ES2738329T3 - Compuestos de heteroarilpiridona y aza-piridona como inhibidores de la actividad btk - Google Patents

Compuestos de heteroarilpiridona y aza-piridona como inhibidores de la actividad btk Download PDF

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Daniel Fred Ortwine
Binqing Wei
Wendy B Young
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Abstract

Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en: 2-{4-hidroximetil-1'-metil-5'-[5-(4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6'-oxo-1',6'-dihidro-[3,3']bipiridinil-5-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura **Fórmula** 2-{3'-hidroximetil-1-metil-5-[5-(4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura **Fórmula** 2-[3'-hidroximetil-1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura **Fórmula** 2-[3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura **Fórmula** 2-[4-hidroximetil-1'-metil-5'-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6'-oxo-1',6'-dihidro-[3,3']bipiridinil-5-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura **Fórmula** 2-{3'-hidroximetil-1-metil-5-[5-((R)-2-metil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura **Fórmula** 2-{5-[5-((2S,5R)-2,5-dimetil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura **Fórmula** 2-[3'-hidroximetil-1-metil-5-(5-oxetan-3-il-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura **Fórmula** 2-{5-[5-((S)-2-etil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura **Fórmula** 2-[5-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilamino)-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura **Fórmula** 2-[5-(2,6-dimetil-pirimidin-4-ilamino)-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura **Fórmula** 2-[3'-hidroximetil-1-metil-5-(2-metil-pirimidin-4-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona; **Fórmula** 2-[3'-hidroximetil-1-metil-5-(6-metil-pirimidin-4-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura **Fórmula** 2-{3-hidroximetil-4-[6-(imidazo[1,2-a]piridin-7-ilamino)-4-metil-5-oxo-4,5-dihidro-pirazin-2-il]-piridin-2-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura **Fórmula** ; y 2-[3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-5-(pirazin-2-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura **Fórmula** o estereoisómeros, tautómeros o sales farmacéuticamente aceptables del mismo para su uso como medicamento.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos de heteroarilpiridona y aza-piridona como inhibidores de la actividad btk
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La invención se refiere en general a los compuestos para tratar trastornos mediados por la tirosina cinasa de Bruton (Btk), incluyendo inflamación, inmunológicos y cáncer, y más específicamente a los compuestos que inhiben la actividad Btk. La invención también se refiere a los compuestos para el diagnóstico o tratamiento in vitro, in situ e in vivo de células de mamífero, o procesos patológicos asociados.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Las proteínas cinasas, la familia más grande de enzimas humanas, engloban más de 500 proteínas. La tirosina cinasa de Bruton (Btk) es un miembro de la familia Tec de tirosina cinasas, y es un regulador del desarrollo temprano de los linfocitos B, así como de la activación, señalización y supervivencia de los linfocitos B maduros.
La señalización de los linfocitos B a través del receptor de linfocitos B (BCR) puede dar lugar a una amplia gama de resultados biológicos, que, a su vez, dependen de la etapa de desarrollo del linfocito B. La magnitud y duración de las señales del BCR se deben regular con precisión. La señalización mediada por BCR anómala puede provocar la activación regulada erróneamente de los linfocitos B y/o la formación de autoanticuerpos patógenos, dando lugar a múltiples enfermedades autoinmunitarias y/o inflamatorias. La mutación de Btk en los seres humanos da como resultado la agammaglobulinemia ligada al cromosoma X (XLA). Esta enfermedad se asocia con la maduración alterada de linfocitos B, producción de inmunoglobulina disminuida, respuestas inmunitarias independientes de los linfocitos T comprometidas e importante atenuación de la señal de calcio sostenida tras la estimulación del BCR. Se han establecido pruebas del papel de Btk en trastornos alérgicos y/o enfermedades autoinmunitarias y/o enfermedades inflamatorias en modelos de ratones que carecen de Btk. Por ejemplo, en modelos preclínicos murinos estándar de lupus eritematoso diseminado (LED), la carencia de Btk ha demostrado que da como resultado una importante mejora de la progresión de la enfermedad. Además, los ratones que carecen de Btk también pueden ser resistentes al desarrollo de artritis inducida por colágeno y pueden ser menos susceptibles a la artritis inducida por estafilococos. Un gran conjunto de pruebas respalda el papel de los linfocitos B y el sistema inmunitario humoral en la patogenia de las enfermedades autoinmunitarias y/o inflamatorias. Los tratamientos basados en proteínas (tales como Rituxan) desarrollados para reducir los linfocitos B, representan un enfoque para el tratamiento de una serie de enfermedades autoinmunitarias y/o inflamatorias. Debido al papel de Btk en la activación de los linfocitos B, los inhibidores de Btk pueden ser útiles como inhibidores de la actividad patógena mediada por los linfocitos B (tal como la producción de autoanticuerpos). Btk también se expresa en los osteoclastos, mastocitos y monocitos y ha demostrado que es importante para la función de estas células. Por ejemplo, la carencia de Btk en ratones se asocia con una activación alterada de los mastocitos mediada por IgE (importante disminución de la liberación de TNF-alfa y otras citocinas inflamatorias), y la carencia de Btk en los seres humanos se asocia con una producción muy reducida de TNF-alfa por los monocitos activados.
Por lo tanto, la inhibición de la actividad Btk puede ser útil para el tratamiento de trastornos alérgicos y/o enfermedades autoinmunitarias y/o inflamatorias tales como: LED, artritis reumatoide, vasculitis múltiple, púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), miastenia grave, rinitis alérgica y asma (Di Paolo et al (2011) Nature Chem. Biol. 7(1):41-50; Liu et al (2011) Jour. of Pharm. and Exper. Ther. 338(1):154-163). Además, se ha informado que la Btk desempeña un papel en la apoptosis; por tanto, la inhibición de la actividad Btk puede ser útil para el cáncer, así como para el tratamiento del linfoma de linfocitos B, leucemia y otras neoplasias malignas hemáticas. Además, dado el papel de la Btk en la función de los osteoclastos, la inhibición de la actividad Btk puede ser útil para el tratamiento de trastornos óseos, tales como osteoporosis. Se ha informado de inhibidores de Btk específicos (Liu (2011) Drug Metab. and Disposition 39(10):1840-1849; documentos US 7884108, WO 2010/056875; WO2010100070; US 7405295; US 7393848; WO 2006/053121; US 7947835; US 2008/0139557; US 7838523; US 2008/0125417; US 2011/0118233; PCT/US2011/050034 “PYRIDINONES/PYRAZINONES, METHOD OF MAKING, AND METHOD OF USE THEREOF”, presentada el 31 de agosto de 2011; PCT/US2011/050013 “PYRIDAZINONES, METHOD OF MAKING, AND METHOD OF USE THEREOF”, presentada el 31 de agosto de 2011; n.° de ser. de EE. UU. 13/102720 “PYRIDONE AND AZA-PYRIDONE COMPOUNDS AND METHODS OF USE”, presentada el 6 de mayo de 2011).
SUMARIO DE LA INVENCIÓN
En toda la divulgación, se hace referencia a la fórmula genérica (I), así como a sus usos médicos, solo con propósitos ilustrativos. Sin embargo, la invención solo se refiere a la materia objeto (es decir, los compuestos ejemplificados) que se encuentra en las definiciones de (I) como se define en las reivindicaciones y a su uso médico como se define en las reivindicaciones.
La invención se refiere en general a los compuestos de heteroarilpiridona y aza-piridona de fórmula I, con actividad moduladora de la tirosina cinasa de Bruton (Btk).
Los compuestos de fórmula I tienen las estructuras:
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incluyendo estereoisómeros, tautómeros o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los diversos sustituyentes se definen a continuación en el presente documento.
Un aspecto de la invención es una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I y un vehículo, agente deslizante, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede comprender además un segundo agente terapéutico.
Otro aspecto de la invención es un procedimiento para preparar una composición farmacéutica que comprende combinar un compuesto de fórmula I con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La invención incluye compuestos para su uso en un procedimiento de tratamiento de una enfermedad o trastorno, comprendiendo el procedimiento administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I a un paciente con una enfermedad o trastorno seleccionado de trastornos inmunitarios, cáncer, cardiovasculopatía, infección vírica, inflamación, trastornos del metabolismo/de la función endocrina y trastornos neurológicos, y mediado por la tirosina cinasa de Bruton.
La invención incluye un kit para tratar una afección mediada por la tirosina cinasa de Bruton, que comprende: a) una primera composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I; y b) instrucciones de uso.
La invención incluye un compuesto de fórmula I para su uso como medicamento y para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno seleccionado de trastornos inmunitarios, cáncer, cardiovasculopatía, infección vírica, inflamación, trastornos del metabolismo/de la función endocrina y trastornos neurológicos, y mediado por la tirosina cinasa de Bruton.
La invención incluye el uso de un compuesto de fórmula I en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de trastornos inmunitarios, cáncer, cardiovasculopatía, infección vírica, inflamación, trastornos del metabolismo/de la función endocrina y trastornos neurológicos, y donde el medicamento media en la tirosina cinasa de Bruton.
La invención incluye procedimientos de preparación de un compuesto de fórmula I.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
La figura 1 muestra la preparación de 2-(4-(hidroximetil)-5-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-M)piridin-3-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1 (2H)-ona 101 partiendo de 2,2,2-tricloro-1-(4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-il)etanona 101a.
La figura 2 muestra la preparación de 2-(4-(hidroximetil)-5-(1-metil-5-(5-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 102 partiendo de 1-metil-3-[5-(4-metil-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-piridin-2-ona 102a
La figura 3 muestra la preparación de 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 103 partiendo de 2-bromo-4-cloronicotinaldehído 103a
La figura 4 muestra la preparación de 2-(3-(hidroximetil)-2-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-4-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 104 partiendo de 4-bromo-2-cloronicotinaldehído 104a
La figura 5 muestra la preparación de 4-hidroximetil-3-[1-metil-5-({5-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-5-{6-oxo-8-tia-5-azatriciclo-[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7)-dien-5-il}piridina 105 partiendo de N-metoxi-N-metil-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[6]tiofen-2-carboxamida 105a
La figura 6 muestra la preparación de 4-hidroximetil-3-[1-metil-5-({5-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-5-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1 (8),2(6)-dien-10-il}piridin-4 carbaldehído 106 partiendo de 3,3-dimetilciclopentanona 106a
La figura 7 muestra la preparación de 10-[4-[1-metil-5-({5-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-4-(hidroximetil)piridin-3-il]-4,4-dimetil-1, 10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 107 partiendo de (E)-3-(2-cloro-4,4-dimetilciclopent-1-enil)acrilato de etilo 107a
La figura 8 muestra la preparación de 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-4,4-dimetil-1, 10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 108 partiendo de 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 108a.
La figura 9 muestra la preparación de 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-4,4-dimetil-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-9-ona 109 partiendo de 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 109a.
La figura 10 muestra la preparación de 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1.6- dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 110 partiendo de 1-metil-3-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 110a
La figura 11 muestra la preparación de 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(morfolin-4-carbonil)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1.6- dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 111 partiendo de (6-aminopiridin-3-il)(morfolino)metanona 111a
La figura 12 muestra la preparación de 2-(4-(hidroximetil)-5-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-1(2H)-ona 112 partiendo de 5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxilato de metilo 112a
La figura 13 muestra la preparación de 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrah¡drop¡razolo[1,5-a]p¡raz¡n-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-1(2H)-ona 113 partiendo de (3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol 113a
La figura 14 muestra la preparación de (R)-2-(4-(6-(4-(1,4-dimetil-3-oxopiperazin-2-il)fenilamino)-4-metil-5-oxo-4,5-dihidropirazin-2-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]mdol-1(2H)-ona 114 partiendo de (R)-5-bromo-3-(4-(1,4-dimetil-3-oxopiperazin-2-il)fenilamino)-1-metilpirazin-2(1H)-ona 114a
La figura 15 muestra la preparación de 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-1(2H)-ona 115 partiendo de 5-bromo-1-metil-3-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino)piridin-2(1H)-ona 115a
La figura 16 muestra la preparación de 4-hidroximetil-3-[1-metil-5-({5-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-5-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1 (9),2(7),3-trien-5-il}piridina 116 partiendo de 3-bromo-5-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-4-carbaldehído 116a
La figura 17 muestra la preparación de 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(metilsulfonil)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidro-p¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-1(2H)-ona 117 partiendo de 5-(metiltio)-2-nitropiridina 117a
La figura 18 muestra la preparación de 2-(4-(5-(5-ciclopropil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-1(2H)-ona 118 partiendo de 5-amino-3-ciclopropil-1H-pirazol-1-carboxilato de tere-butilo 118a
La figura 19 muestra la preparación de (S)-2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-1(2H)-ona 119 partiendo de (S)-acetato de (4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 119a
La figura 20 muestra la preparación de 2-(4-(5-(5-(4-(2-hidroxi-2-metilpropil)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-1(2H)-ona 120 partiendo de 5-bromo-3-(5-(4-(2-hidroxi-2-metilpropil)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 120a
La figura 21 muestra la preparación de 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-6,7,8,9-tetrah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-1(2H)-ona 121 partiendo de 4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-2(1H)-il)nicotinaldehído 121a
La figura 22 muestra la preparación de 2-(4-(5-(5-((2S,5R)-2,5-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 122 partiendo de (2R, 5S)-2,5-dimetil-4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de tere-butilo 122a
La figura 23 muestra la preparación de 2-(4-(5-(5-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1 -il)piridin-2-ilamino)-1 -metil-6-oxo-1,6 -dihidropiridin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidro-pirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 123 partiendo de (2-bromoetoxi)(fere-butil)dimetilsilano 123a
La figura 24 muestra la preparación de 3-hidroximetil-4-[1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1 (9),2(7),3-trien-5-il}piridina 124 partiendo de 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.02,7]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 124a
La figura 25 muestra la preparación de 7,7-difluoro-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona, útil para la preparación de 140 a partir de 1H-pirrol-2-carboxilato de etilo.
La figura 26 muestra la preparación de 5-(oxetan-3-il)-1H-pirazol-3-amina, útil para la preparación de 266 a partir de 3-nitro-1H-pirazol.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE MODOS DE REALIZACIÓN EJEMPLARES
Ahora se hará referencia en detalle a determinados modos de realización de la invención, en los que se ilustran ejemplos en las estructuras y fórmulas adjuntas. Aunque la invención se describirá junto con los modos de realización enumerados, se entenderá que no se pretende que limiten la invención a esos modos de realización. Por el contrario, se pretende que la invención cubra todas las alternativas, modificaciones y equivalentes que se pueden incluir dentro del alcance de la presente invención como se define por las reivindicaciones. Un experto en la técnica reconocerá muchos procedimientos y materiales similares o equivalentes a los descritos en el presente documento, que se podrían usar en la práctica de la presente invención. La presente invención no se limita de ningún modo a los procedimientos y materiales descritos. En el caso de que uno o más de la literatura, patentes y materiales similares incorporados difiera de o contradiga la presente solicitud, incluyendo, pero sin limitarse a, términos definidos, uso de los términos, técnicas descritas, o similares, rige la presente solicitud. A menos que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado entendido comúnmente por un experto en la técnica a la que pertenece la presente invención. Aunque se pueden usar procedimientos y materiales similares o equivalentes a los descritos en el presente documento en la práctica o pruebas de la invención, se describen a continuación procedimientos y materiales adecuados. Todas las publicaciones, solicitudes de patente, patentes y otras referencias mencionadas en el presente documento se incorporan por referencia en su totalidad. La nomenclatura usada en la presente solicitud se basa en la nomenclatura sistemática de la IUPAC, a menos que se indique de otro modo.
DEFINICIONES
Cuando se indica el número de sustituyentes, el término “uno o más” se refiere al intervalo desde un sustituyente al número más alto posible de sustitución, es decir, el reemplazo de un hidrógeno hasta el reemplazo de todos los hidrógenos por sustituyentes. El término “sustituyente” indica un átomo o un grupo de átomos que reemplazan un átomo de hidrógeno en una molécula original. El término “sustituido” indica que un grupo específico tiene uno o más sustituyentes. Cuando cualquier grupo puede llevar múltiples sustituyentes y se proporciona una variedad de posibles sustituyentes, los sustituyentes se seleccionan independientemente y no necesitan ser los mismos. El término “no sustituido” significa que el grupo especificado no tiene ningún sustituyente. El término “opcionalmente sustituido” significa que el grupo especificado no está sustituido o está sustituido con uno o más sustituyentes, elegidos independientemente del grupo de sustituyentes posibles. Cuando se indica el número de sustituyentes, el término “uno o más” significa de un sustituyente al número más alto posible de sustitución, es decir, el reemplazo de un hidrógeno hasta el reemplazo de todos los hidrógenos por sustituyentes.
El término “alquilo” como se usa en el presente documento se refiere a un radical hidrocarburo monovalente de cadena lineal o ramificada saturado de uno a doce átomos de carbono (C1-C 12), en el que el radical alquilo puede estar opcionalmente sustituido independientemente con uno o más sustituyentes descritos a continuación. En otro modo de realización, un radical alquilo es de uno a ocho átomos de carbono (C1-C 8 ), o de uno a seis átomos de carbono (C1-C 6). Los ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero no se limitan a, metilo (Me, -C H 3), etilo (Et, -CH 2CH3), 1-propilo (n-Pr, n-propilo, -CH 2CH2CH3), 2-propilo (i-Pr, i-propilo, -CH(CH3)2), 1 -butilo (n-Bu, n-butilo, -CH 2CH2CH2CH3), 2-metil-1 -propilo (i-Bu, i-butilo, -CH2CH(CH3)2), 2-butilo (s-Bu, s-butilo, -CH(CH3)CH2CH3), 2-metil-2-propilo (t-Bu, t-butilo, -C(CH3)3), 1-pentilo (n-pentilo, -CH 2CH2CH2CH2CH3), 2-pentilo (-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-pentilo (-CH(CH2CH3)2), 2-metil-2-butilo (-C(CH3)2 CH2CH3), 3-metil-2-butilo (-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-metil-1-butilo (-CH2CH2CH(CH3)2), 2-metil-1 -butilo (-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-hexilo (-CH 2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-hexilo (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-hexilo (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-metil-2-pentilo (-C(CH3)2CH2CH(CH3), 3-metil-2-pentilo (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-metil-2-pentilo (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-metil-3-pentilo (-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-metil-3-pentilo (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-dimetil-2-butilo (-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-dimetil-2 -butilo (-CH(CH3)c (CH3)3 , 1 -heptilo, 1 -octilo y similares.
El término “alquileno” como se usa en el presente documento se refiere a un radical hidrocarburo divalente de cadena lineal o ramificada saturado de uno a doce átomos de carbono (C1-C 12), en el que el radical alquileno puede estar opcionalmente sustituido independientemente con uno o más sustituyentes descritos a continuación. En otro modo de realización, un radical alquileno es de uno a ocho átomos de carbono (C1-C 8), o de uno a seis átomos de carbono (C1-C 6). Los ejemplos de grupos alquileno incluyen, pero no se limitan a, metileno (-CH 2-), etileno (-CH 2CH2-), propileno (-CH 2CH2CH2- ) y similares.
El término “alquenilo” se refiere a un radical hidrocarburo monovalente de cadena lineal o ramificada de dos a ocho átomos de carbono (C2-C 8) con al menos un sitio de insaturación, es decir, un doble enlace sp2 carbono-carbono, en el que el radical alquenilo puede estar opcionalmente sustituido independientemente con uno o más sustituyentes descritos en el presente documento, e incluye radicales que tienen orientaciones “cis” y “trans”, o, de forma alternativa, orientaciones “E” y “Z”. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, etilenilo o vinilo (-CH=CH2), alilo (-CH 2CH=CH2) y similares.
El término “alquenileno” se refiere a un radical hidrocarburo divalente de cadena lineal o ramificada de dos a ocho átomos de carbono (C2-C 8) con al menos un sitio de insaturación, es decir, un doble enlace sp2 carbono-carbono, en el que el radical alquenileno puede estar opcionalmente sustituido independientemente con uno o más sustituyentes descritos en el presente documento, e incluye radicales que tienen orientaciones “cis” y “trans”, o, de forma alternativa, orientaciones “E” y “Z”. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, etilenileno o vinileno (-CH=CH-), alilo (-CH 2CH=CH-) y similares.
El término “alquinilo” se refiere a un radical hidrocarburo monovalente lineal o ramificado de dos a ocho átomos de carbono (C2-C 8) con al menos un sitio de insaturación, es decir, un triple enlace sp carbono-carbono, en el que el radical alquinilo puede estar opcionalmente sustituido independientemente con uno o más sustituyentes descritos en el presente documento. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, etinilo (-C=CH), propinilo (propargilo, -CH 2CECH) y similares.
El término “alquinileno” se refiere a un radical hidrocarburo divalente lineal o ramificado de dos a ocho átomos de carbono (C2-C 8) con al menos un sitio de insaturación, es decir, un triple enlace sp carbono-carbono, en el que el radical alquinileno puede estar opcionalmente sustituido independientemente con uno o más sustituyentes descritos en el presente documento. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, etinileno (-C=C-), propinileno (propargileno, -CH 2CEC-) y similares.
Los términos “carbociclo”, “carbociclilo”, “anillo carbocíclico” y “cicloalquilo” se refieren a un anillo saturado o parcialmente insaturado no aromático monovalente que tiene de 3 a 12 átomos de carbono (C3-C 12) como un anillo monocíclico o de 7 a 12 átomos de carbono como un anillo bicíclico. Los carbociclos bicíclicos que tienen de 7 a 12 átomos se pueden disponer, por ejemplo, como un sistema biciclo [4,5], [5,5], [5,6] o [6 ,6 ], y los carbociclos bicíclicos que tienen 9 o 10 átomos de anillo se pueden disponer como un sistema biciclo [5,6] o [6 ,6 ], o como sistemas con puente, tales como biciclo[2.2.1]heptano, biciclo[2.2.2]octano y biciclo[3.2.2]nonano. También se incluyen restos espiro en el alcance de esta definición. Los ejemplos de carbociclos monocíclicos incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, 1-ciclopent-1-enilo, 1-ciclopent-2-enilo, 1-ciclopent-3-enilo, ciclohexilo, 1-ciclohex-1-enilo, 1-ciclohex-2-enilo, 1-ciclohex-3-enilo, ciclohexadienilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclononilo, ciclodecilo, cicloundecilo, ciclododecilo y similares. Los grupos carbociclilo están opcionalmente sustituidos independientemente con uno o más sustituyentes descritos en el presente documento.
“Arilo” significa un radical hidrocarburo aromático monovalente de 6-20 átomos de carbono (C6-C 20) derivado mediante la retirada de un átomo de hidrógeno de un único átomo de carbono de un sistema de anillos aromáticos original. Algunos grupos arilo se representan en las estructuras ejemplares como “Ar”. Arilo incluye radicales bicíclicos que comprenden un anillo aromático condensado a un anillo saturado, parcialmente insaturado o un anillo carbocíclico aromático. Los grupos arilo típicos incluyen, pero no se limitan a, radicales derivados de benceno (fenilo), bencenos sustituidos, naftaleno, antraceno, bifenilo, indenilo, indanilo, 1,2-dihidronaftaleno, 1,2,3,4-tetrahidronaftilo y similares. Los grupos arilo están opcionalmente sustituidos independientemente con uno o más sustituyentes descritos en el presente documento.
“Arileno” significa un radical hidrocarburo aromático divalente de 6-20 átomos de carbono (C6-C 20) derivado mediante la retirada de un átomo de hidrógeno de dos átomos de carbono de un sistema de anillos aromáticos original. Algunos grupos arileno se representan en las estructuras ejemplares como “Ar”. Arileno incluye radicales bicíclicos que comprenden un anillo aromático condensado a un anillo saturado, parcialmente insaturado o un anillo carbocíclico aromático. Los grupos arileno típicos incluyen, pero no se limitan a, radicales derivados de benceno (fenileno), bencenos sustituidos, naftaleno, antraceno, bifenileno, indenileno, indanileno, 1,2-dihidronaftaleno, 1,2,3,4-tetrahidronaftilo y similares. Los grupos arileno están opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes descritos en el presente documento.
Los términos “heterociclo”, “heterociclilo” y “anillo heterocíclico” se usan de manera intercambiable en el presente documento y se refieren a un radical carbocíclico saturado o uno parcialmente insaturado (es decir, que tiene uno o más dobles y/o triples enlaces en el anillo) de 3 a aproximadamente 20 átomos de anillo en el que al menos un átomo de anillo es un heteroátomo seleccionado de nitrógeno, oxígeno, fósforo y azufre, siendo C los átomos de anillo restantes, donde uno o más átomos de anillo están opcionalmente sustituidos independientemente con uno o más sustituyentes descritos a continuación. Un heterociclo puede ser un monociclo que tiene de 3 a 7 miembros de anillo (de 2 a 6 átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos seleccionados de N, O, P y S) o un biciclo que tiene de 7 a 10 miembros de anillo (de 4 a 9 átomos de carbono y de 1 a 6 heteroátomos seleccionados de N, O, P y S), por ejemplo: un sistema biciclo [4,5], [5,5], [5,6] o [6 ,6 ]. Los heterociclos se describen en Paquette, Leo A.; “Principies of Modem Heterocyclic Chemistry” (W.A. Benjamín, Nueva York, 1968), en particular, los capítulos 1,3, 4, 6 , 7 y 9; “The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs” (John Wiley y Sons, Nueva York, 1950 hasta la actualidad), en particular, los volúmenes 13, 14, 16, 19 y 28; y J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566. “Heterociclilo” también incluye radicales donde los radicales heterocíclicos están condensados a un anillo saturado, parcialmente insaturado o un anillo aromático carbocíclico o heterocíclico. Los ejemplos de anillos heterocíclicos incluyen, pero no se limitan a, morfolin-4-ilo, piperidin-1-ilo, piperazinilo, piperazin-4-il-2-ona, piperazin-4-il-3-ona, pirrolidin-1-ilo, tiomorfolin-4-ilo, S-dioxotiomorfolin-4-ilo, azocan-1-ilo, azetidin-1-ilo, octahidropirido[1,2-a]pirazin-2-ilo, [1,4]diazepan-1-ilo, pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidrotienilo, tetrahidropiranilo, dihidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, piperidino, morfolino, tiomorfolino, tioxanilo, piperazinilo, homopiperazinilo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, homopiperidinilo, oxepanilo, tiepanilo, oxazepinilo, diazepinilo, tiazepinilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, indolinilo, 2H-piranilo, 4H-piranilo, dioxanilo, 1,3-dioxolanilo, pirazolinilo, ditianilo, ditiolanilo, dihidropiranilo, dihidrotienilo, dihidrofuranilo, pirazolidinilimidazolinilo, imidazolidinilo, 3-azabiciclo[3.1.0]hexanilo, 3-azabiciclo[4.1.0]heptanilo, azabiciclo[2.2.2]hexanilo, 3H-indolilo, quinolizinilo y N-piridilureas. También se incluyen restos espiro en el alcance de esta definición. Los ejemplos de un grupo heterocíclico en el que 2 átomos de anillo están sustituidos con restos oxo (=O) son pirimidinonilo y 1,1-dioxo-tiomorfolinilo. Los grupos heterociclo en el presente documento están opcionalmente sustituidos independientemente con uno o más sustituyentes descritos en el presente documento.
El término “heteroarilo” se refiere a un radical aromático monovalente de anillos de 5, 6 o 7 miembros, e incluye sistemas de anillos condensados (de los que al menos uno es aromático) de 5-20 átomos, que contienen uno o más heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre. Los ejemplos de grupos heteroarilo son piridinilo (incluyendo, por ejemplo, 2 -hidroxipiridinilo), imidazolilo, imidazopiridinilo, pirimidinilo (incluyendo, por ejemplo, 4-hidroxipirimidinilo), pirazolilo, triazolilo, pirazinilo, tetrazolilo, furilo, tienilo, isoxazolilo, tiazolilo, oxadiazolilo, oxazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, indolilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, cinnolinilo, indazolilo, indolizinilo, ftalazinilo, piridazinilo, triazinilo, isoindolilo, pteridinilo, purinilo, oxadiazolilo, triazolilo, tiadiazolilo, tiadiazolilo, furazanilo, benzofurazanilo, benzotiofenilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo y furopiridinilo. Los grupos heteroarilo están opcionalmente sustituidos independientemente con uno o más sustituyentes descritos en el presente documento.
Los grupos heterociclo o heteroarilo pueden estar unidos con carbono (enlazados con carbono) o nitrógeno (enlazados con nitrógeno) cuando ello sea posible. A modo de ejemplo y sin limitación, los heterociclos o heteroarilos unidos con carbono se unen en la posición 2, 3, 4, 5 o 6 de una piridina, la posición 3, 4, 5 o 6 de una piridazina, la posición 2, 4, 5 o 6 de una pirimidina, la posición 2, 3, 5 o 6 de una pirazina, la posición 2, 3, 4 o 5 de un furano, tetrahidrofurano, tiofurano, tiofeno, pirrol o tetrahidropirrol, la posición 2, 4 o 5 de un oxazol, imidazol o tiazol, la posición 3, 4 o 5 de un isoxazol, pirazol o isotiazol, la posición 2 o 3 de una aziridina, la posición 2, 3 o 4 de una azetidina, la posición 2, 3, 4, 5, 6 , 7 u 8 de una quinolina o la posición 1, 3, 4, 5, 6 , 7 u 8 de una isoquinolina.
A modo de ejemplo y sin limitación, los heterociclos o heteroarilos unidos con nitrógeno se unen en la posición 1 de una aziridina, azetidina, pirrol, pirrolidina, 2 -pirrolina, 3-pirrolina, imidazol, imidazolidina, 2 -imidazolina, 3-imidazolina, pirazol pirazolina, 2-pirazolina, 3-pirazolina, piperidina, piperazina, indol, indolina, 1H-indazol, la posición 2 de un isoindol o isoindolina, la posición 4 de una morfolina y la posición 9 de un carbazol o p-carbolina.
Los términos “tratar" y “tratamiento" se refieren al tratamiento terapéutico, en el que el objetivo es ralentizar (disminuir) un cambio fisiológico o trastorno indeseado, tal como el desarrollo o la propagación de la artritis o el cáncer. Para los propósitos de la presente invención, los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, pero no se limitan a, alivio de los síntomas, disminución de la extensión de la enfermedad, estado de la enfermedad estabilizado (es decir, sin empeoramiento), retardo o ralentización de la progresión de la enfermedad, mejora o atenuación del estado de la enfermedad, y remisión (ya sea parcial o total), ya sea detectable o no detectable. “Tratamiento” también puede significar prolongar la supervivencia en comparación con la supervivencia esperada si no se recibe tratamiento. Aquellos que necesitan tratamiento incluyen aquellos con la afección o trastorno.
La frase “cantidad terapéuticamente eficaz” significa una cantidad de un compuesto de la presente invención que (i) trata la enfermedad, afección o trastorno particular, (ii) atenúa, mejora o elimina uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particular o (iii) previene o retarda la aparición de uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particular descrito en el presente documento. En el caso del cáncer, la cantidad terapéuticamente eficaz del fármaco puede reducir el número de células cancerosas; reducir el tamaño tumoral; inhibir (es decir, ralentizar hasta cierto punto y preferentemente detener) la infiltración de células cancerosas en órganos periféricos; inhibir (es decir, ralentizar hasta cierto punto y preferentemente detener) la metástasis tumoral; inhibir, hasta cierto punto, el crecimiento tumoral; y/o aliviar hasta cierto punto uno o más de los síntomas asociados con el cáncer. En la medida en la que el fármaco pueda prevenir el crecimiento y/o destruir las células cancerosas existentes, puede ser citostático y/o citotóxico. Para el tratamiento del cáncer, la eficacia se puede medir, por ejemplo, evaluando el tiempo transcurrido hasta la progresión de la enfermedad (TTP) y/o determinando la tasa de respuesta (RR).
"Trastorno inflamatorio" como se usa en el presente documento se puede referir a cualquier enfermedad, trastorno o síndrome en el que una respuesta inflamatoria excesiva o no regulada da lugar a síntomas inflamatorios excesivos, daño en el tejido del huésped o pérdida de la función de los tejidos. "Trastorno inflamatorio" también se refiere a un estado patológico mediado por la afluencia de quimiotaxia de leucocitos y/o neutrófilos.
"Inflamación" como se usa en el presente documento se refiere a una respuesta protectora localizada desencadenada por una lesión o destrucción de tejidos, que sirve para destruir, diluir o aislar (secuestrar) tanto el agente dañino como el tejido lesionado. La inflamación se asocia notablemente con la afluencia de quimiotaxia de leucocitos y/o neutrófilos. La inflamación puede resultar de una infección con organismos y virus patógenos y de medios no infecciosos, tales como traumatismo o reperfusión tras infarto de miocardio o apoplejía, respuesta inmunitaria a xenoantígenos y respuestas autoinmunitarias. En consecuencia, los trastornos inflamatorios tributarios de tratamiento con los compuestos de fórmula I engloban trastornos asociados con reacciones del sistema de defensa específico, así como con reacciones del sistema de defensa no específico.
"Sistema de defensa específico" se refiere al componente del sistema inmunitario que reacciona a la presencia de antígenos específicos. Los ejemplos de inflamación que resulta de una respuesta del sistema de defensa específico incluyen la respuesta clásica a xenoantígenos, enfermedades autoinmunitarias y la respuesta a la hipersensibilidad de tipo retardado mediada por los linfocitos T. Las enfermedades inflamatorias crónicas, el rechazo de tejidos y órganos trasplantados sólidos, por ejemplo, los trasplantes de riñón y médula ósea, y la enfermedad injerto contra huésped (EICH), son otros ejemplos de reacciones inflamatorias del sistema de defensa específico.
El término "sistema de defensa no específico" como se usa en el presente documento se refiere a trastornos inflamatorios que están mediados por los leucocitos que no tienen memoria inmunológica (por ejemplo, granulocitos y macrófagos). Los ejemplos de inflamación que resulta, al menos en parte, de una reacción del sistema de defensa no específico incluyen la inflamación asociada con afecciones tales como síndrome de dificultad respiratoria (aguda) del adulto (SDRA) o síndromes de lesiones multiorgánicas; lesión por reperfusión; glomerulonefritis aguda; artritis reactiva; dermatosis con componentes inflamatorios agudos; meningitis purulenta aguda u otros trastornos inflamatorios del sistema nervioso central, tales como apoplejía; lesión térmica; enfermedad intestinal inflamatoria; síndromes asociados a la transfusión de granulocitos; y toxicidad inducida por citocinas.
"Enfermedad autoinmunitaria" como se usa en el presente documento se refiere a cualquier grupo de trastornos en los que la lesión tisular se asocia con respuestas humorales o mediadas por células a los propios constituyentes del cuerpo.
"Enfermedad alérgica" como se usa en el presente documento se refiere a cualquier síntoma, daño en el tejido o pérdida de la función de los tejidos que resulta de la alergia. "Enfermedad artrítica" como se usa en el presente documento se refiere a cualquier enfermedad que se caracteriza por lesiones inflamatorias de las articulaciones atribuibles a una variedad de etiologías. "Dermatitis" como se usa en el presente documento se refiere a cualquiera de una gran familia de enfermedades de la piel que se caracterizan por la inflamación de la piel atribuible a una variedad de etiologías. "Rechazo de trasplante" como se usa en el presente documento se refiere a cualquier reacción inmunitaria dirigida frente al tejido injertado, tal como órganos o células (por ejemplo, médula ósea), caracterizada por una pérdida de la función de los tejidos injertados y circundantes, dolor, hinchazón, leucocitosis y trombocitopenia. Los procedimientos terapéuticos incluyen procedimientos para el tratamiento de trastornos asociados con la activación de las células inflamatorias.
"Activación de células inflamatorias" se refiere a la inducción mediante un estímulo (incluyendo, pero sin limitarse a, citocinas, antígenos o autoanticuerpos) de una respuesta celular proliferativa, la producción de mediadores solubles (incluyendo, pero sin limitarse a, citocinas, radicales del oxígeno, enzimas, prostanoides o aminas vasoactivas), o expresión en la superficie de las células de nuevos o números incrementados de mediadores (incluyendo, pero sin limitarse a, antígenos del complejo principal de histocompatibilidad o moléculas de adhesión celular) en células inflamatorias (incluyendo, pero sin limitarse a, monocitos, macrófagos, linfocitos T, linfocitos B, granulocitos (es decir, leucocitos polimorfonucleares, tales como neutrófilos, basófilos y eosinófilos), mastocitos, células dendríticas, células de Langerhans y células endoteliales). Se apreciará por los expertos en la técnica que la activación de uno o una combinación de estos fenotipos en estas células puede contribuir al inicio, perpetuación o exacerbación de un trastorno inflamatorio.
El término "AINE" es un acrónimo de "fármaco antinflamatorio no esteroideo" y es un agente terapéutico con efectos analgésicos, antipiréticos (que reducen la temperatura corporal elevada y que alivian el dolor sin alterar la conciencia) y, en dosis más altas, antinflamatorios (que reducen la inflamación). El término "no esteroideo" se usa para distinguir estos fármacos de los esteroides, que (entre una amplia gama de otros efectos) tienen una acción depresora de los icosanoides y antinflamatoria similar. Como analgésicos, los AINE son inusuales en tanto que no son opiáceos. Los AINE incluyen aspirina, ibuprofeno y naproxeno. Los AINE se indican normalmente para el tratamiento de afecciones agudas o crónicas donde están presentes el dolor y la inflamación. Los AINE se indican en general para el alivio sintomático de las siguientes afecciones: artritis reumatoide, artrosis, artropatías inflamatorias (por ejemplo, espondilitis anquilosante, artritis psoriásica, síndrome de Reiter, gota aguda, dismenorrea, dolor óseo metastático, cefaleas y jaquecas, dolor posoperatorio, dolor leve a moderado debido a inflamación y lesión tisular, fiebre, íleo y cólico renal. La mayoría de los AINE actúa como inhibidores no selectivos de la enzima ciclooxigenasa, inhibiendo las isoenzimas tanto ciclooxigenasa-1 (COX-1) como ciclooxigenasa-2 (COX-2). La ciclooxigenasa cataliza la formación de prostaglandinas y tromboxano a partir de ácido araquidónico (derivado por sí mismo de la bicapa fosfolipídica celular por la fosfolipasa A2). Las prostaglandinas actúan (entre otras cosas) como moléculas mensajeras en el proceso de inflamación. Los inhibidores de COX-2 incluyen celecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, parecoxib, rofecoxib, rofecoxib y valdecoxib.
El término “cáncer” se refiere a o describe la afección fisiológica en los mamíferos que se caracteriza típicamente por un crecimiento celular no regulado. Un “tumor” comprende una o más células cancerosas. Los ejemplos de cáncer incluyen, pero no se limitan a, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma y leucemia o neoplasias malignas linfocíticas. Los ejemplos más particulares de dichos cánceres incluyen carcinoma de células escamosas (por ejemplo, carcinoma de células escamosas epiteliales), cáncer de pulmón, incluyendo carcinoma de pulmón microcítico, carcinoma de pulmón no microcítico (CPNM), adenocarcinoma de pulmón y carcinoma escamoso de pulmón, cáncer del peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico o de estómago, incluyendo cáncer gastrointestinal, cáncer pancreático, glioblastoma, cáncer cervicouterino, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de mama, cáncer de colón, cáncer rectal, cáncer colorrectal, carcinoma de endometrio o de útero, carcinoma de las glándulas salivales, cáncer de riñón o renal, cáncer de próstata, cáncer vulvar, cáncer de tiroides, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma de pene, así como cáncer de cabeza y cuello.
Las "neoplasias malignas hemáticas" son los tipos de cáncer que afectan a la sangre, médula ósea y ganglios linfáticos. Como los tres están estrechamente conectados a través del sistema inmunitario, una enfermedad que afecte a uno de los tres a menudo también afectará a los demás: aunque el linfoma es una enfermedad de los ganglios linfáticos, a menudo se propaga a la médula ósea, afectando a la sangre. Las neoplasias malignas hemáticas son neoplasias malignas ("cáncer") y, en general, se tratan por especialistas en hematología y/u oncología. En algunos centros, "hematología/oncología" es una única subespecialidad de medicina interna, mientras que en otros se consideran divisiones separadas (también existen oncólogos quirúrgicos y radiólogos). No todos los trastornos hemáticos son malignos ("cancerosos"); estas otras afecciones de la sangre también se pueden tratar por un hematólogo. Las neoplasias malignas hemáticas pueden derivar de cualquiera de los dos linajes celulares sanguíneos principales: líneas celulares mieloides y linfocíticas. La línea celular mieloide produce normalmente granulocitos, eritrocitos, trombocitos, macrófagos y mastocitos; la línea celular linfocítica produce linfocitos B, T, NK y plasmocitos. Los linfomas, las leucemias linfocíticas y el mieloma provienen de la línea linfocítica, mientras que la leucemia mielógena aguda y crónica, los síndromes mielodisplásicos y las enfermedades mieloproliferativas son de origen mieloide. Las leucemias incluyen leucemia linfoblástica aguda (LLA), leucemia mielógena aguda (LMA), leucemia linfocítica crónica (LLC), leucemia mielógena crónica (LMC), leucemia monocítica aguda (LMA) y linfoma linfocítico pequeño (LLP). Los linfomas incluyen linfomas hodgkinianos (los cuatro subtipos) y linfomas no hodgkinianos (todos los subtipos).
Un “agente quimioterápico” es un compuesto químico útil en el tratamiento del cáncer, independientemente del mecanismo de acción. Las clases de agentes quimioterápicos incluyen, pero no se limitan a: agentes alquilantes, antimetabolitos, alcaloides de plantas venenosas fusiformes, antibióticos citotóxicos/antitumorales, inhibidores de topoisomerasa, anticuerpos, fotosensibilizadores e inhibidores de cinasa. Los agentes quimioterápicos incluyen compuestos usados en el “tratamiento dirigido” y quimioterapia convencional. Los ejemplos de agentes quimioterápicos incluyen: erlotinib (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), docetaxel (TAXOTERE®, Sanofi-Aventis), 5-FU (fluorouracilo, 5-fluorouracilo, n.° CAS 51-21-8), gemcitabina (GEMZAR®, Lilly), PD-0325901 (n.° CAS 391210-10­ 9, Pfizer), cisplatino (cis-diamina, dicloroplatino(II), n.° CAS 15663-27-1), carboplatino (n.° CAS 41575-94-4), paclitaxel (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), trastuzumab (He Rc EPTIN®, Genentech), temozolomida (4-metil-5-oxo-2,3,4,6,8-pentazabiciclo[4.3.0]nona-2,7,9-trien-9-carboxamida, n.° CAS 85622-93-1, TEMODAR®, Te MODAL®, Schering Plough), tamoxifeno ((Z)-2-[4-(1,2-difenilbut-1-enil)fenoxi]-W,W-dimetiletanamina, NOLVADEX®, ISTUBAL®, VALODEX®) y doxorrubicina (ADRIAMYCIN®), Akti-1/2, HPPD y rapamicina.
Otros ejemplos de agentes quimioterápicos incluyen: oxaliplatino (ELOXATIN®, Sanofi), bortezomib (VELCADE®, Millennium Pharm.), sutent (SUNITINIB®, SU11248, Pfizer), letrozol (FEMARA®, Novartis), mesilato de imatinib (GLEECEC®, Novartis), XL-518 (inhibidor de Mek, Exelixis, documento WO 2007/044515), ARRY-886 (inhibidor de Mek, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (inhibidor de PI3K, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (inhibidor de PI3K, Novartis), XL-147 (inhibidor de PI3K, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), fulvestrant (FASLODEX®, AstraZeneca), leucovorina (ácido folínico), rapamicina, (sirólimus, RAPAMUNE®, Wyeth), lapatinib (TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), lonafarnib (SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), sorafenib (NEXAVAR®, BAY43-9006, Bayer Labs), gefitinib (IRESSA®, AstraZeneca), irinotecán (CAMPTOSAR®, CPT-11, Pfizer), tipifamib (ZARNESTRA™, Johnson & Johnson), ABRAXANE™ (sin Cremophor), formulaciones de nanopartículas genomanipuladas con albúmina de paclitaxel (American Pharmaceutic al Partners, Schaumberg, Il), vandetanib (rINN, ZD6474, ZACTIMA®, AstraZeneca), clorambucilo, AG1478, AG1571 (SU 5271); Sugen), temsirólimus (TORISEL®, Wyeth), pazopanib (GlaxoSmithKline), canfosfamida (TELCYTA®, Telik), tiotepa y ciclosfosfamida (CYTOXAN®, NEOSAR®); sulfonatos de alquilo, tales como busulfano, improsulfano y piposulfano; aziridinas, tales como benzodopa, carboquona, meturedopa y uredopa; etileniminas y metilamelaminas, incluyendo altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilmelamina; acetogeninas (especialmente bulatacina y bulatacinona); una camptotecina (incluyendo el análogo sintético topotecán); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluyendo sus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina y bizelesina); criptoficinas (en particular, criptoficina 1 y criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluyendo los análogos sintéticos, KW-2189 y CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; una sarcodictina; espongistatina; mostazas nitrogenadas, tales como clorambucilo, clornafazina, clorofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, melfalán, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo; nitrosoureas, tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina y ranimnustina; antibióticos, tales como los antibióticos enodiinos (por ejemplo, caliquemicina, caliquemicina gamma1I, caliquemicina omegaI1 (Angew Chem. Int. Ed. Engl. (1994) 33:183-186); dinemicina, dinemicina A; bifosfonatos, tales como clodronato; una esperamicina; así como el cromóforo neocarzinostatina y cromóforos de antibióticos enodiinos de cromoproteínas relacionados), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azerasina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, morfolinooxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina y desoxidoxorrubicina), epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, nemorrubicina, marcelomicina, mitomicinas, tales como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, porfiromicina, puromicina, quclamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina; antimetabolitos, tales como metotrexato y 5-fluorouracilo (5-FU); análogos del ácido fólico, tales como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina, tales como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina, tales como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andrógenos, tales como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; agentes antiadrenales, tales como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; reponedores de ácido fólico, tal como ácido frolínico; aceglatona; glucósido de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; eniluracilo; amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxato; defofamina, demecolcina diaziquona; elfornitina; acetato de eliptinio; una epotilona; etoglucido; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinano, lonidamina; maitansinoides, tales como maitansina y ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitraerina; pentostatina; phenamet, pirarrubicina; losoxantrona; ácido podofilínico; 2-etilhidracida; procarbacina; complejo de polisacárido PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoxano; rizoxina; sizofirán; espirogermanio; ácido tenuazónico; triaziquona; 2,2',2”-triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A y anguidina); uretano, vindesina; dacarbacina; mannomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinósido (“Ara-C”); ciclofosfamida; tiotepa; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platino, tales como cisplatino y carboplatino; vinblastina; etopósido (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina (NAVELBINE®); novantrona; tenipósido; edatrexato; daunomicina; aminopterina; capecitabina (XELODA®, Roche); ibandronato; CPT-11; inhibidor de topoisomerasa RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides, tales como ácido retinoico; y sales, ácidos y derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
También se incluyen en la definición de “agente quimioterápico”: (i) agentes antihormonales que actúan para regular o inhibir la acción de las hormonas sobre tumores, tales como antiestrógenos y moduladores selectivos del receptor de estrógenos (MSRE), incluyendo, por ejemplo, tamoxifeno (incluyendo NOLVADEX®; citrato de tamoxifeno), raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona y FARESTON® (citrato de toremifina); (ii) inhibidores de aromatasa que inhiben la enzima aromatasa, que regula la producción de estrógenos en las glándulas suprarrenales, tales como, por ejemplo, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimida, MEGASE® (acetato de megestrol), a Ro MASIN® (exemestano; Pfizer), formestanie, fadrozol, RIVISOR® (vorozol), FEMARA® (letrozol; Novartis) y ARIMIDEX® (anastrozol; AstraZeneca); (iii) antiandrógenos, tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprorelina y goserelina; así como troxacitabina (un análogo de 1,3-dioxolano nucleósido citosina); (iv) inhibidores de proteína cinasa, tales como inhibidores de MEK (documento WO 2007/044515); (v) inhibidores de lipido cinasa; (vi) oligonucleótidos antisentido, en particular los que inhiben la expresión de genes en vías de señalización implicadas en la proliferación anormal de las células, por ejemplo, PKC-alfa, Raf y H-Ras, tales como oblimersén (GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) ribozimas, tales como inhibidores de la expresión de VEGF (por ejemplo, ANGIOZYME®) e inhibidores de la expresión de HER2; (viii) vacunas, tales como las vacunas de tratamiento génico, por ejemplo, ALLOVECTIN®, LEUVECTIN® y VAXID®; PROLEUKIN® rIL-2; inhibidores de topoisomerasa 1, tales como LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) agentes antiangiogénicos, tales como bevacizumab (AVASTTN®, Genentech); y sales, ácidos y derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
También se incluyen en la definición de “agente quimioterápico” anticuerpos terapéuticos, tales como alemtuzumab (Campath), bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); cetuximab (ERBIt Ux ®, Imclone); panitumumab (VECTIBIX®, Amgen), rituximab (RITUXAN®, Genentech/Biogen Idec), pertuzumab (OMNITARG™, 2C4, Genentech), trastuzumab (HERCEPTIN®, Genentech), tositumomab (Bexxar, Corixia) y el conjugado anticuerpo-fármaco, gemtuzumab ozogamicina (MYLOTARG®, Wyeth).
Los anticuerpos monoclonales humanizados con potencial terapéutico como agentes quimioterápicos en combinación con los inhibidores de Btk de la invención incluyen: alemtuzumab, apolizumab, aselizumab, atlizumab, bapineuzumab, bevacizumab, bivatuzumab mertansine, cantuzumab mertansine, cedelizumab, certolizumab pegol, cidfusituzumab, cidtuzumab, daclizumab, eculizumab, efalizumab, epratuzumab, erlizumab, felvizumab, fontolizumab, gemtuzumab ozogamicin, inotuzumab ozogamicin, ipilimumab, labetuzumab, lintuzumab, matuzumab, mepolizumab, motavizumab, motovizumab, natalizumab, nimotuzumab, nolovizumab, numavizumab, ocrelizumab, omalizumab, palivizumab, pascolizumab, peefusituzumab, pectuzumab, pertuzumab, pexelizumab, ralivizumab, ranibizumab, reslivizumab, reslizumab, resyvizumab, rovelizumab, ruplizumab, sibrotuzumab, siplizumab, sontuzumab, tacatuzumab tetraxetan, tadocizumab, talizumab, teflbazumab, tocilizumab, toralizumab, trastuzumab, tucotuzumab celmoleukin, tucusituzumab, umavizumab, urtoxazumab y visilizumab.
Un “metabolito” es un producto producido a través del metabolismo en el cuerpo de un compuesto específico o sal del mismo. Los metabolitos de un compuesto se pueden identificar usando técnicas rutinarias conocidas en la técnica y determinarse sus actividades usando pruebas tales como las descritas en el presente documento. Dichos productos pueden resultar, por ejemplo, de la oxidación, reducción, hidrólisis, amidación, desamidación, esterificación, desesterificación, escisión enzimática, y similares, del compuesto administrado. En consecuencia, la invención incluye metabolitos de los compuestos de la invención, incluyendo los compuestos producidos mediante un procedimiento que comprende poner en contacto un compuesto de fórmula I de la presente invención con un mamífero durante un periodo de tiempo suficiente para proporcionar un producto metabólico del mismo.
El término “prospecto del envase” se usa para referirse a las instrucciones incluidas habitualmente en los envases comerciales de productos terapéuticos que contienen información sobre las indicaciones, uso, dosificación, administración, contraindicaciones y/o advertencias en relación con el uso de dichos productos terapéuticos.
El término “quiral” se refiere a las moléculas que tienen la propiedad de no superponerse al compañero imagen especular, mientras que el término “aquiral” se refiere a las moléculas que son superponibles a su compañero imagen especular.
El término “estereoisómeros” se refiere a compuestos que tienen una constitución química idéntica, pero difieren con respecto a la disposición de los átomos o grupos en el espacio.
“Diastereómero” se refiere a un estereoisómero con dos o más centros de quiralidad y cuyas moléculas no son imágenes especulares entre sí. Los diastereómeros tienen diferentes propiedades físicas, por ejemplo, puntos de fusión, puntos de ebullición, propiedades espectrales y actividades. Las mezclas de diastereómeros se pueden separar bajo procedimientos analíticos de alta resolución, tales como electroforesis y cromatografía.
Los “enantiómeros” se refieren a dos estereoisómeros de un compuesto que son imágenes especulares no superponibles entre sí.
Las definiciones y convenciones estereoquímicas usadas en el presente documento siguen en general S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, Nueva York; y Eliel, E. y Wilen, S., “Stereochemistry of Organic Compounds”, John Wiley y Sons, Inc., Nueva York, 1994. Los compuestos de la invención pueden contener centros asimétricos o quirales y, por lo tanto, existir en diferentes formas estereoisómeras. Se pretende que todas las formas estereoisómeras de los compuestos de la invención, incluyendo, pero sin limitarse a, diastereómeros, enantiómeros y atropoisómeros, así como mezclas de las mismas, tales como mezclas racémicas, formen parte de la presente invención. Muchos compuestos orgánicos existen en formas ópticamente activas, es decir, tienen la capacidad de rotar el plano de la luz polarizada en el plano. Al describir un compuesto ópticamente activo, se usan los prefijos D y L, o R y S, para indicar la configuración absoluta de la molécula sobre su(s) centro(s) quiral(es). Los prefijos d y l o (+) y (-) se emplean para designar el signo de rotación de la luz polarizada en el plano por el compuesto, significando (-) o l que el compuesto es levógiro. Un compuesto con el prefijo (+) o d es dextrógiro. Para una estructura química dada, estos estereoisómeros son idénticos excepto porque son imágenes especulares entre sí. Un estereoisómero específico también se puede denominar enantiómero, y una mezcla de dichos isómeros a menudo se llama mezcla enantiómera. Una mezcla 50:50 de enantiómeros se denomina mezcla racémica o un racemato, que se puede producir donde no haya existido estereoselección o estereoespecificidad en una reacción o proceso químico. Los términos “mezcla racémica” y “racemato” se refieren a una mezcla equimolar de dos especies enantiómeras, desprovistas de actividad óptica. Los enantiómeros se pueden separar de una mezcla racémica mediante un procedimiento de separación quiral, tal como cromatografía de fluidos supercríticos (SFC). La asignación de la configuración en los centros quirales en los enantiómeros separados puede ser provisional, y se puede representar en las estructuras de la tabla 1 con propósitos ilustrativos, mientras que la determinación estereoquímica está pendiente, tal como los datos cristalográficos de rayos X.
El término “tautómero” o “forma tautómera” se refiere a isómeros estructurales de diferentes energías que son interconvertibles por medio de una barrera de baja energía. Por ejemplo, los tautómeros protónicos (también conocidos como tautómeros prototrópicos) incluyen las interconversiones por medio de la migración de un protón, tales como las isomerizaciones ceto-enol e imina-enamina. Los tautómeros de valencia incluyen interconversiones mediante reorganización de algunos de los electrones de enlace.
El término “sales farmacéuticamente aceptables” indica sales que no sean indeseables biológicamente o de otro modo. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen tanto sales de adición de ácido como de base. La frase “farmacéuticamente aceptable” indica que la sustancia o composición debe ser química y/o toxicológicamente compatible con los demás ingredientes comprendidos en una formulación y/o con el mamífero que se trata con la misma.
El término “sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable” indica las sales farmacéuticamente aceptables formadas con ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido carbónico, ácido fosfórico, y ácidos orgánicos seleccionados de las clases alifática, cicloalifática, aromática, aralifática, heterocíclica, carboxílica y sulfónica de ácidos orgánicos, tales como ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido glucónico, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido aspártico, ácido ascórbico, ácido glutámico, ácido antranílico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido embónico, ácido fenilacético, “mesilato” del ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-toluensulfónico y ácido salicíclico.
El término “sal de adición de base farmacéuticamente aceptable” indica las sales farmacéuticamente aceptables formadas con una base orgánica o inorgánica. Los ejemplos de bases inorgánicas aceptables incluyen sales de sodio, potasio, amonio, calcio, magnesio, hierro, cinc, cobre, manganeso y aluminio. Las sales derivadas de bases orgánicas no tóxicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas, incluyendo aminas sustituidas naturales, aminas cíclicas y resinas básicas de intercambio iónico, tales como isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, 2 -dietilaminoetanol, trimetamina, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína, etilendiamina, glucosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina y resinas de poliamina.
Un “solvato” se refiere a una asociación o complejo de una o más moléculas de disolvente y un compuesto de la invención. Los ejemplos de disolventes que forman solvatos incluyen, pero no se limitan a, agua, isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etilo, ácido acético y etanolamina.
El término “CE50” es la “concentración eficaz semimáxima” e indica la concentración plasmátca de un compuesto particular requerido para obtener un 50 % del máximo de un efecto particular in vivo.
El término “Ki” es la constante de inhibición e indica la afinidad de unión absoluta de un inhibidor particular con respecto a un receptor. Se mide usando ensayos de unión por competición y es igual a la concentración donde el inhibidor particular ocuparía un 50 % de los receptores si no estuviera presente ningún ligando competitivo (por ejemplo, un radioligando). Los valores de Ki se pueden convertir logarítmicamente en valores de pKi (-log Ki), en los que los valores más altos indican una potencia exponencialmente mayor.
El término “CI50” es la concentración inhibidora semimáxima e indica la concentración de un compuesto particular requerido para obtener una inhibición de un 50 % de un proceso biológico in vitro. Los valores de CI50 se pueden convertir logarítmicamente en valores de pCI50 (-log CI50), en los que los valores más altos indican una potencia exponencialmente mayor. El valor CI50 no es un valor absoluto, sino que depende de las condiciones experimentales, por ejemplo, las concentraciones empleadas, y se puede convertir en una constante de inhibición absoluta (Ki) usando la ecuación de Cheng-Prusoff (Biochem. Pharmacol. (1973) 22:3099). Se pueden calcular otros parámetros del porcentaje de inhibición, tales como CI70, CI90, etc.
Los términos “compuesto de la presente invención” y “compuestos de la presente invención” y “compuestos de fórmula I” incluyen los compuestos de las fórmulas I y estereoisómeros, isómeros geométricos, tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
También se pretende que cualquier fórmula o estructura dada en el presente documento, incluyendo los compuestos de fórmula I, represente hidratos, solvatos y polimorfos de dichos compuestos, y mezclas de los mismos.
También se pretende que cualquier fórmula o estructura dada en el presente documento, incluyendo los compuestos de fórmula 1, represente formas no marcadas, así como formas marcadas isotópicamente de los compuestos. Los compuestos marcados isotópicamente tienen estructuras representadas por las fórmulas dadas en el presente documento, excepto porque uno o más átomos se reemplazan por un átomo que tiene una masa atómica o un número másico seleccionado. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como, pero sin limitarse a, 2H (deuterio, D), 3H (tritio), 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl y 125I. Diversos compuestos marcados isotópicamente de la presente invención, por ejemplo, aquellos en los que se incorporan isótopos radiactivos, tales como 3H, 13C y 14C. Dichos compuestos marcados isotópicamente pueden ser útiles en estudios metabólicos, estudios cinéticos de reacción, técnicas de detección o de formación de imágenes, tales como tomografía de emisión de positrones (PET) o tomografía computarizada de emisión monofotónica (SPECT) incluyendo ensayos de distribución en tejido de sustrato o fármaco, o en tratamiento radioactivo de pacientes. Los compuestos terapéuticos de la invención marcados o sustituidos con deuterio pueden tener propiedades de DMPK (metabolismo y farmacocinética de fármacos) mejoradas en relación con la distribución, metabolismo y excreción (ADME). La sustitución con isótopos más pesados, tales como deuterio, puede proporcionar determinadas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, semivida in vivo incrementada o requisitos de dosificación reducida. Un compuesto marcado con 18F puede ser útil para estudios de PET o SPECT. Los compuestos marcados isotópicamente de la presente invención de los mismos se pueden preparar, en general, llevando a cabo los procedimientos divulgados en los esquemas o en los ejemplos y preparaciones descritos a continuación sustituyendo un reactivo marcado isotópicamente fácilmente disponible con un reactivo no marcado isotópicamente. Además, la sustitución con isótopos más pesados, en particular, deuterio (es decir, 2 H o D) puede proporcionar determinadas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, semivida in vivo incrementada o requisitos de dosificación reducida o una mejora en el índice terapéutico. Se entiende que el deuterio en este contexto se considera un sustituyente en el compuesto de la fórmula (I). La concentración de dicho isótopo más pesado, específicamente deuterio, se puede definir por un factor de enriquecimiento isotópico. En los compuestos de la presente invención, cualquier átomo no designado específicamente como un isótopo particular pretende representar cualquier isótopo estable de ese átomo. A menos que se indique de otro modo, cuando una posición se designa específicamente como "H" o "hidrógeno", se entiende que la posición tiene hidrógeno en su composición isotópica de abundancia natural. En consecuencia, en los compuestos de la presente invención, se pretende que cualquier átomo designado específicamente como deuterio (D) represente al deuterio.
COMPUESTOS DE HETEROARILPIRIDONA Y AZA-PIRIDONA
La presente invención proporciona compuestos de heteroarilpiridona y aza-piridona de fórmula I, incluyendo las fórmulas Ia-Ii, y formulaciones farmacéuticas de los mismos, que son potencialmente útiles en el tratamiento de enfermedades, afecciones y/o trastornos modulados por la cinasa Btk:
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incluyendo estereoisómeros, tautómeros o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que:
X1 es CR1 o N;
X2 es CR2 o N;
X3 es CR3 o N;
donde uno o dos de X1, X2 y X3 son N;
R1, R2 y R3 están seleccionados independientemente de H, F, Cl, -N H 2 , -NHCH3 , -N(CH3)2, -OH, -OCH3 , -OCH 2CH3 , -OCH 2CH2OH, y alquilo C1-C 3 ;
R4 se selecciona de H, F, Cl, CN, -CH 2OH, -CH(CH3)OH, -C(CH3)2OH, -CH(CF3)OH, -CH 2F, -CHF2 , -CH 2CHF2 , -CF3, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHC(O)CH3, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH 2CH2OH, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, 1-hidroxiciclopropilo, imidazolilo, pirazolilo, 3-hidroxi-oxetan-3-ilo, oxetan-3-ilo y azetidin-1-ilo;
R5 es arilo C6-C 20, carbociclilo C3-C 12, heterociclilo C2-C 20, heteroarilo C1-C 20, -(arilo C6-C 20)-(heterociclilo C2-C 20), —(heterociclilo C1-C 20)-(heterociclilo C2-C 20), -(heteroarilo C1-C 20)-(heterociclilo C2-C 20)-(heterociclilo C2-C 20), -(heteroarilo C1—C20)-(heterociclilo C2—C20)-(alquilo C1—C6), —(heteroarilo C1—C20)—(alquilo C1—C6), —(heterociclilo C2—C20)-(alquilo C1-C6), -(heterociclilo C2-C 20)-(carbociclilo C3-C12), -(heteroarilo C1-C 20)-(carbociclilo C3-C12), o -(heteroarilo C1-C 20)-C(=O)-(heterociclilo C2-C 20) opcionalmente sustituido;
R6 es H, F, -CH3, -CH2CH3, -C ^ C ^ O H , -NH 2 u -OH;
R7 se selecciona de las estructuras:
Ċ
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donde la línea ondulada indica el sitio de unión; y
Y1 e Y2 están seleccionados independientemente de CH y N, donde cada uno de Y1 e Y2 no son N;
donde alquilo, carbociclilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos seleccionados independientemnte de F, Cl, Br, I, -CN, -C H 3 , -CH 2CH3 , -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH 2OH, -CH 2OCH3 , -CH 2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH 2CH2SO2CH3 , -CH 2OP(O)(OH)2 , -CH 2F, -CHF2 , -CF3, -CH 2CF3 , -CH 2CHF2 , -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH 2CN, -CO 2H, -COCH3 , -CO 2CH3 , -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3 , -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, -NO 2 , =O, -OH, -OCH 3 , -OCH2CH3 , -OCH2CH2OCH3 , -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -OP(O)(OH)2 , -S(O)2N(CH3)2, -SCH 3 , -S(O)2CH3, -S(O)3H, ciclopropilo, oxetanilo, azetidinilo, 1 -metilazetidin-3-il)oxi, N-metil-N-oxetan-3-ilamino, azetidin-1 -ilmetilo y morfolino.
Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen los compuestos de las fórmulas la-c:
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Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que X1 es N, X1 es N, X1 es N, X1 y X3 son N, X1 y X2 son N o X2 y X3 son N, como se muestra en las fórmulas Ic-li.
Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que R5 es heteroarilo C1-C 20 opcionalmente sustituido seleccionado de pirazolilo, piridinilo, pirimidinilo, 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilo, 5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilo, 6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilo y 1-metil-5-(5-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilo.
Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que R5 es -(heteroarilo C1-C 20)-(heterociclilo C2-C 20) donde heteroarilo es piridinilo opcionalmente sustituido y heterociclilo es piperazinilo opcionalmente sustituido.
Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que R5 es fenilo, opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de F, Cl, -C H 3 , -S(O)2CH3, ciclopropilo, azetidinilo, oxetanilo y morfolino.
Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que R5 se selecciona de las estructuras:
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Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que R5 es:
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donde R8 se selecciona de H, -C H 3 , -CH 2OCH3 , -CH 2CH3 , -CH(CH3)2, -CH 2CH2OH, -CH 2CH2OCH3 , -CH 2F, -CHF2 , -C F 3 , -CH 2CF3 , -CH 2CHF2 , -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH 2CN, -C(O)CH3, -C(O)CH2CH3, -C(O)CH(CH3)2, -NH 2 , -NHCH3 , -N(CH3)2, - o h , -OCH 3 , -OCH 2CH3 , -CH 2CH2OH, ciclopropilo y oxetanilo.
Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que R6 es CH3.
Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que Y1 es CH e Y2 es N, Y1 es N e Y2 es CH, cada uno de Y1 e Y2 son CH o cada uno de Y1 e Y2 son CH y R6 es CH3.
Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen los compuestos en las tablas 1 y 2.
Los compuestos de fórmula I de la invención pueden contener centros asimétricos o quirales y, por lo tanto, existir en diferentes formas estereoisómeras. Se pretende que todas las formas estereoisómeras de los compuestos de la invención, incluyendo, pero sin limitarse a, diastereómeros, enantiómeros y atropoisómeros, así como mezclas de las mismas, tales como mezclas racémicas, formen parte de la presente invención.
Además, la presente invención abarca todos los diastereómeros, incluyendo los isómeros cis-trans (geométricos) y conformacionales. Por ejemplo, si un compuesto de fórmula I incorpora un doble enlace o un anillo condensado, las formas cis y trans, así como mezclas de las mismas, se abarcan dentro del alcance de la invención.
En las estructuras mostradas en el presente documento, si la estereoquímica de cualquier átomo quiral particular no se especifica, entonces todos los estereoisómeros se contemplan e incluyen como los compuestos de la invención. Si la estereoquímica se especifica mediante una cuña sólida o línea punteada que representa una configuración particular, entonces, ese estereoisómero se especifica y define así.
Los compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas así como solvatadas con disolventes farmacéuticamente aceptables, tales como agua, etanol y similares, y se pretende que la invención abarque ambas formas no solvatadas como solvatadas.
Los compuestos de la presente invención también pueden existir en diferentes formas tautómeras y todas dichas formas se abarcan dentro del alcance de la invención. El término “tautómero” o “forma tautómera” se refiere a isómeros estructurales de diferentes energías que son interconvertibles por medio de una barrera de baja energía. Por ejemplo, los tautómeros protónicos (también conocidos como tautómeros prototrópicos) incluyen las interconversiones por medio de la migración de un protón, tales como las isomerizaciones ceto-enol e imina-enamina. Los tautómeros de valencia incluyen interconversiones mediante reorganización de algunos de los electrones de enlace.
EVALUACIÓN BIOLÓGICA
Se pueden establecer las eficacias relativas de los compuestos de fórmula I como inhibidores de una actividad enzimática (u otra actividad biológica) determinando las concentraciones en las que cada compuesto inhibe la actividad a un grado predefinido y, a continuación, comparando los resultados. Típicamente, la determinación preferente es la concentración que inhibe un 50 % de la actividad en un ensayo bioquímico, es decir, la concentración inhibidora al 50 % o “CI50”. La determinación de los valores de CI50 se puede lograr usando técnicas convencionales conocidas en la técnica. En general, se puede determinar una CI50 midiendo la actividad de una enzima dada en presencia de un intervalo de concentraciones de inhibidor en estudio. A continuación, los valores de la actividad enzimática obtenidos experimentalmente se representan frente a las concentraciones inhibidoras usadas. La concentración del inhibidor que muestra una actividad enzimática de un 50 % (en comparación con la actividad en ausencia de cualquier inhibidor) se toma como el valor de CI50. De forma análoga, se pueden definir otras concentraciones inhibidoras a través de determinaciones apropiadas de la actividad. Por ejemplo, en algunos contextos puede ser deseable establecer una concentración inhibidora al 90 %, es decir, CI90, etc.
Los compuestos de fórmula I se sometieron a prueba mediante un ensayo de cinasa Btk bioquímico estándar (ejemplo 901).
Un procedimiento general para un ensayo de cinasa Btk celular estándar que se puede usar para someter a prueba los compuestos de fórmula I es un ensayo de Btk para células Ramos (ejemplo 902).
Se puede usar un ensayo de proliferación de linfocitos B celular estándar para someter a prueba los compuestos de fórmula I con linfocitos B purificados a partir del bazo de ratones Balb/c (ejemplo 903).
Se puede usar un ensayo de proliferación de linfocitos T estándar para someter a prueba los compuestos de fórmula I con linfocitos T purificados a partir del bazo de ratones Balb/c (ejemplo 904).
Se puede llevar a cabo un ensayo de inhibición de CD86 en los compuestos de fórmula I en cuanto a la inhibición de la actividad de los linfocitos B usando los esplenocitos de ratón totales purificados a partir de bazos de ratones Balb/c de 8-16 semanas (ejemplo 905).
Se puede llevar a cabo un ensayo de supervivencia de linfocitos B-LLA en los compuestos de fórmula I para medir el número de linfocitos B-LLA viables en cultivo (ejemplo 906).
Se puede llevar a cabo un ensayo de sangre completa para CD69 en los compuestos de fórmula I para determinar la capacidad de los compuestos de inhibir la producción de CD69 por los linfocitos B en sangre completa humana activados reticulando IgM en superficie con anti-IgM humana con F(ab')2 de cabra (ejemplo 907). CD69 es una lectina de tipo C de tipo II implicada en la migración de linfocitos y en la secreción de citocinas. La expresión de CD69 representa uno de los indicadores de la activación de los leucocitos disponibles más tempranos y su rápida inducción se produce a través de la activación transcripcional (Vázquez et al. (2009) Jour. of Immunology publicado el 19 de octubre de 2009, doi:10.4049/jimmunol.0900839). La inhibición dependiente de la concentración de la estimulación del receptor por el antígeno por los inhibidores de Btk selectivos induce la expresión en la superficie de las células del marcador de activación de los linfocitos CD69 (Honigberg et al (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. 107(29):13075-13080). Por tanto, la inhibición de CD69 por los inhibidores de Btk selectivos se puede correlacionar con la eficacia terapéutica de determinados trastornos de los linfocitos B. Los valores de CI70 para FACS en sangre Hu para CD69 se presentan para los compuestos de fórmula I ejemplares en las tablas 1 y 2.
Se puede medir la actividad citotóxica o citostática de los compuestos ejemplares de fórmula I: estableciendo una línea celular de tumores de mamífero en proliferación en un medio de cultivo celular, añadiendo un compuesto de fórmula I, cultivando las células durante un periodo de aproximadamente 6 horas a aproximadamente 5 días; y midiendo la viabilidad de las células (ejemplo 908). Se usan ensayos basados en células in vitro para medir la viabilidad, es decir, la proliferación (CI50), la citotoxicidad (CE50) y la inducción de la apoptosis (activación de caspasa) y pueden ser útiles en la predicción de la eficacia clínica frente a las neoplasias malignas hemáticas y neoplasias hemolinfáticas.
La potencia in vitro de las combinaciones de los compuestos de fórmula I con agentes quimioterápicos se puede medir mediante el ensayo de proliferación de las células del ejemplo 908; el ensayo de viabilidad de las células luminiscente CellTiter-Glo®, comercialmente disponible de Promega Corp., Madison, WI. Este procedimiento de ensayo homogéneo se basa en la expresión recombinante de la luciferasa Coleóptera (documentos US 5583024; US 5674713; US 5700670) y determina el número de células viables en cultivo en base a la determinación cuantitativa del ATP presente, un indicador de las células metabólicamente activas (Crouch et al. (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88; documento US 6602677). El ensayo CellTiter-Glo® se llevó a cabo en un formato de 96 o 384 pocillos, haciéndolo tributario de cribado de alto rendimiento (HTS) automatizado (Cree et al. (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404). El procedimiento de ensayo homogéneo implica añadir el único reactivo (reactivo de CellTiter-Glo®) directamente a las células cultivadas en medio complementado con suero. No se requieren múltiples etapas de lavado de las células, retirada del medio y pipeteo. El sistema detecta tanto como 15 células/pocillo en un formato de 384 pocillos a los 10 minutos después de añadir el reactivo y mezclar.
El formato "añadir-mezclar-medir" homogéneo da como resultado la lisis de las células y la generación de una señal luminiscente proporcional a la cantidad de ATP presente. La cantidad de ATP es directamente proporcional al número de células presentes en cultivo. El ensayo CellTiter-Glo® genera una señal luminiscente "de tipo resplandeciente" producida por la reacción de la luciferasa, que, en general, tiene una semivida mayor de cinco horas, dependiendo del tipo de célula y medio usados. Las células viables se reflejan en unidades relativas de luminiscencia (URL). El sustrato, la luciferina de escarabajo, se descarboxila oxidativamente por la luciferasa de luciérnaga recombinante con conversión simultánea de ATP en AMP y generación de fotones. La semivida extendida elimina la necesidad de usar inyectores de reactivo y proporciona flexibilidad para el procesamiento continuo o en lotes de múltiples placas. Se puede usar este ensayo de proliferación de las células con diversas formatos de pocillos múltiples, por ejemplo, formato de 96 o 384 pocillos. Se pueden registrar los datos mediante un dispositivo de formación de imágenes como un luminómetro o una cámara con CCD. La luminiscencia de salida se presenta como unidades relativas de luz (URL), medidas con el tiempo.
La eficacia antiproliferativa de los compuestos ejemplares de fórmula I y combinaciones con agentes quimioterápicos se mide mediante el ensayo CellTiter-Glo® (ejemplo 908) frente a determinadas líneas celulares de tumores hemáticos. Se establecen los valores de CE50 para los compuestos y combinaciones sometidos a prueba.
Los compuestos de fórmula I ejemplares en las tablas 1 y 2, se prepararon, caracterizaron y sometieron a prueba para determinar la inhibición de Btk de acuerdo con los procedimientos de la presente invención y tienen las siguientes estructuras y denominaciones correspondientes (ChemDraw Ultra, versión 9.0.1 y ChemBioDraw, versión 11.0, CambridgeSoft Corp., Cambridge MA). Si más de una denominación se asocia con el compuesto de fórmula I o intermedio, la estructura química definirá el compuesto (solo los ejemplos 107, 108, 130, 141, 144, 150, 153, 158, 163, 164, 168, 173, 179, 180, 185 y 188 forman parte de la invención).
Tabla 1
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Tabla 2
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ADMINISTRACIÓN DE LOS COMPUESTOS DE FÓRMULA I
Los compuestos de la invención se pueden administrar por cualquier vía apropiada para la afección que se va a tratar. Las vías adecuadas incluyen oral, parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa, intrarterial, intradérmica, intratecal y epidural), transdérmica, rectal, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal, intraperitoneal, intrapulmonar e intranasal. Para el tratamiento inmunosupresor local, los compuestos se pueden administrar por administración intralesional, incluyendo perfusión o de otro modo poniendo en contacto el injerto con el inhibidor antes del trasplante. Se apreciará que la vía preferente puede variar, por ejemplo, con la afección del destinatario. Cuando el compuesto se administra por vía oral, se puede formular como una pastilla, cápsula, comprimido, etc. con un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. Si el compuesto se administra por vía parenteral, se puede formular con un vehículo parenteral farmacéuticamente aceptable y en una forma inyectable de dosificación unitaria, como se detalla a continuación.
Una dosis para tratar a pacientes humanos puede variar de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 1000 mg del compuesto de fórmula I. Una dosis típica puede ser de aproximadamente 100 mg a aproximadamente 300 mg del compuesto. Se puede administrar una dosis una vez al día (c.v.d), dos veces al día (d.v.d) o con mayor frecuencia, dependiendo de las propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas, incluyendo la absorción, distribución, metabolismo y excreción del compuesto particular. Además, 20 factores de toxicidad pueden influir en la dosificación y en la pauta de administración. Cuando se administra por vía oral, la pastilla, cápsula o comprimido se puede ingerir diariamente o con menos frecuencia durante un periodo de tiempo especificado. La pauta se puede repetir durante una serie de ciclos de tratamiento.
COMPUESTOS PARA SU USO EN LOS PROCEDIMIENTOS DE TRATAMIENTO CON LOS COMPUESTOS DE FÓRMULA I
Solo los compuestos como se reivindica para su uso en el tratamiento de artritis reumatoide, lupus, urticaria y esclerosis múltiple forman parte de la invención.
Los compuestos de fórmula I de la presente invención son útiles para tratar a un paciente humano o animal que padece una enfermedad o trastorno que surge del crecimiento, función o comportamiento celular anómalo asociado con la cinasa Btk, tal como un trastorno inmunitario, cardiovasculopatía, infección vírica, inflamación, un trastorno del metabolismo/endocrino o un trastorno neurológico, que, por tanto, se puede tratar mediante un procedimiento que comprende la administración al mismo de un compuesto de la presente invención como se define anteriormente. Un paciente humano o animal que padece cáncer también se puede tratar mediante un procedimiento que comprende la administración al mismo de un compuesto de la presente invención como se define anteriormente. De este modo, la afección del paciente se puede mejorar.
Los compuestos de fórmula I pueden ser útiles para el diagnóstico o tratamiento in vitro, in situ, e in vivo de células de mamífero, organismos o procesos patológicos asociados, tales como inflamación sistémica y local, enfermedades inmunoinflamatorias, tales como artritis reumatoide, supresión inmunitaria, rechazo de trasplante de órganos, alergias, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, dermatitis, asma, lupus eritematoso diseminado, síndrome de Sjogren, esclerosis múltiple, esclerodermia/esclerosis sistémica, púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), vasculitis asociada a anticuerpos frente al citoplasma de los neutrófilos (ANCA), enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), psoriasis y para efectos protectores de las articulaciones generales.
Los compuestos para su uso en los procedimientos también incluyen tratar dichas enfermedades tales como enfermedades artríticas, tales como artritis reumatoide, artritis monoarticular, artrosis, artritis gotosa, espondiloartritis; enfermedad de Behget; sepsis, choque séptico, choque endotóxico, sepsis gramnegativa, sepsis grampositiva y síndrome del choque tóxico; síndrome de lesión multiorgánica después de septicemia, traumatismo o hemorragia; trastornos oftálmicos, tales como conjuntivitis alérgica, conjuntivitis primaveral, uveítis y oftalmopatía asociada a tiroides; granuloma eosinófilo; trastornos pulmonares o respiratorios, tales como asma, bronquitis crónica, rinitis alérgica, SDRA, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica (por ejemplo, enfermedad pulmonar obstructiva crónica), silicosis, sarcoidosis pulmonar, pleuritis, alveolitis, vasculitis, enfisema, neumonía, bronquiectasia y toxicidad del oxígeno pulmonar; lesión por reperfusión del miocardio, cerebro o extremidades; fibrosis, tal como fibrosis quística; formación de queloides o formación de tejido cicatricial; ateroesclerosis; enfermedades autoinmunitarias, tales como lupus eritematoso diseminado (LED), tiroiditis autoinmunitaria, esclerosis múltiple, algunas formas de diabetes, y síndrome de Reynaud; y trastornos de rechazo de trasplante, tales como EICH y rechazo de aloinjertos; glomerulonefritis crónica; enfermedades intestinales inflamatorias, tales como enfermedad intestinal inflamatoria crónica (EIIC), enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y enterocolitis necrosante; dermatosis inflamatorias, tales como dermatitis de contacto, dermatitis atópica, psoriasis o urticaria; fiebre y mialgias debidas a infección; trastornos inflamatorios del sistema nervioso central o periférico, tales como meningitis, encefalitis y lesión en el cerebro o médula espinal debida a un traumatismo leve, síndrome de Sjogren; enfermedades que implican diapédesis leucocitaria; hepatitis alcohólica; neumonía bacteriana; enfermedades mediadas por complejos antígeno-anticuerpo; choque hipovolémico; diabetes mellitus de tipo I; hipersensibilidad aguda y retardada; estados de la enfermedad debidos a discrasia leucocitaria y metástasis; lesión térmica; síndromes asociados a la transfusión de granulocitos; y toxicidad inducida por citocinas.
Los compuestos para su uso en los procedimientos también incluyen tratar un cáncer seleccionado de mama, ovario, cuello del útero, próstata, testículos, aparato genitourinario, esófago, laringe, glioblastoma, neuroblastoma, estómago, piel, queratoacantoma, pulmón, carcinoma epidermoide, carcinoma de células grandes, carcinoma de pulmón no microcítico (CPNM), carcinoma microcítico, adenocarcinoma de pulmón, hueso, colon, adenoma, páncreas, adenocarcinoma, tiroides, carcinoma folicular, carcinoma no diferenciado, carcinoma papilar, seminoma, melanoma, sarcoma, carcinoma de vejiga, carcinoma de hígado y conductos biliares, carcinoma de riñón, pancreático, trastornos mieloides, linfoma, tricoleucocitos, cavidad bucal, naso-faríngeo, faringe, labio, lengua, boca, intestino delgado, colonrecto, intestino grueso, recto, cerebro y sistema nervioso central, leucemia hodgkiniana, bronquios, tiroides, hígado y conductillo biliar intrahepático, hepatocelular, gástrico, glioma/glioblastoma, endometrio, melanoma, riñón y pelvis renal, vejiga urinaria, cuerpo uterino, cuello uterino, mieloma múltiple, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, leucemia linfocítica, leucemia linfocítica crónica (LCC), leucemia mieloide, cavidad oral y faringe, linfoma no hodgkiniano, melanoma y adenoma de colon velloso.
Los compuestos para su uso en los procedimientos pueden tener utilidad en el tratamiento de sujetos que están o pueden estar sujetos a lesión por reperfusión, es decir, una lesión resultante de situaciones en las que un tejido u órgano experimenta un periodo de isquemia seguido de reperfusión. El término "isquemia" se refiere a la anemia tisular localizada debida a la obstrucción de la entrada de sangre arterial. La isquemia transitoria seguida de reperfusión da como resultado de manera característica la activación y transmigración de neutrófilos a través del endotelio de los vasos sanguíneos en el área afectada. La acumulación de neutrófilos activados, a su vez, da como resultado la generación de metabolitos reactivos del oxígeno, que dañan los componentes del tejido u órgano implicado. Este fenómeno de "lesión por reperfusión" se asocia comúnmente con afecciones tales como apoplejía vascular (incluyendo isquemia focal y global), choque hemorrágico, isquemia o infarto de miocardio, trasplante de órganos y vasoespasmo cerebral. Para ilustrar, la lesión por reperfusión se produce al final de los procedimientos de derivación cardíaca o durante un paro cardíaco cuando el corazón, una vez que se ha prevenido que reciba sangre, comienza a reperfundir. Se espera que la inhibición de la actividad Btk pueda dar como resultado cantidades reducidas de lesión por reperfusión en dichas situaciones.
FORMULACIONES FARMACÉUTICAS
Para usar un compuesto de la presente invención para el tratamiento terapéutico de mamíferos, incluyendo seres humanos, se formula normalmente de acuerdo con la práctica farmacéutica estándar como una composición farmacéutica. De acuerdo con este aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención en asociación con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
Una formulación típica se prepara mezclando un compuesto de la presente invención y un vehículo, diluyente o excipiente. Los vehículos, diluyentes y excipientes adecuados son bien conocidos por los expertos en la técnica e incluyen materiales tales como carbohidratos, ceras, polímeros solubles en agua y/o hinchables, materiales hidrófilos o hidrófobos, gelatina, aceites, disolventes, agua y similares. El vehículo, diluyente o excipiente particular usado dependerá de los medios y el propósito para los que se aplica el compuesto de la presente invención. Los disolventes se seleccionan en general en base a disolventes reconocidos por expertos en la técnica como seguros (GRAS) para administrarse a un mamífero. En general, los disolventes seguros son disolventes acuosos no tóxicos, tales como agua y otros disolventes no tóxicos que son solubles o miscibles en agua. Los disolventes acuosos adecuados incluyen agua, etanol, propilenglicol, polietilenglicoles (por ejemplo, PEG 400, PEG 300), etc., y mezclas de los mismos. Las formulaciones también pueden incluir uno o más tampones, agentes estabilizantes, tensioactivos, agentes humectantes, agentes lubricantes, emulsionantes, agentes de suspensión, conservantes, antioxidantes, agentes opacificantes, deslizantes, coadyuvantes tecnológicos, colorantes, edulcorantes, agentes perfumantes, agentes saborizantes y otros aditivos conocidos para proporcionar una presentación elegante del fármaco (es decir, un compuesto de la presente invención o composición farmacéutica del mismo) o para ayudar en la fabricación del producto farmacéutico (es decir, medicamento).
Las formulaciones se pueden preparar usando procedimientos convencionales de disolución y mezclado. Por ejemplo, el principio activo (es decir, un compuesto de la presente divulgación o forma estabilizada del compuesto (por ejemplo, complejo con un derivado de ciclodextrina u otro agente de formación de complejos conocido) se disuelve en un disolvente adecuado en presencia de uno o más de los excipientes descritos anteriormente. El compuesto de la presente invención se formula típicamente en formas de dosificación farmacéuticas para proporcionar una dosificación fácilmente controlable del fármaco y para posibilitar el cumplimiento por parte del paciente de la pauta prescrita.
La composición (o formulación) farmacéutica para su aplicación se puede envasar en una variedad de modos dependiendo del procedimiento usado para administrar el fármaco. En general, un artículo para su distribución incluye un recipiente en el que se ha depositado la formulación farmacéutica en una forma apropiada. Los recipientes adecuados son bien conocidos por los expertos en la técnica e incluyen materiales tales como frascos (plástico y vidrio), sobres, ampollas, bolsas de plástico, cilindros de metal y similares. El recipiente también puede incluir un ensamblaje a prueba de manipulaciones para prevenir el acceso indiscreto al contenido del envase. Además, en el recipiente se ha depositado una ficha técnica que describe el contenido del recipiente. La ficha técnica también puede incluir advertencias apropiadas.
Las formulaciones farmacéuticas de los compuestos de la presente invención se pueden preparar para diversas vías y tipos de administración. Por ejemplo, un compuesto de fórmula I que tiene el grado de pureza deseado se puede mezclar opcionalmente con diluyentes, vehículos, excipientes o estabilizantes farmacéuticamente aceptables (Remington's Pharmaceutical Sciences (1980) 16.a edición, Osol, A. Ed.), en forma de una formulación liofilizada, polvo molido o una solución acuosa. La formulación se puede llevar a cabo mezclando a temperatura ambiente al pH apropiado, y en el grado de pureza deseado, con vehículos fisiológicamente aceptables, es decir, vehículos que no sean tóxicos para los receptores en las dosificaciones y concentraciones empleadas. El pH de la formulación depende principalmente del uso particular y de la concentración del compuesto, pero puede variar de aproximadamente 3 a aproximadamente 8. La formulación en un tampón acetato a pH 5 es un modo de realización adecuado.
El compuesto normalmente se puede almacenar como una composición sólida, una formulación liofilizada o como una solución acuosa.
Las composiciones farmacéuticas de la invención se formularán, dosificarán y administrarán de una manera, es decir, cantidades, concentraciones, pautas, ciclos, vehículos y vía de administración, consistente con la buena práctica médica. Los factores que se deben tener en consideración en este contexto incluyen el trastorno particular que se trata, el mamífero particular que se trata, la afección clínica del paciente individual, la causa del trastorno, el sitio de administración del agente, el procedimiento de administración, la pauta de administración y otros factores conocidos por los médicos de cabecera. La "cantidad terapéuticamente eficaz" del compuesto que se va a administrar se regirá por dichas consideraciones, y es la cantidad mínima necesaria para mejorar o tratar el trastorno hiperproliferativo.
Como una proposición general, la cantidad farmacéuticamente eficaz inicial del inhibidor administrado por dosis estará en el intervalo de aproximadamente 0,01-100 mg/kg, a saber, de aproximadamente 0,1 a 20 mg/kg de peso corporal del paciente por día, siendo el intervalo inicial típico del compuesto usado de 0,3 a 15 mg/kg/día.
Los diluyentes, vehículos, excipientes y estabilizantes aceptables no son tóxicos para los receptores a las dosificaciones y concentraciones empleadas, e incluyen tampones, tales como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes, incluyendo ácido ascórbico y metionina; conservantes (tales como cloruro de octadecildimetilbencilamonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio; fenol, alcohol butílico o bencílico; alquilparabenos, tales como metil- o propilparabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol; y m-cresol); polipéptidos de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos); proteínas, tales como seroalbúmina, gelatina o inmunoglobulinas; polímeros hidrófilos, tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina o lisina; monosacáridos, disacáridos y otros carbohidratos, incluyendo glucosa, manosa o dextrinas; agentes quelantes, tales como EDTA; azúcares, tales como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones formadores de sales, tales como sodio; complejos de metal (por ejemplo, complejos Zn-proteína) y/o tensioactivos no iónicos, tales como TWEEN™, PLURONICS™ o polietilenglicol (PEG). Los ingredientes farmacéuticos activos también se pueden atrapar en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización interfacial, por ejemplo, hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina y microcápsulas de poli(metacrilato de metilo), respectivamente, en sistemas de administración de fármacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones. Dichas técnicas se divulgan en Remington's Pharmaceutical Sciences 16.a edición, Osol, A. Ed. (1980).
Se pueden preparar preparaciones de liberación sostenida de los compuestos de fórmula I. Los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen un compuesto de fórmula I, estando las matrices en forma de artículos conformados, por ejemplo, películas o microcápsulas. Los ejemplos de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli(metacrilato de 2-hidroxietilo) o poli(alcohol vinílico)), polilactidas (documento US 3773919), copolímeros de ácido L-glutámico y L-glutamato de Y-etilo, copolímeros de etileno-acetato de vinilo no degradables, de ácido láctico-glicólico degradables, tales como LUPRON DEPOT™ (microesferas inyectables compuestas de copolímero de ácido lácticoglicólico y acetato de leuprorelina) y poli(ácido D-(-)-3-hidroxibutírico).
Las formulaciones incluyen las adecuadas para las vías de administración detalladas en el presente documento. Las formulaciones se pueden presentar convenientemente en una forma de dosificación unitaria y se pueden preparar mediante cualquiera de los procedimientos bien conocidos en la técnica de la farmacia. Las técnicas y formulaciones se encuentran en general en Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Dichos procedimientos incluyen la etapa de asociar el ingrediente activo con el vehículo que constituye uno o más ingredientes auxiliares. En general, las formulaciones se preparan asociando uniforme y estrechamente el ingrediente activo con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos o ambos, y, a continuación, si fuera necesario, conformando el producto.
Las formulaciones de un compuesto de fórmula I adecuado para su administración oral se pueden preparar como unidades discretas, tales como pastillas, cápsulas, sellos o comprimidos, conteniendo cada una cantidad predeterminada de un compuesto de fórmula I. Los comprimidos prensados se pueden preparar comprimiendo en una máquina adecuada el ingrediente activo en una forma de flujo libre, tal como un polvo o gránulos, opcionalmente mezclada con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, conservante, tensioactivo o agente dispersante. Los comprimidos moldeados se pueden preparar moldeando en una máquina adecuada una mezcla del ingrediente activo en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte. Los comprimidos se pueden recubrir o ranurar opcionalmente y se formulan opcionalmente para proporcionar una liberación lenta o controlada del ingrediente activo a partir de los mismos. Los comprimidos, pastilla para chupar, pastillas, suspensiones acuosas o en aceite, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras o blandas, por ejemplo, cápsulas de gelatina, jarabes o elixires se pueden preparar para su uso oral. Las formulaciones de los compuestos de fórmula I pretendidas para su uso oral se pueden preparar de acuerdo con cualquier procedimiento conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas y dichas composiciones pueden contener uno o más agentes, incluyendo agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes y agentes conservantes, para proporcionar una preparación de sabor agradable. Los comprimidos que contienen el ingrediente activo en mezcla con un excipiente farmacéuticamente aceptable no tóxico que son adecuados para la fabricación de tabletas son aceptables. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio o de sodio, lactosa, fosfato de calcio o de sodio; agentes de granulación y disgregación, tales como almidón de maíz o ácido algínico; agentes aglutinantes, tales como almidón, gelatina o goma arábiga; y agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Los comprimidos pueden estar no recubiertos o se pueden recubrir mediante técnicas conocidas, incluyendo microencapsulación para retardar la disgregación y la adsorción en el tubo gastrointestinal y, de este modo, proporcionar una acción sostenida durante un periodo más largo. Por ejemplo, se puede emplear un material de retardo temporal, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo, solo o con una cera.
Para el tratamiento del ojo u otros tejidos externos, por ejemplo, la boca y la piel, las formulaciones se aplican preferentemente como una pomada o crema tópica que contiene el/los ingrediente(s) activo(s) en una cantidad de, por ejemplo, un 0,075 a un 20 % p/p. Cuando se formulan en una pomada, los ingredientes activos se pueden emplear con una base de pomada parafínica o bien miscible en agua. De forma alternativa, los ingredientes activos se pueden formular en una crema con una base de crema de aceite en agua. Si se desea, la fase acuosa de la base de crema puede incluir un polialcohol, es decir, un alcohol que tiene dos o más grupos hidroxilo, tales como propilenglicol, butano 1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol y polietilenglicol (incluyendo PEG 400) y mezclas de los mismos. Las formulaciones tópicas pueden incluir deseablemente un compuesto que potencie la absorción o penetración del ingrediente activo a través de la piel u otras áreas afectadas. Los ejemplos de dichos potenciadores de la penetración dérmica incluyen dimetilsulfóxido y análogos relacionados. La fase oleosa de las emulsiones de la presente invención se puede constituir a partir de ingredientes conocidos de una manera conocida. Aunque la fase puede comprender meramente un emulsionante, deseablemente comprende una mezcla de al menos un emulsionante con una grasa o un aceite o con tanto una grasa como un aceite. Preferentemente, se incluye un emulsionante hidrófilo conjuntamente con un emulsionante lipófilo que actúa como un estabilizador. También es preferente incluir tanto un aceite como una grasa. Conjuntamente, el/los emulsionante(s) con o sin estabilizante(s) constituyen la llamada cera emulsionante, y la cera conjuntamente con el aceite y la grasa constituye la llamada base de pomada emulsionante que forma la fase dispersada oleosa de las formulaciones de las cremas. Los emulsionantes y estabilizantes de emulsión adecuados para su uso en la formulación de la invención incluyen Tween® 60, Span® 80, alcohol cetoestearílico, alcohol bencílico, alcohol miristílico, monoestearato de glicerilo y laurilsulfato de sodio.
Las suspensiones acuosas de los compuestos de fórmula I contienen los materiales activos en mezcla con excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Dichos excipientes incluyen un agente de suspensión, tal como carboximetilcelulosa, croscarmelosa, povidona, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa de sodio, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto y goma arábiga, y agentes dispersantes o humectantes, tales como un fosfoglicérido natural, (por ejemplo, lecitina), un producto de condensación de un óxido de alquileno con un ácido graso (por ejemplo, estearato de polioxietileno), un producto de condensación de óxido de etileno con un alcohol alifático de cadena larga (por ejemplo, heptadecaetilenoxicetanol), un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial derivado de un ácido graso y un anhídrido de hexitol (por ejemplo, monooleato de sorbitán polioxietilenado). La suspensión acuosa también puede contener uno o más conservantes, tales como phidroxibenzoato de etilo o n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes saborizantes y uno o más agentes edulcorantes, tales como sacarosa o sacarina.
Las composiciones farmacéuticas de los compuestos de fórmula I pueden estar en forma de una preparación inyectable estéril, tal como una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión se puede formular de acuerdo con la técnica conocida usando los agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados que se han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente aceptable no tóxico por vía parenteral, tal como una solución en 1,3-butanodiol o preparada como un polvo liofilizado. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden emplear están agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, los aceites fijados estériles se pueden emplear convencionalmente como un disolvente o medio de suspensión. Para este propósito, se puede emplear cualquier aceite fijado insípido, incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, se pueden usar de forma similar ácidos grasos, tales como ácido oleico, en la preparación de inyectables.
La cantidad del ingrediente activo que se puede combinar con el material de vehículo para producir una única forma de dosificación variará dependiendo del huésped tratado y el modo de administración particular. Por ejemplo, una formulación de liberación prolongada pretendida para su administración oral a seres humanos puede contener de aproximadamente 1 a 1000 mg de material activo formulado con una cantidad apropiada y conveniente de material de vehículo que puede variar de aproximadamente un 5 a aproximadamente un 95 % de las composiciones totales (peso:peso). La composición farmacéutica se puede preparar para proporcionar cantidades fácilmente medibles para su administración. Por ejemplo, una solución acuosa pretendida para su infusión intravenosa puede contener de aproximadamente 3 a 500 pg del ingrediente activo por mililitro de solución para que se pueda producir la infusión de un volumen adecuado a una tasa de aproximadamente 30 ml/h.
Las formulaciones adecuadas para la administración parenteral incluyen soluciones inyectables estériles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostáticos y solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor pretendido; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes.
Las formulaciones adecuadas para su administración tópica en el ojo también incluyen colirio en las que el ingrediente activo se disuelve o suspende en un vehículo adecuado, especialmente un disolvente acuoso para el ingrediente activo. El ingrediente activo está presente preferentemente en dichas formulaciones en una concentración de aproximadamente un 0,5 a un 20 % p/p, por ejemplo de aproximadamente un 0,5 a un 10 % p/p, por ejemplo, de aproximadamente un 1,5 % p/p.
Las formulaciones adecuadas para su administración tópica en la boca incluyen pastillas para chupar que comprenden el ingrediente activo en una base saborizada, normalmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto; pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte, tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arábiga; y colutorios que comprenden el ingrediente activo en un vehículo líquido adecuado.
Las formulaciones para su administración rectal se pueden presentar como un supositorio con una base adecuada que comprende, por ejemplo, manteca de cacao o un salicilato.
Las formulaciones adecuadas para su administración intrapulmonar o nasal tienen un tamaño de partícula, por ejemplo, en el intervalo de 0,1 a 500 micrómetros (incluyendo los tamaños de partícula en un intervalo entre 0,1 y 500 micrómetros en incrementos de micrómetros, tal como 0,5, 1,30 micrómetros, 35 micrómetros, etc.), que se administra por inhalación rápida a través de las fosas nasales o por inhalación a través de la boca para alcanzar los sacos alveolares. Las formulaciones adecuadas incluyen soluciones acuosas u oleosas del ingrediente activo. Las formulaciones adecuadas para su administración en aerosol o polvo seco se pueden preparar de acuerdo con procedimientos convencionales y se pueden administrar con otros agentes terapéuticos, tales como los compuestos usados hasta ahora en el tratamiento o profilaxis de trastornos como se describe a continuación.
Las formulaciones adecuadas para su administración vaginal se pueden presentar como óvulos vaginales, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones para pulverización que contienen, además del ingrediente activo, dichos vehículos, que se conocen en la técnica como apropiados.
Las formulaciones se pueden envasar en recipientes de dosis unitarias o de dosis múltiples, por ejemplo, ampollas y viales sellados, y se pueden almacenar en un estado secado por congelación (liofilizado) que solo requiera la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo, agua, para su inyección inmediatamente antes del uso. Las soluciones y suspensiones inyectables improvisadas se preparan a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles de la clase descrita previamente. Las formulaciones de dosificación unitaria preferentes son las que contienen una dosis diaria o subdosis diaria unitaria, como se cita anteriormente en el presente documento, o una fracción apropiada de la misma, del ingrediente activo.
