2 (Ang2).
Los ejemplos no limitantes de categorías de angiopoyetinas modificadas incluyen angiopoyetinas recombinantes (por ejemplo, angiopoyetina expresada en un vector adenoviral; Thurston et al 2000, Nat. Med.), formas mutantes y quiméricas de angiopoyetinas y proteínas de fusión que comprenden angiopoyetina o un fragmento de la misma que se unen específicamente a los receptores Tie1 y/o Tie2.
De acuerdo con determinadas realizaciones ejemplares de la presente divulgación, la angiopoyetina modificada es una proteína de fusión que comprende uno o más dominios de la molécula de angiopoyetina fusionada a un dominio de multimerización. En términos generales, el o los dominios de multimerización de la presente invención funcionan para conectar los diversos componentes de la molécula de angiopoyetina (por ejemplo, los dominios similares a fibrinógeno) entre sí. Como se usa en el presente documento, un "dominio de multimerización" es cualquier macromolécula que tiene la capacidad de asociarse (covalentemente o no covalentemente) con una segunda macromolécula de estructura o constitución igual o similar. Por ejemplo, un dominio de multimerización puede ser un polipéptido que comprende un dominio Ch3 de inmunoglobulina. Un ejemplo no limitante de un dominio de multimerización es una parte Fc de una inmunoglobulina, por ejemplo, un dominio Fc de una IgG seleccionada de los isotipos IgG1, IgG2, IgG3 y IgG4, así como cualquier alotipo dentro de cada grupo de isotipos. En determinadas realizaciones, el dominio de multimerización es un fragmento Fc o una secuencia de aminoácidos de 1 a aproximadamente 200 aminoácidos de longitud que contiene al menos un residuo de cisteína. En otras realizaciones, el dominio de multimerización es un residuo de cisteína o un péptido corto que contiene cisteína. Otros dominios de multimerización incluyen péptidos o polipéptidos que comprenden o consisten en una cremallera de leucina, un motivo de hélice-bucle o un motivo de superhélice.
En determinadas realizaciones, la angiopoyetina modificada es una proteína de fusión que comprende uno o más dominios similares a fibrinógeno de la molécula de angiopoyetina-1 fusionada al fragmento Fc de una inmunoglobulina que comprende cualquiera de las secuencias de aminoácidos, como se expone en la Patente de Estados Unidos No. 7.008.781. En determinadas realizaciones ejemplares, la proteína de fusión que se puede usar en el contexto de los métodos de la presente invención comprende un primer dominio similar a fibrinógeno de angiopoyetina fusionado en su extremo C-terminal al extremo N-terminal de un fragmento Fc de IgG y el extremo C-terminal del fragmento Fc fusionado al extremo N-terminal de un segundo dominio similar a fibrinógeno de angiopoyetina (Davis et al, Nat. Struct. Biol. 2003), en la que la angiopoyetina es Ang1. De acuerdo con determinadas realizaciones ejemplares, los métodos de la presente invención comprenden el uso de la angiopoyetina modificada denominada y conocida en la técnica como AngF1-Fc-F1. En determinadas realizaciones, la angiopoyetina modificada es un dímero que comprende dos AngF1-Fc-F1s que se asocian a través de la asociación intramolecular de los fragmentos Fc (también denominados BowAng1, como se desvela en Davis et al, Nat. Struct. Biol. 2003). De acuerdo con determinadas realizaciones, la proteína de fusión comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2. En algunas realizaciones, la proteína de fusión comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4.
Otras angiopoyetinas modificadas que se pueden usar en el contexto de los métodos de la presente invención incluyen cualquiera de las moléculas de angiopoyetina modificadas como se expone en las patentes de Estados Unidos No. 6265564, 6441137 y 6825008.
En determinadas realizaciones, la angiopoyetina o variantes de la misma se pueden usar para tratar, prevenir o mejorar al menos un síntoma o indicación de una enfermedad o trastorno que incluye sepsis, dengue, fiebre hemorrágica (incluyendo fiebre hemorrágica viral, por ejemplo, fiebre de Lassa, fiebre amarilla y fiebre del Ébola), síndrome de choque tóxico, SUH, choque hemorrágico (modelo de pérdida masiva de sangre debido a una lesión traumática, por ejemplo, DEI), reperfusión isquémica, síndrome urémico hemolítico, infarto de miocardio y apoplejía.
Composiciones farmacéuticas
La presente divulgación incluye métodos que comprenden administrar una angiopoyetina modificada a un sujeto, en los que la angiopoyetina modificada está contenida dentro de una composición farmacéutica. Las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden formular con vehículos, excipientes y otros agentes adecuados que proporcionan una transferencia, administración, tolerancia y similares adecuadas. Puede encontrarse una multitud de formulaciones apropiadas en el formulario conocido para todos los químicos farmacéuticos: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. Estas formulaciones incluyen, por ejemplo, polvos, pastas, pomadas, gelatinas, ceras, aceites, lípidos, vesículas que contienen lípidos (catiónicos o aniónicos) (tales como LIPOFECTIN™), conjugados de ADN, pastas de absorción anhidras, emulsiones de aceite en agua y agua en aceite, emulsiones de Carbowax (polietilenglicoles de diversos pesos moleculares), geles semisólidos y mezclas semisólidas que contienen Carbowax. Véase también, Powell et al., "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311.
Se conocen diversos sistemas de administración y pueden usarse para administrar la composición farmacéutica de la invención, por ejemplo, encapsulación en liposomas, micropartículas, microcápsulas, células recombinantes capaces de expresar los virus mutantes, endocitosis mediada por receptor (véase, por ejemplo, Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262: 4429-4432). Los métodos de administración incluyen, pero sin limitación, las rutas intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, intranasal, epidural y oral. La composición se puede administrar mediante cualquier ruta conveniente, por ejemplo, por infusión o inyección en embolada, por absorción a través de revestimientos epiteliales o mucocutáneos (por ejemplo, mucosa oral, mucosa rectal e intestinal, etc.) y se puede administrar junto con otros agentes biológicamente activos.
