ES2728096T3

ES2728096T3 - Hidrolizado peptídico de caracoles, fracciones peptídicas, procedimiento de fabricación, utilización y composiciones para inhibir la enzima de conversión de la angiotensina

Info

Publication number: ES2728096T3
Application number: ES15741979T
Authority: ES
Inventors: Pascal Drevet
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2014-07-21
Filing date: 2015-07-21
Publication date: 2019-10-22
Anticipated expiration: 2035-07-21
Also published as: SI3171885T1; EP3171885A1; LT3171885T; FR3023717A1; FR3023717B1; EP3171885B1; WO2016012453A1; PL3171885T3

Abstract

Procedimiento de preparación de un hidrolizado peptídico que presenta una actividad inhibidora de la enzima de conversión de la angiotensina, que comprende las etapas de: a) trituración de todo o parte de cuerpos de caracoles para obtener un triturado; b) mezcla de dicho triturado con agua purificada; c) hidrólisis enzimátifca por alcalasa de la mezcla obtenida en la etapa b) para obtener un hidrolizado; d) separación líquido-sólido del hidrolizado obtenido en la etapa c) para obtener una fase líquida y una fase sólida; e) secado de la fase líquida obtenida en la etapa d).

Description

DESCRIPCIÓN

Hidrolizado peptídico de caracoles, fracciones peptídicas, procedimiento de fabricación, utilización y composiciones para inhibir la enzima de conversión de la angiotensina

1. Campo de la invención

El campo de la invención es el de los productos (complementos alimentarios, ingredientes de salud, medicamentos) destinados a prevenir o tratar la hipertensión arterial, en el hombre o en el animal.

Más precisamente, el campo de la invención es el relativo a tales productos cuyo principio activo presenta una actividad inhibidora de la enzima de conversión de la angiotensina, a continuación “ECA”.

La invención se refiere así a un procedimiento de obtención de un hidrolizado de caracol que permite inhibir la ECA.

2. Técnica anterior

La presión arterial es la presión ejercida por la sangre sobre las paredes de los vasos sanguíneos. Un adulto humano presenta normalmente una presión arterial inferior o igual a 120/80 mmHg. Se habla de hipertensión arterial cuando la presión arterial medida supera 140/90 mmHg.

La hipertensión arterial es un factor de riesgo mayor, especialmente para el desarrollo de accidentes vasculares cerebrales (AVC) y de las enfermedades cardio-vasculares, importantes causas de morbilidad y de mortalidad en occidente. Se estima que el 31% de la población adulta en los estados unidos sufre hipertensión y que un americano adulto de 3 estaría en condición de pre-hipertensión arterial. Es la razón por la cual la hipertensión se trata directamente cuando se diagnóstica.

A medida que se envejece, la pared de los vasos sanguíneos pierde su elasticidad y se ensancha volviéndose más resistente a las deformaciones relacionadas por el impulso de la sangre. Esta resistencia creciente de las paredes aumenta la presión arterial.

La presión arterial se controla también por un cierto número de sistemas metabólicos, incluyendo la principal vía, que se denomina sistema renina-angiotensina (SRA). En los riñones, este sistema segrega una enzima denominada enzima de conversión de la angiotensina (ACE). La enzima de conversión de la angiotensina (ECA) es una exopeptidasa que permite convertir la angiotensina I en angiotensina II que es un potente vasoconstrictor. La ECA tiene también la función de inhibidor de la bradiquina con la función vasodilatadora. Esta dualidad en su modo de acción hace que de la ECA una buena diana en el tratamiento de la hipertensión arterial.

Los inhibidores de ECA permiten por lo tanto reducir la frecuencia cardiaca estimulando la vasodilatación de los vasos y, en consecuencia, contribuyen a reducir la presión en el sistema cardiovascular.

Se prescriben regularmente, por lo tanto, para el tratamiento de la hipertensión arterial, de las nefropatías, en particular de las nefropatías diabéticas, de las infecciones agudas del miocardio, de los infartos del miocardio, del AVC y su prevención.