Por lo tanto, la invención proporciona además composiciones veterinarias que comprenden al menos un ingrediente activo como se define anteriormente conjuntamente con un vehículo veterinario. Los vehículos veterinarios son materiales útiles para el propósito de administrar la composición y pueden ser materiales sólidos, líquidos o gaseosos, que de otro modo son inertes o aceptables en la técnica veterinaria y son compatibles con el ingrediente activo. Estas composiciones veterinarias se pueden administrar por vía parenteral, oral o por cualquier otra vía deseada.
POLITERAPIA
Los compuestos de fórmula I se pueden emplear solos o en combinación con otros agentes terapéuticos para el tratamiento de una enfermedad o trastorno descrito en el presente documento, tal como inflamación o un trastorno hiperproliferativo (por ejemplo, cáncer). En determinados modos de realización, un compuesto de fórmula I se combina en una formulación de combinación farmacéutica, o pauta posológica como politerapia, con un segundo compuesto terapéutico adicional que tiene propiedades antinflamatorias o antihiperproliferativas o que es útil para tratar una inflamación. trastorno de la respuesta inmunitaria o trastorno hiperproliferativo (por ejemplo, cáncer). El agente terapéutico adicional puede ser un agente antinflamatorio, un agente inmunomodulador, agente quimioterápico, un potenciador de la apoptosis, un factor neurotrópico, un agente para tratar una cardiovasculopatía, un agente para tratar una hepatopatía, un agente antivírico, un agente para tratar trastornos sanguíneos, un agente para tratar la diabetes y un agente para tratar trastornos de la inmunodeficiencia. El segundo agente terapéutico puede ser un agente antinflamatorio AINE. El segundo agente terapéutico puede ser un agente quimioterápico. El segundo compuesto de la formulación de combinación farmacéutica o pauta posológica tiene preferentemente actividades complementarias al compuesto de fórmula I de tal manera que mutuamente no se afectan de forma adversa. Dichos compuestos están presentes adecuadamente en combinación en cantidades que son eficaces para el propósito pretendido. En un modo de realización, una composición de la presente invención comprende un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, tautómero, solvato o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un agente terapéutico, tal como un AINE.
La politerapia se puede administrar como una pauta simultánea o secuencial. Cuando se administra secuencialmente, la combinación se puede administrar en dos o más administraciones. La administración combinada incluye la coadministración, usando formulaciones separadas o una única formulación farmacéutica, y la administración consecutiva en cualquier orden, en la que preferentemente existe un periodo de tiempo durante el que ambos (o todos los) agentes activos ejercen simultáneamente sus actividades biológicas.
Las dosificaciones adecuadas para cualquiera de los agentes coadministrados anteriores son las usadas actualmente y se pueden reducir debido a la acción combinada (sinergia) del agente recién identificado y otros agentes o tratamientos terapéuticos.
La politerapia puede proporcionar "sinergia" y demostrar ser "sinérgica", es decir, el efecto logrado cuando los ingredientes activos usados conjuntamente es mayor que la suma de los efectos que resultan de usar los compuestos por separado. Se puede conseguir un efecto sinérgico cuando los ingredientes activos se: (1) coformulan y administran o suministran simultáneamente en una formulación de dosificación unitaria combinada; (2) administran mediante alternancia o en paralelo como formulaciones separadas; o (3) mediante alguna otra pauta. Cuando se administra en un tratamiento de alternancia, se puede lograr un efecto sinérgico cuando los compuestos se administran o suministran secuencialmente, por ejemplo, mediante diferentes inyecciones en jeringuillas separadas, pastillas o cápsulas separadas, o infusiones separadas. En general, durante el tratamiento de alternancia, se administra secuencialmente una dosificación eficaz de cada ingrediente activo, es decir, en serie, mientras que en la politerapia, las dosificaciones eficaces de dos o más ingredientes activos se administran conjuntamente.
En un modo de realización particular del tratamiento, un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, tautómero, solvato o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se puede combinar con otros agentes terapéuticos, hormonales o de anticuerpos, tales como los descritos en el presente documento, así como combinar con tratamiento quirúrgico y radioterapia. Las politerapias comprenden, por tanto, la administración de al menos un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, tautómero, solvato o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el uso de al menos otro procedimiento de tratamiento del cáncer. Las cantidades del/de los compuesto(s) de fórmula I y del/de los demás agente(s) terapéutico(s) farmacéuticamente activo(s) y los momentos de administración relativos se seleccionarán para lograr el efecto terapéutico combinado deseado.
METABOLITOS DE LOS COMPUESTOS DE FÓRMULA I
También se encuentran dentro del alcance de la presente invención los productos metabólicos in vivo de fórmula I descritos en el presente documento. Dichos productos pueden resultar, por ejemplo, de la oxidación, reducción, hidrólisis, amidación, desamidación, esterificación, desesterificación, escisión enzimática, y similares, del compuesto administrado. En consecuencia, la invención incluye metabolitos de los compuestos de fórmula I, incluyendo los compuestos producidos mediante un procedimiento que comprende poner en contacto un compuesto de la presente invención con un mamífero durante un periodo de tiempo suficiente para proporcionar un producto metabólico del mismo.
Los productos metabólicos se identifican típicamente preparando un isótopo radiomarcado (por ejemplo, 14C o 3H) de un compuesto de la invención, administrándolo por vía parenteral en una dosis detectable (por ejemplo, más de aproximadamente 0,5 mg/kg) a un animal, tal como una rata, ratón, conejillo de Indias, mono o al hombre, esperando un tiempo suficiente para que se produzca el metabolismo (típicamente, de aproximadamente 30 segundos a 30 horas) y aislando sus productos de conversión a partir de la orina, sangre u otras muestras biológicas. Estos productos se aíslan fácilmente, puesto que están marcados (otros se aíslan mediante el uso de anticuerpos que se pueden unir a epítopos que sobreviven en el metabolito). Las estructuras del metabolito se determinan de manera convencional, por ejemplo, por análisis mediante EM, CL/EM o RMN. En general, el análisis de los metabolitos se realiza del mismo modo que los estudios sobre el metabolismo de fármacos convencionales bien conocidos por los expertos en la técnica. Los productos metabólicos, siempre que no se encuentren de otro modo in vivo, son útiles en ensayos de diagnóstico para la dosificación terapéutica de los compuestos de la invención.
ARTÍCULOS DE FABRICACIÓN
En otro modo de realización de la invención, se proporciona un artículo de fabricación, o "kit", que contiene materiales útiles para el tratamiento de las enfermedades y trastornos descritos anteriormente. En un modo de realización, el kit comprende un recipiente que comprende un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, tautómero, solvato, metabolito o sal o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. El kit puede comprender además una ficha técnica o un prospecto del envase en o asociado con el recipiente. El término "prospecto del envase" se usa para referirse a las instrucciones incluidas habitualmente en los envases comerciales de productos terapéuticos que contienen información sobre las indicaciones, uso, dosificación, administración, contraindicaciones y/o advertencias en relación con el uso de dichos productos terapéuticos. Los recipientes adecuados incluyen, por ejemplo, frascos, viales, jeringuillas, envases alveolados, etc. El recipiente se puede formar a partir de una variedad de materiales, tales como vidrio o plástico. El recipiente puede contener un compuesto de fórmula I o una formulación del mismo que sea eficaz para tratar la afección y pueda tener un puerto de acceso estéril (por ejemplo, el recipiente puede ser una bolsa de solución intravenosa o un vial que tiene un tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica). Al menos un agente activo en la composición es un compuesto de fórmula I. La ficha técnica o prospecto del envase indica que la composición se usa para tratar la afección de elección, tal como cáncer. Además, la ficha técnica o prospecto del envase pueden indicar que el paciente que se va a tratar tiene un trastorno, tal como un trastorno hiperproliferativo, neurodegeneración, hipertrofia cardíaca, dolor, jaquecas o una enfermedad o acontecimiento neurotraumático. En un modo de realización, la ficha técnica o los prospectos del envase indican que la composición que comprende un compuesto de fórmula I se puede usar para tratar un trastorno que resulta de un crecimiento celular anómalo. La ficha técnica o prospecto del envase también pueden indicar que la composición se puede usar para tratar otros trastornos. De forma alternativa, o adicionalmente, el artículo de fabricación puede comprender además un segundo recipiente que comprenda un tampón farmacéuticamente aceptable, tal como agua bacteriostática para inyectables (BWFI), solución salina tamponada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. Puede incluir además otros materiales deseables desde un punto de vista comercial y del usuario, incluyendo otros tampones, diluyentes, filtros, agujas y jeringuillas.
El kit puede comprender además instrucciones para la administración del compuesto de fórmula I y, si está presente, la segunda formulación farmacéutica. Por ejemplo, si el kit comprende una primera composición que comprende un compuesto de fórmula I y una segunda formulación farmacéutica, el kit puede comprender además instrucciones para la administración simultánea, secuencial o separada de las primera y segunda composiciones farmacéuticas a un paciente que lo necesite.
En otro modo de realización, los kits son adecuados para la administración de formas orales sólidas de un compuesto de fórmula I, tales como comprimidos o cápsulas. Dicho kit incluye preferentemente una serie de dosificaciones unitarias. Dichos kits pueden incluir una tarjeta que tiene las dosificaciones orientadas en orden de su uso pretendido. Un ejemplo de dicho kit es un "envase alveolado". Los envases alveolados son bien conocidos en la industria del envasado y se usan ampliamente para envasar formas de dosificación unitaria farmacéuticas. Si se desea, se puede proporcionar una ayuda de recuerdo, por ejemplo, en forma de números, letras u otras marcas o con un encarte de calendario, que designe los días en la pauta de tratamiento en los que se pueden administrar las dosificaciones.
De acuerdo con un modo de realización, un kit puede comprender (a) un primer recipiente con un compuesto de fórmula I contenido en el mismo; y opcionalmente (b) un segundo recipiente con una segunda formulación farmacéutica contenida en el mismo, en el que la segunda formulación farmacéutica comprende un segundo compuesto con actividad antihiperproliferativa. De forma alternativa, o adicionalmente, el kit puede comprender además un tercer recipiente que comprenda un tampón farmacéuticamente aceptable, tal como agua bacteriostática para inyectables (BWFI), solución salina tamponada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. Puede incluir además otros materiales deseables desde un punto de vista comercial y del usuario, incluyendo otros tampones, diluyentes, filtros, agujas y jeringuillas.
En determinados otros modos de realización en los que el kit comprende una composición de fórmula I y un segundo agente terapéutico, el kit puede comprender un recipiente para contener las composiciones separadas, tal como un frasco dividido o un envase de lámina metálica dividido, sin embargo, las composiciones separadas también se pueden contener en un único recipiente no dividido. Típicamente, el kit comprende instrucciones para la administración de los componentes separados. La forma del kit es en particular ventajosa cuando los componentes separados se administran preferentemente en diferentes formas de dosificación (por ejemplo, oral y parenteral), se administran en diferentes intervalos de dosificación o cuando se desea la valoración de los componentes individuales de la combinación por el médico prescriptor.
PREPARACIÓN DE LOS COMPUESTOS DE FÓRMULA I
Los compuestos de fórmula I se pueden sintetizar por vías sintéticas que incluyen procesos análogos a los bien conocidos en las técnicas químicas, en particular, en vista de la descripción contenida en el presente documento, y aquellas para otros heterociclos se describen en: Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, editores Katritzky y Rees, Elsevier, 1997, por ejemplo, volumen 3; Liebigs Annalen der Chemie, (9):1910-16, (1985); Helvetica Chimica Acta, 41:1052-60, (1958); Arzneimittel-Forschung, 40(12):1328-31, (1990), de los que cada uno se incorpora expresamente por referencia. Los materiales de partida están disponibles en general de fuentes comerciales, tales como Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI) o se preparan fácilmente usando procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica (por ejemplo, preparados mediante procedimientos descritos en general en Louis F. Fieser y Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-23, Wiley, N.Y. (1967-2006 ed.), o Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlín, incluyendo los suplementos (también disponibles por medio de la base de datos en línea de Beilstein).
Las transformaciones de química sintética y las metodologías de los grupos protectores (protección y desprotección) útiles en la síntesis de los compuestos de fórmula I y los reactivos e intermedios necesarios son conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, los descritos en R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T. W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3.° Ed., John Wiley y Sons (1999); y L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley y Sons (1995) y ediciones posteriores de las mismas.
Los compuestos de fórmula I se pueden preparar individualmente o como colecciones de compuestos que comprenden al menos 2, por ejemplo, de 5 a 1000 compuestos, o de 10 a 100 compuestos. Las colecciones de compuestos de fórmula I se pueden preparar mediante un enfoque combinatorio de 'división y mezcla' o mediante múltiples síntesis paralelas usando química en fase de solución o bien en fase sólida, mediante procedimientos conocidos por los expertos en la técnica. Por tanto, de acuerdo con otro aspecto de la invención se proporciona una colección de compuestos que comprende al menos 2 compuestos, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Las figuras y ejemplos proporcionan procedimientos ejemplares para preparar los compuestos de fórmula I. Los expertos en la técnica apreciarán que se pueden usar otras vías sintéticas para sintetizar los compuestos de fórmula I. Aunque los materiales de partida y reactivos específicos se representan y analizan en las figuras y ejemplos, otros materiales de partida y reactivos se pueden sustituir fácilmente para proporcionar una variedad de derivados y/o condiciones de reacción. Además, se pueden modificar adicionalmente muchos de los compuestos ejemplares preparados mediante los procedimientos descritos en vista de esta divulgación usando una química convencional bien conocida por los expertos en la técnica.
En la preparación de los compuestos de las fórmulas I, puede ser necesaria la protección de la funcionalidad remota (por ejemplo, amina primaria o secundaria) de los intermedios. La necesidad de dicha protección variará dependiendo de la naturaleza de la funcionalidad remota y las condiciones de los procedimientos de preparación. Los grupos protectores de amino adecuados incluyen acetilo, trifluoroacetilo, t-butoxicarbonilo (BOC), benciloxicarbonilo (CBz) y 9-fluorenilmetilenoxicarbonilo (Fmoc). La necesidad de dicha protección se determina fácilmente por un experto en la técnica. Para una descripción general de los grupos protectores y su uso, véase T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Nueva York, 1991.
Los procedimientos experimentales, intermedios y reactivos útiles para la preparación de los compuestos de fórmula I se pueden encontrar en el n.° de ser. de EE. UU. 13/102720, “PYRIDONE AND AZA-PYRIDONE COMPOUNDS AND METHODS OF USE”, presentada el 6 de mayo de 2011, que se incorpora por referencia en su totalidad.
Las figuras 1-24 describen la síntesis de modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I 101-124, descritos con más detalle en los ejemplos 101-124, y pueden ser útiles para la preparación de otros compuestos de fórmula I.
PROCEDIMIENTOS DE PREPARACIÓN GENERALES
Procedimiento general: Acoplamiento de Suzuki
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La reacción de acoplamiento de tipo Suzuki es útil para formar enlaces carbono-carbono para unir los anillos de los compuestos de fórmula I e intermedios, tal como A-3 (Suzuki (1991) Pure Appl. Chem. 63:419-422; Miyaura y Suzuki (1979) Chem. Reviews 95(7):2457-2483; Suzuki (1999) J. Organometal. Chem. 576:147-168). El acoplamiento de Suzuki es una reacción de acoplamiento cruzado mediado por paladio de un haluro de heteroarilo, tal como B-2 o B-4, con un ácido borónico, tal como A-1 o A-2. Por ejemplo, se puede combinar B-2 con aproximadamente 1,5 equivalentes de 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) y disolver en aproximadamente 3 equivalentes de carbonato de sodio como una solución 1 molar en agua y un volumen igual de acetonitrilo. Se añade una cantidad catalítica, o más, de un reactivo de paladio de baja valencia, tal como dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II). En algunos casos, se usa acetato de potasio en lugar de carbonato de sodio para ajustar el pH de la capa acuosa. A continuación, se calienta la reacción a aproximadamente 140-150 °C a presión en un reactor de microondas (Biotage AB, Uppsala, Suecia) durante de 10 a 30 minutos. El contenido se extrae con acetato de etilo u otro disolvente orgánico. Después de la evaporación de la capa orgánica, el éster de boro A-1 se puede purificar en sílice o mediante HPLC de fase inversa. Los sustituyentes son como se define, o formas protegidas o precursores de los mismos. De forma similar, se puede boronilar el intermedio de bromuro B-4 para dar A-2.
El acoplamiento de Suzuki de B-2 y A-2, o de A-1 y B-4, da el compuesto de fórmula I o el intermedio A-3. Se añade éster (o ácido) borónico (1,5 eq.) A-1 o A-2, y un catalizador de paladio, tal como cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) (0,05 eq.), a una mezcla del intermedio de halo (1 eq.) B -2 o B-4 en acetonitrilo y 1 M de solución acuosa de carbonato de sodio (volumen igual de acetonitrilo). La mezcla de reacción se calienta a aproximadamente 150 °C en un microondas durante aproximadamente 15 min. CL/EM indica cuándo se ha completado la reacción. Se añade agua a la mezcla, y el producto precipitado se filtra y purifica mediante HPLC para proporcionar el producto A-3. Los sustituyentes R1’, R2’, R4’ pueden ser R1, R2, R4 como se define, o formas protegidas o precursores de los mismos.
Se puede usar una variedad de catalizadores de paladio durante la etapa de acoplamiento de Suzuki. Se pueden usar diversos catalizadores de Pd (II) y Pd (0) de baja valencia en la reacción de acoplamiento de Suzuki, incluyendo PdCl2(PPha)2 , Pd(t-Bu)3, PdCl2 dppf CH2Cl2 , Pd(PPh3)4, Pd(OAc)/PPh3, ChPd[(Pet3)]2, Pd(DIPHOS)2 , ChPd(Bipy), [PdCl(Ph2PCH2PPh2)]2 , Cl2Pd[P(o-tol)3]2, Pd2(dba)3/P(o-tol)3, Pd2(dba)/P(furilo)3, ChPd[P(furilo)3]2, ChPd(PMePh2)2 , Cl2Pd[P(4-F-Ph)3]2, Cl2Pd[P(C6F6)3]2, Cl2Pd[P(2-COOH-Ph)(Ph)2]2, ChPd[P(4-COOH-Ph)(Ph)2]2 y los catalizadores encapsulados Pd EnCat™ 30, Pd EnCat™ TPP30 y Pd(II)EnCat™ BINAP30 (documento US 2004/0254066).
Procedimiento general: Reacción de Buchwald
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La reacción de Buchwald es útil para aminar los intermedios de 6-bromo B-1 (Wolf y Buchwald (2004) Org. Synth Coll. Vol. 10:423; Paul et al. (1994) Jour. Amer. Chem. Soc. 116:5969-5970). A una solución del intermedio de halo B-1 en DMF se le añade la amina apropiada R5-NH2 (200 % en mol), CS2CO3 (50 % en mol), Pd2(dba)3 (5 % en mol) y 4,5-b¡s(d¡fen¡lfosfino)-9,9-d¡met¡lxanteno (Xantphos, n.° de registro CAS 161265-03-8, 10 % en mol). La reacción se calienta a aproximadamente 110 °C a presión en un reactor de microondas (Biotage AB, Uppsala, Suecia) durante aproximadamente 30 min. La solución resultante se concentra a vacío para dar B-2. Pueden ser útiles otros catalizadores de paladio y ligandos de fosfina.
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También se pueden preparar los intermedios de N-heteroarilamida B-4 en condiciones de Buchwald con intermedios de amida cíclica (R7), tal como 3,4,6,7,8,9-hexahidropiraz¡no[1,2-a]¡ndol-1(2H)-ona 101e y dibromuros de heteroarilo B-3.
PROCEDIMIENTOS DE SEPARACION
En los procedimientos de preparación de los compuestos de fórmula I puede ser ventajoso separar los productos de reacción entre sí y/o de los materiales de partida. Los productos deseados de cada etapa o serie de etapas se separan y/o purifican al grado de homogeneidad deseado mediante técnicas comunes en la técnica. Típicamente, dichas separaciones implican extracción en múltiples fases, cristalización a partir de un disolvente o mezcla de disolventes, destilación, sublimación o cromatografía. La cromatografía puede implicar cualquier número de procedimientos que incluyan, por ejemplo: procedimientos y aparatos de cromatografía de fase inversa y de fase normal; de exclusión por tamaño; de intercambio iónico; de líquidos de alta, media y baja presión; cromatografía analítica a pequeña escala; de lecho móvil simulado (SMB) y en capa fina o gruesa preparativa, así como técnicas de cromatografía en capa fina a pequeña escala y ultrarrápida.
Otra clase de procedimientos de separación implica el tratamiento de una mezcla con un reactivo seleccionado para unirse a o de otro modo hacer separable un producto deseado, material de partida sin reaccionar, reacción por producto o similares. Dichos reactivos incluyen adsorbentes o absorbentes, tales como carbón activado, tamices moleculares, medios de intercambio iónico o similares. De forma alternativa, los reactivos pueden ser ácidos en el caso de un material básico, bases en el caso de un material ácido, reactivos de unión, tales como anticuerpos, proteínas de unión, quelantes selectivos, tales como éteres de corona, reactivos de extracción iónica líquido/líquido (LIX) o similares. La selección de los procedimientos de separación apropiados depende de la naturaleza de los materiales implicados, tal como el punto de ebullición y el peso molecular en la destilación y sublimación, la presencia o ausencia de grupos funcionales polares en la cromatografía, la estabilidad de los materiales en medios ácidos y básicos en la extracción en múltiples fases y similares.
Las mezclas diaestereómeras se pueden separar en sus diastereómeros individuales en base a sus diferencias fisicoquímicas mediante procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica, tales como mediante cromatografía y/o cristalización fraccionada. Los enantiómeros se pueden separar convirtiendo la mezcla enantiómera en una mezcla diaestereómera mediante reacción con un compuesto ópticamente activo apropiado (por ejemplo, un auxiliar quiral, tal como un alcohol quiral o cloruro de ácido de Mosher), separando los diastereómeros y convirtiendo (por ejemplo, hidrolizando) los diastereómeros individuales en los enantiómeros puros correspondientes. Además, algunos de los compuestos de la presente invención pueden ser atropisómeros (por ejemplo, biarilos sustituidos) y se consideran parte de la presente invención. Los enantiómeros también se pueden separar mediante el uso de una columna de HPLC quiral.
Se puede obtener un único estereoisómero, por ejemplo, un enantiómero, sustancialmente libre de su estereoisómero mediante resolución de la mezcla racémica usando un procedimiento tal como la formación de diastereómeros usando agentes de resolución ópticamente activos (Eliel, E. y Wilen, S. “Stereochemistry of Organic Compounds,” John Wiley y Sons, Inc., Nueva York, 1994; Lochmuller, C. H., (1975) J. Chromatogr., 113(3):283-302). Las mezclas racémicas de compuestos quirales de la invención se pueden separar y aislar mediante cualquier procedimiento adecuado, incluyendo: (1) la formación de sales diastereómeras iónicas con compuestos quirales y la separación mediante cristalización fraccionada u otros procedimientos, (2) la formación de compuestos diastereómeros con reactivos de derivatización quirales, la separación de los diastereoisómeros y la conversión en los estereoisómeros puros y (3) la separación de los estereoisómeros sustancialmente puros o enriquecidos directamente en condiciones quirales. Véase: “Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology,” Irving W. Wainer, Ed., Marcel Dekker, Inc., Nueva York (1993).
En el procedimiento (1), se pueden formar sales diastereómeras mediante reacción de bases quirales enantioméricamente puras, tales como brucina, quinina, efedrina, estricnina, a-metil-p-feniletilamina (anfetamina) y similares, con compuestos asimétricos que tienen funcionalidad ácida, tales como ácido carboxílico y ácido sulfónico.
Se pueden inducir las sales diastereómeras para la separación mediante cristalización fraccionada o cromatografía iónica. Para la separación de los isómeros ópticos de los compuestos amino, la adición de ácidos carboxílicos o sulfónicos quirales, tales como ácido canforsulfónico, ácido tartárico, ácido mandélico o ácido láctico puede dar como resultado la formación de las sales diastereómeras.
De forma alternativa, mediante el procedimiento (2), se hace reaccionar el sustrato que se va a separar con un enantiómero de un compuesto quiral para formar un par diastereómero (E. y Wilen, S. “Stereochemistry of Organic Compounds”, John Wiley y Sons, Inc., 1994, p. 322). Los compuestos diastereómeros se pueden formar haciendo reaccionar compuestos asimétricos con reactivos de derivatización quirales enantioméricamente puros, tales como derivados de mentilo, seguido de la separación de los diastereoisómeros y la hidrólisis para proporcionar el enantiómero puro o enriquecido. Un procedimiento de determinación de la pureza óptica implica preparar ésteres quirales, tales como un éster de mentilo, por ejemplo, cloroformiato de (-) mentilo en presencia de una base, o éster de Mosher, acetato de a-metoxi-a-(trifluorometil)fenilo (Jacob III. J. Org. Chem. (1982) 47:4165), de la mezcla racémica, y analizar el espectro de RMN de 1H para determinar la presencia de los dos enantiómeros o diastereómeros atropoisómeros. Los diastereómeros estables de los compuestos atropisómeros se pueden separar y aislar mediante cromatografía de fase normal e inversa seguido de procedimientos para la separación de las naftilisoquinolinas atropisómeras (documento WO 96/15111). Por el procedimiento (3), se puede separar una mezcla racémica de dos enantiómeros mediante cromatografía usando una fase estacionaria quiral ("Chiral Liquid Chromatography" (1989) WJ Lough, Ed., Chapman and Hall, Nueva York; Okamoto, J. Chromatogr., (1990) 513: 375-378). Se pueden distinguir los enantiómeros enriquecidos o purificados mediante procedimientos usados para distinguir otras moléculas quirales con átomos de carbono asimétrico, tales como la rotación óptica y el dicroísmo circular.
EJEMPLOS
Ejemplo 101a 2,2,2-tricloro-1-(4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-il)etanona 101a
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Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético, un condensador y una entrada de nitrógeno se purgó con nitrógeno y se cargó con 4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol (3,00 g, 24,8 mmol), cloruro de tricloroacetilo (13,5 g, 74,4 mmol) y 1,2-dicloroetano (50 ml). La solución se agitó a 85 °C durante 2 h. Después de ese tiempo, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para dar un rendimiento de un 100 % (6,50 g) de 2,2,2-tricloro-1-(4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-il)etanona 101a como un semisólido negro: RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 11,94 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 2,62 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 2,47 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 1,80 (m, 2H), 1,65 (m, 2H); EM (ESI+) m/z 266,0 (M+H)
Ejemplo 101b 4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-carboxilato de etilo 101b
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Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se purgó con nitrógeno y se cargó con 101a (6,50 g, 24,8 mmol), etóxido de sodio (17,0 mg, 0,25 mmol) y etanol (40 ml). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Después de ese tiempo, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para dar un rendimiento de un 100 % (4,80 g) de 4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-carboxilato de etilo 101b como un sólido marrón: pf 70-72 °C; RMN de 1H (300 MHz, CDCla) ó 9,08 (s, 1H), 6,75 (s, 1H), 4,25 (c, 2H, J = 7,2 Hz), 2,65 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 2,56 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 1,85 (m, 4H), 1,28 (t, 3H, J = 7,2 Hz); EM (ESI+) m/z 194,1 (M+H)
Ejemplo 101c 1-(cianometil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-carboxilato de etilo 101c
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Un matraz de fondo redondo de una única boca de 125 ml equipado con un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se purgó con nitrógeno y se cargó con 101b (5,76 g, 29,8 mmol) y DMF (50 ml). La solución se enfrió a 0 °C usando un baño de hielo. Se añadió NaH (dispersión al 60 % en aceite de vaselina, 1,43 g, 35,8 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Después de ese tiempo, se añadió bromoacetonitrilo (1,43 g, 35,8 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 14 h. Después de ese tiempo, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se dividió entre acetato de etilo (150 ml) y agua (450 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 150 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para dar un rendimiento de un 55 % (3,80 g) de 1-(cianometil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-carboxilato de etilo 101c como un semisólido amarillo: RMN de 1H (300 m Hz , CDCb) ó 6,66 (s, 1H), 5,29 (s, 2H), 4,28 (c, 2H, J = 12 Hz), 2,62 (t, 2H, J = 6,3 Hz), 2,49 (t, 2H, J = 6,3 Hz), 1,92 (m, 2H), 1,75 (m, 2H), 1,33 (t, 3H, J = 12 Hz); EM (ESI+) m/z 233,1 (M+H)
Ejemplo 101 d 1-(2-aminoetil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-carboxilato de etilo 101d
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Un frasco de reactor Parr de 200 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 1,28 g de peso seco), 101c (3,00 g, 12,9 mmol), ácido clorhídrico al 12 % (6,5 ml, 25 mmol), acetato de etilo (60 ml) y etanol (40 ml). El frasco se acopló a un hidrogenador Parr, se evacuó, se cargó con gas hidrógeno a una presión de 50 psi (0,35 MPa) y se agitó durante 6 h. Después de este tiempo, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el frasco. Se añadió el agente de filtro de tierra de diatomeas (CELlTE®, Imerys Minerals California, Inc.) CELITE® 521 (4,0 g) y la mezcla se filtró a través de una almohadilla de CELlTE® 521. La torta de filtro se lavó con etanol (2 x 20 ml) y los filtrados combinados se concentraron hasta sequedad a presión reducida. El residuo se dividió entre acetato de etilo (150 ml) y carbonato de potasio acuoso al 10 % (100 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 75 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a presión reducida. El residuo se trituró con etanol (5 ml) para dar un rendimiento de un 71 % (1,71 g) de 1-(2-aminoetil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-carboxilato de etilo 101d como un sólido blanco: pf 102­ 104 °C; RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 6,61 (s, 1H), 6,22 (a., 2H), 4,15 (m, 4H), 2,77 (m, 2H), 2,59 (t, 2H, J = 6,5 Hz), 2,42 (t, 2H, J = 6,5 Hz), 1,70 (m, 2H), 1,62 (m, 2H), 1,23 (t, 3H, J = 7,0 Hz); EM (APCI+) m/z 237,2 (M+H)
Ejemplo 101e 3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 101e
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Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se purgó con nitrógeno y se cargó con 101d (1,80 g, 7,63 mmol), etóxido de sodio (1,55 g, 22,8 mmol) y etanol (50 ml). La mezcla se agitó a 55 °C durante 5 h. Después de ese tiempo, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se dividió entre acetato de etilo (200 ml) y agua (100 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para dar un rendimiento de un 42 % (605 mg) de 3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 101e como un sólido blanco: pf 207-209 °C; RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 7,41 (s, 1H), 6,36 (s, 1H), 3,84 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 3,42 (m, 2H), 2,51 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 2,42 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 1,76 (m, 2H), 1,65 (m, 2H); (APCI+) m/z 191,3 (M+H)
Ejemplo 101f 3-bromo-5-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)isonicotinaldehído 101f
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Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 101e (300 mg, 1,57 mmol), 3,5-dibromoisonicotinaldehído (2) (517 mg, 1,96 mmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (XantPhos, 120 mg, 0,2 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (180 mg, 0,2 mmol), Cs2CO3 (650 mg, 2 mmol) y 1,4-dioxano (8 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 6 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con DCM/MeOH (de 40:1 a 20:1) para dar 101f como un sólido amarillo pálido (350 mg, 40 %). EM: [M+H]+ 374.
Ejemplo 101g 4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1 -carboxilato de ferc-butilo 101g
Figure imgf000078_0002
1016
A una solución de 5-bromo-2-nitropiridina (30 g, 148 mmol) en DMSO (1 l) se le añadieron K2CO3 (40 g, 296 mmol) y piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (28 g, 148 mmol). La mezcla se agitó a 65 °C durante la noche. Después de enfriar, se vertió en agua (2 l). El sólido precipitado se recogió y se secó a vacío. A continuación, se purificó adicionalmente mediante columna ultrarrápida eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 20:1 y, a continuación, con cloruro de metileno para dar 101g como un sólido amarillo (17 g, 37 %). EM: [M+H]+ 309.
Ejemplo 101h 4-(6-aminopiridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 101h
Figure imgf000078_0003
Un frasco de 500 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1 -carboxilato de ferc-butilo 101g (3,1 g, 10 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 1,0 g) y etanol (100 ml). Se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó durante 16 h a temperatura ambiente. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el frasco. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 101h (2,7 g, 97 %). EM: [M+H]+ 279
Ejemplo 101i 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 101i
Figure imgf000078_0004
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (50 ml), 101h (1,3 g, 4,7 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,24 g, 4,7 mmol) y carbonato de cesio (3,8 g, 12 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 30 minutos, se añadieron XantPhos (272 mg, 0,47 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (430 mg, 0,47 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 3 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se dividió entre acetato de etilo (100 ml) y agua (100 ml) y se filtró. La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 2). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (50 ml) y se secaron sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en columna ultrarrápida eluyendo con cloruro de metileno/metanol 50:1 para dar 101 i (1,3 g, 59 %). EM: [M+H]+ 464.
Ejemplo 101j 5-bromo-1-metil-3-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 101j
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Una mezcla de 101 i (3,6 g, 7,8 mmol) y HCl 4,0 M/dioxano (10 ml) se agitó durante 5 h a temperatura ambiente. A continuación, se concentró a presión reducida. El residuo se basificó con NaOH acuoso 1,0 M y se extrajo con cloruro de metileno. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y se concentraron a presión reducida para dar 101j (2,46 g, 87 %). EM: [M+H]+ 364.
Ejemplo 101k 5-bromo-1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 101k
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101k
Una mezcla de 101j (2,75 g, 7,5 mmol), oxetan-3-ona (1,6 g, 22,7 mmol), NaBHaCN (4,75 g, 22,5 mmol) y cloruro de cinc (3 g, 22,7 mmol) en metanol (125 ml) se agitó durante 5 horas a 50 °C. La mezcla se añadió a agua y se extrajo con cloruro de metileno tres veces. Las capas orgánicas se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna eluyendo con cloruro de metileno/metanol 25:1 para dar 101k (1,92 g, 61 %). EM:
[M+H]+ 420. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) 68,58 (d, J = 2,5, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,94 (d, J = 3, 1H), 7,54 (d, J = 2,5, 1H), 7,39 (dd, J = 3, 1H), 7,25 (d, J = 4, 1H), 4,56 (t, J = 6,5, 2H), 4,46 (t, J = 6,5, 2H), 3,50 (s, 3H), 3,43 (m, 1H), 3,01 (m, 4H), 2,40 (m, 4H).
Ejemplo 101l 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 1011
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 500 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 101k (10,5 g, 25 mmol), Pin2B2 (15,6 g, 2,5 eq., 62 mmol), Pd2(dba)3 (1,14 g, 0,05 eq., 1,25 mmol), X-phos (1,16 g, 0,1 eq., 2,5 mmol), AcOK (7,35 g, 3 eq., 75 mmol) y dioxano (150 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 14 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó mediante PE/eA=3/1 (80 ml) para dar 1011 como un sólido amarillo (10,5 g, 94 %). EM: [M+H]+ 468.
Ejemplo 101m 3-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)isonicotinaldehído 101m
Un tubo sellado se cargó con 101f (200 mg, 0,53 mmol), 1011 (250 mg, 0,53 mmol), PdCb(dppf) (42 mg, 0,05 mmol), K3PO4 (210 mg, 1,0 mmol) y NaoAc (85 mg, 1,0 mmol) en acetonitrilo/H2O (8 ml/1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C en un tubo sellado durante 4 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó en Combi-flash de fase inversa eluyendo con DCM/MeOH 20:1 para dar 101m (135 mg, 40 %). CLEM: [M+H]+ 635.
Ejemplo 101 2-(4-(hidroximetil)-5-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 101
Una mezcla de 101m (135 mg, 0,21 mmol) y NaBH4 (20 mg, 0,5 mmol) en MeOH (5 ml) se agitó a 0 °C durante 0,5 h. La mezcla se desactivó con agua y el residuo se extrajo con EtOAc (5 ml X 2). El extracto de EtOAc combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 101 (55 mg, 40 %). CLEM: [M+H]+ 637. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 8,58 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,86 (d, J = 3,0, 1H), 7,38-7,37 (m, 2H), 7,25-7,23 (m, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,16 (t, J = 3,0, 1H), 4,56-4,40 (m, 6H), 4,19-4,12 (m, 3H), 3,95 (t, J = 3,0, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,43-3,41 (m, 1H), 3,06 (s, 4H), 2,57-2,61 (m, 2H), 2,45-2,48 (m, 6H), 1,78-1,80 (m, 2H), 1,69-1,70 (m, 2H)
Ejemplo 102a 1-metil-3-[5-(4-metil-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-piridin-2-ona 102a
Figure imgf000080_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 1 l equipado con un agitador magnético y un termorregulador se purgó con nitrógeno y se cargó con 5-bromo-1-metil-3-[5-(4-metilpiperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-1H-piridin-2-ona preparada de acuerdo con el documento US 2009/0318448, (10,0 g, 0,027 mol), bis(pinacolato)diboro (8,06 g, 0,032 mol), acetato de potasio (10,4 g, 0,11 mol) y 1,4-dioxano (200 ml). Después de que se hiciera pasar una corriente de nitrógeno a través de la suspensión resultante durante 30 min, se añadió Pd(dppf)Cl2 CH2Cl2 (582 mg, 0,795 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a reflujo durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente, se dividió entre agua (400 ml) y acetato de etilo (600 ml) y se filtró a través de una almohadilla de CELITE®. La fase orgánica se extrajo, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. El residuo se trituró con una mezcla de éter dietílico (50 ml) y hexanos (250 ml) y la suspensión se filtró. La torta de filtro se secó a vacío a temperatura ambiente para dar un rendimiento de un 27 % (3,04 g) de 1-metil-3-[5-(4-metil-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-piridin-2-ona 102a como un sólido marrón.
Ejemplo 102b 3-(1-metil-5-(5-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)isonicotinaldehído 102b
Un tubo sellado se cargó con 3-bromo-5-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)isonicotinaldehído 101f (200 mg, 0,53 mmol), 1-metil-3-(5-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 102a (225 mg, 0,53 mmol), PdCL(dppf) (42 mg, 0,05 mmol), K3PO4 (210 mg, 1 mmol) y NaOAc (85 mg, 1 mmol) en acetonitrilo/H2O (8 ml/1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 4 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó en columna ultrarrápida eluyendo con DCM/MeOH 20:1 para dar 102b (135 mg, 43 %). CLEM: [M+H]+ 593.
Ejemplo 102 2-(4-(hidroximetil)-5-(1-metil-5-(5-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1 (2H)-ona 102
Una mezcla de 3-(1-metil-5-(5-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)isonicotinaldehído 102b (135 mg, 0,22 mmol) y NaBH4 (20 mg, 0,5 mmol) en MeOH (5 ml) se agitó a 0 °C durante 0,5 h. La mezcla se desactivó con agua y el residuo se extrajo con EtOAc (5 ml X 2). El extracto de EtOAc combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 102 (18 mg, 20 %). CLEM: [M+H]+ 595. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 8,59 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,37-7,38 (m, 2H), 7,23-7,25 (m, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,16 (t, J=3,0, 1H), 4,40 (s, 2H), 4,14-4,18 (m, 3H), 3,93-3,95 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,09 (s, 4H), 2,60-2,61 (m, 6H), 2,48-2,34 (m, 5H), 1,78-1,79 (m, 2H), 1,69-1,70 (m, 2H)
Ejemplo 103a 2-bromo-4-cloronicotinaldehído 103a
A una solución de 2-bromo-4-cloropiridina (1,6 g, 8,0 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (40 ml) enfriada a-70 °C se le añadió la solución de diisopropilamida de litio (5,0 ml, 10,0 mmol, 2,0 M) durante un periodo de 5 minutos y se agitó a -70 °C durante otra 1 h. Se introdujo DMF anhidra (1,3 g) durante un periodo de 3 minutos y la mezcla se agitó durante otros 30 minutos. A continuación, se desactivó con NH4Cl saturado (30 ml) y se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 3). La capa orgánica combinada se secó sobre Mg2SÜ4 anhidro, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (20:1) para dar 103a como un sólido amarillo (900 mg, 48 %). RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 10,21 (s, 1H), 8,52 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 5,0 Hz, 1H).
Ejemplo 103b 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 103b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 103a (800 mg, 3,5 mmol), 3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 101e (665 mg, 3.5 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (320 mg, 0,35 mmol), XantPhos (400 mg, 0,7 mmol), Cs2cO3 (2,3 g, 7,0 mmol) y 1,4-dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (80:1) para dar 103b como un sólido amarillo (1,2 g, 50 %). EM: [M+H]+ 330.
Ejemplo 103c 4-(1 -metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1 -M)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)nicotinaldehído 103c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 103b (600 mg, 1,0 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxa-borolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 1011 (468 mg, 1,0 mmol), Pd(dppf)Cl2 (81 mg, 0,1 mmol), K3PO4.3 H2O (678 mg, 3,0 mmol) y tetrahidrofurano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 4 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (40:1) para dar 103c como un sólido amarillo (510 mg, 73 %). EM: [M+H]+ 635.
Ejemplo 103 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 103
A la solución de 103c (500 mg, 0,8 mmol) en metanol (50 ml) se le añadió borohidruro de sodio (91 mg, 2,4 mmol) a 0 °C y se agitó durante otros 30 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (3 ml) y se concentró. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 103 (224 mg, 45 %). CLEM: [M+H]+ 637. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 8,61 (d, J = 3,0, 1H), 8,48 (d, J = 6,0, 1H), 7,92 (d, J = 3,5, 1H), 7,81 (d, J = 3,0, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,38 (d, J = 6,0, 1H), 7,24-7,27 (m, 1H), 6,88 (s, 1H), 6,81 (d, J = 11,5, 1H), 5,01-5,04 (m, 1H), 4,60-4,71 (m, 5H), 4,32-4,49 (m, 2H), 3,83-4,15 (m, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,53-3,59 (m, 1H), 3,13-3,16 (m, 4H), 2,55-2,61 (m, 4H), 2,49-2,52 (m, 4H), 1,78-1,90 (m, 4H)
Ejemplo 104a 4-bromo-2-cloronicotinaldehído 104a
Figure imgf000081_0001
A una solución de 4-bromo-2-cloropiridina (12,0 g, 60,0 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (300 ml) enfriada a -70 °C se le añadió la solución de diisopropilamida de litio (30,0 ml, 60,0 mmol, 2,0 M) durante un periodo de 30 minutos y se agitó durante otras 2 h a -70 °C. Se introdujo DMF anhidra (12,0 g) durante un periodo de 10 minutos y se agitó durante otros 30 minutos. A continuación, se desactivó con NaHCO3 saturado (200 ml), se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). La capa orgánica combinada se secó sobre Mg2SO4 anhidro, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (20:1) para dar 104a como un sólido amarillo (4,0 g, 29 %). RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 10,23 (s, 1H), 8,44 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 5,5 Hz, 1H).
Ejemplo 104b 2-cloro-4-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 104b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 104a (1,1 g, 5,0 mmol), 3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 101e (477 mg, 2,5 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (230 mg, 0,25 mmol), XantPhos (430 mg, 0,75 mmol), Cs2CO3 (1,6 g, 5,0 mmol) y 1,4-dioxano (50 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (40:1) para dar 104b como un sólido amarillo (1,1 g, 80 %). EM: [M+H]+ 330.
Ejemplo 104c 2-(1 -metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1 -M)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-4-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)nicotinaldehído 104c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 104b (658 mg, 1,0 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxa-borolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 1011 (622 mg, 2,0 mmol), Pd (dppf) Cl2 (65 mg, 0 , 08 mmol), K3PO4.3 H2O (361 mg, 1,6 mmol) y tetrahidrofurano (40 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 4 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (40:1) para dar 104c como un sólido amarillo (400 mg, 63 %). EM: [M+H]+ 635.
Ejemplo 104 2-(3-(hidroximetil)-2-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-4-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 104
A la solución de 104c (360 mg, 0,6 mmol) en metanol (50 ml) se le añadió borohidruro de sodio (70 mg, 1,8 mmol) a 0 °C y se agitó durante otros 30 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (2 ml) y se concentró. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 104 (63 mg, 16 %) como un sólido blanquecino. CLEM: [M+H]+ 637. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) 6 8,70 (d, J=3,0, 1H), 8,65 (d, J=5,5, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,85 (d, J=3,0, 1H), 7,60 (d, J=2,5, 1H), 7,36-7,37 (m, 2H), 7,22-7,23 (m, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,12 (t, J=5,5, 1H), 4,55-4,56 (m, 2H), 4,43-4,45 (m, 4H), 4,14-4,16 (m, 3H), 3,93-3,95 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,43-3,44 (m, 1H), 3,05-3,08 (m, 4H), 2,61-2,63 (m, 2H), 2,46-2,47 (m, 2H), 2,36-2,39 (m, 4H), 1,68-1,78 (m, 4H).
Ejemplo 105a W-metoxi-W-metil-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-2-carboxamida 105a
Figure imgf000082_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético se purgó con nitrógeno, se cargó con ácido 4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-2-carboxílico (3,00 g, 16,5 mmol), cloruro de metileno (80 ml) y DMF (60 mg, 0,825 mmol) y se enfrió a 0 °C. A la solución resultante, se le añadió gota a gota cloruro de oxalilo (2,31 g, 18,2 mmol). Después de que esta adición se completara, la reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. Después de este tiempo, la reacción se concentró hasta sequedad a presión reducida. El sólido blanco resultante se disolvió en cloruro de metileno (80 ml) y la solución se enfrió a 0 °C. A continuación, se añadieron trietilamina (5,00 g, 49,5 mmol) y N,O-dimetilhidroxilamina (1,61 g, 16,5 mmol). Después de que la adición se completara, el baño de enfriamiento se retiró y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Después de este tiempo, la mezcla de reacción se dividió entre agua (100 ml) y acetato de etilo (200 ml). Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (100 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (100 ml), seguido de salmuera (100 ml), y se secaron sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida para dar un rendimiento de un 88 % de 105a (3,29 g) como un sólido blanco: pf 36-37 °C; RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 6 7,79 (s, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,34 (s, 3H), 2,78 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 2,62 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 1,82 (m, 4H); EM (APCI+) m/z 226,3 (M+H)
Ejemplo 105b 3-cloro-1-(4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-2-il)propan-1-ona 105b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se purgó con nitrógeno y se cargó con 105a (2,70 g, 12,0 mmol) y THF anhidro (45 ml) y la solución se enfrió a -10 °C con baño de acetona/hielo. Se añadió gota a gota una solución 1,0 M de bromuro de vinilmagnesio en THF (13,2 ml, 13,2 mmol) y la mezcla de reacción resultante se agitó a 0 °C durante 4 h. Después de este tiempo, la mezcla de reacción se dividió entre acetato de etilo (100 ml) y ácido clorhídrico acuoso 2 M (40 ml). Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (40 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (100 ml), seguido de salmuera (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron a presión reducida. El residuo resultante se disolvió en cloruro de metileno (30 ml) y se añadió una solución 2 M de cloruro de hidrógeno en éter dietílico (15 ml). Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 h, los disolventes se retiraron a presión reducida. La purificación del residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida dio un rendimiento de un 29 % (804 mg) de 105b como un sólido blanquecino: pf 57-58 °C; RMN de 1H (500 MHz, CDCb) ó 7,41 (s, 1H), 3,89 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 3,30 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 2,81 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 2,64 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 1,83 (m, 4H); EM (ECI+) m/z 229,1 (M+H)
Ejemplo 105c 5,6,7,8-tetrahidro-1H-benzo[d]ciclopenta[d]tiofen-3(2H)-ona 105c
Figure imgf000083_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 105b (800 mg, 3,51 mmol) y ácido sulfúrico al 98 % (8 ml). Después de agitar a 95 °C durante 16 h, la mezcla de reacción se vertió en hielo (50 g) y la suspensión resultante se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida para dar 105c en un rendimiento de un 47 % (320 mg) como un sólido blanquecino: pf 75-76 °C; RMN de 1H (500 MHz, CDCls) ó 2,89 (m, 2H), 2,87-2,83 (m, 4H), 2,56 (t, 2H, J = 6,5 Hz), 1,84 (m, 4H)
Ejemplo 105d Oxima de 5,6,7,8-tetrahidro-1H-benzo[d]ciclopenta[d]tiofen-3(2H)-ona 105d
Figure imgf000083_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se cargó con clorhidrato de hidroxilamina (573 mg, 8,25 mmol) y metanol (10 ml). La mezcla se enfrió a 0 °C usando un baño de hielo. Se añadió acetato de sodio (677 mg, 8,25 mmol). La mezcla se agitó a 0 °C durante 30 min. Después de este tiempo, se añadió 105c (319 mg, 1,65 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Después de este tiempo, la mezcla se concentró y el residuo resultante se trituró con agua (10 ml). El sólido resultante se recogió y se secó en un horno de vacío a 45 °C para dar un rendimiento de un 84 % (287 mg) de 105d como un sólido blanquecino: pf 173-174 °C; RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 10,38 (s, 1H), 2,97 (m, 2H), 2,77-2,73 (m, 4H), 2,47 (m, 2H), 1,75 (m, 4H); EM (APCI+) m/z 208,3 (M+H)
Ejemplo 105e 3,4,5,6,7,8-hexahidrobenzotieno[2,3-c]piridin-1(2H)-ona 105e
Figure imgf000083_0003
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un condensador de reflujo, un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se cargó con 105d (285 mg, 1,38 mmol) y ácido fosfórico (15 g). Después de agitar a 80 °C durante 16 h, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió agua (30 ml). La mezcla resultante se agitó durante 30 min y se filtró. La torta de filtro se lavó con agua (20 ml) y se secó en un horno de vacío a 45 °C para dar un rendimiento de un 75 % (215 mg) de 105e como un sólido blanquecino: pf 203 °C dec; RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 5,62 (s, 1H), 3,59 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 2,81 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 2,72 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 2,48 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 1,84 (m, 4H). EM (APCI+) m/z 208,3 (M+H)
Ejemplo 105f 3-bromo-5-{6-oxo-8-tia-5-azatriciclo[7.4.0.02,7]trideca-1(9),2(7)-dien-5-il}piridin-4-carbaldehído 105f
Figure imgf000084_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (15 ml), 3,5-dibromoisonicotinaldehído (400 mg, 1,5 mmol), 8-tia-5-azatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7)-dien-6-ona 105e (146 mg, 0,76 mmol) y carbonato de cesio (176 mg, 1,5 mmol). Se añadieron Xantphos (40 mg, 0,08 mmol) y Pd3(dba)3 (70 mg, 0,08 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 5 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se evaporó en columna ultrarrápida eluyendo con DCM:MeOH (20:1) para dar 105f (200 mg, 70 %). EM: [M+H]+ 377.
Ejemplo 105g 3-[1-metil-5-({5-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-5-{6-oxo-8-tia-5-azatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7)-dien-5-il}piridin-4-carbaldehído 1o5g
Figure imgf000084_0002
Un tubo sellado se cargó con 105f (200 mg, 0,53 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il) piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 1011 (240 mg, 0,51 mmol), PdCh(dppf) (42 mg, 0,05 mmol), K3PO4 (230 mg, 1 mmol) y NaOAc (80 mg, 1 mmol) en CH3CN (5 ml) y H2O (1,5 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con 10:1 de DCM/MeOH para dar 105g en un rendimiento de un 40 % (138 mg) como un sólido amarillo pálido. Em : [M+H]+ 638.
Ejemplo 105 4-hidroximetil-3-[1-metil-5-({5-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-5-(6-oxo-8-tia-5-azatriciclo-[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7)-dien-5-il}piridina 105
A una solución de 3-[1-metil-5-({5-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-5-{6-oxo-8-tia-5-azatriciclo[7.4.0.027]-trideca-1(9),2(7)-dien-5-il}piridin-4-carbaldehído 105g (130 mg, 0,20 mmol) en metanol (5 ml) a 0 °C se le añadió borohidruro de sodio (22 mg, 0,6 mmol) y se agitó durante 30 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (1,0 ml) y se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 105 (90 mg, 65 %). CLEM: [M+H]+ :654. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) 68,58 (d, J=2,0, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,36 (m, 2H), 7,24-7,22 (m, 1H), 5,14 (t, J=3,0, 1H), 4,56-4,42 (m, 6H), 4,08-3,90 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 3,43 (d, J=3,5,1H), 3,07 (s, 4H), 2,89-2,79 (m, 4H), 2,55-2,53 (m, 2H), 2,39-2,37 (m, 4H), 1,80-1,81 (m, 4H)
Ejemplo 106a 3,3-dimetilciclopentanona 106a
Figure imgf000084_0003
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 1 l equipado con un agitador magnético, un embudo de adición y una entrada de nitrógeno se purgó con nitrógeno y se cargó con éter (200 ml) y yoduro de cobre (I) (54,46 g, 0,286 mol). La mezcla se enfrió a 0 °C, se añadió gota a gota metillitio (1,6 M en éter, 357,5 ml, 0,572 mol) a la mezcla de reacción durante 1,5 h y se agitó a 0 °C durante 2 h adicionales. Después de este tiempo, se añadió gota a gota una solución de 3-metilciclo-pent-2-enona (25 g, 0,260 mol) en éter (150 ml) durante 1,5 h. A continuación, se agitó la mezcla de reacción a 0 °C durante 2 h y se vertió en sulfato de sodio decahidratado (300 g). La mezcla resultante se agitó durante 30 min. Después de este tiempo, la mezcla se filtró y se lavó con éter (1000 ml). El filtrado se concentró y se destiló a presión reducida para dar un rendimiento de un 70 % (20,5 g) de 3,3-dimetilciclo-pentanona 106a como un líquido incoloro: pe 50-55 °C (a 10 mmHg); RMN de 1H (300 MHz, CDCla) ó 2,31 (t, 2H, J = 7,8 Hz), 2,05 (s, 2H), 1,79 (t, 2H, J = 7,8 Hz); EM (ESI+) m/z 113,3 (M+H)
Ejemplo 106b 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-ciclopenta[ó]tiofen-2-carboxilato de etilo 106b
Figure imgf000085_0001
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 500 ml equipado con un agitador magnético, un condensador de reflujo, un embudo de adición y una entrada de nitrógeno se purgó con nitrógeno y se cargó con DMF (9,49 g, 0,100 mol) y cloruro de metileno (100 ml). La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota oxicloruro de fósforo (14,1 g, 0,920 mol) a la reacción durante 30 min. Una vez que esta adiciónse completó, la reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. Después de este tiempo, se añadió gota a gota una solución de 106a (11,2 g, 0,100 mol) en cloruro de metileno (100 ml) durante 1 h. A continuación, se agitó la reacción a reflujo durante 18 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en una mezcla de hielo picado (400 ml) y acetato de sodio (100 g, 1,22 mol). La mezcla resultante se agitó durante 45 min. Después de este tiempo, la capa acuosa se separó y se extrajo con cloruro de metileno (2 x 500 ml). A continuación, las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (2 x 200 ml), seguido de salmuera (200 ml), y se secaron sobre sulfato de sodio. A continuación, el agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró para dar el producto bruto 2-cloro-4,4-dimetilciclopent-1-enocarbaldehído que se dispuso en un matraz de fondo redondo de tres bocas de 500 ml equipado con un agitador magnético, un condensador de reflujo y una entrada de nitrógeno. A continuación, se añadieron cloruro de metileno (200 ml), 2-mercaptoacetato de etilo (11,0 g, 0,092 mol) y trietilamina (30 g, 0,207 mol). A continuación, se agitó la mezcla de reacción a reflujo durante 6 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró hasta obtener un residuo naranja denso. Se añadieron etanol (200 ml) y trietilamina (30,0 g, 0,207 mol) y la reacción se calentó a reflujo durante 12 h. A continuación, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida y el residuo resultante se diluyó con éter (600 ml). La mezcla resultante se lavó con ácido clorhídrico 1 M (150 ml), salmuera (100 ml), se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida para dar 106b en un rendimiento de un 34 % (7,70 g) como un líquido incoloro: RMN de 1H (300 MHz, CDCla) ó 7,48 (s, 1H), 4,33 (c, 2H, J = 7,2 Hz), 2,72 (s, 2H), 2,56 (s, 2H), 1,38 (t, 3H, J = 1,8 Hz), 1,17 (s, 6H); EM (ESI+) m/z 225,1
Ejemplo 106c Ácido 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-ciclopenta[ó]tiofen-2-carboxílico 106c
Figure imgf000085_0002
En un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo, se disolvió 106b (4,00 g, 17,8 mmol) en etanol (50 ml). Se añadieron THF (50 ml), agua (50 ml) e hidróxido de litio (854 mg, 35,6 mmol) y la mezcla se agitó a 60 °C durante 4 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se acidificó con ácido clorhídrico 2 M hasta pH 1,5 y, a continuación, se extrajo con acetato de etilo (2 x 200 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua (2 x 100 ml), seguido de salmuera (100 ml), y se secaron sobre sulfato de sodio. A continuación, el agente de secado se separó mediante filtración. Después de evaporar el filtrado resultante, se obtuvo 106c en un rendimiento de un 91 % (3,2 g) como un sólido blanco: pf 170-172 °C; RMN de 1H (300 MHz, CDCla) ó 12,77 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 2,71 (s, 2H), 2,53 (s, 2H), 1,20 (s, 6H); EM (ESI-) m/z 195,0
Ejemplo 106d Ácido 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-ciclopenta[ó]tiofen-2-carboxílico 106d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético, un condensador de reflujo y un burbujeador dispuesto en el condensador se cargó con 106c (2,30 g, 11,6 mmol), tolueno (25 ml), cloruro de tionilo (4,09 g, 34,9 mmol) y DMF (1 gota). La mezcla se calentó a reflujo durante 1 h y, a continuación, se evaporó a presión reducida en un evaporador rotativo a 45 °C. El cloruro de ácido resultante se diluyó con cloruro de metileno (20 ml). En un matraz de fondo redondo de tres bocas de 250 ml separado equipado con un agitador magnético se disolvieron clorhidrato de W,0-dimetilhidroxilamina (2,26 g, 23,2 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (2,97 g, 23,0 mmol) en cloruro de metileno anhidro (20 ml) en nitrógeno y la solución se enfrió a 0 °C en un baño de hielo/agua. Se añadió la solución del cloruro de ácido y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla de reacción se extrajo con agua (100 ml), ácido cítrico acuoso al 10 % (50 ml) y una mezcla 1:1 de bicarbonato de sodio acuoso saturado y agua (100 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó a presión reducida en un evaporador rotativo para dar un rendimiento de un 93 % (2,60 g) de 106d como un sólido amarillo claro: RMN de 1H (300 MHz, CDCla) 67,66 (s, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,35 (s, 3H), 2,74 (s, 2H), 2,58 (s, 2H), 1,23 (s, 6H)
Ejemplo 106e 3-cloro-1-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-ciclopenta[d]tiofen-2-il)propan-1-ona 106e
Figure imgf000086_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se purgó con nitrógeno y se cargó con 106d (2,41 g, 10,0 mmol) y THF anhidro (20 ml). La solución se enfrió a -70 °C y se añadió bromuro de vinilmagnesio 1 M en THF (11 ml, 11,0 mmol) con la temperatura de reacción mantenida por debajo de -60 °C. La mezcla de reacción se agitó a de -13 a -7 °C durante 2 h y, a continuación, se calentó a temperatura ambiente durante 30 min. La reacción se enfrió de nuevo a -70 °C y se añadió una solución 2 M de cloruro de hidrógeno en éter (22,5 ml, 45 mmol). A continuación, la reacción se almacenó en un congelador a -10 °C durante la noche. Después de este tiempo, la mezcla se evaporó a presión reducida en un evaporador rotativo y el residuo resultante se dividió entre agua (100 ml) y éter (100 ml). El extracto de éter se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó a presión reducida en un evaporador rotativo para dar 106e bruto (2,86 g, 118 %) como un aceite marrón con aproximadamente un 75 % de pureza (mediante RMN): RMN de 1H (300 MHz, CDCla) 67,45 (s, 1H), 3,89 (t, 2H, J = 6,9 Hz), 3,30 (t, 2H, J = 6,9 Hz), 2,75 (s, 2H), 2,59 (s, 2H), 1,24 (s, 6H)
Ejemplo 106f 6,6-dimetil-1,2,6,7-tetrahidrodiciclopenta[d,d]tiofen-3(5H)-ona 106f
Figure imgf000086_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 106e bruto (2,86 g, 10,0 mmol, suponiendo un rendimiento cuantitativo) y ácido sulfúrico al 98 %. La mezcla de reacción se calentó en un baño de aceite a 90 °C durante la noche. La mezcla de reacción se dispuso en un baño de hielo/acetona y se añadió una solución fría (5 °C) de hidrogenofosfato de dipotasio (105 g, 0,603 mol) en agua (300 ml) en una porción. La mezcla resultante se agitó con acetato de etilo (300 ml) y se filtró. La torta de filtro se lavó con acetato de etilo (100 ml). La capa de acetato de etilo del filtrado se separó, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó a presión reducida en un evaporador rotativo, el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (sílice, hexanos/acetato de etilo 80:20) para dar 106f en un rendimiento de un 37 % en dos etapas (683 mg) como un sólido marrón amorfo: pf 60-62 °C; RMN de 1H (500 MHz, CDCb) 62,92-2,87 (m, 4H), 2,79 (s, 2H), 2,53 (s, 2H), 1,26 (s, 6H); CLEM (ESI+) m/z 207,0 (M+H)
Ejemplo 106g 6,6-dimetil-1,2,6,7-tetrahidrodiciclopenta[d,d]tiofen-3(5H)-ona 106g
Figure imgf000086_0003
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se cargó con clorhidrato de hidroxilamina (688 mg, 9,90 mmol), acetato de sodio (812 mg, 9,90 mmol) y metanol (10 ml) y la mezcla a temperatura ambiente durante 30 min. Después de este tiempo, se añadió gota a gota una solución de 106f (680 mg, 3,30 mmol) a temperatura ambiente y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 h en atmósfera de nitrógeno. Puesto que la reacción no se completó, se añadieron clorhidrato de hidroxilamina (1,15 g, 16,5 mmol) y acetato de sodio (1,35 g, 16,5 mmol) y la agitación se continuó a temperatura ambiente durante 58 h. Después de este tiempo, la mezcla se diluyó con cloruro de metileno (150 ml) y agua (100 ml) y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con salmuera (50 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró para dar 106g bruto en rendimiento cuantitativo (730 mg) como un semisólido amarillo que se usó en la siguiente etapa sin purificación: pf 122-124 °C; RMN de 1H para el isómero principal (500 MHz, CDCls) ó 3,13-3,11 (m, 2H), 2,85-2,83 (m, 2H), 2,77 (s, 2H), 2,49 (s, 2H), 1,24 (s, 6H); EM (ESI+) m/z 222,0 (M+H)
Ejemplo 106h 6,6-dimetil-3,4,6,7-tetrahidro-5H-c¡dopenta[4,5]t¡eno[2,3-c]piridin-1(2H)-ona 106h
Figure imgf000087_0001
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 100 ml equipado con un condensador de reflujo, un agitador mecánico y una entrada de nitrógeno se cargó con 106g (700 mg, 3,16 mmol) y ácido fosfórico (25 g). La mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante 13 h en atmósfera de nitrógeno. Después de este tiempo, la mezcla se enfrió a 0 °C y se añadió cuidadosamente gota a gota agua (50 ml) manteniendo la temperatura interna entre 10-45 °C. La mezcla se diluyó con cloruro de metileno/metanol 90:10 (100 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con cloruro de metileno/metanol 90:10 (50 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 ml), salmuera (150 ml) y se secaron sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (sílice, cloruro de metileno/metanol 95:5) para dar 6,6-dimetil-3,4,6,7-tetrahidro-5H-ddopenta[4,5]t¡eno[2,3-c]piridin-1(2H)-ona 106h en un rendimiento de un 90 % (630 mg) como un sólido blanquecino amorfo: pf 205-207 °C; RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 5,51 (s, 1H), 3,60-3,56 (m, 2H), 2,76-2,73 (m, 4H), 2,49 (s, 2H), 1,26 (s, 6H); EM (ESI+) m/z 222,0 (M+H)
Ejemplo 106i 3-bromo-5-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-4-carbaldehído 106i
Figure imgf000087_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (15 ml), 3,5-dibromoisonicotinaldehído (400 mg, 1,5 mmol), 4,4-dimetil-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-9-ona (106h) (170 mg, 0,76 mmol) y carbonato de cesio (176 mg, 1,5 mmol). Se añadieron Xantphos (40 mg, 0,08 mmol) y Pd2(dba)3 (70 mg, 0,08 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 5 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se evaporó en columna ultrarrápida eluyendo con DCM:MeOH (20:1) para dar 106i (200 mg, 65 %). EM: [M+H]+ 405.
Ejemplo 106j 3-[1-metil-5-({5-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-5-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-4-carbaldehído 106j
Figure imgf000088_0001
Un tubo sellado se cargó con 106i (200 mg, 0,50 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il) p¡peraz¡n-1-¡l)p¡rid¡n-2-¡lam¡no)-5-(4,4,5,5-tetramet¡l-1,3,2-d¡oxaborolan-2-¡l)pir¡d¡n-2(1H)-ona 1011 (240 mg, 0,51 mmol), PdCh(dppf) (42 mg, 0,05 mmol), K3PO4 (230 mg, 1 mmol) y NaOAc (80 mg, 1 mmol) en CH3CN (5 ml) y H2O (1,5 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con DCM/MeOH 10:1 para dar 106j (130 mg, 40 %) como un sólido amarillo pálido. EM: [M+H]+ 666.
Ejemplo 106 4-h¡drox¡met¡l-3-[1-met¡l-5-({5-[4-(oxetan-3-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l]p¡rid¡n-2-¡l}am¡no)-6-oxo-1,6-d¡h¡drop¡r¡d¡n-3-¡l]-5-{4,4-d¡met¡l-9-oxo-7-t¡a-10-azatr¡c¡clo[6.4.0.026]dodeca-1(8), 2(6)-dien-10-il}p¡r¡d¡n-4-carbaldehído 106
A una solución de 106j (130 mg, 0,20 mmol) en metanol (5 ml) a 0 °C se le añadió borohidruro de sodio (22 mg, 0,6 mmol) y se agitó durante 30 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (1,0 ml) y se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 106 (60 mg, 45 %) como un sólido amarillo. CLEM: [M+H]+: 668. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 8,58 (d, J=2,0, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,87 (d, J=2,5, 1H), 7,38-7,36 (m, 2H), 7,24-7,22 (m, 1H), 5,15 (t, J=5,0, 1H), 4,56-4,42 (m, 6H), 4,08-4,04 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 3,43-3,42 (m, 1H), 3,07-2,94 (m, 6H), 2,55-2,53 (m, 4H), 2,39-2,38 (m, 4H), 1,23 (s, 6H)
Ejemplo 107a (E)-3-(2-cloro-4,4-dimetilc¡clopent-1-en¡l)acr¡lato de etilo 107a
Figure imgf000088_0002
Los siguientes dos procedimientos se adaptaron de Organic Preparations and Procedures Int., 29(4):471-498. Un matraz de fondo redondo de una única boca de 500 ml equipado con un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se cargó con 2-cloro-4,4-dimetilc¡clopent-1-enocarbaldehído (38 g, 240 mmol) en benceno (240 ml). A la solución se le añadió etoxicarbonilmetilentrifenilfosforano (84 g, 240 mmol). La mezcla se agitó durante 14 h. Después de ese tiempo, el disolvente se evaporó y el residuo se trituró con hexanos (2 l) para extraer el producto de los subproductos de PPh3. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna usando un gradiente de hexano al 100 % - hexano/acetato de etilo 1:1 para dar un rendimiento de un 37 % (20 g) de (E)-3-(2-cloro-4,4-dimet¡lc¡clopent-1-enil)acr¡lato de etilo 107a.
Ejemplo 107b 5,5-dimetil-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[b]p¡rrol-2-carbox¡latode etilo 107b
Figure imgf000088_0003
107b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se cargó con 107a (17 g, 74 mmol) en DMSO (100 ml). A la solución se le añadió acida de sodio (9,6 g, 150 mmol). A continuación, la mezcla se calentó a 75 °C y se agitó durante 8 h. Después de enfriar a ta (temperatura ambiente), se añadieron H2O (100 ml) y CH2CI2 (200 ml) y la capa orgánica se separó. La capa acuosa se extrajo con CH2CI2 (50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna usando un gradiente de hexano al 100 % - hexano/acetato de etilo 1:1 para dar un rendimiento de un 37 % (5,7 g) de 107b.
Ejemplo 107c 1-(cianometil)-5,5-dimetil-1,4,5,6-tetrahidrociclo-penta[b]pirrol-2-carboxilato de etilo 107c
Figure imgf000089_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se cargó con 107b (6,2 g, 30 mmol) en DMF (57 ml). A la solución se le añadió NaH (dispersión al 80 % en aceite de vaselina, 1,26 g, 42,1 mmol). La mezcla resultante se agitó a ta durante 90 min. Después de ese tiempo, se añadió bromoacetonitrilo (2,94 ml, 42 mmol). La mezcla se agitó durante 14 h. Después de ese tiempo, se añadieron agua (100 ml) y acetato de etilo (200 ml) y la capa orgánica se separó. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 X 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para dar un rendimiento de un 95 % (7 g) de 107c.
Ejemplo 107d Clorhidrato de 1-(2-aminoetil)-5,5-dimetil-1,4,5,6-tetrahidrociclo-penta[b]pirrol-2-carboxilato de etilo 107d
Figure imgf000089_0002
1Q7d
Un frasco de reactor Parr de 500 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 2,0 g de peso seco), 107c (4,5 g, 18 mmol), ácido clorhídrico al 12 % (9,2 ml, 37 mmol), acetato de etilo (80 ml) y etanol (52 ml). El frasco se acopló a un hidrogenador Parr, se evacuó, se cargó con gas hidrógeno a una presión de 50 psi (0,35 MPa) y se agitó durante 6 h. Después de este tiempo, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el frasco. Se añadió CELITE® 521 (10,0 g) y la mezcla se filtró a través de una almohadilla de CELITE® 521. La torta de filtro se lavó con etanol (2 x 50 ml) y los filtrados combinados se concentraron hasta sequedad a presión reducida. El residuo bruto clorhidrato de 1-(2-aminoetil)-5,5-dimetil-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[b]pirrol-2-carboxilato de etilo 107d se llevó a la siguiente etapa sin purificación adicional.
Ejemplo 107e 4,4-dimetil-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 107e
Figure imgf000089_0003
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se purgó con nitrógeno y se cargó con clorhidrato de 1-(2-aminoetil)-5,5-dimetil-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[b]pirrol-2-carboxilato 107d bruto (~18 mmol), etóxido de sodio (6,2 g, 92 mmol) y etanol (120 ml). La mezcla se agitó a 55 °C durante la noche. Después de ese tiempo, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se dividió entre acetato de etilo (200 ml) y agua (100 ml). La solución se filtró. El sólido se lavó con acetato de etilo (15 ml) para dar 850 mg del producto deseado 107e. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a presión reducida hasta prácticamente sequedad. La solución se filtró y el sólido (1,44 g) se lavó con acetato de etilo (15 ml). Los sólidos combinados se secaron a vacío para dar un rendimiento de un 61 % (2,3 g) de 107e.
Ejemplo 107f 3-bromo-5-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-carbaldehído 107f
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (15 ml), 3,5-dibromoisonicotinaldehído (400 mg, 1,5 mmol), 107e (155 mg, 0,76 mmol) y carbonato de cesio (176 mg, 1,5 mmol). Se añadieron Xantphos (40 mg, 0,08 mmol) y Pd2(dba)3 (70 mg, 0,08 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 5 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en columna ultrarrápida eluyendo con DCM:MeOH (20:1) para dar 107f (200 mg, 70 %). EM: [M+H]+ 388.
Ejemplo 107g 5-[1-metil-5-({5-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-3-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]-dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-carbaldehído 107g
Un tubo sellado se cargó con 107f (200 mg, 0,51 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 101l (240 mg, 0,51 mmol), Pdch(dppf) (42 mg, 0,05 mmol), K3PO4 (230 mg, 1 mmol) y NaOAc (80 mg, 1 mmol) en CH3CN (5 ml) y H2O (1,5 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con 10:1 de DCM/MeOH para dar 107g en un rendimiento de un 35 % (120 mg) como un sólido marrón. EM: [M+H]+ 649.
Ejemplo 107 10-[4-[1-metil-5-({5-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-4-(hidroximetil)piridin-3-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 107
A una solución de 107g (120 mg, 0,18 mmol) en metanol (5 ml) a 0 °C se le añadió borohidruro de sodio (22 mg, 0,6 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (1,0 ml) y se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 107 (72 mg, 60 %). CLEM: [M+H]+ :651. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) ó 8,65 (s,1H), 8,59 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,86 (d, J=1,5, 1H), 7,36 (m, 2H), 7,22 (d, J=2,4, 2H), 6,52 (s, 1H), 5,16 (t, J=3,0, 1H), 4,56-4,44 (m, 6H), 4,21-4,12 (m, 3H), 3,92 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,43-3,42 (m, 1H), 3,06 (s, 4H), 2,57-2,38 (m, 8H), 1,21 (s, 6H)
Ejemplo 108a 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 108a
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 2-bromo-4-cloronicotinaldehído 103a (3,0 g, 13,6 mmol), 4,4-dimetil-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 107e (1,84 g, 9,0 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (826 mg, 0,9 mmol), XantPhos (1,04 mg, 1,8 mmol), Cs2CO3 (5,8 g, 18,0 mmol) y 1,4-dioxano (40 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se recristalizó a partir de acetato de etilo para dar 108a como un sólido amarillo (730 mg, pureza: 99 %; rendimiento: 31,7 %). EM:
[M+H]+ 344,0.
Ejemplo 108b 4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]-dodeca-2(6),7-dien-10-il}nicotinaldehído 108b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diaza-triciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 108a (350 mg, 1,02 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 1011 (476 mg, 1,02 mmol), Pd(dppf)Cl2 (83 mg, 0,10 mmol), K3PO4 (526 mg, 3,06 mmol) y tetrahidrofurano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 4 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (40:1) para dar 108b como un sólido blanco (400 mg, 61 %). EM: [M+H]+ 649,4.
Ejemplo 108 2-(3-(hidroximetil)-4-(1 -metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1 -il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-4,4-dimetil-1, 10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 108
A una solución de 4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo-[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}nicotinaldehído 108b (400 mg, 0,62 mmol) en metanol (30 ml) a 0 °C se le añadió borohidruro de sodio (70 mg, 1,86 mmol) y se agitó durante 30 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (1,0 ml) y se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 108 (170 mg, 42 %). CLEM: [M+H]+ 651,4. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) ó 8,63 (d, J = 2,0, 1H), 8,48 (d, J = 5,0, 1H), 7,92 (d, J = 2,5, 1H), 7,82 (d, J = 2,5, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,36 (d, J = 5,0, 1H), 7,27-7,25 (m, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,81 (d, J = 9,5, 1H), 5,05 (t, J = 6,5, 1H), 4,72-4,64 (m, 5H), 4,51-4,48 (m, 1H), 4,34­ 4,32 (m,1H), 4,15 (d, J = 4,5, 2H), 3,87-3,84 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,59-3,54 (m, 1H), 3,16-3,14 (m, 4H), 2,58-2,50 (m, 8H), 1,27 (s, 6H)
Ejemplo 109a 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 109a
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 2-bromo-4-cloronicotinaldehído 103a (660 mg, 3,0 mmol), 4,4-dimetil-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-9-ona 106h (665 mg, 3,0 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (270 mg, 0,3 mmol), XantPhos (340 mg, 0,6 mmol), Cs2CO3 (2,0 g, 6,0 mmol) y 1,4-dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano para dar 109a como un sólido amarillo (105 mg, 14 %). EM: [M+H]+ 361.
Ejemplo 109b 4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]-dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}nicotinaldehído 109b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 109a (75 mg, 0,2 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 1011 (94 mg, 0,2 mmol), Pd(dppf)Cl2 (17 mg, 0,02 mmol), K3PO4.3 H2O (140 mg, 0,6 mmol) y tetrahidrofurano (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 4 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (40:1) para 109b como un sólido amarillo (60 mg, 47 %). EM: [M+H]+ 666.
Ejemplo 109 2-(3-(hidroximetil)-4-(1 -metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1 -il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-4,4-dimetil-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-9-ona 109
A una solución de 109b (60 mg, 0,1 mmol) en metanol (5 ml) a 0 °C se le añadió borohidruro de sodio (11 mg, 0,3 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (0,3 ml) y se concentró. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 109 (14 mg, 24 %) como un sólido marrón. CLEM: [M+H]+ 668. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) 68,60 (d, J=2,5, 1H), 8,48 (d, J=5,0, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,85 (d, J=3,0, 1H), 7,44 (d, J=2,0, 1H), 7,34-7,38 (m, 2H), 7,23 (d, J=9,0, 1H), 4,94 (t, J=5,0, 1H), 4,55 (t, J=7,0, 2H), 4,39-4,46 (m, 4H), 4,14-4,19 (m, 1H), 3,79-3,83 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,42-3,44 (m, 1H), 3,00-3,07 (m, 5H), 2,85­ 2,90 (m, 1H), 2,76 (s, 2H), 2,52-2,59 (m, 2H), 2,36-2,39 (m, 4H), 1,21 (d, J=6,5, 6H)
Ejemplo 110a 1-metil-3-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 110a
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona (0,45 g, 1,08 mmol), (PinB)2 (1,37 g, 5,4 mmol), Pd2(dba)3 (49 mg, 0,054 mmol), X-Phos (52 mg 0,11 mmol), KOAc (318 mg, 3,24 mmol), 1, 4-dioxano 20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla de reacción se calentó a 60 °C durante 15 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 110a bruto, que se usó directamente la siguiente reacción. EM: [M+H]+ 426.
Ejemplo 110b 4-(1-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 110b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino-[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 103b (377 mg, 1,15 mmol), 110a (320 mg, 0,78 mmol), Pd(dppf)Cl2 (130 mg, 0,16 mmol), K3PO4.3 H2O (52,9 mg, 0,23 mmol) y tetrahidrofurano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante la noche, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (40:1) para dar 110b como un sólido amarillo (351 mg, 76 %). EM: [M+H]+ 593.
Ejemplo 110 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 110
A la solución de 110b (60 mg, 0,1 mmol) en metanol (50 ml) se le añadió borohidruro de sodio (11,5 mg, 0,3 mmol) a 0 °C y la mezcla se agitó durante otros 30 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (3 ml) y se concentró. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 110 (26,2 mg, 49 %). CLEM: [M+H]+ 595. RMN de 1H (500 MHz, CDCI3) 58,69 (d, J = 1,5, 1H), 8,46 (d, J = 5,0, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,41-7,37 (m, 1H), 7,34 (d, J = 1,5, 1H), 6,89 (s, 1H), 6,22 (d, J = 8,0, 1H), 6,15 (d, J = 8,5, 1H), 5,10 (t, J = 6,5, 1H), 4,66-4,64 (m, 1H), 4,51-4,30 (m, 2H), 4,15-4,12 (m, 2H), 3,93-3,89 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,58-3,48 (m, 4H), 2,61-2,56 (m, 7H), 2,47-2,39 (m, 3H), 1,91-1,87 (m, 2H), 1,79-1,78 (d, J = 5,0, 3H)
Ejemplo 111a (6-aminopiridin-3-il)(morfolino)metanona 111a
Figure imgf000092_0001
A una solución de morfolina (9,00 g, 103 mmol) en EtOH (400 ml) se le añadió EDCI (10,0 g, 52,2 mmol), HOBt (7,00 g 51,8 mmol) y ácido 6-aminonicotínico (6,00 g, 43,4 mmol). Después de agitar durante 18 h, la suspensión resultante se filtró. El sólido se trituró con una mezcla de MeOH (100 ml) y cloruro de metileno (100 ml) para dar 111a como un sólido blanco (2,7 g, 30 %). CLEM: (M+H)+ 208 con una mezcla de MeOH (100 ml) y cloruro de metileno (100 ml) para dar 111a como un sólido blanco (2,7 g, 30 %). CLEM: (M+H)+ 208
Ejemplo 111b 5-bromo-1-metil-3-(5-(morfolin-4-carbonil)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 111b
Figure imgf000092_0002
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 101 i, el intermedio 111a y 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona se hiceron reaccionar para dar 111b en un rendimiento de un 21 %. CLEM: (M+H)+ 394. RMN de 1H (500 MHz, MeOD) 58,84 (d, J=2,5, 1H), 8,42 (d, J=2, 1H), 7,72 (m, 1H), 7,42 (d, J=2, 1H), 7,11 (d, J=8,5, 1H), 3,72 (m, 8H), 3,63 (s, 3H).
Ejemplo 111c 1-metil-3-(5-(morfolin-4-carbonil)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 111c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador se cargó con 111b (1,0 g, 0,25 mmol), X-phos (120 mg, 0,025 mmol), Pd2(dba)3 (110 g, 0,0125 mmol), KOAc (750 mg, 0,75 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (3,2 g, 1,25 mmol) y 1,4-dioxano (50 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 15 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 5:1 para dar 111c como un sólido amarillo (700 mg, 63 %). EM: [M+H]+ 441.
Ejemplo 111d 4-(1-metil-5-(5-(morfolin-4-carbonil)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)nicotinaldehído 111d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador se cargó con 111c (450 mg, 1,26 mmol), 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 103b (413 mg, 1,26 mmol), pd(dppf)Cl2 (102 mg, 0,126 mmol), K3PO4.3 H2O (85 mg, 0,352 mmol) y THF (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 15 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 7:1 para dar 111d como un sólido amarillo (700 mg, 63 %). EM: [M+H]+ 608.
Ejemplo 111 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(morfolin-4-carbonil)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 111
Una mezcla de 111d (60 mg, 0,05 mmol), NaBH4 (6,4 mg, 0,1 mmol) y MeOH (5 ml) se agitó a 0 °C durante 30 min. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con EtOAc (10 ml X 2). El extracto de EtOAc combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 111 (27 mg, 44 %). CLEM: [M+H]+ 610. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) 59,00 (s, 1H), 8,78 (d, J=2,0, 1H), 8,49 (d, J=5, 1H), 8,26 (d, J=2,0, 1H), 7,65-7,67 (m, 2H), 7,60 (d, J=2,5, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,96 (t, J=5, 1H), 4,40-4,46 (m, 2H), 4,11-4,24 (m, 3H), 3,86­ 3,88 (m, 1H), 3,56-3,62 (m, 8H), 3,50 (s, 4H), 2,62-2,63 (m, 2H), 2,46-2,47 (m, 2H), 1,67-1,80 (m, 4H)
Ejemplo 112a 5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxilato de metilo 112a
Figure imgf000093_0001
Un matraz de fondo redondo de 500 ml equipado con un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se purgó con nitrógeno y se cargó con ácido 5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxílico (30,4 g, 184 mmol), DMF (1,00 g, 13,6 mmol) y cloruro de metileno (300 ml). La solución se enfrió a 0 °C usando un baño de hielo. Se añadió gota a gota cloruro de oxalilo (28,0 g, 221 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente durante 30 min y se agitó durante 5 h. Después de este tiempo, la solución resultante se concentró para dar un sólido marrón. Este sólido se disolvió en metanol anhidro (400 ml) y la solución se enfrió a 0 °C. Se añadió trietilamina (57 g, 552 mmol) a la mezcla de reacción y se agitó durante unas 2 h adicionales a temperatura ambiente. Después de este tiempo, la mezcla de reacción se concentró hasta sequedad a presión reducida. El residuo se diluyó con cloruro de metileno (300 ml) y se lavó con agua (200 ml) y bicarbonato de sodio acuoso saturado (200 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se valoró con hexano (200 ml) para dar 112a en un rendimiento de un 58 % (19,1 g) como un sólido blanco: pf 72-74 °C; RMN de 1H (300 MHz, DMSO-cfó) 57,13 (s, 1H), 6,23 (s, 1H), 3,93 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 3,77 (s, 3H), 2,75 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 1,93 (m, 2H), 1,80 (m, 2H); (APCI+) m/z 180,1 (M+H)
Ejemplo 112b 3-(cianometil)-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxilato de metilo 112b
Figure imgf000093_0002
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 500 ml equipado con un embudo de adición, un termómetro y se cargó con 112a (6,70 g, 37,4 mmol), yodoacetonitrilo (12,5 g, 74,9 mmol), sulfato de hierro (II) heptahidratado (5,20 g, 18,7 mmol) y dimetilsulfóxido (250 ml). Se añadió gota a gota peróxido de hidrógeno (35 %, 18,2 g, 187 mmol) a la mezcla en 1 h a través de una bomba de jeringa a temperatura ambiente usando un baño de agua. Se añadió sulfato de hierro (II) heptahidratado (de 2 a 3 equivalentes) a la mezcla de reacción en porciones para mantener la temperatura entre 25 °C y 35 °C, hasta que el color de la mezcla de reacción fuera rojo intenso. Si la TLC muestra que la reacción no se completó, a continuación, se añaden más peróxido de hidrógeno (2-3 equivalentes) y más sulfato de hierro (II) heptahidratado (1-2 equivalentes) de la misma manera hasta que la reacción se complete. Después de ese tiempo, la mezcla de reacción se dividió entre solución saturada de bicarbonato de sodio (200 ml) y acetato de etilo (400 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución saturada de tiosulfato de sodio (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para dar un rendimiento de un 78 % (6,40 g) de 112b como un aceite amarillo: RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 56,23 (s, 1H), 4,23 (s, 2H), 3,94 (t, 2H, J = 6,5 Hz), 3,81 (s, 3H), 2,74 (t, 2H, J = 6,5 Hz), 2,00 (m, 2H), 1,83 (m, 2H); (APCI+) m/z 219,3 (M+H)
Ejemplo 112c Sal clorhidrato de 3-(2-aminoetil)-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxilato de metilo 112c
Figure imgf000093_0003
Se hidrogenó 3-(cianometil)-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxilato de metilo 112b con catalizador de óxido de platino en 50 psi (0,35 MPa) de hidrógeno en etanol y acetato de etilo en presencia de cloruro de hidrógeno durante la noche a temperatura ambiente para dar 112c (380 mg, 1,74 mmol) que se usó directamente en la siguiente etapa.
Ejemplo 112d 3,4,6,7,8,9-hexahidropmdo[3,4-6]¡ndol¡z¡n-1(2H)-ona 112d
Figure imgf000094_0001
112d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se purgó con nitrógeno y se cargó con sal clorhidrato de 3-(2-am¡noet¡l)-5,6,7,8-tetrah¡dro¡ndol¡z¡n-2-carboxilato de metilo 112c (preparado anteriormente, 1,74 mmol estimados, suponiendo un rendimiento cuantitativo), etóxido de sodio (354 mg, 5,22 mmol) y etanol (20 ml). La mezcla se agitó a 55 °C durante 5 h. Después de ese tiempo, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se dividió entre acetato de etilo (200 ml) y agua (100 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para dar un rendimiento de un 67 % (220 mg) de 112d como un sólido blanco: pf 195-197 °C; RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 6,76 (s, 1H), 5,89 (s, 1H), 3,78 (t, 2H, J = 6,5 Hz), 3,35 (m, 2H), 2,66 (m, 4H), 1,87 (m, 2H), 1,72 (m, 2H); (APCI+) m/z 191,3 (M+H)
Ejemplo 112e 3-bromo-5-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-¡l)¡son¡cot¡naldehído 112e
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (15 ml), 3,5-dibromoisonicotinaldehído (400 mg, 1,5 mmol), 112d (142 mg, 0,76 mmol) y carbonato de cesio (176 mg, 1,5 mmol). Se añadieron Xantphos (40 mg, 0,08 mmol) y Pd2(dba)3 (70 mg, 0,08 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 5 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se evaporó en columna ultrarrápida eluyendo con DCM:MeOH (20:1) para dar 112e (200 mg, 70 %). EM: [M+H]
Ejemplo 112f 3-(1-met¡l-5-(5-(4-(oxetan-3-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡d¡n-2-¡lam¡no)-6-oxo-1,6-d¡h¡drop¡r¡d¡n-3-¡l)-5-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-¡l)¡son¡cot¡naldehído 112f
Un tubo sellado se cargó con 112e (200 mg, 0,53 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il) p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡d¡n-2-¡lam¡no)-5-(4,4,5,5-tetramet¡l-1,3,2-d¡oxaboroian-2-¡l)p¡r¡d¡n-2(1H)-ona 1011 (240 mg, 0,51 mmol), PdCh(dppf) (42 mg, 0,05 mmol), K3PO4 (230 mg, 1 mmol) y NaOAc (80 mg, 1 mmol) en CH3CN (5 ml) y H2O (1,5 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con 10:1 de DCM/MeOH para dar 112f (138 mg, 40 %) como un sólido amarillo pálido. EM: [M+H]+ 635.
Ejemplo 112 2-(4-(hidroximetil)-5-(1 -metil-5-(5-(4-(oxetan-3-¡l)p¡perazin-1-il)pir¡din-2-¡lamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-¡l)p¡r¡d¡n-3-¡l)-3,4,6,7,8,9-hexah¡dropir¡do[3,4—b]indolizin-1 (2H)-ona 112
Una mezcla de 112f (130 mg, 0,20 mmol) y NaBH4 (20 mg, 0,5 mmol) en MeOH (5 ml) se agitó a 0 °C durante 0,5 h. La mezcla se desactivó con agua y se extrajo con EtOAc (5 ml X 2). El extracto de EtOAc combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 112 (48 mg, 34 %). CLEM: [M+H]+ :637. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 8,58 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,86 (d, J=2,4, 1H), 7,37­ 7,36 (m, 2H), 7,23-7,21 (m, 1H), 6,02 (s, 1H), 5,02 (s, 1H), 4,54 (t, J=6,5, 2H), 4,45 (t, J=5,5, 2H), 4,36-4,35 (m, 2H), 4,00-3,79 (m, 4H), 3,59 (s, 3H), 3,43-3,41 (m, 1H), 3,07-2,96 (m, 6H), 2,70 (t, J=6,0, 2H), 2,39-2,38 (m, 4H), 1,92-1,90 (m, 2H), 1,75-1,73 (m, 2H).
Ejemplo 113a (3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol 113a
Figure imgf000094_0002
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 3 l equipado con un agitador magnético, un embudo de adición y una entrada de nitrógeno se purgó con nitrógeno y se cargó con ácido 3-nitropirazol-5-carboxílico (28,0 g, 178 mmol) y THF (420 ml) y se enfrió a -5 °C usando un baño de hielo/acetona. La solución de complejo de borano-THF (1,0 M, 535 ml, 535 mmol) se añadió a una tasa que mantenía la temperatura de reacción interna por debajo de 5 °C. Después de que la adición se completara, el baño de enfriamiento se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a -5 °C usando un baño de hielo/acetona, se añadió agua (70 ml) y ácido clorhídrico 4 N (70 ml) y la reacción se agitó a reflujo durante 1 h para destrozar el complejo de borano con pirazol. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida hasta un volumen de aproximadamente 30 ml. Se añadió acetato de etilo (175 ml) y la mezcla se agitó durante 15 min. La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (4 * 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato de sodio acuoso saturado (2 * 50 ml), salmuera (50 ml) y se secaron sobre sulfato de sodio, el agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para dar (3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol 113a en un rendimiento de un 94 % (24,0 g) como un sólido amarillo claro: RMN de 1H (300 MHz, DMSO-cfó) 5 13,90 (s.a., 1H), 6,87 (s, 1H), 5,58 (t, 1H, J = 5,4 Hz), 4,53 (d, 2H, J = 5,1 Hz); EM (ESI+) m/z 144,0 (M+H)
Ejemplo 113b (1-(2-bromoetil)-3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol 113b
Figure imgf000095_0001
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 1 l equipado con un agitador magnético y un termorregulador se purgó con nitrógeno y se cargó con 113a (25,0 g, 175 mmol), DMF (250 ml) y carbonato de cesio (70,0 g, 215 mmol) se calentó a 104 °C durante 5 min. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió a 0 °C usando un baño de hielo/acetona y se añadió en porciones dibromoetano (329 g, 1,75 mol) (no exotérmica). A continuación, la reacción se agitó a 0 °C durante 1 a temperatura ambiente durante 4 h. Después de este tiempo, se añadió lentamente una solución de KH2PO4 (40 g) en agua (400 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se añadió acetato de etilo (450 ml) y la capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 * 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (200 ml), salmuera (200 ml), se secaron sobre sulfato de sodio y el agente de secado se retiró mediante filtración. El filtrado se concentró a presión reducida para dar un rendimiento de un 86 % (37,5 g) de 113b bruto como un aceite naranja: RMN de 1H (300 MHz, CDCla) 56,85 (s, 1H), 4,82 (d, 2H, J = 5,4 Hz), 4,66 (t, 2H, J = 6,3 Hz), 3,83 (t, 2H, J = 6,3 Hz); EM (ESI+) m/z 249,9 (M+H).
Ejemplo 113c 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazol 113c
Figure imgf000095_0002
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 500 ml equipado con un agitador magnético, una entrada de nitrógeno y un condensador de reflujo se purgó con nitrógeno y se cargó con 113b (37,0 g, 148 mmol) y cloroformo (160 ml). La reacción se enfrió a -5 °C usando un baño de hielo/acetona y se añadió en porciones tribromuro fosforoso (40,0 g, 148 mmol). El baño de enfriamiento se retiró y la reacción se agitó a reflujo durante 2 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a -5 °C y se añadió bicarbonato de sodio acuoso saturado (250 ml) hasta que se alcanzó un pH de 8,5. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 * 150 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con carbonato de sodio acuoso saturado (2 * 50 ml), salmuera (75 ml), se secaron sobre sulfato de sodio y el agente de secado se retiró mediante filtración. El filtrado se concentró a presión reducida para dar un residuo amarillo que se disolvió con calentamiento suave en cloruro de metileno (60 ml). Se añadieron hexanos (aproximadamente 20 ml) y la solución se volvió turbia. La mezcla se calentó hasta que se formó un precipitado sólido, se añadió cloruro de metileno (9 ml) y la solución se volvió transparente. Se dejo que la solución enfriara a temperatura ambiente y después de 4 h los cristales resultantes se recogieron mediante filtración a vacío. La torta de filtro se lavó con una mezcla helada 1:2 de cloruro de metileno:hexanos (2 * 20 ml) para dar 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazol (19,7 g). Los filtrados combinados se evaporaron y el procedimiento se realizó de nuevo para dar unos 9,70 g adicionales de 1-(2-bromoetil)-5-(bromo-metil)-3-nitro-1H-pirazol. Los sólidos se combinaron y secaron a alto vacío durante 18 h para dar un rendimiento de un 57 % (26,0 g) de 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazol 113c como cristales blancos: pf 95-97 °C; RMN de 1H (300 MHz, CDCla) 56,93 (s, 1H), 4,63 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 4,54 (s, 2H), 3,86 (t, 2H, J = 6,0 Hz).
Ejemplo 113d 5-metil-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 113d
Figure imgf000096_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 1 l equipado con un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se cargó con THF (350 ml), 113c (10,0 g, 32,2 mmol), solución de metilamina 2 M en THF (113 ml, 225 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 72 h. Después de este tiempo, la reacción se concentró hasta sequedad a presión reducida y el sólido resultante se agitó con una mezcla de acetato de etilo (75 ml) y carbonato de potasio acuoso al 10 % (75 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 x 75 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con carbonato de potasio acuoso al 10 % (75 ml), seguido de salmuera (50 ml), y se secaron sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 113d en un rendimiento de un 97 % (5,70 g) como un sólido amarillo: RMN de 1H (300 MHz, CDCb) ó 6,62 (s, 1H), 4,28 (t, 2H, J = 5,4 Hz), 3,67 (s, 2H), 2,95 (t, 2H, J = 5,4 Hz), 2,52 (s, 3H); EM (ESI+) m/z 183,0 (M+H)
Ejemplo 113e 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-amina 113e
Figure imgf000096_0002
Un frasco de reactor Parr de 500 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 800 mg de peso seco) y una solución de 113d (4,00 g, 2,20 mmol) en etanol (160 ml). El frasco se acopló al hidrogenador Parr, se evacuó, se cargó con gas hidrógeno a una presión de 45 psi (0,31 MPa) y se agitó durante 2 h. Después de este tiempo, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el frasco. Se añadió CELITE® 521 (1,0 g) y la mezcla se filtró a través de una almohadilla de CELITE® 521. La torta de filtro se lavó con etanol (2 x 75 ml) y los filtrados combinados se concentraron hasta sequedad a presión reducida para dar un rendimiento de un 99 % de 113e (3,31 g) como un sólido naranja: RMN de 1H (300 MHz, CDCb) ó 5,34 (s, 1H), 3,98 (t, 2H, J = 5,4 Hz), 3,52 (s, 3H), 2,84 (t, 2H, J = 5,7 Hz), 2,45 (s, 3H); EM (ESI+) m/z 153,1 (M+H)
Ejemplo 113f 5-bromo-1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazm-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 113f
Figure imgf000096_0003
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 113e (1,02 g, 6,7 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (2,15 g, 8,1 mmol), Pd2(dba)3 (610 mg, 0,67 mmol), 2,2-bis(difenilfosfino)-1,1-binaftilo (775 mg, 1,34 mmol), carbonato de cesio (4,37 g, 13,6 mmol) y 1,4-dioxano (30 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 110 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (15:1, V/V) para dar 113f (380 mg, 14 %) como un sólido blanco. CLEM: [M+H]+ 338
Ejemplo 113g 2-(4-cloro-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 113g
Figure imgf000097_0001
A una solución de 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)nicotinaldehído 103b (1,0 g, 3,0 mmol) en metanol (50 ml) se le añadió borohidruro de sodio (380 mg, 9,0 mmol) a 10 °C y la mezcla se agitó durante otros 30 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (1 ml) y se concentró. El residuo se disolvió en diclorometano (50 ml) y se lavó con agua (10 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se evaporó a presión reducida para dar 113g como un sólido amarillo (900 mg, 90 %). EM: [M+H]+ 332.
Ejemplo 113h Acetato de (4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 113h
Figure imgf000097_0002
A una mezcla de 113g (900 mg, 2,7 mol) y trietilamina (900 mg, 9,0 mol) en diclorometano (5 ml) se le añadió gota a gota cloruro de acetilo (600 mg, 6,0 mol) mientras se agitaba a temperatura ambiente y se agitó durante otra 1 h. La mezcla de reacción se concentró y purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano para dar 113h como un sólido blanco (950 mg, 94 %). EM: [M+H]+ 374.
Ejemplo 113i Acetato de (2-(1-Oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)metilo 113i
Figure imgf000097_0003
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 113h (950 mg, 2,5 mmol), Pin2B2 (1,6 g, 2,0 eq., 5 mmol), Pd2(dba)3 (230 mg, 0,1 eq., 0,25 mmol), X-phos (232 mg, 0,2 eq., 0,5 mmol), AcOK (735 mg, 3 eq., 7,5 mmol) y dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 14 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó mediante PE/eA=3/1 (10 ml) para dar 113i como un sólido amarillo (950 mg, 87 %). EM: [M+H]+ 383.
Ejemplo 113j Acetato de (4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 W)-il)piridin-3-il)metilo 113j
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 113f (190 mg, 0,56 mmol), 113i (215 mg, 0,56 mmol), Pd (dppf)Cb (47 mg, 0,056 mmol), NaOAc 1,0 M (93 mg, 1,12 mmol, 2,0 equiv.), K3PO4 1,0 M (240 mg, 1,12 mmol, 2,0 equiv.) y acetonitrilo (3 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 110 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (10:1, V/V) para dar 113j (300 mg, 94 %) como un sólido marrón. CLEM: [M+H]+ 597
Ejemplo 113 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-1(2H)-ona 113
Una mezcla de 113j (300 mg, 0,50 mmol) y LOH.H2O (120 mg, 2,50 mmol) en ¡PrOH/THF (1:1, 3 ml) y H2O (1 ml) se agitó a 30 °C durante 2 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con EtOAc (10 ml X 2). El extracto de EtOAc combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 113 (91 mg, 32 %) como un sólido blanco. CLEM: [M+H]+ 555. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,47 (d, J=5,0, 1H), 7,95 (d, J=5,0, 1H), 7,72 (d, J=2,0, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,35 (d, J=5,0, 1H), 6,89 (s, 1H), 5,69 (s, 1H), 5,01-5,02 (m, 1H), 4,61-4,62 (m, 1H), 4,48-4,49 (m, 1H), 4,32-4,33 (m, 1H), 4,15-4,07 (m, 4H), 3,86-3,87 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,60-3,59 (m, 2H), 2,88 (t, J=6,0, 2H), 2,61-2,56 (m, 4H), 2,47 (s, 3H), 1,89-1,90 (m, 2H), 1,78-1,79 (m, 2H)
Ejemplo 114a (R)-5-bromo-3-(4-(1,4-dimetil-3-oxopiperazin-2-il)fenilamino)-1-metilpirazin-2(1H)-ona 114a
Figure imgf000098_0001
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con (R)-3-(4-aminofenil)-1,4-dimetilpiperazin-2-ona (1,08 g, 5 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,47 g, 5,5 mmol), diisopropiletilamina (1,94 g, 15 mmol) y iPrOH (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 110 °C durante la noche. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, se añadió agua (20 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml X 2). La capa orgánica se separó, se combinó, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (10:1, V/V) para dar 114a (1,8 g, 90 %) como un sólido rojo. CLEM: [M+H]+ 406
Ejemplo 114b (R)-acetato de (4-(6-(4-(1,4-dimetil-3-oxopiperazin-2-il)fenilamino)-4-metil-5-oxo-4,5-dihidropirazin-2-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 114b
Figure imgf000098_0002
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 114a (228 mg, 0,56 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]mdol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (215 mg, 0,56 mmol), Pd (dppf)Cb (47 mg, 0,056 mmol), NaOAc 1,0 M (93 mg, 1,12 mmol, 2,0 equiv.), K3PO4 1,0 M (240 mg, 1,12 mmol, 2,0 equiv.) y acetonitrilo (3 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 110 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (10:1, V/V) para 114b (360 mg, 96 %) como un sólido marrón. CLEM:
[M+H]+ 665.
