ES2844978T3 - Cristal de un compuesto que tiene actividad inhibidora de JAK - Google Patents

Abstract

Tosilato de [1-({6-[(2S)-butan-2-ilamino]-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il}carbonil)piperidin-4- il]carbamato de metilo monohidrato.

Description

DESCRIPCIÓN

Cristal de un compuesto que tiene actividad inhibidora de JAK

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un compuesto novedoso con actividad inhibidora de JAK1.

Antecedentes técnicos

Las tirosinas quinasas son un grupo de enzimas que fosforilan específicamente un residuo de tirosina en proteínas. Las enzimas tienen un papel significativo en las rutas de transducción de señales intracelulares y tienen relación con una amplia variedad de funciones biológicas incluyendo la supervivencia, diferenciación, proliferación y secreción celulares. La familia de quinasas Janus (también denominada JAK) es conocida como la de tirosinas quinasas intracelulares que implican una señalización de citoquinas. La familia JAK incluye cuatro tipos de enzimas: JAK1, JAK2, JAK3 y tirosina quinasa 2 (también denominada Tyk2). Una vez que una citoquina se asocia con su respectivo receptor de citoquina, JAK se fosforila, y un residuo de tirosina del receptor se fosforila después. A continuación, el transductor de señal y activador de la transcripción (también denominado “STAT”), que existe en las células, se asociará con el residuo de tirosina fosforilado del receptor, y un residuo de tirosina de STAT es fosforilado por JAK. Las STAT fosforiladas forman un dímero, y el dímero se transloca al núcleo y activa la transcripción de un gen diana, lo que produce la activación de las células. Las rutas JAK/STAT son las rutas de transducción de señales intracelulares clave de citoquinas en células inmunocompetentes (bibliografía no de patente 1). Aproximadamente 40 tipos de transducciones de señales de citoquinas están mediados por una combinación de las cuatro JAK y siete STAT, y se cree que las anomalías de una producción de citoquina y señalización de citoquina tienen una implicación estrecha no solo en varias enfermedades inmunitarias e inflamatorias, tal como enfermedades autoinmunitarias y enfermedades alérgicas, sino también enfermedades que tienen diversas patologías tal como cánceres. Los compuestos que suprimen la activación de estas rutas JAK/STAT llaman la atención como nuevos terapéuticos para estas enfermedades y, de hecho, ya se han aprobado inhibidores de JAK en los Estados Unidos y Japón como un terapéutico para mielofibrosis, policitemia vera y artritis reumatoide. Además, se esperan efectos de tales compuestos en el tratamiento de otras enfermedades autoinmunitarias (tal como artritis psoriásica, artritis juvenil, enfermedad de Castleman, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Sjogren, esclerosis múltiple, enfermedad intestinal inflamatoria, enfermedad de Behget, miastenia grave, diabetes mellitus de tipo 1, nefropatía de inmunoglobulina, enfermedades tiroideas autoinmunitarias, psoriasis, esclerodermia, nefritis lúpica, ojo seco, vasculitis (tal como arteritis de Takayasu, arteritis de células gigantes, poliangiitis microscópica, granulomatosis con poliangiitis y granulomatosis eosinofílica con poliangiitis), dermatomiositis, polimiositis y neuromielitis óptica), enfermedades inflamatorias (tal como dermatitis atópica, dermatitis de contacto, eccema, prurito, alergias alimentarias, asma bronquial, neumonía eosinofílica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, rinitis alérgica, sinusitis crónica, sinusitis eosinofílica, pólipo nasal, conjuntivitis alérgica, artrosis, espondilitis anquilosante, enfermedad de Kawasaki, enfermedad de Buerger, poliarteritis nodosa y vasculitis de IgA), enfermedades proliferativas (tal como cánceres sólidos, cánceres sanguíneos, tumor maligno de la linfa, enfermedades mieloproliferativas, mieloma múltiple, fibrosis pulmonar y eosinofilia), pérdida de audición repentina, nefropatía diabética, alopecia areata, rechazo a trasplante de médula ósea o rechazo a trasplante de órganos. Actualmente, están en marcha ensayos clínicos para algunas enfermedades enumeradas anteriormente en Japón, los Estados Unidos y Europa.

Específicamente, varios estudios biológicos han demostrado un papel importante de JAK1 en las transducciones de señales de muchas citoquinas (véase la bibliografía no de patente 2, 3 y 4), lo que indica que inhibidores de JAK1 son útiles en el tratamiento de las enfermedades, tal como enfermedades autoinmunitarias: artritis psoriásica (véase la bibliografía no de patente 5), artritis juvenil (véase la bibliografía no de patente 6), enfermedad de Castleman (véase la bibliografía no de patente 6), lupus eritematoso sistémico (véase la bibliografía no de patente 7), síndrome de Sjogren (véase la bibliografía no de patente 8), esclerosis múltiple (véase la bibliografía no de patente 9), enfermedad intestinal inflamatoria (véase la bibliografía no de patente 10), enfermedad de Behget (véase la bibliografía no de patente 11), miastenia grave (véase la bibliografía no de patente 12), diabetes mellitus de tipo 1 (véase la bibliografía no de patente 9), nefropatía de inmunoglobulina (véase la bibliografía no de patente 13), enfermedades tiroideas autoinmunitarias (véase la bibliografía no de patente 14), psoriasis (véase la bibliografía no de patente 15), esclerodermia (véase la bibliografía no de patente 16), nefritis lúpica (véase la bibliografía no de patente 17), ojo seco (véase la bibliografía no de patente 18), vasculitis (véase la bibliografía no de patente 19, 20, 21, 22 y 23), dermatomiositis (véase la bibliografía no de patente 24), poliomiositis (véase la bibliografía no de patente 24), neuromielitis óptica (véase la bibliografía no de patente 25), enfermedades inflamatorias: dermatitis atópica (véase la bibliografía no de patente 26), dermatitis de contacto (véase la bibliografía no de patente 27), eccema (véase la bibliografía no de patente 28), prurito (véase la bibliografía no de patente 29), alergias alimentarias (véase la bibliografía no de patente 30), asma bronquial (véase la bibliografía no de patente 31), neumonía eosinofílica (véase la bibliografía no de patente 32), enfermedad pulmonar obstructiva crónica (véase la bibliografía no de patente 33), rinitis alérgica (véase la bibliografía no de patente 31), sinusitis crónica (véase la bibliografía no de patente 34), sinusitis eosinofílica, pólipo nasal (véase la bibliografía no de patente 35), conjuntivitis alérgica (véase la bibliografía no de patente 36), artrosis (véase la bibliografía no de patente 37), espondilitis anquilosante (véase la bibliografía no de patente 6), enfermedad de Kawasaki (véase la bibliografía no de patente 38), enfermedad de Buerger (véase la bibliografía no de patente 39), poliarteritis nodosa (véase la bibliografía no de patente 40), vasculitis de IgA (véase la bibliografía no de patente 41), enfermedades proliferativas: cánceres sólidos, cánceres sanguíneos, tumor maligno de la linfa, enfermedades mieloproliferativas, mieloma múltiple (véase la bibliografía no de patente 42, 43 y 44), pérdida de audición repentina (véase la bibliografía no de patente 45), nefropatía diabética (véase la bibliografía no de patente 46), alopecia areata (véase la bibliografía no de patente 47), rechazo a trasplante de médula ósea o rechazo a trasplante de órganos, etc. Por ejemplo, los siguientes ensayos clínicos están en marcha.

(1) Artritis reumatoide (https://clinicaltrials.gov/ NCT01888874 y NCT02049138),

(2) enfermedad de Crohn (https://clinicaltrials.gov/ NCT02365649),

(3) cáncer de pulmón no microcítico (https://clinicaltrials.gov/ NCT02257619),

(4) cáncer pancreático (https://clinicaltrials.gov/ NCT01858883),

(5) mielofibrosis (https://clinicaltrials.gov/ NCT01633372) y

(6) psoriasis (https://clinicaltrials.gov/ NCT02201524).

Además, entre las señalizaciones de citoquinas asociadas con JAK1, ya se han lanzado los inhibidores para las siguientes citoquinas.

(1) IL-6 (también denominada interleuquina-6): agentes terapéuticos para artritis reumatoide, artritis juvenil y enfermedad de Castleman (véase la bibliografía no de patente 48, 49 y 50).

(2) IL-2: agente terapéutico para rechazo agudo después de trasplante renal (véase la bibliografía no de patente 51).

Además, los ensayos clínicos sobre los siguientes inhibidores de citoquinas están en marcha.

(3) IL-4 e IL-13: agente terapéutico para asma bronquial, dermatitis atópica, sinusitis eosinofílica, pólipo nasal y esofagitis eosinofílica (véase bibliografía no de patente 31).

(4) IL-13: agente terapéutico para fibrosis pulmonar (véase https://clinicaltrials.gov/ NCT02036580).

(5) IL-5: agente terapéutico para asma bronquial, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, eosinofilia, granulomatosis eosinofílica con poliangiitis, esofagitis eosinofílica, sinusitis eosinofílica/pólipo nasal y dermatitis atópica (véase bibliografía no de patente 31 y bibliografía no de patente 52).

(6) IFNa (también denominado interferón-a): agente terapéutico para lupus eritematoso sistémico (véase bibliografía no de patente 7).

(7) IL-31: agente terapéutico para dermatitis atópica (https://clinicaltrials.gov/ NCT01986933).

(8) TSLP (también denominada linfopoyetina estromal tímica): agentes terapéuticos para asma bronquial (https://clinicaltrials.gov/ NCT02054130) y dermatitis atópica (https://clinicaltrials.gov/ NCT00757042).

Por tanto, la inhibición de la señal de JAK1 es un medio preferido para la prevención o el tratamiento de las enfermedades causadas por una anomalía de JAK1, tal como enfermedades autoinmunitarias, enfermedades inflamatorias y enfermedades proliferativas.

Como un inhibidor de JAK1, se describen [1,2,4]triazolo[1,5-a]piridinas (véase bibliografías de patente 1 y 2), pirazinonas tricíclicas (véase bibliografía de patente 3), pirrolopirimidinas (véase bibliografías de patente 4 a 7), ftalazinas (véase bibliografía de patente 8), imidazopirrolopiridinas (véase bibliografía de patente 9 y bibliografía de no patente 53), diamino-1,2,4-triazoles (véase bibliografía no de patente 54), pirazolo[1,5-a]piridinas (véase bibliografía de patente 10), imidazo[1,2-a]piridinas (véase bibliografías de patente 11 y 12), benzimidazoles (véase bibliografía de patente 13), 7-azaindoles (véase bibliografía de patente 14). Sin embargo, ninguno de los documentos mencionados divulga compuestos pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol.