Una composición farmacéutica de la presente invención puede suministrarse por vía subcutánea o intravenosa con una aguja y una jeringa convencionales. Además, con respecto al administración subcutánea, un dispositivo de administración de pluma preparado tiene aplicaciones en la administración de una composición farmacéutica de la presente invención. Dicho dispositivo de administración de pluma puede ser reutilizable o desechable. Un dispositivo de administración de pluma reutilizable generalmente utiliza un cartucho reemplazable que contiene una composición farmacéutica. Una vez que se ha administrado toda la composición farmacéutica dentro del cartucho y que el cartucho está vacío, el cartucho vacío puede desecharse fácilmente y remplazarse con un nuevo cartucho que contiene la composición farmacéutica. El dispositivo de administración de pluma entonces puede reutilizarse. En un dispositivo de administración de pluma desechable, no hay un cartucho reemplazable. Más bien, el dispositivo de administración de pluma desechable viene prellenado con la composición farmacéutica mantenida en un depósito dentro del dispositivo. Una vez que el depósito se vacía de la composición farmacéutica, el dispositivo completo se desecha.
En determinadas situaciones, la composición farmacéutica puede suministrarse en un sistema de liberación controlada. En una realización, puede usarse una bomba. En otra realización, pueden usarse materiales poliméricos; véase, Medical Applications of Controlled Release, Langer y Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida. En otra realización más, un sistema de liberación controlada puede ubicarse en las proximidades de la diana de la composición, requiriendo por tanto solo una fracción de la dosis sistémica (véase, por ejemplo, Goodson, 1984, en Medical Applications of Controlled Release, anteriormente, vol. 2, págs. 115-138). Otros sistemas de liberación controlada se discuten en la revisión de Langer, 1990, Science 249:1527-1533.
Las preparaciones inyectables pueden incluir formas de dosificación para inyecciones intravenosas, subcutáneas, intracutáneas e intramusculares, infusiones por goteo, etc. Estas preparaciones inyectables pueden prepararse por métodos conocidos. Por ejemplo, las preparaciones inyectables pueden prepararse, por ejemplo, disolviendo, suspendiendo o emulsionando el anticuerpo o su sal, descrita anteriormente, en un medio acuoso estéril o un medio oleoso convencionalmente usado para inyecciones. Como medio acuoso para inyecciones, existen, por ejemplo, solución salina fisiológica, una solución isotónica que contiene glucosa y otros agentes auxiliares, etc., que puede usarse en combinación con un agente solubilizante apropiado tal como un alcohol (por ejemplo, etanol), un polialcohol (por ejemplo, propilenglicol, polietilenglicol), un tensioactivo no iónico [por ejemplo, polisorbato 80, HCO-50 (aducto de polioxietileno (50 mol) de aceite de ricino hidrogenado)], etc. Como medio oleaginoso, se emplean, por ejemplo, aceite de sésamo, aceite de soja, etc., que pueden usarse en combinación con un agente solubilizante tal como benzoato de bencilo, alcohol bencílico, etc. La inyección así preparada se introduce preferentemente en una ampolla apropiada.
Ventajosamente, las composiciones farmacéuticas para uso oral o parenteral descritas anteriormente se preparan en formas farmacéuticas en una dosis unitaria adecuada para ajustarse a una dosis de los principios activos. Dichas formas farmacéuticas en una dosis unitaria incluyen, por ejemplo, comprimidos, píldoras, cápsulas, inyecciones (ampollas), supositorios, etc.
Dosificaciones
La cantidad de la angiopoyetina modificada (por ejemplo, AngF1-Fc-F1) administrada a un sujeto de acuerdo con los métodos de la presente invención es, en general, una cantidad terapéuticamente eficaz. Como se usa en el presente documento, la frase "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad de angiopoyetina modificada que da como resultado uno o más de: (a) una reducción en la gravedad o duración de un síntoma, indicación o complicación de la malaria cerebral grave; (b) aumento de la supervivencia; (c) protección de la integridad de la barrera hematoencefálica; y (d) prevención del deterioro neurológico en el sujeto.
En el caso de una angiopoyetina modificada, una cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 0,05 mg a aproximadamente 600 mg, por ejemplo, aproximadamente 0,05 mg, aproximadamente 0,1 mg, aproximadamente 1,0 mg, aproximadamente 1,5 mg, aproximadamente 2,0 mg, aproximadamente 10 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 40 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 60 mg, aproximadamente 70 mg, aproximadamente 80 mg, aproximadamente 90 mg, aproximadamente 100 mg aproximadamente 110 mg, aproximadamente 120 mg, aproximadamente 130 mg, aproximadamente 140 mg aproximadamente 150 mg, aproximadamente 160 mg, aproximadamente 170 mg, aproximadamente 180 mg aproximadamente 190 mg, aproximadamente 200 mg, aproximadamente 210 mg, aproximadamente 220 mg aproximadamente 230 mg, aproximadamente 240 mg, aproximadamente 250 mg, aproximadamente 260 mg aproximadamente 270 mg, aproximadamente 280 mg, aproximadamente 290 mg, aproximadamente 300 mg, aproximadamente 310 mg, aproximadamente 320 mg, aproximadamente 330. mg, aproximadamente 340 mg aproximadamente 350 mg, aproximadamente 360 mg, aproximadamente 370 mg, aproximadamente 380 mg aproximadamente 390 mg, aproximadamente 400 mg, aproximadamente 410 mg, aproximadamente 420 mg aproximadamente 430 mg, aproximadamente 440 mg, aproximadamente 450 mg, aproximadamente 460 mg aproximadamente 470 mg, aproximadamente 480 mg, aproximadamente 490 mg, aproximadamente 500 mg aproximadamente 510 mg, aproximadamente 520 mg, aproximadamente 530 mg, aproximadamente 540 mg aproximadamente 550 mg, aproximadamente 560 mg, aproximadamente 570 mg, aproximadamente 580 mg aproximadamente 590 mg o aproximadamente 600 mg, de la angiopoyetina modificada.
La cantidad de angiopoyetina modificada contenida dentro de las dosis individuales se puede expresar en términos de miligramos de proteína por kilogramo de peso corporal del sujeto (es decir, mg/kg). Por ejemplo, la angiopoyetina modificada se puede administrar a un sujeto en una dosis de aproximadamente 0,0001 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal del paciente. En determinadas realizaciones, la angiopoyetina modificada se administra a un sujeto que lo necesite a una dosis de aproximadamente 5 - 25 mg/kg del peso corporal del sujeto.