Ejemplo 114 (R)-2-(4-(6-(4-(1,4-dimetil-3-oxopiperazin-2-il)fenilamino)-4-metil-5-oxo-4,5-dihidropirazin-2-il)-3 (h¡drox¡met¡l)p¡r¡d¡n-2-¡l)-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]mdol-1(2H)-ona 114
Una mezcla de 114b (360 mg, 0,54 mmol) y UOH.H2O (138 mg, 2,76 mmol) en ¡PrOH/THF (1:1, 3 ml) y H2O (1 ml) se ag¡tó a 30 °C durante 2 h. La mezcla se evaporó a vacío y el res¡duo se extrajo con EtOAc (10 ml x 2). El extracto de EtOAc comb¡nado se concentró a pres¡ón reduc¡da y el res¡duo se pur¡f¡có con HPLC prep. de fase ¡nversa para dar 114 (72 mg, 21 %) como un sól¡do blanco. CLEM: [M+H]+ 623. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,53 (d, J=4,5, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,83-7,78 (m, 3H), 7,36 (d, J=8,0, 2H), 6,89 (s, 1H), 5,12-5,14 (m, 1H), 4,68-4,70 (m, 1H), 4,49-4,53 (m, 1H), 4,38-4,43 (m, 1H), 4,15-4,06 (m, 2H), 3,89-3,90 (m, 1H), 3,72-3,73 (m, 2H), 3,65 (s, 3H), 3,21-3,22 (m, 1H), 3,01-3,03 (m, 4H), 2,71-2,56 (m, 5H), 2,20 (s, 3H), 1,90-1,92 (m, 2H), 1,79-1,80 (m, 2H)
Ejemplo 115a 5-bromo-1-met¡l-3-(5-met¡l-1H-p¡razol-3-¡lam¡no)p¡r¡d¡n-2(1H)-ona 115a
Figure imgf000099_0001
Un matraz de fondo redondo de una ún¡ca boca de 100 ml equ¡pado con un ag¡tador magnét¡co y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-d¡oxano (15 ml), 5-met¡l-1H-p¡razol-3-am¡na (1 g, 10 mmol) (1), 3,5-d¡bromo-1-met¡lp¡r¡d¡n-2(1H)-ona (4 g, 15 mmol) (2) y carbonato de ces¡o (6,4 g, 20 mmol). Se añad¡eron Xantphos (400 mg, 0,8 mmol) y Pd2(dba)3 (700 mg, 0,8 mmol) y la mezcla de reacc¡ón se calentó a 100 °C durante 5 h. Después de este t¡empo, la reacc¡ón se enfr¡ó a temperatura amb¡ente y se f¡ltró. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y el res¡duo se evaporó en columna ultrarrápida eluyendo con DCM:MeOH (20:1) para dar 115a (1,0 g, 35 %). EM: [M+H]+ 283.
Ejemplo_____ 115b 4-(1-met¡l-5-(5-met¡l-1H-p¡razol-3-¡lam¡no)-6-oxo-1,6-d¡h¡drop¡r¡d¡n-3-¡l)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-2(1H)-¡l)n¡cot¡naldehído 115b
Figure imgf000099_0002
Un tubo sellado se cargó con 115a (280 mg, 1 mmol), ác¡do 3-(acetox¡met¡l)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-2(1H)-¡l)p¡r¡d¡n-4-¡lborón¡co 113i (420 mg, 1,1 mmol), PdCL(dppf) (41 mg, 0,056 mmol), K3PO4 (100 mg) y NaOAc (50 mg) en CH3CN (10 ml) y H2O (3 ml). El s¡stema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacc¡ón se calentó a 100 °C durante 2 h. A cont¡nuac¡ón, se enfr¡ó a temperatura amb¡ente y se f¡ltró. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y el res¡duo resultante se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna ultrarráp¡da eluyendo con 10:1 de DCM/MeOH para dar 115b en un rend¡m¡ento de un 35 % (190 mg) como un sól¡do amar¡llo pál¡do. EM: [M+H]+ 542.
Ejemplo 115 2-(3-(h¡drox¡met¡l)-4-(1-met¡l-5-(5-met¡l-1H-p¡razol-3-¡lam¡no)-6-oxo-1,6-d¡h¡drop¡r¡d¡n-3-¡l)p¡r¡d¡n-2-¡l)-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-1(2H)-ona 115
Un matraz de fondo redondo de una ún¡ca boca de 100 ml se cargó con 115b (190 mg, 0,35 mol) en THF/¡PA/H2O (5 ml/5 ml/2 ml) y L¡OH (85 mg, 3,5 mmol) m¡entras se ag¡taba. Esta mezcla se ag¡tó a 50 °C durante 0,5 h. A cont¡nuac¡ón, se añad¡eron 20 ml de H2O y la mezcla se extrajo con EA (30 ml X 3). La capa orgán¡ca comb¡nada se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar un sól¡do amar¡llo, que se pur¡f¡có ad¡c¡onalmente med¡ante HPLC prep. de fase ¡nversa para dar 115 como un sól¡do blanco (48 mg, rend¡m¡ento de un 30 %). CLEM: [M+H]+ 500. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,44 (d, J=6,0, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,30 (d, J=6,0, 2H), 6,87 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 4,59-3,86 (m, 7H), 3,69 (s, 3H), 2,57-2,56 (m, 4H), 2,25 (s, 3H), 1,88-1,77 (m, 4H)
Ejemplo 116a 3-bromo-5-{6-oxo-8-t¡a-4,5-d¡azatr¡c¡clo[7.4.0.027]tr¡deca-1(9),2(7),3-tr¡en-5-¡l}p¡r¡d¡n-4-carbaldehído 116a
Figure imgf000100_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (15 ml), 3,5-dibromoisonicotinaldehído (200 mg, 0,76 mmol), 8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.02,7]trideca-1(9),2(7),3-trien-6-ona 191d (160 mg, 0,76 mmol) y carbonato de cesio (176 mg, 1,5 mmol). Se añadieron yoduro cuproso, CuI, (100 mg, 0,76 mmol) y 4,7-dimetoxi-1,10-fenantrolina (127 mg, 0,52 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 5 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se evaporó en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAC/PE (1:2) para dar 116a (80 mg, 30 %). EM: [M+H]+ 390.
Ejemplo 116b 3-[1-metil-5-({5-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1 -il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-5-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1 (9),2(7),3-trien-5-i!}piridin-4-carbaldehído 116b
Figure imgf000100_0002
Un tubo sellado se cargó con 116a (80 mg, 0,20 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 1011 (96 mg, 0,20 mmol), PdCb(dppf) (18 mg, 0,02 mmol), K3PO4 (30 mg) y NaOAc (20 mg) en CH3CN (5 ml) y H2O (1 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con 10:1 de DCM/MeOH para dar 116b en un rendimiento de un 35 % (46 mg). EM: [M+H]+ 651.
Ejemplo 116 4-hidroximetil-3-[1-metil-5-({5-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-5-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridina 116
A una solución de 116b (46 mg, 0,07 mmol) a 0 °C en metanol (4 ml) se le añadió borohidruro de sodio (20 mg, 0,7 mmol) y se agitó durante 30 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (1,0 ml) y se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 116 (12 mg, 28 %) como un sólido amarillo. CLEM: [M+H]+ 653. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) 68,60 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,56 (d, J=2,0, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,87 (d, J=3,0, 1H), 7,38-7,36 (m, 2H), 7,24-7,22 (m, 1H), 4,90 (m, 1H), 4,56-4,53 (m, 2H), 4,46-4,44 (m, 4H), 3,59 (s, 3H), 3,44-3,42 (m, 1H), 3,06 (t, J=4,5, 4H), 2,94-2,93 (m 2H), 2,85-2,84 (m, 2H), 2,38 (t, J=4,0, 4H), 1,89-1,84 (m, 4H)
Ejemplo 117a 5-(metiltio)-2-nitropiridina 117a
Figure imgf000100_0003
A una mezcla de 5-cloro-2-nitropiridina (3 g, 18 mmol) en MeOH (20 ml), se le añadió metanotiolato de sodio (1,4 g, 20 mmol) a 0 °C y la mezcla se agitó a 20 °C durante 2 horas. La suspensión resultante se filtró y se lavó con agua y se secó a vacío para dar 117a bruto como un sólido amarillo (2 g, 66 %) sin purificación para la siguiente etapa. EM:
[M+H]+ 171.
Ejemplo 117b 5-(metilsulfonil)-2-nitropiridina 117b
Figure imgf000101_0001
A una mezcla de 117a (260 mg, 0,5 mmol) en ácido acético (15 ml) se le añadió H2O2 (aq. 30 %) (7,5 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a 25 °C. La solución de reacción se vertió en agua y se extrajo con EtOAC y se concentró hasta obtener un líquido amarillo pálido, se purificó mediante gel de sílice con (EtOAC/PE:1:3) para dar 117b (2 g, 86 %). EM: [M+H]+ 203.
Ejemplo 117c 5-(metilsulfonil)piridin-2-amina 117c
Figure imgf000101_0002
Una mezcla de 117b (2 g, 10 mmol), MeOH (10 ml), Pd/C (120 mg) en metanol (8 ml) se agitó a 25 °C en H2 (50 psi (0,35 MPa)) durante la noche. El Pd/C se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 117c (1,7 g, 98 %). EM: [M+H]+ 173.
Ejemplo 117d 5-bromo-1-metil-3-(5-(metilsulfonil)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 117d
Figure imgf000101_0003
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (15 ml), 117c (1,7 g, 10 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (5,2 g, 20 mmol) y carbonato de cesio (6,4 g, 20 mmol). Se añadieron Xantphos (300 mg, 0,8 mmol) y Pd2(dba)3 (500 mg, 0,8 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 5 h (horas). Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en columna ultrarrápida eluyendo con DCM:MeOH (20:1) para dar 117d (1 g, 30 %). EM: [M+H]+ 358.
Ejemplo 117e Acetato de (4-(1-metil-5-(5-(metilsulfonil)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 117e
Un tubo sellado se cargó con 117d (100 mg, 0,28 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-¡l)p¡r¡d¡n-4-¡lborón¡co 113i (115 mg, 0,3 mmol), PdCL(dppf) (25 mg, 0,03 mmol), K3PO4 (126 mg, 0,6 mmol) y NaOAc (60 mg, 0,6 mmol) en MeCN (8 ml) y H2O (1 ml). El s¡stema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacc¡ón se calentó a 100 °C durante 2 h. A cont¡nuac¡ón, se enfr¡ó a temperatura amb¡ente y se f¡ltró. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y el res¡duo resultante se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna ultrarrápida en gel de síl¡ce con DCM:MeOH (20:1) para dar 117e (100 mg, 40 %). EM: [M+H]+ 617.
Ejemplo 117 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(metilsulfonil)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexah¡dro-pirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 117
Un matraz de fondo redondo de una ún¡ca boca de 100 ml se cargó con 117e (100 mg, 0,2 mol) en THF/PA/H2O (5 ml/5 ml/2 ml) y L¡OH (50 mg, 2 mmol) m¡entras se ag¡taba. Esta mezcla se agitó a 50 °C durante 0,5 h. A cont¡nuac¡ón, se añad¡eron 20 ml de H2O y la mezcla se extrajo con EA (30 ml X 3). La capa orgán¡ca comb¡nada se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar un sólido amar¡llo, que se pur¡f¡có ad¡c¡onalmente med¡ante HPLC prep. de fase ¡nversa para dar 117 como un sól¡do blanco (72 mg, rend¡m¡ento de un 90 %). EM: [M+H]+ 575. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 9,39 (s, 1H), 8,84 (d, J=2,0,1H), 8,60 (d, J=2,5, 1H), 8,50 (d, J=2,5, 1H), 7,98 (dd, J=2,5, 4,0, 1H), 7,69 (d, J=2,4, 1H), 7,49-7,47 (d, J=9,0, 1H), 7,38-7,37 (m, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,99 (t, J=4,5, 1H), 4,47-4,39 (m, 2H), 4,26-4,11 (m, 3H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 3,19 (s, 3H), 2,66-2,54 (m, 2H), 2,48-2,46 (m, 2H), 1,79-1,66 (m, 4H)
Ejemplo 118a 5-am¡no-3-c¡cloprop¡l-1H-p¡razol-1-carbox¡lato de tere-butilo 118a
Figure imgf000102_0001
A una mezcla de 3-c¡cloprop¡l-1H-p¡razol-5-am¡na (0,25 g, 2 mmol) y K2CO3 (0,828 g, 6 mmol) en THF (5 ml) se le añad¡ó (Boc)2O (0,436 g, 2 mmol) en THF (5 ml). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 15 h. A cont¡nuac¡ón, se f¡ltró y se concentró. El res¡duo se pur¡f¡có med¡ante columna ultrarrápida eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 6:1 para dar 118a como un sól¡do blanco (240 mg, 54 %). CLEM: (M-Boc)+ 124.
Ejemplo 118b 5-bromo-3-(3-ciclopropil-1H-pirazol-5-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 118b
Figure imgf000102_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (15 ml), 118a (455 mg, 1,95 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (0,40 g, 1,5 mmol) y carbonato de cesio (1,22 g, 3,75 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 30 minutos, se añadieron XantPhos (87 mg, 0,15 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (70 mg, 0,075 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 15 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se dividió entre acetato de etilo (30 ml) y agua (30 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 2). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (50 ml) y se secaron sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en columna ultrarrápida eluyendo con DCM/MeOH 50:1 para dar 118b como un sólido amarillo (320 mg, 50 %). CLEM: (M+H)+ 309. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 11,85 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,02 (d, J = 2,5, 1H), 7,35 (d, J = 2,5, 1H), 5,77 (d, J = 2, 1H), 3,46 (s, 3H), 1,83 (m, 1H), 0,90 (m, 2H), 0,64 (m, 2H)
Ejemplo 118c Acetato de (4-(5-(5-ciclopropil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 118c
Figure imgf000103_0001
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 118b (310 mg, 1 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (385 mg, 1 mmol), Pd(dppf)Cl2 (80 mg, 0,1 mmol), K3PO4 (424 mg, 2 mmol), NaOAc ( 1 6 5 mg, 2 mmol), CH3CN (15 ml) y agua (1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 110 °C durante 3 h. Se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (50:1, V/V) para dar 118c (400 mg, 68 %) como un sólido amarillo. CLEM: [M+H]+ 569
Ejemplo 118 2-(4-(5-(5-ciclopropil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1 (2H)-ona 118
Una mezcla de 118c (350 mg, 0,62 mmol) y UOH.H2O (260 mg, 6,2 mmol) en PrOH/THF (1:1, 3 ml) y H2O (1 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con EtOAc (10 ml X 2). El extracto de EtOAc combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 118 (200 mg, 54 %) como un sólido blanco. CLEM: [M+H]+ 526. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 11,83 (s, 1H), 8,48 (d, J=5, 1H), 8,05 (d, J=2, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,38 (d, J=2, 1H), 7,31 (d, J=5, 1H), 6,58 (s, 1H), 5,81 (d, J=2, 1H), 4,95 (t, J=5, 1H), 4,49-4,51 (m, 1H), 4,38-4,40 (m, 1H), 4,19-4,21 (m, 3H), 3,85-3,87 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 2,61-2,62 (m, 1H), 2,56-2,57 (m, 1H), 2,48-2,49 (m, 2H), 1,81-1,82 (m, 3H), 1,70-1,71 (m, 2H), 0,88-0,89 (m, 2H), 0,63-0,64 (m, 2H)
Ejemplo 119a (S)-acetato de (4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 119a
Figure imgf000103_0002
Siguiendo los procedimientos como se describe para 118c, acetato de (2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)metilo 113i (250 mg) y (S)-5-bromo-1-metil-3-(3-metil-5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 130e (233 mg) se hicieron reaccionar para dar 119a como un sólido amarillo (230 mg, 62 %). CLEM: [M+H]+ 693
Ejemplo 119 (S)-2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1 (2H)-ona 119
Siguiendo los procedimientos como se describe para 118, la hidrólisis de acetato de 119a con LiOH.H2O en PrOH/THF (1:1) y H2O dio 119 como un sólido blanco (184 mg, 85 %). CLEM: [M+H]+ 651. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) ó 8,65 (d, J=2,5, 1H), 8,50 (d, J=5,0, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,84 (d, J=2,0, 1H), 7,35 (d, J=5,0, 1H), 7,33 (d, J=7,0, 1H), 6,90 (s, 1H), 6,83 (d, J=9,0, 1H), 5,04-5,06 (m, 1H), 4,62-4,73 (m, 5H), 4,51 (s, 1H), 4,32 (s, 1H), 4,16 (s, 1H), 4,11 (s, 1H), 3,89 (s, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,57 (t, J=6,0, 1H), 3,48 (s, 1H), 3,07-3,12 (m, 2H), 2,53-2,63 (m, 7H), 2,24 (m, 1H), 1,88-1,93 (m, 2H), 1,80 (s, 2H), 0,99 (d, J=6,5, 3H).
Ejemplo 120a 5-bromo-3-(5-(4-(2-hidroxi-2-metilpropil)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 120a
Figure imgf000104_0001
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 101j (500 mg, 1,37 mmol), 2,2-dimetiloxirano (990 mg, 13,7 mmol), Cs2CO3 (1,3 g, 4,11 mmol) y CH3CN (15 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 110 °C durante 15 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El producto bruto 120a así obtenido se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional (460 mg, 77 %). CLEM: [M+h ]+ 437.
Ejemplo 120b Acetato de (4-(5-(5-(4-(2-hidroxi-2-metilpropil)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 120b
Figure imgf000104_0002
Siguiendo los procedimientos como se describe para la preparación de 118c, la reacción de 120a (435 mg, 1,0 mmol) y ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (383 mg, 1 mmol) dio 120b (437 mg, 63 %). CLEM: [M+H]+ 696.
Ejemplo 120 2-(4-(5-(5-(4-(2-hidroxi-2-metilpropil)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 120
Siguiendo los procedimientos como se describe para la preparación de 118, la hidrólisis de acetato de 120b (70 mg, 0,1 mmol) con UOH.H2O en PrOH/THF (1:1) y H2O, dio 120 (27 mg, 42 %) como un sólido gris. CLEM: [M+H]+ 653. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) ó 8,61 (d, J=3, 1H), 8,50 (d, J=5, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,83 (d, J=3, 1H), 7,46 (d, J=2, 1H), 7,36 (m, 2H), 7,24 (d, J=9, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,95 (m, 1H), 4,44 (m, 2H), 4,24 (m, 2H), 4,13 (m, 2H), 3,87-3,88 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,03-3,05 (m, 4H), 2,64-2,66 (m, 5H), 2,61-2,63 (m, 1H), 2,49-2,51 (m, 2H), 2,24 (s, 2H), 1,70­ 1,71 (m, 4H), 1,10 (s, 6H).
Ejemplo 121a 4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 121a
Un matraz se cargó con 4-cloro-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 103b (88 mg, 0,27 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 1011 (125 mg, 0,27 mmol), PdCh(dppf) (18 mg, 0,02 mmol), K3PO4 (30 mg), en THF (5 ml) y H2O (1 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se sometió a reflujo durante 4 h y, a continuación, se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con 10:1 de DCM/MeOH para dar 121a (90 mg, 56 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 633.
Ejemplo 121 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-1 (2H)-ona 121
A 0 °C, a una suspensión de 121a (76 mg, 0,12 mmol) en metanol (4 ml) se le añadió borohidruro de sodio (20 mg, 0,7 mmol) y se agitó durante 30 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (1,0 ml) y se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 121 (56 mg, 74 %). CLEM: [M+H]+ 635. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 8,66 (d, J=2,0, 1H), 8,57 (d, J=5,0, 1H), 7,93 (d, J=3,0, 1H), 7,85 (d, J=2,5, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,50 (d, J=5,0, 1H), 7,24-7,27 (m, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,97 (d, J=6,0, 1H), 6,81 (d, J=8,0, 1H), 6,67 (d, J=6,0, 1H), 5,08 (d, J=11,5, 1H), 4,67-4,72 (m, 4H), 4,51 (d, J=12,0, 1H), 4,35 (t, J=12,0, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,57-3,59 (m, 1H), 3,16-3,17 (m, 4H), 2,70-2,74 (m, 4H), 2,52-2,53 (m, 4H), 1,94-1,95 (m, 2H), 1,84-1,86 (m, 2H).
Ejemplo 122a (2R, 5S)-2,5-dimetil-4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 122a
Figure imgf000105_0001
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 101g, se hicieron reaccionar (2R, 5S)-2,5-dimetilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (1,5 g, 6,0 mmol) y 5-bromo-2-nitropiridina (1212 mg, 6,0 mmol) para dar 122a como un sólido amarillo (1500 mg, 75 %). CLEM: [M+H]+ 337
Ejemplo 122b (2R, 5S)-4-(6-aminopiridin-3-il)-2,5-dimetilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 122b
Figure imgf000105_0002
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 101h, la reacción de 122a (1,5 g, 4,46 mmol) dio 122b como un sólido amarillo (1130 mg, 83 %). CLEM: [M+H]+ 307
Ejemplo 122c (2R, 5S)-4-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)-2,5-dimetilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 122c
Figure imgf000105_0003
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 101i, la reacción de 122b (766 mg, 2,50 mmol) y 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (668 mg, 2,50 mmol) dio 122c como un sólido amarillo (978 mg, 79 %). CLEM:
[M+H]+ 492
Ejemplo 122d (2R, 5S)-4-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)-2,5-dimetilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 122d
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 101j, la reacción de 122c (978 mg, 1,99 mmol) dio 122d como un sólido amarillo (700 mg, 90 %). CLEM: [M+H]+ 392
Ejemplo 122e 5-bromo-3-(5-((2S, 5R)-2,5-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 122e
Figure imgf000106_0001
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 101k, la reacción de 122d (700 mg, 1,79 mmol), dio 122e como un sólido amarillo (723 mg, 91 %). CLEM: [M+H]+ 448
Ejemplo 122f Acetato de (4-(5-(5-((2S, 5R)-2,5-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metMo 122f
Figure imgf000106_0002
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 113j, la reacción de 122e (723 mg, 1,62 mmol) y ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (613 mg, 1,62 mmol) dio 122f como un sólido amarillo (464 mg, 41 %). CLEM: [M+H]+ 707
Ejemplo 122 2-(4-(5-(5-((2S,5R)-2,5-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 122
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 113, la hidrólisis de 122f (464 mg, 0,66 mmol) con hidróxido de litio dio 122 como un sólido blanco (83 mg, 20 %). CLEM: [M+H]+ 665. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,69 (d, J=2,5, 1H), 8,51 (d, J=5,0,1H), 8,03 (d, J=2,5, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,86 (d, J=2,5, 1H), 7,38 (d, J=5,0, 2H), 6,90 (s, 1H), 6,82 (d, J=9,0, 1H), 5,07 (s, 1H), 4,77-4,72 (m, 2H), 4,68-4,61 (m, 3H), 4,52 (s, 1H), 4,33 (s, 1H), 4,17-4,11 (m, 2H), 3,88 (s, 1H), 3,76 (s, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,19 (s, 1H), 2,93-2,90 (m, 1H), 2,73 (s, 2H), 2,63-2,57 (m, 4H), 2,48 (s, 1H), 1,99-1,90 (m, 3H), 1,80 (s, 2H), 0,91 (t, J=5,5, 6H)
Ejemplo 123a (2-bromoetoxi)(ferc-butil)dimetilsilano 123a
T B D M S O ^ ^ Br
123a
A una solución de 2-bromoetanol (5,0 g, 40,3 mmol) en DCM (20 ml) se le añadió cloruro de terc-butildimetilsililo (9,1 g, 60,5 mmol) seguido de las adiciones de trietilamina (8,14 g, 80,6 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (49,2 mg, 0,4 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 h y se concentró a vacío. El residuo se dividió entre HCl 1 N y acetato de etilo. La porción acuosa se extrajo con acetato de etilo. La porción orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a vacío para dar un aceite amarillo, que se purificó mediante cromatografía en columna eluyendo con PE:EA (50:1) para dar 123a como un aceite incoloro (6,0 g, 62,4 %). CLEM: (M+H)+ 241.
Ejemplo 123b 5-bromo-3-(5-(4-(2-(ferc-butildimetilsililoxi)etil)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 123b
Figure imgf000107_0001
A una suspensión de 123a (231 mg, 0,96 mmol) en MeCN (40 ml) a 70 °C se le añadió 5-bromo-1-metil-3-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1 H)-ona 101j (350 mg, 0,96 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 3 días. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (30:1) para dar 123b como un sólido amarillo (452 mg, 90 %). EM: [M+H]+ 524,7.
Ejemplo 123c 5-bromo-3-(5-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 123c
Figure imgf000107_0002
A una suspensión de 123b (300 mg, 0,57 mmol) a temperatura ambiente en MeOH (20 ml) se le añadió ácido L(-)-canforsulfónico (199 mg, 0,86 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche. Se añadió agua (20 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml X 2). La capa orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró para dar 123c (325 mg, 95 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 408,7.
Ejemplo 123d Acetato de (4-(5-(5-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 123d
Figure imgf000108_0001
Un tubo sellado se cargó con 123c (200 mg, 0,49 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-¡l)p¡r¡d¡n-4-¡lborón¡co (113i) (188 mg, 0,49 mmol), Pd(dppf)Cl2 (40 mg, 0,049 mmol), K3PO4 (208 mg, 0,98 mmol), NaOAc (133 mg, 0 , 9 8 mmol), H2O (3 ml) y MeCN (50 ml). La mezcla se calentó a 110° durante 3 h. El d¡solvente se evaporó a vacío y el res¡duo se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en gel de síl¡ce eluyendo con DCM/MeOH 30:1 para 123d (187 mg, 57 %). EM: [M+H]+ 667,7.
Ejemplo 123 2-(4-(5-(5-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidro-pirazino[1,2-a]mdol-1(2H)-ona 123
Una mezcla de 123d (187 mg, 0,28 mmol) y L¡OH (235 mg, 5,6 mmol) en ¡PrOH/THF (1:1, 3,5 ml) y H2O (0,5 ml) se ag¡tó a 35 °C durante 0,5 h. A cont¡nuac¡ón, se evaporó a vacío y el res¡duo se extrajo con EtOAc (5 ml X 2). El extracto de EtOAc comb¡nado se concentró a pres¡ón reduc¡da y el res¡duo se purificó med¡ante HPLC prep. de fase ¡nversa para dar 123 (40 mg, 31 %) como un sól¡do amar¡llo. EM: [M+H]+ 625,4. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,63 (d, J = 2,5, 1H), 8,49 (d, J = 5,0, 1H), 7,92 (d, J = 2,5, 1H), 7,82 (d, J = 2,0, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,36 (d, J = 5,5, 1H), 7,27-7,25 (m, 1H), 6,89 (s, 1H), 6,81 (d, J = 9,5, 1H), 5,04-5,02 (m, 1H), 4,62 (d, J = 10, 1H), 4,50-4,47 (m, 1H), 4,34-4,29 (m, 1H), 4,12-4,09 (m, 2H), 3,89-3,85 (m, 1H), 3,71-3,67 (m, 5H), 3,15-3,12 (m, 4H), 2,74-2,54 (m, 10H), 1,92-1,87 (m, 2H), 1,79-1,78 (m, 3H)
Ejemplo 124a 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.02,7]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 124a
A una suspens¡ón de 2-bromo-4-cloron¡cot¡naldehído 103a (641 mg, 2,9 mmol) y 8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.02,7]trideca-1(9),2(7),3-trien-6-ona 191d (400 mg, 1,94 mmol) en d¡oxano (20 ml) se le añad¡ó K2CO3 (536 mg, 3,88 mmol), Cul (369 mg, 1,94 mmol) y 4,7-d¡metox¡-1,10-fenantrol¡na (471 mg, 1,96 mmol). Después de hacer burbujear n¡trógeno a través de la soluc¡ón resultante durante 30 m¡n, la mezcla se ag¡tó a 80 °C durante 16 h. Se dejó que enfr¡ara a temperatura amb¡ente y se añad¡ó a H2O (100 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de et¡lo (2 x 200 ml). La capa orgán¡ca comb¡nada se lavó con salmuera (100 ml) y se secó sobre sulfato de sod¡o. El agente de secado se retiró med¡ante f¡ltrac¡ón y el f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có en columna ultrarrápida eluyendo con PE:EA (5:1) para dar 124a (230 mg, 34 %). CLEM: [M+H]+ 346
Ejemplo 124b 4-[1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 124b
Un matraz de fondo redondo se cargó con 124a, 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetramet¡l-1,3,2-d¡oxaborolan-2-¡l)p¡r¡d¡n-2(1H)-ona 1011 (271 mg, 0,58 mmol), PdCh(dppf) (50 mg, 0 , 06 mmol), K3PO4.3 H2O (323 mg, 1,16 mmol), THF (15 ml) y H2O (5 ml). Después de tres c¡clos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 70 °C durante 2 h. A cont¡nuac¡ón, se f¡ltró y el f¡ltrado se evaporó a vacío. El res¡duo se pur¡f¡có en cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con petróleo/acetato de etilo 1:3 para dar 124b como un sól¡do amar¡llo (200 mg, 53 %). CLEM: [M+H]+ 651
Ejemplo 124 3-hidroximetil-4-[1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridina 124
Una mezcla de 4-[1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 124b (200 mg, 0,31 mmol), NaBH4 (35 mg, 0,92 mmol) y CH3OH (10 ml) se agitó a 25 °C durante 1 h. A continuación, la mezcla se extrajo con CH2Cl2 (10 ml X 2). El extracto de CH2Cl2 combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 124 (100 mg, 50 %) como un sólido amarillo. CLEM: [M+H]+ 653. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 8,64 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 8,57 (d, J=5,0 Hz, 1 H), 8,46-8,48 (m, 2 H), 7,88 (d, J=3,0 Hz, 1 H), 7,54 (d, J=5,0 Hz, 1 H), 7,48 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 7,37-7,39 (m, 1 H), 7,24 (d, J=9,0 Hz, 1 H), 4,85-4,87 (m, 1H), 4,55-4,57 (m, 2 H), 4,45 4,47 (m, 2 H), 3,67-4,39 (m, 2 H), 3,60 (s, 3 H), 3,42-3,45 (m, 1 H), 3,06-3,08 (m, 4 H), 2,95 (s, 2 H), 2,87 (s, 2 H), 2,38-2,40 (m, 4 H), 1,87-1,89 (m, 4 H).
Ejemplo 125a (3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol 125a
Figure imgf000109_0001
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 3 l equipado con un agitador magnético, un embudo de adición y una entrada de nitrógeno se purgó con nitrógeno y se cargó con ácido 3-nitropirazol-5-carboxílico (28,0 g, 178 mmol) y THF (420 ml) y se enfrió a -5 °C usando un baño de hielo/acetona. La solución de complejo de borano-THF (1,0 M, 535 ml, 535 mmol) se añadió a una tasa que mantenía la temperatura de reacción interna por debajo de 5 °C. Después de que la adición se completara, el baño de enfriamiento se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a -5 °C usando un baño de hielo/acetona, se añadió agua (70 ml) y ácido clorhídrico 4 N (70 ml) y la reacción se agitó a reflujo durante 1 h para destrozar el complejo de borano con pirazol. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida hasta un volumen de aproximadamente 30 ml. Se añadió acetato de etilo (175 ml) y la mezcla se agitó durante 15 min. La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (4 * 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato de sodio acuoso saturado (2 * 50 ml), salmuera (50 ml) y se secaron sobre sulfato de sodio, el agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 125a en un rendimiento de un 94 % (24,0 g) como un sólido amarillo claro: RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 613,90 (s.a., 1H), 6,87 (s, 1H), 5,58 (t, 1H, J = 5,4 Hz), 4,53 (d, 2H, J = 5,1 Hz); EM (ESI+) m/z 144,0 (M+H)
Ejemplo 125b (1-(2-bromoetil)-3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol 125b
Figure imgf000109_0002
L25I»
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 1 l equipado con un agitador magnético y un termorregulador se purgó con nitrógeno y se cargó con 125a (25,0 g, 175 mmol), DMF (250 ml) y carbonato de cesio (70,0 g, 215 mmol) se calentó a 104 °C durante 5 min. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió a 0 °C usando un baño de hielo/acetona y se añadió en porciones dibromoetano (329 g, 1,75 mol) (no exotérmica). A continuación, la reacción se agitó a 0 °C durante 1 a temperatura ambiente durante 4 h. Después de este tiempo, se añadió lentamente una solución de KH2PO4 (40 g) en agua (400 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se añadió acetato de etilo (450 ml) y la capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 * 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (200 ml), salmuera (200 ml), se secaron sobre sulfato de sodio y el agente de secado se retiró mediante filtración. El filtrado se concentró a presión reducida para dar un rendimiento de un 86 % (37,5 g) de 125b bruto como un aceite naranja: RMN de 1H (300 MHz, CDCla) 66,85 (s, 1H), 4,82 (d, 2H, J = 5,4 Hz), 4,66 (t, 2H, J = 6,3 Hz), 3,83 (t, 2H, J = 6,3 Hz); EM (ESI+) m/z 249,9 (M+H).
Ejemplo 125c 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazol 125c
Figure imgf000109_0003
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 500 ml equipado con un agitador magnético, una entrada de nitrógeno y un condensador de reflujo se purgó con nitrógeno y se cargó con 125b (37,0 g, 148 mmol) y cloroformo (160 ml). La reacción se enfrió a -5 °C usando un baño de hielo/acetona y se añadió en porciones tribromuro fosforoso (40,0 g, 148 mmol). El baño de enfriamiento se retiró y la reacción se agitó a reflujo durante 2 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a -5 °C y se añadió bicarbonato de sodio acuoso saturado (250 ml) hasta que se alcanzó un pH de 8,5. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 * 150 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con carbonato de sodio acuoso saturado (2 * 50 ml), salmuera (75 ml), se secaron sobre sulfato de sodio y el agente de secado se retiró mediante filtración. El filtrado se concentró a presión reducida para dar un residuo amarillo que se disolvió con calentamiento suave en cloruro de metileno (60 ml). Se añadieron hexanos (aproximadamente 20 ml) y la solución se volvió turbia. La mezcla se calentó hasta que se formó un precipitado sólido, se añadió cloruro de metileno (9 ml) y la solución se volvió transparente. Se dejo que la solución enfriara a temperatura ambiente y después de 4 h los cristales resultantes se recogieron mediante filtración a vacío. La torta de filtro se lavó con una mezcla helada 1:2 de cloruro de metileno:hexanos (2 x 20 ml) para dar 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazol (19,7 g). Los filtrados combinados se evaporaron y el procedimiento se realizó de nuevo para dar unos 9,70 g adicionales de 1-(2-bromoetil)-5-(bromo-metil)-3-nitro-1H-pirazol. Los sólidos se combinaron y secaron a alto vacío durante 18 h para dar un rendimiento de un 57 % (26,0 g) de 125c como cristales blancos: pf 95-97 °C; RMN de 1H (300 MHz, CDCb) 56,93 (s, 1H), 4,63 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 4,54 (s, 2H), 3,86 (t, 2H, J = 6,0 Hz).
Ejemplo 125d 2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 125d
Figure imgf000110_0001
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 125c (4 g, 12,9 mmol) y solución de amoníaco 0,5 M en dioxano (200 ml). La mezcla resultante se calentó cuidadosamente a 50 °C durante la noche. Después de este tiempo, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y al residuo se le añadió H2O (50 ml) y EtOAc (50 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml) y se secaron sobre sulfato de sodio. La solución resultante se concentró a presión reducida para dar un rendimiento de un 100 % (2,1 g) de 125d bruto.
Ejemplo 125e 1-(2-nitro-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-5(4H)-il)etanona 125e
Figure imgf000110_0002
Un matraz de fondo redondo de 200 ml se cargó con 125d (2,1 g, 12,9 mmol), trietilamina (5,5 ml, 38,7 mmol), cloruro de acetilo (1,1 ml, 15,5 mmol) y CH2Cl2 (100 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de este tiempo, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y al residuo se le añadió H2O (50 ml) y EtOAc (50 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml). Los extractos acuosos combinados se volvieron a extraer con CH2Cb:MeOH 9:1 (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna eluyendo con un gradiente de CH2Cl2 - CH2Cb:MeOH 9:1para dar un rendimiento de un 84 % (2,3 g) de 125e.
Ejemplo 125f 1-(2-amino-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-5(4H)-il)etanona 125f
Figure imgf000110_0003
Un frasco de hidrogenación Parr de 500 ml se cargó con 125e (2,3 g, 10,9 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 570 mg de peso seco) y etanol (100 ml). El frasco se evacuó, se cargó con gas hidrógeno a una presión de 50 psi (0,35 MPa) y se agitó durante 2 h en un aparato de hidrogenación Parr. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® 521 lavando con CH2Cb:MeOH 1:1 (500 ml). La solución resultante se concentró a presión reducida para dar un rendimiento de un 95 % (1,9 g) de 125f bruto.
Ejemplo 125g 3-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-5-bromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona 125g
Figure imgf000111_0001
Un tubo sellado se equipó con un agitador magnético y se cargó con 125f (860 mg, 4,8 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,8 g, 6,7 mmol) y carbonato de cesio (3,4 g, 10,5 mmol) en 1,4-dioxano (67 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la solución durante 30 min, se añadieron Xantphos (330 mg, 0,6 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (300 mg, 0,3 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 16 h. Después de este tiempo, se añadieron H2O (50 ml) y EtOAc (50 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con EtOAc (2 x 5 0 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml) y se secaron sobre sulfato de sodio. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna eluyendo con un gradiente de CH2Cl2 -CH2Cl2 :Et2O:MeOH 60:35:5 para dar un rendimiento de un 41 % de 125g (720 mg).
Experimento 125h 5-bromo-1-metil-3-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 125h
Figure imgf000111_0002
Un matraz de fondo redondo de 50 ml con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 125g (250 mg, 0,7 mmol), NaOH acuoso (5 N, 6 ml), etanol (6 ml). La mezcla se agitó a reflujo durante 30 min. Después de este tiempo, se añadieron acetato de etilo (5 ml) y agua (5 ml). La capa acuosa separada se extrajo con acetato de etilo (2 x 5 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron a presión reducida para dar un rendimiento de un 91 % (200 mg) de 125h bruto.
Ejemplo 125i 5-bromo-1-metil-3-(5-(oxetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 125i
Figure imgf000111_0003
El compuesto 125i se sintetizó usando el mismo procedimiento que 101k, donde se mezclaron 5-bromo-1-metil-3-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona (125h) (250 mg, 0,78 mmol) y oxetan-3-ona (600 mg, 8,3 mmol) en metanol (8 ml). Se añadió cianoborohidruro de sodio (148 mg, 3 mmol) y cloruro de cinc (165 mg, 1,5 mmol) en metanol (8 ml) y la reacción se calentó a 48 °C durante 12 horas. El tratamiento y la cromatografía en columna ultrarrápida (sílice, cloruro de metileno/éter dietílico/metanol 60:35:5) dieron un rendimiento de un 34 % (100 mg) de 5-bromo-1-metil-3-(5-(oxetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona (125i) como un sólido verde claro: EM (ESI+) m/z 382,1 (M+H).
Ejemplo 125j Acetato de (4-(1-metil-5-(5-(oxetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 125j
Figure imgf000112_0001
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 113j, se hicieron reaccionar ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (200 mg, 0,52 mmol) y 125i (198 mg, 0,52 mmol) para dar 125j como un sólido amarillo (200 mg, 60 %). CLEM: [M+H]+ 639
Ejemplo 125 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(oxetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-M)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-1 (2H)-ona 125
Siguiendo los procedimientos como se describe en el ejemplo 123, 125j (200 mg 0,31 mmol) se hidrolizó mediante hidróxido de litio para dar 125 como un sólido blanco (116 mg, 62 %). CLEM: [M+H]+ 597. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,48 (d, J=5,0, 1H), 7,95 (d, J=2,0, 1H), 7,69 (d, J=2,0, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,34 (d, J=5,5, 1H), 6,89 (s, 1H), 5,73 (s, 1H), 5,02 (t, J=6,5, 1H), 4,75 (t, J=6,5, 2H), 4,67 (t, J=6,5, 2H), 4,61-4,63 (m, 1H), 4,50 (s, 1H), 4,31-4,35 (m, 1H), 4,10-4,16 (m, 4H), 3,86-3,88 (m, 1H), 3,74-3,79 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,56 (d, J=4,5, 2H), 2,82 (t, J=4,5, 2H), 2,50-2,62 (m, 4H), 1,88-1,92 (m, 2H), 1,78-1,82 (m, 2H)
Ejemplo 126a 3-bromo-5-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)isonicotinaldehído 126a
Figure imgf000112_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (15 ml), 3,5-dibromoisonicotinaldehído (604 mg, 2,28 mmol), 6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona (142 mg, 0,76 mmol) y carbonato de cesio (485 mg, 1,5 mmol). Se añadieron CuI (143 mg, 0,76 mmol) y 4,7-dimetoxi-1,10-fenantrolina (127 mg, 0,52 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 5 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAC/PE (1:2) para dar 126a (100 mg, 35 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 372.
Ejemplo 126b 3-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)isonicotinaldehído 126b
Figure imgf000112_0003
Un tubo sellado se cargó con 126a (100 mg, 0,27 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 1011 (125 mg, 0,27 mmol), PdCh(dppf) (18 mg, 0,02 mmol), K3PO4 (30 mg) y NaOAc (20 mg) en CH3CN (5 ml) y H2O (1 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h y, a continuación, se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con 10:1 de DCM/MeOH para dar 126b (80 mg, 48 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 633.
Ejemplo 126 2-(4-(hidroximetil)-5-(1 -metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 126
A una suspensión de 126b (76 mg, 0,12 mmol) a 0 °C en metanol (4 ml) se le añadió borohidruro de sodio (20 mg, 0,7 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (1,0 ml) y se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 126 (28 mg, 37 %). CLEM: [M+H]+ 635. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 8,61 (d, J=2,5, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,86 (d, J=3,0, 1H), 7,38-7,36 (m, 2H), 7,27-7,22 (m, 2H), 6,82-6,78 (m, 2H), 5,18-5,11 (m, 1H), 4,55 (t, J=6,0, 2H), 4,45 (t, J=6,0, 2H), 4,41-4,29 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 3,44-3,42 (m, 1H), 3,06 (t, J=4,5, 4H), 2,75-2,73 (m, 2H), 2,62-2,60 (m, 2H), 2,38 (t, J=4,5, 4H), 1,86-1,75 (m, 4H).
Ejemplo 127a Acetato de (4-(1-metil-6-oxo-5-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2 -a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 127a
Figure imgf000113_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 101j (200 mg, 0,55 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (210 mg, 0,55 mmol), Pd(dppf)Cl2 (45 mg, 0,055 mmol), K3PO4 (284 mg, 1,65 mmol) y tetrahidrofurano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (33:1) para dar 127a como un sólido marrón (200 mg, 58,3 %). EM: [M+H]+ 623,7.
Ejemplo 127 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-6-oxo-5-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 127
Una mezcla de 127a (190 mg, 0,31 mmol) y LiOH (571 mg, 13,6 mmol) en PrOH/THF (1:1, 3,5 ml) y H2O (0,5 ml) se agitó a 35 °C durante 0,5 h. A continuación, se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con EtOAc (5 ml X 2). El extracto de EtOAc combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 127 (50 mg, 26,9 %). EM: [M+H]+ 581,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,63 (d, J = 2,0, 1H), 8,49 (d, J = 5,0, 1H), 7,91 (d, J = 3,5, 1H), 7,82 (d, J = 2,0, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,37 (d, J = 5,0,1H), 7,20-7,25 (m, 1H), 6,89 (s, 1H), 6,81 (d, J = 9,0, 1H), 5,04-5,02 (m, 1H), 4,64-4,61 (m, 1H), 4,50 (d, J = 5,0, 1H), 4,34-4,31 (m, 1H), 4,18-4,08 (m, 2H), 3,89-3,86 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,05-3,06 (m, 8H), 2,62-2,56 (m, 4H), 1,92-1,88 (m, 2H), 1,81-1,78 (m, 3H)
Ejemplo 128a 5-ciclopropil-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 128a
Figure imgf000113_0002
Una mezcla de 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazol 113c (4 g, 12,9 mmol) y ciclopropanamina (7,35 g, 129 mmol) en THF (40 ml) se agitó a 30 °C durante la noche. Después de la finalización de la reacción, la mezcla se filtró y el sólido se lavó con THF (100 ml). El filtrado se concentró a presión reducida para dar 128a (2,68 g, 99 %). EM: [M+H]+ 209.
Ejemplo 128b 5-ciclopropil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-amina 128b
Figure imgf000114_0001
Una mezcla de 128a (2,68 g, 12,9 mmol), Fe (3,6 g, 64,4 mmol) y NH4CI (4,1 g, 77,4 mmol) en etanol (30 ml) y agua (5 ml) se calentó a reflujo durante 2 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla se filtró y el sólido se lavó con etanol (150 ml). El filtrado se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con metanol/cloruro de metileno (1/7). Los extractos combinados se secaron sobre Na2SO4 y se evaporaron. El residuo se purificó en Combi-flash de fase inversa para dar 128b (1,8 g, 75 %). EM: [M+H]+ 179.
Ejemplo 128c 5-bromo-3-(5-ciclopropil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 128c
Figure imgf000114_0002
Una mezcla de 128b (1,39 g, 7,8 mmol), XantPhos (450 mg, 0,78 mmol), Pd2dba3 (476 mg, 0,52 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,72 g, 6,5 mmol) y Cs2CO3 (6,3 mg. 19,5 mmol) en 1,4-dioxano (30 ml) se calentó a reflujo durante 1 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla se separó por filtración y el sólido se lavó con metanol (60 ml). El filtrado se evaporó a vacío y el residuo se evaporó en Combi-flash de fase inversa para dar 128c (0,84 g, 30 %). EM: [M+H]+ 364.
Ejemplo 128d Acetato de (4-(5-(5-ciclopropil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidro-pirazino[1,2—a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 128d
Figure imgf000114_0003
Siguiendo los procedimientos como se describe en el ejemplo 113j, la reacción de 128c (230 mg, 0,6 mmol) y ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (218 mg, 0,6 mmol) dio 128d como un sólido amarillo (331 mg, 89 %). CLEM: [M+H]+ 623
Ejemplo 128 2-(4-(5-(5-ciclopropil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5—a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-1(2H)-ona 128
Siguiendo los procedimientos como se describe en el ejemplo 113, 128d (331 mg, 0,53 mmol) se hidrolizó con hidróxido de litio y dio 128 como un sólido blanco (54 mg, 20 %). CLEM: [M+H]+ 581. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 6 8,48 (d, J=5,0, 1H), 7,93 (d, J=2,0, 1H), 7,72 (d, J=2,0, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,34 (d, J=5,0, 1H), 6,90 (s, 1H), 5,70 (s, 1H), 5,03-5,02 (m, 1H), 4,64-4,62 (m, 1H), 4,52 (s, 1H), 4,32 (s, 1H), 4,16-4,03 (m, 4H), 3,89-3,87 (m, 1H), 3,80 (s, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,12-3,10 (m, 2H), 2,61-2,57 (m, 4H), 1,90 (d, J=5,5, 3H), 1,79 (s, 2H), 0,56 (d, J=6,0, 2H), 0,53 (s, 2H) Ejemplo 129a 2-n¡tro-6,7-d¡h¡dro-4H-p¡razolo[5,1—c][1,4]oxazina 129a
Figure imgf000115_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazol 113c (3,00 g, 9,59 mmol) y ácido bromhídrico acuoso 4 M (120 ml) y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante 24 h. Después de este tiempo, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida hasta aproximadamente un volumen de 6 ml y el residuo se agitó en hidróxido de sodio acuoso 2 M (40 ml) durante 2 h. Después de este tiempo, se añadió cloruro de metileno (40 ml) y la mezcla se agitó durante 15 min. La capa acuosa se separó y se extrajo con cloruro de metileno (2 * 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml) y se secaron sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para dar un rendimiento de un 62 % (1,01 g) de 129a como un sólido blanco: pf 110-112 °C; RMN de 1H (300 MHz, CDCb) 6 6 , 6 8 (s, 1H), 4,87 (s, 2H), 4,28 (t, 2H, J = 5,4 Hz), 4,20 (t, 2H, J = 5,1 Hz); EM (ESI+) m/z 170,0 (M+H).
Ejemplo 129b 6,7-dihidro-4H-p¡razolo[5,1 -c][1,4]oxazin-2-amina 129b
Figure imgf000115_0002
Un frasco de hidrogenación Parr de 500 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 129a (1,01 g, 5,92 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 125 mg de peso seco) y etanol (50 ml). El frasco se evacuó, se cargó con gas hidrógeno a una presión de 25 psi (0,17 MPa) y se agitó durante 2 h en un aparato de hidrogenación Parr. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el frasco. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® 521 y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna usando 400 cm3 de gel de sílice y eluyendo con metanol al 3 % en cloruro de metileno. Las fracciones que contenían 129b se recogieron para dar, después de concentrar a presión reducida, un rendimiento de un 73 % ( 601 mg) de 129b como un sólido amarillo: pf 74-76 °C RMN de 1H (300 MHz, CDCb) 6 5,37 (s, 1H), 4,72 (s, 2H), 4,07 (t, 2H, J = 5,1 Hz), 3,98 (t, 2H, J = 5,1 Hz), 3,57 (s.a., 2H); EM (ESI+) m/z 140,4 (M+H).
Ejemplo 129c 5-bromo-3-(6,7-dihidro-4H-p¡razolo[5,1-c][1,4]oxaz¡n-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 129c
Figure imgf000115_0003
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 50 ml equipado con un agitador magnético, un condensador de reflujo y una entrada de nitrógeno se cargó con 1,4-dioxano (20 ml), 129b (600 mg, 4,31 mmol), 3,5-dibromo-1-metil-piridin-2(1H)-ona (1,44 g, 5,40 mmol) y carbonato de cesio (3,08 g, 9,48 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la solución resultante durante 30 min, se añadieron Xantphos (300 mg, 0,52 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (320 mg, 0,35 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se dividió entre acetato de etilo (75 ml) y agua (75 ml) y se filtró. La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 * 25 ml). Las capas orgánicas se combinaron y lavaron con salmuera (50 ml) y se secaron sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna usando 500 cm3 de gel de sílice y eluyendo con metanol al 1 % en cloruro de metileno. Las fracciones que contenían 129c se recogieron para dar, después de concentrar a presión reducida, un rendimiento de un 31 % (433 mg) de 129c como un sólido verde: pf 195-197 °C; RMN de 1H (300 MHz, CDCb) 6 7,92 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,44 (s, 1H), 6,90 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 5,65 (s, 1H), 4,80 (s, 2H), 4,13 (s, 2H), 3,61 (s, 5H); EM (ESI+) m/z 324,9 (M+H).
Ejemplo 129d Acetato de (4-(5-(6,7-dihidro-4H-p¡razolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 129d
Figure imgf000116_0001
Siguiendo los procedimientos como se describe en el ejemplo 113j, la reacción de ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (200 mg, 0,52 mmol) y 129c (170 mg, 0,52 mmol) dio 129d como un sólido amarillo (185 mg, 61 %). CLEM: [M+H]+ 584
Ejemplo 129 2-(4-(5-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 129
Siguiendo los procedimientos como se describe en el ejemplo 113, 129d (180 mg 0,31 mmol) se hidrolizó con hidróxido de litio para dar 129 como un sólido blanco (100 mg, 62 %). CLEM: [M+H]+ 542. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,48 (d, J=5,0, 1H), 7,98 (d, J=2,0, 1H), 7,71 (d, J=2,0, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,35 (d, J=5,0, 1H), 6,89 (s, 1H), 5,72 (s, 1H), 5,03 (d, J=6,5, 1H), 4,79 (s, 2H), 4,61-4,64 (m, 1H), 4,50 (s, 1H), 4,31-4,35 (m, 1H), 4,06-4,16 (m, 6H), 3,86 (s, 1H), 3,71 (s, 3H), 2,56-2,62 (m, 4H), 1,88-1,92 (m, 2H), 1,80 (m, 2H)
Ejemplo 130a (3S)-3-metil-4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 130a
Figure imgf000116_0002
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 101g, la reacción de 5-bromo-2-nitropiridina (10,5 g, 50 mmol) y (3S)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (10,0 g, 50 mmol) dio 130a como un sólido amarillo (8,05 g, 50 %). CLEM: [M+H]+ 323
Ejemplo 130b (3S)-4-(6-aminopiridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 130b
Figure imgf000116_0003
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 101h, la hidrogenación de 130a (5,8 g) dio 130b como un sólido marrón (4,9 g, 96 %). CLEM: [M+H]+ 293
Ejemplo 130c (3S)-4-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 130c
Figure imgf000116_0004
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 101 i, la reacción de 130b (4,0 g) y 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (5,5 g) dio 130c como un sólido amarillo (5,4 g, 83 %). CLEM: [M+H]+ 478
Ejemplo 130d (3S)-5-bromo-1-metil-3-(5-(2-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 130d
Figure imgf000117_0001
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 101j, la hidrólisis ácida del grupo de 130c (3,1 g) dio 130d como un sólido amarillo (2,3 g, 95 %). Cl EM: [M+H]+ 380.
Ejemplo 130e (3S)-5-bromo-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 130e
Figure imgf000117_0002
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 101k, la aminación reductora de 130d (2,35 g) con oxetan-3-ona (0,4 ml) dio 130e como un sólido amarillo (2,6 g, 98 %). CLEM: [M+H]+ 434.
Ejemplo 130f (3S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 130f
Figure imgf000117_0003
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 130e (1,0 g, 1,0 eq., 2,3 mmol), Pin2B2 (1,46 g, 2,50 eq., 5,75 mmol), Pd2(dba)3 (105 mg, 0,05 eq., 0,125 mmol), X-Phos (93 mg, 0,1 eq., 0,23 mmol), AcOK (676 mg, 3,0 eq., 6,9 mmol) y dioxano (50 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 4 h, a continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó con PE/EA 3:1 (80 ml) para dar 130f como un sólido amarillo (1,0 g, 90 %). EM: [M+H]+ 482.
Ejemplo 130g (3S)-4-[1-metil-5-({5-[2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 130g
Figure imgf000118_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 130f (420 mg, 1,0 eq., 0,44 mmol), 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.02,6]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 108a (200 mg, 2 eq., 0,88 mmol):
Figure imgf000118_0002
PdCL(dppf) (36 mg, 0,1 eq., 0,044 mmol), K3PO4 (279 mg, 3 eq., 1,32 mmol) y THF (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó con PE/EA 3:1 (80 ml) para dar 130g (90 mg, 31 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 663.
Ejemplo 130 (3S)-10-[4-[1-metil-5-({5-[2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-3-(hidroximetil)piridin-2-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 130
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 130g (90 mg, 1 eq., 0,11 mmol), LiOH (7,9 mg, 3 eq., 0,33 mmol), i-PrOH (3 ml), THF (3 ml) y H2O (2 ml). La mezcla se agitó a 30 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 130 (40 mg, 44 %) como un sólido amarillo. CLEM: [M+H]+ 665,4. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) 6 8,65 (d, J=2,0, 1H), 8,48 (d, J=5,0, 1H), 7,96 (d, J=2,0, 1H), 7,84-7,83 (m, 2H), 7,36 (d, J=5,0, 1H), 7,31 (dd, J=3,0, 9,0, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,81 (d, J=9,0, 1H), 5,08-5,05 (m, 1H), 4,71-4,61 (m, 5H), 4,51-4,29 (m, 2H), 4,16-4,15 (m, 2H), 3,87-3,85 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,55-3,45 (m, 2H), 3,06-3,08 (m, 2H), 2,59-2,47 (m, 7H), 2,22-2,17 (m, 1H), 1,27 (s, 6H), 0,98 (d, J=6,5, 3H).
Ejemplo 131a (S)-acetato de (4-(5-(5-(2-etil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metMo 131a
Figure imgf000118_0003
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con (S)-5-bromo-3-(5-(2-etil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 161e (269 mg, 0,60 mmol):
Figure imgf000119_0001
113i (230 mg, 0,60 mmol), Pd(dppf)Cl2 (25 mg, 0,03 mmol), NaOAc (98 mg, 1,2 mmol), K3PO4 (254 mg, 1,2 mmol) y acetonitrilo (4 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 1 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (25:1, V/V) para dar 131a (150 mg, 40 %) como un sólido marrón. CLEM: [M+H]+ 707
Ejemplo 131 (S)-2-(4-(5-(5-(2-etil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]mdol-1(2H)-ona 131
Una mezcla de 131a (150 mg, 0,21 mmol) y LiOH (50 mg, 2,1 mmol) en PrOH/THF (1:1, 4 ml) y H2O (1 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con EtOAc (10 ml X 2). El extracto de EtOAc combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 131 (26 mg, 25 %) como un sólido blanco. CLEM: [M+H]+ 665. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,64 (d, J=2,0, 1H), 8,50 (d, J=5,0, 1H), 7,93 (d, J=2,5, 1H), 7,83 (d, J=1,5, 2H), 7,38 (d, J=5,0, 1H), 7,27 (d, J=5,0,1H), 6,90 (s, 1H), 6,83 (d, J=8,5, 1H), 4,73-4,64 (m, 5H), 4,50 (s, 1H), 4,33-4,31 (m, 1H), 4,20-4,16 (m, 2H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,53-3,51 (m, 1H), 3,33 (s, 1H), 3,13 (t, J=5,0, 2H), 2,61-2,56 (m, 4H), 2,45 (d, J=4,0, 2H), 2,37 (s, 1H), 1,91-1,79 (m, 7H), 1,39-1,40 (m, 1H), 0,83 (t, J=7,0, 3H).
Ejemplo 132a 6-cloro-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilamino)-2-metilpiridazin-3(2H)-ona 132a
Figure imgf000119_0002
Una mezcla de 6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-amina 129b (0,8 g, 5,76 mmol), xantophos (360 mg, 0,623 mmol), Pd2dba3 (384 mg, 0,42 mmol), 4-bromo-6-cloro-2-metilpiridazin-3(2H)-ona (1,28 g, 5,76 mmol) y Cs2CO3 (5,05 g. 17,3 mmol) en 1,4-dioxano (40 ml) se calentó a reflujo durante 2 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla se separó por filtración y se lavó con MeOH (60 ml). El filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó en Combi-flash de fase inversa para dar 132a (1,3 g, 81 %). EM: [M+H]+ 282.
Ejemplo 132b Acetato de (4-(5-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 132b
Figure imgf000119_0003
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 131a, la reacción de ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (200 mg, 0,52 mmol) y 132a (146 mg, 0,52 mmol) dio 132b como un sólido amarillo (100 mg, 53 %). CLEM: [M+H]+ 5 85
Ejemplo 132 2-(4-(5-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]mdol-1(2H)-ona 132
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 131, la hidrólisis de 132b (100 mg 0,171 mmol) con hidróxido de litio dio 132 como un sólido blanco (60 mg, 65 %). CLEM: [M+H]+ 543. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) 6 8,55 (d, J=5,0, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,43 (d, J=5,5, 1H), 6,87 (s, 1H), 5,97 (s, 1H), 4,80 (s, 2H), 4,58 (s, 3H), 4,47 (s, 1H), 4,15-1,14 (m, 2H), 4,11 (s, 4H), 3,90 (s, 4H), 2,61-2,60 (m, 2H), 2,57 (t, J=6,5, 2H), 1,89-1,91 (m, 2H), 1,79-1,80 (m, 2H)
Ejemplo 133a 6-cloro-2-metil-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)piridazin-3(2H)-ona 133a
Figure imgf000120_0001
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 250 ml equipado con un condensador de reflujo, un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se cargó con 4-bromo-6-cloro-2-metilpiridazin-3(2H)-ona (1,90 g, 8,53 mmol):
Figure imgf000120_0002
113e (1,18 g, 7,75 mmol) y 1,4-dioxano (40 ml). El matraz se purgó con nitrógeno y se enfrió a 0 °C. Se añadió una solución 1 M de hexametildisilacida de litio en THF (39 ml, 39,0 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión resultante durante 30 min, se añadieron Xantphos (381 mg, 0,659 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (355 mg, 0,388 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 h. Después de este tiempo, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con agua (10 ml). El pH de la solución se ajustó a 7,6 con ácido clorhídrico 2 N. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 4 0 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en sílice para dar un rendimiento de un 76 % (1,74 g) de 133a como un sólido blanquecino: pf 184-186 °C; RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) 69,62 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 6,00 (s, 1H), 4,04 (t, 2H, J = 5,1 Hz), 3,65 (s, 3H), 3,53 (s, 2H), 2,82 (t, 2H, J = 5,1 Hz), 2,37 (s, 3H); EM (ESI+) m/z 295,1 (M+H).
Ejemplo 133b Acetato de (4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 133b
Figure imgf000120_0003
Siguiendo los procedimientos como se describe para el compuesto 131a, y partiendo de ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico, 113i (200 mg, 0,52 mmol) y 132a (153 mg, 0,52 mmol), se dio 132b como un sólido amarillo (170 mg, 55 %). CLEM: [M+H]+ 598
Ejemplo 133 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1 (2H)-ona 133
La hidrólisis de 133b (160 mg 0,267 mmol) con hidróxido de litio dio 133 como un sólido blanco (94 mg, 63 %). CLEM:
[M+H]+ 556. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,55 (d, J=5,0, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,43 (d, J=5,0, 1H), 6,87 (s, 1H), 5,94 (s, 1H), 4,57 (s, 3H), 4,47 (s, 1H), 4,11-4,15 (m, 4H), 3,89 (s, 3H), 3,87 (s, 1H), 3,61 (d, J=4,0,2H), 2,90 (s, 2H), 2,61 (d, J=4,0, 2H), 2,57 (t, J=6,0, 2H), 2,49 (s, 3H), 1,89-1,91 (m, 2H), 1,79-.80 (m, 2H)
Ejemplo 134a 10-bromo-1H,2H,3H,4H,6H,7H,8H,9H-pirazino[1,2-a]indol-1-ona 134a
En un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 250 ml se dispuso una solución de 1H,2H,3H,4H,6H,7H,8H,9H-pirazino[1,2-a]indol-1-ona 101e (9,5 g, 49,94 mmol, 1,00 equiv.) en N,N-dimetilformamida (100 ml), seguido de la adición de N-bromosuccinimida (9,8 g, 55,06 mmol, 1,10 equiv.) en varios lotes a 0 °C. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y se diluyó con 500 ml de agua. El precipitado se filtró y se secó en un horno de vacío para dar 9,5 g (71 %) de 119a como un sólido marrón claro.
Ejemplo 134b 10-fluoro-1H,2H,3H,4H,6H,7H,8H,9H-pirazino[1,2-a]indol-1-ona 134b
En un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 2 l purgado y mantenido con una atmósfera inerte de nitrógeno se dispuso una solución de 134a (40 g, 148,62 mmol, 1,00 equiv.) en tetrahidrofurano (200 ml), seguido de la adición gota a gota de n-BuLi (2,4 M) (218 ml, 3,50 equiv.) con agitación a -78 °C. La solución resultante se agitó a -40 °C durante 3 h. A esto se le añadió gota a gota una solución de N-fluorobencenosulfonimida (98,7 g, 313,33 mmol, 2,10 equiv.) en tetrahidrofurano (200 ml) con agitación a -78 °C. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 h, se desactivó mediante la adición de 200 ml de agua y se extrajo con 3x500 ml de acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron a vacío. El producto bruto (30 g) se purificó mediante HPLC prep. con las siguientes condiciones (fase móvil, A: ácido trifluoroacético al 0,05 %/agua; B: CH3CN; gradiente: B al 10 %-B al 25 %) para dar 5,05 g (16 %) de 134b como un sólido blanco. EM: [M+H]+ 209. RMN de 1H (300 MHz, CDCla) 66,16 (a., 1H), 3,90-3,86 (m, 2H), 3,65-3,62 (m, 2H), 2,53-2,47 (m, 4H), 1,88-1,80 (m, 2H), 1,77-1,72 (m, 2H).
Ejemplo 134c 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 134c
Figure imgf000121_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (60 ml), 134b (500 mg, 2.4 mmol):
Figure imgf000121_0002
2-bromo-4-cloronicotinaldehído 103a (1,60 g, 7,2 mmol) y acetato de potasio (471 mg, 4,8 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 30 minutos, se añadieron Xantphos (140 mg, 0,24 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (220 mg, 0,24 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 80 °C durante 10 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se dividió entre acetato de etilo (40 ml) y agua (40 ml) y se filtró. La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en columna ultrarrápida eluyendo con PE/EA 3:1 para dar 134c (678 mg, 81 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 348. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) 69,87 (s, 1H), 8,60 (d, J=5,5, 1H), 7,56 (d, J=5,5, 1H), 4,23-4,25 (m, 2H), 4,13-4,15 (m, 2H), 2,59 (t, J=6,0, 2H), 2,41 (t, J=6,0, 2H), 1,75-1,80 (m, 2H), 1,66-1,70 (m, 2H)
Ejemplo 134d 2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)nicotinaldehído 134d
Figure imgf000122_0001
Una mezcla de 134c (300 mg, 0,86 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 1011 (403 mg, 0,86 mmol), CHaCoONa (142 mg, 1,72 mmol), K3PO4 (460 mg, 1,72 mmol), PdCb(dppf) (71 mg, 0,086 mmol) en CH3CN (25 ml) y H2O (1 ml) se calentó a 100 °C durante 3 horas. Después de que la reacción se evaporara, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol (30:1) para dar 134d (312 mg, rendimiento de un 55 %) como un sólido marrón. EM: (M+H)+ 653.
Ejemplo 134 10-fluoro-2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-1 (2H)-ona 134
A una solución de 134d (200 mg, 0,30 mmol) en MeOH (20 ml) se le añadió NaBH4 (40 mg, 0,9 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 2 h. Después de que la reacción se evaporara, el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 134 (108 mg, rendimiento de un 54 %) como un sólido amarillo. EM: (M+H)+ 655. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) ó 8,61 (d, J=2,0, 1H), 8,49 (d, J=5,0, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,85 (d, J=2,5, 1H), 7,45 (d, J=1,5, 1H), 7,37-7,39 (m, 1H), 7,35 (d, J=5,0, 1H), 7,24 (d, J=9,0, 1H), 4,99 (s, 1H), 4,56 (t, J=6,5, 2H), 4,40-4,47 (m, 4H), 4,18­ 4,22 (m, 2H), 4,05-4,09 (m, 1H), 3,84-3,96 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,41-3,46 (m, 1H), 3,07 (s, 4H), 2,54-2,61 (m, 2H), 2,39-2,42 (m, 6H), 1,78 (s, 2H), 1,69 (s, 2H)
Ejemplo 135a 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5—a]pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1 H)-ona 135a
Figure imgf000122_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador se cargó con el compuesto 113h (1,0 g, 3 mmol), Pin2B2 (3,8 g, 15 mmol), Pd(dppf)Cl2 (137 mg, 0,15 mmol), X-phos (143 mg, 0,3 mmol), KOAc (88 mg, 9 mmol) y 1,4-dioxano (50 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla de reacción se calentó a 60 °C durante 15 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó con éter de petróleo para dar 135a como un sólido amarillo (0,87 g, 75 %). EM: [M+H]+ 386
Ejemplo 135b 2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5—a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)nicotinaldehído 135b
Una suspensión de 135a (385 mg, 1 mmol), 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 134c (347 mg, 1 mmol), K3PO4 (424 mg, 2 mmol), NaOAc (164 g, 2 mmol) y 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (41 mg, 0,05 mmol) en CH3CN (50 ml) se calentó a 100 °C en un globo de N2 durante 4 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completada en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con DCM (50 ml) y agua (80 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con DCM (3 x 50 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con DCM/MeOH (de 80/1 a 30/1) para dar 135b (285 g, 50 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 571
Ejemplo 135 10-fluoro-2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 135
A una solución de 135b (280 g, 0,49 mmol) en MeOH (50 ml) se le añadió NaBH4 (56 g, 1,47 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 3 h, CLEM indicó que se completó la reacción. A continuación, la mezcla se vertió en H2O (50 ml) y se extrajo con DCM (50 ml x 3 ). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 135 (187 mg, 67%) como un sólido blanco. EM: [M+H]+ 572. r Mn de 1H (500 MHz, CDCb) 5 8,47 (d, J=5,5, 1H), 7,95 (d, J=2,0, 1H), 7,70 (d, J=2,0, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,35 (d, J=5,5, 1H), 5,70 (s, 1H), 4,96 (t, J=7,0, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,45 (s, 1H), 4,33 (s, 1H), 4,07-4,12 (m, 4H), 3,84 (s, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,60 (s, 2H), 2,88 (t, J=5,5, 2H), 2,61 (s, 2H), 2,57 (s, 2H), 2,48 (s, 3H), 1,86-1,90 (m, 2H), 1,77 (s, 2H)
Ejemplo 136a (S)-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)nicotinaldehído 136a
Figure imgf000123_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 130f (225 mg, 1,5 eq., 0,47 mmol), 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 134c (150 mg, 1 eq., 0,43 mmol):
Figure imgf000123_0002
PdCh(dppf) (35 mg, 0,1 eq., 0,043 mmol), K3PO4 (273 mg, 3 eq., 1,29 mmol) y THF (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna con DCM/EtOH (40:1) para dar 136a como un sólido amarillo (100 mg, 34 %). EM: [M+H]+ 667,3.
Ejemplo 136 (S)-10-fluoro-2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il) piperazin-1 -il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1 ,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2 -a]indol-1 (2 H)-ona 136
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 136a (100 mg, 1,0 eq., 0,15 mmol), NaBH4 (17 mg, 3,0 eq., 0,45 mmol) y MeOH (10 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 136 (64 mg, 64 %). CLEM:
[M+H]+ 669,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 58,64 (d, J=2,0, 1H), 8,48 (d, J=5,0, 1H), 7,96 (d, J=2,5, 1H), 7,83-7,82 (m, 2H), 7,36 (d, J=5,0, 1H), 7,30 (dd, J=2,5, 9,0, 1H), 6,81 (d, J=8,5, 1H), 4,99-4,96 (m, 1H), 4,71-4,61 (m, 5H), 4,45­ 3,83 (m, 5H), 3,71 (s, 3H), 3,54-3,45 (m, 2H), 3,08-3,06 (m, 2H), 2,56-2,47 (m, 7H), 2,21-2,17 (m, 1H), 1,89-1,76 (m, 4H), 0,98 (d, J=6,5, 3H)
Ejemplo 137a (R)-acetato de (4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 137a
Figure imgf000124_0001
Una mezcla de (R)-5-bromo-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 151f, el enantiómero de 130f (283 mg, 0,65 mmol):
Figure imgf000124_0002
Se calentó ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (250 mg, 0,65 mmol), PdCb(dppf) (53 mg, 0,065 mmol), NaOAc (107 mg, 1,3 mmol), K3PO4 (347 mg, 1,3 mmol) en acetonitrilo (30 ml) a 100 °C durante 3 h. El disolvente se evaporó a vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con DCM/MeOH 30:1 para dar 137a (216 mg, 48 %) como un sólido marrón. CLEM: [M+H]+ 693,4
Ejemplo 137 (R)-2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexa-hidropirazino[1,2-a]indol-1 (2H)-ona 137
A una solución de 137a (200 mg, 0,29 mmol) en propan-2-ol (8 ml), tetrahidrofurano (8 ml) y agua (2,0 ml) se le añadió LiOH (690 mg, 29 mmol). La mezcla se agitó a 30 °C durante 2 h. A continuación, se evaporó y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 137 (143 mg, 76 %) como un sólido blanco. CLEM: (M+H)+ 651,4. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) 68,63 (d, J=2,0, 1H), 8,49 (d, J=5,0, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,84 (d, J=2,5, 1H), 7,47 (d, J=2,0, 1H), 7,37-7,39 (m, 1H), 7,35 (d, J=5,5, 1H), 7,25 (d, J=9,5, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,95 (t, J=4,0, 1H), 4,54-4,58 (m, 2H), 4,40-4,49 (m, 4H), 4,11-4,26 (m, 3H), 3,86-3,88 (m, 1H), 3,68 (s, 1H), 3,61 (s, 3H), 3,37-3,42 (m, 1H), 3,08-3,11 (m, 1H), 2,95 (t, J=9,0, 1H), 2,62-2,67 (m, 1H), 2,54-2,59 (m, 2H), 2,48 (t, J=6,0, 2H), 2,30-2,36 (m, 2H), 2,19 (t, J=8,0, 1H), 1,81 (s, 2H), 1,68-1,72 (m, 2H), 0,93 (d, J=6,0, 3H)
Ejemplo 138a 3-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)isonicotinaldehído 138a
Figure imgf000124_0003
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml se cargó con 3-bromo-5-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)isonicotinaldehído 101f (298 mg, 0,7 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 135a (325 mg, 0,84 mmol), PdCb(dppf) (30 mg, 0,035 mmol), K3PO4 (300 mg, 1,4 mmol) y NaOAc 3H2O (200 mg, 1,4 mmol) en CH3CN (70 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con argón. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con DCM/MeOH 25:1 para dar 138a (220 mg, 55 %) como un sólido amarillo pálido. EM: [M+H]+ 553,3.
Ejemplo 138 2-(4-(hidroximetil)-5-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-1 (2H)-ona 138
Una mezcla de 138a (200 mg, 0,36 mmol) y NaBHU (50 mg, 1,2 mmol) en MeOH (60 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se desactivó con agua y se extrajo con EtOAc (10 ml X 3). El extracto de EtOAc combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 138 (162 mg, 85 %). CLEM: [M+H]+ :555.3. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) ó 8,64 (s,1H), 8,49 (s, 1H), 7,97 (d, J=2,5, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,33 (d, J=2, 1H), 6,88 (s, 1H), 5,68 (s, 1H), 4,65-4,63 (m, 1H), 4,57-4,55 (m, 1H), 4,37 (t, J=11, 1H), 4,20-4,16 (m, 3H), 4,07-3,98 (m, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,59 (s, 2H), 2,87 (t, J=5,5, 2H), 2,61-2,56 (m, 4H), 2,48 (s, 3H), 1,92-1,90 (m, 2H), 1,80-1,79 (m, 2H)
Ejemplo 139a 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 139a
Figure imgf000125_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (50 ml), 2-bromo-4-cloronicotinaldehído 103a (1,4 g, 6,4 mmol), 3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-1(2H)-ona 112d (0,6 g, 3,2 mmol), Pd2(dba)3 (293 mg, 0,32 mmol), XantPhos (370 mg, 0,64 mmol) y carbonato de potasio (627 mg, 6,4 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 80 °C durante la noche. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con DCM/CH3OH (20:1, V/V) para dar 139a (528 mg, 50 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 330. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) ó 10,09 (s, 1H), 8,37 (d, J=5,5, 1H), 7,16 (d, J=5,5, 1H), 6,25 (s, 1H), 4,29-4,32 (m, 2H), 3,83-3,86 (m, 2H), 2,96-2,99 (m, 2H), 2,75-2,78 (m, 2H), 2,00-2,07 (m, 2H), 1,82-1,85 (m, 2H)
Ejemplo 139b 4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 139b
Figure imgf000125_0002
Un matraz de fondo redondo se cargó con 139a (100 mg, 0,30 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2- ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 1011 (140 mg, 0,30 mmol), PdCb(dppf) (25 mg, 0,03 mmol), K3PO4.3 H2O (160 mg, 0,60 mmol), NaOAc (59 mg, 0,60 mmol), acetonitrilo (10 ml) y H2O (5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó en cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con petróleo/acetato de etilo 1:3 para dar 139b como un sólido amarillo (95 mg, 50 %). CLEM: [M+H]+ 635
Ejemplo 139 2-(3-(hidroximetil)-4-(1 -metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3- il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4—b]indolizin-1 (2H)-ona 139
Una mezcla de 139b (95 mg, 0,15 mmol), NaBH4 (17 mg, 0,45) y CH3OH (10 ml) se agitó a 25 °C durante 1 h. La mezcla se extrajo con CH2Cl2 (10 ml X 2). El extracto de CH2Cl2 combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 139 (60 mg, 63 %). CLEM: [M+H]+ 637. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) ó 8,63 (d, J=2,0, 1H), 8,47 (d, J=5,5, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,85 (d, J=2,5, 1H), 7,49 (d, J=2,0, 1H), 7,37-7,39 (m, 1H), 7,30 (d, J=5,0, 1H), 7,24 (d, J=9,0, 1H), 6,05 (s, 1H), 4,47-4,57 (m, 2H), 4,41-4,47 (m, 2H), 4,39-4,41 (m, 1H), 4,33-4,35 (m, 1H), 4,11-4,16 (m, 1H), 3,93-3,96 (m, 1H), 3,76-3,82 (m, 2H), 3,59 (s, 3H), 3,41-3,45 (m, 2H), 3,06-3,08 (m, 4H), 2,98-3,01 (m, 1H), 2,92-2,95 (m, 1H), 2,71-2,72 (m, 2H), 2,36-2,39 (m, 4H), 1,91-1,93 (m, 2H), 1,72-1,78 (m, 2H)
Ejemplo 140a (S)-2-(7,7-difluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)nicotinaldehído 140a
Figure imgf000126_0001
Siguiendo los procedimientos como se describe en el ejemplo 130g, la reacción de (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 130f y 4-cloro-2-(7,7-difluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído (170 mg):
Figure imgf000126_0002
dio 140a como un sólido amarillo (200 mg, 60 %). CLEM: [M+H]+ 684,3. Se preparó 4-cloro-2-(7,7-difluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído a partir de 7,7-difluoro-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona de acuerdo con el esquema de reacción en la figura 25.
Ejemplo 140 (S)-7,7-difluoro-2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-ii)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-1 (2H)-ona 140
Siguiendo los procedimientos como se describe en el ejemplo 130, la reducción con borohidruro de sodio de 140a (200 mg) dio 140 como un sólido amarillo (104 mg, 51 %). CLEM: [M+H]+ 686,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 8,62 (d, J=2,0, 1H), 8,46-8,49 (m, 2H), 7,83 (d, J=3,0, 1H), 7,45 (d, J=2,5, 1H), 7,35-7,38 (m, 2H), 7,25 (d, J=9,5, 1H), 6,64 (s, 1H), 4,95-4,97 (m, 1H), 4,54-4,57 (m, 2H), 4,38-4,48 (m, 4H), 4,15-4,27 (m, 3H), 3,87-3,90 (m, 1H), 3,67 (s, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,26-3,39 (m, 3H), 3,08-3,10 (m, 1H), 2,92-2,96 (m, 1H), 2,63-2,67 (m, 2H), 2,52-2,55 (m, 1H), 2,30-2,36 (m, 2H), 2,18-2,24 (m, 3H), 0,93 (d, J=6,0, 3H)
Ejemplo 141a 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 141a
Figure imgf000126_0003
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 2-bromo-4-cloronicotinaldehído 103a (3,0 g, 13,6 mmol), 4,4-dimetil-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 107e (1,84 g, 9,0 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (826 mg, 0,9 mmol), XantPhos (1,04 mg, 1,8 mmol), Cs2CO3 (5,8 g, 18,0 mmol) y 1,4-dioxano (40 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se recristalizó a partir de acetato de etilo para dar 141a como un sólido amarillo (730 mg, 31,7 %). EM: [M+H]+ 344,0.
Ejemplo 141b 2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-metil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-carbaldehído 141b
Figure imgf000127_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 141a (130 mg, 0,38 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 135a (146 mg, 0,38 mmol), Pd(dppf)Cl2 (31 mg, 0,038 mmol), K3CO3 (105 mg, 0,76 mmol) y DMF (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 110 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (30:1) para dar l4 lb como un sólido marrón (160 mg, 74,6 %). EM: [M+H]+ 567.3.
Ejemplo 141 2-[3'-hidroximetil-1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4’]bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetM-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1 -ona 141
A una solución de 141b (150 mg, 0,26 mmol) a temperatura ambiente en metanol (10 ml) se le añadió borohidruro de sodio (29 mg, 0,78 mmol) y la mezcla resultante se agitó durante 30 minutos. Se desactivó con agua (1,0 ml) y se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 141 (35 mg, 23,2 %). CLEM: [M+H]+ 569.3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,46 (d, J = 5,0, 1H), 7,94 (d, J = 2,5, 1H), 7,72 (d, J = 2,0, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,33 (d, J = 5,5, 1H), 6,83 (s, 1H), 5,68 (s, 1H), 5,03-5,00 (m, 1H), 4,64-4,61 (m, 1H), 4,51-4,48 (m, 1H), 4,32-4,27 (m, 1H), 4,21-4,09 (m, 4H), 3,91-3,82 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,62-3,58 (m, 2H), 2,87 (t, J = 2,5, 2H), 2,57 (d, J = 4,0, 2H), 2,54 (s, 2H), 2,51 (s, 3H), 1,27 (s, 6H)
Ejemplo 142a 5-bromo-1-metil-3-(pirimidin-4-ilamino)piridin-2(1H)-ona 142a
Figure imgf000127_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y una entrada de nitrógeno se cargó con 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (2,00 g, 21,0 mmol), 2-aminopirimidina (5,61 g, 21,0 mmol), carbonato de cesio (13,7 g, 42,1 mmol), DMF (5 ml) y 1,4-dioxano (70 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión resultante durante 30 min, se añadieron Xantphos (1,10 g, 1,89 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (963 mg, 1,05 mmol). Un condensador de reflujo se acopló al matraz y la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 4 h. Después de este tiempo, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con cloruro de metileno/metanol 90:10 (150 ml) y agua (100 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con cloruro de metileno/metanol 90:10 (50 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (sílice, cloruro de metileno/metanol 90:10) para dar 142a en un rendimiento de un 58 % (3,42 g) como un sólido verde claro amorfo: pf 217-219 °C; RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 69,29 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,72 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,36 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,37 (dd, J = 5,5, 1,0 Hz, 1H), 3,53 (s, 3H); CLEM (ESI+) m/z 281,0 (M+H).
Ejemplo 142b Acetato de (4-(1-metil-6-oxo-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 142b
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 142a (154,5 mg, 0,55 mmol), acetato de (2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)metilo 113i (252,5 mg, 0,55 mmol), Pd(dppf)Cl2 (25,9 mg, 0,03135 mmol), NaOAc (108 mg, 1,1 mmol), K3PO4 3 H2O (293 mg, 1,1 mmol), acetonitrilo (6 ml) y agua (0,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 110 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (15:1, V/V) para dar 142b (117 mg, 30 %) como un sólido marrón. CLEM: [M+H]+ 540,2
Ejemplo 142 2-[3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-3,4,6,7,8,9-hexahidro-2H-pirazino[1,2-a]indol-1-ona 142
Una mezcla de 142b (121,6 mg, 0,225 mmol) y LiOH (100 mg, 4,2 mmol) en PrOH/THF (1:1, 4 ml) y H2O (1 ml) se agitó a 35 °C durante 0,5 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con EtOAc (20 ml X 3). El extracto de EtOAc combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 142 (54 mg, 48,2 %) como un sólido amarillo pálido. CLEM: [M+H]+ 498,1. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) ó 9,23 (s, 1H), 8,76 (d, J=2,5, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,50 (d, J=5,0, 1H), 8,31 (d, J=6,0, 1H), 7,69 (d, J=2,5, 1H), 7,37 (d, J=5,0, 1H), 7,31-7,33 (m, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,97 (t, J=4,5, 1H), 4,39-4,43 (m, 2H), 4,10-4,24 (m, 3H), 3,87 (d, J=12,0, 1H), 3,61 (s, 3H), 2,57-2,64 (m, 2H), 2,47 (d, J=6, 2H), 1,79 (d, J=4,0, 2H), 1,69 (d, J=6,0, 2H)
Ejemplo 143a 1-metil-3-(pirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 143a
Figure imgf000128_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(pirimidin-4-ilamino)piridin-2(1H)-ona 142a (4,0 g, 14 mmol), X-phos (400 mg, 0,7 mmol), Pd2(dba)3 (635 mg, 0,7 mmol), KOAc (7,3 mg, 28 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (10,6 g, 42 mmol) y 1,4-dioxano (100 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla de reacción se calentó a 60 °C durante 8 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 5:1 para dar 143a como un sólido amarillo pálido (3,8 mg, 82 %). EM: [M+H]+ 329,5.
Ejemplo______143b 4-(1-metil-5-(pirimidin-4-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}nicotinaldehído 143b
Figure imgf000128_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador se cargó con 143a (150 mg, 0,46 mmol), 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 109a (164 mg, 0,46 mmol):
Pd(dppf)Cl2 (16 mg, 0,02 mmol), K3PO4.3 H2O (223 mg, 0,92 mmol) en CH3CN (5 ml) y H2O (1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con 20:1 de DCM/MeOH para dar 143b como un sólido amarillo (110 mg, 48 %). EM: [M+H]+ 527.
Ejemplo 143 6-[3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-2,2-dimetil-2,3,5,6-tetrahidro-1 H,4H-8-tia-6-aza-ciclopenta[a]inden-7-ona 143
Una mezcla de 143b (110 mg, 0,2 mmol), NaBH4 (30 mg, 0,8 mmol) y MeOH (5 ml) se agitó a 25 °C durante 30 min. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con EtOAc (10 ml X 2 ). El extracto de EtOAc combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 143 (48 mg, 44 %). CLEM: [M+H]+ 529. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) 69,23 (s, 1H), 8,76 (d, J=2,5, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,51-8,49 (m, 1H), 8,31 (m, 1H), 7,67 (d, J=3,0, 1H), 7,38-7,37 (m, 1H), 7,33-7,31 (m, 1H), 5,02-5,01 (m, 1H), 4,43 (d, J=2,5, 2H), 4,18­ 4,15 (m, 1H), 3,83-3,81 (m, 1H), 3,61-3,59 (m, 3H), 3,03-2,99 (m, 1H), 2,91-2,89 (m, 1H), 2,76 (s, 2H), 2,60-2,53 (m, 2H), 1,23-1,22 (m, 6H)
Ejemplo_______ 144a 4-(1-metil-5-(pirimidin-4-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}nicotinaldehído 144a
Figure imgf000129_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador se cargó con 1-metil-3-(pirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 143a (150 mg, 0,46 mmol), 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 108a (157 mg, 0,46 mmol):
Figure imgf000129_0002
Pd(dppf)Cl2 (16 mg, 0,02 mmol), K3PO4.3 H2O (223 mg, 0,92 mmol) en CH3CN (5 ml) y H2O (1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con 20:1 de DCM/MeOH para dar 144a como un sólido amarillo (98 mg, 48 %). EM: [M+H]+ 510.
Ejemplo 144 2-[3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta-[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona 144
Una mezcla de 144a (98 mg, 0,19 mmol), NaBH4 (30 mg, 0,8 mmol) y MeOH (5 ml) se agitó a 25 °C durante 30 min. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con EtOAc (10 ml x 2 ). El extracto de EtOAc combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 144 (25 mg, 42 %). CLEM: [M+H]+ 512. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) 69,18 (s, 1H), 8,76-8,74 (m, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,50-8,47 (m, 1H), 8,31-8,30 (m, 1H), 7,68-7,69 (m, 1H), 7,37-7,36 (m, 1H), 7,33-7,31 (m, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,07-5,04 (m, 1H), 4,44-4,41 (m, 2H), 4,23-4,18 (m, 3H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 2,61-2,56 (m, 2H), 2,42 (s, 2H), 1,21-1,20 (m, 6H)
Ejemplo 145a (S)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}nicotinaldehído 145a
Figure imgf000130_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il) piperazin-1 -il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 130f ( 1 60 mg, 1 eq., 0,33 mmol), 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.02,6]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 109a (120 mg, 1 eq., 0,33 mmol):
Figure imgf000130_0002
PdCL(dppf) (27 mg, 0,1 eq., 0,033 mmol), K3PO4 (140 mg, 2 eq., 0,66 mmol), NaOAc (54 mg, 2 eq., 0,66 mmol) y CH3CN (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna eluyendo con DCM/EtOH (40/1) para dar 145a como un sólido amarillo (97 mg, 43 %). EM: [M+H]+ 680,3.
Ejemplo 145 6-{3'-hidroximetil-1-metil-5-[5-((S)-2-metil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-2,2-dimetil-2,3,5,6-tetrahidro-1 H,4H-8-tia-6-aza-ciclopenta[a]inden-7-ona 145
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 145a (97 mg, 1,0 eq., 0,14 mmol), NaBH4 (16 mg, 3,0 eq., 0,42 mmol) y MeOH (10 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 145 (61 mg, 63 %). CLEM:
[M+H]+ 682,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 6 8,65 (d, J=2,5, 1H), 8,50 (d, J=5,0, 1H), 7,97 (d, J=2,5, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,80 (d, J=2,5, 1H), 7,37 (d, J=5,0, 1H), 7,30 (dd, J=3,0, 9,0, 1H), 6,81 (d, J=9,0, 1H), 4,82-4,79 (m, 1H), 4,71­ 4,61 (m, 5H), 4,45-4,31 (m, 2H), 3,85-3,80 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,54-3,46 (m, 2H), 3,07 (d, J=5,0, 2H), 2,98-2,93 (m, 2H), 2,79 (s, 2H), 2,60-2,46 (m, 5H), 2,21-2,18 (m, 1H), 1,28 (s, 6 H), 0,98 (d, J=6,0, 3H)
Ejemplo 146a 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 146a
Figure imgf000130_0003
A una solución de 2-bromo-4-cloronicotinaldehído 103a (1600 mg, 7,27 mmol), 10-fluoro-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona (500 mg, 2,40 mmol):
Figure imgf000130_0004
En dioxano (50 ml) se añadió KOAc (471 mg, 4,82 mmol), Pd2(dba)3 (220 mg, 0,24 mmol) y 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetil-xanteno (140 mg, 0,24 mmol). Después de hacer burbujear argón a través de la solución resultante durante 30 min, la mezcla se agitó a 80 °C durante 10 h. Se dejó que enfriara a temperatura ambiente y se añadió H2O (100 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 x 200 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (100 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en columna ultrarrápida eluyendo con PE/EA (3:1) para dar 146a como un sólido amarillo (420 mg, 49 %). Cl Em : [M+H]+ 348
Ejemplo 146b 2-(10-Fuoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)-4-(1-metil-6-oxo-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il)nicotinaldehído 146b
Figure imgf000131_0001
Un matraz de fondo redondo se cargó con 146a (200 mg, 0,58 mmol), 1-metil-3-(pirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 143a (227 mg, 0,69 mmol), PdCh(dppf) (47 mg, 0,06 mmol), K3PO4 (244 mg, 1,15 mmol), NaOAc (94 mg, 1,15 mmol), acetonitrilo (30 ml) y H2O (3 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó en cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con metanol/dicloro-metano 1:20 para dar 146b como un sólido rojo (79 mg, 27 %). CLEM: [M+H]+ 514
Ejemplo 146 10-fluoro-2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-6-oxo-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 146
Una mezcla de 146b (79 mg, 0,15 mmol), NaBH4 (22 mg, 0,60) y CH3OH (10 ml) se agitó a 25 °C durante 1 h. La mezcla se extrajo con CH2Cl2 (10 ml X 2). El extracto de CH2Cl2 combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 146 (39 mg, 49 %). CLEM: [M+H]+ 516. RMN de 1H (500 MHz, CDCl3) ó 8,83 (d, J=2,0, 1 H), 8,78 (s, 1 H), 8,52 (d, J=5,0, 1 H), 8,35 (d, J=5,5, 1 H), 8,12 (s, 1 H), 8,03 (d, J=2,0, 1 H), 7,36 (d, J=5,0, 1 H), 6,76-6,77 (m, 1 H), 5,07 (s, 1 H), 4,65 (d, J=9,5, 1 H), 4,48 (d, J=9,5, 1 H), 4,29 (d, J=1,5, 1 H), 4,02-4,13 (m, 2 H), 3,79 (d, J=6,5, 1 H), 3,73 (s, 3 H), 2,52-2,58 (m, 4 H), 1,85-1,90 (m, 2 H), 1,77 (d, J=5,0, 2 H)
Ejemplo 147a 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 147a
Figure imgf000131_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (50 ml), 2-bromo-4-cloronicotinaldehído 103a (1,4 g, 6,4 mmol), 3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-1(2H)-ona 112d (0,6 g, 3,2 mmol), Pd2(dba)3 (293 mg, 0,32 mmol), XantPhos (370 mg, 0,64 mmol) y acetato de potasio (627 mg, 6,4 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 80 °C durante la noche. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con CH2O 2/CH3OH (20:1, V/V) para dar 147a (528 mg, 50 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 330. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) ó 10,09 (s, 1H), 8,37 (d, J=5,5, 1H), 7,16 (d, J=5,5, 1H), 6,25 (s, 1H), 4,29-4,32 (m, 2H), 3,83-3,86 (m, 2H), 2,96-2,99 (m, 2H), 2,77-2,78 (m, 2H), 2,00-2,07 (m, 2H), 1,83-1,85 (m, 2H)
Ejemplo 147b 2-(3-Formil-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indoMzin-1 (2H)-ona 147b
Figure imgf000132_0001
Un matraz de fondo redondo se cargó con 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indoNzm-2(1H)-il)nicotinaldehído 147a (100 mg, 0,30 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 135a (116 mg, 0,30 mmol), Pdch(dppf) (25 mg, 0,03 mmol), K3PO4.3 H2O (160 mg, 0,60 mmol), NaOAc (59 mg, 0,60 mmol), acetonitrilo (10 ml) y H2O (5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó en cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con petróleo/acetato de etilo 1:3 para dar 147b como un sólido amarillo (100 mg, 60 %). CLEM: [M+H]+ 553
Ejemplo 147 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4—b]indoMzin-1 (2H)-ona 147
Una mezcla de 147b (100 mg, 0,18 mmol), NaBH4 (21 mg, 0,54) y CH3OH (10 ml) se agitó a 25 °C durante 1 h. La mezcla se extrajo con CH2Cl2 (10 ml X 2). El extracto de CH2Cl2 combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 147 (60 mg, 60 %). CLEM: [M+H]+ 555. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 8,45 (d, J=5,0, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,06 (d, J=5,0, 1H), 7,41 (d, J=2,0, 1H), 7,29 (d, J=5,0, 1H), 6,04 (s, 1H), 5,88 (s, 1H), 4,92 (s, 1H), 4,33-4,42 (m, 2H), 4,11-4,16 (m, 1H), 3,91-3,96 (m, 3H), 3,77-3,82 (m, 2H), 3,57 (s, 3H), 3,45-3,48 (m, 2H), 2,91-3,01 (m, 2H), 2,71-2,79 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 1,90-1,92 (m, 2H), 1,71-1,79 (m, 2H)
Ejemplo 148a 3-(2-bromo-4-cloropiridin-3-il)oxetan-3-ol 148a
Figure imgf000132_0002
A una solución de 2-bromo-4-cloropiridina (14 g, 70 mmol) en THF seco (200 ml) se le añadió gota a gota LDA (42,0 ml, 84,0 mmol, 2,0 M) a -70 °C. Después de agitar durante 0,5 h a esta temperatura, se añadió lentamente una solución de oxetan-3-ona (6,6 g, 90 mmol) en THF seco (40 ml) y la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante una 1 h adicional. Se añadieron NH4Cl acuoso saturado (50 ml) y EA (200 ml). La mezcla se dividió entre agua y acetato de etilo. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica combinada se lavó con agua y salmuera. Después de secar sobre sulfato de magnesio anhidro, el disolvente se evaporó y el material bruto se purificó mediante SGC eluyendo con DCM) para dar 148a como un sólido amarillo (8,8 g, 45 %). EM: [M+H]+ 266,0.
Ejemplo 148b 2-(4-cloro-3-(3-hidroxioxetan-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 148b
Figure imgf000132_0003
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 101e (190 mg, 1,0 mmol), 148a (795 mg, 3,0 mmol), Cul (95 mg, 0,5 mmol), DMEDA (88 mg, 1,0 mmol), KOAc (294 mg, 3,0 mmol) y 1,4-dioxano (50 ml). El sistema se evacuó y, a continuación, se rellenó con N2. Un condensador de reflujo se acopló al matraz y la mezcla de reacción se calentó a 85 °C durante 15 h. A continuación, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 2:1 para dar 148b como un sólido amarillo (156 mg, 42 %). EM: [M+H]+ 374,2.
Ejemplo 148 (S)-2-(3-(3-hidroxioxetan-3-il)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-1 (2H)-ona 148
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml se cargó con 148b (100 mg, 0,3 mmol), (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 130f (173 mg, 0,36 mmol), Pd(dppf)Cl2 (15 mg, 0,015 mmol), K3PO4 (130 mg, 0,6 mmol) y NaOAc-3^O (90 mg, 0,6 mmol) en CH3CN (30 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con DCM/MeOH 25:1 para dar 148 (30 mg, 20 %) como un sólido amarillo pálido. EM: [M+H]+ 693,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,69 (d, J=2, 1H), 8,50 (d, J=5, 1H), 8,01 (d, J=2,5, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,38-7,32 (m, 2H), 6,89 (s, 1H), 6,83 (d, J=8,5, 1H), 6,67 (s, 1H), 4,93 (d, J=6, 1H), 4,71-4,63 (m, 6H), 4,46 (d, J=7,5, 1H), 4,24-4,18 (m, 2H), 4,10-4,05 (m, 1H), 3,90 (d, J=12,5, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,55-3,46 (m, 2H), 3,10 (t, J=4,5, 2H), 2,63-2,48 (m, 7H), 2,22 (t, J=7,5, 1H), 1,92-1,88 (m, 2H), 1,82-1,77 (m, 2H), 1,02-1,00 (m, 3H)
Ejemplo 149a (S)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4—b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 149a
Figure imgf000133_0001
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4—b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 139a (100 mg, 0,30 mmol), (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)-piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 191j (146 mg, 0,30 mmol), PdCL(dppf) (25 mg, 0,030 mmol), K3PO4.trihidratado (160 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio (49 mg, 0,60 mmol), acetonitrilo (20 ml) y agua (3 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con petróleo/acetato de etilo 1:3 para dar 149a como un sólido amarillo (97 mg, 50 %). EM-ESI: [M+H]+ 649
Ejemplo 149 2-{3'-hidroximetil-1-metil-5-[5-((S)-2-metil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-2,3,5,6,7,8-hexahidro-4H-2,4b-diaza-fluoren-1-ona 149
Una mezcla de 149a (97 mg, 0,15 mmol), NaBH4 (17 mg, 0,45) y metanol (10 ml) se agitó a 25 °C durante 1 h. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (10 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 149 (62 mg, 63 %). EM-ESI: [M+H]+ 651,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 68,63 (s, 1H), 8,46 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,83 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,38-7,36 (m, 1H), 7,31 (J = 5,0 Hz, 1H), 7,25-7,23 (m, 1H), 6,04 (s, 1H), 4,57-4,55 (m, 2H), 4,48-4,46 (m, 1H), 4,42-4,38 (m, 2H), 4,35-4,33 (m, 1H), 4,15-4,12 (m, 1H), 3,96-3,94 (m, 1H), 3,82-3,78 (m, 2H), 3,69-3,67 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,41-3,38 (m, 2H), 3,18-3,15 (m, 2H), 3,00-2,95 (m, 3H), 2,73-2,71 (m, 2H), 2,30-2,28 (m, 2H), 2,20-2,16 (m, 1H), 1,93-1,89 (m, 3H), 1,77-1,75 (m, 1H), 0,93 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 150a 3-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-5-[1-metil-5-({5-metil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5—a]pirazin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-4-carbaldehído 150a
Figure imgf000134_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 3-bromo-5-{4,4-d¡met¡l-9-oxo-1,10-d¡azatr¡c¡clo[6.4.0.02’6]dodeca-2(6),7-d¡en-10-¡l}pir¡d¡n-4-carbaldehído 107f (233 mg, 0,60 mmol), 1-metil-3-({5-metil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazm-2-il}amino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-2-ona 135a (231 mg, 0,60 mmol), Pd(dppf)Cl2 (49 mg, 0,060 mmol), acetato de potasio (118 mg, 1,2 mmol), K3PO4trihidratado (320 mg, 1,2 mmol), acetonitrilo (12 ml) y agua (5 gotas). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 110 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 150a (168 mg, 49 %) como un sólido. EM-ESI: [M+H]+ 567
Ejemplo 150 2-[4-hidroximetil-1'-metil-5'-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6'-oxo-1',6'-dihidro-[3,3']bipiridinil-5-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona 150
A una solución de 150a (170 mg, 0,30 mmol) en metanol (10 ml) se le añadió borohidruro de sodio (68 mg, 1,8 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (2 ml) y se concentró. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 150 (42 mg, 25 %) como un sólido amarillo pálido. EM-ESI: [M+H]+ 569. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,63 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,95 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,32 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,82 (s, 1H), 5,67 (s, 1H), 4,63-4,55 (m, 2H), 4,37-4,35 (m 1H), 4,22-4,18 (m, 3H), 4,05-3,97 (m, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,59-3,57 (m, 2H), 2,86 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,56 (s, 2H), 2,50 (s, 2H), 2,46 (s, 3H), 1,26 (s, 6H).