Documentos del estado de la técnica

Bibliografías no de patente

[Bibliografía no de patente 1] O'Shea et al., Immunity, 2012, 36, 542-550.

[Bibliografía no de patente 2] O'Sullivan et al., Mol. Immunol., 2007, 44, 2497-2506.

[Bibliografía no de patente 3] Quintás-Cardama et al., Nat. Rev. Drug Discov., 2011, 10, 127-140.

[Bibliografía no de patente 4] Haan et al., Chem. Biol., 2011, 18, 314-323.

[Bibliografía no de patente 5] Gan et al., BioDrugs, 2013, 27, 359-373.

[Bibliografía no de patente 6] Mihara et al., Clin. Sci. (Lond.), 2012, 122, 143-159.

[Bibliografía no de patente 7] Wallace et al., 71st Ann. Meet. Am. Coll. Rheumatol., 2007, Abs. 1315.

[Bibliografía no de patente 8] Gliozzi et al., J. Autoimmun., 2013, 40, 122-133.

[Bibliografía no de patente 9] Neurath et al., Cytokine Growth Factor Rev., 2011, 22, 83-89.

[Bibliografía no de patente 10] Vuitton et al., Curr. Drug Targets, 2013, 14, 1385-1391.

[Bibliografía no de patente 11] Akdeniz et al., Ann. Acad. Med. Singapore, 2004, 33, 596-599.

[Bibliografía no de patente 12] Dalakas, Ann. N.Y. Acad. Sci., 2012, 1274, 1-8.

[Bibliografía no de patente 13] Goto et al., Clin. Immunol., 2008, 126, 260-269.

[Bibliografía no de patente 14] Nanba et al., Thyroid, 2009, 19, 495-501.

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[Bibliografía no de patente 17] Dong et al., Lupus, 2007, 16, 101-109.

[Bibliografía no de patente 18] Lim et al., Cornea, 2015, 34, 248-252.

[Bibliografía no de patente 19] Saadoun et al., Arthritis Rheumatol., 2015, 67, 1353-1360.

[Bibliografía no de patente 20] Kieffer et al., Rev. Med. Interne., 2014, 35, 56-59.

[Bibliografía no de patente 21] Takenaka et al., Clin. Rheumatol., 2014, 33, 287-289.

[Bibliografía no de patente 22] Kobold et al., Clin. Exp. Rheumatol., 1999, 17, 433-440.

[Bibliografía no de patente 23] Vaglio et al., Allergy, 2013, 68, 261-273.

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[Bibliografía no de patente 26] Bao et al., JAKSTAT, 2013, 2, e24137.

[Bibliografía no de patente 27] Takanami-Ohnishi et al., J. Biol. Chem., 2002, 277, 37896-37903.

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[Bibliografía no de patente 31] Legrand et al., J. Allergy Clin. Immunol. Pract., 2015, 3, 167-174.

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[Bibliografía no de patente 33] Southworth et al., Br. J. Pharmacol., 2012, 166, 2070-2083.

[Bibliografía no de patente 34] Van Zele et al., Allergy, 2006, 61, 1280-1289.

[Bibliografía no de patente 35] Nabavi et al., Allergol. Immunopathol. (Madr.), 2014, 42, 465-471.

[Bibliografía no de patente 36] Sakai et al., Curr. Eye Res., 2013, 38, 825-834.

[Bibliografía no de patente 37] Beekhuizen et al., Eur. Cell Mater., 2013, 26, 80-90.

[Bibliografía no de patente 38] Abe, Nihon Rinsho, 2014, 72, 1548-1553.

[Bibliografía no de patente 39] Slavov et al., Clin. Exp. Rheumatol., 2005, 23, 219-226.

[Bibliografía no de patente 40] Kawakami et al., Acta. Derm. Venereol. 2012, 92, 322-323.

[Bibliografía no de patente 41] Gülhan et al., Pediatr. Nephrol., 2015, 30, 1269-1277.

[Bibliografía no de patente 42] Costa-Pereira et al., Am. J. Cancer Res., 2011, 1, 806-816.

[Bibliografía no de patente 43] Vainchenker et al., Semin. Cell Dev. Biol., 2008, 19, 385-393.

[Bibliografía no de patente 44] Li et al., Neoplasia, 2010, 12, 28-38.

[Bibliografía no de patente 45] Masuda et al., Otol. Neurotol., 2012, 33, 1142-1150.

[Bibliografía no de patente 46] Donate-Correa et al., J. Diabetes Res., 2015, 948417.

[Bibliografía no de patente 47] Zhang et al., Arch. Dermatol. Res., 2015, 307, 319-331.

[Bibliografía no de patente 48] Nishimoto et al., J. Rheumatol., 2003, 30, 1426-1435.

[Bibliografía no de patente 49] Yokota et al., LANCET, 2008, 371, 998-1006.

[Bibliografía no de patente 50] Nishimoto et al., Blood, 2000, 95, 56-61.

[Bibliografía no de patente 51] Nashan et al., LANCET, 1997, 350, 1193-1198.

[Bibliografía no de patente 52] Kouro et al., Int. Immunol., 2009, 21, 1303-1309.

[Bibliografía no de patente 53] Kulagowski et al., Journal of Medicinal Chemistry, 2012, 55, 5901-5921.

[Bibliografía no de patente 54] Malerich et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2010, 20, 7454-7457.

Bibliografía de patente

[Bibliografía de patente 1] WO 2010/149769

[Bibliografía de patente 2] WO 2010/010190

[Bibliografía de patente 3] WO 2012/085176

[Bibliografía de patente 4] WO 2009/114512

[Bibliografía de patente 5] WO 2011/075334

[Bibliografía de patente 6] WO 2012/022045

[Bibliografía de patente 7] WO 2012/054364

[Bibliografía de patente 8] WO 2012/037132

[Bibliografía de patente 9] WO 2011/086053

[Bibliografía de patente 10] WO 2011/101161

[Bibliografía de patente 11] WO 2011/076419

[Bibliografía de patente 12] JP 2011/136925

[Bibliografía de patente 13] WO 2005/066156

[Bibliografía de patente 14] WO 2007/084557

El documento EP3190116 divulga pirazolotiazoles como inhibidores de JAK1. El documento WO2013/025628 describe pirazolopiridinas como inhibidores de JAK3. El documento WO2007/041130 trata de pirrolopirimidinas como inhibidores de JAK2 y JAK3. El documento WO2010/070060 se refiere a derivados pirazoles 3,4-diaril bicíclicos, en particular, pirazolotiazoles, como moduladores de quinasas.

Compendio de la invención

Problema que se va a resolver por la invención

Un objeto de la presente invención es proporcionar un compuesto con una excelente actividad inhibidora de JAK1.

Medios para resolver el problema

La presente invención se basa en el descubrimiento del inventor de que un compuesto mostrado a continuación (de aquí en adelante denominado “el compuesto de la invención”) tiene una excelente actividad inhibidora de JAK1.

La presente invención incluye los siguientes (I) a (III).

(I) Un compuesto descrito en cualquiera de los siguientes (1) a (6):

(1) tosilato de [1-({6-[(2S)-butan-2-ilamino]-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il}carbonil)piperidin-4-il]carbamato de metilo monohidrato;

(2) tosilato de [1-({6-[(2R)-butan-2-ilamino]-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il}carbonil)piperidin-4-il]carbamato de metilo monohidrato;

(3) tosilato de (1-{[6-{[(1S)-1-ciclopropiletil]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)carbamato de metilo monohidrato;

(4) (1-{[6-{[(1S)-1-ciclopropiletil]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)carbamato de etilo;

(5) N-(1-{[6-{[(1S)-1-ciclopropiletil]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)ciclopropanocarboxamida; y

(6) N-(1-{[6-{[(2R)-3,3-dimetilbutan-2-il]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)ciclopropanocarboxamida.

(II) Un cristal descrito en cualquiera de los siguientes (1) a (6):

(1) Un cristal de tosilato de [1-({6-[(2S)-butan-2-ilamino]-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il}carbonil)piperidin-4-il]carbamato de metilo monohidrato caracterizado por un patrón de difracción de polvo de rayos X obtenido usando radiación Ka de cobre, que comprende picos de difracción a ángulos de difracción (20) de 12,6°, 13,3°, 17,3°, 20,0°, 20,4°, 21,3° y 22,3°;

(2) Un cristal de tosilato de [1-({6-[(2R)-butan-2-ilamino]-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il}carbonil)piperidin-4-il]carbamato de metilo monohidrato caracterizado por un patrón de difracción de polvo de rayos X obtenido usando radiación Ka de cobre, que comprende picos de difracción a ángulos de difracción (20) de 12,6°, 13,3°, 17,3°, 20,0°, 20,4°, 21,3° y 22,3°;

(3) Un cristal de tosilato de (1-{[6-{[(1S)-1-ciclopropiletil]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)carbamato de metilo monohidrato caracterizado por un patrón de difracción de polvo de rayos X obtenido usando radiación Ka de cobre, que comprende picos de difracción a ángulos de difracción (20) de 12,6°, 13,3°, 17,2°, 20,6° y 21,8°;

(4) Un cristal de (1-{[6-{[(1S)-1-ciclopropiletil]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)carbamato de etilo caracterizado por un patrón de difracción de polvo de rayos X obtenido usando radiación Ka de cobre, que comprende picos de difracción a ángulos de difracción (20) de 12,0°, 13,8°, 15,0°, 16,0°, 19,4°, 20,9° y 21,9°;

(5) Un cristal de N-(1-{[6-{[(1S)-1-ciclopropiletil]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)ciclopropanocarboxamida caracterizado por un patrón de difracción de polvo de rayos X obtenido usando radiación Ka de cobre, que comprende picos de difracción a ángulos de difracción (20) de 11,1°, 12,9°, 15,4°, 17,8°, 21,2° y 22,3°; y

(6) Un cristal de N-(1-{[6-{[(2R)-3,3-dimetilbutan-2-il]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)ciclopropanocarboxamida caracterizado por un patrón de difracción de polvo de rayos X obtenido usando radiación Ka de cobre, que comprende picos de difracción a ángulos de difracción (20) de 10,6°, 13,0°, 14,6°, 17,4°, 17,7°, 21,3° y 21,7°.

(III) Una composición farmacéutica que comprende un compuesto descrito en (I) o (II) como un principio activo.

Cuando se especifica un ángulo de difracción (20) para un pico de difracción en los ejemplos de trabajo o en las reivindicaciones, se debe entender que un ángulo de difracción especificado puede tener un error en el intervalo de ± 0,2°, preferiblemente en el intervalo de ± 0,1°.