Ejemplos
Los siguientes ejemplos se presentan para proporcionar a los expertos en la materia una divulgación y descripción completa de cómo preparar y usar los métodos y composiciones de la invención, y no pretenden limitar el alcance de lo que los inventores consideran su invención. Se ha intentado garantizar la exactitud con respecto a los números usados (por ejemplo, cantidades, la temperatura, etc.) pero deben tenerse en cuenta algunos errores y desviaciones experimentales. A menos que se indique lo contrario, las partes son partes en peso, el peso molecular es el peso molecular promedio, la temperatura está en grados centígrados y la presión es o está cerca de la atmosférica.
Ejemplo 1: Alteraciones en los reguladores endoteliales en el modelo de malaria cerebral experimental (ECM) inducida por Plasmodium berghei ANKA (Pba) murino
En este ejemplo, se estudiaron las alteraciones en los reguladores endoteliales en la malaria cerebral experimental inducida por Plasmodium berghei ANKA (PbA) en un modelo en ratón. Este modelo se basa en la observación de que los ratones C57BI/6 son susceptibles al parásito murino P. berghei ANKA, que produce una enfermedad grave y finalmente mortal con síntomas neurológicos paralelos a los síntomas y al desarrollo de la enfermedad de la malaria cerebral en seres humanos infectados con Plasmodium falciparum. A diferencia de los ratones C57BI/6, los ratones BALB/c son resistentes a PbA, ya que no desarrollan encefalopatía, aunque resultan infectados y alcanzan niveles similares o, en ocasiones, mayores de densidad de parásitos. Este estudio mostró que la desregulación del eje Ang/Tie2 estaba asociada con la gravedad de la enfermedad y la letalidad. Además, los niveles de Ang1 se correlacionan inversamente con la morbilidad y la mortalidad en el modelo en ratón de malaria cerebral.
Materiales y métodos
Modelo de ECM inducida por PbA: Infección
Se hizo pasar Plasmodium berghei ANKA (PbA; MR4, Manassas, VA) crioconservado a través de ratones C57BI/6 sin tratamiento previo. Para el experimento, la infección se inició en ratones C57BI/6 y BALB/c mediante inyección intraperitoneal (ip) de 1 x106 eritrocitos parasitados (PE) recién aislados obtenidos de ratones con pase por donante. La parasitemia se controló mediante frotis de sangre muy líquida teñida con tinción de Geimsa modificada (Protocolo Hema3 Stain Set, Sigma, Oakville, ON) contando al menos 1500 eritrocitos. Los ratones infectados se monitorizaron para determinar la supervivencia, el deterioro neurológico, la fuga vascular, la carga parasitaria y los niveles de factores angiogénicos y marcadores de activación endotelial.
Supervivencia y evaluación del estado de salud
La supervivencia de los ratones tras la infección se representó como curvas de Kaplan Meier usando una prueba del orden logarítmico para la comparación. La evaluación cuantitativa del deterioro neurológico asociado con la ECM (deterioro de la coordinación y el rendimiento motor) se realizó diariamente usando la puntuación rápida de coma y comportamiento murino de 10 parámetros (RMCBS), como se describió anteriormente por Carroll RW, et al. 2010 en PLoS ONE 5: e13124. Los signos de ECM incluyen deterioro del equilibrio/coordinación, deterioro motor (ataxia, hemiplegia/paraplejia), pérdida de reflejos y autoconservación, falta de comportamiento relacionado con la higiene (acicalamiento) y/o crisis epilépticas. Para cada parámetro, se asignó una puntuación de 0 a 2, con 0 indicando la función más baja y una puntuación de 2 la más alta. Las puntuaciones totales para cada ratón se calcularon y se proporcionaron como un porcentaje de la puntuación total posible. Se consideró que los ratones con una puntuación del 35 % o menos tenían ECM grave.
Ensayo de permeabilidad al azul de Evans
La permeabilidad vascular en el cerebro se evaluó usando el colorante azul de Evans (EB). A los ratones se les inyectaron por vía intravenosa a través de la vena de la cola 0,1 ml de solución de colorante azul de Evans al 1 % (azul de Evans en polvo; Sigma-Aldrich en PBS, filtro esterilizado) cuando se observaron signos clínicos de ECM. Los ratones se sacrificaron con isoflurano (anestésico por inhalación al 99,9 %) después de 1 hora, se perfundieron con 50 ml de PBS (1X). Los cerebros se diseccionaron asépticamente, se pesaron, se fotografiaron y se colocaron en 1 ml de N,N-dimetilformamida durante 48 horas a temperatura ambiente para extraer el colorante del tejido. La absorbancia se midió a 620 nm. La concentración se calculó usando una curva patrón de colorante EB y se expresó como ng de colorante por gramo de tejido cerebral.
Detección de marcadores de citocinas de activación endotelial
Se extrajo sangre periférica completa mediante venopunción safena el día 0 (d 0; antes de la infección por PbA) y el d 6 tras la infección En tubos heparinizados (Starstedt). Se aisló plasma de muestras de sangre completa mediante centrifugación a 1000 x g durante 15 min. Las muestras de plasma se dividieron en alícuotas y se almacenaron a -80 °C hasta su análisis. Los niveles de molécula de adhesión intercelular de ratón-1 (sICAM-1/CD54), E-Selectina (sE-Sel/CD62E) y molécula de adhesión de células vasculares-1 (sVCAM-1/CD106) en sus formas solubles se determinaron en plasma usando kits de ELISA murinos disponibles en el mercado (R&D Systems, Minneapolis, EE. UU.), de acuerdo con el protocolo del fabricante. Los niveles de antígeno del factor de von Willebrand (vWF:Ag) se midieron en suero mediante ELISA de la siguiente manera: se recubrieron las placas MaxiSorp de 96 pocillos (Nunc) durante la noche a 4 °C con un anticuerpo policlonal anti-vWF humano (1:600, Dako, Glostrup, Dinamarca) en PBS 0,01 M. Se sembró suero de ratón en BSA-PBS al 1 % y el vWF:Ag unido se detectó con anticuerpo policlonal antivWF humano conjugado con peroxidasa de rábano picante (HRP) (1:8000, Dako). Las placas se desarrollaron con una solución sustrato de 3,3',5,5'-tetrametilbencidina (TMB) y se leyó la absorbancia a 450 nm, después de que la reacción colorimétrica se detuviera con H2SO4. La concentración de vWF:Ag se interpoló a partir de una curva patrón creada con vWF humano de una concentración conocida a partir de plasma congelado fresco (1:500, American Diagnostica, Stamford, CT) que se incluyó en cada placa. Se determinaron IFN-gamma y TNF-alfa en plasma usando kits de ELISA murinos disponibles en el mercado (eBioscience), de acuerdo con el protocolo del fabricante. Análisis estadístico
El análisis estadístico se realizó usando GraphPad Prism versión 4.00 (San Diego, CA). La supervivencia de ratones tras la infección se representó gráficamente como curvas de Kaplan Meier y se evaluó mediante la prueba del orden logarítmico. Los estudios de supervivencia se realizaron por triplicado y los datos se agruparon a menos que se especifique lo contrario. La prueba de Shapiro-Wilk se usó para determinar los datos distribuidos normalmente y las comparaciones entre los grupos se evaluaron mediante la prueba no paramétrica de Mann-Whitney o la prueba de Kruskal-Wallis seguida de la prueba post-hoc de Dunn. Se usó ANOVA bidireccional para comparar entre grupos en múltiples puntos temporales. Para ensayar biomarcadores de plasma, se usó la prueba de Friedman con la comparación múltiple de Dunn para comparar los niveles entre las muestras recogidas de pacientes en diferentes puntos temporales (por ejemplo, ingreso y convalecencia). Todos los datos se presentan como mediana y RIC (no paramétrico), a menos que se indique otra cosa. Los datos normalmente distribuidos se presentan como media y SEM. Un p<0,05 se consideró estadísticamente significativo. Los datos de múltiples experimentos se normalizaron a la media geométrica del grupo infectado pero no tratado de cada experimento para comparaciones.