Ejemplo 151a (R)-3-metil-4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 151a
Figure imgf000134_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (60 ml), 5-bromo-2-nitropiridina (2,0 g, 10,0 mmol), (R)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (2,0 g, 10,0 mmol) y carbonato de cesio (6,5 g, 20 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 10 minutos, se añadieron tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (915 mg, 1,0 mmol) y XantPhos (579 mg, 1,0 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 100 °C durante 15 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se dividió entre acetato de etilo (100 ml) y agua (100 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (100 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 151a (1,6 g, 44 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 323. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 68,21 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,45-7,43 (m, 1H), 4,34-4,33 (m, 1H), 3,92-3,99 (m, 1H), 3,80 (d, J = 12,5 Hz, 2H), 3,06-3,23 (m, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,09 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 151b (R)-4-(6-aminopiridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 151b
Un matraz de 250 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 151a (1,5 g, 4,6 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 200 mg) y metanol (70 ml). Se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 10 h. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 151b (1,1 g, 81 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 293
Ejemplo 151c (R)-4-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de tere-butilo 151c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (40 ml), 151b (1,0 g, 3,4 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (2,7 g, 10,2 mmol) y carbonato de cesio (2,2 g, 6,8 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 10 minutos, se añadieron XantPhos (198 mg, 0,34 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (313 mg, 0,34 mmol). La mezcla de reacción se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 100 °C durante 5 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se dividió entre acetato de etilo (50 ml) y agua (50 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (3 X 30 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 151c como un sólido amarillo (1,1 g, 63 %). EM-ESI: [M+H]+ 478.
Ejemplo 151d (R)-5-bromo-1-metil-3-(5-(2-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 151d
A una mezcla de 151c (600 mg, 1,26 mmol) en metanol (20 ml) se le añadió HCl/dioxano (4 M, 4 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. A continuación, se concentró a presión reducida. El residuo se basificó con NaOH acuoso 1 M y se extrajo con diclorometano (3 X 30 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera y se concentró a presión reducida para dar 151d (450 mg, 95 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 378.
Ejemplo 151e (R)-5-bromo-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 151f
Una mezcla de 151d (40,0 g, 106 mmol), oxetan-3-ona (11,4 g, 159 mmol), NaBHaCN (10,0 g, 159 mmol) y cloruro de cinc (21,3 g, 159 mmol) en metanol (700 ml) se agitó a 50 °C durante 5 horas. Se añadió agua (50 ml) a la mezcla y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 200 ml) y la capa orgánica combinada se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 151e (35 g, 73 %). EM: [M+H]+ 434.
Ejemplo 151f (R)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1 H)-ona 151f
Figure imgf000135_0001
A una solución de 151e (2,0 g, 4,60 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (3,50 g, 13.80 mmol) en dioxano (50 ml) se le añadió PdCh(dppf) (377,10 mg, 0,46 mmol) y acetato de potasio (2,70 g, 27.80 mmol). La mezcla se agitó a 10 °C durante 12 h en atmósfera de argón. Después de la reacción, la mezcla se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 15:1 para dar 151f (1,10 g, 49 %) como un sólido marrón. EM: [M+H]+ 482,3
Ejemplo 151g (R)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 151g
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 103b (150 mg, 0,45 mmol), 151f (331 mg, 0,69 mmol), PdCh(dppf) (37 mg, 0,045 mmol), K3PO4 (190 mg, 0,90 mmol), acetato de sodio (74 mg, 0,90 mmol), acetonitrilo (15 ml) y agua (1,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó con cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:20 para dar 151g como un sólido rojo (89 mg, 30 %). EM-ESI: [M+H]+ 647
Ejemplo 151 2-{3'-hidroximetil-1-metil-5-[5-((R)-2-metil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazino[1,2-a]indol-1 -ona l5 l
Una mezcla de 151g (89 mg, 0,14 mmol), NaBH4 (22 mg, 0,60) y metanol (10 ml) se agitó a 25 °C durante 1 h. La mezcla se desactivó con agua (8 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 151 (35 mg, 39 %). EM-ESI: [M+H]+ 649. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,65 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,55 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,83 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,50-7,48 (m, 2H), 7,38-7,36 (m, 1H), 7,26­ 7,24 (m, 2H), 6,83-6,80 (m, 2H), 4,98 (s.a., 1H), 4,5-4,54 (m, 2H), 4,48-4,33 (m, 4H), 3,67-3,66 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,39-3,38 (m, 2H), 3,09-3,08 (m, 1H), 2,96-2,94 (m, 1H), 2,76-2,74 (m, 2H), 2,64-2,62 (m, 2H), 2,36-2,31 (m, 2H), 2,20­ 2,17 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 1,88-1,86 (m, 2H), 1,75-1,74 (m, 2H), 0,93 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 152a 8-(6-nitropiridin-3-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-carboxilato de tere-butilo 152a
Figure imgf000136_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (100 ml), 5-bromo-2-nitropiridina (2,5 g, 12,4 mmol), 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-carboxilato de tere-butilo (869 g, 4,1 mmol), Pd2(dba)3 (193 mg, 0,21 mmol), XantPhos (237 mg, 0,41 mmol) y carbonato de cesio (2,7 g, 8,2 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a 110 °C durante la noche. La reacción se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 3:1 para dar 152a (2,63 g, 66,8 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+h ]+ 335,2.
Ejemplo 152b 8-(6-aminopiridin-3-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-carboxilato de ferc-butilo 152b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 152a (2,5 g, 7,5 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 250 mg) y metanol (40 ml). La mezcla se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 152b (1,51 g, 66 %) como un aceite incoloro. EM-ESI: [M+H]+ 305,3
Ejemplo 152c 8-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-carboxilato de ferc-butilo 152c
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 152b (1,3 g, 4,3 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,2 g, 4,3 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (394 mg, 0,43 mmol), XantPhos (497 mg, 0,86 mmol), Cs2CO3 (2,8 g, 8,6 mmol) y 1,4-dioxano (15 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a 120 °C durante 2 h. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 152c como un sólido amarillo (900 mg, 43 %). EM-ESI: [M+H]+ 490,3.
Ejemplo 152d 3-(5-(3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-il)piridin-2-ilamino)-5-bromo-1-metil-piridin-2(1H)-ona 152d
Una mezcla de 152c (900 mg, 1,84 mmol) y HCl 4,0 M/dioxano (60 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. A continuación, se concentró a presión reducida para dar 152d bruto como un sólido amarillo (700 mg, 98 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 390,3.
Ejemplo 152e 5-bromo-1-metil-3-(5-(3-(oxetan-3-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 152e
Una mezcla de 152d (676 mg, 1,7 mmol), oxetan-3-ona (251 mg, 3,5 mmol), NaBHaCN (274 mg, 4,4 mmol) y cloruro de cinc (592 mg, 4,4 mmol) en metanol (30 ml) se agitó a 50 °C durante 5 horas, se añadió agua y la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano tres veces. El extracto combinado se concentró a presión reducida para dar 152e bruto como un sólido amarillo (650 mg, 84 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 446,2.
Ejemplo 152f Acetato de (4-(1-metil-5-(5-(3-(oxetan-3-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 152f
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 152e (300 mg, 0,67 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113h (257 mg, 0,67 mmol), Pd(dppf)Cl2 (55 mg, 0,067 mmol), K3PO4 (284 mg, 1,34 mmol), acetato de sodio (110 mg, 1,34 mmol), agua (6 gotas) y acetonitrilo (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a reflujo durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 152f como un sólido marrón (200 mg, 42 %). EM-ESI: [M+H]+ 705,4.
Ejemplo 152 2-{3'-hidroximetil-1-metil-5-[5-((1S,5R)-3-oxetan-3-il-3,8-diaza-biciclo[3.2.1]oct-8-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-3,4,6,7,8,9-hexahidro-2H-pirazino[1,2-a]indol-1-ona 152
Una mezcla de 152f (180 mg, 0,26 mmol) e hidróxido de litio (215 mg, 5,1 mmol) en /-propanol/THF (1:1,4 ml) y agua (1 ml) se agitó a 35 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se diluyó con agua y acetato de etilo. La fase acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 152 (12 mg, 71 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 663,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-cfó) ó 8,55 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,80 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,25-7,23 (m, 1H), 7,20 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 4,96-4,94 (m, 1H), 4,48-4,43 (m, 3H), 4,39-4,37 (m, 3H), 4,25-4,19 (m, 5H), 3,85 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 2,66-2,54 (m, 4H), 2,40-2,36 (m, 3H), 2,17 (d, J = 10,5 Hz, 2H), 1,94-1,65 (m, 8H).
Ejemplo 153a 2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(2R)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-carbaldehído 153a
Figure imgf000138_0001
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 108a (105 mg, 0,30 mmol), 1-metil-3-({5-[(2R)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-5-(tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-2 -ona 151g ( 21 6 mg, 0,45 mmol), PdCb(dppf) (25 mg, 0,030 mmol), K3PO4 ( 1 26 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio (49 mg, 0,60 mmol), acetonitrilo (15 ml) y agua (1,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 80 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:20 para dar 153a como un sólido rojo (82 mg, 41%). EM-ESI: [M+H]+ 663
Ejemplo 153 2-{3'-hidroximetil-1-metil-5-[5-((R)-2-metil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2’-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona 153
Una mezcla de 153a (82 mg, 0,12 mmol), NaBH4 (22 mg, 0,60) y metanol (10 ml) se agitó a 25 °C durante 1 h. A continuación, se desactivó con agua (5 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 153 (22 mg, 28 %). EM-ESI: [M+H]+ 665. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) ó 8,65 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,36 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,32-7,26 (m, 1H), 6,84-6,80 (m, 2H), 5,30 (s, 1H), 4,71-4,32 (m, 7H), 4,15 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 3,85 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,57-3,43 (m, 2H), 3,08-3,06 (m, 2H), 2,57-2,48 (m, 7H), 2,22-2,20 (m, 1H), 1,27 (s, 6 H), 0,98 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 154a 4-[1-metil-5-({5-[(2R)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 154a
Figure imgf000138_0002
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 124a (84 mg, 0,24 mmol), (R)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 151g (173 mg, 0,36 mmol), PdCb(dppf) (20 mg, 0,024 mmol), K3PO4 (100 mg, 0,48 mmol), acetato de sodio (40 mg, 0,48 mmol), acetonitrilo (20 ml) y agua (2 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:20 para dar 154a como un sólido rojo (112 mg, 70 %). EM-ESI: [M+H]+ 665
Ejemplo 154 3-{3'-hidroximetil-1-metil-5-[5-((R)-2-metil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-6,7,8,9-tetrahidro-3H-benzo[4,5]tieno[2,3-d]piridazin-4-ona 154
Una mezcla de 154a (150 mg, 0,23 mmol), NaBH4 (35 mg, 0,92) y metanol (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, la mezcla se desactivó con agua ( 8 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 x 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 154 (29 mg, 19 %). EM-ESI: [M+H]+ 667. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,64 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,56 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,49-8,47 (m, 2H), 7,85 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,38-7,36 (m, 1H), 7,24 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,85 (t, J = 9,5 Hz, 1H), 4,57-4,54 (m, 2H), 4,43-4,36 (m, 4H), 3,69-3,68 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,40-3,36 (m, 1H), 3,11-3,07 (m, 1H), 2,97-2,86 (m, 6H), 2,33-2,31 (m, 2H), 2,16 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 1,89-1,86 (m, 4H), 0,92 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 155a 3-(5-((2S,5R)-2,5-d¡met¡l-4-(oxetan-3-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡d¡n-2-¡lam¡no)-1-met¡l-5-(4,4,5,5-tetramet¡l-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 155a
Un matraz de fondo redondo de una ún¡ca boca de 100 ml equ¡pado con un ag¡tador magnét¡co y un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-3-(5-((2S,5R)-2,5-d¡met¡l-4-(oxetan-3-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡d¡n-2-¡lam¡no)-1-met¡lp¡r¡d¡n-2(1H)-ona 122e (3,0 g, 6,70 mmol), P¡n2B2 (8442 mg, 33,5 mmol), Pd2(dba)3 (311 mg, 0,34 mmol), X-phos (319 mg, 0,67 mmol), acetato de potas¡o (1970 mg, 20,1 mmol) y d¡oxano (50 ml). Después de tres c¡clos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 60 °C durante 16 h. A cont¡nuac¡ón, se enfr¡ó a temperatura amb¡ente y se f¡ltró. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo resultante se lavó con éter de petróleo/acetato de etilo 8:1 (80 ml) para dar 155a como un sól¡do amar¡llo (3 g, 90 %). EM: [M+H]+ 496,4.
Ejemplo 155b 4-(5-(5-(2,5-d¡met¡l-4-(oxetan-3-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡d¡n-2-¡lam¡no)-1-met¡l-6-oxo-1,6-d¡h¡drop¡r¡d¡n-3-¡l)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-¡l)n¡cot¡naldehído 155b
Figure imgf000139_0001
Un matraz de fondo redondo de una ún¡ca boca de 50 ml equ¡pado con un ag¡tador magnét¡co y un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-¡l)n¡cot¡naldehído 139a (133 mg, 0,40 mmol), 155a (198 mg, 0,40 mmol), Pd(dppf)Cl2 (17 mg, 0,020 mmol), K3P0 4 (254 mg, 1,2 mmol), acetato de sod¡o (98 mg, 1,2 mmol), agua (5 gotas) y aceton¡tr¡lo (10 ml). Después de tres c¡clos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 3 h. A cont¡nuac¡ón, se enfr¡ó a temperatura amb¡ente y se f¡ltró. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y el res¡duo resultante se purificó med¡ante cromatografía en columna en gel de síl¡ce eluyendo con d¡clorometano/metanol 30:1 para dar 155b como un sól¡do blanco (80 mg, 30 %). EM-ESI:
[M+H]+ 663,3.
Ejemplo 155 2-{5-[5-((2S,5R)-2,5-d¡met¡l-4-oxetan-3-¡l-p¡peraz¡n-1-¡l)-p¡r¡d¡n-2-¡lam¡no]-3'-h¡drox¡met¡l-1-met¡l-6-oxo-1,6-d¡h¡dro-[3,4']b¡p¡r¡d¡n¡l-2'-¡l}-2,3,5,6,7,8-hexah¡dro-4H-2,4b-d¡aza-fluoren-1-ona 155
A una soluc¡ón de 155b (80 mg, 0,12 mmol) a 0 °C en metanol (5 ml) se le añad¡ó boroh¡druro de sod¡o (12 mg, 0,36 mmol). La mezcla de reacc¡ón se agitó durante 30 m¡nutos. A cont¡nuac¡ón, se desact¡vó con agua (1 ml) y se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có med¡ante HPLC prep. de fase ¡nversa para dar 155 (32 mg, 40 %). EM-ESI: [M+H]+ 665,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,68 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,04 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,86 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,37-7,33 (m, 2H), 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,32 (s, 1H), 5,02 (d, J = 13,0 Hz, 1H), 4,78-4,71 (m, 2H), 4,67-4,61 (m, 3H), 4,44-4,39 (m, 1H), 4,31-4,29 (m, 1H), 3,96-3,91 (m, 1H), 3,86­ 3,80 (m, 2H), 3,78-3,75 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,21-3,19 (m, 1H), 3,01-2,93 (m, 3H), 2,85-2,83 (m, 2H), 2,72 (d, J = 10,0 Hz, 2H), 2,49-2,47 (m, 1H), 2,05-2,03 (m, 2H), 1,98-1,97
Ejemplo_____ 156a 4-(5-(5-((2S,5R)-2,5-d¡met¡l-4-(oxetan-3-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)p¡r¡d¡n-2-¡lam¡no)-1-met¡l-6-oxo-1,6-d¡h¡drop¡r¡d¡n-3-¡l)-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-¡l)n¡cot¡naldehído 156a
Figure imgf000140_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 3-(5-((2S,5R)-2,5-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 155a (171 mg, 0,35 mmol), 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 134c (120 mg, 0,35 mmol), K3PO4 (146 mg, 0,69 mmol), PdCL(dppf) (28 mg, 0,035 mmol), acetato de sodio (56 mg, 0,69 mmol), agua (5 gotas) y acetonitrilo (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40/1 para dar 156a como un sólido amarillo (60 mg, 25 %). EM-ESI: [M+H]+ 681,3
Ejemplo 156 2-{5-[5-((2S,5R)-2,5-dimetil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4’]bipiridinil-2'-il}-10-fluoro-3,4,6,7,8,9-hexahidro-2H-pirazino[1,2-a]indol-1-ona 156
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 156a (60 mg, 0,088 mmol), NaBH4 (17 mg, 0,44 mmol) y metanol (10 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, se desactivó con agua y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 156 (15 mg, 25 %). EM-ESI: [M+H]+ 683,5. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,84 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,37-7,35 (m, 2H), 6,81 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,99-4,59 (m, 6H), 4,45-4,32 (m, 2H), 4,12-4,03 (m, 2H), 3,85-3,73 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,19-3,16 (m, 1H), 2,91­ 2,89 (m, 1H), 2,75-2,69 (m, 2H), 2,57-2,47 (m, 5H), 1,97-1,76 (m, 5H), 0,89-0,87 (m, solapamiento, 6H).
Ejemplo 157 2-{5'-[5-((2S,5R)-2,5-dimetil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-4-hidroximetil-1'-metil-6'-oxo-1',6'-dihidro-[3,3']bipiridinil-5-il}-3,4,6,7,8,9-hexahidro-2H-pirazino[1,2-a]indol-1-ona 157
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 3-bromo-5-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2a]indol-2(1H)-il)isonicotinaldehído 101f (200 mg, 0,54 mmol), 3-(5-((2S,5R)-2,5-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 155a (267 mg, 0,54 mmol), Pd(dppf)Cl2 (44 mg, 0,054 mmol), K3PO4 (229 mg, 1,08 mmol), acetato de sodio (89 mg, 1,08 mmol), agua (0,2 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 157 (35,5 mg, 11 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 665,4. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,65-8,63 (m, 2H), 8,50 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,48-7,47 (m, 1H), 7,36 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 6,81 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,75-4,54 (m, solapamiento, 6H), 4,37-4,13 (m, solapamiento, 4H), 4,00­ 3,95 (m, 1H), 3,74-3,73 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,19-3,15 (m, 1H), 2,91-2,90 (m, 1H), 2,74-2,44 (m, solapamiento, 7H), 1,92-1,88 (m, 2H), 1,81-1,79 (m, 2H), 0,90-0,89 (m, 6H).
Ejemplo 158a 4-[5-({5-[(2S,5R)-2,5-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatri-ciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 158a
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con (4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído) 108a (280 mg, 0,80 mmol), 3-(5-((2S,5R)-2,5-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 155a (480 mg, 0,96 mmol), Pd(dppf)Cl2 (33 mg, 0,040 mmol), K3PO4 (339 mg, 1,6 mmol), acetato de sodio trihidratado (218 mg, 1,6 mmol) y acetonitrilo (100 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con 25:1 de diclorometano/metanol para dar 158a (300 mg, 54 %) como un sólido marrón amarillento. EM-ESI: [M+H]+ 677,3.
Ejemplo 158 2-{5-[5-((2S,5R)-2,5-dimetil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4’]bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1 -ona 158
Una mezcla de 158a (200 mg, 0,30 mmol) y NaBH4 (36 mg, 0,90 mmol) en metanol (30 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se desactivó con agua (5 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 158 (110 mg, 55 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 679,4. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,68 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,87 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,37-7,36 (m, 2H), 6,85 (s, 1H), 6,81 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 5,07 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 4,77-4,71 (m, 2H), 4,67-4,61 (m, 3H), 4,53-4,51 (m, 1H), 4,34-4,32 (m, 1H), 4,16 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,76 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,20-3,17 (m, 1H), 2,92 (dd, J = 3,0, 11,5 Hz, 1H), 2,76-2,70 (m, 2H), 2,58 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 2,52 (s, 2H), 2,49-2,46 (m, 1H), 1,97-1,93 (m, 1H), 1,28 (s, 6H), 0,92-0,89 (m, 6H).
Ejemplo 159a 4-[5-({5-[2,5-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 159a
Figure imgf000141_0001
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4.5- diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 124a (200 mg, 0,58 mmol), 3-({5-[(2S,5R)-2,5-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-2-ona 155a (1,0 g, 2,0 mmol), PdCh(dppf) (47 mg, 0,060 mmol), K3PO4 (280 mg, 1,2 mmol), acetato de sodio (95 mg, 1,2 mmol), acetonitrilo (15 ml) y agua (1,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó con cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:20 para dar 159a como un sólido rojo (150 mg, 38 %). EM-ESI: [M+H]+ 679
Ejemplo 159 3-{5-[5-((2S,5R)-2,5-dimetil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1.6- dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-6,7,8,9-tetrahidro-3H-benzo[4,5]tieno[2,3-d]piridazin-4-ona 159
Una mezcla de 159a (130 mg, 0,19 mmol), NaBH4 (22 mg, 0,60) y metanol (10 ml) se agitó a 25 °C durante 1 h. A continuación, la mezcla se desactivó con agua (8 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 159 (28 mg, 22 %). EM-ESI: [M+H]+ 681. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,71 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,65 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,70 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,67-4,61 (m, 2H), 4,71-4,64 (m, 2H), 4 ,4 4 -4 , 4 2 (m, 2H), 4,34-4,33 (m, 1H), 3,83-3,76 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,20-3,16 (m, 1H), 2,99-2,84 (m, 6H), 2,79-2,71 (m, 2H), 2,50-2,48 (m, 1H), 2,02-1,98 (m, 4H), 0,91 (d, J = 6,0 Hz, 6H).
Ejemplo_____ 160a 4-(5-(5-((2S,5R)-2,5-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)nicotinaldehído 160a
Figure imgf000142_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 103b (150 mg, 1,0 eq., 0,46 mmol), 3-(5-((2S,5R)-2,5-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 155a (228 mg, 0,46 mmol), K3PO4 (195 mg, 0,92 mmol), PdCl2(dppf) (37 mg, 0,046 mmol), acetato de sodio (75 mg, 0,92 mmol), agua (8 gotas) y acetonitrilo (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 80 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/etanol 40:1 para dar 160a como un sólido amarillo (80 mg, 26 %). EM-ESI: [M+H]+ 661,4.
Ejemplo 160 2-{5-[5-((2S,5R)-2,5-dimetil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4’]bipiridinil-2'-il}-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazino[1,2—a]indol-1-ona 160
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 160a (80 mg, 0,12 mmol), NaBH4 (23 mg, 0,60 mmol) y metanol (10 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se desactivó con agua (1 ml) y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 160 (44 mg, 55 %). EM-ESI: [M+H]+ 663,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,72­ 8,70 (m, 1H), 8,57 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,89-7,87 (m, 2H), 7,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,37-7,35 (m, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,97 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,10-5,08 (m, 1H), 4,76-4,32 (m, 6H), 3,76-3,72 (m, 4H), 3,20-3,17 (m, 1H), 2,93-2,90 (m, 1H), 2,76-2,69 (m, 6H), 2,49-2,46 (m, 1H), 1,97­ 1,94 (m, 3H), 1,87-1,84 (m, 2H), 0,89 (t, J = 6,5 Hz, 6H).
Ejemplo 161a (S)-3-etil-4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 161a
Figure imgf000142_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (50 ml), 5-bromo-2-nitropiridina (2,02 g, 10 mmol), (S)-3-etilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (2,14 g, 10,0 mmol), Pd2(dba)3 (458 mg, 0,50 mmol), XantPhos (576 mg, 1,0 mmol) y carbonato de cesio (6,52 g, 20 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante la noche. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 3:1 para dar 161a (700 mg, 22 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 336
Ejemplo 161b (S)-4-(6-aminopiridin-3-il)-3-etilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 161b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 161a (0,7 g, 2,08 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 208 mg) y metanol (40 ml). La mezcla se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 161b (568 mg, 89 %). EM: [M+H]+ 306
Ejemplo 161c (S)-4-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)-3-etilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 161c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (50 ml), 161b (568 mg, 1,86 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (498 mg, 1,86 mmol), Pd2(dba)3 (85 mg, 0,093 mmol), XantPhos (107 mg, 0,186 mmol) y carbonato de cesio (1,198 g, 3,72 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 6 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 100:1 para dar 161c (502 mg, 55 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 492.
Ejemplo 161d (S)-5-bromo-3-(5-(2-etilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-piridin-2(1H)-ona 161d
Una mezcla de 161c (502 mg, 1,02 mmol), diclorometano (2 ml) y HCl 4,0 M/dioxano (4 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. A continuación, se concentró a presión reducida para dar 161d bruto como un sólido amarillo (263 mg, 66 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM: [M+H]+ 392.
Ejemplo 161e (S)-5-bromo-3-(5-(2-etil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 161e
Figure imgf000143_0001
Una mezcla de 161d (263 mg, 0,67 mmol), oxetan-3-ona (96 mg, 1,34 mmol), NaBHaCN 104 mg, 1,68 mmol) y cloruro de cinc (227 mg, 1,68 mmol) en metanol (10 ml) se agitó a 50 °C durante 5 horas. A continuación se añadió agua (10 ml) a la reacción. La mezcla resultante se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano tres veces. La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 161e (203 mg, 68 %). EM: [M+H]+ 448.
Ejemplo 161f (S)-3-(5-(2-etil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1 H)-ona 161f
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 161e (3219 mg, 7,20 mmol), Pin2B2 (9072 mg, 36,0 mmol), Pd2(dba)3 (329 mg, 0,36 mmol), X-phos (302 mg, 0,72 mmol), acetato de potasio (2117 mg, 21,6 mmol) y dioxano (50 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 60 °C durante 16 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó con éter de petróleo/acetato de etilo 8:1 (80 ml) para dar 161f como un sólido amarillo (3,0 g, 84 %). EM: [M+H]+ 496,4.
Ejemplo 161g 4-(5-(5-(2-etil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 161g
Figure imgf000143_0002
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 161f (200 mg, 0,40 mmol), 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 139a (132 mg, 0,40 mmol), K3PO4 trihidratado (213 mg, 0,80 mmol), acetato de sodio (66 mg, 0,80 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (16 mg, 0,020 mmol) y acetonitrilo (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/N2 , la mezcla se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 2 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con diclorometano (50 ml) y agua (50 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (3 x 20 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 30/1) para dar 161g (150 mg, 57 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 663
Ejemplo 161 2-{5-[5-((S)-2-etil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il)-2,3,5,6,7,8-hexahidro-4H-2,4b-diaza-fluoren-1-ona 161
A una solución de 161g (120 mg, 0,18 mmol) en metanol (20 ml) se le añadió NaBH4 (21 mg, 0,54 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 1 h, CLEM indicó que se completó la reacción. A continuación, la mezcla se vertió en agua (20 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 40 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo sólido se purificó mediante HPLC prep. para dar 161 (97 mg, 81 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 665. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,63 (s, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,84-7,82 (m, 2H), 7,35 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,32 (s, 1H), 5,01-4,99 (m, 1H), 4,73-4,64 (m, 5H), 4,45-4,40 (m, 1H), 4,30 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 3,94-3,91 (m, 1H), 3,85-3,83 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,55-3,53 (m, 1H), 3,34-3,32 (m, 1H), 3,14-3,12 (m, 2H), 3,04-2,92 (m, 2H), 2,84-2,82 (m, 2H), 2,59-2,57 (m, 1H), 2,46-2,44 (m, 2H), 2,38­ 2,36 (m, 1H), 2,06-2,01 (m, 2H), 1,90-1,86 (m, 2H), 1,68-1,66 (m, 1H), 1,43-1,39 (m, 1H), 0,82 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Ejemplo 162a 5-bromo-1-metil-3-(pirazin-2-ilamino)piridin-2(1 H)-ona 162a
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con pirazin-2-amina (500 mg, 5,3 mmol), 3,5-dibromo-1-metil-piridin-2(1H)-ona (1335 mg, 5,3 mmol), Pd2(dba)3 (229 mg, 0,25 mmol), XantPhos (289 mg, 0,50 mmol), carbonato de cesio (3,26 g, 10 mmol) y 1,4-dioxano (50 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 162a (420 mg, 30 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 281,0.
Ejemplo 162b Acetato de (4-(1-metil-6-oxo-5-(pirazin-2-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 1 6 2 b
Figure imgf000144_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 162a (170 mg, 0,61 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (280 mg, 0,72 mmol), Pd(dppf)Cl2 (30 mg, 0,037 mmol), K3PO4 trihidratado (270 mg, 1,2 mmol), acetato de sodio (180 mg, 1,2 mmol), acetonitrilo (20 ml) y agua (0,5 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con 25:1 de diclorometano/metanol para dar 162b (130 mg, 40 %) como un sólido marrón amarillento. EM-ESI: [M+H]+ 540,3
Ejemplo 162 2-[3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-5-(pirazin-2-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-3,4,6,7,8,9-hexahidro-2H-pirazino[1,2-a]indol-1-ona 162
Una mezcla de 162b (110 mg, 0,20 mmol) e hidróxido de litio (84 mg, 2,0 mmol) en /-propanol/THF (1:1,4 ml) y agua (1 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se diluyó con agua y acetato de etilo. La fase acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 x 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 162 (85 mg, 85 %) como un sólido amarillo pálido. EM-ESI: [M+H]+ 498,3. RMN de 1H (500 MHz, CHCla) 68,73 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,54 (d, J = 5 Hz, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,15-8,14 (m, 2H), 8,01 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,00 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 5 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 4,66-4,65 (m, 1H), 4,52-4,51 (m, 1H), 4,32-4,31 (m, 1H), 4,18-4,17 (m, 1H), 4,14-4,12 (m, 1H), 3,90­ 3,88 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,62-2,57 (m, 4H), 1,92-1,88 (m, 3H), 1,80-1,79 (m, 2H).
Ejemplo 163a Ácido 1-metil-5-(5-(oxetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-ilborónico 163a
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(5(oxetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 125i (1,0 g, 2,64 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (2,0 g, 7,92 mmol), PdCh(dppf) (190 mg, 0,26 mmol), acetato de potasio (776 mg, 7,92 mmol) y dioxano (40 ml). Después de hacer burbujear argón en la mezcla durante 30 minutos, un condensador de reflujo se acopló al matraz y la mezcla se agitó a 100 °C durante 6 h en una atmósfera de argón. La mezcla resultante se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante Combiflash de fase inversa eluyendo con NH4HCO3 al 0,3 % en agua/CH3CN para dar 163a como un sólido blanco (300 mg, 33 %). EM: [M+H]+ 346.
Ejemplo 163b 2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(1-metil-5-{[5-(oxetan-3-il)-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino}-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-carbaldehído 163b
Figure imgf000145_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con (4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído) 108a (280 mg, 0,81 mmol), 163a (440 mg, 0,96 mmol), Pd(dppf)Cl2 (40 mg, 0,049 mmol), K3PO4 (360 mg, 1,6 mmol), acetato de sodio trihidratado (240 mg, 1,6 mmol), agua (6 gotas) y acetonitrilo (20 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 163b (150 mg, 31 %) como un sólido marrón amarillento. EM-ESI: [M+H]+ 609,3
Ejemplo 163 2-[3'-hidroximetil-1-metil-5-(5-oxetan-3-il-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona 163
Una mezcla de 163b (80 mg, 0,12 mmol) y NaBH4 (15 mg, 0,36 mmol) en metanol (5 ml) se agitó a 30 °C durante 2 h. La mezcla se desactivó con agua y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con acetato de etilo (3 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 163 (30 mg, 50 %) como un sólido rojo oscuro. EM-ESI: [M+H]+ 611,4. RMN de 1H (500 MHz, CHCla) 68,48 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 2, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,34 (d, J = 5 Hz, 1H), 6,8 (s, 1H), 5,70 (s, 1H), 5,03 (t, J = 6, 1H), 4,77-4,73 (m, 3H), 4,68 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 4,51-4,50 (m, 1H), 4,34-4,33 (m, 1H), 4,23-4,16 (m, 2H), 4,09 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,86-3,85 (m, 1H), 3,79-3,74 (m, 1H), 3,71 (s,3H), 3,56 (d, J = 4, 2H), 2,83 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,58 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2,52 (s, 2H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 164a 2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[5-({5-[(2S)-2-etil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-carbaldehído 164a
Figure imgf000145_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con (4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído) 108a (280 mg, 0,8 mmol), (S)-3-(5-(2-etil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 161f (500 mg, 0,96 mmol), Pd(dppf)Cl2 (33 mg, 0,040 mmol), K3PO4 (360 mg, 1,6 mmol), acetato de sodio trihidratado (240 mg, 1,6 mmol) y acetonitrilo (100 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 164a (320 mg, 60 %) como un sólido marrón amarillento. EM-ESI: [m H]+ 677,3.
Ejemplo 164 2-{5-[5-((S)-2-etil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-c¡dopenta[4,5]p¡rrolo[1,2-a]p¡raz¡n-1-ona 164
Una mezcla de 164a (200 mg, 0,30 mmol) y NaBH4 (36 mg, 0,90 mmol) en metanol (30 ml) se agitó a 30 °C durante 2 h. La mezcla se desactivó con agua y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con acetato de etilo (3 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 164 (140 mg, 72 %) como un sólido verde claro. EM-ESI: [M+H]+ 679,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,63 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,37 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 5,06 (s, 1H), 4,71-4,61 (m, 5H), 4,52-4,50 (m, 1H), 4,34-4,32 (m, 1H), 4,16 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 3,87-3,85 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,55-3,50 (m, 1H), 3,33­ 3,30 (m, 1H), 3,12 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,58-2,55 (m, 3H), 2,52 (s, 2H), 2,44 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 2,35 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 1,68-1,64 (m, 1H), 1,42-1,37 (m, 1H), 1,28 (s, 6H), 0,82 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Ejemplo 165a (S)-4-(5-(5-(2-etil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 165a
Figure imgf000146_0001
Un matraz de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-2(1H)-il)nicotinaldehído 103b (164 mg, 0,50 mmol), (S)-3-(5-(2-etil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1 -il)piridin-2-ilamino)-1 -metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-M)piridin-2(1 H)-ona 161f (347 mg, 0,70 mmol), acetato de potasio (137 mg, 1,4 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (29 mg, 0,035 mmol), agua (5 gotas) y acetonitrilo (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C en atmósfera de argón durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con diclorometano (50 ml) y agua (50 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (3 * 20 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SÜ4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 25/1) para dar 165a (151 mg, 46 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 661
Ejemplo 165 2-{5-[5-((S)-2-etil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazino[1,2-a]¡ndol-1-ona 165
A una solución de 165a (100 mg, 0,15 mmol) en metanol (10 ml) se le añadió NaBH4 (34 mg, 0,90 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 1 h, CLEM indicó que se completó la reacción. A continuación, la mezcla se desactivó con agua (8 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SÜ4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 165 (35 mg, 35 %) como un sólido amarillo claro. EM-ESI: [M+H]+ 663. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,64 (s, 1H), 8,57 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,82 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,51-7,48 (m, 2H), 7,35 (dd, J = 2,0 Hz, 9,0 Hz, 1H), 7,27-7,23 (m, 2H), 6,83-6,81 (m, 2H), 4,97 (s.a., 1H), 4,59-4,55 (m, 2H), 4,49-4,32 (m, 4H), 3,61 (s, 3H), 3,51-3,47 (m, 1H), 3,42­ 3,37 (m, 1H), 3,17-3,16 (m, 1H), 3,01-2,98 (m, 1H), 2,76-2,74 (m, 2H), 2,63-2,61 (m, 3H), 2,55-2,54 (m, 1H), 2,19-2,16 (m, 1H), 2,12-2,07 (m, 1H), 1,90-1,85 (m, 2H), 1,77-1,66 (m, 3H), 1,27-1,25 (m, 1H), 0,79 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
Ejemplo 166a 2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexah¡drop¡raz¡no[1,2-a]¡ndol-2(1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-(oxetan-3-il)-4,5,6,7-tetrah¡drop¡razolo[1,5-a]p¡raz¡n-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)nicotinaldehído 166a
Figure imgf000147_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1-metil-3-(5-(oxetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 163a (354 mg, 0,83 mmol), 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 134c (289 mg, 0,83 mmol), PdCh(dppf) (68 mg, 0,08 mmol), K3PO4 (352 mg, 1,66 mmol), acetato de sodio (136 mg, 1,66 mmol), acetonitrilo (50 ml) y agua (3 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 166a (305 mg, 60 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+:613.6.
Ejemplo 166 10-fluoro-2-[3'-hidroximetil-1-metil-5-(5-oxetan-3-il-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-3,4,6,7,8,9-hexahidro-2H-pirazino[1,2-a]indol-1-ona 166
A una suspensión de 166a (250 mg, 0,41 mmol) en metanol (20 ml) se le añadió borohidruro de sodio (47 mg, 1,23 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 30 minutos. A continuación, se desactivó con agua (2 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 166 (20 mg, 6,6 %). EM-ESI:
[M+H]+ 615,6. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,46 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 4,95 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,76-4,74 (m, 2H), 4,69-4,65-4,67 (m, 3H), 4,46-4,44 (m, 1H), 4,35-4,33 (m, 1H), 4,10-4,08 (m, 4H), 3,38-3,35 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,58-3,56 (m, 2H), 2,842,82 (m, 2H), 2,58-2,53 (m, 4H), 1,89-1,84 (m, 2H), 1,77-1,76 (m, 2H).
Ejemplo 167a 3-clorobiciclo[2.2.1]hept-2-en-2-carbaldehído 167a
Figure imgf000147_0002
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se purgó con nitrógeno y se cargó con 1,2-dicloroetano anhidro (24 ml) y DMF anhidra (9,12 g, 125 mmol). La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se añadió oxicloruro de fósforo (15,3 g, 100 mmol) durante un periodo de 5 minutos mientras se mantenía la temperatura de reacción entre 0 y 10 °C. El baño de enfriamiento se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió una solución de biciclo[2.2.1]heptan-2-ona (5,50 g, 50,0 mmol) en 1,2-dicloroetano (10 ml) y la mezcla resultante se calentó a 80 °C durante la noche. Después de este tiempo, la reacción se vertió en una solución de monohidrogenofosfato de potasio (43,5 g, 250 mmol) en agua (200 ml) y se agitó durante 15 minutos. La capa orgánica se separó y se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en cloruro de metileno (300 ml) y se lavó con agua (2 x 50 ml). La capa de cloruro de metileno se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:100 para dar 167a como un aceite amarillo (2,2 g, 28 %). EM: [M+H]+ 157. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 69,80 (s, 1H), 3,42-3,41 (m, 1H), 3,08-3,07 (m, 1H), 1,95-1,77 (m, 2H), 1,68-1,66 (m, 1H), 1,41-1,17 (m, 3H).
Ejemplo 167b (E)-3-(3-clorobiciclo[2.2.1]hept-2-en-2-il)acrilato de etilo 167b
A una solución de 167a (9,0 g, 57,7 mmol) en cloruro de metileno (250 ml) se le añadió 2-(trifenil-A5-fosfanil¡den)acetato de etilo (20 g, 57,7 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. A continuación, se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:100 para dar 167b como un aceite amarillo (6,0 g, 46 %). EM: [M+H]+ 227.
Ejemplo 167c 3-azatriciclo[5.2.1.026]deca-2(6),4-dien-4-carboxilato de etilo 167c
Figure imgf000148_0001
A una solución de 167b (5,0 g, 22 mmol) en DMSO (30 ml) se le añadió NaN3 (2,2 g, 33 mmol). La mezcla se calentó a 105 °C durante 6 horas. Se añadió agua (13 ml) a la mezcla de reacción después de enfriar hasta temperatura ambiente y la mezcla resultante se extrajo con cloruro de metileno (3 X 50 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a presión reducida hasta sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 20:1 para dar 167c como un sólido marrón (2,7 g, 60 %). EM: [M+H]+ 206. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 11,51 (s, 1H), 6,45 (s, 1H), 4,16 (c, J = 6,5 Hz, 2H), 3,26-3,24 (m, 2H), 1,82-1,79 (m, 2H), 1,74-1,72 (m, 2H), 1,24 (t, J = 6,5 Hz, 3H), 0,91-0,89 (m, 2H).
Ejemplo 167d 3-(cianometil)-3-azatriciclo[5.2.1.026]deca-2(6),4-dien-4-carboxilato de etilo 167d
Figure imgf000148_0002
A una solución de 167c (3,0 g, 14,6 mmol) en DMF anhidra (30 ml) se le añadió NaH (880 mg, 22 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió 2-bromoacetonitrilo (3,5 g, 29,3 mmol) y la mezcla resultante se calentó a 65 °C durante 1 hora. A continuación, se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de la reacción, se añadió agua (30 ml) y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 3). La fase orgánica combinada se evaporó a presión reducida hasta sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 20:1 para dar 167d como un sólido marrón (2,6 g, 72 %). EM: [M+H]+ 245.
Ejemplo 167e 3-(2-aminoetil)-3-azatriciclo[5.2.1.026]deca-2(6),4-dien-4-carboxilato de etilo 167e
Figure imgf000148_0003
Se hidrogenó una suspensión de 167d (4,0 g, 16 mmol) y Ni Raney (400 mg) en metanol (60 ml) en un aparato Parr a 50 psi (0,35 MPa) durante la noche. La mezcla se filtró a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 20:1 para dar 167e como un sólido amarillo (2,0 g, 50 %). EM: [M+H]+ 249.
Ejemplo 167f 3,6-diazatetraciclo[9.2.1.02,10.038]tetradeca-2(10),8-dien-7-ona 167f
Figure imgf000149_0001
A una solución de 167e (1,8 g, 7,2 mmol) en etanol (40 ml) se le añadió metóxido de sodio (2,5 g, 36 mmol). La mezcla se calentó a 65 °C durante 12 horas. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente. El disolvente se evaporó hasta sequedad a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 20:1 para dar el racemato como un sólido marrón (800 mg, 53 %), del que su resolución quiral dio 167f y 170a. EM: [M+H]+ 203.
Ejemplo 167g 4-cloro-2-[(1S,11R)-7-oxo-3,6-diazatetraciclo[9.2.1.0210.038]tetradeca-2(10),8-dien-6-il]piridin-3-carbaldehído 167g
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (30 ml), 167f (400 mg, 2,0 mmol), 2-bromo-4-cloronicotinaldehído (1,30 g, 6,0 mmol) y acetato de potasio (390 mg, 4,0 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 30 minutos, se añadieron Xantphos (110 mg, 0,20 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (180 mg, 0,20 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 80 °C durante 10 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se dividió entre acetato de etilo (50 ml) y agua (30 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (3 X 30 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 2:1 para dar 167g (391 mg, 57 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 342,2
Ejemplo 167h 4-[1-metil-5-({5-metil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-[(1S,11R)-7-oxo-3,6-d¡azatetrac¡clo[9.2.1.02’10.03’8]tetradeca-2(10),8-d¡en-6-¡l]p¡r¡d¡n-3-carbaldehído 167h
Figure imgf000149_0002
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 167g (150 mg, 0,44 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 135a (169 mg, 0,44 mmol), acetato de sodio (72 mg, 0,88 mmol), K3PO4 (234 mg, 0,88 mmol), PdCl2(dppf) (36 mg, 0,044 mmol), acetonitrilo (20 ml) y agua (1 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 100 °C en N2 durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 167h (132 mg, 53 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 565,3
Ejemplo 167 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidro-6,9-metanopirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 167
A una solución de 167h (120 mg, 0,21 mmol) en metanol (20 ml) se le añadió NaBH4 (24 mg, 0,63 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 2 h. La reacción se desactivó con agua y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 167 (98 mg, 83 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 567,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,05 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,32 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,53 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,98 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,48-4,30 (m, 3H), 4,27-4,22 (m, 2H), 3,92-3,91 (m, 2H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,52-3,33 (m, 3H), 3,29 (ps, 1H), 2,79-2,77 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,87-1,76 (m, 3H), 1,60-1,59 (m, 1H), 1,09-0,91 (m, 2H).
Ejemplo 168a 3-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 168a
Un matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con la mezcla de 5-bromo-3-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 129c (1,3 g, 4.0 mmol), bis(pinacolato)diboro (2,03 g, 8,0 mmol), PdCb(dppf) (439 mg, 0 , 60 mmol), acetato de potasio (784 mg, 8.0 mmol) y 1,4-dioxano (60 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a reflujo durante 15 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente tras la finalización de la reacción y se filtró. El sólido se lavó con acetato de etilo (100 ml). El filtrado combinado se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 168a (446 mg, 30 %). EM: [M+H]+ 373.
Ejemplo 168b 4-(1-metil-5-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il)nicotinaldehído 168b
Figure imgf000150_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 108a (200 mg, 0,58 mmol), 168a (433 mg, 1,16 mmol), PdCb(dppf) (48 mg, 0,052 mmol), K3PO4 (246 mg, 1,16 mmol), acetato de sodio (96 mg, 1,16 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 168b (250 mg, 78 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 554,6.
Ejemplo 168 2-[5-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilamino)-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4’]bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetM-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1 -ona 168
A una suspensión de 168b (200 mg, 0,36 mmol) a 0 °C en metanol (10 ml) se le añadió borohidruro de sodio (42 mg, 1,1 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos y se desactivó con agua (2 ml). A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 168 (53 mg, 21 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 556,6. RMN de 1H (400 MHz, CDCb) ó 8,46 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,97 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,33 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 6,83 (s, 1H), 5,71 (s, 1H), 5,04-5,01 (m, 1H), 4,78 (s, 2H), 4,64-4,62 (m, 1H), 4,49 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,32-4,28 (m, 1H), 4,14 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 4,09-4,08 (m, 4H), 3,87-3,83 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 2,56 (d, J = 2,8 Hz, 2H), 2,50 (s, 2H), 1,26 (s, 6H).
Ejemplo 169a 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-5-azatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7)-dien-5-il}piridin-3-carbaldehído 169a
Figure imgf000150_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 2-bromo-4-cloronicotinaldehído 103a (1276 mg, 5,80 mmol), 8-tia-5-azatriciclo[7.4.0.027}]trideca-1(9),2(7)-dien-6-ona 105e (600 mg, 2,90 mmol), Cul (551 mg, 2,90 mmol), K2CO3 (800 mg, 5,80 mmol), 4,7-dimetoxi-1,10-fenantrolina (696 mg, 2,90 mmol) y dioxano (20 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la solución resultante durante 10 min, la mezcla se agitó a 95 °C durante 16 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró.
Al residuo se le añadió agua (20 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 10:1 para dar 169a (171 mg, 17 %). CLEM-ESI: [M+H]+ 347
Ejemplo 169b 4-[1-metil-5-({5-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-oxo-8-tia-5-azatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7)-dien-5-il}piridin-3-carbaldehído 169b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 169a (150 mg, 0,43 mmol), 3-(5-(2-etil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 1011 (200 mg, 0,43 mmol), Pd2(dba)3 (37 mg, 0,040 mmol), triciclohexilfosfina (120 mg, 0,43 mmol), Cs2CÜ3 (281 mg, 0,86 mmol), dioxano (10 ml) y agua (0,1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 110 °C durante 4 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con petróleo/acetato de etilo 1:3 para dar 169b como un sólido amarillo (45 mg, 16 %). CLEM-ESI: [M+H]+ 652
Ejemplo_____ 169 2-{3'-hidroximetil-1-metil-5-[5-(4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-3,4,5,6,7,8-hexahidro-2H-benzo[4,5]tieno[2,3-c]piridin-1-ona 169
Una mezcla de 169b (45 mg, 0,070 mmol), NaBH4 (8 mg, 0,21) y metanol (5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se desactivó con agua (5 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con Hp Lc prep. de fase inversa para dar 169 (14 mg, 30 %). CLEM-ESI: [M+H]+ 654. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,62 (s, 1H), 8,50 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,86 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,39-7,34 (m, 2H), 7,25-7,22 (m, 1H), 4,95-4,93 (m, 1H), 4,57-4,55 (m, 2H), 4,47-4,41 (m, 4H), 4,19-4,17 (m, 1H), 3,82-3,80 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,45-3,43 (m, 1H), 3,32-3,30 (m, 1H), 3,09-3,07 (m, 4H), 3,01-2,90 (m, 1H), 2,89-2,88 (m, 1H), 2,80-2,79 (m, 2H), 2,51-2,50 (m, 1H), 2,40-2,38 (m, 4H), 1,83-1,80 (m, 4H).
Ejemplo 170b 4-cloro-2-[(1 R,11 S)-7-oxo-3,6-diazatetraciclo[9.2.1.0210.038]tetradeca-2(10),8-dien-6-il]piridin-3-carbaldehído 170b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (30 ml), (1S,11R)-3,6-diazatetraciclo[9.2.1.0210.038]tetradeca-2(10),8-dien-7-ona 170a (400 mg, 2,0 mmol), 2-bromo-4-cloronicotinaldehído 103a (1,30 g, 6,0 mmol) y acetato de potasio (390 mg, 4,0 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 30 minutos, se añadieron Xantphos (110 mg, 0,20 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (180 mg, 0,20 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 80 °C durante 10 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se dividió entre acetato de etilo (50 ml) y agua (30 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (3 X 30 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 2:1 para dar 170b (405 mg, 59 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 342,2
Ejemplo 170c 4-[1-metil-5-({5-metil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-[(1R,11S)-7-oxo-3,6-diazatetraciclo[9.2.1.0210.038]tetradeca-2(10),8-dien-6-il]piridin-3-carbaldehído 170c
Figure imgf000151_0001
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 170b (150 mg, 0,44 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 135a (169 mg, 0,44 mmol), acetato de sodio (72 mg, 0,88 mmol), K3PO4 (234 mg, 0,88 mmol), Pd (dppf) Cl2 (36 mg, 0,044 mmol), acetonitrilo (20 ml) y agua (1 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla de reacción durante 30 minutos, se calentó a 100 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 170c (146 mg, 52 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 565,3
Ejemplo 170 2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidro-6,9-metanopirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 170
A una solución de 170c (122 mg, 0,22 mmol) en metanol (20 ml) se le añadió NaBH4 (24 mg, 0,64 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 2 h. La reacción se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar el compuesto del título (98 mg, 75 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 567,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,05 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,32 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,53 (s, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,98 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,48-4,30 (m, 3H), 4,27-4,22 (m, 2H), 3,92-3,91 (m, 2H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,49-3,47 (m, 3H), 3,30-3,28 (m, 1H), 2,79-2,77 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,87-1,76 (m, 3H), 1,61-1,59 (m, 1H), 1,09-0,88 (m, 2H).
Ejemplo 171a 4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-[(1S,11R)-7-oxo-3,6-diazatetraciclo[9.2.1.021°.038]tetradeca-2(10),8-dien-6-il]piridin-3-carbaldehído 171a
Figure imgf000152_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con acetonitrilo (30 ml), 4-cloro-2-[(1S,11R)-7-oxo-3,6-d¡azatetrac¡clo[9.2.1.02’1°.03’8]tetradeca-2(10),8-dien-6-il]piridin-3-carbaldehído 167g (170 mg, 0,50 mmol) (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 130f (336 mg, 0,70 mmol), agua (3 ml) y acetato de potasio (147 mg, 1,5 mmol). Después de hacer burbujear argón a través de la suspensión durante 30 minutos, se añadió 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (408 mg, 0,05 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 80 °C durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 100 ml). El filtrado combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 50:1 a 30:1) para dar 171a (95 mg, 29 %) como un sólido amarillo claro. EM-ESI: [M+H]+ 661,3
Ejemplo 171 (S)-2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidro-6,9-metanopirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 171
A una solución de 171a (90 mg, 0,136 mmol) en metanol (10 ml) se le añadió NaBH4 (26 mg, 0,7 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 1 h, CLEM indicó que se completó la reacción. Se desactivó con agua (30 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 30 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo sólido se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 171 (35 mg, 31,5 %) como un sólido amarillo claro. EM-ESI: [M+H]+ 663,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,62 (s, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,83 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,38 (dd, J = 2,5, 9,0 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 6,51 (s, 1H), 4,97 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 4,58-4,54 (m, 2H), 4,50-4,37 (m, 4H), 4,30-4,24 (m, 2H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,69-3,67 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,47 (s, 1H), 3,42-3,37 (m, 1H), 3,30 (s, 2H), 3,10-3,07 (m, 1H), 2,95-2,92 (m, 1H), 2,36-2,29 (m, 3H), 2,21-2,16 (m, 1H), 1,88-1,754 (m, 3H), 1,60-1,58 (m, 1H), 1,08-1,05 (m, 1H), 0,98-0,96 (m, 1H), 0,93 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
Ejemplo 172a 3-(1,2,4-triazin-3-ilamino)-5-bromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona 172a
Figure imgf000153_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 500 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (100 ml), 1,2,4-triazin-3-amina (1,5 g, 15,6 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (4,2 g, 15,6 mmol), Pd2(dba)3 (458 mg, 1,56 mmol), XantPhos (1,8 g, 3,12 mmol) y carbonato de cesio (10 g, 31,2 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a 90 °C durante 2,5 h. Después de este tiempo, la reacción se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo resultante se recristalizó a partir de acetato de etilo para dar 172a como un sólido amarillo (1,76 g, 40 %). EM-ESI: [M+H]+ 282.
Ejemplo 172b Acetato de (4-(5-(1,2,4-triazin-3-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 172b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 172a (200 mg, 0,71 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1 H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (272 mg, 0,71 mmol), Pd(dppf)Cl2 (58 mg, 0,071 mmol), acetato de sodio (193 mg, 1,42 mmol), K3PO4 (321 mg, 1,42 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo ( 10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a 100 °C durante 3 h. Después de este tiempo, la reacción se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo resultante se recristalizó a partir de acetato de etilo para dar 172b como un sólido amarillo (380 mg, 99 %). EM-ESI: [M+H]+ 541,2
Ejemplo_____172 2-(4-(5-(1,2,4-triazin-3-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 172
Una mezcla de 172b (350 mg, 0,65 mmol) e hidróxido de litio (273 mg, 6,5 mmol) en /-propanol/THF (1:1, 5 ml) y agua (0,5 ml) se agitó a 36 °C durante 0,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 172 (90 mg, 28 %). EM-ESI: [M+H]+ 499,2. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,77 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,72 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 5,10 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,65-4,51 (m, 2H), 4,31-4,27 (m, 1H), 4,16-4,08 (m, 2H), 3,90-3,87 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,62-2,56 (m, 4H), 1,92-1,87 (m, 2H), 1,79-1,78 (m, 2H).
Ejemplo 173a 5-bromo-3-(2,6-dimetilpirimidin-4-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 173a
Figure imgf000153_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (150 ml), 2,6-dimetilpirimidin-4-amina (2,5 g, 20,3 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (5,4 g, 20,3 mmol), Pd2(dba)3 (1,86 mg, 2,03 mmol), XantPhos (2,3 g, 4,06 mmol) y carbonato de cesio (13,2 g, 40,6 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 2,5 h. Después de este tiempo, la reacción se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo resultante se recristalizó a partir de acetato de etilo para dar 173a como un sólido amarillo (4,4 g, 40 %). EM-ESI: [M+H]+ 309,0.
Ejemplo 173b 3-(2,6-dimetilpirimidin-4-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 173b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 173a (1,5 g, 4,9 mmol), Pin2B2 (6,2 g, 24,5 mmol), Pd2(dba)3 (449 mg, 0,49 mmol), X-phos (467 mg, 0,98 mmol), acetato de potasio (1,4 g, 14,7 mmol) y dioxano (60 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 16 h. La reacción se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo resultante se recristalizó a partir de acetato de etilo para dar 173b como un sólido gris claro (1,2 g, 72 %). EM-ESI:
[M+H]+ 357,2.
Ejemplo 173c 2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.02,6]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{5-[(2,6-dimetilpirimidin-4-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-carbaldehído 173c
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 173b (250 mg, 0,70 mmol), 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.02,6]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 108a (240 mg, 0,70 mmol), Pd(dppf)Cl2 (57 mg, 0,071 mmol), acetato de sodio (19 mg, 1,4 mmol), K3PO4 (316 mg, 1,4 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (15 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. Después de este tiempo, la reacción se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo resultante se recristalizó a partir de acetato de etilo para dar 173c como un sólido marrón (300 mg, 80 %). EM-ESI: [M+H]+ 538,3.
Ejemplo 173 2-[5-(2,6-dimetil-pirimidin-4-ilamino)-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-cidopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona 173
A 0 °C, a una solución de 173c (290 mg, 0,54 mmol) en metanol (5 ml) se le añadió borohidruro de sodio (62 mg, 1,62 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos y se desactivó con agua (1 ml). A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 173 como un sólido blanco (50 mg, 17 %). EM-ESI: [M+H]+ 540,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,90 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,35 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,45 (s, 1H), 5,16-5,13 (m, 1H), 4,67-4,52 (m, 2H), 4,33-4,29 (m, 1H), 4,16 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 3,90-3,86 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 2,58-2,56 (m, solapamiento, 5H), 2,51 (s, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,02 (s, 6H).
Ejemplo 174a 4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-[(1R,11S)-7-oxo-3,6-d¡azatetrac¡clo[9.2.1.02’10.03’8]tetradeca-2(10),8-dien-6-¡l]p¡r¡d¡n-3-carbaldehído 174a
Figure imgf000154_0001
Un matraz de fondo redondo se cargó con 4-cloro-2-[(1R,11S)-7-oxo-3,6-diazatetraciclo[9.2.1.0210.03,8]tetradeca-2(10),8-dien-6-il]piridin-3-carbaldehído 170b (200 mg, 0,59 mmol), 1-metil-3-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-2-ona 191j (400 mg, 0,88 mmol), PdCh(dppf) (50 mg, 0,06 mmol), K3PO4 trihidratado (300 mg, 1,20 mmol), acetato de sodio (100 mg, 1,20 mmol), acetonitrilo (15 ml) y agua (1,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó con cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:20 para dar 174a como un sólido rojo (170 mg, 44 %). EM-ESI: [M+H]+ 661,3
Ejemplo 174 (1R,11S)-6-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-2-il]-3,6-diazatetraciclo[9.2.1.0210.03,8]tetradeca-2(10),8-dien-7-ona 174
Una mezcla de 174a (150 mg, 0,23 mmol), NaBH4 (34 mg, 0,90) y metanol (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se desactivó con agua (30 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 174 (42 mg, 28 %). EM-ESI: [M+H]+ 663,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,65 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,85-7,84 (m, 2H), 7,36 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 3,5, 11,0 Hz, 1H), 6,82-6,80 (m, 2H), 5,16-5,06 (m, 1H), 4,72-4,61 (m, 5H), 4,08-4,05 (m, 1H), 4,32-4,21 (m, 3H), 3,88-3,85 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,54-3,50 (m, 2H), 3,38-3,37 (m, 2H), 3,08-3,06 (m, 2H), 2,57­ 2,54 (m, 1H), 2,48-2,45 (m, 2H), 2,21-2,17 (m, 1H), 1,93-1,91 (m, 3H), 1,66-1,64 (m, 1H), 1,14-1,08 (m, 2H), 0,98 (d, J = 8,0 Hz, 3H).
Ejemplo 175a 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.02,7]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 175a
Figure imgf000155_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 124a (150 mg, 0,43 mmol), 3-(5-(2-etil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 161f (215 mg, 0,43 mmol), PdCb(dppf) (33 mg, 0,040 mmol), K3PO4 trihidratado (202 mg, 0,86 mmol), acetato de sodio (71 mg, 0,86 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (2 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con petróleo/acetato de etilo 1:3 para dar 175a como un sólido amarillo (108 mg, 37%). EM-ESI: [M+H]+ 679
Ejemplo 175 3-{5-[5-((S)-2-etil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-6,7,8,9-tetrahidro-3H-benzo[4,5]tieno[2,3-d]piridazin-4-ona 175
Una mezcla de 175a (200 mg, 0,16 mmol), NaBH4 (18 mg, 0,48) y metanol (8 ml) se agitó a 25 °C durante 1 h. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (10 ml) y se evaporó a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 175 (55 mg, 50 %). EM-ESI: [M+H]+ 681. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 8,61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,57-8,56 (m, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,83 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,54-7,53 (m, 1H), 7,47 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,35-7,32 (m, 1H), 7,24-7,22 (m, 1H), 4,85-4,83 (m, 1H), 4,59-4,55 (m, 2H), 4,47-4,44 (m, 1H), 4,40-4,36 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 3,51-3,49 (m, 1H), 3,40-3,38 (m, 1H), 3,17-3,14 (m, 1H), 3,00­ 2,95 (m, 3H), 2,87-2,85 (m, 2H), 2,66-2,60 (m, 1H), 2,55-2,53 (m, 1H), 2,18-2,15 (m, 1H), 2,10-2,06 (m, 1H), 1,89-1,86 (m, 4H), 1,68-1,64 (m, 1H), 1,28-1,25 (m, 2H), 0,79 (t, J = 9,5 Hz, 3H).
Ejemplo 176a (S)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 176a
Figure imgf000155_0002
Un matraz de fondo redondo se cargó con 4-cloro-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 121a (180 mg, 0,55 mmol), (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 191j (397 mg, 0,82 mmol), Pdcb(dppf) (45 mg, 0,06 mmol), K3PO4 trihidratado (286 mg, 1,10 mmol), acetato de sodio (90 mg, 1,10 mmol), acetonitrilo (15 ml) y agua (1,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:20 para dar 176a como un sólido rojo (228 mg, 64%). EM-ESI: [M+H]+ 647,3
Ejemplo 176 (S)-2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6 dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2—a]indol-1 (2H)-ona 176
Una mezcla de 176a (200 mg, 0,31 mmol), NaBH4 (47 mg, 1,20) y metanol (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (10 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 x 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 176 (42 mg, 28 %). EM-ESI: [M+H]+ 649,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 88,66 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,56 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,47 (s, 1H), 7,84 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,50-7,48 (m, 2H), 7,39-7,36 (m, 1H), 7,26-7,24 (m, 2H), 6,83-6,80 (m, 2H), 4,57-4,54 (m, 2H), 4,48-4,40 (m, 3H), 4,35-4,33 (m, 1H), 3,69-3,67 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,41-3,38 (m, 2H), 3,11-3,08 (m, 1H), 2,97-2,93 (m, 1H), 2,76-2,74 (m, 2H), 2,62-2,60 (m, 2H), 2,52-2,51 (m, 1H), 2,35-2,32 (m, 2H), 2,19-2,17 (m, 1H), 1,90-1,87 (m, 2H), 1,77-1,75 (m, 2H), 0,94 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 177a Acetato de (4-(5-(5-etil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5—a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 177a
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Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-3-(5-etil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5—a]pirazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 208c (300 mg, 0,85 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (1,21 g, 3,16 mmol), PdCh(dppf) (35 mg, 0,043 mmol), K3PO4 (361 mg, 1,70 mmol), acetato de sodio (140 mg, 1,70 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 177a (365 mg, 60 %) como un aceite marrón. EM-ESI: [M+H]+ 611
Ejemplo 177 2-(4-(5-(5-etil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5—a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-1(2H)-ona 177
A una solución de 177a (300 mg, 0,49 mmol) en propan-2-ol (4 ml), tetrahidrofurano (4 ml) y agua (1 ml) se le añadió hidróxido de litio (35 mg, 1,47 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. Se evaporó y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 177 (79 mg, 28 %) como un sólido blanco. EM-ESI:
[M+H]+ 569. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 88,46 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,33 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 5,69 (s, 1H), 4,99-4,97 (m, 1H), 4,61-4,60 (m, 1H), 4,48-4,46 (m, 1H), 4,33-4,31 (m, 1H), 4,14-4,06 (m, 4H), 3,87-3,85 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,62 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2,91 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 2,63-2,55 (m, 6H), 1,91-1,87 (m, 2H), 1,79-1,78 (m, 2H), 1,17 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Ejemplo 178a 5-bromo-1-metil-3-(piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 178a
Figure imgf000156_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (60 ml), 5-bromo-2-nitropiridina (8,0 g, 31,8 mmol), piridin-2-amina (1,0 g, 10,6 mmol) y carbonato de cesio (7,0 g, 21,2 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 30 minutos, se añadieron XantPhos (616 mg, 1,0 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (973 mg, 1,0 mmol). La mezcla de reacción se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 100 °C durante 12 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se dividió entre acetato de etilo (100 ml) y agua (100 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (3 X 150 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 178a (1,5 g, 51 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 280
Ejemplo 178b 1-metil-3-(piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 178b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 178a (1,06 g, 3,8 mmol), Pin2B2 (4,8 g, 19,0 mmol), Pd2(dba)3 (348 mg, 0,38 mmol), X-Phos (350 mg, 0,76 mmol), acetato de potasio (1,12 g, 11,40 mmol) y dioxano (30 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 60 °C durante 6 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 3:1 para dar 178b como un sólido amarillo (1,2 g, 96 %). EM-ESI: [M+H]+ 328,2
Ejemplo 178c 4-{1-metil-6-oxo-5-[(piridin-2-il)amino]piridin-3-il}-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 178c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 178b (131 mg, 0,40 mmol), 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 124a (138 mg, 0,40 mmol), Pd(dppf)Cl2 (33 mg, 0,040 mmol), K3PO4 (170 mg, 0,80 mmol), acetato de sodio (66 mg, 0,80 mmol), agua (6 gotas) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 178c como un sólido amarillo (180 mg, 88 %). EM-ESI: [M+H]+ 511,2
Ejemplo 178 3-[3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-5-(piridin-2-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-6,7,8,9-tetrahidro-3H-benzo[4,5]tieno[2,3-d]piridazin-4-ona 178
A una solución de 178c (179 mg, 0,35 mmol) en metanol (6 ml) se le añadió borohidruro de sodio (39 mg, 1,05 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos y se desactivó con agua (1,0 ml). A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 178 (100 mg, 56 %). EM-ESI: [M+H]+ 513,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) ó 8,81 (s, 1H), 8,68 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,27 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,94 (s.a., 1H), 7,76 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,58-7,56 (m, 2H), 6,85-6,80 (m, 2H), 4,47-4,45 (m, 2H), 4,38-4,36 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,01-2,99 (m, 2H), 2,89-2,87 (m, 2H), 2,02-1,99 (m, 4H).
Ejemplo 179a 4-(1-metil-5-(2-metilpirimidin-4-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il)nicotinaldehído 179a
Figure imgf000157_0001
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 1 -metil-3-(2-metilpirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 213b (510 mg, 1,5 mmol), 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 108a (343 mg, 1,0 mmol), K3PO4 (424 mg, 2,0 mmol), acetato de sodio (272 mg, 2,0 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (40 mg, 0,044 mmol), acetonitrilo (20 ml) y agua (0,5 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 2 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con diclorometano (30 ml) y agua (30 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (3 * 20 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 30/1) para dar 179a (300 mg, 57 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 524
Ejemplo 179 2-[3'-hidroximetil-1-metil-5-(2-metil-pirimidin-4-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona 179
A una solución de 179a (262 mg, 0,50 mmol) en metanol/diclorometano (10/10 ml) se le añadió NaBH4 (57 mg, 1,5 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 1 h, CLEM indicó que se completó la reacción. A continuación, la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (5 ml) y diclorometano (20 ml). La fase acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo sólido se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 179 (180 mg, 69 %) como un sólido blanco. EM-ESI:
[M+H]+ 526. RMN de 1H (500 MHz, CDCls) 68,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,53 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,28 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,07 (s, 1H), 8,03 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,36 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 6,60 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,18-5,16 (m, 1H), 4,70-4,67 (m, 1H), 4,55-4,53 (m, 1H), 4,33-4,31 (m, 1H), 4,18-4,16 (m, 2H), 3,91-3,90 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,60 (s, 3H), 2,58 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2,52 (s, 2H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 180a 5-bromo-1-metil-3-(6-metilpirimidin-4-ilamino)piridin-2(1H)-ona 180a
Figure imgf000158_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 6-metilpirimidin-4-amina (800 mg, 2,6 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (694 mg, 2,6 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (238 mg, 0,26 mmol), XantPhos (300 mg, 0,52 mmol), Cs2cO3 (1,7 g, 5,2 mmol) y 1,4-dioxano (30 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 2,5 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 180a como un sólido amarillo (800 mg, 36 %). EM-ESI: [M+H]+ 295,1
Ejemplo 180b 1-metil-3-(6-metilpirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 180b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 180a (1,0 g, 3,4 mmol), Pin2B2 (4,3 g, 17 mmol), Pd2(dba)3 (312 mg, 0,34 mmol), X-phos (324 mg, 0,68 mmol), acetato de potasio (666 mg, 6,8 mmol) y dioxano (40 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 14 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó con éter de petróleo/acetato de etilo 3:1 (80 ml) para dar 180b como un sólido amarillo (600 mg, 50 %). EM-ESI: [M+H]+ 343,2.
Ejemplo 180c 2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(6-metilpirimidin-4-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-carbaldehído 180c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 180b (239 mg, 0,70 mmol), 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 108a (239 mg 0,70 mmol), Pd(dppf)Cl2 (57 mg, 0,070 mmol), acetato de sodio (115 mg, 1,4 mmol), K3PO4 (320 mg, 1,4 mmol), agua (5 ml) y acetonitrilo (15 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. Después de este tiempo, la reacción se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 180c como un sólido amarillo (170 mg, 47 %). EM-ESI: [M+H]+ 524,2.
Ejemplo 180 2-[3'-hidroximetil-1-metil-5-(6-metil-pirimidin-4-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona 180
A 0 °C, a una solución de 180c con agua (1 ml). A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 180 (47 mg, 32 %). EM-ESI: [M+H]+ 526,2. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,82 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,68 (s, 1H), 8,51 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,02-8,00 (m, 2H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,62 (s, 1H), 5,13 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,67-4,52 (m, 2H), 4,29-4,15 (m, 3H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 2,57 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2,51 (s, 2H), 2,43 (s, 3H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 181a 4-[1-metil-5-({5-metil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.02,7]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 181a
Figure imgf000159_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 124a (210 mg, 0,60 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 135a (346 mg, 0,90 mmol), Pd(dppf)Cl2 (30 mg, 0,030 mmol), K3PO4 (270 mg, 1,2 mmol), acetato de sodio trihidratado (180 mg, 1,2 mmol), agua (6 gotas) y acetonitrilo (40 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 181a (300 mg, 88 %) como un sólido marrón amarillento. EM-ESI: [M+H]+ 569,3.
Ejemplo 181 3-[3'-hidroximetil-1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4’]bipiridinil-2'-il]-6,7,8,9-tetrahidro-3H-benzo[4,5]tieno[2,3—d]piridazin-4-ona 181
Una mezcla de 181a (300 mg, 0,50 mmol) y NaBH4 (60 mg, 1,5 mmol) en metanol (20 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se desactivó con agua y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con acetato de etilo (3 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 181 (100 mg, 35 %). EM-ESI: [M+H]+ 571,2. RMN de 1H (500 MHz, CHCla) 6 8,64 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,00 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 5,70 (s, 1H), 4,45-4,43 (m, 2H), 4,32 (s.a., 1H), 4,11-4,09 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,63 (s, 2H), 2,99-2,97 (m, 2H), 2,93-2,91 (m, 2H), 2,88-2,86 (m, 2H), 2,50 (s, 3H), 2,00-1,98 (m, 4H).
Ejemplo__________182a 4-{1-metil-6-oxo-5-[(pirimidin-4-il)amino]-1,6-dihidropiridin-3-il}-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 182a
Figure imgf000159_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 124a (345 mg, 1,0 mmol), 1-metil-3-(pirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 143a (328 mg, 1,0 mmol), Pd(dppf)Cl2 (82 mg, 0,10 mmol), acetato de sodio (162 mg, 2,0 mmol), K3PO4 (424 mg, 2,0 mmol) y acetonitrilo/agua (20/1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 182a como un sólido amarillo (156 mg, 30 %). EM-ESI: [M+H]+ 512,1.
Ejemplo 182 3-[3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-6,7,8,9-tetrahidro-3H-benzo[4,5]tieno[2,3-d]piridazin-4-ona 182
A temperatura ambiente, a una solución de 182a (140 mg, 0,27 mmol) en metanol (5 ml) se le añadió borohidruro de sodio (31 mg, 0,82 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 20 minutos y se desactivó con agua (1 ml). A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 60:1 para dar 182 como un sólido blanco (60 mg, 43 %). EM-ESI: [M+H]+ 514,2. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,89 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,82 (s, 1H), 8,70 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,36 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,89 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 4,44-4,42 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,99-2,98 (m, 2H), 2,88-2,87 (m, 2H), 2,03-1,98 (m, 4H).
Ejemplo 183a 2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)-4-(1-metil-6-oxo-5-(piridin-2-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il)nicotinaldehído 183a
Figure imgf000160_0001
Un matraz de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 134c (297 mg, 0,57 mmol), 1-metil-3-(piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 178b (186 mg, 0,57 mmol), acetato de sodio (90 mg, 1,1 mmol), K3PO4 (234 mg, 1,1 mmol), PdCh(dppf) (50 mg, 0,057 mmol), acetonitrilo (25 ml) y agua (1 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 100 °C en atmósfera de nitrógeno durante 3 horas. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 20:1 para dar 183a (178 mg, 61 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 513,3.
Ejemplo 183 10-fluoro-2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-6-oxo-5-(piridin-2-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 183
Una mezcla de 183a (160 mg, 0,31 mmol) y NaBH4 (59 mg, 1,55 mmol) en metanol (20 ml) se agitó a 20 °C durante 2 h. A continuación, la reacción se desactivó con agua y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 183 (42 mg, 26 %) como un sólido blanquecino. EM-ESI: [M+h ]+ 515,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,74 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,18-8,17 (m, 1H), 7,61-7,58 (m, 1H), 7,53 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,81-6,79 (m, 1H), 4,95 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,49-4,40 (m, 2H), 4,22-4,14 (m, 2H), 4,10-4,05 (m, 1H), 3,87-3,85 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,64-2,60 (m, 1H), 2,57-2,53 (m, 1H), 2,43-2,41 (m, 2H), 1,81-1,75 (m, 2H), 1,71-1,67 (m, 2H).
Ejemplo 184a 1-metil-3-(pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 184a
Figure imgf000160_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(pirazin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 162a (600 mg, 2,1 mmol), Pin2B2 (2540 mg, 10 mmol), Pd2(dba)3 (100 mg, 0,11 mmol), X-phos (100 mg, 0,25 mmol), acetato de potasio (600 mg, 6,1 mmol) y dioxano (30 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 15 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó mediante éter de petróleo para dar 184a como un sólido amarillo (700 mg, 90 %). EM-ESI: [M+H]+ 329,4
Ejemplo 184b 2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}-4-{1-metil-6-oxo-5-[(pirazin-2-il)amino]-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-carbaldehído 184b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 109a (100 mg, 0,30 mmol), 184a (170 mg, 0,60 mmol), Pd(dppf)Cl2 (12 mg, 0,015 mmol), K3PO4 (130 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio trihidratado (85 mg, 0,60 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (6 gotas). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con 25:1 de diclorometano/metanol para dar 184b (80 mg, 54 %) como un sólido marrón amarillento. EM-ESI: [M+H]+ 527,2.
Ejemplo 184 6-[3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-5-(pirazin-2-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-2,2-dimetil-2,3,5,6-tetrahidro-1 H,4H-8-tia-6-aza-ciclopenta[a]inden-7-ona 184
Una mezcla de 184b (80 mg, 0,15 mmol) y NaBH4 (18 mg, 0,45 mmol) en metanol (5 ml) se agitó a 30 °C durante 2 h. La mezcla se desactivó con agua y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con acetato de etilo (3 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 184 (24 mg, 35 %) como un sólido blanco. e M-ESI: [M+H]+ 529,3. RMN de 1H (500 MHz, CHCla) 68,73 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,54 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,14 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,02 (s, 1H), 7,96 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 4,86-4,83 (m, 1H), 4,71-4,68 (m, 1H), 4,46-4,41 (m, 1H), 4,32 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 3,85-3,81 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,99-2,94 (m, 2H), 2,81 (s, 2H), 2,61-2,51 (m, 2H), 1,30 (s, 6H).
Ejemplo 185a 5-bromo-3-(iiriidazo[1,2-a]piridin-7-ilamino)-1-metilpirazin-2(1H)-ona 185a
Figure imgf000161_0001
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con imidazo[1,2-a]piridin-7-amina (665 mg, 5,0 mmol), Cs2CO3 (3,26 g, 10 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpirazin-2(1H)-ona (1,86 g, 7,0 mmol), Xantphos (289 mg, 0,50 mmol), Pd2(dba)3 (458 mg, 0,50 mmol) y 1,4-dioxano (30 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 100 °C en atmósfera de nitrógeno durante 16 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró que quedaba poco material de partida. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se diluyó con diclorometano (60 ml) y agua (50 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 60/1 30/1) para dar 185a (700 mg, 44 %) como un sólido amarillo claro. EM-ESI: [M+H]+ 320
Ejemplo 185b Ácido 6-(Imidazo[1,2-a]piridin-7-ilamino)-4-metil-5-oxo-4,5-dihidropirazin-2-ilborónico 185b
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 185a (638 mg, 1,99 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (Pin2B2 , 2,54 mg, 10 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (163 mg, 0,18 mmol), Cs2CO3 (1,3 g, 3,98 mmol) y 1,4-dioxano (20 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 80 °C en atmósfera de nitrógeno durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se diluyó con éter de petróleo (150 ml) y acetato de etilo (15 ml). La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El sólido se recogió mediante filtración y se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 60/1 a 15/1) para dar 185b (400 mg, 70 %) como un sólido blanquecino. EM-ESI: [M+H]+ 286
Ejemplo 185c 2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(6-{imidazo[1,2-a]piridin-7-ilamino}-4-metil-5-oxopirazin-2-il)piridin-3-carbaldehído 185c
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 185b (400 mg, 1,40 mmol), 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3carbaldehído 108a (192 mg, 0,56 mmol), acetato de potasio (220 mg, 2,24 mmol), acetonitrilo (20 ml) y agua (0,5 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 30 minutos, se añadió 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (49 mg, 0,054 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 80 °C durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 20 ml). El filtrado combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 40:1 a 10:1) para dar 185c (90 mg, 29 %) como un sólido amarillo claro. EM-ESI: [M+H]+ 549
Ejemplo 185 2-(3-hidroximetil-4-[6-(imidazo[1,2-a]piridin-7-ilamino)-4-metil-5-oxo-4,5-dihidro-pirazin-2-il]-piridin-2-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-cidopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazm-1-ona 185
A una solución de 185c (80 mg, 0,146 mmol) en metanol (5 ml) se le añadió NaBH4 (34 mg, 0,90 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 1 h, CLEM indicó que se completó la reacción. La mezcla de reacción se desactivó con agua (3 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SÜ4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 185 (49 mg, 61%) como un sólido amarillo claro. EM-ESI: [M+H]+ 551. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 69,67 (s, 1H), 8,57 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,41 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,46 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 6,59 (s, 1H), 5,04-5,02 (m, 1H), 4,67-4,64 (m, 1H), 4,519-4,481 (m, 1H), 4,31-4,20 (m, 3H), 3,88 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 3,58 (s, 3H), 2,63-2,55 (m, 2H), 2,44-2,42 (m, 2H), 1,23 (s, 6H).
Ejemplo 186a 5-bromo-1-metil-3-(piridin-3-ilamino)pirazin-2(1 H)-ona 186a
Figure imgf000162_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con piridin-3-amina (940 mg, 10 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpirazin-2(1H)-ona (5,4 g, 20 mmol), ipropanol (50 ml) y di-i-propiletilamina (10 ml). La mezcla se calentó a reflujo durante 5 h. Después de la finalización de la reacción, se enfrió a temperatura ambiente. El disolvente se retiró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 186a (1,4 g, 50 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 281,6.
Ejemplo 186b Ácido 4-metil-5-oxo-6-(piridin-3-ilamino)-4,5-dihidropirazin-2-ilborónico 186b
Un matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 186a (800 mg, 2,86 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (2,18 g, 8,57 mmol), Pd (dppf) CÍ2 (204 mg, 0,28 mmol), acetato de potasio (560 mg, 5,71 mmol) y dioxano (60 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se agitó a 100 °C durante 3 h en nitrógeno. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo sólido se lavó con éter de petróleo (2 X 30 ml) para dar 186b (406 mg, 58 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 247,3.
Ejemplo 186c 2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)-4-(4-metil-5-oxo-6-(piridin-3-ilamino)-4,5-dihidropirazin-2-il)nicotinaldehído 186c
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 186b (127 mg, 0,52 mmol), 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 134c (180 mg, 0,52 mmol), Na2CO3 (110 mg, 1,04 mmol), PdCL(dppf) (38 mg, 0,052 mmol), Dm F (12 ml) y agua (1 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 50 °C durante 8 horas en nitrógeno. A continuación, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 30:1 para dar 1 8 6 c (132 mg, 49 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 514,3.
Ejemplo 186 10-fluoro-2-(3-(hidroximetil)-4-(4-metil-5-oxo-6-(piridin-3-ilamino)-4,5-dihidropirazin-2-il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 186
A una solución de 186c (118 mg, 0,23 mmol) en metanol (15 ml) se le añadió NaBH4 (27 mg, 0,70 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 2 h. La reacción se desactivó con agua y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 186 (33 mg, 28%) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 516,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 59,78 (s, 1H), 8,54 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,39-8,37 (m, 2H), 8,06-8,04 (m, 2H), 7,76 (s, 1H), 7,59 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 4,97 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,68-4,65 (m, 1H), 4,51-4,47 (m, 1H), 4,25-4,19 (m, 2H), 4,10-4,05 (m, 1H), 3,91-3,88 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 2,66-2,60 (m, 1H), 2,57-2,53 (m, 1H), 2,44-2,42 (m, 2H), 1,82-1,75 (m, 2H), 1,71-1,67 (m, 2H).
Ejemplo 187a Acetato de (4-(5-(5-(2,2-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)pmdin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1 H)-M)piridin-3-M)metilo 187a
Figure imgf000163_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-3-(5-(2,2-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 190e (200 mg, 1,0 eq., 0,45 mmol), acetato de (2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)metilo 113i (345 mg, 2 eq., 0,90 mmol), PdCL(dppf) (36 mg, 0,1 eq., 0,045 mmol), K3PO4 (191 mg, 2 eq., 0,90 mmol), acetato de sodio (74 mg, 2,0 eq., 0,90 mmol), acetonitrilo (15 ml) y agua (0,1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a 90 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/etanol 50:1 para dar 187a (100 mg, 31 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 707,4.
Ejemplo 187 2-(4-(5-(5-(2,2-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1 -metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 187
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 187a (100 mg, 1 eq., 0,14 mmol), hidróxido de litio (54 mg, 10 eq., 1,4 mmol), /-propanol (3 ml), THF (3 ml) y agua (2 ml). La mezcla se agitó a 30 °C durante 1 h. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 187 como un sólido blanco (43 mg, 46 %). EM-ESI: [M+H]+ 665,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 58,69 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,42-7,40 (m, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,98 (s.a., 1H), 4,54 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,46-4,38 (m, 4H), 4,25-3,85 (m, 4H), 3,60 (s, 3H), 3,38-3,35 (m, 1H), 3,03­ 2,54 (m, 4H), 2,47 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,32-2,12 (m, 4H), 1,79-1,67 (m, 4H), 0,97 (s, 6H).
Ejemplo 188a Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-6-oxo-5-[(pirazin-2-il)amino]-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 188a
Figure imgf000163_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(pirazin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 162a (210 mg, 0,70 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199e (560 mg, 1,4 mmol), Pd(dppf)Cl2 (70 mg, 0,035 mmol), K3PO4 (320 mg, 1,4 mmol), acetato de sodio trihidratado (210 mg, 1,4 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (6 gotas). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con 25:1 de diclorometano/metanol para dar 188a (150 mg, 40%) como un sólido marrón amarillento. EM-ESI: [M+H]+ 554,2.
Ejemplo 188 2-[3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-5-(pirazin-2-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-cidopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona 188
Una mezcla de 188a (150 mg, 0,27 mmol) e hidróxido de litio (103 mg, 2,7 mmol) en /-propanol/THF (5:3, 8 ml) y agua (2 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con acetato de etilo (2 X 20 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 188 (40 mg, 35 %) como un sólido blanco. e M-ESI: [M+H]+ 512,3. RMN de 1H (500 MHz, CHCla) 68,73 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,15-8,13 (m, solapamiento, 2H), 8,02-8,00 (m, 2H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,68-4,51 (m, 2H), 4,33-4,29 (m, 1H), 4,18 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,91-3,86 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,60-2,58 (m, 2H), 2,53 (s, 2H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 189a 4-(pirazin-2-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 189a
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 500 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con DMSO (250 ml), piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (15,8 g, 85,0 mmol), 2-cloropirazina (9,7 g, 85,0 mmol) y Cs2CO3 (55,3 g, 170 mmol). La mezcla se calentó a 60 °C durante 3 días. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 5:1 para dar 189a (13,3 g, 60 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 265,3
Ejemplo 189b 4-(5-bromopirazin-2-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 189b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 500 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con acetonitrilo (150 ml), 189a (3,0 g, 8,8 mmol) y N-bromosuccinimida (1,56 g, 8,8 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 10:1 para dar 189b como un sólido amarillo (2,85 g, 73,4 %). EM: [M+H]+ 343,3. RMN de 1H (500 MHz, (CD3)2CO) 6 8,03 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 3,48-3,46 (m, 4H), 3,42-3,40 (m, 4H), 1,33 (s, 9H).
Ejemplo 189c 4-(5-(difenilmetilenamino)pirazin-2-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 189c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 189b (3,3 g, 9,6 mmol), difenilmetanimina (1,74 g, 9,6 mmol), diacetato de paladio (440 mg, 0,48 mmol), (R)-(+)-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo (598 mg, 0,96 mmol), Cs2CO3 (6,2 g, 19,2 mmol) y 1,4-dioxano (80 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 115 °C durante 64 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 5:1 para dar 189c como un sólido amarillo (3,2 g, 75 %). EM: [M+H]+ 444,2.
Ejemplo 189d 4-(5-aminopirazin-2-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 189d
A una solución de 189c (2,5 g, 5,6 mmol) en metanol (25 ml) se le añadió acetato de sodio (0,56 g, 6,8 mmol) y clorhidrato de hidroxilamina (0,7 g, 10 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 0,5 h. A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna eluyendo con diclorometano/metanol 15:1 para dar 189d (1,3 g, 71 %). EM: [M+H]+ 280,3.
Ejemplo 189e 4-(5-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)pirazin-2-il)piperazin-1-carboxilato de fercbutilo 189e
Una mezcla de 189d (1,1 g, 3,94 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,1 g, 3,94 mmol), diacetato de paladio (45 mg, 0,20 mmol), (R)-(+)-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo (245 mg, 0,39 mmol) y Cs2CO3 (2,6 g, 7,9 mmol) en 1,4-dioxano (150 ml) se calentó a 120 °C durante 2 horas. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 189e (900 mg, 54 %). EM: [M+H]+ 465,1.
Ejemplo 189f 5-bromo-1-metil-3-(5-(piperazin-1-il)pirazin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 189f
Una mezcla de 189e (1,0 g, 2,2 mmol) y HCl 4,0 M/dioxano (60 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. A continuación, se concentró a presión reducida para dar 189f bruto como un sólido amarillo (760 mg, 98 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM: [M+H]+ 395,1.
E je m p lo 189g 5 -b ro m o -1 -m e til-3 -(5 -(4 -(o x e ta n -3 - il)p ip e ra z in -1 - il)p ira z in -2 - ila m in o )p ir id in -2 (1 H )-o n a 189g
Figure imgf000165_0001
Una mezcla de 189f (740 mg, 2,0 mmol), oxetan-3-ona (288 mg, 4,0 mmol), NaBhbCN (315 mg, 5,0 mmol) y cloruro de cinc (680 mg, 5,0 mmol) en metanol (60 ml) se agitó a 50 °C durante 5 horas. A continuación, se desactivó con agua y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano tres veces. El extracto combinado se concentró a presión reducida para dar 189g bruto como un sólido amarillo (660 mg, 78 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM: [M+H]+ 423,1.
Ejemplo 189h Acetato de (4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2- (1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 189h
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 189g (180 mg, 0,43 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (165 mg, 0,43 mmol), Pd(dppf)Cl2 (35 mg, 0,043 mmol), acetato de sodio (71 mg, 0,86 mmol), K3PO4 (194 mg, 0,86 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. Después de este tiempo, la reacción se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 189h como un sólido amarillo (100 mg, 34 %). EM-ESI: [M+H]+ 680,3.
Ejemplo 1892-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3- il)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1 (2H)-ona 189
A temperatura ambiente, a una solución de 189h (90 mg, 0,13 mmol) en /-propanol/THF (1:1, 5 ml) y agua (0,5 ml) se le añadió hidróxido de litio (126 mg, 2,9 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 35 °C durante 0,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó con HPLc prep. de fase inversa para dar 189 (60 mg, 71 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 638,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,43 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,82 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 5,04-5,01 (m, 1H), 4,72-4,50 (m, 6H), 4,32-4,30 (m, 1H), 4,15-4,09 (m, 2H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,57-3,49 (m, 5H), 2,61-2,43 (m, 8H), 1,92-1,78 (m, 4H).
Ejemplo 190a 3.3-d¡met¡l-4-(6-n¡trop¡r¡d¡n-3-¡l)piperaz¡n-1-carbox¡lato de ferc-butilo 190a
Figure imgf000165_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-2-nitropiridina (5,6 g, 28,0 mmol), 3,3-dimetil-4-piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (3,0 g, 14,0 mmol), carbonato de cesio (9,1 g, 28 mmol) y 1,4-dioxano (50 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la solución resultante durante 30 min, se añadieron Binap (870 mg, 1,4 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (1,2 g, 1,4 mmol). La mezcla de reacción se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se agitó a 120 °C durante 24 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró y el filtrado se dividió entre acetato de etilo (200 ml) y agua (50 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 ml) y se secaron sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 5:1 para dar 190a (1,27 g, 27 %). CLEM: [M+H]+ 337,2.
Ejemplo 190b 4-(6-aminopiridin-3-il)-3,3-dimetilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 190b
Un matraz de fondo redondo de 50 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 3,3-dimetil-4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 190a (1100 mg, 3,2 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 10 % humedecido, 110 mg) y metanol (20 ml). A continuación, se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. Se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de agente de filtro de tierra de diatomeas (CELITE®, Imerys Minerals California, Inc.) y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 190b (950 mg, 94 %). CLEM: [M+H]+ 307,3
Ejemplo 190c 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)-3,3-dimetilpiperazin-1-carboxilato de tere-butilo 190c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 4-(6-aminopiridin-3-il)-3,3-dimetilpiperazin-1-carboxilato de tere-butilo 190b (950 mg, 3,1 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1240 mg, 4,6 mmol), 1,4-dioxano (30 ml) y carbonato de cesio (2015 mg, 6.2 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la solución resultante durante 5 min, se añadieron Xantphos (179 mg, 0,31 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (283 mg, 0,31 mmol). La mezcla de reacción se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a reflujo durante 10 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se dividió entre acetato de etilo (50 ml) y agua (10 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (3 * 20 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 4:1 para dar 190c (1,21 g, 79 %). CLEM: [M+H]+ 492,1.
Ejemplo 190d 5-bromo-3-(5-(2,2-dimetilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 190d
A una solución de 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)-3,3-dimetilpiperazin-1-carboxilato de tere-butilo 190c (1,19 g, 1,9 mmol) en diclorometano (20 ml) se le añadió HCl 3 M en éter dietílico (15 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. A continuación, se concentró a presión reducida para dar 190d (900 mg, 95 %). CLEM: [M+H]+ 392,1.
Ejemplo 190e 5-bromo-3-(5-(2,2-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 190e
Una mezcla de 5-bromo-3-(5-(2,2-dimetilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-piridin-2(1H)-ona 190d (900 mg, 2.3 mmol), oxetan-3-ona (497 mg, 6,9 mmol), NaBHaCN (435 mg, 6,9 mmol) y cloruro de cinc (311 mg, 2,3 mmol) en metanol (30 ml) se agitó a 50 °C durante 4 horas. A continuación, se concentró a presión reducida. Se añadió agua (10 ml) al residuo y la mezcla se extrajo con cloroformo (3 x 50 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 190e (800 mg, 78 %). CLEM: [M+H]+ 448,1. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,65 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,37-7,34 (m, 1H), 6,96 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,69-4,61 (m, 4H), 3,60 (s, 3H), 3,50-3,14 (m, 3H), 2,43-2,17 (m, 4H), 1,06 (s, 6H).
Ejemplo 190f 2-(4-cloro-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 190f
Figure imgf000166_0001
A una solución de 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)-nicotinaldehído 103b (1,0 g, 3,0 mmol) en metanol (30 ml) se le añadió borohidruro de sodio (380 mg, 9,0 mmol) a 10 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos y se desactivó con agua (10 ml). A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo se disolvió en diclorometano (50 ml). La mezcla se lavó con agua (10 ml), se secó sobre Na2SÜ4 anhidro, se filtró y se evaporó a presión reducida para dar 190f como un sólido amarillo (900 mg, 90 %). EM-ESI: [M+H]+ 332.
Ejemplo 190g Acetato de (4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 190g A una mezcla de 2-(4-cloro-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 190f (900 mg, 2,7 mol) y trietilamina (900 mg, 9,0 mol) en diclorometano (25 ml) se le añadió gota a gota cloruro de acetilo (600 mg, 6,0 mol) mientras se agitaba a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano para dar 190g como un sólido blanco (950 mg, 94 %). EM-ESI: [M+H]+ 374.
Ejemplo 190h Acetato de (4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 190h
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con acetato de (4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidro-pirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 190g (950 mg, 2,5 mmol), Pin2B2 (4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1,6 g, 2,0 eq., 5 mmol), Pd2(dba)3 (230 mg, 0,1 eq., 0,25 mmol), X-phos (232 mg, 0,2 eq., 0,50 mmol), acetato de potasio (735 mg, 3 eq., 7,5 mmol) y dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 15 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó con éter de petróleo/acetato de etilo 3:1 para dar 190h como un sólido amarillo (950 mg, 87 %). EM-ESI: [M+H]+ 383.
Ejemplo 190i Acetato de (4-(5-(5-(2,2-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 190i
Figure imgf000167_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-3-(5-(2,2-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 190e (200 mg, 1,0 eq., 0,45 mmol), acetato de (2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)metilo 190h (345 mg, 2 eq., 0,90 mmol), PdCb(dppf) (36 mg, 0,1 eq., 0,045 mmol), K3PO4 (191 mg, 2 eq., 0,90 mmol), acetato de sodio (74 mg, 2,0 eq., 0,90 mmol), acetonitrilo (15 ml) y agua (0,1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a 90 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/etanol 50:1 para dar 190i (100 mg, 31 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 707,4.
Ejemplo______ 190 2-[4-[5-[[5-[2,2-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 190
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético se cargó con acetato de (4-(5-(5-(2,2-dimetil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-02(1H)-il)piridin-3-il)metilo 190i (100 mg, 1 eq., 0,14 mmol), hidróxido de litio (54 mg, 10 eq., 1,4 mmol), /-propanol (3 ml), THF (3 ml) y agua (2 ml). La mezcla se agitó a 30 °C durante 1 h. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 190 como un sólido blanco (43 mg, 46 %). EM-ESI: [M+H]+ 665,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-cfó) 6 8,69 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,42­ 7,40 (m, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,98 (s.a., 1H), 4,54 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,46-4,38 (m, 4H), 4,25-3,85 (m, 4H), 3,60 (s, 3H), 3,38-3,35 (m, 1H), 3,03-2,54 (m, 4H), 2,47 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,32­ 2,12 (m, 4H), 1,79-1,67 (m, 4H), 0,97 (s, 6H)
Ejemplo 191a N-ferc-butil-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-2-carboxamida 191a
Una mezcla de ácido 4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-2-carboxílico (500 g, 2,75 mol, 1,0 equiv.) y cloruro de tionilo (655 g, 5,5 mol, 2,0 equiv.) se calentó a reflujo durante 3 h. El cloruro de tionilo en exceso se retiró mediante destilación a presión reducida. El residuo se llevó a diclorometano (1,0 l) y se añadió una solución de ferc-butilamina (402 g, 5,5 mol, 2,0 equiv.) en diclorometano (500 ml) con agitación mientras la temperatura de la mezcla se mantenía por debajo de 10 °C. La solución resultante se agitó a 25 °C durante 16 h. La mayor parte del disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se refrigeró en un baño de hielo y se introdujo lentamente solución de KOH 2 M para ajustar el pH a 11 con agitación. La suspensión se filtró y el sólido se recogió, se lavó tres veces con agua y se secó a vacío para dar 191a como un sólido blanco (580 g, 80 %, en dos etapas). EM: [M+H]+ 238. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) 5 7,02 (s, 1H), 5,77 (s, 1H), 2,65 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 2,47 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 1,74-1,70 (m, 4H), 1,35 (s, 9H).
Ejemplo 191c N-terc-butil-3-(diazenilmetil)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo-[b]tiofen-2-carboxamida 191c
Se añadió lentamente una solución de 191a (100 g, 0,42 mol, 1,0 equiv.) en THF (500 ml) a n-butillitio (672 ml, 2,5 M en THF, 1,68 mol, 4,0 equiv.) a -78 °C bajo protección con argón. La mezcla se agitó durante 2 h. Se añadió N,N-dimetilformamida (306 g, 4,2 mol, 10,0 equiv.) a la mezcla mientras la temperatura se mantenía a -78 °C. Después de otras 2,0 h, la mezcla de reacción se desactivó mediante la adición de metanol (500 ml) a -78 °C. Se agitó durante 0,50 h a temperatura ambiente para dar 191b in situ. A continuación, se añadió hidracina hidratada acuosa al 80 % (131 g, 2,1 mol) y la mezcla se sometió a reflujo a 65 °C durante la noche. El disolvente orgánico se retiró a presión reducida. El residuo se filtró y el sólido amarillo resultante se lavó con agua. El sólido se secó a vacío para dar 191c, que se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional. EM: [M+H]+ 280.
Ejemplo 191d 8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-(9),2(7),3-trien-6-ona 191d
Figure imgf000168_0001
Una mezcla de N-terc-butil-3-(diazenilmetil)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-2-carboxamida 191c (40 g, 144 mmol) en H2SO4 (acuoso, al 30 %, 3 l) se sometió a reflujo a 105 °C durante 24 h. A continuación, se filtró y el filtrado se extrajo con diclorometano (3 x 1 l). El extracto combinado se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 100:1 para dar 191d como un sólido blanco (9,0 g, 31 %). EM: [M+H]+ 207. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 58,15 (s, 1H), 2,96-2,94 (m, 2H), 2,86-2,84 (m, 2H), 1,96-1,94 (m, 4H).