El cristal de la invención tiene alta pureza y también es fácil de manejar. Por tanto, el cristal de la invención es útil como fuente de fabricación para la producción industrial de una medicina, es decir, un inhibidor de JAK.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 es un patrón de difracción de polvo de rayos X del cristal de tosilato de [1-({6-[(2S)-butan-2-ilamino]-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il}carbonil)piperidin-4-il]carbamato de metilo monohidrato, que comprende picos de difracción a diferentes ángulos (20) de 12,6°, 13,3°, 15,2°, 17,3°, 18,3°, 19,1°, 20,0°, 20,4°, 21,3°, 22,3°, 23,8°, 26,8° y 27,4°. El eje vertical indica la intensidad del pico (cps), y el eje horizontal indica el ángulo de difracción (20 [°]).

La figura 2 es un patrón de difracción de polvo de rayos X del cristal de tosilato de [1-({6-[(2R)-butan-2-ilamino]-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il}carbonil)piperidin-4-il]carbamato de metilo monohidrato, que comprende picos de difracción a diferentes ángulos (20) de 12,6°, 13,3°, 15,2°, 17,3°, 18,3°, 19,2°, 20,0°, 20,4°, 21,3°, 22,3°, 23,8°, 26,8° y 27,4°. El eje vertical indica la intensidad del pico (cps), y el eje horizontal indica el ángulo de difracción (20 [°]).

La figura 3 es un patrón de difracción de polvo de rayos X del cristal de tosilato de (1-{[6-{[(1S)-1-ciclopropiletil]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)carbamato de metilo monohidrato, que comprende picos de difracción a diferentes ángulos (20) de 12,6°, 13,3°, 15,2°, 17,2°, 19,1°, 20,1°, 20,6°, 21,8°, 23,0°, 24,0°, 26,9° y 27,2°. El eje vertical indica la intensidad del pico (cps), y el eje horizontal indica el ángulo de difracción (20 [°]).

La figura 4 es un patrón de difracción de polvo de rayos X del cristal de (1-{[6-{[(1S)-1-ciclopropiletil]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)carbamato de etilo, que comprende picos de difracción a diferentes ángulos (20) de 12,0°, 13,8°, 15,0°, 16,0°, 17,7°, 18,6°, 19,4°, 19,6°, 20,2°, 20,9°, 21,9°, 22,7° y 24,1°. El eje vertical indica la intensidad del pico (cps), y el eje horizontal indica el ángulo de difracción (20 [°]).

La figura 5 es un patrón de difracción de polvo de rayos X del cristal de N-(1-{[6-{[(1S)-1-ciclopropiletil]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)ciclopropanocarboxamida, que comprende picos de difracción a diferentes ángulos (20) de 11,1°, 11,5°, 12,9°, 15,4°, 17,8°, 18,3°, 18,5°, 21,2°, 22,3°, 24,3°, y 25,2°. El eje vertical indica la intensidad del pico (cps), y el eje horizontal indica el ángulo de difracción (20 [°]).

La figura 6 es un patrón de difracción de polvo de rayos X del cristal de N-(1-{[6-{[(2R)-3,3-dimetilbutan-2-il]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)ciclopropanocarboxamida, que comprende picos de difracción a diferentes ángulos (20) de 10,6°, 13,0°, 14,6°, 17,4°, 17,7°, 20,8°, 21,3°, 21,7°, 22,7°, 25,0°, y 26,5°. El eje vertical indica la intensidad del pico (cps), y el eje horizontal indica el ángulo de difracción (20 [°]).

Los términos usados en el presente documento se definen a continuación.

El término “alquilo” incluye, por ejemplo, un alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 8 átomos de carbono, más preferiblemente de 1 a 6 átomos de carbono. Específicamente, el término puede incluir, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, tertbutilo, pentilo, sec-pentilo, 1 -etilpropilo, 1,2-dimetilpropilo, tert-pentilo, 2-metilbutilo, isopentilo, neopentilo, n-hexilo, sec-hexilo, 1 -etilbutilo, isohexilo, neohexilo, 1,1-dimetilbutilo, thexilo, 2-etilbutilo, 1,2,2-trimetilpropilo, 2,2-dimetilbutilo, heptilo, isoheptilo, octilo e isooctilo.

El término “cicloalquilo” puede incluir, por ejemplo, un grupo hidrocarburo saturado de mono- a tricíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono. Es preferible el cicloalquilo monocíclico que tiene de 3 a 6 átomos de carbono. Específicamente, el término puede incluir ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, biciclo[2.1.0]pentilo, biciclo[2.2.1]heptilo, y biciclo[2.2.2]octilo.

El término “arilo” se refiere a, por ejemplo, un grupo hidrocarburo aromático de mono- a tricíclico que tiene de 6 a 14 átomos de carbono. Específicamente, el término puede incluir fenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 1 -antrilo, 2-antrilo, 9-antrilo, 1-fenantrilo, 2-fenantrilo, 3-fenantrilo, 4-fenantrilo y 10-fenantrilo. En especial, fenilo es preferible.

Modo de llevar a cabo la invención

El compuesto de la invención se puede producir según, por ejemplo, los siguientes procedimientos y ejemplos como se describe posteriormente, o métodos conocidos en la técnica, usando un compuesto o un intermedio, que está disponible o se puede preparar fácilmente. En el caso donde un material de partida tiene un grupo funcional que puede afectar la reacción en el proceso para la producción del compuesto de la invención, el material de partida se debe proteger con un grupo protector apropiado según un método conocido de antemano. El grupo protector se puede eliminar por un método conocido después de la reacción.

Esquema 1

[Fórmula 1]

(en donde, R1 es alquilo o cicloalquilo sustituido por alquilo, R2 es alquilo o arilo opcionalmente sustituido por alquilo, y R3 es alquilo o cicloalquilo sustituido por alquilo).

Etapa 1

En esta etapa, el compuesto 1 se reduce para obtener el compuesto 2.

Los ejemplos del agente reductor que se va a usar en esta reacción incluyen borohidruro de sodio, triacetoxiborohidruro de sodio y similares. Tal agente reductor preferiblemente se usa en una cantidad en el intervalo desde 0,25 a 3 equivalentes molares de compuesto 1.

El solvente que se va a usar en esta reacción no está limitado siempre que no participe en la reacción, pero ejemplos del mismo incluyen éteres tal como tetrahidrofurano (de aquí en adelante denominado “THF”), éter dietílico; alcoholes, tal como metanol y etanol; y un solvente mezcla de los mismos.

La temperatura de reacción puede estar en el intervalo desde -78°C a 100°C, preferiblemente de -30°C a 20°C.

El tiempo de reacción varía dependiendo de la temperatura de reacción y similar, pero en general está en el intervalo desde 1o minutos a 24 horas.

Etapa 2

En esta etapa, el compuesto 2 se deshidrata con un ácido y después se somete a reacción de ciclación con el compuesto 3 para obtener el compuesto 4.

Los ejemplos del ácido que se va a usar en esta reacción incluyen ácido sulfúrico, ácido metanosulfónico, ácido ptoluenosulfónico, y similares. Tal ácido preferiblemente se usa en una cantidad en el intervalo desde 1 a 3 equivalentes molares de compuesto 2.

El solvente que se va a usar en esta reacción no está limitado siempre que no participe en la reacción, pero ejemplos del mismo incluyen alcoholes tal como 2-propanol y etanol; nitrilos tal como acetonitrilo y propionitrilo; y un solvente mezcla de los mismos.

La temperatura de reacción puede estar en el intervalo desde 0°C a 100°C, preferiblemente de 20°C a 70°C.

El tiempo de reacción varía dependiendo de la temperatura de reacción y similar, pero en general está en el intervalo desde 10 minutos a 2 horas para la deshidratación y en general está en el intervalo de 30 minutos a 5 horas para la ciclación.

Etapa 3

Esta etapa es la conversión del compuesto nitrilo 4 al correspondiente compuesto imidato 5 en presencia de una base, tal como un alcóxido de metal alcalino, o un ácido, tal como cloruro de hidrógeno, en un solvente adecuado con agitación.

Los ejemplos de la base que se va a usar en esta reacción incluyen alcóxidos tal como metóxido de sodio y etóxido de sodio, y los ejemplos del ácido incluyen cloruro de hidrógeno gaseoso. El cloruro de hidrógeno se puede preparar a partir de cloruros ácidos, tal como cloruro de acetilo, y alcoholes, tal como metanol y etanol. Tal base y ácido se usan preferiblemente en una cantidad en el intervalo desde 1 a 100 equivalentes molares de compuesto 4.

El solvente que se va a usar no está particularmente limitado siempre que no participe en la reacción, pero ejemplos del mismo incluyen alcoholes tal como metanol, etanol; éteres tal como THF; y un solvente mezcla de los mismos. La temperatura de reacción puede estar en el intervalo desde -20°C a 150°C, preferiblemente de 0°C a 100°C. El tiempo de reacción varía dependiendo de la temperatura de reacción y similar, pero en general está en el intervalo desde 30 minutos a 48 horas.

Etapa 4

Esta etapa es la conversión del compuesto imidato 5 al correspondiente compuesto amidina 6 por reacción del compuesto imidato 5 con amoniaco o una sal de amonio.

Los ejemplos de la sal de amonio que se va a usar en esta reacción incluyen acetato de amonio, cloruro de amonio y similares. Tal sal de amonio o amoniaco preferiblemente se usa en una cantidad en el intervalo de 1 a 10 equivalentes molares del compuesto imidato 5.

Si es necesario, la reacción se puede llevar a cabo en presencia de una base. Los ejemplos de tal base que se va a usar incluyen bases orgánicas tal como trietilamina (de aquí en adelante denominada “TEA”), diisopropiletilamina (de aquí en adelante denominada “DIPEA”) y similares.

El solvente que se va a usar no está particularmente limitado siempre que no participe en la reacción, pero ejemplos del mismo incluyen alcoholes tal como metanol, etanol, y similares.

La temperatura de reacción puede estar en el intervalo desde -20°C a 150°C, preferiblemente de 0°C a 100°C. El tiempo de reacción varía dependiendo de la temperatura de reacción y similar, pero en general está en el intervalo desde 30 minutos a 48 horas.

Etapa 5

En esta etapa, el compuesto amidina 6 se hace reaccionar con oxalacetato de dietilo 7 o una sal del mismo en presencia de una base en un solvente apropiado para obtener un compuesto pirimidina 8.

Los ejemplos de la base que se va a usar incluyen bases inorgánicas tal como hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, carbonato de sodio y similares; alcóxidos tal como metóxido de sodio, etóxido de sodio, y similares. La base preferiblemente se usa en una cantidad en el intervalo de 1 a 50 equivalentes molares del compuesto amidina 6. El solvente que se va a usar no está particularmente limitado siempre que no participe en la reacción, pero ejemplos del mismo incluyen éteres tal como THF, dimetoxietano (de aquí en adelante denominado “DME”); alcoholes tal como metanol y etanol; agua; y un solvente mezcla de los mismos.