El principal inhibidor de ECA propuesto en el mercado es el captopril (ácido (2S)-1-[(2S)-2-metil-3-sulfanilpropanil]-pirrolidina-2-carboxílico). El captopril se sintetiza por vía química y se derivó inicialmente del veneno de serpiente jararacá. Es hoy en día el tratamiento de referencia de la hipertensión arterial, la prevención de las recidivas de los infartos de miocardio y de la insuficiencia cardiaca congestiva.

Los efectos secundarios de este inhibidor de ECA son numerosos: proteinuria, hiperkalemía, leucopenia, náuseas, tos seca persistentes, etc. Además de estos efectos indeseables, el captopril provoca unos eritemas cutáneos y unas alteraciones del sabor: algunos pacientes se quejan de un sabor metálico persistente en boca. Otros constatan la pérdida total de este sentido. Estos últimos efectos estarían relacionados con la presencia de un grupo tiol en el captopril.

3. Objetivos de la invención

La invención tiene en particular como objetivo, en al menos un modo de realización, un procedimiento que permite producir una composición de origen natural, alimentaria o farmacéutica, que permite inhibir la ECA.

La invención tiene también por objetivo proponer, en al menos un modo de realización, una alternativa de origen natural al captopril.

4. Descripción de la invención

Estos objetivos, así como otros que aparecerán a continuación, se alcanzan con la ayuda de un procedimiento de preparación de un hidrolizado de todo o parte de cuerpo de caracoles según la reivindicación 1, presentando dicho hidrolizado una actividad inhibidora de la enzima de conversión de la angiotensina.

El hidrolizado obtenido según el procedimiento de la invención se puede utilizar en una composición peptídica de origen natural para inhibir la ECA, a partir de caracol. Así, los efectos indeseables de los medicamentos sintetizados por vía química son susceptibles, como mínimo, de atenuarse. En particular, las erupciones y las alteraciones del gusto constatadas en los pacientes tratados por el captopril son susceptibles de evitarse.

El depositante ha constatado, en efecto, de manera sorprendente que un hidrolizado peptídico de caracol permitía inhibir la ECA de manera significativa, incluso con una eficacia comparable a la del captopril.

Así, el depositante propone utilizar el hidrolizado peptídico de caracol a fin de proporcionar una alternativa a los inhibidores convencionales de ECA.

El origen natural del hidrolizado permite limitar las reacciones alérgicas y los efectos indeseables del tratamiento. Efectivamente, se sabe que lo productos de origen natural provocan globalmente menos efectos secundarios que los productos sintetizados por vía química.

Según la invención, el hidrolizado se obtiene a partir de hepatopáncreas de caracol. Esta parte del caracol es particularmente rica en enzimas y en proteínas. Esta variante consiste en la práctica en trabajar a partir de desechos de la industria agroalimentaria, correspondiendo las hepatopáncreas a la parte del caracol no aprovechada de forma culinaria. En efecto, es posible recuperar estos desechos de caracoles para producir el hidrolizado según la invención. El coste de producción del hidrolizado se encuentra por lo tanto reducido.

Ventajosamente, el hidrolizado según la invención se obtiene a partir de todo o parte del cuerpo de caracoles que pertenece a al menos una especie seleccionada del grupo constituido por Helix aspersa, Helix lucorum, Helix pomada. Estas especies pueden recogerse o bien por recolección en la naturaleza, o bien producirse en granjas. Preferentemente, dicho hidrolizado se obtiene a partir de todo o parte del cuerpo de Helix aspersa. En efecto, la especie Helix aspersa es una especie de caracoles de granja. La calidad del caracol es por lo tanto más fácilmente controlable.

El hidrolizado obtenido según el procedimiento de la invención comprende preferiblemente una fracción peptídica que agrupa los péptidos de peso molecular que va de 100 Daltons (DA) a 1050 Daltons (Da).