Ejemplo 191e (3S)-3-metil-4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo 191e
Siguiendo el procedimiento descrito para el compuesto 101g y partiendo de (3S)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de terc-butilo (10,0 g, 50 mmol) y 5-bromo-2-nitropiridina (10,5 g, 50 mmol) se dio 191e como un sólido amarillo (8,05 g, 50 %). EM-ESI: [M+H]+ 323
Ejemplo 191f (3S)-4-(6-aminopiridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de terc-butilo 191f
Siguiendo el procedimiento descrito para el compuesto 101h y partiendo de (3S)-3-metil-4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo 191e (5,8 g, 18 mmol) se dio 191f como un sólido marrón (4,9 g, 93 %). EM-ESl: [M+H]+ 293
Ejemplo 191g (3S)-4-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de terc-butilo 191g
Siguiendo el procedimiento descrito para el compuesto 101 i y partiendo de (3S)-3-metil-4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo 191f (4,0 g, 13,7 mmol) y 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (5,5 g, 20,6 mmol) se dio 191g como un sólido amarillo (5,4 g, 83 %). EM-ESl: [M+H]+ 478
E je m p lo 191h (3 S )-5 -b ro m o -1 -m e til-3 -(5 -(2 -m e tilp ip e ra z in -1 - il)p ir id in -2 - ila m in o )p ir id in -2 (1 H )-o n a 191h
Figure imgf000169_0001
Siguiendo el procedimiento descrito para el compuesto 101j y partiendo de (3S)-4-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)-3-metil-piperazin-1-carboxilato de tere-butilo 191g (3,1 g, 6,5 mmol), se dio 191h como un sólido amarillo (2,3 g, 94 %). EM-ESI: [M+H]+ 378.
Ejemplo 191i (S)-5-bromo-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 191i
Una mezcla de (S)-5-bromo-1-metil-3-(5-(2-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 191h (40,0 g, 106 mmol), oxetan-3-ona (11,4 g, 159 mmol), NaBHaCN (10,0 g, 159 mmol) y cloruro de cinc (21,3 g, 159 mmol) en metanol (700 ml) se agitó a 50 °C durante 5 horas. La mezcla se añadió a agua (100 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (200 ml x 3). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 191i (35 g, 73 %). EM: [M+H]+ 434.
Ejemplo 191j (3S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1 H)-ona 191j
Figure imgf000169_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con (S)-4-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de tere-butilo 191 i (1,0 g, 1,0 eq., 2,3 mmol), Pin2B2 (1,46 g, 2,50 eq., 5,75 mmol), Pd2(dba)3 (105 mg, 0,05 eq., 0,125 mmol), X-Phos (93 mg, 0,1 eq., 0,23 mmol), acetato de potasio (676 mg, 3,0 eq., 6,9 mmol) y dioxano (50 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 4 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó con éter de petróleo/acetato de etilo 3:1 (80 ml) para dar 191j como un sólido amarillo (1,0 g, 90 %). EM: [M+H]+ 482.
Ejemplo 191k 4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diaza-triciclo'[7.4.0.027]tri-deca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 191k
Figure imgf000170_0001
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 191j ( 1 68 mg, 0,35 mmol), 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 124a (121 mg, 0,35 mmol), K3PO4 (148 mg, 0,70 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (13 mg, 0,0175 mmol), acetato de sodio trihidratado (95 mg, 0,70 mmol), agua ( 6 gotas) y acetonitrilo (10 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 1 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completada en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con diclorometano (30 ml) y agua (30 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (3 x 20 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 30/1) para dar 191k (118 mg, 51 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 665
Ejemplo 191 5-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)pipera-zin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-2-il]-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-6-ona 191
A una solución de 4-[1 -metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1 -il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6 -dihidropiridin-3-il]-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo-[7.4.0.027]-trideca-1 (9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 191k (118 mg, 0,18 mmol) en metanol/diclorometano (10/10 ml) se le añadió NaBH4 (21 mg, 0,54 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 1 h, CLEM indicó que se completó la reacción. A continuación, la mezcla se vertió en agua (20 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (20 ml x 3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo sólido se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 191 (71 mg, 60%) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 667. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,64 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,58 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,48-8,46 (m, 2H), 7,86 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,37 (dd, J = 3,0, 9,0 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 4,86-4,85 (m, 1H), 4,58-4,55 (m, 2H), 4,48-4,46 (m, 2H), 4,42-4,40 (m, 2H), 3,65-3,64 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 3,41-3,99 (m, 1H), 3,05-3,04 (m, 1H), 2,97-2,95 (m, 3H), 2,87-2,86 (m, 2H), 2,52-2,51 (m, 1H), 2,34-2,32 (m, 2H), 2,21-2,20 (m, 1H), 1,89-1,87 (m, 4H), 0,94 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
Ejemplo 192a 1-formil-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxilato de metilo 192a
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un agitador magnético se purgó con nitrógeno y se cargó con dicloroetano anhidro (10 ml) y DMF anhidra (0,7 ml, 9,0 mmol). La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se añadió oxicloruro de fósforo (0,7 ml, 7,3 mmol) durante un periodo de 2 min, mientras se mantenía la temperatura de reacción entre 0 °C y 10 °C. El baño de enfriamiento se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió una solución de 5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxilato de metilo 112a (1,0 g, 5,6 mmol) en acetonitrilo (10 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas adicionales. Después de este tiempo, el disolvente se concentró a presión reducida y el residuo oleoso se llevó a NaHCO3 acuoso saturado (20 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 70 ml). La capa orgánica combinada se lavó con agua (20 ml), se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:1 para dar 192a como un sólido blanco (406 mg, 33 %). EM: (M+H)+ 208,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 10,29 (s, 1H), 7,43 (s, 1H), 3,99 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,76 (s, 3H), 2,95 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 1,90-1,85 (m, 2H), 1,78-1,74 (m, 2H).
E je m p lo 192b 7 ,8 ,9 ,10 -te tra h id ro p ir id a z in o [4 ,5 -a ]in d o liz in -4 (3 H )-o n a 192b
Figure imgf000171_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml se cargó con hidróxido de hidrazinio (20 ml), 1-formil-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxilato de metilo 192a (2,5 g, 12,0 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 4 horas. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró para dar 192b como un sólido amarillo (1,9 g, 83 %). EM: (M+H)+ 190,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 11,44 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,42 (s, 1H), 4,18 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,96 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 1,98-1,93 (m, 2H), 1,87-1,82 (m, 2H).
Ejemplo 192c 4-cloro-2-(4-oxo-7,8,9,10-tetrahidropiridazino[4,5-a]indolizin-3(4H)-il)nicotinaldehído 192c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (50 ml), carbonato de potasio (1,5 g, 10,6 mmol), 7,8,9,10-tetrahidropiridazino[4,5-a]indolizin-4(3H)-ona 192b (1,0 g, 5,3 mmol) y 2-bromo-4-cloronicotinaldehído (3,5 g, 15,9 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 30 minutos, se añadieron bromuro de cobre (I) (75,0 mg, 0,53 mmol) y sarcosina (47,0 mg, 0,53 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 95 °C durante 12 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se dividió entre cloruro de metileno (60 ml) y agua (40 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con cloruro de metileno (3 x 7 0 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 10:1 para dar 192c como un sólido marrón (521 mg, 30 %). EM-ESI: [M+H]+ 329,2.
Ejemplo 192d (S)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(4-oxo-7,8,9,10-tetrahidropiridazino[4,5-a]indolizin-3(4H)-il)nicotinaldehído 192d
Figure imgf000171_0002
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(4-oxo-7,8,9,10-tetrahidropiridazino[4,5—a]indolizin-3(4H)-il)nicotinaldehído 192c (196 mg, 0,60 mmol), (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)-piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 191j (290 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio (100 mg, 1,2 mmol), K3PO4 (320 mg, 1,2 mmol), PdCb(dppf) (50 mg, 0,060 mmol), acetonitrilo (25 ml) y agua (1 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 100 °C durante 3 horas bajo protección con N2. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 20:1 para dar 192d 173 mg, 44 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 648,4.
Ejemplo 192 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,8,9,10-tetrahidropiridazino[4,5—a]indolizin-4-ona 192
A una solución de 192d (160 mg, 0,25 mmol) en MeOH (20 ml) se le añadió NaBH4 (28 mg, 0,75 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 2 h y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 192 (97 mg, 60 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 650,4. RMN de 1H (500 MHz, DMSO de) 8 8,65 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,54 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,86 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,51 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,38-7,36 (m, 1H), 7,25 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 4,66 (s, 1H), 4,57-4,54 (m, 2H), 4,48-4,46 (m, 1H), 4,43-4,41 (m, 1H), 4,33 (s, 2H), 4,25-4,21 (m, 2H), 3,69-3,66 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,42­ 3,37 (m, 1H), 3,11-3,07 (m, 1H), 3,06-3,04 (m, 2H), 2,97-2,92 (m, 1H), 2,55-2,53 (m, 1H), 2,35-2,29 (m, 2H), 2,19-2,17 (m, 1H), 2,04-1,96 (m, 2H), 1,93-1,85 (m, 2H), 0,93 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 193a 2-(hidroxi(piridin-2-il)metil)acrilato de metilo 193a
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Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml se cargó con cloroformo (100 ml), picolinaldehído (10,7 g, 0,10 mol), acrilato de metilo (8,60 g, 0,10 mol) y 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano (0 , 56 0 g, 5,00 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 h. Después de este tiempo, la reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 3:1 para dar 193a como un aceite amarillo oscuro (11,6 g, 60 %). EM-ESI: (M+H)+ 194,2. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 8 8,54 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,69-7,66 (m, 1H), 7,42 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,22-7,20 (m, 1H), 6,36 (s, 1H), 5,97 (s, 1H), 5,62 (s, 1H), 4,85 (s, 1H), 3,74 (s, 3H).
Ejemplo 193b Indolizin-2-carboxilato de metilo 193b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con anhídrido acético (80 ml) y 193a (6 , 68 g, 34,6 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo en nitrógeno durante 4 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se vertió sobre la mezcla de hielo (100 g) y bicarbonato de sodio acuoso saturado (200 ml) y se agitó durante 1 h. La solución resultante se neutralizó con bicarbonato de sodio acuoso saturado y se extrajo con cloruro de metileno (3 x 200 ml). El extracto orgánico combinado se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 10:1 (10:1) para dar 193b como un sólido blanco (2,1 g, 35 %). EM-ESI: (M+H)+ 176,2. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 8 7,86-7,84 (m, 1H), 7,79 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 7,36-7,34 (m, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,70-6,66 (m, 1H), 6,55-6,51 (m, 1H), 3,88 (s, 3H).
Ejemplo 193c 5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxilato de metilo 193c
Un matraz de fondo redondo de 250 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 193b (2,0 g, 11,4 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 200 mg) y metanol (50 ml). Se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó en hidrógeno a 5 atm (0,51 MPa) a temperatura ambiente durante 8 h. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 193c como un sólido blanco (1,1 g, 81 %). EM-ESI: [M+H]+ 180,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 8 7,25 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,09 (s, 1H), 3,93 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,66 (s, 3H), 2,67 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,87-1,83 (m, 2H), 1,75-1,70 (m, 2H).
Ejemplo 193d 3-formil-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxilato de metilo 193d
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un agitador magnético se purgó con nitrógeno y se cargó con dicloroetano anhidro (20 ml) y DMF anhidra (0,70 ml, 9,0 mmol). A la mezcla a 0 °C se le añadió oxicloruro de fósforo (0,70 ml, 7,3 mmol) durante un periodo de 2 min, mientras se mantenía la temperatura de reacción entre 0 °C y 10 °C. El baño de enfriamiento se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió una solución de 193c (1,0 g, 5,6 mmol) en acetonitrilo (10 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de este tiempo, se concentró a presión reducida. El residuo oleoso se llevó a NaHCO3 acuoso saturado (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con agua (50 ml), se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:5 para dar 193d como un sólido blanco (703 mg, 58 %). EM-ESI: (M+H)+ 208,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-cfó) ó 10,14 (s, 1H), 6,40 (s, 1H), 4,27 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,78 (s, 3H), 2,78 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,94-1,85 (m, 2H), 1,78-1,69 (m, 2H).
Ejemplo 193e 6,7,8,9-tetrahidropiridazino[4,5-b]indolizin-1(2H)-ona 193e
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 193d (600 mg, 2,9 mmol) e hidracina hidratada (20 ml). La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 4 horas. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró para dar 193e como un sólido amarillo (413 mg, 75 %). EM-ESI: (M+H)+ 190,1. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 12,17 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 6,33 (s, 1H), 4,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,88 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 2,00-1,96 (m, 2H), 1,84-1,79 (m, 2H).
Ejemplo 193f 4-cloro-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropiridazino[4,5-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 193f
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (40 ml), 193e (800 mg, 3,6 mmol), 2-bromo-4-cloronicotinaldehído (2,8 g, 12,6 mmol) y carbonato de potasio (1,2 g, 8,4 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 30 minutos, se añadieron yoduro de cobre (I) (800 mg, 4,2 mmol) y 4,7-dimetoxi-1,10-fenantrolina (1,0 g, 4,2 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 90 °C durante 12 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se dividió entre cloruro de metileno (60 ml) y agua (40 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con cloruro de metileno (3 x 40 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:1 para dar 193f como un sólido marrón (513 mg, rendimiento de un 37 %). EM-ESI: [M+H]+ 329,1.
Ejemplo 193g (S)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)-piridin-2-il-amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-6,7,8,9 tetrahidro-piridazino[4,5-b]indoMzin-2(1 H)-il)nicotinaldehído 193g
Figure imgf000173_0001
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 193f (200 mg, 0,61 mmol), 191j (293 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio (98 mg, 1,2 mmol), K3PO4 (254 mg, 1,2 mmol), PdCb(dppf) (50 mg, 0,060 mmol), acetonitrilo (25 ml) y agua (1 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 100 °C durante 3 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 25:1 para dar 193g (206 mg, 53 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 648,3.
Ejemplo 193 2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidropiridazino[4,5—b]indolizin-1-ona 193
A una solución de 193g (180 mg, 0,28 mmol) en metanol (20 ml) se le añadió NaBhU (32 mg, 0,84 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 2 h y se desactivó con agua. A continuación, se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 193 (140 mg, 78 %) como un sólido blanquecino. EM-ESI:
[M+H]+ 650,4. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-cfe) ó 8,67 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,55 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,85 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,52-7,50 (m, 2H), 7,38-7,36 (m, 1H), 7,25 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,49 (s, 1H), 4,72 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,57-4,54 (m, 2H), 4,47 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,41 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,33-4,29 (m, 2H), 4,28-4,25 (m, 2H), 3,71-3,65 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,41-3,77 (m, 1H), 3,10-3,08 (m, 1H), 2,98-2,90 (m, 3H), 2,57-2,52 (m, 1H), 2,35­ 2,30 (m, 2H), 2,18-2,16 (m, 1H), 2,06-2,0 (m, 2H), 1,89-1,82 (m, 2H), 0,93 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
Ejemplo 194a 1-metil-3-(pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 194a
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(pirazin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 142a (600 mg, 2,0 mmol), Pin2B2 (2,54 g, 10 mmol), Pd2(dba)3 (100 mg, 0,10 mmol), X-phos (100 mg, 0,20 mmol), acetato de potasio (600 mg, 6,0 mmol) y dioxano (80 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 16 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó con éter de petróleo para dar 194a como un sólido amarillo (producto bruto) (1,0 g, pureza mediante CLEM: 70 %). EM-ESI: [M+H]+ 329,4.
Ejemplo__________ 194b 4-{1-metil-6-oxo-5-[(pirazin-2-il)amino]-1,6-dihidropiridin-3-il}-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 194b
Figure imgf000174_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 124a (345 mg, 1,0 mmol), 194a (659 mg, 2,0 mmol), Pd(dppf)Cl2 (50 mg, 0,050 mmol), K3PO4 (450 mg, 2,0 mmol), acetato de sodio trihidratado (300 mg, 2,0 mmol), agua (6 gotas) y, acetonitrilo (40 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 194b (250 mg, 49 %) como un sólido marrón amarillento. EM-ESI: [M+H]+ 512,3.
Ejemplo__________ 194 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-6-oxo-5-(pirazin-2-ilamino)-3-piridil]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidrobenzotiofeno[2,3-d]piridazin-4-ona 194
Una mezcla de 194b (200 mg, 0,4 mmol) y NaBH4 (48 mg, 1,2 mmol) en metanol (20 ml) se agitó a 30 °C durante 2 h. La mezcla se desactivó con agua (5 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 ml). El combinado con extracto de acetato de etilo se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante Hp LC prep. de fase inversa para dar 194 (60 mg, 30 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 514,2. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) ó 8,78 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,69 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 8,04 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 5 Hz, 1H), 4,44-4,37 (m, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,01-2,99 (m, 2H), 2,88-2,86 (m, 2H), 2,01-1,96 (m, 4H).
Ejemplo 195a 4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-carboxilato de etilo 195a
Figure imgf000175_0001
A una mezcla de 3-(2-clorociclohex-1-enil)acrilato de etilo (21,4 g, 100 mmol) en DMSO (100 ml) se le añadió acida de sodio (9,75 g, 150 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 105 °C durante 4 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se vertió en agua con hielo. El precipitado resultante se recogió mediante filtración para dar 195a (18,0 g, 93,3 %). EM-ESI: [M+H]+ 194.
Ejemplo 195b 1-(2,2-dietoxietil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-carboxilato de etilo 195b
A una suspensión de NaH (1,44 g, 60,2 mmol) en N,N-dimetilformamida (DMF) (30 ml) se le añadió lentamente 195a (5,80 g, 30,1 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h, seguido de la adición de 2-bromo-1,1-dietoxietano (11,9 g, 60,2 mmol). La reacción se calentó a 70 °C durante 30 h y se desactivó con agua (100 ml). A continuación, la mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml). La fase orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 40:1 para 195b (4,7 g, 51 %). EM-ESI: [M-EtOH+H]+ 264. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 86,65 (s, 1H), 4,59 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,17-4,16 (m, 4H), 3,59-3,57 (m, 2H), 3,27-3,26 (m, 2H), 2,61 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,51 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,73-1,71 (m, 2H), 1,63-1,61 (m, 2H), 1,25 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,02 (t, J = 7,0 Hz, 6H).
Ejemplo 195c Ácido 1-(2,2-dietoxietil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-carboxílico 195c
A una mezcla de 195b (4,7 g, 15,2 mmol) en un disolvente mixto de etanol (20 ml), tetrahidrofurano (20 ml) y agua (30 ml) se le añadió hidróxido de sodio (3,0 g, 75,0 mmol). La reacción se calentó a 75 °C durante dos días y se concentró a presión reducida. El residuo se suspendió en agua y se neutralizó con solución acuosa diluida de ácido cítrico. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 X 100 ml) y la fase orgánica combinada se concentró a presión reducida para dar 195c (3,32 g, 78 %). EM-ESI: [M-EtOH+H]+ 236.
Ejemplo 195d 1-(2,2-dietoxietil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-carboxamida 195d
A una mezcla de 195c (2,8 g, 10,0 mmol) en N,N-dimetilformamida (30 ml) se le añadió hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N,,N'-tetrametiluronio (HATU) (5,7 g, 15,0 mmol), Et3N (1,5 g, 15,0 mmol) y DMAP (128 mg, 1,0 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió hidróxido de amonio saturado (30 ml) y la mezcla resultante se agitó adicionalmente durante 2 h. A continuación, se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 X 100 ml). La fase orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (de 6:1 a 3:1) para dar 195d (2,7 g, 96 %). EM-ESI: [M-EtOH+H]+ 235. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) 87,35 (s.a., 1H), 6,70 (s.a., 1H), 6,60 (s, 1H), 4,60 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 3,57-3,56 (m, 2H), 3,25 (m, 2H), 2,57 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,40 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,71 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 1,64 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 1,01 (t, J = 7,0 Hz, 6H).
Ejemplo 195e 6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 195e
Una mezcla de 195d (2,7 g, 9,6 mmol) y ácido acético (10 ml) se calentó a 110 °C durante 2 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y neutralizó con solución acuosa de carbonato de sodio y se extrajo con acetato de etilo (3 X 30 ml). La fase orgánica combinada se concentró a presión reducida para dar 195e como un sólido amarillo (1,6 g, 88 %). EM-ESI: [M+H]+ 189,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 810,28 (s, 1H), 7,02 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 6,63 (s, 1H), 6,52 (pt, J = 5,5 Hz, 1H), 2,66 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,57 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,83-1,82 (m, 2H), 1,73-1,72 (m, 2H).
Ejemplo 195f 4-cloro-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 195f
Figure imgf000176_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (15 ml), 2-bromo-4-cloronicotinaldehído 103a (503 mg, 2,28 mmol), 195e (142 mg, 0,76 mmol), carbonato de cesio (490 mg, 1,5 mmol), CuI (143 mg, 0,76 mmol) y 4,7-dimetoxi-1,10-fenantrolina (127 mg, 0,52 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 80 °C durante 10 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se lavó con salmuera y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó con cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:4 para dar 195f (160 mg, 65 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 328.
Ejemplo 195g 2-(3-(formil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5—a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-pirazino[1,2—a]indol-1 (2H)-ona 195g
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 195f (130 mg, 0,40 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5—a]pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 135a (154 mg, 0,40 mmol), Pd(dppf)Cl2 (29 mg, 0,040 mmol), K3PO4 (170 mg, 0,80 mmol), acetato de sodio (66 mg, 0,80 mmol), agua (6 gotas) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 195g como un sólido amarillo (120 mg, 54 %). EM-ESI: [M+H]+ 551,2
Ejemplo 195 2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5—a]pirazin-2-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidropirazino[1,2—a]indol-1-ona 195
A una solución de 195g (120 mg, 0,22 mmol) en metanol (5 ml) a 0 °C se le añadió borohidruro de sodio (25 mg, 0,66 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. A continuación, se desactivó con agua (1,0 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 195 (70 mg, 58 %). EM-ESI: [M+H]+ 553,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,56 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,97 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,70 (s, 1H), 5,08-5,06 (m, 1H), 4,51-4,49 (m, 1H), 4,36-4,34 (m, 1H), 4,14-4,05 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,62-3,60 (m, 2H), 2,91-2,89 (m, 2H), 2,75-2,70 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 1,97-1,95 (m, 2H), 1,86-1,84 (m, 2H).
Ejemplo 196a 2-ciclopropilpirimidin-4-amina 196a
Figure imgf000177_0002
_, . .
196a 00 "C 5 h
196b
Figure imgf000177_0001
Se disolvió clorhidrato de ciclopropilcarbamidina (1,0 g, 8,3 mmol) en etanol (25 ml) y trietilamina (1,26 g, 12,5 mmol), seguido de la adición de 2-cloroacrilo-nitrilo (870 mg, 10 mmol). La solución naranja-amarilla resultante se sometió a reflujo durante 1 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a vacío y el residuo se purificó mediante Combiflash de fase inversa para dar 196a (300 mg, 27 %) como un sólido marrón claro. EM-ESI:
[M+H]+ 136
Ejemplo 196b 5-bromo-3-(2-ciclopropilpirimidin-4-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 196b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 196a (300 mg, 2.22 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1 H)-ona (593 mg, 2.22 mmol) y carbonato de cesio (1.45 g, 4.44 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 30 minutos, se añadieron Xantphos (127 mg, 0,22 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (100 mg, 0,11 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a reflujo durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 50 ml). El filtrado combinado se concentró a presión reducida y el residuo se lavó con acetonitrilo (5 ml) para dar 196b (420 mg, 59 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 321
Ejemplo 196c 3-(2-ciclopropilpirimidin-4-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 196c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y a condenser se cargó con 196b (380 mg, 1,2 mmol), PM2B2 (1,5 g, 5,9 mmol), Pd2(dba)3 (55 mg, 0,060 mmol), X-phos (57 mg, 0,060 mmol), acetato de potasio (350 mg, 3,6 mmol) y 1,4-dioxano (20 ml). La mezcla de reacción se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 60 °C durante 15 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó con éter de petróleo para dar 196c (410 mg, 94 %) como un sólido amarillo, que se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 369
Ejemplo 196d 4-{5-[(2-ciclopropilpiridin-4-il)amino]-1 -metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 196d
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 196c (258 mg, 0,70 mmol), 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 108a (240 mg, 0,70 mmol), K3PO4 (297 mg, 1,4 mmol), acetato de sodio (190 mg, 1,4 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (29 mg, 0,035 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 1 h. El análisis de la reacción mediante CLEM mostró una conversión completada en el producto deseado. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con diclorometano (20 ml) y agua (20 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 30/1) para dar 196d (220 mg, 57 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 549
Ejemplo 196 3-[4-[5-[(2-ciclopropilpirimidin-4-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 196
A una solución de 196d (200 mg, 0,36 mmol) en metanol/diclorometano (5/5 ml) se le añadió NaBH4 (42 mg, 1,1 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 1 h, CLEM indicó que se completó la reacción. La mezcla se concentró a presión reducida y se añadió agua (10 ml) al residuo. A continuación, se extrajo con diclorometano (20 ml x 3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SÜ4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. para dar 196 (135 mg, 68 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 551. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,84 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 6,52 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,22-5,19 (m, 1H), 4,72-4,69 (m, 1H), 4,56-4,54 (m, 1H), 4,31 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 4,17 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 3,94­ 3,91 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,58 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2,53 (s, 2H), 2,18-2,13 (m, 1H), 1,29 (s, 6H), 1,16-1,13 (m, 1H), 1,06-0,95 (m, 3H).
Ejemplo 197a 4-(5-nitropiridin-2-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 197a
Figure imgf000178_0001
Una mezcla de 2-bromo-5-nitropiridina (5,0 g, 24,6 mmol), piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (13,8 g, 74,2 mmol), acetonitrilo (150 ml) se agitó a reflujo durante 2,5 h. Después de que la reacción se completara, el disolvente se retiró a presión reducida para dar 197a como un sólido amarillo (4,1 g, 54 %). EM-ESI: [M+H]+ 309.
Ejemplo 197b 4-(5-aminopiridin-2-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 197b
Un matraz de fondo redondo de 250 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 197a (4,0 g, 13,0 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 10 % humedecido, 500 mg) y metanol (130 ml). El matraz se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 15 h. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 197b (3,3 g, 91 %). EM-ESI: [M+H]+ 279
Ejemplo 197c 4-(5-(6-bromo-4-metil-3-oxo-3,4-dihidropirazin-2-ilamino)piridin-2-il)piperazin-1-carboxilato de fercbutilo 197c
Una mezcla de 197b (500 mg, 1,8 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpirazin-2(1H)-ona (530 mg, 2,0 mmol), N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (1,5 ml, 0,90 mmol) y propan-2-ol (20 ml) se agitó a 100 °C durante 15 h. Después de que la reacción se completara, el disolvente se retiró a presión reducida para dar 197c como un sólido marrón (375 mg, 45 %). EM-ESI: [M+H]+ 465.
Ejemplo 197d 5-bromo-1-metil-3-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-ilamino)-pirazin-2(1H)-ona 197d
A una solución de 197c (500 mg, 1,08 mmol) en diclorometano (10 ml) se le añadió HCl 4,0 M/dioxano (10 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. A continuación, se concentró a presión reducida para dar 197d (358 mg, 91 %). EM-ESI: [M+H]+ 365.
Ejemplo 197e 5-bromo-1-metil-3-(6-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-ilamino)pirazin-2(1H)-ona 197e
Una mezcla de 197d (0,75 g, 2,1 mmol), oxetan-3-ona (0,24 ml, 4,2 mmol), NaBHaCN (0,32 g, 5,1 mmol) y cloruro de cinc/éter dietílico (5,1 ml, 5,1 mmol) en metanol (30 ml) se agitó a 50 °C durante 5 horas. El sólido se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 10:1 para dar 197e (550 mg, 64 %). EM-ESI: [M+H]+ 421.
Ejemplo 197f Acetato de (4-(4-metil-6-(6-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-ilamino)-5-oxo-4,5-dihidropirazin-2-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 197f
Figure imgf000179_0001
Un matraz de fondo redondo equipado con un condensador de reflujo se cargó con 197e (200 mg, 0,48 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (364 mg, 0,95 mmol), PdCl2(dppf) (40 mg, 0,049 mmol), K3PO4 3 H2O (250 mg, 0,95 mmol), acetato de sodio (80 mg, 0,95 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 80 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:20 para dar 197f como un sólido rojo (230 mg, 70 %). EM-ESI: [M+H]+ 680
Ejemplo 197 2-[3-(hidroximetil)-4-[4-metil-6-[[6-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-3-piridil]amino]-5-oxo-pirazin-2-il]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 197
Una mezcla de 197f (200 mg, 0,30 mmol) e hidróxido de litio (70 mg, 3,0 mmol) en THF (9 ml), /-propanol (6 ml) y agua (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. La mezcla se concentró a presión reducida y se diluyó con agua (4 ml). A continuación, se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml) y el extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 197 (59 mg, 30 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 638. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 9,30 (s, 1 H), 8,70 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 8,49 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 8,14-8,11 (m, 1 H), 7,59 (s, 1 H), 7,55 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 6,82 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 6,58 (s, 1 H), 4,93 (t, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,60-4,54 (m, 3 H), 4,48-4,42 (m, 3 H), 4,26-4,08 (m, 3 H), 3,86 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 3,54 (s, 3 H), 3,44-3,40 (m, solapamiento, 5 H), 2,66-2,53 (m, 2 H), 2,46-2,47 (m, 2 H), 2,35-2,33 (m, 4 H), 1,80-1,68 (m, 4 H).
Ejemplo 198a 4-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(4-oxo-7,8,9,10-tetrahidropiridazino[4,5—a]indolizin-3(4H)-il)nicotinaldehído 198a
Figure imgf000180_0001
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(4-oxo-7,8,9,10-tetrahidropiridazino[4,5-a]indolizin-3(4H)-il)nicotinaldehído 192c (118 mg, 0,36 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-il-amino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 1011 (171 mg, 0,36 mmol), Na2CO3 (78 mg, 0,72 mmol), Pd(dppf)Cl2 (30 mg, 0,036 mmol), Dm F (10 ml) y agua (1 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 50 °C durante 10 horas bajo protección con N2. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 20:1 para dar 198a (93 mg, 40%) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 634,3.
Ejemplo 198 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,8,9,10-tetrahidropiridazino[4,5-a]indolizin-4-ona 198
A una solución de 198a (80 mg, 0,13 mmol) en metanol (4 ml) se le añadió NaBH4 (14 mg, 0,39 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 2 h. A continuación, se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 198 (38 mg, 43%) como un sólido blanquecino. EM-ESI: [M+H]+ 636,4. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,65 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,54 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,88 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,50 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,39-7,36 (m, 1H), 7,25-7,23 (m, 1H), 4,67 (s.a., 1H), 4,55 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 4,46 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,33-4,31 (m, 2H), 4,26-4,20 (m, 2H), 3,59 (s, 3H), 3,46-3,41 (m, 1H), 3,09­ 3,03 (m, 6H), 2,39-2,37 (m, 4H), 2,04-1,96 (m, 2H), 1,93-1,86 (m, 2H).
Eem lo 199a Imidazo 12-a irimidin-7-amina 199a
Figure imgf000180_0002
A la solución de pirimidin-2,4-diamina (3,0 g, 0,027 mol) en etanol (90 ml) y NaHCO3 acuoso (2 M, 20 ml) se le añadió 2-cloroacetaldehído (4,3 g, 0,055 mol). La mezcla se agitó a 70 °C durante la noche. La TLC mostró que el material de partida había desaparecido. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se extrajo con acetato de etilo (3 X 30 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 1:5 para dar 199a como un sólido blanco (2,2 g, 60 %). EM: [M+H]+ 135,1.
Ejemplo 199b 5-bromo-3-(imidazo[1,2-a]pirimidin-7-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 199b
Un matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 199a (2,2 g, 16,4 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (8,77 g, 32,8 mmol), Pd2dba3 (1,5 g, 1,64 mmol), Xantphos (1,88 g, 3,28 mmol), Cs2CO3 (10,7 g, 32,8 mmol) y 1,4-dioxano (150 ml). El sistema se evacuó y, a continuación, se rellenó con N2. A continuación, se calentó a reflujo durante 3 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla se separó por filtración y el sólido se lavó con metanol (60 ml). El filtrado combinado se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 20:1 para dar 199b como un sólido verde claro (1,63 g, 31 %). EM: [M+H]+ 320,1 Ejemplo 199c 10-[4-cloro-3-(hidroximetil)piridin-2-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 199c
Figure imgf000181_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 108a (9,0 g, 26,1 mmol, 1,0 eq.), metanol (50 ml), diclorometano (30 ml) y NaBEU (5,95 g, 156,6 mmol, 5,0 eq.) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h. Después de que la reacción se completara, la reacción se desactivó con agua y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano. La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SÜ4 y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:4 para dar 199c como un sólido blanco (7,0 g, 77 %). EM-ESI: [M+H]+ 345,9.
Ejemplo 199d Acetato de (4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo-[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il)metilo 199d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 199c (7,0 g, 20,2 mmol, 1,0 eq.), trietilamina (4,08 g, 40,4 mmol, 2,0 eq.) y THF (50 ml). A la mezcla se le añadió gota a gota la solución de cloruro de acetilo (2,36 g, 30,3 mmol, 1,5 eq.) en THF (20 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora. Después de que la reacción se completara, se desactivó con agua con hielo y se evaporó a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano. La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SÜ4 y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se lavó con acetato de etilo/petróleo 1:8 para dar 199d como un sólido blanco (5,9 g, 76 %). EM-ESI: [M+H]+ 388,3.
Ejemplo 199e Ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199e
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 199d (4,5 g, 1,0 eq., 11,6 mmol), Pin2B2 (7,38 g, 2,5 eq., 29,0 mmol), PdCL(dppf) (473 mg, 0,05 eq., 0,58 mmol), x-phos (470 mg, 0,1 eq., 1,16 mmol), acetato de potasio (3,41 g, 3,0 eq., 34,8 mmol) y dioxano (100 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 4 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 199e bruto como un líquido marrón rojizo (4,0 g, pureza: 65 %). EM-ESI: [M+H]+ 398,3.
Ejemplo 199f Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[5-({imidazo[1,2-a]pirimidin-7-il}amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-il)metilo 199f
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 199b (500 mg, 1,5 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatri-ciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199e (1200 mg, 3,0 mmol), Pd(dppf)Cl2 (65 mg, 0,075 mmol), K3PO4 (650 mg, 3,0 mmol), acetato de sodio trihidratado (420 mg, 3,0 mmol), agua (6 gotas) y acetonitrilo (20 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 199f (240 mg, 40 %) como un sólido marrón amarillento. EM-ESI: [M+H]+ 593,4.
Ejemplo 199 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-(imidazo[1,2—a]pirimidin-7-ilamino)-1-metil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 199
Una mezcla de 199f (180 mg, 0,30 mmol) e hidróxido de litio (130 mg, 3,0 mmol) en /-propanol/THF (5:3, 8 ml) y agua (2 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se diluyó con agua (3 ml). A continuación, se extrajo con acetato de etilo (2 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. para dar 199 (40 mg, 30 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 551,3. RMN de 1H (500 MHz, CHCla) 6 9,09 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,13 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,47 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,10 (s, 1H), 4,67-4,50 (m, 2H), 4,32-4,18 (m, 3H), 3,93-3,88 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,60-2,58 (m, 2H), 2,52 (s, 2H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 200a 4-(6-nitropiridin-3-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de ferc-butilo 200a
Figure imgf000182_0002
, .
01 %
200a 200 h
Roo
Figure imgf000182_0003
200c
Figure imgf000182_0001
200c1 200f
Una mezcla de 5-bromo-2-nitropiridina (2,0 g, 9,7 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridin-1 (2H)-carboxilato de ferc-butilo (3,0 g, 9,7 mmol), pd(dppf)Cl2 (792 mg, 0,97 mmol), K3PO4.3 H2O (5,2 g, 19,4 mmol) y acetato de sodio (1,59 g, 19,4 mmol) en acetonitrilo (100 ml) y agua (5 ml) se evacuó y, a continuación, se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 80 °C durante 6 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con 1:5 acetato de etilo/éter de petróleo para dar 200a como un sólido amarillo (2,2 g, 74 %).
Ejemplo 200b 4-(6-aminopiridin-3-il)piperidin-1 -carboxilato de ferc-butilo 200b
Un matraz de fondo redondo de 500 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 200a (2,5 g, 8,2 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 300 mg) y metanol (80 ml). El matraz se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente en atmósfera de hidrógeno durante 12 h. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 200b (1,8 g, 78 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 278,1
Ejemplo 200c 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de tere-butilo 200c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 200b (2,0 g, 7,2 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,9 g, 7,2 mmol), carbonato de cesio (4,7 g, 14,4 mmol) y 1,4-dioxano (50 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 30 min, se añadieron Xantphos (418 mg, 0,72 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (661 mg, 0,72 mmol). La mezcla de reacción se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 100 °C durante 6 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se dividió entre acetato de etilo (120 ml) y agua (60 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (3 * 80 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:4 para dar 200c (2,0 g, 61 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 463,2
Ejemplo 200d 5-bromo-1-metil-3-(5-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1 H)-ona 200d
Una mezcla de 200c (1,0 g, 2,3 mmol) y HCl 4,0 M/dioxano (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se basificó con hidróxido de sodio acuoso y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica combinada se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SÜ4 y se concentró a presión reducida para dar 200d (650 mg, 84 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 363,0
Ejemplo 200e 5-bromo-1-metil-3-(5-(1-(oxetan-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 200e
Una mezcla de 200d (500 mg, 1,4 mmol), oxetan-3-ona (298 mg, 4,2 mmol), NaBHaCN (261 mg, 4,2 mmol) y 1 mol/l cloruro de cinc en etoxietano (4 ml, 4,2 mmol) en metanol (20 ml) se agitó a 50 °C durante 5 horas. Se añadió agua (20 ml) a la reacción y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano (3 * 50 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 10:1 para dar 200e (450 mg, 78 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 419,1
Ejemplo 200f Acetato de (4-(1-metil-5-(5-(1-(oxetan-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 200f
Un matraz de fondo redondo equipado con un condensador de reflujo se cargó con 200e (300 mg, 0,72 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (414 mg, 1,08 mmol), PdCh(dppf) (57 mg, 0,070 mmol), K3PO4 3 H2O (560 mg, 2,16 mmol), acetato de sodio (177 mg, 2,16 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 80 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó con cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:20 para dar 200f como un sólido rojo (324 mg, 68 %). EM-ESI: [M+H]+ 676,2
Ejemplo 200 2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[1-(oxetan-3-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-4-il]-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 200
Una mezcla de 200f (260 mg, 0,39 mmol) e hidróxido de litio (92,4 mg, 3,85 mmol) en THF (9 ml), isopropanol (6 ml) y agua (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. La mezcla se extrajo, concentró a presión reducida y diluyó con agua (4 ml). A continuación, se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml) y el extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 200 (53,1 mg, 20 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 634,2. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,76 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 8,74 (s, 1H), 8,49 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 8,24 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 7,73-7,71 (m, 1 H), 7,54 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 7,36 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 7,30 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,58 (s, 1 H), 6,11 (s, 1 H), 4,97 (s, 1 H), 4,57 (t, J = 6,5 Hz, 2 H), 4,38-4,49 (m, 4 H), 4,08-4,26 (m, 3 H), 3,86 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 3,61 (s, 3 H), 3,54-3,45 (m, 1 H), 2,95 (s, 2 H), 2,68-2,54 (m, 2 H), 2,48-2,46 (m, solapamiento, 6 H), 1,83-1,75 (m, 2 H), 1,73-1,65 (m, 2 H).
Ejemplo 201a 5-bromo-3-(¡m¡dazo[1,2-a]p¡rid¡n-7-ilamino)-1-metilpirazin-2(1H)-ona 201a
Figure imgf000184_0001
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con imidazo[1,2 -ajpiridin-7-amina (665 mg, 5,0 mmol), CS2CO3 (3,26 g, 10 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpirazin-2(1H)-ona (1,86 g, 7,0 mmol), Xantphos (289 mg, 0,50 mmol), Pd2(dba)3 (458 mg, 0,50 mmol) y 1,4-dioxano (30 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 100 °C en atmósfera de nitrógeno durante 16 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró que quedaba poco material de partida. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se diluyó con diclorometano (60 ml) y agua (50 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y concentraron a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 60/1 a 30/1) para dar 201a (700 mg, 44 %) como un sólido amarillo claro. EM-ESI: [M+H]+ 320
Ejemplo 201b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[6-({imidazo[1,2-a]piridin-6-il}amino)-4-metil-5-oxo-4,5-dihidropirazin-2-il]piridin-3-il)metilo 201b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 201a (64 mg, 0,20 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199e ( 1 60 mg, 0,40 mmol), Pd(dppf)Cl2 (10 mg, 0,012 mmol), K3PO4 (100 mg, 0,39 mmol), NaOAc3 H2O (60 mg, 0,44 mmol), agua ( 6 gotas) y acetonitrilo (5 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 20:1 para dar 201b (40 mg, 34 %) como un sólido marrón amarillento. EM-ESI: [M+H]+ 593,2.
Ejemplo 201 3-[3-(hidroximetil)-4-[6-(imidazo[1,2-a]piridin-6-ilamino)-4-metil-5-oxo-pirazin-2-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 201
Una mezcla de 201b (40 mg, 0,067 mmol) e hidróxido de litio (25 mg, 0,60 mmol) en /-propanol/THF (3:2, 5 ml) y agua (1 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con acetato de etilo (2 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 201 (10 mg, 30 %) como un sólido blanco. e M-ESI: [M+H]+ 551,3. RMN de 1H (500 MHz, CHCla) ó 9,58 (s, 1H), 8,58 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,73 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,63­ 7,61 (m, 2H), 7,55 (s, 1H), 7,13-7,11 (m, 1H), 6,87 (s, 1H), 5,19-5,17 (m, 1H), 4,77-4,75 (m, 1H), 4,57-4,42 (m, 2H), 4,20-4,17 (m, 2H), 3,92-3,90 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 2,60-2,53 (m, 4H), 1,29 (s, 6 H).
Ejemplo 202a 4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(4-oxo-7,8,9,10-tetrahidropiridazino[4,5-a]indolizin-3(4H)-il)nicotinaldehído 202a
Figure imgf000184_0002
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(4-oxo 7,8,9,10-tetrahidropiridazino[4,5—a]indolizin-3(4H)-il)nicotinaldehído 192c (200 mg, 0,60 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5—a]pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 135a (230 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio (100 mg, 1,2 mmol), K3PO4 (320 mg, 1,2 mmol), PdCh(dppf) (50 mg, 0,060 mmol), acetonitrilo (25 ml) y agua (1 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 100 °C durante 3 horas bajo protección con N2. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 25:1 para dar 202a (205 mg, 62 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 552,3.
Ejemplo 202 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5—a]pirazin-2-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,8,9,10-tetrahidropiridazino[4,5—a]indolizin-4-ona 202
A una solución de 202a (180 mg, 0,33 mmol) en metanol (25 ml) se le añadió NaBH4 (37 mg, 0,99 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 2 h y se desactivó con agua. A continuación, se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 202 (120 mg, 66 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 554,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) 68,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,07 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,45 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,65 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,34-4,32 (m, 2H), 4,26-4,20 (m, 2H), 3,93-3,91 (m, 2H), 3,58 (s, 3H), 3,49 (s, 2H), 3,06-3,04 (m, 2H), 2,79-2,77 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,04-1,96 (m, 2H), 1,93-1,86 (m, 2H).
Ejemplo 203a 5-metil-4,5,6,7-tetrahidrotiazolo[5,4—c]piridin-2-amina 203a
Figure imgf000185_0001
Una solución de 1-metil-4-piperidona (11,3 g, 100 mmol) en 2-propanol (80 ml) se calentó a 50 °C. A la solución se le añadieron secuencialmente una solución de cianamida (4,2 g, 100 mmol) en 2-propanol (25 ml) y azufre en polvo (3,2 g, 100 mmol). Después de que se añadiera una cantidad catalítica de pirrolidina (1,3 ml), la mezcla resultante se agitó a 50 °C durante 2 horas. Se dejó la mezcla de reacción enfriara a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. A continuación, se enfrió a o por debajo de 10 °C en un baño de hielo-agua y se agitó durante 1 hora a la misma temperatura. Los cristales precipitados se recogieron mediante filtración y se lavaron con 2-propanol (20 ml). Los cristales húmedos se secaron a vacío para dar 203a (10 g, 59 %). EM: [M+H]+ 170. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 66,70 (s, 2H), 3,31 (s, 2H), 2,61 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,45 (m, 2H), 2,33 (s, 3H).
Ejemplo 203b 5-bromo-1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidrotiazolo[5,4—c]piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 203b
Siguiendo los procedimientos descritos para 191g, y partiendo de 203a (4,0 g, 23,5 mmol) y 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (3,0 g, 17,8 mmol), se dio 203b como un sólido amarillo (2,8 g, 44 %). EM: [M+H]+ 357.
Ejemplo 203c 10-[3-(acetoximetil)-4-[1-metil-5-({5-metil-4H,5H,6H,7H-[1,3]tiazolo[5,4—c]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-2-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 203c
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 203b (178 mg, 0,50 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199e (200 mg, 0,50 mmol), K3PO4 (212 mg, 1,0 mmol), acetato de sodio (82 mg, 1,0 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (21 mg, 0,025 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 1 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se diluyó con diclorometano (20 ml) y agua (10 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (2 * 20 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SÜ4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 30/1) para dar 203c (135 mg, 43 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 584
Ejemplo 203 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-tiazolo[5,4-c]piridin-2-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 203
A una solución de 203c (140 g, 0,22 mmol) en THF//-propanol/agua (5/2/2 ml) se le añadió LiOH (54 mg, 2,2 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 1 h, CLEM indicó que se completó la reacción. A continuación, la mezcla se concentró a presión reducida y se diluyó con agua (3 ml). A continuación, se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. para dar 203 (85 mg, 66 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 586. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,50 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,37 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,95 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,11-5,09 (m, 1H), 4,67-4,64 (m, 1H), 4,52 (s.a., 1H), 4,30-4,28 (m, 1H), 4,16 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 3,89-3,86 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,60 (s, 2H), 2,84-2,81 (m, 4H), 2,58 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 2,53 (s, 3H), 2,52 (s, 2H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 204a 4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropiridazino[4,5-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 204a
Figure imgf000186_0001
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropiridazino[4,5-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 193f (200 mg, 0,60 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo-[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 135a (230 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio (100 mg, 1,2 mmol), K3PO4 (320 mg, 1,2 mmol), PdCb(dppf) (50 mg, 0,060 mmol), acetonitrilo (25 ml) y agua (1 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 30 minutos, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 20:1 para dar 204a (185 mg, 55%) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 552.3.
Ejemplo 204 2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidropiridazino[4,5—b]indolizin-1 -ona 204
A una solución de 204a (160 mg, 0,29 mmol) en metanol (20 ml) se le añadió NaBH4 (33,0 mg, 0,87 mmol). La mezcla se agitó a 20 °C durante 2 h y se desactivó con agua. A continuación, se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 204 (120 mg, 75%) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 554.3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) ó 8,55 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,09 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,49 (s, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,73 (s.a., 1H), 4,30 (s, 2H), 4,27-4,25 (m, 2H), 3,93-3,91 (m, 2H), 3,58 (s, 3H), 3,49 (s, 2H), 2,95-2,93 (m, 2H), 2,78-2,76 (m, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,04-1,99 (m, 2H), 1,88-1,83 (m, 2H).
Ejemplo 205a 2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 205a
Figure imgf000187_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazol 125c (3,0 g, 9,64 mmol) en THF (35 ml) y amoníaco acuoso (135 ml, 25­ 28 %). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 72 h en nitrógeno. A continuación, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se dividió entre acetato de etilo (100 ml) y agua (100 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con carbonato de potasio al 10 % (2 x 100 ml), salmuera (200 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 205a como un sólido amarillo (1,23 g, 76 %). EM: [M+H]+ 169
Ejemplo 205b 2-nitro-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-5(4H)-carboxilato de tere-butilo 205b
A una solución de 205a (504 mg, 3,0 mmol) en THF (20 ml) se le añadió (Boc)2Ü (785 mg, 3,60 mmol) y DMAP (74 mg, 0,60 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 100:1 para dar 205b como un sólido blanco (750 mg, 80 %). EM-ESI:
[M+H]+ 269,3
Ejemplo 205c 2-amino-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-5(4H)-carboxilato de tere-butilo 205c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 205b (0,75 g, 2,80 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 280 mg) y metanol (30 ml). La mezcla se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 205c (524 mg, 79 %). EM-ESI: [M+H]+ 239,1
Ejemplo 205d 2-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-5(4H)-carboxilato de tere-butilo 205d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 205c (524 mg, 2,2 mmol), Pd2(dba)3 (201 mg, 0,22 mmol), XantPhos (254 mg, 0,44 mmol), carbonato de cesio (1434 mg, 4,4 mmol) y 1,4-dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 4 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 205d (600 mg, 70 %) como un sólido amarillo. EM-ESI:
[M+H]+ 424,2
Ejemplo 205e 2-(5-(3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-il)-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-5(4H)-carboxilato de tere-butilo 205e
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 205d (213 mg, 0,50 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (192 mg, 0,50 mmol), Pd(dppf)Cl2 (41 mg, 0,050 mmol), acetato de sodio (82 mg, 1,0 mmol), K3PO4 (212 mg, 1,0 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 205e (280 mg, 82 %) como un sólido amarillo. EM-ESI:
[M+H]+ 683,3
Ejemplo 205f Acetato de (4-(1-metil-6-oxo-5-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 2o5f
Una mezcla de 205e (280 mg, 0,41 mmol), HCl 4,0 M/dioxano (4 ml) y diclorometano (4 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. A continuación, se concentró a presión reducida para dar 205f como un sólido amarillo (165 mg, 66 %), que se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional. e M-ESI: [M+H]+ 583,3.
Ejemplo 205 2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-6-oxo-5-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 205
Una mezcla de 205f (165 mg, 0,28 mmol) e hidróxido de litio (67 mg, 2,80 mmol) en /-propanol/THF (1:1,4 ml) y agua (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y se diluyó con agua (4 ml). A continuación, se extrajo con acetato de etilo (10 ml X 2). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 205 (70 mg, 46 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 541,2. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,35 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 5,70 (s, 1H), 5,01 (s, 1H), 4,64-4,61 (m, 1H), 4,50 (s, 1H), 4,34 (s, 1H), 4,16-3,99 (m, 6H), 3,89-3,87 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,30 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,63­ 2,57 (m, 4H), 1,92-1,89 (m, 2H), 1,80-1,78 (m, 3H).
Ejemplo 206a 3-yodoazetidin-1-carboxilato de ferc-butilo 206a
Figure imgf000188_0001
Una solución de 3-hidroxiazetidin-1-carboxilato de ferc-butilo (3,5 g, 0,020 mol) en tolueno (200 ml) se trató con imidazol (4,08 g, 0,060 mol), trifenilfosfina (0,60 g, 0,040 mol) y yodo (7,62 g, 0,030 mol). La mezcla se calentó a 100 °C durante 1 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en solución saturada de NaHCÜ3 (30 ml). La trifenilfosfina en exceso se retiró mediante la adición de yodo hasta que la coloración del yodo persistía en la capa orgánica. La mezcla se lavó con solución de Na2SÜ3 al 5 %, se secó sobre Na2SÜ4 y se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice para dar 206a (5,31 g, 93 %). EM-ESI: [M+H]+ 284.
Ejemplo 206b 3-(6-nitropiridin-3-iloxi)azetidin-1-carboxilato de ferc-butilo 206b
Una mezcla de 206a (2,24 g, 7,9 mmol), 6-nitropiridin-3-ol (1,0 g, 7,2 mmol) y CS2CO3 (2,6 g, 7,9 mmol) en DMF (8 ml) se calentó a 125 °C en un tubo sellado durante la noche. El sólido se filtró y se lavó con acetato de etilo (2 X 20 ml). El filtrado combinado se evaporó a vacío y el residuo se evaporó en Combiflash de fase inversa para dar 206b (1,25 g, 59 %). EM-ESI: [M+H]+ 296.
Ejemplo 206c 3-(6-aminopiridin-3-iloxi)azetidin-1-carboxilato de ferc-butilo 206c
Un frasco de hidrogenación Parr de 100 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 206b (1,07 g, 3,6 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 0,30 g) y metanol (60 ml). El frasco se evacuó, se cargó con gas hidrógeno a una presión de 25 psi (0,17 MPa) y se agitó durante 2 h en un aparato de hidrogenación Parr. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el frasco. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 206c (0,95 g, 99 %). EM-ESI: [M+H]+ 266.
Ejemplo 206d 3-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-iloxi)azetidin-1-carboxilato de fercbutilo 206d
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 206c (950 mg, 3,6 mmol), XantPhos (125 mg, 0,29 mmol), Pd2dba3 (260 mg, 0,29 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,03 g, 3,9 mmol), Cs2CO3 (1,8 g, 7,2 mmol) y 1,4-dioxano (20 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. A continuación, se calentó a reflujo durante 2 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla se separó por filtración y se lavó con metanol (100 ml). El filtrado combinado se evaporó a vacío y el residuo se evaporó en Combiflash de fase inversa para dar 206d (1,46 g, 90 %). EM-ESI: [M+H]+ 451.
Ejemplo 206e Clorhidrato de 3-(5-(azetidin-3-iloxi)piridin-2-ilamino)-5-bromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona 206e
Una mezcla de 206d (1,46 g, 3,2 mmol) y HCl/1,4-dioxano (3,2 ml, 4 M, 12,8 mmol) en metanol (20 ml) se calentó a 80 °C durante 1 h. A continuación, la mezcla se concentró a presión reducida para dar 206e (1,24 g, 99 %). EM-ESI:
[M+H]+ 351.
Ejemplo 206f 5-bromo-1-metil-3-(5-(1-metilazetidin-3-iloxi)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 206f
Una mezcla de 206e (1,24 g, 3,2 mmol), solución acuosa de formaldehído al 37 % (15 ml), ácido acético (1 ml) y NaBH(OAc)3 (1,36 g, 6,4 mmol) en metanol (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. El disolvente se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con acetato de etilo (3 X 20 ml). El extracto combinado se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en Combiflash de fase inversa para dar 206f (940 mg, 80 %). EM-ESI: [M+H]+ 365.
Ejemplo 206g Acetato de (4-(1-metil-5-(5-(1-metilazetidin-3-iloxi)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 206g
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 206f (108 mg, 0,30 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (115 mg, 0,30 mmol), Pd(dppf)Cl2 (15 mg, 0,015 mmol), K3PO4 (135 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio trihidratado (90 mg, 0,60 mmol) en acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 206g (90 mg, 52 %) como un sólido marrón amarillento. EM-ESI:
[M+H]+ 624,2.
Ejemplo 206 2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-(1-metilazetidin-3-il)oxi-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 2 0 6
Una mezcla de 206g (93,6 mg, 0,15 mmol) e hidróxido de litio (65 mg, 1,5 mmol) en THF//-propanol (5:3, 8 ml) y agua (2 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y se diluyó con agua (3 ml). A continuación, se extrajo con acetato de etilo (2 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 206 (35 mg, 42 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 582,3. RMN de 1H (500 MHz, CHCb) 6 8,62 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,76 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,12-7,10 (m, 1H), 6,90 (s, 1H), 6,81-6,80 (m, 1H), 5,07-5,04 (m, 1H), 4,77 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,64-4,62 (m, 1H), 4,52-4,50 (m, 1H), 4,33-4,30 (m, 1H), 4,16-4,10 (m, 2H), 3,97-3,88 (m, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,25-3,24 (m, 2H), 2,63-2,57 (m, 4H), 2,51 (s, 3H), 1,93-1,91 (m, 2H), 1,80­ 1,79 (m, 2H).
Ejemplo 207a Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(1-metilazetidin-3-il)oxi]piridin-2-il}amino)-6-oxopiridin-3-il]piridin-3-il)metilo 207a
Figure imgf000190_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(5-(1-metilazetidin-3-iloxi)piridin-2-ilamino)-piridin-2(1H)-ona 206f (108 mg, 0,40 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diaza-triciclo[6.4.0.02,6]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199e (240 mg, 0,60 mmol), Pd(dppf)Cl2 (20 mg, 0,02 mmol), K3PO4 (180 mg, 0,80 mmol), acetato de sodio trihidratado (120 mg, 0,80 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 10:1 para dar 207a (100 mg, 45 %) como un sólido marrón amarillento. CLEM-ESI: [M+H]+ 638,4.
Ejemplo 207 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-(1-metilazetidin-3-il)oxi-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazm-4-ona 207
Una mezcla de 207a (90 mg, 0,15 mmol) e hidróxido de litio (65 mg, 1,5 mmol) en THF//-propanol (5:3, 8 ml) y agua (2 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y se diluyó con agua (4 ml). A continuación, se extrajo con acetato de etilo (2 X 20 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 207 (30 mg, 38 %) como un sólido blanco. CLEM: [M+H]+ 596,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,86-7,83 (m, 2H), 7,77 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,12-7,10 (m, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,81 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 5,07-5,04 (m, 1H), 4,74-4,64 (m, 2H), 4,52-4,51 (m, 1H), 4,34-4,32 (m, 1H), 4,17-4,16 (m, 2H), 3,88-3,87 (m, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,17-3,16 (m, 2H), 2,58 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2,52 (s, 2H), 2,45 (s, 3H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 208a 5-etil-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 208a
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Un matraz de fondo redondo de una única boca de 150 ml equipado con un agitador magnético se cargó con metanol (60 ml), 2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 205a (1,5 g, 8,9 mmol), ZnCb (2,43 g, 17,8 mmol), acetaldehído (784 mg, 17,8 mmol) y NaBHaCN (1,12 g, 17,8 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 40:1 para dar 208a (1,4 g, 81 %) como un aceite amarillo. EM-ESI:
[M+H]+ 197
Ejemplo 208b 5-etil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-amina 208b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 208a (1,4 g, 7,1 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 208 mg), metanol (30 ml) y gas hidrógeno. La mezcla se agitó a temperatura ambiente en atmósfera de hidrógeno durante 2 h. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 208b (1,0 g, 84 %) como un aceite amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 167
Ejemplo 208c 5-bromo-3-(5-etil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 208c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 208b (1,0 g, 6,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,6 g, 6,0 mmol), Pd2(dba)3 (274 mg, 0,30 mmol), XantPhos (347 mg, 0,60 mmol), carbonato de cesio (3,9 g, 12,0 mmol) y 1,4-dioxano (50 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 208c (630 mg, 29 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 352
Ejemplo 208d 3-(5-etil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1 H)-ona 208d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (20 ml), 208c (350 mg, 0,99 mmol), bis(pinacolato)diboro (1,31 g, 4,99 mmol), Pd2(dba)3 (45 mg, 0,050 mmol), X-phos (58 mg, 0,10 mmol) y acetato de potasio (291 mg, 2,97 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 90 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se lavó con éter de petróleo para dar 208d (120 mg, 30 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 400,2
Ejemplo 208e 4-(5-(5-etil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidro-pirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 208e
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 208d (120 mg, 0,30 mmol), 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido-[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 139a (99 mg, 0,30 mmol), PdCh(dppf) (13 mg, 0,015 mmol), K3PO4 (127 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio (49 mg, 0,60 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar el 208e (95 mg, 56 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 567,2.
Ejemplo 208 2-[4-[5-[(5-etil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-1-ona 208
A una mezcla de 208e (95 mg, 0,16 mmol) a 0 °C en metanol (10 ml) se le añadió borohidruro de sodio (19 mg, 0,50 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos y se desactivó con agua (2,0 ml). A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 208 (8 mg, 9 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 569,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) 68,46 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 2,0 Hz, 1H, 7,70 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,30 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,30 (s, 1H), 5,71 (s, 1H), 4,93-4,96 (m, 1H), 4,63-4,61 (m, 1H), 4,42-4,26 (m, 2H), 4,09 (s, 2H), 3,94-3,81 (m, 3H), 3,69-3,68 (m, solapamiento, 5H), 3,06-2,90 (m, 4H), 2,81 (d, J = 3,0 Hz, 2H), 2,66 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 2,04-2,00 (m, 2H), 1,88-1,85 (m, 2H), 1,20 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Ejemplo 209a 1-(2-nitro-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-5(4H)-il)etanona 209a
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-co^c 209c
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2D9d
A una solución de 2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 205a (672 mg, 4,0 mmol) en diclorometano (20 ml) se le añadió cloruro de acetilo (936 mg, 12,0 mmol) y K2CO3 (1104 mg, 8,0 mmol). La mezcla se agitó durante la noche. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 100:1 para dar 209a como un sólido blanco (500 mg, 60 %). EM: [M+H]+ 211,2
Ejemplo 209b 1-(2-amino-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-5(4H)-il)etanona 209b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 209a (492 mg, 2,34 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 234 mg) y metanol (20 ml). La mezcla se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 209b (380 mg, 80 %). EM: [M+H]+ 181,1
Ejemplo 209c 3-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-5-bromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona 209c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (481 mg, 1,8 mmol), 209b (270 mg, 1,5 mmol), 1,4-dioxano (20 ml), Pd2(dba)3 (137 mg, 0,15 mmol), XantPhos (173 mg, 0,30 mmol) y carbonato de cesio (978 mg, 3,0 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 6 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 209c (540 mg, 89 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 368,0
Ejemplo 209d 3-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1 H)-ona 209d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 209c (365 mg, 1,0 mmol), Pin2B2 (1,26 g, 5,0 mmol), Pd2(dba)3 (91 mg, 0,10 mmol), X-phos (92 mg, 0,20 mmol), AcOK (294 mg, 3,0 mmol) y dioxano (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 60 °C durante 16 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 50:1 para dar 209d como un sólido marrón (330 mg, 80 %). EM: [M+H]+ 414,2
Ejemplo 209e Acetato de (4-(5-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 209e
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 209d (185 mg, 0,50 mmol), acetato de (4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino-[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 113h (192 mg, 0,50 mmol), Pd(dppf)Cl2 (41 mg, 0,050 mmol), acetato de sodio (82 mg, 1,0 mmol), K3PO4 (212 mg, 1,0 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 209e (150 mg, 48 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 625,4
Ejemplo 209 2-[4-[5-[(5-acetil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 209
Una mezcla de 209e (150 mg, 0,24 mmol) e hidróxido de litio (58 mg, 2,4 mmol) en /-propanol/THF (1:1,4 ml) y agua (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y se diluyó con agua (4 ml). A continuación, se extrajo con acetato de etilo (2 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 209 (75 mg, 53 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 583,3. RMN de 1H (500 MHz, T=80 °C, DMSO-de) ó 8,44 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,93-7,90 (m, 2H), 7,34 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,98 (s, 1H), 4,72-4,63 (m, 3H), 4,45-4,43 (m, 2H), 4,16-4,10 (m, 3H), 3,99-3,86 (m, solapamiento, 5H), 3,58 (s, 3H), 2,62-2,57 (m, 2H), 2,49-2,47 (m, 2H), 2,08 (s, 3H), 1,83-1,77 (m, 2H), 1,72-1,68 (m, 2H).
Ejemplo 210a Ácido 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo-[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carboxílico 210a
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A una mezcla de 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 108a (500 mg, 1,46 mmol), alcohol ferc-butílico (20 ml) y diclorometano (5 ml) se le añadió 2-metil-2-buteno (3066 mg, 43,8 mmol). Se añadió gota a gota una solución acuosa (8 ml) de NaClO2 (263 mg, 2,92 mmol) y NaH2PO4dihidratado (683 mg, 4,38 mmol) a -10 °C y la mezcla de reacción se agitó a -10 °C durante la noche. Se concentró a presión reducida y el residuo se extrajo con acetato de etilo (4 * 20 ml). El extracto orgánico combinado se secó sobre MgSO4 y se concentró. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 210a (315 mg, 60 %) como un sólido amarillo pálido. EM-ESI: [M+H]+ 360,1
Ejemplo 210b Ácido 2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-carboxílico 210b
Un matraz de fondo redondo de 25 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 210a (400 mg, 1,1 mmol), (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 191j (536 mg, 1,1 mmol), PdCh(dppf) (81 mg, 0,11 mmol), K3PO4 (466 mg, 2,2 mmol), acetato de sodio (216 mg, 2,2 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,2 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con petróleo/acetato de etilo 1:3 para dar 210b como un sólido amarillo (306 mg, 41 %). EM-ESI: [M+H]+ 679,3
Ejemplo 210 2-(7,7-dimetil-4-oxo-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazm-3-il)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]piridin-3-carboxamida 210
Un matraz de fondo redondo de 25 ml se cargó con 210b (300 mg, 0,44 mmol), trietilamina (1 ml), DMAP (5 mg, 0,040 mmol), HATU (250 mg, 0,66 mmol) y DMF (10 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. A continuación, se añadió lentamente amoníaco acuoso al 37 % (15 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante otras 2,5 h. La mezcla se trató con 20 ml agua y se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). El extracto orgánico combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 210 (98 mg, 33 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 678,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 8,71 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,55 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,84 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,45-7,42 (m, 2H), 7,38­ 7,36 (m, 1H), 7,24-7,22 (m, 1H), 6,49 (s, 1H), 4,57-4,54 (m, 2H), 4,48-4,47 (m, 1H), 4,43-4,40 (m, 1H), 4,12-4,11 (m, 2H), 4,04-4,00 (m, 2H), 3,67-3,66 (m, 1H), 3,57 (s, 3H), 3,42-3,37 (m, 1H), 3,10-3,08 (m, 1H), 2,97-2,92 (m, 1H), 2,55­ 2,53 (m, 3H), 2,41 (s, 2H), 2,36-2,29 (m, 2H), 2,21-2,18 (m, 1H), 1,21 (s, 6H), 0,93 (d, J = 6,0 Hz, 3H)
Ejemplo 211 2-(7,7-dimetil-4-oxo-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazm-3-il)-N-metil-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]piridin-3-carboxamida 211
Un matraz de fondo redondo se cargó con ácido 2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-carboxílico 210b (300 mg, 0,44 mmol), trietilamina (1 ml), DMAP (5 mg, 0,040 mmol), HATU (250 mg, 0,66 mmol) y DMF (10 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. A continuación, se añadió lentamente CH3NH2 (27 mg, 0,88 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante otras 2,5 h. La mezcla se trató con agua (20 ml) y se extrajo con diclorometano (20 ml X 3). El extracto orgánico combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 211 (106 mg, 35 %) como un sólido amarillo. EM-ESI:
[M+H]+ 692,5. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,71 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,55 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,42 (s, 1H), 8,11­ 8,08 (m, 1H), 7,86 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,44-7,41 (m, 2H), 7,38-7,35 (m, 1H), 7,24-7,22 (m, 1H), 6,48 (s, 1H), 4,58-4,56 (m, 2H), 4,48-4,46 (m, 1H), 4,43-4,41 (m, 1H), 4,08-4,07 (m, 2H), 3,97-3,94 (m, 2H), 3,66-3,65 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 3,41-3,39 (m, 1H), 3,10-3,08 (m, 1H), 2,97-2,93 (m, 1H), 2,56 (s, 2H), 2,53-2,48 (m, solapamiento, 4H), 2,37-2,36 (m, 2H), 2,35-2,31 (m, 2H), 2,29-2,19 (m, 1H), 1,21 (s, 6H), 0,93 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
Ejemplo 212a Acetato de {4-[5-({5-acetil-4H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il}amino)-1-metil-6-oxopiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]-dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il}metilo 212a
Figure imgf000194_0001
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 3-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-5-bromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona 209c (185 mg, 0,50 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199e (200 mg, 0,50 mmol), Pd(dppf)Cl2 (41 mg, 0,050 mmol), acetato de sodio (82 mg, 1,0 mmol), K3PO4 (212 mg, 1,0 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 212a (180 mg, 56 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 639,3
Ejemplo 212 3-[4-[5-[(5-acetil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazm-4-ona 212
Una mezcla de 212a (180 mg, 0,28 mmol) e hidróxido de litio (67 mg, 2,8 mmol) en /-propanol/THF (1:1, 4 ml) y agua (1 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y se diluyó con agua (4 ml). A continuación, se extrajo con acetato de etilo (2 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 212 (70 mg, 42 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 597,3. RMN de 1H (500 MHz, T=80 °C, DMSO-de) ó 8,47 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,37 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,00 (s, 1H), 4,66 (s.a., 2H), 4,47 (s, 2H), 4,20-4,18 (m, 3H), 4,00-3,99 (m, 3H), 3,92-3,88 (m, 3H), 3,61 (s, 3H), 2,59 (s, 2H), 2,46 (s, 2H), 2,11 (s, 3H), 1,25 (s, 6H).
Ejemplo 213a 5-bromo-1-metil-3-(2-metilpirimidin-4-ilamino)piridin-2(1H)-ona 213a
Figure imgf000195_0001
Siguiendo los procedimientos descritos en el ejemplo 196, la reacción de 2-metilpirimidin-4-amina (2,0 g, 18,3 mmol) y 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (9,6 g, 36 mmol) dio 213a como un sólido amarillo (2,3 g, 43,4 %). EM: [M+H]+ 295. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 9,20 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 8,26 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,18 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 2,52 (s, 3H).
Ejemplo 213b 1-metil-3-(2-metilpirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 213b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con bis(pinacolato)diboro (689 mg, 2,61 mmol), 1,4-dioxano (30 ml), 213a (307 mg, 1,04 mmol), Pd2(dba)3 (47 mg, 0,050 mmol), X-phos (48 mg, 0,10 mmol) y acetato de potasio (305 mg, 3,12 mmol). La mezcla se calentó a 65 °C durante 6 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío para dar 213b (300 mg, 84 %) como un sólido marrón. EM: [M+H]+ 342,2
Ejemplo 213c 2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)-4-(1-metil-5-(2-metilpirimidin-4-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)nicotinaldehído 213c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 134c (150 mg, 0,43 mmol), 213b (147 mg 0,43 mmol), Pd(dppf)Cl2 (35 mg, 0,043 mmol), acetato de sodio (71 mg, 0,86 mmol), K3PO4 (182 mg, 0,86 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (15 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2,5 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, se filtró la reacción. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 213c como un sólido amarillo (130 mg, 57 %). EM-ESI: [M+H]+ 528,2.
Ejemplo 213 10-fluoro-2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(2-metilpirimidin-4-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 213
A una solución de 213c (120 mg, 0,23 mmol) a 0 °C en metanol (10 ml) se le añadió borohidruro de sodio (26 mg, 0,69 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 20 minutos y se desactivó con agua (10 ml). A continuación, se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml) y la capa orgánica combinada se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 213 (62 mg, 44 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 530,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 9,11 (s, 1H), 8,93 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,21 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 4,96 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,57­ 4,45 (m, 2H), 4,23-4,18 (m, 2H), 4,08-4,05 (m, 1H), 3,90-3,87 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,64-2,56 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,43-2,42 (m, 2H), 1,78-1,76 (m, 2H), 1,72-1,66 (m, 2H).
Ejemplo 214a 3-bromo-5-yodopiridin-2-ol 214a
Figure imgf000196_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con acetonitrilo (50 ml), ácido trifluoroacético (10 ml), 3-bromopiridin-2-ol (4,0 g, 11,56 mmol) y N-yodosuccinimida (5,2 g, 11,56 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 h. La mezcla se diluyó con agua (100 ml) y sólido blanco resultante se recogió mediante filtración para dar 214a (6,6 g, 96 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 300
Ejemplo 214b 3-bromo-5-yodo-1-metilpiridin-2(1H)-ona 214b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con DMF (50 ml), 214a (6,0 g, 20,0 mmol), yodometano (4,26 g, 30,0 mmol) y K2CO3 (5,52 g, 40,0 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y se diluyó con agua (200 ml). El sólido blanco resultante se recogió mediante filtración para dar 214b (5,97 g, 95 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 314
Ejemplo 214c Acetato de [4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il]metilo 214c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 214b (1,57 g, 5,0 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]-dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199e (1,98 g, 5,0 mmol), PdCb(dppf) (205 mg, 0,25 mmol), K3PO4 (2,12 g, 10,0 mmol), acetato de sodio (820 mg, 10,0 mmol), acetonitrilo (45 ml) y agua (1 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se agitó a 30 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 214c (580 mg, 22 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 539,2. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) ó 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,79 (s, 1H), 5,15 (s, 2H), 4,55-4,51 (m, 1H), 4,27-4,25 (m, 1H), 4,15-4,13 (m, 1H), 4,06-4,04 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 2,58-2,56 (m, 2H), 2,51 (s, 2H), 1,86 (s, 3H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 214d Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-6-oxo-5-({4H,6H,7H-pirano[4,3-d][1,3]tiazol-2-il}amino)-1,6-dihidro-piridin-3-ii]piridin-3-il)metilo 214d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (10 ml), 214c (150 mg, 0,28 mmol), Pd2(dba)3 (27 mg, 0,030 mmol), XantPhos (35 mg, 0,060 mmol) y carbonato de cesio (183 mg, 0,56 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 10 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 214d (89 mg, 52 %) como un sólido amarillo. EM-ESI:
[M+H]+ 615,2
Ejemplo 214 3-[4-[5-(6,7-dihidro-4H-pirano[4,3-d]tiazol-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazm-4-ona 214
Una mezcla de 214d (89 mg, 0,14 mmol), hidróxido de litio (35 mg, 1,45 mmol) y agua/THF//-propanol (3 ml/5 ml/5 ml) se agitó a 30 °C durante 2 h. A continuación, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 214 (45 mg, 50 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 573,2. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 510,01 (s, 1H), 8,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,59 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,96-4,94 (m, 1H), 4,61 (s, 2H), 4,46-4,43 (m, 2H), 4,22-4,17 (m, 3H), 3,89-3,87 (m, 3H), 3,61 (s, 3H), 2,62-2,57 (m, 4H), 2,43 (s, 2H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 215a 3-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatridclo[6.4.0.02,6]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-5-(1-metN-5-[(2-metilpmmidin-4-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-M}piridin-4-carbaldehído 215 a
Figure imgf000197_0001
Un tubo sellado se cargó con 3-bromo-5-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatnddo-[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-piridin-4-carbaldehído 107 f (210 mg, 0,54 mmol), 1-metil-3-(pmmidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-ona 2 l 3 b (177 mg, 0,54 mmol), PdCL(dppf) (42 mg, 0,050 mmol), K3PO4 (210 mg, 1,0 mmol) y acetato de sodio (85 mg, 1,0 mmol), acetonitrilo (8 ml) y agua (0,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 4 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 20:1 para dar 215 a (150 mg, 53 %). EM-ESI: [M+H]+ 524,2.
Ejemplo 215 3-[4-(hidroximetil)-5-[1-metil-5-[(2-metilpirimidin-4-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-3-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pimdo[3,5-b]pirazin-4-ona 215
Una mezcla de 215 a (150 mg, 0,28 mmol) y NaBH4 (20 mg, 0,50 mmol) en metanol (5 ml) se agitó a 25 °C durante 0,2 h. La mezcla se desactivó con agua (5 ml) y se evaporó a vacío. El residuo se extrajo con acetato de etilo (3 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 215 (80 mg, 53 %). EM-ESI: [M+H]+ 526,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 59,09 (s, 1H), 8,89 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,20 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,13 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,52 (s, 1H), 5,19-5,18 (m, 1H), 4,47-4,46 (m, 2H), 4,23-4,20 (m, 3H), 3,95-3,93 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,57 (s, 2H), 2,42 (s, 3H), 2,41 (s, 2H), 1,21 (s, 6H).
Ejemplo_____216a 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidrotiazolo[5,4-c]piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1 H)-ona 216 a
Figure imgf000197_0002
5-bromo-1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidrotiazolo[5,4-c]piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 203 b (997 mg, 2,8 mmol) se disolvió en dioxano (50 ml), seguido de la adición de bis(pinacolato)diboro (3,0 g, 12,0 mmol), Pd2(dba)3 (128 mg, 0,14 mmol), X-phos (134 mg, 0,28 mmol) y acetato de potasio (823 mg, 8,4 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 2 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión y el residuo se lavó con éter de petróleo (2 * 10 ml) para dar 216 a como un sólido amarillo (968 mg, 86 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. e M-ESI: [M+H]+ 403,2 Ejemplo 216b 4-[1-metil-5-({5-metil-4H,6H,7H-[1,3]tiazolo[5,4-c]piridin-2-il}amino)-6-oxopiridin-3-il]-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.02’7]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 216b
Un matraz de fondo redondo equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 124a (138 mg, 0,40 mmol), 216a (240 mg, 0,60 mmol), PdCL(dppf) (20 mg, 0,020 mmol), K3PO4 (180 mg, 0,80 mmol), acetato de sodio trihidratado (120 mg, 0,80 mmol), agua ( 6 gotas) y acetonitrilo (15 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 216b como un sólido amarillo (100 mg, 45 %). EM-ESI: [M+H]+ 586,2.
Ejemplo 216 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-tiazolo[5,4-c]piridin-2-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidrobenzotiofeno[2,3-d]piridazin-4-ona 216
A una solución de 216b (100 mg, 0,15 mmol) en metanol ( 6 ml) se le añadió NaBH4 (18 mg, 0,45 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 30 °C durante 1 h y se desactivó con salmuera (10 ml). A continuación, se evaporó a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 X 20 ml) y la capa orgánica combinada se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 216 como un sólido blanco (40 mg, 40 %). EM-ESI: [M+H]+ 588,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 6 8 , 68 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,43 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,79 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 4,43-4,39 (m, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,57­ 3,55 (m, 2H), 3,00-2,98 (m, 2H), 2,88-2,86 (m, 2H), 2,82-2,80 (m, 4H), 2,50 (s, 3H), 2,03-1,95 (m, 4H).
Ejemplo_____ 217a Acetato de (4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 217a
Figure imgf000198_0001
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (766 mg, 2,0 mmol), 3-bromo-5-yodo-1-metilpiridin-2(1H)-ona 214b ( 6 26 mg, 2,0 mmol), Pd(dppf)Cl2 (164 mg, 0,20 mmol), acetato de sodio (328 mg, 4,0 mmol), K3PO4 (848 mg, 4,0 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 217a (700 mg, 67 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 525,2
Ejemplo 217b Acetato de (4-(5-(1H-Imidazo[4,5-b]piridin-5-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 217b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 217a (158 mg, 0,30 mmol), 1H-imidazo[4,5-b]piridin-5-amina (80 mg, 0,60 mmol), Pd2(dba)3 (27 mg, 0,030 mmol), XantPhos (35 mg, 0,061 mmol), carbonato de cesio (200 mg, 0,60 mmol) y 1,4-dioxano (5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a 100 °C durante 6 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 217b (40 mg, 23 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 579,4
Ejemplo 217 2-[3-(hidroximetil)-4-[5-(1 H-imidazo[4,5-b]piridin-5-ilamino)-1 -metil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 217
Una mezcla de 217b (40 mg, 0,070 mmol) e hidróxido de litio (26 mg, 0,70 mmol) en /-propanol/THF (1:1,4 ml) y agua (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se diluyó con agua y acetato de etilo. La fase acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 217 (15 mg, 40 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 537,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-cfó) ó 12,62 (s, 1H), 8,91-8,64 (m, 2H), 8,52 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,19-8,06 (m, 1H), 7,89-7,79 (m, 1H), 7,57-7,53 (m, 1H), 7,43-7,40 (m, 1H), 7,22 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,59 (s, 1H), 5,06-4,96 (m, 1H), 4,5-4,40 (m, 2H), 4,26-4,11 (m, 3H), 3,88-3,85 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,62-2,54 (m, 2H), 2,50-2,48 (m, 2H), 1,81-1,79 (m, 2H), 1,71-1,67 (m, 2H).
Ejemplo 218a 5-bromo-3-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 218a
Figure imgf000199_0001
Una solución de 5-bromo-1-metil-3-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino)piridin-2(1H)-ona (2,8 g, 9,9 mmol) en DMF anhidra (10 ml) se trató con dispersión al 60 % de NaH en aceite de vaselina (0,51 g, 13 mmol) mientras se agitaba en nitrógeno. Después de la efervescencia, la reacción se agitó durante unos 30 minutos adicionales. En este momento, la reacción se trató con yodometano (0,98 g, 7,0 mmol) con agitación continua en nitrógeno durante 2 horas. Se añadió lentamente agua (50 ml) y la mezcla se filtró. El filtrado se extrajo con acetato de etilo (3 X 30 ml). El extracto combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 3:1 para dar 218a (0,70 g, 24 %). EM: [M+H]+ 297.
Ejemplo 218b Acetato de (4-{5-[(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-piridin-3-il}-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il)metilo 218b
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 218a (130 mg, 0,44 mmol), ácido (3-(acetoximetil)-2-(7,7-dimetil-1-oxo-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ciclo-penta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-4-il)borónico 199e (175 mg, 0,44 mmol), PdCh(dppf) (36 mg, 0,044 mmol), K3PO4 (343 mg, 1,32 mmol), acetato de sodio (108 mg, 1,32 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:20 para dar 218b como un sólido rojo (103 mg, 42 %). EM-ESI: [M+H]+ 570,2
Ejemplo 218 3-[4-[5-[(1,5-dimetilpirazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 218
Una mezcla de 218b (103 mg, 0,17 mmol), hidróxido de litio (42 mg, 1,75 mmol), THF (3 ml), /-propanol (2 ml) y agua (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y se diluyó con agua (4 ml). A continuación, se extrajo con diclorometano (10 ml X 2) y el extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 218 (29 mg, 48 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 528,4. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 8,04 (s, 1 H), 8,02 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 7,38 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 7,32 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 6,55 (s, 1 H), 5,89 (s, 1 H), 4,97 (s, 1 H), 4,48-4,39 (m, 2 H), 4,24-4,16 (m, 3 H), 3,86-3,84 (m, 1 H), 3,58 (s, 3 H), 3,57 (s, 3 H), 2,62-2,56 (m, 2 H), 2,42 (s, 2 H), 2,16 (s, 3 H), 1,22 (s, 6 H).
Ejemplo 219a 3-(3-aminofenilamino)-5-bromo-1-metilpirazin-2(1 H)-ona 219a
Figure imgf000200_0001
A una solución de 3,5-dibromo-1-metilpirazin-2(1H)-ona (536 mg, 2,0 mmol) y benceno-1,3-diamina (324 mg, 3,0 mmol) en isopropanol (18 ml) se le añadió trietilamina (2,8 ml). La mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante la noche. A continuación, la mezcla se evaporó a presión reducida para dar 219a (480 mg, 81 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 295,0
Ejemplo 219b Acetato de (4-{6-[(3-aminofenil)amino]-4-metil-5-oxo-4,5-dihidropirazin-2-il}-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il)metilo 219b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 219a (480 mg, 1,62 mmol), ácido (3-(acetoximetil)-2-(7,7-dimetil-1-oxo-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ddopenta[4,5]pimdo[1,2-a]pirazm-2(6H)-il)piridin-4-il)borónico 199e (1,61 g, 4,05 mmol), Pd(dppf)Cl2 (134 mg, 0,162 mmol), acetato de potasio (318 mg, 3,24 mmol), K3PO4 (706 mg, 3,24 mmol), acetonitrilo (20 ml) y agua (8 gotas). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol 20:1 para dar 219b (354 mg, 38 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 568,3
Ejemplo_____219 3-[4-[6-(3-aminoanilino)-4-metil-5-oxo-pirazin-2-il]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 219
Una mezcla de 219b (283,5 mg, 0,50 mmol) e hidróxido de litio monohidratado (630 mg, 15,0 mmol) en /-propanol/THF (1:1, 8 ml) y agua (2 ml) se agitó a 35 °C durante 0,5 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se diluyó con agua (3 ml). A continuación, se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 219 (170 mg, 79 %) como un sólido amarillo pálido. EM-ESI: [M+H]+ 526,4. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,85 (s, 1H), 8,47 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,92-6,91 (m, 2H), 6,57 (s, 1H), 6,24-6,22 (m, 1H), 5,13 (s, 2H), 4,84-4,75 (m, 2H), 4,49-4,46 (m, 1H), 4,30-4,26 (m, 1H), 4,20-4,19 (m, 2H), 3,95-3,92 (m, 1H), 3,56 (s, 3H), 2,62­ 2,54 (m, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,23 (s, 6H).
Ejemplo_____ 220a (S)-2-cloro-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)nicotinaldehído 220a
Figure imgf000201_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 191j (1,5 g, 1,0 eq., 3,11 mmol), 4-bromo-2-cloronicotinaldehído 104a (1,02 g, 1,5 eq., 4,67 mmol), PdCh(dppf) (130 mg, 0,05 eq., 0,16 mmol), K3PO4 (1,32 g, 2 eq., 6,22 mmol), acetato de sodio (510 mg, 2,0 eq., 6,22 mmol), acetonitrilo (35 ml) y agua (1,0 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/etanol 50:1 para dar el 220a (1,1 g, 71 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 495,3.
Ejemplo 220b (S)-2-(3,4,6,7,8,9-hexahidropirazmo[1,2-a]indol-2(1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1 -il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)nicotinaldehído 220b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 220a (300 mg, 1,0 eq., 0,61 mmol), 1,2,3,4,6,7,8,9-octahidropirazino[1,2-a]indol (128 mg, 1,2 eq., 0,73 mmol), Pd2(dba)3 (55 mg, 0,1 eq., 0,060 mmol), X-Phos (30 mg, 0,1 eq., 0,060 mmol), Cs2CO3 (390 mg, 2,0 eq., 1,22 mmol) y dioxano (15,0 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 16 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/EtOH 40:1 para dar 220b (100 mg, 26 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 635,3.
Ejemplo 220 5-[2-(3,4,6,7,8,9-hexahidro-1H-pirazino[1,2-a]indol-2-il)-3-(hidroximetil)-4-piridil]-1-metil-3-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]piridin-2-ona 220
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml se cargó con 220b (100 mg, 1,0 eq., 0,15 mmol), NaBH4 (30 mg, 5,0 eq., 0,75 mmol), metanol (5 ml) y diclorometano (5 ml). La mezcla se agitó a 0 °C durante 10 min y se desactivó con agua (5 ml). A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar el compuesto del título (10 mg, 10 %). EM-ESI: [M+H]+ 637,5. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) 68,61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,24 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,39-7,36 (m, 1H), 7,24 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,55 (s, 1H), 5,36-5,35 (m, 1H), 4,57-4,54 (m, 2H), 4,48-4,40 (m, 6H), 3,92-3,90 (m, 2H), 3,79-3,67 (m, 3H), 3,59 (s, 3H), 3,40-3,37 (m, 2H), 3,09­ 3,07 (m, 1H), 2,95-2,92 (m, 1H), 2,55-2,51 (m, 2H), 2,38-2,30 (m, 4H), 2,17-2,16 (m, 1H), 1,75-1,74 (m, 2H), 1,68-1,65 (m, 2H), 0,92 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 221a 3-[(6-aminopiridin-2-il)amino]-5-bromo-1-metil-1,2-dihidropiridin-2-ona 221a
Figure imgf000202_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (20 ml), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,06 g, 4,0 mmol), piridin-2,6-diamina (872 mg, 8,0 mmol), Pd2(dba)3 (732 mg, 0,80 mmol), XantPhos (462,4 mg, 0,80 mmol) y carbonato de cesio (2,6 g, 8,0 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 110 °C durante 1 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol 20:1 para dar 221a (570 mg, 48 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 295,0
Ejemplo 221b Acetato de (4-{5-[(6-aminopiridin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.02,6]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il)metilo 221b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 221a (354 mg, 1,2 mmol), ácido (3-(acetoximetil)-2-(7,7-dimetil-1-oxo-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ddopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazm-2(6H)-il)piridin-4-il)borónico 199e (1,20 g, 3,0 mmol), Pd(dppf)Cl2 (99 mg, 0,12 mmol), acetato de potasio (235 mg, 2,4 mmol), K3PO4 (532 mg, 2,4 mmol), acetonitrilo (12 ml) y agua (10 gotas). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol 30:1 para dar 221b (210 mg, 31 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 568,3
Ejemplo 221 3-[4-[5-[(6-amino-2-piridil)amino]-1 -metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridM]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 221
Una mezcla de 221b (181 mg, 0,32 mmol) e hidróxido de litio monohidratado (148 mg, 3,2 mmol) en /-propanol/THF (1:1, 6 ml) y agua (1,5 ml) se agitó a 35 °C durante 0,5 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 221 (82 mg, 49 %) como un sólido amarillo pálido. EM-ESI:
[M+H]+ 526,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 68,84 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,46 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,54 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,36 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,91 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,79 (s.a., 2H), 5,07 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,58-4,47 (m, 2H), 4,27-4,20 (m, 3H), 3,90 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 3,60 (s, 3H), 2,62-2,57 (m, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 222a N-(5-cloro-2-metoxipiridin-3-il)-2-metilpirimidin-4-amina 222a
Figure imgf000203_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (30 ml), 3-bromo-5-cloro-2-metoxipiridina (865 mg, 3,9 mmol), 2-metilpirimidin-4-amina (327 mg, 3,0 mmol), Pd2(dba)3 (275 mg, 0,30 mmol), XantPhos (173,4 mg, 0,30 mmol) y carbonato de cesio (1,96 g, 6,0 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 5 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 5:1 para dar 222a (555 mg, 74 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 251,0
Ejemplo 222b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{6-metoxi-5-[(2-metilpirimidin-4-il)amino]piridin-3-il}piridin-3-il)metilo 222b
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 222a (550 mg, 2,2 mmol), ácido (3-(acetoximetil)-2-(7,7-dimetil-1-oxo-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ciclopenta[4,5]pirrolo-[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-4-il)borónico 199e (2,18 g, 5,5 mmol), Pd2(dba)3 (201 mg, 0,22 mmol), triciclohexilfosfina ( 84 mg, 0,30 mmol), Cs2CÜ3 (1,43 g, 4,4 mmol), dioxano (12 ml) y agua (1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 110 °C durante 4 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol 30:1 para dar 222b (310 mg, 25 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 568,6
Ejemplo 222c 10-[3-(hidroximetil)-4-{6-metoxi-5-[(2-metilpirimidin-4-il)amino]piridin-3-il}piridin-2-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 222c
Una mezcla de 222b (283,5 mg, 0,50 mmol) e hidróxido de litio monohidratado (630 mg, 15,0 mmol) en /-propanol/THF (1:1, 10 ml) y agua (2,5 ml) se agitó a 35 °C durante 0,5 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se diluyó con agua (3 ml). A continuación, se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). El extracto orgánico combinado se concentró a presión reducida para dar 222c (240 mg, 92 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 526,2
Ejemplo 222 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[(2-metilpirimidin-4-il)amino]-6-oxo-1H-piridin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 222
A una solución de 222c (226 mg, 0,43 mmol) en dioxano (8 ml) se le añadió HCl concentrado (1,1 ml). La reacción se agitó a 100 °C durante 1 h. A continuación, la mezcla se ajustó a pH 7,0 introduciendo NaHCÜ3 acuoso saturado. Se extrajo con diclorometano (3 x 20 ml) y el extracto combinado se evaporó a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 222 (30 mg, 14 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 512,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 6 12,24 (s, 1H), 9,10 (s, 1H), 8,96 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 5,08-5,06 (m, 1H), 4,50-4,42 (m, 2H), 4,25-4,19 (m, 3H), 3,87-3,85 (m, 1H), 2,62-2,53 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,43 (s, 2H), 1,23 (s, 3H), 1,22 (s, 3H)
Ejemplo 223a 2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidrotiazolo[5,4-c]piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)nicotinaldehído 223a
Figure imgf000204_0001
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 1 -metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidrotiazolo[5,4-c]piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1 H)-ona 216a (200 mg, 0,50 mmol), 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 134c (174 mg, 0,50 mmol), K3PO4 (212 mg, 1,0 mmol), acetato de sodio (82 mg, 1,0 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (21 mg, 0,025 mmol) y acetonitrilo/agua (15/1 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 100 °C durante 1 h bajo protección con N2. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con diclorometano (50 ml) y agua (50 ml). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 70/1 a 30/1) para dar 223a (167 mg, 57 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 588,1
Ejemplo 223 10-fluoro-2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-tiazolo[5,4-c]piridin-2-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-1-ona 223
El compuesto 223a (160 mg, 0,27 mmol) se disolvió en metanol (30 ml), seguido de la adición de NaBH4 (31 mg, 0,82 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 30 min y, a continuación, se desactivó con agua (10 ml). Se concentró a presión reducida y el residuo se extrajo con diclorometano (3 X 30 ml). La fase orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 223 (56 mg, 35 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 590,2. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de): ó 9,92 (s, 1H), 8,64 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 4,93 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,46­ 4,41 (m, 2H), 4,19-4,17 (m, 2H), 4,08-4,03 (m, 1H), 3,88-3,85 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,42 (s, 2H), 2,63-2,58 (m, 6H), 2,41 (s, 3H), 2,34 (s, 2H), 1,78-1,76 (m, 2H), 1,68-1,66 (m, 2H).
Ejemplo 224a (S)-4-(6-(6-cloro-2-metil-3-oxo-2,3-dihidropiridazin-4-ilamino)piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 224a
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con (S)-4-(6-aminopiridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 191f (2,5 g, 8,5 mmol), 4-bromo-6-cloro-2-metiipiridazin-3(2H)-ona (2,2 g, 10,0 mmol), XantPhos (240 mg, 0,40 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (360 mg, 0,40 mmol), CS2CO3 (5,5 g, 17 mmol) y 1,4-dioxano (100 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 40:1 a 30:1) para dar 224a como un sólido amarillo pálido (3,2 g, 8 6 %). EM-ESI: [M+H]+ 435,1.
Ejemplo 224b (S)-6-cloro-2-metil-4-(5-(2-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridazin-3(2H)-ona 224b
Una mezcla de 224a (3,0 g, 6,9 mmol) y HCl 4,0 M/etanol (20 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. A continuación, la mezcla se concentró a presión reducida para dar 224b bruto como un sólido amarillo (2,5 g, 98 %), que se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 335,1.
Ejemplo 224c (S)-6-cloro-2-metil-4-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridazin-3(2H)-ona 224c
Una mezcla de 224b (2,3 g, 6 , 8 mmol), oxetan-3-ona (1,4 g, 20,0 mmol), NaBHaCN (620 mg, 10 mmol) y cloruro de cinc (1,36 g, 10 mmol) en metanol (20 ml) se agitó a 50 °C durante 3 horas. La mezcla se añadió a agua (40 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano tres veces. La capa orgánica combinada se secó y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 224c (2,0 g, 75 %). EM-ESI: [M+H]+ 391,2.
Ejemplo 224d Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il]piridin-3-il)metilo 224d
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 224c (200 mg, 0,50 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico l99e (240 mg, 0 , 60 mmol), Pd(dppf)Cl2 (18 mg, 0,025 mmol), acetato de sodio (74 mg, 0,90 mmol), K3PO4 (191 mg, 0,90 mmol) y acetonitrilo/agua (6 :1 , 3,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 1 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 224d (180 mg, 51 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 708,3.
Ejemplo 224 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-6-oxopiridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5—b]pirazin-4-ona 224
Una mezcla de 224d (180 mg, 0,25 mmol) e hidróxido de litio (72 mg, 3,0 mmol) en /-propanol/THF (5/3 ml) y agua (2 ml) se agitó a 35 °C durante 0,2 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se extrajo con acetato de etilo (10 ml X 2). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante Combiflash de fase inversa eluyendo con NH4HCO3 al 0,3 % en agua/acetonitrilo para dar 224 (54 mg, 33 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 666,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-cfó) 6 9,29 (s, 1H), 8,52 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,91 (s,1H), 7,43-7,42 (m, 2H), 7,40-7,39 (m, 1H), 6,55 (s, 1H), 4,77-4,75 (m, 1H), 4,57-4,55 (m, 3H), 4,48-4,47 (m, 1H), 4,43-4,41 (m, 2H), 4,28-4,26 (m, 1H), 4,19-4,18 (m, 2H), 3,88-3,86 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,38-3,37 (m, 1H), 3,21-3,19 (m, 1H), 2,98-2,96 (m, 1H), 2,64-2,62 (m, 1H), 2,58-2,56 (m, 2H), 2,42-2,41 (m, 3H), 2,26-2,25 (m, 1H), 2,11-2,09 (m, 1H), 1,21 (s, 6 H), 0,98 (d, J = 5,5 Hz, 3H).
Ejemplo 225a 6-cloro-2-metil-4-(2-metilpirimidin-4-ilamino)piridazin-3(2H)-ona 225a
Figure imgf000205_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 2-metilpirimidin-4-amina (330 mg, 3,03 mmol), 4-bromo-6-cloro-2-metilpiridazin-3(2H)-ona (675 mg, 3,03 mmol), Pd2(dba)3 (274 mg, 0,30 mmol), XantPhos (143 mg, 0,30 mmol), Cs2CO3 (2960 mg, 9,09 mmol) y dioxano (40 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante la noche. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:20 para dar 225a como un sólido amarillo (560 mg, 73 %). EM-ESI: [M+H]+ 252,1
Ejemplo 225b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(2-metilpirimidin-4-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il}piridin-3-il)metilo 225b
Un matraz de fondo redondo equipado con un condensador de reflujo se cargó con 225a (200 mg, 0,80 mmol), ácido (3-(acetoximetil)-2-(7,7-dimetil-1-oxo-3,4,7,8-tetrahidro-1H-cidopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-4-il)borónico 199e (318 mg, 0,80 mmol), PdCL(dppf) (65,3 mg, 0,080 mmol), K3PO4 ( 6 24 mg, 2,4 mmol), acetato de sodio (200 mg, 2,4 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:20 para dar 225b como un sólido rojo (150 mg, 47 %). EM-ESI: [M+H]+ 569,3
Ejemplo 225 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(2-metilpirimidin-4-il)amino]-6-oxo-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 225
Una mezcla de 225b (120 mg, 0,21 mmol), hidróxido de litio (59 mg, 2,11 mmol), THF ( 6 ml), /-propanol (4 ml) y agua (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. La mezcla se concentró a presión reducida y se diluyó con agua (3 ml). A continuación, se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 225 como un sólido blanco (29 mg, 48 %). EM-ESI: [M+H]+ 527,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 9,82 (s, 1 H), 8 , 88 (s, 1 H), 8,54 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 8,37 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 7,44 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 7,34 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 6,56 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 4,87 (t, J = 1.5 Hz, 1 H), 4,67 (d, J = 11,5 Hz, 1 H), 4,42 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 4,29-4,25 (m, 1 H), 4,20 (s.a., 2 H), 3,93 (d, J = 9.5 Hz, 1 H), 3,81 (s, 3 H), 2,62-2,58 (m, 2 H), 2,50-2,49 (m, por debajo del pico de disolvente, 2H), 2,40 (s, 3 H), 1,22 (s, 6 H).
Ejemplo 226a 6-cloro-2-metil-4-({5-[(morfolin-4-il)carbonil]piridin-2-il}amino)-2,3-dihidropiridazin-3-ona 226a
Figure imgf000206_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (40 ml), (6-aminopiridin-3-il)(morfolino)metanona 111a (2,07 g, 10,0 mmol), 4-bromo-6-cloro-2-metilpiridazin-3(2H)-ona (3,35 g, 15,0 mmol), Pd2(dba)3 (915 mg, 1 , 0 mmol), XantPhos (578 mg, 1 , 0 mmol) y carbonato de cesio (6,52 g, 20 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 8 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 20 ml). El filtrado combinado se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida para dar 226a (2,45 g, 51 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 350,1
Ejemplo 226b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(morfolin-4-il)carbonil]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidro-piridazin-3-il]piridin-3-il)metilo 226b
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 226a (279 mg, 0,80 mmol), acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)metilo 199e (1,53 g, 3,2 mmol), Pd2(dba)3 (73,2 mg, 0,080 mmol), triciclohexilfosfina (44,6 mg, 0,16 mmol), carbonato de cesio (521,6 mg, 1,6 mmol), 1,4-dioxano (10 ml) y agua ( 8 gotas). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a 110 °C durante 4 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol 40:1 para dar 226b como un sólido amarillo (120 mg, 23 %). EM-ESI: [M+H]+ 667,3
Ejemplo 226 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-(morfolin-4-carbonil)-2-piridil]amino]-6-oxo-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazm-4-ona 226
Una mezcla de 226b (120 mg, 0,18 mmol) e hidróxido de litio monohidratado (227 mg, 5,4 mmol) en /-propanol/THF/agua (3 ml/3 ml/2 ml) se agitó a 35 °C durante 0,5 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 226 como un sólido blanco (53 mg, 47 %). EM-ESI: [M+H]+ 625,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 5 9,75 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,54 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,36 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,79-7,77 (m, 1H), 7,59 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,60-4,57 (m, 1H), 4,40-4,37 (m, 1H), 4,27-4,25 (m, 1H), 4,20-4,17 (m, 2H), 3,91-3,88 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,60-3,45 (m, solapamiento, 8H), 2,62-2,56 (m, 2H), 2,42 (s, 2H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 227a Acetato de {4-[1-metil-5-({5-[(morfolin-4-il)carbonil]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il]-2-{1-oxo-1H,2H,3H,4H,6H,7H,8H,9H-pirazino[1,2-a]indol-2-il}piridin-3-il}metilo 227a
Figure imgf000207_0001
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 6-cloro-2-metil-4-({5-[(morfolin-4-il)carbonil]piridin-2-il}amino)-2,3-dihidropiridazin-3-ona 226a (244 mg, 0,70 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (558 mg, 1,5 mmol), Pd2(dba)3 (64 mg, 0,070 mmol), triciclohexilfosfina (39 mg, 0,14 mmol), carbonato de cesio (456 mg, 1,4 mmol), 1,4-dioxano (7 ml) y agua (6 gotas). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a 110 °C durante 4 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol 40:1 para dar 227a como un sólido amarillo (290 mg, 63 %). EM-ESI: [M+H]+ 653,3
Ejemplo 227 2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-(morfolin-4-carbonil)-2-piridil]amino]-6-oxo-piridazin-3-il]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 227
Una mezcla de 227a (131 mg, 0,20 mmol) e hidróxido de litio 1agua (120 mg, 2,0 mmol) en /-propanol/THF/agua (4 ml/4 ml/2 ml) se agitó a 35 °C durante 0,5 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 227 como un sólido blanco (75 mg, 62 %). EM-ESI: [M+H]+ 611,2. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 59,75 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,54 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,36 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,79-7,77 (m, 1H), 7,59 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,60-4,57 (m, 1H), 4,38-4,36 (m, 1H), 4,29­ 4,19 (m, 2H), 4,10-4,05 (m, 1H), 3,93-3,90 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,60-3,50 (m, solapamiento, 8H), 2,66-2,54 (m, 2H), 2,48-2,46 (m, 2H), 1,81-1,66 (m, 4H).