La temperatura de reacción puede estar en el intervalo desde 0°C a 200°C, preferiblemente de 0°C a 100°C.

El tiempo de reacción varía dependiendo de la temperatura de reacción y similar, pero en general está en el intervalo desde 3o minutos a 24 horas.

Etapa 6

En esta etapa, el ácido carboxílico 8 se acopla con el compuesto amina 9 en un solvente apropiado para obtener el compuesto 10. Alternativamente, un derivado activado del ácido carboxílico 8 se puede hacer reaccionar con el compuesto 9 para obtener el compuesto 10.

Los ejemplos de tal derivado activado incluyen haluros ácidos tal como cloruro ácido, anhídridos ácidos mixtos, imidazolidas, amidas activas, y similares, como se usan convencionalmente para la reacción de condensación de amidas.

En el caso de usar el ácido carboxílico 8, se puede usar un agente de condensación, ejemplos del cual incluyen 1,1'-carbonildiimidazol (de aquí en adelante denominado “CDI”), 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (de aquí en adelante denominada “EDCI”), hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (de aquí en adelante denominado “HATU”), difenilfosforil azida, y similares. La cantidad del agente de condensación que se va a usar en esta reacción es adecuadamente de 1 a 3 equivalentes molares de ácido carboxílico 8.

Si es necesario, la reacción se puede llevar a cabo en presencia de una base. Los ejemplos de tal base que se va a usar incluyen bases orgánicas tal como TEA, DIPEA, piridina y similares.

El solvente que se va a usar no está limitado siempre que no participe en la reacción, pero ejemplos del mismo incluyen éteres tal como THF y DME; amidas tal como dimetilformamida (de aquí en adelante denominada “DMF”), N-metilpirrolidona (de aquí en adelante denominada “NMP”), nitrilos tal como acetonitrilo y propionitrilo, y un solvente mezcla de los mismos.

La temperatura de reacción puede estar en el intervalo desde -78°C a 200°C, preferiblemente de -20°C a 50°C.

El tiempo de reacción varía dependiendo de la temperatura de reacción y similar, pero en general está en el intervalo desde 1o minutos a 24 horas.

Etapa 7

En esta etapa, el compuesto 10 se hace reaccionar con cloruro de sulfonilo 11 en un solvente apropiado para obtener el compuesto 12.

Los ejemplos del cloruro de sulfonilo 11 que se va a usar incluyen cloruro de metanosulfonilo, cloruro de ptoluenosulfonilo, cloruro de bencenosulfonilo, y similares. La cantidad del cloruro de sulfonilo 11 que se va a usar es preferiblemente de 1 a 3 equivalentes molares de compuesto 10.

Si es necesario, la reacción se puede llevar a cabo en presencia de una base. Los ejemplos de tal base que se va a usar incluyen bases orgánicas tal como TEA, DIPEA, piridina y similares.

El solvente que se va a usar en esta reacción no está limitado siempre que no participe en la reacción, pero ejemplos del mismo incluyen éteres tal como THF y DME; nitrilos tal como acetonitrilo y propionitrilo; amidas tal como d Mf y NMP; y un solvente mezcla de los mismos.

La temperatura de reacción puede estar en el intervalo desde -20°C a 200°C, preferiblemente de 0°C a 100°C.

El tiempo de reacción varía dependiendo de la temperatura de reacción y similar, pero en general está en el intervalo desde 30 minutos a 24 horas.

Etapa 8

En esta etapa, el compuesto 12 se hace reaccionar con el compuesto amina 13 en un solvente apropiado para obtener el compuesto 14.

La cantidad del compuesto amina 13 que se va a usar en esta reacción es adecuadamente de 1 a 10 equivalentes molares de compuesto 12.

Si es necesario, la reacción se puede llevar a cabo en presencia de una base. Los ejemplos de tal base que se va a usar incluyen bases orgánicas tal como TEA, DIPEA, piridina; bases inorgánicas tal como hidróxido de sodio, bicarbonato de sodio, carbonato de potasio, y similares.

El solvente que se va a usar en esta reacción no está limitado siempre que no participe en la reacción, pero ejemplos del mismo incluyen éteres tal como THF y DME; nitrilos tal como acetonitrilo y propionitrilo; amidas tal como DMF y NMP; alcoholes tal como etanol, alcohol isopropílico; y un solvente mezcla de los mismos.

La temperatura de reacción puede estar en el intervalo desde 0°C a 200°C, preferiblemente de 20°C a 150°C. La reacción se puede llevar a cabo usando microondas y/o un estado sellado, si es necesario.

El tiempo de reacción varía dependiendo de la temperatura de reacción y similar, pero en general está en el intervalo desde 30 minutos a 24 horas.

Un compuesto de la invención, que es un tosilato monohidrato, se puede obtener por adición de ácido ptoluenosulfónico monohidrato a una solución de la base libre del compuesto.

El compuesto de la invención tiene actividad inhibidora de JAK1 como se muestra en los siguientes ejemplos de prueba. Además, el compuesto de la invención también tiene efectos antiinflamatorios, inmunosupresores y antiproliferativos, etc., basado en su actividad inhibidora de JAK1.

Según esto, el compuesto de la invención se puede usar como un agente preventivo o terapéutico, por ejemplo, para las enfermedades asociadas con JAK1 y también las enfermedades para las que se espera el efecto del compuesto en vista de sus efectos antiinflamatorios, inmunosupresores y antiproliferativos, etc.

Los ejemplos de enfermedades específicas para las que el compuesto de la invención se puede aplicar incluyen enfermedades autoinmunitarias (por ejemplo, artritis reumatoide, artritis psoriásica, artritis juvenil, enfermedad de Castleman, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Sjogren, esclerosis múltiple, enfermedad intestinal inflamatoria, enfermedad de Behget, miastenia grave, diabetes mellitus de tipo 1, nefropatía de inmunoglobulina, enfermedades tiroideas autoinmunitarias, psoriasis, esclerodermia, nefritis lúpica, ojo seco, vasculitis (por ejemplo, arteritis de Takayasu, arteritis de células gigantes, poliangiitis microscópica, granulomatosis con poliangiitis y granulomatosis eosinofílica con poliangiitis), dermatomiositis y polimiositis y neuromielitis óptica), enfermedades inflamatorias (por ejemplo, dermatitis atópica, dermatitis de contacto, eccema, prurito, alergias alimentarias, asma bronquial, neumonía eosinofílica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, rinitis alérgica, sinusitis crónica, sinusitis eosinofílica, pólipo nasal, conjuntivitis alérgica, artrosis, espondilitis anquilosante, enfermedad de Kawasaki, enfermedad de Buerger, poliarteritis nodosa y vasculitis de IgA), enfermedades proliferativas (por ejemplo, cánceres sólidos, cánceres sanguíneos, tumor maligno de la linfa, enfermedades mieloproliferativas, mieloma múltiple, fibrosis pulmonar y eosinofilia), pérdida de audición repentina, nefropatía diabética, alopecia areata, rechazo a trasplante de médula ósea o rechazo a trasplante de órganos.

El compuesto de la invención se puede administrar como un medicamento a mamíferos, incluyendo seres humanos, como está o como una composición farmacéutica que contiene el mismo en una cantidad de, por ejemplo, el 0,001% al 99,5%, preferiblemente del 0,1% al 90%, en combinación con uno o más soporte(s) farmacéuticamente aceptable(s) no tóxico(s) e inactivo(s).

El soporte que se va a usar, puede ser uno o más seleccionados de diluyentes, rellenos sólidos, semisólidos o líquidos y otros auxiliares para la formulación farmacéutica. La composición farmacéutica según la invención se puede administrar en una forma farmacéutica unitaria. La composición farmacéutica se puede administrar por administración intersticial, oral, intravenosa, tópica (por ejemplo, administración transdérmica, instilación ocular, intraperitoneal o intratorácica) o transrectal. La composición se debe administrar en una forma farmacéutica adecuada para estos métodos de administración.

La dosis del compuesto se debe ajustar considerando las condiciones del paciente, tal como edad, peso corporal, y la enfermedad que se va a tratar y la fase de la enfermedad, la vía de administración, y el compuesto que se va a administrar, etc. En el caso de administración oral a un adulto, una dosis diaria típica del compuesto de la invención o su sal farmacéuticamente aceptable puede ser de 0,01 mg a 5 g, y preferiblemente de 1 mg a 500 mg. En algunos casos, una dosis menor puede ser suficiente, o, al contrario, se puede requerir una dosis mayor. En general, la dosis se da una vez al día o varias veces al día como porciones divididas, o en el caso de administración intravenosa, el medicamento puede ser una inyección en embolada o administrarse de forma continua en 24 horas.

Ejemplos

La invención se describe en más detalle con referencia a los siguientes ejemplos, ejemplos de prueba y ejemplos de formulación, que no se pretende que limiten el ámbito de la presente invención.

La difractometría de rayos X de polvo se determinó usando SmartLab de Rigaku Corporation (diana: Cu, voltaje: 45 kV, corriente; 200 mA, velocidad de barrido: 47,3 grados/min).

Se determinó la espectrometría de masas usando cromatografía líquida de alta resolución y espectrometría de masas. Se usó el método de ionización de electrospray como el método de ionización. Las medidas de la espectrometría de masas se muestran como m/z.

La condición de medida para cromatografía líquida de alta resolución espectrometría de masas es como sigue.

Analizador: sistema ACQUITY UPLC MS/PDA (Waters)

Espectrómetro de masas: detector Waters 3100 MS

Detector de haz de fotodiodo: detector ACQUITY PDA (longitud de onda de detección UV: 210 a 400 nm) Columna: Acquity BEH C18, 1,7 |jm, 2,1 x 50 mm

Velocidad de flujo: 0,5 ml/min

Temperatura de la columna: 40°C

Solvente:

Solución A: ácido fórmico al 0,1%/H2O (v/v; lo mismo en adelante)

Solución B: ácido fórmico al 0,1%/acetonitrilo

La pureza óptica se determina usando cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) en la siguiente condición de medida.

Analizador: SHIMADZU LC-10AS (SHIMADZU)

Detector: SPD-10A (SHIMADZU, longitud de onda de detección UV: 254 nm)

Columna: Chiralcel A d -H, O 4,6 mm x 250 mm (Daicel)

Velocidad de flujo: 1 ml/min

Temperatura de la columna: 40°C

Solvente: hexano/etanol/dietilamina = 850/150/1 (v/v/v).

Las abreviaturas usadas en los ejemplos son como sigue.