Preferentemente, la fracción agrupa los péptidos de peso molecular que va de 100 Da a 350 Da.

El depositante ha constatado, en efecto, que estas fracciones presentan una buena actividad inhibidora de ECA. De manera más preferida, la fracción del hidrolizado obtenido según el procedimiento de la invención agrupa los péptidos de pesos moleculares que van de 100 a 175 Da. El depositante ha constatado, en efecto, que esta fracción particular del hidrolizado peptídico según la invención presenta una actividad inhibidora de ECA particularmente interesante. En efecto, la actividad inhibidora de esta fracción es comparable a la del captopril. Esta fracción es, por lo tanto, particularmente interesante para la formulación de una composición, llegado el caso, farmacéutica, de origen natural para tratar la hipertensión arterial.

El hidrolizado obtenido gracias al procedimiento según la invención comprende preferiblemente una mezcla de péptidos seleccionados del grupo constituido por arginina-leucina (RL), tirosina-serina (YS), tirosina-glicina (YG), tirosina-alanina (YA), leucina-serina (LS), leucina-glicina (LG), serina-penilalanina (SF), fenilalanina-glicina (FG), glicina-fenilalanina (GF), ácido aspártico-fenilalanina (DF), tirosina-metionina (YM), valina-triptofano (VW), tirosinafenilalanina (YF), fenilalanina-leucina (FL), fenilalanina-fenilalanina (FF), leucina-ácido aspártico-alanina (LDA) o sus combinaciones, para prevenir o tratar la hipertensión arterial en el hombre o el animal.

En efecto, el depositante ha constatado que el hidrolizado obtenido según el procedimiento de la invención contenía estos péptidos.

Preferentemente, el hidrolizado obtenido según la invención comprende una mezcla de péptidos seleccionados del grupo constituido por valina-triptofano (VW), tirosina-glicina (YG), tirosina-alanina (YA), serina-fenilalanina (SF), fenilalanina-glicina (FG), glicina-fenilalanina (GF), ácido aspártico-fenilalanina (DF), tisorina-metionina (YM) o sus combinaciones. En efecto, el depositante ha constatado que las fracciones peptídicas de la invención que contienen estos péptidos eran las que presentaban la actividad inhibidora de ECA más interesante. En consecuencia, el péptido o la mezcla de péptido según la invención se puede utilizar para prevenir y/o tratar la hipertensión arterial.

El hidrolizado obtenido gracias al procedimiento de la invención se puede integrar en unas composiciones farmacéuticas o unos complementos alimentarios destinados a prevenir o reducir la hipertensión, en el hombre y/o en el animal, en particular el perro o el grato.

Puede también incorporarse en unas composiciones alimentarias funcionales. Se entiende por “composiciones alimentarias funcionales” o “alimentos funcionales” unos productos alimentarios de gran consumo a los que se añade un principio activo que permite luchar contra y/o prevenir una patología, o disminuir un factor de riesgo para una patología. Por ejemplo, se pueden citar las margarinas enriquecidas en omega 3, 6 y 9 que permiten luchar contra el exceso de colesterol (que no es una enfermedad en sí pero que es un factor de riesgo para las placas de ateroma y las patologías cardiovasculares). Como precisión, cuando dicho principio activo se integra en una composición alimentaria para hacer una composición alimentaria funcional, o alimento funcional, puede designarse bajo el término de “ingrediente de salud”.

Un enfoque holístico del tratamiento de la hipertensión arterial permite disminuir la dosis de medicamento a tomar por el paciente. Esto permite también tratar una hipertensión arterial ligera.

La invención cubre por lo tanto también cualquier composición que comprende un hidrolizado obtenido por el procedimiento según la invención, en un complemento alimentario, de uso humano o veterinario, para su utilización para prevenir la hipertensión arterial.