Resultados
Como se muestra en la figura 1, los ratones BALB/c resistentes (también denominados "ECM-R") mostraron una supervivencia significativamente prolongada (p=0,0007, prueba del orden logarítmico) después de la infección con PbA en comparación con los ratones C57BI/6 susceptibles (también denominados "ECM-S"). Los ratones BALB/c resistentes mostraron una supervivencia del 100 % durante los 7 días tras la infección, y la supervivencia disminuyó a más del 10 % en el día 10 y hasta el día 14 (cuando los ratones fueron sacrificados). Por el contrario, los ratones C57BI/6 susceptibles mostraron solo aproximadamente un 50 % de supervivencia ya el día 6 con un 0 % el día 8 tras la infección.
Los ratones ECM-S mostraron deterioro neurológico, como lo evidencian las puntuaciones de menos del 35 % aproximadamente el día 6 en comparación con los ratones resistentes a ECM-R que mostraron una ausencia de deterioro neurológico (figura 2). Se usó la extravasación de azul de Evans (EB) para evaluar la permeabilidad vascular y la disfunción de la barrera hematoencefálica. Después de la perfusión para eliminar el colorante circulante, el nivel de EB extravasado en parénquima cerebral de ratones ECM-S infectados con PbA fue 2 veces más alto que el nivel en ratones ECM-R con cargas parasitarias comparables [media (SD) de colorante EB/g de tejido: 10,7 (7,9) para ratones ECM-R frente a 22,9 (7,2) para ratones ECM-S; p=0,005], coherente con un aumento de la fuga vascular y la pérdida de la integridad de la barrera hematoencefálica (figura 3). Esto fue independiente de la parasitemia observada, como lo demuestra una mayor carga parasitaria en los ratones resistentes en comparación con los ratones susceptibles (figura 4).
Los ratones ECM-R difirieron de los ratones ECM-S en los niveles de factores angiogénicos Ang1, Ang2 y vWF en la infección por PbA. La evaluación longitudinal en el transcurso de la infección mostró que los niveles de Ang1 disminuían con el tiempo (p<0,0001, ANOVA bidireccional; figura 5). La cinética de la disminución de Ang1 tras la infección fue significativamente diferente en ratones ECM-R frente a ECM-S (p=0,02, ANOVA bidireccional). Durante la fase aguda de la enfermedad, los ratones ECM-R mantuvieron niveles de Ang1 significativamente más altos en comparación con los ratones ECM-S (p <0,001). Para ambas cepas, la pérdida de Ang1 circulante se asoció con la aparición de deterioro neurológico y eCm , según lo determinado por una disminución significativa en la RMCBS. Los niveles séricos de Ang1 (ng/ml) se correlacionaron significativamente con las puntuaciones de RMCBS (%) (p<0,05; figura 6a) y con el tiempo hasta la muerte (horas) (p<0,0001; figura 6b). En general, cuando se evaluó el día 6 tras la infección, los ratones con los niveles más bajos de Ang1 circulante tuvieron una probabilidad significativamente mayor de avanzar hasta un desenlace fatal, lo que respalda la hipótesis de que Ang1 puede ser un determinante crítico de la supervivencia.
Los ratones ECM-R mostraron niveles de Ang2 y vWF significativamente más bajos (figuras 7 - 9).
Ejemplo 2: El bloqueo de Ang2 no confiere una protección mejorada contra el desarrollo de CM experimental En este ejemplo, se evaluó el efecto del bloqueo de Ang2 en ECM inducida por PbA en un modelo en ratón. Veinte ratones C57BI/6 fueron infectados por Plasmodium berghei ANKA (PbA) a través de una inyección intraperitoneal de 1 x106 eritrocitos parasitados (PE) recién aislados obtenidos de ratones con pase por donante el día 0. Los ratones infectados se trataron con 15 mg/kg de un anticuerpo anti-Ang2, H1H685, como se describe en la publicación de solicitud de patente de Estados Unidos No. US20110027286, los días -1, 1, 4 y 7 tras la infección mediante inyección subcutánea. Los ratones se monitorizaron para determinar la supervivencia, el deterioro neurológico, la carga parasitaria y los niveles de proteínas plasmáticas, como se describe en detalle en el ejemplo 1.
La figura 10 muestra una curva de Kaplan Meier que representa gráficamente la supervivencia de ratones infectados con PbA y tratados con anticuerpo anti-Ang2 (denominado "mAb 'B'" en la figura 10), o un control de isotipo (mAb 'A ') o solución salina. El bloqueo de Ang2 con el anticuerpo anti-Ang2 no causó un aumento de la supervivencia de los ratones infectados en comparación con el control de isotipo. El tratamiento con anticuerpo anti-Ang2 tampoco evitó el deterioro neurológico en los ratones infectados (figura 11), aunque no hubo una diferencia significativa en la carga parasitaria entre los ratones infectados tratados con anticuerpo anti-Ang2, el control de isotipo o solución salina (figura 12). Los niveles de proteína plasmática de vWF, ICAM, VCAM y E-selectina no difirieron significativamente en los ratones tratados con el anticuerpo anti-Ang2 o control de isotipo (figura 13).