DMF: dimetilformamida

DMSO: dimetilsulfóxido

DIPEA: N,N-diisopropiletilamina

TEA: trietilamina

THF: tetrahidrofurano

TFA: ácido trifluoroacético

NMP: N-metilpirrolidona

HATU: hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio

MS: espectrometría de masas

LCMS: cromatografía líquida de alta resolución espectrometría de masas

ESI: ionización de electroespray

M: concentración molar

v/v: volumen/volumen

Ejemplo de referencia 1: Pirazolo[5,1-b1[1,31tiazol-7-carbonitrilo

Etapa 1: Preparación de 2-(tiazol-2-il)acetonitrilo

Enfriando en hielo, se añadió hidruro de sodio al 60% (7,9 g) en porciones a una solución de cianoacetato de tertbutilo (28 g) en DMF (100 ml) y la mezcla resultante se agitó durante 10 minutos. A la mezcla se añadió 2-bromotiazol (25 g), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 15 minutos y después a 120°C durante 2 horas. A la mezcla se añadió ácido clorhídrico acuoso 1 M de, seguido por extracción con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y se concentró a presión reducida. El residuo se lavó con hexano, y después se suspendió en tolueno (200 ml). A la suspensión se añadió ácido p-toluenosulfónico monohidrato (2,0 g), y la mezcla se agitó a 105°C durante 2 horas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo, y se lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice para dar el compuesto del título (7,0 g). MS (m/z): 125 [M+H]+

Etapa 2: Preparación de pirazolo[5,1 -b][1,3]tiazol-7-carbonitrilo

Enfriando en hielo, a una solución de 2-(tiazol-2-il)acetonitrilo obtenida (5 g) en la etapa 1 en diclorometano (50 ml) se añadió una solución de O-(mesitilsulfonil)hidroxiamina (preparada como se describe en Organic Process Research & Development, 2009, 13, 263-267) en diclorometano (20 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, y se añadió éter dietílico a la mezcla enfriando en hielo. El sólido precipitado se recogió por filtración, y el sólido así obtenido se suspendió en ortoformiato de trietilo (35 ml). La mezcla se agitó a 120°C durante 1 hora y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice para dar el compuesto del título (2,5 g).

MS (m/z): 150 [M+H]+

Ejemplo de referencia 2: Ácido 6-h¡drox¡-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-il)p¡r¡m¡d¡na-4-carboxíl¡co

A una soluc¡ón de p¡razolo[5.1 -b1[1.3]t¡azol-7-carbon¡tr¡lo (6 g) obten¡do en el ejemplo de referenc¡a 1 en metanol (150 ml) se añad¡ó metóx¡do de sod¡o al 28% en metanol (24.6 ml). La mezcla se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 3 horas. Se añad¡ó cloruro de amon¡o (12.9 g). y la mezcla se ag¡tó a 90°C durante 1 hora. La mezcla se concentró a pres¡ón reduc¡da. Al res¡duo se añad¡ó oxaloacetato de d¡et¡lo sód¡co (33.8 g) en h¡dróx¡do de sod¡o acuoso 5 M (200 ml). y la mezcla se ag¡tó a 100°C durante la noche. La mezcla se ac¡d¡f¡có con ác¡do clorhídr¡co conc.. y el sól¡do prec¡p¡tado se recog¡ó por f¡ltrac¡ón. El sól¡do así obten¡do se d¡solv¡ó en soluc¡ón de h¡dróx¡do de potas¡o acuosa 5 M. y se lavó con cloroformo. La fase acuosa se ac¡d¡f¡có con ác¡do clorhídr¡co conc.. y el sól¡do prec¡p¡tado se recog¡ó por f¡ltrac¡ón. y se secó para obtener el compuesto del título (10 g).

MS (m/z): 263 [M+H]+

Ejemplo de referenc¡a 3: 6-Cloro-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-carbox¡lato de met¡lo

El ác¡do 6-h¡drox¡-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡na-4-carboxíl¡co (1.4 g) obten¡do en el ejemplo de referenc¡a 2 se suspend¡ó en ox¡cloruro de fósforo (20 ml). Se añad¡ó d¡et¡lan¡l¡na (1.6 g). y la mezcla se ag¡tó a 130°C durante 2 horas. La mezcla de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. y se añad¡ó metanol (100 ml) enfr¡ando en h¡elo. y la mezcla se ag¡tó durante 10 m¡nutos. La mezcla se d¡luyó con cloroformo. y se lavó con agua. La fase orgán¡ca comb¡nada se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro. y se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por cromatografía en columna de gel de síl¡ce para dar el compuesto del título (910 mg).

MS (m/z): 297 [M+H1+

Ejemplo de referenc¡a 4: (1-{[6-cloro-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l1carbon¡l}p¡per¡d¡n-4-¡l)carbamato de met¡lo

Se suspend¡ó ác¡do 6-h¡drox¡-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡na-4-carboxíl¡co (820 mg) obten¡do en el ejemplo de referenc¡a 2 en ox¡cloruro de fósforo (5.0 ml). Se añad¡ó d¡et¡lan¡l¡na (0.47 g). y la mezcla se ag¡tó a 110°C durante 2 horas. La mezcla se concentró a pres¡ón reduc¡da. y se d¡solv¡ó en d¡clorometano (40 ml) enfr¡ando en h¡elo. Se añad¡eron DIPEA (5.4 ml) y p¡per¡d¡n-4-¡lcarbamato de met¡lo (594 mg). y la mezcla se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 30 m¡nutos. La mezcla se d¡luyó con cloroformo. y se lavó con b¡carbonato de sod¡o acuoso saturado. La fase orgán¡ca se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro. y se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por cromatografía en columna de gel de síl¡ce para dar el compuesto del título (910 mg).

MS (m/z): 421.423 [M+H1+

Ejemplo de referenc¡a 5: N-(1-{[6-cloro-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l1carbon¡l}p¡per¡d¡n-4-¡l)c¡clopropanocarboxam¡da

El compuesto del título se preparó como se descr¡be en el ejemplo de referenc¡a 4 a part¡r de ác¡do 6-h¡drox¡-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡na-4-carboxíl¡co (8 g) obten¡do en el ejemplo de referenc¡a 2 usando N-(p¡per¡d¡n-4-¡l)c¡clopropanocarboxam¡da (5.65g. preparada como se descr¡be en Journal of Medicinal Chemistry, 2010, 53, 6386­ 6397). en lugar de p¡per¡d¡n-4-¡lcarbamato de met¡lo. para dar el compuesto del título (6.65 g).

MS (m/z): 431.433 [M+H1+

Ejemplo de referenc¡a 6: Ác¡do 6-{[(1S)-1-c¡cloprop¡let¡l1am¡no}-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡na-4-carboxíl¡co

Etapa 1: Preparac¡ón de 6-{[(1S)-1-c¡cloprop¡let¡l1am¡no}-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡na-4-carbox¡lato de met¡lo

A una soluc¡ón de 6-cloro-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡na-4-carbox¡lato de met¡lo obten¡do en el ejemplo de referenc¡a 3 (1.0 g) en DMF (10 ml) se añad¡eron DIPEA (1.8 ml) y (1S)-1-c¡cloprop¡letanam¡na (320 mg). y la mezcla se ag¡tó a 80°C durante 3 horas. La mezcla se pur¡f¡có por cromatografía en columna de gel de síl¡ce para dar el compuesto del título (1.1 g).

MS (m/z): 344 [M+H1+

Etapa 2: Preparac¡ón de ác¡do 6-{[(1S)-1-c¡cloprop¡let¡l1am¡no}-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡na-4-carboxíl¡co

A una soluc¡ón de 6-{[(1S)-1-c¡cloprop¡let¡l1am¡no}-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡na-4-carbox¡lato de met¡lo obten¡do en la etapa 1 (600 mg) en THF (15 ml) y agua (5 ml) se añad¡ó h¡dróx¡do de l¡t¡o monoh¡drato (100 mg). y la mezcla se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 1 hora. La mezcla se ac¡d¡f¡có con ác¡do clorhídr¡co 1 M. segu¡do por dest¡lac¡ón de THF a pres¡ón reduc¡da. y se extrajo con cloroformo. La fase orgán¡ca se secó sobre sulfato de sod¡o anh¡dro. y se concentró a pres¡ón reduc¡da para dar el compuesto del título (470 mg).

MS (m/z): 330 [M+H1+

Ejemplo de referenc¡a 7: 3-Am¡no-4-h¡drox¡-1.3-t¡azol¡d¡na-2-t¡ona

Se añadió borohidruro de sodio (19,1 g) a THF (750 ml), y una suspensión de N-aminorodanina (250 g) en THF (500 ml) se añadió en porciones a menos de 5°C. Después de agitar durante 30 minutos a menos de 5°C, se añadió metanol (111 ml) gota a gota, y la mezcla se agitó durante 2 horas. Se diluyó ácido clorhídrico conc. (44 ml) con agua (500 ml) y se añadió gota a gota a la mezcla, y después se añadió agua (1000 ml) gota a gota, y la mezcla se agitó durante 1 hora a menos de 10°C. Los cristales precipitados se filtraron, lavaron con agua (600 ml) y se secaron a 40°C a presión reducida para dar el compuesto del título (209,1 g).

MS (m/z): 151 [M+H]+

Ejemplo de referencia 8: 2-cloro-2-cianoeten-1-oleato de sodio

A una suspensión de metóxido de sodio (14,3 g) en ciclopentil metil éter (300 ml) se añadieron gota a gota formiato de metilo (17,5 g) a menos de 20°C y después cloroacetonitrilo (20 g), y la mezcla se agitó durante 3 horas a menos de 30°C. Después de completar la reacción, los cristales precipitados se filtraron, lavaron con ciclopentil metil éter (40 ml), y se secaron a 40°C a presión reducida para dar el compuesto del título (29,2 g).

Ejemplo de referencia 9: P¡razolo[5,1-b1[1.31t¡azol-7-carbox¡m¡dato de metilo clorhidrato

A una suspensión de 3-amino-4-hidroxi-1,3-tiazolidina-2-tiona (50 g) en 2-propanol (250 ml) se añadió ácido sulfúrico conc. (48,97 g), y la mezcla se agitó con calor a 80°C durante 1 hora. Después de enfriar a menos de 40°C, se añadieron acetonitrilo (500 ml) y 2-cloro-2-cianoeten-1-oleato de sodio (62,65 g) obtenido en el ejemplo de referencia 8, y la mezcla se agitó a 80°C durante 4 horas. Después de enfriar, se añadió carbón activo (10 g), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Los materiales insolubles de la mezcla se eliminaron por filtración y se lavó tres veces con acetonitrilo (100 ml). El filtrado se concentró a presión reducida y después se azeotropó tres veces con metanol (100 ml) para eliminar el acetonitrilo. Se añadieron metanol (150 ml) y THF (150 ml) al concentrado, que después se añadió a una solución de cloruro de acetilo (209 g) en metanol (350 ml) por debajo de 20°C. Después de agitar durante la noche a temperatura ambiente, se añadió THF (350 ml), y la mezcla se agitó a menos de 10°C durante 1 hora. Los cristales precipitados se filtraron, lavaron con THF (300 ml) y se secaron a 50°C a presión reducida para dar el compuesto del título (45,5 g).