Tales complementos alimentarios pueden formularse, por ejemplo, en forma de cápsulas, de comprimidos o de cápsulas blandas que contienen un líquido. Estos complementos alimentarios pueden destinarse a individuos, humanos o animales, que presentan una predisposición a la hipertensión arterial. Este es, especialmente, el caso de los individuos mayores cuyas paredes de vasos pierden naturalmente su elasticidad. Es también el caso de individuos cuya hipertensión arterial es ligeramente sobre-elevada y que es necesario vigilar. En este último caso, estos individuos podrían estar interesados en un complemento alimentario que permita mantener su presión arterial en los estándares.

Tales complementos alimentarios pueden contener al menos un excipiente tal como un agente de carga, un lubricante, un agente de recubrimiento, un conservante, un estabilizante, un regulador de pH, etc.

Así, la invención propone una alternativa a los tratamientos convencionales, y especialmente al captopril. La ausencia de grupo tiol en los productos según la invención es susceptible de suprimir los efectos indeseables anteriormente citados como la alteración del gusto y las erupciones cutáneas.

El medicamento que contiene el hidrolizado obtenido según la invención puede contener al menos un excipiente tal como un agente de carga, un lubricante, un agente de recubrimiento, un conservante, un estabilizante, un regulador de pH, etc.

Según la reivindicación 1, la invención se refiere a un procedimiento de preparación de un hidrolizado según la invención que comprende las etapas de:

a) trituración de todo o parte de cuerpos de caracoles para obtener un triturado;

b) mezcla de dicho triturado con agua purificada;

c) hidrólisis por alcalasa de la mezcla obtenida en la etapa b) para obtener un hidrolizado;

d) separación líquido-sólido del hidrolizado obtenido en la etapa c) para obtener una fase líquida y una fase sólida; e) secado de la fase líquida obtenida en la etapa d).

Ventajosamente, dicha etapa c) de hidrólisis se efectúa a una temperatura de 55°C, en la práctica utilizando, para la etapa b), agua calentada a esta temperatura. Esta temperatura permite activar las proteasas y lisar las proteínas contenidas en los caracoles a fin de obtener un hidrolizado según la invención.

En una variante interesante, el procedimiento según la invención comprende además una etapa de concentración de la fase líquida obtenida en la etapa d) entre la etapa de separación líquido-sólido d) y la etapa de secado e).

La etapa de concentración permite especialmente acelerar el secado de dicha fase líquida. Esta etapa opcional de concentración puede llevarse a cabo por evaporación al vacío.

El procedimiento según la invención puede también comprender una etapa suplementaria de ultrafiltración realizada después de la etapa de separación líquido-solido y antes de la etapa de concentración. Tal etapa de ultrafiltración permite eliminar los elementos de pequeño tamaño que la separación líquido-sólido no hubiera logrado eliminar. Ventajosamente, la técnica de filtración utilizada es una técnica de ultrafiltración tangencial sobre membrana que presenta un umbral de corte de 10 000 Daltons (Da). Esto significa que la membrana retiene las partículas cuyo peso molecular es superior o igual a 10000 Da. La técnica de filtración tangencial consiste en hacer pasar el fluido tangencialmente a la superficie del filtro. Es la presión del fluido que le permite atravesar el filtro. Las partículas, en este caso, se quedan en el flujo de circulación tangencial, lo que permite ralentizar la obturación de la membrana de filtración.

5. Lista de las figuras

Otras características y ventajas de la invención aparecerán más claramente a la lectura de la descripción siguiente de un modo de realización preferido, dado a título de simple ejemplo ilustrativo y no limitativo, y de la figura 1 anexa. La figura 1 presenta un cromatógrama obtenido después de la cromatografía de exclusión estérica de un hidrolizado según la invención.

6. Descripción de un modo de realización de la invención

El principio general de la invención se basa en la proposición de una alternativa natural a los inhibidores convencionales de ECA obtenidos por síntesis química. La alternativa natural propuesta por el depositante consiste en un hidrolizado, sus fracciones peptídicas y/o los péptidos aislados de este hidrolizado para inhibir ECA. Además, la invención propone también utilizar las propiedades inhibidoras de tal hidrolizado, obtenido a partir de caracoles, de sus fracciones peptídicas y/o de péptidos que lo constituye para proponer unos medicamentos, unos complementos alimentarios y unos alimentos funcionales que permiten prevenir y/o tratar la hipertensión arterial.