Ejemplo 228a (S)-acetato de (4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)pirazin-2-il-amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 228a
Figure imgf000207_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con (S)-5-bromo-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)pirazin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona (90 mg, 0,21 mmol) 191i, ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (80,4 mg, 0,21 mmol), Pd(dppf)Cl2 (17,2 mg, 0,021 mmol), K3PO4 (89 mg, 0,42 mmol), acetato de sodio (57,1 mg, 0,42 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (30 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 50:1 a 30:1) para dar 228a como un sólido marrón (60 mg, 42 %). EM-ESI:
[M+H]+ 694,3.
Ejemplo 228 2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]pirazin-2-il]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-1-ona 228
Una mezcla de 228a (50 mg, 0,070 mmol) e hidróxido de litio (43 mg, 1,8 mmol) en /-propanol/THF (1:1,4 ml) y agua (1 ml) se agitó a 35 °C durante 30 min. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 228 (10 mg, 21 %). EM-ESI: [M+H]+ 652,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 68,61 (s, 1H), 8,48 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,94 (s.a., 1H), 4,56-4,55 (m, 2H), 4,49-4,47 (m,1H), 4,42-4,36 (m, solapamiento, 4H), 4,25­ 4,17 (m, 2H), 4,13-4,10 (m, 1H), 3,86-3,76 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 3,39-3,37 (m, 1H), 3,01-2,96 (m, 1H), 2,78-2,76 (m, 1H), 2,62-2,57 (m, solapamiento, 3H), 2,50-2,47 (m, 2H), 2,10-2,07 (m, 1H), 1,94-1,90 (m, 1H), 1,80-1,78 (m, 2H), 1,70-1,69 (m, 2H), 1,12 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 229a 2-etilpirimidin-4-amina 229a
Figure imgf000208_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 2-cloropirimidin-4-amina (2,60 g, 20,0 mmol), trietilborano (20,0 ml, 1,0 M en THF, 20,0 mmol), Pd(dppf)Cl2 (816 mg, 1,0 mmol), K3PO4 (13,0 g, 40,0 mmol), agua (2 ml) y tetrahidrofurano (50 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 14 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 229a como un sólido amarillo (600 mg, 24 %). EM-ESI: [M+H]+ 124,3
Ejemplo 229b 5-bromo-3-(2-etilpirimidin-4-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 229b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 229a (246 mg, 2,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (534 mg, 2,0 mmol), Pd2(dba)3 (182 mg, 0,20 mmol), XantPhos (231 mg, 0,40 mmol), Cs2CO3 (1,30 g, 4,0 mmol) y 1,4-dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 4 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 229b como un sólido blanquecino (308 mg, 50 %). EM-ESI: [M+H]+ 309,1
Ejemplo 229c Acetato de (2'-(7,7-dimetil-1-oxo-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ciclopenta-[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)-5-((2-etilpirimidin-4-il)amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4'-bipiridin]-3'-il)metilo 229c
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 229b (277 mg, 0,90 mmol), ácido (3-(acetoximetil)-2-(7,7-dimetil-1-oxo-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ddopenta[4,5]pimdo[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-4-il)borónico 199e (358 mg, 0,90 mmol), Pd(dppf)Cl2 (74 mg, 0,090 mmol), K3P0 4 (381 mg, 1,80 mmol), agua (2 ml) y tetrahidrofurano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 60:1 para dar 229c como un sólido blanco (291 mg, 50 %). EM-ESI: [M+H]+ 582,4
Ejemplo 229 3-[4-[5-[(2-etilpirimidin-4-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pimdo[3,5-b]pirazin-4-ona 229
A una solución de 229c (291 mg, 0,45 mmol) en tetrahidrofurano (10 ml) y agua (2 ml) se le añadió hidróxido de litio (48 mg, 2,0 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 1 h y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 229 (165 mg, 61 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 540,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 69,12 (s, 1H), 8,96 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,25 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,00 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,55-4,44 (m, 2H), 4,26-4,19 (m, solapamiento, 3H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,74 (c, J = 7,5 Hz, 2H), 2,59-2,54 (m, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,22-1,20 (m, solapamiento, 9H).
Ejemplo 230a (S)-4-(5-bromopirazin-2-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 230a
Figure imgf000209_0001
Una mezcla de (S)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (6,0 g, 30 mmol) y 2,5-dibromopirazina (14,1 g, 60 mmol) se agitó a 80 °C durante 15 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (de 10:1 a 2:1) para dar 230a como un sólido amarillo (1,14 g, 19 %). EM: [M+H]+ 359,1.
Ejemplo 230b (S)-4-(5-(difenilmetilenamino)pirazin-2-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 230b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 230a (2,6 g, 7,3 mmol), difenilmetanimina (1,3 g, 7,3 mmol), Pd2(dba)3 (669 mg, 0,73 mmol), (R)-(+)-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1 '-binaftilo (968 mg, 1,46 mmol), Cs2CO3 (4,7 g, 14,6 mmol) y 1,4-dioxano (40 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 96 °C durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (de 10:1 a 3:1) para dar 230b como un aceite rojo (3,3 g, 75 %). EM: [M+H]+ 458,3.
Ejemplo 230c (S)-4-(5-aminopirazin-2-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 230c
A una solución de 230b (3,3 g, 7,2 mmol) en metanol (25 ml) se le añadieron acetato de sodio (708 mg, 8,6 mmol) y clorhidrato de hidroxilamina (907 mg, 8,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 0,5 h. A continuación, se concentró a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 50:1 a 30:1) para dar 230c como un aceite amarillo (1,35 g, 64 %). EM: [M+H]+ 294,3.
Ejemplo 230d (S)-4-(5-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)pirazin-2-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 230d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 230c (1,25 g, 4,3 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (3,4 g, 12,9 mmol), Pd2(dba)3 (394 mg, 0,43 mmol), Xantphos (497 mg, 0,86 mmol), Cs2CO3 (4,7 g, 14,6 mmol) y 1,4-dioxano (80 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 50:1 a 30:1) para dar 230d (1,9 g, 72 %). EM: [M+H]+ 481,2.
Ejemplo 230e (S)-5-bromo-1-metil-3-(5-(2-metilpiperazin-1-il)pirazin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 230e
Una mezcla de 230d (1,9 g, 3,97 mmol) y ácido trifluoroacético (4 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, se concentró a presión reducida para dar 230e bruto (1,45 g, 97 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM: [M+H]+ 381,2.
Ejemplo 230f (S)-5-bromo-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)pirazin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 230f
Una mezcla de 230e (2,0 g, 5,3 mmol), oxetan-3-ona (763 mg, 10,6 mmol), NaBH3CN (835 mg, 13,3 mmol) y cloruro de cinc (1,8 g, 13,3 mmol) en metanol (60 ml) se agitó a 50 °C durante 30 min. La mezcla se concentró a presión reducida. Al residuo se le añadió agua y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano tres veces. A continuación, la capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 50:1 a 20:1) para dar 230f como un aceite amarillo (1,6 g, 70 %). EM: [M+H]+ 437,2.
Ejemplo 230g 5-[4-cloro-3-(hidroximetil)piridin-2-il]-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.02,7]trideca-1(9),2(7),3-trien-6-ona 230g
Figure imgf000210_0001
1Z4a 23flg 230h
Figure imgf000210_0003
. .
230 i MeCN.H.n
rs1l.j¡-3 3 h
Figure imgf000210_0002
Una mezcla de 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.02,7]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il)piridin-3-carbaldehído 124a (797 mg, 2,31 mmol), NaBH4 (263 mg, 6,92 mmol) y CH3OH (50 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (30 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 X 30 ml) y el extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice eluyendo con 5:1 para dar 230g (649 mg, 81 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 348,1
Ejemplo 230h Acetato de (4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.02,7]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-il)metilo 230h
Un matraz de fondo redondo se cargó con 230g (597 mg, 1,72 mmol), diclorometano (50 ml) y trietilamina (5 ml). La solución se agitó a 0 °C durante 0,5 h y se añadió lentamente cloruro de acetilo (135 mg, 1,72 mmol). La mezcla se agitó a 0 °C durante otras 2,5 h. A continuación, se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 9:1 para dar 230h (602 mg, 90 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 390,1
Ejemplo 230i 4-(Dihidroxiboranil)-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo-[7.4.0.02,7]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-il]metilo 230i
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 230h (595 mg, 1,53 mmol), Pin2B2 (1,94 g, 7,65 mmol), PdCh(dppf) (65 mg, 0,080 mmol), X-Phos (73 mg, 0,15 mmol), acetato de potasio (304 mg, 3,1 mmol) y dioxano (50 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó con éter de petróleo para dar 230i (409 mg, 67 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 400,1
Ejemplo 230j Acetato de {4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]pirazin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-(6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1 (9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-il}metilo 230j
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 230f (100 mg, 0,23 mmol), 230i (140 mg, 0,35 mmol), Pd(dppf)Cl2 (19 mg, 0,023 mmol), acetato de sodio (63 mg, 0,46 mmol), K3PO4 (98 mg, 0,46 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 3 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, se filtró la reacción. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 50:1 a 30:1) para dar 230j como un sólido amarillo (90 mg, 55 %). EM-ESI: [M+H]+ 710,2.
Ejemplo 230 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]pirazin-2-il]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidrobenzotiofeno[2,3—d]piridazin-4-ona 230
Una mezcla de 230j (80 mg, 0,11 mmol) e hidróxido de litio (27 mg, 1,1 mmol) en /-propanol/THF (1:1, 10 ml) y agua (2 ml) se agitó a 35 °C durante 0,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 230 (34 mg, 45%). EM-ESI: [M+H]+ 668,2. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-cfó) ó 8,64 (s, 1H), 8,56 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,40 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,53 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 4,84 (s.a., 1H), 4,58-4,54 (m, 2H), 4,50-4,47 (m, 1H), 4,43-4,36 (m, solapamiento, 4H), 3,78-3,75 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,39-3,35 (m, 1H), 3,02-3,0 (m, 1H), 2,98-2,95 (m, 2H), 2,90-2,82 (m, 2H), 2,78-2,76 (m, 1H), 2,60-2,56 (m, 1H), 2,10-2,09 (m, 1H), 1,95-1,88 (m, solapamiento, 5H), 1,10 (d, J = 8,0 Hz, 3H).
Ejemplo 231a 2-(4-cloro-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-10-fluoro-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-ona 231a
Figure imgf000211_0001
Una mezcla de 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 134c (800 mg, 2,31 mmol), NaBH4 (263 mg, 6,92 mmol) y metanol (50 ml) se agitó a 0 °C durante 1 h. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (30 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 X 30 ml) y el extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 5:1 para dar 231a (650 mg, 81 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 340,1
Ejemplo 231b Acetato de (4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 231b
Un matraz de fondo redondo se cargó con 231a (600 mg, 1,72 mmol), diclorometano (50 ml) y trietilamina (5 ml). La solución se agitó a 0 °C durante 0,5 h y se añadió lentamente cloruro de acetilo (135 mg, 1,72 mmol). La mezcla se agitó a 0 °C durante otras 2,5 h. A continuación, se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 9:1 para dar 231b (605 mg, 90 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 392,1
Ejemplo 231c Ácido 3-(acetoximetil)-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazmo[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 231c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 231b (600 mg, 1,53 mmol), Pin2B2 (1,94 g, 7,65 mmol), PdCb(dppf) (65 mg, 0,080 mmol), X-Phos (73 mg, 0,15 mmol), acetato de potasio (304 mg, 3,1 mmol) y dioxano (30 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó con éter de petróleo para dar 231c (412 mg, 67 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 402,1
Ejemplo 231d (S)-acetato de (2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]mdol-2(1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)piridin-3-il)metilo 231d
Figure imgf000211_0002
Un matraz de fondo redondo equipado con un condensador de reflujo se cargó con 231c (200 mg, 0,50 mmol), (S)-6-cloro-2-metil-4-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridazin-3(2H)-ona 224c (195 mg, 0,50 mmol), PdCb(dppf) (24 mg, 0,030 mmol), K3PO4 (212 mg, 1,0 mmol), acetato de sodio (98 mg, 1,0 mmol), acetonitrilo (30 ml) y agua (3 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó con cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con petróleo/acetato de etilo 1:3 para dar 231d como un sólido amarillo (213 mg, 60 %). EM-ESI: [M+H]+ 712,3
Ejemplo 231 10-fluoro-2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-6-oxo-piridazin-3-il]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]mdoM-ona 231
Una mezcla de 231d (150 mg, 0,21 mmol) e hidróxido de litio (51 mg, 2,1 mmol) en /-propanol/THF (1:1, 10 ml) y agua (3 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se extrajo con acetato de etilo (2 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 231 (83 mg, 59 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 670,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) ó 9,29 (s, 1H), 8,53 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,43-7,40 (m, 3H), 4,76 (s.a., 1H), 4,60-4,54 (m, 3H), 4,49-4,46 (m, 1H), 4,43-4,37 (m, 2H), 4,21-4,56 (m, 2H), 4,07-4,03 (m, 1H), 3,89-3,83 (m, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,41-3,37 (m, 1H), 3,22-3,19 (m, 1H), 3,00-2,93 (m, 1H), 2,65-2,60 (m, 2H), 2,55-2,54 (m, 1H), 2,43-2,39 (m, 3H), 2,27-2,24 (m, 1H), 2,12-2,07 (m, 1H), 1,76-1,66 (m, 4H), 0,97 (d, J = 9,0 Hz, 3H).
Ejemplo 232a 2-nitro-5-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)piridina 232a
Figure imgf000212_0001
Una mezcla de 4-(6-nitropiridin-3-il)-5,6-dihidropiridin-1 (2H)-carboxilato de ferc-butilo 200a (2,0 g, 6,6 mmol) en HCl/dioxano (20 ml, 4 M) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. A continuación, se evaporó a presión reducida. El residuo se lavó con acetato de etilo (3 X 7 ml) para dar 232a como un sólido amarillo (1,0 g, 74 %). EM-ESI: [M+H]+ 206.
Ejemplo 232b 5-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-2-nitropiridina 232b
A una solución de 232a (1,2 g, 5,8 mmol) en CH3OH (25 ml) se le añadió HCHO (1 ml, 35 mmol) y ácido acético (1 ml), seguido de la adición de NaBHCN3 (1,0 g, 12 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. A continuación, se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante Combiflash de fase inversa eluyendo con NH4HCO3 al 0,3 % en agua/acetonitrilo para dar 232b como un sólido amarillo (1,0 g, 78 %). EM-ESI: [M+H]+ 220.
Ejemplo 232c 5-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-2-amina 232c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 232b (2,0 g, 9,0 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 200 mg) y metanol (40 ml). El matraz se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó en hidrógeno a temperatura ambiente durante 12 h. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 232c (1,6 g, 92,5 %), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 192
Ejemplo 232d 5-bromo-1-metil-3-(5-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 232d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 232c (1,5 g, 7,9 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (2,0 g, 7,9 mmol), carbonato de cesio (5,0 g, 16 mmol) y 1,4-dioxano (50 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión resultante durante 30 minutos, se añadieron XantPhos (455 mg, 0,79 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (718 mg, 0,79 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 100 °C durante 2 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se dividió entre acetato de etilo (100 ml) y agua (100 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (3 X 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (3 X 20 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:3 para dar 232d como un sólido marrón (1,5 g, 50 %). EM-ESI: [M+H]+ 377.
Ejemplo 232e Acetato de (4-(1-etil-5-(5-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 232e
Un matraz de fondo redondo equipado con un condensador de reflujo se cargó con 232d (160 mg, 0,40 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (191 mg, 0,50 mmol), Pd(dppf)Cl2 (20 mg, 0,024 mmol), K3PO4 (180 mg, 0,80 mmol), acetato de sodio trihidratado (120 mg, 0,80 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/CH3OH 25:1 para dar 232e como un sólido amarillo (180 mg, 55 %). EM-ESI: [M+H]+ 636,3
Ejemplo 2322-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-(1-metil-4-piperidil)-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 232
Una mezcla de 232e (180 mg, 0,30 mmol) e hidróxido de litio (130 mg, 3,0 mmol) en THF//-propanol (6:3, 9 ml) y agua (3 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se extrajo con acetato de etilo ( 2 X 20 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 232 (55 mg, 35 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 594,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,72 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,44-7,36 (m, 2H), 6,90 (s, 1H), 6,80-6,78 (m, 1H), 5,08-5,04 (m, 1H), 4,64-4,50 (m, 2H), 4,34-4,29 (m, 1H), 4,16-4,10 (m, 2H), 3,91-3,87 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,03-3,00 (m, 2H), 2,62-2,56 (m, 4H), 2,46-2,42 (m, 1H), 2,36 (s, 1H), 2,13-2,07 (m, 2H), 1,92-1,82 (m, solapamiento, 8H).
Ejemplo 233a 2-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)-6,7-dihidrotiazolo[5,4-c]piridin-5(4H)-carboxilato de tere-butilo 233a
Figure imgf000213_0001
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 2-amino-6,7-dihidrotiazolo[5,4-c]piridin-5(4H)-carboxilato de tere-butilo (600 mg, 2,35 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (942 mg, 3,53 mmol), Pd2(dba)3 (214 mg, 0,235 mmol), Xantphos (270,5 mg, 0,47 mmol), Cs2CO3 (1,53 g, 4,7 mmol) y dioxano (30 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 110 °C bajo protección con N2 durante 12 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se lavó con acetonitrilo para dar 233a (600 mg, 54 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 441,1
Ejemplo 233b 2-[(5-{3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4- il}-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)amino]-4H,5H,6H,7H-[1,3]tiazolo[5,4—c]pmdm-5-carboxilato de ferc-butilo 233b
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 233a (300 mg, 0,68 mmol), ácido (3-(acetoximetil)-2-(7,7-dimetil-1-oxo-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ciclopenta[4,5]pirrolo-[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-4-il)borónico 199e (1,8 g, 2,72 mmol), Pd(dppf)Cl2 (27,7 mg, 0,034 mmol), K3PO4 (288,3 mg, 1,36 mmol), acetato de sodio (111,5 mg, 1,36 mmol), agua (10 gotas) y acetonitrilo (10 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla durante 30 minutos, se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 1 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 100:1 para dar 233b (220 mg, 45 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 714,3
Ejemplo 233c Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-6-oxo-5- ({4H,5H,6H,7H-[1,3]tiazolo[5,4—c]piridin-2-il}amino)-1,6-dihy-dropiridin-3-il]piridin-3-il)metilo 233c
A una solución de 233b (220 mg, 0,308 mmol) en acetato de etilo (5 ml) se le añadió una solución de HCl en acetato de etilo (0,123 ml, 2,5 M, 0,308 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, se concentró a presión reducida para dar 233c (180 mg, bruto), que se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 614,3
Ejemplo 233 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-6-oxo-5-(4,5,6,7-tetrahidrotiazolo[5,4—c]piridin-2-ilamino)-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 233
A una solución de 233c (180 mg, 0,29 mmol) en THF (3 ml) y propan-2-ol (3 ml) se le añadió agua (1 ml) e hidróxido de litio (14,0 mg, 0,58 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 233 (28,6 mg, 17 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 572,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 9,85 (s, 1H), 8,63 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 4,95-4,92 (m, 1H), 4,47-4,37 (m, 2H), 4,25-4,18 (m, 3H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,71 (s, 2H), 3,59 (s, 3H), 2,92-2,90 (m, 2H), 2,62­ 2,56 (m, 2H), 2,50-2,39 (m, 5H), 1,21 (s, 6 H).
Ejemplo 235a Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]pirazin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-il)metilo 235a
Figure imgf000214_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con (S)-5-bromo-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il) piperazin-1 -il)pirazin-2-ilamino)piridin-2(1 H)-ona 230f (200 mg, 0,46 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]-dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199e (366 mg, 0,92 mmol), Pd(dppf)Cl2 (38 mg, 0,046 mmol), acetato de sodio ( 1 26 mg, 0,92 mmol), K3PO4 (196 mg, 0,92 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 3 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, se filtró la reacción. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 50:1 a 30:1) para dar 235a como un sólido marrón (100 mg, 31 %). EM-ESI: [M+H]+ 708,5.
Ejemplo 235 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]pirazin-2-il]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5—b]pirazin-4-ona 235
Una mezcla de 235a (90,0 mg, 0,13 mmol) e hidróxido de litio (36,4 mg, 3,25 mmol) en /-propanol/THF (1:1, 5 ml) y agua (1 ml) se agitó a 35 °C durante 0,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 235 (18,2 mg, 22 %). EM-ESI: [M+H]+ 666,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 6 8,61 (s, 1H), 8,48 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,39 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,47 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,96 (s.a., 1H), 4,57-4,55 (m, 2H), 4,49-4,47 (m, 1H), 4,42-4,37 (m, solapamiento, 4H), 4,22-4,18 (m, solapamiento, 3H), 3,84-3,76 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 3,39-3,37 (m, 1H), 3,02-2,81 (m, 1H), 2,78-2,76 (m, 1H), 2,62-2,56 (m, 3H), 2,43-2,41 (m, 2H), 2,10-2,07 (m, 1H), 1,92-1,90 (m, 1H), 1,22 (s, 6H), 1,12 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
Ejemplo 236a Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-1-metil-5-{[5-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-2-il]amino}-6-oxopiridin-3-il)piridin-3-il)metilo 236a
Figure imgf000215_0001
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(5-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 232d (160 mg, 0,40 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199e (240 mg, 0,60 mmol), Pd(dppf)Cl2 (20 mg, 0,020 mmol), K3PO4 (180 mg, 0,80 mmol), acetato de sodio trihidratado (120 mg, 0,80 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó en cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 236a como un sólido amarillo (150 mg, 38 %). EM-ESI: [M+H]+ 650,3
Ejemplo 236 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-(1-metil-4-piperidil)-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pimdo[3,5-b]pirazin-4-ona 236
Una mezcla de 236a (150 mg, 0,25 mmol) e hidróxido de litio (105 mg, 2,5 mmol) en THF//-propanol (6:3, 9 ml) y agua (3 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se extrajo con acetato de etilo (2 X 20 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 236 (40 mg, 30 %) como un sólido verde claro. EM-ESI: [M+H]+ 608,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,73 (s, 1H), 8,52 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,90-7,88 (m, 2H), 7,45-7,37 (m, 2H), 6,86­ 6,80 (m, 2H), 5,11 (s.a., 1H), 4,67-4,65 (m, 1H), 4,53-4,51 (m, 1H), 4,35-4,33 (m, 1H), 4,18 (s.a., 2H), 3,90-3,89 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,24-3,22 (m, 2H), 2,59-2,50 (m,, solapamiento, 8H), 2,36-2,32 (m, 2H), 2,01-1,87 (m, 4H), 1,29 (s, 6H).
Ejemplo 237a 2-{10-fluoro-1-oxo-1H,2H,3H,4H,6H,7H,8H,9H-pirido[3,4-b]indolizin-2-il}-4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-carbaldehído 237a
Figure imgf000215_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 134c (70 mg, 0,20 mmol), 1-metil-3-({5-[(2A)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-5-(tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-2-ona l 9 l j (192 mg, 0,40 mmol), Pd(dppf)Cl2 (33 mg, 0,040 mmol), acetato de potasio (39 mg, 0,40 mmol), K3PO4 (87 mg, 0,40 mmol), acetonitrilo (7 ml) y agua (6 gotas). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 95 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol 50:1 para dar 237a (286 mg, pureza: 46 %, rendimiento: 98 %) como un sólido. e M-ESI: [M+H]+ 667,3
Ejemplo 237 10-fluoro-2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4—b]indoMzin-1 -ona 237
A una solución de 237a (131 mg, 0,197 mmol) en metanol (7 ml) se le añadió borohidruro de sodio (59,8 mg, 1,57 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a 0-25 °C durante 1,5 h. A continuación, se desactivó con agua (1,5 ml). La mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se extrajo con diclorometano (3 X 30 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 237 (36 mg, 28 %) como un sólido blanco. Em -ESI: [M+H]+ 669,3. RMN de 1H (500 Mh z , CDCb) ó 8,66 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,83 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,36-7,32 (m, 2H), 6,84 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,90-4,86 (m, 1H), 4,73-4,65 (m, 5H), 4,39-4,30 (m, 2H), 3,90-3,77 (m, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,56­ 3,48 (m, 2H), 3,10-3,09 (m, 2H), 2,98-2,92 (m, 2H), 2,79-2,75 (m, 2H), 2,59-2,57 (m, 1H), 2,50-2,49 (m, 2H), 2,22-2,21 (s, 1H), 2,04-1,99 (m, 2H), 1,88-1,84 (m, 2H), 1,01 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
Ejemplo 238a (E)-3-((ferc-butilsulfinilimino)metil)-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxilato de metilo 238a
Figure imgf000216_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 500 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 3-formil-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxilato de metilo (10,0 g, 48,3 mmol, 1,0 eq.), 2-metilpropan-2-sulfinamida (11,7 g, 96,6 mmol, 2,0 eq.), KHSO4 (32,8 g, 241,5 mmol, 5 eq.) y diclorometano (250 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 h. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:3 para dar 238a (12,4 g, 83 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 311,3.
Ejemplo 238b 3-((1,1-dimetiletilsulfinamido)metil)-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxilato de metilo 238b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 238a (4,0 g, 12,8 mmol, 1,0 eq.), NaBH4 (2,9 g, 76,9 mmol, 6,0 eq.) y metanol (100 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Después de este tiempo, se añadió agua (50 ml) a la reacción y la mezcla resultante se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 50 ml). La capa orgánica combinada se evaporó a presión reducida para dar 238b (3,9 g, 96 %), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM: [M-C4H10NOS]+ 192,3.
Ejemplo 238c 3-(aminometil)-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-carboxilato de metilo 238c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 238b (3,5 g, 11,2 mmol), solución saturada de HCl/éter dietílico (15 ml) y diclorometano (15 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Después de que la reacción se completara, se añadió solución acuosa saturada de NaHCO3 (50 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con diclorometano (3 X 50 ml). La capa orgánica combinada se evaporó a presión reducida para dar 238c (2,2 g, 94 %), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM: [M-NH2]+ 192,1. RMN de 1H (500 MHz, MeOD) ó 6,28 (s, 1H), 4,38 (s, 2H), 4,03 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3,84 (s, 3H), 2,78 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 2,06-2,02 (m, 2H), 1,87-1,82 (m, 2H).
Ejemplo 238d 2,3,5,6,7,8-hexahidropirrolo[3,4-b]indolizin-1-ona 238d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 238c (1,3 g, 6,25 mmol, 1,0 eq.) y THF (20 ml). A -78 °C, a la solución se le añadió hexametildisilazano de litio/THF (18,7 ml, 18,7 mmol, 3,0 eq.). A continuación, se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de que la reacción se completara, se añadió solución acuosa saturada de NH4Cl (30 ml) y la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 50 ml) y la capa orgánica combinada se evaporó a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 60:1 para dar 238d (585 mg, 53 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 177,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 7,38 (s, 1H), 5,82 (s, 1H), 4,13 (s, 2H), 3,86 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 2,73 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 1,91-1,88 (m, 2H), 1,75-1,73 (m, 2H).
Ejemplo 238e 4-cloro-2-(1-oxo-5,6,7,8-tetrahidro-1H-pirrolo[3,4-b]indolizin-2(3H)-il)nicotinaldehído 238e
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 238d (400 mg, 2,27 mmol), 2-bromo-4-cloronicotinaldehído (1,50 g, 6,90 mmol, 3,0 eq.), Pd2(dba)3 (208 mg, 0,227 mmol, 0,1 eq.), xantphos (131 mg, 0,227 mmol, 0,1 eq.), Cs2CO3 (1,50 g, 4,54 mmol, 2,0 eq.) y dioxano (30 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 30 minutos, la mezcla de reacción se agitó a 90 °C durante 16 h. Después de que la reacción se completara, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:3 para dar 238e (300 mg, 42 %) como un sólido amarillo claro. EM-ESI: [M+H]+ 316,1.
Ejemplo 238f (S)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-il-amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-5,6,7,8-tetrahidro-1H-pirrolo[3,4-b]indolizin-2(3H)-il)nicotinaldehído 238f
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 238e (150 mg, 0,48 mmol, 1,0 eq.), (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 191j (459 mg, 0,95 mmol, 2,0 eq.), Pd(dppf)Cl2 (39 mg, 0,048 mmol, 0,1 eq.), acetato de sodio (78 mg, 0,95 mmol, 2,0 eq.), K3PO4 (202 mg, 0,95 mmol, 2,0 eq.), acetonitrilo (10 ml) y agua (1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 85 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/etanol 40:1 para dar 238f (90 mg, 30 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 635,3.
Ejemplo 238 2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-5,6,7,8-tetrahidro-1H-pirrolo[3,4-b]indolizin-3-ona 238
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 238f (90 mg, 1,0 eq., 0,14 mmol), NaBH4 (23 mg, 5 eq., 0,60 mmol) y metanol (5 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos y se desactivó con agua. A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 238 (60 mg, 66 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 637,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,69 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,36-7,31 (m, 2H), 6,83 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,15 (s, 1H), 5,71 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,96 (s, 2H), 4,72-4,63 (m, 4H), 4,52-4,51 (m, 2H), 3,97-3,95 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,55-3,53 (m, 1H), 3,48-3,46 (m, 1H), 3,10-3,08 (m, 2H), 2,91-2,89 (m, 2H), 2,58-2,56 (m, 1H), 2,49-2,48 (m, 2H), 2,23-2,19 (m, 1H), 2,08­ 2,02 (m, 2H), 1,93-1,89 (m, 2H), 1,00 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
Ejemplo 239a 3-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)azetidin-1-carboxilato de tere-butilo 239a
Figure imgf000218_0001
. .
239a 23Bb
Figure imgf000218_0002
239d
233c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (50 ml), 3-(6-aminopiridin-3-il)azetidin-1-carboxilato de terc-butilo(1,8 g, 7,2 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,9 g, 7,2 mmol) y carbonato de cesio (4,7 g, 14,4 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión resultante durante 30 minutos, se añadieron XantPhos (418 mg, 0,72 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (661 mg, 0,72 mmol). La mezcla de reacción se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 105 °C durante 0,5 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se dividió entre acetato de etilo (120 ml) y agua (60 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (3 X 80 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:4 para dar el 239a como un sólido amarillo (3,06 g, 98 %). EM-ESI: [M+H]+ 435.
Ejemplo 239b 3-(5-(azetidin-3-il)piridin-2-ilamino)-5-bromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona 239b
El compuesto 239a (1,0 g, 2,3 mmol) se suspendió en HCl 4 M/dioxano (10 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. A continuación, se concentró a presión reducida. El residuo se basificó con NaOH acuoso y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera y se concentró a presión reducida para dar 239b como un sólido amarillo (650 mg, 84 %). EM-ESI: [M+H]+ 335.
Ejemplo 239c 5-bromo-1-metil-3-(5-(1-metilazetidin-3-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 239c
Una mezcla de 239b (469 mg, 1,4 mmol), formaldehído acuoso al 37 % (4,0 g, 50 mmol), NaBHaCN (261 mg, 4,2 mmol) y cloruro de cinc 1 M en etoxietano (4 ml, 4,2 mmol) en metanol (40 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se añadió a agua (20 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 50 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 10:1 para dar 239c como un sólido amarillo (300 mg, 83 %). EM-ESI: [M+H]+ 349.
Ejemplo 239d Acetato de (4-(1-metil-5-(4-(1-metilazetidin-3-il)fenilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-piridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 239d
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 239c (106 mg, 0,30 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexa-hidropirazmo[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (115 mg, 0,30 mmol), Pd(dppf)Cl2 (25 mg, 0,030 mmol), K3PO4 (127 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio (49 mg, 0,60 mmol), agua (1 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 15:1 para dar 239d como un sólido blanco (100 mg, 49 %). EM-ESI: [M+H]+ 607,3
Ejemplo 239 2-[3-(hidroximetil)-4-[1 -metil-5-[[5-(1-metilazetidin-3-il)-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil] 3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 239
A una solución de 239d (100 mg, 0,16 mmol) en propan-2-ol (2 ml), tetrahidrofurano (2 ml) y agua (1 ml) se le añadió hidróxido de litio (38 mg, 1,60 mmol). La mezcla se agitó a 30 °C durante 2 h. A continuación, se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 239 (22,5 mg, 26%) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 566,4. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,75 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,91-7,89 (m, 2H), 7,59 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 6,84 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,09-5,06 (m, 1H), 4,66-4,64 (m, 1H), 4,54-4,50 (m, 1H), 4,36-4,33 (m, 1H), 4,18-4,11 (m, 2H), 3,92-3,88 (m, 1H), 3,75-3,72 (m, solapamiento, 5H), 3,63-3,58 (m, 1H), 3,16-3,14 (m, 2H), 2,64-2,58 (m, 4H), 2,40 (s, 3H), 1,93­ 1,90 (m, 2H), 1,84-1,79 (m, 2H).
Ejemplo 240a Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(1-metil-5-{[5-(1-metilazetidin-3-il)piridin-2-il]amino)-6-oxopiridin-3-il)piridin-3-il)metilo 240
Figure imgf000219_0001
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(5-(1-metilazetidin-3-il)piridin-2-ilamino)-piridin-2(1H)-ona 239c (106 mg, 0,30 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il)piridin-4-il)borónico 199e (119 mg, 0,30 mmol), Pd(dppf)Cl2 (25 mg, 0,031 mmol), K3PO4 (127 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio (49 mg, 0,60 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 15:1 para dar 240a como un sólido blanco (80 mg, 48 %). EM-ESI: [M+H]+ 622,7
Ejemplo 240 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-(1-metilazetidin-3-il)-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazm-4-ona 240
A una solución de 240a (80 mg, 0,130 mmol) en propan-2-ol (2 ml), tetrahidrofurano (2 ml) y agua (1 ml) se le añadió hidróxido de litio (38 mg, 1,60 mmol). La mezcla se agitó a 30 °C durante 1 h. La reacción se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 24024,3 mg, 33 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 580,4. RMN de 1H (500 MHz, CDCls) ó 8,76 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,92-7,90 (m, 2H), 7,59 (dd, J = 1,5, 8,5 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,84 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,09-5,06 (m, 1H), 4,68-4,66 (m, 1H), 4,56-4,54 (m, 1H), 4,37-4,35 (m, 1H), 4,19-4,17 (m, 2H), 3,90­ 3,88 (m, 1H), 3,75-3,72 (m, solapamiento, 5H), 3,64-3,62 (m, 1H), 3,19-3,16 (m, 2H), 2,60 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 2,54 (s, 2H), 2,42 (s, 3H), 1,30 (s, 6H).
Ejemplo 241a 2-{10-fluoro-1-oxo-1H,2H,3H,4H,6H,7H,8H,9H-pirido[3,4-b]indolizin-2-il}-4-[1-metil-5-({5-metil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-carbaldehído 241a
Figure imgf000219_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 134c (59,6 mg, 0,17 mmol), 1-metil-3-({5-metil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il}amino)-5-(tetrametil-1,3,2-dioxa-borolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-2-ona 135a (261,8 mg, 0,68 mmol), Pd(dppf)Cl2 (25,0 mg, 0,030 mmol), Na2CO3 (54,1 mg, 0,51 mmol), DMF (6 ml) y agua (0,75 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 70 °C durante 1 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 241a (100 mg, pureza: 54 %, rendimiento: 56 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 571,3
Ejemplo 241 10-fluoro-2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4—b]indoMzin-1 -ona 241
A la solución de 241a (54,0 mg, 0,095 mmol) en metanol (5 ml) se le añadió borohidruro de sodio (28,9 mg, 0,76 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a 0-25 °C durante 1,5 h. A continuación, se desactivó con agua (5 ml). La mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se extrajo con diclorometano (3 X 30 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 241 (8,0 mg, 15 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 573,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 68,47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,06 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,88 (s, 1H), 4,87­ 4,85 (m, 1H), 4,44-4,35 (m, 2H), 4,13-4,08 (m, 1H), 3,92-3,89 (m, 3H), 3,79-3,76 (m, 2H), 3,58 (s, 3H), 3,49 (s, 2H), 2,99-2,94 (m, 2H), 2,79-2,77 (m, 2H), 2,66-2,64 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,90-1,78 (m, 2H), 1,75-1,73 (m, 2H).
Ejemplo 242a 3-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 242a
Figure imgf000220_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-3-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 218a (800 mg, 2,69 mmol, 1,0 eq.), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1,70 g, 6,73 mmol, 2,5 eq.), Pd2(dba)3 (123 mg, 0,13 mmol, 0,05 eq.), X-Phos (128 mg, 0,27 mmol, 0,1 eq.), acetato de potasio (528 mg, 5,38 mmol, 2,0 eq.) y dioxano (50 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 70 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:70 para dar 242a (740 mg, 79 %) como un sólido verde. EM-ESI: [M+H]+ 345,3
Ejemplo 242b 4-(5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 242b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 242a (282 mg, 0,82 mmol, 1,5 eq.), 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1 H)-il)nicotinaldehído 139a (180 mg, 0,55 mmol, 1,0 eq.), Pd(dppf)Cl2 (45 mg, 0,055 mmol, 0,1 eq.), acetato de sodio (90 mg, 1,25 mmol, 2,0 eq.), K3PO4 (232 mg, 1,25 mmol, 2,0 eq.), acetonitrilo (20 ml) y agua (1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 1 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 242b (150 mg, 48 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 512,3.
Ejemplo 242 2-[4-[5-[(1,5-dimetilpirazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-1-ona 242
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 242b (150 mg, 0,29 mmol, 1,0 eq.), NaBH4 (55 mg, 1,46 mmol, 5,0 eq.) y metanol (10 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 min. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 242 (100 mg, 66%) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 514,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 68,47 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,04-8,03 (m, 2H), 7,42 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,05 (s, 1H), 5,90 (s, 1H), 4,87-4,85 (m, 1H), 4,43-4,35 (m, 2H), 4,18-4,12 (m, 1H), 3,98-3,93 (m, 1H), 3,84-3,78 (m, 2H), 3,59 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,06-2,92 (m, 2H), 2,75-2,68 (m, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,94-1,92 (m, 2H), 1,79-1,73 (m, 2H).
Ejemplo 243a 4-(metilsulfoniloxi)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo 243a
Figure imgf000221_0001
Z43f
243g
A una solución de 4-hidroxipiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (14,0 g, 70,0 mmol) a 0 °C en trietilamina (9,9 g, 98 mmol) y diclorometano (100 ml) se le añadió gota a gota cloruro de metanosulfonilo (11,2 g, 98,0 mmol). La reacción se llevó a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (50 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 X 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 243a, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional (19,5 g, 100 %). EM-ESI: [M-t-Bu]+ 224,1
Ejemplo 243b 4-(4-nitro-1H-imidazol-1 -il)piperidin-1 -carboxilato de ferc-butilo 243b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 243a (7,0 g, 25,1 mmol), DMF (120 ml), 4-nitro-1H-imidazol (2,80 g, 25,1 mmol) y K2CO3 (6,9 g, 50,2 mmol). La mezcla se calentó a 120 °C durante la noche. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo/diclorometano 2:2:1 para dar 243b (2,4 g, 32,4 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 297,3
Ejemplo 243c 4-(4-amino-1H-imidazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo 243c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 243b (2,3 g, 7,8 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 10 % humedecido, 230 mg) y etanol (40 ml). La mezcla se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 243c (2,0 g, 95 %). EM-ESI: [M+H]+ 267,2.
Ejemplo 243d 4-(4-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)-1H-imidazol-1-il)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo 243d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 243c (2,3 g, 8,6 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (2,3 g, 8,6 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (789 mg, 0,86 mmol), XantPhos (994 mg, 1,72 mmol), Cs2CO3 (5,6 g, 17,2 mmol) y 1,4-dioxano (80 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 95 °C durante 4 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 50:1 a 20:1) para dar 243d como un sólido oleoso amarillo (2,3 g, 59 %). EM-ESI: [M+H]+ 452,3.
Ejemplo 243c 5-bromo-1-metil-3-(1-(piperidin-4-il)-1H-imidazol-4-ilamino)piridin-2(1H)-ona 243e
Una mezcla de 243d (2,2 g, 4,88 mmol) y ácido trifluoroacético (20 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, se concentró a presión reducida para dar 243e bruto (1,5 g, 88 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESl: [M+H]+ 352,2
Ejemplo 243f 5-bromo-1-metil-3-(1-(1-(oxetan-3-il)piperidin-4-il)-1H-imidazol-4-ilamino)piridin-2(1H)-ona 243f
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 243e (2,2 g, 6,3 mmol), NaBHaCN (995 mg, 15,8 mmol), oxetan-3-ona (907 mg, 12,6 mmol), cloruro de cinc (2,1 g, 15,8 mmol) y metanol (60 ml). La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 5 h y se concentró a presión reducida. Al residuo se le añadió agua y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano tres veces. A continuación, la capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con trietilamina al 1 % en metanol. Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron a presión reducida. Se añadió diclorometano al residuo y la suspensión resultante se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 243f como un sólido amarillo (800 mg, 62 %). EM-ESI: [M+H]+ 408,2
Ejemplo 243g Acetato de (4-(1-metil-5-(1-(1-(oxetan-3-il)piperidin-4-il)-1H-imidazol-4-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 243g
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 243f (300 mg, 0,74 mmol), ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 113i (567 mg, 1,48 mmol), Pd(dppf)Cl2 (60,5 mg, 0,074 mmol), K3PO4 (314 mg, 1,48 mmol), acetato de sodio (201 mg, 1,48 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 1:1 que contenía trietilamina al 0,5 % para dar 243g como un sólido amarillo (100 mg, 20 %). EM-ESI: [M+H]+ 667,4.
Ejemplo 243 2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[1-[1-(oxetan-3-il)-4-piperidil]imidazol-4-il]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 243
Una mezcla de 243g (80 mg, 0,12 mmol) e hidróxido de litio (100 mg, 2,4 mmol) en /-propanol/THF/agua (2:2:1, 8 ml) se agitó a 35 °C durante 30 min. A continuación, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. Al residuo se le añadió agua y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano tres veces. La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 243 (28,0 mg, 30 %). EM-ESI: [M+H]+ 625,4. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,48 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,45 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,35-7,34 (m, 2H), 7,11 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 5,14 (s.a., 1H), 4,54 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 4,43-4,40 (m, 4H), 4,23-4,11 (m, 3H), 3,99-3,96 (m, 1H), 3,91-3,84 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,43-3,39 (m, 1H), 2,77-2,76 (m, 2H), 2,62-2,57 (m, 2H), 2,47-2,46 (m, 2H), 1,94-1,89 (m, 6H), 1,79-1,78 (m, 2H), 1,69­ 1,66 (m, 2H).
Ejemplo 244a 2-(4-cloro-3-(hidroximetil)piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-1(2H)-ona 244a
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244ú ■¡■■y
A una solución de 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 139a (1,0 g, 3,0 mmol) en metanol (30 ml) se le añadió borohidruro de sodio (380 mg, 9,0 mmol) a 30 °C. La mezcla de reacción se agitó durante otra 1 h y se desactivó con agua (10 ml). A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). El extracto orgánico combinado se secó sobre Na2SO4 anhidro, filtró y se evaporó a presión reducida para dar 244a como un sólido amarillo (920 mg, 92 %). EM-ESI: [M+H]+ 332,3
Ejemplo 244b Acetato de (4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 244b
A una mezcla de 244a (900 mg, 2,7 mmol) y trietilamina (810 mg, 8,1 mmol) en diclorometano (30 ml) se le añadió gota a gota cloruro de acetilo (630 mg, 8,1 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 30 °C durante 1 h. A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano para dar 244b como un sólido blanco (900 mg, 90 %). EM-ESI: [M+H]+ 374,2
Ejemplo 244c Ácido 3-(acetoximetil)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)piridin-4-ilborónico 244c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 244b (900 mg, 2,4 mmol), Pin2B2 (3,05 g, 12 mmol), Pd(dppf)Cl2 (98 mg, 0,12 mmol), X-phos (114 mg, 0,24 mmol), acetato de potasio (720 mg, 7,2 mmol) y dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 4 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó con éter de petróleo/acetato de etilo 5:1 (10 ml) para dar 244c como un sólido amarillo (1,0 g, pureza: 60 %). EM-ESI: [M+H]+ 384,1.
Ejemplo 244d Acetato de (4-(1-metil-5-(5-(1-metilazetidin-3-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3.4.6.7.8.9- hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 244d
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(5-(1-metilazetidin-3-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1 H)-ona 239c (140 mg, 0,40 mmol), 244c (230 mg, 0,60 mmol), Pd(dppf)Cl2 (20 mg, 0,020 mmol), K3PO4 (180 mg, 0,80 mmol), acetato de sodio trihidratado (120 mg, 0,80 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó en cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 244d como un sólido amarillo (90 mg, 43 %). EM-ESI: [M+H]+ 608,3
Ejemplo 244 2-[3-(hidroximetil)-4-[1 -metil-5-[[5-(1-metilazetidin-3-il)-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-3.4.6.7.8.9- hexahidropirido[3,4-b]indolizin-1-ona 244
Una mezcla de 244d (90 mg, 0,15 mmol) e hidróxido de litio (60 mg, 1,5 mmol) en THF//-propanol (5:3, 8 ml) y agua (2 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se diluyó con agua (3 ml). A continuación, se extrajo con acetato de etilo (20 ml X 2). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 244 (25 mg, 30 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 566,4. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,74 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,16 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,87 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,59-7,57 (m, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,85-6,83 (m, 1H), 6,33 (s, 1H), 5,04-5,01 (m, 1H), 4,67-4,65 (m, 1H), 4,44-4,39 (m, 1H), 4,33-4,29 (m, 1H), 3,95-3,91 (m, 1H), 3,86-3,83 (m, 2H), 3,76-3,74 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,62-3,59 (m, 1H), 3,16-3,13 (m, 2H), 3,02-2,95 (m, 2H), 2,84-2,83 (m, 2H), 2,39 (s, 3H), 2,05-2,02 (m, 2H), 1,90-1,87 (m, 2H).
Ejemplo 245a 4-cloro-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 245a
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Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 6,7,8,9-tetrahidropirido[3,4-b]indolizin-1(2H)-ona 112d (1,48 g, 7,9 mmol, 1,0 eq.), 2-bromo-4-cloronicotinaldehído (3,48 g, 15,8 mmol, 2,0 eq.), CuI (1,50 g, 7,9 mmol, 1,0 eq.), 4,7-dimetoxi-1,10-fenantrolina (2,13 g, 7,9 mmol, 1,0 eq.), K2CO3 (2,18 g, 15,8 mmol, 2,0 eq.) y dioxano (50 ml). La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 24 h. Después de que la reacción se completara, la mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:2 para dar 245a (550 mg, 21 %) como un sólido ligeramente amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 328,1.
Ejemplo 245b 4-fluoro-2-(1-metil-5-(5-(4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-6-(1-oxo-5,6,7,8-tetrahidro-1H-pirrolo[3,4-b]indolizin-2(3H)-il)benzaldehído 245b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 245a (140 mg, 0,42 mmol, 1,0 eq.), (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 1911 (308 mg, 0,63 mmol, 1,5 eq.), Pd(dppf)Cl2 (35 mg, 0,042 mmol, 0,1 eq.), acetato de sodio (70 mg, 0,84 mmol, 2,0 eq.), K3PO4 (175 mg, 0,84 mmol, 2,0 eq.), acetonitrilo (20 ml) y agua (1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 245b (100 mg, 36 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 647,4.
Ejemplo 245 (S)-2-(3-(hidroximetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il) piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-2-il)-6,7,8,9-tetrahidropirido[3,4-b]indolizin-1 (2H)-ona 245
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 245b (100 mg, 0,15 mmol, 1,0 eq.), NaBH4 (29 mg, 0,77 mmol, 5,0 eq.) y metanol (10 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 min. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 245 (80 mg, 79%) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 649,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 68,69-8,68 (m, 1H), 8,57 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,85 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,39-7,36 (m, 1H), 7,26-7,24 (m, 2H), 6,69 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,31 (s, 1H), 4,97 (s.a., 1H), 4,58-4,54 (m, 2H), 4,49-4,41 (m, 2H), 4,34-4,27 (m, 2H), 4,09-4,06 (m, 2H), 3,69-3,68 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 3,41-3,39 (m, 1H), 3,12-3,19 (m, 1H), 2,97-2,93 (m, 1H), 2,87 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,56-2,54 (m, 1H), 2,37-2,30 (m, 2H), 2,21-2,16 (m, 1H), 2,03-1,98 (m, 2H), 1,85-1,82 (m, 2H), 0,94 (d, J = 5,5 Hz, 3H).
Ejemplo_____ 246a 4-(5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 246a
Figure imgf000225_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(1-oxo-6,7,8,9-tetrahidropindo[3,4-b]mdoNzm-2(1H)-il)nicotinaldehído 245 a (130 mg, 0,39 mmol, 1,0 eq.), 3-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 218 a (600 mg, 1,75 mmol, 4,0 eq.), Pd(dppf)Cl2 (32 mg, 0,040 mmol, 0,1 eq.), acetato de sodio ( 6 4 mg, 0,78 mmol, 2,0 eq.), K3PO4 (165 mg, 0,78 mmol, 2,0 eq.), acetonitrilo (15 ml) y agua (1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/etanol 50:1 para dar 246 a (38 mg, 19 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 510,3.
Ejemplo_____ 246 2-[4-[5-[(1,5-dimetilpirazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidropirido[3,4-b]indolizin-1-ona 246
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 246 a (38 mg, 0,074 mmol, 1,0 eq.), NaBH4 (29 mg, 0,37 mmol, 5,0 eq.) y metanol (5 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 min. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar el compuesto del título (18 mg, 48 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 512,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,58 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,17 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 6,58-6,57 (m, 2H), 5,74 (s, 1H), 5,41-5,39 (m, 1H), 4,42-4,32 (m, 2H), 4,08 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 2,98 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 2,25 (s, 3H), 2,13-2,09 (m, 2H), 1,97-1,92 (m, 2H).
Ejemplo 247a Acetato de {4-[5-({5-acetil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il}amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-il}metilo 247 a
Figure imgf000225_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 3-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-5-bromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona 209 c (183 mg, 0,50 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-4-il}borónico 230 i (200 mg, 0,50 mmol), pd(dppf)Cl2 (37 mg, 0,05 mmol), K3PO4 (212 mg, 1,0 mmol), acetato de sodio (82 mg, 1,0 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 1 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 50:1 a 20:1) para dar 247 a como un sólido amarillo (100 mg, 31 %). EM-ESI: [M+H]+ 641,2.
Ejemplo 247 3-[4-[5-[(5-acetil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidrobenzotiofeno[2,3-d]piridazin-4-ona 247
Una mezcla de acetato de {4-[5-({5-acetil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il}amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.02’7]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-il}metilo 247 a (100 mg, 0,16 mmol) e hidróxido de litio (96 mg, 4,0 mmol) en /-propanol/THF/agua (2:2:1, 10 ml) se agitó a 35 °C durante 30 min. La mezcla se concentró a presión reducida. Al residuo se le añadió agua (5 ml) y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano tres veces. A continuación, la capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 247 (51 mg, 53 %). EM-ESI: [M+H]+ 599,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de, T=80 °C) ó 8,54-8,51 (m, 1H), 8,38 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,93-7,91 (m, 2H), 7,48 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 6,00 (s, 1H), 4,64-4,62 (m, 2H), 4,39 (s, 2H), 3,98-3,95 (m, 2H), 3,89­ 3,86 (m, 2H), 3,58 (s, 3H), 2,95-2,93 (m, 2H), 2,87-2,84 (m, 2H), 2,08 (s, 3H), 1,89-1,87 (m, 4H).
Ejemplo 248a (R)-(6-aminopiridin-3-il)(3-metilmorfolino)metanona 248 a
A una solución de (R)-3-metilmorfolina (2,02 g, 20 mmol) en etanol (25 ml) se le añadió 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI) (3,33 g, 17,4 mmol), hidroxibenzotriazol (HOBt) (2,35 g, 17,4 mmol) y ácido 6-aminonicotínico (2,0 g, 14,5 mmol). Después de agitar durante 18 h a temperatura ambiente, la reacción suspension se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 3:1 para dar 248 a como un sólido blanco (1,6 g, 36 %). EM-ESI: [M+H]+ 222,3.
Figure imgf000226_0002
hos
Figure imgf000226_0001
no
Figure imgf000226_0003
Ejemplo 248b 6-cloro-2-metil-4-[(5-{[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]carbonil}piridin-2-il)amino]-2,3-dihidropiridazin-3-ona 248 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (50 ml), 248 a (330 mg, 1,5 mmol), 4-bromo-6-cloro-2-metilpiridazin-3(2H)-ona (446 mg, 2,0 mmol), carbonato de cesio (978 mg, 3,0 mmol), Xantphos (88 mg, 0,15 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (68 mg, 0,075 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a reflujo durante 4 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (3 X 30 ml) y el filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (de 2:1 a 1:2) para dar 248 b (430 mg, 79 %) como un sólido amarillo. EM-Es I: [M+H]+ 364,3
Ejemplo 248c Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-{[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]carbonil}piridin-2-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il}piridin-3-il)metilo 248 c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 248 b (364 mg, 1,0 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (596 mg, 1,5 mmol), K3PO4 (424 mg, 2,0 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (73 mg, 0,10 mmol), acetato de sodio (164 mg, 2,0 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2,5 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con diclorometano (50 ml) y agua (50 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (3 * 20 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SÜ4 y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80:1 a 50:1) para dar 248 c (250 mg, 37 %) como un aceite amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 681,3
Ejemplo 248 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(3R)-3-metilmorfolin-4-carbonil]-2-piridil]amino]-6-oxo-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 248
A una solución de 248 c (250 mg, 0,37 mmol) en THF//-propanol/agua (2,5/2/0,5 ml) se le añadió hidróxido de litio (86 mg, 3,6 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 3 h, CLEM indicó que se completó la reacción. A continuación, la mezcla se vertió en agua (20 ml) y se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SÜ4, y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo sólido se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 248 (110 mg, 48 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 639,3. RMN de 1H (500 MHz, MeOD) ó 8,85 (s, 1H), 8,58 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,44 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,79 (dd, J = 2,5, 8,5 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 4,85-4,83 (m, 1H), 4,66-4,64 (m, 1H), 4,42-4,27 (m, 4H), 4,02-3,88 (m, solapamiento, 6H), 3,74-3,67 (m, 2H), 3,56­ 3,46 (m, 2H), 2,67-2,59 (m, 2H), 2,51 (s, 2H), 1,39 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 249a (R)-5-bromo-1-metil-3-(5-(3-metilmorfolin-4-carbonil)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 249 a
Figure imgf000227_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (15 ml), (R)-(6-aminopiridin-3-il) (3-metilmorfolino)metanona 248 a (332 mg, 1,5 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (480 mg, 1,8 mmol) y carbonato de cesio (978 mg, 3,0 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 3 minutos, se añadieron Xantphos (87 mg, 0,15 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (69 mg, 0,075 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a reflujo durante 2,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 50 ml) y el filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (de 2:1 a 1:2) para dar 249 a (430 mg, 70 %) como un sólido amarillo. EM-Es I: [M+H]+ 407,3
Ejemplo 249b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-{[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]carbonil}piridin-2-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 249 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 249 a (407 mg, 1,0 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (800 mg, 2,0 mmol), K3PO4 (424 mg, 2,0 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (73 mg, 0,1 mmol), acetato de sodio (164 mg, 2,0 mmol), acetonitrilo (8 ml) y agua (0,2 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 1,5 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con diclorometano (20 ml) y agua (20 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (20 ml * 3). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 60:1 para dar 249 b (200 mg, 29 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 680,1
Ejemplo 249 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(3R)-3-metilmorfolin-4-carbonil]-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 249
A una solución de 249 b (204 mg, 0,30 mmol) en THF//-propanol/agua (3/3/0,5 ml) se le añadió hidróxido de litio (72 mg, 3 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 3 h, CLEM indicó que se completó la reacción. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (10 ml). A continuación, se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa (A: NH4HCO3 al 1 % en agua, B: acetonitrilo) para dar 249 (85 mg, 44 %) como un sólido blanco. e MESI: [M+H]+ 638,3. RMN de 1H (500 MHz, MeOD) 5 8,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,33 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,69 (dd, J = 2,0, 6,5 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 4,70 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,40-4,27 (m, 4H), 3,99-3,89 (m, 3H), 3,74 (S, 3H), 3,55-3,46 (m, solapamiento, 4H), 2,67-2,59 (m, 2H), 2,51 (s, 2H), 1,39 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 250a 1-(5-(h¡drox¡metil)-3-mtro-1H-p¡razol-1-¡l)propan-2-ol 250 a
Figure imgf000228_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con (3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol (0,57 g, 4,0 mmol), Cs2CO3 (261 mg, 0,8 mmol) y 2-metiloxirano (20 ml). La mezcla se agitó a 30 °C durante 2 días. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con diclorometano (100 ml). La mezcla resultante se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 250 a (0,40 g, 50 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 202,3
Ejemplo 250b 1-(5-(bromomet¡l)-3-n¡tro-1H-p¡razol-1-¡l)propan-2-ol 250 b
A una mezcla de 250 a (4,0 g, 20,0 mmol) en cloroformo (100 ml) enfriada a 0 °C se le añadió la solución de POBr3 (22,9 g, 80 mmol) en cloroformo (20 ml) durante 30 minutos mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de 5 °C. La mezcla de reacción se calentó a 50 °C y se agitó a esta temperatura durante 3 h. A continuación, se enfrió a 0 °C y se desactivó con agua. La capa orgánica se separó y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 250 b (3,3 g, 62 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 264,1
Ejemplo 250c 1-(5-((met¡lam¡no)met¡l)-3-n¡tro-1H-p¡razol-1-¡l)propan-2-ol 250 c
A una solución de 250 b (3,0 g, 11,4 mmol) en diclorometano (30 ml) se le añadió la solución de CH3NH2 (3,0 g, 34,2 mmol, 35 % en agua). Esta mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, la capa orgánica separó, se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 250 c (1,9 g, 78 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 215,3
Ejemplo 250d 5,6-dimetil-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 250 d
A una mezcla de 250 c (1,129 g, 5,27 mmol) y trifenilfosfina (4,14 g, 15,8 mmol) en THF anhidro (40 ml) enfriada a 0 °C se le añadió la solución de azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD) (3,19 g, 15,8 mmol) en THF (15 ml) durante un periodo de 30 minutos mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de 5 °C. La mezcla de reacción se calentó a 30 °C y se agitó a esta temperatura durante 5 h. A continuación, la mezcla se desactivó con agua (50 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 80 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80:1 a 30:1) para dar 250 d (0,83 g, 80 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 197,2
Ejemplo 250e 5,6-d¡met¡l-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-am¡na 250 e
A una solución de 250 d (550 mg, 2,8 mmol) en metanol (20 ml) se le añadió Ni Raney (aproximadamente 600 mg). La reacción se cargó con gas hidrógeno (por medio de un globo) y se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. A continuación, se filtró a través de un tapón de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 250 e como un sólido amarillo (400 mg, 86 %), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 167,3
Ejemplo 250f Acetato de (4-(5-(5,6-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metilo 250 f
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con acetato de (4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 217 a (525 mg, 1,0 mmol), 250 e (166 mg, 1,0 mmol), carbonato de cesio (652 mg, 2,0 mmol) y 1,4-dioxano (10 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 30 minutos, se añadieron xantphos (116 mg, 0,20 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (92 mg, 0,10 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a reflujo durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 30 ml) y el filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80:1 a 30:1) para dar 250 f (80 mg, 13 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 611,4
Ejemplo_____250 2-[4-[5-[(5,6-dimetil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 250
A una solución de 250 f (75 mg, 0,123 mmol) en THF//-propanol/agua (4/2/2 ml) se le añadió hidróxido de litio (15 mg, 0,62 mmol). La mezcla se agitó a 30 °C durante 1 h. Después de que la reacción se completara, la mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 250 como un sólido blanco (40 mg, 57 %). EM-ESI: [M+H]+ 569,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,96 (s.a., 1H), 7,73 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,36 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 5,71 (s, 1H), 5,03 (t, J = 3,5 Hz, 1H), 4,65-4,62 (m, 1H), 4,52-4,50 (m, 1H), 4,35-4,33 (m, 1H), 4,17-4,05 (m, 3H), 3,91-3,88 (m, 2H), 3,73-3,71 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,55-3,52 (m, 1H), 2,90-2,87 (m, 1H), 2,64-2,58 (m, 4H), 2,43 (s, 3H), 1,93-1,90 (m, 2H), 1,81-1,80 (m, 2H), 1,24 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 252a 5-bromo-3-(1-etil-5-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 252 a
Figure imgf000229_0001
Un matraz de fondo redondo de 100 ml se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino)piridin-2(1H)-ona 115 a (800 mg, 2,83 mmol), bromoetano (216 mg, 1,98 mmol), K2CO3 (780 mg, 5,66 mmol) y DMF (20 ml). La mezcla se calentó a 85 °C durante la noche. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:20 para dar 252 a como un sólido rojo (298 mg, 37%). EM-ESI: [M+H]+ 311,0. RMN de 1H (500 MHz DMSO-de) ó 8,28 (s, 1H), 7,99 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,85 (s, 1H), 3,98-3,94 (m, 2H), 3,48 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,27 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
Ejemplo 252b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{5-[(1-etil-5-metil-1H-pirazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 252 b
Un matraz de fondo redondo equipado con un condensador de reflujo se cargó con 252 a (200 mg, 0,64 mmol), ácido (3-(acetoximetil)-2-(7,7-dimetil-1-oxo-3,4,7,8-tetrahidro-1H-cidopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-4-il)borónico 199 e (309 mg, 0,64 mmol), PdCh(dppf) (52,5 mg, 0,060 mmol), K3PO4 (333 mg, 1,29 mmol), acetato de sodio (105 mg, 1,29 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:20 para dar 252 b como un sólido amarillo (120 mg, 27,6 %). EM-ESI: [M+H]+ 584,3
Ejemplo 252 3-[4-[5-[(1-etil-5-metil-pirazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 252
Una mezcla de 252 b (120 mg, 0,21 mmol) e hidróxido de litio (23 mg, 0,82 mmol) en THF (6 ml), /-propanol (4 ml) y agua (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (5 ml). La mezcla resultante se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 252 (52 mg, 47 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 542,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-cfó) ó 9,06 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,09 (s,1H), 8,07 (s, 1 H), 7,41 (s, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,88 (s, 1H), 4,97 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 4,50-4,41 (s, 2H), 4,24-4,19 (s, 3H), 3,93-3,85 (m, 3H), 3,59 (s, 3 H), 2,62-2,57 (m, 2H), 2,43 (s, 2H), 2,19 (s, 3 H), 1,27-1,23 (m, solapamiento, 9 H).
Ejemplo 253a 4-bromo-6-cloro-2-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)piridazin-3(2H)-ona 253 a
Figure imgf000230_0002
Figure imgf000230_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 500 ml equipado con un agitador magnético se purgó con nitrógeno y se cargó con DMF anhidra (150 ml) y 4-bromo-6-cloro-piridazin-3(2H)-ona (10,0 g, 47,8 mmol). La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se añadió hidruro de sodio. La reacción se agitó a 0 °C durante 20 min. Después de este tiempo, se añadió cloruro de 2-(trimetilsilil)etoximetilo (11,9 g, 71,6 mmol) y el baño de enfriamiento se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. A continuación, la reacción se desactivó con bicarbonato de sodio acuoso saturado (30 ml). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 * 300 ml). Los extractos se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida para dar 253 a en un rendimiento de un 56 % (9,00 g) como un aceite amarillo: RMN de 1H (300 MHz, CDCla) ó 8,02 (s, 1H), 5,42 (s, 2H), 3,79 (t, 2H, J = 5,4 Hz), 0,96 (t, 2H, J = 5,4 Hz), 0,01 (s, 9H).
Ejemplo 253b (S)-4-(6-(6-cloro-3-oxo-2-((2-(trimetilsilil)etoxi)-metil)-2,3-dihidropiridazin-4-ilamino)piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de tere-butilo 253 b
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con (S)-4-(6-aminopiridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de tere-butilo 191 f (580 mg, 2,0 mmol), 253 a (1,36 g, 4,0 mmol), Pd2(dba)3 (180 mg, 0,20 mmol), Xantphos (230 mg, 0,40 mmol), Cs2CO3 (1,3 g, 4,0 mmol) y dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 4:1 para dar 253 b (1,0 g, 91 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 551,2
Ejemplo 253c (S)-6-cloro-4-(5-(2-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridazin-3(2H)-ona 253 c
Un matraz de fondo redondo de 50 ml se cargó con 253 b (551 mg, 1,0 mmol), HCl concentrado (2 ml) y metanol (10 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. A continuación, se concentró a presión reducida para dar 253 c , que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 321,1
Ejemplo 253d (S)-6-cloro-4-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridazin-3(2H)-ona 253 d
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 253 c (321 mg, 1,0 mmol), 3-oxetanona (142 mg, 2,0 mmol), NaBHaCN (125 mg, 2,0 mmol), ZnCb (272 mg, 2,0 mmol) y metanol (10 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche y se concentró a presión reducida. Se añadió agua (20 ml) al residuo y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo para dar 253 d (210 mg, 56 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 377,3.
Ejemplo 253e Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il]piridin-3-il)metilo 253 e
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 253 d (172 mg, 0,46 mmol), ácido (3-(acetoximetil)-2-(7,7-dimetil-1-oxo-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ddopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazm-2(6H)-il)piridin-4-il)borónico 199 e (0,91 g, 2,29 mmol), Pd(dppf)Cl2 (36 mg, 0,050 mmol), K3PO4 (195 mg, 0,92 mmol), acetato de sodio (75 mg, 0,050 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol 20:1 para dar el 253 e (100 mg, 31 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 694,3.
Ejemplo 253 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-6-oxo-1H-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pimdo[3,5-b]pirazm-4-ona 253
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 253 e (92 mg, 0,13 mmol), hidróxido de litio (16 mg, 0,65 mmol), THF (2 ml), /-propanol (2 ml) y agua (0,5 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, se concentró a presión reducida. Se añadió agua (10 ml) al residuo y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 253 (22 mg, 26 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 652,2. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 610,83 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 8,58 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,12 (s, 1H), 8,05 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 3,0 Hz, 5,5 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 6,84 (s, 1H), 4,74-4,68 (m, 3H), 4,65-4,58 (m, 3H), 4,26-4,14 (m, 2H), 3,99-3,96 (m, 1H), 3,71-3,69 (m, 1H), 3,55-3,53 (m, 1H), 3,18-3,14 (m, 2H), 2,64-2,59 (m, 3H), 2,53-2,47 (m, 4H), 2,40-2,33 (m, 2H), 1,29 (s, 6H), 1,09 (d, J = 7,0 Hz, 3H).
Ejemplo 254a 4-[5-({5-Acetil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il}amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 254 a
Figure imgf000231_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 3-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-il-amino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 209 d (344 mg, 0,83 mmol), 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 109 a (202 mg, 0,56 mmol), Pd(dppf)Cl2 (20 mg, 0,028 mmol), K3PO4 (235 mg, 1,11 mmol), acetato de sodio (91 mg, 1,11 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 1 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 254 a (400 mg, bruto), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 612,3
Ejemplo 254 3-[4-[5-[(5-acetil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]tieno[1,3-c]piridin-4-ona 254
A una solución de 254 a (98 mg, 0,16 mmol) en metanol y diclorometano se le añadió NaBH4 (13 mg, 0,33 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla se desactivó con solución acuosa de NH4Cl (5 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). El extracto combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 254 (53 mg, 54 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 613,9. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de, T=80 °C) 68,45 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,93-7,92 (m, 2H), 7,33 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,97 (s, 1H), 4,67-4,63 (m, 3H), 4,46-4,45 (m, 2H), 3,97-3,93 (m, 2H), 3,89-3,86 (m, 3H), 3,56 (s, 3H), 2,97-2,91 (m, 2H), 2,53-2,55 (m, 2H), 2,49-2,46 (m, 2H), 2,08 (s, 3H), 1,21 (s, 6H).
Ejemplo 255a 4-(5-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5—a]pirazin-2-ilamino)-1 -metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 255 a
Figure imgf000232_0001
Siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 246 y partiendo de 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 134 c (200 mg, 0,575 mmol) y 3-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5—a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 209 d (356 mg, 0,863 mmol), se obtuvo 255 a como un aceite rojo (320 mg, 93 %). EM-ESI: [M+H]+ 599,3
Ejemplo 255 2-[4-[5-[(5-acetil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5—a]pirazin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-10-fluoro-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-1-ona 255
Siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 254 y partiendo de 255 a (200 mg, 0,334 mmol), se obtuvo 255 como un sólido blanco (55,5 mg, 28 %). EM-ESI: [M+H]+ 601,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de, T=80 °C) ó 8,45 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 7,33 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,97 (s, 1H), 4,70-4,63 (m, 3H), 4,46 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,10-3,86 (m, solapamiento, 8H), 3,58 (s, 3H), 2,57-2,55 (m, 2H), 2,43-2,39 (m, 2H), 2,08 (s, 3H), 1,79-1,67 (m, 4H).
Ejemplo 256a (S)-(6-aminopiridin-3-il)(3-metilmorfolino)metanona 256 a
Figure imgf000232_0002
A una solución de (S)-3-metilmorfolina (1,5 g, 15,0 mmol) en etanol (20 ml) se le añadió EDCI (3,33 g, 17,4 mmol), HOBt (2,35 g, 17,4 mmol) y ácido 6-aminonicotínico (2,07 g, 15,0 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 18 h, la suspensión resultante se filtró. El sólido se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 2:1 directamente con acetato de etilo para dar 256 a (1,0 g, 30 %) como un sólido blanco. EM-ESI: 222,3 (M+H)+.
Ejemplo 256b (S)-5-bromo-1-metil-3-(5-(3-metilmorfolin-4-carbonil-piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 256 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (10 ml), 256 a (111 mg, 0,50 mmol), 4-bromo-6-cloro-2-metilpiridazin-3(2H)-ona (134 mg, 0,60 mmol), carbonato de cesio (326 mg, 1,0 mmol), Xantphos (29 mg, 0,05 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (23 mg, 0,025 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 100 °C durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (3 X 30 ml) y el filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (de 2:1 a 1:2) para dar 256 b (140 mg, 77 %) como un sólido amarillo. EM-Es I: [M+H]+ 364,3
Ejemplo 256c Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-{[(3S)-3-metilmorfolin-4-il]carbonil}piridin-2-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il}piridin-3-il)metilo 256 c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 256 b (140 mg, 0,38 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (159 mg, 0,40 mmol), K3PO4 (85 mg, 0,40 mmol), acetato de sodio (33 mg, 0,40 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (15 mg, 0,020 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 100 °C durante 2,5 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con diclorometano (30 ml) y agua (30 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (3 x 20 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 60:1 para dar 256 c (90 mg, 35 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 681,3
Ejemplo 256 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(3S)-3-metilmorfolin-4-carbonil]-2-piridil]amino]-6-oxo-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 256
A una solución de 256 c (90 mg, 0,13 mmol) en THF//-propanol/agua (2,0/1/0,5 ml) se le añadió hidróxido de litio (31 mg, 1,3 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 3 h, CLEM indicó que se completó la reacción. A continuación, la mezcla se vertió en agua (15 ml) y se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 256 (40 mg, 48 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 639,3. RMN de 1H (500 MHz, MeOD) ó 8,86 (s, 1H), 8,58 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,44 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,79 (dd, J = 2,0, 6,5 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 4,85­ 4,82 (m, 1H), 4,66-4,64 (m, 1H), 4,42-4,27 (m, 4H), 4,02-3,88 (m, solapamiento, 6H), 3,74-3,67 (m, 2H), 3,56-3,46 (m, 2H), 2,67-2,59 (m, 2H), 2,51 (s, 2H), 1,39 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 257a (S)-5-bromo-1-metil-3-(5-(3-metilmorfolin-4-carbonil)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 257 a
Figure imgf000233_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con (S)-(6-aminopiridin-3-il)(3-metilmorfolino)metanona (222 mg, 1,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (320 mg, 1,2 mmol), carbonato de cesio (652 mg, 2 mmol) y 1,4-dioxano (10 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 10 minutos, se añadieron Xantphos (58 mg, 0,10 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (46 mg, 0,050 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a reflujo durante 2,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 30 ml) y el filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (de 2:1 a 1:2) para dar 257 a (280 mg, 69 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 407,3
Ejemplo 257b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-{[(3S)-3-metilmorfolin-4-il]carbonil}piridin-2-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 257 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 257 a (203 mg, 0,50 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (640 mg, 1,6 mmol), K3PO4 (212 mg, 1,0 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (18 mg, 0,025 mmol), acetato de sodio (82 mg, 1,0 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,2 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2,5 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con diclorometano (20 ml) y agua (20 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 60:1 para dar 257 b (160 mg, 47 %) como un sólido negro. EM-ESI: [M+H]+ 680,1
Ejemplo 257 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(3S)-3-metilmorfolin-4-carbonil]-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 257
A una solución de 257 b (157 mg, 0,23 mmol) en THF//-propanol/agua (2/2/0,5 ml) se le añadió hidróxido de litio (55 mg, 2,3 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 3 h, CLEM indicó que se completó la reacción. La mezcla se vertió en agua (15 ml) y se extrajo con diclorometano (3 X 15 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo sólido se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa (A: NH4HCO3 al 1 % en agua; B: acetonitrilo) para dar 257 (52 mg, 35 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 668,3. RMN de 1H (500 MHz, MeOD) ó 8,94 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,33 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,69 (dd, J = 2,0, 6,5 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 4,70 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,41-4,27 (m, 4H), 3,99-3,89 (m, 3H), 3,74-3,66 (m, solapamiento, 5H), 3,55-3,46 (m, 2H), 2,67-2,59 (m, 2H), 2,51 (s, 2H), 1,39 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 258a 6-cloro-2-metil-4-({5-[(morfolin-4-il)carbonil]piridin-2-il}amino)-2,3-dihidropiridazin-3-ona 258 a
Figure imgf000234_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (40 ml), (6-aminopiridin-3-il)(morfolino)-metanona (2,07 g, 10,0 mmol), 4-bromo-6-cloro-2-metilpiridazin-3(2H)-ona 111 a (3,35 g, 15,0 mmol), Pd2(dba)3 (915 mg, 1,0 mmol), XantPhos (578 mg, 1,0 mmol) y carbonato de cesio (6,52 g, 20 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 8 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 20 ml). El filtrado combinado se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida para dar 258 a (2,45 g, 51 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 350,1
Ejemplo 258b Ácido 1 -metil-5-(5-(morfolin-4-carbonil)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-ilborónico 258 b
Figure imgf000234_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 258 a (2,0 g, 5,73 mmol, 1,0 eq.), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (7,56 g, 28,6 mmol, 5,0 cq), Pd(dppf)Cl2 (465 mg, 0,57 mmol, 0,1 eq.), X-Phos (461 mg, 1,14 mmol, 0,2 eq.), acetato de potasio (1,11 g, 11,4 mmol, 2,0 eq.) y dioxano (50 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 50 °C durante 6 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó con acetato de etilo/éter de petróleo 1:3 para dar 258 b (1,70 g, 83 %) como un sólido amarillo, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM: [M+H]+ 360,1
Ejemplo 258c 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 258 c
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-carbaldehído 124 a (100 mg, 0,29 mmol), 258 b (128 mg, 0,36 mmol), PdCh(dppf) (24 mg, 0,031 mmol), K3PO4 (123 mg, 0,58 mmol), acetato de sodio (57 mg, 0,58 mmol), acetonitrilo (30 ml) y agua (3 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó con cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con petróleo/acetato de etilo 1:3 para dar 258 c como un sólido amarillo (45 mg, 25 %). EM-ESI: [M+H]+ 625,2
Ejemplo 258 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-(morfolin-4-carbonil)-2-piridil]amino]-6-oxo-piridazin-3-il]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidrobcnzotiofeno[2,3-d]piridazin-4-ona 258
Una mezcla de 258 c (45 mg, 0,071 mmol), NaBH4 (8 mg, 0,21 mmol) y metanol (7 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (5 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml) y el extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 258 (24 mg, 53 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 627,2. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-cfó) ó 9,80 (s, 1H), 8 , 68 (s, 1H), 8,65 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,39 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,80-7,78 (m, 1H), 7,67 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,85 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,52-4,35 (m, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,60-3,49 (m, 8 H), 2,95-2,93 (m, 2H), 2,89-2,84 (m, 2H), 1,94-1,83 (m, 4H).
Ejemplo 259a 2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.02 ,6]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(morfolin-4-il)carbonil]piridin-2-il}amino)-6-oxopiridazin-3-il]piridin-3-carbaldehído 259 a
Figure imgf000235_0001
Un matraz de fondo redondo equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 109 a (144 mg, 0,40 mmol), ácido 1-metil-5-(5-(morfolin-4-carbonil)piridin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-ilborónico 258 a (215 mg, 0,60 mmol), PdCh(dppf) (16 mg, 0,020 mmol), K3PO4 trihidratado (207 mg, 0,80 mmol), acetato de sodio ( 66 mg, 0,80 mmol), acetonitrilo (15 ml) y agua (1,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó con cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 259 a como un sólido amarillo (80 mg, 30 %). EM-ESI: [M+H]+ 640,3.
Ejemplo 259 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-(morfolin-4-carbonil)-2-piridil]amino]-6-oxo-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]tieno[1,3-c]pindin-4-ona 259
Una mezcla de 259 a (80 mg, 0,12 mmol), NaBH4 (14 mg, 0,36 mmol) y metanol (5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, se desactivó con salmuera (5 ml) y se evaporó a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 x 10 ml) y el extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 259 como un sólido blanco (38 mg, 49 %). EM-ESI: [M+H]+ 642,8. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,78 (s, 1H), 8,61 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,44 (d, J = 2,5 Hz, 2H), 7,80-7,77 (m, 1H), 7,45 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,06-7,04 (m, 1H), 4,65-4,59 (m, 2H), 4,42 (s, 1H), 4,30-4,27 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,90-3,87 (m, 1H), 3,76-3,68 (m, 8 H), 3,04-2,92 (m, 2H), 2,82-2,80 (m, 2H), 2,59-2,54 (m, 2H), 1,30 (s, 6 H).
Ejemplo 260a Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-metil-1 H-pirazol-3-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 260 a
Figure imgf000235_0002
Un matraz de fondo redondo equipado con un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino)piridin-2(1H)-ona 218 a (201 mg, 0,71 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e ( 2 82 mg, 0,71 mmol), Pd(dppf)Cl2 (51 mg, 0,07 mmol), K3PO4 (301 mg, 1,42 mmol), acetato de sodio (116 mg, 1,42 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,2 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con metanol/diclorometano 1:20 para dar 260 a como un sólido rojo (150 mg, 38%). EM-ESI: [M+H]+ 556,3
Ejemplo 260 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-1H-pirazol-3-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 260
Una mezcla de 260a (150 mg, 0,27 mmol) e hidróxido de litio (13 mg, 0,54 mmol) en THF (6 ml), /-propanol (4 ml) y agua (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (5 ml). A continuación, se extrajo con diclorometano (2 x 10 ml) y el extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 260 (28 mg, 20 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 514,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 611,76 (s, 1 H), 8,47 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 8,07-8,05 (m, 2 H), 7,38-7,31 (m, 2 H), 6,55 (s, 1 H), 5,88 (s, 1 H), 4,95-4,93 (m, 1 H), 4,48-4,39 (m, 2 H), 4,22-4,18 (m, 3 H), 3,83 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 3,58 (s, 3 H), 2,64-2,56 (m, 2 H), 2,36-2,34 (m, 2 H), 2,16 (s, 3 H), 1,22 (s, 6 H).
Ejemplo 261a 4-{5-[(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-piridin-3-il}-2-{10-fluoro-1-oxo-1H,2H,3H,4H,6H,7H,8H,9H-pirido[3,4-b]indolizin-2-il}piridin-3-carbaldehído 261a
Figure imgf000236_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 134c (97 mg, 0,28 mmol), 3-[(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)amino]-1-metil-5-(tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-2-ona 218a (192,6 mg, 0,56 mmol), Pd2(dba)3 (54,9 mg, 0,060 mmol), tri(ciclohexil)fosfina (50,2 mg, 0,18 mmol), Cs2CO3 (182,6 mg, 0,56 mmol), dioxano (8 ml) y agua (0,25 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se agitó a 110 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol 35:1 para dar 261a (90 mg, 61 %) como un sólido negro. EM-ESI: [M+H]+ 530,2
Ejemplo 261 2-[4-[5-[(1,5-dimetilpirazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-10-fluoro-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-1-ona 261
A una solución de 261a (90,0 mg, 0,17 mmol) en metanol (5 ml) se le añadió borohidruro de sodio (64,6 mg, 1,7 mmol) a temperatura ambiente. La reacción se agitó durante 0,5 h. A continuación, se desactivó con agua (2 ml) y se evaporó a vacío. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 261 (47,0 mg, 52 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 532,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 68,47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,03 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,87-4,85 (m, 1H), 4,45-4,36 (m, 2H), 4,11-4,09 (m, 1H), 3,93-3,91 (m, 1H), 3,79-3,76 (m, 2H), 3,59 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,00-2,94 (m, 2H), 2,66-2,63 (m, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,90-1,88 (m, 2H), 1,78-1,73 (m, 2H)
Ejemplo 262a 5-bromo-1-metil-3-(5-metiloxazol-2-ilamino)piridin-2(1 H)-ona 262a
Figure imgf000236_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-metiloxazol-2-amina (276 mg, 2,82 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (753 mg, 2,82 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (256 mg, 0,28 mmol), XantPhos (324 mg, 0,56 mmol), Cs2CO3 (1,8 g, 5,64 mmol) y 1,4-dioxano (30 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 92 °C durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 100:1 para dar 262 a como un sólido blanco (702 mg, 88 %). EM-ESI: [M+H]+ 284,1.
Ejemplo 262b Acetato de (2-{4,4-d¡met¡l-9-oxo-1,10-d¡azatr¡ciclo[6.4.0.02’6]dodeca-2(6),7-d¡en-10-¡l}-4-{1-met¡l-5-[(5-metil-1,3-oxazol-2-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 262 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 262 a (150 mg, 0,53 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (421 mg, 1,06 mmol), Pd(dppf)Cl2 (37 mg, 0,050 mmol), K3PO4 (225 mg, 1,06 mmol), acetato de sodio (87 mg, 1,06 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 1 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 50:1 a 30:1) para dar 262 b como un sólido amarillo (100 mg, 34 %). EM-ESI: [M+H]+ 556,9.
Ejemplo 262 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metiloxazol-2-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 262
Una mezcla de 262 b (100 mg, 0,18 mmol) e hidróxido de litio (108 mg, 4,5 mmol) en /-propanol/THF/agua (4/4/2 ml) se agitó a 35 °C durante 30 min. La mezcla se concentró a presión reducida. Al residuo se le añadió agua (5 ml) y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano tres veces. La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 262 como un sólido blanco (21,0 mg, 23 %). EM-ESI: [M+H]+ 515,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 9,19 (s, 1H), 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,30 (s, 1H), 7,60 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,96-4,94 (m, 1H), 4,45-4,36 (m, 2H), 4,24-4,14 (m, 3H), 3,84 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 2,62-2,56 (m, 2H), 2,44-2,42 (m, 2H), 2,22 (s, 3H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 263a 6-cloro-2-metil-4-(pirimidin-4-ilamino)piridazin-3(2H)-ona 263 a
Figure imgf000237_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (150 ml), pirimidin-4-amina (1,7 g, 18,0 mmol), 4-bromo-6-cloro-2-metilpiridazin-3(2H)-ona (4,0 g, 18,0 mmol) y carbonato de cesio (11,74 g, 36,0 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 30 minutos, se añadieron Xantphos (1,04 g, 1,8 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (823 mg, 0,9 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a reflujo durante 15 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 50 ml). El filtrado combinado se concentró y el residuo se lavó con acetonitrilo (5 ml) para dar 263 a (2,99 g, 70 %) como un sólido amarillo. EM: [M+H]+ 238
Ejemplo 263b Ácido 1 -metil-6-oxo-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidropiridazin-3-il-borónico 263 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 263 a (500 mg, 2,11 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (2,68 g, 10,6 mmol), Pd(dppf)Cl2 (170 mg, 0,20 mmol), X-phos (170 mg, 0,40 mmol), acetato de potasio (410 mg, 4,21 mmol) y dioxano (30 ml). El sistema se sometió a 3 ciclos de descarga de vacío/argón y se agitó a 50 °C durante 6 h. La CLEM indicó que 263 a se convirtió totalmente en 263 b .
Ejemplo 263c 2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)-4-(1-metil-6-oxo-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidropiridazin-3-il)nicotinaldehído 263 c
A la mezcla de 263 b a temperatura ambiente se le añadió 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 134 c (300 mg, 0,90 mmol), Pd(dppf)Cl2 (170 mg, 0,20 mmol), K3PO4 (103 mg, 0,40 mmol) y agua (2 ml). El sistema se sometió a 3 ciclos de descarga de vacío/argón de nuevo y se agitó a 80 °C durante 4 h. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua (30 ml) y se filtró. El filtrado se extrajo con diclorometano (2 x 30 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 40:1 a 20:1) para dar 263 c como un sólido amarillo (210 mg, 45 %). EM-ESI: [M+H]+ 515,3
Ejemplo 263 10-fluoro-2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-6-oxo-5-(pirimidin-4-ilamino)piridazin-3-il]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 263
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 263 c (100 mg, 0,19 mmol), NaBH4 (30 mg, 0,78 mmol) y metanol (20 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. A continuación, se diluyó con agua (30 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 X 30 ml) y el extracto de diclorometano combinado se secó y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 263 como un sólido blanco (67 mg, 68 %). EM-ESI: [M+H]+ 517,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 9,93 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,55 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,56 (dd, J = 1,0, 6,0 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 4,83 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,62-4,58 (m, 1H), 4,39­ 4,36 (m, 1H), 4,25-4,19 (m, 2H), 4,06-4,04 (m, 1H), 3,92-3,90 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 2,64-2,54 (m, 2H), 2,43-2,41 (m, 2H), 1,781,76 (m, 2H), 1,69-1,67 (m, 2H).
Ejemplo 264a 2-(4-aminopirimidin-2-il)propan-2-ol 264 a
Figure imgf000238_0001
A una solución de 4-aminopirimidin-2-carboxilato de etilo (840 mg, 5,0 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (50 ml) enfriada a -20 °C se le añadió una solución de bromuro de metilmagnesio en THF (8,5 ml, 25,0 mmol, 3,0 M) durante un periodo de 5 minutos. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante otras 2 h. A continuación, se desactivó con NH4Cl saturado (20 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con acetato de etilo (5 X 40 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Mg2SO4 anhidro, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante Combiflash de fase inversa para dar 264 a como un sólido amarillo (240 mg, 32 %) EM-ESI: [M+H]+ 154,1
Ejemplo 264b 5-bromo-3-(2-(2-hidroxipropan-2-il)pirimidin-4-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 264 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 264 a (300 mg, 2,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (800 mg, 3,0 mmol), Pd2(dba)3 (182 mg, 0,20 mmol), XantPhos (231 mg, 0,40 mmol), Cs2CO3 (1,30 g, 4,0 mmol) y 1,4-dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 15 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 (40:1) y se purificó adicionalmente mediante Combiflash de fase inversa para dar 264 b como un sólido blanco (200 mg, 30 %). EM-ESI:
[M+H]+ 339,0
Ejemplo 264c Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.02,6]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(5-{[2-(2-hidroxipropan-2-il)pirimidin-4-il]amino}-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-piridin-3-il)piridin-3-il)metilo 264 c
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 264 b (170 mg, 0,50 mmol), ácido (3-(acetoximetil)-2-(7,7-dimetil-1-oxo-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ddopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-4-il)borónico 199 e (200 mg, 0,50 mmol), Pd(dppf)Cl2 (40 mg, 0,050 mmol), K3PO4 (212 mg, 1,0 mmol), agua (0,5 ml) y tetrahidrofurano (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 6 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 264 c como un sólido marrón (200 mg, 54 %). EM-ESI: [M+H]+ 612,3
Ejemplo 264 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[[2-(1-hidroxi-1-metil-etil)pirimidin-4-il]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 264
A una solución de 264 c (170 mg, 0,27 mmol) en tetrahidrofurano (10 ml) y agua (2 ml) se le añadió hidróxido de litio (64 mg, 3,0 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 35 °C durante 2 h. A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 264 (86 mg, 46 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 570,1. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 9,27 (s, 1H), 8,94 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,33 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,14 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,89 (s, 1H), 4,48-4,42 (m, 2H), 4,23-4,19 (m, solapamiento, 3H), 3,85-3,84 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,67-2,56 (m, 2H), 2,42 (s, 2H), 1,42 (s, 3H), 1,40 (s, 3H), 1,21 (s, solapamiento, 6H).
Ejemplo 265a 1-(2-nitro-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-5(4H)-il)propan-1-ona 265 a
Figure imgf000239_0001
2653 265 b
Figure imgf000239_0002
265c 265d
A una solución de 2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 209 a (200 mg, 1,19 mmol) en diclorometano (8 ml) se le añadió Et3N (240 mg, 2,38 mmol). Después de agitar durante 5 minutos, se añadió una solución de cloruro de propionilo (121 mg, 1,31 mmol) en diclorometano (2 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 265 a (260 mg, 98 %) como un sólido blanco, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 225,0
Ejemplo 265b 1-(2-amino-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-5(4H)-il)propan-1-ona 265 b
A una solución de 265 a (260 mg, 1,16 mmol) en metanol (10 ml) se le añadió Pd al 10 %/C (26 mg). El sistema se evacuó y, a continuación, se rellenó con H2. Después de agitar durante 2 h, el análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 265 b como un sólido amarillo (225 mg, 99 %). EM-ESI: [M+H]+ 195,1
Ejemplo 265c 5-bromo-1-metil-3-(5-propionil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 265 c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 265 b (200 mg, 1,03 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (414 mg, 1,55 mmol), Pd2(dba)3 (47 mg, 0,052 mmol), Xantphos (60 mg, 0,103 mmol), Cs2CO3 (671,6 mg, 2,06 mmol) y dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 3 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 80:1 para dar 265 c (280 mg, 72 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 380,2
Ejemplo 265d Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-6-oxo-5-({5-propanoil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5—a]pirazin-2-il}amino)-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-il)metilo 265 d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 265 c (200 mg, 0,53 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (834 mg, 2,10 mmol), Pd(dppf)Cl2 (19 mg, 0,0263 mmol), K3PO4 (223 mg, 1,052 mmol), acetato de sodio (86 mg, 1,052 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (5 gotas). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 3 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 60:1 para dar 265 d (100 mg, 29 %) como un aceite amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 653,3
Ejemplo 265 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-6-oxo-5-[(5-propanoil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino]-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5—b]pirazin-4-ona 265
A una solución de 265 d (100 mg, 0,153 mmol) en THF (3 ml), /-propanol (3 ml) y agua (5 ml) se le añadió hidróxido de litio (37 mg, 1,53 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 265 (50 mg, 54 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 611,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de, T=80 °C) ó 8,45 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,93-7,90 (m, 2H), 7,35 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 5,98 (s, 1H), 4,74-4,71 (m, 1H), 4,65 (s, 2H), 4,46-4,44 (m, 2H), 4,18-4,16 (m, 2H), 3,97-3,87 (m, solapamiento, 5H), 3,58 (s, 3H), 2,57-2,56 (m, 2H), 2,49-2,37 (m, 4H), 1,22 (s, 6H), 1,03 (t, J = 12,0 Hz, 3H).
Ejemplo 266a 5-bromo-1-metil-3-((5-(oxetan-3-il)-1H-pirazol-3-il)amino)piridin-2(1 H)-ona 266 a
Figure imgf000240_0001
Siguiendo el esquema de reacción de la figura 26, se preparó 266 a .
Ejemplo 266b Acetato de (2'-(7,7-dimetil-1-oxo-3,4,7,8-tetrahidro-1H-cidopenta[4,5]pirrolo[1,2—a]pirazin-2(6H)-il)-1-metil-5-((5-(oxetan-3-il)-1H-pirazol-3-il)amino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4'-bipiridin]-3'-il)metilo 266 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 266 a (33 mg, 0,10 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (60 mg, 0,15 mmol), Pd(dppf)Cl2 (7 mg, 0,010 mmol), K3PO4 (42 mg, 0,20 mmol), acetato de sodio (16 mg, 0,20 mmol), acetonitrilo (6 ml), agua (0,1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 266 b como un sólido blanco (17 mg, 28 %). EM-ESI: [M+H]+ 598,4
Ejemplo 266 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-(oxetan-3-il)-1H-pirazol-3-il]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pimdo[3,5-b]pirazin-4-ona 266
Una mezcla de 266 b (15 mg, 0,025 mmol) e hidróxido de litio (6 mg, 0,25 mmol) en /-propanol/THF (1:1, 4 ml) y agua (1 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (5 ml). A continuación, se extrajo con acetato de etilo (2 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 266 (4,5 mg, 33 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 556,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,07-5,04 (m, 2H), 4,79-4,76 (m, 2H), 4,68-4,66 (m, 1H), 4,54-4,51 (m, 1H), 4,37-4,34 (m, 1H), 4,28-4,25 (m, 1H), 4,18 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,89-3,87 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 2,59-2,57 (m, 2H), 2,54-2,52 (m, 3H), 1,29 (s, 6H).
Ejemplo 267a 5-bromo-1-metil-3-(5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 267 a
Figure imgf000241_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-amina (1,15 g, 10,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (4,00 g, 15,0 mmol), Pd2(dba)3 (916 mg, 1,0 mmol), Xantphos (1,16 g, 2,0 mmol), Cs2CÜ3 (6,52 g, 20,0 mmol) y dioxano (50 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 20:1 para dar 267 a (2,2 g, 73 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 301,2
Ejemplo 267b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 267 b
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 267 a (150 mg, 0,50 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (640 mg, 1,5 mmol), PdCh(dppf) (37 mg, 0,050 mmol), K3PO4 (212 mg, 1,0 mmol), acetato de sodio (82 mg, 1,0 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,2 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 267 b (80 mg, 28 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 574,2
Ejemplo 267 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 267
Un matraz de fondo redondo de 25 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 267 b (80 mg, 0,14 mmol), hidróxido de litio (17 mg, 0,70 mmol), THF (2 ml), /-propanol (2 ml) y agua (0,5 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (5 ml), se extrajo con diclorometano (10 ml x 3) y la capa orgánica combinada se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 267 (32 mg, 43 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 532,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 610,19 (s, 1H), 8,57 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,92 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,45-4,37 (m, 2H), 4,22-4,17 (m, 3H), 3,85-3,80 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 2,58-2,56 (m, 2H), 2,52 (s, 3H), 2,42 (s, 2H), 1,17 (s, 6H).
Ejemplo 268a 1-metil-4-nitro-1H-imidazol 268 a
Figure imgf000242_0001
2 G 3 d
A una mezcla de 4-nitro-1H-imidazol (2,0 g, 17,7 mmol) y K2CO3 (3,67 g, 26,5 mmol) en acetonitrilo (20 ml) se le añadió gota a gota yodometano (1,3 ml, 3,0 g, 21,2 mmol) mientras se agitaba a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó a 60 °C durante la noche. A continuación, se evaporó a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (20 ml). La mezcla se extrajo con diclorometano (2 X 20 ml). El extracto combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 100:1 para dar 268 a como un sólido amarillo (1,8 g, 82 %). EM-ESI: [M+H]+ 128,1. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,37 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 3,76 (s, 3H).
Ejemplo 268b 1-metil-1H-imidazol-4-amina 268 b
Un matraz de fondo redondo de 100 ml se cargó con 268 a (1,6 g, 12,6 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 160 mg) y etanol (15 ml). El matraz se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 268 b (1,2 g, 98 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 98,2
Ejemplo 268c 5-bromo-1-metil-3-(1-metil-1H-imidazol-4-ilamino)piridin-2(1H)-ona 268 c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (50 ml), 268 b (1,1 g, 11,3 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (3,0 g, 11,3 mmol), Pd2(dba)3 (1,0 g, 1,13 mmol), XantPhos (1,3 g, 2,26 mmol) y carbonato de cesio (7,3 g, 22,6 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 92 °C durante 4,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 100:1 a 50:1) para dar 268 c (2,4 g, 76 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 283,1
Ejemplo 268d Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(1-metil-1H-imidazol-4-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 268 d
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 268 c (150 mg, 0,53 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (80,4 mg, 0,21 mmol), Pd(dppf)Cl2 (17,2 mg, 0,021 mmol), K3PO4 (89 mg, 0,42 mmol), acetato de sodio (57,1 mg, 0,42 mmol), agua (0,2 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 2,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 30:1 a 20:1) para dar 268 d (110 mg, 37,2 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 556,4.
Eiemplo 268 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(1-metilimidazol-4-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 268
Una mezcla de 268 d (100 mg, 0,18 mmol) e hidróxido de litio (189 mg, 4,5 mmol) en /-propanol/THF (1:1, 4,0 ml) y agua (1,0 ml) se agitó a 35 °C durante 30 min. La mezcla se concentró a presión reducida. Al residuo se le añadió agua (5 ml) y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 268 (19,8 mg, 22 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 514,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 58,47 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,44 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,36 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,95 (s, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,12-5,10 (m, 1H), 4,44-4,41 (m, 2H), 4,22-4,18 (m, 3H), 3,84-3,82 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,59 (s, 3H), 2,59­ 2,56 (m, 2H), 2,44-2,42 (m, 2H), 1,22 (s, 6H)
Ejemplo 269a 2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(morfolin-4-il)carbonil]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-carbaldehído 269 a
Figure imgf000243_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 108 a (100 mg, 0,29 mmol), 1-metil-3-(5-(morfolin-4-carbonil)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-di-oxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 111 c (192 mg, 0,44 mmol), Pd(dppf)Cl2 (12 mg, 0,015 mmol), K3PO4 (123 mg, 0,58 mmol), acetato de sodio (47 mg, 0,58 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (5 gotas). Después de tres ciclos de descarga de vacío/N2 , la mezcla se calentó a 100 °C durante 1 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. Se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (diclorometano/metanol 40:1) para dar 269 a (150 mg, 83 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 621,8
Ejemplo 269 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-(morfolin-4-carbonil)-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazm-4-ona 269
A una solución de 269 a (150 mg, 0,24 mmol) en diclorometano (5 ml) y metanol (5 ml) se le añadió NaBH4 (18,2 mg, 0,482 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 h, la mezcla se desactivó con NH4Cl acuoso (10 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 20 m). El extracto combinado se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se concentró a presión reducida y se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 269 (114 mg, 76 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 624,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 59,00 (s, 1H), 8,79 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,26 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,67 (dd, J = 2,0, 9,0 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,38-7,36 (m, 2H), 6,56 (s, 1H), 5,00 (s, 1H), 4,47-4,40 (m, 2H), 4,25-4,19 (m, 3H), 3,86­ 3,84 (m, 1H), 3,62-3,60 (solapamiento, m, 4H), 3,51 (s, 3H), 3,52-3,50 (m, 4H), 2,59-2,57 (m, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 270a N-[(pirazin-2-il)carbamotioil]carbamato de etilo 270 a
Figure imgf000243_0002
370P 270f 270g
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético se cargó con pirazin-2-amina (7,6 g, 80,0 mmol, 1,0 eq.), carbonisotiocianatidato de O-etilo (12,5 g, 95,4 mmol, 1,2 eq.) y dioxano (150 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Después de que la reacción se completara, se concentró hasta un volumen de alrededor de 20 ml a presión reducida y la suspensión resultante se filtró. El sólido se recogió y se lavó con acetato de etilo (3 * 20 ml) para dar 270 a (14,0 g, 77 %) como un sólido blanco. EM-ESI:
[M+H]+ 227,3
Ejemplo 270b [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-2-amina 270 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 270 a (6,00 g, 26,43 mmol, 1,0 eq.), clorhidrato de hidroxilamina (3,32 g, 47,52 mmol, 1,8 eq.), DIPEa (12 ml), etanol (40 ml) y metanol (40 ml). La mezcla de reacción se agitó a 65 °C durante 16 horas. Después de que la reacción se completara, se enfrió a temperatura ambiente y se concentró hasta un volumen de alrededor de 20 ml a presión reducida. La suspensión resultante se recogió mediante filtración y el sólido se lavó con diclorometano/etanol 60:1 (50 ml) para dar 270 b (3,3 g, 92 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 136,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,84 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 8,70 (dd, J = 1,0, 4,0 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,47 (s, 2H).