MS (m/z): 182 [M+H]+

Ejemplo de referencia 10: Sal acetato de p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-carbox¡m¡dam¡da

A una suspensión de pirazolo[5,1-b1[1,3]tiazol-7-carboximidato de metilo clorhidrato (200 g) en metanol (1000 ml) se añadieron acetato de amonio (85,15 g) y después DIPEA (142,82 g), y la mezcla se agitó a 65°C durante 1 hora. Después de completar la reacción, la mezcla se enfrió y se añadió acetonitrilo (2000 ml) gota a gota a temperatura ambiente. Después de agitar durante 1 hora a menos de 10°C, los cristales precipitados se filtraron, lavaron con acetonitrilo (400 ml), y se secaron a 50°C a presión reducida para dar el compuesto del título (185,12 g).

Análisis elemental para C6H6^ S ^ H 4O2

Calculado (%) C: 42,47, H: 4,46, N: 24,76

Determinado (%) C: 42,18, H: 4,25, N: 24,41

Ejemplo de referencia 11: Ácido 6-h¡drox¡-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡na-4-carboxíl¡co

A una solución acuosa (900 ml) de hidróxido de sodio (39,08 g) se añadió oxalacetato de dietilo sódico (130,65 g) a menos de 10°C, y la mezcla se agitó durante 1 hora. Se añadió acetato de pirazolo[5,1-b1[1,3]tiazol-7-carboximidamida (90 g) a la mezcla, y la mezcla se agitó con calor a 50°C durante 3 horas. Después de enfriar a menos de 30°C, la mezcla se acidificó a pH 1 a 2 con ácido clorhídrico conc. (138 g), y después se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Los cristales precipitados se recogieron por filtración, se lavaron con agua (360 ml), y se secaron a 60°C para dar el compuesto del título (107,17 g).

MS (m/z): 263 [M+H]+

Ejemplo de referencia 12: (1-[6-h¡drox¡-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡na-4-carbon¡l1p¡per¡d¡n-4-¡l)carbamato de metilo

A una suspensión de ácido 6-h¡drox¡-2-(p¡razolo[5,1-b][1,3]t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡na-4-carboxíl¡co (238 g) en DMF (714 ml) se añadió TEA (275,51 g), y la mezcla se agitó a 50°C durante 30 minutos. Después de enfriar a menos de 20°C, se añadió 1,1'-carbonildiimidazol (323,76 g). Después de agitar durante 30 minutos, se añadió tosilato de piperidin-4-ilcarbamato de metilo (449,79 g), y la mezcla se agitó durante 30 minutos. Después de completar la reacción, se añadió acetonitrilo (3570 ml) gota a gota a temperatura ambiente, y la mezcla se agitó durante la noche. Los cristales precipitados se filtraron, lavaron con acetonitrilo (480 ml), y se secaron a 60°C a presión reducida para dar el compuesto del título (377,79 g).

MS (m/z): 403 [M+H]+

Ejemplo de referencia 13: 4-metilbenceno-1-sulfonato de 6-{4-[(metox¡carbon¡l)am¡nolp¡per¡d¡na-1-carbon¡l}-2-(p¡razolo[5.1-bl[1.3lt¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡lo

A una suspens¡ón de {1-[6-h¡drox¡-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡na-4-carbon¡l1p¡per¡d¡n-4-¡l}carbamato de met¡lo (365 g) en aceton¡tr¡lo (1825 ml) se añad¡eron TEA (275.33 g) y después cloruro de 4-toluenosulfon¡lo (259.36 g). y la mezcla se ag¡tó con calor a 50°C durante 1 hora. Después de completar la reacc¡ón. la mezcla se enfr¡ó y se añad¡ó agua (3650 ml) gota a gota a temperatura amb¡ente. Después de ag¡tar la mezcla durante 1 hora a menos de 10°C. los cr¡stales prec¡p¡tados se f¡ltraron. lavaron con agua (73o ml). y se secaron a 60°C a pres¡ón reduc¡da para dar el compuesto del título (442.08 g).

MS (m/z): 557 [M+H]+

Ejemplo 1: Tos¡lato de [1-({6-[(2S)-butan-2-¡lam¡nol-2-(p¡razolo[5.1-bl[1.3lt¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}carbon¡l)p¡per¡d¡n-4-¡llcarbamato de met¡lo monoh¡drato

Etapa 1: Preparac¡ón de [1-({6-[(2S)-butan-2-¡lam¡nol-2-(p¡razolo[5.1-bl[1.3lt¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}carbon¡l)p¡per¡d¡n-4-¡llcarbamato de met¡lo

A una soluc¡ón de 4-met¡lbenceno-1-sulfonato de 6-{4-[(metox¡carbon¡l)am¡nolp¡per¡d¡na-1-carbon¡l}-2-(p¡razolo[5.1-bl[1.3lt¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡lo obten¡do en el ejemplo de referenc¡a 13 (1.0 g) en aceton¡tr¡lo (7.0 ml) se añad¡eron DIPEA (0.67 g) y (2S)-butan-2-am¡na (0.4 g). y la mezcla se selló y calentó con ag¡tac¡ón a 100°C durante 2 horas. Después de completar la reacc¡ón. la mezcla se d¡luyó con acetato de et¡lo y se lavó con agua (30 ml) y salmuera (30 ml). La fase orgán¡ca se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro. se concentró a pres¡ón reduc¡da. y se pur¡f¡có por cromatografía en columna para dar el compuesto del título (650 mg). La pureza ópt¡ca del compuesto del título así obten¡do era ¡gual a o mayor del 99%. conf¡rmado por cromatografía líqu¡da de alta resoluc¡ón (t¡empo de retenc¡ón: 35.7 m¡nutos).

MS (m/z): 458 [M+Hl+

Etapa 2: Preparac¡ón de tos¡lato de [1-({6-[(2S)-butan-2-¡lam¡nol-2-(p¡razolo[5.1-bl[1.3lt¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}carbon¡l)p¡per¡d¡n-4-¡llcarbamato de met¡lo monoh¡drato

A [1-({6-[(2S)-butan-2-¡lam¡nol-2-(p¡razolo[5.1-bl[1.3lt¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}carbon¡l)p¡per¡d¡n-4-¡llcarbamato de met¡lo obten¡do en la etapa 1 del ejemplo 1 (202 mg) se añad¡ó aceton¡tr¡lo (5 ml). y la mezcla se calentó a 50°C. Se añad¡ó ác¡do p-toluenosulfón¡co (83 mg). y la mezcla se ag¡tó durante la noche a temperatura amb¡ente. Los cr¡stales prec¡p¡tados se recog¡eron por f¡ltrac¡ón y se secaron a pres¡ón reduc¡da para obtener cr¡stales del compuesto del título (210 mg). El espectro de d¡fracc¡ón de polvo de rayos X se muestra en la f¡gura 1. El anál¡s¡s elemental mostró que el cr¡stal así obten¡do es monoh¡drato.

Anál¡s¡s elemental para C21H27N7O3S^C7HsO3S^1.0H2O

Calculado (%) C: 51.92. H: 5.76. N: 15.14

Determ¡nado (%) C: 51.54. H: 5.92. N: 15.03

Ejemplo 2: Tos¡lato de [1-({6-[(2R)-butan-2-¡lam¡nol-2-(p¡razolo[5.1-bl[1.3lt¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}carbon¡l)p¡per¡d¡n-4-¡llcarbamato de met¡lo monoh¡drato

Etapa 1: Preparac¡ón de [1-({6-[(2R)-butan-2-¡lam¡nol-2-(p¡razolo[5.1-bl[1.3lt¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}carbon¡l)p¡per¡d¡n-4-¡llcarbamato de met¡lo

A una soluc¡ón de 4-met¡lbenceno-1-sulfonato de 6-{4-[(metox¡carbon¡l)am¡nolp¡per¡d¡na-1-carbon¡l}-2-(p¡razolo[5.1-bl[1.3lt¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡lo obten¡do en el ejemplo de referenc¡a 13 (1.5 g) en aceton¡tr¡lo (10 ml) se añad¡eron DIPEA (1.0 g) y (2R)-butan-2-am¡na (0.59 g). y la mezcla se selló y calentó con ag¡tac¡ón a 100°C durante 2 horas. Después de completar la reacc¡ón. la mezcla se d¡luyó con acetato de et¡lo y se lavó con agua (50 ml) y salmuera (30 ml). La fase orgán¡ca se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro. se concentró a pres¡ón reduc¡da. y se pur¡f¡có por cromatografía en columna para dar el compuesto del título (0.93 g). La pureza ópt¡ca del compuesto del título así obten¡do era ¡gual a o mayor del 99%. conf¡rmado por cromatografía líqu¡da de alta resoluc¡ón (t¡empo de retenc¡ón: 29.1 m¡nutos).

MS (m/z): 458 [M+Hl+

Etapa 2: Preparac¡ón de tos¡lato de [1-({6-[(2R)-butan-2-¡lam¡nol-2-(p¡razolo[5.1-bl[1.3lt¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}carbon¡l)p¡per¡d¡n-4-¡llcarbamato de met¡lo monoh¡drato

A [1-({6-[(2R)-butan-2-¡lam¡nol-2-(p¡razolo[5.1-bl[1.3lt¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l}carbon¡l)p¡per¡d¡n-4-¡llcarbamato de met¡lo obten¡do en la etapa 1 del ejemplo 2 (140 mg) se añad¡ó aceton¡tr¡lo (3.5 ml). y la mezcla se calentó a 50°C. Se añad¡ó ác¡do p-toluenosulfón¡co monoh¡drato (58 mg). y la mezcla se ag¡tó durante la noche a temperatura amb¡ente. Los cr¡stales prec¡p¡tados se recog¡eron por f¡ltrac¡ón y se secaron a pres¡ón reduc¡da para obtener cr¡stales del compuesto del título (152 mg). El espectro de d¡fracc¡ón de polvo de rayos X se muestra en la f¡gura 2. El anál¡s¡s elemental mostró que el cr¡stal así obten¡do es monoh¡drato.