6.1 Preparación de un hidrolizado según el procedimiento de la invención

Se prepara un hidrolizado según el procedimiento de la invención utilizando aproximadamente 250 kg de caracoles, seleccionados entre las especies Helix aspersa, Helix lucorum y Helix pomada o de las hepatopáncreas de Helix aspersa, Helix lucorum y Helix pomada. Es posible utilizar unos lotes de caracoles que contiene sólo una especie o una mezcla de dos o tres de las especies citadas. Preferentemente, se utiliza Helix aspersa ya que son unos caracoles de granja. La calidad del lote es, por lo tanto, más fácil de controlar. El hidrolizado puede prepararse a partir de caracoles congelados. En este caso, los caracoles se descongelan en cámara fría a fin de que la descongelación sea lenta. Una descongelación lenta permite preservar las enzimas y proteínas del caracol.

Una vez descongelados, los caracoles se trituran según cualquier técnica conocida por el experto en la materia. Un volumen de 250 l de agua purificada se calienta a 55°C antes de mezclarse con los caracoles triturados.

A fin de proceder a la hidrólisis enzimática, se añade a la mezcla caracoles triturados - agua a 55°C una cantidad del 1% másico de alcalasa con respecto al peso de los caracoles, es decir 2,5 kg de proteasa. La mezcla se mantiene a 55°C, pH 8 durante 2 horas para que la reacción enzimática se lleve a cabo. La hidrólisis se detiene después al final de 2 horas calentando la mezcla a 90°C durante 10 segundos, a fin de inactivar la proteasa. Se obtiene así una mezcla hidrolizada.

La mezcla hidrolizada se somete después a una etapa de centrifugación a 4000 rpm, durante 5 minutos, a temperatura ambiente (centrifugadora KR25i, JOUAN). El sobrenadante se recupera y se elimina el residuo que comprende los restos no digeridos de los cuerpos de caracoles.

Se realiza una filtración opcional para eliminar los restos sobre una membrana que presenta un umbral de corte de 10000 Da. En esta etapa, se obtiene un sobrenadante claro.

Preferentemente, el sobrenadante se somete después a una etapa de concentración por evaporación al vacío a fin de eliminar el agua superflua y concentrar las enzimas en el sobrenadante. Más precisamente, el sobrenadante se inyecta en un evaporador rotativo al vacío, o bien en un evaporador al vacío de columna. La evaporación se lleva a cabo así durante un tiempo comprendido entre 4 y 6 horas, a una temperatura finamente controlada comprendida entre 40°C y 45°C. Así, se facilita la etapa de secado. Este intervalo de temperatura permite secar el sobrenadante sin dañar los péptidos contenidos en el hidrolizado.

Finalmente, el sobrenadante, eventualmente concentrado, se somete a una etapa de secado. Preferentemente, se procede a un secado por flujo de aire cuya temperatura no supera 45°C. Así, se preservan la calidad de los péptidos y su actividad. Se pueden utilizar otras técnicas para secar el hidrolizado y, especialmente, la atomización y la liofilización. La elección entre estas técnicas depende de las obligaciones industriales y de la utilización del hidrolizado.

6.2. Preparación de fracciones peptídicas

Unas fracciones peptídicas del hidrolizado se obtienen después sometiendo el hidrolizado obtenido según el procedimiento descrito en el punto 6.1 a una cromatografía de exclusión estérica sobre columnas Superdex Peptides HT 10/300 (Ge Healthacre) cuya zona de fraccionamiento de gel está comprendida entre 100 Da y 7000 Da.