Ejemplo 270c [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-2-ilcarbamato de tere-butilo 270 c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 270 b (2,00 g, 14,8 mmol, 1,0 eq.), Boc2O (3,87 g, 17,77 mmol, 1,2 eq.) y THF anhidro (60 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se enfrió a -78 °C, seguido de la adición de LHMDS (37,0 ml, 37,0 mmol, 2,5 eq., 1,0 M en THF). Después de que la reacción se agitara a -78 °C durante 2 horas, se desactivó con solución acuosa saturada de NH4Cl (30 ml). La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se extrajo con diclorometano (3 X 50 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:4 para dar 270 c (1,87 g, 53 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M-t-Bu]+ 180,0. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 10,31 (s, 1H), 8,94 (s, 1H), 8,72 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 1,25 (s, 9H).
Ejemplo 270d 5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-2-ilcarbamato de tere-butilo 270 d
Un matraz de fondo redondo de 100 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 270 c (1,0 g, 4,25 mmol), paladio al 20 % sobre carbono (un 10 % humedecido, 200 mg) y etanol (40 ml). A continuación, se evacuó, se cargó con gas hidrógeno (25 atm (2,5 MPa)) y se agitó a 60 °C durante 24 h. Se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 270 d (700 mg, 68 %). EM-ESI: [M-t-Bu]+ 184,0
Ejemplo 270e 7-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-2-il-carbamato de tere-butilo 270 e
Siguiendo el procedimiento en el ejemplo 191i y partiendo de 270 d (500 mg, 2,1 mmol, 1,0 eq.), paraformaldehído (630 mg, 21,0 mmol, 10,0 eq.), ZnCh/éter dietílico (2,1 ml, 2,1 mmol, 1,0 M), NaBHaCN (390 mg, 6,3 mmol, 3,0 eq.) y metanol (20 ml), se dio 270 e como un sólido amarillo (500 mg, 94 %). EM-Es I: [M-tBu]+ 198,0.
Ejemplo 270f 7-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-2-amina 270 f
Siguiendo el procedimiento en el ejemplo 131e y partiendo de 270 e (500 mg, 1,97 mmol), la desprotección de Boc con ácido dio 270 f como un sólido amarillo (200 mg, 66 %). EM-ESI: [M+H]+ 154,1.
Ejemplo 270g Acetato de (4-(1-metil-5-(7-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 270 g
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 270 f (100 mg, 0,65 mmol, 1,7 eq.), acetato de (4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 217 a (200 mg, 0,38 mmol, 1,0 eq.), DMF (10 ml) y carbonato de cesio (499 mg, 1,52 mmol, 4,0 eq.). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la solución resultante durante 10 minutos, se añadieron Xantphos (44 mg, 0,076 mmol, 0,20 eq.) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (35 mg, 0,038 mmol, 0,10 eq.). La mezcla de reacción se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 100 °C durante 16 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se dividió entre acetato de etilo (50 ml) y agua (10 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (3 * 20 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 270 g (90 mg, 41 %). EM-ESI: [M+H]+ 598,3.
Ejemplo 270 2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(7-metil-6,8-dihidro-5H-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 270
Siguiendo el procedimiento para el ejemplo 241 y partiendo de 270 g (90 mg, 0,15 mmol), se dio 270 como un sólido blanco (47 mg, 56 %). EM-ESI: [M+H]+ 556,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,50 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,93 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4 ,4 4 -4 , 3 8 (m, 2H), 4,24-4,02 (m, 5H), 3,88-3,85 (m, 1H), 3,61-3,59 (m, solapamiento, 5H), 2,87 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,64-2,58 (m, 2H), 2,49-2,46 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 1,80-1,69 (m, 4H).
Ejemplo 271a (S)-4-(6-(5-cloro-2-metoxipiridin-3-ilamino)piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de tere-butilo 271 a
Figure imgf000245_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (40 ml), (S)-4-(6-aminopiridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de tere-butilo 101 h (2,04 g, 7,0 mmol), 3-bromo-5-cloro-2-metoxipiridina (2,8 g, 12,6 mmol), Pd2(dba)3 (640 mg, 0,70 mmol), XantPhos (404,6 mg, 0,70 mmol) y carbonato de cesio (4,56 g, 14,0 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 4 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:3 para dar 271 a (1,7 g, 57 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 434,2
Ejemplo 271b (3S)-4-(6-{[5-(2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-3-(hidroximetil)piridin-4-il)-2-metoxipiridin-3-il]amino}piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de tere-butilo 271 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 271 a (650 mg, 1,50 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (1,79 g, 4,5 mmol), Pd2(dba)3 (137,2 mg, 0,15 mmol), P(cy)3 (16 7 , 4 mg, 0,60 mmol), Cs2CO3 (978 mg, 3,0 mmol), dioxano (20 ml) y agua (0,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 110 °C durante 16 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. Se añadieron hidróxido de litio monohidratado (1,89 g, 45 mmol) y agua (2,0 ml). La mezcla resultante se agitó a 45 °C durante 4 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 3:1 para dar 271 b (290 mg, 27 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 709,3
Ejemplo 271c 10-[3-(hidroximetil)-4-[5-({5-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-2-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 271 c
Una solución de 271 b (286,6 mg, 0,40 mmol) en dioxano/HCl (30 ml) se agitó a 50 °C durante 2 h. Se evaporó a presión reducida para dar 271 c (450 mg, bruto) como un sólido negro. EM-ESI: [M+H]+ 595,3
Ejemplo 271 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-6-oxo-1H-piridin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5—b]pirazin-4-ona 271
A una solución de 271 c (450 mg, 0,75 mmol) en metanol (10 ml) se le añadió oxetan-3-ona (162 mg, 2,25 mmol), NaBHaCN (141,8 mg, 2,25 mmol) y ZnCb (306 mg, 2,25 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (5 ml). A continuación, se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml) y el extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 271 (23,0 mg, 8,8 %, en dos etapas) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 651,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 69,76 (s, 1H), 8,74 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,41 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,35 (dd, J = 2,5 Hz, 8,5 Hz, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,85 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 5,16-5,13 (m, 1H), 4,72-4,69 (m, 5H), 4,54-4,53 (m, 1H), 4,36-4,35 (m, 1H), 4,19-4,17 (m, 2H), 3,89-3,87 (m, 1H), 3,56-3,49 (m, 2H), 3,11-3,09 (m, 2H), 2,60-2,48 (m, solapamiento, 7H), 2,24-2,21 (m, 1H), 1,29 (s, 6H), 1,02 (d, J = 6,0 Hz, 3H)
Ejemplo 272a 5-bromo-1-metil-3-(5-(1-(oxetan-3-il)azetidin-3-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 272 a
Figure imgf000246_0001
Una mezcla de 3-(5-(azetidin-3-il)piridin-2-ilamino)-5-bromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona 239 b (140 mg, 0,42 mmol), oxetan-3-ona (91 mg, 1,26 mmol), NaBHaCN (78 mg, 1,26 mmol) y cloruro de cinc (171 mg, 1,26 mmol) en metanol (10 ml) se agitó a 50 °C durante 2 horas. La mezcla se concentró a presión reducida y agua (5 ml) se añadió al residuo. A continuación, se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 272 a (145 mg, 85 %). EM-ESI: [M+H]+ 390,8
Ejemplo 272b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[1-(oxetan-3-il)azetidin-3-il]piridin-2-il}amino)-6-oxopiridin-3-il]piridin-3-il)metilo 272 b
Un matraz de fondo redondo de 25 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 272 a (140 mg, 0,35 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diaza-triciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (140 mg, 0,35 mmol), Pd(dppf)Cl2 (28 mg, 0,035 mmol), acetato de sodio (58 mg, 0,70 mmol), K3PO4 (148 mg, 0,70 mmol), agua (6 gotas) y acetonitrilo (6 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 272 b (114 mg, 46 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 664,4
Ejemplo 272 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[1-(oxetan-3-il)azetidin-3-il]-2-piridil]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 272
Una mezcla de 272 b (114 mg, 0,17 mmol) e hidróxido de litio (41 mg, 1,7 mmol) en /-propanol/THF (1:1,4 ml) y agua (1 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío y el residuo se diluyó con agua (5 ml). A continuación, se extrajo con acetato de etilo (3 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 272 (52 mg, 50 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 622,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) 6 8,77 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,90 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,61 (dd, J = 2,0, 8,5 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,86-6,84 (m, 2H), 5,12-5,09 (m, 1H), 4,77-4,74 (m, 2H), 4,69-4,66 (m, 1H), 4,61-4,59 (m, 2H), 4,54 (s.a., 1H), 4,36-4,32 (m, 1H), 4,19-4,17 (m, 2H), 3,90-3,83 (m, 2H), 3,80-3,77 (m, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,71-3,68 (m, 1H), 3,30-3,27 (m,2H), 2,60-2,59 (m, 2H), 2,54 (s, 2H), 1,30 (s, 6H).
Ejemplo 273a Acetato de [4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il]metilo 273 a
Figure imgf000247_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 3-bromo-5-yodo-1-metilpiridin-2(1H)-ona 214 b (1,57 g, 5,0 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.02,6]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (1,98 g, 5,0 mmol), PdCL(dppf) (205 mg, 0,25 mmol), K3PO4 (2,12 g, 10,0 mmol), acetato de sodio (820 mg, 10,0 mmol), acetonitrilo (45 ml) y agua (1 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se agitó a 30 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 273 a (580 mg, 22 %) como un sólido blanco. EM-ESI:
[M+H]+ 539,2. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,79 (s, 1H), 5,15 (s, 2H), 4,55-4,51 (m, 1H), 4,27-4,25 (m, 1H), 4,15-4,13 (m, 1H), 4,06­ 4,04 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 2,58-2,56 (m, 2H), 2,51 (s, 2H), 1,86 (s, 3H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 273b Acetato de (2'-(7,7-dimetil-1-oxo-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ddopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazm-2(6H)-il)-1-metil-6-oxo-5-(piridin-2-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4'-bipiridin]-3'-il)metilo 273 b
Figure imgf000247_0002
En un frasco de 1 dracma (3,7 ml) se añadió 273 a (40 mg, 0,074 mmol), 2-aminopiridina, (1,2 equiv.), carbonato de cesio (1,5 equiv.), Xantphos (10 % en mol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (5 % en mol) en 1,4-dioxano seco (0,2 M). A continuación, se agitó la reacción a 80 °C durante 3 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, a continuación, la reacción se diluyó con diclorometano (3 ml) y se lavó con agua (2 x 3 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío. A continuación, el producto bruto 273 b se llevó a la siguiente etapa sin purificación.
Ejemplo_______273 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-6-oxo-5-(2-piridilamino)-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pimdo[3,5-b]pirazin-4-ona 273
En un frasco de 1 dracma (3,7 ml) se añadió 273 b (1 equiv.) en una mezcla 4:1 de THF y agua (1 ml). A continuación, se añadió hidróxido de litio (1,5 equiv.) a la mezcla y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. A continuación, la reacción se diluyó con diclorometano (3 ml) y se lavó con agua (2 x 3 ml). La capa orgánica se recogió, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío. El material bruto se purificó mediante cromatografía de fase inversa para dar 273. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) ó 8,73 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,17 (dd, J = 5,1, 1,9 Hz, 1H), 7,62 - 7,56 (m, 1H), 7,54 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,80 (dd, J = 7,0, 5,1 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,96 - 4,93 (m, 1H), 4,48 - 4,39 (m, 2H), 4,24 - 4,17 (m, 2H), 3,89 - 3,84 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 2,58 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2,43 (s, 3H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 274 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metilpirazin-2-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 274
Siguiendo los procedimientos del ejemplo 273, y sustituyendo 2-amino-5-metilpirazina con 2-aminopiridina, se preparó 274. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) ó 8,98 (s, 1H), 8,68 - 8,58 (m, 2H), 8,49 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,58 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,75 (s, 1H), 4,93 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,47 - 4,37 (m, 2H), 4,25 -4,16 (m, 2H), 3,88-3,82 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,57 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2,43 (s, 2H), 2,34 (s, 3H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 275 3-[4-[5-[(5-fluoro-2-piridil)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pimdo[3,5-b]pirazin-4-ona 275
Siguiendo los procedimientos del ejemplo 273, y sustituyendo 2-amino-5-fluoropiridina con 2-aminopiridina, se preparó 275. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 58,79 (s, 1H), 8,65 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,14 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 7,58 (td, J = 8,7, 3,1 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,40 (dd, J = 9,2, 3,9 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,98 - 4,91 (m, 1H), 4,46 - 4,38 (m, 2H), 4,23 - 4,16 (m, 2H), 3,88 - 3,82 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 2,61 - 2,51 (m, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 276 6-[[5-[2-(7,7-dimetil-4-oxo-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-3-il)-3-(hidroximetil)-4-piridil]-1-metil-2-oxo-3-piridil]amino]piridin-3-carbonitrilo 276
Siguiendo los procedimientos del ejemplo 273, y sustituyendo 2-amino-5-cianopiridina con 2-aminopiridina, se preparó 276. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 59,38 (s, 1H), 8,73 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,58 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,94 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,75 (s, 1H), 4,97 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 4,46 - 4,38 (m, 2H), 4,21 (s, 3H), 3,84 (s, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,58 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 2,45 (s, 2H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 277 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[(5-metoxi-2-piridil)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pimdo[3,5-b]pirazin-4-ona 277
Siguiendo los procedimientos del ejemplo 273, y sustituyendo 2-amino-5-metoxipiridina con 2-aminopiridina, se preparó 277. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 58,61 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,51 -8,47 (m, 2H), 7,91 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,33 - 7,29 (m, 2H), 6,56 (s, 1H), 4,94 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 4,47 - 4,38 (m, 2H), 4,24 - 4,16 (m, 2H), 3,87 - 3,83 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,60 (s, 3H), 2,58 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 278 3-[4-[5-[(5-ciclopropil-2-piridil)amino]-1 -metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pimdo[3,5-b]pirazin-4-ona 278
Siguiendo los procedimientos del ejemplo 273, y sustituyendo 2-amino-5-ciclopropilpiridina con 2-aminopiridina, se preparó 278. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 58,67 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,53 - 8,45 (m, 2H), 8,01 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,28 (dd, J = 8,6, 2,5 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,96 - 4,92 (m, 1H), 4,47 - 4,41 (m, 2H), 4,24 - 4,16 (m, 2H), 3,89 - 3,85 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 2,58 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 2,44 (s, 2H), 1,86 - 1,77 (m, 1H), 1,22 (s, 6H), 0,93 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 0,90 - 0,85 (m, 1H), 0,67 - 0,58 (m, 2H).
Ejemplo 279 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-6-oxo-5-[[5-(trifluorometil)-2-piridil]amino]-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 279
Siguiendo los procedimientos del ejemplo 273, y sustituyendo 2-amino-5-trifluorometilpiridina con 2-aminopiridina, se preparó 279. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 59,23 (s, 1H), 8,80 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,54 - 8,46 (m, 2H), 7,88 (dd, J = 8,7, 2,6 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,97 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 4,50 - 4,40 (m, 2H), 4,26 - 4,16 (m, 2H), 3,90 - 3,81 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,58 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 280 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[1-metil-5-(morfolin-4-carbonil)pirazol-3-il]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 280
Siguiendo los procedimientos del ejemplo 273, y sustituyendo (3-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)(morfolino)metanona con 2-aminopiridina, se preparó 280. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 58,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,05 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,30 (s, 2H), 4,99 - 4,91 (m, 1H), 4.48 - 4,39 (m, 2H), 4,23 - 4,15 (m, 7H), 3,89 - 3,82 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,59 (s, 3H), 3,27 (s, 2H), 2,58 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 281 3-[3-(hidroximetil)-4-[1 -metil-5-[(5-metil-2-piridil)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pimdo[3,5-b]pirazin-4-ona 281
Siguiendo los procedimientos del ejemplo 273, y sustituyendo 2-amino-5-metilpiridina con 2-aminopiridina, se preparó 281. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 58,67 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 8,01 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,44 (dd, J = 8,5, 2,4 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,75 (s, 1H), 4,93 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 4,46 - 4,36 (m, 2H), 4,26 - 4,16 (m, 2H), 3,86 - 3,80 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 2,58 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 2,43 (s, 2H), 2,17 (s, 3H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 282a 3,3-dimetilciclopentanona 282 a
Figure imgf000249_0001
A una suspensión de CuI (81,0 g, 420 mmol) en éter etílico anhidro (500 ml) enfriada a 0 °C se le añadió la solución de metillitio en éter etílico (430 ml, 860 mmol, 2,0 M) durante un periodo de 30 minutos. La mezcla se agitó a 0 °C durante 2 h. A la mezcla anterior se le añadió gota a gota 3-metilciclopent-2-enona (33,6 g, 350 mmol) durante un periodo de 1 h a 0 °C. La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante otras 2 h. A continuación, se desactivó con NPUCl saturado (300 ml) y se filtró. El filtrado se extrajo con éter etílico (2 X 200 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Mg2SÜ4 anhidro y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida para dar 282a como un aceite incoloro (28 g, 71 %). RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 2,31 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 2,05 (s, 2H), 1,79 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 1,12 (s, 6H).
Ejemplo 282b 2-cloro-4,4-dimetilciclopent-1-enocarbaldehído 282b
A una solución de DMF (18,3 g, 250 mmol) en diclorometano (300 ml) enfriada a 0 °C se le añadió POCl3 (40,5 g, 250 mmol) durante un periodo de 10 minutos. La mezcla se agitó a 20 °C durante 1 h. A la mezcla anterior se le añadió gota a gota 282a (28,0 g, 250 mmol) durante un periodo de 20 minutos. La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 20 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en una solución de acetato de sodio (60 g) en agua con hielo (400 g). La mezcla se extrajo con diclorometano (2 X 300 ml). La capa orgánica combinada se lavó con agua (2 X 200 ml), se secó sobre Mg2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida para dar 282b como un aceite incoloro (33,0 g, bruto). RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 9,99 (s, 1H), 2,62 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 2,38 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 1,15 (s, 6H).
Ejemplo 282c 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-ciclopenta[b]tiofen-2-carboxilato de etilo 282 c
A una solución de 282 b (33,0 g, bruto) en diclorometano (400 ml) y trietilamina (60 g, 600 mmol) se le añadió 2-mercaptoacetato de etilo (19,2 g, 160 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 6 h. A continuación, se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en etanol (400 ml) y trietilamina (60 g, 600 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante 12 h. De nuevo, se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 40:1 para dar 282 c como un sólido amarillo (18,0 g, 32 %, en dos etapas). EM-ESI: [M+H]+ 225,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 67,49 (s, 1H), 4,32 (c, J = 7,0 Hz, 2H), 2,72 (s, 2H), 2,56 (s, 2H), 1,35 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 282d Ácido 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-ciclopenta[b]tiofen-2-carboxílico 282 d
A la solución de 282 c (16,0 g, 71,0 mmol) en propan-2-ol (200 ml), tetrahidrofurano (200 ml) y agua (200 ml) se le añadió hidróxido de litio (6,82 g, 284 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 65 °C durante 5 h. Los disolventes orgánicos se retiraron a presión reducida. El pH del residuo se ajustó a 1,0 con ácido clorhídrico (12 M). El precipitado se recogió mediante filtración y se secó a vacío para dar 282 d (12,0 g, 86 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 196,9
Ejemplo 282e N-terc-butil-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-ciclopenta[b]tiofen-2-carboxamida 282 e
Una suspensión de 282 d (12,0 g, 61,0 mmol) en SOCb (80 ml) se calentó a 65 °C durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con diclorometano (20 ml), que se añadió a la solución de 2-metilpropan-2-amina (4,45 g, 61,0 mmol) y trietilamina (18,0 g, 180 mmol) en diclorometano (180 ml). La mezcla resultante se agitó durante 16 h y se diluyó con diclorometano (200 ml). Se lavó con agua (3 X 50 ml), se secó sobre Mg2SO4 anhidro, se filtró y se evaporó a presión reducida para dar 282 e (15,0 g, 97 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 252,0
Ejemplo 282f N-terc-butil-3-formil-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-ciclopenta[b]tiofen-2-carboxamida 282 f
A una solución de 282 e (1,5 g, 6,0 mmol) en THF anhidro (60 ml) enfriada a -70 °C se le añadió la solución de nbutillitio (10,0 ml, 25 mmol, 2,5 M, en hexano) durante un periodo de 5 minutos. Se agitó a -70 °C durante 6 h. Se añadió DMF (1,3 g, 18,0 mmol) durante un periodo de 5 minutos y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. A continuación, se desactivó con NH4Cl saturado (40 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con acetato de etilo (2 X 30 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Mg2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida para dar 282 f como un sólido amarillo (1,34 g, 80 %). EM-ESI: [M+H]+ 280,3
Ejemplo 282g N-terc-butil-3-(hidrazonometil)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-ciclopenta[b]tiofen-2-carboxamida 282 g A una solución de hidracina acuosa al 85 % (10 ml) en THF (180 ml) se le añadió 282 f (5,6 g, 20,0 mmol) en THF anhidro (20 ml) durante un periodo de 5 minutos. Se agitó a 20 °C durante 3 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para dar 282 g como un sólido negro (6,0 g, rendimiento: 95 %, pureza: 95 %). EM-ESI: [M+H]+ 294,0 Ejemplo 282h 4,4-dimetil-7-tia-10,11-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6),11-trien-9-ona 282 h
Una solución de 282 g (3,8 g, 13,0 mmol) en H2SO4 al 30 %(100 ml) se calentó a reflujo durante 16 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se extrajo con diclorometano (3 X 200 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 100:1 para dar 282 h como un sólido amarillo (1,72 g, 60 %). EM-ESI: [M+H]+ 221,0 Ejemplo 282i 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10,11-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6),11-trien-10-il}piridin-3-carbaldehído 282 i
Siguiendo los procedimientos como se describe en el ejemplo 108a y partiendo de 282 h (330 mg, 1,5 mmol) y 2-bromo-4-cloronicotinaldehído (950 mg, 4,5 mmol), se obtuvo 282 i como un sólido amarillo (260 mg, 48 %). EM-ESI:
[M+H]+ 359,9
Ejemplo 282j 2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10,11-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6),11-trien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-carbaldehído 282 j Siguiendo el procedimiento para la preparación en el ejemplo 191k y partiendo de 282 i (216 mg, 0,60 mmol) y (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 191 j (482 mg, 0,90 mmol), se obtuvo 282 j como un sólido amarillo (407 mg, 48 %). EM-ESI: [M+H]+ 678,8 Ejemplo 282 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oxetan-3-il)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-6-oxo-3 piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-6,8-dihidrociclopenta[3,4]tieno[1,3—d]piridazin-4-ona 282
Siguiendo los procedimientos en el ejemplo 191 y partiendo de 282 j (370 mg, 0,55 mmol), se obtuvo 282 como un sólido amarillo (64 mg, 17 %). EM-ESI: [M+H]+ 681,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 6 8,63 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,56 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,46-8,45 (m, 2H), 7,85 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,36 (dd, J = 3,0, 9,0 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,85 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,57-4,54 (m, 2H), 4,47 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,4-4,37 (m, 3H), 3,68-3,67 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,40-3,38 (m, 1H), 3,11-3,08 (m, 1H), 2,96-2,90 (m, 3H), 2,81­ 2,79 (m, 2H), 2,56-2,53 (m, 1H), 2,33-2,32 (m, 2H), 2,19-2,16 (m, 1H), 1,28 (s, 3H), 1,27 (s, 3H), 0,93 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
Ejemplo 283a 5-bromo-1-metil-3-(5-metilisoxazol-3-ilamino)piridin-2(1H)-ona 283 a
Figure imgf000251_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-metilisoxazol-3-amina (1,0 g, 10,2 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (4,09 g, 15,3 mmol), Pd2(dba)3 (467 mg, 0,51 mmol), Xantphos (598 mg, 1,02 mmol), Cs2CO3 (6,65 g, 20,4 mmol) y dioxano (50 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 3 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. Se filtró cuando la mezcla todavía estaba caliente. El filtrado se enfrió hasta temperatura ambiente y el precipitado resultante se recogió mediante filtración para dar 283 a (1,6 g, 55 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 284,1
Ejemplo 283b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-metil-1,2-oxazol-3-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 283 b
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 283 a (150 mg, 0,53 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (834 mg, 2,1 mmol), Pd(dppf)Cl2 (21 mg, 0,026 mmol), K3PO4 (224 mg, 0,053 mmol), acetato de sodio (87 mg, 1,1 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (5 gotas). Después de tres ciclos de descarga de vacío/N2 , la mezcla se calentó a 100 °C durante 1 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se lavó con acetonitrilo para dar el 283 b (100 mg, 34 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 557,3
Ejemplo 283 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metilisoxazol-3-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 283
A una solución de 283 b (90 mg, 0,162 mmol) en THF (5 ml), /-propanol (5 ml) y agua (5 ml) se le añadió hidróxido de litio (3,8 mg, 1,62 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (20 ml * 3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 283 (65 mg, 78 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 514,9. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-cfe) 6 8,98 (s, 1H), 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,25 (s, 1H), 4,93 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,48-4,38 (m, 2H), 4,25-4,19 (m, 3H), 3,87-3,85 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 2,62-2,54 (m, 2H), 2,43 (s, 2H), 2,31 (s, 3H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 284a 2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-(oxetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)nicotinaldehído 284 a
Figure imgf000252_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1-metil-3-(5-(oxetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 163 a (354 mg, 0,83 mmol), 4-cloro-2-(10-fluoro-1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)nicotinaldehído 134 c (289 mg, 0,83 mmol), PdCh(dppf) (68 mg, 0,08 mmol), K3PO4 (352 mg, 1,66 mmol), acetato de sodio (136 mg, 1,66 mmol), acetonitrilo (50 ml) y agua (3 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 284 a (305 mg, 60 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+: 613,6.
Ejemplo 284 10-fluoro-2-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-(oxetan-3-il)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-1 -ona 284
A una suspensión de 284 a (250 mg, 0,41 mmol) en metanol (20 ml) se le añadió borohidruro de sodio (47 mg, 1,23 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 30 minutos. A continuación, se desactivó con agua (2 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 284 (20 mg, 6,6 %). EM-ESI:
[M+H]+ 615,6. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,46 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 4,95 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,76-4,74 (m, 2H), 4,69-4,65-4,67 (m, 3H), 4,46-4,44 (m, 1H), 4,35-4,33 (m, 1H), 4,10-4,08 (m, 4H), 3,38-3,35 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,58-3,56 (m, 2H), 2,842,82 (m, 2H), 2,58-2,53 (m, 4H), 1,89-1,84 (m, 2H), 1,77-1,76 (m, 2H).
Ejemplo 285a 4-nitro-1-(oxetan-3-il)-1H-imidazol 285 a
Figure imgf000252_0002
Un tubo sellado se cargó con 4-nitro-1H-imidazol (500 mg, 4,42 mmol), 3-yodooxetano (920 mg, 5,0 mmol), Cs2CO3 (2,90 g, 8,84 mmol) y dioxano (12 ml). El tubo sellado se calentó a 120 °C durante 16 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 285 a como un sólido blanco (250 mg, 33 %). EM-ESI: [M+H]+ 170,2.
Ejemplo 285b 1-(Oxetan-3-il)-1H-imidazol-4-amina 285 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 285 a (100 mg, 0,6 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 10 % humedecido, 10 mg) y metanol (10 ml). El matraz se evacuó, se cargó con gas hidrógeno (por medio de un globo) y se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 285 b (70 mg, 85 %). EM-ESI: [M+H]+ 140,3.
Ejemplo 285c Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(1-metil-5-{[1-(oxetan-3-il)-1H-imidazol-4-il]amino}-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)metilo 285 c
Un matraz de fondo redondo de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 285 b (40 mg, 0,28 mmol), acetato de [4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-d¡azatr¡-c¡clo[6.4.0.02’6]dodeca-2(6),7-d¡en-10-¡l}p¡r¡d¡n-3-¡l]metilo 273 a (150 mg, 0,28 mmol), Pd2(dba)3 (15 mg, 0,015 mmol), XantPhos (18 mg, 0,03 mmol), carbonato de cesio (200 mg, 0,6 mmol) y 1,4-dioxano (6 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 285 c como un sólido amarillo (80 mg, 47 %). EM-ESI: [M+H]+ 598,3.
Ejemplo 285 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[1-(oxetan-3-il)imidazol-4-il]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 285
Una mezcla de 285 c (80 mg, 0,13 mmol) e hidróxido de litio agua (55 mg, 1,3 mmol) en /-propanol/THF (3:2, 5 ml) y agua (2 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y se añadió agua (5 ml) al residuo. A continuación, se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 285 (36 mg, 50%) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 556,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,47-7,45 (m, 2H), 7,35-7,34 (m, 2H), 7,28 (s, 1H), 6,88 (s, 1H), 5,27-5,19 (m, 2H), 5,10-5,07 (m, 2H), 4,94-4,91 (m, 2H), 4,69-4,65 (m, 1H), 4,52-4,44 (m, 2H), 4,17-4,16 (m, 2H), 3,87-3,84 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 2,59-2,58 (m, 2H), 2,53 (s, 2H), 1,29 (s, 6H).
Ejemplo 286a Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(1,2-oxazol-3-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 286 a
Figure imgf000253_0001
Un matraz de fondo redondo de 25 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con acetato de [4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatricido[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il]metilo 273 a (161 g, 0,30 mmol), isoxazol-3-amina (25 mg, 0,30 mmol), carbonato de cesio (196 mg, 0,60 mmol) y 1,4-dioxano (10 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 10 minutos, se añadieron tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (14,0 mg, 0,015 mmol) y xantphos (17 mg, 0,030 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a reflujo durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 10 ml). El filtrado orgánico combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 30/1) para dar 286 a (96 mg, 59 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 542,8.
Ejemplo_____286 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-(isoxazol-3-ilamino)-1-metil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pimdo[3,5-b]pirazin-4-ona 286
A una solución de 286 a (96 mg, 0,18 mmol) en THF//-propanol/agua (5/3/2 ml) se le añadió hidróxido de litio (21 mg, 0,88 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Después de que la reacción se completara, la mezcla se evaporó a presión y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 286 como un sólido blanco (75 mg, 85 %). EM-ESI: [M+H]+ 501,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,49 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,97 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,37 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,18 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,12-5,11 (m, 1H), 4,66-4,64 (m, 1H), 4,52-4,51 (m, 1H), 4,29-4,27 (m, 1H), 4,18-4,16 (m, 2H), 3,87-3,86 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 2,59-2,57 (m, 2H), 2,53-2,51 (m, 2H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 287a N-metoxi-N-metil-3-nitro-1H-pirazol-5-carboxamida 287 a
Figure imgf000254_0001
CsI.C --O- 3,, diojíano
2B7j
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 500 ml equipado con un agitador magnético se cargó con ácido 3-nitro-1H-pirazol-5-carboxílico (15,7 g, 1,0 eq., 100 mmol), clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (19,5 g, 2,0 eq., 200 mmol), HATU (76,0 g, 2,0 eq., 200 mmol), trietilamina (40,4 g, 4,0 eq., 400 mmol) y diclorometano (300 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El disolvente se retiró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 100:1 para dar 287 a (16,0 g, 80 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 201,1
Ejemplo 287b 3-amino-N-metoxi-N-metil-1H-pirazol-5-carboxamida 287 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 287 a (16,0 g, 1,0 eq., 80,0 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 800 mg) y metanol (100 ml). La mezcla se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante la noche. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE®. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 287 b (11,0 g, 81 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 171,1
Ejemplo 287c 3-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-N-metoxi-N-metil-1H-pirazol-5-carboxamida 287 c
Un matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con un agitador magnético y una trampa de Dean-Stark se cargó con 287 b (11,0 g, 1,0 eq., 64,7 mmol), hexano-2,5-diona (11,1 g, 1,5 eq., 97,2 mmol), ácido p-toluensulfónico monohidratado (558 mg, 0,05 eq., 3,24 mmol) y tolueno (100 ml). La mezcla de reacción se sometió a reflujo durante la noche. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con 1 : 2 éter de petróleo/acetato de etilo para dar 287 c (10,4 g, 65 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 249,0
Ejemplo 287d 2-(3-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-5-(metoxi(metil)carbamoil)-1H-pirazol-1-il)etilcarbamato de tere-butilo 287 d
Un matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 287 c (10,4 g, 1,0 eq., 41,9 mmol), 2-cloroetilcarbamato de tere-butilo (37,7 g, 5,0 eq., 210,0 mmol), Na2CO3 (22,3 g, 5,0 eq., 210,0 mmol) y DMF (100 ml). La mezcla de reacción se agitó a 110 °C durante la noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla resultante se vertió en agua (200 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 X 100 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo para dar 287 d (10,8 g, 6 6 %) como un aceite amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 392.0
Ejemplo 287e 2-(5-acetil-3-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-1H-pirazol-1-il)etilcarbamato de tere-butilo 287 e
Un matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 287 d (7,82 g, 1,0 eq., 20.0 mmol) y THF (100 ml) bajo protección con N2. Se añadió una solución de MeMgBr (3,0 M en éter) (17 ml, 2,5 eq., 50.0 mmol) a -78 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y se desactivó con solución saturada de NH4CL A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). La capa orgánica combinada se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 4:1 para dar 287 e como un aceite incoloro (5,40 g, 78 %). EM-ESI: [M+H]+ 347,0. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 6,57 (s, 1H), 5,91 (s, 2H), 4,93 (s.a., 1H), 4,71 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3,62 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,57 (s, 3H), 2,16 (s, 6 H), 1,28 (s, 9H).
Ejemplo 287f 2-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-4-metil-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazina 287 f
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 287 e (5,40 g, 1,0 eq., 15,6 mmol), CF3COOH (10 ml) y diclorometano (50 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se concentró a presión reducida para dar 287 f bruto, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 229,1
Ejemplo 287g 2-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-4-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 287 g
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 287 f (3,56 g, 1,0 eq., 15,6 mmol), NaBH4 (2,96 g, 5,0 eq., 78,0 mmol) y metanol (50 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre agua (50 ml) y diclorometano (50 ml). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (3 X 50 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 10:1 para dar 287 g como un aceite incoloro (1,54 g, 43 % en dos etapas). EM-ESI: [M+H]+ 231,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 5,91 (s, 1H), 5,86 (s, 2H), 4,17-4,11 (m, 3H), 3,51-3,48 (m, 1H), 3,36-3,31 (m, 1H), 2,13 (s, 6H), 1,50 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 287h 2-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-4,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 287 h
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 287 g (1,54 g, 1,0 eq., 6,70 mmol), formaldehído (37 % en agua) (1,09 g, 2,0 eq., 13,4 mmol), NaBHsCN (2,11 g, 5,0 eq., 33.5 mmol), HOAc (3 ml) y metanol (30 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre agua (50 ml) y diclorometano (50 ml). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (3 X 50 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida para dar 287 h bruto, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 245,0
Ejemplo 287i 4,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-amina 287 i
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 287 h (1,63 g, 1,0 eq., 6,70 mmol), NH2OHHCl (2,33 g, 5,0 eq., 33,5 mmol) y etanol (50 ml). La mezcla se sometió a reflujo durante 2 días. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 287 i como un sólido amarillo (211 mg, 19 %). EM-ESI: [M+H]+ 167,1. RMN de 1H (500 MHz, CDCls) ó 5,36 (s, 1H), 4,04-4,00 (m, 1H), 3,94-3,92 (m, 1H), 3,61 (s.a., 2H), 3,30 (c, J = 6.5 Hz, 1H), 3,10-3,08 (m, 1H), 2,81-2,75 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 1,38 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 287j Acetato de (4-(5-(4,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 287 j
Un matraz de fondo redondo de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 287 i (20 mg, 1,0 eq., 0,12 mmol), acetato de (4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-M)metiio 273 a (127 mg, 2,0 eq., 0,24 mmol), Pd2(dba)3 (9,0 mg, 0,1 eq., 0,010 mmol), Xantphos (11 mg, 0,2 eq., 0,020 mmol), CS2CO3 (78 mg, 2,0 eq., 0,24 mmol) y dioxano (5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/N2 , la mezcla se agitó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 20:1 para dar 287 j como un sólido marrón (60 mg, 82 %). EM-ESI: [M+H]+ 610,9
Ejemplo_____287 2-[4-[5-[(4,5-dimetil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 287
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 287 j (60 mg, 1,0 eq., 0,098 mmol), hidróxido de litio (12 mg, 5,0 eq., 0,49 mmol), /-propanol/THF (4/4 ml) y agua (1 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 287 como un sólido amarillo (24 mg, 43 %). EM-ESI: [M+H]+ 568,9. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,72 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,36 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 5,04-5,02 (m, 1H), 4,64-4,62 (m, 1H), 4,56-4,54 (m, 1H), 4,39-4,37 (m, 1H), 4,17-3,92 (m, 4H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,45-3,37 (m, 1H), 3,17-3,14 (m, 1H), 2,89-2,81 (m, 1H), 2,64-2,58 (m, 4H), 2,48 (s, 3H), 1,93-1,89 (m, 2H), 1,81-1,80 (m, 2H), 1,46 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 288a 1-metil-3-(5-metilisoxazol-3-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 288 a
Figure imgf000256_0001
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-1-metil-3-(5-metilisoxazol-3-ilamino)piridin-2(1H)-ona 283 a (330 mg, 1,16 mmol), Pin2B2 (442 mg, 1,74 mmol), Pd2(dba)3 (53 mg, 0,058 mmol), X-Phos (55 mg, 0,116 mmol), acetato de potasio (227 mg, 2,32 mmol) y dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/N2 , la mezcla se calentó a 70 °C durante 2 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. Se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se lavó con éter de petróleo para dar 288 a (300 mg, 78 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 332,3
Ejemplo 288b 2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10,11-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6),11-trien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-metil-1,2-oxazol-3-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidro-piridin-3-il}piridin-3-carbaldehído 288 b
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10,11-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6),11-trien-10-il}piridin-3-carbaldehído 282 i (72 mg, 0,20 mmol), 288 a (102 mg, 0,30 mmol), PdCL(dppf) ( 16 mg, 0,020 mmol), K3PO4 (85 mg, 0,40 mmol), acetato de sodio (33 mg, 0,40 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno en la mezcla durante 10 minutos, un condensador de reflujo se acopló al matraz y la mezcla se calentó a 100 °C durante 1 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 288 b , que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 529,3.
Ejemplo 288 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metilisoxazol-3-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-6,8-dihidrocidopenta[3,4]tieno[1,3-d]piridazin-4-ona 288
Una mezcla de 288 a (82 mg, 0,16 mmol) y NaBH4 (18,1 mg, 0,48 mmol) en metanol (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla se desactivó con agua (5 ml) y se evaporó a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). El extracto combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 288 (54 mg, dos etapas: 34 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 531,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 9,0 (s, 1H), 8,57 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,00 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,25 (s, 1H), 4,86 (s.a., 1H), 4,39 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 3,60 (s, 3H), 2,91 (s, 2H), 2,81 (s, 2H), 2,31 (s, 3H), 1,28 (s, 6 H).
E je m p lo 289 a 3 -a m in o -1 H -p ira z o l-1 -c a rb o x ila to de fe rc -b u tilo 289a
Figure imgf000257_0001
. ..
289a 105 C ,15 h
239 b
Figure imgf000257_0002
2 S 9 t
A una mezcla de 3-ciclopropil-1H-pirazol-5-amina (3,0 g, 36 mmol) y trietilamina (7,6 g, 75 mmol) en 1,4-dioxano (35 ml) se le añadió (Boc)2O (7,8 g, 36 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 2 h. A continuación, se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 3:1 para dar 289 a como un sólido blanco (3,4 g, 52 %). EM-ESI: [M+H]+ 184,1.
Ejemplo 289b 3-(1H-pirazol-3-ilamino)-5-bromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona 289 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 289 a (2,2 g, 12 mmol), XantPhos (0,69 g, 1,2 mmol), Pd2(dba)3 (1,1 g, 1,2 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (6,4 g, 24 mmol), Cs2CO3 (15,6 g, 48 mmol) y 1,4-dioxano (50 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 10 minutos, se calentó a 105 °C durante 15 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo la mezcla se lavó con metanol (8 ml) para dar 289 b como un sólido amarillo pálido (1,2 g, 37 %). EM-ESl: [M+H]+ 269,1.
Ejemplo 289c Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-6-oxo-5-[(1H-pirazol-3-il)amino]-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 289 c
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 289 b (200 mg, 0,74 mmol), ácido (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-{3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (360 mg, 0,90 mmol), PdCP(dppf) (41 mg, 0,050 mmol), K3PO4 (320 mg, 1,5 mmol), acetato de sodio (123 mg, 1,5 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,2 ml). El sistema se evacuó y, a continuación, se rellenó con N2. A continuación, se calentó a 90 °C durante 4 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 10:1 para dar 289 c como un sólido amarillo pálido (150 mg, 38 %). EM-ESI: [M+H]+ 542,3.
Ejemplo 289 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-6-oxo-5-(1H-pirazol-3-ilamino)-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 289
Una mezcla de 289 c (150 mg, 0,28 mmol) e hidróxido de litio hidratado (236 mg, 5,6 mmol) en THF (4 ml), /-propanol (4 ml) y agua (2 ml) se agitó a 40 °C durante 0,5 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y se diluyó con agua (10 ml). A continuación, se extrajo con acetato de etilo (3 X 15 ml). El extracto combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 289 como un sólido amarillo pálido (25 mg, 18 %). EM-ESI: [M+H]+ 499,9. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 612,07 (s, 1H), 8,47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,55-7,54 (m, 1H), 7,40-7,39 (m, 1H), 7,32 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,12 (s, 1H), 4,94­ 4,92 (m, 1H), 4,48-4,47 (m, 1H), 4,41-4,39 (m, 1H), 4,23-4,17 (m, 3H), 3,84-3,82 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 2,58-2,56 (m, 2H), 2,50-2,42 (m, 2H), 1,22 (s, 6H).
E je m p lo 290 a 5 -b ro m o -1 -m e til-3 -(1 -m e til-1 H -p ira z o l-3 - ila m in o )p ir id in -2 (1 H )-o n a 290a
Figure imgf000258_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (100 ml), 1-metil-1H-pirazol-3-amina (970 mg, 10,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2-(1 H)-ona (2,9 g, 11 mmol) y carbonato de cesio (6,5 g, 20,0 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 10 minutos, se añadieron tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (457 mg, 0,50 mmol) y Xantphos (587 mg, 1,0 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a reflujo durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 50 ml) y se concentró el filtrado orgánico combinado. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 290 a como un sólido amarillo (900 mg, 32 %). EM-ESI:
[M+H]+ 283,1
Ejemplo 290b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-[(1-metil-1H-pirazol-3-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 290 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatri-ciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (595 mg, 1,5 mmol), 290 a (282 mg, 1,0 mmol), K3PO4 (424 mg, 2,0 mmol), acetato de sodio (164 mg, 2,0 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (82 mg, 0,1 mmol) y acetonitrilo/agua (15/1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/N2 , la mezcla se calentó a 100 °C durante 1,5 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre diclorometano (30 ml) y agua (30 ml). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 50/1) para dar 290 b (300 mg, 54 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 556,1
Ejemplo 290 3-[3-(hidroximetil)-4-[1 -metil-5-[(1-metilpirazol-3-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 290
A una solución de 290 b (139 mg, 0,25 mmol) en THF (5 ml), propan-2-ol (5 ml) y agua (2 ml) se le añadió hidróxido de litio (60 mg, 2,5 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 h. A continuación, se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre diclorometano (20 ml) y agua (10 ml). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). El extracto combinado se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 290 (30 mg, 23 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 514,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 68,47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,16 (s, 1H), 8,03 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,07 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 4,97 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,47-4,40 (m, 2H), 4,24-4,18 (m, 3H), 3,85-3,83 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 2,58-2,56 (m, 2H), 2,42 (s, 2H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 291a Acetato de (4-{1-metil-5-[(5-metil-1,2-oxazol-3-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}-2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}piridin-3-il)metilo 291 a
Figure imgf000258_0002
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con acetato de (2-{6-oxo-8-tia-4,5-diazatriciclo[7.4.0.027]trideca-1(9),2(7),3-trien-5-il}-4-(tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)metilo 230 i (150 mg, 0,31 mmol), 5-bromo-1-metil-3-(5-metilisoxazol-3-ilamino)piridin-2(1H)-ona 283 a (88 mg, 0,31 mmol), PdCL(dppf) (24 mg, 0,031 mmol), K3PO4 (131 mg, 0,62 mmol), acetato de sodio (61 mg, 0,62 mmol), agua (0,2 ml) y acetonitrilo (10 ml). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se agitó a 100 °C durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre diclorometano (20 ml) y agua (10 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 20 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SÜ4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 291a (104 mg, 60 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 559,1
Ejemplo______ 291 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metilisoxazol-3-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidrobenzotiofeno[2,3-d]piridazin-4-ona 291
A una solución de 291a (100 mg, 0,18 mmol) en THF/ /-propanol/agua (10/5/5 ml) se le añadió hidróxido de litio (43 mg, 1,8 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitarse durante 1 h, la EM indicó que se completó la reacción. A continuación, la mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se dividió entre agua (10 ml) y diclorometano (15 ml). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SÜ4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 291 (56 mg, 60 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 517,2. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 9,02 (s, 1H), 8,58 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,00 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,25 (s, 1H), 4,87-4,85 (m, 1H), 4,42-4,36 (m, 2H), 3,61 (s, 3H), 2,98-2,85 (m, 4H), 2,32 (s, 3H), 1,92-1,86 (m, 4H).
Ejemplo 292a 4-{5-[(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-piridin-3-il}-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10,11 -diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1 (8),(6),11-trien-10-il}piridin-3-carbaldehído 292a
Figure imgf000259_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 3-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 242a (344 mg, 1,0 mmol), 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10,11-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6),11-trien-10-il}piridin-3-carbaldehído 282i (538,5 mg, 1,5 mmol), Pd2(dba)3 (91,5 mg, 0,10 mmol), triciclohexilfosfina (112 mg, 0,40 mmol), carbonato de cesio (652 mg, 2,0 mmol), 1,4-dioxano (20 ml) y agua (0,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 75 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se lavó con éter de petróleo para dar 292a (300 mg, bruto) como un sólido negro. EM-ESI: [M+H]+ 542,2
Ejemplo 292 3-[4-[5-[(1,5-dimetilpirazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-6,8-dihidrocidopenta[3,4]tieno[1,3-d]piridazin-4-ona 292
A una solución de 292a (162,6 mg, 0,30 mmol) en metanol (6 ml) se le añadió borohidruro de sodio (114 mg, 3,0 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a 25 °C durante 0,5 h. A continuación, se desactivó con agua (10 ml). La mezcla resultante se evaporó a presión reducida y el residuo se extrajo con diclorometano (3 x 20 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 292 (35 mg, 22 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 543,8. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,57 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 8,02 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,90 (s, 1H), 4,88 (s, 1H), 4,40 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 3,59 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 2,92 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 2,81 (s, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,29 (s, 3H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 293a 1 -metil-4-nitro-1H-1,2,3-triazol 293a
Figure imgf000260_0001
NaOAc. K3 PO 4'
reflujo. 2 h 293 d
A un de fondo redondo de una única boca de 100 ml que contenía 4-nitro-2H-1,2,3-triazol (2,0 g, 17,5 mmol) y THF (10 ml) a 0 °C se le añadió NaH (1,7 g, 35,0 mmol, 2,0 eq.). La mezcla se agitó a 0 °C durante 15 min. Una solución de yodometano (3,68 g, 26,3 mmol, 1,5 eq.) en acetona (40 ml) se añadió y la mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de este tiempo, la reacción se desactivó con agua (20 ml) a 0 °C y se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con diclorometano (100 ml). A continuación, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 6:1 para dar 293 a (800 mg, 35 %) como un sólido amarillo claro y el regioisómero 1-metil-5-nitro-1H-1,2,3-triazol (1,34 g, 60 %) como un sólido blanco. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,34 (s, 1H), 4,26 (s, 3H).
Ejemplo 293b 1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amina 293 b
Siguiendo el procedimiento en el ejemplo 130b y partiendo de 293 a (800 mg, 6,25 mmol) y paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 160 mg) se dio 293 b como un sólido amarillo (600 mg, 98 %). RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 66,91 (s, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,65 (s.a., 2H).
Ejemplo 293c 5-bromo-1-metil-3-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-ilamino)piridin-2(1H)-ona 293 c
Siguiendo el procedimiento en el ejemplo 130c, y partiendo de 293 b (500 mg, 5,10 mmol, 10 eq.) y 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (2,04 g, 7,65 mmol, 1,5 eq.), se dio 293 c como un sólido amarillo (760 mg, 52 %). EM-ESI:
[M+H]+ 283,9.
Ejemplo 293d Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 293 d
Siguiendo el procedimiento en el ejemplo 283b, y partiendo de 293 c (150 mg, 0,53 mmol, 1,0 eq.) y ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (629 mg, 1,59 mmol, 3,0 eq.), se dio 293 d como un sólido amarillo (110 mg, 37 %). EM-ESI: [M+H]+ 557,4.
Ejemplo 293 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(1-metiltriazol-4-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 293
Siguiendo el procedimiento en el ejemplo 283, y partiendo de 293 d (110 mg, 0,20 mmol), se dio 293 como un sólido amarillo pálido (78 mg, 75 %). EM-ESI: [M+H]+ 514,9. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) 68,49 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,33 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 6,87 (s, 1H), 5,25 (s.a., 1H), 4,65-4,38 (m, 3H), 4,21-4,20 (m, 2H), 4,08 (s, 3H), 3,89-3,85 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 2,59 (s, 2H), 2,54 (s, 2H), 1,29 (s, 6H).
Ejemplo 294 3-[4-[5-[(5-ferc-butilisoxazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 294
Siguiendo los procedimientos en el ejemplo 273 y sustituyendo 5-(ferc-butil)isoxazol-3-amina con 2-aminopiridina, se preparó 294 (5,1 mg, rendimiento de un 16 %). RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 58,93 (s, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,04 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 6,22 (s, 1H), 4,90 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 4,51 - 4,36 (m, 2H), 4,26 - 4,16 (m, 3H), 3,85 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 3,60 (s, 3H), 2,58 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,27 (s, 9H), 1,22 (s, 6H). ES-EM m/z 557,4 [M+1].
Ejemplo 295a 5-etilisoxazol-3-amina 295a
Figure imgf000261_0001
A una solución de 3-oxopentanonitrilo (1,0 g, 10,3 mmol) en agua (20 ml) se le añadió NaOH (535,6 mg, 13,4 mmol). Después de agitar durante 5 minutos, se añadió clorhidrato de hidroxilamina (787,4 mg, 11,33 mmol) y la mezcla se calentó a 40 °C durante 12 h. En este punto, se añadió HCl conc. (3 ml) y la mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 2 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se ajustó el pH a 10 con NaOH acuoso (30 %). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 X 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 2:1 para dar 295a como un sólido amarillo (300 mg, 25 %). EM-ESI: [M+H]+ 113,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 5,55 (s, 1H), 5,40 (s, 2H), 2,56-2,52 (m, 2H), 1,13 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Ejemplo 295b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{5-[(5-etil-1,2-oxazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 295b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 295a (24,8 mg, 0,222 mmol), acetato de [4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatri-ciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il]metilo 273a (100 mg, 0,185 mmol), Pd2(dba)3 (8,5 mg, 0,0093 mmol), Xantphos (10,7 mg, 0,019 mmol), Cs2CO3 (120,6 mg, 0,37 mmol) y dioxano (10 ml). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 3 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. Se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se lavó con acetonitrilo (0,5 ml) para dar 295b como un sólido blanco (52 mg, 49,5 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 570,8
Ejemplo 295 3-[4-[5-[(5-etilisoxazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 295
A una solución de 295b (42 mg, 0,0736 mmol) en THF (4 ml), /-propanol(4 ml) y agua (4 ml) se le añadió hidróxido de litio (17,7 mg, 0,736 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (5 ml) y se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). El extracto combinado se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 295 (22 mg, 57%) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 528,8. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 58,99 (s, 1H), 8,49 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,25 (s, 1H), 4,94-4,92 (m, 1H), 4,48-4,38 (m, 2H), 4,26-4,19 (m, 3H), 3,87-3,85 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 2,68-2,66 (m, 2H), 2,62-2,59 (m, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,22 (s, 6H), 1,19 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Ejemplo 296a (3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol 296a
Figure imgf000262_0001
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 100 ml equipado con una entrada de nitrógeno se purgó con nitrógeno y se cargó con ácido 3-nitropirazol-5-carboxílico (0,56 g, 3,56 mmol) y THF (8 ml). El sistema se enfrió a -5 °C usando un baño de hielo/acetona. La solución de complejo de borano-THF (1,0 M, 11 ml, 11,0 mmol) se añadió a una tasa que mantenía la temperatura de reacción interna por debajo de 5 °C. Después de que la adición se completara, el baño de enfriamiento se retiró y la reacción se agitó a 60 °C durante 3 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a -5 °C usando un baño de hielo/acetona, se añadió agua (2 ml) y ácido clorhídrico 4 N (2 ml). La mezcla de reacción se agitó a 70 °C durante 1 h para destrozar el complejo de borano-pirazol. Se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida hasta un volumen de aproximadamente 1 ml. Se añadieron acetato de etilo (20 ml) y agua (10 ml) y la mezcla se agitó durante 15 min. La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (4 x 10 ml). La capa orgánica combinada se lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado (2 x 10 ml), salmuera (10 ml), y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 296 a (345 mg, 68 %) como un sólido amarillo claro. EM-ESI: [M+H]+ 144
Ejemplo 296b (1-(2-bromoetil)-3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol 296 b
Una mezcla de 296 a (345 mg, 2,41 mmol) y carbonato de cesio (965 mg, 2,96 mmol) en DMF (5 ml) se enfrió a 0 °C usando un baño de hielo/acetona y se añadió en porciones dibromoetano (4,48 g, 24,1 mmol) (no exotémica). La reacción se agitó a 0 °C durante 1 h y temperatura ambiente durante 4 h. Después de este tiempo, se añadieron acetato de etilo (20 ml) y agua (15 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 x 10 ml). La capa orgánica combinada se lavó con agua (10 ml), salmuera (10 ml), y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración. El filtrado se concentró a presión reducida para dar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 6:1 para dar 296 b (300 mg, 50 %). EM-ESI: [M+H]+ 250
E je m p lo 296 c 1 -(2 -b ro m o e til) -5 -(c lo ro m e til) -3 -n itro -1 H -p ira zo l 296c
Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 50 ml equipado con una entrada de nitrógeno y un condensador de reflujo se purgó con nitrógeno y se cargó con 296 b (438 mg, 1,76 mmol) y cloroformo (10 ml). La reacción se enfrió a -5 °C usando un baño de hielo/acetona y se añadió en porciones SOCl2 (628 mg, 5,28 mmol). El baño de enfriamiento se retiró y la reacción se agitó a 70 °C durante 3 h. Después de este tiempo, el disolvente se retiró a presión reducida, se añadió acetato de etilo al residuo y la solución resultante se enfrió a -5 °C. Se añadió bicarbonato de sodio acuoso saturado (3 ml) hasta que se alcanzó un pH de 8,5. La mezcla se dividió entre acetato de etilo y agua. La capa orgánica combinada se lavó con carbonato de sodio acuoso saturado (2 x 5 ml), salmuera (10 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 296 c (284 mg, 60 %).
Ejemplo 296d 5-(2-metoxietil)-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 296 d
Un frasco de microondas equipado con un agitador magnético se cargó con 296 c (2,67 g, 10,0 mmol), 2-metoxietanamina (2,25 g, 30,0 mmol) y DMSO (14 ml). La mezcla de reacción se calentó a 120 °C bajo irradiación con microondas durante 1,0 h. Se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con acetato de etilo (40 ml). La mezcla se lavó con agua (3 X 15 ml). La capa orgánica se secó y filtró. El filtrado se concentró a presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 296 d (1,7 g, 75 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 227,0
Ejemplo 296e 5-(2-metoxietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-amina 296 e
A una solución de 296 d (1,7 g, 7,5 mmol) en etanol (50 ml) se le añadió Pd/C (10 %, 800 mg). La reacción se cargó con gas hidrógeno (por medio de un globo) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de que la reacción se completara, la mezcla se filtró a través de un tapón de CELITE®. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 296 e como un sólido amarillo (1,2 g, 82 %), que se usó directamente sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 197,3
Ejemplo 296f 5-bromo-3-(5-(2-metoxietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 296 f
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (40 ml), 296 e (588 mg, 3,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (800 mg, 3,0 mmol) y carbonato de cesio (1,96 g, 6,0 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 20 minutos, se añadieron xantphos (173 mg, 0,30 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (137 mg, 0,15 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a reflujo durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 15 ml). El filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo sólido se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 30/1) para dar 296 f (745 mg, 65 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 382,9
Ejemplo 296g Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(5-{[5-(2-metoxietil)-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino}-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)metilo 296 g
Un matraz de fondo redondo de 25 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con ácido {3-[(acetoxi)metil]-2- {4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico l 99 e (198 mg, 0,50 mmol), 296 f (190 mg, 0,50 mmol), K3PO4 (212 mg, 1,0 mmol), acetato de sodio (82 mg, 1,0 mmol), Pd(dppf)Cl2 (21 mg, 0,025 mmol), acetonitrilo (8 ml) y agua (0,5 ml). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 1 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre diclorometano (20 ml) y agua (10 ml). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 20 ml). El extracto orgánico combinado se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 30/1) para dar 296 g (163 mg, 50 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 654,9
Ejemplo 296 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[[5-(2-metoxietil)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino]-1-metil-6-oxo-3- piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 296
A una solución de 296 g (160 mg, 0,245 mmol) en THF//-propanol/agua (8/5/3 ml) se le añadió hidróxido de litio (29 mg, 1,22 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se evaporó a presión. El residuo se purificó mediante Hp LC prep. de fase inversa para dar 296 como un sólido blanco (117 mg, 78%). EM-ESI: [M+H]+ 613,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 5,71 (s, 1H), 5,05 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 4,66-4,65 (m, 1H), 4,52-4,50 (m, 1H), 4,36-4,34 (m, 1H), 4,17-4,05 (m, 2H), 4,10-4,08 (m, 2H), 3,88-3,87 (m, 1H), 3,75-3,73 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,61-3,59 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 3,04-3,03 (m, 2H), 2,80 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,59-2,57 (m, 2H), 2,54-2,53 (m, 2H), 1,29 (s, 6H).
Ejemplo 297a 6-cloro-2-metil-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)piridazin-3(2H)-ona 297 a
Figure imgf000264_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (30 ml), 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-amina 113 e (1,70 g, 11.2 mmol), 4-bromo-6-cloro-2-metilpiridazin-3(2H)-ona (2,68 g, 12,0 mmol) y carbonato de cesio (7,30 g, 22,4 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 30 minutos, se añadieron Xantphos (0,59 g, 1.02 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (467 mg, 0,51 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 90 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 297 a (1,9 g, 60 %) como un sólido marrón. CLEM: [M+H]+ 295,1
Ejemplo 297b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-metil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[l,5-a]pirazin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il]piridin-3-il)metilo 297 b
Un matraz de fondo redondo de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 297 a (195 mg, 0,66 mmol), acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)metilo 199 e (315 mg, 0,66 mmol), PdCb(dppf) (40 mg, 0,050 mmol), K3PO4 (250 mg, 1,2 mmol), acetato de sodio (100 mg, 1,20 mmol), acetonitrilo (8 ml) y agua (1 ml). El sistema se evacuó y, a continuación, se rellenó con N2. A continuación, se calentó a 100 °C durante 1 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 20:1 para dar 297 b como un sólido amarillo (150 mg, 38 %). EM-ESI: [M+H]+ 612,3.
Ejemplo 297 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino]-6-oxo-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5—b]pirazin-4-ona 297
Una mezcla de 297 b (150 mg, 0,24 mmol) e hidróxido de litio hidratado (96 mg, 2,4 mmol) en THF (8 ml), /-propanol (8 ml) y agua (2 ml) se agitó a 40 °C durante 0,5 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se dividió entre diclorometano (15 ml) y agua (10 ml). El extracto combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 297 como un sólido amarillo pálido (98 mg, 70 %). EM-ESI:
[M+H]+ 570,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) 6 9,30 (s, 1H), 8,52 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 5,99 (s, 1H), 4,74-4,73 (m, 1H), 4,60-4,58 (m, 1H), 4,40-4,37 (m, 1H), 4,26-4,24 (m, 1H), 4,19-4,18 (m, 2H), 3,96-3,95 (m, 2H), 3,89-3,87 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,53-3,52 (m, 2H), 2,80-2,78 (m, 2H), 2,57-2,55 (m, 2H), 2,52-2,50 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 298a Acetato de (4-{5-[(5-cianopirazin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il)metilo 298 a
Figure imgf000264_0002
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con acetato de [4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3 iljmetilo 273 a (269 mg, 0,50 mmol), 5-aminopirazin-2-carbonitrilo (60 mg, 0,50 mmol), XantPhos (29 mg, 0,050 mmol), Pd2(dba)3 (45 mg, 0,050 mmol), Cs2CO3 (326 mg, 1,0 mmol) y 1,4-dioxano (10 ml). La mezcla de reacción se calentó a 100 °C bajo irradiación con microondas durante 1 h después de tres veces en atmósfera/descarga de argón. La mezcla se separó por filtración y el sólido se lavó con metanol (50 ml). El filtrado combinado se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó con cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 298 a (200 mg, 69 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 579,3.
Ejemplo 298 5-[[5-[2-(7,7-dimetil-4-oxo-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazm-3-il)-3-(hidroximetil)-4-piridil]-1-metil-2-oxo-3-piridil]amino]pirazin-2-carbonitrilo 298
Una mezcla de 298 a (200 mg, 0,35 mmol) e hidróxido de litio (84 mg, 3,5 mmol) en /-propanol/THF (5 ml/5 ml) y agua (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se dividió entre acetato de etilo (20 ml) y agua (10 ml). El extracto combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 298 (40 mg, 21 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 537,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 69,96 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,701 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,00 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,42-4,39 (m, 2H), 4,24-4,19 (m, 3H), 3,84 (m, 1H), 3,63 (s, 3H), 2,57 (m, 2H), 2,42 (s, 2H), 1,23 (s, 6H)
Ejemplo 299a 5-fenillisoxazol-3-amina 299 a
Figure imgf000265_0001
A una solución agitada de 3-oxo-3-fenillpropanonitrilo (1,5 g, 10,3 mmol) y NaOH (452 mg, 11,3 mmol) en agua (10 ml)/EtOH (10 ml) se le añadió clorhidrato de hidroxilamina (785 mg, 11,3 mmol). La mezcla se agitó a 80 °C durante la noche. En este punto, se añadió HCl conc. (1,3 ml, 15,5 mmol) y la mezcla resultante se calentó a 80 °C durante 2 h. A continuación, se basificó a pH 10 y se extrajo con acetato de etilo. El extracto combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo (de 1:50 a 1:10) para dar 299 a como un sólido amarillo (1,1 g, 68 %). E M - E s I: [M+H]+ 161,3.
Ejemplo 299b 5-bromo-1-metil-3-(5-fenillisoxazol-3-ilamino)piridin-2(1 H)-ona 299 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (40 ml), 299 a (640 mg, 4,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,1 g, 4,0 mmol), Pd2(dba)3 (366,8 mg, 0,40 mmol), XantPhos (462,4 mg, 0,80 mmol) y carbonato de cesio (2,6 g, 8,0 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 92 °C durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se lavó con acetonitrilo para dar 299 b (1,7 g, 87 %). EM-ESI: [M+H]+ 346,0.
Ejemplo 299c Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-6-oxo-5-[(5-fenil-1,2-oxazol-3-il)amino]-1,6-dihidropiridin-piridin-3-il}piridin-3-il)metilo 299 c
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 299 b (138 mg, 0,40 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diaza-triciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (158,8 mg, 0,40 mmol), Pd(dppf)Cl2 (32,7 mg, 0,040 mmol), K3PO4 (169,6 mg, 0,80 mmol), acetato de sodio (108,8 mg, 0,80 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 299 c como un sólido marrón (120 mg, 49 %). EM-ESI: [M+H]+ 618,8.
Ejemplo 299 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-6-oxo-5-[(5-fenillisoxazol-3-il)amino]-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 299
Una mezcla de 299 c (100 mg, 0,16 mmol) e hidróxido de litio (96 mg, 4,0 mmol) en /-propanol/THF (1:1,4 ml) y agua (1 ml) se agitó a 40 °C durante 30 min. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y se diluyó con agua (5 ml). La mezcla resultante se extrajo con diclorometano tres veces. La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 299 como un sólido blanco (35 mg, 31 %). EM-ESI: [M+H]+ 576,8. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 69,17 (s, 1H), 8,51 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,79-7,77 (m, 2H), 7,60 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,55-7,49 (m, 3H), 7,35 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 6,57 (s, 1H), 4,96-4,93 (m, 1H), 4,50-4,40 (m, 2H), 4,26-4,19 (m, 3H), 3,88-3,85 (m, 1H), 3,63 (s, 3H), 2,62-2,59 (m, 2H), 2,44-2,42 (m, 2H), 1,23 (s, 6H).
Ejemplo 300a 5-(1-metoxipropan-2-il)-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 300 a
Figure imgf000266_0001
Un frasco de microondas equipado con un agitador magnético se cargó con 1-(2-bromoetil)-5-(clorometil)-3-nitro-1H-pirazol 296 c (1,0 g, 3,7 mmol), 1-metoxipropan-2-amina (1,0 g, 11,2 mmol) y DMSO (6 ml). La mezcla se calentó a 120 °C bajo irradiación con microondas durante 1,0 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con agua (30 ml). La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (3 X 20 ml). La capa orgánica combinada se secó y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (de 60/1 a 1/1) para dar 300 a (600 mg, 68 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 241,0
Ejemplo 300b 5-(1-metoxipropan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-amina 300 b
A una solución de 300 a (600 mg, 2,5 mmol) en EtOH (40 ml) se le añadió Pd/C (10 %, 60 mg). La mezcla de reacción se cargó con gas hidrógeno (por medio de un globo) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de que la reacción se completara, la mezcla se filtró a través de un tapón de CELITE®. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 30 o b como un sólido amarillo (467 mg, 89 %), que se usó sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 211 , 1
Ejemplo 300c 5-bromo-3-(5-(1-metoxipropan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]-pirazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 300 c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (40 ml), 300 b (400 mg, 1,9 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (H-001) (508 mg, 1,9 mmol) y carbonato de cesio (1,24 g, 3,8 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 20 minutos, se añadieron xantphos (109 mg, 0,19 mmol) y Pd2(dba)3 (87 mg, 0,095 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a reflujo durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 30 ml). El filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 30/1) para dar 300 c (436 mg, 58 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 396,0
Ejemplo 300d Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(5-{[5-(1-metoxipropan-2-il)-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino}-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)metilo 300 d
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (238 mg, 0 , 60 mmol), 300 c (240 mg, 0,80 mmol), K3PO4 (254 mg, 1,2 mmol), acetato de sodio (98 mg, 1,6 mmol), Pd(dppf)Cl2 (22 mg, 0,030 mmol) y acetonitrilo/agua (12/0,5 ml). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 1 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre diclorometano (30 ml) y agua (30 ml). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 * 30 ml). El extracto orgánico combinado se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 30/1) para dar 300 d (200 mg, 50 %) como un sólido amarillo. EM-ESI:
[M+H]+ 669,4
Ejemplo 300 (R)-2-(3'-(hidroximetil)-5-((5-(1-metoxipropan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4'-bipiridin]-2'-il)-7,7-dimetil-2,3,4,6,7,8-hexahidro-1H-cidopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazm-1-ona 300
A una solución de 300 d (200 mg, 0,30 mmol) en THF//-propanol/agua (6/3/3 ml) se le añadió hidróxido de litio (36 mg, 1,5 mmol). La mezcla se agitó a 30 °C durante 1 h y se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre acetato de etilo (15 ml) y (10 ml). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 X 10 ml). La capa orgánica combinada se secó, se filtró y se concentró a presión reducida. La HPLC prep. y la resolución quiral dieron los dos enantiómeros: 300 (35 mg, 18,6 %) como un sólido blanco; y 303 (28 mg, 15 %) como un sólido blanco. EM-ESI:
[M+H]+ 627,4. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) ó 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,72 (s, 1H), 5,05-5,03 (m, 1H), 4,67-4,45 (m, 1H), 4,52-4,50 (m, 1H), 4,35-4,31 (m, 1H), 4,18-4,16 (m, 2H), 4,09-4,07 (m, 2H), 3,87-3,85 (m, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,56-3,52 (m, 1H), 3,45-3,43 (m, 1H), 3,38 (s, 3H), 3,11-3,08 (m, 3H), 2,60-2,58 (m, 2H), 2,53 (s, 2H), 1,29 (s, 6 H), 1,17 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
Ejemplo 301a 6-(trifluorometil)piridazin-3-amina 301 a
Figure imgf000267_0001
Una mezcla de 3-cloro-6-trifluorometilpiridazina (1,6 g, 8,80 mmol) e hidróxido de amonio (9 ml) en THF (3 ml) se calentó a 100 °C en un reactor de microondas durante 1 h. Después de este periodo, la mezcla de reacción se evaporó y el residuo se extrajo con diclorometano. El extracto combinado se secó sobre MgSO4 , se filtró y se evaporó a presión reducida para dar 301 a (1,3 g, 93 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 164,1
Ejemplo 301b 5-bromo-1-metil-3-(6-(trifluorometil)piridazin-3-ilamino)piridin-2(1H)-ona 301 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 301 a (750 mg, 4,6 mmol), XantPhos (532 mg, 0,92 mmol), Pd2dba3 (421 mg, 0,46 mmol), 2-bromo-4-cloronicotinaldehído (H-001) (1,84 g, 6,9 mmol), Cs2CO3 (3,0 g, 9,2 mmol) y 1,4-dioxano (50 ml). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 90 °C durante la noche. Después de la finalización de la reacción, la mezcla se filtró y el sólido se lavó con metanol (30 ml). El filtrado combinado se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 20:1 para dar 301 b (1,38 g, 89 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 350,8
Ejemplo 301c Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(1-metil-6-oxo-5-{[6-(trifluorometil)piridazin-3-il]amino}-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)metilo 301 c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 301 b (300 mg, 0,86 mmol), acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)metilo 199 e (824 mg, 1,72 mmol), CH3COONa (140 mg, 1,72 mmol), PdCh(dppf) (70 mg, 0,086 mmol), K3PO4 (360 mg, 1,72 mmol), acetonitrilo (20 ml) y agua (0,5 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 20 minutos, se calentó a 100 °C en atmósfera de nitrógeno durante 2 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 301 c como un sólido blanco (125 mg, 23 %). EM-ESI: [M+H]+ 622,3
Ejemplo 301 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-6-oxo-5-[[6-(trifluorometil)piridazin-3-il]amino]-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 301
Una mezcla de 301 c (90 mg, 0,14 mmol) e hidróxido de litio (24 mg, 0,56 mmol) en /-propanol/THF/agua (6 ml/4 ml/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se dividió entre diclorometano (20 ml) y agua (10 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 301 c como un sólido blanco (39 mg, 48 %). EM-ESI: [M+H]+ 580,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 9,57 (s, 1H), 8,87 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,98-4,97 (m, 1H), 4,48-4,40 (m, 2H), 4,27-4,20 (m, 3H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 2,62-2,53 (m, 2H), 2,42-2,41 (m, 2H), 1,2 (s, 6H).
Ejemplo 302a N-metil(1-metil-3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanamina 302 a
A una solución agitada de MeNH2 (30 % en peso en agua) (2,5 g, 20 mmol) en acetona (10 ml) a 0 °C (baño de hielo) se le añadió K2CO3 (415 mg, 3 mmol), seguido de la adición gota a gota de una solución de 5-(bromometil)-1-metil-3-nitro-1H-pirazol (220 mg, 1 mmol) en acetona (5 ml). A continuación, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 3 h. El disolvente se retiró y el residuo se extrajo con cloruro de metileno (3 X 15 ml), se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar 302 a como un aceite amarillo (170 mg, 99 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Cl Em : (M+H)+ 171
Ejemplo 302b N-metil-N-((1-metil-3-nitro-1H-pirazol-5-il)metil)oxetan-3-amina 302 b
A una mezcla de 302 a (170 mg, 1 mmol) en metanol (4 ml), se le añadieron ZnCl2 (1 mmol/l en éter dietílico) (2 ml, 2 mmol) y oxetan-3-ona (150 mg, 2 mmol) a temperatura ambiente bajo protección con nitrógeno, seguido de la adición de NaBH3CN (130 mg, 2 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 50 °C y se agitó durante 3 h. A continuación, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se retiró el disolvente. El residuo se purificó en cromatografía ultrarrápida en columna eluyendo con cloruro de metileno/metanol 50:1 para dar 302 b como un sólido amarillo (180 mg, 80 %, dos etapas). CLEM: (M+H)+ 227. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) ó 6,99 (s, 1H), 4,52 (t, J = 6,5, 2H), 4,42 (t, J = 6, 2H), 3,98 (s, 3H), 3,63 (m, 1H), 3,50 (s, 2H), 2,03 (s, 3H).
Ejemplo 302c 1-metil-5-((metil(oxetan-3-il)amino)metil)-1H-pirazol-3-amina 302 c
A una solución de 302 b (1,8 g, 7,96 mmol) en etanol (20 ml) y agua (20 ml) se le añadieron NH4Cl (3,3 g, 63,6 mmol) y hierro en polvo (1,80 g, 31,8 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante 2 h. Después de esto, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó y el residuo se extrajo con cloruro de metileno (3 X 30 ml), se secó Na2SO4 y se concentró para dar el producto bruto, que se purificó en columna ultrarrápida eluyendo con cloruro de metileno/metanol 50:1 que contenía trietilamina al 0,5 % para dar 302 c como un aceite amarillo (1,3 g, 83 %). CLEM: (M+H)+ 197
Ejemplo 302d 5-bromo-1-metil-3-(1-metil-5-((metil(oxetan-3-il)amino)metil)-1H-pirazol-3-ilamino)piridin-2(1H)-ona 302 d
Figure imgf000269_0001
Siguiendo el procedimiento en el ejemplo 292c, y partiendo de 302 c y 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona, se dio 302 d en un rendimiento de un 63 %. CLEM: (M+H)+ 383. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) 68,35 (s, 1H), 7,99 (d, J = 2,5, 1H), 7,36 (d, J = 2,5, 1H), 5,99 (s, 1H), 4,50 (t, J = 7, 2H), 4,40 (t, J = 6,5, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,57 (m, 1H), 3,49 (s, 3H), 3,35 (s, 2H), 2,01 (s, 3H).
Ejemplo 302e Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(1-metil-5-{[metil(oxetan-3-il)amino]metil}-1H-pirazol-3-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 302 e
Un matraz de fondo redondo de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 302 d (200 mg, 0,52 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026jdodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (210 mg, 0,53 mmol), PdCb(dppf) (37 mg, 0,050 mmol), K3PO4 (250 mg, 1,2 mmol), acetato de sodio (100 mg, 1,20 mmol), acetonitrilo (8 ml) y agua (0,5 ml). El sistema se evacuó y, a continuación, se rellenó con N2. La mezcla se calentó a 100 °C durante 1 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 20:1 para dar 302 e como un sólido amarillo (150 mg, 44 %). EM-ESI: [M+H]+ 655,3.
Ejemplo 302 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[1-metil-5-[[metil(oxetan-3-il)amino]metil]pirazol-3-il]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5—b]pirazin-4-ona 302
Una mezcla de 302 e (150 mg, 0,23 mmol) e hidróxido de litio hidratado (90 mg, 2,3 mmol) en THF (8 ml), /-propanol (8 ml) y agua (2 ml) se agitó a 40 °C durante 0,5 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre agua (10 ml) y diclorometano (3 X 15 ml). El extracto orgánico combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 302 como un sólido amarillo pálido (105 mg, 75 %). EM-ESI: [M+H]+ 612,8. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 68,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,05 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,01 (s, 1H), 4,99-4,97 (m, 1H), 4,50-4,46 (m, 3H), 4,40-4,38 (m, 3H), 4,25-4,18 (m, 3H), 3,85-3,84 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,59 (s, 3H), 3,58-3,54 (m, 1H), 2,58-2,56 (m, 2H), 2,52-2,50 (m, 2H), 2,43-2,42 (m, 2H), 2,00 (s, 3H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 303 (S)-10-[3-(hidroximetil)-4-[5-({5-[(2R)-1-metoxipropan-2-il]-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5—a]pirazin-2-il}amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-2-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 303
Siguiendo el ejemplo 300, se obtuvo el único enantiómero 303 (28 mg, 15 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 627,4. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 68,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,72 (s, 1H), 5,05-5,03 (m, 1H), 4,67-4,45 (m, 1H), 4,52-4,50 (m, 1H), 4,35-4,31 (m, 1H), 4,18-4,16 (m, 2H), 4,09-4,07 (m, 2H), 3,87-3,85 (m, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,56-3,52 (m, 1H), 3,45-3,43 (m, 1H), 3,38 (s, 3H), 3,11-3,08 (m, 3H), 2,60-2,58 (m, 2H), 2,53 (s, 2H), 1,29 (s, 6H), 1,17 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
Ejemplo 304a 5-(2-metoxietil)-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5—a]pirazina 304 a
Figure imgf000270_0001
s.
Figure imgf000270_0002
7Ü °C .2 fl ACN, agua
»4d 1 M “C 1 h 30
A una solución de 2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina (190 mg, 1,13 mmol) 125 i en acetonitrilo (10 ml) se le añadió K2CO3 (311,9 mg, 2,26 mmol) y 1-bromo-2-metoxietano (188,3 mg, 1,36 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 80 °C durante 17 h bajo irradiación con microondas. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 304 a como un sólido blanco (230 mg, 90 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 227,0
Ejemplo 304b 5-(2-metoxietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-amina 304 b
A una solución de 304 a (286 mg, 1,26 mmol) en metanol (10 ml) se le añadió Pd/C (28,6 mg). El sistema se evacuó y, a continuación, se rellenó con H2. Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 h, la mezcla se separó por filtración. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 304 b como un sólido amarillo (240 mg, 97 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 197,0
Ejemplo 304c 5-bromo-3-(5-(2-metoxietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 304 c
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 304 b (230 mg, 1,17 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (468,4 mg, 1,76 mmol), Pd2(dba)3 (53,5 mg, 0,0585 mmol), Xantphos (67,6 mg, 0,117 mmol), Cs2CO3 (762,8 mg, 2,34 mmol) y dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/N2 , la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. Se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 304 c como un sólido oscuro (380 mg, 85 %). EM-ESI: [M+H]+ 382,2
Ejemplo 304d 3-(5-(2-metoxietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1 H)-ona 304 d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 304 c (330 mg, 0,86 mmol), Pin2B2 (329 mg, 1,30 mmol), Pd2(dba)3 (40 mg, 0,043 mmol), X-phos (41 mg, 0,086 mmol), acetato de potasio (169 mg, 1,726 mmol) y dioxano (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/N2 , la mezcla se calentó a 70 °C durante 2 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. Se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se lavó con éter de petróleo para dar 304 d como un aceite oscuro (240 mg, 80 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 348,3
Ejemplo 304e 2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10,11-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6),11-trien-10-il}-4-(5-{[5-(2 metoxietil)-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino}-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-carbaldehído 304 e
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10,11-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6),11-trien-10-il}piridin-3-carbaldehído 282 i (60 mg, 0,167 mmol), 304 d (143,4 mg, 0,334 mmol), Pd(dppf)Cl2 (6,8 mg, 0,0084 mol), K3PO4 (70,8 mg, 0,334 mmol), acetato de sodio (27,4 mg, 0,334 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (3 gotas). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a 100 °C durante 1 h bajo protección con N2. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. Se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 304 e (80 mg, 77 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 626,8
Ejemplo 304 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[[5-(2-metoxietil)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-6,8-dihidrociclopenta[3,4]tieno[1,3-d]piridazin-4-ona 304
A una solución de 304 e (80 mg, 0,128 mmol) en diclorometano (4 ml) y metanol (4 ml) se le añadió NaBH4 (9,7 mg, 0,256 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se desactivó con NH4Cl acuoso (10 ml) y se concentró a presión reducida y el residuo se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). El extracto combinado se secó sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 304 (23,5 mg, 29 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 628,8. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 68,57 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,05 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,89 (s,1H), 4,87 (s, 1H), 4,39 (s, 2H), 3,92-3,90 (m, 2H), 3,61 (s, 2H), 3,59 (s, 3H), 3,50 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,26 (s, 3H), 2,92-2,89 (m, 4H), 2,81 (s, 2H), 2,68-2,66 (m, 2H), 1,29 (s, 3H), 1,28 (s, 3H).
Ejemplo 305a 6-cloro-4-(5-(2-metoxietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-2-metilpiridazin-3(2H)-ona 305 a
Figure imgf000271_0001
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 5-(2-metoxietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-amina 304 b (392 mg, 2,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (446 mg, 2,0 mmol), carbonato de cesio (1,30 g, 4,0 mmol) y 1,4-dioxano (40 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 10 minutos, se añadieron xantphos (115 mg, 0,20 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (92 mg, 0,10 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 100 °C durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 x 15 ml). El filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 30/1) para dar 305 a (412 mg, 61 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 338,9
Ejemplo 305b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(5-{[5-(2-metoxietil)-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino}-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)piridin-3-il)metilo 305 b
Un matraz de fondo redondo de 25 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 305 a (200 mg, 0,60 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (238 mg, 0,60 mmol), K3PO4 (254 mg, 1,2 mmol), acetato de sodio (98 mg, 1,2 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (22 mg, 0,030 mmol) y acetonitrilo/agua (8/0,5 ml). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 1 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre diclorometano (30 ml) y agua (20 ml). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 30 ml). El extracto orgánico combinado se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 30/1) para dar 305 b (169 mg, 43 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 655,9
Ejemplo 305 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[[5-(2-metoxietil)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino]-1-metil-6-oxopiridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5—b]pirazin-4-ona 305
A una solución de 305b (160 mg, 0,24 mmol) en THF//-propanol/agua (6/4/3 ml) se le añadió hidróxido de litio (29 mg, 1,2 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre agua (15 ml) y acetato de etilo (20 ml). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 X 20 ml). La capa orgánica combinada se secó y se concentró a presión. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 305 como un sólido blanco ( 88 mg, 6 0 %). EM-ESI: [M+H]+ 614,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) 6 8,56 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,44 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,84 (s, 1H), 5,96 (s, 1H), 4,59-4,57 (m, 3H), 4,49-4,47 (m, 1H), 4,17-4,12 (m, 4H), 3,92-3,90 (m, 4H, solapamiento), 3,77-3,75 (m, 2H), 3,61-3,60 (m, 2H), 3,41 (s, 3H), 3,05-3,03 (m, 2H), 2,81-2,79 (m, 2H), 2,60-2,58 (m, 2H), 2,52-2,50 (m, 2H), 1,28 (s, 6 H).
Ejemplo 306a Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026 ]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{5-[(6-metoxipiridazin-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 306a
Figure imgf000272_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 6-metoxipiridazin-3-amina (65 mg, 0,52 mmol), XantPhos (29 mg, 0,050 mmol), Pd2dba3 (45 mg, 0,050 mmol), acetato de [4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026 ]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il]metilo 273a (281 mg, 0,52 mmol), Cs2CO3 (326 mg, 1,0 mmol) y 1,4-dioxano (10 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 20 minutos, se calentó a reflujo durante 2 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se dividió entre acetato de etilo (20 ml) y agua (10 ml). El acetato de etilo se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 20:1 para dar 306a (180 mg, 60 %). EM-ESI: [M+H]+ 584,3.
Ejemplo 306 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[(6-metoxipiridazin-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 306
Una mezcla de 306a (180 mg, 0,32 mmol) e hidróxido de litio monohidratado (84 mg, 2,0 mmol) en THF (5 ml), ipropanol (5 ml) y agua (1,5 ml) se agitó a 40 °C durante 0,5 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se dividió entre acetato de etilo (20 ml) y agua (10 ml). El acetato de etilo se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 306 (80 mg, 49 %). EM-ESI: [M+H]+ 542,3. Rm N de 1H (500 MHz, DMSO-de) 6 8 , 8 6 (s, 1H), 8,76 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,11-7,10 (m, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,94-4,93 (m, 1H), 4,48-4,45 (m, 1H), 4,40-4,38 (m, 1H), 4,25-4,18 (m, 3H), 3,91 (s, 3H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,58-2,56 (m, 2H), 2,50-2,49 (m, 2H), 1,21 (s, 6 H).
Ejemplo 307a 1,3-dimetil-5-nitro-1H-indazol 307a
Figure imgf000273_0001
A una solución de 1-(2-cloro-5-nitrofenil)etanona (500 mg, 2,5 mmol) en etanol anhidro (15 ml) se le añadió clorhidrato de 1,1-dimetilhidracina (3,38 g, 35,0 mmol) bajo protección con nitrógeno. La mezcla se calentó a reflujo durante 10 h y se evaporó a presión reducida para dar 307 a bruto (3,0 g), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 192,2
Ejemplo 307b 1,3-dimetil-1H-indazol-5-amina 307 b
A una solución de 307 a (bruto, 2,5 mmol) en etanol (95 %, 30 ml) se le añadió NH2NH2 acuosa (1,25 g, 25,0 mmol), Pd/C (100 mg) bajo protección con nitrógeno. La mezcla se agitó a 50 °C durante 1,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de una almohadilla de CELITE®. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se recristalizó a partir de etanol anhidro (5 ml) para dar 307 b como un sólido blanco (340 mg, 84 % en dos etapas). EM-ESI: [M+H]+ 162,3
Ejemplo 307c 5-bromo-3-(1,3-dimetil-1H-indazol-5-ilamino-1-metilpirazin-2(1H)-ona 307 c
A una solución de 307 b (280 mg, 1,74 mmol) en /-propanol (7 ml) se le añadió trietilamina (352 mg, 3,48 mmol) y 3,5-dibromo-1-metilpirazin-2(1H)-ona (H-005) (700 mg, 2,61 mmol). Después de agitarse a reflujo durante 6 h, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente. El precipitado se filtró, se lavó con /-propanol (2 X 2 ml) y se secó a 60 °C a presión reducida para dar 307 c como un sólido marrón (560 mg, 92 %). EM-ESl: [m H]+ 347,8.
Ejemplo 307d Acetato de (4-{6-[(1,3-dimetil-1H-indazol-5-il)amino]-4-metil-5-oxo-4,5-dihidro-pirazin-2-il}-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il)metilo 307 d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 307 c (300 mg, 0,86 mmol), 1,4-dioxano (20 ml), agua (1 ml), acetato de [4-(dihidroxiboranil)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il]metilo 199 e (512 mg, 1,28 mmol) y carbonato de cesio (560 mg, 1,72 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 10 minutos, se añadieron Cy3P (96 mg, 0,34 mmol) y Pd2(dba)3 (79 mg, 0,086 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a reflujo durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (3 X 20 ml). El filtrado combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 100:1 para dar 307 d (230 mg, 43 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 620,9
Ejemplo 307 3-[4-[6-[(1,3-dimetilindazol-5-il)amino]-4-metil-5-oxo-pirazin-2-il]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 307
Una mezcla de 307 d (230 mg, 0,37 mmol), hidróxido de litio (89 mg, 3,7 mmol) en /-propanol/THF (1:1, 10 ml) y agua (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 307 (41 mg, 19 %) como un sólido blanco. EM ESI: [M+H]+ 578,4. RMN de 1H (500 MHz, CDCI3) 58,58 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,56 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,88 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,51 (dd, J = 2,0, 9,0 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 5,17-5,14 (m, 1H), 4,75-4,73 (m, 1H), 4,55-4,52 (m, 1H), 4,48-4,43 (m, 1H), 4,20-4,16 (m, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,92-3,70 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 2,60 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 2,57 (s, 3H), 2,54 (s, 2H), 1,30 (s, 6H).
Ejemplo 308a 2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatricido[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}-4-(5-{[5-(2-metoxietil)-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino}-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-carbaldehído 308 a
Figure imgf000274_0001
Siguiendo el procedimiento en el ejemplo 304 y partiendo de 4-doro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriddo[6.4.0.02,6]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 109 a (250 mg, 0,693 mmol) y 3-(5-(2-metoxietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 304 d (595 mg, 0,1,386 mmol), se obtuvo 308 a como un sólido amarillo (250 mg, 57 %). EM-ESI:
[M+H]+ 628,3
Ejemplo 308 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[[5-(2-metoxietil)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]tieno[1,3—c]piridin-4-ona 308
Siguiendo los procedimientos en el ejemplo 304 y partiendo de 308 a (230 mg, 0,366 mmol) y NaBH4 (27,7 mg, 0,732 mmol), se obtuvo 308 como un sólido blanco (53,2 mg, 23 %). EM-ESI: [M+H]+ 629,8. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 58,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,04 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,95-4,93 (m, 1H), 4,47-4,39 (m, 2H), 4,20-4,14 (m, 1H), 3,92-3,91 (m, 2H), 3,84-3,80 (m, 1H), 3,61 (s, 2H), 3,58 (s, 3H), 3,51-3,49 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 3,06-3,00 (m, 1H), 2,91-2,87 (m, 3H), 2,77 (s, 2H), 2,68-2,53 (m, 4H), 1,19 (s, 3H), 1,18 (s, 3H).
Ejemplo 309a 5-(3-metoxipropil)-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5—a]pirazina 309 a
Figure imgf000275_0001
Figure imgf000275_0002
PcJv(dL>a isan tch os
CslOO,, dioxa no.
303a 309 b IDO UC. S il
Figure imgf000275_0003
Un frasco de microondas equipado con un agitador magnético se cargó con 1-(2-bromoetil)-5-(clorometil)-3-nitro-1H-pirazol 296 c (600 mg, 2,2 mmol), 3-metoxipropan-1-amina (595 mg, 6 , 6 mmol) y DMSO ( 6 ml). Se calentó a 120 °C bajo irradiación con microondas durante 0,5 h. A continuación, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con acetato de etilo (30 ml). La mezcla resultante se lavó con agua (3 X 10 ml). La capa orgánica se secó y filtró. El filtrado se concentró a presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 309 a (350 mg, 6 6 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 241,1
Ejemplo 309b 5-(3-metoxipropil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-amina 309 b
A una solución de 309 a (300 mg, 1,25 mmol) en etanol (20 ml) se le añadió Pd/C (10 %, 30 mg). La reacción se cargó con gas hidrógeno (por medio de un globo) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Después de que la reacción se completara, la mezcla se filtró a través de un tapón de CELITE®. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 309 b como un sólido amarillo (250 mg, 92 %), que se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa. EM-ESI:
[M+H]+ 211,3
Ejemplo 309c 5-bromo-3-(5-(3-metoxipropil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-il-amino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 309 c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (320 mg, 1,2 mmol), 309 b (250 mg, 1,2 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (55 mg, 0,060 mmol), xantphos (70 mg, 0,12 mmol), carbonato de cesio (782 mg, 2,4 mmol) y 1,4-dioxano (20 ml). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a 100 °C durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 x 10 ml). El filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80:1 a 30:1) para dar 309 c (200 mg, 42 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 396,2
Ejemplo 309d Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(5-{[5-(3-metoxipropil)-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino}-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)metilo 309 d
Un matraz de fondo redondo de 25 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 309 c (120 mg, 0,30 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (240 mg, 0,60 mmol), K3PO4 (127 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio monohidratado ( 8 2 mg, 0,60 mmol), Pd(dppf)Cl2 (12 mg, 0,015 mmol) y acetonitrilo/agua (8/0,5 ml). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 2 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre diclorometano (20 ml) y agua (10 ml). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 * 10 ml). El extracto orgánico combinado se secó sobre Na2SÜ4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80:1 a 30:1) para dar 309 d (150 mg, 74 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 668,9
Ejemplo 309 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[[5-(3-metoxipropil)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 309
A una solución de 309 d (120 mg, 0,18 mmol) en THF//-propanol/agua (5/3/3 ml) se le añadió hidróxido de litio monohidratado (76 mg, 1,8 mmol). La mezcla se agitó a 30 °C durante 1 h. Después de que la reacción se completara, la mezcla se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 309 como un sólido blanco (85 mg, 76%). EM-ESI: [M+H]+ 627,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) ó 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 5,71 (s, 1H), 5,05 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,66-4,64 (m, 1H), 4,52-4,50 (m, 1H), 4,36-4,32 (m, 1H), 4,17-4,16 (m, 2H), 4,08-4,06 (m, 2H), 3,88-3,85 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,65-3,64 (m, 2H), 3,48 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,36 (s, 3H), 2,93 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,65-2,62 (m, 2H), 2,59-2,58 (m, 2H), 2,53 (s, 2H), 1,87-1,83 (m, 2H), 1,29 (s, 6H).
Ejemplo 310a Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-metil-1,2-tiazol-3-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 310 a
Figure imgf000276_0001
Un tubo sellado de 25 ml se cargó con acetato de [4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il]metilo 273 a (150 mg, 0,28 mmol), clorhidrato de 5-metilisotiazol-3-amina (55 mg, 0,33 mmol), Cs2CÜ3 (183 mg, 0,56 mmol), Pd2(dba)3 (27 mg, 0,030 mmol), XantPhos (35 mg, 0,060 mmol) y dioxano (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 110 °C bajo irradiación con microondas durante 0,5 horas. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante columna en gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/metanol 20:1 para dar 310 a como un sólido amarillo (50 mg, 31 %). EM-ESI: [M+H]+ 573,2.
Ejemplo 310 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metilisotiazol-3-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 310
A una solución de 310 a (50 mg, 0,090 mmol) en THF/ /-propanol/agua (4 ml/4 ml/1 ml) se le añadió hidróxido de litio (21 mg, 0,90 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h y se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 X 20 ml). La capa orgánica combinada se secó con Na2SÜ4 y se concentró a presión reducida para dar a un sólido amarillo, que se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 310 como un sólido amarillo (20 mg, 43 %). EM-ESI: [M+H]+ 530,8. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,51 (s, 1H), 5,09-5,06 (m, 1H), 4,66-4,47 (m, 2H), 4,28-4,27 (m, 1H), 4,17­ 4,12 (m, 2H), 3,89-3,82 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 2,57 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 2,52-2,50 (m, solapamiento, 5H), 1,27 (s, 6H).
Ejemplo 311a Acetato de (4-{5-[(5-ciclopropil-1,2-oxazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-piridin-3-il}-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il)metilo 311 a
Figure imgf000277_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-ciclopropilisoxazol-3-amina (80 mg, 0,65 mmol), XantPhos (29 mg, 0,050 mmol), Pd2dba3 (45 mg, 0,050 mmol), acetato de [4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.02,6]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il]metilo 273 a (350 mg, 0,65 mmol), Cs2CO3 (390 mg, 1,2 mmol) y 1,4-dioxano (10 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 10 minutos, se calentó a reflujo durante 2 h. A continuación, la mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se dividió entre acetato de etilo (20 ml) y agua (10 ml). La capa orgánica se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 20:1 para dar 311 a (120 mg, 32 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 583,2.
Ejemplo 311 3-[4-[5-[(5-ciclopropilisoxazol-3-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 311
Una mezcla de 311 a (120 mg, 0,20 mmol) e hidróxido de litio monohidratado (80 mg, 2,0 mmol) en THF (5 ml), i-propanol (5 ml) y agua (1,5 ml) se agitó a 40 °C durante 0,5 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (5 ml). A continuación, se extrajo con acetato de etilo (2 x 10 ml). El extracto combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 311 (65 mg, 58 %) como un sólido amarillo pálido. EM-ESI: [M+H]+ 541,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 68,92 (s, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 6,19 (s, 1H), 4,92­ 4,90 (m, 1H), 4,45-4,44 (m, 1H), 4,40-4,39 (m, 1H), 4,24-4,18 (m, 3H), 3,86-3,83 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 2,58-2,56 (m, 2H), 2,44-243 (m, 2H), 2,07-2,04 (m, 1H), 1,22 (s, 6H), 1,03-0,99 (m, 2H), 0,84-0,81 (m, 2H).
Ejemplo 312a 5-bromo-1-metil-3-(5-metil-1-(oxetan-3-il)-1H-pirazol-3-ilamino)piridin-2(1H)-ona 312 a
Figure imgf000277_0002
Una mezcla de 5-bromo-1-metil-3-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino)piridin-2(1H)-ona 115 a (200 mg, 0,71 mmol), 3-yodooxetano (647 mg, 3,53 mmol), Cs2CO3 (1150 mg, 3,53 mmol) y acetonitrilo (5 ml) se calentó a 80 °C en un tubo sellado durante la noche. A continuación, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 20:1 para dar el 312 a como un sólido amarillo (120 mg, 50 %). EM-ESI: [M+H]+ 339,1
Ejemplo 312b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(1-metil-5-{[5-metil-1-(oxetan-3-il)-1H-pirazol-3-il]amino}-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)metilo 312 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 312 a (170 mg, 0,50 mmol), ácido (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,{3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (200 mg, 0,50 mmol), CHaCOONa (82 mg, 1,00 mmol), PdCh(dppf) (41 mg, 0,050 mmol), K3PO4 (212 mg, 1,00 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 20 minutos, se calentó a 100 °C en atmósfera de nitrógeno durante 2 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 312 b como un sólido blanco (172 mg, 56 %). EM-ESI: [M+H]+ 612,4
Ejemplo 312 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[5-metil-1-(oxetan-3-il)pirazol-3-il]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazm-4-ona 312
Una mezcla de 312 b (90 mg, 0,15 mmol) e hidróxido de litio (14 mg, 0,60 mmol) en /-propanol/THF/agua (6/4/2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre agua (10 ml) y diclorometano (3 X 20 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 312 como un sólido blanco (54 mg, 64 %). EM-ESI: [M+H]+ 569,9. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,24 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,48 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 5,95 (s, 1H), 5,46-5,42 (m, 1H), 4,99-4,91 (m, 3H), 4,81­ 4,78 (m, 2H), 4,52-4,41 (m, 2H), 4,24-4,18 (m, 3H), 3,87-3,84 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 2,61-2,56 (m, 2H), 2,43 (s, 2H), 2,15 (s, 3H), 1,22 (s, 3H), 1,19 (s, 3H).