Análisis elemental para C21H27N7O3S^C7HsO3S^1,0H2O

Calculado (%) C: 51,92, H: 5,76, N: 15,14

Determinado (%) C: 51,72, H: 5,84, N: 15,14

Ejemplo 3: Tosilato de (1-(r6-(r(1S)-1-c¡cloprop¡let¡l1am¡no)-2-(p¡razolor5.1-bin.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡llcarbon¡l)p¡per¡din-4-¡l)carbamato de metilo monohidrato

Etapa 1: Preparación de (1-{[6-{[(1S)-1-c¡cloprop¡let¡l]am¡no}-2-(p¡razolo[5,1-b][1,3]t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]carbon¡l}p¡per¡d¡n-4-¡l)carbamato de metilo

A una solución de 4-metilbenceno-1-sulfonato de 6-{4-[(metoxicarbonil)amino]piperidina-1-carbonil}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡lo obtenido en el ejemplo de referencia 13 (1,0 g) en acetonitrilo (7,0 ml) se añadieron DIPEA (0,69 g) y (1S)-1-ciclopropiletanamina (460 mg), y la mezcla se selló y calentó con agitación a 100°C durante 2 horas. Después de completar la reacción, la mezcla se diluyó con acetato de etilo y se lavó con agua (50 ml) y salmuera (30 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se concentró a presión reducida, y se purificó por cromatografía en columna para dar el compuesto del título (720 mg).

Etapa 2: Preparación de tosilato de (1-{[6-{[(1S)-1-c¡cloprop¡let¡l]am¡no}-2-(p¡razolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-il]carbonil}piperidin-4-il)carbamato de metilo monohidrato

A (1-{[6-{[(1S)-1-c¡cloprop¡let¡l]am¡no}-2-(p¡razolo[5,1-b][1,3]t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l]carbon¡l}p¡perid¡n-4-¡l)carbamato de metilo obtenido en la etapa 1 del ejemplo 3 (201 mg) se añadió acetonitrilo (5 ml), y la mezcla se calentó a 50°C. Se añadió ácido p-toluenosulfónico monohidrato (81 mg), y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Los cristales precipitados se recogieron por filtración y se secaron a presión reducida para obtener cristales del compuesto del título (237 mg). El espectro de difracción de polvo de rayos X se muestra en la figura 3. El análisis elemental mostró que el cristal así obtenido es monohidrato.

Análisis elemental para C22H27N7O3S^C7HsO3S^1,0H2O

Calculado (%) C: 52,79, H: 5,65, N: 14,86

Determinado (%) C: 52,72, H: 5,54, N: 14,82

Rotación óptica específica: [a]o25 = -44,4 (c = 1,00, DMSO)

Ejemplo 4: (1-{[6-{[(1S)-1-c¡cloprop¡let¡l1am¡no}-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l1carbon¡l}p¡per¡d¡n-4-il)carbamato de etilo

A una solución de ácido 6-{[(1S)-1-c¡cloprop¡let¡l]am¡no}-2-(p¡razolo[5,1-b][1,3]t¡azol-7-¡l)p¡rim¡d¡na-4-carboxíl¡co obtenido en el ejemplo de referencia 6 (640 mg) en DMF (5,0 ml) se añadieron piperidin-4-ilcarbamato de etilo (310 mg, preparado como se describe en el documento US4918073), DIPEA (730 pl) y HATU (1,1 g), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice para dar el compuesto del título (410 mg). Al compuesto del título (350 mg) se añadió acetato de etilo (7 ml), y la mezcla se calentó para disolver el compuesto y se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. Los cristales precipitados se recogieron por filtración y se secaron a presión reducida para obtener cristales del compuesto del título (280 mg). El espectro de difracción de polvo de rayos X se muestra en la figura 4.

MS (m/z): 484 [M+H]+

Análisis elemental para C23H29N7O3S

Calculado (%) C: 57,12, H: 6,04, N: 20,27

Determinado (%) C: 56,81, H: 6,12, N: 20,28

Rotación óptica específica: [a]o25 = -44,2 (c = 1,00, DMSO)

Ejemplo 5: N-(1-{[6-{[(1S)-1-c¡cloprop¡let¡l1am¡no}-2-(p¡razolo[5.1-b1[1.31t¡azol-7-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l1carbon¡l}p¡per¡d¡n-4-¡l)c¡clopropanocarboxamida

A una solución de ácido 6-{[(1S)-1 -ciclopropiletil1amino}-2-(pirazolo[5,1-b1[1,3]tiazol-7-il)pirimidina-4-carboxílico obtenido en el ejemplo de referencia 6 (350 mg) en DMF (8,0 ml) se añadieron N-(piperidin-4-il)ciclopropanocarboxamida (268 mg), DIPEA (552 pl) y HATU (606 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice para dar el compuesto del título (410 mg). Al compuesto del título (350 mg) se añadió acetato de etilo (7 ml), y la mezcla se calentó para disolver el compuesto y se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. Los cristales precipitados se recogieron por filtración y se secaron a presión reducida para obtener cristales del compuesto del título (280 mg). El espectro de difracción de polvo de rayos X se muestra en la figura 5.

Análisis elemental para C24H29N7O2S

Calculado (%) C: 60,12, H: 6,09, N: 20,44

Determinado (%) C: 59,89, H: 6,37, N: 20,22

MS (m/z): 480 [M+H]+

Rotación óptica específica: [a]D25 = -45,2 (c = 1,00, DMSO)

Ejemplo 6: N-(1-{[6-{[(2R)-3,3-dimetilbutan-2-il1amino}-2-(pirazolo[5,1-b1[1,31tiazol-7-il)pirimidin-4-il1carbonil}piperidin-4-¡l)ciclopropanocarboxam¡da

En una atmósfera de argón, a una solución de N-(1-{[6-cloro-2-(pirazolo[5,1-b1[1,31tiazol-7-il)pirimidin-4-il1carbonil}piperidin-4-il)ciclopropanocarboxamida obtenida en el ejemplo de referencia 5 (55o mg) en tert-butanol (20 ml) se añadieron TEA (534 j l) y (2R)-3,3-dimetilbutan-2-amina (258 mg), y la mezcla se agitó a 90°C durante la noche. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice para dar el compuesto del título (570 mg). Al compuesto del título (100 mg) se añadió acetato de etilo (2 ml), y la mezcla se calentó para disolver el compuesto y se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. Los cristales precipitados se recogieron por filtración y se secaron a presión reducida para obtener cristales del compuesto del título (70 mg). El espectro de difracción de polvo de rayos X se muestra en la figura 6.

Análisis elemental para C25H33N7O2S

Calculado (%) C: 60,58, H: 6,71, N: 19,78

Determinado (%) C: 60,20, H: 6,96, N: 19,53

MS (m/z): 496 [M+H1+

Rotación óptica específica: [afc25 = 14,0 (c = 1,00, DMSO)

Ejemplo de prueba 1: Efecto inhibidor sobre tirosina quinasa JAK

1. Preparación del compuesto de prueba

El compuesto de prueba se disolvió en dimetilsulfóxido (DMSO) a 10 mM y se diluyó adicionalmente con DMSO a las concentraciones de 1000, 100, 10, 1, 0,1 y 0,01 jM , respectivamente. Para JAK1 , se usaron estas soluciones del compuesto de prueba a las seis concentraciones de 10 mM, 1000 jM , 100 jM , 10 jM , 1 jM y 0,1 jM . Para JAK2 y JAK3, se usaron estas soluciones del compuesto de prueba a las seis concentraciones de 1000 jM , 100 jM , 10 jM , 1 jM , 0,1 jM y 0,01 jM . Las soluciones del compuesto de prueba se diluyeron adicionalmente 20 veces con un tampón de ensayo para obtener una solución de muestra. Se usaron como tampón de ensayo Tris-HCl 15 mM (pH 7,5), Tween-20 al 0,01% (v/v) y ditiotreitol 1 mM. Se diluyó DMSO 20 veces con el tampón de ensayo y se usó como un control negativo.

2. Actividad inhibidora de la tirosina quinasa JAK en presencia de ATP 1 mM.

La actividad se determinó por el método ELISA. Cada una de las soluciones de muestra se añadió a una placa de 96 pocillos (DELFIA Strip Plate 8 x 12 pocillos, PerkinElmer) recubierta de estreptavidina a 10 jl/pocillo (n = 2). Una solución de sustrato que contenía sustrato de péptido biotinilado (1250 nM para JAK1, 625 nM para JAK2 y JAK3), ATP 2,5 mM (concentración final 1 mM), MgCh 25 mM, Tris-HCl 15 mM (pH 7,5), Tween-20 al 0,01% (v/v) y ditiotreitol 1 mM, se añadió a la placa a 20 jl/pocillo. Por último, la tirosina quinasa JAK (Carna Biosciences, Inc.), que se había diluido previamente con tampón de ensayo a 7,5 nM para JAK1 y 0,75 nM para JAK2 y JAK3, se añadió a la placa a 20 jl/pocillo, y la placa se incubó a 30°C durante 1 h. La placa se lavó cuatro veces con tampón (Tris-HCl 50 mM (pH 7,5), NaCl 150 mM, Tween-20 al 0,02% (v/v)). Se añadió un tampón de bloqueo (seroalbúmina bovina al 0,1%, Tris-HCl 50 mM (pH 7,5), NaCl 150 mM, Tween-20 al 0,02% (v/v)) a la placa a 150 jl/pocillo y la placa se bloqueó a 30°C durante 1 h. El tampón de bloqueo se eliminó, y un anticuerpo anti-tirosina fosforilada marcado con peroxidasa de rábano (BD Biosciences, Inc.) (diluido 10000 veces con el tampón de bloqueo) se añadió a la placa a 100 jl/pocillo, y la placa se incubó a 30°C durante 30 min. La placa se lavó con el tampón de lavado cuatro veces, y se añadió solución de 3,3',5,5'-tetrametilbencidina (Nacalai Tesque) a la placa a 100 jl/pocillo para desarrollar el color durante 10 minutos. A la placa se añadió ácido sulfúrico 0,1 M a 100 jl/pocillo para parar la reacción. Se midió la absorbancia a 450 nm usando un lector de microplacas (BIO-RAD).

3. Análisis de los resultados

Se realizó un análisis de regresión no lineal usando el sistema SAS (SAS Institute Inc.) para la absorbancia medida, y se calculó la concentración del compuesto de prueba que produjo inhibición al 50% de la respectiva actividad tirosina quinasa (CI50). Los resultados se muestran en la siguiente tabla 1.

[Tabla 11

Usando los compuestos mostrados anteriormente en el ejemplo de prueba 1, se realizaron los siguientes ensayos (ejemplos de prueba 2, 3 y 4).