La fase estacionaria está compuesta de bolas porosas de agarosa y de dextrano de un diámetro medio de 13 pm. La fase móvil está compuesta de una mezcla de agua, de acetonitrilo y de trifluoroacetato en las proporciones volúmicas respectivas (70/30/0,1). La absorbancia se mide a 214 nm y se registra por el equipo automatizado a una frecuencia de 0,3 Hz.

La figura 1 representa el cromatograma obtenido. Se distinguen 5 fracciones que tienen respectivamente unos pesos moleculares aparentes comprendidos entre:

- fracción 1: de 1050 Da a 10000 Da;

- fracción 2: de 350 Da a 1050 Da;

- fracción 3: de 175 Da a 350 Da;

- fracción 4: de 100 Da a 175 Da; y

- fracción 5: de 0 a 100 Da.

6.3. Preparación de péptidos aislados

El aislamiento de los péptidos a partir de cada una de las fracciones se realiza por cromatografía en fase líquida a alta presión (HPLC) seguida de una espectrometría de masa (MS) según cualquier método bien conocido por el experto en la técnica.

El HPLC permite fraccionar las moléculas en función de su hidrofobia. La salida de la columna de HPLC se conecta a un espectrómetro de masa de tipo triple cuadripolo. Este tipo de espectrómetro permite combinar dos analizadores cuadripolares en serie y realizar unos MS en tándem, o MS2. El análisis MS2 permite determinar la masa y la estructura de los péptidos en una sola inyección.

La fragmentación de las fracciones producidas en el punto 6,2 ha permitido aislar 17 péptidos. Los resultados de la espectrometría de masa se presentan en la tabla siguiente:

Tabla 1

6.4. Determinación de la actividad inhibidora del hidrolizado, de las fracciones y de los péptidos

Se mide el potencial inhibidor del hidrolizado total, de las 5 fracciones aisladas y de los péptidos obtenidos por fragmentación de las fracciones gracias al método descrito por Cushman y Cheung (Cushman DW et al., Spectrophotometric assay and properties of the angiotensin-converting enzyme of rabbit lung; Biochem Pharmacol.

1971 Jul;20(7):1637-48).

Brevemente, este método se basa en la hidrólisis del sustrato Hipuril-L-histidil-L-leucina (HHL) por ECA para producir ácido hipúrico (HA) y histidil-leucina. Después de la incubación a 37°C durante 30 minutos en tampón borato de sodio pH 8,3, la reacción se detiene por adición de HCl. La separación del sustrato HHL y del producto HA se realiza por cromatografía líquida de alta presión en fase inversa (RP-HPLC) sobre una columna C18 (Kinetex). La elución se realiza por una mezcla de agua (75% v/v) y de acetonitrilo (25% V/V). La cuantificación se realiza por una detección a 228 nm y se mide el área debajo de la curva (ASC) de cada pico.

La determinación de IC⁵⁰de cada péptido se lleva a cabo utilizando diferentes concentraciones de péptidos, para una concentración constante de HHL fijada a 5 mM. La comparación entre la concentración de HA producida para cada concentración de muestra con aquella obtenida sin adición de péptido permite la determinación de IC⁵⁰.

Como control positivo, el captopril se ensaya también en paralelo al hidrolizado, de las fracciones y de los péptidos. El control negativo es el sustrato HHL solo, sin ECA, diluida en tampón borato pH 8,3. La muestra es el péptido, la fracción o el hidrolizado total a ensayar.

El índice IC⁵⁰corresponde a la concentración de inhibidor necesaria para inhibir el 50% de ECA en el ensayo: cuando más baja sea la concentración de inhibidor necesario para inhibir ECA, más bajo será el IC⁵⁰y más potente será el inhibidor.

El porcentaje de inhibición de ECA se calcula según la fórmula siguiente:

Porcentaje de inhibición ECA (%) = ^ASCHA(Captop

_ASCHA(Captop ^{ríí) - ASCHA(Mwestra}

_{r íí) - ASCHA (HHL)}( 100

Los resultados de las mediciones del potencial inhibidor se presentan en la tabla siguiente.