Ejemplo 3: La administración terapéutica de Ang1 mejora significativamente la supervivencia de ratones infectados con PbA
En este ejemplo, se estudió el efecto de la administración de Ang1 sobre la ECM inducida por PbA en un modelo en ratón. Ochenta ratones C57BI/6 fueron infectados por Plasmodium berghei ANKA (PbA) a través de una inyección intraperitoneal de 1 x106 eritrocitos parasitados (PE) recién aislados obtenidos de ratones con pase por donante el día 0. Los ratones infectados se dividieron en cuatro grupos y se trataron con ya sea 15 mg/kg de un anticuerpo anti-Ang2 (véase el ejemplo 2), un anticuerpo de bloqueo doble "comparador" de Ang1/Ang2 o un control de isotipo, o con 25 mg/kg de AngF1-Fc-F1 (SEQ ID NO: 2) a través de inyección subcutánea el día 4 y el día 6 tras la infección. El anticuerpo de bloqueo de Ang1/Ang2 doble "comparador" fue el pepticuerpo 2xCon4C (AMG386) como se expone en la Patente de Estados Unidos No. 7205275 (Amgen). Los ratones se monitorizaron para determinar la supervivencia, el deterioro neurológico, la carga parasitaria y los niveles de proteínas plasmáticas, como se describe en detalle en el ejemplo 1.
Como se muestra en la figura 14, la administración terapéutica de AngF1-Fc-F1 a ratones infectados con PbA mejoró significativamente la supervivencia (p <0,05, prueba del orden logarítmico) en comparación con ratones tratados con el control de isotipo, el anticuerpo anti-Ang2 o el anticuerpo de bloqueo doble. Los ratones tratados con AngF1-Fc-F1 mostraron una supervivencia de más del 35 % hasta al menos el día 15 tras la infección en comparación con los ratones tratados con los otros tres tratamientos que mostraron una supervivencia del 0% el día 8 tras la infección, aunque el porcentaje de parasitemia en todos los tratamientos fue similar (figura 15). El tratamiento con AngF1-Fc-F1 también protegió la integridad de la barrera hematoencefálica como lo muestra la captación de colorante azul de Evans (figura 16). Los ratones tratados con AngF1-Fc-F1 mostraron una cantidad significativamente baja de captación de colorante (panel C de la figura 16a), coherente con el mantenimiento de una barrera hematoencefálica intacta y una permeabilidad vascular reducida (p<0,05, Kruskal-Wallis), a pesar de que el porcentaje de parasitemia fue similar (figura 16b). Esto confirmó que la Ang1 exógena es suficiente para mantener la integridad de la barrera hematoencefálica después de una exposición letal a malaria.
La administración terapéutica de AngF1-Fc-F1 también evitó la morbilidad y el deterioro neurológico asociados con la ECM (figura 17), independientemente de los cambios en la parasitemia periférica (figura 18). El día 6 tras la infección, la mayoría de los ratones de control habían progresado a ECM, mientras que la progresión de la enfermedad se mitigó en los ratones tratados. Los ratones tratados con AngF1-Fc-F1 infectados mostraron una pérdida de peso similar a los ratones tratados con control.
Para determinar si la protección vascular con AngF1-Fc-F1 se produjo secundariamente a una reducción de las citocinas inflamatorias o si la protección se debió a un aumento directo de la estabilidad vascular frente a una respuesta inflamatoria sistémica, muestras de plasma de ratones infectados con PbA tratados y no tratados fueron analizadas para citocinas proinflamatorias clave. Los ratones infectados con PbA mostraron un aumento significativo de TNF e IFNy el día 6 tras a la infección (aumento de 3 veces en TNF y un aumento de 60 veces en IFNy en comparación con el valor inicial, p<0,01 para ambos, ANOVA unidireccional) a pesar del tratamiento. El tratamiento con AngF1-Fc-F1 no afectó a los niveles de TNF o IFNy, y tanto los ratones de control como los tratados mostraron una regulación positiva similar en respuesta a la infección (figura 19a).
La estimulación con citocinas proinflamatorias y/o las interacciones endoteliales directas con eritrocitos parasitados pueden contribuir a una serie de eventos patológicos implicados en la CM, incluyendo la regulación positiva de los receptores de células endoteliales que median la citoadhesión del parásito. La interrupción del secuestro del parásito a los receptores del huésped a través de la regulación negativa de las moléculas de adhesión celular (CAM), tales como ICAM-1 y/o la molécula de adhesión celular vascular 1 (VCAM-1), puede disminuir la obstrucción microvascular y la disfunción endotelial. Por lo tanto, se investigó el efecto del tratamiento con Ang1 sobre la reducción de los niveles circulantes de formas solubles de CAMS, considerado como un indicador de la activación endotelial y un fenotipo vascular proadhesivo. El análisis de las muestras de plasma recogidas el día 6 tras la infección mostró un aumento de 4 veces en los niveles circulantes de sICAM-1 con infección por PbA, en comparación con el valor inicial (p<0,001, ANOVA unidireccional con prueba de Bonferroni para comparaciones múltiples; figura 19c). Estos niveles se redujeron significativamente con el tratamiento con Ang1 en comparación con los controles infectados con PbA (p<0,05; figura 19c). De forma similar, los niveles de sVCAM-1 aumentaron significativamente el día 6 después de la infección con PbA (aumento de 5 veces, p<0,001; figura 19c) y el tratamiento con Ang1 redujo significativamente los niveles circulantes de sVCAM-1 en comparación con los controles infectados con PbA (p<0,05, figura 19c). Estos datos indican que las interacciones Ang-1-Tie-2 ayudan a mantener la inactividad vascular frente a la respuesta inflamatoria sistémica, en parte a través de la preservación de un fenotipo vascular antiadhesivo a través de la regulación negativa de las moléculas de adhesión.
Este estudio demostró que la administración terapéutica de Ang1 (AngF1-Fc-F1), pero no la inhibición de Ang2, mejoró la integridad de la barrera hematoencefálica y la supervivencia. Esto respaldó la investigación de pro-Ang1, pero no la inhibición de Ang2 como terapia complementaria para la malaria cerebral. Además, es de interés que el tratamiento basado en Ang1 fue eficaz y preservó la integridad de la barrera hematoencefálica, a pesar de una respuesta sistémica proinflamatoria robusta a la infección. Los datos sugieren que las estrategias antiinflamatorias pueden no ser necesarias para preservar la integridad vascular y mejorar el desenlace en infecciones potencialmente mortales asociadas con inflamación sistémica.