Ejemplo de prueba 2: Efecto inhibidor sobre modelo de inflamación de vías respiratorias inducido por Aspergillus

Se ajustan extractos de Aspergillus fumigatus (Greer laboratories, Inc.) a 400 pg/ml con PBS. Las soluciones de Aspergillus fumigatus así preparadas se administran a ratones como gotas nasales (50 pl) el día 0, día 1, día 7 y día 8. La gota nasal se administra una hora después de la administración de compuestos de prueba por la mañana. El compuesto de prueba se administra dos veces al día por la mañana y por la tarde del día 0 al día 9. El compuesto de prueba se suspende en metilcelulosa al 0,5% a 10 mg/ml, y se administra por vía oral a la dosis de 10 ml/kg. El líquido de lavado broncoalveolar (LLBA) se recoge el día 10, y se mide el recuento de glóbulos blancos totales en LLBA usando Celltac (NIHON KOHDEN). La proporción de eosinófilos en los glóbulos blancos totales se calcula usando ADVIA 120 (Siemens Healthcare Diagnostic), y la proporción se multiplica por el recuento de glóbulos blancos totales para determinar el recuento de eosinófilos en LLBA. Se determina la tasa de inhibición del compuesto de prueba, asumiendo que la proporción inhibidora en el tratamiento con extracto de Aspergillus fumigatus y metilcelulosa al 0,5% como el 0% y la proporción inhibidora en el tratamiento sin extracto de Aspergillus fumigatus pero con metilcelulosa al 0. 5 . como el 100%.

Ejemplo de prueba 3: Efecto inhibidor sobre fosforilación de STAT6 estimulada por IL-4

1. Preparación del compuesto de prueba

El compuesto de prueba se disuelve en dimetilsulfóxido (DMSO) a 10 mM, y se diluye adicionalmente con DMSO a las concentraciones de 300 y 100 pM. La solución se diluye adicionalmente con medio RPMI 1640 100 veces para obtener una solución de muestra. Además, se diluye DMSO 100 veces con medio RPMI 1640 y se usa como un control negativo.

2. Actividad STAT6 fosforilada

La solución de muestra o la solución de control negativo (50 pl) se mezcla con una solución de células DND39 (400 pl) (número de células: 105 células) y se agita a 37°C durante 30 min. Se añaden 50 pl de interleuquina-4 (10 ng/ml) como un estimulante, y la mezcla se agita durante 15 min. Se añaden 500 pl de tampón de fijación (BD Biosciences, Inc.) a la mezcla, y la mezcla se agita durante 10 min para parar la reacción. Después de centrifugar y eliminar el sobrenadante, se añaden 500 pl de un agente de permeabilización de la membrana tampón Perm III (BD Biosciences, Inc.) al precipitado, y se incuba a 4°C durante 30 min. Después de lavar dos veces con un tampón de tinción (BD Biosciences, Inc.), se añade anti-STAT6 (pY641) de ratón Alexa Fluor 647 (BD Biosciences, Inc.), y se incuba en un lugar oscuro fresco durante 30 min. La solución celular obtenida se somete a un citómetro de flujo. La actividad de inhibición del compuesto de prueba se calcula, asumiendo el valor GEOMEAN de la intensidad de fluorescencia del grupo de control negativo estimulado con interleuquina-4 como la proporción inhibidora del 0% y el valor GEOMEAN de la intensidad de fluorescencia del grupo control negativo no estimulado como la proporción inhibidora del 100%. A partir de los resultados, se confirma que los compuestos de prueba suprimían la señalización de IL-4.

Ejemplo de prueba 4: Efecto inhibidor sobre fosforilación de STAT5 estimulada por IL-7

1. Preparación del compuesto de prueba

El compuesto de prueba se disuelve en dimetilsulfóxido (DMSO) a 10 mM y se diluye adicionalmente con medio RPMI 1640 100 veces para preparar una solución de muestra. Además, se diluye DMSO 100 veces con medio RPMI 1640 y se usa como un control negativo.

2. Actividad STAT5 fosforilada

A 100 |jl de sangre humana reciente se añaden 10 |jl de la solución de muestra o la solución de control negativo, y se agita a 37°C durante 30 min. Se añaden 10 j l de interleuquina-7 (100 ng/ml) como un estimulante, y la mezcla se agita durante 15 min. Se añaden al sistema de reacción 1,4 ml de Lyse/tampón de fijación (BD Bioscience, Inc.), que se diluye 5 veces por agua destilada. La mezcla se agita durante 10 min, y se centrifuga para separar las células. Después de eliminar el sobrenadante, se añade 1 ml de PBS. Después de centrifugar para eliminar el PBS, se añaden 500 j l de tampón Perm III (BD Bioscience, Inc.), y se incuba a 4°C durante 30 min. Después de lavar dos veces con tampón de tinción (BD Biosciences, Inc.), se añade anticuerpo de ratón anti-STAT5 (pY694) Alexa Fluor 647 (BD Biosciences, Inc.), y se incuba en un lugar oscuro fresco durante 30 min. La solución celular obtenida se somete a citómetro de flujo. La actividad de inhibición del compuesto de prueba se calcula, asumiendo el valor GEOMEAN de la intensidad de fluorescencia del grupo de control negativo estimulado con IL-7 como la proporción inhibidora del 0% y el valor GEOMEAN de la intensidad de fluorescencia del grupo control negativo no estimulado como la proporción inhibidora del 100%. A partir de los resultados, se confirma que los compuestos de prueba suprimían la señalización de IL-7.

Como se muestra en los ejemplos de prueba 1 a 4, el compuesto de la invención mostró actividad inhibidora de JAK1 y, por tanto, es eficaz en el modelo de inflamación in vivo.

Aplicabilidad industrial

En vista del hecho de que el compuesto de la invención muestra actividad inhibidora de JAK1, es útil como un agente terapéutico para una enfermedad autoinmunitaria (por ejemplo, artritis reumatoide, artritis psoriásica, artritis juvenil, enfermedad de Castleman, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Sjogren, esclerosis múltiple, enfermedad intestinal inflamatoria, enfermedad de Behget, miastenia grave, diabetes mellitus de tipo 1, nefropatía de inmunoglobulina, enfermedades tiroideas autoinmunitarias, psoriasis, esclerodermia, nefritis lúpica, ojo seco, vasculitis (por ejemplo, arteritis de Takayasu, arteritis de células gigantes, poliangiitis microscópica, granulomatosis con poliangiitis y granulomatosis eosinofílica con poliangiitis), dermatomiositis, polimiositis y neuromielitis óptica), enfermedades inflamatorias (por ejemplo, dermatitis atópica, dermatitis de contacto, eccema, prurito, alergias alimentarias, asma bronquial, neumonía eosinofílica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, rinitis alérgica, sinusitis crónica, sinusitis eosinofílica, pólipo nasal, conjuntivitis alérgica, artrosis, espondilitis anquilosante, enfermedad de Kawasaki, enfermedad de Buerger, poliarteritis nodosa y vasculitis de IgA), enfermedades proliferativas (por ejemplo, cánceres sólidos, cánceres sanguíneos, tumor maligno de la linfa, enfermedades mieloproliferativas, mieloma múltiple, fibrosis pulmonar y eosinofilia), pérdida de audición repentina, nefropatía diabética, alopecia areata, rechazo a trasplante de médula ósea o rechazo a trasplante de órganos.

Ejemplo de formulación 1

Comprimido (comprimido oral)

En un comprimido de 80 mg de la formulación:

Compuesto del ejemplo 1 5,0 mg

Almidón de maíz 46,6 mg

Celulosa cristalina 24,0 mg

Metilcelulosa 4,0 mg

Estearato de magnesio 0,4 mg

Según un método convencional, un polvo mezcla de los componentes se comprimió para formar un comprimido oral.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Tosilato de [1-({6-[(2S)-butan-2-ilamino]-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il}carbonil)piperidin-4-il]carbamato de metilo monohidrato.

2. Un cristal del compuesto según la reivindicación 1 caracterizado por un patrón de difracción de polvo de rayos X obtenido usando radiación de cobre Ka, que comprende picos de difracción a ángulos de difracción (20) de 12,6°, 13,3°, 17,3°, 20,0°, 20,4°, 21,3° y 22,3°.

3. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto según la reivindicación 1 o 2 como un principio activo.

4. Tosilato de [1-({6-[(2R)-butan-2-ilamino]-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il}carbonil)piperidin-4-il]carbamato de metilo monohidrato.

5. Un cristal del compuesto según la reivindicación 4 caracterizado por un patrón de difracción de polvo de rayos X obtenido usando radiación de cobre Ka, que comprende picos de difracción a ángulos de difracción (20) de 12,6°, 13,3°, 17,3°, 20,0°, 20,4°, 21,3° y 22,3°.

6. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto según la reivindicación 4 o 5 como un principio activo.

7. Tosilato de (1-{[6-{[(1S)-1-ciclopropiletil]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)carbamato de metilo monohidrato.

8. Un cristal del compuesto según la reivindicación 7 caracterizado por un patrón de difracción de polvo de rayos X obtenido usando radiación de cobre Ka, que comprende picos de difracción a ángulos de difracción (20) de 12,6°, 13,3°, 17,2°, 20,6° y 21,8°.

9. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto según la reivindicación 7 o 8 como un principio activo.

10. Un cristal de (1-{[6-{[(1S)-1-ciclopropiletil]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)carbamato de etilo caracterizado por un patrón de difracción de polvo de rayos X obtenido usando radiación de cobre Ka, que comprende picos de difracción a ángulos de difracción (20) de 12,0°, 13,8°, 15,0°, 16,0°, 19,4°, 20,9° y 21,9°.

11. Una composición farmacéutica que comprende el cristal según la reivindicación 10 como un principio activo.

12. Un cristal de N-(1-{[6-{[(1S)-1-ciclopropiletil]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)ciclopropanocarboxamida caracterizado por un patrón de difracción de polvo de rayos X obtenido usando radiación de cobre Ka, que comprende picos de difracción a ángulos de difracción (20) de 11,1°, 12,9°, 15,4°, 17,8°, 21,2° y 22,3°.

13. Una composición farmacéutica que comprende el cristal según la reivindicación 12 como un principio activo.

14. Un cristal de N-(1-{[6-{[(2R)-3,3-dimetilbutan-2-il]amino}-2-(pirazolo[5,1-b][1,3]tiazol-7-il)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)ciclopropanocarboxamida caracterizado por un patrón de difracción de polvo de rayos X obtenido usando radiación de cobre Ka, que comprende picos de difracción a ángulos de difracción (20) de 10,6°, 13,0°, 14,6°, 17,4°, 17,7°, 21,3° y 21,7°.

15. Una composición farmacéutica que comprende el cristal según la reivindicación 14 como un principio activo.