Tabla 2

Como se puede observar a la vista de los resultados presentados en la tabla 2, la fracción 4, de peso molecular aparente de 100 Da a 175 Da presenta un potencial de inhibición de ECA muy próximo al del captopril. Las fracciones 2, 3 o 4, preferentemente la fracción 4, pueden, por lo tanto, utilizarse ventajosamente como medicamento destinado a tratar y/o prevenir la hipertensión arterial.

Se constata también que los dipéptidos VY (valina-tirosina) y VW (valina-triptófano) poseen unas IC⁵⁰bajas. Estos péptidos pueden, por lo tanto, incorporarse ventajosamente a un producto alimentario para hacer un alimento funcional destinado a prevenir o reducir la hipertensión arterial. Pueden también incorporarse en una composición farmacéutica o un complemento alimentario, para la prevención y/o el tratamiento de la hipertensión arterial.

El hidrolizado total presenta también un valor de IC⁵⁰interesante para ECA. De la misma manera, el hidrolizado puede utilizarse como medicamento o incorporarse en un alimento funcional o un complemento alimentario para tratar, reducir o prevenir la hipertensión arterial.

El hidrolizado, las fracciones péptidos que lo componen y los péptidos que se aislaron de ello, permiten eliminar, o por lo menos reducir, los efectos indeseables inducidos por los tratamientos actuales de la hipertensión.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Procedimiento de preparación de un hidrolizado peptídico que presenta una actividad inhibidora de la enzima de conversión de la angiotensina, que comprende las etapas de:

b) mezcla de dicho triturado con agua purificada;

c) hidrólisis enzimátifca por alcalasa de la mezcla obtenida en la etapa b) para obtener un hidrolizado;

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado por que comprende una etapa de ultrapurificación realizada después de la etapa d) de separación líquido-sólido.

3. Procedimiento según la reivindicación 1 o 2, que comprende además una etapa de concentración de la fase líquida efectuada antes de la etapa e) de secado.

4. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que dichos caracoles pertenecen a al menos una especie seleccionada del grupo constituido por Helix aspersa, Helix lucorum, Helix pomada.

5. Procedimiento según la reivindicación 4, caracterizado por que dichos caracoles son de la especie Helix aspersa.

6. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que dicho hidrolizado comprende una mezcla de péptidos seleccionados del grupo constituido por arginina-leucina (RL), tirosina-serina (YS), tirosina-glicina (YG), tirosina-alanina (YA), leucina-serina (LS), leucina-glicina (LG), serina-penilalanina (SF), fenilalanina-glicina (FG), glicina-fenilalanina (GF), ácido aspártico-fenilalanina (DF), tirosina-metionina (YM), valinatriptofano (VW), tirosina-fenilalanina (YF), fenilalanina-leucina (FL), fenilalanina-fenilalanina (FF), leucina-ácido aspártico-alanina (LDA), valina-tirosina (VY).

7. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado por que dicho hidrolizado comprende una mezcla de péptidos seleccionados del grupo constituido por valina-triptofano (VW), tirosina-glicina (YG), serina-fenilalanina (SF), glicina-fenilalanina (GF), ácido aspártico-fenilalamina (DF), valina-tirosina (VY).

8. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 6 o 7, caracterizado por que dicha mezcla de péptidos agrupa unos péptidos de pesos moleculares que van de 350 Da a 1050 Da.

9. Procedimiento según la reivindicación 6 o 7, caracterizado por que dicha mezcla de péptidos agrupa unos péptidos de peso molecular que va de 175 Da a 350 Da.

10. Procedimiento según la reivindicación 6 o 7, caracterizado por que dicha mezcla de péptidos agrupa unos péptidos de peso molecular que va de 100 Da a 175 Da.

11. Hidrolizado obtenido por el procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 10, por su utilización, en una composición alimentaria funcional para uso humano o animal, para la prevención de la hipertensión arterial.