En un experimento adicional, AngF1-Fc-F1 se administrará en combinación con un anticuerpo anti-Tie2 (como se expone en el documento US20130209492) a ratones C57BI/6 susceptibles infectados para estudiar la implicación de Tie2 en el bloqueo del efecto protector de AngF1-Fc -F1. El anticuerpo anti-Tie2 puede ser un anticuerpo activador (o agonista), por ejemplo, aumenta la unión de una angiopoyetina y/o aumenta la actividad de Tie2. Se espera que el AngF1-Fc-F1 administrado en combinación con el anticuerpo anti-Tie2 conduzca a una menor supervivencia de los ratones infectados en comparación con el AngF1-Fc-F1 solo.
En otro experimento adicional, AngF1-Fc-F1 se usará para tratar ratones BALB/c resistentes infectados con PbA para estudiar el efecto sobre la supervivencia, la integridad de la barrera hematoencefálica, el deterioro neurológico y los marcadores de proteínas plasmáticas. Se espera que la administración de AngF1-Fc-F1 conduzca a una mejor protección de la integridad de la barrera hematoencefálica y la supervivencia de ratones BALB/c infectados.
En un tercer experimento, se administrará AngF1-Fc-F1 en combinación con un anticuerpo anti-Tie2 a ratones BALB/c resistentes infectados para estudiar si los ratones resistentes se vuelven susceptibles a ECM. Se espera que el AngF1-Fc-F1 administrado en combinación con el anticuerpo anti-Tie2 conduzca a una menor supervivencia de los ratones BALB/c infectados en comparación con el AngF1-Fc-F1 solo.
Ejemplo 4: Administración terapéutica de AngF1-Fc-F1 como terapia complementaria en combinación con artesunato
En este ejemplo, se estudió el efecto de la administración de Ang-F1-Fc-F1 en combinación con artesunato sobre ECM inducida por PbA en un modelo en ratón. Veinte ratones C57BI/6 fueron infectados por Plasmodium berghei ANKA (PbA) a través de una inyección intraperitoneal de 1 x106 eritrocitos parasitados (PE) recién aislados obtenidos de ratones con pase por donante el día 0. Los ratones infectados se trataron con 15 mg/kg de AngF1-Fc-F1 (SEQ ID NO: 2) los días 4 y 6 tras la infección y con 10 mg/kg de artesunato el día 5 tras la infección mediante inyección subcutánea. Los ratones se monitorizaron para determinar la supervivencia, el deterioro neurológico, la carga parasitaria y los niveles de proteínas plasmáticas, como se describe en detalle en el ejemplo 1.
El tratamiento complementario con AngF1-Fc-F1 mejoró significativamente la supervivencia de los ratones infectados en comparación con el artesunato solo (figura 20). Los ratones infectados tratados con AngF1-Fc-F1 en combinación con artesunato mostraron un 100 % de supervivencia al menos hasta el día 15 tras la infección. Por el contrario, los ratones infectados tratados con artesunato solo mostraron una supervivencia inferior al 60 % el día 8 tras la infección. A pesar de la disminución significativa de la carga parasitaria a los niveles previos a la ECM (es decir, <2 % de parasitemia), el 41,7 % de los ratones tratados con artesunato murieron de ECM. Este efecto fue independiente del porcentaje de parasitemia (figura 21).
En un experimento adicional, se estudiará el efecto de AngF1-Fc-F1 complementario en combinación con artesunato sobre el deterioro neurológico en ratones infectados. Se espera que la administración de AngF1-Fc-F1 en combinación con artesunato prevenga el deterioro neurológico en ratones infectados en comparación con el artesunato solo.
En otro experimento adicional, se administrará AngF1-Fc-F1 en combinación con un anticuerpo anti-Ang2 (como se describe en el ejemplo 2) para estudiar la supervivencia de ratones infectados. Se espera que el AngF1-Fc-F1 administrado en combinación con el anticuerpo anti-Ang2 conduzca a una supervivencia mejorada de los ratones infectados en comparación con el AngF1-Fc-F1 solo.
Ejemplo 5: Protección contra lesión pulmonar aguda asociada a malaria
En este ejemplo, se estudiará el efecto de la administración de AngF1-Fc-F1 sobre la permeabilidad vascular en el pulmón y la lesión pulmonar aguda asociada a malaria en ratones infectados. Veinte ratones C57BI/6 se infectarán con Plasmodium berghei ANKA (PbA) a través de una inyección intraperitoneal de 1 x106 eritrocitos parasitados (PE) recién aislados obtenidos de ratones con pase por donante el día 0. Los ratones infectados se tratarán con 15 mg/kg de AngF1-Fc-F1 (SEQ ID NO: 2) los días 4 y 6 tras la infección a través de inyección subcutánea. Los ratones se monitorizarán para determinar la supervivencia y la permeabilidad vascular en los pulmones mediante tinción con azul de Evans.
Se espera que los ratones tratados con AngF1-Fc-F1 muestren ausencia de captación de colorante azul de Evans en los pulmones, lo que indica ausencia de permeabilidad vascular y protección contra lesión pulmonar aguda

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una proteína angiopoyetina modificada para su uso en un método de tratamiento, prevención o mejora de al menos un síntoma, indicación o complicación de la malaria cerebral, comprendiendo dicho método administrar la composición a un sujeto que lo necesite, en la que la angiopoyetina modificada comprende una proteína de fusión que comprende al menos un dominio similar a fibrinógeno de angiopoyetina-1 fusionado a un fragmento Fc de inmunoglobulina.
2. La composición para su uso en el método de la reivindicación 1, en la que el al menos un síntoma, indicación o complicación se selecciona del grupo que consiste en fiebre, cefalea y mialgia seguidos de somnolencia, confusión, fuga vascular, pérdida de integridad de la barrera hematoencefálica, nivel sanguíneo elevado de un marcador endotelial, seleccionado opcionalmente del grupo que consiste en Ang1, Ang2, Tie2, vWF, ICAM-1, E-selectina y VCAM-1, secuestro de eritrocitos parasitados en el cerebro, deterioro del equilibrio o la coordinación, deterioro motor, esplenomegalia, pérdida de reflejos y autoconservación, falta de comportamiento relacionado con la higiene, lesión pulmonar aguda, convulsiones, crisis epilépticas, coma y muerte.