Ejemplo 313a 2-(5-(hidroximetil)-3-nitro-1H-pirazol-1-il)acetato de etilo 313 a
Figure imgf000278_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con acetonitrilo (30 ml), (3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol (1,43 g, 10,0 mmol), Cs2CO3 (490 mg, 1,5 mmol) y 2-bromoacetato de etilo (2,00 g, 12 mmol). La mezcla se agitó a 40 °C durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 313 a (1,65 g, 72 %) como un sólido amarillo. EM-ESI:
[M+H]+ 229,9
Ejemplo 313b 2-(5-(clorometil)-3-nitro-1H-pirazol-1-il)acetato de etilo 313 b
Figure imgf000278_0002
A una mezcla de 313 a (1,50 g, 6,55 mmol) en CHCb (60 ml) enfriada a 0 °C se le añadió lentamente SOCl2 (2,34 g, 19,6 mmol) mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de 5 °C. Esta mezcla de reacción se calentó a 50 °C y se agitó a esta temperatura durante 3 h. A continuación, se enfrió a 0 °C y se desactivó con agua. La capa orgánica se separó y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 313 b (1,1 g, 68 %) como un sólido amarillo. EM-ESI:
[M+H]+ 247,9
Ejemplo 313c 5-metil-2-nitro-4,5-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-6(7H)-ona 313 c
Figure imgf000278_0003
A una solución de 313 b (1,0 g, 4,0 mmol) en diclorometano (30 ml) se le añadió una solución de CH3NH2 (1,07 g, 12,0 mmol, 35 % en metanol). Esta mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y se diluyó con agua (30 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 313 c (450 mg, 57 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 196,9
Ejemplo 313d 2-amino-5-metil-4,5-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-6(7H)-ona 313 d
Figure imgf000279_0001
A una solución de 313 c (450 mg, 2,3 mmol) en etanol (30 ml) se le añadió Pd/C (10 %, 400 mg). La reacción se cargó con gas hidrógeno (por medio de un globo) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de que la reacción se completara, la mezcla se filtró a través de un tapón de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 313 d como un sólido amarillo (320 mg, 84 %), que se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa. EM-ESI:
[M+H]+ 167,1
Ejemplo 313e 2-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)-5-metil-4,5-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-6(7H)-ona 313 e
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 313 d (300 mg, 1,8 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (482 mg, 1,8 mmol), carbonato de cesio (1,17 g, 3,6 mmol) y 1,4-dioxano (20 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 10 minutos, se añadieron xantphos (104 mg, 0,18 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (82 mg, 0,090 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a reflujo durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 30 m). El filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 30/1) para dar 313 e (390 mg, 61 %) como un sólido amarillo.
Ejemplo 313f Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-metil-6-oxo-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-il)metilo 313 f
Figure imgf000279_0002
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 313 e (150 mg, 0,43 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (170 mg, 0,43 mmol), K3PO4 (183 mg, 0,86 mmol), acetato de sodio (71 mg, 0,86 mmol), Pd(dppf)Cl2 (35 mg, 0,043 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a 100 °C durante 3 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 313 f (131 mg, 49 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 625,3.
Ejemplo 313 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6-oxo-4,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5—b]pirazin-4-ona 313
Una mezcla de 313 f (130 mg, 0,21 mmol) e hidróxido de litio (10 mg, 0,42 mmol) en /-propanol/THF (1:1, 7 ml) y agua (2 ml) se agitó a 0 °C durante 0,5 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre agua (10 ml) y acetato de etilo (3 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 313 (60 mg, 49 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 582,8. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,10 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,07 (s, 1H), 4,95 (s.a., 1H), 4,62-4,54 (m, 4H), 4,46-4,42 (m, 2H), 4,24-4,19 (m, 3H), 3,89-3,82 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 2,99 (s, 3H), 2,60-2,57 (m, 2H), 2,45-2,44 (m, 2H), 1,23 (s, 6H).
Ejemplo 314a 1 -(6-nitropiridin-3-M)azetidin-3-ol 314 a
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con acetonitrilo (50 ml), 5-fluoro-2-nitropiridina (1,2 g, 7,9 mmol), K2CO3 (2,1 g, 15,8 mmol) y clorhidrato de azetidin-3-ol (1,3 g, 11,9 mmol). La mezcla se calentó a 60 °C durante 1 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 50:1 a 20:1) para dar 314 a (1.1 g, 73 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 196,0.
Ejemplo 314b 1-(6-aminopiridin-3-il)azetidin-3-ol 314 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 314 a (1,0 g, 5,1 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 10 % humedecido, 100 mg) y etanol (40 ml). La mezcla se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 314 b como un sólido amarillo (792 mg, 85 %). EM-ESI: [M+H]+ 166,1.
Ejemplo 314c 5-bromo-3-(5-(3-hidroxiazetidin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 314 c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 314 b (792 mg, 4,8 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,9 g, 7,2 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (440 mg, 0,48 mmol), XantPhos (555 mg, 0,96 mmol), Cs2cO3 (3,1 g, 9,6 mmol) y 1,4-dioxano (40 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 90 °C durante 3,0 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 50:1 a 20:1) para dar 314 c como un sólido amarillo (1,5 g, 89 %). EM-ESI: [M+H]+ 351,1
Ejemplo 314d Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(5-{[5-(3-hidroxiazetidin-1-il)piridin-2-il]amino}-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-piridin-3-il)piridin-3-il)metilo 314 d
Figure imgf000280_0001
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 314 c (176 mg, 0,50 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatri-ciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (198 mg, 0,50 mmol), Pd(dppf)Cl2 (41 mg, 0,050 mmol), K3PO4 (212,0 mg, 1,0 mmol), acetato de sodio (82,0 mg, 1,0 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 95 °C durante 1 hora. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 314 d bruto como un sólido marrón, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 623,8.
Ejemplo 314 3-[4-[5-[[5-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-piridil]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazm-4-ona 314
Una mezcla de 314 d (producto bruto 311,5 mg, 0,50 mmol) e hidróxido de litio hidratado (300 mg, 12,5 mmol) en ipropanol/THF/agua (2:2:1, 10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre agua (10 ml) y diclorometano (3 X 10 ml). El extracto combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 314 (46 mg, dos etapas: 16 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 581,9. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 68,54 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,54 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,83-6,81 (m, 2H), 6,75 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,04-5,02 (m, 1H), 4,77-4,75 (m, 1H), 4,64-4,62 (m, 1H), 4,50-4,48 (m, 1H), 4,34-4,32 (m, 1H), 4,17-4,14 (m, 4H), 3,86-3,83 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,64-3,62 (m, 2H), 2,57-2,56 (m, 2H), 2,51 (s, 2H), 2,31­ 2,30 (m, 1H), 1,27 (s, 6H).
Ejemplo 315 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[[1-metil-5-(pirrolidin-1-carbonil)pirazol-3-il]amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5—b]pirazin-4-ona 315
Siguiendo los procedimientos del ejemplo 273, y sustituyendo (3-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)(pirrolidin-1-il)metanona con 2-aminopiridina, se preparó 315.27,3 mg, rendimiento de un 60 %. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 68,48 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,05 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,46 (s, 1H), 4,95 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,42 - 4,47 (m, 1H), 4,17 - 4,21 (m, 3H), 3,79 (s, 2H), 3,59 (s, 3H), 3,48 (dt, J = 11,1, 6,6 Hz, 3H), 3,27 (s, 2H), 2,57 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,90 - 1,84 (m, 3H), 1,22 (s, 6H). ES-EM m/z 611,4 [M+1].
Ejemplo 316 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[[5-(metoximetil)-1-metil-pirazol-3-il]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5—b]pirazin-4-ona 316
Siguiendo los procedimientos del ejemplo 273, y sustituyendo 5-(metoximetil)-1-metil-1H-pirazol-3-amina con 2-aminopiridina, se preparó 316. 43,2 mg, rendimiento de un 84 %. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 6 8,47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,15 (s, 1H), 8,04 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,11 (s, 1H), 4,96 - 4,90 (m, 1H), 4,38 - 4,46 (m, 1H), 4,38 (s, 2H), 4,19 (d, J = 9,8 Hz, 2H), 3,82 - 3,96 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,27 (s, 2H), 2,57 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,22 (s, 6H). ES-EM m/z 558,3 [M+1 ].
Ejemplo 317a 5-metil-2-(1-metil-2-oxo-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)-4,5-dihidropirazolo[1,5—a]pirazin-6(7H)-ona 317 a
Figure imgf000281_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 2-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)-5-metil-4,5-dihidropirazolo[1,5—a]pirazin-6(7H)-ona 313 e (270 mg, 1,0 eq., 0,68 mmol), Pin2B2 (863,6 mg, 5,0 eq., 3,4 mmol), Pd2(dba)3 (62,4 mg, 0,1 eq., 0,068 mmol), X-Phos (64,8 mg, 0,2 eq., 0,14 mmol), acetato de potasio (200 mg, 3,0 eq., 2,04 mmol) y dioxano (15 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 65 °C durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 317 a bruto, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 399,9.
Ejemplo 317b 2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-metil-6-oxo-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5—a]pirazin-2-il}amino)-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-carbaldehído 317 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 317 a (100 mg, 0,28 mmol), 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 109 a (112 mg, 0,28 mmol), Pd(dppf)Cl2 (22,9 mg, 0,028 mmol), K3PO4 (118,7 mg, 0,56 mmol), acetato de sodio (45,9 mg, 0,56 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a reflujo durante 1 hora. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 50:1 a 30:1) para dar 317 b como un sólido amarillo (60 mg, 36 %). EM-ESI: [M+H]+ 597,8.
Ejemplo 317 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6-oxo-4,7-dihidropirazolo[1,5—a]pirazin-2-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]tieno[1,3—c]piridin-4-ona 317
Una mezcla de 317 b (60 mg, 0,10 mmol) y NaBH4 (11,3 mg, 0,30 mmol) en metanol (5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla se desactivó con agua (15 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). El extracto combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 317 (15 mg, 25 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 599,8. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) 68,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,0 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,82-4,66 (m, 4H), 4,56 (s, 2H), 4,42-4,33 (m, 2H), 3,83-3,81 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,15 (s, 3H), 2,98-2,94 (m, 2H), 2,80 (s, 2H), 2,57-2,52 (m, 2H), 1,28 (s, 6H).
Ejemplo 318a Acetato de {4-[5-({4,5-dimetil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il}amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il}metilo 318 a
Figure imgf000282_0001
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-amina 287 i (123 mg, 1,0 eq., 0,74 mmol), acetato de [4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il]metilo 273 a (400 mg, 1,0 eq., 0,74 mmol), Pd2(dba)3 (68 mg, 0,1 eq., 0,074 mmol), Xantphos (86 mg, 0,2 eq., 0,148 mmol), Cs2COa (487 mg, 2,0 eq., 1,48 mmol) y dioxano (15 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/N2 , la mezcla se agitó a 100 °C durante 2 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol 20:1 para dar 318 a como un sólido marrón (221 mg, 48 %). EM-ESI: [M+H]+ 624,9
Ejemplo 318b 10-{4-[5-({4,5-dimetil-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il}amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-3-(hidroximetil)piridin-2-il}-4,4-dimetil-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 318 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 318 a (200 mg, 1,0 eq., 0,32 mmol), hidróxido de litio (38 mg, 5,0 eq., 1,60 mmol), /-propanol/THF (8/8 ml) y agua (2 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se concentró a presión reducida. Se añadió el residuo dividido entre agua y diclorometano. La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar la mezcla racémica 318 b como un sólido amarillo (91 mg, 43 %).
Ejemplo 318 (R)-2-(5-((4,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino)-3'-(hidroximetil)-1-metil-6-oxo-1.6- dihidro-[3,4’-bipiridin]-2'-il)-7,7-dimetil-2,3,4,6,7,8-hexahidro-1H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2—a]pirazin-1 -ona 318
La resolución de HPLC quiral (columna: OZ-H, metanol al 100 % (acetato de etilo al 0,1 %)) de 318 b separó los enantiómeros 318 y 319.318 : EM-ESI: [M+H]+ 582,8. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) 68,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,72 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,36 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 5,04 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,66-4,64 (m, 1H), 4,52-4,48 (m,1H), 4,36-4,34 (m,1H), 4,18-4,05 (m, solapamiento, 4H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,43-3,41 (m, 1H), 3,17-3,15 (m, 1H), 2,87-2,85 (m, 1H), 2,60-2,59 (m, 2H), 2,53 (s, 2H), 2,48 (s, 3H), 1,46 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,29 (s, 6H).
Ejemplo 319 (S)-2-(5-((4,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-il)amino)-3'-(hidroximetil)-1-metil-6-oxo-1.6- dihidro-[3,4'-bipiridin]-2-il)-7,7-dimetil-2,3,4,6,7,8-hexahidro-1H-cidopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona 319
La resolución de HPLC quiral (columna: OZ-H, metanol al 100 % (acetato de etilo al 0,1 %)) de 318 b racémico separó los enantiómeros 318 y 319.319 : EM-ESI: [M+H]+ 582,8. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) 68,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,72 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,36 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 5,04 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,67-4,65 (m, 1H), 4,52-4,48 (m,1H), 4,36-4,34 (m, 1H), 4,18-4,05 (m, solapamiento, 4H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,43-3,41 (m, 1H), 3,17-3,15 (m, 1H), 2,87-2,85 (m, 1H), 2,60-2,59 (m, 2H), 2,53 (s, 2H), 2,48 (s, 3H), 1,46 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,30 (s, 6H).
Ejemplo 320a (6-aminopiridin-3-il)((3R,5S)-3,5-dimetilmorfolino)metanona 320 a
Figure imgf000283_0001
o xano.
320a 320 b
Figure imgf000283_0002
3?0c
A una solución de (3S,5R)-3,5-dimetilmorfolina (1,15 g, 10 mmol) en DMF (15 ml) se le añadió HATU (3,8 g, 10 mmol), DIPEA (2,6 g, 20 mmol) y ácido 6-aminonicotínico (1,38 g, 10 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 18 h. A continuación, se filtró y el filtrado se purificó con Combiflash (A: NH4HCO3 al 1 %/agua, B: acetonitrilo) para dar 320 a (650 mg, 27 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 236,1.
Ejemplo 320b 5-bromo-3-(5-((3R,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-carbonil)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 320 b
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 320 a (160 mg, 1,0 eq., 0,68 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (273 mg, 1,5 eq., 1,02 mmol), Pd2(dba)3 (64 mg, 0,1 eq., 0,070 mmol), Xantphos (79 mg, 0,2 eq., 0,14 mmol), Cs2CO3 (444 mg, 2,0 eq., 1,36 mmol) y dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo para dar 320 b (190 mg, 66 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 420,8.
Ejemplo 320c Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{5-[(5-{[(3R,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]carbonil}piridin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 320 c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 320 b (150 mg, 1,0 eq., 0,36 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (286 mg, 2,0 eq., 0,72 mmol), PdCb(dppf) (29 mg, 0,10 eq., 0,040 mmol), K3PO4 (153 mg, 2,0 eq., 0,72 mmol), acetato de sodio (59 mg, 2,0 eq., 0,72 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,2 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se calentó a 90 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 320 c (161 mg, 64 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 693,8
Ejemplo 3203-[4-[5-[[5-[(3S,5R)-3,5-dimetilmorfolin-4-carbonil]-2-piridil]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pimdo[3,5-b]pirazm-4-ona 320
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 320 b (145 mg, 1,0 eq., 0,21 mmol), hidróxido de litio (26 mg, 5,0 eq., 1,05 mmol), THF (4,0 ml), /-propanol (4,0 ml) y agua (1,0 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con diclorometano (3 X 15 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 320 (35 mg, 26 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 651,9
Ejemplo 321a 6-cloro-4-(5-((3R,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-carbonil)piridin-2-ilamino)-2-metilpiridazin-3 (2H)-ona 321 a
Figure imgf000284_0001
Un matraz de fondo redondo de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con (6-aminopiridin-3-il)((3R,5S)-3,5-dimetilmorfolino)metanona 320 a (235 mg, 1,0 mmol), 4-bromo-6-cloro-2-metilpiridazin-3(2H)-ona (232 mg, 1,05 mmol), carbonato de cesio (652 mg, 2,0 mmol) y 1,4-dioxano (6,0 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 10 minutos, se añadieron Xantphos (116 mg, 0,20 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (70 mg, 0,10 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a reflujo durante 2,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (3 X 10 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (de 2:1 a 1:10) para dar 321 a (140 mg, 37 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 378,3
Ejemplo 321b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{5-[(5-{[(3R,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]carbonil}piridin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il}piridin-3-il)metilo 321 b
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 321 a (140 mg, 0,37 mmol), acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)metilo 199 e (355 mg, 0,74 mmol), K3PO4 (157 mg, 0,74 mmol), acetato de sodio (61 mg, 0,74 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (36 mg, 0,040 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,2 ml). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 1,5 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre diclorometano (30 ml) y agua (30 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (3 * 20 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 60:1 para dar 320 b (105 mg, 41 %) como un sólido negro. EM-ESI: [M+H]+ 695,3
Ejemplo 321 3-[4-[5-[[5-[(3S,5R)-3,5-dimetilmorfolin-4-carbonil]-2-piridil]amino]-1-metil-6-oxo-piridazin-3-il]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 321
A una solución de 321 b (105 mg, 0,15 mmol) en THF//-propanol/agua (2/1/0,5 ml) se le añadió hidróxido de litio (36 mg, 1,5 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 3 h, CLEM indicó que se completó la reacción. A continuación, la mezcla se vertió en agua (25 ml) y se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa (A: NH4HCO3 al 1 %/agua, B: acetonitrilo) para dar 321 (100 mg, 95 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 652,8. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 9,69 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,31 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,77-7,75 (m, 1H), 7,58 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,78 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,60-4,57 (m, 1H), 4,41-4,37 (m, 1H), 4,30-4,25 (m, 1H), 4,19 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 4,01-4,00 (m, 2H), 3,92-3,88 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,65-3,61 (m, 2H), 3,56-3,53 (m, 2H), 2,61-2,58 (m, 2H), 2,42 (s, 2H), 1,25 (d, J = 6,0 Hz, 6H), 1,21 (s, 6H)
Ejemplo 322a Acetato de (4-(5-(5-((3R,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-carbonil)piridin-2-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1 -oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2—a]indol-2(1 H)-il)piridin-3-il)metMo 322 a
Figure imgf000285_0001
Un matraz de fondo redondo de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con (6-aminopiridin-3-il)((3R,5S)-3,5-dimetilmorfolino)metanona 320 a (120 mg, 0,50 mmol), acetato de (4-(5-bromo-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-2(1H)-il)piridin-3-il)metilo 217 a (262 mg, 0,50 mmol), carbonato de cesio (326 mg, 1,0 mmol) y 1,4-dioxano (6 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 10 minutos, se añadieron Xantphos (58 mg, 0,10 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (45 mg, 0,050 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a reflujo durante 2,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (3 X 10 ml). El filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80/1 a 50/1) para dar 322 a (200 mg, 59%) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 680,3
Ejemplo 3222-[4-[5-[[5-[(3S,5R)-3,5-dimetilmorfolin-4-carbonil]-2-piridil]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirazino[1,2-a]indol-1-ona 322
A una solución de 322 a (136 mg, 0,20 mmol) en THF//- propanol/agua (4/2/1 ml) se le añadió hidróxido de litio (48 mg, 2,0 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 2 h, CLEM indicó que se completó la reacción. A continuación, la mezcla se vertió en agua (15 ml) y se extrajo con diclorometano (3 X 15 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SÜ4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa (A: NH4HCO3 al 1 %/agua, B: acetonitrilo) para dar 322 (50 mg, 40 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 638,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,94 (s, 1H), 8,77 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,64-7,62 (m, 1H), 7,59 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,37-7,35 (m, 2H), 6,57 (s, 1H), 4,95 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 4,47-4,38 (m, 2H), 4,23-3,99 (m, 5H), 3,88-3,87 (m, 1H), 3,65-3,61 (m, solapamiento, 5H), 3,56-3,53 (m, 2H), 2,66-2,56 (m, 2H), 2,47-2,44 (m, 2H), 1,80-1,79 (m, 2H), 1,70-1,66 (m, 2H), 1,25 (d, J = 6,0 Hz, 6H)
Ejemplo 323a 5-(3-metoxiazetidin-1-il)-2-nitropiridina 323 a
Figure imgf000285_0002
Un matraz de fondo redondo de 100 ml se equipó con un condensador de reflujo se cargó con clorhidrato de 3-metoxiazetidina (1,0 g, 8,09 mmol), 5-bromo-2-nitropiridina (1,97 g, 9,71 mmol), Pd2(dba)3 (370,1 mg, 0,404 mmol), Xantphos (467,6 mg, 0,809 mmol), CS2CO3 (7,9 g, 24,3 mmol) y dioxano (50 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla de reacción durante 20 minutos, se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 3 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. Se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 323 a como un sólido amarillo (1,63 g, 96 %). EM-ESI: [M+H]+ 210,2
Ejemplo 323b 5-(3-metoxiazetidin-1-il)piridin-2-amina 323 b
A una solución de 323 a (1,5 g, 7,17 mmol) en metanol (150 ml) se le añadió Pd al 10 %/C (150 mg). El sistema se evacuó y, a continuación, se rellenó con H2. Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 h, la mezcla se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 323 b como un aceite amarillo (1,2 g, 93 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 180,1
Ejemplo 323c 5-bromo-3-(5-(3-metoxiazetidin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 323 c
Un matraz de fondo redondo de 100 ml se equipó con un condensador de reflujo se cargó con 323 b (1,2 g, 6,7 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (2,14 g, 8,04 mmol), Pd2(dba)3 (306,5 mg, 0,335 mmol), Xantphos (387,3 mg, 0,67 mmol), Cs2CO3 (4,37 g, 13,4 mmol) y dioxano (50 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla de reacción durante 20 minutos, se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 3 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. Se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se lavó con éter de petróleo para dar 323 c como un sólido marrón (1,16 g, 47 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. e M-ESI: [M+H]+ 364,8.
Ejemplo 323d Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(5-{[5-(3-metoxiazetidin-1 -il)piridin-2-il]amino}-1 -metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)metilo 323 d
Un matraz de fondo redondo de 50 ml se equipó con un condensador de reflujo se cargó con 323 c (150 mg, 0,411 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (326,5 mg, 0,822 mmol), Pd(dppf)Cl2 (16,8 mg, 0,0205 mmol), K3PO4 (174,3 mg, 0,822 mmol), acetato de sodio (67,5 mg, 0,822 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (5 gotas). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla de reacción durante 20 minutos, se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 1 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. Se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 323 d como un aceite amarillo (180 mg, 68,7 %). EM-ESI: [M+H]+ 637,8
Ejemplo 323 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[[5-(3-metoxiazetidin-1-il)-2-piridil]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazm-4-ona 323
A una solución de 323 d (160 mg, 0,251 mmol) en THF (5 ml), /-propanol (5 ml) y agua (5 ml) se le añadió hidróxido de litio (95 mg, 2,51 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. A continuación, se concentró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (10 ml). La mezcla resultante se extrajo con diclorometano (3 x 15 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 323 (33,8 mg, 23%) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 595,8. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-cfó) ó 8,55 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,48 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,91 (dd, J = 2,5, 8,5 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,96-4,94 (m, 1H), 4,47-4,39 (m, 2H), 4,31-4,19 (m, 4H), 4,03-4,00 (m, 2H), 3,85-3,83 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,55-3,53 (m, 2H), 3,23 (s, 3H), 2,62-2,54 (m, 2H), 2,44-2,42 (m, 2H), 1,22 (s, 6H).
Ejemplo 324a (6-aminopiridin-3-il)((3S,5S)-3,5-dimetilmorfolino)metanona 324 a
Figure imgf000287_0001
K.PO,
NaOAc, CH,CN.
100 °C 324c
A una solución de (3S,5S)-3,5-dimetilmorfolina (115 mg, 1,0 mmol) en DMF (2 ml) se le añadió HATU (380 mg, 1,0 mmol), DIPEA (260 mg, 2,0 mmol) y ácido 6-aminonicotínico (138 mg, 1,0 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 18 h, la mezcla de reacción se filtró y purificó con Combiflash (A: NH4HCO3 al 1 %/agua, B: acetonitrilo) para dar 324 a (80 mg, 34 %) como un sólido amarillo. EM (ESI): 236,1 (M+H).
Ejemplo 324b 6-cloro-4-(5-((3S,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-carbonil)piridin-2-ilamino)-2-metilpiridazin-3(2H)-ona 324 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (8 ml), carbonato de cesio (221 mg, 0,68 mmol), 324 a (80 mg, 0,34 mmol) y 4-bromo-6-cloro-2-metilpiridazin-3(2H)-ona (80 mg, 0,36 mmol). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 5 minutos, se añadieron Xantphos (40 mg, 0,068 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (24 mg, 0,034 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a reflujo durante 2,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (3 X 10 ml). El filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (2/1 para acetato de etilo al 100 %) para dar 324 b (40 mg, 31 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 378,3
Ejemplo 324c Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{5-[(5-{[(3S,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]carbonil}piridin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il}piridin-3-il)metilo 324 c
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 324 b (40 mg, 0,11 mmol), acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)metilo 199 e (105 mg, 0,22 mmol), K3PO4 (47 mg, 0,22 mmol), acetato de sodio (18 mg, 0,22 mmol), 1,1-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (20 mg, 0,022 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (6 gotas). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 1,5 h. El análisis mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con diclorometano (50 ml) y agua (50 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (3 * 20 ml). El extracto combinado se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 60:1 para dar 324 c (40 mg, 52 %) como un sólido negro. EM-ESI: [M+H]+ 695,3
Ejemplo 324 3-[4-[5-[[5-[(3S,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-carbonil]-2-piridil]amino]-1-metil-6-oxo-piridazin-3-il]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pimdo[3,5-b]pirazin-4-ona 324
A una solución de 324 c (40 mg, 0,057 mmol) en THF/ /-propanol/agua (1/1/0,5 ml) se le añadió hidróxido de litio (14 mg, 0,57 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 3 h, CLEM indicó que se completó la reacción. A continuación, la mezcla se vertió en agua (20 ml) y se extrajo con diclorometano (3 X 15 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo sólido se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa (A: NH4HCO3 al 1 %/agua, B: acetonitrilo) para dar 324 (10 mg, 27,7 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 653,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-cfó) ó 9,69 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,53 (d, J = 5,0, 1H), 8,31 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,77-7,75 (m, 1H), 7,58 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,78 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,60-4,57 (m, 1H), 4,41-4,37 (m, 1H), 4,30-4,25 (m, 1H), 4,19 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 4,01 (s, 2H), 3,92-3,88 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,65-3,61 (m, 2H), 3,56-3,53 (m, 2H), 2,57 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 2,42 (s, 2H), 1,25 (d, J = 6,0 Hz, 6H), 1,21 (s, 6H)
Ejemplo 325a 3-amino-5-bromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona 325 a
Figure imgf000288_0001
A una solución de 5-bromo-3-(difenilmetilenamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona (3,82 g, 10,4 mmol) en acetato de etilo (10 ml) se le añadió HCl 4 M/dioxano (7,8 ml, 31,3 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 0,5 h y se concentró a presión reducida. El residuo se lavó con éter metil-ferc-butílico y se filtró. El sólido se disolvió en acetato de etilo (10 ml) y agua (10 ml). El pH de la mezcla resultante se ajustó a entre 7 y 8 añadiendo gradualmente K2CO3. La fase acuosa se separó y se extrajo con diclorometano tres veces. La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida para dar 325 a como un sólido amarillo (1,1 g, 52 %). E M - e S i : [M+H]+ 202,9.
Ejemplo 325b 1-(2-bromo-5-fluoropiridin-4-il)etanol 325 b
A un matraz de 3 bocas de 250 ml se le añadió una solución (20 ml) de 2-bromo-5-fluoropiridina (8,80 g, 50 mmol) en THF. A -78 °C, a la solución se le añadió gota a gota LDA (25,0 ml, 50 mmol, 2,5 M en THF). Después de agitar durante 5 min, se añadió gota a gota diisopropilamina (7,0 ml, 50 mmol) por medio de una jeringa y la mezcla se agitó a -78 °C durante 4 h. Se añadió gota a gota una solución de acetaldehído (11 ml, 55 mmol, 5 M en THF) en THF por medio de una jeringa. Los contenidos se retiraron del baño frío y se agitaron con calentamiento a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se diluyó con agua (150 ml) y se agitó vigorosamente durante 5 min. Los contenidos se concentraron a presión reducida y el residuo se extrajo con éter etílico (3 x 150 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida para dar un aceite amarillo, que se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (de 10:1 a 5:1) para dar 325 b (8,0 g, 72,7 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 220,1. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) 6 8,15 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 2,18-2,16 (m, 1H), 1,52 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 325c 1-(2-bromo-5-fluoropiridin-4-il)etanona 325 c
Una mezcla de 325 b (7,5 g, 34,2 mmol) y ácido 2-yodoxibenzoico (38,4 g, 137 mmol) en acetato de etilo (200 ml) se agitó a 85 °C durante 20 h. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (de 20:1 a 10:1) para dar 325 c (6 , 8 g, 92 %) como un aceite amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 217,9.
Ejemplo 325d 5-bromo-3-metil-1H-pirazolo[3,4-c]piridina 325 d
A un matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con un condensador de reflujo se le añadió etilenglicol seco (30 ml) y 325 c (4,3 g, 20 mmol). A continuación, se añadió gota a gota hidracina hidratada (5,0 ml, 4,8 g, 81,6 mmol) por medio de una jeringa. La mezcla se calentó a 165 °C durante 3,5 h. La mezcla marrón anaranjada resultante se enfrió a temperatura ambiente y los contenidos se vertieron sobre una mezcla en agitación de 100 ml de hielo/agua (1 :1 ), con lo que se produjo la precipitación. Después de agitar durante 10 min, se recogió el precipitado blanquecino, que se secó a vacío para dar 325 d como un sólido blanquecino (3,1 g, 74 %). EM-ESI: [M+H]+ 211,9.
Ejemplo 325e 5-bromo-1,3-dimetil-1H-pirazolo[3,4-c]piridina 325 e y 5-bromo-2,3-dimetil-2H-pirazolo[3,4-c]piridina 326 a
Una mezcla de 325 d (3,0 g, 14,2 mmol), CH3 I (2,40 g, 17,0 mmol) y K2CO3 (2,9 g, 21,3 mmol) en acetonitrilo (60 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 8:1 para dar 325 e (920 mg, 29,0 %) como un sólido blanco y eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 2:1 para dar 326 a (390 mg, 12,0 %) como un sólido gris. EM-ESI: [M+H]+ 226,1.
Ejemplo 325f 5-bromo-3-(1,3-dimetil-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-5-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 325 f
Un tubo sellado se cargó con 325 e (202 mg, 1,0 mmol), 325 a (337,5 mg, 1,5 mmol), Pd2(dba)3 (91,7 mg, 0,10 mmol), BINAP (124,6 mg, 0,20 mmol), carbonato de cesio (650 mg, 2,0 mmol) y 1,4-dioxano (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, el tubo sellado se calentó a 100 °C durante 2 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (de 5:1 a 2:1) para dar 325 f (140 mg, 40 %) como un sólido amarillo. E M - E s I: [M+H]+ 348,2.
Ejemplo 325g Acetato de {4-[5-({1,3-dimetil-1H-pirazolo[3,4-c]pmdin-5-il}amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il}metilo 325 g
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 325 f (120 mg, 0,35 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (417 mg, 1,05 mmol), Pd(dppf)Cl2 (29 mg, 0,035 mmol), K3PO4 (148,0 mg, 0,70 mmol), acetato de sodio (57,4 mg, 0,70 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (15 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se calentó a reflujo durante 1 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 325 g como un sólido amarillo (70 mg, 33 %). EM-ESI: [M+H]+ 620,8.
Ejemplo 325 3-[4-[5-[(1,3-dimetilpirazolo[3,4-c]piridin-5-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazm-4-ona 325
Una mezcla de 325 g (60 mg, 0,10 mmol) e hidróxido de litio (60 mg, 2,5 mmol) en /-propanol/THF (1:1, 4 ml) y agua (1 ml) se agitó a 35 °C durante 30 min. A la mezcla de reacción se le añadió agua (10 ml) y la mezcla resultante se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano tres veces. La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 325 como un sólido amarillo (20 mg, 31 %). EM-ESI: [M+H]+ 578,8. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) 6 8,80 (s, 1H), 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,36 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,49 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,06-5,05 (m, 1H), 4,51-4,43 (m, 2H), 4,25-4,19 (m, 3H), 4,00 (s, 3H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,63 (s, 3H), 2,62-2,59 (m, 2H), 2,44-2,43 (m, solapamiento, 5H), 1,22 (s, 6 H).
Ejemplo 326b 5-bromo-3-(2,3-dimetil-2H-pirazolo[3,4-c]piridin-5-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 326 b
325 a
Pd2(db3j3i xantphos
Figure imgf000290_0002
Cs2C03. diovano
Figure imgf000290_0001
100 °C. 2,5 h
Figure imgf000290_0003
,
N,, 100 326c
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-2,3-dimetil-2H-pirazolo[3,4-c]piridina 326 a from Ejemplo 325 (452 mg, 2,0 mmol), 3-amino-5-bromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona 325 a (400 mg, 2,0 mmol), carbonato de cesio (1,3 g, 4,0 mmol) y 1,4-dioxano (10 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 5 minutos, se añadieron BINAP (124 mg, 0,2 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (140 mg, 0,2 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a reflujo durante 2,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (3 X 10 ml). El filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (2 / 1 para acetato de etilo al 100 %) para dar 326 b (160 mg, 23 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 348,3
Ejemplo 326c Acetato de {4-[5-((2,3-dimetil-2H-pirazolo[3,4—c]piridin-5-il)amino)-1 -metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il}metilo 326 c
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 326 b (160 mg, 0,46 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (300 mg, 0,69 mmol), K3PO4 (195 mg, 0,92 mmol), acetato de sodio (75 mg, 0,92 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaladio (II) (42 mg, 0,046 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua ( 6 gotas). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 1,5 h. El análisis mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con diclorometano (50 ml) y agua (50 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con diclorometano (3 * 2 0 ml). El extracto combinado se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 60:1 para dar 326 c (130 mg, 45 %) como un sólido negro. EM-ESI: [M+H]+ 621,3
Ejemplo 326 3-[4-[5-[(2,3-dimetilpirazolo[3,4—c]piridin-5-il)amino]-1 -metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5—b]pirazin-4-ona 326
A una solución de 326 c (130 mg, 0,21 mmol) en THF//-propanol/agua (4/2/1 ml) se le añadió hidróxido de litio (50 mg, 2,0 mmol) a temperatura ambiente. Después de que la reacción se agitara durante 3 h, CLEM indicó que se completó la reacción. A continuación, la mezcla se vertió en agua (30 ml) y se extrajo con diclorometano (3 X 30 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo sólido se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa (A: NH4HCO3 al 1 %/agua, B: acetonitrilo) para dar 326 (60 mg, 50 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 579,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 6 8 , 8 6 (s, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,06 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,47 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 5,13 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,50-4,46 (m, 2H), 4,24-4,19 (m, 3H), 4,09 (s, 3H), 3,86-3,85 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,62-2,53 (m, solapamiento, 5H), 2,43 (s, 2H), 1,22 (s, 6 H)
Ejemplo 327a 5-(2-metoxietil)-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 327 a
Figure imgf000291_0001
A una solución de 2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina (190 mg, 1,13 mmol) 209 a en acetonitrilo (10 ml) se le añadió K2CO3 (311,9 mg, 2,26 mmol) y 1-bromo-2-metoxietano (188,3 mg, 1,36 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 80 °C durante 17 h bajo irradiación con microondas. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 327 a como un sólido blanco (230 mg, 90 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 227,0
Ejemplo 327b 5-(2-metoxietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-amina 327 b
Figure imgf000291_0002
A una solución de 327 a (286 mg, 1,26 mmol) en metanol (10 ml) se le añadió Pd/C (28,6 mg). El sistema se evacuó y, a continuación, se rellenó con H2. Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 h, la mezcla se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 327 b como un sólido amarillo (240 mg, 97 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 197,0
Ejemplo 327c 3,5-dibromo-6-metilpiridin-2(1 H)-ona 327 c
Se suspendió 6-metil-piridin-2-ol (10,9 g, 0,10 mol) en diclorometano anhidro (300 ml) y se agitó a temperatura ambiente. Bajo enfriamiento con un baño de enfriamiento de hielo/agua, se añadió lentamente en porciones N-bromosuccinimida (NBS) (11,4 g, 0,20 mol) durante un intervalo de tiempo de 5 minutos. La suspensión se agitó a reflujo durante 2 horas. Después de esto, la suspensión se filtró. La torta de filtro se lavó exhaustivamente con metanol y se secó a vacío para dar 327 c como un sólido blanco (22,7 g, 85 %). EM-ESI: [M+H]+ 266.
Ejemplo 327d 3,5-dibromo-1,6-dimetilpiridin-2(1 H)-ona 327 d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético se cargó con DMF (50 ml), 327 c (10,0 g, 37,5 mmol), CH3 I (5,3 g, 37,5 mmol) y K2CO3 (7,8 g, 56,2 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. Se añadió agua (100 ml) y el sólido blanco resultante se recogió para dar 327 d (8,2 g, 78 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 280.
Ejemplo 327e 5-bromo-3-(5-(2-metoxietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1,6-dimetilpiridin-2(1 H)-ona 327 e
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 327 b (392 mg, 2,0 mmol), 327 d (562 mg, 2,0 mmol), carbonato de cesio (1,30 g, 4,0 mmol) y 1,4-dioxano (20 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la suspensión durante 10 minutos, se añadieron xantphos (115 mg, 0,20 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (92 mg, 0,10 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a reflujo durante 5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con diclorometano (2 X 15 ml). El filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80:1 a 30:1) para dar 327 e (490 mg, 62 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 396,2
Ejemplo 327f Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.02,6]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(5-{[5-(2-metoxietil)-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino}-1,2-dimetil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)metilo 327 f
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 25 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 327 e (158 mg, 0,40 mmol), ácido {3-[(acetiloxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il)borónico 199 e (159 mg, 0,40 mmol), K3PO4 (170 mg, 0,80 mmol), acetato de sodio ( 66 mg, 0,80 mmol), Pd(dppf)Cl2 (15 mg, 0,020 mmol) y acetonitrilo/agua (7/0,5 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/N2 , la mezcla se calentó a 95 °C durante 1 h. El análisis mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con diclorometano (50 ml) y agua (30 ml). La capa acuosa se extrajo con diclorometano ( 2 * 30 ml). El extracto orgánico combinado se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 80:1 a 30:1) para dar 327 f (120 mg, 45 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 6 6 8 , 8
Ejemplo 327 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[[5-(2-metoxietil)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino]-1,2-dimetil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 327
A una solución de 327 f (120 mg, 0,18 mmol) en THF//-propanol/agua (6/4/3 ml) se le añadió hidróxido de litio (22 mg, 0,90 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (15 ml). A continuación, se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a presión. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 327 como un sólido blanco (55 mg, 49%). EM-ESI: [M+H]+ 626,9. RMN de 1H (500 MHz, CDCb) 6 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,15 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,82 (s, 1H), 5,61 (s.a., 1H), 4,53-4,45 (m, 3H), 4,26-4,16 (m, 3H), 4,03-3,97 (m, 3H), 3,71-3,69 (m, 5H, solapamiento), 3,58 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,39 (s, 3H), 2,98 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,77 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,60-2,57 (m, 2H), 2,53 (s, 2H), 2,17 (s, 3H), 1,29 (s, 6 H).
Ejemplo 328a 3-(5-(2-metoxietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1 H)-ona 328 a
Figure imgf000292_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-bromo-3-(5-(2-metoxietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1 H)-ona 296 f (330 mg, 0 , 8 6 mmol), Pin2B2 (329 mg, 1,30 mmol), Pd2(dba)3 (40 mg, 0,043 mmol), X-phos (41 mg, 0,086 mmol), acetato de potasio (169 mg, 1,726 mmol) y dioxano (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/N2 , la mezcla se calentó a 70 °C durante 2 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. Se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se lavó con éter de petróleo para dar 328 a como un aceite oscuro (240 mg, 80 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 348,3
Ejemplo 328b 3-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-5-(5-{[5-(2-metoxietil)-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino}-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-4-carbaldehído 328 b
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 3-bromo-5-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piri-dine-4-carbaldehído 107 f (100 mg, 0,26 mmol), 328 a (110 mg, 0,26 mmol), Pd(dppf)Cl2 (10 mg, 0,026 mmol), acetato de sodio (50 mg, 0,50 mmol), K3PO4 (100 mg, 0,50 mmol) y acetonitrilo/agua (5 ml/1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se calentó a 10 0 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 10:1 para dar 328 b (50 mg, 32 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 611,3.
Ejemplo 328 3-[4-(hidroximetil)-5-[5-[[5-(2-metoxietil)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-il]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5—b]pirazin-4-ona 328
Una mezcla de 328 b (50 mg, 0,08 mmol) y NaBH4 (8,0 mg, 0,20 mmol) en metanol (4 ml) se agitó a 25 °C durante 0,5 h. La mezcla de reacción se desactivó con agua (10 ml) y se evaporó a presión reducida. Se añadió el residuo extraído con diclorometano (2 X 10 ml). El extracto combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 328 (13 mg, 25 %) como un sólido amarillo pálido. EM-ESI: [M+H]+ 613,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 6 8,62 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,92 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,31 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6,82 (s, 1H), 5,67 (s, 1H), 4,64-4,62 (m, 1H), 4,57-4,55 (m, 1H), 4,38-4,34 (m, 1H), 4,22-4,17 (m, 3H), 4,05-4,02 (m, 2H), 3,99-3,96 (m, 1H), 3,71-3,70 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,57 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 3,37 (s, 3H), 2,99 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 2,77 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,56 (s, 2H), 2,51 (s, 2H), 1,27 (s, 6 H).
Ejemplo 329a 2-cloro-4-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026 ]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 329 a
Figure imgf000293_0001
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 4,4-dimetil-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-9-ona 107 e (612 mg, 3,0 mmol), 4-bromo-2-cloronicotinaldehído (2,0 g, 9,0 mmol), Pd2(dba)3 (275 mg, 0,30 mmol), XantPhos (347 mg, 0,60 mmol), carbonato de cesio (1,95 g, 6 , 0 mmol) y 1,4-dioxano (30 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se calentó a 97 °C durante la noche. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:2 para dar 329 a como un sólido amarillo (660 mg, 65 %). EM-ESI: [M+H]+ 344,1.
Ejemplo 329b 4-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-2-(5-{[5-(2-metoxietil)-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5—a]pirazin-2-il]amino}-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-carbaldehído 329 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 329 a (100 mg, 0,30 mmol), 3-(5-(2-metoxietil)-4.5.6.7-tetrahidropirazolo[1,5—a]pirazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-diox aborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 328 a (257 mg, 0,60 mmol), pd(dppf)Cl2 (25 mg, 0,030 mmol), K3PO4 (127 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio (49 mg, 0,60 mmol), agua (0,50 ml) y THF ( 10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se calentó a reflujo durante 1 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 329 b como un sólido marrón (60 mg, 34 %). EM-ESI: [M+H]+ 611,3.
Ejemplo 329 3-[3-(hidroximetil)-2-[5-[[5-(2-metoxietil)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5—a]pirazin-2-il]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-4-piridil]-7,7-dimetil-1.2.6.8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5—b]pirazin-4-ona 329
Una mezcla de 329 b (50 mg, 0,080 mmol) y NaBH4 (9,1 mg, 0,24 mmol) en metanol (5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. La mezcla se desactivó con agua (10 ml) y se evaporó a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 10 m). El extracto combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 329 (15 mg, 30 %) como un sólido amarillo. E m - E S I : [M+H]+ 613,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 6 8 , 6 6 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,12 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,83 (s, 1H), 5,71 (s, 1H), 4,67-4,63 (m, 1H), 4,49-4,43 (m, 1H), 4,24-4,23 (m, 2H), 4,19-4,17 (m, 1H), 4,06-4,04 (m, 2H), 4,01-3,97 (m, 1H), 3,74-3,71 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,59-3,55 (m, 2H), 3,38 (s, 3H), 3,00 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,77 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,56 (s, 2H), 2,51 (s, 2H), 1,27 (s, 6 H).
Ejemplo 330a 10-[4-cloro-3-(hidroximetil)piridin-2-il]-4,4-dimetil-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026 ]dodeca-1 (8),2(6)-dien-9-ona 330 a
Figure imgf000294_0001
Una mezcla de 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026 ]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-3-carbaldehído 109 a (1,2 g, 3,3 mmol), NaBEU (228 mg, 6,0 mmol) y metanol (10 ml) se agitó a 0 °C durante 0,5 h. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (10 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (2 X 15 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida para dar 330 a como un sólido amarillo pálido (1,0 g, 84 %). EM-ESI: [M+H]+ 362,9
Ejemplo 330b Acetato de (4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026 ]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-3-il)metilo 330 b
Una mezcla de 330 a (1,0 g, 2,76 mmol), trietilamina (610 mg, 6,0 mmol) y anhídrido acético (5 ml) se agitó a 25 °C durante 2 h. A continuación, la mezcla de reacción se desactivó con agua (10 ml) y el pH se ajustó a alrededor de 8 con NaHCÜ3 (aq.). La mezcla se extrajo con diclorometano (2 X 15 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo 1:1 para dar 330 b como un sólido amarillo pálido (1,0 g, 90 %). EM-ESI: [M+H]+ 405,2
Ejemplo 330c Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026 ]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)metilo 330 c
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 330 b (1,0 g, 2,47 mmol), 4,4,4',4',5,5,5,,5,-octametil-2,2,-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1,87 g, 7,40 mmol), Pd(dppf)Cl2 (100 mg, 0,13 mmol), X-phos (125 mg, 0,25 mmol), acetato de potasio (500 mg, 5,0 mmol) y 1,4-dioxano (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se calentó a 65 °C durante 4 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida para dar 330 c (1,0 g, 98 %) como un aceite marrón sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 415,2.
Ejemplo 330d (3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol 330 d
Una mezcla de ácido 3-nitro-1H-pirazol-5-carboxílico (4,71 g, 30 mmol), BH3/THF (75 ml, 1 mol/l, 75 mmol) se agitó a 60 °C durante 2 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se añadió HCl 4 M (19 ml, 75 mmol). Se agitó a 70 °C durante 2 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre acetato de etilo y salmuera (100:100 ml). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (4 X 50 ml). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SÜ4 y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (de 5:1 a 1:1) para dar 330 d (3,5 g, 79 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 144,2
Ejemplo 330e 1-(5-(hidroximetil)-3-nitro-1H-pirazol-1-il)-2-metilpropan-2-ol 330 e
Un tubo sellado se cargó con 330 d (2,145 g, 15 mmol), Cs2CÜ3 (978 mg, 3,0 mmol) y 2,2-dimetiloxirano (15 ml). La mezcla se agitó a 70 °C durante 3 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (de 5:1 a 1:1) para dar 330 e (1,2 g, 38 %) como un sólido blanco. EM-e S i: [M+H]+ 216,2
Ejemplo 330f 6,6-dimetil-2-nitro-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1 -c][1,4]oxazina 330 f
A una solución de 330 e (1,1 g, 5,1 mmol) en DMF (10 ml), se le añadió NaH (dispersión al 60 por ciento en aceite de vaselina, 246 mg, 6,14 mmol) a 0 °C. La suspensión resultante se agitó durante 30 min, seguido de la adición de cloruro de p-toluensulfonilo (1169 mg, 6,14 mmol). La mezcla se agitó a 60 °C durante la noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añadió solución saturada de cloruro de amonio y la mezcla se extrajo con diclorometano. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SÜ4 y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con un gradiente de éter de petróleo/acetato de etilo (de 9:1 a 2:1) para dar 330 f (228 mg, 22 %). EM-ESI: [M+H]+ 198,3
Ejemplo 330g 6,6-dimetil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-amina 330 g
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 330 f (0,21 g, 1,25 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 125 mg) y metanol (10 ml). La mezcla se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 330 g (167 mg, 93 %). EM-ESI: [M+H]+ 168,1
Ejemplo 330h 6-cloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilamino)-2-metilpiridazin-3(2H)-ona 330 h
Figure imgf000295_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 330 g (250 mg, 1,5 mmol), 4-bromo-6-cloro-2-metilpiridazin-3(2H)-ona (669 mg, 3,0 mmol), Pd2(dba)3 (137 mg, 0,15 mmol), Xantphos (173 mg, 0,30 mmol), Cs2CÜ3 (978 mg, 3,0 mmol) y 1,4-dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y se lavó con acetato de etilo para dar 330 h como un sólido amarillo (209 mg, 45 %). EM-ESI: [M+H]+ 310,1.
Ejemplo 330i Acetato de {4-[5-((6,6-dimetil-4H,6H,7H-pirazolo[3,2-c][1,4]oxazin-2-il}amino)-1-metil-6-oxo-1,6 -dihidropiridazin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}piridin-3-il}metilo 330 i
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 330 h (133 mg, 0,43 mmol), 330 c (178 mg, 0,43 mmol), acetato de sodio (71 mg, 0,86 mmol), K3PO4 (182 mg, 0,86 mmol), Pd(dppf)Cl2 (35 mg, 0,043 mmol), acetonitrilo (15 ml) y agua (0,5 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 20 minutos, la mezcla de reacción se calentó a 95 °C durante 3 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 330 i como un sólido amarillo (69 mg, 25 %). EM-ESI: [M+H]+ 644,3.
Ejemplo 330 3-[4-[5-[(6,6-dimetil-4,7-dihidropirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-piridazin-3-il]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]tieno[1,3-c]piridm-4-ona 330
Una mezcla de 330 i (69 mg, 0,11 mmol) e hidróxido de litio (10 mg, 0,42 mmol) en /-propanol/THF (1:1,3,5 ml) y agua (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, la mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (10 ml). Se extrajo con acetato de etilo (2 X 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó con HPLC prep. de fase inversa para dar 330 (30 mg, 47 %). EM-ESI: [M+H]+ 602,5. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,56 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,43 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,94 (s, 1H), 4,82 (s, 2H), 4,60-4,58 (m, 2H), 4,38-4,36 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,89-3,87 (m, 3H), 3,02-2,93 (m, 2H), 2,79-2,75 (m, 2H), 2,59-2,54 (m, 2H), 1,37 (s, 6 H), 1,28 (s, 6 H).
Ejemplo 331a 5-bromo-1-metil-3-(3-metilisotiazol-5-ilamino)pirazin-2(1H)-ona 331 a
Figure imgf000296_0001
Un tubo sellado equipado con un agitador magnético se cargó con 3-metilisotiazol-5-amina (170 mg, 1,5 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpirazin-2(1H)-ona (400 mg, 1,5 mmol), Pd(OAc)2 (84 mg, 0,375 mmol), BINAP (116 mg, 0,188 mmol), K2CO3 (450 mg, 4,5 mmol) y 1,4-dioxano (4 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se calentó a 120 °C en un tubo sellado durante 18 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 100:1 a 25:1) para dar 331 a (220 mg, 50 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 301,0.
Ejemplo 331b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{4-metil-6-[(3-metil-1,2-tiazol-5-il)amino]-5-oxo-4,5-dihidropirazin-2-il}piridin-3-il)metilo 331 b
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 331 a (150 mg, 0,50 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (400 mg, 1,0 mmol), Pd(dppf)Cl2 (25 mg, 0,025 mmol), K3PO4 (220 mg, 1,0 mmol), acetato de sodio trihidratado (136 mg, 1,0 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (0,5 ml). El sistema se evacuó y se rellenó con N2. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 1 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 100/1 a 25/1) para dar 331 b (200 mg, 70 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 574,2.
Ejemplo 331 3-[3-(hidroximetil)-4-[4-metil-6-[(3-metilisotiazol-5-il)amino]-5-oxo-pirazin-2-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pimdo[3,5-b]pirazin-4-ona 331
Una mezcla de 331 b (120 mg, 0,21 mmol) e hidróxido de litio monohidratado ( 88 mg, 2,1 mmol) en THF//-propanol (4:2, 6 ml) y agua (2 ml) se agitó a 30 °C durante 1 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y se diluyó con agua (10 ml). A continuación, se extrajo con acetato de etilo (2 * 15 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 331 (50 mg, 45 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 532,2. RMN de 1H (500 MHz, CHCla) ó 9,13 (s, 1H), 8,61 (d, J = 5 Hz, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,99 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 5,32-5,39 (m, 1H), 4,77-4,75 (m, 1H), 4,58-4,56 (m, 1H), 4,32-4,37 (m, 1H), 4,21-4,18 (m, 2H), 3,96-3,94 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 2,61-2,58 (m, 2H), 2,54 (s, 2H), 2,48 (s, 3H), 1,30 (s, 6 H).
Ejemplo 332a 5-bromo-3-(5-etil-1,3,4-tiadiazol-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 332 a
Figure imgf000297_0001
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-etil-1,3,4-tiadiazol-2-amina (500 mg, 3,88 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,55 g, 5,81 mmol), Pd2(dba)3 (357 mg, 0,39 mmol), XantPhos (451 mg, 0,78 mmol), Cs2CO3 (2,5 g, 7,67 mmol) y 1,4-dioxano (40 ml). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a 100 °C durante 2 h. La mezcla se enfrió a 90 °C y se filtró. El filtrado se enfrió en un baño de hielo-agua y, a continuación, se filtró de nuevo para dar 332 a (574 mg, 47 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 315,1
Ejemplo 332b Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatridclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-{5-[(5-etil-1,3,4-tiadiazol-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 332 b
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 332 a (200 mg, 0,63 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriddo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (754 mg, 1,89 mmol), PdCL(dppf) (51 mg, 0,063 mmol), K3PO4 ( 2 67 mg, 1,26 mmol), CHsCoONa (103 mg, 1,26 mmol), acetonitrilo (15 ml) y agua (0,5 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 20 minutos, se calentó a 100 °C en una atmósfera de nitrógeno durante 2 h. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 332 b como un sólido marrón (178 mg, 48 %). EM-ESI: [M+H]+ 588,2
Ejemplo 332 3-[4-[5-[(5-etil-1,3,4-tiadiazol-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 332
Una mezcla de 332 b (158 mg, 0,27 mmol) e hidróxido de litio (19 mg, 0,81 mmol) en /-propanol/THF/agua (9 ml/ 6 ml/ 6 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se extrajo con diclorometano (3 X 20 ml). El extracto de diclorometano combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 332 como un sólido blanco ( 8 0 mg, 54 %). EM-ESI: [M+H]+ 546,2. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 6 10,20 (s, 1H), 8,60 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 4,92 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 4,49-4,39 (m, 2H), 4,25-4,19 (m, 3H), 3,87-3,85 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 2,92-2,88 (m, 2H), 2,58-2,53 (m, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,27-1,22 (m, solapamiento, 9H).
Ejemplo 333a Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatricido[6.4.0.026 ]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)amino]-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}piridin-3-il)metilo 333 a
Figure imgf000297_0002
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10-azatriciclo[6.4.0.026 ]dodeca-1(8),2(6)-dien-10-il}-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)metilo 330 c (180 mg, 0,37 mmol), 5-bromo-1-metil-3-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-ilamino)piridin-2(1H)-ona 292 c (125 mg, 0,43 mmol), Pd(dppf)Cl2 (20 mg, 0,025 mmol), acetato de potasio (80 mg, 0,80 mmol), K3PO4 (165 mg, 0,80 mmol) y acetonitrilo/agua (10 ml/1 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se calentó a 100 °C durante 1 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 20:1 para dar 333 a (150 mg, 71 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 574,1
Ejemplo 333 3-[3-(hidroximetil)-4-[1-metil-5-[(1 -metiltriazol-4-il)amino]-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]tieno[1,3-c]piridin-4-ona 333
Una mezcla de 333 a (150 mg, 0,26 mmol) e hidróxido de litio hidratado (84 mg, 2,0 mmol) en THF (5 ml), /-propanol (5 ml) y agua (1,5 ml) se agitó a 40 °C durante 0,5 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y se diluyó con agua (10 ml). A continuación, se extrajo con diclorometano (2 X 10 ml). La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 333 (52 mg, 38 %) como un sólido amarillo pálido. EM-ESI: [M+H]+ 532,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) ó 8,48-8,47 (m, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,78-7,77 (m, 2H), 7,42 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,34-7,33 (m, 1H), 4,97-4,95 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,43-4,41 (m, 2H), 4,17-4,16 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,94-3,92 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,04-3,02 (m, 1H), 2,90-2,89 (m, 1H), 2,77-2,75 (m, 2H), 2,56-2,54 (m, 2H), 1,23 (s, 3H), 1,22 (s, 3H).
Ejemplo 334 3-[4-[5-[(5-ciclopropil-1,3,4-tiadiazol-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 334
Siguiendo los procedimientos del ejemplo 273, y sustituyendo 5-ciclopropil-1,3,4-tiadiazol-2-amina con 2-amino piridina, se dio 334 (8,7 mg, rendimiento de un 22 %). RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6 ) ó 8,48 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,10 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 6,53 (s, 1H), 4,95 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,55 - 4,49 (m, 1H), 4,27-4,23 (m, 3H), 3,78 (s, 2H), 3,51 (s, 3H), 3,48 (dt, J = 12,3, 5,2 Hz, 3H), 3,24 (s, 2H), 2,50 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 2,33 (s, 2H), 1,85 - 1,82 (m, 3H), 1,23 (s, 6 H). ES-EM m/z 531,3 [M+1].
Ejemplo 335a 5-bromo-3-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 335 a
Figure imgf000298_0001
Un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 1,4-dioxano (10 ml), 6,6-dimetil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-amina 330 g (167 mg, 1,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1 H)-ona (320 mg, 1 , 2 mmol), Pd2(dba)3 (91 mg, 0 , 10 mmol), XantPhos (116 mg, 0 , 20 mmol) y carbonato de cesio (652 mg, 2,0 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/argón, la mezcla se calentó a 100 °C durante 3 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 100:1 para dar 335 a (210 mg, 60 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 352,9
Ejemplo 335b 3-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1 H)-ona 335 b
A una mezcla de 335 a (160 mg, 0,45 mmol) y 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (572 g, 2,25 mmol) en dioxano (20 ml) se le añadió PdCh(dppf) (36,8 mg, 0,045 mmol) y acetato de potasio (88,2 mg, 0,90 mmol). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se agitó a 90 °C durante 4 h en atmósfera de nitrógeno. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida para dar 335 b , que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 401,3.
Ejemplo 335c 4-[5-({6,6-dimetil-4H,6H,7H-pirazolo[3,2-c][1,4]oxazin-2-il}amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10,11-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1(8),2(6),11-trien-10-il}piridin-3-carbaldehído 335 c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 335 b (240 mg, 0,60 mmol), 4-cloro-2-{4,4-dimetil-9-oxo-7-tia-10,11-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-1 (8),2(6),11 -trien-10-il}piridin-3-carbaldehído 282 i (107,7 mg, 0,30 mmol), Pd(dppf)Cl2 (24,5 mg, 0,030 mmol), K3PO4 (127,2 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio (49,2 mg, 0,60 mmol), agua (0,5 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se calentó a 95 °C durante 1 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 30:1 para dar 335 c como un sólido marrón (60 mg, 22 %, dos etapas). EM-ESI: [M+H]+ 598,2.
Ejemplo_____ 335 3-[4-[5-[(6,6-dimetil-4,7-dihidropirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-il)amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-6,8-dihidrocidopenta[3,4]tieno[1,3-d]pmdazm-4-ona 335
Una mezcla de 335 c (50 mg, 0,080 mmol) y NaBH4 (9,1 mg, 0,24 mmol) en metanol (5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. La mezcla se desactivó con agua (10 ml) y se evaporó a presión reducida. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 10 ml). El extracto combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 335 (15 mg, 30 %) como un sólido amarillo. EM-ESI: [M+H]+ 600,2. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 6 8,56 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,07 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,94 (s, 1H), 4,85-4,83 (m, 1H), 4,72 (s, 2H), 4,38-4,37 (m, 2H), 3,79-3,78 (m, 2H), 3,3 (s, 3H), 2,92-2,91 (m, 2H), 2,81 (s, 2H), 1,28 (s, 6 H), 1,25 (s, 6 H).
Ejemplo 336a 5-(metoximetil)-1-metil-3-nitro-1H-pirazol 336 a
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 5-(bromometil)-1-metil-3-nitro-1H-pirazol (8 , 8 g, 40 mmol), metóxido de sodio (4,3 g, 80 mmol) y metanol (50 ml). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se dividió entre acetato de etilo (60 ml) y agua (60 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 X 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 336 a como un aceite amarillo (6,1 g, 90 %). EM-ESI: [M+H]+ 172.
Ejemplo 336b 5-(metoximetil)-1-metil-1H-pirazol-3-amina 336 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 250 ml equipado con un agitador magnético se cargó con 336 a (4,0 g, 23 mmol), Pd/C (1,0 g) y etanol (100 ml). La mezcla se hidrogenó a temperatura ambiente durante 15 h. A continuación, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 336 b como un aceite amarillo (3,3 g, 99 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 142.
Ejemplo 336c 5-bromo-3-(5-(metoximetil)-1-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 336 c
Figure imgf000299_0001
Siguiendo el procedimiento en el ejemplo 335a, y partiendo de 335 b (1,7 g, 12 mmol) y 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (3,2 g, 12 mmol), se dio 336 c como un sólido amarillo (2,8 g, 71 %). EM-ESI: [M+H]+ 327. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 6 7,86 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,38 (s, 1H), 6 , 8 8 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,41 (s, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,36 (s, 3H).
Ejemplo 336d 3-(5-(metoximetil)-1-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona 336 d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 336 c (600 mg, 1,83 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1,39 g, 5,49 mmol), Pd2(dba)3 (183 mg, 0,20 mmol), X-phos (190 mg, 0,40 mmol), acetato de potasio (392 mg, 4,0 mmol) y 1,4-dioxano (30 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se calentó a 85 °C durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 336 d bruto como un aceite negro (400 mg, 75 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación. EM-ESI: [M+H]+ 293,1
Ejemplo 336e 4-(5-(5-(metoximetil)-1-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 336 e
Figure imgf000300_0001
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 336 d (368 mg, 0,98 mmol), 4-cloro-2-(1-oxo-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-2(1H)-il)nicotinaldehído 139 a (270 mg, 0,82 mmol), PdCh(dppf) (60 mg, 0,082 mmol), K3PO4 (348 mg, 1,64 mmol)), acetato de sodio (135 mg, 1,65 mmol), acetonitrilo (15 ml) y agua (0,5 ml). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a 95 °C durante 3 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol 20:1 para dar 336 e (100 mg, 22 %). EM-ESI: [M+H]+ 542,2
Ejemplo 336 2-[3-(hidroximetil)-4-[5-[[5-(metoximetil)-1-metil-pirazol-3-il]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-hexahidropirido[3,4-b]indolizin-1-ona 336
A una solución de 336 e (100 mg, 0,18 mmol) en metanol (10 ml) se le añadió NaBH4 (41 mg, 1,08 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y CLEM mostró que el material de partida había desaparecido. La reacción se desactivó con solución de HCl 1,0 M (10 ml) y se evaporó a presión reducida hasta que se destiló la mayor parte del metanol. El residuo se extrajo con diclorometano (3 X 15 ml). La capa orgánica combinada se secó con Na2SO4 y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 336 como un sólido blanco (41 mg, 41%). EM-ESI: [M+H]+ 544,2. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 6 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,33 (s, 1H), 5,95 (s, 1H), 4,99-4,96 (m, 1H), 4,67­ 4,64 (m, 1H), 4,42-4,41 (m, 3H), 4,36-4,26 (m, 1H), 3,98-3,91 (m, 1H), 3,88-3,82 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,37 (s, 3H), 3,06-2,91 (m, 2H), 2,87-2,79 (m, 2H), 2,08-2,01 (m, 2H), 1,91-1,86 (m, 2H).
Ejemplo 337a 1,2-dimetil-4-nitro-1H-imidazol 337 a
Figure imgf000301_0001
95 2 h
337d 3376
A una mezcla de 2-metil-4-nitro-1H-imidazol (10,0 g, 78,7 mmol) y K2CO3 (21,7 g, 160 mmol) en DMF (80 ml) se le añadió gota a gota CH3 I (13,4 g, 94 mmol) mientras se agitaba a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 2 h. A continuación se añadió agua (200 ml) a la mezcla. La suspensión resultante se filtró, se lavó con agua y se secó a vacío para dar 337 a como un sólido blanco (5,0 g, 45 %). E m - E S I : [M+H]+ 142,1.
Ejemplo 337b 1,2-dimetil-1H-imidazol-4-ilcarbamato de ferc-butilo 337 b
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 337 a (2,0 g, 14,1 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 400 mg), (Boc)2O (9,22 g, 43,3 mmol), trietilamina (2,85 g, 28,2 mmol) y etanol (20 ml). La mezcla se evacuó, se cargó con gas hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 40:1 para dar 337 b (1,2 g, 40 %) como un sólido marrón. EM-ESI: [M+H]+ 212,1
Ejemplo 337c Clorhidrato de 1,2-dimetil-1H-imidazol-4-amina 337 c
A una solución de 337 b (1,2 g, 5,68 mmol) en diclorometano (5,0 ml) se le añadió HCl 3 M en dioxano (5,0 ml). Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y se concentró a presión reducida. El producto bruto se lavó mediante acetato de etilo para dar 337 c (450 mg, 55 %) como un sólido amarillo pálido, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 112,2
Ejemplo 337d 5-bromo-3-(1,2-dimetil-1H-imidazol-4-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 337 d
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 337 c (400 mg, 3,60 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (960 mg, 3,60 mmol), XantPhos (240 mg, 0,40 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (360 mg, 0,40 mmol), Cs2CO3 (4,69 g, 14,4 mmol) y 1,4-dioxano (20 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se calentó a 90 °C durante 2,5 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (de 30:1 a 20:1) para dar 337 d como un sólido amarillo pálido (350 mg, 33 %). EM-ESI: [M+H]+ 297,1.
Ejemplo 337e Acetato de (4-{5-[(1,2-dimetil-1H-imidazol-4-il)amino]-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il}-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]-dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il)metilo 337 e
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 337 d (20 mg, 0,67 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (270 mg, 0,67 mmol), Pd(dppf)Cl2 (42 mg, 0,050 mmol), acetato de sodio (82 mg, 1,0 mmol), K3PO4 trihidratado (266 mg, 1,0 mmol), agua ( 6 gotas) y acetonitrilo ( 6 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se calentó a 95 °C durante 2 h. A continuación, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 25:1 para dar 337 e (200 mg, 50 %) como un sólido marrón. CLEM-ESI: [M+H]+ 570,3
Ejemplo 337 3-[4-[5-[(1,2-dimetilimidazol-4-il)amino]-1 -metil-6-oxo-3-piridil]-3-(hidroximetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 337
Una mezcla de 337 e (100 mg, 0,19 mmol) e hidróxido de litio (34 mg, 1,4 mmol) en /-propanol/THF (1:1,4 ml) y agua (1 ml) se agitó a 40 °C durante 0,5 h. La mezcla se evaporó a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (10 ml). A continuación, se extrajo con acetato de etilo (2 x 10 ml). El extracto de acetato de etilo combinado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 337 (35 mg, 40 %) como un sólido blanco. CLEM-ESI: [M+H]+ 528,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) ó 8,45 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,28­ 7,27 (m, 2H), 7,25 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,79 (s, 1H), 4,62-4,40 (m, 3H), 4,15-4,14 (m, 2H), 3,84-3,81 (m, 1H), 3,67 (s, 3H), 3,52 (s, 3H), 2,57-2,56 (m, 2H), 2,51 (s, 2H), 2,32 (s, 3H), 1,27 (s, 6 H).
Ejemplo 338a 3-(2-nitro-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-5(4H)-il)propanonitrilo 338 a
Figure imgf000302_0001
Siguiendo el procedimiento del ejemplo 296d, y partiendo de 1-(2-bromoetil)-5-(clorometil)-3-nitro-1H-pirazol 296 d (268 mg, 1,00 mmol) y 3-aminopropanonitrilo (210 mg, 3,00 mmol), se dio 338 a como un sólido blanco (180 mg, 81 %). EM-ESI: [M+H]+ 222,1
Ejemplo 338b 3-(2-amino-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-5(4H)-il)propanonitrilo 338 b
Siguiendo el procedimiento del ejemplo 296e, y partiendo de 338 a (180 mg, 0,81 mmol), se dio 338 b como un sólido amarillo (120 mg, 77 %). EM-ESI: [M+H]+ 192,2
Ejemplo 338c 3-(2-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirazin-5(4H)-il)propanonitrilo 338 c
Siguiendo el procedimiento del ejemplo 309c ,y partiendo de 338 b (120 mg, 0,63 mmol) y 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona ( 1 6 9 mg, 0,63 mmol), se dio 338 c como un sólido amarillo (150 mg, 63 %). EM-ESI: [M+H]+ 377,2 Ejemplo 338d Acetato de [4-(5-{[5-(2-cianoetil)-4H,5H,6H,7H-pirazolo[1,5-a]pirazm-2-il]amino}-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-3-il]metilo 338 d
Siguiendo el procedimiento del ejemplo 309d, y partiendo de 338 c (150 mg, 0,45 mmol) y ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (358 mg, 0,90 mmol), se dio 338 d como un sólido amarillo (150 mg, 52 %). EM-ESI: [M+H]+ 650,3
Ejemplo 338 3-[2-[[5-[2-(7,7-dimetil-4-oxo-1,2,6,8-tetrahidrocidopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazm-3-il)-3-(hidroximetil)-4-piridil]-1-metil-2-oxo-3-piridil]amino]-6,7-dihidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirazin-5-il]propanonitrilo 338
Siguiendo el procedimiento del ejemplo 309, y partiendo de 338 e (150 mg, 0,23 mmol), se dio 338 como un sólido blanco (55 mg, 40 %). EM-ESI: [M+H]+ 608,3. RMN de 1H (500 MHz, CDCla) 6 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 5,05 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,66-4,64 (m, 1H), 4,52-4,50 (m, 1H), 4,36-4,34 (m, 1H), 4,17-4,16 (m, 2H), 4,09-4,07 (m, 2H), 3,88-3,84 (m, 1H), 3,75 (s, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,05-3,03 (m, 2H), 2,93-2,90 (m, 2H), 2,63-2,58 (m, 4H), 2,53 (s, 2H), 1,29 (s, 6 H).
Ejemplo 339a 4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1 -carboxilato de tere-butilo 339 a
A una solución de 5-bromo-2-nitropiridin (30,0 g, 148 mmol) en DMSO (1 l) se le añadieron K2CO3 (40,0 g, 296 mmol) y piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (28,0 g, 148 mmol). La mezcla se agitó a 65 °C durante la noche. Después de enfriar, se vertió en agua (2 l). El sólido precipitado se recogió y se secó a vacío. A continuación, se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo 20 : 1 y, a continuación, con diclorometano para dar 339 a como un sólido amarillo (17,0 g, 37 %). EM-ESI: [M+H]+ 309.
Ejemplo 339b 4-(6-aminopiridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de tere-butilo 339 b
Un matraz de fondo redondo de 500 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con 339 a (3,1 g, 10 mmol), paladio al 10 % sobre carbono (un 50 % humedecido, 1 , 0 g) y etanol ( 1 00 ml). Se evacuó, se cargó con gas hidrógeno por medio de un globo y se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. A continuación, se evacuó el hidrógeno y se cargó nitrógeno en el matraz. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 339 b (2,7 g, 97 %). EM-ESI: [M+H]+ 279
Ejemplo 339c 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de tere-butilo 339 c
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 100 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con 339 b (1,3 g, 4,7 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (1,24 g, 4,7 mmol), carbonato de cesio (3,8 g, 12 mmol) y 1,4-dioxano (50 ml). Después de hacer burbujear nitrógeno a través de la mezcla resultante durante 30 minutos, se añadieron XantPhos (272 mg, 0,47 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (430 mg, 0,47 mmol). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/argón y se calentó a reflujo durante 3 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se dividió entre acetato de etilo (100 ml) y agua (100 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 X 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El agente de secado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 50:1 para dar 339 c (1,3 g, 59 %). EM-ESI: [M+H]+ 464.
Ejemplo 339d 4-{6-[(5-{3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}-1 -metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)amino]piridin-3-il}piperazin-1 -carboxilato de tere-butilo 339 d
Figure imgf000304_0001
339 e
Un matraz de fondo redondo de una única boca de 50 ml equipado con un agitador magnético y un condensador de reflujo se cargó con acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)metilo 199 e (287,4 mg, 0,60 mmol), 339 c (145 mg, 0,30 mmol), Pd(dppf)Cl2 (24,5 mg, 0,030 mmol), K3PO4 (127,2 mg, 0,60 mmol), acetato de sodio (49,2 mg, 0,60 mmol), agua (0,50 ml) y acetonitrilo (10 ml). Después de tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno, la mezcla se calentó a 95 °C durante 1 h. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo para dar 339 d como un sólido amarillo (140 mg, 61 %). EM-ESI: [M+H]+ 737,3.
Ejemplo 339c Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-(1-metil-6-oxo-5-{[5-(piperazin-1-il)piridin-2-il]amino}-1,6-dihidropiridin-3-il)piridin-3-il)metilo 339 e
Una mezcla de 339 d (130 mg, 0,18 mmol) y HCl/metanol (4,0 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. A continuación, se concentró a presión reducida para dar 339 e bruto (100 mg, 87 %), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 637,3.
Ejemplo 339 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[[5-[4-(2-metoxietil)piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociclopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 339
Una mezcla de 339 e (100 mg, 0,18 mmol), 1-bromo-2-metoxietano (24,8 mg, 0,18 mmol) y K2CO3 (49,7 mg, 0,36 mmol) en acetonitrilo (5,0 ml) en un sellado se agitó a 85 °C durante la noche. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. Al residuo se le añadió agua y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano tres veces. La capa orgánica combinada se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 339 como un sólido amarillo (31,1 mg, 30%). EM-ESI: [M+H]+ 653,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO) 6 8,61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,84 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,38-7,34 (m, 2H), 7,23 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 4,97-4,95 (m, 1H), 4,45-4,40 (m, 2H), 4,23-4,19 (m, 3H), 3,85-3,83 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,47-3,44 (m, 2H), 3,24 (s, 3H), 3,04­ 3,02 (m, 4H), 2,59-2,53 (m, solapamiento, 8 H), 2,43 (s, 2H), 1,23 (s, 6 H).
Ejemplo 340a (3S)-3-metil-4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 340 a
Siguiendo el procedimiento del ejemplo 323a, y partiendo de (3S)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (10,0 g, 50 mmol) y 5-bromo-2-nitropiridina (10,5 g, 50 mmol), se dio 340 a como un sólido amarillo (8,05 g, 50 %). EM-ESI:
[M+H]+ 323
Ejemplo 340b (3S)-4-(6-aminopiridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo 340 b
Siguiendo el procedimiento del ejemplo 323b, y partiendo de 340 a (5,8 g, 18 mmol), se dio 340 b como un sólido marrón (4,9 g, 93 %). EM-ESI: [M+H]+ 293
Ejemplo 340c (3S)-4-(6-(5-bromo-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de tere-butilo 340 c
Siguiendo los procedimientos del ejemplo 323c, y partiendo de 340 b (4,0 g, 13,7 mmol) y 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (5,5 g, 20,6 mmol), se dio 340 c como un sólido amarillo (5,4 g, 83 %). EM-e S i: [M+H]+ 478
Ejemplo 340d (3S)-5-bromo-1-metil-3-(5-(2-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)piridin-2(1H)-ona 340 d
Siguiendo el procedimiento del ejemplo 271c, y partiendo de 340 c (3,1 g, 6,5 mmol), se dio 340 d como un sólido amarillo (2,3 g, 94 %). EM-ESI: [M+H]+ 378.
Ejemplo 340e (S)-5-bromo-3-(5-(4-(2-metoxietil)-2-metilpiperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2(1H)-ona 340 e
Figure imgf000305_0001
Una mezcla de 340 d (500 mg, 1,32 mmol), 1-bromo-2-metoxietano (239,1 mg, 1,72 mmol), K2CO3 (364 mg, 2,64 mmol) y acetonitrilo ( 6 ml) en un tubo sellado se calentó a 80 °C durante 12 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. Se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en agua (20 ml) y acetato de etilo (30 ml). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 X 30 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se concentró a presión reducida para dar 340 e bruto como un aceite oscuro (600 mg), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. EM-ESI: [M+H]+ 436,1
Ejemplo 340f Acetato de (2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}-4-[5-({5-[(2S)-4-(2-metoxietil)-2-metilpiperazin-1-il]piridin-2-il}amino)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridin-3-il]piridin-3-il)metilo 340 f
Un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con un condensador de reflujo se cargó con 340 e (180 mg, 0,412 mmol), ácido {3-[(acetoxi)metil]-2-{4,4-dimetil-9-oxo-1,10-diazatriciclo[6.4.0.026]dodeca-2(6),7-dien-10-il}piridin-4-il}borónico 199 e (327,3 mg, 0,824 mmol), Pd(dppf)Cl2 (16,8 mg, 0 , 0 2 0 6 mmol), K3PO4 (174,7 mg, 0,824 mmol), acetato de sodio (67,6 mg, 0,824 mmol), acetonitrilo (10 ml) y agua (3 gotas). El sistema se sometió a tres ciclos de descarga de vacío/nitrógeno y se calentó a 100 °C bajo protección con N2 durante 1 h. El análisis de la mezcla de reacción mediante CLEM mostró una conversión completa en el producto deseado. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol 20:1 para dar 340 f como un aceite amarillo (190 mg, 65 %). EM-ESI: [M+H]+ 709,4
Ejemplo 340 3-[3-(hidroximetil)-4-[5-[[5-[(2S)-4-(2-metoxietil)-2-metil-piperazin-1-il]-2-piridil]amino]-1-metil-6-oxo-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidroddopenta[3,4]pirrolo[3,5-b]pirazin-4-ona 340
A una solución de 340 f (170 mg, 0,24 mmol) en THF ( 6 ml), /-propanol ( 6 ml) y agua ( 6 ml) se le añadió hidróxido de litio (57,6 mg, 2,4 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 h, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en diclorometano (20 ml) y agua (10 ml). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (3 * 20 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SÜ4, se concentró a presión reducida y se purificó mediante HPLC prep. de fase inversa para dar 340 (48,5 mg, 30 %) como un sólido blanco. EM-ESI: [M+H]+ 667,3. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-de) 6 8,62 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,82 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,37-7,34 (m, 2H), 7,24 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,97-4,95 (m, 1H), 4,47-4,41 (m, 2H), 4,25-4,19 (m, 3H), 3,85-3,83 (m, 1H), 3,63-3,62 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 3,47-3,45 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 3,06-3,04 (m, 1H), 2,93-2,89 (m, 1H), 2,70-2,68 (m, 1H), 2,62-2,32 (m, solapamiento, 9H), 1,22 (s, 6 H), 0,91 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 901 Ensayo de Btk bioquímico
Un procedimiento generalizado para un ensayo de cinasa Btk bioquímico estándar que se puede usar para someter a prueba los compuestos de fórmula I es como sigue. Se prepara una mezcla maestra menos enzima Btk que contiene 1X tampón cinasa de señalización de células (Tris-HCl 25 mM, pH 7,5, beta-glicerofosfato 5 mM, ditiotreitol 2 mM, Na3VO40,1 mM, MgCh 10 mM), sustrato de péptido biotinilado para PTK 2 de Promega 0,5 pM y BSA al 0,01 %. Se prepara una mezcla maestra más enzima Btk que contiene 1X tampón cinasa de señalización de células, sustrato de péptido biotinilado para PTK 20,5 pM, BSA al 0,01 % y 100 ng/pocillo (0,06 mU/pocillo) de enzima Btk. Se prepara la enzima Btk como sigue: se subclonó una Btk natural humana de longitud completa (número de acceso n M - 000061 ) con una marca His V5 y 6 x c terminal en el vector pFastBac para preparar el baculovirus que porta esta Btk con marca de epítopo. La generación de baculovirus se realiza en base a las instrucciones de Invitrogen detalladas en su protocolo publicado "Bac-to-Bac Baculovirus Expression Systems" (n.os de cat. 10359-016 y 10608-016). Se usa el virus del paso 3 para infectar a células Sf9 para sobreexpresar la proteína Btk recombinante. A continuación, se purifica la proteína Btk hasta homogeneidad usando una columna de Ni-NTA. La pureza de la preparación de proteínas es mayor de un 95 % en base a la tinción con Sypro-Ruby sensible. Se prepara una solución de ATP 200 pM en agua y se ajusta a pH 7,4 con NaOH 1 N. Una cantidad de 1,25 pl de los compuestos en DMSO al 5 % se transfiere a una placa de poliestireno Costar de 1X área de 96 pocillos. Los compuestos se someten a prueba individualmente y con una curva de respuesta a la dosis de 11 puntos (la concentración de partida es 10 pM; dilución 1:2). Una cantidad de 18,75 pl de la mezcla maestra menos enzima (como control negativo) y mezcla maestra más enzima se transfiere a pocillos apropiados en una placa de poliestireno costar de 1X área de 96 pocillos. Se añaden 5 pl de ATP 200 pM a esta mezcla en la placa de poliestireno Costar de 1X área de 96 pocillos para una concentración de ATP final de 40 pM. Se deja que la reacción incube durante 1 hora a temperatura ambiente. La reacción se detiene con 1X tampón de detección de Perkin Elmer que contiene EDTA 30 mM, SA-APC 20 nM y Ab PT6 6 1 nM. La placa se lee usando fluorescencia resuelta en el tiempo con un Perkin Elmer Envision usando un filtro de excitación de 330 nm, un filtro de emisión de 665 nm y un 2.° filtro de emisión de 615 nm. Los valores de CI50 se calculan posteriormente. De forma alternativa, se puede usar el ensayo Lanthascreen para evaluar la actividad Btk a través de la cuantificación de su producto peptídico fosforilado. La FRET (transferencia de energía por resonancia de fluorescencia) que se produce entre la fluorescencia en el producto peptídico y el terbio en el anticuerpo de detección disminuye con la adición de inhibidores de Btk que reducen la fosforilación del péptido. En un volumen de reacción final de 25 pl, se incuba Btk (h) (reacción con 0,1 ng/25 ul) con Hepes 50 mM, pH 7,5, MgCh 10 mM, MnCh 2 mM, DTT 2 mM, NaVO40,2 mM, b S a al 0,01 % y fluoresceína-poli-GAT 0,4 uM. La reacción se inicia mediante la adición de ATP a o 25 uM (Km de ATP). Después de la incubación durante 60 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detiene mediante la adición de una concentración final de 2 nM de anticuerpo de detección Tb-PY20 en EDTA 60 mM durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se determina la detección en un Perkin Elmer Envision con excitación de 340 nm y emisión a 495 nm y 520 nm. Los valores de CI50 en la inhibición de Btk ejemplares aparecen en las tablas 1, 2 y 3.
Ejemplo 902 Ensayo de Btk para células Ramos
Otro procedimiento generalizado para un ensayo de cinasa Btk celular estándar que se puede usar para someter a prueba los compuestos de fórmula I es como sigue. Se incuban células Ramos a una densidad de 0,5 x 107 células/ml en presencia del compuesto de prueba durante 1 h a 37 °C. A continuación, las células se estimulan incubando con 10 pg/ml de F(ab)2 de anti-IgM humana durante 5 minutos a 37 °C. Las células se sedimentan, se lisan y se realiza un ensayo de proteínas en el lisado limpio. Se someten cantidades iguales de proteínas de cada muestra a SDS-PAGE e inmunoelectrotransferencia con anticuerpo anti-phosphoBtk (Tyr223) (Cell Signaling Technology n.° 3531; Epitomies, n.° de cat. 2207-1) o bien anticuerpo phosphoBtk (Tyr551) (BD Transduction Labs n.° 558034) para evaluar la autofosforilación de Btk o un anticuerpo anti-Btk (BD Transduction Labs n.° 611116) para controlar las cantidades totales de Btk en cada lisado.
Ejemplo 903 Ensayo de proliferación de linfocitos B
Un procedimiento generalizado para un ensayo de proliferación de linfocitos B celular estándar que se puede usar para someter a prueba los compuestos de fórmula I es como sigue. Los linfocitos B se purifican a partir de bazos de ratones Balb/c de 8-16 semanas usando un kit de aislamiento de linfocitos B (Miltenyi Biotech, n.° de cat 130-090­ 862). Los compuestos de prueba se diluyen en DMSO al 0,25 % e incuban con 2,5 x 105 de linfocitos B esplénicos de ratón purificados durante 30 min antes de la adición de 10 pg/ml de un anticuerpo anti-IgM de ratón (Southern Biotechnology Associates n.° de cat. 1022-01) en un volumen final de 100 pl. Después de 24 h de incubación, se añade 1 pCi de 3H-timidina y las placas se incuban unas 36 h adicionales hasta la obtención usando el protocolo del fabricante para el sistema de ensayo de captación de SPA[3H]timidina (Amersham Biosciences n.° RPNQ 0130). Se realiza un recuento de la fluorescencia basada en microesferas de SPA en un contador microbeta (Wallace Triplex 1450, Perkin Elmer).
Ejemplo 904 Ensayo de proliferación de linfocitos T
Un procedimiento generalizado para un ensayo de proliferación de linfocitos T estándar que se puede usar para someter a prueba los compuestos de fórmula I es como sigue. Los linfocitos T se purifican a partir de bazos de ratones Balb/c de 8-16 semanas usando un kit de aislamiento de linfocitos Pan-T (Miltenyi Biotech, n.° de cat 130-090-861). Los compuestos de prueba se diluyen en DMSO al 0,25 % e incuban con 2,5 x 105 linfocitos T esplénicos de ratón purificados en un volumen final de 10 0 pl en placas de fondo transparente y plano recubiertas previamente durante 90 min a 37 °C con 10 pg/ml de cada uno de anticuerpos anti-CD3 (BD, n.° 553057) y anti-CD28 (BD, n.° 553294). Después de 24 h de incubación, se añade 1 pCi de 3 H-timidina y las placas se incuban unas 36 h adicionales hasta la obtención usando el protocolo del fabricante para el sistema de ensayo de captación de SPA[3H]timidina (Amersham Biosciences n.° RPNQ 0130). Se realizó un recuento de la fluorescencia basada en microesferas de SPA en un contador microbeta (Wallace Triplex 1450, Perkin Elmer).
Ejemplo 905 Ensayo de inhibición de CD86
Un procedimiento generalizado para un ensayo estándar en cuanto a la inhibición de la actividad de los linfocitos B que se puede usar para someter a prueba los compuestos de fórmula I es como sigue. Los esplenocitos de ratón totales se purifican a partir de bazos de ratones Balb/c de 8-16 semanas mediante lisis de glóbulos rojos (BD Pharmingen n.° 555899). Los compuestos de prueba se diluyen en DMSO al 0,5 % e incuban con 1,25 x 106 esplenocitos en un volumen final de 200 pl en placas de fondo transparente y plano (Falcon 353072) durante 60 min a 37 °C. A continuación, las células se estimulan con la adición de 15 pg/ml de IgM (Jackson ImmunoResearch 115­ 006-020) e incuban durante 24 h a 37 °C, un 5 % de CO2. Después de 24 h de incubación, las células se transfieren a placas de 96 pocillos transparentes de fondo cónico y se sedimentan mediante centrifugación a 1200 x g x 5 min. Las células se prebloquean mediante CD16/CD32 (BD Pharmingen n.° 553142), seguido de tinción triple con CD19-FITC (BD Pharmingen n.° 553785), CD8 6 -PE (BD Pharmingen n.° 553692) y 7AAD (BD Pharmingen n.° 51-68981E). Las células se clasifican en una BD FACSCalibur y se seleccionan en la población CD19+/7AAD- . Se miden los niveles de expresión en la superficie de CD8 6 en la población seleccionada frente a la concentración del compuesto de prueba.
Ejemplo 906 Ensayo de supervivencia de linfocitos B-LLA
Lo siguiente es un procedimiento para un ensayo de supervivencia de linfocitos B-LLA (leucemia linfoblástica aguda) estándar usando una lectura con XTT para medir el número de células viables. Se puede usar este ensayo para someter a prueba los compuestos de fórmula I en cuanto a su capacidad de inhibir la supervivencia de linfocitos B-LLA en cultivo. Una línea de linfocitos B de leucemia linfoblástica aguda humana que se puede usar es SUP-B15, una línea de prelinfocitos B-LLA humana que está disponible de la ATCC.
Los prelinfocitos B-LLA SUP-B15 se siembran en placas de microvaloración de 96 pocillos múltiples en 100 pl de medios de Iscove FBS al 20 % a una concentración de 5 x 105 células/ml. A continuación, se añaden los compuestos de prueba con una conc. final de DMSO al 0,4 %. Se incuban las a 37 °C con un 5 % de CO2 durante hasta 3 días. Después de 3 días, las células se dividen 1:3 en placas de 96 pocillos nuevas que contienen el compuesto de prueba y se deja que crezcan hasta unos 3 días adicionales. Después de cada periodo de 24 h, se añaden 50 ul de una solución de XTT a una de las placas de 96 pocillos de muestra y se toman lecturas de la absorbancia a las 2, 4 y 20 horas siguiendo las instrucciones del fabricante. A continuación, se toma la lectura tomada con una DO para células solo tratadas con DMSO en el intervalo lineal del ensayo (0,5-1,5) y se mide el porcentaje de células viables en los pocillos tratados con el compuesto frente a las células solo tratadas con DMSO.
Ejemplo 907 Ensayo de sangre completa para CD69
Se obtiene sangre humana a partir de voluntarios sanos, con las siguientes restricciones: 1 semana libre de fármacos, no fumadores. La sangre se extrae (aproximadamente 20 ml para someter a prueba 8 compuestos) mediante venopunción en tubos de Vacutainer® (Becton, Dickinson y Co.) con heparina de sódica.
Las soluciones de los compuestos de fórmula I a 10 mM en DMSO se diluyen 1:10 en DMSO al 100 %, a continuación se diluyen en diluciones en serie tres veces en DMSO al 100 % para una curva de respuesta a la dosis de diez puntos.
Los compuestos se diluyen adicionalmente 1:10 en PBS y, a continuación, se añade una alícuota de 5,5 pl de cada compuesto por duplicado a una placa de 96 pocillos de 2 ml; se añade 5,5 pl de DMSO al 10 % en PBS como control y pocillos sin estímulo. Se añade sangre completa humana, SCH, (100 pl) a cada pocillo. Después de la mezcla, las placas se incuban a 37 °C, un 5 % de CO2 , humedad de un 100 % durante 30 minutos. Se añade anti-IgM humana con F(ab')2 de cabra (10 pl de una solución de 500 pg/ml, 50 pg/ml final) a cada pocillo (excepto los pocillos sin estímulo) con mezclado y las placas se incuban durante unas 20 horas adicionales. Al final de la incubación de 20 horas, las muestras se incuban con anticuerpos marcados fluorescentes durante 30 minutos, a 37 °C, un 5 % de CO2 , humedad de un 100 %. Se incluyen las tinciones para el control inducido, no teñidas y únicas en cuanto a los ajustes de compensación y la configuración del voltaje inicial. A continuación, las muestras se lisan con PharM Lyse™ (BD Biosciences Pharmingen) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. A continuación, las muestras se transfieren a una placa de 96 pocillos adecuada para usarse en el sistema de 96 pocillos de HTS de BD Biosciences en la máquina LSRII. Se obtuvieron los datos adquiridos y los valores de intensidad de fluorescencia media usando el programa informático DIVA de BD Biosciences. Los resultados se analizan inicialmente mediante el programa informático de análisis de FACS (Flow Jo). Las concentraciones inhibidoras (CI50, CI70, CI90, etc.) para los compuestos de prueba se definen como la concentración que disminuye, por ejemplo, en un 50 %, el porcentaje positivo de células CD69 que también son CD20 positivas estimuladas por anti-IgM (promedio de 8 pocillos de control, después de la sustracción del promedio de 8 pocillos para el caso sin estímulo). Los valores de CI70 se calculan mediante Prism, versión 5, usando un ajuste de curva de regresión y como se muestra en las tablas 1 y 2.
Ejemplo 908 Ensayo de proliferación de las células in vitro
La eficacia de los compuestos de fórmula I se mide mediante un ensayo de proliferación de las células que emplea el siguiente protocolo (Mendoza et al. (2 0 0 2 ) Cancer Res. 62:5485-5488). El ensayo de viabilidad de las células luminiscente CellTiter-Glo®, incluyendo los reactivos y el protocolo están disponibles comercialmente (Promega Corp., Madison, WI, Technical Bulletin TB288). El ensayo evalúa la capacidad de los compuestos de introducirse en las células e inhibir la proliferación de las células. El principio del ensayo se basa en la determinación del número de células viables presentes determinando cuantitativamente el ATP presente en un ensayo homogéneo donde la adición del reactivo de Cell-Titer Glo da como resultado la lisis de las células y la generación de una señal luminiscente a través de la reacción de la luciferasa. La señal luminiscente es proporcional a la cantidad de ATP presente.
Se siembra un panel de líneas celulares de linfoma de linfocitos B (BJAB, SUDHL-4, TMD8 , OCI-Ly10, OCI-Ly3, WSU-DLCL2) en una placa de 384 pocillos en medio de crecimiento normal y se añadieron inhibidores de BTK diluidos en serie o solo DMSO a cada pocillo. Se evalúa la viabilidad de las células después de una incubación de 96 horas mediante CellTiter-Glo® (Promega). Se pueden presentar los datos como viabilidad de las células relativa en células tratadas con inhibidor de BTK con respecto a células de control tratadas con DMSO. Los puntos de datos son la media de 4 muestras en cada nivel de dosis. Las barras de error representan la DE de la media.
Procedimiento: Día 1 - Sembrar placas de células (placas TC negras microtransparentes, de fondo transparente y de 384 pocillos con tapa de Falcon, n.° 353962), obtener células, sembrar células a 1000 células por 54 pl por pocillo en placas de células de 384 pocillos durante un ensayo de 3 días. Medio de cultivo celular: RPMI o DMEM con alto contenido de glucosa, suero fetal bovino al 10 %, L-glutamina 2 mM, P/S. Incubar D/N a 37 °C, un 5 % de CO2.
Día 2 - Añadir fármaco a las células, dilución del compuesto, placas con DMSO (en serie 1:2 para 9 puntos), añadir 20 pl de compuestos a 10 mM en la 2a columna de la placa de 96 pocillos. Realizar una dilución en serie 1:2 por toda la placa (10 pl 20 pl de DMSO al 100 %) para un total de 9 puntos usando Precision. Placas de polipropileno de fondo cónico de 96 pocillos de placas con medios de Nune (n.° de cat. 249946) (dilución 1:50) Añadir 147 pl de medios en todos los pocillos. Transferir 3 pl de DMSO compuesto de cada pocillo en la placa con DMSO a cada pocillo correspondiente en la placa con medios usando Rapidplate.
Adición de fármaco a las células, placa de células (dilución 1:10), añadir 6 pl de medios compuesto directamente a las células (54 pl de medios ya en las células). Incubar 3 días a 37 °C y un 5 % de CO2 en una estufa de incubación que no se abrirá a menudo.
Día 5 - Revelar las placas, descongelar el tampón de Cell Titer Glo a temperatura ambiente. Retirar las placas de células de 37 °C y equilibrar a temperatura ambiente, durante aproximadamente 30 minutos. Añadir el tampón de Cell Titer Glo al sustrato de Cell Titer Glo (de frasco a frasco). Añadir 30 pl de reactivo de Cell Titer Glo (Promega n.° de cat. G7572) a cada pocillo de células. Disponer en el agitador de placas durante 30 minutos. Leer la luminiscencia en el lector de placas Analyst HT (medio segundo por pocillo).
Ensayos de viabilidad de las células y ensayos de combinación: Se sembraron las células a 1000-2000 células/pocillo en placas de 384 pocillos durante 16 h. En el día dos, se preparan nueve diluciones 1:2 del compuesto en serie en DMSO en una placa de 96 pocillos. Los compuestos se diluyen adicionalmente en medios de crecimiento usando un robot Rapidplate (Zymark Corp., Hopkinton, MA). A continuación, se añaden los compuestos diluidos a pocillos por cuadruplicado en placas de células de 384 pocillos y se incuba a 37 °C y un 5 % de CO2. Después de 4 días, se miden los números de células viables relativos mediante luminiscencia usando Cell-Titer Glo (Promega) de acuerdo con las instrucciones del fabricante y se leen en un Wallac Multilabel Reader (PerkinElmer, Foster City). Se calculan los valores de CE50 usando el programa informático Prism® 4.0 (GraphPad, San Diego). Los compuestos de fórmula I y los agentes quimioterápicos se añaden simultáneamente o separados por 4 horas (uno después del otro) en todos los ensayos.
Un ensayo de proliferación de las células in vitro ejemplar adicional incluye las siguientes etapas:
1. Se deposita una alícuota de 100 pl de cultivo celular que contiene aproximadamente 104 células en el medio en cada pocillo de una placa de paredes opacas de 384 pocillos.
2. Se preparan pocillos de control que contienen medio y sin células.
3. Se añade el compuesto a los pocillos experimentales y se incuba durante 3-5 días.
4. Las placas se equilibran hasta temperatura ambiente durante aproximadamente 30 minutos.
5. Se añade un volumen de reactivo de CellTiter-Glo igual al volumen del medio de cultivo celular presente en cada pocillo.
6. El contenido se mezcla durante 2 minutos en un agitador orbital para la inducir la lisis de las células.
7. Se incuba la placa a temperatura ambiente durante 10 minutos para estabilizar la señal de luminiscencia.
8. Se registra la luminiscencia y se presenta en gráficos como URL = unidades relativas de luminiscencia. Aunque la invención anterior se ha descrito con cierto detalle a modo de ilustración y ejemplo, para los propósitos de claridad de comprensión, no se deben interpretar las descripciones y ejemplos como limitantes del alcance de la invención.

Claims (7)

R E IV IN D IC A C I O N E S
1. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:
2-{4-hidroximetil-1'-metil-5'-[5-(4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6'-oxo-1',6'-dihidro-[3,3']bipiridinil-5-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ddopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazm-1-ona, que tiene la estructura
Figure imgf000310_0001
2-{3'-hidroximetil-1-metil-5-[5-(4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ddopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazm-1-ona, que tiene la estructura
Figure imgf000310_0002
2-{3'-hidroximetil-1-metil-5-[5-((S)-2-metil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ddopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura
Figure imgf000310_0003
2-[3'-hidroximetil-1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ddopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura
Figure imgf000311_0001
2-[3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-cidopenta[4,5]pirrolo[1,2—a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura
Figure imgf000311_0002
2-[4-hidroximetil-1'-metil-5'-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6'-oxo-1',6'-dihidro-[3,
3']bipiridinil-5-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2 —a]pirazin-1 -ona, que tiene la estructura
Figure imgf000311_0003
2-{3'-hidroximetil-1-metil-5-[5-((R)-2-metil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2—a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura
Figure imgf000311_0004
2-{5-[5-((2S,5R)-2,5-dimetil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-cidopenta[4,5]pirrolo[1,2—a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura
Figure imgf000312_0001
2-[3'-hidroximetil-1-metil-5-(5-oxetan-3-il-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4’]bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2—a]pirazin-1 -ona, que tiene la estructura
Figure imgf000312_0002
2-{5-[5-((S)-2-etil-4-oxetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-cidopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura
Figure imgf000312_0003
2-[5-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazin-2-ilamino)-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-cidopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura
Figure imgf000312_0004
2-[5-(2,6-dimetil-pirimidin-4-ilamino)-3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-cidopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura
Figure imgf000313_0001
2-[3'-hidroximetil-1-metil-5-(2-metil-pirimidin-4-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona;
Figure imgf000313_0002
2-[3'-hidroximetil-1-metil-5-(6-metil-pirimidin-4-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura
Figure imgf000313_0003
2-{3-hidroximetil-4-[6-(imidazo[1,2-a]piridin-7-ilamino)-4-metil-5-oxo-4,5-dihidro-pirazin-2-il]-piridin-2-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura
Figure imgf000313_0004
2-[3'-hidroximetil-1-metil-6-oxo-5-(pirazin-2-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,
4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciclopenta[4,
5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura
o estereoisómeros, tautómeros o sales farmacéuticamente aceptables del mismo para su uso como medicamento.
2 El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho compuesto es 2-{3'-hidroximetil-1-metil-5-[5-((S)-2-metil-4-oxetan-3-il-piperazin-1 -il)-piridin-2-Mamino]-6-oxo-1,
6-dihidro-[3,4’]bipiridinM-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-cidopenta[4,5]pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que tiene la estructura
Figure imgf000314_0001
o estereoisómeros, tautómeros o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
3 El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 o 2 para su uso en el tratamiento de artritis reumatoide, lupus eritematoso diseminado, urticaria y esclerosis múltiple.
El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 para su uso en el tratamiento de artritis reumatoide. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 para su uso en el tratamiento de lupus eritematoso diseminado.
6. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 para su uso en el tratamiento de urticaria.
7. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 para su uso en el tratamiento de esclerosis múltiple.
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