3. La composición para su uso en el método de la reivindicación 1 o 2, en la que:
(a) la angiopoyetina modificada se administra a una dosis de 5 a 50 mg/kg del peso corporal del sujeto, opcionalmente en la que la angiopoyetina modificada se administra como una dosis de 15 mg/kg del peso corporal del sujeto; y/o
(b) la angiopoyetina modificada se administra por vía subcutánea; y/o
(c) la angiopoyetina modificada se administra en combinación con un segundo agente terapéutico; y/o
(d) la angiopoyetina modificada se administra en combinación con un segundo agente terapéutico y el segundo agente terapéutico se selecciona del grupo que consiste en una artemisinina, quinina y una variante o derivado de la mismas, opcionalmente en la que el segundo agente terapéutico es artesunato
4. La composición para su uso en el método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que la administración de la angiopoyetina modificada aumenta la supervivencia.
5. La composición para su uso en el método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que la administración de la angiopoyetina modificada protege la integridad de la barrera hematoencefálica.
6. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una proteína angiopoyetina modificada para su uso en un método de prevención de la malaria cerebral grave en un sujeto infectado con Plasmodium spp., comprendiendo el método: (a) seleccionar un sujeto con más del 0,1 % de parasitemia; y (b) administrar la composición farmacéutica al sujeto que lo necesite, en la que la angiopoyetina modificada comprende una proteína de fusión que comprende al menos un dominio similar a fibrinógeno de angiopoyetina-1 fusionado a un fragmento Fc de inmunoglobulina.
7. La composición para su uso en el método de la reivindicación 6, en la que la administración de la angiopoyetina modificada previene al menos una indicación seleccionada del grupo que consiste en deterioro neurológico y fuga vascular, opcionalmente en la que al menos una indicación de deterioro neurológico se selecciona del grupo que consiste en deterioro del equilibrio o la coordinación, deterioro motor, pérdida de reflejos y autoconservación, lesión y deterioro neurocognitivos a largo plazo, deficiencia de memoria, trastornos afectivos, falta de comportamiento relacionado con la higiene, convulsiones y crisis epilépticas.
8. La composición para su uso en el método de la reivindicación 6 o 7, en la que la administración de la angiopoyetina modificada previene la pérdida de integridad de la barrera hematoencefálica.
9. La composición para su uso en el método de una cualquiera de las reivindicaciones 6-8, en la que:
(a) la angiopoyetina modificada se administra a una dosis de 15 mg/kg del peso corporal del sujeto; y/o
(b) la angiopoyetina modificada se administra por vía subcutánea; y/o
(c) la angiopoyetina modificada se administra en combinación con un segundo agente terapéutico, opcionalmente en la que el segundo agente terapéutico es artesunato.
10. La composición para su uso en el método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 9, en la que
la proteína de fusión comprende un primer dominio similar a fibrinógeno de angiopoyetina-1 fusionado en su extremo C-terminal al extremo N-terminal de un fragmento Fc y el fragmento Fc fusionado en su extremo C-terminal al extremo N-terminal de un segundo dominio similar a fibrinógeno de angiopoyetina-1.
11. La composición para su uso en el método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 10, en la que la angiopoyetina-1 modificada es AngF1-Fc-F1.
12. La composición para su uso en el método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en la que el fragmento Fc comprende un dominio Fc de IgG.
13. La composición para su uso en el método de la reivindicación 12, en el que el dominio Fc de IgG es un dominio Fc de IgG1 humana.
14. La composición para su uso en el método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 13, en la que la angiopoyetina-1 modificada consiste en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2.
ES14800207T 2013-11-01 2014-10-31 Intervenciones basadas en angiopoyetina para el tratamiento de la malaria cerebral Active ES2727532T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361898539P 2013-11-01 2013-11-01
US201462040514P 2014-08-22 2014-08-22
PCT/US2014/063347 WO2015066426A2 (en) 2013-11-01 2014-10-31 Angiopoietin-based interventions for treating cerebral malaria

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2727532T3 true ES2727532T3 (es) 2019-10-16

Family

ID=51932597

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES14800207T Active ES2727532T3 (es) 2013-11-01 2014-10-31 Intervenciones basadas en angiopoyetina para el tratamiento de la malaria cerebral

Country Status (20)

Country Link
US (4) US9592271B2 (es)
EP (1) EP3062811B1 (es)
JP (1) JP2016537416A (es)
KR (1) KR20160099085A (es)
CN (1) CN105873599A (es)
AU (1) AU2014342162B2 (es)
CA (1) CA2928852A1 (es)
CY (1) CY1121710T1 (es)
DK (1) DK3062811T3 (es)
ES (1) ES2727532T3 (es)
HR (1) HRP20191070T1 (es)
HU (1) HUE044660T2 (es)
LT (1) LT3062811T (es)
MX (1) MX377089B (es)
PL (1) PL3062811T3 (es)
PT (1) PT3062811T (es)
RS (1) RS59000B1 (es)
SI (1) SI3062811T1 (es)
SM (1) SMT201900295T1 (es)
WO (1) WO2015066426A2 (es)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2494108C2 (ru) 2006-04-07 2013-09-27 Аерпио Терапетикс, Инк. Антитела, которые связывают человеческий белок бета-тирозин фосфатазу (нртрвета), и их использование
US7622593B2 (en) 2006-06-27 2009-11-24 The Procter & Gamble Company Human protein tyrosine phosphatase inhibitors and methods of use
ES2726946T3 (es) 2009-07-06 2019-10-10 Aerpio Therapeutics Inc Derivados de benzosulfonamida, composiciones de los mismos y su uso en la prevención de la metástasis de las células cancerosas
WO2013056240A1 (en) 2011-10-13 2013-04-18 Aerpio Therapeutics, Inc. Methods for treating vascular leak syndrome and cancer
US20150050277A1 (en) 2013-03-15 2015-02-19 Aerpio Therapeutics Inc. Compositions and methods for treating ocular diseases
CA2928852A1 (en) 2013-11-01 2015-05-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Angiopoietin-based interventions for treating cerebral malaria
EP3116503A4 (en) 2014-03-14 2017-08-23 Aerpio Therapeutics, Inc. Hptp-beta inhibitors
ES2894802T3 (es) 2015-09-23 2022-02-15 Aerpio Pharmaceuticals Inc Activadores de Tie-2 para su uso en el tratamiento de la presión intraocular
ES2867249T3 (es) * 2015-11-06 2021-10-20 Regeneron Pharma Angiopoyetinas para usar en la promoción de la coagulación sanguínea y en el tratamiento de trastornos de la coagulación sanguínea
US20220010281A1 (en) * 2018-10-29 2022-01-13 Ottawa Hospital Research Institute Genetically-engineered mesenchymal stem cells overexpressing aoah and uses thereof
SG11202108022RA (en) 2019-01-30 2021-08-30 Agency Science Tech & Res Use of igfbp7 for treating malaria
EP3962482A4 (en) 2019-04-29 2023-01-11 EyePoint Pharmaceuticals, Inc. TIE 2 ACTIVATORS FACING THE SCHLEMM CHANNEL
CN110687289B (zh) * 2019-10-17 2023-04-18 中国人民解放军陆军军医大学 Fgl2蛋白作为疟疾感染标志物的应用
JP2023515827A (ja) * 2020-02-28 2023-04-14 ノースウェスタン ユニバーシティ 房水流出を高め、眼圧を減少させる方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1025193A (en) 1911-03-01 1912-05-07 Oliver Jefferson Kennedy Foldable holder for writing-pads.
IL143558A0 (en) 1998-12-23 2002-04-21 Regeneron Pharma Method of enhancing the biological activity of ligands
EP1819355A4 (en) * 2004-09-28 2009-08-12 Genexel Sein Inc METHOD OF USE OF A CHIMERIC COILED COIL MOLECULE
US20070154482A1 (en) 2005-09-12 2007-07-05 Beth Israel Deaconess Medical Center Methods and compositions for the treatment and diagnosis of diseases characterized by vascular leak, hypotension, or a procoagulant state
US20120189635A1 (en) 2009-07-29 2012-07-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for Treating or Preventing Malaria by Administering an Antibody that Specifically Binds Angiopoietin-2 (Ang-2)
JO3182B1 (ar) 2009-07-29 2018-03-08 Regeneron Pharma مضادات حيوية بشرية عالية الالفة مع تولد الاوعية البشرية - 2
WO2011093851A1 (en) 2010-01-26 2011-08-04 Scott And White Memorial Hospital And Scott, Sherwood, And Brindley Foundation Method for treatment of vascular hyperpermeability
MX359833B (es) * 2011-08-19 2018-10-12 Regeneron Pharma Anticuerpos anti-tie2 y usos de los mismos.
CA2928852A1 (en) 2013-11-01 2015-05-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Angiopoietin-based interventions for treating cerebral malaria

Also Published As

Publication number Publication date
RS59000B1 (sr) 2019-08-30
CN105873599A (zh) 2016-08-17
WO2015066426A2 (en) 2015-05-07
DK3062811T3 (da) 2019-05-13
WO2015066426A3 (en) 2015-07-23
US20160045566A1 (en) 2016-02-18
KR20160099085A (ko) 2016-08-19
CA2928852A1 (en) 2015-05-07
US9968653B2 (en) 2018-05-15
EP3062811A2 (en) 2016-09-07
LT3062811T (lt) 2019-05-10
US20190175699A1 (en) 2019-06-13
CY1121710T1 (el) 2020-07-31
US9592271B2 (en) 2017-03-14
PT3062811T (pt) 2019-06-11
SMT201900295T1 (it) 2019-07-11
EP3062811B1 (en) 2019-04-03
MX377089B (es) 2025-03-07
AU2014342162A1 (en) 2016-05-26
US10525106B2 (en) 2020-01-07
HUE044660T2 (hu) 2019-11-28
JP2016537416A (ja) 2016-12-01
MX2016005446A (es) 2017-01-05
SI3062811T1 (sl) 2020-07-31
AU2014342162B2 (en) 2020-01-02
US20170136090A1 (en) 2017-05-18
PL3062811T3 (pl) 2019-10-31
HRP20191070T1 (hr) 2019-09-20
US20180228870A1 (en) 2018-08-16
US10251938B2 (en) 2019-04-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2727532T3 (es) Intervenciones basadas en angiopoyetina para el tratamiento de la malaria cerebral
US11331393B2 (en) Renal-homing peptide conjugates and methods of use thereof
ES2965486T3 (es) Formulaciones de anticuerpos anti-C5 de alta concentración
ES2424242T3 (es) Uso de polipéptidos de aprotinina como portadores en conjugados farmacéuticos
JP5579713B2 (ja) 高分子の送達増強のための方法および組成物
US20200330603A1 (en) Peptides for renal therapy
WO2013148350A2 (en) Anti-light antibody therapy for inflammatory bowel disease
US20220226454A1 (en) Antigenic composition(s) and method(s) of use against porphyromonas gingivalis for the prevention and/or treatment of infection and/or diseases
WO2019086676A1 (en) IL13Rα2 PEPTIDE AND ITS USES
Smith et al. Efficacy and safety of iptacopan in patients with C3 glomerulopathy: 12-Month results from the Phase 3 APPEAR-C3G study
Furrer et al. Intranasal delivery of ESBA105, a TNF-alpha-inhibitory scFv antibody fragment to the brain
CN101848727A (zh) 脱铁乳铁蛋白组合物及其用于治疗病毒性丙型肝炎的方法
KR20160145820A (ko) 알츠하이머병（ａｄ）의 치료 및 예방
WO2022029810A1 (en) Peptides able to bind angiotensin-converting enzyme 2 (ace2) and medical uses thereof
HK1228301B (en) Angiopoietin-based interventions for treating cerebral malaria
HK1228301A1 (en) Angiopoietin-based interventions for treating cerebral malaria
KR20160145821A (ko) 알츠하이머병（ａｄ）의 치료 및 예방
CA3166634A1 (en) Methods of treating clear cell renal carcinoma (ccrcc) using axl decoy receptors
KR20210010890A (ko) Pcsk9 결합 분자를 포함하는 조성물 및 사용 방법
ES2864350T3 (es) Pautas posológicas para uso con inhibidores de PCSK9
KR20260040257A (ko) Hb-egf/egfr 경로 활성화와 관련된 신장 질환치료에서 사용하기 위한 hb-egf 억제제 및 코르티코스테로이드 제제의 조합
HK1241908A1 (en) Methods and formulations for treating vascular eye diseases